UA64159A

UA64159A - 1mb b-7019 bifidobacterium bifidum strain, the 1mb b-7020 bifidobacterium longum strain, the 1 mb b-7021 lactobacillus acidophilus strain and the 1mb b-7026 streptococcus thermophilus strain for production of bacterial concentrate, the bacterial concentrate "biocor-1" and the biologically active additive "biocorrectin"

Info

Publication number: UA64159A
Application number: UA2003021523A
Authority: UA
Inventors: Nadia Mykhailivna Ralko; Nadia Mykhailivna Ruban; Svitlana Rostyslavivna Yemets; Oleksandr Fedorovych Bubalo; Arkadii Arsenovych Oliferko
Original assignee: Biocor Entpr For Making Correc
Priority date: 2003-02-21
Filing date: 2003-02-21
Publication date: 2004-02-16

Description

Опис винаходу

Дана група винаходів відноситься до медичної і харчової біотехнології може бути використана у 2 виробництві препаратів та харчових продуктів, які коригують мікрофлору травного тракту людей та тварин, у медицині, харчовій і молочній промисловості, сільському господарстві.

Функції нормальної мікрофлори в організмі є життєво важливими: синтезуюча, регуляторна, десенсибілізуюча, дезінтоксикаційна, ферментативна, захисна й імуностимулююча. Останнім часом спостерігається широка розповсюдженість серед населення дисбактеріозів та вторинних імунодефіцитів. При 70 цьому проявляється виражена алергізація організму та активізація хронічних бактеріальних і вірусних інфекцій.

Численні епідеміологічні дослідження доводять, що майже 9095 населення земної кулі мають порушення якісного та/"або кількісного складу мікрофлори в організмі людини. Причинами дисбактеріозів є антибіотикотерапія, гормонотерапія та хіміотерапія, гіповітамінози, неповноцінне і нераціональне харчування, несприятливі соціально-економічні та екологічні умови. Тому виникла необхідність проведення активної профілактики та 12 ефективної корекції порушеної мікробіологічної рівноваги. Одним з найбільш ефективних засобів корекції є пробіотики. Серед пробіотиків важливими є біфідобактерії Війдорасіегішт Біацт і Війдорасіегішт Іопдит, а також лактобактерії І асіорасійиз асідорпйиз і термофільні стрептококи Зігеріососсив (Пегторпйїи5, а також бактерійні концентрати і більш складні композиції.

Відомий штам Війдорасіегшт Бійдит В-3300, використовуваний у виробництві бактерійних препаратів, сквашує молоко протягом 18-24 годин, має антагоністичну активність проти 5.зоппеї, З.Лехпегі, Е.соїї (220),

З.ацгейв, стійкий до канаміцину, мономіцину, чутливий до антибіотиків пеніцилінового ряду, кефзолу, гентаміцину тощо (див. патент БО 2023396, МПК А23С9/12, 1994р.).

Недоліком цього штаму є недостатньо висока біологічна активність і технологічність.

Відомий штам Війдобрасіегішт Бідит М-4, депонований 5 квітня 1993 року у центральному музеї промислових 29 мікроорганізмів ВНИЙгенетика під номером 5-1257 (патент Російської Федерації 2108383, МПК9 сС12М1/20, «

А23С9/12, 1998 рік). Цей штам виділений із умісту кишечнику здорової дорослої людини. Морфологічні і культуральні ознаки. Вирощені на гідролізованих молочних середовищах клітини штаму М-4 мають вигляд довгих тонких гранульованих паличок, розташованих у скупченнях, дуже рідко - у вигляді окремих паличок. Довжина клітин складає 3,5-5мкм, товщина 0,3-0О,5мкм. Грампозитивні, нерухливі, спор і капсул не утворюють. У щільних Ф 3о живильних середовищах (1,595 агару) утворюють пастоподібні колонії ясно-коричневого кольору у вигляді юю "гречаних зерен" або дисків до 2,5-Змм у діаметрі. Пігменту не утворюють. У рідких живильних середовищах ріст по висоті живильного середовища 90-9595. Фізіолого-біохімічні ознаки. Непатогенний, безспоровий облігатний -- анаероб. Каталазу не утворює. Оптимальна температура росту 36,5-38,0"С, максимальна температура чЖ становить 4120,57С, мінімальна - 25-0,5"С; при 46,57С не розмножується. Оптимальний початковий рн

Зо живильних стерилізованих середовищ 6,8-7,0 одиниць рН. Желатин не розріджує, нітрати не відновлює, індол не ї-оі утворює. Ферментує лактозу з утворенням оцтової і молочної кислот (газу не утворює). На молочних середовищах утворює більше молочної кислоти, ніж оцтової; на печіночних середовищах утворює , більше оцтової кислоти, ніж молочної. Сквашує молоко при 59о-ній дозі інокуляції (інокулят готують на « дю гідролізатно-молочних середовищах) за 14-1бгод., закислюючи молоко до рН-(4,7-0,1) або до кислотності -о (7555)7"Т. Штам стійкий до 495 Масі, при 6б9о Масі у середовищі ріст знижується на порядок, понад 690 - у 2-4 с рази. Стійкий до ристоміцину, кормогризину, канаміцину, неоміцину, мономіцину. Чутливий до тетрацикліну, :з» оксацикліну, ампіциліну, пеніциліну. Ферментує глюкозу, галактозу, лактозу, сахарозу; не утилізує арабінозу, ксилозу, рибозу, манозу, фруктозу, мальтозу, рафінозу, сорбіт, інулін, маніт, інозит, трегалозу. Максимальний 415 ріст на живильних середовищах складає (6-9)108КУО/мл, у молоці - (4-6). 109КУОС/мл. Штам В. рійаит М-4 о антагоністично активний до патогенних і умовно-патогенних мікроорганізмів - шигел Зонне, Флекснера, до ентеропатогенних мікроорганізмів. т. Причинами, що перешкоджають одержанню потрібного технічного результату є недостатня стійкість до - агресивних середовищ шлунково-кишкового тракту.

Для штаму Війдобвасіегішт Біїдит 1МВ В-7019, що заявляється, за прототип вибрано штам Війдобасіегіт о Біїйдит 45 депонований у ""НИИгенетика" під номером ВКПМ Ас-1621 (патент Російської Федерації Мо2184146,

Ге МПК" С12М1/20, А23С9/12, АбІ1КЗ5/74, А23І1/03, 2002 рік). Штам виділений з кишечнику здорової дорослої людини. Культурально-морфологічні ознаки. Поліморфні грам позитивні палички вигнуті або з роздвоєннями на кінцях, нерухомі, ростуть у рідких живильних середовищах по всьому об'єму, крім зони аеробіозу. Культура ов штаму пігмент не утворює. На середовищах Блаурока, гідролізатно-молочному, казеїново-гідролізатному і тіогліколевому, логарифмічна фаза росту закінчується за 16-18 годин. Загальна кислотність на середовищі

Р» Блаурока за 24 годинник досягає 90-1007Т. Оптимальна температура вирощування 37,5-40,57С. Кращий спосіб нагромадження біомаси - вирощування культури на казеїново-гідролізатному середовищі. Середовище висушування сахарозо-желатинове. У ліофільному вигляді зберігається від 1 року до 7 років. 60 Фізіолого-біохімічні ознаки. Облігатний анаероб. Ферментує целобіозу, лактозу і глюкозу з утворенням оцтової і | - молочної кислот. Арабінозу, ксилозу, рибозу, маніт, меліцитозу, саліцин не ферментує. Зброджує молоко за 14-16 годин з утворенням стабільного згустку при кислотності 90-1107Т. Каталазу не утворює, желатин не розріджує. Антагоністичні властивості. Штам біфідобактерій В.бійдит 45 ВКПМ Ас-1621 пригнічує ріст шигел

Зонне, Флекснера, ентеропатогенних кишкових паличок, золотистих стафілококів, клебсіел, протеїв та інших б5 умовно патогенних мікроорганізмів. Антибіотикостійкість штаму. Штам В.Бійдит 45 ВКПМ Ас-1621 стійкий до дії канаміцину, мономіцину, гентаміцину, левоміцитину, кефзолу, стрептоміцину, ампіциліну. Адгезивні властивості біфідобактерій. Адгезивність штаму оцінювалася по середньому показнику адгезії (СПА), який дорівнює 9,8-10.

Бактеріоциногенні властивості. Штам біфідобактерій В.бйацт 45 ВКПМ Ас-1621 виділяє біфідоцини й утворює зону затримки росту індикаторних культур від 2 до 3,5мМм.

Причинами, що перешкоджають одержанню потрібного технічного результату є те, що штам Віїйдобасіегійт рійдцит 45 ВКПМ Ас-1621 недостатньо стійкий до ушкоджуючих факторів середовищ культивування та шлунково-кишковому тракту, а отже, недостатні його життєздатність і колонізуючі властивості.

Біфідобактерії роду Війдорасіегішт Іопдуит знаходять використання у складі бактерійних препаратів лікувально-профілактичного призначення і більш складних композицій. Наприклад, відомий штам Війдорасіегіцт 70. Іопдит 274 (патент Російської Федерації Мо2151606, МПК" АбІКЗ5/74, С12М1/20, 2000 рік). Штам депонований у

Центральному музеї промислових мікроорганізмів інституту "ВНИЙ генетика" під номером Ас-1571 і характеризується наступними властивостями. Культурально-морфологічні властивості. При культивуванні в стовпчику 0,7595-ного агару Блаурока утворює колонії у вигляді гречаних зерен або дисків розміром до 0,5-1мм у діаметрі протягом 2-х діб. При культивуванні в рідкому середовищі Блаурока в анаеробних умовах утворює 75 рівномірне помутніння через 24 години. На щільному середовищі Блаурока в анаеробних умовах росте у вигляді колоній 5-типу, круглі з рівними краями, діаметром 2-Змм, непрозорі, блискучі, пігменту не утворюють; профіль колоній опуклий, легко знімаються петлею з поверхні щільного середовища. У мазках клітини розташовані у формі "китайських ієрогліфів", мають вигляд прямих або розгалужених паличок з О-подібними роздвоєннями на одному або обох кінцях, іноді утворюють стовщення на кінцях. Нерухомі, у мазку розташовуються безладно.

Грам позитивні, іноді усередині клітин виявляється зернистість. Спор не утворюють. Фізіологічні властивості.

Облігатний анаероб; росте у високому стовпчику агару в пробірці. У пробірках з рідким середовищем і на чашках

Петрі з щільним середовищем росте в анаеробних умовах. При культивуванні в рідкому середовищі в анаеробних умовах через 18-20 годин після посіву в їмл середовища виростає 5,0.108-1,0.109 живих мікробних клітин. Максимум росту при 37,57. Біохімічні ознаки. Синтезує фермент фруктозо-б6-фосфатфосфокеталазу. Зброджує глюкозу, лактозу, сахарозу, мальтозу, ксилозу, арабінозу, мелізитозу, рафінозу. Не зброджує « гліцерол, рамнозу, манітол, саліцин, целобіозу, манозу, сорбітол, трегалозу. Не утворює індол і каталазу, не відновлює нітрати. Кислотоутворення при вирощуванні в середовищі Блаурока через 72 години становить 71,8"Т. Штам Війдорасіегшт Іопдит 24 володіє підвищеною адгезивною активністю стосовно піхвових епітеліоцитів, значною антагоністичною активністю і кислотоутворюючою функцією, природною стійкістю доряду /Ф) антибіотиків. Штам непатогенний для експериментальних тварин (мишей), а також для людей (у дослідах на ю добровольцях). Чутливий до антибіотиків: пеніциліну, оксациліну ампіциліну цефазоліну еритроміцину.

Причинами, що перешкоджають одержанню потрібного технічного результату є специфічне призначення «- штаму для лікування порушень мікробіоценозу піхви. «

В якості прототипу для штаму Війдобрасіегішт Іопдит 1МВ В-7020, що заявляється, вибрано штам

Зо Війдорасіегічт Іюпдит 17х (патент Російської Федерації 2048517, мпке С12М1/20, А23С9/12, Аб1КЗ35/74, 1995 іс), рік. Штам депонований і зберігається у Всесоюзній колекції культур промислових мікроорганізмів "ВНИЙИгенетика" під номером В-5813. Штам Віїйдорасіегішт Іюопдит 17х має наступні морфолого-культуральні і фізіолого-біохімічні характеристики. Рідкі живильні середовища (Блаурока, кукурудзяно-лактозне, « гідролізатно-молочне). Дводобова культура - палички прямі і злегка розгалуженої форми з булавоподібними стовщеннями, розміром 0,5х1,0, 3,6-5,2мкм, одиночні, здвоєні, у вигляді ланцюжків. На рідких середовищах, о, с розлитих у пробірки, високим шаром ростуть у вигляді "стовпа" каламуті з зоною анаеробіозу. У молоці клітини "» паличкоподібні, укорочені, зернисті. При глибинному рості в агаризованому середовищі колонії мають вигляд " стовщених гвіздків розміром 1х2, 2х4мм. Клітини грампозитивні, слабко забарвлюються метиленовою синню, по краях клітин, помітні округлі гранули, каталазонегативні, газ не утворюють, протеолітичною активністю не володіють, нітрати, нітрити не відновлюють. Відношення до вуглеводів і спиртів. Засвоює фруктозу, галактозу,

Ме глюкозу, рибозу, манозу, лактозу, мальтозу, мелібіозу, сахарозу, трегалозу, арабінозу, ксилозу, інулін, їх саліцин, слабко сорбіт; не засвоює целобіозу, рамнозу, маніт і дульцит. Відношення до органічних кислот.

Продукують молочну, оцтову кислоти. Відношення до продуктів кишкового обміну. Резистентний до вмісту в - середовищі 4090 жовчі, 0,595 фенолу, 2,596 Масі. Оптимальна температура росту 37-39"С, не росте при 45750. с 20 Стійкість штаму до антибіотиків. Мінімальна інгібуюча концентрація, мкг/мл: еритроміцин - 0,05; олеандоміцин - 0,1; бензилпеніцилін - 0,4; ампіцилін - 2,0; оксациллін, тетрациклін - 3,0; гентаміцин, метицилін - 10,0;

Ме; стрептоміцин - 24,0; левоміцитин - 65,0; леворин, ністатин - 2060,0. Антагоністична активність. Відносно патогенних, умовно-патогенних мікроорганізмів, при спільному культивуванні 1:11 Віїйдорасіегішт Іюпдит 17х, у рідкому середовищі Блаурока, пригнічував ріст через 48 годин, Е. соїї - 100; бЗаІтопеїІа (Урпітогішт - 100; го Рг. мцїЇдагів - 99,75; Ре. аегидіпова - 76; К. рпейтопіае - 94-95. Штам непатогенний. При внесенні в Війдорасіегічт Іопдут 17х у молоко в кількості 5-6б95 сквашування настає через 14-16 годин, кислотність 85-1102Т, титр біфідобактерій досягає 5.109-1.1019, Штам рекомендується при готуванні біфідобактерійних препаратів і лікувальних кисломолочних продуктів.

Недоліком цього штаму є недостатньо висока біологічна активність і технологічність. 60 Лактобактерії роду Іасіорасіїйшз асідорпйиз знаходять широке використання у різноманітних галузях народного господарства. Так, наприклад, штам Іасіорасій5 асідорпййиз СМСМ 1-1225, зареєстрований у

Національній колекції культур мікроорганізмів (СМСМ) Пастерівського інституту (патент Російської Федерації

Мо2126446, МПКУ С12М1/20, АбІКЗ5/74, 1999 рік; патент України Мо26430, МПКУ С12М1/20, АбІ1КЗ5/74, 1999 рію), запропоновано для лікування діареї. Пропонована культура і композиція на її основі мають більш високу бо здатність змагального витіснення патогенних бактерій з кишкових клітин, особливо бактерій, відповідальних за діарею.

Причинами, що перешкоджають одержанню потрібного технічного результату, є вузько специфічне призначення штаму.

У патенті Російської Федерації Мо2103354, МПКУ сС12М1/20, А23С9/123, 1998 рік описано штам молочнокислих бактерій - І асіорасійи5 асідорпйше-13 (ВКПМ В) для виготовлення лікувально-дієтичних кисломолочних продуктів. Як стверджують автори, штам здатний до активного заселення слизової травного тракту і товстої кишки, стійкий до дії магнітних полів зберігає активні біохімічні властивості.

Причинами, що перешкоджають одержанню потрібного технічного результату є специфічне призначення 70 штаму.

Лактобактерії роду бігеріососсиз (Пегторпіз знаходять широке використання у різноманітних галузях народного господарства. Так, наприклад, у патенті У/О 82/03971, МПК? А23С19/032, 05.0.5.1982 наведено дані про використання Зігеріососсивз (Пегторнпіз разом з Іасіобрасіїйв Биїдагісиз та І асіорасійиз сазеї у виробництві сиру, що має низький вміст жиру. У патенті ЕР 0148299, МПК С12М01/20, 17.07.1985 дано 75 відомості про використання у виробництві йогурту Зігеріососсиз (пегторпйиз у складі бактеріальної культури.

Використання штаму Зігеріососсуз (тепторпійиз ССМ у виробництві ферментованих молочних продуктів із умістом жиру від 0,05 до 30956 і максимальною кислотністю 207Т наведено у патенті МУО 93/16600, МПК

А23С09/123, 02.09.1993. Суміш Зігеріососсив (пеппорпйиз 0ОМ-001 147, 5ігеріососсиз (пегторпійиз 0М-001 339, і

І асіорасіїїиз БиЇдагісиз ЮОМ-100 182 запропонована для ферментування молочних харчових продуктів у патенті

ЕР 0794707, МПКУ А23С09/123, 17.09.1997,

Для штаму Зігеріососсиз (Ппегторпіїиз 1МВ В-7026, що заявляється, прототипом вибрано штам Зігеріососсив

Іегторпйїиз депонований у СМСМ (Національній колекції культур мікроорганізмів) Франції під номером 1-1477, (ЕР 0783566, МПК С12М01/20, 16.07.1997). Штам Зігеріососсив (пегторпйце 1-1477 запропонований для сквашування молока. 29 Причинами, що перешкоджають одержанню потрібного технічного результату є недостатня стійкість до « агресивних середовищ шлунково-кишкового тракту.

Більшість сучасних бактерійних препаратів (бакпрепаратів) містять у своєму складі декілька штамів. Відомі бакпрепарати лактобактерин, ацилакт, біфідумбактерин, колібактерин, біфікол, біоспорин, споробактерин тощо, які здатні нормалізувати мікрофлору організму (Воробьев и др. Дисбактериозьі - актуальнье проблемь б медициньі/ Вестник РАМН -1997, Мо3З, с.3-5). Відомий бактеріальний препарат "Біолактин', описаний у патенті о

України Мо20506, МПК9 сС12М1/20; А23С9/12, 27.02.98, бюл. Мої. "Біолактин", містить бактерії з родів

Війдорасіегішт, І асіорасій5 та Іасіососсив. Із роду Війдорасіегіцт він містить штами видів: В.рійадит, -

В.опдит, В. іптапіївг, з роду Іасіорасіїйй5 - штами видів: 1бБ. Пеїмейісив, ІБ. сазеї, 15. ріапіагит. При чІ готуванні посівного матеріалу попередньо отриманий консорціум молочнокислих бактерій з'єднують з консорціумом біфідобактерій у співвідношенні 1:3. ї-о

Причинами, що перешкоджають одержанню потрібного технічного результату є надмірна складність бактеріального концентрату, а отже велика ймовірність браку технологічного процесу виготовлення кінцевого продукту, що використовує значне число штамів. « дю Для бакконцентрату "Біокор-1" за прототип вибрано за найбільшою кількістю спільних суттєвих ознак з бактеріальний концентрат "Старт", (патент України 22655, МПКО С12М1/20; А23С23/00, 30.06.98. Бюл. Мо3). с "Старт" містить біфідобактерії і молочнокислі стрептококи, з біфідобактерій він містить штам Війдобасіегійт :з» Іопдит МКРМ 5-1514, з молочнокислих стрептококів Зігеріососсиз (пегпорпйиз - штами ВКПМ 8-4463 і ВКПМ

В-3161, або штами ВКПМ 8-4464 і ВКПМ 8-7331, або штами ВКПМ 8-7329 ії ВКПМ 8В-7330 при співвідношенні

Культур (5-8):111. При цьому використовувані штами мікроорганізмів по таксономічній приналежності б відповідають видовому складу мікрофлори кишечнику людини. Спільними ознаками з винаходом, що заявляється є наявність у складі бакконцентрату суміші ліофілізованих культур штамів біфідобактерій та - лактобактерій Віїдобасіегіт Іопдит і Зігеріососсиз (пеппорпйЙив. - Причинами, що перешкоджають одержанню потрібного технічного результату є помірні властивості бакконцентрату "Старт". о Крім бакконцентратів, що містять ліофілізовану біомасу біфідобактерій і лактобактерій, для лікування

Ге) дисбактеріозів використовують більш складні композиції, до складу яких входять носії (різноманітні лікувальні, смакові, харчові добавки та наповнювачі). Так, наприклад, у патенті України Мо 20509, МПК

Аб1КЗ35/74; С12М1/20, 27.02.98, бюл. Мої наведено дані про таблетовану форму бактерійного препарату, що містить у якості носія (наповнювача) лактозу, крім того таблетки містять полівінілпіролідон, стеаринову кислоту або карбоксиметилцелюлозу. Спільними ознаками з винаходом, що заявляється, є наявність

Р» бакконцентрату та лактози. Причинами, що перешкоджають одержанню потрібного технічного результату є інше призначення таблеток аналога.

За найбільшим числом спільних суттєвих ознак в якості прототипу для біологічно активної добавки бо Біокоректин" вибрано композицію, описану у прикладах З і 4 патенту України Мо24636, МПК сС12М1/20;

А23С9/12, 30.10.98, бюл. Моб5, що складається з бакконцентрату (ліофілізованої суміші штамів Вігдобасіегійт

Іопдит МКРМ 5-1514, 5ігеріососсиз (пегппорпйиз: ВКПМ В-4463 і | асіорасійиз аеїргоескі! ввр. асідорпйиз ВКПМ

В-2707) і носія (суха адаптована суміш "Детолакт" чи суміш сахарози, глюкози). Ця композиція також містить ячмінно-солодовий екстракт, аскорбінову кислоту та стеарат кальцію. Спільними ознаками з винаходом, що 65 заявляється є наявність у складі прототипу таких компонентів: бакконцентрату, носія та стеарату кальцію.

Причинами, що перешкоджають одержанню потрібного технічного результату, є помірні властивості композицій за прототипом.

В основу групи винаходів, що заявляється, поставлено задачу віднайти такі штами біфідобактерій і лактобактерій, які зберігаючи ефективність прототипу, знаходилися б у більш стійкій рівновазі, і були б більш адаптованими до умов України, створити з штамів ефективний бакконцентрат сухий "Біокор-1"7, а також біологічно активну добавку "Біокоректин".

Зазначену задачу вирішує штам Війдорасіегішт Бййдит 1МВ В-7019 для виготовлення бактерійних концентратів та харчових продуктів, які коригують мікрофлору травного тракту людей та тварин.

Зазначену задачу вирішує штам Війдорасіегіцт Іопдит 1МВ В8-7020 для виготовлення бактерійних 7/0 концентратів та харчових продуктів, які коригують мікрофлору травного тракту людей та тварин.

Зазначену задачу вирішує штам Іасіорасійи5 асідорпішз 1МВ В8-7021 для виготовлення бактерійних концентратів та харчових продуктів, які коригують мікрофлору травного тракту людей та тварин.

Зазначену задачу вирішує штам бактерій Зігеріососсуиз (пепторпйиз 1МВ 8-7026 для виготовлення бактерійних концентратів та харчових продуктів, які коригують мікрофлору травного тракту людей та тварин.

Зазначена задача вирішується тим, що бакконцентрат, який містить суміш ліофілізованих культур штамів біфідобактерій та лактобактерій, згідно з винаходом він містить із біфідобактерій штами Віїйдобвасіегійт

Бійацт 1МВ В8-7019 і Вітідобасіегішт Ююпдит 1МВ В-7020, а в якості лактобактерій містить штами І асіорасіШ5 асідорпіїив 1МВ В-7021 і Бігеріососсиув (Ппеппорпйиз 1МВ В-7026 при такому співвідношенні, 9о мас.: біфідобактерії 40-80 лактобактерії 20-60

Зазначена задача вирішується тим, що біологічно активна добавка, яка містить бакконцентрат і носій, згідно з винаходом, в якості бакконцентрату вона містить бакконцентрат "Біокор-1", який складається із ре біфідобактерій штамів Війдорасіегішт Бійбут 1МВ В-7019 та Війдобасіегічт Іопдит 1МВ В-7020 у кількості 107-10 12КУО/г і лактобактерій штамів І асіобасіїше асідорпйце 1МВ В-7021 та Зігеріососсив (тепторпййв 1МВ В-7026 « у кількості 107-10'9КУО/г, в якості носія вона містить фруктовий, цитрусовий чи овочевий порошок, або порошок ананасів, чи баштанових культур, або їх суміш, а також цукор молочний і стеарат кальцію при такому співвідношенні компонентів, 9о мас.: Ге»!

Зо бакконцентрат 10-25 Іс) цукор молочний 20-35 «- стеарат кальцію 1-2 носій решта « ! ! ! ! с, (Се)

Згідно з винаходом, біологічно активна добавка додатково містить вітаміни у розрахунку на кг продукту: вітамін С 1,0-20г вітамін Вї /15-8Омг « 20 вітамін Вб 15-8Омг - с вітамін В12 1,0-4,Ог вітамін РР 10-20мг . а вітамінА /2,0-Б,О0мг вітамін О 10-БОмМг вітамін Е 5,0-10г (22)

Згідно з винаходом, біологічно активна добавка в якості носія вона містить порошок, вибраний з наступного ве ряду: порошок яблук, порошок груш, порошок винограду, порошок цитрусових, порошок ананасів, порошок - моркви, порошок буряка, порошок часнику, порошок гарбуза, порошок кавуна, порошок дині, порошок капусти, порошок петрушки, порошок кропу, порошок шпинату, порошок топінамбуру. о Згідно з винаходом, біологічно активна добавка в якості носія містить суміш порошків фруктових, овочевих,

Ге баштанових та цитрусових культур.

Технічним результатом групи винаходів, що заявляється, є адаптованість властивостей біокоректину до умов

України, а також забезпечення концентрування та розмноження у просвіті кишечнику бактерій, що входять до вв складу бакконцентрату.

Далі наведено відомості про штами, що заявляються. Штам Війдорасіегішт Бійацт МВ В-7019

Р» ідентифіковано в науково-методичному центрі "Біокорекція" м.Київ, узвіз Протасів Яр. Штам Війдорасіегіит рійдит депонований у колекції Інституту мікробіології та вірусології НАН України під номером 1МВ В-7019 у 200Ор. 60 Родовід штаму. Штам ізольований з кишечного вмісту. Спосіб одержання штаму. Штам культивований в напіврідкому поживному середовищі Блаурока шляхом пересівів з окремих колоній 1-2 рази на тиждень з експозицією в термостаті при 38:20,57"С. Клонування проведено двадцятьма пасажами з уокремлених колоній з розведення щільного росту, яке відповідає 1:100млн. Штам виявив антагонізм до поширених умовно-патогенних та патогенних мікробів, має високий рівень адгезії до слизової оболонки кишечнику, достатню для виробництва 65 швидкість накопичення біомаси, високі показники кислотності.

Культурально-морфологічні та фізіолого-біохімічні особливості штаму Морфологія. Клітини штаму

Грам-позитивні поліморфні палички, довжиною 4-5мкм, товщиною біля 0, 5мкм, можуть мати біфуркації на одному, або обох кінцях; розташовуються скупченнями по 7 і більше клітин, або поодинці, парами.

Культуральні властивості. Вимагає анаеробних умов, використання регенерованих середовищ. В лабораторіях добре культивується в стовпчиках напіврідкого середовища Блаурока та інших за умови, що висота стовпчика не нижче 5см. Засівається піпетками місткістю в 1-2мл, з введенням матеріалу до дна пробірки з наступним перемішуванням без барботажу. Через добу при щільному посіві стає помітною смуга прозорої незарослої рідини безпосередньо під меніском. Культура вимагає 1-2 діб вирощування, аби досягти максимальної концентрації. За повного терміну культивації концентрація може сягати 1О0Омлн. на мл і більше. 7/0 Штам швидко утворює смугасті видовжені колонії, які на другу добу грубішають і стають схожі на "ракетні запуски" з характерним розгалуженням в нижній частині. На поверхні агарових середовищ колонії напівпрозорі, округлі, трохи розпливчасті діаметром 2-Змм.

Фізіолого-біохімічні властивості. Результати випробувань наведені в таблиці 1.

І драбноя 10000000 бат баян 10011101 ешевтятявю

Целювея 10000000 Длююа 00000100 з нн ИН но

Мел 31711020 Дам 11110113 юю 01000001 те 01011111 лЛаюовяздюд

Дульцит 77711111 об желамн | нерозріднує/ | «

Молоко закислює, згусток не утворює.

Штам призначений для використання в складі заквасок, бактерійних концентратів для виготовлення сумішей і препаратів з метою корекції порушень мікробіоценозів і лікування кишкових захворювань людей і свійських б зо тварин.

Продукти, що синтезуються штамом. Штам синтезує кислоти, зокрема оцтову і молочну, чинники мікробного МО антагонізму. «--

Активність і промислові показники штаму. Антагоністична активність штаму. Для визначення антагоністичної активності штаму було застосовано метод його вирощування на агарових платівцях з підшаруванням культури «

Зегайа тагсезсепе, як поглинача кисню. Штам рискою засівався на поверхню агару і через добу «о перпендикулярно до нього на відстані не більше 1-2мм стрічками засівались штами, що випробовувались. Склад агару для випробування антагоністичної дії відповідав складові казеїно-дріжджово-гідролізатного середовища з доданням агару до 295. Результати наведені в таблиці 2. « й - с :» в

Ф

2 щ сі с

Специфічна активність в кишечнику (рівень адгезії штаму до поверхні слизової оболонки (рівень гістадгезії) експериментальних тварин). » Рівень адгезії (гістадгезії) клітин кишкових мікробів, зокрема біфідобактерій є прямим визначенням їх колонізаційної активності. Випробовували на свіжоекстірпованих кишечниках за методом В. П. Жалко-Титаренко,

В.М. Бондаренко, А.В. Григор'єва, Л.Г. Купчинського. Метод складається з 9 окремих процедур: готування во мікробної суспензії, передопераційної підготовки тварини, евтаназії, препарування кишечнику, його канюлізації і введення мікробної суспензії, витримування при зниженій температурі, відмиванні, триптичної дезінтеграції і посіву. Результати розраховували за формулою В.Жалко-Гитаренко:

Стах - ту, ве де: Стдх "7 рівень гістадгезії в кількостях колонієутворюючих одиниць на кв.мм поверхні слизової, т. концентрація мікробів в дезінтеграті,

М - об'єм дезінтеграту, 1- довжина експонованого відрізка кишки, а - ширина відрізка кишки.

Гістадгезійна активність штаму залежить від концентрації біфідобактерій в порожнині кишки - К, за співвідношенням:

Стяк МК де: "У - коефіцієнт гістадгезії, що обчислюється за результатами досліду за формулою: ц- Стах

Кк

Специфічна, колонізаційна (гістадгезійна) активність штаму наведена в таблиці 3. ів

Для визначення конкурентноздатності штаму за сайти адгезії в кишечнику обчислено показник конкуренції порівняно з вірулентними шигеллами Флек-снера, що мають О0-0,03. Показник конкуренції: (Мштаму)КИшигел)70,36:0,03-12.

Це означає, що штам перевищує гістадгезивну потужність збудника дизентерії майже у 12 разів.

Репродуктивна активність. Штам досягає максимальної концентрації при репродукції у флаконах з казеїново-дріжджово-гідролізатним середовищем на третю добу вирощування. Початкова швидкість « розмноження при концентраціях 10000-1000000КУО на мл складає величину т-0,2 за годину. Рівні максимальних концентрацій і відповідно кислотності за Тернером наведені в таблиці 4. (22) зо в - пн нин По НИ пото з зв Ф

Довгострокове зберігання штаму. Для довгострокового зберігання штаму необхідно його ліофілізувати за « технологією, що використовується при випуску препаратів типу "Біфідумбактерин сухий". Тимчасове продовжене Ще с зберігання протягом тижня, до місяця включно припустимо в пробірках з середовищем Блаурока та іншим під й шаром вазелінової олії в рефрижераторі з температурою не нижче 57С. Для ліофілізації треба мати культуру «» штаму вирощену в напіврідкому середовищі при 397С протягом 2-х діб. До взятого об'єму культури додають свіжовиготовлене середовище висушування в кількості 33965. Середовище висушування складається з трьох рівних частин по 5бмл: знежиреного молока - "обрату"; розчину З31,5г сахарози у дистильованій воді; розчину

Ге») 4,5г желатини у дистильованій воді (желатину для набухання витримують у теплій воді 1-2 години). Компоненти нарізно стерилізують в автоклаві ЗОхв. при 1107С, змішують в теплому стані і додають до культури при 37-39". т- Режим висушування: заморожування під вакуумом до -457С, ступінчасте підвищення температури по 57С на - годину до 22--247С, досушування протягом 12 год.

Спосіб, умови та склад середовища для культивування штаму. Штам культивують в напіврідких середовищах іні за відомими стандартними рецептурами. Основою культивування є ряд пробірок з відповідним середовищем по

Ге) Омл, що попередньо бажано регенерувати. Колонія штаму вноситься в першу пробірку ряду, ретельно перемішується насмоктуваннями без барботажу. Матеріал з першої пробірки далі переноситься в наступні по 1мл (серійні десятикратні розведення). Температура культивування 38:20,57"С. Для одержання штаму з наданих Депозитарієм флаконів, культура оживлюється регідратуванням шляхом додавання 5мл стерильної дистильованої води, фізіологічного розчину хлориду натрію або поживного середовища. Після цього матеріал

Р серійно розводять по їмл в рядах з 9 пробірками по Умл середовища в кожній і термостатують з щоденною перевіркою протягом 4 днів. Генетичні особливості штаму. Штам генетично однорідний. Штам чутливий до деяких антибіотиків: гентаміцину, тетрацикліну, ампіцикліну, карбе-ніциліну, рифампіцину, цефазоліну, бо Мономіцину, канаміцину. Штам резистентний до нітроксоліну, налідіксової кислоти.

Штам Війдобасіегішт Іюпдит 1МВ В-7020 депонований в Депозитарії Інституту мікробіології і вірусології

НАН України 25 жовтня 2000 року. Видова назва культури Війдорасіегішт Іопдит. Родовід штаму - Штам ізольований з кишечного вмісту. Культивований в напіврідкому поживному середовищі Блаурока шляхом пересівів з окремих колоній 1-2 рази на тиждень з експозицією в термостаті при 38:2-0,57С. Клонування проведено 65 двадцятьма пасажами з уокремлених колоній з розведення щільного росту, яке відповідає 1:100млн. Штам виявив антагонізм до поширених умовно-патогенних та патогенних мікробів, має високий рівень адгезії до слизової оболонки кишечнику, достатню для виробництва швидкість накопичення біомаси, високі показники кислотності в градусах Тернера. Штам ідентифіковано в науково-методичному центрі "Біокорекція" м.Київ, узвіз

Протасів Яр, 4.

Культурально-морфологічні та фізіолого-біохімічні особливості штаму. Морфологія. Клітини штаму

Грампозитивні поліморфні палички, довжиною 2-3,5мкм, товщиною біля 0,5мкм, можуть мати біфуркації на одному, або обох кінцях; розташовуються скупченнями по 7 і більше клітин, або поодинці, парами.

Культуральні властивості. Вимагає анаеробних умов, використання регенерованих середовищ. На збагачених середовищах утворює ледь помітний ріст в аеробних умовах. Добре культивується в стовпчиках 7/о напіврідкого середовища Блаурока та інших за умови, що висота стовпчика не нижче 5см. Засівається піпетками місткістю в 1-2мл, з введенням матеріалу до дна пробірки з наступним перемішуванням без барботажу. Через добу при щільному посіві стає помітною смуга прозорої незарослої рідини безпосередньо під меніском. Культура вимагає 1-2 діб вирощування, аби досягти максимальної концентрації. За повний термін культивації концентрація може досягати 100млн/мл і більше. Штам швидко утворює смугасті видовжені колонії, які на другу добу грубішають: стають схожі на "ракетні запуски" з характерним розгалуженням в нижній частині. На поверхні агарових середовищ колонії напівпрозорі, округлі, трохи розпливчасті діаметром 2-Змм. Фізіолого-біохімічні властивості. Результати випробувань наведені в таблиці 5. драбнюя 00020000 бек 0001003 сан | 0 вило ятлюю, го «

Мелцитюю| 5 (ема 171 тет 0000000 Лаюозаназдю!

Дульцит 7771-11 0 желатин | онерозріднує | Ф

Молоко закислює, утворюючи характерний згусток. За переліком ферментативних ознак штам М ідентифікується як варіант Війдорасіегіит Іопдит. «--

Галузь використання штаму. Штам призначений для використання в складі заквасок, бактерійних концентратів для виготовлення сумішей і препаратів з метою корекції порушень мікробіоценозів і лікування «

Кишкових захворювань людей і свійських тварин. со

Продукт, що синтезується штамом. Штам синтезує кислоти, зокрема оцтову і молочну, чинники мікробного антагонізму.

Антагоністична активність штаму. Для визначення антагоністичної активності штаму було застосовано метод його вирощування на агарових платівцях з підшаруванням культури як поглинача кисню. Штам рискою засівався « 0 на поверхню агару і через добу перпендикулярно до нього на відстані не більше 1-2мм стрічками засівались - с штами, що випробовувались. Склад агару для випробування антагоністичної дії відповідав складові казеїно-дріжджово-гідролізатного середовища з доданням агару до 295. Результати наведені в таблиці 6, в якій :з» подані також назви випробуваних мікробних видів та їх штамів. й п й

Ф з щ й с с

КорпеотолвеАтостя: 00

Буре свжовидлений 6 ов »

Специфічна активність в кишечнику рівень адгезії штаму до поверхні слизової оболонки (рівень гістадгезії) бо /експериментальних тварин (білих мишей).

Рівень адгезії (гістадгезії) клітин кишкових мікробів, зокрема біфідобактерій є прямим визначенням їх колонізаційної активності. Випробовується на свіжо екстірпованих кишечниках за методом В.П.

Жалко-Титаренко, В.М. Бондаренко, А.В. Григор'єва, Л.Г. Купчинського. Метод складається з 9 окремих процедур: готування мікробної суспензії, передопераційної підготовки тварини, евтаназії, препарування б5 Кишечнику, його канюлізації і введення мікробної суспензії витримування при зниженій температурі, відмиванні, триптичної дезінтеграції і посіву. Результати розраховуються за формулою В.П. Жалко-Титаренко:

т.

Сттвк - та: де: Стдх "7 рівень гістадгезії в кількостях колонієутворюючих одиниць на кв.мм поверхні слизової, т- концентрація мікробів в дезінтеграті,

Гістадгезійна активність штаму залежить від концентрації біфідобактерій в порожнині кишки - К, за 70 співвідношенням:

Стах МК де: ЧУ - коефіцієнт гістадгезії, що обчислюється за результатами досліду за формулою: ц- Стах

Кк й й но : не й й

Специфічна, колонізаційна (гістадгезійна) активність штаму наведена в таблиці 7.

Для визначення конкурентноздатності штаму за сайти адгезії в кишечнику обчислено показник конкуренції « порівняно з вірулентними шигеллами Флекснера, що мають О-0,03: показник конкуренції: (штаму )ХМшигел)70,307:0,03-10,05

Це означає, що штам перевищує гістадгезивну потужність збудника дизентерії майже у 10 разів.

Репродуктивна активність. Штам досягає максимальної концентрації при репродукції у флаконах з іа казеїново-дріжджово-гідролізатним середовищем на третю добу вирощування. Початкова швидкість ю розмноження при концентраціях 10000-1000000КУО на мл складає величину т-0,706 за годину. Рівні максимальних концентрацій і відповідно кислотності за Тернером наведені в таблиці 8. - « з5 Ф

Ов яко0116 « вд тмн000010000в6 о З с хз»

Довгострокове збереження штаму. Для довгострокового збереження штаму необхідно його ліофілізувати за технологією, що використовується при випуску препаратів типу "Біфідумбактерин сухий". Тимчасове продовжене

Ме зберігання протягом тижня, до місяця включно припустимо в пробірках з середовищем Блаурока та інших під їх шаром вазелінової олії в рефрижераторі з температурою не нижче 57С. Для ліофілізації треба мати культуру штаму вирощену в напіврідкому середовищі при 397 протягом 2-х діб. До взятого об'єму культури додають - свіжовиготовлене середовище висушування в кількості 33965. Середовище висушування складається з трьох с 20 рівних частин по 5О0мл: знежиреного молока "обрату"; розчину 31,5г сахарози у дистильованій воді; розчину 4,5г желатини у дистильованій воді (желатину для набухання витримують у теплій воді 1-2 години). Компоненти с нарізно стерилізують в автоклаві ЗОхв. при 1107С, змішують в теплому стані і додають до культури при 37-39".

Режим висушування: заморожування під вакуумом до -457С, ступінчасте підвищення температури по 57С на годину до 22 - 4247С, досушування - 12 год. 99 Спосіб, умови та склад середовища для культивування штаму. Штам культивують в напіврідких середовищах » за відомими стандартними рецептурами. Основою культивування є ряд пробірок з відповідним середовищем по

Омл, що попередньо бажано регенерувати. Колонію штаму вносять в першу пробірку ряду, ретельно перемішують насмоктуваннями без барботажу. Матеріал з першої пробірки далі переносять в наступні по мл (серійні десятикратні розведення). Температура культивування 38:20,5"С. Для одержання штаму з наданих 60 Депозитарію флаконів, культуру оживлюють регідратуванням шляхом додавання 5мл стерильної дистильованої води, фізіологічного розчину хлориду натрію або поживного середовища. Після цього матеріал серійно розводять по мл в рядах з 9 пробірками по ОУмл середовища в кожній і термостатують з щоденною перевіркою протягом 4 днів.

Генетичні особливості штаму. Штам генетично однорідний. Штам чутливий до деяких антибіотиків: бо гентаміцину. тетрацикліну, ампіцикліну, карбеніциліну, рифампіцину. Штам резистентний до нітроксоліну, невіграмону, поліміксину, левоміцетину, стрептоміцину, мономіцину.

Штам І асіорасійиз асідорпййиз 1МВ В-7021 депонований в Депозитарії Інституту мікробіології і вірусології

НАН України 25 жовтня 2000 року. Видова назва культури І асіобасіїиз5 асідорпйшв5. Родовід штаму - виділений від здорової дитини 7 років в 199 р. співробітниками науково-медичного центру "Біокорекція", м.Київ, узвіз

Протасів Яр, 4.

Грампозитивні правильної форми палички, розмірами (1,4-1,5)Х(3,0-6,0)мкм (іноді нитчасті), розташовуються по 1-2 або короткими ланцюжками. Спор не містять, не рухливі. Не виявлено мезодіамінопімелінової кислоти в клітинних стінках. Колонії - білуваті з нерівними краями, непрозорі, шорсткуваті, розмірами 1-2мм. 70 Культуральні властивості. Потребує для росту багатих складних поживних середовищ. Оптимальне рН для росту 5,5-6,2, оптимальна температура 40:27, ріст відсутній при 157С. Факультативний анаероб.

Фізіолого-біохімічні властивості. Не синтезує каталази, індолу, НоЗ, цитохромів (бензидиновий тест негативний), не розріджує желатини, не відновлює нітрати до нітритів. Росте при 4095-ій концентрації жовчі в середовищі, росте у молоці з утворенням згустку та відновлює молоко з лакмусом чи метиленовою синькою.

Зброджує вуглеводи до молочної кислоти, не утворює СО» із глюкози. Зброджує: фруктозу, галактозу, глюкозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, маннозу, саліцин. Не зброджує: рамнозу, рибозу, трегалозу, ксилозу, арабінозу, сорбіт, маніт, глюконат, гліцерин. Галузь використання штаму. Штам призначений для використання в складі заквасок та бактерійних концентратів, для приготування препаратів та харчових продуктів, які коригують мікрофлору травного тракту людей та тварин. Продукт, що синтезується штамом. Штам синтезує молочну Кислоту, яка являється чинником мікробного антагонізму. Антагоністична активність штаму. Для визначення антагоністичної активності штаму було застосовано метод його вирощування на пластинах молочного агару та "Лактоагару" при відсутності кисню в ексикаторі. Результати досліджень наведено у таблиці 9. зв «

Евореполасоїоєти 00008

Ф зо ю -

Заітопеа урні 562 свіжовиділений 6

Ревюетіаьвтяя 00000105 з зв Ф

Спосіб, умови та склад середовища для культивування та зберігання штаму. Для довгострокового зберігання штаму необхідно його ліофілізувати за технологією, що використовується при випуску препаратів типу « "Біфідумбактерин сухий." Тимчасове продовжене зберігання протягом 1-3 тижнів, до місяця включно, припустимо пт) с в пробірках з молочним агаром та під шаром вазелінової олії в рефрижераторі з температурою не нижче 570.

Для ліофілізації вирощують культуру в напіврідкому середовищі при 39-407"С протягом двох діб. До культури з добавляють 3395 свіжовиготовленого захисного середовища для висушування такого складу: знежиреного молока (обрату) БОмл б 15 31,5956-ого розчину сахарози на дистильованій воді БОмл 4,595-ого розчину желатини на дистильованій воді (попередньо дають желатині набухнути в теплій воді 1-2 години) БХОмл

ЧК» -з Компоненти нарізно стерилізують в автоклаві ЗОхв. при 1107С і змішують перед використанням. Режим висушування: заморожування до -45"С, висушування під вакуумом від -457С протягом 10-12 годин з підвищенням с 50 температури по 57С на годину до 22 - 24"С і досушування при цій температурі 6-12 годин. Штам культивують на комерційному середовищі "Лактоагар' (Росія), агарі з молоком, гідролізатно-молочному або

Фо кукурудзяно-лактозному середовищі.

Молочний агар. 295 агару та 20965 знежиреного молока (відновлене комерційне сухе молоко з кислотністю 16-187Т в кількості 100г на 9У0Омл дистильованої води). Стерилізують окремо агар та молоко при (121-41)7С 1Охв. 59 При використанні до розплавленого агару додають 2095 знежиреного молока, старанно перемішують та в. розливають в чашки Петрі.

Гідролізатно-молочне середовище. Гідролізоване молоко розбавляють питною водою 1:1. В невеликій кількості розведеного гідролізату розплавляють агар із розрахунку (2,540,5)г на Якуб.дм приготовленого середовища. До залишку гідролізату додають 20г пептону, З,5г хлористого натрію, суміш нагрівають до 805-27С, 60 після чого змішують з розплавленим агаром. Виставивши рН7,50,1, кип'ятять 15хв., відстоюють, фільтрують, доливають гарячою дистильованою водою до заданого об'єму та додають 10,0г лактози, 0,15г солянокислого цистеїну. Середовище розливають в пробірки по 10,Окуб.см та стерилізують парою при 1122417С протягом ЗОхв. в розігрітому автоклаві рН готового середовища 7,102.

Кукурудзяно-лактозне середовище. В невеликій кількості дистильованої води плавлять агар із розрахунку бо (2,5:20,5)г на Ткуб.дм приготовленого середовища. До залишку дистильованої води додають (10:1)г пептону,

(40:41) г чи куб.см водного розчину кукурудзяного екстракту, розбавленого 1:6, (6-0,5)г натрію лимоннокислого тризаміщеного, (0,12-0,02)г магнію сірчанокислого, (250,1)г калію фосфорнокислого двозаміщеного. Суміш нагрівають до (80-2)"С, після чого з'єднують з розплавленим агаром, додають (10:0,5)г лактози, (0,15--0,05)г боляноКкислого цистеїну або (0,52-0,1)г аскорбінової кислоти. рН готового середовища 7,0-0,2. Для одержання штаму з наданих Депозитарію флаконів, культуру оживляють регідратуванням сухого матеріалу шляхом додавання бмл стерильної дистильованої води, фізіологічного розчину хлориду натрію або рідкого поживного середовища. Після цього суспензію серійно розводять по їмл в рядах з 9 пробірками по Умл середовища в кожній і термостатують з щоденною перевіркою протягом 4 днів. Можна серійні розведення сухої біомаси /о засівати на молочний агар або "Лактоагар" в чашки Петрі і термостату-вати.

Особливості штаму. Штам генетично однорідний. Штам чутливий до деяких антибіотиків: ампіцикліну, цефалотину, мономіцину, пеніциліну, кліндаміцину, канаміцину, гентаміцину, резистентний до нітроксоліну, 5-НОК, невіграмону.

Штам Зігеріососсиз (Пегторпйиз 1МВ 8-7026 депонований в Депозитарії Інституту мікробіології |і 7/5 Вірусології НАН України 18 червня 2001 року.

Видова назва мікроорганізму: Зігеріососсиз (Тегторпіїи5. Родовід штаму - ізольований із кисломолочних продуктів. Штам ідентифіковано в лабораторії "Біокорекція", м.Київ.

Культурально-морфологічні та фізіолого-біохімічні особливості. Факультативний анаероб. Вимагає для росту багатих середовищ з вуглеводами та органічними джерелами азоту (пептон, гідролізат казеїну). При вирощуванні на поверхні живильних агаризованих середовищ (МРС) утворюють білуваті круглі блискучі колонії діаметром 0,5-1,0мм. Глибинні колонії у вигляді білих дисків діаметром до 1мм. У бульйоні утворюють однорідну муть та аморфний осад. Коковидні грампозитивні клітини 0,8-1,Омкм, іноді до 1,2мкм діаметром, розміщуються попарно, групами і ланцюжками (останні превалюють при рості у рідкому та напіврідкому середовищі). Нерухомі, спор не утворюють. Желатин не розріджують, утворюють аміак із аргініну. Не містять каталази. Молоко об сквашують, лакмус у молоці відновлюють, не відновлюють молоко з 0,196 метиленової синьки. Не ростуть при 4095 жовчі, при 6,595 Масі, при рНО,б, при ї-0, 4-15 "С. Ростуть при 2,595 Масі, при 457"С та слабо при 5070. «

Хороший ріст в зоні 25-457С, оптимум 40"С. Оптимальне для росту значення рнНб,0-6,5. Виживають у рідкому середовищі при ріНУ, після прогріву при 60"С протягом ЗОхв. Зброджують вуглеводи до лактату без продукування вуглекислого газу. Зброджують: глюкозу, лактозу (здатність до зброджування лактози може Ге! зо втрачатися при культивуванні), фруктозу, сахарозу; не зброджують маніт, гліцерин.

Галузь використання штаму. Штам найбільш ймовірно використовувати у харчовій промисловості. о

Продукт, що синтезується штамом. Продукується комплекс біологічно активних речовин, зокрема молочна «- кислота, антибіотикоподібні речовини. Активність штаму. Сквашує стерильне знежирене молоко (обрат) через 4-6 годин культивування при температурі 40"С. Спосіб, умови та склад середовища для культивування штаму. «

Штам культивують при 37-40"С протягом 24-48 годин на поверхні агаризованих або в рідких середовищах. «о

Використовуються середовища МРС, МПА або МПБ з 195 глюкози, стерильне знежирене молоко, відновлене 1095 знежирене молоко. Культуру пересівають раз у місяць. Склад середовища МРС (г/л): пептон 10 « м'ясна вода 100 -о дріжджовий автолізат 100 с екстракт печінки 100 з глюкоза 20 оцтовокислий натрій Б калію гідрофосфат 2

Ге») магнію сульфат 02 марганцю сульфат 0,05 о твін 80 1 ша дистильована вода до 10001 сл 50 рн-в,в

Ге Спосіб, умови та склад середовища для довгострокового зберігання штаму. Культуру вирощують при оптимальних умовах у 1095 відновленому молоці, стерильному знежиреному молоці, напіврідких середовищах (див. вище) з 0,7г/л агару. Зберігають при 4"С протягом місяця. Клітини можна сублімаційно висушувати після

Заморожування до -357С і зберігати протягом 3-5 років. Для ліофілізації культуру вирощують протягом 24 годин на стерильному знежиреному молоці і зміщують у співвідношенні 1:11 з захисним середовищем. Захисне » середовище при ліофілізації у 90: 2095-ного водного розчину сахарози 10

ЗО90-ного водного розчин лимоннокислого натрію 10 бо розчин желатози (1 частину желатози розчиняють у б частинах дистильованої води). 30

Відомості про патогенність (для людини, тварин чи рослин). Штам непатогенний для теплокровних тварин. Не досліджували ауксотрофність, резистентність до антибіотиків, фагів тощо.

Далі винахід, що заявляється, підтверджується прикладами конкретної реалізації для бакконцентрату сухого бо "Біокор-1" і біологічно активної добавки "Біокоректин". Приклад 1. Для виготовлення бакконцентрату сухого

"Біокор-1" брали: штам Війдобасіегішт ріййачт 1МВ В-7019, штам Війдорасіегішт юопдит 1МВ В-7020, штам І асіорасійив асідорпййиз МВ В-7021, штам Зігеріососсив (пегторпіїиз 1МВ В-7026, печінкове середовище (Блаурока) для культивації біфідобактерій, питна вода за ГОСТ 2874, магній сірчанокислий 7-водний за ГОСТ 4523, 70 натрію гідроксид за ГОСТ 4328, натрій лимоннокислий за ГОСТ 22280, молоко знежирене сухе за ГОСТ 10970, молоко знежирене кислотністю не більше 197Т, одержане з молока за ДСТУ 3662.

Для накопичення біомаси мікроорганізмів виготовляли середовище культивування, основою якого є 7/5 Відновлене знежирене молоко, білки якого гідролізовані протосубтиліном з додаванням лактози, лимоннокислого натрію, сірчанокислого заліза та стимуляторів росту. У підготовлене поживне середовище вносили посівний матеріал, який готували таким чином. Для виготовлення посівного матеріалу (інокуляту) біфідобактерій 590 добової культури, що була вирощена у середовищі Блаурока додають у виготовлене середовище культивування для накопичення біомаси. Культивування здійснювали протягом Збгод. при температурі 35:-176.

Посівна доза біфідобактерій у ферментер становила 7905. Інокулят молочнокислих бактерій Зігеріососсив

ІШепторнуїнз готували на стерилізованому знежиреному молоці з посівною дозою 195 при температурі 37170 протягом 1бгод. Посівна доза термофільного стрептокока в ферментер становила 395. Інокулят І асіобасіїїиз асідорпіїнз готували на стерилізованому знежиреному молоці з посівною дозою 0,795 при температурі 38-17 протягом 1бгод. Посівна доза Іасіорасіїйшз асідорпіз у ферментер становила 295. Накопичену біомасу ов Мікроорганізмів відокремлювали від культурального середовища на суперцентрифузі, зважували та змішують зі стерильним водним розчином захисного середовища, що містить 595 сухого знежиреного молока, 89о сахарози, « 4,590 натрію лимоннокислого. Одержану таким чином суспензію заморожували в морозильній шафі при температурі мінус (35-45)"С і висушували в сублімаційній сушарці. Одержали бакконцентрат "Біокор-1", що мав такі властивості. Сипучий порошок світло-коричневого кольору. Смак і запах - знеособлені, без сторонніх Ге! зо присмаків та запахів. Масова частка вологи - 595. Гривалість сквашування молока (при внесенні 1г на 1л) при 377С становила 4год. Співвідношення кількості біфідобактерій та лактобактерій, у 90: о «- біфідобактерії 40 лактобактерії 60 «

Зо Приклад 2. Бакконцентрат "Біокор-1" готували так, як описано у прикладі 1, за винятком того, що дещо ї-оі змінювали співвідношення інокулятів біфідобактерій та лактобактерій. Одержали сухий бакконцентрат із таким співвідношенням кількості біфідобактерій та лактобактерій, у бо: біфідобактерії 80 ч с 40 лактобактерії 20 З "» Бакконцентрат мав кремовий колір, масова частка вологи - 4,995. Тривалість сквашування молока при " додаванні до 1 літра молока 1г бакконцентрату становила 5 годин при 3770.

Приклад 3. Бакконцентрат "Біокор-1" готували так, як описано у прикладі 1, за винятком того, що дещо змінювали співвідношення інокулятів біфідобактерій та лактобактерій. Одержали сухий бакконцентрат із таким (22) співвідношенням кількості біфідобактерій та лактобактерій, у бо: те біфідобактерії 60 - лактобактерії 40 с Й | Й

Сухий бакконцентрат "Біокор-1" - сипучий порошок кремового кольору без сторонніх присмаків та запахів. (Че) Масова частка вологи - 4,895. Тривалість сквашування молока - 15год.

Бакконцентрат "Біокор-1" застосовують в харчовій промисловості для виготовлення профілактичних молочнокислих продуктів і біологічно активних добавок.

Крім того, бактеріальний концентрат "Біокор-1" має високу біологічну активність, сприяє активній колонізації штамів біфідобактерій та лактобактерій у травній системі людини, проявляє високий рівень » антагоністичної активності до небажаної мікрофлори слизових оболонок. "Біокор-1" є лікувально-профілактичним продуктом, нормалізує мікрофлору слизових оболонок, відновлює функції кишкового тракту, активізує синтез вітамінно-ферментих комплексів, підвищує імунітет, сприяє зникненню алергічних проявів на шкірі. во За даними клінічних досліджень терапевтична дія у хворих з загостреннями патології та дисбіозами лікуванні наступала на 2-4 день у 5095 випадків, на 4-6 день ще у 3095 випадків, що складало разом 8095. Для хворих з хронічними захворюваннями кишечнику терапевтична дія проявлялась на 6-12 день у 8095 хворих.

Бакконцентрат "Біокор-1" рекомендовано використовувати в рідкому або ліофілізованому стані, як закваску для приготування домашнього та промислового лікувально-профілактичного кисломолочного продукту, коктейлів б5 тощо.

Біологічно активну добавку "Біокоректин" (далі біокоректин) виготовляли використовуючи наступну сировину та матеріали: бакконцентрат "Біокор-1"7, описаний у прикладах 1-3, а також порошок яблук, порошок груш, порошок винограду, порошок цитрусових, порошок ананасів, порошок моркви, порошок буряка, порошок часнику, порошок гарбуза, порошок кавуна, порошок дині, порошок капусти, порошок петрушки, порошок кропу, порошок шпинату, порошок топінамбуру, цукор молочний, вітаміни С, В., Ве, Вл», РР, А, 0, Е, кальцію стеарат, капсули желатинові тверді.

Приклад 4. Для виготовлення біокоректину брали у розрахунку на 1кг готового продукту: бакконцентрат "Біокор-1" 120Гг; 70 цукор молочний 265Г;, стеарат кальцію 15г, носій (порошок яблук) бог;

Складові частини композиції змішували до утворення однорідного порошку. Далі одержаний порошок біокоректину після перевірки властивостей відправляли на фасування або для спорядження желатинових т капсул, пакування, маркування та зберігання готової продукції.

Біокоректин - високодисперсний порошок, однорідний по всій масі з приємним смаком і запахом, властивими порошку яблук, без сторонніх присмаків та запахів. У 100г біокоректину міститься 0,4г білків, 9,вг вуглеводів енергетична цінність 45ккал. За мікробіологічними показниками біокоректин відповідає таким вимогам: загальна кількість життєздатних мікроорганізмів становить не менше 1-10КУО/г (відсутність бактерій групи кишкових паличок (колі форми) та патогенних мікроорганізмів в т.ч. бактерій роду Сальмонела, 51. айгецйзв, В. сегецйв).

Приклади 5-8. Біокоректин виготовляли так, як описано у прикладі 4, за винятком того, що змінювали співвідношення компонентів. Склад одержаного біокоректину наведено у прикладах 5-8 таблиці 10.

Органолептичні та мікробіологічні показники були практично такими ж, як і для прикладу 4.

Приклади 9-11. Біокоректин виготовляли так, як описано у прикладі 4, за винятком того, що до складу 29 композиції додатково вводили вітаміни. Склад біокоректину з доданими вітамінами наведено у прикладах 9-11 « таблиці 10.

Приклади 12-28. Біокоректин виготовляли так, як описано у прикладі 4, за винятком того, що в якості носія брали порошок, вибраний з наступного ряду: порошок яблук, порошок груш, порошок винограду, порошок цитрусових, порошок ананасів, порошок моркви, порошок буряка, порошок часнику, порошок гарбуза, порошок Ф кавуна, порошок дині, порошок капусти, порошок петрушки, порошок кропу, порошок шпинату, порошок М топінамбуру. Указані носії підвищують гістадгезійну активність штамів, що входять до складу біокоректину, а також розширюють асортимент органолептичних та лікувальних властивостей біокоректину. У прикладах 12-28 -- таблиці 11 наведено деякі особливості властивостей біокоректину з різними носіями, що мав такий склад, 95 «І зве (се) бакконцентрат "Біокор-1" 12 цукор молочний 26,5 стеарат кальцію 1,5 « дю носій 60 - с Отже біокоректин є джерелом чистих культур симбіотичних біфідобактерій у кількості 1.107-1.1012КУО/г, :з» лактобактерій в кількості 1.107-1.1012КУО/г, а також вітамінів, мінеральних речовин природного походження. 5 ь їх "Біокор-1", КУС/г продукту

Іоспдит 1МВ Іегторнішв

Ге в-7020 1мМВ в-7026 рю юю 5 рю юю 11 ст ПОМСНННИ ПОЕТИ ПОЄД НОЄ НИ НО УНОНЯ НОЄ УАН НОСИ ПОН КОН ПАННО ПОН ПОН КОН НОЯ ПОН з» рю юю юю 11111 в рю юю вв я роюв юю 12651666 1 1 16001005085001600ю0ю0 08020605» вол 1 юв1юв вв вою ю во волю яю т 65 Мо прикл Носій Деякі особливості властивостей біокоректину з носієм

12 порошок яблук містить пектини, органічні кислоти, флавоноїди, вітаміни, органічні сполуки заліза та фосфору, дубильні речовини, катехіни, використовують при дискінезії жовчних шляхів, при спастичному коліті, при авітамінозах містить дубильні, та пектинові речовини, каротин, вітаміни, мінеральні солі, в'яжучий засіб (14 порошок винограду ззагальнозміцнююча, сечогінна, послаблююча та жовчогінна дія на організм порошок цитрусових Іполіпшує травлення при гіпосекреторних гастритах, слабкому жовчовиділенні, схильності до спастичних запорів, проявляє загальнозміцнюючі властивості 16 порошок ананасів містить білки, вуглеводи, вітаміни, ферменти, у тому числі фермент бромелайн, що має унікальні властивості прискорювати розщеплення жирів в організмі 17 порошок моркви містить р-каротин та інші каротиноїди, вітаміни, пектинові речовини, макро- та мікроелементи, цінний 70 лікувальний засіб при авітамінозах, як допоміжний засіб при кон'юнктивітах, кератитах тощо 18 порошок буряка стимулює гемопоез, стимулює шлункову секрецію і перистальтику кишечнику, сприяє виведенню холестерину, проявляє протипухлинні властивості, ефективний при спастичних колітах, атеросклерозі, тиреотоксикозі, аритміях, гіпертонічній хворобі, захворюваннях печінки, атонії кишечнику 19 порошок часнику стимулює виділення шлункового соку і жовчі, посилює перистальтику кишок, сприяє розвитку нормальної кишкової флори, розширює кровоносні судини, знижує кров'яний тиск 19 20 порошок гарбуза містить цукри, органічні кислоти, вітаміни, мінеральні речовини, проявляє сечогінну, жовчогінну та послаблюючу дію містить цукри, органічні кислоти, пектинові речовини, вітаміни, сечогінний та жовчогінний засіб 22 порошок дині містить пектинові речовини, вітаміни, мінеральні солі, має помірно послаблюючі, сечогінні та жовчогінні властивості 23 порошок капусти містить білки, цукри, органічні кислоти, мінеральні речовини, вітаміни, у тому числі так званий вітамін У, який дає добрий терапевтичний ефект при виразковій хворобі шлунка та дванадцятипалої кишки, при ентеритах, колітах тощо 24 порошок петрушки містить флавоноїди, вітаміни, білки, збуджує апетит, поліпшує травлення, пригнічує процеси бродіння у кишечнику, сприяє виділенню молока у матерів-годувальниць (25 порошоккропу містить флавоноїди, вітаміни, мінеральні речовини, проявляє багатогранний позитивний вплив на організм 29 26 порошок шпинату |посилює перистальтику кишок, виявляє легку проносну дію, має капілярозміцнюючі, протисклеротичні та « протизапальні властивості, також використовують як засіб, що створює лікувальний фон, і для потенціювання дії лікарських засобів при ряді захворювань 27 порошок містить вуглеводи у вигляді полімерів (фруктоолігосахаридів), які не розщеплюються у шлунковому соку тому, топінамбуру що там відсутній фермент інуліназа; у результаті цього фруктоолігосахариди доходять до кишечнику, де Ге») відбувається їх ферментація біфідобактеріями, що інтенсивно при цьому розмножуються і витісняють з кишечнику патогенні та умовно-патогенні мікроорганізми юю 28 суміш порошків застосовують в лікувально-профілактичному і дієтичному харчуванні, має загально зміцнюючи і адаптогенні фруктових, властивості, сприяє нормалізації мікрофлори кишечнику людини, забезпечує ефективність в ьо овочевих, лікувально-профілактичному харчуванні при наявності хвороб шлунково-кишкового тракту, що пов'язано з баштанових та дисбактеріозом; при захворюванні шлунку та дванадцятипалої кишки, печінки, порушеннях обміну речовин; при « цитрусових культур /лікуванні кишкових інфекцій (шігельоз, сальмонельоз, стафілококовий ентероколіт та інші), інфекцій органів

Зо урогеніталій та органів верхніх дихальних шляхів; після радіо опромінювань, перенесення гострих інфекцій, ре) харчових отруєнь, імунодефіцитів, тривалого застосування антибіотиків та хіміотерапевтичних препаратів

Біокоректин має загальнозміцнюючі і адаптогенні властивості, сприяє нормалізації мікрофлори кишечнику « людини шляхом пригнічення патогенних і умовно патогенних мікроорганізмів та збільшення кількості 420 Молочнокислої мікрофлори. Клінічні дослідження, які були проведені у лікарнях міста Києва, дозволяють 8 с рекомендувати біокоректин з високим ефектом у профілактичному та дієтичному харчуванні при: й - застосуванні антибіотиків та хіміотерапевтичних препаратів; "» - променевій терапії; - хворобах шлункова-кишкового тракту, що пов'язані з дисбактеріозом; - харчових алергозах;

Ге») - кишкових інфекціях; - вторинних імунодефіцитах. шк Біокоректин рекомендується вживати по 2-3 капсули дорослим, дітям по 1-2 капсули на добу за 30 хвилин до - приймання їжі протягом 1-2 місяців. Спосіб застосування, який запропоновано авторами, пройшов клінічні випробування і не викликає заперечень. і-й Біологічно активна добавка "Біокоректин" дозволена до використання МОЗ України. іе)

Claims

Формула винаходу що й що о й

1. Штам Війдобрасіегішт Біййдит 1МВ В-7019 для виготовлення бактерійних концентратів та харчових Р продуктів, які коригують мікрофлору травного тракту людей та тварин.

2. Штам бактерій Віїдобасіегіцт Іопдит 1МВ В-7020 для виготовлення бактерійних концентратів та харчових продуктів, які коригують мікрофлору травного тракту людей та тварин. во З.

Штам бактерій Іасіорасіййз асідорпійзІМВ 8-7021 для виготовлення бактерійних концентратів та харчових продуктів, які коригують мікрофлору травного тракту людей та тварин.

4. Штам бактерій бігеріососсивз (Штептпорнпішз 1МВ 8-7026 для виготовлення бактерійних концентратів та харчових продуктів, які коригують мікрофлору травного тракту людей та тварин.

5. Бакконцентрат, що містить суміш ліофілізованих культур штамів біфідобактерій та лактобактерій, 65 який відрізняється тим, що з біфідобактерій він містить штами Війдорасіегт бБійдит 1МВ В-7019 і Війдобасіегішт Іопдит 1МВ В-7020, а як лактобактерії містить штами І асіорасіїивз асідорпіше 1МВ В-7021 і зігеріососсиз (пегпторпіїиз 1МВ В-7026 при такому співвідношенні, бо мас.: біфідобактерії 40 - 80 лактобактерії 20-60.

6. Біологічно активна добавка, що містить бакконцентрат і носій, яка відрізняється тим, що як бакконцентрат вона містить бакконцентрат "Біокор-1", який складається із біфідобактерій штамів Віїдорасіегішт Бійдит 1МВ В-7019 та Віїдобасіегічт Іюпдит 1МВ В-7020 у кількості 107-1012 КУО/г і лактобактерій штамів І асіобасіїйв 70 асідорпйце 1МВ В-7021 та Зігеріососсив (Штепторпйшв 1МВ В-7026 у кількості 1071-1010 КУО/г, як носій вона містить фруктовий, цитрусовий чи овочевий порошок або порошок ананасів чи баштанових культур, або їх суміш, а також цукор молочний і стеарат кальцію при такому співвідношенні компонентів, 95 мас.: бакконцентрат 10-25 цукор молочний 20-35 й стеарат кальцію 1-2 носій решта.

7. Біологічно активна добавка за п. б, яка відрізняється тим, що вона додатково містить вітаміни у розрахунку на кг продукту: вітамінс 1,0-20г вітамін Ві 15 - ВОмг вітамін Вб 15-8Омг вітамін В12 1,0- 4, Омг вітамінРР о /10-20мг « вітамінА 2,0 - Б.Омг вітамін О 10-БОмМг вітамін Е 5,0- 10г. Ге»! , й -. но й У

8. Біологічно активна добавка за п. 6, яка відрізняється тим, що як носій вона містить порошок, вибраний з.й наступного ряду: порошок яблук, порошок груш, порошок винограду, порошок цитрусових, порошок ананасів, «- порошок моркви, порошок буряка, порошок часнику, порошок гарбуза, порошок кавуна, порошок дині, порошок капусти, порошок петрушки, порошок кропу, порошок шпинату, порошок топінамбуру. «

9. Біологічно активна добавка за п. б, яка відрізняється тим, що як носій вона містить суміш фруктових, с овочевих, баштанових та цитрусових порошків. Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2004, М 2, 15.02.2004. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і « науки України. Муки т кр о, . и? (о) ЧК» - 1 іЧе) 60 б5