UA133573U - Спосіб мікрометоду визначення рістстимулюючої активності поживних середовищ для культивації клітин - Google Patents
Спосіб мікрометоду визначення рістстимулюючої активності поживних середовищ для культивації клітин Download PDFInfo
- Publication number
- UA133573U UA133573U UAU201811463U UAU201811463U UA133573U UA 133573 U UA133573 U UA 133573U UA U201811463 U UAU201811463 U UA U201811463U UA U201811463 U UAU201811463 U UA U201811463U UA 133573 U UA133573 U UA 133573U
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- cells
- nutrient media
- cell
- cultivation
- determining
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 title description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 22
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims description 6
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 abstract description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Спосіб мікрометоду визначення рістстимулюючої активності поживних середовищ для культивації клітин включає отримання суспензії клітин, визначення їх оптимальної концентрації, внесення поживних середовищ, що перевіряються, в лунки 96-лункових полістиролових плашок, титрування концентрату клітин, інкубацію упродовж 7 днів, облік формування моношару клітин та висновок по якості поживних середовищ по їх впливу на рістстимулюючу активність клітин, що дає змогу провести ефективну та якісну оцінку поживних середовищ.
Description
Корисна модель належить до галузі біотехнології та ветеринарної вірусології, а саме культивування культур клітин, які необхідні як біологічний матеріал для репродукції вірусів, вивчення їх біологічних властивостей, ідентифікації, типізування та лабораторної діагностики захворювань тварин.
Враховуючи значну роль вірусологічних досліджень у встановленні остаточного діагнозу при тому чи іншому інфекційному захворюванні, визначення рістстимулюючої активності поживних середовищ є досить важливим етапом при культивації клітин, що ставить даний спосіб в ряд вагомих внесків у цій галузі ветеринарної біотехнології.
В доступній нам інформації ми не знайшли повідомлень з визначення рістстимулюючої активності поживних середовищ для культивації клітин. Є лише загальноприйнятий метод перевірки придатності поживності середовищ (199, Ігла, гідролізатів) та сироватки великої рогатої худоби при культивації клітин, що проводиться шляхом порівняння з відомими якісними зразками середовищ та сироваток.
Придатність середовищ та сироваток оцінюють методом виключення, використовуючи різні схеми та комбінації, що дають можливість провести оцінку їх поживності. Так середовище з 10 95 сироваткою ВРХ повинно забезпечувати утворення моношару клітин в матрацах упродовж 4-5 днів при посівній дозі 400-500 тис. клітин/см" зі зміною середовища через добу культивування. Якщо поживне середовище не відповідає даним вимогам, то воно є непридатним для використання при культивації клітин. Ми пропонуємо використання способу, який дає можливість визначити якісну характеристику поживного середовища, а не лише придатності або непридатності його для культивації клітин.
В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб, який надасть можливість визначити якісну оцінку поживності середовищ для культивації клітин.
Поставлена задача вирішується тим, що спосіб мікрометоду визначення рістстимулюючої активності поживних середовищ для культивації клітин включає отримання суспензії клітин, визначення їх оптимальної концентрації, внесення поживних середовищ, що перевіряються, в лунки 96-лункових полістиролових плашок, титрування концентрату клітин, інкубацію упродовж 7 днів, облік формування моношару клітин та висновок по якості поживних середовищ по їх впливу на рістстимулюючу активность клітин.
Спосіб здійснюють таким чином:
В технологічний процес встановлення рістстимулюючої активності поживних середовищ та сироватки крові входить отримання суспензії клітин. Так з культивованої тридобової культури клітин в скляних матрацах на поживному середовищі, в склад якого входить 45 956 середовище 199, 45 95 середовище Ігла та 10 95 сироватка крові великої рогатої худоби при температурі -37 С зі сформованим моношаром зливають поживне середовище і одночасно заливають диспергуючим розчином версена і витримують в термостаті при температурі 437 "С упродовж 15-20 хвилин до появи перших ознак відокремлення клітин від поверхні скла. Після чого версен обережно зливають з матраців і заливають таким об'ємом розчину Ерла без індикатора фенолового червоного, який би лише покрив моношар клітин, що становить 10 95 від об'єму поживного середовища, що використовується при культивації культури клітин. При струшуванні матраців, клітини відокремлюються від поверхні скла і переходять в розчин Ерла. З матраців відбирають проби суспензій клітин в стерильних умовах і переносять в кювети з робочою довжиною 5 мм, та визначають оптичну густину проб проти контролю (контроль - дистильована вода) за довжини хвилі 450 нм. Після встановлення оптичної густини проб проводять визначення концентрації клітин в пробах по калібрувальному графіку, де по осі абсцис відмічено різний рівень оптичної густини проб, а по осі ординат відповідно оптичній густині проб - концентрація клітин в 1 см3. Після визначення концентрації клітин та отримання посівної дози 400-500 тис. клітин/см3 шляхом розведення чи концентрування, суспензію клітин переносять у 9б-лункові полістиролові плашки. В кожний ряд планшета вносять в об'ємі 0,1 см? живильні середовища, що перевіряються на рістстимулюючу активність клітин. Потім в перші лунки додавали по 0,1 см суміші клітин. Після перемішування піпетуванням 0,1 см суміші переносили у наступні лунки. Таким чином отримували розведення клітин в титрах 1:2-1:256.
Планшети поміщали в пристрій для культивації клітин (патент України Мо 67895, МПК
С201М33/00, Ме и201109473. Заявлено 28.07.2011; Опубл. 12.03.2012; Бюл. Мо 5), а потім в термостат. Витримували в термостаті при температурі «37 "С впродовж 6-7 днів та періодично вели спостереження за ростом клітин.
Після 7-днів інкубації проводили облік. Так формування моношару клітин при розведенні клітин в титрах 1:64-1:1128 вказувало на досить хорошу рістстимулюючу активність поживних середовищ для культивації клітин, а титр 1:16-1:32 - середню, 1:2-1:8 - низьку.
Експериментальні дослідження, проведені в лабораторії дослідної станції епізоотології ІВМ
НААН показали, що розроблений спосіб мікрометоду визначення рістстимулюючої активності поживних середовищ для культивації клітин є досить ефективним при оцінці якості середовищ та не є трудомістким. Користуючись ним, можна проводити масові дослідження із значною економією часу та реагентів. Запропонований спосіб знайде застосування у біотехнологічних лабораторіях ветеринарної медицини та науково-дослідних установах.
Claims (1)
- ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб мікрометоду визначення рістстимулюючої активності поживних середовищ для культивації клітин, що включає отримання суспензії клітин, визначення їх оптимальної концентрації, внесення поживних середовищ, що перевіряються, в лунки 96б-лункових полістиролових плашок, титрування концентрату клітин, інкубацію упродовж 7 днів, облік формування моношару клітин та висновок по якості поживних середовищ по їх впливу на рістстимулюючу активність клітин, що дає змогу провести ефективну та якісну оцінку поживних середовищ.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU201811463U UA133573U (uk) | 2018-11-22 | 2018-11-22 | Спосіб мікрометоду визначення рістстимулюючої активності поживних середовищ для культивації клітин |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU201811463U UA133573U (uk) | 2018-11-22 | 2018-11-22 | Спосіб мікрометоду визначення рістстимулюючої активності поживних середовищ для культивації клітин |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA133573U true UA133573U (uk) | 2019-04-10 |
Family
ID=66043197
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAU201811463U UA133573U (uk) | 2018-11-22 | 2018-11-22 | Спосіб мікрометоду визначення рістстимулюючої активності поживних середовищ для культивації клітин |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA133573U (uk) |
-
2018
- 2018-11-22 UA UAU201811463U patent/UA133573U/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rodwell et al. | Methods for direct and indirect measurement of mycoplasma growth | |
| van Dooremalen et al. | Organoid-derived epithelial monolayer: a clinically relevant in vitro model for intestinal barrier function | |
| Templeton et al. | Methods for culturing human femur tissue explants to study breast cancer cell colonization of the metastatic niche | |
| UA133573U (uk) | Спосіб мікрометоду визначення рістстимулюючої активності поживних середовищ для культивації клітин | |
| US7833780B2 (en) | Viral diagnostic method and well for use in same | |
| CN113355386B (zh) | 一种应用三原核受精卵检测体外受精环境质量的方法 | |
| CN206545021U (zh) | 一种斑马鱼胚胎急性毒性实验的试剂盒 | |
| Maggi et al. | Bovine papillomavirus type 1 infection in an equine congenital papilloma | |
| CN105316282B (zh) | 一种达氏鲟精原细胞培养液及应用 | |
| UA123097U (uk) | Спосіб мікрометоду визначення придатності поживних середовищ для культивації клітин | |
| Harbort et al. | A gnotobiotic growth assay for Arabidopsis root microbiota reconstitution under iron limitation | |
| RU2595423C2 (ru) | СПОСОБ ОЦЕНКИ АДГЕЗИВНЫХ СВОЙСТВ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ Vibrio cholerae El Tor И Vibrio cholerae O139 НА КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЕ HuTu-80 | |
| ES2966679T3 (es) | Métodos y composiciones para mejorar la detección de microorganismos | |
| Fujimine-Sato et al. | Exploration of the cytoplasmic function of abnormally fertilized embryos via novel pronuclear-stage cytoplasmic transfer | |
| RU2827170C1 (ru) | Способ культивирования клеток гортани плодов свиньи для вирусологии | |
| Fallon et al. | Standardization of a colorimetric method to quantify growth and metabolic activity of Wolbachia-infected mosquito cells | |
| CN102676629A (zh) | 一种水产养殖中细菌耐药性的检测方法 | |
| Upadhyay | Testing viral infections | |
| RU1632037C (ru) | Способ определения ростовых свойств сыворотки крупного рогатого скота | |
| Ikram et al. | Seroprevalence and Risk factor of Brucella Abortus in Cattle (Indigenous and crossbred) in District Layyah | |
| KR20110086649A (ko) | 단백질 칩을 이용한 살아있는 수생병원성균의 분광학적 검출법 | |
| CN112175898A (zh) | 一种非标记法分离小鼠输卵管内膜干细胞的方法 | |
| Vágó et al. | Isolation and Culturing of Primary Murine Chondroprogenitor Cells: A Mammalian Model of Chondrogenesis | |
| Cêtre-Sossah | Isolation of Rift Valley Fever Virus from Field Specimens Using Cell Culture Approaches | |
| AU2006206051B2 (en) | Virus recovery medium, use thereof and viral diagnostic kit including same |