WO2000041674A1 - Utilisation d'un extrait d'un vegetal du genre rosmarinus dans des compositions destinees a traiter les signes cutanes du vieillissement - Google Patents

Utilisation d'un extrait d'un vegetal du genre rosmarinus dans des compositions destinees a traiter les signes cutanes du vieillissement Download PDF

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skin
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Lionel Breton
Françoise Bernerd
Richard Martin
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L'oreal
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Definitions

  • the invention relates to the use of at least one extract of at least one plant of the genus Rosmarinus in or for the preparation of a composition intended to treat, preventively and / or curatively, the skin signs of aging .
  • the extract or the composition are intended to stimulate restructuring and / or inhibit the degradation of the skin and / or mucous membranes by stimulating the synthesis of collagen and / or by inhibiting collagenases.
  • the invention also relates to a method of cosmetic treatment of the skin and / or mucous membranes.
  • Human skin is made up of two compartments, namely a surface compartment, the epidemic, and a deep compartment, the dermis.
  • the natural human epidermis is mainly composed of three types of cells which are the keratinocytes, very majority, the melanocytes and the Langerhans cells. Each of these cell types contributes by its own functions to the essential role played in the body by the skin.
  • the dermis provides the epidermis with solid support. It is also its nourishing element. It mainly consists of fibroblasts and an extracellular matrix itself composed mainly of collagen, elastin and a substance, known as the fundamental substance, components synthesized by the fibroblast. There are also leukocytes, mast cells or tissue macrophages. It is also crossed by blood vessels and nerve fibers. In normal skin, that is to say non-pathological or scarring, the fibroblast is in a quiescent state, that is to say non-proliferative, not very active from a metabolic point of view and not mobile.
  • Collagen fibers which ensure the solidity of the dermis.
  • Collagen fibers are made up of fibrils sealed to each other, thus forming more than ten different types of structures.
  • the solidity of the dermis is largely due to the entanglement of collagen fibers packed against each other in all directions. Collagen fibers participate in the elasticity and tone of the skin and / or mucous membranes.
  • the collagen fibers are constantly renewed, but this renewal decreases with age, which leads to thinning of the dermis.
  • This thinning of the dermis is also due to pathological causes such as hypersecretion of corticosteroid hormones, certain diseases (Marfan syndrome, Ehiers-Danlos syndrome) or vitamin deficiencies (scurvy).
  • pathological causes such as hypersecretion of corticosteroid hormones, certain diseases (Marfan syndrome, Ehiers-Danlos syndrome) or vitamin deficiencies (scurvy).
  • extrinsic factors such as ultraviolet rays, tobacco or certain treatments (glucocorticoids, vitamin D and derivatives for example) also have an effect on the skin and its collagen level.
  • collagen fibers are sensitive to certain enzymes called collagenases. Degradation of collagen fibers results in the appearance of soft, wrinkled skin that humans, preferring the appearance of smooth and taut skin, have always sought to combat.
  • Collagenases are part of a family of enzymes called metalloproteinases (MMPs) which are themselves members of a family of proteolytic enzymes (endoproteases) which have a zinc atom coordinated to 3 cysteine residues and a methionine in their active site and which degrade the macromolecular components of the extracellular matrix and basal laminae at neutral pH (collagen, elastin, etc.).
  • MMPs metalloproteinases
  • endoproteases proteolytic enzymes
  • these enzymes are present, but weakly expressed, in normal physiological situations such as organ growth and tissue renewal.
  • the family of metalloproteinases is made up of several well-defined groups based on their similarities in terms of structure and substrate specificity (see Woessner JF, Faseb Journal, vol. 5, 1991, 2145).
  • collagenases intended for degrading fibrillar collagens MMP-1 or interstitial collagenase, MMP-8 or neutrophil collagenase, MMP-13 or collagenase 3
  • gelatinases which degrade collagen type IV or any denatured form of collagen MMP-2 or gelatinase A (72 kDa), MMP-9 or gelatinase B (92 kDa)
  • stromelysins MMP-3 including the broad spectrum of activity targets proteins in the extracellular matrix such as glycoproteins (fibronectin, laminin), proteoglycans, etc., or even membrane metalloproteinases.
  • Prolonged exposure to ultraviolet radiation has the effect of stimulating the expression of collagenases, particularly MMP-1. This is one of the components of photo-induced skin aging.
  • the main modifications concerning the dermis are a reduction in the collagen level and the dermal thickness. This leads in menopausal women to thinning of the skin and / or mucous membranes. The woman then feels a feeling of "dry skin” or of skin that pulls and there is an accentuation of fine wrinkles and fine lines on the surface. The skin has a rough appearance on palpation. Finally, the skin has reduced flexibility.
  • One of the aims of the present invention is therefore to be able to have a new product which has a stimulating effect on the synthesis of collagen, an effect which inhibits collagenases and, if possible, no significant side effects.
  • an extract of at least one plant of the genus Rosmarinus has an activity stimulating the synthesis of collagen and an activity inhibiting the activity of collagenases.
  • Plants of the genus Rosmarinus in addition to their taste and odor properties, are known for their anti-inflammatory effects.
  • the activity stimulating the synthesis of collagen and the activity inhibiting the activity of collagenases of an extract of at least one plant of the genus Rosmarinus have never been described.
  • the primary object of the invention is the use of at least one extract of at least one plant of the genus Rosmarinus in or for the preparation of a composition, the extract or the composition being intended to treat, so preventive and / or curative, the skin signs of aging.
  • extract of at least one plant of the genus Rosmarinus is understood to mean both a crude mixture of parts of the plant roughly reduced to pieces and of the extraction solvent as well as elaborate preparations of the active principles dissolved during the extraction.
  • active principle any molecule or composition capable of modifying or modulating the functioning of at least one given biological system.
  • cutaneous signs of aging means any modification of the external appearance of the skin due to aging, whether chronobiological and / or photoinduced, such as for example wrinkles and fine lines, withered skin, mole skin, thinned skin, the lack of elasticity and / or tone of the skin, but also all internal modifications of the skin which do not systematically result in a modified external appearance, such as for example any internal degradations of the skin, particularly of collagen, consecutive to exposure to ultraviolet radiation.
  • a second object of the invention is the use of at least one extract of at least one plant of the genus Rosmarinus in or for the preparation of a composition, the extract or the composition being intended to stimulate the synthesis of collagen .
  • a third object of the invention is the use of at least one extract of at least one plant of the genus Rosmarinus in or for the preparation of a composition, the extract or the composition being intended to inhibit the expression of proteases extracellular matrix, particularly metalloproteinases and even more particularly metalloproteinase type 1.
  • a fourth object of the invention is the use of at least one extract of at least one plant of the genus Rosmarinus in or for the preparation of a composition, the extract or the composition being intended to treat cutaneous lesions linked to menopause.
  • a fifth object of the invention is the use of at least one extract of at least one plant of the genus Rosmarinus in or for the preparation of a composition, the extract or the composition being intended for combating fine lines and wrinkles .
  • a sixth object of the invention is the use of at least one extract of at least one plant of the genus Rosmarinus in or for the preparation of a composition, the extract or the composition being intended for combating withered skin.
  • the seventh subject of the invention is the use of at least one extract of at least one plant of the genus Rosmarinus in or for the preparation of a composition, the extract or the composition being intended for combating soft skin.
  • the eighth object of the invention is the use of at least one extract of at least one plant of the genus Rosmarinus in or for the preparation of a composition, the extract or the composition being intended for combating thinned skin.
  • the ninth object of the invention is the use of at least one extract of at least one plant of the genus Rosmarinus in or for the preparation of a composition, the extract or the composition being intended to combat the lack of elasticity and / or skin tone.
  • the extract of at least one plant of the genus Rosmarinus used according to the invention can be obtained from plant material obtained from a whole plant or part of a plant such as the leaves, stems, flowers, petals, roots or still dedifferentiated cells.
  • dedifferentiated plant cells any plant cell having none of the characteristics of a particular specialization and capable of living by itself and not in dependence on other cells.
  • the whole plant is used, particularly the stem and / or the leaves, very particularly the leaves.
  • the extract of at least one plant of the genus Rosmarinus can be any extract prepared from any plant material derived from at least one plant of the genus Rosmarinus cultivated in vivo or derived from culture in vitro.
  • in vivo culture means any culture of the conventional type, that is to say in soil in the open air or in a greenhouse, or even above ground.
  • in vitro culture means all of the techniques known to those skilled in the art which artificially make it possible to obtain a plant or part of a plant.
  • the selection pressure imposed by physicochemical conditions during the growth of plant cells in vitro makes it possible to obtain standardized plant material available throughout the year, unlike plants cultivated in vivo.
  • a plant of the genus Rosmarinus is used which is grown in vivo.
  • the Rosmarinus officinalis species comprises two varieties which are Rosmarinus tenuifolius and Rosmarinus latifolius.
  • the extract of the invention can be prepared from plant material from the Rosmarinus officinalis species, whatever the variety.
  • Any extraction method known to those skilled in the art can be used to prepare the extract according to the invention. Mention may, in particular, be made of alcoholic extracts, in particular ethanolic or hydroalcoholic extracts.
  • the extract is an aqueous extract.
  • the plant material is ground in a cold aqueous solution and in a second step, the particles in suspension are removed from the aqueous solution resulting from the first step.
  • This aqueous solution corresponds to the extract.
  • the aqueous solution from the second step is sterilized.
  • This extract can then be lyophilized.
  • the first step can advantageously be replaced by a simple freezing operation of the plant tissues (for example at -20 ° C or even at -180 ° C in liquid nitrogen), followed by an aqueous extraction repeating the second and third steps above described.
  • the cold treatment makes it possible to freeze the enzymatic activities, the sterilizing filtration avoids the degradation of the active ingredients by the microorganisms of the environment.
  • the water vehicle is compatible with ex vivo receptors and facilitates cosmetic or pharmaceutical formulations.
  • the extract obtained can be fractionated by any known fractionation method making it possible to eliminate the oxidases and in particular the polyphenoloxidase.
  • the extract can also be stabilized. Any known stabilization method can be used according to the invention. It is possible, for example, to stabilize the extract of the invention by bubbling nitrogen through to eliminate the dissolved oxygen or alternatively by adding cysteine and / or sulfur derivatives to a final concentration of between 0.5 g / l and 10 g / l and preferably between 1 g / l and 2.5 g / l.
  • the extract alone can constitute the active principle of the compositions of the invention.
  • the extract does not contain rosmarinic acid.
  • An example of preparation of extract usable according to the invention is given elsewhere in the examples.
  • the amount of extract usable according to the invention is of course a function of the desired effect and can therefore vary to a large extent.
  • an extract as defined above can be used in an amount representing from 0.001% to 20% of the total weight of the composition and preferably in an amount representing from 0.01% to 10% of the total weight of the composition.
  • the present invention further relates to a cosmetic treatment process for the skin intended to stimulate the synthesis of collagen and / or treat cutaneous lesions linked to age and / or menopause and / or fight against thinning of the skin. dermis and / or combat the appearance of soft and / or wrinkled skin, characterized in that a cosmetic composition comprising at least extract of, is applied to the skin, to the hair, and / or to the mucous membranes. at least one plant of the genus Rosmarinus.
  • the cosmetic treatment process of the invention can be implemented in particular by applying the cosmetic compositions as defined above, according to the usual technique for using these compositions. For example: application of creams, gels, serums, lotions, milks, shampoos or anti-sun compositions, on the skin, or on the hair or application of toothpaste on the gums.
  • compositions illustrate the invention without limiting it in any way.
  • proportions indicated are percentages by weight.
  • Example 1 Preparation of an extract of Rosmarinus officinalis:
  • the powder obtained is mixed with 5 liters of 0.05 M phosphate buffer at pH 8.5.
  • the whole is stirred for 30 minutes at 4 ° C, then centrifuged at 10,000 G at 4 ° C.
  • the supernatant is filtered at 0.22 ⁇ m (sterilizing filtration).
  • the extract is then fractionated by ultrafiltration on a Sartorius type membrane in order to eliminate the oxidation phenomena therefrom.
  • the extract is then lyophilized. This gives 29.5 grams of active extract called "lyophilized extract”.
  • Example 2 Effect of the extract of Example 1 on the synthesis of collagen: The study is carried out by measuring the incorporation of radioactive praline in cultures of normal human dermal fibroblasts.
  • the fibroblast cultures are carried out according to conventional cell culture methods, namely in MEM / M199 medium sold by the company Gibco, in the presence of sodium bicarbonate (1.87 mg / ml) of L-glutamine (2 mM), penicillin (50 IU / ml) and 10% fetal calf serum (Gibco).
  • the test is carried out on cell cultures at 80% confluence in a 24-hole plate.
  • the extract of Example 1 lyophilized extract titrated at 25 mg / ml of water to obtain a 100% stock solution
  • 0.2%, 1% and 2% is brought into contact with cells for 48 hours.
  • Labeling with tritiated praline (L- [2,3- 3 H] -proline sold by Amersham, 33 ⁇ Ci / ml) is carried out for 24 hours.
  • the level of incorporated tritiated praline is measured at the end of the test by acid precipitation of the proteins on filters and counting in liquid scintillation.
  • a positive control (vitamin C at 20 ⁇ g / ml) known to stimulate the synthesis of collagen is introduced into the test as a reference.
  • cpm counts per minute
  • p confidence interval calculated according to the Dunett method.
  • Example 3 Effect of the extract of Example 1 on the expression of collagenases.
  • the study makes it possible to evaluate the effectiveness of a product in inhibiting the induction of transcription of the collagenase gene by ultraviolet radiation.
  • the test is carried out on Hela cells (ATCC CCL2) in which the promoter of the collagenase 1 gene (3.8 kB) clones upstream of the chloramphenicol acetyltransferase (CAT) gene has been introduced.
  • ATCC CCL2 Hela cells
  • CAT chloramphenicol acetyltransferase
  • UVB ultraviolet B radiation
  • the cells are then brought into contact for 2 hours with the extract of Example 1 at concentrations varying from 0.05% to 0.5%.
  • the CAT assay is carried out using a "CAT-Elisa" kit sold by the company Boehringer, according to the supplier's instructions.
  • a "base rate" of the expression of CAT is measured in cells which have received neither ultraviolet radiation nor treatment with the product to be tested.
  • the test results, presented in the attached table, are expressed relative to the base rate (100%), as a percentage of activation or inhibition of the expression of the CAT gene.
  • Example 4 Examples of formulations illustrating the invention and particularly the compositions according to the invention combining at least one extract of Rosmarinus officinalis. These compositions were obtained by simple mixing of the various components.
  • Composition 1 Make-up removing lotion for the face
  • Composition 2 Shampoo
  • Hydroxypropylcellulose (Klucel H ® sold by the company Hercules) 1.00%
  • Composition 3 Face care cream (oil in water emulsion)
  • Polysorbate 60 (Tween 60 ® sold by the company ICI) 1.00%
  • Composition 4 Skin gel Extract from Example 1 0.50%
  • Hydroxypropylcellulose (Klucel H ® sold by the company Hercules) 1.00%
  • Composition 5 Gel for facial care
  • Composition 6 Gel Extract of Example 1 1, 00%
  • Hydroxypropylcellulose (Klucel H ® sold by Hercules) 1.00% Antioxidant 0.05% Lidocaine hydrochloride 2.00% Isopropanol 40.00% Preservative 0.30% Water qs 100.00%
  • Composition 7 Sun erythema care cream (oily oil emulsion - ddaanns ⁇ > - water)
  • Polysorbate 60 (Tween 60 ® sold by the company ICI) 1.00%
  • Composition 8 Anti-wrinkle face cream (emulsion ⁇ hhuuiillee // eeaauu))
  • Composition 9 Lotion Extract from Example 1 0.50% Giycolic acid 50.00% Hydroxypropylcellulose (Klucel H ® sold by the company Hercules) 0.05% Preservative 0.30%

Abstract

L'invention se rapporte à l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus, dans ou pour la préparation d'une composition destinée à traiter, de manière préventive et/ou curative, les signes cutanés du vieillissement. En particulier, l'extrait ou la composition sont destinés à stimuler la restructuration et/ou inhiber la dégradation de la peau et/ou des muqueuses par la stimulation de la synthèse du collagène et/ou par l'inhibition des collagénases.

Description

Utilisation d'un extrait d'un végétai du genre Rosmarinus dans des compositions destinées à traiter les signes cutanés du vieillissement
L'invention se rapporte à l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition destinée à traiter, de manière préventive et/ou curative, les signes cutanés du vieillissement. En particulier, l'extrait ou la composition sont destinés à stimuler la restructuration et/ou inhiber la dégradation de la peau et/ou des muqueuses par la stimulation de la synthèse du collagène et/ou par l'inhibition des collagénases. L'invention a également pour objet un procédé de traitement cosmétique de la peau et/ou des muqueuses.
La peau humaine est constituée de deux compartiments à savoir un compartiment superficiel, l'épidémie, et un compartiment profond, le derme.
L'épiderme humain naturel est composé principalement de trois types de cellules qui sont les kératinocytes, très majoritaires, les mélanocytes et les cellules de Langerhans. Chacun de ces types cellulaires contribue par ses fonctions propres au rôle essentiel joué dans l'organisme par la peau.
Le derme fournit à l'épiderme un support solide. C'est également son élément nourricier. Il est principalement constitué de fibroblastes et d'une matrice extracellulaire composée elle-même principalement de collagène, d'élastine et d'une substance, dite substance fondamentale, composants synthétisés par le fibroblaste. On y trouve aussi des leucocytes, des mastocytes ou encore des macrophages tissulaires. Il est également traversée par des vaisseaux sanguins et des fibres nerveuses. Dans une peau normale, c'est à dire non pathologique ni cicatricielle, le fibroblaste est à l'état quiescent, c'est à dire non prolifératif, peu actif d'un point de vue métabolique et non mobile.
Ce sont les fibres de collagène qui assurent la solidité du derme. Les fibres de collagène sont constituées de fibrilles scellées les unes aux autres, formant ainsi plus de dix types de structures différentes. La solidité du derme est en grande partie due à l'enchevêtrement des fibres de collagène tassées les unes contre les autres en tous sens. Les fibres de collagène participent à l'élasticité et à la tonicité de la peau et/ou des muqueuses.
Les fibres de collagènes sont constamment renouvelées mais ce renouvellement diminue avec l'âge ce qui entraîne un amincissement du derme. Cet amincissement du derme est également dû à des causes pathologiques comme par exemple l'hypersécrétion d'hormones corticoïdes, certaines maladies (syndrome de Marfan, syndrome de Ehiers-Danlos) ou encore des carences vitaminiques (scorbut). Il est également admis que des facteurs extrinsèques comme les rayons ultraviolets, le tabac ou certains traitements (Glucocorticoïdes, vitamine D et dérivés par exemple) ont également un effet sur la peau et sur son taux de collagène.
Cependant, divers facteurs entraînent la dégradation du collagène, avec toutes les conséquences que l'on peut envisager sur la structure et/ou la fermeté de la peau et/ou des muqueuses.
Bien que très résistantes, les fibres de collagène sont sensibles à certaines enzymes appelées collagénases. Une dégradation des fibres de collagène entraîne l'apparence de peau molle et ridée que l'être humain, préférant l'apparence d'une peau lisse et tendue, cherche depuis toujours à combattre.
Les collagénases font partie d'une famille d'enzymes appelées métalloprotéinases (MMPs) qui sont elles-mêmes les membres d'une famille d'enzymes protéolytiques (endoprotéases) qui possèdent un atome de zinc coordonné à 3 résidus cystéine et une méthionine dans leur site actif et qui dégradent les composants macromoléculaires de la matrice extracellulaire et des lames basâtes à pH neutre (collagène, élastine, etc. ...). Très largement répandues dans le monde vivant, ces enzymes sont présentes, mais faiblement exprimées, dans des situations physiologiques normales comme la croissance des organes et le renouvellement des tissus.
Leur surexpression chez l'homme et leur activation sont cependant liées à de nombreux processus, parfois pathologiques, qui impliquent la destruction et le remodelage de la matrice. Cela entraîne soit une résorption non contrôlée de la matrice extracellulaire, soit inversement l'installation d'un état de fibrose.
La famille des métalloprotéinases est constituée de plusieurs groupes bien définis basés sur leurs ressemblances en terme de structure et de spécificité de substrat (voir Woessner J. F., Faseb Journal, vol. 5, 1991, 2145). Parmi ces groupes, on peut citer les collagénases destinées à dégrader les collagènes fibrillaires (MMP-1 ou collagénase interstitielle, MMP-8 ou collagénase de neutrophile, MMP-13 ou collagénase 3), les gélatinases qui dégradent le collagène de type IV ou toute forme de collagène dénaturé (MMP-2 ou gélatinase A (72 kDa), MMP-9 ou gélatinase B (92 kDa) ), les stromélysines (MMP-3) dont le large spectre d'activité s'adresse aux protéines de la matrice extracellulaire telles que les glycoproteines (fibronectine, laminine), les proteoglycannes, etc., ou encore les métalloprotéinases membranaires.
L'exposition prolongée aux rayonnements ultraviolets, particulièrement aux rayonnements ultraviolets de type A et ou B, a pour effet une stimulation de l'expression des collagénases, particulièrement de la MMP-1. C'est là une des composantes du vieillissement cutané photo-induit.
Par ailleurs à la ménopause, les principales modifications concernant le derme sont une diminution du taux de collagène et de l'épaisseur dermique. Cela entraîne chez la femme ménopausée un amincissement de la peau et/ou des muqueuses. La femme ressent alors une sensation de "peau sèche" ou de peau qui tire et l'on constate une accentuation des fines rides et ridules de surface. La peau présente un aspect rugueux à la palpation. Enfin la peau présente une souplesse diminuée.
On comprend alors à la lecture de ce qui précède l'importance du collagène dans la structure des tissus, particulièrement de la peau et/ou des muqueuses, et l'importance qu'il y a à non seulement maintenir son taux dans les tissus mais également à combattre sa dégradation pour ainsi lutter contre le vieillissement qu'il soit chronobiologique ou photo-induit et ses conséquences, l'amincissement du derme et/ou la dégradation des fibres de collagène ce qui entraînent l'apparence de peau molle et ridée.
Un des buts de la présente invention est donc de pouvoir disposer d'un produit nouveau qui présente une effet stimulateur de la synthèse du collagène, un effet inhibiteur des collagénases et si possible pas d'effets secondaires notables.
Or, de manière surprenante et inattendue la demanderesse a maintenant découvert qu'un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus présente une activité stimulatrice de la synthèse du collagène et une activité inhibitrice de l'activité des collagénases.
Les végétaux du genre Rosmarinus, outre leurs propriétés gustatives et odorantes, sont connus pour leurs effets anti-inflammatoires. On peut citer à cet égard les demandes de brevet FR-A-2504551 , JP-A-7017846, WO-A-9325209, SU-A-1733000, FR-A-2662078, DE-A-3536342, US 5393526 ou encore la demande déposée par la demanderesse sous le numéro WO-A-9701288. A la connaissance de la demanderesse l'activité stimulatrice de la synthèse du collagène et l'activité inhibitrice de l'activité des collagénases d'un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus n'ont jamais été décrites.
Ainsi, l'invention a pour objet premier l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à traiter, de manière préventive et/ou curative, les signes cutanés du vieillissement.
Par extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus, on entend aussi bien un mélange brut de parties du végétal grossièrement réduites en morceaux et du solvant d'extraction que des préparations élaborés des principes actifs solubilisés lors de l'extraction.
Par principe actif, on entend toute molécule ou composition susceptible de modifier ou de moduler le fonctionnement d'au moins un système biologique donné.
Par signes cutanés du vieillissement on entend toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau dues au vieillissement qu'il soit chronobiologique et/ou photoinduit, comme par exemple les rides et ridules, la peau flétrie, la peau mole, la peau amincie, le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau, mais également toutes modifications internes de la peau qui ne se traduisent pas systématiquement par un aspect extérieur modifié, comme par exemple toutes dégradations internes de la peau, particulièrement du collagène, consécutives à une exposition aux rayonnements ultra-violets.
L'invention a pour second objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à stimuler de la synthèse du collagène.
L'invention a pour troisième objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à inhiber l'expression des protéases de la matrice extracellulaire, particulièrement des métalloprotéinases et encore plus particulièrement de la métalloprotéinase de type 1. L'invention a pour quatrième objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à traiter les atteintes cutanées liées à la ménopause.
L'invention a pour cinquième objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre les rides et ridules.
L'invention a pour sixième objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre la peau flétrie.
L'invention a pour septième objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétai du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre la peau molle.
L'invention a pour huitième objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre la peau amincie.
L'invention a pour neuvième objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau.
L'extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus utilisé selon l'invention peut être obtenu à partir de matériel végétal issu de plante entière ou de partie de plante comme les feuilles, les tiges, les fleurs, les pétales, les racines ou encore des cellules dédifférenciées.
Par cellules végétales dédifférenciées, on entend toute cellule végétale ne présentant aucun des caractères d'une spécialisation particulière et capable de vivre par elle-même et non en dépendance avec d'autres cellules.
Préférentiellement selon l'invention on utilise de la plante entière, particulièrement de la tige et/ou des feuilles, très particulièrement des feuilles. L'extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus peut être tout extrait préparé à partir de tout matériel végétal issu d'au moins un végétal du genre Rosmarinus cultivé in vivo ou issu de culture in vitro.
Par culture in vivo on entend toute culture de type classique c'est à dire en sol à l'air libre ou en serre, ou encore hors sol.
Par culture in vitro, on entend l'ensemble des techniques connues de l'homme du métier qui permet de manière artificielle l'obtention d'un végétal ou d'une partie d'un végétal. La pression de sélection imposée par les conditions physicochimiques lors de la croissance des cellules végétales in vitro permet d'obtenir un matériel végétal standardisé et disponible tout au long de l'année contrairement aux plantes cultivées in vivo.
Préférentiellement selon l'invention on utilise un végétal du genre Rosmarinus issu de culture in vivo.
L'espèce Rosmarinus officinalis comporte deux variétés qui sont Rosmarinus tenuifolius et Rosmarinus latifolius. L'extrait de l'invention peut être préparé à partir de matériel végétal provenant de l'espèce Rosmarinus officinalis quelque soit la variété.
Toute méthode d'extraction connue de l'homme du métier peut être utilisée pour préparer l'extrait selon l'invention. On peut, en particulier, citer les extraits alcooliques, notamment ethanoliques ou encore hydroalcooliques.
Préférentiellement selon l'invention, l'extrait est un extrait aqueux.
On peut également utiliser un extrait préparé par la méthode décrite dans la demande de brevet français n° 95-02379 déposée par la demanderesse. Ainsi, dans une première étape on broie le matériel végétal dans une solution aqueuse à froid et dans une deuxième étape les particules en suspension sont éliminées de la solution aqueuse issue de la première étape. Cette solution aqueuse correspond à l'extrait.
Eventuellement, dans une troisième étape on stérilise la solution aqueuse issue de la deuxième étape.
Cet extrait peut alors être lyophilisé. La première étape peut être avantageusement remplacée par une opération de congélation simple des tissus végétaux (par exemple à -20°C ou encore à -180°C dans l'azote liquide), suivie d'une extraction aqueuse reprenant les deuxième et troisième étapes ci-dessus décrites.
Le traitement à froid permet de geler les activités enzymatiques, la filtration stérilisante évite la dégradation des actifs par les micro-organismes de l'environnement. Enfin, le véhicule eau est compatible avec les récepteurs ex vivo et facilite les formulations cosmétiques ou pharmaceutiques.
Il est connu que les extraits végétaux contiennent des oxydases responsables, entre autres, de l'oxydation desdits extraits. Or une telle oxydation conduit à une coloration marron foncée des extraits et à une odeur acre rendant ceux-ci peu compatibles avec leur utilisation en cosmétique. Dans cet ordre d'idée on connaît en particulier une laccase dont le poids moléculaire est supérieur à 100000 daltons.
Ainsi, avantageusement, l'extrait obtenu peut être fractionné par toute méthode de fractionnement connue permettant d'éliminer les oxydases et en particulier la polyphénoloxydase. On peut par exemple filtrer l'extrait de l'invention sur une membrane de dialyse afin d'en éliminer les molécules d'un poids moléculaire supérieur à 100000 daltons. Il est également possible de faire subir à l'extrait un fractionnement par précipitations sélectives.
D'autres méthodes permettent de se prémunir des phénomènes d'oxydation. En particulier, l'extrait peut également être stabilisé. Toute méthode de stabilisation connue peut être utilisée selon l'invention. On peut par exemple stabiliser l'extrait de l'invention par barbotage d'azote pour éliminer l'oxygène dissout ou encore en y ajoutant de la cystéine et/ ou des dérivés soufrés à une concentration finale comprise entre 0,5 g/l et 10 g/l et de préférence entre 1 g/l et 2,5 g/l.
Bien évidemment l'extrait selon l'invention peut être fractionné et stabilisé.
L'extrait peut constituer à lui seul le principe actif des compositions de l'invention.
Sous une forme particulière de l'invention, l'extrait ne contient pas d'acide rosmarinique. Un exemple de préparation d'extrait utilisable selon l'invention est donné par ailleurs dans les exemples.
La quantité d'extrait utilisable selon l'invention est bien entendu fonction de l'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure.
Pour donner un ordre de grandeur, on peut utiliser un extrait tel que défini précédemment en une quantité représentant de 0,001% à 20% du poids total de la composition et préférentiellement en une quantité représentant de 0,01% à 10% du poids total de la composition.
La présente invention a en outre pour objet un procédé de traitement cosmétique de la peau destiné à stimuler la synthèse du collagène et/ou traiter les atteintes cutanées liées à l'âge et/ou à la ménopause et/ou lutter contre l'amincissement du derme et/ou combattre l'apparence de la peau molle et/ou ridée, caractérisé par le fait que l'on applique sur la peau, sur les cheveux, et/ou sur les muqueuses, une composition cosmétique comprenant au moins extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus.
Le procédé de traitement cosmétique de l'invention peut être mis en œuvre notamment en appliquant les compositions cosmétiques telles que définies ci- dessus, selon la technique d'utilisation habituelle de ces compositions. Par exemple : application de crèmes, de gels, de sérums, de lotions, de laits, de shampooings ou de compositions anti-solaires, sur la peau, ou sur les cheveux ou encore application de dentifrice sur les gencives.
Les exemples et compositions suivants illustrent l'invention sans la limiter aucunement. Dans les compositions les proportions indiquées sont des pourcentages en poids.
Exemple 1 : Préparation d'un extrait de Rosmarinus officinalis :
636 grammes de matériel végétal de Rosmarinus officinalis, partie aérienne correspondant à des tiges et des feuilles, sont plongés dans environ 1 kg d'azote liquide. Après élimination des tiges, les feuilles sont réduites en poudre par broyage au
Turrax à 24000 T/min. durant 1 minute à 4°C (bain de glace).
La poudre obtenue est mélangée à 5 litres de tampon phosphate 0,05 M à pH 8,5.
L'ensemble est agité durant 30 minutes à 4°C, puis centrifugé à 10000 G à 4°C. Le surnageant est filtré à 0,22 μm (filtration stérilisante).
L'extrait est alors fractionné par ultrafiltration sur membrane de type Sartorius afin d'en éliminer les phénomènes d'oxydation.
L'extrait est ensuite lyophilisé. On obtient ainsi 29,5 grammes d'extrait actif dénommé "extrait lyophilisé".
Exemple 2 : Effet de l'extrait de l'exemple 1 sur la synthèse du collagène : L'étude est faite par mesure de l'incorporation de praline radioactive dans des cultures de fibroblastes dermiques humains normaux. Les cultures de fibroblastes sont effectuées selon les méthodes classiques de culture cellulaire, à savoir en milieu MEM/M199 vendu par la société Gibco, en présence de bicarbonate de sodium (1 ,87 mg/ml) de L-glutamine (2 mM), de pénicilline (50 Ul/ml) et de 10% de sérum de veau fœtal (Gibco).
Le test est effectué sur des cultures de cellules à 80% de confluence en plaque de 24 trous. L'extrait de l'exemple 1 (extrait lyophilisé titré à 25 mg/ml d'eau pour obtenir une solution mère à 100%), aux concentrations finales de 0,2%, 1% et 2%, est mis en contact avec les cellules pendant 48 heures. Le marquage à la praline tritiée (L-[2,3-3H]-proline vendue par Amersham, 33 μCi/ml) est effectué pendant 24 heures.
Le taux de praline tritiée incorporée est mesuré en fin de test par précipitation acide des protéines sur filtres et comptage en scintillation liquide.
Les résultats sont évalués par rapport à un témoin constitué par des cellules n'ayant pas été traitées avec l'extrait de l'exemple 1.
Un témoin positif (vitamine C à 20 μg/ml) connu pour stimuler la synthèse du collagène est introduit dans le test comme référence.
Les résultats de ce test, exprimés en pourcentages d'activation, sont présentés dans le tableau suivant :
Figure imgf000012_0001
cpm : coups par minute p : intervalle de confiance calculé selon la méthode de Dunett.
Ces résultats montrent que l'extrait de l'exemple 1 stimule de façon significative l'incorporation de praline dans le collagène et donc qu'il présente un effet sur la néosynthèse du collagène. .
Exemple 3 : Effet de l'extrait de l'exemple 1 sur l'expression des collagénases.
L'étude permet d'évaluer l'efficacité d'un produit à inhiber l'induction de la transcription du gène de la collagénase par le rayonnement ultra-violet.
Le test est réalisé sur des cellules Hela (ATCC CCL2) dans lesquelles le promoteur du gène de la collagénase 1 (3,8 kB) clone en amont du gène de la chloramphénicol acétyltransférase (CAT) a été introduit.
Les cellules sont exposées à un rayonnement ultra-violet B (UVB) émis par un tube Philips TL 12W/20, filtrés KADACEL afin d'éliminer les UVC, aux doses de 5 et 10 mj/cm2. Les cellules sont alors mises en contact pendant 2 heures avec l'extrait de l'exemple 1 à des concentrations variant de 0,05% à 0,5%. Le dosage de la CAT est réalisé à l'aide d'un kit "CAT-Elisa" vendu par la société Boehringer, selon les indications du fournisseur.
Un "taux de base" de l'expression de la CAT est mesuré dans des cellules n'ayant reçu ni rayonnement ultra-violet ni traitement par le produit à tester. Les résultats du test, présentés dans le tableau ci-joint, sont exprimés par rapport au taux de base (100%), en pourcentage d'activation ou d'inhibition de l'expression du gène CAT.
Ces résultats reflètent donc l'activité du promoteur de la collagénase 1 après induction par les ultra-violets et en présence ou non du produit à tester.
Figure imgf000013_0001
* : Dose en mJ/cm2
Ces résultats montrent que :
- l'activité du promoteur de la collagénase est stimulée par les rayons UVB
(colonne "sans extrait") ; - cette stimulation est diminuée en présence de l'extrait de l'exemple 1 (colonnes "Extrait à ...") ;
Ces résultats montrent bien l'effet inhibiteur de la synthèse de la collagénase 1 , par inhibition de l'activité de son promoteur, de l'extrait de Rosmarinus officinalis de l'exemple 1.
Exemple 4 : Exemples de formulations illustrant l'invention et particulièrement les compositions selon l'invention associant au moins un extrait de Rosmarinus officinalis. Ces compositions ont été obtenues par simple mélange des différents composants.
Composition 1 : Lotion démaquillante pour le visage
Extrait de l'exemple 1 10,00 %
Antioxydant 0,05 %
Isopropanol 40,00 %
Conservateur 0,30 %
Eau qsp 100,00 %
Composition 2 : Shampooing
Extrait de l'exemple 1 0,50 %
Hydroxypropylcellulose (Klucel H® vendu par la société Hercules) 1,00 %
Parfum 0,50 %
Conservateur 0,30 %
Eau qsp 100,00 %
Composition 3 : Crème de soin du visage (émulsion huile dans eau)
Extrait de l'exemple 1 2,00 %
Stéarate de glycérol 2,00 %
Polysorbate 60 (Tween 60® vendu par la société ICI) 1 ,00 %
Acide stéarique 1 ,40 %
Triéthanolamine 0,70 %
Carbomer 0,40 %
Fraction liquide du beurre de karité 12,00 %
Perhydrosqualène 12,00 %
Antioxydant 0,05 %
Parfum 0,50 %
Conservateur 0,30 % Eau qsp 100,00 %
Composition 4 : Gel pour la peau Extrait de l'exemple 1 0,50 %
Acide tout trans rétinoïque 0,05 %
Hydroxypropylcellulose (Klucel H® vendu par la société Hercules) 1 ,00 %
Antioxydant 0,05 %
Isopropanol 40,00 % Conservateur 0,30 %
Eau qsp 100,00 %
Composition 5 : Gel pour le soin du visage
Extrait de l'exemple 1 5,00 % Hydroxypropylcellulose (Klucel H® vendu par la société Hercules) 1 ,00 %
Antioxydant 0,05 %
Isopropanol 40,00 %
Conservateur 0,30 %
Eau qsp 100,00 %
Composition 6 : Gel Extrait de l'exemple 1 1 ,00 %
Hydroxypropylcellulose (Klucel H® vendu par la société Hercules) 1,00 % Antioxydant 0,05 % Chlorhydrate de lidocaïne 2,00 % Isopropanol 40,00 % Conservateur 0,30 % Eau qsp 100,00 %
Composition 7 : Crème de soin de l'érythème solaire (émulsion hu uiillee--ddaannsε >--eeaau)
Extrait de l'exemple 1 2,50 %
Stéarate de glycérol 2,00 %
Polysorbate 60 (Tween 60® vendu par la société ICI) 1 ,00 %
Acide stéarique 1 ,40 % Acide glycyrrhétinique 2,00 %
Triéthanolamine 0,70 %
Carbomer 0,40 %
Fraction liquide du beurre de karité 12,00 % Huile de tournesol 10,00 % Antioxydant 0,05 % Parfum 0,50 % Conservateur 0,30 % Eau qsp 100,00 %
Composition 8 : Crème de soin antirides pour le visage (émulsion ι hhuuiillee//eeaauu))
Extrait de l'exemple 1 5,00 %
Stéarate de glycérol 2,00 % Polysorbate 60 (Tween 60® vendu par la société ICI) 1 ,00 %
Acide stéarique 1,40 %
Acide n-octanoyl-5-salicyiique 0,50 %
Triéthanolamine 0,70 %
Carbomer 0,40 % Fraction liquide du beurre de karité 12,00 %
Perhydrosqualène 12,00 %
Antioxydant 0,05 %
Parfum 0,50 %
Conservateur 0,30 % Eau qsp 100,00 %
Composition 9 : Lotion Extrait de l'exemple 1 0,50 % Acide giycolique 50,00 % Hydroxypropylcellulose (Klucel H® vendu par la société Hercules) 0,05 % Conservateur 0,30 %
NaOH qsp pH = 2,8
Ethanol qsp 100,00 %

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à traiter, de manière préventive et/ou curative, les signes cutanés du vieillissement.
2. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à stimuler de la synthèse du collagène.
3. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à inhiber l'expression des protéases de la matrice extracellulaire.
4. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée par le fait que l'extrait ou la composition sont destinés à inhiber l'expression des métalloprotéinases.
5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 3 ou 4, caractérisée par le fait que l'extrait ou la composition sont destinés à inhiber l'expression de la métalloprotéinase de type 1.
6. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à traiter les atteintes cutanées liées à la ménopause.
7. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre les rides et ridules.
8. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre la peau flétrie.
9. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre la peau molle.
10. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre la peau amincie.
11. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau.
12. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition, l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre les dégradations internes de la peau consécutives à une exposition aux rayonnements ultra-violets.
13. Utilisation selon la revendication 12, l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre les dégradations du collagène.
14. Utilisation selon l'une quelconque des revendication précédentes, caractérisée par le fait que le matériel végétal est issu de plante entière ou de partie de plante comme les feuilles, les tiges, les fleurs, les pétales, les racines ou encore des cellules dédifférenciées.
15. Utilisation selon la revendication 14, caractérisée par le fait que le matériel végétal est issu des feuilles.
16. Utilisation selon l'une quelconque des revendication précédentes, caractérisée par le fait que le matériel végétal est issu d'au moins un végétal du genre Rosmarinus cultivé in vivo ou issu de culture in vitro.
17. Utilisation selon la revendication 16, caractérisée par le fait que le matériel végétal est issu d'au moins un végétal du genre Rosmarinus cultivé in vivo.
18. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée par le fait que l'extrait est un extrait aqueux.
19. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée par le fait que l'extrait ne contient pas d'acide rosmarinique.
20. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée par le fait que l'extrait est utilisé en une quantité représentant de 0,001% à 20% du poids total de la composition.
21. Utilisation selon la revendication précédente, caractérisée par le fait que l'extrait est utilisé en une quantité représentant de 0,01% à 10% du poids total de la composition.
22. Procédé de traitement cosmétique de la peau destiné à stimuler la synthèse du collagène et/ou traiter les atteintes cutanées liées à l'âge et/ou à la ménopause et/ou lutter contre l'amincissement du derme et/ou combattre l'apparence de la peau molle et ridée, caractérisé par le fait que l'on applique sur la peau, sur les cheveux, et/ou sur les muqueuses, une composition cosmétique comprenant au moins extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus.
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