WO2003035663A1 - Nouveaux derives d'hydroxyalkyle indolocarbazole, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent - Google Patents

Nouveaux derives d'hydroxyalkyle indolocarbazole, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent Download PDF

Info

Publication number
WO2003035663A1
WO2003035663A1 PCT/FR2002/003592 FR0203592W WO03035663A1 WO 2003035663 A1 WO2003035663 A1 WO 2003035663A1 FR 0203592 W FR0203592 W FR 0203592W WO 03035663 A1 WO03035663 A1 WO 03035663A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
formula
compound
linear
branched
compounds
Prior art date
Application number
PCT/FR2002/003592
Other languages
English (en)
Inventor
Michelle Prudhomme
Christelle Marminon
Pascale Moreau
John Hickman
Alain Pierre
Bruno Pfeiffer
Pierre Renard
Jean-Guy Bizot-Espiard
Original Assignee
Les Laboratoires Servier
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to CA002463923A priority Critical patent/CA2463923A1/fr
Priority to EP02796813A priority patent/EP1438320A1/fr
Priority to HU0401885A priority patent/HUP0401885A2/hu
Priority to KR1020047005995A priority patent/KR100588222B1/ko
Priority to BR0213403-9A priority patent/BR0213403A/pt
Priority to JP2003538176A priority patent/JP2005509641A/ja
Priority to MXPA04003741A priority patent/MXPA04003741A/es
Priority to NZ532365A priority patent/NZ532365A/en
Application filed by Les Laboratoires Servier filed Critical Les Laboratoires Servier
Priority to US10/492,876 priority patent/US20040242508A1/en
Priority to EA200400533A priority patent/EA006201B1/ru
Publication of WO2003035663A1 publication Critical patent/WO2003035663A1/fr
Priority to ZA2004/02626A priority patent/ZA200402626B/en
Priority to NO20041761A priority patent/NO20041761L/no
Priority to HK05102890A priority patent/HK1072774A1/xx

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/23—Heterocyclic radicals containing two or more heterocyclic rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, not provided for in groups C07H19/14 - C07H19/22
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/12—Antidiuretics, e.g. drugs for diabetes insipidus

Definitions

  • the present invention relates to new derivatives of hydroxyalkyl indolocarbazole, their process of preparation and the pharmaceutical compositions which contain them.
  • the compounds of the present invention constitute derivatives of rebeccamycin, this product having an inhibitory activity of topoisomerase I making it particularly useful in the treatment of tumors.
  • Many chemical modifications of rebeccamycin have been made, both in terms of the functional groups present on the molecule (WO 98/07433) and their positions on the hexacyclic skeleton (WO 98/07433) and their positions on the hexacyclic skeleton (WO
  • the compounds described by the Applicant surprisingly exhibit selective inhibitory activity on a kinase family and more specifically on the kinase GSK-3 (glycogen synthase kinase).
  • Glycogen Synthase Kinase 3 is found in most human tissues
  • GSK-3 (muscle, liver, pancreas, heart, intestine, ). This enzyme is involved in the insulin signaling pathway. Insulin via the PI 3-kinase pathway inhibits GSK-3, leading to an increase in the synthesis of glycogen stores. GSK-3 also phosphorylates the insulin substrate proteins resulting in desensitization of the insulin stimulation pathways. Experiments carried out in the Zucker rat (obese and diabetic) have shown that inhibition of GSK-3 leads to stimulation of glucose transport. It was also found that the activity of GSK-3 was increased in models or in pathological situations in animals as in humans (type II diabetes).
  • GSK-3 activity makes it possible to prevent neuronal death in subjects suffering from neurodegenerative pathologies, as well as to prevent the death of healthy cells in a subject suffering from affection. tumor and treat with cytotoxic agents.
  • the compounds capable of inhibiting the synthesis of GSK-3 are therefore particularly useful for the treatment of type II diabetes, obesity, pathologies of the central nervous system, Alzheimer's disease, Parkinson's disease , and to prevent normal cell apoptosis induced by anticancer drugs.
  • the compounds described by the Applicant in addition to the fact that they are new, unexpectedly exhibit selective inhibitory activity with respect to the Glycogen Synthase Kinase 3, making them particularly useful for their use as a medicament, in the treatment of the pathologies mentioned above.
  • Ri and R 2 identical or different, independently of each other, each represent a group chosen from hydrogen, alkyl (C ⁇ _-C 6 ) linear or branched, arylalkyl
  • C ⁇ -C 6 linear or branched, hydroxy, hydroxyalkyl (C ⁇ -C 6 ) linear or branched, dihydroxyalkyl (C ⁇ -C 6 ) linear or branched, alkoxy (C ⁇ -C 6 ) linear or branched, alkoxy (C ⁇ -C 6) alkyl (C ⁇ -C6) linear or branched, amino, and aminoalkyl (C ⁇ -C6) linear or branched, the amino moiety in each of the groups being optionally substituted by one or two identical or different, selected from alkyl
  • Ra and Rb identical or different, independently of each other, each represent a linear or branched alkylene chain (C ⁇ -C 6 ), • Xi, X 2 and X 3) identical or different, independently of each other, each represent a group chosen from hydroxy, alkoxy (C ⁇ -C 6 ) linear or branched, aryloxy, arylalkoxy (C ⁇ -C 6 ) linear or branched, alkyl (C ⁇ ⁇ C 6 ) linear or branched, amino (optionally substituted by one or two groups, identical or different, alkyl (C ⁇ -C 6 ) linear or branched), halogen, alkylcarbonyloxy (C ⁇ -C 6 ) linear or branched, and azido,
  • aryl group is understood a phenyl or naphthyl group, and by isomers one understands the optical isomers (racemates, enantiomers and diastereoisomers).
  • hydrochloric hydrobromic, sulfuric, phosphonic, acetic, trifluoroacetic, lactic, pyruvic, malonic, succinic, glutaric, fumaric, tartaric, maleic, citric, ascorbic, oxalic, methane acids. sulfonic, camphoric, etc.
  • Preferred Ri groups of the compounds of the invention are the hydrogen atom, the alkyl group (C ⁇ -C6) linear or branched alkyl or hydroxy (C ⁇ -C6) linear or branched.
  • the preferred group R 2 of the compounds of the invention is the hydrogen atom.
  • the preferred compounds are the compounds of formula (I) in which Ra and Rb, identical, represent a linear alkylene chain (C ⁇ -C).
  • the groups X_. X and X 3 preferred, compounds of the invention are chosen from hydroxy, alkoxy (C ⁇ -C 6 ) linear or branched and alkylcarbonyloxy (C ⁇ -C 6 ) linear or branched.
  • Preferred groups X 4 are selected from -R c-Xi groups in which Rc represents a methylene and X group. represents a group chosen from hydroxy, halogen, alkoxy (C ⁇ -C 6 ) linear or branched and alkylcarbonyloxy (C _ -C 6 ).
  • the preferred compounds are the compounds of formula (LA):
  • R_, R 2 , Ra, Rb, Xi, X, X 3 and X 4 are as defined in formula (I).
  • the preferred compound of the invention is 3,9-bis (hydroxymethyl) -12- (4-O-methyl- ⁇ -D- glucopyranosyl) -12,13-dihydro-5H-indolo [2,3- ⁇ ] pyrrolo [3,4-c] carbazole-5,7 (6H) -dione
  • the isomers as well as the addition salts with a pharmaceutically acceptable acid or base of the preferred compounds form an integral part of the invention.
  • the present invention also relates to the process for preparing the compounds of formula (I), characterized in that a compound of formula (II) is used as starting material:
  • the compounds of formula (II), (IV), and (VIII) are either commercial compounds, or obtained according to conventional methods of organic synthesis easily accessible to those skilled in the art.
  • the compounds of formula (I) have a completely surprising selective inhibitory activity GSK-3 (glycogen Synthase Kinase-3). This characteristic property allows their use in the treatment of type II diabetes, obesity, pathologies of the central nervous system, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, and for apoptosis.
  • the present invention also relates to pharmaceutical compositions containing as active principle at least one compound of formula (I), one of its isomers, or one of its addition salts with a pharmaceutically acceptable acid or base, alone or in combination with one or more inert, non-toxic, pharmaceutically acceptable excipients or vehicles.
  • compositions according to the invention particular mention will be made of those which are suitable for oral, parenteral (intravenous, intramuscular, or subcutaneous), per or transcutaneous, intravaginal, rectal, nasal, perlingual, buccal administration. , ocular or respiratory.
  • compositions according to the invention for parenteral injections include in particular aqueous and non-aqueous sterile solutions, dispersions, suspensions or emulsions as well as sterile powders for the reconstitution of injectable solutions or dispersions.
  • compositions according to the invention for solid oral administrations, include in particular simple or coated tablets, sublingual tablets, sachets, capsules, granules, and for oral, nasal, buccal or ocular administrations, include in particular emulsions, solutions, suspensions, drops, syrups and aerosols.
  • compositions for rectal or vaginal administration are preferably suppositories, and those for per or trans-cutaneous administration include in particular powders, aerosols, creams, ointments, gels and patches.
  • compositions cited above illustrate the invention but do not limit it in any way.
  • inert, non-toxic, pharmaceutically acceptable excipients or vehicles mention may be made, by way of indication and without limitation, of diluents, solvents, preservatives, wetting agents, emulsifiers, dispersing agents, binders, swelling agents, disintegrants, retardants, lubricants, absorbents, suspending agents, colorants, flavorings, etc ...
  • the useful dosage varies according to the age and weight of the patient, the route of administration, the pharmaceutical composition used, the nature and severity of the condition, and the taking of any associated treatments. The dosage ranges from 0.5 mg to 500 mg in one or more doses per day.
  • the starting materials used are known products or prepared according to known procedures. The different stages of preparation lead to synthesis intermediates useful for the preparation of the compounds of the invention.
  • Example 1 3,9-bis (hy roxymethyl) -l 2- (4-0-methyl- ⁇ -D-glucopyranosy ⁇ ) -l 2,13- dihydro-5i ⁇ -in (Iolo [2,3-] pyrro ⁇ o [3,4-cJcarbazole-5,7 (6H) -diione,
  • Stage A 12- (2 5 3,6-tri-0-acetyl-4-f9-methyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) -12,13-dihydro-5H- indolo [2,3-fllpyrrolo [3,4 c] carbazole-5,7 (6ii) -dione,
  • Stage C 3,9-DîformyI-12- (4-t -methyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) -12,13-dihydro-5Er- indolo [2,3- ⁇ ] pyrrolo [3,4-clcarbazole-5 , 7 (6jfif) -dione.
  • stage B The compound obtained in stage B is dissolved in 13 ml of methanol, then 6 ml of a 30% aqueous solution of NH 4 OH are added. After 24 hours of stirring at room temperature, the reaction medium is evaporated to dryness. The residue is dissolved in an ethyl acetate / tetrahydrofuran mixture, acidified with an IN solution of hydrochloric acid and then extracted with ethyl acetate. The organic phase is dried over magnesium sulfate and evaporated under reduced pressure. Chromatography on silica gel of the residue (cyclohexane / acetone: 20/80) allows the expected product to be isolated. Melting point:> 300 ° C
  • Stage D 3,9-bis (hydroxymethyl) -12- (4-0-methyl- ⁇ -D-glycopranosyl) -12,13- dihydro-5i-indolo [2,3- ⁇ ] pyrrolo [3,4- c] carbazoIe-5-7 (6E -dione.
  • Example 2 3,9-bis (hydroxymethyl) -6-methyl-I2- (4-0-methyl- ⁇ -D- glucopyranosyl) -12,13-dihydro-5i ⁇ -mdolo [2,3-] pyrrolo [3 , 4-c] carbazole-5,7-dione.
  • Stage A 12- (4-0-methyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) -12,13-dihydrofuro [3,4-cl indolo [2,3-fl] carbazole-5,7 »dione.
  • Stage B 6-methyl U2- (4-0-hy hyI- ⁇ -D-glueopyra ⁇ osyI) -12,13-dihydro-5H- mdolo [2,3 - «] pyrrolo [3,4-c] carbazole-5, 7-dione.
  • Stage C 3-9-bis (hydroxymethyl) -6-methyl-12- (4-? -Methyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) - 12-13-dihydro-5i ⁇ -indolo [2-3- ⁇ ] pyrroIo [ 3,4-c] carbazole-5,7-dio ⁇ e.
  • Example 3 6- (2-hydroxyethyl) -3,9-bis (hydroxymethyl) -12- (4- "9-methyl- ⁇ -D- glucopyranosyl) -1,213-dihy dro-5H-indolo [2 , 3 - "] pyrrolo [3,4-c] carbazole-5,7-dione.
  • Stage A 6- (2-hydroxyethyl) -12- (4- * -methyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) -12,13-dihydro- 5iî-mdoIo [2,3- ⁇ ] pyrroIo [3,4-c ] earbazole-5,7-diQne.
  • Stage B 6- (2-hydroxyethyl) -3,9-bis (hydroxymethyl) -12- (4- ⁇ 9-methyl- ⁇ -D- glucopyranosyl) -12,13-dihydro-5 J ff-mdoloP, 3- ⁇ ] pyrroIo [3,4-c] carbazole-5,7-dione.
  • the product is obtained according to the method of Example 1, from stages A to D, using the compound obtained in preceding stage A as a substrate.
  • Example 4 6-diethylaminoethyl-3,9-bis (hydroxymethyl) -12- (4- "-methyl- ⁇ -D- glucopyranosyl) -12,13-dihydro-5H-mdolol2,3- ⁇ ] pyrrolo [3, 4-c] earbazole-5,7-dione.
  • Stage A 6-diethylammoethyl-12- (4-0-methyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) -12,13-dîhydro- 5i ⁇ -indolo [2,3- ⁇ ] pyrroIo [3,4-c] carbazole-5 , 7-dione.
  • Stage B 6-diethylaminoethyl-3,9-bis (hydroxymethyl) -12- (4-0-methyl- ⁇ -D- glucopyranosyl) -12, I3-dihydro-5H-indolo [2,3- ⁇ ] pyrrolo [ 3,4-c] carbazol
  • the product is obtained according to the method of Example 1, from stages A to D, using the compound obtained in preceding stage A as a substrate.
  • the product is obtained according to the method of stage D of example 1, using as compound the compound obtained in stage B of example 1.
  • Example 6 3,9-bîs (hydroxymethyl) -12- (6-chloro-6-deoxy-4-0-methyl-I- ⁇ -D ⁇ glucopyranosyl) -12,13-dib.ydro-5H- whatsoeverolo [2, 3- ⁇ t] pyrrolo [3,4-c] carbazole-5,7 (6H) -diotte.
  • Stage A 12- (6-chloro-6-deoxy-4-0-methyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) -12,13-dihydro-5jH r - itt QloP î S- ⁇ lpyrrolop ⁇ - lcarbazole-S CôE -d ⁇ Otte.
  • the product is obtained according to the method of Example 1, from stages A to D, using the compound obtained in preceding stage A as a substrate.
  • Glycogen synthase kinase 3 was purified from Sf9 cells transfected as described in Eur. J. Biochem., 1992, 305-311.
  • Example 1 has an IC 50 of 0.03 ⁇ M. It is therefore active vis-à-vis GSK-3 and this activity is selective as evidenced by the results set out in Examples 8 and 9 described below.
  • the enzyme was purified from a homogenate of starfish oocytes (Marthasterias glacialis) in M phase as described in Ewr. J. Biochem, 1997, 243. 527-536 and J Biol.
  • the IC 50 values are estimated from the dose-response curves. During this test, the compound of Example 1 has an IC 50 greater than 5 ⁇ M, thus demonstrating its weak capacity to inhibit this cyclin dependent protein kinase.
  • CDK5 was expressed in E. coli as a GST (Glutathione-S-transferase) fusion protein and purified on a glutathione-agarose affinity column. CDK5 is then activated by p25 (1/1 mixture), prepared in the same way. The enzymatic activity of the CDK5 / p25 complex is measured as described above for CDK1 / cyclin B. The IC 50 values are estimated from the dose-response curves.
  • Example 1 has an IC 5 o greater than 5 ⁇ M, thus demonstrating its weak ability to inhibit this cyclin dependent protein kinase.
  • Example 10 Pharmaceutical composition for 1000 tablets dosed at 10 mg

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Composé de formule (I) dans laquelle: - R1 et R2 représentent chacun un groupement choisi parmi hydrogène, alkyle, arylalkyle, hydroxy, hydroxylalkyle, dihydroxyalkyle, alkoxy, alkoxyalkyle, amino et aminoalkyle (étant éventuellement substitués), - Ra et Rb représentent chacun une chaîne alkylène, - X1, X2 et X3 représentent chacun un groupement choisi parmi hydroxy, alkoxy, aryloxy, arylalkoxy, alkyle, amino (éventuellement substitué), halogène, alklcarbonyloxy et azido, - X4 représente un groupement méthylidène ou un groupement de formule -Rc-X1 tel que défini dans la description, leurs isomères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. Médicaments.

Description

NOUNEAUX DERIVES DΗYDROXYALKYLE INDOLOCARBAZOLE,
LEUR PROCEDE DE PREPARATION
ET LES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES QUI LES CONTIENNENT
La présente invention concerne de nouveaux dérivés d'hydroxyalkyle indolocarbazole, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
Les composés de la présente invention constituent des dérivés de la rebeccamycine, ce produit présentant une activité inhibitrice de la topoisomérase I la rendant particulièrement utile dans le traitement des tumeurs. De nombreuses modifications chimiques de la rebeccamycine ont été réalisées, tant au niveau des groupes fonctionnels présents sur la molécule (WO 98/07433) que de leurs positions sur le squelette hexacyclique (WO
00/64917), en vue d'en améliorer les propriétés thérapeutiques.
Les composés décrits par la Demanderesse présentent de façon surprenante une activité inhibitrice sélective sur une famille de kinase et plus spécifiquement sur la kinase GSK-3 (glycogène synthase kinase).
La Glycogène Synthase Kinase 3 est présente dans la plupart des tissus chez l'homme
(muscle, foie, pancréas, cœur, intestin, ...). Cette enzyme est impliquée dans la voie de signalisation de l'insuline. Ainsi, l'insuline par la voie de la PI 3-kinase inhibe la GSK-3 conduisant alors à une augmentation de la synthèse de réserves sous forme de glycogène. La GSK-3 phosphoryle également les protéines substrats de l'insuline entraînant une désensibilisation des voies de stimulation de l'insuline. Des expériences conduites chez le rat Zucker (obèse et diabétique) ont montré que l'inhibition de la GSK-3 conduit à une stimulation du transport du glucose. Il a également été constaté que l'activité de la GSK-3 était augmentée dans des modèles ou dans des situations pathologiques chez l'animal comme chez l'homme (diabète de type II). De plus des éléments permettent de démontrer que l'inhibition de l'activité de la GSK-3 permet de prévenir la mort neuronale chez des sujets atteints de pathologies neurodégératives, ainsi que de prévenir la mort des cellules saines chez un sujet atteint d'affection tumorale et traiter par des agents cytotoxiques. Les composés capables d'inhiber la synthèse de la GSK-3 sont donc particulièrement utiles pour le traitement du diabète de type II, de l'obésité, des pathologies du système nerveux central, de la maladie d'Alzheimer, de la maladie de Parkinson, et pour prévenir l'apoptose des cellules normales induite par les médicaments anticancéreux.
Ainsi les composés décrits par la Demanderesse, outre le fait qu'ils soient nouveaux, présentent de façon inattendue une activité inhibitrice sélective vis-à-vis de la Glycogène Synthase Kinase 3, les rendant particulièrement utiles pour leur utilisation en tant que médicament, dans le traitement des pathologies mentionnées précédemment.
Plus particulièrement, la présente invention concerne les composés de formule (I) :
Figure imgf000003_0001
dans laquelle :
• Ri et R2, identiques ou différents, indépendamment l'un de l'autre, représentent chacun un groupement choisi parmi hydrogène, alkyle (Cι_-C6) linéaire ou ramifié, arylalkyle
(Cι-C6) linéaire ou ramifié, hydroxy, hydroxyalkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié, dihydroxyalkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié, alkoxy (Cι-C6) linéaire ou ramifié, alkoxy(Cι-C6)alkyle(Cι-C6) linéaire ou ramifié, amino et aminoalkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié, la partie amino dans chacun des groupements étant éventuellement substituée par un ou deux groupements, identiques ou différents, choisi parmi alkyle
(Cι-C6) linéaire ou ramifié, aryle et arylalkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié,
• Ra et Rb, identiques ou différents, indépendamment l'un de l'autre, représentent chacun une chaîne alkylene (Cι-C6) linéaire ou ramifié, • Xi, X2 et X3) identiques ou différents, indépendamment l'un de l'autre, représentent chacun un groupement choisi parmi hydroxy, alkoxy (Cι-C6) linéaire ou ramifié, aryloxy, arylalkoxy (Cι-C6) linéaire ou ramifié, alkyle (Cι~C6) linéaire ou ramifié, amino (éventuellement substitué par un ou deux groupements, identiques ou différents, alkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié), halogène, alkylcarbonyloxy (Cι-C6) linéaire ou ramifié, et azido,
• 4 représente un groupement méthylidène ou un groupement de formule -Rc-Xi dans laquelle Rc représente une liaison simple ou un groupement méthylène, et Xi est tel que défini précédemment,
leurs isomères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable,
étant entendu que par groupement aryle on comprend un groupement phényle ou naphtyle, et par isomères on comprend les isomères optiques (racémates, énantiomères et diastéréoisomères) .
Parmi les acides pharmaceutiquement acceptables, on peut citer à titre non limitatif les acides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique, phosphonique, acétique, trifluoroacétique, lactique, pyruvique, malonique, succinique, glutarique, fumarique, tartrique, maléïque, citrique, ascorbique, oxalique, méthane sulfonique, camphorique, etc
Parmi les bases pharmaceutiquement acceptables, on peut citer à titre indicatif l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium, la triéthylamine, la tertbutylamine, etc
Les groupements Ri préférés des composés de l'invention sont l'atome d'hydrogène, le groupement alkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié ou hydroxyalkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié.
Le groupement R2 préféré des composés de l'invention est l'atome d'hydrogène. Selon une variante avantageuse de l'invention, les composés préférés sont les composés de formule (I) dans lesquelles Ra et Rb, identiques, représentent une chaîne alkylene (Cι-C ) linéaire.
Les groupements X_. X et X3 préférés, des composés de l'invention sont choisis parmi les groupements hydroxy, alkoxy (Cι-C6) linéaire ou ramifié et alkylcarbonyloxy (Cι-C6) linéaire ou ramifié.
Les groupements X4 préférés, des composés de l'invention sont choisis parmi les groupements -Rc-Xi dans lesquels Rc représente un groupement méthylène et X. représente un groupement choisi parmi hydroxy, halogène, alkoxy (Cι-C6) linéaire ou ramifié et alkylcarbonyloxy (C _ -C6) .
Selon une variante avantageuse de l'invention, les composés préférés sont les composés de formule (LA) :
Figure imgf000005_0001
dans laquelle R_, R2, Ra, Rb, Xi, X , X3 et X4 sont tels que définis dans la formule (I).
Le composé préféré de l'invention est le 3,9-bis(hydroxyméthyl)-12-(4-O-méthyl-β-D- glucopyranosyl)-12,13-dihydro-5H-indolo[2,3-α]pyrrolo[3,4-c]carbazole-5,7(6H)-dione
Les isomères ainsi que les sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable des composés préférés font partie intégrante de l'invention. La présente invention concerne aussi le procédé de préparation des composés de formule (I), caractérisé en ce qu'on utilise comme produit de départ un composé de formule (II) :
Figure imgf000006_0001
dans laquelle Xi, X2, X3 et X4 sont tels que définis dans la formule (1),
composé de formule (II), qui est soumis à des conditions d'hydrogénolyse en présence de nickel de Raney et de soude, pour conduire au composé de formule (III) :
Figure imgf000006_0002
dans laquelle Xi, X2, X3 et X4 sont tels que définis précédemment,
composé de formule (111) qui est soumis à l'action d'un composé de formule (IV)
Figure imgf000006_0003
dans laquelle Ri est tel que défini dans la formule (I),
pour conduire au composé de formule (V) :
Figure imgf000007_0001
dans laquelle Ri, Xi, X2, X3 et sont tels que définis précédemment,
composé de formule (V) qui est mis à réagir avec du α,α-dichlorométhylméthyléther en présence d'un acide de Lewis pour conduire au composé de formule (VI) :
Figure imgf000007_0002
dans laquelle Ri, Xi, X2, X3 et X4 sont tels que définis précédemment,
composé de formule (VI) dont les fonctions aldéhydes sont réduites par action d'un agent réducteur couramment utilisé en synthèse organique, pour conduire au composé de formule (I/a), cas particulier des composés de formule (I) :
Figure imgf000008_0001
dans laquelle Ri, Xi, X2, X3 et sont tels que définis précédemment,
composé de formule (Va) qui est transformé en son dérivé dihalogéne correspondant selon des conditions usuelles de la chimie organique, puis mis à réagir avec un cyanure alcalin en présence de diméthylsulfoxyde, pour conduire au composé de formule (Nil) :
Figure imgf000008_0002
dans laquelle Ri, Xi, X2, X3 et X4 sont tels que définis précédemment,
composé de formule (VII) qui est transformé en ester selon des conditions classiques puis soumis à un agent réducteur pour conduire au composé de formule (I/b), cas particulier des composés de formule (1) :
Figure imgf000009_0001
dans laquelle Rl5 Xi, X2, X3 et X sont tels que définis précédemment,
composé de formule (I/b) qui peut être soumis de nouveau, et de façon répétitive, à la même série de réactions ayant conduit aux composés de formules (VII) et (I/b) à partir des composés de formule (I/a), pour conduire au composé de formule (I/c), cas particulier des composés de formule (I) :
Figure imgf000009_0002
dans laquelle Ri, Xi, X2, X et X- sont tels que définis précédemment, et Ra et Rb sont tels que définis dans la formule (I),
composé de formule (I/c) qui peut être soumis à l'action d'un composé de formule (VIII) :
R2a-Hal (VHI) dans laquelle R2a a la même définition que R2 dans la formule (I) à l'exception de la définition atome d'hydrogène, pour conduire au composé de formule (I/d), cas particulier des composés de formule (I) :
Figure imgf000010_0001
dans laquelle Ri, Ra, Rb, Xi, X2, X3, Xi et R2a sont tels que définis précédemment,
les composés de formule (I/a) à (I/d) formant l'ensemble des composés de formule (I), que l'on purifie, le cas échéant, selon des techniques classiques de purification, qui peuvent, si on le désire, être séparés en leurs différents isomères, selon une technique classique de séparation, dont on module les substituants X_, X2, X3 et Xi selon les méthodes classiques de la synthèse organique utilisées dans le domaine de la chimie des sucres, et que l'on transforme, si on le souhaite, en leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.
Les composés de formule (II), (IV), et (VIII) sont soit des composés commerciaux, soit obtenus selon des méthodes classiques de la synthèse organique facilement accessibles à l'homme du métier.
Les composés de fonnule (I) possèdent une activité inhibitrice sélective GSK-3 (glycogène Synthase Kinase-3) tout à fait surprenante. Cette propriété caractéristique permet leur utilisation dans le traitement du diabète de type II, de l'obésité, des pathologies du système nerveux central, de la maladie d'Alzheimer, de la maladie de Parkinson, et pour Fapoptose.
La présente invention a également pour objet les compositions pharmaceutiques renfermant comme principe actif au moins un composé de formule (I), un de ses isomères, ou un de ses sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable, seul ou en combinaison avec un ou plusieurs excipients ou véhicules inertes, non toxiques, pharmaceutiquement acceptables.
Parmi les compositions pharmaceutiques selon l'invention, il sera cité plus particulièrement celles qui conviennent pour l'administration orale, parentérale (intraveineuse, intramusculaire, ou sous-cutanée), per ou trans-cutanée, intravaginale, rectale, nasale, perlinguale, buccale, oculaire ou respiratoire.
Les compositions pharmaceutiques selon l'invention pour les injections parentérales comprennent notamment les solutions stériles aqueuses et non aqueuses, les dispersions, les suspensions ou émulsions ainsi que les poudres stériles pour la reconstitution des solutions ou des dispersions injectables.
Les compositions pharmaceutiques selon l'invention, pour les administrations orales solides, comprennent notamment les comprimés simples ou dragéifiés, les comprimés sublinguaux, les sachets, les gélules, les granules, et pour les administrations liquides orales, nasales, buccales ou oculaires, comprennent notamment les émulsions, les solutions, les suspensions, les gouttes, les sirops et les aérosols.
Les compositions pharmaceutiques pour l'administration rectale ou vaginale sont préférentiellement des suppositoires, et celles pour l'administration per ou trans-cutanée comprennent notamment les poudres, les aérosols, les crèmes, les pommades, les gels et les patchs.
Les compositions pharmaceutiques citées précédemment illustrent l'invention mais ne la limitent en aucune façon.
Parmi les excipients ou véhicules inertes, non toxiques, pharmaceutiquement acceptables, on peut citer à titre indicatif et non limitatif les diluants, les solvants, les conservateurs, les agents mouillants, les émulsifiants, les agents dispersants, les liants, les agents gonflants, les agents désintégrants, les retardants, les lubrifiants, les absorbants, les agents de suspension, les colorants, les aromatisants, etc... La posologie utile varie selon l'âge et le poids du patient, la voie d'administration, la composition pharmaceutique utilisée, la nature et la sévérité de l'affection, et la prise de traitements associés éventuels. La posologie s'échelonne de 0,5 mg à 500 mg en une ou plusieurs prises par jour.
Les exemples suivants illustrent l'invention mais ne la limitent en aucune façon.
Les produits de départ utilisés sont des produits connus ou préparés selon des modes opératoires connus. Les différents stades de préparation conduisent à des intermédiaires de synthèse utiles pour la préparation des composés de l'invention.
Les structures des composés décrits dans les exemples et dans les préparations ont été déterminées selon les techniques spectrophotométriques usuelles (infrarouge, résonance magnétique nucléaire, spectrométrie de masse, ...).
Exemple 1 : 3,9-bis(hy roxyméthyl)-l 2-(4-0-méthyl-β-D-glucopyranosy ï)-l 2,13- dihydro-5iï-in(Iolo[2,3- ]pyrroïo[3,4-cJcarbazole-5,7(6H)-diione,
Stade A : 12-(253,6-tri-0-acétyl-4-f9-méthyl-β-D-glucopyranosyl)-12,13-dihydro-5H- indolo[2,3-fllpyrrolo[3,4-c]carbazole-5,7(6iï)-dione,
A 0,136 mmol de rebeccamycine déchlorée sont additionnés successivement, à 0°C, 1,37 mmol d'anhydride acétique et 3 mmol de pyridine. Après 19 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est jeté sur de la glace et extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée par une solution de Na2CO3, puis par une solution saturée en NaCl, séchée sur sulfate de magnésium et concentrée. Une chromatographie sur gel de silice du résidu (acétate d'éthyle) permet d'isoler le produit attendu. StadeB 3,9-Diformyl-12-(2î3,6-tri-0-acétyl-4-(?-méthyl-β-D-glucopyranosyl)- 12 3-dihydro-5Jςr-mdoIo[2,3-α]pyrrolo[3»4-c]earbazole-5,7(6JH)-dione.
A une solution de 0,12 mmol du composé obtenu au stade A dans 2 ml de dichlorométhane sont additionnés 2,4 mmol de α,α-dichlorométhyl méthyl éther. Le mélange est refroidi à 0°C et 2,4 mmol d'une solution 1M de TiCLt dans le dichlorométhane sont ajoutés, puis le milieu est agité à température ambiante pendant 24 heures. Après hydrolyse, et extraction au dichlorométhane, la phase organique est lavée par une solution saturée en NaCl, séchée sur sulfate de magnésium et concentrée permettant d'obtenir le produit attendu.
Stade C : 3,9-DîformyI-12-(4-t -méthyl-β-D-glucopyranosyl)-12,13-dihydro-5Er- indolo[2,3-α]pyrrolo[3,4-clcarbazole-5,7(6jfif)-dione.
Le composé obtenu au stade B est dissous dans 13 ml de méthanol, puis 6 ml d'une solution aqueuse à 30% de NH4OH sont ajoutés. Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est évaporé à sec. Le résidu est dissous dans un mélange acétate d'éthyle/tétrahydrofurane, acidifié par une solution IN d'acide chlorhydrique puis extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium et évaporée sous pression réduite. Une chromatographie sur gel de silice du résidu (cyclohexane/acétone : 20/80) permet d'isoler le produit attendu. Point de fusion : > 300°C
Stade D : 3,9-bis(hydroxyméthyI)-12-(4-0-méthyl-β-D-gIucopyranosyl)-12,13- dihydro-5iï-indolo[2,3-α]pyrrolo[3,4-c]carbazoIe-5-7(6E -dione.
A une solution de 0,09 mmol du composé obtenu au stade C dans 28 ml de méthanol sont additionnés 20 mg de nickel de Raney (1/1 en poids dans l'eau). Le mélange est agité 3 jours à température ambiante sous une pression d'hydrogène de 1 bar. Après filtration sur célite et lavages successifs du solide par du méthanol, du télxahydrofurane et de l'acétone, les solvants sont évaporés. Une chromatographie sur gel de silice du résidu (cyclohexane/acétone : 1/1) permet d'isoler le produit attendu. Point de fusion : > 300°C
Infrarouge (KBr) : vco = 1720, 1740 cm'1; VNH,OH = 3100-3600 cm 1
Exemple 2 : 3,9-bis(hydroxyméthyl)-6-méthyl-I2-(4-0-méthyl-β-D- glucopyranosyl)-12,13-dihydro-5iï-mdolo[2,3- ]pyrrolo [3,4-c]carbazoIe-5,7-dione.
Stade A ; 12-(4-0-mêthyl-β-D-glucopyranosyl)-12,13-dihydrofuro[3,4-cl indolo [2,3-fl] carbazole-5,7»dione.
Une solution de 0,40 mmol de 12-(4-O-méthyl-β-D-glucopyranosyl)-12,13-dihydro-5H- indolo[2,3-α]pyrrolo[3,4-c]carbazole-5,7-dione, 420 mg de soude et 70 ml d'eau est portée à reflux pendant 3 heures, puis diluée, acidifiée par une solution aqueuse d'acide chlorhydrique IN et extraite à l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée, séchée, filtrée puis concentrée sous pression réduite. Une chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle/cyclohexane : 80/20) permet d'isoler le produit attendu.
Stade B : 6-mëthyU2-(4-0-mê hyI-β-D-glueopyraιιosyI)-12,13-dihydro-5H- mdolo[2,3-«]pyrrolo[3,4-c]carbazole-5,7-dione.
0,12 mmol du composé obtenu au stade A et une solution 2M de méthylamine dans 14 ml de tétrahydrofurane sont agités à 70°C pendant 16 heures. Après refroidissement, le mélange reactionnel est hydrolyse entraînant la formation d'un précipité. Ce dernier est purifié par chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle/cyclohexane : 80/20) permettant d'isoler le produit attendu.
Stade C : 3-9-bis(hydroxyméthyl)-6-mêthyI-12-(4- ?-méthyl-β-D-glucopyranosyl)- 12-13-dihydro-5iï-indolo[2-3-α]pyrroIo[3,4-c]carbazole-5,7-dioιιe.
Le produit est obtenu selon le procédé de l'exemple 1, des stades A à D, en utilisant comme substrat le composé obtenu au stade B précédent. Exemple 3 : 6-(2-hydroxyéthyl)-3,9-bis(hydroxyméthyl)-12-(4-«9-mêthyl-β-D- glucopyranosyl)-l 2,13-dihy dro-5H-indolo [2,3-«]pyrrolo[3,4-c] carbazole-5,7-dione.
Stade A : 6-(2-hydroxyéthyl)-12-(4-* -méthyl-β-D-glucopyranosyl)-12,13-dihydro- 5iî-mdoIo[2,3-α]pyrroIo[3,4-c]earbazole-5,7-diQne.
Une solution de 0,30 mmol du composé obtenu au stade A de l'exemple 2 et 1,3 ml d'éthanolamine est agitée 1 heure à température ambiante, puis jetée sur de la glace et extraite à l'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée, filtrée puis concentrée sous pression réduite. Une chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle/cyclohexane) permet d'isoler le produit attendu.
Stade B : 6-(2-hydroxyéthyl)-3,9-bis(hydroxyméthyI)-12-(4-ι9-méthyl-β-D- glucopyranosyl)-12,13-dihydro-5Jff-mdoloP,3-α]pyrroIo[3,4-c]carbazole- 5,7-dione.
Le produit est obtenu selon le procédé de l'exemple 1, des stades A à D, en utilisant comme substrat le composé obtenu au stade A précédent.
Exemple 4 : 6-diéthylaminoéthyl-3,9-bis(hydroxyméthyl)-12-(4-« -méthyl-β-D- glucopyranosyl)-12,13-dihydro-5H-mdolol2,3-α]pyrrolo[3,4-c] earbazole-5,7-dione.
Stade A : 6-diéthylammoéthyI-12-(4-0-méthyl-β-D-glucopyranosyl)-12,13-dîhydro- 5iï-indolo[2,3-α]pyrroIo[3,4-c]carbazole-5,7-dione.
A une solution de 60 mg du composé obtenu au stade A de l'exemple 2 dissous dans 7 ml de tétrahydrofurane sec, sont ajoutés goutte à goutte 26 μl de N.N-diéthyléthylènediamine. Le mélange reactionnel est porté à 65°C pendant 4 jours à l'abri de la lumière puis refroidi et repris par un mélange (solution aqueuse d'acide chlorhydrique lN/acétate d'éthyle). Après extraction à l'acétate d'éthyle, la phase organique est séchée, filtrée puis concentrée sous pression réduite. Une chromatographie sur gel de silice permet d'isoler le produit attendu.
Stade B : 6-diéthylaminoêthyl-3,9-bis(hydroxyméthyl)-12-(4-0-méthyl-β-D- glucopyranosyl)-12,I3-dihydro-5H-indolo[2,3-α]pyrrolo[3,4-c]carbazole-
5,7-dîone.
Le produit est obtenu selon le procédé de l'exemple 1, des stades A à D, en utilisant comme substrat le composé obtenu au stade A précédent.
Exempl s ; 3,9-bis(hydroxymétbyl)-12-(2,3,6-tri-*9-acétyl-4-< -méthyl-β-D- glueopyraιιosyl)-12 3-dihydro-5jH-mdolo[2,3-α]pyrrolo[3s4-c] carbazole-5,7(«Sflf)-dîone.
Le produit est obtenu selon le procédé du stade D de l'exemple 1, en utilisant comme substrat le composé obtenu au stade B de l'exemple 1.
Exemple 6 : 3,9-bîs(hydroxyméthyl)-12-(6-chloro-6-déoxy-4-0-mêthyI-β-D~ glucopyranosyl)-12,13-dib.ydro-5H-îndolo[2,3-<t]pyrrolo[3,4-c] carbazole-5,7(6H)-diotte.
Stade A ; 12-(6-chloro-6-déoxy-4-0-mêthyl-β-D-glucopyranosyl)-12,13-dihydro-5jHr- itt QloPîS-αlpyrrolop^- lcarbazole-S CôE -dïOtte.
A une solution de 0,45 mmol de rebeccamycine déchlorée dans 2 ml de pyridine sont ajoutés 4 équivalents de PPh3 et 2 équivalent de CC14. Après 3 heures d'agitation à température ambiante, le mélange reactionnel est hydrolyse par une solution aqueuse d'acide chlorhydrique IN puis extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée, séchée, filtrée puis concentrée sous pression réduite. Stade B : 3,9-bis(hydroxymétlιyl)-12-(6-chloro-6-déoxy-4-<?-méthyl-β-D- glucopyranosyl)-12,13-dîhydro-5iï-indolo[2,3-α]pyrrolo[3,4-clcarbazole- 5,7(6iî)-dione.
Le produit est obtenu selon le procédé de l'exemple 1, des stades A à D, en utilisant comme substrat le composé obtenu au stade A précédent.
ETUDE PHARMACOLQGIOUE DES COMPOSES DE L'INVENTION
Exemple 7 : Activité inhibitrice vis-à-vis de GS -3
Protocole Expérimental
La glycogène synthase kinase 3 a été purifiée à partir de cellules Sf9 transfectées comme décrit dans Eur. J. Biochem., 1992, 305-311. Le mélange reactionnel comprend, dans un volume final de 30 μl : 1 mg/ml de BSA, 10 mM de DTT, 6,7 μM de peptide GS-1 comme substrat, 15 μM [γ-32P]ATP (3000 Ci/mmol, 1 mCi/ml), 10 mM de MgCl2, 1 mM de EGTA, 25mM de Tris-HCl ρH=7,5, 50 μg/ml d'héparine, et l'inhibiteur à une concentration donnée. Après 30 minutes à 30°C, 25 μl du mélange sont déposés sur des filtres en papier phosphocellulose Whatman® P81, qui sont ensuite lavés 5 fois par 10 ml d'acide phosphorique (10 ml/L). La radioactivité des filtres est ensuite comptée en présence de 1 ml de liquide de scintillation. Les valeurs d'ICso sont estimées à partir des courbes dose-réponse.
Lors de ce test, le composé de l'exemple 1 présente un IC50 de 0,03 μM. Il est donc actif vis-à-vis de GSK-3 et cette activité est sélective comme le prouve les résultats exposés au sein des exemples 8 et 9 décrits ci-dessous.
Exemple 8 : Activité inhibitrice vis-à-vis de CDK-1
Protocole Expérimental
L'enzyme a été purifiée à partir d'un homogénat d'oocytes d'étoile de mer (Marthasterias glacialis) en phase M comme décrit dans Ewr. J. Biochem, 1997, 243. 527-536 et J Biol.
Chem.,1999, 274, 11977-11986. Le mélange reactionnel comprend, dans un volume de 30 μl : 1 mg/ml d'histone Hl comme substrat, 15 μM [γ-32P]ATP (3000 Ci/mmol, 1 mCi/ml), 15 mM de MgCl2, 60 mM de β-glycérophosphate, 15 mM de _σ-nitrophénylphosphate, 25 mM de MOPS ρH=7,2, 5 mM de EGTA, 1 mM de DTT, 1 mM de sodium vanadate , et l'inhibiteur à une concentration donnée. Après 10 minutes d'incubation à 30°C, 25 μl du mélange reactionnel sont prélevés et traités comme décrit précédemment dans le protocole
GSK-3. Les valeurs d'IC50 sont estimées à partir des courbes dose-réponse. Lors de ce test, le composé de l'exemple 1 présente un IC50 supérieur à 5 μM démontrant ainsi sa faible capacité à inhiber cette protéine kinase cycline dépendante.
Exemple 9 : Activité inhibitrice vis-à-vis de CDK5
Protocole Expérimental
La CDK5 a été exprimée dans E. coli sous forme d'une protéine de fusion GST (Glutathion-S-transférase) et purifiée sur une colonne d'affinité de glutathion-agarose. La CDK5 est ensuite activée par p25 (mélange 1/1), préparée de la même façon. L'activité enzymatique du complexe CDK5/p25 est mesurée comme décrit ci-dessus pour la CDKl/cyclin B. Les valeurs d'IC50 sont estimées à partir des courbes dose-réponse.
Lors de ce test, le composé de l'exemple 1 présente un IC5o supérieur à 5 μM démontrant ainsi sa faible capacité à inhiber cette protéine kinase cycline dépendante.
Exemple 10 ; Composition pharmaceutique pour 1000 comprimés dosés à 10 mg
Composé de l'exemple 1 10 g Hydroxypropylméthylcellulose 10 g
Amidon de blé 15 g
Lactose 90 g
Stéarate de magnésium 2 g

Claims

REVENDICATIONS
1- Composés de fonnule (I)
Figure imgf000019_0001
dans laquelle :
• Ri et R2, identiques ou différents, indépendamment l'un de l'autre, représentent chacun un groupement choisi parmi hydrogène, alkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié, arylalkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié, hydroxy, hydroxyalkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié, dihydroxyalkyle (Cι~C6) linéaire ou ramifié, alkoxy (Cι-C6) linéaire ou ramifié, alkoxy(Cι-C6)alkyle(Cι-C6) linéaire ou ramifié, amino et aminoalkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié, la partie amino dans chacun des groupements étant éventuellement substituée par un ou deux groupements, identiques ou différents, choisi parmi alkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié, aryle et arylalkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié,
Ra et Rb, identiques ou différents, indépendamment l'un de l'autre, représentent chacun une chaîne alkylene (Cι-C6) linéaire ou ramifié,
Xi, X2 et X3ι identiques ou différents, indépendamment l'un de l'autre, représentent chacun un groupement choisi parmi hydroxy, alkoxy (C.-C6) linéaire ou ramifié, aryloxy, arylalkoxy (Cι-C6) linéaire ou ramifié, alkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié, amino (éventuellement substitué par un ou deux groupements, identiques ou différents, alkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié), halogène, alkylcarbonyloxy (Cι-C6) linéaire ou ramifié, et azido,
• X représente un groupement méthylidène ou un groupement de formule -Rc-Xi dans laquelle Rc représente une liaison simple ou un groupement méthylène, et Xi est tel que défini précédemment,
leurs isomères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable,
étant entendu que par groupement aryle on comprend un groupement phényle ou naphtyle, et par isomères on comprend les isomères optiques.
2- Composés de formule (I) selon la revendication 1, caractérisés en ce que Ri représente un atome d'hydrogène, un groupement alkyle ( -C6) linéaire ou ramifié ou hydroxyalkyle (Cι-C6) linéaire ou ramifié, leurs isomères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.
3- Composés de formule (I) selon la revendication 1, caractérisés en ce que R2 représente un atome d'hydrogène.
- Composés de formule (I) selon la revendication 1, caractérisés en ce que Ra et Rb, identiques, représentent une chaîne alkylene (Cι-C3) linéaire, leurs isomères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.
- Composés de formule (I) selon la revendication 1, caractérisés en ce que Xi, X2 et X3 représentent chacun un groupement choisi parmi groupement hydroxy, alkoxy (Cι-C6) linéaire ou ramifié et alkylcarbonyloxy (Cι-C6) linéaire ou ramifié, leurs isomères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.
- Composés de formule (I) selon la revendication 1, caractérises en ce que X4 représente un groupement choisi parmi les groupements -Rc-Xi dans lesquels Rc représente un groupement méthylène et Xi représente un groupement choisi parmi hydroxy, halogène, alkoxy (Cι-C6) linéaire ou ramifié et alkylcarbonyloxy (Cι-C6), leurs isomères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.
- Composés de formule (1) selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils représentent des composés de formule (LA) :
Figure imgf000021_0001
dans laquelle Ri, R2, Ra, Rb, X_, X2, X3 et X sont tels que définis dans la formule (I), leurs isomères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.
- Composés de formule (I) selon la revendication 1 qui est le 3,9-bis(hydroxyméthyl)-12-
(4-O-méthyl-β-D-glucopyranosyl)-12,13-dihydro-5H-indolo[2,3--7]pyrrolo[3,4-c] carbazole-5,7(6H)-dione, leurs isomères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.
- Procédé de préparation des composés de formule (I) selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on utilise comme produit de départ un composé de formule (II) :
Figure imgf000022_0001
dans laquelle Xi, X2, X3 et X sont tels que définis dans la formule (I),
composé de formule (II), qui est soumis à des conditions d'hydrogénolyse en présence de nickel de Raney et de soude, pour conduire au composé de formule (III) :
Figure imgf000022_0002
dans laquelle X_, X2, X3 et X4 sont tels que définis précédemment,
composé de formule (111) qui est soumis à l'action d'un composé de formule (IN)
Rι-ΝH2 (IV) dans laquelle Ri est tel que défini dans la formule (I),
pour conduire au composé de formule (V)
Figure imgf000023_0001
dans laquelle Ri, Xi, X2, X3 et X sont tels que définis précédemment,
composé de formule (V) qui est mis à réagir avec du α,α-dichlorométhylméthyléther en présence d'un acide de Lewis pour conduire au composé de formule (VI) :
Figure imgf000023_0002
dans laquelle Ri, Xi, X2, X3 et X4 sont tels que définis précédemment,
composé de formule (NI) dont les fonctions aldéhydes sont réduites par action d'un agent réducteur couramment utilisé en synthèse organique, pour conduire au composé de formule (I/a), cas particulier des composés de formule (I) :
Figure imgf000024_0001
dans laquelle Ri, Xi, X2, X3 et X4 sont tels que définis précédemment,
composé de formule (I/a) qui est transformé en son dérivé dihalogéne correspondant selon des conditions usuelles de la chimie orgamque, puis mis à réagir avec un cyanure alcalin en présence de diméthylsulfoxyde, pour conduire au composé de formule (Nil) :
Figure imgf000024_0002
dans laquelle Ri, Xi, X2, X3 et X4 sont tels que définis précédemment,
composé de formule (VII) qui est transformé en ester selon des conditions classiques puis soumis à un agent réducteur pour conduire au composé de formule (I/b), cas particulier des composés de formule (I) :
Figure imgf000025_0001
dans laquelle Ri, Xi, X2, X3 et X* sont tels que définis précédemment,
composé de formule (I/b) qui peut être soumis de nouveau, et de façon répétitive, à la même série de réactions ayant conduit aux composés de formules (VII) et (I/b) à partir des composés de formule (I/a), pour conduire au composé de formule (I/c), cas particulier des composés de formule (I) :
Figure imgf000025_0002
dans laquelle Ri, Xi, X2, X3 et X sont tels que définis précédemment, et Ra et Rb sont tels que définis dans la formule (I),
composé de formule (I/c) qui peut être soumis à l'action d'un composé de formule (VIII) :
R2a-Hal (VIII) dans laquelle R a a la même définition que R2 dans la formule (I) à l'exception de la définition atome d'hydrogène, pour conduire au composé de formule (I/d), cas particulier des composés de formule (I) :
Figure imgf000026_0001
dans laquelle Ri, Ra, Rb, Xi, X2, X3, Xi et R2a sont tels que définis précédemment,
les composés de formule (I/a) à (I/d) formant l'ensemble des composés de formule (I), que l'on purifie, le cas échéant, selon des techniques classiques de purification, qui peuvent, si on le désire, être séparés en leurs différents isomères, selon une technique classique de séparation, dont on module les substituants X_, X2, X3 et X4 selon les méthodes classiques de la synthèse organique utilisée dans le domaine de la chimie des sucres, et que l'on transforme, si on le souhaite, en leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.
- Compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif au moins un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, seul ou en combinaison avec un ou plusieurs excipients ou véhicules inertes, non toxiques, pharmaceutiquement acceptable.
- Compositions pharmaceutiques selon la revendication 10 contenant au moins un principe actif selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, utiles en tant qu'inhibiteur de la glycogène synthase kinase GSK-3.
- Compositions pharmaceutiques selon la revendication 10 contenant au moins un principe actif selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 utiles, en tant que médicament, dans le traitement du diabète de type II, de l'obésité, des pathologies du système nerveux central, de la maladie d'Alzheimer, de la maladie de Parkinson, et pour inhiber l'apoptose des cellules normales due aux traitements anticancéreux.
PCT/FR2002/003592 2001-10-22 2002-10-21 Nouveaux derives d'hydroxyalkyle indolocarbazole, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent WO2003035663A1 (fr)

Priority Applications (13)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MXPA04003741A MXPA04003741A (es) 2001-10-22 2002-10-21 Derivados novedosos de hidroxialquil indolocarbazol, metodo de preparacion y composiciones farmaceuticas que los contienen.
HU0401885A HUP0401885A2 (hu) 2001-10-22 2002-10-21 Új hidroxialkil-indolokarbazol-származékok, eljárás ezek előállítására és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények
KR1020047005995A KR100588222B1 (ko) 2001-10-22 2002-10-21 히드록시알킬 인돌로카르바졸 유도체, 제조방법 및 이들을함유하는 약제 조성물
BR0213403-9A BR0213403A (pt) 2001-10-22 2002-10-21 Derivados de hidroxialquila indolocarbazol, o respectivo processo de preparo, e as composições farmacêuticas que os contêm
JP2003538176A JP2005509641A (ja) 2001-10-22 2002-10-21 新規ヒドロキシアルキルインドロカルバゾール化合物、その調製方法、およびそれらを含む医薬組成物
CA002463923A CA2463923A1 (fr) 2001-10-22 2002-10-21 Nouveaux derives d'hydroxyalkyle indolocarbazole, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
NZ532365A NZ532365A (en) 2001-10-22 2002-10-21 New hydroxyalkylindolocarbazole compounds, a process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
EP02796813A EP1438320A1 (fr) 2001-10-22 2002-10-21 Nouveaux derives d'hydroxyalkyle indolocarbazole, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
US10/492,876 US20040242508A1 (en) 2001-10-22 2002-10-21 Novel hydroxyalkyl indolocarbazole derivatives, preparation method and pharmaceutical compositions containing the same
EA200400533A EA006201B1 (ru) 2001-10-22 2002-10-21 Производные гидроксиалкилиндолкарбазола, способ их получения и фармацевтические композиции, которые их содержат
ZA2004/02626A ZA200402626B (en) 2001-10-22 2004-04-02 New hydroxyalkylindolocarbazole compounds, a process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
NO20041761A NO20041761L (no) 2001-10-22 2004-04-29 Nye hydroksyalkylindolokarbazolforbindelser, fremgangsmate for deres fremstilling og farmasoytiske sammensetninger inneholdende dem
HK05102890A HK1072774A1 (en) 2001-10-22 2005-04-07 Novel hydroxyalkyl indolocarbazole derivatives, p reparation method and pharmaceutical compositions containing same

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR01/13576 2001-10-22
FR0113576A FR2831169B1 (fr) 2001-10-22 2001-10-22 Nouveaux derives d'hydroxyalkyle indolocarbazole, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2003035663A1 true WO2003035663A1 (fr) 2003-05-01

Family

ID=8868539

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR2002/003592 WO2003035663A1 (fr) 2001-10-22 2002-10-21 Nouveaux derives d'hydroxyalkyle indolocarbazole, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent

Country Status (18)

Country Link
US (1) US20040242508A1 (fr)
EP (1) EP1438320A1 (fr)
JP (1) JP2005509641A (fr)
KR (1) KR100588222B1 (fr)
CN (1) CN1253463C (fr)
AR (1) AR036898A1 (fr)
BR (1) BR0213403A (fr)
CA (1) CA2463923A1 (fr)
EA (1) EA006201B1 (fr)
FR (1) FR2831169B1 (fr)
HK (1) HK1072774A1 (fr)
HU (1) HUP0401885A2 (fr)
MX (1) MXPA04003741A (fr)
NO (1) NO20041761L (fr)
NZ (1) NZ532365A (fr)
PL (1) PL368237A1 (fr)
WO (1) WO2003035663A1 (fr)
ZA (1) ZA200402626B (fr)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2305352A1 (fr) 2004-04-02 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Inhibiteurs de la 5-alpha-reductase pour le traitement d'hommes aux troubles métaboliques et anthropométriques
WO2012027331A1 (fr) 2010-08-27 2012-03-01 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Compositions et procédés pour traiter ou prévenir un syndrome métabolique et des maladies et troubles associés
WO2013138352A1 (fr) 2012-03-15 2013-09-19 Synergy Pharmaceuticals Inc. Formulations d'agonistes de la guanylate cyclase c et procédés d'utilisation
WO2014197720A2 (fr) 2013-06-05 2014-12-11 Synergy Pharmaceuticals, Inc. Agonistes ultra-purs de guanylate cyclase c, leur procédé de production et d'utilisation

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI499414B (zh) * 2006-09-29 2015-09-11 Lexicon Pharmaceuticals Inc 鈉與葡萄糖第２型共同運輸體（ｃｏ-ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ２）的抑制物與其應用方法
WO2008109591A1 (fr) * 2007-03-08 2008-09-12 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. Analogues de phlorizine utilisés comme inhibiteurs du co-transporteur 2 du sodium-glucose
CN104031052B (zh) * 2014-05-20 2016-06-08 中国科学院南海海洋研究所 抗生素Indimicins A–E及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000064917A2 (fr) * 1999-04-26 2000-11-02 Advanced Life Sciences Inc. Regioisomeres d'indolocarbazoles synthetiques et leurs utilisations
EP1101770A1 (fr) * 1999-11-17 2001-05-23 Adir Et Compagnie Nouveaux dérives de 12,13-(pyranosyl)-indolo(2,3-a)pyrrolo(3,4-c)carbazole et 12,13-(pyranosyl)-furo(3,4-c)indolo(2,3-a)carbazole, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6703373B1 (en) * 1999-09-10 2004-03-09 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Indolopyrrolocarbazole derivatives and antitumor agents

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000064917A2 (fr) * 1999-04-26 2000-11-02 Advanced Life Sciences Inc. Regioisomeres d'indolocarbazoles synthetiques et leurs utilisations
EP1101770A1 (fr) * 1999-11-17 2001-05-23 Adir Et Compagnie Nouveaux dérives de 12,13-(pyranosyl)-indolo(2,3-a)pyrrolo(3,4-c)carbazole et 12,13-(pyranosyl)-furo(3,4-c)indolo(2,3-a)carbazole, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2305352A1 (fr) 2004-04-02 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Inhibiteurs de la 5-alpha-reductase pour le traitement d'hommes aux troubles métaboliques et anthropométriques
WO2012027331A1 (fr) 2010-08-27 2012-03-01 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Compositions et procédés pour traiter ou prévenir un syndrome métabolique et des maladies et troubles associés
WO2013138352A1 (fr) 2012-03-15 2013-09-19 Synergy Pharmaceuticals Inc. Formulations d'agonistes de la guanylate cyclase c et procédés d'utilisation
EP3708179A1 (fr) 2012-03-15 2020-09-16 Bausch Health Ireland Limited Formulations d'agonistes de guanylate cyclase c et leurs procédés d'utilisation
EP4309673A2 (fr) 2012-03-15 2024-01-24 Bausch Health Ireland Limited Formulations d'agonistes de guanylate cyclase c et leurs procédés d'utilisation
WO2014197720A2 (fr) 2013-06-05 2014-12-11 Synergy Pharmaceuticals, Inc. Agonistes ultra-purs de guanylate cyclase c, leur procédé de production et d'utilisation
EP4424697A2 (fr) 2013-06-05 2024-09-04 Bausch Health Ireland Limited Agonistes ultra-purs de guanylate cyclase c, leur procédé de fabrication et d'utilisation

Also Published As

Publication number Publication date
KR100588222B1 (ko) 2006-06-12
EA006201B1 (ru) 2005-10-27
NO20041761L (no) 2004-04-29
HUP0401885A2 (hu) 2004-12-28
AR036898A1 (es) 2004-10-13
EP1438320A1 (fr) 2004-07-21
CN1571793A (zh) 2005-01-26
MXPA04003741A (es) 2004-07-23
HK1072774A1 (en) 2005-09-09
FR2831169B1 (fr) 2003-12-12
JP2005509641A (ja) 2005-04-14
CA2463923A1 (fr) 2003-05-01
PL368237A1 (en) 2005-03-21
NZ532365A (en) 2005-07-29
EA200400533A1 (ru) 2004-08-26
KR20040054735A (ko) 2004-06-25
ZA200402626B (en) 2005-06-29
BR0213403A (pt) 2004-11-03
US20040242508A1 (en) 2004-12-02
CN1253463C (zh) 2006-04-26
FR2831169A1 (fr) 2003-04-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2406263B1 (fr) Derivés de pyrazolo[1,5-a]-1,3,5-triazines, leur preparation et leur application en thérapeutique
HUT67496A (en) Methylen-oxindole derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions compsiring them
EP1558612B1 (fr) Derives d&#39;imidazopyridine, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
CH633796A5 (fr) Dipyridoindoles therapeutiquement actifs.
CA2436958A1 (fr) Derives d&#39;acyclonucleosides pyrimidiniques, leur procede de preparation et leur utilisation
WO2003002563A1 (fr) Derives de pyrido-pyrido-pyrrolo pyrrolo-indole et pyrido-pyrrolo pyrrolo carbazole, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP1101770B1 (fr) Nouveaux dérives de 12,13-(pyranosyl)-indolo(2,3-a)pyrrolo(3,4-c)carbazole et 12,13-(pyranosyl)-furo(3,4-c)indolo(2,3-a)carbazole, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
WO2003035663A1 (fr) Nouveaux derives d&#39;hydroxyalkyle indolocarbazole, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP0117959B1 (fr) Nouveaux dérivés de la nitrosourée, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques les renfermant
FR2845996A1 (fr) Nouveaux derives de[3,4-a:3,4-c]carbazole, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
WO1995018817A1 (fr) Nouveaux derives de l&#39;adenosine, leurs procedes de preparation, compositions pharmaceutiques les contenant
CA2896209A1 (fr) 3,5-diaryl-azaindoles comme inhibiteurs de la proteine dyrk1a pour le traitement des deficiences cognitives liees au syndrome de down et a la maladie d&#39;alzheimer
WO1992019638A1 (fr) DERIVE DE 1-β-D-ARABINOFURANOSYL-(E)-5-(2-HALOGENOVINYL)-URACILE
EP0699679A1 (fr) Nouveaux composés tétrahydropyraniques, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
FR2701261A1 (fr) Nouveaux composés glucuronides de la diosmétine, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques les renfermant.
EP0412015B1 (fr) Nouveaux dérivés N-(vincristinoyl-23) et N-(noranhydro-5&#39; vinblastinoyl-23) d&#39;acide amino-1 méthylphosphonique, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
CA1204770A (fr) Derives fluores de diaminoalkene
FR2758562A1 (fr) Nouveaux derives d&#39;acides mixtes aminobenzyliques, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
CH609056A5 (en) Process for the preparation of pyrimidines
FR2781482A1 (fr) Nouveaux derives de 8h-thieno-[2,3-b]pyrrolizine-8-one, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
CA2033798A1 (fr) Derives de la thymidine, leur preparation et les compositions qui les contiennent
WO1986007057A1 (fr) Derives methyles de bis 7h pyridocarbazoles methyles et compositions pharmaceutiques les contenant
LU82694A1 (fr) Nouveaux composes de purine,leur procede de production et composition pharmaceutique les contenant
FR2902792A1 (fr) Nouveaux derives cinnamates de tetrahydro-7h-pyrano(2,3-c)acridin-7-one, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
BE845707A (fr) Nouveaux sulfonamides, leur preparation et leur application comme medicaments

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NO NZ PL PT RO RU SD SE SG SI SK SL TJ TM TR TT TZ UA UG US UZ VN YU ZA ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE SK TR

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2004/02626

Country of ref document: ZA

Ref document number: 200402626

Country of ref document: ZA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2002796813

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 10492876

Country of ref document: US

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2002820784X

Country of ref document: CN

Ref document number: 532365

Country of ref document: NZ

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: PA/a/2004/003741

Country of ref document: MX

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2003538176

Country of ref document: JP

Ref document number: 2463923

Country of ref document: CA

Ref document number: 2002361289

Country of ref document: AU

Ref document number: 1020047005995

Country of ref document: KR

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200400533

Country of ref document: EA

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2002796813

Country of ref document: EP

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 532365

Country of ref document: NZ

WWG Wipo information: grant in national office

Ref document number: 532365

Country of ref document: NZ

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Ref document number: 2002796813

Country of ref document: EP