UA26768U - MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS - Google Patents

MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS Download PDF

Info

Publication number
UA26768U
UA26768U UAU200704446U UAU200704446U UA26768U UA 26768 U UA26768 U UA 26768U UA U200704446 U UAU200704446 U UA U200704446U UA U200704446 U UAU200704446 U UA U200704446U UA 26768 U UA26768 U UA 26768U
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
monoclonal antibodies
mkat
solution
human
igg
Prior art date
Application number
UAU200704446U
Other languages
English (en)
Inventor
Ihor Vasyliovych Nikolaienko
Oleksandr Yuriiovych Halkin
Original Assignee
Ihor Vasyliovych Nikolaienko
Oleksandr Yuriiovych Halkin
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ihor Vasyliovych Nikolaienko, Oleksandr Yuriiovych Halkin filed Critical Ihor Vasyliovych Nikolaienko
Priority to UAU200704446U priority Critical patent/UA26768U/uk
Publication of UA26768U publication Critical patent/UA26768U/uk

Links

Landscapes

  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

Опис винаходу
Корисна модель належить до імунохімії, гібридомної технології та біотехнології і може бути використаний 2 для одержання моноклональних антитіл (МКАТ) до дО людини та їхніх імуноферментних кон'югатів. Метою винаходу є одержання нових моноклональних антитіл до дб людини, придатних для використання у імуноферментних тест-системах.
Відомі МКАТ до імуноглобулінів людини класу до |1). Проте згадані моноклональні антитіла непридатні для використання у імуноферментних тест-системах. 70 Найбільш близьким до запропонованих є моноклональні антитіла, які взаємодіють із Їд людини |21.
У порівнянні із вищезгаданим антитілами клони 153Н11 та 156011 характеризуються більшою специфічністю та активністю у імуноферментному аналізі. Моноклональні антитіла продукуються гібридними клітинами, що одержані при злитті мієломних мишачих клітин Зр 2/0 та спленоцитів мишей лінії ВаІр/сє. Клони МКАТ 153НІ11 та 18 1560111 характеризуються наступними ознаками (таблиця 1).
Приклад 1. Одержання асцитичної рідини із вмістом моноклональних антитіл 153Н11 та 156011.
Черевину миші ВаїЇр/с обробляли спиртом та внутрішньочеревно вводили по 0,5мл пристану (Зідта, США, кат. номер 77640) за допомогою стерильного скляного шприца на мл або 2мл; використовували стерильні голки не) "Рекорд" 0,5 х 10-15мм. Мишей витримували 3-4 тижні. Процедуру праймування проводили у гумових рукавичках.
Кріопробірки з замороженими клітинами клонів 153Н11 та 156011 діставали з судини Дюара із рідкимазотом, 00 витримували на повітрі 2-3 хвилини та занурювали у воду із температурою 37-402С. Пробірки витримували у с воді до тих пір, поки повністю розтане лід. Після цього за допомогою піпетки на їмл суспензії гібридом переносили у пробірки на 15мл (Мипс, кат. номер 366060), повільно додавали 10-15мл середовища ОМЕМ її" (бЗідта, США, кат. номер ОО 5648) без сироватки. Центрифугували при 1300об/хв. протягом Зхв. Надосад с видаляли, а осад клітин ресуспендували у ї0мл середовища ОМЕМ (Зідта, США, кат. номер ЮО 5648) без сироватки. Суспензію переносили у "пеніциліновий" флакон та закривали пробкою. с
Суспензію клітин перемішували та набирали у стерильний шприц по їмл, вводили у черевну порожнину мишей (справа або зліва від серединної лінії на їсм нижче від реберної дуги), яка за 3-4 тижні до цього була праймована пристанем. Мишей залишали на 5-10 днів для накопичення у черевній порожнині асцитичної рідини. «
Дану процедуру проводили у гумових рукавичках.
Через 5-10 днів після введення мишам суспензій гібридом 153Н11 та 156011 у очеревинних порожнинах - с спостерігалося накопичення асцитичних рідин. Для її відбору використовували трубку спеціальної голки ч довжиною 4см. Голки стерилізували шляхом обробки етиловим спиртом (7095) протягом 1Охв. Черевину миші -» обробляли спиртом та робили голкою прокол справа або зліва від серединної лінії на їсм нижче від реберної дуги, відбирали асцитичну рідину у пробірку на 15мл (Мипс, кат. номер 366060). Після відбору рідини місце проколу обробляли спиртовим розчином йоду та на 1хв. затискали пінцетом. Повторний підбір асцитичної рідини ко проводили через 2-Здні. Процедуру підбору асциту проводили доти, доки тварина залишалася живою. У бо середньому одна миша здатна дати 2-5мл асциту за один відбір. Асцитичну рідину центрифугували у пробірці на 15мл (Мипс, кат. номер 366060) при 5000об/хв. упродовж Бхв. Відбирали освітлену фракцію та зберігали у -і флаконах при мінус 2020. б 50 Процедуру відбору асциту проводили у гумових рукавичках.
Приклад 2. Виділення та очистка моноклональних антитіл 153Н11 со Розморожували асцитичну рідину та переносили її у центрифужну пробірку та освітлювали при 4000об/хв. протягом ЗОхв. Після цього асцитичну рідину фільтрували через фільтри з порами 0,45мкм (Зідта, США, кат. номер Е8273). оо Для афінної очистки використовували колонку з білююм А-сефарозою об'ємом 1О0мл. Перед нанесенням с асцитичної рідини колонку промивали із швидкістю 1,5-2мл/хв 5-10 об'ємами 0,02М натрій-калій фосфатного буферу, рН 7,0-7,2 (КН»РО, та МазНРО)). Фільтровану асцитичну рідину в об'ємі 20 мл пропускали через колонку зі швидкістю 1Тмл/хв. Після цього промивали колонку 10 - 15 об'ємами фосфатного буферу. Елюцію проводили за допомогою 0,1М лимонної кислоти в об'ємі 15мл. Вихід МКАТ 153Н11 реєстрували при 28Онм. Пік, 60 який виходить із колонки збирали у флакон, що містив 2дмл 1М трис основи. рН одержаного розчину мав становити 7,0 - 8,0, що контролювали за допомогою індикаторного паперу. Значення рН коректували додаванням кислоти або трис-основи. Після виходу піка колонку промивали із швидкістю 1,5-2мл/хв 10-20 об'ємами 0,02М натрій-калій фосфатного буферу до нейтрального рн.
МКАТ 153Н11 концентрували за допомогою насиченого розчину сульфату амонію. Для цього до бо охолодженого препарату МКАТ 153Н11 додавали насичений розчин сульфату амонію до 40-5095 насичення.
Витримували на холоді (492) 2-3 години, після чого центрифугували 20хв при 40О0О0об/хв. при кімнатній температурі Осад МКАТ ресуспендували в розчині сульфату амонію 4095-ого насичення та переносили у центрифужні пробірки на 15мл (Мипс, кат. номер 366060). Центрифугували у кутовому роторі при 10000боб/хв. протягом 20хв. Надосад старанно видаляли, а осад МКАТ 153Н11 розчиняли в мінімальній кількості (1-2мл) деіїонізованої води. Розчин переносили у мікропробірки та освітляювали при 10000об/хв. протягом 10хв.
Освітлені МКАТ 153Н11 переносили до спільного флакону. Концентрація МКАТ 153НІ11, одержаних таким способом, коливається від 20 до 4Омг/мл.
Одержаний розчин МКАТ 153Н11 фільтрували через фільтри з порами 0,45мкм (Зідта, США, кат. номер
Е8273). 70 Стандартний фосфатний буфер (рН 7,2-7,4) фільтрували через фільтри з порами 0,45мкм (Зідта, США, кат. номер Е8273). Використовували колонку 1,5 х 20см з сефадексом 0-25 (Атегепат РнНагптасіа Віоїесп, 17-0033-01) зрівноважену фосфатним буфером шляхом пропускання його із швидкістю 2мл/хв. протягом 20хв.
МКАТ 153Н11 в об'ємі 2-3Змл наносили на гель, після поглинання розчину гелем наносили такий же об'єм буферу. Після поглинання гелем буферу колонку заповнювали фосфатним буфером доверху, вставляли 7/5 адаптер та проводили елюції фосфатним буфером із швидкістю 2 мл/хв. Вихід піку реєстрували при 280нм.
Збирали фракцію МКАТ 153Н11 в окремий флакон, додавали 195 1095-ого азиду натрію та зберігали при плюс 42 до 4 місяців.
Приклад 3. Виділення та очистка моноклональних антитіл 156011
Розморожували асцитичну рідину із вмістом моноклональних антитіл 156011 та переносили її у центрифужну пробірку на 1бмл. Пробірку поміщали у нагріту до 372С воду на 10 хвилин. Зважували сульфат натрію в кількості, потрібній для 1895-го насичення (вага на об'єм) асцитичної рідини, всипали у пробірку з асцитом та старанно струшували до розчинення сульфату натрію. Спостерігали помутніння, зумовлене випадінням в осад
МКАТ. Пробірку центрифугували при 10000об./хв впродовж 5 хвилин у кутовому роторі. Після чого надосад видаляли, а осад антитіл розводили у 5мл деіонізованої води. Пробірку поміщали у нагріту до 45 - 502С воду на 5хХвиИлин. -
Знову зважуювали сульфат натрію у кількості, потрібній для 1695-го насичення (вага на об'єм) розчину антитіл, всипали у пробірку та старанно струшували до розчинення сульфату натрію. Спостерігали помутніння, зумовлене випадінням антитіл в осад. Пробірку центрифугували при 10000об./хв впродовж 5 хвилин у кутовому роторі. Після чого надосад видаляли, а осад антитіл розводили у 2-Змл деїіонізованої води. с
Одержаний розчин МКАТ фільтрували через фільтри з порами 0,22мкм. «со
Для переведення МКАТ у фосфатний буфер використовували 0,02М фосфатний буфер (рН 7,2-7 4) та колонку 1,5 х 20см з сефадексом 0-25 зрівноважену фосфатним буфером. МКАТ, одержані раніше, в об'ємі її 2-Змл наносили на гель, після поглинання розчину гелем наносили такий же об'єм буферу. Після поглинання «со гелем буферу колонку заповнювали фосфатним буфером доверху, вставляли адаптер та проводять елюцію
Зо фосфатним буфером із швидкістю 2мл/хв. Вихід піку реєстрували при 280нм. Збирали фракцію МКАТ в окремий с флакон, додавали 195 1095-ого азиду натрію та зберігали при плюс 42 до 6 місяців.
Приклад 4. Спосіб одержання кон'югату моноклональних антитіл 153Н11 та 156011 з пероксидазою хрону.
Кон'югацію МКАТ з пероксидазою хрону здійснювали у співвідношенні антитіл до ферменту 2:1 (масові долі) « методом періодатного окислення за Тііззеп ІЗ| із власними модифікаціями.
При окисленні пероксидазу хрону розчиняли у 0,1М бікарбонатному буфері, до концентрації 15мг/мл та З с додавали такий же об'єм 14мММ водного розчину періодату натрію. Суміш інкубували протягом 2 годин при "з кімнатній температурі. Одержаний таким чином розчин активованої пероксидази додавали до розчину антитіл, " які попередньо діалізували проти 0,1М карбонатного розчину, рН 9,2. Суміш переносили у герметичну хроматографічну колонку та додавали 1/3 частину сухого сефадексу 525, інкубували протягом З годин при кімнатній температурі. о По закінченні інкубації, розчин кон'югату елюювали з колонки та зупиняли реакцію додаванням 1/20 об'ємні
Ф частини водного розчину МаВІ-Ї" (5мг/мл), залишаючи на ЗОхв. при кімнатній температурі. Після цього ще додавали 33/20 частини розчину боргідриду натрію, інкубували протягом 60 хв. Одержаний розчин ш- пероксидазного кон'югату МКАТ переводили у 0,02М фосфатний буфер з 0,15М Масі шляхом діалізу.
Ф 20 Приклад 5. Використання кон'югату моноклональних антитіл з пероксидазою хрону у тест-системах для діагностики гепатиту В, сифілісу, токсоплазмозу, простого герпесу. со У лунки імуносорбенту вносили досліджувані сироватки та розчин для їх розведення у співвідношеннях, що наведені у таблиці 2. с кон'югаті |Ісироваток сироватки вом зом во 100мкл попередньо розведеної 1:51 сироватки людини Тохоріазта допаїї простого герпесу 1 і 2 типів
Планшет інкубували при 372С упродовж 1 години та відмивали фосфатно-сольовим буфером з детергентом бо (ФСБД) 4 рази. Розчин кон'югату моноклональних антитіл вносили по 100мкл в лунку, інкубували при 372С протягом ЗО хвилин та відмивали ФОСБД б разів. Далі в лунки вносили по 1ООмкл розчину хромогену - 3,3,5,5'і-тетраметилбензидину - й інкубували при 18-259СС в темному місті протягом 30 хвилин, після чого реакцію зупиняли внесенням у всі лунки по 100мкл стоп-реагенту. Через 5 хвилин після зупинення реакції визначали оптичну густину при 45О0нм/62Онм.
Перелік літературних джерел: 1. Климович В.Б., Самойлович М.П., Крутецкая И.Ю. и др. Моноклональнье антитела к подклассам Ід человека: получение и исследование специфичности // Иммунология. - 1998. - Мо3З. - С. 27 - 31. 2. Кеїітег С.В., РАийШірв О.9., Аїоіївіо С.Н. еї аїЇ. Емаїнайоп ої (пійу-сопе тоивзе топосіопа! апііродіев 70. питап Ід еріюрез // Нібгідота. - 1984. - Мої. 3, 3. - Р. 263-275.
З. Тіїввеп Р. Ргерагайоп ої епгуте-апіроду ог епгуте-тасготоїЇесціе сопіда(ев // І арогаїогу іеспіднев іп Біоспетівзігу апа тоїіесшіаг Біоіоду: ргасіїсе апа (Шеогу ої еплуте іттипоаззауз / Едйоге К.Н. Вигаоп, Р.Н. уап Кпіррепрего. - Атвіегдат: ЕІземіег, 1985. - Р. 221 - 241. т

Claims (1)

  1. Формула винаходу Моноклональні антитіла до дО людини, придатні для використання у імуноферментних тест-системах, належать до класу імуноглобулінів миші, продукуються гібридомами, які одержані внаслідок хімічно індукованої гібридизації імунокомпетентних В-лімфоцитів та мієломи Зр 2/0, які отримані за довгостроковою схемою імунізації мишей лінії ВАГ! В/с, характеризуються високими константою афінності, титром у культуральній рідині та титром пероксидазного кон'югату.
    Офіційний бюлетень "Промислова власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2007, М 16, 10.10.2007. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. ші с «со ча (Се) с ші с з іме) (22) -І б 50 ІЧ е)
    с 60 б5
UAU200704446U 2007-04-23 2007-04-23 MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS UA26768U (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAU200704446U UA26768U (en) 2007-04-23 2007-04-23 MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAU200704446U UA26768U (en) 2007-04-23 2007-04-23 MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA26768U true UA26768U (en) 2007-10-10

Family

ID=38800373

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAU200704446U UA26768U (en) 2007-04-23 2007-04-23 MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS

Country Status (1)

Country Link
UA (1) UA26768U (uk)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2464787C2 (ru) * 2011-01-12 2012-10-27 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный технологический университет" (ГОУ ВПО "КубГТУ") Способ приготовления хлебобулочного изделия
RU2480517C1 (ru) * 2011-11-07 2013-04-27 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный технологический университет" (ФГБОУ ВПО "КубГТУ") Линия получения масла из зародышей кукурузы

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2464787C2 (ru) * 2011-01-12 2012-10-27 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный технологический университет" (ГОУ ВПО "КубГТУ") Способ приготовления хлебобулочного изделия
RU2480517C1 (ru) * 2011-11-07 2013-04-27 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный технологический университет" (ФГБОУ ВПО "КубГТУ") Линия получения масла из зародышей кукурузы

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kaufman et al. The pathogenesis of the renal lesion in a patient with streptococcal disease, infected ventriculoatrial shunt, cryoglobulinemia and nephritis
Tomino et al. Cross-reactivity of IgA antibodies between renal mesangial areas and nuclei of tonsillar cells in patients with IgA nephropathy.
Kim et al. Inherited deficiency of the second component of complement (C2) with membranoproliferative glomerulonephritis
UA26768U (en) MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNO-ENZYME TEST-SYSTEMS
West et al. Mechanisms of hypocomplementemia in glomerulonephritis
RU2395576C1 (ru) ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНОГО Mus musculus L.1B2 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ НУКЛЕОПРОТЕИНА ВИРУСА ЭБОЛА, СУБТИП ЗАИР (ШТАММ Mainga) (ВАРИАНТЫ), МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО, ПРОДУЦИРУЕМОЕ ШТАММОМ (ВАРИАНТЫ), НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ФОРМАТА "СЭНДВИЧ" ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ НУКЛЕОПРОТЕИНА ВИРУСА ЭБОЛА, СУБТИП ЗАИР (ШТАММ Mainga)
CN103197069B (zh) 用于检测磺胺二甲基嘧啶和恩诺沙星的酶联免疫试剂盒及其应用
CN103808931A (zh) 一种检测磺胺嘧啶的酶联免疫试剂盒及其检测方法
UA26766U (en) Monoclonal antibodies to surface antigen of hepatitis b virus, suitable for use in immune-enzyme test-systems
UA26767U (en) MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF CATTLE SUITABLE FOR USE IN IMMUNE-ENZYME TEST-SYSTEMS
MATOUSEK Antigenic characteristics of spermatozoa from bulls, rams and boars
CN101349694A (zh) 一种链霉素药物快速检测试剂盒及其应用
UA26764U (en) MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgM OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNE-ENZYME TEST-SYSTEMS
CN103509068A (zh) 丁胺卡那霉素半抗原及其制备方法和应用
Kerr et al. Rapid specific agglutination of Eaton agent (Mycoplasma pneumoniae)
UA26765U (en) Monoclonal antibodies to nucleolapside antigen of p24 human immune deficiency virus suitable for use in immune-enzyme systems
CN1308686C (zh) 一种检测氯霉素的试剂盒
UA16036U (en) Set of monoclonal antibodies of g3, g6, g7, specific to human immuniglobulins of class g, suitable for use in immuno fermentative analysis
Rosenau et al. Resistance of Specifically-Sensitized Treponema pallidum to Methylene Blue Stain.
ES2269115T3 (es) Diagnostico de la enfermedad de whipple.
CN109134657A (zh) 一种25-羟基维生素d3的抗体制备方法
UA47440U (uk) МОНОКЛОНАЛЬНІ АНТИТІЛА ДО IgA ЛЮДИНИ, ПРИДАТНІ ДЛЯ ВИКОРИСТАННЯ У ІМУНОФЕРМЕНТНОМУ АНАЛІЗІ
RU2528869C1 (ru) ШТАММ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНОГО MUS MUSCULUS L. CCHFV Vd-3-ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНОГО АНТИТЕЛА 3H6/F2 К ВИРУСУ КРЫМ-КОНГО ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ
EP0198866A1 (en) Monoclonal antibodies and their use
RU2528868C1 (ru) ШТАММ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНОГО MUS MUSCULUS L. CCHFV Vd-2-ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНОГО АНТИТЕЛА 1E2/E5 К ВИРУСУ КРЫМ-КОНГО ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ