WO2005110451A1

WO2005110451A1 - コーヒー豆抽出物、抽出方法及び同抽出物を含む組成物

Info

Publication number: WO2005110451A1
Application number: PCT/JP2005/009306
Authority: WO
Inventors: Henry Aoki
Original assignee: Kuboyama Bioken Co., Ltd.
Priority date: 2004-05-19
Filing date: 2005-05-17
Publication date: 2005-11-24
Also published as: US20050261197A1

Abstract

ゲニスティン、フラビアン酸、ダイゼイン、ダイジン、及びチロシソ-グリシン-セリン-アルギニン-セリンのアミノ酸配列を有するペプチドを含む組成物と同時に、当該組成物から製造される抗炎症活性を有する薬剤組成物、並びに、各化合物を単離し、当該組成物を作成するための方法。化合物誘導体をコーヒー豆から効率良く回収する加熱、抽出及び凝縮系を使用する。

Description

コーヒー豆抽出物、抽出方法及び同抽出物を含む組成物発明の背景

本発明は、コーヒー豆からの特定の抽出物、同抽出物の製造方法、同抽出物を含む組成物、及びその薬剤及び抗炎症剤としての使用に関する。この組成物は、特に炎症状態の治療及び又は予防のための薬剤として有用である。

その開示をここに参照して組込む米国特許 5 5 7 2 9 2 3号、 5 1 7 0 6 9 7号及び 4 7 7 6 1 0 4号に開示する装置は、麦芽、大豆などの材料から有効成分を抽出するための抽出システムを含む。当該装置は、水貯溜槽を所定温度に加熱するための手段及び、水を霧状に粉砕あるいは霧化するための手段を含む霧状微小粒子発生タンク、霧状微小粒子発生タンクに接続され、霧状の微小粒子が原材料層を通過するとき原材料の有効成分を霧状の微小粒子に付着させるための原材料層を保持する抽出装置、原材料層を通過して原材料層から有効成分を抽出した霧状の微小粒子を液化するため抽出装置に接続される凝縮装置、凝縮装置で液化された水が流れ込む貯留タンク、貯留タンクと霧状微小粒子発生タンクとの間の通路に設けられ、抽出装置内の原材料層を減圧する送風機、及び凝縮装置と貯留タンクとを冷却する冷却手段からなる。

前述の装置から製造される液体抽出物、及び Z又は改良型凝縮器及び Z又は改良型乾燥工程を有する装置から製造される抽出物を、乾燥又は凍結乾燥などにより容易に凝固することの出来る工程が米国特許 6 7 2 6 9 1 4号に開示されており、その開示をここに参照して組込む。凝固又は乾燥した抽出物からは、薬剤組成物や化粧品、香水及び Z又は風味増強剤の製造に有用なその他の組成物を、容易に製造することが出来る。加えて、非栄養吸収剤を用いて抽出物を凝固させることにより乾燥抽出物の分析が抽出物自体の分析に比較して容易になる。

発明の開示

本発明者は、コーヒー豆から化合物の組合せを抽出し単離することが出来ること、及びこのとき同じくコーヒー豆から抽出される生物活性べプチドと組合せると、その組合せは動物特にヒ卜を含む哺乳類に投与するとき抗炎症活性を有することを発見した。

したがって、本発明の目的は、有用な生物活性を有する組成物を提供することである。

本発明のさらなる目的は、コーヒー豆から抽出される 4つの化合物との組合せで生物活性ペプチドを含む薬剤組成物を提供することである。本発明のさらに別の目的は、抗炎症活性を有する組成物を提供することである。

本発明により先行技術の問題が解消された。本発明は、コーヒー豆から基本的に 4つの化合物を含む抽出物溶液、同様にコーヒー豆から抽出される生物活性ペプチドとこれらの化合物を共に含む組成物や、抗炎症活性を有する組成物、及び当該抽出物と組成物を製造するための方法を提供する。この化合物及びべプチドは、原材料から効率的に回収する加熱、抽出、及び凝縮システムを用いて得るのが好適である。凝縮器は、少なくとも 2つの好適には円筒状の容器からなり、その少なくとも 1 つの容器には、空気流から湿気を凝縮するため冷却媒体を有するのが好適である。任意に第 3の容器を追加してもよい。得られた液体抽出物は吸湿剤と接触させ、抽出物に浸した材料を乾燥させる。あるいは、植物性又は動物性食材を抽出物に浸してから乾燥させる。

抽出され、単離される化合物は、ゲニスティン、フラボン酸、ダィゼイン（ d i a d z e i n ) 及びダイジン（ d i a d z i n ) である。ペプチドはペンタペプチドで、アミノ酸配列配列番号 N 0 . 1 ：チロシン—グリシンーセリン—アルギニン—セリン（ Y G S R S ) を有する。化合物とペプチドは、混合して抗炎症活性を有する組成物が形成される。図面の簡単な説明

第 1 図は、本発明に従って、活性成分（単数又は複数）を抽出するため使用される抽出乾燥装置の 1 実施例の概略図である。

第 2図は、本発明に従って、活性成分（単数又は複数）を抽出するため使用される抽出/乾燥器装置の別の実施例の概略図である。第 3図は、本発明に従って、活性成分（単数又は複数）を抽出するため使用される抽出装置の外側円筒の部分斜視図である。

第 4図（ a )、（ b ) 及び（ c ) はそれぞれ、本発明に従って、活性成分（単数又は複数）を抽出するため使用される抽出装置の内側円筒の構造を示す斜視図である。

第 5図は、本発明に従って、活性成分（単数又は複数）を抽出するため使用される抽出装置に使用される空気流量調整手段の平面図である。

第 6図は、第 5図の 6 — 6線断面図である。

第 7図は、本発明に従って、活性成分（単数又は複数）を抽出するため使用される抽出システムに使用される凝縮装置の 1 実施例の概略図である。

第 8図は、本発明に従って、活性成分（単数又は複数）を抽出するため使用される抽出システムに使用される凝縮装置の概略図である。第 9図は、本発明の別の実施例に従って、活性成分（単数又は複数）を抽出するため使用される抽出システムの凝縮装置の凝縮部の断面図である。

第 1 0図は、第 9図の装置の凝縮部の上面図である。発明を実施するための最良の形態

抽出システムに投入して抽出物を製造し、そこからペプチドとゲニスティン、フラビアン酸、ダイゼイン及びダイジンを単離できる好適な原材料は、コーヒー豆である。

以下に、添付図面を参照して抽出物を得る好適な方法を詳細に記述する。第 1 図は、製造装置の第 1 実施例の構造を示す概略図である。図中、 1 は、その中に液体、好適には水の貯溜槽を有するハウジング即ち容器である。ハウジング 1 は、ステンレス鋼製であることが好ましい。ハウジング 1 の大きさに特に制限はなく、図示する抽出実施例においては、通常、使用する原材料 4の量及びそれから抽出する有効成分の所望の抽出速度に左右される。ハウジング 1 は、貯溜槽を加熱するための手段 Hを含むが、この手段に特に制限はなく、電気発熱体あるいはコイル、紫外線発熱体又は赤外線発熱体、バーナーなどを含むことが出来る。加熱手段 Hは、ハウジング 1 の中の液体を、液体を蒸発させるのに必要な温度まで、十分に加熱できるものでなければならない。ヒー夕は、作業者が所望の液温を指定できるようにゲージ（不図示）に結合しても、ヒータ起動用のスィッチ（不図示）に結合してもよい。加熱手段 Hは、ハウジング 1 の内側又は外側に置くことが出来る。ハウジング 1 と連動して、水の霧状の微小粒子即ち霧を発生させるための手段（非表示）を任意に設けてもよい。適切な手段には、ハウジング 1 の底部に設けられ、それぞれ水を粉砕して霧化する能力を有する 1 または複数セッ卜のバイブレータ（タンクの大きさに応じて）を備えた超音波発生装置が含まれる。家庭用超音波加湿器に使用される従来の超音波発生装置もまた使用することが出来る。遠心霧化方法もまた使用できる。

ハウジング 1 は、中に収容される原材料から有効成分を抽出するための抽出装置 2 と、パイプ P 1 などにより流体連通している。第 3図は、外側円筒の外観の斜視図である。これは、抽出装置 2の主要要素であって、第 1 外側円筒 2 a及び第 2外側円筒 2 bを含み、その両者は互いに着脱可能に結合され、ステンレス綱製であるのが好適である。抽出作業中の温度検出のため温度センサ（不図示）を、第 2外側円筒 2 bの底側に固定することが出来る。ヒンジロック機構 C 1 が円筒 2 aを円筒 2 bに接合してあるため、その中への原材料の出し入れが容易に出来るようになつている。図 3は、ロックを解いて開放した状態の抽出装置 2を示す。

第 4図は、第 3図の外側円筒 2の中に収容される内側円筒の概略図である。第 4図（ a ) に示す内側円筒 2 cは、前述の外側円筒の中に嵌込むのに適切な形状と大きさのもので、小粒子に粉砕された原材料を保持するための網部をその底部に有している。第 4図（ b ) は、内側円筒 2 cの中に挿入するための案内板 2 dを示し、第 4図 ( c ) に示すように、コーヒー粉などの原材料の粉砕片 Sを内側円筒 2 cの中で区分けできる構造となっている。この案内板 2 dがあることにより、ハウジング 1 からの蒸気が、以下に記述するように、容易且つ円滑に原材料の粉砕片 Sの中を通過することが出来る。当業者が、案内板 2 d には螺旋形など別の形状を使用してもよいことを理解するのは当然である。

抽出装置 2は、パイプ P 2を経由して凝縮装置 3 と流体連通している。パイプ P 2の中にはバルブ V 1 を配置して、パイプ P 3 (後述）の中のバルブ V 2 と共に、凝縮装置 3 に流入する空気量と凝縮装置内の減圧度を調節する。抽出物は凝縮装置 3の中で、その開示をここに参照して組込む米国特許 5 5 7 2 9 2 3号及び 5 1 7 0 6 9 7号に開示されているように、空冷又は水冷を含む各種方法により冷却される。

凝縮装置 3の 1 実施例は、同心円筒 2つを含み、内側円筒 5の内容物を冷却する冷却材を外側円筒 4が収容する。図示する実施例においては、内側と外側の円筒は同延ではなく、それにより冷却過程で生じる凝縮液を内側下部 5 aで収集できるようになつている。しかし、当業者は、別途に凝縮液収集のための適切な手段（一端で内側円筒 5 と連通し他端で補助容器と連通する配管など）を設けて、内側と外側の円筒 5を同延にすることが出来ると理解するのは当然である。同様に、外側円筒 4が収容する冷却材が内側円筒 5の側面だけでなくその底部も囲むようにするため、内側円筒 5の長さを外側円筒 4より短くすることも出来る。この後者の実施例においてもまた、凝縮液を別の場所に収集するため適切な手段を設けることになる。

外側円筒 4に収容される冷却材 6は、水などの液体であるのが好ましい。しかし、冷却材 6はまた、気体又は氷などの固体、または長時間にわたり低温を維持することの出来る他の材料でもよい。冷却材 6は外側円筒 4内で循環させて冷却を増進させることができ、また運転中連続的に又は頻繁に補給することが出来る。

内側円筒 5には、 1 つまたは複数の空気流量調節手段 3 6を収容するのが好適であるが、図示するように 2つが最適である。第 5図と第 6図に示すように、空気流量調節器 3 6は、複数の傾斜板 3 7 を含み、隣接する傾斜板 3 7間には空隙「 g」が形成されている。傾斜板 3 7の傾斜を調節することにより、制限する空気流量を調節することが出来る。内側円筒 5に流入する空気が空気流量調節器 3 6を垂直軸の周りに回転させ、それにより空気流は、外側円筒内の冷却材 6 により冷却された円筒 5の壁の方向に強制的に向けられる。あるいは、空気流量調節器 3 6をモー夕などで駆動して、空気流からの水分抽出量を增加させることが出来る。得られた凝縮液は、ドレイン 7から排出して収集する。

第 7図は、凝縮装置 3の別の実施例を示す。ここでは、三重容器設計などを使用して空気流量調節を行う。前述の実施例のように外側容器 4 " が、その環状部に冷却材を収容する。中間容器 Mが、抽出装置からの空気流を適切なパイプ 9 4を経由して受け、その空気流はパイプ 9 3を経由して装置の外に進む（そして任意に再循環してハウジング 1 に戻る）。中心容器 5 " は、中間容器 Mの内容物を外側容器 4 "の方向に向ける補助をして冷却を増進させるように配置される。容器の形状は、円筒形が好適であるが、必ずしもその必要はない。中間容器 Mの中の空気を強制的に外側容器 4 "の壁に当てて冷却を増進できる限り、別の形状もまた適している。冷却壁の表面積もまた重要である。したがって、ジグザグ形状を採用して表面積を増加すること、あるいは、冷却壁から交互に突起を伸ばして表面積を増加させることが出来る。第 8図は、凝縮装置のさらに別の実施例を示す。この実施例は、中心容器 5 "が冷却流体で満たされていることを除いて、第 7図に示すものと同様である。この冷却流体は外側容器 4 " に収容される冷却流体と同じでも異なるものでもよい。流体が同一である場合は、中心容器 5 " と外側容器 4 " との間に連結手段 9 5を設けて冷却流体をその間で循環させることが出来る。第 7図の実施例のように、中心容器 5 "は、円筒形が好適であるが、必ずしもその必要はない。冷却面の表面積を増加し冷却すべき媒体を強制的に冷却面に当てるのを補助することにより冷却を増進する別の形状も使用することが出来る。中心容器 5 " も短くすることで、冷却すべき媒体が容器の底部にも曝されるようにすることが出来る。さらに、冷却すベき媒体の入口と出口は、冷却すべき媒体が凝縮装置から出る前に、中央容器 5 "の周辺移動するように配置することが出来る。第 9図のように、中央容器 5 " はまた、外側容器 4 " 及び中間容器 Mより長くし、中に冷却流体を導入するための入口 9 6を具えてもよい。

凝縮装置は、水分を除去する媒体の温度を上げるためヒータと組合せることが出来る。複数の装置を直列に配置することで、凝縮を増進することができるが、空間的余裕に応じて直列の配置は垂直方向または水平方向のいずれでもよい。この装置は、空気流量調節のため回転装置を用いる第 2図の実施例より、製造が容易で迅速である。

第 9図と第 1 0図において、凝縮装置 3の別の実施例を示す。この凝縮装置 3はハウジングを有するが、ハウジングはプラスチック製でもよく、図に示すように、好適には羽根型の 1 つまたは複数の間隔をあけた冷却面 4 a - 4 nを持つ。冷却面 4 a — 4 nは、任意の熱伝導材で作ることが出来るが、金属が好ましく、アルミニゥ厶が最も好ましい。冷却面 4 a — 4 nは、下記に詳細を説明するように、流入材料と接触させるためハウジング内に広い表面積を提供し、ハウジング 3の大部分を通って伸びるのが好適である。間に空隙のある冷却面 4 a - 4 nの数は重要ではなく、凝縮装置 3のハウジングの大きさと同時に所望最適凝縮率に左右される。図示するように、冷却面 4 a - 4 nは、その自由端に向かって次第に細くなるのが好ましい。好適実施例においては、冷却面 4 a — 4 nが同じ広さの仕切り板 5を含み、凝縮装置ハウジングは 2つの別個の区画あるいは区域に分けられるが、 1 つは流入材料の流れのためで、他は凝縮装置 3で凝縮されずに流出する材料の再循環のためである。より明確に説明すると、パイプ P 2からの流入材料は（第 2図に示す装置の方向に基づいて）下向きに流れて第 1 区画に入り、そこでその中に位置する冷却面 4 a - 4 n と接触する。このとき凝縮されない材料はいずれも、この第 1 区画を横切って 2つの区画が連通する凝縮チャンバ 3 0の中の第 2区画に入り、次いで（ここでも第 2 図に示す装置の方向に関して）上向きに第 2区画を通って流れ、そこでその中に位置する冷却面 4 a - 4 n に接触する。第 2区画で凝縮されない材料はいずれも、パイプ P 3から流出してファン 8を経由して容器 1 に再循環する。

冷却面 4 a — 4 nの冷却は、当分野では従来からある熱電冷却器 2 0を 1 つ以上用いて行われる。簡単に言うと、熱電冷却器は、冷却器を流れる直流電流が熱伝達をもたらし、冷却側と加熱側を形成する固体ヒー卜ポンプである。（単数又は複数の）熱電冷却器 2 0 は、熱伝導性グリースなどの使用を含む方法で、冷却面 4 a - 4 n と熱伝導関係に配置される。冷却器 2 0は、その冷却側が冷却面 4 a— 4 nを冷却するような位置に配置される。所望の冷却に応じて、複数の熱電冷却器 2 0を含むモジュール設計を用いてもよい。ヒー卜シンク 2 1 もまた（単数又は複数の）熱電冷却器 2 0と熱伝導関係に配置して、その熱を放散させるのが好ましい。図示するように、熱の放散を増進するため、ヒー卜シンク 2 1 の近傍にファン 2 2を配置してもよい。

本発明者は、（単数又は複数の）熱電冷却器 2 0を含む凝縮装置 3により製造される凝縮液の量が、冷却面 4 a - 4 nの温度が 3 °C 〜 6 0 °Cであるとき効率良く最適化されることを発見した。適切な温度範囲には、 1 0 ~ 6 0 °C及び 3 0 - 5 5 °Cが含まれる。適正温度範囲の最低域では、複数の熱電冷却器を^要とするので、より大きいヒー卜シンク、より大きいファン風量及び冷却器とファンにより多くの電力を必要とする。

凝縮装置 3内の冷却により得られる凝縮液は、凝縮装置 3の下端の冷却面 4 a - 4 nの終端面より下方に位置する凝縮チャンバ 3 0に流入する。凝縮チャンバ 3 0から、凝縮液はドレインパイプ 3 1 に流入し、そこから抽出物貯溜槽に送られて収集される。凝縮されない蒸気はすべて、パイプ P 3 とファン 8を通って、容器 1 に再循環されさらに処理される。

少なくとも 1 つ以上の（ 2つを図示）空気循環又は送風手段が設けられるが、ファン又は送風機の形のものが好適である。（単数又は複数の）ファン 8は減圧によりシステム全体を通る流れをもたらすのに十分な大きさを必要とする。減圧は約 5 ~ 5 0 O m m H ₂ 0の範囲内でなければならない。従来の家庭用電気掃除機のファンが有効であることが見出された。

凝縮装置 3はパイプ P 3を経由してハウジング 1 と連通している。パイプ P 3の中にバルブ V 2を配置してバルブ V 1 と共に空気流と減圧を調節することが出来る。例えば、バルブ V 2を開放している間は、バルブ V 1 を部分的に閉じると、凝縮装置 3は減圧状態になる。バルブ V 1 を開放している間は、バルブ V 2を部分的に閉じると、凝縮装置 3の中の圧力が上昇する。バルブの調節は手動でも自動でも行うことが出来る。

ここで、上述の構造に基づき装置の操作を記述する。

先ず、必要な場合は適切な手段を用いて原材料をほぼ米粒大まで粉砕し、これを第 5図（ a ) に示す内側円筒 2 c に充填する。充填したら、内側円筒 2 c内に安定した状態で保持するため原材料はネッ卜で覆われる。

続いて、内側円筒 2 cを第 3図に示す外側円筒 2の中に挿入する。ハウジング 1 は、十分な量の水又はその他の液体で満たたされ、霧を発生することが出来る。水は連続的に同一レベルに保つことも出来るし、バッチ式に加えることも出来る。温度ゲージを所望の温度に設定し、ヒータを起動して水を適切な温度に加熱することで、抽出装置 2内の温度は原材料の有効成分を破壊しないレベル（一般的に 1 0 0 °C以下）になる。例えば、コーヒー豆の場合、水温は好適には約 8 5 °Cまで加熱され、抽出装置に達するときの水温が約 6 0

〜 7 0 °C、好適には約 6 5 °Cになるようにする。

ハウジング 1 内の温度が所望のレベルに達したら、（単数又は複数の）送風機 8を起動してシステムを通じた流れを起こす。（単数又は複数の）送風機 8は、ハウジング〗、抽出装置 2、凝縮装置 3 及びこれらそれぞれの装置を連結するパイプにより形成される閉鎖循環流路の中で空気流を循環させる。ハウジング 1 内で発生した霧状の水は、こうして空気流と共にパイプ Pを通過し、抽出装置 2 に達する。抽出装置 2の中の温度は、温度センサにより測定して、内部が適切な温度に達していることを確認することが出来る。

ハウジング 1 内の温度は抽出装置 2 内の温度に応じて制御することが出来る。

上述のように、空気流は（単数又は複数の）送風機 8を作動させて各装置の間を循環するが、抽出装置 2が原材料の粉砕粒子 Sで満たされているので、原材料が空気流に対する抵抗を生み、これによリ抽出装置 2の中に減圧空間を生む。

減圧状態に達すると、原材料内の成分が原材料の破砕片 Sの表面に抽出され、次いでそこを通過する霧状の水により捕捉される。抽出装置内の温度、具体的には、内側円筒 2 c内の温度が所望の範囲に保たれているので、原材料に含まれる成分は熱により破壊されることなく水中に抽出される。

得られる液体（例えば水）は原材料の有効成分を含み、次いで送風機 8からの空気流と共に連結パイプ P 2を経由して凝縮装置 3 に流れる。凝縮装置 3の外側円筒 4は、内側円筒 5内の水分を凝縮するのに十分な温度の冷却材、好適には水、で満たされている。空気流と凝縮装置 3 内の減圧とはバルブ V 1 と V 2を調節して制御される。液化又は凝縮材料は、図示するように、ドレイン 7を通つて排出され、最終的にバルブ V 3を経由して収集される。

凝縮装置 3で液化されない粒子は、空気流と共に連結パイプ P 3 を経由してハウジング 1 に向かって吸引され、それにより再循環される。再循環部分は、任意に整流板や螺旋形状などを使用して予備加熱し、タンク 1 の中の水温を下げないようにすることが出来る。

凝縮装置 3の中の冷却材は、定期的に交換してもよい。あるいは、冷却液の連続流によって内側円筒 5を冷却してもよい。

原材料は、ほぼ米粒大まで粉砕してもよい。しかし、完成品内の有効成分の濃度は、原材料の大きさを変えることにより制御することが出来る。例えば、原材料を微粉に粉砕すると、有効成分濃度の高い完成品を得ることが出来る。しかし、このような場合、完成品が製造される速度が低下する。原材料の大きさが増すに連れて、完成品の中の有効成分濃度が低下し、製造速度が向上する。同様に、案内板 2 dの使用によリ時間当たり完成品製造量が約 2 0 %増加するが、完成品の中の有効成分濃度は減少する。

それぞれの実施例において記述される前述の装置を用いて、凝縮装置を通して湿気を多く含む空気を循環させ、その含まれる湿気を減少又は除去することにより、外気の彰響を受けない安定した乾燥を実現出来る。その結果、乾燥時間とそれに伴うエネルギ必要量は有意に短縮削減できる。

製品は無色透明で澄んだ液体である。次いで抽出物を凝固させる。第 1 実施例における凝固処理の手順は次の通りである。

吸収性の非栄養材料を用いる。適切な材料には、ミリポアコーポレーシヨンから市販の Γジユラポア」フィル夕など変性ポリフッ化ビニリデン膜などの親水性薄膜フィルタ、ガラス繊維薄膜、木綿、ナイロン、セルローズ、又はティーバッグなどに使用される紙材料が含まれる。材料の形に特別の制限はないので、シ一卜及びディスクの形状を含んでもよい。所定の用途のため選択される材料の独特なアイデンティティは、完成品の有効成分の同定に使用される分析工程など、次の工程で使用される溶剤の性質にある程度左右される。

吸収剤材料は、抽出物と接触する。吸収剤材料は、全面積を抽出物で湿潤させるのが好ましい。吸収剤材料がフィルタである場合は、抽出物で材料を完全に湿潤させるためには、フィルタを通して抽出物を押し出す、あるいは引き出す圧力又は真空（真空ポンプを用いるなど）などの駆動力を用いることにより実現出来る。吸収剤材料は、細孔を拡張して湿潤を増進するため、抽出物で湿潤させる前又はその途中で任意に加熱してもよい。別に又は追加して、抽出物を単独で又は吸収剤材料と一緒に加熱してもよい。吸収剤材料が抽出物で十分に湿潤されたら、好適には乾燥により、抽出物を材料に付着させる。乾燥は、凍結乾燥、加熱又は空気乾燥により行うが、凍結乾燥が特に好ましい。乾燥した材料は、相当な長期間にわたって抽出物の劣化なしに貯蔵することが出来る。この乾燥した材料は、水又は適切な溶剤に溶解し、その中に抽出物の有効成分も溶解することが出来る。所望であれば、圧力を増大して溶解を促進してもよい。乾燥した材料はまた、分析、特に薬剤研究のための分析に使用されるか、又は、先ず溶解して得られた溶液を分祈に使用してもよい。使用する吸収剤材料が紙であるときは、乾燥した材料は、水に溶解して健康飲料として摂取することが出来る。冷凍乾燥を行うときは、冷凍乾燥工程を、温度範囲約一 1 o °c乃至約— 7 0 °C及び真空度約 5 . 3 c f m乃至約 2 3 c f mで排気を実施するのが好ましい。当業者は、温度および真空は物質の性質および物質の大きさ、並びに使用する特定の冷凍乾燥機によって変動することを理解するであろう。物質を冷凍乾燥する時間量は、当業者が容易に決定することが出来ると同時に、ある程度物質の濃度に左右される。

その結果得られる製品は、数日または数ケ月の長期間に渡って、製品の品質または味に有害な影響を及ぼすことなく貯蔵することが出来る。実際、その結果得られる製品の味は、水またはその他の液体キャリアを用いて元の形に戻すとき、元の原材料に比べて向上している。輸送と貯蔵が容易になり費用効率が良くなる。別の方法では加熱により破壊されることのある抽出物の中の有効成分が、上に詳述する抽出工程を用いることにより失われずにすむ。冷凍乾燥製品はまた、液体抽出物より長い貯蔵寿命を有し、化学物質の識別と化学試験に適合する。

冷凍乾燥製品は、液体キヤリァ、好ましくは水、を製品に添加することにより簡単に元の形に戻すことが出来る。添加する液体キヤリアの量は特に制限されておらず、最終的な液体中の抽出物の所望濃度に左右される。冷凍乾燥製品はそのまま（即ち元の形に戻すことなく）サラダ用の付け合わせ、乾燥スープの成分、又は他の食品成分との混合などのように、他の食品の添加物として又は他の食品と一緒に使用することが出来る。冷凍乾燥製品を加熱して、気化芳香を室内に分散させることもできる。

チロシン—グリシン一セリン一アルギニン—セリンのアミノ酸配列を有するペプチドに加えて、以下の化合物が下記の方法によつてコーヒー豆から抽出された。

ゲニスティン：

化学式： C， ₅ H，。 0 ₅

炭素： 6 6 . 6 7 % 水素： 3 . 7 3 % 酸素： 2 9. 6 0 % 分子量： 2 7 0. 2 4 溶融点： 2 9 7 — 2 9 8 °C 最大 U V : 2 6 2 . 5 n m フラボン酸：

ィ匕学式： C ' ₉ H， ₅0₅ 炭素： 7 0. 3 6 水素： 4. 9 7 % 酸素： 2 4. 6 % 分子量： 3 2 4. 3

溶融点： 1 2 3 — 1 2 4 °C 最大 U V : 3 6 4. 3 n m ダイゼイン：

ィ匕学式： C , ₅ H , ₀0₄ 炭素： 7 0. 8 6 % 水素： 3. 9 6 % 酸素： 2 5 . 1 7 % 分子量： 2 5 4. 2 4 溶融点： 1 9 3 — 1 9 7 °C 最大 U V : 4 5 0、 2 5 0 n m

ダイジン：

ィ匕学式： C _{2 1} H _{2 0}0₉

炭素： 6 0. 6 %

水素： 4 . 8 %

酸素： 3 4. 6 %

分子量： 4 1 6

溶融点： 2 3 4 — 2 3 6 °C

旋光性： { & } ² ° _σ、 — 3 6 . 4 ° ( 0. 0 2 Ν N a O H ) 最大 U V : 2 9 6 . 0 n m

ペプチドに上記化合物の有効量を含む薬剤組成物は、ヒ卜及び動物の薬剤として、特に抗炎症性の状態の治療および又は予防に有用である。患者の治療のため有効な量は、それを必要とする患者に対する投与に当たって、炎症を軽減または消滅する組成物の量である。組成物が有効な各種の炎症には、脳炎、脳膜炎、眼瞼縁炎、結膜炎、角膜炎、虹彩炎、網膜炎、口内炎、口唇炎、舌炎、扁桃腺炎、内耳炎、外耳炎、中耳炎、胃炎、十二指腸炎、肺炎、胸膜炎、気管支炎、鼻炎、大腸炎、小腸の炎症、腎炎、腎盂炎、脬炎、胆嚢炎、肝炎、甲状腺炎、前立腺炎、膀胱炎、ミオティス、骨膜炎、骨髄炎、精巣炎、子宮内膜炎、膣炎、卵巣炎、皮膚炎、関節炎、肛門周囲炎、リンパ節炎、糖尿病（脬島の炎症）、感冒（扁桃腺炎、気管支炎、鼻炎、粘膜炎）、導麻疹、各種の湿疹（皮膚炎）、ネフローゼ（腎炎）、歯槽膿漏（歯周炎、アプリカリス、歯髄炎）、喘息（気管支炎）、神経痛（神経炎）、肺結核（肺炎、気管支炎、粘膜炎）、感染症（パクテリアとウィルスにより起こる炎症）、アレルギー（抗原抗体反応により起こる炎症）、ハンセン病（ウィルス性皮膚炎、及びミ才テイス）、癌（炎症および硬変もまた原因となる）、潰瘍（炎症の進行）、硬変（炎症と潰瘍の進行）、精力減退（腺炎）、角化症、膠原病、ヒステリー、ノイローゼ、肝硬変、高血圧、血栓症、狭心症、リウマチ、痛風、不撓性、アルツハイマー病、ライム病、狂牛病、及び寄生虫による炎症が含まれる。

炎症の治療または予防における本発明の抽出物の治療または予防に係る投与量は、ペプチドと組合せた場合、ある程度、治療すベき症状の特性、重症度および性質に左右される。服用量および服用の頻度もまた、特定患者の年齢、体重、及び反応によって変化する。一般的に、日用量の範囲の総量は、少なくとも一日一回体重の約 1 乃至 1 O m c g Z k gで、 1 日 2乃至 3回が好ましい。より厳しい症状に対する服用量は、少なくとも〗日 1 回、体重の約 1 0乃至 1 0 0 m c g / k g となる。服用の頻度は、必要な場合または希望する場合、 1 日約 3回から 4回に増やすことが出来る。有効な投与をするには、経口、点滴、筋肉投与、皮内注射および皮下投与を含む当業者に公知の適切な投与経路を採用することが出来るが、経口投与の方が好ましく、液体形状が最も好適である。本発明の薬剤組成物は、鎮痛剤など別の治療剤と組合せることが gd來る。

本発明の薬剤組成物は、犬、猫、魚およびヒ卜を含む動物に投与される。水性ベースのキャリア、エチルアルコール、プロピレングリコール及びダリセリンなどの補助溶剤、フィラ一、潤滑剤、湿潤剤、着香剤、着色剤、乳化、懸濁化または分散剤、懸濁化剤、甘味料、などを含む薬理学的に許容できるキヤリァと、その他在来の添加物を使用することが出来る。抽出物溶液を、前述の 4つの単離された化合物それぞれを単に単離べプチドと混合して調製し、何らのキャリア又は添加物なしで経口投与するのが好適である。

抽出組成物における各化合物の比率は、各々の適切な量を混合して最終抽出溶液を処方することにより、簡単に変動する。各化合物の重量に対して同等量を使用するのが好適である。

試験例 1

本発明で用いられるペプチドは、以下のように単離し同定した。コーヒー豆を原材料として上に詳述する抽出方法を用いた。結果として得られる抽出物でガラス繊維膜（ 9 6 . 4 g ) を濡らした。膜を三種類の酢酸ェチル各 3 0 0 m I で抽出した。回転蒸発器を用いて真空状態で酢酸ェチルを乾燥に近い状態にした。溶媒層の温度は 4 0 °Cを超えなかった。残渣は淡褐色の液体（ 2 0 . 6 m I ) であった。次いでこの抽出物をェチルエーテル 1 5 0 m I で抽出したエーテル層を除去し無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥した。硫酸ナトリウムを除去し、回転蒸発器中において真空状態でエーテル層を完全に乾燥させた。白色の短い針状化合物を生じた。これをエタノール中に取り入れ、エタノールの蒸発に際して再結晶させた。次いでこの化合物を配列させて次のパラメ一夕を得た。

吸収スペクトル： 3 4 8 m u

薄層クロマ卜グラフィ一

メルク · シリカゲル： 3 . 8

少量ケルダール： 1 2 . 4 %

溶融点： 1 7 2 °C

アミノ酸配列：チロシン—グリシンーセリン一アルギニン一セリン

試験例 2

酢酸ェチルを用いて試験例 1 の膜を抽出しペプチド分級物を得た後、粗製抽出物を調製するため、その膜を、酢酸ェチル：ェタノ —ル：アセトン（ 2 ： 2 ： 1 ) を用いて続けて抽出した。 2 0 0 0 m I から 2 0 0 m I まで容積が減少した後、結果として得られる濃縮物を、 1 0 %のメタノールとへキサンの混合物を用いて 3回単離した。メタノール可溶部をさらに 5 0 % M e O Hとジクロロメタンに単離した。次いでジクロロメタン可溶性抽出物を、各種濃度（ 0 ： 1 0 0 )、（ 1 : 9 9 )、（ 1 : 5 0 )、及び（ 1 : 2 0 ) のジクロ口メタン一メタノールを用いてシリカゲル ·カラム上でクロマ卜グラフした。次いで 4つの分級物（各 1 0 0 m I ) を乾燥させメタノールに取り入れて再結晶させた。

抽出された化合物を、吸収スぺクトルと溶融点により特徴付け、ゲニスティン、フラボン酸、ダイゼイン及びダイジンであると確認した。

試験例 3

プロ卜コル設計

ラッ卜を用いて開発したアジュバン卜誘導関節炎のモデルによリ、ヒ卜の慢性関節リウマチの治療に役立つ化合物のスクリ一ニングを可能にすることが示されている。アジュバン卜誘導関節炎は、ステロイドと非ステロイドの両者に反応する。足の重量および又は足の容積の差を測定することにより、炎症の程度を見極める。供試生物

体重が 2 7 5 — 3 1 0 gのラッ卜をージニァ州ケン卜のァニマル 'テクノロジ一社から購入した。これらは S Dラッ卜の才スであった。動物は個別にステンレス綱製のかごに入れ、水と餌（ハーラン ·テクラン齧歯類飼料）は自由に取れるようにした。照明周期は、 1 2時間を明るく、 1 2時間を暗くした。温度は 2 2 °C ± 3 °C に保ち、相対湿度は 4 0乃至 7 0 %とした。

服用量管理

ゲニスティン、フラボン酸、ダイゼイン、ダイジン及びチロシン一グリシン—セリン—アルギニン—セリンのアミノ酸配列を有するペプチドなどの単離された化合物を組合せて組成物を調製した。単離された化合物それぞれ 1 ミリグラムを蒸留水 9 m I とアルコール 1 m I の中に混合した。次いで、毎日のチューブによる栄養補給で体重 1 キロ当たり l O m c g服用量を与えるため、混合物を希釈した。

試験期間

試料は、経口（チューブによる栄養補給）で 1 日 1 回、 1 1 日間与えた。

実験設計

S Dラッ卜の才ス（ 2 7 5 — 3 1 0 g ) を、フルーエンドの完全アジュバント（死菌である結核菌の 0 . 5 %懸濁液（ H 3 7 R A、ディフコ、鉱物油中））注射によリ感作させた。 0 . 1 m I ァリクゥォッ卜を各ラッ卜の右後足の足裏に皮内投与した。

試料は経口（チューブによる栄養補給）で、治療グループ当たり

5匹の各ラッ卜に、 1 日 1 回 1 1 日間与えた。試料の投与は炎症が生じた日に開始した。

左後足を、感作の直前に測定し、 1 1 日目に再度測定した。非感作ラッ卜グループと比較して、足裏浮腫抑制率および体重増加率を測定した。各グループの足重量を平均した。次のような計算方法で足重量を比較して抗炎症活性を測定した。

抗炎症反応 =

制御グループの平均足重量一試験グループの平均足重量試験グループの平均足重量陽性対照としてヒドロコルチゾンを使用した。これは慢性関節リゥマチ患者に 1 O m g Z体重 k gの服用量で与える一般的な抗炎症薬である。本発明では組成物を 1 O m c g Z体重 k g及び 1 m c _g /体重 k gで与えた。表 I .ラッ卜のアジュバン卜誘導関節炎における単離された組成物とペプチドとの比較処置ラッ卜感作前の足重量抑制率数 ( g ) (%) 制御グループ 5 1 . 2 ―

1 m c g Z体重 k 5 0 . 7 1 6 9 g、

組成物

1 O m c gノ体重 k 5 0 . 6 0 1 0 0 g、組成物

1 m c g Z体重 k 5 0 . 8 0 5 0 g、ヒドロコルチゾ

ン

1 O m c g /体重 k 5 0. 7 6 5 8 g、ヒドロコルチゾ

ン日間でのラッ卜の体重増加の比較

処置' ラッ卜平均初期平均取平均体重増数体重（ g ) 終体加（ g )

( g ) 制御グループ 5 3 0 9 . 3 4 9. 4 0. 0

1 1

1 m c g Z体重 k 5 3 0 3 . 3 4 0. 3 7. 0 g、 8 8

組成物

1 O m c g Z体重 k 5 2 9 3 . 3 3 7. 4 4. 1 g、組成物 4 5

1 m c g Z体重 k 5 2 9 9 . 3 3 1 . 3 1 . 4 g、ヒドロコルチゾ 6 0

ン

1 O m c g Z体重 k 5 2 9 3 . 3 1 7. 2 3. 6 g、ヒドロコルチゾ 4 0

ン結果としては、コーヒー豆から単離される 5つの化合物を含む組成物を 1 O m c g Z体重 k gの量を投与することにより、アジュバン卜誘導関節炎を 1 0 0 %抑制できた。 1 m e g k g レベルでは組成物によって 6 9 %の抑制が実現された。これらの値は、体重 g当たり 1 及び 1 0 m c gで投与されるヒドロコルチゾンの場合の 5 0 %及び 5 8 %の活性度より高い。これらの服用量において、組成物で治療を受けた動物は制御グループに匹敵するレベルまで体重が増加した一方、 1 O m c g Z体重 k gのヒドロコルチゾンで治療を受けた動物は、体重の増加率に 5 0 %ほどの減少が見られた。

Claims

請求の範囲

1 . 基本的に、ゲニスティンと、フラビアン酸と、ダイゼイン（ d

1 a d z i e n ) と、夕"ィジン（ d i a d z i n )、チロシン一グリシンーセリン—アルギニン—セリンのアミノ酸配列を有するぺプチドと、を含むことを特徴とする組成物。

2 . 請求項 1 記載の組成物において、この組成物を薬理的に容認可能なキャリアと共に用いることを特徴とする薬剤組成物。

3 . ゲニスティンと、フラビアン酸と、ダイゼインと、ダイジンと、チロシン—グリシン—セリン—アルギニンーセリンのアミノ酸配列を有するペプチドと、を含む組成物の製造方法であって；次の方法によりコ一七一豆からの抽出によって、前記各化合物を単離するステツプを含み、

前記各化合物の単離ステップが、

水を所定の温度に加熱するステップと、

前記加熱水を微小粒子に霧状化するステップと、

コーヒー豆を前記加熱され霧状化された水粒子に減圧状態の下で接触させるステップと、

その結果生じる水粒子を凝縮させるステップと、

その結果生じる冷却された水を收集するステップと、その結果生じる液体抽出物を、次の方法により凝固させるステツプを含み、

その方法は、

吸収剤を準備するステップと、

前記吸収剤材料を前記抽出物と接触させるステップと、その結果生じる湿潤吸収剤材料を乾燥して前記抽出物の固状体を生産するステップと、

前記組成物を含む溶液を前記抽出物から単離するステップと、前記単離化合物を混合して前記組成物を形成するステップと、を含むことを特徴とする方法。

4 . 請求項 3において、前記吸収性材料はガラス繊維であることを特徴とするゲニスティンと、フラビアン酸と、ダイゼインと、ダィジンと、チロシン一グリシン一セリン一アルギニン一セリンのァミノ酸配列を有するペプチドと、を含む組成物の製造方法。

5 . 請求項 3 において、前記乾燥は冷凍乾燥であることを特徴とするゲニスティンと、フラビアン酸と、ダイゼインと、ダイジンと、チロシン一グリシン—セリン—アルギニン—セリンのアミノ酸配列を有するペプチドと、を含む組成物の製造方法。

6 . 請求項 5 において、前記冷凍乾燥は、約— 1 0 °Cないし一 7 o °cの温度範囲で実施されることを特徴とするゲニスティンと、フラビアン酸と、ダイゼインと、ダイジンと、チロシン一グリシン一セリン—アルギニンーセリンのアミノ酸配列を有するペプチドと、を含む組成物の製造方法。

7 . 基本的に、ゲニスティンと、フラビアン酸と、ダイゼインと、ダイジンと、チロシン—グリシン—セリン—アルギニン—セリンのアミノ酸配列を有するペプチドと、を含むことを特徴とするコ一ヒ —豆抽出物。

8 . ヒ卜を含む動物の炎症を抑制する方法であって；

前記動物に、基本的に、ゲニスティンと、フラビアン酸と、ダイゼインと、ダイジンと、チロシン一グリシン一セリン一アルギニン一セリンのアミノ酸配列を有するペプチドと、を含む組成物の有効量を投与するステツプを含むことを特徴とする方。