WO2005077931A2 - Verfahren zur herstellung von 1-[n2-[3,5-dibrom-n-[[4-(3,4-dihydro-2(1h)-oxochinazolin-3-yl)-1-piperidinyl]carbonyl]-d-tyrosyl]-l-iysyl]-4-(4-pyridinyl)-piperazin - Google Patents

Verfahren zur herstellung von 1-[n2-[3,5-dibrom-n-[[4-(3,4-dihydro-2(1h)-oxochinazolin-3-yl)-1-piperidinyl]carbonyl]-d-tyrosyl]-l-iysyl]-4-(4-pyridinyl)-piperazin Download PDF

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WO2005077931A2 PCT/EP2005/001188 EP2005001188W WO2005077931A2 WO 2005077931 A2 WO2005077931 A2 WO 2005077931A2 EP 2005001188 W EP2005001188 W EP 2005001188W WO 2005077931 A2 WO2005077931 A2 WO 2005077931A2
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Svenja Renner
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
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    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
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Definitions

  • the present application relates to a process for the preparation of the CGRP antagonist 1 - [/ V - [3,5-dibromo- / V - [[4- (3,4-dihydro-2 (1 H) -oxoquinazoline-3- yl) -1-piperidinyl] carbonyl] -D-tyrosyl] -L-iysyl] -4- (4-pyridinyl) -piperazine of the formula
  • WO 98/11128 already describes a production process for gram quantities of the compound of the formula I which comprises chromatographic purification, which is not practical for the production of large quantities.
  • the compound of the formula I is very sensitive to oxidation, which leads to greater losses during production.
  • the object of the present invention was therefore to develop an improved manufacturing process which can also be used on a pilot plant or production scale.
  • chromatographic purification should be avoided using the new method.
  • the yields should be significantly increased at all levels and the product quality (by-product profile, purity, content) should be significantly improved.
  • R 1 is a straight-chain or branched C 6 alkyl or benzyl group, preferably a straight or branched C 1 -C 6 alkyl group, in the presence of 1.0 to 1.2 equivalents, preferably 1.1 equivalents, of a condensation such as carbonyldiimidazole, carbonylditriazole, 1, 2,4-triazole, ⁇ -propanephosphonic anhydride, dicyclohexylcarbodiimide or 1-ethyl-3- (3'-dimethylaminopropyl) carbodiimide, the combination of carbonyldiimidazole and 1, 2,4-triazole is preferably used at temperatures between 0 ° C and 60 ° C, preferably between 10 ° C and room temperature.
  • a condensation such as carbonyldiimidazole, carbonylditriazole, 1, 2,4-triazole, ⁇ -propanephosphonic anhydride, dicyclohexylcarbodiimide
  • Suitable solvents are polar aprotic organic solvents such as tetrahydrofuran, dimethylformamide or / V-methylpyrrolidinone, preference being given to using dimethylformamide.
  • polar aprotic organic solvents such as tetrahydrofuran, dimethylformamide or / V-methylpyrrolidinone, preference being given to using dimethylformamide.
  • R 1 denotes a straight-chain or branched d- 6 alkyl or benzyl group, preferably a C 3 alkyl group, in an oxygen-free solvent, for example methanol, ethanol, isopropanol or mixtures thereof in a ratio of 1: 0.9 to 1: 1.2 , preferably 1: 1.1, suspended, the suspension heated to temperatures from 70 ° to 80 ° C, then cooled to 0 ° C and the solid isolated.
  • an oxygen-free solvent for example methanol, ethanol, isopropanol or mixtures thereof in a ratio of 1: 0.9 to 1: 1.2 , preferably 1: 1.1
  • the purified ester of the general formula IV is saponified in a second step.
  • an oxygen-free aqueous or alcoholic solution of 2.0 to 3.0 equivalents, preferably 2.5 equivalents, of an alkali hydroxide, in particular lithium hydroxide can be added dropwise.
  • the solvent is separated off, for example, by distillation, as a result of which the free acid is 3,5-dibromo- ⁇ / - [[4- (1,4-dihydro-2-oxo-3 (2/4) -quinazolinyl ) -1-piperidinyl] carbonyl] -D-tyrosine of the formula
  • alcohols such as methanol, ethanol or isopropanol are also used as solvents.
  • the free acid of the formula (V) obtained in the second step is mixed with an oxygen-free solution of a compound of the general formula
  • R 2 denotes an amine protective group
  • a polar aprotic organic solvent such as tetrahydrofuran, dimethylformamide or ⁇ / -methylpyrrolidinone, with dimethylformamide being preferably used.
  • a phenylalkoxycarbonyl group with 1 to 3 carbon atoms in the alkoxy part, optionally substituted by a halogen atom, by a nitro or phenyl group, by one or two methoxy groups for example the benzyloxycarbonyl, 2-nitrobenzyloxycarbonyl, 4-nitro benzyloxycarbonyl-, 4-methoxy-benzyloxycarbonyl-, 2-chloro-benzyloxycarbonyl-, 3-chloro-benzyloxycarbonyl-, 4-chloro-benzyloxycarbonyl-, 4-biphenylyl- ⁇ , ⁇ -dimethyl-benzyloxycarbonyl- or 3,5- Dimethoxy- ⁇ , -dimethyl-benzyloxycarbonyl group,
  • alkoxycarbonyl group with a total of 1 to 5 carbon atoms in the alkyl part for example the methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, n-propoxycarbonyl, isopropoxycarbonyl, ⁇ -butoxycarbonyl, 1-methylpropoxycarbonyl, 2-methylpropoxycarbonyl or te / ⁇ . butyloxycarbonyl,
  • the formyl, acetyl or trifluoroacetyl group preference being given to using a straight-chain or branched d- ⁇ -alkyloxycarbonyl or a benzyloxycarbonyl group and particularly preferably the te / butyloxycarbonyl group.
  • tertiary amines such as e.g. Ethyldiisopropylamine, triethylamine or triisopropylamine, preferably in the presence of ethyldiisopropylamine, and a condensing agent instead.
  • Suitable condensing agents are dicyclohexylcarbodiimide, carbonyldiimidazole, carbonylditriazole or 1-ethyl-3- (3'-dimethylaminopropyl) carbodiimide, optionally in the presence of hydroxysuccinimide, hydroxybenzotriazole, p-nitrophenol or pentafluorophenol, which are added in excess.
  • 1-Ethyl-3- (3'-dimethylaminopropyl) carbodiimide is particularly suitable.
  • R 2 denotes an amine protective group
  • R 2 is converted in a fourth step into the compound of the formula I in a conventional manner by splitting off the amine protective group under oxygen-free conditions.
  • a first object of the present invention is thus a process for the preparation of 1 - [/ V 2 - [3,5-dibromo- / V - [[4- (3,4-dihydro-2 (1 W) -oxoquinazolin-3 -yl) -1-piperidinyl] carbonyl] -D-tyrosyl] -L-lysyl] -4- (4-pyridinyl) -piperazine of the formula
  • R 1 denotes a straight-chain or branched C 1-4 alkyl or benzyl group, preferably a straight-chain or branched C 3 alkyl group, coupled in the presence of 1.0 to 1.2 equivalents of a condensing agent and the resulting 3,5-dibromo / V - [[4- (1,4-dihydro-2-oxo-3 (2H) -quinazolinyl) - D-tyrosine-1-piperidinyl] carbonyI] ester of the general formula
  • R 1 denotes a straight-chain or branched C 1 -C 6 -alkyl or benzyl group, preferably a straight-chain or branched C 1 -C 3 -alkyl group, is then crystallized under oxygen-free conditions
  • R 2 is an amine protecting group, coupled and
  • Step 1
  • the solvent mixture is distilled off under vacuum at a maximum of 70 ° C.
  • the residue is suspended in DMF (330 ml), briefly dewatered at 60 ° C. in an oil pump vacuum and the suspension, cooled to 5-10 ° C., is filtered off to separate the precipitated salts (boron salts, common salt).
  • the solution (approx. 365 ml) is hydrogenated in the presence of Raney nickel (3.4 g, 50% water-moist) at 40-60 ° C. and 2 bar.
  • Raney nickel 3.4 g, 50% water-moist
  • 180-200 ml of DMF are distilled off at a maximum of 80 ° C in an oil pump vacuum (note: the water content should be below 2% in order to avoid excessive decomposition of the carbonyldiimidazole (CDI) used below)
  • CDI (64.5 g, 0.4 mol, 1.2 eq.) Is added in portions to the solution, which is cooled to 20-25 ° C, so that a temperature of 35 ° C is not exceeded. After the addition and a short subsequent stirring time, the suspension is cooled to 20-25 ° C. and a mixture of water (490 ml) and methanol (120 ml) is run in. The crystals formed are filtered off at 0 ° C. and washed with a water / methanol mixture (160 ml, 40 ml) and then dried in vacuo. Yield: 85 g (80% of theory, based on 2-nitrobenzaldehyde)
  • Injection system automatic feed system, e.g. HP1090
  • UV detector e.g. DAD, HP1040, cell 10 mm
  • Chromatographic conditions flow constant pump, gradient system, e.g. HP1090 injection system: automatic feed system, e.g. HP1090 injection volume: 5 / I
  • UV detector e.g. DAD, HP1040, cell 10 mm
  • the product phase is first washed with sodium bicarbonate solution (3 x 23ml) and with water (2 x 10ml) and the solvent is distilled off. The residue is taken up in methanol (200 ml) and hydrogenated in the presence of palladium-carbon (1.67 g, 50% water-moist) at 40 ° C. and 4 bar. After filtering the catalyst, the solution is concentrated ( ⁇ 1/8) and cooled to 0 to 4 ° C. Ammonium tetrafluoroborate (5.3 g, 50 mmol, 1.1 eq.) Dissolved in water (19 ml) is added dropwise to this solution. The substance begins to crystallize out. The mixture is stirred for a further 1 hour and then filtered.
  • Injection system automatic feed system e.g. HP1090 injection volume: 10 ⁇ ⁇
  • Solvent A 0.1% 0.01 M octanesulfonic acid sodium salt in triethylammonium phosphate buffer, pH 3.0
  • Solvent B 0.01 M octanesulfonic acid sodium salt in acetonitrile
  • UV detector e.g. DAD, HP1040, cell 10 mm
  • Chromatographic conditions Flow constant pump, gradient system, e.g. HP1090 Injection system: Automatic feed system, e.g. HP1090 Injection volume: 10 ⁇ l
  • Solvent A 0.1% 0.01 M octanesulfonic acid sodium salt in triethylammonium phosphate buffer, pH 3.0
  • Solvent B 0.01 M octanesulfonic acid sodium salt in acetonitrile Gradient Run-Time solvent A solvent B 0 min 70% 30% 3 min 70% 30% 15 min 65 % 35% 45 min 40% 60% 50 min 30% 70% 52 min 30% 70%
  • UV detector e.g. DAD, HP1040, cell 10 mm
  • reaction solution thus prepared is dropped into a solution of 3,4-dihydro-3- (4-piperidinyl) -2 (1 H) -quinazoline (7.21 g, 31.2 mmol, 1.1 eq.) In oxygen-free DMF (150 ml) and then heated to 50-55 ° C and stirred for 1.5 hours. The mixture is cooled to room temperature and dropped into oxygen-free water (550 ml) within 1 hour. The white suspension is stirred overnight at room temperature and then filtered off. The residue is washed with oxygen-free water (4 x 50 ml) and dried in vacuo. Yield: 15.2 g (88% of theory)
  • Injection system automatic feed system, e.g. HP1090 injection volume: 15 ⁇ l
  • UV detector e.g. DAD, HP1040, cell 10 mm
  • Injection system automatic feed system, e.g. HP1090
  • UV detector e.g. DAD, HP1040, cell 10 mm measuring wavelength: 290 nm
  • Injection system automatic feed system e.g. HP1090 injection volume: 4 ⁇ l
  • UV detector e.g. DAD, HP1040, cell 10 mm
  • Flow constant pump, gradient system e.g. HP1090 or HP1100 injection system: automatic feed system e.g. HP1090 injection volume: 7 ⁇ l column: 125 x 4.6 mm i.D.
  • UV detector e.g. DAD, HP1040, cell 10 mm

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  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
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  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Gegenstand der vorliegenden Anmeldung ist ein Verfahren zur Herstellung des CGRP-Antagonisten 1-[N2-[3,5-Dibrom-N-[[4-(3,4-dihydro-2(1H)-oxochinazolin-3-yl)-1-piperidinyl]carbonyl]-D-tyrosyl]-L-Iysyl]-4-(4-pyridinyl)-piperazin der Formel (I) mit Hilfe dessen diese Verbindung in grossen mengen, hohen Ausbeuten und hoher Reinheit hergestellt werden kann.

Description

Verfahren zur Herstellung von 1-[/v2-[3,5-Dibrom-/V-[[4-(3,4-dihydro- 2(1 W)-oxochinazolin-3-yl)-1-piperidinyl]carbonyl]-D-tyrosyl]-L-lysyl]- 4-(4-py ridi ny l)-pi perazi n
Gegenstand der vorliegenden Anmeldung ist ein Verfahren zur Herstellung des CGRP-Antagonisten 1 -[/V -[3,5-Dibrom-/V-[[4-(3,4-dihydro-2(1 H)-oxochinazolin-3-yl)- 1 -piperidinyl]carbonyl]-D-tyrosyl]-L-Iysyl]-4-(4-pyridinyl)-piperazin der Formel
Figure imgf000003_0001
mit Hilfe dessen diese Verbindung in großen Mengen, hohen Ausbeuten und hoher Reinheit hergestellt werden kann.
Hintergrund der Erfindung Die Verbindung 1-[/V2-[3,5-Dibrom-/V-[[4-(3,4-dihydro-2(1 rι/)-oxochinazolin-3-yl)-1- piperidinyl]carbonyl]-D-tyrosyl]-L-lysyl]-4-(4-pyridinyl)-piperazin (I) ist aus der internationalen Patentanmeldung PCT/EP97/04862 (veröffentlicht als WO 98/11128) bekannt und stellt einen hochwirksamen CGRP-Antagonisten zur akuten und prophylaktischen Behandlung von Kopfschmerzen, insbesondere Migräne und Cluster Headache, dar.
In der WO 98/11128 wird bereits ein Herstellverfahren für Grammengen der Verbindung der Formel I beschrieben, welches eine chromatographische Aufreinigung beinhaltet, was zur Herstellung großer Mengen nicht praktikabel ist. Zudem hat sich gezeigt, dass die Verbindung der Formel I sehr oxidationsempfindlich ist, was bei der Herstellung zu größeren Verlusten führt. Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung bestand somit darin, ein verbessertes Herstellverfahren zu entwickeln, das auch im Technikums- bzw. Produktionsmaßstab Anwendung finden kann. Insbesondere sollte nach dem neuen Verfahren auf eine chromatographische Aufreinigung verzichtet werden. Darüber hinaus sollten die Ausbeuten auf allen Stufen deutlich erhöht sowie die Produktqualität (Nebenproduktprofil, Reinheit, Gehalt) signifikant verbessert werden.
Beschreibung der Erfindung
Überraschenderweise hat sich gezeigt, dass ein sauerstofffreies Arbeiten auf jeder Synthesestufe sowohl die Ausbeute als auch die Reinheit der Zwischenprodukte und damit auch die des Endprodukts signifikant erhöht.
Zur Darstellung des CGRP-Antagonisten 1-[Λ -[3,5-Dibrom-N-[[4-(3,4-dihydro-2(1 H)- oxochinazolin-3-yl)-1-piperidinyl]carbonyl]-D-tyrosyl]-L-lysyl]-4-(4-pyridinyl)-piperazin der Formel (I) werden daher in einem ersten Schritt 1.0 bis 1.2 Äquivalente, vorzugsweise 1.1 Äquivalente einer sauerstofffreien Lösung der Verbindung 3,4- Dihydro-3-(4-piperidinyl)-2(1 H)-chinazolin der Formel
Figure imgf000004_0001
mit 1.0 Äquivalenten eines 3,5-Dibrom-D-tyrosinesters der allgemeinen Formel
Figure imgf000004_0002
in der R1 eine geradkettige oder verzweigte Cι-6-Alkyl- oder Benzylgruppe, vorzugsweise eine geradkettige oder verzweigte C^s-Alkylgruppe, bedeutet, in Gegenwart von 1.0 bis 1.2 Äquivalenten, vorzugsweise 1.1 Äquivalenten, eines Kondensations- mittels wie Carbonyldiimidazol, Carbonylditriazol, 1 ,2,4-Triazol, π-Propanphosphon- säureanhydrid, Dicyclohexylcarbodiimid oder 1-Ethyl-3-(3'-dimethylaminopropyl)- carbodiimid, wobei die Kombination von Carbonyldiimidazol und 1 ,2,4-Triazol bevorzugt verwendet wird, bei Temperaturen zwischen 0°C und 60°C, vorzugsweise zwischen 10°C und Raumtemperatur, umgesetzt. Geeignete Lösungsmittel sind polare aprotische organische Lösungsmittel wie Tetrahydrofuran, Dimethylformamid oder /V-Methylpyrrolidinon, wobei Dimethylformamid bevorzugt verwendet wird. Zur weiteren Aufreinigung wird der so erhaltene 3,5-Dibrom-/V-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo- 3(2H)-chinazolinyl)-D-tyrosin-1-piperidinyl]carbonyl]-ester der allgemeinen Formel
Figure imgf000005_0001
in der R1 eine geradkettige oder verzweigte d-6-Alkyl- oder Benzylgruppe, vorzugsweise eine Cι-3-Alkylgruppe, bedeutet, in einem sauerstofffreien Lösungsmittel, beispielsweise Methanol, Ethanol, Isopropanol oder Gemischen daraus im Verhältnis 1 :0.9 bis 1 :1.2, vorzugsweise 1:1.1, suspendiert, die Suspension auf Temperaturen von 70° bis 80°C erhitzt, anschließend auf 0°C abgekühlt und der Feststoff isoliert.
Der gereinigte Ester der allgemeinen Formel IV wird in einem zweiten Schritt verseift. Zu diesem Zweck kann eine sauerstofffreie wässrige oder alkoholische Lösung von 2.0 bis 3.0 Äquivalenten, vorzugsweise 2.5 Äquivalenten, eines Alkalihydroxids, insbesondere Lithiumhydroxid, zugetropft werden. Am Ende der Reaktion wird das Lösungsmittel z.B. durch Destillation abgetrennt, wodurch die freie Säure 3,5-Di- brom-Λ/-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2/4)-chinazolinyl)-1-piperidinyl]carbonyl]-D-tyrosin der Formel
Figure imgf000006_0001
erhalten wird. Als Lösungsmittel kommen neben Wasser auch Alkohole wie Methanol, Ethanol oder Isopropanol zum Einsatz.
In einem dritten Schritt wird die im zweiten Schritt erhaltene freie Säure der Formel (V) mit einer sauerstofffreien Lösung einer Verbindung der allgemeinen Formel
Figure imgf000006_0002
in der R2 eine Amin-Schutzgruppe bedeutet, in einem polaren aprotischen organischen Lösungsmittel wie z.B. Tetrahydrofuran, Dimethylformamid oder Λ/-Methyl- pyrrolidinon, wobei Dimethylformamid bevorzugt verwendet wird, umgesetzt.
Unter einer in den vor- und nachstehenden Definitionen genannten Amin-Schutzgruppe sind die aus der Peptidchemie geläufigen Schutzgruppen zu verstehen, beispielsweise
eine im Phenylkern gegebenenfalls durch ein Haiogenatom, durch eine Nitro- oder Phenylgruppe, durch eine oder zwei Methoxygruppen substituierte Phenylalkoxy- carbonylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen im Alkoxyteil, beispielsweise die Benzyloxycarbonyl-, 2-Nitro-benzyloxycarbonyl-, 4-Nitro- benzyloxycarbonyl-, 4-Methoxy-benzyloxycarbonyl-, 2-Chlor-benzyloxycarbonyl-, 3-Chlor-benzyloxycarbonyl-, 4-Chlor-benzyloxycarbonyl-, 4-Biphenylyl-α,α-di- methyl-benzyloxycarbonyl- oder 3,5-Dimethoxy-α, -dimethyl-benzyloxycarbonyl- gruppe,
eine Alkoxycarbonylgruppe mit insgesamt 1 bis 5 Kohlenstoffatomen im Alkylteil, beispielsweise die Methoxycarbonyl-, Ethoxycarbonyl-, n-Propoxycarbonyl-, Isopropoxycarbonyl-, π-Butoxycarbonyl-, 1 -Methylpropoxycarbonyl-, 2-Methyl- propoxy-carbonyl- oder te/ϊ.Butyloxycarbonylgruppe,
die Allyloxycarbonyl-, 2,2,2-Trichlor-(1 ,1-dimethylethoxy)carbonyl- oder 9-Fluorenyl- methoxycarbonyl-Gruppe oder
die Formyl-, Acetyl- oder Trifluoracetylgruppe, wobei bevorzugt eine geradkettige oder verzweigte d-β-Alkyloxycarbonyl- oder eine Benzyloxycarbonylgruppe und besonders bevorzugt die te/ -Butyloxycarbonylgruppe verwendet wird.
Diese Umsetzung findet in Gegenwart von tertiären Aminen wie z.B. Ethyldiiso- propylamin, Triethylamin oder Triisopropylamin, vorzugsweise in Gegenwart von Ethyldiisopropylamin, und einem Kondensationsmittel statt. Geeignete Kondensationsmittel sind Dicyclohexylcarbodiimid, Carbonyldiimidazol, Carbonylditriazol oder 1-Ethyl-3-(3'-dimethylaminopropyl)-carbodiimid, gegebenenfalls in Gegenwart von Hydroxysuccinimid, Hydroxybenzotriazol, p-Nitrophenol oder Pentafluorphenol, welche im Überschuss zugegeben werden. Besonders geeignet ist 1-Ethyl-3-(3'- dimethylaminopropyl)-carbodiimid.
Die so erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel
Figure imgf000008_0001
in der R2 eine Amin-Schutzgruppe bedeutet, wird in einem vierten Schritt durch Abspaltung der Amin-Schutzgruppe unter sauerstofffreien Bedingungen auf übliche Weise in die Verbindung der Formel I übergeführt.
Durch dieses Verfahren wird die Verbindung der Formel I mit einer Gesamtausbeute von 55% und einer Reinheit > 99% erhalten.
Ein erster Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist somit ein Verfahren zur Herstellung von 1-[/V2-[3,5-Dibrom-/V-[[4-(3,4-dihydro-2(1 W)-oxochinazolin-3-yl)-1-pi- peridinyl]carbonyl]-D-tyrosyl]-L-lysyl]-4-(4-pyridinyl)-piperazin der Formel
Figure imgf000008_0002
dadurch gekennzeichnet, dass
(a) 1.0 bis 1.2 Äquivalente einer sauerstofffreien Lösung der Verbindung 3,4- Dihydro-3-(4-piperidinyl)-2(1r7)-chinazolin der Formel
Figure imgf000009_0001
mit 1.0 Äquivalenten eines 3,5-Dibrom-D-tyrosinesters der allgemeinen Formel
Figure imgf000009_0002
in der R1 eine geradkettige oder verzweigte C^-Alky!- oder Benzylgruppe, vorzugsweise eine geradkettige oder verzweigte Cι-3-Alkylgruppe, bedeutet, in Gegenwart von 1.0 bis 1.2 Äquivalenten eines Kondensationsmittels gekuppelt und der entstandene 3,5-Dibrom-/V-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2H)-chinazolinyl)- D-tyrosin-1-piperidinyl]carbonyI]-ester der allgemeinen Formel
Figure imgf000009_0003
in der R1 eine geradkettige oder verzweigte C-ι-6-Alkyl- oder Benzylgruppe, vorzugsweise eine geradkettige oder verzweigte C-ι-3-Alkylgruppe, bedeutet, anschließend unter sauerstofffreien Bedingungen kristallisiert wird,
(b) der so erhaltene 3,5-Dibrom-Λ/-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2H)-chinazoIinyl)-D- tyrosin-1-piperidinyl]carbonyl]-ester der allgemeinen Formel IV durch Zutropfen einer sauerstofffreien wässrigen oder alkoholischen Lösung von 2.0 bis 3.0 Äquivalenten eines Alkalihydroxids verseift wird, wodurch die freie Säure 3,5-Dibrom-Λ/-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2H)-chinazolinyl)-1 -piperidinyl]- carbonyl-D-tyrosin der Formel
Figure imgf000010_0001
erhalten wird,
(c) die freie Säure der Formel V mit einer sauerstofffreien Lösung einer Verbin- düng der allgemeinen Formel
Figure imgf000010_0002
in der R2 eine Amin-Schutzgruppe bedeutet, gekuppelt und
(d) die Amin-Schutzgruppe der entstandenen Verbindung der allgemeinen Formel
Figure imgf000011_0001
in der R2 eine Amin-Schutzgruppe bedeutet, unter sauerstofffreien Bedingungen abgespalten wird, wodurch die erfindungsgemäße Verbindung der Formel I rein erhalten wird.
Experimenteller Teil
Folgende Abkürzungen werden verwendet:
CDI Carbonyldiimidazol
DMF Dimethylformamid d.Th. der Theorie eq. Äquivalent(e) konz. konzentriert
MtBE Methyl-terf.-butylether
Smp. Schmelzpunkt
TEAP Triethylaminphosphat
Stufe 1 :
Herstellung von 3,4-Dihydro-3-[1-(phenylmethyl)-4-piperidinyl]-2(1 H)-chinazolin
Figure imgf000012_0001
Zu einer inertisierten Lösung von 2-Nitrobenzaldehyd (50 g, 0.33 mol, 1.0 eq.) in Methanol (240 ml) wird bei 10-20°C 4-Aminobenzylpiperidin (66.2 g, 0.35 mol, 1.05 eq.) zudosiert. Die Lösung wird auf 40-45°C erwärmt und etwa 1 Stunde nachgerührt. Danach wird auf 20-25°C abgekühlt und mit etwas konz. Salzsäure auf einen pH von 9 eingestellt. Zu dieser Lösung werden gleichzeitig konz. Salzsäure (chemisch rein, ca. 37%ig, 12 ml) und eine aus Natriumborhydrid (7.1 g, 0.19 mol, 0.57 eq.), Wasser (15 ml) und konz. Natronlauge (0.3 ml, chemisch rein, etwa 45%ig) hergestellte Suspension so zudosiert, dass der eingestellte pH konstant bleibt (Vorsicht, Gasentwicklung, exotherm!). Nach Zugabe wird noch etwa 1 Stunde nachgerührt, mit konz. Salzsäure (chemisch rein, ca. 37%ig, 65 ml) auf pH 1-1.5 gestellt (Vernichtung überschüssigen Natriumborhydrids!) und schließlich mit konz. Natronlauge (chemisch rein, ca. 45%ig, 38 ml) wieder auf pH 9 zurückgestellt.
Das Lösemittelgemisch wird unter Vakuum bei maximal 70°C abdestilliert. Der Rückstand wird in DMF (330 ml) suspendiert, kurz bei 60°C im Olpumpenvakuum entwässert und die auf 5-10°C gekühlte Suspension zur Abtrennung der ausgefallenen Salze (Borsalze, Kochsalz) filtriert.
Die Lösung (etwa 365 ml) wird in Gegenwart von Raney-Nickel (3.4 g, 50% wasserfeucht) bei 40-60°C und 2 bar hydriert. Nach dem Abfiltrieren des Katalysators werden 180-200 ml DMF bei maximal 80°C im Olpumpenvakuum abdestilliert (Anm.: Der Wassergehalt soll unter 2% liegen, um eine übermäßige Zersetzung des im Folgenden eingesetzten Carbonyldiimidazols (CDI) zu vermeiden)
CDI (64.5 g, 0.4 mol, 1.2 eq.) wird zu der auf 20-25°C gekühlten Lösung portionsweise zugegeben, sodass eine Temperatur von 35°C nicht überschritten wird. Nach der Zugabe und einer kurzen Nachrührzeit wird die Suspension auf 20-25°C abgekühlt und ein Gemisch aus Wasser (490 ml) und Methanol (120 ml) zulaufen gelassen. Die gebildeten Kristalle werden bei 0°C abfiltriert und mit einem Wasser/- Methanol-Gemisch (160 ml, 40 ml) nachgewaschen und anschließend im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 85 g (80% d.Th., bezogen auf 2-Nitrobenzaldehyd)
Physikochemische Charakterisierung 3,4-Dihydro-3-[1 -(phenylmethyl)-4-piperidinyl]-
2(1 H)-chinazolin:
Smp.: 205-206°C Reinheit: 99.7% HPLC-Peakfläche
Chromatographische Bedingungen:
Flusskonstante Pumpe, Gradientensystem, z.B. HP1090
Einspritzsystem: Automatisches Aufgabesystem, z.B. HP1090
Einspritzvolumen 6 μ\ Säule: 250 x 4.6 mm i.D.
Stationäre Phase: Hypersil BDS CPS; 3 μm
Mobile Phase: Lösungsmittel A: 0.05M Triethylammoniumacetat pH = 5.0 Lösungsmittel B: Methanol Gradient Run-Time Lösungsmittel A Lösungsmittel B 0 min 90% 10% 5 min 90% 10% 30 min 70% 30% 40 min 30% 70% 55 min 10% 90%
Equilibrierungszeit: 8 Minuten
Laufzeit: 55 Minuten
Ofentemperatur: 45°C _
Durchfluss: 0.7 ml / Minute
Detektor: UV-Detektor, z.B. DAD, HP1040, Zelle 10 mm
Messwellenlänge: 250 nm
Stufe 2:
Herstellung von 3,4-Dihydro-3-(4-piperidinyl)-2(1 r7)-chinazolin
Figure imgf000014_0001
3,4-Dihydro-3-[1-(phenylmethyl)-4-piperidinyl]-2(1 H)-chinazolin (52 g, 0.16 mol, 1.0 eq.) wird in Ethanol (260 ml) gelöst und in Gegenwart von Palladiumkohle (20.8 g, 50% wasserfeucht) bei 60°C und 2 bar hydriert. Nach dem Abfiltrieren des Katalysators wird das Lösemittelgemisch (Ethanol, Toluol) im Vakuum bei maximal 70°C abdestilliert und der Rückstand zuerst mit Methanol (52 ml), dann mit MtBE (170 ml) versetzt und die Mischung mindestens 30 Minuten auf Rückfluss erhitzt. Aus der auf unter 0°C abgekühlten Lösung kristallisiert die Substanz aus, wird abfiltriert, mit MtBE (70 ml) nachgewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 31.5 g (85% d.Th.)
Physikochemische Charakterisierung 3,4-Dihydro-3-(4-piperidinyl)-2(1 H)-chinazolin: Smp.: 195°C Reinheit: 99.7% HPLC-Peakfläche,
Chromatographische Bedingungen: Flusskonstante Pumpe, Gradientensystem, z.B. HP1090 Einspritzsystem: Automatisches Aufgabesystem, z.B. HP1090 Einspritzvolumen: 5 /I
Säule: 250 x 4.6 mm i.D.
Stationäre Phase: Nucleosil C18 AB; 5 μm
Mobile Phase: Lösungsmittel A: 0.5% KH2P0 , pH 3.0 Lösungsmittel B: Methanol / Acetonitril 50 / 50 Gradient Run-Time Lösungsmittel A Lösungsmittel B 0 min 90% 10% 15 min 90% 10% 30 min 50% 50% 45 min 20% 80%
Equilibrierungszeit: 8 Minuten
Laufzeit: 45 Minuten
Ofentemperatur: Raumtemperatur
Durchfluss: 0.8 ml / Minute
Detektor: UV-Detektor, z.B. DAD, HP1040, Zelle 10 mm
Messwellenlänge: 254 nm
Stufe 3:
Herstellung von [(5S)-5-Amino-6-oxo-6-[4-(4-pyridinyl)-1-piperazinyl]hexyl]-1 ,1 -di- methylethylester-mono[tetrafluoroborat(1 -)]-carbamoylsäure, roh
Figure imgf000015_0001
Zu einer Lösung von Z-Lys(Boc)-OSu (22.32 g, 46 mmol, 1.0 eq.) in DMF (37 ml) wird eine Lösung von 1-(4-Pyridyl)-piperazin (8.05 g, 49 mmol, 1 ,05 eq.) in DMF (25 ml) innerhalb 30 Minuten zudosiert und die Mischung noch 4 Stunden nachgerührt. Danach werden Toluol (270 ml) und Natriumhydrogencarbonatlösung (4.5 g auf 65 ml Wasser) zugegeben und die organische Phase abgetrennt. Die wässrige Phase wird noch zweimal mit Toluol (270 ml) nachextrahiert und anschließend verworfen. Die Produktphase wird zuerst mit Natriumhydrogencarbonatlösung (3 x 23ml) und mit Wasser (2 x 10ml) nachgewaschen und das Lösemittel abdestilliert. Der Rückstand wird mit Methanol (200 ml) aufgenommen und in Gegenwart von Palladiumkohle (1.67 g, 50% wasserfeucht) bei 40°C und 4 bar hydriert. Nach Filtration des Katalysators wird die Lösung aufkonzentriert (~ 1/8) und auf 0 bis 4°C abgekühlt. Zu dieser Lösung wird Ammoniumtetrafluorborat (5.3 g, 50 mmol, 1.1 eq.) gelöst in Wasser (19 ml) zugetropft. Dabei beginnt die Substanz auszukristallisieren. Es wird noch 1 Stunde nachgerührt und anschließend filtriert. Man wäscht die Kristalle zuerst mit kaltem Methanol (56 ml), dann mit MtBE (56 ml) nach und trocknet im Vakuum. Ausbeute: 17.6 g (80% d.Th., bezogen auf Z-Lys(Boc)-OSu)
Physikochemische Charakterisierung [(5S)-5-Amino-6-oxo-6-[4-(4-pyridinyl)-1 -pipera- zinyl]hexyl]-1 ,1-dimethylethylester-Mono[tetrafluoroborat(1-)]carbamoylsäure, roh: Smp.: 208°C
Reinheit: 99.5% HPLC-Peakf lache,
Chromatographische Bedingungen:
Flusskonstante Pumpe, Gradientensystem, z.B. HP1090
Einspritzsystem: Automatisches Aufgabesystem z.B. HP1090 Einspritzvolumen: 10 μ\
Säule: 250 x 4.6 mm i.D.
Stationäre Phase: Kromasil 100 C18; 5 μm
Mobile Phase:
Lösungsmittel A: 0.1% 0.01 M Octansulfonsäure-Natriumsalz in Triethylammo- niumphosphatpuffer, pH 3.0
Lösungsmittel B: 0.01 M Octansulfonsäure-Natriumsalz in Acetonitril
Gradient Run-Time Lösungsmittel A Lösungsmittel B 0 min 70% 30% 3 min 70% 30% 15 min 65% 35% 45 min 40% 60%, 50 min 30% 70% 52 min 30% 70%
Equilibrierungszeit: 8 Minuten
Laufzeit: 52 Minuten
Ofentemperatur: Raumtemperatur
Durchfluss: 1.0 ml / Minute
Detektor: UV-Detektor, z.B. DAD, HP1040, Zelle 10 mm
Messwellenlänge: 210 nm
Stufe 4:
Aufreinigung von [(5S)-5-Amino-6-oxo-6-[4-(4-pyridinyl)-1-piperazinyl]hexyl]-1 ,1- dimethylethylester-Mono[tetrafluoroborat(1-)]carbamoylsäure
Die rohe [(5S)-5-Amino-6-oxo-6-[4-(4-pyridinyl)-1-piperazinyl]hexyl]-1 ,1-dimethyl- ethylester-Mono[tetrafluoroborat(1-)]carbamoylsäure aus Stufe 3 (16 g, 33.3 mmol) wird in Ethanol (68 ml) suspendiert und auf Rückfluss erhitzt. Zu dieser heißen Lösung wird Wasser (40 ml) zugetropft. Die Lösung wird heiß filtriert, auf 0-4°C abgekühlt und die ausgefallenen Kristalle abfiltriert. Man wäscht zuerst mit kaltem Ethanol/W asser-Gemisch (4 + 2.5 ml), dann mit kaltem Ethanol (7 ml) nach und trocknet die Substanz im Vakuum. Ausbeute: 15.2 g (95% d.Th.)
Physikochemische Charakterisierung [(5S)-5-amino-6-oxo-6-[4-(4-pyridinyl)-1 -pipera- zinyl]hexyl]-1 ,1-dimethylethylester-Mono[tetrafluoroborat(1-)]carbamoylsäure, rein: Smp.: 208°C Reinheit: 99.9% HPLC-Peakfläche,
Chromatographische Bedingungen: Flusskonstante Pumpe, Gradientensystem, z.B. HP1090 Einspritzsystem: Automatisches Aufgabesystem, z.B. HP1090 Einspritzvolumen: 10 μl
Säule: 250 x 4.6 mm i.D.
Stationäre Phase: Kromasil 100 C18; 5 μm
Mobile Phase:
Lösungsmittel A: 0.1 % 0.01 M Octansulfonsäure-Natriumsalz in Triethylammo- niumphosphatpuffer, pH 3.0 Lösungsmittel B: 0.01 M Octansulfonsäure-Natriumsalz in Acetonitril Gradient Run-Time Lösungsmittel A Lösungsmittel B 0 min 70% 30% 3 min 70% 30% 15 min 65% 35% 45 min 40% 60% 50 min 30% 70% 52 min 30% 70%
Equilibrierungszeit: 8 Minuten
Laufzeit: 52 Minuten
Ofentemperatur: Raumtemperatur
Durchfluss: 1.0 ml / Minute
Detektor: UV-Detektor, z.B. DAD, HP1040, Zelle 10 mm
Messwellenlänge: 210 nm
Stufe 5:
Herstellung von 3,5-Dibrom-/V-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2H)-chinazolinyl)-D-tyrosin-1 ■ piperidinyl]carbonyl]-methylester, roh
Figure imgf000018_0001
3,5-Dibrom-D-tyrosin-methylester (10.0 g, 28.3 mmol, 1.0 eq.) und 1 ,2,4-Triazol (4.52 g, 65.4 mmol, 2.3 eq.) werden bei 10°C in sauerstofffreiem DMF (70 ml) suspendiert. Dann wird 1 ,1 -Carbonyldiimidazol (5.05 g, 31.1 mmol, 1.1 eq.) portionsweise zugegeben und 1 Stunde bei 10°C sowie 1 Stunde bei Raumtemperatur nachgerührt. Die so bereitete Reaktionslösung wird in eine Lösung von 3,4-Dihydro-3-(4- piperidinyl)-2(1 H)-chinazolin (7.21 g, 31.2 mmol, 1.1 eq.) in sauerstofffreiem DMF (150 ml) eingetropft und anschließend auf 50-55°C erwärmt und 1.5 Stunden nachgerührt. Das Gemisch wird auf Raumtemperatur gekühlt und innerhalb von 1 Stunde in sauerstofffreies Wasser (550 ml) getropft. Die weiße Suspension wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und dann abfiltriert. Der Rückstand wird mit sauerstofffreiem Wasser (4 x 50 ml) gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 15.2 g (88% d.Th.)
Physikochemische Charakterisierung 3,5-Dibrom-Λ/-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2/-/)- chinazolinyl)-D-tyrosin-1 -piperidinyl]carbonyl]-methylester, roh:
Smp.: 215°C
Reinheit: 99.3% HPLC-Peakfläche, Chromatographische Bedingungen:
Flusskonstante Pumpe, Gradientensystem, z.B. HP1090
Einspritzsystem: Automatisches Aufgabesystem, z.B. HP1090 Einspritzvolumen: 15 μl
Säule: 250 x 4.6 mm i.D.
Stationäre Phase: YMC ODS AM; 5 μm
Mobile Phase: Lösungsmittel A: 0.1% KH2P0 , pH 3.0 Lösungsmittel B: Methanol / Acetonitril 50 / 50 Gradient Run-Time Lösungsmittel A Lösungsmittel B 0 min 90% 10% 10 min 90% 10% 25 min 50% 50% 50 min 50% 50% 75 min 10% 90%
Equilibrierungszeit: { 3 Minuten
Laufzeit: 75 Minuten
Ofentemperatur: f Raumtemperatur Durchfluss: 1.0 ml / Minute
Detektor: UV-Detektor, z.B. DAD, HP1040, Zelle 10 mm
Messwellenlänge: 215 nm
Stufe 6:
Aufreinigung von 3,5-Dibrom-Λ/-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2H)-chinazolinyI)-D-tyrosin- 1-piperidinyl]carbonyl]-methylester
In sauerstofffreiem Ethanol (125 ml) und isopropanol (150 ml) wird 3,5-Dibrom-/V-[[4- (1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2H)-chinazolinyl)-D-tyrosine-1-piperidinyl]carbonyl]-methylester, roh (10 g, 16.4 mmol) suspendiert und das Gemisch 20 Minuten auf Rückfluss erhitzt. Anschließend wird innerhalb von 5 Stunden auf 0°C gekühlt und 1 Stunde nachgerührt. Das Kristallgut wird abfiltriert und mit eiskaltem, sauerstofffreiem Isopropanol (2 x 20 ml) gewaschen. Die Trocknung erfolgt im Vakuum. Ausbeute: 8.79 g (88% d.Th.)
Physikochemische Charakterisierung 3,5-Dibrom-/V-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2H)- chinazolinyl)-D-tyrosin-1 -piperidinyl]carbonyl]-methylester, rein:
Smp.: 215°C
Reinheit: 99.7% HPLC-Peakfläche, Chromatographische Bedingungen:
Flusskonstante Pumpe, Gradientensystem, z.B. HP1090
Einspritzsystem: Automatisches Aufgabesystem, z.B. HP1090
Einspritzvolumen 15 μl
Säule 250 x 4.6 mm i.D.
Stationäre Phase YMC ODS AM; 5 μm
Mobile Phase: Lösungsmittel A: 0.1% KH2P04, pH 3.0 Lösungsmittel B: Methanol / Acetonitril 50 / 50 Gradient Run-Time Lösungsmittel A Lösungsmittel B 0 min 90% 10% 10 min 90% 10% 25 min 50% 50% 50 min 50% 50% 75 min 10% 90% Equilibrierungszeit: 8 Minuten Laufzeit: 75 Minuten Ofentemperatur: Raumtemperatur Durchfluss: 1.0 ml / Minute Detektor: UV-Detektor, z.B. DAD, HP1040, Zelle 10 mm Messwellenlänge: 215 nm
Stufe 7:
Herstellung von 3,5-Dibrom- V-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2H)-chinazolinyl)-1-piperidi- nyl]carbonyl]-D-tyrosin
Figure imgf000021_0001
' 3,5-Dibrom-Λ/-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2r7)-chinazolinyl)-D-tyrosin-1-piperidinyl]- carbonyl]-methylester, rein (7.50 g, 12.9 mmol, 1.0 eq.) wird in sauerstofffreiem Wasser (50 ml) suspendiert und mit einer Lösung aus LiOH (0.74 g, 30.9 mmol, 2.5 eq.) in sauerstofffreiem Wasser (15 ml) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 3 Stunden nachgerührt und anschließend in eine Mischung von sauerstofffreiem DMF (8 ml), Wasser (25 ml) und konz. HCI (3.3 ml, 32%ig) eingetropft. Die Suspension wird 3 Stunden nachgerührt, der Feststoff abfiltriert und im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 7.30 g (99% d.Th.) Physikochemische Charakterisierung 3,5-Dibrom-/V-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2H)- chinazolinyl)-1-piperidinyl]carbonyl]-D-tyrosin: Smp.: 210°C Reinheit: 99.8% HPLC-Peakf lache, Chromatographische Bedingungen: Flusskonstante Pumpe, Gradientensystem, z.B. HP1090 Einspritzsystem: Automatisches Aufgabesystem z.B. HP1090 Einspritzvolumen: 10 μl Säule: 250 x 4.6 mm i.D. Stationäre Phase: YMC ODS AM; 5 μm
Mobile Phase: Lösungsmittel A: 0.1% KH2P04, pH 3.0 Lösungsmittel B: Methanol Gradient Run-Time Lösungsmittel A Lösungsmittel B 0 min 70% 30% 5 min 70% 30% 15 min 45% 55% 40 min 45% 55% 55min 5% 95% 60 min 5% 95% Equilibrierungszeit: 8 Minuten Laufzeit: 60 Minuten
Ofentemperatur: Raumtemperatur Durchfluss: 1.0 ml / Minute
Detektor: UV-Detektor, z.B. DAD, HP1040, Zelle 10 mm Messwellenlänge: 290 nm
Stufe 8:
Herstellung von [R-(R*,S',)H5-[[3-(3,5-Dibrom-4-hydroxyphenyl)-2-[[[4-(1 ,4-dihydro-2- oxo-3(2W)-chinazolinyl)-1 -piperidinyl]carbonyl]amino]-1 -oxopropyl]amino]-6-oxo-6-[4- (4-pyridinyl)-1-piperazinyl]hexyl]-carbamoylsäure-1 ,1-dimethylethylester
Figure imgf000023_0001
Zu einer Lösung von 3,5-Dibrom-Λ/-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2H)-chinazolinyl)-1-pipe- ridinyl]carbonyl]-D-tyrosin (5.96 g, 10.0 mmol, 1.0 eq.) in sauerstofffreiem DMF (40 ml) werden [(5S)-5-amino-6-oxo-6-[4-(4-pyridinyl)-1 -piperazinyl]hexyl]-1 ,1-dimethyl- ethylester-Mono[tetrafluoroborat(1-)]carbamoylsäure (4.84 g, 10.1 mmol, 1.01 eq.) und N-Ethyldiisopropylamin (1.55 g, 12.0 mmol, 1.2 eq.) gegeben und das Gemisch auf 0°C gekühlt. Dann wird Λ/-(3-Dimethylaminopropyl)-Λ/-ethylcarbonyldiimid-Hydro- chlorid (1.92 g, 10.02 eq.) innerhalb von 2 Stunden in kleinen Portionen zudosiert. Anschließend wird 12 Stunden bei Raumtemperatur nachgerührt. Die Rohlösung wird in eine Mischung von Kaliumhydrogenphosphat (8.79 g, 64.6 mmol, 6.5 eq.) in sauerstofffreiem Wasser (250 ml) getropft und 1 Stunde bei 40°C gerührt und wiederum 12 Stunden bei Raumtemperatur nachgerührt. Der Feststoff wird abfiltriert, mit Wasser (4 x 60 ml) gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 8.05 g (83% d.Th.)
Physikochemische Charakterisierung [R-(R*, S^]-[5-[[3-(3,5-Dibrom-4-hydroxy- phenyl)-2-[[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2H)-chinazolinyl)-1 -piperidinyl]carbonyl]amino]-1 ■ oxopropyl]amino]-6-oxo-6-[4-(4-pyridinyl)-1-piperazinyl]hexyl]-carbamoylsäure-1 ,1 - dimethylethylester:
Smp.: 209°C
Reinheit: 98.7% HPLC-Peakf lache, Chromatographische Bedingungen:
Flusskonstante Pumpe, Gradientensystem, z.B. HP1090
Einspritzsystem: Automatisches Aufgabesystem z.B. HP1090 Einspritzvolumen: 4 μl
Säule: 125 x 4.6 mm i.D. Stationäre Phase: Inertsil ODS-2; 5 μm
Mobile Phase: Lösungsmittel A: TEAP Puffer, pH 3.0 Lösungsmittel B: Acetonitril Gradient Run-Time Lösungsmittel A Lösungsmittel B 0 min 95% 5% 3 min 95% 5% 15 min 73% 27% 30 min 73% 27% 35min 70% 30% 40min 70% 30% 65 min 45% 55%>
Equilibrierungszeit: 10 Minuten Laufzeit: 65 Minuten
Ofentemperatur: 45°C Durchfluss: 1.0 ml / Minute
Detektor: UV-Detektor z.B. DAD, HP1040, Zelle 10 mm
Messwellenlänge: 215 nm
Stufe 9:
Herstellung von 1-[/V2-[3,5-Dibrom-Λ/-[[4-(3,4-dihydro-2(1 W)-oxochinazolin-3-yl)-1- piperidinyl]carbonyl]-D-tyrosyl]-L-lysyl]-4-(4-pyridinyl)-piperazin
Figure imgf000024_0001
In eine eisgekühlte, sauerstofffreie Lösung von HCI(g) (4N) in 1 ,4-Dioxan (60 ml) wird eine Lösung von [R-(R*,S*)]-[5-[[3-(3,5-Dibrom-4-hydroxyphenyl)-2-[[[4-(1 ,4-dihydro- 2-oxo-3(2H)-chinazolinyl)-1-piperidinyl]carbonyl]amino]-1-oxopropyl]amino]-6-oxo-6- [4-(4-pyridinyl)-1 -piperazinyl]hexyl]-carbamoylsäure-1 ,1 -dimethylethylester (4.00 g, 4.00 mmol, 1.0 eq.) in sauerstofffreiem DMF (10 ml) langsam eingetropft und die trübe Mischung 2.5 Stunden bei 12°C nachgerührt. Zum Beenden der Reaktion werden Sauerstoff frei es Aceton (160 ml) und DMF (12 ml) zugegeben und anschließend wird der Niederschlag abfiltriert und mit sauerstofffreiem Aceton (200 ml) gewaschen. Der Rückstand wird in sauerstofffreiem Wasser (120 ml) aufgelöst und mit einem Gemisch von Ammoniak (25%ig, 7 ml) in Wasser (40 ml) versetzt. Die weiße Suspension wird 1 Stunde nachgerührt, der Feststoff abgetrennt, mit sauerstofffreiem Wasser (2 x 80 ml) gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 2.79 g (78% d.Th.)
Physikochemische Charakterisierung 1-[/Vt2-[3,5-Dibrom-Λ/-[[4-(3,4-dihydro-2(1 /-/)- oxochinazolin-3-yl)-1 -piperidinyl]carbonyl]-D-tyrosyl]-L-lysyl]-4-(4-pyridinyl)-piperazin: Smp.: 203°C
Reinheit: 99.3% HPLC-Peakfläche, Chromatographische Bedingungen:
Flusskonstante Pumpe, Gradientensystem, z.B. HP1090 oder HP1100 Einspritzsystem: Automatisches Aufgabesystem z.B. HP1090 Einspritzvolumen: 7μl Säule: 125 x 4.6 mm i.D.
Stationäre Phase: Inertsil ODS-2; 5μm Mobile Phase: Lösungsmittel A: 0.5 % KH2P04, pH=3,0 Lösungsmittel B: Acetonitril
Gradient Run-Time Lösungsmittel A Lösunc 0 min 100% 0% 6 min 88% 12% 12 min 81.5% 18.5% 23 min 81.5% 18.5% 38 min 45% 55%
Laufzeit: 38 Minuten
Equilibrierungszeit: 8 Minuten
Ofentemperatur: 45°C
Durchfluss: 1.0 ml / Minute Detektor: UV-Detektor, z.B. DAD, HP1040, Zelle 10 mm
Messwellenlänge: 215 nm

Claims

Patentansprüche
1. Verfahren zur Herstellung von 1-[/V2-[3,5-Dibrom-Λ/-[[4-(3,4-dihydro-2(1 H)-oxo- chinazolin-3-yl)-1-piperidinyl]carbonyl]-D-tyrosyl]-L-lysyl]-4-(4-pyridinyl)-piperazin der Formel
Figure imgf000027_0001
dadurch gekennzeichnet, dass
(a) 1.0 bis 1.2 Äquivalente einer sauerstofffreien Lösung der Verbindung 3,4- Dihydro-3-(4-piperidinyl)-2(1 /-/)-chinazolin der Formel
Figure imgf000027_0002
mit 1.0 Äquivalenten eines 3,5-Dibrom-D-tyrosinesters der allgemeinen Formel
Figure imgf000027_0003
in der R1 eine geradkettige oder verzweigte C-ι_6-Alkyl- oder Benzylgruppe, vorzugsweise eine geradkettige oder verzweigte Cι-3-Alkylgruppe, bedeutet, in Gegenwart von 1.0 bis 1.2 Äquivalenten eines Kondensationsmittels gekuppelt und der entstandene 3,5-Dibrom-Λ/-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2/ )-chinazolinyl)- D-tyrosin-1 -piperidinyl]carbonyl]-ester der allgemeinen Formel
Figure imgf000028_0001
in der R1 eine geradkettige oder verzweigte C^-Alky!- oder Benzylgruppe, vorzugsweise eine geradkettige oder verzweigte Cι-3-Alkylgruppe, bedeutet, anschließend unter sauerstofffreien Bedingungen kristallisiert wird,
(b) der so erhaltene 3,5~Dibrom-Λ/-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2 -/)-chinazolinyl)-D-ty- rosin-1-piperidinyl]carbonyl]-ester der allgemeinen Formel IV durch Zutropfen einer sauerstofffreien wässrigen oder alkoholischen Lösung von 2.0 bis 3.0 Äquivalenten eines Alkalihydroxids verseift wird, wodurch die freie Säure 3,5- Dibrom-/V-[[4-(1 ,4-dihydro-2-oxo-3(2rV)-chinazolinyl)-1-piperidinyl]carbonyl-D- tyrosin der Formel
Figure imgf000028_0002
erhalten wird, (c) die freie Säure der Formel V mit einer sauerstofffreien Lösung einer Verbindung der allgemeinen Formel
Figure imgf000029_0001
in der R eine Amin-Schutzgruppe bedeutet, gekuppelt und
(d) die Amin-Schutzgruppe der entstandenen Verbindung der allgemeinen Formel
Figure imgf000029_0002
in der R2 eine Amin-Schutzgruppe bedeutet, unter sauerstofffreien Bedingungen abgespalten wird, wodurch die erfindungsgemäße Verbindung der Formel I rein erhalten wird.
PCT/EP2005/001188 2004-02-12 2005-02-05 Verfahren zur herstellung von 1-[n2-[3,5-dibrom-n-[[4-(3,4-dihydro-2(1h)-oxochinazolin-3-yl)-1-piperidinyl]carbonyl]-d-tyrosyl]-l-iysyl]-4-(4-pyridinyl)-piperazin WO2005077931A2 (de)

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WO1998011128A1 (de) * 1996-09-10 1998-03-19 Dr. Karl Thomae Gmbh Abgewandelte aminosäuren, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und verfahren zu ihrer herstellung
WO2000055154A1 (de) * 1999-03-12 2000-09-21 Boehringer Ingelheim Pharma Kg Abgewandelte aminosäureamide als cgrp antagoniste
WO2001049676A1 (de) * 1999-12-30 2001-07-12 Boehringer Ingelheim Pharma Kg Substituierte piperidine, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und verfahren zu ihrer herstellung

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