WO1998047548A1 - Adsorbants de la toxine-1 du syndrome de choc toxique, procede d'elimination de ladite toxine par adsorption, adsorbeurs remplis avec ces adsorbants et utilisation desdits adsorbants - Google Patents

Description

明 糸田 ト キ シ ッ ク シ ョ ッ ク シ ン ド ロ ー ム ト キ シ ン 一 ：！ の 吸着剤、 そ の 吸着除去方法、 該吸着剤を充填 し て な る 吸着器お よ び該吸着剤 の 用途 技術分野

本発明 は、 ト キ シ ッ ク シ ョ ッ ク シ ン ド ロ ー ム ト キ シ ン 一 1 の 吸着剤、 そ の 吸着除去方法、 前記吸着剤を充填 し て な る 吸着器お よ び前記吸着剤 の 用 途 に 関す る 。 背景技術

ト キ シ ッ ク シ ョ ッ ク シ ン ド ロ ー ム ト キ シ ン 一 1 (以下、 T S S T — 1 と い う ） は黄色 ブ ド ウ 球菌が産生す る 分子 量約 2 0 〜 3 0 k D a の 可溶性 夕 ン パ ク 質か ら な る ェ キ ソ ト キ シ ン （外毒素） で あ り 、 代表的 な ス ー パ ー 抗原で め る 。

敗血症 と は、 体内 の ど こ か に感染があ り そ の た め に全 身的な炎症反応を お こ し た状態 を い う 。 こ の 炎症症状が 亢進 し て い く と 、 シ ョ ッ ク 症状 （敗血症性 シ ョ ッ ク ） が お こ り 、 ま た臓器障害 （臓器不全） がお こ り 、 さ ら に は 多臓器不全 と い っ た 重篤な状態 に 陥 る 。 そ の 感染源 は主 と し て細菌 で あ り 、 こ の 細菌 は グ ラ ム 陽性蘭 と グ ラ ム 陰 性菌 と に大別 さ れ る 。

グ ラ ム 陽性蘭の一種で あ る 黄色 ブ ド ウ 球菌 に感染 し た ばあ い、 感染 し た黄色 ブ ド ウ 球菌 の 産生す る T S S T — 1 が T 細胞を増殖 し 活性化す る こ と に よ り 敗血症を惹起 す る 。 最近で は メ チ シ リ ン耐性黄色 ブ ド ウ 球菌 （ M R S A ) 感染お よ びそ れ に伴 う 敗血症性 シ ョ ッ ク は院内感染 の 重要な 起炎菌 と し て注 目 さ れ、 こ こ 数年社会的大問題 と な っ て い る （川 股 知 之 （ Tomoyuki Kawamata) ら 、 「集中治療」 、 7 卷、 631頁 （ 1995)) 。

一方、 グ ラ ム 陰性菌 に感染 し た ば あ い、 そ の細胞壁 に 存在す る エ ン ド ト キ シ ン （内毒素） が血液中 に侵入 し 敗 血症を 引 き お こ す。 さ ら に近年、 T S S T — 1 がス ー パ 一抗原 と し て免疫系 を賦活化 し ェ ン ド ト キ シ ン の毒性を 数千倍 に も 増強す る た め、 臨床的 に は敗血症がお き な い 低濃度の ェ ン ド ト キ シ ン の存在 に よ っ て も 敗血症が引 き お こ さ れ る こ と が示 さ れて い る 。 す な わ ち 、 グ ラ ム 陽性 菌お よ び グ ラ ム 陰性菌が複合感染 し た ば あ い は敗血症を 引 き お こ す可能性が非常 に高 く な る 。

敗血症の 治療 に は、 感染対策 と し て の 抗生物質、 感染 に対す る 抵抗力を賦活化す る た め の y — グ ロ プ リ ン な ど が用 い ら れて い る が、 依然高 い 死亡率を示 し て い る 。 そ の た め、 敗血症の 原因 と な る T S S T — 1 や エ ン ド ト キ シ ン を体液中か ら 除去す る こ と が医学的見地か ら 望 ま れ て い る 。

エ ン ド ト キ シ ン に 関 し て は、 体液中か ら 除去す る た め の 吸着剤が知 ら れて い る 。 た と え ば、 特公平 1 一 1 6 3 8 9 号公報で は、 適 当 な担体 に ェ ン ド ト キ シ ン の解毒剤 と し て知 ら れて い る ポ リ ミ キ シ ン を固定 し た 吸着剤が開 示 さ れて い る 。 ま た、 本発明者 ら が、 特開平 8 — 1 7 3 8 0 3 号公報で、 ス ル ホ ン酸基を導入 し た ス チ レ ン ー ジ ビニ ル ベ ン ゼ ン共重合体 に よ り ェ ン ド ト キ シ ン の 吸着が 可能で あ る こ と を 開示 し て い る 。 こ れ ら の 吸着剤 は グ ラ ム 陰性菌 の 感染 に対 し て は か な り の 効果が期待で き る 。 し か し 、 グ ラ ム 陽性菌お よ び グ ラ ム 陰性菌 に よ る 複合感 染がお こ り 、 T S S T — 1 お よ びエ ン ド ト キ シ ン が共存 す る ば あ い に は そ の 効果 は下が る 。 さ ら に、 グ ラ ム 陽性 菌の み が感染 し 、 T S S T — 1 が体液中 に侵入 し た ばあ い に は効果 は期待で き な い。 ェ ン ド ト キ シ ン の 吸着剤 は 種 々 知 ら れて い る が、 T S S T — 1 の 吸着剤 は知 ら れて い な い こ と か ら そ の 吸着剤の 開発が強 く 望 ま れて い た。

本発明 の 目 的 は、 体液中 の T S S T — 1 を効率 よ く 吸 着除去 し う る 吸着剤、 前記吸着剤を用 い た体液中 の T S S T — 1 の 吸着除去方法お よ び T S S T — 1 吸着器、 な ら び に前記吸着剤の用 途を提供す る こ と で あ る 。 発明 の 開示

本発明者 ら は、 体液中 に存在す る T S S T — 1 を効率 よ く 吸着除去 し う る 吸着剤 に つ い て鋭意検討 し た。 そ の 結果、 水不溶性担体 に 1 0 g P 値が 2 . 5 0 以上の化合 物を固定 し て な る 吸着剤が体液中 に存在す る T S S T — 1 を効率 よ く 吸着除去 し う る こ と を 見 い だ し 、 本発明を 兀成 し た o

す な わ ち 、 本発 明 は （ 1 ) 水不溶性担体 に 1 0 g P ( P はォ ク タ ノ ー ル — 水系で の分配係数） 値が 2 . 5 0 以上の化合物を 固定 し て な る T S S T — 1 の 吸着剤 に 関 す る 。

さ ら に本発明 は、 （ 2 ) 前記水不溶性担体が水不溶性 多孔質担体で あ る こ と を特徴 と す る 前記 （ 1 ) 項記載の 吸着剤 に 関す る 。

さ ら に本発明 は、 （ 3 ) 前記水不溶性多孔質担体の球 状 タ ン パ ク 質の排除限界分子量が 1 万以上 6 0 万以下で あ る 前記 （ 2 ) 項記載の 吸着剤 に 関す る 。

さ ら に本発明 は、 （ 4 ) 前記 （ 1 ) 項記載の 吸着剤 に T S S T — 1 を含む体液を接触 さ せ る こ と を特徴 と す る 体液中 の T S S T 1 の 吸着除去方法 に 関す る 。

さ ら に本発明は、 （ 5 ) 体液の入口 お よ び出 口を有 し、 かつ吸着剤の容器外への流出防止手段を備え た容器内 に、 前記 （ 1 ) 項記載の 吸着剤 を充填 し て な る T S S T — 1 の 吸着器 に 関す る 。

さ ら に本発明 は、 （ 6 ) ト キ シ ッ ク シ ョ ッ ク シ ン ド ロ — ム ト キ シ ン — 1 の 吸着剤 を製造す る た め の 、 水不溶性 担体に l o g P ( P はォ ク タ ノ ー ル —水系での分配係数） 値が 2 . 5 0 以上の化合物を 固定 し て な る 吸着剤の 用途 に 関す る 。 図面の簡単 な 説明

図 1 は、 本発明 の T S S T — 1 吸着器の一実施例 を示 す概略断面説明 図で あ る 。

図 2 は、 3 種類の 水不溶性担体を 用 い て流量 と 圧力損 失 △ P と の 関係を調べ た結果を示す ダ ラ フ で あ る 。 発明 を実施す る た め の 最良の 形態 本発明 に お け る 「 T S S T — 1 」 と は、 黄色 プ ド ウ 球 菌が産生す る 分子量約 2 0 〜 3 0 k D a の 可溶性 夕 ン パ ク 質か ら な る ェ キ ソ ト キ シ ン で あ る 。

ま た、 体液 と は、 血液、 血漿、 血清、 腹水、 リ ンパ液、 関節内液お よ び こ れ ら か ら え ら れ た 分画成分、 な ら び に そ の ほかの生体 由 来の 液性成分を い う 。

1 O g P 値 と は、 化合物の疎水性のパラ メ 一 タ であ る。 代表的 な ォ ク 夕 ノ ー ル — 水系での分配係数 P は以下の よ う に求め ら れ る 。 ま ず、 化合物をォ ク タ ノ ー ル （ も し く は水） に溶解 し 、 こ れ に 等量の水 （ も し く は ォ ク タ ノ ー ル） を加 え 、 グ リ ッ フ ィ ン · フ ラ ス ク · シ エ イ 力 一 （ Gr if fin flask shaker) ( グ リ ッ フ ィ ン · ア ン ド · ジ ョ ー ジ · リ ミ テ ツ ド （ Griffin & George Ltd. ) 製） で 3 0 分間振盪す る 。 そ の の ち 2 0 0 0 r p mで 1 〜 2 時間遠 心分離 し 、 ォ ク タ ノ ー ル層 お よ び水層 中の 化合物の各濃 度を分光学的方法 ま た は G L C な ど の 種々 の 方法で測定 す る こ と に よ り 分配係数 P が次式か ら 求め ら れ る 。

P = C 0 c t / C w

C 0 c t ： ォ ク タ ノ ー ル層 中 の化合物濃度

C w ： 水層 中 の 化合物濃度

本発明 の 吸着剤 は、 前記の よ う に し て求め ら れ る P の 対数値 （ l o g P 値） が 2 . 5 0 以上の化合物を水不溶 性担体 に 固定 し て な る 。

こ れま で に 多 く の 研究者 ら に よ り 種 々 の 化合物の 1 0 g P 値が実測 さ れて お り 、 前記 1 0 g P の 実測値 は シ ー

• ノヽ ン シ ュ （ Hansch) ら に よ っ て 整 理 さ れ て い る ( 「パ ー テ ィ シ ヨ ン ' コ エ フ ィ シ ェ ン ッ ' ア ン ド · ゼ ァ

• ユ ー ジ ズ ； ケ ミ カ ル · レ ビ ュ ー ズ （ PARTITION C0EFFI CIENTS AND THEIR USES ； Chemical Reviews) 」 、 71巻、 525頁 （1971)) 。

ま た実測値の知 ら れて い な い化合物 につ い て は、 ァ ー ル · エ フ · レ ッ カ ー （ B. F. Rekker) がそ の 著書 （ 「ザ

• ノヽ ィ ド ロ フ ォ ビ ッ ク · フ ラ グ メ ン タ ル · コ ン ス タ ン ト ( THE HYDROPHOBIC FRAGMENTAL CONSTANT) J 、 エ ノレ セ ビ ア · サ イ ェ ン テ ィ フ ィ ッ ク · ノ、° プ リ ツ シ ン グ · カ ン ノ、⁰ 二 一 ( Elsevier Sci. Pub. Com. ) 、 ア ム ス テ ゾレ ダ ム （19 77)) 中 に示 し て い る 疎水性 フ ラ グ メ ン ト 定数 f を 用 い て計算 し た値 （ ∑ f ) が参考 と な る 。 疎水性 フ ラ グ メ ン ト 定数 と は、 数多 く の 1 o g P 実測値を も と に、 統計学 的処理を行 い 決定 さ れ た 種 々 の フ ラ グ メ ン ト の疎水性を 示す値で あ る 。 化合物を構成す る お の お の の フ ラ グ メ ン ト の f 値の 和 は 1 o g P 値 と ほ ぼ一致す る 。 本発明 に お い て l o g P 値 と い う と き 、 l o g P 値が知 ら れて い な い化合物 に つ い て は ∑ f 値を意味す る 。

T S S T — 1 の 吸着 に 有効な化合物の探索 に あ た り 、 種 々 の 1 0 g P 値を有す る 化合物を水不溶性担体 に 固定 し、 T S S T — 1 に対す る 吸着能を検討 し た。 そ の結果、 l o g P 値が 2 . 5 0 以上、 好 ま し く は 2 . 8 0 以上、 さ ら に好 ま し く は 3 . 0 0 以上の 化合物が T S S T — 1 の 吸着 に 有効で あ り 、 l o g P 値が 2 . 5 0 未満の化合 物 は ほ と ん ど T S S T — 1 に対す る 吸着能を示 さ な い こ と がわか っ た。 た と え ば、 ィ匕合物 と し て ア ル キ ル ア ミ ン を水不溶性担体 に 固定 し た ばあ い、 ア ルキ ル ア ミ ン を n — へ キ シ ソレ ア ミ ン （ 1 o g P = 2 . 0 6 ) か ら n — ォ ク チ ル ァ ミ ン （ l o g P = 2 . 9 0 ) に変え る と 、 こ の あ い だで T S S T — 1 に 対す る 吸着能 は飛躍的 に 高 ま る こ と が わ か っ た 。 こ れ ら の 結果 よ り 、 本発明 の 吸着剤の T S S T — 1 に対す る 吸着能 は、 l o g P 値が 2 . 5 0 以 上の化合物の 固定 に よ り 担体上 に 導入 さ れ た原子団 と T S S T — 1 と の あ い だ の 疎水性相互作用 に よ る も の と 考 え ら れ、 1 o g P 値が 2 . 5 0 未満の化合物で は疎水性 が小 さ す ぎ る た め に T S S T — 1 に 対す る 吸着能を示 さ な い こ と が考え ら れ る 。 本発明 に お い て、 水不溶性担体 に 固定 さ れ る 化合物 と し て は、 l o g P 値が 2 . 5 0 以上の 化合物で あ れば特 別 な 制限な し に用 い る こ と がで き る 。 た だ し 、 化学結合 法 に よ り 担体 に化合物を 固定す る ば あ い、 化合物の一部 が脱離す る こ と が多 い が、 こ の脱離基が化合物の 疎水性 に 大 き く 寄与 し て い る ば あ い、 す な わ ち 脱離 に よ り 担体 上 に 固定 さ れ る 原子団 の 疎水性が ∑ f 値で示す と 2 . 5 0 よ り 小 さ く な る よ う な ばあ い に は本発明 の 主 旨か ら 考 え て、 本発明 に用 い る 化合物 と し て は不適 当 で あ る 。 そ の 代表例 の 1 つ と し て、 エ ス テ ル交換 に よ り 水酸基を有 す る 担体 に安息香酸イ ソ ペ ン チ ル エ ス テ ル （ ∑ f = 4 . 1 5 ) を 固定す る ばあ い があ げ ら れ る 。 こ の ば あ い 、 実 際 に担体 に 固定 さ れ る 原子団 は C ₆H _r C O — で あ り 、 こ の原子団の ∑ f 値は 1 以下であ る 。 こ の よ う な化合物が、 本発明で用 い る 化合物 と し て適当 か ど う か は、 脱離基の 部分を水素 に 置 き 換え た化合物の l o g P 値が 2 . 5 0 以上か ど う か に よ り 判断すれば よ い 。

1 o g P 値が 2 . 5 0 以上のィヒ合物の 中 で も 、 不飽和 炭化水素、 ア ル コ ー ノレ 、 ァ ミ ン 、 チ オ ー ル 、 カ ル ボ ン酸 お よ びそ の 誘導体、 ハ ロ ゲ ン 化物、 ア ルデ ヒ ド、 ヒ ド ラ ジ ド、 イ ソ シ ア ナ ー ト 、 グ リ シ ジ ル エ ー テ ル な ど の ォ キ シ ラ ン環含有化合物、 な ら び にノヽ ロ ゲ ン化 シ ラ ン な どの よ う に担体への結合 に利用 で き る 官能基を有す る 化合物 が好ま し い 。 こ の よ う な 化合物の代表例 と し て は、 た と え ば 、 n — ヘ プ チ リレ ア ミ ン 、 n — ォ ク チ ル ァ ミ ン 、 デ シ ル ァ ミ ン 、 ド デ シ ノレ ァ ミ ン 、 へ キ サ デ シ ノレ ア ミ ン 、 ォ ク タ デ シ ゾレ ア ミ ン 、 2 — ア ミ ノ ォ ク テ ン 、 ナ フ チ ノレ ア ミ ン 、 フ ヱ ニ ノレ 一 n — プ ロ ピ ソレ ア ミ ン 、 ジ フ エ ニ ソレ メ チ ル ア ミ ン な ど の ア ミ ン 類 ； n — へ プ チ ノレ ア ル コ ー ル、 n — ォ ク チ ノレ ア ル コ ー ル、 ド デ シ ゾレ ア ノレ コ ー ノレ、 へ キ サ デ シ ル ァ ル コ ー ル、 1 ー ォ ク テ ン 一 3 —オ ー ル、 ナ フ ト ー ル、 ジ フ エ ニ ル メ タ ノ ー ル、 4 一 フ エ 二 ル ー 2 — プ タ ノ ー ル な ど の ア ル コ ー ノレ類 お よ び こ れ ら の ア ル コ ー ノレ の ダ リ シ ジ ル エ ー テ ノレ類 ； n —オ ク タ ン酸、 ノ ナ ン酸、 2 — ノ ネ ン 酸、 デ カ ン酸、 ド デ カ ン酸、 ス テ ア リ ン 酸、 ァ ラ キ ド ン 酸、 ォ レ イ ン 酸、 ジ フ ヱ ニ ル酢酸、 フ ヱ ニ ノレ プ ロ ピ オ ン 酸 な ど の カ ル ボ ン 酸類 お よ び こ れ ら の 酸ハ ロ ゲ ン 化物 ； エ ス テ ル、 ア ミ ド な ど の 力 ノレ ボ ン 酸誘導体 ； 塩化ォ ク チ ル、 臭ィ匕 ォ ク チ ル、 塩化 デ シ ル、 塩化 ド デ シ ル な ど の ハ ロ ゲ ン 化物 ； オ ク タ ン チ オ ー ル、 ド デ カ ン チ オ ー ル な ど の チ ォ ー ノレ類 ； n —ォ ク チ ノレ ト リ ク ロ ロ シ ラ ン 、 ォ ク タ デ シ ル ト リ ク ロ ロ シ ラ ン な ど の ノヽ ロ ゲ ン ィ匕 シ ラ ン 類 ； な ら び に n —ォ ク チ ノレ ア ノレ デ ヒ ド、 n — カ プ リ ン ア ル デ ヒ ド、 ド デ シ ル ァ リレ デ ヒ ド な ど の ア ル デ ヒ ド類 な ど が あ げ り れ 。

こ れ ら の ほ か に も 、 前記 の 例示化合物 の 炭化水素部分 の 水素原子がハ ロ ゲ ン 、 窒素、 酸素、 ィ ォ ゥ な ど の へ テ 口 原子 を 含有す る 置換基、 ほ か の ア ル キ ル基 な ど で 置換 さ れ た 化合物 の う ち 、 l o g P 値が 2 . 5 0 以上 の 化合 物、 前述の シ ー · ノヽ ン シ ュ ら の 総説 「パ ー テ ィ シ ョ ン · コ エ フ イ シ ェ ン ッ · ア ン ド ， ゼ ァ · ユ ー ジ ズ ； ケ ミ カ ル

• レ ビ ュ ー ズ、 71巻、 525頁 、 （1971)」 中 の 5 5 5 頁 か ら 6 1 3 頁 の 表 に 示 さ れ て い る l o g P 値が 2 . 5 0 以 上 の 化合物 な ど を 用 い う る が、 本発 明 に お い て は こ れ ら の み に 限定 さ れ る も の で は な い 。

な お、 こ れ ら の 化合物 は そ れ ぞ れ単独 で用 い て も よ い し 、 任意の 2 種類以上を組み合わ せ て も よ く 、 さ ら に は l o g P 値が 2 . 5 0 未満の化合物 と の組み 合わせ で用 い て も よ い。

本発明 の 吸着剤 に お け る 水不溶性担体 と は、 常温常圧 で固体で あ り 水不溶性で あ る 担体を意味す る 。

ま た、 本発明 に お け る 水不溶性担体の形状の例 と し て は、 た と え ば粒状、 板状、 繊維状お よ び 中空糸状な どが あ げ ら れ る が、 こ れ ら の み に 限定 さ れず、 ま た前記担体 の大 き さ も と く に 限定 さ れな い。

本発明 に お け る 水不溶性担体 と し て は、 た と え ばガ ラ ス ビ ー ズ お よ び シ リ カ ゲルな ど の 無機担体、 架橋 ま た は 無架橋の ポ リ ビニ ル ア ル コ ー ル、 架橋 ま た は無架橋 の ポ リ ア ク リ レ ー ト 、 架橋 ま た は無架橋 の ポ リ ア ク リ ノレ ア ミ ド お よ び架橋 ま た は無架橋の ポ リ ス チ レ ン な どの 合成高 分子な ら び に結晶性セ ル ロ ー ス 、 架橋 ま た は無架橋 の セ ル ロ ー ス 、 架橋 ま た は無架橋 の ァ ガ ロ ー ス お よ び架橋 ま た は無架橋の デキ ス ト リ ン な ど の 多糖類か ら な る 有機担 体、 さ ら に は こ れ ら の 組み合わ せ に よ り え ら れ る 有機 一 有機、 有機 一 無機な ど の複合担体な どが代表例 と し て あ げ り れ る o

な かで も 、 親水性担体が非特異的吸着が比較的少な く

T S S T - 1 の 吸着選択性が良好で あ る た め好 ま し い。 こ こ で い う 親水性担体 と は、 水不溶性担体を構成す る 化 合物を平板状 に し た と き の水 と の接触角 が 6 0 度以下の 担体を い う 。 こ の よ う な担体の 代表例 と し て は、 た と え ばセ ル ロ ー ス 、 ポ リ ビニ ル ア ル コ ー ノレ、 エ チ レ ン 一 酢酸 ビニ ル共重合体 け ん化物、 ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド、 ポ リ ア ク リ ル酸、 ポ リ メ タ ク リ ル酸、 ポ リ メ タ ク リ ル酸メ チル、 ポ リ ア ク リ ル酸 グ ラ フ ト イ匕 ポ リ エ チ レ ン 、 ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド グ ラ フ ト イ匕ポ リ エ チ レ ン お よ び ガ ラ ス な ど か ら な る 担体があ げ ら れ る 。

な かで も 、 多孔質セ ル ロ ー ス ゲル は、 （ 1 ) 機械的強 度が比較的高 く 強靭で あ る た め、 撹拌な ど の 操作 に よ り 破壊 さ れた り 微粉を生 じ た り す る こ と が少な く 、 カ ラ ム に充填 し たばあ い体液を高流速で流 し て も圧密化 し た り 、 目 詰 ま り し た り せず、 さ ら に細孔構造が高圧蒸気滅菌な ど に よ っ て変化を受 け に く い、 （ 2 ) ゲルがセ ル ロ ー ス で構成 さ れて い る た め親水性で あ り 、 リ ガ ン ド の 結合 に 利用 し う る 水酸基が多数存在 し、 非特異的吸着が少な い、 ( 3 ) 空孔容積を大 き く し て も 比較的強度が高 い た め軟 質ゲル に劣 ら な い 吸着容量がえ ら れ る 、 お よ び （ 4 ) 安 全性が合成高分子ゲル な ど に比べて高 い な ど の す ぐ れた 特性を有 し て お り 、 本発明 に用 い る の に最 も 適 し た担体 の 1 つ で あ る 。 本発明 に お い て用 い ら れ る 担体 は、 好 ま し く は圧力 を増加 さ せ て も 流量が比例 し て増加 し な い硬 質ゲ ルで あ る 。 し か し 、 本発明 に お い て は こ れ ら の み に 限定 さ れ る も の で は な い 。 な お、 前記担体 は そ れぞれ単 独で用 い て も よ い し 、 任意の 2 種類以上を混合 し て用 い て も よ い 。

本発明 に 用 い る 水不溶性担体 に要求 さ れ る 性質 は、 適 当 な 大 き さ の 細孔を多数有す る こ と 、 す な わ ち 多孔質で あ る こ と で あ る 。 本発明 の 吸着剤 の 吸着対象で あ る T S S T — 1 は分子量約 2 0 〜 3 0 k D a の タ ン パ ク 質であ り 、 こ の タ ン パ ク 質を効率よ く 吸着す る た め に は T S S T _ 1 は あ る 程度高 い 確率で細孔内 に 侵入 し う る が、 ほ か の タ ン パ ク 質の侵入 は で き る 限 り お こ ら な い こ と が好 ま し い。 細孔径 に 侵入可能 な 物質の 分子量の 目 安 と し て 排除限界分子量が一般 に用 い ら れて い る 。 排除限界分子 量 と は、 成書 （ た と え ば、 波多野博行 （ Hiroyuki Hat an o) 、 花井俊彦 （ Toshihiko Hanai) 著、 「実験高速液体 ク ロ マ ト グ ラ フ 」 、 化学同人） な ど に述べ ら れて い る ご と く 、 ゲル浸透 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に お い て細孔内 に侵 入で き な い （排除 さ れ る ） 分子の う ち 最 も 小 さ い も の の 分子量を い う 。 排除限界分子量は一般に球状タ ンパ ク 質、 デキ ス ト ラ ン お よ び ポ リ エ チ レ ン グ リ コ 一 ゾレ な ど に つ い て よ く 調べ ら れ て い る 。 本発明 に 用 い る 水不溶性多孔質 担体の ば あ い、 球状 タ ン パ ク 質を用 い て え ら れ た値を用 い る の が適 し て い る 。

種 々 の 排除限界分子量の 担体を用 い て検討 し た結果、 T S S T — 1 の 吸着 に適 し た担体の 細孔径の 範囲 は、 排 除限界分子量が 1 万以上 6 0 万以下であ っ た。 すな わち、 1 万未満の排除限界分子量を有す る 担体を用 い た ばあ い は、 T S S T — 1 の 吸着量が少な く 、 そ の た め に実用性 が低下す る 。 ま た 6 0 万 を超え る 排除限界分子量を有す る 担体を用 い た ば あ い は、 T S S T — 1 以外の タ ン ノ、。 ク 質 （主 と し て ア ル ブ ミ ン ） の 吸着量が多 く な り 、 選択性 の 点で そ の 実用性が低下す る 。 し た が っ て、 本発明 に用 い る 水不溶性担体の 好 ま し い排除限界分子量 は 1 万以上 6 0万以下、 さ ら に好ま し く は 1 万 5 千以上 4 0 万以下、 と く に好 ま し く は 2 万以上 3 0 万以下であ る 。

つ ぎ に担体 の 多孔構造 に つ い て は、 吸着剤の単位体積 あ た り の 吸着能か ら 考 え て、 表面多孔性よ り も 全多孔性 が好 ま し く 、 空孔容積が 2 0 %以上で あ り 、 比表面積が 3 πι Ζ 8 以上で あ る こ と が好 ま し い 。 さ ら に 担体 は リ ガ ン ド の 固定化反応 に用 い う る 官能基 を有す る こ と が好 ま し い。 こ れ ら の 官能基の 代表例 と し て は、 た と え ば水酸基、 ア ミ ノ 基、 ア ルデ ヒ ド基、 カ ル ボキ シ ル基、 チ オ ー ル基、 シ ラ ノ ー ル基、 ア ミ ド基、 ェ ポ キ シ基ゝ ノヽ d ゲ ン 基、 ス ク シ 二 ル イ ミ ド基、 酸無水物 基な どが あ げ ら れ る が、 こ れ ら に 限定 さ れ な い。

本発明 に用 い る 水不溶性担体 と し て は、 硬質担体、 軟 質担体の い ずれ も 用 い う る が、 体外循環用 の 吸着剤 と し て使用 す る ば あ い は、 力 ラ ム に充填 し 、 通液す る 際 な ど に 目 詰 ま り を生 じ な い こ と が重要で あ り 、 そ の た め に は 充分な 機械的強度が要求 さ れ る 。 し た が っ て、 本発明 に 用 い る 水不溶性担体 は硬質担体で あ る こ と が よ り 好 ま し で い う 硬質担体 と は、 た と え ば粒状ゲルの ばあ い、 以下の 参考例 に 示す ご と く 、 ゲル を 円筒状 カ ラ ム に 均一 に充填 し 、 水性流体を流 し た 際の 圧力損失 Δ P と 流 量 の 関係が 0 . 3 k g / c m ²ま で の 直線 関 係 に あ る も の を い う

本発明 の 吸着剤 は、 l o g P 値が 2 . 5 0 以上の 化合 物を水不溶性担体 に 固定 し て え ら れ る が、 そ の 固定化方 法 と し て は、 公知の 種 々 の方法を特別 な 制限な し に用 い る こ と がで き る 。 し か し、 本発明の 吸着剤 を体外循環治 療に供す る ばあ い に は、 滅菌時あ る い は治療時 に お い て の リ ガ ン ドの脱離溶 出 を極力抑 え る こ と が安全上重要で あ り 、 そ の た め に は共有結合法 に よ り 固定す る こ と が好 ま し い。

ま た、 本発明 に お け る 吸着剤 は 1 0 g P 値が 2 . 5 0 以上の化合物を適量固定 し た も のであ る こ と が好ま し い。 該固定量が少なす ぎる と T S S T — 1 の吸着がみ ら れず、 多す ぎ る と 体液 と し て血液を用 い た ば あ い に 血小板な ど の 粘着成分の 付着が起 こ り う る 。 よ っ て、 l o g P 値が 2 . 5 0 以上の 化合物 の 固定量 は、 好 ま し く は水不溶性 担体の単位体積 （ l m l ) あ た り 0 . l // m o l か ら 1 0 0 0 0 m o 1 で あ り 、 さ ら に好 ま し く は 1 / m o 1 か ら 2 0 0 // m o 1 で あ り 、 最 も 好 ま し く は 5 m o 1 か ら 1 0 0 // m o l で あ る 。

本発明 に よ る 吸着剤 を用 い て体液中 よ り T S S T — 1 を 吸着除去す る 方法 に は種 々 の 方法が あ る 。 最 も 簡便な 方法 と し て は、 体液を取 り 出 し てバ ッ グ な ど に貯留 し 、 こ れ に 吸着剤 を混合 し て T S S T - 1 を 吸着除去 し た の ち 、 吸着剤 を 濾別 し て T S S T — 1 が除去 さ れた体液を え る 方法が あ げ ら れ る 。 ほ かの 方法 と し て は、 体液の 入 口 と 出 口 を有 し 、 少 な く と も 出 口 に は体液 は通過す る が 吸着剤 は通過 し な い フ ィ ル タ ー を装着 し た容器 に 吸着剤 を充填 し 、 こ れ に体液を流す方法があ る 。 い ずれの方法 も 用 い う る が、 後者の 方法 は操作 も 簡便で あ り 、 ま た体 外循環回路 に 組み込む こ と に よ り 、 患者の 体液、 と く に 血液か ら 効率 よ く オ ン ラ イ ン で T S S T — 1 を除去す る こ と が可能で あ り 、 本発明 の 吸着剤 は こ の 方法 に適 し て い る

こ こ で い う 体外循環回路で は、 本発明 の 吸着剤を単独 で用 い る こ と も で き る が、 ほ か の体外循環治療 シ ス テ ム と の併用 も 可能で あ る 。 併用 の 例 と し て は、 た と え ば人 ェ透析回路 な どが あ げ ら れ、 透析療法 と の組み合わ せ に 用 い る こ と も で き る 。

つ ぎ に 、 前記 T S S T — 1 吸着剤を用 い た本発明 の τ S S T — 1 吸着器を 、 そ の一実施例 を示す概略断面説明 図であ る 図 1 に も と づ き 説明す る 。 図 1 に お い て、 1 は 体液の 入 口 、 2 は体液の 出 口 、 3 は本発明 の T S S T — 1 吸着剤、 4 お よ び 5 は体液お よ び体液 に 含 ま れ る 成分 は通過で き る が前記 T S S T — 1 吸着剤 は通過で き な い フ ィ ル タ ー （吸着剤流出防止フ ィ ル タ ー ） 、 6 は カ ラ ム 、 7 は T S S T — 1 吸着器で あ る 。 し か し な が ら 、 T S S T — 1 吸着器 は こ の よ う な 具体例 に 限定 さ れ る も の で は な く 、 体液の 入 口 お よ び 出 口 を 有 し 、 かつ T S S T — 1 吸着剤の 容器外への流 出 防止手段を備 え た容器内 に前記 吸着剤を充填 し た も の で あ れ ば よ い 。

前記流 出 防止手段 と し て は、 た と え ば メ ッ シ ュ 、 不織 布、 綿栓 な ど の フ ィ ル タ 一 が あ げ ら れ る 。 ま た、 容器の 形状、 材質、 大 き さ は と く に 限定 さ れな い が、 好 ま し い 具体例 と し て は、 た と え ば容量 1 5 0 〜 4 0 0 m l 程度、 直径 4 〜 1 0 c m程度 の 透明 ま た は半透明 の 筒状容器な どがあ げ ら れ る 。 と く に好 ま し く は耐滅菌性を有す る 素 材で あ る が、 具体的 に は シ リ コ ン コ 一 ト さ れた ガ ラ ス、 ポ リ プ ロ ピ レ ン 、 塩化 ビニ ル、 ポ リ カ ー ボネ ー ト 、 ポ リ サ ゾレ フ オ ン 、 ポ リ メ チ ソレ ペ ン テ ン な どがあ げ ら れ る 。

以下、 実施例 に も と づ い て本発明 を さ ら に詳細 に述べ る が、 本発明 は以下の 実施例 の み に 限定 さ れ る も の で は な い。

参考例

両端 に孔径 1 5 mの フ ィ ル タ ー を装着 し た ガ ラ ス製 円 筒 カ ラ ム （内 径 9 m m、 カ ラ ム 長 1 5 0 m m ) に ァ ガ ロ ー ス ゲル （バ イ オ ゲ ル （ B i 0 g e 1 ) A — 5 m、 粒径 5 0 〜 1 0 0 メ ッ シ ュ 、 ィ ォ ラ ッ ド （ BI0-BAD) 社製、 米 国） 、 ビニ ル系 ポ リ マ ー ゲル —ノレ H W— 6 5 粒径 5 0 〜 1 0 0 m 、 東 ソ 一 (株） 製、 日 本） お よ び セ ル ロ ー ス ゲル （セ ノレ 口 フ ア イ ン G C — 7 0 0 m 、 粒径

4 5 〜 1 0 5 ^ m、 チ ッ ソ （株 ) 製、 日 本） を そ れぞれ 均一に充填 し 、 ぺ リ ス 夕 ポ ン プ に よ り 水を流 し 、 圧力損 失 △ P と 流量 と の 関係を求め た。 結果を 図 2 に示す。

図 2 に示す ご と < ゝ h 3 パ一ル H W 一 6 5 お よ び セ ル

D フ ァ イ ン G C - 7 0 0 m が圧力 の 増加 に ほ ぼ比例 し て 流量が増加す る の に対 し ゝ バ ィ ォ ゲル A — 5 m は圧密化 を 引 さ お し し 、 圧カを增加 さ せ て も 流量が増加 し な い こ と がわ か る 。 本発明 に お い て は前者の ご と く 、 圧力損失

Δ P と 流量 と の 関係が 0 . 3 k g c m ²ま で の 直線 関 係 に あ る も の を硬質ゲ ル と い ラ

実施例 1

セ ル ロ 一 ス 系多孔質ゲル で あ る セ ル 口 フ ァ イ ン G C - 2 0 0 m (球状 タ ン パ ク 質の排除限界分子量 1 4 万、 チ ッ ソ (株） 製、 日 本） 1 7 0 m 1 に 水を加 え全量を 3 4

0 m 1 と し た の ち 、 2 M水酸化 ナ ト リ ゥ ム 水溶液 9 0 m 1 を加え 4 0 °C と し た。 こ れ に ェ ピ ク ロ ノレ ヒ ド リ ン 3 1 m 1 を加え、 4 0 °C で撹拌下 2 時間反応 さ せ た。 反応終 j '後ゝ τ£ zr に水洗 し 、 ェ ポ キ シ化ゲル ¾ え た 。

し の ェ ポ キ シ ィ匕 ゲ ル ] . 0 m 1 に n - - 才 ク チ ル ァ ミ ン

( 1 0 g P = 2 . 9 0 ) 2 0 0 m g を加え、 5 0 ( V / V ) % エ タ ノ ー ル水溶液中、 4 5 °C で静置下、 6 曰 間反 応 さ せ、 固定ィヒ し た。 反応終了後、 5 0 ( V / V ) %ェ タ ノ 一ル水溶液、 ェ タ ノ ー ル、 5 0 ( V / V ) % ェ タ ノ 一ル水溶液、 水の順 に 充分 に洗浄 し 、 n —ォ ク チ ル ァ ミ ン 固定化ゲ ル を え た。

、'―

刖記固定化ゲル （吸着剤） 0 . 2 m 1 に 対 し 、 ゥ シ胎 児血清 （ フ 口 一 ラ ボ ラ ト リ ーズ （Flow Laboratories) 社製、 オ ー ス ト ラ リ ア ） に T S S T — 1 ( ト キ シ ン テ ク ノ ロ ジ 一 社製、 米国） を加え て調製 し た T S S T — 1 加 血清 （ T S S T — 1 濃度 5 n g Z m l ) 1 . 2 m l を加 え、 3 7 °Cで 2 時間イ ン キ ュ ベ ー ト し た。 吸着剤の かわ り に生理食塩水 0 . 2 m l に つ い て も 同様の 操作を行 つ た。 イ ン キ ュ ベ ー ト 前後の 上澄み溶液 に お け る T S S T — 1 の 濃度を E L I S A 法 に よ り 測定 し 、 吸着率を算出 し た。 吸着率 は 吸着剤が入 っ た ばあ い の上澄み濃度を生 理食塩水の ば あ い の 濃度で割 る こ と に よ り 求め た （百分 率） 。

T S S T — 1 の E L I S A 法 は以下の よ う に し て行 つ た。 一次抗体 ゥ サ ギ抗 T S S T — 1 I g G ( ト キ シ ン テ ク ノ ロ ジ 一 社製、 米国） を コ ー テ ィ ン グ緩衝液で 1 6 0 0 倍 に希釈 し マ イ ク ロ プ レ ー ト に 1 0 0 1 ずつ分注 し た。 4 °Cで一晩お い た の ち 、 マ イ ク ロ プ レ ー ト を洗浄 し た。 3 % ゥ シ 血清 ア ル ブ ミ ン 溶液を 2 0 0 u l ずつ マ イ ク 口 プ レ ー ト に分注 し 、 室温で 2 時間 お い た の ち 、 マ イ ク 口 プ レ ー ト を洗浄 し た。 そ こ に T S S T — 1 の 標準 液お よ びィ ン キ ュ ベ ー ト 前後の上澄み溶液を 1 0 0 μ 1 マ イ ク ロ プ レ ー ト に入れ た。 室温で 2 時間 お い た の ち 洗 浄 し た。 二次抗体 ゥ サ ギ抗 T S S T — 1 H R P 0 ( ト キ シ ン テ ク ノ ロ ジ 一 社製、 米国） を 1 % ゥ シ血清 ア ル ブ ミ ン 溶液で 4 0 0 倍 に 希釈 し 1 0 0 // 1 ずつ 分注 し た。 室温で 2 時間 お い た の ち 洗浄 し た。 オ ル ト フ ヱ 二 レ ン ジ ア ミ ン 溶液を 1 0 0 1 ずつ 分注 し 室温で 1 0 分間お い た。 4 規定硫酸を 1 0 0 ^ 1 ずつ分注 し 、 4 9 2 n mで の 吸光度を測定 し た。 標準液の 吸光度 と 比較 し て イ ン キ ュ ベー ト 前後の上澄み溶液の τ S S Τ - 1 濃度を求め た。 実施例 2

η — ォ ク チ ル ァ ミ ン （ 1 o g P = 2 . 9 0 ) を セ チ ル ァ ミ ン （ ∑ f = 7 . 2 2 ) に 、 固定化反応の 溶媒を エ タ ノ ー ル に変え た ほか は実施例 1 と 同様 に し て セ チ ル ア ミ ン 固定化ゲルを え た。 こ の 吸着剤 を 用 い て実施例 1 と 同 様に し て吸着実験を行い、 T S S T — 1 の濃度を測定 し、 吸着率を算 出 し た。

実施例 3

セ ル 口 フ ァ イ ン G C — 2 0 0 mを セ ル 口 フ ァ イ ン G C - 7 0 0 m (球状 タ ン パ ク 質の 排除限界分子量 4 0 万、 チ ッ ソ （株） 製、 日 本） に変え た ほ か は実施例 2 と 同様 に し て セ チ ル ァ ミ ン 固定化ゲルを え た。 こ の 吸着剤を用 い て実施例 1 と 同様 に し て吸着実験を行い 、 T S S T — 1 の 濃度を 測定 し 、 吸着率を算 出 し た。

実施例 4

セ ル 口 フ ァ イ ン G C — 2 0 0 mを 1 0 m l と り 、 そ こ に t — プ チ ノレ ア ノレ コ ー ル 1 0 m 1 お よ び 力 リ ゥ ム ブ ト キ シ ド 2 . 0 g を加え 、 4 0 °Cで 1 時間撹拌 し た。 つ ぎ に 臭化セ チ ル （固定化後 ∑ f = 9 . 7 1 ) 2 . 0 m l を加 え、 4 時間撹拌 し た。 反応後ゲルを濾別 し 、 エ タ ノ ー ル お よ び水で洗浄 し 、 セ チ ル基を エ ー テ ル結合で固定 し た セ ル ロ ー ス ゲルを え た。 こ の 吸着剤 を用 い て実施例 1 と 同様 に し て 吸着実験を行 い、 T S S T — 1 の 濃度を 測定 し 、 吸着率を算出 し た。

比較例 1

n — 才 ク チ ル ァ ミ ン （ l o g P = 2 . 9 0 ) を n — ブ チ ノレ ア ミ ン （ 1 0 g P = 0 . 9 7 ) に 変 え た ほ か は 実施 例 1 と 同様 に し て n — プチ ル ア ミ ン 固定化ゲルを え た。 こ の 吸着剤 を用 い て実施例 1 と 同様 に し て吸着実験を行 い、 T S S T — 1 の 濃度を 測定 し 、 吸着率を算出 し た。 比較例 2

n — ォ ク チ ノレ ア ミ ン （ l o g P = 2 . 9 0 ) を n — へ キ シ ル ァ ミ ン （ 1 0 g P = 2 . 0 6 ) に変え た ほ か は実 施例 1 と 同様 に し て n — へキ シ ル ァ ミ ン 固定化ゲルを え た。 こ の 吸着剤を用 い て実施例 1 と 同様 に し て吸着実験 を行い、 T S S T — 1 の 濃度を測定 し 、 吸着率を算出 し た。

各 々 の実施例 お よ び比較例 に お い て用 い た化合物の 1 o g P 値 ま た は ∑ f 値な ら び に算出 し た 吸着率 （％ ) を 表 1 に示す。

logP (∑ f) 値 吸着率 (%)

実施例 1 2. 9 0 3 8

実施例 2 7. 2 2 7 9

実施例 3 7. 2 2 7 8

実施例 4 9. 7 1 8 5

比較例 1 0. 9 7 4

比較例 2 2. 0 6 1 産業上の利用 可能性

本発明 に よ れば、 水不溶性担体 に 1 o g P 値が 2 . 5 0 以上の化合物を固定 し て な る 吸着剤を用 い る こ と に よ り 体液中 の T S S T — 1 を効率 よ く 吸着除去す る こ と が で き る 。

Claims

請 求 の 範 囲

1. 水不溶性担体 に l o g P ( P は ォ ク タ ノ ー ル 一 水系 で の分配係数） 値が 2 . 5 0 以上の化合物を固定 し て な る ト キ シ ッ ク シ ョ ッ ク シ ン ド ロ ー ム ト キ シ ン 一 1 の 吸着剤。

2. 該水不溶性担体が水不溶性多孔質担体で あ る こ と を 特徴 と す る 請求の 範囲第 1 項記載の 吸着剤。

3. 該水不溶性多孔質担体の 球状 タ ン パ ク 質 の排除限界 分子量が 1 万以上 6 0 万以下で あ る 請求 の 範囲第 2 項 記載の 吸着剤。

4. 請求の 範囲第 1 項記載の 吸着剤 に ト キ シ ッ ク シ ョ ッ ク シ ン ド ロ ー ム ト キ シ ン 一 1 を含む体液を接触 さ せ る こ と を特徴 と す る 体液中の ト キ シ ッ ク シ ョ ッ ク シ ン ド ロ ー ム ト キ シ ン — 1 の 吸着除去方法。

5. 体液の 入 口 お よ び 出 口 を有 し 、 かつ 吸着剤の 容器外 への 流 出 防止手段を備え た 容器内 に、 請求の 範囲第 1 項記載の 吸着剤 を充填 し て な る ト キ シ ッ ク シ ョ ッ ク シ ン ド ロ ー ム ト キ シ ン 一 1 の 吸着器。

6. ト キ シ ッ ク シ ョ ッ ク シ ン ド ロ ー ム ト キ シ ン 一 1 の 吸 着剤を製造す る た め の 、 水不溶性担体 に 1 o g P ( P はォ ク タ ノ ー ル — 水系での 分配係数） 値が 2 . 5 0 以 上の化合物を固定 し て な る 吸着剤の 用途。