WO2002068408A1 - Derives chimiques et leur application comme agent antitelomerase - Google Patents

Derives chimiques et leur application comme agent antitelomerase Download PDF

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WO2002068408A1
WO2002068408A1 PCT/FR2002/000645 FR0200645W WO02068408A1 WO 2002068408 A1 WO2002068408 A1 WO 2002068408A1 FR 0200645 W FR0200645 W FR 0200645W WO 02068408 A1 WO02068408 A1 WO 02068408A1
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WO
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group
alkyl
carbon atoms
amino
dialkylamino
Prior art date
Application number
PCT/FR2002/000645
Other languages
English (en)
Inventor
Patrick Mailliet
Jean-François RIOU
Abdelazize Laoui
Jean-Louis Mergny
Sylvie Gontier
Original Assignee
Aventis Pharma S.A.
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Filing date
Publication date
Application filed by Aventis Pharma S.A. filed Critical Aventis Pharma S.A.
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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the present invention relates to cancer therapy and relates to new anticancer agents having a very specific mechanism of action. It also relates to new chemical compounds as well as their therapeutic application in humans.
  • the present invention relates to the use of new non-nucleotide chemical compounds which interact with specific structures of deoxyribonucleic acid (DNA) or ribonucleic acid (RNA). These new compounds consist of a distributing agent linked to an aminoaromatic group. These new compounds are useful in the treatment of cancer and act in particular as telomerase inhibiting agents. They are particularly useful for stabilizing DNA in a G-quadruplex structure (guanine tetrads). The therapeutic application of telomerase inhibition via the stabilization of these G-quadruplexes is the arrest of cell mitosis and the death of rapidly dividing cells such as cancer cells and possibly the induction of cell senescence cancerous.
  • telomerase makes it possible to add repeated DNA sequences of the TTAGGG type, called telomeric sequences, at the end of the telomer, during cell division.
  • telomerase makes the cell immortal. In fact, in the absence of this enzymatic activity, the cell loses 100 to 150 bases each division, which makes it rapidly sinking. When rapidly dividing cancer cells appeared, these cells appeared to have telomeres maintained at a stable length during cell division.
  • telomerase was highly activated and that it allowed the addition of repeating motifs of telomeric sequences at the end of the telomer and therefore allowed the conservation of the length of the telomer in cancer cells. It has been shown for some time that more than 85% of cancer cells have positive tests for the presence of telomerase while somatic cells do not have this characteristic. Thus telomerase is a highly wished target for treating cancer cells.
  • the first obvious approach to blocking telomerase was the use of nucleotide structures (Chen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93 (7), 2635-2639).
  • Patent WO 99/40087 describes the use of compounds which interact with the G-quadruplex structures which are perylenic compounds and carbocyanines containing at least seven rings including two heterocycles.
  • telomerases and correspond to the following general formula: nitrogen aromatic cycle -NR 3 - distributor -O- or -S- non-aromatic hydrocarbon chain or nitrogen aromatic cycle in which
  • the nitrogen aromatic ring represents: o a quinoline optionally substituted by at least one N (Ra) (Rb) group in which Ra and Rb, identical or different, represent hydrogen or a C1-C4 alkyl radical or else by a ORa group in which Ra is defined as above o a quinoline having a nitrogen atom in quaternary form or o a benzamidine or o a pyridine • the distributor represents:
  • a triazine group optionally substituted by an alkyl radical having 1 to 4 carbon atoms, a thio, oxy or amino themselves optionally substituted by one or more short chain alkyl chains containing 1 to 4 carbon atoms or even a halogen atom or
  • R3 represents hydrogen or a C1-C4 alkyl radical or a salt thereof.
  • non-aromatic hydrocarbon chain means an alkyl (C1-C4), alkenyl (C2-C4), linear or branched, cycloalkyl (C3-C18), cycloalkenyl (C3-C18), heterocycloalkyl (C3-C18).
  • the heterocycloalkyl group optionally includes the nitrogen atom of amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino, diarylamino radicals.
  • non-aromatic hydrocarbon chain may be optionally substituted by one or more atoms or radicals chosen from halogen atoms, hydroxy, aryl, heteroaryl, alkyloxy, aryloxy, thio, alkylthio, arylthio, amino, alkylamino radicals and / or arylamino, dialkylamino, diarylamino, amidino, guanidino, alkylcarbonylamino, or arylcarbonylamino, carboxyl, alkyloxycarbonyl or aryloxycarbonyl, aminocarbonyl, alkylaminocarbonyl and / or arylaminocarbonyl, dialkylaminocarbonyl, alkylcarbonyl or arylcarbonom.
  • halogen atoms hydroxy, aryl, heteroaryl, alkyloxy, aryloxy, thio, alkylthio, arylthio, amino, alkylamino radicals and
  • the alkyl chains of the optional substituents of the hydrocarbon chain preferably contain 1 to 4 carbon atoms and the aryl groups of the optional substituents of the hydrocarbon chain preferably contain 5 to 18 carbon atoms.
  • the compounds included above it is preferred, among all of the compounds included above, to use those comprising as a distributor a triazine or diazine group.
  • the diazine groups it is preferred to use pyrimidines or quinazolines.
  • the hydrocarbon chains the alkyl chains containing 2 to 3 carbon atoms are preferred, the heterocycloalkyl or cycloalkyl chains containing 5 to 7 carbon atoms and in particular 4 to 7 carbon atoms.
  • R1 and R2 which are identical or different represent hydrogen or a straight or branched alkyl group containing 1 to 4 carbon atoms or
  • halogen atom chosen from fluorine, chlorine, bromine or iodine
  • R3 represents hydrogen or a C1-C4 alkyl radical.
  • Ar, and Ar 2 identical or different represent: o a quinoline optionally substituted by at least one group N (Ra) (Rb) in which Ra and Rb, identical or different represent hydrogen or a C1-C4 alkyl radical or indeed by an ORa group in which Ra is defined as above o a quinoline having a nitrogen atom in quaternary form or o a benzamidine or o a pyridine attached in position -4 or fused with an aryl or heteroaryl group optionally substituted by a C1-C4 alkyl group
  • Alk represents a hydrocarbon chain, optionally substituted, non-aromatic, chosen from alkyl (C1-C4), alkenyl (C2-C4), linear or branched, cycloalkyl (C3-C18), cycloalkenyl (C3-C18), heterocycloalkyl (C3
  • Alk represents in particular o an alkyl unit containing 1 to 4 linear or branched carbon atoms optionally substituted by an amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino or diarylamino radical o an alkenyl unit containing 2 to 4 atoms carbon, linear or branched optionally substituted by an amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino or diarylamino radical o a cycloalkyl unit containing from 3 to 18 carbon atoms o a cycloalkenyl unit containing from 3 to 18 carbon atoms
  • heterocycloalkyl unit containing from 3 to 18 carbon atoms optionally including the nitrogen atom of amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino, diarylamino radicals or a salt thereof.
  • Alk represents very particularly o an alkyl unit containing 2 to 3 linear or branched carbon atoms substituted by an amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino or diarylamino radical o an alkenyl unit containing 2 to 3 atoms carbon, substituted by an amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino or diarylamino radical o a heterocycloalkyl unit containing from 4 to 7 carbon atoms including the nitrogen atom of amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino, diarylamino radicals or a salt thereof.
  • heterocycloalkyl unit mention may, for example, be made of the piperidyl radical.
  • quinoline units can be substituted by any other group which does not intervene in the intended application, thus acridine or isoquinoline or quinazoline or quinoxaline or phthalazine or benzothiazine or benzoxazine or phenoxazine or phenothiazine groups are included in the definition of quinoline groups.
  • Preferred among the compounds of formula (I) above are those for which Arl and / or Ar2 is chosen from the groups 4-aminoquinolyl, 4-alkyl- or 4-dialkylamino-quinolyl, 4-aminoquinolinium or quinolinium including the quinolinium nucleus is optionally substituted with a methyl group.
  • groups A they preferably represent the methylthio, amino, alkylamino or dialkylamino radicals in which the alkyl groups have 1 to 4 carbon atoms.
  • non-aromatic hydrocarbon chain Alk it preferably represents a 2- (dialkylamino) ethyl, 3- (dialkylamino) propyl, 2- (N-alkyl-N-arylamino) ethyl, 3- (N-alkyl) chain -N-arylamino) propyl, Nalkylpiperidyl or Narylpiperidyl in which the alkyl groups preferably contain 1 to 4 carbon atoms, even more preferably 1 to 2 carbon atoms and the aryl groups preferably contain 5 to 18 carbon atoms, even more preferably 6 carbon atoms.
  • Another object of the present invention relates to the compounds of formula (I) as new chemicals. It therefore relates to new products characterized in that they correspond to the following general formula: aromatic nitrogen cycle -NR 3 - distributor -O- or -S- non-aromatic hydrocarbon chain or aromatic nitrogen cycle in which
  • the nitrogen aromatic cycle represents: a quinoline optionally substituted by at least one N (Ra) (Rb) group in which Ra and Rb, which are identical or different, represent hydrogen or a C1-C4 alkyl radical or else by an ORa group in which Ra is defined as previously o a quinoline having a nitrogen atom in quaternary form or o a benzamidine or o a pyridine
  • R3 represents hydrogen or a C1-C4 alkyl radical • the distributor represents:
  • a triazine group optionally substituted by an alkyl radical having 1 to 4 carbon atoms, a thio, oxy or amino radical themselves optionally substituted by one or more short-chain alkyl chains containing 1 to 4 carbon atoms or an atom halogen or
  • the non-aromatic hydrocarbon chain is chosen from alkyl (C1-C4), alkenyl (C2-C4), linear or branched, cycloalkyl (C3-C18), cycloalkenyl (C3-C18), heterocycloalkyl (C3-C18) chains optionally the nitrogen atom of amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino, diarylamino radicals, or a salt thereof,
  • the present invention relates more particularly to the new products corresponding to the following formula (I):
  • RI and R2 which are identical or different, represent a hydrogen atom or a straight or branched alkyl group containing 1 to 4 carbon atoms or • an OR1 or SRI group in which RI represents hydrogen or has the same meaning as before or
  • R 3 represents a hydrogen atom or a C1-C4 alkyl group
  • Ar, and Ar 2 identical or different represent: o a quinoline optionally substituted by at least one group N (Ra) (Rb) in which Ra and Rb, identical or different represent hydrogen or a C1-C4 alkyl radical or an ORa group in which Ra is defined as above, o a quinoline having a nitrogen atom in quaternary form or o a benzamidine or a pyridine attached in position -4 or fused with an aryl or heteroaryl group optionally substituted by an alkyl group in C1-C4
  • - Alk represents a hydrocarbon chain, optionally substituted, non-aromatic, chosen from alkyl (C1-C4), alkenyl (C2-C4), linear or branched, cycloalkyl (C3-C18), cycloalkenyl (C3-C18), heterocycloalkyl (C3-C18) optionally including the nitrogen atom of amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino, diarylamino radicals, or a salt thereof.
  • Alk can take the values already indicated above and in particular Alk represents o an alkyl unit containing 2 to 3 linear or branched carbon atoms substituted by an amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino, or diarylamino radical o an alkenyl unit containing 2 to 3 carbon atoms, substituted by an amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino or diarylamino o a cycloalkyl or heterocycloalkyl unit containing from 5 to 7 carbon atoms including the nitrogen atom of amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino, diarylamino radicals, or a salt thereof.
  • the compounds of formula (I) which are preferred are those for which Ar represents a group chosen from the following units: 4-amino- or 4-methylamino- or 4-dimethylamino-quinolyl or quinolinium in which the quinolinium ring is optionally substituted by a methyl group.
  • the compounds of general formula (I) which are preferred are those for which A represents an amino or dimethylamino group or more preferably methylthio.
  • the compounds of general formula (I) which are preferred are those for which the non-aromatic hydrocarbon chain Alk is chosen from alkyl chains containing 2 to 3 carbon atoms and cycloalkyl or heterocycloalkyl chains containing 5 to 7 carbon atoms, these chains themselves carrying an amino, alkylamino and / or arylamino, dialkylamino or diarylamino radical, in which the alkyl groups contain 1 to 4 carbon atoms and the aryl groups contain 5 to 18 carbon atoms.
  • the compounds of general formula (I) which are particularly preferred are those for which the non-aromatic hydrocarbon chain Alk represents a 2- (dialkylamino) ethyl, 3- (dialkylamino) propyl, 2- (N-alkyl-N-arylamino) chain ethyl, 3- (N-alkyl-N-arylamino) propyl, Nalkylpiperidyl or Narylpiperidyl in which the alkyl groups contain 1 to 4 carbon atoms, in particular 1 to 2 carbon atoms and the aryl groups contain 5 to 18 carbon atoms, including 6 carbon atoms.
  • the invention relates very particularly to the following compounds: N6- [6- (2-dimethylamino-ethoxy) -4-methylsulfanyl- [1, 3,5] triazin-2-yl] -2- methyl-quinoline-4,6-diamine
  • Another object of the present invention relates to the use of the compounds of formula (I) as a pharmaceutical product for human use.
  • the triazine of general formula (A) can be obtained by sequential displacement of the halogen atoms, very generally chlorine atoms, of the products of general formula (B) by the amines Ar , NHR 3 of general formula (C) then with alcohols or phenols or thiols or thoiphenols of general formula (E) or (E ') or conversely reaction of (B) with (E) or (E') then of the intermediate obtained with (C) according to scheme 1:
  • R represents the values of A as defined above in the compounds of formula (I): if necessary, the optionally reactive functions of A can be possibly protected according to the usual methods known to those skilled in the art.
  • Ar , Ar 2 , Alk and R3 have the meanings indicated above for the compounds of formula (I).
  • intermediate D to prepare intermediate D, one operates with 1 mole of dihalo-s-triazine, or trihalo-s-triazine, and 1 mole of amine Ar ,. It is preferred to operate in an inert solvent such as optionally aqueous acetone or an optionally aqueous alcohol, such as ethanol, or a halogenated solvent, such as dichloromethane, or an ether such as diethyl ether or dioxane, or a polar aprotic solvent such as DMF, DMSO or NMP. According to a better way of implementing the invention, the operation is carried out at a temperature between 20 ° C and 50 ° C.
  • an inert solvent such as optionally aqueous acetone or an optionally aqueous alcohol, such as ethanol, or a halogenated solvent, such as dichloromethane, or an ether such as diethyl ether or dioxane, or a polar aprotic solvent
  • the present invention thus also relates to a process for the preparation of the compounds of formula (I) according to scheme 1 characterized in that the product of general formula (D) as defined above in which X represents a halogen atom and R, R3 and Arl have the meanings indicated above, is reacted with alcohol Alk-OH or thiol Alk-SH or phenol Ar 2 -OH or thiophenol Ar 2 -SH without solvent by microwave irradiation .
  • the present invention more specifically relates to such a method characterized in that one operates at a temperature between 80 and 150 ° C.
  • OR1 or SRI can also be prepared by nucleophilic displacement of a halogen atom, generally a chlorine atom, of a product of general formula (A) in which R represents a halogen atom according to scheme 2:
  • R Cl (or F or Br or I)
  • R NR, R 2 or OR, or SR 1
  • Diagram 2 One generally operates by condensing 1 mole of product of general formula (A) in which R represents a halogen atom, preferably a chlorine atom, with 1 mole of amine R1R2NH or of alcoholate RIO " or of thioalcoholate RIS.
  • R represents a halogen atom, preferably a chlorine atom
  • Reaction takes place in an inert medium under the conditions of the reaction, mention may be made, among inert solvents, of optionally aqueous acetone or an optionally aqueous alcohol such as ethanol or a halogenated solvent such as dichloromethane, or an ether such as diethyl oxide or dioxane, or a polar aprotic solvent such as DMF, DMSO or NMP
  • inert solvents of optionally aqueous acetone or an optionally aqueous alcohol such as ethanol or a halogenated solvent such as dichloromethane, or an ether such as diethyl oxide or dioxane, or a polar aprotic solvent such as DMF, DMSO or NMP
  • the operation is preferably carried out at a temperature between 20 ° C. and reflux, in the presence in particular an organic base, such as triethylamine, or an inorganic base, such as sodium hydroxide or sodium or potassium carbonate.
  • a base during the amination reaction, e t isolating a hydrochloride from the product of general formula (A), the base of which can then be released.
  • the incoming group represents an RIO “ or RIS " group
  • an alkali or alkaline earth alcoholate or thioalcoholate such as a sodium or potassium or lithium or ammonium or cesium or barium salt
  • a polar aprotic solvent such as DMF or DMSO or NMP
  • the present invention also relates to therapeutic compositions containing a compound according to the invention, in combination with a pharmaceutically acceptable carrier according to the mode of administration chosen.
  • the pharmaceutical composition can be in solid, liquid or liposome form.
  • solid compositions mention may be made of powders, capsules, tablets.
  • oral forms it is also possible to include the solid forms protected from the acid environment of the stomach.
  • the supports used for solid forms consist in particular of mineral supports such as phosphates, carbonates or organic supports such as lactose, celluloses, starch or polymers.
  • Liquid forms are made up of solutions of suspensions or dispersions. They contain as dispersive support either water or an organic solvent (ethanol, NMP or others) or mixtures of surfactants and solvents or complexing agents and solvents.
  • the administered dose of the compounds of the invention will be adapted by the practitioner according to the route of administration of the patient and the state of the latter.
  • the compounds of the present invention can be administered alone or in admixture with other anticancer agents.
  • anticancer agents include anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents, anticancer agents
  • alkylating agents and in particular cyclophosphamide, melphalan, Pifosfamide, chlorambucil, busulfan, thiotepa, prednimustine, carmustine, lomustine, semustine, steptozotocine, decarbazine, temozolomide, procarbazine and hexam “Platinum derivatives such as in particular Latin cisp, carboplatin or Poxaliplatin
  • antibiotic agents such as bleomycin, mitomycin, dactinomycin
  • antimicrotubule agents such as vinblastine, vincristine, vindesine, vinorelbine, taxoides (paclitaxel and docetaxel)
  • anthracyclines such as doxorubicin, daunorubicin, Pidarubicin, epirubicin, mitoxantrone, losoxantrone
  • fluoropyrimidines such as 5-fluorouracil, UFT, floxuridine,
  • cytidine analogs such as 5-azacytidine, cytarabine, gemcitabine, 6-mercaptomurine, 6-thioguanine • adenosine analogs such as pentostatin, cytarabine or fludarabine phosphate • methotrexate and folinic acid
  • the compounds of the present invention can be combined with radiation treatment. These treatments can be administered simultaneously, separately, sequentially.
  • the treatment will be adapted to the patient to be treated by the practitioner.
  • the stabilization activity of the G-quadruplexes can be determined by a method using the formation of a complex with fluorescein, the experimental protocol of which is described below.
  • the oligonucleotide FAM + DABCYL carries the catalog reference, OL-0371-0802. It has the sequence:
  • GGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG corresponding to 3.5 repeats of the human telomeric motif (strand rich in G).
  • Fluorescein is attached to the 5 'end, DABCYL to the 3' end, by the chemical arms described by Eurogentec. The concentration of the samples is verified by spectrophotometry, recording the absorbance spectrum between 220 and 700 nm and using the molar extinction coefficient provided by the supplier.
  • a stock solution of oligonucleotide at the strand concentration of 0.2 ⁇ M in a 0.1 M LiCl 10 mM cacodylate buffer pH 7.6 is previously prepared, briefly heated to 90 ° C and slowly cooled to 20 ° C, then distributed in aliquots of 600 ⁇ l in fluorescence cells. 3 ⁇ l of water (for control) or 3 ⁇ l of the product to be tested (stock at 200 ⁇ M, final concentration 1 ⁇ M) are then added and mixed. The samples are then left to incubate for at least 1 hour at 20 ° C before each measurement. The use of longer incubation times (up to 24 hours) has no influence on the result obtained.
  • the Tm of the reference sample without addition of product is 44 ° C. in a Lithium Chloride buffer. This temperature is brought to more than 55 ° C. in a sodium chloride buffer.
  • the addition of a compound stabilizing G-quadruplex induces a increase in Tm. This increase is considered significant if it is greater than 3 °.
  • the biological antomeromerase activity is determined by the following experimental protocol: Preparation of the extract enriched in human telomerase activity
  • the HL60 leukemia line is obtained from the ATCC (American Type).
  • the cells are cultured in suspension in RPMI 1640 medium containing, 2 mM L-Glutamine, Penicillin 200 U / ml, streptomycin 200 ⁇ g / ml, gentamycin 50 ⁇ g / ml and supplemented with 10% fetal calf serum inactivated by the heat.
  • telomerase activity is determined by a protocol for extending the oligonucleotide TS ( 5 AATCGTTCGAGCAGAGTTTT ' ), in the presence of a cellular extract enriched in telomerase activity and of compounds which are added at different concentrations (10, 1, 0.1 and 0.01 ⁇ g / ml).
  • the extension reaction is followed by a PCR amplification of the extension products using the oligonucleotides TS and CXext GTGCCCTTACCCTTACCCTTACCCTAA 3 ' ).
  • the reaction medium is prepared according to the following composition: Tris HC1 pH 8.3 20 mM
  • Bovine albumin serum 0.1 mg / ml
  • the oligonucleotides are obtained from Eurogentec (Belgium) and are stored at -20 ° C at a stock concentration of 1 mg / ml in distilled water.
  • reaction samples are assembled in 0.2 ml PCR tubes and a drop of paraffin oil is placed on each of the reactions of the experiment before the tubes are closed.
  • reaction samples are then incubated in a Cetus 4800 type PCR apparatus under the following temperature conditions:
  • the acrylamide gels are then dried on a sheet of 3MMM Whatmann paper at 80 ° C for 1 hour. Analysis and quantification of the reaction products are carried out using an Instantlmager device (Pacard).
  • the concentration of compound inducing a 50% inhibition of the telomerase reaction is determined using a semi-logarithmic graphical representation of the inhibition values obtained as a function of each of the concentrations of compound tested.
  • a compound is active as an antelomerase agent when the amount inhibiting 50% of the telomerase reaction is notably less than 5 ⁇ M.
  • the cytotoxic biological activity on human tumor lines is determined according to the following experimental protocol:
  • the human cell lines KB and A549 originate from the ATCC (Americam Type Culture Collection, Rockville USA).
  • the A549 cells are cultured in a layer in a culture flask in RPMI 1640 medium, L-Glutamine at 2 mM, Penicillin 200 U / ml, streptomycin 200 ⁇ g / ml and supplemented with 10% fetal calf serum inactivated by heat.
  • KB cells are cultured in a layer in a culture flask in Dulbelco's medium containing, 2 mM L-Glutamine, Penicillin 200 U / ml, streptomycin 200 ⁇ g / ml and added with 10% fetal calf serum inactivated by heat.
  • the cells in the exponential growth phase are trypsinized, washed in PBS IX and are seeded in 96-well microplates (Costar) at the rate of 4x10 4 cells / ml for A549 and 1.5 ⁇ 10 4 cells / ml (0.2 ml / well) then incubated for 96 hours in the presence of variable concentrations of product to be studied (10, 1, 0.1 and 0.01 ⁇ g / ml, each point in quadruplicate). 16 hours before the end of the incubation, 0.02% final neutral red is added to each well. At the end of the incubation, the cells are washed with PBS IX and lysed with 1% sodium lauryl sulfate. The cellular incorporation of the dye, which reflects cell growth, is evaluated by spectrophotometry at a wavelength of 540 nm for each sample using a Dynatech MR5000 reading device.
  • the concentration of compound inducing a 50% inhibition of growth is determined using a semi logarithmic graphical representation of the inhibition values obtained as a function of each of the concentrations of compound tested.
  • a compound is considered to be active as a cytotoxic agent if the inhibitory concentration of 50% of the growth of the tumor cells tested is notably less than 10 ⁇ M.
  • the following nonlimiting examples are given to illustrate the invention.
  • N6- (6-amino-4-methylsulfanyl- [1,3,5] triazin-2-yl are introduced into a 12 ml quartz microwave reactor, of the Synthewave 402 Prolabo type. ) - 2-methylquinoline-4,6-diamine and 27 ⁇ l (0.27 mmol) of 2-dimethylaminoethanol.
  • the mixture is heated for 2 hours under microwave irradiation at a temperature in the region of 80 ° C. After cooling, the contents of the tube are taken up in methanol and evaporated under reduced pressure. The residue is crystallized from toluene.
  • N6- (6-amino-4-methylsulfanyl- [1,3,5] triazin-2-yl are introduced into a 12 ml quartz microwave reactor, of the Synthewave 402 Prolabo type. ) - 2-methylquinoline-4,6-diamine, prepared as in Example 1, and 35 ⁇ l (0.3 mmol) of 3-dimethylaminopropanol.
  • the mixture is heated for 5 minutes under microwave irradiation at a temperature in the region of 125 ° C. After cooling, the contents of the tube is taken up in methanol and evaporated under reduced pressure. The residue is crystallized from toluene.
  • N6- (6-amino-4-methylsulfanyl- [1,3,5] triazin-2-yl are introduced into a 12 ml quartz microwave reactor, of the Synthewave 402 Prolabo type.
  • 2-methylquinoline-4,6-diamine prepared as in Example 1, 35 mg (0.3 mmol) of 4-hydroxy-1-methylpiperidine and 0.5 g of alumina.
  • the mixture is heated for 10 minutes under microwave irradiation at a temperature in the region of 148 ° C. After cooling, the contents of the tube are taken up in methanol and evaporated under reduced pressure. The residue is crystallized from toluene.

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Abstract

La présente invention est relative à la thérapie du cancer et concerne de nouveaux agents anticancéreux ayant un mécanisme d'action bien particulier. Elle concerne aussi de nouveaux composés chimiques ainsi que leur application thérapeutique chez l'homme.

Description

DERIVES CHIMIQUES ET LEUR APPLICATION COMME AGENT
ANTITELOMERASE
La présente invention est relative à la thérapie du cancer et concerne de nouveaux agents anticancéreux ayant un mécanisme d'action bien particulier. Elle concerne aussi de nouveaux composés chimiques ainsi que leur application thérapeutique chez l'homme.
La présente invention concerne l'utilisation de nouveaux composés chimiques non nucléotidiques qui interagissent avec des structures spécifiques de l'acide désoxyribonucléique (ADN) ou de l'acide ribonucléique (ARN). Ces nouveaux composés sont constitués d'un agent répartiteur lié à un groupe aminoaromatique. Ces nouveaux composés sont utiles dans le traitement des cancers et agissent en particulier en tant qu'agents inhibiteurs de la télomérase. Ils sont particulièrement utiles pour stabiliser l'ADN en structure G-quadruplexe (tétrades de guanines). L'application thérapeutique de l'inhibition de la télomérase via la stabilisation de ces G-quadruplexes est l'arrêt de la mitose cellulaire et la mort des cellules à division rapide telles que les cellules cancéreuses et éventuellement l'induction de la sénescence des cellules cancéreuses.
Les composés de la présente invention présentent l'avantage du point de vue thérapeutique de bloquer la télomérase. Du point de vue biologique, la télomérase permet l'ajout de séquences d'ADN répétées du type T T A G G G, dites séquences télomériques, à l'extrémité du télomère, lors de la division cellulaire. Par cette action la télomérase rend la cellule immortelle. En effet, en l'absence de cette activité enzymatique, la cellule perd à chaque division 100 à 150 bases, ce qui la rend rapidement senescente. Lors de l'apparition de cellules cancéreuses à division rapide, il est apparu que ces cellules présentaient des télomères maintenus à une longueur stable au cours de la division cellulaire. Dans ces cellules cancéreuses il est apparu que la télomérase était fortement activée et qu'elle permettait l'addition de motifs répétés de séquences télomériques à la fin du télomère et permettait donc la conservation de la longueur du télomère dans les cellules cancéreuses. Il est apparu depuis quelques temps que plus de 85 % des cellules cancéreuses présentaient des tests positifs à la présence de télomérase alors que les cellules somatiques ne présentent pas cette caractéristique. Ainsi la télomérase est une cible très convoitée pour traiter les cellules cancéreuses. La première approche évidente pour bloquer la télomérase a été l'utilisation de structures nucléotidiques (Chen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93(7), 2635-2639). Parmi les composés non nucléotidiques qui ont été utilisées dans l'art antérieur on peut citer les diaminoanthraquinones (Sun et al. J. Med. Chem. 40(14), 2113-6) ou les diethyloxadicarbocyanines (Wheelhouse R. T. Et al. J. Am. Chem. Soc. 1998(120) 3261-2).
Le brevet WO 99/40087 décrit l'utilisation de composés qui interagissent avec les structures G-quadruplexes qui sont des composés pérylènes et des carbocyanines contenant au moins sept cycles dont deux hétérocycles.
Il est apparu de façon tout-à-fait surprenante que des structures simples permettaient d'obtenir un résultat au moins équivalent avec des structures beaucoup moins compliquées du point de vue chimique. Les composés de la présente invention qui répondent à l'objectif visé c'est-à-dire qui fixent la structure G-quadruplex d'ADN ou d'ARN et notamment la structure G-quadruplex des télomères par ce fait présentent une activité inhibitrice des télomérases et répondent à la formule générale suivante : cycle aromatique azoté -NR3- répartiteur -O- ou -S- chaîne hydrocarbonée non aromatique ou cycle aromatique azoté dans laquelle
• le cycle aromatique azoté, représente : o une quinoléine éventuellement substituée par au moins un groupe N(Ra)(Rb) dans lequel Ra et Rb, identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4 ou bien par un groupe ORa dans lequel Ra est défini comme précédemment o une quinoléine possédant un atome d'azote sous forme quaternaire ou o une benzamidine ou o une pyridine • le répartiteur représente :
0 un groupe triazine éventuellement substitué par un radical alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un radical thio, oxy ou amino eux mêmes éventuellement substitués par une ou plusieurs chaînes alkyle à chaîne courte contenant 1 à 4 atomes de carbone ou encore un atome d'halogène ou
0 un groupe carbonyle ou 0 un groupe C(=NH)-NH-C(=NH) ou
0 un groupe alkylediyle contenant 3 à 7 atomes de carbone ou
0 un groupe diazine éventuellement substitué par les mêmes groupes que la triazine
• R3 représente l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4 ou un de ses sels.
On entend au sens de la formule ci-dessus par chaîne hydrocarbonée non aromatique une chaîne alkyle (C1-C4), alkényle (C2-C4), linéaire ou ramifiée, cycloalkyle (C3-C18), cycloalkényle (C3-C18), hétérocycloalkyle (C3-C18). Le groupe hétérocycloalkyle inclut éventuellement l'atome d'azote de radicaux amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino.
Il est évidemment entendu que la chaîne hydrocarbonée non aromatique peut être éventuellement substituée par un ou plusieurs atomes ou radicaux choisis parmi les atomes d'halogène, les radicaux hydroxy, aryle, hétéroaryle, alkyloxy, aryloxy, thio, alkylthio, arylthio, amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino, amidino, guanidino, alkylcarbonylamino, ou arylcarbonylamino, carboxyle, alkyloxycarbonyle ou aryloxycarbonyle, aminocarbonyle, alkylaminocarbonyle et/ou arylaminocarbonyle, dialkylaminocarbonyle, alkylcarbonyl ou arylcarbonyl, cyano et trifluorométhyle.
Les chaînes alkyle des substituants éventuels de la chaîne hydrocarbonée contiennent de préférence 1 à 4 atomes de carbone et les groupes aryles des substituants éventuels de la chaîne hydrocarbonée contiennent de préférence 5 à 18 atomes de carbone.
On préfère parmi l'ensemble des composés ci-dessus inclus utiliser ceux comportant comme répartiteur un groupe triazine ou diazine. Parmi les groupes diazines on préfère utiliser les pyrimidines ou les quinazolines. Parmi les chaînes hydrocarbonée on préfère les chaînes alkyle contenant 2 à 3 atomes de carbone, les chaînes hétérocycloalkyles ou cycloalkyles contenant 5 à 7 atomes de carbone et notamment 4 à 7 atomes de carbone.
Parmi les triazines on préfère les composés répondant aux formules (I) ci-dessous :
Figure imgf000005_0001
dans laquelle :
- A représente
• un groupe amino de formule NR1R2 dans lequel RI et R2 identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un groupe alkyle droit ou ramifié contenant 1 à 4 atomes de carbone ou
• un groupe OR1 ou SRI dans lequel RI a la même signification que précédemment ou
• un groupe alkyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou ou un groupe trifluorométhyle ou « un atome d'hydrogène ou
• un atome d'halogène choisi parmi le fluor, le chlore, le brome ou l'iode
- R3 représente l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4.
- Ar, et Ar2 identiques ou différents représentent : o une quinoléine éventuellement substituée par au moins un groupe N(Ra)(Rb) dans lequel Ra et Rb, identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4 ou bien par un groupe ORa dans lequel Ra est défini comme précédemment o une quinoléine possédant un atome d'azote sous forme quaternaire ou o une benzamidine ou o une pyridine attachée en position -4 ou fusionnée avec un groupe aryle ou hétéroaryle éventuellement substituée par un groupe alkyle en Cl -C4
- Alk représente une chaîne hydrocarbonée, éventuellement substituée, non aromatique, choisie parmi les chaîne alkyle (C1-C4), alkényle (C2-C4), linéaires ou ramifiées, cycloalkyle (C3-C18), cycloalkényle (C3-C18), hétérocycloalkyle (C3-
C18) incluant éventuellement l'atome d'azote de radicaux amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino ou un de ses sels. Dans les composés définis ci-dessus Alk représente notamment o un motif alkyle contenant 1 à 4 atomes de carbone linéaire ou ramifié éventuellement substitué par un radical amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino ou diarylamino o un motif alkényle contenant 2 à 4 atomes de carbone, linéaire ou ramifié éventuellement substitué par un radical amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino ou diarylamino o un motif cycloalkyle contenant de 3 à 18 atomes de carbone o un motif cycloalkényle contenant de 3 à 18 atomes de carbone
o un motif hétérocycloalkyle contenant de 3 à 18 atomes de carbone incluant éventuellement l'atome d'azote de radicaux amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino ou un de ses sels.
Dans les composés définis ci-dessus Alk représente tout particulièrement o un motif alkyle contenant 2 à 3 atomes de carbone linéaire ou ramifié substitué par un radical amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino ou diarylamino o un motif alkényle contenant 2 à 3 atomes de carbone, substitué par un radical amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino ou diarylamino o un motif hétérocycloalkyle contenant de 4 à 7 atomes de carbone incluant l'atome d'azote de radicaux amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino ou un de ses sels. Comme motif hétérocycloalkyle, on peut citer par exemple le radical pipéridyle.
Il est évident que les motifs quinoléines peuvent être substitués par tout autre groupe n'intervenant pas dans l'application visée, ainsi des groupes acridines ou isoquinoléines ou quinazolines ou quinoxalines ou phtalazines ou benzothiazines ou benzoxazines ou phénoxazines ou phénothiazines sont inclus dans la définition des groupes quinoléines.
On préfère parmi les composés de formule (I) ci-dessus ceux pour lesqels Arl et/ou Ar2 est choisi parmi les groupes 4-aminoquinolyl, 4-alkyl- ou 4- dialkylamino-quinolyl, 4-aminoquinolinium ou quinolinium dont le noyau quinolinium est éventuellement substitué par un groupe méthyle.
En ce qui concerne les groupes A, ils représentent de préférence le radical méthylthio, amino, alkylamino ou dialkylamino radicaux dans lesquels les groupes alkyle possèdent 1 à 4 atomes de carbone.
En ce qui concerne la chaîne hydrocarbonée non aromatique Alk, elle représente de préférence une chaîne 2-(dialkylamino)éthyl, 3-(dialkylamino)propyl, 2-(N-alkyl-N-arylamino)éthyl, 3-(N-alkyl-N-arylamino)propyl, Nalkylpipéridyle ou Narylpipéridyle dans lesquels les groupes alkyle contiennent de préférence 1 à 4 atomes de carbone, encore plus préférentiellement 1 à 2 atomes de carbone et les groupes aryle contiennent de préférence 5 à 18 atomes de carbone, encore plus préférentiellement 6 atomes de carbone.
Un autre objet de la présente invention concerne les composés de formule (I) en tant que produits chimiques nouveaux. Il concerne donc les produits nouveaux caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale suivante : cycle aromatique azoté -NR3- répartiteur -O- ou -S- chaîne hydrocarbonée non aromatique ou cycle aromatique azoté dans laquelle
• le cycle aromatique azoté représente : o une quinoléine éventuellement substituée par au moins un groupe N(Ra)(Rb) dans lequel Ra et Rb, identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4 ou bien par un groupe ORa dans lequel Ra est défini comme précédemment o une quinoléine possédant un atome d'azote sous forme quaternaire ou o une benzamidine ou o une pyridine
• R3 représente l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4 • le répartiteur représente :
0 un groupe triazine éventuellement substitué par un radical alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un radical thio, oxy ou amino eux même éventuellement substitués par un ou plusieurs chaînes alkyle à chaîne courte contenant 1 à 4 atomes de carbone ou un atome d'halogène ou
0 un groupe diazine éventuellement substitué par les mêmes groupes que la triazine
• la chaîne hydrocarbonée non aromatique est choisie parmi les chaînes alkyle (C1-C4), alkényle (C2-C4), linéaires ou ramifiées, cycloalkyle (C3-C18), cycloalkényle (C3-C18), hétérocycloalkyle (C3-C18) incluant éventuellement l'atome d'azote de radicaux amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino, ou un de ses sels,
La présente invention concerne plus particulièrement les produits nouveaux répondant à la formule (I) suivante :
Figure imgf000008_0001
dans laquelle : - A représente
• un groupe amino de formule NR1R2 dans lequel RI et R2 identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle droit ou ramifié contenant 1 à 4 atomes de carbone ou • un groupe OR1 ou SRI dans lequel RI représente l'hydrogène ou a la même signification que précédemment ou
• un groupe alkyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou un groupe trifluorométhyle ou
• un atome d'hydrogène ou • un atome d'halogène choisi parmi le fluor, le chlore, le brome ou l'iode
- R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4
- Ar, et Ar2 identiques ou différents représentent : o une quinoléine éventuellement substituée par au moins un groupe N(Ra)(Rb) dans lequel Ra et Rb, identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4 ou un groupe ORa dans lequel Ra est défini comme précédemment, o une quinoléine possédant un atome d'azote sous forme quaternaire ou o une benzamidine ou une pyridine attachée en position -4 ou fusionnée avec un groupe aryle ou hétéroaryle éventuellement substituée par un groupe alkyle en C1-C4-
- Alk représente une chaîne hydrocarbonée, éventuellement substituée, non aromatique, choisie parmi les chaîne alkyle (C1-C4), alkényle (C2-C4), linéaires ou ramifiées, cycloalkyle (C3-C18), cycloalkényle (C3-C18), hétérocycloalkyle (C3-C18) incluant éventuellement l'atome d'azote de radicaux amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino, ou un de ses sels. Dans les composés nouveaux ci-dessus, Alk peut prendre les valeurs déjà indiquées ci-dessus et notamment Alk représente o un motif alkyle contenant 2 à 3 atomes de carbone linéaire ou ramifié substitué par un radical amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, ou diarylamino o un motif alkényle contenant 2 à 3 atomes de carbone, substitué par un radical amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino ou diarylamino o un motif cycloalkyle ou hétérocycloalkyle contenant de 5 à 7 atomes de carbone incluant l'atome d'azote de radicaux amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino, ou un de ses sels.
Les composés de formule (I) qui sont préférés sont ceux pour lesquels Ar, représente un groupe choisi parmi les motifs suivants : 4-amino- ou 4-méthylamino- ou 4-diméthylamino-quinolyl ou quinolinium dont le noyau quinolinium est éventuellement substitué par un groupe méthyle. Les composés de formule générale (I) qui sont préférés sont ceux pour lesquels A représente un groupe amino ou diméthylamino ou plus préférentiellement méthylthio.
Les composés de formule générale (I) qui sont préférés sont ceux pour lesquels la chaîne hydrocarbonée non aromatique Alk est choisie parmi les chaînes alkyle contenant 2 à 3 atomes de carbone et les chaînes cycloalkyles ou hétérocycloalkyles contenant 5 à 7 atomes de carbone, ces chaînes portant elles- mêmes un radical amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino ou diarylamino, dans lesquels les groupes alkyle contiennent 1 à 4 atomes de carbone et les groupes aryle contiennent 5 à 18 atomes de carbone. Les composés de formule générale (I) qui sont particulièrement préférés sont ceux pour lesquels la chaîne hydrocarbonée non aromatique Alk représente une chaîne 2-(dialkylamino)éthyl, 3-(dialkylamino)propyl, 2-(N-alkyl-N-arylamino)éthyl, 3-(N-alkyl-N-arylamino)propyl, Nalkylpipéridyle ou Narylpipéridyle dans lesquels les groupes alkyle contiennent 1 à 4 atomes de carbone, notamment 1 à 2 atomes de carbone et les groupes aryle contiennent 5 à 18 atomes de carbone, notamment 6 atomes de carbone.
L'invention concerne tout particulièrement les composés suivants : N6-[6-(2-diméthylamino-éthoxy)-4-méthylsulfanyl-[ 1 ,3,5]triazin-2-yl]-2- méthyl-quinoline-4,6-diamine
N6-[6-(3-diméthylamino-propoxy)-4-méthylsulfanyl-[l,3,5]triazin-2-yl]-2- méthyl-quinoline-4,6-diamine - N6-[6-(l -méthyl-piperidin-4-yloxy)-4-méthylsulfanyl-[ 1 ,3,5]triazin-2-yl]-2- méthyl-quinoline-4,6-diamine
N6-[6-(2-diméthylamino-éthylsulfanyl)-4-méthylsulfanyl-[l,3,5]triazin-2-yl]-2- méthyl-quinoline-4,6-diamine
Un autre objet de la présente invention concerne l'utilisation des composés de la formule (I) comme produit pharmaceutique à usage humain.
Les procédés de préparation des composés de formule (I)
Figure imgf000011_0001
sont décrits ci-après.
Dans le cas où Ar, et Alk sont présents, la triazine de formule générale (A) peut être obtenue par déplacement séquentiel des atomes d'halogène, très généralement des atomes de chlore, des produits de formule générale (B) par les aminés Ar,NHR3 de formule générale (C) puis par des alcools ou des phénols ou des thiols ou des thoiphénols de formule générale(E) ou (E') ou inversement réaction de (B) avec (E) ou (E') puis de l'intermédiaire obtenu avec (C) selon le schéma 1 :
Figure imgf000012_0001
X = = Cl (ou F ou Br ou 1)
(B) (C) (D)
Alk — O(S)H
Ar2- — 0(S)H (E)
Figure imgf000012_0002
(A)
(A)
Schéma 1
Dans les composés (B), (D) et (A) du schéma 1, R représente les valeurs de A telles que définies ci-dessus dans les composés de formule (I) : si nécessaire, les fonctions éventuellement réactives de A peuvent être éventuellement protégées selon les méthodes usuelles connues de l'homme du métier.
Ar,, Ar2, Alk et R3 ont les significations indiquées ci-dessus pour les composés de formule (I).
Généralement, pour préparer l'intermédiaire D, on opère avec 1 mole de dihalogéno- s-triazine, ou trihalogéno-s-triazine, et 1 mole d'aminé Ar,. On préfère opérer dans un solvant inerte tel que l'acétone éventuellement aqueux ou un alcool éventuellement aqueux, comme l'éthanol, ou un solvant halogène, tel que le dichlorométhane, ou un éther tel que l'oxyde de diéthyle ou le dioxane, ou un solvant aprotique polaire tel que le DMF le DMSO ou la NMP. Selon une meilleure manière de mettre en oeuvre l'invention on opère à une température comprise entre 20°C et 50°C.
Le produit de formule générale (D) est avantageusement isolé et purifié.
Ensuite on ajoute 1 mole d'alcool Alk-OH ou de thiol Alk-SH ou de phénol Ar2-OH ou de thiophénol Ar2-SH au produit de formule générale (D), qui peut être éventuellement isolé. On opère notamment à une température comprise entre 50°C et le reflux à sec ou dans solvant comme un éther tel que le dioxane, ou un solvant aprotique polaire tel que le DMF le DMSO ou la NMP. Avantageusement, on peut opérer en faisant réagir les alcoolates Alk-ONa ou les thiolates Alk-SNa ou les phénates Ar2-ONa ou les thiophénates Ar2-SNa correspondants, préparés préalablement ou extemporanément par action de sodium ou d'hydrure de sodium sur les alcools ou les thiols ou par action d'hydrure ou d'hydroxyde de sodium sur les phénols ou les thiophénols dans le solvant utilisé pour la réaction avec le produit de formule générale (D). Il a été trouvé particulièrement avantageux d'opérer en chauffant le mélange constitué d'une mole du produit de formule générale (D) avec 1 mole d'alcool Alk-OH ou de thiol Alk-SH ou de phénol Ar2-OH ou de thiophénol Ar2-SH, sans solvant, par irradiation microonde. On opère de préférence à une température comprise 80 et 150°C.
La présente invention a ainsi également pour objet un procédé de préparation des composés de formule (I) selon le schéma 1 caractérisé en ce que le produit de formule générale (D) telle que définie ci-dessus dans laquelle X représente un atome d'halogène et R, R3 et Arl ont les significations indiquées ci-dessus, est mis en réaction avec l'alcool Alk-OH ou le thiol Alk-SH ou le phénol Ar2-OH ou le thiophénol Ar2-SH sans solvant par irradiation microonde.
La présente invention a plus précisément pour objet un tel procédé caractérisé en ce que l'on opère à une température comprise 80 et 150°C.
Méthode générale 2
Selon une seconde méthode les produits de formule générale (A) dans lesquels Ar sont définis tels que précédemment et R représente un groupe NR1R2 ou
OR1 ou SRI peuvent être également préparés par déplacement nucléophile d'un atome d'halogène, généralement un atome de chlore, d'un produit de formule générale (A) dans lequel R représente un atome d'halogène selon le schéma 2 :
Figure imgf000013_0001
(A) (A)
R = Cl (ou F ou Br ou I) R= NR,R2 ou OR, ou SR1
Schéma 2 On opère généralement en condensant 1 mole de produit de formule générale (A) dans lequel R représente un atome d'halogène, préférentiellement un atome de chlore, avec 1 mole d'aminé R1R2NH ou d'alcoolate RIO" ou de thioalcoolate RIS. La réaction a lieu en milieu inerte dans les conditions de la réaction. On peut citer parmi les solvants inertes l'acétone éventuellement aqueux ou un alcool éventuellement aqueux comme l'éthanol ou un solvant halogène tel que le dichlorométhane, ou un éther tel que l'oxyde de diéthyle ou le dioxane, ou un solvant aprotique polaire tel que le DMF le DMSO ou la NMP. Lorsque le groupe entrant représente un groupe R1R2NH, on opère de préférence à une température comprise entre 20°C et le reflux, en présence notamment d'une base organique, telle que la triéthylamine, ou minérale, telle que la soude ou le carbonate de sodium ou de potassium. Il est également possible de ne pas utiliser de base lors de la réaction d'amination, et d'isoler un chlorhydrate du produit de formule générale (A), dont la base peut ensuite être libérée. Lorsque le groupe entrant représente un groupe RIO" ou RIS" on opère préférentiellement avec un alcoolate ou un thioalcoolate alcalin ou alcalinoterreux, tel qu'un sel de sodium ou de potassium ou de lithium ou d'ammonium ou de césium ou de baryum, dans un solvant aprotique polaire tel que le DMF ou le DMSO ou la NMP, à une température comprise entre 50°C et le reflux.
Méthode générale 3 II est entendu que les s-triazines de formule générale peuvent être obtenues sous forme de librairies, en appliquant les méthodes décrites dans les schémas 1 ou 2 en chimie parallèle et/ou combinatoire en phase liquide ou en phase solide, étant entendu que, lorsqu'on travaille en phase solide, l'un quelconque des réactifs est préalablement fixé sur un support solide, choisi en fonction de la réaction chimique mise en jeu, et que ladite réaction chimique est suivie d'une opération de clivage du produit de la réaction du support solide.
La présente invention concerne aussi les compositions thérapeutiques contenant un composé selon l'invention, en association avec un support pharmaceutiquement acceptable selon le mode d'administration choisi. La composition pharmaceutique peut se présenter sous forme solide, liquide ou de liposomes.
Parmi les compositions solides on peut citer les poudres, les gélules, les comprimés. Parmi les formes orales on peut aussi inclure les formes solides protégées vis-à-vis du milieu acide de l'estomac. Les supports utilisés pour les formes solides sont constitués notamment de supports minéraux comme les phosphates, les carbonates ou de supports organiques comme le lactose, les celluloses, l'amidon ou les polymères. Les formes liquides sont constituées de solutions de suspensions ou de dispersions. Elles contiennent comme support dispersif soit l'eau, soit un solvant organique (éthanol, NMP ou autres) ou de mélanges d'agents tensioactifs et de solvants ou d'agents complexants et de solvants.
La dose administrée des composés de l'invention sera adaptée par le praticien en fonction de la voie d'administration du patient et de l'état de ce dernier.
Les composés de la présente invention peuvent être administrés seuls ou en mélange avec d'autres anticancéreux. Parmi les associations possibles on peut citer
• les agents alkylants et notamment le cyclophosphamide, le melphalan, Pifosfamide, le chlorambucil, le busulfan, le thiotepa, la prednimustine, la carmustine, la lomustine, la semustine, la steptozotocine, la decarbazine, la témozolomide, la procarbazine et l'hexamethylmélamine « les dérivés du platine comme notamment le cisp latine, le carboplatine ou Poxaliplatine
• les agents antibiotiques comme notamment la bléomycine, la mitomycine, la dactinomycine,
• les agents antimicrotubules comme notamment la vinblastine, la vincristine, la vindésine, la vinorelbine, les taxoides (paclitaxel et docétaxel)
• les anthracyclines comme notamment la doxorubicine, la daunorubicine, Pidarubicine, l'épirubicine, la mitoxantrone, la losoxantrone
• les topoisomérases des groupes I et II telles.que l'étoposide, le teniposide, l'amsacrine, l'irinotecan, le topotecan et le tomudex,
• les fluoropyrimidines telles que le 5-fluorouracile, l'UFT, la floxuridine,
• les analogues de cytidine telles que la 5-azacytidine, la cytarabine, la gemcitabine, la 6-mercaptomurine, la 6-thioguanine • les analogues d'adénosine telles que la pentostatine, la cytarabine ou le phosphate de fludarabine • le methotrexate et l'acide folinique
• les enzymes et composés divers tels que la L-asparaginase, l'hydroxyurée, l'acide trans-rétinoique, la suramine, la dexrazoxane, l'amifostine, l'herceptin ainsi que les hormones oetrogéniques, androgéniques.
Il est également possible d'associer aux composés de la présente invention un traitement par les radiations. Ces traitements peuvent être administrés simultanément, séparément, séquentiellement. Le traitement sera adapté au malade à traiter par le praticien. L'activité de stabilisation des G-quadruplexes peut être déterminée par une méthode utilisant la formation d'un complexe avec la fluoresceine dont le protocole expérimental est décrit ci-après.
Oligonucléotides
Tous les olignucléotides, modifiés ou non, ont été synthétisés par Eurogentec SA, Seraing, Belgique. L'oligoncléotide FAM + DABCYL porte la référence catalogue, OL-0371-0802. Il possède la séquence:
GGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG correspondant à 3.5 répétitions du motif télomérique humain (brin riche en G). La fluoresceine est attaché à l'extrémité 5', le DABCYL à l'extrémité 3', par les bras chimiques décrit par Eurogentec. La concentration des échantillons est vérifiée par spectrophotométrie, en enregistrant le spectre d'absorbance entre 220 et 700 nm et en utilisant le coefficient d'extinction molaire fourni par le fournisseur.
Tampons
Toutes les expériences ont été réalisées dans un tampon cacodylate de sodium 10 mM pH 7.6 contenant 0.1 M de Chlorure de Lithium (ou de Chlorure de Sodium). L'absence de contamination fluorescente dans le tampon a été préalablement vérifiée. L'oligonucléotide fluorescent est ajouté à la concentration finale de 0.2 μM.
Etude de Fluorescence
Toutes les mesures de fluorescence ont été effectuées sur un appareil Spex Fluorolog DMIB, en utilisant une largeur de raie d'excitation de 1.8 nm et une largeur de raie d'émission de 4.5 nm. Les échantillons sont placés dans une cuvette en quartz micro de 0.2 x 1 cm. La température de l'échantillon est contrôlée par un bain-marie extérieur. L'oligonucléotide seul a été analysé à 20, 30, 40, 50, 60, 70 et 80°C. Les spectres d'émission sont enregistrés en utilisant une longueur d'onde d'excitation de 470 nm. Les spectres d'excitation sont enregistrés en utilisant soit 515 nm soit 588 nm comme longueur d'onde d'émission. Les spectres sont corrigés de la réponse de l'instrument par des courbes de référence. Une extinction importante (80-90 %) de la fluorescence de la fluoresceine à température ambiante est observée, en accord avec un repli intramoléculaire de l'oligonucléotide à 20°C sous forme d'un G-quadruplex, ce qui induit une juxtaposition de ses extrémités 5' et 3', respectivement liées à la fluoresceine et au DABCYL. Cette juxtaposition entraîne un phénomène déjà décrit d'extinction de fluorescence, utilisé pour les "Molecular Beacons".
Tm en fluorescence :
Une solution stock d'oligonucléotide à la concentration en brin de 0.2 μM dans un tampon 0.1 M LiCl 10 mM cacodylate pH 7.6 est préalablement préparée, chauffée brièvement à 90°C et refroidie lentement à 20°C, puis distribuée par aliquots de 600 μl dans les cuves de fluorescence. 3 μl d'eau (pour le contrôle) ou 3 μl du produit à tester (stock à 200 μM, concentration finale 1 μM) sont alors ajoutés et mélangés. Les échantillons sont alors laissés à incuber pendant au moins 1 heure à 20°C avant chaque mesure. L'utilisation de temps d'incubation plus longs (jusqu'à 24 heures) n'a pas d'influence sur le résultat obtenu.
Chaque expérience ne permet que la mesure d'un seul échantillon. Celui-ci est d'abord incubé à une température initiale de 20°C, porté à 80°C en 38 minutes, laissé 5 minutes à 80°C, puis refroidi à 20°C en 62 minutes. Durant ce temps, la fluorescence est mesurée simultanément à deux longueurs d'onde d'émission (515 nm et 588 nm) en utilisant 470 nm comme longueur d'onde d'excitation. Une mesure est effectuée toutes les 30 secondes. La température du bain-marie est enregistrée en parallèle, et le profil de fluorescence en fonction de la température est reconstitué à partir de ces valeurs. Les profils de fluorescence sont ensuite normalisés entre 20°C et 80°C, et la température pour laquelle l'intensité d'émission à 515 nm est la moyenne de celles à haute et basse température est appelée Tm. Dans ces conditions, le Tm de l'échantillon de référence sans addition de produit est de 44°C dans un tampon Chlorure de Lithium. Cette température est portée à plus de 55°C dans un tampon Chlorure de Sodium. L'addition d'un composé stabilisant le G-quadruplex induit une augmentation du Tm. Cette augmentation est jugée significative si elle est supérieure à 3°.
L'activité biologique antitélomérase est déterminée par le protocole expérimental suivant : Préparation de l'extrait enrichi en activité télomérase humaine
La lignée de leucémie HL60 est obtenue auprès de l'ATCC (Américain Type
Culture Collection, Rockville USA). Les cellules sont cultivées en suspension dans du milieu RPMI 1640 contenant, L-Glutamine à 2 mM, Pénicilline 200 U/ml, streptomycine 200 μg/ml, gentamycine 50 μg/ml et additionné de 10 % de sérum foetal de veau inactivé par la chaleur.
Une aliquote de 105 cellules est centrifugée à 3000xG et le surnageant écarté. Le culot de cellules est resuspendu par plusieurs pipettages successifs dans 200 μl de tampon de lyse contenant CHAPS 0.5 %, Tris-HCl pH 7,5 10 mM, MgCl2 ImM, EGTA 1 mM, β-mercaptoethanol 5 mM, PMSF 0.1 mM et glycérol 10 % et est conservé dans la glace pendant 30 minutes. Le lysat est centrifugé à 16 OOOOxG pendant 20 minutes à 4°C et 160 μl du surnageant est récupéré. Le dosage des protéines de l'extrait est effectué par la méthode de Bradford. L'extrait est conservé à -80°C.
Dosage de l'activité télomérase L'inhibition de l'activité télomérase est déterminée par un protocole d'extension de l'oligonucléotide TS (5 AATCGTTCGAGCAGAGTT3'), en présence d'un extrait cellulaire enrichi en activité télomérase et des composés qui sont ajoutés à différentes concentrations (10, 1, 0.1 et 0,01 μg/ml). La réaction d'extension est suivie d'une amplification PCR des produits d'extension à l'aide des oligonucléotides TS et CXext GTGCCCTTACCCTTACCCTTACCCTAA3').
Le milieu réactionnel est préparé selon la composition suivante : Tris HC1 pH 8,3 20 mM
MgCl2 1,5 mM
Tween 20 0,005 % (P/V) EGTA 1 mM dATP 50 μM dGTP 50 μM dCTP 50 μM dTTP 50 μM
Oligonucléotide TS 2 μg/ml
Oligonucléotide CXext 2 μg/ml
Sérum Albumine bovine 0,1 mg/ml
Taq DNA polymérase l U/ml alpha 32P dCTP (3000 Ci/mmole) 0.5 μl
Extrait télomérase 200 ng sous un volume de 10 μl Produit à tester ou solvant sous un volume de 5 μl
Eau bi-distillée QS 50 μl
Les oligonucléotides sont obtenus auprès d' Eurogentec (Belgique) et sont conservés à -20°C à une concentration stock de 1 mg/ml dans de l'eau distillée.
Les échantillons réactionnels sont assemblés dans des tubes à PCR de 0.2 ml et une goutte d'huile de paraffine est déposée sur chacune des réactions de l'expérience avant la fermeture des tubes.
Les échantillons réactionnels sont ensuite incubés dans un appareil à PCR de type Cetus 4800 selon les conditions de températures suivantes :
15 minutes à 30°C, 1 minute à 90°C, suivis de 30 cycles de,
30 secondes à 94°C,
30 secondes à 50°C, et 1 minute 30 secondes à 72°C, suivis d'un cycle final de 2 minutes à 72°C.
Pour chacun des échantillons, une aliquote de 10 μl est pipettée sous la couche d'huile et mélangée avec 5 μl d'un tampon de dépôt contenant : TBE 3X glycérol 32 % (P/V)
Bleu de bromophénol 0.03 %
Xylène cyanol 0.03 % Les échantillons sont ensuite analysés par électrophorèse en gel d'acrylamide
12 % dans un tampon TBE IX pendant 1 heure sous une tension de 200 volts, à l'aide d'un système d' électrophorèse Novex.
Les gels d'acrylamides sont ensuite séchés sur une feuille de papier whatmann 3MM à 80°C pendant 1 heure. L'analyse et la quantification des produits de la réaction sont effectuées à l'aide d'un appareil Instantlmager (Pacard).
Pour chaque concentration de composé testée, les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition de la réaction et calculés à partir du contrôle enzymatique non traité et de l'échantillon sans enzyme (blanc) selon la formule suivante : (Valeur Composé - valeur blanc/ Valeur contrôle enzymatique - valeur blanc) x 100.
La concentration de composé induisant une inhibition de 50 % de la réaction télomérase (IC50) est déterminée à l'aide d'une représentation graphique semi logarithmique des valeurs d'inhibition obtenues en fonction de chacune des concentrations de composé testée.
On considère qu'un composé est actif en tant qu'agent antitélomérase lorsque la quantité inhibant 50 % de la réaction télomérase est notamment inférieure à 5 μM.
L'activité biologique cytotoxique sur des lignées de tumeur humaines est déterminée selon le protocole expérimental suivant :
Les lignées de cellules humaines KB et A549 sont originaires de l'ATCC (Americam Type Culture Collection, Rockville USA). Les cellules A549 sont cultivées en couche en flacon de culture dans du milieu RPMI 1640, L-Glutamine à 2 mM, Pénicilline 200 U/ml, streptomycine 200 μg/ml et additionné de 10 % de sérum fœtal de veau inactivé par la chaleur. Les cellules KB sont cultivées en couche en flacon de culture dans du milieu de Dulbelco's contenant, L-Glutamine à 2 mM, Pénicilline 200 U/ml, streptomycine 200 μg/ml et additionné de 10 % de sérum fœtal de veau inactivé par la chaleur.
Les cellules en phase exponentielles de croissances sont trypsinées, lavées dans du PBS IX et sont ensemencées en microplaques 96 puits (Costar) à raison de 4x104 cellules/ml pour A549 et de l,5xl04 cellules/ml (0.2 ml/puit) puis incubées pendant 96 heures en présence de concentrations variables de produit à étudier (10, 1, 0.1 et 0.01 μg/ml, chaque point en quadruplicata). 16 heures avant la fin de l'incubation, 0.02 % final de rouge neutre est ajouté dans chaque puits. A la fin de l'incubation, les cellules sont lavées par du PBS IX et lysées par 1 % de lauryl sulfate de sodium. L'incorporation cellulaire du colorant, qui reflète la croissance cellulaire, est évaluée par spectrophotométrie à une longueur d'onde de 540 nm pour chaque échantillon à l'aide d'un appareil de lecture Dynatech MR5000.
Pour chaque concentration de composé testé, les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition de croissance cellulaire et calculés à partir du contrôle non traité et du milieu de culture sans cellules (blanc) selon la formule suivante :
(Valeur Composé - valeur blanc/ Valeur contrôle cellules - valeur blanc) x lOO.
La concentration de composé induisant une inhibition de 50 % de la croissance (IC50) est déterminée à l'aide d'une représentation graphique semi logarithmique des valeurs d'inhibition obtenues en fonction de chacune des concentrations de composé testée.
On considère qu'un composé est actif comme agent cytotoxique si la concentration inhibitrice de 50 % de la croissance des cellules tumorales testées est notamment inférieure à 10 μM. Les exemples suivants et non limitatifs sont donnés pour illustrer l'invention.
Exemple 1 : Synthèse de N6-[6-(2-diméthylamino-éthoxy)-4-méthylsulfanyl- [l,3,5]triazin-2-yl]-2-méthyl-quinoline-4,6-diamine
Préparation de la N6-(6-chloro-4-méthylsulfanyl- l,3,51triazin-2-yl)-2-méthyl- quinoline-4,6-diamine
Dans un tricol de 1 litre, à une solution de 5 g (25 mmoles) de 2,6-dichloro-6- méthylsulfanyl-[l,3,5]triazine, qui peut être préparée selon J. Amer. Chem. Soc, 1945, 67, 662, dans 400 ml de tétrahydrofurane, on ajoute successivement 4,4 g (25 mmoles) de 2-méthyl-quinoline-4,6-diamine, qui peut être préparée selon J. Med. Chem. 1992, 35, 252, et 2,8 g (25 mmoles) de carbonate de sodium. Le mélange réactionnel est chauffé à reflux pendant 16 heures. Après évaporation du tétrahydrofurane, le résidu est repris par 400 ml d'un mélange d'eau et de dichorométhane (50-50 en volumes). La phase organique est décantée, séchée sur sulfate de sodium et concentrée à sec sous pression réduite. On obtient alors 7,5 g (88 %) de N6-(6-chloro-4-méthylsulfanyl-triazin-2-yl)-2-méthyl-quinoline-4,6- diamine, sous forme d'un solide jaune pâle dont les caractéristiques sont les suivantes :
- point de fusion = 294°C
- spectre de RMN Η (300 MHz, (CD3)2SO d6, δ en ppm) : 2,43 (s : 3H) ; 2,52 (s : 3H) ; 6,47 (s : 1H) ; 6,61 (mf : 2H) ; 7,62 (d large, J = 9 Hz : 1H) ; 7,69 (d, J = 9 Hz : 1H) ; 8,32 (mf : 1H) ; 10,80 (mf : 1H).
Préparation de la N6-r6-(2-diméthylamino-éthyloxy)-4-méthyl-sulfanyl-ri,3,5]triazin- 2-yll-2-méthyl-quinoline-4,6-diamine (exemple 1)
Dans un réacteur micro-onde en quartz de 12 ml, de type Synthewave 402 Prolabo, on introduit 25 mg (0,075 mmole) de N6-(6-amino-4-méthylsulfanyl-[l,3,5]triazin-2-yl)- 2-méthylquinoline-4,6-diamine et 27 μl (0,27 mmole) de 2-diméthylaminoéthanol. On chauffe pendant 2 heures sous irradiation micro-onde à une température voisine de 80°C. Après refroidissement, le contenu du tube est repris au méthanol et évaporé sous pression réduite. Le résidu est cristallisé dans le toluène. On obtient ainsi 26 mg (rdt 90 %) de N6-[6-(2-diméthylamino-éthyloxy)-4-méthyl-sulfanyl-[l,3,5]triazin-2- yl]-2-méthyl-quinoline-4,6-diamine, sous forme d'une poudre jaune abricot dont la caractéristique est la suivante :
- spectre de masse (EI/DCI) = 385 (MH+)
Exemple 2 : Synthèse de N6-[6-(3-diméthylamino-propoxy)-4-méthylsulfanyl- [l,3,5]triazin-2-yl]-2-méthyl-quinoline-4,6-diamine
Dans un réacteur micro-onde en quartz de 12 ml, de type Synthewave 402 Prolabo, on introduit 25 mg (0,075 mmole) de N6-(6-amino-4-méthylsulfanyl-[l,3,5]triazin-2-yl)- 2-méthylquinoline-4,6-diamine, préparé comme à l'exemple 1, et 35 μl (0,3 mmole) de 3-diméthylaminopropanol. On chauffe pendant 5 minutes sous irradiation microonde à une température voisine de 125°C. Après refroidissement, le contenu du tube est repris au méthanol et évaporé sous pression réduite. Le résidu est cristallisé dans le toluène. On obtient ainsi 25 mg (rdt 83 %) de N6-[6-(2-diméthylamino-éthyloxy)- 4-méthyl-sulfanyl-[l,3,5]triazin-2-yl]-2-méthyl-quinoline-4,6-diamine, sous forme d'une poudre jaune abricot dont les caractéristiques sont les suivantes : - spectre de masse (EI/DCI) = 399 (MH+)
Exemple 3 : Synthèse de N6-[6-(l-méthyl-piperidin-4-yloxy)-4-méthylsulfanyl- [l,3,5]triazin-2-yl]-2-méthyl-qumoline-4,6-diamine
Dans un réacteur micro-onde en quartz de 12 ml, de type Synthewave 402 Prolabo, on introduit 25 mg (0,075 mmole) de N6-(6-amino-4-méthylsulfanyl-[l,3,5]triazin-2-yl)- 2-méthylquinoline-4,6-diamine, préparé comme à l'exemple 1, 35 mg (0,3 mmole) de 4-hydroxy-l-méthylpipéridine et 0,5 g d'alumine. On chauffe pendant 10 minutes sous irradiation micro-onde à une température voisine de 148°C. Après refroidissement, le contenu du tube est repris au méthanol et évaporé sous pression réduite. Le résidu est cristallisé dans le toluène. On obtient ainsi 22 mg (rdt 71 %) de N6-[6-(l-méthyl-pipéridin-4-yloxy)-4-méthyl-sulfanyl-[l,3,5]triazin-2-yl]-2-méthyl- quinoline-4,6-diamine, sous forme d'une poudre jaune pâle dont les caractéristiques sont les suivantes :
- spectre de masse (EI/DCI) = 411 (MPT)
Exemple 4 : Synthèse de N6-[6-(2-diméthylamino-éthylsulfanyl)-4-méthylsulfanyl- [ 1 ,3,5]triazin-2-yl]-2-méthyl-quinoline-4,6-diamine
Dans un tricol de 10 ml, on introduit successivement 2,5 ml de dioxane 50 μl (0,31 mmole) de chlorhydrate de 2-méthylaminoéthanethiol, 50 μl d'une solution 10 N d'hydroxyde de sodium et 25 mg (0,075 mmole) de N6-(6-amino-4- méthylsulfanyl-[l,3,5]triazin-2-yl)-2-méthylquinoline-4,6-diamine, préparé comme à l'exemple 1. On chauffe pendant 16 heures au reflux. Après refroidissement, le précipité formé est essoré et cristallisé dans l'oxyde de diéthyle. On obtient ainsi 17 mg (rdt 57 %) de N6-[6-(2-diméthylamino-éthylsulfanyl)-4-méthylsulfanyl- [l,3,5]triazin-2-yl]-2-méthyl-quinoline-4,6-diamine, sous forme d'une poudre beige dont les caractéristiques sont les suivantes : - spectre de masse (EI/DCI) = 401 (Mît) Tableau de résultats biologiques
Figure imgf000024_0001

Claims

REVENDICATIONS
1 - Composés fixant la structure G-quadruplex d'ADN ou d'ARN caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale suivante : cycle aromatique azoté -NR3- répartiteur -O ou S- chaîne hydrocarbonée non aromatique ou cycle aromatique azoté dans laquelle
• le cycle aromatique azoté, représente : o une quinoléine éventuellement substituée par au moins un groupe N(Ra)(Rb) dans lequel Ra et Rb, identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4 ou bien par un groupe ORa dans lequel Ra est défini comme précédemment o une quinoléine possédant un atome d'azote sous forme quaternaire ou o une benzamidine ou o une pyridine
• R3 représente l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4
• le répartiteur représente :
0 un groupe triazine éventuellement substitué par un radical alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un radical thio, oxy ou amino eux même éventuellement substitués par un ou plusieurs chaînes alkyle à chaîne courte contenant 1 à 4 atomes de carbone ou un atome d'halogène ou
0 un groupe carbonyle ou
0 un groupe C(=NH)-NH-C(=NH) ou 0 un groupe alkylediyle contenant 3 à 7 atomes de carbone ou
0 un groupe diazine éventuellement substitué par les mêmes groupes que la triazine
ou un de ses sels. 2 - Composés fixant la structure G-quadruplex des télomères caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale telle que définie à la revendication 1.
3 - Composés selon l'une des revendications 1 ou 2 caractérisés en ce que le répartiteur est choisi parmi les groupes triazine ou diazine.
4 - Composés selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisés en ce que les groupes diazines sont des pyrimidines ou des quinazolines.
5 - Composés selon l'une des revendications précédentes caractérisés en ce que la chaîne hydrocarbonée non aromatique est choisie parmi les chaîne alkyle (Cl- C4), alkényle (C2-C4), linéaires ou ramifiées, cycloalkyle (C3-C18), cycloalkényle (C3-C18), hétérocycloalkyle (C3-C18) incluant éventuellement l'atome d'azote de radicaux amino, alkylamino et ou arylamino, dialkylamino, diarylamino.
6 - Composés selon la revendication 5 caractérisés en ce que la chaîne hydrocarbonée non aromatique est éventuellement substituée par un ou plusieurs atomes ou radicaux choisis parmi les atomes d'halogène, les radicaux hydroxy, aryle, hétéroaryle, alkyloxy, aryloxy, thio, alkylthio, arylthio, amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino, amidino, guanidino, alkylcarbonylamino, ou arylcarbonylamino, carboxyle, alkyloxycarbonyle ou aryloxycarbonyle, aminocarbonyle ; alkylaminocarbonyle et/ou arylaminocarbonyle, dialkylamino- carbonyle, alkylcarbonyl ou arylcarbonyl, cyano et trifluorométhyle.
7 - Composés selon la revendication 6 caractérisés en ce que les chaînes alkyle des substituants éventuels de la chaîne hydrocarbonée non aromatique contiennent 1 à 4 atomes de carbone et les groupes aryles des substituants éventuels de la chaîne hydrocarbonée contiennent 5 à 18 atomes de carbone.
8 - Composés selon la revendication 5 caractérisés en ce que parmi les valeurs de la chaîne hydrocarbonée non aromatique on préfère les chaînes alkyle contenant 2 à 3 atomes de carbone, les chaînes hétérocycloalkyles ou cycloalkyles contenant 5 à 7 atomes de carbone.
9 - Composés selon la revendication 1 ou 2 caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule (I) ci-dessous :
Figure imgf000027_0001
dans laquelle :
- le cycle triazine porte un atome d'oxygène ou de soufre lui- même lié à Alk
- A représente
• un groupe amino de formule NR1R2 dans lequel RI et R2 identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un groupe alkyle droit ou ramifié contenant 1 à 4 atomes de carbone ou
• un groupe OR1 ou SRI dans lequel RI a la même signification que précédemment ou
• un groupe alkyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou ou un groupe trifluorométhyle ou
• un atome d'hydrogène ou
• un atome d'halogène choisi parmi le fluor, le chlore, le brome ou l'iode
- R3 représente l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4
- Ar, et Ar2 identiques ou différents représentent : o une quinoléine éventuellement substituée par au moins un groupe N(Ra)(Rb) dans lequel Ra et Rb, identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4 ou bien par un groupe ORa dans lequel Ra est défini comme précédemment o une quinoléine possédant un atome d'azote sous forme quaternaire ou o une benzamidine ou o une pyridine attachée en position -4 ou fusionnée avec un groupe aryle ou hétéroaryle éventuellement substituée par un groupe alkyle en Cl -C4
- Alk représente une chaîne hydrocarbonée, éventuellement substituée, non aromatique choisie parmi les chaîne alkyle (C1-C4), alkényle (C2-C4), linéaires ou ramifiées, cycloalkyle (C3-C18), cycloalkényle (C3-C18), hétérocycloalkyle (C3-
C18) incluant éventuellement l'atome d'azote de radicaux amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino ou un de ses sels.
10 - Composés selon la revendication 9 caractérisés en ce que la chaîne hydrocarbonée non aromatique Alk est éventuellement substituée par un ou plusieurs atomes ou radicaux choisis parmi les atomes d'halogène, les radicaux hydroxy, aryle, hétéroaryle, alkyloxy, aryloxy, thio, alkylthio, arylthio, amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino, amidino, guanidino, alkylcarbonylamino, ou arylcarbonylamino, carboxyle, alkyloxycarbonyle ou aryloxycarbonyle, amino- carbonyle ; alkylaminocarbonyle et/ou arylaminocarbonyle, dialkylaminocarbonyle, alkylcarbonyl ou arylcarbonyl, cyano et trifluorométhyle.
11 - Composés selon la revendication 9 caractérisés en ce que Ar, représente un groupe choisi parmi les groupes suivants : 4-amino- ou 4-méthylamino- ou 4-diméthylamino- quinolyl ou quinolinium dont le noyau quinolinium est éventuellement substitué par un goupe méthyle.
12 - Composés selon la revendication 9 caractérisé en ce que les groupes A représentent le radical méthylthio, amino, alkylamino ou dialkylamino radicaux dans lesquels les groupes alkyle possèdent 1 à 4 atomes de carbone.
13 - Composés selon la revendication 9 caractérisés en ce que A représente un groupe méthylthio.
14 - Composés selon la revendication 9 caractérisés en ce que Alk représente un motif alkyle contenant 2 à 3 atomes de carbone linéaire ou ramifié substitué par un radical amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino, un motif alkényle contenant 2 à 3 atomes de carbone, substitué par un radical amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino ou diarylamino, un motif cycloalkyle contenant de 4 à 7 atomes de carbone ou un motif hétérocycloalkyle (C4-C7) incluant l'atome d'azote de radicaux amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino
15 - Composés selon la revendication 9 caractérisés en ce que Alk représente une chaîne 2-(dialkylamino)éthyl, 3-(dialkylamino)propyl, 2-(N-alkyl-N-arylamino) éthyl, 3-(N-alkyl-N-arylamino)propyl, Nalkylpipéridyle ou Narylpipéridyle dans lesquels les groupes alkyle contiennent 1 à 4 atomes de carbone et les groupes aryle contiennent 5 à 18 atomes de carbone.
16 - Composés selon la revendication 1 ou 2 caractérisés en ce qu'ils ont une activité inhibitrice des télomérases.
17 - Composés selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisés en ce qu'ils ont une activité anticancéreuse.
18 - Composés caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale suivante : cycle aromatique azoté -NR3- répartiteur -O ou S- chaîne hydrocarbonée non aromatique ou cycle aromatique azoté dans laquelle
• le cycle aromatique azoté représente : o une quinoléine éventuellement substituée par au moins un groupe N(Ra)(Rb) dans lequel Ra et Rb, identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4 ou bien par un groupe ORa dans lequel Ra est défini comme précédemment o une quinoléine possédant un atome d'azote sous forme quaternaire ou o une benzamidine ou o une pyridine
• R3 représente l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4
• le répartiteur représente : 0 un groupe triazine éventuellement substitué par un radical alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, un radical thio, oxy ou amino eux même éventuellement substitués par un ou plusieurs chaînes alkyle à chaîne courte contenant 1 à 4 atomes de carbone ou un atome d'halogène ou
0 un groupe diazine éventuellement substitué par les mêmes groupes que la triazine
• la chaîne hydrocarbonée non aromatique est choisie parmi les chaînes alkyle (C1-C4), alkényle (C2-C4), linéaires ou ramifiées, cycloalkyle (C3-C18), cycloalkényle (C3-C18), hétérocycloalkyle (C3-C18) incluant éventuellement l'atome d'azote de radicaux amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino ou un de ses sels,
19 - Composés répondant à la formule (I) suivante :
Figure imgf000030_0001
dans laquelle : - A représente
• un groupe amino de formule NR1R2 dans lequel RI et R2 identiques ou différents représentent un groupe alkyle droit ou ramifié contenant 1 à 4 atomes de carbone ou
• un groupe OR1 ou SRI dans lequel RI représente l'hydrogène ou a la même signification que précédemment ou
• un groupe alkyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou un groupe trifluorométhyle ou • un atome d'hydrogène ou • un atome d'halogène choisi parmi le fluor, le chlore, le brome ou l'iode
- R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4
- Ar, et Ar2 identiques ou différents représentent : o une quinoléine éventuellement substituée par au moins un groupe N(Ra)(Rb) dans lequel Ra et Rb, identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4 ou bien par un groupe ORa dans lequel Ra est défini comme précédemment o une quinoléine possédant un atome d'azote sous forme quaternaire ou o une benzamidine ou o une pyridine attachée en position -4 ou fusionnée avec un groupe aryle ou hétéroaryle éventuellement substituée par un groupe alkyle en Cl -C4
- Alk représente une chaîne hydrocarbonée, éventuellement substituée, non aromatique, choisie parmi les chaîne alkyle (C1-C4), alkényle (C2-C4), linéaires ou ramifiées, cycloalkyle (C3-C18), cycloalkényle (C3-C18), hétérocycloalkyle (C3- C18) incluant éventuellement l'atome d'azote de radicaux amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino ou un de ses sels.
20 - Composés selon la revendication 18 ou 19 caractérisés en ce que la chaîne hydrocarbonée non aromatique Alk est éventuellement substituée par un ou plusieurs atomes ou radicaux choisis parmi les atomes d'halogène, les radicaux hydroxy, aryle, hétéroaryle, alkyloxy, aryloxy, thio, alkylthio, arylthio, amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino, amidino, guanidino, alkylcarbonylamino, ou arylcarbonylamino, carboxyle, alkyloxycarbonyle ou aryloxycarbonyle, aminocarbonyle , alkylaminocarbonyle et/ou arylaminocarbonyle, dialkylaminocarbonyle, alkylcarbonyl ou arylcarbonyl, cyano et trifluorométhyle.
21 - Composés selon la revendication 19 caractérisés en ce que Ar, et Ar2 identiques ou différents représentent un groupe choisi parmi les groupes suivants : 4-amino- ou 4-méthylamino- ou 4-diméthylamino-quinolyl ou quinolinium dont le noyau quinolinium est éventuellement substitué par un groupe méthyle.
22 - Composés selon la revendication 19 caractérisé en ce que les groupes A représentent le radical méthylthio, amino, alkylamino ou dialkylamino radicaux dans lesquels les groupes alkyle possèdent 1 à 4 atomes de carbone.
23 - Composés selon la revendication 19 caractérisés en ce que RI et R2 représentent l'hydrogène.
24 - Composés selon la revendication 22 caractérisés en ce que A représente un groupe méthylthio.
25 - Composés selon la revendication 19 caractérisés en ce que Alk représente un motif alkyle contenant 2 à 3 atomes de carbone linéaire ou ramifié substitué par un radical amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino, un motif alkényle contenant 2 à 3 atomes de carbone, substitué par un radical amino, alkylamino et/ou arylamino, dialkylamino, diarylamino, ou un motif hétérocycloalkyle ou cycloalkyle contenant de 4 à 7 atomes de carbone.
26 - Composés selon la revendication 19 caractérisés en ce que Alk représente une chaîne 2-(dialkylamino)éthyl, 3-(dialkylamino)propyl, 2-(N-alkyl-N- arylamino)éthyl, 3-(N-alkyl-N-arylamino)propyl, Nalkylpipéridyle ou
Narylpipéridyle dans lesquels les groupes alkyle contiennent 1 à 4 atomes de carbone et les groupes aryle contiennent 5 à 18 atomes de carbone.
27 - Composés selon la revendication 18 ou 19 suivants:
N6-[6-(2-diméthylamino-éthoxy)-4-méthylsulfanyl-[ 1 ,3,5]triazin-2-yl]-2- méthyl-quinoline-4,6-diamine
N6-[6-(3-diméthylamino-propoxy)-4-méthylsulfanyl-[l,3,5]triazin-2-yl]-2- méthyl-quinoline-4,6-diamine
N6-[6-(l-méthyl-piperidin-4-yloxy)-4-méthylsulfanyl-[l,3,5]triazin-2-yl]-2- méthyl-quinoline-4,6-diamine
N6-[6-(2-dimémylammo-é ylsulfanyl)-4-mémylsulfanyl-[l,3,5]triazin-2-yl]-2- méthyl-quinoline-4,6-diamine 28 - Utilisation des composés de la revendication 18 ou 19 comme produit pharmaceutique à usage humain.
29 - Associations thérapeutiques constituées d'un composé selon la revendication 1 ou 2 et d'un autre composé anticancéreux.
30 - Associations selon la revendication 29 caractérisées en ce que le composé anticancéreux est choisi parmi les agents alkylants, les dérivés du platine, les agents antibiotiques, les agents antimicrotubules, les anthracyclines, les topoisomérases des groupes I et II, les fluoropyrimidines, les analogues de cytidine, les analogues d'adénosine, les enzymes et composés divers tels que la L-asparaginase, l'hydroxyuree, l'acide trans-rétinoîque, la suramine, l'irinotecan, le topotecan, la dexrazoxane, l'amifostine, l'herceptin ainsi que les hormones oetrogéniques, androgéniques.
31 - Association thérapeutique constituée d'un composé selon la revendication 1 ou 2 et de radiations.
32 - Associations selon l'une quelconque des revendications 30 ou 31 caractérisées en ce que chacun des composés ou des traitements est administré simultanément, séparément ou séquentiellement.
33 - Procédé de préparation des composés de formule (I) telle que définie à la revendication 9 caractérisé en ce que le produit de formule générale (D)
Figure imgf000033_0001
dans laquelle R représente les valeurs de A telles que définies à la revendication 9, X représente un atome d'halogène et R3 et ARl ont les significations indiquées à la revendication 9, est mis en réaction avec l'alcool Alk-OH ou le thiol Alk-SH ou le phénol Ar2-OH ou le thiophénol Ar2-SH sans solvant par irradiation microonde.
34 - Procédé selon la revendication 33 caractérisé en ce que l'on opère à une température comprise 80 et 150°C.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2850970A1 (fr) * 2003-02-07 2004-08-13 Aventis Pharma Sa Derives chimiques se liant de maniere tres specifique aux structures d'adn en g-quadruplexe et leur application comme agent anticancereux specifique
US7482352B2 (en) 2001-03-23 2009-01-27 Aventis Pharma S.A. Chemical derivatives and their application as antitelomerase agents

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0649062A (ja) * 1992-07-31 1994-02-22 Mitsui Toatsu Chem Inc ピリミジニルアミノまたはトリアジニルアミノキノリン誘導体とその製造法およびこれを有効成分とする農園芸用殺菌剤
WO1999040087A2 (fr) * 1998-02-04 1999-08-12 The Board Of Regents, The University Of Texas System Dispositif thermoacoustique servant a explorer un tissu
WO2001040218A1 (fr) * 1999-11-29 2001-06-07 Aventis Pharma S.A. Derives arylamines et leur application comme agent antitelomerase

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0649062A (ja) * 1992-07-31 1994-02-22 Mitsui Toatsu Chem Inc ピリミジニルアミノまたはトリアジニルアミノキノリン誘導体とその製造法およびこれを有効成分とする農園芸用殺菌剤
WO1999040087A2 (fr) * 1998-02-04 1999-08-12 The Board Of Regents, The University Of Texas System Dispositif thermoacoustique servant a explorer un tissu
WO2001040218A1 (fr) * 1999-11-29 2001-06-07 Aventis Pharma S.A. Derives arylamines et leur application comme agent antitelomerase

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PATENT ABSTRACTS OF JAPAN vol. 018, no. 282 (C - 1205) 30 May 1994 (1994-05-30) *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7482352B2 (en) 2001-03-23 2009-01-27 Aventis Pharma S.A. Chemical derivatives and their application as antitelomerase agents
FR2850970A1 (fr) * 2003-02-07 2004-08-13 Aventis Pharma Sa Derives chimiques se liant de maniere tres specifique aux structures d'adn en g-quadruplexe et leur application comme agent anticancereux specifique
WO2004072027A2 (fr) * 2003-02-07 2004-08-26 Aventis Pharma S.A. Derives chimiques se liant de maniere tres specifique aux structures d'adn en g-quadruplexe et leur application comme agent anticancereux specifique
WO2004072027A3 (fr) * 2003-02-07 2004-09-23 Aventis Pharma Sa Derives chimiques se liant de maniere tres specifique aux structures d'adn en g-quadruplexe et leur application comme agent anticancereux specifique

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