WO1999033953A1

WO1999033953A1 - Nouveau micro-organisme et procede de production de polyols au moyen de celui-ci

Info

Publication number: WO1999033953A1
Application number: PCT/JP1998/005773
Authority: WO
Inventors: Saburo Chida
Original assignee: Nikken Chemicals Co., Ltd.
Priority date: 1997-12-25
Filing date: 1998-12-21
Publication date: 1999-07-08
Also published as: KR20010033541A; EP1041140A1; EP1041140A4; US6214605B1; CA2315371A1

Description

曰月糸田 β 新規微生物及びそれを用いるポリオールの製造方法技術分野

本発明は、新規微生物及びそれを用いるポリオールの製造方法に関し、詳しくはトリコスポロノイデス属に属する新菌株であるトリコスポロノィデス · コゥノスェンシス (Trichosporonoides kounosuensis) 7E-1 (FERM BP- 6572)株及び該菌株を用いるポリオールの製造方法に関する。背景技術

現在までに、ポリオール、特にエリスリトールを生産するために実用化されている微生物として、モニリエラ ' トメントサ 'バール ' ポリ二ス (Moniliella tomentosa var. pollinis CBS 461. 67)とトリコスポロノィデス · メガチ 'リエンシス (Trichosporonoides megachil iensis SN - G42 (FERM BP- 1430) [オーレォバシディウム (Aureobasidium sp. SN-G 42 (FERM P-8940 と同じ） ] の 2種類が知られている。前者には、糖類の発酵によりポリオールを工業的規模で製造する方法など（特公平 6— 3 0 5 9 1号公報、同 6— 3 0 5 9 2号公報、同 6— 3 0 5 9 3号公報、同 6— 3 0 5 9 4号公報）一連のポリオールの製造方法が知られている。また、後者にはエリスリトール生産能を有する新規微生物及びそれを用いる発酵によるエリスリトールの製造方法（特公平 4— 1 1 1 8 9号公報、同 4— 6 3 5号公報）等が知られている。

一方、トリコスポロノイデス属の微生物については、ブラジル国カンビナス大学のマリナ · A · Y · ァォキ氏らによるグルコース及びスクロ —スからのエリスリトールへの変換の報告（BIOTECHNOLOGY LETTERS, Volume 15， No.4, p.383-388, April 1993) がある。この報告によると、グルコースからエリスリトールへの変換率が 43. 0%、スクロースからエリスリトールへの変換率が 37. 4%と高いものの、このときの培養液の糖濃度は 10% (W/V) と低く工業的規模での製造には問題がめる。

更に、三菱化学の上田氏らはトリコスポロノイデス属の 5菌種、すなわちトリコスポロノイデス 'ォエドセファリス (Trichosporonoicies oedocephalis CBS 649.66 ) 、トリコスポロノイデス ·マディダ mad i da CBS 240.79 ) 、トリコスポロノイデス 'ニグレヅセンス nigrescens CBS 268.81 ) 、トリコスポロノイデス ·スパスラ夕 spathulata CBS 241.79 ) 及びトリコスポロノイデス · メガチリェンシス_^. megachiliensis CBS 567.85)について、グルコースからエリスリトールが生成できることを報告している（特開平 9— 154589号公報）。しかしながら、培養温度範囲が 25〜37°C (適温 27〜35°C) と狭く、冷却に多量の水を必要とするなど、大規模生産には必ずしも有利とは言えない。特に、エリスリトール生産性が 136. 0 g/Lと最良の成績を示したトリコスポロノイデス ·ニグレツセンスは、残念ながら 37°C及びグルコース濃度 50%では生育を示さないこと（後述）が知られている。発明の開示

本発明の目的は、ポリオ一ル生産能の高い新規な微生物、特に比較的高い温度（35〜39°C) 及び高い糖濃度（20〜60%) でもエリスリトール等のポリオールを多量に生成する微生物を提供することにある。また、本発明の別の目的は、該微生物を用いて安価にポリオールを製造する方法を提供することにある。本発明者は、ポリオール、特にエリスリトールの生産能を有する新規微生物を見出すべく種々研究を行った結果、蜜蜂の巣より分離した新規微生物が上述した課題、すなわち培養温度 3 5〜3 9 °C、糖濃度 2 0〜 6 0 %で良好な生育を示し、多量のポリオールを生成することを見出し、本発明を完成した。

すなわち本発明は、蜜蜂の巣より分離したトリコスポロノイデス属に属する新規微生物、詳しくはトリコスポロノイデス 'コゥノスェンシス 7E-KFERM BP- 6572)株に関する。

更に、本発明は、上記の微生物を培養し、培養物から主としてエリスリトール、グリセリン及びリビト一ルを含むポリオールを採取することを特徴とするポリオールの製造方法に関する。発明を実施するための最良の形態

本発明に係る新規微生物は、以下の方法により分離した。すなわち、蜜蜂の巣を 4 0 %のグルコースを含む培地で培養することにより、耐糖性微生物を選抜し、更に培養温度を 3 5 °Cに設定することにより、中温菌ないしは高温菌を選抜した。次いで、通常の微生物の分離方法にて純粋分離した微生物を 3 0 %のグルコースを含む培地で培養し、培養物に蓄積されたポリオール量を測定することによりポリオール生産能の高い微生物、詳しくはトリコスポロノイデス 'コウノスェンシス 7E- 1 株を分離した。

この微生物は、日本国茨城県つくば巿東 1丁目 1番 3号の工業技術院生命工学工業技術研究所の特許微生物寄託センターに、受託番号 FERM BP- 6572 として国際寄託されている（平成 1 0年 1 1月 1 2日に原寄託 (寄託番号： FERM P- 16303、原寄託日：平成 9年 7月 3日）より移管）。本発明者により、埼玉県鴻巣巿の蜜蜂の巣より分離されたトリコスポロノイデス 'コウノスェンシス 7E-1 株の菌学的性質は、下記に詳述する通りである。なお、トリコスポロノィデス ·コウノスェンシス 7E-1 株の菌学的性質の試験は、 N. J. W. Kreger-van Rij Groningen編集

"ザ 'イースト ·ァ ·夕キソノミック 'スタディー（The Yeasts, A Taxisonoinic Study, Third Revised and Enlarged Edition) (1984年アムステルダムのェルスビーエル 'サイエンス 'パブリシャ一ズ社（ Elsevier Science Publishers B.V. ) 出版）に準拠した。

1. 培地上の生育状況

1 ) 顕微鏡的所見

(YM液体培地、 25°C、 3日間培養）

栄養細胞の大きさ： 4〜7. 5 x4〜 12 z

栄養細胞の形状：球形又は卵形又は楕円形

栄養細胞の形状：多極出芽

(ポテトグルコース寒天培地によるスライド培養、 25° (、 7日間培養）芽出分生子（Blastic conidia) ：形成する

分裂子：形成する

偽菌糸：形成する

菌糸：形成する

2) 液体培養（YM液体培地、 25°C)

表面生育：皮膜形成

濁度：透明又は微濁

沈査：大

培地の色：培養 4日目頃より淡褐色に変化し、以後日数の経過と共に濃く変色する。

3) 寒天培地（YM寒天培地、 25°C、 2週間培養）

生育：良好光沢：無し

色素： 1週間以上培養すると、コロニー及び培地も暗褐色に変色する

2. 子嚢胞子の形成

ポテトグルコース寒天培地、コーンミール寒天培地、 YM寒天培地、ゴロドコヮ寒天培地及び酢酸培地で、子嚢胞子を形成しない。

3. 生理学的性質

酸素要求性好気的

生育温度 42 °C

最適生育温度 3 1〜 37。C

生育 pH 2〜 1 0. 5

最適生育 pH 5〜 8

KN0₃ の資化性有り

脂肪の分解 ffiノ"c、 1

尿素の分解有り

ゼラチンの液化有り

カロチノィドの生成無し

有機酸の生成有り

エステルの生成有り

デンプン様物質の生成無し

ビ夕ミンの要求性有り

ジァゾニゥムブル一 Bの呈色反応有り

耐浸透圧性の有無

塩化ナトリゥム濃度 1 0 % 有り（生育する）

塩化ナトリウム濃度 1 2 % 無し（生育せず）

グルコース濃度 6 0% 有り（生育する）

4. 糖の発酵性グルコース有りラクトース無しガラクトース有りメリビオース Mしラフイノース無しスクロース有りマルト一ス有りィヌリン Mしイノシトール Mし . 炭素化合物の資化性

D —ァラビノース

L —ァラビノース + D —リボース + D —キシロース + D -グルコース + D —マンノ一ス + D—ガラクト一ス + L —ラムノース

D—フラクト一ス + L —ソルボース

マルートス + スクロース + ラクト一ス

メリビオース

セ口ビオース + トレハロースラフイノース

メレジトース

ひーメチルー D—グルコシド

アルブチン +

エスクリン

サリシン

デキストリン +

可溶性デンプン +

ィヌリン +

メタノール

ェタノ一ル +

アド二トール（リビトール）

イノシトール

エリスリト一ル +

D—マンニトール +

D—ソルビトール

ズルシトール

キシリトール +

グリセリン +

D L—乳酸塩

コハク酸塩 +

クェン酸塩 +

本菌株の上記諸性質を、前記著作（The Yeasts, A Taxisonomic Study) の酵母の分類に照合すると、トリコスポロン属 (Trichosporon) に近似している。しかしながら、ジァゾニゥムブルー Bの呈色反応、尿素分解、糖の発酵性及び K N 0 ₃ の資化性等から、トリコスポロン属のどの菌種とも合致せず異なっている。スタディズ 'イン 'マイコロジィ No. 19 ( Studies in Mycology No. 19) の G. S. DE HOOG 編集 "ザ ' ブラック ' イースト， 11：モニリエラ 'アンド ·ァライド ·ゼネラ（THE BLACK YEASTS, I I： MONILIELLA AND ALLIED GENERA) " ( 1979年オランダの C B S出版 (CBS : CENTRAALBUREAU VOOR SCHIMMELCULTURES) ) の分類方法の記載に照合すると、属の分類では芽出分生子（Blastic conidia)の長さからトリコスポロノイデス属に分類される。

種の分類方法の記載に照合すると、トリコスポロノイデス ·ォェドセファリス (Trichosporonoides oedocephalis CBS 649. 66 ) は菌糸柄 (Stalk) の先端に同調的に分生子を形成するのに対して、本菌株は形成しない点で異なっている。コーンミール寒天培地（ 2 5 °C、 2週間培養）でのコロニーの生育を比較すると、トリコスポロノイデス ·ォエドセフアリスはコロニーの直径が 1 5 . 5〜 1 7 mmと遅い生育を示し、コロ二一の表面は黒褐色を呈し、気中菌糸の形成は観察されなかった。それに対して、本菌株はコロニーの直径が 3 1〜 3 4 mmと旺盛な生育を示し、コロニーの表面は旺盛な気中菌糸の形成により灰白色を呈した。

ポテトグルコース寒天培地（2 5 °C、 2週間培養）においては、トリコスポロノイデス ·ォェドセファリスのコロニーの直径は 2 2〜 2 2 . 5 mmと中程度の生育を示し、コロニーの表面はしわ状で中心部は濃褐色、辺縁部は淡褐色を呈しており、コロニー表面の所々には、薄く微弱な気中菌糸の形成が認められた。それに対して、本菌株はコロニーの直径が 3 3〜3 4 . 5 mmと旺盛な生育を示した。また、コロニーの表面は平らで旺盛な気中菌糸に覆われて灰白色を呈した。 Y M寒天培地（ 2 5 °C、 2週間培養）においては、トリコスポロノイデス ·ォエドセファリスのコロニーの直径は 2 2〜 2 3 mmと中程度の生育を示し、コロニーの表面はしわ状で、褐色を呈し、辺縁部は白色〜淡褐色を呈し、コロニーの辺縁部の所々に気中菌糸の形成が認められた。それに対して、本菌株は生育が旺盛でコロニーの直径は 3 2〜 3 4 mmを示した。また、コロニ —の表面は、旺盛な気中菌糸に覆われて灰白色を呈した。炭素化合物の資化性においては、トリコスポロノイデス · ォェドセファリスは D—キシロース、キシリトール及びィヌリンを資化しないのに対し、本菌株はこれらを資化する点で異なっていた。

トリコスポロノィデス . スノスラ夕 ( T ric ho s_£p ronp i de s s^athulata CBS 241. 79)は、スプーン型の菌糸柄を形成するのに対し、本菌株は形成しない。コーンミール寒天培地（ 2 5 ° (、 2週間培養）でのコロニーの生育を比較すると、トリコスポロノイデス ' スパスラ夕はコロニーの直径が 5 0 mm以上と巨大化するが、淡黄褐色の極めて薄い生育で、しかも気中菌糸を形成しない点で本菌株とは異なっていた。ポテトグルコース寒天培地（ 2 5 ° ( 、 2週間培養）においては、トリコスポロノイデス ·スパスラ夕のコロニーの直径は 5 1〜 5 3 mmと本菌株以上に極めて旺盛な生育を示した。また、トリコスポロノイデス ·スパスラ夕のコロニ一の表面は中心から放射状にしわを形成し、中心部は濃褐色、辺縁部は淡褐色を呈し、コロニー表面の中心は濃く周辺に向かって薄く疎らに灰白色の気中菌糸が形成するのに対し、本菌株は、前記したように、コロニー表面はしわがなく、平滑で灰白色の良く生育した菌糸で覆われている点で異なっていた。 Y M寒天培地（ 2 5。C、 2週間培養）においても、トリコスポロノイデス ' スパスラ夕のコロニーの直径は 4 4 . 5 〜4 7 mmと本菌株以上の旺盛な生育を示した。コロニーの表面は、中央が僅かに盛り上がり、中心付近から辺縁部に向かって放射状にしわを形成し、表面は全面純白の気中菌糸を形成するのに対し、本菌株は前記したように、気中菌糸は灰白色であった。炭素化合物の資化性においては、トリコスポロノイデス 'スパスラ夕はメレジトース、ラフイノ一ス、 D—ソルビトール、 D L —乳酸塩、エスクリン及びサリシンを資化するのに対し、本菌株はこれらを資化しない点で異なっている。また、トリコスポロノイデス ·スパスラ夕は培地にビ夕ミンを要求せず、牛脂の分解性試験は陽性であるが、本菌株はビタミン要求性であり、牛脂の分解性試験は陰性である。

トリコスポロノィデス 'マディダ (Trichosporonoides mad i da CBS 240. 79) は、菌糸をほとんど形成しない点で本菌株とは大きく異なっている。コーンミール寒天培地（ 2 5 °C、 2週間培養）でのコロニーの生育を比較すると、トリコスポロノィデス ·マディダはコロニーの直径が 2 3 ~ 2 5 mmと中程度の生育で、中心部は濃褐色を呈し、辺縁部は淡褐色で気中菌糸は形成しない。それに対して、本菌株は生育も旺盛で、気中菌糸もよく形成することは前記した通りである。

ポテトグルコース寒天培地（ 2 5 °C、 2週間培養）においても、本菌株とは異なっている。すなわち、トリコスポロノイデス ' マディダのコロニーの直径は 2 2〜2 4 . 5 mmと本菌株と異なり中程度の生育で、またコロニーは黒褐色で表面はいくつかの塊状に盛り上がって生育し、気中菌糸の形成も認められない点でも本菌株とは異なっている。 Y M寒天培地（ 2 5 °C、 2週間培養）においても、トリコスポロノイデス 'マディダのコロニーの直径は 2 1〜2 2 mmと本菌株とは異なり中程度の生育であった。コロニーの表面も本菌株とは異なり粗く盛り上がり、濃褐色を呈し、辺縁部は淡褐色であった。気中菌糸の形成もほとんど認められなかった。糖の発酵では、トリコスポロノイデス ·マディダはガラクト一スとスクロースを発酵せず、この点で本菌株とは異なる。なお、スクロースの発酵性については、 A. T. MARTINEZ (スタディズ 'イン ' マイコロジィ No. 19 (Studies in Mycology No. 19) )の文献では陽性であるが、 G. Douglas及び Inglisらの文献 (G. Douglas Inglis, Lynne Sigler, Mark S. Goettel. TRICHOSPORONOIDES MEGACHILIENSI S, A NEW HYPHO- MYCETE ASSOCIATED WITH ALFALFA LEAFCUTTER BEES, WITH NOTES ON TRICHOSPORONOIDES AND MONILIELLA. ycologia, 84 (4) , 1992, pp. 555-570)では陰性と報告されており、本発明者の試験結果とも一致したので陰性とした。炭素化合物の資化性においては、トリコスポロノイデス ·マディダはガラクトースとィヌリンを資化しないのに対し、本菌株はそれらを資化する点で異なっている。

また、前記した G. Douglas及び Ingl isらの文献の分類方法の記載に照合すると、トリコスポロノイデス 'ニグレヅセンス (Trichosporonoides nigrescens CBS 268. 81 ) は 3 7 °Cで生育せず、スクロースも発酵しない点で本菌株とは異なっている。また、炭素化合物の資化性においては、トリコスポロノイデス 'ニグレツセンスは L —ァラビノース、 D—キシロースを資化しない点と D —ソルビトールを資化する点で本菌株とは異なっている。コーンミール寒天培地（ 2 5 °C、 2週間培養）でのコロニーの生育を比較すると、トリコスポロノイデス ' ニグレツセンスはコロニーの直径が 9〜 9 . 5 mmと弱い生育で本菌株とは異なっていた。なお、コロニー中心部は黒濃褐色を呈し、辺縁部は淡褐色で気中菌糸の形成は認められなかった。それに対して、本菌株は生育も旺盛で、気中菌糸もよく形成することは前記した通りである。

ポテトグルコース寒天培地（ 2 5 ° (：、 2週間培養）においても、本菌株とは異なっている。すなわち、トリコスポロノイデス ' ニグレツセンスのコロニーの直径は 1 7 . 5〜 1 9 mmと本菌株と異なり中程度の生育で、コロニーは黒褐色で表面はいくつかの塊状に盛り上がって生育し、気中菌糸の生育は認められなかった。これらは、本菌株とは異なる特徴である。 Y M寒天培地（ 2 5 °C；、 2週間培養）においても、トリコスポロノイデス 'ニグレツセンスのコロニーの直径は 1 3 ~ 1 4 . 5 mmと本菌株とは異なり、遅い生育であった。コロニーの表面は濃褐色で、表面はいくつかの塊状に盛り上がって生育し、気中菌糸の形成は認められなかった。これらの特徴も、本菌株とは異なる特徴である。

同様に、前記 G. Douglas及び Inglisらの文献の分類方法の記載に照合すると、トリコスポロノィデス ·オーストラリエンス（Trichosporonoides australiense Ramirez ( 1989) )はラクト一スを発酵し、 Lーァラビノースと D—キシロースを資化しないが、本菌株は反対にラクトースを発酵せず、 L —ァラビノースと D —キシロースを資化する点で異なっている。また、トリコスポロノイデス ' オーストラリエンスは耐糖性が低く、 5 0 %のグルコースを含む培地には生育しないが、本菌株は 6 0 %のグルコ —スを含む培地でも良く生育する点で異なっている。更に、トリコスポロノイデス ·オーストラリエンスはゥレア一ゼを産生しないため、尿素を分解せず、ジァゾニゥムブル一 Bの呈色反応も陰性であるが、本菌株は両方とも陽性である。

トリコスポロノィデス · メガチリエンシス (Trichosporonoides megachiliensis CBS 567. 85 ) は硝酸塩を資化せず、 Lーァラビノース、 D—キシロース、キシリトール、ィヌリンなども資化しない点で本菌株と異なっている。コーンミール寒天培地（ 2 5 °C、 2週間培養）でのコロニ一の生育を比較すると、トリコスポロノイデス ' メガチリェンシスはコロニーの直径が 2 8〜2 9 . 5 mmと本菌株に近い生育をするが、表面は平らで黒褐色の薄い生育となり、気中菌糸の形成は極めて薄く貧弱である。それに対して、本菌株の気中菌糸は、コロニー基部の褐色の色彩が見えない程よく形成され、コロニー表面は灰白色を呈している。ポテトグルコース寒天培地（ 2 5 ° (、 2週間培養）においても、トリコスポロノイデス · メガチリェンシスは本菌株とは異なっている。すなわち、トリコスポロノィデス · メガチリエンシスのコロニーの直径は 2 5 〜2 7 mmと本菌株に近い生育を示すが、本菌株とは異なりコロニーはほとんど気中菌糸を形成せず、表面は平坦で黒褐色を呈していた。また、本菌株とは異なり、コロニーの辺縁部ではコロニーの先端が培地中に放射状に伸張し、いが栗状の独特の形態を呈した。 Y M寒天培地（ 2 5 °C、 2週間培養）においては、トリコスポロノイデス ' メガチリェンシスのコロニーの直径は 2 9 . 8〜3 0 . 5 mmと本菌株とほぼ同等の旺盛な生育を示した。しかし、気中菌糸の形成は表面の一部、コロニーによつては表面の半分程度で、コロニーの表面全面に気中菌糸を形成する本菌株とは異なっている。

したがって、本菌株はトリコスポロノイデス属に属する力、これまでに報告された菌種、すなわちトリコスポロノイデス ·ォェドセファリス、トリコスポロノイデス · スパスラ夕、トリコスポロノイデス ·マディダ、トリコスポロノイデス · ニグレツセンス、トリコスポロノイデス ·ォ一ストラリエンス及びトリコスポロノイデス · メガチリエンシスとは異なる新種である。本発明者は、この新種をトリコスポロノイデス ' コウノスェンシスと名付けた。上記新種の他、該新種に自然もしくは人工的手段、例えば紫外線照射、突然変異誘起剤による処理によって変異させた変異株も、ポリオール生産能を有する限り、本発明に包合される。

本菌株の培養は炭素源、窒素源、無機塩類等を含む液体培地を用いて好気的条件下に行われる。

炭素源としてはグルコース、フラクトース、スクロース等の糖類及びこれら糖類を含む澱粉糖化液、甘藷糖蜜、甜菜糖蜜等の糖質が使用される。培地の糖濃度は 2 0〜6 0 %、好ましくは 3 0〜 5 0 %である。窒素源としては微生物により利用可能な窒素化合物、例えば酵母ェキス、ペプトン、麦芽エキス、コーンスチープリカ一、アンモニア水、ァンモニゥム塩類、尿素、硝酸塩類等が使用される。無機塩としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、カリウム塩、鉄塩、マンガン塩等が適宜使用される。

培養は通常、培養温度 2 5〜40°C、好ましくは 3 5〜3 9°Cで 3〜 1 0日間行われ、培養により培地中に主としてエリスリトール、グリセリン及びリビトールを含むポリオールが蓄積される。ポリオール合計の収率は、例えば培地中のグルコース濃度 30W/V%の場合、 43. 7 %である。

培地中に蓄積されたポリオールを採取する方法は公知の方法に従って行えばよく、例えば菌体を濾過あるいは遠心分離によって除去し、ィォン交換樹脂処理法、吸着クロマトグラフィー法、溶媒抽出法あるいは濃縮冷却晶析法、その他の方法を適宜組み合わせることにより行われる。また、不純物の除去には通常用いられる活性炭脱色処理法、再結法で精製しても良い。

次に、本発明の実施例について具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

実施例 1 (培養温度とポリオール産生量の比較）

トリコスポロノイデス · コゥノスェンシス 7E- 1 (FERM BP- 6572)株を酵母エキス培地（グルコース 30 W/V%、酵母エキス 1 W/V%) に植菌し、 3 5°Cで 3日間振とう培養した。次いで、得られた培養液を同じ組成の酵母エキス培地を分注しておいた L型培養管に、培地量の 2 % になるように接種し、振とう温度勾配培養装置（アドバンテック東洋株式会社、モデル TN— 2 1 48) を用いて、振とう数 6 0回/分、温度 1 5. 9〜46. 2°Cの範囲で 6日間培養し、培養温度の違いによるポリオールの産生量（g/L) の比較を行った。

ポリオールの産生量及び培養液中の残存グルコース量は、高速液体ク口マトグラフィ（島津製作所、モデル R I D— 6 A) で培養液中の量を測定することにより算出した。また、培養液中の菌の増殖性は、培養液の濁度（ 660 nmの吸光度 X培養液の希釈倍数）で表示して比較した。その結果を第 1表に示した。

第 1 表

実施例 2 (グルコースの濃度とポリオール生産量）

トリコスポロノイデス · コウノスェンシス 7E- 1 (FERM BP- 6572)株を酵母エキス培地（グルコース 3 0 W/V%、酵母エキス 1 W/V%) に植菌し、 35°Cで 3日間振とう培養した。続いて、得られた種培養液を予め三角フラスコに分注しておいた糖濃度試験用培地、すなわちグルコ —スの濃度を 20、 30、 40または 50 W/V%に調製した酵母ェキス培地（酵母エキス培地を基本に C/N比は一定）に培地量の 2%接種し、振とう数 220回/分、 35°Cで培養した。培養は、培地中のグルコースがほとんど消費されるまで（ 1 15~ 157時間）行った。培養によるポリオールの産生量は、培養液を高速液体クロマトグラフィ（島津製作所、モデル R ID— 6A) で測定することにより算出した。その結果を第 2表に示した。なお、表中の対 Glu収率は、消費されたグルコースに対するポリオール合計の収率を表す。

第 2 表

実施例 3 (スクロースの濃度とポリオ一ル産生量）

トリコスポロノイデス · コウノスェンシス 7E- 1 (FERM BP-6572)株を酵母エキス培地（グルコース 3 0W/V%、酵母エキス 1 W/V%) に植菌し、 3 5°Cで 3日間振とう培養した後、あらかじめ三角フラスコに分注しておいた糖濃度試験用培地、すなわちスクロースの濃度を 20、 30、 40または 50W/V%に調製したスクロース酵母エキス培地 (酵母エキス培地を基本に CZN比は一定）に培地量の 2 %接種し、振とう数 220回/分、 3 5 °Cで培養した。培養は、培地中のスクロースがほとんど消費されるまで（ 1 1 5〜 1 5 7時間）行った。培養によるポリオールの産生量は、培養液を高速液体クロマトグラフィ（島津製作所、モデル R I D— 6 A) で測定することにより算出した。その結果を第 3表に示した。表中の対 Sue 収率は、消費されたスクロースに対するポリオール合計の収率を表す。

第 3 表

実施例 4 (フラクト一スとポリオール産生量）

トリコスポロノイデス · コウノスェンシス 7E- 1 (FERM BP- 6572)株を酵母エキス培地（グルコース 3 0 W/V%、酵母エキス 1 W/V%) に植菌し、 3 5°Cで 3日間振とう培養した後、あらかじめ三角フラスコに分注しておいた糖濃度試験用培地、すなわちフラクトースの濃度を 4 0 w/v%に調製したフラクトース酵母エキス培地（酵母エキス培地を基本に C/N比は一定）に培地量の 2 %接種し、振とう数 2 2 0回/分、 3 5°Cで 1 0日間培養した。その結果、培地中にポリオ一ル（エリスリトール、グリセリン及びリビトールの合計）が 1 9 2. 1 (g/L) 産生した。

実施例 5

トリコスポロノイデス ' コウノスェンシス 7E- 1 (FERM BP- 6572)株を酵母エキス培地（グルコース 30 W/V%、酵母エキス 1W/V%) に植菌し、 3 5°Cで 3日間振とう培養した。その後、あらかじめ三角フラスコに分注しておいた糖濃度試験用培地、すなわちグルコースの濃度を 30または 40 W/V%に調製した酵母エキス培地（酵母エキス培地を基本に C/N比は一定）に培地量の 2 %接種し、振とう数 2 20回/分、 38. 5°Cで培養した。培養は、培地中のグルコースが全て消費されるまで（ 1 1 3又は 143時間）行った。培養によるポリオールの産生量は、培養液を高速液体クロマトグラフィ（島津製作所、モデル R I D— 6 A) で測定することにより算出した。その結果、濃度 3 0 %のグルコース培地ではポリオ一ル合計の収率が 43. 7%であり、濃度 40%の培地ではポリオール合計の収率が 44. 0 %であった。産業上の利用可能性

本発明に係る新規微生物は、従来公知のトリコスポロノイデス属のいずれの種とも違った分類学上の性質を有し、しかも、エリスリトールなどのポリオールの生産能が高い有用な微生物である。また、該微生物を用いることにより、エリスリトールなどのポリオールを効率よく製造することができる。

Claims

言青求の範囲

1. 高濃度の糖を含む培地で培養することにより、培地中にポリオ一ルを高収率で蓄積するトリコスポロノイデス ' コウノスェンシス 7 E— 1 (FERM BP— 6 5 72 ) 株。

2. トリコスポロノイデス ' コウノスェンシス 7 E— 1 (FERM

B P - 6 5 72 ) 株を糖濃度が 20〜 6 0 %の培地で培養し、培地中に蓄積されたポリオールを採取することを特徴とするポリオールの製造方法

3. 糖を含む培地が、グルコース、フラクトース又はスクロースを主成分とするものであることを特徴とする請求項 2記載のポリオールの製造方法。

4. ポリオールが、エリスリトール、グリセリン及びリビトールを主成分として含むものであることを特徴とする請求項 2又は 3記載のポリオ —ルの製造方法。

5. 培地の糖濃度が 20〜6 0 %で、培養温度が 2 5〜40°Cの範囲内であることを特徴とする請求項 2ないし 4のいずれかに記載のポリオ一ルの製造方法。

6. 培地の糖濃度が 30〜 5 0 %で、培養温度が 3 5〜 3 9 °Cの範囲内であることを特徴とする請求項 2ないし 4のいずれかに記載のポリオ一ルの製造方法。

7. 培地中に蓄積されたポリオールが、対糖収率 3 5 %以上であることを特徴とする請求項 2ないし 6のいずれかに記載のポリオールの製造方