WO2003078436A1 - Derives de porphyrines, leur procede de preparation, compositions pharmaceutiques et utilisations - Google Patents

Derives de porphyrines, leur procede de preparation, compositions pharmaceutiques et utilisations Download PDF

Info

Publication number
WO2003078436A1
WO2003078436A1 PCT/FR2003/000805 FR0300805W WO03078436A1 WO 2003078436 A1 WO2003078436 A1 WO 2003078436A1 FR 0300805 W FR0300805 W FR 0300805W WO 03078436 A1 WO03078436 A1 WO 03078436A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
formula
chosen
groups
alkyl
Prior art date
Application number
PCT/FR2003/000805
Other languages
English (en)
Inventor
Alexandrine Maraval
Corine Vialas
Geneviève PRATVIEL
Bernard Meunier
Original Assignee
Centre National De La Recherche Scientifique
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centre National De La Recherche Scientifique filed Critical Centre National De La Recherche Scientifique
Priority to AU2003229863A priority Critical patent/AU2003229863A1/en
Publication of WO2003078436A1 publication Critical patent/WO2003078436A1/fr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/22—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the present invention relates to dual molecules combining a porphyrin derivative with a 2- or 4-aminopyridine or one of their derivatives, their preparation process, the pharmaceutical compositions containing them and their use as an inhibitor telomerase for the preparation of a medicament, in particular an antitumor medicament.
  • telomeres constitute a privileged biological target for the search for antitumor molecules.
  • telomeres While chromosomes are made up of classic double-stranded or duplex DNA, the telomeres, which are the ends of chromosomes, adopt a very specific quadruplex structure.
  • the DNA sequence of telomeres is rich in guanines.
  • Quadruplex DNA is made up of four strands that join together through the formation of tetrads of guanines.
  • the telomeres thus constitute, by this characteristic structure, a biological target for molecules capable of recognizing them selectively. They also represent a selective target for tumor cells. Normal cells see the size of their telomeres decrease with each cell division to a critical size which induces the entry of the cell into the phase of programmed cell death or apoptosis.
  • telomeres In at least 80% of human cancers, tumor cells have an enzyme, telomerase, which continually lengthens telomeres.
  • telomerase enzyme that continually lengthens telomeres.
  • telomeres as biological targets of anticancer agents.
  • Two aspects are important (i) the discovery of the role of telomeres as the biological clock of cells, thus having a key importance in the manifestation of the cancerous character of a cell and (ii) the determination of the particular structure of telomeres. Molecules capable of targeting these structures in vivo have therefore been sought.
  • telomeres examples include 2,6-diaminoanthraquinone (2,6-DAQ) (Sun D. et al., J. Med. Chem., 1997, 40, 2113-2116), ⁇ , ⁇ '-bis- [2- (l -piperidino) ethyl] -3,4,9,10-perylenetetracarboxylic diimide (PIPER) (Fedoroff ON. Et al., Biochemistry, 1998, 37, 12367-12374), of porphyrin derivatives (Wheelhouse RT et al., J. Am. Chem.
  • 2,6-DAQ 2,6-diaminoanthraquinone
  • PIPER perylenetetracarboxylic diimide
  • Such molecules capable of targeting telomeres and of inhibiting telomerase by this means, have been selected for their strong affinity for quadruplex DNA structures. This affinity is the guarantee of the selective recognition, by these molecules, of the structures of telomeric DNA in cells.
  • the molecules must interact with telomeres and not with normal DNA. Thus only cells dependent on the elongation of their telomeres for their survival, like tumor cells, will be sensitive to these molecules. Normal cells will not be disturbed.
  • the inventors have in particular set themselves the goal of providing molecules which can be used as telomerase inhibitors and which have an affinity with telomeres which is even better compared to that of the molecules described in the prior art.
  • the present invention therefore has for first object dual molecules associating a porphyrin derivative with at least one aminopyridine or one of its derivatives, characterized in that they are chosen from the compounds of the following formula and their pharmaceutically acceptable salts:
  • radicals Ri to R 4 located in the meso position of the porphyrin nucleus represent a hydrogen atom or a group chosen from: - the aminopyridine groups of formulas (Ha) and (Ilb) below wherein :
  • R 5 , R 6 , R and R 8 identical or different, represent a hydrogen or halogen atom, a C ⁇ -C alkyl radical, C1-C alkoxy or an aryl group; at least two of the radicals R 5 ⁇ R 6 , R 7 and R 8 together with the carbon atom of the aminopyridine ring to which they are linked, can also form a 5 or 6-membered aromatic ring, itself being optionally substituted by a halogen atom, a C ⁇ -C alkyl radical, C 1 -C alkoxy ) an aromatic group or extended by a 5 or 6-membered aromatic ring;
  • B represents a linking arm constituted by a linear or branched, saturated or unsaturated hydrocarbon chain, optionally substituted, interrupted and / or terminated by one or more heteroatoms such as N, O or S, and / or by one or more groups chosen from alkyl, C ⁇ -C4 alkoxy, C ⁇ -C 4 alkyl, aryl or one or more functions chosen from ether, ester, amide, carbonyl, carbamate, urea, thiourea and disulfide; it being understood that when said linking arm B represents a chain comprising an amide function, then said amide function is not directly attached to the amine located in position 4 or 2 respectively of the groups of formulas (Ha) and (Ilb);
  • X, Y and Z identical or different, represent a carbon atom or a nitrogen atom substituted by a radical R 9 chosen from hydrogen, C ⁇ -C alkyl radicals and groups of formulas (Ha) and ( Ilb) above; being understood that at least one and only one of the vertices X, Y and Z represents a nitrogen atom substituted by a radical R;
  • A is an organic or mineral anion, preferably chosen from anions compatible with pharmaceutical use such as chlorides, acetates and citrates;
  • M is inert metal in oxidation or with redox properties; said compounds of formula (I) comprising at least one group of formula (Ha) or (Ilb) and at least one group of (III).
  • the compounds of formula (I) in accordance with the invention are based on the association of two units with complementary properties.
  • the porphyrin entity which interacts by stacking with the flat tetrads is associated with at least one 2- or 4-aminopyridine motif which can lodge in the grooves of the telomeres.
  • the porphyrinic motif ensures a strong affinity with telomeres.
  • the aromatic plane structure of porphyrin interacts with the guanine tetrads which form the quadruplexes characteristic of telomeres.
  • Two types of porphyrins can be envisaged depending on the nature of the central metal, either inert in oxidation (telomerase inhibitor) or else a metal with redox properties (capable of causing DNA cleavages).
  • the 2- and 4-aminopyridine motifs are recognized as capable of crossing cell membranes and thus allow the internalization of the porphyrinic derivatives of formula (I) in the cells.
  • they also contribute to a better affinity of the compounds of formula (I) for their biological target: the telomeres.
  • aryl group means any aromatic group having one or more benzenic, naphthalene or anthracene rings, said rings optionally containing one or more heteroatoms such as O, N or S, and being optionally substituted by one or more groups chosen from halogen atoms, C ⁇ -C alkyl, amino, C ⁇ -C 4 aminoalkyl, (C ⁇ -C) alkyl C ⁇ -C aminoalkyl, dialkyl (C ⁇ -C) C ⁇ -C aminoalkyl, nitro , C ⁇ -C alkyleneamino or C 2 -C 4 alkenyleneamino.
  • halogen atoms designated for R 5> R 6 , R 7 and R s chlorine and bromine atoms are preferred.
  • the number of carbon atoms constituting the hydrocarbon chain of the link arm B is preferably between 1 and 24.
  • M is preferably a transition metal chosen from those in the first row of Mendeleev's table, in particular nickel and manganese, those of the second row, in particular palladium or those of the third row, in particular platinum and gold.
  • the vertices W 1s W 2 , W and W which are identical or different, represent a carbon or nitrogen atom, said groups being optionally substituted by one or more halogen atoms and / or by one or more alkyl radicals or C ⁇ -C alkoxy 4 .
  • the group 7-chloro-4-aminoquinoline is particularly preferred.
  • para-alkyl-pyridinium groups such as the 4-methylpyridinium, 4-ethylpyridinium, 4-propylpyridinium and 4-butylpyridinium groups.
  • the link arm B corresponds to the following formula B1:
  • - NI and N2 identical or different, represent an ether, ester, amide, carbamoyl, carbamate, urea, thiourea or disulfide bond, located in the para, ortho or meta position relative to the point of attachment of the phenyl radical to the porphyrin nucleus ,
  • - D represents an aliphatic chain C ⁇ -C ⁇ 2 linear, branched or cyclic, optionally comprising one or more amino functions; or an aromatic group,
  • - Alk represents a C ⁇ -C ⁇ 2 alkyl chain.
  • link arm Bl in which NI represents an ether bond, D and Alk are identical and represent a linear C 4 alkyl chain and N2 represents an amide bond is particularly preferred (link arm B1A).
  • the present invention also relates to the process for preparing dual molecules of formula (I) characterized in that it consists: - in a first step, in reacting, in an organic solvent medium, a porphyrin of formula (T) next :
  • the groups R'i to R ' 4 represent a hydrogen atom, a pyridine group or a group -B'Rio
  • B' represents a linker chosen from a phenyl radical or a linear or branched, saturated or unsaturated hydrocarbon chain, optionally substituted or interrupted by one or more heteroatoms such as ⁇ , O or S, and / or by one or more groups chosen from C ⁇ -C alkyl, C ⁇ -C alkoxy radicals , aryl or by one or more functions chosen from the ether, ester, amide, carbonyl, carbamate, urea, thiourea and disulfide functions, and Rio represents a function capable of allowing the attachment of a group of formulas (II 1 a) or (H'b); it being understood that at least one of the radicals R'i to R ' 4 represents a group -B'Rio; with a compound of the following formulas (lia ')
  • R ' 5 , R' ⁇ , R ' 7 and R' 8 identical or different, represent a hydrogen or halogen atom, a C ⁇ -C 4 alkyl radical, C ⁇ -C alkoxy or an aryl group; at least two of the radicals R ' 5; R ' 6 , R' 7 and R ' 8 together with the carbon atom of the aminopyridine ring to which they are linked, can also form a 5 or 6-membered aromatic ring, itself being optionally substituted by a halogen atom , a C ⁇ -C alkyl radical, C ⁇ -C 4 alkoxy, an aromatic group or extended by a 5 or 6-membered aromatic ring;
  • R'n represents an attachment function compatible with the attachment function chosen for R' ⁇ 0 or a hydrogen atom
  • radicals R " ⁇ to R” 4 identical or different, represent a hydrogen atom, a pyridine group or an aminopyridine group of formula (Ha) or (Ilb) below:
  • the radicals R 5] R 6 , R 7 and R 8 represent a hydrogen or halogen atom, a C ⁇ -C 4 alkyl radical, C ⁇ -C alkoxy or an aryl group; at least two of the radicals R 5> R ⁇ , R 7 and R 8 together with the carbon atom of the aminopyridine ring to which they are linked, can also form a 5 or 6-membered aromatic ring, itself being optionally substituted by a halogen atom, a C ⁇ -C 4 alkyl radical, C ⁇ -C alkoxy j an aromatic group or extended by a 5 or 6-membered aromatic ring; .
  • B represents a linking arm constituted by a linear or branched, saturated or unsaturated hydrocarbon chain, optionally substituted, interrupted and / or terminated by one or more heteroatoms such as N, O or S, and / or by one or more groups chosen from alkyl C 1 -C 4 alkoxy, C 1 -C 4 alkyl, aryl or one or more functions chosen from ether, ester, amide, carbonyl, carbamate, urea, thiourea and disulfide, provided that when said link arm B represents a chain comprising an amide function, then said amide function is not directly attached to the amine located in position 4 or 2 respectively of the groups of formulas (Ha) and (Ilb); then
  • a second step optionally to quaternize, in an acid medium, the pyridine group or groups of the compound of formula (I ") in the presence of a C ⁇ -C alkyl halide such as methyl iodide or a halide of a group of formulas (IIa ') or (Ilb'), then
  • the first two stages of the preparation process according to the invention are preferably carried out at room temperature, while the third stage is preferably carried out at a temperature between approximately 80 and 120 ° C. and more particularly at a temperature of approximately 100 ° C.
  • the organic solvents used during the various stages of the preparation process in accordance with the invention are preferably chosen from hydroalcoholic solvents such as methanol, ethanol and propanol, dimethylformamide, dichloromethane, N-methylmorpholine, benzotriazol -1- yloxytris (dimethyl-amino) phosphonium and mixtures thereof.
  • attachment functions R'io and R'u mention may in particular be made of the carboxylic functions; thiol; amine; -NHR in which R represents a linear or branched C ⁇ -C alkyl radical; hydroxyl; phosphate and halogen.
  • R'io represents a carboxylic or hydroxyl function
  • R'n can represent an amine function and vice versa
  • R'io represents a thiol function
  • R'n preferably represents a thiol function also.
  • the subject of the invention is also a pharmaceutical composition characterized in that it contains, as active principle, at least one dual molecule of formula (I) as defined above and at least one pharmaceutically acceptable vehicle.
  • composition in accordance with the invention can be administered in different forms, more especially by oral, rectal or injectable route.
  • the amount of dual molecules of formula (I) present in the pharmaceutical composition in accordance with the invention preferably corresponds to unit doses of between 10 g and 800 mg.
  • the nature of the pharmaceutically acceptable vehicle, present in the pharmaceutical composition in accordance with the invention will of course vary depending on the mode of administration and the galenic presentation of said composition.
  • the pharmaceutically acceptable vehicle generally consists of one or more excipients conventionally used for the preparation of injectable pharmaceutical compositions, such as physiological saline, mineral salts, vitamins.
  • the pharmaceutical composition in accordance with the invention may also contain one or more additional active ingredients, in particular one or more active ingredients with antitumor activity.
  • additional active ingredients in particular one or more active ingredients with antitumor activity.
  • the subject of the invention is the use of at least one compound of formula (I) above as an inhibitor of telomerases, for the preparation of a medicament, and in particular of an antitumor medicament.
  • the invention also comprises other provisions which will emerge from the description which follows, which refers to examples of preparation of compounds of formula (I) in accordance with the invention and to an example of use. in evidence of the specificity of the compounds of formula (I) with respect to the telomeric sequences, as well as in the appended FIG. 1 which represents the autoradiography of an electrophoresis gel on which DNA fragments are visualized after treatment with compounds of formula (I) in accordance with the invention.
  • EXAMPLE 1 SYNTHESIS OF A COMPOUND OF FORMULA (I) COMPRISING THREE PATTERNS OF FORMULA (II) AND A PATTERN OF FORMULA (IIP,; COMPOUND (IA):
  • the mixture is then filtered through cotton and the dichloromethane is evaporated.
  • the purple powder thus obtained is dried with a ramp.
  • TLC monitoring of the synthesis is carried out as follows: a drop of the reaction medium is taken, a few drops of distilled water and citric acid solution at pH 3 (200 mg in 200 ml) are added to it porphyrin to precipitate. A few drops of dichloromethane extract the porphyrin which is then deposited on TLC.
  • the eluent used is a dichloromethane / ethanol mixture (94/6).
  • Rf (phenol) 0.34;
  • Rf (phenolate) 0.24;
  • Rf (acid) 0.15;
  • Rf (ester) 0.40.
  • the purple powder obtained is then purified on a silica column: a column is conditioned with a mixture of dichloromethane / ethanol solvent (95/5, v / v) and the product is deposited on the column in the minimum of this same mixture. Then eluted with 3 liters of dichloromethane / ethanol mixture (94/6, v / v) then with 2 liters at 93/7 and finally 2 liters at 92/8. Identical fractions are combined and the solvent is removed on a rotary evaporator. The violet solid is taken up in the minimum of dichloromethane and 200 ml of hexane are added. The mixture is placed overnight at 4 ° C for the porphyrin to precipitate.
  • the suspension obtained is filtered through sintered glass No. 3, the filtrate is removed and the purple powder is taken up in dichloromethane.
  • the solvent is evaporated on a rotary evaporator and the powder is dried on a vacuum rack.
  • the pure product (la) is obtained with a yield of 65% (275 mg; 0.385 mmol).
  • porphyrin (la) obtained above in the first step (1 equivalent; 0.136 mmol) are dissolved in 15 ml of freshly distilled dichloromethane. 20 equivalents of N-methylmorpholine ( ⁇ MM) are then added (300 ⁇ l; 2.725 mmol) and 2 equivalents of benzotriazol hexafluorophosphate-1-yloxytris (dimethyl-amino) phosphonium (BOP) (124 mg; 0.272 mmol).
  • the product obtained is purified on a silica column: the column is conditioned with a dichloromethane / ethanol mixture (94/6, v / v) with a few drops of NH 4 OH and the deposition is carried out in the minimum of this same mixture. Eluted with 200 ml of dichloromethane / ethanol (94/6, v / v) + 20 ⁇ l of NH 4 OH then with 1 1 of dichloromethane / ethanol (93/7, v / v) + 100 ⁇ l of NH OH. The identical fractions are combined and the solvent is evaporated.
  • the purple powder is taken up in the minimum amount of dichloromethane and then 200 ml of ethyl ether are added to it. The mixture is placed overnight at 4 ° C. and the porphyrin precipitates. The suspension is filtered on sintered glass No. 3, the filtrate is removed and the powder is taken up in a dichloromethane / ethanol mixture (90/10, v / v), the solvent is evaporated and the purple powder is dried with a ramp at empty. The coupling product is obtained with a yield of 95% (124.1 mg; 0.129 mmol).
  • 1H NMR (CDCI3): ⁇ -2.88 (s; 2H; NH pyro ⁇ e ); 1.79 (m; 4H;
  • the coupling product obtained above in the second step (124 mg; 0.129 mmol) is dissolved in 20 ml of DMF dried over molecular sieve and then added to the solution 1 equivalent of 1 M hydrochloric acid in ether (130 ⁇ l; 0.129 mmol). The mixture is then stirred for 30 minutes at room temperature and then 50 equivalents of methyl iodide (400 ⁇ l; 6.473 mmol). The solution is kept under magnetic stirring for 6 hours at room temperature, then the excess methyl iodide and the solvent are evaporated on a rotary evaporator while heating to 100 ° C.
  • the brown solid residue is taken up in 5 ml of DMF, 1 equivalent of triethylamine (18 ⁇ l; 0.129 mmol) is added to it. The mixture is stirred for 30 minutes at room temperature. 15 ml of propanol-2 and 30 ml of ethyl ether are added to the mixture, the porphyrin precipitates. The suspension is centrifuged (for 10 minutes, speed 7) and the supernatant is removed. The brown solid pellet is taken up in a methanol / water mixture (20/80, v / v) and the solvents are evaporated on a rotary evaporator. The product thus obtained is dried on a vacuum ramp to give a brown powder with a yield of 91% (170.5 mg; 0.118 mmol).
  • the non-metallized porphyrin has a band at 428 nm. This band moves at 466 nm in the presence of HCl. Mn porphyrin has a band at 466 nm. 15 ml of propanol-2 and 30 ml of ethyl ether are added to the reaction medium, the porphyrin precipitates. The suspension is centrifuged (for 10 minutes, speed 7) and the supernatant is removed. The green solid pellet is taken up in a methanol / water mixture (20/80, v / v) then the solvent is eliminated on a rotary evaporator and the solid is dried with a vacuum ramp. The powder is suspended in 40 ml of THF and stirred overnight at room temperature.
  • the mixture is centrifuged and the supernatant is removed.
  • the solid pellet is taken up in 30 ml of methanol / water mixture (50/50, v / v).
  • the counter-ions are exchanged for chlorides by adding 2 tips of DOWEX 1x8-200 resin spatula (charged with Cl " ) to the mixture and the mixture is left under mechanical stirring for 24 hours.
  • the mixture is filtered on sintered glass No. 3 which is then rinsed with 10 ml of methanol / water mixture (50/50, v / v).
  • the filtrate is recovered and the solvents are removed on a rotary evaporator.
  • the solid residue is taken up in the minimum of DMF, added 100 ⁇ l of distilled water, 5 ml of propanol-2 and 10 ml of ethyl ether and the porphyrin is left to precipitate for 1 hour at 4 ° C.
  • the suspension is then centrifuged for 10 minutes at speed 7 and the supernatant is removed.
  • the solid pellet is taken up in a methanol / water mixture (50/50, v / v), the solvent is evaporated, and the product is dried in a vacuum rack.
  • Manganese porphyrin is obtained with a yield of 78% (32.8 mg; 0.028 mmol).
  • the porphyrin of Ni has a band at 428 nm but it does not move in the presence of HCl. Nickel porphyrin is obtained with 82% yield
  • the porphyrin le (100 mg; 0.118 mmol) is dissolved in 15 ml of dry DMF. 40 equivalents of NMM (520 ⁇ l; 4.712 mmol) and 4 equivalents of 7-chloro, 4- [N- (4-aminobutyl) - amino] quinoline (117.4 mg; 0.471 mmol) are then added. The mixture is left to stir for 15 minutes under argon and then the BOP (4 equivalents; 208.4 mg; 0.471 mmol) is added and the mixture is stirred for 30 minutes at room temperature.
  • the reaction is monitored by TLC, eluting with a mixture of dichloromethane / ethanol (90/10, v / v) under an atmosphere of ⁇ H OH.
  • the mixture is evaporated on a rotary evaporator while heating to a temperature of 100 ° C.
  • the product is purified on a silica column: the column is conditioned with a dichloromethane / ethanol mixture (92/8, v / v) and the deposition is carried out in the minimum of this same mixture.
  • the methylated coupling product is obtained with a yield of 95%.
  • Manganese porphyrin is obtained with a yield of 66%.
  • Nickel porphyrin was obtained with a yield of 75%.
  • the human telomeric sequence was synthesized by the standard chemical method on solid phase ⁇ -cyanoethylphosphoramidite. The purification was carried out by electrophoresis on a 20% denaturing polyacrylamide gel. The DNA concentration was determined by UN measurement at 260 nm. The 5 'end of the DNA strand was labeled with [ 32 P] using the standard procedure with polynucleotide kinase T4 and ATP [ ⁇ - 32 P] ordered respectively from New England Biolabs and ICN Biomedical. 2) Oxidation of the human telomeric sequence by the compounds of formula (I) in accordance with the invention and KHSO j _
  • the cleavage reactions of the human telomeric sequence were carried out with DNA labeled in 5 ′ (final concentration 1 ⁇ M, 100,000-150,000 cpm) in a Tris / HCl buffer at pH 7 (50 mM) and KC1 (200 mM ) (Tris / KCl buffer) or NaCl (200 mM) (Tris / NaCl buffer).
  • the experiments were also carried out in 50 mM Tris / HCl buffer at pH 7 (Tris buffer).
  • the reaction medium is heated to 90 ° C for 10 minutes and then slowly cooled to room temperature.
  • the DNA is preincubated with different compounds of formula (I), namely the compounds of formulas (IA) and (IC) prepared in Examples 1 and 3 above
  • the cleavage reaction is initiated by addition of a freshly prepared solution of KHSO 5 (final concentration 500 ⁇ M, Curox ® from Interox). The final volume is 20 ⁇ l. After one hour at 0 ° C, the cleavage reactions are stopped by adding Hepes buffer pH 8 (final concentration 48 mM). The DNA samples are then diluted with 10 ⁇ l of 3M sodium acetate buffer (pH

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

La présente invention est relative à des molécules duales associant un dérivé de porphyrine avec une 2- ou 4-aminopyridine ou l'un de leur dérivés, à leur procédé de préparation, aux compositions pharmaceutiques les contenant et à leur utilisation à titre d'inhibiteur de la télomérase pour la préparation d'un médicament, notamment d'un médicament antitumoral.

Description

DERIVES DE PORPHYRINES, LEUR PROCEDE DE PREPARATION, COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES ET UTILISATIONS
La présente Invention est relative à des molécules duales associant un dérivé de porphyrine avec une 2- ou 4-aminopyridine ou l'un de leur dérivés, à leur procédé de préparation, aux compositions pharmaceutiques les contenant et à leur utilisation à titre d'inhibiteur de la télomérase pour la préparation d'un médicament, notamment d'un médicament antitumoral.
Dans le cadre de la lutte contre le cancer, et en particulier de la chimiothérapie, le milieu médical est toujours en attente de nouvelles molécules à activité antitumorale. Celles-ci pourraient par exemple être associées aux molécules existantes et déjà utilisées dans le cadre des multi-thérapies qui combinent plusieurs médicaments aux mécanismes d'action différents.
A cet égard, les telomères constituent une cible biologique privilégiée pour la recherche de molécules antitumorales.
Tandis que les chromosomes sont constitués d'ADN double brin classique ou duplex, les telomères, qui sont les extrémités des chromosomes, adoptent une structure en quadruplex très particulière. La séquence de l'ADN des telomères est riche en guanines. Un ADN quadruplex est constitué de quatre brins qui s'associent grâce à la formation de tétrades de guanines. Les telomères constituent ainsi, de par cette structure caractéristique, une cible biologique pour des molécules capables de les reconnaître sélectivement. Ils représentent de plus une cible sélective de cellules tumorales. Les cellules normales voient la taille de leurs telomères diminuer à chaque division cellulaire jusqu'à une taille critique qui induit l'entrée de la cellule dans la phase de mort cellulaire programmée ou apoptose.
Dans au moins 80% des cancers humains, les cellules tumorales possèdent une enzyme, la télomérase, qui allonge continuellement les telomères. Le fait que les telomères des cellules tumorales gardent toujours une taille supérieure à la taille critique d'entrée en apoptose, confère à ces cellules la capacité de se diviser indéfiniment. La réduction de la taille des telomères est donc une voie prometteuse dans la mise au point de nouveaux agents anticancéreux. Deux stratégies sont envisageables : - l'inhibition de la télomérase, active dans les cellules cancéreuses, par toute molécule se fixant sur les telomères ;
- le raccourcissement des telomères à l'aide d'une molécule capable de couper l'ADN télomérique. La proposition des telomères comme cibles biologiques d'agents anticancéreux est récente (Zakian N.A., Science, 1995, 270, 1601-1607). Deux aspects sont importants (i) la découverte du rôle des telomères comme horloge biologique des cellules, ayant donc une importance clé dans la manifestation du caractère cancéreux d'une cellule et (ii) la détermination de la structure particulière des telomères. Des molécules capables de cibler ces structures in vivo ont donc été recherchées.
D'après la littérature, quelques molécules capables de reconnaître les structures particulières des telomères et d'inhiber la télomérase ont été décrites. Il s'agit de la 2,6-diaminoanthraquinone (2,6-DAQ) (Sun D. et al., J. Med. Chem., 1997, 40, 2113-2116), du Ν,Ν'-bis-[2-(l -piperidino)éthyl]-3,4,9, 10-pérylènetétracarboxy- lique diimide (PIPER) (Fedoroff ON. et al., Biochemistry, 1998, 37, 12367-12374), de dérivés de la porphyrine (Wheelhouse R.T. et al., J. Am. Chem. Soc, 1998, 120, 3261-3262 ; demande de brevet EP 0 345 171 ; demande internationale WO 98/33503 et Nialas C. et al., Biochemistry, 2000, 39, 9514-9522) ou bien encore de dérivés de quinacridines (Mergny J.-L. et al., Proc. Νatl. Acad. Sci., 2001, 98, 3062-3067). Par ailleurs, la demande internationale WO 01/40218 décrit des dérivés arylamines, de type quinoléines et leur interaction avec les structures d'ADN quadruplex.
De telles molécules, capables de cibler les telomères et d'inhiber la télomérase par ce biais, ont été sélectionnées pour leur forte affinité pour les structures d'ADN quadruplex. Cette affinité est le gage de la reconnaissance sélective, par ces molécules des structures d'ADN télomérique dans les cellules. Les molécules doivent interagir avec les telomères et non avec l'ADN normal. Ainsi seules les cellules dépendantes de l'allongement de leur telomères pour leur survie, comme les cellules tumorales, seront sensibles à ces molécules. Les cellules normales ne seront pas perturbées.
Cependant les molécules proposées dans l'art antérieur ne présentent pas toujours une affinité suffisante pour les ADNs quadruplex. C'est donc afin de remédier à ce problème et de pourvoir à des molécules présentant une affinité améliorée pour les ADNs quadruplex que les Inventeurs ont mis au point ce qui fait l'objet de l'Invention.
Les Inventeurs se sont en particulier fixés pour but de pourvoir à des molécules pouvant être utilisées à titre d'inhibiteur de la télomérase et présentant une affinité avec les telomères encore améliorée par rapport à celle des molécules décrites dans l'art antérieur.
La présente Invention a donc pour premier objet des molécules duales associant un dérivé de porphyrine avec au moins une aminopyridine ou l'un de ses dérivés, caractérisées par le fait qu'elles sont choisies parmi les composés de formule suivante et leurs sels pharmaceutiquement acceptables :
Figure imgf000004_0001
dans laquelle : les radicaux Ri à R4 situés en position méso du noyau porphyrine, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupement choisi parmi : - les groupements aminopyridine de formules (Ha) et (Ilb) suivantes
Figure imgf000005_0001
dans lesquels :
. R5, R6, R et R8, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou d'halogène, un radical alkyle en Cι-C , alcoxy en Ci-C ou un groupement aryle ; deux au moins des radicaux R5ι R6, R7 et R8 conjointement avec l'atome de carbone du cycle aminopyridine auquel ils sont liés, peuvent également former un cycle aromatique à 5 ou 6 chaînons, lui-même étant éventuellement substitué par un atome d'halogène, un radical alkyle en Cι-C , alcoxy en C1-C ) un groupement aromatique ou étendu par un cycle aromatique à 5 ou 6 chaînons ;
. B représente un bras de liaison constitué par une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, éventuellement substituée, interrompue et/ou terminée par un ou plusieurs hétéroatomes tels que N, O ou S, et/ou par un ou plusieurs groupements choisis parmi les radicaux alkyle en Cι-C4, alcoxy en Cι-C4, aryle ou par une ou plusieurs fonctions choisies parmi les fonctions ether, ester, amide, carbonyle, carbamate, urée, thiourée et disulfure ; étant entendu que lorsque ledit bras de liaison B représente une chaîne comprenant une fonction amide, alors ladite fonction amide n'est pas directement rattachée à l'aminé située en position 4 ou 2 respectivement des groupements de formules (Ha) et (Ilb) ;
- les groupements N-alkyl-pyridiniumyle de formule (III) suivante :
Figure imgf000005_0002
dans laquelle : . X, Y et Z, identiques ou différents, représentent un atome de carbone ou un atome d'azote substitué par un radical R9 choisi parmi l'hydrogène, les radicaux alkyle en Cι-C et les groupements de formules (Ha) et (Ilb) ci-dessus ; étant entendu qu'au moins un et seulement un seul des sommets X, Y et Z représente un atome d'azote substitué par un radical R ;
A est un anion organique ou minéral, de préférence choisis parmi les anions compatibles avec une utilisation pharmaceutique tels que les chlorures, les acétates et les citrates ;
• M est métal inerte en oxydation ou à propriétés redox ; lesdits composés de formule (I) comportant au moins un groupement de formule (Ha) ou (Ilb) et au moins un groupement de (III).
Les composés de formule (I) conformes à l'Invention sont basés sur l'association de deux motifs à propriétés complémentaires.
L'entité porphyrine qui interagit par empilement avec les tétrades planes est associée avec au moins un motif 2- ou 4-aminopyridine qui peut se loger dans les sillons des telomères. Le motif porphyrinique assure une forte affinité avec les telomères. La structure plane aromatique de la porphyrine vient interagir avec les tétrades de guanines qui forment les quadruplex caractéristiques des telomères. Deux types de porphyrines peuvent être envisagés selon la nature du métal central, soit inerte en oxydation (inhibiteur de télomérase) ou bien un métal à propriétés rédox (capable de provoquer des coupures d'ADN).
Les motifs 2- et 4-aminopyridine sont reconnus comme capables de traverser les membranes cellulaires et permettent ainsi l'internalisation des dérivés porphyriniques de formule (I) dans les cellules. De plus, grâce à leurs propriétés d'interaction avec les acides nucléiques, ils contribuent aussi à une meilleure affinité des composés de formule (I) pour leur cible biologique : les telomères.
Selon l'Invention, on entend par groupement aryle, tout groupement aromatique possédant un ou plusieurs noyaux benzeniques, naphtalénique ou anthracéniques, lesdits noyaux contenant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes tels que O, N ou S, et étant éventuellement substitués par un ou plusieurs groupes choisis parmi les atomes d'halogène, les radicaux alkyles en Cι-C , amino, aminoalkyle en Cι-C4, alkyl(Cι-C )aminoalkyle en Cχ-C , dialkyle(Cι-C )aminoalkyle en Cι-C , nitro, alkylèneamino en Cι-C ou alkénylèneamino en C2-C4.
Parmi les atomes d'halogène désignés pour R5> R6, R7 et Rs, les atomes de chlore et de brome sont préférés.
Le nombre d'atomes de carbone constituant la chaîne hydrocarbonée du bras de liaison B est de préférence compris entre 1 et 24.
M est de préférence un métal de transition choisi parmi ceux de la première rangée du tableau de Mendeleïev, en particulier le nickel et le manganèse, ceux de la deuxième rangée, en particulier le palladium ou encore ceux de la troisième rangée, en particulier le platine et l'or.
Parmi les groupements de formules (Ha) et (Ilb) ci-dessus, on peut tout particulièrement citer les groupements 4-aminopyridine, 2-aminopyridine, 4-aminoquinoléine, 2-aminoquinoléine, 9-aminoacridine, ainsi que les groupements de formules suivantes (IIa-1) à (IIa-9) et (11b- 1) à (IIb-5) :
Figure imgf000007_0001
Figure imgf000007_0002
Figure imgf000007_0003
Figure imgf000008_0001
Figure imgf000008_0002
(llb-3)
(llb-4) et
Figure imgf000009_0001
(llb-5)
dans lesquelles les sommets Wls W2, W et W , identiques ou différents, représentent un atome de carbone ou d'azote, lesdits groupements étant éventuellement substitués par un ou plusieurs atomes d'halogène et/ou par un ou plusieurs radicaux alkyle ou alcoxy en Cι-C4.
Parmi les groupements de formule (Ha) ci-dessus, le groupement 7-chloro-4-aminoquinoléine est particulièrement préféré.
Parmi les groupements de formule (III) ci-dessus, on peut notamment citer les groupements para-alkyl-pyridinium tels que les groupements 4-méthylpyridinium, 4-éthylpyridinium, 4-propylpyridinium et 4-butylpyridinium.
Selon une forme de réalisation préférée de l'Invention, le bras de liaison B répond à la formule Bl suivante :
-Ph-V1 — D — V2— Alk- (B 1 )
dans laquelle :
- Ph représente un radical phényle,
- NI et N2, identiques ou différents, représentent une liaison ether, ester, amide, carbamoyle, carbamate, urée, thiourée ou disulfure, située en position para, ortho ou meta par rapport au point d'accrochage du radical phényle sur le noyau porphyrine,
- D représente une chaîne aliphatique en Cι-Cι2 linéaire, ramifiée ou cyclique, comportant éventuellement une ou plusieurs fonctions aminé ; ou un groupement aromatique,
- Alk représente une chaîne alkyle en Cι-Cι2.
Selon l'Invention, le bras de liaison Bl dans lequel NI représente une liaison ether, D et Alk sont identiques et représentent une chaîne alkyle linéaire en C4 et N2 représente une liaison amide est particulièrement préféré (bras de liaison B1A).
Parmi les molécules duales de formule (I) conforme à l'Invention, on préfère les composés comportant comme substituants Ri à j, trois groupements para- alkyl-pyridinium et un groupement de formule (Ilb) qui est un groupement 7-chlro-4- aminoquinoléine relié au noyau porphyrine par un bras de liaison B 1 A.
La présente Invention a également pour objet le procédé de préparation des molécules duales de formule (I) caractérisé par le fait qu'il consiste : - dans une première étape, à faire réagir, en milieu solvant organique, une porphyrine de formule (T) suivante :
Figure imgf000010_0001
dans laquelle les groupements R'i à R'4, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupement pyridine ou un groupement -B'Rio, dans lequel B' représente un bras de liaison choisi parmi un radical phényle ou une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, éventuellement substituée ou interrompue par un ou plusieurs hétéroatomes tels que Ν, O ou S, et/ou par un ou plusieurs groupements choisis parmi les radicaux alkyle en Cι-C , alcoxy en Cι-C , aryle ou par une ou plusieurs fonctions choisies parmi les fonctions ether, ester, amide, carbonyle, carbamate, urée, thiourée et disulfure, et Rio représente une fonction apte à permettre l'accrochage d'un groupement de formules (II1 a) ou (H'b) ; étant entendu que l'un au moins des radicaux R'i à R'4 représente un groupement -B'Rio ; avec un composé de formules (lia') ou (Ilb') suivantes :
Figure imgf000011_0001
dans lesquelles :
. R'5, R'Ô, R'7 et R'8 identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou d'halogène, un radical alkyle en Cι-C4, alcoxy en Cι-C ou un groupement aryle ; deux au moins des radicaux R'5; R'6, R'7 et R'8 conjointement avec l'atome de carbone du cycle aminopyridine auquel ils sont liés, peuvent également former un cycle aromatique à 5 ou 6 chaînons, lui-même étant éventuellement substitué par un atome d'halogène, un radical alkyle en Cι-C , alcoxy en Cι-C4, un groupement aromatique ou étendu par un cycle aromatique à 5 ou 6 chaînons ;
- R'n représente une fonction d'accrochage compatible avec la fonction d'accrochage choisie pour R'ι0 ou un atome d'hydrogène,
- B" peut prendre les mêmes significations que celles indiquées ci- dessus pour B', pour obtenir un composé de formule (I") suivante :
Figure imgf000011_0002
dans laquelle les radicaux R"ι à R"4, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupement pyridine ou un groupement aminopyridine de formule (Ha) ou (Ilb) suivantes :
Figure imgf000012_0001
dans lesquels :
. les radicaux R5] R6, R7 et R8, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou d'halogène, un radical alkyle en Cι-C4, alcoxy en Cι-C ou un groupement aryle ; deux au moins des radicaux R5> RÔ, R7 et R8 conjointement avec l'atome de carbone du cycle aminopyridine auquel ils sont liés, peuvent également former un cycle aromatique à 5 ou 6 chaînons, lui-même étant éventuellement substitué par un atome d'halogène, un radical alkyle en Cι-C4, alcoxy en Cι-C j un groupement aromatique ou étendu par un cycle aromatique à 5 ou 6 chaînons ; . B représente un bras de liaison constitué par une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, éventuellement substituée, interrompue et/ou terminée par un ou plusieurs hétéroatomes tels que N, O ou S, et/ou par un ou plusieurs groupements choisis parmi les radicaux alkyle en C1-C4, alcoxy en C1-C4, aryle ou par une ou plusieurs fonctions choisies parmi les fonctions ether, ester, amide, carbonyle, carbamate, urée, thiourée et disulfure, étant entendu que lorsque ledit bras de liaison B représente une chaîne comprenant une fonction amide, alors ladite fonction amide n'est pas directement rattachée à l'aminé située en position 4 ou 2 respectivement des groupements de formules (Ha) et (Ilb) ; puis
- dans une deuxième étape, à quaterniser éventuellement, en milieu acide, le ou les groupements pyridine du composé de foπnule (I") en présence d'un halogénure d'alkyle en Cι-C tel que l'iodure de méthyle ou d'un halogénure d'un groupement de formules (lia') ou (Ilb'), puis
- dans une troisième étape, à faire réagir, en milieu solvant organique, le composé obtenu ci-dessus à la troisième étape, avec un sel d'un métal M, pour obtenir la molécule duale de formule (I) correspondante.
Les procédés de préparation des porphyrines de formule (Y) ont déjà été décrits dans l'état antérieur de la technique, notamment dans les articles de Casas C. et al, J. Org. Chem., 1993, 58, 2913-2917 et de Bigey P. et al, Bull. Soc. Cliim. Fr., 1996, 133, 679-689.
Par ailleurs, la préparation des groupements aminopyridine de formule (Ha') et (Ilb') ci-dessus peut être réalisée selon la méthode décrite par Krogstad F.M. et al, J. Med. Chem., 1998, 41, 4918-4926.
Les deux premières étapes du procédé de préparation conforme à l'Invention sont de préférence réalisées à température ambiante, tandis que la troisième étape est de préférence réalisée à une température comprise entre 80 et 120°C environ et plus particulièrement à une température d'environ 100°C. Les solvants organiques utilisés lors des différentes étapes du procédé de préparation conforme à l'Invention sont de préférence choisis parmi les solvants hydroalcooliques tel que le méthanol, l'éthanol et le propanol, la diméthylfonnamide, le dichlorométhane, la N-méthylmorpholine, le benzotriazol-1- yloxytris(diméthyl-amino)phosphonium et leurs mélanges. Parmi les fonctions d'accrochage R'io et R'u, on peut notamment citer les fonctions carboxylique ; thiol ; aminé ; -NHR dans laquelle R représente un radical alkyle linéaire ou ramifié en Cι-C ; hydroxyle ; phosphate et halogène.
A titre d'exemple, lorsque R'io représente une fonction carboxylique ou hydroxyle, R'n peut représenter une fonction aminé et inversement et lorsque R'io représente une fonction thiol, R'n représente de préférence une fonction thiol également.
L'Invention a également pour objet une composition pharmaceutique caractérisée par le fait qu'elle renferme, à titre de principe actif, au moins une molécule duale de formule (I) telle que définie ci-dessus et au moins un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
La composition pharmaceutique conforme à l'Invention peut être administrée sous différentes formes, plus spécialement par voie orale, rectale ou injectable.
La quantité de molécules duales de formule (I) présente dans la composition pharmaceutique conforme à l'Invention correspond de préférence à des doses unitaires comprises entre 10 g et 800 mg. La nature du véhicule pharmaceutiquement acceptable, présent au sein de la composition pharmaceutique conforme à l'Invention, variera bien entendu en fonction du mode d'administration et de la présentation galénique de ladite composition. Le véhicule pharmaceutiquement acceptable est généralement constitué d'un ou de plusieurs excipients classiquement utilisés pour la préparation de compositions pharmaceutiques injectables, tels que du sérum physiologique, des sels minéraux, des vitamines.
Bien entendu, l'homme de l'art veillera à cette occasion à ce que le ou les additifs éventuellement utilisés soient compatibles avec les propriétés intrinsèques attachées à la composition pharmaceutique conforme à l'Invention.
La composition pharmaceutique conforme à l'Invention peut en outre renfermer un ou plusieurs principes actifs additionnels, en particulier un ou plusieurs principes actifs à activité antitumorale. Enfin, l'Invention a pour objet l'utilisation d'au moins un composé de formule (I) ci-dessus à titre d'inhibiteur des télomérases, pour la préparation d'un médicament, et en particulier d'un médicament antitumoral.
Outre les dispositions qui précèdent, l'Invention comprend encore d'autres dispositions qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de préparation de composés de formule (I) conformes à l'Invention et à un exemple de mise en évidence de la spécificité des composés de formule (I) vis-à-vis des séquences télomériques, ainsi qu'à la figure 1 annexée qui représente l'autoradiographie d'un gel d'électrophorèse sur lequel sont visualisés des fragments d'ADN après traitement avec des composés de formule (I) conformes à l'Invention.
EXEMPLE 1 : SYNTHÈSE D'UN COMPOSE DE FORMULE (I) COMPORTANT TROIS MOTIFS DE FORMULE (II) ET UN MOTIF DE FORMULE (IIP, ; COMPOSE (IA) :
Figure imgf000015_0001
1) Première étape : Synthèse d'un composé (la) à novau porphyrine tetrasubstitué comportant, en position éso, trois groupements pyridine et un groupement acide phénoxybutylcarboxylique.
Le composé (la) répond à la formule suivante :
Figure imgf000015_0002
Dans un ballon de 100 ml, on sèche sous vide un mélange de
5-[4-[(éthylcarbonyl)oxy]phényl]-10,15,20-tris(4-pyridyl)porphyrine (1 équivalent ;
400 mg ; 0,59 mmol) et de NaOH (25 équivalents ; 590 mg ; 14,75 mmol). Les poudres sont alors placées sous argon et on additionne 40 ml de diméthylformamide (DMF) séché sur tamis moléculaire. La solution passe du violet au vert.
Après 3 heures d'agitation à température ambiante, lorsque tout le phénol a réagi (contrôle sur chromatographie sur couche mince, CCM), on ajoute 145 μl de 5-bromo-valérate d'éthyle (1,5 équivalent ; 0,885 mmol).
Après 2 h 30 d'agitation à température ambiante, lorsque tout le phénolate a réagi (contrôle sur CCM), on additionne quelques gouttes d'eau distillée au milieu réactionnel pour hydrolyser l'ester en acide carboxylique. Quand cette hydrolyse est terminée, on ajoute 100 ml d'eau distillée dans le ballon et on neutralise le milieu réactionnel avec de l'acide chlorhydrique à 37% (contrôle au papier pH). La porphyrine précipite et elle est extraite avec 2 x 250 ml de dichlorométhane. La phase organique est lavée avec 2 x 300 ml d'eau distillée puis séchée sur sulfate de sodium anhydre.
Le mélange est ensuite filtré sur coton et le dichlorométhane est évaporé. La poudre violette ainsi obtenue est séchée à la rampe.
Le suivi en CCM de la synthèse est réalisé de la façon suivante : une goutte du milieu réactionnel est prélevée, on lui ajoute quelques gouttes d'eau distillée et de solution d'acide citrique à pH 3 (200 mg dans 200 mL) jusqu'à ce que la porphyrine précipite. Quelques gouttes de dichlorométhane extraient la porphyrine qui est alors déposée sur CCM. L'éluant utilisé est un mélange dichlorométhane / éthanol (94/6). Rf (phénol) = 0,34; Rf (phénolate) = 0,24 ; Rf (acide) = 0,15 ; Rf (ester) = 0,40.
La poudre violette obtenue est ensuite purifiée sur colonne de silice : une colonne est conditionnée avec un mélange de solvant dichlorométhane / éthanol (95/5, v/v) et le produit est déposé sur la colonne dans le minimum de ce même mélange. On élue alors avec 3 litres de mélange dichlorométhane / éthanol (94/6, v/v) puis avec 2 litres à 93/7 enfin 2 litres à 92/8. Les fractions identiques sont rassemblées et le solvant est éliminé au rotavapor. Le solide violet est repris dans le minimum de dichlorométhane et on ajoute 200 ml d'hexane. Le mélange est placé, pendant une nuit à 4°C pour que la porphyrine précipite. La suspension obtenue est filtrée sur verre fritte n°3, le filtrat est éliminé et la poudre violette est reprise dans du dichlorométhane. Le solvant est évaporé au rotavapor et la poudre est séchée à la rampe à vide. Le produit pur (la) est obtenu avec un rendement de 65% ( 275 mg; 0,385 mmol).
RMN 1H (CDC13) : δ = -2,87 (s ; 2H ; NHpyroιie) ; 2,13 (m ; 4H O-CH2-CH2-CH2) ; 2,68 (t ; 3JHH = 6,3 Hz ; 2H; CH2-COOH) ; 4,33 (t ; 3JHH = 6,3 Hz 2H ; O-CH2) ; 7,31 (d ; 3JHH = 8,6 Hz ; 2H ; CHb) ; 8,10 (d ; 3JHH = 8,6 Hz ; 2H CHa) ; 8,16 (d ; 3JHH = 5,9 Hz ; 6H ; CHC) ; 8,80 (d ; 3JHH = 4,8 Hz ; 2H ; CHe ou f) 8,84 (s ; 4H ; CHg) ; 8,97 (d ; 3JHH = 4,8 Hz; 2H ; CHf ou β) ; 9,04 (d ; 3JHH = 5,9 Hz 6H; CHd) ppm. Le signal du proton de la fonction acide carboxylique n'a pas été observé.
Analyse élémentaire pour C 6H35N O3, 2H2O :
Figure imgf000017_0001
2) Deuxième étape : Réaction de couplage entre la porphyrine (la) et le fragment quinoléine
Dans un ballon de 50 ml sous argon, on dissout 100 mg de porphyrine (la) obtenue ci-dessus à la première étape (1 équivalent ; 0,136 mmol) dans 15 ml de dichlorométhane fraîchement distillé. On additionne alors 20 équivalents de N-méthylmorpholine (ΝMM) (300 μl ; 2,725 mmol) et 2 équivalents d'hexafluorophosphate de benzotriazol- 1 -yloxytris(diméthyl-amino)phosphonium (BOP) (124 mg ; 0,272 mmol). Quand tout l'acide a été activé (contrôle sur plaque CCM éluant dichlorométhane/éthanol : 97/3, v/v), on ajoute sous argon 2 équivalents de 7-chloro,4-[N-(4-aminobutyl)-amino]quinoléine (70 mg ; 0,272 mmol). Après 30 minutes d'agitation magnétique à température ambiante, on contrôle par CCM que la réaction est terminée (éluant dichlorométhane/éthanol : 97/3, v/v sous atmosphère de ΝH4OH). Le mélange réactionnel est alors lavé avec 3 x 30 ml d'eau distillée puis séché sur sulfate de sodium anhydre et filtré sur coton. Le solvant est éliminé au rotavapor.
Le produit obtenu est purifié sur colonne de silice : la colonne est conditionnée avec un mélange dichlorométhane/éthanol (94/6, v/v) avec quelques gouttes de NH4OH et le dépôt est effectué dans le minimum de ce même mélange. On élue avec 200 ml de dichlorométhane/éthanol (94/6, v/v) + 20 μl de NH4OH puis avec 1 1 de dichlorométhane/éthanol (93/7, v/v) + 100 μl de NH OH. Les fractions identiques sont rassemblées et le solvant est évaporé. La poudre violette est reprise dans le minimum de dichlorométhane puis on lui additionne 200 ml d'éther éthylique. Le mélange est placé une nuit à 4 °C et la porphyrine précipite. La suspension est filtrée sur verre fritte n°3, le filtrat est éliminé et la poudre est reprise dans un mélange dichlorométhane/éthanol (90/10, v/v), le solvant est évaporé et la poudre violette est séchée à la rampe à vide. Le produit de couplage est obtenu avec un rendement de 95% (124,1 mg; 0,129 mmol). RMN 1H (CDCI3) : δ = -2,88 (s ; 2H; NHpyroιιe) ; 1,79 (m ; 4H ;
C(O)-NH-CH2-CH2-CH2 ) ; 2,05 (m ; 4H ; O-CH2-CH2-CH2) ; 2,42 (t ; 3JHH = 6,3 Hz ; 2H ; CH2-C(O)-NH) ; 3,41 (m ; 4H ; C(O)-NH-CH2, et CH2-quinoléine), 4,27 (t ; 3JHH = 6,1 Hz ; 2H ; O-CH2) ; 5,85 (t ; 3JHH = 6,0 Hz ; 1H ; NHbras) ; 5,92 (t ; 3JHH = 6,1 Hz ; 1H ; NHbras) ; 6,39 (d ; 3JHH = 5,5 Hz; 1H ; CHa.) ; 7,27 (d ; 3JHH = 8,6 Hz; 2H CHb) ; 7,35 (dd ; 3JHH = 9,0 Hz ; 4JHH = 2,2 Hz ; 1H ; CHd') ; 7,88 (d ; 3JHH = 9,0 Hz 1H ; CHe.) ; 7,91 (d ; 4JHH = 2,2 Hz ; 1H ; CH0.) ; 8,09 (d ; 3JHH = 8,6 Hz ; 2H ; CHa) 8,15 (m ; 6H ; CHC) ; 8,47 (d ; 3JHH = 5,5 Hz ; 1H ; CHb.) ; 8,80 (d ; 3JHH = 4,8 Hz 2H ; CHe ou f) ; 8,85 (s ; 4H ; CHg) ; 8,95 (d ; 3JHH = 4,8 Hz ; 2H ; CHe ou f) ; 9,04 (m 6H ; CH ) ppm.
3) Troisième étape : Méthylation des groupements pyridine du produit de couplage obtenu à la deuxième étape.
Le produit de couplage obtenu ci-dessus à la deuxième étape (124 mg ; 0,129 mmol) est dissous dans 20 ml de DMF séché sur tamis moléculaire puis on ajoute à la solution 1 équivalent d'acide chlorhydrique 1 M dans l'éther (130 μl ; 0,129 mmol). Le mélange est ensuite agité pendant 30 minutes à température ambiante puis on additionne 50 équivalents d'iodure de méthyle (400 μl ; 6,473 mmol). La solution est maintenue sous agitation magnétique pendant 6 heures à température ambiante, puis on évapore l'excès d'iodure de méthyle et le solvant au rotavapor en chauffant à 100 °C. Le résidu solide marron est repris dans 5 ml de DMF, on lui ajoute 1 équivalent de triéthylamine (18 μl ; 0,129 mmol). Le mélange est agité pendant 30 minutes à température ambiante. On ajoute au mélange 15 ml de propanol-2 et 30 ml d'éther éthylique, la porphyrine précipite. La suspension est centrifugée (pendant 10 minutes, vitesse 7) et le surnageant est éliminé. Le culot solide marron est repris dans un mélange méthanol/eau (20/80, v/v) et les solvants sont évaporés au rotavapor. Le produit ainsi obtenu est séché à la rampe à vide pour donner une poudre marron avec un rendement de 91 % (170,5 mg ; 0,118 mmol).
RMN 1H (DMSO-- ) : δ = -3,01 (s ; 2H ; NHpyroUe) ; 1,64 (m ; 4H C(O)-NH-CH2-CH2-CH2 ) ; 1,87 (m ; 4H ; O-CHz-CKb-CHî) ; 2,27 (t ; 3JHH ≈ 6,3 Hz 2H ; CH2-C(O)-NH) ; 3,17 (m ; 2H ; C(O)-NH-CH2, ou CH2-quinoléine) ; 3,45 (m 2H ; C(O)-NH-CH2, ou CH^-quinoléine) ; 4,28 (m ; 2H ; O-CH2) ; 4,73 (s ; 9H N-CH3) ; 6,73 (d ; 3JHH = 6,5 Hz ; 1H; CHa.) ; 7,42 (d ; 3JHH = 8,5 Hz ; 2H ; CHb) 7,63 (dd ; 3JHH = 9,0 Hz ; 4JHH ≈ 1,9 Hz ; 1H ; CHd') ; 7,80 (d ; 4JHH = 1,9 Hz ; 1H CHc-) ; 7,95 (s ; 4H ; CHg) ; 8,14 (d ; 3JHH = 8,5 Hz ; 2H ; CHa) ; 8,43 (d ; 3JHH = 9,0 Hz ; 1H ; CHβ.) ; 8,47 (d ; 3JHH = 6,5 Hz ; 1H ; CHb-) ; 9,00 (d ; 3JHH = 6,2 Hz ; 6H ; CHC) ; 9,12 (s ; 2H ; CHe ou f) ; 9,25 (s ; 2H ; CHe ou f) ; 9,51 (d ; 3JHH = 6,2 Hz ; 6H ; CHa) ppm.
4) Quatrième étape : Synthèse du composé (LA) par métallation du composé obtenu à la troisième étape. 50 mg (0,036 mmol) du produit de couplage méthylé obtenu ci- dessus à la troisième étape sont mis en solution dans 3 ml de mélange DMF/eau (50/50) dans un ballon de 25 ml surmonté d'un réfrigérant. La solution est chauffée à 100°C puis on lui additionne un mélange de diacétate de Mn (6 équivalents ; 0,216 mmol) et de 2,4,6-collidine (7 équivalents ; 0,251 mmol) dans 1,2 ml de DMF. Le chauffage et l'agitation sont maintenus pendant 2 heures et 30 minutes. Le suivi de la réaction est réalisé par absorption UN. La porphyrine non métallée présente une bande à 428 nm. Cette bande se déplace à 466 nm en présence d'HCl. La porphyrine de Mn présente une bande à 466 nm. Au milieu réactionnel on ajoute 15 ml de propanol-2 et 30 ml d'éther éthylique, la porphyrine précipite. La suspension est centrifugée (pendant 10 minutes, vitesse 7) et le surnageant est éliminé. Le culot solide vert est repris dans un mélange méthanol/eau (20/80, v/v) puis le solvant est éliminé au rotavapor et le solide est séché à la rampe à vide. La poudre est mise en suspension dans 40 ml de THF et agitée pendant une nuit à température ambiante. Le mélange est centrifugé est le surnageant est éliminé. Le culot solide est repris dans 30 ml de mélange méthanol/eau (50/50, v/v). On procède à l'échange des contre-ions par des chlorures en ajoutant 2 pointes de spatule de résine DOWEX 1x8-200 (chargée en Cl") au mélange et on laisse sous agitation mécanique pendant 24 heures. Le mélange est filtré sur verre fritte n°3 qui est ensuite rincé avec 10 ml de mélange méthanol/eau (50/50, v/v). Le filtrat est récupéré et les solvants sont éliminés au rotavapor. Le résidu solide est repris dans le minimum de DMF, on ajoute 100 μl d'eau distillée, 5 ml de propanol-2 et 10 ml d'éther éthylique et on laisse la porphyrine précipiter pendant 1 heure à 4°C. La suspension est ensuite centrifugée pendant 10 minutes à vitesse 7 et le surnageant est éliminé. Le culot solide est repris dans un mélange méthanol/eau (50/50, v/v), le solvant est évaporé, et le produit est séché à la rampe à vide.
La porphyrine de manganèse est obtenue avec un rendement de 78 % (32,8 mg ; 0,028 mmol).
Analyse par spectrophotométrie de MASSE (électrospray mode positif) :
Figure imgf000020_0001
Les valeurs sont calculées à partie de la masse exacte. EXEMPLE 2 : SYNTHÈSE D'UN COMPOSÉ DE FORMULE (I) COMPORTANT TROIS MOTIFS DE FORMULE (II) ET UN MOTIF DE FORMULE (IIP : COMPOSE (IB)
Figure imgf000021_0001
A partir du produit obtenu ci-dessus à l'issue de la troisième étape de l'exemple 1 , on procède à la métallation en utilisant du diacétate de Ni dans les mêmes conditions que celles indiquées ci-dessus à la quatrième étape de l'exemple 1.
La porphyrine de Ni présente une bande à 428 nm mais elle ne bouge pas en présence d'HCl. La porphyrine de nickel est obtenue avec 82% de rendement
(34,5 mg ; 0,029 mmol).
Analyse par spectrophotométrie de MASSE (électrospray mode positif) :
Figure imgf000021_0002
EXEMPLE 3 : SYNTHÈSE D'UN COMPOSE DE FORMULE (I) COMPORTANT DEUX MOTIFS DE FORMULE (II) ET DEUX MOTIFS DE FORMULE (III) : COMPOSE (IC)
Figure imgf000022_0001
1) Première étape : Synthèse d'un composé (le) à noyau porphyrine tetrasubstitué comportant, en position méso, deux groupements pyridine et deux groupements acide phénoxybutylcarboxylique.
Le composé (le) répond à la formule suivante :
Figure imgf000023_0001
Le mode opératoire utilisé est identique à celui déjà décrit à la première étape de l'exemple 1 ci-dessus pour la préparation de la porphyrine la mais en partant de la 5,10-bis[4-[(éthylcarbonyl)oxy]phényl]-15,20-bis(4-pyridyl) porphyrine.
50 équivalents de NaOH sont utilisés et le mélange réactionnel est agité pendant 3 heures à température ambiante puis 3 équivalents de 5-bromo-valérate d'éthyle sont ajoutés et l'agitation est maintenue pendant 24 heures à température ambiante. Le produit n'est pas chromatographié sur colonne de silice mais il est précipité à l'éther. Pour ce faire, le produit est repris (après neutralisation, extraction et évaporation) dans le minimum de mélange CH2Cl2/EtOH (90/10, v/v) et précipité par addition de 200 ml de diéthyl éther. Le produit pur le est obtenu avec un rendement de 73%.
RMN 1H (CDC13) : δ = -2,96 (s ; 2H ; NHpyroιιe) ; 1,83 (m ; 8H ; O-CH2.CH2-CH2 ) ; 2,41 (t ; 3JHH = 6,9 Hz ; 4H ; CE -COOH) ; 4,25 (t ; 3JHH = 6,0 Hz ; 4H ; O-CH2) ; 7,35 (d ; 3JHH = 8,5 Hz ; 4H ; CHb) ; 8,09 (d ; 3JHH = 8,5 Hz ; 4H ; CHa) ; 8,24 (d ; 3JHH = 5,7 Hz ; 4H ; CH0) ; 8,83 (d ; 3JHH = 5,0 Hz ; 2H ; CHkou 1) ; 8,86 (s ; 2H ; CHi ouj) ; 8,89 (s ; 2H; CHi ouj) ; 8,91 (d ; 3JHH = 5,0 Hz ; 2H ; CHkou l) ; 9,03 (d ; 3JHH = 5,7 Hz ; 4H ; CHd) ; 12,1 (s ; 2H ; COOH) ppm. Analyse élémentaire pour C52H N6O6, 3,5H2O :
Figure imgf000024_0001
2) Deuxième étape : Réaction de couplage entre la porphyrine (le) et deux fragments quinoléine
Dans un ballon de 50 ml sous argon, on dissout la porphyrine le (100 mg ; 0,118 mmol) dans 15 ml de DMF sec. On additionne ensuite 40 équivalents de NMM (520 μl ; 4,712 mmol) et 4 équivalents de 7-chloro,4-[N-(4-aminobutyl)- amino] quinoléine (117,4 mg ; 0,471 mmol). On laisse agiter pendant 15 minutes sous argon puis on additionne le BOP (4 équivalents ; 208,4 mg ; 0,471 mmol) et on agite pendant 30 minutes à température ambiante. La réaction est suivie par CCM en éluant avec un mélange de dichlorométhane/éthanol (90/10, v/v) sous atmosphère de ΝH OH. Quand la réaction est terminée, le mélange est évaporé au rotavapor en chauffant à une température de 100°C. Le produit est purifié sur colonne de silice : la colonne est conditionnée avec un mélange dichlorométhane/éthanol (92/8, v/v) et le dépôt est réalisé dans le minimum de ce même mélange. On élue avec 100 ml de CH2Cl2/EtOH (92/8, v/v) en présence de NH4OH, puis avec 100 ml de mélange CH2Cl2/EtOH (9/91, v/v) puis avec 2 1 du même mélange à 10/90, v/v. Les fractions identiques sont rassemblées et le solvant est éliminé au rotavapor. La poudre issue de la purification sur colonne est reprise dans le minimum de mélange dichlorométhane/méthanol (50/50, v/v) et le produit de couplage est précipité par addition d'éther éthylique (200 ml). Le mélange est placé à une température de 4°C pendant 1 heure puis filtré sur verre fritte n°3. Le filtrat est éliminé et la poudre est reprise dans un mélange méthanol/eau (50/50, v/v). Les solvants sont évaporés au rotavapor et le produit de couplage est séché à la rampe à vide. On obtient ainsi le produit de couplage pur avec un rendement de 95 % (145,7 mg ; 0,112 mmol).
RMN 1H (DMSO-Je) : δ = -2,96 (s ; 2H ; NHpyrone) ; 1,62 (m ; 8H ; C(O)-NH-CH2-CH2-CH2 ) ; 1,83 (m ; 8H ; O-CH2-CH2-CH2) ; 2,24 (t ; 3JHH = 6,3 Hz ; 4H ; CH2-C(O)-NH) ; 3,16 (td ; 3JHH = 3JHH = 5,4 Hz ; 4H ; C(O)-NH-CH2 ou CHb-quinoléine) ; 3,28 (td ; 3JHH = 3JHH = 5,7 Hz ; 4H ; C(O)-NH-CH2 ou CHz-quinoléine) ; 4,18 (m ; 4H; O-CH2) ; 6,45 (d ; 3JHH = 5,5 Hz ; 2H ; CHa) ; 7,28 (d ; 3JHH = 7,9 Hz ; 4H ; CHb) ; 7,37 (t ; 3JHH = 5,4 Hz ; 2H ; NHbras) ; 7,41 (dd ; 3JHH = 9,0 Hz ; 4JHH = 2,2 Hz ; 2H ; CHd.) ; 7,74 (d ; 4JHH = 2,2 Hz ; 2H ; CHC.) ; 7,93 (t ; 3JHH ≈ 5,7 Hz ; 2H ; NHbras) ; 8,04 (d ; 3JHH = 7,9 Hz ; 4H ; CHa) ; 8,22 (d ; 3JHH = 5,0 Hz ; 4H ; CHC) ; 8,27 (d ; 3JHH = 9,0 Hz ; 2H ; CHe.) ; 8,34 (d ; 3JHH = 5,5 Hz ; 2H ; CHb.) ; 8,81 (d ; 3JHH = 4,9 Hz ; 2H ; CHk ou i) ; 8,85 (s ; 4H ; CHi et j) ; 8,88 (d ; 3JHH = 4,9 Hz ; 2H ; CHk ouι) ; 9,00 (d ; 3JHH = 5,0 Hz ; 4H ; CHd) ppm.
3) Troisième étape : Méthylation des groupements pyridine du produit de couplage obtenu à la deuxième étape.
La procédure est la même que celle décrite ci-dessus à la troisième étape de l'exemple 1 mais on utilise ici deux équivalents de HCl.Et2O et 50 équivalents de iodure de méthyle dans le DMF sec. L'agitation est maintenue pendant 24 heures à température ambiante. Dans ce cas, le produit de couplage méthylé n'est pas soluble dans le mélange MeOH/H2O, donc il est repris dans un. volume (V) minimum de DMF et précipité par addition de 3V de propanol-2 et 6V d'éther.
Le produit de couplage méthylé est obtenu avec un rendement de 95 %.
RMN 1H (DMSO-- ) : δ = -2,97 (s ; 2H ; NHpyrone) ; 1,62 (m ; 8H ; C(O)-NH-CH2-CH2-CH2 ) ; 1,85 (m ; 8H ; O-CH2-CH2-CH2) ; 2,26 (t ; 3JHH = 6,3 Hz ; 4H ; CH2-C(O)-NH) ; 3,15 (m ; 4H ; C(O)-NH-CH2 ou CH2-quinoléine) ; 3,54 (m ; 4H ; C(O)-NH-CH2 ou CH^-quinoléine) ; 4,26 (t ; 3JHH = 4,6 Hz ; 4H ; O-CH2) ; 4,71 (s ; 6H ; N-CH3) ; 6,89 (d ; 3JHH = 7,2 Hz ; 2H ; CH*.) ; 7,38 (d ; 3JHH = 8,6 Hz ; 4H CHb) ; 7,74 (dd ; 3JHH = 9,0 Hz ; 4JHH = 2,0 Hz ; 2H ; CHd.) ; 7,81 (d ; 4JHH = 2,0 Hz 2H ; CHC.) ; 7,96 (t ; 3JHH = 5,5 Hz ; 2H ; NHbras) ; 8,12 (d ; 3JHH = 8,6 Hz ; 4H ; CHa) 8,49 (d ; 3JHH = 9,0 Hz ; 2H ; CHe.) ; 8,51 (d ; 3JHH = 7,2 Hz ; 2H ; CHb.) ; 8,92 (s 2H ; CHi ouj) ; 9,02 (m ; 8H ; CH c + k + 1) ; 9,14 (s ; 2H ; CHi θuj) ; 9,31 (t ; 3JHH - 5,4 Hz ; 2H ; NHbras) ; 9,47 (d ; 3JHH = 6,6 Hz ; 4H ; CHd) ppm. 4) Quatrième étape : Synthèse du composé (IC) par métallation du composé obtenu à la troisième étape.
Le même mode opératoire que celui déjà décrit à la quatrième étape de l'exemple 1 a été utilisé.
La porphyrine de manganèse est obtenue avec un rendement de 66 %.
Analyse par spectrophotométrie de MASSE (électrospray mode positif) :
Figure imgf000026_0002
Les valeurs sont calculées à partie de la masse exacte.
EXEMPLE 4 : SYNTHESE D'UN COMPOSE DE FORMULE (I) COMPORTANT DEUX MOTIFS DE FORMULE (ID ET DEUX MOTIFS DE FORMULE (III) : COMPOSE (ID)
Figure imgf000026_0001
Le même mode opératoire que celui déjà décrit à la quatrième étape de l'exemple 1 a été utilisé.
La porphyrine de nickel a été obtenue avec un rendement de 75 %.
Analyse par spectrophotométrie de MASSE (électrospray mode positif) :
Figure imgf000027_0001
Les valeurs sont calculées à partir de la masse exacte.
EXEMPLE 5 : MISE EN EVIDENCE DE LA SPECIFICITE DES COMPOSES DE FORMULE (I) VIS-A-VIS DES SÉQUENCES TÉLOMÉRIQUES
1) Synthèse, purification et marquage du brin d'ADN télomérique.
La séquence télomérique humaine a été synthétisée par la méthode chimique standard sur phase solide β-cyanoéthylphosphoramidite. La purification a été réalisée par électrophorèse sur un gel de polyacrylamide dénaturant à 20%. La concentration en ADN a été déterminée par mesure UN à 260 nm. L'extrémité 5' du brin d'ADN a été marquée au [32P] en utilisant la procédure standard avec la polynucléotide kinase T4 et de l'ATP[γ-32P] commandés respectivement à New England Biolabs et ICN Biomédical. 2 )Oxydation de la séquence télomérique humaine par les composés de formule (I) conforme à l'Invention et KHSOj_
Les réactions de coupure de la séquence télomérique humaine ont été réalisées avec de l'ADN marqué en 5' (concentration finale 1 μM, 100000- 150000 cpm) dans un tampon Tris/HCl à pH 7 (50 mM) et KC1(200 mM) (tampon Tris/KCl)ou NaCl (200 mM) (tampon Tris/NaCl). Les expériences ont également été effectuées dans un tampon Tris/HCl 50 mM à pH 7 (tampon Tris). Le milieu réactionnel est chauffé à 90 °C pendant 10 minutes puis lentement refroidi à température ambiante. L'ADN est préincubé avec différents composés de formule (I), à savoir les composés de formules (IA) et (IC) préparés aux exemples 1 et 3 ci-dessus
(1 μM) pendant 1 heure à 0°C.
Les composés (IA) et (IC) sont comparés avec un composé de référence ne faisant pas partie de l'Invention et correspondant à un composé de formule (I) dans lequel les radicaux Ri à R sont identiques et représentent un acétate de 4-méthylpyridiniumyle. Les lignes correspondant à ce composé de référence sont indiquées "Mn" sur la figure 1.
La réaction de coupure est initiée par addition d'une solution fraîchement, préparée de KHSO5, (concentration finale 500 μM, Curox® d'Interox). Le volume final est de 20 μl. Après une heure à 0°C, les réactions de coupure sont arrêtées par addition de tampon Hepes pH 8 (concentration finale 48 mM). Les échantillons d'ADN sont alors dilués avec 10 μl de tampon acétate de sodium 3 M (pH
5,2) et 1 μl de tARN à 10 mg/ml puis précipités avec 300 μl d'éthanol froid pendant une nuit à -20°C. Après centrifugation (15 minutes à 4°C, 12 x 103 tours/minute), le précipité d'ADN est lavé deux fois avec de l'ethanol à 70% froid, séché sous vide
(speedvac), et soumis à un traitement à la pipéridine (50 μl, 1 M, pendant 30 minutes à
90°C). Le traitement à la pipéridine est suivi d'une lyophilisation de la solution de pipéridine.
3) Analyse par électrophorèse sur gel de polyacrylamide. Après la précipitation à l'ethanol et le traitement à la pipéridine, le précipité d'ADN sèc est dilué dans du formamide contenant des marqueurs colorés.
Les échantillons sont incubés 2 minutes à 90°C puis plongés dans la glace et déposés sur un gel dénaturant de polyacrylamide à 20% (urée 7M). La migration dure environ
3 heures à 2000 V. Les fragments d'ADN sont visualisés soit par autoradiographie avec des films Kodak BioMax MR-1 ou par Phosphorhnager® (Molecular Dynamics) en utilisant Image Quant Software. Chaque gel comportait un séquençage Maxam et
Gilbert.
Les résultats obtenus sont reportés sur la figure 1 qui correspond à l'autoradiographie du gel après l'électrophorèse. Ces résultats montrent que les composés de formule (IA) et (IC) conformes à la présente Invention sont capables de dégrader l'ADN des telomères avec une grande efficacité. Le site d'interaction des composés de formule (I) avec l'ADN est indiqué par la position des dommages observés sur ce dernier. L'efficacité de la réaction de dégradation des telomères ainsi que la position des dégâts observés sont différentes en fonction du composé testé.

Claims

REVENDICATIONS
1. Molécules duales associant un dérivé de porphyrine avec au moins une aminopyridine ou l'un de ses dérivés, caractérisées par le fait qu'elles sont choisies parmi les composés de formule (I) suivante et leurs sels pharmaceutiquement acceptables :
Figure imgf000030_0001
dans laquelle les radicaux Ri à t situés en position méso du noyau porphyrine, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupement choisi parmi : - les groupements aminopyridine de formules (Ha) et (Ilb) suivantes
Figure imgf000030_0002
dans lesquels : . R5, R6, R7 et R8, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou d'halogène, un radical alkyle en Cι-C , alcoxy en Cι-C4 ou un groupement aryle ; deux au moins des radicaux R5j R6, R7 et R8 conjointement avec l'atome de carbone du cycle aminopyridine auquel ils sont liés, peuvent également former un cycle aromatique à 5 ou 6 chaînons, lui-même étant éventuellement substitué par un atome d'halogène, un radical alkyle en Cι-C4, alcoxy en Cι-C4, un groupement aromatique ou étendu par un cycle aromatique à 5 ou 6 chaînons ; . B représente un bras de liaison constitué par une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, éventuellement substituée, interrompue et/ou terminée par un ou plusieurs hétéroatomes tels que N, O ou S, et/ou par un ou plusieurs groupements choisis parmi les radicaux alkyle en Cι-C4, alcoxy en Cι-C , aryle ou par une ou plusieurs fonctions choisies parmi les fonctions ether, ester, amide, carbonyle, carbamate, urée, thiourée et disulfure, étant entendu que lorsque ledit bras de liaison B représente une chaîne comprenant une fonction amide, alors ladite fonction amide n'est pas directement rattachée à l'aminé située en position 4 ou 2 respectivement des groupements de formules (Ha) et (Ilb) ;
- les groupements N-alkyl-pyridiniumyle de formule (III) suivante :
Figure imgf000031_0001
dans laquelle :
. X, Y et Z, identiques ou différents, représentent un atome de carbone ou un atome d'azote substitué par un radical R9 choisi parmi l'hydrogène, les radicaux alkyle en Cι-C et les groupements de formules (Ha) et (Ilb) ci-dessus ; étant entendu qu'au moins un et seulement un seul des sommets X, Y et Z représente un atome d'azote substitué par un radical R9 ;
A est un anion organique ou minéral ; • M est métal inerte en oxydation ou à propriétés redox ; lesdits composés de formule (I) comportant au moins un groupement de formule (Ha) ou (Ilb) et au moins un groupement de (III).
2. Molécules duales selon la revendication 1, caractérisées par le fait que A est choisi parmi les chlorures, les acétates et les citrates.
3. Molécules duales selon la revendication 1 ou 2, caractérisées par le fait que le nombre d'atomes de carbone constituant la chaîne hydrocarbonée du bras de liaison B est compris entre 1 et 24.
4. Molécules duales selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées par le fait que M est un métal de transition choisi parmi le manganèse, le nickel, le palladium, le platine et l'or.
5. Molécules duales selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées par le fait que les groupements de formules (lia) et (Ilb) sont choisis parmi les groupements 4-aminopyridine, 2-aminopyridine, 4-aminoquinoléine, 2-aminoquinoléine, 9-aminoacridine, ainsi que les groupements de formules suivantes (IIa-1) à (IIa-9) et (IIb-1) à (IIb-5) :
Figure imgf000032_0001
Figure imgf000032_0002
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000033_0002
Figure imgf000033_0003
Figure imgf000033_0004
(llb-3)
(llb-4) et
Figure imgf000034_0001
(llb-5)
dans lesquelles les sommets Wi, W , W3 et W , identiques ou différents, représentent un atome de carbone ou d'azote, lesdits groupements étant éventuellement substitués par un ou plusieurs atomes d'halogène et/ou par un ou plusieurs radicaux alkyle ou alcoxy en Cι-C .
6. Molécules duales selon la revendication 5, caractérisées par le fait que le groupement de formule (Ha) est un groupement 7-chloro-4-aminoquinoléine.
7. Molécules duales selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées par le fait que le groupement de formule (III) représente un groupement para-alkyl-pyridinium choisi parmi le 4-méthylpyridinium, le 4-éthylpyridinium, le 4-propylpyridinium et le 4-butylpyridinium.
8. Molécules duales selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées par le fait que le bras de liaison B répond à la formule B 1 suivante :
-P -V1— D — V2— Alk- (B 1 )
dans laquelle :
- Ph représente un radical phényle,
- NI et N2, identiques ou différents, représentent une liaison ether, ester, amide, carbamoyle, carbamate, urée, thiourée ou disulfure, située en position para, ortho ou meta par rapport au point d'accrochage du radical phényle sur le noyau porphyrine,
- D représente une chaîne aliphatique en Cι-Cι2 linéaire, ramifiée ou cyclique, comportant éventuellement une ou plusieurs fonctions aminé ; ou un groupement aromatique, - Alk représente une chaîne alkyle en Cι-Cι2.
9. Molécules duales selon la revendication 8, caractérisées par le fait que le bras de liaison B est un bras de liaison BIA dans lequel NI représente une liaison ether, D et Alk sont identiques et représentent une chaîne alkyle linéaire en C4 et N2 représente une liaison amide.
10. Molécules duales selon la revendication 9, caractérisées par le fait qu'elles comportent comme substituants Ri à *, trois groupements para-alkyl- pyridinium et un groupement de formule (Ilb) qui est un groupement 7-chlro-4- aminoquinoléine relié au noyau porphyrine par un bras de liaison BIA.
11. Molécules duales selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées par le fait qu'elles sont choisies parmi les composés de formules suivantes :
Figure imgf000035_0001
Figure imgf000036_0001
Figure imgf000036_0002
et
Figure imgf000037_0001
12. Procédé de préparation des molécules duales de formule (I) telles que définies à l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé par le fait qu'il consiste :
- dans une première étape, à faire réagir, en milieu solvant organique, une porphyrine de formule (I1) suivante :
Figure imgf000037_0002
dans laquelle les groupements R'i à R'4, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupement pyridine ou un groupement -B'R10, dans lequel B' représente un bras de liaison choisi parmi un radical phényle ou une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, éventuellement substituée ou interrompue par un ou plusieurs hétéroatomes tels que N, O ou S, et/ou par un ou plusieurs groupements choisis parmi les radicaux alkyle en Cι-C4, alcoxy en Cι-C , aryle ou par une ou plusieurs fonctions choisies parmi les fonctions ether, ester, amide, carbonyle, carbamate, urée, thiourée et disulfure, et R^ représente une fonction apte à permettre l'accrochage d'un groupement de formules (H'a) ou (H'b) ; étant entendu que l'un au moins des radicaux R'i à R' représente un groupement -B'Rio ; avec un composé de formules (lia') ou (Ilb') suivantes :
Figure imgf000038_0001
dans lesquelles :
. R'5, R'Ô, R'7 et R'8 identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou d'halogène, un radical alkyle en Cι-C , alcoxy en Cι-C ou un groupement aryle ; deux au moins des radicaux R'5ι R'6, R'7 et R'8 conjointement avec l'atome de carbone du cycle aminopyridine auquel ils sont liés, peuvent également former un cycle aromatique à 5 ou 6 chaînons, lui-même étant éventuellement substitué par un atome d'halogène, un radical alkyle en Cι-C , alcoxy en Cι-C ι un groupement aromatique ou étendu par un cycle aromatique à 5 ou 6 chaînons ;
- R'n représente une fonction d'accrochage compatible avec la fonction d'accrochage choisie pour R'io ou un atome d'hydrogène,
-B" peut prendre ies mêmes significations que celles indiquées ci- dessus pour B', pour obtenir un composé de formule (I") suivante :
Figure imgf000039_0001
dans laquelle les radicaux R"ι à R" , identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupement pyridine ou un groupement aminopyridine de formules (Ha) ou (Ilb) suivantes :
Figure imgf000039_0002
dans lesquelles :
. les radicaux R5; R6, R7 et R8, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou d'halogène, un radical alkyle en Cι-C , alcoxy en Cι-C ou un groupement aryle ; deux au moins des radicaux R5] R6, R7 et R8 conjointement avec l'atome de carbone du cycle aminopyridine auquel ils sont liés, peuvent également former un cycle aromatique à 5 ou 6 chaînons, lui-même étant éventuellement substitué par un atome d'halogène, un radical alkyle en Cι-C4, alcoxy en Cι-C , un groupement aromatique ou étendu par un cycle aromatique à 5 ou 6 chaînons ;
. B représente un bras de liaison constitué par une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, saturée ou insaturée, éventuellement substituée, interrompue et/ou terminée par un ou plusieurs hétéroatomes tels que N, O ou S, et/ou par un ou plusieurs groupements choisis parmi les radicaux alkyle en Cι-C , alcoxy en
Cι-C , aryle ou par une ou plusieurs fonctions choisies parmi les fonctions ether, ester, amide, carbonyle, carbamate, urée, thiourée et disulfure, étant entendu que lorsque ledit bras de liaison B représente une chaîne comprenant une fonction amide, alors ladite fonction amide n'est pas directement rattachée à l'aminé située en position 4 ou 2 respectivement des groupements de formules (Ha) et (Ilb) ; puis - dans une deuxième étape, à quaterniser éventuellement, en milieu acide, le ou les groupements pyridine du composé de formule (I") en présence d'un halogénure d'alkyle en Cι-C tel que l'iodure de méthyle ou d'un halogénure d'un groupement de formules (lia') ou (Ilb'), puis
- dans une troisième étape, à faire réagir, en milieu solvant organique, le composé obtenu ci-dessus à la troisième étape, avec un sel d'un métal M, pour obtenir la molécule duale de formule (I) correspondante.
13. Procédé selon la revendication 12, caractérisé par le fait que les fonctions d'accrochage R'io et R'n sont choisies parmi les fonctions carboxylique ; thiol ; aminé ; -NHR dans laquelle R représente un radical alkyle linéaire ou ramifié en Cι-C4 ; hydroxyle ; phosphate et halogène.
14. Composition pharmaceutique caractérisée par le fait qu'elle renferme, à titre de principe actif, au moins une molécule duale de formule (I) telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 11 et au moins un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
15. Composition pharmaceutique selon la revendication 14, caractérisée par le fait que la quantité de molécule duale de formule (I) présente dans ladite composition correspond à des doses unitaires comprises entre 10 mg et 800 mg.
16. Composition pharmaceutique selon la revendication 14 ou 15, caractérisée par le fait qu'elle renferme un ou plusieurs principes actifs additionnels à activité antitumorale.
17. Utilisation d'au moins une molécule duale de formule (I) telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 11, à titre d'inhibiteur des télomérases, pour la préparation d'un médicament.
18. Utilisation selon la revendication 17, caractérisée par le fait que le médicament est un antitumoral.
PCT/FR2003/000805 2002-03-15 2003-03-13 Derives de porphyrines, leur procede de preparation, compositions pharmaceutiques et utilisations WO2003078436A1 (fr)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2003229863A AU2003229863A1 (en) 2002-03-15 2003-03-13 Porphyrin derivatives, method for the production thereof, pharmaceutical compositions and use thereof

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR02/03222 2002-03-15
FR0203222A FR2837202B1 (fr) 2002-03-15 2002-03-15 Nouveaux derives de porphyrines, leur procede de preparation compositions pharmaceutiques et utilisations

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2003078436A1 true WO2003078436A1 (fr) 2003-09-25

Family

ID=27772149

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR2003/000805 WO2003078436A1 (fr) 2002-03-15 2003-03-13 Derives de porphyrines, leur procede de preparation, compositions pharmaceutiques et utilisations

Country Status (3)

Country Link
AU (1) AU2003229863A1 (fr)
FR (1) FR2837202B1 (fr)
WO (1) WO2003078436A1 (fr)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007128968A1 (fr) * 2006-04-07 2007-11-15 Imperial Innovations Limited Inhibiteurs de télomérase
US7432369B2 (en) 2004-03-29 2008-10-07 Inotek Pharmaceuticals Corporation Pyridyl-substituted porphyrin compounds and methods of use thereof
CN104513250A (zh) * 2014-12-23 2015-04-15 南开大学 一种水溶性卟啉的合成方法及其光催化应用
CN105399671A (zh) * 2015-12-02 2016-03-16 广西中医药大学 7-对甲苯氨基苯并[c]吖啶盐酸盐及其制备方法和用途

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998033503A1 (fr) * 1997-02-05 1998-08-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Composes de porphyrine utilises comme inhibiteurs de telomerase

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998033503A1 (fr) * 1997-02-05 1998-08-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Composes de porphyrine utilises comme inhibiteurs de telomerase

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ISHIKAWA, YOSHINOBU ET AL: "Efficient photocleavage of DNA by cationic porphyrin-acridine hybrids with the effective length of diamino alkyl linkage", CHEMICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN (2001), 49(3), 287-293, XP002222570 *
KURODA, REIKO ET AL: "Intelligent compounds which read DNA base sequences", SUPRAMOLECULAR CHEMISTRY (1995), 6(1-2), 95-102, XP008011161 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7432369B2 (en) 2004-03-29 2008-10-07 Inotek Pharmaceuticals Corporation Pyridyl-substituted porphyrin compounds and methods of use thereof
WO2007128968A1 (fr) * 2006-04-07 2007-11-15 Imperial Innovations Limited Inhibiteurs de télomérase
CN104513250A (zh) * 2014-12-23 2015-04-15 南开大学 一种水溶性卟啉的合成方法及其光催化应用
CN105399671A (zh) * 2015-12-02 2016-03-16 广西中医药大学 7-对甲苯氨基苯并[c]吖啶盐酸盐及其制备方法和用途

Also Published As

Publication number Publication date
AU2003229863A1 (en) 2003-09-29
FR2837202A1 (fr) 2003-09-19
FR2837202B1 (fr) 2007-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2286385C (fr) Derives de quinoleines en tant qu'inhibiteurs de la vih integrase
EP0345171B1 (fr) Dérivés de métalloporphyrines, leur préparation, leur application en thérapeutique et leur utilisation pour la préparation de molécules hybrides
EP1773835B1 (fr) Derives de pyrido-pyrido-pyrimidine, leur preparation, leur application dans le traitement du cancer
EP2289891A2 (fr) Nouveaux dérivés de polyquinoléines et leur utilisation thérapeutique.
EP2321323B9 (fr) Derives dimeriques d'artemisinine et application en therapie anticancereuse
EP2158194B1 (fr) Dérivés de 7 -alkynyl-1,8-naphthyridones, leur préparation et leur application en thérapeutique
JPH11501324A (ja) コルヒチン誘導体、それらの使用およびそれらを含有する製剤
JPS6150985A (ja) 新規なカンプトテシン誘導体
WO2003078436A1 (fr) Derives de porphyrines, leur procede de preparation, compositions pharmaceutiques et utilisations
EP0172083A1 (fr) Nouveaux amides substitués, leur préparation et les médicaments qui les contiennent
EP2331555B1 (fr) Dérives ferroceniques a activite anticancereuse
CA2377154A1 (fr) Derives d'ammonium quaternaire, leur procede de preparation et leur usage en pharmacie
CN113214238B (zh) 一类具有酰化哌嗪结构的吲哚恶二唑衍生物的制备和用途
JP2000513716A (ja) タキサン誘導体、その調製、及びそれを含有する処方物
KR100399589B1 (ko) 신규 퀴놀린디온 유도체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는약학적 조성물
EP1461319B1 (fr) Derives de quinoleine, procede de synthese, et medicaments renfermant ces derives
EP3237015B1 (fr) Derives hydroxybisphosphoniques hydrosolubles de la doxorubicine
WO1998031688A1 (fr) Derives d'acides boroniques inhibiteurs d'angiogenese
EP0223647B1 (fr) Alkylcarboxamides de pyridylalkylamines, leurs préparations et leur utilisation en tant que médicaments
EP3063158B1 (fr) Dérivés de métallocène à activité anticancéreuse
JP3009716B2 (ja) 新規なカンプトテシン誘導体
JPH09502704A (ja) 新規な１，２−ジチイン抗感染症剤
CA2142560C (fr) Nouveaux analogues de l'acronycine, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
JPH0283376A (ja) ベンゾオキサゾロン誘導体および抗アレルギー又は抗炎症組成物
CA2196102A1 (fr) Derives de streptogramine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NI NO NZ OM PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): GH GM KE LS MW MZ SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IT LU MC NL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
122 Ep: pct application non-entry in european phase
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: JP

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Country of ref document: JP