UA34497C2 - Спосіб виділення компонента з крові шляхом центрифугування і пристрій для його здійснення - Google Patents

Abstract

Винахід стосується центрифужного пристрою для відділення компоненту, такого як мономерна форма фібрину, з плазми. Вказаний спосіб включає обробку плазми одним або більше реагентами. Реагенти видаляються з бажаного продукту за допомогою нового пристрою відцентрової фільтрації.

Description

Изобретение относится к центрифужному устройству для отделения компонента, такого как мо- номерная форма фибрина, из плазмьі, причем указанньій способ включает обработку плазмь! одним или более реагентами, в котором указаннье реагенть! подаются в подходящую реакционную камеру, содержа- щую указанную плазму, и где такие реагенть! позтому удаляются из желаємого продукта с помощью нового устройства и способа для центробежной фильтрации.

В документе ЕР-Р5 Мо 592.242 описаньі способь! и композиции для совершенно нового фибринового материала для закрьтия ран, включающие контактирование желаємого участка с композицией, содержащей мономерную форму фибрина и превращение зтой мономерной формь! в полимерную форму фибрина однов- ременно с зтапом контактирования. Термин "фибрин" определяется как фибрин І, фибрин ІЇ и/или фибрин дез рр.

Кроме того, известен способ из патентной заявки США с Серийньім Номером 155,984 для отделения компонента, такого как мономерная форма фибрина, из крови. Зтот способ отделения компонентов жид- кости, содержащей несколько компонентов с различньім удельньім весом, включаеєт зтапь! сбора крови в первую камеру устройства, причем указанная камера ограничиваєтся по существу симметричнь!ми по оси наружной и внутренней стенкой. Кровь подвергается центрифугированию путем вращения устройства вок- руг оси симметрии камерь! так, чтобьї установить концентрическую поверхность раздела между компонен- тами крови. По крайней мере, один из компонентов крови, такой как плазма, в последующем переносится во вторую камеру в устройстве предпочтительно путем уменьшения обьема первой камерь во время про- должающегося центрифугирования устройства. По существу симметричная по оси внутренняя стенка вь- полнена в первой камере так, чтобь! обеспечить то, что вся кровь подвергается воздействию вращения центрифуги, необходимому для разделения. Зта внутренняя стенка имеет радиус, приспособленньй для желаемой скорости вращения.

Во второй камере фракция с полимерной формой фибрина без поперечньїх связей отделяется от плазмьї посредством подходящего фермента и в последующем повторно растворяется в мономерную фор- му фибрина и переносится в шприц через фильтр путем уменьшения обьема второй камерьі. Однако оказалось, что отделение компонента, такого как мономерная форма фибрина из крови только путем фильтрации в устройстве указанного вьіше типа не обеспечивает удовлетворительньйй результат. Зто происходит главньім образом вследствиє того факта, что трудно гарантировать удовлетворительное отде- ление фракции, содержащей фибрин І во второй камере, и, соответственно, относительно большое ко- личество содержащегося в крови фибрина І теряется во время следующего переноса фракции жидкости из второй камерь в первую камеру во время последующего зтапа способа.

Наряду с зтим, в предложенном ранее способе отделения мономерной формь! фибрина описанная вьіше обработка фибриногена в плазме подходящим ферментом давала получение полимерной формь! фибрина без поперечньх связей в форме толстой желеобразной массь! на дне второй камерь». Для обеспе- чения желаемого раствора мономерной формь! требовалось значительное количество буфера для повтор- ного растворения в сочетаний с активньм перемешиванием. Зто привело к нескольким недостаткам. Во- первьїх, предпочтительнье способьї получения мономерной формь! фибрина, например, для использо- вания в качестве фибринового материала для закрьтия ран, как раскрьто в ЕР 592,242, требуют концент- рированнье растворьї мономерной формь! фибрина и большое количество буфера для повторного раство- рения или растворителя, требуемого для растворения желеобразной массь,, если растворяющие растворь недостаточно зффективньі. Далее, активное перемешивание, требуемое для растворения желеобразной массьї в раствор мономерной формь! фибрина, может вьізвать повреждение устройства и самого фибрина.

Одновременно подаваемая заявка "Способ и устройство для отделения компонента такого как фиб- рин І при заболеваниях крови" поданная одновременно с данной заявкой, раскрьіваєт изобретение, вклю- чающее способ, которьій обеспечивает отделение полимерной формь! фибрина без поперечньїх связей из фракции плазмь! в цилиндрической камере, осуществляемьй во время центрифугирования, посредством которого полимерная форма фибрина без поперечньх связей осаждаєтся на наружной стенке камерь, пос- ле чего остающаяся жидкая фракция, накапливаємая в камере, удаляеєтся из камерь, и что фракция с по- лимерной формой фибрина без поперечньїх связей, остающаяся в камере, преимущественно осажденной на стенке, растворяется добавлением растворителя и центробежньім перемешиванием.

Поскольку обработка плазмьї ферментом проводится во время продолжающегося центрифугирова- ния, центробежная сила, действующая на получаеємую в результате полимерную форму фибрина без по- перечньх связей, обеспечиваєт то, что он осаждаєтся в виде тонкой желеобразной пленки, которая в ос- новном прилипаєт к окружающим стенкам камерьі. Остающаяся жидкая плазма осаждаєеєтся на дне камерні, когда прекращаєется центрифугирование, и может удаляться любьім удобньім способом. Затем желаемьй раствор мономерной формь! фибрина обеспечиваєтся внесением подходящего буферного раствора для повторного растворения в камеру и воздействием на буфер в покрьїтой гелем камере центробежньм пе- ремешиванием. Зтот способ предоставляєт преимущества перед предшествующими способами. Во-пер- вьіх, повторное растворение геля без поперечньїх связей буферньім раствором крайне зффективно, час- тично, вследствие большой площади поверхности того же обьема фибринового геля, по сравнению с мас- сой фибринового геля, предоставляемой в известньїх способах. Соответственно, гель может бьіть раство- рен небольшими количествами буфера для повторного растворения, обеспечивая получение раствора мо- номерной формь! фибрина желаємой концентрации. Далее, действие центробежного перемешивания на буферньій раствор внутри покрьтой гелем камерь! является сравнительно щадящим способом, не вь- зьівающим повреждения оборудования или продукта мономерной формь! фибрина.

Одновременно заявляемое изобретение также включает способ, включающий подачу крови, пред- почтительно в присутствий антикоагулянта в первую кольцевую камеру в устройстве, где кольцевая камера ограничивается цилиндрической наружной стенкой и цилиндрической внутренней стенкой, причем обе стенки простираются соосно вдоль общей оси, а также верхней стенкой и нижней стенкой, где верхняя стенка или нижняя стенка образована корпусом поршня, смещаемьм внутри первой камерьі, причем указанньій способ кроме того включаєт центрифугирование устройства вокруг указанной общей оси в ос- новном для разделения крови на клеточную фракцию и фракцию плазмь! с последующим переносом по- лученной в результате фракции плазмь! под влиянием корпуса поршня во вторую камеру, ограничиваемую наружной цилиндрической стенкой, которая простирается соосно с указанной общей осью, посредством че- го вьізьівается отделение фракции с полимерной формой фибрина без поперечньїх связей во второй ка- мере в то время как добавляется подходящий фермент. Зтот способ отличается тем, что фракция плазмь!, содержащая фибриноген, подвергается воздействию фермента во время центрифугирования так, что по- лученная в результате полимерная форма фибрина без поперечньїх связей осаждаєтся на цилиндричес- кой наружной стенке указанной второй камерьі, после чего жидкая фракция, собранная на дне второй ка- мерь, переносится под влиянием корпуса поршня в первую камеру, и что фракция с полимерной формой фибрина без поперечньх связей, остающаяся во второй камере, в основном осажденная на цилиндричес- кой стенке, растворяєтся добавлением растворителя и центробежньмм перемешиванием. Затем фермент по желанию может бьть удален, и полученньій таким образом раствор мономерной формь! фибрина пе- реносится в любой желаєемьй приемньй контейнер.

Соответственно, асептическое условиє для сбора раствора легко поддерживаєется. После повторного растворения мономерной формьї! фибрина он может переноситься в приемньй контейнер, такой как шприц, для последующего использования как описано в предшествующем уровне техники. Перед переносом фер- мент может бьіть удален любьїм удобньїм средством.

Указанная вьіше одновременно подаваємая заявка также раскрьшваеєт устройство для разделения компонентов из жидкости путем центрифугирования вокруг центральной оси вращения, которое включает первую кольцевую камеру, ограничиваемую наружной цилиндрической стенкой и внутренней цилиндричес- кой стенкой, причем обе стенки концентрично расположень! вокруг указанной оси вращения, а также верх- ней стенкой и нижней стенкой, где нижняя стенка образована корпусом поршня, смещаемьм внутри указанной первой камерьі, причем указанное устройство кроме того включает вторую камеру, сообщаю- щуюся с первой камерой посредством первого трубопровода и определяется наружной цилиндрической стенкой, концентрично расположенной вокруг оси вращения и указанньім корпусом поршня, и нижней стен- кой, где указанная вторая камера приспособлена располагаться ниже первой камерь! во время центри- фугирования, и где указанное устройство также включает средство для подачи крови в первую камеру и средство для подачи композиции, способствующей отделению, а также приемное средство для соедине- ния, по крайней мере, одного приемного контейнера для жидкости, где приемное средство сообщаєется со второй камерой через второй трубопровод. В предпочтительном варианте реализации поршневой шток со- держит внутреннюю стенку первой камернь!.

Зто устройство изобретения для осуществления способа в соответствии с одновременно подавае- мой заявкой отличаєтся тем, что первьій трубопровод включаєеєт, по крайней мере, один канал, существую- щий между отверстием в верхней стенке первой камерь и отверстием в нижней стенке второй камерь!.

В результате, обеспечиваєтся устройство, которое является относительно простьім и которое не- зависимо от положения поршня обеспечиваеєт легкий и бьістрьій перенос обсуждаємьх фракций из одной камерь в другую камеру, и, в частности, жидкой фракции из второй камерь! в первую камеру после отде- ления фракции, содержащей фибрин-І. Последнее особенно связано с фактом, что жидкость автоматичес- ки концентрируется на дне второй камерь, когда центрифугирование прекращается, посредством чего она может бьїть легко перенесена в первую камеру приводимьї!м в движение поршнем.

В соответствий с одновременно подаваємой заявкой на изобретение, особенно предпочтительно, чтобьї указанньй, по крайней мере, один канал простирался через внутреннюю часть наружной цилиндри- ческой стенки как в первой, так и во второй камерах, что в результате обеспечиваєт особую простоту и лег- кость изготовления устройства.

Далее, отверстие канала на нижней стенке второй камерь! может бьіть расположено в центре камерь! в связи с углублением, образованньм нижней стенкой. В результате, рассматриваємая жидкая фракция легко и бистро направляєтся прямо во впускное отверстие канала. Альтернативно, каждьйй канал может бьіть образован трубкой, простирающейся прямолинейно через корпус поршня и укрепленной на концах в верхней стенке первой камерь и нижней стенке, соответственно, второй камерь, где она сообщается с от- делами канала, заканчивающимися в соответствующей камере.

Дополнительно, первая и вторая камера может особенно простьім образом включать общую наруж- ную цилиндрическую стенку, сформированную наружньм и внутренним цилиндром, герметично пригнаннь- ми друг к другу, и ограничивающими между собой простирающийся в осевом направлений канал, и цилинд- рьї могут заканчиваться на одном конце торцевой стенкой, включающей отверстиеє, позволяющее про- ходить поршневому штоку, соединенному с корпусом поршня, причем указанньій корпус поршня образует нижнюю стенку первой камерь и отделяєт указанную первую камеру от второй камерьї, и где канал прости- рается между торцевьми стенками цилиндров в отверстие, непосредственно примькающее к поршневому штоку.

При использований такого устройства и способа, подходящие реагенть! для облегчения отделения и обработки желаемьх компонентов в плазме крови, бьіли предварительно загруженьі во вторую камеру.

Например, в ЕР 592,242 описано, что биотиново-авидиновая система захвата может удобно использовать- ся для удаления батроксобина из желаємого раствора. Требуется, чтобьі! биотин-батроксобин присутство- вал во второй камере для вступления в реакцию с фибриногеном в плазме и превращения его в мономер-

ную форму фибрина (которьій немедленно превращаєтся в полимерную форму фибрина). Для последую- щего захвата биотинилированного батроксобина с использованием биотиново-авидиновой системьї, авидин, которьй связан, например, с агарозой должен также присутствовать во второй камере. В закрьтом, автоматическом центрифужном устройстве зти вещества должнь загружаться в устройство перед обработ- кой крови. Предварительная загрузка биотинилированного батроксобина и авидиновой агарозь в одну и ту же камеру представляла трудности, поскольку вьісокое сродство авидина с биотином, на котором основан ферментньй захват, как и требуется, предотвращаєт первую реакцию достаточньїх количеств фермента с фибриногеном. Вторая совместно подаваємая заявка, составленная одновременно с зтой и озаглавленная "Центрифуга с кольцевьїм фильтром", описьіваєт устройство, которое обеспечиваєт возможность легко по- мещать один или более реагентов внутрь реакционной камерь и освобождать такие реагенть! в желаемой последовательности. Предпочтительно, при использованиий в устройстве типа, описанного в упомянутой вьіше совместно подаваємой заявке, реагентьії, такие как фермент и композиция захвата фермента, могут освобождаться по желанию. Для достижения указанной вьіше цели, в соответствии с изобретением пре- доставляеєтся устройство, отличающееся тем, что капсула расположена во второй камере и включаєт мно- жество отсеков для приема соответствующих композиций, способствующих разделению, и что капсула вк- лючает закривающее приспособление, закривающее указанньсе отсеки и под воздействием поршня, прис- пособленного последовательно открьіваться для вьіпуска содержимого отсеков.

Такая капсула обеспечиваєт возможность простьім и легким способом подавать вещества, необхо- димье для отделения фибрина 1, причем указанная капсула предпочтительно обеспечиваеєется зтими ве- ществами заранее. Кроме того, предоставленнье отсеки обеспечивают возможность равномерного разде- ления рассматриваємого количества. Батроксобин предпочтительно помещается в один отсек в химичес- ком взаймоотношений с биотином, обеспечивая то, что фермент батроксобин может легко захватьіваться после использования с помощью авидина, которьій позтому помещается во второй отсек в химическом взаймоотношений с агарозой в форме относительно крупньїх частиц. Вьісокое сродство биотина к авидину обеспечиваєет то, что комплексованнье биотинилированнье агарознье частиць! батроксобина/авидина в последующем легко удаляются фильтрацией из раствора фибрина І. Помещение двух веществ в их соот- ветствующие отсеки обеспечивает также возможность легко дозировать вещества в желаємое время воз- действием на поршень. Указанньєе вьіше вещества или композиции, биотин-батроксобин, соответственно, и авидин-агароза могут использоваться в любой удобной форме, например, в форме лиофилизированного порошка.

В соответствии с изобретением, особенно предпочтительно, чтобь! капсула включала центральную втулку, соосно установленную внутри второй камерь и несущую три расположенньсе на расстоянии друг от друга радиальньх диска, образующих перегородки в отсеках и имеющих в основном идентичньй наружньй окружньй контур, и что закривающие средства образованьі корпусом в форме муфть, смещаемо, но гер- метично окружающей радиальньсе диски.

Для активации корпуса в форме муфть! поршень может в соответствии с изобретением преймущест- венно включать направленную вниз юбку, функционирующую совместно с корпусом в форме муфть на капсуле так, чтобьї ступенчато смещать указанньйй корпус в форме муфть!, посредством чего указанньй корпус последовательно открьівает для освобождения содержимого указанньх отсеков внутри капсуль!.

В соответствии с одновременно подаваемой заявкой на изобретение системь! доставки реагентов, капсула может бьіть приспособлена в соединениий с осевьім каналом в примькающую третью камеру, при- чем наружная сторона корпуса в форме муфть! капсуль! плотно примькает к боковой стенке осевого ка- нала, по крайней мере, после начального смещения корпуса, посредством чего самая нижняя перегородка капсуль! позволяєт жидкости свободно проходить из второй камерь в третью камеру после конечного сме- щения корпуса в форме муфть, вьізванного поршнем вне контакта с окружностью самой нижней перего- родки. Таким образом, капсула образует дополнительную часть, создающую преимущества устройства и способствующую указанному устройству в дальнейшей работе во время отделения фибрина |.

Так, чтобьї далее образовать неотьемлемую составную часть устройства, втулка капсуль! может в соответствий с изобретением включать осевой сквозной канал и закрепляться на направленном вверх вьс- тупе, расположенном в центре на дне нижней, третьей камерьї, причем указанньій сквозной канал на дне через жидкость сообщаєтся с наружньім кольцевь!м отсеком третьей камерь через канальную систему, а верхний конец втулки может подбираться для герметичного соединения с осевьм каналом в корпусе порш- ня так, чтобьї соединяться с принимающим жидкость контейнером, прикрепленньм к нему.

Для удаления одного или более реагентов из желаємого раствора продукта, полученная в результа- те жидкая фракция, содержащая фибрин І, направляется в шприц через фильтр под воздействием поршня.

В результате, раствор фибрина І принудительно направляется через фильтр, в то время как фермент и другие вещества, подмешанньєе для ускорения отделения, задерживаются фильтром. Однако итоговьй вь- ход фибрина І не полностью удовлетворительньйй, по сравнению с количеством фибрина І, присутствую- щим в образце крови.

Сущность изобретения.

Задачей изобретения позтому является предоставление способа, обеспечивающего возможность достижения более вьісокого вніхода фибрина І посредством устройства рассматриваємого типа.

Для решения указанной вьіше задачи, в соответствии с изобретением предоставляется способ, отли- чающийся тем, что часть жидкой фракции, остающаяся во второй камере, перед переносом в принимаю- щий жидкость контейнер переносится в третью камеру, соосно установленную с другими камерами, и что жидкость, присутствующую теперь в указанной третьей камере, заставляют пройти через кольцевой фильтр во время центрифугирования с тем, чтобь! войти в кольцевой наружньй отсек, которьій приспособ-

лен для соединения с принимающим жидкость злементом. В результате, раствор фибрина І может пропус- каться через фильтр под влиянием центробежной силь, которая значительно более зффективна, чем фильтрация посредством поршня.

Изобретение кроме того относится к устройству для осуществления указанного вьіше способа. Уст- ройство изобретения включаєт первую кольцевую камеру, ограниченную наружной цилиндрической стен- кой и внутренней цилиндрической стенкой, причем обе стенки концентрично расположень вокруг оси вра- щения, и верхнюю стенку и нижнюю стенку, где верхняя стенка или нижняя стенка образована корпусом поршня, смещаєемьм внутри первой камерь, причем указанное устройство кроме того включает вторую ка- меру, сообщающуюся с указанной первой камерой посредством первого трубопровода и ограничиваєтся наружной цилиндрической стенкой, концентрично расположенной вокруг оси вращения, указанной нижней стенкой первой камерь! и другой нижней стенкой, где вторая камера приспособлена располагаться ниже первой камерь! во время центрифугирования, и где указанное устройство также включает средство для по- дачи крови в первую камеру и средство для подачи композиции, способствующей отделению, а также приемное средство для соединения по крайней мере одного приемного контейнера для жидкости, причем приемное средство сообщаеєется со второй камерой через второй трубопровод.

Зто устройство в соответствии с изобретением отличаеєтся тем, что второй трубопровод сообщается со второй камерой через третью камеру, соосно установленную относительно ее, и включающую канал во вторую камеру, которьій может открьіваться снаружи, что третья камера включаєт внутренний отсек и на- ружньйй кольцевой отсек, причем указанньюе отсеки взаймно связаньії через проходящий радиально кру- говой канал, в котором расположен кольцевой фильтр для предотвращения прохождения жидкости, содер- жащей нежелательньсе ингредиенть, используемье для стимуляции отделения.

В соответствии с изобретением, канал между второй и третьей камерой может бьіть соосно распо- ложен относительно двух камер, и закрьіваться посредством капсуль, которая раскрьта в упомянутой вь- ше одновременно подаваемой заявке на патент, озаглавленной "Устройство подачи реагента в центри- фугу". Зта капсула включаєт центральную втулку, соосно установленную во второй камере и несущую мно- жество расположенньх на расстояниий друг от друга радиальньїхх дисков, образующих перегородки во мно- жестве отсеков в капсуле, где диски имеют идентичньій наружньйй окружньй контур, которне снаружи отсе- ков закрьть! посредством герметизирующего, смещаємо установленного корпуса в форме муфть, наруж- ная сторона которого подобрана для плотного упора в боковую стенку осевого канала, причем самьйй ниж- ний образующий перегородку диск капсульі! обеспечиваєт свободньйй проход жидкости из второй камерь в третью камеру путем осевого смещения корпуса в форме муфть с устранением контакта с окружностью са- мой нижней перегородки при воздействиий поршня. В результате, достигается легкий и простой доступ к рассматриваемому фильтру посредством капсуль, которая уже используется для подачи веществ, необхо- димьїх для стимуляции отделения фибрина І внутри второй камерь.

Зта капсула предпочтительно активируєется корпусом поршня, включающим направленную вниз юб- ку, простирающуюся соосно с корпусом в форме муфть! капсуль! и приспособленную входить в зацепление с указанньім корпусом, когда корпус поршня сдвигается вниз под давлением с тем, чтобьі! таким образом последовательно открьїть в подходящие моменть! соответствующие отсеки в капсуле, и наконец открьїть проход жидкости из второй камерь в третью камеру.

Для облегчения переноса раствора фибрина І! в контейнер для приема жидкости, такой как шп- риц, втулка капсуль! может, в соответствии с изобретением, включать осевой сквозной канал и прик- репляться на направленном вверх вьіступе, расположенном в центре на дне нижней, третьей камерь,, причем указанньій сквозной канал через жидкость сообщаеєется с наружньм кольцевьм отсеком трет- ьей камерьі через канальную систему, а верхний конец втулки может подбираться для герметичного соединения с каналом в корпусе поршня так, чтобьї соединяться с принимающим жидкость контейне- ром, прикрепляемь!м к нему.

Наконец, в соответствии с изобретением, втулка капсульь может прикрепляться к вьіступу на дне третьей камерь! посредством муфть, которая на каждом конце, соответственно, окружаєт втулку и вьступ, и муфта может включать круговую, виіступающую наружу часть стенки, посредством которой указанньй кольцевой фильтр прикрепляется между наружной окружностью указанной поверхности стенки и нижней стенкой второй камерь, посредством чего виіступающая наружу часть стенки муфть! расположена на расс- тояниий от дна третьей камерь и таким образом образует соединение между наружнь!м кольцевьм отсеком и простирающимся по оси каналом в соединений со сквозньім каналом втулки и простираясь между наруж- ной стороной вьіступа и примькающей внутренней стороной муфть!ї. Полученное в результате устройство особенно простое.

Способьї настоящего изобретения относятся к усовершенствованньім способам отделения и вьіделе- ния отдельного компонента крови или раствора, содержащего такой компонент. Однако настоящий способ пригоден для любой процедурьі, приспосабливаемой к цилиндрической центрифуге, в которой первьй раствор обрабатьвваєется одним или более катализаторами или реагентами во время центрифугирования.

Другие процедурь с кровью, которне могут получить преимущества от использования такого способа, вк- лючают, но не ограничиваются, отделением любого компонента крови, такого как обогащенная тромбо- цитами плазма, концентрат тромбоцитов, криопреципитированньій фибриноген, другие белки в плазме, та- кие как тромбин, фибронектин и им подобнье. Предпочтительно кровь получают от одного донора, а най- более предпочтительно кровь получают от одного и того же лица, кому будет введен компонент крови.

Хотя настоящие способь! далее описьіваются с точки зрения получения раствора мономерной фор- мьі фибрина, обьем изобретения, как будет понятно специалистам в зтой области, не будет ограничен зтим.

Используемьй здесь термин "центробежное перемешивание" относится к движению устройства, в которое буферньй раствор для повторного растворения вносится для повторного растворения промежу- точного продукта, такого как гель полимерной формь! фибрина без поперечньїх связей с наружньмх сте- нок камерь». Такое движение или центробежноє перемешиваниє может включать центрифугирование для обеспечения того, чтобьі! вся доступная площадь поверхности геля подвергалась воздействию раст- вора для повторного растворения, и включаєт предпочтительно такое центрифугирование с последую- щими прерьвистьми вращениями в том же направлений и/или прерьівистьми вращениями в противо- положньїх направлениях. Обьчнье центробежнье перемешивания включают, но не ограничиваются, бьістрими вращениями в течение 5-30 секунд, предпочтительно бьістрьми вращениями в течение 5-10 секунд при 2 000- 000 об./мин в повторньїх циклах возвратно-поступательного движения в течение любого желаемого пе- риода времени. При настоящих способах предпочтительньі бьістрье вращения в течение 5-10 секунд приблизительно при З 000 об./мин с повторнььмми циклами возвратно-поступательного движения в те- чение 1-2 минут. Как упомянуто вьіше, зтому может предшествовать несколько более продолжительноеє вращение, например, 20 секунд или более для первоначального распределения растворителя.

Термин "фибрин" используемьій здесь, относится к фибрину І, фибрину ІІ или фибрину дез рр.

Настоящее устройство, включающее центрифужную систему кольцевого фильтра, раскрьттую здесь, предоставляет зффективньй и точньїй способ вьіделения одного или более реагентов из раствора желае- мого продукта. Зто особенно важно в закрьітьїх, замкнутьїх, автоматических центрифугах для использо- вания в методиках разделения крови, в которьїх требуется последовательноеє введение двух или более реагентов в реакционную камеру. В предпочтительньх способах и устройствах, описанньх здесь, для пре- доставления раствора, содержащего мономерную форму фибрина, например, для использования в новом фибриновом материале для закрьттия ран, последовательное внесение биотинилированного батроксобина с последующим введением авидиновой агарозь! в камеру, содержащую плазму, предоставляєт вьісоко со- вершенньй способ получения такого раствора.

Краткое описание чертежей.

Предпочтительнье варианть! реализации настоящего устройства и способов будут теперь описань со ссьілкой на чертежи, на которьх Фиг. 1 представляєт вид в разрезе по оси предпочтительного варианта реализации устройства в соответствий с изобретением, а Фиг. 2 иллюстрирует второй вариант реализации устройства в соответствии с изобретением. Фиг. З иллюстрирует третий вариант реализации устройства в соответствий с изобретением.

Настоящее устройство представляет единое, закрьтое автоматизируемое устройство, способное превращать цельную кровь в желаемье компоненть! крови, предпочтительно аутологичнье компоненть, используемьсе, например, в качестве фибриновьх материалов для закрьтия ран.

Описание предпочтительньїх вариантов реализации настоящего изобретения.

Предпочтительно, настоящая центрифужная система кольцевого фильтра используется с устройст- вом как описано в указанной вьіше приведенной в качестве ссьілки одновременно поданной заявки, и поз- тому описьівается ниже со ссьілкой на такое устройство. Однако следуєт понять, что она может использо- ваться в любом устройстве реакционной камерьї, требующем одного или более реагентов.

Устройство, показанное на фиг. 1 в соответствии с изобретением, собрано из частей, в целом предс- тавляющих вращательную симметрию и подразумевающих, что устройство может известньім самим по се- бе способом легко размещаться в центрифуге для центрифугирования вокруг центральной оси 1. На фиг. 1 предпочтительньйй вариант реализации устройства включает наружньй контейнер 2 и внутренний контей- нер 3, которне подобрань так, что они полностью смькаются при помещений одного в другой и везде плот- но примькают друг к другу, кроме части, где образуется протирающийся по оси промежуточньй канал 4.

Канал 4 образуется бороздой, спрофилированной во внутреннем контейнере 3. Два контейнера 2 и З вклю- чают их соответствующие верхние части 5 и 6, соответственно, которне ограничивают центральное от- верстие 7, обеспечивающее прохождение поршневого штока 8. Вокруг отверстия 7 два контейнера вклю- чают простирающиеся по оси части 9 и 10, соответственно, которне простираются близко к полому порш- невому штоку 8 в направлений в сторону от внутренней части контейнеров. Наружньій контейнер 2 упирается в польїй поршневой шток вдоль короткого радиально вьіступающего фланца 11, имеющего уг- лубление 12, принимающее уплотнительное кольцо 13.

Как показано на фиг. 1, канал 4 продолжаєется между внутренним и наружньїм контейнерами на всем протяжений от наружньїх цилиндрических стенок внутреннего и наружного контейнера вдоль верхних час- тей 5, 6 и осевьх частей 9 и 10 к отверстию непосредственно ниже уплотнительного кольца 13 в отверстий 7. Осевая часть 10 внутреннего контейнера 3, упирающегося в отверстие 7, подобрана по размеру так, что внутри контейнеров 2 и З вокруг полого поршневого штока 8 существует узкий, но свободньй канал.

Наружньй контейнер 2 включает цилиндрическую часть равномерного диаметра, как показано на фиг. 1. По направлению вниз в проекции относительно чертежа зта часть продолжаєтся в цилиндрическую часть 14 несколько большего диаметра через короткую переходную часть 15, образующую внутреннюю по- верхность 16 в форме усеченного конуса. Внутренний контейнер З заканчиваєтся в месте, где переходная часть 15 наружного контейнера 2 продолжаєтся в цилиндрическую часть 14 большего диаметра. Нижний конец внутреннего контейнера З включаеєт наружную поверхность 17 в форме усеченного конуса, подхо- дящую по форме усеченно-конической поверхности 16 на внутренней стороне наружного контейнера 2. На- ружньй и внутренний кольцевой диск 19 и 20, соответственно, расположеньі непосредственно под нижним концом внутреннего контейнера 3, которьій заканчивается радиальной поверхностью 18. Зти диски тесно примькают друг к другу, за исключением того, что они образуют между собой канал 21, простирающийся в осевой плоскости от центрального отверстия 22 и по направлению к внутренней стороне наружного контейнера 2, где канал 21 сообщается с каналом 4 между наружньм контейнером 2 и внутренним кон- тейнером З через простирающуюся по оси часть 23. Канал 21 и осевая часть 23 канала удобно сформи- рованьї посредством бороздь на стороне внутреннего диска 20, обращенной к наружному диску 19. Два диска 19 и 20 спрофилировань! с таким косьім ходом, что они включают в целом внутреннюю и наружную усеченно-конические поверхности, как показано на фиг. 1, и посредством их наклонень вниз, по направ- лению к центральному отверстию 22. На фиг. 1 также показано, что внутренний диск 20 включаеєет ра- диальную поверхность 24, упирающуюся в прилегающую радиальную поверхность 18 внутреннего кон- тейнера 3. Радиальная поверхность 24 внутреннего диска 20 снабжена углублением 25 для приема уп- лотнительного кольца 26.

Два диска 19 и 20 удерживаются в положенийи упора в радиальную поверхность 18 внутреннего кон- тейнера З посредством крьішки 27, закривающей наружньй контейнер в направлений вниз. Крьішка 27 вк- лючает имеющую форму муфть! круговую часть 28, подобранную для плотного упора во внутреннюю сто- рону наружного контейнера 2, к которому она фиксирована подходящим образом, таким как путем защел- кивания вхождением в зацепление между круговьім фланцем 29 на наружной стороне муфть! 28 и соот- ветствующей круговой бороздой 30 на внутренней стороне наружного контейнера 2. Герметизирующее соединение обеспечивается посредством уплотнительного кольца 31 в круговом углублении 32 на наруж- ной периферии наружного диска 19. Кришка 27 включает кроме того относительно тонкую стенку 32, по- добранную для образования нижнего дна устройства в положении, показанном на фиг. 1. Зта стенка 32 простираєтся в основном вдоль хода, параллельного наружному и внутреннему диску 19 и 20 таким обра- зом, что перегородка 32 простираєтся от внутренней сторонь! муфть 28 в части, прилегающей к дискам 19 и 20, и по направлению вниз к части, в целом на уровне с нижней кромкой 33 наружного контейнера 2. Для усиления относительно тонкой стенки 32, предоставляется усиливающий радиальньй фланец 34 через одинаковье промежутки, причем только один из указанньїх фланцев изображен на фиг. 1. Зтот фланец 34 частично спрофилирован частью, расположенной снаружи стенки 32, и частично частью, расположенной внутри стенки 32, как показано на фиг. 1. Последняя часть обозначена ссьілочньім номером 35 и спрофили- рована так, что она упирается в нижнюю сторону наружного диска 19, что в результате помогает поддержи- вать диски 19 и 20 в надежном положении.

Разделяющее средство 36 вдавливаєтся между наружньі!м диском 19 и крьішкой 27. Зто разделяю- щее средство 36 включаєт центральньй сегмент (отрезок) трубки 37. Зтот сегмент трубки установлен на штиьре 38, простирающемся по оси по направлению внутрь и спрофилированном как единое целое со стен- кой 32 крьішки 27. Зтот сегмент трубки 37 спрофилирован как единое целое с круговьім перегородочньм диском 39, простирающимся в наружном направлений от сегмента трубки 37 таким образом, что он перво- начально слегка прогибаєтся по направлению вниз к стенке 32 крьішки 27, после чего он простираеєтся вдоль короткой осевой линии так, чтобьї продолжиться в направлений, в основном параллельном стенке 32 крьішки. Перегородочньій диск 39 заканчивается короткой радиально простирающейся периферией 40, опирающейся на вьіступ 41 на фланцевьїх частях 35 на крьішке 27. Блок кольцевого фильтра 42 впрессо- вьівается между наружной периферией 40 перегородочного диска 39 и нижней стороной наружного диска 19. Зтот блок кольцевого фильтра 42 упираєется во в целом радиально спрофилированную поверхность 43 на прилегающей наружной стороне наружного диска 19. Устройство и способь! применения такого кольце- вого фильтра являются предметом заявки, составленной и подаваемой одновременно с настоящей заяв- кой и озаглавленной "ЦДентрифуга с кольцевьїм фильтром".

Для обеспечения устойчивости разделяющего средства 36, усиливающие радиальнье фланцьї, обоз- наченнье ссьілочньім номером 44, приспособленьі кроме того между сегментом трубки 37 и перегородоч- нНьІм диском 39.

Система подачи реагентов настоящего изобретения включаєт капсулу, обозначенную номером 45, закрепленную на конце, противоположном от кришки 27 сегмента трубки 37 разделяющего средства 36.

Такая капсула подходит для избирательного освобождения агентов во вторую камеру 75. Зта капсула вк- лючает удлиненньй сегмент трубки 46, спрофилированньй как единое целое с радиальньїм кольцом 47, и несущим два дополнительньх радиальньх кольца 48 и 49. Зти радиальнье кольца 48 и 49 закреплень пу- тем неподвижной посадки на их соответствующие стороньї фиксированного кольца 47. Нефиксированнье кольца 48 и 49 размещень на их соответствующем расстояниий от фиксированного кольца 47 посредством круговьїх вьіступов 50 и 51, соответственно, на сегменте трубки 46. Три диска 47, 48 и 49 имеют одина- ковьій наружньйй диаметр и несут вдоль своих соответствующих периферических участков круговую, сме- щаєемо установленную муфту 52.

Как показано на чертежах, нижний диск 49 упираєется в верхний конец сегмента трубки 37 разделяю- щего средства 36, посредством чего определяется положение капсуль! 45 в осевом направлений. Положе- ние кроме того определяєтся таким образом, что при смещений в осевом направлений, смещаємая муфта 52 капсуль! входит в герметизирующее зацепление своим нижним концом, как показано на чертеже, с са- мьїм внутренним краем 53 на наружном диске 19 в центральном отверстии 22. В зтом положений муфть 52 еще существует сообщение между пространством внутри внутреннего диска 20, окружающим муфту 52, и впускньім отверстием в канал 21 между наружньі!м диском 19 и внутренним диском 20. Длина оси смещаве- мой муфть!ї 52 подобрана таким образом, что зацепление с наружньім диском 20 происходит до того как верхний конец, показанньій на чертеже, муфть! 52 разьединится с фиксированньім кольцом 47 во время осевого смещения вниз указанной муфть! 52. Внутренний диаметр муфть! 52 подобран также к наружному диаметру простирающейся по оси части перегородочного диска 39 разделяющего средства 36 таким обра- зом, что продолжающееся смещение вниз муфть! 52 по направлению к крьішке 27 вьізьівает фиксирующее зацепление указанной муфть 52 с разделяющим средством 36 как только оно разьединилось с наружнь!м диском 19. Длина осевой части разделяющего средства 36 соответствует также длине по оси муфть 52 та- ким образом, что указанная муфта 52 в самом нижнем положенийи в целом полностью принимается разде- ляющим средством 36.

Как показано на чертежах, польій поршневой шток 8 включаєт круговой поршень 55 внутри наружного контейнера 2 и внутреннего контейнера 3, причем указанньійй поршень 55 плотно прилегает к внутренней стороне внутреннего контейнера З посредством уплотнительного кольца 56.

Люеровский переходник 57 спрофилирован внутри полого поршневого штока для соединения с обьч- ньЬім шприцем 58 с плунжером 59 поршневого действия для воздействия на содержимое шприца 58. Пе- реходник 57 спрофилирован в целом как сегмент трубки, сособщающейся с центральньїм отверстием 61 в поршне 55 через усеченно-коническую часть 60. Сегмент трубки 57 снабжен радиально внутрь простираю- щейся перемьічкой 62 для направления жидкости, витекающей из шприца 58 в сторону от осевого канала и посредством зтого вокруг сегмента трубки 46 ниже его внутрь капсульі 45. Последний сегмент трубки 46 имеет такую длину и такие размерь, что он может вступать в плотньїй контакт с сегментом трубки 57 внут- ри полого поршневого штока 8, когда поршень 55 находится в своем крайнем нижнем положении около крьішки 27. Для способствования указанному плотному соединению, внутренняя сторона сегмента трубки 57 сформирована с постепенно уменьшающимся диаметром на конце, примьікающем к поршню 55.

Простирающаяся по оси юбка 63 изготовлена как единое целое с поршнем 55 вокруг центрального отверстия 61 указанного поршня. Зта юбка 63 спрофилирована с таким диаметром и такой длиной, что путем подходящего смещения поршня 55 он может активировать указанное вьіше смещение смещаемой муфтиь 52 капсуль 45 в указаннье положения, в которьїх она входит в зацепление с внутренним краєм 53 центрального отверстия 22 посредством двух дисков 19 и 20 с последующим зацеплением разделяю- щего средства 36.

Упругое, виіступающее уплотнительное кольцо 64, как указано, фиксируется вокруг полого поршня на верхней части внутри контейнеров 2 и 3, как показано на фиг. 1. Зто виіступающее уплотнительное кольцо 64 приспособлено предотвращать нежелательное прохождение жидкости из внутренних частей контейне- ров 2 и З в канал 4, но оно позволяет жидкости проходить, когда на нее воздействует сила, прилагаеємая посредством поршня 55.

Как показано в верхней части фиг. 1, имеется соединение с рукавом 65 через отверстие 66 в наруж- ном и нижнем контейнере 2 и 3, соответственно. Зто соединение известно и позтому не показано в подроб- ностях, но оно позволяєт прерьівать соединение с рукавом по желанию. Кроме того, отверстие для вьіпуска воздуха с подходящим фильтром предоставлено обьічньїм образом, и позтому оно ни показано, ни описано в подробностях.

Канал 69 обеспечиваєтся из зоньї между разделяющим средством 36 и крьішкой 27 и на всем про- тяжений вверх через внутреннюю часть трубчатого сегмента 37 разделяющего средства 36 и через внут- реннюю часть сегмента трубки 46 капсуль! 45. Зтот канал 69 позволяет жидкости проходить в шприц 58 из указанной зоньї, когда последний сегмент трубки 46 соединен с сегментом трубки 57 внутри поршневого штока 8. Канал 66 предоставлен в самой нижней части штьря 38 в крьиішке 27 путем профилирования указанного штьїря 38 плоской, осевой поверхностью, причем указанньй штьірь имеет в целом попереч- ное сечение в виде круга. В результате, пространство создается между штьірем и прилегающей частью внутренней поверхности сегмента трубки 37. Зона 67 предоставлена непосредственно на штьрем 38, где разделяющее средство 36 представляет слегка уменьшенньій внутренний диаметр. Таким образом можно разместить небольшой фильтр 68 непосредственно вьіше указанной зоньї, показанной на фиг. 1, посредством чего жидкость должна проходить через указанньій фильтр перед тем, как она войдет в сег- мент трубки 46 капсуль! 45.

Описанное устройство включаєт первую кольцевую камеру 70, ограничиваемую изнутри польм поршнем 8, образующим цилиндрическую внутреннюю стенку 71, а снаружи цилиндрической наружной стенкой 27, образованной наружньї!м контейнером 2 и внутренним контейнером 3. В положений при обьч- ном использованиий, показанном на фиг. 1, кольцевая камера 70 сверху ограничиваєтся верхней стенкой 73, образованной дном 5 и 6, соответственно, наружного контейнера 2 и внутреннего контейнера 3. По нап- равлению вниз, кольцевая камера 70 ограничивается нижней стенкой 74, образованной поршнем 55. Вто- рая камера 75, ограничивается ниже поршня 55, причем указанная вторая камера снаружи ограничиваєется той же цилиндрической наружной стенкой 72, как и первая камера 70. По направлению вниз, вторая камера 75 ограничиваєтся второй нижней стенкой 76, образованной наружньїм диском 19 и внутренним диском 20.

Капсула 45 установлена в центре внутренней части второй камерь! 75. Третья камера 77 предоставляется ниже указанной второй нижней стенки 76, и зта третья камера 77 ограничивается разделяющим средством 36 и блоком кольцевого фильтра 42. Кроме того, зта третья камера 77 сообщаеєется со второй камерой 75 через канал, образованньйй центральньїм отверстием 22 в наружном диске 19 и внутреннем диске 20. На- конец, четвертая камера 78 предоставляется ниже разделяющего средства 36, причем указанная четвер- тая камера 78 ограничиваєется снизу стенкой 32 крьішки 27 и, кроме того, частями муфть! 28 крьішки 27 и нижней стороной наружного диска 19.

Как описано вьіше, описанное устройство первоначально приспособлено для отделения компонента, такого как мономерная форма фибрина из крови, и для зтой цели вторая камера 75 и предпочтительно верхняя камера 80 капсуль 46, заблаговременно заполняется подходящим ферментом, таким как батрок- собин. Как понятно из ЕР-Р5 Мо 592,242, может использоваться любой фермент, подобньїй тромбину. Та- кие ферменть! включают тромбин как таковой или любой другой материал с аналогичной активностью, та- кой как Анкрод, Акутин, Вениим, Аспераза, Ботропаза, Кротабаза, Флаворксобин, Габоназа и предпочти-

тельньїй Батроксобин. Батроксобин может бьіть химически связан с биотином, которьйй представляет собой синтетическое вещество, позволяющее батроксобину захватьіваться обьічно известньім образом посредст- вом авидина в авидиново-агарозной композиции. Соответственно, авидин-агароза обнаруживаєется в самой нижней камере 81 капсуль!. Как биотиново-батроксобиновая композиция, так и авидиново-агарозная компо- зиция сравнительно легко заполняются в соответствующие камерь 80 и 81 внутри капсуль! 45 перед тем как указанная капсула помещается внутрь устройства.

Наконец, установлен шприц 58, причем указанньійй шприц содержит буфер рн-4 из ацетата, раство- ренного уксусной кислотой и приспособленньй для приєма фибрина І.

Другой буфер, известньій из предшествующего уровня техники, также может использоваться. Буфер- ньій агент для повторного растворения может бьіть любьмм кислотньім буферньім раствором, предпочти- тельно раствором, имеющим рН между 1 и 5. Подходящие примерьі! включают уксусную кислоту, янтарную кислоту, глюкуроновую кислоту, цистеиновую кислоту, кротоновую кислоту, итаконовую кислоту, глутоно- вую кислоту, муравьиную кислоту, аспарагиновую кислоту, адипиновую кислоту и соли любой из зтих кис- лот. Предпочтительньіми являются янтарная кислота, аспарагиновая кислота, адипиновая кислота и соли уксусной кислотьї, например, ацетат натрия. Также солюбилизация может проводиться при нейтральной рн посредством хаотропного вещества. Подходящие вещества включают мочевину, натрия бромид, гуанидин гидрохлорид, КСМ5, калия йодид и калия бромид. Концентрация и обьемь! таких кислотньїх буферов или таких хаотропньїх веществ такие как описано в ЕР-Р5 Ме592,242.

Во время или сразу после подачи крови, поршневой шток 8 проталкиваєется так далеко внутрь уст- ройства, что смещаємая муфта 52 капсуль! 45 сдвигается по направлению вниз, герметично перекрьївая сквозной канал через нижнюю стенку 76 и во вторую камеру 77. В результате, одновременно открьівается доступ к композиции биотин-батроксобин внутри самой верхней камерь 80 капсуль!.

Когда устройство готово к использованию, образец крови подаєтся в первую камеру через иголку, не показанную, и рукав 65 обьічньім образом, причем в указанньій образец крови предпочтительно подме- шивается антикоагулянт также обьічньім образом. Во время подачи крови через рукав 65 и отверстие 66 во внутрь первой камерь! 70, воздух удаляется из камерь! обьічньмм образом. После подачи крови рукав 65 удаляется, а отверстие 66 герметично закрьивается. В последующем устройство с кровью помещается в центрифугу, которая, наряду с другими функциями, помогаєт в герметической компрессийи различньх час- тей. Центрифуга вьізьівает вращение устройства вокруг оси вращения 1. В результате центрифугирования кровь отделяется в первой камере 70 на плазменную фракцию, осаждающуюся радиально внутри остаю- щейся порции крови, причем указанная остающаяся порция содержит зритроцить! и белье клетки крови.

Как описано в ЕР-Р5 Мо 592,242, тромбоцить! могут присутствовать в любой фракции, по желанию, путем изменения скорости и времени центрифугирования.

Когда поверхность раздела между плазмой и оставшейся порцией крови стабилизируется, т.е. когда разделение заканчиваєтся, начинается уменьшение обьема первой камерьі! 70 поршневьім штоком ви в последующем поршень 55 вьітягиваєтся наружу. В результате, сначала возможньй внутренний слой возду- ха проходит через каналь 4 и 21 во вторую камеру 75, адальнейшее движение поршня 55 приводит к тому, что плазма также проходит во вторую камеру 75. Движение поршня 55 прекращаєется, когда весь слой плаз- мь! будет перекачен во вторую камеру 75, т.е. когда поверхность раздела между плазмой и оставшейся порцией крови достигнет внутреннюю стенку 71 первой камерь 70.

Во второй камере 75 плазменная фракция вступаєт в контакт с ферментом батроксобином, что в ре- зультате приводит к тому, что мономерная форма фибрина, которьій полимеризуєтся немедленно в по- лимерную форму фибрина без поперечньїх связей, освобождаєется из плазменной фракции. Зтот процесс вьіполняєется в то время как устройство непрерьівно центрифугируется, что в результате приводит к тому, что полимерная форма фибрина зффективно отделяєтся от оставшейся порции плазменной фракции, при- чем указанная полимерная форма фибрина образуется реакцией биотиново-батроксобиновой композиции и осаждением в виде вязкого слоя вдоль цилиндрической наружной стенки 72. Когда зто отделение завер- шается, центрифугирование прекращаєется, посредством чего остающаяся относительно жидкая порция плазменной фракции может бьіть легко вьідавлена назад в первую камеру 70 поршнем 55 сначала подня- тьІм для переноса воздуха из первой камерь 70 во вторую камеру 75, с последующим нажатием указанного поршня 55 вниз. Таким образом, зтот перенос жидкости может вьіполняться относительно легко и бьстро перед тем как вязкий слой с полимерной формой фибрина достигнет отверстия в канал 21. Дальнейшие мерьї могут необязательно предприниматься для предотвращения слишком бьістрого достижения вязким слоем впускного отверстия канала 21, такие как путем установки кольца вьіступающих вверх зубцов 82, по- казанньїх пунктирньми линиями на нижней стенке 76. Зта процедура центрифугирования/дренирования может проводиться два и более раз, как может потребоваться, для получения насколько возможно макси- мального количества жидкой плазмь! из полимерной формь! фибрина.

Как только остающаяся порция плазменной фракции бьла вьітеснена из второй камерь 75, смещае- мая муфта 52 капсуль; 45 смещается дальше вниз таким образом, что возникает возможность доступа в са- мую нижнюю камеру 81. В то же самое время или в связи с последним смещением муфть, плунжер 49 шп- рица 58 полностью придавливаєется вниз посредством шпинделя, действующего снаружи таким образом, что буфер рн-4 переносится во вторую камеру 75, что может бьіть сделано во время начала центробежно- го перемешивания. Добавление буфера рн-4 обеспечиваєт то, что полимерная форма фибрина раство- ряется в нем, а присутствие авидин-агарозной композиции в нижней камере 81 внутри капсуль 45 обеспе- чиваєт то, что биотин-бактроксобиновая композиция связьіваєтся обьічньмм образом авидином. Продол- жающееся смещение поршня 55 вьізьївает зацепление смещаємой муфть 52 на капсуле 45 с разделяю- щим средством 36 и разьединение нижней стенки 76, что в результате приводит к тому, что обеспечиваеєт-

ся свободньій доступ к третьей камере 77. В результате содержимое второй камерьі 75 может свободно стекать вниз в третью камеру 77. Предпочтительно, повторное растворение проводится во время центро- бежного перемешивания, которое включаєт центрифугирование и серию прерьівистьїх возвратно-посту- пательньїх перемешивающих движений.

Продолжающееся центрифугирование обеспечивает то, что раствор мономерной формь! фибрина может бьїіть отделен в третьей камере через кольцевой фильтр 42, задерживающий относительно крупнье частиць агарозь! и батроксобина, связаннье с ней, через систему захвата биотин-авидина. Когда раствор мономерной формь! фибрина прошел в самую нижнюю четвертую камеру 78 в результате упомянутого вь!- ше центрифугирования, указанное центрифугирование прекращаєтся и раствор фибрина І! легко перено- сится в шприц 58 путем возобновленного оттягивания вверх плунжера 59, причем самьй верхний конец трубчатого сегмента 46 капсуль! 45 входит в зацепление с сегментом трубки 47, образуя соединение со шп- рицем 58.

По мере того как полимерная форма фибрина отделяется от плазменной фракции во второй камере 75 во время продолжающегося центрифугирования и по мере того, как раствор мономерной формь! фибри- на отделяєется в третьей камере 77 центрифугированием, можно достичь относительно вьІсокКий вьход фибрина І из рассматриваємого образца крови.

Изобретение бьіло описано со ссьілкой на предпочтительньій вариант реализации. Однако может бьіть вьіполнено много модификаций без отклонения от обьема изобретения.

На фиг. 2 показаньі! примерь! таких модификаций, так как указанная фиг. 2 иллюстрирует второй ва- риант реализации изобретения, которьій более или менее соответствует варианту реализации изобре- тения, показанному на фиг. 1. Вариант реализации, показанньїй на фиг. 2, включаєет первую камеру 90 и вторую камеру 91, разделеннье поршнем 92, которьій включает польій поршневой шток 93, ограничиваю- щий первую камеру по направлению внутрь. По направлению наружу, две камерь! определяются частью, в целом, трубчатого злемента 94, образующего наружную цилиндрическую стенку 95 для двух камер 90 и 91.

По направлению вверх, первую камеру 90 ограничиваєт верхняя стенка 85, которая в свою очередь обра- зуется верхней крьішкой, прикрепленной к трубчатому злементу 94 посредством кольца 96, вкрученного в указанньй трубчатьй злемент 94. Верхняя стенка 85 определяет сквозное отверстие для прохода полого поршневого штока 93. По направлению вниз, вторую камеру 91 определяєт нижняя стенка 96, образован- ная круговьім внутренним фланцем в трубчатом злементе 94. На стороне примьікающей ко второй камере 91, трубчатьй злемент 94 включаєт усеченно-коническую поверхность 97, наклоненную в сторону от порш- ня 92 по направлению к центру второй камерь 91. Нижняя стенка 96 определяет центральньй сквозной ка- нал 98 в третью камеру 99. Третья камера 99 определяется разделяющим средством 100 и блоком кольце- вого фильтра 101, вставленного между нижней стенкой 96 и разделяющим средством 100 и ведущим в чет- вертую кольцевую камеру 102. Четвертая камера 102 определяется между имеющей форму конуса крьіш- кой 103, фиксированной к трубчатому злементу 94 резьбой. Указанная крьішка 103 удерживаєет через про- межуточнье фланцьі 103 разделяющее средство 100 в положений в центре внутри трубчатого злемента 94, в то же время сдавливая блок кольцевого фильтра 101.

Капсула 105 крепится на вьіступающем к центру и вверх штьіре 104 на разделяющем средстве 100.

Капсула 105 включает трубчатую часть 106 с имеющими форму диска кольцами 107, 108, подвижно прик- репленньїми к нему и определяющими камерь для указанньїх ферментов, обозначеннье буквами ВВ и АА, соответственно, посредством смещаємо расположенной манжеть. Имеющие форму диска кольца фикси- руются на желаємом расстояниий друг от друга на сегменте трубки 106 с помощью спрофилированньмх на нем вьіступов по наружной периферии трубчатого злемента 106, имеющего уменьшающийся диаметр по направлению снизу вверх.

Сквознье канальі 115 и 116 образовань от верха первой камерь 90 по направлению ко дну второй камерь 91. Зти каналь! предоставленьі посредством их соответствующих фиксированньїх сегментов трубки 117 и 118, соответственно, простирающихся параллельно оси вращения устройства и прикреп- ленньїх на концах в связанньїх отверстиях в верхней стенке 95 и нижней стенке 96. Канальное соедине- ние между зтими сегментами трубки и камерами, соответственно, обеспечиваются подходящими отверс- тиями и втулками, прикрепленньїми на них. Сегменть! трубок 117 и 118 простираются через их соответст- вующие отверстия в поршне 92. Везде установленьі уплотнительньсе кольца с тем, чтобьі! предотвратить утечку.

Переходник 120 закреплен в центре внутри поршня 92 для подсоединения к шприцу 121 внутри по- лого поршневого штока 93 и к верхнему концу трубчатого сегмента 106 капсуль 105. Переходник 120 несет юбку 122, виіступающую во вторую камеру 91 и влияющую на смещаемую муфту 110 на капсуле 105. Как показано, наружньйй диаметр зтой муфть! 110 подобран к диаметру сквозного канала 98 по направлению вниз в третью камеру 99 таким образом, что муфта 110 направляется и удерживаєтся нижней стенкой 96 в любом положениий, а следовательно также в самом нижнем положенийи, в котором муфта 105 не входит в зацепление с самьмм нижним концом 109 в форме диска в капсуле, что обеспечивает возможность прохож- дения жидкости из второй камерь 91 по направлению вниз в третью камеру 99. Канал 123 простираєтся из четвертой камерь 102 и проходит по центру вверх через штьірь 104 на разделяющем средстве 100 и далее по направлению вверх через трубчатьй злемент 106 капсуль 105, посредством чего жидкость может отту- да попадать в шприц 121.

Устройство, показанное на фиг. 2, используется полностью таким же образом, как и устройство, по- казанноеє на фиг. 1, и в нем, естественно, также предусмотрено приспособление для подсоединения к нему рукава для подачи крови.

Описаннье части, образующие часть различньїх устройств, легко изготавливаются из подходящих пластических материалов путем инжекторного формовочного литья, и позтому рассматриваємье устройст- ва также относительно дешевь и подходят для одноразового использования.

Изобретение бьіло описано со ссьілкой на предпочтительнье варианть! реализации устройства. Спо- соб в соответствий с изобретением может, однако, легко осуществляться в лаборатории в асептических ус- ловиях посредством колпачка, которьйй может бьіть закрьтт криішкой. Плазма и фермент заливаются в кол- пачок и путем смешивания и последующего центрифугирования, полимерная форма фибрина без попереч- ньїх связей отделяеєется на дно или стенку колпачка, как описано вьіше. После удаления остающейся плаз- менной фракции, полимерная форма фибрина без поперечньїх связей повторно растворяется путем до- бавления растворителя и путем центробежного перемешивания как также описано вьіше.

Пример. 140 мл цельной крови и 20 мл антикоагулянта нитрата натрия (Фармакопея США) вносят в первую камеру 70 устройства, описанного вьіше. Зту комбинацию центрифугируют в течение 2 минут прибли- зительно при 6 000 об./мин для обеспечения разделения плазмьї и клеток крови. Продолжая центрифуги- рование до полного разделения поршень поднимают так, чтобьї перенести саму внутреннюю фазу, т.е. плазму, во вторую камеру 75. Переносят около 60 мл плазмьі. Ее обрабатьшвают 30 единицами биотини- лированного батроксобина, которьйй вносят во вторую камеру 75 через верхнюю камеру 80 капсуль 45, как описано ранее. Плазму и аброксобин смешивают при более низкой скорости, например, приблизительно от 2000 до З 000 об./мин и затем центрифугируют в течение 9 минут при 9 000 об./мин.

Гель полимерной формь! фибрина без поперечньїх связей осаждают в виде тонкого слоя геля на стенки цилиндра и вращение прекращают. Оставшуюся плазменную жидкость (сьіворотку) затем переносят назад в первую камеру 70. За зтим следуют два дополнительньїх центрифугирования в течение 1 минуть при 9 000 об./мин для удаления максимально возможного количества сьіворотки в геле. После каждого та- кого 1-минутного центрифугирования, избьток сьіворотки переносят в первую камеру 70.

Затем буферньй раствор, содержащий 3,5 мл 0,2 М ацетата натрия (рн 4,0), содержащий 24 мМ хлорида кальция вносят во вторую камеру 75 через шприц 58. В зто время в течение 2 минут проводят центробежное перемешивание, состоящее из циклов 5-10 сек. вращений приблизительно при З 000 об./мин каждьй при повторньїх возвратно-поступательньїх дви- жениях, для растворения геля полимерной формь! фибрина и получения раствора, содержащего мономер- ную форму фибрина. В разделенньйй таким образом раствор добавляют авидин-агарозу через нижнюю ка- меру 71 капсуль! 45. После зтого в течение 5 минут проводят центробежное перемешивание, состоящее из циклов 5-10 сек. вращений приблизительно при З 000 об./мин каждьй при повторньїх возвратно-поступатель- ньїх движениях. Полученньій в результате раствор содержит мономерную форму фибрина плюс комплекс авидин-агарозь!: биотина-батроксобина.

Зтот раствор переносят в третью камеру 77 и, центрифугируя, фильтруют через кольцевой фильтр Рогех с размером пор 20 мкм в течение 1 минуть! при 9 000 об./мин. Полученньй в результате раствор мономерной формь! фибрина набирают в шприц 58, как описано ранее.

Образованньй таким образом раствор мономерной формь! фибрина (фибрин І в зтом случає) пов- торно полимеризуют в фибриновьй материал для закрьтия ран путем совместного нанесения на участок, где требуется такой материал для закрьтия ран, с 0,75 М буфером карбоната/бикарбоната натрия в соот- ношений фибрин І:буфер 5:1.

-в ее К

ТЕГ в | ! | | | й с | | | де во се Те

ЕВ ни пере ни

МИ зд ДН сни ли ЩО 4 у 7 | у; т як: ИН і д

Кі )

М й Д Коб св й т кн т ІНКешист Б

ІЙ з І в І 75. й з ї- свв /й 6 ів їй во Ц, тв 5)

НЕ Ве УА

ЗЕ аа МИ БІ ЕК 42 Ах Та І ЯК Ід вх Й Ме "ЯМ й я ХЕ

М 68 67 37 38 3644 54 За 3

Фиг. 1

) /

ЕР а я Ек, Іа пе Пе

ВІ й и ЧІ щи щі и й ЦО, т ЛІ ЦІ

ІН ТК ТИ 95 ів ЗК с нау: вх ше Й щі. се ЧЕ ПВ

ОУЕН По

У бе е я і ен вутх ре Ь що й ян

Фиг. що 7 о зі

У Ь--

Й ої ; Ії 530 й іє се; ІІ зов зи ДІЯ з

Ще, г я пат | І; ; у ЩО !

ЇЇ ЛІ ІЙ о СД Ї зоре щі . т ДЯ в ше оса) дона І її о.

Ж сі;

Л інши ші Ж

ЩА дк ее оз ее ЧЕЕт НЕ

Кк й.

У іч л М А

Ше - Я Ол ОР й

Тираж 50 екз.

Відкрите акціонерне товариство «Патент»

Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122) 3-72 -89 (03122)2-57- 03