WO1982003396A1 - Nouveaux composes de glycosides de cundurango, procede de preparation, leur utilisation en tant qu'agent antitumoral et composition les contenant - Google Patents

Nouveaux composes de glycosides de cundurango, procede de preparation, leur utilisation en tant qu'agent antitumoral et composition les contenant Download PDF

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WO1982003396A1
WO1982003396A1 PCT/JP1982/000088 JP8200088W WO8203396A1 WO 1982003396 A1 WO1982003396 A1 WO 1982003396A1 JP 8200088 W JP8200088 W JP 8200088W WO 8203396 A1 WO8203396 A1 WO 8203396A1
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column
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performance liquid
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PCT/JP1982/000088
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English (en)
French (fr)
Inventor
Kogyo Kk Zenyaku
Original Assignee
Mitsuhashi Hiroshi
Mizuno Denichi
Hayashi Koji
Abe Shigeru
Takase Muneaki
Narita Toshiharu
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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J17/005—Glycosides

Definitions

  • the present invention relates to a novel compound obtained from a potato family Condslango (Marsde ⁇ a cundurango Reichenbac fi I.), represented by the following general formula [I], a method for producing the same, and a method for producing the same.
  • the present invention relates to an antitumor agent and a composition containing the same.
  • condlango glycoside E H, condunglan glycoside E 02 when R is R i and R 2, respectively.
  • Condullango is a small potato shrub that grows naturally in the mountains of northwestern South America, and its bark is generally used in the form of a stream extract as an aromatic bitter stomach for indigestion and anorexia. (The 9th revised edition of the Japanese Pharmacopoeia).
  • Conzlango bark is a component of Conzlango bark
  • This bark may be a commercially available bark, but it is preferable that the bark be sufficiently dried and minced after collection.
  • organic solvent lower alcohols such as methanol, ethanol, and isopronol are used, but methanol is preferred.
  • defatting may be performed with aliphatic hydrocarbons such as pentane, hexane, heptane, rig mouth oil, petroleum ether, and the like. It is preferable to use double volume (VZW) of hexane.
  • VZW double volume
  • One specific example of the extraction operation is as follows. Then, the solution is filtered to obtain a solution. The residue is repeatedly subjected to a similar extraction procedure, all the liquids are combined, concentrated under reduced pressure, and dried to obtain an extract.
  • the warm extraction is performed by a bar-corrosion method, which is preferably performed at 4-6 o'clock on a water bath and at a water bath temperature of 35-55 * 0 with a reflux cooling S3 vessel attached.
  • the solvent usage is 2 to 3 times (VZW) the amount of Conlango.
  • the extraction residue is preferably extracted at least 0.7 to 0.8 times the amount of the initial solvent (V ⁇ V) at least three times.
  • O PI Separation can be performed by cultivation, centrifugation, etc., but commercially available superabsorbents such as radiolite (manufactured by Showa Chemical Industry Co., Ltd.), cellite (manufactured by Wakoro Chemical Industry Co., Ltd.), Even better results can be obtained by performing suction iP appointment using an iBRACEL (John ⁇ manufactured by Manville) or the like.
  • radiolite manufactured by Showa Chemical Industry Co., Ltd.
  • cellite manufactured by Wakoro Chemical Industry Co., Ltd.
  • iBRACEL John ⁇ manufactured by Manville
  • Decompression is carried out by a usual method, for example, using a vacuum stirrer or a hollow pump.
  • the extract obtained in the second operation is applied to an open column.
  • Silica gel, cellulose, fluoridyl, etc. are used as column fillers.
  • the elution conditions are determined as appropriate, but the following operations are preferred.
  • the following solvent extraction operation may be performed instead of the open column method. That is, the extraction briquettes obtained by concentrating to dryness in the second operation are dissolved in chlorinated hydrocarbons other than carbon tetrachloride, such as black mouth form and dichloromethane, in the minimum amount that completely dissolves them.
  • chlorinated hydrocarbons other than carbon tetrachloride such as black mouth form and dichloromethane
  • VZV 2 to 4 times
  • pentane, ⁇ -hexane, heptane and other aliphatic hydrocarbon millet or extract is directly ⁇ to 3 times (V / W).
  • aromatic hydrocarbons such as carbon chloride or toluene, benzene, etc., and thoroughly shake the mixture. After standing for several hours to 10 hours, the insoluble portion is collected.
  • This insoluble part is returned to a similar operation. It is preferable to repeat the extraction two or three times at 0.4-0.6 times the initial solvent usage ⁇ VZV).
  • the insoluble portion thus obtained is sufficiently dried under ridge pressure and then pulverized to obtain a brown powdery extract.
  • the insoluble portion may be fractionated by a decantation method, suction conditions, and centrifugation.
  • the extract obtained in the third operation is subjected to high performance liquid chromatography (hereinafter referred to as HPLC) to fractionate and isolate the compound of the present invention.
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • the extract obtained in the third operation is dissolved in a minimum amount of black-mouthed form that completely dissolves the solution, and n-hexane is added to the solution until the solution does not become cloudy.
  • n-hexane is added to the solution until the solution does not become cloudy.
  • beaks corresponding to Fr-1 fractions of the chart (Fig. 1 in the attached drawing) obtained in advance in the preliminary test were determined in advance.
  • the fraction selected as an indicator is collected, and S is dried to dryness to obtain an extract.
  • the obtained extract is subjected to reverse phase HPLC. While confirming the elution peak with the detector, it corresponded to Fr-2 and Fr-13 fractions of the chart (Fig. 2 in the attached drawing) obtained in advance in the preliminary test.
  • the fractions selected using the beak as an indicator are each fractionated, concentrated and dried to obtain a white powdery condlango glycoside Era and a condlango glycoside of the present invention. If necessary, purify again by reverse-phase HPLC.
  • the antitumor effect of the compound of the present invention was determined by the following screening test. Confirmed by experiments.
  • mice were used per group in the group to which the compound of the present invention was administered, and ten mice were used per group in the control group.
  • mice 6-week-old male ddY mice (weight: 28-30 g).
  • the ⁇ species were transplanted into the abdominal cavity of a mouse, and on the 7th day after sufficient proliferation, the cells were collected. 2.0 ⁇ 10 S cells were subcutaneously implanted subcutaneously into the groin of the experimental mouse to obtain a solid tumor. At 24 o'clock after transplantation, the compound of the present invention was dissolved in physiological saline permanently and administered intraperitoneally.
  • the dosing volume was adjusted to 0.2 per animal and the administration was performed once a day for 10 consecutive days.
  • the control group received only saline.
  • the tumor was excised 30 times after the transplantation, and the average tumor weight ( ⁇ ) of the compound-administered group of the present invention and the average tumor weight (C) of the control group were measured, and TZC (96) was calculated.
  • the results were as shown in the table below.
  • the acute toxicity of the compound of the present invention is as follows.
  • the compound of the present invention was administered intraperitoneally to d (JY male mice (body weight: 21 to 25 g)) at the age of 5 weeks, and after 5 days from the administration, the mice were treated for eradication, death, and weight change. One had been observed, the result of calculation of the LD so values, co Nzura down deferred.
  • Totai E 01 is 75 mg / kg
  • Totai E 02 was Tsu 103 MGZ kg der.
  • the compound of the present invention When used as a solid preparation for oral administration, it can be made into tablets, granules, powders, capsules and the like, and saccharides and cells commonly used in preparations can be used. Additives such as excipients, such as a loose compound, starch paste, binders, such as methylcellulose, extenders, and disintegrants may be included.
  • excipients such as a loose compound, starch paste, binders, such as methylcellulose, extenders, and disintegrants
  • binders such as methylcellulose, extenders, and disintegrants
  • disintegrants When used as a liquid preparation for veterinary use, it may be in the form of a liquid for internal use, suspension, emulsion, syrup, etc. It may be in the form of a dry product that is redissolved before 1U.
  • E-saccharide can be used in the range of 0.54 to 6.00 ag / kg / day, and conslango glycoside E can be used in the range of 0.54 to 8.10 ag / kg / day.
  • the dose may be appropriately increased depending on the symptoms, age, dosage form, and the like.
  • Injections may be in the form of an aqueous solution, a suspending agent, an oil column or a water-soluble emulsion, but usually dissolve or become turbid in an aqueous medium such as sterile water or physiological saline. It is manufactured by II. If necessary, a solubilizer, a stabilizing agent, a preservative, a tonicity agent and the like used in one step may be added.
  • the injection solution obtained in this way is administered by a suitable method such as injection, intramuscular injection, or subcutaneous injection.
  • a suitable method such as injection, intramuscular injection, or subcutaneous injection.
  • Condlango glycoside E o! Is 0.18 to 2.00 ig / kg / day
  • Condylango glycoside E. 2 can be used in the range of 0.1'3 to 2.7 sgZ kg per day.
  • the dose at this time may be appropriately increased depending on the symptoms, age, dosage form, administration method, and the like.
  • Fig. 1 shows a chart obtained when the extracted ⁇ obtained in the third operation was subjected to a phase-based HPLC
  • Fig. 2 shows an extract of the Fr — fraction extracted from a reversed-phase system
  • Fig. 3 shows a chart obtained when subjected to HPLC.
  • Fig. 3 shows a chart obtained when the extract of Fr-2 fraction was subjected to reverse HPLC.
  • Fig. 4 shows a chart obtained. The figure shows a chart obtained when the extract of Fr-3 fraction was subjected to reversed-phase HPLC.
  • the extract 69 obtained by the above open column was dissolved in 50 W of black mouth form, and the maximum amount of n-hexane that did not cause whitening was added to the solution.
  • HPLC Waterstar Systems 500, packing material: Prepack 500-silica (Waters)
  • OMPI Elution was performed using a volume ratio of 6: 1: 1), a flow rate of 200 W / min, and a detection of RI (1/10 ⁇ 10- * RIUFS). While confirming the peak of the elution with the detector, the eluate within the range of 15 minutes, which was selected using the beak corresponding to Fr-1 fraction in Fig. 1 of the attached drawing as an index, was collected. The extract was concentrated and dried under reduced pressure at 45 to give a white powder extract 1.19.
  • the obtained extract was dissolved in an aqueous solution of 5096 (V / V) acetate in 2013, and each of them was separated by HPLC for semi-preparation.
  • each of the obtained extraction catalysts was subjected to the following purification process to obtain a target compound.
  • V 3450 (Broad), 1745 1705
  • Acetyl group 169.9 (Calponyl carbon)
  • Cinnamoyl group 118.7, 128.7 (2 overlaps)
  • V 3450 (alloy), 1745, 1710
  • Acetyl group 169.8 (force luponyl carbon)
  • Cinnamoyl group 117.9, 128.7 (2 overlaps)
  • the condlango glycoside E (H and condlango glycoside ⁇ 2) of the present invention is a completely new compound that has not been known before, and the production thereof. According to the invention of the method,

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Description

明 翻 新規コ ンズラ ンゴ配糖体化合物 、 そ の製谆方法、 それか ら なる抗腫獏剤及びそれを含む耝成物 技術分野
本発明 はガガイ モ科植物 コ ンズラ ンゴ （ M a r s d e π ί a cundu rango R e i chenbac f i I . ) よ り 得 ら れ下記一般式 [ I ] で示さ れる新規化合物 、 そ の製造方法、 それか ら な る抗腫瘍剤及びそれを含む钽成物 に 関する 。
Figure imgf000003_0001
[ I J
O.MPI wo
Figure imgf000004_0001
上記一般式 [ I 〗 の化合物は Rがそれぞれ' R i 、 R 2 で ある と きに コ ンズラ ンゴ配糖体 E (H 、 コ ンズラ ンゴ配糖体 E 02 と呼ぷ。
背景技術
コ ンズラ ンゴは南米西北部の山間地に自生するガガイ モ 科のややつ る性の低木で 、 その樹皮は一般に流エキスの形 で消化不良、 食欲不振時の芳香性苦味健胃剤 と し て用 い ら れている （第 9改正 日本薬局方解説書 ） 。
コ ンズラ ンゴ樹皮の成分 と し て は コ ンズラ ンゴゲニ ン
( condu rangogen i n ) 一 A 、 コ ンズラ ンゴゲニ ン
( condu rangogen I n ) 一 C 、 その他多数のプ レグナン型化 合物 、 それ等のエステル及び配糖体が含ま れ、 その抽出 、 単離、 構造等に 関する報告が近年 、 例えば下記の様な文献 にみ られるが 、 その詳細 について は依然不明な点が多い。
R . T schesGhe等荖 ： T etrahedron 21 , 1777頁 （ 1965 年 ） ； 21. 1797頁 ( 1965年 ) ； 23_, 1461頁 ( 1967年 .） ； 24., 4359頁 （ 1968年 ）
M . P a ί I er 等著 ： M onatshefte fur C hec i e 106 , 37頁 （ 1975年 ）
三樣博等著 ： C iiem. P harm. B ul l 16., 2522頁 （ 1968年 ） 本発明者等は研究の結果、 抗腫瘍活性を有する前記一般 式 [ I ] で示さ れる新規化合物を見出 し 、 本発玥を完成 し 発明の開示
本発明に おいて コ ンズラ ンゴはその樹皮を用いる のが好
0 PI ま しい。 この樹皮は市販のものでよいが採取後充分乾燥 し 細切 したちのが好ま しい。
抽出钧の製造の本質上、 溶媒の選択や使用頭位は絶対的 なちのでな < 、 適宜変更できるが、 好ま しい製造法は以下 の通 り である
( 第 1 操作〉
細切 した コ ンズランゴを有檨溶媒で抽出 し、 抽出液を減 圧下濃縮乾固する。.有機溶媒と してはメ タ ノ ール、 ェ タ ノ ール、 イ ソプロノ ノ ール等の低級アルコ ールが用 い られる が、 メ タ ノ ールが好ま しい。
なお 、 抽出前にペンタ ン、 へキサン、 へブタ ン、 リ グ口 イ ン、 石油ェ一テル等の脂肪族炭化水素で脱脂しても よい この前処理はコ ンズラ ンゴに対 し て 4 / 倍量 （ V Z W ) のへキサンを用いて行う のが好ま し い。
抽出操作の一具体例を示す と 、 まず 、 室溫下 ^時藺〜数 十時圜静置にて抽出する。 次いで沪過 して沪液を得る 。 残 渣を周様な抽出沪過に繰返 し付 し 、 全 ' 液を合わせ、 弒圧 下濃缩乾固 して抽出物を得る
冷浸抽出で行う のが一般的であるが、 .抽出時圏を短縮す る為、 加温 してちよい。 加温抽出 は還流冷 S3器を付し 、 水 浴上で 4 〜 6 時藺、 水浴溫度 35〜 55 *0で行う のが好ま しい バー コ レーシ ヨ ン法でち ょい α
溶媒使 ¾量はコ ンズラ ンゴの 2 〜 3 倍量 ( V Z W ) であ る。 抽出残渣は最初の溶媒使用量の 0. 7〜 0. 8倍量 （ V Ζ V ) ずつで 3 回以上繰返 し抽出するのが好ま しい。
O PI 分離は沪 戶遏、 遠心分離等で行 っ てちょいが 、 市販の ^過助剤、 例えばラジオ ラ イ 卜 （ 昭和化学工業 社製 〉 、 セ ラィ 卜 （ 和光耗薬工業㈱社製 ） 、 フ ア イブラセル （ ジ ョ ンス ♦ マン ビル社製 》 等を使用 し て吸引 iP適を行う と更に 良い結果が得 ら れる 。
減圧は通常の方法、 例えぱァス ビ レー タ ー、 冥空ポ ンプ 等を用いて行う 。
抽出容器は内面をグラスライ ニ ング したもの 、 ホー ロ ー 引き し た もの又はステ ン レス製のものを用いる
( 第 2操作 ）
第 1 操作で得 ら れた抽出物に ク ロ 口 ホルム 、 ジ ク ロ ロ メ タ ン等の四塩化炭素以外の塩素化炭化水素を加え、 激 し く 振盪 して不溶部を除去する 。 不溶部 は同様な操作に操返 し 付す。 全抽出液を合わせてその ま ま 、 又は吸引沪過後に減 圧下 S縮乾固する 。 使用溶媒量は第 1 操作！：·得られた抽出 物 に対 し て 2〜 6倍量 （ V ZW〉 である 。 各不溶部は最初 の使用溶媒量の 0.2〜 0.4倍量 （ V Z V ) ずつで 4〜 5 回 繰返 し操作するのが好ま しい。
( 第 3操作 ）
第 2操作で得 ら れた抽出液を オープン カ ラムに付す操作 である。 カ ラム充塡剤 と してはシ リ カ ゲル、 セルロ ース 、 フ ロ リ ジル等を用 いる 。 溶出条件は適宜決め られるが 、 以 下の操作が好ま しい。
抽出液の 0.2〜 0.4倍量 （ WZ V ) の シ リ カ ゲルを乾式 法で充填 し た カ ラ ムに抽出液を注ぎ、 ま ず第 2搡作で用 い
-BU E U
O PI たの と同一の溶媒で緑褐色バン ドを溶出除去させる。 つ い で、 第 1 操作 と第 2操作で用いたの と同一の溶媒の混液で 溶出 して得 られる溶出液を減圧下濃縮乾固後粉砕 して褐色 粉末状の抽出钧を得る。
溶出は ク ロ 口 ホルムで緑褐色バン ドを除いた後に抽出液 の 1·5〜 2 · 5倍量 （ V Ζ V ) のメ タ ノ ール · ク ロ 口 ホルム 混液 （容畺比 = 10： 90〜 30： 70) を用いて行う のが好ま し い。
又、 オープンカ ラム法に代え、 以下の溶媒抽出操作を行 つ てもよい。 即ち 、 第 2操作で濃縮乾固 して得 ら れた抽出 勒を完全に溶解する最少量の ク ロ 口 ホルム、 ジク ロ ロ メ タ ン等の四塩化炭素以外の塩素化炭化水素に溶解 し、 その生 成溶液に 2〜 4倍量 （ VZ V ) のペンタ ン、 η-へキサン、 ヘプタ ン等の脂肪族炭化水粟又は抽出物に直接 Ί 〜 3倍量 ( V / W ) の四塩化炭素又は ト ルエン、 ベ ンゼン等の芳香 族炭化水素を加えて充分撩泮 し 、 数時間〜致十時圜静置後 に不溶部を分取する。
この不溶部は周様な操作に操 り返 し ^す。 最初の溶媒使 用量の 0.4〜 0.6倍量 < VZ V ) ずつで 2〜 3回操 り返 し 抽出するのが好ま しい。 かく し て得ら れた不溶部を稜圧下 で充分乾燥後に粉砕 して褐色粉末状の抽出物を得る。
不溶部の分取はデカ ンテー シ ヨ ン法、 吸引沪遏、 遠心分 離で行う と よい。
本発钥の製造方法全体のコ ス 卜 を下げ、 或いは操作を容 易にするた め に 、 コ ンズラ ンゴを まずァセ 卜 ン ， メ チルェ チルケ 卜 ン等の脂肪族ケ 卜 ン 、 it酸メ チル · 酢酸ェチル · 群酸ブチル等の低极脂肪族エス テル、 ジェチルエ ーテル ♦ テ 卜 ラ ヒ ドロ フラ ン ♦ ジ 才キサ ン等のエーテルで抽出 し 、 その-抽出液を上記第 3 操作に付 して も.よい。 この場合の抽 出は上記第 1 操作と周様 にな し得る。
( 第 4 操作）
第 3 操作で得 られた抽出物を高速液体ク ロマ 卜 グラフ法 ( 以後 H P L C とする ） に付 し 、 本発明の化合物を分画、 単離する。 まず第 3 操作で得 ら れた抽出物 を完全 に溶解す る最少量の ク ロ 口 ホルムで溶解 し 、 こ れに n— へキサンを 液が 白濁 しない程度まで加え 、 得 ら れた試料溶液を頭相系 の H P L C を用い n— へ キサン ♦ ク ロ 口 ホルム · メ タ ノ ー ル混液 （ 容量比 6 ： 1 ： 1 ) を溶離液と して溶出する 。 検出器で溶出 ビー クを確認 し なが ら 、 あ らかじめ予備試験 で得 られたチ ャ ー ト （ 添付図面の第 1 図 ） の F r — 1 画分 に 該当す る ビ ー ク を指標 と し て選択 し た画分を分取 し 、 S 縮乾固 し て抽出物を得る 。
次いで得 ら れた抽出物を逆相系の H P L C に付す 。 検出 器で溶出 ピー ク を確認 しなが ら 、 あ ら か じめ予備試験で得 られたチ ヤ 一 卜 （ 添付図面の第 2 図 ） の F r — 2 及び F r 一 3 画分に該当する ビー ク を指標 と し て選択 した画分を各 々分取後濃縮乾固 し、 白色粉末状の本発明の コ ンズラ ンゴ 配糖体 E ra 及びコ ンズラ ンゴ配糖体 を得る 。 なお所望 に応じて再度逆相系 H P L Cで精製 し てちょい。
本発明の化合物の抗腫瘍作用 は下記のス ク リ 一 二 ング試 験によ り確認 し た 。
抗腫瘼性の測定にはエ ー リ ヅ ヒ ♦ カ ルシノ ー マ
( E hr I i ch carcino a) 癌種を用い、 皮下'.結節型腫癢と し 本発明の化合物投与群では一群 7 匹、 対照群では一群 10 匹のマウスを用いた。
試 験 法
実験動物 は 6週令の ddY系雄マ ウス （ 体重 28〜 30g ) を 用いた。
瘥種をマウスの腹腔 に移植 し、 充分増殖 した 7 日 目 に この細胞を採取 し 、 2.0X 10S 個を実験マウスのそけい部 皮下に移植 し固形腫瘍と した 。 移植後 24時藺目 よ り本発明 の化合物を生理食塩永に溶解し 、 腹腔内に投与した 。
投与容量は一匹当 り Ί 回 0.2 に調整 し 、 1 日 Ί 回 10日 ί連耪投与を行っ た。 対照群に は生理食塩水のみを投与 し
？ 。
移植後 30曰 目 に腫瘼を摘出 し 、 本発明の化合物投与群の 平均腫瘍重量 （ Τ ) 、 及び対照群の平均腫瘍重量 （ C ) を 測定 し、 T Z C ( 96 ) を算出 した 。 の結果は下記表の通 り であ っ た 。
じ
OMPI ンズラ ンゴ配糖体化合物の抗腫瘍作用
Figure imgf000011_0001
次に 、 本発明 の化合物の急性毒性 は下記の通 り で あ る 。 本発明の化合物 を 5 週令の d(JY系雄マ ウ ス （ 体重 21〜 25g ) に腹腔内投与 を行い 、 投与後 5 日 閻 に わ た り一殺症状 、 死 亡例及び体重推移 につ いて 観察 し 、 L D so 値を算出 し た 結 果、 コ ンズラ ン ゴ配.糖体 E 01 は 75mg/ kg、 コ ンズラ ンゴ配 糖体 E 02 は 103 mgz kgであ っ た 。
本発明 の化合物 を経口投与の際、 固形製剤 と し て 用 い る 場合 は錠剤 、 穎粒剤 、 散剤 、 カ ブセル剤等 に する こ と がで き 、 製剤上一般に使用 さ れる糖類、 セ ル ロ ー ス 覉合物 の よ う な ¾形剤 、 で んぷんペー ス 卜 、 メ チルセル ロ ース の よ う な結合剤 、 増量剤 、 崩壊剤等の添加物 を包含 し て も よ い 。 又轻ロ用 液体製剤 と し て 用 いる場合 は 、 内用 水剤 、 懸濁 液 剤、 乳剤 、 シ ロ ッ プ剤 等の形態で あ っ て も 良 く 、 又使用 す ひ MPI 1U る前に再溶解させる乾燥生成 ¾の形態であ っ てもよい。
本発明の化合物を成人に絰ロ投与する場合コ ンズランゴ
E糖体 Ε οι は 1 日 0.54 〜 6.00 ag/ kg, コ ンズランゴ配 糖体 E は Ί 日 0.54 〜 8.10 agZ kgの範囲で两いるこ と ができる 。 この際、 用量は症状、 年令、 剤型等によ り適宜 増滅される。
注 ®の場合は水溶液、 懸渴剤、 油柱又は水溶性乳剤の形 態であ っ てちょ いが、 通常截菌水又は生理食塩液など水性 铵体媒体に溶辟又は戀濁する こ と によ り II製される。 必要 に応じて一股に使用 される溶解剤 、 安定化剤、 保存剤、 等 張化剤など加えても良い。
この よ う に し て得 ら れた注射液剤は錚猇注射、 筋肉注射、 皮下注射等適当な方法で投与される。 成人に非轻ロ投与す る場合、 コ ンズラ ンゴ配糖体 E o! は Ί 日 0.18 〜 2.00 ig / kg, ロ ンズラ ンゴ配糖体 E。2 は 1 日 0.1'3 〜 2·7 sgZ kgの範囲で用 いる こ とができる。 この際の用量は、 症状、 年令、 剤型、 投与方式等に よ り適宜増鎵される。
図面の簡単な説明
第 1 図 は第 3操作で得 られた抽出 ¾を展相系の H P L C に付した時に得ら れる チャ ー ト を示す図、 第 2図は F r — 画分の抽出物を逆相系の H P L Cに付 した時に得られる チヤ一 卜 を示す図、 第 3図は F r — 2画分の抽出物を逆招 系の H P L Cに付 した時.に得られるチャ ー ト を示す図、 第 4図は F r — 3画分の抽出物を逆相系の H P L Cに付した 時に得 られるチヤ一 卜 を示す図である。
OMPI 発明を実施するための最良の形態
以下、 実施例 に よ り更に具体的に説明する。
実施例
钿切 したコ ンズラ ンゴ樹皮 10kgにメ タ ノ ール 20 jf を加え、 至温下一夜静置 して冷浸油出を行っ た。 静置後こ れを沪過 し 、 残渣はメ タ ノ ール 15 J? ずつで周様に 3 回抽出 ^遏 し た 。 全 液を合わせ、 減圧下 45 で濃縮乾固 して抽出物 1.4kg を得た 。
これを分液ロ ー ト に移 し 、 ク ロ 口 ホ ^ム 3 を加えて激 し く 振盪 した。 静置後ク ロ 口 ホルム抽出液を得、 不溶部は ク ロ 口 ホルム 1 J? ずつで同様に 3 回抽出 し た 。 全抽出液を 集め、 カ ラ ム ク ロ マ 卜 用 シ リ カ ゲル （ ヮ コ 一ゲル C一 200 和光耗薬工業㈱社製 〕 2 kgを乾式法で充縝 し たカ ラム ( 内 径 X長さ - 17cinx 65cm) に吸着させた後ク ロ 口 ホルム 10 、 次いでメ タ ノ ール * ク ロ 口 ホルム混液 （ 容量比 - 20： 80 ) 14 J? で煩次溶出 し た 。. メ タ ノ ール · ク ロ 口 ホルム混液溶出 部を滅圧下 451；で S縮乾固後粉砕 して褐色粉末状の抽出物 323gを得た 0
上記オープン カ ラム に よ り分取 した抽出物 6 9 を ク ロ 口 ホルム 50Wに溶解 し、 こ れに n— へキサンを液が白溻 しな い最大量を加え 、 生成溶液を大量分取用 の H P L C ( ゥ ォ 一タ ーズ社製システム 500、 充塡剤 ： プ レパ ッ ク 500-シ リ 力 （ ウォー タ ーズ社製 ） 全多孔性シ リ カ ゲル、 球状、 表面 積 = 320 τη2 / g 、 カ ラ ム ： 内径 X 長さ = 57ΙΒΠΙΧ 300ΙΒΠ 、 溶 難液 ： η —へキサン · ク ロ 口 ホルム · メ タ ノ ール混液 （ 容
OMPI 量比 = 6 : 1 : 1 ) 、 流速 ： 200W /分、 検出 ： R I ( 1 / 10x 10-* R I U F S ) ) を用いて溶出 した。 検出器で溶 出 ピー クを確認 しなが ら 、 添付図面第 1 図の F r — 1 画分 に該当する ビークを指標と して選択 した 15分間の範囲の溶 出液を分取後、 減圧下 45 で濃縮乾固 して 白色粉末状の抽 出物 1.19 を得た。
得 られた抽出物を 2013の 5096 ( V / V ) ァセ 卜二 ト リ ル 水溶液に溶解 し、 その 1 ずつをセミ分取用 の H P L C
〔 充琪剤 ： リ コ 口 ソープ （ L ichrosorb ) R P— 18 ( メ ル ク社製 10 81 ) 、 カ ラム ： 内径 X長さ - 21iBfflX 300fflia 、 溶 籤液 ： 5096 ( V Z V 》 ァセ 卜 二 卜 リ ル水溶液、 流速 ： 6
Z分、 圧 ： 60kg/ca2 、 検出 ： R I ( 32 10^ R I U F S ) 〕 を用いて溶出 した。 検出器で溶出 ビー クを確認 しな が ら 、 添付図面第 2 図の F r — 2画分に該当する ビー クを 指標と して選択 した 4分間及び F r — 3画分に該当するピ ー クを指標と して選択 し た 7分間の範囲の溶出液を各々分 取後集めて 、 滅圧下 40てで濕綰乾固 して 白色粉末 の抽出 物 105iB£i ( F r — 2画分 ） 及び 312iag ( F r — 3画分 ） を
W o
次いで得られた各々の抽出勅を以下の精製工程にかけ、 目 的とする化合物を得た。
(D F r — 2画分の抽出物を 0.5mgずっ と り 、 0.5a?
の 50% ( V / V ) ァセ 卜 二 卜 リ ル水溶液に溶解 し 、 分析用の H P し G 〔充塡剤 ： リ コ ロ ソ ーブ
( L ic rosorb ) R P— 18 (メ ルク社製 ) 、
_O PI d WIP0 一 カ ラム ： 内径 X長さ = 4 mx 250iDffl 、 溶離液 ： 50% ( V / V ) ァセ ト ニ ト リ ル水溶液、 流速 ： Ο.δ ノ 分、 圧力 ： 150 kg / en2 、 検出 ： U V 280 nm ( 0. 32 A U F S ) ) を用いて溶出 し た。 検出器で溶出 ビー ク を確認 しなが ら 、 添付図面第 3 図の 1 ピー ク に該 当する 3 分藺の範囲の溶出液を分取後集めて 、 減圧 下 40でで濃縮乾固 して 、 白色粉末状の本発明のコ ン ズラ ンゴ配糖体 E 02 72ngを得た 。 その理化学的性質は下記の通 りであ っ た 。
① 融点 ： 1ら 0〜 167 （ 白色非結晶性固体 〉
20
② 比旋光度 ： （ ひ 〕 D 一 25.4 ( メ タ ノ ル中 、 C 0.35 )
③ 元素分析値 C59 H86 (¾ 2 ¾ 0 と して 計算値 （ ％ ) C ； 59.08 、 H ； 7.56 実験値 ( 0ん ） C ： 59.24 、 H ； 7.52
④ 紫外吸収スぺ ク 卜 ル （ na) ス^ T(loge): 217 ( 4.03 ) 223 ( 3.99 )
280 ( 4.25 )
⑤ 赤外吸収スペ ク ト ル （ CB-1 )
KBr
V ： 3450 ( ブロ ー ド ） 、 1745 1705
max 、
1700 ( シ ョ ルダー 》 、 1630、 1250 1160、 1070 ( ブ ロ ー ド ） 、 865
⑥ — N M R スぺ ク トル （CDCi ( ΡΡΠΐ )
δ ： 1.21 ( 3 Η , ά J = 6 H z ) 1.24 ( 3 H 、 s 、 18M e ) URE
O.MPI vnpo ,* 1.27 ( 3 H 、 d , J = 6 H z )
1.31 < 3 H 、 s . 19 e )
1.34 ( 3 H 、 d . J = 6 H z )
1.91. ( 3 H 、 s A c )
2.17 ( 3 H 、 s . 21M e )
3.37 、 3.44 3.59 ( 各々 3 H s ) 5.01 ( 1 H d J = 10H Z )
5.41 ( 1 H 、 B )
5.84 ( 1 H 、 t 、 J 10H
6.47 ( 1 H 、 d 、 J 16H
7.77 ( 1 H d 、 J 16H
ェ 一 N M R スペ ク ト ル （ ビ リ ジ ン一 d5 ) ( ΡΡΠΐ ) ゲニン部 ： 79·2 ( 3 位の炭素 ）
85.5 ( 14位の炭素）
118.0 ( 6位の炭素 ）
139.5 ( 5 位の炭素 ）
ァセチル基 ： 169.9 ( カ ルポニル炭素 ）
シンナモイ ル基 ： 118.7、 128.7 ( 2本の重複）
129.3 ( 2 本の重複 ）
130.9、 134.6、 146.4
169.9 ( カルボニル炭素 》
糖部 ： 96.4、 101.7 ( 2 本の重複）
106.5 (各糖の "1 位の炭素 〉
0D F r — 3 画分の抽出物を 0.5 Big ずっ と り 、 0.5 a?の 5096 ( V / V ) ァセ 卜 二 卜 リ ル水溶液に溶薛 し、 ひ？ API ， ゝ \TIPO ①と周様な操作で H P L Cを用いて溶出 し た 。 検出器 で溶出 ビー クを確認 し なが ら 、 添付図面第 4 図の 1 ピ ー ク に該当する 4 分藺の籍囲の溶出液を分取後集めて 減圧下 40 で濃縮乾固 し て 、 白色粉末状の本発明の コ ンズラ ンゴ配糖体 Ew 197mg を得た。
その理化学的性質は下記の通 り であ っ た。
① 融点 ： 164〜 174で （ 白色非結晶性固体 ）
② 比旋光度 ： （ な 〕 + 69.8' ( メ タ ノ ール中 C
0.49 )
元素分析値 ： C66 H98 026 ♦ 2 H2 0 して
計算値 （ ％ ) ： C ； 59.00 、 H 7.65 実験値 （ ％ ) ： C ： 59.11 H ； 7.76
④ 紫外吸収スぺ ク 卜ル （ nm〉
CH^OH
λ υπ3υπ (log ε ) ： 218 ( 4.21 ) 224 ( 4.18 )
281 ( 4.38 )
⑤ 赤外吸収スぺク 卜 ル （ cnr1 )
KBr
V ： 3450 ( アロ ー ド ） 、 1745、 1710
max
1700 ( シ ョ ルダー 〉 、 1630、 1255 1160 1070 ( ブ ロ ー ド ） 、 865
⑥ N M R スぺ ク 卜 ル （CDC13 ) ( ppm )
δ 1.22 ( 6 H 、 （J J = 6 H
1.24 < 3 H 、 s 18 e )
1.26 ( 3 H 、 d J = 6 H
1.31 ( 3 H 、 s 19 e )
1.91 ( 3 H 、 s A c ) ひ? ΡΙ
U P0 2.17 ( 3 H s , 21M e )
3.37 ( 3 H s )
3.43 ( 6 H s )
3.59 ( 3 H s ) -
5.00 ( 1 H d 、 J 10H z )
5.41 ( 1 H B )
5.84 ( 1 H t 、 J 10H
6.47. ( H d 、 J 16H
7.77 ( 1 H d 、 J 16H
13
⑦ で一 一 N M R スペク トル （ ビ リ ジン一 （is ) ( pom ) »
ゲニン部 ： 79.2 ( 3 位の炭素 ）
85.5 ( 14位の炭素 ）
118.0 ( 6位の炭素 ） ' '
139.5 ( 5 位の炭素）
ァセチル基 ： 169.8 ( 力 ルポニル炭素 ）
シンナモイ ル基 ： 117.9、 128.7 ( 2本の重複 ）
129.2 (. 2本の重複）
130.9、 134.6、 146.4
167.0 ( カルボニル基 ）
糖部 ： 96.4、 100.3、 101.7 ( 2 本の重複〉
106.5 ( 各糖の 1 位の炭素 ）
産業上の利用可饈性
以上逑べたよ う に 、 本発明のコ ンズラ ンゴ配糖体 E (H 及 びコ ンズラ ンゴ配糖律 Ε θ2 は従来知 ら れていなか っ た全く 新 しい化合物であ り 、 又、 その製造方法の発明に よれば容
/ O PI ' 易 に入手 し得る原料生薬を用 い低級アルコ ールに よる抽出 四塩化炭素以外の塩素化炭化水素に よ る抽出 、 オ ープン力 ラム法、 及び髙速液体ク ロ マ 卜 グラ フ法に よ り顺次抽出単 離するこ と によ り 比蛟的簡単に且つ大量に製造するこ とが できる 。 更に 、 著 しい腫攝増殖阻止効果を示 し、 医薬 と し て優れた臨床的効果を期待するこ とができる。 更に又、 そ の組成物は薬学的に許容される希釈剤ない し担体と混合す るこ と に よ り容易に得ら れ且つ人体への投与も容易である
Ο, ΡΙ

Claims

請求の ^囲
1. 下記 殺式 [ I ] で示されるコ ンズ ンゴ配糖体化合 ·¾ 。
Figure imgf000020_0001
-CI3
( S中、 Rは
Figure imgf000020_0002
H OH
OMPI
糊^ U i^^ゆf 9るゆゆ ,-
2. 式 ：
Figure imgf000022_0001
Figure imgf000022_0002
H OH で示されるコ ンズラ ンゴ E糖体 E M をガガイ モ科植物コ ン ズランゴか ら製造する方法におい て 、
OMPI 次の ' 3 工程 ：
(υ低級アルコ ール可溶性部分を得る工程 ：
(2)四塩化炭素以外の塩素化炭化水素に可溶性部分を得るェ 程 ；
(3)シ リ カゲルカ ラムでメ タ ノ ール ♦ ク ロ 口 ホル厶混液溶出 部を得る工程 ：
に よ り 得 られるガガイ モ科植物 コ ンズラ ンゴの抽出物を次 の 3 工程に類次付するこ とか らなる方法。
(υ抽出物を頓相系高速液体ク ロ マ 卜 グラ フ法 （ ウ ォ ー タ ー ズ社製システ ム 500 ： 充塡剤 ： プ レパ ッ ク 500 —シ リ カ
( ウ ォ ー タ ーズ社製 ） 、 全多孔性シ リ カ ゲル、 球状、 表 面積 - 320 / g ； カ ラ ム ： 内径 X 長さ - 57mmx 300 mm 溶離剤 ： n — へキサン · ク ロ 口 ホルム ♦ メ タ ノ ール混液' ( 容量比 - 6 ： 1 ： 1 ) ； 流速 ： 200 Z分 ： 検出 ： R I ( 1Z 10X 10 R I U F S ) ) に付 して第 Ί 図 に示さ れる F r — 1 画分 に該当 する ピ ーク を指標 と し て選択さ れる画分を集める工程。
(2)抽出物を逆相系高速液体ク ロ マ 卜 グラ フ法 〔 充塡剤 ： リ コ ロ ソ ーブ R P— 18 ( メ ノレク社製 10 ffl 〉 ： カ ラム ： 内 径 X長さ = 21mu!X 300 mm : 溶離剤 ： 50% ( V / V ) ァ セ 卜 二 卜 リ ル水溶液 ； 流速 ： 6 Z分 ： 圧力 ： SOkgZoi2: 検出 ： R I ( 32X 10-6 R I U F S ) 〕 に付 して 、 第 2 図 に示さ れる F r — 3画分に該当する ピー ク を指標 と して 選択さ れる画分を集める工程。
(3)抽出 ¾を逆相系高速液体ク ロ マ 卜 グラフ 法 （ 充塡剤 ：
O.MPI 小 WIP0 21 リ コ 口 ソ ープ R P — 8 ( メ ルク社製 5 ) ： カ ラム ： 内径 X 長さ 4 BifflX 250 ffiffl : 溶艇剤 ： 50% ( V / V ) ァ セ ト ニ 卜 リ ル水溶液 ： 流速 ： 0.8κ? Z分 ： 圧力 ： 150 kg Ζαπ2: 検出 ： U V 280 ηπ ( 0.32 A U F S ) 〕 に付し て 第 4 図に示される Ί ビー ク に該当する画分を集める工程
3. 式 ：
Figure imgf000024_0001
O PI
、 W1PO a . で示される コ ンズラ ンゴ配糖体 Ε θ2 をガガイ モ科植物 コ ン ズラ ンゴから製造する方法におい て 、
次の 3工程 ：
Π)低扱 アルコ ール可溶性部分を得る工程 ：
(2)四塩化炭素以外の塩素化炭化水素に可溶性部分を得るェ 程 ：
(3)シ リ カ ゲルカ ラムでメ タ ノ ール ♦ ク ロ 口 ホルム混液溶出 部を得る工程 ：
に よ り 得 ら れるガガイ モ科植物 コ ンズラ ンゴの抽出 ¾を次 の 3 工程に顒次付する こ とか ら なる方法。
(1)抽出物を顆相系高速液体ク ロマ 卜 グラ フ法 （ ウ ォ ー タ ー ズ社製システム 500 ： 充填剤 ： プ レパ ヅ ク 500 — シ リ カ
( ウ ォ ー タ ーズ社製 ） 、 全多孔性シ リ カ ゲル、 球状、 表 面積 - 320 in2 / g ： カ ラム ： 内径 X長さ = 57Dimx 300 ram 溶離剤 ： n— へキサン · ク ロ 口 ホルム · メ タ ノ ール混液 ( 容量比 = 6 ： 1 ： 1 ) ： 流速 ： 200 /分 ： 検岀 ： R I < 1Z 10X 10 R I U F S ) 〕 に付 し て第 1 図 に示さ れる F r — 1 画分に該 する ピ ー ク を指標と し て選択さ れる画分を集める工程。
(2)抽出物を逆相系高速液体ク ロマ 卜 グラ フ法 〔 充填剤 ： リ コ ロ ソ ーブ R P— 18 ( メ ルク社製 10^ m ) ： カ ラム ： 内 径 X 長さ - 21 X 300 mm : 溶鱸剤 ： 50% ( V Z V ) ァセ 卜二 卜 リ ル水溶液 ： 流速 ： 6 Z分 ： 圧力 ： 60 Kgノ cm2; 検出 ： R I ( 32x 10"6 R I U F S ) 〕 に付 し て 、 第 2 図 に示される F r — 2画分に 該当する ビー クを指標 と し て 選択される画分を集める工程。 .
(3)抽出物を逆相系高速液体ク ロマ 卜 グラ フ法 （充旗剤 ： リ コ ロソ ーァ R P— 8 ( メ ルク社製 5 ^ ID ) ； カ ラム ： 内 径 X長さ - 4 BBix 250 aa： 溶錐剤 ： 50% ( V Z V ) ァセ 卜 二 卜 リ ル水溶液 ： 淀速 ： 分 ： 圧力 ： 150 Kg/ on2: 検出 ： U V 280 ηι ( 0,32 A U F S ) ) に付して第 3 図に示される 1 ビー ク に該当する画分を集める工程。
4. 請求の矩囲 1. に記軟の化合物か らなる抗腫瘼剤。
5. 薬学的に許容される希轵剤ない し担体 と混合された
抗腫瘻活性成分 と しての請求の範囲 1. に記載の化合物を 含む薬学的組成饬。
O. PI
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