WO2006001374A1

WO2006001374A1 - 放射線治療増感剤

Info

Publication number: WO2006001374A1
Application number: PCT/JP2005/011630
Authority: WO
Inventors: Ippei Sakimoto; Masahiko Miura; Keiko Kataoka; Kengo Sakaguchi; Fumio Sugawara; Keisuke Ohta; Takayuki Yamazaki
Original assignee: Toyo Suisan Kaisha, Ltd.
Priority date: 2004-06-24
Filing date: 2005-06-24
Publication date: 2006-01-05
Also published as: JPWO2006001374A1; AU2005257359A1; CN1972955A; KR100832167B1; EP1734046A4; KR20070020270A; ATE479695T1; US20090253644A1; CA2567306C; EA200602065A1; EP1734046B1; CN1972955B; CA2567306A1; EP1734046A1; BRPI0511824A; NO20070421L; EA010292B1; US20070219145A1; JP3927993B2; DE602005023288D1

Abstract

　次の一般式（１）：　［化１］（式中、Ｒ101は、高級脂肪酸のアシル残基を表し、Ｒ102は、水素原子または高級脂肪酸のアシル残基を表す。）により表される化合物及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも１種の化合物を有効成分として含有する放射線治療増感剤。

Description

明細書

放射線治療増感剤

技術分野

[0001] 本発明は、新規な放射線治療増感剤に関する。より詳細には、本発明は、一般式（ 1)で表されるスルホピラノシルァシルグリセロール又はその薬学的に許容され得る塩を有効成分として含有する放射線治療増感剤に関する。

背景技術

[0002] 現在、我が国においては、悪性腫瘍、心疾患及び脳血管疾患が死因の約 6割を占めている。このうち、悪性腫瘍は死因のトップに位置するとともに、増加の傾向にある。悪性腫瘍に対する治療法には、手術療法、化学療法及び放射線療法が三大治療法として知られている。近年、患者の生活の質 (QOL)が重視されており、放射線療法が注目されてきている。

[0003] 現在、放射線療法において放射線と同時に投与されたとき、その治療効果を強める化学的又は薬学的物質、すなわち放射線増感剤として臨床的に実用化し得る増感剤としては、ハロゲンィ匕ピリミジンと低酸素細胞増感剤の 2種類が知られている（例えば、非特許文献 1参照)。ハロゲンィ匕ピリミジンとしては、 5—ョード 'デォキシ'ゥリジン等が知られている。また、低酸素細胞増感剤としては、ミソニダゾール等が知られている。し力しながら、これらの既知の放射線治療増感剤には、胃腸障害'末梢神経毒性、その他の副作用の問題等解決すべき問題があり、ほとんど実用化には至っていない。

非特許文献 1 : Radiobiology for the Radiologist (Fourth Edition), Eric J. Hall他、 J.B. Lippincott Company (「放射線科医のための放射線生物学」、浦野宗保訳、（株)篠原出版新社）

発明の開示

[0004] [発明が解決しょうとする課題]

本発明は、上記問題点に鑑みてなされたものであり、本発明の第一の目的は、実用可能な放射線治療増感剤を提供することである。 [0005] 本発明の第二の目的は、上記放射線治療増感剤を使用する、抗腫瘍放射線治療方法を提供することである。

[0006] [課題を解決するための手段]

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究した結果、一般式（1)で表されるスルホピラノシルァシルグリセロール誘導体に優れた放射線治療増感効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、次の放射線治療増感剤を提供する。

[0007] [1]次の一般式 (1) :

[化 1]

[0008] (式中、 R は、高級脂肪酸のァシル残基を表し、 R は、水素原子または高級脂肪

101 102

酸のァシル残基を表す。 )により表される化合物及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも 1種の化合物を有効成分として含有する放射線治療増感剤。

[0009] [2]前記有効成分が、次の一般式 (2)：

[化 2]

( 2 )

[0010] (式中、 R は、高級脂肪酸のァシル残基を表し、 R は、水素原子または高級脂肪

102

酸のァシル残基を表す。 )により表される化合物及びその薬学的に許容される塩からなる群力選択される少なくとも 1種の化合物である上記 [ 1 ]に記載の放射線治療増感剤。

[0011] [3]—般式（2)において、 R が R— CO— (Rは、炭素数 13〜25のアルキル基である。）であり、 R が水素原子または R— CO— (Rは、炭素数 13〜25のアルキル基

102

である。）である、上記 [2]に記載の放射線治療増感剤。

[0012] [4]一般式（2)において、 R 力 — CO— (Rは、 13〜25の間の奇数の炭素数を

101

有する直鎖アルキル基である。）である、上記 [3]に記載の放射線治療増感剤。

[0013] [5]—般式（2)において、 R が水素原子である、上記 [3]に記載の放射線治療増

102

感剤。

[0014] [6]—般式 (2)において、 R が水素原子である、上記 [4]に記載の放射線治療増

102

感剤。

[0015] [7]—般式（2)において、 R が R— CO—（Rは、炭素数 13〜25のアルキル基で

102

ある。）である、上記 [3]に記載の放射線治療増感剤。

[0016] [8]—般式（2)において、 R が R— CO—（Rは、炭素数 13〜25のアルキル基で

102

ある。）である、上記 [4]に記載の放射線治療増感剤。

[0017] また、本発明は、上記放射線治療増感剤と放射線照射とを併用する抗腫瘍放射線治療方法も提供する。

[発明の効果]

[0018] 本発明の放射線治療増感剤は、放射線照射と併用することにより、予測を超える程の相乗的な抗腫瘍治療効果を達成することができる。

図面の簡単な説明

[0019] [図 1]図 1は、試験の日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。

[図 2]図 2は、試験の日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。

[図 3]図 3は、試験の日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。

[図 4]図 4は、試験の日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。

[図 5]図 5は、試験の日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。

[図 6]図 6は、試験の日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。

[図 7]図 7は、試験の日数と腫瘍体積との関係を示すグラフである。

[図 8]図 8は、コロニーアツセィ結果を示すグラフである。

[図 9]図 9は、コロニーアツセィ結果を示すグラフである。

[図 10]図 10は、コロニーアツセィ結果を示すグラフである。 [図 11]図 11は、コ口-一アツセィ結果を示すグラフである。

[図 12]図 12は、放射線照射量と本発明の放射線治療増感剤の濃度を変えて行ったコロニーアツセィの結果を示すグラフである。

[図 13]図 13は、コ口-一アツセィ結果を示すグラフである。

[図 14]図 14は、コ口-一アツセィ結果を示すグラフである。

[図 15]図 15は、コ口-一アツセィ結果を示すグラフである。

[図 16]図 16は、コロニーアツセィ結果を示すグラフである。

[図 17]図 17は、コ口-一アツセィ結果を示すグラフである。

[図 18]図 18は、コロニーアツセィ結果を示すグラフである。

[図 19]図 19は、コ口-一アツセィ結果を示すグラフである。

[図 20]図 20は、血管新生キットを用いたアツセィ結果を示すグラフである。

発明を実施するための最良の形態

[0020] 本明細書において、放射線治療増感剤には、これを使用することによって放射線単独照射の場合よりも抗腫瘍効果を高めることができるものが含まれる。抗腫瘍効果には、腫瘍を縮小あるいは消滅させる場合が含まれる。この他、抗腫瘍効果には、腫瘍の成長を遅延する場合や、より少ない放射線量や照射回数によって同じ抗腫瘍効果を達成できる場合が含まれ得るが、本発明の放射線治療増感剤の作用機序を限定することを意図するものではな、。

[0021] まず、本発明の放射線治療増感剤の有効成分である一般式（1)：

[化 3]

[0022] (式中、 R は、高級脂肪酸のァシル残基を表し、 R は、水素原子または高級脂肪

101 102

酸のァシル残基を表す。 )により表されるスルホピラノシルァシルグリセロール誘導体について詳細に説明する。

[0023] 上記一般式（1)のスルホピラノシルァシルグリセロール誘導体にお!、て、ビラノシドを構成する糖骨格であるビラノースには、 a—D グルコース、 13—D グルコース、 a—D ガラクトース、 β—D ガラクトース、 a—D マンノース、 β— D マンノース等が含まれる。

[0024] これらビラノシドの糖骨格は、舟形、、す型の、ずれの配置をもとり得る。し力しながら、いす型のもののほうが、安定性の観点力好ましい。

[0025] グリセロール部分の 2位の炭素（不斉炭素）における絶対配置は、 S又は Rの何れでちょい。

[0026] 上記一般式（1)において、 R は、高級脂肪酸のァシル残基を表す。 R により表さ

101 101 れる高級脂肪酸のァシル残基を提供する脂肪酸には、直鎖状又は分岐状の、飽和又は不飽和高級脂肪酸が含まれる。

[0027] R により表される直鎖状又は分岐状の、高級脂肪酸のァシル残基には、 R— C (

101

= 0) - (式中、 Rは、炭素数 13以上のアルキル基又はアルケニル基を表す。）で表される基が含まれる。このァシル残基: R— C ( = 0)—の Rにより表されるアルキル基及びアルケニル基の炭素数は、製造コスト、放射線治療増感活性等を考慮すると、 1 3以上 25以下が好ましぐ 13〜25の奇数が更に好ましい。

[0028] 上記一般式（1)において、 R は、水素原子または高級脂肪酸のァシル残基を表

102

す。 R により表される高級脂肪酸のァシル残基は、上述した R の高級脂肪酸のァ

102 101

シル残基と同義である。

[0029] 一般式（1)において、 R と R が共に高級脂肪酸のァシル残基である場合、これ

101 102

らのァシル残基は互いに同じであっても異なって、てもよ、が、製造の容易性の観点から同じであることが好ましい。

[0030] 一般式（1)のスルホピラノシルァシルグリセロール誘導体として、ビラノシドを構成する糖骨格であるビラノースが、 ( —D グルコース、 13—D グルコース、 (X— D ガラタトース、 j8— D—ガラクトース、 a— D マンノース、 j8— D マンノースであり； R

1 力 R - C ( = 0) （式中、 Rは、 13〜25の間の奇数の炭素数を有するアルキル基

01

又はアルケニル基を表す)で表される基であり； R 力水素原子または上記 R と同

102 101 義の高級脂肪酸のァシル残基である、化合物が挙げられる。

[0031] 上記一般式（1)で表されるスルホピラノシルァシルグリセロール誘導体は、既知の化合物であり、例えば、本出願人の出願 (特開 2000— 143516号公報、国際公開第 WO00Z52020号、第 WO00Z52021号及び WO00Z51622号）等に記載の方法に従ヽ製造することができる。

[0032] 一般式（1)で表されるスルホピラノシルァシルグリセロール誘導体の薬学的に許容される塩には、例えば、ナトリウム及びカリウムのような一価の陽イオンの塩が含まれる力これらに限定されるものではない。

[0033] 本発明の放射線治療増感剤は、上述した本発明の一般式（1)で表されるスルホピラノシルァシルグリセロール誘導体及びその薬学的に許容される塩カゝらなる群力ゝら選択される 1種またはそれ以上を有効成分として含有する。上述したように、一般式（1) で表されるスルホピラノシルァシルグリセロール誘導体には、ビラノシル部分の立体異性体ゃグリセリジル部分の C2炭素 (不斉炭素）における異性体等が含まれる。本発明の放射線治療増感剤は、その活性に悪影響を及ぼさない限り、これらの異性体を単独で含有することも、 2種以上の異性体の混合物を含有することもできる。また、本発明の放射線治療増感剤は、一般式（1)において、置換基 R 101及び Z又は R 102が異なる複数種類の化合物を含有することも可能である。さらに、本発明の放射線治療増感剤は、その活性に悪影響を及ぼさない限り、他の放射線治療増感剤や、抗癌剤、その他の薬学的活性を有する化合物と併用することもできる。

[0034] 以下、本発明の一般式（1)で表されるスルホピラノシルァシルグリセロール誘導体及びその薬学的に許容される塩からなる群の化合物を「本発明の放射線治療増感物質」ともいう。

[0035] 本発明の放射線治療増感物質は、例えば、経口投与、非経口投与することができる。本発明の放射線治療増感物質は、これらの投与経路に応じて、適切な薬学的に許容される賦形剤又は希釈剤等と組み合わせることにより薬学的製剤にすることができる。

[0036] 経口投与に適した剤型としては、固体、半固体、液体又は気体等の状態のものが含まれ、具体的には、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を挙げることができる力これらに限定されるものではない。

[0037] 本発明の放射線治療増感物質を錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、溶液剤、懸濁剤等に製剤化するためには、それ自体は既知の方法を用いて、本発明の放射線治療増感物質をバインダー、錠剤崩壊剤、潤滑剤等と混合し、さらに、必要に応じて、希釈剤、緩衝剤、浸潤剤、保存剤、フレーバー剤等と混合することにより行うことができる。一例を挙げると、上記バインダーには、結晶セルロース、セルロース誘導体、コーンスターチ、ゼラチン等が、錠剤崩壊剤には、コーンスターチ、馬鈴薯デンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム等力潤滑剤には、タルク、ステアリン酸マグネシゥム等が含まれ、さらには、ラタトース、マン-トール等のような従来用いられている添加剤等を用いることができる。

[0038] また、本発明の放射線治療増感物質は、液体、微細粉末の形態のものを、気体又は液体の噴霧剤と共に、又は必要に応じて浸潤性付与剤のような既知の助剤と共に、エアロゾル容器、ネブライザ一のような非加圧容器に充填し、エアロゾル剤又は吸入剤の形態で投与することもできる。噴霧剤としては、ジクロロフルォロメタン、プロパン、窒素等の加圧ガスを用いることができる。

[0039] 本発明の放射線治療増感物質を非経口投与する場合、例えば、注射、経皮投与、直腸投与、および眼内投与等により投与することができる。

[0040] 注射による投与としては、皮下、皮内、静脈内、筋肉内等に投与することができる。

これらの注射用製剤は、それ自体は既知の方法により、本発明の放射線治療増感物質を、植物性油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステル、プロピレングリコールのような水性又は非水性の溶媒中に溶解、懸濁又は乳化し、さらに、所望により、可溶化剤、浸透圧調節剤、乳化剤、安定剤及び保存料のような従来用いられている添加剤と共に製剤化することができる。

[0041] 本発明の放射線治療増感物質を溶液、懸濁液、シロップ、エリキシル等の形態にするためには、注射用滅菌水や規定生理食塩水のような薬学的に許容される溶媒を用!/、ることができる。

[0042] 経皮投与は、対象となる皮膚の状態等に応じて軟膏剤、乳化剤、パスタ剤、ハツプ剤、リニメント剤、ローション剤、懸濁剤等として投与することができる。

[0043] 軟膏剤は、それ自体は既知の方法により、本発明の放射線治療増感物質をヮセリン、パラフィン等のような疎水性基材または親水ワセリン、マクロゴール等のような親水性基材と練合することにより製剤化することができる。乳化剤その他の経皮投与剤も、通常用いられる方法により製剤化することができる。

[0044] 直腸投与には、例えば、坐薬として投与することができる。坐薬は、それ自体は既知の方法により、本発明の放射線治療増感物質を、体温で融解するが室温では固化しているカカオバター、カーボンワックス、ポリエチレングリコールのような賦形剤と混合し、成形することにより製剤化することができる。

[0045] 眼内投与は、点眼剤、眼軟膏等のような眼用製剤等として投与することができる。

点眼剤は、それ自体は既知の方法により、滅菌精製水のような水性溶剤に本発明の放射線治療増感物質を溶解または懸濁し、必要に応じて保存剤、緩衝剤、界面活性剤等を添加することにより製剤化することができる。

[0046] 本発明の放射線治療増感物質の投与条件 (例えば、投与量、投与回数、投与間隔 )は、投与形態、投与経路、対象とする腫瘍の条件 (例えば、腫瘍の種類、存在位置、進行段階)、放射線治療の条件 (例えば、照射線の種類、量、回数)、放射線治療との併用の仕方 (例えば、放射線治療を行う時期と本発明の放射線治療増感剤を投与する順序)等に応じて適宜設定、調節することができる。一例を挙げると、経口投与する場合は、放射線治療増感物質として、 0.001〜100mg/kg体重/日、注射剤として投与する場合は、放射線治療増感物質として、 0.001〜50mg/kg体重/日、経皮投与する場合は、放射線治療増感物質として、 0.001〜100mg/kg体重/日、直腸投与する場合は、放射線治療増感物質として、 0.001〜50mg/kg体重/日、眼内投与の場合は、放射線治療増感物質として、 0.001〜3%程度の溶液を 1日数回に分けて点眼するなどに設定することができる力これらに限定されるものではない。

[0047] 一方、放射線治療では、照射する放射線の種類、量、回数は、従来行われて、る放射線治療と同様の条件とすることができる。従来行われているヒトへの放射線照射の例として、具体的には、医療用放射線、たとえば X線、 γ線、電子線、 j8線のほか π —中間子、中性子やその他の重粒子などの粒子線を、 1回あたり約 0. 1〜： LOOGy の照射量で、合計照射量が約 10〜500Gyとなるように、 1週間〜 6ヶ月の期間にわたって照射するものが挙げられる。代表的なヒトへの照射例としては、 X線を、 1回 2G yを週 5回照射し、約 6週間かけて合計 60Gyを照射するものを挙げることができるが、それに限定されるものではない。例えば、照射量や照射回数を減らすことができる。また、照射方法も原体照射、癌病巣をピンポイントでねらいうちする定位照射、さらには強度変調放射線照射等により行うことができる。カロえて、密封小線源による照射、遠隔 γ線照射、粒子線を用いた照射により行うこともできる。なお、内照射により、 1 回あたりの照射量の増大、および照射期間の短縮ィ匕が可能である。

[0048] 放射線照射と本発明の放射線治療増感剤の投与とは、同時期であっても、いずれかを他方に先行させて行うこともできる。この場合、本発明の放射線治療増感剤は、放射線照射と併用される抗腫瘍剤として、または放射線照射と併用される血管新生抑制剤としてはたらくことが期待される。

[0049] 上述の放射線の照射条件と本発明の放射線治療増感剤の投与条件は、放射線治療の分野で周知のとおり、放射線源の種類、照射方法、照射部位および照射期間；増感剤の種類、投与ルートおよび投与時期；治療すべき疾患および疾患の重症度；照射される被検体の年齢、体重、健康状態、病歴などに依存して、医療従事者その他の専門家により適宜選択することができる。

実施例

[0050] 以下、本発明の実施例を説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。

[0051] <実施例 1 (動物実験） >

(実験例 1 1)

ヌードマウスを 4つの群 (コントロール群;本発明の放射線治療増感剤単独投与群；放射線照射単独群;放射線照射と本発明の放射線治療増感剤投与の併用群;各群は、 4頭）に分け、それぞれの右下肢皮下にヒト舌扁平上皮癌細胞（SAS細胞）を 1. O X 10⁶個 PBS (―)に懸濁して移植し、 10〜14日後、腫瘍体積が約 50mm³〜約 10 Omm³の範囲の所望の値になった時点でそれぞれの群に処理を開始した。なお、放射線治療増感剤としては、 3— O— (6—デォキシ— 6—スルホー a—D—ダルコビラノシル )—l— 0—ステアロイルーグリセロール'ナトリウム塩（以下、「a— SQMG C1 8:0」ともいう）を使用した。放射線照射単独群については、 8Gyの線量で 2回 (試験開始時 (第 0日）と第 6日） X線照射し、 α - SQMG C18:0単独投与群については、 lmgZkgの濃度で 2回 (第 0日と第 6日）腹腔内投与し、併用群に関しては、その両方で処理をした。コントロール群には、放射線照射及び a—SQMG C18:0投与の両者とも行わなかった。その後、 16〜23日間にわたってノギスにて腫瘍の短径及び長径を測り、腫瘍体積を以下の式により計算し、腫瘍成長遅延効果を比較した。

[0052] 体積計算式腫瘍体積 (mm³) = (短径) ² X (長径） X 0. 5

得られた結果を図 1に示す。図 1において、横軸は、処理開始後の日数を表し、縦軸は、腫瘍体積を表す。また、白抜き矢印は、 X線を照射した日を表し、黒ぬり矢印は、 α -SQMG C18:0を投与した日を表す（以下の図 2〜図 7においても同じ)。

[0053] 図 1に示す結果から、 α—SQMG C18:0投与を放射線照射と併用することにより、放射線照射により達成される抗腫瘍効果をはるかに超える抗腫瘍効果が得られた

[0054] (実験例 1 2)

放射線照射を試験開始時 (第 0日）と第 4日に行い、 α -SQMG C18:0の投与を第 0日のみに行い、 26日間に亘つて試験したこと以外は、実験例 1 1と同様の実験を行った。

[0055] 得られた結果を図 2に示す。図 2に示す結果から、 α— SQMG C18:0投与を放射線照射と併用することにより、放射線照射により達成される抗腫瘍効果をはるかに超える抗腫瘍効果が得られた。

[0056] この相乗効果を数値化するために、以下の式により ER (enhancement ratio:増感率 )を算出した。 ERは、文献（Int. J. Radiation Oncology Bio. Phys. Vol.55, No.3, pp.7 13-723 (2003))により規定される値であり、その規定に基づいて以下に ERを説明する。

[0057] ER = NGD ÷ X線単独での TGD

式中、「TGD (tumor growth delay)」は、各試験区において腫瘍体積が一定の大きさに達するまでに要する日数がコントロール区と比較してどれだけ遅れたかを表す。すなわち下記の式で表される。なお腫瘍体積の一定の大きさとは、特別な断りのない限り本発明の実施例においては 500mm³とする。

TGD= (試験区において腫瘍体積が 500mm³になるまでに要する日数）―（コントロール区において腫瘍体積が 500mm³になるまでに要する日数）「NGD (normalized growth delay)」は、次の式で表される。

NGD= (併用での TGD) - (薬剤単独での TGD)

上記文献によれば、上記式により求めた増感率 (ER)が 1. 0を超える場合、抗腫瘍効果が相乗的であるといえる。

[0058] その結果、実験例 1 2の動物実験での増感率 (ER)は 2. 0であり、相乗性が非常に高いことを示している。

[0059] (実験例 1 3)

放射線照射を試験開始時 (第 0日）と第 3日に行い、 α -SQMG C18:0の投与を第 0日力第 4日まで 1日 1回投与し、 35日間に亘つて試験したこと以外は、実験例 1 1と同様の実験を行った。

[0060] 得られた結果を図 3に示す。図 3に示す結果から、 α— SQMG C18:0投与を放射線照射と併用することにより、放射線照射により達成される抗腫瘍効果をはるかに超える抗腫瘍効果が得られた。

[0061] 実験例 1 2に記載の式により求めた、実験例 1 3の動物実験での増感率 (ER) は 3. 0であり、相乗性が極めて高いことを示している。

[0062] (実験例 1 4)

本実験例では、放射線照射を 1回あたり 2Gyの線量で、試験開始時 (第 0日）から第 4日まで毎日行い、 a— SQMG C18:0の投与を第 0日力第 4日まで毎日行った以外は、上記実験例と同様にして実験を行った。以下、その詳細を記す。

[0063] 8週齢のヌードマウスをランダムに 4匹ずつ 4グループに分け、そのそれぞれの右下肢皮下にヒト舌扁平上皮癌細胞（SAS細胞）を 1. O X 10⁶個 PBS (—）に懸濁して移植し、 10日後、腫瘍体積が約 50mm³になった時点でそれぞれの群に処理を開始した。放射線治療増感剤は、上記実験例と同様 α— SQMG C18:0を使用した。放射線照射単独群にっ、ては、 2Gyの線量で試験開始時 (第 0日）から第 4日まで 1日 1 回の計 5回 X線照射した。 α -SQMG C18:0単独投与群については、 lmg/kgの濃度で試験開始時 (第 0日）から第 4日まで 1日 1回の計 5回腹腔内投与した。併用群に関しては、その両方で処理をした。コントロール群には、放射線照射及びひ—SQM G C18:0投与の両者とも行わなかった。その後、 30日間にわたってノギスにて腫瘍の短径および長径を測り、腫瘍体積を以下の式により計算し、腫瘍成長遅延効果を比較した。

[0064] 体積計算式腫瘍体積 (mm³) = (短径) ² X (長径） X 0. 5

得られた結果を図 4に示す。図 4に示す結果から、通常臨床現場で用いられているのと同じ線量（1回当たり 2Gy)を 5回照射し合計照射量を lOGyとした場合にも、放射線照射単独により達成される抗腫瘍効果を上回る抗腫瘍効果があることが分かつた。

[0065] この相乗効果を数値化するために、実験例 1 2に記載の方法と同様に増感率 (E R)を計算した。その結果、 ERは 1. 8となり相乗性が高いことが示された。

[0066] 本実験例を、上記実験例 1 3 (1回当たりの照射量 8Gyを 2回照射し、合計照射量を 16Gyとした実験例）と比較すると、本実験例は、実験例 1—3より 1回の照射量が少なぐかつ合計照射量も少ないが、実験例 1 3と同様に相乗的な抗腫瘍効果が確認された。

[0067] (実験例 1 5)

8週齢のヌードマウスをランダムに 5匹ずつ 4グループに分け、そのそれぞれにヒト食道癌細胞 (TE— 8細胞）を実験例 1— 1と同様に移植した。腫瘍体積が 50mm³になるのを目安に a - SQMG C18:0投与および放射線照射処理を行った。放射線照射単独群は 8Gyの線量で第 0日と第 4日の 2回 X線照射した。 α—SQMG C18:0単独投与群は lmg/kgの濃度で第 0日から第 4日まで 1日 1回の計 5回腹腔内投与した。併用群については、その両方で処理した。コントロール群については、放射線照射、 a - SQMG C18:0投与の両者とも行わなかった。その後、 51日間に亘つて実験例 1 - 1と同様に腫瘍体積を測定した。

[0068] 得られた結果を図 5に示す。図 5に示す結果から、ヒト食道癌に対しても a SQM G C18:0を放射線照射と併用することにより、放射線照射により達成される抗腫瘍効果をはるかに超える抗腫瘍効果が得られた。また、実験例 1 2に記載の方法と同様に増感率 (ER)を求めた。ただし、本実験例では、抗腫瘍効果が高ぐ試験終了までに併用群での腫瘍体積が 500mm³に達しなカゝつたため、腫瘍体積 400mm³に達するまでの日数力増感率を計算した。その結果、 ERは 3. 25であり、相乗性が極めて高いことが示された。

[0069] (実験例 1 6)

ヌードマウスにヒト子宫頸部癌細胞 (HeLa細胞）を移植したこと以外は実験例 1 5 と同様の方法で人癌移植マウスを作成した。腫瘍体積が 100mm³になるのを目安に a - SQMG C18:0投与および放射線照射処理を行った。放射線照射単独群は 8 Gyの線量で第 0日と第 4日の 2回 X線照射した。 a— SQMG C18:0単独投与群は 1 mg/kgの濃度で第 0日から第 4日まで 1日 1回の計 5回と、第 12日から第 16日まで 1 日 1回の計 5回、 2クールに分けて合計 10回を腹腔内投与した。併用群については、その両方で処理した。コントロール群については、放射線照射、 a— SQMG C18:0 投与の両者とも行わな力つた。その後、 35日間に亘つて実験例 1—1と同様に腫瘍体積を測定した。

[0070] 得られた結果を図 6に示す。図 6に示す結果から、ヒト子宫頸部癌に対しても a S QMG C18:0を放射線照射と併用することにより、放射線照射により達成される抗腫瘍効果をはるかに超える抗腫瘍効果が得られた。また、実験例 1 2に記載の方法と同様に増感率 (ER)を求めた。その結果、 ERは 2. 71であり、相乗性が極めて高いことが示された。

[0071] (実験例 1 7)

本実験例では、ヌードマウスにヒト肺癌細胞 (A549細胞）を移植したこと以外は、上記実験例と同様にして実験を行った。以下、その詳細を記す。

[0072] 8週齢のヌードマウスをランダムに 4匹ずつ 4グループに分け、そのそれぞれの右下肢皮下にヒト肺癌細胞 (A549細胞）を 2. O X 10⁶個 PBS (—）に懸濁して移植し、 45 日後、腫瘍体積が約 50mm³になった時点でそれぞれの群に処理を開始した。放射線治療増感剤は、上記実験例と同様 α— SQMG C18:0を使用した。放射線照射単独群については、 4Gyの線量で試験開始時 (第 0日）と第 3日に計 2回 X線照射した。 α—SQMG C18:0単独投与群については、 lmg/kgの濃度で試験開始時 (第 0 日）力第 4日まで 1日 1回の計 5回腹腔内投与した。併用群に関しては、その両方で処理をした。コントロール群には、放射線照射及び a—SQMG C18:0投与の両者とも行わなかった。その後、 20日間にわたってノギスにて腫瘍の短径および長径を測り、腫瘍体積を以下の式により計算し、腫瘍成長遅延効果を比較した。

[0073] 体積計算式腫瘍体積 (mm³) = (短径) ² X (長径） X 0. 5

得られた結果を図 7に示す。図 7に示す結果から、腺癌である肺癌に対しても、 a - SQMG C18:0投与と放射線照射を併用することで、放射線照射単独により達成される抗腫瘍効果を上回る抗腫瘍効果があることが分力ゝつた。

[0074] 本実験例では、併用群において腫瘍の成長が抑制され、腫瘍体積の増大がほとんどみられな力つたため、この相乗効果を数値ィ匕するための増感率 (ER)の値を算出することができない。すなわち、本実験例の結果は、 ER値の算出が不可能なほど、 a - SQMG C18:0投与と放射線照射との相乗効果が高いことを示す。

[0075] このように高、相乗性のある抗腫瘍効果を示す本発明の一般式（1)で表される放射線治療増感剤は、本発明の放射線治療増感物質単独又は放射線照射単独により期待できる抗腫瘍効果と同程度の効果が、より少ない投与量又はより低い総放射線量で達成できることを示している。この結果、本発明の放射線治療増感剤を使用することにより、通常化学療法剤や放射線照射により引き起こされ得るような副作用が出にくいことが期待できる。

[0076] また、上記実験を通じて、ヌードマウスの体重に変化はな力つた。さらに、本発明の放射線治療増感剤をマウスの皮膚に塗布した場合にも、炎症その他の問題はなかつた。さらに、放射線照射による皮膚の炎症も認められな力つた。これらのことからも、本発明の放射線治療増感剤は、副作用が少ないことが推測される。

[0077] なお、上記実施例では、本発明の放射線治療増感剤として、 a— SQMG C18:0 ( 3 -0 - (6—デォキシ一 6—スルホ一 a— D—ダルコビラノシル )一 1— O—ステア口ィル—グリセロール ·ナトリウム塩)を使用した。し力しながら、他の一般式（1)で表される化合物を使用した場合 (例えば、 α—SQMG C18:0のステアロイル基の代わりにミリストイル基ゃパルミトイル基やその他の飽和ァシル基を有する飽和モノァシルグリセリドや、 CH - (CH ) - (CH=CH- CH ) - (CH ) - CO-、 CH - (CH ) - (CH=CH- CH ) -

3 2 3 2 1 2 6 3 2 5 2 1

(CH ) -CO-, CH - (CH ) - (CH=CH- CH ) - (CH ) -CO-やその他の不飽和ァシル基

2 6 3 2 7 2 1 2 6

を有する、不飽和モノァシルグリセリド、これら 6種類のァシル基やその他のァシル基のいずれか 1種又は 2種を有する飽和 Z不飽和ジァシルグリセリドを使用した場合）においても同様又はそれ以上の効果を奏することが期待できる。下記実験例 2— 6乃至 2—12において、 α—SQMG C18:0のステアロイル基の代わりにミリストイル基、パルミトイル基またはォレオイル基を有する場合、ビラノースとグリセロールの結合が a結合の代わりに β結合の場合、モノァシル誘導体の代わりにジァシル誘導体である場合、並びにグルコース以外の糖骨格である場合の一般式（1)の化合物においても放射線治療増感剤としての効果が確認されて、ることから、他の一般式（1)で表される化合物を使用した場合の効果が期待される。

[0078] また、上記実施例において、舌扁平上皮癌、食道癌、子宫頸部癌、肺癌に対する効果を明確にしたが、他の癌 (例えば、前立腺癌、大腸癌、胃癌、乳腺癌、膝癌、肝癌、神経膠癌、頸部腺癌などの腺癌、移行上皮癌、肉腫、黒色腫のような固形癌や、リンパ腫のような液性癌）においても同様又はそれ以上の効果を奏することが期待できる。

[0079] さらに、本発明の放射線治療増感剤の投与量、回数、放射線の種類や照射量、回数、放射線照射と本発明の放射線治療増感剤の投与順についても、上記条件以外の場合においても、適宜変更することにより、同様またはそれ以上の効果を奏することが期待できる。そのような条件設定は、医師その他の医療関係者によって通常行われて、る手法に従、行うことができる。

[0080] <実施例 2 (コロニーアツセィ） >

(実験例 2— 1)

ゥシ血管内皮細胞 (BAEC)を適宜シャーレにまき、 2〜3時間後細胞の接着を確認し、 α - SQMG C18:0単独投与区及び併用区では 10 /z Mの α—SQMG C18 :0で処理した。 24時間後、試験区全ての培地交換を行い、放射線単独照射区及び併用区では ⁶°Coの γ線を 4Gy照射した。 37°Cの COインキュベータ内で 10〜 12日

2

間培養後、形成されたコロニーをホルマリン固定し、クリスタルバイオレット染色液にて染色した。それぞれのプレート上で約 50個以上の細胞力もなるコロニー数を計測し、以下の式により細胞生存率（Surviving fraction;SF)を求めた。

[0081] SF (細胞生存率） =コロニー数 Z 播種細胞数 X (PE/100)

ここで、 PE(plating efficiency)は、コントロールのプレートにおけるコロニー形成率（ %)を表す。

[0082] なお、実験は、 3回行い、それらの平均値を算出した。

[0083] 試験の結果、 α— SQMG C18:0単独投与区及び放射線単独 4Gy照射区の SF 値は、それぞれ 0. 616及び 0. 158であった。これらの SF値から算出される理論的な併用の相加点（α— SQMG C18:0単独投与区の SF X 放射線単独 4Gy照射区の SF値)及び実測された併用区の SF値を図 8に示す。

[0084] 理論的な併用の相加点は 0. 0974であったのに対し、併用区の SF値は 0. 0640となり、理論的な相加点を大きく下回った。

[0085] (実験例 2— 2)

実験例 2— 1で用いた放射線量 4Gyの代わりに 6Gyを照射した以外は、同様の実験を行った。

[0086] 試験の結果、 α— SQMG C18:0単独投与区及び放射線単独 6Gy照射区の SF 値は、それぞれ 0. 616及び 0. 0820であった。これらの SF値から算出される理論的な併用の相加点（α— SQMG C18:0単独投与区の SF X 放射線単独 6Gy照射区の SF値)及び実測された併用区の SF値を図 9に示す。

[0087] 理論的な併用の相加点は 0. 0505であったのに対し、併用区の SF値は 0. 0180となり、理論的な相加点を大きく下回った。

[0088] なお、上記実験例 2— 1及び 2— 2と並行して BAECに対して行ったコロニーアツセィと同じものを SAS細胞についても実施したが、 α—SQMG C18:0による SAS細胞増殖抑制効果は認められな力つた。

[0089] 上記実験例 2— 1及び 2— 2の結果から、血管内皮細胞の増殖抑制に対する α— S

QMG C18:0と放射線の併用による相乗効果が非常に大き!/、ことが示された。

[0090] (実験例 2— 3)

実験例 2— 1で用いた放射線量 4Gyの代わりに 2Gyを照射した以外は、同様の実験を行った。結果を図 10に示す。

[0091] 試験の結果、 Mの α— SQMG C18:0単独投与区及び放射線単独 2Gy照射区の SF値は、それぞれ 0. 9433及び 0. 5957であった。これらの SF値から算出される理論的な併用の相加点は 0. 5620であったのに対し、 α -SQMG C18:0と放射線照射を併用した場合の SF値は 0. 0644となり、理論的な相加点を大きく下回つた。

[0092] (実験例 2— 4)

実験例 2— 3で用いた 10 /z Mの a—SQMG C18:0処理の代わりに 5 Μの α— SQMG C18:0で処理した以外は実験例 2— 3と同様の実験を行った。結果を図 1 1 に示す。

[0093] 試験の結果、 5 Mの α - SQMG C18:0単独投与区及び放射線単独 2Gy照射区の SF値は、それぞれ 1. 0094及び 0. 5957であった。これらの SF値から算出される理論的な併用の相加点は 0. 6012であったのに対し、 5 μ Μの α - SQMG C18: 0と放射線照射を併用した場合の SF値は 0. 1370となり、理論的な相加点を大きく下回った。

[0094] (実験例 2— 5)

本実験例では、上記実験例 2— 1〜実験例 2— 4と同様の手法に従って、種々のコ口-一アツセィを実施した。すなわち、 _a—SQMG C18:0の投与濃度および ⁶°Coの γ線の照射量をそれぞれ、 0〜25 μ Μの範囲および 0〜8Gyの範囲で種々に変更してコロニーアツセィを実施した。

[0095] 結果をまとめて図 12に示す。図 12において「0Gy」、「2Gy」、「4Gy」、「6Gy」および「8Gy」により示される各データは、表示される照射量で ^6QCoの γ線を照射し、 a SQMG C18:0の投与濃度を 0〜25 /ζ Mの範囲で変更した各実験の結果を示す。これら結果より、 α— SQMG C18:0単独による処理では、細胞増殖抑制効果は得られないが、 α— SQMG C18:0の投与を放射線照射と併用すると、放射線照射の細胞増殖抑制効果を増大させることが分力る。

[0096] (実験例 2— 6)

実験例 2— 2で用いた at SQMG C18:0の代わりに 3 O （6 デォキシ 6— スルホ一 at—D—ダルコビラノシル） l— O ミリストイル一グリセロール'ナトリウム塩 (以下、「ひ SQMG C14:0」）を用いたこと以外は同様の実験を行った。結果を図 13に示す。

[0097] 試験の結果、 α— SQMG C14:0単独投与区及び放射線単独 6Gy照射区の SF 値は、それぞれ 1. 0605及び 0. 0674であった。これらの SF値から算出される理論的な併用の相加点は 0. 0715であったのに対し、 α - SQMG C 14:0と放射線照射を併用した場合の SF値は 0. 0109となり、理論的な相加点を大きく下回った。

[0098] (実験例 2— 7)

実験例 2— 2で用いた at SQMG C18:0の代わりに 3— O—（6 デォキシ 6— スルホー a—D—ダルコピラノシル）—l— O—パルミトイルーグリセロール'ナトリウム塩（以下、「ひ SQMG C16:0」）を用いたこと以外は同様の実験を行った。結果を図 14に示す。

[0099] 試験の結果、 α— SQMG C16:0単独投与区及び放射線単独 6Gy照射区の SF 値は、それぞれ 0. 9553及び 0. 0674であった。これらの SF値から算出される理論的な併用の相加点は 0. 0644であったのに対し、 α - SQMG C 16:0と放射線照射を併用した場合の SF値は 0. 0233となり、理論的な相加点を大きく下回った。

[0100] 実験例 2— 6の結果から、血管内皮細胞の増殖抑制に対する a - SQMG C14:0 と放射線の併用による相乗効果が非常に大きいことが示され、実験例 2— 7の結果から、血管内皮細胞の増殖抑制に対する ex - SQMG C16:0と放射線の併用による相乗効果が非常に大きいことが示された。

[0101] (実験例 2— 8)

実験例 2— 1で用いた at SQMG C18:0の代わりに 3— O—（6 デォキシ 6— スルホー a—D—ダルコピラノシル） l— O—ォレオイル一グリセロール'ナトリウム塩 (以下、「ひ—SQMG C18: l」）を用いたこと以外は実験例 2—1と同様の実験を行った。結果を図 15に示す。

[0102] 試験の結果、 α— SQMG C18: l単独投与区及び放射線単独 4Gy照射区の SF 値は、それぞれ 1. 0392及び 0. 1915であった。これらの SF値から算出される理論的な併用の相加点は 0. 1990であったのに対し、 α - SQMG C 18: lと放射線照射を併用した場合の SF値は 0. 0843となり、理論的な相加点を大きく下回った。

[0103] (実験例 2— 9)

実験例 2— 1で用いた at SQMG C18:0の代わりに 3— O—（6 デォキシ 6— スルホ一 β—D—ダルコビラノシル） l— O—ステアロイル一グリセロール'ナトリウム塩 (以下、「j8— SQMG C18:0」）を用いたこと以外は実験例 2— 1と同様の実験を行った。結果を図 16に示す。

[0104] 試験の結果、 β - SQMG C18:0単独投与区及び放射線単独 4Gy照射区の SF 値は、それぞれ 0. 8562及び 0. 1915であった。これらの SF値から算出される理論的な併用の相加点は 0. 1640であったのに対し、 β - SQMG C18:0と放射線照射を併用した場合の SF値は 0. 0922となり、理論的な相加点を大きく下回った。

[0105] (実験例 2— 10)

実験例 2— 1で用いた at SQMG C18:0の代わりに 3— O—（6 デォキシ 6— スルホ一 13—D—ダルコビラノシル） 1 , 2—ジ一 O—ステアロイル一グリセロール' ナトリウム塩 (以下、「j8— SQDG C18:0」）を用いたこと以外は実験例 2—1と同様の実験を行った。結果を図 17に示す。

[0106] 試験の結果、 β - SQDG C18:0単独投与区及び放射線単独 4Gy照射区の SF値は、それぞれ 0. 7190及び 0. 1915であった。これらの SF値から算出される理論的な併用の相加点は 0. 1377であったのに対し、 β - SQDG C18:0と放射線照射を併用した場合の SF値は 0. 0908となり、理論的な相加点を大きく下回った。

[0107] (実験例 2— 11)

実験例 2— 1で用いた at SQMG C18:0の代わりに 3— O—（6 デォキシ 6— スルホ一 a—D—ダルコピラノシル） 1 , 2—ジ一 Ο—ステアロイル一グリセロール' ナトリウム塩 (以下、「α— SQDG C18:0」）を用いたこと以外は実験例 2—1と同様の実験を行った。結果を図 18に示す。

[0108] 試験の結果、 α— SQDG C18:0単独投与区及び放射線単独 4Gy照射区の SF値は、それぞれ 0. 9216及び 0. 1915であった。これらの SF値から算出される理論的な併用の相加点は 0. 1765であったのに対し、 α - SQDG C18:0と放射線照射を併用した場合の SF値は 0. 0882となり、理論的な相加点を大きく下回った。

[0109] (実験例 2— 12)

実験例 2— 1で用いた at SQMG C18:0の代わりに 3— O—（6 デォキシ 6— スルホ一 at—D—マンノピラノシル） l— O—ステアロイル一グリセロール'ナトリウム塩 (以下、「_a—SRMG C18:0」）を用いたこと以外は実験例 2—1と同様の実験を行った。結果を図 19に示す。

[0110] 試験の結果、 α— SRMG C18:0単独投与区及び放射線単独 4Gy照射区の SF 値は、それぞれ 0. 8758及び 0. 1915であった。これらの SF値から算出される理論的な併用の相加点は 0. 1677であったのに対し、 α -SRMG C18:0と放射線照射を併用した場合の SF値は 0. 0784となり、理論的な相加点を大きく下回った。

[0111] 血管内皮細胞は、生体内に発生した腫瘍塊に新たに到達する新生血管を形成する細胞である。新生血管は、これを経由して腫瘍細胞へ栄養と酸素を補給することにより、腫瘍を増殖させていく。したがって、血管内皮細胞の増殖抑制作用は、抗腫瘍効果と密接に結びつくものである。よって、上記コロニーアツセィの結果は、本発明の放射線治療増感剤の抗腫瘍効果を有意に裏付けるものである。

[0112] なお、血管新生を阻害する作用を有する血管新生阻害剤は、耐性獲得が少ない、腫瘍の種類に拘らず均一な効果を持つ、副作用が軽度などの利点があるといわれている。

[0113] く実施例 3 (血管新生キットによるアツセィ） >

血管新生キット（クラボウの「血管新生キット KZ- 1000」）を用いて、 Mの α—S QMG C18:0投与と 4Gyの ⁶°Coの γ線照射との併用による血管新生抑制効果を調ベた。

[0114] 血管新生キットにより得られた結果を画像ソフトにて数値ィ匕し、図 20に示す。

[0115] スラミン (Suramin)という薬剤は血管新生を抑える薬品として既知の物質で、その作用は血管内皮細胞の増殖因子受容体の阻害であることが知られている。本実施例ではスラミンをポジティブコントロールとして 50 μ Μで用いた。

[0116] α -SQMG C18:0単独（管腔形成率 0.7229)では Suramin単独（管腔形成率 0.33

86)に比べ血管新生を阻害する効果はかなり低いが、放射線と併用したとき Suramin 以上に効果が発揮され、相乗的に血管新生を抑制していることが分力つた。

[0117] 上述の通り「理論的な併用の相加点」を掛け算によって算出し、この理論値を実測値と比較する。

[0118] 4Gy+ Suramin 4Gy+ α -SQMG

理論値 0. 219 0. 467 実測値 0. 232 0. 0762

放射線と Suraminを併用した場合の管腔形成率の実測値は、理論値より若干高かつたが、放射線と (X—SQMGを併用した場合の管腔形成率の実測値は、理論的な併用の相加点を大きく下回り、これは、血管新生阻害効果が理論値よりも高いことを示す。

生体内に発生した腫瘍の増殖には、腫瘍細胞へ栄養と酸素を補給するための血管の新生を伴う。したがって、血管新生抑制効果は、抗腫瘍剤効果と密接に結びつくものである。よって、上記実施例 3の結果は、本発明の放射線治療増感剤の抗腫瘍効果を有意に裏付けるものである。

Claims

請求の範囲

[1] 次の一般式（1)

[化 4]

(式中、 R は、高級脂肪酸のァシル残基を表し、 R は、水素原子または高級脂肪

101 102

[2] 前記有効成分が、次の一般式 (2)：

[化 5]

101 102

酸のァシル残基を表す。 )により表される化合物及びその薬学的に許容される塩からなる群力選択される少なくとも 1種の化合物である請求項 1に記載の放射線治療増感剤。

[3] 一般式（2)において、 R が R— CO— (Rは、炭素数 13〜25のアルキル基である。

101

)であり、 R が水素原子または R— CO— (Rは、炭素数 13〜25のアルキル基である

102

。）である、請求項 2に記載の放射線治療増感剤。

[4] 一般式（2)において、 R が R— CO— (Rは、 13〜25の間の奇数の炭素数を有す

101

る直鎖アルキル基である。）である、請求項 3に記載の放射線治療増感剤。

[5] 一般式（2)において、 R が水素原子である、請求項 3に記載の放射線治療増感剤。

[6] 一般式 (2)において、 R が水素原子である、請求項 4に記載の放射線治療増感

102

剤。

[7] 一般式（2)において、 R 力 — CO— (Rは、炭素数 13〜25のアルキル基である。

102

)である、請求項 3に記載の放射線治療増感剤。

[8] 一般式（2)において、 R 力 — CO— (Rは、炭素数 13〜25のアルキル基である。

102

)である、請求項 4に記載の放射線治療増感剤。