HUT77264A - Centrifuga gyűrűs szűrővel - Google Patents

Description

A nemzetközi bejelentés száma: PCT/US95/15675

A nemzetközi közzététel száma: WO 96/16715

A találmány tárgya gyűrűs szűrővel ellátott centrifuga és eljárás egy komponens, például fibrinmonomer elválasztására plazmából.

Az eljárás magában foglalja a plazma egy vagy több reagenssel való kezelését, amelynek során a reagenseket egy centrifugás berendezés plazmát tartalmazó, gyűrűs reakciókamrájába juttatják, majd a berendezéssel centrifugálják. Ezután a keletkező folyékony frakciót átviszik egy második kamrába. A második kamrában lévő folyékony frakció elválása a folyamatos centrifugálás és az elválasztást elősegítő, megfelelő keverékek hozzáadása, valamint a nem használható résznek az első kamrába való visszajuttatása révén folytatódik. A folyékony frakciónak a második kamrában 'visszamaradó részét egy szűrőn egy folyadék-befogadó edénybe juttatják. A folyékony frakciónak a második kamrában visszamaradó részét - mielőtt a folyadékbefogadó edényhez jut - egy harmadik kamrába juttatják, és a harmadik kamrában lévő folyadékot a centrifugálás alatt áthajtják egy gyűrűs szűrőn, hogy belépjen egy gyűrűs rekeszbe, amely összeköttetésben van a folyadék-befogadó edénnyel.

Az eljárás végrehajtására szolgáló berendezés tartalmaz egy első, gyűrűs kamrát (70), amelyet egy külső, hengeres fal (72), egy belső, hengeres fal (72), egy fedőfal (73) és egy fenékfal (74) határol. A külső és belső fal koncentrikusan helyezkedik el a forgástengely körül (1). A fedőfalat (73) vagy a fenékfalat (74) egy dugattyútest képezi, amely mozgatható az első kamrán belül. A berendezés tartalmaz továbbá egy az első kamrával egy első vezetéken át összeköttetésben lévő második kamrát (75), amelyet egy a forgástengely (1) körül koncentrikusan elhelyezkedő, külső hengeres fal, az első kamra fenékfala (74) és egy másik fenékfal (76) határol. A második kamra úgy van beállítva, hogy a centrifugálás alatt az első kamra alatt helyezkedjen el. A berendezés tartalmaz még vérbetápláló eszközöket (65 tömlő, 66 nyílás) a vérnek az első kamrába való betáplálására és keverék-betápláló eszközt (45 kapszula) az elválasztást elősegítő keverékek betáplálására, valamint befogadó eszközt (58 fecskendő) legalább egy folyadék-befogadó edénnyel való összeköttetésre. A befogadó eszköz a második kamrával egy második, vezetéken át van kapcsolatban. A második vezeték a második kamrával egy azzal koaxiálisán elhelyezett, harmadik kamrán (77) át van összekötetésben, amely tartalmaz egy a második kamrához vezető, kívülről nyitható átjárót (22 nyílás). A harmadik kamrának van egy belső rekesze és egy külső rekesze, amelyeket egy sugárirányú, kerületi átjáró köt össze. Az átjáróban egy gyűrűs szűrő (42 szűrőegység) van elhelyezve az elválasztás elősegítésére használt, nem kívánt alkotórészeket tartalmazó folyadék átfolyásának megakadályozására.

A jelen berendezés, amelynek része az itt ismertetett centrifugás, gyűrűs szűrőrendszer, hatékony és pontos eljárást nyújt egy vagy több reagens visszanyerésére egy kívánt termékoldatból.

(1. ábra)

64,001/BE

S.B.G. & Κ.

Nemzetközi Szabadalmi Iroda

H-1062 Btul.oesi. Andrássy út 113. Telefon. <4 .. -5ti. i-ax: 34-24-323

64.001/BE

Centrifuga gyűrűs szűrővel

BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY, SKILLMAN, NJ, US

Feltaláló:

HOLM Niels Erik, BIRKER0D, DK

A bejelentés napja: 1995.12.01.

Elsőbbsége: 1994.12.02., 08/348,672, US

A nemzetközi bejelentés száma: PCT/US95/15675

A nemzetközi közzététel száma: WO 96/16715 • · · · • ·

A találmány tárgyát egy gyűrűs szűrővel ellátott centrifuga és egy komponens, például fibrinmonomer plazmából való elválasztására szolgáló eljárás képezi. Az eljárás magában foglalja a plazma egy vagy több reagenssel való kezelését, amelynek során a reagenseket a plazmát tartalmazó, alkalmas reakciókamrához juttatjuk. A reagenseket a kívánt termékből egy új szerű.centrifugás szűrőberendezéssel és eljárással távolítjuk el.

Az EP-PS 592 242 számú szabadalmi iratban eljárásokat és teljesen újszerű fibrin tömítőszer keverékeket ismertetnek. Az eljárás során egy kívánt helyet érintkeztetnek egy fibrinmonomert tartalmazó keverékkel, és az érintkeztetési lépéssel egy időben ezt a monomert átalakítják fibrinpolimerré. A fibrin kifejezést fibrin I-ként, fibrin II-ként és/vagy des ββ fibrinként definiálják.

A 155 984 lajstromszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésből továbbá ismert egy eljárás egy komponens, mint például fibrinmonomer elválasztására vérből. A több, különböző sűrűségű komponenst tartalmazó folyadék komponenseinek elválasztására szolgáló eljárás magában foglalja a vér összegyűjtésének lépéseit egy berendezés első kamrájában, amely kamrát egy tengelyirányban lényegében szimmetrikus külső és belső fal határol. A vért centrifugálásnak vetik alá a berendezésnek a kamra szimmetriatengelye körüli forgatásával úgy, hogy koncentrikus határfelületet jöjjön létre a vér komponensei között. A vérnek legalább az egyik komponensét, mint például a plazmát azután átviszik a berendezésben lévő második kamrába, előnyös módon a berendezés folyamatos centrifugálása közben az első kam64 ,001/BE ra térfogatának csökkentése révén. A tengelyirányban lényegében szimmetrikus belső fal úgy van elhelyezve az első kamrában, hogy az összes vér biztosan ki legyen téve az elváláshoz szükséges centrifugális forgásnak. Ennek a belső falnak a sugara igazodik a kívánatos szögsebességhez.

A második kamrában megfelelő enzim segítségével egy nem térhálós fibrinpolimert tartalmazó frakciót választanak el a plazmától, azt követően újra fibrinmonomerré oldják, és szűrőn át egy fecskendőhöz juttatják a második kamra térfogatának csökkentésével .

Kiderült azonban, hogy egy komponens, mint például fibrin I elválasztása a vérből csak szűréssel egy fenti típusú berendezésben nem nyújt kielégítő eredményt. Ennek oka elsősorban az, hogy nehéz biztosítani a fibrin I-t tartalmazó frakció kielégítő elválását a második kamrában, és ilyenformán a vér fibrin I tartalmának viszonylag nagy mennyisége elvész a folyékony frakció ezt követő átkerülésekor a második kamrából az első kamrába az eljárás következő lépése alatt.

A korábbi fibrinmonomeres eljárásban a plazmában lévő fibrinogén megfelelő enzimmel való, fent ismertetett kezelése során is a nem térhálós fibrinpolimer sűrű gélmassza formájában állt elő a második kamra fenekén. Abból a célból, hogy a kívánt fibrinmonomer-oldat álljon rendelkezésre, erős keveréssel összekötött, jelentős mennyiségű újraoldó pufferre volt szükség. Ennek következtében több hátrány lépett fel. Először is az előnyös fibrinmonomeres eljárások, például az EP 592 242 számú európai szabadalmi bejelentésben ismertetett fibrin tömítőszerként való

64,001/BE • · · alkalmazásra szolgáló eljárások,, tömény fibrinmonomer-oldatokat igényelnek, és a gélmassza feloldásához szükséges nagy mennyiségű újraoldó puffer vagy oldószer híg oldatokat nyújtott, amelyek szintén nem működnek. Továbbá a gélmassza fibrinmonomer-oldattá való feloldásához szükséges erős keverés károsíthatja a berendezést és magát a fibrint is.

A jelen bejelentéshez kapcsolódó és azzal egy időben benyújtott, Eljárás és berendezés fibrin I elválasztására vérplazmából című bejelentés olyan eljárást tartalmazó találmányt ismertet, amelynek során nem térhálós fibrinpolimert választunk el plazmafrakcióból egy hengeres kamrában. Az elválasztást centrifugálás közben végezzük, ami által a nem térhálós fibrinpolimer lerakódik a kamra külső falán. Ezután a kamrában összegyűlt, visszamaradó folyékony frakciót eltávolítjuk a kamrából, hogy a nem térhálós fibrinpolimert tartalmazó, kamrában maradt, lényegében a falon lerakodott frakciót oldószer hozzáadásával és centrifugális keveréssel leoldjuk.

Mivel a plazma enzimmel való kezelését folyamatos centrifugálás közben végezzük, az ennek következtében keletkező nem térhálós fibrinpolimerre ható centrifugális erő hatására a fibrinpolimer vékony gélfilmként kicsapódik, amely lényegében rátapad a kamra kerületi falaira. A visszamaradó plazmafolyadék lerakódik a kamra fenekére, amikor a centrifugálást leállítjuk, és valamilyen alkalmas eszközzel eltávolítható. A kívánt fibrinmonomer-oldatot ezután megfelelő újraoldó pufferoldatnak a kamrába való bevezetésével és a géllel bevont kamrában a puffer centrifugális keverésével nyerjük. Ennek az eljárásnak több előnye van

64,001/BE • · · · a már ismert eljárásokkal szemben. Először is a nem térhálós gél újraoldása pufferoldattal rendkívül hatásos részben amiatt, hogy ugyanakkora térfogatú fibringélnek az ismert eljárásokban kapott fibrin gélmasszákhoz képest nagy a felülete. Ennek megfelelően a gél kis mennyiségű újraoldó pufferrel oldható, amelynek eredménye tetszőleges koncentrációjú fibrinmonomer-oldat. Továbbá a pufferoldattal végzett centrifugális keverési művelet a géllel bevont kamrában viszonylag kíméletes eljárás, amely nem károsítja sem a berendezést sem a fibrinmonomer terméket.

A jelen találmányhoz kapcsolódó találmány magában foglal egy további eljárást is, amelynek során a vért előnyös módon antikoaguláns jelenlétében egy berendezés első, gyűrűs kamrájába tápláljuk, ahol a gyűrűs kamrát egy hengeres külső fal, egy hengeres belső fal, egy fedőfal és egy fenékfal határolja. A külső és belső fal koaxiális egy közös tengely körül. A fedőfalat vagy a fenékfalat egy dugattyútest képezi, amely az első kamrán belül mozgatható. Az eljárás magában foglalja továbbá a berendezés centrifugálását az említett közös tengely körül lényegében a vér szétválasztása céljából sejtfrakcióra és., plazmafrakcióra. Ezt a lépést a dugattyútest hatása közben a keletkező plazmafrakciónak egy második kamrába való átvitele követi. A második kamrát egy külső hengeres fal határolja, amely a közös tengellyel koaxiális. Ezáltal a nem térhálós fibrinpolimert tartalmazó frakció a második kamrában elválik, miközben megfelelő enzimet adunk hozzá. Ezt az eljárást az jellemzi, hogy a fibrinogén-tartalmú plazmafrakciót centrifugálás közben tesszük ki az enzimnek, úgyhogy a keletkező nem térhálós fibrinpolimer lerakódik a második

64,001/BE • · · · kamra hengeres külső falán, ami után a második kamra fenekén összegyűlt, folyékony frakciót a dugattyútest hatása közben átvisszük az első kamrába, és hogy a második kamrában maradó, nem térhálós fibrinpolimert tartalmazó frakciót, amely lényegében lerakodott a hengeres falon, oldószer hozzáadásával és centrifugális keveréssel újraoldjuk. Ezután, ha kívánatos, az enzim eltávolítható, és az így előállított fibrinmonomer-oldatot tetszőleges befogadó edénybe visszük.

Ennek megfelelően az oldat gyűjtéséhez könnyen fenntarthatok a steril körülmények. Az újraoldás után a fibrinmonomer további használathoz - az adott szakterületen ismert módon - átvihető egy befogadó edénybe, például egy fecskendőbe. Az átvitel előtt az enzim valamilyen alkalmas eszközzel eltávolítható.

A jelen bejelentéshez kapcsolódó, fent említett bejelentés ismertet továbbá egy berendezést komponenseknek folyadékból egy központi forgástengely körüli centrifugálással való elválasztására. A berendezés tartalmaz egy első, gyűrűs kamrát, amelyet egy külső hengeres fal, egy belső hengeres fal, egy fedőfal és egy fenékfal határol. A külső és belső- fal koncentrikusan helyezkedik el a forgástengely körül. A fenékfalat egy dugattyútest képezi, amely mozgatható az első kamrán belül. A berendezés tartalmaz továbbá egy az első kamrával egy első vezetéken át összeköttetésben lévő második kamrát, amelyet egy a forgástengely körül koncentrikusan elhelyezkedő, külső hengeres fal, a dugattyútest és egy fenékfal· határol. A második kamra úgy van beállítva, hogy a centrifugálás alatt az első kamra alatt helyezkedjen el, és a berendezés tartalmaz még vér-betápláló esz64.001/BE • · · · ·· közt a vérnek az első kamrába való betáplálására és keverékbetápláló eszközt az elválasztást elősegítő keverék betáplálására, valamint befogadó eszközt legalább egy folyadék-befogadó edénnyel való kapcsolatra, ahol a befogadó edény egy második vezetéken át van összeköttetésben a második kamrával. Az egyik előnyös kiviteli alakban a dugattyúrúd alkotja az első kamra belső falát.

Ezt az invenciózus berendezést, amely a jelen találmányhoz kapcsolódó találmány szerinti eljárás végrehajtására szolgál, az jellemzi, hogy az első vezeték legalább egy csatornát alkot az első kamra fedőfalán lévő nyílás és a második kamra fenékfalán lévő nyílás között.

Ennek eredményeképpen viszonylag egyszerű berendezést kapunk, amely a dugattyú helyzetétől függetlenül biztosítja a kérdéses frakciók könnyű és gyors átvitelét az egyik kamrából a másik kamrába, különösen a folyékony frakció átvitelét a második kamrából az első kamrába a fibrin I-et tartalmazó frakció elválasztása után. Az utóbbi különösen amiatt van, hogy a centrifugálás leállásakor a folyadék automatikusan a második kamra fenekén koncentrálódik, miáltal könnyen átjuttatható az első kamrába a dugattyú mozgatásával.

A jelen találmányhoz kapcsolódó találmány szerint különösen előnyös, hogy a legalább egy csatorna átnyúlik mind az első, mind a második kamrában a külső hengeres fal belsején, aminek következtében a berendezés különösen egyszerűen és könnyen előállítható .

Továbbá a csatorna nyílását a második kamra fenékfalán köz64,001/BE • · · pontosan, a fenékfal által képezett mélyedéssel összeköttetésben lehet elhelyezni a kamrában. Ennek eredményeképpen a kérdéses folyékony frakció könnyen és gyorsan jut közvetlenül a csatorna bevezető nyílásához. Egy másik változatban minden egyes csatornát egy cső képezhet, amely egyenes vonalban terjed a dugattyútesten át, és az első kamra fedőfalában, illetve a második kamra fenékfalában lévő végeken van rögzítve, ahol összeköttetésben van a megfelelő kamrában végződő csatornarészekkel.

Ezenkívül az első és a második kamrának különösen egyszerű módon van egy közös külső hengeres fala. A falat egy külső és egy belső, egymásba tömítően illeszkedő henger képezi, amelyek egymás között meghatároznak egy tengelyirányú csatornát. A hengerek egyik vége le lehet zárva egy nyílással ellátott végfallal. A nyílás lehetővé teszi a dugattyútesttel összekötött dugattyúrúd átnyúlását, amely dugattyútest képezi az első kamra fenékfalát, és elválasztja az első kamrát a második kamrától, és ahol a csatorna a hengerek végfalai között egy közvetlenül a dugattyúrúd mellett lévő nyílásig ér.

Ilyen berendezés és eljárás alkalmazásakor a vérplazmában lévő, kívánt komponensek elválasztásának és kezelésének megkönynyítésére alkalmas reagenseket előre betöltöttünk a második kamrába. Az EP 592 242 számú európai szabadalmi bejelentésben például azt ismertetik, hogy a biotin-avidin befogórendszer megfelelően használható a batroxobin eltávolítására a kívánt oldatból. A biotin-batroxobin jelenlétére szükség van a második kamrában, hogy reagáljon a plazmában lévő fibrinogénnel és fibrinmonomerré alakítsa (amely azonnal fibrinpolimerré alakul). Abból

64,001/BE • · · · a célból, hogy ezután a biotin-avidin rendszer alkalmazásával befogjuk a biotinilezett batroxobint, a második kamrában avidinnak is jelen kell lennie, amely például agarózhoz van kötve.

Zárt, automatizált centrifuga-berendezésben ezeket a reagenseket a vérkezelést megelőzően kell betölteni a berendezésbe. A biotinilezett batroxobin és azavidin-agaróz előre betöltése ugyanabba a kamrába nehézségekbe ütközött, mivel az avidinnak a biotinhoz való nagy affinitása, amelyre az enzimbefogás támaszkodik, elegendő mennyiségű enzimet akadályoz meg a fibrinogénnel való első reagálástól, ahogy erre szükség van.

Egy második, a jelen bejelentéshez kapcsolódó, azzal egy időben benyújtott, Berendezés és eljárás, valamint centrifugareagens ellátó rendszer egy komponens elválasztására plazmából című bejelentés olyan berendezést ismertet, amely lehetővé teszi egy reakciókamrában egy vagy több reagens könnyű elhelyezését és ezeknek a reagenseknek a kívánt sorrendben való kiengedését. Ha előnyös módon a fent említett, kapcsolódó bejelentésben ismertetett típusú berendezésben használjuk a reagenseket akkor ezek, például egy enzim és egy enzimbefogó keverék a kívánt módon engedhetők ki. A fenti cél érdekében a találmány értelmében a berendezést az jellemzi, hogy egy kapszula van elhelyezve a második kamrában, amelynek több rekesze van az elválasztást elősegítő, megfelelő keverékek befogadására. A kapszula tartalmaz továbbá záróelemeket, amelyek lezárják a rekeszeket egy dugattyú hatása közben, amely a rekeszek sorban való nyitásával, azok tartalmának kiengedésére szolgál.

Az ilyen kapszula lehetővé teszi a fibrin I elválasztásához

64.001/BE • »··· szükséges anyagok egyszerű és könnyű betáplálását. A kapszula előnyös módon előre meg van töltve ezekkel az anyagokkal. Ezenkívül a rekeszek lehetővé teszik a kérdéses mennyiség egyenletes, előre meghatározott, arányos adagolását. A batroxobin előnyös módon egy rekeszben van kémiai kapcsolatban a biotinnal feltételezve, hogy használat után a batroxobin enzim könnyen befogható az avidinnal, amely ezért a második rekeszben van kémiai kapcsolatban a viszonylag nagy részecskék formájában lévő agarózzal·. A biotinnak az avidinhoz való nagy affinitása következtében a komplexált biotinilezett batroxobin/avidin agaróz részecskék szűréssel könnyen eltávolíthatók a fibrin I-oldatból. A két anyagnak a megfelelő rekeszekben való elhelyezése lehetővé teszi a dugattyú hatása közben az anyagok könnyű adagolását is a kívánt időkben. A fenti biotin-batroxobin, illetve az avidin-agaróz anyagok vagy keverékek bármilyen megfelelő formában, például liofilizált por alakjában használhatók.

A kapcsolódó, reagens ellátó rendszer tárgyú találmány szerint különösen előnyös, hogy a kapszulában van egy központi agyrész, amely koaxiálisán van rögzítve a második kamra belsejében, és három egymástól bizonyos távolságban elhelyezett, sugárirányú tárcsát tart. A tárcsák válaszfalakat képeznek a rekeszekben, és külső kerületi körvonaluk lényegében azonos. Előnyös továbbá, hogy a záróelemeket egy hüvely alakú test képezi, amely mozgathatóan, de tömítően veszi körül a sugárirányú tárcsákat.

A hüvely alakú, mozgatható test működtetésére a dugattyú a találmány szerint előnyös módon tartalmazhat egy a hüvely alakú testtel együtt működő, lefelé terjedő szoknyát a kapszulán, hogy

64.001/BE fokozatosan mozgassa a hüvely alakú testet, miáltal ez a test sorban kinyitja a kapszulában lévő rekeszeket, amelyeknek tartalma kiszabadul.

A kapcsolódó, reagens ellátó rendszer tárgyú találmány szerint a kapszula összeköttetésben lehet egy szomszédos harmadik kamrához vezető, tengelyirányú átjáróval. A kapszula hüvely alakú testének külső oldala - legalább a test kezdeti mozgatása után - tömítően felfekszik a tengelyirányú átjáró oldalfalára, miáltal a kapszula legalsó válaszfala szabad átjárást enged a folyadéknak a második kamrából a harmadik kamrába azután, hogy a dugattyú - a legalsó válaszfallal való kapcsolódásának megszűntével - kiváltja a hüvely alakú test végső mozgását. Ily módon a kapszula előnyös módon a berendezés egy további részét képezi, és segíti a berendezés további működését a fibrin I elválasztása közben.

Abból a célból, hogy a berendezés integrált részét képezze, a kapszula agyrésze a találmány szerint tartalmazhat egy tengelyirányú, átmenő átjárót, és rögzítve lehet az alsó, harmadik kamra fenekében központosán elhelyezett,· felfelé nyúló kiugráson. Az átmenő átjáró egy csatornarendszeren keresztül a fenéken folyadékvezető összeköttetésben van a harmadik kamra külső, gyűrűs rekeszével, és az agyrész felső vége tömítően kapcsolódhat egy tengelyirányú átjáróhoz a dugattyútestben, hogy összeköttetésben legyen egy hozzá rögzíthető folyadék-befogadó edénnyel.

Az egy vagy több reagensnek a kívánt termékoldatból való eltávolítása érdekében a keletkező fibrin I-tartalmú folyékony frakciót egy szűrőn át egy fecskendőbe visszük a dugattyú hatása

64.001/BE közben. Ennek eredményeként a fibrin I oldata kényszer hatására átmegy a szűrőn, míg az elválasztás gyorsítására hozzákevert enzimet és a többi anyagot a szűrő visszatartja. A fibrin I kapott kitermelése azonban a vérmintában lévő fibrin I mennyiségéhez viszonyítva nem teljesen kielégítő.

Találmányunk célja eljárás, amely nagyobb fibrin I kitermelés megvalósítását teszi lehetővé az együtt tárgyalt berendezés alkalmazásával.

Találmányunk célja továbbá berendezés a fenti eljárás végrehajtására. Az invenciózus berendezés tartalmaz egy első, gyűrűs kamrát, amelyet egy külső hengeres fal, egy belső hengeres fal, egy fedőfal és egy fenékfal határol. A külső és belső fal koncentrikusan helyezkedik el a forgástengely körül. A fedőfalat vagy a fenékfalat egy dugattyútest képezi, amely mozgatható az első kamrán belül. A berendezés tartalmaz továbbá egy az első kamrával egy első vezetéken át összeköttetésben lévő második kamrát, amelyet egy a forgástengely körül koncentrikusan elhelyezkedő, külső hengeres fal, az első kamra fenékfala és egy másik fenékfal határol. A második kamra úgy van beállítva, hogy a centrifugálás alatt az első kamra alatt helyezkedjen el, és a berendezés tartalmaz még vér-betápláló eszközt a vérnek az első kamrába való betáplálására és keverék-betápláló eszközt az elválasztást elősegítő keverékek betáplálására, valamint befogadó eszközt legalább egy folyadék-befogadó edénnyel való kapcsolatra, ahol a befogadó edény egy második vezetéken át van összeköttetésben a második kamrával.

A feladatot a találmány értelmében az eljárás tekintetében

64.001/BE • « ·· • ·· · · úgy oldjuk meg, hogy a folyékony frakciónak a második kamrában visszamaradó részét - mielőtt a folyadék-befogadó edényhez juttatjuk - a többi kamrával koaxiálisán elhelyezett, harmadik kamrába juttatjuk. Az ily módon a harmadik kamrába került folyadékot a centrifugálás alatt áthajtjuk egy gyűrűs szűrőn, hogy belépjen egy külső, gyűrűs rekeszbe, amely összeköttetésben van a folyadék-befogadó edénnyel. Ennek következtében a fibrin I-oldatot a centrifugális erő hatása alatt át lehet hajtani a szűrőn, ami számottevően hatékonyabb, mint a dugattyúval való szűrés.

A feladatot a találmány értelmében a berendezés tekintetében úgy oldjuk meg, hogy a második vezeték a második kamrával egy azzal koaxiálisán elhelyezett, harmadik kamrán át van összekötetésben, amely tartalmaz egy a második kamrához vezető, kívülről nyitható átjárót. A harmadik kamrának van egy belső rekesze és egy külső rekesze, amelyeket egy sugárirányú, kerületi átjáró köt össze. Az átjáróban egy gyűrűs szűrő van elhelyezve az elválasztás elősegítésére használt, nem kívánt alkotórészeket tartalmazó folyadék átfolyásának megakadályozására.

A találmány értelmében a második és-a harmadik kamra közötti átjáró a két kamrával koaxiálisán lehet elhelyezve, és egy kapszula zárja le, amelyet a fentebb említett, kapcsolódó, Berendezés és eljárás, valamint centrifuga-reagens ellátó rendszer egy komponens elválasztására plazmából című bejelentés ismertet. Ebben a kapszulában van egy központi agyrész, amely koaxiálisán van rögzítve a második kamra belsejében, és több, egymástól bizonyos távolságban elhelyezett, sugárirányú tárcsát tart. A tárcsák válaszfalakat képeznek a kapszulában lévő rekeszekben,

64.001/BE • « « · ·· · • « * · • · · · · • * · · · · · ·« · · · és külső kerületi körvonaluk lényegében azonos. A rekeszeket kívül egy tömítően és mozgathatóan szerelt, hüvely alakú test zárja le, amelynek külső oldala tömítően felfekszik a tengelyirányú átjáró oldalfalára. A kapszula legalsó válaszfala szabad átjárást enged a folyadéknak a második kamrából a harmadik kamrába a hüvely alakú test tengelyirányú mozgása révén a dugattyú hatása közben azáltal, hogy a legalsó válaszfallal való kapcsolódása megszűnik. Ennek eredményeként a kérdéses szűrő könnyen és egyszerűen hozzáférhetővé válik egy kapszula segítségével, amelyet már a második kamrában a fibrin I elválásának elősegítéséhez szükséges anyagok betáplálására használunk.

A kapszulát előnyös módon a kapszula hüvely alakú testével koaxiális, lefelé terjedő szoknyát magában foglaló dugattyútest működteti. A szoknya összekapcsolódik a hüvely alakú testtel, amikor a dugattyútestet lefelé nyomjuk, hogy ezáltal megfelelő időpontokban a kapszulában lévő, megfelelő rekeszek sorban kinyíljanak, és végül kinyíljon a folyadék-átjáró a második kamrából a harmadik kamrába.

A fibrin I-oldatnak egy folyadék-befogadó edénybe, például egy fecskendőbe, való juttatásának megkönnyítése érdekében a kapszula agyrésze a találmány értelmében tartalmazhat egy tengelyirányú, átmenő átjárót, és rögzítve lehet az alsó, harmadik kamra fenekében központosán elhelyezett, felfelé nyúló kiugráson. Az átmenő átjáró egy csatornarendszeren keresztül a fenéken folyadékvezető összeköttetésben van a harmadik kamra külső, gyűrűs rekeszével, és az agyrész felső vége tömítően kapcsolódhat egy átjáróhoz a dugattyútestben, hogy összeköttetésben legyen

64,001/BE egy hozzá rögzíthető folyadék-befogadó edénnyel.

Végül a találmány értelmében a kapszula agyrésze a harmadik kamra fenekében lévő kiugráshoz egy hüvellyel lehet rögzítve, amely mind a két végen körülveszi az agyrészt, illetve a kiugrást, és a hüvelynek lehet egy kerületi, kifelé kiugró falrésze, miáltal a gyűrűs szűrő az említett falfelület külső kerülete és a második kamra fenékfala között van rögzítve. Ezáltal a hüvely kifelé kiugró falrésze bizonyos távolságban van a harmadik kamra fenekétől, és így összeköttetést képez a külső, gyűrűs rekesz és egy tengelyirányú, a kiugrás külső oldala és a hüvely szomszédos belső oldala közötti csatorna között, amely összeköttetésben van az agyrész átmenő átjárójával. A kapott berendezés különösen egyszerű.

A jelen találmány szerinti eljárások tökéletesített folyamatokat nyújtanak egy egyedi vérkomponens vagy ezt a komponenst tartalmazó oldat elválasztására és elkülönítésére. A jelen eljárás mindazonáltal bármilyen műveletre megfelel, amely hengeres centrifugához alkalmazható, ahol egy első oldatot a centrifugálás alatt egy vagy több katalizátorral vagy reagenssel kezelünk. Más, vérkezelési műveletek, amelyeknél hasznos lehet ez az eljárás, magukba foglalják, de nem korlátozódnak a következő vérkomponensek elkülönítésére:

vérlemezkében dús plazma, vérlemezke-koncéntrátűm, krioprecipitált fibrinogén, egyéb fehérjék a plazmában, mint például trombin, fibronektin és hasonlók. A vér előnyös módon egyetlen donortól szár64.001/BE ···» 9 . ·· • « · · ·· · · • ·»·· - ·· • ·· ···«· 4 · · ·· ·· · *· ♦· mazik, még előnyösebb módon a vér ugyanattól a személytől van, akinél a vérkomponenst alkalmazni fogják.

Míg a jelen eljárásokat itt egy fibrinmonomer-oldat előállításával kapcsolatban ismertetjük, a találmány terjedelmét ez nem korlátozza, ahogyan az adott területen jártas szakemberek számára ez nyilvánvaló.

Az itt használt centrifugális keverés fogalom annak a berendezésnek a mozgására utal, amelyben az újraoldó pufferoldatot használjuk a köztitermék, úgymint a nem térhálós fibrinpolimergél leoldására a külső kamrafalakról. Az ilyen mozgatás vagy centrifugális keverés jelenthet olyan centrifugálást, amit annak biztosítása céljából végzünk, hogy a gél teljes kitett felszíne érintkezzen az újraoldó oldattal, és előnyös módon olyan centrifugálást jelent, amelyet leállás után ugyanolyan irányú forgások és/vagy leállás után ellentétes irányú forgások követnek. Jellegzetes centrifugális keverés többek között az 5-30 másodperces forgások, előnyös módon az 5-10 másodperces forgások 2000-5000 percenkénti fordulatszámon, ismételt előre/vissza ciklusokban, tetszőleges ideig. A jelen eljárásokban az 5-10 másodperces forgások előnyösek körülbelül 3000 percenkénti fordulatszámon, ismételt előre/vissza ciklusokban, 1-2 percig. Ahogy fent említettük, ezt megelőzheti egy valamivel hosszabb forgás, például 20 másodpercig vagy tovább, az oldat kezdeti eloszlatására.

Az itt használt fibrin fogalom a fibrin I-re, fibrin IIre és/vagy des ββ fibrinre utal.

A jelen berendezés, amelynek része az itt ismertetett centrifugás, gyűrűs szűrőrendszer, hatékony és pontos eljárást nyújt

64,001/BE ·♦ * · * · » ·· ♦ · • · · ···«· • · 9 · ♦ egy vagy több reagens visszanyerésére egy kívánt termékoldatból.

Ez különösen a vérelválasztási technikáknál használt, zárt, önálló, automatizált centrifugákban kritikus, ahol két vagy több reagenst sorban kell bevinni egy reakciókamrába, következésképpen el is kell távolítani. Az itt ismertetett, előnyös eljárásokban és berendezésekben, amelyekkel fibrinmonomer tartalmú oldat nyerhető, például egy újszerű fibrin tömítőszerben való alkalmazásra, a biotinilezett batroxobin sorrendi bevitele, amelyet az avidin agaróz bevitele követ a plazmát tartalmazó kamrába, az ilyen oldat előállításához nagyon korszerű eljárást nyújt.

Találmányunkat annak példaképpeni kiviteli alakjai kapcsán ismertetjük részletesebben, ábráink segítségével, amelyek közül az

1. ábra a találmány szerinti berendezés előnyös kiviteli alakjának tengelyirányú metszete, a

2. ábra a találmány szerinti berendezés második kiviteli alakja, a

3. ábra a találmány szerinti berendezés harmadik kiviteli alakj a.

A jelen berendezés egyetlen, zárt automatizálható berendezés, amely a teljes vért a kívánt vérkomponensekké, előnyös módon autológ komponensekké tudja alakítani, amelyek például fibrin tömítőszerekként használhatók.

A jelen centrifugás, gyűrűs szűrőrendszert előnyös módon a fent hivatkozott, kapcsolódó bejelentésekben taglalt berendezéssel együtt alkalmazzuk, ezért egy ilyen berendezés kapcsán ismertetjük alább. Meg kell azonban érteni, hogy bármilyen reakciókamrában alkalmazható, amelyből el kell távolítani egy vagy

64.001/BE *» j ’* · • « < « » *· 4 « • · » · »··« több reagenst.

Az 1. ábrán látható, találmány szerinti berendezés lényegében forgásszimmetrikus részekből épül fel, amelyek olyanok, hogy a berendezés az önmagában ismert, könnyű módon behelyezhető egy centrifuga-készülékbe, hogy a központi 1 forgástengely körül centrifugálható legyen. A berendezés 1. ábra szerinti,· előnyös kiviteli alakja tartalmaz egy külső 2 edényt és egy belső 3 edényt, amelyek teljesen egymásba illenek, és mindenhol szorosan érintkeznek egymással kivéve ott, ahol egy tengelyirányú, közbenső 4 csatorna van. A 4 csatornát a belső 3 edényben kialakított horony képezi. A 2, illetve 3 edény magában foglalja az 5, illetve 6 fedőrészt, amelyek meghatároznak egy központos 7 nyílást. Ezen a 7 nyíláson nyúlik át a 8 dugattyúrúd. A 7 nyílás körül a két edénynek tengelyirányban kiterjedő 9, illetve 10 szakasza van, amelyek az üreges 8 dugattyúrúdhoz közel az edények belsejétől távolodó irányba terjednek ki. A külső 2 edény egy rövid, sugárirányú 11 perem mentén érintkezik az üreges 8 dugattyúrúddal, amely perem el van látva egy 13 tömítőgyűrűt befogadó 12 bemélyedéssel.

Az 1. ábrán látható, hogy a 4 csatorna a belső és a külső edény között egész úton folytatódik a belső és a külső edény külső hengeres falaitól, az 5 és 6 fedőrészek, valamint a tengelyirányú 9 és 10 szakaszok mentén közvetlenül a 13 tömítőgyűrű alatti nyílásig a 7 nyílásban. A belső 3 edénynek a 7 nyílással szomszédos, tengelyirányú 10 szakasza úgy van méretezve, hogy van egy szűk, de szabad átjáró a 2 és 3 edény belsejébe az üreges 8 dugattyúrúd körül.

64.001/BE

A külső 2 edénynek van egy egyenlő átmérőjű hengeres része (vő. 1. ábra) . Az ábrához képest lefelé ez a rész egy kissé nagyobb átmérőjű, hengeres 14 szakaszba megy át egy rövid átmeneti 15 szakaszon keresztül, amely csonka kúp alakú belső 16 felületet képez. A belső 3 edény azon a helyen végződik, ahol a külső 2 edény átmeneti 15 szakasza a nagyobb átmérőjű, hengeres· 14 szakaszba megy át. A belső 3 edény alsó végén van egy csonka kúp alakú, külső 17 felület, amely illeszkedik a külső 2 edény belső oldalán lévő, csonka kúp alakú 16 felület alakjához. A sugárirányú 18 felületben végződő, belső 3 edénynek közvetlenül az alsó vége alatt van egy külső és egy belső gyűrűs 19, illetve 20 tárcsa. Ezek a tárcsák szorosan érintkeznek egymással eltekintve attól, hogy egymás között meghatároznak egy 21 csatornát, amely egy tengelyirányú síkban egy központos 22 nyílástól a külső 2 edény belső oldaláig terjed. Ez a 21 csatorna egy tengelyirányú csatornaszakaszon keresztül összeköttetésben van a külső 2 edény és a belső 3 edény közötti 4 csatornával. A 21 csatornát és a tengelyirányú 23 csatornaszakaszt alkalmas módon a külső 19 tárcsával szemben lévő belső 20 tárcsa- oldalában lévő horony szolgáltatja. A 19 és 20 tárcsák ferdén vannak kialakítva úgy, hogy lényegében csonka kúp alakú belső és külső felületeket alkotnak, és így a központos 22 nyílás felé lejtenek (vö. 1. ábra) . Az 1. ábrán az is látható, hogy a belső 20 tárcsának van egy sugárirányú 24 felülete, amely érintkezik a belső 3 edényen lévő, szomszédos, sugárirányú 18 felülettel. A belső 20 tárcsa sugárirányú 24 felülete egy 25 bemélyedéssel van ellátva a 26 tömítőgyűrű befogadására.

64.001/BE • ·

A 19 és 20 tárcsákat a külső edényt lefelé szorító 27 köpeny tartja meg a sugárirányú 18 felülethez illeszkedő helyzetükben. Ennek a 27 köpenynek egy része a külső 2 edény belső oldalához szorosan illeszkedő, kerületi 28 hüvely, amely a külső 2 edényhez megfelelő módon van rögzítve, például a 28 hüvely külső oldalán lévő 29 borda és a külső 2 edény belső oldalán lévő, megfelelő, kerületi 30 horony közötti bepattanó kapcsolódással. Tömítő kapcsolatot a kerületi 31a bemélyedésben lévő 31 tömítőgyűrű létesít a külső 19 tárcsa külső kerületén. A 27 köpenynek van továbbá egy viszonylag vékony 32 fala, amely az 1. ábra szerinti helyzetben lévő berendezés alsó fenekét képezi. Ez a 32 fal a külső 19 tárcsával és a belső 20 tárcsával lényegében párhuzamosan terjed oly módon, hogy a 32 fal a 28 hüvely belső oldalától a 19 és 20 tárcsákkal szomszédos szakaszon és lefelé a külső 2 edény alsó 33 peremével lényegében egy szinten lévő szakasz felé terjed. A viszonylag vékony 32 fal megerősítése céljából sugárirányú 34 merevítőbordák vannak szabályos helyközönként, amelyek közül az 1. ábrán csak egy látható. A 34 merevítőborda részben a 32 falon kívül elhelyezett bordarésszel·, részben a 32 falon belül elhelyezett 35 bordarésszel van kialakítva (vő. 1. ábra) . A 35 bordarész úgy van kialakítva, hogy érintkezik a 19 tárcsa fenékoldalával, és ennek eredményeképpen segít megbízható helyzetben megtartani a 19 és 20 tárcsákat.

A külső 19 tárcsa és a 27 köpeny közé egy 36 elválasztóelem van bepréselve. A 36 elválasztóelem magában foglal egy központos 37 csőszakaszt. A 37 csőszakasz egy 38 csapszegre van szerelve, amely tengelyirányban befelé áll ki, és egy darabban van kiala64,001/BE ···:.··.: ·· ·..· • ···· _ φ

·..··..···:· ··.’·· kítva a 27 köpeny 32 falával. A 37 csőszakasz egy darabban van kialakítva egy kerületi 39 faltárcsával, amely a 37 csőszakasztól oly módon terjed kifelé, hogy kezdetben kissé lefelé, a 27 köpeny 32 fala felé lejt, majd van egy rövid tengelyirányú szakasza, hogy aztán a 27 köpeny 32 falával lényegében párhuzamosan folytatódjon. A 39 faltárcsa egy rövid, sugárirányú 40 szegélyben végződik, amely felfekszik a 41 vállon, amely a 27 köpenyen lévő 35 bordarészeken van. A 39 faltárcsa külső 40 szegélye és a külső 19 tárcsa fenékoldala közé egy gyűrűs 42 szűrőegység van bepréselve. A gyűrűs 42 szűrőegység érintkezik egy lényegében sugárirányban kialakított 43 felülettel a külső 19 tárcsa szomszédos külső oldalán.

A 36 elválasztóelemben való stabilitás biztosítása végett további sugárirányú 44 merevítőbordák vannak kialakítva a 37 csőszakasz.é§. a 39 faltárcsa között.

A kapcsolódó találmány szerinti reagens ellátó rendszer tartalmaz egy 45 kapszulát, amely a 36 elválasztóelem 37 csőszakaszának a 27 köpennyel szemben lévő végében van rögzítve. Az ilyen kapszula alkalmas az anyagok szele-ktív beengedésére a második 75 kamrába. A 45 kapszula egy hosszúkás 46 csőszakasz, amely egy darabban van kialakítva egy sugárirányú 47 gyűrűvel, és két további sugárirányú 48 és 49 gyűrűt tart. A 48 és 49 gyűrűk ékelődő sajtoló illesztéssel vannak rögzítve a rögzített 47 gyűrű megfelelő oldalán. A mozgó 48 és 49 gyűrűk a rögzített 47 gyűrűtől megfelelő távolságban kerületi 50, illetve 51 vállak segítségével vannak elhelyezve a 46 csőszakaszon. A 47, 48 és 49 gyűrűk külső átmérője ugyanakkora, és megfelelő peremükön egy

64.001/BE • · ··

kerületi, mozgathatóan szerelt 52 hüvelyt tartanak.

Ahogyan az 1. ábrán látható, az alsó 49 gyűrű érintkezik a 36 elválasztóelem 37 csőszakaszának felső végével, ami meghatározza a 45 kapszula tengelyirányú helyzetét. Ezt a helyzetet továbbá oly módon is meghatározzuk, hogy amikor a kapszula mozgatható 52 hüvelye te-ngelyirányban mozog, akkor alsó vége révén a központos 22 nyílásban tömítő kapcsolatba kerül a külső 19 tárcsán lévő legbelső 53 éllel. Az 52 hüvelynek ebben a helyzetében még mindig van összeköttetés az 52 hüvelyt körülvevő, belső 20 tárcsán belüli tér, valamint a külső 19 tárcsa és a belső 20 tárcsa közötti 21 csatornához vezető beömlő nyílás között. A mozgatható 52 hüvely tengelyirányú hossza akkora, hogy a külső tárcsával a kapcsolódás az 52 hüvely felső vége és a rögzített 47 gyűrű szétkapcsolódása előtt következik be az 52 hüvely tengelyirányban lefelé való mozgásakor (vö. 1. ábra) . Az 52 hüvely belső átmérője is illesztve van a 36 elválasztóelem részét képező 39 faltárcsa tengelyirányú részének külső átmérőjéhez oly módon, hogy az 52 hüvelynek a 27 köpeny felé tartó, folytonos lefelé mozgása következtében az 52 hüvely mereven kapcsolódik a 36 elválasztóelemmel, amikor az 52 hüvely és a külső 19 tárcsa szétkapcsolódik. A 36 elválasztóelem tengelyirányú részének hossza megegyezik az 52 hüvely tengelyirányú hosszával is oly módon, hogy az 52 hüvelyt a legalsó helyzetben a 36 elválasztóelem lényegében teljesen befogadja.

Ahogyan az 1. ábrán látható, az üreges 8 dugattyúrúd magában foglal egy kerületi 55 dugattyút a külső 2 edényen és a belső 3 edényen belül. Az 55 dugattyú egy 56 tömítőgyűrűn át tömí64.001/BE .? ·..· ··:· ·’·'·· tőén kapcsolódik a belső 3 edény belső oldalával.

Egy 57 Luer-csatlakozó van kialakítva az üreges 8 dugattyúrúdon belül egy szokásos 58 fecskendő befogadására, amelynek van egy az 58 fecskendő tartalmára ható, dugattyús működésű 59 dugója. Az 57 csatlakozó lényegében csőszakaszként van kialakítva, amely egy csonka kúp alakú 60 szakaszon keresztül összeköttetésben van az 55 dugattyúban lévő központos 61 nyílással. A csőszakaszként kialakított 57 csatlakozó el van látva egy sugárirányban befelé álló 62 bordával, hogy az 58 fecskendőt elhagyó folyadékot eltérítse a tengelyirányú haladástól és ezáltal a 45 kapszulán belül a 46 csőszakasz köré, alulra irányítsa. A 46 csőszakasz hossza és méretei akkorák, hogy tömítően tud kapcsolódni az 57 csatlakozóval az üreges 8 dugattyúrúd belsejében, amikor az 55 dugattyú a legalsó helyzetében, a 27 köpenyhez közel van. A fenti tömítő kapcsolat elősegítése céljából az 57 csatlakozó belső oldala folyamatosan csökkenő átmérővel van kialakítva az 55 dugattyú felé eső végen.

Az 55 dugattyú központos 61 nyílása körül a dugattyúval egy darabban, egy tengelyirányban kiálló 63 -szoknya van kialakítva. A 63 szoknya átmérője és hossza akkora, hogy az 55 dugattyú megfelelő mozgatásával aktiválni tudja a 45 kapszula mozgatható 52 hüvelyének fenti elmozdulását az említett helyzetbe, amelyben az 52 hüvely tömítő kapcsolatba kerül a 19 és 20 tárcsákon átvezető, központos 22 nyílás 53 élével, amit a 36 elválasztóelem kapcsolódása követ.

Egy rugalmas, gyűrűs 64 fésűs tömítés van rögzítve felül, az üreges dugattyú körül a 2 és 3 edényeken belül (vö. 1. ábra).

64,001/BE • · · · ·

A 64 fésűs tömítés megakadályozza a folyadék nem kívánatos folyását a 2 és 3 edények belsejéből a 4 csatornához, de lehetővé teszi a folyadékáramlást, amikor az 55 dugattyúra erő hat.

Ahogyan az 1. ábrán felül látható, a külső, illetve belső 2, illetve 3 edényben lévő 66 nyíláson keresztül kapcsolat van egy 65 tömlőhöz. Ez a kapcsolat ismert, ezért részletesebben nem ismertetjük, de ha szükséges, a 65 tömlőhöz vezető kapcsolat megszakítható. Ezenkívül szokásos módon van egy megfelelő szűrővel ellátott, légtelenítő nyílás, amelyet ezért nem ábrázolunk és részletesebben nem is ismertetünk.

A 36 elválasztóelem és a 27 köpeny közötti területről, valamint a 36 elválasztóelem 37 csőszakaszának belsejében és a 45 kapszula 46 csőszakaszának belsejében az egész úton felfelé egy átjáró van. A 69 átjáró lehetővé teszi a folyadékmozgást a fenti területről az 58 fecskendőig, amikor a 46 csőszakasz csatlakozik az 57 csatlakozóhoz a 8 dugattyúrúd belsejében. A 69 átjáró a 27 köpenyben lévő 38 csapszeg legalsó szakaszán van. A 38 csapszeg egy lapos, tengelyirányú felülettel és lényegében kör alakú keresztmetszettel van kialakítva.- Ennek eredményeképpen egy tér alakul ki a 38 csapszeg és a 37 csőszakasz belső oldalának szomszédos szakasza között. Közvetlenül a 38 csapszeg felett van egy 67 terület, ahol a 36 elválasztóelemnek valamivel kisebb a belső átmérője. Ily módon egy kis 68 szűrőt lehet helyezni közvetlenül a 67 terület fölé (vő. 1. ábra), miáltal a folyadéknak át kell folynia a 68 szűrőn, mielőtt belép a 45 kapszula 46 csőszakaszába.

Az ismertetett berendezés tartalmaz egy első, gyűrűs 70

64,001/BE • · ·· kamrát, amelyet belül egy hengeres, belső 71 falat képező, üreges 8 dugattyúrúd, kívül a külső 2 edény és a belső 3 edény által képezett, hengeres, külső 72 fal határol. Az 1. ábrán látható, szokásos használati helyzetben a gyűrűs 70 kamrát felül a külső 2 edény és a belső 3 edény 5, illetve 6 fedőrésze által képezett, felső 73- fal határolja. A gyűrűs 70 kamrát alul az 55 dugattyú által képezett 74 fenékfal határolja. Az 55 dugattyú alatt lévő második 75 kamrát kívül ugyanaz a hengeres külső 72 fal határolja, mint az első 70 kamrát. A második 75 kamrát alul a külső 2 edény és a belső 3 edény által képezett második 76 fenékfal határolja. A 45 kapszula központosán van elhelyezve a második 75 kamra belsejében. A második 76 fenékfal alatt egy harmadik 77 kamra van, amelyet a 36 elválasztóelem és a gyűrűs 42 szűrőegység határol. Ezenkívül a harmadik 77 kamra a külső 19 tárcsában és a belső 20 tárcsában lévő központos 22 nyílás által képezett átjárón keresztül összeköttetésben van a második 75 kamrával. Végül van egy negyedik 78 kamra a 36 elválasztóelem alatt, amelyet alul a 27 köpeny 32 fala, továbbá a 27 köpeny 28 hüvelyének részei és a külső 19 tárcsa fenékoldala határolják.

Ahogyan fent ismertettük, az ismertetett berendezés elsősorban egy komponens, mint például vérből származó fibrinmonomer elválasztására alkalmas, és ebből a célból a második 75 kamra vagy előnyös módon a 45 kapszula felső 80 kamrája előre meg van töltve egy alkalmas enzimmel, például batroxobinnal. Amint az EP-PS 592 242 számú európai szabadalmi bejelentésből ismert, bármilyen trombinszerű enzim alkalmazható. Ezek az enzimek magukban foglalják magát a trombint vagy más hasonló aktivitású

64.001/BE ···· • · anyagokat, úgymint az Ancrod, Acutin, Venyyme, Asperase,

Botropase, Crotabase, Flavorxobin, Gabonásé és az előnyben részesített Batroxobin. A batroxobin kémiailag kötve lehet biotinhoz. A biotin olyan szintetikus anyag, amely lehetővé teszi a batroxobin szokásosan ismert módon való befogását avidin-agaróz keverékben lévő avidin segítségével. Ennek megfelelően a 45 kapszula legalsó 81 kamrájában avidin-agaróz van. A biotin-batroxobin keveréket is és az avidin-agaróz keveréket is viszonylag könnyű betölteni a 45 kapszulában a megfelelő 80, illetve 81 kamrába, mielőtt a 45 kapszulát behelyezzük a berendezésbe.

Végül van egy 58 fecskendő, amely ecetsavval hígított acetátból készített, 4-es pH-jú puffért tartalmaz. Az 58 fecskendőt a fibrin I befogadására használjuk.

Más, az adott szakterületen ismert puffer is használható.

Az újraoldó pufferanyag bármilyen savas pufferoldat lehet, előnyös módon olyan, amelynek pH-ja 1 és 5 között van. Alkalmas példák: ecetsav, borostyánkősav, glükuronsav, ciszteinsav, krotonsav, itakonsav, glükonsav, hangyasav, aszparaginsav, adipinsav és ezek közül bármelyiknek a sói. Előnyös a borostyánkősav, az aszparaginsav, az adipinsav és az ecetsav sói, például a nátrium-acetát. Az oldódás megkönnyítése semleges pH-η egy kaotrop anyaggal is végezhető. Alkalmas anyagok például a karbamid, a nátrium-bromid, a guanidin-hidrokiorid, a KSCN, a káiium-jodid és a kálium-bromid. Az ilyen savas puffer vagy az ilyen kaotrop anyag koncentrációit és mennyiségeit az EP-PS 592 242 számú európai szabadalmi bejelentésben ismertetik.

A vérbevezetés alatt vagy közvetlenül utána a 8 dugattyúru64.001/BE dat olyan mélyen toljuk a berendezés belsejébe, hogy a 45 kapszula mozgatható 52 hüvelye lefelé mozog tömítő kapcsolódásba a fenékfalon átmenő átjáróban a második 77 kamráig. Ennek eredményeképpen egyidejűleg bemenet nyílik a biotin-batroxobin keverékhez a 45 kapszula legfelső 80 kamrájában.

Ha a berendezés használatra kész·, egy nem ábrázolt tűn és a 65 tömlőn keresztül szokásos módon vérmintát táplálunk az első kamrába, amely vérminta szintén szokásos módon össze van keverve egy antikoagulánssal. A vérnek a 65 tömlőn és a 66 nyíláson át az első 70 kamrába való betáplálása alatt a kamrából szokásos módon eltávolítjuk a levegőt. A vér betáplálása után eltávolítjuk a 65 tömlőt, és a 66 nyílást tömítően lezárjuk. Ezután a berendezést a vérrel behelyezzük a centrifugába, amely többek között segít a különböző részek tömítő összenyomásában. A centrifuga a berendezést az 1 forgástengely körül forgatja. A centrifugálás eredményeképpen a vér az első 70 kamrában plazmafrakcióvá válik szét. A plazmafrakció sugárirányban kiülepszik a vér visszamaradó részében, amely a vörösvértesteket és a fehérvérsejteket tartalmazza. Ahogyan az EP-PS ·· 592 242 számú európai szabadalmi iratban ismertetik, a vérlemezkék bármelyik frakcióban lehetnek - igény szerint - a centrifugálás sebességének és idejének változtatásával.

Amikor a plazma és a vér visszamaradó része közötti határfelület stabilizálódott, azaz amikor az elválasztás teljes, a 8 dugattyúrúd, következésképpen az 55 dugattyú kihúzása révén elkezd csökkenni az első 70 kamra térfogata. Ennek eredményeképpen először egy lehetséges belső légréteg halad át a 4 és 21 csator64.001/BE • « * » » ·*·♦ nákon a második 7.5 kamrába, és az 55 dugattyú további mozgása maga után vonja, hogy a plazma is a második 75 kamrába jut. Az dugattyú mozgását akkor állítjuk le, amikor a teljes plazmafázis a második 75 kamrába kényszerült, azaz amikor a plazma és a vér visszamaradó része közötti határfelület elérte az első 70 kamra belső 71 falát.

A második 75 kamrában a plazmáirakció érintkezésbe kerül a batroxobin enzimmel, és ennek eredményeként a fibrinmonomer, amely azonnal nem térhálós fibrinpolimerré polimerizálódik, felszabadul a plazmafrakcióból. Ez a folyamat a berendezés folyamatos centrifugálása közben zajlik le azzal az eredménnyel, hogy a fibrinpolimer hatékonyan elválik a plazmafrakció visszamaradó részétől, amely fibrinpolimer a biotin-batroxobin keverék reakciója révén képződik, és viszkózus rétegként kiülepszik a hengeres, külső 72 falon. Amikor ez az elválasztás végbement, leállítjuk a centrifugálást, miáltal a plazmafrakció visszamaradó, viszonylag folyós része könnyen visszanyomható az első 70 kamrába úgy, hogy az 55 dugattyút először felemeljük a levegőnek az első 70 kamrából a második 75 kamrába való bejuttatására, majd lenyomjuk. A folyadékszállítás viszonylag könnyen és gyorsan végrehajtható, mielőtt a fibrinpolimert tartalmazó, viszkózus réteg eléri a 21 csatornához vezető nyílást. Annak megakadályozása érdekében, hogy a viszkózus réteg túl gyorsan érje el a 21 csatorna bemenetét, választható módon további lépéseket lehet tenni, például felfelé álló 82 fogakból álló gyűrű alkalmazásával, amelyet szaggatott vonallal jelöltünk a 76 fenékfalon. Ez a centrifugálási/folyadékelvezető eljárást - szükség szerint

64.001/BE

kétszer vagy többször el lehet végezni, hogy annyi plazmafolyadékot nyerjünk ki a fibrinpolimerből, amennyi csak lehetséges.

Amikor a plazmáirakció visszamaradó részét már kihajtottuk a második 75 kamrából, a 45 kapszula mozgatható 52 hüvelyét tovább mozgatjuk lefelé oly módon, hogy bemeneti lehetőség legyen a legalsó 81 kamrába. Ugyanekkor vagy az 52 hüvely utóbbi mozgatásával összekötve teljesen lenyomjuk az 58 fecskendő 59 dugóját egy kívülről működtetett orsóval oly módon, hogy a 4-es pH-jú puffer átjut a második 75 kamrába. Ez végezhető a centrifugális keverés indítása közben. A 4-es pH-jú puffer hozzáadása révén a fibrinpolimer abban oldódik, és az avidin-agaróz keverék jelenléte a 45 kapszulán belül az alsó 81 kamrában azt eredményezi, hogy a biotin-batroxobin keverék a szokásos módon az avidin révén kötődik. Ha folytatjuk az 55 dugattyú mozgatását, akkor a mozgatható 52 hüvely a 45 kapszulán kapcsolódik a 36 elválasztóelemmel, és az 52 hüvely és a 76 fenékfal elválik, amelynek eredményeként szabad bemenet nyílik a harmadik 77 kamrához. Ennek eredményeképpen a második 75 kamra tartalma szabadon lefolyhat a harmadik 77 kamrába. Az újraoldást előnyös módon a centrifugális keverés alatt végezzük, amely magában foglalja a centrifugálást és előre/vissza keverési mozgások leállításiindítási sorozatát.

A centrifugálás folytatása következtében a fibrinmonomeroldat kiválhat a harmadik 77 kamrában a gyűrűs 42 szűrőegységen keresztül, amely visszatartja az agaróz viszonylag nagy részecskéit és a hozzá a biotin-avidin befogórendszer révén kötött batroxobint. Amikor a fibrinmonomer-oldat a fenti centrifugálás

64.001/BE eredményeként bejutott a legalsó,. negyedik 78 kamrába, leállítjuk a centrifugálást, és a fibrin I oldatot könnyen odajuttatjuk az 58 fecskendőhöz úgy, hogy az 59 dugót újból visszahúzzuk, a 45 kapszula 46 csőszakaszának legfelső vége kapcsolódik a csőszakaszként kialakított 57 csatlakozóval, amely kapcsolatot hoz létre az 58 fecskendővel.

Mivel a fibrinpolimert a második 75 kamrában folyamatos centrifugálás közben elválasztjuk a plazmafrakciótól, és mivel a fibrinmonomer-oldatot centrifugálással elválasztjuk a harmadik 77 kamrában, ezért a kérdéses vérmintából viszonylag nagy kitermeléssel nyerhető fibrin I.

A találmányt egy előnyös kiviteli alakra vonatkozóan ismertettük, de számos módosítás is végrehajtható a találmány terjedelmétől való eltérés nélkül.

A 2. ábra példákat mutat néhány ilyen módosításra. A 2. ábrán a találmány második kiviteli alakja látható, amely többékevésbé megegyezik a találmány 1. ábra szerinti kiviteli alakjával. A 2. ábra szerinti kiviteli alaknak van egy első 90 kamrája és egy második 91 kamrája, amelyeket a 92 dugattyú választ el. A 92 dugattyúnak van egy üreges 93 dugattyúrúdja, amely belül határolja az első 90 kamrát. A két kamrát kívül egy lényegében cső alakú 94 tagnak az a szakasza határolja, amely hengeres külső 95 falat képez a két 90 és 91 kamrának. Az első 90 kamrát felül a 85 fedőfal határolja, amelyet viszont egy 86 gyűrűvel a cső alakú 94 taghoz rögzített fedél képez. A 96 gyűrű be van csavarva a cső alakú 94 tagba. A 85 fedőfal meghatároz egy átmenő nyílást az üreges 93 dugattyúrúd számára. A második 91 kamra alját a cső

64.001/BE • · alakú 94. tagban lévő, kerületi belső gallér által képezett 96 fenékfal· határolja. A második 91 kamra felé eső oldalon a cső alakú 94 tagnak van egy csonka kúp alakú 97 felülete, amely a 92 dugattyútól a második 91 kamra középpontja felé lejt. A 96 fenékfal meghatároz egy központos átmenő 98 átjárót egy harmadik kamrához. A harmadik 99 kamrát egy 100 elválasztóelem és egy gyűrűs 101 szűrőegység határolja. Az utóbbi a 96 fenékfal és a

100 elválasztóelem közé van beillesztve, és egy negyedik, gyűrűs 102 kamrához vezet. A negyedik 102 kamrát a cső alakú 94 taghoz menetesen rögzített csésze alakú 103 köpeny határolja. A 103 köpeny közbenső 113 bordákon keresztül központos helyzetben tartja a 100 elválasztóelemet a cső alakú 94 tagon belül, miközben préseli a gyűrűs 101 szűrőegységet.

Egy 105 kapszula van rögzítve a 100 elválasztóelemen egy központosán és felfelé kiálló 104 csapszegen. A 105 kapszulának van egy cső alakú 106 szakasza tárcsa alakú 107, 108 gyűrűkkel, amelyek lazán kapcsolódnak a 106 csőszakaszhoz, és kamrákat határolnak a BB, illetve AA enzimek számára egy mozgathatóan szerelt 110 hüvely segítségével. A tárcsa alakú 107, 108 gyűrűk a kívánt távolságokban a 106 csőszakaszon vállak segítségével vannak rögzítve. A vállakat a 106 csőszakasz külső kerülete képezi, amelynek átmérője alulról felfelé csökken.

Az első 90 kamra tetejétől a második 91 kamra fenekéig két átmenő 115 és 116 csatorna terjed. Ezeket a csatornákat a rögzített 117, illetve 118 csőszakaszok képezik, amelyek a berendezés forgástengelyével párhuzamosak, és a végeken a 85 fedőfalban és a 96 fenékfalban lévő, összekötött nyílásokban vannak rögzítve.

64.001/BE • ·

A csatorna-kapcsolatot a csőszakaszok, illetve a kamrák között megfelelő furatok és a bennük rögzített dugók biztosítják. A 117 és 118 csőszakaszok átnyúlnak a 92 dugattyúban lévő, megfelelő nyílásokon. A szivárgás megakadályozására mindenhol tömítőgyűrűk vannak.

A 92 dugattyúban egy 120 csatlakozó van központosán rögzítve az üreges 93 dugattyúrúdon belüli 121 fecskendőhöz és a 105 kapszula 106 csőszakaszához való csatlakozásra. A 120 csatlakozó egy 122 szoknyát tart, amely benyúlik a második 91 kamrába, és hatása van a 105 kapszulán lévő mozgatható 110 hüvelyre. Ahogyan az ábrán látható, a 110 hüvely külső átmérője illeszkedik a harmadik 99 kamrához lefelé vezető, átmenő 98 átjáró átmérőjéhez oly módon, hogy a 110 hüvelyt a 96 fenékfal vezeti és bármilyen helyzetben, következésképpen egy legalsó helyzetben is megtartja, amelyben a 110 hüvely nem kapcsolódik a 105 kapszulában lévő, legalsó, tárcsa alakú 109 gyűrűvel, és lehetővé teszi a folyadék átfolyását a második 91 kamrából lefelé a harmadik 99 kamrába. A negyedik 102 kamrából egy 123 csatorna terjed ki, amely központosán felfelé halad a 100 elválasztóelemen lévő 104 csapszegen át és tovább felfelé a 105 kapszula 106 csőszakaszán át, miáltal abból a folyadék be tud lépni a 121 fecskendőbe.

A 2. ábra szerinti berendezést teljesen ugyanolyan módon használjuk, mint az 1. ábra szerinti berendezést, ennek megfelelően természetesen itt is vannak eszközök a vér betáplálására szolgáló tömlőnek a berendezéshez való csatlakoztatására.

A különböző berendezések részét képező, ismertetett alkatrészek könnyen előállíthatok alkalmas műanyagokból fröccsöntés64.001/BE sel, és ezért a kérdéses berendezések is viszonylag olcsók és egyszeri használatra alkalmasak.

A találmányt a berendezés előnyös kiviteli alakjaira vonatkozóan ismertettük. A találmány szerinti eljárás azonban laboratóriumban is könnyen lefolytatható aszeptikus körülmények között egy pohárban, amely fedéllel zárható. Plazmát és enzimet töltünk a pohárba, keveréssel és az azt követő centrifugálással a nem térhálós fibrinpolimer kiválik a pohár fenekén vagy falán, ahogy fentebb ismertettük. A visszamaradó plazmafrakció eltávolítása után a nem térhálós fibrinpolimert oldószer hozzáadásával és centrifugális keveréssel újraoldjuk, ahogy ezt is ismertettük fentebb.

Példa

140 ml teljes vért és 20 ml nátrium-nitrát antikoagulánst bevittünk a fent ismertetett berendezés első 70 kamrájába. A keveréket 2 percig körülbelül 6000 percenkénti fordulatszámon centrifugáltuk a plazma és vérsejtek elválasztása céljából. Miközben a centrifugálást folytattuk az elválasztás fenntartása végett, a dugattyút felemeltük, hogy a -legbelső fázist, azaz a plazmát bejuttassuk a második 75 kamrába. Hozzávetőleg 60 ml plazma került át. Ezt 30 egység biotinilezett batroxobinnal kezeltük, amelyet a 45 kapszula felső 80 kamráján keresztül vittünk a második 75 kamrába, ahogy korábban ismertettük. A plazmát és a batroxobint kis sebességen, például 2000-3000 percenkénti fordulatszámon összekevertük, majd 9 percig 9000 percenkénti fordulatszámon centrifugáltuk.

A nem térhálós fibrinpolimer-gél vékony gélrétegként kicsa64.001/BE • · · ·

pódott a hengeres falakon, és a forgatást abbahagytuk. A visszamaradó plazmafolyadékot (szérumot) azután visszajuttattuk az első 70 kamrába. Ezt két, további 1 perces centrifugálás követte 9000 percenkénti fordulatszámon a lehető legtöbb, gélen belüli szérum eltávolítása céljából. Minden egyes 1 perces centrifugálást követően a szérumfelesleget az első 70 kamrába juttattuk.

Ezután 24 mM kalcium-kloridot tartalmazó, 3,5 ml mennyiségű

0,2 M nátrium-acetátból álló pufferoidatot (pH 4,0) az 58 fecskendővel vittünk a második 75 kamrába. Ezúttal 5-10 másodperces forgásokból álló centrifugális keverést végeztünk körülbelül

3000 percenkénti fordulatszámon. Minden egyes keverést ismételt előre/vissza ciklusokban 2 percig végeztünk a fibrinpolimer-gél újraoldása és fibrinmonomer-tartalmú oldat előállítása céljából.

Az így elkészített oldathoz avidin-agarózt adtunk hozzá a 45 kapszula alsó 71 kamráján át. Ezt további, 5-10 másodperces forgásokból álló centrifugális keverés követte körülbelül 3000 percenkénti fordulatszámon. Minden egyes keverést ismételt előre/vissza ciklusokban 5 percig végeztünk. A kapott oldat fibrinmonomert, valamint avidin-agaróz : biotin-batroxobin komplexet tartalmazott.

Ezt az oldatot bevittük a harmadik 77 kamrába, és 20 mm-es, gyűrűs Porex szűrőn 1 percig 9000 percenkénti fordulatszámon centrifugálisan szűrtük. A kapott fibrinmonomer-oldatot az 58 fecskendőbe gyűjtöttük, ahogy korábban ismertettük. Az oldat körülbelül 25 mg/ml fibrinmonomert tartalmazott.

Az így képezett fibrinmonomer-oldatot (ami ebben az esetben fibrin I) újrapolimerizáltuk fibrin tömítőszerré úgy, hogy egy

64.001/BE • · ilyen tömítőszerben hiányos helyen koadminisztrációt végeztünk

0,75 M nátrium-karbonát/bikarbonát pufferral 5:1 fibrin I : puffer arányban.

64.001/BE

Claims (6)

1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK

   1. Eljárás egy komponens, mint például fibrin I elválasztására vérből· centrifugálással, amely eljárás során alvadásgátlóval (anticlotter) kevert vért táplálunk egy berendezés első gyűrűs kamrájába, amely gyűrűs kamrát egy külső, hengeres fal, egy belső, hengeres fal, egy fedőfal és egy fenékfal határol, ahol a külső és belső fal koaxiális egy közös tengely körül, és a fedőfalat vagy fenékfalat az első kamrán belül mozgatható dugattyútest képezi, és amely eljárás során továbbá a berendezést a közös tengely körül centrifugáljuk, ezután a dugattyútest hatása közben a keletkező folyékony frakciót átvisszük egy második kamrába, amelyet egy a közös tengellyel koaxiális, külső, hengeres fal határol, miáltal a második kamrában lévő folyékony frakció elválása a folyamatos centrifugálás és az elválasztást elősegítő, megfelelő keverékek hozzáadása, valamint a nem használható résznek az első kamrába való visszajuttatása révén folytatódik, és miáltal a folyékony frakciónak a második kamrában visszamaradó részét egy szűrőn egy f o-lyadék-bef ogadó edénybe juttatjuk tetszés szerint egy oldószer hozzáadása után, azzal jellemezve, hogy a folyékony frakciónak a második kamrában viszszamaradó részét - mielőtt a folyadék-befogadó edényhez juttatjuk - a többi kamrával koaxiálisán elhelyezett, harmadik kamrába juttatjuk, és az ily módon a harmadik kamrába került folyadékot a centrifugálás alatt áthajtjuk egy gyűrűs szűrőn, hogy belépjen egy külső, gyűrűs rekeszbe, amely összeköttetésben van a folyadék-befogadó edénnyel.

   64.001/BE • · · ·
2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás végrehajtására szolgáló berendezés, amely tartalmaz egy első, gyűrűs kamrát (70), amelyet egy külső, hengeres fal (72), egy belső, hengeres fal (72), egy fedőfal (73) és egy fenékfal (74) határol, ahol a külső és belső fal koncentrikusan helyezkedik el a forgástengely körül (1), és a fedőfalat (73) vagy a fenékfalat (74) egy dugattyútest képezi, amely mozgatható az első kamrán belül, és tartalmaz továbbá egy az első kamrával egy első vezetéken át összeköttetésben lévő második kamrát (75), amelyet egy a forgástengely (1) körül koncentrikusan elhelyezkedő, külső hengeres fal, az első kamra fenékfala (74) és egy másik fenékfal (76) határol, ahol a második kamra úgy van beállítva, hogy a centrifugálás alatt az első kamra alatt helyezkedjen el, és ahol a berendezés tartalmaz még vér-betápláló eszközöket (65 tömlő, 66 nyílás) a vérnek az első kamrába való betáplálására és keverék-betápláló eszközt (45 kapszula) az elválasztást elősegítő keverékek betáplálására, valamint befogadó eszközt (58 fecskendő) legalább egy folyadékbefogadó edénnyel való összeköttetésre, amely befogadó eszköz a második kamrával egy második vezetéken át van kapcsolatban, azzal jellemezve, hogy a második vezeték a második kamrával egy azzal koaxiálisán elhelyezett, harmadik kamrán (77) át van öszszekötetésben, amely tartalmaz egy a második kamrához vezető, kívülről nyitható átjárót (22 nyílás), és a harmadik kamrának van egy belső rekesze és egy külső rekesze, amelyeket egy sugárirányú, kerületi átjáró köt össze, amely átjáróban egy gyűrűs szűrő (42 szűrőegység) van elhelyezve az elválasztás elősegítésére használt, nem kívánt alkotórészeket tartalmazó folyadék át64,001/BE folyásának megakadályozására.
3. 3. A 2. igénypont szerinti berendezés, azzal jellemezve, hogy a második kamra (75) és a harmadik kamra (77) közötti átjáró (22 nyílás) a két kamrával koaxiálisán van elhelyezve, és egy kapszula (45) zárja le, amelyben van egy a második kamrában koaxiálisán rögzített, központi agyrész, és amely több, egymástól bizonyos távolságban elhelyezett, sugárirányú tárcsát (47, 48 és

   49 gyűrűk) tart, amely tárcsák válaszfalakat képeznek a kapszulában lévő rekeszekben (80, 81 kamrák), továbbá külső kerületi körvonaluk lényegében azonos; a rekeszeket kívül egy tömítően és mozgathatóan szerelt, hüvely alakú test (52 hüvely) zárja le, amelynek bármilyen helyzetében a külső oldala tömítően felfekszik a tengelyirányú átjáró (22 nyílás) oldalfalára (53 él); a kapszula legalsó válaszfalat képező tárcsája szabad átjárást enged a folyadéknak a második kamrából (75) a harmadik kamrába (77) a hüvely alakú test tengelyirányú mozgása révén a dugattyú (55) hatása közben azáltal, hogy a legalsó válaszfallal való kapcsolódása megszűnik.
4. 4. A 3. igénypont szerinti berendezés, azzal jellemezve, hogy a dugattyútest magában foglal egy a kapszula (45) hüvely alakú testével (52 hüvely) koaxiális, lefelé terjedő szoknyát (63), amely összekapcsolódik a hüvely alakú testtel a dugattyútest lefelé nyomásakor, hogy ezáltal megfelelő időpontokban a kapszulában lévő, megfelelő rekeszek sorban kinyíljanak, és végül kinyíljon a folyadék-átjáró a második kamrából (75) a harmadik kamrába (77) .
5. 5. A 3. vagy a 4. igénypont szerinti berendezés, azzal jel64,001/BE ·« lemezve, hogy a kapszula (45) agyrésze tartalmaz egy tengelyirányú, átmenő átjárót, és rögzítve lehet az alsó, harmadik kamra (77) fenekében központosán elhelyezett, felfelé nyúló kiugráson, amely átmenő átjáró egy csatornarendszeren keresztül a fenéken folyadékvezető összeköttetésben van a harmadik kamra külső, gyűrűs rekeszével, és az agyrész felső vége tömítően kapcsolódik egy átjáróhoz a dugattyútestben, hogy összeköttetésben legyen egy hozzá rögzíthető folyadék-befogadó edénnyel.
6. 6. Az 5. igénypont szerinti berendezés, azzal jellemezve, hogy a kapszula (45) agyrésze a harmadik kamra (77) fenekében lévő kiugráshoz egy hüvellyel lehet rögzítve, amely mind a két végen körülveszi az agyrészt, illetve a kiugrást, és a hüvelynek van egy kerületi, kifelé kiugró falrésze, miáltal a gyűrűs szűrő az említett falfelület külső kerülete és a második kamra fenékfala között van rögzítve, miáltal a hüvely kifelé kiugró falrésze bizonyos távolságban van a harmadik kamra fenekétől, és így összeköttetést képez a külső, gyűrűs rekesz és egy tengelyirányú, a kiugrás külső oldala és a hüvely szomszédos belső oldala közötti csatorna között, amely összeköttetésben van az agyrész átmenő átjárójával.

   64.001/BE •64:öO1/BE

   1/3 <20

   -*R|9 μ»'Λ· -