CN113355386B - 一种应用三原核受精卵检测体外受精环境质量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种应用三原核受精卵检测体外受精环境质量的方法，在待测体外受精操作环境中和已预先检测质量合格的体外受精操作环境中培养三原核受精卵，检测培养情况，对比两者差异，判断待测体外受精操作环境的质量。该方法操作简单，可靠性高。

Description

一种应用三原核受精卵检测体外受精环境质量的方法
技术领域
本发明涉及一种应用三原核受精卵检测体外受精环境质量的方法，属于体外受精技术领域。
背景技术
体外受精(IVF)是将精子或卵子取出体外，经过处理或培养成胚胎后，再植入母体内的一种辅助生殖技术。在体内，胚胎是处于一个低氧、无光、恒温和恒湿的微环境中，并受到母体保护的环境中发育。但是体外受精操作是将胚胎置于体外环境的操作，胚胎应对温度、湿度、PH及渗透压等变化时削弱了自身的发育潜能。因此，对体外受精操作环境的要求必须严格，尤其是新建实验室和新进设备的操作环境。新建IVF实验室在和新进设备在投入使用前必须进行环境质量检测。目前，体外受精操作环境的质量检测一般采用鼠胚实验。但是，毕竟小鼠和人类胚胎属于不同物种，小鼠胚胎对环境的敏感性和人胚胎对环境的敏感性也不尽相同，将小鼠胚胎用于对人胚胎的环境的检测的可靠性受到广泛的质疑；同时，鼠胚实验不仅需要饲养小鼠，并且需要进行促排，过程繁琐，尤其是对于没有动物房的生殖中心来说更为艰难。
三原核受精卵是在辅助生殖过程中可能出现两条精子进入一个卵细胞中而形成的异常受精卵，这种受精卵在胚胎挑选时就要被剔除掉而废弃掉。三原核受精卵来源于人类且具有分裂能力，具有用于人类IVF操作环境的质量检测的潜能。但是，现有技术中还没有成熟的采用三原核受精卵检测IVF操作环境的质量的方法。
发明内容
本发明提供了一种应用三原核受精卵检测体外受精环境质量的方法，可以有效解决上述问题。
本发明是这样实现的：
一种应用三原核受精卵检测体外受精环境质量的方法，在待测体外受精操作环境中和已预先检测质量合格的体外受精操作环境中培养三原核受精卵，检测培养情况，对比两者差异，判断待测体外受精操作环境的质量。
作为进一步改进的，所述培养情况的检测指标包括卵裂率、I级碎片胚胎率、退化率及发育阻滞率。
作为进一步改进的，所述体外受精操作环境为体外受精实验室或体外受精培养箱。
作为进一步改进的，所述培养三原核受精卵的培养条件为：培养基为卵裂期培养液，温度36.5-37.5℃，通入气体为89v/v％N2、6％v/vCO2、5％v/vO2。
本发明的有益效果是：
本发明的方法是评估体外受精操作环境对人类胚胎质量的影响，三原核胚胎属于人类胚胎，与人类胚胎具有相同的发育过程及环境敏感性，相比于小鼠胚胎，更能直接反应环境质量。
本发明的方法采用了三原核受精卵，三原核受精卵采集方便，克服了传统鼠胚实验的复杂操作。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1是本发明实施例1提供的新旧IVF实验室中三原核受精卵的培养发育情况图。
具体实施方式
为使本发明实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施方式中的附图，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
在本发明的描述中，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
本发明实施例提供一种应用三原核受精卵检测体外受精环境质量的方法，在待测体外受精操作环境中和已预先检测质量合格的体外受精操作环境中培养三原核受精卵，检测培养情况，对比两者差异，判断待测体外受精操作环境的质量。
作为进一步改进的，所述培养情况的检测指标包括卵裂率、I级碎片胚胎率、退化率及发育阻滞率。在辅助生殖过程中，就是将胚胎置于体外环境中培养，所以体外的环境质量与胚胎碎片、阻滞、退化是最直接相关的，选择这些指标，最能反应体外受精操作环境的质量。
作为进一步改进的，所述体外受精操作环境为体外受精实验室或体外受精培养箱。
作为进一步改进的，所述培养三原核受精卵的培养条件为：培养基卵裂期培养液
实施例1
病例选择及分组
按照以下标准筛选新旧实验室IVF-ET治疗患者(各位患者均已签署知情同意书)。入选条件：(1)女方年龄22～35岁；(2)IVF周期；(3)授精16-18小时出现的三原核受精卵；(4)同批胚胎可正常卵裂；(5)无遗传病史。共筛选得到634个三原核受精卵作为分析对象。其中164个培养于在旧实验室旧培养箱(已经过验证，适合胚胎培养)，168个胚胎是培养于新实验室旧培养箱(环境质量待检测)，150个是新实验室开启2个月内的新培养箱(环境质量待检测)，152个培养于新实验室开启2个月后的新培养箱(环境质量待检测)。
三原核受精卵的采集方法
辅助生殖体外操作过程中，女方当天取出卵子，男方取出精液，在体外完成受精，次日进行观察是否受精以及是否正常受精，对于正常受精(二倍体)则继续培养，对于三原核受精卵(三倍体)则进行废弃处理。
环境指标的检测
利用Environment Test Meter(AdcancedSense，英国)检测IVF实验室环境的温度、湿度和VOC浓度；PM2.5测定使用Handheld3016 IAQ检测仪。检测时间点为进行胚胎操作的时间，检测三次取平均值。两组的环境温度、湿度、PM2.5的差异无统计学意义，见表1。说明，新实验的环境已处为较为稳定理想的状态。
表1环境指标的检测
Figure BDA0003097830230000051
三原核受精卵的培养条件为：培养基为卵裂期培养液G-1(Vitrolife)，温度37℃，通入气体为89v/v％N2、6％v/vCO2、5％v/vO2。
如图1所示，三原核受精卵(图A,D)前期发育可以继续发育到第三天卵裂期(图B，E)，过程中也可能会不产生碎片(图F)或者产生碎片(图C)。
新旧IVF实验室中三原核受精卵的培养发育情况
新建胚胎实验室在投入使用前已通过环境指标的检测和鼠胚生物学检测，各项指标均合格。收集搬迁前旧实验室组旧培养箱的三原核受精卵164例和搬迁后新实验室组旧培养箱的三原核受精卵168例的培养三天情况，统计两组的卵裂率，I级碎片胚胎率，退化率，发育阻滞率。实验结果见表2。结果表明，新旧实验室组的卵裂率，I级碎片胚胎率，退化率，发育阻滞率的差异没有统计学意义。这说明新实验室的环境已符合胚胎培养的环境，这个结果与前期环境检测结果一致。
卵裂率＝卵裂数/受精卵总数；I级碎片胚胎率＝I级碎片胚胎数/受精卵总数；退化率＝退化胚胎数/受精卵总数；发育阻滞率＝发育阻滞胚胎数/受精卵总数。
表2新旧IVF实验室中三原核受精卵的培养发育情况
Figure BDA0003097830230000061
Figure BDA0003097830230000071
新旧培养箱中三原核受精卵的培养发育情况
收集搬迁后新实验室启用2个月内的新进培养箱的三原核受精卵150例为新培养箱前期组和152个培养于新实验室开启2个月后的新培养箱为新培养箱后期组的培养三天情况，统计两组的卵裂率，I级碎片胚胎率，退化率，发育阻滞率。实验结果见表3。结果表明，与新实验室旧培养箱168例相比，新培养箱前期组的差异显著，新培养箱后期组的差异不显著。这说明，新实验室启用2个月内的新进培养箱不适合胚胎培养，2个月后的培养箱适用于胚胎培养。
表3新旧培养箱中三原核受精卵的培养发育情况
Figure BDA0003097830230000072
Figure BDA0003097830230000081
注：a表示与旧培养箱组对比
三原核受精卵的形成机制不清，可能与加精子浓度过高、卵子成熟度异常、皮质颗粒异常相关。三倍体是致死性的，极少数存活并分娩的胎儿多伴有严重先天畸形。临床上不移植三原核受精卵来源的胚胎，通常将其丢弃不用。因此，采用三原核受精卵进行研究也不违背伦理。同时，三原核受精卵可以像双原核受精卵同样具备分裂能力，这为人类胚胎早期阶段的染色体研究提供了很好的材料来源。
本发明尝试使用人三原核受精卵进行新进设备的环境质量检测，结果表明，新设备使用的前2个月的三原核受精卵的I级碎片胚胎率，退化率，发育阻滞率变化显著，而使用2个月后的培养箱适用于胚胎培养。因此，人的三原核受精卵可应用于新进设备的质量检测。这种方法可以称为人三原核受精卵生物检测法。这种方法同样可以适用于培养液、耗材的检测。
综上所述，三原核受精卵同样可适用于IVF操作环境的质量检测。
以上所述仅为本发明的优选实施方式而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种应用三原核受精卵检测体外受精环境质量的方法，其特征在于，在待测体外受精操作环境中和已预先检测质量合格的体外受精操作环境中培养三原核受精卵，检测培养情况，对比两者差异，判断待测体外受精操作环境的质量；所述三原核受精卵取自年龄22~35岁的女性；所述培养三原核受精卵的培养条件为：培养基为卵裂期培养液，温度36.5-37.5℃，通入气体为89v/v% N2、6% v/vCO2、5% v/vO2。
2.根据权利要求1所述应用三原核受精卵检测体外受精环境质量的方法，其特征在于，所述培养情况的检测指标包括卵裂率、I级碎片胚胎率、退化率及发育阻滞率。
3.根据权利要求1所述应用三原核受精卵检测体外受精环境质量的方法，其特征在于，所述体外受精操作环境为体外受精实验室或体外受精培养箱。
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