UA73475C2 - Hepatitis b virus strain, induced by vaccine, nucleic acid isolated molecule coding mutant main surface antiigen of hepatitis b virus, vector and vector system for the preparation of polypeptide, a method for the preparation of polypeptide (variants), purified polypeptide (variants), oligonucleotide, a method for the preparation of antibodies (variants), antibody (variants), a method for the determination of chemical compound for treating the infection of hepatitis b strain infection, a composition, a method for the preparation of composition, a method of organism liquids screening for hepatitis b virus, a method of antibody use, vaccine against hepatitis - Google Patents
Hepatitis b virus strain, induced by vaccine, nucleic acid isolated molecule coding mutant main surface antiigen of hepatitis b virus, vector and vector system for the preparation of polypeptide, a method for the preparation of polypeptide (variants), purified polypeptide (variants), oligonucleotide, a method for the preparation of antibodies (variants), antibody (variants), a method for the determination of chemical compound for treating the infection of hepatitis b strain infection, a composition, a method for the preparation of composition, a method of organism liquids screening for hepatitis b virus, a method of antibody use, vaccine against hepatitis Download PDFInfo
- Publication number
- UA73475C2 UA73475C2 UA2000127296A UA2000127296A UA73475C2 UA 73475 C2 UA73475 C2 UA 73475C2 UA 2000127296 A UA2000127296 A UA 2000127296A UA 2000127296 A UA2000127296 A UA 2000127296A UA 73475 C2 UA73475 C2 UA 73475C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- polypeptide
- virus
- hepatitis
- amino acid
- nucleic acid
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 299
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 247
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 245
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 title claims abstract description 197
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 84
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 title claims description 48
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 45
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 30
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims description 27
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims description 22
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 8
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 title description 5
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 title description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title description 3
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 title 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 173
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 130
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 126
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 126
- 101710084021 Large envelope protein Proteins 0.000 claims abstract description 92
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 89
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 89
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 87
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 52
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 52
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 51
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 156
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 65
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 64
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 63
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 47
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 claims description 45
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 31
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 28
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 16
- 208000010667 Carcinoma of liver and intrahepatic biliary tract Diseases 0.000 claims description 15
- 101710123661 Venom allergen 5 Proteins 0.000 claims description 15
- 206010073069 Hepatic cancer Diseases 0.000 claims description 14
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 claims description 14
- 201000002250 liver carcinoma Diseases 0.000 claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 11
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 11
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 10
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 9
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 6
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 6
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 6
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 5
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 3
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 2
- 229960002520 hepatitis vaccine Drugs 0.000 claims description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 claims description 2
- 241000239366 Euphausiacea Species 0.000 claims 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims 2
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 31
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 28
- 239000000470 constituent Substances 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 54
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 52
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 29
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 27
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 18
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 18
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 15
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 11
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 11
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 10
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 9
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 5
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 5
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 4
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 4
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 101710173438 Late L2 mu core protein Proteins 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100291267 Drosophila melanogaster Miga gene Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710175243 Major antigen Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- -1 antibody Proteins 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 229940060415 hepatitis b immune globulin Drugs 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059193 Acute hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000609447 Beet necrotic yellow vein virus (isolate Japan/S) Protein P25 Proteins 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 101100078424 Caenorhabditis elegans mtrr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 102100027988 GTP-binding protein Rhes Human genes 0.000 description 1
- 101000578396 Homo sapiens GTP-binding protein Rhes Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241001387976 Pera Species 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100021941 Sorcin Human genes 0.000 description 1
- 101710089292 Sorcin Proteins 0.000 description 1
- 108010015780 Viral Core Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101150003160 X gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 208000037628 acute hepatitis B virus infection Diseases 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 208000027697 autoimmune lymphoproliferative syndrome due to CTLA4 haploinsuffiency Diseases 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000003914 blood derivative Substances 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000002333 glycines Chemical class 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 238000011451 sequencing strategy Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000005570 vertical transmission Effects 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5761—Hepatitis B
- G01N33/5764—Hepatitis B surface antigen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
- C12Q1/706—Specific hybridization probes for hepatitis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
Description
Опис винаходу
У цій заявці в дужках наведені різні посилання. Опис цих публікацій в їхній повноті включений у цей 2 винахід шляхом посилання на цю заявку для більш повного відображення рівня техніки, до якого належить цей винахід.
Цей винахід стосується геному вірусу гепатиту В із індукованою вакциною мутацією по залишку амінокислоти 145 (гліцин на аргінін) в межах головного поверхневого антигену, його послідовності нуклеотидів, визначених чотирьох головних послідовностей білка, антигену, антитіла, систем виявлення, розробки ефективних вакцин і 70 противірусних агентів.
Вірус гепатиту В був уперше відкритий в 1963 як вірус людини, який передається парентерально. Хоча ці віруси не є особливо цитотоксичними й не призводять до масової загибелі клітин, вони були причиною основної інфекційної хвороби, яка вражає як дорослих, так і дітей в усьому світі. Наявність поверхневого антигену гепатиту В була головним маркером для виявлення носіїв вірусу гепатиту В і, таким чином, можливо, тих, хто 12 мав ризик передачі вірусу. На відміну від цього, наявність антитіла до поверхневого антигену вказує на імунну відповідь, яка мала б привести зрештою до одужання. Стимулювання такої імунної відповіді було значною мірою досягнуто ліцензованими на даний момент вакцинами гепатиту В, розробленими МегскК Зпагре Ропте. Ці вакцини містять головний поверхневий антиген в або природній формі (одержаний з плазми) або рекомбінантній формі (одержаний з дріжджів), і виявились безпечними та ефективнимив нейтралізації вірусу гепатиту В. У
Сінгапурі активна програма вакцинації в національному масштабі привела до значного зниження гострого інфікування гепатиту В і проявів первинної карциноми печінки. Це зниження, у свою чергу, було пов'язане із підвищеним імунітетом у населення.
Головним антигенним епітопом вірусу гепатиту В є надзвичайно консервативна ділянка, що містить 23 амінокислотних залишки й розташована в положенні амінокислот 124-147 головного поверхневого антигену. Ця с 29 мала ділянка, яка визначається як групова специфічна детермінанта "а", знаходиться у всіх підтипах таї Ге) ізолятах геномів вірусу гепатиту В. Ця ділянка має антигенні властивості завдяки запропонованій структурі подвійної петлі, з якою зв'язується індуковане вакциною нейтралізуюче антитіло.
На відміну від випадкових мутацій, які вводять у геном вірусу гепатиту В під час реплікації вірусу дефективною зворотною транскриптазою, мутації, що виникають після вакцинації, відбуваються переважно в "а" о 30 епітопі головного поверхневого антигену. Ці мутантні віруси є особливо цікавими, оскільки вони виявляють - зменшену афінність до нейтралізуючого антитіла, Її таким чином можуть реплікуватися незалежно. Серед цих мутантів, що уникають вакцини, мутація по залишку амінокислоти 145 (гліцин на аргінін) в другій петлі З головного поверхневого антигену є найбільш важливою через те, що вона є стійкою, це призводить до с конформаційних змін епітопу "а", і таку мутацію спостерігали в Північній Америці, Європі, Японії та 35 Південно-Східній Азії. У Сінгапурі, наприклад, такі мутанти є найбільш частим варіантом після вакцинації. в
Були ідентифіковані дванадцять інфекційних варіантів серед 41 спалахів інфекцій, які мали мутацію аргініну по залишку амінокислоти 145 головного поверхневого антигену. Існує доказ вертикальної передачі від одного з 12 варіантів, і цей варіант також був пов'язаний з активною хворобою печінки. Більшою мірою, деякі з цих « варіантів на даний момент виявляються в рандомізованій безсимптомній популяції дорослого населення. З 70 Наявність цього реплікативного індукованого вакциною мутанта та його здатність уникати виявлення з с використанням стандартних реактивів є надто важливим через те, що це приводить до розвитку гострого
Із» гепатиту В в Італії та Сінгапурі. Ця ситуація, таким чином, вимагає термінової розробки специфічних систем виявлення, а також ефективних профілактичних вакцин та противірусних агентів. Визначення послідовності нуклеотидів цього індукованого вакциною мутанта вірусу являє собою перший крок у досягненні цієї мети й, 45 звичайно, буде корисним для різних згаданих вище розробок. і У цьому винаході запропоновано виділений штам вірусу гепатиту В, визначений як сінгапурський штам вірусу оз гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-145 (гліцин на аргінін), та який містить вірусний геном, що зберігається під номерами доступу Мо РО7121504, РО7121505 та РУО7121506 в Європейській колекції культури шк клітин від 15 грудня 1997 року. -І 20 У цьому винаході також запропоновано виділену нуклеїнову кислоту, що кодує поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що сл відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин.
У цьому винаході запропоновано спосіб одержання поліпептиду в очищеній формі, й очищений поліпептид, який одержують, є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має
ГФ) послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин. о У цьому винаході запропоновано олігонуклеотид з щонайменше 15 нуклеотидів, здатний до специфічної гібридизації з послідовностями лише мутантного вірусного штаму вірусу гепатиту В. 60 У цьому винаході запропоновано спосіб одержання антитіл до поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, а також одержаних антитіл.
У цьому винаході запропоновано використання описаного вище поліпептиду, антитіл або нуклеїнової кислоти для визначення, чи інфікований суб'єкт описаним вище вірусним штамом.
У цьому винаході також запропоновано композицію, здатну до стимулювання або збільшення виробництва 62 антитіла до поліпептиду.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано спосіб визначення хімічної сполуки, яка здатна до лікування та/або попередження зараження описаним вище мутантним вірусним штамом, а також композиції, які містять такі сполуки.
У цьому винаході також запропоновано композицію, яка містить хімічну сполуку, визначену описаними вище способами, у кількості, ефективній, щоби лікувати або попереджати інфікуванню штамом, і фармацевтично ефективний носій.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано використання композицій для лікування суб'єкта, який заражений цим вірусним штамом. 70 У цьому винаході також запропоновано використання композицій для запобігання інфікування суб'єкта цим вірусним штамом.
Нарешті, у цьому винаході запропоновано спосіб скринінгу рідин організму на цей вірусний штам.
КОРОТКИЙ ОПИС ФІГУР
Фігура 1. Структура чотирьох рамок зчитування геному вірусу гепатиту В людини, який був виділений з 7/5 одинадцятирічного сінгапурського хлопчика з мутацією гліцину на аргінін в амінокислотному залишку 145 головного поверхневого антигену, що позначено символом "зірочка". Головні білки вірусу: ДНК-полімераза, великий/середній/головний поверхневий антиген, пресерцевинний, серцевинний й трансактивуючий Х означені, як Р, Ргеб5 1/Ргеб52/5, Ргес, С і Х, відповідно.
Фігура 2. Стратегія клонування та визначення послідовності того ж самого геному вірусу гепатиту В.
Фігура 3. Повна послідовність нуклеотидів вірусу гепатиту В людини, який був виділений з одинадцятирічної дитини, яка була народжена в Сінгапурі матірю з вірусом дикого типу. Дитина отримала стандартний імуноглобулін проти гепатиту В (НВІС) та вакцину НВ і була заражена через рік мутованим штамом. Цей штам ніс мутацію по залишку амінокислоти 145 (гліцин на аргінін) головного поверхневого антигену (Послідовність Мо 1). Мутація показана в нуклеїнових кислотах, що мають номери 587-589. сч
Фігура 4. Визначена послідовність амінокислот ДНК-полімерази з послідовності нуклеотидів Фігури З (Послідовність Мо 2). і)
Фігура 5. Визначена послідовність амінокислот великого поверхневого антигену з послідовності нуклеотидів
Фігури 3. Мутований амінокислотний залишок (С на К) має номер 319 (Послідовність Мо 3).
Фігура 6. Визначена послідовність амінокислот серцевинного білка з послідовності нуклеотидів Фігури З ю
Зо «Послідовність Мо 4).
Фігура 7. Визначена послідовність амінокислот трансактивуючого білка Х з послідовності нуклеотидів Фігури -
З (Послідовність Мо 5). «
Фігура 8. Послідовність олігонуклеотидів, яка відповідає сайту ініціації ДНК-полімерази в положенні 2307 вірусного генома й комплементарна кодуючому ланцюгу (змістовий олігонуклеотид) (Послідовність Моб). о
Фігура 9. Послідовність олігонуклеотидів, яка відповідає положенню 250 послідовності нуклеотидів вірусу й ї- комплементарна комплементарному ланцюгу (антизмістовий олігонуклеотид) (Послідовність Мо7).
Фігура 10. Послідовність олігонуклеотидів, яка відповідає положенню 250 послідовності нуклеотидів вірусу й комплементарна кодуючому ланцюгу (змістовий олігонуклеотид) (Послідовність Мов).
Фігура 11. Послідовність олігонуклеотидів, яка відповідає стоп-кодону ділянки ДНК-полімерази в положенні « 1623 вірусного генома й комплементарна комплементарному ланцюгу (антизмістовий олігонуклеотид) пт) с (Послідовність Моб).
Фігура 12. Послідовність олігонуклеотидів, яка відповідає положенню 1420 вірусного генома й ;» комплементарна кодуючій послідовності (змістовий олігонуклеотид) (Послідовність Мо10).
Фігура 13. Послідовність олігонуклеотидів, яка відповідає положенню 2340 вірусного генома й
Комплементарна комплементарному ланцюгу (антизмістовий олігонуклеотид) (Послідовність Мо11). -І У цьому винаході посилання здійснюються на специфічні нуклеотиди кодуючого ланцюга нуклеїнової кислоти.
Наступні стандартні скорочення використовуються в цьому винаході, щоби вказати на специфічні нуклеотиди: і С-цитозин; А:аденозин; Т-тимідин; О-гуанозиню. їх У цьому винаході запропоновано послідовність нуклеотидів геному вірусу гепатиту В, який несе індуковану 5о вакциною мутацію по залишку амінокислоти 145 (гліцин на аргінін) головного поверхневого антигену, що
Ш- складається з 3215 нуклеотидів (Фігура 3), що кодує 4 білки вірусу, які перекриваються, показані на Фігурах 4-7. сп У винаході запропоновано послідовності амінокислот чотирьох головних вірусних білків, до яких належать
ДНК-полімераза, великий/середній/головний поверхневий антиген, серцевинний та трансактивуючий Х. Ці білки можуть бути одержані, використовуючи рекомбінантну технологію, та використані при одержанні поліклональних боб або моноклональних антитіл.
У цьому винаході також запропоновано діагностичну систему вірусу гепатиту В, специфічну до індукованої
Ф) вакциною мутації по залишку амінокислоти 145 (гліцин на аргінін) головного поверхневого антигену, ка використовуючи нуклеотидні послідовності або послідовності білка чи антитіла, які описуються в цьому винаході.
У цьому винаході запропоновано виділений штам вірусу гепатиту В, визначений як сінгапурський штам вірусу бо Гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-145 (гліцин на аргінін), та який містить вірусний геном, що зберігається під номерами доступу Мо РО7121504, РО7121505 та РО7121506.
У винаході також запропоновано виділену нуклеїнову кислоту, що кодує поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу бе ТИМ, Що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин. У специфічному втіленні поліпептид кодується нуклеотидами 155-835 послідовності нуклеїнової кислоти, позначеної як Послідовність Мо
1, зокрема такої, що містить нуклеотиди "АБА" в положенні 587-589, замість "ЗОА".Ця нуклеїнова кислота може бути ДНК або РНК, зокрема кДНК або геномна ДНК.
В іншому втіленні винаходу поліпептид має послідовність амінокислот по суті ту ж саму, що й залишки амінокислот 174-400 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо 3.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує пептид, де пептид кодується нуклеотидами 527-595 Послідовності Мо 1.
У цьому винаході також запропоновано виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує пептид, де пептид має послідовність амінокислот, що містить залишки амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як 70 Послідовність МоЗ3.
У цьому винаході також запропоновано вектор, який містить виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не 7/5 гліцин, ї функціонально з'єднаний з промотором транскрипції РНК.
Крім того, у цьому винаході запропоновано вектор, який містить виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує пептид, де пептид кодується молекулою нуклеїнової кислоти, що містить нуклеотиди 527-595 Послідовності Мо1.
В обох визначених вище векторах, вектор може містити вірусну ДНК.
У цьому винаході також запропоновано систему вектора для одержання поліпептиду, який містить описані вище вектори в придатному хазяіні.
У цьому винаході також запропоновано спосіб одержання поліпептиду або пептиду, який складається з вирощування систем вектора, описаних вище, за придатних умов одержання поліпептиду, та виділення поліпептиду, що одержується таким чином.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано спосіб одержання поліпептиду або пептиду в очищеній формі, сч який складається з: (а) уведення описаних вище векторів в придатну клітину-хазяїна; (б) культивування клітин хазяїна таким чином, щоби одержати поліпептид; (в) виділення поліпептиду, який одержують на етапі (б); і (г) і) очищення поліпептиду, виділеного таким чином.
У Цьому винаході, крім іншого, запропоновано очищений поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що му зо Відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин. Одним способом одержання - поліпептиду є спосіб, описаний вище. «Е
У цьому винаході також запропоновано очищений пептид, де пептид складається з послідовності залишків амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо 3. Одним способом одержання і
Зз5 Пполіпептиду є спосіб, описаний вище. ча
У цьому винаході також запропоновано олігонуклеотид з щонайменше 15 нуклеотидів, здатний до специфічної гібридизації з унікальною послідовністю нуклеотидів у межах нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головногоповерхневогоантигену «
Вірусу гепатитуВ дикого типу тим,що в с амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, без гібридизації до будь-якої . послідовності нуклеотидів у межах нуклеїнової кислоти, яка кодує головний поверхневий антиген вірусу гепатиту и? В дикого типу. Зокрема олігонуклеотид містить нуклеотиди 527-595 Послідовності Мо 1.
У цьому винаході також запропоновано спосіб одержання антитіл до поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що -І відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, а не до головного о поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу, що складається з: (а) одержання поліпептиду в очищеній їх формі; (б) імунізації організму, здатного до вироблення антитіл проти очищеного поліпептиду; (в) збирання 5р утворених антитіл; (г) з'єднання одержаних антитіл і очищеного поліпептиду за умов для формування комплексу; ш- і (д) визначення, які з одержаних антитіл утворюють комплекс з очищеним поліпептидом таким чином, щоб сп одержати антитіла до поліпептиду. Зокрема, поліпептид кодується нуклеотидами 155-835 послідовності нуклеїнової кислоти, позначеної як Послідовність Мо 1. В іншому втіленні поліпептид містить послідовність амінокислот, головним чином ідентичну залишкам амінокислот 174-400 послідовності амінокислот, позначеної як
Послідовність Мо 3.
Можна застосувати описаний вище добре відомий спосіб на кролях або мишах. (Ф, У Цьому винаході також запропоновано спосіб одержання антитіл до пептиду, де пептид містить ка послідовність амінокислот, що містить залишки амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як
Послідовність Мо 3, що складається з: (а) одержання пептиду в очищеній формі; (б) імунізації во організму, здатного до вироблення антитіл проти очищеного пептиду; (в) збирання утворених антитіл; (г) об'єднання одержаних антитіл і очищеного пептиду за умов формування комплексу; і (д) визначення, які з одержаних антитіл утворюють комплекс з очищеним пептидом так, щоб одержати антитіла до пептиду.
Можна було 6 застосувати описаний вище добре відомий спосіб на кролях або мишах.
У цьому винаході також запропоновано антитіла, які одержують описаними вище способами, зокрема 65 моноклональні антитіла. Крім того, у винаході запропоновано антитіла, здатні до виявлення поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такого поліпептиду, який має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, і нездатний до виявлення головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу, також як і антитіла, здатні до виявлення пептиду, де пептид містить послідовність, яка складається із залишків амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо 3.
У цьому винаході також запропоновано використання виділеної нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу /0 ТИМ, Що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, для визначення, чи суб'єкт інфікований штамом вірусу гепатиту В, визначеним як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-145 (гліцин на аргінін), де таке визначення складається з: (а) одержання відповідного зразка нуклеїнової кислоти від суб'єкта; і (б) визначення, чи зразок нуклеїнової кислоти з етапу (а) або є нуклеїновою кислотою, або одержується з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним /5 поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин.
Способом визначення є спосіб, де зразок нуклеїнової кислоти етапу (а) містить мРНК, яка відповідає копії
ДНК, що кодує поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, і де визначення етапу (б) складається з: (ії) контактування МРНК з описаним вище олігонуклеотидом за умов, за яких мРНК зв'язується з олігонуклеотидом таким чином, що утворюється комплекс; (ї) виділення комплексу, який утворюється таким чином; і (ії) розпізнання мРНК у виділеному комплексі так, сч щоби таким чином визначити, чи мРНК або є нуклеїновою кислотою, або одержується з нуклеїнової кислоти, яка о кодує поліпептид.
Інший приклад - це те, коли зразок нуклеїнової кислоти етапу (а) містить мРНК, яка відповідає копії ДНК, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного антигену ю зо Вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, і де визначення етапу (б) складається з: (а) трансляції МРНК за придатних умов, щоб одержати - послідовність амінокислот; і (ії) порівняння послідовності етапу (і) з послідовністю амінокислот виділеної «г нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, де поліпептид містить послідовність амінокислот, головним чином ідентичну залишкам амінокислот 174-400 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо З так, щоби і з5 Таким чином визначити, чи зразок нуклеїнової кислоти або є нуклеїновою кислотою, або одержується з ча нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид. Подальшим прикладом є приклад, де визначення етапу (б) складається з: (а) ампліфікації нуклеїнової кислоти, присутньої в зразку етапу (а); і (ії) виявлення наявності поліпептиду в ампліфікованій нуклеїновій кислоті, яку одержали.
У цьому винаході запропоновано використання антитіла, яке розпізнає поліпептид, що є мутантним головним « поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В для визначення того, чи суб'єкт має схильність до карциноми в с печінки, де таке визначення складається з: (а) одержання відповідного зразка нуклеїнової кислоти суб'єкта; і (б) визначення того, чи зразок нуклеїнової кислоти з етапу (а) або є нуклеїновою кислотою, або одержується з ;» нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним зовнішнім антигеном штаму вірусу гепатиту
В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу в тому, що амінокислота в положенні 145 такого -І поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, за допомогою контактування із зразком за відповідних умов, щоби зв'язатися з антитілами п. 35 формули винаходу так, щоб визначити, чи суб'єкт має схильність до карциноми о печінки. ї5» У Цьому винаході також запропоновано використання антитіл, здатних до виявлення поліпептиду, який є Мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, визначений як сінгапурський штам вірусу
Ш- гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5-145 (гліцин на аргінін), для визначення, чи суб'єкт сп інфікований штамом вірусу гепатиту В, визначений як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-145 (гліцин на аргінін), де таке визначення складається з: (а) одержання відповідного зразка від суб'єкта; і (б) визначення, чи зразок з етапу (а) є нуклеїновою кислотою або одержується з ов нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот
Ф) головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого ка поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, за допомогою контактування із зразком за відповідних умов, щоби зв'язатися з антитілами так, щоби визначити, чи суб'єкт інфікований. До того ж, антитіло може також бути бо Здатним до виявлення пептиду, де пептид містить послідовність, яка складається із залишків амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо З.
В описаних вище використаннях виділена нуклеїнова кислота, олігонуклеотид або антитіло можуть бути мічені маркером, що може бути виявлений. До прикладів маркерів, здатних до виявлення, належать радіоактивні ізотопи, флюорофори та білки. 65 У специфічному втіленні до зразків належать, крім іншого, кров, тканина або сироватка.
У цьому винаході також запропоновано спосіб визначення хімічної сполуки для одержання ліків, які здатні до лікування інфекції штаму вірусу гепатиту В, визначеного як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-3'-145 (гліцин на аргінін), який складається з: (а) контактування поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такого поліпептиду, який має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, з хімічною сполукою за умов, за яких відбувається зв'язування між поліпептидом і хімічною сполукою; (б) виявлення специфічного зв'язування хімічної сполуки з поліпептидом; і (в) визначення, чи хімічна суміш інгібує поліпептид так, щоби розпізнати хімічну сполуку, яка здатна до лікування інфекції вірусним штамом. 70 У цьому винаході також запропоновано спосіб визначення хімічної сполуки для одержання ліків, які здатні попереджувати інфекцію штаму вірусу гепатиту В, визначеного як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-145 (гліцин на аргінін), який складається з: (а) контактування поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такого поліпептиду, який має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену 7/5 Вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, з хімічною сполукою за умов, за яких відбувається зв'язування між поліпептидом і хімічною сполукою; (б) виявлення специфічного зв'язування хімічної сполуки з поліпептидом; і (в) визначення, чи хімічна суміш інгібує поліпептид так, щоби розпізнати хімічну сполуку, яка здатна до запобігання інфікуванню вірусним штамом.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано композицію, яка містить поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, або його похідна; кількість такого поліпептиду ефективна, щоби стимулювати або збільшити одержання антитіла в суб'єкті; і фармацевтично прийнятний носій. с
Фактична ефективна кількість залежатиме від розміру поліпептиду, здатності поліпептиду до біодеградації, біологічної активності поліпептиду та біодоступності поліпептиду. Якщо поліпептид не деградує швидко, він є (8) біодоступним і надзвичайно активним, менша кількість буде потрібна для ефективності. Ефективна кількість буде відома фахівцю в галузі; це також залежатиме від форми поліпептиду, розміру поліпептиду та біологічної активності поліпептиду. Використання ад'юванта, наприклад, повинно знизити необхідну кількість поліпептиду. ю зо Фахівець у галузі може звичайним чином виконати емпіричні тести на активність, щоби визначити біоактивність у біотестах і таким чином визначити ефективну кількість. -
Фармацевтично прийнятні носії добре відомі фахівцям у галузі й включають, крім іншого, 0,01-0,1 М, краще «г 0,05 М, фосфатного буфера або 0,895 сольового розчину. Крім того, такі фармацевтично прийнятні носії можуть бути водними або неводними розчинами, суспензіями та емульсіями. До прикладів неводних розчинників о
Зв належать пропіленгліколь, поліетиленгліколь, олії, як наприклад, оливкова олія, і органічний ефір для ї- ін'єкцій, наприклад, етилолеат. Водні носії містять воду, алкогольні/водні розчини, емульсії або суспензії, включаючи сольові та забуферені середовища. До парентеральних носіїв належать розчини хлориду натрію, декстроза Рингера, глюкоза й хлорид натрію, розчин Рингера з додаванням лактату або фіксовані олії. До внутрішньовенних носіїв належать рідкі та поживні наповнювачі, електролітні наповнювачі, як наприклад ті, що « основані на декстрозі Рингера тощо. Консерванти та інші додатки, наприклад, антибіотики, антиоксиданти, п») с хелатори, інертні гази тощо, можуть також бути присутні.
Й У цьому винаході, крім іншого, запропоновано композицію, яка містить пептид, де пептид складається з и? послідовності залишків амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо 3, або його похідну, кількість такого пептиду ефективна, щоби стимулювати або збільшити одержання антитіла в суб'єкті, і фармацевтично прийнятний носій. -І У Цьому винаході, крім іншого, запропоновано композиції, які містять хімічну сполуку, визначену вищеописаними способами в кількості, ефективній, щоби лікувати або попереджати інфікуванню штамом вірусу о гепатиту В, визначеного як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- Б'-Нб їх (гліцин на аргінін), і фармацевтично ефективного носія.
У цьому винаході запропоновано використання описаних вище композицій як ліків для лікування та/або ш- попередження карциноми печінки. с У цьому винаході також запропоновано використання визначених вище композицій для лікування суб'єкта, інфікованого штамом вірусу гепатиту В, визначеного як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5'-145 (гліцин на аргінін). 5Б У цьому винаході також запропоновано використання визначених вище композицій для попередження інфікування штамом вірусу гепатиту В, визначеного як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе
Ф) поверхневий антиген- 5'-145 (гліцин на аргінін), суб'єкта, яке складається з уведення ефективної кількості. ка У цьому винаході, крім іншого, запропоновано спосіб скринінгу тканин і рідин тіла суб'єкта на вірус гепатиту В, визначений як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-145 бо (гліцин на аргінін), який складається з: (а) одержання відповідного зразка рідини тіла суб'єкта; (б) визначення наявності поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, у зразку етапу (а) так, щоби піддати зразок скринінгу на штам. У втіленнях цього 65 способу рідина тіла містить кров, сироватку або зразок нуклеїнової кислоти крові чи сироватки.
Цей винахід пропонує спосіб визначення того, чи суб'єкт має схильність до карциноми печінки, який складається з: (а) одержання відповідного зразка нуклеїнової кислоти від суб'єкта; і (б) визначення того, чи зразок нуклеїнової кислоти з етапу (а) є нуклеїновою кислотою або одержується з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, таким чином визначаючи, чи суб'єкт має схильність до карциноми печінки.
У цьому винаході також запропоновано описаний вище спосіб, де зразок нуклеїнової кислоти етапу (а) містить МРНК, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, 70 такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, і де визначення етапу (б) складається з: (ії) контактування МРНК з описаним вище олігонуклеотидами за умов, за яких мРНК може зв'язуватись з олігонуклеотидом з утворенням комплексу; (ії) виділення комплексу, який утворюється таким чином; і (ії) розпізнання мРНК у виділеному комплексі так, щоби /5 таким чином визначити, чи мРНК є нуклеїновою кислотою або одержується з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано описаний вище спосіб, де зразок нуклеїнової кислоти етапу (а) містить мРНК, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штамом вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, і де визначення етапу (б) складається з: (ї) трансляції мРНК за придатних умов, щоб одержати послідовність амінокислот; і (ії) порівняння послідовності етапу (а) амінокислот з послідовністю амінокислот, яка кодується виділеною нуклесновою кислотою, описаною вище, так, щоби визначити, чи зразок нуклеїнової кислоти є нуклеїновою кислотою або одержується з нуклеїнової кислоти, яка сч ов Кодує поліпептид.
У цьому винаході також запропоновано описаний вище спосіб, де визначення етапу (б) складається з: (Її) і) ампліфікації нуклеїнової кислоти, присутньої в зразку етапу (а); і (ії) виявлення наявності поліпептиду в ампліфікованій нуклеїновій кислоті.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано описаний вище спосіб визначення, чи має суб'єкт схильність ю зо до карциноми печінки, який складається з: (а) одержання відповідного зразка із суб'єкта; і (б) визначення, чи зразок з етапу (а) є нуклеїновою кислотою або одержується з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є - мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність «ф амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, за допомогою і) з5 Контакту із зразком за відповідних умов, щоби зв'язатися з описаними вище антитілами так, щоби визначити, чи ча суб'єкт має схильність до карциноми печінки.
У цьому винаході запропоновано описані вище способи, де олігонуклеотид або антитіло піддають міченню маркером, який можна визначити.
У цьому винаході також запропоновано описані вище способи, де маркером, що можна визначити, є « радіоактивний ізотоп, фрлюорофор або фермент. з с У цьому винаході також запропоновано описані вище способи, де зразок містить кров, тканину або сироватку.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано спосіб визначення хімічної сполуки для одержання ліків, які ;» здатні лікувати карциному печінки, який складається з: (а) контактування поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такого поліпептиду, який має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В -І дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, з хімічною сполукою за умов, за яких відбувається зв'язування між поліпептидом і хімічною сполукою; (б) виявлення о специфічного зв'язування хімічної сполуки з поліпептидом; і (в) визначення, чи хімічна суміш зв'язується з їх поліпептидом так, щоби розпізнати хімічну сполуку, яка здатна лікувати карциному печінки.
Цей винахід пропонує спосіб визначення хімічної сполуки для одержання ліків, які здатні попереджати ш- карциному печінки, що складається з: (а) контактування поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим сп антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин, з хімічною сполукою за умов зв'язування між дв Поліпептидом і хімічною сполукою; (б) виявлення специфічного зв'язування хімічної сполуки з поліпептидом; і (в) визначення, чи хімічна суміш зв'язується з поліпептидом так, щоби розпізнати хімічну сполуку, яка здатна (Ф, до попередження карциноми печінки. ка Крім того, у цьому винаході запропоновано композицію, яка містить хімічну сполуку, визначену описаними вище способами в кількості, ефективній, щоби лікувати карциному печінки, і фармацевтично ефективний носій. 60 У цьому винаході також запропоновано композицію, яка містить хімічну сполуку, визначену описаними вище способами в кількості, ефективній, щоби попереджати карциному печінки й фармацевтично ефективний носій.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано спосіб лікування суб'єкта з карциномою печінки, який складається з уведення ефективної кількості описаних вище композицій.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано спосіб попередження карциноми печінки суб'єкта, який 65 складається з уведення ефективної кількості описаних вище композицій.
У цьому винаході також запропоновано вакцину від гепатиту, що містить мутантну форму поверхневого антигену вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену гепатиту В тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду -це аргінін, а не гліцин.
У цьому винаході також запропоновано описану вище вакцину та ад'ювант.
Цей винахід проілюстрований в наступному експериментальному розділі. Ці розділи наведені для того, щоби допомогти в розумінні винаходу, і не мають наміру обмежувати у любий спосіб цей винахід.
Опис експериментів
У способі, який описується нижче, виділяли вірус гепатиту В, який несе мутацію по залишку амінокислоти 70 145 головного поверхневого антигену, і визначали послідовність нуклеотидів.
Одержували зразок сироватки (20/815сє) з одинадцятирічної дитини, народженої від матері, яка несе поверхневий антиген дикого типу. Дитину, що була визначена як поверхневий антиген-негативна при народженні, піддавали дії імуноглобуліну проти гепатиту В (НВІС) і вакцини, одержаної з плазми. Через рік дитина була визначена як поверхневий антиген-позитивна й несла мутацію аргініну по залишку амінокислоти 145 7/5 В головному поверхневому антигені. У цьому винаході перед визначенням послідовності виділяли вірусну ДНК.
Як описано в прикладах нижче, геном цього мутантного вірусу гепатиту В, що несе мутацію по залишку амінокислоти 145 головного поверхневого антигену, складається з 3215 нуклеотидів, які є тотожними вірусу дикого типу того ж підтипу (аа). Відкриті рамки зчитування (ОКЕ) для головних вірусних білків знаходяться у відповідних положеннях при порівнянні з вірусом дикого типу. Положення 1 в геномі мутантного вірусу гепатиту
В визначається згідно з положенням у вірусі дикого типу, що відповідає сайту рестрикції ЕсокКіІІ, який відсутній у вірусі гепатиту В у цьому винаході завдяки змінам в послідовності нуклеотидів.
Структура різних ОКЕ в геномі мутантного вірусу наведена на Фігурі 1 та їх положення вказані, як зазначено нижче: - Ген ДНК-полімерази починається з положення 2307 і закінчується в положенні 1623, таким чином сч об складаючись з 2532 нуклеотидів, і кодує 843 амінокислотних залишки; - Ген великого поверхневого антигену починається з положення 2848 і закінчується в положенні 835, таким і) чином складаючись з 1203 нуклеотидів і кодує 400 амінокислотних залишки. Цей великий поверхневий антиген перекриває середній поверхневий антиген, що починається з положення 3205 і головний поверхневий антиген, який починається з положення 155. Як середній (що складається з 281 амінокислотних залишків), так і головні ю
Ззо0 (що складаються з 226 амінокислотних залишків) поверхневі антигени в тому ж положенні, що й великий поверхневий антиген; - - Генсерцевини починаєтьсяз положення 1814ізакінчуєтьсяв положенні 2452, таким чином складаючись з 639 «г нуклеотидів, і кодує 212 амінокислотних залишків; та - Трансактивуючий ген Х починається з положення 1374 і закінчується в положенні 1838, таким чином ме)
Зв складаючись з 465 нуклеотидів, і кодує 154 амінокислотних залишків. ї-
До того ж, аналіз послідовності встановив, що цей мутантний вірус гепатиту В належить до підтипу аа, що визначається залишком лізину в положеннях 122 і 160 в головному поверхневому антигені. Мутація, індукована вакциною (з гліцину на аргінін) знаходиться по залишку амінокислоти 145 головного поверхневого антигену, що узгоджується з попереднім аналізом епітопу "а" прямим визначенням послідовності. «
Порівняно з вірусом гепатиту В дикого типу, який зберігається в базі даних СЗепрапк (номер доступу з с 000329), ідентичність цього штаму вірусу гепатиту В становить 89,495 для послідовності нуклеотидів.
Ідентичність різних вірусних білків цього мутанту вірусу гепатиту В порівняно з їх аналогами дикого типу ;» становить 88,395, 87,75, 93,41905 і 8795 для ДНК-полімерази (Засоби ідентифікації білка (РІК) номер доступу
РОЗА460), великого поверхневого антигену (номер доступу РІК АЗЗ3460), серцевини (номер доступу РІК С93460) і трансактивуючого білка Х (номер доступу РІК АЗ1289), відповідно. -І Геном вірусу гепатиту В у цьому винаході, який несе індуковану вакциною мутацію по залишку амінокислоти 145 (гліцин на аргінін) головного поверхневого антигену, може використовуватися як матеріал, щоб одержати о олігонуклеотиди, специфічні до генома мутанту вірусу. Ці олігонуклеотиди можуть використовуватися як їх матеріал для надзвичайно специфічних діагностичних агентів, які виявляють вірус, що несе індуковану вакциною 5р Мутацію по залишку амінокислоти 145 головного поверхневого антигену.
Ш- Геном вірусу гепатиту В у цьому винаході із індукованою вакциною мутацією по залишку амінокислоти 145 сп (гліцин на аргінін) головного поверхневого антигену може використовуватися як матеріал, щоб одержати білки винаходу за допомогою експресії вектора, який несе відповідну кодуючу ділянку і який може реплікуватися в клітині хазяїна, як наприклад, Езсле/л/ст/а со/), з допомогою стандартної технології рекомбінантної ДНК.
Білки цього винаходу корисні як матеріал для надзвичайно специфічних діагностичних агентів,здатних до виявлення вірусу гепатиту В, який несе індуковану вакциною мутацію по залишку амінокислоти 145 головного
Ф) поверхневого антигену. Використовуючи відомі способи, ці тотожні білюи можуть використані, щоб одержати ка поліклональні та моноклональні антитіла.
Поліклональні та моноклональні антитіла можуть використовуватися як матеріал для діагностичних агентів, во щоби виявляти з високою специфічністю антигенів вірусу гепатиту В із індукованою вакциною мутацією по залишку амінокислоти 145 (гліцин на аргінін) головного поверхневого антигену.
Система виявлення з використанням кожного білка цього винаходу або білків з частковою заміною амінокислот, і система виявлення з використанням моноклональних або поліклональних антитіл до таких білків, корисні як надзвичайно специфічні діагностичні агенти для визначення вірусу гепатиту В із індукованою 65 вакциною мутацією по залишку амінокислоти 145 головного поверхневого антигену, і ефективні, щоби виявити та піддавати скринінгу такі віруси з крові для переливання або похідних крові. Білки або антитіла до таких білків, можуть використовуватися як матеріал для створення профілактичної та терапевтичної вакцини проти такого вірусу.
Добре відомо, що один або більше нуклеотидів ДНК можуть бути замінені іншими нуклеотидами, щоб одержати той же білок. Цей винахід також стосується таких змін нуклеотидів, які кодують білки, згадані в цьому винаході. Також добре відомо, що одна або більше амінокислот в послідовності білка може бути замінена іншими подібними амінокислотами, як визначено їхніми гідрофільними властивостями або зарядами, щоб одержати аналог послідовності амінокислот. Будь-які аналоги білків цього винаходу, що містять заміну амінокислоти, делеції або ізостери (змінені амінокислоти, що несуть близьку структурну та просторова 70 подібність до амінокислот білка), додаткові амінокислоти або додавання ізостеру може бути використане за умови, що одержані послідовності викликають антитіла, що розпізнають вірус гепатиту В із індукованою вакциною мутацією в мутації амінокислоти 145 (гліцин на аргінін) головного поверхневого антигену.
ПРИКЛАДИ
Послідовність нуклеотидів і визначена послідовність амінокислот вірусу гепатиту В, що несуть індуковану /5 вакциною мутацію по залишку амінокислоти 145 (гліцин на аргінін) головного поверхневого антигену, була визначена в наступному способі: 1. Виділення вірусної ДНК
Вірусну ДНК виділяли зі зразка сироватки (20/815с), який одержували з сироватки одинадцятирічної дитини-китайця, яка народилася від матері, що несе поверхневий антиген вірусу гепатиту В дикого типу.
Незважаючи на негативні результати аналізу при народженні, дитині вводили НВІС і вакцину, одержану з плазми, і через рік дитина виявилась позитивною на поверхневий антиген вірусу гепатиту В. Аналіз послідовності епітопу "а" вказав на наявність індукованої вакциною мутації по залишку амінокислоти 145 головного поверхневого антигену.
Спосіб виділення, який використовується, описаний нижче: До 200 мкл зразка сироватки додавали 400 мкл сч буфера для лізису (10 мМ хлорид Трису, рН 7,4, ЕОТА 1 мм і додецил сульфат натрію 2965) і 25 мкл протеїнази К (20 мг/мл), інкубували за 659С протягом З годин. Вірусну ДНК потім виділяли фенолом/хлороформом і і) осаджували етанолом. 2. Ампліфікація вірусної ДНК ланцюговою полімеразною реакцією (РСК). Геном вірусу був ампліфікований ланцюговою полімеразною реакцією (РСК), використовуючи З набори олігонуклеотидів, що перекриваються, які ою були одержані згідно з вірусом гепатиту В дикого типу підтипу ади/. Уводили різні сайти ферментів рестрикції, щоби полегшити клонування продуктів РОК. Положення цих олігонуклеотидів показано на Фіг. 2 і вказано, як - зазначено нижче: « -Прапорець 1 (АТААОСТТАТОССССТАТСТТАТСААСАСТТОССОБА) (Послідовність Моб) починаєтьсязсайтукодуючої ділянки ініціації ДНК-полімерази в положенні 2307 послідовності нуклеотидів вірусуй і.
Комплементарна кодуючому ланцюгу (змістовий олігонуклеотид). Додатковий сайт ферменту рестрикції Ніпай р. підкреслений; -ХьаЗ (ВАСТСТАСАСТСТОСОСТАТТОТОА) (Послідовність Мо 7) починається на внутрішньому сайті ферменту рестрикції ХраІ в положенні 250 послідовності нуклеотидів вірусу й комплементарна комплементарному ланцюгу (антизмістовий олігонуклеотид). Додатковий сайт ферменту рестрикції Ніпагйі « підкреслений; шщ с -Хра5 (ВЗАСТСТАСАСТООТООСТОСАСТТСТ) (Послідовність Мо8) починаєтьсянавнутрішньому сайті Хбваїв й тому ж положенніщо й для олігонуклеотиду ХЬБаЗ, але комплементарнакодуючому ланцюгу (змістовий «» олігонуклеотид). Додатковий сайт ферменту рестрикції Ніпайї|І підкреслений; -СотптопЗ(ТОАСААТТСТ САСОСТООТСТОСАТОСОАСОТ) (Послідовність Мо 9) починається на стоп-кодоні
ДНК-полімерази в положенні 1623 послідовності нуклеотидів вірусу й комплементарна комплементарному -і ланцюгу (антизмістовий олігонуклеотид). Додатковий сайт ферменту рестрикції ЕсоК1 підкреслений; -М11 (ТТІТОТТТАСОТССССТ) ( Послідовність Мо 10) починається біля сайта ініціації гена Х в положенні 1420 о послідовності нуклеотидів вірусу й комплементарна кодуючому ланцюгу (змістовий олігонуклеотид); ї» -Ніпанпд оМуЗ (СТААССТТАСТТТОСОбБААСТОТТОАТ) (Послідовність Мо 11) починається близько до сайту ініціації ДНК-полімерази в положенні 2340 й комплементарна комплементарному ланцюгу (антизмістовий
Ше олігонуклеотид). Додатковий сайт ферменту рестрикції Ніпайї|І підкреслений. 4 Використовуючи вірусну ДНК як шаблон, потім використовували РСК на ОМА Тпегптаї! Сусіег (Регкіп-ЕІтег,
Сеййв) протягом 35 циклів, використовуючи Ріш-полімеразу (Зігаїадепе, США), кожний цикл складався з 1,5 хвилин за температури денатурації 949С, 2 хвилини за температури гібридизації 5392С і 4 хвилини за температури 722С. Використовували наступні комбінації олігонуклеотидів: Ріад'!/Храз, Храб/СоттопЗ3 і о М11/НіпапАРМУЗ, і одержували продукти ампліфікації 1,2 т. п. н., 1,4 т. п. н. і 1,1 т. п. н., відповідно.
З. Клонування ампліфікованих вірусних фрагментів ДНК. Ампліфікований вірусний фрагмент ДНК з іме) Ніаді/ХьаЗ(1.2 т. п. н.) піддавали ферменту рестрикції НіпайШ і ХБаі перед клонуванням в плазміду
ВіІсезЗсгірі, попередньо оброблену тими ж самими ферментами рестрикції. Подібне розщеплення Хваї і Есокі 60 було застосоване до продуктів РОК з Храб/Соттоп3З (1.4 т. п. н.) перед клонуванням в плазміду Віпезстгірі, попередньо оброблену Хра! і ЕсокКІ. З другого боку, фрагмент ДНК, ампліфікований з допомогою М11 і
НіпашнАОМУЗ (1,1 т. п. н.), безпосередньо клонували в плазміду 7егоВішпі, одержану Іпуйгобеп (США) для клонування фрагментів ДНК з тупими кінцями. 4. Визначення послідовності нуклеотидів. 6Е Послідовність нуклеотидів індукованого вакциною вірусу гепатиту В у цьому винаході була визначена на шаблоні ДНК плазміди інгібіторів термінації утворення ланцюга, використовуючи Зедцепазе ОМА Зедпцепсіпа Кії
(Опіеай 5іафез Віоспетіса! Согр.). Щоби полегшити процедуру визначення послідовності, одержували різні внутрішні олігонуклеотиди(від Мідо М13) згідно з вірусом гепатиту В дикого типу, та їхні положення показані на Фіг. 2.
З аналізу, описаного вище, визначали послідовність нуклеотидів повної довжини вірусу гепатиту В, який несе індуковану вакциною мутацію по залишку амінокислоти 145 (гліцин на аргінін) головного поверхневого антигену, як показано на Фігурі 3.
Визначали ділянки послідовностей нуклеїнових кислот, що кодують головні вірусні білки, показані на
Фігурах 4-7: ДНК-полімераза вірусу гепатиту В (Фігура 4), великого поверхневого антигену (Фігура 5), білок /о серцевини (Фігура 6) і трансактивуючий білок Х (Фігура 7).
Розташування вірусної послідовності в цьому винаході з іншими вірусними послідовностями гепатиту В, наведене в базі даних СепрапКк, може показати специфічні відмінності між послідовностями, які у свою чергу можуть використовуватись для створення зондів ДНК. Тоді може бути створена система виявлення з використанням ланцюгової полімеразної реакції (РСК). Такі реакції РСК включать комбінації олігонуклеотидів, 7/5 бпецифічні до вірусу гепатиту В із індукованою вакциною мутацією по залишку амінокислоти 145 (гліцин на аргінін) головного поверхневого антигену, таким чином дозволяючи проводити виявлення цих ДНК мутантів вірусів. ДНК вірусів може бути виділена, як описано в цьому винаході. Реакції РОК можуть бути виконані, використовуючи специфічні олігонуклеотиди, використовуючи тотожні умови циклювання, описані вище.
Результати можна потім аналізувати після розділення продуктів РСК на 195 агарозному гелі.
Згідно з відомими імунологічними процедурами є можливим визначення епітопів послідовностей білка, як наприклад, тих, що наведені на Фігурах 4-7. Визначення цих епітопів, специфічних до вірусу гепатиту В із індукованою вакциною мутацією по залишку амінокислоти 145 головного поверхневого антигену дозволяє синтез пептидів, використовуючи способи генної інженерії, синтез білків, одержання антитіл, створення специфічних діагностичних реактивів, розвиток профілактичних і терапевтичних вакцин та противірусних агентів. сч
Система виявлення антитіл проти вірусу гепатиту В із індукованою вакциною мутацією по залишку амінокислоти 145 головного поверхневого антигену може бути створена, використовуючи полівінілові і) мікротитрувальні планшети та спосіб сандвіча. 5Омкл 5 мкг/мл пептиду вірусу гепатиту В (індукований вакциною мутант) можуть бути розподілені в кожну комірку мікротитрувального планшета й інкубовані протягом ночі за кімнатної температури для закріплення. Подібні процедури можуть бути застосовані до білка "5, очищеного від ю
Зо Клітин-хазяїна, як наприклад, Евспелспіа со//. Комірки мікропланшету можуть бути промиті п'ять разів фізіологічним сольовим розчином, який містить 0,0595 Тмееп 20. Для покривання рідиною 100 мкл буфера Масі, - який містить 3095 (по масі) сироватки теляти і 0,0595 Тм'ееп 20 (буфер С5), можуть бути розподілені в кожну « комірку й видалені після інкубації протягом 30 хвилин за кімнатної температури.
Щоби визначити антитіла, специфічні до індукованих вакциною мутантів вірусу гепатиту В в сироватці, ме) зв первинну реакцію виконують так, що 50 мкл буфера С5 і 10 мкл зразка сироватки можуть бути розподілені в ї- кожну комірку мікропланшету й інкубовані на мікропланшетному вібраторі протягом однієї години за кімнатної температури. Після завершення первинної реакції комірки мікропланшету промивали п'ять разів, як описано вище.
У другій реакції Тнг моноклональних антитіл миші до (дО людини, мічених пероксидазою хріну, розчиняли в «
ЗОмкл сироватки теляти й розподіляли в кожну комірку мікропланшету, інкубували на мікропланшетному з с вібраторі протягом однієї години за кімнатної температури. По завершенні комірки промивали п'ять разів таким же чином. Після додавання перекису водню (як субстрату) і ХОмкл розчину О-фенілендіаміну (як барвника) в ;» кожну комірку, після інкубації протягом 30 хвилин за кімнатної температури, 5Омкл розчину 4М сірчаної кислоти розподіляли в кожну лунку, щоби зупинити подальше забарвлення й для зчитування поглинання за 49Онм.
Цей винахід дозволяє виявляти індукованого вакциною мутанта вірусу гепатиту В, зокрема того, що несе -І мутацію по залишку амінокислоти 145 головного поверхневого антигену. Такий мутантний вірус гепатиту В досі уникав виявлення з використанням загальновживаних способів з використанням антитіл, а у цьому винаході і запропоновано системи виявлення, здатні до надзвичайно специфічного та чутливого виявлення на ранній стадії їх інфікування.
Крім того, ці властивості дозволяють ставити точний діагноз пацієнтам на ранній стадії хвороби, а також ш- допомагають видалити з високою ефективністю кров, яка містить індукований вакциною мутант вірусу гепатиту В сп з допомогою скринінгу донорської крові.
Білки та їхні антитіла у цьому винаході можуть бути використані для створення профілактичних і терапевтичних вакцин, також як і імунологічних фармацевтичних засобів. Інформація щодо послідовностей ов структурних генів цих мутантних вірусів буде корисна в системах виявлення відповідних білкових антигенів і антитіл.
Ф) Комплекси антиген-антитіло можуть бути виявлені відомими способами. Специфічні моноклональні та ка поліклональні антитіла можуть бути утворені з допомогою імунізації тварин, таких як, наприклад, миші та кролі, пептидами або білками, специфічними до індукованих вакциною мутантів вірусу гепатиту В. во Інгібіторні противірусні агенти можуть бути розроблені й спрямовані проти цих білків і молекул у культурі клітин або /л у/ко.
Цей винахід оснований на вивченні на виділеному вірусному геномі з індукованою вакциною мутацією по залишку амінокислоти 145 (гліцин на аргінін) головного поверхневого антигену. Винахід робить можливим надзвичайно специфічне виявлення цих індукованою вакциною мутантів вірусу гепатиту В і пропонує матеріал, 65 як наприклад, білок, поліклональні та моноклональні антитіла для створення такої системи виявлення.
Авторам відомі факти, які свідчать, що при експресії в ссавців головний поверхневий антиген (НВзАд)
мутанту НВУ, про що повідомляється в даному винаході, виявляється як 22 кДа білок на Кумасі-блакитному зафарбованому гелі ЗО5-РАСЕ, тоді як дикий тип НВзАд виявляється як 25 кДа білок. Оскільки єдиний сайт глікозилювання на НВзАд розташований близько (аспарагін в положенні 146) до мутації в положенні 145, є дуже ймовірним, що принципова заміна гліцину на аргінін в положенні 145 впливає на процес глікозилювання в мутанті
НезАад. Цей дефективний процес глікозилювання мав би, у свою чергу, призвести до утворення меншої кількості білка, як і спостерігалося в даному дослідженні. Оскільки на антигенність білка негативно впливає ступінь його глікозилювання, передбачається, що мутант НВзАд, про який ідеться мова в даному винаході, є більш антигенним, ніж дикий тип НВвгАд. Це передбачення, крім того, підтримується структурним аналізом, 7/0 Використовуючи спосіб, розроблений Норр і ММооадв.
Серологічні дослідження авторів також вказують на головні відмінності між носіями НВМ дикого типу й тими, які несуть мутант НВУ, про який ідеться мова в даному винаході, де однією такою різницею є те, що завантаження вірусної ДНК сироватки є суттєво нижчим заприблизно 5 пгна мл, як визначено за допомогою 7251 гібридизаційним тестом (АбБбої І арогаюгіез, США). Значна різниця існує в завантаженні ДНК НВМ дикого типу, 75 що є набагато вищим за 100Опг на мл. Крім того, рівень антитіл проти поверхневого антигену вірусу гепатиту В (анті-НВ5) визначається в 10 МО на мл в мутантному НВУ, про який ідеться мова в нашому винаході, тоді як такі антитіла залишаються невизначеними в носіях НВМ дикого типу.
У процесі визначення послідовності автори спостерігали, як кілька олігонуклеотидів, створених згідно з (кожний з них довше, ніж 17 основ) послідовністю НВМ дикого типу, не змогли гібридизуватися з ДНК мутантів
Вірусів, про який ідеться мова в даному винаході. Два таких олігонуклеотиди розташовані в геномі в положеннях 2711-2729 і 2902-2920. Результати авторів, таким чином, вказують на структурні відмінності між геномами дикого типу й мутантного НВУ.
ПОСИЛАННЯ
1. Ооп, С-9., "Міга! Нераїйів В іп зЗіпдароге: ерідетіоіоду, ргемепіоп апа сопігоі-топійгіпо Пера су
В ргоодгатте апа тападетепі ої сагтіегв" .). Коуа! СоПеде РпНузіс. І опдоп (1997), іп ргезв. 2. Ооп, С-). "Іввцевз аззосіагей м/йп НВМ тщшапі зігаїіпів" У. Коуаї. СоПеде РпНузіс. І опдоп (1997), іп ргезв. і9)
З. Ооп, С-)., еї аі. Нерайів В зипасе апіїдепе тшапів (НВзАд) -ІНеїг звідпіїсапсе" АппаІївз Асад. Меа. Зіпдароге (1997), іп ргезв. 4. Ооп, С-9У., "МоїІесціаг ерідетіооду ера В Са мапйапсе апа тшапів: відпійсапсе іп іттипе о роршіайоп" "АМА (1996) 12: 5-6. 5. боп, К-Т, "Нераїййів В іттипігайоп іп Зіпдароге" І апсеї (1996) 348: 1385-1386. - б. Ооп, С-)., еї аї. "Майшга! Нпівіогу ої Пераїів В зипасе апідепе тиїапів іп спідгеп" Гапсе( (1996) 348: «Ж 1524-1525. 7. Нагізоп, Т. 9., "Сепеїйїс магіайоп іп перайііз В мігив", Ешг. У. (завігоепіег. 5: Нерайі. (1996) 8: 306-311. і. 8. Ооп, С-)., еї аі., "Моіесціаг ерідетіоіоду ої пераїййів В мігивз массіпе магіапів іп Зіпдароге" Массіпе (1995) 13: В. 699-702. 9. Сагтап, МУ., еї аї., "Міга! депеїйіс магіайоп: Пераїйіз В аз а сііпісаІ ехатріе" І апсеї (1993) 341: 349-353. 10. Нагізоп, Т. 9., "Магіапів ої Пераїййіз В мігив" Мох Запа (1992) 63: 161-167. « 11. Наттівоп, Т. 9. еї аї., "Іпдерепдепі етегдепсе ої а массіпе-іпдисед езсаре тшапі ої пераїййів В мігив", у). 70 Нерайі. (1991) 13: 5105-107. - с 12. Сагтап, МУ. Р. еї аіІ., "Массіпе-іпдисед езсаре тшапі ої пераїййів В мігив" І апсеї (1990) 336: 325-329. тШТА РА ТО теипи-пП0-7 Ро ген | подолано тИЗ-Ж 2 « «3» » Я -5 х : Ж Є Є Є Є Є Є -і- ЗКМИ 8 - 6 Я - 1 1620 2300 3215 -І о й УББ МУ? що У МІЙ лі що Уї3 Ти У2 из 7 щ» сл Е
Ф) іме) 60 б5
ПЕРЮНК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
(ЗАГАЛЬНА ІНФОРМАЦІЯ: (0 НАЗВА ВИНАХОДУ: ШТАМ ВІРУСУ ГЕПАТИТУ В, ІНДУКОВАНИЙ
ВАКЦИНОЮ, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ (й) КІЛЬКІСТЬ ПОСЛІДОВНОСТІЙ ТВ (2) ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ 21 (Фігура 3) «УХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ (2) ДОВЖИНА: 3215 ц. п. (6) ТИП: нукасіїнова кислота (в) ЛАНЦІОГОВІСТЬ: погвійна (г) ТОПОЛОГІЯ: кільцева (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність 1:
СТОСАССАСТ ТТССАССАЛА СТСТТСААСА ТОССАСАЄТС АОСССССТоТ АСТТТССТоС во
ТОСТСССТСС АСТТОАССАМ САСТСВОСОС ТОСТСАСААТ АСТСТСТСТо ССАТАТОСТС 12
ВАТСТТАТСО АвСАСТОССо АСССТОТАСС ОААСАТОСАС ААСАТСОСАТ САСОАСТоСТ. 180
АсбАСССсСтТо СТООТСТтТАС АСсОоСобоСІТ ТІТСТТСТТо АСАЛАААТОС ТСАСАВТАСС 240
ССАСАСТСТА САСТОСТОСТ ССАСТІСТСТ СААТТІТСТА боСОбААСАС ССбІСТСТСТ зоо
ТССССААААТ ТСОСАСТОСС АААТСТССАС ТСАСТСАССА АССТСТТСТС СТОСААТТТо зво
ТОСТОСТТАТ СОСТССАТОТ СТСТоссосо ТТТТАТСАТС ТТССТСТЄСА ТССТОСТОСТ 420
АТОССТСАТС ТІСТІОТТОО ТІСТІСТОСА СТАТСАЛОСТ АТоТІСССО; ТІТСТССТСТ во
ААТІССАССА ТСААСААСАА ССАССАСССС АССАТССААА АССТОСАСАА СТОСТОСТСА 5
МССМАССТСТ АТСТІТСССТ САТСТТОСТО ТАСААЛАССТ АСОСАСАЄМА АСТОСАССТО воо
ТАТТСССАТС ССАТСАТСТІ ОбОСТІТСОС ААААТАССТА ТсОсАСТОСо ССТОАСТССо 860 тТтТтТСтТСтТтТос СТІСАСТТІАС ТАбТОоССАТТІ ТбттТСАСтТос ТІСоТАвооС тттоссесас то
ТОТСТбОСТТ ТСАСТТАТАТ ССАТОАТОТО СТІТТООССС ССААСТСТСТ АСАВСАТСТТ тво
САСТСССТТТІ АТОССОСТОТ ТАССААТТІТТ СТТІТСТСТІ ТОССТАТАСА ТІТАВАСОСТ 840
САСАВДААСАА ААВСАТСССС АТАТТОССТІ ААСТІСАТОС САТАТСТСАТ ТоСсАсТтТоС. 900
СССАСАТТОС САСАССААСА ТАТТСТАСАА ААААТСАААА ТСТОТТТТАС САВАСТТеСТ з60
СТАААСАСОС СТАТТОАТТО САААСТАТОТ САДССААТТо ТоОсТСТІТТ соостттоес 1025
СССОСТТТСА СОСААТСТОС АТАТОСТОСТ ТТААТОССТТІ ТАТАТОСАТО ТАТАСАЛССА 1080
ВААСАСОСТТ ТТАСТТІСТО ОСАКАСТТАС ВАСАССТТТС ТААСТАААСА ОТАТСТОААС 1140
СсТтІТАССССо ТТоСтТсаОсА АсСоссстостТ СТоТасСсАЛО ТОТТТОСТаК СоСААССССС 1200
АСІОСТтТСбо ССТТОбССАТ АССССАТСАС СОСАТОСОТО СААССТТТОТ бтСТестСсТо 1260 Ге 29 СССАТССАТА СТОСССААСТ ССТАСССОСТ ТСТТТІТОСТС ССАССАССІС ТОССССАААА 1320 Ге)
СТСАТОбОСА СТСАСААТІС ТСТССТОСТС ТОСОССААСТ АТАСАТСАТТ ТССАтТоССсТо іїзво
СтТАСОоСТоТо СТОССААСТо САТОСТОоСоС бобАСоТОСТ ТІОТІТАСоТ ССсСТСбОСо 1440
СТСАЛАТСОСО СоСКОФАССо стТоссоссос СостТтососс ТСТАССоСсс ссттстосос 01500
СТСТТАТАСС САССОАССАС СоССсСсСАСС ТСТСТІТАСО СОСАСТСССС сТСТоТессТ 1550
ТСТСАТСТОС СССАСОСТОТ ССАСТТОССТ ТСАССТСТОС ВОСТОБСАТО САСАССАССС 1520 ів)
ТОАЛОССССВ ССССАЛССТО СССААОСТСТ ТОСАТААСАС САСТСТТССА СТТТСАССЛА 1680
ТСТСААСОАС ССАССТТСАС ССАТАСТІСА ААСАСТСТОТ СТІТААТСАС ТоСОАСОАСТ 1740 -
ТОООССАСОМ ССТТАОСТТА ААСОТСТТТО ТАСТАССМОС СТСТАСССАТ АААТТОСТОТ 1800
СТТСАССАТС АССАТаСАКАС ТТТТТСАССТ СТОССТААТС АТСТСАТСТІ САТОТОСТАС 1860 «І
ТОоТТСААССС ТосСААостТотТ осстТІСОСТо ОСТТТебоосС АТОСАСАТТО ВСССОТАТАА 1920
МОВАТТТОСА ОСТІСТОТОС ВСТТАСТСТС ТТТТТТОССТ ТСТСАСТІТТТ ТІТССТІСТАТ 1980 Ге)
ТОСАСАТСТС СТССАСАССЯ ССТСТОСТСТ СТАТСОССАС ОССТТАСАСТ СТСОССААСА 2040
ТІСТТСАССТІ САССАТАСОС САСТСАСОСА АОСТАТІСТО АСТТСОССТО АСТТААТОАА 2100 -
ТСТАСССАСС ТОСОТОССАА СТААТІТОСА АСАТССЛОСА ТОСАСССААТ ТАСТАСТСАС 2160
СТАТСОТСААС СТТААТАТСО СССТАЛАААТ САСАСААСТА ТТОТОСТТІС АСАТТТОСТО 2220
ТСТТАСТТІТ СОСАСАСААА СТОТІСТТСА АТАТІТОСТС ТСТТТТОСАС ТСТОСАТТОС 2280
САСТОСТССТ ССАТАТАСАС САССАЛАТОС СССТАТСІТА ТСААСАСТТС СОСАЛАСТАЄ 2340 «
ТОТТСТТАСА ССАВОАбССА ССТОСОСТАС ВАСААСААСТ СОСТСОССТС ОСАБАССААО. 2200
СТСТСААТСС СССССТСОСА СААСАТСТСА АТСТСОСОМА ТСТСААТСТТ АСТАТТОСТТ 2460 -
ССАСАСАТАА ССТСССАДАС ТТТАСбССоС ТТТАТІСТІС ТАСОСТАССТ ТОСТТТААТе 2520 с СТААЛАТОССА ААСТОСТТСТ ТТТССССАСА ТТСАТІТОСА ССАССАСАТТ СТІСАТАСАТ 2550
СТАЛОСАЛАТТ ТСТООСОСОС СТТАСАСТАА АТОААЛААСАО САСАСТААЛА ТТААТТАТОС 2640 х - СТОСТАССТІТ ТТАТССАЛАТ СТТАСТАААТ АТТТССССТІ АСАТАААССС АТСАААССАТ 2700 " АТТАТССКСА СТАТОТАСТТ ААТСАТТАСТ ТССАОАСОСО АСАТТАТТТА САСАСТСТТІ тво
СОАНСОСОСО САТСТТКТАТ АААЛОМОКСТ ССАСАСОТАС ССССТСАТТТ тососатеьс 2820
САТАТТСТТО СОААСАВОАТ СТАСАОСАТО ОСАССТТООТ СТІССАКАСС ТОСАВААССС 2880
ВТОСООАСАА АТСТТТСТСТ ССССААТСОС СТОБОАТТСТ ТСССОбАТСА ТСАСТТОбАЄ 2940 -і ССТОСАТІСА АВСССААСТС АСААААТССА САТТСССАСС ТСААСССОСА СААОСАСААС 3000
ТосссозАсСа ССААСАКосСТ оссАстТоссА ССАТТССсСсС САВОСТТСАС СССТССТСАТ. зово (95) ососсАсСтот тобботосАо СоСІСАбОСТ САСОбССТАС ТСАСААСТОТ СССАССАОСТ 3120
ССТоСтТестТо ССТОСАССАА ТССОСАСТСА ССААСОСВОС СТАСТСССТІ АТСТССАЄСТ 0 ЗІ80
ЧК» СТААСССАСА СТСАТССТСА СОССАТОСАЄ ТОСАХ 3215 -І сл (Ф, ко 60 б5
(У) ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ме: (Фігура 4) (і) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: (а) ДОВЖИНА: 843 амінокислоти (6) ТИП: амінокислота (в) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: одинична (г) ТОПОЛОГІЯ: лінійна (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Ло?
Меї Ркго Бей бак Туг біп Нів Ре Агу був Бей пед цеп цем Азр січ 1 5 10 15 «Фіз лАіа б1у Рго цем Сіш біз бії Без Рго Агд рез Аїа Азр обі сіу 20 25 30 їв Ап Аг Ако Маї Аїа Січ Аср оївч Азп без біу Азп о Пеп Авп Уаї 35 40 45 бБег І12 Рго Тгр ТВг Ні Пув Ма) бСіу Авп Ре ТБг б1іу Пес Тук 5Зех 50 55 60
Зек Тпг Уві Рко Сув Рпе Азп Рго Буз ТІр біп ТВг Рго 5ег Рпе Рго 65 70 75 во дар Іїв Нів Пец Сіп Сіш дЛер І1е Гей Лер Аг Сує Був Сіп Ре Уаї 85 зо 25 біч Рго Беч Таг Уаї Аза біс Авп Агсу Аг Пе Був рез І1е неє Рко 100 105 1ю вій АГ Рпе Тут РГО АБП Маї Так був Туг їец Рго їз Авр був б1у 115 120 125
Іїз цув Рго Туг Тук Рго бій Тут Уа! Уаї Асп Нів Тук РБе сіп ТБу 130 135 140
Акад Нія Туг Пе Нія ТВг Ге Тер оруя Аза с1у І1е Пцеп Тук цун Агд 145 150 155 160 січ бБет Тпк Аго Бек Аіа Бег Ріє Сув біу бек Рко Тук Бек Ттр бій 155 170 175 біб Авр о пец біп Нія б1іу Агу Це Уа! РБе Сіп Тік бег цув Аку Нів 180 185 1930 с1у АврІуя Бек Ра Сув Рго біч Бек Рко б1у І1е Пец Рко-Аку бег 195 200 205
Бег Уа) біу Рго Суз І1є біп Бег біп еп Акд Був бек лгу Меч б1у 210 215 220
Рко Фіп Рго Аїа біп біу біп Пезч ліз б1у Аг 010 бі сіу о1у Заг 225 230 235 240 сеІ с1у Заг І1є Ак Віа Ак Уаї Нів Рко 5ег бек Тер с1у Тк Маї сіу 245 250 255 Ге)
Уаї бі Рго Зек біу Бек біу Рхо Так Нів Аяп Сув Аїа Зах баг 5Зег 260 265 270
Зег Заг Су Пе Ніа 01п Зеок Аза Уаії Агу Був Міа Аїа Тук Зег йвч 215 280 285
І1їе Бек Тік бБег Пцувз Сіу Нія Бек Бег б5ег біу Нів Аїа Маї Січ рей Іо) 290 295 зоо0 з0 Нів Нів Рпе Рго Рго Авл бек Бег Аго Зег Сіп Зег бСіп біу Рко Уаї 305 310 315 320 че їйец Зек Суя Тер Тгр Беш біп Ре Акуд Азп бег біз Рго Сув 5ег бій 325 330 335 «І
Тук Сув Пец Сув Ніз Іїе Уаї Лял Печ І1е Січ Авр Тгр сіу Рко Суз 340 345 зБО0 со
Твх біз Нів біу біз Нів Ак9д І1е Акд ТБЕ Рго Аку ТВ Рго Азїва Аг 355 зво 365
Уаї Тіг біу біу Уа1ї Рів цез Маї Азр Буз Авп Рго Нія Азп Тік А1а І " 370 375 зво біз бек Агуд Пец Уаї Уаї Авр Ре бек Сіп Ре бек Ак Сіу Авп Таг 385 зз0 395 400
Аг Маї бек Тер Рго цуз Ре Аіа Маї Рго Азп Пец біп Зек йеч тТБК 405 410 415 «
Азп Бей Бей бетг бЗетг Азп Гей Зек Тгр Пец Бек Печ Азр Уа1ї бек А1а 420 425 430 шщ й
Аїа Рпе Тук Нів Пен Рко Пец Нів Рго Аза Аїа Неб Рго Нів Пец Гец с 435 450 445
Уаї сіу Бех бек бсіу еч 5ег Акуд Туг Маї Аїа Аго Пец Бек Бек Авп . » а5о0 455 або " Зег Аг І1е Авп о Авп Аза о біц Нів Агу Тр оМеє Сі Ал Ге Ні Аяп 465 470 475 480 бек Сув бек Аку Авп Пцеч Туг Уаї бег Пцемш Меє цез Пцеч Тур цув Так 85 90 495
Тук б1у біп Пруз Пцеш Нів Пец Тук бек Нів Рго 116 Ії Пец біу Рпе -і 500 505 510
Аху цує Ії Рго Мес біу Маї біу цей Бек Рго Рпе Пец Гвю Аза біп
ОО 5ІБ 520 525
ТРпе Тпт бек Аїа Іїе Суб Бек Маї Маї Ахку дку Аза Ре Рго нів Сув
І: 530 535 5а0 їеч Аїа Ре бБег Тут Меб Авр Анр о Маї Уаї Гец сіу Аза цув'зек МУаї 545 550 555 560
І біп Нів Пец Сіш Бег Ппеч Туг Аза Аза Уаї Твг Авп РБе Пец Гей Зек 565 570 575 сл їеч сіу ІЇ1є Нів Іеи Аза Рко Нія Шуа Тпх Цув Аку Тер Сіу Тук 5ех 580 585 590 їез Ап Рпеа Меє біу Тук Ма1ї 21іє Сіу бек Тер сіу ТВг Пец Рко біп 595 во 605 біз Ніє І1е Уаї Сіп Гуз їі Був Меї Суз рве Ак Пув Мей Ркго Маї 610 615 - 620
Авп Аку Рго І1їе Азр Ткр цув Маї Суя Сіп Агу 11е Уа1і сіу цеч Бей
ГФ) 625 630 635 640 60 бо сіу Ре А1їа А)а рго Рпа Тк Сіл Сув біу Тукх Рко Аіа Геч Має Рго 45 550 555 їеа Тук Аіа Суб І1е Сіп ліа Пує Сіп Аіа Рре Так РАе бек біп ТБЕ
Бо 665 670
Туг цув Тік Рпе їечш Бег Пув біп Тук реч Авзп о Пеи туго Рго Ма! діа 675 680 685
АкФ сіп Агу Рго Сіу Пйеч Сув біс Уаі Рае Аїа Авр А1їа ТЬк Рго ТЬг "630 695 то біу Тгр біу цез діа Іі б1іу Нів Сіп Агу Меє Ак біу Тпг Ре Уаї 705 7ю 7ів 120
Баг Рго цес Рго 11 Нів Тіх Азїа біз Беч Беч Аза Аїа Суя Рпе дія 225 730 735
Агд Зек Аго бБег біу Віа Цуз цеч І1їе біу ТВх Азр Азп Бек маії Уві 740 745 750
Бїеч баг Акд цу Тук Так Бек Ре Рго Тер рез Пей б1іу Сув Аіа Аїа 755 760 765
Меп Тер Ії рез Агу сіу Так бег Рпе Уаї Тук Уа Рко бек Аза Пвч 770 775 780
Азп РКО Аза Аяр Ар Рго 5ег Агуд сіу Агд Печ сіу йеш Туг АК Ро 785 790 795 800 реч бе Акд о цез реч Туг Агуд Рго ТВг Твк Сіу Аг Твх Бех Беш Тук 805 810 815
Аїа Авр Бек Рго Бек Уаї Рко Бех Нів цеч Рго Азр Агу Уві Нів Рпе 820 825 8зо
Аїа Бех Рго Меч Ні Маї Аіа Тгр Ак Рго Рго 835 840 (2 ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ме 3: (Фігура 5) 0)ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: (2) ДОВЖИНА 400 амінокислот (б) ТИП: амінокислота (в) ЛАНЦІОГОВІСТЬ: одинична (г) ТОПОЛОГІЯ: лінійна - (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Ло3:
Меє сіу Сіу Тгр бех бех МЦую Рго Ак Муз С1іу Меї Сіу Таг Ап беч 1 5 10 15 ч І
Бек Маї Рко Авп РКО Пец біу Рпє РБє Рго Авр Ніє біп еп Адяр Рго 20 25 зо
Міа Рне Гуя Аза Аяп Зег Сійш лап Рго Аяр Ткр АЛяр Тез яп Рко Нія з5 40 45 цу Авр Азп Тер Рго Азр о Аіва Азо Пув Уаї біу Маї Сіу ліа Ро біу 50 55 50
ВБКо б1у рРпе Тпг Рго Рго Нів сіу б1у цеш Дей біу Тер баг Рко сіп 55 70 75 во
Аіа біп сіу цец Пец Тл о ТвК оМаї Рго Аза А1а Рго Рго Рго Аза бег зо 85 90 95
Твг Азп Аг біп Бег біу АкФ біп Рко ТПх Рго Пец Бек Рго Ркго Гви 100 105 110
Ат Мар Ткг о Нія Рко Сіп Аза Мек біп Ткр Авп бег Твг Твс РАе нів « 115 120 125 сіп ТпК рец біп Авр Рго Аку Уаї Агуд Аіа пе Тус Рпе Рко А1а сіу Гео) 130 135 140 сіу Бек Бех Бех біу ТБу Уаї Бек Рто Аїа сій лап ТБ Уаі бег лЛіа 145 150 155 160 у
І1їе Бег бЗех І18 Пец бег Пуюш ТБт Сіу Авр Рко Маї Рго Авп Меє біч 165 170 175
АБп 1126 Аза Бех сіу Пец Пем біу Рго Пец Пцеч Уаї цеш сіл Аза сіу 180 185 190
Рве Рпле йеч Пец ТЬг о Пув І16 реч Тк Ії Рго біп бех Пец Ар 5ег 195 200 205
Тур Тгр ТВг бЗег Пец деп Ре Пец біу б1іу Рго Твіг Маї Сузв Печ сіу 210 215 220 ) сіп Азп Бек біп Бек біп І1є Бек Бек Нав Бег Рго ТБг Суз Сув Рго ( 225 230 235 250
Рго Ї1е Сув Рго Сіу Тухк Агуд Тгр Мей Суз Геч Аку Акд Ріпа І18 І16 ч з» 245 250 255 к Рпе реп Суз І11їе рез Тем Пе Сув Без ІЗїе Рів це Пец Маї Ше Гез 260 255 270
Азр Тук біп біу Меє Пец Рко Уаї Суз Рго Пеп Ії Рко біу Бех Таг 275 280 285 -і ТнЕ Тк бек Тк б1іу Рко Сув Муз ТВг Сув ТЬг Тіт Рго Аіа біп сіу 290 295 300
Тік Бег Мебє Ре Рго Зек Суз Сув Суа Тпг цуя Рго ТЬг Авр Агд Азп
ОО 305 310 315 320
Сув Твх Сув Т1е Рго Іїе Рго Бег бег Тер А1їа Рае Аіїа Пув Тух беч «г» 325 330 335
Ттр сі Тер Аїд бек уаї Агу Рве бЗег Тер йеч Бех Пец Пем Ма1ї Ркго з40 345 350-
І Рне улі Ссіп Тер Ре Уаї с1іу Геч бек Рго Тк Уаї Ткр Тем бог Маї 355 зво 365 сл Іїе ТіІр Меє Меб Тгр Рпе Тер Сіу Рко Бех Печ Тутгт Авп Ії Геи бек 370 375 380
Рго РБе Меє Рго Пец Бей Рго Іїе Ре РБе Суз Пец Тер Уаї Тут Іїє з85 3930 395 400 25 60 бо
(2ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ле 4: (Фігура 6) (І) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: (в) ДОВЖИНА: 212 амінокислот (6) ТИП: амінокислота (8) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: одинична (0) ТОПОЛОГІЯ; лінійна с (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Мо: 4:
Ме біп Пес Рпе Нів Печ Сув Іва І1є І16 бех Сув бек Сув Рго Твг 1 5 10 15 чаї біп Віа 5ех уз рей Сув аз с1у Тгр реч Тгр сіу мес Авзр І16 20 25 зо
Азр Рго Тук цуз біз Ро Сіу Ліа бек Уві Січ Коч Геї бек Рпе Бем 35 «0 45 170 Ркго 5ег Авр Рпе Рпе Рго Зек Іїе Агу Авр рез Гео Авр о Трг Аїіа бег 50 55 во
Аїа цеч Тук Агд біз Аза Тез Сійп бек Рго біч Нів Суя бек Рго нія 65 70 15 80
Нів ТвВг Аза еш Абу бів Аіа 18 Ге бег Ткр біу Січ їжи Мебс Авп 85 90 95
Тез А1їа Твк ТгроУаї сіу Бек Авп печ бій Авр Рго Аза бек Згд сі 100 105 110
Шез Маї Уаї бег Тух Уаї Азо Уаї Авп Меє Сіу Печ Буя Іїа Агу біп 15 115 120 125 їеч грец ТгроРпе Нів Іїе Бех Сув Пез Тл Рре сіу Ах бій Так хУаї 130 135 1410 цеаз біш Тук оце уа)ї бек Рпе Сіу Маї Ттр І1єе Ак9 Тк Рго Рго діа 155 150 155 160
Туг АгЧ Рго Рго Аяп діа Рго І16 Геп бБег ТЦІ Печ Рко біз ТВг Таг 165 170 175 укі Хаї Агу Аг Аку біу Агу бек Рго Аго АгФ Ак ТБЕ Рко бек ркго 20 180 185 190
Аг Аг Аку Аго бек бій Бек Рго Агу Агу Ак Лгд Зк о біп бег Агу 195 200 205 - біч Бек біп Сув 210 (2) ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ 55 5: (Фігура 7) с 25 () ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: Ге) (4) ДОВЖИНА: 154 амівокислоти (5) ТИП; амінокислота (83) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: одинична (Гутопологія: лінійна () ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ; Послідовність Ле: 5 мес А1іа А1їа Аху рем Сує Суз біл Пем дяр Рго Аза Агу АБр т ївч ІС 1 5 10 1 30 Сув цеч Аку Вго Маї б1у А1а біч Зек Агу Ф1У Ахо Рго ем Рго 01У ча 20 25 зо
Рго цем біу Аза пцем Рго Рко Аіа Бех Рго Рко Маї 11 Рко Твх дер 35 40 45 « ніє б1у Аіа Ні цем 5ех 1ем Ак біу реч Рго Маї Сув Аза Рів Бег 50 55 50
Бек Аїа б1у Рго Су Аїа їз Агу Рве Твгобех Аза Ауу Ах Мес СІМ Гео) ' то 75 во
Трг Твт Уаі Авп діа Нів б1іу Авпогей рго бує Маї цеч нів Цує Ах 35 85 зо з5 че
ТВІ цем бІу їеу бег Аїа Мек бег Тв ТЬг Ар Пец біш Аїа Тух Рве 100 105 110 цуз Авр Сув Маї Рне Авп січ Тгр бій бій їеч біу біч біз Маї Ага 120 й 125 це ру Маї Ре Уаї Ім б1у біу Суб Атд Нія цув пе Уа) Су 5ех 130 135 140
Рго Бек Рго Сув Ажп Ре РБе Тих Бек Аза 145 150 шщ с (2) ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ 22 6: (Фігура 8)
ІЧ () ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: 2 (8) ДОВЖИНА: 35 п. в. щі «6) ТИП: нуклеїнова кислота (в) ЛАІЦЮГОВІСТЬ: одинична (0) ТОПОЛОГІЯ: лінійна (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Ме: 6:
І АТАЛОСТТАТО ССССТАТСТТ АТСААСАСТТ ССОСА зв
ОО (2) ПІФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ле 7: (Фігура 9) (0) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: с» (4) ДОВЖИНА: 25 п. н. (6) ТИП: нуклеїнова кислота (в) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: одинична
І 50 (утопологія: лінійна (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Ле 7: 5 « п САСТСТАСАС ТСТОССОТАТ ТОТОА й
(ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ме 8: (Фігура 10) () ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВПОСТІ: (ут: нуклеїнога кислота ек НИ (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Ме 8:
ОАОТСТАСАС ТСОТООТОСА СТТСТ 25 (2)ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ме 9: (Фігура 11) 0УХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: (бу тил; нуклегноза кислот 70 лося (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Ме 9:
ТОАСААТТСТ САСООТОаТС ТОСАТОСвАС ОТ 37 (С) ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ле 10: (Фігура 12) 4) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ; 75 (ит вулетовв пслота (ТОЛЯ (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ; Послідовність Ле 0:
ТТТОоТТТАСо ТеССОТ 16 (2) ПІФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ме 11: (Фігура 133 й (Ї) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: (ву тип: нуклеїнова кислот ення с, (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Ме |і:
СТААОСТТАСЄ ТТТССООАЛО ТОТТИаАТ Ге о
Claims (67)
1. Виділений штам вірусу гепатиту В, визначений як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе ( поверхневий антиген-5'-145 (гліцин на аргінін), що зберігається під номером доступу Мо РО7121501, РО7121502 і РО7121503 в Європейській колекції культур клітин від 15 грудня 1997 року. т
2. Виділена молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим «І антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота о з5 в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, причому вказана послідовність являє ч- собою Послідовність Мо 1 на Фіг. 3.
З. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що поліпептид кодується нуклеотидами 155-835 послідовності нуклеїнової кислоти, позначеної як Послідовність Мо 1. «
4. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. З, яка відрізняється тим, що містить "АСБА" в положеннях 587-589. -
с
5. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота - це ДНК.
ц
6. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота - це РНК. "»
7. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 5, яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота - це кКДНК.
8. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 5, яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота - це геномна
ДНК. -І
9. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що поліпептид містить послідовність амінокислот, по суті ту саму, що й залишки амінокислот 174-400 послідовності амінокислот, о позначеної як Послідовність Мо 3, ьч
10. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що кодує поліпептид, що є Ммутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, причому такий поліпептид має і послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену сл вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, призначена для визначення, чи суб'єкт інфікований штамом вірусу гепатиту В, визначеного як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-145 (гліцин на аргінін), де таке визначення включає: а) одержання відповідного зразка нуклеїнової кислоти суб'єкта, і о б) визначення, чи зразок нуклеїнової кислоти зі стадії а) є нуклеїновою кислотою або одержаний з іме) нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності бо амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин.
11. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 10, яка відрізняється тим, що зразок нуклеїнової кислоти стадії а) містить мРНК, яка відповідає транскрипту ДНК, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка 65 Відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, і де визначення стадії б) включає: ї) контактування мРНК з олігонуклеотидом за п. 32 за умов, за яких мРНК зв'язується з олігонуклеотидом так, щоб сформувати комплекс, ї) виділення комплексу, який утворився таким чином, і її) розпізнання мРНК у виділеному комплексі так, щоб таким чином визначити, чи мРНК є нуклеїновою кислотою або одержана з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид.
12. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 10, яка відрізняється тим, що зразок містить кров, тканину або сироватку. 70
13. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за пп. 10-11, яка відрізняється тим, що виділена нуклеїнова кислота, олігонуклеотид або антитіло мічені маркером, здатним до визначення.
14. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 10, яка відрізняється тим, що зразок нуклеїнової кислоти на стадії а) включає мРНК, що відповідає транскрипту ДНК, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка 7/5 Відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, і де визначення на стадії б) включає: ї) трансляцію мРНК за придатних умов для одержання послідовності амінокислот, і ї) порівняння послідовності амінокислот зі стадії ї) з послідовністю амінокислот виділеної нуклеїнової 2о Кислоти за п. 9 так, щоб визначити, чи зразок нуклеїнової кислоти є нуклеїновою кислотою або одержана з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид.
15. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 10, яка відрізняється тим, що визначення стадії б) включає: ї) ампліфікацію нуклеїнової кислоти у зразку стадії а) та ї) виявлення наявності поліпептиду в одержаній ампліфікованій нуклеїновій кислоті. сч
16. Виділена молекула нуклеїнової кислоти, яка відрізняється тим, що кодує пептид, де пептид кодується молекулою нуклеїнової кислоти, що включає нуклеотиди 527 -595 Послідовності Мо 1. і)
17. Виділена молекула нуклеїнової кислоти, яка відрізняється тим, що кодує пептид, де пептиду відповідає послідовність, яка складається із залишків амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо 3. ю зо
18. Вектор, що містить виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка - відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу «г тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, і функціонально з'єднана з промотором транскрипції РНК. ме)
19. Вектор за п. 18, який відрізняється тим, що вектор містить ДНК вірусу. ї-
20. Вектор, який відрізняється тим, що містить виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує пептид, де пептид кодується молекулою нуклеїнової кислоти, що включає нуклеотиди 527-595 Послідовності Мо 1.
21. Вектор за п. 20, який відрізняється тим, що вектор містить ДНК вірусу.
22. Векторна система хазяїна для одержання поліпептиду, що містить вектор за п. 18 в придатному хазяїні. «
23. Векторна система хазяїна для одержання пептиду, що містить вектор за п. 20 в придатному хазяїні. з с
24. Спосіб одержання поліпептиду, який включає вирощування векторної системи хазяїна за п. 22 за придатних умов утворення поліпептиду, і виділення поліпептиду, одержаного таким чином. ;»
25. Спосіб одержання пептиду, який включає вирощування векторної системи хазяїна за п. 23 за придатних умов утворення поліпептиду, і виділення поліпептиду, одержаного таким чином.
26. Спосіб одержання поліпептиду в очищеній формі, який включає: -І а) введення вектора за п. 18 в придатну клітину-хазяїна, б) культивування одержаної клітини-хазяїна, щоб одержати поліпептид, і в) виділення поліпептиду, що одержують на стадії б), і ї5» г) очищення поліпептиду, виділеного таким чином.
27. Спосіб одержання поліпептиду в очищеній формі, який включає: Ш- а) введення вектора за п. 20 в придатну клітину-хазяїна, сп б) культивування одержаної клітини-хазяїна, щоб одержати поліпептид, в) виділення поліпептиду, що одержують на стадії б), і г) очищення поліпептиду, виділеного таким чином. 5Б
28. Очищений поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, який зберігається під номером доступу Мо РО7121501, РО7121502 і РУО7121503 в Європейській колекції культур клітин (Ф) від 15 грудня 1997 року, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від ка послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин. 60
29. Очищений поліпептид, одержаний відповідно до способу, який включає: а) введення вектора, що містить виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, який зберігається під номером доступу Мо РО7121501, РО7121502 і РО7121503 в Європейській колекції культур клітин від 15 грудня 1997, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного 65 поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу, тим що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, і функціонально з'єднаний з промотором транскрипції РНК в придатній клітині-хазяїні; б) культивування клітини-хазяїна, що утворилася, щоб одержати поліпептид; в) виділення поліпептиду, який одержують на стадії б), і г) очищення поліпептиду, виділеного таким чином.
30. Очищений пептид, де пептид має послідовність, що включає залишки амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо З,
31. Очищений пептид, одержаний відповідно до способу, який включає: а) введення вектора, що містить виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує пептид, що містить щонайменше /о частину головного поверхневого антигену штаму вірусу гепатиту В, який зберігається під номером доступу Мо РО7121501, РО7121502 ії РО7121503 в Європейській колекції культур клітин від 15 грудня 1997, де пептид кодується молекулою нуклеїнової кислоти, що містить нуклеотиди 527-595 Послідовності Мо 1, у придатну клітину-хазяїна; б) культивування клітини-хазяїна, що утворилися, щоб одержати поліпептид; в) виділення поліпептиду, який одержують на стадії б), і г) очищення поліпептиду, виділеного таким чином.
32. Олігонуклеотид з щонайменше 15 нуклеотидів, здатний до специфічної гібридизації з унікальною послідовністю нуклеотидів у межах нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де вказаний поліпептид має послідовність амінокислот, яка Відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, без гібридизації до будь-якої послідовності нуклеотидів у межах нуклеїнової кислоти, яка кодує головний поверхневий антиген вірусу гепатиту В дикого типу, причому олігонуклеотид включає нуклеотиди 527-595 Послідовності Мо 1.
33. Спосіб одержання антитіл до поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму с вірусу гепатиту В, де вказаний поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні о 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, що включає: а) одержання поліпептиду в очищеній формі; б) імунізацію організму, здатного до утворення антитіл проти очищеного поліпептиду, ю зо в) збирання утворених антитіл, г) об'єднання одержаних антитіл і очищеного поліпептиду за умов формування комплексу, і - д) визначення, які з одержаних антитіл утворюють комплекс з очищеним поліпептидом так, щоб одержати «Е антитіла до поліпептиду.
34. Спосіб за п. 33, який відрізняється тим, що поліпептид кодується нуклеотидами 155-835 послідовності і) нуклеїнової кислоти, позначеної як Послідовність Мо 1. М
35. Спосіб за п. 33, який відрізняється тим, що поліпептид має послідовність амінокислот, головним чином таку саму, що й залишки амінокислот 174-400 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо 3.
36. Спосіб за п. 33, який відрізняється тим, що організм - це кріль або миша.
37. Спосіб одержання антитіл до пептиду, де пептид має послідовність амінокислот, що включає залишки « амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо 3, який включає: шщ с а) одержання пептиду в очищеній формі, . б) імунізацію організму, здатного до утворення антитіл проти очищеного пептиду, и?» в) збирання утворених антитіл, г) об'єднання одержаних антитіл і очищеного пептиду за умов формування комплексу, і д) визначення, які з одержаних антитіл утворюють комплекс з очищеним пептидом так, щоб одержати -І антитіла до пептиду.
38. Спосіб за п. 37, який відрізняється тим, що організм - це кріль або миша. і
39. Антитіло, одержане за п. 33 або 37. їх
40. Антитіло за п. 39, яке відрізняється тим, що воно являє собою моноклональне антитіло.
41. Антитіло, здатне специфічно зв'язувати поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном - штаму вірусу гепатиту В, де зазначений поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від с послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, і нездатне до виявлення головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу.
42. Антитіло, здатне специфічно зв'язувати поліпептид, де поліпептид має послідовність амінокислот, що включає залишки амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо 3. (Ф)
43. Антитіло за пп. 41-42, яке відрізняється тим, що здатне до виявлення поліпептиду, який є мутантним ка головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, визначеного як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-145 (гліцин на аргінін), для визначення, чи суб'єкт інфікований бр штамом вірусу гепатиту В, визначеного як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5-145 (гліцин на аргінін), де визначення включає: а) одержання відповідного зразка з суб'єкта, і б) визначення, чи зразок стадії а) є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має 65 послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, за допомогою контактування із зразком за відповідних умов, щоб зв'язатися з антитілами за п. 41 або 42 так, щоб визначити, чи інфікований суб'єкт.
44. Антитіло за п. 43, яке відрізняється тим, що виділена нуклеїнова кислота, олігонуклеотид або антитіло Мічені маркером, здатним до визначення.
45. Антитіло за п. 44, яке відрізняється тим, що маркером, здатним до визначення, є радіоактивний ізотоп, флюорофор або фермент.
46. Спосіб визначення хімічної сполуки для застосування у виробництві лікарських засобів, придатних для лікування інфекції штаму вірусу гепатиту В, визначеного як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що /о несе поверхневий антиген- 5'-145 (гліцин на аргінін), де спосіб визначення хімічної сполуки включає: а) контактування поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, з хімічною сполукою за умов, в яких відбувається зв'язування між поліпептидом і хімічною сполукою, б) виявлення специфічного зв'язування хімічної сполуки з поліпептидом, і в) визначення, чи хімічна сполука інгібує поліпептид так, щоб ідентифікувати хімічну сполуку, придатну для лікування інфекції вірусним штамом.
47. Спосіб визначення хімічної сполуки для застосування у виробництві лікарських засобів, придатних для 2о попередження інфікування штамом вірусу гепатиту В, визначеного як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5'-145 (гліцин на аргінін), де спосіб визначення хімічної сполуки включає: а) контактування поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду сч ов ЯВЛЯЄ собою аргінін, а не гліцин, з хімічною сполукою за умов, в яких відбувається зв'язування між о поліпептидом і хімічною сполукою, б) виявлення специфічного зв'язування хімічної сполуки з поліпептидом, і в) визначення, чи хімічна сполука інгібує поліпептид так, щоб розпізнати хімічну сполуку, придатну для попередження інфікування вірусним штамом. ю зо
48. Композиція, яка містить поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, що зберігається під номером доступу МоРО7121501, РО7121502 і РУО7121503 в Європейській колекції - культур клітин від 15 грудня 1997 року, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється «г від послідовності амінокислот головного зовнішнього вірусу В антигенного гепатиту дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, причому кількість такого ме) поліпептиду є ефективною, щоб стимулювати або збільшити продукування антитіла в суб'єкті, та фармацевтично ї- прийнятний носій.
49. Композиція за п. 48, яка відрізняється тим, що вона призначена для лікування суб'єкта, інфікованого штамом вірусу гепатиту В, визначеним як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5-145 (гліцин на аргінін). «
50. Композиція за п. 48, яка відрізняється тим, що вона призначена для попередження інфікування суб'єкта з с штамом вірусу гепатиту В, визначеним як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5-145 (гліцин на аргінін). з
51. Композиція, яка містить пептид, де пептид включає послідовність, яка складається із залишків амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо З, причому кількість такого пептиду є ефективною, щоб стимулювати або збільшити продукування антитіла в суб'єкті, та фармацевтично -І прийнятний носій.
52. Композиція за п. 51, яка відрізняється тим, що вона призначена для лікування суб'єкта, інфікованого о штамом вірусу гепатиту В, визначеного як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий їх антиген- 5-145 (гліцин на аргінін).
53. Композиція за п. 51, яка відрізняється тим, що вона призначена для попередження інфікування суб'єкта ш- штамом вірусу гепатиту В, визначеним як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий сп антиген- 5-145 (гліцин на аргінін).
54. Спосіб одержання композиції, який відрізняється тим, що включає визначення хімічної сполуки способом за п. 46 і змішування сполуки з фармацевтично ефективним носієм.
55. Спосіб одержання композиції, який відрізняється тим, що включає визначення хімічної сполуки способом за п. 47 і змішування сполуки з фармацевтично ефективним носієм. Ф)
56. Спосіб за п. 54, який відрізняється тим, що одержану композицію застосовують для попередження ка інфікування суб'єкта штамом вірусу гепатиту В, визначеним як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5'-145 (гліцин на аргінін). во
57. Спосіб скринінгу рідин організму суб'єкта на вірус гепатиту В, визначеного як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5'-145 (гліцин на аргінін), який включає: а) одержання відповідного зразка рідини організму суб'єкта, б) визначення наявності поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності 65 амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, у зразку стадії а) так, щоб піддати зразок скринінгу на штам.
58. Спосіб за п. 57, який відрізняється тим, що рідина організму включає кров, сироватку або зразок нуклеїнової кислоти крові або сироватки.
59. Спосіб застосування антитіла, що здатне до виявлення поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В для визначення, чи суб'єкт має схильність до карциноми печінки, де таке визначення включає: а) одержання відповідного зразка нуклеїнової кислоти з суб'єкта, і б) визначення, чи зразок стадії а) є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує 7/0 поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, за допомогою контактування із зразком за відповідних умов, за яких відбувається зв'язування з антитілами за п. 41 так, щоб визначити, чи суб'єкт має схильність до карциноми печінки.
60. Спосіб за п. 59, який відрізняється тим, що зразок нуклеїнової кислоти стадії а) містить МРНК, що кодує поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, і де визначення стадії б) включає: ї) контактування мРНК з олігонуклеотидом за п. 32 за умов, за яких мРНК зв'язується з олігонуклеотидом так, щоб сформувати комплекс, ї) виділення комплексу, який утворюється таким чином, і її) розпізнання мРНК у виділеному комплексі так, щоб таким чином визначити, чи мРНК є нуклеїновою кислотою або одержана з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид. сч
61. Спосіб за п. 59, який відрізняється тим, що зразок нуклеїнової кислоти на стадії а) містить мРНК, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий і) поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, і де визначення стадії б) включає: ю зо ї) трансляцію мРНК за придатних умов для одержання послідовності амінокислот, і ії) порівняння послідовності амінокислот стадії ії) з послідовністю амінокислот, яка кодується виділеною нуклеїновою кислотою - за п. 9 так, щоб визначити, чи зразок нуклеїнової кислоти є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової «г кислоти, яка кодує поліпептид.
62. Спосіб за п. 59, який відрізняється тим, що визначення стадії б) включає: і) ї) ампліфікацію нуклеїнової кислоти у зразку стадії а) та ї- ії) виявлення наявності поліпептиду в одержаній ампліфікованій нуклеїновій кислоті.
63. Спосіб за п. 59, який відрізняється тим, що зразок містить кров, тканину або сироватку.
64. Спосіб застосування антитіла, що здатне до виявлення поліпептиду, який є мутантним головним « поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В для визначення, чи суб'єкт має схильність до карциноми в с печінки, де таке визначення включає:
. а) одержання відповідного зразка з суб'єкта, і и?» б) визначення, чи зразок стадії а) є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену -І вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 145 такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин, за допомогою контактування із зразком за відповідних умов, за яких відбувається зв'язування з о антитілами за п. 42 так, щоб визначити, чи суб'єкт має схильність до карциноми печінки. їх
65. Спосіб за пп. 60, 61 або 62, який відрізняється тим, що виділена нуклеїнова кислота, олігонуклеотид або 50р антитіло мічені здатним до визначення маркером. -
66. Спосіб за п. 65, який відрізняється тим, що маркером, здатним до визначення, є радіоактивний ізотоп, сп флюорофор або фермент.
67. Вакцина від гепатиту, що містить мутантну форму поверхневого антигену вірусу гепатиту В, що зберігається під номером доступу Мо РО7121501, РО7121502 і РУО7121503 в Європейській колекції культур клітин від 15 грудня 1997 року, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену гепатиту В тим, що амінокислота в положенні 145 Ф) такого поліпептиду являє собою аргінін, а не гліцин. ка 68. Вакцина за п. 67, яка відрізняється тим, що додатково містить ад'ювант. во Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2005, М 8, 15.08.2005. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. б5
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/SG1998/000045 WO1999066047A1 (en) | 1998-06-19 | 1998-06-19 | A vaccine-induced hepatitis b viral strain and uses thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA73475C2 true UA73475C2 (en) | 2005-08-15 |
Family
ID=20429861
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2000127296A UA73475C2 (en) | 1998-06-19 | 1998-06-19 | Hepatitis b virus strain, induced by vaccine, nucleic acid isolated molecule coding mutant main surface antiigen of hepatitis b virus, vector and vector system for the preparation of polypeptide, a method for the preparation of polypeptide (variants), purified polypeptide (variants), oligonucleotide, a method for the preparation of antibodies (variants), antibody (variants), a method for the determination of chemical compound for treating the infection of hepatitis b strain infection, a composition, a method for the preparation of composition, a method of organism liquids screening for hepatitis b virus, a method of antibody use, vaccine against hepatitis |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7038035B1 (uk) |
| EP (1) | EP1086232A1 (uk) |
| JP (1) | JP2002518013A (uk) |
| KR (1) | KR100498117B1 (uk) |
| CN (1) | CN1255540C (uk) |
| AR (1) | AR020092A1 (uk) |
| AU (1) | AU756858B2 (uk) |
| BG (1) | BG105065A (uk) |
| BR (1) | BR9815912A (uk) |
| CA (1) | CA2332173A1 (uk) |
| HU (1) | HUP0103258A3 (uk) |
| IL (1) | IL140363A0 (uk) |
| IS (1) | IS5777A (uk) |
| MX (1) | MXPA00012724A (uk) |
| MY (1) | MY135991A (uk) |
| NO (1) | NO20006457L (uk) |
| NZ (1) | NZ508892A (uk) |
| PL (1) | PL191312B1 (uk) |
| TR (1) | TR200003778T2 (uk) |
| UA (1) | UA73475C2 (uk) |
| WO (1) | WO1999066047A1 (uk) |
| YU (1) | YU80500A (uk) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AUPP967999A0 (en) * | 1999-04-09 | 1999-05-06 | North Western Health Care Network | Viral variants |
| AUPQ810900A0 (en) * | 2000-06-09 | 2000-07-06 | Austin and Repatriation Medical Centre, The | Viral variants and methods of using same |
| CN100355777C (zh) * | 2003-02-10 | 2007-12-19 | 文洪模 | 乙型肝炎病毒pre－S突变蛋白及其制备方法与应用 |
| US20060057670A1 (en) * | 2004-09-10 | 2006-03-16 | The Chinese University Of Hong Kong | Genomic markers of hepatitis B virus associated with hepatocellular carcinomas |
| ES2428630T3 (es) | 2004-09-22 | 2013-11-08 | Advanced Life Science Institute, Inc. | Método para detectar el antígeno s del virus de la hepatitis B |
| WO2006132598A1 (en) | 2005-06-07 | 2006-12-14 | Temasek Life Sciences Laboratory Limited | Porcine circovirus type 2 vaccines |
| CN101948933B (zh) * | 2010-07-22 | 2013-04-03 | 中国人民解放军第三〇二医院 | 检测石蜡包埋肝组织乙型肝炎病毒cccDNA的试剂盒 |
| CN101948932B (zh) * | 2010-07-22 | 2013-04-03 | 中国人民解放军第三〇二医院 | 滚环扩增加跨缺口荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒cccDNA试剂盒 |
| RU2586513C1 (ru) * | 2015-04-24 | 2016-06-10 | Закрытое акционерное общество научно-производственная компания "Комбиотех" | РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ ДРОЖЖЕЙ Hansenula polymorpha - ПРОДУЦЕНТ МУТАНТНОГО ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА ВИРУСА ГЕПАТИТА В (ВАРИАНТЫ) |
| RU2603729C2 (ru) * | 2015-04-24 | 2016-11-27 | Закрытое акционерное общество научно-производственная компания "Комбиотех" | Рекомбинантная вакцина для профилактики вирусного гепатита в (варианты) |
| CR20220129A (es) | 2019-09-30 | 2022-05-06 | Gilead Sciences Inc | Vacunas para vhb y métodos de tratamiento de vhb |
| CN113201051B (zh) * | 2021-04-27 | 2022-08-02 | 复旦大学 | 一种乙肝病毒表面蛋白突变体及其在抗乙肝病毒中的应用 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9007024D0 (en) * | 1990-03-29 | 1990-05-30 | Imperial College | Novel vaccine |
| US5955089A (en) * | 1993-04-20 | 1999-09-21 | Uab Research Foundation | Strain selection of pneumococcal surface proteins |
| GB9401987D0 (en) | 1994-02-02 | 1994-03-30 | Imperial College | Modified nucleic acid |
| US5830759A (en) * | 1994-08-18 | 1998-11-03 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Unique associated Kaposi's sarcoma virus sequences and uses thereof |
| AU4353897A (en) | 1996-09-18 | 1998-04-14 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Viral defective interfering particles and uses thereof |
-
1998
- 1998-06-19 CN CNB988142007A patent/CN1255540C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-19 HU HU0103258A patent/HUP0103258A3/hu not_active Application Discontinuation
- 1998-06-19 JP JP2000554856A patent/JP2002518013A/ja active Pending
- 1998-06-19 KR KR10-2000-7014443A patent/KR100498117B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-06-19 TR TR200003778T patent/TR200003778T2/xx unknown
- 1998-06-19 US US09/719,533 patent/US7038035B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-19 WO PCT/SG1998/000045 patent/WO1999066047A1/en not_active Application Discontinuation
- 1998-06-19 BR BR9815912A patent/BR9815912A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-06-19 AU AU77950/98A patent/AU756858B2/en not_active Ceased
- 1998-06-19 NZ NZ50889298A patent/NZ508892A/xx unknown
- 1998-06-19 IL IL14036398A patent/IL140363A0/xx unknown
- 1998-06-19 CA CA 2332173 patent/CA2332173A1/en not_active Abandoned
- 1998-06-19 EP EP19980926022 patent/EP1086232A1/en not_active Withdrawn
- 1998-06-19 UA UA2000127296A patent/UA73475C2/uk unknown
- 1998-06-19 MX MXPA00012724A patent/MXPA00012724A/es unknown
- 1998-06-19 YU YU80500A patent/YU80500A/sh unknown
- 1998-06-19 PL PL345203A patent/PL191312B1/pl not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-06-17 MY MYPI99002505A patent/MY135991A/en unknown
- 1999-06-18 AR ARP990102961 patent/AR020092A1/es unknown
-
2000
- 2000-12-18 NO NO20006457A patent/NO20006457L/no not_active Application Discontinuation
- 2000-12-18 BG BG105065A patent/BG105065A/xx unknown
- 2000-12-19 IS IS5777A patent/IS5777A/is unknown
-
2006
- 2006-03-20 US US11/385,013 patent/US20070026422A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO20006457D0 (no) | 2000-12-18 |
| AU7795098A (en) | 2000-01-05 |
| PL191312B1 (pl) | 2006-04-28 |
| AR020092A1 (es) | 2002-04-10 |
| CN1255540C (zh) | 2006-05-10 |
| CA2332173A1 (en) | 1999-12-23 |
| JP2002518013A (ja) | 2002-06-25 |
| TR200003778T2 (tr) | 2001-06-21 |
| NO20006457L (no) | 2001-02-16 |
| BR9815912A (pt) | 2002-02-05 |
| WO1999066047A1 (en) | 1999-12-23 |
| HUP0103258A3 (en) | 2003-10-28 |
| NZ508892A (en) | 2004-02-27 |
| PL345203A1 (en) | 2001-12-03 |
| YU80500A (sh) | 2004-05-12 |
| AU756858B2 (en) | 2003-01-23 |
| EP1086232A1 (en) | 2001-03-28 |
| BG105065A (en) | 2001-09-28 |
| CN1304453A (zh) | 2001-07-18 |
| US20070026422A1 (en) | 2007-02-01 |
| HUP0103258A2 (hu) | 2001-12-28 |
| IS5777A (is) | 2000-12-19 |
| US7038035B1 (en) | 2006-05-02 |
| KR100498117B1 (ko) | 2005-07-01 |
| KR20010106128A (ko) | 2001-11-29 |
| MY135991A (en) | 2008-07-31 |
| IL140363A0 (en) | 2002-02-10 |
| MXPA00012724A (es) | 2003-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100217483B1 (ko) | C형 간염 바이러스 에피토프 | |
| KR0185373B1 (ko) | Hcv 폴리단백질에서 유래되는 hcv 아미노산 서열 부분을 포함하는 폴리펩티드 및 그 사용 | |
| JP2662358B2 (ja) | Ｎａｎｂｖの診断用薬 | |
| KR100193801B1 (ko) | 진단 및 치료용 c형 간염 바이러스(hcv) 게놈서열 | |
| US5879904A (en) | Nucleotide and peptide sequences of a hepatitis C virus isolate, diagnostic and therapeutic applications | |
| US20070026422A1 (en) | Vaccine-induced hepatitis B viral strain and uses thereof | |
| IE83377B1 (en) | New HCV isolate J-1 | |
| EP0700441B1 (en) | Multiple sclerosis virus | |
| WO1994018217A1 (en) | Non-a, non-b, non-c, non-d, non-e hepatitis reagents and methods for their use | |
| JP2004043470A (ja) | 腸内伝達された非−ａ／非−ｂ肝炎ウィルス物質及びその特徴的なエピトープ | |
| KR19990022114A (ko) | 추출되어 미처리된 폴리펩타이드를 사용하는 양성 스트랜드 ｒｎａ 바이러스의 진단 및 이에 대한 백신화 방법 | |
| JP4641695B2 (ja) | 新規なｈｅｖ抗原性ペプチド及び方法 | |
| KR20020008172A (ko) | Ττ바이러스 서열 유래의 펩티드 및 ττ바이러스에결합하는 단일특이적 항체 | |
| US5866139A (en) | Nucleotide and peptide sequences of a hepatitis C virus isolate, diagnostic and therapeutic applications | |
| US7105165B2 (en) | Mutant human hepatitis B viral strain and uses thereof | |
| AU756866B2 (en) | A mutant human hepatitis B viral strain and uses thereof | |
| KR100187483B1 (ko) | Hcv 폴리뉴클레오티드 및 그 사용 | |
| EP0554624A1 (en) | Oligonucleotides, oligopeptides and determination system of HCV antibody subtype | |
| NZ528350A (en) | A vaccine-induced hepatitis B viral strain and uses thereof | |
| WO1994011737A1 (en) | Method for detection of a new marker associated with hepatitis delta virus infection | |
| NZ528739A (en) | A mutant human hepatitis B viral strain and uses thereof | |
| JPH0568563A (ja) | Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子およびその利用方法 |