WO2005121123A1

WO2005121123A1 - Composes utilises comme antagonistes de ccr5

Info

Publication number: WO2005121123A1
Application number: PCT/CN2005/000659
Authority: WO
Inventors: Gang Pei; Dawei Ma; Li Chen; Shanghai Yu; Ben Li; Fang Dong; Yanhui Lv; Renhai Chen; Jin Zhang
Original assignee: Shanghai Target Drug Co., Ltd.
Priority date: 2004-06-09
Filing date: 2005-05-12
Publication date: 2005-12-22
Also published as: CA2569861A1; IL179888A0; US20070161634A1; EP1760079A1; EP1760079A4; CN1706824A; BRPI0511999A; AU2005251850B2; ZA200610300B; JP2008501732A; CN1329374C; CA2569861C; AU2005251850A1

Description

作为 CCR5拮抗剂的化合物技术领域

本发明涉及作为 CCR5拮抗剂的化合物 (吡咯衍生物)，及其制法和用途。背景技术

趋化因子是一类引导淋巴细胞定向迁移的细胞因子，在炎症反应、白细胞外渗、组织浸润、肿瘤发生、胚胎发育中有重要的作用。趋化因子属于分泌型信号分子大家族，分子量大约 8至 14kD。目前这一家族大约有 45个成员，它们的共同特征是：含有四个位置保守的半胱氨酸 (Cys)。根据其靠近 N端的两个 Cys间是否含有其它氨基酸，这一家族被分为四类： c- c, c-x- C, C- X₃- C， C。其中， CC类（又称 β-趋化因子）和 cxc类（又称 -趋化因子）是最主要的两类。

体内趋化因子的功能是通过趋化因子受体介导的。趋化因子受体的目前标准的命名是根据其特异结合的趋化因子的特征 (例如，若其配基是 CC类趋化因子亚家族，则它就被命名为 CCR)。趋化因子的受体属于 7次跨膜的 G蛋白偶联受体家族（GPCR)，这类受体 N端在细胞外， C端在细胞内，含有七个非常保守的由 a螺旋构成的跨膜区域。它们在与激动剂结合时能偶联到 G蛋白上，从而使细胞外的信号得以传递到细胞内。在激动剂的作用下，趋化因子受体能引起一系列的胞内信号及改变细胞的行为，如抑制腺苷酸环化酶 (AC) , 动员细胞内钙释放，激活一系列的蛋白激酶，引导细胞定向迁移（趋化），影响细胞因子的释放等。

目前发现的趋化因子受体有 19个，它们是 CCR1-11 , CXCR1-6, XCRl , CX₃CR1。趋化因子受体被认为是炎症反应和自身免疫性疾病的重要介导者（Gerard et al. , Nat Immunol, 2, 108-15 (2001) ) , 因此，趋化因子受体的调节剂（包括激动剂和拮抗剂）能够用于多种疾病，如炎症或过敏性疾病，过敏反应、自身免疫性疾病、炎症性肠道疾病、硬皮病、嗜酸细胞性肌炎、肿瘤发生和转移等。

作为趋化因子受体家族一成员的 CCR5 , 其内源性激动剂有 RANTES、 MIP- Ice和 ΜΙΡ-Ιβ, 它表达于外周血来源的树突状细胞， Τ淋巴细胞，单核细胞，巨噬细胞以及参与维持长期炎症反应的免疫细胞和炎症细胞。因此，调节 CCR5的功能可能调节 Τ细胞向炎症反应损伤处的募集，从而为治疗炎症反应和自身免疫性疾病提供了一个新的靶点，例如， CCR5缺失使得小鼠免于 DSS诱导的严重的炎症及粘膜的损伤（Andres et al. , J Immunol. , 164, 6303-12 (2000) )；在小鼠上， CCR5的小分子拮抗剂 TAK- 779抑制了胶原诱导的关节炎（Yang et al. , Eur J Immunol. , 32, 2124-32 (2002) )。所以， CCR5 的拮抗剂可用于下述疾病的治疗：哮喘和局部紊乱（如局部性皮炎，局部过敏），风湿性关节炎，动脉硬化，牛皮癣，肉状瘤症和其它纤维化疾病，自身免疫性疾病（如多发性硬化症，炎症性肠炎）。此外，由于 CD⁸⁺T细胞与慢性梗阻性肺病（C0PD)有关（Cosio et al. , Chest, 121， 160S-165S, (2002) ) , 因此， CCR5的拮抗剂还可能用于 C0PD的治疗。

除了在炎症和免疫反应中的作用，趋化因子受体还可能是某些寄生虫和病毒入侵细胞的重要受体。例如， Duffy受体是疟原虫进入红细胞的受体，缺少 Duffy受体的人群不容易患上疟疾。更为重要的是，有几个趋化因子受体参与了 HIV的入侵，被称为 HIV 的共受体。

研究表明， Th细胞上的 CD4分子对于 HIV的侵入必不可少，但仅 CD4不足以介导 HIV与细胞的融合。进一步的研究发现，另外的被称为 HIV侵入共受体的分子是趋化因子受体中的 CCR5， CXCR4, CCR2b, CCR3, CCR8 及孤儿受体 V28, STRL-33, GPRl, GPR15, APJ (Doms et al. , virology, 235, 179 - 90, (1997) )。在体内， CCR5及 CXCR4是 HIV 进入的主要共受体， CCR3也可能参与了一部分 ΗΠ的进入。 CCR5是巨噬细胞向型 (M- 向性) HIV-1的共受体而 CXCR4是 T细胞向性（T-向性）的 HIV- 1 的共受体。因此， CCR5 对 HIV的传播起重要作用，调节 CCR5的物质能影响 M向性 HIV- 1在人群中的传播及把疾病控制在早期。在体外实验中发现与能 CCR5结合的趋化因子 RANTES, MIP- loc及 MIP - 1β 都能通过抑制 Μ向性的 HIV 1进入细胞从而抑制 HIV感染。一些能与 CCR5结合及拮抗 CCR5功能的小分子化合物也在体外非常有效地抑制 HIV侵入细胞。

综上所述，本领域迫切需要开发作为具有潜在药物用途的 CCR5拮抗剂的化合物。发明内容

本发明的目的就是提供一类作为 CCR5拮抗剂的化合物。

本发明的另一目的是提供所述化合物的制法和用途。在本发明的第一方面，提供了一种式 I化合物或其药学上可接受的盐:

式中，为未取代的或被 1-3个取代基取代的下列基团：苄基、苯甲酰基、环己基甲酰基、环戊基甲酰基、苯磺酰基、或萘甲酰基，所述的取代基选自卤素、 C1-C4烷基、 C1-C4烷氧基；

^为羟基、苯甲羧基、苯氧基、苯硫基、苯胺基或苯磺酰基，所述基团中苯环可被 1-3个选自下组的取代基取代：卤素和 C1-C4烷基；为氢、 C_rC₄烷基，

3]-二氧五环 -4基)，所述基团中苯环可被 1-3个选自下组的取代基取代：卤素和 C1-C4烷基；

R₄为无、 H或羟基；

R₇为氢， C1-C6烷基或苯基；

X为无、 0、或 C;

条件是 X为无或 0时， R₄、 R₅、和不存在；

当 X为 C时， Y是 N，为 - 0₆垸基或烯丙基，且^为对硝基苄氧羰基、苄氧羰基、对 ¾素苄氧羰基、对甲氧基苄氧羰基、对甲基苄氧羰基、对三氟甲基苄氧羰基、 N-苯基甲酰胺基、苯氧乙酰基、 3,4-二氧亚甲基苄氧羰基、对氨基苄氧羰基、苯磺酰基、对甲基苯磺酰基，或者 R₅、 1 ₆和 Y—起构成苯基或 -R₈-苯基，其中是01 4的亚垸基。一类较佳的化合物中， ^为苄基、苯甲酰基、邻卤代苯甲酰基、环己基甲酰基，环戊基甲酰基，苯磺酰基，萘甲酰基。

另一类优选化合物中，为羟基、苯甲羧基、苯氧基、苯硫基、苯胺基或苯磺酰基。另一类优选化合物中， R₃为氢、 ₄垸基、苯基、

另一类优选化合物中， X为无或◦，且 R₄、 R₅、和¥不存在。

另一类优选化合物中， X为 C, 且 Y是 N，为基或烯丙基， R₆为对硝基苄氧羰基、苄氧羰基、对卤素苄氧羰基、对甲氧基苄氧羰基、对甲基苄氧羰基、对三氟甲基苄氧羰基、 N-苯基甲酰胺基、苯氧乙酰基、 3,4-二氧亚甲基苄氧羰基、对氨基苄氧羰基、苯磺酰基、对甲基苯磺酰基或者 R₅、和 Y—起构成苯基、 -CH₂CH₂CH₂-苯基。

另一类优选化合物中， R₇为氢， C1-C3烷基或苯基。

另一类优选的化合物是式 ΙΠ所示的化合物：

R₃为氢、垸基，

所述基团中苯环可被 1-3个选自下组的取代基取代：卤素和 C1-C4烷基；

R₆为对硝基苄氧羰基、苄氧羰基、对卤素苄氧羰基、对甲氧基苄氧羰基、对甲基苄氧羰基、对三氟甲基苄氧羰基、 N-苯基甲酰胺基、苯氧乙酰基、 3,4-二氧亚甲基苄氧羰基、对氨基苄氧羰基、苯磺酰基、对甲基苯磺酰基。

特别优选的化合物是表 I所列的化合物。

在本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，它含有药学上可接受的载体和式 I 化合物。

在本发明的第三方面，提供了一种本发明式 I化合物的用途，用于制备药物，尤其是用于治疗 HIV感染、哮喘、风湿性关节炎、自身免疫性疾病、慢性梗阻性肺病 (COPD)。

在本发明的第四方面，提供了式 Π所示的制备本发明化合物的中间体：

R₃为氢、 C C₄烷基，

所述基团中苯环可被 1-3个选自下组的取代基取代：卤素和 C1-C4烷基

R₇为氢， C1-C6烷基或苯基。具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，根据 CCR5的结构特点，设计和合成了一类吡咯衍生物，测试结果表明这些化合物是有效的 CCR5拮抗剂。在此基础上完成了本发明。本文所用的术语 "烷基"指直链或支链饱和的、含有 1-8个碳原子 (较佳地 1-6个碳原子）的脂族烃类基团； "链烯基"包括含有至少一个碳碳双键和 2- 8个碳原子（较佳地 2- 6个碳原子）的直链和支链烃基； "炔基 "包括含有至少一个碳碳三键和 2 8个碳原子 (较佳地 2- 6个碳原子）的直链和支链烃基。

本文的术语"芳基"指芳族体系，可以是单环或原本稠合的或连接在一起的多芳环，从而使至少一部分稠合或连接的环形成共轭的芳系。芳基基团包括（但不限制于）：苯基、萘基、四氢萘基。

本文所用的术语 "杂环"指稳定的 4-7元单环或稳定的多环杂环，该杂环可以是饱和的、部分不饱和的或不饱和的，且由碳原子和选自以下的 1-4个杂原子构成： N、 0和 S 原子。 N和 S原子可以被氧化。杂环还可包括任何多环，其中任一上述杂环可稠合于芳环。

术语 "取代的芳基"或 "取代的杂环"指被 1-4个选自下组的基团所取代的芳基或杂环：卤素、 CN、 0H、 N0₂、氨基、烷基、环烷基、链烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、垸基氨基或芳硫基。较佳地，取代基是卤素、 C1- C4垸基。

"卤素"指F、 Cl、 Br、或 I。

本发明的化合物可以以由药学上或生理学可接受的酸或碱衍生的盐形式使用。这些盐包括（但不限于）与如下无机酸形成的盐：如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、以及与有机酸形成的盐，而有机酸则指乙酸、草酸、丁二酸、酒石酸、甲磺酸和马来酸。其他盐包括与碱金属或碱土金属（如钠、钾、钙或镁)形成的盐，以酯、氨基甲酸酯或其他常规的"前体药物" 的形式（当以这种形式给药时，在体内可转化成活性部分）。

本发明还包括药物组合物以及治疗方法，它包括给哺乳动物施用药物有效量的式 I 化合物。本发明的化合物可用于治疗： HIV感染、哮喘和局部紊乱（如局部性皮炎、局部过敏）、风湿性关节炎、动脉硬化、牛皮癣、肉状瘤症和其它纤维化疾病、自身免疫性疾病（如多发性硬化症、炎症性肠炎）、慢性梗阻性肺病 (COPD)。

当化合物用于上述用途时，它们可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合，如溶剂、稀释剂等，而且可以用如下形式口服给药：片剂、胶囊、可分散的粉末、颗粒或悬浮液（含有如约 0. 05-5%悬浮剂）、糖浆（含有如约 10- 50%糖）、和酏剂（含有约 20- 50%乙醇），或者以无菌可注射溶液或悬浮液形式（在等渗介质中含有约 0. 05- 5%悬浮剂）进行非肠胃给药。例如，这些药物制剂可含有与载体混合的约 25- 90%，通常约为 5%-60% (重量）的活性成分。

所用的活性成分的有效剂量可随所用的化合物、给药的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。然而，通常当本发明的化合物每天以约 0. 5- 500mg/kg动物体重的剂量给予时，能得到令人满意的效果，较佳地每天以 2- 4次分开的剂量给予，或以缓释形式给药。对大部分大型哺乳动物而言，每天的总剂量约为 1- 100mg，较佳地约为 2- 80mg。适用于内服的剂量形式，包含与固态或液态药学上可接受的载体密切混合的约 0. 5- 500mg的活性化合物。可调节此剂量方案以提供最佳治疗应答。例如，由治疗状况的迫切要求，可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。

这些活性化合物可通过口服以及静脉内、肌内或皮下等途径给药。固态载体包括：淀粉、乳糖、磷酸二钙、微晶纤维素、蔗糖和白陶土，而液态载体包括：无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油（如玉米油、花生油和芝麻油），只要适合活性成分的特性和所需的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，例如调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素 E、维生素 (、 BHT和 BHA

从易于制备和给药的立场看，优选的药物组合物是固态组合物，尤其是片剂和固体填充或液体填充的胶囊。化合物的口服给药是优选的。

这些活性化合物也可肠胃外或腹腔内给药。也可在适当混合有表面活性剂（如羟丙基纤维素）的水中制备这些活性化合物（作为游离碱或药学上可接受的盐）的溶液或悬浮液。还可在甘油、液体、聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散液。在常规储存和使用条件下，这些制剂中含有防腐剂以防止微生物生长。

适应于注射的药物形式包括：无菌水溶液或分散液和无菌粉 (用于临时制备无菌注射溶液或分散液）。在所有情况中，这些形式必须是无菌的且必须是流体以易于注射器排出流体。在制造和储存条件下必须是稳定的，且必须能防止微生物（如细菌和真菌）的污染影响。载体可以是溶剂或分散介质，其中含有如水、醇（如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇）、它们的适当混合物和植物油。

本发明的化合物可用下列所示流程进行制备- 流程 I

β -丙胺酸化合物 1在甲醇和二氯亚砜中回流上甲酯，再用两分子苄溴在碳酸钾作碱乙腈中保护氨基得化合物 2。保护的 β -丙氨酸酯 2与酮酸酯 3进行 Aldol缩合得到两组对映异构体 4

4 (+/-) cis + (+/-) trans

得到的缩合产物催化氢化掉一个苄基后关五元内酰胺环得到两组顺反异构体 5。接下来用强碱 (氢氧化钠或氢氧化钾)皂化分子中的甲酯为反式酸 6

trans (+/-) trans 5

与胺化合物在缩合试剂存在下缩合就得到酰胺化合物 7。最后用锂铝氢还原就得到目标化合物 8。

流程 II：

流程 I中得到的化合物 8经催化氢化掉苄基后与酰氯进行反应得到化合物 9。

流程 III :

流程 I中酸 6与胺化合物 11在缩合试剂作用下缩合得到化合物 12，锂铝氢还原分子中的酰胺键得到化合物 13，再与 R₆C1反应的到化合物 14

流程 IV：

流程 I中的酸 6在缩合试剂存在下与水合哌啶酮盐酸盐缩合的酮化合物 15，锤铝氢还原得醇化合物 16， Swern氧化醇为酮化合物 17，再与胺 R₅XH在醋酸钠硼氢存在下缩合，最后与 R₆C1反应得到化合物 18。

流程 v_:

流程 IV中的醇化合物 16中的仲醇用乙酯保护得化合物 19，催化氢化掉分子中的苄基，得到化合物 20，再与 R_tCl反应得化合物 21，化合物 21在碳酸钾甲醇中脱区仲醇上的保护基得到化合物 22， Swern氧化仲醇为酮 23, 再与胺 R₅C1在醋酸钠硼氢存在下縮合，

流程 VI：

流程 I中化合物 8用甲磺酰活化分子中的羟基为甲磺酰酯，再与 R₂H进行取代得到化合物 25。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例 1化合物 I-a-a: 1-苄基 -3-(3a,7_a-二氢苯并【1 , 3]二氧五环 -5-位) -4-(4-苯基哌啶 -1-亚甲基)吡咯 -3-醇

按照流程 I，冰浴下将 S0C1₂ (10 nil)滴入 β _丙氨酸盐酸盐（7. 05 g)的甲醇（40 ml)溶液后升温回流 3 h，冷却后旋干溶剂，抽干，加入 K₂C0₃ (38 g)和 150 ml乙氰溶液搅拌，加入 22 ml苄溴室温搅拌 20h, 加水把碳酸钾溶解，乙酸乙酯萃取两次，食盐水洗， Na₂S0₄ 干燥，过滤浓缩，柱层析，得到 N， N-二苄基 -丙氨酸甲酯（14. 9 g〉，收率 93. 61

¾ NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 7. 27 (ra， 10 H)， 3. 56 (s, 3H) , 3. 51 (s， 4H)， 2. 74 (t, / = 6. 9 Hz, 2H) , 2. 45 (t, 2H) .

4-苯并 [1， 3]二氧五环- 1-苄基 -4-轻基- 5-氧基吡咯- 3-羧酸甲酯先将反应体系无水操作，氮气保护下 0 °C向 1.09 ml (iPr)₂NH的 7 ml THF溶液中滴加 4.5 ml 1.6 M的丁基锂正己烷溶液，搅拌 10 min冷至 -78 °C,滴加 N， N 二苄基 e -丙氨酸甲酯（1.00 g, 3.53 讓 ol)的 40 ml THF溶液后搅拌 lh，再滴加反应物苯并 [1， 3]二氧五环- 4-乙酮酸酯的 5 ml THF溶液， -78 °C反应 4 h。用饱和 NH₄C1水溶液淬灭，用（60X2)乙酸乙酯萃取，水洗，食盐水洗， Na₂S0₄干燥，过滤浓缩后柱层析，用（乙酸乙酯：石油醚 =1:13)过柱得一固体化合物（0.654 g)和一液体化合物（0.653 g)，总收率 73.3%。液体化合物（3.197 g)溶于 250 ml MeOH中，加入 0.32 g Pd/C,室温一个气压氢气下反应 3 h，过滤，旋干甲醇，先用（乙酸乙酯：石油醚 = 1:4)过下未反应的原料 1.065 g,再用（乙酸乙酯: 石油醚 = 1:2)过柱得到白色固体 0.935 g,转化率 59.8%。

IR (KBr) 3332, 2962, 2916, 1725, 1683, 1504, 1492 cm-¹;

¾ NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 7.27-7.41 (m, 5H), 6.76-6.94 (m, 3H), 5.97 (s, 2H), 4.65 (d, J_AB= 14.7 Hz, 1H), 4.55 (d, J_AB = 14.7 Hz, 1H) , 3.90 (s， 1H) , 3.70 (s, 3H)， 3.62 (m, 1H) , 3.31-3.38 (m, 2H) .

ESI- MS m/z 392 (M+ + Na⁺) .

计算值：（^Hw^Os: C, 65.03; H, 5.18; N， 3.79; 测量值： C, 65.11; H, 5.18; N,

3.74.

4 -苯并 [1， 3]二氧五环 -1-苄基- 4-羟基- 5-氧基吡咯 -3-羧酸

向上面得到的甲酯化合物的甲醇溶液中加入 1.4当量 1 N的 NaOH水溶液，室温反应到原料消失，旋千甲醇，加水用 1N的 HC1水溶液中和至 pH = 3，用乙酸乙酯萃取两次，水洗，食盐水洗至中性， Na₂S0₄干燥，过滤浓缩得到固体化合物。

IR (KBr) 3267, 2887, 1713, 1688， 1501, 1487, 1254, 1299 era一¹;

EI-MS m/z (%) 355 (M⁺， 54.49), 337 (2.76), 282 (3.64), 190 (6.62), 149 (100)， 119 (19.60), 91 (41.13)；

¾ NMR(DMS0 d„ 300 MHz) δ 12.45 (s， 1H) 7.41-7.30 (m， 5H), 6.94-6.86 (m, 3H)， 6.44 (s, 1H), 6.019 (s, 2H) , 4.46 (d, J_AB = 15.3 Hz, 1H), 4.44 (d, J_AS= 15.0 Hz, 1H), 3.58 (m， 1H), 3,37 (m, 2H)。

3 -苯并 [1， 3]-二氧五环 -1-苄基- 3-经基- 4- (4_苯基哌啶基- 1-羰基）吡咯^ M 0°C氮气保护下向上面羧酸化合物（0.238 g， 0.67 mmol)和氮羟基琥珀酰亚胺（0.085 g， 0.74 mmol)的 20 ml THF溶液中加入 DCC (0.152 g ， 0.74 mmol)自然升温过夜，滤去固体并加入 4-苯基哌啶，室温反应 12 h, 旋干 THF，加水和乙酸乙酯分液，有机相用食盐水洗，干燥。过滤浓缩，用（EA:PE = 1:1) 过柱得到白色固体（0.152 g)收率 45%。

IR (KBr) 3325, 2921， 1695, 1682, 1492, 1442 cm"¹;

¾ NMR (CDC1₃， 300 MHz) δ 7.31-7.20 (m, 8H)， 7.12 (d, 2H), 6.98-6.78 (m, 3H) , 5.97 (s, 2H), 4.76 (m, 2H) , 4.51 (d, J_AB = 14.7 Hz, 1H) ' 3.76—3.67 (m, 2H)， 3.54 (dd， 1H), 3.38—3.30 (m, 1H) , 3.07-2.98 (m, 1H) , 2.71—2.60 (m, 2H) , 1.88-1.84 (m, 2H)， 1.66-1.53 (m, 2H) .

EI-MS m/z (%) 498 (M⁺, 12.79) , 480 (67.79), 352(100), 283 (70.60), 189 (95.24), 160 (55.04)；

计算值： C₃。H₃。N₂0₅: C， 72.27; H, 6.06; N, 5.62. 测量值： C, 72.00; H, 5.94; N, 5.56.

1-苄基 - 3_ (3a, 7a -二氢苯并 [1， 3]二氧五环- 5-位） -4- (4-苯«啶- 1 -亚甲基）吡咯 - 3 -醇（I- a-a)

0 °M LiAlH₄ (8 eq) 加入上面化合物（1 eq) 的 THF溶液后，升温回流 24h，冷却， 0。C滴加 10%NaOH水溶液淬灭，过滤，旋干 THF，加乙酸乙酯溶解，食盐水洗，干燥。过滤浓缩并用（EtOAc： Et₃N=10: 1)过柱得油状物，收率 90%。

IR (KBr) 2935, 1503， 1486 cm—¹;

¾ NMR (CDC1₃ 300M Hz) δ 7.32-7.05 (m, 12H), 6.69 (d, / = 8.1 Hz, 1H) , 5.87 (s, 2H)， 3.61 (s, 2H), 2.96-2.88 (m, 3H)， 2.82-2.75 (m, 2H ) ' 2.61-2.53 (m, 2H) , 2.37-2.32 (m, 4H), 2.08—1.99 (m, 2H), 1.76-1.67 (m, 3H)；

ESI— MS m/z 471 (M⁺ + H⁺), 493 ( ⁺ + Na⁺). 实施例 2 化合物 I-a-b: 1-苄基 -3-(3a,7a-二氢苯并 [1， 3】二氧五环 -5-位) -4-(4-哌啶 -1- 亚甲基)吡咯 -3-醇

按照制备化合物 I- a- a相同的方法，将 4-苯基哌啶换成哌啶即可以得到化合物 I_a -

IR (film) 2933, 1504， 1486 cm—¹;

¾ NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 7.38-7.16 (m, 5H)， 7.12 (d， /= 1.8 Hz, 1H) , 7.04 (dd, /= 8.1 Hz 1.8 Hz, 1H)， 6.68 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.87 (s, 2H), 3.58 (s, 2H), 2.86 (t, 2H)， 2.76— 2.64 (m, 2H) , 2.53 (m, 1H), 2.31—2.24 (m, 2H) , 2.14 (ra, 4H), 1.60-1.22 (m, 5H)， 1.21-1.15 (m, 2H).

EI-MS m/z (%) 394 (M⁺, 1.5), 277 (100), 98 (95.8)， 91 (93.2) ;

HRMS Calcd. for C₂₄H₃₀N₂0₃ (M 3942256, 测量值： 394.2228. 实施例 3化合物 I-a-c: 1-节基 -3-(3a，7a-二氢苯并 [1， 3]二氧五环 -5-位) -4-(4-吗啡啉-

1-亚甲基)吡咯 -3-醇

按照制备化合物 I-a- a相同的方法，将 4-苯基哌啶换成吗啡啉即可以制得化合物 1-

IR (film) 3370， 2926, 1504, 1487 cm"¹;

¾ NMR (CDC1₃， 300 MHz) δ 7.34-7.15 (m， 5H) , 7.09 (d， J=l.5 Hz, 1H) , 7.02

(dd, J = 7.8 Hz and 5 Hz, 1H), 6.68 (d, / = 7.8 Hz, 1H) , 5.87 (s， 2H), 3.58 (s， 2H), 3.56-3. 9 (m, 4H)， 2.88-2.83 (m, 2H) , 2.78-2.71 (m, 2H), 2.60-2.50 (m, 1H), 2.35-2.29 (m, 2H), 2.20- 2.15 (m， 4H) , 1.53—1.47 (m, 1H) .

EI-MS m/z (%) 396 (M⁺， 7.1)， 378 (1.4), 278 (51.7), 1656 (100), 91 (78.7) ; HRMS Calcd. for C₂₃H₂₈N₂0₄ (M⁺) 396.2049, 测量值： 396.2006. 实施例 4化合物 I-a-d: 1-节基 -4-二乙胺基甲基 -3-(3_a,7a-二氢苯并 [1， 3]二氧五环 -5- 位)吡咯 -3-醇

按照制备化合物 I- a- a相同的方法，将 4-苯基哌啶换成乙二胺即可以制得化合物 I- IR (film) 3314, 2931, 1665, 1487, 1452 cm"¹;

¾ NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 7.31-7.17 (m, 5H), 7.11-7.02 (m, 2H)， 6.70—6.67 (m,

1H),

5.87 (s， 2H), 3.64-3.58 (m， 3H), 2.86—2.76 (m, 4H), 2.46—2.35 (ra， 4H),

2.21-2.14 (m, 2H), 1.58-1.49 (m, 1H) , 1.28-1.13 (m, 6H)；

EI-MS m/z (%) 382 (M⁺, 2.1), 91 (77.3), 56 (100)；

画 S Calcd. for C₂₃H₃₀N₂0₃ (M⁺) 382.2256, found: 382.2296. 实施例 51- b- a ： 1-苄基 -3-苯基 -4- (4-苯基哌啶甲基）吡咯 -3 -醇

按照制备化合物 I-a- a相同的方法，将苯并 [1， 3]二氧五环 4-乙酮酸乙酯换成苯乙酮酸乙酯即可以制得化合物 I- b-a。

¾ NMR (CDCI3, 300M Hz) δ 7.69-7.61 (m, 2Η) , 7.37-7.13 (m, 13H), 3.67 (s, 2H), 3.01-2.81 (m, 4H) , 2.65 (ra, 1H)， 2.57—2.52 (m, 1H), 2.46-2.35 (m， 2H)， 2.08-2.02 (m, 2H) , 1.80—1.69 (m, 4H), 1.51-1.41 (m, 2H)；

EI-MS m/z (%) 427 (M⁺ + 1， 0.79), 336 (3.81), 293 (43.34), 252 (19.54), 233 (95.09)， 200 (14.97), 174 (97.91), 91 (100)；

HRMS Calcd. for C₂₉H₃₄N₂0 (M⁺) 426.2671, 测量值： 426.2657. 实施例 6化合物 I-b-b: [3-羟基- 3-苯基 -4- (4-苯基哌啶甲基)吡咯基]苯甲酮按照流程 II，将化合物 I- b-a(0.4 g)溶于 30 ml甲醇中，加入 50 mg Pd/C, 一个大气压氢气下反应 12 h后过滤，旋干甲醇。取此产物 96 mg溶于 2 ml二氯甲烷（无水处理），氮气保护下加入 0.059 ml三乙氨， 0 °C滴加 0.04 ml苯甲酰氯的 1 ml二氯甲烷溶液，自然升温反应 4 h后加水分液，食盐水洗，干燥，过滤浓縮，先用（EA:PE = 1:2) 过柱，再用（EA:PE:Et₃N = 1:1:0.5) 过柱得到固体（65 mg)，收率 52%。

IR (KBr) 3269, 3028, 2922, 2808, 1723， 1592, 1571, 1453, 1381， 1247 cm"¹; ¾ NMR (CDCI3, 300 MHz), δ 7.61-6.91 (m, 15H), 4.1 -3.92 (m， 2H)， 3.79- 3.64 (ra, 2H), 3.18 3.18 (m, 1H), 3.05-2.96 (m, 1H) , 2.87-2.78 (m, 2H) , 2.65- 2.59 (m, 1H)， 2.53-2.43 (m, 2H), 2.29—2.05 (m, 2H), 1.88—1.73 (m, 4H)；

EI-MS m/z (%) 440 (M⁺， 0.93), 401 (5.42), 292 (16.12), 200 (12.45)， 186 (35.38)

174 (100), 160 (7.34);

HRMS Calcd. for C₂₉H₃₂N₂0₂ (M⁺) 440.2463, 测量值： 440.2448. 实施例 7化合物 I- b- c: [3-轻基- 3-苯基- 4- (4-苯基哌啶甲基）吡咯基]邻碘苯甲酮按照制备化合物 Ι-b-b相同的方法，将苯甲酰氯换成邻碘苯甲酰氯即可以制备化合物 I- b_c。

IR (KBr) 3027, 2933, 2808, 1732, 1634, 1440, 1425, 1248, 762, 699 cm^-1; ¾ NMR (CDCI3300 MHz) δ 7.89-7.79 (ra, 1H) , 7.62-7.59 (m, 1H)， 7.54-7.46 (m, 1H)， 7.46-7.17 (m， 11H), 4.10—4.02 (m, 1H), 3,97-3.93 (m, 1H), 3.59 (m, 1H) , 3.40 (m, 1H)， 3.14 (m, 1H) ' 3.00 (m, 1H)， 2.85-2.79 (m, 2H) , 2.63-2.44 (m, 3H)， 2.29-2.04 (ra, 2H) , 1,89—1.74 (m, 4H)；

EI-MS m/z ( ) 566 (M+， 0.37), 565 (0.40), 406 (0.68), 355 (0.5)， 231 (8.77), 174 (100), 160 (3.43), 105 (5.04), 91 (3.57). 实施例 8化合物 I- b-d: 1-苯磺酰基- 3-苯基 -4- (4-苯基哌啶甲基）吡咯 -3 -醇按照制备化合物 I-b-b相同的方法，将苯甲酰氯换成苯磺酰氯即可以制备化合物 I - b-d。

IR (KBr) 3496, 3062, 2933, 2812, 1737, 1494, 1447, 1345, 1247, 1168 cm—¹; ¾ NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 7.83 (d, / = 8.7 Hz, 2H)， 7.57—7.47 (m, 3H),

7.34-7.07 (m, 10H), 3.64 (d, J_AB = 10.8 Hz, 1H) , 3.60—3.58 (m, 1H)， 3.43 (d, J_AB = 10.8 Hz, 1H), 3.32 -3.27 (q, 1H)， 2.76 (d, 1H)， 2.68 (d, 1H)， 2.42-2.30 (m， 4H), 2.07-1.94 (m， 2H) , 1.74-1.59 (m, 4H)；

EI-MS m/z ( ) 477 (M⁺ + 1， 0.33), 336 (25.49), 335 (100), 174 (83.55), 160 (3.01). 实施例 9化合物 I- b- e: 环戊基 -[3-羟基 -3_苯基- 4- (4 -苯基哌啶- 1-亚甲基）吡咯- 1-位]甲酮

按照制备化合物 I-b-b相同的方法，将苯甲酰氯换成环戊基甲酰氯即可以制得化合物 I- b_e。

IR (KBr) 3276, 2953, 1608, 1493, 1453, 1381 cm"¹；

¾ NMR (CDC1₃， 300 MHZ) δ 7.58 (m, 2H)， 7.39 (m， 2H)， 7, 31 (m, 2H) , 7.20 (m, 2H), 3.90-3.70 (m, 4H) , 3.14—3.05 (m, 1H) , 2.88—2.69 (m, 3H)， 2.60-2.44 (m_; 3H), 2.29-2.14 (m, 2H) , 1.91-1.71 (m, 10H), 1.62-1.54 (m, 2H)：

EI-MS m/z (%) 432 (M⁺， 0.56)， 292 (2.48)， 174 (100)：

HRMS Calcd. forC_2SH₃₆N₂0₂ (M+) 432.2776, 测量值： 432.2800. 实施例 10 化合物 I_b- f: 环己基 - [3-羟基- 3-苯基- 4- (4-苯«啶- 1-亚甲基）吡咯- 1-位]甲酮

按照制备化合物 I- b-b相同的方法，将苯甲酰氯换成环己基甲酰氯即可以得到化合物 I- b-f。

IR (KBr) 3253, 2939, 2850, 1606, 1493, 1453, 1398 cm"¹;

¾ NMR (CDCI3, 300 MHZ) δ 7.57-7.51 (m, 2H), 7.43-7.20 (m, 8H),3.89- 3.70 (m, 4H), 3.10 (t, 1H), 2.85-2.71 (m, 2H), 2.58-36 (m, 3H), 2.32-2.06 (m, 3H), 1.82-1.43 (m, 13H);

EI-MS m/z (%) 446 (M⁺, 0.55), 174 (100);

HRMS 计算值： C₂₉H₃₈N₂0₂ (M⁺) 446.2933, 测量值： 446.2945. 实施例 11 化合物 I- b-g: 1-苄基- 3-苯基- 4- [4- (3-苯丙基)哌啶- 1-亚甲基]吡咯- 3- 醇

按照制备化合物 I- b-a相同的方法，将 4-苯基哌啶换成 4-苯丙基哌啶即可以得到化合物 I- b-g。

IR (KBr) 3200, 3027, 2928, 2806， 1739, 1494, 1474, 1446, 1376 cm"¹;

¾ NMR (CDC1₃， 300 MHZ) δ 7.78-7.60 (m， 2H), 7.41-7.14 (m, 13H), 3.70 (m, 2H),

3.01-2.53 (m, 8H), 2.58-2.53 (m, 2H), 2.45-2.41 (m, 2H), 2.00-1.83 (m, 1H), 1.80-1.50 (m, 4H), 1.43-1.18 (m, 5H);

EI-MS m/z (%) 377 (3.08), 334 (30.38), 233 (79.19), 216 (76.27), 91 (100)。实施例 12 化合物 I- b- h: 1-(1-苄基- 4-经基 _4-苯基哌啶- 3-亚甲基 )-4- (3-苯丙基）脈啶- 4-醇

按照制备化合物 I-b- a相同的方法，将 4-苯基哌啶换成 4-苯丙基 -4-羟基哌啶即可以得到化合物 I- b-h。

¾ NMR (CDC1₃, 300 MHZ) δ 7.54-7.51 (m, 2Η) , 7.32—7.08 (m, 13H), 3.61—3.57 (m, 3H), 2.96 (m, 2H)， 2.84 (d, IH), 2.73 (q, 1H), 2.63—2.48 (m, 4H)， 2.40—2.18 (m, 3H)， 2.12-1.97 (m, IH), 1.62-1.32 (m, 7H), 1.26-1.15 (m, 2H)；

EI-MS m/z (%) 393 (4.19), 350 (31.62), 233 (83.79), 91 (100)；

HRMS 计算值： C₃₂H₄₁N₂0₂ (M⁺) 485.3162, 测量值： 485.3162. 实施例 13 化合物 I- b_j: 1-苄基- 3-苯基 -4- [4- (4-氟苯基哌啶- 1-亚甲基）]吡咯- 3- 醇

按照制备化合物 I-b- a相同的方法，将苯乙酮酸酯换成 4-氟苯乙酮酸酯即可以得到化合物 I- b- j。

醒 R (CDCI3, 300MHz) δ 7.62 7.55 (m, 2H) , 7.37-7.08 (m， 12H), 3.6 (s, 2H) , 2.99-2.75 (m, 5H)， 2.64-2.45 (m, 2H)， 2.43-2.33 (m, 3H) , 2.03 (m, IH), 1.80- 1.42 (m, 5H)；

EI-MS m/z (%) 353 (1.64), 335 (1.81), 310 (25.31), 292 (24.04) , 252 (38.22), 234 (38.90), 174 (100), 91 (54.63)。实施例 14化合物 I- b-k: 1- [1-苄基- 4-羟基- 4_(4-氟苯基哌啶- 3-亚甲基）]_4- (3- 苯丙基)哌啶- 4 -醇

按照制备化合物 I- b- h相同的方法，将苯乙酮酸酯换成 4 -氟苯乙酮酸酯即可以得到化合物 I-b- k。

¾ NMR (CDC1₃, 300MHz) δ 7.63-7.57 (m， 2H), 7.38-7.16 (, 10H) , 7.02-6.96 (m, 2H)， 3.73-3.66 (m， 3H), 2.96—2.89 (m， 2H) , 2.89-2.81 (m, 2H)， 2.63-2.54 (m, 4H)， 2.43-2.18 (m, 4H) , 1.71-1.64 (m， 3H) , 1.61-1.42 (m, 4H)， 1.32-1.24 (ra, 2H)； EI-MS m/z (%) 283 (3.31), 268 (5.14), 258 (18.72)， 232 (52.00), 91 (100)；实施例 15 化合物 I - c-a: 1-苄基- 3-甲基 -4-(4-苯基哌啶- 1-亚甲基)吡咯- 3 -醇按照制备化合物 I- b- a相同的方法，将苯乙酮酸酯换成丙酮酸乙酯即可以得到化合物 I-c- a (0.088 g, 产率 30.2%)。

¾ NMR (CDC1₃， 300MHz) δ 7.20-7.06 (ra, 10Η), 3.73 (t, / = 5.4 Hz, 1H), 3.58-3.45 (m， 2H), 3.16 (d, 1H), 2.89 (d, 1H), 2.75-2.31 (m, 5H), 2.18-2.00 (m， 2H), 1.90 (m, 1H)， 1.78—1.54 (m， 4H), 1.26 (s, 3H)；

EI- MS m/z (%) 274 (1.47), 273 (7. 9), 172 (100), 160 (16.83), 91 (94.57)。实施例 16 化合物 I-c- b: 苯甲酸 -1-苄基- 3-甲基- 4- (4-苯脈啶 -1-亚甲基）吡咯- 3- 醇酯

上面得到的化合物 I- c- a( 1 eq ) 溶于二氯甲垸中，加入三乙胺（1.5 eq)，零度下加入苯甲酰氯（1.2 eq )并室温反应 6小时，加水洗，水相用二氯甲烷萃取一次，合并有机相，饱和食盐水洗，干燥，柱层析得到化合物 I- c-b。

¾ NMR (CDC1₃₎ 300MHz) δ 7.95-7.87 (m, 2H) , 7.46—7.08 (m, 13H), 4.26 (t, 6.1 Hz, 1H)， 3.65-3.51 (m, 3H) , 3.32 (d， 1H)， 3.08-2.83 (m， 5H) , 2.78—2.56 (m， 3H), 2.42—2.20 (m, 3H)， 2.09 (m， 1H)， 1.94 (m， 1H), 1.65 (s, 3H)；

EI- MS m/z (%) 377 (1.45), 172 (100), 91 (73.73)。实施例 17 化合物 I- d- a: 1-苄基- 4- (4-苯基哌啶- 1-亚甲基)吡咯- 3 -醇

按照制备化合物 I-b- a相同的方法，将苯乙酮酸酯换成乙醛酸乙酯即可以得到化合物 I- d- a。

¾ NMR (CDC1₃, 300MHz) δ 7.33-7.19 (m, 10H), 3.70 (d, /= 12.9 Hz, 1H)， 3.62 (d, J: 12.9 Hz, 1H)， 3.20 (d, 1H) , 3.04-2.70 (m, 6H)， 2, 56-2.25 (m, 4H), 2.23-2. 13 (m, 2H), 1.90-1.76 (m, 4H)；

EI- MS m/z (%) 332 (0.54), 259 (13.15)， 174 (57.86), 91 (100)；实施例 18 化合物 I-d- b: 1-(1-苄基- 4-苯氧基吡咯- 3-亚甲基 )-4-苯哌啶

按照流程 VI，化合物 I- b-a (1 eq)溶于二氯甲烷中，向其中加入三乙胺（1.5 eq)。零度下加入甲磺酰氯（1.2 eq)并在此温度下反应半小时，分别加水、食盐水洗，干燥旋干得白色固体。

得到的固体溶于四氢呋喃中加入苯酚钠（ 2 eq )并升温回流， 6小时后结束，加水洗，干燥，柱层析得到化合物 I- d-b。

¾ NMR (CDC1₃, 300MHz) δ 7.35-7.17 (m, 10H), 6.98-6.89 (m, 3H) , 6.84-6.80 (m, 2H), 4.19-4.15 (m， 1H) , 3.99 (t, 1H)， 3.80 (d, 13.2 Hz, 1H) , 3.73 (d， J= 13, 2 Hz, 1H), 3.18-3.12 (ra, 2H) , 2.95-2.83 (m, 5H) , 2.79-2.62 (m, 2H) , 2.50 (m, 1H)， 2.06-1.99 (m, 2H), 1.80—1.73 (m, 4H)；

EI-MS m/z (%) 426 (M++1, 1.00), 335 (17.96), 266 (18.06), 94 (100), 91 (57.79)；实施例 19 化合物 I- d- c: 1-(1-苄基- 4-苯硫基吡咯- 3-亚甲基 )-4-苯哌啶

按照制备化合物 I-d- b相同的方法，将苯酚钠换成苯硫酚钠即可以得到化合物 I-d- c。醒 R (CDC1₃, 300MHz) δ 7.40-7.16 (m, 15H), 3.75 (dd, J_AB - 13.2 Hz, 2H) , 3.33 (m, 1H), 2.94—2.70 (m, 8H) , 2.68 (m, 1H), 2.59 (m, 1H), 2.01 (m, 1H), 1.90 (m, 1H)， 1.78-1.60 (m, 4H)；

EI-MS m/z (%) 442 (M⁺+l, 3.83), 351 (21.14), 333 (100), 174 (30.73), 91 (83.42)。实施例 20 化合物 I- d- d: 1- (4-苯磺酰基- 1-苄基吡咯- 3-亚甲基 )-4-苯哌啶化合物 I- d- c ( 1 eq ) 溶于二氯甲垸中，加入 mCPBA (2.0 eq ；)并室温搅拌过夜，加水洗，干燥并柱层析得到化合物 I- d - d。

¾ NMR (CDC1₃, 300MHz) δ 7.84-7.81 (m, 2H) , 7.58-7.21 (m, 13H)， 4. δθ—4.68

(m, 1H), 4.53 (dd, J_AB = 13.2 Hz, 2H)， 4.20-4.11 (m, 2H), 4.08-3.96 (m, 1H) , 3.64-3.51 (m， 3H), 3.30-3.12 (m, 3H)， 2.98-2.84 (m, 1H)， 2, 59 (m， 3H), 1.70 (m, 2H)；

EI-MS m/z (%) 382 (12.12)， 332 (8.52), 282 (27.51), 267 (33.19), 91 (100)。实施例 21 化合物 I- d-e: [1-苄基- 4- (4-苯基哌啶- 1-亚甲基）吡咯- 3-醇]苯胺按照制备化合物 I-d-b相同的方法，将苯酚钠换成苯胺即可以得到化合物 I- d-e。 ¾ NMR (CDC1₃, 300MHz) δ 7.33-7.20 (m, 15H), 4.07 (q, 1H)， 3.64 (dd, J_AB = 13.2 Hz, 2H)， 3.17 (d, 1H), 3.07-2.91 (m, 2H) , 2.75-2.72 (m, 2H), 2.56-2.40 (m, 2H), 2.40-2.25 (m, 1H) , 2.18 (m, 2H), 2.00 (m, 2H)， 1.90-1.65 (m, 4H) ;

ESI- MS m/z 426 (M⁺+l)；实施例 22 化合物 II_a- a: 节基- 4-羟基 -4-苯 ¾比咯- 3-亚甲基）哌啶 _4-位] 乙酰甲酸苄酯

按照流程 III，将制备化合物 I-b-a时的中间体 4-苯基- 1-苄基- 5-氧基吡咯- 3-羧酸

( 1 eq )与13(^ ( 1.1 eq)和 HOSu ( 1.1 eq ) 溶于四氢呋喃中，室温反应 6小时后过滤，向母液中加入 4-乙酰胺哌啶（ 1.1 eq )并室温反应 6小时后旋千溶剂，加水和乙酸乙酯震荡分液，有机相用食盐水洗，干燥。柱层析后得到固体化合物。

固体化合物溶于四氢呋喃中，加入锂铝氢（8 eq )并升温回流 24小时后用 10%氢氧化钠水溶液淬灭。过滤并旋干溶剂得到粘稠化合物。

上述粘稠化合物溶于二氯甲烷中，加入三乙胺（ 2.0 eq )和苯氧羰基氯（1.5 eq ) 并反应 3小时，向体系中加水震荡分液，有机相用食盐水洗，干燥后柱层析得到化合物 II—a— ει。

NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 7.38-7.12 (m， 15H), 5.07 (m, 2H) , 3.91-3.89 (m, 1H), 3.87-3.33 (m, 2H) , 3.20-3.07 (m, 3H)， 2.95-2.85 (m, 311) , 2.82-2.72 (ra, 2H), 2.62-2.56 (m, 1H) , 2.45-2.40 (tn, 2H) , 2.36-2.29 (m， 1H), 2.04—1.98 (m, 2H) , 1.39-1.12 (m, 3H) , 1.06 (t, / = 7.2 Hz, 3H)；

EI-MS m/z (%) 528 (M⁺ + H⁺, 1.43), 484 (2.56), 395 (61.84), 394 (67.91), 259 (16.15), 234 (58.02), 141 (48.31), 98 (40.18), 91 (100). 实施例 23 化合物 II- a-b: {1- [1-苄基- 4-羟基- 4- (4-氟）苯比咯- 3-亚甲基]哌啶- 4 -位 }乙酰甲酸苄酯

按照制备化合物 Il-a-a相同的方法，将 4-苯基- 1-苄基- 5-氧基吡咯- 3-羧酸换成 4- (4-氟）苯基 -1-苄基 -5-氧基吡咯- 3-羧酸即可以制得化合物 II- a-b。

¾ NMR (CDC1₃, 300MHz) δ 7.60 (m, 2H), 7.36-7.28 (m, 11H), 6.98 (ΐ, 2H),

5.11 (s, 2H), 3.76-3.60 (m, 2H)， 3.10 (s, 2H) , 3.00-2.87 (m, 2H), 2.87-2.71 (m, 2H), 2.63-2.30 (m， 3H) , 2.05 (m, 2H), 1.73 (m, 3H)， 1.40-1.20 (m, 2H), 1.11 (m, 2H) , 0.85 (t, 3H)；

ESI- MS m/z 546 (M++1) . 实施例 24化合物 II- a - c: [1- (1 -苄基 -4-经基 -4-甲 Sfl比咯- 3-亚甲基）哌啶- 4-位] 乙酰甲酸苄酯

按照制备化合物 Π- a-a相同的方法，将 4-苯基- 1-苄基- 5-氧基吡咯 -3-羧酸换成 4- 甲基 -1-苄基 -5 氧基吡咯 3-羧酸即可以制得化合物 II-a-c。

NMR (CDC1₃, 300ΜΗζ) δ 7.38-7.27 (m， 10H) , 5.14 (s， 2H), 4.20 (t, /= 4.2

Hz, 1H)， 3.58 (dd; J_AB = 13.2 Hz), 3.20 (d, 2H), 2.98 (d, 1H), 2.80-2.65 (m, 3H), 2.55 (d, 1H)， 2.40-1.84 (m, 5H)， 1.80—1.55 (m, 4H) , 1.42-1.05 (m, 4H) , 0.88 (t， 3H)；

ESI- MS m/z 466 (M++1)。实施例 25 化合物 III- a- a: 烯丙基苄基- 4-羟基- 4-苯吡^ "3-亚甲基）哌啶- 4-位]甲酰胺 -4-硝基苄酯

按照流程 IV，将制备化合物 I-b-a时的中间体 4-苯基 -1-苄基- 5-氧基吡咯 -3-羧酸（ 1 eq )与1)∞ ( 1.1 eq)和 HOSu ( 1.1 eq ) 溶于四氢呋喃中，室温反应 6小时后过滤，加入三乙胺（ 2.0 eq )和水合哌啶酮盐酸盐（ 1.1 eq )并搅拌过夜。旋干四氢呋喃后加水和乙酸乙酯震荡分液，有机相用食盐水洗后干燥，过滤并旋干溶剂得到白色固体。

将固体溶于四氢呋喃中并加入锂铝氢（ 8 eq )，升温回流 24小时后用 10%氢氧化钠淬灭，过滤并旋干溶剂得到固体泡沬仲醇化合物。

将上面的固体泡沫溶于二氯甲垸，加入三乙胺（ 1.5 eq )和对硝基苯氧羰基氯（ 1.2 eq )并室温反应 4小时，水洗分液后干燥，柱层析后得到化合物 III- a- a。

IR (kBr) 2938, 2806, 1751, 1710， 1608， 1523, 1496, 1448, 1378, 1348, 1261 era—¹；

¾ NMR (CDCI3, 300MHz) δ 8.27-8.22 (m, 2H), 7.55-7.25 (ra， 12H), 5.97—5.82 (m, 1H), 5.36-5.07 (m, 4H) , 4.39 (m, 1H) , 3.68 (m, 2H), 3.25 (m, 2H), 2.80-2.22 (m, 6H), 1.79 (m， 4H)；

ESI- MS m/z 585 (M⁺+l)；

HRMS 计算值： C₃₄H"N₄0₅ (M⁺+l) 585.3071, 测量值 585.3070. 实施例 26 化合物 III- a- b: 烯丙基苯甲酰基- 4-羟基 -4-苯吡咯 - 3-亚甲基) 哌啶- 4-位]甲酰胺 -4-硝基苄酯

按照流程 V，将制备化合物 ΙΠ- a- a时得到的中间体仲醇化合物（ 1 eq )溶于二氯甲烷中，向体系中加入催化量的 DMAP (0.1 eq )，三乙胺（ 5.0 eq )和醋干（ 3.0 eq ) 零度反应 2小时后加水震荡分液，有机相用食盐水洗并干燥，柱层析后得到固体泡沬。

上面的固体泡沬溶于甲醇中，加入 5%的 Pd/C在一大气压氢气下氢化过夜，滤除催化剂并旋干溶剂得到泡沫化合物。产物溶于二氯甲垸中并加入三乙胺（ 1.5 eq )和苯甲酰氯（ 1.2 eq )搅拌 2小时，水洗并干燥后柱层析得到泡沫化合物。

得到的化合物（ 1 eq )溶于甲醇：水为 5: 1溶剂中，加入碳酸钾（ 2.0 eq )并搅拌 4 小时后旋干甲醇，用乙酸乙酯萃取两次后合并有机相，食盐水洗，干燥后过滤并旋干溶剂得到白色泡沬化合物。

-78°C下，草酰氯（ 1.3 eq )的二氯甲垸溶液滴加到二甲亚砜的二氯甲烷溶液中并搅拌 10分钟，将上面的白色泡沬化合物（ 1 eq )的二氯甲垸溶液加入上述体系中反应 30分钟后加入三乙胺（ 3 eq )并升温到室温，加水和乙酸乙酯震荡分液，有机相用食盐水洗后千燥，柱层析得到酮化合物。

向上面的酮化合物（ 1 eq )和 811((^(：)₃ ( 1.5 eq )的混合物中加入 1， 2-二氯乙垸，再向体系中加入烯丙胺（ 1 eq )和醋酸（ 1 eq )，反应过夜后加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取两次后合并有机相，食盐水洗后干燥，过滤旋干溶剂得到白色泡沫化合物。

上面得到的泡沬化合物（ 1 eq )溶于二氯甲垸中，加入三乙胺（ 2 eq )和对硝基苄氧羰基氯（ 1.5 eq )后搅拌 2小时。加水和乙酸乙酯震荡后分液，有机相用食盐水洗后干燥，过滤后柱层析得到化合物 Ill-a- b。

IR (KBr) 3375, 3063, 2943, 1701, 1627, 1608， 1577, 1522, 1496, 1421， 1346, 1250 cm"¹;

¾ NMR (CDC1₃₎ 300MHz) δ 8.24—8.19 (m, 2H), 7.61-7.21 (m, 12H), 5.82-5.77 (m, 1H), 5.22-5.11 (m, 4H), 4.14—3.61 (m, 8H)， 3.17—3.07 (m， 1H), 2.98—2.40 (m, 4H), 2.20 (m, 1H), 1.82—1.50 (m, 4H) ;

ESI- S m/z 599 (M⁺+l)；

HRMS 计算值： C₃₄H₃₉N₄0₆ (M⁺+l) 599.2864, 测量值 599.2879。实施例 27 化合物 Ill-a- c: 烯丙基 - (2-碘）苯甲酰基 _4-羟基- 4-苯吡咯 - 3-亚甲基]哌啶- 4 -位]甲酰胺 -4-硝基苄酯

按照制备化合物 ΠΙ-a-b相同的方法，将苯甲酰氯换成邻碘苯甲酰氯即可以得到化合物 III- a- c。

IR (KBr) 3375， 2941, 1701, 1637, 1522, 1467, 1421, 1345, 1249 cm"¹;

JH NMR (CDC1₃, 300丽 z) δ 8.24-8.20 (m, 2H), 7.86—7.80 (m, 1H) , 7.55-7.06

(m, 10H), 5.95-5.76 (m, 1H), 5.23-5.12 (m, 4H) , 4.16-4.04 (m, 2H)， 3.96-3.85 (m, 3H), 3.70-3.13 (m, 3H), 3.03 (m, 1H)， 2.80 (m， 2H) , 2.57 (m, 1H)， 2.18-2.02 (m, 2H)， 1.87-1.64 (m, 4H)；

ESI-MS m/z 725 (M++1)； HRMS 计算值： C₃₄H₃₈N₄0₆I (M++1) 725.1831, 测量值 725.1833。

实施例 28 ΙΙΙ-a-d: 烯丙基 -[1- (1-萘甲酰基- 4-羟基 -4-苯 BHJ各- 3-亚甲基）哌啶 -4- 位]甲酰胺 -4-硝基苄酯

按照制备化合物 ΙΠ-a- b相同的方法，将苯甲酰氯换成 1-萘甲酰氯即可以得到化合物 III- a-d。

IR (KBr) 3381, 3060， 2943, 1701, 1633, 1522, 1465, 1428, 1384, 1346, 1249 cm^-1;

¾ NMR (CDC1₃, 300MHz) δ 8.23-8.18 (m， 2H), 7.96—7.82 (m, 3H)， 7.58—7.21 (m， 11H), 5.95-5.76 (m, IH) , 5.21—5, 11 (m, 4H) , 4.20-3.96 (m, 3H), 3.94-3.58 (m, 3H), 3.52—3.21 (m, 2H) , 3.10 (m, 1H)， 2.82—2.52 (m, 4H), 2.25—2.06 (m, IH), 1.74-1.39 (m, 4H)；

ESI - MS m/z 649 (M++1)；

HRMS 计算值： C₃₈H₄₁N₄0₆ (M'+l) 649.3021, 测量值 649.3016。实施例 29 III- a- e:烯丙基环戊基甲酰基 -4-羟基- 4-苯咄各 -3-亚甲基）哌啶

-4-位]甲酰胺 -4-硝基苄酯

按照制备化合物 ΙΠ-a- b相同的方法，将苯甲酰氯换成环戊基甲酰氯即可以得到化合物 III-a - e:

IR (KBr) 3375, 2948, 1700， 1637, 1523, 1467， 1345, 1249 cm—¹;

¾ NMR (CDC1₃, 300MHz) δ 8.23 (d, 2H)， 7.54-7.23 (m， 8H), 5.83-5.77 (m, IH)，

5.23-5.12 (m, 4H), 4.10—3.67 (m, 7H)， 3.58—3.40 (m， IH), 3.06—2.60 (m, 4H), 2.59-2.40 (ra, IH) , 2.14—2.03 (ra, IH), 2.00—1.48 (m, 13H)；

ESI- MS m/z 591 (M⁺+l)；

HRMS 计算值： C₃₃H₄₃N₄0₆ (M⁺+l) 591.3177, 测量值 591, 3168。实施例 30 化合物 III- a- f: 烯丙基环己基甲酰基 4-羟基 -4-苯吡咯 -3-亚甲基)哌啶 -4-位]甲酰胺 -4-硝基苄酯

按照制备化合物 ΠΙ- a-b相同的方法，将苯甲酰氯换成环己基甲酰氯即可以得到化合物 III- a- f。

IR (KBr) 3375， 2933, 2855, 1701, 1638, 1523, 1450, 1346, 1250 cm—¹;

¾ NMR (CDCI3, 300MHz) δ 8.22 (d, J = 7.8 Hz), 7.60—7.52 (m， 3H) , 7.42- 7.11 (ra, 4H)， 5.92—5.76 (m， IH), 5.22 (s, 2H)， 5.16—5.10 (m, 2H)， 4.15—3.62 (m, 7H), 3.58 3.37 (in, IH), 3.11-2.60 (m, 4H)， 2.58-2.00 (m, 2H)， 2.00-1.44 ( , 15H)； ESI- MS m/z 605 (M⁺+l)；

HRMS 计算值： C₃₄H₄₅N₄0₆ (M⁺+l) 605.3334, 测量值 605.3333. 实施例 31化合物 III- a- g:烯丙基苄基- 4-羟基- 4- (4-氟）苯吡咯 -3-亚甲基] 哌啶- 4-位}甲酰胺 -4-硝基苄酯

按照制备化合物 ΠΙ- a- a相同的方法，将中间体 4-苯基- 1-苄基- 5-氧基吡咯- 3-羧酸换成 4- (4-氟）苯基- 1-苄基- 5-氧基吡咯 -3-羧酸即可以得到化合物 III- a- g。

IR (KBr)

¾ NMR (CDC1₃, 300MHz) δ 8.21 (m, 2H), 7.64-7.47 (m, 3H) , 7.40-7.20 (m, 6H) , 7.05-6.96 (m, 2H) , 5.89 (m， 1H), 5.18-5.06 (m, 4H), 3.68 (m, 3H), 3.28-3.21 (m, 3H), 2.95 (d, 1H), 2.86-2.74 (m， 3H), 2.60 (m, 1H)， 2.53-2.25 (m， 5H)， 1.85- 1.75 (m, 4H).

ESI MS m/z (M⁺+l) 603;

HRMS 计算值： C₃₄H₃₉N₄0₅F (M++1) 625.2797, 测量值 625.2808。实施例 32: 化合物 I- c - c

按照制备类似化合物 I- c-b相同的方法，将丙酮酸乙酯换成乙醛酸乙酯可以得到化合物 I- c- c (0.086 g，产率 29%)。实施例 33：化合物 IV- a-a和 IV-a-b

按照制备化合物 I- b- a相似的方法，将 β-丙氨酸换成丁氨酸，得到对映异构体化合物 IV a a和 IV- a- b (0.020 g，产率 31%)。实施例 34: 化合物 ΠΙ- a-h

按照制备化合物 III- a-e相同的方法，将对硝基苄氧羰基氯换为苄氧羰基氯，得到化合物 III- a_h:

NMR (CDC1₃, 300MHz) 7.52-7.26 (ra, 10H), 5.85-5.77 (m, 1H)， 5.21-5.08 (m, 4H), 4.05-3.88 (m, 1H)3.87— 3.64 (m, 6H) , 3.01-2.39 (m, 7H), 2.38-2.14 (m, 1H) , 1.87-1.48 (m, 12H)；

ESI- MS m/z 546.4 (M⁺+l)；实施例 35: 化合物 III-a-i

按照制备化合物 III- a- e相同的方法，将对硝基苄氧羰基氯换为对甲氧基苄氧羰基氯，得到化合物 III- a- i:

¾ NMR (CDC1₃， 300MHz) δ 7.52-7.24 (m, 7H)， 6.95-6.82 (d, 2H) , 5.92—5.68 (m, 1H), 5.26-5.02 (m, 4H), 4.21-3.63 (m, 10H), 3.22-2.34 (m， 7H) , 2.02-1.51 (m, 13H)；实施例 36: 化合物 III- a-j

按照制备化合物 III-a- e相同的方法，将对硝基苄氧羰基氯换为对溴苄氧羰基氯，得到化合物 III- a- j:

¾ NMR (CDCI3, 300MHz) δ 7.55-7.15 (m, 9H), 5.86—5.67 (m, 1H)， 5.30-5.00 (m, 4H), 4.17-3.62 (ra, 7H)， 3.06-2.35 (m, 6H), 2.22-2.02 (m, 2H) , 1.86—1.53 (m, 12H)；实施例 37: 化合物 III-a- k 按照制备化合物 ΠΙ-a-e相同的方法，将对硝基苄氧羰基氯换为苯基异氰酸脂，得到化合物 ΠΙ-a- k:

¾ NMR (CDCI3, 300MHz) δ 7.58-7.26 (m, 8H)， 7.08—6.98 (m， 2H) , 6.60-6.52 (d, IH), 6.00-5.86 (m, IH) , 5.48-5.32 (ra, 2H), 4.44-4.32 (m, 1H)， 3.91-3.50 (ra, 5H)， 3.11-2.02 (m， 9H)， 1.96-1.49 (m， 12H)；

ESI- MS m/z 531 (M⁺+l)；实施例 38: 化合物 III-a-1

按照制备化合物 III- a-e相同的方法，将对硝基苄氧羰基氯换为苯氧乙酰氯，得到化合物 III- a- 1:

¾ NMR (CDCI3, 300MHz) 7.52-7.26 (m, 7H) , 7.00-6.89(m, 3H) 5.86-5.77 (m, 1H)， 5.30-5.21 (m, 2H) , 4.70-4.66 (d， 2H)， 4.58-4.40 (m, IH) , 4.00-3.69 (m, 6H)， 3.02-2.38 (m, 6H)， 2.38-2.05 (m, 2H), 1.87 - 1.45 (m, 12H)；

ESI-MS m/z 546.5 (M⁺+l)；上述实施例所制备的各化合物总结于表 I中-

I-a-c 1-苄基 -3- (3a,7a- 苄基羟基无无无氢氧无二氢笨并 [1, 3]

二氧五环 -5-位） - 4- (4-吗啡啉-1- N

1

亚甲基）吡咯 -3- l-a-c Bn

醇

I-b-b [3-羟基 -3-苯基- 苯甲羟基苯基无无无氢碳苯基 2855± 4- (4-苯基哌啶- 酰基 860 1-亚甲基）吡咯- 1-位]苯甲酮

I-b-c [3-羟基 -3-苯基- 邻碘羟基苯基无无无氢碳苯基 1157± 4- (4-苯基哌啶- 苯甲 224 1-亚甲基）吡咯- N 1

酰基

1-位] -2-碘苯甲

。

酮

I-b-d 1-苯磺酰基 -3-苯苯磺羟基 ib

本基无无无无碳苯基 ++ 基—4- (4-苯基哌酰基

亚甲基） η比 0

咯- 3-醇

II-a-a [1- (1-苄基 -4-羟苄基羟基苯基无苄氧氢碳氮 401. 2 基 -4-苯基吡咯- 基羰 ±87. 5

3-亚甲基）哌啶-

4-位]乙酰甲酸

苄酯

I-b-j 1-苄基 -3-苯基- 羟基 4-氟苯无无无氢碳苯基 ++

4-[4- (4-氣苯基

哌啶 -1-亚甲基）]

吡咯 -3-醇

I-b-h 苄基—4-羟羟基苯基羟基无苯基氢碳亚丙 368± 基 -4-苯基哌啶- 52 3-亚甲基）-4- (3- 苯丙基）哌啶 -4- 醇

I-c-a 1-苄基 -3-甲基- 羟基甲基无无无氢碳苯基

4- (4-苯基哌啶- 1-亚甲基）吡咯- 3-醇

I-b-f 环己基 -[3-羟基- 环己羟基苯基无无无氢碳苯基 3-苯基 -4- (4-苯

基哌啶 -1-亚甲酰基

基）吡咯- 1-位]甲

酮

I-b-e环戊基 -[3-羟基- 环戊羟基苯基 '无无无氢碳苯基 1895± 3-苯基 -4- (4-苯 615 基哌啶 -1-亚甲 N 酰基

基）吡咯 -1-位]甲

酮

I-d-a ₁_苄基-4- (4-苯羟基 a 无无无氢碳苯基

基哌啶 -1-亚甲

基）吡咯 -3-醇

I-c-b苯甲酸 -1-苄基- 苄基苯甲甲基无无无氢碳苯基

3-甲基 -4- (4-苯

哌啶 -1-亚甲基）

吡咯 -3-醇酯

I-c-c苯甲酸 -1-苄基- 苄基苯甲氢无无无氢碳苯基

4- (4-苯哌啶-1- 亚甲基）吡咯 -3- 醇酯

I-d-b 1一(1-苄基 -4-苯苄基苯氧无无无氢碳苯基

氧基吡咯 -3-亚

甲基）-4-苯哌啶

I-b 1-苄基 -3-苯基- 羟基苯基无无苯基氢碳亚丙 408. 5 4-[4- (3-苯丙基） ±10. 5 哌啶 -1-亚甲基]

吡咯 -3-醇

I-b-k 1— [1—苄基—4-羟苄基羟基苯基羟基无苯基氢碳亚丙 2512 基 -4- (4-氟苯基

呃啶 -3-亚甲

基）] -4- (3-苯丙

基）哌啶- 4-醇

1-苄基—5-甲基- 苄基羟基苯基无无无甲基碳本基 3-苯基 4- (4-苯哌

、、、、N

啶 -1-亚甲基）吡

咯 -3-醇 1-苄基 -5-甲基- -ψ

苄基羟基本 δ 无无无碳苯基 + 3-苯基 4- (4-苯哌

啶 -1-亚甲基）吡

咯 -3-醇

III-a-烯丙基 -{1-[1-苄羟基 4-氟苯无烯丙对硝氢碳

基 -4-羟基 -4- (4- g 基苄

氟）苯吡咯 -3-亚氧羰

甲基]哌啶 -4-位} 。。

甲酰胺 -4-硝基

苄酯

II-a-b {1-[1-苄基 -4-羟羟基 4-氟苯无苄氧氢碳氮 565. 5 基 -4- (4-氟）苯基基羰 ±64. 5 吡咯- 3-亚甲基]

哌啶 -4-位}乙酰

甲酸苄酯

II-a-c [1- (1-苄基 -4-羟羟基无苄氧氢碳氮 + 基 _4-甲基吡咯- 基羰

3-亚甲基）哌啶-

⁴-位]乙酰甲酸

苄酯

I-d-c 1-苄基 -4-苯硫基苄基苯硫氢无无无氢碳苯基

吡咯 -3-亚甲基） - 4-苯哌啶

I-d-d 1- (4-苯磺酰基- 苯磺氢无无无氢碳苯基

1-苄基吡咯 -3-亚酰基

甲基）-4-苯哌啶

I-d-e [1-节基—₄_ (4-苯苄基苯氨氢无无无氢碳苯基

基哌啶 -1-亚甲

基）吡咯 -3-醇]苯

胺

III-a-a烯丙基 -[1- (1- 羟基苯基无烯丙对硝碳

基 -4—羟基 -4-苯 10,000 吡咯 -3-亚甲基）。=。 V

氧羰

哌啶 -4-位]甲酰

胺 -4-硝基苄酯

ΙΠ-a-j烯丙基 -[1- (1-环环戊羟基本 S 无烯丙对溴氢碳氮 8. 87 戊基甲酰基 -4- 基甲苄氧

羟基 -4-苯吡咯- 酰基羰基

3-亚甲基）哌啶-

4-位]甲酰胺 -4- 溴苄酯

Hl-a- 烯丙基 -[1- (1-环环戊羟基本 δ 无烯丙 Ν-苯氢碳氮 6. 46 k 戊基甲酰基 -4- 基甲基甲

羟基 -4-苯吡咯- V 酰基酰胺

3-亚甲基）哌啶-

4-位] -3-苯基脲

ni-a-1烯丙基 -[1-(1-环环戊羟基本基无烯丙苯氧氢碳

戊基甲酰基 -4- 基甲乙酰 13. 6 羟基- 4-苯吡咯- N 酰基

3-亚甲基)哌啶-

4-位]乙酰胺苯

醚

注： " + "表示 ΙΟ,ΟΟΟ ηΜ时有一点抑制， " + + "表示 ΙΟ,ΟΟΟ ηΜ时有较大的抑制，但抑制率仍小于 50%。生物学活性的测试例

A. [^3SS]GTPyS 结合实验

CCR5与激动剂结合后，发生构象变化，从而使得 CCR5与 G蛋白发生相互作用，从而激活了 G蛋白。 G蛋白是由 α亚基， βγ亚基共同组成的三聚体。由于 α亚基与 GTP结合的能力取决于 CCR5与激动剂的作用，测定 oc亚基结合的 GTP量就能反映激动剂对 CCR5的激活能力。在 GTP_YS结合实验中，为了排除由于 GTP酶水解 GTP造成与 G蛋白结的 GTP 量不能准确反映 CCR5的激活，同时也为了检测方便，采用 ³⁵S标记的 GTP的结构类似物 GTPyS替代 GTP， GTPyS不能被水解。这样，在 CCR5未被激活时， α亚基结合 GDP; CCR5 激活后， α亚基结合 GTP_YS，测定 α亚基结合 ³⁵S-GTP_YS的数量就能反映出 CCR5被激动剂激活的程度。当加入本发明的拮抗剂时，将使得激动剂激活 CCR5的能力下降。

CCR5对 G蛋白的徼活按以下实验进行测定。

表达 CCR5的 CHO永久细胞系 (CHO-CCR5)(可购自 Euroscreen S.A. , Belgium)用裂解缓冲液 (5 mM Tris-HCl, H 7.5, 5 mM EDTA and 5 mM EGTA)裂解，以 15,000 x g 离心 10 min。细胞膜用反应缓冲液 (50 mM Tris-HCl, pH 7.5， 5 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 100 mM NaCl)重悬后，用 Bio-Rad的 Bioford法定蛋白。然后，在反应缓冲液中进行 GTPyS结合实验，其中，反应体系为 100 μ1，含 10 μ_§膜蛋白， 40 μΜ GDP， 0.5 nM [³⁵S] GTP-γ- S (1200 Ci/mmol), 加入待测的化合物后，振荡混匀，于冰上放置 5分钟后，再加入 CCR5 激动剂 (10 nM的 RANTES或 30 nM的 ΜΙΡ-1 β)。振荡混匀后，将反应的试管于 30°C孵育 1' 小时。反应结束后，将试管置于冰上，用 PBS稀释以终止反应，用 GF/C滤膜真空抽滤。结合的放射性活性用液体闪烁计数仪测定。基础结合 (basal)在无激动剂的情况下测定，非特异性结合 (non-specific)在有 10 μΜ非同位素的 GTPyS存在的情况下测定。 [³⁵S]GTP_YS 结合百分比按 100 X [c.p.m._saraple-c.p.m._n。_n-_speriflJ/[c.p.m._basai-c.p.m._n。_n._spedfiJ来计算。 IC₅。是抑制 10 nM的 RANTES或 30 nM的 MIP-Ιβ引起的 [³⁵S]GTPyS结合 50%时的化合物浓度，从化合物的浓度曲线上得到 (6-7个化合物的浓度点）。

B.细胞趋化实验

表达趋化因子受体的细胞在与激动剂接触时会向有激动剂的地方发生迁移，因此，测定细胞的迁移能够反应受体与激动剂的相互作用。测量方法如下。

采用 48孔板 (AP48, Neuroprobe Inc., USA)及 8 μπι的滤膜 (25 X 80nun)进行实验，滤膜预先浸入鼠尾胶原，至少两小时，取出后在超净台上吹干，然后浸入 0.1%BSA-MEM。细胞为表达人 CCR5的 HEK293(293- CCR5) (可购自 Euroscreen S.A. , Belgium) ₀ 用胰酶消化细胞 1分钟， 200g离心收集细胞，加入 0.1%BSA-MEM重悬细胞，使细胞密度约为 3 X 10^s / ml。在每个孔中加 26.5 μΐ的趋化因子或 1% BSA MEM，然后放置滤膜，盖上盖子后，每孔加入 50 μΐ的细胞悬液。在做化合物拮抗实验时，细胞悬液中加入待测的化合物，并于 37°C预孵育 20 min。将孔板置于 37°C培养箱进行细胞趋化 6小时。然后，取出滤膜，去除加样孔的细胞后，于 4%多聚甲醛 4 Ό固定过夜。次日取出滤膜，用 0.5% 结晶紫染色 2小时以上，用水脱色后晾干，用扫描仪扫下滤膜的图象，并用 Scion lmage 统计灰度计算。以未加拮抗剂的细胞趋化数为 100%进行计算及作图。 C. MTT细胞毒实验

细胞制备成单细胞悬液，依细胞大小和其生长特性调整细胞密度，用 100 μΐ培液接种于 96孔培养板中， 37°C， 5%C0₂培养箱饱和湿度下孵育，待处理。接种密度为外周血单核细胞 (PBMC): 10⁵个 /？ L , Jurkat细胞： 4 10⁴个/孔。铺细胞 24小时后，加入待测的化合物与细胞孵育。 48小时后，每孔加 10 μΐ MTT(Sigma, USA., 5 mg/ml, 用 PBS 培液配制，置于一 20°C冰箱中保存)，于 37°C细胞培养箱中继续孵育 4小时。然后，加入溶解甲臢的三联剂 (10%SDS— 5%异丁醇一 0.01 M HC1)50 μΐ在培养箱中过夜，在酶标仪上测定00₅₇。/00₆₃。1^1。通过抑制曲线得到半数有毒剂量 CC₅。。活性测定结果：

A. [³⁵S]GTPyS 结合实验表明，本发明的一系列化合物是 CCR5的拮抗剂，它们抑制 10 nM的 RANTES激活 CCR5而引起的 GTPyS的结合，其抑制情况及 IC₅。列于下表。

注： " + "表示 ΙΟ,ΟΟΟ ηΜ时有一点抑制， " + + "表示 ΙΟ,ΟΟΟ ηΜ时有较大的抑制，但抑制率仍小于 50%。 IC₅。值越低，拮抗作用越强。对其中一些化合物测定了它们对 CXCR4及 CCR1受体激活的影响，发现它们 (II-a-a，

III-a-a, III- a-b， III-a-c, III-a-d, III- a-e， III-a-f)在 10,000 nM时对这两个受体都不产生激活或拮抗作用，因此，它们是特异的 CCR5的拮抗剂。

另外， II-a-a的甲磺酸盐除了水溶性显著提高 (约十倍)外，其活性和特异性与未成盐时是一样的， IC₅。为 341.5 ±72.5 nM。

对部分化合物 (包括 II-a-a及其甲磺酸盐)测定了它们对 30 nM的 MIP-Ιβ (另一种 CCR5 的激动剂)引起的 GTPyS结合的 IC₅。，其结果与抑制 RANTES引起的 GTPyS结合一致。

B. 趋化实验证明了本发明化合物在较低浓度下可抑制 RANTES引起细胞趋化。其中，化合物 ΠΙ-a-e对 10 nM的 RANTES引起细胞趋化的 IC₅。约为 30 nM。

C.细胞毒实验表明，测试的化合物的毒性较低或没有。化合物 II-a-a， III-a-b III-a-c, III-a-d、 ΙΠ-a- e、 ΠΙ- a-f等在 10,000 nM时对细胞均没有显著的毒性， CC₅。约为 30,000 nM。

综上所述，本发明化合物是对 CCR5亲和力高并且选择性强的拮抗剂。由于其毒性比较低，治疗指数 CC₅。/IC₅。大于 1000，故可运用于临床上通过拮抗 CCR5而治疗与 CCR5 有关的疾病，如 AIDS, 自身免疫性疾病，炎症反应。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种式 I化合物或其药学上可接受的盐-

式中， ^为未取代的或被 1-3个取代基取代的下列基团：苄基、苯甲酰基、环己基甲酰基、环戊基甲酰基、苯磺酰基、或萘甲酰基，所述的取代基选自卤素、 C1-C4烷基、 C1-C4垸氧基；

为羟基、苯甲羧基、苯氧基、苯硫基、苯胺基或苯磺酰基，所述基团中苯环可被 1-3个选自下组的取代基取代：卤素和 C1-C4烷基； R₃为氢、 C_rC₄垸基，苯基或— ^^，所述基团中苯环可被 1-3个选自下组的取代基取代：卤素和 CI- C4垸基；

R₄为无、 H或羟基；

R₇为氢， C1-C6烷基或苯基；

X为无、 0、或 C;

条件是 X为无或 0时， R₄、 R₅、 R B Y不存在；

当 X为 C时， Y是 N, 为^ ₆烷基或烯丙基，且^为对硝基苄氧羰基、苄氧羰基、对卤素苄氧羰基、对甲氧基苄氧羰基、对甲基苄氧羰基、对三氟甲基苄氧羰基、 N-苯基甲酰胺基、苯氧乙酰基、 3,4-二氧亚甲基苄氧羰基、对氨基苄氧羰基、苯磺酰基、对甲基苯磺酰基，或者 R₅、 1^和 Y—起构成苯基或 -R₈-苯基，其中是€1-€4的亚烷基。

2.如权利要求 1所述的化合物，其特征在于， ^为苄基、苯甲酰基、邻卤代苯甲酰基、环己基甲酰基，环戊基甲酰基，苯磺酰基，萘甲酰基。

3.如权利要求 1所述的化合物，其特征在于，为羟基、苯甲羧基、苯氧基、苯硫基、苯胺基或苯磺酰基。

4. 如权利要求 1所述的化合物，其特征在于， R₃为氢、 ₄垸基、苯基、 4-卤代苯基或" ^^。

5. 如权利要求 1所述的化合物，其特征在于， X为无或 0，且 R₄、 R₅、 1 ₆和¥不存在。

6. 如权利要求 1所述的化合物，其特征在于， X为 C，且 Y是 N， R₅为 C,-^垸基或烯丙基， R_e为对硝基苄氧羰基、苄氧羰基、对卤素苄氧羰基、对甲氧基苄氧羰基、对甲基苄氧羰基、对三氟甲基苄氧羰基、 N-苯基甲酰胺基、苯氧乙酰基、 3，4-二氧亚甲基苄氧羰基、对氨基苄氧羰基、苯磺酰基、对甲基苯磺酰基，或者 R₅、和 —起构成苯基、 -CH₂CH₂CH₂-苯基。

7. 如权利要求 1所述的化合物，其特征在于， R₇为氢， C1-C3垸基或苯基。

8. 如权利要求 1所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有下式 III结构

式中， ^为未取代的或被 1-3个取代基取代的下列基团：苄基、苯甲酰基、环己基甲酰基、环戊基甲酰基、苯磺酰基、或萘甲酰基，所述的取代基选自卤素、 C1-C4垸基、 C1-C4垸氧基； R₃为氢、 -C₄烷基，

所述基团中苯环可被 1-3个选自下组的取代基取代：卤素和 C1-C4垸基；

9. 如权利要求 1所述的化合物，其特征在于，选自下组-

1-苄基 -3-(3a,7a-二氢苯并 [1， 3]二氧五环 -5-位) -4-(4-苯基呢啶 -1-亚甲基) P比咯 -3-醇; 1-苄基 -3-(3a，7a-二氢苯并 [1,3]二氧五环 -5-位) -4-(4-哌啶 -1-亚甲基)吡咯 -3-醇； 1-苄基 -3-苯基 -4-(4-苯基哌啶 -1-亚甲基)吡咯 -3-醇；

1-苄基 -4-二乙胺基甲基 -3-(3a,7a-二氢苯并 [1,3]二氧五环 -5-位)吡咯 -3-醇；

1-苄基 -3-(3a,7a-二氢苯并 [1,3]二氧五环 -5-位) -4-(4-吗啡啉 -1-亚甲基)吡咯 -3-醇；

[3-羟基 -3-苯基 -4-(4-苯基哌啶 -1-亚甲基)吡咯 -1-位]苯甲酮；

[3-羟基 -3-苯基 -4-(4-苯基哌啶 -1-亚甲基)吡咯 -1-位] -2-碘笨甲酮；

1-苯磺酰基 -3-苯基 -4-(4-苯基哌啶 -1-亚甲基)吡咯 -3-醇；

[1 -(1 -苄基 -4-羟基 -4-苯基吡咯 -3-亚甲基)哌啶 -4-位]乙酰甲酸苄酯；

1-苄基 -3-苯基 -4-[4-(4-氟苯基哌啶 -1-亚甲基)]吡咯 -3-醇； '

苄基 -4-羟基- 4-苯基哌啶 -3-亚甲基 )-4-(3-苯丙基)哌啶 -4-醇；

1-苄基 -3-甲基 -4-(4-苯基哌啶 -1-亚甲基)吡咯 -3-醇；

环己基 -[3-羟基 -3-苯基 -4-(4-苯基哌啶 -1-亚甲基)吡咯 -1-位]甲酮；

环戊基 -[3-羟基 -3-苯基 -4-(4-苯基哌啶 -1-亚甲基)吡咯 -1-位]甲酮；

1-苄基 -4- (4-苯基哌啶小亚甲基)吡咯 -3-醇；

苯甲酸 -1-苄基 -3-甲基 -4-(4-苯哌啶 -1-亚甲基)吡咯 -3-醇酯；

苯甲酸 -1-苄基 -4-(4-苯哌啶 -1-亚甲基)吡咯 -3-醇酯；

1-(1-苄基 -4-苯氧基吡咯 -3-亚甲基 )-4-苯哌啶；

1-苄基 -3-苯基 -4-[4-(3-苯丙基)哌啶 -1-亚甲基]吡咯 -3-醇；

1-[1-苄基 -4-羟基 -4-(4-氟苯基哌啶 -3-亚甲基 )]-4-(3-苯丙基)哌啶 -4-醇；

1-苄基 -5-甲基 -3-苯基 4-(4-苯哌啶 - 1-亚甲基)吡咯 -3-醇；

1-苄基 -5-甲基 -3-苯基 4-(4-苯哌啶 -1-亚甲基)吡咯- 3 -醇；

烯丙基 -{1- [1-苄基 -4-羟基 -4-(4-氟)苯吡咯 -3-亚甲基]哌啶 -4-位}甲酰胺 -4-硝基苄酯；

{1-[1-苄基 -4-羟基 -4-(4-氟)苯基吡咯 -3-亚甲基]哌啶 -4-位}乙酰甲酸苄酯； [1_(1 ^基 _₄_轻基—4-甲基吡咯 _3-亚甲基)哌啶 -4-位]乙酰甲酸苄酉 I 1_苄基— 4-苯硫基吡咯 -3-亚甲基) -4-苯哌啶；

1-(4-苯磺酰基- 1-苄基吡咯 -3-亚甲基 )-4-苯哌啶；

[ 苄基—4-' 4-苯基哌啶 -1-亚甲基)吡咯 -3-醇]苯胺；

烯丙基 -[ -苄基 _4-羟基 -4-苯吡咯 -3-亚甲基)哌啶 -4-位]甲酰胺 -4-硝基苄酯；烯丙基 -【 -苯甲酰基 -4-羟基 -4-苯吡咯 -3-亚甲基)哌啶 -4-位]甲酰胺 -4-硝基苄酯；烯丙基 -I -(2-碘)苯甲酰基 -4-羟基 -4-苯吡咯 -3-亚甲基]哌啶 -4-位]甲酰胺 -4-硝基苄酯

烯丙基 -I -萘甲酰基 -4-羟基 -4-苯吡咯 -3-亚甲基)哌啶 -4-位]甲酰胺 -4-硝基苄酯；烯丙基 -| -环戊基甲酰基 -4-羟基 -4-苯吡咯 -3-亚甲基)哌啶 -4-位]甲酰胺 -4-硝基苄酯；

烯丙基 -I -环己基甲酰基 -4-羟基 -4-苯吡咯 -3-亚甲基)哌啶 -4-位]甲酰胺 -4-硝基苄酯；

烯丙基 -| -环戊基甲酰基 -4-羟基 -4-苯吡咯 -3-亚甲基)哌啶 -4-位]甲酰胺-苄酯；烯丙基 -| -环戊基甲酰基 -4-羟基 -4-苯吡咯 -3-亚甲基)哌啶 -4-位]甲酰胺 -4-甲氧基苄酯，

烯丙基- -环戊基甲酰基- 4-羟基 -4-苯吡咯 -3-亚甲基)哌啶 -4-位]甲酰胺 -4-溴苄

W匕

H曰 5

烯丙基 -| -环戊基甲酰基 -4-羟基 -4-苯吡咯 -3-亚甲基)哌啶 -4-位] -3-苯基脲；烯丙基 -I -环戊基甲酰基- 4-羟基 -4-苯吡咯 -3-亚甲基)哌啶 -4-位]乙酰胺苯醚。

10. 一种药物组合物，其特征在于，它含有药学上可接受的载体和权利要求 1所述的化合物。

11. 一种权利要求 1所述化合物的用途，其特征在于，用于制备药物。

12. 一种式 II所示的化合物：

式中: 为氢、烷基，

所述基团中苯环可被 1-3个选自下组的取代基取代：卤素和 C1-C4垸基

R₇为氢， C1-C6烷基或苯基。