WO2000010571A1

WO2000010571A1 - Antagonistes des canaux calciques

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Publication number: WO2000010571A1
Application number: PCT/JP1999/004535
Authority: WO
Inventors: Yoshinori Ito
Original assignee: Nippon Shinyaku Co., Ltd.
Priority date: 1998-08-25
Filing date: 1999-08-24
Publication date: 2000-03-02
Also published as: EP1108430A1

Description

明細書

カルシウムチヤネノレ掊抗薬技術分野

本発明は、 P/Q-型カルシウムチャネル遮断剤に関する。背景技術

形質膜に存在する電位依存性カルシウムチャネルは、膜電位の脱分極により開き、電気化学的勾配に従って細胞外のカルシウムィォンを選択的に流入させる。すなわち、カルシウムチャネルには、活動電位を発生させる役割と、膜電位情報をカルシウムイオン濃度变化という化学的情報に変換する役割の二面性がある。電気生理学的にカルシウムチャネルは、活性化開口される電位により、高電位活性型（膜電位が 0 mV 近くまで脱分極しないと開かない）と低電位活性型（膜電位が— 60mV 辺りのかなりマイナス電位でも開く）の二つに大別される。カルシウムチャネルには現在、 6つのサブタイプ（ L、 N、 P、 Q、 T、 R型）の存在が知られている。高電位活性型は、電気生理学的 · 薬理学的性質により、 L、 N、 P型に分類されてきた。 L型チャネルは、ジヒドロピリジン（DHP)感受性の高電位活性型カルシウムチャネルとして分類され、血管、膀胱、消化器等の末梢組織の平滑筋、神経、心筋に存在する。 N型は、 DHP 非感受性の高電位活性型カルシウムチャネルとして分類され、神経終末にあるが、平滑筋にはない。 P型は小脳のプルキンェ細胞に多く発現し、その亜種と言われる Q型とともに神経終末に存在しており、神経伝達物質の遊離を調節している。 P型も Q型も、 ω —コノトキシン GVIA に対する感受性がなく、クモ毒成分の ω—ァガトキシン- IVA及び低分子ポリアミンの FTX (funnel- weh sp i der toxin)によりブロックされる。現在のところ、両者の違いは、 ω —ァガトキシン - 1 VA に対する感受性の定量的な差しか見いだされていず、 Q型は、 Ρ型と同一か否か明らかになつていないことから、一般には、 P/Q - 型カルシウムチャネルと呼ばれている。 R型と呼ばれているカルシゥムチャネルは、小脳の顆粒細胞に存在する。 N、 P、 Q及び R型は、非 L型として括ることが可能であり、どれも神経終末部に豊富に存在し、神経伝達物質放出の制御へ寄与すると言われている。低電位活性型には T型のみが知られている。 T型は各組織に広く分布し、心筋や神経でのペースメーカー活性や興奮性に関与している。上記のように、 P型及び Q型カルシウムチャネルは、神経終末部に豊富に存在しており、このチャネルの活性化により神経終末へのカルシウムィオン流入が引き起こされ、神経伝達物質が放出される。このことから P型及び Z又は Q型カルシウムチャネル遮断作用を有する化合物は、神経伝達物質の遊離を抑制し、神経伝達物質が関連している種々の疾患の治療剤として用いることができる。

例えば、神経痛やリウマチにおいては、脊髄の知覚神経における N型及び P/Q-型カルシウムチャネルが活性化され、痛みの伝達物質として知られているサブスタンス Pやグルタミン酸の遊離が增加することにより、痛覚過敏になると考えられている。 P/Q -型カルシゥムチャネル遮断薬は、このような疾患における慢性疼痛の抑制に有用であることが知られている。

さらには、種々の神経疾患（てんかん、精神異常、 A L S ) や心循環器系疾患（高血圧、不整脈、心筋梗塞）においても神経の異常興奮によるカルシウムチャネルの活性化、神経伝達物質の過剰遊離が要因の一つとして考えられていることから、これらの疾患の治療剤としての有用性も期待できる。

P型及びノ又は Q型カルシウムチャネル遮断作用を有する試薬として、 ω—ァガトキシン IVA が市販されている。 ω—ァガトキシン IVA は、ペプチドであって痛みの閾値を変動して慢性疼痛を抑制することが知られている。一般にペプチドは、中枢への移行性が悪く、かつ経口投与すると生体内では、ぺプチダ一ゼにより速やかに分解されるので、作用を発現 · 維持させるためには大量を持続投与しなければならない。

通常使用されている抗炎症 · 鎮痛剤は、炎症をコントロールして疼痛と膨潤を緩和することは可能であるが、慢性疼痛を阻止することは困難である。また、長期投与に伴う副作用が発現し、十分満足できる薬剤とはいえない。従って、これらの抗炎症 ' 鎮痛剤とは異なった新規なメ力二ズムを有する、慢性疼痛を抑制する医薬品が望まれている。

本発明に係る式〔 I 〕の化合物〔4- (4一フルオロフェニル）- 2-メチル -6- (5-ピペリジノペンチルォキシ）ピリミジン、以下、化合物 1 と略する〕は、

くも膜下出血や脳虚血後の神経細胞壊死を抑制することが知られている（国際公開公報 W096/07641号）。また、ナトリウムチャネル遮断作用、 N-型、 L-型、 T-型カルシウムチャネル遮断作用を有することも幸 β 告され飞レる I, Japan e se Journal o f Pharmaco logy 73 (Supp l emen t I) page 1 93 , 1997) 。発明の開示

本発明者らは、上記の観点から、 P/Q-型カルシウムチャネルを標的とする新規カルシウム拮抗薬を求めて種々の化合物を探索した結果、化合物 1 又はその塩に P/Q-型カルシウムチャネル遮断作用を見出し、本発明を完成するに至った。

本発明は、以下（1 )〜（4) に関する。

( 1 ) 化合物 1又はその塩を有効成分とする P/Q-型カルシウムチヤネル遮断剤。

(2) 化合物 1又はその塩を有効成分とする、 P/Q-型カルシウムチヤネルを介した神経伝達物質遊離抑制剤。

(3) 化合物 1又はその塩を有効成分とする、 P/Q -型カルシウムチヤネルを介したド一パミン遊離抑制剤。

(4) 化合物又はその塩を有効成分とする慢性疼痛抑制剤。

本発明は、化合物 1又はその塩に、既に知られている脳神経細胞壊死抑制作用やナトリウムチャネル遮断作用、 N-型、 L-型、 T-型力ルシゥムチヤネル遮断作用とは異なる P/ Q-型カルシウムチャネル遮断作用を見出した点に特徴がある。

以下、本発明を詳述する。

Γ Ρ/Q-型カルシウムチャネル遮断剤」とは、神経終末に存在する P-型及び又は Q-型カルシウムチャネルを阻害して神経伝達物質の遊離を抑制し、神経伝達物質が関濘している種々の疾患の治療に用いることができる薬剤をいう。

「神経伝達物質遊離抑制剤」とは、中枢神経又は知覚神経や自律神経等の末梢神経において神経終末からの種々の伝達物質の放出を抑制する薬剤をいう。

「慢性疼痛抑制剤」とは、神経痛やリウマチ等の炎症時における知覚神経の過敏に基づく痛覚閾値の低下を改善して、慢性疼痛を改善する薬剤をいう。

化合物 1 の塩としては、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、フッ化水素酸、臭化水素酸等の無機酸の塩、又は、酢酸、酒石酸、乳酸、クェン酸、フマーノレ酸、マレイン酸、コハク酸、メタンスノレホン酸、エタンスノレホン酸、ベンゼンスルホン酸、トノレエンスルホン酸、ナフタレンスノレホン酸、カンファースルホン酸等の有機酸の塩を挙げることができる。

化合物 1又はその塩は、例えば、国際公開公報 W096/ 07641 号に記載の方法により製造することができる。

化合物 1又はその塩を P/Q-型カルシウムチャネル遮断剤、神経伝達物質遊離抑制剤又は慢性疼痛抑制剤として投与する場合、化合物 1又はその塩をそのまま又は医薬的に許容される無毒性かつ不活性の担体中に、例えば、 0. 1〜99. 5 重量⁰/。、好ましくは 0. 5〜90 重量％含有する医薬組成物として、人を含む哺乳動物に投与することができる。

担体としては、固形、半固形、又は液状の希釈剤、充填剤、及びその他の処方用の助剤一種以上が用いられる。医薬組成物は、投与単位形態で投与することが望ましい。本発明医薬組成物は、経口的又は非経口的（例、注射、経直腸）に投与することができる。これらの投与方法に適した剤型で投与されるのはもちろんである。例えば、経口投与が特に好ましい。

P/Q-型カルシウムチャネル遮断剤、神経伝達物質遊離抑制剤又は慢性疼痛治療剤としての用量は、年齢、体重等の患者の状態、投与経路、病気の性質と程度等を考慮した上で調整することが望ましい力通常は、成人に対して本発明の有効成分量として、経口投与の場合、 1 曰あたり、 0. 1 mg〜500 m g ヒトの範囲、好ましくは、 1 mg〜200 tn g ヒトの範囲である。場合によっては、これ以下でも足りるし、また逆にこれ以上の用量を必要とすることもある。また、 1 日数回に分割して投与することもできる。

また、化合物 1又はその塩は、ナトリウム及び N -、し-及び T-型カルシウムチャネル遮断作用も有することから、心循環系の疾患（例、不整脈、狭心症）にも用いることができる。

経口投与は固形又は液状の用量単位、例えば、末剤、散剤、錠剤、糖衣剤、カプセル剤、顆粒剤、懸濁剤、液剤、シロップ剤、ドロップ剤、舌下錠その他の剤型によって行うことができる。

末剤は化合物 1又はその塩を適当な細かさにすることにより製造される。散剤は化合物 1 を適当な細かさと成し、次いで同様に細かくした医薬用担体、例えば、澱粉、マンニトールのような可食性炭水化物その他と混合することにより製造される。必要に応じ風味剤、保存剤、分散剤、着色剤、香料その他のものを混じてもよい。

カプセル剤は、まず上述のようにして粉末状となった末剤や散剤あるいは錠剤の項で述べるように頼粒化し'たものを、例えば、ゼラチンカプセルのようなカプセル外皮の中へ充填することにより製造される。滑沢剤や流動化剤、例えば、コロイド状のシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、固形のポリエチレンダリコールのようなものを粉末状態のものに混合し、然るのちに充填操作を行うこともできる。崩壊剤や可溶化剤、例えば、カノレボキシメチノレセノレロース、カノレボキシメチノレセノレロースカノレシゥム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロス力ノレメロースナトリウム、カルボキシメテルスターチナトリウム、炭酸カルシゥム、炭酸ナトリウムを添加すれば、カプセル剤が摂取されたときの医薬の有効性を改善することができる。

また、化合物 1又はその塩の微粉末を植物油、ポリエチレンダリコール、グリセリン、界面活性剤中に懸濁分散し、これをゼラチンシートで包んで軟カプセル剤とすることができる。

錠剤は、賦形剤を加えて粉末混合物を作り、顆粒化もしくはスラグ化し、次いで崩壊剤又は滑沢剤を加えたのち打錠することにより製造される。

粉末混合物の製造には、適当に粉末化された物質を上述の希釈剤やベースと混合し、必要に応じ結合剤（例えば、カルボキシメチルセノレロースナトリウム、メチノレセノレロース、ヒドロキシプロピノレメチノレセノレロース、ゼラチン、ポリビニノレピロリドン、ポリビニノレアルコール）、溶解遅延化剤（例えば、パラフィン）、再吸収剤（例えば、四級塩）や吸着剤（例えば、ベントナイト、カオリン、リン酸ジカルシウム）を併用することができる。粉末混合物は、まず結合剤、例えば、シロップ、澱粉糊、アラビアゴム、セルロース溶液又は高分子物質溶液で湿らせ、攒拌混合し、これを乾燥、粉砕して顆粒とすることができる。このように粉末を頼粒化するかわりに、まず打錠機にかけたのち、得られる不完全な形態のスラグを破砕して顆粒にすることも可能である。このようにして作られる顆粒は、滑沢剤としてステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、ミネラルオイルその他を添加することにより、互いに付着することを防ぐことができる。このように滑沢化された混合物を次いで打錠する。こうして製造した素錠にフイルムコ一ティングゃ糖衣を施すことができる。また、化合物 1又はその塩は、上述のように顆粒化ゃスラグ化の工程を経ることなく、流動性の不活性担体と混合したのちに直接打錠してもよい。シヱラックの密閉被膜からなる透明又は半透明の保護被覆、糖や高分子材料の被覆、及び、ワックスよりなる磨上被覆の如きも用いうる。他の経口投与剤型、例えば、溶液、シロップ、ェリキシルもまたその一定量が薬物の一定量を含有するように用量単位形態にすることができる。シロップは、化合物 1又はその塩を適当な香味水溶液に溶解して製造され、またエリキシルは非毒性のアルコール性担体を用いることにより製造される。懸濁剤は、化合物 1又はその塩を非毒性担体中に分散させることにより処方される。可溶化剤や乳化剤（例えば、エトキシ化されたイソステアリルアルコール類、ポリォキシエチレンソルビトールエステル類）、保存剤、風味賦与剤（例えば、ぺパミント油、サッカリン）その他もまた必要に応じ添加することができる。

必要とあらば、経口投与のための用量単位処方は、マイクロカプセル化してもよい。該処方はまた被覆をしたり、高分子 ' ワックス等中に埋め込んだりすることにより作用時間の延長や持続放出をもたらすこともできる。非経口投与として注射剤、坐剤等を用いることができる。皮下 - 筋肉又は静脈内注射用とした液状用量単位形態、例えば、溶液ゃ懸濁剤の形態を用いることによつて行うことができる。これらのものは、化合物 1又はその塩の一定量を、注射の目的に適合する非毒性の液状担体、例えば、水性や油性の媒体に懸濁し又は溶解し、次いで該懸濁液又は溶液を滅菌することにより製造される。注射液を等張にするために非毒性の塩や塩溶液を添加してもよい。更に安定剤、保存剤、乳化剤等を併用することもできる。

直腸投与は、又はその塩を低融点の、水に可溶又は不溶の固体、例えば、ポリエチレングリコール、カカオ脂、半合成の油脂（例えば、ウイテプゾ一ル登録商標）、高級エステル類（例えば、パルミチン酸ミリスチルエステル）及びそれらの混合物に溶解又は懸濁させて製造した坐剤等を用いることによって行うことができる。化合物 1又はその塩の P/Q-型カルシウムチャネル遮断作用、 P/Q- 型カルシウムチャネルを介した神経伝達物質遊離抑制作用及び慢性疼痛抑制作用は、以下に記載する知見に基づいて、試験を行って確認した。

神経膜は、高カリウム刺激により脱分極し、カルシウムチャネルが活性化することにより、細胞内へのカルシウムイオン流入が引き起こされる。細胞内カルシウムイオン濃度が上昇すると、神経細胞体ではカルシウム依存性酵素である一酸化窒素合成酵素（N0S) が活性化する。また、神経終末では、神経伝達物質が遊離される。そこで培養神経細胞を用いて高力リゥム刺激時の細胞内へのカルシウムィオン濃度及び N0S 活性を調べた。さらに、高カリゥム刺激時の神経終末からのドーパミン遊離には、 N-型及び P/Q-型カルシウムチャネルが関与することを確認したのでド一パミン遊離を in v i vo 条件下で測定した。図面の簡単な説明

第 1図は、マウス大脳皮質由来培養神経細胞における、 KC1 刺激誘発 N O S活性化に及ぼす化合物 1 の塩酸塩（以下、化合物 1 A と称する）の影響を示す。各値は、平均値土 S . E. (N=5- S) を示す。

* ( 5 %の棄却率）および * * ( 1 %の棄却率）は、 W -ァガトキシン IVA 処置群における対照群と比較した時の有意差を示す（Dunnett テストによる検定）。 † † ( 1 %の棄却率）は、二フヱジピン処置群における対照群と比較した時の有意差を示す（Dunnett テストによる検定）。第 2図は、マウス大脳皮質由来培養神経細胞における遊離型カルシゥムイオン激度に及ぼす化合物 1 Aの影響を示す。縦軸は各刺激時でのカルシウムイオン濃度の上昇比（S2/S 1 ) を示す。各値は平均値土 S. E.を示す。 * *は対照群と比較した時の有意差を示す（1 %の棄却率、 Dunnett テストによる検定）。

第 3図は、ラソト線条体からの高カリゥム刺激によるドーパミン遊離に及ぼす化合物 1 Aの影饗を示す。網かけ部は、化合物 1 A存在下でのド一パミン遊離量、白抜き部は、化合物 1 A非存在下でのドーパミン遊離量を示す。各値は平均値土 S. E.を示す。 *は対照群と比較した時の有意差を示す（5 % の棄却率、 t検定）。発明を実施するための最良の形態

以下に本発明の試験例及び処方例をかかげて、本発明を更に詳しく説明するが、本発明は、以下の処方例に限定されない。なお、被験薬物としては、化合物 1 の塩酸塩（化合物 1 A) を用いた。

試験例 1

マウス大脳皮質初代培養神経細胞における一酸化窒素合成酵素（N Q S ) の活性化抑制作用

マウス大脳皮質初代培養神経細胞におけるカルシウム依存性酵素の N O S活性を指標として、この細胞におけるカルシウムチャネルの機能を調べ、これに及ぼす化合物 1 Aの影響について検討した。神経細胞の初代培赛：

胎齢 15 日目のマウス胎児の新皮質を取り出し、これを細切した後、 0.1%トリプシン含有 Ca²⁺- free Puck' s solution ( H 7.4)中、 37°Cで 5分間反応させた。その後、氷冷した 20%馬血清を含有する Dulbeccou s Modified tagle s minimum essential medium (DMEM) を直ちに加え、トリプシンによる反応を停止させた。なお、 DMEM ίこ 10mM N—tris (hydroxymethy丄 methyl一 2一 aminoethanesulfonic acid (TES) 、 lOm Ν-2-hydroxyethylpi erazine-N' - 2 - ethanesulf onic acid (HEPES) 、 30mM glucose 、 carbenicillin (0. lmg/ml)および streptomycin (0. lmg/ml )を添カロした。得られた細胞を DMEMに浮遊させ、細胞浮遊液を lnd あたり 1.45 x l0⁶個の細胞となるように調製した後、 poly -し- lysine (5 μ g/ml H 20) で被膜した coating culture plastic dish (Falcon, Franklin Lakes 社製）若しくは coating glass bottom dish (メリディアンィンスツルメンッファーイ一スト社製）に 1.5 ml を播種した。 95%0₂、 5%C0₂ 通気下にて 37°C、湿度 100%の条件で 15— 30分間静置した。その後、 dish 中の DMEM を吸弓 I除去し、 15% fetal calf serum含有 DMEM を加えて 3 日間培養した。培養 4 日目に培養液を、 20 M cytosine β -D-arabinofuranoside (Ara - C〉および 15%馬血清を含む DME に置換し、 24 時間培養した。培養 5 日目に培養液を、 15% 馬血清含有 DMEM に交換し、以後 4日毎に 15%馬血清含有 DMEM と交換し培養を継続した。

N0S 活性の測定：

Dawson ら（1991)の方法の変法（Tatsumi ら、 1998)により、 cyclic GMP産生能を指標として測定した。 NO S活性は、 cyclic GMP産生を指標として測定し、 Dunnett 法（乱塊法）で検定した。

結果：

神経細胞を高力リゥム刺激することにより活性化される NO Sは、 L -型カルシウムチャネル遮断薬の二フエジピン 1 / Mにより約 56 %、 P/Q-型カルシウムチャネル遮断薬の ω —ァガトキシン IVA 0.1/ Mにより約 53%抑制され、両者の併用により完全に抑制された。しかし、 Ν-型カルシウムチャネル遮断薬の ω—コノトキシン GVIA 5 μ Μ は、 KC1 刺激による N0S 活性化に対してもほとんど影饗を及ぼさなかった。したがって、し-型および P/Q-型两カルシゥムチャネルが、髙カリゥム刺激による NO S活性化に関与していることが分かった。

次に、し-型及ぴ P/Q-型カルシウムチャネルに対する化合物 1 Aの作用について検討する目的で、い型カルシウムチャネル遮断薬もしくは P/Q-型カルシウムチャネル遮断薬存在下での KC1刺激誘発 N0S 活性化に及ぼす影響について検討した。化合物 1 A (3- 30μΜ)は、 ω—ァガトキシン IVA 0.1μ Μ存在下での NO S活性化（L-型カルシゥムチャネルを介した応答）およぴニフエジピン 1 存在下での NO S活性化（P/Q-型カルシウムチャネルを介した応答〉をともに Pく 0.01 で有意に濃度依存的に抑制した（第 1 図、 Dunnett法）。特に、 10 μ Μ の濃度では P/Q-型カルシウムチャネルを介した応答は完全に抑制された。

すなわち、本発明に係る化合物は、 L-型カルシウムチャネル遮断作用に加えて P/Q-型カルシゥムチャネル遮断作用を示した。

試験例 2

マウス大脳皮質初代培養神経細胞における細胞内遊離型カルシウムイオン濃度上昇抑制作用

化合物 1 Αによる高カリゥム刺激锈発性 N O S活性化抑制作用が、カルシウムチャネルを介した細胞内へのカルシウムィォン流入抑制に基づくことを証明する目的で、カルシウム蛍光標識物質である fura-2 acetoxymethyl ester (fura-2/ΑΜ) を用いた 2波長蛍光法により細胞内遊離型カルシウムイオン濃度を測定し、高力リゥム刺激時の細胞内遊離型カルシウムィオン镄度上昇に対する作用について検討した。

カルシウムィオン濃度測定実験用に用いた dish (底面の開口部にカバ一ガラスを装着）では、培養 5 日目の神経細胞を用い、蛍光力ルシゥム指示薬の fura- 2/AM を細胞内に取り込ませた後に測定した。すなわち、培養ネ申経細胞を 10μ fura-2/ΑΜ, 5.4mM KCl , 130m NaCl, 2.5mM CaCl₂及び 5.5mM D - gl ucoseを含む lOmM HEPES - NaOH緩衝液（_PH 7.05)中にて 37¾で 30 分間反応させることにより fura - 2/A を細胞内に取り込ませ、その後、 30 分間インキュベーションを続けることにより細胞内に取り込まれた f ura- 2/AM を内因性ェステラーゼ活性により fura- 2に変換させた。

実験に用いた神経細胞数は対照群 53 細胞、化合物 1 A Ιμ Μ 処置群 73細胞、同 3μ M 処置群 65細胞、同 10 μ Μ 処置群 65細胞、同 30 μ Μ処置群 74細胞である。

カルシウムイオン濃度の測定は Grynkiewicz ら（1985)の方法に準じ、蛍光顕微鏡画像処理法により、 fura- 2/Ca²⁺の励起光 340nm 及び 380ηιη での蛍光強度からカルシウムイオン濃度を求めた。

Argus-50/CA システム（浜松ホトニクス）を用レ、、予め作成したキヤリブレーション曲線から変換して蛍光強度比から細胞内遊離型力ルシゥムイオン濃度を測定した。

高カリゥム刺激を 15 分間隔で 15秒間ずつ 2回行い、各刺激時での遊離型カルシウムィオン濃度上昇比を算出した。化合物 1 Aは 2 回目の刺激 10 分前から刺激終了時まで添加した。その結果、化合物 1 A (1-30 μ Μ)は、高カリウム刺激による細胞内遊離型カルシゥムイオン澳度上昇を漉度依存的に抑制した（第 2図、 Dunnett 法、 Pく 0.01)。

試験例 1 と 2の結果から、化合物 1 Aは初代培養神経において、 KC1 刺激により活性化されたい型及び P/Q-型カルシウムチャネルに対して遮断作用を示し、細胞内へのカルシゥムイオン流入を阻害することでカルシウム活性化酵素である N0S の活性化を抑制することが明らかとなった。

試験例 3

高力リゥム刺激時のラット線条体からの in vivo でのドーノミン遊離抑制作用

神経伝達物質の代表例であるドーパミンを用いて化合物 1 Aの、神経伝達物質遊離抑制に及ぼす影響について検討した。

ラット線条体からのドーパミン遊離を in vivoマイク口ダイァリシス法により測定した。 8-10週齢の SD系雄性ラソトの線条体に、マイク口インジェクション用カニューレを装着したマイクロダイァリシスプローブを挿入し、リンゲル液を 2 μ 1/min の流速で灌流した。

灌流開始 2 時間後から灌流液を 20 分毎に回収し、灌流液中のドーパミンを高速液体クロマトグラフィ一一電気化学検出器により測定した。薬物はマイクロダイアリシスプローブを介して線条体に灌流するか、又はマイクロインジヱクションカニューレを介して線条体に微量注入した。ドーパミン基礎遊離に対する薬物の作用の評価は、薬物処置後値を薬物処置前値と比較することにより行い、 Dunnett' s test により有意差検定を行った。また、 KC1 刺激誘発ドーパミン遊離に対する化合物 1 Aの作用については、化合物 1 A (10 μ M)存在下でのド一パミン遊離量（同側の線条体）を、化合物 1 Α非存在下での KC1 刺激誘発ド一パミン遊離量（反対側の線条体）と比較し、有意差検定は paired t- testにより行った。

ω—コノトキシン GVIA (lOpmol/ 1)及び ω—ァガトキシン IVA (lpmol/ μ 1)を線条体内に微量注入すると、ドーパミン遊離は有意 (Ρく 0. 01)に低下したが、い型カルシウムチャネル遮断薬の二モジピン（10μ Μ)の灌流によつては影饗されなかったことから、 in vivoでのラット線条体からのドーパミン遊離は、 N-型および P/Q-型力ルシゥムチャネルを介することがわかった。

そこで、マイクロダイァリシスプロ一ブを两側の線条体に挿入し、片側にはリンゲル液を（対照側）、もう一方には、化合物 1 A ( 10 β Μ) を灌流した。カリウム刺激は 25- 80raM を 20 分毎に連続して行った。化合物 1 A (10 μ Μ) は、カリウム濃度上昇に伴なつて顕著なドーパミン遊離抑制作用を示し、特に 80mM KC 1 刺激時のドーパミン遊離を有意に抑制した（第 3図、 Pく 0. 05、 pai red t-tes t)。すなわち、本発明に係る化合物は、 L -型カルシウムチャネルに加え、 P/Q-型カルシウムチャネルを遮断して神経伝達物質遊離抑制作用を示した。

以上の試験例 1 〜 3の結果より本発明に係る化合物は、 P/Q-型力ルシゥムチャネル遮断作用、 P/Q-型カルシウムチャネルを介した神経伝達物質遊離抑制作用を有することは、明らかである。処方例 1

錠剤（内服錠） 1錠 120mg中

化合物 1 A 3mg

乳糖 58mg

トウモロコシ澱粉 30mg

結晶セノレロース 20mg

ヒドロキシプロピノレセノレロース 7mg

ステアリン酸マグネシウム 2mg

120mg

の割合で秤量し、ステアリン酸マグネシウムを除く上記成分を均一に混合し、練合した後、造粒機で打錠用顆粒を製造する。これにステアリン酸マグネシゥムを混合して打錠機を用いて直径 8 mm、 1錠重量 120mgに成形し、内服錠とする。産業上の利用可能性

化合物 1 Aは、強い P/Q-型カルシウムチャネル抑制作用を有し、毒性も低く、経口投与も可能であることから、神経痛やリウマチ等の慢性疼痛の治療剤として用いることができる。また、 N-型カルシゥムチャネル抑制を併せ持つていることにより、痛性疼痛やエイズの疼痛も含めて、より良い効果的な慢性疼痛改善剤として用いることができる。さらには、種々の神経疾患（てんかん、精神異常、 A L S、神経痛やリューマチ等の慢性疼痛）や心循環器系疾患（高血圧、不整脈、心筋梗塞）の治療剤として有用性である。

Claims

請求の範囲

1 . 次の式〔 I 〕で表される化合物又はその塩を有効成分とする P/Q-型カルシゥムチャネル遮断剤。

（CH₂ ) 5 -

2 . 塩が塩酸塩である請求項 1記載の P/Q-型カルシウムチャネル遮断剤。

3 . 請求項 1記載の化合物又はその塩を有効成分とする、 P/Q-型力ルシゥムチャネルを介した神経伝達物質遊離抑制剤。

4 . 請求項 1記載の化合物又はその塩を有効成分とする、 P/Q-型力ルシゥムチャネルを介したドーパミン遊離抑制剤。

5 . 請求項 1記載の化合物又はその塩を有効成分とする慢性疼痛抑制剤。