WO2003049841A1

WO2003049841A1 - Vorrichtung zur simultanen dialyse einer vielzahl flüssiger proben

Info

Publication number: WO2003049841A1
Application number: PCT/DE2002/004553
Authority: WO
Inventors: Anton Horn; Stefan Kreusch; Günther SAMMLER; Renate Bublitz; Sina Schwedler
Original assignee: Cybio Ag
Priority date: 2001-12-10
Filing date: 2002-12-10
Publication date: 2003-06-19
Also published as: GB0415432D0; GB2399517B; DE10160975A1; DE10295713D2; GB2399517A; US20050019774A1

Abstract

Vorrichtung zur simultanen Dialyse einer Vielzahl flüssiger Proben, bestehend aus einem Gefäß für die Dialyseflüssigkeit mit Zu- und Abfluss sowie mit einer Füllstands-Niveauregelung und aus einer Probenplatte (3) mit einer im Raster (n x 8 x 12) angeordneten Vielzahl gleicher Probengefäße (5) im μl-Bereich, deren obere Enden offen und deren untere Enden durch in einer Ebene liegende semipermeable Membranen (7) verschlossen sind. Im Rasterbereich der Probengefäße (5) weist die Probenplatte (3) keine die Ebene der Membranen (7) überragende und beim Eintauchen in die Dialyseflüssigkeit (2) Gasbarrieren bildende oder unterstützende Bereiche oder Elemente auf. Im Randbereich besitzt die Probenplatte (3) Elemente zum Entweichen von Luft nach Eintauchen in die Dialyseflüssigkeit. Sowohl die Probenflüssigkeiten als auch die Dialyseflüssigkeiten werden bewegt.

Description

Beschreibung der Erfindung

Vorrichtung zur simultanen Dialyse einer Vielzahl flüssiger Proben

Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung zur simultanen Dialyse einer Vielzahl flüssiger Proben, welche in Probengefäßen einer Probenplatte aufgenommen werden und in diesen für eine Dialysetrennung über mindestens eine semipermeable Membran mit einer Dialyseflussigkeit in Kontakt gebracht wird. Ein solches Dialysesystem kann überall dort Anwendung finden, wo für analytische Zwecke insbesondere eine große Anzahl flüssiger Mikroproben, deren makromolekulare Anteile untersucht werden sollen, von ihren, die Analyse störenden niedermolekularen Bestandteilen möglichst aufwandgering, effizient und gut handhabbar getrennt werden müssen. Außerdem wird das Dialysesystem vorteilhaft eingesetzt, um Makromoleküle enthaltende Mikroproben schnell, schonend und ohne große Verluste zu konzentrieren. Ein weiteres Anwendungsgebiet ist das Umpuffern von Proben, insbesondere im Bereich der DNA-Bearbeitung, für die Untersuchung von Proteinen und bei sequentiell erfolgenden enzymatischen Reaktionen. In den letzten Jahren haben, insbesondere ausgelöst durch die Bemühungen der Pharmaindustrie zur Gewinnung von "targets" für die Entwicklung neuer Pharmaka, hochparalleli- sierte Screeningverfahren (High throughput screening = HTS und Ultra High throughput screening = UHTS) mit extrem hohen Analysefrequenzen Einzug in die Analytik gefunden. Auch die Proteomanalytik, die sich gegenwärtig außerordentlich stark entwickelt, erfordert sehr hohe Probendurchsätze zur Charakterisierung der Vielzahl von Proteinen eines Proteoms mit ihren biologischen Modifikationen sowie für verschiedene Zustände, wie beispielsweise gesund und krank. Außerdem wird für viele Anwendungsgebiete in der biochemischen und biotechnologischen Forschung die Hochdurchsatzanalyse, beispielsweise zur Charakterisierung von Enzymen über ihre Aktivität, zur Charakterisierung von analytischen und präparativen chromatographischen Trennungen, zur massenhaften Renaturierung- von Proteinproben und zur Charakterisierung von Nukleinsäuren, ein unver- zichtbares Hilfsmittel.

Diese Hochdurchsatzverfahren haben zur Entwicklung spezieller Analyseverfahren und in ihrem Umfeld zu passfähigen Hilfstechniken geführt, die sich um das Mikrotiterplatten- raster von 8 x 12 Analysepositionen pro Grundfläche der Platte von circa 12,6 cm x 8,5 cm gruppieren. Gegenwärtig ist ein Trend zur weiteren Verdichtung der Analysepositionen auf der gleichen Grundfläche von n x 8 x l2 für n = 4, n = 16 und noch dichter besetzten Analyseplatten zu beobachten.

Sehr häufig sind es makromolekulare Substanzen wie DNA und ihre Bruchstücke, Proteine und Peptide, Glykoproteine und synthetische Makromoleküle sowie Kombinationen der aufgeführten Stoffe, die von Interesse sind.

Zwei weitere neue analytische Verfahren MALDI-MS = Matrix Assisted Laser Desorption IonisationMass Spectrometry und ESI - MS = Elektrospray IonisationMass Spectrometry wurden erst vor wenigen Jahren entwickelt und haben sich als unverzichtbare Verfahren für HTS/UHTS und für die Proteomanalytik, hier insbesondere in Kombination mit Proteaseverdaumethoden, erwiesen. Insgesamt ist ein starker Trend zur Miniaturisierung der analytischen Verfahren zu erkennen. Viele der für Hochdurchsatzscreening verwendeten Verfahren setzen eine besondere Probenvorbereitung mit hohen Anforderungen voraus. Solche Anforderungen sind:

1. Die Proben dürfen nur eine niedrige Salz- oder Detergenzkonzentration besitzen, oder sie müssen in einem definierten Ionenmilieu vorliegen.

2. Die Proben, die im μl-Volumenbereich vorliegen, müssen hochparallelisiert hantiert werden, um die erforderliche Analysefrequenz zu garantieren. Die Behandlung muss unter standardisierten Bedingungen für alle Proben gleichmäßig erfolgen.

3. Die Wiederfindung muss für diese Mikroproben im Prozess der Probenvorbereitung hinreichend hoch sein.

4. Häufig müssen Proben aus biologischem Material vor der Analyse schonend konzentriert werden, um die notwendige Zielkonzentration zu erreichen.

Zur Entfernung niedermolekularer Substanzen, zur Überführung von Proben in ein definiertes Milieu und zur Konzentrierung von makromolekularen Substanzen hat sich das Dialyseverfahren unter Verwendung semipermeabler Membranen bewährt. So gibt es eine größere Anzahl von Anbietern für Dialyseverfahren, die beispielsweise im Internet unter der Adresse http://biosupplynet.com zusammengestellt sind.

Hauptanstrengungen der Firmen und Erfinder zur Verbesserung der Dialysetechnik richten sich im wesentlichen darauf, Probleme bei der praktikablen Handhabung der Technik, wie beispielsweise Mischprobleme, Wiederfindungsprobleme von Makromolekülen, Probleme mit der Geschwindigkeit des Dialyseprozesses und Probleme, die im Zusammenhang mit kleinen Volumina (μl-Bereich) auftreten, zu überwinden.

Für MALDI- und ESI-MS-V erfahren ist nach dem bekannten Stand der Technik meist eine Entfernung von Salzen, Detergenzien und anderen kontaminierenden Substanzen notwen- dig.

Möglichkeiten, die Qualität der essentiellen Mischung einer Dialyselösung an sich zu verbessern, werden in der US 5,183,564 und in der US 6,176,609 beschrieben. Die letztgenannte Schrift bezieht sich auf ein allgemeines Verfahren zur Mischung in einer Anzahl von Gefäßen. Dem allgemeinen Trend zur Miniaturisierung Rechnung tragend, sind eine Reihe von Lösungen vorgeschlagen worden. So sind in der US 6,039,871 Vorrichtungen genannt, die als Wegwerfmaterial vorgesehen sind und die Dialyse von 10-100μl Proben in speziellen zusammensteckbaren Gefäßen vorsehen. In der US 5,733,442 wird ein geschlossenes Mikrodialysesystem vorgestellt, welches zusammenschraubbare Mikrokammern mit zwei Dialysemembranen und eine besondere Rühreinrichtung besitzt. Der Problematik der Wiederfindung von kleinen Analysevolumina wird durch Einführung einer speziellen Auffangkammer in der US 6,217,772 Aufmerksamkeit geschenkt. In den Schriften US 5,783,075 und US 5,503,741 wird ein Vorschlag zur schwimmenden Dialyse in speziell konfigurierten Gefäßen unterbreitet. Für die schwimmende Dialyse gibt es auch Angebote der Firmen PGC, der Firma Daigger und der Firma Pierce mit den weit verbreiteten Slide-Dialysesystemen.

Zur Erhöhung der Dialysegeschwindigkeit unter besonderer Berücksichtigung der ESI-MS Technik wird ein Kapillardialysesystem in der US 5,954,959 vorgeschlagen. Für die Dialyse einer Vielzahl von Proben gibt es Vorschläge in der US 4,450,076, in der die Dialysegefäße um eine zentrale Achse angeordnet sind und durch Drehung bewegt werden. Angebote von PGC scientific sehen ebenfalls um eine zentrale Achse angeordnete Gleichgewichtsdialysekammern vor, die mit teflonbeschichteten Schrauben abgedichtet werden. Von Pierce wird ein Mikrodialysesystem für 12x20-100 μl- Volumina angeboten.

Die vorgeschlagenen Lösungen sind jedoch für die Anforderungen hoher Durchsätze, wie sie für HTS, UHTS und für die Proteomanalytik notwendig sind, nicht geeignet, weil sie entweder

1. nicht passfähig zur hochparallelisierten Mikroplattentechnologie, insbesondere zur entsprechenden Liquidhandling-Technik, ausgebildet sind 2. eine simultane und essentiell gleichmäßig für alle Proben erfolgende Dialyse großer Probenzahlen im μl- Volumenbereich nicht gestatten

3. die genügend hohe Wiederfindung dieser kleinen Volumina für sekundäre analytische Prozeduren nicht erlauben 4. eine geeignet hohe Dialysegeschwindigkeit nicht vorsehen

5. unpraktikabel große Volumina für die Dialyseflüssigkeit erfordern oder

6. durch ihre komplizierte Einsatzweise unpraktikabel im Routinebetrieb mit einem hohem Durchsatz sind.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zu Grunde, simultan eine Vielzahl von Mikroproben im μl-Bereich essentiell gleichmäßig, gut handhabbar und möglichst aufwandgering zu dialy- sieren, wobei diese Dialyse unter den Anforderungen der modernen Screening- und Analysemethoden mit hohem Probendurchsatz, schnell sowie ggf. automatisierbar durchzuführen sein soll. Die Dialyse soll auch bei hohem Probendurchsatz eine hinreichend hohe Wiederfindung von kleinen Volumina für sekundäre analytische Prozeduren erlauben.

Vorgeschlagen wird eine Vorrichtung zur simultanen Dialyse einer Vielzahl flüssiger Proben, - enthaltend ein Dialysegefäß mit darin befindlicher Dialyseflüssigkeit sowie Mitteln für den Zu- und Abfluss der Dialyseflussigkeit, welche mit einer Füllstands-Niveau- regelung in Verbindung stehen,

- enthaltend zumindest eine in die Dialyseflussigkeit eintauchende bzw. diese berührende sowie durch Halterungselemente in bzw. auf der Oberfläche der Dialyseflüssigkeit gehalterte Probenplatte mit einer im an sich bekannten sowie zur Liquidhandlingtechnik für die Mikroplattentechnologie passfähigen Raster (n x 8 x 12) angeordneten Vielzahl gleicher Probengefäße im Fassungsvermögen für Mikrolitervolumina, wobei von den Probengefäße jeweils die oberen Enden offen und die unteren Enden durch in einer Ebene liegende semipermeable Membranen verschlossen sind und die Probenplatte im Rasterbereich der Probengefäße keine die Ebene der semipermeablen Membranen überragenden und in der Dialyseflussigkeit Gasbarrieren bildenden oder unterstützenden Zonen oder Elemente aufweist sowie in ihren Randbereichen Elemente, beispielsweise Öffnungen, zum Entweichen von Luft beim Berührungskontakt mit der Dialyseflussigkeit besitzt, - außerdem enthaltend Mittel zur Bewegung der Probenplatte und der Dialyseflussigkeit.

Durch die Passfähigkeit der im Dialysesystem eingesetzten Probenplatte zur besagten Liquidhandling-Technik für die Mikroplattentechnologie können die flüssigen Proben mit hohem Durchsatz nach dieser Technologie vorbereitet, angewendet und nachbehandelt werden. Mit der speziellen Ausbildung der Probenplatte werden die Dialyse behindernde Luftbarrieren beim Eintauchen bzw. Aufsetzen der Probenplatte in bzw. auf die Dialyseflüssigkeit vermieden. Treten dennoch prozessbedingt Gase in der Berührungszone zwischen Dialyseflussigkeit und Probenplatte auf, so können diese durch Entlüftungselemente entweichen, um in jedem Fall einen vollständigen Kontakt zwischen Dialyseflüssigkeit und Probenplatte ohne Gasbarrieren, wie Luftblasen etc., zu gewährleisten. Dieser störungsfreie Kontakt ist eine wesentliche Voraussetzung für eine simultane und essentiell gleichmäßig für alle Proben erfolgende Dialyse dieser großen Probenzahlen im μl-Volumenbereich. Dieser Effekt wird wesentlich unterstützt durch die Bewegung der Probenflüssigkeiten und der Dialyseflussigkeit, so dass sich insbesondere keine Sekundärmembranbildung zwischen der Dialyseflüssigkeit und den Probenvolumina ausbilden können und die Dialyse kontinuierlich ablaufen kann. Zu diesem Zweck besitzt das Dialysegefaß mindestens einen Zu- und einen Ablauf, um die in der Dialyseflüssigkeit aufgenommenen Stoffe aus derselben kontinuierlich wieder entfernen zu können, und ständig eine Dialyseflussigkeit mit gleichmäßiger Dialyseaufnahmefähigkeit im System bereitzustellen. Der Ab- und Zufluss ist dabei mit einer Füllstands-Niveauregelung verbunden, um die Dialysebedingungen am semipermeable durchlässigen Kontakt zwischen den Probenflüssigkeiten und der Dialyseflüssigkeit auch unter diesen Gesichtspunkten konstant zu halten.

Durch die Bewegung nicht nur der Dialyseflüssigkeit, sondern auch der Probenflüssigkeiten, beispielsweise durch eine an sich bekannte Schütteleinrichtung, mit welcher die Probenplatte in Verbindung steht, werden nicht nur eine hohe Dialyse-Effektivität an sich erreicht, sondern auch spezielle Anwendungen, wie beispielsweise eine Dialyse z. B. von Mizellen ausbildende Detergenzien, überhaupt erst ermöglicht. Mit den vorgenannten Merkmalen können verschiedenartig ausgebildete sowie mit unterschiedlichsten Aufgaben behaftete manuelle oder automatisch betriebene Dialysesysteme realisiert werden, unabhängig davon, ob die Probenplatte beispielsweise mittels Schwenk- bzw. Rüttelarm, im Dialysegefäß aufliegend oder schwimmend in der im Gefäß befindlichen Dialyseflussigkeit gelagert wird.

Im einfachsten Fall, jedoch ohne die Erfindung darauf zu beschränken, kann die Probenplatte aus einer Platte mit zylindrischen Aussparungen als Probengefäße im Fassungsvermögen für Mikrolitervolumina bestehen. An der Unterseite der Probenplatte sind die Bohrungen (Probengefäße) entweder jeweils durch eine gemeinsame oder durch einzelne Dialysemembranen geschlossen, welche beispielsweise an die Unterseite der Platte geklebt, geschweißt, gebondet oder gespritzt sind. Die Dialysemembranen können auch aus mehreren Lagen bestehen.

Ein Deckel oder eine Klebefolie als lösbarer Verschluss der oberen Enden der Probengefäße schützt das in den Probengefäßen befindliche Probengut und verhindert ein Verdunsten und eine Kontamination der geringen Probenmengen im Mikrohterbereich.

In den Unteransprüchen sind zahlreiche vorteilhafte Ausgestaltungen der erfinderischen Merkmale aufgeführt. So kann das Dialysegefäß mit der aufgenommenen Probenplatte Bestandteil eines Kreislaufsystems sein. In einem solchen Kreislaufsystem, beispielsweise in einer pumpengesteuerten Umwälzeinrichtung, können Ionenaustauscher oder Detergen- zien bindende Adsorber angeordnet sein, welche die Konzentration der aus der Probe zu entfernenden Substanzen in der Dialyseflüssigkeit sehr klein halten und dadurch die Geschwindigkeit des Dialyseprozesses erhöhen sowie das notwendige Volumen der Dialyseflussigkeit minimieren. Auch die Verwendung von gebundenen komplexbildenden Substanzen ist möglich, um beispielsweise Metallionen zu entfernen.

Die Erfindung soll nachstehend anhand von in der Zeichnung dargestellten Ausführungsbeispielen näher erläutert werden. Es zeigen: Fig. 1 : Am Boden eines Dialysegefäßes durch Füße gehalterte Probenplatte Fig. 2: Vorrichtung mit schwimmender Halterung der Probenplatte auf der Oberfläche der Dialyseflussigkeit Fig. 3: Dialysegefäß mit Halterung der Probenplatte gemäß Fig. 1 sowie mit Zu- und Abfluss für die Dialyseflussigkeit Fig. 4: Dialysegefäß mit Probenplatte in einem Kreislaufsystems zum Entfernen störender Substanzen aus der Dialyseflussigkeit

Fig. 5: Vorrichtung zur Dialyse, bei welcher die Probenplatte in einem Schüttler zur Bewegung derselben aufgenommen ist Fig. 6: schwimmende Halterung der Probenplattes (vgl. Fig. 2) mit konischen Probengefäßen

Fig. 7: Verfahrensablauf zur Übertragung des dialysierten Probengutes durch Zentri- fugation aus der Probenplatte mit konischen Probengefäßen in eine Auffangplatte mit zylindrischen Probengefäßen Fig. 8: Verfahrensablauf gemäß Fig. 7 mit einer Dichtung zwischen Probenplatte und Auffangplatte

Fig. 9: Abhängigkeit der Leitfähigkeit der Dialyseflussigkeit von der Dialysezeit

In Fig. 1 ist ein Dialysegefäß 1 mit darin befindlicher Dialyseflüssigkeit 2 gezeigt, auf des- sen Boden im Gefäßinneren eine Probenplatte 3 mittels Halterungen 4 gelagert ist. Die Probenplatte 3 besteht aus einem plattenförmigen Grundkörper mit in einem an sich bekannten und zur Liquidhandling-Technik für die Mikroplattentechnologie passfähigen Raster 8 x 12 angeordneten zylindrischen Aussparungen 5 zur Aufnahme von Probengut 6 im Bereich von Mikrolitervolumina. An der Unterseite der Probenplatte 3 befindet sich eine an diese beispielsweise angeklebte und für alle Probengefäße gemeinsame semipermeable Dialysemembran 7, über welche das in den Aussparungen 5 enthaltene Probengut 6 jeweils mit der Dialyseflüssigkeit 2 in Verbindung steht. Zu diesem Zweck ist die Probenplatte 3 durch die Halterungen 4 so gelagert, dass dieselbe mit der Dialysemembran 7 in die Dialyseflussigkeit 2 eintaucht. Durch die Dialysemembran 7 ist der Austausch kleiner Moleküle, je nach Ausschlussgrenze möglich, indem ein Konzentrationsausgleich zwischen der Dialyseflüssigkeit 2 und den Flüssigkeiten des Probengutes 6 eintritt. Die Entfernung der besagten kleinen Moleküle aus dem Probengut 6 erfolgt somit durch die Gleichgewichtseinstellung zwischen den Konzentrationen der beiden Kompartimente. Große Moleküle werden durch die Dialyse- membran 7 zurückgehalten.

Die Ebene der Dialysemembran 7 verkörpert quasi auch die unterste Ebene der Probenplatte 3 bei ihrer bestimmungsgemäßen Verwendung. Es existieren in diesem Rasterbereich der Probengefäße (Aussparungen 5) keine Zonen oder Elemente zur Stabilisierung, Befestigung, Handhabung etc. oder auch herstellungsbedingte Bereiche, welche von der Probenplatte 3 ausgehend die Ebene der Dialysemembran 7 überragen, die Dialyseflüssigkeit 2 berühren oder in diese eintauchen sowie dort den gleichmäßig verlaufenden Dialyse- prozess störende Luftbarrieren ausbilden oder fördern können. Durch einen an sich bekannten Magnetrührer 8 am Boden des Dialysegefäßes 1 wird die Dialyseflüssigkeit 2 in Bewegung gehalten, um einen Konzentrationsgradienten an der Dialysemembran 7 möglichst klein zu halten und die Dialyse zu beschleunigen. Eine Klebefolie 9 als lösbarer Verschluss der oberen Enden der Probengefäße (Aussparungen 5) schützt das in diesen befindliche Probengut 6 und verhindert ein Verdunsten und eine Kontamination der kleinen Probenvolumina.

In Fig. 2 ist ein Aufbau ähnlich dem Ausführungsbeispiel nach Fig. 1 gezeigt, mit dem Unterschied, dass die Probenplatte 3 nicht (wie in Fig. 1) über fuß- oder ständerartige Halteelemente 4 fest auf dem Boden des Dialysegefäßes 1 steht, sondern durch ein rahmenförmiges Schwimmelement 10 unmittelbar auf der Oberfläche der Dialyseflüssigkeit 2 gehalten wird, so dass die Dialysemembran 7 auf dieser Oberfläche aufliegt. Diese Halterung ist unabhängig vom Füllstand der Dialyseflüssigkeit 2 im Dialysegefäß 1. Zusätzlich besitzt die Probenplatte 3 Entlüftungslöcher 11, welche sich sammelnde Gase unterhalb der Probenplatte 3 entweichen lassen und somit einen vollständigen Kontakt der Dialysemembran 7 mit der Oberfläche der Dialyseflüssigkeit 2 gewährleisten. Dieser vollständige Kontakt bildet die Voraussetzung für eine simultane und essentiell gleichmäßig für alle Proben erfolgende Dialyse dieser großer Probenzahlen im μl-Volumenbereich. Dadurch, dass die Probenplatte 3 zumindest im Rasterbereich der Probengefäße (Aussparungen 5) keine Elemente (beispielsweise zur Halterung o. ä.) besitzt, die nach unten über die Ebene der Dialysemembran 7 hinausragen und in die Dialyseflüssigkeit 2 eintauchen oder dieselbe berühren können, werden schon wesentliche Verwendungseigenschaften für den bestimmungsgemäßen Einsatz der Probenplatte 3 in einem Dialysesystem geschaffen, um Luftbarrieren in der Berührungszone der Dialyseflüssigkeit 2 an der Probenplatte 3 zu vermeiden oder zumindest nicht zu unterstützen. Treten dennoch prozessbedingt Gase in dieser Berührungszone auf, so können diese, wie besagt, durch die Entlüftungslöcher 11 nach oben durch die Probenplatte 3 entweichen. Anstatt der Entlüftungslöcher 11 wären auch andere Elemente, wie Randanphasungen o. ä., denkbar. Aus Übersichtsgründen sind die Entlüftungslöcher 11 (oder andere Entlüftungslemente) nicht in jeder konstruktiven Figur der Zeichnung explizit dargestellt.

Fig. 3 zeigt eine Vorrichtung zur Dialyse, bei welcher die Probenplatte 3 (wie in Fig. 1) mittels der fuß- oder ständerartigen Halteelementen 4 auf dem Boden im Innern des Dialysegefäßes 1 gelagert ist. Das Dialysegefäß 1 besitzt hier einen Zulauf 12 sowie einen Ablauf 13 für die Dialyseflüssigkeit 2. Das Niveau (Füllstand) der Dialyseflüssigkeit 2 wird durch einen einstellbaren Schwimmer 14 mit einem Schwimmerventil 15 reguliert, wobei der Schwimmer 14 in einer Schwimmerführung 16 vertikal beweglich geführt wird. Der Vorteil besteht in der kontinuierlichen Austauschmöglichkeit der Dialyseflüssigkeit 2. Damit wird das Einstellen eines Konzentrationsgleichgewichts zwischen der Dialyseflüssigkeit 2 und dem in den Probengefäßen (Aussparungen 5) jeweils enthaltenen Probengut 6 vermieden, die Dialysegeschwindigkeit ist höher und die Entfernung niedermolekularer Substanzen aus dem Probengut 6 grundsätzlich verbessert. Natürlich kann das Schwimmerventilsystem(12 bis 17) durch einen über einen elektronischen Füllstandssensor geregelten Zulauf ersetzt werden.

Fig. 4 zeigt eine Vorrichtung zur Dialyse, bei der das in Draufsicht gezeigte Dialysegefäß 1 mit der darin aufgenommenen Probenplatte 3 (vgl. Fig.l und Fig. 3) sowie mit dem Zulauf 12 und dem Ablauf 13 als Bestandteil eines Kreislaufsystems für den Durchfluss der Dialyseflüssigkeit 2 dargestellt ist. Der Austausch der Dialyseflüssigkeit 2 erfolgt nicht, wie in der Vorrichtung gemäß Fig. 3, durch ein offenes System, sondern die Dialyseflüssigkeit 2 wird durch eine Pumpe 17 und eine Filterkartusche 18 in einer Leitung 19 als Kreislauf durch das Dialysegefäß 1 bewegt. Der Weg (Richtung) der Dialyseflüssigkeit 2 ist durch Pfeile angedeutet, wobei die schwarzen Pfeile die Auslassrichtung der Dialyseflüssigkeit 2 symbolisieren. Bei ihrem Auslass aus dem Dialysegefäß 1 kann die Dialyseflüssigkeit 2 beispielsweise mit Ionen und/oder Detergenzien aus dem Probengut 6 angereichert sein. Durch ein (oder mehrere) Sorbenz(ien) in der Filterkartusche 18 können diese Bestandteile dem Kreislauf entzogen werden. Die gereinigte Dialyseflüssigkeit 2 gelangt somit, wie durch die weißen Pfeile angedeutet, in das Dialysegefäß 1 zurück. Zweckmäßig ist hier die wiederholte Verwendbarkeit der Dialyselösung 2, verbunden mit der besagten Vermeidung des Einstellens eines Konzentrationsgleichgewichts zwischen der Dialyseflüssigkeit 2 und dem in den Probengefäßen (Aussparungen 5) jeweils enthaltenen Proben- gut 6 und den damit verbundenen Vorteilen für die Dialyse (siehe Ausführungsbeispiel zu Fig. 3).

Fig. 5 zeigt eine Vorrichtung zur Dialyse (wiederum in geschnittener Vorderansicht und Draufsicht), bei welcher die Probenplatte 3 weder fest auf dem Boden des Dialysegefäßes 1 (vgl. Fig. 1) noch schwimmend auf der Dialyseflussigkeit 2 im Dialysegefäß 1 (vgl. Fig. 2) gelagert ist, sondern durch eine Halterung 20 aufgenommen ist, die über einen Schüttlerarm 21 mit einem Schüttler 22 in Verbindung steht. Schüttler 22 dient, angedeutet durch die weißen gekreuzten Pfeile in Fig. 5, zur Horizontalbewegung der Probenplatte 3 über die Oberfläche der Dialyseflüssigkeit und bewegt die Probenplatte 3 in einem Bereich der Amplitude und Frequenz von an sich bekannten im Laborbetrieb eingesetzten Schüttlern für Mikrotiterplatten. Dadurch wird das in den Probengefäßen (Aussparungen 5) der Probenplatte 3 befindliche Probengut 6 durchmischt, was einer Entstehung von Konzentrationsgradienten im Probengut 6, wie auch in der Dialyseflüssigkeit 2, auf die sich die Schüttelbewegung überträgt, entgegenwirkt. Außerdem wird die für manche Dialyseprozesse besonders hinderliche Ausbildung von sekundären Membranen vermieden. Auch der Abtransport von Gasbläschen im Bereich der Membran wird durch diese Bewegung begünstigt. Der Vorteil dieser Vorrichtung ist, dass ggf. auch kombiniert mit dem Wechsel der Dialyseflüssigkeit 2 bzw. deren Umwälzung und Reinigung, wie in den Ausführungsbeispielen zu Fig. 3 und Fig. 4 beschrieben, die Geschwindigkeit und Vollständigkeit der Dialyse erhöht wird. Die kombinatorische Darstellung mit den besagten vorher beschriebenen Ausführungsbeispielen ist aus Gründen der Übersichtlichkeit nicht gesondert in der Zeichnung enthalten. In einer weiteren hier nicht gezeigten Ausführungsform kann die Bewegung von Proben und Dialyseflüssigkeit mit den genannten positiven Effekten auch durch Einkopplung eines Ultraschallmischers erfolgen.

Fig. 6 zeigt (ebenfalls in geschnittener Vorderansicht und Draufsicht) eine Vorrichtung zur Dialyse, bei welcher die Probenplatte 3 (wie in Fig. 2) schwimmend auf der Oberfläche der Dialyseflüssigkeit 2 gelagert ist. Die Probenplatte besitzt nicht, wie bei den vorher beschriebenen Ausführungsbeispielen, Probengefäße mit zylindrisch parallelen Gefäßwandungen, sondern konisch gestaltete Aussparungen 5a in Form eines Kegelstumpfes mit jeweils größeren unteren und durch die Dialysemembran 7 verschlossenen Öffnungen sowie vergleichsweise kleineren oberen Öffnungen. Diese kleineren oberen Öffnungen bilden einen vorteilhaften Formschluss (vgl. Fig. 7) zum Übertragen des Probengutes 6 nach der Dialyse in (im selben Raster befindliche) Einzelvolumina anderer Probenaufnahmeplatten, insbesondere der an sich bekannten Mikrotiterplattentechnologie. Gut erkennbar in der Draufsicht-Darstellung von Fig. 6 ist auch die Klebefolie 9 über der Rasteranordnung der Probengefäße (Aussparungen 5a), welche ein Verdunsten, Verschütten und Kontaminieren des in den Aussparungen 5a befindlichen Probengutes 6 während der Dialyse oder auch beim Transport verhindert.

Fig. 7 und Fig. 8 zeigen schematisch jeweils in Schnittdarstellung durch die Platte einen solchen Verfahrensablauf zur Übertragung des dialysierten Probengutes durch Zentrifuga- tion aus der Probenplatte 3 mit konischen Probengefäßen (vgl. Fig. 6) in eine Auffangplatte 23 mit zylindrischen Probengefäßen. Die Auffangplatte 23 wird umgekehrt auf die Probenplatte 3 aufgesetzt und gemeinsam mit dieser gedreht. Durch Zentrifugation wird das zunächst in der Probenplatte 3 befindliche Probengut 6 in die Auffangplatte 23 übertragen. Anschließend werden die Probenplatte 3 und die Auffangplatte 23 wieder voneinander getrennt. Als Zentrifuge kann eine an sich bekannte Laborzentrifuge für Mikrotiterplatten eingesetzt werden. In Fig. 7 sind die oberen Öffnungen der Aussparungen 5 kleiner als die diesen zugewandten Öffnungen der Probengefäße von der Auffangplatte 23, wodurch der bereits beschriebene gute Formschluss durch das in der Zeichnung angedeutete Ineinandergreifen der Probengefäße gewährleistet wird. Bei Fig. 8 hingegen sind die einander zugewandten Öffnungen der Probengefäße von der Probenplatte 3 und der Auffangplatte 23 jeweils gleichgroß. Hier wird ein erforderlicher dichter Formschluss durch eine zwischen der Probenplatte 3 und der Auffangplatte 23 angeordnete Dichtung 24 gewährleistet.

In den folgenden vier Anwendungsbeispielen wird gezeigt, wie mit den beschriebenen Vorrichtungen unterschiedliche Substanzen dialysiert wurden.

Anwendungsbeispiel 1: Es sollen mit einer Vorrichtung, welche die Aufnahme der Probenplatte 3 in einer Schütteleinrichtung gemäß Fig. 5 vorsieht und die nach Fig. 4 in ein Kreislaufsystem für die Dialyseflüssigkeit 2 eingebunden ist, gleichmäßig, simultan aus 96 Proben, niedermoleku- lare Substanzen, wie p-Nitrophenol (p-NP) und Kochsalz, in kurzen Dialysezeiten entfernt werden.

Dazu werden in die 8 x 12 Dialysegefäße, die mit einer VSWP Millipore Membran (0,025 μm) verschlossen sind, je 100 μl einer 1,5 mM p-NP Lösung in 50 mM Diäthanol- aminpuffer pH = 9.8 (DEA), die zusätzlich 750 mM NaCl enthält, pipettiert und gegen ein nur 11 -fach größeres Volumen von 110 ml deionisiertem Wasser 2 Stunden dialysiert. Die Dialyseflüssigkeit 2 wird mit einer Schlauchpumpe umgepumpt. In den Kreislauf ist eine Deionisierungssäule (Eco Pac, 10 ml, Bio-Rad) integriert (vgl. Fig. 4). Während der Dialyse wird die Probenplatte 3, die mit der Klebefolie 9 verschlossen und in der Halte- rung 20 der Schütteleinrichtung befestigt ist (siehe Fig. 5), ständig geschüttelt. Die Effektivität der Abtrennung des niedermolekularen p-Nitrophenols nach der Dialyse wird durch Vergleich der Absorbanzen bei 405 nm der dialysierten Proben mit den Absorbanzen der Ausgangslösung geprüft. Zur Absorbanzmessung der zur Dialyse eingesetzten Ausgangslösung werden nach Verdünnung mit DEA-Pufferlösung pH = 9.8 in einer Mikrotiterplatte die Absorbanzen in einem Reader gemessen. Zur Absorbanzmessung der 96 dialysierten Proben werden mit einer Multipipette aus der Probenplatte 3 Aliquots entnommen, mit einer 50 mM DEA-Pufferlösung pH = 9,8 in einer Mikrotiterplatte gemischt und in einem Reader gemessen. Der Vergleich der Absorbanzen in den 96 Positionen des Dialysemoduls ist in Tabelle 1 gezeigt. Die gemessenen Absorbanzen sind um den Pufferblindwert reduziert.

Tabelle 1 : Vergleich der Absorbanzen bei 405 nm (A ₀₅) vor und nach Dialyse

Die Werte zeigen, dass unter den beschriebenen Bedingungen mehr als 99 % des p-NP entfernt werden konnte. Die Streuung der Absorbanzwerte nach Dialyse zeigt, dass die Dialysegeschwindigkeit in allen 96 Dialysegefäßen sehr ähnlich ist.

Neben dem Vergleich der Absorbanzen vor und nach der Dialyse, wurde zusätzlich die Leitfähigkeit der eingesetzten Proben (6) gemessen und mit der Leitfähigkeit der Proben nach der Dialyse aus den 96 Dialysegefäßen verglichen. Aus diesen Werten wurde eine Restleitfähigkeit gegenüber der Ausgangslösung von 0,2 % bestimmt, was die Effektivität der Dialyse ebenfalls bestätigt.

Anwendungsbeispiel 2: Zur Abtrennung niedermolekularer Ionen von Proteinen werden in 8 x 11 Positionen der Probenplatte 3 je 75 μl einer konzentrierten Lösung von alkalischer Phosphatase (14,5 μg/ml) in 1 M DEA-Puffer pH = 9,8 gegeben und 1 Stunde gegen ein großes Volumen von 470 ml deionisiertes Wasser dialysiert. Die Probenplatte 3, die auf einem Polystyrolrahmen als Schwimmelement 10 aufgelegt ist, schwimmt auf der Dialyseflüssigkeit 2, welche von dem Magnetrührer 8 bewegt wird (vgl. Fig. 2). Die kontinuierliche Abnahme der niedermolekularen Substanzen in den Probengefäßen (Aussparungen 5) wird durch Messung der Leitfähigkeit (vgl. Fig. 9) in der Dialyseflüssigkeit 2 verfolgt. Nach 60 min Dialyse sind 96 % der dialysierbaren Ionen entfernt. Die Bestimmung der enzymatischen Aktivitäten der alkalischen Phosphatase in den 88 besetzten Dialysegefäßen der Probenplatte 3 und ein Vergleich der enzymatischen Aktivität mit der Ausgangslösung ergab eine Wiederfindung der Enzymaktivität von 90,4 + 4,3 %.

Anwendungsbeispiel 3 : Am Beispiel von Triton X-100 (TX-100) soll geprüft werden, ob es möglich ist, dieses häufig genutzte Detergenz durch Dialyse aus Analyseproben zu entfernen. Dazu wird die Probenplatte 3 mit je 75 μl einer 0,5 %igen wässrigen Triton X-100 Lösung beschickt und gegen Leitungswasser 8 Stunden dialysiert. Die Probenplatte 3 wird mit der Klebefolie 9 verschlossen, wiederum in die Halterung 20 der Schütteleinrichtung eingeführt (vgl. Fig. 5) und ständig geschüttelt. Dabei taucht dieselbe in 170 ml Leitungswasser als Dialyseflüssigkeit 2 ein, welches in einem Kreislaufsystem gemäß Fig. 4 mit einer Fließgeschwindigkeit von 170 ml/min erneuert wird.

Um eventuelle Volumenänderungen zu erfassen, wird die Probenplatte 3 vor und nach Dialyse gewogen. Zur Testung der Effektivität der Tritonentfernung durch Dialyse werden mit einer Multipipette Aliquots aus den Dialysegefäßen des Moduls entnommen, in einer Mikrotiterplatte mit 30 %igem n-Propanol gemischt und in einem Fluoreszenzreader bei einer Excitationswellenlänge von 270 nm nach einer Emissionswellenlänge von 310 nm gemessen. Die zur Dialyse eingesetzte Triton X-100 Lösung wird nach Verdünnung in 30 %igem n-Propanol unter gleichen Bedingungen in einer Mikrotiteφlatte gemessen. Zur Korrektur der Messwerte und zur Kontrolle der Linearität des Messbereichs werden sowohl die Propanollösung in 56 Positionen der Mikrotiterplatte (Blindwerte) als auch drei Eichkonzentrationen von Triton X-100 zwischen 12,5 und 50 μM unter gleichen Bedingungen geraessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengefasst. Die gemessenen Mittelwerte sind um den gemittelten Propanolblindwert reduziert.

Tabelle 2: Vergleich der Fluoreszenzen vor und nach Dialyse

Die gemessenen Fluoreszenzen nach Dialyse in den 96 Dialysegefäßen der Probenplatte 3 zeigen, dass unter den beschriebenen Bedingungen 98,7 % des Triton X-100 gleichmäßig aus allen 96 Dialysegefäßen entfernt werden kann.

Anwendungsbeispiel 4:

Die Probenplatte 3 kann auch zum gleichzeitigen Konzentrieren von 96 Proben verwendet werden. Dazu werden je 100 μl einer 0,3 %igen Dextranblaulösung mit einer Multipipette in die Probengefäße (Aussparungen 5) der Probenplatte 3 pipettiert. Die Probenplatte 3 wird anschließend auf den Schwimmrahmen 10 (vgl. Fig. 2) aus Polystyrol fixiert, welcher auf 100 ml einer 30 %-igen wässrigen Polyethylenglykollösung (PEG 40 000) gelegt. Nach 45 min wurde die Volumenreduktion quantitativ bestimmt. Dazu wurden aus 88 von 96 Positionen je 30 μl mit einer Multipipette entnommen und in eine Mikrotiterplatte pipettiert, die je 120 μl 50 mM DEA-Pufferlösung enthält. In die fehlenden 8 Positionen der Mikrotiteφlatte wurden statt der Probelösung je 30 μl Referenzlösung (0,3 % Dextranblaulösung) gegeben. Die Mikrotiteφlatte wurde nach intensivem Mischen bei 620 nm in einem Reader gemessen. Ein Vergleich der gemittelten Absorbanzen von Proben und Referenzlösung zeigt die unter den beschriebenen Bedingungen gemessenen Absorbanzen (Tabelle 3). Tabelle 3: Vergleich der Absorbanzen von Dextranblau vor und nach Konzentrierung

Die Absorbanzen haben um den Faktor 1 ,6 zugenommen. Das bedeutet, dass nach 45 min das Volumen der Proben um 37,5 μl abgenommen hat, und zwar relativ gleichmäßig, wie die Streuung zeigt.

Anwendungsbeispiel 5:

Zur Dialyse von Plasmid-DNA wurden in einer 96 well Dialyseplatte 110 μl der Proben mit Plasmid-DNA pcDNA3.1hcS ΔE44-N63 (6,5 kb) gegen Puffer Tris 10 mM pH 8 unter Schütteln und Rühren behandelt. Den Proben wurde Paranitrophenol (PNP) in der Endkonzentration 978 μM zugesetzt und die Abnahme der Konzentration jeweils nach zwei und vier Stunden gemessen.

Der Gehalt an DNA in den Proben wurde ebenfalls nach zwei und vier Stunden in jeweils acht Parallelproben einer Konzentration anhand der optischen Dichte ermittelt. Die Detektion erfolgte bei 400 nm für PNP und 260 nm für die Plasmid-DNA.

Bilanz der Plasmid-DNA: Die Konzentrationen wurden mit einer Eichreihe des Plasmids anhand der optischen Dichte berechnet.

Bilanz von PNP in den Proben anhand einer Eichreihe für die Proben (n=32):

Aufstellung der verwendeten Bezugszeichen

1 Dialysegefäß

2 Dialyseflüssigkeit

3 Probenplatte

4 Halterung

5, 5a Aussparung

6 Probengut

7 Dialysemembran

8 Magnetrührer

9 Klebefolie

10 Schwimmelement

11 Entlüftungsloch

12 Zulauf

13 Ablauf

14 Schwimmer

15 S chwimrnerventil

16 S chwimmer fuhrung

17 Pumpe

18 Filterkartusche

19 Leitung

20 Halterung

21 Schüttlerarm

22 Schüttler

23 Auffangplatte

24 Dichtung

Claims

Patentansprüche

1. Vorrichtung zur simultanen Dialyse einer Vielzahl flüssiger Proben, - enthaltend ein Dialysegefäß (1) mit darin befindlicher Dialyseflüssigkeit (2) sowie Mitteln (12, 13) für den Zu- und Abfluss der Dialyseflüssigkeit (2), welche mit einer Füllstands-Niveauregelung (15) in Verbindung stehen,

- enthaltend zumindest eine in die Dialyseflüssigkeit (2) eintauchende bzw. diese berührende sowie durch Halterungselemente (4, 10, 20) in bzw. auf der Oberfläche der Dialyseflüssigkeit (2) gehalterte Probenplatte (3) mit einer im an sich bekannten sowie zur Liquidhandlingtechnik für die Mikroplattentechnologie passfähigen Raster (n x 8 x 12) angeordneten Vielzahl gleicher Probengefäße (5) im Fassungsvermögen für Mikrolitervolumina, wobei von den Probengefäße (5) jeweils die oberen Enden offen und die unteren Enden durch in einer Ebene liegende semipermeable Membranen (7) verschlossen sind und die Probenplatte (3) im Rasterbereich der Probengefäße (5) keine die Ebene der semipermeablen Membranen (7) überragenden und in der Dialyseflüssigkeit (2) Gasbarrieren bildenden oder unterstützenden Zonen oder Elemente aufweist sowie in ihren Randbereichen Elemente, beispielsweise Öffnungen (11), zum Entweichen von Luft beim Berührungskontakt mit der Dialyseflüssigkeit (2) besitzt,

- außerdem enthaltend Mittel (21, 22, 8, 17) zur Bewegung der Probenplatte und der Dialyseflüssigkeit (2)

2. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeiclinet, dass die Probenplatte (3) aus einer Platte mit zylindrischen Aussparungen (5) als Probengefäße besteht.

3. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Probenplatte (3) die Geometrie von an sich bekannten Mikrotitrationsplatten aufweist.

4. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die unteren Enden der auf der Probenplatte (3) vorgesehenen Probengefäße (5) jeweils durch einzelne Dialysemembranen (7) geschlossen sind.

1.

5. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die unteren Enden der auf der Probenplatte (3) vorgesehenen Probengefäße (5) durch eine oder mehrere gemeinsame Dialysemembranen (7) geschlossen sind.

6. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Dialysemembranen (7) aus mehreren Membranschichten bestehen.

7. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Probenplatte (3) auf die Dialysemembranen (7) aufgespritzt ist.

8. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Dialysemembran (7) auf die Unterseite der Probenplatte (3) geklebt ist.

9. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Dialysemembran (7) auf die Unterseite der Probenplatte (3) gebondet, geschweißt oder gespritzt ist.

10. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass eine Klebefolie (9) als lösbarer Verschluss der oberen Enden der Probengefäße (5) vorgesehen ist.

11. Vorrichtung gemäß Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass ein Deckel als lösbarer Verschluss der oberen Enden der Probengefäße (5) vorgesehen ist.

12. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Dialysegefäß (1) mindestens einen Zufluss (12) sowie mindestens einen vorzugsweise mit einem Schwimmerventil (15) in Verbindung stehenden Abfluss (13) für die Dialyseflüssigkeit (2) aufweist.

13. Vorrichtung gemäß Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass zwischen dem mindestens einen Abfluss (13) und dem mindestens einem Zufluss (12) Mittel (18) zur Entfer- nung von zu dialysierenden Substanzen aus der Dialyseflüssigkeit (2) vorgesehen sind.

14. Vorrichtung gemäß Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass diese Mittel aus wenigstens einem Ionenaustauscher bestehen.

15. Vorrichtung gemäß Anspruch 13, dadurch gekennzeiclinet, dass diese Mittel als Deter- genzien bindende Adsorber ausgebildet sind.

16. Vorrichtung gemäß Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass diese Mittel chelatbil- dende Substanzen enthalten.

17. Vorrichtung gemäß Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass die Durchflußmenge der Dialyseflüssigkeit (2) durch den mindestens einen Zufluss (12) und durch den mindestens einen Abfluss (13), beispielsweise durch Ventile oder Stellelemente, jeweils einstell- bar ist.

18. Vorrichtung gemäß Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass das Dialysegefäß (1) mit seinem mindestens einen Zufluss (12) und mit seinem mindestens einen Abfluss (13) Bestandteil eines durch eine Umwälzpumpe (17) bewegten Kreislaufsystems für die Dialy- seflüssigkeit (2) ist.

19. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Probenplatte (3) im Dialysegefäß (1), beispielsweise durch auf dem Gefäßboden aufliegende fuß- bzw. ständerartige Elemente (4), gehaltert wird.

20. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Probenplatte (3) mittels eines oder mehreren Schwimmelementen (10) in der im Dialysegefäß (1) befindlichen Dialyseflüssigkeit (2) gehaltert wird.

21. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Probenplatte (3) mit Mitteln (22, 21) zur Bewegung und Durchmischung zumindest der in den Probengefäßen (5) enthaltenen Flüssigkeit (6) in Verbindung steht.

22. Vorrichtung gemäß Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, dass diese Mittel aus einem an sich bekannten Schüttler (22) bestehen.

23. Vorrichtung gemäß Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, dass diese Mittel aus einer Ultraschallquelle bestehen.

24. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass Kontrollelemente zur Messung und/oder Beeinflussung der Dialyseflüssigkeit (2) vorgesehen sind.

25. Vorrichtung gemäß Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, dass die Kontrollelemente Mittel zur simultanen Leitfähigkeitsmessung sind.

26. Vorrichtung gemäß Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, dass die Kontrollelemente Mittel zur simultanen Messung der optischen Dichte sind.

27. Vorrichtung gemäß Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, dass die Kontrollelemente Fluoreszenzdetektoren sind.

28. Vorrichtung gemäß Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, dass die Kontrollelemente Thermometer sind.

29. Vorrichtung gemäß Anspruch 24 dadurch gekennzeichnet, dass die Kontrollelemente zur Steuerung des Dialyseprozesses eingesetzt werden.

30. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass zum Zweck einer Probenumfüllung, beispielsweise durch Zentrifugation, eine umgekehrt auf die Probenplatte (3) aufsetzbare Auffangplatte (23) mit einer Pluralität von Probengefäßen vorgesehen ist, deren Rasteranordnung (n x 8 x 12) deckungsgleich zum Raster der Probengefäße (5) der Probenplatte (3) ist.

31. Vorrichtung gemäß Anspruch 30 dadurch gekennzeichnet, dass die Probengefäßöffnungen der beim Aufsetzen der Auffangplatte (23) korrespondierenden Probengefäße der Auffangplatte (23) und der Probenplatte (3) jeweils unterschiedlich sind und für einen Formschluss vorzugsweise jeweils ineinander greifen.

32. Vorrichtung gemäß Anspruch 31 dadurch gekennzeichnet, dass die Probengefäße (5) der Probenplatte (3) konisch ausgeführt sind, wobei die unteren größeren Öffnungen durch die Dialysemembranen (7) verschlossen sind und die oberen Öffnungen der Proben- gefäße (5) jeweils kleiner als die beim Aufsetzen der Auffangplatte (23) korrespondierenden Probengefäßöffnungen der Auffangplatte (23) sind.

33. Vorrichtung gemäß Anspruch 30 dadurch gekennzeichnet, dass die Öffnungen der beim Aufsetzen der Auffangplatte (23) korrespondierenden Probengefäße der Auffangplatte (23) und der Probenplatte (3) jeweils gleichgroß sind.

34. Vorrichtung gemäß Anspruch 30 dadurch gekennzeichnet, dass Mittel zum besseren Formschluss sowie zur Abdichtung zwischen der Probenplatte (3) und der Auffangplatte (23), beispielsweise eine Dichtung oder Paste, vorgesehen sind.

35. Vorrichtung gemäß Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, dass die Mittel zur Bewegung der Dialyseflüssigkeit (2) aus einem an sich bekannten Magnetrührer (8) bestehen.