WO2003082818A1 - Composes alcaloides, formulations pharmaceutiques analgesiques et preparations associees - Google Patents

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WO2003082818A1
WO2003082818A1 PCT/CN2002/000916 CN0200916W WO03082818A1 WO 2003082818 A1 WO2003082818 A1 WO 2003082818A1 CN 0200916 W CN0200916 W CN 0200916W WO 03082818 A1 WO03082818 A1 WO 03082818A1
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acetone
analgesic
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PCT/CN2002/000916
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Shingshing Tong
Shouquan Gao
Zhaoming Xie
Yongmin Li
Shaoxiong Zhu
Xiaohong Wang
Zhengping Tang
Ming Yang
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Shingshing Tong
Shouquan Gao
Zhaoming Xie
Yongmin Li
Shaoxiong Zhu
Xiaohong Wang
Zhengping Tang
Ming Yang
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/34—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by amino groups
    • C07C233/35—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by amino groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom
    • C07C233/36—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by amino groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom having the carbon atom of the carboxamide group bound to a hydrogen atom or to a carbon atom of an acyclic saturated carbon skeleton
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
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    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/68—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D211/72—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/74—Oxygen atoms

Definitions

  • Alkaloid compounds, analgesics and preparation method thereof are Alkaloid compounds, analgesics and preparation method thereof
  • the present invention relates to alkaloids, in particular small molecular weight alkaloids and methods for preparing the same.
  • the invention also relates to analgesics, in particular to analgesics containing alkaloids provided by the invention.
  • the invention also relates to a preparation method of the analgesic medicine, which is a preparation method using Anluo small leather umbrella as a raw material.
  • BACKGROUND Humans have been plagued by diseases. In many cases, in addition to the loss of physical function and even life, the disease also causes physical pain, such as advanced cancer and trauma. To alleviate the pain of patients, many analgesics have been developed. Drugs with better analgesic effects are morphine and duhentine. This is currently the most effective analgesic in clinical applications. However, the biggest disadvantage of this drug is that it cannot be used for a long time, otherwise, it will cause dependence or addiction. In addition to this type of analgesics, Chinese folks use Anluocortis mycelium to treat bruises and fracture pain.
  • the extraction method of Fang Shengding and others was as follows: the dried mycelium and the culture medium were soaked and washed with cold water, dried, ground and extracted with ethanol under reflux, the alcohol solution was concentrated under reduced pressure, and the precipitate was filtered. The solution was concentrated under reduced pressure to a syrup, and subjected to silica gel column chromatography, eluting with increasing methanol in dichloromethane. From alfalfa divided in dichloromethane-methanol 96: 4 and p-hydroxycinnamic acid in 95: 5.
  • the extraction method of Zhu Shaoxiong and others was: extracting Anluolifera extract with ethyl acetate, filtering, and concentrating. 5% sodium carbonate solution was washed twice, and then washed with water until neutral and dry. The solvent was recovered to obtain an extract.
  • the compound I provided by the present invention is: the molecular formula is C 9 H 17 N0.
  • Another compound provided by the present invention is: the molecular formula is C 6 H 12 N 2 0 2
  • the present invention provides a method for extracting and preparing the raw material of Anluo cortex, which directly obtains two kinds of compounds.
  • the specific method is:
  • the present invention provides an analgesic drug whose active ingredient is Compound I.
  • the content of compound I is greater than 25%.
  • the present invention also provides an analgesic drug whose active ingredient is Compound II.
  • the content of alkaloids is greater than 25%.
  • the analgesic medicament provided by the present invention is prepared from Anluo cortex as raw material.
  • the preferred preparation method is:
  • analgesics are obtained by sieving and granulating.
  • the total alkaloid content is required to be above 51%.
  • the experiment proves that the analgesics obtained by the above method have good analgesic effect. It may be both analgesic and peripheral analgesic drugs, while Du Lengding is an obvious central analgesic drug.
  • the pharmacodynamic test proves that the effective analgesic dose of the effective part of the total alkaloid is 640mg / day / person. It is equivalent to 160g of medicine (wheat bran, husk solid fat alcohol culture) or about 53g of dried mycelium. More importantly: The analgesics provided by the present invention do not cause dependence.
  • FIG. 1 is a compound I'H-NMR chart.
  • FIG. 2 is a C-NMR chart of Compound I.
  • FIG. 1 is a compound I'H-NMR chart.
  • FIG. 2 is a C-NMR chart of Compound I.
  • Figure 3 is a compound I'H ⁇ HCOSY diagram.
  • Figure 4 shows the HMQC chart for Compound I.
  • Figure 5 is the HMBC chart of Compound I.
  • Figure 6 is a FAB-MS chart of Compound I.
  • Figure 7 shows the DEPT spectrum of Compound I.
  • Figure 8 UV absorption spectrum of Compound II;
  • Figure 9 IR absorption spectrum of Compound II.
  • Figure 10 Compound II mass spectrum;
  • silica gel H diatomite (2: 1)
  • silica gel H column silica gel H: diatomite (2: 1)
  • Acetone wet method on the column add acetone to elute, collect the acetone eluent to a very light color (less amount of extract), recover acetone to obtain a thick paste (about 0.5 kg, relative density 1.35-1 (38, 60 ° C thermal measurement), washed with ethyl acetate, filtered with suction, recrystallized insoluble matter with ethyl acetate 2-3 times, filtered with suction, and dried below 70 ° C to obtain about 160g of dry alkaloid crystals. .
  • H of ⁇ 1.72 is associated with C of ⁇ 27 ⁇ 93, which is confirmed as H and C of CH 3 ;
  • H of ⁇ 2.77 is associated with C of ⁇ 50.61, which is confirmed as-CH 2 - ⁇ and C 'H- 13 C HMBC (Remote Correlation) spectrum
  • H of ⁇ .72 is associated with C of 50.61
  • H of ⁇ 1.72 is associated with C of ⁇ 60.41
  • ⁇ of ⁇ 2.77 is ⁇ 27.93
  • the C of ⁇ 2.77 is associated with the C of ⁇ 60.41
  • the ⁇ of 2.77 is associated with the C of 203.18.
  • the compound I of the present invention has a good analgesic effect when used for analgesics. It may be an analgesic with both external and central analgesia. And does not create dependencies.
  • 3 ⁇ 4 Spectral identification is a low-molecular alkaloid compound with a clearly symmetrical structure in the molecule.
  • the test results are as follows: (In this application, compounds I and II are also called alkaloids I and alkaloids II.)
  • Solubility Compound II is easily soluble in chloroform, ethanol, and methanol, soluble in acetone, and slightly soluble in ethyl acetate.
  • Compound ⁇ Apparatus: GC-17A, QP-5000 GC / MS, EL source bombardment voltage 70ev, quadrupole detection, molecular weight range 40-500, multiplier voltage l.lkv, injection rod heating program: true Room temperature 80 ° Cmin 300 °
  • Extracted ingredients of Anlucorium acuminata mycelium A, compound I, B, compound II.
  • various products were used at 1, 2, and 4 times the intended clinical dose as low, medium, and high doses.
  • mice BALB / C line, ICR clean mice, weighing 18-20g. Provided by Shanghai Xipuer-Becky Laboratory Animal Co., Ltd.
  • Apparatus BJ—084J hot plate analgesic instrument, produced by Jiangsu Baishi Medical Device Factory.
  • a low dose group 10 0. 1 15. 3 ⁇ 3.6
  • a high dose group 10 0. 4 9. 6 ⁇ 2. 7 **
  • Blank control group 10 NS 28.0 ⁇ 5. 8
  • Example 2 Preparation method of analgesics: 40 kg of Anluo cortex medicinal material was pulverized into the coarsest powder, and ethanol was added to reflux 3 times, and 8 times the amount of each addition was extracted for 2 hours. The filtrates were combined, and ethanol was recovered under reduced pressure to obtain about 6kg (relative density about 1.20—1.25, thermal measurement at 60 ° C), add 10 times the amount of water to dilute, add concentrated ammonia water to adjust pH 8-9, add petroleum ether 5 times, recover petroleum ether, add chloroform 5 times, recover chloroform, get Thick paste about 1kg (relative density 1.35 -1.38, 6 (TC thermal measurement), add about 5kg silica gel H: diatomaceous earth (2: 1), mix well, dry, and put on a silica gel H column [silica gel H: diatomaceous earth (2 : 1), Acetone wet method on column], collect the acetone eluent to a very light color (less amount of extract), and recover ace
  • the capsule raw material provided in Example 1 of the present invention has a specification of 0.16 g (crystal) per capsule.
  • One of the positive control drugs Du Lengding, produced by Hubei Jingmen Pharmaceutical Factory, batch number: 990508
  • mice BALB / C, iCR series clean-grade mice, weighing 18-20g, SD series clean-grade rats, provided by Shanghai Xipuer-Bikai Experimental Animal Co., Ltd.
  • the present invention provides capsules I 10 0. 025 34.5 ⁇ 14. 0 5. 0
  • mice in the capsule III, IV, and V dose groups provided by the present invention has a significant difference, and the effect is obvious in a dose-response relationship, which can significantly inhibit the writhing of mice caused by acetic acid.
  • 1g / kg ⁇ Response indicating that the capsule provided by the present invention has a better analgesic effect, and its writhing response in mice, indicates that the capsule provided by the present invention has a good analgesic effect, and its effective analgesic dose in mice is 0.1 g / kg or so.
  • the present invention provides capsules I 10 0.025 37. 6 ⁇ 6. 9
  • mice The effective dose of the mice was 0.10 / Kg, and the analgesic effects of the mice were measured at 0.5, 1, 1, 3, 4, 5, and 6 hours after administration.
  • mice Ninety BALB / C mice, half male and half female, were randomly divided into 9 groups, namely the blank control group, Du Lunding group, 0.5 hour group, 1 hour group, 2 hour group, 3 hour group, 4 hour group, In the 5 hour group, the 6 hour group, except for the Dolentine group, the other groups were administered by gavage according to the dose in Table 5.
  • the Dolentine group was injected subcutaneously. Leng Ding, the first 3 groups were 30 minutes after administration, and the last 5 groups were 1, 2, 3, 4, 5, 6 hours after administration: ,,,,,,,,
  • Blank control group 10 NS 27. 6 ⁇ 7. 8
  • the capsules provided by the present invention have significant differences in the number of twisted mice in 0.5 hours, 1 hour, 2 hours, 3 hours, and 4 hours, and have a significant time-dependent relationship.
  • the writhing response in mice caused by acetic acid indicates that the capsules provided by the present invention have a good analgesic effect within 0.5-4 hours after drug administration.
  • mice 90 female BALB / C-type female mice that meet the requirements (with an average pain threshold within 30 s) were randomly divided into 9 groups, which were the blank control group, Du Lunding group, 0.5 hour group, 1 hour group, 2 hour group, 3 hour group, 4 hour group, 5 hour group, 6 hour group. Except for the Dolentine group, the other groups were administered by gavage according to the doses in Table 6. The Dolentine group was subcutaneously injected with Dolentine. The first 3 groups were 30 minutes after the administration, and the last 5 groups were 1, 1, 3, 3 after the administration. At 4, 5, and 6 hours, the mice in each group were placed in a hot plate pain meter, and the hot plate temperature was 55.
  • Du Lianding group 10 0. 02 55. 9 ⁇ 2. 4 ** 0.10 31 ⁇ 5 ⁇ 7.2 **
  • the capsules provided by the present invention were 0.5 hours, 1 hour, 2 hours,
  • mice There is a significant difference in the average pain threshold of mice at 3 hours and 4 hours, and it has a significant time-dependent relationship, which can significantly improve the heat-resistant pain ability of mice, indicating that the capsules provided by the present invention have the effect within 0.5-4 hours after administration Better analgesic effect.
  • Blank control group 10 NS 4.3 ⁇ 1.9 25.2 ⁇ 6.9
  • the present invention provides a capsule low-dose group of 10 0.10 7. 5 ⁇ 4 .3 * 30.5 ⁇ 11.3
  • the present invention provides capsules in a dosage group of 10 0.20 8.2 ⁇ 3.7 ** 3 8 ⁇ 1 2 .0 *
  • the present invention provides a capsule high-dose group 10 0.40 10. 6 ⁇ 5.8 ** 35.3 soil 17.8 *
  • the present invention provides significantly lower pain thresholds for right foot plantar (inflammation midge) in rats with lower, medium and high capsules, and the increase range is more than 70%; ) Only the middle and high dose pain thresholds were significantly increased, and the increase was only 30%, indicating that the capsule provided by the present invention may be a peripheral analgesic and central analgesic drug, and Du Lengding is an obvious central analgesic drug.
  • the analgesic capsules provided by the present invention are formulated into a suspension of 13.3 mg / ml and 26.7 mg / ml of Mephicam (Morphine Hydrochloride Controlled Release Tablets) Southwest Pharmaceutical Co., Ltd., batch number 980801, and 2 . 9 mg / ml, 6. 67 mg / ml.
  • Mephicam Mephicam
  • mice BALB / C clean-grade mice, half male and half male, weighing 20-24g. SD rats, half male and half male, weighing 200-220g, were provided by Shanghai Xipuer-Bikai Company.
  • 2.1.1.1 Method Take 40 mice, half male and half female, divided into 4 groups, and give them distilled water, morphine hydrochloride, and high and low dose drugs. Dosages are divided into four doses per day on the first and third days. On the fourth and seventh days, intragastric administration is performed once a day for 7 consecutive days, starting from the 7th day, every 4 days within 72 hours. Measure the weight once an hour, record the changes in body weight, and watch the animals' spirit, activity, diet, etc., and record the changes of the animals after stopping the drug. See table 8
  • mice Take 40 mice, half male and half male, randomly divided into 4 groups of blank, morphine, small and high-dose drug groups according to body weight, the latter three groups were administered orally at 15 mg / kg, twice a day, and the first 4 morphine groups
  • the doses of the drug group and the drug group were 60 mg / kg, 180 mg / kg, 332 mg / kg, and 665 mg / kg.
  • the blank control group was given the same volume of normal saline for 13 consecutive days.
  • mice in the morphine group had significant differences in the number of jumps, diarrhea, and weight loss, but there were no significant differences in the analgesic ⁇ capsules in the large and low dose groups. See Table 10.
  • Blank control group-10 0.6 ⁇ 1.2 0.06 ⁇ 0.18 0
  • Blank control group 1 10 0.2 ⁇ 0.45 0.48 ⁇ 0.24 0.31 ⁇ 0 ⁇ 18 0
  • Low-dose group 300 10 0.0 ⁇ 0.0 * 0.06 ⁇ 0.86 * 0 ⁇ 12 ⁇ 0 ⁇ 20 * 0

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Description

生物碱类化合物、 镇痛药物及其制备方法
技术领域： 本发明涉及生物碱类化合物， 特别是小分子量生物碱及其制备 方法。 本发明还涉及镇痛药物， 具体地是指含有本发明提供的生物碱的镇痛药 物。 本发明还涉及该镇痛药物的制备方法， 该方法是以安络小皮伞为原料的制 备方法。
背景技术： 人类一直受到疾病的困扰。 而在许多情况下， 疾病除了造成人 体机能甚至生命的丧失外， 还造成人肉体的痛苦， 例如： 晚期癌症， 外伤等。 为了减轻病人的痛苦， 人们已经研制了许多镇痛药物。 具有较好镇痛效果的药 物有吗啡、 杜冷丁。 这是目前临床应用中最有效的镇痛药物。 但是， 该药物的 最大缺点是不能长期使用， 否则， 会产生依赖性或成瘾性。 在这类镇痛药物之 外， 我国民间用安络小皮伞菌丝体来治疗跌打刀伤、 骨折疼痛。 上海中药制药 厂将野生小皮伞菌的干菌丝体连同基质的粗提取物制成 "安络解痛片"。这些都 是粗制剂， 技术含量低， 成分复杂。 中国卫生部部颁药品标准收载了安络小皮 伞的四种制剂： 安络痛片、 安络痛胶囊、 安络痛酒和安络痛酊， 均采用乙醇提 取工艺。 后有文献报道安络小皮伞中的有效成分， 如方圣鼎等人提取的镇痛有 效成分为对羟基肉桂酸（《中草药》 1989年第 20卷第 10期）； 朱绍雄等人提取 的镇痛有效成分为三十烷酸和麦角甾醇 （《中草药》 1989年第 19卷第 8期）。
方圣鼎等人的提取方法是： 将干菌丝体连同培养基质加冷水浸泡洗涤， 烘 干、 磨粉后用乙醇回流提取， 醇溶液减压浓缩， 滤取析出物。 溶液再减压浓缩 的糖浆状物， 经硅胶柱层析， 二氯甲烷中递增甲醇洗脱。 从二氯甲烷 -甲醇 96: 4中分的苜蓿素， 95 : 5中分得对羟基肉桂酸。
朱绍雄等人提取方法是： 将安络小皮伞醇浸膏用乙酸乙酯提取， 过滤， 浓 缩。 5 %碳酸钠溶液洗涤两次， 再用水洗至中性、 干燥， 回收溶媒得浸膏， 经 G 柱层析， 石油醚 -乙酸乙酯梯度洗脱依次得 2, 3, 5， 6-四氯 -1， 4-二甲氧基苯 (石油醚重结晶）， 三十烷酸（无水结晶）， β-谷甾醇（先硅胶 G旋转薄层分离， 正已垸 -乙酸乙酯洗脱， 浓缩得结晶）， 5, 8-过氧麦角甾醇（乙酸乙酯重结晶）。
发明内容：
虽然， 现有技术中已经有不少从安络小皮伞中提取镇痛有效成分的报道， 但本申请人进一步在其中找到了新的镇痛有效成分， 并且不但具有好的镇痛效 果， 而且不产生依赖性。 这也是本发明要解决的技术问题。
本发明提供化合物 I是： 分子式为 C9H17N0。
Figure imgf000003_0001
本发明提供的另一种化合物是： 分子式为 C6H12N202
0 0
II //
CH3— C - NH - CH2— CH2― NH― C― CH3
上述两种化合物均可由化学方法合成。 但本发明提供了一种以安络小皮伞 原料的提取制备方法， 直接得到两种化合物。 其具体方法是：
(1) 以安络小皮伞为原料用乙醇提取； （2)回收乙醇后得清膏，用水稀释 并调 PH8-9, 脱脂后用氯仿萃取； （3) 回收氯仿后得绸膏， 上硅胶 H柱用 丙酮洗脱； （4) 回收丙酮后得绸膏， 用醋酸乙酯-丙酮洗脱， 抽滤得结晶； 将得到的结晶上硅胶 H柱， 用丙酮洗脱， 第 1出峰的为生物碱 I , 第 2出 峰的为生物碱 II， 再用醋酸乙酯 -丙酮（2 : 1 )重结晶， 进一步纯化分离得 到生物碱 I 、 II。
本申请人通过实验分析了化合物（ I )、 （Π )的化学结构。 证明该化合 物的结构为上述所示的结构。 详细分析和实验数据见后面所附的结构分析 部分。 同时本申请人也通过实验证明， 此两个化合物均具有良好的镇痛作 用。 因此可用于制备镇痛药物。
因此本发明提供一种镇痛药物， 其有效成分是化合物 I 。
优选化合物 I的含量大于 25 %。
本发明还提供一种镇痛药物， 其有效成分是化合物 II。
优选生物碱 Π的含量大于 25 %。
本发明提供的镇痛药物是以安络小皮伞为原料制备的。
优选的制备方法是：
( 1 ) 以安络小皮伞为原料用乙醇提取； （2 )回收乙醇后得清膏，用水稀释 并调 PH为 8 - 9 , 脱脂后用氯仿萃取； （3 ) 回收氯仿后得綢膏， 上硅胶 H 柱用丙酮洗脱； （4 ) 回收丙酮后得绸膏， 用醋酸乙酯洗涤， 抽滤得结晶。 由上述方法得到结晶中除含有本发明指明的化合物 I 、 II 之外，还含有三 萜类化合物。 但化合物 I 、 Π的总量超过 51%, 其中单一的主要有效成分占总 生物碱量的 25%以上。
将上述总生物碱结晶与淀粉、 糊精混均后， 经过筛制粒即得镇痛药物。 要 求总生物碱的含量在 51%以上。
实验证明上述方法得到的镇痛药物具有良好的镇痛效果。 其可能为外周镇 痛与中枢镇痛药物兼有的镇痛药物， 杜冷丁则为明显的中枢镇痛药物。
经药效学试验证明， 总生物碱有效部位的镇痛有效剂量为 640mg/日 /人， 相当于曰服药量 160g (麦麸、 谷壳固体发醇培养物）或相当于干菌丝体约 53g。 更重要的是： 本发明提供的镇痛药物不产生依赖性。
附图说明
图 1为化合物 I 'H-NMR图。 图 2为化合物 I "C-NMR图。
图 3为化合物 I 'H^HCOSY图。 图 4为化合物 I HMQC图。
图 5为化合物 I HMBC图。 图 6为化合物 I FAB-MS图。
图 7为化合物 I DEPT谱图。 图 8化合物 II紫外吸收光谱图； 图 9化合物 II红外吸收光谱图。 图 10化合物 II质谱图；
图 11、 12化合物 II核磁共振谱图。
实施例 1 : 化合物 I和化合物 Π的制备方法
将安络小皮伞药材 40kg粉碎成最粗粉，加乙醇回流 3次，每次加 8倍量提 取 2小时， 滤液合并， 减压回收乙醇， 得约 6kg (相对密度约 1. 20— 1. 25， 60 °(：热测），加 10倍量水稀释， 加浓氨水调 PH8— 9 ,加石油醚 5次， 回收石油醚， 加氯仿 5次， 回收氯仿， 得稠膏约 lkg (相对密度 1. 35— 1. 38, 60°C热测）加约 5kg硅胶 H: 硅藻土（2: 1 )拌匀， 干燥， 上硅胶 H柱 [硅胶 H: 硅藻土（2: 1 )， 丙酮湿法上柱]， 加丙酮洗脱， 收集丙酮洗脱液至颜色极浅 （浸膏量较少）， 回 收丙酮， 得稠膏 (约 0. 5kg，相对密度 1. 35— 1. 38， 60°C热测）， 加醋酸乙酯洗 涤， 抽滤， 不溶物加醋酸乙酯重结晶 2— 3次， 抽滤， 70°C以下干燥， 得总生物 碱结晶干品约 160g。
再将得到的结晶上硅胶 H柱， 用丙酮洗脱， 分别收集第 1出峰和第 2出峰 的洗脱液， 用醋酸乙酯 -丙酮（2: 1 )混和溶液重结晶， 纯化分离得到化合物 I 约 30g， 化合物 II约为 18 g。 纯度可达 98%以上。
化合物 I结构的鉴定：
Figure imgf000006_0001
H
化合物 I
化合物 I经军事医学科学院 毒物药物研究所 天然产化学研究室鉴定分 析结果如下：
化合物 I经正离子 FAB确证， 其分子式为 C9H17N0， 分子量为 155
UV λ MAX202.3nm, IR ( Br) 3532 (N-H) , 1726, 1705 (C=0) , 2997-2465 (脂肪 C- H)。 MS (m/z, 正离子 FAB) 156 (M+l ), 58 (M-98, -C ( CH3 ) 2NH )。 !H-画 R (CDC13) δ: 1.72 ( 12H, S, (CH3) 4)， 2.77(4H, S, ( CH2 ) 2) 9.81 ( 1H， S， NH )。 13H-NMR (CDCI3) δ： 27.93 ( CH3 ) 4, 50.61 ( CH2 ) 2, 60.41 ( C )， 203.18 (C=0) 'H-HCOSY谱表明 CH2与 CH3不相关联。 'Η- 13C HMQC (相关谱） 中， δ 1.72 的 H 与 δ27· 93的 C相关联，确证为 CH3的 H和 C; δ 2.77的 H与 δ 50.61的 C相关 联， 确证为 - CH2-的 Η和 C 'H-13C HMBC (远程相关）谱中 δΐ.72的 H与 50.61 的 C相关联， δ 1.72的 H与 δ60.41的 C相关联， δ 2.77的 Η与 δ 27.93的 C 相关联， δ2.77的 Η与 δ60.41的 C相关联， δ 2.77的 Η与 δ 203.18的 C相关 联。 根据以上数据， 确证化合物 I的结构如式 Α。 见表 1及附图 1-7 表 1 400MHZ测定化合物 I nH-NMR和 "H-NMR数据
Figure imgf000007_0001
本发明的化合物 I用于镇痛药物具有良好的镇痛效果。其可能为外同镇痛与 中枢镇痛兼有的镇痛药物。 且不产生依赖性。
化合物 Π的结构的鉴定：
上述得到的化合物 （ II )进一步纯化后， 经湖南师范大学和湖南大学四大
¾谱鉴定， 为低分子生物碱类化合物， 分子中具有明显的对称结构， 测定结果 to下： （本申请中， 化合物 I和 II又称为生物碱 I和生物碱 II。）
(1) 溶解度： 化合物 II易溶于氯仿、 乙醇、 甲醇， 溶于丙酮， 微溶于醋 酸乙酯。
(2) 熔点： 化合物 II： 82-84°C
(3) UV图谱： 化合物 II： 仪器： 曰本岛津 ΡΕ-λ 16型紫外可见分光光度 计， 扫描测定。 max MeM=203.3mn测定条件结果见图 8。
(4) IR图谱： 化合物 II： 仪器： IRv ^cnT1): 3295 (NH)、 3090-2860
(脂肪 CH)， 1653, 1561 ( c=0 ), 1445, 1366, 1289， 1236 ( CH2 )0 测定条件及结果见图 9。
(5) 质谱 (MS):
化合物 Π： 仪器： GC-17A, QP-5000气质联用仪， EL源轰击电压 70ev, 四 级杆检测， 分子量范围 40— 500, 倍增器电压 l.lkv, 进样杆升温程序： 真 空下室温 80°Cmin 300°
MSm/z: 143(m+), 85(m-58 ), 73 (m+-70 ), 60 ( m+-83 ) , 43 ( m-100 ), 30(100%)。 测定条件及结果见图 10。
( 6 )核磁共振谱：
化合物 Π: 仪器： AC-80MHZ核磁共振仪， 瑞士布鲁克公司， H-NMR(CDC13), 6PPm: 1.78 ( CH3- ), 3.06 ( -CH— ), 7.77 ( NH )0 13C-NMR δ PP m: 22.59 (CH3— )， 38.60 (-CH-), 169.40 (-C―)。 测定条件及结果见图 11、 12。
(7)元素分析：
化合物 Π： 仪器： PE-2400型， C、 H、 N元素分析仪， 美国 PE公司 测定结果： C: 49.45% H: 10.59% N: 20.20%
C: 49.65% H: 10.68% N: 20.11%
本发明提供的化合物 I、 Π镇痛效果实验
一、 实验材料
1、 药物与试剂
安络小皮伞菌丝体的提取成份： A、 化合物 I , B、 化合物 II。 实验时各种 产物釆用拟用临床剂量的 1、 2、 4倍作为低、 中、 高剂量。
阳性对照药之一， 杜冷丁， 沈阳制药一厂生产， 批号： 980908。
阳性对照药之二， 阿斯匹林， 湖南制药厂生产， 批号： 990704-7。
2、 动物： BALB/C系、 ICR清洁级小鼠， 体重 18— 20g。 上海西普尔-必凯实 验动物有限公司提供。
3、 仪器: BJ— 084J热板镇痛仪， 江苏白石医疗器械厂生产。
二、 方法与结构
1、 对醋酸引起扭体反应的影响 (1)方法：取 BALB/C小鼠 90只， 雌雄各半， 随机分成 9组， 除杜冷丁组外, 其余各组按表 1剂量瑄胃给药 1小时，杜冷丁组皮下注射杜冷丁 20分后，各鼠 腹腔注射 0. 7%冰醋酸 0. lm/ l Og , 记录 5— 15分内的扭体次数。
表 1 化合物 I 、 II对小鼠扭体反应的影响 （ X ^SD )
组别 动物数 剂量 扭体次数
(只） ( 8/kg )
空白对照组 10 NS 22. 6 ± 7. 4
杜冷丁组 10 0. 02 0. 8 ± 0. 8**
阿斯匹林组 10 0. 20 17. 2 ± 4. 2*
A低剂量组 10 0. 1 15. 3 ± 3. 6
A中剂量组 10 0. 2 12. 7 ± 3. 8**
A高剂量组 10 0. 4 9. 6 ± 2. 7**
B低剂量组 10 0. 2 14. 6 ± 3. 1*
B中剂量组 10 0. 4 11. 5 ± 2. 7**
B高剂量组 10 0. 8 10. 4 ± 2. 4**
与空白对照组比较， *P<0. 05 , **P<0. 01
(2)结果:表 1可见， 与空白对照组比较， A、 B、 低、 中、 高组小鼠扭体次 数有显著性差异， 且高、 中、 低剂量成较明显的量效关系， 能明显抑制由醋酸 引起的小鼠扭体反应，表明生物碱 I和生物碱 Π结晶均具有极明显的镇痛作用， 杜冷丁具有极明显的镇痛作用。
2、 鼠热板痛阈值的影响
(1)方法：取符合要求 （平均痛阈值在 30s ) 的 BALB/C系雄性小鼠 90只， 随机分成 9组， 除杜冷丁组外， 其余各组按表 2剂量灌胃药 1小时， 杜冷丁组 皮下注射杜冷丁 20分后， 将小鼠放入热板测痛仪， 热板温度为 55 ± 0. 5 °C，自 小鼠投入热板至出现舔后足的时间为该鼠的痛阈值， 隔 30分后再测一次， 共 3 次， 求出平均痛阈值进行统计。
表 2 化合物 I 、 II对小鼠热板痛阀值的影响 （Γ± SD )
组别 动物数 剂量 平均痛阈值
(只） (g/Kg) (s)
空白对照组 10 NS 28. 0 ± 5. 8
杜冷丁组 10 0. 02 58. 4 ± 3. 6**
阿斯匹林组 10 0. 20 38. 4 ± 5. 2**
Α低剂量组 10 0. 1 36. 9 ± 2. 8* A中剂量组 10 0.2 42.2 ± 3.7**
A高剂量组 10 0.4 44.6 ± 5.4**
B低剂鲞组 10 0.2 44.2 ± 3.1**
B中剂量组 10 0.4 46.5 ±4.1**
B高剂量组 10 0.8 49.1 ± 4.8**
与空白对照组比较， ： *P<0.05, * *P<0.01
(2)结果：与空白对照组比较， A、 B低、 中、 高剂量组平均痛阈值有显著 性差异， 表明化合物 I和化合物 Π结晶能明显提高小鼠的耐热能力， 具有较好 的镇痛作用。 杜冷丁具有极明显的镇痛作用。
实施例 2 镇痛药物的制备方法：将安络小皮伞药材 40kg粉碎成最粗粉， 加乙醇回流 3次， 每次加 8倍量提取 2小时， 滤液合并， 减压回收乙醇， 得约 6kg (相对密 度约 1.20— 1.25, 60°C热测）， 加 10倍量水稀释， 加浓氨水调 PH8— 9， 加石油 醚 5次， 回收石油醚， 加氯仿 5次， 回收氯仿， 得稠膏约 lkg (相对密度 1.35 -1.38, 6(TC热测）， 加约 5kg硅胶 H: 硅藻土 （2: 1 )拌匀， 干燥， 上硅胶 H 柱 [硅胶 H: 硅藻土（2: 1 ), 丙酮湿法上柱]， 收集丙酮洗脱液至颜色极浅（浸 膏量较少）， 回收丙酮得稠膏（约 0.5 kg， 相对密度 1.35— 1.38, 60°C热测）， 加醋酸乙酯洗涤， 抽滤， 不溶物加醋酸乙酯重结晶 2— 3次， 抽滤， 70°C以下干 燥， 得总生物碱结晶干品约 160g， 加入淀粉约 50g， 糊精约 100g， 粉碎成细粉， 过 100目筛， 混匀， 加 50%乙醇适量制软材， 16 目筛制粒， 60— 80°C干燥， 16 目筛整粒， 检验， 灌装胶囊， 消毒， 包装， 既得。 制成约 1000粒。
本发明提供的镇痛药物的镇痛效果实验
一、 试验材料
1、 药物与试剂
本发明实施例 1提供的胶囊原料， 规格 0.16g (结晶） /粒。
阳性对照药之一， 杜冷丁， 湖北荆门制药厂生产， 批号： 990508 阳性对照药之二， 阿司匹林片， 广州广济堂制药厂生产， 批号： 990614。
2、 动物： BALB/C, iCR系清洁级小鼠， 体重 18— 20g , SD系清洁级大鼠， 上海西普尔 -必凯实验动物有限公司提供。
3、 仪器: BJ-084J热板测痛仪， 江苏白石医疗器械厂生产。 二、 方法与结果 本研究釆用 5个剂量对小鼠镇痛试验进行研究，其剂量分别为 0. 025、 0. 05、 0. 10、 0. 20、 0. 40/kg (以小鼠计算）。 用杜冷丁作阳性对照药。 1、 对醋酸引起的扭体反应的影响
(1)方法：取 BALBC/小鼠 70只， 雌雄各半， 随机分成 7组， 除杜冷丁组外， 其余各组按表 3剂量灌胃给药 1小时，杜冷丁组皮下注射杜冷丁 20分后，各鼠 腹腔注射 0. 7%冰醋酸 0. lml /l Og, 记录 5— 15分内的扭体次数。
表 3本发明提供的胶囊不同剂量的对小鼠扭体反应的影响
组别 动物数 剂量 扭体次数 抑制率
(只） ( g/kg ) (%)
空白对照组 10 NS 36. 3 ± 13. 2 ―
杜冷丁组 10 0. 02 2. 8 ± 2. 2** 92. 3
本发明提供胶囊 I 10 0. 025 34. 5 ± 14. 0 5. 0
II 10 0. 05 31. 7 ± 11. 2 12. 8
III 10 0. 10 24. 4 ± 14. 6* 32. 8
IV 10 0. 20 18. 9 ± 12. 2** 52. 0
V 10 0. 40 13. 7土 8. 6** 62. 3 与空白对照组比较 *P<0. 05 , **P<0. 01。
(2)结果：与空白对照组比较本发明提供的胶囊 III、 IV、 V剂量组小鼠体次 数有显著性差异， 且成效明显的量效关系， 能明显抑制由醋酸引起的小鼠扭体 反应， 表明本发明提供胶囊具有较好的镇痛作用， 其小鼠扭体反应， 表明本发 明提供胶囊具有较好的镇痛作用， 其小鼠镇痛有效剂量为 0. 1g/kg左右。 相当 于杜冷丁的 1 /5 (按剂量比较）。 2、 对小鼠热板痛阈值的 ¾响
(1)方法：取符合要求（平均痛阈值在 30s内）的 BALB/C系雄性小鼠 70只 , 随机分成 7组， 除杜冷丁组外， 其余各组按表 4剂量灌胃给药 1小时， 杜冷丁 组皮下注射杜冷丁 20分后， 将小鼠放入热板测痛仪内， 热板温度为 55 ± 05 °C ， 自小鼠投入热板至出现舔后足的时间为该痛阈值， 隔 30分后在测一次， 共 3 次， 求出平均痛阈值进行统计。
表 4 本发明提供胶囊不同剂量对小鼠热板痛阈值的影响 （X ± SD )
组别 动物数 剂量 平均痛阈值
(只） (g/kg)
空白对照组 10 NS 34. 7 ± 10. 5
杜冷丁组 10 0. 02 58. 8 ± 2. 4**
本发明提供胶囊 I 10 0. 025 37. 6 ± 6. 9
II 10 0. 05 39. 8 ± 11. 0
III 10 0. 10 43. 1 + 12. 3*
IV 10 0. 20 48. 4 土 14. 5 **
V 10 0. 40 52. 4 土 15. 2**
与空白对照组比较， *P<0. 05， ： **Ρ<0· 01。
(2)结果：与空白对照组比较，本发明提供胶囊 III、 IV、 V剂量组平均痛阈 值有显著性差异， 且成较明显的量效关系， 能明显提高小鼠的耐热痛能力， 表 明本发明提供的胶囊具有较好的镇痛作用， 其小鼠镇痛有效剂量为 0. 1g/Kg左 右。 相当于杜冷丁的 1/5 (按剂量比较）。
3、 镇痛作用时间的研究
釆用小鼠有效剂量 0. 10/Kg， 给药后分别在 0. 5、 1、 1、 3、 4、 5、 6小时 测定小鼠的镇痛效果。
(1)对醋酸引起扭体反应的影响
取 BALB/C小鼠 90只， 雌雄各半， 随机分成 9组， 分别为空白对照组、 杜 冷丁组、 0. 5小时组、 1小时组、 2小时组、 3小时组、 4小时组、 5小时组、 6 小时组、 除杜冷丁组外， 其余各组按表 5剂量灌胃给药， 杜冷丁组皮下注射杜 冷丁， 前 3组在给药后 30分， 后 5组分别在给药后 1、 2、 3、 4、 5、 6小时: 、、、、、
各鼠腹¾¾¾¾¾¾ ff. ^ ^ ^ ^ ^ ^
j^^^¾ ρ π π π,ττ、ττ腔注射 0. 7%冰醋酸 0. lml /10g ， 记录 5-15分内的扭次次数。
表 5本发明提供的胶囊不同时间对小鼠扭体反应的影响 （Γ土 SD )
组别 动物数 剂量 扭体次数
H) (g/kg)
空白对照组 10 NS 27. 6 ± 7. 8
杜冷丁组 10 0. 02 1. 8 ± 1. 7**
组 10 0. 10 18. 5 土 9. 4**
10 0. 10 15. 6 ± 11. 2**
10 0. 10 18. 4 ± 9. 0**
10 0. 10 20. 7 ± 6. 3**
10 0. 10 22. 8 ± 5. 4*
10 0. 10 24. 6 ± 6· 1
10 0. 10 27. 0 ± 9. 5
与空白对照组比较， *P<0. 05 , **P<0. 01。
结果：与空白对照组比较， 本发明提供胶囊 0. 5小时、 1小时、 2小时、 3 小时、 4小时小鼠扭体次数有显著性差异， 且成较明显的时效关系， 能明显抑 制由醋酸引起的小鼠扭体反应， 表明本发明提供的胶囊在药后 0. 5-4小时内均 具有较好的镇痛作用。
(2)对小鼠热板痛阈值的影响 取符合要求的（平均痛阈值在 30s内）的 BALB/C系雌性小鼠 90只， 随机分 成 9组， 分别为空白对照组、 杜冷丁组、 0. 5小时组、 1小时组、 2小时组、 3 小时组、 4小时组、 5小时组、 6小时组。 除杜冷丁组外， 其余各组按表 6剂量 灌胃给药， 杜冷丁组皮下注射杜冷丁， 前 3组在给药后 30分， 后 5组分别在给 药后 1、 1、 3、 4、 5、 6小时， 将各组小鼠放入热板测痛仪内， 热板温度为 55
± 0. 5 °C， 自小鼠投入热板至出现舔后足的时间为该鼠的痛阈值， 隔 30分后再 测一次， 共 3次， 求出平均痛阈值进行统计。
表 6本发明提供的胶囊不同时间对小鼠热板痛阈值的影响 （Y± SD )
组别 动物数 剂量 扭体次数
H) (g/kg)
空白对照组 10 NS 20. 8 ± 5. 4
杜冷丁组 10 0. 02 55. 9 ± 2. 4** 0.10 31· 5 ±7.2**
0.10 34.9 ±2.8*
、、、、
0.10 35.2 ±5.0**
L
组 0.10 29.0±4.8**
0.10 25.6 ±4.4*
0.10 23.2 ±5.1
0.10 22.2 ±5.9
与空白对照组比较 P>0.05, ***与空白对照组比较 P<0.01。
结果:与空白对照组比较， 本发明提供的胶囊的 0.5小时、 1小时、 2小时、
3小时、 4小时小鼠平均痛阈值有显著性差异， 且成较明显的时效关系， 能明显 提高小鼠的耐热痛能力， 表明本发明提供胶囊在给药后 0.5- 4小时内均具有较 好的镇痛作用。
4、 对镇痛部位的研究 方法：取 SD清洁级大鼠 50只， 雄性， 随机分成 5组， 于每鼠右后足跖注射 20%啤酒醇母混悬液 0. lml， 造成无菌性炎症水肿后 1小时， 出杜冷丁组外， 其 余各组按表 7剂量胃给药 1小时，杜冷丁组皮下注射杜冷丁 20分后，用尾部压 痛装置测定各鼠双后足跖的痛阀值， 比较在左右后跖的痛阀值。
表 7本发明提供胶囊对大鼠镇痛部位的影响 （1±SD)
组别 动物数 剂量 右足跖痛阀 左足跖痛阀
(只） （g/kg) ( g ) LsJ_
空白对照组 10 NS 4.3 ± 1.9 25.2 ±6.9
杜冷丁组 10 0.02 21.6 ±2.5** 121.0±21.5**
本发明提供胶囊低剂量组 10 0.10 7.5 ±4.3* 30.5 ±11.3
本发明提供胶囊中剂量组 10 0.20 8.2 ±3.7** 3 8±12.0*
本发明提供胶囊高剂量组 10 0.40 10. 6 ±5.8** 35.3土 17.8*
与空白对照组比较， *P<0.05， **P<0.01。
与空白对照组比较， 本发明提供胶囊较低、 中、 高组大鼠右足跖（炎症中 跖） 的痛阀值显著性提高， 升高幅度在 70%以上； 而左右跖 （非炎症中跖） 只 有中、 高剂量的痛阀值显著性升高， 升高幅度只有 30%, 表明本发明提供胶囊 可能为外周镇痛与中枢镇痛药物， 杜冷丁则为明显的中枢镇痛药物。 本发明提供的镇痛药物依赖性实验 1试验材料 1. 1药物与试剂
本发明提供的镇痛胶囊， 用时配成 13. 3mg/ml、 26. 7 mg/ml混悬液 美菲康（盐酸吗啡控释片）西南药业股份有限公司， 批号 980801， 用时配 成 2. 9 mg/ml、 6. 67 mg/ml。
1. 2动物： BALB/C清洁级小鼠， 雌雄各半， 体重 20-24g。 SD大鼠， 雌雄 各半， 体重 200-220g， 由上海西普尔 -必凯公司提供。
2试验方法和结果 2. 1 自然戒断试验
2. 1. 1小鼠自然戒断试验
2. 1. 1. 1方法：取小鼠 40只， 雌雄各半， 随分为 4组， 分别给予蒸馏水， 盐酸吗啡及高、低二个剂量药物。第 1-3天按每曰剂量平均分四次给药，第 4-7 天每天上、 下午在固定时间内灌胃一次连续给药 7天， 于第 7天起， 72小时内 每隔 4小时测一次体重， 记录体重变化情况， 并观赏动物的精神、 活动、 饮食 等情况， 记录停药后动物的变化。 见表 8
表 8对小鼠自然戒断症状的影响 （X ± SD )
组别 剂量 ( mg/kg.日 ) 动物 （只） 体重变化
空白 10 0. 01 土 0. 45
盐酸吗啡 200 10 1. 12 ± 0. 68***
药物 400 10 0. 23 ± 0. 49*
药物 800 10 0. 19 ± 0. 59*
与空白对照组比较， P>0. 05， ***与空白对照组比较 P<0. 01 <
2. 1. 1. 2试验结果
动物在头三天给药后， 进食减少， 活动迟缓， 三天后恢复正常， 各组动物 在停止给药后 48小时内，活动无异常变化，各组也未见兴奋状态。由表 8可见， 在 72小时观察期内， 空白组动物体重无异常变化， 药物一、 两个剂量动物体重 变化很小， 与空白对照组比较无显著性差异， 而盐酸吗啡组动物体重出现明显 减轻。 与空白对照组比较有非常显著性差异。 盐酸吗啡组动物在停药后出现体 重下降， 在停药第 12-24内为体重减轻最明显的。 随后， 体重逐步恢复。 而给 药组未出现这种情况。
2. 1. 2大鼠自然戒断试验 将动物随机分为组， 分别灌胃给予蒸馏水、 盐酸吗啡及高、 低二个剂量药 物组。 第 1-3天按每曰剂量平均分成四次给药， 第 4-7天分二次给药， 给药时 间为 8: 00、 11： 00、 14： 00、 17： 00和 8: 00、 4: 00。 共给药 7天。 于第 7 天起， 72小时内每隔 4小时测一次体重， 记录体重变化情况， 并观察动物的精 神、 活动、 饮食等情况， 详细记录停药后的变化情况。 见表 9。
表 9对大鼠自然戒断症状的影响 （X ± SD )
组别 剂量 ( mg/kg.日 ) 动物 （只） 体重变化
空白 10 — 0. 86 ± 0. 98
盐酸吗啡 200 10 —8. 54 土 0. 63***
药物 400 10 — 1. 24 ± 0. 83*
药物 800 10 — 1. 62 ± 0. 88*
*与空白对照组比较， P>0. 05 , ***与空白对照组比较 P<0. 01。
2. 1. 2. 2试验结果 动物在给药初期（头三天左右）， 进食减少， 活动迟缓， 三天后逐渐恢复正 常。恢复正常后及停药 48小时内，各组动物活动无异常情况，也未见兴奋状态。 从表 9可见在 72小时观察期内， 空白组动物体重逐日略有增加，其体重减轻最 大值只有 0. 86g, 体重变化非常小。 药物高、 低两个剂量组动物体重最大下降 量大下将量也很小， 与空白对照组比较， 无显著差异。 盐酸吗啡组动物在停药 后 48小时的中断体重持续下降，在停药第 12-18小时内下降最大，随后体重小 幅回升，至观察期结束体重仍未恢复正常， 而给药组未出现这种体重变化情况。
2. 2催促戒断试验 2.2.1小鼠催促戒断试验 2.2.1.1试验方法
取小鼠 40只， 雌雄各半， 按体重随机分为空白、 吗啡、 小、 大剂量药物组 4组， 后三组按 15 mg/kg灌胃给药， 每曰二次， 头 4吗啡组和药物组剂量分别 为 60mg/kg、 180mg/ kg、 332 mg/ kg, 665 mg/ kg; 空白对照组给予同体积的 生理盐水， 连续给药 13天， 在第 14天 9: 00至 12: 00之间腹腔注射纳洛酮 30 mg/ kg, 立即放入大玻璃容器内测定小鼠 20分内的跳跃数， 并观察 2小时 小鼠的行为， 测量体重和排便。 2.2.1.2试验结果
由表 10可见，经注射纳洛酮后， 吗啡组动物在 2小时观察期内明显比其他 几组动物兴奋， 表现为跳跃、 湿狗样抖动、 腹泻、 前爪震颤、 流泪等。 与空白 对照组比较， 吗啡组小鼠跳跃数， 腹泻只数及体重下降均有明显的差异， 而镇 痛 Π号胶囊大、 小剂量组均无明显差异。 见表 10。
表 10镇痛 II号胶囊对小鼠催促戒断的影响
组别 平均剂量 N 跳跃 体重变化 腹泻
( mg/ kg. 日) (次） （g) (只）
空白对照组 一 10 0.6 ± 1.2 0.06 ±0.18 0
吗啡组 157 10 22.3 ± 14.8*** —0.17 ± 0.32*** 10***
小剂量组 332 10 0.8 ±0.9* —0.12 ±0.14* 0
大剂量组 665 10 0.3 ±0.5* 0.02 ±1.3* 0
*与空白对照组比较， P>0.05， ***与空白对照组比较 P<0.01。
2.2.2对大鼠催促戒断试验 2.2.2.1试验方法
取大鼠 40只， 雌雄各半， 随机分为 4组， 吗啡组和药物组灌胃给药， 每曰 二次， 连续给药 14天， 空白对照组给予同体积的生理盐水； 第 14天在 8: 00 末次给药后 40分皮下注射纳洛酮 4 mg/ kg, 然后立即观察记录 1小时内大鼠 的戒断反应症状。 并于 30、 60分称体重。 2.2.2.2试验结果
由表 II可见， 经注射纳洛酮后， 吗啡动物在观察期明显比其他几组动物兴 奋， 表现为跳跃、 湿狗样抖动、 腹泻、 前爪震颤、 流泪等。 与空白对照组比较， 吗啡的大鼠跳跃数， 腹泻只数及体重下降均有明显的差异， 而本发明提供的镇 痛胶囊大、 小剂量组各项指示均无明显差异。
表 II本发明提供的胶囊对大鼠催促戒断的影响
组别 平均剂量 Ν 跳跃 体重变化 腹泻
( mg/ kg. 日） (^) 30min 60min (只）
空白对照组 一 10 0.2± 0.45 0.48 ± 0.24 0.31 ±0·18 0
150 10 19.4 ± 11.2*** _4.62 ± 1.64*** —4.89 ± 1.76***10***
小剂量组 300 10 0.0 ± 0.0* 0.06 ±0.86* 0·12±0·20* 0
大剂量组 600 10 0.3 ± 0.5* -0.13± 0.37* 0.02 ± 0.65* 0
与空白对照组比较， "*Ρ<0.01, ***与空白对照组比较 Ρ>0.05。
3讨论 ·.经大、 小鼠自然戒断和催促戒断试验， 本发明提供的镇痛胶囊大、 小剂量组各戒断指标与空白对照组比较， 均无显著性差异， 而吗啡组则有明显 的差异， 表现出明显的依赖性。 表明本发明提供的镇痛胶囊没有身体依赖性。

Claims

具有式 （ Γ ) 结构的化合物。
Figure imgf000019_0001
Η
( I )
2、 具有式 （ Π )结构的化合物。
0 0
II II
CH3— C— ΝΗ— CH2— CH2-NH— C— CH3 ( II )
3、 制备权利要求 1或 2所述的化合物的方法， a) 以安络小皮伞为原料， 用乙醇提取；
b) 回收乙醇后得清膏， 用水稀释并调 PH值为 8— 9 , 脱脂后， 用氯仿 萃取；
c) 回收氯仿后稠膏， 上硅胶 H柱， 用丙酮洗脱； d) 回收丙酮后稠膏， 用醋酸乙酯洗涤， 抽滤得结晶； e) 将得到的结晶上硅胶 H柱， 用丙酮洗脱， 第 1出峰的为生物碱 I， 第 2出峰的为生物碱 II， 再用醋酸乙酯 -丙酮（2: 1 )重结晶， 进一 步纯化分离得到生物碱 I 、 π。 、 一种镇痛药物， 其特征在于其中的有效成分是权利要求 1所述的化 合物 I。
、 根据权利要求 4所述的镇痛药物， 其特征在于上述有效成分的含量 大于 25%。
、 一种镇痛药物， 其特征在于其中的有效成分是杈利要求 2所述的化 合物 Π。
、 根据权利要求 4或 5所述的镇痛药物， 其特征在于还含化合物 II。 、 根据权利要求 7所述的镇痛药物， 其特征在于化合物 II的含量大于
25%。
、 制备权利要求 7或 8所述的镇痛药物的方法， 其特征在于它是以安 络小皮伞为原料提取的。
0、 根据权利要求 9所述的镇痛药物的方法， 其特征在于
a) 以安络小皮伞为原料， 用乙醇提取；
b) 回收乙醇后得清膏， 用水稀释并调 PH值为 8— 9， 脱脂后， 用氯仿 萃取；
c) 回收氯仿后稠膏， 上硅胶 H柱， 用丙酮洗脱；
d) 回收丙酮后稠膏， 用醋酸乙酯洗涤， 抽滤得结晶；
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