WO2001097831A1

WO2001097831A1 - Agents therapeutiques et prophylactiques destines a l'insuffisance cardiaque

Info

Publication number: WO2001097831A1
Application number: PCT/JP2001/005391
Authority: WO
Inventors: Takahiko Murata; Haruyoshi Ueo; Tadashi Ohyama
Original assignee: Kaken Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2000-06-23
Filing date: 2001-06-25
Publication date: 2001-12-27
Also published as: CA2413252A1; US20040014671A1; AU2001274601A1; EP1297839A1; US6878689B2; EP1297839A4

Description

明細書心不全の予防または治療剤技術分野

本発明は、成長ホルモン遊離促進ペプチドの一種である、 D—ァラニルー 3— (ナフタレン一 2—ィル）一 D—ァラニルー L一ァラニルー L—トリブトフィル一 D—フエ二ルァラ二ルー L—リジンアミド（以下プラルモレリンと略記することがある）及び/又はその塩を有効成分として含有する、急性心不全、慢性心不全の急性増悪期または慢性心不全への移行期の心不全の予防または治療剤に関する。

背景技術

循環器疾患の中で、心室より末梢の器官へ十分な血流が供給されない病態を心不全といい、これは、急性心不全と慢性心不全に区別される。

急性心不全は、急激に循環動態が悪化して、心不全に至るものをいい、肺うつ血に基づく著明な呼吸困難あるいは低心拍出に基づく心原性ショック、泡沫痰喀出、乏尿 ·無尿、四肢冷感、血圧下降、冷汗または頻脈（時に徐脈）といった症状を呈し、速やかに治療しなければ死亡に至る。一方、慢性心不全は陳旧性心筋梗塞、拡張型心筋症などに見られるように心不全が徐々に進行するため、心肥大をはじめとする種々の代償機序が働いてある平衡状態にあるものを呼び、息切れ、易疲労感、運動耐用能の低下、肝脾の腫大、浮腫または末梢静脈怒張などの症状を呈する。このため、治療は生命予後の改善が最終目的であり、運動耐用能を改善し、生活の質（QOL) の向上が治療目標となる。

このように、両者の病態及び治療目的が異なるために、心不全の治療薬の選択が重要である。すなわち、急性心不全の患者に対しては、救命を目標とするため、心筋の低下した収縮力を増強させ、悪ィヒした循環動態を改善するような強心薬を治療薬として選択する。しかし安定状態にある慢性心不全の患者に強心薬を投与すると、すでに疲弊した心筋を強心薬がさらに刺激して収縮させるために、障害がいつそう進展してしまうことになる。急性心不全の治療薬としては、受容体刺激薬、

ゼ (PDE)阻害薬（例えば、アムリノン）が開発されているが、血管拡張作用があるため、血圧が低下した患者には使用できない。

従って、血圧が低下した患者等、従来の急性心不全薬が適用できなかった患者にも使用できる急性心不全薬が望まれる。

また、心不全の治療計画において、急性心不全を治療した後、病状が徐々に安定し、慢性心不全に移行するまでの期間にも適用できる製剤が望まれる。

一方、心疾患の治療に、成長ホルモン（以下 GHと略す)、 GH遊離促進べプチド（以下 GHR Pと略す）あるいは GH遊離促進物質（以下 GH secretagogue、 GHSと略す）が、効果を有するという報告がある。 Pharmacia & Upjohn (WO 9 8 2 2 1 2 4) は、へキサレリンについて、ラットの摘出した心臓で心不全の効果を判定している（詳細は Berti等、 Eur. J. Pharmacol 334:201-207,1997; J. Cardio. Pharmacol. 32:260-265, 1998; Endocrinology 140:4024-4031, 1999参照）。 Eli-Lilly (WO 9 9 0 8 6 9 7 ) は、遺伝的拡張型心筋症ラットを用いて、 GRP-2(プラルモレリンと同一分子)が慢性心不全のうつ血性心不全に及ぼす治療効果を判定している。

し力し、いずれも急性心不全の治療効果についての報告はない。

一方、 Deghenghi (U S 5,932,548) は、リシンを配列に含む特定のペプチドが、心臓に結合し、心臓の灌流圧を上げることを報告している。また、 Bodart等（Circ. Res. 85:796-802, 1999) は、 GH R Pが心臓の灌流圧を上げることと、心臓の収縮力を低下させることを報告している。

従って、従来、 GHR Pあるいは GH Sを急性心不全の治療に用いることは予測できなかった。

本発明の目的は、十分な心筋収縮力の増加ゃ拍出量の増加による強心作用を有する心不全の予防または治療剤を提供することである。本発明のさらなる目的は、急性心不全、慢性心不全の急性増悪期または慢性心不全への移行期の心不全の予防または治療剤を提供することである。本発明の別の目的は、強心作用を有すると共に頻脈、不整脈、心拍数の増加、血圧の低下等の副作用を起こさない心不全の予防または治療剤を提供することである。本発明のさらなる別の目的は、血圧が低下した患者等、従来の急性心不全薬が適用できなかった患者にも適用できる急性心不全薬を提供することである。

発明の開示

本発明者らは、鋭意検討した結果、成長ホルモン遊離促進物質の中でプラルモレリンが心筋収縮力の増加ゃ拍出量の増加による顕著な強心作用を有しており、上記課題を解決できることを発見し、本発明を完成した。

本発明は、プラルモレリン及び/又はその塩を有効成分として含有することを特徴とする、急性心不全、慢性心不全の急性增悪期または慢性心不全への移行期の心不全の予防または治療剤（以下「本発明の製剤」または「本願製剤」という）を提供する。

図面の簡単な説明

図 1は、プラルモレリンニ塩酸塩（以下 KP-102という）、へキサレリン及びァムリノンの陽性変力作用を示す。

値は平均土 S. E. (n=5)で示す。 *： pく 0. 05、 ** : ρ<0· 01 v s. 基底値

図 2は、麻酔開胸ゥサギにおける KP-102の収縮期左室内圧、 +dP/dtmax、平均血圧および心拍数に対する作用を示す。値は平均土標準偏差（n二 4)で示す。図 3は、冠状動脈前下行枝閉塞ィヌにおける KP-102の心拍出量（CO)、一回拍出量（SV)、左室内圧最大 +dP/dt (+dP/dtmax) 駆出分画（EF) に対する改善作用を示す。値は、病態が安定後の薬物投与直前の値に対する百分率であり、平均士標準偏差で示す。 * : p<0. 05 (経時測定分散分析により、薬物投与後 30分までの対照群との比較）及び #： pく 0. 05 (経時測定分散分析により、薬物投与後 20分までの対照群との比較）で有意差あり。

図 4は、冠状動脈前下行枝閉塞ィヌにおける KP-102の平均血圧（MB P )、心拍数（HR)、ダブルプロダクト（RPP)、全末梢血管抵抗（TPR) に対する影響を示す。値は、病態が安定後の薬物投与直前の値に対する百分率であり、平均土標準偏差で示す。 ** : P<0. 01 (経時測定分散分析により、薬物投与後 30分までの対照群との比較）で有意差あり。

発明を実施するための最良の形態好ましい態様としては、以下のものがあげられる。

本発明は、有効成分がプラルモレリンの酸付加塩であることを特徴とする前記製剤を提供する。

本発明は、有効成分がプラルモレリンニ塩酸塩であることを特徴とする前記製剤を提供する。

本明細書でいう、「急性心不全」は、急激に循環動態が悪化して、心不全に至るものをいい、ここで、「心不全」とは、心室より末梢の器官へ十分な血液が供給されない病態をいう。

「慢性心不全の急性増悪期」とは、安定して経過していた慢性心不全が感染や過労などに伴って急激に悪化することであり、急性心不全と同様な病態を示す。ここで、「慢性心不全」とは、心不全が徐々に進行し、種々の代償機序が働いてある平衡状態にあるものをいう。

「慢性心不全への移行期」とは、急性心不全を治療した後、病状が徐々に安定し、慢性心不全に移行するまでの期間をいう。

本発明の製剤において、用いられる有効成分は、プラルモレリン及び Z又はその塩である。プラルモレリンは、公知の方法により、例えば、特表平 7— 5 0 7 0 3 9記載の方法により製造することができる。

プラルモレリンの塩とは、酸付加塩をいう。酸付加塩が、薬効の点で、フリー体のものよりも好ましく用いられる。この酸付加塩を形成しうる酸としては、例えば塩酸、硫酸、臭化水素酸、燐酸、硝酸などの無機酸、蟻酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、ダルコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クェン酸、マレイン酸、フタル酸、フエニル酢酸、安息香酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、篠酸、トリフルォロ酢酸などの有機酸、ァスパラギン酸、グルタミン酸などのアミノ酸などの中から、医薬上許容される酸付加塩を形成しうるものが適宜選ばれる。

好ましい酸付加塩は、塩酸塩であり、より好ましくは二塩酸塩である。

本発明の製剤において、プラルモレリン及びその酸付加塩を 2種以上組み合わせて用いてもよい。

本発明に用いられるプラルモレリン及び/又はその塩は、公知の製剤技術により、単独でまたは薬理学的に許容しうる担体、添加剤等とともに、通常の経口型製剤及び非経口型製剤、例えば、液剤（注射剤、点鼻剤、シロップ剤、ドライシロップ剤など）、錠剤、トローチ剤、カプセル剤（硬、軟、マイクロカプセル等)、散剤、細粒剤、顆粒剤、軟膏剤、坐剤等などに製剤可能であり、また、ドラッグデリバリ一システム（例えば、徐放剤等）などの剤型にも製剤可能である。

本願の製剤に用いることができる担体、添加剤等としては以下のような通常医薬品の調剤に使用されるものがあげられる：例えば生理食塩液、水（常水、蒸留水、精製水、注射用水など)、リンゲル液等の水性溶剤、例えば、油性溶剤（植物油など）、水溶性溶剤（プロピレングリコール、マクロゴール、エタノール、ダリセリンなど）等の非水性溶剤、例えばカカオ脂、ポリエチレングリコ一ル、マイクロクリスタリンワックス、サラシミツロウ、流動パラフィン、白色ワセリン等の基剤、例え'ば蔗糖、デンプン、マンニット、ソルビット、乳糖、ぶどう糖、セルロース、タルク、燐酸カルシウム、炭酸カルシウム等の賦形剤、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、蔗糖、デンプン等の結合剤、例えばデンプン、カルポキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルデンプン、炭酸水素ナトリウム、燐酸カルシウム、カルポキシメチルセルロースカルシウム、クェン酸カルシウム等の崩壊剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ラゥリル硫酸ナトリウム等の滑沢剤、例えばクェン酸、メントール、グリシン、ソルビトール、オレンジ末等の矯味剤、例えばパラォキシ安息香酸エステル類、ベンジルアルコール、クロロブ夕ノール、四級アンモニゥム塩（塩化ベンザルコニゥム、塩化べンゼ卜ニゥムなど）等の保存剤及び防腐剤、例えばアルブミン、ゼラチン、ソルピトール、マンニトール等の安定剤、例えばメチルセルロース、ポリビエルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム等の懸濁化剤、例えばダリセリン、ソルビ] ル等の可塑剤、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース等の分散剤、例えば塩酸等の溶解補助剤、例えばモノステアリン酸ナトリウム等の乳化剤、例えば塩化ナトリウム等の電解質並びに例えば糖アルコール類、糖類及びアルコール類等の非電解質の浸透圧調整剤、着香剤等。

また、経口製剤の場合、プラルモレリン吸収性促進のために、特開平 1 0— 456194公報記載のような結晶セルロース（「アビセル」 [商品名、旭化成工業（株）製]等、水膨潤性セルロース (カルポキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルポキシメチルセル口一スナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセル口一ス等）を含むことができる。

本製剤中に含まれるプラルモレリン及び Z又はその塩の含有量は所望の効果を奏する限り特に限定されないが、製剤中、好ましくは約 0. 0 0 0 1〜約 1 0 wZv %、さらに最も好ましくは約 0 . 0 0 1〜約 2 w/v %の濃度になるように含有することができる。

本願製剤は、通常、静脈注（点滴を含む)、経口、皮下、点鼻、経肺、動脈注投与等の手段により、ヒトを含む哺乳動物に投与される。好ましくは、静脈注により投与される。

本願製剤の投与量は、患者の年令、体重、症状、投与法などにより異なるが、プラルモレリン二塩酸塩を例とすると、成人に対する 1日量は、非経口投与、例えば静脈内投与では、体重 1 k g当たり好ましくは約 0. 1〜約 1 0 0 0 gの量で、さらに好ましくは約 1〜約 1 0 0 gの量で点滴であるいは 1回ないし数回に分けて、経口投与では体重 1 k g当たり好ましくは約 1 t g〜約 1 0 m gの量で、さらに好ましくは約 1 0〜約 1 0 0 0 jti gの量で数回に分けて投与することができる。

また、本発明の予防または治療剤は、冠拡張剤（ニトログリセリン等)、利尿剤 (フロセミド等)、既存強心剤（ミルリノン等)、アンジォテンシン変換酵素（A C E) P且害剤（ォレイン酸ェナラプリル等）等の心不全治療薬、あるいは高血圧 ,等の循環器系疾患の治療薬（塩酸二カルジピン等）と同時にまたは時間をおいて併用することができる。

本願製剤は、急性心不全、慢性心不全の急性増悪期または慢性心不全への移行期の心不全の予防または治療剤として有用である。また、本願製剤は、顕著な心筋収縮力の増加ゃ拍出量の増加による強心作用を示すので、特に急性心不全の予防または治療に用いることが有効である。

以下に製剤例及び試験例を示して具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。製剤例

[製剤例 1 ]

プラルモレリン二塩酸塩を生理食塩液に溶解し、おのおの 01wZv%、

0. 02wZv%及び 0. lw/v%の液剤を調製した。

[製剤例 2]

プラルモレリンニ塩酸塩の llmg及ぴ乳糖 189mgをゼラチンカプセルに充填しカプセル剤を調製した。

試験例

本製剤に使用されるプラルモレリンが、心不全に対して優れた強心作用を有することを試験例により実証する。

[試験例 1 ] モルモット乳頭筋でのプラルモレリンの心筋収縮増強作用心筋収縮力の一般的評価法であるモルモッ卜摘出心筋を用いてプラルモレリンの直接的効果を評価した。

1.材料および実験方法

1)使用動物

ハートレー系雄性モルモット（体重 301〜350g、日本 SLC) を購入した。動物は、温度 23±2°C、湿度 55±15%、照明時間 12時間の環境下で、餌および飲水は自由摂取させ、予備飼育した後、体重 360〜480gで使用した。各被験物質に対して 1群 5匹を用いて試験を行つた。

2)使用試薬

被験物質としては、プラルモレリン二塩酸塩（KP-102)、成長ホルモン遊離促進物質の代表例として、へキサレリン、ダレリン、イブ夕モレリンメタンスルホン酸塩（以下、 ΜΚ— 0677という）（以上、特開平 6— 263737記載の方法によって製造)、並びに遺伝子組換えヒト成長ホルモン（住友製薬）及び既知急性心不全薬であるアムリノン (シグマ社) を使用した。 ΚΡ-102、へキサレリンおよび ΜΚ— 0677は蒸留水に溶解した。グレリンは生理食塩液で溶解した。アムリノンはジメチルスルホォキサイドにまず溶解し、生理食塩液で希釈した。上記成長ホルモンは専用の溶解液（メタクレゾ—ル 0. 3wZv%および D_マンニトール 3. 9w/v%) を用いて溶解した。被験物質溶液の添加量は最高でも l wZv %とした。なお、被験物質以外の試薬はナカライテスク社の特級品を使用した。

3)摘出乳頭筋の標本作製

モルモットの後頭部を強打し気絶させた後、頸動脈を切開して放血により致死せしめた。開胸し、心臓上部の血管部を切断し、心臓を摘出した。心臓を直ちに、 95%O₂-5%C0₂混合ガスで十分に通気しておいた Krebs-Henseleit(K-H)栄養液 (NaCl 118.0mM, KC1 4.7mM, CaCl₂-2H₂0 l.OmM, KH₂P0₄ 1.2mM, MgSO₄- 7H₂0 1.2mM, NaHCO₃ 25.0mM, グルコース ll.OmM)の中に移した。ラバーを敷いたシャーレの上に、心臓の前面が見えるようにして針で固定した。右室上部 (心房側）の心室壁を心房に沿って横方向に切開し、さらに心室中隔に沿って縦方向に切開して心室壁を開き右室乳頭筋を露出させた。次いで、大動脈から左室の全面を心尖部まで切り開き、左室前壁を左右に大きく開き固定し、左室乳頭筋を露出させた。三尖弁あるいは二尖弁を心室から切り離し、乳頭筋基部で切り離し、乳頭筋標本とした。この標本の基部を、 15mLの栄養液を満たしたオルガンバス中でフィールド刺激電極に固定した。弁への付着腱索を糸で結んで、 FD ピックアップ（TB-612T, 日本光電）に連結した。 0.5gの静止張力をかけ、電気刺激装置 (SEN-3201, 日本光電）により頻度 1 Ηζ、持続 20msec、閾値の約 1.2倍の電圧で駆動した。約 1時間の平衡後、 KP-102, へキサレリンおよびアムリノンを各々、 1 0、 3 0、 1 0 0 M累積投与した。また、それぞれの被験物質投与による変力作用の変化を確認した後、 CaCl₂ 12.5mMを投与し、標本の最大発生張力を確認した。発生張力は、多用途プリアンプ装置 (BMP-6008，日本光電）およびレコーダ (WT-647G, 日本光電）を用いて記録した。

4)デ一夕の表示方法と解析法

各データは、いずれも平均土標準誤差で示した。被験物質の陽性変力作用の変化は、被験物質投与前値（図 1において、基底値と表示）との間で paired t検定により処理し、 p <0.05を有意差ありとした。

·糸口;^

被験物質投与前においては、試験動物群間の乳頭筋標本において発生張力および最大発生張力に差を認めなかつた。遺伝子組換えヒト成長ホルモン（0.2 IU/mL)、ダレリン（1 M)、 MK— 0 6 7 7 (100 M) の投与群では、発生張力の変化は認められなかった。

その他の被験物質投与群では、図 1に示すように 10から 100 Mで濃度依存的に発生張力が増加した。しかし、効力には差があり、 KP-102 は、被験物質投与前値とに比べて、有意な効果を示し、この効果は、アムリノンの効果とほぼ同等であったのに対し、へキサレリンの効果は極めて弱く、被験物質投与前値とに比べて有意な効果を示さなかった。

[試験例 2 ] ゥサギ静脈内投与によるプラルモレリンの心機能に対する作用プラルモレリンの心機能に対する作用を各種パラメータ [血圧、心拍数、収縮期左室内圧（LVPsys)、左室内圧（LVP) の波形を微分することによって得られる最大 +dP/dt (+dP/dtmax) ]を測定することによって評価した。特に、左室内圧最大 +dP/dt (+dP/dtmax) の値は、急性心不全の治療に充分である強心作用を有するか否かを言平価する上で重要である。

1.試験物質および試薬

1)被験物質

プラルモレリンニ塩酸塩（以下 KP-102という）（WO 9 3 0 4 0 8 1記載の方法によって製造）を注射用蒸留水で溶解して 1.5m_g/mL溶液を調製した。

2)対照物質

日局注射用蒸留水（大塚製薬株式会社）を使用した。

3)試薬

動物の麻酔のために、ベントパルピタールナトリウム（ナカライテスク社）を 15mg/mLになるよう生理食塩液（大塚製薬株式会社）に溶解して調製した。

2.使用動物および飼育条件

実験には体重 2 k g前後の雄性 NZW系ゥサギ（北山ラベス社）を用いた。動物は入荷後、室温 20±2 、湿度 55± 15%、照明時間 12時間/日（7:00-19:00) の条件下で、固形飼料（ラボ Rストック、オリエンタル酵母工業）および水道水を与え、 6日以上飼育した後に使用した。

3 . 試験方法

1 ) 麻酔開胸ゥサギの心機能測定ゥサギの耳介静脈からベントバルピタールナトリウム 30mg/kg を呼吸に注意しながらゆっくりと投与して麻酔した後、背位に固定し、気管力ニューレを揷入した。人工呼吸下（換気量： SSmLZ回、換気回数 45回 Z分、 SN-480-7、シナノ製作所)、正中開胸後、心嚢膜を切開して心臓を露出させた。左室内圧（LVP) は、心尖部から左心室内へ挿入した注射針付力ニューレを圧トランスデューサー (TP-300T 日本光電）及び歪圧アンプ（AP-610G、日本光電）を介して測定した。この LVPの波形を微分ュニット（ED-601、日本光電）で微分することで左室内圧最大 +dP/dt (+dP/dtmax) を求め、心収縮性の指標とした。血圧は左大腿動脈に挿入した力ニューレより圧トランスデューサ一（TP-300T、日本光電）を介して歪圧アンプ（AP-601G、日本光電）を用いて測定した。心拍数は LVPの脈波で心拍計（AT-601G、日本光電）を駆動することにより測定した。これらのパラメ一夕はレコーダー（TA-11、グ一ルド社）上で記録した。左大腿静脈に力ニューレを揷入し、試験物質の投与に供した。実験中の動物の直腸温が 39°Cになるよう、体温制御装置（TK-43、朝日電子）で制御した。麻酔薬は適宜追加したが、測定中の追加麻酔は避けた。

2 ) 群構成

試験は以下に示す 2群で行つた。

•対照群（蒸留水） _η=4

•KP-102群（300 g Zk g投与） n=4

(注：実験には 9羽のゥサギを使用したが、そのうち、対照群の 1羽は溶媒投与の 3分後に突然全パラメ一夕が大きく変動したため除外した。最終的に各群 4羽、合計 8羽に対して試験を行った。）

3 ) 試験プロトコール

各パラメータが安定した後、溶媒による影響がないことを確かめるため、蒸留水 0.2mL/kg を注入ポンプ（FP-W-100、東洋産業）で 1分かけて投与し、投与後 5分間観察した。蒸留水投与の約 5分後、前述の群構成に従って試験物質を注入ポンプで 1分かけて 0.2mL/kgの容量で投与した。各循環パラメ一夕は、投与前、投与後 1、 3、 5、 10、 15、 20、 25分に計測し、与前値に対する変ィ匕率（％) で示した。なお、一部の動物では試験物質の投与後 40分まで測定した。 4. 統計解析

結果はいずれも平均土標準偏差で表示した。群間に差があるかどうかは経時測定型分分析 (repeated measures ANOVA)を行つて検定した。有意水準は 5 %とした。

5. 結果

1) 各群の試験物質投与前値

各群の試験物質投与前のパラメータ（体重、平均血圧、心拍数、 LVPsys及び +dP/dtmax) 値を表 1に示す。

表 1

/ フメータ対照 KP-102

(n=4) (n=4)―

体重 (kg) 2. ±0.10 2.17±0.07

平均血圧（mmHg) 68±16 77±6

心拍数（拍数/分） 299±13 321±5*

収縮期左室内圧 (mnHg) 105±22 120±12

+dP/dtmax (mmHg/秒） 4599±1333 5770±1477

平均土標準偏差。 *D<0.05_o 採用した動物群においては、いずれの測定パラメ一夕においても溶媒の蒸留水投与による影響は認められなかった。

体重、平均血圧、 LVPsys、および +dP/dtmax の投与前値に有意な群間差は認められなかったが、心拍数に有意差が認められた (対照群； 299± 13、 KP-102群； 321±5)。この値は正常範囲での単なる偏りであり、さらに差が出た原因は不明であるが軽微な差であり、心収縮能の評価には影響はないと考えられた。

2) LVPsys, +dP/dtmax、平均血圧および心拍数に及ぼすプラルモレリンの影響 (図 2)

T」VPsvs、 +dP/dtmax及び平均血圧

対照群では、 LVPsys、 +dP/dtinaxおよび平均血圧は、投与 15分後わずかに自然低下する傾向が認められた。 KP-102 の 300 g Z k g静脈内投与群では、 4例中全例の LVPsysおよび +dP/dtmax を増加させ、対照群と比べて有意な変化を認めた (pく 0.01)。この強心作用は、投与 1分後から観察され、 5分から 10分をピ一クとするカーブを描き、投与 25分後でも完全に投与前値へ戻らなかった。 LVPsysおよび +dP/dtmaxの最大増加率はそれぞれ投与前値の 13%、 22%であった。 KP-102を投与した 1例についてさらに観察したところ、 40分後に投与前値に回復した。

KP-102投与群では LVPsys に伴って有意な血圧の上昇が認められたが (p<

0.05)、この変化は投与 25分後にはほぼ投与前値に戻つた。

心拍数

対照群の心拍数は投与 15分後まで変化なく、 20分後に 1 %、 25分後に 2%低下した。一方、 KP-102投与群は、投与 3分後に 2 %低下し、その後投与前値に戻り、投与 15分後には 1 %、 25分後には 2%上昇し、対照群との変動パターンに違いが認められた。そのため、対照群と KP-102投与群の間に交互作用が認められた (pく 0.01)。しかし、心拍数の変動は対照群、 KP-102投与群とも最大で投与前の 2%と小さいものであり、 KP-102 の心拍数への影響はほとんどないと考えられた。

[試験例 3 ] プラルモレリン静脈内投与によるィヌ冠状動脈前下行枝閉塞モデルの心機能に及ぼす影響

ィヌ冠状動脈前下行枝閉塞による急性心収縮不全モデルを用いて、プラルモレリンの強心作用について検討した。

冠状動脈閉塞によって低下した心機能に対するプラルモレリンの作用を各種循環器系パラメ一夕：心拍出量（CO)、一回拍出量（SV)、左室内圧最大 +dP/dt (+dP/dtmax)、駆出分画 [EF (ejection fraction) ]、平均血圧（MBP)、心拍数 (HR)、全末梢血管抵抗（TPR) 及び心筋酸素消費量の指標ダブルプロダクト ( PP) によって評価した。

1 .試験材料および方法

1 ) 試験物質および試薬

( 1 ) 対照物質

日局注射用蒸留水（以下蒸留水という。大塚製薬株式会社）を使用した。 ( 2 ) 被験物質

プラルモレリンニ塩酸塩（以下 KP-102という）（WO9304081記載の方法によつて製造）は、蒸留水で溶解し、 0.5mg/mL溶液を調製した。

( 3ノ Βί、薬

ペントバルビタールナトリウム（以下ペントバルビタールという。ナカラィテスク）を生理食塩液（大塚製薬株式会社）に溶解して 30mg/mL液を調製し、動物の麻酔に用いた。気管への刺激を避けるため、キシロカイン（キシロカインスプレー：ァストラゼネ力）を気管力ニューレに数回塗布した。

2 ) 使用動物

実験には日本農産工業株式会社（神奈川）より購入したビーグル成犬（体重 9 〜： llkg) を雌雄の別なく使用した。動物は入荷後、室温 20±2°C、湿度 55± 15%、照明時間 12時間/日（7:00-19:00) の条件下で、固形飼料（CD- 5、日本クレアまたはラボ Dストック、ナルク）および水道水を与え、 1週間以上飼育した後に使用した。

3 ) 測定方法

ペントバルビタール（30mg/kg) の静脈内投与により麻酔を導入し、維持麻酔として右橈側皮静脈に留置したポリエチレン力ニューレよりインフユ一ジョンポンプ（FP-W-100、東洋産業）を用いてペントバルビタール（5-6mg/kg/時）を持続注入した。気管力ニューレを揷入し、人工呼吸器 (SN-480-3 シナノ製作所）による人工呼吸（一回換気量 20mL/kg、呼吸回数 18回/分）下に左第 4肋間を開胸した。左前下行枝を起始部から 1一 2 cm を丁寧に剥離し、閉塞用の糸を通した。

次に左第 5肋間を開胸し、心尖部から 5セグメントコンダク夕ンスカテーテル (CCS-108-DA、ユニークメディカル）をすベての電極が左心室内に収まるよう心尖部から揷入した。左頸動脈からは 5 Frマイクロチップ圧力トランスデュ一サ一付カテーテル（圧力トランスデューサーカテーテル、 MPC-500、 MILLAR) を左心室内に挿入した。コンダクタンスカテーテルおよび左心室に揷入した圧力トランスデューサーカテーテルを心室容積測定装置（インテグラル 3 ； VPR-1002 ユニークメディカル）の内蔵アンプに接続し、左室内圧（LVP) と左心室容積の変化を同時計測した。血圧は左大腿動脈に挿入した 5 Fr圧力トランスデューサーカテーテルから血圧アンプ（AP641G、日本光電）を介して測定し、平均血圧 (MBP) を得た。心拍数（HR) は血圧の脈波から心拍計（AT-601G、日本光電）で計測した。

再び第 4肋間を開き、心拍出量（CO(EMF)) (CO(EMF)：電磁血流計による方法によって求める C O)測定のため、大動脈起始部に電磁血流計（MFV-2100、日本光電）に接続したプローブを装着した。冠状動脈閉塞による虚血領域にスパィラル電極を取り付け、表面心電図を記録した。左前下行枝にドップラープロ一ブを装着し、ドップラー血流計（PD-20、 Crystal Biotech) で血流を調べた。冠状動脈前下行枝の閉塞は、閉塞用の糸を約 5分かけて引き上げることで行つた。血管が完全に閉塞していることは、表面心電図の変化とドップラーサウンドの消失で確認した。

コンダク夕ンスカテーテルで得られた各セグメント間の電圧から心室容積を算出するため、血液抵抗率（を冠状動脈閉塞前に測定した。薬物による影響を測定終了後に飽和食塩液を右大腿静脈から注入し心室外漏れ電流による容積誤差 (Vp)を求めた。心室容積測定装置に付属の解析ソフト（ィンテグラル 3 ver.2.42、ユニークメディカル）に pおよび Vpを入力した。 LVPの変化から +dP/dtmax、 -dP/dt max, 収縮期左室内圧（LVPsys) および左室拡張末期圧（LVEDP) と、心室容積の変化から一回拍出量（SV) および心拍出量（CO) を算出した。循環パラメ一夕はレコ一ダー (TA-11、グールド）上に記録した。全末梢血管抵抗 (TPR) と心筋酸素消費量の指標ダブルプロダクト（RPP) ば以下の式により算出した。 TPR = MBP I CO

RPP= MBP x HR

実験中、動物の体温は体温制御装置（TK43、朝日電子工業および ΚΝ-474、夏目製作所）で 37°Cに制御した。測定中の麻酔薬の追加は行わなかった。

4 ) 群構成

試験は以下に示す 2群で行つた。

対照群（冠状動脈閉塞後に蒸留水を投与する群）： 4匹

KP-102群（冠状動脈閉塞後に l O O ^ g Z k gの KP-102を投与する群）： 5 匹

5 ) 実験プロトコール

冠状動脈前下行枝閉塞により +dP/dtmaxおよび COなどが低下したが、このような循環パラメータが安定した後、試験物質を左大腿静脈内にインフュージョンポンプ（FP-W-100、東洋産業）で 1分かけて注入（0.2mL/kg/分）した。その後、直ちに蒸留水を約 30秒間さらに注入（0.2mL/kg/分）した。各循環パラメ一夕は、閉塞前、投与前、投与後 1、 3、 5、 10、 15、 20、 25、 30、 40、 50、および 60分に計測し、閉塞による影響は、閉塞前値に対する変化率 (%) で評価し、また、プラルモレリンの作用は、投与前値に対する変化率 (%) で評価した。

6 ) 統計解析

結果はいずれも平均士標準偏差で表示した。

各パラメータの冠状動脈閉塞前および閉塞後の各々の値に群間差があるかどうかは unpaired t-testで検定した。また、各群内において、冠状動脈閉塞前後の各パラメータ値に差があるかどうかは paired t-testで検定した。

試験物質投与後の各パラメ一タ値に群間差があるかどうかは経時測定型分散分析（repeated measures ANOVA)で検定した。有意水準は 5%とした。 CO(EMF) と CO の変動に差を認めなかったので、 CO (心室容積の変化から求める）を解析対象とした。 '

2 . 結果

1 ) 各群の試験物質投与前値

冠状動脈閉塞前、体重は対照群及び KP-102群の両群間に有意な差はなく（対照群； 9.93土 0.56kg、 KP-102群； 9.67 ± 0.20kg；)、またすベての循環器系パラメ —夕においても有意な群間差を認めなかった（表 2)。

次に、各群の試験物質投与前における冠状動脈閉塞による影響を調べた。

冠状動脈前下行枝閉塞後 20分以内にすべての動物で閉塞後期外収縮が発生したが、時間経過に伴いその発生頻度は減少する傾向にあり、閉塞後 30-80分後には循環器系パラメータも安定し、安定した後にパラメータを測定した（表 2 )。その結果、閉塞前値と比較して、冠状動脈閉塞により COは 15% (対照群 18%、 KP-102群 14%)、 +dP/dtinaxは 7 % (対照群 5.4%、 KP-102群 8.7%) 低下し (p<0.05)、 EF (駆出分画）は 29% (対照群 31%、 KP-102群 24%) 低下した (p<0.05)。さらに SVおよび- dP/dt max も冠状動脈閉塞により両群とも有意 (p<0.05) に低下したが、 MBP、 LVEDP、 HR、 TPRは閉塞前と比べて有意な差を認めなかつた。閉塞後の各循環器系パラメ一夕は両群間に有意差はなかった。

表 2 麻酔開胸ィヌの冠状動脈閉塞前後の心血行動態パラメータ値

パラメータ

MBP (mmHg) 98.9± 18.6 97.1 ±20.4 96.5± 11.1 94.1 ± 13.5 HR (拍数/分） 132.3±15.3 138.5± 19.1 142.6± 13.8 142.8±13.1 CO(mL/分） 591.0± 182.8 500.8±221.7* 570.0± 165.1 483.4士 91.2* SV (mL/拍数） 4.43+0.95 3.55±1.18** 3.96±0.76 3.34±0.36* EF (%) 77.1 ±7.8 52.2±6.7* 66·6±21·2 52.1 ± 14.6*

LVPsys (mmHg) 122.0± 16.0 116.0± 16.5** 126.6±14.1 118.7± 17.3 LVEDP (mmHg) 5.5± 1.4 6.0±1.2 8.14±4.7 9.2±5.0 +dP/dt max (mmHg/秒） 2413.3±414.5 2284.8±405.6** 2473.8 ±592'.2 2255.8±575.2* - dP/dt max (rrimHg/秒） 2871.0±320.0 2507.3±465.9* 3059.2±689.2 2459.4±536.9* RPP (mmHg'拍数/分） 13231 +4002 13710±4952 13856±2874 13559±3250 TPR (mmHg/L/分） 174.5±39.3 215.1 ±74.5 174.9±27.0 195.8± 10.8 各値は平均土標準偏差を示す。

*, は、それぞれ危険率 5%、 1%未満で、対応する群の前値と比較し有意差あり ( (Student's paired t - test)。対応する時間で、 KP-102群と対照群の間に有意差はなし。

2 ) プラルモレリンの循環動態に及ぼす影響（図 3および図 4 ) 上記冠状動脈閉塞により心機能を低下させた各動物群に、 KP-102及び蒸留水を各々投与したことによる、循環動態に及ぼす影響を投与前値からの変化率として図 3および図 4に示した。

COおよび SVに対する作用

対照群では、投与後の SVおよび CO はいずれもほとんど変化しなかった。 KP-102投与群では、 COは投与 10分後をピークとする 7 %の増加を示し、 SV は投与 5分後に 5 %増加した。 COと SVの変化はいずれも対照群と比べて有意なものであった（p<0.05)。

+dP/dtmaxおよび— dP/dt ma に対する作用

対照群では、 +dP/dtmaxおよび— dP/dt maxとも変化を認めなかった。 KP-102 投与群では、 -dP/dt maxは対照群と比べて有意な変化はなかつたが、 +dP/dtmax は投与 10分後には 7 %上昇し、 20分以内のデータでは対照群と比べて有意差を認めた（p<0.05)。

EFに対する作用

対照群では、冠状動脈閉塞により低下した値を維持した。 KP-102投与群では、 10分後に最大 10%の増加が観察され、対照群と比べて有意な差を認めた。

MBP、 HRおよび RPPに対する作用

MBPと HRは、対照群、 KP-102群ともに変化しなかった。心筋酸素消費量の指標である RPPも両群とも変化なく、群間に差を認めなかった。

LVP s y sおよび LVEDPに対する作用

対照群、 KP-102群とも LVPsysおよび LVEDPに変化を認めず、両群間に差はなかった。

TPRに対する作用

対照群では冠状動脈閉塞により増加した TPRは上昇したままであつたが、 KP-102投与群では低下し、両群間で有意な差を認めた（p<0.05)。

3 . 考察

急性心収縮不全モデルに対して、 KP-102は平均血圧（MBP) や心拍数（HR) およびその積であるダブルプロダクト（RPP) を変ィ匕させることなく、心拍出量 (CO) , 一回拍出量（SV) 及び +dP/dteiax を増加させ、冠状動脈閉塞によって低下した心機能を亢進させた。さらに、 KP-102 は冠状動脈閉塞により低下した駆出分画 (EF) も有意に増加させた。駆出分画 (EF) は、心ェコ一で非侵襲的に測定できるために臨床で頻用されている心収縮能評価パラメ一夕である。また、これまでの研究から心拍数（HR) 及び心筋酸素消費量の指標ダブルプロダクト

(RPP) を変化させないことが心不全治療にとつて望ましいこととされている。従って、 KP-102に関するこれらの知見は臨床での KP-102の効果を期待させるもめである。

上記結果において、 KP-102が、正常動物の心機能だけでなく急性心収縮不全動物の低下した心機能に対しても、優れた心筋収縮力の増加及び拍出量の増加による強心作用を有し、また、心拍数、平均血圧及び心筋酸素消費量の指標ダブルプロダク卜に影響を与えない点で臨床上望ましいことが確認された。

産業上の利用可能性

プラルモレリンは、他の成長ホルモン遊離促進物質と比較して、顕著な心筋収縮力の増強及び拍出力の増加作用を示した。従って、このような強心作用により、本願プラルモレリン含有製剤は、急性心不全、慢性心不全の急性増悪期または慢性心不全への移行期の心不全の予防または治療剤として有用である。

また、プラルモレリンは、強心作用を有すると同時に、心拍数に影響を与えず、血圧低下などの副作用をおこさない。従って、本願プラルモレリン含有製剤は、従来の急性心不全薬と異なり、血圧が低下した患者にも適用することができる。

Claims

請求の範囲

1 . D—ァラニルー 3— (ナフタレン一 2 rル) —D—ァラニル一 L—ァラニル— L—トリプトフィルー D—フエ二ルァラ二ルー L—リジンアミド及び/又はその塩を有効成分として含有することを特徴とする、急性心不全、慢性心不全の急性増悪期または慢性心不全への移行期の心不全の予防または治療剤。

2 . 該有効成分が D—ァラニルー 3— （ナフタレン— 2—ィル） — D—ァラニルー L—ァラ二ルー L—トリブトフィル— D _フエ二ルァラニル— Lーリジンァミドの酸付加塩である、請求の範囲第 1項に記載の心不全の予防または治療剤。

3 . 該有効成分が D _ァラニルー 3— (ナフ夕レン— 2—ィル) 一 D—ァラニルー L—ァラニル—L—トリブトフィル— D—フエニルァラニル—L一リジンァミドニ塩酸塩である、請求項 2に記載の心不全の予防または治療剤。

4. 該心不全が急性心不全である、請求の範囲第 1〜 3項のいずれか 1項に記載の心不全の予防または治療剤。

5 . 該心不全が慢性心不全の急性増悪期である、請求の範囲第 1〜 3項のいずれか 1項に記載の心不全の予防または治療剤。

6 . 該心不全が慢性心不全への移行期である、請求の範囲第 1〜 3項のいずれか 1項に記載の心不全の予防または治療剤。