WO2004020618A1 - Streptococccus suis- oberflächenproteine, ornithin-carbamolytransferase und arginin-deiminase, die unter stressbedingungen exprimiert werden - Google Patents
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Definitions
- the present invention relates to a non-recombinant subunit vaccine against Sc. Pig suis infections and a process for their production.
- the scope of the invention is in the pharmaceutical industry and veterinary medicine.
- Streptococccus (Sc.) Suis is an important infectious agent in pigs, which can cause meningitis, polyarthritis, septicemia and respiratory diseases. In rare cases, it can lead to zoonosis in humans. The most important source of distribution are inapparent germ carriers. The detection of the pathogen is not synonymous with an existing infection. This is due to its pronounced heterogeneity, the Sc. suis for virulence. Potential virulence factors are the polysaccharide capsule (basis for serotyping), the MRP (muramidase released protein), the EF (extracellular factor) and hemolysins such as suilysin.
- the object of the present invention is to provide a vaccine which overcomes the disadvantages of the prior art mentioned.
- the task is solved by the protein AdiS with the amino acid sequence: MRGRK AYGPP RFPSC INLQG GQIMS NHPIH VFSEI GKLKK VMLHR PGKEI ENLMP DYLER LLFDD IPFLE DAQKE HDAFA QALRD EGVEV LYLEK Laaes LVTPE IREQF IDEYL EEANI RGRAT KKAIR KLLMS IEDNQ ELVEK TMAGV QKAEL PKIPS EEKGL TDLVE SSYPF AIDPM PNLYF TRDPF ATIGN AVSLN HMYSE TRNRE T YGK YIFTH HPEYG GKVPL VYNRE ETTRI EGGDE LVLSK DVLAV GISQR TDAAS IEKLL VNIFE RHVGF KKVLA FEFAN NRKFM HLDTV FTMVD YDKFT IHPEI EGDLR VFSVT YENDT LHIEE EHG
- a protein with an amino acid sequence which is at least 90% of the amino acid sequence of the protein AdiS homologous is preferred.
- polynucleotide according to the invention the protein AdiS being encoded by the following sequence section:
- a polynucleotide according to the invention is also preferred according to the invention, the protein OCTS being encoded by the following sequence section:
- the present invention relates to an ADS operon which encompasses the regions which the OCTS, AdiS and CKS proteins encode with the following nucleotide sequence:
- a polynucleotide which has a nucleotide sequence which is at least 90% homologous to the sequence of the ADS operon according to the invention.
- Another object of the present invention is a method for producing the protein AdiS according to the invention, which is obtained by stress cultivation.
- a temperature change from 32 to 42 ° C. and / or a change from aerobic conditions to an increased CO 2 partial pressure is used during cultivation.
- the present invention furthermore relates to a non-recombinant subunit vaccine against Streptococcus suis infections in pigs, which comprises the protein AdiS according to the invention and / or the protein OCTS and / or a homologous protein according to the invention.
- a non-recombinant subunit vaccine is preferred which is characterized in that it contains an adjuvant and / or other auxiliaries and carriers.
- the adjuvant is selected from the group consisting of mineral oil and aluminum hydroxide.
- the task is solved by identifying virulence factors, which are on the one hand serotype-independent and on the other hand immunogenic, as well as their representation and use in a vaccine.
- This has the advantage that immunization against serotypes of Sc. suis is possible and the costs of immunization can be significantly reduced.
- in vitro inducing signals stress signals
- Temperature fluctuations and various oxygen tensions were used, e.g. Temperature fluctuations and various oxygen tensions to imitate habitat-specific conditions and to identify proteins induced thereby.
- SAGP is an arginine deiminase (AD) that is inhibitory affects phagocyte proliferation and may be involved in the intracellular survival of streptococci.
- Northern blot analyzes showed that the genes coding for OCTS and AdiS in Sc. suis are located on an operon. In addition, the Northern blot analyzes confirmed the regulation at the transcriptional level.
- the proteins OCTS and AdiS were induced by stress signals typical of tissue and disease. They are localized on the surface, occur regardless of the affiliation to the two most important serotypes (2 and 9) in Europe in all tested Sc. suis strains and are part of a protein fraction generated by stress induction that is immunogenic in pigs. Furthermore, they show high homologies to a potential virulence factor of Sc. pyogenes on. From this reveals that the proteins OCTS and AdiS from Sc. suis are suitable for the development of a vaccine.
- the present invention furthermore relates to vaccines which contain the protein AdiS according to the invention.
- the vaccines according to the invention are produced in a manner known per se.
- a non-recombinant subunit vaccine according to the invention is mixed and sterilized together with pharmaceutically acceptable auxiliaries, carriers, solvents and / or adjuvants.
- the methods are known to the person skilled in the art.
- Sc. suis field isolate (19841/1) was selected, which was isolated from the CNS and characterized as serotype 2, MRP + / EF4- and suilysin-t-.
- the cultivation of Sc. suis takes place under non-inducing standard conditions at 32 ° C or
- the culture supernatant was obtained by centrifuging the bacterial culture at 10,000 xg for 10 min.
- the bacterial pellet was treated with a muramidase in order to detach the murein-associated surface proteins from the cell wall. After subsequent centrifugation at 10,000 xg for 10 min, the supernatant was removed from the pellet separated. The protein fractions were then examined in the following proteome analysis.
- the differentially expressed proteins were identified using one and two-dimensional gel electrophoresis.
- One-dimensional gel electrophoresis is carried out in polyacrylamide gel.
- Immobiline DryStrip gels (pH 3-10) were used for the first dimension of two-dimensional gel electrophoresis.
- the second dimension also takes place in the polyacrylamide gel.
- Two induced protein bands with relative molecular weights of approx. 47 (OCTS) and 53 kilodaltons (AdiS) were cut out after performing a Western blot and the first 15 amino acids were sequenced N-terminally. The sequence of the first 15 amino acids of both proteins was entered into a database for homology searches for known proteins or genes.
- a suitable probe could be constructed using the nucleotide sequence determined from this.
- a primer was generated and the DNA of the Sc. suis parent strain carried out a PCR. The product was cloned and then sequenced for control. The probe obtained in this way was then used in Northern and Southern analyzes.
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Abstract
Die vorliegende Erfindung betrifft eine nichtrekombinante Subunit-Vakzine gegen Sc.suis-Infektionen des Schweines und ein Verfahren zu deren Herstellung.
Description
STREPTOCOCCUS SUIS - OBERFLACHENPROTEINE , ORNITHIN-CARBAMOYLTRANSFΞRASE UND ARGININ-DEI INASE , DIE UNTER STRESSBEDINGUNGEN EXPRIMIERT WERDEN
Die vorliegende Erfindung betrifft eine nicht- rekombinante Subunit-Vakzine gegen Sc. suis-Infektionen des Schweines und ein Verfahren zu deren Herstellung. Anwendungsbereich der Erfindung sind die pharmazeutische Industrie und die Veterinärmedizin.
Streptococccus (Sc. ) suis ist ein wichtiger Infektionserreger beim Schwein, der Meningitiden, Polyarthritiden, Septikämien und respiratorische Erkrankungen hervorrufen kann. In seltenen Fällen kann er zu einer Zoonose beim Menschen führen. Die wichtigste Verbreitungsquelle stellen inapparente Keimträger dar. Der Nachweis des Erregers ist nicht gleichbedeutend mit einer vorliegenden Infekti- on. Dies ist begründet in seiner ausgeprägten Heterogeni- tät, die Sc . suis bezüglich seiner Virulenz aufweist. Potentielle Virulenzfaktoren sind die Polysaccharidkapsel (Grundlage der Serotypisierung) , das MRP (Muramidase Re- leased Protein) , der EF (Extrazellulärfaktor) und Hämoly- sine wie das Suilysin.
Das Hauptproblem bei der Bekämpfung von Sc. suis- Infektionen ist das Fehlen einer geeigneten Vakzine, die einen serotypübergreifenden Schutz erzeugt.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es eine Vakzine zur Verfügung zu stellen, welches die genannten Nachteile des Standes der Technik überwindet .
Die Aufgabe wird gelöst durch das Protein AdiS mit der Aminosäuresequenz :
MRGRK AYGPP RFPSC INLQG GQIMS NHPIH VFSEI GKLKK VMLHR PGKEI ENLMP DYLER LLFDD IPFLE DAQKE HDAFA QALRD EGVEV LYLEK LAAES LVTPE IREQF IDEYL EEANI RGRAT KKAIR KLLMS IEDNQ ELVEK TMAGV QKAEL PKIPS EEKGL TDLVE SSYPF AIDPM PNLYF TRDPF ATIGN AVSLN HMYSE TRNRE T YGK YIFTH HPEYG GKVPL VYNRE ETTRI EGGDE LVLSK DVLAV GISQR TDAAS IEKLL VNIFE RHVGF KKVLA FEFAN NRKFM HLDTV FTMVD YDKFT IHPEI EGDLR VFSVT YENDT LHIEE EHGDL AELLA ANLGL EKVEL IRCGG GDMVA AGREQ WNDGS NTLTI APGW WYKR NTITN AILES KGLRL IKIGG SELVR GRGGP RCMSM PFERE DI
Erfindungsgemäß bevorzugt ist ein Protein mit einer Aminosäuresequenz, die wenigstens zu 90 % der Aminosäurese- quenz des Proteins AdiS homolog ist .
Erfindungsgemäß bevorzugt ist ferner auch ein erfindungsgemäßes Polynukleotid, wobei das Protein AdiS durch den folgenden Sequenzabschnitt kodiert ist:
ATGAGAGGCAGGAAAGCGTACGGTCCTCCTCGTTTCCCATCATGTATAA ATCTACAAGGAGGACAGATCATGTCAAACCATCCAATTCATGTTTTTTC AGAAATTGGTAAGCTGAAAAAAGTTATGTTACACAGACCAGGTAAGGAA ATTGAAAACCTTATGCCTGACTATCTAGAACGCCTACTCTTCGATGATA TCCCATTCTTAGAAGATGCACAGAAAGAGCATGATGCCTTTGCTCAAGC
TCTTCGTGATGAAGGTGTAGAAGTGCTCTACTTGGAAAAATTAGCTGCT
GAGTCACTTGTTACACCTGAAATTCGTGAACAATTTATTGATGAATATC
TTGAΆGAΆGCTAACATTCGTGGCCGGGCAACTAAAAAGGCAATTCGTAA
GCTGTTGATGTCTATTGAAGATAATCAAGAACTGGTTGAGAAAACGATG GCTGGTGTTCAAAAGGCAGAΆTTGCCAAAAATCCCTTCTGAAGAAAAAG
GTTTGACAgATTTGGTTGAATCCTCTTACCCATTTGCAAtAGACCCAAT GCCAAACCTTTACTTCACACGGGATCCATTTGCTACGATTGGTAATGCT GTTTCTCTTAACCACATGTATTCAGAAACACGGAACCGTGAAACCTTGT ATGGTAAATATATCTTCACTCATCACCCAGAATATGGTGGAAAAGTTCC ATTGGTTTACAATCGTGAAGAAACTACTCGTATAGAGGGTGGTGACGAA
TTGGTTCTTTCAAAAGATGTTTTGGCAGTAGGTATTCACAACGTACCGA
TGCGGCATCAATTGAAAAACTATTGGTAAATATCTTTGAACGGCATGTT GGCTTCAΆGAAAGTATTGGCATTCGAATTTGCTAACAACCGTAΆATTCA TGCATTTGGATACAGTATTTACCATGGTTGACTATGATAAGTTTACTAT CCACCCAGAAATCGAAGGTGACCTTCGTGTCTTCTCTGTAACCTATGAA AATGACACGCTTCATATTGAAGAAGAACATGGTGATTTGGCAGAACTTT TGGCTGCGAΆCCTTGGTCTTGAAAAAGTAGAATTGATTCGTTGTGGTGG CGGTGATATGGTTGCTGCTGGTCGTGAGCAATGGAATGATGGTTCAAAT ACATTGACTATTGCACCAGGTGTGGTAGTTGTTTACAAACGCAΆTACGA TTACCAATGCTATCCTCGAGTCCAAAGGGCTTCGTTTGATTAAGATTGG CGGAAGCGAATTGGTTCGCGGTCGTGGTG GACCTCGTTGTATGTCAAT GCCGTTTGAACGTGAAGACATCTAATGC
Erfindungsgemäß bevorzugt ist ferner ein erfindungsgemäßes Polynukleotid, wobei das Protein OCTS durch den fol- genden Sequenzabschnitt kodiert ist :
ATTTAAAGGTAGACATTTCCTTGCAGAGAAAGATTTCACACGCGCAGAA TTGGAATGGTTGATTGATTTCTCAGCTCATTTGAAAGATTTGAΆAAAAC GCAATATTCCACACCGTTATTTGGAAGGTAAAAATATTGCTCTCTTGTT TGAAAAAACATCAACACGTACTCGTGCTGCCTTCACAGTAGCATCTATT GACCTTGGTGCCCATCCAGAATATCTTGGTGCAAATGACATCCAACTTG GTAAGAAAGAATCTACAGAAGATACTGCTAAAGTTTTGGGACGTATGTT CGACGGTATTGAATTCCGTGGTTTCAGTCAAAAAATGGTGG
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein ADS-Operon das die Regionen umfasst, welche die Proteine OCTS, AdiS und CKS kodiert mit folgender Nukleotidsequenz :
AAAGCCAGTCGCCAGGTAGTTGAAACGATTATGGAAAGTGACATGATTGTACTTGGACCG + + + + + + so
TTTCGGTCAGCGGTCCATCAACTTTGCTAATACCTTTCACTGTACTAACATGAACCTGGC
GGTTCTCTTTTTACCTCAATCTTGCCGAATCTGATGATTTCTGACATTGGCAAAGCCCTA + + + + + + 120
CCAAGAGAAAAATGGAGTTAGAACGGCTTAGACTACTAAAGACTGTAACCGTTTCGGGAT
AAAGAAACCAAGGCTGAAGTGACCTATGTGTGCAACATTATGACCCAACGGGGAGAGACT + + + + + + 180
TTTCTTTGGTTCCGACTTCACTGGATACACACGTTGTAATACTGGGTTGCCCCTCTCTGA
GAGTTTTTCTCAGATGCGGACCACGTGGCGGTTCTCAATGCACACTTAGCTGAACAATTC + + + + + + 240
CTCAAAAAGAGTCTACGCCTGGTGCACCGCCAAGAGTTACGTGTGAATCGACTTGTTAAG
ATTGATACAGTTTTGGTCAATATTGAGCCAGTTCCACAAGAGTATATGAATAGCAACCAG
TAACTATGTCAAAACCAGTTATAACTCGGTCAAGGTGTTCTCATATACTTATCGTTGGTC
TTTGATGAATACTTGGTACAGGTAAAACACGATTTTGCAGGTTTGCAAAAACAAGCTAAT + + + + + + 360
AAACTACTTATGAACCATGTCCATTTTGTGCTAAAACGTCCAAACGTTTTTGTTCGATTA
CGTGTGATTTCTTCGAATTTTCTTCGTTTGGAAAATGGCGGAGCTTTCCATGATGGTGAC + + + + + + 420 GCACACTAAAGAAGCTTAAAAGAAGCAAACCTTTTACCGCCTCGAAAGGTACTACCACTG
TTGGTAGTAGAAGAGTTGCTCAAGATTTTGCAGGTGCGGCCATGAGTTTTACAGTACAAG + + + + + + 4S0
AACCATCATCTTCTCAACGAGTTCTAAAACGTCCACGCCGGTACTCAAAATGTCATGTTC
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ACCGTAAATTCATGCATTTGGATACAGTATTTACCATGGTTGACTATGATAAGTTTACTA + + + + + + 3480
TGGCATTTAAGTACGTAAACCTATGTCATAAATGGTACCAACTGATACTATTCAAATGAT
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AGGTGGGTCTTTAGCTTCCACTGGAAGCACAGAAGAGACATTGGATACTTTTACTGTGCG
TTCATATTGAAGAAGAACATGGTGATTTGGCAGAACTTTTGGCTGCGAACCTTGGTCTTG + + + + + + 3600
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AAAAAGTAGAATTGATTCGTTGTGGTGGCGGTGATATGGTTGCTGCTGGTCGTGAGCAAT + + + + + + 3660 TTTTTCATCTTAACTAAGCAACACCACCGCCACTATACCAACGACGACCAGCACTCGTTA
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GTATGCAcCGTGAAGCAGGCTTTCATCAGTTGAATATACATTCGGAGTTAACTGCAAAGA + + + + + + 4200 CATACGTgGCACTTCGTCCGAAAGTAGTCAACTTATATGTAAGCCTCAATTGACGTTTCT
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TTGATTTCTCAGCTCATTTGAAAGATTTGAAAAAACGCAATATTCCACACCGTTATTTGG 4- 4- 4* 4- 4* 4* 4440
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GTCATCGTAGATAACTGGAACCACGGGTAGGTCTTATAGAACCACGTTTACTGTAGGTTG
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TTGAATTCCGTGGTTTCAGTCAAAAAATGGTGGAATGAATTCTGCAGAGCTCCGGC 4- 4- 4* 4- 4- 4676
AACTTAAGGCACCAAAGTCAGTTTTTTACCACCTTACTTAAGACGTCTCGAGGCCG
Erfindungsgemäß bevorzugt ist dabei ein Polynukleotid, das eine Nukleotidsequenz besitzt, die wenigstens zu 90 % der Sequenz des erfindungsgemäßen ADS-Operons homolog ist .
Ein weitere Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung des erfindungsgemäßen Proteins AdiS, wobei dieses durch Stressanzucht erhalten wird.
Dabei ist es erfindungsgemäß besonders bevorzugt, dass während der Anzucht ein Temperaturwechsel von 32 auf 42 °C und/ oder ein Wechsel von aeroben Bedingungen auf ei- nen erhöhten C02-Partialdruck angewendet wird.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ferner eine Nicht-rekombinante Subunit-Vakzine gegen Streptococcus suis-Infektionen beim Schwein, welche das erfmdungsgemä- ße Protein AdiS und/oder das Protein OCTS und/oder ein erfindungsgemäßes homologes Protein umfasst.
Bevorzugt ist dabei eine Nicht-reko binante Subunit- Vakzine welche dadurch gekennzeichnet ist, dass sie ein Adjuvanz und/oder andere Hilfs- und Trägerstoffe enthält.
Dabei ist es insbesondere bevorzugt, dass das Adjuvanz ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Mineralöl und Aluminiumhydroxid.
Die Aufgabe wird durch die Identifizierung von Virulenz- faktoren, die zum einen serotypunabhängig und zum anderen immunogen sind, sowie deren Darstellung und Verwendung in einem Impfstoff gelöst. Dies hat den Vorteil, dass durch eine Impfung eine Immunisierung gegen in Europa gängige Serotypen von Sc. suis möglich wird und sich dadurch die Kosten eine Immunisierung erheblich senken lassen.
Überraschenderweise konnte die Induktion potenzieller „in vivo" Virulenzfaktoren durch habitattypische Signale „in vitro" ausgelöst werden. Dazu wurden "in vitro" induzierende Signale (Stress-Signale) eingesetzt, wie z.B. Temperaturschwankungen und verschiedene SauerstoffSpannungen, um habitatspezifische Bedingungen zu imitieren und dadurch induzierte Proteine zu identifizieren.
Zwei neuartige, durch Temperatur und C02 induzierte Proteine wurden in der die Murein-assoziierten Oberflächenkomponenten enthaltenden Protoplasten-Überstands-Fraktion von Sc . suis identifiziert.
Eines der Proteine, das OCTS, zeigte auf Protein- und DNA-Ebene eine hohe Homologie zu einer Ornithin- Carbamoyltransferase (OCT) von Sc . pyogenes . Das andere Protein, AdiS, zeigte eine ausgeprägte Homologie mit dem „Streptococcal Acid Glykoprotein" (SAGP) von Sc . pyogenes . SAGP ist eine Arginin-Deiminase (AD) , die hemmend
auf die Proliferation von Phagozyten wirkt und möglicherweise am intrazellulären Überleben der Streptokokken beteiligt ist.
Durch Northernblotanalysen konnte belegt werden, dass die für das OCTS und AdiS kodierenden Gene bei Sc . suis auf einem Operon lokalisiert sind. Darüber hinaus bestätigten die Northernblotanalysen die Regulation auf transkriptio- neller Ebene.
Mit Hilfe von Southernblotanalysen konnte ein SAGP- Homolog bei 42 weiteren, den in Deutschland und Europa (ausser U.K.) am häufigsten auftretenden Serotypen 2 und 9 angehören Sc . suis-Stämmen nachgewiesen werden. An bei- spielhaft ausgewählten 8 Stämmen dieser 42 Stämme wurde das Protein auch im Westernblot nachgewiesen und eine entsprechende AD-Enzymaktiviät gezeigt .
Die Homologie des AdiS mit dem SAGP wurde ausserdem durch Westernblotanalysen unter Verwendung eines spezifischen Anti-SAGP-Antiserums nachgewiesen. Schliesslich zeigte sich in Westernblotanalysen mit Rekonvaleszenzseren von Sc. suis-infizierten Schweinen, dass beide Proteine Bestandteil einer durch Stressinduktion erzeugten Protein- fraktion sind, die im Schwein immunogen ist. Aus dieser Fraktion werden die Impfantigene gewonnen.
Die Proteine OCTS und AdiS wurden durch gewebe- bzw. krankheitstypische Stress-Signale induziert. Sie sind an der Oberfläche lokalisiert, treten unabhängig von der Zugehörigkeit zu den beiden mit Abstand wichtigsten Serotypen (2 und 9) in Europa bei allen getesteten Sc . suis- Stämmen auf und sind Bestandteil einer durch Stressinduktion erzeugten Proteinfraktion, die im Schwein immunogen ist. Weiterhin weisen sie hohe Homologien zu einem potentiellen Virulenzfaktor von Sc . pyogenes auf. Hieraus er-
gibt sich, dass die Proteine OCTS und AdiS von Sc. suis für die Entwicklung eines Impfstoffes geeignet sind.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Impfstoffe, welche das erfindungsgemäße Protein AdiS enthalten. Die Herstellung der erfindungsgemäßen Impfstoffe erfolgt in an sich bekannter Weise. Dazu wird eine erfindungsgemäße nicht rekombinante Subunitvakzine zusammen mit pharmazeutisch verträglichen Hilfsstoffen, Träger- Stoffen, Lösemitteln und/oder Adjuvantien gemischt und sterilisiert. Die Verfahren sind dem Fachmann bekannt.
Beispiel
Für den experimentellen Ansatz wurde ein hochvirulentes Sc . suis-Feldisolat (19841/1) ausgewählt, das aus dem ZNS isoliert und als Serotyp 2, MRP+/EF4- und Suilysin-t- charakterisiert wurde. Die Anzucht von Sc. suis erfolgt un- ter nicht-induzierenden Standardbedingungen bei 32°C oder
37°C bis zur mittleren logarithmischen Wachstumsphase. Die eine Hälfte der Kultur wurde unter nicht- induzierenden Bedingungen weiterinkubiert, und die andere Hälfte der Kultur wurde für eine Stunde einer Temperatur- erhöhung auf 42°C bzw. einem erhöhten C02-Partialdruck ausgesetzt .
Nach Ernte der Kulturen wurden die drei Proteinfraktionen Kultur-Uberstand, Protoplasten-Uberstand und Protoplasten gewonnen. Der Kultur-Uberstand wurde durch Zentrifugation der Bakterienkultur bei 10.000 x g für 10 min gewonnen. Das Bakterienpellet wurde mit einer Muramidase behandelt, um die mureinassozierten Oberflächenproteine von der Zellwand abzulösen. Nach anschließender Zentrifugation bei 10.000 x g für 10 min wurde der Überstand vom Pellet
abgetrennt. Die Proteinfraktionen wurden dann in der folgenden Proteomanalyse untersucht .
Die differenziell exprimierten Proteine wurden mit Hilfe der ein- und zweidimensionalen Gelelektrophorese identifiziert. Die eindimensionale Gelelektrophorese erfolgt im Polyacrylamidgel . Für die erste Dimension der zweidimensionalen Gelelektrophorese wurden Immobiline DryStrip gels (pH 3-10) verwendet. Die zweite Dimension findet e- benfalls im Polyacrylamidgel statt. Zwei induzierte Proteinbanden mit relativen Molekulargewichten von ca. 47 (OCTS) und 53 Kilodalton (AdiS) wurden nach Durchführung eines Westernblotes ausgeschnitten und N-terminal die ersten 15 Aminosäuren ansequenziert. Die Sequenz der ers- ten 15 Aminosäuren beider Proteine wurde zur Homologiesuche auf bekannte Proteine bzw. Gene in eine Datenbank eingegeben.
Mit Hilfe der hieraus ermittelten Nukleotidsequenz konnte eine passende Sonden konstruiert werden. Hierfür wurde ein Primer generiert und mit der DNA des Sc . suis- Ausgangsstammes eine PCR durchgeführt. Das Produkt wurde kloniert und anschließend zur Kontrolle sequenziert . Die so gewonnene Sonde wurde anschließend in Northern- und Southernanalysen eingesetzt.
Claims
1. Protein AdiS mit der Aminosäuresequenz:
MRGRK AYGPP RFPSC INLQG GQIMS NHPIH VFSEI GKLKK VMLHR PGKEI ENLMP DYLER LLFDD IPFLE DAQKE HDAFA QALRD EGVEV LYLEK LAAES LVTPE IREQF IDEYL EEANI RGRAT KKAIR KLLMS IEDNQ ELVEK TMAGV QKAEL PKIPS EEKGL TDLVE SSYPF AIDPM PNLYF TRDPF ATIGN AVSLN HMYSE TRNRE TLYGK YIFTH HPEYG GKVPL VYNRE ETTRI EGGDE LVLSK DVLAV GISQR TDAAS IEKLL VNIFE RHVGF KKVLA FEFAN NRKFM HLDTV FTMVD YDKFT IHPEI EGDLR VFSVT YENDT LHIEE EHGDL AELLA ANLGL EKVEL IRCGG GDMVA AGREQ WNDGS NTLTI APGW WYKR NTITN AILES KGLRL IKIGG SELVR GRGGP RCMSM PFERE DI
2. Protein, mit einer Aminosäuresequenz, die wenigstens zu 90 % der Aminosäuresequenz des Proteins AdiS homolog ist .
3. Polynukleotid gemäß Anspruch 3 , dadurch gekennzeichnet, dass das Protein AdiS durch den folgenden Sequenzabschnitt kodiert ist:
ATGAGAGGCAGGAAAGCGTACGGTCCTCCTCGTTTCCCATCATGTATAA
ATCTACAAGGAGGACAGATCATGTCAAACCATCCAATTCATGTTTTTTC AGAAATTGGTAAGCTGAAAAAAGTTATGTTACACAGACCAGGTAAGGAA ATTGAAAACCTTATGCCTGACTATCTAGAACGCCTACTCTTCGATGATA TCCCATTCTTAGAAGATGCACAGAAAGAGCATGATGCCTTTGCTCAAGC TCTTCGTGATGAAGGTGTAGAAGTGCTCTACTTGGAAAAATTAGCTGCT
GAGTCACTTGTTACACCTGAAATTCGTGAACAATTTATTGATGAATATC TTGAΆGAAGCTAACATTCGTGGCCGGGCAACTAAAAΆGGCAATTCGTAA GCTGTTGATGTCTATTGAAGATAATCAAGAACTGGTTGAGAAAACGATG GCTGGTGTTCAAAAGGCAGAATTGCCAAAAATCCCTTCTGAAGAAAAAG GTTTGACAGATTTGGTTGAATCCTCTTACCCATTTGCAATAGACCCAAT GCCAAACCTTTACTTCACACGGGATCCATTTGCTACGATTGGTAATGCT
GTTTCTCTTAACCACATGTATTCAGAAACACGGAACCGTGAAACCTTGT ATGGTAAATATATCTTCACTCATCACCCAGAATATGGTGGAAAAGTTCC ATTGGTTTACAATCGTGAAGAAACTACTCGTATAGAGGGTGGTGACGAA TTGGTTCTTTCAAAAGATGTTTTGGCAGTAGGTATTCACAACGTACCGA TGCGGCATCAATTGAAAAACTATTGGTAAATATCTTTGAACGGCATGTT
GGCTTCAAGAAAGTATTGGCATTCGAATTTGCTAACAACCGTAAATTCA TGCATTTGGATACAGTATTTACCATGGTTGACTATGATAAGTTTACTAT CCACCCAGAAATCGAAGGTGACCTTCGTGTCTTCTCTGTAACCTATGAA AATGACACGCTTCATATTGAAGAAGAACATGGTGATTTGGCAGAACTTT TGGCTGCGAACCTTGGTCTTGAAAAAGTAGAATTGATTCGTTGTGGTGG
CGGTGATATGGTTGCTGCTGGTCGTGAGCAATGGAATGATGGTTCAAAT ACATTGACTATTGCACCAGGTGTGGTAGTTGTTTACAAACGCAATACGA TTACCAATGCTATCCTCGAGTCCAAAGGGCTTCGTTTGATTAAGATTGG CGGAAGCGAATTGGTTCGCGGTCGTGGTG GACCTCGTTGTATGTCAAT GCCGTTTGAACGTGAAGACATcTAATGC
4. Polynukleotid gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Protein OCTS durch den folgenden Sequenzabschnitt kodiert ist:
ATTTAAAGGTAGACATTTCCTTGCAGAGAAAGATTTCACACgCGCAGAA TTGGAATGGTTGATTGATTTCTCAGCTCATTTGAAAGATTTGAAAAAAC GCAATATTCCACACCGTTATTTGGAAGGTAAAAATATTGCTCTCTTGTT TGAAAAAACATCAACACGTACTCGTGCTGCCTTCACAGTAGCATCTATT GACCTTGGTGCCCATCCAGAATATCTTGGTGCAAATGACATCCAACTTG
GTAAGAAAGAATCTACAGAAGATACTGCTAAAGTTTTGGGACGTATGTT CGACGGTATTGAATTCCGTGGTTTCAGTCAAAAAATGGTGG
5. ADS-Operon das die Regionen umfasst, welche die Pro- teine OCTS, AdiS und CKS kodiert mit folgender Nukleotidsequenz:
AAAGCCAGTCGCCAGGTAGTTGAAACGATTATGGAAAGTGACATGATTGTACTTGGACCG
+ + + + + + 60
TTTCGGTCAGCGGTCCATCAACTTTGCTAATACCTTTCACTGTACTAACATGAACCTGGC
GGTTCTCTTTTTACCTCAATCTTGCCGAATCTGATGATTTCTGACATTGGCAAAGCCCTA + + + + + + 120
CCAAGAGAAAAATGGAGTTAGAACGGCTTAGACTACTAAAGACTGTAACCGTTTCGGGAT
AAAGAAACCAAGGCTGAAGTGACCTATGTGTGCAACATTATGACCCAACGGGGAGAGACT + + + + + + iso TTTCTTTGGTTCCGACTTCACTGGATACACACGTTGTAATACTGGGTTGCCCCTCTCTGA
GAGTTTTTCTCAGATGCGGACCACGTGGCGGTTCTCAATGCACACTTAGCTGAACAATTC
CTCAAAAAGAGTCTACGCCTGGTGCACCGCCAAGAGTTACGTGTGAATCGACTTGTTAAG
ATTGATACAGTTTTGGTCAATATTGAGCCAGTTCCACAAGAGTATATGAATAGCAACCAG
TAACTATGTCAAAACCAGTTATAACTCGGTCAAGGTGTTCTCATATACTTATCGTTGGTC
TTTGATGAATACTTGGTACAGGTAAAACACGATTTTGCAGGTTTGCAAAAACAAGCTAAT
AAACTACTTATGAACCATGTCCATTTTGTGCTAAAACGTCCAAACGTTTTTGTTCGATTA
CGTGTGATTTCTTCGAATTTTCTTCGTTTGGAAAATGGCGGAGCTTTCCATGATGGTGAC
GCACACTAAAGAAGCTTAAAAGAAGCAAACCTTTTACCGCCTCGAAAGGTACTACCACTG
TTGGTAGTAGAAGAGTTGCTCAAGATTTTGCAGGTGCGGCCATGAGTTTTACAGTACAAG + + + + + + 480 AACCATCATCTTCTCAACGAGTTCTAAAACGTCCACGCCGGTACTCAAAATGTCATGTTC
TAAAGGAAGAATTGCTGCTTCAGTCTAGCCAAAATAAGAGCGAGCTATCTGCTATTATCA + + + + + + 540
ATTTCCTTCTTAACGACGAAGTCAGATCGGTTTTATTCTCGCTCGATAGACGATAATAGT
AATTGTCAGGTAGTTTGGGCTTAGCTTCATCAGGTTCGACTCTTTCTATCAGCACGGAAA
+ + + + + + 00
TTAACAGTCCATCAAACCCGAATCGAAGTAGTCCAAGCTGAGAAAGATAGTCGTGCCTTT
ATGCAAAGATTGCCCGTCACATTTATGAACTGTTACTCCATTTCTACCAGATTAAAGCTG + + + + + + 660
TACGTTTCTAACGGGCAGTGTAAATACTTGACAATGAGGTAAAGATGGTCTAATTTCGAC
AGATTCGCCATCATCAAAAACCTAATCTCAAAAAGAATCGTGTGTATGCAGTTTTGATAG + + + + + + 20 TCTAAGCGGTAGTAGTTTTTGGATTAGAGTTTTTCTTAGCACACATACGTCAAAACTATC
AAGACGGCGTGAATGAGATATTGAACGATTTGCATTtGGcTGaTAGCTTcTTTGGATTAG
TTCTGCCGCACTTACTCTATAACTTGCTAAACGTAAaCCgACtATCGAAgAAACCTAATC
AGACGGGGATTTCTCCCTTGGTTTTGGAAAATGATTCGTGGAGTCAAGCCTATCTTCGTG 4- 4* 4- 4* 4- 4- 840
TCTGCCCCTAAAGAGGGAACCAAAACCTTTTACTAAGCACCTCAGTTCGGATAGAAGCAC
GAGCATTTTTAGCGGCAGGCTCTGTTAAGGATCCTGAAAAAGGAAAATACCAGCTTGAAA
CTCGTAAAAATCGCCGTCCGAGACAATTCCTAGGACTTTTTCCTTTTATGGTCGAACTTT
TAGCTTCTGTCTATAGTGACCATGCCAATGACCTGCCAATCTGATGCAGAAATTTCTTTT
ATCGAAGACAGATATCACTGGTACGGTTACTGGACGGTTAGACTACGTCTTTAAAGAAAA
GGACGCCAAAGTCATTGAGCGAAGTAAGGGAACCATTACCTATCTGCAACGTGCAGAGGA + + + + + + 1020 CCTGCGGTTTCAGTAACTCGCTTCATTCCCTTGGTAATGGATAGACGTTGCACGTCTCCT
CATTATGGATTTTCTTTTGGTGATTGGAGCAGAAGAGACGAAGACAGAATTTGAGAATGT + + + + + + 1080
GTAATACCTAAAAGAAAACCACTAACCTCGTCTTCTCTGCTTCTGTCTTAAACTCTTACA
TAAATTGCTTCGTGAGGCTCGCAATGACCTAAATCGAGCCACCAATGCGGAAGCTGCTAA
+ + + + + + 1140
ATTTAACGAAGCACTCCGAGCGTTACTGGATTTAGCTCGGTGGTTACGCCTTCGACGATT
TATTGCAAAGACGGTCAATGCTAGTATGAAAACAATCAATAATATTATCAAAATTATGGA + + + + + + 1200
ATAACGTTTCTGCCAGTTACGATCATACTTTTGTTAGTTATTATAATAGTTTTAATACCT
TACTATCGGTCTAGATCAGTTGTCAGGTGACTTGCAGGAGATTGCCCAGTTGCGAATTCA + + + + + + 1260 ATGATAGCCAGATCTAGTCAACAGTCCACTGAACGTCCTCTAACGGGTCAACGCTTAAGT
GCATCCAGACTATTCCATTCAGCAATTGGCGGATAGTCTAACGGTACCGATCACTAAAAG + + + + + + 1320
CGTAGGTCTGATAAGGTAAGTCGTTAACCGCCTATCAGATTGCCATGGCTAGTGATTTTC
TGGTGTCAACCATCGTTTGCGGAAAATCAATAAGATTGCGGATGAATTGACTGACTAGAT + + + + + + 1380
ACCACAGTTGGTAGCAAACGCCTTTTAGTTATTCTAACGCCTACTTAACTGACTGATCTA
AGGTATACATAGAATGTTATGGACATTTGAATTAACTTTGATACATCGTTACTTTCGGCT + + + + + + 1440
TCCATATGTATCTTACAATACCTGTAAACTTAATTGAAACTATGTAGCAATGAAAGCCGA
TGCCGTACTCTAGTATTGCTTACACCTCAGTTCCTTGTCTGAAAGTTAATTCATTCGACG 4- 4- 4* 4* 4- 4- 1500
ACGGCATGAGATCATAACGAATGTGGAGTCAAGGAACAGACTTTCAATTAAGTAAGCTGC
ATACTAAGACTGGTTCGAGAGGACCAGTTTTTTGTATTAGTtGtGATAGTATTCCTCTTC + + + + 4. + 1560 TATGATTCTGACCAAGCTCTCCTGGTCAAAAAACATAATCAaCaCTATCATAAGGAGAAG
aCAGGAATGATCCTGTTTTATGAATTTTTCAGTAATGATTaGCATAGAACGTTAATATAT + + + + + 4. 1620 tGTCCTTACTAGGACAAAATACTTAAAAAGTCATTACTAAtCGTATCTTGCAATTATATA
GTTaAAATAGATaGAAGGATaCTTTagCTaGAAAGGaGTTTtGaTGATAAgCAaCGaACa
4. 4. + 4. 4. + 1680
CAAtTTTATCTAtCTTCCTAtGAAAtcGAtCTTTCCtCAAAaCtACTATTcGTtGCtTGt
ATATGATTaTcTaAgAGCaCATCCaACTTTTGaACGtTTGACaCgTGATAgCTTTGATCA 4. 4. + 4. 4, 4. 1740
TATACTAAtAgAtTcTCGtGTAGGtTGAAAACtTGCaAACTGtGcACTATcGAAACTAGT
AtTAgcTAAgCaTaTTCgtTTTCGAAAGATTCCTAAGGGACAAATCTTTTTTTACGCAGA 4. 4. 4. 4. 4, 4. 1800 TaATcgATTcGtAtAAGcaAAAGCTTTCTAAGGATTCCCTGTTTAGAAAAAAATGCGTCT
GGATCCTAGAGATTATCTATTTGTATTGTATAAGGGCTATGCTCGGATTGAGCAATATGA 4. 4. 4. 4. 4. 4. 1860
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TGAGACGGATAGTTTTACGTATTTAGACTATATTCGGCAGGGTGGTGCCTTTCCTTTTGG
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TTTTATTGtaCCgAtGGTCTTGTTTGAAACCTTGTCGAAGATAAATCCGAGTCAAATGGC 4- 4- 4* 4- 4- 4* 2040
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TTATATCTGTCAAAAATTATCCAAAGTGCTTCGTTTTCAAGAGTTGCGCTTGCGAAATGC 4. 4. 4. 4. 4. 4. 2100 AATATAGACAGTTTTTAATAGGTTTCACGAAGCAAAAGTTCTCAACGCGAACGCTTTACG
GATGCGTTCCAAGGCATCAGATCGAGTCGTTCAAGCCTTGCCTCTTCTTTATTGGGATAT 4. 4. 4. 4. 4. 4. 2160
CTACGCAAGGTTCCGTAGTCTAGCTCAGCAAGTTCGGAACGGAGAAGAAATAACCCTATA
GTGCCAGCGAGAGCAGTTTGCTACCTTGCCATTTGAAATTCATATTCAAGAGATTTCGCG
4. 4. 4. + 4. 4. 2220
CACGGTCGCTCTCGTCAAACGATGGAACGGTAAACTTTAAGTATAAGTTCTCTAAAGCGC
TTTAGCAGCTACGACACGGGAAACGGTTAGCCATGTTTTGAAGCAACTGAAGCAGGATGG 4. 4, 4. 4. 4. 4, 2280
AAATCGTCGATGCTGTGCCCTTTGCCAATCGGTACAAAACTTCGTTGACTTCGTCCTACC
TAAAATAGCTTATAGCCATAAACAGTTAACTTATTTAGATATTGATTATTTCTTAGAAAA 4. 4. 4. 4. 4. 4. 2340 ATTTTATCGAATATCGGTATTTGTCAATTGAATAAATCTATAACTAATAAAGAATCTTTT
TTTGACAGAAACTCATTGAAGTTTCTGTTTTTTATAAAAAAATAAAAATTCATATAATGA 4. 4. 4, 4. 4. 4. 2400
AAACTGTCTTTGAGTAACTTCAAAGACAAAAAATATTTTTTTATTTTTAAGTATATTACT
TATAACGGAAAGAATTATGCAGAATTTAGATGATATAATCGATAATTATTTATAAATAAG 4. 4. 4. 4. 4. 4. 2460
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GTTAAAAATGTGAAGAATTTCTCAAAATAAATGTGAGCGTTTTCAAGTTTTTGTTTTTTT 4. 4. 4. 4. 4. 4. 2520
CAATTTTTACACTTCTTAAAGAGTTTTATTTACACTCGCAAAAGTTCAAAAACAAAAAAA
GCTCTGTTAAACTATGGATGTAAAGAGGAAATGAGAGGCAGGAAAGCGTACGGTCCTCCT 4- 4- 4* 4* 4- 4- 2580
CGAGACAATTTGATACCTACATTTCTCCTTTACTCTCCGTCCTTTCGCATGCCAGGAGGA
CGTTTCCCATCATGTATAAATCTACAAGGAGGΆCAGATCATGTCAΆACCATCCAATTCAT 4, 4. 4. 4. + 4. 2640 GCAAAGGGTAGTACATATTTAGATGTTCCTCCTGTCTAGTACAGTTTGGTAGGTTAAGTA
GTTTTTTCAGAAATTGGTAAGCTGAAAAΆAGTTATGTTACACAGΆCCAGGTAAGGΆΆΆTT 4. 4. 4. 4. 4. 4. 2700
CAAAAΆAGTCTTTAΆCCATTCGACTTTTTTCAATACAATGTGTCTGGTCCATTCCTTTAA
GAAAACCTTATGCCTGACTATCTAGAACGCCTACTCTTCGATGATATCCCATTCTTΆGAA
4. + 4, 4. + + 2760
CTTTTGGAATACGGACTGATAGATCTTGCGGATGAGAAGCTACTATAGGGTAAGAATCTT
GATGCACAGAAAGAGCATGATGCCTTTGCTCAAGCTCTTCGTGATGAAGGTGTAGAAGTG 4. 4. 4. 4. + 4. 2820
CTACGTGTCTTTCTCGTACTACGGAAACGAGTTCGAGAAGCACTACTTCCACATCTTCAC
CTCTACTTGGAAAAATTAGCTGCTGAGTCACTTGTTACACCTGAAATTCGTGAACAATTT 4. 4. 4. 4. 4. 4. 2880 GAGATGAACCTTTTTAATCGACGACTCAGTGAACAATGTGGACTTTAAGCACTTGTTAAA
ATTGATGAATATCTTGAAGAAGCTAACATTCGTGGCCGGGCAACTAAAAAGGCAATTCGT 4. 4. 4. 4. 4. 4. 2940
TAACTACTTATAGAACTTCTTCGATTGTAAGCACCGGCCCGTTGATTTTTCCGTTAAGCA
AAGCTGTTGATGTCTATTGAAGATAATCAAGAACTGGTTGAGAAAACGATGGCTGGTGTT 4. 4. 4. 4. 4. 4. 3000
TTCGACAACTACAGATAACTTCTATTAGTTCTTGACCAACTCTTTTGCTACCGACCACAA
CAAAAGGCAGAATTGCCAAAAATCCCTTCTGAAGAAAAAGGTTTGACAgATTTGGTTGAA + 4. 4. 4. 4. 4. 3060
GTTTTCCGTCTTAACGGTTTTTAGGGAAGACTTCTTTTTCCAAACTGTcTAAACCAACTT
TCCTCTTACCCATTTGCAAtAGACCCAATGCCAAACCTTTACTTCACACGGGATCCATTT 4- 4- 4- 4- 4- 4- 3120
AGGAGAATGGGTAAACGTTaTCTGGGTTACGGTTTGGAAATGAAGTGTGCCCTAGGTAAA
GCTACGATTGGTAATGCTGTTTCTCTTAACCACATGTATTCAGAAACACGGAACCGTGAA 4. 4. 4. 4. 4. 4. 3180 CGATGCTAACCATTACGACAAAGAGAATTGGTGTACATAAGTCTTTGTGCCTTGGCACTT
ACCTTGTATGGTAAATATATCTTCACTCATCACCCAGAATATGGTGGAAAAGTTCCATTG 4. 4. 4. 4. 4. 4. 3240
TGGAACATACCATTTATATAGAAGTGAGTAGTGGGTCTTATACCACCTTTTCAAGGTAAC
GTTTACAATCGTGAAGAAACTACTCGTATAGAGGGTGGTGACGAATTGGTTCTTTCAAAA
4. 4, 4, 4. 4. 4. 3300
CAAATGTTAGCACTTCTTTGATGAGCATATCTCCCACCACTGCTTAACCAAGAAAGTTTT
GATGTTTTGGCAGTAGGTATTCACAACGTACCGATGCGGCATCAATTGAAAAACTATTGG + 4, + 4. + 4, 336O
CTACAAAACCGTCATCCATAAGTGTTGCATGGCTACGCCGTAGTTAACTTTTTGATAACC
TAAATATCTTTGAACGGCATGTTGGCTTCAAGAAAGTATTGGCATTCGAATTTGCTAACA 4. 4. 4. 4. + + 3420 ATTTATAGAAACTTGCCGTACAACCGAAGTTCTTTCATAACCGTAAGCTTAAACGATTGT
ACCGTAAATTCATGCATTTGGATACAGTATTTACCATGGTTGACTATGATAAGTTTACTA
TGGCATTTAAGTACGTAAACCTATGTCATAAATGGTACCAACTGATACTATTCAAATGAT
TCCACCCAGAAATCGAAGGTGACCTTCGTGTCTTCTCTGTAACCTATGAAAATGACACGC 4. 4, 4. + 4. 4. 3540
AGGTGGGTCTTTAGCTTCCACTGGAAGCACAGAAGAGACATTGGATACTTTTACTGTGCG
TTCATATTGAAOAAGAACATGGTGATTTGGCAGAACTTTTGGCTGCGAACCTTGGTCTTG 4, 4. 4. 4. 4. 3600
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AAAAAGTAGAATTGATTCGTTGTGGTGGCGGTGATATGGTTGCTGCTGGTCGTGAGCAAT 4- 4- 4- 4- 4* 4- 3660
TTTTTCATCTTAACTAAGCAACACCACCGCCACTATACCAACGACGACCAGCACTCGTTA
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CCTTACTACCAAGTTTATGTAACTGATAACGTGGTCCACACCATCAACAAATGTTTGCGT
ATACGATTACCAATGCTATCCTCGAGTCCAAAGGGCTTCGTTTGATTAAGATTGGCGGAA
TATGCTAATGGTTACGATAGGAGCTCAGGTTTCCCGAAGCAAACTAATTCTAACCGCCTT
GCGAATTGGTTCGCGGTCGTGGTGGACCTCGTTGTATGTCAATGCCGTTTGAACGTGAAG
4. + 4. 4. 4. 4. 3840
CGCTTAACCAAGCGCCAGCACCACCTGGAGCAACATACAGTTACGGCAAACTTGCACTTC
ACATcTAATGCCAAGTaTAGAACGAACAACAATCGGTTCGGAAGAATGGCAACGCGCAGC
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GAgATAgATACAGGCgATATTCCATAAACAGGAACTCGCACCATAACGTTTCCTTCTACT
ATTTGACCAGAATGATACGGAAgAAAGAGTTTACGCCAATcTcTTTATTGGTGAAGAGCC
TAAACTGGTCTTACTATGCCTTcTTTCTCAAATGCGGTTAgAgAAATAACCACTTCTCGG
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AACTAAAGAGTCGAGTAAACTTTCTAAACTTTTTTGCGTTATAAGGTGTGGCAATAAACC
AAGGTAAAAATATTGCTCTCTTGTTTGAAAAAACATCAACACGTACTCGTGCTGCCTTCA 4. 4. + 4. 4. + 4500 TTCCATTTTTATAACGAGAGAACAAACTTTTTTGTAGTTGTGCATGAGCACGACGGAAGT
CAGTAGCATCTATTGACCTTGGTGCCCATCCAGAATATCTTGGTGCAAATGACATCCAAC
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TTGGTAAGAAAGAATCTACAGAAGATACTGCTAAAGTTTTGGGACGTATGTTCGACGGTA 4, + 4. 4. 4. 4. 4620
AACCATTCTTTCTTAGATGTCTTCTATGACGATTTCAAAACCCTGCATACAAGCTGCCAT
TTGAATTCCGTGGTTTCAGTCAAAAAATGGTGGAATGAATTCTGCAGAGCTCCGGC
AACTTAAGGCACCAAAGTCAGTTTTTTACCACCTTACTTAAGACGTCTCGAGGCCG
6. Polynukleotid, das eine Nukleotidsequenz besitzt, die wenigstens zu 90 % der Sequenz des ADS-Operons gemäß
Anspruch 3 homolog ist.
7. Verfahren zur Herstellung des Proteins AdiS gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es durch Stressanzucht erhalten wird.
8. Verfahren gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass bei der Anzucht eine Temperatur von 32 bis 42 °C und/ oder ein erhöhter C02-Partialdruck angewendet wird.
9. Nicht-rekombinante Subunit-Vakzine gegen Streptococ- cus suis-Infektionen beim Schwein, dadurch gekennzeichnet, dass sie das Protein AdiS gemäß Anspruch 1 und/oder das Protein OCTS und/oder ein Protein gemäß Anspruch 2 umfasst .
10. Nicht-rekombinante Subunit-Vakzine gemäß Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass sie ein Adjuvanz und/oder andere Hilfs- und Trägerstoffe enthält.
11. Nicht-rekombinante Subunit-Vakzine gemäß Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass das Adjuvanz ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Mineralöl und Aluminiumhydroxid.
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