WO2003103695A1 - Nuevo uso terapéutico de los extractos de polypodium - Google Patents

Nuevo uso terapéutico de los extractos de polypodium Download PDF

Info

Publication number
WO2003103695A1
WO2003103695A1 PCT/ES2003/000272 ES0300272W WO03103695A1 WO 2003103695 A1 WO2003103695 A1 WO 2003103695A1 ES 0300272 W ES0300272 W ES 0300272W WO 03103695 A1 WO03103695 A1 WO 03103695A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
polypodium
fibrosis
extracts
disease
peyronie
Prior art date
Application number
PCT/ES2003/000272
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Eliseo Quintanilla Almagro
Original Assignee
Especialidades Farmacéuticas Centrum, S.A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Especialidades Farmacéuticas Centrum, S.A. filed Critical Especialidades Farmacéuticas Centrum, S.A.
Priority to KR10-2004-7019739A priority Critical patent/KR20050014848A/ko
Priority to US10/516,825 priority patent/US20060093690A1/en
Priority to JP2004510814A priority patent/JP2005528452A/ja
Priority to EP03730214A priority patent/EP1637148A1/en
Priority to CA002488356A priority patent/CA2488356A1/en
Priority to AU2003240850A priority patent/AU2003240850A1/en
Publication of WO2003103695A1 publication Critical patent/WO2003103695A1/es

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/11—Pteridophyta or Filicophyta (ferns)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/11—Pteridophyta or Filicophyta (ferns)
    • A61K36/12—Filicopsida or Pteridopsida
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives

Definitions

  • the present invention describes a new therapeutic use of Polypodium extracts, specifically, for the treatment of fibrosis.
  • Tissue fibrosis are chronic pathologies characterized by an overproduction of the components of the extracellular matrix (ECM), mainly collagen and fibronectin, and the proliferation of fibroblasts.
  • ECM extracellular matrix
  • TGF- ⁇ Transforming Growth Factor
  • ECM extracellular matrix
  • La Peyronie's disease is a disease with a widely unknown epidemiology, history and etiology. Among the etiological factors found, genetic, traumatic, arterial hypertension and / or idiopathic factors can be mentioned.
  • TGF- ⁇ Transforming Growth Factor
  • TGF- ⁇ Transforming Growth Factor
  • Polypodium extracts have been described in the state of the art with different pharmacological activities.
  • EP-0503.208, ES-2,088,770, EP 1,172,111 and the documents cited in European Patent EP 1,172,111 describe different pharmacological activities of Polypodium extracts.
  • the therapeutic activities described in the state of the art can be summarized as: immunological and regulatory activity of different cytokine populations; regulation of the expression of adhesion molecules; activity in neurodegenerative diseases; anti-inflammatory activity and collagenopoietic activity.
  • the documents closest to the invention are those that describe the collagenopoietic activity of Polypodium extracts and their application in pathologies with a collagen defect.
  • EP-503.208 describes the immumodulatory activity of Polypodium extracts and their activity in stimulating fibroblasts to synthesize precollagen.
  • Polypodaceae in the treatment of diseases of the musculoskeletal system that present a deficit of collagen. In this way it is suggested that Polypodium extracts increase the synthesis of collagen and synthesize a more resistant collagen.
  • the problem that the present invention solves is to achieve an effective pharmacological treatment for fibrosis or fibrotic diseases, such as scleroderma, pulmonary fibrosis, renal fibrosis, atherosclerosis, Pancreatic fibrosis, cardiac fibrobis, liver fibrosis, spinal fibrosis, Dupuytren's disease and, especially, Peyronie's disease, these pathologies being characterized by an overproduction of the extracellular membrane components (ECM).
  • ECM extracellular membrane components
  • Polypodium extracts inhibit in vitro dose-dependent synthesis of collagen and fibronectics in human fibroblasts. This regulatory capacity of Polypodium extracts has also been shown in vivo, reducing collagen plaque in patients suffering from La Peyronie disease, fibrosis of the tunica albuginea of the penis.
  • TGF- ⁇ Growth Transforming Factor
  • Another problem that solves the administration of Polypodium extracts is to obtain an improvement in clinical parameters related to Peyronie's disease, that is, after oral administration of Polypodium extracts, the fibrotic plaque of the tunica albuginea of the penis is reduced, the pain during intercourse is reduced, the incursion of the penis is reduced and it produces a psychological improvement of the patients, as described in claim 3.
  • the clinical results obtained in the patients treated with the Polypodium extracts are statistically better than the patients treated with other drugs.
  • intracavernous injection must be performed by a qualified person and is a painful route of administration.
  • Polypodium extracts are obtainable by polar solvent extraction, dielectric constant greater than 20. More specifically, Polypodium extracts are obtainable by water extraction, and more specifically, by water extraction of the rhizomes of the Polypodium leukotomes, as described in claims 4,5,6 and 7.
  • claim 8 describes the chemical species present said extracts.
  • Polypodium extracts are obtainable by extraction with a polar solvent, with a polar solvent meaning a constant. dielectric ( €) greater than 20.
  • the following table shows some dielectric constant values of solvents at 20 ° C according to Handbook of Chemistry and Physis, 54 to Edition.1973
  • the Polypodium extracts are obtained by extraction with water and evaporation of the solvent.
  • Polypodium refers to ferns in the genus Polypodium.
  • the rhizomes of Polypodium leucotomos are dried and extracted with water in a rhizome / solvent ratio (10:10).
  • the extract is filtered through of membrane.
  • the solvent is evaporated under reduced pressure until a residual humidity of approximately 25% is obtained.
  • Charges are added to the resulting extracts (starch, lactose and magnesium stearate) to facilitate handling and prevent microbial contamination.
  • the stabilized extract was encapsulated in unit doses equivalent to 120 mg of dry aqueous extract.
  • the cultures of human skin fibroblasts are a good model for the study of the effect of drugs on fibrotic diseases, that is, the pathologies that lead to an overproduction of the extracellular matrix components.
  • Polypodium extracts have inhibited collagen synthesis in a dose-dependent manner after incubation of human fibroblasts with 1,10,50,100,500 ⁇ g / ml of Polypodium extract in the presence of tritiated proline ( 3 H-proline) at 37 ° C for 24 hours and measure of the triallium proline incorporated. Polypodium extracts inhibited 40%, for a concentration of 50 ⁇ g / ml, the synthesis of collagen against controls.
  • tritiated proline 3 H-proline
  • Polypodium extracts have also inhibited the synthesis of fibronectin, both leaf and rhizome extracts, in vitro. After incubation of the fibroblasts in the presence of Polypodium extracts and measured by immunoassay, Polypodium extracts inhibited dose-dependent (20-1000 ⁇ g / ml) synthesis of 40% fibronectin. Apart from the inhibitory activity of the synthesis of the components of the extracellular matrix (ECM) in vitro; Polypodium extracts have shown this activity in vivo. After in vivo administration to patients with La Peyronie's disease, penile collagen plaque size has been reduced and expression of TFG- ⁇ , overexpressed protein in all fibrosis, has also been reduced.
  • ECM extracellular matrix
  • the age of the patients studied was in the same range.
  • the plaque size was determined by a physical examination and by penile ultrasound.
  • TGF- ⁇ decreased by 22% after treatment with respect to initial values, while in patients treated with Tamoxifen the production of TGF- ⁇ decreased by 5%.
  • Figure 1 describes the effect of Polypodium rhizome extracts on the inhibition of collagen synthesis. The average of 4 parallel experiments and the standard deviation are indicated.
  • Figure 2 describes the effect of Polypodium rhizome extracts on the inhibition of fibrotechnin synthesis. The average of 3 parallel experiments and the standard deviation are indicated.
  • Figure 3 describes the effect of Polypodium leaf extracts on the inhibition of fibrotechnin synthesis. The average of 3 parallel experiments and the standard deviation are indicated.
  • Polypodium extracts Polypodium extracts. Polypodium extracts were obtained by extraction in water for 48 hours, membrane filtration, evaporation of the solvent under reduced pressure, redissolution in physiological serum and lyophilization. The extracts were dissolved in PBS and used immediately after reconstitution. Culture media Fibroblasts were obtained from surgical material. Skin samples were pre-incubated for 2 hours at 4 ° C in RPMI 1640 culture medium with a double amount (2%) of penicillin / streptomycin. Subsequently, the fatty tissues were removed, the skin was cut into small pieces and fixed to culture plates moistened with fetal calf serum (FCS).
  • FCS fetal calf serum
  • the skin pieces were incubated at 37 ° C under a 5% carbon dioxide atmosphere in RPMI 1964 with 10% FCS and 1% penicillin / streptomycin. The medium was renewed twice a week.
  • the fibroblasts were trypsinized (Trypsin / EDTA: 0.05% / 0.02%) and subcultured for the experiments. Only the cells between the fourth to the eleventh pass (4th-14th) were used.
  • Collagen Synthesis Fibroblasts of healthy human skin were cultured in tissue microplates. Each well was inoculated with 10,000 cells in 100 ⁇ l of RPMI medium supplemented with FCS (10%) and L-ascorbic acid (50 ⁇ g / ml). After 24 hours of incubation in a 5% atmosphere in carbon dioxide the culture medium was replaced by 100 ⁇ l of fresh medium containing the different concentrations tested (1-1000 ⁇ g / ml of Polypodium extracts) and 1 ⁇ Ci H-proline . After a subsequent incubation for 24 hours, the collagen was extracted from each well by the addition of 100 ⁇ l of cold acetic acid (lM) with 1% pepsin and stored overnight at 4 ° C.
  • lM cold acetic acid
  • the collagen was precipitated by the addition of 2 ml of 4.5 M sodium chloride in the same buffer. After 2 hours, the tubes were centrifuged at 4000 g for 30 minutes, the supernatants were discarded and the precipitated collagen was washed with 2 ml of 2% ethanol and centrifuged at 4000 g for 30 minutes. Finally, each precipitate was dissolved in 250 ⁇ l of 0.5 M acetic acid and led to scintillation vials containing 5-10 ml of a scintillation solution. Radioactivity was measured in a liquid scintillation counter with an external standard according to the method described in Webster and Harvey, Analytical Biochemistry 96,220-224, 1979.
  • the fibroblasts were cultured in microplates with an initial density of 20,000 cells per milliliter with RPMI medium without FCS. After 24 hours at 37 ° C and in a 5% carbon dioxide atmosphere, the culture medium was renewed and the cells were cultured for 48 hours at 37 ° C with the different concentrations of the extracts (1 -1000 ⁇ g / ml) The cells were subsequently washed three times with PBS containing 1% bovine serum albumin (BSA) and polysorbart 20 (T een 20).
  • BSA bovine serum albumin
  • the cells were fixed with a methanol / acetone solution (v / v: l / l) for 30 minutes, the cells were washed three times, as described above, and incubated with a mouse monoclonal antibody antifibrotechnin (Sigma F - 7384). After washing, the cells were incubated with a goat anti-mouse monoclonal antibody conjugated with alkaline phosphatase (Sigma A-2179) for 1 hour at 37 ° C. The cells were washed again three times and incubated with p-nitrophenyl phosphate (1 mg / me) for 15 minutes in the dark. Subsequently, the microplates were centrifuged at 200 g for 5 minutes and 100 ⁇ l of the supernatant was transferred to a new microplate. It was measured in an ELISA reader at 405 nm.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Se describe un nuevo uso de los extractos del género de las Polypodaceas para el tratamiento de las patologías fibróticas, patologías producidas por una sobreexpresión de los componentes de la matriz extracelular y por una sobre expresión del Factor Transformante de Crecimiento (TFG-ß); por ejemplo,esclerodermia, fibrosis pulmonar, ateroesclerosis, fibrosis medular, fibrosis hepática, fibrosis pancreática, fibrosis renal, fibrosis cardiaca, enfermedad de Dupuytrem y, especialmente, enfermedad de La Peyronie; se describe la inhibición de los componentes de la matriz extracelular in vitro, reducción de las fíbrosis de la túnica albugínea del pene y tamaño de la placa de colágeno en pacientes con la enfermedad de Peyronie por los extractos de Polypodium; en un modo preferente los extractos de Polypodium son obtenibles por extracción con un disolvente polar a partir de los rizomas del Polypodium leucomotos.

Description

NUEVO USO TERAPÉUTICO DE LOS EXTRACTOS DE POLYPODIUM.
Campo técnico de la invención La presente invención describe un nuevo uso terapéutico de los extractos de Polypodium, concretamente, para el tratamiento de las fibrosis.
Antecedentes de la invención
Las fibrosis tisulares son patologías crónicas caracterizadas por una sobreproducción de los componentes de la matriz extracelular (ECM), principalmente colágeno y fibronectina, y la proliferación de los fibroblastos.
Recientemente, se ha descubierto que el Factor Transformante de Crecimiento (TGF-β) está implicado en todos procesos fibróticos e induce la expresión de las proteínas de la matriz extracelular (ECM), independientemente de su patogenia. A título de ejemplo, se pueden nombrar las siguientes enfermedades fibróticas: esclerodermia,fibrosis hepática, fibrobis medular, ateroesclerosis,fibrosis pulmonar, fibrosis cardiaca, fíbrosis pancrética, fibrosis renal, enfermedad de Dupuytren o enfermedad de La Peyronie.
Por lo que respecta a la enfermedad de La Peyronie, es una enfermedad con una epidemiología, historia y etiología ampliamente desconocidas. Entre los factores etiológicos encontrados se pueden citar factores genéticos, traumáticos, hipertensión arterial y/o idopáticos.
En el ámbito clínico, los enfermos presentan una fibrosis en la túnica albugínea del pene que producen unas induraciones o placas en el pene muy dolorosas en la fase temprana de su evolución. Las placas durante la erección provocan una incurvatura del pene que en grados avanzados dificulta o impide la actividad sexual. En ciertas ocasiones, el cuadro clínico se acompaña de pérdida de rigidez en la erección.
Al igual que en otras fibrosis, se ha descrito que el Factor Transformante del Crecimiento (TFG-β) está implicado en la etiopatogenia de la enfermedad de La Peyronie y los enfermos tienen aumentada esta protema. Además, es no es extraño que la enfermedad de La Peyronie esté asociada con otras fibrosis, principalmente con la enfermedad de Dupuytren o enfermedad de Paget.
La búsqueda de nuevos tratamientos para el tratamiento de las fibrosis está enfocada hacia la búsqueda de productos capaces de inhibir la sobreproducción del Factor de Crecimiento Transformante (TFG-β)que produciría una inhibición en la síntesis de las proteínas de la matriz extracelular. Sin embargo, no hay una correlación clara entre la reducción del TGF-β en los estudios in vitro y en los modelos con animales, con los resultados obtenidos in vivo respecto a la mejoría clínica o reducción de las placas de colágeno.
El-Sakka et al. J. Uro. 1999 Jun;161(16):1980-3 describen que la colchicina disminuye la expresión de TFG-β en ratas que desarrollaron la enfermedad de La Peyronie por inyección en el pene de las ratas del TGF-β.
Sin embargo, Reinhart et al. Dtsch Z Verdau Stoffwechselkr 1986;46(5):257-75 describen que el tratamiento con colchicina sobre pacientes con fibrosis hepática produce con la misma frecuencia, una mejoría, un empeoramiento o ningún cambio en los grados de fibrosis.
Respecto a la enfermedad de La Peyronie, Kadioglu et al. Int. J. Impot. Res. 2000 Jun; 12(3): 169-75 describen que, sobre una muestra de 60 pacientes afectados por la enfermedad de La Peyronie y tratados durante 10 meses con colchicina, la incurvación del pene mejoró en el 30% de los casos, permaneció igual en el 48% de los casos y empeoró en el 22% de los casos.
Uno de los tratamientos utilizados actualmente, es el uso de tamoxifeno
(Ralph et al. The treatrnent of Peyronie 's disease with Tamoxifeno. Br J Urol. 1992,70: 684-651) basándose en su actividad in vitro reguladora de la secreción de TGF-β. Sin embargo, su eficacia clínica es reducida. Así, Teloken C et al Tamoxifen ver sus placebo in the treatment of Peyronie 's diseases J Urol. 1999 Dec;162(6):2003-5, en un estudio clínico comparativo entre Tamoxifeno versus placebo los resultados fueron similares.
Otros métodos para reducir la placa incluyen la inyección vía intracavernosa de diversos agentes farmacológicos, a título de ejemplo:interferón α 2b, verapamilo o corticoides. Esta vía de administración es dolorosa para el paciente y la administración de la droga la debe realizar una persona cualificada. La administración de estos agentes puede producir efectos secundarios: el inferieron gamma produce fiebre, malestar y mialgia; los corticoides intraplaca producen gangrena; el tamoxifeno oralmente produce disminución de la libido y disminución del eyaculado.
Los extractos de Polypodium han sido descritos en el estado de la técnica con diferentes actividades farmacológicas. Las patentes EP-0503.208, ES-2.088.770, EP 1.172.111 y los documentos citados en la patente europea EP 1.172.111 describen diferentes actividades farmacológicas de los extractos de Polypodium. Las actividades terapéuticas descritas en el estado de la técnica se pueden resumir en: actividad inmunológica y reguladora de diferentes poblaciones de citocinas; regulación de la expresión de las moléculas de adhesión; actividad en las enfermedades neurodegenerativas; actividad anti-inflamatoria y actividad colagenopoyética.
Así, los documentos más cercanos a la invención son los que describen la actividad colagenopoyétíca de los extractos de Polypodium y su aplicación en las patologías con un defecto de colágeno.
EP-503.208 describe la actividad inmumoduladora de los extractos de Polypodium y su actividad en la estimulación de los fibroblastos para sintetizar precolágeno.
FR 2.479.690 describe, también, el uso de los extractos de las
Polypodaceas en el tratamiento de las enfermedades del aparato osteomotor que cursan un déficit de colágeno. De esta forma se sugiere que los extractos de Polypodium aumentan la síntesis de colágeno y sintetizan un colágeno más resistente.
Objeto de la invención
El problema que resuelve la presente invención es conseguir un tratamiento farmacológico eficaz para las fibrosis o enfermedades fibróticas, tales como esclerodermia, fibrosis pulmonar, fibrosis renal, ateroesclerosis, fibrosis pancreática,fibrobis cardiaca, fibrosis hepática, fibrosis medular, enfermedad de Dupuytren y, especialmente, la enfermedad de la Peyronie, estando caracterizadas estas patologías por un sobreproducción de los componentes de la membrana extracelular (ECM).
La solución encontrada por los inventores es el uso de Polypodium, como se describe en la reivindicación 1.
Los inventores han encontrado que, los extractos de Polypodium inhiben in vitro de forma dosis dependiente la síntesis de colágeno y fíbronectica en fibroblastos humanos. Esta capacidad reguladora de los extractos de Polypodium se ha mostrado también in vivo, reduciéndose la placa de colágeno en los pacientes que sufren la enfermedad de La Peyronie, fibrosis de la túnica albugínea del pene.
Otro problema resuelto por los extractos de Polypodium es la reducción de la expresión del Factor Transformante de Crecimiento (TGF-β), proteína involucrada en todas las patologías fibróticas, como se describe en la reivindicación 2. Además, esta reducción de la expresión del TGF-β es más significativa in vivo que la producida por el tamoxifeno, fármaco de referencia por su actividad reguladora del TGF- β.
Como es conocido por el experto, la administración de extractos de Polypodium no produce ningún efecto secundario ni toxicológico, evitándose de esta forma los efectos adversos producidos con las terapias anticitocinas.
En un modo particular, otro problema que resuelve la administración de extractos de Polypodium, es obtener una mejora en los parámetros clínicos relacionados con la enfermedad de la Peyronie, es decir, tras la administración por vía oral de los extractos de Polypodium se reduce la placa fibrótica de la túnica albugínea del pene, se reduce el dolor durante el coito, se reduce la incurvatura del pene y se produce una mejora psicológica de los pacientes, como se describe en la reivindicación 3. Los resultados clínicos obtenidos en los pacientes tratados con los extractos de Polypodium son estadísticamente mejores que los pacientes tratados con otros fármacos.
La vía oral, según la reivindicación 9, resuelve los problemas relacionados por la administración por vía intracavernosa: la inyección por vía intracavernosa la debe realizar una persona cualificada y es una vía de administración dolorosa.
En un modo particular, los extractos de Polypodium son obtenibles mediante extracción con disolvente polar, constante dieléctrica mayor de 20. Más concretamente, los extractos de Polypodium son obtenibles mediante extracción con agua, y más concretamente, mediante la extracción con agua de los rizomas del Polypodium leucotomos, según se describe en las reivindicaciones 4,5,6 y 7.
Con el propósito de describir los extractos descritos en la invención paramétricamente, la reivindicación 8 describe las especies químicas presentes dichos extractos.
Descripción detallada de la invención
Los extractos de Polypodium son obtenibles mediante extracción con un disolvente polar, significando disolvente polar un disolvente una constante dieléctrica (€ )mayor a 20. En la tabla siguiente se indican algunos valores de constante dieléctricas de los disolventes a 20°C según Handbook of Chemistry and Physis, 54a Edition.1973
Disolvente Constante dieléctrica (G)
Agua 80
Metanol 32
Etanol 24
Etilenglicol 37
En un modo preferente realización, los extractos de Polypodium son obtenidos por extracción con agua y evaporación del disolvente.
Alternativamente, se pueden utilizar otras operaciones conocidas para el experto en la materia y descritas en el estado de la técnica para la purificación de los extractos de Polypodium, o mejorar el rendimiento de la extracción. Por consiguiente, estas operaciones no aportarían ninguna ventaja adicional al extracto. Entre estas operaciones se pueden citar: optimización de las condiciones del secado de la planta; combinación de diferentes disolventes; desengrasado del material vegetal; adición de agentes conservantes; adición de agentes antimicrobianos; adición de cargas para facilitar la conservación y mejorar la manipulación; extracción mediante fluidos en estado supercrítico; optimización de la época de recolección del material vegetal; purificación mediante cromatografía; purificación mediante adsorción con carbón activo u otros. El material vegetal descrito en la invención fue recolectado en la región de los Montes Mataque en Guatemala, con la consiguiente autorización de las autoridades del país.
La clasificación taxonómica de las especies vegetal depende del autor, por lo tanto, existen diferentes nomenclaturas dependiendo de la clasificación utilizada.
La clasificación taxonómica del material vegetal descrito en la presente invención se detalla a continuación:
Nombre científico: Phlebodium aureum (Linnaeus)
Subgénero: Phlebodium
Género: Polypodium
Familia: Polypodiaceae Además, existen otras sinonimias aceptadas tales como Polypodium aureum (Linnaeus) ó Polypodium leucotomos (Poiret) y otras variedades: Polypodium aerolatum, Phlebodiu aerolatum, Polypodium aureum var. Aerolatum ó Pleopeltis áurea.
Por lo tanto, el término Polypodium se refiere a los heléchos comprendidos en el género Polypodium.
En un modo preferente de la invención, los rizomas de Polypodium leucotomos (Poiret) se secan y se extractan con agua en una relación rizoma/ disolvente (l:10).Con el fin de disminuir la carga bacteriana, el extracto se filtra a través de membrana. El disolvente se evapora a presión reducida hasta obtener una humedad residual del 25% aproximadamente. A los extractos resultantes se le añaden cargas (almidón, lactosa y estearato magnésico) para facilitar la manipulación y evitar la contaminación microbiana. El extracto estabilizado se encapsuía en dosis unitarias equivalentes a 120 mg de extracto acuoso seco.
El análisis cromatográfico de los extractos( Columna rellena de
Octadecilsilano 5 mieras; fase móvil(ácido fosfórico 3%: agua: acetonitrilo/ 25:72:3);detección a 210 nm) muestra la presencia en los extractos de ácido quínico, ácido fumárico, ácido láctico, ácido málico y ácido cítrico. De esta forma, estos compuestos se utilizan como marcadores del extracto para fines analíticos.
Los cultivos de fibroblastos de piel humana son un buen modelo para el estudio del efecto de los fármacos en las enfermedades fibróticas, es decir, las patologías que cursan una sobreproducción de los componentes de la matriz extracelular.
Los extractos de Polypodium han inhibido la síntesis de colágeno de manera dosis dependiente tras la incubación de fibroblastos humanos con 1,10,50,100,500 μg/ml de extracto de Polypodium en presencia de prolina tritiada(3 H-prolina)a 37 ° C durante 24 horas y medida de la prolina triatiada incorporada. Los extractos de Polypodium inhibieron un 40%, para una concentración de 50 μg/ml, la síntesis de colágeno frente a los controles.
Los extractos de Polypodium han inhibido también la síntesis de la fibronectina, tanto los extractos de hoja como de rizoma, in vitro. Después de la incubación de los fibroblastos en presencia de los extractos de Polypodium y medida por inmunoensayo, los extractos de Polypodium inhibieron de forma dosis dependiente( 20 -1000 μg/ml)la síntesis de fibronectina al 40%. A parte de la actividad inhibidora de la síntesis de los componentes de la matriz extracelular (ECM) in vitro; los extractos de Polypodium han mostrado esta actividad in vivo. Después de la administración in vivo a pacientes con la enfermedad de La Peyronie, se ha reducido el tamaño de la placa de colágeno del pene y también se ha reducido la expresión del TFG-β, proteína sobreexpresada en todas las fibrosis.
En un estudio clínico sobre 34 pacientes durante seis meses de tratamiento, los pacientes tratados con el Extracto de Polypodium mostraron una mejor evolución, tanto clínica como psicológica, que los pacientes tratados con Tamoxifeno. En todos los parámetros analizados la mejoría es estadísticamente significativa.
Los resultados obtenidos se detallan a continuación:
Figure imgf000011_0001
Los resultados obtenidos con los extractos de Polypodium son mejores, también, que los resultados descritos por Kadioglu et al Int. J. Impot. Res. 2000 Jun; 12(3): 169-75. Estos autores describen que, sobre una muestra de 60 pacientes afectados por la enfermedad de La Peyronie y tratados durante 10 meses con colchicina, la incurvación del pene mejoró en el 30% de los casos, permaneció igual en el 48% de los casos y empeoró en el 22% de los casos.
Los pacientes del grupo P fueron tratados con 720 mg de extracto de Polypodium obtenido según ha descrito anteriormente cada 8 horas vía oral.
Los pacientes del grupo T fueron tratados con 20 mg de Tamoxifeno cada 24 horas vía oral.
La edad de los pacientes estudiados estaba en el mismo rango.
El tamaño de la placa se determinó por un examen físico y mediante ecografía de pene.
La incurvatura del pene se determinó fotográficamente.
En los pacientes tratados con extractos de Polypodium la producción de
TGF-β decreció un 22% tras el tratamiento respecto a los valores iniciales, mientras que en los pacientes tratados con Tamoxifeno la producción de TGF- β decreció un 5%.
Igualmente se produjo una disminución del 17% de la interleucina 10
(IL-10) del grupo tratado con los extractos de Polypodium frente a una disminución del 79% de la IL-10 en el grupo tratado con tamoxifeno Después del tratamiento, el 67% de los pacientes tratados con los extractos de Polypodium estaba satisfecho con el tratamiento frente al 45% del grupo tratado con Tamoxifeno.
Explicación de las figuras
La figura 1 describe efecto de los extractos de rizoma de Polypodium sobre la inhibición de la síntesis de colágeno. Se indica la media de 4 experimentos paralelos y la desviación estándar.
La figura 2 describe efecto de los extractos de rizoma de Polypodium sobre la inhibición de la síntesis de fibrotecnina. Se indica la media de 3 experimentos paralelos y la desviación estándar.
La figura 3 describe efecto de los extractos de hoja de Polypodium sobre la inhibición de la síntesis de fibrotecnina. Se indica la media de 3 experimentos paralelos y la desviación estándar.
Ejemplo 1. Efecto de los extractos de Polypodium sobre los componentes de la matriz extracelular
Extractos de Polypodium. Los extractos de Polypodium fueron obtenidos por extracción en agua durante 48 horas, filtración por membrana, evaporación del disolvente a presión reducida, redisolución en suero fisiológico y liofilización. Los extractos se disolvieron en PBS y se usaron inmediatamente después de su reconstitución. Medios de cultivo. Los fibroblastos se obtuvieron de material quirúrgico. Las muestras de piel se preincubaron durante 2 horas a 4 ° C en medio de cultivo RPMI 1640 con una cantidad doble (2%) de penicilina/estreptomicina. Posteriormente, los tejidos grasos se eliminaron, la piel se cortó en pequeños trozos y se fijó a placas de cultivo humedecidas con suero fetal de ternero (FCS). Los trozos de piel se incubaron a 37 ° C en atmósfera de dióxido de carbono al 5% en RPMI 1964 con un 10% de FCS y un 1% de penicilina/estreptomicina. El medio se renovó 2 vez veces por semana. Los fibroblastos se tripsinizaron (Tripsina/EDTA: 0.05%/0.02%) y se subcultivizaron para los experimentos. Se usaron solamente las células entre el cuarto al decimoprimer pase(4°-14°).
Síntesis de colágeno. Los fibroblastos de piel humana sana se cultivaron en microplacas para tejidos. Cada pocilio se inoculó con 10.000 células en 100 μl del medio RPMI suplementado con FCS(10%) y L-ácido ascórbico (50 μg/ml). Después de 24 horas de incubación en una atmósfera al 5% en dióxido de carbono el medio de cultivo se remplazó por 100 μl de medio fresco conteniendo las diferentes concentraciones ensayadas (1-1000 μg/ml de extractos de Polypodium) y lμCi H-prolina. Después de una posterior incubación durante 24 horas, se extrajo el colágeno de cada pocilio por la adición de 100 μl de ácido acético frío(lM) con pepsina al 1% y se guardó durante toda la noche a 4 ° C. Todos los pasos siguientes se realizaron a 4 ° C. El contenido de los pocilios se transvasó a tubos de 3 mi de polipropileno a los cuales se les añadió 800 μl de ácido acético(0.5M) que contenía una sal soluble de colágeno de piel de rata que actuaba como diluyente. Los tubos se centrifugaron a 4.000 g durante 20 minutos. Los sobrenadantes se transfirieron a tubos limpios y el precipitado se decartó. El colágeno se precipitó del sobrenadante por la adición de 250 μl de cloruro sódico en ácido acético 0.5M (25%) a cada tubo. Después de 2 horas los tubos se centrifugaron a 4000 g durante 30 minutos y los precipitados se redisolvieron en 300 μl de NaCl 0.15 en Tris-HCl 0.05 M, pH 7.5. El colágeno se precipitó por la adición de 2 mi de cloruro sódico 4.5 M en el mismo tampón. Después de 2 horas, los tubos se centrifugaron a 4000 g durante 30 minutos, se descartaron los sobrenadantes y el colágeno precipitado se lavó con 2 mi de etanol al 2% y se centrífugo a 4000 g durante 30 minutos. Finalmente, cada precipitado se disolvió en 250 μl de ácido acético 0.5 M y se llevó a viales de centelleo que contenían 5-10 mi de una solución de centello. Se midió la radiactividad en un contador de centelleo líquido con estándar externo según el método descrito en Webster and Harvey, Analytical Biochemistry 96,220-224,1979.
Síntesis de Fibrotecnica. Los fibroblastos se cultivaron en microplacas con una densidad inicial de 20.000 células por mililitro con medio RPMI sin FCS. Después de 24 horas a 37 °C y en una atmósfera de dióxido de carbono al 5%, el medio de cultivo se renovó y las células se cultivaron durante 48 horas a 37 °C con las diferentes concentraciones de los extractos (1 -1000 μg/ml). Las células posteriormente se lavaron tres veces con PBS que contenía seroalbúmina bovina (BSA) al 1% y polisorbarto 20 (T een 20). Las células se fijaron con una disolución de metanol/acetona (v/v:l/l) durante 30 minutos, las células se lavaron tres veces, como se ha descrito anteriormente, y se incubaron con un anticuerpo monoclonal de ratón antifibrotecnina (Sigma F- 7384). Después del lavado, las células se incubaron con un anticuerpo monoclonal de cabra antiratón conjugado con fosfatasa alcalina (Sigma A- 2179) durante 1 hora a 37° C. Las células se lavaron de nuevo tres veces y se incubaron con fosfato de p-nitrofenilo (1 mg/mí) durante 15 minutos en la oscuridad. Posteriormente, las microplacas se centrifugaron a 200 g durante 5 minutos y 100 μl del sobrenadante se transferió a una nueva microplaca.Se midió en un lector ELISA a 405 nm.
Resultados
1. Efectos del extracto de rizoma de Polypodium sobre la inhibición de la síntesis del colágeno.
Sobre 4 experimentos paralelos los datos obtenidos son:
Concentración % de incorporación % de inhibición
Control 100% 0%
1 μg/ml 116% -16% 10 μg/ml 84% 16%
50 μg/ml 58% 42%
100 μg/ml 60% 40%
500 μg/ml 53% 47%
103 μg/ml 64% 36%
En la figura 1 se ilustran estos resultados.
2. Efectos del extracto de rizoma de Polypodium en la inhibición de la síntesis de la fibronectina.
Sobre 3 experimentos paralelos los resultados obtenidos fueron: Concentración % de incorporación % de inhibición
Control 100% 0%
1 μg/ml 95% 5%
10 μg/ml 98% 2%
20 μg/ml 95% 5%
50 μg/ml 87% 13%
500 μg/ml 76% 24%
103 μg/ml 60% 40%
En la figura 2 se ilustran estos resultados.
3. Efectos del extracto de hoja de Polypodium en la inhibición de la síntesis de la fibronectina Sobre 3 experimentos paralelos los resultados obtenidos fueron:
Concentración % de incorporación % de inhibición
Control 100% 0% i μg/ml 105% -5%
10 μg/ml 86% 14%
20 μg/ml 85% 15%
50 μg/ml 82% 18%
500 μg/ml 55% 45%
103 μg/ml 40% 60%
En la figura 3 se ilustran estos resultados.

Claims

REIVINDICACIONES
Uso de los extractos de Polypodium para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de las patologías fibróticas, tales como, esclerodermia, fibrosis pulmonar, ateroesclerosis, fibrosis medular, fibrosis hepática, fibrosis pancreática, fibrosis renal, fibrosis cardiaca, enfermedad de Dupuytren o enfermedad de La Peyronie.
2. Uso de los extractos de Polypodium según la reivindicación 1 caracterizado porque disminuyen la expresión del Factor Transformante del Crecimiento beta (TGF-β).
3. Uso de los extractos de Polypodium según la cualquiera de las reivindicaciones 1-2 caracterizado porque, al menos, reducen la incurvatura del pene, reducen el tamaño de placas del pene, reducen el dolor durante el coito o producen una mejora psicológica, en los individuos que padecen la enfermedad de La Peyronie.
Uso de los extractos según cualquiera de las reivindicaciones 1-3 donde la composición farmacéutica comprende un extracto de Polypodium obtenible por extracción con disolvente con una polaridad mayor de 20.
5. Uso de los extractos según la reivindicación 4 caracterizado porque la composición farmacéutica comprende un extracto obtenible por extracción con medios para solubilizar los compuestos solubles en agua.
6. Uso de los extractos según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizados por el extracto es obtenido a partir de los rizomas.
7. Uso los extractos según la reivindicación 6 donde la especie utilizada es Polypodium leucotomos (Poiret).
8. Uso de los extractos según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizados porque los extractos comprenden al menos ácido láctico, ácido fumárico, ácido quínico, ácido cítrico o ácido málico.
12. Uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque la vía de administración es oral.
PCT/ES2003/000272 2002-06-06 2003-06-05 Nuevo uso terapéutico de los extractos de polypodium WO2003103695A1 (es)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2004-7019739A KR20050014848A (ko) 2002-06-06 2003-06-05 미역고사리속 추출물의 신규한 치료적 용도
US10/516,825 US20060093690A1 (en) 2002-06-06 2003-06-05 Novel therapeutic use of polypodium extracts
JP2004510814A JP2005528452A (ja) 2002-06-06 2003-06-05 ポリポディウム抽出物の新規な治療用途
EP03730214A EP1637148A1 (en) 2002-06-06 2003-06-05 Novel therapeutic use of polypodium extracts
CA002488356A CA2488356A1 (en) 2002-06-06 2003-06-05 Novel therapeutic use of polypodium extracts
AU2003240850A AU2003240850A1 (en) 2002-06-06 2003-06-05 Novel therapeutic use of polypodium extracts

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES200201345A ES2197018B1 (es) 2002-06-06 2002-06-06 Nuevo uso terapeutico de los extractos de polypodium.
ESP200201345 2002-06-06

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2003103695A1 true WO2003103695A1 (es) 2003-12-18

Family

ID=29724726

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/ES2003/000272 WO2003103695A1 (es) 2002-06-06 2003-06-05 Nuevo uso terapéutico de los extractos de polypodium

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20060093690A1 (es)
EP (1) EP1637148A1 (es)
JP (1) JP2005528452A (es)
KR (1) KR20050014848A (es)
CN (1) CN1678332A (es)
AU (1) AU2003240850A1 (es)
CA (1) CA2488356A1 (es)
ES (1) ES2197018B1 (es)
WO (1) WO2003103695A1 (es)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100807758B1 (ko) * 2006-04-03 2008-02-28 부경대학교 산학협력단 항염증 활성을 갖는 미역 추출물
US8465413B2 (en) 2010-11-25 2013-06-18 Coloplast A/S Method of treating Peyronie's disease
WO2015200333A1 (en) * 2014-06-25 2015-12-30 Whitten Jeffrey P Polypodium leucotomos extract preparation and use thereof
CN107556398A (zh) * 2017-09-19 2018-01-09 李仲昆 一种水龙骨多糖提取物及其制备方法
KR20200037468A (ko) 2018-09-30 2020-04-09 제토바이오 주식회사 구연산을 통한 미생물 생존내구력 강화와 유산균 및 인산가용화균으로 구성된 복합미생물 대량생산 액상비료 및 그 제조방법

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4338300A (en) * 1981-02-05 1982-07-06 The Regents Of The University Of California Use of purified clostridial collangenase in the treatment of Peyronie's disease
EP0503208A1 (en) * 1991-03-08 1992-09-16 Maracuyama International, S.A. Procedure for obtaining a natural water-soluble extract from the leaves and/or rhizomes of various immunologically active ferns
US5911994A (en) * 1997-04-29 1999-06-15 Heilmittelbetrieb Isernhagen Gmbh Extract from Salvia officinalis for use in the treatment of Dupuytrens's contracture
US6022539A (en) * 1999-06-03 2000-02-08 Advance Biofactures Of Curacao Amelioration of peyronie's disease
BR9801985A (pt) * 1998-04-30 2000-02-08 Cristiano Alberto Ribeiro Sant Composição cremosa aplicada na terapeutica da doença de peyronie.
WO2000007587A1 (en) * 1998-08-03 2000-02-17 Easterling W Jerry Composition and method for treating peyronie's disease and other sub-dermal plaque manifestation disorders

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3395223A (en) * 1965-05-13 1968-07-30 Carter Wallace Fern extract for treating gastric ulcers
US4206222A (en) * 1977-06-23 1980-06-03 Societe Civile Particuliere De Brevets Suffren Method for preparing a substance having properties against collagen diseases and products obtained
EP0680762B1 (en) * 1994-05-06 2002-08-14 Especialidades Farmaceuticas Centrum, S.A. Pharmaceutical composition comprising fern extract(s) for the treatment of neurodegenerative diseases.
US6228366B1 (en) * 1998-07-29 2001-05-08 Helsint, S.A.L. Water-soluble fractions of Phlebodium decumanum and its use as nutritional supplement in AIDS and cancer patients

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4338300A (en) * 1981-02-05 1982-07-06 The Regents Of The University Of California Use of purified clostridial collangenase in the treatment of Peyronie's disease
EP0503208A1 (en) * 1991-03-08 1992-09-16 Maracuyama International, S.A. Procedure for obtaining a natural water-soluble extract from the leaves and/or rhizomes of various immunologically active ferns
US5911994A (en) * 1997-04-29 1999-06-15 Heilmittelbetrieb Isernhagen Gmbh Extract from Salvia officinalis for use in the treatment of Dupuytrens's contracture
BR9801985A (pt) * 1998-04-30 2000-02-08 Cristiano Alberto Ribeiro Sant Composição cremosa aplicada na terapeutica da doença de peyronie.
WO2000007587A1 (en) * 1998-08-03 2000-02-17 Easterling W Jerry Composition and method for treating peyronie's disease and other sub-dermal plaque manifestation disorders
US6022539A (en) * 1999-06-03 2000-02-08 Advance Biofactures Of Curacao Amelioration of peyronie's disease

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CORRALES PADILLA H. ET AL: "A new agent (hydrophilic fraction of polypodium leucotomos) for management of psoriasis", INTERNATIONAL JOURNAL OF DERMATOLOGY, vol. 13, 1974, pages 276 - 282, XP002974514 *
TUOMINEN M. ET AL: "Effects of calaguala and an active principle, adenosine, on platelet activating factor", PLANTA MEDICA, vol. 58, 1992, pages 306 - 310, XP009004817 *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20050014848A (ko) 2005-02-07
ES2197018B1 (es) 2005-10-01
AU2003240850A1 (en) 2003-12-22
JP2005528452A (ja) 2005-09-22
CA2488356A1 (en) 2003-12-18
CN1678332A (zh) 2005-10-05
ES2197018A1 (es) 2003-12-16
US20060093690A1 (en) 2006-05-04
EP1637148A1 (en) 2006-03-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6855337B1 (en) Bear derived isolate and method
WO2010134756A2 (ko) 녹차 추출물을 함유하는 조성물
Gao et al. Medicinal and edible plant Allium macrostemon Bunge for the treatment of testosterone-induced androgenetic alopecia in mice
WO2003103695A1 (es) Nuevo uso terapéutico de los extractos de polypodium
Zhang et al. Leech extract alleviates idiopathic pulmonary fibrosis by TGF-β1/Smad3 signaling pathway
CN113209154B (zh) 鸡骨香提取物在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用
US20240408162A1 (en) Use of Extract from Morus alba L. in the Preparation of a Medicament for Preventing and/or Treating a Hepatobiliary Disease
ES2856498T3 (es) Extracto de Daphne laureola y su uso para el tratamiento de dermopatías
KR100394147B1 (ko) 구성약제의 만성골다공증 및 류마티스 관절염 치료를 위한물추출물 및 추출방법
Lee et al. Clematis mandshurica protected to apoptosis of rat chondrocytes
Zhou et al. Inhibitory effects of amines from Citrus reticulata on bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats
US20110262567A1 (en) Composition for treating gout, containing angelica gigas extract having a xanthine oxidase-inhibiting effect and an inflammation-inducing enzyme-inhibiting effect
JPH01110630A (ja) 不妊症療法剤
US20250127844A1 (en) Peptide having hair loss prevention or hair growth promotion activity and use thereof
BR112020002216B1 (pt) Uma composição sinérgica como um promotor de autofagia
Torki et al. Solubility of calcium oxalate and calcium phosphate crystallization in the presence of crude extract and fractions from Kelussia odoratissima Mozaff
TW576748B (en) An agent for inhibiting the stimulation of vessel permeability of blood brain barrier
KR100463263B1 (ko) 골길이 성장 촉진 효과를 가지는 가시오가피 추출물 및 이를 함유하는 약학적 제제
CN113694109A (zh) 一种复方黄柏药物制剂、制备方法及应用
CN112773898A (zh) 磷酸二酯酶5抑制剂在制备抗纤维化疾病药物中的应用
Lee et al. Effects of Osteo-F, a new herbal formula, on osteoporosis via up-regulation of Runx2 and Osterix
KR0156623B1 (ko) 상피세포 손상 치료용 조성물
AU2019417521A1 (en) Agent for inhibiting reduction in decomposition of denatured elastin, agent for maintaining normal elastin fibers, agent for inhibiting formation of elastin-elafine composite, and screening method for substance having elastin-elafine composite formation inhibitory effect
CN113797314B (zh) Cst多肽在制备股骨头坏死治疗药物中的应用
CN115245533B (zh) 南山花根提取物在肺纤维化治疗的应用

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NI NO NZ OM PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): GH GM KE LS MW MZ SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IT LU MC NL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2488356

Country of ref document: CA

Ref document number: 1020047019739

Country of ref document: KR

Ref document number: 2003240850

Country of ref document: AU

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2004510814

Country of ref document: JP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2003730214

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 20038186926

Country of ref document: CN

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1020047019739

Country of ref document: KR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2006093690

Country of ref document: US

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 10516825

Country of ref document: US

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2003730214

Country of ref document: EP

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 10516825

Country of ref document: US

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Ref document number: 2003730214

Country of ref document: EP