WO1998013049A1 - Procede d'elaboration d'un produit notamment destine a prevenir et a soigner des maladies de la peau, et un tel produit - Google Patents

Procede d'elaboration d'un produit notamment destine a prevenir et a soigner des maladies de la peau, et un tel produit Download PDF

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WO1998013049A1
WO1998013049A1 PCT/FR1997/001705 FR9701705W WO9813049A1 WO 1998013049 A1 WO1998013049 A1 WO 1998013049A1 FR 9701705 W FR9701705 W FR 9701705W WO 9813049 A1 WO9813049 A1 WO 9813049A1
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extract
product according
cells
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PCT/FR1997/001705
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Jean Gedouin
Romuald Vallee
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Codif International S.A.
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    • C08B37/0084—Guluromannuronans, e.g. alginic acid, i.e. D-mannuronic acid and D-guluronic acid units linked with alternating alpha- and beta-1,4-glycosidic bonds; Derivatives thereof, e.g. alginates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase

Definitions

  • the present invention relates to a process for preparing a product, in particular intended for preventing and treating skin diseases, such as rashes or allergic manifestations to cosmetic compositions, and such a product.
  • the invention also relates to a product intended to combat the skin effects of aging, whether the latter is natural, due to pollution or resulting from exposure to ultraviolet radiation.
  • Langerhans cells which belong to a family of so-called lymphoid dendritic cells, are mainly located in the middle layers of the epidermis. Despite their low density, they have an information and surveillance role throughout the epidermis, thanks to their dendritic nature and their migratory capacity, in particular. Langerhans cells are capable of both phagocytising foreign bodies or allergens that have entered the epidermis and transmitting antigens to particular immunocompetent cells, cells called T cells. Activation and protection of Langerhans cells therefore stimulate the intrinsic defense process of the epidermis
  • Such products are thus known which are produced from extracts of yeast membranes, and which consist of polysaccharides of plant origin. Mention may, for example, be made of products belonging to the family of ⁇ -1, 3 glucans, recognized by the membrane receptors of Langerhans cells, and which allow said cells to maintain their macrophage activity to a certain extent and to protect the immuno-competent cells of the epidermis.
  • a major drawback of the aforementioned products lies in their often insufficient penetration into the epidermis, which is due to the large size of the polysaccharide molecules constituting said products.
  • the object of the present invention is to provide a process for the preparation of a product, in particular intended for preventing and treating skin diseases, and such a product, which is such that said product can penetrate the epidermis and therefore present a good protective activity of the skin against external aggressions.
  • a process for the preparation of such a product is such that it consists in using a natural sodium alginate extract and in subjecting said extract to at least one depolymerization treatment.
  • said extract is subjected to an enzymatic depolymerization treatment by means of an alginate lyase.
  • said depolymerized extract is subjected to hydrolysis in an acid medium.
  • a product according to the invention intended to prevent and treat skin diseases is such that it comprises sequences of oligo-alginates and uronic acids.
  • chelate comprises for example Zn 2 "1" ions, or a set of ions
  • said product also comprises natural extracts of algae of the chlorella type.
  • a product according to the invention is intended to protect the Langerhans cells of the epidermis from ultraviolet radiation.
  • a product according to the invention of the type comprising said chelate is intended to have an anti-radical effect vis-à-vis the free radicals produced by ultraviolet radiation.
  • said product is then intended to protect the cells of the dermis from the oxidation of proteins, and from the fragmentation of DNA.
  • Said product comprising said chelate is also intended to have an inhibitory effect vis-à-vis the activity of the enzyme 5 ⁇ reductase
  • Said product comprising said chelate is also intended to present an inhibitory effect vis-à-vis the bacterial strain pathogen Propionibactérium ac és.
  • a product according to the invention consists of oligosaccharides of the type comprising, on the one hand, oligoalginates and, on the other hand, acids having a structure analogous to that of acids alpha-hydroxylated, such as uronic acids.
  • Said product is prepared from an extract of algae, preferably of the Lamitiana ⁇ gitata species, which are based on polysaccharides consisting of a sodium alginate.
  • a process for preparing said product is as follows Said sodium alginate extract is first subjected to an enzymatic depolymerization reaction.
  • An enzyme of the mannuronate lyase type is used for this purpose, preferably an alginate lyase.
  • This enzyme obtained by bacterial fermentation, makes it possible to depolymerize by ⁇ -elimination the alternating blocks of the sodium alginate molecule, which consist of sequences of sodium ⁇ -L-guluronate and of ⁇ -D-mannuronate. sodium linked in 1, 4.
  • the abovementioned enzyme makes it possible to very quickly reduce the viscosity of the sodium alginate solution at the end of said depolymerization step.
  • the depolymerized alginate extract is then subjected to partial hydrolysis in an acid medium, so as to obtain a product characterized by a degree of polymerization further reduced compared to that of said depolymerized extract.
  • said enzyme makes it possible to limit the gelation of alginic acid following acidification, which makes it possible to confer good activity on the product obtained.
  • the algae extract consisting of sodium alginate is first dissolved for one hour at a concentration of 5%.
  • the solubilized alginate extract is then subjected to an enzymatic depolymerization at a temperature of 25 ° C. and for four hours, using an alginate lyase known under the name AL 951.
  • AL 951 an alginate lyase known under the name AL 951.
  • the enzyme / alginate mass ratio is 0.01% and the pH of the medium is 7.5.
  • the number-average molecular masses of said solubilized extract are determined during and after said enzymatic depolymerization, by the method known as "assay of conjugated double bonds" (see Annex I). The number-average degree of polymerization of this extract is deduced therefrom at the two aforementioned moments.
  • said degree of polymerization of the alginate extract is 96 following the enzymatic treatment.
  • This alginate extract with a degree of polymerization equal to 96 can constitute a product according to the invention, which is intended to have an action on the skin essentially on the surface thereof.
  • the depolymerized extract is then partially hydrolyzed in an acid medium, the hydrolysis being carried out for four hours at a pH of 1.5 and at 94 ° C.
  • sulfuric acid is added to said extract , the acid / alginate ratio being 30% by dry weight.
  • the reaction is stopped by cooling until the temperature of the medium reaches 20 ° C., which is the case after one hour.
  • the number-average molecular mass of the hydrolyzed extract is then determined by the SOMOGYI-NELSON method known as the “dosage of reducing sugars” (see Annex II), and the average number of polymerization degrees of the product are deduced therefrom. finally got it.
  • said degree of polymerization of the product according to the invention is 12.
  • the sodium alginate extract is first dissolved for one hour at a concentration of 5%.
  • the solubilized extract is then subjected to an enzymatic depolymerization at a temperature of 25 ° C and for twenty-three hours, by means of said alginate lyase.
  • the enzyme / alginate mass ratio is 0.1% and the pH of the medium is maintained at 7.5.
  • the number-average degree of polymerization is determined as indicated in Example 1.
  • said degree of polymerization of the extract treated with Palginate lyase is 9
  • the treated extract is then subjected to acid hydrolysis under the same conditions as in the previous example, and the number-average polymerization degree of the product finally obtained is determined in the same way.
  • the product according to the invention is characterized by a degree of polymerization equal to 4
  • hydrolysis in an acid medium constitutes an optional step in the process according to the invention. Indeed, one could be satisfied to carry out only the enzymatic depolymerization, as long as the degree of polymerization of the product obtained following the treatment with alginate lyase would be such that the penetration of said product into the skin would be satisfactory. , the maximum admissible value of the degree of polymerization of the product according to the invention is approximately 20 to present said action, in depth.
  • UVB radiation irradiation class B ultraviolet
  • Each of said products is characterized by the same volume fraction of oligosaccharides equal to 0.25%, and the pH of said products are respectively 2, 4 and 7
  • These products will be respectively designated by the name of ALGpH2, ALGpH4 and ALGpH7 in the continuation of the description
  • the first series (control) is such that each explant constituting it does not receive the product according to the invention and is not subjected to U irradiation.
  • the third series (treated and not irradiated) is such that each explant constituting it receives the product according to the invention but is not subjected to U V B irradiation
  • the fourth series (treated and irradiated) is such that each explant constituting it receives the product according to the invention and is subjected to U V B irradiation
  • the four sets of explants are frozen by immersion in isopentane which is cooled to -55 ° C in liquid nitrogen. Several frontal cuts are then made inside a cryostat at a temperature of -16 ° C., which has the effect of stopping the immune activity of Langerhans cells.
  • the primary antibody is intended to recognize Langerhans cells and the secondary antibody, coupled to fluorescent molecules of tetramethyl-rhodamine-isothiocyanate (TRITC), is intended to stain said cells
  • the cut samples are observed and incubated under a fluorescence microscope, in order to be able to visualize and count the Langerhans cells characterizing each sample.
  • the samples were photographed and studied for each series of explants, so as to be able to assess the average number of cells of Langerhans per unit length of epidermis for all the samples observed
  • SEM mean standard error
  • E I represents the percentage value of said immunomodulatory effect
  • ⁇ N (irradiated control-witness) represents the number of Langerhans cells of the "control” series minus that of the "irradiated control” series
  • ⁇ N treated-irradiated treaty represents the number of Langerhans cells of the "series” treaty "minus that of the” irradiated treaty "series
  • ALGpH7 has a very significant immunomodulatory effect, so that it makes it possible to obtain almost total protection of Langerhans cells against ultraviolet radiation.
  • the first test is known by the assay of the epidermal interleukin 1 ⁇ level, after topical treatment. It consists of performing the following operations
  • interleukin 1a was taken from a treated area (ZT) and from another untreated area (ZNT).
  • the level of interleukin 1a was determined by the ELISA technique, using a monoclonal antibody specific for interleukin 1a and a secondary antibody conjugated to peroxidase.
  • the assay is read using a microplate reader spectrophotometer. In theory, it is known that the higher the optical density measured, the higher the concentration of interleukin la. An increase in the epidermal interleukin concentration indicates a soothing effect of the product.
  • ⁇ % (ZT - ZNT) / ZNT x 100.
  • said product according to the invention can be considered as a soothing product
  • the second test is known as the Stinging Test. This is an "anti-stinging lactic acid" test which involved 8 volunteers after 28 days of twice-daily use of products according to the invention, characterized by a volume fraction of 5% in a cosmetic base.
  • This test allows, firstly, to assess the skin reactivity of the volunteers included in the study and then, secondly, to assess the anti-tingling effect of the product tested.
  • a Stinging Test is carried out to assess the reactivity of the skin on the face.
  • the product was distributed to the 8 selected volunteers, who applied themselves to the face of the said product morning and evening, during the said 28 days.
  • each volunteer applied to its nasolabial fold a solution of 10% lactic acid on one side, and distilled water on the other side.
  • the mean reactivity scores obtained for all the volunteers were 4.1 at D 0 and 2.6 at D 28 , a decrease of 36.6%.
  • a product according to the invention is obtained by adding to a product according to said first embodiment (preferably of degree of polymerization close to 10), a solution comprising one or more oligo- elements intended to form a stable complex, also called a chelate, with said product.
  • Said trace elements consist of mineral elements in canonical form
  • This solution comprises a mixture of magnesium and manganese ions, in the following proportions, 6 ml of ultra pure water containing 2.652 g of magnesium sulfate (MgSO 4 , 7H 2 0) is used + 10 ml of ultra pure water containing 1.807 g of manganese sulfate (MnSO 4 , H 2 0) for the production of said chelate.
  • the mixture obtained is stirred for 1 hour at room temperature, then it is centrifuged for 20 minutes at 8000 rpm
  • the inhibitory effect of the oligosaccharide-Zn chelate was evaluated by a radiochemical method, on the 5 ⁇ R activity of a mammalian prostate extract, such as a dog.
  • NADPH Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate
  • NADPH regeneration system we essentially witness the following reactions:
  • the sample was calibrated to transform approximately 0.1 pmole of testosterone, with 50 ⁇ l of extract (ie an arbitrary unit of enzyme)
  • the mixtures were incubated for 4 hours at 37 ° C, then the testosterone and the derivatives formed were extracted with 500 ⁇ l of dichloromethane.
  • the dichloromethane fraction was removed, dried under a stream of nitrogen and chromatographed on silica in a dichloromethane / ethyl acetate / methanol system (proportions 85: 15: 3).
  • the plates obtained were autoradiographed on Kodak MP® films.
  • This 5% (v / v) oligosaccharide-Zn chelate has an interesting inhibitory effect on the activity of 5 ⁇ reductase, hence its interesting effect against acne.
  • acnes strain is cultivated in an anaerobic medium, either in the presence of 5 g of glucose (conventional carbon source), or in the presence of a product according to the invention (oligosaccharide with a degree of polymerization close to 10 alone, or this oligosaccharide forming a chelate with zinc), either in the presence of the only medium (control cultures)
  • the amount of bacteria that have grown is evaluated after 48 hours of culture by turbidimetry at 750 nm Results glucose at 5 g / 1 increases by a factor 2.2, 1.6; and 5.2 the amount of M ikristtnae, S. aureus and P. acne, respectively
  • Said oligosaccharide with a degree of polymerization close to 10, tested at 5.6% (v / v), has no effect on the 2 bacterial strains M fxristinae and S. aureus At this concentration, it decreases by 14 ⁇ 2 % (number of tests: n 2) the amount of P. acnes
  • the oligosaccharide-Zn chelate, tested at 5.6% (v / v), increases by 33% M fxristinae (non-pathogenic strain), has no effect on S. aureus, and inhibits by 74 ⁇ 12% ( number of tests: n 3) the amount of P. acn s (pathogenic strain) At 1.6%, it still inhibits the P.
  • the superoxide anions were quantified by the formation of form.azan (red) from tetrazolium nitroblue (NBT) at 33 ⁇ M, by spectrophotometric kinetic assay at 560 mm.
  • Non-irradiated control 0.46 ⁇ 0.25 46 100
  • UV irradiation increases the oxidation of proteins by a factor of 2.4.
  • Oligosaccharide chelate - Mg + Mn decreases the oxidation of cellular proteins caused by UV rays, with an effect that follows a dose-effect relationship
  • This chelate protects cellular proteins from proradical attack from UV rays
  • Human dermis fibroblasts (taken from 5 donors) were incubated for 24 hours at 37 ° C in the presence of the oligosaccharide-Mg + Mn chelate, or in the presence of a mixture consisting of vitamin C at 50 ⁇ g / ml and glutathione at 50 ⁇ g / ml, or in the presence of salt medium (control) A series of the cultures were exposed to UVB irradiation (325 mJ / cm:). while another series was kept away from radiation
  • the DNA breakage rate was evaluated by labeling the ends of the broken DNA with a nucleotide coupled to fluorescence (TUNEL method).
  • This method uses the Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT) enzyme. According to this method, a decrease in the fluorescence of the cells translates a decrease in the number of DNA breaks, that is to say a protective effect.
  • TdT Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
  • the cells are not fluorescent In the presence of the TdT enzyme and an enzyme which degrades DNA (Dnase 1), a very strong fluorescence is observed Consequently, the specificity of the marking is established In the absence of UVB radiation and in the presence of the TdT enzyme, the cells have very little fluorescence. After irradiation with UVB and in the presence of the enzyme TdT, the fluorescence of the cells increases.
  • the cells incubated in the presence of oligosaccharides-Mg + 0.04%, (v / v) before irradiation, then irradiated, then treated with the TdT enzyme are less fluorescent.
  • the oligosaccharide-Mg + Mn protects dermal fibroblasts from DNA breakage by UVB rays.
  • a product according to the invention consists of a first product, which is obtained in accordance with one of these two modes, and of a second product, which is produced at from natural extracts of microscopic algae of the chlorella type according to the following process.
  • This process essentially consists in grinding said algae in an alkaline medium, in acidifying the extraction juice obtained, in eliminating cellular debris by tangential microfiltration on a filter whose retention threshold is 0.22 ⁇ m, and in concentrating the remaining organic elements, until an extract comprising 5% of active materials is obtained, which constitutes said second product.
  • the mixing of said first and second products is carried out in a neutral solvent, for example water, using concentrations of 5% for each of them.
  • a neutral solvent for example water
  • Alginate lyase is an enzyme that depolymerizes sodium alginate extract, generating conjugated double bonds and reducing hemi-acetal functions
  • each reaction medium sample is characterized on the one hand, by a mass of 10 g and a pH adjusted to 4 with hydrochloric acid of concentration 1 N
  • sampled solution is diluted so that its optical density is less than 1
  • optical density (OD) of said solution is measured for a radiation of 235 nm, which allows the Casons concentration (mol H) of the conjugated double bonds to be determined, thanks to the relation
  • ⁇ 5050 1. moH cm ⁇ l
  • ⁇ 5050 1. moH cm ⁇ l
  • the acid hydrolysis of the alginate generates a reducing hemi-acetal function and a hydroxyl function.
  • the said reducing function is assayed using the following solutions.

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Abstract

La présente invention concerne un procédé d'élaboration d'un produit notamment destiné à prévenir et à soigner des maladies de la peau, et un tel produit. Ledit procédé d'élaboration selon l'invention consiste à utiliser un extrait naturel d'alginate de sodium et à soumettre ledit extrait à au moins un traitement de dépolymérisation. Un tel produit selon l'invention comprend des enchaînements d'oligo-alginates et d'acides uroniques. L'invention s'applique notamment à des éruptions cutanées, des manifestations allergiques à des compositions cosmétiques, et aux effets cutanés du vieillissement.

Description

Procédé d ' élaboration d ' un produit notamment destiné à prévenir et à soigner des maladies de la peau , et un tel produit
La présente invention concerne un procédé d'élaboration d'un produit notamment destiné à prévenir et à soigner des maladies de la peau, telles que des éruptions cutanées ou des manifestations allergiques à des compositions cosmétiques, et un tel produit. L'invention concerne également un produit destiné à lutter contre les effets cutanés du vieillissement, que ce dernier soit naturel, dû à la pollution ou résultant d'expositions aux rayonnements ultraviolets.
Les travaux de Susuma Tonegawa, Prix Nobel de médecine en 1987, ont mis en évidence la fonction immunologique de certaines cellules de l'épiderme, les cellules de Langerhans, vis-à-vis des agressions localisées dans la couche épidermique de la peau. Les cellules de Langerhans, qui appartiennent à une famille de cellules dites dendritiques lymphoides, sont essentiellement situées dans les couches moyennes de l'épiderme. Malgré leur faible densité, elles ont un rôle d'information et de surveillance sur l'ensemble de l'épiderme, grâce à leur nature dendritique et à leur capacité migratoire, notamment. Les cellules de Langerhans sont capables à la fois de phagocyter les corps étrangers ou les allergènes ayant pénétré dans l'épiderme et de transmettre des antigènes à des cellules immuno-compétentes particulières, les cellules dites cellules T. L'activation et la protection des cellules de Langerhans permettent donc de stimuler le processus de défense intrinsèque de l'épiderme
Or, on sait que ces cellules sont directement exposées aux rayonnements ultraviolets résultant d'une exposition au soleil. Des études récentes ont montré que ces rayonnements provoquent à plus ou moins grande échelle, d'une part, une diminution des marqueurs de membrane et donc une altération de la capacité de présentation d'antigènes aux cellules immuno-compétentes et, d'autre part, une disparition des dendrites caractérisant les cellules de Langerhans. En cas d'exposition prolongée au soleil, les rayonnements ultraviolets inhibent les cellules de Langerhans et ces dernières voient leur nombre diminuer
On a cherché à élaborer des produits susceptibles de protéger et d'activer les cellules de Langerhans en prévision des rayonnements ultraviolets qui agissent fréquemment sur l'épiderme.
On connaît ainsi de tels produits qui sont élaborés à partir d'extraits de membranes de levures, et qui sont constitués de polysaccharides d'origine végétale On peut par exemple citer des produits appartenant à la famille des β- 1, 3 glucanes, reconnus par les récepteurs membranaires des cellules de Langerhans, et qui permettent auxdites cellules de maintenir dans une certaine mesure leur activité macrophage et de protéger les cellules immuno-compétentes de l'épiderme. Un inconvénient majeur des produits précités réside dans leur pénétration souvent insuffisante dans l'épiderme, laquelle est due à la taille importante des molécules de polysaccharides constituant lesdits produits.
Le but de la présente invention est de proposer un procédé d'élaboration d'un produit notamment destiné à prévenir et à soigner des maladies de la peau et un tel produit, qui soit tel que ledit produit puisse pénétrer de manière satisfaisante dans l'épiderme et donc présenter une bonne activité protectrice de la peau vis-à-vis des agressions extérieures.
A cet effet, un procédé d'élaboration d'un tel produit est tel qu'il consiste à utiliser un extrait naturel d'alginate de sodium et à soumettre ledit extrait à au moins un traitement de dépolyméri.sation.
Selon une autre caractéristique de l'invention, l'on soumet ledit extrait à un traitement de dépolymérisation enzymatique au moyen d'une alginate lyase.
De préférence et ultérieurement audit traitement enzymatique, l'on soumet ledit extrait dépolymérisé à une hydrolyse en milieu acide Un produit selon l'invention destiné à prévenir et à soigner des maladies de la peau est tel qu'il comprend des enchaînements d'oligo-alginates et d'acides uroniques.
De préférence, il comprend en outre au moins un oligoélément sous forme cationique formant un chélate avec lesdits enchaînements. Ledit chélate comprend par exemple des ions Zn2"1", ou un ensemble d'ions
Mn2+ et Mg2+
Selon une variante de réalisation de l'invention, ledit produit comprend en outre des extraits naturels d'algues du type chlorella.
Un produit selon l'invention est prévu pour protéger des rayonnements ultraviolets les cellules de Langerhans de l'épiderme.
Il est également prévu pour augmenter la concentration épidermique de l'interleukine la
Un produit selon l'invention du type comprenant ledit chélate est prévu pour présenter un effet anti-radicalaire vis-à-vis des radicaux libres produits par des rayonnements ultraviolets.
Plus précisément, ledit produit est alors prévu pour protéger les cellules du derme de l'oxydation des protéines, et de la fragmentation de l'ADN
Ledit produit comprenant ledit chélate est également prévu pour présenter un effet inhibiteur vis-à-vis de l'activité de l'enzyme 5α réductase Ledit produit comprenant ledit chélate est également prévu pour présenter un effet inhibiteur vis-à-vis de la souche bactérienne pathogène Propionibactérium ac és.
Les caractéristiques de l'invention mentionnées ci-dessus, ainsi que d'autres, apparaîtront plus clairement à la lecture de la description suivante de plusieurs exemples de réalisation
Selon un premier mode de réalisation de l'invention, un produit selon l'invention est constitué d'oligosaccharides du type comprenant, d'une part, des oligoalginates et, d'autre part, des acides présentant une structure analogue à celle des acides alpha-hydroxylés, tels que des acides uroniques.
Ledit produit est élaboré à partir d'un extrait d'algues, de préférence de l'espèce Lamitiana ώgitata, qui sont à base de polysaccharides constitués d'un alginate de sodium Un procédé d'élaboration dudit produit est le suivant On soumet dans un premier temps ledit extrait d'alginate de sodium à une réaction de dépolymérisation enzymatique On utilise à cet effet une enzyme du type mannuronate lyase, de préférence une alginate lyase. Cette enzyme, obtenue par fermentation bactérienne, permet de dépolymériser par β-élimination les blocs alternés de la molécule d'alginate de sodium, qui sont constitués d'enchaînements d'α-L- guluronate de sodium et de β-D-mannuronate de sodium liés en 1, 4. De plus, l'enzyme précitée permet de réduire très rapidement la viscosité de la solution d'alginate de sodium au terme de ladite étape de dépolymérisation.
De préférence, on soumet ensuite l'extrait d'alginate dépolymérisé à une hydrolyse partielle en milieu acide, de manière à obtenir un produit caractérisé par un degré de polymérisation encore réduit par rapport à celui dudit extrait dépolymérisé.
On notera que cette hydrolyse est grandement facilitée par la mise en oeuvre de ladite première étape, de par la viscosité réduite de l'extrait d'alginate traité par ladite enzyme et grâce à la dépolymérisation préalable desdits blocs caractérisant l'alginate de sodium
Par ailleurs, il est à noter que ladite enzyme permet de limiter la gélification de l'acide alginique suite à l'acidification, ce qui permet de conférer une bonne activité au produit obtenu
A titre simplement indicatif, on trouvera ci-dessous deux exemples de préparation du produit selon l'invention.
Exemple 1:
L'extrait d'algue constitué d'alginate de sodium est d'abord solubilisé pendant une heure à une concentration de 5 %.
L'extr t d'alginate solubilisé est ensuite soumis à une dépolymérisation enzymatique à une température de 25° C et pendant quatre heures, au moyen d'une alginate lyase connue sous la dénomination AL 951 De plus, le ratio massique enzyme/alginate est de 0,01 % et le pH du milieu est de 7,5.
Les masses moléculaires moyennes en nombre dudit extrait solubilisé sont déterminées pendant et après ladite dépolymérisation enzymatique, par la méthode dite du "dosage des doubles liaisons conjuguées" (voir annexe I). On en déduit le degré de polymérisation moyen en nombre dudit extrait aux deux moments précités.
Dans cet exemple de réalisation, ledit degré de polymérisation de l'extrait d'alginate est de 96 suite au traitement enzymatique. Cet extrait d'alginate de degré de polymérisation égal à 96 peut constituer un produit selon l'invention, qui est prévu pour présenter une action sur la peau essentiellement en surface de celle-ci.
De préférence, on hydrolyse ensuite partiellement et en milieu acide l'extrait dépolymérisé, l'hydrolyse étant conduite pendant quatre heures à un pH de 1,5 et à 94° C. A cet effet, on ajoute de l'acide sulfurique audit extrait, le ratio acide/alginate étant de 30 % en poids sec. La réaction est stoppée par refroidissement jusqu'à ce que la température du milieu atteigne 20° C, ce qui est le cas au bout d'une heure
On détermine alors la masse moléculaire moyenne en nombre de l'extrait hydrolyse par la méthode de SOMOGYI-NELSON dite du "dosage des sucres réducteurs" (voir annexe II), et l'on en déduit le degré de polymérisation moyen en nombre du produit finalement obtenu.
Dans cet exemple de réalisation, ledit degré de polymérisation du produit selon l'invention est de 12.
Exemple 2;
De même que précédemment, l'extrait d'alginate de sodium est d'abord solubilisé pendant une heure à une concentration de 5 %.
L'extrait solubilisé est ensuite soumis à une dépolymérisation enzymatique à une température de 25° C et pendant vingt-trois heures, au moyen de ladite alginate lyase. De plus, le ratio massique enzyme/alginate est de 0,1 % et le pH du milieu est maintenu à 7,5. Suite au traitement enzymatique, le degré de polymérisation moyen en nombre est déterminé comme indiqué dans l'exemple 1.
Dans cet exemple de réalisation, ledit degré de polymérisation de l'extrait traité par Palginate lyase est de 9 On soumet ensuite ledit extrait traité à une hydrolyse acide dans les mêmes conditions qu'à l'exemple précédent, et l'on détermine de la même manière le degré de polymérisation moyen en nombre du produit finalement obtenu
Dans cet exemple de réalisation, le produit selon l'invention est caractérisé par un degré de polymérisation égal à 4
On notera que les degrés de polymérisation réduits qui ont été finalement obtenus dans lesdits exemples de réalisation favorisent la pénétration cutanée du produit selon l'invention, pour son action en profondeur dans le stratum corneυm, notamment
On notera encore que l'hydrolyse en milieu acide constitue une étape facultative du procédé selon l'invention. En effet, l'on pourrait se contenter de procéder à la seule dépolymérisation enzymatique, du moment que le degré de polymérisation du produit obtenu suite au traitement à l'alginate lyase serait tel que la pénétration dudit produit dans la peau serait satisfaisante A titre indicatif, la valeur maximale admissible du degré de polymérisation du produit selon l'invention est environ de 20 pour présenter ladite action,en profondeur.
On notera en outre qu'un produit selon ce premier mode de réalisation de l'invention présente une stabilité dans le temps satisfaisante, d'après les tests chromatographiques dont il a fait l'objet
Afin de mettre en évidence l'effet immuno-modulateur sur l'épiderme d'un produit selon ce premier mode de réalisation de l'invention, on a procédé à des expériences consistant, après avoir soumis des explants de peau à une irradiation aux rayons ultraviolets de classe B (U V B ), à visualiser et à compter les cellules de
Langerhans présentes dans l'épiderme, à l'aide d'un microscope à fluorescence.
On trouvera ci-dessous un compte-rendu détaillant le mode opératoire et les résultats se rapportant à ces expériences, ceci pour trois produits différents correspondant à la première variante de réalisation de l'invention
Chacun desdits produits est caractérisé par une même fraction volumique d'oligosaccharides égale à 0,25 %, et les pH desdits produits sont respectivement de 2, 4 et 7 Ces produits seront respectivement désignés sous le nom d'ALGpH2, ALGpH4 et ALGpH7 dans la suite de la description Des échantillons d'expiants de peau d'un sujet sain, obtenus suite à une intervention de chirurgie plastique abdominale, sont placés en survie dans un milieu de culture approprié Quatre séries d'expiants sont préparées:
- la première série (témoin) est telle que chaque explant la constituant ne reçoit pas le produit selon l'invention et n'est pas soumis à une irradiation U. V B
- la deuxième série (témoin irradié) est telle que chaque explant la constituant ne reçoit pas le produit selon l'invention mais est soumis à une irradiation U V B
- la troisième série (traité et non irradié) est telle que chaque explant la constituant reçoit le produit selon l'invention mais n'est pas soumis à une irradiation U V B
- la quatrième série (traité et irradié) est telle que chaque explant la constituant reçoit le produit selon l'invention et est soumis à une irradiation U V B
Les quatre séries d'expiants sont congelées par immersion dans de l'isopentane qui est refroidi à -55° C dans de l'azote liquide. On effectue par la suite plusieurs coupes frontales à l'intérieur d'un cryostat à une température de -16° C, ce qui a pour effet de stopper l'activité immunitaire des cellules de Langerhans
On procède ensuite à l'incubation d'un anticorps primaire et d'un anticorps secondaire dans chaque explant, lesquels anticorps permettent de révéler, par la technique d'immunofluorescence, l'activité des cellules de Langerhans En effet, les cellules de Langerhans ne sont actives que si elles jouent leur rôle antigénique en bloquant les anticorps, ladite action antigénique étant observable au microscope à fluorescence
L'anticorps primaire est prévu pour reconnaître les cellules de Langerhans et l'anticorps secondaire, couplé à des molécules fluorescentes de tétraméthyl- rhodamine-isothiocyanate (TRITC), est prévu pour colorer lesdites cellules
On observe les échantillons coupés et incubés au microscope à fluorescence, afin de pouvoir visualiser et dénombrer les cellules de Langerhans caractérisant chaque échantillon Les échantillons ont été photographiés et étudiés pour chaque série d'expiants, de manière à pouvoir évaluer le nombre moyen de cellules de Langerhans par unité de longueur d'épiderme pour l'ensemble des échantillons observés On a également fait figurer pour chaque série étudiée l'erreur standard moyenne (SEM), laquelle est obtenue en divisant l'écart-type mesuré par la racine carrée du nombre d'échantillons de la série concernée Le nombre total d'échantillons étant important, deux catégories de mesures ont été effectuées, la première catégorie étant destinée à déterminer l'effet immuno-modulateur des produits ALGpH2 et ALGpH7, alors que la seconde catégorie est destinée à déterminer l'effet immuno-modulateur du troisième produit ALGpH4 selon l'invention
L'effet immuno-modulateur de chaque produit a été chiffré au moyen de la relation suivante:
ΔN(témoιn-témoin irradié) - ΔN(traité-traité irradié)
E I (%) = x 100 ΔN(témoin-témoin irradié)
où E I représente la valeur en pourcentage dudit effet immuno- modulateur,
ΔN(témoin-témoin irradié) représente le nombre de cellules de Langerhans de la série "témoin" diminué de celui de la série "témoin irradié", et ΔN(traité-traité irradié) représente le nombre de cellules de Langerhans de la série "traité" diminué de celui de la série "traité irradié"
La valeur trouvée pour E I permet de définir de manière qualitative et standardisée l'effet immuno-modulateur du produit testé. En particulier,
- Si 70 % < E I < 100 % alors le produit a un très bon effet immuno- modulateur
- Si E I > 100 % alors le produit a un effet immuno-modulateur absolu
Les tableaux I et II ci-dessous rendent compte de ces mesures
Tableau I
Nombre moyen Variation et taux de cellules de de variation du
Série Langerhans par nombre de Effet immuno- d'échantillons cm d'épiderme cellules de modulateur
± SEM Langerhans par cm d'épiderme après irradiation témoin 305 ± 22 -220 cellules témoin irradié 85 ± 13 -72,1 % traité par ALGpH2 276 ± 55 et non irradié ( 1 13 cellules traité par ALGpH2 389 ± 56 +40,9 % 151.4 % et irradié traité par ALGpH7 262 ± 23 et non irradié -8 cellules traité par ALGpH7 254 1 31 -3, 1 % 96 % et irradié
Tableau II
Nombre moyen Variation et taux de cellules de de variation du Effet immuno-
Série Langerhans par nombre de modulateur d'échantillons cm d'épiderme cellules de
± SEM Langerhans par cm d'épiderme après irradiation témoin 151 ± 14 -93 cellules témoin irradié 58 ± 7 -61,6 % traité par ALGpH4 303 ± 18 et non irradié +23 cellules traité par ALGpH4 326 ± 20 +7,6 % 124.7 % et irradié
Il apparaît à la lecture des tableaux I et II que les produits ALGpH2 et ALGpH4 selon l'invention ont un effet immuno-modulateur absolu, c'est-à-dire qu'ils protègent totalement les cellules de Langerhans contenues dans l'épiderme, suite à l'irradiation de ce dernier aux rayons ultraviolets
Il apparaît également que le produit selon l'invention ALGpH7 a un effet immuno-modulateur très important, en sorte qu'il permet d'obtenir une protection quasi-totale des cellules de Langerhans vis-à-vis des rayonnements ultraviolets.
Par conséquent, l'activité macrophage desdites cellules est préservée grâce au produit selon l'invention et la protection de l'épiderme vis-à-vis des agressions extérieures est améliorée.
Dans une seconde expérience, on a confirmé l'effet de ALGpH4 à plusieurs doses L'irradiation aux UVB a provoqué une diminution de 70 % du nombre de cellules de Langerhans par cm d'épiderme
Suite au traitement des explants de peau par des produits selon l'invention correspondant respectivement à des fractions volumiques d'oligosaccharides ALGpH4 testées de 0,5 %, 2 % et 3,5 %, on a obtenu des effets immunoprotecteurs de 35 %,
64 % et 75 % (relation effet-dose)
On a par ailleurs procédé à une évaluation du potentiel phototoxique in vivo desdits produits selon un premier mode de réalisation de l'invention Pour ce faire, on a sélectionné dix sujets âgés de 31 à 64 ans et ne présentant ni affection cutanée, ni antécédent médical susceptible de déconseiller l'application topique de substances.
On leur a appliqué sur un bras et pendant 24 heures un pansement adhésif occlusif contenant environ 0,2 ml de produit selon l'invention, puis on a irradié aux UVA leur bras dépourvu dudit pansement II s'est avéré que ledit produit n'a pas induit de réaction de phototoxicité du type érythème ou oedème. On a également procédé à deux tests in vivo qui sont généralement prévus pour permettre d'établir l'effet apaisant éventuel d'un produit.
- Le premier test est connu sous le nom de dosage du taux d'interleukine 1 α épidermique, après traitement topique. Il consiste à réaliser les opérations suivantes
Le premier jour (J0), des volontaires (10 volontaires sains d'âge moyen 27 dans cet exemple de réalisation) ont été sélectionnés
Un produit selon ledit premier mode leur a été appliqué sur les avant-bras (à raison de 2μl/cm2) à t0 (initialement)et t12 (12 heures plus tard). Le lendemain (Jj), l'interleukine la a été prélevée sur une zone traitée (ZT) et sur une autre zone non traitée (ZNT). Le taux d'interleukine l a été dosé par la technique ELISA, en utilisant un anticorps monoclonal spécifique de l'interleukine la et un anticorps secondaire conjugué à la peroxydase. A la fin de la réaction substrat-peroxydase, la lecture du dosage est réalisée à l'aide d'un spectrophotomètre lecteur de microplaques. En théorie, on sait que plus la densité optique mesurée est forte, plus la concentration en interleukine la est importante Une augmentation de la concentration en interleukine la épidermique traduit un effet apaisant du produit.
Les valeurs du taux d'interleukine la et l'écart-type à la moyenne (SEM), obtenus sur les 10 volontaires, ont été calculés pour la zone traitée et pour la zone non traitée correspondante.
On a exprimé la variation sur les moyennes (Δ %) en appliquant la formule suivante:
Δ % = (ZT - ZNT) / ZNT x 100.
Les données des 2 traitements (zone témoin et zone traitée) ont été analysés par un test de Student sur données appariées. Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous:
Figure imgf000014_0001
Ce test a montré que, après deux applications standards sur les avants bras espacées de 12 heures, ledit produit à 5 % augmente significativement le taux d'interleukine la épidermique (Δ % = +1 1 ,1 %) On notera par ailleurs que la probabilité d'erreur de ce test est inférieure à 0,05, ce qui permet de valider ledit test
Dans ces conditions expérimentales, ledit produit selon l'invention peut être considéré comme un produit apaisant
- Le second test est connu sous le nom de Stinging Test. II s'agit d'un test "anti-picotement à l'acide lactique" qui a porté sur 8 volontaires après 28 jours d'utilisation biquotidienne de produits selon l'invention, caractérisés par une fraction volumique de 5 % dans une base cosmétique
Ce test permet, dans un premier temps, d'évaluer la réactivité cutanée des volontaires inclus dans l'étude puis, dans un deuxième temps, d'évaluer l'effet anti- picotement du produit testé
Le premier jour (J0), un Stinging Test est effectué afin d'évaluer la réactivité de la peau au niveau du visage. Le produit a été distribué aux 8 volontaires retenus, lesquels se sont appliqués sur le visage ledit produit matin et soir, pendant lesdits 28 jours Conformément à ce test, chaque volontaire a procédé à une application sur son sillon naso-génien d'une solution d'acide lactique à 10 % sur l'un de ses côtés, et d'eau distillée sur son autre côté.
10 secondes, 2,5 minutes et 5 minutes après l'application, les sensations des volontaires sont évaluées selon l'échelle suivante - 0 pas de picotement
- 1 sensation légère - 2 : sensation modérée
- 3 : sensation sévère
Un score global de réactivité prenant en compte les trois dates précitées a été calculé selon la formule: score global = somme scores (acide lactique) - somme scores (eau distillée).
Après ces 28 jours (J28), un nouveau Stinging test a été effectué de la même manière, avec les mêmes calculs de scores de réactivité.
Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous.
Scores de réactivité obtenus avant et après 28 jours de traitement (valeurs individuelles):
Volontaire Jo . ?8 - Jn
1 4 2 -2
2 3 2 -1
3 5 4 -1
4 4 1 -3
5 3 3 0
6 4 3 -1
7 6 5 -1
8 4 1 -3
Moyenne 4,1 2,6 1,5
Plus l'écart entre JQ et J28 est important (avec Jo < J28 P'us 'e seu" de réactivité est diminué.
Les scores moyens de réactivité obtenus pour l'ensemble des volontaires ont été de 4,1 à J0 et de 2,6 à J28, soit une diminution de 36,6 %.
Dans les conditions de l'étude, une application quotidienne dudit produit selon l'invention inclus à 5 % dans une base cosmétique a eu pour effet de diminuer le seuil de réactivité de la peau. Un effet anti-picotementdudit produit a été ainsi mis en évidence. Selon un second mode de réalisation de l'invention, un produit selon l'invention est obtenu en aioutant à un produit selon ledit premier mode de réalisation (de préférence de degré de polymérisation voisin de 10), une solution comprenant un ou plusieurs oligo-éléments prévus pour former un complexe stable, encore appelé chélate, avec ledit produit. Lesdits oligo-éléments sont constitués d'éléments minéraux sous forme canonique
A titre simplement indicatif, on trouvera ci-dessous deux exemples de préparation de chélates constituant des produits selon l'invention
Exemple 1:
On resolubilise à 30°C (pH = 4,13) des extraits d'oligoaiginates du type précité dans ledit premier mode Puis, à une température de 20°C, on réajuste le pH desdits extraits à 5,60 avec de la soude IN Après centrifugation pendant 20 minutes à 8000 t/min, on mélange 100 grammes de fraction surnageante à une solution contenant des minéraux comprenant des ions zinc
A titre d'exemple, on utilise 8 ml d'eau ultra pure contenant 0,5789 g de sulfate de zinc (Zn S04, H20) pour la réalisation dudit chélate
Exemple 2:
Dans cet exemple, lesdites étapes de resolubilisation, de réajustement du pH et de centrifugation sont identiques. Seule diffère la solution minérale ajoutée.
Cette solution comprend un mélange d'ions magnésium et manganèse, dans les proportions suivantes on utilise 6 ml d'eau ultra pure contenant 2,652 g de sulfate de magnésium (MgS04, 7H20) + 10 ml d'eau ultra pure contenant 1,807 g de sulfate de manganèse (MnSO4, H20) pour la réalisation dudit chélate.
On agite le mélange obtenu pendant 1 heure à température ambiante, puis on le centrifuge pendant 20 minutes à 8000 t/min
On conserve ensuite la fraction surnageante contenant le chélate à température ambiante. On va détailler ci-dessous l'activité supplémentaire que présente un chélate selon ledit premier exemple de préparation (chélate oligosaccharides-Zinc). en plus des effets précités obtenus pour un produit selon ledit premier mode de réalisation. Deux tests in vitro ont établi un effet anti-acné pour ce chélate.
- Premier test in vitro établissant un effet inhibiteur dudit chélate sur l'enzyme 5α réductase:
On sait que les enzymes de type 5α réductase (5αR) transforment la testostérone en 17β-hydrosy-5α-androstan-3-one ou 5-déhydrotestérone (5DHT). Cette réaction est cruciale dans l'action des androgènes. Ces enzymes sont présentes dans les kératinocytes de l'épiderme, dans les fibroblastes du derme et dans les glandes sébacées, notamment
L'effet inhibiteur du chélate oligosaccharide-Zn a été évalué par une méthode radiochimique, sur l'activité 5αR d'un extrait de prostate de mammifère, tel qu'un chien. Dans cette expérience, en présence de NADPH (Nicotinamide adénine dinucléotide phosphate) et d'un système de régénération du NADPH, on assiste essentiellement aux réactions suivantes:
testostérone > 5α-dihydrotestostérone > 5α-androstanediols* T 5αR 5DHT 3HSD** ASD
avec * = isomères 3β, 17β-diol et 3α, 17β-diol et ** = 3-hydroxystéroïde deshydrogénases.
Matériel et méthode: les solutions du produit ont été réalisées à 5 fois la concentration finale utilisée dans la réaction, dans un tampon citrate-phosphate à 0,1 M et à pH = 5,6 (t.ampon utilisé lors de la réaction 5αR). L'inhibiteur de référence de 5αR était le finastéride (Chibro-Proscar®, comprimés à 5 mg), testé à la concentration de 500 μg/ l, après dilution dans le tampon citrate-phosphate à 0,1 M.
L'extrait enzymatique utilisé était un extrait brut de prostate de chien préparé en tampon Tris 0,1 M/ sucrose 20 %, pH = 7,5. L'échantillon était calibré de façon à transformer approximativement 0,1 pmole de testostérone, avec 50 μl d'extrait (soit une unité arbitraire d'enzyme) Les mélanges ont été incubés pendant 4 heures à 37° C, puis la testostérone et les dérivés formés ont été extraits par 500μl de dichlorométhane. La fraction de dichlorométhane a été prélevée, séchée sous flux d'azote et chromatographiée sur silice dans un système dichlorométhane/acétate d'éthyle/méthanol (proportions 85: 15:3). Les plaques obtenues ont été autoradiographées sur films Kodak MP®.
L'évaluation de la quantité de testostérone transformée a été réalisée après découpage des spots de produits formés et comptage en scintillation liquide. L'effet du finastéride et du chélate oligosaccharide-Zn sur la transformation de la testostérone en DHT et ASD est illustré dans le tableau ci-dessous 0 (T = contrôles sans enzyme; E = contrôles plus enzyme; F = finastéride; PI = oligosaccharides à 5 %; P2 = oligosaccharides à 1 %):
Figure imgf000018_0001
Résultats le finastéride inhibe de 85 % la transformation de testostérone en 5DHT et en
ASD
Le chélate oligosaccharide-Zn, testé à 1 % (v/v), n'a pas d'effet inhibiteur net A 5% (v/v), il inhibe de 26 % l'activité de la 5α réductase Conclusion:
Ce chélate oligosaccharide-Zn à 5 %(v/v) présente un effet inhibiteur intéressant sur l'activité de la 5α réductase, d'où son effet intéressant contre l'acné
- Second test //; vitro établissant un effet sur la flore pathogène et non pathogène
Les effets d'un oligosaccharide de degré de polymérisation voisin de 10 selon ledit premier mode et d'un chélate de cet oligosaccharide + Zn ont été évalués sur la souche non pathogène Micrococcus kristmae, la souche pathogène Staphylococcus aureus et la souche pathogène Propionibactéréum acnés Cette dernière est particulièrement incriminée dans les irritations survenant au cours des infections cutanées de l'acné
Matériel et méthode les bactéries sont cultivées dans un milieu salin (5,6 g 1 de NaCl, 2,812 g/1 de
KH2PO4) contenant de la peptone pancréatique (5,625 g/1) et des extraits de coeur/cervelle (9,843 g 1). Les souches M. fxristinae et S. aureus sont cultivées en milieu aérobie, et la souche P. acnés est cultivée en milieu anaérobie, soit en présence de 5 g 1 de glucose (source carbonée classique), soit en présence d'un produit selon l'invention (oligosaccharide de degré de polymérisation voisin de 10 seul, ou cet oligosaccharide formant un chélate avec du zinc), soit en présence du seul milieu (cultures témoin) La quantité de bactéries ayant poussé est évaluée après 48 heures de culture par turbidimétrie à 750 nm Résultats le glucose à 5 g/1 augmente d'un facteur 2,2, 1,6; et 5,2 la quantité de M ikristtnae, S. aureus et P. acné, respectivement
Ledit oligosaccharide de degré de polymérisation voisin de 10, teste à 5,6 % (v/v), n'a pas d'effet sur les 2 souches bactériennes M fxristinae et S. aureus A cette concentration, il diminue de 14 ± 2 % (nombre de tests: n = 2) la quantité de P. acnés Le chélate oligosaccharide-Zn, testé à 5,6 % (v/v), augmente de 33 % M fxristinae (souche non pathogène), n'a pas d'effet sur S. aureus, et inhibe de 74 ± 12 % (nombre de tests: n = 3) la quantité de P. acn s (souche pathogène) A 1,6 %, il inhibe encore de 45 ± 15 % (n = 2) la souche P. acnés. Conclusion: au vu de ces résultats, la chélation du zinc augmente significativement l'effet inhibiteur de l'oligoalginate de degré de polymérisation voisin de 10 sur la souche pathogène Propionibacterium acnés, et favorise le développement de la souche non pathogène Micrococcus kristinae. D'où son effet bénéfique vis-à-vis de l'acné
On va à présent détailler ci-dessous l'activité supplémentaire que présente un chélate selon ledit second exemple de préparation (chélate oligosaccharides-Mg + Mn). en plus des effets précités obtenus pour un produit selon ledit premier mode de réalisation. Trois tests in vitro ont établi un effet anti-radicalaire pour ce chélate (les radicaux libres sont des radicaux crées par les rayonnements UV qui sont néfastes pour la peau).
- Test de l'anion superoxyde:
Dans un premier temps, l'action anti-radicalaire d'un chélate oligosaccharide- Mg + Mn a été modélisé par le système hypoxanthine/xanthine oxydase, connu pour provoquer la formation d'un dérivé oxygéné fortement instable, l'anion superoxyde (O2 ). Ce dernier génère une suite de réactions en cascade qui provoquent l'altération des protéines et des lipides cellulaires, mais aussi des acides nucléiques (ADN). Les effets ont été comparés à ceux de 1 Oligosaccharide non chélate Matériel et méthode: les anions superoxydes (O2 ~) ont été générés par l'addition de xanthine oxydase (55 mUI/ml) à de Phypoxanthine (0,85 mM) dans un milieu Tris-HCl, pH = 7,4. Les anions superoxydes ont été quantifiés par la formation de form.azan (rouge) à partir de nitrobleu de tétrazolium (NBT) à 33μM, par dosage spectophotométrique en cinétique à 560 mm.
Le principe du dosage des anions superoxydes est le suivant: Hypoxanthine + O2 + H2O » Acide urique + 2 O2 " + 2 H' xanthme,ox 4tlase
NBT Formazan (rouge)
Résultats l'oligosaccharide non chélate inhibe de façon proportionnelle à sa concentration la réaction colorimétrique U exerce une activité anti-radicalaire vis-à- vis de l'anion superoxyde
Le chélate oligosaccharide-Mg+Mn testé à 0,00001 , 0,0001, 0,001 et 0, 1 % (V/V) inhibe la réaction de 12 %, 28 %, 61 % et 75 %, respectivement
A 0,33 % et 3,3 % (V/V), ledit chélate inhibe la réaction de 81 % et 92 %, respectivement
Conclusion la complexation de Mg2^ et Mn2+ donne à l'oligoalginate des propriétés anti- radicalaires très puissantes vis-à-vis de l'anion superoxyde
- Test sur la protection des protéines cellulaires
L'effet anti-radicalaire vis-à-vis de l'anion superoxyde nous a amené à tester les effets du complexe oligosaccharide - Mg + Mn sur des cultures de fibrobla^es de derme humain, soumises à une attaque proradicalaire provoquée par une irradiation aux rayons UV
Matériel et méthode des fibroblastes de derme humain sont incubés pendant 24 heures avec les chélates d 'oligosaccharides - Mg + Mn, aux 3 concentrations non cytotoxiques de 0,04, 0,2 et 1 % (v/v) Une série des cultures est exposée aux UV (0,325J/cm2), l'autre série est maintenue à l'abri de l'irradiation Les protéines sont extraites et leur taux d'oxydation est mesuré par un dosage immunologique L'oxydation des protéines introduit un groupement carbonyle au niveau de certains acides aminés (Lys, Arg, Pro, Thr) Les groupements carbonyles sont transformés en 2,4 dinitrophényl hydrazone (DNP-hydrazone) et ces derniers dérivés sont quantifiés en utilisant un anticorps spécifique anti-DNP suivi d'une réaction colorimétrique
Les résultats obtenus quant à l'effet protecteur desdits chélates vis-à-vis de l'oxydation desdites protéines sont présentés dans le tableau ci-dessous (par convention, le pourcentage de protection est considéré égal à 100 lorsque la quantité moyenne est inférieure ou égale à celle du témoin non irradié)
Série d'échantillon Quantité moyenne Pourcentage Pourcentage de groupement du témoin de protection carbonyl dans les irradié protéines
± SEM
Témoin non irradié 0,46 ± 0,25 46 100
Témoin irradié 1,1 1 ± 0,08 100 0
Traité par les chélates à 0,04 % 0,87 ± 0,27 78 37 puis irradié
Traité par les chélates à 0,2 % 0,59 ± 0,05 53 80 puis irradié
Traité par les chélates à 1 % 0,35 ± 0,07 31 100 puis irradié
L'irradiation UV augmente l'oxydation des protéines d'un facteur 2,4. Le chélate d'oligosaccharides - Mg + Mn diminue l'oxydation des protéines cellulaires provoquée par les rayons UV, avec un effet qui suit une relation dose-effet
Conclusion.
Ce chélate protège les protéines cellulaires d'une attaque proradicalaire des rayons UV
- Test sur l'effet protecteur de l'ADN cellulaire
Des effets de protection de l'ADN ont été évalués en mesurant le taux de cassures de l'ADN dans des fibroblastes exposés à une irradiation UVB
Matériel et méthode
Des fibroblastes de derme humain (prélevés chez 5 donneurs) ont été incubés pendant 24 heures à 37° C en présence du chélate oligosaccharide-Mg + Mn, ou en présence de mélange constitué de vitamine C à 50μg/ml et de glutathion à 50μg/ml, ou en présence de milieu sel (témoin) Une série des cultures a été exposée à une irradiation UVB (325 mJ/cm:). alors qu'une autre série a été maintenue à l'abri de l'irradiation
Ces deux séries ont été placées à 37° C pendant 24 heures Le taux de cassure de l'ADN a été évalué par le marquage des extrémités de l'ADN cassé avec un nucléotide couplé à la fluorescence (méthode TUNEL).
Cette méthode utilise l'enzyme Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT) Selon cette méthode, une diminution de la fluorescence des cellules traduit une diminution du nombre de cassures de l'ADN, c'est-à-dire un effet protecteur
Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous
Figure imgf000023_0001
avec - pas de fluorescence +/- faible intensité + intensité moyenne +++ forte intensité
Commentaires des résultats En l'absence de l'enzyme TdT, les cellules ne sont pas fluorescentes En présence de l'enzyme TdT et d'une enzyme qui dégrade l'ADN (Dnase 1 ), on observe une très forte fluorescence Par conséquent, la spécificité du marquage est établie En l'absence de rayonnement UVB et en présence de l'en.zyme TdT, les cellules sont très peu fluorescentes. Après irradiation aux UVB et en présence de l'enzyme TdT, la fluorescence des cellules augmente.
Les cellules incubées en présence d'oligosaccharides-Mg+Mn à 0,04 %, (v/v) avant l'irradiation, puis irradiées, puis traitées avec l'enzyme TdT sont moins fluorescentes.
Conclusion:
L'oligosaccharide-Mg+Mn protège les fibroblastes dermiques de la cassure de l'ADN par les rayons UVB.
Selon une variante de réalisation dudit premier ou dudit second mode, un produit selon l'invention est constitué d'un premier produit, qui est obtenu conformément à l'un de ces deux modes, et d'un second produit, qui est élaboré à partir d'extraits naturels d'algues microscopiques du type chlorella selon le procédé suivant.
Ce procédé consiste essentiellement à effectuer un broyage en milieu alcalin desdites algues, à acidifier le jus d'extraction obtenu, à éliminer les débris cellulaires par microfiltration tangentielle sur un filtre dont le seuil de rétention est de 0,22 μm, et à concentrer les éléments organiques restants, jusqu'à obtention d'un extrait comprenant 5 % de matières actives, qui constitue ledit second produit.
Le mélange desdits premier et second produits s'effectue dans un solvant neutre, par exemple de l'eau, en utilisant des concentrations de 5 % pour chacun d'eux.
ANNEXE
I Détermination du degré de polymérisation moyen en nombre d'un extrait d'alginate de sodium dépolymérisé par un traitement à l'alginate lyase. par dosage des doubles liaisons conjuguées
L'alginate lyase est une enzyme qui dépolymérisé l'extrait d'alginate de sodium en générant des doubles liaisons conjuguées et des fonctions hémi-acétaliques réductrices
Ces doubles liaisons conjuguées présentant un maximum d'absorption dans l'ultraviolet à 235 nm, on procède à leur dosage par spectrophotométrie ultraviolette, de manière à pouvoir quantifier le nombre de moles d'oligo-alginates produites dans le volume de solution
On prélève une quantité donnée de milieu réactionnel à des moments différents de la réaction enzymatique, et l'on procède à l'ajustement du pH de la solution prélevée afin de ralentir ladite réaction Dans cet exemple de réalisation, chaque prélèvement de milieu réactionnel est caractérisé, d'une part, par une masse de 10 g et un pH ajusté à 4 avec de l'acide chlorhydrique de concentration 1 N
De plus, ladite solution prélevée est diluée pour que sa densité optique soit inférieure à 1
On mesure la densité optique (DO) de ladite solution pour un rayonnement de 235 nm, ce qui permet de doser la concentration Casons (mol H ) des doubles liaisons conjuguées, grâce à la relation
DO
(0 ^-liaisons = ' ε
où ε (5050 1. moH cm~l) représente le coefficient d'extinction moléculaire des oligo-alginates insaturés.
En tenant compte des dilutions pratiquées, il est possible de mesurer la concentration en doubles liaisons conjuguées dans le milieu réactionnel de départ De plus, connaissant la concentration pondérale d'alginate Ca|gjnate dans la solution (en g 1"'), on obtient la masse molaire moyenne en nombre Mn (g moH) des échantillons prélevés au moyen de la relation
^alginate (ii) Mn =
Cli taisons
On en déduit le degré de polymérisation moyen en nombre DPn au moyen de la relation suivante
Mr
(iii) DPn =
Mo
où MQ désigne la masse molaire d'une unité constitutive de la molécule d'alginate de sodium (MQ = 216 g mol"*).
II Détermination du degré de polymérisation moyen en nombre d'un extrait d'alginate de sodium dépolymérisé au moyen d'une hydrolyse en milieu acide, par la méthode du dosage des sucres réducteurs (méthode dite de SOMOGYI-NELSON)
L'hydrolyse acide de l'alginate génère une fonction hémi-acétalique réductrice et une fonction hydroxyle On procède au dosage de ladite fonction réductrice au moyen des solutions suivantes
Solution A
Carbonate de sodium anhydre 25g Tartrate de sodium et de potassium 25g Hydrogénocarbonate de sodium 20g
Sulfate de sodium anhydre 200g On dissout ces quatre composés dans 1 1 d'eau ultra-pure
Solution B Sulfate de cuivre monohydraté 30 g
Acide sulfurique concentré 4 gouttes On dissout l'ensemble dans 200 ml d'eau ultra-pure
Solution C
Obtenue par l'adjonction de 25 volumes de la solution A à un volume de la solution B
Solution D
Molybdate ammoniacal 25 g Acide sulfurique concentré 39 g Arseniate de sodium 3 g
On dissout l'ensemble dans 500 ml d'eau ultra-pure
Le pπncipe de cette méthode repose sur le fait que ladite fonction hemi- acétalique est oxydée par le cuivre et génère de l'oxyde cuivreux, lequel réagit avec le complexe arsénio-molybdique pour produire un oxyde de molybdate Le mode opératoire suivi est décrit ci-dessous
On ajoute 1 ml de la solution C à 1 ml de la solution à doser dans un tube à essai, et l'on chauffe pendant 20 min au bain-marie le mélange obtenu On refroidit ensuite rapidement ledit mélange en versant de l'eau courante sur ledit tube Puis on ajoute successivement audit mélange 1 ml de solution D et 12 ml d'eau ultra-pure
L'oxyde de molybdate produit présentant une absorption maximale pour un rayonnement de longueur d'onde égale à 660 nm, on mesure la densité optique de la solution obtenue à cette longueur d'onde
Les calculs permett.ant de déterminer la masse molaire moyenne en nombre et d'en déduire le degré de polymérisation moyen en nombre de l'alginate hydrolyse sont les mêmes que ceux qui ont été exposés au Paragraphe I.

Claims

REVENDICATIONS
1) Procédé d'élaboration d'un produit destiné à prévenir et à soigner des maladies de la peau, caractérisé en ce qu'il consiste à utiliser un extrait naturel d'alginate de sodium et à soumettre ledit extrait à au moins un traitement de dépolymérisation. 2) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on soumet ledit extrait à un traitement de dépolymérisation enzymatique au moyen d'une alginate lyase
3) Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que, ultérieurement audit traitement enzymatique, l'on soumet ledit extrait dépolymérisé à une hydrolyse en milieu acide.
4) Produit destiné à prévenir et à soigner des maladies de la peau, caractérisé en ce qu'il comprend des enchaînements d'oligo-alginates et d'acides uroniques.
5) Produit destiné à prévenir et à soigner des maladies de la peau selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'il comprend en outre au moins un oligoélément sous forme cationique formant un chélate avec lesdits enchaînements.
6) Produit destiné à prévenir et à soigner des maladies de la peau selon la revendication 5, caractérisé en ce que ledit chélate comprend des ions Zn^+.
7) Produit destiné à prévenir et à soigner des maladies de la peau selon la revendication 5, caractérisé en ce que ledit chélate comprend des ions Mn2+ et Mg2+ 8) Produit selon une des revendication 4 à 7, caractérisé en ce qu'il comprend en outre des extraits naturels d'algues du type chlorella.
9) Produit selon une des revendications 4 à 8, caractérisé en ce qu'il est prévu pour protéger des rayonnements ultraviolets les cellules de Langerhans de l'épiderme.
10) Produit selon une des revendications 4 à 8, caractérisé en ce qu'il est prévu pour augmenter la concentration épidermique de l'interleukine la.
1 1 ) Produit selon une des revendications 5 à 7, caractérisé en ce qu'il est prévu pour présenter un effet anti-radicalaire vis-à-vis des radicaux libres produits par des rayonnements ultraviolets.
12) Produit selon la revendication 11, caractérisé en ce qu'il est prévu pour protéger les cellules du derme de l'oxydation des protéines.
13) Produit selon la revendication 1 1, caractérisé en ce qu'il est prévu pour protéger les cellules du derme de la fragmentation de l'ADN 14) Produit selon une des revendications 5 à 7, caractérisé en ce qu'il est prévu pour présenter un effet inhibiteur vis-à-vis de l'activité de l'enzyme 5α réductase.
15) Produit selon une des revendications 5 à 7, caractérisé en ce qu'il est prévu pour présenter un effet inhibiteur vis-à-vis de la souche bactérienne pathogène
Propionibactèrium acnés.
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR3024358A1 (fr) * 2014-08-01 2016-02-05 Courtage Et De Diffusion Codif Internat Soc D Compositions cosmetiques et complements alimentaires neuro-protecteurs comprenant de l'oligoalginate ayant un degre de polymerisation de 10 pour lutter contre le vieillissement de la peau.
FR3071403A1 (fr) 2017-09-25 2019-03-29 Societe De Courtage Et De Diffusion - Codif International Procede de traitement d'un extrait d'alginates, produit correspondant obtenu, et utilisations associees.
FR3142888A1 (fr) 2022-12-12 2024-06-14 L'oreal Utilisation cosmétique d’une association d’acide salicylique et/ou de ses dérivés et/ou de leurs sels, de sarcosine et d’un extrait d’algue d’origine marine pour traiter et/ou prévenir les peaux grasses

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2781157B1 (fr) * 1998-07-15 2000-08-25 Oreal Composition anti-inflammatoire
EP1559429A4 (fr) * 2002-06-25 2009-09-09 Shiseido Co Ltd Agent anti-vieillissement
JP5201795B2 (ja) * 2005-01-12 2013-06-05 ロート製薬株式会社 掻痒抑制剤
JP2007314462A (ja) * 2006-05-25 2007-12-06 Nippon Tablet Kk 外用剤
FR2911278B1 (fr) * 2007-01-12 2009-05-01 Limousine D Applic Biolog Dite Procede d'obtention d'un actif cosmetique depigmentant, principe actif obtenu et compositions l'incluant
WO2014059313A1 (fr) 2012-10-12 2014-04-17 Lehigh University Enzymes thermiquement stables, compositions associées et procédés d'utilisation de celles-ci
EP4289412A3 (fr) * 2015-07-28 2024-03-06 Mary Kay, Inc. Formulations cutanées topiques
CN105902408B (zh) * 2015-09-25 2019-02-05 上海百雀羚生物科技有限公司 含有褐藻和红藻精华的化妆品组合物

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH03273002A (ja) * 1990-03-22 1991-12-04 Otsuka Chem Co Ltd アルギン酸分解物
JPH04169188A (ja) * 1990-10-31 1992-06-17 Taiyo Fishery Co Ltd アルギン酸オリゴ糖の製造方法及び精製法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH03273002A (ja) * 1990-03-22 1991-12-04 Otsuka Chem Co Ltd アルギン酸分解物
JPH04169188A (ja) * 1990-10-31 1992-06-17 Taiyo Fishery Co Ltd アルギン酸オリゴ糖の製造方法及び精製法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE WPI Week 9204, Derwent World Patents Index; AN 92-027442, XP002031850 *
DATABASE WPI Week 9231, Derwent World Patents Index; AN 92-253393, XP002031851 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR3024358A1 (fr) * 2014-08-01 2016-02-05 Courtage Et De Diffusion Codif Internat Soc D Compositions cosmetiques et complements alimentaires neuro-protecteurs comprenant de l'oligoalginate ayant un degre de polymerisation de 10 pour lutter contre le vieillissement de la peau.
FR3071403A1 (fr) 2017-09-25 2019-03-29 Societe De Courtage Et De Diffusion - Codif International Procede de traitement d'un extrait d'alginates, produit correspondant obtenu, et utilisations associees.
FR3142888A1 (fr) 2022-12-12 2024-06-14 L'oreal Utilisation cosmétique d’une association d’acide salicylique et/ou de ses dérivés et/ou de leurs sels, de sarcosine et d’un extrait d’algue d’origine marine pour traiter et/ou prévenir les peaux grasses

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