WO2004005935A1

WO2004005935A1 - 統合失調症の検査、診断方法

Info

Publication number: WO2004005935A1
Application number: PCT/JP2003/008525
Authority: WO
Inventors: Kenji Hashimoto; Masaomi Iyo; Takeshi Fukushima; Kazuhiro Imai
Original assignee: Mitsubishi Pharma Corporation
Priority date: 2002-07-04
Filing date: 2003-07-04
Publication date: 2004-01-15
Also published as: EP1542017A1; US20050164400A1; EP1542017A4; JPWO2004005935A1; JP4299243B2; AU2003244205A1

Abstract

本発明は、Ｄ型セリン及びＬ型セリンの生体試料中の濃度を測定することを特徴とする統合失調症の検査、診断方法に関する。本発明の方法によれば、高速液体クロマトグラフィーなどの分析技術を用いて生体試料中のＤ型セリン及びＬ型セリンの濃度を測定することによって、統合失調症の検査、診断ができる。

Description

統合失調症の検査、診断方法

技術分野

本発明は、統合失調症の検查、診断方法に関する。さらに詳しくは生体試料中の D 型セリン、 L型セリン又は D型セリン及ぴ L型セリンの濃度を測定することを特徴とする銃合失調症の検査、診断方法に関する。

背景技術

統合失調症 (Schizophrenia)は、人口の約 1 %の割合で起こり、思春期から 2 0代の若い時期に発症する。症状としては、幻覚、妄想などの陽性症状、感情鈍麻、意欲減退、社会的引きこもりなどの陰性症状、及び認知機能障害などがある。病態の特殊性から早期診断、治療、社会復帰活動、再発予防といった包括的な治療体系の確立が望まれている。統合失調症の治療には、薬物治療が不可欠であり、フエノチアジン系化合物、プチ口フエノン系化合物、ベンズアミド系化合物、ィミノジベンジル系化合物、チェピン系化合物、インドール系化合物及ぴセロトニン ' ドーパミン受容体遮断薬などが投与されている。

統合失調症の病態には、遺伝的要因及び環境要因が関与していることが知られている。フェンサイタリジン、ケタミンなどの NMD A受容体遮断薬によって統合失調症と酷似した症状が引き起こされることが知られており、いわゆる「銃合失調症のグノレタミン酸機能低下仮説」が提唱されている。現在のところ、統合失調症を検查、診断する生物学的マーカーが無い。血液や尿などの患者のサンプルを用いた研究が数多く行なわれてきたが、未だに確立されたものは無!/、。

ところで、 D型アミノ酸は、哺乳類には存在しないと思われていたが、近年、 D型セリンを含む D型ァミノ酸がヒトを含む哺乳類にも低濃度で存在することが明らかになってきた。一方、 D型セリンは、興奮性の神経伝達を司るグルタミン酸受容体のサプタイプ NMD A受容体のグリシン部位のァゴニストとして作用することが知られている。統合失調症のグルタミン酸機能低下仮説に基づくと、 D型セリンが統合失調症の病態に関与している可能 14がある。

したがって、統合失調症患者の治療のために D型セリンを投与する方法（米国特許第 6 1 6 2 8 2 7号明細書）や、統合失調症、アルツハイマー病、自閉症、鬱病などの神経精神疾患の治療に、 NMD A受容体のグリシン部位のァゴニストである D型セリン、 D型ァラニン等を投与する方法が知られている（国際公開 WO 9 9 / 5 2 5 1 9号パンフレツト）。

統合失調症による入院患者は日本における病院の総べッド数の約 1 5 %を占め、医療経済という点からも問題は大きい。医療の現場から統合失調症を早期に検査、診断するような検査、診断薬及び検査、診断方法の開発が望まれている。

尚、統合失調症は従来「精神分裂病」と呼ばれていたが、 2 0 0 2年 8月に開催された日本精神神経学会総会で「統合失調症」と病名が変更になった。「精神分裂病」、「統合失調症」はともに「Schizophrenia」を意味する。

発明の開示

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行なった結果、統合失調症患者の生体試料（例えば血清等）中の D型セリン及ぴ L型セリンのレベルが、健常者のそれと比較して有意に変化していることを見出した。

特に、本発明者らは、 NMD A受容体ァゴニスト活性を有する D型セリンが統合失調症患者末梢血で有意に減少していることを初めて発見した。これまでセリン（トータルセリン： D型セリンと L型セリンの総和，約 9 9 %が L型セリン）が統合失調症患者末梢血中で増カ卩しているという報告はあったが、今回トータルセリン、 L型セリン、 D型セリンそれぞれを測定したところ、トータルセリンはやはり統合失調症患者で増加（P=0. 017)、 L型セリンも同様に増カ卩（P=0. 012)していたのに対し、 D型セリンは統合失調症患者で減少 (P=0. 001)しており、 D型セリン /トータルセリンの比も患者で明らかに減少（P=0. 0001)していることが判明した。 D型セリンの減少と、患者の病態（陰性、陽性など)、薬物治療の有無、薬剤投与背景などとの明確な相関は見られなかった力ただ薬物治療群でのみ解析した際に、 D型セリンと B P R Sスコア（Brief Psychiatric Rating Scale, このスコアが低いほど改善度が高い）に関してむしろ正の相関がみられた。 D型セリンの減少に関しては D型セリンの合成酵素セリンラセマーゼ、分解酵素 D型アミノ酸酸ィ匕酵素、 D型セリントランスポーター等の関与が考えられる。本発明は、上記の知見等に基づいて完成されたものである。

すなわち、本発明は以下の（1) から（28) に関する。

(I) 生体試料中の（a) D型セリン、（b) L型セリン又は（c) D型セリン及ぴ L型セリンの濃度を測定することを特徴とする統合失調症の検查方法。

(2) 生体試料中の D型セリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度の平均値より低いことを指標とする前記 (1) 記載の統合失調症の検査方法。

( 3 ) 生体試料中の D型セリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度の平均値一標準偏差より低いことを指標とする前記（1) 記載の統合失調症の検査方法。

(4) 生体試料中の D型セリン濃度が統合失調症個体又は個体群における該濃度の平均値 +標準偏差より低いことを指標とする前記（1)記載の統合失調症の検査方法。

(5) 生体試料中の L型セリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度の平均値より高いことを指標とする前記（1) 記載の統合失調症の検査方法。

(6) 生体試料中のトータルセリン濃度に対する D型セリン濃度の割合を指標とする前記 (1) 記載の統合失調症の検査方法。

(7) 生体試料中のトータルセリン濃度に対する D型セリン濃度の割合が健常個体又は個体群における該割合の平均値より低いことを指標とする前記 (6) 記載の統合失調症の検査方法。

(8) 生体試料中のトータルセリン濃度に対する D型セリン濃度の割合が健常個体又は個体群における該割合の平均値一標準偏差より低いことを指標とする前記 (6) 記載の統合失調症の検査方法。

( 9 ) 生体試料中のトータルセリン濃度に対する D型セリン濃度の割合が統合失調症個体又は個体群における該割合の平均値 +標準偏差より低いことを指標とする前記

(6) 記載の統合失調症の検査方法。

(10) D型セリン療法が有効な統合失調症患者を選別する前記（ 1 ) 乃至（ 9 ) のいずれかに記載の統合失調症の検査方法。

(I I) アミノ酸標識試薬を用いる前記 (1) 乃至（10) のいずれかに記載の銃合失調症の検査方法。

(12) 生体試料にァミノ酸標識試薬を接触させ、セリンを標識する工程及び標識 D型セリンと標識 L型セリンとを分離 '定量する工程を含む前記 (11) 記載の統合失調症の検査方法。

(13) 標識 D型セリンと標識 L型セリンとを分離'定量する工程の前に標識セリンを分離 ·定量する工程を更に含む前記（12) 記載の統合失調症の検查方法。

(14) 標識 D型セリンと標識 L型セリンとを分離 ·定量する工程に力ラム又はキャピラリーを用いる前記（12) 記載の統合失調症の検査方法。

(15) 標識 D型セリンと標識 L型セリンとを分離 ·定量する工程にカラム又はキャピラリーを用いる前記（13) 記載の統合失調症の検查方法。

(16) 標識セリンを分離 ·定量する工程にクロマトグラフィーを用いる前記 (1 3) 記載の統合失調症の検査方法。

(17) 標識セリンを分離'定量する工程にクロマトグラフィーを用いる前記 (1 5) 記載の統合失調症の検査方法。

(18) カラム又はキヤビラリ一が光学分割用カラム又はキヤビラリ一である前記

(14)、（15) 又は（17) 記載の統合失調症の検査方法。

(19) クロマトグラフィーが高速液体クロマトグラフィーである前記（16) 又は（17) 記載の統合失調症の検查方法。

(20) クロマトグラフィーが高速液体クロマトグラフィーであり、カラム又はキャピラリーが光学分割用カラム又はキヤビラリ一である前記（17) 記載の統合失調症の検査方法。

(21) アミノ酸標識試薬がアミノ酸蛍光標識試薬である前記（11) 乃至（20) のいずれかに記載の統合失調症の検査方法。

(22) アミノ酸蛍光標識試薬が 4一フルオロー 7—ニトロー2， 1, 3—べンズォキサジァゾールである前記（21) 記載の統合失調症の検査方法。

(23) ァミノ酸標識試薬を含有する統合失調症の検査用試薬。

( 24) アミノ酸標識試薬がアミノ酸蛍光標識試寒である前記（23) 記載の統合失調症の検査用試薬。

(25) アミノ酸蛍光標識試薬が 4一フルオロー 7—二トロー 2, 1， 3—べンズォキサジァゾールである前記（24) 記載の統合失調症の検査用試薬。 ( 2 6 ) 血清中の D型セリン及ぴ L型セリンの濃度を測定し、濃度の増減を指標とすることを特徴とする統合失調症の検査、診断方法。

( 2 7 ) 血清中の D型セリン濃度を測定し、濃度の減少を指標とすることを特徴とする統合失調症の検査、診断方法。

( 2 8 ) 血清中の L型セリン濃度を測定し、濃度の増加を指標とすることを特徴とする統合失調症の検查、診断方法。

発明の実施の形態

本発明による統合失調症の検查、診断は、例えば次のようにして行なうことができる。生体試料（例えばヒトの血清）を調製し、生体試料中のトータルセリン、 D型セリン及ぴ Z又は L型セリンの濃度を種々の方法により定量する。統合失調症患者の生体試料（例えば血清）中の D型セリン濃度及び/又はトータルセリンに対する D型セリンの濃度比が、健常者の値より有意に低いこと等を利用し、統合失調症を検査、診断する。

即ち、統合失調症の指標としては、例えば、

i ) 生体試料中の D型セリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度の平均値より低いこと。

ϋ ) 生体試料中の L型セリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度の平均値より高いこと。

iii) 生体試料中のトータルセリン濃度に対する D型セリン濃度の割合が健常個体又は個体群における該割合の平均値より低いこと。

等の指標が挙げられる。

さらに、統合失調症の好ましい指標としては、例えば、

iv) 生体試料中の D型セリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度の平均値ー標準偏差より低いこと。

V ) 生体試料中の D型セリン濃度が統合失調症個体又は個体群における該濃度の平均値 +標準偏差より低いこと。

vi) 生体試料中のトータルセリン濃度に対する D型セリン濃度の割合が健常個体又は個体群における該割合の平均値一標準偏差より低いこと。 vi) 生体試料中のトータルセリン濃度に対する D型セリン濃度の割合が統合失調症個体又は個体群における該割合の平均値 +標準偏差より低いこと。

等が挙げられる。

ここで、「D型セリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度の平均値 (一標準偏差）より低い」とは、「一個体の D型セリン濃度が、その個体が健常であるときの該濃度を複数回測定した値の平均値 (一標準偏差）より低い」こと、又は「一個体の D型セリン濃度が、健常個体の集団の該濃度の平均値 (一標準偏差）より低い」ことを意味する。また、「D型セリン濃度が統合失調症個体又は個体群における該濃度の平均値 +標準偏差より低い」とは、「一個体の D型セリン濃度が、その個体が統合失調症であるときの該濃度を複数回測定した値の平均値 +標準偏差より低い」こと、又は「一個体の D型セリン濃度が、統合失調症個体の集団の該濃度の平均値 +標準偏差より低い」ことを意味する。本明細書中、「健常個体または個体群における該割合の平均値（一標準偏差)」、「統合失調症個体又は個体群における該割合の平均値 +標準偏差」等の意味も、同様に解することとする。

本発明において、生体試料中の D型セリン濃度のみを測定し、 D型セリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度より低いことを指標として統合失調症の検査、診断をすることもできる。このとき、好ましい指標としては、例えば生体試料が血清である場合、 D型セリン濃度が 2 . 0 0 m o 1 / L以下であることである。

また、本発明において、生体試料中の L型セリン濃度のみを測定し、 L型セリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度より高いことを指標として統合失調症の検査、診断をすることもできる。このとき、好ましい指標としては、例えば生体試料が血清である場合、 L型セリン濃度が 1 9 O ^ m o 1 /Lであることである。

さらに、本発明において、生体試料中のトータルセリン濃度を測定し、トータルセリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度より高いことを指標として統合失調症の検査、診断をすることもできる。このとき、好ましい指標としては、例えば生体試料が血清である場合、トータルセリン濃度が 1 9 0 ^ m o 1 / L以上であることである。

本発明の検査、診断に供することのできる生体試料としては、例えば血清、血漿、血液、尿、髄液、唾液、涙液、汗等の生体由来の液体成分、毛髪、血球、パイォプシ一等で切除された組織の一部等の生体由来の固形成分等が挙げられ、生体由来の全ての成分が含まれる。好ましい生体試料としては血清が挙げられる。また、生体から直接採取された試料に、種々の処理を加えて得られた産物も本発明における生体試料である。この場合、処理の種類、回数は限定されず、複数種類の処理を組み合わせたものであってもよい。処理の種類としては、例えば除蛋白、脱塩、透析、酸/塩基/緩衝液等の添加、加熱、カラムによるアミノ酸含有画分の分離 ·精製等が挙げられるが、これらのものに限定されない。

本発明の検查、診断に供せられる試料の由来する生体としては、ヒトを含む哺乳動物（例えば、ヒト、サル、マウス、ラット、モルモット等）が挙げられる。

本発明の統合失調症の検査、診断方法において、生体試料中の D型及ぴ L型セリンの濃度を測定する方法は自体公知の全ての方法を用いることができる。また、今後新たに開発されるであろう、生体試料中の D型及ぴ L型セリンの濃度を測定する方法も用いることが可能である。好ましくはァミノ酸標識試薬により生体試料中のセリンを含むアミノ酸を標識して、検出感度を上昇させる。ここで、アミノ酸標識試薬とは、アミノ酸の分離 ·定量等に際して、その検出感度を上昇させる目的で、アミノ酸を標識する試薬であり、アミノ酸標識試薬とァミノ酸 Zセリンとを反応させることにより、それぞれ標識アミノ酸 Zセリンを得る。アミノ酸標識試薬としてはアミノ酸吸光標識試薬、アミノ酸蛍光標識試薬及びアミノ酸発光標識試薬とがあり、アミノ酸/セリンと反応することにより各々吸光標識ァミノ酸 Zセリン、蛍光標識ァミノ酸 Zセリン又は発光標識ァミノ酸 Zセリンを得る。これらの吸光度、蛍光強度又は発光強度を指標に生体試料中のアミノ酸、セリンを分離 '定量する。好ましくはアミノ酸蛍光標識試薬を用いる。アミノ酸吸光標識試薬としては例えばニンヒドリン等が挙げられる。ァミノ酸蛍光標識試薬としては例えば、オルトフタルアルデヒド（O P A)、フルォレツサミン（F L A)、ナフタレン一 2， 3—ジカルポキシアルデヒド（ND A)、ダンシルクロリド（D N S— C 1 )、 9一フルォレニルメチノレクロ口ホルメート（FMO C— C l )、 3， 4—ジヒドロー 6 , 7—ジメトキシー 4一メチル一3—ォキソキノキサリン一 2—カルボ二ノレクロリド（DME Q— C O C 1 )、 7—メチノレクマリン一 3—力/レポ-ルフルオリド、 4一フルオロー 7—二トロー 2， 1， 3—べンズォキサジァゾール（N B D— F)、 4一クロロー 7—ュトロ一 2 , 1 , 3—ベンズォキサジァゾーノレ（N B D— C 1 )、 D B D試薬、蛍光性エドマン試薬、フルォレツセインイソチオシァネート、 D B D— N C S、 D B D— P r o— C O C 1、 N B D— P r o _ C O C 1、 (+) - 1 - ( 1 ソシァネートェチル）ナフタレン、（+ ) —1— ( 9—フルォレニル）ェチルクロ口ホルメート、 N—ァセチル一 L一システィン等が挙げられ、いずれも本発明に用いることが出来るが、好ましくは 4一フルォロ一 7—ニトロ一 2 , 1， 3— ベンズォキサジァゾール（N B D— F) を用い、これとアミノ酸 Zセリンを反応させて N B D標識アミノ酸 Zセリンを得る。

本発明の統合失調症の検查、診断方法における、生体試料中のセリンの測定方法としては、例えば、生体試料にアミノ酸標識試薬を接触させ、セリンを標識する工程及ぴ標識 D型セリンと標識 L型セリンとを分離 ·定量する工程を含む測定方法が挙げられる。

ここで、標識 D型セリンと標識 L型セリンとを分離'定量する工程の前に、標識セリンを分離'定量する工程を更に含むことが好ましい。

即ち、本発明の統合失調症の検査、診断方法における、生体試料中のセリンの好ましい測定方法としては、例えば、以下の工程、

工程 1 ：生体試料にアミノ酸標識試薬を接触させ、セリンを標識する工程；工程 2 ：標識セリンを分離 ·定量する工程；

工程 3 ：標識 D型セリンと標識 L型セリンとを分離 '定量する工程；

を含む測定方法が挙げられる。

該測定方法は、通常工程 1→工程 2→工程 3の順で行われる。ここで、工程 1の前、工程 1と工程 2の間、工程 2と工程 3の間に他の工程を行うことを妨げるものではない。

上記工程 2において、標識セリンを分離 ·定量する方法は、特に限定されないが、好ましくはクロマトグラフィーを用いる。標識セリンの分離 ·定量に使用することの出来るクロマトグラフィーとしては、例えば移動相が液体であるクロマトグラフィー (例えば高速液体ク口マトグラフィー（H P L C)、中高圧液体ク口マトグラフィ一等)、移動相が気体であるクロマトグラフィー（例えばガスクロマトグラフィー）、移動相が超臨界液体であるクロマトグラフィー（例えば超臨界液体クロマトグラフィー）が挙げられるが、好ましくは高速液体クロマトグラフィーを用いる。移動相又は試料の移動手段としては、ポンプ等による物理的手段の他、電気的手段（例えば電気泳動等）を用いることも出来る。

標識セリンは、上記のクロマトグラフィーの装置に設置された適当な分離媒体を介して分離される。好ましい分離媒体としては、カラム、キヤピラリー、ゲル、薄層等が挙げられ、より好ましくはカラムが挙げられる。標識セリンの分離に用いることの出来るカラムとしては、例えば逆相カラム、順相カラム、イオン交換カラム、配位子交換カラム、イオン排除カラム、サイズ排除カラム（G P C及び G F C)、光学分割用カラム、ァフィ二ティカラム等が挙げられるが、好ましくは逆相カラム、イオン交換カラムを用いる。

分離された標識セリンは、適当な検出手段を用いて定量される。吸光標識セリンは吸光光度計によって、蛍光標識セリンは蛍光光度計によつて定量することが望ましい。本工程により生体試料中のトータルセリン濃度を測定することができる。

なお、工程 2において、複数種のクロマトグラフィーを組み合わせて用いたり、複数種の分離媒体を組み合わせて用いたりしてもよい。

上記工程 3において、標識 D型セリンと標識 L型セリンとの分離 ·定量の方法は、特に限定されないが、好ましくはクロマトグラフィーを用いる。該クロマトグラフィ一としては、上記工程 2の標識セリンの分離 ·定量に使用することの出来るクロマトグラフィ一と同様のクロマトグラフィ一が例示され、好ましくは高速液体クロマトグラフィーを用いる。移動相又は試料の移動手段としては、ポンプ等による物理的手段の他、電気的手段（例えば電気泳動等）を用いることも出来る。

標識 D型セリンと標識 L型セリンとは、上記のクロマトグラフィ一に設置された適当な分離媒体を介して分離される。該分離媒体の態様としては、本目的を達成できるものは全て用いることができるが、好ましくはカラム、キヤビラリ一、ゲル、薄層が挙げられ、より好ましくはカラム又はキヤピラリーを用いる。標識 D型セリンと標識 L型セリンとの分離に用いることの出来るカラム又はキヤビラリ一としては、例えば逆相カラム又はキヤピラリー、順相カラム又はキヤビラリ一、イオン交換カラム又はキヤピラリー、配位子交換カラム又はキヤビラリ一、イオン排除カラム又はキヤピラリー、サイズ排除カラム（0 ?。及ぴ。 0 又はキヤビラリ一、光学分割用カラム又はキヤビラリ一、ァフィ二ティカヲム又はキヤビラリ一等が挙げられるが、好ましくは光学分割用カラム又はキヤピラリーを用いる。

分離された標識 D型セリン及ぴ標識 L型セリンは、上述の適当な検出手段を用いて定量される。本工程により生体試料中の D型セリン濃度及び L型セリン濃度を測定することができる。工程 3においては、複数種のクロマトグラフィーを組み合わせて用いたり、複数種の分離媒体を組み合わせて用いたりしてもよい。

尚、前述の通り、工程 2において標識セリンを分離し、これを工程 3において更に標識 D型セリンと標識 L型セリンとに分離'定量するのが好ましい。この場合、工程 2で分離された標識セリンを一度分取して、これを工程 3に用いる。あるいは、一つのクロマトグラフィ一装置に複数個の力ラムをスィツチングパルプを介して連続して取り付ける等して、工程 2と工程 3とを連続的に行ってもよい。

生体試料中の D型セリン及ぴ L型セリンを測定する更に具体的な方法としては、例えば、以下の工程、

工程（A) ：生体試料に 4—フルオロー 7—ニトロ一 2， 1， 3—べンズォキサジァゾール（N B D— F ) を接触させ、セリンを標識する工程；

工程 (B) : N B D標識セリンを高速液体クロマトグラフィーで分離'定量する工程；工程 (C)： N B D標識 D型セリンと N B D標識 L型セリンとを光学分割用カラムを用いて分離 ·定量する工程；

を含む方法や、以下の工程、

工程（I ) : 生体試料に 4—フルオロー 7—ュトロー 2， 1， 3—ベンズォキサジァゾールなどのアミノ酸蛍光標識試薬を接触させて、蛍光標識ァミノ酸（例えば N B D 標識セリン等）を合成する工程；

工程（ Π )： N B D標識セリンを高速液体ク口マトグラフィ一で分離 -定量する工程；工程 (Π)：分取した N B D標識セリンを光学分割用カラムを用いて分離'定量する工程；力らなる方法などが例示される。

本発明の統合失調症の検查、診断方法は、従来の主観的検查、診断方法（例えば D — I Vに従った B P R Sスコア判定等）や今後開発される全ての検查、診断方法と併用することもできる。また、何らかの方法によって、確定的に統合失調症であることが明らかな患者から、本発明の検查、診断方法において指標として使用し得る D 型セリン、 L型セリンの定量値についてのデータを収集することによって、本発明の検査、診断方法のみによって確定的な判定を下すことも可能となる。また、本発明の検査、診断方法は、法的責任能力の有無を調べる目的で、又はその他の目的で行われる精神鑑定に適用することも可能である。 .

本発明の検査、診断方法を用いることにより、患者の病態（陰'性、陽性など）の判定、重症度の判定、病態の経過観察、治療効果の有無の判定、予後の予測、他の精神疾患との判別等が容易に出来る。特に、トータルセリンに対する D型セリンの濃度比が特に低い患者を選別できることから、 D型セリン療法が有効な対照患者を、治療開始前に選別し、より効率的な治療を行うことが出来る。ここで、 D型セリン療法とは、例えば、 D型セリン自体、セリンラセマーゼの発現を上昇させるィ匕合物、セリンラセマ一ゼを活性化させる化合物、 D型セリンのトランスポータ阻害剤又は D型セリンの分解酵素阻害剤等を投与することによって、生体中の D型セリンを増加させるような、統合失調症の治療方法を意味する。

D型セリン療法が有効な統合失調症患者を選別する指標としては、上述の統合失調症の指標を用いることが出来る。

即ち、 D型セリン療法が有効な統合失調症患者を選別する指標としては、例えば、 I ) 生体試料中の D型セリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度の平均値より低いこと。

Π ) 生体試料中の L型セリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度の平均値より ft ヽこと。

ΙΠ) 生体試料中のトータルセリン濃度に対する D型セリン濃度の割合が健常個体又は個体群における該割合の平均値より低いこと。

等の指標が挙げられる。さらに、 D型セリン療法が有効な統合失調症患者を選別する好ましい指標としては、例えば、

V) 生体試料中の D型セリン濃度が統合失調症個体又は個体群における該濃度の平均値 +標準偏差より低いこ.と。

VI) 生体試料中のトータルセリン濃度に対する D型セリン濃度の割合が健常個体又は個体群における該割合の平均値一標準偏差より低いこと。

W) 生体試料中のトータルセリン濃度に対する D型セリン濃度の割合が統合失調症個体又は個体群における該割合の平均値 +標準偏差より低いこと。

等が挙げられる。

また、以上のことから、アミノ酸標識試薬、好ましくはアミノ酸蛍光標識試薬、より好ましくは 4一フルオロー 7—二トロ一 2 , 1， 3—べンズォキサジァゾールは統合失調症の検査、診断用試薬として用いることが出来る。

本発明方法は、また「抗統合失調症薬の候補物質」の判定にも有用である。すなわち、 D型セリンを増加させる作用あるいは L型セリンを減少させる作用を有する化合物は、抗統合失調症薬として有用である可能性がある。「抗統合失調症薬の候補物質」は、試験者が所望する任意の物質であり得る。

実施例

以下、試験例により、本発明をさらに詳細に説明するが、いかなる意味においても本宪明の範囲を限定するものではない。

試験例 1

健常者 4 2名及ぴ統合失調症患者 4 2名より血液を採取した後、通常の方法で血清を分離し、以下の試験に供した。すべての患者は D S M— I Vに従って診断され、専門医による B P R Sスコア判定が行われた。被験者の背景は表 1に示した通りである。 (試験方法）

ヒト血清 2 0 /i Lにメタノール 1 8 0 Lを加えて、除タンパク後、遠心し、この上清 2 0 μ に 0 . 1 Mホウ酸緩衝液（ρ Η 8 . 0 ) を 2 0 // L、 5 0 mM N B D ― Fのァセトニトリノレ溶液を 60 μ L加えた後、 60。Cで 1分間加温した。これに 0. 1%トリフルォロ酢酸含有の水 Iァセトニトリル混液（90/10) 200 L をカロえた。この溶液 l O iLを HPLCに注入した。

HPLCとしては、 ODSカラム（TSKgel 0DS-80Ts (東ソ一社製)）とキラルカラム（SumichiralOA- 2500(S) (住化分析センタ一社製））を 6方パルプで接続したカラムスイッチング HP LCを使用した。これにより、 ODSカラムにて NBD標識セリン (NBD標識 D型セリンと NBD標識 L型セリンの和）を分離'定量し、続いてキラルカラムで NBD標識 D型セリンと NBD標識 L型セリンを分離 ·定量した。 NBD 標識セリンの検出 ·定量には蛍光検出器（日立社製）を用いた。励起波長は 47 O n m、蛍光波長は 530 nmである。

ODSカラムによる NBD標識セリンの分離 ·定量に際しては、移動相は 0. 8m L/mi nの定流速で流した。移動相としては A液（ 0. 1 %トリフルォロ酢酸含有の水/ァセトニトリル混液（90/10))、 B液（0. 1%トリフルォロ酢酸含有の水/ァセトニトリル混液 (10ノ 90)) および C液 (ァセトニトリル）を用意した。溶出条件は以下の通りである。

0〜25. 0分 A液： B液： C液 = 92 ： 8 ： 0

25. 1〜35. 0分 A液： B液： C液 = 0 : 100 : 0

35. 1〜45. 0分 A液： B液： C液 = 0 : 0 : 100

キラルカラムによる NBD標識 D型セリンと NBD標識 L型セリンの分離 ·定量に際しては、移動相は 0. 8mLZm i nの定流速で流した。移動相としては、 15m Mクェン酸のメタノール溶液を用いた。

NBD標識 D型セリンと NBD標識 L型セリンの定量に際しては、 D型セリンおよぴ L型セリンの標準品（シグマネ： t ) を上記と同様に処理し、検量線を作製した。各試料を処理した際に得られる蛍光ピーク面積を検量線にプロットし、 D型セリン濃度および L型セリン濃度を算出した。

以上の操作により、ヒト血清中の D型セリンならびに L型セリンを定量した。

(結果）

健常者群と統合失調症群において、ヒト血清中の D型セリン及ぴ L型セリンの含量を高速液体ク口マトグラフィ一にて測定し、濃度を算出した。その結果を表 1に示す。

統合失調症群では、 D型セリンのレベルは、平均 1. 8 6 μΐϋο 1 /L_S健常者では、 D型セリンのレベルは、平均 2. 2 8 mo 1 ZLであった。この 2群間の値をノンパラメトリック .マンホイットェ ' Uテストで解析した結果、統合失調症患者で有意（z = -4.78, p = 0.001) に減少していることが判った。また、未治療の患者と治療中の患者において D型セリン濃度の有意な変化は認められなかった。さらに、治療中の患者においてもクロルプロマジン換算で統計解析した結果、 D型セリン濃度と相関していないこと、さらに罹病期間とも相関していないことが判った。統合失調症群では、 L型セリンのレベルは、平均 197. 9 ^mo 1/L, 健常者では、 L型セリンのレベルは、平均 175. 0 i mo 1ZLであった。この 2群間の値をノンパラメトリック .マンホイットニ . Uテストで解析した結果、統合失調症患者で有意 (z = - 2.49， p = 0.013) に増カ卩していることが判った。統合失調症群では、全セリンに対する D型セリンの割合は、平均 0. 95 %、健常者では、全セリンに対する D型セリンの割合は、平均 1. 34%であった。この 2群間の値をノンパラメトリック 'マンホイツトニ ·υテストで解析した結果、統合失調症患者で有意（ζ = - 4.78, ρく 0.0001) に減少していることが判った。

産業上の利用可能性

本発明の方法を用いれば、血清中の D型セリン、 L型セリンの濃度を指標とすることにより、被験者が統合失調症に罹患しているか否かを客観的に検查、診断することができる。 ' 本出願は、日本で出願された特願 2002—195315を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims

1 . 生体試料中の（a ) D型セリン、（b ) L型セリン又は（c ) D型セリン及ぴ L 型セリンの濃度を測定することを特徴とする統合失調症の検査方法。

2 . 生体試料中の D型セリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度の平均値より低いことを指標とする請求の範囲 1記載の統合失調症の検査方法。

3 . 生体試料中の D型セリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度の平均値一標準偏差より低いことを指標とする請求の範囲 1記載の統合失調症の検査方法。

4 . 生体試料中の D型セリン濃度が統合失調症個体又は個体群における該濃度の平均値 +標準偏差より低いことを指標とする請求の範囲 1記載の統合失調症の検査方法。

5 . 生体試料中の L型セリン濃度が健常個体又は個体群における該濃度の平均値より高いことを指標とする請求の範囲 1記載の統合失調症の検査方法。

6 . 生体試料中のトータルセリン濃度に対する D型セリン濃度の割合を指標とする請求の範囲 1記載の統合失調症の検査方法。

7 . 生体試料中のトータルセリン濃度に対する D型セリン濃度の割合が健常個体又は個体群における該割合の平均値より低いことを指標とする請求の範囲 6記載の統合失調症の検査方法。

8 . 生体試料中のトータルセリン濃度に対する D型セリン濃度の割合が健常個体又は個体群における該割合の平均値一標準偏差より低いことを指標とする請求の範囲 6 記載の統合失調症の検査方法。 '

9 . 生体試料中のトータルセリン濃度に対する D型セリン濃度の割合が統合失調症個体又は個体群における該割合の平均値 +標準偏差より低いことを指標とする請求の範囲 6記載の統合失調症の検查方法。

1 0 . D型セリン療法が有効な統合失調症患者を選別する請求の範囲 1乃至 9のいずれかに記載の統合失調症の検查方法。

1 1 . アミノ酸標識試薬を用いる請求の範囲 1乃至 1 0のいずれかに記載の統合失調症の検查方法。

1 2 . 生体試料にァミノ酸標識試薬を接触させ、セリンを標識する工程及び標識 D 型セリンと標識 L型セリンとを分離 ·定量する工程を含む請求の範囲 1 1記載の統合失調症の検査方法。

1 3 . 標識 D型セリンと標識 L型セリンとを分離 ·定量する工程の前に標識セリンを分離 ·定量する工程を更に含む請求の範囲 1 2記載の統合失調症の検查方法。

1 4 . 標識 D型セリンと標識 L型セリンとを分離 ·定量する工程にカラム又はキヤビラリ一を用いる請求の範囲 1 2記載の統合失調症の検査方法。

1 5 . 標識 D型セリンと標識 L型セリンとを分離'定量する工程にカラム又はキヤピラリーを用いる請求の範囲 1 3記載の銃合失調症の検査方法。

1 6 . 標識セリンを分離 ·定量する工程にクロマトグラフィーを用いる請求の範囲 1 3記載の統合失調症の検查方法。

1 7 . 標識セリンを分離'定量する工程にクロマトグラフィーを用いる請求の範囲 1 5記載の統合失調症の検査方法。

1 8 . カラム又はキヤビラリ一が光学分割用カラム又はキヤビラリ一である請求の範囲 1 4、 1 5又は 1 7記載の統合失調症の'検查方法。

1 9 . クロマトグラフィーが高速液体クロマトグラフィーである請求の範囲 1 6又は 1 7記載の銃合失調症の検查方法。

2 0 . クロマトグラフィーが高速液体クロマトグラフィーであり、カラム又はキヤビラリ一が光学分割用カラム又はキヤビラリ一である請求の範囲 1 7記載の統合失調症の検査方法。

2 1 . アミノ酸標識試薬がアミノ酸蛍光標識試薬である請求の範囲 1 1乃至 2 0のいずれかに記載の統合失調症の検査方法。

2 2 . アミノ酸蛍光標識試薬が 4 _フルオロー 7—二トロー 2， 1 , 3—べンズォキサジァゾールである請求の範囲 2 1記載の統合失調症の検査方法。

2 3 . ァミノ酸標識試薬を含有する統合失調症の検査用試薬。

2 4 . アミノ酸標識試薬がアミノ酸蛍光標識試薬である請求の範囲 2 3記載の統合失調症の検査用試薬。

2 5 . アミノ酸蛍光標識試薬が 4一フルォロ一 7—-トロー 2， 1， 3—ベンズォキサジァゾールである請求の範囲 2 4記載の統合失調症の検查用試薬。

2 6 . 血清中の D型セリン及ぴ L型セリンの濃度を測定し、濃度の増減を指標とすることを特徴とする統合失調症の検査、診断方法。

2 7 . 血清中の D型セリン濃度を測定し、濃度の減少を指標とすることを特徴とする統合失調症の検査、診断方法。

2 8 . 血清中の L型セリン濃度を測定し、濃度の増加を指標とすることを特徴とする統合失調症の検査、診断方法。