FR3024358A1 - Compositions cosmetiques et complements alimentaires neuro-protecteurs comprenant de l'oligoalginate ayant un degre de polymerisation de 10 pour lutter contre le vieillissement de la peau. - Google Patents

Compositions cosmetiques et complements alimentaires neuro-protecteurs comprenant de l'oligoalginate ayant un degre de polymerisation de 10 pour lutter contre le vieillissement de la peau. Download PDF

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Abstract

Compositions cosmétiques neuro-protectrices comprenant de l'oligoalginate et au moins un milieu cosmétiquement acceptable pour prévenir et/ou lutter contre le vieillissement de la peau, ladite composition étant susceptible de stimuler la production de sAPP-alpha par les neurones. Complément alimentaire neuroprotecteur à visée cosmétique comprenant un oligoalginate et au moins un additif. Utilisation d'un oligoalginate, pour la prévention du vieillissement cutané grâce à la protection des neurones.

Description

Compositions cosmétiques et compléments alimentaires neuro-protecteurs comprenant de l'oligoalginate pour lutter contre le vieillissement de la peau. 1. Domaine de l'invention Le domaine de l'invention est celui de la cosmétique. Plus précisément, l'invention concerne l'utilisation d'un oligoalginate pour la formulation de compositions cosmétiques et de compléments alimentaires destinés à réduire, ou à tout le moins à prévenir, le vieillissement cutané neuro-induit. 2. Art antérieur Le maintien de la beauté et de la souplesse de la peau nécessite de nombreux soins. La formation des rides est un processus naturel dû au ralentissement de la régénération de la peau et à la détérioration des fibres de collagène et d'élastine. Outre les effets naturels du temps, on sait également que les facteurs environnementaux et le mode de vie sont responsables du vieillissement. En particulier, l'exposition abusive au soleil est néfaste pour la qualité de la peau. En effet, les UV fragmentent les fibres d'élastine et de collagène. Une fois ces fibres détruites, la peau perd de sa souplesse et de sa fermeté. La peau s'affaisse, se creuse et les rides apparaissent. La pollution peut également agresser la peau et induire la formation de radicaux libres au niveau du derme et de l'épiderme. Les radicaux libres dégradent le collagène, et altèrent l'ADN. L'industrie cosmétique propose donc de nombreuses solutions pour ralentir le vieillissement de la peau. Tout d'abord, les filtres solaires permettent de protéger la peau de l'effet des UVA et UVB. Ainsi, l'altération des fibres d'élastine et de collagène est à tout le moins limitée. Hormis les compositions solaires, l'industrie cosmétique propose également des compositions cosmétiques anti-âge permettant de favoriser la synthèse de novo des fibres d'élastine et/ou de collagène. Des compositions plus complexes et plus récentes comprennent en outre des antioxydants, tels que des acides de fruits ou du thé vert, afin de lutter au mieux contre la formation des radicaux libres au niveau de l'épiderme.
Cependant, d'autres facteurs sont impliqués dans le vieillissement de la peau ; par exemple, une mauvaise alimentation, le manque de sommeil, le stress, la consommation d'alcool et de tabac, etc. En effet, ces comportements seraient susceptibles d'induire la formation de radicaux libres qui, comme énoncé précédemment, accélèrent le vieillissement de la peau. Les inventeurs ont de plus découvert que les neurones, lorsqu'ils subissent une agression chimique ou une attaque radicalaire, sécrètent dans l'organisme des substances accélérant le vieillissement de la peau.
Hormis adopter une meilleure hygiène de vie et éviter la pollution atmosphérique, ce qui n'est pas nécessairement chose aisée, il n'existe pas de solution pour lutter contre ces causes du vieillissement. Outre ces considérations, un besoin croissant de retour vers des produits plus naturels et moins artificiels se fait ressentir depuis quelques années. 3. Objectifs de l'invention L'invention a notamment pour objectif de pallier ces inconvénients de l'art antérieur. Plus précisément, un objectif de l'invention est de fournir une composition cosmétique permettant, dans au moins un mode de réalisation, de lutter contre les effets du vieillissement induits par les altérations du système nerveux. Un autre objectif de l'invention est de fournir, dans au moins un mode de réalisation, un complément alimentaire permettant de limiter les effets du vieillissement induits par les neurones.
L'invention a encore pour objectif, dans au moins un mode de réalisation, d'utiliser un composé actif pour lutter contre les effets du vieillissement induits par les altérations des neurones. 4. Exposé de l'invention Ces objectifs, ainsi que d'autres qui apparaîtront par la suite, sont atteints à l'aide d'une composition cosmétique neuro-protectrice comprenant de l'oligoalginate et au moins un milieu cosmétiquement acceptable pour prévenir et/ou lutter contre le vieillissement de la peau, ladite composition étant susceptible de stimuler la production de sAPP-alpha (Secreted Amyloid Precursor Protein alpha en anglais) par les neurones.
Ainsi, les inventeurs ont constaté de manière tout à fait étonnante que les neurones, lorsqu'ils subissent des dommages ou dégénèrent en raison de l'âge, relarguent des composés accélérant le vieillissement. Au cours du vieillissement, les cellules nerveuses sont altérées : elles subissent des attaques radicalaires qui entrainent la mort cellulaire par apoptose. Outre le vieillissement, les composés chimiques contenus dans la pollution atmosphérique et inhalés par l'organisme ou encore ceux contenus dans l'eau ou les pesticides pulvérisés sur les aliments induisent la formation de radicaux libres dans le système nerveux. Ces attaques radicalaires provoquent la dégénérescence des neurones, qui relarguent alors des substances circulant dans l'organisme. Les inventeurs ont constaté que ces substances libérées par les neurones lorsqu'ils sont agressés réduisent la viabilité des fibroblastes. En d'autres termes, les substances libérées par les neurones altérés accélèrent le vieillissement cutané. La protéine sAPP (Secreted Amyloid Precursor Protein en anglais) est une protéine secrétée par les neurones, en fonction de leur activité. La protéine sAPP peut être ensuite clivée par l'enzyme alpha-secrétase pour produire la sous-unité alpha « sAPP-alpha ». La protéine sAPP-alpha semble avoir un rôle neuroprotecteur et antiapoptotique via un mécanisme pour le moment inconnu. Or, il n'existe, à la connaissance de la Déposante, aucune composition permettant de lutter contre les effets du vieillissement induit par les altérations du système nerveux. Les oligoalginates utilisés dans le cadre de la présente invention peuvent être obtenus par l'action enzymatique d'une enzyme «alginate lyase», isolée et purifiée à partir d'un micro-organisme marin, sur un polysaccharide purifié d'algue brune. Ce polysaccharide est composé d'acide uronique (association d'acide guluronique et d'acide mannuronique) et est communément dénommé «alginate ». Un procédé d'obtention des oligoaginates est décrit dans la demande de brevet FR-2753628-A1.
De préférence, l'oligoalginate présente un degré de polymérisation compris entre 2 et 20, de manière davantage préférée entre 7 et 11, et de manière préférée entre toutes, un degré de polymérisation moyen de 10. A titre d'exemple et de clarification, un degré de polymérisation de 10 signifie que l'oligoalginate comprend 10 unités successives d'acide uronique. La méthode de détermination du degré de polymérisation moyen est décrite dans la demande de brevet FR-2753628-A1. De manière avantageuse, l'oligoalginate présente un rapport acide mannuronique / acide guluronique supérieur à 1. Les compositions cosmétiques selon l'invention ont donc pour objectif de stimuler la synthèse de sAPP-alpha, ce qui permet de protéger les neurones de la dégénérescence induite par les radicaux libres et/ou certaines agressions chimiques ou biologiques. Outre la dégénérescence inéluctable liée à l'âge, les neurones sont altérés par de nombreux facteurs liés à notre mode de vie : inhalation de particules de pollution, consommation de produits chimiques via notre alimentation, stress, anxiété, manque de sommeil, consommation de médicaments, d'alcool ou de tabac etc. En favorisant la protection des neurones et leur survie, la composition selon l'invention évite, ou à tout le moins limite, la libération de substances accélérant le vieillissement cutané. Par voie de conséquence, les compositions selon l'invention permettent de lutter contre le vieillissement cutané neuro-induit. En d'autres termes, les inventeurs proposent une solution innovante qui permet de prévenir le vieillissement en luttant contre ses causes endogènes, et non plus seulement en corrigeant ou réduisant les signes déjà installés du vieillissement cutané. Avantageusement, la composition selon l'invention comprend de l'oligoalginate selon l'invention en quantité inférieure ou égale à 5% par rapport à la masse totale de la composition. De préférence, la composition selon l'invention comprend de l'oligoalginate en quantité inférieure ou égale à 1% par rapport à la masse totale de la composition. De manière davantage préférée, l'oligoalginate selon l'invention est présent dans la composition selon l'invention en quantité inférieure ou égale à 0,1% par rapport à la masse totale de la composition.
Avantageusement, la composition selon l'invention se présente sous une forme choisie parmi un gel, une solution, une crème, une pommade, un lait, un beurre, une émulsion huile dans eau, une émulsion eau dans huile, une émulsion triple. Ces types de formulations conviennent particulièrement à l'application topique de la composition selon l'invention. Il peut donc être envisagé de formuler la composition selon l'invention comme une crème pour visage destinée à prévenir, ralentir et/ou corriger les signes de l'âge. Il peut également être envisagé de formuler la composition selon l'invention comme un produit corporel afin de prévenir, ralentir et/ou corriger les signes de l'âge.
La composition selon l'invention peut en outre comprendre au moins un additif choisi parmi les parfums, les colorants, les conservateurs, les huiles essentielles de végétaux, les extraits végétaux, de fruits ou d'algues. De manière intéressante, il peut être envisagé d'inclure des ingrédients cosmétiques réputés pour leur action antioxydante, tels le thé vert, les acides de fruits, la vitamine C etc. pour renforcer l'action protectrice de l'oligoalginate. L'invention concerne en outre un complément alimentaire neuro-protecteur à visée cosmétique comprenant un oligoalginate et au moins un additif. De préférence, l'oligoalginate présente un degré de polymérisation compris entre 2 et 20, de manière davantage préférée entre 7 et 11 et de manière préférée entre toutes un degré de polymérisation moyen de 10. Avantageusement, l'oligoalginate présente un rapport acide mannuronique / acide guluronique supérieur à 1. De tels compléments alimentaires peuvent donc avoir un rôle de réduction des signes du vieillissement et/ou de prévention de la formation des rides et du vieillissement cutané neuro-induit en général. L'ingestion de compléments selon l'invention permet d'obtenir une absorption par l'organisme optimale. Les compléments selon l'invention peuvent se présenter sous la forme d'une gélule, d'une capsule, d'un comprimé, d'une dragée, de granules ou d'une poudre. Avantageusement, ledit additif est choisi parmi les correcteurs de pH, les colorants, les agents de charge, les lubrifiants, les agents d'enrobage, les arômes et leur combinaison.
Un autre objet de l'invention concerne en outre l'utilisation de l'oligoalginate pour la prévention et/ou la réduction des signes du vieillissement cutané grâce à la protection des neurones. De préférence, l'oligoalginate présente un degré de polymérisation compris entre 2 et 20, de manière davantage préférée entre 7 et 11 et de manière préférée entre toute un degré de polymérisation moyen de 10. Avantageusement, l'oligoalginate présente un rapport acide mannuronique / acide guluronique supérieur à 1. 5. Liste des figures D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront plus clairement à la lecture de la description suivante d'un mode de réalisation préférentiel, donné à titre de simple exemple illustratif et non limitatif, et des dessins annexés, parmi lesquels : - la figure 1 est un graphique présentant les résultats de l'administration à différents dosages d'OA DP10 (oligoalginate avec un degré de polymérisation moyen de 10) sur des neurones de rat en présence de l'oligomère A131-42 neurotoxique ; - la figure 2 est un graphique présentant les résultats de l'effet de surnageant de neurones sur des fibroblastes humains, sans composé neurotoxique ; - la figure 3 est un graphique présentant les résultats de l'effet de surnageant de neurones dilués à 25% sur des fibroblastes humains, après traitement des neurones par l'oligomère A131-42 neurotoxique ; - la figure 4 est un graphique présentant les résultats de l'effet de surnageant de neurones dilués à 50% sur des fibroblastes humains, après traitement des neurones par l'oligomère A131-42 neurotoxique ; - la figure 5 est un graphique illustrant la cinétique d'activation de la protéine sAPP-alpha par l'OA DP10.30 6. Description d'un mode de réalisation de l'invention Le principe général de l'invention repose sur l'incorporation d'un oligoalginate neuroprotecteur, l'oligoalginate présentant de préférence un degré de polymérisation moyen compris entre 2 et 20, de manière davantage préférée entre 7 et 11 et de manière préférée entre toutes de 10 (OA DP10), pour formuler des compositions cosmétiques ou un complément alimentaire permettant de lutter contre le vieillissement cutané neuro-induit. Les inventeurs ont en effet observé que le vieillissement cutané n'avait pas pour seule origine les altérations directes de la surface de l'épiderme ou la formation de radicaux libres au niveau de l'épiderme. Bien au contraire, il semblerait d'après leurs recherches que le vieillissement cutané peut également être induit par les substances libérées par les neurones lorsqu'ils sont altérés. Par conséquent, les inventeurs proposent des compositions cosmétiques qui visent à lutter contre le vieillissement cutané à sa source et non plus seulement à corriger les signes déjà installés. Cette démarche est donc plus efficace que la simple correction des signes de l'âge. 6.1. Détermination de l'effet neuroprotecteur de l'oligoalginate de degré de polymérisation 10 L'objectif de cette première étude est de mesurer l'effet neuroprotecteur potentiel de l'oligoalginate de degré de polymérisation moyen 10 (OA DP10) 1. MATERIEL ET METHODE L'OA DP10, sous forme de poudre, a été solubilisé à 1% dans de l'eau. Cette solution a ensuite été utilisée afin d'avoir des concentrations finales en poudre de 0.01%, 0.005% et 0.0025%. La référence positive utilisée est l'oligomère AB1-42, un inducteur de neurotoxicité, testé à 1p.M. Le véhicule utilisé au cours de l'analyse est l'eau. Les cellules sont des neurones corticaux embryonnaires provenant de foetus de rats (Pillot et al., Beta-amyloid peptide interacts specifically with the carboxy-terminal domain of human apolipoprotein E: relevance to Alzheimer's disease. Journal of neurochemistry; 1999;72(1):230-7; Kriem et al., Cytosolic phospholipase A2 mediates neuronal apoptosis induced by soluble oligomers of the amyloid-beta peptide. FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology 2005;19(1):85-7; Garcia et al., Ciliary neurotrophic factor cell-based delivery prevents synaptic impairment and improves memory in mouse models of Alzheimer's disease. J Neurosci. 2010; 30(22):7516-27). Les cellules ont été placées dans des récipients en plastique enduits de polyornithine. Les neurones de rat ont ensuite été cultivés dans un milieu chimiquement défini et complété par des hormones, des protéines et des sels. Les cultures ont été maintenues à 35°C dans une atmosphère humidifiée de CO2 à 5%. La population corticale a été déterminée pour être au moins de 97% de neurones, par immunomarquage. Toutes les expériences ont été effectuées en aveugle. Les expériences ont été réalisées dans des plaques de 48 puits. Les neurones corticaux primaires ont été incubés soit avec le véhicule (eau), soit en présence d'OA DP10 à des concentrations croissantes (jusqu'à 0,01%) et en l'absence d'oligomère AB1-42, soit en présence d'OA DP10 à des concentrations croissantes (jusqu'à 0,01%) et d'oligomère AB1-42. Les traitements ont été réalisés selon le protocole suivant: a. pré-incubation des neurones pendant 6 heures soit avec le véhicule soit avec des concentrations croissantes d'OA DP10 ; b. incubation des produits pendant 10 minutes dans le milieu de culture en présence d'eau ou de 11.J.M d'oligomère AB1-42 ; c. application des mélanges sur les neurones corticaux primaires avant incubation pendant 24 heures supplémentaires.
Les différentes concentrations d' OA DP 10 testées sont 0,01% ; 0,005% et 0,0025%. Les neurones sont ensuite récupérés, testés au sel de méthyltétrazolium (MU) (Garcia et al., Ciliary neurotrophic factor cell-based delivery prevents synaptic impairment and improves memory in mouse models of Alzheimer's disease. J Neurosci. 2010; 30(22):7516-27; Desbene et al., 2012). L'absorbance à 570 nm est mesurée par spectroscopie. Seules les cellules viables absorbent la longueur d'onde. 2. R ES U LTATS La figure 1 est un graphique présentant les résultats de la mesure d'absorbance à 570 nm (en ordonnée) en fonction de la condition testée (en abscisse). Comme on peut le constater, l'incubation des neurones avec l'oligomère Al3 1-42 entraîne une diminution d'environ 45% de la viabilité cellulaire. En revanche, l'administration d'OA DP10 protège les neurones de cette toxicité et procure environ 42% de protection avec la concentration la plus élevée d'actif par rapport à la condition traitée avec l'oligomère AB1-42 seul. 6.2. Effets de l'altération des neurones sur les fibroblastes L'objectif de cette étude a été de tester les effets des milieux de culture de neurones sur des cultures de fibroblastes de derme humain (2 études séparées) en présence ou absence d'un facteur de stress. a. MATERIEL ET METHODE Les données ci-dessous sont communes aux deux études. On utilise comme témoin positif l'oligomère AB1-42. Ce composé est un puissant neurotoxique permettant d'induire une dégénérescence rapide des neurones. Il est testé dans l'eau, à une concentration finale de 0,1 i.J.M. L'oligolaginate de degré de polymérisation moyen de 10 (OA DP10), sous forme de poudre, a été solubilisé à 1% en masse dans de l'eau. Cette solution a ensuite été utilisée afin d'avoir une concentration finale en poudre de 0.01%. Les neurones sont des neurones corticaux embryonnaires provenant de foetus de rats (Pillot et al. Journal of neurochemistry; 1999;72(1):230-7; Kriem et al FASEB journal 2005;19(1):85-7; Garcia et al., J Neurosci. 2010; 30(22):7516-27). Les cellules ont été placées dans des récipients en plastique enduits de polyornithine avant d'être mises en culture dans un milieu chimiquement défini et complété par des hormones, des protéines et des sels. Les cultures ont été maintenues à 35°C dans une atmosphère 2 humidifiée de CO à 5%. La population corticale a été déterminée pour être au moins de 97% de neurones, par immunomarquage. Le véhicule utilisé est de l'eau stérile. a. Etude 1 : Milieu sans A131-42 oligomère Les fibroblastes utilisés pour cette étude proviennent d'un donneur de 54 ans utilisés au sixième repiquage. Ils ont été ensemencés dans des plaques multi-puits contenant du milieu nutritif (SVF à 10%). Le milieu de culture des neurones a été ensuite dilué à 50% dans du milieu de culture des fibroblastes (SVF à 1%). Puis, les fibroblastes ont été traités pendant 48h avec ce milieu supplémenté avec le milieu de culture des neurones dilué à 50% seul, ou avec du milieu de culture des neurones contenant l'OA DP 10. Après ces 48h d'incubation, la viabilité cellulaire a été évaluée en utilisant le test au sel de méthyltétrazolium MU (Garcia et al., J Neurosci. 2010; 30(22):7516-27; Desbene et al., 2012). La densité optique est mesurée à 570 nm par spectroscopie et permet de quantifier les cellules actives sur le plan métabolique et donc vivantes. Après incubation, les milieux de culture sont récupérés et centrifugés. b. Etude 2 : Milieu avec l'oligomère A131-42 Les fibroblastes de derme humain utilisés pour cette étude proviennent d'un donneur de 50 ans utilisés au neuvième repiquage. Toutes les expériences ont été effectuées dans des plaques à 6 puits à la sixième division. A temps T=0, le milieu de culture a été remplacé par du milieu de culture seul, ou du milieu de culture contenant soit de l'OA DP 10 à 0,01%, soit du milieu de culture contenant l'oligomère A81-42 à 1 i.J.M, soit du milieu de culture contenant l'oligomère A131-42 et l'OA DP 10. Les cellules ont ensuite été incubées pendant 24h. Puis, les fibroblastes ont été ensemencés dans des plaques multi-puits contenant du milieu nutritif (10% SVF). Le milieu de culture des neurones a été ensuite dilué à 25% ou à 50% dans le milieu de culture des fibroblastes (1% SVF). Les fibroblastes ont été traités pendant 48h soit avec ce milieu supplémenté avec le milieu de culture des neurones dilué à 25% ou 50% seul, soit avec du milieu de culture des neurones contenant l'oligomère A131-42, soit avec du milieu de culture des neurones contenant l'OA DP10, soit avec du milieu de culture des neurones contenant l'oligomère A131-42 et l'OA DP10. Après ces 48h d'incubation, la viabilité cellulaire a été évaluée en utilisant le test au MU. 2. R ES U LTATS b. Etude 1 : Milieu sans oligomère A131-42 Les résultats de cette étude sont présentés à la figure 2.
Le milieu de culture des neurones sans incubation avec les neurones, dilué à 50% dans le milieu de culture des fibroblastes, n'a pas d'effet significatif sur la viabilité des fibroblastes en comparaison avec le milieu pour fibroblastes. Ce résultat indique que les résultats obtenus ne sont pas des artefacts dus à une différence de milieu nutritif.
En revanche, le surnageant de culture des neurones diminue la viabilité des fibroblastes, de l'ordre de -22% après 24 heures. Le milieu de culture des neurones traités par l'OA DP10 limite cette chute de viabilité (+ 60% de viabilité). Il est à noter que l'OA DP10 seul dilué dans le même milieu et à la même concentration finale n'a pas d'effet significatif sur la viabilité des fibroblastes. c. Etude 2 : Milieu avec oligomère A131-42 Effet des milieux dilués à 25% Les résultats de cette étude sont présentés à la figure 3. Le milieu de culture des neurones, dilué à 25% dans le milieu de culture des fibroblastes, n'a pas d'effet significatif sur la viabilité des fibroblastes de derme humain. En revanche, le milieu de culture des neurones traités avec l'agent neurotoxique l'oligomère A131-42 diminue considérablement la viabilité des fibroblastes, de l'ordre de -62% après 24 heures. Le milieu de culture des neurones traités par l'OA DP10 seul n'a pas d'effet significatif sur la viabilité des fibroblastes. En revanche, le milieu de culture des neurones traité par l'OA DP10 avant l'ajout de l'agent neurotoxique oligomère A131-42 limite la chute de viabilité induite par le milieu neurone + l'oligomère A131-42 (+ 93% de viabilité). - Effet des milieux dilués à 50% Les résultats de cette étude sont présentés à la figure 4. Le milieu de culture des neurones sans contact avec les neurones (milieu de contrôle) n'est pas toxique sur les fibroblastes, même dilué à 50%. L'ajout du milieu de culture des neurones, en contact avec les neurones, diminue légèrement la viabilité des fibroblastes, de l'ordre de 16%. L'ajout du milieu de culture des neurones exposés à l'oligomère A131-42 (dilué à 50% dans le milieu de culture des fibroblastes) diminue en revanche fortement la viabilité des fibroblastes, de l'ordre de -48% après 24 heures. Ce résultat démontre que les neurones altérés libèrent dans leur milieu de culture des substances réduisant la viabilité des fibroblastes humains.
Le milieu de culture des neurones traités par l'OA DP10 (sans A131-42 Oligomère) limite la chute de viabilité. Le milieu de culture des neurones + l'OA DP10+ l'oligomère A131-42 limite également la chute de viabilité (+ 131% de viabilité) et augmente même la viabilité de 15% par rapport au milieu de culture des neurones. Ces résultats démontrent l'effet neuro-protecteur de l'OA DP10 sur les neurones. Ils démontrent également que grâce à cet effet neuroprotecteur, l'OA DP10 contribue à protéger les fibroblastes de la dégradation consécutive à l'altération des neurones. 6.3. Effet de l'OA DP10 sur la sécrétion de la protéine neurotrophique SAPPalpha Cette étude a pour objectif de comprendre le mécanisme neuro-protecteur de l'oligoalginate présentant un degré de polymérisation moyen de 10 (OA DP10). 1. MATERIEL ET METHODE L'OA DP10 sous forme poudre a été solubilisé à 1% dans de l'eau. Cette solution a ensuite été utilisée afin d'avoir une concentration finale massique en poudre de 0,01%. Le témoin positif utilisé est le PACAP (« Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide » en anglais), connu également sous le nom de « Vasoactive Intestinal Peptide » (VIP). Ce produit est utilisé à la concentration finale massique de 0,01% dans de l'eau. Ce peptide est connu pour être un puissant activateur de l'alpha-secrétase, et par conséquent stimuler la synthèse de sAPP-alpha par les neurones.
Les cellules sont des neurones corticaux embryonnaires provenant de foetus de rats (Pillot et al., Journal of neurochemistry; 1999;72(1):230-7; Kriem et al., FASEB journal 2005;19(1):85-7; Garcia et al., J Neurosci. 2010;30(22):7516-27). Les cellules ont été placées dans des récipients en plastique enduits de polyornithine avant d'être mises en culture dans un milieu chimiquement défini et complété par des hormones, des protéines et des sels. Les cultures ont été maintenues à 35°C dans une atmosphère humidifiée de CO2 à 5%. La population corticale a été déterminée, par immunomarquage, pour être au moins de 97% de neurones. Toutes les expériences ont été effectuées dans des plaques à 48 puits à la sixième division. Au temps T=0, le milieu de culture a été remplacé par du milieu de culture contenant soit le véhicule (eau), la référence positive (PACAP) et l'OA DP 10 à 0.01%. Les cellules sont ensuite incubées durant différents temps d'incubation, jusqu'à 24h afin d'établir une cinétique. Après l'incubation, les milieux de culture sont récupérés, centrifugés pour séparer les cellules mortes des cellules vivantes. La quantification du fragment sAPP-alpha a été réalisée par dosage à l'aide d'un kit ELISA. 2. RESULTATS Les résultats de cette étude sont présentés à la figure 5. Le facteur neurotrophique sAPPa correspond au fragment alpha protéolytique soluble de la protéine APP. Il a été démontré récemment que de faibles doses de sAPP-alpha sont en mesure de prévenir la mort des cellules neuronales. Comme on peut le constater au vu de la figure 5, l'incubation pendant 24h avec PACAP à 0,1 i.J.M, augmente la production de sAPP-alpha de 107% par rapport au contrôle non traité. Ce résultat était attendu et valide l'étude. L'OA DP 10 testé à 0,01%, stimule également la production de sAPP-alpha par les cellules neuronales après 6h d'incubation (+41%), après 10h d'incubation (+87%) et après 24h d'incubation (+107%).
L'OA DP10 présente donc la même efficacité que le témoin positif PACAP pour stimuler la production de sAPP-alpha par les neurones humains, facteur connu pour stimuler la survie des neurones. 6.4. Effet des radicaux libres sur les neurones Des essais identiques à ceux décrits au point 6.1 ont été menés avec du peroxyde d'hydrogène H202. Le peroxyde d'hydrogène est un puissant générateur de radicaux libres. L'objectif de ce test était de déterminer l'effet des radicaux libres sur les neurones et de vérifier si l'effet neuroprotecteur de l'OA DP10 est lié à l'origine de l'agression ou si cette action est généralisable à tout type d'agression. Brièvement, l'oligolaginate de degré de polymérisation moyen de 10 (OA DP10), sous forme de poudre, a été solubilisé à 1% en masse dans de l'eau. Cette solution a ensuite été utilisée afin d'avoir une concentration finale en poudre de 0,01%. Les neurones sont des neurones corticaux embryonnaires provenant de foetus de rats (Pillot et al. Journal of neurochemistry; 1999;72(1):230-7; Kriem et al FASEB journal Biology 2005;19(1):85-7; Garcia et al. J Neurosci. 2010; 30(22):7516-27). Les cellules ont été placées dans des récipients en plastique enduits de polyornithine avant d'être mises en culture dans un milieu chimiquement défini et complété par des hormones, des protéines et des sels. Les cultures ont été maintenues à 35°C dans une atmosphère humidifiée de CO2 à 5%. La population corticale a été déterminée pour être au moins de 97% de neurones, par immunomarquage. Le véhicule utilisé est de l'eau stérile. Les expériences ont été réalisées dans des plaques de 48 puits. Les neurones corticaux primaires ont été incubés avec un véhicule (eau) ou des concentrations d'OA DP10 de 0,01% et en l'absence ou en présence de peroxyde d'hydrogène à 0,25mM. Les neurones sont ensuite récupérés, testés au sel de methyltetrazolium (MU) (Garcia et al. J Neurosci. 2010; 30(22):7516-27; Desbene et al., 2012). D'après les résultats, le peroxyde d'hydrogène seul réduit la viabilité des neurones d'environ 70%. Les neurones sont donc particulièrement sensibles à la formation de radicaux libres qui entrainent la mort des cellules.
L'ajout d'OADP10 permet de protéger les neurones des effets létaux des radicaux libres en réduisant la mortalité des cellules. Plus exactement, l'administration d'OA DP10 conjointement au peroxyde d'hydrogène permet d'améliorer la viabilité des cellules de 21% par rapport à la condition traitée seulement au peroxyde d'hydrogène. L'administration préventive d'OA DP10 6h avant l'ajout de peroxyde d'hydrogène permet d'améliorer la viabilité de 42% par rapport à la condition traitée à l'eau + peroxyde d'hydrogène. Ces résultats concordent avec ceux obtenus avec l'oligomère A131-42 et démontrent l'efficacité des oligoalginates selon l'invention pour protéger les neurones quelle que soit la source d'agression. 6.5. Exemple d'une composition cosmétique anti-âge et neuroprotectrice comprenant de l'OA DP10. Phase Nom INCI % A Cetearyl Isononanoate 6,00 A Phenoxyethanol 0,80 B Aqua 88,83 B Chlorphenesin 0,27 C Xanthan Gum 0,30 C Propylene Glycol 0,50 D Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate 0,40 Crosspolymer E Sodium Polyacrylate 0,50 F Polyacrylate-13 & Polyisobutene & 0,10 Polysorbate 20 & Aqua & Sorbitan Isostea rate G Solution de OA DP10 a 5% dans l'eau 1,50 G Aqua & Sodium Hydroxide (soude) 0,80 7. Conclusions Les résultats obtenus démontrent clairement que les oligoalginates et en particulier l'OA DP10 possèdent d'excellentes propriétés de neuroprotection, que ce soit contre un neurotoxique tel l'oligomère A131-42 ou les radicaux libres. Comme démontré au paragraphe 6.2, les neurones lorsqu'ils subissent une agression libèrent des substances délétères pour la survie des fibroblastes humains. En effet, le milieu de culture des neurones stressés par les fragments solubles de la protéine APP provoque une baisse de viabilité des fibroblastes du derme humain. La co-administration de l'OA DP10 avec l'oligomère A131-42 neurotoxique ou le peroxyde d'hydrogène générateur de radicaux libres sur les neurones démontre que l'OA DP10 permet de protéger les neurones efficacement de l'apoptose (voir respectivement les paragraphes 6.1 et 6.4).
Comme démontré au paragraphe 6.3 de la demande, l'action neuroprotectrice de l'OA DP10 passe par la stimulation de la synthèse de la protéine sAPP-alpha par les neurones, cette protéine ayant un rôle anti-apoptotique. En protégeant les neurones, l'OA DP10 a indirectement un effet protecteur sur les cellules cutanées.
L'OA DP10 permet donc de prévenir ou à tout le moins limiter le vieillissement cutané neuro-induit, grâce à ses propriétés de neuro-protection.

Claims (2)

  1. REVENDICATIONS1. Composition cosmétique neuro-protectrice comprenant de l'oligoalginate et au moins un milieu cosmétiquement acceptable pour prévenir et/ou lutter contre le vieillissement de la peau, ladite composition étant susceptible de stimuler la production de sAPP-alpha par les neurones.
  2. 2. Composition selon la revendication 1 dans laquelle ledit oligoalginate présente un degré de polymérisation compris entre 2 et 20, de manière davantage préférée entre 7 et 11 et de manière préférée entre toutes un degré de polymérisation moyen de 10.3. 4. 5. 6. Composition selon la revendication 1 ou 2 caractérisée en ce qu'elle comprend ledit oligoalginate en quantité inférieure ou égale à 5% par rapport à la masse totale de la composition. Composition selon la revendication 3 caractérisée en ce qu'elle comprend ledit oligoalginate en quantité inférieure ou égale à 1% par rapport à la masse totale de la composition. Composition selon la revendication 4 caractérisée en ce que ledit oligoalginate est présent en quantité inférieure ou égale à 0,1% par rapport à la masse totale de la composition. Composition selon l'une des revendications 1 à 5 se présentant sous une forme choisie parmi un gel, une solution, une crème, une pommade, un lait, un beurre, une émulsion huile dans eau, une émulsion eau dans huile, une émulsion triple. 7. Composition selon l'une des revendications 1 à 6 comprenant en outre au moins un additif choisi parmi les parfums, les colorants, les conservateurs, leshuiles essentielles de végétaux, les extraits végétaux, de fruits ou d'algues. 8. Complément alimentaire neuro-protecteur à visée cosmétique comprenant un oligoalginate et au moins un additif. 9. Complément selon la revendication 8 se présentant sous la forme d'une gélule, d'une capsule, d'un comprimé, d'une dragée, de granules ou d'une poudre. 10. Complément selon la revendication 8 ou 9 dans lequel ledit additif est choisi parmi les correcteurs de pH, les colorants, les agents de charge, les lubrifiants, les agents d'enrobage, les arômes et leur combinaison. 11. Utilisation d'un oligoalginate pour la prévention et/ou la réduction des signes du vieillissement cutané grâce à la protection des neurones.15
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