UA131106U - Спосіб одержання поверхнево-активних речовин - Google Patents

Спосіб одержання поверхнево-активних речовин Download PDF

Info

Publication number
UA131106U
UA131106U UAU201806317U UAU201806317U UA131106U UA 131106 U UA131106 U UA 131106U UA U201806317 U UAU201806317 U UA U201806317U UA U201806317 U UAU201806317 U UA U201806317U UA 131106 U UA131106 U UA 131106U
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
medium
surfactants
volume fraction
concentration
cultivation
Prior art date
Application number
UAU201806317U
Other languages
English (en)
Inventor
Тетяна Павлівна Пирог
Лілія Вікторівна Никитюк
Вероніка Олександрівна Макієнко
Світлана Ігорівна Антонюк
Original Assignee
Національний Університет Харчових Технологій
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Національний Університет Харчових Технологій filed Critical Національний Університет Харчових Технологій
Priority to UAU201806317U priority Critical patent/UA131106U/uk
Publication of UA131106U publication Critical patent/UA131106U/uk

Links

Landscapes

  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Спосіб одержання поверхнево-активних речовин включає культивування штаму Nocardia vaccinii IMB В-7405 у рідкому середовищі, що містить мінеральні солі, як джерело вуглецевого живлення технічний гліцерин (відходи виробництва біодизелю) з внесенням суспензії живих або інактивованих клітин Escherichia coli ІЕМ-1. Концентрація технічного гліцерину у середовищі для біосинтезу поверхнево-активних речовин становить 2,4-2,6 % (об'ємна частка), а для одержання інокуляту використовують очищений гліцерин об'ємною часткою 0,7-0,9 %.

Description

Корисна модель належить до біотехнологічної промисловості і стосується одержання мікробних поверхнево-активних речовин (ПАР), які можуть бути використані як антимікробні агенти у харчовій промисловості, медицині та сільському господарстві.
Відомий спосіб одержання ПАР за допомогою штаму Рзєейдотопав 5р. РБ-17 (Пат. 10467
ОА, МПК ОС 21 М 1/02. Штам Реепдотопаз в5р. 5Р-17 - продуцент позаклітинних біоПАР і біополімеру / Шульга О.М., Карпенко О.В., Елісєєв С.А., Щеглова Р.А., Вільданова-Марцишин
Р.І-; Опубл. 25.12.96, Бюл. Мо 4.
Його недоліком є використання складного мінерального середовища з високим вмістом солей (12 г/л) для культивування продуцента, наявність у його складі факторів росту, а також невисокий вихід ПАР від субстрату.
Найбільш близьким до запропонованого технічного рішення є спосіб одержання ПАР за допомогою Мосагайїйа массіпі ІМВ 8-7405 (Патент України на винахід Мо 105975 "Спосіб одержання поверхнево-активних речовин" / Пирог Т.П., Мащенко О.Ю., Покора Х.А., Гриценко
Н.А. Опубл. 10.07.2014, Бюл. Мо 13), який включає культивування штаму Мосагаїа массіпії ІМВ В- 17405 у рідкому середовищі з технічним гліцерином в концентрації, що становить 3,9-4,1 Фо.
Недоліком цього способу є недостатньо висока антимікробна активність синтезованих ПАР.
В основу корисної моделі поставлено задачу створення нового способу одержання ПАР, який підвищує антимікробну активність поверхнево-активних речовин.
Поставлена задача вирішується тим, що спосіб одержання поверхнево-активних речовин включає культивування штаму Мосагаїйа массіпії ІМВ В-7405 у рідкому середовищі, що містить мінеральні солі, як джерело вуглецевого живлення технічний гліцерин (відходи виробництва біодизелю) з внесенням суспензії живих або інактивованих клітин ЕвбспПегіспіа соїї ІЕМ-1. Згідно корисної моделі концентрація технічного гліцерину у середовищі для біосинтезу ПАР становить 2,4-2,6 95 (об'ємна частка), а для одержання інокуляту використовують очищений гліцерин об'ємною часткою - 0,7-0,9 9.
Причинно-наслідковий зв'язок між запропонованими ознаками і очікуваним технічним результатом полягає в наступному. Використання для біосинтезу ПАР технічного гліцерину об'ємною часткою 2,4-2,6 95, а для одержання інокуляту очищеного гліцерину об'ємною часткою 0,7-0,9 95 дає змогу знизити мінімальні інгібуючі концентрації (МІК) синтезованих ПАР у 4-16
Зо разів (до 4-24 мкг/мл).
Спосіб здійснюється наступним чином. Культивування М. массіпії ІМВ В-7405 здійснюють у рідкому мінеральному середовищі такого складу (г/лух МамМмОз - 0,5, Ма50О-7НгО - 011,
Сасі»2Нго - 01, КНеРО» - 01, Реб5О4:7НгО - 0,001, дріжджовий автолізат - 0,5 95 (об'ємна частка); рН 6,8-7,0. Як джерело вуглецю використовують технічний гліцерин (відходи виробництва біодизелю, Комсомольський біопаливний завод, Полтавська обл.) у концентрації 2,5 95 (об'ємна частка). Як посівний матеріал використовують культуру в експоненційній фазі, вирощену у середовищі наведеного складу з 0,8 96 очищеного гліцерину. Інокулят, в якому чисельність бактерій становить 107-105 кл/мл, вносять у кількості 10 95 від об'єму середовища.
Е. соїї ІЕМ-1, вирощену на м'ясо-пептонному агаризованому середовищі упродовж 14 год., суспендують у 100 мл стерильної водопровідної води і вносять 2,5 мл суспензії на 100 мл середовища культивування продуцента ПАР. Інактивовані стерилізацією в автоклаві при 131 С упродовж 1 год. клітини вносять з розрахунку 10 мл суспензії на 100 мл поживного середовища.
Культивування бактерій здійснюють в колбах об'ємом 750 мл із 100 мл середовища на качалці (320 об/хв) при 28 "С упродовж 120 год.
Використання нового способу дає змогу знизити мінімальні інгібуючі концентрації синтезованих ПАР у 4-16 разів (до 4-24 мкг/мл).
Приклад 1. Антимікробні властивості ПАР М. массіпії ІМВ В-7405, синтезованих за внесення у середовище з технічним гліцерином живих та інактивованих клітин Е. соїї ІЕМ-1
Культивування штаму ІМВ В-7405 здійснюють у рідкому мінеральному середовищі такого складу (г/л): МаМОз - 0,5, МазО:7НгО - 01, СасСі»-2НгО - 0,1, КНгРО» - 0,1, Ге5О:7НгО - 0,001, дріжджовий автолізат - 0,5 95 (об'ємна частка); рН 6,8-7,0. Як джерело вуглецю використовують технічний гліцерин (відходи виробництва біодизелю, Комсомольський біопаливний завод,
Полтавська обл.) у концентрації 2,5 95 (об'ємна частка). Як посівний матеріал використовують культуру в експоненційній фазі, вирощену у середовищі наведеного складу з 0,8 95 очищеного гліцерину. Інокулят, в якому чисельність бактерій становить 105-105 кл/мл, вносять у кількості 1095 від об'єму середовища. Е. соїї ІЕМ-17, вирощену на м'ясо-пептонному агаризованому середовищі упродовж 14 год., суспендують у 100 мл стерильної водопровідної води і вносять 2,5 мл суспензії на 100 мл середовища культивування продуцента ПАР. Інактивовані стерилізацією в автоклаві при 131 "С упродовж 1 год. клітини вносять з розрахунку 10 мл бо суспензії на 100 мл поживного середовища.
Культивування бактерій здійснюють в колбах об'ємом 750 мл із 100 мл середовища на качалці (320 об/хв) при 28 "С упродовж 120 год.
Позаклітинні поверхнево-активні речовини виділяють так. Культуральну рідину центрифугують (5000 4, 20 хв) для відділення біомаси. 25 мл супернатанту переносять у циліндричну ділильну воронку об'ємом 100 мл, додають 5 мл 1М НС, воронку закривають пришліфованим корком і струшують упродовж З хв, далі додають ще 4 мл 1М НСІ й 16 мл суміші хлороформу й метанолу (2:11) й струшують упродовж 5 хв. Отриману після екстракції суміш залишають у воронці для розділення фаз, після чого нижню фракцію збирають (органічний екстракт 1), а водну фазу ще раз екстрагують. При повторній екстракції у водну фазу додають 9 мл 1М НС й 16 мл суміші хлороформу з метанолом (2:11) й проводять екстракцію ліпідів протягом 5 хв. Після розділення фаз збирають нижню фракцію, одержують органічний екстракт 2. На третьому етапі до водної фази додають 25 мл суміші хлороформу з метанолом (2:71) й проводять екстракцію як описано вище, при цьому одержують органічний екстракт 3. Екстракти 1-3 об'єднують і упарюють на роторному випарнику ИР-ІМ2 (Росія) при температурі 507 й абсолютному тиску 0,4 атм до постійної маси.
Антимікробні властивості поверхнево-активних речовин аналізують за показником мінімальної інгібуючої концентрації (МІК). Визначення мінімальної інгібуючої концентрації здійснюють методом двократних серійних розведень у м'ясо-пептонному бульйоні (МПБ). У стерильних умовах у 10 пробірок вносять по 1 мл середовища, у першу додають 1 мл розчину
ПАР певної концентрації, після чого перемішують, відбирають 1 мл і переносять у наступну пробірку. Аналогічно проводять розведення для наступних дев'яти пробірок. З останньої пробірки відбирають 1 мл. Таким чином, кінцевий об'єм у кожній пробірці становить 1 мл (МПБ і розчин ПАР), а концентрація ПАР у кожній наступній пробірці знижується у 2 рази. Як контроль використовують 1 мл МПБ без додавання розчину ПАР. Далі у кожну з пробірок вносять по 0,1 мл суспензії тест-культур (105-106 КУО/мл), та перемішують. Пробірки інкубують впродовж 24 год. при 28-30 "С.
Результати оцінюють візуально за помутнінням середовища: (ж) - пробірки, в яких спостерігають помутніння середовища (ріст тест-культури), (-) - помутніння немає (ріст відсутній). Мінімальну інгібуючу концентрацію розчину ПАР визначають як концентрацію ПАР в
Зо першій пробірці, де ріст відсутній.
Як тест-культури під час визначення антимікробних властивостей ПАР використовують штами бактерій ЕзсНегіспіа соїї ІЕМ-1, В. вибій5 БТ-2, Рзепдотопах 5р. МІ-2, Ргоївив миїЇдагів
ПА-12, етарпуіїососси5 ацтеие БМСОС-1 з колекції живих культур кафедри біотехнології і мікробіології Національного університету харчових технологій.
Значення мінімальних інгібуючих концентрацій ПАР, синтезованих за наявності у середовищі клітин бактерії-індуктора, наведено у табл. 1. Ці дані свідчать, що ПАР, утворювані за внесення у середовище культивування продуцента ПАР суспензії як живих, так і інактивованих клітин Е. соїї ІЕМ-1, проявляють вищу антимікробну активність, ніж синтезовані в аналогічних умовах без індуктора.
Таблиця 1
Мінімальні інгібуючі концентрації поверхнево-активних речовин
М. массіпії ІМВ В-7405, синтезованих за наявності клітин Е. соїї ІЄМ-1 клітини індуктора
І сої ПЕМ-1 | зиБрій5 БТ-2 в5р. МІ-2 уцідагів ПА-12 | ашеив БМО-1
Живі 17171178 11116 Ї711178 17111116 | 4 0
Чнактивовані///////7771710 120 Її 778 7171110 11ло
Контроль (без дир 010910 |ю
Примітка: Під час визначення МІК похибка не перевищувала 5 95.
Приклад 2. Вплив концентрації технічного гліцерину у середовищі на антимікробні властивостей ПАР, синтезованих М. массіпії ІВ В-7405 за наявності Е. соїї ІЕМ-1
Культивування М. массіпії ІВ В-7405 здійснюють у середовищі наведеного вище складу (див. приклад 1). Як джерело вуглецю використовують технічний гліцерин (відходи виробництва біодизелю, Комсомольський біопаливний завод, Полтавська обл.) у концентрації 2,3-2,7 95
(об'ємна частка). Як посівний матеріал використовують культуру в експоненційній фазі, вирощену у середовищі наведеного складу з 0,8 96 очищеного гліцерину. Інокулят, в якому чисельність бактерій становить 107-105 кл/мл, вносять у кількості 10 95 від об'єму середовища.
Е. соїї ІЕМ-1, вирощену на м'ясо-пептонному агаризованому середовищі упродовж 14 год., суспендують у 100 мл стерильної водопровідної води і вносять 2,5 мл суспензії на 100 мл середовища культивування продуцента ПАР. Культивування бактерій здійснюють в колбах об'ємом 750 мл із 100 мл середовища на качалці (320 об/хв.) при 28 "С упродовж 120 год.
Виділення ПАР і визначення мінімальних інгібуючих концентрацій здійснюють як описано у прикладі 1.
Дані, наведені у табл. 2, показують, що під час культивування М. массіпії ІМВ В-7405 за наявності клітин Е. соїї ІЕМ-1 у середовищі з 2,4-2,6 95 т синтезуються ПАР з найвищою антимікробною активністю.
Таблиця 2
Антимікробна активність ПАР М. массіпії ІМВ В-7405, синтезованих за наявності клітин
Е. сої ТЕМ-1 у середовищі з різною концентрацією технічного гліцерину
Концентрація о сої ЕМ-1 | вибій5 БТ-2 вр. МІ-2 муцідагів ПА-12 | ашеив БМО-1 77177123. | 16 | 32 | 16 | з | 8 77777125 Щ (| 8 | 16 | 8 | 16 | 4 71717126. | 12 | 24 | 12 | 24 | 6 1271 | 118 | 36 | 18 | з | 9
Примітка: Під час визначення МІК похибка не перевищувала 5 95.
Приклад 3. Вплив концентрації очищеного гліцерину у середовищі для одержання інокуляту на антимікробну активність ПАР, синтезованих М. массіпії ІМВ В-7405 за наявності Е. соїї ІЕМ-1
Культивування М. массіпі ІМВ В-7405 здійснюють у середовищі наведеного вище складу (див. приклад 1). Як джерело вуглецю використовують технічний гліцерин у концентрації 2,5 90 (об'ємна частка). Як посівний матеріал використовують культуру в експоненційній фазі, вирощену у середовищі наведеного складу з 0,6-1,0 965 очищеного субстрату. Інокулят, в якому чисельність бактерій становить 107-105 кл/мл, вносять у кількості 10 95 від об'єму середовища.
Е. соїї ІЕМ-1, вирощену на м'ясо-пептонному агаризованому середовищі упродовж 14 год., суспендують у 100 мл стерильної водопровідної води і вносять 2,5 мл суспензії на 100 мл середовища культивування продуцента ПАР.
Культивування бактерій здійснюють в колбах об'ємом 750 мл із 100 мл середовища на качалці (320 об/хв) при 28 "С упродовж 120 год.
Виділення ПАР і визначення мінімальних інгібуючих концентрацій здійснюють як описано у прикладі 1.
Як видно з даних, наведених у табл. 3, у разі використання посівного матеріалу, вирощеного
Зо у середовищі з 0,7-0,9 9ю очищеного гліцерину, синтезовані за наявності живих клітин Е. соїї
ІЕМ-1 поверхнево-активні речовини характеризуються найвищою антимікробною активністю.
Таблиця З
Антимікробна активність ПАР М. массіпії ІМВ В-7405, синтезованих за наявності клітин
Е. соїї ІЕМ-1, залежно від концентрації очищеного гліцерину у середовищі для одержання інокуляту
Концентрація МІК (мкг/мл) щодо гліцерину, 90 со ЕМ-1 | вибійв БТ-2 5р. МІ-2 мУцЇдагіз ПА-12 | ашеив БМО-1 77771706 | 15 | 30 | 15 | 30 | 75 20711112 | 124 | 12 11 24 | 6 7775708 6юЮюЮщЩщБГ | 8 | 16 | 8 | 16 | 4 7777.7609 | 10 | 20 | 0 | 20 | 5 11770777 71716 | 732 | 16 | з | 88
Примітка: Під час визначення МІК похибка не перевищувала 5 95.
Приклад 4. Порівняння антимікробної активності ПАР, синтезованих за наявності Е. соїї ІЕМ- 1 у різних умовах культивування М. массіпії ІМВ В-7405
Культивування М. массіпі ІМВ В-7405 здійснюють у середовищі наведеного вище складу (див. приклад 1). Як джерело вуглецю використовують технічний гліцерин у концентрації 2,5 90 (об'ємна частка). Як посівний матеріал використовують культуру в експоненційній фазі, вирощену у середовищі наведеного складу з 0,7 9о очищеного гліцерину.
Як джерело вуглецю та енергії використовують також технічний гліцерин у концентрації 4 Фо (об'ємна частка). Як посівний матеріал використовують культуру з експоненційної фази росту (48 год.), вирощену на середовищі наведеного складу з 0,5 9о технічного гліцерину. Інокулят, в якому чисельність бактерій становить 105-105 кл/мл, вносять у кількості 10 95 від об'єму середовища.
Культивування бактерій здійснюють в колбах об'ємом 750 мл із 100 мл середовища на качалці (320 об/хв) при 28 "С упродовж 120 год.
Виділення ПАР і визначення мінімальних інгібуючих концентрацій здійснюють як описано у прикладі 1.
Таблиця 4
Антимікробні властивості ПАР, синтезованих в різних умовах культивування
М. массіпії ІМВ В-7405
МІК (мкг/мл) щодо в ! Ргоївив
Умови культивування ЕзсПегіспіа, /Васіив5 Рзепдотопав миїдагів ПА- еарпуіососсив сої ТЕМ-1 | зибіів5 БТ-2 5р. МІ-2 9 12 агеи5 БМО-1
Звюзнннння 55 | 85151 способу рішення
Примітка: Під час визначення МІК похибка не перевищувала 5 95.
Дані, наведені у табл. 4, засвідчують, що використання нового способу дає змогу знизити мінімальні інгібуючі концентрації синтезованих ПАР порівняно з найбільш близького рішення у 4-16 разів.
Отже, використання для біосинтезу ПАР технічного гліцерину об'ємною часткою 2,4-2,6 о, а для одержання інокуляту очищеного гліцерину об'ємною часткою 0,7-0,9 95 дає змогу знизити мінімальні інгібуючі концентрації (МІК) синтезованих ПАР у 4-16 разів (до 4-24 мкг/мл).

Claims (1)

  1. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб одержання поверхнево-активних речовин, що включає культивування штаму Мосагаїа массіпії ІМВ В-7405 у рідкому середовищі, що містить мінеральні солі, як джерело вуглецевого живлення технічний гліцерин (відходи виробництва біодизелю) з внесенням суспензії живих або інактивованих клітин ЕзсеПегіспіа соїї ІЕМ-1, який відрізняється тим, що концентрація технічного гліцерину у середовищі для біосинтезу поверхнево-активних речовин становить 2,4-2,6 95 (об'ємна частка), а для одержання інокуляту використовують очищений гліцерин об'ємною часткою 0,7-0,9 95.
UAU201806317U 2018-06-06 2018-06-06 Спосіб одержання поверхнево-активних речовин UA131106U (uk)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAU201806317U UA131106U (uk) 2018-06-06 2018-06-06 Спосіб одержання поверхнево-активних речовин

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAU201806317U UA131106U (uk) 2018-06-06 2018-06-06 Спосіб одержання поверхнево-активних речовин

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA131106U true UA131106U (uk) 2019-01-10

Family

ID=65577775

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAU201806317U UA131106U (uk) 2018-06-06 2018-06-06 Спосіб одержання поверхнево-активних речовин

Country Status (1)

Country Link
UA (1) UA131106U (uk)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107245457B (zh) 一种铁皮石斛内生真菌菌株及其产生的胞外多糖以及该胞外多糖的提取方法与应用
CN102206616A (zh) 蜡状芽孢杆菌发酵产磷脂酶c的方法
CN106566845A (zh) 一种霍氏肠杆菌生产的生物表面活性剂及其应用
CN111019866B (zh) 一种普洱茶树叶片内生芽孢杆菌及其应用
CN102174409A (zh) 一种混合营养无菌培养微藻快速积累油脂的方法
UA131106U (uk) Спосіб одержання поверхнево-активних речовин
CN108410767A (zh) 纳豆菌及其在发酵菲律宾蛤仔制备活性多糖中的应用
CN107338196B (zh) 一株解酯耶氏酵母菌株及其应用
UA120565C2 (uk) Спосіб одержання поверхнево-активних речовин
CN102321555B (zh) 一株产杀/抗白蚁化合物的内生菌
CN109400444B (zh) 抑制植物病源真菌的倍半萜类化合物及其制备方法
CN102199545B (zh) 一株辛格粒毛盘菌及其液态发酵制备胞内黑色素的方法
CN109112171A (zh) 一种基于海洋微生物的抗菌活性物质的制备方法
CN112143681B (zh) 一株可产阿魏酸酯酶的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN101845406B (zh) 一种海绵共生放线菌的分离筛选方法
CN109609405A (zh) 产抑藻活性物质的芽孢杆菌及用途
UA131107U (uk) Спосіб одержання поверхнево-активних речовин
UA119302C2 (uk) Спосіб одержання поверхнево-активних речовин
CN108130287B (zh) 一种黄杆菌、分泌物的应用及制备方法
CN103087949B (zh) 一株生防内生放线菌——盐屋链霉菌
CN103131645A (zh) 一株以葡萄糖为碳源合成2-苯乙醇的肠杆菌
CN108949867B (zh) 一种利用海洋细菌发酵制备海葵毒素的方法
CN113337403A (zh) 一种球毛壳菌hjf 13菌株及其应用
CN108130292B (zh) 海洋链霉菌s063及其抗补体活性应用
CN105754908B (zh) 一种铜绿假单胞菌菌株及其应用