WO2003011463A1 - Récipient perfectionne facilitant son vidage complet - Google Patents

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WO2003011463A1
WO2003011463A1 PCT/FR2002/002477 FR0202477W WO03011463A1 WO 2003011463 A1 WO2003011463 A1 WO 2003011463A1 FR 0202477 W FR0202477 W FR 0202477W WO 03011463 A1 WO03011463 A1 WO 03011463A1
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WO
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container
sample
analysis
card
liquid
Prior art date
Application number
PCT/FR2002/002477
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English (en)
Inventor
Rémy DESCHOMETS
Michel Rapaud
Original Assignee
Biomerieux S.A.
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Filing date
Publication date
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    • B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above
    • B01L3/5082—Test tubes per se
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    • B65D2231/00—Means for facilitating the complete expelling of the contents
    • B65D2231/005—Means for facilitating the complete expelling of the contents the container being rigid

Definitions

  • the present invention relates to a container comprising a container and an opening through which it is possible to carry out the taking of at least one biological sample with a view to its transfer, by means of transfer under suction, to another container, a card of analysis or whatever,
  • the objective is only to transfer a given quantity from a first container to a second container, in other analyzes, it may be essential to obtain a total transfer of liquid from the first container to the second container, and the feasibility of the analysis may then depend on the fact that no liquid remains in the first container.
  • application WO-A-99/30170 describes a method for checking the volume drawn in in an automatic diagnostic system, by using a pressure sensor in order to measure the volume of sample remaining in the first container before and after aspiration. In addition, by comparing with the aspirated volumes and the expected aspiration times, it is possible to determine the presence of clots or foam.
  • this device although very precise, is relatively complex, which generates significant manufacturing and even user costs.
  • application WO-A-00/58736 relates to a device for aspirating liquid into a container, comprising a mechanism making it possible to detect that the tip of the suction pipette is in contact with the bottom of the container during the suction operation.
  • this device is then mainly intended for the precise suction of small quantities of liquid contained in a container such as a test tube or a vial, and not to aspirate all the liquid present in the container.
  • this device is also complex, which generates significant user costs.
  • this device has the drawback of involving the washing of the pipette tip when it is desired to aspirate a new liquid in order to limit any risk of contamination between two biological samples.
  • This washing step has a significant drawback during the automation of a biological analysis system since it requires a special device necessary for this purpose.
  • Other documents propose, in addition to cleaning the pipette tips, either decontamination of said tips, or finally pure and simple replacement with new and clean tips.
  • Patent application WO-A-98/51412 relates to a sedimentation tube having a guide for a pipette or a syringe, in order to correctly position it and thus avoid an excessively strong flow of liquid harmful to sedimentation.
  • the present invention relates to a container comprising a container and an opening through which it is possible to take the sample of at least one biological sample with a view to its transfer, by means of transfer under suction, to another container.
  • an analysis card or the like characterized in that it consists of a means for positioning the transfer means and a means for concentrating the sample, located in the container and / or the opening .
  • the transfer means is integrated into the other container, the analysis card or the like.
  • the transfer means is independent of the other container, the analysis card or the like.
  • the means for positioning the transfer means is constituted by a longitudinal groove in a substantially vertical position.
  • the longitudinal groove has a section which matches the shape of the section of the transfer means.
  • the longitudinal groove comprises, at the bottom of the container, a support stop for the transfer means, this stop creating at least one space to allow complete suction of the sample.
  • the means for concentrating the sample consists of a container bottom wall which is inclined.
  • inclined it should be understood that when the container is placed on a flat support, whether this is horizontal or not, then the bottom of the wall is not parallel with respect to this flat support.
  • the inclination of the bottom wall of the container is between 1 and 60 °, preferably between 20 and 40 °, and even more preferably substantially 30 °.
  • the container is extended laterally in the form of a means for stabilizing the container.
  • a space is present between the container bottom wall and the lower part of the container stabilization means.
  • FIG. 1 represents a front view of a container according to the present invention structurally and functionally associated with an embodiment of an analysis card, allowing the enumeration and the characterization of microorganisms in a biological sample.
  • FIG. 2 shows a partial sectional view along A-A of Figure 1, highlighting the point of installation of the pipe connecting an analysis card to the container.
  • FIG. 3 represents a side view of a container according to the invention.
  • FIG. 4 represents a sectional view along B-B of FIG. 3.
  • FIG. 5 represents a side view of a container according to the invention, container which has undergone a rotation of 90 °, in the direction of clockwise in view from below, with respect to FIG. 3.
  • FIG. 6 shows a sectional view along C-C of Figure 5.
  • Figure 7 shows a detail view along D of Figure 4, highlighting the lower liquid collection area of the container according to the invention.
  • FIG. 8 represents a top view along E of FIG. 6.
  • an analysis card 1 essentially consists of a single monobloc element constituted by the body 2 of the analysis card 1.
  • This body 2 comprises an injection zone 3 of a biological liquid to be analyzed 4 which is initially present in a container 14.
  • Such an analysis card can for example consist of a card as described in patent application WO-A-00/12674 filed by the Applicant under priority of 1 September 1998. for more information about the reader should refer to this document. It is of course conceivable that the body 2 is not a single piece, but consists of several parts associated with each other by any means of fixing the state of the art, such as glue, mechanical means (screws, bolts, rivets, elastic, etc.), welding.
  • the injection zone 3 can be on any face of the body 2, whether on the side, as shown in FIG. 1, or on the back, or even on another side wall.
  • the card 1 is not filled directly by the sample 4, contained in the container or tube 14, but is connected to this liquid 4 by means of a flexible pipe 15.
  • the assembly thus formed is ready to be positioned in a vacuum chamber. 2 shows a section along AA of Figure 1.
  • the supply channel 5 constitutes a baffle so that the injection zone 3 is positioned laterally in the center of the body 2 of the card 1, that is to say that it extends within said card 1 in the direction of one of its lateral surfaces.
  • the existing connection between the body 2 of the card 1 and the pipe 15 is provided by a circular groove 13, located in the body 2, and by a shoulder 16 of said pipe 15 cooperating with the groove 13.
  • the body 2 is substantially in the shape of a parallelepiped.
  • This body 2 has a number of grooves and cavities 9, 10 or 11 located within it. These cavities can be constituted by through holes, as is the case in FIG. 7, or by blind holes, as is the case in FIG. 8.
  • the isolation of these grooves and these blind holes with respect to the exterior is effected by the application of an adhesive transparent film 18 which sticks to the surface of said body 2.
  • the adhesive transparent film 18 is of advantageous use because, after it has been pierced or removed, it allows an operator to have direct access to the content of the cavities 9 to 11.
  • the grooves it is noted first of all that there is a main supply channel 5 which is located downstream of the zone of injection 3.
  • each well 7 Downstream of this channel 5, there is a well 12 which acts as the main means of distributing the biological liquid 4 to be analyzed.
  • the main channel 5 is located between the injection zone 3 and the well 12.
  • These wells 7 act as distribution means.
  • terminal analysis cavities 9 of large size there are three types of terminal analysis cavities in these figures, namely, terminal analysis cavities 9 of large size, terminal analysis cavities 10 of medium size and finally terminal analysis cavities 11 small.
  • the cavities located on the body 2 of the analysis card 1 are, on the one hand, the grooves which are formed by the main channel 5, the secondary channels 6 and the terminal channels 8 and, on the other hand, the blind holes which are formed by the injection zone 3, the well 12, the wells 7 and all of the analysis cavities 9, 10 and 11.
  • the analysis cavities 9, 10 and 11 of different sizes make it possible to dispense with the need to carry out dilutions.
  • this analysis cavity 9, 10 or 11 there will be a number of microorganisms which will be more or less important.
  • it will therefore be possible to grow certain microorganisms which, depending on their presence or absence in each cavity 9, 10 or 11, will make it possible to have a change in optical density, l appearance or disappearance of a fluorescence or a color (chromogenic effect). This will make it possible to detect the presence or absence of micro-organism (s) and also to carry out a quantification. Examples will be discussed later.
  • the different secondary channels 6 are all of identical volume.
  • the secondary channels 6 located in the center of the analysis card 1 are of shorter length than those located on the sides. It will therefore be necessary to foil their width or their depth so that the volumes are constant between all these channels 6.
  • the length of the terminal channels 8 is identical for each analysis cavity 9, 10 or 11 of identical volume.
  • the ratio existing between two cavities of different volumes are 1 to 10 between the cavities 10 and 9 and the cavities 11 and 10 and by 1 per 100 between the cavities 11 and 9.
  • This proportionality can also be found at the level of the terminal channels 8, these terminal channels 8 being of different dimensions depending on the fact that they supply large-sized cavities 9, medium-sized cavities 10 or finally small-sized cavities 11.
  • the points of intersection of these different channels with one another are always made by means of wells acting not only as a distribution means but also as a buffer volume preventing any contamination after the introduction of the sample 4 .
  • the method for filling an analysis card 1 therefore consists in:
  • the air comes into contact with the fractions of the biological sample 4, either at the level of the terminal channels 8 according to FIG. 1, or at the level of the analysis cavities 9, 10 and 11. This creates a physical separation between the bacteria.
  • the volume of biological liquid 4 is related to the total volume of the analysis cavities 9, 10 and 11 as well as possibly the volume of the terminal channels 8.
  • any fluid, gaseous or liquid can be used which can perform this isolation function.
  • the fluid is a liquid, such as oil, it must be of a lower density than the biological sample.
  • the card 1 must be maintained substantially in a vertical position, as shown in FIG. 1, the insulating fluid, not shown in the figures, being in a position above the biological sample, previously contained in the container 14 and then in each cavity 9, 10 and 11.
  • the isolation of said cavities 9, 10 and 11 can be achieved by obstructing the terminal channels 8.
  • An adhesive can be used, for example, as an insulating fluid, or they can be obstructed by physical compression.
  • the volume of biological fluid 4 to be analyzed is less than the total volume of all the analysis cavities 9, 10 and 11. This ratio between the volume of biological fluid 4 and the total volume of all the analysis cards 9, 10 and 11 is preferably one for two.
  • the filling of the cavities 9, 10 and 11 takes place simultaneously, moreover, at a given filling time, the ratio between the volume of liquid present in each size of small, medium or large cavity over the total volume of each size cavity, respectively small, medium or large, is constant for all of the cavities 9, 10 and 11 of the card 1.
  • the main objective of this invention is therefore to allow emptying of the container 14 and filling of the analysis card 1 which are effective, that is to say as complete as possible.
  • Said card 1 according to FIG. 1 makes it possible to count the microorganisms contained in a biological sample 4 and can be used in the food sector. To perform this count, the most probable number (MPN) of bacteria in a sample is calculated by a statistical method, explained by R. J. Parnow (1972). Thus we associate the probability of appearance with each combination of positive (s). The method of J. C. De Man (1975) is used for this.
  • the total volume of the cavities 9, 10 and 11 being 4440 ⁇ l, the volume of the sample 4 being 2220 ⁇ l, the volume of the insulating liquid may be 2220 ⁇ l. It can be lower if you want there to be air in the card 1 once sealed, or higher if you want to be sure that the card is completely filled with sample 4 and the insulating liquid . In the latter case, this technique can be advantageous for the growth of anaerobic microorganisms.
  • the third possibility concerns filling the tube 14 with a very large quantity of sample.
  • the transfer by breaking the depression is carried out until the manipulator directly or indirectly withdraws the end 17 of the flexible pipe 15 from the sample 4, while allowing the transfer of the fractions from said sample 4 to the cavities 9 to continue, 10 and 11. Automation of this technique is therefore difficult to achieve.
  • the internal structure of the container 14 is therefore quite important to allow the implementation of the first solution mentioned above, which is the most interesting solution.
  • the material constituting this container 14 is generally in one piece, preferably made of a plastic material. Nevertheless, it is also possible that said container 14 is made of at least two materials.
  • the inner part can be plastic while the outer part, which has the thread can be metal, usually aluminum, or glass.
  • the preferred manufacturing method is therefore a molding which, to be feasible, implies, although this is not shown in the figures, that the vertical walls 19 and 25, which will be explained below, are slightly inclined, for example by 1 °.
  • Figures 3 and 4 on the one hand, and 5 and 6, on the other hand, show a container 14 according to the present invention from two different angles, that is to say after it 14 has undergone a rotation along its longitudinal axis of 90 °.
  • the container 14 is essentially composed of three parts.
  • a first part called a neck 20 which allows the introduction of a liquid 4 into said container 14, a second part called a container 19 which makes it possible to receive the liquid 4 after its introduction via the neck 20 and a third part called a stabilization means 23 shown in the figure
  • an external circular angle 23 As can be seen in this FIG. 4, but also in FIG. 6, the external circular angle 23 ends with a free end forming a fulcrum 24 for the entire container 14 This stabilization means 23 therefore makes it possible to place and maintain the entire container 14 in a vertical position.
  • the container 19 is of substantially cylindrical shape over its entire height. It has over its entire length a positioning means 26 and is constituted, as can be seen in Figure 6 but also in Figure 8, by a groove of circular section 26. This groove 26 allows the passage of the pipe 15, their forms being adapted to marry.
  • the groove 26 extends in the upper part, at the level of the internal face of the neck 20. It is also noted, on the external face of this neck 20, the presence of groove 21 allowing the screwing of a plug not shown in the figures. Finally, in the upper part of the neck 20, there is an inner bevel 22 facilitating, on the one hand the molding, on the other hand the introduction of the pipe 15.
  • the container 19 therefore consists of a side wall 25 along which runs the groove 26 to the bottom formed by a wall 27 in an inclined position relative to the longitudinal axis of the container 14. Of course, it is always in order to facilitate the molding of this type of device, that the groove 26 is present over the entire length and comes into contact with the bottom wall 27.
  • Said wall 27 has an inclination 29, shown in FIG. 7, which is substantially 30 °. It is also noted in this FIG. 7 that the lower end of the container 19 is at a certain distance 30 from the lower end of the external circular angle 23 shown more precisely by its fulcrum 24. Finally, to further facilitate the correct positioning of the pipe 15 within the groove 26, the bottom of this groove 26, that is to say at the lowest point of contact between the inclined bottom wall 27 and the side wall 25 of the container 19, is present a support stop 28 which receives, as shown in Figure 7, the free end 17 of the pipe 15. So there is always a space 31 present under said free end 17, which facilitates the complete and complete aspiration of the liquid sample initially present in the container 14.

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Abstract

La présente invention concerne un récipient (14) comportant un contenant (19) et une ouverture (20) par lequel il est possible de réaliser le prélèvement d'au moins un échantillon biologique en vue de son transfert, via un moyen de transfert sous aspiration, vers un autre récipient (14), une carte d'analyse ou autre. Le récipient est caractérisé par le fait qu'il est constitué d'un moyen de positionnement (26) du moyen de transfert et d'un moyen de concentration (27) de l'échantillon (4), situés dans le contenant (19) et/ou l'ouverture (20). Les moyens de positionnement (26) et de concentration (27) coopérant ensemble. L'invention trouve une application préférentielle dans le domaine de la microbiologie.

Description

RÉCIPIENT PERFECTIONNÉ FACILITANT SON VIDAGE COMPLET
DESCRIPTION
La présente invention concerne un récipient comportant un contenant et une ouverture par lequel il est possible de réaliser le prélèvement d'au moins un échantillon biologique en vue de son transfert, via un moyen de transfert sous aspiration, vers un autre récipient, une carte d'analyse ou autre,
Lors de l'analyse d'échantillons biologiques, des étapes de transfert de liquide (échantillons, réactifs...) d'un premier contenant (seringue, tube à essai, flacon...) vers un deuxième contenant (seringue, tube à essai, flacon...) sont indispensables. On retrouve dans l'art antérieur de nombreux dispositifs permettant ce transfert de liquide, qui diffèrent les uns des autres selon l'utilisation que l'on souhaite en faire. On retrouve ainsi des dispositifs d'utilisation manuelle ou automatisée, des dispositifs permettant de prélever des quantités de liquides avec plus ou moins de précision, des dispositifs qui répondent ainsi au besoin de chaque analyse et/ou utilisateur.
Si dans certaines analyses biologiques, l'objectif est seulement de transférer une quantité donnée d'un premier contenant vers un deuxième contenant, dans d'autres analyses, il peut être indispensable d'obtenir un transfert total de liquide du premier contenant vers le deuxième contenant, et la faisabilité de l'analyse peut alors dépendre du fait qu'aucun liquide ne reste dans le premier contenant.
On retrouve ainsi dans l'état de la technique des dispositifs permettant de vérifier qu'une certaine quantité de liquide a bien été traitée. A ce titre, la demande WO-A-99/30170 décrit un procédé pour vérifier le volume aspiré dans un système automatique de diagnostic, par l'utilisation d'un capteur de pression afin de mesurer le volume d'échantillon restant dans le premier contenant avant et après l'aspiration. De plus en comparant avec les volumes aspirés et les durées d'aspiration attendues, il est possibles de déterminer la présence de caillots ou de mousse. Toutefois, ce dispositif, bien que très précis est relativement complexe, ce qui engendre des coûts de fabrication et même d'utilisation importants. La Demanderesse a d'ailleurs développer un appareil similaire bien moins onéreux car il est construit sur la base d'une pipette conventionnelle, la demande de brevet WO-A-99/50674, déposée sous priorité du 1er avril 1998, donnera plus d'informations au lecteur. Toutefois cet appareil n'est pas passif, et il nécessite encore un capteur de pression et un calculateur.
On retrouve également dans l'art antérieur des dispositifs permettant d'augmenter la précision du volume que l'on souhaite transférer, et donc ainsi d'aspirer la totalité du liquide à transférer. A cet effet, la demande WO-A-00/58736 concerne un dispositif d'aspiration de liquide dans un récipient, comportant un mécanisme permettant de détecter que la pointe de la pipette d'aspiration est en contact avec le fond du récipient pendant l'opération d'aspiration. Toutefois, ce dispositif est alors principalement destiné à l'aspiration de façon précise de petites quantités de liquide contenu dans un contenant tel qu'un tube à essai ou un flacon, et non d'aspirer la totalité du liquide présent dans le contenant. De plus, ce dispositif est également complexe, ce qui engendre des coûts d'utilisation important. Enfin, ce dispositif présente l'inconvénient d'impliquer le lavage de la pointe de la pipette lorsque l'on souhaite aspirer un nouveau liquide afin de limiter tout risque de contamination entre deux échantillons biologiques. Cette étape de lavage présente un inconvénient conséquent lors de l'automatisation de système d'analyse biologique puisqu'il nécessite un dispositif particulier nécessaire à cet effet. D'autres documents proposent outre le nettoyage des embouts de pipette, soit la décontamination desdits embouts, soit enfin le remplacement pur et simple par des embouts neufs et propres. Ce problème de contamination a d'ailleurs déjà été résolu dans la demande de brevet WO-A-99/50674 de la Demanderesse, déjà évoquée plus haut, qui présente un procédé de prélèvement d'un échantillon biologique par l'intermédiaire d'un appareil d'aspiration-refoulement dont l'extrémité inférieure se positionne de façon à affleurer seulement la surface libre de l'échantillon biologique Le problème essentiel de l'ensemble de ces documents de l'état de la technique réside dans le fait que l'on ne s'intéresse qu'à l'embout de l'appareil d'aspiration et non au récipient qui contient l'échantillon de départ.
Ce n'est pas le cas du brevet US-A-3,977,598, qui propose un tube particulièrement adapté à son utilisation pour la centrifugation. Celui-ci possède une gorge qui est positionnée sur l'extérieur du tube. Notre invention se distingue de cet état de la technique par le fait que le moyen de positionnement et le moyen de concentration de l'échantillon sont situés dans le contenant et/ou l'ouverture. De plus le mode de réalisation proposée par ce document nécessite obligatoirement un trou sur le coté du tube, pour laisser passer le tube, et ce quelque soit le matériau qui le constitue (verre ou plastique).
La démarche intellectuelle permettant d'aboutir à notre invention n'est absolument pas celle de ce document puisque, d'une part le tube, selon notre invention, ne doit subir aucune centrifugation, et d'autre part, nous ne souhaitons pas récupérer ce qui se trouve au fond du tube lors de la centrifugation, à l'exception de ce qui est éloigné de ce fond, mais nous souhaitons plutôt récupérer le maximum du liquide contenu dans le tube, c'est exactement le rôle alloué à la butée d'appui pour le moyen de transfert.
La demande de brevet WO-A-98/51412 concerne un tube de sédimentation possédant un guide pour une pipette ou une seringue, afin de bien la positionner et d'éviter ainsi un flux de liquide trop fort nuisible à la sédimentation.
Ce tube ne décrit pas notre moyen de concentration, qui se trouve sous la forme d'une paroi inclinée. Cette analyse est également vrai pour le brevet GB-A- 1,064,901, qui décrit un container qui ne divulgue pas, à l'instar du document précédent moyen de concentration que nous divulguons sous la forme d'une paroi inclinée.
Aucune information manquante dans ces trois précédents documents ne peut être retrouvée dans le brevet US-A-4,056,361, qui dévoile un container ne possédant pas le moyen de positionnement . Ce document, seul ou en combinaison avec les documents précédents, ne divulgue ni ne suggère la butée dont le rôle essentiel est de permettre l'aspiration complète de l'échantillon liquide.
C'est également le cas de la demande de brevet GB-A-2,228,730, demande qui concerne un récipient possédant pas de moyen de positionnement mais une simple ouverture. A ce titre, la présente invention concerne un récipient simple, adaptable notamment sur des automates d'analyse biologique, permettant le transfert total d'un échantillon biologique tout en limitant également le risque de contamination.
A cet effet, la présente invention concerne un récipient comportant un contenant et une ouverture par lequel il est possible de réaliser le prélèvement d'au moins un échantillon biologique en vue de son transfert, via un moyen de transfert sous aspiration, vers un autre récipient, une carte d'analyse ou autre, caractérisé par le fait qu'il est constitué d'un moyen de positionnement du moyen de transfert et d'un moyen de concentration de l'échantillon, situés dans le contenant et/ou l'ouverture.
Selon une première variante de réalisation, le moyen de transfert est intégré à l'autre récipient, la carte d'analyse ou autre.
Selon une seconde variante de réalisation, le moyen de transfert est indépendant de l'autre récipient, la carte d'analyse ou autre. Dans tous les cas de figure, le moyen de positionnement du moyen de transfert est constitué par une rainure longitudinale en position sensiblement verticale.
Dans ce dernier cas, la rainure longitudinale a une section qui épouse la forme de la section du moyen de transfert.
Dans ce dernier cas de figure, la rainure longitudinale comporte, en fond de contenant, une butée d'appui pour le moyen de transfert, cette butée créant au moins un espace pour permettre l'aspiration complète de l'échantillon.
Dans tous les cas de figure, le moyen de concentration de l'échantillon est constitué par une paroi de fond de contenant qui est inclinée. Par « inclinée », il faut comprendre que lorsque le récipient est posé sur un support plan, que celui-ci soit horizontal ou non, alors le fond de la paroi n'est pas parallèle par rapport à ce support plan.
Dans ce dernier cas de figure, l'inclinaison de la paroi de fond de contenant est comprise entre 1 et 60°, préférentiellement entre 20 et 40°, et encore plus préférentiellement de sensiblement 30°. Dans ce dernier cas de figure, le contenant se prolonge latéralement sous la forme d'un moyen de stabilisation du récipient. De plus, un espace est présent entre la paroi de fond de contenant et la partie inférieure du moyen de stabilisation du récipient.
Les figures ci-jointes sont données à titre indicatif et n'ont aucun caractère limitatif sur la portée de la présente invention. Elles constituent un mode particulier de réalisation de ladite invention.
La figure 1 représente une vue de face d'un récipient selon la présente invention associé structurellement et fonctionnellement avec un mode de réalisation d'une carte d'analyse, permettant le dénombrement et la caractérisation de micro-organismes dans un échantillon biologique.
La figure 2 représente une vue en coupe partielle selon A-A de la figure 1, mettant en évidence le point d'implantation du tuyau reliant une carte d'analyse au récipient.
La figure 3 représente une vue latérale d'un récipient selon l'invention La figure 4 représente une vue en coupe selon B-B de la figure 3.
La figure 5 représente une vue latérale d'un récipient selon l'invention, récipient qui a subi une rotation de 90°, dans le sens des aiguilles d'une montre en vue de dessous, par rapport à la figure 3.
La figure 6 représente une vue en coupe selon C-C de la figure 5. La figure 7 représente une vue de détail selon D de la figure 4, mettant en évidence la zone inférieure de prélèvement de liquide du récipient selon l'invention. Enfin, la figure 8 représente une vue de dessus selon E de la figure 6.
Si on se réfère à la figure 1, une carte d'analyse 1 est essentiellement constituée d'un seul élément monobloc constitué par le corps 2 de la carte d'analyse 1. Ce corps 2 comporte une zone d'mjection 3 d'un liquide biologique à analyser 4 qui est présent initialement dans un récipient 14. Une telle carte d'analyse peut par exemple être constituée par une carte telle que décrite dans la demande de brevet WO-A-00/12674 déposée par la Demanderesse sous priorité du 1er septembre 1998. Pour plus d'informations à ce sujet le lecteur est prié de ce reporter à ce document. Il est bien entendu envisageable que le corps 2 ne soit pas monobloc, mais constitué de plusieurs parties associées les unes aux autres par tout moyen de fixation de l'état de la technique, tel que colle, moyen mécanique (vis, boulon, rivet, élastique, etc.), soudure. De plus, la zone d'injection 3 peut être sur n'importe quelle face du corps 2 que ce soit sur le côté, comme représenté sur la figure 1, ou au verso, ou encore sur une autre paroi latérale. Sur la figure 5, la carte 1 n'est pas remplie directement par l'échantillon 4, contenu dans le récipient ou tube 14, mais est relié à ce liquide 4 par l'intermédiaire d'un tuyau souple 15. L'ensemble ainsi formé est prêt à être positionné dans une chambre à vide. La figure 2 représente une coupe selon A-A de la figure 1. Le canal d'amenée 5 constitue une chicane pour que la zone d'injection 3 soit positionnée latéralement au centre du corps 2 de la carte 1, c'est-à-dire qu'elle se prolonge au sein de ladite carte 1 en direction de l'une de ses surfaces latérales. La liaison existante entre le corps 2 de la carte 1 et le tuyau 15 est assurée par une rainure circulaire 13, située dans le corps 2, et par un épaulement 16 dudit tuyau 15 coopérant avec la rainure 13.
Le corps 2 est en forme sensiblement de parallélépipède. Ce corps 2 comporte un certain nombre de rainures et de cavités 9, 10 ou 11 situées en son sein. Ces cavités peuvent être constituées par des trous traversants, comme c'est le cas en figure 7, ou par des trous borgnes, comme c'est le cas en figure 8. L'isolement de ces ramures et de ces trous borgnes par rapport à l'extérieur est effectué par l'application d'un film transparent adhésif 18 qui vient se coller sur la surface dudit corps 2. Le film transparent adhésif 18 est d'une utilisation intéressante car, après son perçage ou son retrait, il permet à un opérateur d'avoir un accès direct au contenu des cavités 9 à 11. En ce qui concerne les rainures, on note tout d'abord qu'il existe un canal principal d'amenée 5 qui est situé en aval de la zone d'injection 3. En aval de ce canal 5, est présent un puits 12 qui fait office de moyen de distribution principal du liquide biologique 4 à analyser. En fait, le canal principal 5 est situé entre la zone d'injection 3 et le puits 12. De la même façon, il existe des canaux secondaires 6, qui relient ce puits 12 à un ensemble de puits 7, où chaque puits 7 correspond à un canal 6. Ces puits 7 font office de moyens de distribution. Au niveau de ces puits 7, est présent un certain nombre de canaux teπninaux 8, chaque canal 8 reliant un puits 7 à une cavité d'analyse terminale 9, 10 ou 11.
En fait, il y a trois types de cavités d'analyse terminales sur ces figures, à savoir, des cavités d'analyse terminales 9 de grande taille, des cavités d'analyse terminales 10 de taille moyenne et enfin des cavités d'analyse terminales 11 de petite taille.
On comprend donc bien que les cavités situées sur le corps 2 de la carte d'analyse 1 sont, d'une part, les rainures qui sont constituées par le canal principal 5, les canaux secondaires 6 et les canaux terminaux 8 et, d'autre part, les trous borgnes qui sont constitués par la zone d'injection 3, le puits 12, les puits 7 et l'ensemble des cavités d'analyse 9, 10 et 11.
Les cavités d'analyse 9, 10 et 11 de tailles différentes permettent de se dispenser de la nécessité d'effectuer des dilutions. Ainsi, en fonction de la quantité de liquide, qui sera présente dans cette cavité d'analyse 9, 10 ou 11, on aura un nombre de microorganismes qui sera plus ou moins important. En fonction du milieu de culture à ajouter, il sera donc possible de faire croître certains micro-organismes qui en fonction de leur présence ou de leur absence dans chaque cavité 9, 10 ou 11 permettront d'avoir une modification de la densité optique, l'apparition ou la disparition d'une fluorescence ou d'une couleur (effet chromogène). Ceci permettra de détecter la présence ou l'absence de micro-organisme(s) et également d'effectuer une quantification. Des exemples seront exposés plus loin.
Pour simplifier le mode de réalisation de la figure 1, il serait tout à fait possible d'injecter le liquide biologique à analyser 4 directement au niveau du puits 12 et ainsi il ne serait pas nécessaire d'avoir la zone d'injection 3 et le canal principal d'amenée 5.
Afin que les volumes distribués dans chaque cavité d'analyse 9, 10 ou 11 soient identiques pour chaque cavité 9, 10 ou 11 de volumes identiques ou proportionnelles pour chaque cavité 9, 10 ou 11 de volumes différents, les différents canaux secondaires 6 sont tous d'un volume identique. Ainsi, comme on le remarque bien sur la figure 1, les canaux secondaires 6 situés au centre de la carte d'analyse 1 sont d'une longueur plus faible que ceux situés sur les côtés. Il conviendra donc déjouer sur leur largeur ou sur leur profondeur afin que les volumes soient constants entre tous ces canaux 6. De la même façon, la longueur des canaux terminaux 8 est identique pour chaque cavité d'analyse 9, 10 ou 11 de volume identique.
En fait, il existe également une proportionnalité entre les petites cavités 11 et les grandes cavités 9 ainsi qu'avec les cavités moyennes 10. Ainsi, le rapport existant entre deux cavités de volumes différents, sur les figures représentées, sont de 1 pour 10 entre les cavités 10 et 9 et les cavités 11 et 10 et de 1 pour 100 entre les cavités 11 et 9. Cette proportionnalité peut également se retrouver au niveau des canaux terminaux 8, ces canaux terminaux 8 étant de dimensions différentes en fonction du fait qu'ils alimentent des cavités de grande taille 9, des cavités de taille moyenne 10 ou enfin des cavités de petite taille 11.
Un dernier point en considération de la structure de la carte d'analyse 1, tous les canaux, qu'il soient principaux 5, secondaires 6, terminaux 8, ne se croisent pas les uns avec les autres afin d'éviter toute contamination d'une quantité de l'échantillon située dans une cavité d'analyse par rapport à une quantité de l'échantillon située dans une autre cavité d'analyse. Pour se faire, les points d'intersection de ces différents canaux entre eux, sont toujours réalisés par l'intermédiaire de puits faisant office non seulement de moyen de distribution mais également de volume tampon empêchant toute contamination après l'introduction de l'échantillon 4.
Le procédé de remplissage d'une carte d'analyse 1, consiste donc à :
• générer une dépression au sein et/ou au voisinage de la carte 1,
• relier la zone d'injection 3 de ladite carte 1 à un volume de liquide biologique 4 à analyser présent dans le récipient 14,
• casser progressivement la dépression de sorte que, d'une part, le liquide biologique 4 soit transféré dans les cavités d'analyse 9, 10 et/ou 11, et, d'autre part, l'air vienne isoler les différentes fractions de l'échantillon, issues dudit liquide biologique 4, qui sont présents dans chacune desdites cavités d'analyse 9, 10 ou 11.
De ce fait, une fois que la dépression est cassée, l'air vient en contact avec les fractions de l'échantillon biologique 4, soit au niveau des canaux terminaux 8 selon la figure 1, soit au niveau des cavités d'analyse 9, 10 et 11. Ceci créé une séparation physique entre les bactéries. Bien entendu, ceci n'est réalisable que si le volume de liquide biologique 4 est en rapport avec le volume total des cavités d'analyse 9, 10 et 11 ainsi qu'éventuellement du volume des canaux terminaux 8 .
En lieu et place de l'air, on peut utiliser n'importe quel fluide, gazeux ou liquide, qui pourra assurer cette fonction d'isolement. Il y a lieu de veiller à cette occasion à ce que le fluide soit substantiellement inerte par rapport aux composés biologiques contenus dans l'échantillon, et non missible avec ledit échantillon. Si le fluide est un liquide, comme par exemple de l'huile, il doit être d'une densité plus faible que l'échantillon biologique.
Dans ce cas, la carte 1 doit être maintenue sensiblement en position verticale, comme représenté en figure 1, le fluide isolant, non représenté sur les figures, étant en position supérieure à l'échantillon biologique, contenu préalablement dans le récipient 14 puis dans chaque cavité 9, 10 et 11.
Mais il est possible d'utiliser d'autres techniques pour isoler ou séparer physiquement les cavités 9, 10 et 11. Ainsi, on peut ajouter à l'échantillon biologique 4 et au milieu de culture, permettant la croissance microbienne, un gélifiant, tel que de la peptine. Dans ce cas et lorsque le gélifiant a fait son œuvre, il n'y a plus de nécessité à maintenir la carte 1 en position sensiblement verticale.
Enfin, l'isolement desdites cavités 9, 10 et 11 peut être réalisé par l'obstruction des canaux terminaux 8. On peut utiliser par exemple une colle comme fluide isolant, ou on peut les obstruer par une compression physique.
Il est donc évident que le contrôle stricte du volume d'échantillon 4 qui est transféré dudit récipient 14 vers la carte 1 est d'une très grande importance. Un autre avantage consiste à ne pas conserver, ou très peu, de liquide 4 au sein du récipient 14 après le transfert vers ladite carte 1. D'ailleurs, dans un mode particulièrement intéressant de remplissage par le procédé selon l'invention, le volume de liquide biologique 4 à analyser est inférieur au volume total de toutes les cavités d'analyse 9, 10 et 11. Ce rapport entre le volume de liquide biologique 4 et le volume total de toutes les cartes d'analyse 9, 10 et 11 est préférentiellement de un pour deux.
Le remplissage des cavités 9, 10 et 11 s'effectue simultanément, d'ailleurs, à un instant du remplissage donné, le rapport entre le volume de liquide présent dans chaque taille de cavité petite, moyenne ou grande sur le volume total de chaque taille de cavité, respectivement petite, moyenne ou grande, est constant pour la totalité des cavités 9, 10 et 11 de la carte 1.
L'objectif principal de cette invention est donc de permettre un vidage du récipient 14 et un remplissage de la carte d'analyse 1 qui soient efficace, c'est-à-dire le plus complet possible. Ladite carte 1, selon la figure 1, permet de dénombrer les microorganismes contenus dans un échantillon biologique 4 et peut être utilisée dans le domaine alimentaire. Pour effectuer ce dénombrement, on calcule le nombre le plus probable (NPP) de bactéries dans un échantillon par une méthode statistique, expliquée par R. J. Parnow (1972). Ainsi on associe la probabilité d'apparition à chaque combinaison de positif(s). On utilise pour cela la méthode de J. C. De Man (1975).
Il est bien entendu possible d'avoir une carte d'analyse semblable du point de vue du concept général mais différente sur certains détails, par exemple une carte qui comporte quatre, cinq tailles différentes de cavités, voire plus, et ce afin d'augmenter le champ d'investigation de la carte.
Bien entendu, il est possible de faire de la numération d'autres entités biologiques que les bactéries, telles que les acides nucléiques (ADN ou ARN), les anticorps, les antigènes. La révélation peut être réalisée par des anticorps anti-entités biologiques qui sont marqués. Comme évoqué précédemment, il est possible d'ajouter dans le tube 14 un liquide, non missible, de densité plus faible que l'échantillon 4 qui sera aspiré après ledit échantillon 4 et qui servira d'isolant entre les différentes quantités réparties dans chaque cavité. Il est également possible d'avoir deux tubes 14, l'un contenant l'échantillon biologique, l'autre contenant le fluide isolant, et de plonger le tuyau 15 alternativement dans le premier tube 14 puis dans le second tube 14. Il est enfin possible d'avoir sur la carte 1 deux tuyaux 15. Le volume total des cavités 9, 10 et 11 étant de 4440 μl, le volume de l'échantillon 4 étant de 2220 μl, le volume du liquide isolant pourra être de 2220 μl. Il pourra être inférieur si l'on désire qu'il y ait de l'air dans la carte 1 une fois scellée, ou supérieur si l'on veut être sûr du remplissage complet de la carte par l'échantillon 4 et le liquide isolant. Dans ce dernier cas, cette technique peut être intéressante pour la croissance de micro-organismes anaérobies. Afin de déterminer exactement le volume de l'échantillon 4 qui doit être transféré dans la carte 1, trois possibilités existent qui ne font pas appel à une automatisation : « La première possibilité concerne le remplissage du tube 14 par la quantité exacte de l'échantillon 4. Le tuyau souple 15 ayant son extrémité libre 17 au niveau le plus inférieur dudit échantillon 4, la totalité de l'échantillon 4 est transférée. Cette solution est particulièrement avantageuse car elle permet d'obtenir un récipient 14 quasiment sans liquide en son sein. « La deuxième possibilité concerne le remplissage de la carte 1 par une quantité d'échantillon 4 déterminée par la position de l'extrémité libre 17 immergée dans ledit échantillon 4, au sein dudit tube 14. L'échantillon 4 aspiré correspond à la colonne de liquide 4 située au-dessus de ladite extrémité 17, et seule cette colonne de liquide supérieure est transférée. Cette solution est bien moins intéressante car le récipient 14 contient alors une certaine quantité de liquide en son sein.
• Enfin, la troisième possibilité concerne le remplissage du tube 14 par une quantité très importante d'échantillon. Le transfert en cassant la dépression est réalisé jusqu'à ce que le manipulateur retire directement ou indirectement l'extrémité 17 du tuyau souple 15 de l'échantillon 4, tout en permettant la continuation du transfert des fractions dudit échantillon 4 vers les cavités 9, 10 et 11. L'automatisation de cette technique est donc difficile à réaliser.
Il est donc aisé de comprendre que, lorsque le transfert de l'échantillon 4 s'effectue, le prélèvement a lieu, dans un premier temps, au niveau dudit échantillon 4.
C'est donc le niveau de l'échantillon 4 qui diminue jusqu'à ce que l'extrémité libre 17 du tuyau souple 15 se retrouve dans le fluide isolant. C'est alors, dans un second temps, ce fluide qui est transféré vers la carte 1.
La structure interne du récipient 14 est donc tout à fait importante pour permettre la mise en œuvre de la première solution ci-dessus évoquée, qui est la solution la plus intéressante. De plus, la matière constituant ce récipient 14 est généralement monobloc, préférentiellement en une matière plastique. Néanmoins, il est également possible que ledit récipient 14 soit constitué de deux matières au moins. Par exemple, la partie intérieure peut être en plastique alors que la partie extérieure, qui comporte le pas de vis peut être en métal, généralement de raluminium, ou en verre. Le mode de fabrication préférentiel est donc un moulage qui, pour être réalisable, implique, bien que cela ne soit pas représenté sur les figures, que les parois verticales 19 et 25, qui seront explicitées plus loin, soient légèrement inclinées, par exemple de 1°.
Les figures 3 et 4, d'une part, et 5 et 6, d'autre part, montrent un récipient 14 selon la présente invention sous deux angles différents, c'est-à-dire après que celui-ci 14 ait subi une rotation selon son axe longitudinal de 90°.
Selon la coupe B-B de la figure 3, on remarque en figure 4 que le récipient 14 est essentiellement composé de trois parties. Un première partie dite goulot 20 qui permet l'introduction d'un liquide 4 au sein dudit récipient 14, une deuxième partie dite contenant 19 qui permet de réceptionner le liquide 4 après son introduction via le goulot 20 et une troisième partie dite moyen de stabilisation 23 constituée sur la figure
4 par une cornière circulaire extérieure 23. Comme on le voit bien sur cette figure 4, mais également sur la figure 6, la cornière circulaire extérieure 23 se termine par une extrémité libre formant un point d'appui 24 pour l'ensemble du récipient 14. Ce moyen de stabilisation 23 permet donc de poser et de maintenir en position verticale l'ensemble du récipient 14.
De manière plus importante pour la présente invention, le contenant 19 est de forme sensiblement cylindrique sur toute sa hauteur. Il comporte sur toute sa longueur un moyen de positionnement 26 et est constitué, comme on le voit bien sur la figure 6 mais également sur la figure 8, par une rainure de section circulaire 26. Cette rainure 26 permet le passage du tuyau 15, leurs formes étant adaptées pour s'épouser.
On remarque que sur le mode de réalisation présenté sur les figures, la rainure 26 se prolonge en partie supérieure, au niveau de la face intérieure du goulot 20. On remarque également, sur la face extérieure de ce goulot 20, la présence de rainure 21 permettant le vissage d'un bouchon non représenté sur les figures. Enfin, en partie supérieure du goulot 20, est présent un biseau intérieur 22 facilitant, d'une part le moulage, d'autre part l'introduction du tuyau 15. Le contenant 19 est donc constitué d'une paroi latérale 25 le long de laquelle court la rainure 26 jusqu'au fond constitué par une paroi 27 en position inclinée par rapport à l'axe longitudinal du récipient 14. Bien entendu, c'est toujours dans un souci de faciliter le moulage de ce type de dispositif, que la rainure 26 est présente sur toute la longueur et vient au contact de la paroi de fond 27. Ladite paroi 27 comporte une inclinaison 29, représentée sur la figure 7, qui est de sensiblement 30°. On remarque également sur cette figure 7 que l'extrémité inférieure du contenant 19 est à une certaine distance 30 par rapport à l'extrémité inférieure de la cornière circulaire extérieure 23 représentée plus précisément par son point d'appui 24. Enfin, pour faciliter encore le bon positionnement du tuyau 15 au sein de la rainure 26, le fond de cette rainure 26, c'est-à-dire au point de contact le plus bas entre la paroi de fond inclinée 27 et la paroi latérale 25 du contenant 19, est présent une butée d'appui 28 qui reçoit, comme cela a été représenté sur la figure 7, l'extrémité libre 17 du tuyau 15. De telle sorte, il y a toujours un espace 31 présent sous ladite extrémité libre 17, ce qui facilite l'aspiration complète et entière de l'échantillon liquide initialement présent dans le récipient 14.
REFERENCES
1. Carte d'analyse
2. Corps de la carte d'analyse 1 3. Zone d'injection dans la carte 1
4. Liquide ou échantillon biologique à analyser
5. Canal principal d'amenée
6. Canaux secondaires
7. Puits correspondant à chaque canal 6 ou moyen de distribution 8. Canaux terminaux
9. Cavités d'analyse terminales, de grande taille, correspondant à un canal 8
10. Cavités d'analyse terminales, de taille moyenne, correspondant à un canal 8
11. Cavités d'analyse terminales, de petite taille, correspondant à un canal 8
12. Puits ou moyen de distribution principal 13. Rainure circulaire dans le corps 2
14. Récipient contenant l'échantillon 4
15. Moyen de transfert ou tuyau reliant la zone d'injection 3 au tube 14
16. Epaulement du tuyau 15 coopérant avec la rainure 13
17. Extrémité libre du tuyau 15 18. Film transparent adhésif
19. Contenant de l'échantillon 4 du récipient 14
20. Ouverture ou goulot du récipient 14 ou du contenant 19
21. Rainure de vissage d'un bouchon présente sur le goulot 20
22. Biseau à l'entrée du goulot 20 23. Moyen de stabilisation ou cornière circulaire extérieure
24. Point d'appui de la cornière 23
25. Paroi latérale du contenant 19
26. Moyen de positionnement ou rainure pour le passage du tuyau 15
27. Moyen de concentration de l'échantillon 4 ou paroi de fond inclinée du contenant 19
28. Butée d'appui de l'extrémité libre 17 du tuyau 15 29. Angle d'inclinaison de la paroi de fond 27
30. Distance séparant l'extrémité inférieure du contenant 19 par rapport à l'extrémité inférieure de la cornière circulaire extérieure 23
31. Espace entre l'extrémité libre 17 du tuyau 15 et la paroi de fond inclinée 27 du récipient 14

Claims

REVENDICATIONS
1. Récipient (14) comportant un contenant (19) et une ouverture (20) par lequel il est possible de réaliser le prélèvement d'au moins un échantillon biologique (4) en vue de son transfert, via un moyen de transfert (15) sous aspiration, vers un autre récipient (14), tel qu'une carte d'analyse (1), caractérisé par le fait qu'il est constitué d'un moyen de positionnement (26) du moyen de transfert (15), qui comporte, en fond de contenant (19), une butée d'appui (28) pour le moyen de transfert (15), cette butée créant au moins un espace pour permettre l'aspiration complète de l'échantillon (4), et d'un moyen de concentration (27) de l'échantillon (4), situés dans le contenant (19) et/ou l'ouverture (20), qui est constitué par une paroi de fond (27) de contenant (19) qui est inclinée.
2. Récipient, selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le moyen de transfert (15) est intégré à l'autre récipient (14), tel que la carte d'analyse (1).
3. Récipient, selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le moyen de transfert (15) est indépendant de l'autre récipient (14), tel que la carte d'analyse (1).
4. Récipient, selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que le moyen de positionnement (26) du moyen de transfert (15) est constitué par une rainure longitudinale (26) en position sensiblement verticale.
5. Récipient, selon la revendication 4, caractérisé par le fait que la rainure longitudinale (26) a une section qui épouse la forme de la section du moyen de transfert (15).
6. Récipient, selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé par le fait que l'inclinaison de la paroi de fond (27) de contenant (19) est comprise entre 1 et 60°, préférentiellement entre 20 et 40°, et encore plus préférentiellement de sensiblement 30°.
7. Récipient, selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé par le fait que le contenant (19) se prolonge latéralement sous la forme d'un moyen de stabilisation (23) du récipient (14).
8. Récipient, selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé par le fait qu'un espace est présent entre la paroi de fond (27) de contenant (19) et la partie inférieure du moyen de stabilisation (23) du récipient (14).
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