WO1999001155A1 - Cephalo-protecteur - Google Patents

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WO1999001155A1
WO1999001155A1 PCT/JP1998/003011 JP9803011W WO9901155A1 WO 1999001155 A1 WO1999001155 A1 WO 1999001155A1 JP 9803011 W JP9803011 W JP 9803011W WO 9901155 A1 WO9901155 A1 WO 9901155A1
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cerebral
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nucleic acid
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PCT/JP1998/003011
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Shigeki Ono
Isao Date
Original Assignee
Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd.
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/13—Decoys

Definitions

  • the present invention relates to a cerebral protective agent containing NF- / B decoy, particularly to a cerebral protective agent against cerebral damage caused by cerebral disease. Specifically, the present invention relates to a brain protective agent against brain damage caused by a brain disease containing a decoy of NF- ⁇ , and a brain protective method using the brain protective agent containing the decoy.
  • the transcription factor NF- ⁇ is thought to be involved in various diseases such as ischemic disease, inflammatory disease, and autoimmune disease, and administration of the decoy is effective in treating and preventing those diseases. It is considered valid (see W096 / 3 5430).
  • the transcription factor NF- ⁇ consists of a heterodimer of ⁇ 65 and ⁇ 50. Normally, the inhibitor I ⁇ is present in the cytoplasm in a bound form, and its nuclear translocation is blocked. However, when some kind of stimulus such as cytokine ⁇ , ischemia or reperfusion is applied for some reason, I ⁇ is phosphorylated and degraded, so that NF- ⁇ is activated and translocated into the nucleus. I do.
  • NF- ⁇ ⁇ promotes transcription of genes downstream of it by binding to the NF- ⁇ binding site of the chromosome.
  • Genes controlled by NF- ⁇ include, for example, cytokins such as IL-1, IL-6 and IL-18, and adhesion factors such as VCAM-1 and ICAM-1.
  • brain disorders occur in brain diseases due to various causes such as cerebral nerve cell death, and in recent years, the need for brain protection has been recognized.
  • NF- ⁇ B activation of the production of cytokines and cell adhesion factors under the control of NF- ⁇ B may be associated with cerebral disorders caused by brain diseases (eg, cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage, Cerebral nerve cell death in the prognosis of vascular disorders and severe head injuries), and as a result of intensive studies, NF- ⁇ is required to protect the brain against brain disorders caused by brain diseases. It has been found that it is particularly effective to administer a decoy, that is, a compound that specifically antagonizes a nucleic acid to which NF- ⁇ binds, and thus completed the present invention.
  • a decoy that is, a compound that specifically antagonizes a nucleic acid to which NF- ⁇ binds
  • the present invention provides a brain protective agent containing a decoy of NF- ⁇ , and more specifically, a brain protective agent and a method for protecting against brain damage caused by a brain disease containing a decoy of NF- ⁇ B.
  • the disease targeted by the cerebral protective agent of the present invention is not particularly limited.
  • cerebral damage caused by undesired activation of a gene controlled by the transcription factor NF- / c c is considered. It is effective, for example, cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage, cerebral infarction such as cerebral thrombosis and cerebral embolism, sequela after cerebral hemorrhage, cerebrovascular dementia, hydrocephalus, cerebral artery malformation and hemangiomas, various brain tumors, Parkinson's syndrome, Brain damage due to cerebral arteriosclerosis, meningitis (bacterial, aseptic, post-operative, etc.), encephalitis, AIDS, various encephalopathies (Pett's encephalopathy, multiple sclerosis) and brain cell death due to severe head injury included.
  • the cerebral protective agent containing the NF- ⁇ decoy obtained by the present invention is suitable for the treatment and prevention of cerebral vasospasm that appears with subarachnoid hemorrhage
  • the decoy of NF- ⁇ used in the present invention is a substance that inhibits gene activation by NF- / ⁇ , and specifically, is specific to the nucleic acid binding site of NF- ⁇ on chromosome. Any compounds can be used as long as they antagonize, for example, nucleic acids and analogs thereof (see W096 / 35430, JP07-291186OA). Examples of preferred NF-KB decoys include oligonucleotides containing a consensus sequence for the NF- ⁇ B binding site, variants thereof, or compounds containing these in the molecule.
  • the oligonucleotide may be DNA or RNA, and may include a modified nucleic acid or pseudo-nucleic acid in the oligonucleotide.
  • these oligonucleotides, mutants thereof, or those containing these in the molecule The compound may be single-stranded or double-stranded, and may be linear or cyclic.
  • the mutant is a nucleic acid in which a part of the above sequence is mutated, substituted, inserted, or deleted, and indicates a nucleic acid that specifically antagonizes a nucleic acid binding site to which NF-B binds.
  • More preferred NF- ⁇ B decoys include double-stranded oligonucleotides containing one or several of the above nucleic acid sequences or mutants thereof.
  • the oligonucleotide used in the present invention may be an oligonucleotide having a thiophosphate diester bond (S-oligo) in which the oxygen atom of the phosphodiester bond is replaced by a zeo atom, or a phosphodiester bond having a charge.
  • Oligonucleotides that have been modified to make the oligonucleotide less susceptible to degradation in vivo such as oligonucleotides substituted with unnatural methyl phosphate groups, are included.
  • a general chemical synthesis method or biochemical synthesis method can be used as a method for producing the NF- ⁇ B decoy used in the present invention.
  • a nucleic acid is used as a decoy of NF- ⁇ B
  • a nucleic acid synthesis method generally used in genetic engineering can be used.
  • nucleic acids containing them or a part thereof can be synthesized using a DNA synthesizer, Good, and after synthesizing these nucleic acids, nucleic acids containing them or a part thereof.
  • the nucleic acid may be amplified using the PCR method or a closing vector. Further, the nucleic acid obtained by these methods may be cleaved with a restriction enzyme or the like, or bound with a DNA ligase or the like to produce the desired nucleic acid. Further, in order to obtain a more stable decoy nucleotide in a cell, the nucleic acid may be subjected to chemical modification such as alkylation or acylation at the base, sugar or phosphate moiety.
  • the preparation containing the NF- / B decoy as a main component obtained by the present invention is not particularly limited as long as the preparation is such that the active ingredient is taken up into the cells of the affected area or the cells of the target tissue.
  • the NF- ⁇ B decoy is used alone or in combination with a conventional carrier, and is administered orally, parenterally, topically, or externally.
  • These preparations may be liquid dosage forms such as solutions, suspensions, syrups, ribosome preparations, emulsions, syrups, etc., or solid dosage forms such as tablets, granules, powders and capsules. You may.
  • the above preparations may contain various carriers, auxiliaries, stabilizers, lubricants, and other commonly used additives such as lactose, citrate, tartaric acid, stearic acid, magnesium stearate, clay, sucrose, Corn starch, ta Luc, gelatin, agar, pectin, fallen raw oil, olive oil, cocoa batata, ethyl lendacol, etc. can be added.
  • a preferred preparation is a form used in a commonly used gene transfer method, for example, a membrane fusion ribosome preparation using Sendai virus or the like.
  • Ribosomal preparations such as ribosome preparations that utilize endocytosis, preparations containing cationic lipids such as lipofectamine (manufactured by Lifetech Oriental), TfX50, etc., or retrovirus vectors, adenovirus vectors, etc. It is advantageous to use a virus preparation using
  • the structure of the ribosome is a large single membrane ribosome (L
  • UV multilayer ribosomes
  • MLV multilayer ribosomes
  • SUV small single-wall ribosomes
  • the method for producing the ribosome is not particularly limited as long as the decoy is retained, and a conventional method such as a reverse-phase evaporation method (Szoka, F., et al: Biochim.Biophys.Acta, Vol. 601 559 (1980)), ether injection method (Deamer, DW: Ann. NY Acad. Sci., Vol. 308250 (1978)), surfactant method (Brunner, J., et al .: Biochim. Biophys. Acta, Vol. .455 322 (1976)).
  • a reverse-phase evaporation method Szoka, F., et al: Biochim.Biophys.Acta, Vol. 601 559 (1980)
  • ether injection method Deamer, DW: Ann. NY Acad. Sci., Vol. 308250 (1978)
  • surfactant method Brunner, J., et al .: Biochim. Biophys. Acta, Vol. .45
  • Phospholipids cholesterols, nitrogen lipids, and the like are used as lipids for forming the liposome structure.
  • phospholipids are preferable, and phosphatidylcholine, phosphatidinoreserin, and phosphatidinoreglycerol are generally used.
  • Natural phospholipids such as oleoresin, phosphatidinole inositol, phosphatidylethanolamine, phosphatidic acid, canolegiolipin, sphingomyelin, egg yolk lecithin, soybean lecithin, lysolecithin, etc.
  • Lephosphate distearoylphosphatidylcholine, dipalmitoylphosphatidylcholine, dipalmitoylphosphatidylethanolamine, dipalmito inolephosphatidinoreserin, eleostearoisolephospha Jizorekorin, Ereo Synthetic phospholipids such as stearoyl phosphatidylethanolamine and eleostearoyl phosphatidylserine can be used.
  • lipids containing phospholipids can be used alone, or two or more of them can be used in combination.
  • a compound having an atomic group having a positive group such as ethanolamine-choline in the molecule
  • the binding rate of the electrically negative decoin nucleotide can be increased.
  • additives generally known as additives for ribosome formation such as cholesterols, stearylamine, ⁇ -tocopherol, and the like can also be used.
  • the liposome thus obtained is purified from 1) a fusion-promoting substance, such as Sendai virus, inactivated Sendai virus, or Sendai virus, in order to promote its uptake into the cells of the affected area or target tissue cells.
  • a fusion-promoting substance such as Sendai virus, inactivated Sendai virus, or Sendai virus.
  • a specific example of a method for producing a liposome preparation is as follows.
  • the liposome-forming substance is dissolved together with cholesterol and the like in an organic solvent such as tetrahydrofuran, chloroform, and ethanol, and placed in an appropriate container.
  • the solvent is distilled off under reduced pressure to form a ribosome-forming substance film on the inner surface of the container.
  • a buffer solution containing NF- ⁇ decoy is added, and the mixture is stirred.
  • ribosomes are isolated.
  • the liposome containing the decoy of NF- ⁇ obtained in this way has the ability to suspend in a suitable solvent, or V, which is once freeze-dried and redispersed in a suitable solvent for treatment. It can be used for
  • the membrane fusion promoting substance may be added after ribosome isolation and before use.
  • the content of the decoy in the preparation containing the decoy of NF-— as a main component obtained in this way can be variously set according to the disease to be applied, the application site, the administration form and the administration method. .
  • the cerebral protective agent containing NF- ⁇ decoy obtained in this way can be administered by various methods depending on the type of disease, the type of decoy used, and the like. Etc. may be administered.
  • the dose of the NF- ⁇ decoy is appropriately selected depending on the age and other conditions of the patient, the type of disease, the type of decoy used, and the like. 10 to 10000 Onmole per dose can be administered at appropriate times.
  • mice 2-2.5 kg male New Zealand White Heron was used. Experimental animals were anesthetized by intravenously injecting 20 mg / kg pentobarbitur. An auricular was introduced into the auricular artery to collect arterial blood. The head was fixed with a stereotaxic frame, and the cervical muscles were contracted to expose the atlanto-occipital periosteum. After removing 1 ml of the cerebrospinal fluid, 1 mg Zkg of autologous blood was carefully infused into the cisterna magna (subarachnoid) using a 27-gauge dollar for more than 3 minutes. The animal's head was then lowered for 30 minutes so that the basilar artery of the animal was covered with autologous blood, and a subarachnoid hemorrhage model was created.
  • Evaluation Angiography was performed 3 days before and 4 days after the creation of subarachnoid hemorrhage, and the rate of change in the vessel diameter of the basilar artery was measured.
  • histological search was performed by hematoxylin-eosin staining.
  • the activity of NF- ⁇ was evaluated using the gel shift method.
  • Cerebral angiography showed a narrowing of 69% in the control group and the scrambled decoy-administered group, but markedly suppressed vasoconstriction by about 90% in the NF- / CB-administered group. Histologically, the control group and the scrambled decoy-administered group showed remarkable narrowing of the blood vessel diameter, but the NF- ⁇ B decoy-administered group had almost the same histology as normal blood vessels. In the gel shift method, the activity was clearly suppressed in the NF- ⁇ decoy-administered group compared to the control group.

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Description

明細書 脳保護剤 技術分野
本発明は、 NF— / Bのデコイを含有する脳保護剤、 特に脳疾患に起因する脳 障害に対する脳保護剤に関するものである。 詳細には、 NF— κ Βのデコイを含 有する脳疾患に起因する脳障害に対する脳保護剤および、 該デコイを含有する脳 保護剤を使用する脳保護方法に関する。 背景技術
転写調節因子 NF— κ Βは、 虚血性疾患、 炎症性疾患、 自己免疫疾患等の様々 な疾患に関与していると考えられており、 そのデコイの投与がそれらの疾患の治 療および予防に有効であると考えられている （W096/3 5430参照)。 転写調節因子 NF— κ Βは、 ρ 65と ρ 50のへテロダイマ一からなつている。 通常は、 細胞質内に阻害因子 I κ Βが結合した形で存在し、 核移行が阻止されて いる。 ところが、 何らかの原因でサイトカインゃ、 虚血、 再灌流といった何らか の刺激が加わると I κ Βがリン酸ィヒされ、分解されることにより、 NF— κ Β が 活性化されて核内に移行する。 N F— Κ Βは染色体の N F - κ Β結合部位に結合 することにより、 その下流にある遺伝子の転写を促進する。 NF— κ Βにより制 御される遺伝子には、 例えば、 I L— 1、 I L— 6、 I L一 8などのサイトカイ ン類や、 V CAM— 1や I CAM— 1などの接着因子がある。
一方、 脳疾患において、 脳神経細胞死等の様々な原因により脳障害が起こるこ とが知られており、 近年、 脳保護の必要性が認識されている。
例えば、 破裂脳動脈瘤によるくも膜下出血の治療成績は、 手術用顕微鏡の導入 以後、 動脈瘤クリッビング術が安全に行われるようになり、 飛躍的に向上した。 しかし、 くも膜下出血に伴い出現する脳血管攣縮などの脳障害に対しては、 その 発生機序についても解明されておらず、 さらに確実な治療法の確立もない。 発明の開示
本発明者等は、 NF— κ Bの制御下にあるサイトカイン類ゃ細胞接着因子の生 産の活性化が、 脳疾患に起因する脳障害 （例えば、 くも膜下出血後の脳血管攣縮 や、 脳血管障害や重傷頭部外傷の予後の脳神経細胞死） を引き起こす一つの原因 となっていると予測し、 鋭意研究の結果、 脳疾患に起因する脳障害に対する脳保 護には、 NF— κΒのデコイ、 すなわち NF— κ Βが結合する核酸と特異的に拮 抗する化合物を投与することが特に有効であることを見いだし、 本発明を完成し た。
すなわち、 本発明は、 NF—κΒのデコイを含有する脳保護剤さらに詳しくは NF— Κ Bのデコイを含有する脳疾患に起因する脳障害に対する脳保護剤および 保護方法を提供するものである。
本発明の脳保護剤の対象とする疾患は、 特に限定されないが、 特に、 脳組織に おいて、 転写調節因子 NF—/ c Βが制御する遺伝子の所望しない活性化に起因す る脳障害に有効であり、 例えばくも膜下出血後の脳血管攣縮や、 脳血栓症および 脳塞栓等の脳梗塞、 脳出血後後遺症、 脳血管性痴呆、 水頭症、 脳動脈奇形 ·血管 腫、 各種脳腫瘍、 パーキンソン症候群、 脳動脈硬化症、 髄膜炎 （細菌性、 無菌性、 術後等）、 脳炎、 エイズ、 各種の脳症 （ペーチュット脳症、 多発性硬化症） や重 傷頭部外傷 よる脳神経細胞死による脳障害が含まれる。 特に本発明により得ら れる NF— κ Βのデコイを含有する脳保護剤は、 くも膜下出血に伴い出現する脳 血管攣縮の治療および予防には好適である。
本発明で用いられる NF— κ Βのデコイとしては、 NF— / Βによる遺伝子の 活性化を阻害する物質であり、 具体的には染色体上に存在する NF— Κ Βの核酸 結合部位と特異的に拮抗する化合物であればよく、 例えば核酸およびその類似体 が含まれる （W096/35430、 J P07— 291 86 OA参照）。 好まし い NF— K Bのデコイの例としては、 NF— κ B結合部位のコンセンサス配列を 含むオリゴヌクレオチド、 その変異体、 またはこれらを分子内に含む化合物があ げられる。 オリゴヌクレオチドは DNAでも RNAでもよく、 またそのオリゴヌ クレオチド内に核酸修飾体または および擬核酸を含むものであってもよい。 ま た、 これらのオリゴヌクレオチド、 その変異体、 またはこれらを分子内に含むィ匕 合物は 1本鎖でも 2本鎖であってもよく、 線状であっても環状であってもよい。 変異体とは上記配列の一部が、 変異、 置換、 挿入、 欠失しているもので、 N F— Bが結合する核酸結合部位と特異的に拮抗する核酸を示す。 さらに好ましい N F - κ Bのデコイしては、 上記核酸配列を 1つまたは数個含む 2本鎖ォリゴヌク レオチドまたはその変異体があげられる。 本発明で用いられるオリゴヌクレオチ ドは、 リン酸ジエステル結合部の酸素原子をィォゥ原子で置換したチオリン酸ジ エステル結合をもつオリゴヌクレオチド （S—オリゴ）、 または、 リン酸ジエス テル結合を電荷をもたないメチルホスフエ一ト基で置換したオリゴヌクレオチド 等の生体内でオリゴヌクレオチドが分解を受けにくくするために改変したオリゴ ヌクレオチド等が含まれる。
本発明で用いられる N F— κ Bのデコイの製造方法としては、 一般的な化学合 成法または生化学合成法を用いることが出来る。 例えば N F— κ Bのデコイとし て核酸を用いる場合、 遺伝子工学で一般的に用いられる核酸合成法を用いること が出来、 例えば、 D NA合成装置を用いて目的のデコイヌクレオチドを直接合成 してもよいし、またこれらの核酸、それを含む核酸またはその一部を合成した後、
P C R法またはクローユングベクター等を用いて核酸を増幅してもよレ、。さらに、 これらの方法により得られた核酸を、 制限酵素等を用いて切断、 D N Aリガーゼ 等を用いて結合等を行い目的とする核酸を製造してもよい。 また、 さらに細胞内 でより安定なデコイヌクレオチドを得るために、 核酸の塩基、 糖、 リン酸部分を 例えばアルキル化、 ァシル化等の化学修飾を施してもよい。
本発明により得られる N F— / Bのデコイを主成分として含有する製剤は、 主 薬が患部の細胞または目的とする組織の細胞内に取り込まれるような製剤であれ ば特に限定されるものではなく、 N F— κ Bのデコイ単独で、もしくは慣用の 担 体と混合して、経口投与、非経口投与、局所投与ないしは外用の形で投与される。 これらの製剤は溶液、 懸濁液、 シロップ、 リボソーム製剤、 乳剤、 シロップ等の 液体の投与形態であってもよいし、 錠剤、 顆粒剤、 粉末剤、 カプセル剤などの固 形の投与形態であってもよい。 必要に応じ、 上記製剤には各種の担体、 助剤、 安 定剤、 潤滑剤、 その他一般に使用される添加剤、 例えば乳糖、 クェン酸、 酒石酸、 ステアリン酸、 ステアリン酸マグネシウム、 白陶土、 蔗糖、 コーンスターチ、 タ ルク、 ゼラチン、 寒天、 ぺクチン、 落下生油、 オリープ油、 カカオバタ一、 ェチ レンダリコールなどを添加することができる。
特に、 NF— / c Bのデコイとして核酸またはその修飾体を用いる場合の好ま しい製剤としては、 一般に用いられている遺伝子導入法で用いられる形態、 例え ばセンダイウィルス等を用いた膜融合リボソーム製剤ゃェンドサイトーシスを利 用するリボソーム製剤等のリボソーム製剤、 リポフエクトァミン （ライフテック オリエンタル社製） や T f X 50等のカチオン性脂質を含有する製剤またはレト 口ウィルスベクター、 アデノウィルスベクター等を用いるウィルス製剤を用いる のが有利である。
リボソーム製剤は、 そのリボソームの構造体が、 大きな 1枚膜リボソーム （L
UV), 多重層リボソーム （MLV)、 小さな一枚膜リボソーム （SUV) のいず れであってもよい。 その大きさも、 LUVでは 200から 1 00 Onm、 MLVで は 400から 3 50 Onm、 SUVでは 20から 50 nm程度の粒子系をとり得る 1S センダイウィルス等を用いる膜融合リボソーム製剤の場合は粒子系 200か ら 1 00 Onmの ML Vを用いるのが好ましい。
リボソームの製造方法は、 デコイが保持されるものであれば特に限定されるも のではなく、慣用の方法、例えば逆相蒸発法 (Szoka, F. ,et al:Biochim. Biophys. Acta, Vol.601 559(1980))、 エーテル注入法 （Deamer, D. W. ： Ann. N. Y. Acad. Sci. , Vol.308250 (1978))、界面活性剤法（Brunner, J., etal: Biochim. Biophys. Acta, Vol.455 322(1976)) 等を用いて製造することができる。
リポソーム構造を形成するための脂質としてはリン脂質、 コレステロール類や 窒素脂質等が用いられるが、 一般的にはリン脂質が好適であり、 ホスファチジル コリン、 ホスファチジノレセリン、 ホスファチジノレグリセ口一ノレ、 ホスファチジノレ イノシト一ノレ、 ホスファチジルエタノールァミン、 ホスファチジン酸、 カノレジオ リピン、 スフインゴミエリン、 卵黄レシチン、 大豆レシチン、 リゾレシチン、 等 の天然リン脂質、 あるいはこれらを常法によって水素添加したものの他、 ジセチ ルホスフェート、 ジステアロイルホスファチジルコリン、 ジパルミ トイルホスフ ァチジルコリン、 ジパルミ トイルホスファチジルエタノールァミン、 ジパルミ ト イノレホスファチジノレセリン、 エレォステアロイゾレホスファチジゾレコリン、 ェレオ ステアロイルホスファチジルエタノールァミン、 エレォステアロイルホスファチ ジルセリン等の合成リン脂質等を使用することができる。
これらのリン脂質を含む脂質類は単独で用いることもできるが、 2種以上を併 用することも可能である。 このとき、 エタノールアミンゃコリン等の陽性基をも つ原子団を分子内に持つものを用いることにより、 電気的に陰性なデコイヌクレ ォチドの結合率を増加させることもできる。 これらリポソーム形成時の主要リン 脂質の他に一般にリボソーム形成用添加剤として知られるコレステロール類、 ス テアリルァミン、 α—トコフエロール等の添加剤を用いることもできる。
このようにして得られるリポソ一ムは患部の細胞または目的とする組織め細胞 内に取り込みを促進するために、 ）1莫融合促進物質、 例えばセンダイウィルス、 不 活化センダイウィルス、 センダイウィルスより精製された膜融合促進蛋白質、 ポ リエチレングリコール等を加えることができる。
リポソーム製剤の製造法の例を具体的に説明すると、 たとえば前記したリポソ —ム形成物質をコレステロール等と共にテトラヒ ドロフラン、 クロ口ホルム、 ェ タノール等の有機溶媒に溶解し、 これを適当な容器に入れて減圧下に溶媒を留去 して容器内面にリボソーム形成物質の膜を形成する。 これに N F— κ Βのデコイ を含有する緩衝液を加えて撹拌し、 得られたリポソ一ムにさらに所望により前記 した膜融合促進物質を加えた後、 リボソームを単離する。 このようにして得られ る N F— κ Βのデコイを含有するリポソ一ムは適当な溶媒中に懸濁させる力、 或 V、はいつたん凍結乾燥したものを適当な溶媒に再分散させて治療に用いることが できる。 膜融合促進物質はリボソーム単離後、 使用までの間に加えてもよい。 この様にして得られた N F— Κ Βのデコイを主成分として含有する製剤におけ る、 デコイの含有割合は、 適用疾患、 適用部位、 投与形態および投与方法に応じ て種々設定することができる。
この様にして得られる N F— κ Βのデコイを含有する脳保護剤は、疾患の種類、 使用するデコイの種類等により各種の方法で投与することができ、 例えば、 大槽 (くも膜下） 内等に投与すればよい。
' N F - κ Βのデコイの投与量は、年齢その他患者の条件、疾病の種類、使用 す るデコイの種類等により適宜選択されるが、 例えば大槽内投与等では一般には 1 回あたり 10から 10、 00 Onmoleを適時投与する事ができる。
以下に本発明の実施例によりさらに具体的に説明する。
実施例
モデル動物の作成
実験動物として、 2— 2. 5 k gの雄性ニュージーランド白ゥサギを用いた。 実験動物はペントバルビツールを 20 m g / k g静脈内に注射し麻酔した。 耳介 動脈に力ニューレを揷入し動脈血を採取した。 頭部を定位フレームで固定し、 項 部筋を収縮させることにより、 環椎後頭骨膜を露出させた。 脳脊髄液を 1 m 1除 いた後、 大槽 （くも膜下） に 1 mgZk gの自家血を 27ゲージの二一ドルを用 いて 3分以上かけて注意深く注入した。 その後、 動物の脳底動脈を自家血で覆う ように動物の頭部を 30分間、 下げた状態に置き、 くも膜下出血モデルを作成し た。
デコイの投与
ゥサギ N F— /C B結合認識配列 (2 Omer； TGGAGGGGCTTTCCCCATAG) (NF- κ Β デコイ群） およびスクランブル NF— κ Β結合認識配列 （2 Omer) (スクラ ンプルデコイ群） を合成 し（Ray, A. , Gao, X. & Ray, B. J. Biol. Chem. 270, 29201- 29208 (1995)参照）、カチオン性リボソーム投与システム（Tfx50promega, WI, U.S.A.) を用いて 、 くも膜下出血作成 2日前に大槽内に投与した。
評価はくも膜下出血作成 3日前、 及び 4日後に血管撮影を施行し、 '脳底動脈の 血管径の変化率を測定した。 また、 へマトキシリン—ェォシン （Hematoxylin - eosin) 染色にて組織学的検索を行った。 NF— κΒ の活性に関しては、 ゲルシ フト法を用いて評価した。
^口: τ :
脳血管撮影上、 コント口ール群、 スクランブルデコイ投与群では 69 %まで狭小 化を認めたが、 NF— /C B投与群では約 90%と著明な血管収縮の抑制を認めた。 組織学的にも、 コントロール群、 スクランブルデコイ投与群では著しい血管径の 狭小化を認めたが、 NF— κ Bデコイ投与群では、 正常血管とほとんど同様の組 織像であった。 また、 ゲルシフト法ではコントロール群に較べ、 NF—κ Βデコ ィ投与群で明らかに活性が抑制された。

Claims

請求の範囲
1 . N F— /c Bのデコイを含有する脳保護剤。
2 . 脳疾患に起因する脳障害に対する請求の範囲第 1項記載の脳保護剤。
3 . 脳疾患が脳血管障害であるところの請求の範囲第 2項記載の脳保護剤。
4 . 脳疾患に起因する脳障害が、 くも膜下出血に伴う脳血管攣縮であるところ の請求の範囲第 2項記載の脳保護剤。
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