UA47440U - МОНОКЛОНАЛЬНІ АНТИТІЛА ДО IgA ЛЮДИНИ, ПРИДАТНІ ДЛЯ ВИКОРИСТАННЯ У ІМУНОФЕРМЕНТНОМУ АНАЛІЗІ - Google Patents
МОНОКЛОНАЛЬНІ АНТИТІЛА ДО IgA ЛЮДИНИ, ПРИДАТНІ ДЛЯ ВИКОРИСТАННЯ У ІМУНОФЕРМЕНТНОМУ АНАЛІЗІ Download PDFInfo
- Publication number
- UA47440U UA47440U UAU200900855U UAU200900855U UA47440U UA 47440 U UA47440 U UA 47440U UA U200900855 U UAU200900855 U UA U200900855U UA U200900855 U UAU200900855 U UA U200900855U UA 47440 U UA47440 U UA 47440U
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- mkat
- monoclonal antibodies
- solution
- enzyme assay
- human iga
- Prior art date
Links
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 title abstract 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 abstract description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 abstract description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 abstract 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 abstract 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 abstract 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 abstract 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 abstract 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 abstract 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 abstract 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PMJHNEFCWLUZBC-UHFFFAOYSA-N 4-(4-amino-3-methylphenyl)-2,6,6-trimethylcyclohexa-1,3-dien-1-amine Chemical compound CC1=C(N)C(C)(C)CC(C=2C=C(C)C(N)=CC=2)=C1 PMJHNEFCWLUZBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Моноклональні антитіла до IgA людини, придатні для використання у імуноферментному аналізі, належать до класу імуноглобулінів миші, продукуються гібридомами, які одержані внаслідок хімічно індукованої гібридизації імунокомпетентних В-лімфоцитів та мієломи Sp 2/0, які отримані за короткостроковою схемою імунізації мишей лінії BALB/c, характеризуються високими константою афінності, титром у культуральній рідині та титром пероксидазного кон'югату.
Description
при кімнатній температурі Осад МКАТ ресуспендували в розчині сульфату амонію 4095-ого насичення та переносили у центрифужні пробірки на 15мл. Центрифугували у кутовому роторі при 10000об/хв. протягом 20хв.
Надосад старанно видаляли, а осад МКАТ розчиняли в мінімальній кількості (1-2мл) деіонізованої води. Розчин переносили у мікропробірки та освітлювали при 10000об/хв. протягом 1Охв. Освітлені МКАТ 131А9, 13605 переносили до спільного флакону. Концентрація МКАТ 131А9, 13605, одержаних таким способом, коливається від 15 до 5О0мг/мл. Одержаний розчин МКАТ фільтрували через фільтри з порами 0,45мкм.
Стандартний фосфатний буфер (рН 7,2-7,4) фільтрували через фільтри з порами 0,45мкм. Використовували колонку 1,5х20см з сефадексом 0-25 (Атегепат РНаптасіа Віоїеси, 17-0033-01) зрівноважену фосфатним буфером шляхом пропускання його із швидкістю 2мл/хв. протягом 20хв. МКАТ в об'ємі 2-3мл наносили на гель, після поглинання розчину гелем наносили такий же об'єм буферу. Після поглинання гелем буферу колонку заповнювали фосфатним буфером доверху, вставляли адаптер та проводили елюції фосфатним буфером із швидкістю 2мл/хв. Вихід піку реєстрували при 280нм. Збирали фракцію МКАТ в окремий флакон, додавали 195 1095-ого азиду натрію та зберігали при плюс 4"С до 4 місяців.
Приклад З
Виділення та очистка МКАТ 133012.
Розморожували асцитичну рідину із вмістом моноклональних антитіл 133012 та переносили її у центрифужну пробірку на 15мл. Пробірку поміщали у нагріту до 37"С воду на 10 хвилин. Зважували сульфат натрію в кількості, потрібній для 1895-го насичення (вага на об'єм) асцитичної рідини, всипали у пробірку з асцитом та старанно струшували до розчинення сульфату натрію. Спостерігали помутніння, зумовлене випадінням в осад МКАТ.
Пробірку центрифугували при 10000об./хв впродовж 5 хвилин у кутовому роторі. Після чого надосад видаляли, а осад антитіл розводили у 5мл деіонізованої води. Пробірку поміщали у нагріту до 45-507С воду на 5 хвилин.
Знову зважували сульфат натрію у кількості, потрібній для 1695-го насичення (вага на об'єм) розчину антитіл, всипали у пробірку та старанно струшували до розчинення сульфату натрію. Спостерігали помутніння, зумовлене випадінням антитіл в осад. Пробірку центрифугували при 10000об./хв впродовж 5 хвилин у кутовому роторі.
Після чого надосад видаляли, а осад антитіл розводили у 2-Змл деіонізованої води. Одержаний розчин МКАТ фільтрували через фільтри з порами 0,22мкм. Для переведення МКАТ у фосфатний буфер використовували 0,02М фосфатний буфер (рН 7,2-7,4) та колонку 1,5х20см з сефадексом 5-25 зрівноважену фосфатним буфером.
МКАТ, одержані раніше, в об'ємі 2-3мл наносили на гель, після поглинання розчину гелем наносили такий же об'єм буферу. Після поглинання гелем буферу колонку заповнювали фосфатним буфером доверху, вставляли адаптер та проводять елюцію фосфатним буфером із швидкістю 2мл/хв. Вихід піку реєстрували при 280нм.
Збирали фракцію МКАТ в окремий флакон, додавали 195 1095-ого азиду натрію та зберігали при плюс 4"С до 6 місяців.
Приклад 4
Спосіб одержання кон'югат МКАТ з пероксидазою хрону.
Кон'югацію МКАТ з ферментом пероксидазою хрону здійснювали у співвідношенні антитіл до ферменту 2:11 (масові долі) методом періодатного окислення за Р. Ті)5зеп (Ті)ї5зеп Р. Ргасіїсе апа (пеогу ої еплгуте іттипоаззау5 // Гар. Теспіднев іп Віоспет. апа Моїесшіаг Віоіоду. - 1985. - 15. - 674р.) із власними модифікаціями.
При окисленні пероксидазу хрону розчиняли у 0,1М бікарбонатному буфері, рН 8,3, до концентрації 15мг/мл та додавали такий же об'єм 14мММ водного розчину періодату натрію. Суміш інкубували протягом 2 годин при кімнатній температурі. Одержаний таким чином розчин активованої пероксидази додавали до розчину антитіл, які попередньо діалізували проти 0,1М карбонатного розчину, рН 9,2. Суміш переносили у герметичну хроматографічну колонку та додавали 1/3 частину сухого сефадексу 525, інкубували протягом З годин при кімнатній температурі.
По закінченні інкубації, розчин кон'югату елюювали з колонки та зупиняли реакцію додаванням 1/20 об'ємні частини водного розчину МавВвнНа (5мг/мл) залишаючи на ЗОхв. при кімнатній температурі. Після цього ще додавали 3/20 частини розчину боргідриду натрію, інкубували протягом боОхв. Одержаний розчин пероксидазного кон'югату МКАТ переводили у 0,02М фосфатний буфер з 0,15М Масі шляхом діалізу.
Приклад 5
Використання кон'югатів МКАТ з пероксидазою хрону у складі імуноферментних тест-систем.
У лунки 96-лункового полістеролового планшету, що сенсибілізовані рекомбінантними антигенами Спіатуаїіа мШмаспотаїййз або Неїїсорасієг руїогі, або Мусоріазта Потіпіх, або Мусоріазта рпештопіає, або Шгєеаріазта игеаіумйсит вносили по 40мкл досліджувані сироватки крові людини, позитивний та негативний контролі й по 8Омкл розчин для їх розведення. Планшет інкубували при 37"С упродовж 1 години та відмивали фосфатно- сольовим буфером з детергентом (ФСОБД) 4 рази. Розчин кон'югату моноклональних антитіл вносили по 100мкл в лунку, інкубували при 377"С протягом 30 хвилин та відмивали ФОБД 6 разів. Далі в лунки вносили по 100мкл розчину хромогену (3,3,5,5'-тетраметилбензидину) та інкубували при 18-25"С в темному місті протягом 30 хвилин, після чого реакцію зупиняли внесенням у всі лунки по 100мкл 0,5М сірчаної кислоти. Через 5 хвилин після зупинення реакції визначали оптичну густину при 450нм/620нм.
Розраховували рівень граничного значення (Г3) додаючи до середнього значення оптичної густини негативного контролю величину 0,2. Для кожного досліджуваного зразка сироватки крові людини розрахувати індекс позитивності (ІП) шляхом ділення значення оптичної густини відповідного зразка на ГЗ3. Досліджувані зразки із значенням ІП рівним та вище 1,0 вважати позитивними на відповідний серологічний маркер, а зразки із значенням ІП нижче 1,0 вважати негативними.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU200900855U UA47440U (uk) | 2009-02-05 | 2009-02-05 | МОНОКЛОНАЛЬНІ АНТИТІЛА ДО IgA ЛЮДИНИ, ПРИДАТНІ ДЛЯ ВИКОРИСТАННЯ У ІМУНОФЕРМЕНТНОМУ АНАЛІЗІ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU200900855U UA47440U (uk) | 2009-02-05 | 2009-02-05 | МОНОКЛОНАЛЬНІ АНТИТІЛА ДО IgA ЛЮДИНИ, ПРИДАТНІ ДЛЯ ВИКОРИСТАННЯ У ІМУНОФЕРМЕНТНОМУ АНАЛІЗІ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA47440U true UA47440U (uk) | 2010-02-10 |
Family
ID=50694173
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAU200900855U UA47440U (uk) | 2009-02-05 | 2009-02-05 | МОНОКЛОНАЛЬНІ АНТИТІЛА ДО IgA ЛЮДИНИ, ПРИДАТНІ ДЛЯ ВИКОРИСТАННЯ У ІМУНОФЕРМЕНТНОМУ АНАЛІЗІ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA47440U (uk) |
-
2009
- 2009-02-05 UA UAU200900855U patent/UA47440U/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU695419B2 (en) | Method for detecting antibodies | |
| CN102305859B (zh) | 检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的活毒抗体试剂盒 | |
| ES2711398T3 (es) | Procedimiento para reducir falsos negativos en inmunoensayo para ensayar muestra derivada de biomembrana | |
| CN101125889A (zh) | 一种微囊藻毒素单克隆抗体及其制备方法与应用 | |
| CN101738473A (zh) | 梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒及其制备方法 | |
| ES2283129T3 (es) | Metodo para deteccion de bacteria de legionela empleando anticuerpos especificos de antigeno purificados. | |
| CN102080067A (zh) | 一种检测呕吐毒素的方法及其专用试剂盒 | |
| KR100905066B1 (ko) | 마이코플라즈마 뉴모니아성 폐렴 진단을 위한 재조합단백질 및 이를 이용한 진단 키트 | |
| CN110045130B (zh) | 一种与IgA肾病相关的多肽的免疫分析检测试剂盒 | |
| King et al. | Identification, characterisation, and measurement of immunoglobulin concentrations in grey (Haliocherus grypus) and common (Phoca vitulina) seals | |
| CN103364552A (zh) | 猪细小病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒及其制备方法和其应用 | |
| CN102336814B (zh) | 一种用于制备抗肝脏肿瘤标志物ck-19抗体的多肽序列、多克隆抗体与应用 | |
| US5310656A (en) | Vitamin B12 assay | |
| EP0479929B1 (en) | Vitamin b12 assay | |
| US5506109A (en) | Vitamin B12 assay | |
| UA47440U (uk) | МОНОКЛОНАЛЬНІ АНТИТІЛА ДО IgA ЛЮДИНИ, ПРИДАТНІ ДЛЯ ВИКОРИСТАННЯ У ІМУНОФЕРМЕНТНОМУ АНАЛІЗІ | |
| CN111458498A (zh) | 一种手足口ev71抗原检测试剂盒 | |
| CN109232238A (zh) | 吉非罗齐半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和用途 | |
| CN102226171B (zh) | 一种包含抗犬血红蛋白单克隆抗体的诊断试剂盒及其应用 | |
| CN104311654A (zh) | 一种cide3多肽及其抗体的制备和应用 | |
| CN111848792B (zh) | 疫苗中牛血清白蛋白等杂质的抗体制备方法及检测方法 | |
| CN101349694A (zh) | 一种链霉素药物快速检测试剂盒及其应用 | |
| UA26768U (en) | MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS | |
| Bradley et al. | A biochemical and immunological approach to the identification of HY antigentic proteins secreted from Daudi cells | |
| JP6481192B2 (ja) | クドア・セプテンプンクタータの迅速検出法 |