DL-HIDROXIBENCENAMIDAS QUE PRESENTAN ACTIVIDAD ANTICONVULSIONANTE CAMPO TÉCNICO La presente invención se relaciona con nuevas DL-hidroxibencenamidas las cuales presentan actividad anticonvulsionante, y con métodos para la preparación de tales compuestos. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los compuestos DL-4-hidroxi-4-fenilhexanam¡da, DL-3-hidroxi-3-fenilpentanamida y DL-2-hidroxi-2-fenilbutiramida presentan un amplio espectro de actividad anticonvulsionante. Protegen a ratones contra ataques provocados por el pentilenotetrazol, la bicuculina, la 4-aminopiridina, la tiosemicarbazida y contra el electrochoque máximo (Meza Toledo et al, Arzneim. Forsch. 40 (II), 1289 (1990)). También protegen a gatos y ratas contra el kindling hipocampal (Solís et al , Arch. Neurocien. (Méx.) 1 , 99 (1996)). Además la DL-3-hidroxi-3-fenilpentanam¡da protege a ratas contra el síndrome de abstinencia al ácido gama-amino butírico, un modelo de epilepsia focal el cual muestra una extraordinaria resistencia a los antiepilépticos clásicos (Brailowsky et al, Epilepsy Res. 11 , 167 (1992)). La DL-3-hidroxi-3- fenilpentanamida también produce una disminución significativa de las descargas de punta y espiga en un modelo de epilepsia congénita de la rata de Estrasburgo (Brailowsky et al citado arriba). Buscando incrementar la actividad biológica de las amidas mencionadas se sintetizó una serie nueva de DL-hidroxi-bencenamidas. DESCRIPCIÓN DETALLADA Se sintetizaron DL-hidroxibencenamidas que contienen los grupos trifluorometilo y cloro en el anillo aromático. Los compuestos preparados son: DL-2-hidroxi-2-fenil hexanamida (1), DL-2-hidroxi-2-(3', 4'-diclorofenil) hexanamida (2), DL-3-hidroxi-3- (3', 5'-bistrifluorometilfenil) pentanamida (3), DL-3-hidroxi-3-fenil heptanamida (4) y DL-4-hidroxi-4-(4'-trifluorometilfenil)-hexanamida (5). Se utilizó la prueba del pentilenotetrazol para evaluar la actividad anticonvulsionante de cada compuesto. Como puede observarse en la Tabla 1 , los compuestos 1 , 3, 4, y 5 presentaron una actividad anticonvulsionante inusitadamente alta, siendo para el compuesto 3 superior en más de cuatro veces con respecto a la actividad que presentó el compuesto no halogenado. Lo anterior fué particularmente inesperado basados en la naturaleza de ésos compuestos, y demuestra que existen diferencias sustanciales inesperadas en la actividad de los compuestos mencionados. Basados en el efecto
protector de los compuestos de la invención contra las convulsiones producidas por el pentilenotetrazol, puede esperarse que sean efectivos en la epilepsia tipo ausencias.
En los ejemplos siguientes, los puntos de fusión se determinaron en un aparato
Mettler-Toledo FP62. Los espectros de infrarrojo se obtuvieron en un espectrómetro
Perkin Elmer modelo Spectrum GX2000 con ATR. Los espectros de RMN-1H (400
MHz) y de RMN-13C (100 MHz) se obtuvieron en un aparato Jeol Eclipse y los desplazamientos químicos se indican en δ (ppm) en CDCI3 utilizando TMS como estándar interno.
Síntesis de DL-2-hidroxi-2-(fenil ó 3', 4'-diclorofenil) hexanamidas
Los compuestos 1 y 2 se prepararon mediante una condensación entre la respectivas cetonas: valerofenona y 3',4'-diclorovalerofenona con el cianuro de trimetilsilil, en presencia de yoduro de zinc, para formar las cianhidrinas correspondientes, las cuales se hidrolizaron parcialmente en medio ácido para formar las amidas 1 y 2.
EJEMPLO 1 Síntesis de la DL-2-hidroxi-2-fenil hexanamida (1)
En un matraz de fondo redondo de 500 mi y dos bocas se colocaron, bajo atmósfera de nitrógeno, 37.5 g (0.2314 moles) de valerofenona, 1.154 g (0.0036 moles) de yoduro de zinc, 103 mi de cloruro de metileno y 26.79 g (0.2698 moles) de cianuro de trimetilsilil. La reacción se mantuvo con agitación a temperatura ambiente durante 12 horas. Posteriormente la mezcla de reacción se concentró, el residuo se enfrió,
se le adicionó 50 mi de HCI 37 %, se saturó con HC y se dejó reposar hasta el día siguiente. El sólido formado se separó por filtración y se recristalizó con benceno obteniéndose 14 g (29.2 %) de 1 con un p.f. 83-84 °C. IR (ATR): 1668, 3267, 3444 cm"1 ; RMN-1H, 300 MHz (CDCI3) δ: 0.89 (t, 3H, H6, J= 6.69 Hz), 1.32 (m, 2H, H5), 1.99 (m, 2H, H4), 2.17 (m, 2H, H3), 3.73 (s, 1 H, -OH), 6.07 (sa, 1 H, -NH2), 6.54 (sa, 1H, -NH2), 7.44 (m, 5H, 2; 3\ 4\ 5-, 6-); RMN-13C, 75 MHz (CDCI3) δ: 14.15 (C6), 22.98 (C5), 25.64 (C4), 39.02 (C3), 78.81 (C2), 125.59 (C3-, 5')> 127.82(C4 , 128.50 (C2-, 6'), 142.61 (C ), 177.55 (C1). EJEMPLO 2 Síntesis de la DL-2-hidrox¡-2-(3', 4'-diclorofenil) hexanamida (2) Se sintetizó con el método descrito para el compuesto 1. Se utilizó una mezcla de reacción conteniendo: 11.55 g (0.05 moles) de 3',4'-diclorovalerofenona, 248 mg (0.0007769 moles) de yoduro de zinc, 25 mi de cloruro de metileno y 5.8 g (0.0584 moles) de cianuro de trimetilsilil. Después de concentrar, hidrolizar (15 mi HCI 37 %), filtrar y recristalizar con benceno, se obtuvieron 5 g (36.2 %) de 2 con un p.f. 103- 104 °C. IR (ATR): 1671 , 3257, 3467 crn"1 ; RMN-1H, 300 MHz (CDCI3) δ: 0.86 (t, 3H, H6, J= 7.1 Hz), 1.28 (m, 2H, H5), 1.99 (m, 2H, H4), 2.15 (m, 2H, H3), 3.76 (s, 1H, - OH), 6.08 (sa, 1H, -NH2), 6.78 (sa, 1 H, -NH2), 7.39 (d, 1 H, H5-, J= 2 Hz), 7.43 (d, 1 H, H6-, J= 2 Hz), 7.68 (s, 1H, H2 ); RMN-13C, 75 MHz (CDCI3) δ: 14.34 (C6), 23.10 (C5), 25.80 (C4), 39.57 (C3), 78.64 (C2), 125.49 (C5 ), 128.09 (C6 , 130.56 (C2'), 132.18 (C3 ), 132.78 (C4 ), 143.08 (C ), 176.91 (d).
Síntesis de DL-3-hidroxi-3-(3\ 5'-bistrifluorometilfenil) pentanamida (3) y de DL-3- hidroxi-3-fenil heptanamida (4)
Los compuestos 3 y 4 se prepararon mediante una condensación entre la 3', 5'- bistrifluorometilpropiofenona y la valerofenona con el bromoacetato de etilo, en presencia de zinc, para formar los hidroxiésteres correspondientes los cuales se trataron con hidróxido de amonio para producir las amidas 3 y 4
Síntesis de la DL-3-hidroxi-3-(3', 5'-bistr¡fluorometilfenil) pentanamida (3)
A. Síntesis del DL-3-hidroxi-3-(3',5'-bistrifluorometilfenil) pentanoato de etilo
A una mezcla agitada que contenía: 38 g (0.1406 moles) de 3', 5'- bistrifluorometilpropiofenona, 29.33 g (0.1757 moles) de bromoacetato de etilo, 30 mi de benceno y 9 mi de éter etílico anhidro, se le adicionaron 14.70 g (0.2248 moles) de zinc activado y se reflujo durante 3 horas. La mezcla de reacción se hidrolizó con 126 mi de H2S0 al 10 % y la capa orgánica se lavó sucesivamente con H2S0 al 5 % (49 mi), Na2C03 al 10 % (18 mi), H2S04 al 5 % (20 mi) y finalmente con agua (2 x 50 mi). La capa bencénica se guardó y las soluciones acidas combinadas se extrajeron con éter etílico (2 x 50 mi). Los extractos etéreos y la solución bencénica inicial se reunieron, se secaron sobre MgS0 anhidro, se filtraron y se concentraron. El residuo se destiló a presión reducida obteniéndose 34.7 g (68.9 %) de DL-3- hidroxi-3-(3',5'-bistrifluorometilfenil) pentanoato de etilo el cual destiló a 151-152 °C a 25 mm de Hg. IR (ATR): 1714, 3491 crτϊ1; RMN-1H, 300 MHz (CDCI3) δ: 0.77 (t, 3H, H5, J= 7.6 Hz), 1.09 (t, 3H, -C00CH2-CH3, J= 7.2 Hz), 1.85 (m(AA'X3), 2H, H4), 2.91 (m(AA'), 2H, H2), 4.04 (m, 2H, -COOCH2Me, J= 7 Hz), 4.55 (sa, 1 H, -OH), 7.76 (s, 1H, H_y), 7.88 (s, 2H, H2- ,β'): RMN-13C, 75 MHz (CDCI3) δ: 7.53 (C5), 13.75 (Cera), 35.75 (C4), 44.36 (C2), 61.14 (C.0CH2-), 75.04 (C3), 120.98 (C4-, 3J13C19F= 3.75 Hz), 123.20 (CCF3-, 1J13C19F= 232.5 Hz), 125.52 (C2; &, 3J13C19F = 2.8 Hz), 131.45 (C3\ s-, 2J13 C 19F= 33 Hz), 148.42 (O), 172.51 (C1).
B. Síntesis de la DL-3-hidroxi-3-(3', 5'-bistr¡fluorometilfenil) pentanamida (3)
Una mezcla conteniendo 29.1 g (0.0812 moles) de DL-3-hidroxi-3-(3',5'- bistrifluorometilfenil) pentanoato de etilo, 100 mi de etanol y 100 mi de NH OH al 28 % se enfrió a 0 °C y se saturó con NH3 . El matraz se tapó con un tapón de caucho y se mantuvo a temperatura ambiente durante 30 días. Después la mezcla de reacción se enfrió, se le adicionó 7 g de NaCI sólido y se extrajo con éter etílico (100 mi). El extracto etéreo se concentró y el residuo se recristalizó con agua obteniéndose 7 g (26.1 %) de 3 con un p.f. 84-85 °C. IR (ATR): 1672, 3196, 3359 cm"1 ; RMN-1H, 300 MHz (CDCI3) δ: 0.74 (t, 3H, H5, J= 7.40 Hz), 1.81 (m, 2H, H4),
2.72 (s, 1 H, H2), 5.28 (s, 1 H, -OH), 5.84 (sa, 1 H, -NH2), 6.17 (sa, 1 H, -NH2), 7.77 (s, 1 H, H4 , 7.86 (s, 2H, H2-, 6-); RMN-13 C, 75 MHz (CDCI3) δ: 7.83 (C5), 35.92 (C4), 45.53 (C2), 75.71 (C3), 121.33 (C4-, 3J13 C 19F= 3.75 Hz), 123.78 (CCF3, 1J13C19F= 270.75 Hz), 125.75 (C2-, es 3J13C19F= 4.9 Hz), 131.85 (C3', 5; 2J13C19F= 33 Hz), 148.75 (C ), 174.71 (C1). EJEMPLO 4 Síntesis de la DL-3-hidroxi-3-fenil-heptanamida (4)
A. Síntesis del DL-3-hidroxi-3-feniI heptanoato de etilo
Se sintetizó con el método descrito para el compuesto DL-3-hidroxi-3-(3',5'- bistrifluorometilfenil) pentanoato de etilo. Se utilizó una mezcla de reacción conteniendo: 51.4 g (0.3172 moles) de valerofenona, 66.17 g (0.3965 moles) de bromoacetato de etilo, 66 mi de benceno, 20 mi de éter etílico anhidro y 32.40 g
(0.4955 moles) de zinc activado. Después de la hidrólisis, extracción y destilación, se obtuvieron 58.8 g (74.1 %) del DL-3-hidroxi-3-fenil heptanoato de etilo, el cual destiló a 154-155 °C a 15 mm de Hg. IR (ATR): 1712, 3499 cm"1 ; RMN-1H, 400 MHz
(CDCI3) δ: 0.81 (t, 3H, H7, J= 7.32 Hz), 1.08 (t, 3H, -COOCH2-CH3, J= 6.96 Hz), 1.23
(m, 4H, H5| 6), 1.77 (ddd, 2H, H4, J= 4, 4.6 Hz), 2.88 (m(AA'), 2H, H2), 4.01 (q, 2H, -
COOCH2Me, J= 7 Hz), 4.39 (s, 1 H, -OH), 7.21 (d,d, 2H, H4s J= 2, 4 Hz), 7.31 (dd,
2H, H3', 5', J= 2, 4 Hz), 7.41 (dd, 1 H, H2', 6-, J= 2, 4 Hz); RMN-13C, 100 MHz (CDCI3) δ: 14.02 (C7), 14.05 (CCHS), 23.01 (C6), 25.59 (C5), 43.14 (C4), 45.47 (C2), 60.72 (C.0CH2-
), 75.09 (C3), 125.13 (C3-, 5')> 126.72 (C4 , 128.32 (C2-, &), 145.64 (Cr), 173 (C1).
B. Síntesis de la DL-3-hidroxi-3-fenil-heptanamida (4)
Una mezcla conteniendo: 57.8 g (0.2312 moles) de DL-3-hidroxi-3-fenil heptanoato de etilo, 410 mi de etanol absoluto y 290 mi de NH4OH al 28 % se enfrió a 0 °C y se saturó con NH3 (g). El matraz se tapó con un tapón de caucho y se mantuvo a temperatura ambiente durante cuatro semanas. Después la mezcla de reacción se enfrió, se le adicionó 20 g de NaCI sólido y se extrajo con tres porciones de 100 mi de éter etílico cada una. Los extractos etéreos reunidos se concentraron y el residuo se recristalizó con agua obteniéndose 27.5 g (53.8 %) de 4 con un p.f. 93-94 °C. IR (ATR): 1660, 3219, 3410 cm"1 ; RMN-1H, 300 MHz (CDCI3) δ: 0.80 (t, 3H, H7, J= 7.1 Hz), 0.99 (m, 2H, H6), 1.24 (m, 2H, H5), 1.77 (m, 2H, H4), 2.67 (m(AA'), 2H, H2), 5.13 (s, 1 H, -OH), 5.84 (sa, 1 H, -NH2), 6.03 (sa, 1H, -NH2), 7.28 (m, 5H, H2-, 3\ 4-, s-, β-); RMN-13C, 75 MHz (CDCI3) δ: 13.90 (C7), 22.81 (C6), 25.32 (C5), 42.90 (C4), 46.10
(C2), 75.26 (C3), 124.95 (C3-, 5'), 126.55 (C*), 128.06 (C2- ,6')- 145.39 (Cr), 174.95
(Ci).
Síntesis de DL-4-hidroxi-4-(4'-tr¡fluorometilfenil)-hexanamida (5)
El compuesto 5 se obtuvo mediante una condensación entre la 4'- trifluorometilpropiofenona con el succinato de dietilo, en presencia de hidruro de sodio para formar los hemiésteres correspondientes los cuales se descarbetoxilaron en medio ácido, para producir la DL-5-etil-5-(4'-trifluorometilfenil) butirolactona. El tratamiento de la lactona con hidróxido de amonio condujo a la amida 5.
EJEMPLO 5 Síntesis de la DL-4-hidroxi-4-(4'-trifluorometilfenil) hexanamida (5) A. Síntesis de la DL-5-etil-5-(4'-trifluorometilfenil) butirolactona Una mezcla conteniendo: 25 g (0.1237 moles) de 4'-trifluorometilpropiofenona, 115 mi de benceno seco, 64.57 g (0.3711 moles) de succinato de dietilo, 8.91 g (0.3712 moles) de hidruro de sodio y 1.8 mi de etanol absoluto se agitó durante 3 horas en atmósfera de nitrógeno. Después se acidificó con 26 mi de CH3COOH glacial, se diluyó con 112 mi de agua y se extrajo con cuatro porciones de 50 mi de éter cada una. Los extractos etéreos reunidos se lavaron con dos porciones de 100 mi de Na2Cθ3 al 5 % y la fase etérea se guardó. La solución alcalina se acidificó con H2S04 al 98 % y se extrajo con dos porciones de 50 mi de éter cada una. La fracción etérea obtenida de la fase acida se reunió con la extraída de la fase alcalina, se secaron sobre MgS04 anhidro, se filtraron y se concentraron. Se obtuvieron 69.6 g de un producto espeso, al cual se le adicionaron 99 mi de CH3COOH glacial, 66 mi de HBr al 48 % y 33 mi de agua. La mezcla de reacción se reflujo durante 24 horas, se concentró y se extrajo con cuatro porciones de 50 mi de éter etílico cada una. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con una solución saturada de NaHC03 al 5 % y
la fase etérea se guardó. La fase alcalina se acidificó con H2SO4 al 98 %, se extrajo con éter, los extractos etéreos reunidos se concentraron y el residuo obtenido se trató con 99 mi de CH3COOH glacial, 66 mi de HBr al 48 %, 33 mi de agua y se reflujo durante 40 horas. Posteriormente la solución obtenida se trató como se mencionó previamente. La fracción etérea de éste segundo tratamiento se reunió con la solución etérea separada inicialmente de la reacción original. Estas se lavaron con una solución saturada de NaCI y se secaron sobre MgS04 anhidro. Posteriormente se filtró, se concentró y el residuo se destiló fraccionadamente al vacío obteniéndose 7.8 g (24.4 %) de la DL-5-etil-5-(4'-trifluorometilfenil) butirolactona la cual destiló a 152-154 °C a 30 mm de Hg. IR (ATR): 1779 cm"1; RMN-1H, 400 MHz (CDCI3) δ: 0.74 (t, 3H, -CH3), 1.92 (q, 2H, -CH2Me), 2.39 (m, 4H, - CH2-CH2-), 7.47 (m, 4H, H2-, 3-, 5', β1); RMN-13C, 100 MHz (CDCI3) δ: 8.28 (C7), 29.85 (C6), 34.8 (C4), 35.26 (C3), 89.55 (C5), 118.78 (Cera), 125.75 (C3-, 5-), 125.92 (C2-, &), 129.49 (C4), 147 (Cr), 176.58 (C2) . B. DL-4-h¡droxi-4-(4'-trifluorometilfenil) hexanamida (5)
Una mezcla conteniendo: 3.9 g (0.0151 moles) de DL-5-etil-5-(4'-trifluorometilfenil) butirolactona, 15 mi de etanol absoluto y 15 mi de NH4OH al 28 % se enfrió a 0 °C y se saturó con NH3 . El matraz se tapó con un tapón de caucho y se mantuvo a temperatura ambiente durante tres semanas. Después la mezcla de reacción se enfrió, se le adicionó 1.5 g de NaCI sólido y se extrajo con tres porciones de 10 mi de éter etílico cada una. Los extractos etéreos reunidos se concentraron y el residuo se recristalizó con agua obteniéndose 1.0 g (24.1 %) de 5 con un p.f. 129-130 °C. IR (ATR): 1682, 3198, 3388 crτϊ1; RMN-1H, 400 MHz (CDCI3) δ: 0.74 (t, 3H, H6, J= 7.48 Hz), 1.83 (q, 2H, H5, J= 7.52 Hz), 2.11 (m, 4H, H2, 3), 4.35 (s, 1 H, -OH), 5.63 (sa, 1 H, -NH2), 5.84 (sa, 1 H, -NH2), 7.55 (m(AA'BB'), 4H, H?, 3-, 5\ 6'); RMN-13C, 100 MHz (CDCI3) δ: 7.80 (C6), 30.38 (C3), 36.61 (C5), 36.98 (C2), 76.78 (C4), 124.6 (Cera), 125.12 (CJJ-, 51), 126.15 (C2; &), 128.7 (C4-), 149.94 (Cr), 176.85 (Cι) . EJEMPLO 6 Actividad anticonvulsionante A. Métodos generales
Se utilizaron ratones albino macho de la cepa CF-1 (Instituto Nacional de Virología, México D. F.) de 18-25 g de peso, los cuales se colocaron en jaulas en grupos de 20. Los ratones se mantuvieron a temperatura ambiente (20-24 °C), con agua y croquetas (marca Lab Diet 5008) ad libitum, con un ciclo de 12-h luz-oscuridad. Los
compuestos DL-2-hidroxi-2-fenil butiramida, DL-3-hidroxi-3-fenil pentanamida, DL-4- hidroxi-4-fenil hexanamida y pentilenotetrazol, fueron disueltos en agua, mientras que los compuestos 1-5 se disolvieron en una solución de polietilénglicol-400 al 30 % en agua. La vía de administración de todos los compuestos fué intraperitoneal (i.p.). Se determinó la dosis de pentilenotetrazol que produjo convulsiones y muerte en 100 % de los ratones (CD100) y ésta se utilizó en las evaluaciones realizadas. El valor obtenido de CD100 para el pentilenotetrazol fué de 100 mg kg"1. En la determinación de las curvas dosis-respuesta se utilizaron por separado cinco grupos de 10-20 ratones a los cuales se les administraron los compuestos de prueba vía i.p., y 30 min después se les administró i.p. el pentilenotetrazol a una dosis de 100 mg kg"1. La supresión de los ataques clónicos y de la muerte se consideró el punto final de la evaluación. El vehículo fué inactivo en todas las pruebas realizadas. Las DE50 y los intervalos de confianza al 95 % fueron calculados por el método de Litchfield y Wilcoxon (Tabla 1). Ver Litchfield y cois., J. Pharmacol. Exp. Ther. 96, 99 (1949). Tabla 1
a) Ataques provocados por el pentilenotetrazol (PTZ) en ratones, b) Intervalos de confianza al 95%. c) 20 % de protección a una dosis de 80 mgkg
"1, n=20, d) 61 % de protección a una dosis de 30 mgkg
"1, n=18.
Puesto que la ley de patentes en México no permite patentar el uso de nuevos compuestos con actividad farmacológica, en las reivindicaciones de la presente
solicitud de patente, se incluye el uso de las DL-hidroxibencenamidas como anticonvulsionantes.