WO2004019680A1 - 臓器、組織または細胞の保護および保存のための組成物およびその利用 - Google Patents

Abstract

本発明は、臓器、組織または細胞の保護および保存を効率よく行う組成物を提供すること。特に手術中でも使用することができる保護組成物を提供する。本発明は詳細には、ポリフェノールを含む、臓器、組織または細胞の保護および保存のための組成物が提供される。被検体における臓器、組織または細胞を保護するための方法であって、１）ポリフェノールを、該臓器、組織または細胞に暴露する工程を包含する、方法もまた提供される。このような組成物およびポリフェノールは、臓器（特に、心臓、脳、神経、脊髄など）の機能の保護に有効である。

Description

明細書

臓器、 組織または細胞の保護および保存のための組成物およびその利用 技術分野 細胞、 組織または臓器の保護および保存に関する。 特に、 臓器、 細胞および 組織の保護および保存の機能を有する組成物およびその利用に関する。 背景技術

通常、 細胞を保存するには、 一 1 9 6 °Cの極低温で凍結保存され、 必要なと き、 これら凍結細胞を急速解凍して生細胞が得られている。 しかしながらこの 凍結 ·融解後の生存率は、 細胞の種類や実験者の熟練度に依存するものの、 癌 以外の正常有用細胞、 例えばランゲルハンス島や肝細胞の生存率は極めて低く たかだか 1 0〜3 0 %である。

さらに、 血球成分や血小板は凍結保存ができないので、 その有効期間も 1 2 〜7 2時間と非常に短い。 加えて最近、 臓器移植の症例が増えているが、 移植 臓器の保存方法も重要な研究課題として残っており、 細胞の増殖と細胞障害に 大きく関係している。

近年の外科手術の技術、 免疫抑制剤などの進歩に伴って、 臓器移植の症例が 増加している。 この臓器移植に於いて、 提供者 （ドナー） から摘出された臓器 が直ちに受容者 (レシピエント) に移植されることが理想的ではあるが、 必ず しも直ちに移植手術がなされていない。 し力 し、 移植手術は緊急性を伴うため 貴重な臓器保存の問題が極めて重要である。 現在、 臓器保存法として、 臓器の 代謝抑制を目的とする低温保存法と、 代謝維持を目的とする灌流保存法が適用 されており、 それらに使用される様々な保存液が開発され臨床的に応用されて いる。 さらに、 心臓などの臓器の手術の際に、 血流を一過的に止めることが必要と なる場合があるが、 細胞、 組織おょぴ臓器が虚血状態になり、 その後に再灌流 すると、 フリーラジカルが発生し細胞、 組織および臓器の機能に障害が発生す る。 従来は、 低温度処理などによりこの障害を低減させることが行われている 力 そのような処理は煩雑であり、 手術の自由度を妨げる結果となっている。 また、 従来の処理では、 再灌流に障害が残ることが多く、 細胞、 組織おょぴ臓 器の保護は完全に行われているとは言いがたい。

近年、 緑茶ポリフエノールなどのポリフエノール類は、 抗酸化作用等の生理 活性のあることが知られようになり、 広くその解明や応用が研究されるように なってきている。

上述のように、 細胞、 組織おょぴ臓器では、 しばしば、 虚血およぴ再灌流等 に生じるフリーラジカルの存在が生体膜の脂質過酸化を促進し、 生体膜障害を 引き起こし、 その結果移植臓器の機能障害が起こる。 このことから、 本発明者 らは、 この過酸化脂質生成による細胞障害を阻止する、 効果的な保存液の開発 を行っている。 以前にポリフエノール類のこれら細胞、 組織または臓器におけ るフリーラジカルの抑制作用を突き止め、 有効成分としてポリフエノールを含 む動物の細胞、 組織または臓器の保存剤を提案した （特開 2 0 0 0— 3 4 4 6 0 2号公報） 。

特開 2 0 0 0 - 3 4 4 6 0 2号公報においては、 ポリフエノール含む保存剤 を、 通常の細胞培養液として用いられる種々の培養液または臓器保存液に加え ることによって、 生体から取り出された細胞などを遮断状態におき、 増殖作用 を抑制して保存期間を大幅に延長させ、 あるいは保存臓器等の機能を長期にわ たって保つことができた。

ところで、 臓器移植に限らず、 外科的措置を行う際には、 対象とする臓器な どを血流から遮断した状態である程度維持しなければならない場合が少なくな い。 このような場合にも、 血流から遮断されて虚血状態の臓器は、 上記のように 速やかにフリーラジカルの生成により、 生体膜の損傷を生じるため、 外科的措 置において時間的制約があり、 また施術後の回復にも著しく影響する。

具体的には、 例えば心臓手術では心停止液を心臓に灌流して人為的に心停止 させて行うが、 この間心筋は虚血状態となって酸素不足から心機能低下を招く ことが多い。 このため虚血状態の後、 再灌流する際に心筋に大きな障害をもた らす場合がある。 これを再灌流障害と呼ぶが、 このため患者に致命的な負担を かける場合もあり、 大きな問題となっている。

このような状態を回避、 あるいは抑制するため、 体温を低温度下において代 謝を低下させ、 これらの外科的措置時間の延長を図り、 また術後の臓器などの 損傷を軽減することも行われているが、 なお外科的措置に十分な時間を確保す ることは困難であり、 臓器への損傷を抑制することも十分とはいえない。 また、 このような低温処置を行うことも、 大掛かりとなって精密な処置を迅速に行わ なければならない手術現場においては少なからぬ障害になる。

上述のように、 細胞または組織レベルでは保存という機能をポリフエノール が担うことは明らかにされているが、 臓器という高次レベルで、 しかも、 その 機能を維持する、 すなわち、 保護という機能まで行うということは予測され得 ない。 なぜなら、 例えば、 遺体から 2 4時間以内に組織を取り出しても機能を 保持していることは技術常識であるが、 臓器 （例えば、 心臓など） の場合は、 死ぬまでに臓器を取り出すことが必要であり、 それが故、 脳死後心臓停止まで の臓器の摘出が重要な役割を果たしている。 したがって、 臓器、 糸且織または細 胞を 「保護」 するという組成物はいまだに明らかにされていない。

外科的措置などにおいて低温度処理などの行うことなく、 虚血状態における 細胞、 組織または臓器などにおけるフリ一ラジカルの生成を抑え、 代謝機能を 維持してその機能を保護 （すなわち、 臓器、 組織および細胞を 「保護」 ） し、 虚血状態での外科的措置時間の延長および施術後の回復、 障害の予防を図るこ とを課題とした。 また、 同様に保存中の臓器 （特に心臓） の保攀を図ることを 課題とした。 発明の要旨

本発明は、 一部、 本発明者らが、 ポリフエノールに臓器、 組織または細胞の 保護作用が予想外に顕著であることを発見したことによつて達成された。

したがって、 本発明は以下を提供する。

(I) ポリフエノールを含む、 臓器、 組織または細胞の保護およぴ保存の ための組成物。

(2) 前記ポリフエノールは、 虚血および再灌流のうち少なくとも 1つの 時期において、 前記臓器、 組織または細胞の保護に有効な量で存在する、 項目 1に記載の組成物。

(3) 前記虚血または再灌流は、 外科的または内科的な手術のときに起こ る、 項目 2に記載の組成物。

(4) 前記保護は、 手術の際のものであり、 前記ポリフエノールは、 該手 術前から再灌流後のいずれか時点で投与される、 項目 1に記載の組成物。

(5) 前記投与は、 少なくとも術前約 2週間から手術当日のいずれかの時 点である、 項目 4に記載の組成物。

( 6 ) 前記投与は、 少なくとも虚血時に行われる、 項目 4に記載の糸且成物。 (7) 前記投与は少なくとも再灌流時に行われる、 項目 4に記載の組成物。

( 8 ) 前記投与は少なくとも再灌流後に行われる、 項目 4に記載の,袓成物。

(9) 前記投与は、 経口または非経口で行われる、 項目 4に記載の糸且成物。

(1 0) 前記手術は、 外科的または内科的である、 項目 4に記載の糸且成物。

(I I) 前記手術は、 外科手術である、 項目 1 0に記載の組成物。

(1 2) 前記手術は、 オフポンプ、 PC I、 カテーテルインターベンショ ンまたは体外循環を使用する、 項目 1 1に記載の組成物。 (13) 前記外科手術は、 大動脈、 冠動脈または弁膜の手術である、 項目 11に記載の組成物。

(14) 前記臓器、 組織または細胞は、 臓器である、 項目 1に記載の組成 物 _α

(15) .前記臓器は、 皮膚、 血管、 角膜、 腎臓、 心臓、 肝臓、 臍帯、 腸、 神経、 肺、 胎盤または膝臓を含む、 項目 1に記載の組成物。

(16) 前記臓器は、 心臓、 脳、 神経およぴ脊髄からなる群より選択され る、 項目 1に記載の組成物。

(1 7) 前記臓器、 且織または細胞は、 哺乳動物のものである、 項目 1に 記載の組成物。

(18) 前記臓器、 組織または細胞は、 ヒトの のである、 項目 1に記載 の組成物。

(1 9) 臓器、 組織または細胞の保護剤である、 項目 1に記載の組成物。 (20) 前記保護は、 虚血時の保護を含む、 項目 19に記載の組成物。 (21) 臓器、 組織または細胞の保存剤である、 項目 1に記載の組成物。

(22) 前記ポリフエノールは、 混合物または単品である、 項目 1に記載 の組成物。

(23) 前記ポリフエノールは、 カテキン類、 タンニン、 プルアントシァ 二ジンおよびリスベラトロールからなる群より選択される、 項目 1に記載の組 成物。

(24) 前記ポリフエノールは、 少なくともカテキン類またはタンニンを 含む、 項目 1に記載の糸且成物。

(25) 前記ポリフエノールは、 ェピガロカテキンガレートを含む、 項目 1に記載の組成物。

(26) 前記ポリフエノールは、 ヒドロキシ価が 2〜約 100である、 項 目 1に記載の組成物。 (27) 前記ポリフエノールは、 茶抽出物、 海草抽出物、 アロエ抽出物お よびワイン抽出物、 サボテン抽出物および果実抽出物からなる群より選択され る抽出物を含む、 項目 1に記載の組成物。

(28) 前記ポリフエノールは海草抽出物を含む、 項目 1に記載の組成物 _c (29) 前記ポリフ.エノ一ルは茶抽出物を含む、 項目 1に記載の組成物。

(30) 被検体における臓器、 組織または細胞を保護するための方法で あって、

1) ポリフエノーノレを、 該臓器、 組織または細胞に暴露する工程

を包含する、 方法。

(31) 前記ポリフエノールは、 虚血およぴ再灌流のうち少なくとも 1つ の時期において、 前記臓器、 組織または細胞の保護に有効な量で前記被検体に 投与される、 項目 30に記載の方法。

(32) 前記保護は、 手術の際になされる、 項目 30に記載の方法。

(33) 前記手術は、 外科的または内科的な手術である、 項目 32に記載 の方法。

(34) 前記ポリフエノールは、 前記手術前から再灌流後のいずれか時点 で前記被検体に投与される、 項目 32に記載の方法。

(35) 前記投与は、 少なくとも術前約 2週間から手術当日のいずれかの 時点である、 項目 34に記載の方法。

(36) 前記投与は、 少なくとも虚血時に行われる、 項目 34に記載の方 法。

(37) 前記投与は少なくとも再灌流時に行われる、 項目 34に記載の方 法。

(38) 前記投与は少なくとも再灌流後に行われる、 項目 34に記載の方 法。 (39) 前記投与は、 経口または非経口で行われる、 項目 34に記載の方 法。

(40) 前記手術は、 外科手術である、 項目 32に記載の方法。

(41) 前記手術は、 オフポンプ、 PC I、 カテーテルインターベンショ ンまたは体外循環を使用する、 項目 32に記載の方法。

(42) 前記外科手術は、 大動脈、 冠動脈または弁膜の手術である、 項目 40に記載の方法。

(43) 前記臓器、 組織または細胞は、 臓器である、 項目 30に記載の方 法。

(44) 前記臓器は、 皮膚、 血管、 角膜、 腎臓、 心臓、 肝臓、 臍帯、 腸、 神経、 肺、 胎盤または膝臓を含む、 項目 30に記載の方法。

(45) 前記臓器は、 心臓、 脳、 神経おょぴ脊髄からなる群より選択され る、 項目 30に記載の方法。

(46) 前記臓器、 ，袓織または細胞は、 哺乳動物のものである、 項目 30 に記載の方法。

(47) 前記臓器、 組織または細胞は、 ヒ トのものである、 項目 30に記 載の方法。

(48) 前記保護は、 虚血時の保護を含む、 項目 30に記載の方法。 (49) 前記保護は、 再灌流時の保護を含む、 項目 30に記載の方法。 (50) 前記ポリフヱノールは、 混合物または単品である、 項目 30に記 載の方法。

(51) 前記ポリフエノールは、 カテキン類、 タンニン、 プルアントシァ 二ジンおよびリスベラトロールからなる群より選択される、 項目 30に記載の 方法。

(52) 前記ポリフヱノールは、 少なくともカテキン類またはタンニンを 含む、 項目 30に記載の方法。 (53) 前記ポリフエノールは、 ェピガロカテキンガレートを含む、 項目 30に記載の方法。

(54) 前記ポリフエノールは、 ヒドロキシ価が 2〜約 100である、 項 目 30に記載の方法。

(55) 前記ポリフエノールは、 茶抽出物、 海草抽出物、 アロエ抽出物お ょぴワイン抽出物、 サボテン抽出物おょぴ果実抽出物からなる群より選択され る抽出物を含む、 項目 30に記載の方法。

(56) 前記ポリフエノールは海草抽出物を含む、 項目 30に記載の方法。

(57) 前記ポリフエノ一ルは茶抽出物を含む、 項目 30に記載の方法。 (58) 臓器、 組織または細胞を保存するための方法であって、

1) 該臓器、 組織または細胞をポリフヱノールを含む流体中に保持する工程、 を包含する、 方法。

(59) 前記臓器は、 心臓である、 項目 58に記載の方法。

(60) 臓器、 組織または細胞を保護または保存するための医薬を製造す るための、 ポリフエノールの使用であって、 該医薬は、 ポリフエノールを含む、 使用。

したがって、 本発明の糸且成物は、 生体に直接または間接的に投与することに より、 細胞、 組織または臓器を保護 （代謝機能を正常状態と） する、 ポリフエ ノールを有効成分とする代謝機能抑制剤であり得る。 本発明の組成物はさらに、 臓器類の血流を遮断する外科的措置において、 予め生体に投与することにより 対象とする臓器類を代謝機能抑制状態とする、 ポリフエノールを有効成分とす る代謝機能向上剤であり得る。

また、 本発明の組成物その用法として、 臓器類の血流を遮断する外科的措置 において、 ポリフヱノールを有効成分とする代謝機能抑制剤を予め生体に投与 することにより対象とする臓器類を代謝機能を正常状態とする、 臓器類の虚血 性障害抑制法もまた特徴である。 より具体的には、 1つの実施形態において、 上記外科的措置が心臓手術であり、 対象とする臓器が心臓であることを特徴と する虚血性障害抑制法であり、 上記投与条件が経口および静脈投与であり、 さ らに、 上記の投与条件が、 手術当日〜 2週間で、 0 . 0 1〜0 . l g /K g / dayとして心臓の心筋を保護することを特徴とする臓器類の虚血性障害抑制法 が提供される。

以下に、 本努明の好ましい実施形態を示すが、 当業者は本発明の説明および 当該分野における周知慣用技術からその実施形態などを適宜実施することがで き、 本発明が奏する作用おょぴ効果を容易に理解することが認識されるべきで あ 。 図面の簡単な説明

図 1は、 コントロール群ラットおよびポリフエノール投与群ラットの心臓断 面を示す心筋病理標本拡大写真図である。

図 2は、 左心室収縮末期圧-容量関係を示すグラフである。

図 3は、 8— O H d Gを用いた免疫病理学的判定結果である。

図 4は、 心筋細胞の核の空胞変性を示す病理学標本拡大写真図 （コントロー ル） である。

図 5は、 心筋細胞の核の空胞変性を示す病理学標本拡大写真図 （ポリフエノ ール投与） である。

図 6は、 F I T C標識したポリフエノールを用いた細胞内ポリフエノール局 在を示す図である。

図 7は、 再灌流後のポリフエノールの心臓重量に対する効果である。 好ましい実施形態の説明

以下、 本発明を説明する。 本明細書の全体にわたり、 単数形の表現は、 特に 言及しない限り、 その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。 従 つて、 単数形の冠詞または形容詞 （例えば、 英語の場合は 「a」 、 「a n」 、

「t h e」 など） は、 特に言及しない限り、 その複数形の概念をも含むことが 理解されるべきである。 また、 本明細書において使用される用語は、 特に言及 しない限り、 当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべ きである。 したがって、 他に定義されない限り、 本明細書中で使用される全て の専門用語および科学技術用語は、 本発明の属する分野の当業者によって一般 的に理解されるのと同じ意味を有する。 矛盾する場合、 本明細書 （定義を含め て） が優先する。

以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。

本明細書において使用される 「ポリフエノール」 とは、 同一分子内に 2以上 の水酸基を有するフエノールをいい、 多価フエノールともいう。 水酸基の数に よって二価フヱノール、 三価フヱノールなどと呼ばれる。 たとえば、 力テコー ル、 レゾルシン、 ヒドロキノンなどの C ₆ H₄ (O H) ₂は二価フエノールであ り、 フロログルシン C ₆ H ₃ (O H) 3などは三価フエノールである。 ポリフエ ノールは、 ある分類法によれば、 フラボノイド、 加水分解型タンニン、 その他 のポリフエノールに分類することができる。 加水分解型タンニンおよびブロア ントシァ-ジン （縮合型タンニン） は、 総称してタンニン （またはタンニン 酸)'に含まれる。 本明細書において使用されるポリフエノールとして好ましい ものは、 すでに食品または医薬品 （医薬部外品なども含む） として当局の承認 を得たものが好ましい。 そのようなものとしては、 例えば、 日本薬局方に掲載 されているタンニン酸、 タンニン酸アルブミンなどが挙げられるがそれらに限 定されない。

本明細書において使用される 「タンニン」 とは、 ポリオキシフエニルを基本 構造としており、 アルカリ分解するとフヱノール類などが得られるものの総称 である。 カリ融解によって、 ピロガロールを生じるピロガロールタンニンと力 テコールを生じるカテコールタンニンとに分けられる。 また、 希酸と過熱する と加水分解され没食子酸およぴェラグ酸などを生じる加水分解型タンニンと、 重合して水に不溶性のプロバフェンを生じる縮合型タンニンとに分けられる。 加水分解型タンニンは、 没食子酸、 ポリォキシジフェン酸などが糖とデプシド 結合した構造をしていることが多い。 また縮合型タンニンは、 カテキン、 ロイ コアントシアンが数分子重合したものと考えられている。 本明細書では、 どの 型のタンニンも有効であり得る。 1つの実施形態では、 タンニンは、 タンニン 酸またはタンニン酸アルブミンであり得る。 タンニン酸は、 ガロタンニン類の 粗製品であり、 医薬としても使用されている。 タンニン酸アルブミンはタン二 ンとアルブミンとの混合物であり、 これも医薬として用いられている。

本明細書において使用される 「ブラボノイド」 とは、 c ₆ - c ₃- c ₆の炭素骨 格をもった一群の色素の総称である。 フラバンの誘導体を総称する。 植物内で 合成されるものが多く、 植物体内でしばしばマロニル CoAと桂皮酸から生合成 される。 フラポノィ ドとしては、 カルコン類、 フラバノン類、 フラボン類、 フ ラボノール類、 フラバノノール類、 フラバノール (カテキン) 類、 イソフラボ ン類、 アントシァン類、 ベンザルクマラノン類、 アントシァニジン類、 プロト シァニジン類などが挙げられる。 フラポノィドは抗酸ィ匕的な性質を有するが、 フヱノール性水酸基の数が減ればその効果は一般的に弱くなる。 フラボノィド は抗癌作用が注目されている。

このようなフラボノィドは以下のような構造式を有する。

【化 1】

一 0

、ノ CH— 01Ϊ 00 -CH— 0Η 3 0 -co

フラパノール フラパノノール

フラボノ一 Λ

、CH

H— Oil α: CH

CO

イソフラボン

フラパン一 3, 4—ジォ一ル

(ロイコアン卜シアン） 本明細書において使用される 「カルコン」 は、 1， 3 -ジフエニル - 2 -プロピ レン - 1 -オン（1， 3 -ジフエ二ノレプロパ - 2一ェン - 1 -オン）であり、 ベンザノレ ァセトフエノンともよばれる。 カルコン類は、 このカルコンのヒドロキシ誘導 体を含む。 カルコン類としては、 カルコンのほかに、 ブティンコレオブシン、 ィソブトリン、 カルコノカルタミジン、 イソカルタミン、 カルタミン、 ベジシ ン、 ベジシニンなどが挙げられるがそれらに限定されない。

本明細書において使用される 「フラバノン」 は、 2, 3 -ジヒドロフラボンで あり、 フラバノン類は、 その誘導体 （例えば、 ヒ ドロキシ誘導体おょぴメ トキ シ誘導体 (特に 3， 5, 7, 3' , 4， 位に置換)） の総称である。 フラバノン類は、 主と して配糖体として植物界 （特に柑橘類） に存在する。 フラバノンとしては、 フ ラバノンのほかに、 ピノセンブリン、 ナリンゲ-ン、 サリプルビン、 ブルニン、 ナリンギン、 サクラネチン、 サクラニン、 ヘスべレチン、 ヘスベリジン、 エリ ォジクチオール、 マツトイシノールなどが挙げられるがそれらに限定されない 本明細書において使用される 「イソフラボン」 は、 3 -フエニルクロモンで あり、 イソブラボン類は、 その誘導体および配糖体を包含する。

12 差替 え用紙 （規則 26)v 類としては、 イソフラボンのほかに、 ダイゼイン、 ダイジン、 ゲニスティン、 ゲニスチンなどが挙げられるがそれらに限定されない。

本明細書において使用される 「フラボン」 とは、 2—フエユルクロモン （C _{1 5} H _{1 0} O ₂) であり、 フラボン類は、 その誘導体 (例えば、 ヒドロキシ誘導体 およびメ トキシ誘導体） の総称である。 フラボン類としては、 フラボンのほか に、 クリシン、 トリンギン、 アビゲニン、 コスモシイン、 アビイン、 ルテオリ ン、 ガルテオリン、 ダルコルテオリンなどが挙げられるがそれらに限定されな い。

本明細書において使用される 「フラボノール」 とは、 3 -ヒドロキシフラボ ン （C_{1 5}H_{1 0}0₃) であり、 フラボノール類は、 その誘導体 （例えば、 配糖体、 ヒ ドロキシ誘導体おょぴメ トキシ誘導体） の総称である。 フラポノール類として は、 ケンフヱロー Λ^、 トリホリン、 ァストラガリン、 ロビニン、 クエ^^セチン、 クエルシトリン、 イソクエルシトリン、 ルチン、 ミリセチン、 ミリシトリンな どが挙げられるがそれらに限定されない。

本明細書において使用される 「フラバノノール」 とは、 フラバノンの C環 3 位に水酸基が結合したものであり、 フラバノノール類は、 その誘導体の総称で ある。 フラバノノール類としては、 フラバノノールのほか、 ピノバンクシン、 ァロマデンドリン、 ェンゲリチン、 フスチン、 タキシホリン、 ァスチノレビン、 アンぺロプチンなどが挙げられるがそれらに限定されない。

本明細書において使用される 「フラバノール （カテキン） 」 は、 フラバンの C環 3位に水酸基が結合したものであり、 カテキン類は、 その誘導体の総称で ある。 カテキン類としては、 カテキンのほかに、 ガロカテキン、 ェピカテキン、 ェピガロカテキン、 ェピカテキンガレート、 ェピガロカテキンガレート、 およ ぴ 2分子重合したテアフラビン類 （例えば、 テアフラビン、 テアフラビン一 3 一 Ο—ガレート、 テアフラビン一 3， ーガレート、 テアフラビン一 3 , 3， 一 d l— o—ガレートなど） などが挙げられるがそれらに限定されない。 力テキ ンは、 茶類によく含まれている。

本明細書において使用される 「アントシァニジン」 は、 2-フヱニルベンゾピ リリウム構造に 4 - 6値の水酸基が結合したもの （ァグリコン） をいう。 その 配糖体をさすときはアントシァニンといい、 アントシアンはその両者をあわせ ての名である。

ベンザルクマラノンは 「オーロン」 ともいい、 C _{1 5} H _{1 0} O ₂であらわされる。 ベンザルクマラノン類は、 その誘導体の総称である。 ベンザルクマラノン類と しては、 ベンザ クマラノンのほか、 スノレフレチン、 ス フレイン、 パラシト リンレプトシジン、 レプトシン、 才一口シシジン、 ォ一口イシン、 セルヌオシ ドなどが挙げられるがそれらに限定されない。

本発明が対象とする臓器はどのような臓器でもよく、 また本発明が対象とす る組織または細胞は、 生物のどの臓器または器官に由来するものでもよい。 本 明細書において 「臓器」 または 「器官」 とは、 互換可能に用いられ、 生物個体 のある機能が個体内の特定の部分に局在して営まれ， かつその部分が形態的に 独立性をもっている構造体をいう。 一般に多細胞生物 （例えば、 動物、 植物） では器官は特定の空間的配置をもついくつかの組織からなり、 組織は多数の細 胞からなる。 そのような臓器または器官としては、 血管系に関連する臓器また は器官が挙げられる。 1つの実施形態では、 本発明が対象とする臓器は、 皮膚、 血管、 角膜、 腎臓、 心臓、 肝臓、 臍帯、 腸、 神経、 肺、 胎盤、 膝臓、 脳、 四肢 末梢、 網膜などが挙げられるがそれらに限定されない。 好ましくは、 本発明が 対象とする臓器は、 心臓または脳神経系の臓器が挙げられる。 より好ましくは、 本発明が対象とする臓器は、 心臓である。 別の実施形態では、 本発明が対象と する臓器は、 肝臓、 腎臓などであり得る。

本明細書において 「組織」 （t i s s u e ) とは、 多細胞生物において、 実 質的に同一の機能およびノまたは形態をもつ細胞集団をいう。 通常 「組織」 は、 同じ起源を有するが、 異なる起源を持つ細胞集団であっても、 同一の機能およ び Zまたは形態を有するのであれば、 組織と呼ばれ得る。 従って、 本発明の幹 細胞を用いて組織を再生する場合、 2以上の異なる起源を有する細胞集団が一 つの組織を構成し得る。 通常、 組織は、 臓器の一部を構成する。 動物の組織は, 形態的、 機能的または発生的根拠に基づき、 上皮組織、 結合組織、 筋肉組織、 神経組織などに区別される。 植物では、 構成細胞の発達段階によって分裂組織 と永久組織とに大別され、 また構成細胞の種類によって単一組織と複合組織と に分けるなど、 いろいろな分類が行われている。

本明細書において使用される 「細胞」 は、 当該分野において用いられる最も 広義の意味と同様に定義され、 多細胞生物の組織の構成単位であって、 外界を 隔離する膜構造に包まれ、 内部に自己再生能を備え、 遺伝情報およびその発現 機構を有する生命体をいう。 本明細書において対象とされる細胞としては、 ィ ンビポ状態の細胞が挙げられる。 細胞としては、 例えば、 表皮細胞、 睥実質細 胞、 腌管細胞、 肝細胞、 血液細胞、 心筋細胞、 骨格筋細胞、 骨芽細胞、 骨格筋 芽細胞、 神経細胞、 血管内皮細胞、 色素細胞、 平滑筋細胞、 脂肪細胞、 骨細胞、 軟骨細胞などが挙げられる。 細胞は、 由来により、 外胚葉、 中胚葉およぴ内胚 葉に由来する幹細胞に分類され得る。 外胚葉由来の細胞は、 主に脳に存在し、 神経幹細胞などが含まれる。 中胚葉由来の細胞は、 主に骨髄に存在し、 血管幹 細胞、 造血幹細胞および間葉系幹細胞などが含まれる。 内胚葉由来の細胞は主 に臓器に存在し、 肝幹細胞、 膝幹細胞などが含まれる。 本明細書では、 本発明 が対象とする体細胞はどのような胚葉由来でもよい。

本明細書において臓器、 組織または細胞の 「保護」 とは、 生体内 （i n V i v o ) で、 臓器、 組織または細胞の機能を生命を維持するに支障があるほど の消失を食い止めること、 好ましくは維持すること、 より好ましくは向上させ ることをいう。 例えば、 心臓の保護とは、 虚血障害などから心臓を守り、 心機 能が低下しないようにすることをいう。 特に、 虚血による細胞の壊死おょぴそ の後の再灌流におけるフリ一ラジカルの発生など種々の障害要因が生体内にあ り、 これらの攻撃から臓器、 組織または細胞を守ることが保護の概念に含まれ る。

本明細書において臓器、 組織または細胞の 「保存」 とは、 生体外で、 臓器、 組織または細胞の状態を維持または向上することをいう。 したがって、 保護お よび保存は、 その概念が異なる。 特に、 保存効果が認められた物質であっても、 生体内で同じ働きをすることは予測不可能であることから、 一概に保護効果を 有するとはいえない。

このように、 保護と保存とは、 同じ性質を持つ側面もあるが、 保存では、 レヽ つたん保存したまま放置することがおおく、 長時間になることが多いが、 保護 では長時間行うと、 生体自体に影響が出てくることからあまり長時間にわた^ ないという点でも異なる。

本明細書において 「虚血」 または 「虚血状態」 とは、 臓器または,袓織のの局 所的血流不足または無血流状態をいう。 血液供給の障害による局所的な組織の 死滅が生じる。 心臓の手術を行う際には、 血流を一部または全部一時的に停止 する必要があり、 そのような場合には少なくとも一時的に虚血状態になり、 そ の後の再灌流により障害が生じることが多い。 虚血時の保護は従来困難であつ た。

本明細書において 「再灌流」 とは、 冠動脈閉塞が開いた後に血流が再開する ことをいう。 再灌流には、 再灌流障害が生じる。 再灌流障害は、 冠動脈閉塞が 開いた後に続努する心筋障害で、 しばしば、 不整脈を伴う。 これは酸素由来の フリーラジカルのためと考えられている。

本明細書において 「虚血障害」 には、 虚血時および再灌流時に生じる障害が 含まれ、 それらには、 虚血性壌死に起因する障害または疾患、 麻痺、 心不全、 心筋気絶、 脊髄麻痺、 網膜症、 視神経障害、 虚血性心筋症、 脳虚血性障害、 腎 虚血性障害、 肝虚血性障害などの臓器虚血性障害などが挙げられるがそれらに 限定されない。

本発明が対象とする 「疾患」 は、 組織に傷害がある任意の疾患であり得る。 そのような疾患としては、 例えば、 任意の臓器の疾患が挙げられるがそれらに 限定されない。 例えば、 心疾患としては、 心不全、 心筋梗塞、 心筋症などが挙 げられる。 本発明の保護法法は、 心臓以外の臓器の保護するためにも適用され- 得る。

「心不全」 とは、 心機能不全、 循環機能不全、 収縮力減退など心臓自体に障 害があって、 全身の臓器へ必要な量および質の血液を循環し得なくなった状態 をいう。 心不全は、 心筋梗塞、 心筋症などの心臓疾患の末期の症状である。 重 症心不全とは、 その程度が重症であるものをいい、 末期心不全ともいう。

「心筋梗塞」 とは、 冠状動脈の種々の病変による高度狭窄、 閉塞によってそ の灌流領域に虚血性壊死が生じる疾患である。 心筋梗塞の重傷度判定には、 種々の分類がある。 そのような分類としては、 例えば、 時間的経過による分類、 形態学的分類 （心筋層内範囲、 部位、 壌死の大きさなど） 、 心筋の壌死形態、 梗塞後の心室再構築、 血行動態的分類 （治療、 予後などに関連する） 、 臨床的 重症度による分類などが挙げられる。 ここで重症度が高いものを特に重症心筋 梗塞という。

「心筋症」 とは、 心筋の器質的および機能的な異常に起因する疾患の総称で あり、 高血圧、 代謝異常症、 虚血などの基礎疾患に続発する二次性心筋症、 お よび見かけ上の基礎疾患なしに発症する突発性心筋症に分類される。 病理的変 ィ匕としては、 心筋肥大、 線維化、 変性などが認められる。

本明細書において 「予防」 （p r o p h y l a x i sまたは p r e v e n t i o n ) とは、 ある疾患または障害について、 そのような状態が引き起こされ る前に、 そのような状態が起こらないようにする力 そのような状態を低減し た状態で生じさせるかまたはその状態が起こることを遅延させるように処置す ることをいう。 従って、 本発明の保護法は、 予防のためにまたは別の予防法と 組み合わせて使用され得る。

本明細書において 「治療」 とは、 ある疾患または障害について、 そのような 状態になった場合に、 そのような疾患または障害の悪化を防止、 好ましくは、 現状維持、 より好ましくは、 軽減、 さらに好ましくは消長させることをいう。 従って、 本発明の保護法は、 治療において併用され得る。

本明細書において 「オフポンプ」 とは、 外科手術時に使用されるとき、 人工 心肺を用いずに処置を行うことをいう。 オフポンプ手術は、 冠動脈の手術に用 いられる。 オフポンプ手術では、 吻合すべき血管を 1 0— 3 0分ほど遮断する ことから局所的に一過性の虚血が生じることから、 その際の機能障害が時に問 題となっている。

本明細書において 「体外循環」 、 「ポンプ」 または 「人工心肺」 とは、 互換 可能に用いられ、 人工心肺を使用して処置を行うことをいう。 人工心肺を使用 した場合でも、 虚血時およぴ再灌流時の問題は生じることから、 虚血障害はど のような手術を行う際でも問題となっている。

本明細書において 「手術」 は、 外科的であっても内科的であってもよい。 外 科的手術としては、 例えば、 A Cバイパス、 弁形成術、 弁置換術、 大動脈手術、 生体肝移植、 生体腎移植、 脳死肝移植、 心臓移植などが挙げられるがそれらに 限定されない。 好ましくは、 大動脈、 冠動脈または弁膜の手術であり得る。 内 科的手術としては例えば、 バルーンカテーテルなどを用いる P C I (例えば、 P T C A) 、 カテーテルインターペンション、 各種血管に対する P T Aなどが 挙げられる。 バルーンカテーテルは、 内容的には、 オフポンプ手術の範疇に入 ることが多い。

本発明で用いられる細胞、 糸且織または臓器は、 どの生物由来の細胞 （たとえ ば、 任意の種類の多細胞生物 （例えば、 動物 （たとえば、 脊椎動物、 無脊椎動 物） 、 植物 （たとえば、 単子葉植物、 双子葉植物など） など） ） でもよい。 好 ましくは、 脊椎動物 （たとえば、 メクラウナギ類、 ャッメゥナギ類、 軟骨魚類、 硬骨魚類、 両生類、 爬虫類、 鳥類、 哺乳動物など） 由来の細胞が用いられ、 よ り好ましくは、 哺乳動物 （例えば、 単孔類、 有袋類、 貧歯類、 皮翼類、 翼手類、 食肉類、 食虫類、 長鼻類、 奇蹄類、 偶蹄類、 管歯類、 有鱗類、 海牛類、 クジラ 目、 霊長類、 齧歯類、 ゥサギ目など） 由来の細胞、 組織または臓器が対象であ り得る。 さらに好ましくは、 霊長類 （たとえば、 チンパンジー、 二ホンザル、 ヒト） の細胞、 組織または臓器が対象であり得る。 最も好ましくはヒトの細胞、 組織または臓器が対象として用いられる。

本発明の医薬組成物に含まれる薬学的に受容可能なキヤリアとしては、 当 該分野において公知の任意の物質が挙げられる。 そのような薬学的に受容可能 なキャリアとしては、 以下が挙げられるがそれらに限定されない：抗酸化剤、 保存剤、 着色料、 風味料、 および希釈剤、 乳化剤、 懸濁化剤、 溶媒、 フィラー、 増量剤、 緩衝剤、 送達ビヒクル、 希釈剤、 賦形剤および Zまたは薬学的アジュ パント。 代表的には、 本発明の医薬組成物は、 1種または複数種 （例えば、 混 合物） のポリフエノールを、 1つ以上の生理的に受容可能なキャリア、 賦形剤 または希釈剤とともに糸且成物の形態で投与される。 例えば、 適切なビヒクルは、 注射用水、 生理的溶液、 または人工脳脊髄液であり得、 これらには、 非経口送 達のための組成物に一般的な他の物質を補充することが可能である。

例示の適切なキャリアとしては、 中性緩衝化生理食塩水、 または血清アルプ ミンと混合された生理食塩水が挙げられる。 好ましくは、 その生成物は、 適切 な賦形剤 （例えば、 スクロース） を用いて凍結乾燥剤として処方される。 他の 標準的なキャリア、 希釈剤およぴ賦形剤は所望に応じて含まれ得る。 他の例示 的な組成物は、 p H 7 . 0 - 8 . 5の T r i s緩衝剤または p H 4 . 0— 5 . 5の酢酸緩衝剤を含み、 これらは、 さらに、 ソルビトールまたはその適切な代 替物を含み得る。

本発明の医薬組成物は、 非経口的に投与され得る。 あるいは、 その組成物は、 静脈内または皮下で投与され得る。 全身投与されるとき、 本発明において使用 される医薬組成物は、 発熱物質を含まない、 薬学的に受容可能な水溶液の形態 であり得る。 そのような薬学的に受容可能な組成物の調製は、 細胞、 組織また は臓器の生存、 pH、 等張性、 安定性などに相当な注意を払うことを条件とし て、 当業者の技術範囲内である。

本発明の医薬処方物は、 必要に応じて生理学的に受容可能なキャリア、 賦型 剤または安定化剤 （日本薬局方第 14版またはその最新版 （追補を含む） 、 R em i n g t o n s Ph a rma c e u t i c a l S c i e n c e s, 18 t h Ed i t i o n, A. R. Ge nn a r o, e d . ， Ma c k P u b 1 i s h i n g C omp a ny, 1 990などを参照） と、 所望の程度 の純度を有する細胞組成物とを混合することによって、 凍結乾燥されたケーキ または水溶液の形態で調製され保存され得る。

本明細書で使用される受容可能なキャリア、 賦形剤または安定化剤は、 レシ ピエントに対して非毒性であり、 そして好ましくは、 使用される投薬量おょぴ 濃度において不活性であり、 そして以下が挙げられる ： リン酸塩、 クェン酸塩、 または他の有機酸；抗酸化剤 (例えば、 ァスコルビン酸） ；低分子量ポリぺプ チド；タンパク質 （例えば、 血清アルブミン、 ゼラチンまたは免疫グロプリ ン） ；親水性ポリマー （例えば、 ポリビニルピロリ ドン） ；アミノ酸 （例えば、 グリシン、 グルタミン、 ァスパラギン、 アルギニンまたはリジン） ；モノサッ カリ ド、 ジサッカリ ドおよび他の炭水化物 (グルコース、 マンノース、 または デキストリンを含む） ；キレート剤 （例えば、 EDTA) ；糖アルコール （例 えば、 マンニトールまたはソルビトール） ；塩形成対ィオン (例えば、 ナトリ ゥム） ；ならびに/あるいは非イオン性表面活性化剤 （例えば、 Twe e n、 プル口ニック （p 1 u r o n i c ) またはポリエチレングリコール （ P E G) ) 。 (好ましい実施形態の説明）

1つの局面において、 本発明は、 ポリフエノールを含む、 臓器、 組織または 細胞の保護おょぴ保存のための組成物を提供する。 このポリフエノールは、 薬 学的または医学的に （あるいは農学的または獣医学的に） 有効な濃度で存在す る。

本発明者らは数年前に、 このポリフヱノールにおいて、 特に癌細胞増殖抑制 作用に興味を持ち、 種々の性質を調べたところ、 通常の抗酸化物質 （例えば、 酵素系としてスーパーォキシドジスムターゼ （SOD) 、 また非酵素系として ビタミン E、 ビタミン C、 ダルタチオン、 カロチノイド、 フラボノィド、 糖類、 鉄キレート剤、 尿酸、 アルブミン等) には見られない特異的な性質、 即ち水に も有機溶媒にも極めて良く溶ける両親媒性を示し、 タンパク質に対する吸着性 に優れ、 また、 細胞毒性が極めて低い上に、 抗酸化活性は SODの 10倍以上 もあり、 さらにこれまでは全く知られていなかった動物細胞の増殖を自由自在 に制御出来ることを見いだした。

ポリフヱノールは種々の生理活性作用、 例えば抗癌作用、 抗酸化作用、 抗 菌 ·抗ウィルス作用に優れていることは 1980年代から多くの研究者らによ つて報告されている。 このポリフヱノールが細胞増殖に及ぼす影響に関する研 究は既に報告されているものの、 その殆どが癌細胞の增殖を抑制するというも のである。

特に最近の Na t u r eに掲載された論文 J. J a nkun, S. H. S e 1 m a n , a n d R. S w ι e r c z , 'Why d r i n k i n g g r e e n t e a c o u l d r e v e n t c a n c e r ， Na t u r e, 3 87, 5 J un e, 561， 1997、 Y， C a o a n d R. C a o,

An g i o g e n e s i s i nh i b i t e d b y d r i nk i n g t e a, Na t u r e, 398, 1 Ap r i 1 , 381， 1999、 が世界的に 注目された。 緑茶ポリフエノールは、 抗酸化作用、 消臭作用、 抗菌作用などの様々な作用 があり、 また抗ぅ蝕性やその他の生理活性がある （飲食料品用機能性素材有効 利用技術とリーズ N o . 1 0， 緑茶ポリフエノール、 上村光男、 菓子総合技 術センター、 三勇社） ことから、 近年、 機能性食品として愛用されている。 し かしながら、 ポリフエノールの動物細胞や臓器の保存性に対する作用はこれま で全く示唆されていなかった。

このように従来その殆どの研究者らは、 ポリフヱノールの抗酸化物としての 抗癌作用にのみ関心を向けて来たものと思われる。

そのような中、 本発明者らは、 最近、 ポリフエノールに細胞、 組織などの生 体外での保存効果があることを見出し、 特許出願を行った。 この出願において は、 単離された細胞や切除された生体組織および臓器をポリフエノールを含有 する保存液に浸漬して遮断状態としてその保存を図り、 あるいは術後の処置と して保存剤の投与を行うことにより、 その後の臓器に対する各種障害の発生防 止、 回復などを図った。

この場合保存液中の濃度、 あるいは血中濃度が効果のある範囲に保たれれば、 これに接する細胞においてフリーラジカルの生成とその作用を抑制できること が期待され、 実際の効果を確認することにより発明の完成を見たものであった。 したがって、 その作用効果は浸漬された保存液あるいは投与されたことによ り一定の血中濃度が保たれて細胞、 臓器等に対してその効果を発揮するが、 当 然のことながら虚血状態においては効果を発揮できず、 その作用効果は投与の 形態を問わず一過性の作用であって、 その後の持続作用は期待されなかつた。 本発明者らは、 生体に対してポリフエノール類を投与するとき細胞、 組織や 臓器に対するこれらの作用がポリフエノールを添加した保存液などに浸漬した 場合などと比較して作用効果に関する経過が必ずしも同じではなく、 生体内に 投与した場合に、 細胞、 組織または臓器の保護効果があることを突き止め、 本 発明に至った。 すなわち、 対象動物にある期間これらの活性を有するポリフ ノール類を投 与し続けると、 その後これらの細胞、 組織や臓器を採取 ·摘出して血流から遮 断してもこれらの細胞または臓器は遮断中の状態を保ち、 その後再灌流しても その機能を復活 （または維持） し、 フリーラジカルによる損傷を生じない。 従 つて、 本発明は、 特に、 虚血時の臓器保護という面では、 従来達成不可能であ つた効果を奏することができるといえる。

したがって、 このような状態において、 外科的処置を取るため、 生体組織や 臓器などを血流から長時間遮断しておくことが可能となる。 このような効果は 従来の技術では達成不可能であったものであり、 その有用性は筆舌に尽くしが たい。

ポリフヱノールは、 通常純度として 6 0 %以上の製品が入手容易であり、 本 発明の細胞や臓器の保存剤としてのポリフエノールは、 純度 6 0 %以上の製品 でも使用可能であるが、 純度 8 5 %以上の精製品がより適している。 もちろん、 さらに高純度であればより効果的である。

従って、 本発明の組成物に含まれるポリフエノールは、 ポリフエノールの純 度に関係なくすべてが包含される。 特に、 ポリフヱノールはカテキン類または タンニン類が好ましく、 このなかに 3， 3， 4， 5， 7—フラボペントールで 知られるカテキン、 3、 4ージヒドロキシフエニル骨格をもつカテコールアミ ン、 ノノレアドレナリン、 アドレナリン、 ドーパミンが含まれるが、 ェピガロカ テキンガレートを主要成分とするカテキン類であることが特に好ましい。

他の好ましいポリフエノールの例はタン-ン酸が挙げられる。 一般的な、 例 えば局方タンニン酸は、 没食子酸基 8個をブドウ糖残基の周囲、 かつ同一平面 上に配座し、 さらに 2個の没食子酸基を垂直方向に結合させたものである。 し かし、 化合物の中心部は必ずしも葡萄糖に限られたものでなく、 セルローズ系 の化合物であってもよく、 タンニン酸を加水分解して得られる没食子酸のジデ ブシドなども使用することができる。 したがって、 本発明ではポリフヱノールは、 混合物または単品であり得る。 好ましい実施形態では、 ポリフエノールは、 カテキン類、 タンニン、 プルアン トシァニジンおょぴリスベラトロールからなる群より選択される。

1つの好ましい実施形態では、 ポリフエノールは、 少なくとも力テキン類ま たはタンニン酸を含む。 より好ましい実施形態では、 ポリフエノールは、 ェピ ガロカテキンガレートを含む。 別の好ましい実施形態では、 ポリフエノールは、 ポリフロログルシノール複合体を含む。 茶抽出物、 海草抽出物およびワイン抽 出物、 サボテン抽出物おょぴ果実抽出物が好ましい。

本発明で用いられるポリフヱノールのヒドロキシ価は、 ポリフエノールの定 義にあえばどのようなものでもよいが、 通常ヒドロキシ価は、 2〜約 1 0 0で あり、 より好ましくは、 3以上であり得、 さらに好ましくは 4以上であり得る。 本明細書において用いられるポリフエノールは、 種々の食品から抽出され得 る。 そのような食品としては、 例えば、 茶、 ワイン、 チョコレート、 サボテン、 海藻、 野菜 （たまねぎ （最外部の黄褐色の皮） 、 アロエ抽出物パセリの葉、 白 色野菜など） 、 柑橘類 （温州みかん、 だいだい、 ボンカンの皮、 夏みかんの皮、 グレープフルーツ、 レモンなど) 、 リンゴなどの果実類、 穀物 (こう りやん、 大豆、 そば、 小麦など） 、 ダリアの花などが挙げられるがそれらに限定されな い。 好ましくは、 ポリフエノーノレは、 茶抽出物、 海草抽出物、 果実抽出物、 サ ポテン抽出物おょぴワイン抽出物からなる群より選択される抽出物を含む。

1つの好ましい実施形態では、 ポリフエノールは海草抽出物を含む。 別の実 施形態では、 ポリフエノ一ルは茶抽出物を含む。

好ましい実施形態では、 本発明において、 ポリフエノールは、 虚血おょぴ再 灌流のうち少なくとも 1つの時期において、 臓器、 糸且織または細胞の保護に有 効な量で存在するように投与される。 そのような状態を達成するには、 ポリフ ェノールは、 術前に投与されてもよく、 虚血時、 再灌流時のいずれかに投与さ れてもよい。 好ましくは、 投与は、 少なくとも術前約 2週間 （あるいは、 少な くとも術前 1週間、 少なくとも術前 3日間、 少なくとも術前 2日間、 少なくと も術前 1日など） から手術当日のいずれかの時点で行われ、 より好ましくは、 術前約 2週間から手術当日まで定期的に （例えば 1日 1回 0 . l〜1 0 0 m g / k g体重、 例えば、 4 0 m g Z k g体重など） 投与が行われてもよい。 別の 実施形態では、 投与は少なくとも虚血時に行われる。 なお別の実施形態では少 なくとも再灌流時に行われる。 さらに別の実施形態では、 再灌流後に行われる。 投与の間隔は、 これら好ましい実施形態に限定されず、 本発明の処置方法を被 検体 （または患者） に対して施す頻度もまた、 使用目的、 対象疾患 （種類、 重 篤度など） 、 患者の年齢、 体重、 性別、 既往歴、 および治療経過などを考慮し て、 当業者が容易に決定することができる。 頻度としては、 例えば、 1日 3、 4回など （例えば、 1一 2週間糸雍続） 〜2週間に 1回の投与が挙げられる。 経 過を見ながら適宜投与頻度を変更してもよい。 例えば、 1日 3回、 2日〜 1週 間、 継続投与、 毎食前、 毎食間などが挙げられるがそれらに限定されない。 本 発明の組成物の投与は、 当該分野において周知の方法が用いられ、 経口または 非経口で行われる。 そのような非経口投与方法は、 例えば、 静脈内投与、 筋肉 内投与、 皮下投与、 皮内投与、 粘膜投与、 直腸内投与、 膣内投与、 患部への局 所投与、 皮膚投与などであり得る。 そのような投与のための処方物は、 任意の 製剤形態で提供され得る。 そのような製剤形態としては、 例えば、 液剤、 注射 剤、 徐放剤が挙げられる。 本発明の処置方法において使用されるポリフヱノー ルの量は、 使用目的、 対象障害 '手術 ·疾患 （種類、 重篤度など） 、 患者の年 齢、 体重、 性別、 既往歴、 細胞の形態または種類などを考慮して、 当業者が容 易に決定することができる。

ある実施形態において、 上記虚血または再灌流は、 外科的または内科的な手 術のときに起こるものであり得る。 したがって、 本発明は、 外科手術または内 科手術において虚血状態が発生するものにおいて、 多大な効果を奏する。 本発明のひとつの実施形態において、 臓器、 組織または細胞の保護は、 手術 の際のものであり得る。 そのような保護を特に目的とする場合、 ポリフエノー ルは、 手術前から再灌流後のいずれか時点で投与され得、 より好ましくは、 上 述の投与頻度 ·間隔 ·時機で投与される。

本発明の 1つの実施形態において、 上記手術は特に外科手術であり得る。 し , たがって、 本発明が保護の対象とするものは臓器であり得る。 外科手術は、 ォ フポンプ、 P C I、 カテーテルインターペンションまたは対外循環を使用する ものであり得、 心臓の外科手術の場合は、 例えば、 大動脈、 冠動脈または弁膜 の手術などが挙げられるがそれらに限定されない。 したがって、 本発明では、 そのような臓器は、 例えば、 血管、 角膜、 腎臓、 心臓、 肝臓、 臍帯、 腸、 神経、 肺、 胎盤または薛臓であり得る。 好ましくは、 そのような臓器は、 脳、 神経、 心臓、 脊髄などが挙げられるがそれらに限定されない。

本発明のポリフエノール含有組成物は、 生物であれば原則的にどのような生 物でも保護または保存の目的で使用することができる。 好ましくは、 その生物 は、 脊椎動物または無脊椎動物であり、 より好ましくは、 生物は脊椎動物 （た とえば、 メクラウナギ類、 ャッメゥナギ類、 軟骨魚類、 硬骨魚類、 両生類、 爬 虫類、 鳥類、 哺乳動物など） 由来の細胞が用いられ、 さらにより好ましくは、 哺乳動物 (例えば、 単孔類、 有袋類、 貧歯類、 皮翼類、 翼手類、 食肉類、 食虫 類、 長鼻類、 奇蹄類、 偶蹄類、 管歯類、 有鱗類、 海牛類、 クジラ目、 霊長類、 齧歯類、 ゥサギ目など） 由来のものであり得る。 さらに好ましくは、 霊長類

(たとえば、 チンパンジー、 二ホンザル、 ヒト） 由来のものが対象とされ得る。 最も好ましくはヒト由来のものが対象であり得る。

本発明の組成物は、 好ましい実施形態において、 臓器、 組織または細胞の保 護を目的とし得る。 この保護は、 虚血時の保護を含むことが好ましいがそれに 限定されない。 別の実施形態において、 本発明の組成物は、 臓器、 組織または 細胞の保存を目的とし得る。 別の局面において、 本発明は、 被検体における臓器、 組織または細胞を保護 するための方法であって、 1 ) ポリフエノールを、 該臓器、 糸且織または細胞に 暴露する工程を包含する、 方法を提供する。 この方法において、 好ましくは、 ポリフヱノールは、 虚血およぴ再灌流のうち少なくとも 1つの時期において、 前記臓器、 組織または細胞の保護に有効な量で前記被検体に投与され得る。 本 発明の保護方法におけるポリフエノールの投与時機は、 上述したように、 虚血 時または再灌流時、 あるいは再灌流後の障害発生時に有効濃度が存在するよう な量で投与されるのであれば、 どのような投与形態でもよい。 好ましくは、 手 術前から再灌流後のいずれか時点で被検体に投与される。 好ましくは、 投与は、 少なくとも術前約 2週間から手術当日のいずれかの時点であり、 より好ましく は、 虚血時または再灌流時の少なくとも一方において投与され得る。 あるいは、 投与は再灌流後に行われてもよレ、。 再灌流後に投与すると、 障害の軽減または 治癒が達成され得る。 再灌流前に投与すると、 予防効果が奏されるが、 障害が 発生した場合にその障害を低減する作用も有し得る。

本発明の保護方法において、 投与は経口でも非経口でもよい。 術前は経口で 行うことが患者の快適さのために好ましい。 術時は非経口で行うことが好まし V、。 術時は通常麻酔を行つているから患者が服用することが困難であるからで ある。 本明細書において 「被験体」 または 「被検体」 とは、 処置 （例えば、 治 療、 予防、 予後の措置） が適用される生物をいい、 「患者」 ともいわれる。

「患者」 、 「被験体」 または 「被検体」 は、 本発明が適用される生物であれば どのような生物でもよい。 好ましくは、 「患者」 、 「被験体」 ま ·たは 「被検 体」 は、 ヒトである。

ある実施形態では、 上記方法における保護は、 手術の際のものを目的とする 手術のなかでもは、 虚血状態を生じるものにおいて本発明の方法は、 効果を奏 する。 手術は、 外科手術であっても内科手術であってもよい。 本発明の方法は、 特に、 外科手術において適している。 そのような外科手術は、 オフポンプ、 P C I、 カテーテルインターペンションまたは体外循環を使用するものであり得、 外科手術は、 大動脈、 冠動脈または弁膜の手術であり得る。

本発明の保護方法は、 好ましい実施形態では、 臓器を保護する方法であり得 る。 この臓器としては、 皮膚、 血管、 角膜、 腎臓、 心臓、 肝臓、 臍帯、 腸、 神 経、 肺、 胎盤または膝臓が挙げられるがそれらに限定されない。 好ましくは、 前記臓器は、 心臓、 脳、 神経および脊髄からなる群より選択される。 より好ま しくは、 臓器は、 心臓であり得る。 心臓で保護効果が見つかつたことは、 特に 格別の効果であり得る。 本発明の保護方法において対象とされる臓器、 組織または細胞は、 どのよう な生物のものでもよいが、 特に哺乳動物のものが好ましく、 より好ましくはヒ トのものであり得る。

本発明の保護方法は、 虚血時の保護および再灌流時の少なくとも一方を含み 得る。

本発明の保護方法において使用されるポリフヱノールは、 上述したとおりで あり、 種々のものが使用され得る。

別の局面において、 本発明は、 臓器、 a織または細胞を保存するための方法 であって、 1 ) 該臓器、 組織または細胞をポリフエノールを含む流体中に保持 する工程、 を包含する、 方法を提供する。 本発明では、 特に、 心臓の保護のみ ならず、 保存効果をもポリフヱノールが有していたことが判明した。 このこと は、 従来技術にはまったく報告されておらず、 したがって、 格別な効果である ということができる。

別の局面において、 本発明は、 臓器、 組織または細胞を保護または保存する ための医薬を製造するための、 ポリフエノールの使用であって、 該医薬は、 ポ リフエノールを含む、 使用を提供する。 本発明において、 本発明の医薬がパッケージとして実施される場合には、 指 示書が添付され得る。 そのような指示書は、 本発明が実施される国の監督官庁

(例えば、 日本であれば厚生労働省、 米国であれば食品医薬品局 （FDA) な ' ど） が規定した様式に従って作成され、 その監督官庁により承認を受けた旨が 明記される。 本発明の組成物は、 通常は医師の監督のもとで実施されるが、 使 用目的に応じて （例えば、 心臓の保存） 、 その国の監督官庁および法律が許容 する場合は、 医師の監督なしに実施することができる。

本発明の組成物または医薬は、 さらに他の薬剤を含み得る。 そのような薬剤 は、 薬学において公知の任意の薬剤であり得る。 当然、 本発明の組成物または 医薬は、 2種類以上の他の薬剤を含んでいてもよい。 そのような薬剤としては、 例えば、 日本薬局方、 米国薬局方、 他の国の薬局方などの最新版において掲載 されているものなどが挙げられる。 そのような薬剤は、 好ましくは、 目的とす る生物の器官に対して効果を有するものであり得る。 手術の際に用いられる場 合は、 手術において好ましい効果を奏する薬剤が同時投与され得る。 そのよう な薬剤としては、 例えば、 血栓溶解剤、 血管拡張剤、 組織賦活化剤、 力テコー ルァミン、 PDE I I I阻害剤、 カルシウム拮抗剤、 βブロッカー、 ステロイ • ド剤などが挙げられるがそれらに限定されなレ、。

本発明の組成物おょぴ医薬において投与すべきポリフエノールの量は、 その 種類、 使用目的、 対象疾患 （種類、 重篤度など） 、 患者の年齢、 体重、 性別、 既往歴などを考慮して、 当業者が容易に決定することができる。

好ましくは、 本発明の組成物おょぴ医薬において投与すべきポリフエノー ルの量は、 0. 1〜100 Omg/k g/日であり、 好ましくは 1〜1 Omg /k g/日または 10〜100mgZk g 日などであり得る。

以下に、 実施例に基づいて本発明を説明するが、 以下の実施例は、 例示の目 的のみに提供される。 従って、 本 明の範囲は、 上記発明の詳細な説明にも下 記実施例にも限定されるものではなく、 特許請求の範囲によってのみ限定され る。 実施例

(実施例 1) 経口投与による SDラット術前効果

本実施例において、 S Dラットをモデルにしてポリフエノールの保護効果を 確認した。 SDラットは、 清水実験材料から入手し、 京都大学において定めら れる動物実験の指針に従って、 動物愛護精神に則って飼育した。

SDラットを 2群にわけ、 一群にはポリフエノールを多群にはコントロールと して蒸留水を投与した。 投与するポリフエノールは、 緑茶から以下のように調 製した。 緑茶葉を微粉碎し、 低温熱水抽出を行った後、 水 'エタノール系のク 口マトグラフを用いて分離精製した。 緑茶ポリフエノールは、 主成分として力 テキンおよびタンニン酸を含む。 本実施例において用いた緑茶ポリフエノール はェピガロカテキンガレートを多量に含んでいた （ェピガロカテキンガレート

( 28 %) 、 ガロカテキンガレート (11. 6%) 、 ェピカテキンガレート

(4. 6%) 、 ェピガロカテキン （15%) 、 ガロカテキン （14. 8%) 、 ェピカテキン （7. 0%) 、 およびカテキン （9. 5%) の混合物であった）

1 . S Dラットに対する術前投与例

(注） 投与期間：術前 1 4日間

まず、 表 1の各群のラットをエーテルとペントバルビタールにより麻酔し た後、 正中開胸を行って心臓を摘出し、 氷冷した Krebs-Henseleit Buffer (NaCl 0. 6895g, KC1 0. 0343g, MgS0₄ 0. 145g、 CaCl₂— 2H₂0 0. 368g、 KH₂P0₄ 0. 164g、 NaHC0₃ 2. 10_g、 Glucose 0. 188g/100m 1 ) に速やかに浸 漬した。

続いて摘出した心臓の重量を測定した後、 直ちにランゲンドルフ装置に装 着し、 酸素 9 5 %、 二酸化炭素 5 %混合ガスにて飽和させた Krebs Henseleit Buffer を灌流液として事前灌流した。 その後、 左心房から僧 帽弁経由にて左心室にラテックスバルーンを接続した。 事前灌流を 20分間 行った後、 心筋灌流液を採取し、 心筋の逸脱酵素 （G0T、 GPT、 CPK、 CPK - MB、 LDH、 Toloponin-T) を測定した。

また、 同時に左心室内に挿入したバルーンにトランデュ一サーを介して圧 モニターに接続し、 これにより圧一時間関係 ( d P/ d t ) を測定。 さらに左 心室内バルーンを拡張させてその際の圧一容量関係 （ESPVR/EDPVR) を測定 した。

次に、 4 °Cに冷却された心停止液 20 ml/Kgを灌流し、 心停止を得た。 心 停止液は、 30分毎に 10 m 1 /Kgずつ追加投与し、 計 90分間の心停止状 態を続けた。

その後、 Krebs- Henseleit Buffer 10 m 1 /Kgの流量で心臓内の心停止 液を洗い流し （hot shot) 、 その後、 事前灌流と同様に酸素 95 %、 二酸化 炭素 5 %混合ガスにて飽和させた Krebs- Henseleit Bufferを灌流液として 再灌流を行った。

再灌流 5分と 20分経過時に心筋逸脱酵素と心機能 （圧一時間関係、 心拍 数、 圧-容量関係） を測定し、 それぞれを心停止前の値に対する比を計算し た。 また、 再灌流後 20分で灌流を終了し、 その時点での心臓重量を測定し て初期値に対する重量増加比を求めた （図 7) 。

今回、 ポリフエノールの効果を正当に評価するために以下の項目を除外例 として対象から除いた。

1 事前灌流 20分値の灌流液測定において、 To l o p o n i n— Tが 陽性であったもの。

2 再灌流後の灌流液液測定において、 心筋逸脱酵素の異常高値、 あるい は 20分値において上昇しつづけるもの。

3 上記以外に、 再灌流時の心拍数が，事前灌流の 85%以下の徐脈例。

(結果）

1 再灌流後の浮腫の予防効果

再灌流後の心筋重量の増加は、 ポリフヱノール事前投与群で、 1.35 ±0. 05、 コントロール群で 1.49±0. 03と有意に浮腫が軽減され た （P=0. 047) (図 1および図 7) 。 心筋病理標本でもその左心室径と間質浮腫において有意に抑制された。

2 心収縮力の維持

左心室収縮末期圧-容量関係において、 図 2のグラフのとおり有意に心機 能を維持した。

3 酸化ストレスの軽減

酸化ストレスマーカーに一つである 8— O H d Gを用いた免疫病理学的判 定量においてポリフエノール事前投与群で 8 1 . 5土 1 1 . 6、 コントロー ル群で 2 2 6 . 9 ± 3 5 . 6と有意に浮腫が軽減された （Pく 0 . 0 0 0 1 ) (図 3 ) 。

4 心筋細胞の保護

核の空胞変性が抑制された。

以上のとおり、 ラットを対象とした実験により、 90分間の心停止状態にお いて虚血状態を維持したが、 再灌流後の測定で浮腫の軽減が見られ、 さらに 心筋病理標本によれば、 左心室径ぉよぴ間質浮腫において著しい効果が認め られる。

再灌流後の心収縮力も心停止前の機能をほぼ保っており、 再灌流 20分後 でも比較的機能低下が小さいことがわかる。

また、 図 4， 5の糸且織写真で明らかなように、 心筋細胞間の浮腫は著しく 軽減されており、 組織レベル、 細胞レベルでその機能が維持されていること がわかる。

ポリフエノールの事前投与は虚血再灌流後の心機能の維持、 浮腫の軽減、 およぴ酸化ストレスの軽減の 3点において有用性が確認された。 再灌流障害 は、 系外循環を用いない手術においても必然的に起こる現象であり、 この効 果の臨床的有用性は高いと考えられる。 経口投与という簡便な方法で行える 点も有用である。 これらの結果により、 ヒ トにも適用できることが外挿される。 ポリフエノ ールの保護機能が哺乳動物一般において有効であることが明らかになった。 このような効果は従来の知見では予測不可能であったことであり、 このよう な保護効果があることが判明したことは当該分野において画期的な利点をも たらすものとして注目されるべきである。

(実施例 2 ：虚血時の投与効果）

実施例 1において、 術前に投与する代わりに、 虚血時に緑茶ポリフエノー ル組成物を同時投与した。 投与した処方物は、 滅菌してから投与した。 その結果、 再灌流後の浮腫の予防が有意に達成されていることが明らかに なった （データ示さず） 。 また、 心収縮力が維持されており、 酸化ストレス が軽減されており、 心筋細胞が保護されていることが観察された。 ただし、 実施例 1の術前投与に比べると、 その効果はわずかに少なかった。 (実施例 3 ：再灌流時の投与）

実施例 1において、 術前に投与する代わりに、 再灌流時に緑茶ポリフエノ ール組成物を同時投与した。 投与した処方物は、 滅菌してから投与した。 その結果、 再灌流後の浮腫の予防が有意に達成されていることが明らかに なった （データ示さず） 。 また、 心収縮力が維持されており、 酸化ストレス が軽減されており、 心筋細胞が保護されていることが観察された。 ただし、 実施例 1の術前投与おょぴ実施例 2の虚血時の投与に比べると、 その効果は わずかに少なかった。 したがって、 術前に投与するほうが、 実際の虚血時ま たは再灌流時に投与するよりも効果が高いことがわかる。 (実施例 4 ：ポリフヱノールの細胞内蓄積） 術前に投与してもポリフエノールの臓器保護効果があった現象を別の観点 で調べるために、 ポリフエノールが細胞内に蓄積されているかどうかを調べ た。

実施例 1で用いた緑茶ポリフエノールを F I TC標識をし、 同様のプロト コルを用いて経口投与して細胞内でのポリフヱノールの分布を調べた。

結果、 心筋の細胞膜にポリフエノールの分布が局在していることが明らか になった （図 6) 。

(実施例 5 ：脳神経系および肝臓）

次に、 脳および肝臓においても、 実施例 1と同様に緑茶ポリフエノールの 効果を調べたところ、 同様の結果が得られた。

(実施例 6 ：心臓の保存効果）

次に、 麻酔下でラット （ウィスター系、 380 g) の心臓を摘出し、 保存効 果を比較検討した。 コントロールとして、 心臓摘出時に UW液にて洗浄後 48 時間冷却保存した。 これに対して、 この実施例ではその UW液にさらにポリフ ヱノール （10mg/ml) を添加した保存液で腎摘出 時の洗浄を行い、 同 じく 48時間冷却保存した。 その後、 心灌流装置で 90分間の持続灌流を行い 灌流量、 d p/d t、 ESPVR) を比較した。 その結果、 比較対照として用 いた UW液のみの保存腎に比べて、 本発明のポリフエノール添加系では、 心臓 障害が顕著に軽減していた。

(実施例 7 ： ヒトにおける実施）

次に、 ヒトにおける効果を確認するための試験を行う。 ヒトに関しては、 上 述の実施例における結果を参考にして、 以下のようなプロトコルを採用する。 ポリフヱノール（その中でも抗酸化作用の強いといわれているェピガロカテ キンガレートとして) 1日 8 0 O m gの複数回投与、 および 1 6 0 0 m gの単 回投与の臨床試験 (Phasel)が行なわれ、 その安全性は確認されている。 従って、 この用量を、 使用する。 従って、 本発明のポリフヱノールによる心筋保護に対 する臨床試験でも、 患者の同意を得た上で、 同程度つまり 8 0 0 m g〜1 6 0 O m gを 1日量として、 服用させる。 投与期間

上記動物の実施例ならびに他の心筋保護実験ならびに各種臓器保存実験より , ヒトにおいては細胞内にとりこまれて保護的に働くには最低でも約 2日は必要 と考えられる。 そこで、 術前 7日から 1 0日間 1日量を毎日服用するようなレ ジメンを患者に受けさせる。 この場合、 期間は、 緊急症例などの理由で延期さ れることもあることから、 幅を持った期間となる。 対象

心臓血管にかかわる治療すベて （外科的な手術から内科的なカテーテル手技 まで） が治療対象として企図される。

本実施例では、 まず、 開心術症例 （人工心肺を使って行なう心臓血管手術） とオフポンプバイパス手術 （人工心肺を使わずに自己心拍を残したまま冠動脈 バイパス術を行なう手術） に応用する。 この場合、 7から 10日間服用するこ とが好ましいと考えられることから、 緊急でない症例を選択する。

上記症例において、 合併症はほとんど見られなかったが、 先ほど述べた臨床 試験のなかで、 一部の被験者に軽度の頭痛が認められる可能性はあるが、 許容 範囲である。 ただし、 ポリフヱノールの特性上、 鉄の吸収を阻害するため貧血、 代謝排泄などに関連する副作用が起こる可能性はある。 従って、 肝臓および腎 臓において副作用が見られる可能性があるが、 適用を妨げる程度のものはない ようである。 このように、 本発明は、 ヒ トにおいても適用可能であることが実証される。

(実施例 8 ：海草抽出物） '

次に、 茶抽出物に代えて、 海草抽出物を用いて実施例 1〜6の実験を行う。 海草として市販のァォサから以下のように調製した。 ァォサを微粉枠し、 低 温熱水抽出を行った後、 水 ·エタノール系のクロマトグラフを用いてポリフエ ノール類を分離精製した。

まず、 実施例 1に記載されるように術前に投与する場合に心臓に対する保護 効果を観察する。 その結果、 1 再灌流後の浮腫の予防効果； 2 心収縮力の 維持； 3 酸化ストレスの軽減； 4 心筋細胞の保護が観察される。

次に、 実施例 2に記載されるように、 虚血時にァォサポリフエノール糸且成物 を投与する。 その結果、 再灌流後の浮腫の予防が有意に達成されていることが 明らかになる。 また、 心収縮力が維持されており、 酸化ストレスが軽減されて おり、 心筋細胞が保護されていることが観察される。

次に、 実施例 3に記載されるように、 再灌流時にァォサポリフエノール組成 物を同時投与する。 その結果、 再灌流後の浮腫の予防が有意に達成されている ことが明らかになる。 また、 心収縮力が維持されており、 酸化ストレスが軽減 されており、 心筋細胞が保護されていることが観察される。

ァォサのポリフヱノールの体内蓄積を実施例 4に記載のように観察すると、 心筋の細胞膜にポリフエノールの分布が局在することが観察される。 このようにァォサのポリフヱノールであっても、 茶抽出物と同様の結果が得 られることが確認される。

さらに、 実施例 5のように脳おょぴ肝臓における実験を行ったところ、 同様 の結果が得られる。 実施例 6に記載されるように心臓の体外保存効果を観察す ると、 保存効果があることも観察される。

(実施例 9 ：アロエ抽出物）

次に、 茶抽出物に代えて、 アロエ抽出物を用いて実施例 1〜6の実験を行う 巿販のアロエベラから以下のように調製した。 アロエを微粉碎し、 低温熱水 抽出を行った後、 水 'エタノール系のクロマトグラフを用いてポリフエノール 類を分離精製した。

まず、 実施例 1に記載されるように術前に投与する場合に心臓に対する保護 効果を観察する。 その結果、 1 再灌流後の浮腫の予防効果； 2 心収縮力の 維持； 3 酸化ストレスの軽減； 4 心筋細胞の保護が観察される。

次に、 実施例 2に記載されるように、 虚血時にアロエポリフエノール糸且成物 を投与する。 その結果、 再灌流後の浮腫の予防が有意に達成されていることが 明らかになる。 また、 心収縮力が維持されており、 酸化ストレスが軽減されて おり、 心筋細胞が保護されていることが観察される。

次に、 実施例 3に記載されるように、 再灌流時にアロエポリフエノール組成 物を同時投与する。 その結果、 再灌流後の浮腫の予防が有意に達成されている ことが明らかになる。 また、 心収縮力が維持されており、 酸化ストレスが軽減 されており、 心筋細胞が保護されていることが観察される。

アロエのポリフヱノールの体内蓄積を実施例 4に記載のように観察すると、 心筋の細胞膜にポリフヱノールの分布が局在することが観察される。

このようにアロエのポリフエノールであっても、 茶抽出物と同様の結果が得 られることが確認される。 さらに、 実施例 5のように脳おょぴ肝臓における実験を行ったところ、 同様 の結果が得られる。 実施例 6に記載されるように心臓の体外保存効果を観察す ると、 保存効果があることも観察される。 (実施例 1 0 ： ワイン抽出物）

次に、 茶抽出物に代えて、 赤ワイン抽出物を用いて実施例 1〜6の実験を行 Ό ο

市販の赤ワイン （フランス 'ポルドー産 2 0 0 0年物） から以下のように調 製した。 赤ワインを微粉砕し、 低温熱水抽出を行った後、 水'エタノール系の クロマトグラフを用いてポリフエノール類を分離精製した。 赤ワインポリフヱ ノールは、 主成分としてフラボノール、 カテキンを含む。

まず、 実施例 1に記載されるように術前に投与する場合に心臓に対する保護 効果を観察する。 その結果、 1 再灌流後の浮腫の予防効果； 2 心収縮力の 維持； 3 酸ィ匕ストレスの軽減； 4 心筋細胞の保護が観察される。

次に、 実施例 2に記載されるように、 虚血時に赤ワインポリフエノール組成 物を投与する。 その結果、 再灌流後の浮腫の予防が有意に達成されていること が明らかになる。 また、 心収縮力が維持されており、 酸化ストレスが軽減され ており、 心筋細胞が保護されていることが観察される。

次に、 実施例 3に記載されるように、 再灌流時に赤ワインポリフエノール組 成物を同時投与する。 その結果、 再灌流後の浮腫の予防が有意に達成されてい ることが明らかになる。 また、 心収縮力が維持されており、 酸ィ匕ストレスが軽 減されており、 心筋細胞が保護されていることが観察される。

赤ワインのポリフエノールの体内蓄積を実施例 4に記載のように観察すると 心筋の細胞膜にポリフエノールの分布が局在することが観察される。

このように赤ワインのポリフエノールであっても、 茶抽出物と同様の結果が 得られることが確認される。 さらに、 実施例 5のように脳おょぴ肝臓における実験を行ったところ、 同様 の結果が得られる。 実施例 6に記載されるように心臓の体外保存効果を観察す ると、 保存効果があることも観察される。 (実施例 1 1 ：サボテン抽出物）

次に、 茶抽出物に代えて、 サボテン抽出物を用いて実施例 1〜6の実験を行

5 o

市販のサボテンから以下のように調製した。 サボテンを微粉砕し、 低温熱水 抽出を行った後、 水 ·エタノール系のクロマトグラフを用いてポリフエノール 類を分離精製した。 サボテンポリフエノールは、 主成分としてアントシァニン を含む。

まず、 実施例 1に記載されるように術前に投与する場合に心臓に対する保護 効果を観察する。 その結果、 1 再灌流後の浮腫の予防効果； 2 心収縮力の 維持； 3 酸化ストレスの軽減； 4 心筋細胞の保護が観察される。

次に、 実施例 2に記載されるように、 虚血時にサボテンポリフエノール組成 物を投与する。 その結果、 再灌流後の浮腫の予防が有意に達成されていること が明らかになる。 また、 心収縮力が維持されており、 酸化ストレスが軽減され ており、 心筋細胞が保護されていることが観察される。

次に、 実施例 3に記載されるように、 再灌流時にサボテンポリフエノール組 成物を同時投与する。 その結果、 再灌流後の浮腫の予防が有意に達成されてい ることが明らかになる。 また、 心収縮力が維持されており、 酸化ストレスが軽 減されており、 心筋細胞が保護されていることが観察される。

サポテンのポリフヱノールの体内蓄積を実施例 4に記載のように観察すると 心筋の細胞膜にポリフエノールの分布が局在することが観察される。

このようにサポテンのポリフエノールであっても、 茶抽出物と同様の結果が 得られることが確認される。 さらに、 実施例 5のように脳および肝臓における実験を行ったところ、 同様 の結果が得られる。 実施例 6に記載されるように心臓の体外保存効果を観察す ると、 保存効果があることも観察される。 (実施例 1 1 ：果実抽出物）

次に、 茶抽出物に代えて、 果実抽出物を用いて実施例 1〜6の実験を行う。 市販の果実として、 ブドウから以下のように調製した。 果実を微粉碎し、 低 温熱水抽出を行った後、 水 ·エタノール系のクロマトグラフを用いてポリフエ ノール類を分離精製した。

まず、 実施例 1に記載されるように術前に投与する場合に心臓に対する保護 効果を観察する。 その結果、 1 再灌流後の浮腫の予防効果； 2 心収縮力の 維持； 3 酸ィヒストレスの軽減； 4 心筋細胞の保護が観察される。

次に、 実施例 2に記載されるように、 虚血時に果実ポリフヱノール組成物を 投与する。 その結果、 再灌流後の浮腫の予防が有意に達成されていることが明 らかになる。 また、 心収縮力が維持されており、 酸化ストレスが軽減されてお り、 心筋細胞が保護されていることが観察される。

次に、 実施例 3に記載されるように、 再灌流時に果実ポリフエノール組成物 を同時投与する。 その結果、 再灌流後の浮腫の予防が有意に達成されているこ とが明らかになる。 また、 心収縮力が維持されており、 酸化ストレスが軽減さ れており、 心筋細胞が保護されていることが観察される。

果実のポリフエノールの体内蓄積を実施例 4に記載のように観察すると、 心 筋の細胞膜にポリフエノールの分布が局在することが観察される。

このように果実のポリフヱノールであっても、 茶抽出物と同様の結果が得ら れることが確認される。 さらに、 実施例 5のように脳および肝臓における実験を行ったところ、 同様 の結果が得られる。 実施例 6に記載されるように心臓の体外保存効果を観察す ると、 保存効果があることも観察される。 以上のように、 本発明の好ましい実施形態および実施例を用いて本発明を例 示してきたが、 本発明は、 特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈される べきであることが理解される。 本明細書において引用した特許、 特許出願およ び文献は、 その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその 内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。 産業上の利用可能性

本発明により、 ポリフエノールによる臓器、 組織または細胞の保護おょぴ保 存効果が確認された。 このような効果は、 手術などにおいて応用され得るもの であり、 医薬として用いられるほか、 特に、 手術のフレキシビリティーを高め るものとして有用性は高い。

Claims

請求の範囲

I . ポリフエノールを含む、 臓器、 組織または細胞の保護および保存のた めの組成物。

2 . 前記ポリフエノールは、 虚血および再灌流のうち少なくとも 1つの時 期において、 前記臓器、 組織または細胞の保護に有効な量で存在する、 請求項 1に記載の組成物。

3 . 前記虚血または再灌流は、 外科的または内科的な手術のときに起こる、 請求項 2に記載の組成物。

4 . 前記保護は、 手術の際のものであり、 前記ポリフエノールは、 該手術 前から再灌流後のいずれか時点で投与される、 請求項 1に記載の,祖成物。

5 . 前記投与は、 少なくとも術前約 2週間から手術当日のいずれかの時点 である、 請求項 4に記載の組成物。

6 . 前記投与は、 少なくとも虚血時に行われる、 請求項 4に記載の組成物。

7 . 前記投与は少なくとも再灌流時に行われる、 請求項 4に記載の組成物 _c

8 . 前記投与は少なくとも再灌流後に行われる、 請求項 4に記載の組成物 _c

9 . 前記投与は、 経口または非経口で行われる、 請求項 4に記載の組成物 _c

1 0 . 前記手術は、 外科的または内科的である、 請求項 4に記載の組成物

I I . 前記手術は、 外科手術である、 請求項 1 0に記載の,組成物。

1 2 . 前記外科手術は、 オフポンプ、 P C I、 カテーテルインターベンシ ヨンまたは体外循環を使用する、 請求項 1 1に記載の組成物。

1 3 . 前記外科手術は、 大動脈、 冠動脈または弁膜の手術である、 請求項 1 1に記載の組成物。

1 4 . 前記臓器、 組織または細胞は、 臓器である、 請求項 1に記載の組成 物。

1 5 . 前記臓器は、 皮膚、 血管、 角膜、 腎臓、 心臓、 肝臓、 臍帯、 腸、 神 経、 肺、 胎盤または瞎臓を含む、 請求項 1に記載の組成物。

1 6 . 前記臓器は、 心臓、 脳、 神経および脊髄からなる群より選択される、 請求項 1に記載の組成物。

1 7 . 前記臓器、 組織または細胞は、 哺乳動物のものである、 請求項 1に 記載の組成物。

1 8 . 前記臓器、 糸且織または細胞は、 ヒ トのものである、 請求項 1に記載 の組成物。

1 9 . 臓器、 組織または細胞の保護剤である、 請求項 1に記載の組成物。 2 0 . 前記保護は、 虚血時の保護を含む、 請求項 1 9に記載の組成物。

2 1 . 臓器、 組織または細胞の保存剤である、 請求項 1に記載の組成物。 2 2 . 前記ポリフエノールは、 混合物または単品である、 請求項 1に記載 の組成物。

2 3 . 前記ポリフエノールは、 カテキン類、 タンニン、 プルアントシァニ ジンおょぴリスべラト口ールからなる群より選択される、 請求項 1に記載の組 成物。

2 4 . 前記ポリフエノールは、 少なくともカテキン類またはタンニンを含 む、 請求項 1に記載の,袓成物。

2 5 . 前記ポリフエノールは、 ェピガロカテキンガレートを含む、 請求項 1に記載の組成物。

2 6 . 前記ポリフエノールは、 ヒドロキシ価が 2〜約 1 0 0である、 請求 項 1に記載の組成物。

2 7 . 前記ポリフエノールは、 茶抽出物、 海草抽出物、 アロエ抽出物、 ヮ イン抽出物、 サボテン抽出物および果実抽出物からなる群より選択される抽出 物を含む、 請求項 1に記載の組成物。

2 8 . 前記ポリフエノールは海草抽出物を含む、 請求項 1に記載の組成物。

2 9 . 前記ポリフエノ一ルは茶抽出物を含む、 請求項 1に記載の組成物。

3 0 . 被検体における臓器、 組織または細胞を保護するための方法であ つて、

1 ) ポリフエノールを、 該臓器、 組織または細胞に暴露する工程

を包含する、 方法。

3 1 . 前記ポリフエノ一ノレは、 虚血および再灌流のうち少なくとも 1つの 時期において、 前記臓器、 組織または細胞の保護に有効な量で前記被検体に投 与される、 請求項 3 0に記載の方法。

3 2 . 前記保護は、 手術の際になされる、 請求項 3 0に記載の方法。 3 3 . 前記手術は、 外科的または内科的な手術である、 請求項 3 2に記載 の方法。

3 4 . 前記ポリフエノールは、 前記手術前から再灌流後のいずれか時点で 前記被検体に投与される、 請求項 3 2に記載の方法。

3 5 . 前記投与は、 少なくとも術前約 2週間から手術当日のいずれかの時 点である、 請求項 3 4に記載の方法。

3 6 . 前記投与は、 少なくとも虚血時に行われる、 請求項 3 4に記載の方 法。

3 7 前記投与は少なくとも再灌流時に行われる、 請求項 3 4に記載の方 法。

3 8 前記投与は少なくとも再灌流後に行われる、 請求項 3 4に記載の方 法。

3 9 前記投与は、 経口または非経口で行われる、 請求項 3 4に記載の方 法。

4 0 前記手術は、 外科手術である、 請求項 3 2に記載の方法。

4 1 前記手術は、 オフポンプ、 P C I、 カテーテルインターペンション または体外循環を使用する、 請求項 3 2に記載の方法。

4 2 . 前記外科手術は、 大動脈、 冠動脈または弁膜の手術である、 請求項 4 0に記載の方法。

4 3 . 前記臓器、 糸且織または細胞は、 臓器である、 請求項 3 0に記載の方 法。

4 4 . 前記臓器は、 皮膚、 血管、 角膜、 腎臓、 心臓、 肝臓、 臍帯、 腸、 神 経、 肺、 胎盤または膝臓を含む、 請求項 3 0に記載の方法。

4 5 . 前記臓器は、 心臓、 脳、 神経おょぴ脊髄からなる群より選択される、 請求項 3 0に記載の方法。 .

4 6 . 前記臓器、 糸且織または細胞は、 哺乳動物のものである、 請求項 3 0 に記載の方法。

4 7 . 前記臓器、 糸且織または細胞は、 ヒ トのものである、 請求項 3 0に記 載の方法。

4 8 . 前記保護は、 虚血時の保護を含む、 請求項 3 0に記載の方法。

4 9 . 前記保護は、 再灌流時の保護を含む、 請求項 3 0に記載の方法。 5 0 . 前記ポリフエノールは、 混合物または単品である、 請求項 3 0に記 載の方法。

' 5 1 . 前記ポリフエノールは、 カテキン類、 タンニン、 プルアントシァ- ジンおよびリスベラトロールからなる群より選択される、 請求項 3 0に記載の 方法。

5 2 . 前記ポリフエノールは、 少なくともカテキン類またはタンニンを含 む、 請求項 3 0に記載の方法。

5 3 . 前記ポリフエノールは、 ェピガロカテキンガレートを含む、 請求項 3 0に記載の方法。

5 4 . 前記ポリフエノールは、 ヒドロキシ価が 2〜約 1 0 0である、 請求 項 3 0に記載の方法。

5 5 . 前記ポリフエノールは、 茶抽出物、 海草抽出物、 アロエ抽出物およ ぴワイン抽出物、 サボテン抽出物および果実抽出物からなる群より選択される 抽出物を含む、 請求項 3 0に記載の方法。

5 6 . 前記ポリフエノールは海草抽出物を含む、 請求項 3 0に記載の方法。 5 7. 前記ポリフエノ一ルは茶抽出物を含む、 請求項 3 0に記載の方法。 5 8 . 臓器、 組織または細胞を保存するための方法であって、

1 ) 該臓器、 組織または細胞をポリフヱノールを含む流体中に保持する工程、 を包含する、 方法。

5 9 . 前記臓器は、 心臓である、 請求項 5 8に記載の方法。

6 0 . 臓器、 組織または細胞を保護または保存するための医薬を製造する ための、 ポリフエノールの使用であって、 該医薬は、 ポリフエノールを含む、 使用。