FR2935386A1 - Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant une liaion covalente avec une chaine amine - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne des nouveaux polysaccharides synthétiques à activité antithrombotique présentant au moins une liaison covalente avec une chaîne amine, leur procédé de préparation et leur utilisation en thérapeutique.

Description

NOUVEAUX POLYSACCHARIDES A ACTIVITE ANTITHROMBOTIQUE COMPRENANT UNE LIAISON COVALENTE AVEC UNE CHAINE AMINE

La présente invention concerne des nouveaux oligo - et polysaccharides de synthèse 5 présentant au moins une liaison covalente avec une chaîne amine et possédant les activités pharmacologiques anticoagulante et antithrombotique de l'héparine.

La demande de brevet WO 02/24754 décrit des polysaccharides de synthèse qui présentent une liaison covalente avec la biotine (acide hexahydro-2-oxo-1H-thiéno[3,4- 10 d]imidazole-4-pentanoïque) ou avec un dérivé de la biotine. De tels polysaccharides ont une activité antithrombotique qui les rend utilisables en tant qu'agents anticoagulants et possèdent, en outre, l'avantage de pouvoir être rapidement neutralisés par un antidote spécifique, en situation d'urgence. Cet antidote spécifique est l'avidine (The Merck Index, Twelfth edition, 1996, M.N. 920, pages 151-152) ou la 15 streptavidine, deux protéines tétramériques de masses respectives égale à environ 66 000 et 60 000 Da, qui possèdent une très forte affinité pour la biotine.

On a maintenant identifié de nouveaux polysaccharides de structures analogues à ceux décrits dans la demande de brevet WO 02/24754 mais qui, à la place de la 20 liaison covalente avec la biotine, présentent une chaîne amine. Ces nouveaux polysaccharides, de façon avantageuse, possèdent des propriétés antithrombotiques comparables à ceux décrits dans la demande de brevet sus-mentionnée.

D'une manière générale, l'invention concerne donc des polysaccharides synthétiques à 25 activité antithrombotique présentant au moins une liaison covalente avec une chaîne amine de formule -NH-CO-(CH2)5-NH2.

En particulier, la présente invention a pour objet les polysaccharides de formule (I) : RI Pe (I) n 30 dans laquelle : - le trait ondulé désigne une liaison située soit au-dessous soit au-dessus du plan du cycle pyranosique, - la formule : désigne un polysaccharide contenant n unités monosaccharidiques identiques ou différentes, lié par son carbone anomère à Pe, û la formule : 10 est une représentation schématique d'une unité monosaccharidique à structure pyranosique choisie parmi les hexoses, les pentoses et les sucres desoxy correspondants, cette unité étant liée par son carbone anomère à une autre unité monosaccharidique, et les groupes hydroxy de cette unité étant substitués par des 15 groupes R, identiques ou différents, R, étant tel que défini ci-dessous, û Pe représente un pentasaccharide de structure : O "e\ 0 (Rl)n (Po) n (Pe) W 20 - h est égal à 1 ou 2, - n est un entier et peut prendre toute valeur de 0 à 25, - R, représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OS03 , - R2 représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, un groupe (C,-C6)alcoxy ou un 25 groupe -OS03-, - R3 représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2 ou un groupe (C,-C6)alcoxy, - R4 représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OSO3- ou bien R4 constitue un pont -O-CH2-, le groupe -CH2- étant lié à l'atome de carbone porteur de la fonction carboxylique sur le même cycle ; étant entendu que l'un au moins des substituants R,, R2, R3 ou R4 représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, - W représente un atome d'oxygène ou un groupe méthylène, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables.

Comme indiqué précédemment, on notera que de façon générale dans la présente description un trait ondulé désigne une liaison située soit au-dessous, soit au-dessus du plan du cycle pyranosique.

Les monosaccharides contenus dans Po peuvent être identiques ou différents les uns 15 des autres, les liaisons interglycosidiques peuvent être du type a ou 6. Ces monosaccharides sont avantageusement choisis parmi les hexoses D ou L alose, altrose, glucose, mannose, galose, idose, galactose, talose (dans ce cas h = 2) ou parmi les pentoses D ou L ribose, arabinose, xylose, lyxose (dans ce cas h = 2). D'autres monosaccharides tels que par exemple les sucres désoxy peuvent également 20 être utilisés (h = 1 et/ou -CH2R, = CH3). La partie polysaccharidique Po peut être constituée de 0 à 25 unités monosaccharidiques alkylées et di- ou trisulfatées. La partie polysaccharidique Po peut être également constituée de 0 à 25 unités monosaccharidiques alkylées et mono- ou disulfatées. 25 La partie polysaccharidique Po peut être constituée de 0 à 25 unités monosaccharidiques alkylées non chargées et/ou partiellement chargées et/ou totalement chargées. Les unités chargées ou non chargées peuvent être dispersées tout au long de la chaîne ou elles peuvent au contraire être groupées en domaines saccharidiques 30 chargés ou non chargés. Les liaisons entre les unités peuvent être 1,2 ; 1,3 ; 1,4 ; 1,5 ; 1,6 ; et du type a ou R.

Dans la présente description, il a été choisi de représenter les conformations 1C4 pour l'acide-L-iduronique, 4C1 pour l'acide D-glucuronique, mais il est notoire que, d'une façon générale, la conformation en solution des unités monosaccharides est fluctuante. Ainsi, l'acide L-iduronique peut être de conformation 'C4 2So ou 4C1.

Selon un de ses aspects, l'invention concerne les polysaccharides de formule (I.1) : r (Rl)h Ri t m p Pe dans lesquels : û la formule : désigne une famille particulière de polysaccharides Po, liés par leur carbone anomère à Pe tel que défini pour (I), û la formule : est telle que définie pour (I), û les groupes R, sont tels que définis pour (I) et, pour un même monosaccharide, peuvent être identiques ou différents, 20 û le monosaccharide contenu dans [ ]m est répété m fois, le monosaccharide contenu dans [ ]t est répété t fois, le monosaccharide contenu dans [ ]p est répété p fois, p 10 15 m est un entier variant de 1 à 5, t est un entier variant de 0 à 24 et p est un entier variant de 0 à 24 étant entendu que 1 < m + t + p < 25, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables.

Parmi ces polysaccharides de formule (1.1), les polysaccharides dans lesquels un seul des substituants R,, R2, R3 ou R4 représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables, constituent un sous-groupe de l'invention.

Selon un aspect particulier, l'invention concerne les hexadécasaccharides de 10 formule (I.2) : dans laquelle : 15 - T représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, - Pe représente un pentasaccharide de structure : (Pe) 20 dans lequel : ù R, représente un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OSO3-, R2 représente un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OSO3 , - R3 représente un groupe (C,-C6)alcoxy, - R4 représente un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OSO3 , ou bien R4 constitue 25 un pont -O-CH2-, le groupe -CH2- étant lié à l'atome de carbone porteur de la fonction carboxylique sur le même cycle, - W représente un atome d'oxygène ou un groupe méthylène,

6 ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables.

Selon un autre de ses aspects, l'invention concerne les pentasaccharides de formule (I.3) : dans lesquels R,, R2, R3, R4 et W sont tels que définis pour (I), ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables.

Parmi ces pentasaccharides de formule (I.3), les pentasaccharides dans lesquels un seul des substituants R,, R2, R3 ou R4 représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables, constituent un sous-groupe de l'invention.

Parmi ces pentasaccharides de formule (I.3), l'invention a également pour objet les pentasaccharides de formule (I.4) : 20 dans laquelle : - T représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, - R, représente un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OS03 , - R2 représente un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OS03 , 25 - R3 représente un groupe (C,-C6)alcoxy, 10 15 - R4 représente un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OS03 , ou bien R4 constitue un pont -O-CH2-, le groupe -CH2- étant lié à l'atome de carbone porteur de la fonction carboxylique sur le même cycle, - W représente un atome d'oxygène ou un groupe méthylène, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables.

Selon un autre de ses aspects, l'invention concerne le polysaccharide suivant : Méthyl (2-[N-(6-aminohexanoyl)]-2-désoxy-3, 4-di-O-méthyl-6-O-sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(acide 2,3-di-O-méthyl-(3-D-glucopyranosyluronique)-(1- >4)- (2,3,6-tri-O-sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1->4)-(acide 2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyluronique)-(1-->4)-2,3, 6-tri-O-sulfonato-a-D-glucopyranoside, sel de sodium.

II s'agit du pentasaccharide de formule suivante (composé 1): OMe O _ OMe MeO HN MeO OMe OS03 O OOC OMe -0350 03SO O\ L'invention englobe les polysaccharides sous leur forme acide ou sous la forme de l'un 20 quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. Dans la forme acide, les fonctions -COO- et -SO3' sont respectivement sous forme -COOH et -SO3H.

On entend par sel pharmaceutiquement acceptable des polysaccharides de l'invention, un polysaccharide dans lequel une ou plusieurs des fonctions -COO- ou/et -SO3' sont 25 liées de façon ionique à un cation pharmaceutiquement acceptable. Les sels préférés selon l'invention sont ceux dont le cation est choisi parmi les cations des métaux alcalins et plus préférablement encore ceux dont le cation est Na+ ou K+.

H 2 Les composés de la formule (I) ci-dessus comprennent également ceux dans lesquels un ou plusieurs atomes d'hydrogène ou de carbone ont été remplacés par leur isotope radioactif par exemple le tritium ou le carbone-14. De tels composés marqués sont utiles dans les travaux de recherche, de métabolisme ou de pharmacocinétique, dans les essais biochimiques en tant que ligands.

Dans son principe le procédé de préparation des composés selon l'invention utilise des synthons de base di- ou oligosaccharidiques préparés comme précédemment rapporté dans la littérature. On se référera notamment aux brevets ou demandes de brevet EP 0 300 099, EP 0 529 715, EP 0 621 282 et EP 0 649 854 ainsi qu'aux documents C. van Boeckel, M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32, 1671-1690. Ces synthons sont ensuite couplés les uns aux autres de façon à fournir un équivalent entièrement protégé d'un polysaccharide selon l'invention. Cet équivalent protégé est ensuite transformé en un composé selon l'invention.

L'un des synthons de base évoqués ci-dessus contient une fonction protégée particulière permettant l'introduction ultérieure du groupe -CO-(CH2)5-NH2 (de façon à former la chaîne -NH-CO-(CH2)5-NH2 sur le polysaccharide), par exemple une fonction amine latente sous forme de groupe azido ou protégée sous forme de N-phtalimido.

Dans les réactions de couplage évoquées ci-dessus, un di- ou oligosaccharide "donneur", activé sur son carbone anomère, réagit avec un di- ou oligosaccharide "accepteur", possédant un hydroxyle libre.

La présente invention concerne un procédé pour la préparation des composés de formule (I) caractérisé en ce que : dans une première étape, un équivalent complètement protégé du polysaccharide (I) désiré, contenant un précurseur protégé du domaine Pe prolongé à son extrémité non réductrice par un précurseur protégé du polysaccharide sulfaté Po est synthétisé, l'un de ces précurseurs contenant notamment une fonction amine convenablement protégée pour l'introduction ultérieure du groupe -CO-(CH2)5-NH2 , lui-même convenablement protégé; dans une seconde étape, les groupes chargés négativement sont introduits et/ou démasqués ; dans une troisième étape, on déprotège la fonction amine sur le polysaccharide puis on introduit le groupe -CO-(CH2)5-NH2 protégé ; dans une quatrième étape le groupe NH2 terminal est démasqué.35 La synthèse de Pe est réalisée selon les méthodes décrites en particulier dans les demandes de brevet publiées sous les numéros WO 98/03554 et WO 99/36443, ainsi que dans la littérature sur les polysaccharides. La synthèse de la partie polysaccharidique précurseur de Po est réalisée selon des réactions bien connues de l'homme de l'art, en utilisant les méthodes de la synthèse d'oligosaccharides (G.J. Boons, Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1121, WO 98/03554 et WO 99/36443). Typiquement, un oligosaccharide donneur de liaison glycosidique est couplé avec un oligosaccharide accepteur de liaison glycosidique pour conduire à un autre oligosaccharide dont la taille est égale à la somme des tailles des deux espèces réactives. Cette séquence est répétée jusqu'à l'obtention du composé de formule (I) désiré. La nature et le profil de la charge du composé final désiré déterminent la nature des entités chimiques utilisées dans les différentes étapes de la synthèse, selon les règles bien connues de l'homme de l'art. On pourra se référer par exemple à C. van Boeckel, M. Petitou, Angew. Chem. /nt. Ed. Engl., 1993, 32, 1671-1690 ou encore à H. Paulsen, "Advances in selective chemical syntheses of complex oligosaccharides" Angew. Chem. /nt. Ed. Engl., 21, 155-173 (1982).

Les composés de l'invention sont obtenus à partir de leurs précurseurs polysaccharidiques complètement protégés en utilisant l'enchaînement suivant de 20 réactions : û les fonctions alcool devant être transformées en un groupe O-sulfo et les acides carboxyliques sont déprotégés par l'élimination des groupes protecteurs utilisés durant l'élaboration du squelette, les groupes sulfo sont ensuite introduits, 25 û la fonction amine du polysaccharide permettant d'introduire le groupe -CO-(CH2)5-NH2 est déprotégée, - le groupe -CO-(CH2)5-NH2 convenablement protégé est introduit par une réaction classique de couplage amino/acide, puis - le groupe -NH2 terminal est démasqué. 30 Les composés de l'invention peuvent naturellement être préparés en utilisant différentes stratégies connues par l'homme de l'art de la synthèse des oligosaccharides. Le procédé décrit ci-dessus est le procédé préféré de l'invention. Toutefois, les 35 composés de formule (I) peuvent être préparés par d'autres méthodes bien connues de la chimie des sucres décrites par exemple dans Monosaccharides, Their chemistry and their roles in natural products, P.M. Collins et R.J. Ferrier, J. Wiley & Sons, 1995 et dans G.J. Boons, Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1121. Les pentasaccharides Pe peuvent donc être obtenus à partir de synthons 5 disaccharidiques de la façon décrite dans la publication de C. van Boeckel, M. Petitou, Angew. Chem. lnt. Ed. Engl., 1993, 32, 1671-1690.

D'une façon générale, les groupes protecteurs utilisés dans le procédé de préparation des composés (I) sont ceux couramment utilisés dans la chimie des sucres, tels que 10 décrits par exemple dans Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, John Wiley & sons, New-York, 1981. Les groupes protecteurs peuvent par exemple être choisis parmi les groupes acétyles, halogénométhyles, benzoyles, lévulinyles, benzyles, benzyles substitués, trityles éventuellement substitués, tétrahydropyranyles, allyles, pentenyles, tert-butyldiméthylsilyles (tBDMS) ou triméthylsilyléthyles. 15 Les groupes activateurs sont ceux classiquement utilisés en chimie des sucres selon par exemple G.J. Boons, Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1121. Ces groupes activateurs sont choisis par exemple parmi les imidates, les thioglycosides, les penténylglycosides, les xanthates, les phosphites ou les halogénures.

20 Notamment, l'introduction du groupe -CO-(CH2)5-NH2 sur la fonction amine libre du polysaccharide, selon le procédé décrit ci-dessus, peut être réalisée à l'aide d'un réactif de type Act-CO-(CH2)5-NH-Pg, dans lequel "Act" représente un groupe activateur d'une fonction acide (tel qu'un imide, par exemple un dérivé de succinimide, ou encore un anhydride mixte, ou bien tout autre agent activateur connu en chimie 25 peptidique pour les réactions de couplage amino/acide) et "Pg" représente un groupe protecteur de fonction amine (tel qu'un groupe benzyloxycarbonyle).

Le procédé décrit ci-dessus permet d'obtenir les composés de l'invention sous forme de sels. Pour obtenir les acides correspondants, les composés de l'invention sous 30 forme de sels sont mis en contact avec une résine échangeuse de cations sous forme acide. Les composés de l'invention sous forme d'acides peuvent être ensuite neutralisés par une base pour obtenir le sel souhaité. Pour la préparation des sels des composés de formule (I), on peut utiliser toute base minérale ou organique, donnant avec les composés de formule (I), des sels pharmaceutiquement acceptables. On 35 utilise de manière préférentielle comme base l'hydroxyde de sodium, de potassium, de calcium ou de magnésium. Les sels de sodium et de calcium des composés de formule (I) sont les sels préférés.

L'invention sera mieux comprise à l'aide de l'exemple détaillé qui suit, relatif à la 5 préparation d'un composé selon l'invention de type pentasaccharide, répondant à la formule (1.4). Cet exemple n'est pas limitatif et ne fait qu'illustrer la présente invention.

Exemple de préparation du composé 1 : Méthyl (2-fN-(6-aminohexanoyl)]-2-désoxy-3,4-di-O-méthyl-6-O-sulfonato-a-D- 10 glucopyranosyl)-(1 -4)-(acide 2,3-di-O-méthyl-l3-o-glucopyranosyluronique)-(1-A)-(2,3, 6-tri-O-su/fonato-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-(acide 2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyluronique)-(1-)4)-2,3, 6-tri-O-sulfonato-a-D-glucopyranoside, sel de sodium o,so 03s0 O 00C 0 O O O .00C MeO HN MeO OMe OSO3 OMe H2 N 15 Composé 1

1) Préparation du 6-(benzyloxycarbonylamino)hexanoate de succinimidyle A une solution d'acide 6-(benzyloxycarbonylamino) hexanoïque (1.00 g, 3.77 mmol) 20 dans du diméthylformamide (20 mL), on ajoute du triéthylamine (0.63 mL, 4.52 mmol) et on laisse agiter le mélange à température ambiante et sous argon pendant 30 minutes. On refroidit la solution à 0°C et on ajoute goutte à goutte du chloroformiate d'éthyle (0.43 mL, 4.52 mmol). Après deux heures à température ambiante, on ajoute du N-hydroxysuccinimide (0.52 g, 4.52 mmol) et on laisse agiter le mélange pendant la 25 nuit à température ambiante. On évapore à sec avant de reprendre le résidu dans de l'eau à laquelle on ajoute de l'acétate d'éthyle. Les phases sont séparées et la phase aqueuse est extraite par de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de sodium, filtrées et évaporée à sec avant purification sur une colonne de gel de silice avec un mélange d'acétate d'éthyle / pentane (75/25 vlv) comme éluant. Les fractions une fois évaporées donnent 1.13 g de 6-(benzyloxycarbonylamino)hexanoate de succinimidyle sous forme d'huile. CCM : Rf = 0.22 sur plaque de gel de silice avec un mélange n-heptane/acétate d'éthyle (30/70 v/v) comme éluant. 2) Préparation du composé 1' Le greffage de la chaîne aminée est réalisée sur le pentasaccharide 44, ou méthyl (2-amino-2-désoxy-3,4-di-O-méthyl-6-O-sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1->4) -(acide 2,3-di-O-méthyl-(3-D-glucopyranosyluronique)-(1-*4)-(2,3, 6-tri-O-sulfonato-a-D-gluco- pyranosyl)-(1->4)-(acide 2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyl-uronique)-(1->4)- 2,3,6-tri-O-sulfo-nato-a-D-glucopyranoside, sel de sodium, dont la préparation est décrite dans la demande de brevet WO 02/24754: 44 A une solution de 6-(benzyloxycarbonylamino)hexanoate de succinimidyle (783 mg, 2,16 mmol) dans du N,N-diméthylformamide (10 mL), on ajoute le pentasaccharide 44 (505 mg, 0.29 mmol). Après 24 heures d'agitation en atmosphère inerte et à température ambiante, on évapore le solvant sous pression réduite et on dissout le résidu dans de l'eau (40 mL) avant de laver la solution par du chloroforme (2 x 30 mL). La phase chloroformique est lavée à l'eau (10 mL) et les phases aqueuses sont réunies, puis évaporées à sec sous pression réduite. Le résidu solide est trituré par du 2-propanol (10 mL) et la suspension centrifugée pendant 5 minutes à 2500 tpm. La phase alcoolique est soutirée et remplacée par du 2-propanol (10 mL) et la centrifugation est répétée. Après avoir soutiré le solvant, le produit brut est séché sous vide. On obtient ainsi 399 mg du composé 1', ou méthyl (2-[N-(6-benzyloxycarbonylaminohexanoyl)]-2-désoxy-3, 4-di-O-méthyl-6-O-sulfonato-o-D-glucopyranosyl)-(1-+4)(acide 2,3-di-O-méthyl-43-D-glucopyranosyluronique)-(1 ->4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-a-D- glucopyranosyl)-(1-34)-(acide 2, 3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyluronique)-( 1 -*4)-2,3,6- tri-O-sulfonato-a-D-glucopyranoside, dans lequel Pg représente un groupe benzyloxycarbonyle : NH-Pg Composé 1'

RMN du proton à 200 MHz dans l'eau deuteriée : La structure du produit attendu est confirmée, du fait que le spectre obtenu est identique à celui effectué sur un produit synthetisé conformement à l'exemple 5 de la demande de brevet WO 02/24754, sans les signaux dus aux atomes de la partie biotine mais avec des signaux de 7.4 à 7.5 ppm dus au groupement benzyloxy.

3) Préparation du composé 1 Le produit 1' obtenu à l'issue de l'étape précédente (399 mg) est dissous dans de l'eau deuteriée (10 mL). On traite la solution par du palladium sur charbon à 10% (25 mg) et on laisse agiter la solution 20 heures en présence d'hydrogène à pression atmosphérique. On dilue le mélange avec de l'eau (15 mL), on filtre le catalyseur et on lave la solution avec du chloroforme (2 x 15 mL) avant d'évaporer à sec sous pression réduite. Un aliquote (98 mg sur 320 mg) de ce produit est purifié sur une colonne de gel Sephadex G-25 (2.5 x 50 cm) avec de l'eau comme éluant pour donner 25 mg du composé 1.

HPLC : Tr = 15.4 min sur colonne X-Terra RP-18 150 x 4.6 mm, particules de 5p de chez Waters SA. Détection avec lampe UV à 211 nm. Eluant 1 : eau contenant 0.02M d'acétate d'ammonium et 0.05M de di-n-butylamine, ajusté à pH7 avec de l'acide acétique. Eluant 2 : mélange acétonitrile/eau (90/10 v/v) contenant 0.05M de di-nbutylamine et 0.08M d'acide acétique. Les proportions des éluants sont programmées de sorte que la composition en éluant 2 est de 10% à 0 min. ; de 20% à 25 min. ; de 50% à 40 min. ; de 50% à 43 min. et de 5% à 50 minutes.

RMN du proton à 600 MHz dans l'eau deuteriée : La structure du produit attendu est confirmée, du fait que le spectre obtenu est identique à celui effectué sur un produit synthétisé conformément à l'exemple 5 de la demande de brevet WO 02/24754, sans les signaux dus aux atomes de la partie biotine.

Pharmacoloqie :

Les composés selon l'invention ont fait l'objet d'études biochimiques et 10 pharmacologiques.

L'activité pharmacologique de ces produits a notamment été étudiée dans un modèle in vitro d'inhibition du facteur Xa de la coagulation, en présence d'antithrombine (activité anti-facteur Xa dépendante de la présence 15 d'antithrombine), tel que décrit par J.-M. Herbert et al., Blood, 1998, 91, 4197-4205 . Dans ce modèle, on confirme les propriétés antithrombotiques des composés selon l'invention. En particulier pour le composé 1 selon l'invention : CI50 = 1.69.10-2 pg/ml (CI50 : dose permettant une inhibition de 50%).

20 Grâce à leur activité biochimique et pharmaceutique, les oligosaccharides de la présente invention constituent des médicaments très intéressants. Leur toxicité est parfaitement compatible avec cette utilisation. Ils sont également très stables et sont donc particulièrement appropriés pour constituer le principe actif de spécialités pharmaceutiques. 25 Ils peuvent être utilisés dans diverses pathologies consécutives à une modification de l'homéostasie du système de la coagulation apparaissant en particulier lors des troubles du système cardio-vasculaire et cérébro-vasculaire comme les troubles thromboemboliques associés à l'arthérosclérose et au diabète tels que l'angine 30 instable, l'attaque cérébrale, la resténose après angioplastie, l'endartérectomie, la pose de prothèses endovasculaires ; ou les troubles thromboemboliques associés à la rethrombose après thrombolyse, à l'infarctus, à la démence d'origine ischémique, aux maladies artérielles périphériques, à l'hémodialyse, aux fibrillations auriculaires ou encore lors de l'utilisation de prothèses vasculaires de pontages aorto-coronariens. 35 Ces produits peuvent par ailleurs être utilisés pour le traitement ou la prévention de pathologies thromboemboliques d'origine veineuse, telles que les embolies pulmonaires et la thrombose veineuse profonde. Ils peuvent être utilisés ou pour prévenir ou pour traiter les complications thrombotiques observés par exemple à la suite d'opérations chirurgicales, de développements tumoraux ou de dérèglements de la coagulation, induits par des activateurs bactériens, viraux, ou enzymatiques. Dans le cas de leur utilisation lors de la pose de prothèses, les composés de la présente invention peuvent recouvrir des prothèses et les rendre ainsi hémocompatibles. En particulier, ils peuvent être fixés à des prothèses intravasculaires (stents). Dans ce cas, ils peuvent éventuellement être modifiés chimiquement par introduction à l'extrémité non réductrice ou réductrice d'un bras approprié, comme décrit selon EP 649854. Les composés de la présente invention peuvent également être utilisés comme adjuvants lors d'endartérectomie réalisée avec des ballonnets poreux.

Les composés selon l'invention peuvent être utilisés pour la préparation de 15 médicaments destinés à traiter ou prévenir les maladies ci-dessus.

Selon un autre de ses aspects, la présente invention a donc pour objet une composition pharmaceutique contenant, en tant que principe actif, un polysaccharide de synthèse selon l'invention ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, 20 éventuellement en association avec un ou plusieurs excipients inertes et appropriés. Lesdits excipients sont choisis selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaités : orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, transdermique, transmuqueux, locale ou rectale. Le principe actif peut être également présenté sous forme de complexe avec une 25 cyclodextrine, par exemple a, f3 ou y cyclodextrine, 2-hydroxypropyl-8-cyclodextrine ou méthyl-(3-cyclodextrine. Le principe actif peut également être libéré par un ballonnet le contenant ou par un extenseur endovasculaire introduit dans les vaisseaux sanguins. L'efficacité pharmacologique du principe actif n'est ainsi pas affectée.

30 Dans chaque unité de dosage, le principe actif est présent dans les quantités adaptées afin d'obtenir l'effet prophylactique ou thérapeutique désiré. Chaque unité de dosage peut contenir de 0,1 à 100 mg de principe actif, de préférence 0,5 à 50 mg, de façon encore préférée de 2.5 à 3.0 mg.

35 Les composés selon l'invention peuvent également être utilisés en association avec un ou plusieurs autres principes actifs utiles pour la thérapeutique souhaitée tels que par exemple des antithrombotiques, des anticoagulants, des antiagrégants plaquettaires tels que par exemple le dipyridamole, l'aspirine, la ticlopidine, le clopidogrel ou des antagonistes du complexe de la glycoprotéine IIb/IIIa. 5

Claims (13)

1. REVENDICATIONS1. Polysaccharides synthétiques à activité antithrombotique répondant à la formule : dans laquelle : - le trait ondulé désigne une liaison située soit au-dessous soit au-dessus du plan du cycle pyranosique, û la formule : R1 Pe (I) n 10 (Po) n désigne un polysaccharide contenant n unités monosaccharidiques identiques ou différentes, lié par son carbone anomère à Pe, û la formule : est une représentation schématique d'une unité monosaccharidique à structure pyranosique choisie parmi les hexoses, les pentoses et les sucres desoxy correspondants, cette unité étant liée par son carbone anomère à une autre unité 20 monosaccharidique, et les groupes hydroxy de cette unité étant substitués par des groupes R, identiques ou différents, RI étant tel que défini ci-dessous, û Pe représente un pentasaccharide de structure : 15(Pe) - h est égal à 1 ou 2, - n est un entier et peut prendre toute valeur de 0 à 25, - R, représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OSO3-, - R2 représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OS03-, - R3 représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2 ou un groupe (C,-C6)alcoxy, - R4 représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OS03- ou bien R4 constitue un pont -O-CH2-, le groupe -CH2- étant lié à l'atome de carbone porteur de la fonction carboxylique sur le même cycle ; étant entendu que l'un au moins des substituants R,, R2, R3 ou R4 représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, - W représente un atome d'oxygène ou un groupe méthylène, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
2. 2. Polysaccharides selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils répondent à la 20 formule (1.1) : dans laquelle : û la formule : R, ,_e\,ziO (Rl)h ùP Pe m tm 0rP t désigne une famille particulière de polysaccharides Po, liés par leur carbone anomère à Pe tel que défini pour (I) selon la revendication 1, 5 ù la formule : est telle que définie pour (I) selon la revendication 1, ù les groupes R, sont tels que définis pour (I) selon la revendication 1 et, pour un 10 même monosaccharide, peuvent être identiques ou différents, ù le monosaccharide contenu dans [ ]m est répété m fois, le monosaccharide contenu dans [ ]t est répété t fois, le monosaccharide contenu dans [ ]P est répété p fois, ù m est un entier variant de 1 à 5, t est un entier variant de 0 à 24 et p est un entier variant de 0 à 24 étant entendu que 1 m + t + p <_ 25, 15 ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
3. 3. Polysaccharides selon la revendication 2, caractérisés en ce que un seul des substituants R,, R2, R3 ou R4 représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
4. 4. Polysaccharides selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisés en ce qu'ils consistent en des hexadécasaccharides de formule (I.2) : 20P 03S . dans laquelle : - T représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, - Pe représente un pentasaccharide de structure : (Pe) dans lequel : ù R, représente un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OSO3 , - R2 représente un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OSO3-, - R3 représente un groupe (C,-C6)alcoxy, ù R4 représente un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OSO3-, ou bien R4 constitue un pont -O-CH2-, le groupe -CH2 étant lié à l'atome de carbone porteur de la 15 fonction carboxylique sur le même cycle, - W représente un atome d'oxygène ou un groupe méthylène, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 20
5. 5. Polysaccharides selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils consistent en des pentasaccharides de formule (I.3) :dans lesquels R,, R2, R3, R4 et W sont tels que définis pour (I) selon la revendication 1, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
6. 6. Pentasaccharides selon la revendication 5, caractérisés en ce que un seul des 5 substituants R,, R2, R3 ou R4 représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
7. 7. Pentasaccharides selon la revendication 5 ou 6, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule (I.4) : dans laquelle : - T représente un groupe -NH-CO-(CH2)5-NH2, 15 - R, représente un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OS03-, - R2 représente un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OS03-, - R3 représente un groupe (C,-C6)alcoxy, - R4 représente un groupe (C,-C6)alcoxy ou un groupe -OS03-, ou bien R4 constitue un pont -O-CH2-, le groupe -CH2- étant lié à l'atome de carbone porteur de la fonction 20 carboxylique sur le même cycle, - W représente un atome d'oxygène ou un groupe méthylène, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 25
8. 8. Polysaccharide selon l'une quelconque des revendications 1, 5, 6 ou 7, caractérisé en ce qu'il s'agit du méthyl (2-[N-(6-aminohexanoyl)]-2-désoxy-3, 4-di-O-méthyl-6-O-sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1-+4)-(acide 2,3-di-O-méthyl-(3-0-glucopyranosyluronique)-(1û*4)-(2,3, 6-tri-O-sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1 -->4)-(acide 2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyluronique)-(1- .4)-2,3,6-tri-O-sulfonato-a-D- 30 glucopyranoside, sel de sodium. 10
9. 9. Médicaments, caractérisés en ce qu'ils comprennent un polysaccharide selon l'une quelconque des revendications 1 à 8.
10. 10. Compositions pharmaceutiques contenant, en tant que principe actif, un 5 polysaccharide selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, ainsi qu'un ou plusieurs excipients inertes et appropriés.
11. 11. Utilisation d'un polysaccharide selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et à la prévention des 10 pathologies consécutives à une modification de l'homéostasie du système de la coagulation apparaissant lors des troubles du système cardio-vasculaire et cérébrovasculaire comme les troubles thromboemboliques associés à l'arthérosclérose et au diabète tels que l'angine instable, l'attaque cérébrale, la resténose après angioplastie, l'endartérectomie, la pose de prothèses endovasculaires, ou les troubles 15 thromboemboliques associés à la rethrombose après thrombolyse, à l'infarctus, à la démence d'origine ischémique, aux maladies artérielles périphériques, à l'hémodialyse, aux fibrillations auriculaires, lors de l'utilisation de prothèses vasculaires de pontages aorto-coronariens, dans le traitement ou la prévention de pathologies thromboemboliques d'origine veineuse telles les embolies pulmonaires et la thrombose 20 veineuse profonde, pour prévenir ou pour traiter les complications thrombotiques observés à la suite d'opérations chirurgicales, de développements tumoraux ou de dérèglements de la coagulation, induits par des activateurs bactériens, viraux, ou enzymatiques. 25
12. 12. Utilisation d'un polysaccharide selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 pour recouvrir des prothèses.
13. 13. Utilisation d'un polysaccharide selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 comme adjuvant lors d'une endartérectomie réalisée avec des ballonnets poreux. 30