UA26768U - MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS - Google Patents
MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS Download PDFInfo
- Publication number
- UA26768U UA26768U UAU200704446U UAU200704446U UA26768U UA 26768 U UA26768 U UA 26768U UA U200704446 U UAU200704446 U UA U200704446U UA U200704446 U UAU200704446 U UA U200704446U UA 26768 U UA26768 U UA 26768U
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- monoclonal antibodies
- mkat
- solution
- human
- igg
- Prior art date
Links
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 5
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 claims 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 12
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 4
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- QTCANKDTWWSCMR-UHFFFAOYSA-N costic aldehyde Natural products C1CCC(=C)C2CC(C(=C)C=O)CCC21C QTCANKDTWWSCMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- ISTFUJWTQAMRGA-UHFFFAOYSA-N iso-beta-costal Natural products C1C(C(=C)C=O)CCC2(C)CCCC(C)=C21 ISTFUJWTQAMRGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- ASHGTUMKRVIOLH-UHFFFAOYSA-L potassium;sodium;hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[K+].OP([O-])([O-])=O ASHGTUMKRVIOLH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101001081590 Homo sapiens DNA-binding protein inhibitor ID-1 Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000295 fuel oil Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 102000049143 human ID1 Human genes 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Description
Опис винаходуDescription of the invention
Корисна модель належить до імунохімії, гібридомної технології та біотехнології і може бути використаний 2 для одержання моноклональних антитіл (МКАТ) до дО людини та їхніх імуноферментних кон'югатів. Метою винаходу є одержання нових моноклональних антитіл до дб людини, придатних для використання у імуноферментних тест-системах.A useful model belongs to immunochemistry, hybridoma technology and biotechnology and can be used 2 for the production of monoclonal antibodies (MCAT) to human dO and their immunoenzymatic conjugates. The purpose of the invention is to obtain new monoclonal antibodies to human db, suitable for use in immunoenzymatic test systems.
Відомі МКАТ до імуноглобулінів людини класу до |1). Проте згадані моноклональні антитіла непридатні для використання у імуноферментних тест-системах. 70 Найбільш близьким до запропонованих є моноклональні антитіла, які взаємодіють із Їд людини |21.Known MKAT for human immunoglobulins of class up to |1). However, the mentioned monoclonal antibodies are unsuitable for use in immunoenzymatic test systems. 70 The closest to the proposed ones are monoclonal antibodies that interact with human venom |21.
У порівнянні із вищезгаданим антитілами клони 153Н11 та 156011 характеризуються більшою специфічністю та активністю у імуноферментному аналізі. Моноклональні антитіла продукуються гібридними клітинами, що одержані при злитті мієломних мишачих клітин Зр 2/0 та спленоцитів мишей лінії ВаІр/сє. Клони МКАТ 153НІ11 та 18 1560111 характеризуються наступними ознаками (таблиця 1).In comparison with the above-mentioned antibodies, clones 153H11 and 156011 are characterized by greater specificity and activity in immunoenzymatic analysis. Monoclonal antibodies are produced by hybrid cells obtained by the fusion of myeloma mouse cells Zr 2/0 and splenocytes of mice of the BaIr/se line. MKAT clones 153NI11 and 18 1560111 are characterized by the following features (table 1).
Приклад 1. Одержання асцитичної рідини із вмістом моноклональних антитіл 153Н11 та 156011.Example 1. Preparation of ascitic fluid containing monoclonal antibodies 153Н11 and 156011.
Черевину миші ВаїЇр/с обробляли спиртом та внутрішньочеревно вводили по 0,5мл пристану (Зідта, США, кат. номер 77640) за допомогою стерильного скляного шприца на мл або 2мл; використовували стерильні голки не) "Рекорд" 0,5 х 10-15мм. Мишей витримували 3-4 тижні. Процедуру праймування проводили у гумових рукавичках.The abdomen of the VaiYir/s mouse was treated with alcohol and 0.5 ml pristane (Zidta, USA, cat. number 77640) was injected intraperitoneally using a sterile glass syringe per ml or 2 ml; sterile needles were not used) "Record" 0.5 x 10-15 mm. The mice were kept for 3-4 weeks. The priming procedure was carried out in rubber gloves.
Кріопробірки з замороженими клітинами клонів 153Н11 та 156011 діставали з судини Дюара із рідкимазотом, 00 витримували на повітрі 2-3 хвилини та занурювали у воду із температурою 37-402С. Пробірки витримували у с воді до тих пір, поки повністю розтане лід. Після цього за допомогою піпетки на їмл суспензії гібридом переносили у пробірки на 15мл (Мипс, кат. номер 366060), повільно додавали 10-15мл середовища ОМЕМ її" (бЗідта, США, кат. номер ОО 5648) без сироватки. Центрифугували при 1300об/хв. протягом Зхв. Надосад с видаляли, а осад клітин ресуспендували у ї0мл середовища ОМЕМ (Зідта, США, кат. номер ЮО 5648) без сироватки. Суспензію переносили у "пеніциліновий" флакон та закривали пробкою. сCryotubes with frozen cells of clones 153H11 and 156011 were removed from a Dewar vessel with liquid fuel oil, kept in air for 2-3 minutes and immersed in water with a temperature of 37-402С. The test tubes were kept in water until the ice completely melted. After that, with the help of a pipette, the hybridoma suspension was transferred to 15 ml test tubes (Mips, cat. number 366060), slowly added 10-15 ml of OMEM medium (bZidta, USA, cat. number OO 5648) without serum. Centrifuged at 1300 rpm minutes during the incubation period. The supernatant was removed, and the cell pellet was resuspended in 10 ml of OMEM medium (Zidta, USA, cat. number ХО 5648) without serum. The suspension was transferred to a "penicillin" vial and closed with a cork.
Суспензію клітин перемішували та набирали у стерильний шприц по їмл, вводили у черевну порожнину мишей (справа або зліва від серединної лінії на їсм нижче від реберної дуги), яка за 3-4 тижні до цього була праймована пристанем. Мишей залишали на 5-10 днів для накопичення у черевній порожнині асцитичної рідини. «The cell suspension was mixed and drawn up into a sterile syringe, injected into the abdominal cavity of mice (to the right or left of the midline on the lower side of the costal arch), which had been primed with pristane 3-4 weeks before. Mice were left for 5-10 days to accumulate ascitic fluid in the abdominal cavity. "
Дану процедуру проводили у гумових рукавичках.This procedure was carried out in rubber gloves.
Через 5-10 днів після введення мишам суспензій гібридом 153Н11 та 156011 у очеревинних порожнинах - с спостерігалося накопичення асцитичних рідин. Для її відбору використовували трубку спеціальної голки ч довжиною 4см. Голки стерилізували шляхом обробки етиловим спиртом (7095) протягом 1Охв. Черевину миші -» обробляли спиртом та робили голкою прокол справа або зліва від серединної лінії на їсм нижче від реберної дуги, відбирали асцитичну рідину у пробірку на 15мл (Мипс, кат. номер 366060). Після відбору рідини місце проколу обробляли спиртовим розчином йоду та на 1хв. затискали пінцетом. Повторний підбір асцитичної рідини ко проводили через 2-Здні. Процедуру підбору асциту проводили доти, доки тварина залишалася живою. У бо середньому одна миша здатна дати 2-5мл асциту за один відбір. Асцитичну рідину центрифугували у пробірці на 15мл (Мипс, кат. номер 366060) при 5000об/хв. упродовж Бхв. Відбирали освітлену фракцію та зберігали у -і флаконах при мінус 2020. б 50 Процедуру відбору асциту проводили у гумових рукавичках.5-10 days after administration of suspensions of hybrid 153H11 and 156011 to mice, accumulation of ascitic fluids was observed in the peritoneal cavities - s. For its selection, a tube of a special needle with a length of 4 cm was used. Needles were sterilized by treatment with ethyl alcohol (7095) for 1 hour. The abdomen of the mouse -" was treated with alcohol and a puncture was made with a needle to the right or left of the midline at a distance below the costal arch, ascitic fluid was collected in a 15 ml test tube (Mips, cat. number 366060). After removing the liquid, the puncture site was treated with an alcohol solution of iodine and for 1 minute. clamped with tweezers. Re-sampling of ascitic fluid was carried out after 2 days. The ascites selection procedure was carried out as long as the animal remained alive. On average, one mouse is able to give 2-5 ml of ascites in one sampling. The ascitic fluid was centrifuged in a 15 ml test tube (Mips, cat. number 366060) at 5000 rpm. throughout Bhv. The clarified fraction was collected and stored in vials at minus 2020. b 50 The ascites collection procedure was carried out in rubber gloves.
Приклад 2. Виділення та очистка моноклональних антитіл 153Н11 со Розморожували асцитичну рідину та переносили її у центрифужну пробірку та освітлювали при 4000об/хв. протягом ЗОхв. Після цього асцитичну рідину фільтрували через фільтри з порами 0,45мкм (Зідта, США, кат. номер Е8273). оо Для афінної очистки використовували колонку з білююм А-сефарозою об'ємом 1О0мл. Перед нанесенням с асцитичної рідини колонку промивали із швидкістю 1,5-2мл/хв 5-10 об'ємами 0,02М натрій-калій фосфатного буферу, рН 7,0-7,2 (КН»РО, та МазНРО)). Фільтровану асцитичну рідину в об'ємі 20 мл пропускали через колонку зі швидкістю 1Тмл/хв. Після цього промивали колонку 10 - 15 об'ємами фосфатного буферу. Елюцію проводили за допомогою 0,1М лимонної кислоти в об'ємі 15мл. Вихід МКАТ 153Н11 реєстрували при 28Онм. Пік, 60 який виходить із колонки збирали у флакон, що містив 2дмл 1М трис основи. рН одержаного розчину мав становити 7,0 - 8,0, що контролювали за допомогою індикаторного паперу. Значення рН коректували додаванням кислоти або трис-основи. Після виходу піка колонку промивали із швидкістю 1,5-2мл/хв 10-20 об'ємами 0,02М натрій-калій фосфатного буферу до нейтрального рн.Example 2. Isolation and purification of monoclonal antibodies 153Н11 со Ascitic fluid was thawed and transferred to a centrifuge tube and illuminated at 4000 rpm. during ЗОхв. After that, the ascitic fluid was filtered through filters with pores of 0.45 μm (Zidta, USA, cat. number E8273). oo For affinity purification, a column with white A-sepharose with a volume of 100 ml was used. Before applying ascitic fluid, the column was washed at a speed of 1.5-2 ml/min with 5-10 volumes of 0.02 M sodium-potassium phosphate buffer, pH 7.0-7.2 (KH»PO, and MazHPO)). Filtered ascitic fluid in a volume of 20 ml was passed through the column at a speed of 1Tml/min. After that, the column was washed with 10-15 volumes of phosphate buffer. Elution was carried out using 0.1 M citric acid in a volume of 15 ml. The output of MKAT 153Н11 was recorded at 28 Ohm. The peak 60 leaving the column was collected in a vial containing 2 dml of 1M tris base. The pH of the resulting solution should be 7.0 - 8.0, which was monitored using indicator paper. The pH value was adjusted by adding acid or tris-base. After the peak, the column was washed at a rate of 1.5-2ml/min with 10-20 volumes of 0.02M sodium-potassium phosphate buffer to neutral pH.
МКАТ 153Н11 концентрували за допомогою насиченого розчину сульфату амонію. Для цього до бо охолодженого препарату МКАТ 153Н11 додавали насичений розчин сульфату амонію до 40-5095 насичення.MKAT 153Н11 was concentrated using a saturated solution of ammonium sulfate. For this purpose, a saturated solution of ammonium sulfate was added to the cooled preparation of MKAT 153H11 up to 40-5095 saturation.
Витримували на холоді (492) 2-3 години, після чого центрифугували 20хв при 40О0О0об/хв. при кімнатній температурі Осад МКАТ ресуспендували в розчині сульфату амонію 4095-ого насичення та переносили у центрифужні пробірки на 15мл (Мипс, кат. номер 366060). Центрифугували у кутовому роторі при 10000боб/хв. протягом 20хв. Надосад старанно видаляли, а осад МКАТ 153Н11 розчиняли в мінімальній кількості (1-2мл) деіїонізованої води. Розчин переносили у мікропробірки та освітляювали при 10000об/хв. протягом 10хв.It was kept in the cold (492) for 2-3 hours, after which it was centrifuged for 20 minutes at 40O0O0rpm. at room temperature MKAT sediment was resuspended in a 4095th saturation ammonium sulfate solution and transferred to 15 ml centrifuge tubes (Mips, cat. number 366060). Centrifuged in an angular rotor at 10,000 rpm. within 20 minutes The precipitate was carefully removed, and the precipitate of MKAT 153Н11 was dissolved in a minimal amount (1-2 ml) of deionized water. The solution was transferred to microtubes and illuminated at 10,000 rpm. within 10 minutes
Освітлені МКАТ 153Н11 переносили до спільного флакону. Концентрація МКАТ 153НІ11, одержаних таким способом, коливається від 20 до 4Омг/мл.Illuminated MKAT 153Н11 were transferred to a common vial. The concentration of MKAT 153NI11, obtained in this way, ranges from 20 to 4Omg/ml.
Одержаний розчин МКАТ 153Н11 фільтрували через фільтри з порами 0,45мкм (Зідта, США, кат. номерThe obtained solution of MKAT 153Н11 was filtered through filters with pores of 0.45 μm (Zidta, USA, cat. no.
Е8273). 70 Стандартний фосфатний буфер (рН 7,2-7,4) фільтрували через фільтри з порами 0,45мкм (Зідта, США, кат. номер Е8273). Використовували колонку 1,5 х 20см з сефадексом 0-25 (Атегепат РнНагптасіа Віоїесп, 17-0033-01) зрівноважену фосфатним буфером шляхом пропускання його із швидкістю 2мл/хв. протягом 20хв.E8273). 70 Standard phosphate buffer (pH 7.2-7.4) was filtered through filters with pores of 0.45 μm (Zidta, USA, cat. number E8273). A 1.5 x 20 cm column with Sephadex 0-25 (Ategepat RnNagptasia Vioyesp, 17-0033-01) equilibrated with phosphate buffer by passing it at a speed of 2 ml/min was used. within 20 minutes
МКАТ 153Н11 в об'ємі 2-3Змл наносили на гель, після поглинання розчину гелем наносили такий же об'єм буферу. Після поглинання гелем буферу колонку заповнювали фосфатним буфером доверху, вставляли 7/5 адаптер та проводили елюції фосфатним буфером із швидкістю 2 мл/хв. Вихід піку реєстрували при 280нм.MKAT 153H11 in a volume of 2-3 ml was applied to the gel, after absorption of the solution by the gel, the same volume of buffer was applied. After absorption of the buffer by the gel, the column was filled to the top with phosphate buffer, a 7/5 adapter was inserted, and elution was carried out with phosphate buffer at a rate of 2 ml/min. The peak output was recorded at 280 nm.
Збирали фракцію МКАТ 153Н11 в окремий флакон, додавали 195 1095-ого азиду натрію та зберігали при плюс 42 до 4 місяців.The MKAT 153H11 fraction was collected in a separate vial, 195 1095 sodium azide was added and stored at plus 42 for up to 4 months.
Приклад 3. Виділення та очистка моноклональних антитіл 156011Example 3. Isolation and purification of monoclonal antibodies 156011
Розморожували асцитичну рідину із вмістом моноклональних антитіл 156011 та переносили її у центрифужну пробірку на 1бмл. Пробірку поміщали у нагріту до 372С воду на 10 хвилин. Зважували сульфат натрію в кількості, потрібній для 1895-го насичення (вага на об'єм) асцитичної рідини, всипали у пробірку з асцитом та старанно струшували до розчинення сульфату натрію. Спостерігали помутніння, зумовлене випадінням в осадAscitic fluid containing monoclonal antibodies 156011 was thawed and transferred to a 1-bml centrifuge tube. The test tube was placed in water heated to 372C for 10 minutes. Sodium sulfate was weighed in the amount required for 1895th saturation (weight per volume) of ascitic fluid, poured into a test tube with ascites and carefully shaken until the sodium sulfate dissolved. Turbidity due to sedimentation was observed
МКАТ. Пробірку центрифугували при 10000об./хв впродовж 5 хвилин у кутовому роторі. Після чого надосад видаляли, а осад антитіл розводили у 5мл деіонізованої води. Пробірку поміщали у нагріту до 45 - 502С воду на 5хХвиИлин. -MKAT The test tube was centrifuged at 10,000 rpm for 5 minutes in an angle rotor. After that, the supernatant was removed, and the antibody precipitate was diluted in 5 ml of deionized water. The test tube was placed in water heated to 45 - 502C for 5 minutes. -
Знову зважуювали сульфат натрію у кількості, потрібній для 1695-го насичення (вага на об'єм) розчину антитіл, всипали у пробірку та старанно струшували до розчинення сульфату натрію. Спостерігали помутніння, зумовлене випадінням антитіл в осад. Пробірку центрифугували при 10000об./хв впродовж 5 хвилин у кутовому роторі. Після чого надосад видаляли, а осад антитіл розводили у 2-Змл деїіонізованої води. сSodium sulfate was again weighed in the amount required for 1695th saturation (weight per volume) of the antibody solution, poured into the test tube and shaken thoroughly until the sodium sulfate dissolved. Turbidity caused by precipitation of antibodies was observed. The test tube was centrifuged at 10,000 rpm for 5 minutes in an angle rotor. After that, the supernatant was removed, and the antibody precipitate was diluted in 2 ml of deionized water. with
Одержаний розчин МКАТ фільтрували через фільтри з порами 0,22мкм. «соThe resulting MKAT solution was filtered through filters with pores of 0.22 μm. "co
Для переведення МКАТ у фосфатний буфер використовували 0,02М фосфатний буфер (рН 7,2-7 4) та колонку 1,5 х 20см з сефадексом 0-25 зрівноважену фосфатним буфером. МКАТ, одержані раніше, в об'ємі її 2-Змл наносили на гель, після поглинання розчину гелем наносили такий же об'єм буферу. Після поглинання «со гелем буферу колонку заповнювали фосфатним буфером доверху, вставляли адаптер та проводять елюцію0.02 M phosphate buffer (pH 7.2-7 4) and a 1.5 x 20 cm column with Sephadex 0-25 equilibrated with phosphate buffer were used to transfer MKAT into phosphate buffer. MKAT, obtained earlier, in a volume of 2 ml was applied to the gel, after absorption of the solution by the gel, the same volume of buffer was applied. After absorption with the buffer gel, the column was filled with phosphate buffer to the top, the adapter was inserted and elution was carried out
Зо фосфатним буфером із швидкістю 2мл/хв. Вихід піку реєстрували при 280нм. Збирали фракцію МКАТ в окремий с флакон, додавали 195 1095-ого азиду натрію та зберігали при плюс 42 до 6 місяців.With phosphate buffer at a speed of 2 ml/min. The peak output was recorded at 280 nm. The MKAT fraction was collected in a separate vial, 195 1095 sodium azide was added and stored at plus 42 for up to 6 months.
Приклад 4. Спосіб одержання кон'югату моноклональних антитіл 153Н11 та 156011 з пероксидазою хрону.Example 4. The method of obtaining the conjugate of monoclonal antibodies 153Н11 and 156011 with horseradish peroxidase.
Кон'югацію МКАТ з пероксидазою хрону здійснювали у співвідношенні антитіл до ферменту 2:1 (масові долі) « методом періодатного окислення за Тііззеп ІЗ| із власними модифікаціями.Conjugation of MKAT with horseradish peroxidase was carried out in a ratio of antibodies to the enzyme of 2:1 (mass fractions) "by the periodate oxidation method according to Tiizzep IZ". with own modifications.
При окисленні пероксидазу хрону розчиняли у 0,1М бікарбонатному буфері, до концентрації 15мг/мл та З с додавали такий же об'єм 14мММ водного розчину періодату натрію. Суміш інкубували протягом 2 годин при "з кімнатній температурі. Одержаний таким чином розчин активованої пероксидази додавали до розчину антитіл, " які попередньо діалізували проти 0,1М карбонатного розчину, рН 9,2. Суміш переносили у герметичну хроматографічну колонку та додавали 1/3 частину сухого сефадексу 525, інкубували протягом З годин при кімнатній температурі. о По закінченні інкубації, розчин кон'югату елюювали з колонки та зупиняли реакцію додаванням 1/20 об'ємніDuring oxidation, horseradish peroxidase was dissolved in 0.1 M bicarbonate buffer, to a concentration of 15 mg/ml, and the same volume of 14 mM sodium periodate aqueous solution was added with 3 s. The mixture was incubated for 2 hours at room temperature. The activated peroxidase solution obtained in this way was added to the antibody solution, which was previously dialyzed against 0.1 M carbonate solution, pH 9.2. The mixture was transferred to a sealed chromatographic column and 1/3 of dry Sephadex 525 was added, incubated for 3 hours at room temperature. o At the end of the incubation, the conjugate solution was eluted from the column and the reaction was stopped by adding 1/20 vol.
Ф частини водного розчину МаВІ-Ї" (5мг/мл), залишаючи на ЗОхв. при кімнатній температурі. Після цього ще додавали 33/20 частини розчину боргідриду натрію, інкубували протягом 60 хв. Одержаний розчин ш- пероксидазного кон'югату МКАТ переводили у 0,02М фосфатний буфер з 0,15М Масі шляхом діалізу.5 parts of an aqueous solution of MaVI-Y" (5 mg/ml), leaving it to stand at room temperature. After that, 33/20 parts of sodium borohydride solution were added, incubated for 60 minutes. The obtained solution of the peroxidase conjugate of MKAT was transferred to 0.02M phosphate buffer with 0.15M Mass by dialysis.
Ф 20 Приклад 5. Використання кон'югату моноклональних антитіл з пероксидазою хрону у тест-системах для діагностики гепатиту В, сифілісу, токсоплазмозу, простого герпесу. со У лунки імуносорбенту вносили досліджувані сироватки та розчин для їх розведення у співвідношеннях, що наведені у таблиці 2. с кон'югаті |Ісироваток сироватки вом зом во 100мкл попередньо розведеної 1:51 сироватки людини Тохоріазта допаїї простого герпесу 1 і 2 типівФ 20 Example 5. Use of a conjugate of monoclonal antibodies with horseradish peroxidase in test systems for the diagnosis of hepatitis B, syphilis, toxoplasmosis, herpes simplex. c In the wells of the immunosorbent, the tested sera and a solution for their dilution were introduced in the ratios shown in table 2. c conjugates |I serum vom zom in 100 μl of pre-diluted 1:51 human serum Tochoriazt dopaii herpes simplex types 1 and 2
Планшет інкубували при 372С упродовж 1 години та відмивали фосфатно-сольовим буфером з детергентом бо (ФСБД) 4 рази. Розчин кон'югату моноклональних антитіл вносили по 100мкл в лунку, інкубували при 372С протягом ЗО хвилин та відмивали ФОСБД б разів. Далі в лунки вносили по 1ООмкл розчину хромогену - 3,3,5,5'і-тетраметилбензидину - й інкубували при 18-259СС в темному місті протягом 30 хвилин, після чого реакцію зупиняли внесенням у всі лунки по 100мкл стоп-реагенту. Через 5 хвилин після зупинення реакції визначали оптичну густину при 45О0нм/62Онм.The tablet was incubated at 372C for 1 hour and washed with phosphate-buffered saline with the detergent bo (FSBD) 4 times. 100 μl of the conjugate solution of monoclonal antibodies was introduced into the well, incubated at 372C for 30 minutes and washed with FOSBD b times. Next, 100 μl of the chromogen solution - 3,3,5,5'-tetramethylbenzidine - was added to the wells and incubated at 18-259С in the dark for 30 minutes, after which the reaction was stopped by adding 100 μl of stop reagent to all wells. 5 minutes after stopping the reaction, the optical density was determined at 45O0nm/62Ohm.
Перелік літературних джерел: 1. Климович В.Б., Самойлович М.П., Крутецкая И.Ю. и др. Моноклональнье антитела к подклассам Ід человека: получение и исследование специфичности // Иммунология. - 1998. - Мо3З. - С. 27 - 31. 2. Кеїітег С.В., РАийШірв О.9., Аїоіївіо С.Н. еї аїЇ. Емаїнайоп ої (пійу-сопе тоивзе топосіопа! апііродіев 70. питап Ід еріюрез // Нібгідота. - 1984. - Мої. 3, 3. - Р. 263-275.List of literary sources: 1. Klymovych V.B., Samoilovich M.P., Krutetskaya I.Yu. et al. Monoclonal antibodies to human ID subclasses: obtaining and examining specificity // Immunology. - 1998. - Mo3Z. - P. 27 - 31. 2. Keiiteg S.V., RaiyShirv O.9., Aioiivio S.N. oh oh oh Emainayop oi (piyu-sope toivze toposiopa! apiirodiev 70. pitap Id eriyurez // Nibgidota. - 1984. - Moi. 3, 3. - R. 263-275.
З. Тіїввеп Р. Ргерагайоп ої епгуте-апіроду ог епгуте-тасготоїЇесціе сопіда(ев // І арогаїогу іеспіднев іп Біоспетівзігу апа тоїіесшіаг Біоіоду: ргасіїсе апа (Шеогу ої еплуте іттипоаззауз / Едйоге К.Н. Вигаоп, Р.Н. уап Кпіррепрего. - Атвіегдат: ЕІземіег, 1985. - Р. 221 - 241. тZ. Tiivvep R. Rgeragayop oi epgute-apirodu og epgute-tasgotoiYescie sopida(ev // I arogaiogu iespidnev ip Biospetivzigu apa toiiesshiag Bioiodu: rgasiise apa (Sheogu oi eplute ittypoazzauz / Edyoge KN Vygaop, RN uap Kpirreprego. - Atviegdat: Eizemieg, 1985. - R. 221 - 241. t
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU200704446U UA26768U (en) | 2007-04-23 | 2007-04-23 | MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU200704446U UA26768U (en) | 2007-04-23 | 2007-04-23 | MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA26768U true UA26768U (en) | 2007-10-10 |
Family
ID=38800373
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAU200704446U UA26768U (en) | 2007-04-23 | 2007-04-23 | MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA26768U (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2464787C2 (en) * | 2011-01-12 | 2012-10-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный технологический университет" (ГОУ ВПО "КубГТУ") | Bakery product preparation method |
| RU2480517C1 (en) * | 2011-11-07 | 2013-04-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный технологический университет" (ФГБОУ ВПО "КубГТУ") | Maize germs oil production line |
-
2007
- 2007-04-23 UA UAU200704446U patent/UA26768U/en unknown
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2464787C2 (en) * | 2011-01-12 | 2012-10-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный технологический университет" (ГОУ ВПО "КубГТУ") | Bakery product preparation method |
| RU2480517C1 (en) * | 2011-11-07 | 2013-04-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный технологический университет" (ФГБОУ ВПО "КубГТУ") | Maize germs oil production line |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kaufman et al. | The pathogenesis of the renal lesion in a patient with streptococcal disease, infected ventriculoatrial shunt, cryoglobulinemia and nephritis | |
| Tomino et al. | Cross-reactivity of IgA antibodies between renal mesangial areas and nuclei of tonsillar cells in patients with IgA nephropathy. | |
| Kim et al. | Inherited deficiency of the second component of complement (C2) with membranoproliferative glomerulonephritis | |
| UA26768U (en) | MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS | |
| West et al. | Mechanisms of hypocomplementemia in glomerulonephritis | |
| RU2395576C1 (en) | STRAIN OF HYBRID ANIMAL CELLS Mus museums L - PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES FOR EXPOSING NUCLEOPROTEIN OF EBOLA VIRUS, ZAIRE SUBTYPE (Mainga STRAIN) (VERSIONS), MONOCLONAL ANTIBODY PRODUCED BY SAID STRAIN (VERSIONS) AND SET FOR "SANDWICH" FORMAT IMMUNOENZYMOMETRIC TEST SYSTEM FOR EXPOSING NUCLEOPROTEIN OF EBOLA VIRUS, ZAIRE SUBTYPE (Mainga STRAIN) | |
| CN103197069B (en) | Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) kit for detecting sulfamethazine and enrofloxacin and application thereof | |
| CN103808931A (en) | Enzyme linked immunosorbent assay kit for detecting sulfadiazine and detection method thereof | |
| UA26766U (en) | Monoclonal antibodies to surface antigen of hepatitis b virus, suitable for use in immune-enzyme test-systems | |
| UA26767U (en) | MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF CATTLE SUITABLE FOR USE IN IMMUNE-ENZYME TEST-SYSTEMS | |
| MATOUSEK | Antigenic characteristics of spermatozoa from bulls, rams and boars | |
| CN101349694A (en) | Streptomycin medicament fast detecting reagent kit and uses thereof | |
| UA26764U (en) | MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgM OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNE-ENZYME TEST-SYSTEMS | |
| CN103509068A (en) | Amikacin semi-antigen, and preparation method and application thereof | |
| Kerr et al. | Rapid specific agglutination of Eaton agent (Mycoplasma pneumoniae) | |
| UA26765U (en) | Monoclonal antibodies to nucleolapside antigen of p24 human immune deficiency virus suitable for use in immune-enzyme systems | |
| CN1308686C (en) | Kit for detecting chloromycetin | |
| UA16036U (en) | Set of monoclonal antibodies of g3, g6, g7, specific to human immuniglobulins of class g, suitable for use in immuno fermentative analysis | |
| Rosenau et al. | Resistance of Specifically-Sensitized Treponema pallidum to Methylene Blue Stain. | |
| ES2269115T3 (en) | WHIPPLE DISEASE DIAGNOSIS. | |
| CN109134657A (en) | A kind of preparation method for antibody of 25-hydroxyvitamin D3 | |
| UA47440U (en) | MONOCLONAL ANTIBODIES TO HUMAN IgA, SUITABLE FOR USE IN IMMUNE ENZYME ASSAY | |
| RU2528869C1 (en) | STRAIN OF CULTIVATED HYBRID CELLS OF ANIMAL MUS MUSCULUS L CCHFV Vd-3-PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODY 3H6/F2 TO VIRUS OF CRIMEAN-CONGO HAEMORRHAGIC FEVER | |
| EP0198866A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| RU2528868C1 (en) | STRAIN OF CULTIVATED HYBRID CELLS OF ANIMAL MUS MUSCULUS L CCHFV Vd-2-PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODY 1E2/E5 TO VIRUS OF CRIMEAN-CONGO HAEMORRHAGIC FEVER |