UA125207C2 - Комбінована терапія для лікування злоякісної пухлини - Google Patents

Комбінована терапія для лікування злоякісної пухлини Download PDF

Info

Publication number
UA125207C2
UA125207C2 UAA201712418A UAA201712418A UA125207C2 UA 125207 C2 UA125207 C2 UA 125207C2 UA A201712418 A UAA201712418 A UA A201712418A UA A201712418 A UAA201712418 A UA A201712418A UA 125207 C2 UA125207 C2 UA 125207C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
molecule
specifically binds
ligand
chimeric antibody
Prior art date
Application number
UAA201712418A
Other languages
English (en)
Inventor
Джон Марк Уіггінгтон
Джон Марк УИГГИНГТОН
Наіміш Бхарат Панд'я
Наимиш Бхарат ПАНДЬЯ
Роберт Джозеф ЛЕХЛЕЙДЕР
Скотт Кеніг
Скотт КЕНИГ
Еціо Бонвіні
Эцио Бонвини
Original Assignee
Макродженікс, Інк.
Макродженикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Макродженікс, Інк., Макродженикс, Инк. filed Critical Макродженікс, Інк.
Publication of UA125207C2 publication Critical patent/UA125207C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/74—Inducing cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Description

винахід, зокрема, належить до варіанта здійснення, в якому друга молекула зв'язується з РО-1.
Даний винахід також належить до застосування таких фармацевтичних композицій для лікування злоякісної пухлини й інших захворювань.
опис
Посилання на родинні заявки
Згідно з даною заявкою заявляється пріоритет за попередніми заявками на видачу патенту
США з серійними номерами 62/175039 (поданої 12 червня 2015 року; на розгляді), 62/211109 (поданої 28 серпня 2015 року; на розгляді) і 62/242640 (поданої 16 жовтня 2015 року; на розгляді), при цьому згадані заявки включені в даний документ за допомогою посилань у повному їх обсязі.
Посилання на перелік послідовностей
Дана заявка включає один або декілька переліків послідовностей згідно з 37 СЕК 1.821 і далі, які розкриті на машиночитаному носії (назва файлу: 1301-0120РСТ 5Т254хі, створений 23 травня 2016 року і має розмір 82289 байта), при цьому згаданий файл включений у даний документ за допомогою посилання в повному його обсязі.
Рівень техніки
Галузь техніки, до якої відноситься даний винахід
Даний винахід відноситься до фармацевтичної композиції, яка містить першу молекулу, яка специфічно зв'язується з НЕК2г/пеи, і другу молекулу, яка специфічно зв'язується з рецептором клітинної поверхні, який залучений у регуляцію імунної контрольної точки (або його лігандом).
Даний винахід, зокрема, відноситься до варіанта здійснення, в якому друга молекула зв'язується з РО-1. Даний винахід також відноситься до застосування таких фармацевтичних композицій для лікування злоякісної пухлини й інших захворювань.
Опис рівня техніки
І. НЕКОЗ/пеи і рецептори НЕК2/пеий
До процесів клітинного росту й диференціювання залучаються фактори росту, які здійснюють свої дії за допомогою специфічних рецепторів, таких як тирозинкінази. Зв'язування ліганда з тирозинкіназним рецептором запускає каскад подій, який в результаті приводить до клітинної проліферації та диференціювання (Сагрепіег, о. еї а. (1979) "Ерідепта! СтоулЛА Расіюг, " Аппи Вем Віоспет. 48:193-216; Заснз вї а!. (1987) "Сеї! Оінегепііайоп Апа Вураззіпа ОЇ Сепеїїс
Оеїесів Іп Те Зирргезвзіоп ОЇ Маїїдпапсу, " Сапсег Ке5. 47:1981-1986). Тирозинкіназні рецептори можна класифікувати на кілька груп за подібністю послідовностей і різних ознак. Однією з таких
Зо родин є родина рецепторів епідермального фактора росту або ЕгрВ, яка включає в себе множину рецепторів, відомих як НЕК-1 (також відомих як егоВ-1 або ЕСЕК), НЕК2/пеи (також відомих як НЕК2, егЬВ-2, с-пеш або р185), НЕК-3 (також відомих як егрВ-3) і НЕН-4 (також відомих як егбВ-4) (див., наприклад, Сагрепієг, 6. еї аї. (1979) "Ерідента! Столи Расіюог, " Аппи.
Веу. Віоспет. 48:193-216; бетрва, К. сеї аї!. (1985) "А у-егрВ-Веїаїейд Ргоїоопсодепе, с-етЬВ-2, Ів
Оівійпсї Бгот Те с-егоВ-1/Ерідептаї! Столи Расіог-Несеріог Сепе Апа Ів Атрійїей Іп А Нитап
Заїїмагу Сіапа Адепосагсіпота, " Ргос. Маї). Асад. сі. (0О.5.А.) 82:6497-6501; Соийив55епв, Ї. еї аї. (1985) "Туговзіпе Кіпазе НКесеріог М/йп Ехієпзіме НотоЇоду То ЕСЕ Весеріюг Зпагез Спготозотаї!
Їосайоп УУйИ пе Опсодепе, Зсієпсе 230:1132-1139; Вагдтапп, С.І. еї аї. (1986) "Мийіріє
Іпдерепаепі Асіїмайоп5 Ої Те Мей Опсодепе Ву А Роїіпі Миїайоп АКПегіпд Те Ттапететьгапе
Ботаїп ОЇ р185," Се! 45:649-657; Ктаийв, М.Н. єї аї. (1989) "Івоїайоп Ап СпНагасієгігайоп ОЇ
ЕВВВЗ, А Тпіга Метбег ОЇ Тне ЕВВВ/Ерідепта! Стоули Расіог Ресеріог Батійу: Емідепсе Гог
Омегехргезвіоп Іп А Бурзеї ОЇ Нитап Маттагу Титогв," Ргос. Маї). Асад. сі. (0О.5.А.) 86:9193- 9197; Сатамау, К.І... еї а. (1994) "Тне етоВЗ3 Сепе Ргодисі Із А Весеріог Рог Негедиіїп, " У. Віої.
Спет. 269:14303-14306; Ріожмтап, С.О. єї аї. (1993) "Негедиїйп Іпдисез Туговзіпе Рпозрпогуїайоп
ОГ НЕВНА/рівОетьва," Мате 366: 473-475; і ТаНаг, Е. еїг а. (1994) "ЕгВ-3 апа ЕгЬВ-4 Рипсійоп Ав
ТНне Везресіїме І ом Апа Нідп Айіпйу Весерюгз ОЇ АЇЇ пеи бінегепііаноп Расіог/Негедиїїп Івогогтв,"
ВіоЇ. Снет. 269: 25226-25233).
Рецептори ЕгбБВ відіграють важливу роль в поширенні сигналів, що регулюють проліферацію, диференціювання, рухливість і апоптоз клітин, як під час нормальних процесів розвитку, так і під час онкогенезу в людини (5іатоп, 0.9. еї аІ. (1989) "Зщаїез ОЇ Тне НЕВ-2/пеий
Ргоїо-Опсодепе Іп Нитап Вгеабзі Ап Омапйап Сапсег," Зсіепсе 244:707-712). Наприклад, активація рецепторів егоВ пов'язана з наступними МАРК-ЕгКк1/2 і фосфоінозитид-3-кіназного (РІЗКУАКТ шляхами росту й виживання та стимулює їх. Дерегулювання цих шляхів у випадку злоякісної пухлини пов'язане з прогресуванням захворювання та рефрактерністю до терапії (ЕоКагаула, Т. єї а. (1996) "Тугозіпе Рпозрпогуїайоп ОЇ СрІ Ороп Ерідепта! Стоули Расіог (ЕСЕ)
Зійтшайоп Апа 5 Аввосіайоп М/йН ЄС Весеріог Апа ЮОомжмпзігеат зЗідпа!йпу Ргоївїпв," У. Віо)!.
Спет. 271:14554-14559; Тана! Е. еї аї. (1996) "А Ніегагспіса!ї Мейо ОО Іпіеітесеріог
Іптегасіїоп5 Оеїептіпевз 5ідпа! Ттапзадисіп Ву пеи РіМегепіданйоп Расіог/Мецигедиїйп Апа Ерідегтаї
Стоули Расіог, Мої. СеїЇ. Віої. 16:5276-5287; Іапде, С.А. еї аї. (1998) "Сопмегдепсе ОЇ 60 Ргодезіегопе Апа Ерідента! Стоули Расіог бідпаїйпу Іп Вгеазі Сапсег. Роїепііайоп ОЇ Міюдеп-
Асіїмаїєд Ргоїєїп Кіпазе Раїйуаув," У. Віої. Спет. 273:31308-31316; ОіІауіоує, М.А. єї аї. (1998) "Еб8В-1 Апа ЕгЬВ-2 Асадціге Оівііпсі 5ідпаїйп9у Ргорепіе5 ЮОерепдепі Ороп ТНеїг Оітегігайоп
Рагіпег, " Мої. СеїІ. Віої. 18:5042-5051; НаскКеї, Р.О. єї аї. (1999) "Ерідента! Стоун Еасіог
Кесеріоге: Стййса! Медіаєг5 ОЇ Мийріє Кесеріог РаШу/ауз, " Си. Оріп. Сеїї Віої. 11:184-189).
Активація Різк/АКТ сприяє виживанню клітин і підвищеній агресивності пухлини, та повідомлялося, що АКТ2 активується й надекспресується в НЕН2г/пеи-надекспресуючих злоякісних пухлинах молочної залози (5пак, 5. (1999) "Омегліемж ОЇ Тпе Тгазішгитаь (Негсеріїп) апі-НЕН2 Мопосіопа! Апіїроду Сіїпісаї Ргтодгат Іп НЕН2-Омегехргевзіпу Меїавіаїййс Вгеаві
Сапсег" БЗетіп. Опсої. Биррі 12:71-77; Ниапо, 5.М. єї а). (2000) "Модшайнйоп ОЇ Вадіайоп
Везропзе АйПег Ерідепта! Стоули Еасіог Ресеріог ВіосКаде Іп бдиатоийив Сеї|Ї Сагсіпотав:
Іппірйіоп ОЇ Сатаде Рераїг, Сеї! Сусіє Кіпеїїс5, Апа Титог Апдіодепезвів," Сіїпіса! Сапсег Везв. 7:2166-2174; Васив, 5.5. єї аі. (2002) "АКТ2 Ів Егедиепну Оргедшіаїєй Іпй НЕВ-2/пеи-Розйїме
Вгеазі Сапсег Апа Мау Сопійірше То Титог Аддге5ззімепе55 Ву ЕпНапсіпд СеїїЇ 5Бигмімаї|,"
Опсодепе 21:3532-3540).
Передача сигналів родиною рецепторів ЕгбВ ініціюється зв'язуванням ліганда, що запускає димеризацію гомо- або сгетерорецепторів, зворотнє фосфорилювання тирозину цитоплазматичних хвостів і активацію шляхів внутрішньоклітинної передачі сигналів (Сіїгі, А. еї а!. (2003) "Тне Оваї Апа Тне Юитбр: Те Віоіоду ОЇ ЕтЬВ-2 Апа Егов-3," Ехр. Сеї! Ве5. 284:54-65).
Доступність лігандів, які зв'язуються з рецепторами ЕгрВ і активують їх, опосередковується різними металопротеїназами, такими як родина цинк-залежних металопротеїназ АСАМ (а дібіпієдгіп апа теїаІПІоргоїєазе - "дизинтегрин і металопротеїнази"), які каталізують від'єднання ектодоменом на клітинній поверхні певних білків (див. Спапод, С. апа УУегбр, 2. (2001) "Тне Мапу
Еасез ОЇ МеїаПоргоїеазе5: СеїЇ СгоуУлй, Іпмазіоп, Апдіодепезіз5 Апіа Меїазіавзів, " Тгепаз іп СеїЇ
Віоіїоду 11:5937-543; Мозв5, М.І. еї аї. (2002) "Знедаіпд ОЇ Метрбгапе Ргоїєїп Ву АСАМ Ратіїу
Ргоївазев5, " Евзауз іп Віоспетівігу 38:141-153; Зеаїв, О.Р. єї а). (2003) "Тпе АСАМ5 Ратіїу ОЇ
МеїаїІІоргоїєазев: Мийідотаїп Ргоївіп5 М/йи Мийіріє Рипсійоп5," Сепе5 апа ЮОемеіортепі 17:7-30).
Зокрема, було показано, що родина АБАМ відщеплює ліганди, відповідальні за активацію рецепторів ЕгОВ, таких як АРР і Моїсп (Віореї, С.Р. (2005) "АБАМ5: Кеу Сотропепів5 п ЕСЕК зідпаїйту Апа ОємеІортепі, " Маї. Кеу. Мої. Се. Віої. 6:32-43).
Зо НЕК2/пеи є важливим представником родини ЕгЬВ. Це рецепторний білок масою 185 кДа, який спочатку був ідентифікований як продукт трансформуючого гена ЕКВВ2 з різних форм нейробластоми хімічно оброблених щурів. НЕК2г/пеи був добре досліджений через його роль в декількох формах карциноми людини і в розвитку ссавців (Нупез, М.Е. еї а. (1994) "Тне Віоіоду
ОГ егрВ-г/пешШНЕНВ-2 Апа 5 Воїе Іп Сапсег," Віоспіт. еї Віорпув. Асіа 1198:165-184; Роцадаї!,
М.С. єї а). (1994) "Тне пеи-Опсодепе: бЗідпа! Тгапздисіюп Раїйулауз5, Тгапвіоптайоп Меспапізт5
Апа Емоїміпд ТНегарієв,, Опсодепе 9:2109-2123; ее, К.Р. єї аїЇ. (1995) "Ведцігетепі Рог
Мешгедийп Весеріог егтоВа2 Іп Мешга! Апа Сагаіїас Оемеіортепі," Маїшге 378:394-398). Людський ген НЕКдг/пеи і білок НЕК2/пеи описані в роботі Зетбра, К. еї аї. (1985) "А у-егЬВ-ВНеїаїєа
Ргоїсопсодепе, с-егоВ-2, Ів Оівііпсі Ггот Те с-егоВ-1/Ерідепта! Стоули Расіогї-Весеріог Сепе
Апа Із Атрійїєй Іп А Нитап заїїмагу Сіапа Адепосагсіпота," Ргос. Маї!. Асад. Зсі. (0О.5.А.) 82: 6497-6501 і в роботі Мататої!о, Т. еї аї. (1986) "Зітіїату ОЇ Ргоївіп Епсодед Ву Тне Нитап с-егтр-
В-2 Сепе То Ерідепта! Столи Расіог Весеріюог," Маїшге 319:230-234, а послідовність доступна в
СепВапкК під номером доступу ХО3363. НЕК2г/пеи містить чотири домени: позаклітинний домен, з яким зв'язується ліганд, ліпофільний трансмембранний домен, консервативний внутрішньоклітинний тирозинкіназний домен і С-кінцевий сигнальний домен, що несе кілька тирозинових залишків, які можуть бути фосфорильовані (Ріоумлтпап, 5.0. еї аї. (1993) "І ідапа- зЗресіїїс Асіїмайоп ОЇ НЕНА/рівоОетьвВа, А Готи Метрбег ОЇ Тне Ерідегта! Стоули Расіог Несеріог
Еатіу," Рос. Май). Асад. сі. (0.5.А.) 90:1746-1750). Послідовність позаклітинного домену
НЕКг/печ (ЕСО) описана в роботі ЕгапкКіїп, М.С. еї аї. (2004) "Інвіднів Іпіо ЕВ 5ідпаїїпуд Егот
Те Бшисіше ОЇ Те ЕпВ2-Репигитар Сотріех," Сапсег Сеїї. 5(4):317-328, і доступна під записом в Ргоїєїп ОСагаВапк 1578 (2004).
НЕК2г/пеи виконує функцію рецептора фактора росту й часто експресується клітинами злоякісної пухлини молочної залози, злоякісної пухлини яєчників або злоякісної пухлини легені.
НЕК2/пеи надекспресується в 25-30 90 випадків злоякісних пухлин молочної залози та яєчників у людини, а його надекспресія асоційована з агресивним клінічним перебігом і поганим прогнозом у пацієнтів, які страждають на це захворювання (5іатоп, 0... еї аї. (1987) "Нитап
Вгеазі Сапсег: Сотеїайоп ОЇ Веійрзе Апа БЗигуіма! МУйН Атрійїсайоп ОЇ Те НЕВ-2/пеи
Опсодепе," Зсіепсе 235:177-182; Біатоп, 0.9. еї аі. (1989) "Б(Щаїевз ОЇ Те НЕВ-2/пеи Ргою-
Опсодепе Іп Нитап Вгеаві Апа Омагіап Сапсег," Зсіеєпсе 244:707-712). Надекспресію НЕН2г/пеи бо також спостерігали в клітинах злоякісної пухлини інших форм карциноми, включаючи різні карциноми шлунка, ендометрію, слинної залози, легені, нирки, товстої кишки, щитоподібної залози, підшлункової залози та сечового міхура (див., наприклад, роботи Кіпод, С.В. єї а!. (1985) "Атріїісайоп ОЇ А Момеї! м-етоВ-Неїагвд Сепе Іп А Нитап Маттагу Сагсіпота," 5сівепсе 229:974;
МесСапп, А. еї аї. (1990) "с-етоВ-2 Опсоргоїєїп Ехргеввіоп Іп Ргітагу Нитап Титогв, Сапсег 65:88-92; Мопетига, У. єї а. (1991) "ЕмаІнайоп ОГ Іттипогєасіїмйу Рог етьВ-2 Ргоївїп Аз А МаїКег
ОЇ Роог попі Тепт Ргодповів Іп Савігіс Сапсег" Сапсег Незеагсй 511034).
Активація НЕК2г/пеи корелює зі зменшенням клінічної сприйнятливості до гормональної терапії у пацієнтів із злоякісною пухлиною молочної залози (гідні, С. еї. аІ. (1989) "Ехргезвіоп
ОГ с-етьВ-2 Опсоргоївіп: А Ргодповіїс Іпаісаюг іп Нитап Вгєазі Сапсег," Сапсег Вевз. 49:2087- 2090; Кигокама, Н. еї аї. (2001) ""ппірйоп ОГ етЬВ Ресеріог (НЕВ) Тугозіпе Кіпазез Аз А бігаїєду
То АБгодаїе Апіієзітодеп Везібіїапсе п Нитап Вгєазі Сапсег," Сіїп. Сапсег Вез. 7:44365-425, 44115-44125). Дійсно, експресії НЕК2/пеш досить для забезпечення стійкості до естрогенів (Вепл, 0.6. єї аї. (1993) "Евігодеп-Оерепаеєпі, Татохітеп-НКевівіапі Титогідепіс Стоун ОЇ МСЕ-7
СеїІв Тгтапеїесієд М/Йп НЕНг/пеи," Вгеазі Сапсег Вез. Тгєаї. 24:85-95). НЕК2/пеи, а також НЕК-З3 очевидно бере участь у виникненні стійкості до гормонів у пацієнтів із злоякісною пухлиною передміхурової залози. Приблизно одна третина пацієнтів із злоякісною пухлиною передміхурової залози отримують лікування гормональною терапією, спрямоване на блокування дії тестикулярних і надниркових андрогенів. Як і у випадку злоякісної пухлини молочної залози, стійкість неминуча. З нещодавно отриманих даних видно, що сигнали, що виходять від НЕК2г/пеи і НЕК-3, індукують "гормонорефрактерний" стан (Меїпунпой, І.К. еї аї. (2004) "НЕНг/пеи Кіпазе-Оерепдепі Модшіайноп ОЇ Апагодеп Весеріог ЕРипсіп Тигоцди ЕПесів
Оп ОМА Віпаїпуд Апа етабіїйу," Сапсег Сеїї 6:517-527).
Відомо кілька укорочених і сплайсованих варіантів НЕК2/пеи. Наприклад, укорочений ЕСО, розташований у перинуклеарній цитоплазмі деяких клітин карциноми шлунка, продукується альтернативним транскриптом, який утворюється за допомогою сигналу поліаденілювання в інтроні (уататоїйо, Т. еї а. (1986) "Зітіапу ОЇ Ргоївіп Епсодеда Ву Те Нитап с-егр-В-2 Сепе То
Ерідента! Столи Расіог ВРесеріог," Маїште 319:230-234; і сої, СК. еї аі. (1993) "А Тиипсаївй
ІпігасеПшіаг НЕНг/пеи Весеріог Ргодисеа Ву АїЇегпаїме ВМА Ргосезвіпд АПесів Стоумп ОЇ Нитап
Сагсіпота СеїІ5," Мої. СеїІ. Віої. 13:2247-2257). ЕСО НЕК2/пеи також може протеолітично
Зо відщеплятися з клітин злоякісної пухлини молочної залози в культурі, та зустрічається в сироватці деяких пацієнтів із злоякісною пухлиною, та може бути сироватковим маркером метастатичної злоякісної пухлини молочної залози і загального несприятливого прогнозу (Реїспі,
Г. А. еї аї. (1990) "А Тгипсаївд, бЗестеїей Ропт ОЇ Те Ерідепта! Стомлй Расіог Весеріог І5
Епсодеа Ву Ап АйПегпаїїмеу Зріїсед Тгапзсетірі Іп Моптаї Раї Тіззиє," Мої. СеїІ. Віо!. 10:2973-2982;
Ї ей»еї, К. еї а. (1992) "Еіемаїед боїшріє с-етьВ-2 Апіїдеп І емеі5 Іп Те бегит Апа Емпивіоп5 ОГА
Ргоропіоп ОЇ Вгеазі Сапсег Раїйепів," ). Сіїп. ОпсоїЇ. 10:1436-1443; сої, О.К. єї аІ. (1993) "А
Тиипсаїей Іпігасеїїшаг НЕНг/пеи Весеріог Ргодисейд Ву АйПегпаїїме ВМА Ргосезвзіпуд АМесів. Столи
ОЇ Нитап Сагсіпота СеїІв," Мої. СеїІ. Віої. 13:2247-2257; і І ее, Н. еї аї. (1998) "Івоіїайоп Апа
Спагасієгігайоп ОЇ Рошг Апегпаїе с-егтоВ3З Тгапзстгірів Ехргев5зей Іп Омагїіап Сагсіпота-Оеєгімеа СеїЇ
МПпез Ап Мопта! Нитап Тізвцев5," Опсодепе 16:3243-3252). У деяких клітинах злоякісної пухлини, які надекспресують НЕК2г/пеи, добре відомий активатор металопротеїнази, ацетат 4- амінофенілртуті (АРМА), активує металопротеїнази, такі як АБАМ10 і АСАМІ5, з розщепленням рецептора НЕК2г/пеи на дві частини: укорочений мембранний рецептор, відомий як ро, і розчинний ЕСО, відомий як р105 або ЕСО105 (див., наприклад, роботу Моїїйпа, М.А. еї аї. (2001) "Тавіи?2итаь (Негсерійп), А Нитапігей апіі-Нег2 Ресеріог Мопосіопа! Апііроаду, Іппірії5 Ваза! Апа
Асіїмаієд Нег2 Есіодотаїп Сієачхаде Іп Вгеазі Сапсег СеїІв," Сапсег Вев. 61:4744-4749; патентну публікацію США Мо 2004/0247602). Втрата ЕСО робить рецептор рео5 конститутивно активною тирозинкіназою, яка може доставляти сигнали росту й виживання клітинам злоякісної пухлини (див., наприклад, патент США Мо 6541214).
Дослідження показали, що у клітин злоякісної пухлини молочної залози, які надекспресують
НЕК2/пеи, лікування антитілами, специфічними до НЕК2/пеи, у комбінації з хіміотерапевтичними засобами (наприклад, цисплатином, доксорубіцином, таксолом) викликає більш високу цитотоксичну відповідь, ніж лікування лише хіміотерапією (НапсосК, М.С. еї аї. (1991) "А Мопосіопа! Апіїбоду Адаїпбзі Те с-етЬВ-2 Ргоївіп Епнпапсе5 Те Суіоїохісйу ОЇ Сів-
РіаттіпедісНпіогоріайпит Адаїпвї Нитап Вгєазі Апа Омагіап Титог СеїЇ Ііпев5," Сапсег Незв. 51:4575-4580; Апеада, С... єї аї. (1994) "рі85с-ет8В-2 БЗідпаиІ Еппапсев Сівріайп-Іпадисеєа
Суюїохісйу іп Нитап Вгєавзі Сагсіпота СеїЇв: Ав5осіайоп Веїмееп Ап Опсодепіс Весеріог
Тугозіпе Кіпазе Апа Огид-Іпдисед ОМА Рераїг," Сапсег 54:3758-3765; Рієїга5, В... єї аї. (1994) "Апіїроду 1 НЕВ-2г/пеи гесеріог Віоскв ОМА Вераїг Айег Сівріайп Іп Нитап Вгеавзі Апа Омаїап бо Сапсег СеїІв," Опсодепе 9:1829-1838). Можливими механізмами, за допомогою яких антитіла до
НЕК2/пеи можуть посилювати відповідь на хіміотерапевтичні засоби, є модуляція експресії білка НЕК2/пеи або перешкода репарації ДНК (е(апсомхкі, І. еї аї. (1991) "МеснНапівіїс Азресів ОЇ
Тне Оррозіпд Емесів ОЇ Мопосіопа! Апіїрбодієз То Те ЕВВВ2 Весеріюог Оп Титог Стоуйй," Ргос.
Май. Асад. сі. (0.5.А.) 88:8691-8695; Васив, 5.5. єї а. (1992) "А І ідапа Рог Тне етьВ-2 Опсодепе
Ргодисі (9рз3о) Іпдисез ОіНегепііайоп ОЇ Нитап Вгєавзі Сапсег СеїІв," Сеї!Ї Сптоули 5 Бій. 3:401-411;
Васив, 5.5. еї аї. (1993) "Меи Оійегепііаноп Расіюог (Негедиїїп) Іпдисев Ехргевззіоп ОЇ Іпіегсеїїшаг
ДАапезіоп Моїесшіе 1: Іпріїсайоп5 Бої Маттагу Титогв," Сапсег Нев. 53:5251-5261; Кіаррег, Г.М. еї аІ. (1997) "А БЗиурсіаз5 ОЇ Титог-Іппіріюгу Мопосіопа! Апіїбодіеє То ЕтЬВ-2/НЕН2 Віоск5
Стозвіаіїк УУйИ СтоуЛи Расіог Весеріогз," Опсодепе 14:2099-2109; Кіаррег, І.М. еї аї. (2000) "Титог-Іппірйогу Апіїродіеє То НЕН-2/ЕтфВ-2 Мау Асі Ву Весгийіпу с-СБІ Апа Епапсіпд
ОбБідийіпайоп ОЇ НЕВ-2," Сапсег Невз. 60:3384-3388; Апеада, С.І. єї аї. (2001) "Тне Ерідеттаї!
Стоумй Расіог Весеріюог: Ггот Мшапі Опсодепе іп Моппитап Сапсеге То Пегарешіс Тагдеї Іп
Нитап Меоріавіа, " У СіїіпісаІ Опсоіоду 19(185):325-405).
Був розроблений ряд моноклональних антитіл і низькомолекулярних інгібіторів тирозинкінази, націлених на НЕК-1 або НЕК2г/пеи. Наприклад, мишаче моноклональне антитіло, відоме як мишаче антитіло "405", розпізнає позаклітинний епітоп (амінокислоти 529-627) в багатому цистеїном ІІ домені НЕК2г/пеи, який знаходиться дуже близько до трансмембранної ділянки. Обробка клітин злоякісної пухлини молочної залози мишачим 405 і гуманізованим 405 частково блокує активацію МОБ/херегуліну в НЕК2/пепи-НЕН-3 комплексах, за результатами вимірювання за допомогою аналізів фосфорилювання рецепторів (Сагіег, Р. еї аї. (1992) "Нитапігайоп ОЇ Ап апіі-рР185НЕН2 Апіїбоду Бог Нитап Сапсег Тегару," Ргос. Маї)!. Асай. 5сі. (0О.5.А.) 89:4285-4289; Біїм/комуКі, М.Х. єї аЇ. (1999) "Мопсіїпісаї бЗіцадіез Адагезвіпу Те
Меспапізт ОЇ Асійоп ОЇ Тгазіигитаб (Негсерііп)," Зет. іп Опсої. 26:60-70; Ме, 0. єї аї. (1999) "Ацдтепіайоп ОЇ А Нитапігейд апіі-НЕН2 тАБ 405 Іпдисей Стоумй Іппірбйіоп Ву А Нитап-Моизе
СПпітетгіс апіі-ЕСЕ Весеріогї тАБ С225," Опсодепе 18:731-738; Модеї!, С.І. єї аї. (2001) "Ріїві-І іпе
Негсеріїп МопоїНегару Іп Меїавзіаїйс Вгеазі Сапсег," Опсоіоду 61(в!иррі 2):37-42; Модеї, С.І. еї а). (2002) "Епісасу Апа Заїєїу ОЇ Тгазійигитар Ав А 5іпдіє Адепі Іп Рігаі-І іпе Тутєаїтепі ОЇ НЕН2-
Омегехргеззіпу Меїавіаїйс Вгєаві Сапсег," У. Сіїп. Опсої. 20(3):719-726; Рціітою-Оисні, К. еї аї. (2002) "Апійштог Асімйу ОЇ СотрБріпайопе ОЇ апі-НЕН-2 Апіїбоду Ттгазійигитар Апа Огаї
Ніногоругітідіпез5 Саресіїаріпе/5'-СТига Іп Нитап Вгеазі Сапсег Модеї!в," Сапсег Спетоїнег.
РНпаттасої. 49:211-216). Проте, за введення мишачого 405 людям зазнали клінічну невдачу, тому що у пацієнтів швидко розвивалися відповіді з виробленням людських антитіл до мишачих антитіл (НАМА), тому були розроблені гуманізовані форми мишачого 405. Послідовність і кристалічна структура гуманізованого антитіла 405 були описані в патенті США Мо 6054297,
Сапег, Р. єї аї. (1992) "Нитапігайоп ОЇ Ап апіїі-рІВ5НЕН2 Апіїроду Бог Нитап Сапсег ТПегару,"
Ргос. Маї). Асад. сі. (0.5.А.) 89:4285-4289; і Еідепргої, С. єї а. (1993) "Х-гау Бігисіигез ОЇ Те
Апіїдеп-Віпапд Юотаїпе Рот ТНгеє Маїгапів ОЇ Нитапігейд апіі-ріВБНЕН2 Апіїбоду 405 Апа
Сотрагізоп М/йН Моїесшіаг Модеїїпа," У. Мої. Віої. 229: 969-995.
Була розроблена гуманізована форма мишачого антитіла 405, відома як "трастузумаб" (продається як НегсеріїпФ від компанії Сепепіесі, Іпс.), ії вона була схвалена для лікування злоякісних пухлин, які характеризуються надекспресією або генною ампліфікацією НЕК2/пеи, у тому числі злоякісної пухлини молочної залози (Собіеїдн, М.А. еї а. (1999) "Мийіпайопа! 5щшау Ої
ТНне Ейісасу Апа Заїеїу ОЇ Нитапігейд апіі-НЕН2 Мопосіопа! Апіїбоду Іп УМотеп М/по Наме НЕР2-
Омегехргевззіпу Меїазіаїййс Вгеазі Сапсег Тнаї Нав Ргодгеззєд Айег Спетоїпегару Еог Ме!їавіаїйс
Оівєавзе," у. Сп. ОпсоЇ. 17:2639-2648). Трастузумаб пригнічує АРМА-опосередковане розщеплення НЕКг/пеи на частини ЕСО і р95 іп міїго, і вважають, що він виконує свою функцію іп міго за допомогою різних механізмів, включаючи можливе інгібування відщеплення НЕК2/пеи (Реагат, М.О. єї аЇ. (1998) "Рназе І 5щау ОЇ Весеріог-Еппапсей СПпетозепзймйу Овіпд
Весотбріпапі Нитапігей апіі-рІВ5НЕН2г/пеи Мопосіопа! Апіїбоду Рів Сівріайп Іп Раїєпів М/йй
НЕН2г/пеи-Омегехргеззіпуд Меїавіаїййс Вгєавзі Сапсег Веїтасіогу То Спетоїйегару Тгтєаійтепь" У.
Сіїп. Опсоіоду 16(8):2659-2671; Вазеї|да, ». єї а. (2001) "Меспапізт ОЇ Асійоп ОЇ Тгазіигитаь Апа
Зсіепійіс Ордаїє," Зетіпагїв іп Опсоіоду 28(5)(зиррі. 16):4-11; Вазе|да, «4. єї аї. (2001) "Меснапізт
ОЇ Асійоп ОЇ апіі-НЕН2 Мопосіопаї! Апіїрбодієв," Апп. Опсої. 12 (5иррі. 1):535-541). Проте, терапія трастузумабом має низку недоліків, таких як кардіотоксичність і розвиток відповідей з виробленням людських антитіл до гуманізованого антитіла (НАНА) у деяких пацієнтів.
У даному документі представлені нові та вдосконалені форми антитіл до НЕК2/пеи для застосування в різних формах терапії проти злоякісних пухлин, наприклад, сконструйовані химерні антитіла 405, що мають підвищену афінність або специфічність, зменшений потенціал щодо розвитку відповідей НАМА або НАНА, поліпшені ефекторні Функції і т. п., а також вони бо були описані в РСТ публікації УМО 2009/123894. У доклінічних дослідженнях для ефекторних клітин було показано, що такі сконструйовані антитіла 405 характеризуються підвищеною
АрсСб-активністю щодо позитивних за НЕК2/пеи пухлин, у тому числі клітин з низьким рівнем експресії НЕК2г/пеи, незалежно від варіанту Есук (Могавігот, 9... еї аІ. (2011) "Апіі--итог Асіїмну
Апа ТохісокКіпеїїс5 Апаїузів ОЇ МЕОАН22, Ап апіі-НЕН2 Мопосіопа! Апіїбоду М/йй Еппапсед Есу
Весеріог Віпаїпд Ргорепієвз," Вгєавзі Сапсег Везєагсп 13(6):8123). Крім того, за результатами дослідження І фази видно, що такі антитіла добре переносяться з великонадійною активністю у пацієнтів із злоякісною пухлиною молочної залози й злоякісною пухлиною шлунка та стравоходу, в яких була безуспішною терапія НЕН2г/пей, й у пацієнтів з експресуючими
НЕВг/пеи пухлинами, в яких трастузумаб вважається неефективним (Витті5, Н.А. (2013) "Рназе І зішау ОЇ тагаєїшхітаб (МСАН22), Ап ЕС-Моадіїієа Снітегіс Мопосіопа! Апіїбоду (МАБ), іп Райепів (рів) М/Н Адмапсєйд 5оїїй Титоге Ехргеззіпд Те НЕВ2 Опсоргоївїіп," у). Сіп. Опсої. Биррі: арзік. 3004). Отже, такі поліпшені антитіла до НЕК2г/пеи відкривають нові можливості лікування для пацієнтів, у яких пухлини експресують низькі рівні НЕК2/пеи, або для яких інші види терапії на основі НЕК2/пеи були безуспішними.
І. Клітинні імунні відповіді
Імунна система людей та інших ссавців відповідає за забезпечення захисту від інфекції й захворювання. Такий захист забезпечується як гуморальною імунною відповіддю, так і клітинною імунною відповіддю. Гуморальна відповідь приводить у результаті до вироблення антитіл та інших біомолекул, які здатні розпізнавати й нейтралізувати чужорідні мішені (антигени). Для порівняння, під час клітинної імунної відповіді відбувається активація макрофагів, натуральних кілерів (МК) і антиген-специфічних цитотоксичних Т-лімфоцитів Т- клітинами і вивільнення різних цитокінів у відповідь на розпізнавання антигену (Юопа, С. єї аї. (2003) "І(ттипе НРеашіаїйоп Бу Моме! Созіїтшаюгу МоїІесшціев5," Іттипоіод. Вев. 28(1):39-48).
Здатність Т-клітин оптимально опосредковувати імунну відповідь на антиген потребує двох різних сигнальних взаємодій (мМідіена, М. ей аїЇ. (2007) "Моашіаїййпа Со-5ітшиайоп,"
Мешйгоїпегарешіісв 4:666-675; Коптап, А.). єї аї. (2007) "СпесКроїпі ВіосКаде іп Сапсег
ІттипоїПегару," Аду. Іттипої!. 90:297-339). По-перше, антиген, який дислокується на поверхні антиген-презентуючих клітин (АРС), повинен бути презентованим антиген-специфічній наївній бразТ-клітині. Таке презентування доставляє сигнал за допомогою Т-клітинного рецептора
Зо (ТСК), який змушує Т-клітку ініціювати імунну відповідь, яка буде специфічною до презентованого антигену. По-друге, серія о костимулюючих і коінгібуючих сигналів, опосередковуваних взаємодіями між АРС і різними молекулами на поверхні Т-клітин, запускає спочатку активацію та проліферацію Т-клітин і в результаті їх інгібування. Таким чином, перший сигнал надає специфічність імунній відповіді, в той час як другий сигнал призначений для визначення природи, величини й тривалості відповіді.
Імунна система жорстко контролюється костимулюючими й коінгібуючими лігандами й рецепторами. Такі молекули забезпечують другий сигнал для активації Т-клітин і забезпечують збалансовану мережу позитивних і негативних сигналів для максимізації імунних відповідей до інфекції, при цьому обмежуючи імунітет до "своїх" клітин (Умапо, Г.. еї а. (2011) "МІЗТА, А Момвеї!
Моизе 4 Зирепатіу Гідапа Тнаї Медаїмеу Реашіатєвз Т-Сеї| Вевзропзев5," У. Ехр. Мед. 10.1084/ет.20100619:1-16; І ерепієв, В. еї а. (2008) "Пе Воїе ОЇ Медаїїме Совіїтиіаюгтв Юигіпд
Рагавіййс Іп'есіїоп5," Епдостгіпе, Меїароїїс 8 Іттипе Оізогаєтв-ЮОгид Тагдеїв5 8:279-288). Інгібуючі шляхи, важливі для збереження аутотолерантності й модулювання тривалості та величини імунних відповідей, спільно називають імунними контрольними точками. Особливе значення має зв'язування лігандів В7.1 (СО80) і В7.2 (СО86) антиген-презентуючої клітини з рецепторами с028 і СТІ А-4 у СЮ4: Т-лімфоцита (Зпагре, А.Н. еї аї. (2002) "Тне В7-С028 Зуирепатіу," Маїиге
Вехм. Іттипої. 2:116-126; ЮОопа, б. єї аіІ. (2003) "Іттипе Редшиіайоп Бу Моме! Совіїти|іаюгу
Моїесшіев," Іттипоі/од. Невз. 28(1):39-48; І іпаїІєу, Р.5. єї аї. (2009) "ТНе Сіїпіса! ШУ ОГ Іппірйіпу
СОр28-Меадіагей Совіїтшиіайноп," Іттипої. Вем. 229:307-321). Зв'язування В7.1 або В7.2 з СО28 стимулює активацію Т-клітин; зв'язування В7.1 або В7.2 з СТІ А-4 пригнічує таку активацію (опа, С. еї аї. (2003) "І ттипе Недшіайоп ру Моме! Совіїтиіаюгту Моїіесшціев," Іттипо/од. ВНезв. 28(1):39-48; Ііпаієу, Р.5. еї аїЇ. (2009) "Те Сіїпіса, ОЩНІШу ОО Іппірйіпд Ср2г8-Меадіаїєа
Совіїти|айоп," Іттипої. Веу. 229:307-321; Стеепмаїа, В... єї аї. (2005) "Пе В7 Ратіїу Вемізнед,"
Апп. Нему. Іттипої. 23:515-548). СО28 конститутивно експресується на поверхні Т-клітин (Ого55, «.,еїаї!. (1992) "Ідепійісаноп апа Оібвіршіоп ОЇ Тпе Совіїтціаюгу Несеріог СО28 Іп Тне Моизе," у.
Іттипої. 149: 380-388), в той час як експресія СТІ А-4 швидко зростає після активації Т-клітин (овієу, Р. єї аї. (1996) "ІпігасеїІшаг ТганісКкіпуд ОЇ СТІ А4 апа Госаї ГІ осаїїганйоп Тоулага5 пев ОЇ
ТСА Епдадетепі," Іттипйу 4:535-543). Оскільки СТІ А-4 є більш високоафінним рецептором (ЗПпагре, А.Н. єї аї. (2002) "Пе 8В7-С028 БЗиурепатіу, Мате Вем. Іттипої. 2:116-126), бо зв'язування спочатку ініціює проліферацію Т-клітин (через СО28), а потім пригнічує її (через експресію СТІ А-4, яка починається), тим самим послаблюючи ефект, якщо в проліферації більш немає необхідності.
Додаткові дослідження в лігандах рецептора СО28 привели до виявлення й опису характеристик ряду споріднених молекул В7 ("чадродина В7") (ЗПпагре, А.Н. еї а. (2002) "Тпе В7- брав 5урепатіїу," Маїшге Неу. Іттипої. 2:116-126; Стеепуаїд, В.У. єї аї. (2005) "Тне В7 Ратіїу
Вемізйед," Апп. Веу. Іттипої. 23:515-548; СоїІіп5, М. єї аї. (2005) "не В7 Ратійу ОЇ Іттипе-
Веашайгу І ідапавз," Сепоте Вісі. 6:223.1-223.7; І оКе, Р. еї а. (2004) "Етегдіпа Меснапізтв ОЇ
Іттипе Недшаїййоп: Те Ехіепаєд В7 Ратіїу Апа Ведиіаюгу Т-СеїІв." АйНітйїів Вев. Тег. 6:208-214;
Коттап, А.). еї аї. (2007) "СпесКроїпі Віоскаде іп Сапсег ІттипоїНегару," Аду. Іттипої. 90:297- 339; Рііе5, О.В. еї аі. (2007) "Пе Мем В75: Ріауіпуд а Рімоїаї Ноїє іп Титог Іттипйу," у.
Ітітипоїйег. 30(3):251-260; Адагмаї, А. еї аї. (2008) "Не Воїє ОЇ Розййме Совіїтціаюгу Моїесшев
Іп Ткаперіапіайоп Апа ТоіІегапсе," Сит. Оріп. Огдап Тгаперіапі. 13:366-372; Мапо, 5. єї а!. (2004) "Со-Зідпайпу Моіесшез ОЇ Те В7-С0О28 БРатійу Іп Ровзййме Апі Медаїйме ВНедшаїйоп ОЇ т
Гутрпосуїє Незропзев," Містобез Іпіесі. 6:759-766). У даний час існує кілька відомих членів цієї родини: 87.1 (СО80), 87.2 (СО86), індукований костимулюючий ліганд (ІСО5-Ї), ліганд програмованої смерті 1 (РО-І 1; В7-НІ), ліганд програмованої смерті 2 (РО-12; В7-0С), В7-НЗ,
В7-На і В7-Нб (Соїїїпв, М. еї аї. (2005) "Те В7 Ратіїу ОЇ Іттипе-Недшіайюгу І ідапав5," Сепоте
Віо!. 6:223.1-223.7; Ніа|піК, М.Р. еї аї. (2012) "Ємоішіоп ОЇ Те В7 Ратіїу: Со-Емоїшіоп ОГ В7Нб
Апа МмКрзо, Ідепійїсайоп ОЇ А Мем В7 Ратіїу Метрбег, В7Н7, Апа Ої В75 Нівіюогіса! Неїайопе5Нір
УМИп Тпе МНС, " Іттиподепеїйсз5 64(8):571-90).
ІШ. РО-1
Білок програмованої смерті клітини 1 ("РО-1") являє собою мембранний білковий елемент типу масою приблизно 31 кДа великої родини регуляторів Т-клітин СО28/СТІ А-4, який здійснює широкий негативний регулюючий вплив на імунні відповіді (І5піда, М. еї аї. (1992) "Іпдисейд
Ехргезвіоп ОЇ РО-1, А Моме! Метбег ОЇ Те Іттиподіобиїп Сепе 5ирепатіу, Ороп Ргодгаттей
Се! Оеафш, ЕМВО 3. 11:3887-3895; публікація заявки на видачу патенту США МоМо 2007/0202100, 2008/0311117, 2009/00110667, патенти США МоМо 6808710, 7101550, 7488802, 7635757, 7722868, РОСТ публікація У/О 01/14557).
РО-1 експресується на активованих Т-клітинах, В-клітинах і моноцитах (Адаїа, У. еї аІ. (1996) /"Ехргезвіоп ОЇ Пе РО-1 Апіїдеп Оп Тпе Зипасе ОЇ Біїтшіавй Моизе Т Апа В ГутрпПосуїев," Іпі.
Ітітипої. 8(5):765-772; Мата?акі, Т. еї аї. (2002) "Ехргеввіоп ОЇ Ргодгаттеа Оваїйн 1 Гідапах Ву
Митгіпе Т-Сеїї Апа АРС," У. Іттипої. 169:5538-5545) і з низькими рівнями експресії у Т-клітин, що відносяться до натуральних кілерів (МК) (Мізпітига, Н. еї аї. (2000) "Расіїйайоп ОЇ Веїа зЗеїесіп Апа Модіїїсайоп ОЇ Розйме ЗеїІесійїоп п Те Тпутив ОЇ РО-1-Оеєїїсієпі Місе," У. Ехр. Меа. 191:891-898; Мапіп-Ого2со, М. еї аї. (2007) "Іппірйогу Совіїтиіайоп Апа Апіії-Титог Іттипйу," зетіп. Сапсег Віо!. 17(4):288-298).
Позаклітинна ділянка РО-1 складається з одного імуноглобулінового (І9)М домену, який на 23 95 ідентичний еквівалентному домену в СТІ А-4 (Мапіп-Ого2со, М. еї аї. (2007) "Іппіріогу
Совіїтиайоп Апа Апії-Титог Іттипйу," зетіп. Сапсег Віо!. 17(4):288-298). За позаклітинним ДМ доменом іде трансмембранна ділянка й внутрішньоклітинний хвіст. Внутрішньоклітинний хвіст містить два сайти фосфорилювання, розташованих в імунорецепторному тирозиновому інгібуючому мотиві й імунорецепторному тирозиновому активуючому мотиві, що свідчить про те, що РО-1 здійснює негативну регулюючу дію на сигнали ТОК (Ізпіда, У. еї аї. (1992) "Іпаисейд
Ехргезвіоп ОЇ РО-1, А Моме! Метбег ОЇ Те Іттиподіобиїп Сепе 5ирепатіу, Ороп Ргодгаттей
Се! Оєат, ЕМВО 3. 11:3887-3895; ВіапК, б. єї аіІ. (2006) "Сопігіршіоп ОЇ Те РО-І1/РО-1
Раїйулау То Т-СеїЇ Ехнаизійп: Ап Орааїе Оп Ітріїсайопе Рог Спгопіс ІпТесіопе Апа Титог Емавіоп
Сапсег," Іттипої. ІттипоїНег. 56(5):739-745).
РО-1 опосередковує інгібування ним імунної системи шляхом зв'язування з В7-НІ1 і В7-ОС (Ріїе5, О.В. єї а. (2007) "пе Мем В75: Ріауіпа а Рімоїа! Роїе іп Титог Іттипйу," у. Іттипоїпег. 30
БО (3): 251-260; патенти США МоМо 6803192, 7794710; публікації заявок на видачу патенту США
МоМо 2005/0059051, 2009/0055944, 2009/0274666, 2009/0313687; РСТ публікації МУО 01/39722,
МО 02/086083).
В7-НІ1 ї В7-ОС широко експресуються на поверхнях людських і мишачих тканин, таких як серце, плацента, м'яз, ембріональна печінка, селезінка, лімфатичні вузли й тимус, а також на клітинах мишачої печінки, легенів, нирок, острівців підшлункової залози й тонкої кишки (Мапіп-
Ого2со, М. єї аї. (2007) "Іппірйогу Совіїтиіайоп Апа Апіі-Титог Іттипйу, бетіп. Сапсег Віо). 17(4):288-298). У людей експресія білка В7-НІ була виявлена в ендотеліальних клітинах людини (Спеп, У. еї а. (2005) "Ехргезвіоп ої В7-НІ іп Іпїаттаїйогу Репа! Тибшаг Еріїнеїа! СеїІв," Мернгоп.
Ехр. Мерпгої. 102:е81-е92; де Наї), 5. єї аїІ. (2005) "Вепа! Тибшаг Еріїпеїїа! Се Модшіате Т-Сеї 60 Везропзев Міа ІСО5-Ї Апа В7-НІ1" Кіапеу Іпії. 68:2091-2102; Магапеї, М.М. еї аї. (2002) "В7-НІ І5
Ехргеззейа Ву Нитап ЕпаоїнеїїаІ Сеїї Апа Зирргеззе5 Т-СеїЇ СуюКіпе Зупіпевів," У. Іттипої. 169:3581-3588), міокарді (Вгом/п, У.А. еї аї. (2003) "Віоскаде ОЇ Ргодгаттєа Оеваїн-1 І ідапаз Оп
Оепатйііс Се Еппапсе5 Т-Сеї| Асіїмайоп Апа СуюкКіпе Ргодисійоп," у). Іттипої. 170: 1257-1266), синцитіальних трофобластах (Реїгоїй, М.С. єї аЇ. (2002) "В7 БРатіу Моїіесшев: Момеї!
Іттипотоаціайгте Аї Тйе Маїегпаї!-Ееїа!І Іпіепасе," Ріасепіа 23:595-5101). Молекули також експресуються резидентними макрофагами деяких тканин, макрофагами, які були активовані інтерфероном (ІЄМ)-у або фактором некрозу пухлини (ТМЕ)-а (І аїсптап, У. еї аї. (2001) "Рр-І12
Ів А бесопа І ідапа Рог РО-1 Апа Іппіріїв Т-Сеї!| Асіїмайоп," Маї. Іттипої! 2:261-268), і в пухлинах (опо, Н. (2003) "В7-НІ Раїшжау Апа 5 Коїе п Те Емазіоп ОЇ Титог Іпптипу, " У. Мої. мМмеа. 81:281-287).
Було виявлено, що взаємодія між В7-НІ і РО-1ї є важливим негативним костимулюючим сигналом для Т- і В-клітин (Мапіп-Огог2со, М. еї аї. (2007) ""ппірйогу Созіїтшіаноп Апа Апіїі-Титог
Іттипйу, Зетіп. Сапсег Вісі. 17 (4): 288-298) і виконує функцію індуктора загибелі клітин (Іспіда, У. еї а!. (1992) ""пдисед Ехргезвіоп ОЇ РО-1, А Моме! Метбег ОЇ Тпе Іттиподіобиїйп Сепе Биурепйатіу, Ороп Ргодгаттеєй СеїЇ Оєат, ЕМВО .4. 11:3887-3895; Бириані, 5.К. єї аї. (2005) "ТНе Ваїапсе ОЇ Іттипе Незропзев: Совіїтшиіайноп Мегзе Соіппірйіоп," У. Моїес. Мед. 83:193-202).
Більш конкретно, було виявлено, що в низьких концентраціях взаємодія між рецептором РО-1 і лігандом В7-НІ призводить у результаті до передачі інгібуючого сигналу, який сильно інгібує проліферацію антигенспецифічних СО8-Т-клітин; а в більш високих концентраціях взаємодії з
РО-1 не інгібують проліферацію Т-клітин, але помітно зменшують вироблення багатьох цитокінів (Зпагре, А.Н. еї аї. (2002) "Тне В7-С028 Зирепатйу," Маїште Вем. Іттипої. 2:116-126). Було виявлено, що проліферація Т-клітин і вироблення цитокінів як спочиваючими, так і раніше активованими СО4 і СО8 Т-клітинами й навіть наївними Т-клітинами з пуповинної крові інгібуються розчинними злитими білками В7-НІ1-Ес (Егеетап, а... еї а). (2000) "Епдадетепі ОЇ 25. Пе РО-1 Іттипоіппірйогу Несеріог Ву А МомеІ! В7 Ратйу Метрбег" І еад5 То Медаїїме Неашайоп
ОЇ Гутрпосуїе Асіїмайоп," У. Ехр. Мей. 192:1-9; І аїсптап, У. еї аї. (2001) "РО-І2 Ів А бесопа
Пдапа Рог РО-1 Апа Іппібії5 Т-Сеї!| Асіїмайоп," Маїиге Іттипої. 2:261-268; Сапег", Ї. єї а!. (2002) "РО-1:РО-Ї. Іппірйогу РаїШшужау АйМесів Воїй СО4(-) апа СОВ8(-) Т-сеїї5 Апа Ів Омегсоте Ву 1-2,"
Еншг. у. Іттипої. 32(3):634-643; ЗНагре, А.Н. еї аї. (2002) "Тне В7-С028 5ирепатіу," Маїшге Нему.
Зо Іттипої. 2:116-126).
Роль В7-НІ і РО-1 в інгібуванні активації й проліферації Т-клітин вказує на те, що ці біомолекули можуть бути терапевтичними мішенями для різних видів лікування запалення і злоякісної пухлини. Тому було запропоновано застосування антитіл до РО-1 для лікування інфекцій і пухлин і позитивної модуляції адаптивної імунної відповіді (див. публікації заявок на видачу патентів США МоМо 2010/0040614, 2010/0028330, 2004/0241745, 2008/0311117, 2009/0217401, патенти США МоМо 7521051, 7563869, 7595048, РСТ публікації УУО 2004/056875,
МО 2008/083174). Антитіла здатні специфічно зв'язуватися з РО-1, як повідомлялося в роботі
Адаїа, Т. єї а). (1996) "Ехргезвіоп ОЇ Пе РО-1 Апіїдеп Оп ТНне 5ипасе ОЇ 5іітціагєа Моизе Т Апа
В Гутрпосуїев," Іпі. Іттипої. 8(5):765-772; і в роботі Вегдег, В. еї аї. (2008) "Рнавзе І Заїеїу Апа
РпагтасокКіпеїіс 5ішау ОЇ СТ-011, А Нитапігейд Апіїроду Іпіегасіїпд Мйй РО-1, Іп Раїїєпів М/йЙ
Адуапсед Нетаїйіодіс Маїїдпапсієв5," Сіїп. Сапсег Вез. 14 (10): 3044-3051 (див. також патенти
США Мо 8008449 та Мо 8552154, патентні публікації США МоМо 2007/0166281, 2012/0114648, 2012/0114649, 2013/0017199, 2013/0230514 і 2014/0044738 і патентні РСТ публікації УУО 2003/099196, УМО 2004/004771, МО 2004/056875, МО 2004/072286, МО 2006/121168, МО 2007/005874, МО 2008/083174, МО 2009/014708, МО 2009/073533, МО 2012/135408, МО 2012/145549 ії МО 2013/014668).
ІМ. Злоякісні пухлини, що експресують НЕК2/пеий
Ампліфікація або надекспресія НЕНг/пеи відбувається приблизно в 25-30 95 злоякісних пухлин молочної залози (Мійі, 2. еї аї. (2012). "Пе НЕН2 РРесеріог іп Вгєаві Сапсег!:
Раїйорпузіоіоду, Сіїпіса! Озе, апа Мем Адмапсез іп Тнегару, "Спетоїнег Рез Ргасі 2012:742193;
Вигвівїп, Н.). (2005) "ТНе Оівіїпсіїме Майте ої НЕН2-Розіїме Вгеавзі Сапсегв," М. Епаді. У. Мей. 353 (16): 1652-4). Також відомо, що надекспресія має місце в злоякісній пухлині яєчників, шлунка й агресивних формах злоякісної пухлини матки (див., наприклад, роботи Мопетига, У. єї аї. (1991) "ЕмаїІмайоп ОГ Іттипогеасіїмнйу Рог егоВ-2 Ргоївїп А5 А МаїКег ОЇ Роог Зпоп Тепт Ргодпозвів Іп
Савійс Сапсег" Сапсег Незеагсп 51:1034; І апійв, Е. (2012) "Ріїтагу Нитап Омагіап Еріїнеї іа!
Сапсег СеїІє Вгоадіу Ехрге55 НЕН2 Аї ІттипоіодісаПу-Оеїеставріє І ємеїв," РіоБ Опе 7(11):649829; і Тап, М. еї аї. (2007). "МоіІесшаг Меспапізт5 ОГ егрВ2-Медіаїей Вгеазі Сапсег Спетогезівіапсе,"
Аду. Ехр. Меа. Віої. 608: 119-29). Як зазначено вище, надекспресія НЕК2г/пеи сильно пов'язана з підвищеною вірогідністю рецидиву захворювання й поганим прогнозом. Проте, НЕК2/пеи також 60 є важливою мішенню для засобів проти НЕКг/пеи, у тому числі моноклональних антитіл, які націлені на позаклітинний домен рецептора, таких як трастузумаб і маргетуксимаб, і низькомолекулярних конкурентів аденозинтрифосфату (АТФ), здатних блокувати активність тирозинкінази (ТК) у внутрішньоклітинному домені НЕК2, який є мішенню для специфічних засобів, таких як лапатиніб (Сапапі, М.О. еї аї. (2014) "Тагдеїеєд Тгєаїтепі ОЇ Неай Апа Меск
Занатоив-СеїЇ Сагсіпота: Роїепійа! ОЇ І арайіпір," Опсо. Тагдеїв Тег. 7:245-251; Ордат, Г.І. єї а!. (2012) "І арайіпір Рог Адмапсейд Ог Меїавіаїйс Вгеазі Сапсег," Опсоїодіві 17(4):536-542; І іао, у. еї а. (2010) "І арайіпір: Мем Орропипіцев Бог Мападетепі ОЇ Вгеазі Сапсег," Вгєазі Сапсег (Ооме
Меа Ргезвз) 2:79-91).
Хоча ефективний цілеспрямований вплив на злоякісні пухлини, які надекспресують
НЕР2г/пеи, і поліпшив виживаність без прогресування (РЕ5) і загальну виживаність (05), метастатична злоякісна пухлина молочної залози, що експресує НЕНг/пеи, все ще залишається невиліковним захворюванням. Дійсно, у багатьох пацієнтів із злоякісною пухлиною молочної залози має місце рецидив після лікування націленими на НЕНг/пеи засобами, такими як трастузумаб і лапатиніб, що вказує на присутність де помо або придбану стійкість (Тап, М. еї аї. (2007). "Моієсшаг Меспапізтз ОЇ егоВ2-Медіатед Вгєазі Сапсег Спетогезівіапсе," Аду. Ехр. Мед.
Віо!. 608: 119-29; 5іпдуп еї аї. (2014) "НЕН2-Розіїме Адмапсей Вгеазі Сапсег: Оріїтігіпд Раїепі
Ошсотевз Апа Орропипціез Бог Огид Оемеіюортепі" Вгйїзий доцтпа! ої Сапсег 111:1888-1898;
Еогтізапо, І. еї аї. (2014) "Ерідептта! Стоули Расіог-Весеріог Асіїмайоп Модиіаевз 5го-ЮРерепаепі
Везівзіапсе То І араїйіпір Іп Вгєазі Сапсег Моаде!5," Вгтєазі Сапсег Везвєагсі 16:845). Крім того, низький рівень експресії НЕК2/пеш також може бути асоційованим з поганим прогнозом (Сіїстеазе М.7. єї аї. (2009) "ЕЄмеп І ом-Їеме| НЕН2 Ехргеззіоп Мау Ве Авзосіаїєд УМУйН У/огве
Оцісоте Іп Моде-Розіїме Вгеабзі Сапсег" Ат ) Зиг9у Раїйпої. 2009 33(5):759-67). Проте, до теперішнього моменту не були схвалені засоби терапії для націленого на НЕК2/пеи лікування пацієнтів із злоякісними пухлинами, які мають низькі рівні експресії НЕК2/пеи. З цих даних особливо видно важливість розробки вдосконалених засобів терапії злоякісних пухлин, що експресують НЕК2/пеи.
Отже, незважаючи на попередні досягнення, залишається потреба в удосконалених композиціях і способах лікування злоякісних пухлин, що експресують НЕКг/пеи, і, зокрема, метастатичної злоякісної пухлини молочної залози й злоякісних пухлин, що мають низькі рівні експресії НЕК2/пеи. Даний винахід відноситься до таких композицій та до способів їх застосування під час лікуванні позитивної за НЕК2/пеи злоякісної пухлини молочної залози та інших злоякісних пухлин, що експресують НЕК2г/пеи.
Коротке розкриття даного винаходу
Даний винахід відноситься до фармацевтичної композиції, яка містить першу молекулу, яка специфічно зв'язується з НЕК2/пеи, і другу молекулу, яка специфічно зв'язується з рецептором клітинної поверхні, який залучений у регуляцію імунної контрольної точки (або його лігандом).
Даний винахід, зокрема, відноситься до варіанта здійснення, в якому друга молекула зв'язується з РО-1. Даний винахід також відноситься до застосування таких фармацевтичних композицій для лікування злоякісної пухлини й інших захворювань.
Зокрема, даний винахід відноситься до способу лікування злоякісної пухлини, що передбачає введення суб'єкту, який цього потребує, антитіла, яке специфічно зв'язує НЕК2г/пеи, і молекули, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку.
Даний винахід, зокрема, відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитіло, яке специфічно зв'язує НЕК2/пеи, являє собою "варіантне химерне антитіло 405", що містить варіабельний домен легкого ланцюга, який має амінокислотну послідовність 560 ІЮ
МО:4, і важкий ланцюг, який має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО:9, БЕО ІО МО:11 і БЕО ІЮО МО:13.
Даний винахід, зокрема, відноситься до варіанту здійснення таких способів, за яких молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, є антитілом до РО-1 або його антигензв'язуючим фрагментом.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитіло до РО-1 або його антигензв'язуючий фрагмент: (а) конкурує за зв'язування з РО-1 з ніволумабом, пембролізумабом, підилізумабом, антитілом ЕН12.2Н7, антитілом ПРО-1 тАБ 2, антитілом ПРО-1 тАбБ 7, антитілом АНРО-1 тАБ 9, антитілом ПНРО-1 тАБ 15 або з іншим антитілом до РО-1, вибраним з таблиці 1; або (Б) має три СОК важкого ланцюга й три СОК легкого ланцюга ніволумабу, пембролізумабу, підилізумабу, антитіла ЕН12.2Н7, антитіла ПРО-1 тАБ 2, антитіла НРО-1 тАБ 7, антитіла ПРО-1 тА 9, антитіла ПРО-1 тАБ 15 або іншого антитіла до РО-1, вибраного з таблиці 1; або бо (с) має варіабельний домен важкого ланцюга й варіабельний домен легкого ланцюга ніволумабу, пембролізумабу, підилізумабу, антитіла ЕН12.2Н7, антитіла НРО-1 тА 2, антитіла
ИРО-1 тАБ 7, антитіла НРО-1 тАБ 9, антитіла пПРО-1 тАБ 15 або іншого антитіла до РО-ї1, вибраного з таблиці 1.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитіло до РО-1 або його антигензв'язуючий фрагмент містить Ес-ділянку. Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких Ес-ділянка містить одну або декілька амінокислотних модифікацій, які зменшують афінність варіантної Ес-ділянки до
ЕсукШа (СО16А) і/або зменшують АЮСбс-активність. Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких модифікації включають заміну І234А, І 235А або
І 234А і 1235А.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитіло до РО-1 є ніволумабом, пембролізумабом, підилізумабом, антитілом ЕНІ1І2.2Н7, антитілом ПНРО-1 тАб 2, антитілом ПРО-1 тАбБ 7, антитілом пНРО-1 тАб 9, антитілом ПРО-1 тА або іншим антитілом до РО-1, вибраним з таблиці 1. Даний винахід додатково відноситься до 15 варіантів здійснення таких способів, за яких антигензв'язуючий фрагмент антитіла до РО-1 є антигензв'язуючим фрагментом ніволумабу, пембролізумабу, підилізумабу, антитіла ЕН12.2Н7, антитіла НРО-1 тАБ 2, антитіла ПРО-1 тАБ 7, антитіла ПРО-1 тАБб 9, антитіла ПРО-1 тАбБ 15 або іншого антитіла до РО-1, вибраного з таблиці 1.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитіло, яке специфічно зв'язує НЕК2/пеи (зокрема, варіантне химерне антитіло 405), вводять у дозуванні приблизно 6-18 мг/кг маси тіла кожні три тижні, а молекулу, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку (зокрема, антитіло до РО-1), вводять у фіксованому дозуванні приблизно 200 мг кожні три тижні. Даний винахід також відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитіло, яке специфічно зв'язує НЕК2г/пеи (зокрема, варіантне химерне антитіло 405), вводять у дозуванні приблизно 6-18 мг/кг маси тіла кожні три тижні, а молекулу, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку (зокрема, антитіло до
РО-1), вводять у дозуванні приблизно 1-10 мг/кг маси тіла кожні три тижні. Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитіло, яке специфічно
Зо зв'язує НЕК2/пеи (зокрема, варіантне химерне антитіло 405), вводять у дозуванні приблизно 6 мг/кг маси тіла, приблизно 10 мг/кг маси тіла, приблизно 15 мг/кг маси тіла або приблизно 18 мг/кг маси тіла кожні три тижні. Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку (зокрема, антитіло до РО-1), вводять у дозуванні приблизно 1 мг/кг маси тіла, приблизно 2 мг/кг маси тіла, приблизно З мг/кг маси тіла або приблизно 10 мг/кг маси тіла.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитіло, яке специфічно зв'язує НЕК2/пеи (зокрема, варіантне химерне антитіло 405), і молекулу, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку (зокрема, антитіло до РО-1), вводять суб'єкту одночасно в одній фармацевтичній композиції.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитіло, яке специфічно зв'язує НЕК2/пеи (зокрема, варіантне химерне антитіло 405), і молекулу, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку (зокрема, антитіло до РО-1), вводять одночасно в роздільних композиціях так, щоб обидві композиції були введені в межах 24-годинного періоду.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитіло, яке специфічно зв'язує НЕК2/пеи (зокрема, варіантне химерне антитіло 405), і молекулу, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку (зокрема антитіло до РО-1), вводять суб'єкту послідовно в роздільних фармацевтичних композиціях, зокрема, причому другу композицію, яку вводять, вводять щонайменше через 24 години або більше після введення першої композиції, яку вводять.
Даний винахід, зокрема, відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких злоякісною пухлиною є злоякісна пухлина, яка експресує НЕК2/пеи. Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких злоякісною пухлиною є злоякісна пухлина молочної залози, злоякісна пухлина шлунка, злоякісна пухлина передміхурової залози, злоякісна пухлина матки, злоякісна пухлина яєчника, злоякісна пухлина товстої кишки, ендотеліальна злоякісна пухлина, карцинома наднирників, недрібноклітинна злоякісна пухлина легені, злоякісна пухлина голови й шиї, злоякісна пухлина гортані, злоякісна пухлина печінки, бо ниркова злоякісна пухлина, гліобластома або злоякісна пухлина підшлункової залози.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, що додатково передбачають стадію введення третього терапевтичного засобу, зокрема, причому третій терапевтичний засіб являє собою антиангіогенний засіб, протипухлинний засіб, хіміотерапевтичний засіб або цитотоксичний засіб.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких третій терапевтичний засіб вводять одночасно з антитілом, яке специфічно зв'язує НЕКг/пеи (зокрема, варіантним химерним антитілом 405), і/або молекулою, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку (зокрема, антитілом до РО-1), або окремо від них.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитілом, яке специфічно зв'язує НЕК2/пеи, є маргетуксимаб, а молекулою, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, є антитіло до РО-1 під назвою пембролізумаб.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитілом, яке специфічно зв'язує НЕК2/пеи, є маргетуксимаб, а молекулою, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, є антитіло до РО-1 під назвою ніволумаб.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитілом, яке специфічно зв'язує НЕК2/пеи є маргетуксимаб, а молекулою, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, є антитіло до РО-1 під назвою підилізумаб.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитілом, яке специфічно зв'язує НЕК2/пеи, є маргетуксимаб, а молекулою, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, є антитіло до РО-1 під назвою ЕН12.2Н7.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитілом, яке специфічно зв'язує НЕК2/пеи, є маргетуксимаб, а молекулою, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, є антитіло до РО-1 під назвою ПРО-1 тА 2.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитілом, яке специфічно зв'язує НЕК2/пеи, є маргетуксимаб, а молекулою, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, є антитіло до РО-1 під назвою ПРО-1 тА 7.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитілом, яке специфічно зв'язує НЕК2/пеи, є маргетуксимаб, а молекулою, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, є антитіло до РО-1 під назвою ПРО-1 тА 9.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитілом, яке специфічно зв'язує НЕК2/пеим, є маргетуксимаб, а молекулою, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, є антитіло до РО-1 під назвою ПРО-1 тАб 15.
Даний винахід додатково відноситься до варіантів здійснення таких способів, за яких антитілом, яке специфічно зв'язує НЕК2/пеи, є маргетуксимаб, а молекулою, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, є антитіло до РО-1, вибране з таблиці 1.
Додаткові переваги й ознаки даного винаходу будуть очевидні з наведеного далі детального опису, креслень і прикладів, які ілюструють переважні варіанти здійснення даного винаходу.
Короткий опис креслень
На фіг. 1 показані результати вирівнювання послідовностей, що порівнює послідовності варіабельного домену легкого ланцюга "химерного антитіла 405" (5ЕО ІЮ МО:4) з варіабельним доменом легкого ланцюга "мишачого антитіла 405" (ЗЕО ІЮ МО:3) і варіабельним доменом легкого ланцюга "гуманізованого антитіла 405" (ЗЕО І МО:5).
На фіг. 2 показані результати порівняння послідовностей важкого ланцюга "химерного антитіла 405", що має Ес-ділянку дикого типу (ММ) (5ЕБО ІЮО МО:7), важкого ланцюга "варіантного химерного антитіла 405 МТ1", що має першу варіантну Ес-ділянку ("МТ1") (ЗЕО ІЮ
МО:9), важкого ланцюга "варіантного химерного антитіла 405 МТ2", що має другу варіантну Ес- ділянку ("МТ2") (ЗЕО ІЮ МО:11), і важкого ланцюга "варіантного химерного антитіла 405 МТЗ", що має третю варіантну Есо-ділянку ("МТ3") (ЗЕО ІЮ МО:13). Залишки СОК позначені чорними смужками, показаними під такими залишками. бо На фіг. З (секції А-С) показані результати аналізу ВІА;с;огеф зв'язування химерного антитіла
405, що має Ес дикого типу ("сп405 з Ес дикого типу") (секція А), 405 (секція В) і трастузумабу (секція С).
На фіг. 4 (секції А-Ю) показано вплив сп405-Ад (секції А і В) і Сп40О-ЕСМТІ (секції Ві 0) на проліферацію СО16-158Е-- (секції А і С) або СО16-158У/-- (секції В і Ю) клітин ЗКВЕЗ іп міїго.
На фіг. 5 показана підвищена протипухлинна активність різних антитіл за даним винаходом у нетрансгенних мишей.
На фіг. 6 показана підвищена протипухлинна активність різних антитіл за даним винаходом у НСО16А трансгенних мишей.
На фіг. 7 (секції А-В) показана роль теЕсКІМ і пЯСО16А в інгібуванні росту пухлини різними антитілами за даним винаходом у нетрансгенних і трансгенних мишей.
На фіг. 8 показана підвищена протипухлинна активність різних антитіл за даним винаходом у НСО16А трансгенних мишей.
На фіг. 9 (секції А-М) проілюстровано репрезентативне імуногістохімічне фарбування клітин з різних ліній клітин злоякісних пухлин щодо НЕКг/пеи. В секціях А-Ї. представлені різні лінії клітин, тобто секція А: МОА-МВ-435; секція В: МОА-МВ-231; секція С: А549; секція Ю: ОМСАК-8; секція Е: МСЕ-7; секція Е: ВТ-20; секція С: НТ-29; секція Н: 2К75-1; секція І: УІМТ-1; секція 5:
МОА-МВ-453; секція К: ВТ-474; секція Г: 5КВА-3; секція М: текКОМм-3.
На фіг. 10 (секції А-В) показані результати аналізу АОСС, здійснюваного для перевірки здатності варіантів химерного антитіла 405 за даним винаходом опосередковувати АОСС в лініях клітин злоякісних пухлин (МОА-МВ-435 в секції А; МОА-МВ-231 в секції В), що мають дуже низькі або відсутні рівні експресії НЕК2/пеи (оцінка САКО дорівнює 0).
На фіг. 11 (секції А-Е) показані результати аналізу АОСС, здійснюваного для перевірки здатності варіантних химерних антитіл 405 за даним винаходом опосередковувати АОСС в лініях клітин злоякісних пухлин (А549 в секції А; ОМСАК-8 в секції В; МСЕ-7 в секції С; ВТ-20 в секції ОЮ; НТ-29 в секції Е), що мають низькі рівні експресії НЕК2/пеи (оцінка САКО дорівнює 1).
На фіг. 12 (секції А-В) показані результати аналізу АОСС, здійснюваного для перевірки здатності варіантних химерних антитіл 405 за даним винаходом опосередковувати АОСС в лініях клітин злоякісних пухлин (2К75-1 в секції А; УІМТ-1 в секції В), що мають помірні рівні експресії НЕК2/пеи (оцінка САКО дорівнює 25).
Зо На фіг. 13 (секції А-С) показані результати аналізу АОСС, здійснюваного для перевірки здатності варіантних химерних антитіл 405 за даним винаходом опосередковувати АОСС в лініях клітин злоякісних пухлин (МОА-МВ-453 в секції А; ВТ-474 в секції В; 5КВК-3 в секції С; текОУ-3 в секції Ю), що мають високі рівні експресії НЕК2/пеи (оцінка САКО дорівнює З).
На фіг. 14 показана діаграма протоколу оцінки здатності антитіл до РО-1 посилювати проліферацію Т-клітин.
На фіг. 15 показано, що додавання РО-1 тАБ 1 (504; ВМ5-936558; ВгівіоІ-Муєтв 5апірбр, ніволумабу), РО-1 тАбБ 2 (МК-3475; МегскК, пембролізумабу (раніше ламбролізумаб)) і РО-1 тАБ
З (ЕНІ1Т2.2Н7; Обапа Рагрег) на початку аналізу ало-МІК індукувало сильну проліферативну відповідь Т-клітин у порівнянні з ізотипічним контрольним антитілом ІдсС1. Також показані проліферативні відповіді, отримані за допомогою РО-1 тА 4 (СТ-011; СигеТесі, підилізумабу), тАбр до СТГА і тАБ до ГАС-3. Клітини-респондери (К) є пантТ-клітинами; клітини-стимулятори (5) є зрілими дендритними клітинами (тоОс).
Детальне розкриття даного винаходу
Даний винахід відноситься до фармацевтичної композиції, яка містить першу молекулу, яка специфічно зв'язується з НЕК2/пеи, і другу молекулу, яка специфічно зв'язується з рецептором клітинної поверхні, який залучений у регуляцію імунної контрольної точки (або його лігандом).
Даний винахід, зокрема, відноситься до варіанта здійснення, в якому друга молекула зв'язується з РО-1. Даний винахід також відноситься до застосування таких фармацевтичних композицій для лікування злоякісної пухлини й інших захворювань.
Зокрема, даний винахід відноситься до фармацевтичної композиції, яка містить: (І) перше антитіло, яке специфічно зв'язується з НЕК2/пеи, таким чином будучи корисним як селективний цитотоксичний засіб для клітин, що надекспресують НЕК2г/пеи (наприклад, варіантне химерне антитіло 405 до НЕК2г/пеи, має зменшене глікозилювання й змінені ефекторні функції в порівнянні з відомими антитілами 405); і (ІЇ) друге антитіло, яке специфічно зв'язується з РО-1, таким чином будучи корисним у протидії або блокуванні зв'язування РО-1/РО-11 і тим самим збереження Т-клітинних відповідей, попереджаючи доставку негативного сигналу до Т-клітин.
Даний винахід також відноситься до способів застосування таких композицій під час діагностики, прогнозування й терапії таких захворювань, як злоякісна пухлина. 60 Не обмежуючись будь-якою конкретною теорією, за допомогою способів і композицій за даним винаходом, в яких об'єднані в комбінацію високоактивне націлене антитіло до НЕК2/пеи з антитілом до РО-1, можна здійснювати безпосередній цілеспрямований вплив на пухлину шляхом зв'язування з НЕКО/пеи вна клітинах злоякісної пухлини, тим самим зменшуючи/блокуючи активацію МОР/херегуліну в НЕК2/пейи-НЕН-3 комплексах і/або посилюючи АЮСС-активність щодо позитивних за НЕК2г/пеи пухлин, і безпосереднього посилення ендогенних протипухлинних імунних відповідей, наприклад, зв'язуючись з молекулами РО-1 клітинної поверхні, які присутні на поверхнях виснажених і толерантних протипухлинних ефекторних лімфоцитів, і тим самим послаблюючи здатність таких молекул клітинної поверхні зв'язуватися з їх рецепторними лігандами, й тим самим сприяючи активації імунної системи. Ці особливості дозволяють використовувати такі способи лікування й композиції під час лікування злоякісної пухлини.
Тепер докладніше розглянемо переважні в даний час варіанти здійснення даного винаходу, які спільно з кресленнями й наведеними далі прикладами призначені для пояснення ідей даного винаходу. Ці варіанти здійснення описані досить докладно, щоб дати можливість фахівцям у даній галузі техніки здійснювати на практиці даний винахід, і слід розуміти, що можуть бути використані інші варіанти здійснення, а також що можуть бути внесені структурні, біологічні та хімічні зміни без відступу від ідеї й обсягу даного винаходу. Якщо не вказано інше, всі використовувані в даному документі технічні та наукові терміни мають те ж саме значення, яке зазвичай розуміється рядовим фахівцем в галузі техніки, до якої відноситься даний винахід.
Для здійснення на практиці даного винаходу будуть використовуватися, якщо не вказано інше, загальноприйняті методики молекулярної біології (в тому числі рекомбінантні методики), мікробіології, клітинної біології, біохімії та імунології, які знаходяться в компетенції фахівців у даній галузі техніки. Такі методики в повній мірі описані в літературі, а саме: МОЇ ЕС! АВ
СГОМІМа: А ГАВОВАТОНУ МАМИОАЇ, Рошпй Еайіоп (ЗатрбгоокК еї аї. Еадв., 2012) Соїй Зргіпд
Нагрог Ргевз5, Соїй ріпу Натбог, ММ; СОВВЕМТ РАЕОТОСОЇ5 ІМ МОГ ЕС АВ ВІОЇОСУ (Аизибеї, Е.М. еї аї., Едв., 1987) Стеєпе Риб. Авзосіаїєз, Мем Моїк, ММ; ОПІСОМИОСІ ЕОТІСЕ
ЗУМТНЕБІВ: МЕТНОЮ5 АМО АРРІИ ІСАТІОМ5 (Меїйоавз іп Моїієсшціаг Віоіоду), ІММОМОВІОГ ОСТ 7 (апемжау, С.А. єї аі. 2007) Сапапа бсіепсе, Гопдоп, ОК; МОМОСІОМАЇ АМТІВООІЕ5: А
РААСТІСАЇ АРРВОАСН (5Перпега, Р. єї аї. Едв., 2000) Охіога Опімегзйу Ргезв, ОБА, Мем Мої
Зо ММ; ОБІМИа АМТІВООІЕ5: А ГАВОВАТОНУ МАМИАЇ (Напом, Е. еї аЇ. Еадв5., 1998) Соїд 5ргіпд
Натог Іарогаїогу Рге55, Соїд 5ргіпд Наїбог, ММ; ії СЕМІТА, НЕГГМАМ, АМО ВОБЕМВЕНИС З
САМСЕВ: РВІМСІРЕ5 4 РВАСТІСЕ ОР ОМСОГ ОС, ЕІСНТН ЕВІТІОМ, Ремпна, У. єї аї. Едв. 2008, Іірріпсой УМіПате 5 МУМіКіп5, РПйаде!Ірніа, РА. Конструювання антитіл розглянуто в попередніх заявках на видачу патентів США МоМо 60/781564, 60/945523, 61/015106 і 61/019051 і в 5 20040185045, 05 20040197347, 5 20040197866, 5 20050037000, 05 20050064514, 5 20050215767, 05 20060134709, 05 20060177439, 05 20070004909, 05 20070036799, 05 20070037216, 05 :20070077246, 05 20070244303, 5 20080044429, 005 20080050371, 11/869410, 11/952568, патенті США Мо 7112439, УМО 04/063351, УМО 06/088494, УМО 07/024249, УМО 06/113665, МО 07/021841, МО 07/106707 і МУО/2008/140603.
М. Визначення
Даний винахід відноситься до застосування фармацевтичної композиції, яка містить першу молекулу, яка специфічно зв'язується з НЕНг/пеи, і другу молекулу, яка специфічно зв'язується з рецептором клітинної поверхні, який залучений у регуляцію імунної контрольної точки (або його лігандом), для лікування таких захворювань, як злоякісна пухлина. Даний винахід, зокрема, відноситься до варіанта здійснення, в якому друга молекула зв'язується з РО-1.
Застосовуваний у контексті даного документа термін "АрСС" відноситься до антитілозалежної клітинноопосередкованої цитотоксичності, іп міго клітинноопосередкованої реакції, в якій неспецифічні цитотоксичні клітини, які експресують Есук (наприклад, моноцити, такі як натуральні кілери (МК) і макрофаги), розпізнають пов'язане антитіло на клітині-мішені й потім викликають лізис клітини-мішені.
Застосовуваний у контексті даного документа термін "антитіло" означає молекулу імуноглобуліну, здатну специфічно зв'язуватися з поліпептидом або білком або небілковою молекулою через наявність на такій молекулі конкретного домену, або фрагмента, або конформації ("епітопу"). Молекула, що містить епітоп, може мати імуногенну активність, таку, що викликає відповідь з виробленням антитіл у тварини; такі молекули називають "антигенами".
Молекули, що містять епітоп, не обов'язково повинні бути імуногенними.
Застосовуваний у контексті даного документа термін "антитіло" охоплює моноклональні антитіла, мультиспецифічні антитіла, антитіла людини, гуманізовані антитіла, синтетичні антитіла, химерні антитіла, поліклональні антитіла, камелізовані антитіла, одноланцюгові Ем бо (5сЕм), одноланцюгові антитіла, імунологічно активні фрагменти антитіла (наприклад,
фрагменти антитіла, здатні зв'язуватися з епітопом, наприклад, Еар-фрагменти, Рар'- фрагменти, Е(аб)2-фрагменти, Ем-фрагменти, фрагменти, що містять домен МІ. і/або МН, або які містять 1, 2 або З ділянки, що визначають комплементарність (СОК), такого домену МІ. (тобто
СОВІт1, СОВІ2 і/або СОМ. 3) або домену МН (тобто СоОКНІ, СОННна2 і/або СОКНнЗ)), які специфічно зв'язують антиген і т. д., біфункціональні або мультифункціональні антитіла, зв'язані дисульфідним містком біспецифічні Ем (заЕм), інтраантитела й діатіла та епітоп-зв'язуючі фрагменти будь-яких з перерахованих вище. Так, зокрема, термін "антитіло" розуміють як такий, що охоплює молекули імуноглобуліну й імунологічно активні фрагменти молекул імуноглобуліну, тобто молекул, які містять антигензв'язуючий сайт. Молекули імуноглобуліну можуть бути будь-якого типу (наприклад, ідо, ІДЕ, І9М, ІдО, ІдА і Ід), класу (наприклад, Ідсня,
Ідс2, ІдСіз, ІдСя, ІДАї ії ІдДАг) або підкласу (див., наприклад, патентні публікації США МоМо 20040185045, 20050037000, 20050064514, 20050215767, 20070004909, 20070036799, 20070077246 і 20070244303). Останні кілька десятиліть спостерігається пожвавлення інтересу в терапевтичному потенціалі антитіл, а антитіла стають одним з провідних класів одержуваних біотехнологічними методами лікарських засобів (Спап, С.Е. еї аї. (2009) "Тне Озе ОГ Апіїродієв іп Те Ттєайтепі ОЇ Іптесіїбиб5 Оізеазез5," біпдароге Мей. 9. 50(7):663-666). Більш ніж 200 лікарських засобів на основі антитіл були схвалені для застосування або знаходяться на стадії розробки.
Термін "химерне антитіло" означає антитіло, в якому частина важкого й/або легкого ланцюга ідентична або гомологічна антитілу від одного виду (наприклад, миші) або класу або підкласу антитіла, в той час як решта є ідентичною або гомологічною антитілу іншого виду (наприклад, людини) або класу або підкласу антитіла, за умови, що вони характеризуються необхідною біологічною активністю. До химерних антитіл за даним описом, які становлять інтерес, відносяться "приматизовані" антитіла, що містять антигензв'язуючі послідовності варіабельного домену, отримані від відмінного від людини примату (наприклад, мавпинних, людиноподібних мавп і т. д.), і послідовності константної ділянки людини.
Застосовуваний у контексті даного документа термін "моноклональне антитіло" означає антитіло популяції практично однорідних антитіл, тобто окремі антитіла, що входять до складу популяції, є ідентичними, за винятком можливих антитіл, які мають природні мутації та можуть
Зо бути присутніми в незначній кількості, а застосовуваний у контексті даного документа термін "поліклональне антитіло" означає антитіло, отримане з популяції гетерогенних антитіл. Термін "моноклональне" вказує на характерну ознаку антитіла як популяцію практично однорідних антитіл, і його не слід тлумачити як такий, що означає отримання антитіла будь-яким конкретним способом (наприклад, за допомогою гібридоми, фагового відбору, рекомбінантної експресії, трансгенних тварин і т. д.). Термін включає цілі імуноглобуліни, а також фрагменти і т. д., описані вище під визначенням "антитіла". Способи отримання моноклональних антитіл відомі з рівня техніки. Одним способом, який можна використовувати, є спосіб Копіег, 0. еї аї. (1975) "Сопііписи5 Сийиге5 ОЇ Ризей СеїІ5 Зесгейпд Апіїбоду ОЇ Ргедеїїпей Зресійсйну, " Майиге 256:495- 497, або його модифікація. Як правило, моноклональні антитіла розробляють на мишах, щурах або кроликах. Антитіла отримують шляхом імунізації тварини імуногенною кількістю клітин, клітинних екстрактів або білкових препаратів, які містять необхідний епітоп. Імуноген може являти собою без обмеження первинні клітини, культивовані лінії клітин, злоякісні пухлинні клітини, білки, пептиди, нуклеїнові кислоти або тканину. Застосовувані для імунізації клітини можна культивувати протягом деякого періоду часу (наприклад, щонайменше 24 години) перед їх застосуванням як імуногена. Клітини можна застосовувати як імуногени самі по собі або в комбінації з неденатуруючим ад'ювантом, таким як Кібі (див., наприклад, Уеппіпд5, М.М. (1995) "Неміємж ої ЗеїІесієй Адіимапів Овей іп Апіїбоду Ргодисіоп," ІП АА У. 37(3):119-125). Зазвичай клітини слід підтримувати інтактними й переважно життєздатними під час застосування як імуногенів. Інтактні клітини можуть забезпечувати для імунізованих тварин кращу детекцию антигенів, ніж зруйновані клітини. Застосування денатуруючих або агресивних ад'ювантів, наприклад, ад'юванта Фрейнда, може руйнувати клітини й, отже, не рекомендується. Імуноген можна вводити багаторазово з періодичними інтервалами, такими як два рази на тиждень або раз на тиждень, або можна вводити таким чином, щоб зберігалася його життєздатність у тварини (наприклад, в рекомбінантній тканині). Альтернативно, існуючі моноклональні антитіла й будь-які інші еквівалентні антитіла, які є специфічними щодо необхідного патогенного епітопу, можна секвенувати й отримати рекомбінантно будь-якими способами, відомими з рівня техніки.
Згідно з одним варіантом здійснення, таке антитіло секвенують, а полінуклеотидну послідовність потім клонують до вектора для експресії або розмноження. Послідовність, яка кодує антитіло, яке становить інтерес, можна зберігати у векторі в клітині-хазяїні, а потім 60 клітину-хазяїна можна розмножити й заморозити для подальшого застосування.
Полінуклеотидну послідовність таких антитіл можна застосовувати для генетичної маніпуляції з метою створення моноспецифічних або мультиспецифічних (наприклад, біспецифічних, триспецифічних і тетраспецифічних) молекул за даним винаходом, а також антитіла з оптимізованою афінністю, химерного антитіла, гуманізованого антитіла й/або канінізованого антитіла, для покращення афінності або інших характеристик антитіла.
Термін "гуманізоване" антитіло означає химерну молекулу, зазвичай отриману за допомогою рекомбінантних методик, яка має антигензв'язуючий сайт імуноглобуліну від виду, що не відноситься до людини, й решту імуноглобулінову структуру молекули, яка заснована на структурі й/або послідовності імуноглобуліну людини. Антигензв'язуючий сайт може містити або повні варіабельні домени, злиті на константних доменах, або лише СОЕ, щеплені на відповідні каркасні ділянки у варіабельних доменах. Антигензв'язуючі сайти можуть бути дикого типу або модифіковані однією або декількома амінокислотними замінами. Це усуває константну ділянку як імуноген у людей, але можливість імунної відповіді на чужорідну варіабельну ділянку зберігається (ГоВидійо, А.Р. еї аІ. (1989) "Моизе/Нитап Спітегіс Мопосіопа! Апіїбоду Іп Мап:
Кіпеїйс5 Апа Іттипе Незропзе," Ргос. Маї. Асад. осі. (0О.5.А.) 86:4220-4224). В іншому підході основна увага приділяється не лише забезпеченню наявності константних ділянок людського походження, але й модифікації варіабельних ділянок, а також зміни їх форми на якомога ближчу до людської формі. Відомо, що варіабельні ділянки як важких, так і легких ланцюгів містять три
СОН, які варіюють в залежності від розглянутих антигенів і визначають зв'язуючу здатність, які фланковані чотирма каркасними ділянками (ЕН), які є відносно консервативними у заданого виду та які, ймовірно, забезпечують каркас для СОН. Під час отримання відмінних від людських антитіл до конкретного антигену варіабельні ділянки можна "переформувати" або "гуманізувати" шляхом щеплення СОН, отриманих з відмінного від людського антитіла, на ЕВ, що присутні в людському антитілі, яке підлягає модифікації. Застосування такого підходу до різних антитіл розглянуто в роботах зай, К. еї а!. (1993) "Везпаріпд А Нитап Апіїбоду То ІппіБї Те ІпіелпеикКіп 6-Оерепаепі Титог СеїЇ Столи," Сапсег Не 53:851-856. Віесптапп, І. єї а). (1988) "ВезПпаріпа
Нитап Апіібодієз Тог ТПнегару," Маїште 332:323-327; Мептоеуеп, М. еї а). (1988) "Не5паріпд Нитап
Апііродієв: Стайіпд Ап Апійузогуте Асіїмйу, Зсієпсе 239:1534-1536; КешШерогоцдн, б. А. еї аї. (1991) "Нитапігайоп ОГ А Моизе Мопосіопа! Апіроду Ву СОВ-Стайіпуд: Те Ітропапсе ОЇ Ргатемжо/к Незідие5 Оп Гоор Сопіогтаїййоп," Ргоїєїп Епдіпеегіпд 4:773-3783; Маеда, Н. еї аї. (1991) "Сопвігсіоп ОЇ Везпарей Нитап Апіїрбодієз УУйНи НІМ-Мецігаїїгіпа Асіїмйу, Нитап
Апіїродієз Нубгідота 2:124-134; Соптап, 5. 0. єї а). (1991) "Везпаріпд А ТНегарешіс СО04
Апіїроду," Ргос. Маї!. Асайд. сі. (0О.5.А.) 88:4181-4185; Тетрезі, Р.В. еї аї. (1991) "ВезНнаріпа А
Нитап Мопосіопа! Апіроду То Іппірй Нитап Везрігайїгу Зупсуйа! Мігпив ІпТесійоп іп мімо,"
Віо/Гесппоїоду 9:266-271; Со, М. 5. еї аї. (1991) "Нитапігейд Апііродіев Рог Апіїміга! Тнегару,"
Ргос. Майї). Асад. 5сі. (0.5.А.) 88:2869-2873; Сапег, Р. єї аї. (1992) "Нитапігайоп ОЇ Ап Апії- рів85пег2 Апіїроду Рог Нитап Сапсег ТНегару," Ргос. Маї)!. Асад. 5сі. (0О.5.А.) 89:4285-4289; і Со,
М.5. єї аї. (1992) "Спітетіс Апа Нитапігей Апіїбодіез М/Н Зресіїйсйу Бог Тне СОЗЗ Апіїдеп," у.
Ітітипої. 148:1149-1154. Згідно з деякими варіантами здійснення, гуманізовані антитіла зберігають усі послідовності СОВА (наприклад, гуманізоване мишаче антитіло, яке містить усі шість СОВА з мишачих антитіл). Згідно з іншими варіантами здійснення, гуманізовані антитіла мають один або декілька СОВА (один, два, три, чотири, п'ять або шість), які змінені за їх амінокислотною послідовністю(послідовностями) відносно вихідного антитіла, які також називають одним або декількома СОН, "які є похідними від" одного або декількох СОВА з вихідного антитіла (тобто є похідними від таких СОВА, які отримані завдяки даним про амінокислотні послідовності таких СОВА і т. д.). Полінуклеотидну послідовність, що кодує варіабельний домен антитіла, можна застосовувати для створення таких похідних і покращення афінності або інших характеристик таких антитіл. Загальний принцип гуманізації антитіла передбачає збереження основної послідовності антигензв'язуючого сайту антитіла під час заміни нелюдської частини антитіла, яка залишилася, на послідовності людського антитіла.
Існує чотири загальних стадії гуманізації моноклонального антитіла. Ці стадії такі: (1) визначення нуклеотидної та прогнозованої амінокислотної послідовності варіабельних доменів легких і важких ланцюгів вихідного антитіла, (2) конструювання гуманізованого антитіла або канінізованого антитіла, тобто прийняття рішення про те, яку каркасну ділянку антитіла застосовувати в процесі гуманізації або канінізації, (3) фактичні методології/методики гуманізації або канінізації та (4) трансфекція й експресія гуманізованого антитіла. Див., наприклад, патенти США МоМо 4816567, 5807715, 5866692 і 6331415.
Природні антитіла (такі як антитіла до) складаються з двох легких ланцюгів у комплексі з двома важкими ланцюгами. Кожний легкий ланцюг містить варіабельний домен (Мі) і бо константний домен (Сі). Кожний важкий ланцюг містить варіабельний домен (МН), три константних домени (СНІ, СН2 ї СНЗ) і "шарнірний" домен ("Н"), розташований між доменами
СНІ ї СНО. Отже, основною структурною одиницею природних імуноглобулінів (наприклад, дос) є тетрамер, що має два легких ланцюги й два важких ланцюги, які зазвичай експресуються у вигляді глікопротеїну з масою приблизно 150000 Да. Амінокінцева ("М-кінцева") частина кожного ланцюга включає в себе варіабельний домен, що містить приблизно 100-110 або більше амінокислот, в основному відповідальних за розпізнавання антигену. Карбоксикінцева ("С- кінцева") частина кожного ланцюга визначає константну ділянку, причому легкі ланцюги мають один константний домен, а важкі ланцюги зазвичай мають три константних домени й шарнірний домен. Таким чином, структура легких ланцюгів молекули дос є п-МІ -СІ -с, а структура важких ланцюгів Їде є п-МН-СНІ-Н-СН2г-СНЗ-с (де п ії с є відповідно М-кінець їі С-кінець поліпептиду).
Здатність антитіла зв'язувати епітоп антигену залежить від наявності та амінокислотної послідовності доменів МІ і МН антитіла. У результаті взаємодії легкого ланцюга антитіла й важкого ланцюга антитіла й, зокрема, взаємодії його доменів МІ. ії МН утворюється один з двох антигензв'язуючих сайтів природного антитіла. Природні антитіла здатні зв'язуватися лише з одним видом епітопу (тобто вони є моноспецифічними), при цьому вони можуть зв'язувати кілька копій такого виду (тобто характеризуються бівалентністю або мультивалентністю).
Варіабельні домени молекули дсС складаються з ділянок, що визначають комплементарність (СОК), які містять залишки, що вступають у контакт з епітопом, і сегментів, які не відносяться до
СОК ії звуться каркасними сегментами (ЕК), які зазвичай підтримують структуру й визначають позиціювання петель СОК з тим, щоб уможливити такий контакт (хоча деякі каркасні залишки також можуть вступати в контакт з антигеном). Отже, домени Мі. ії МН мають структуру п-ЕВ1-
СОВ1-еЕН2-СОВ2-ЕНЗ3-СОВ3-ЕВА-с. Поліпептиди, які являють собою (або можуть виступати в їх ролі) першу, другу й третю СОК легкого ланцюга антитіла, в даному документі відповідно позначені доменом СОКІ1, доменом СОКІ2 і доменом СОКІ3. Аналогічним чином, поліпептиди, які являють собою (або можуть виступати в їх ролі) першу, другу й третю СОЕК важкого ланцюга антитіла, в даному документі відповідно позначені доменом СОКнНІ1, доменом СОКНа2 і доменом
СОВНнЗ. Таким чином, терміни домен СОКІ1, домен СОКІ2, домен СОКІЗ, домен СОРНІ, домен
СОВЬа і домен СОКНЗ відносяться до поліпептидів, які під час включення в білок приводять до того, що білок стає здатним зв'язуватися зі специфічним епітопом незалежно від того, чи є білок антитілом, яке має легкий і важкий ланцюги, або діатілом, або одноланцюговою зв'язуючою молекулою (наприклад, 5сЕм, ВіТе і т. д-)У або іншим типом білка. Отже, застосовуваний у контексті даного документа термін "антигензв'язуючий домен" означає таку частину антигензв'язуючої молекули, яка відповідає за здатність такої молекули специфічно зв'язувати епітоп антигену. Антигензв'язуючий фрагмент може містити 1, 2, 3, 4, 5 або все 6 доменів СОК такого антитіла, й хоча він і здатний специфічно зв'язуватися з таким епітопом, може характеризуватися специфічністю, афіністю або селективністю щодо такого епітопу, які відрізняються від таких у такого антитіла. Переважно, проте, антигензв'язуючий фрагмент буде містити всі 6 доменів СОК такого антитіла. Антигензв'язуючий фрагмент антитіла може бути окремим поліпептидним ланцюгом (наприклад, 5сЕм) або може містити два або більше поліпептидних ланцюгів, кожен з яких має амінокінец і карбоксикінець (наприклад, діатіло, Рар- фрагмент, Е(аб")2-фрагменти й т. д.).
Застосовуваний у контексті даного документа термін "діатіло" відноситься до комплексу з двох або більше поліпептидних ланцюгів або білків, кожний з яких містить щонайменше один Мі і один Мн домен або його фрагмент, причому обидва домени знаходяться в одному поліпептидному ланцюзі, але відокремлені проміжним лінкером, який є занадто коротким для уможливлювання їх з'єднання для утворення епітопзв'язуючого сайту; отже, для утворення діатіла необхідні щонайменше два поліпептидні ланцюги або два білка. Згідно з конкретними варіантами здійснення, "молекула діатіла" включає молекули, що містять "Ес" або "шарнірну-Ес- ділянку" антитіла. Поліпептидні ланцюги в комплексі можуть бути однаковими або відрізнятися, наприклад, молекула діатіла може являти собою гомомультимер або гетеромультимер. Згідно з конкретними аспектами, "молекула діатіла" включає димери або тетрамери або зазначені поліпептидні ланцюги, що містять як Мі, так і Мн домен (наприклад, молекула гомодимерного антитіла, молекула гетеродимерного антитіла й т. д.). Окремі поліпептидні ланцюги, що містять мультимерні білки, можуть бути ковалентно з'єднані щонайменше в один інший пептид мультимеру за допомогою міжланцюгових дисульфідних зв'язків.
Застосовуваний у контексті даного документа термін "злоякісна пухлина" означає захворювання, що характеризується наявністю новоутворення або пухлини, які утворюються в результаті аномального неконтрольованого росту клітин (при цьому такі клітини є "клітинами злоякісної пухлини"). Застосовуваний у контексті даного документа термін злоякісна пухлина бо безумовно включає різні форми лейкозу й лімфоми. Згідно з деякими варіантами здійснення,
термін злоякісна пухлина означає захворювання, яке характеризується наявністю доброякісної пухлини, яка зберігає свою локалізацію. Проте, згідно з переважними варіантами здійснення, термін злоякісна пухлина означає захворювання, що характеризується наявністю злоякісної пухлини, яка проростає в довколишні структури організму. Такі пухлини можуть додатково мати здатність поширюватися до віддалених ділянок. Згідно з деякими варіантами здійснення, злоякісна пухлина асоційована з клітинами злоякісної пухлини, які експресують специфічний антиген злоякісної пухлини. Згідно з деякими аспектами, застосовуваний у контексті даного документа термін злоякісна пухлина, зокрема, означає злоякісну пухлину, яка експресує
НЕК2/пеи. Таким чином, застосовуваний у контексті даного документа термін "злоякісна пухлина, яка експресує НЕК2г/пеи", означає злоякісні пухлини, які характеризуються наявністю клітин злоякісної пухлини, які експресують здатні до виявлення рівні НЕК2/пеи. Клітини злоякісної пухлини таких злоякісних пухлин, які експресують НЕК2г/пеи, можуть мати високий рівень експресії НЕК2/пеи або низький рівень експресії НЕК2/пеи. Застосовуваний у контексті даного документа термін "високий рівень НЕК2г/пеи" означає злоякісну пухлину, яка характеризується наявністю клітин злоякісної пухлини, які мають оцінку, що дорівнює 2-- або більше, під час використанні класифікації НЕВСЕРТЕЗТО (Оако Суютаїййоп Саїйотіа Іпс.,
Карпентер, Каліфорнія), або суб'єкта або пацієнта, що має клітини злоякісної пухлини, які були виявлені як такі, що надекспресують Нег2г/пеиш, наприклад, за допомогою флуоресцентної гібридизації іп 5йи (РІЗН). Застосовуваний у контексті даного опису "низький рівень НЕК2" означає злоякісну пухлину, яка характеризується клітинами злоякісної пухлини, які мають оцінку менш 2ж (наприклад, 1ж-) у класифікації НЕВСЕРТЕЗТФ (Оако Суютаїйоп Саїйогпіа Іпс.,
Карпентер, Каліфорнія). Доступні різні діагностичні/прогностичні аналізи для визначення рівня експресії НЕК2 клітинами злоякісної пухлини. Згідно 3 одним аспектом, надекспресію НЕК2 можна проаналізувати імуногістохімічним методом (ІНС), наприклад, за допомогою
НЕВСЕРТЕБЗТФ (Оако). Відповідно, на залитих парафіном зрізах тканини, одержаних у результаті біопсії пухлини, можна провести аналіз ІНС і узгодити з критерієм інтенсивності забарвлення білка НЕК2. Альтернативно або додатково, аналізи РІЗН, такі як ІМЕОВМ "М (набори для яких продаються компанією Мепіапа, Арізона) або РАТНМІЗІОМ "М (МУубвів, Іллінойс) можна здійснювати на фіксованій формаліном і залитій парафіном тканині пухлини для
Зо визначення величини (якщо вона існує) надекспресії НЕКЗ в пухлині.
Застосовувані в контексті даного документа терміни "порушення" і "захворювання" застосовують як взаємозамінні для позначення стану суб'єкта. Зокрема, термін "аутоїмунне захворювання" застосовують взаємозамінно з терміном "аутоїмунне порушення" для позначення стану у суб'єкта, який характеризується клітинним, тканинним і/або органним пошкодженням, викликаним імунологічною реакцією суб'єкта на власні клітини, тканини й/або органи. Термін "запальне захворювання" застосовують взаємозамінно з терміном "запальне порушення" для позначення стану у суб'єкта, який характеризується запаленням, переважно хронічним запаленням. Аутоїмунні порушення можуть бути асоційовані або не асоційовані із запаленням. Крім того, запалення може бути викликано або не викликане аутоїмунним порушенням. Таким чином, певні порушення можна характеризувати як аутоїмунне порушення, а також як запальне порушення, в той час як інші порушення можна характеризувати або лише як аутоїмунне порушення, або лише як запальне порушення. Злоякісна пухлина є прикладом "проліферативного порушення" (тобто порушення, яке асоційоване з певним ступенем аномальної проліферації клітин).
У контексті даного документа "ефективна кількість" фармацевтичної композиції, згідно з одним варіантом здійснення, є кількістю, достатньою для досягнення корисних або необхідних результатів, включаючи без обмеження клінічні результати, такі як зменшення розміру пухлини (в контексті злоякісної пухлини, наприклад, пухлини молочної залози, злоякісної пухлини шлунка або передміхурової залози), затримка клітинного росту злоякісної пухлини, затримка розвитку метастаз, зменшення симптому, який є наслідком захворювання, підвищення якості життя тих хто страждає на захворювання, зменшення дози інших лікарських препаратів, необхідних для лікування захворювання, посилення ефекту іншого лікарського препарату, наприклад, шляхом націлювання й/або інтерналізації, затримка прогресування захворювання й/або подовження дожиття індивідуума. Ефективну кількість можна вводити за одне або декілька введень. У контексті даного винаходу ефективна кількість лікарського засобу, сполуки або фармацевтичної композиції являє собою кількість, достатню для зменшення проліферації (або руйнування) клітин злоякісної пухлини або для зменшення й/або затримки розвитку або зростання метастаз клітин злоякісної пухлини, або безпосередньо, або опосередковано. Згідно з деякими варіантами здійснення, ефективна кількість лікарського засобу, сполуки або бо фармацевтичної композиції може бути чи не бути досягнута в поєднанні з іншим лікарським засобом, сполукою або фармацевтичної композицією. Таким чином, "ефективну кількість" можна розглядати в контексті введення одного або декількох хіміотерапевтичних засобів, і один засіб можна розглядати як такий, що дають в ефективній кількості, якщо в поєднанні з одним або декількома іншими засобами може бути досягнутий або досягається необхідний результат.
Незважаючи на те, що індивідуальні потреби розрізняються, визначення оптимальних діапазонів ефективних кількостей кожного компонента входить у компетенцію фахівців у даній галузі техніки. Типові дозування розглянуті нижче.
Термін "ефекторна активність" означає біологічні активності, пов'язані із взаємодією Ес- ділянки антитіла з рецептором або лігандом Ес. Антитіло може мати одну або декілька ефекторних функцій. Необмежуючі приклади ефекторних функцій антитіла включають АОСС, зв'язування С1д, комплементзалежну цитотоксичність (СОС), даунрегуляцію рецепторів клітинної поверхні (наприклад, В-клітинного рецептора; ВСЕ), опсонізацію, опсоно-фагоцитоз, клітинне зв'язування й розеткоутворення. Ефекторні функції включають як функції, які діють після зв'язування антигену, так і функції, які діють незалежно від зв'язування антигену.
Застосовуваний у контексті даного документа термін "ефекторна клітина" означає клітку імунної системи, яка експресує один або декілька рецепторів Ес і опосередковує одну або декілька ефекторних функцій. До еффекторних клітин відносяться без обмеження моноцити, макрофаги, нейтрофіли, дендритні клітини, еозинофіли, тучні клітини, тромбоцити, В-клітини, великі гранулярні лімфоцити, клітини Лангерганса, натуральні кілери (МК), і вони можуть утворюватися будь-яким організмом, включаючи без обмеження людей, мишей, щурів, кроликів і мавп.
Терміни "рецептор Ес" або "БСК" застосовують у контексті даного документа для опису рецептора, який зв'язується з Ес-ділянкою антитіла. Ілюстративним БСК є людський ЕсК з нативною послідовністю. ЕСК може бути ділянкою, яка пов'язує антитіло до (гамма-рецептор, "Есук"), і до нього відносяться рецептори підкласів ЕсукКІ (СОб64), ЕсукіІ! (С032), ЕсукП (СО16) і
ЕСсУуКІМ, у тому числі алельні варіанти й альтернативно сплайсовані форми таких рецепторів, наприклад, існує щонайменше два відомих рецептора ЕсукКі!: ЕсукПА і ЕсукіІІВ. Термін ЕсК також включає неонатальний рецептор, ЕсКп, який відповідає за передачу материнських о зародку.
Термін "сайт глікозилювання" означає амінокислотний залишок або залишки, які розпізнаються клітиною ссавця як місце для приєднання олігосахариду (тобто вуглеводів, що містять два або більше з'єднаних разом простих цукрів). Амінокислотні залишки, до яких приєднуються вуглеводи, такі як олігосахариди, здебільшого являють собою аспарагінові (М- зв'язок), серинові (О-зв'язок) і треонінові (О-зв'язок) залишки. М-зв'язане глікозилювання відноситься до приєднання олігосахаридного фрагмента до бічного ланцюга аспарагінового залишку. О-зв'язане глікозилювання означає приєднання олігосахаридного фрагмента до гідроксіамінокислоти, наприклад, серину або треоніну. Молекули за даним винаходом можуть містити один або декілька сайтів глікозилювання, включаючи сайти М-зв'язаного й О-зв'язаного глікозилювання. Згідно з даним винаходом, можна застосовувати будь-який відомий з рівня техніки сайт глікозилювання для М-зв'язаного або О-зв'язаного глікозилювання. Специфічні сайти приєднання зазвичай мають характерну послідовність амінокислот, яку називають "послідовністю сайту глікозилювання". Послідовністю сайту глікозилювання для М-зв'язаного глікозилювання є: МХ5 або МХТ, де М означає аспарагін, Х може бути будь-якою з традиційних амінокислот, крім проліну, 5 означає серин, а Т означає треонін. Ес-ділянка нативного до людини має два сайти М-зв'язаного глікозилювання, один в кожному з доменів СН2, за аспарагіном у положенні 297 (Азп 297). Сайти глікозилювання можна внести в молекулу за даним винаходом за допомогою способів, добре відомих у галузі техніки, до якої відноситься даний винахід (див., наприклад, ІМ МІТВО МИОТАСЕМЕ5БІ5, ВЕСОМВІМАМТ ОМА: А 5НОВТ
СОШВЗ5БЕ, у. 0. Маївоп, єї а). МУ.Н. Егеетап апа Сотрапу, Мем ХоїКк, 1983, спарієг 8, рр. 106-116, яка включена в даний документ за допомогою посилання в повному її обсязі. Ілюстративний спосіб внесення сайту глікозилювання в молекулу за даним винаходом може передбачати модифікацію або мутацію амінокислотної послідовності молекули так, щоб отримати необхідну послідовність МХ5 або МХТ. Аналогічним чином, сайти глікозилювання можна видалити шляхом модифікації або мутації амінокислотної послідовності існуючого сайту глікозилювання, наприклад, для зміни існуючої послідовності МХ5 або МХТ.
Застосовуваний у контексті даного документа термін "відповідь з виробленням людських антитіл до мишачих антитіл ("НАМА") відноситься до згубної імуногенної відповіді, яка має місце, коли імунна система людини розпізнає мишаче антитіло як чужорідну молекулу й виробляє запальну відповідь щодо нього. Відповідь НАМА може викликати токсичний шок або бо смерть. Химерні й гуманізовані антитіла зменшують ймовірність відповіді НАМА шляхом зменшення відмінних від людських частин уведених антитіл, але при цьому все ще зберігається можливість імунної відповіді з виробленням людських антитіл до людських антитіл ("відповідь
НАНА") проти таких антитіл.
Застосовуваний у контексті даного документа термін "гетерогенна" нуклеїнова кислота означає ДНК, РНК і т. д., яку вводять в клітину-хазяїна. Нуклеїнова кислота може бути отримана з будь-якого з ряду джерел, у тому числі геномної ДНК, мРНК, кДНК, синтетичної ДНК або продуктів їх злиття або комбінації. Нуклеїнова кислота може включати полінуклеотид з тієї ж клітини або типу клітини, що і клітина-хазяїн або клітина-реципієнт, або полінуклеотид з іншого типу клітини, наприклад, ссавця або рослини, й може необов'язково включати маркерні гени або гени відбору, наприклад, гени стійкості до антибіотика, гени стійкості до температури й т. д.
Застосовуваний у контексті даного документа термін "імунюомодулюючий засіб" і його варіанти означають засіб, який модулює імунну систему хазяїна. Згідно з конкретними варіантами здійснення, імуномодулюючий засіб являє собою імунодепресуючий засіб. Згідно з іншими варіантами здійснення, імуномодулюючий засіб являє собою імуностимулюючий засіб.
До імуномодулюючих засобів відносяться без обмеження малі молекули, пептиди, поліпептиди, злиті білки, антитіла, неорганічні молекули, міметики й органічні молекули.
У контексті даного документа вважають, що молекула (наприклад, антитіло) "специфічно" зв'язує ділянку іншої молекули (тобто "епітоп"), якщо вона вступає в реакцію або зв'язується частіше, швидше, довше й/або з більшою афінністю з такою ділянкою відносно інших ділянок молекули або альтернативних молекул. Наприклад, антитіло, яке специфічно зв'язується з епітопом НЕКг/пеи, є антитілом, яке зв'язує такий епітоп НЕК2г/пем з більшою афінністю, авідністю, легше й/або довше, ніж воно зв'язується з іншими епітопами НЕК2г/пеи або з відмінним від НЕК2г/пеи епітопом. Аналогічним чином, антитіло, яке специфічно зв'язується з епітопом РО-1, зв'язує такий епітоп з більшою афінністю, авідністю, легше й/або довше, ніж воно зв'язується з іншими епітопами РО-1 або з відмінним від РО-1 епітопом. Також під час прочитання цього визначення буде зрозуміло, що, наприклад, антитіло (або фрагмент, або епітоп), яке специфічно зв'язується з першою мішенню, може специфічно або переважно зв'язуватися або не зв'язуватися з другою мішенню. Таким чином, "специфічне зв'язування" не обов'язково вказує (хоча й може включати) на виняткове зв'язування. Зазвичай, якщо контекст
Зо явно не свідчить про інше, "зв'язування" означає "специфічне зв'язування". Здатність антитіла специфічно зв'язуватися з епітопом антигену може бути визначена, наприклад, за допомогою імуноаналізу.
Застосовуваний у контексті даного документа термін "молекула нуклеїнової кислоти" включає молекули ДНК (наприклад, кДНК або геномної ДНК), молекули РНК (наприклад, мРНК), комбінації молекул ДНК і РНК або гібридні молекули ДНК/РНК і аналоги молекул ДНК або РНК.
Такі аналоги можна отримати за допомогою, наприклад, нуклеотидних аналогів, які включають без обмеження інозинові або тритильовані залишки. До таких аналогів також можуть відноситись молекули ДНК або РНК, що містять модифіковані кістяки, які надають сприятливі властивості молекулам, такі як, наприклад, стійкість до нуклеаз або збільшена здатність проходити через клітинні мембрани. Нуклеїнові кислоти або нуклеотидні послідовності можуть бути одноланцюговими, дволанцюговими, можуть містити як одноланцюгові, так і дволанцюгові частини й можуть містити триланцюгові частини, але переважно є дволанцюговими ДНК.
Застосовуваний у контексті даного документа термін "істотна ідентичність послідовностей" відноситься до двох або більше послідовностей або підпослідовностей (наприклад, доменів), які щонайменше приблизно на 8095 ідентичні за амінокислотними залишками, переважно щонайменше приблизно на 9095 або щонайменше приблизно на 9595 ідентичні під час порівняння й вирівнювання за максимальної відповідності. Ідентичність послідовностей між двома схожими послідовностями (наприклад, варіабельними доменами антитіла) можна розрахувати за допомогою алгоритмів, таких як ті, що описані в роботах Зтійй, Т.Г. 5 М/агептап,
М.5. (1981) "Сотрагізоп ОЇ Віозедпепсез, " Адм. Аррі. Маїй. 2:482 (алгоритм локальної гомології);
МееаІетап, 5.8. 5 МУйпесп, 0.0. (1970) "А Сепегаї МеїШой Арріїсарбіє То Те Ббеагсп Гог
Зітіїанйнцев п Те Атіпо Асій бедиепсе ОЇ Тмо Ругоївїпв," У. Мої. Віої. 48:443 (алгоритм гомологичного вирівнювання), Реагзоп, М.В. 5 Гіртап, 0... (1988) "Іпргомейд Тоо!5 Рог Віоіодісаї!
Зедиепсе Соптрагіхоп, " Ргос. Май. Асай. Зсі. (0.5.А.) 85:2444 |спосіб пошуку схожості|; або в роботі Айвеспиі, 5.Е. єї аї., (1990) "Вавзіс І оса! АІйдптепі Зеагсп Тоо1," У. Мої. ВіоІ. 215:403-10
І(алгоритм ВІАБЗТ)Ї. Під час застосування зазначених вище алгоритмів використовують параметри за замовчуванням (для довжини вікна, штрафу за введення гепа й т. д.). Зазначена перша амінокислотна послідовність є "істотно схожою" з другою амінокислотною послідовністю, якщо ступінь ідентичності послідовностей складає щонайменше приблизно 70 95, переважно 60 щонайменше приблизно 8095 або щонайменше приблизно 9095 або навіть щонайменше приблизно 95 95. Вважають, що зазначена послідовність нуклеїнової кислоти є "істотно схожою" з другою послідовністю, коли або: (1) ступінь ідентичності послідовностей складає щонайменше приблизно 70 95, переважно щонайменше приблизно 80 95, або щонайменше приблизно 90 95, або навіть щонайменше приблизно 95 95, або (2) молекула нуклеїнової кислоти, яка містить послідовність нуклеїнової кислоти, кодує поліпептид, який щонайменше приблизно на 70 95 ідентичний, переважно щонайменше приблизно на 80 95, або щонайменше приблизно на 90 95, або навіть щонайменше приблизно на 95 95 ідентичний поліпептиду, який кодується молекулою нуклеїнової кислоти, що містить другу послідовність. Послідовності, які Є суттєво ідентичними, також є суттєво схожими.
Під час згадки антитіл віднесення амінокислот до кожного домену проводять згідно з роботою КаБбаї єї а, БЕООЕМСЕВ ОРГ РАОТЕІМ5 ОГ ІММОМОГ ОСІСАЇ ІМТЕВЕ5Т, 5 Еа. (Майбопаї Іпзійшев5 ої Неан, Веїпезаа, МО., (1991) ("Кабаї еї аІ") яка явно включена в даний документ за допомогою посилання. По всьому даному опису нумерація константних залишків у важкому ланцюзі Ідс "згідно з Кабвраї" означає нумерацію Е)О антитіла ІдД01 людини, як описано у
Кабаї єї а.
Термін "мишаче антитіло 405" позначає мишаче антитіло ІдДО1, описане в патенті США Мо 5677171 під номером АТСС СКІ 10463. Мишаче антитіло 405 зв'язує НЕК2/пеи і має варіабельний домен легкого ланцюга, який має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:3, і варіабельний домен важкого ланцюга, який має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:47.
Термін "гуманізоване антитіло 405" означає антитіло (дО, описане в роботі Сагіег, Р. еї аї. (1992) ("Нитапігайоп ОЇ Ап Апіі-Р185пег2 Апіїбоду Бог Нитап Сапсег Тпегару, " Ргос. Май. Асай.
Зсі. (0О.5.А.) 89:4285-4289). Повідомлялося, що гуманізуване антитіло 405 здатне зв'язувати
НЕН2г/пеи, і воно має варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:5, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка має амінокислотну послідовність 5ЕО 1О МО:48.
Амінокислотною послідовністю варіабельного домену легкого ланцюга мишачого антитіла 405 є (5ЕО ІЮ МО:3) (залишки СОВІ підкреслені):
РІММТОЗНКЕ МО5ТЗУСОВМУ5 ІТСКАБОСУМ ТАМАМУСОКР ЕНЗРКО МБ
АБЕВУТаМРО ВЕТамМАБЗаИто ЕТЕТІЗБ5МОА ЕВ АУУУСОО НУТТРРТРОаС
Коо) СТКІ БІК
Амінокислотною послідовністю варіабельного домену важкого ланцюга мишачого антитіла 405 є (5ЕО ІЮ МО:47) (залишки СОАНн підкреслені):
ОМОГ ОО5ОРЕ І УКРОАБІ КІ. 5СТАБОЄМІК ОТМІНУМУКОВ РЕОСІЕУЛСА В
ІМРТМаМТАМ ОРКЕОЮКАТІ ТАОТ5ОМТАМ ОМА ТЕО ТАМУУСЗАМУС врагМАМОУМУ ДМОЮОСАБУТУЗО
Амінокислотною послідовністю варіабельного домену легкого ланцюга гуманізованого антитіла 405 є (БЕО 10 МО:5) (залишки СОН). підкреслені):
РІОМТО5РББ І ЗАЗМарАМТ ІТСВАБООУМ ТАМАМУМООКР СКАРКИ ІМ
АБЗЕ ЕБОаМРЗ ВЕЗаЗНАЗИтТО ЕТ ТІ ОР ЕОЕАТУМСОО НУТТРРТЕСО атТКкМєїК
Амінокислотною послідовністю варіабельного домену важкого ланцюга гуманізованого антитіла 405 є (БЕО ОО МО:48) (залишки СОАНн підкреслені):
ЕМОЇ МЕЗОСІЄ І МОРОаСБІ ВІ. ЗСААБОаєМІК ОТМІНМУУВОА РЕК ЕММАВ
ІМРТтмаУтАМ АОБУКОаВЕТІ БАОТОКМТАМ ГОММ5І ВАЕО ТАМУОоЗАМа срагмМАМОММ/ поаті мгУ55
Термін "химерне антитіло 405" означає антитіло ІС, яке зв'язує Негг/пеи людини й має легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО:2, і важкий ланцюг, що має Ес- ділянку дикого типу; амінокислотна послідовність важкого ланцюга химерного антитіла 405 показана під 5ЕО ІЮ МО:7. "Варіантне химерне антитіло 405" є антитілом ІдСї, яке зв'язує
НЕВг/пеи і має легкий ланцюг і/або важкий ланцюг, амінокислотна послідовність(послідовності) якого(яких) відрізняється (відрізняються) від послідовностей химерного антитіла 405 (наприклад, антитіла Ідс, що містить легкий ланцюг, який має амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО 2, і важкий ланцюг, який має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:9, 5ЕО ІО МО:11 або 5ЕО ІО
МО:13).
МІ. Зв'язуючі молекули
А. Молекули, які специфічно зв'язують НЕНг/пеи
До молекул, які специфічно пов'язують НЕН2г/пєи і охоплюються даним винаходом, належать антитіла до НЕН2г/пеи, здатні специфічно зв'язуватися з безперервним або дискретним (наприклад, конформаційним) епітопом Негг/пеи людини. Антитіла до НЕНг/пеи, 60 що застосовуються в способах за даним винаходом, будуть переважно також характеризуватися здатністю зв'язуватися з молекулами НЕНг/пеи одного або декількох видів, які не відносяться до людини, особливо мишей, щурів, собак і приматів (особливо яванського макака).
Нижче представлені антитіла до НЕК2г/пеи. Додаткові шукані антитіла можна отримати шляхом мутації молекули нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептидний ланцюг таких антитіл, а потім скринінгу щодо експресованих антитіл, які характеризуються здатністю специфічно зв'язуватися з Нег2/пеш, шляхом виділення нових гібридом, які секретують антитіла, продукування у яких індукується під час контакту з НЕК2/пеи або його пептгидним фрагментом або за допомогою інших способів. Послідовність НЕК/2 людини була описана в роботі
Мататою, Т. еї аІ. (1986) "БітіПапшу ОЇ Ргоївіп Епсодеа Ву Те Нитап с-еп-В-2 Сепе То
Еріаепта! Сгоулп Расіог Кесеріог, " Майиге 319:230-234, а послідовність доступна в СепВапк під номером доступу ХОЗЗ363.
Даний винахід, зокрема, відноситься до варіантів химерного антитіла 405 і, більш конкретно, до варіантів такого химерного антитіла 405, які специфічно зв'язуються з НЕН2г/пеи, переважно
Негг/пеи людини, та які характеризуються зменшеним глікозилюванням відносно мишачого антитіла 405 через видалення сайту глікозилювання у варіабельному домені легкого ланцюга.
Зокрема, переважні химерні антитіла за даним винаходом позбавлені сайту глікозилювання у варіабельному домені легкого ланцюга мишачого антитіла 405, який в легкому ланцюзі мишачого антитіла 405 містить послідовність М-В-5 у положеннях 65, 66 і 67. Переважно антитіла мають підвищену афінність зв'язування з НЕНг/пєи, і більш переважно варіантні химерні антитіла 405 за даним винаходом мають підвищену ефекторну функцію або як підвищену афінність зв'язування з НЕНг/пеи, так і підвищену ефекторну функцію в порівнянні з мишачим антитілом 405.
Згідно з переважним варіантом здійснення, переважні варіанти химерного антитіла 405 містять легкий ланцюг (легкий ланцюг химерного 405), що має або містить амінокислотну послідовність 5БЕО 1О МО:2.
Амінокислотна послідовність легкого ланцюга химерного антитіла 405 (5ЕО ІЮ МО:2) (залишки СОН. підкреслені):
РІММТОЗНКЕ МО5ТЗУСОВМУ5 ІТСКАБОСУМ ТАМАМУСОКР ЕНЗРКО МБ
Зо АБЕВУТОаМРО ВЕТазнзато ЕгТЕТІЗО5МОА ЕП АМУМСОО НУТТРРТРСа
СТКУБІКАТМ ААРБЗМРІЕРР БОЕОЇ КБатА ММС ММЕМ РАЕАКМОМ/КМ
РМАГОБамМм5О ЕЗМТЕООЗКО 5ТМУ5І 551 Т І ЗКАЮМЕКНК МУМАСЕУТНОС
ІЇ55РУТКЗЕМ ВаЕС
Ілюстративною молекулою нуклеїнової кислоти, яка кодує легкий ланцюг переважних варіантних химерних антитіл 405, є БЕО ІЮ МО:1: дасаїсдюда Юасссадіс ссасааднс аїдіссассі СЮдасдда їІадддісадс аїсассідса аддссадсса ддадюааї асідсщіад ссіддіаіса дсадааасса ддасаїйсіс ссааасідсі дашасісс дсаїсснос ддіасасща адісссідаї сдсісасід дсадсадаїс тддодасадаї йсасшса ссаїсадсад дідсадосї даадассід9 садшацйа сідісадсаа сайцаїасіа сассісссас спсададода даїассаадд Юддадаїсаа асдіасддід дсідсассаї сідіснсаї сНнсссдсса ісюаїдадс адндаааїс ддаасідсс істюцащі дссідсдаа іаасісіаї сссадададо ссааадіаса чддаада даїаасдссс іссааіїс9дда їаасісссад дададщіса сададсадда садсааддас адсассіаса дссісадсад сасссюдасд сідадсааад садасіасда дааасасааа дісіасдссі дсдаадісас ссаїсадддс сюадсісдс ссдісасааа дадснсаас аддддададі днад
Антитіла, які мають таку амінокислотну послідовність легкого ланцюга, мають модифікацію за положенням 65 ділянки М. і відповідно позбавлені сайту М-зв'язаного глікозилювання, який є в мишачому антитілі 405 (див. фіг. 1, на якій зображено ілюстративне порівняння між амінокислотними послідовностями ділянки Мі химерного антитіла 405, що має модифікацію
Мб655 (ЗЕО ІО МО:4), і мишачого (ЗЕО ІО МО:3) і гуманізованого (ЗЕО ІЮ МО:5) антитіл 405).
Згідно з іншим переважним варіантом здійснення, варіантні химерні антитіла 405 за даним винаходом мають амінокислотну послідовність ділянки Мі 5ЕО 10 МО:4.
Амінокислотна послідовність ділянки Мі химерного 405 (5ЕО ІЮ МО:4) (залишки СОВ: підкреслені):
РІММТОЗНКЕ МО5ТЗУСОВМУ5 ІТСКАБОСУМ ТАМАМУСОКР ЕНЗРКО МБ
АБЕВУТОаМРО ВЕТазнзато гТЕТІЗО5МОА ЕП АМУМСОО НУТТРРТРСС бо атТКкМєїК
Химерне антитіло 405 містить важкий ланцюг ("важкий ланцюг химерного 405"), який має
Ес-ділянку дикого типу (ЗЕО ІЮ МО:7), що може кодуватися послідовністю нуклеїнової кислоти
ЗЕО ІО МО:6. Нижче показані ці послідовності:
Амінокислотна послідовність важкого ланцюга химерного 405, що має Ес-ділянку дикого типу (ЗЕО ІО МО:7) (залишки СОВНн підкреслені):
ОМОГ ОО5ОРЕ І УКРОАБІ КІ. 5СТАБОЄМІК ОТМІНУМУКОВ РЕОСІЕУЛСА В
ІМРТМаМТАМ ОРКЕОЮКАТІ ТАОТ5ОМТАМ ОМА ТЕО ТАМУУСЗАМУС врагМАМОУМ СМОСПАБУТУ5З5 АЗТКОаРБЗУЕР Ї АРЗЗКОТЗОа СТААГ ас УК
ОМЕРЕРМТМ5 М/МЗСИаА ТОМ НТЕРАМІ 055 СІ У5І 55УМТ МРЗЗ ато
МІСМУМНКРЗ МТКМОКАМЕР КЗ5СОКТНТОСР РСОСРАРЕЇЇ СО РОМБ ЕРРКР
КОТ МІЗАТР ЕУТСУММОУ5 НЕОРЕМКЕМУ МУрОаМЕМНМА КТКРАЕЄОУМ
ЗГУВМУМУБМІ Т М НОВУ МаК ЕМКОСКУ5МКА І РАРІЕКТІ5 КАКООРВЕРО
МУТГРРЗАОЕ І ТКМОМБІ ТО І УКагмРБОЇ АМЕМЕЗМООР ЕММУКТТРРУ
ГгОоБРОаБЕРГ М ЗК ТМОКЗАМ ООСММЕЗСЗМ МНЕАЇ НМНМУТ ОКБІ БІ РОК
Ілюстративна молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкий ланцюг химерного 405, що має Ес-ділянку дикого типу (5ЕО ІО МО:6): саддіїсадс Ідсадсадіс їддсссідад сіддюдаадс саддддссіс асісаадію іссідіасад снсіддсії саасаїсааа дасассіаїа їссасюддї дааасададд ссідаасадо дссіддаац чайодаачд ащшаїссіа ссааддсіа їасіадайаї дасссаааді Іссаддасаа доссасіаїс асадсадаса саїссіссаа сасадссіас сідсаадіса дссдссідас аїсюаддас асідссдісії апйасідсіс ссддіддадда даддасодсі ісіаїдсіаї ддасіасідд ддаісадддад ссіссдадас сдщдадсісс дссіссасса адддсссаїс ддіснеоссс сіддсасссї ссіссаадад сассісіддо ддсасадс9д сссіддосід ссіддісаад дасіасісс ссдаассдодї часодідісд ддаасісад дсдсссдас садсддсдід сасасснНеос сддсідіссі асадіссіса ддасісіасі сссісадсад соддоасс дідсссісса дсадсндда сасссадасс іасаїсідса асдідааїса саадсссадс аасассаадд (ддасаадад
Зо адндадссс аааіснцо9їд асаааасіса сасаїдссса ссдідсссад сассідаасі ссюддддда ссадісадісі Іссісцосс сссаааассс ааддасассс ісаюаїсіс ссддассссі даддісасаї дсадчоаді даасдідадс сасдаадасс сідаддісаа днсаасіда їасаюдасд дсдддадодї дсаїааюдсс аадасааадс сдсдддадда дсадіасаас адсасдіасс дідіддісад сдіссісасс діссідсасс аддасіддсі дааюдсаад дадіасааді дсааддісіс саасааадсс сісссадссс ссаїсдадаа аассаїсісс ааадссааад ддсадссссуд адаассасад дідїасассс дсссссаїс ссдддаюдад сідассаада ассаддісад ссюассідс сіюддісааад дсіїсіаїсс садсдасаїс дссдіддацді дадададсаа Ююддсадссу дадаасаасі асаадассас дссісссоюд сюдасіссо асоддсіссії снссісіас адсаадсіса ссдіддасаа дадсаддащо садсаддоада асдіснсіїс аїдсіссдід аюсада(дчад сісідсасаа ссасіасасу садаададсс ісісссідіс Іссдддіааа ща
Згідно з іншими варіантами здійснення, даний винахід відноситься до використання варіантного химерного антитіла 405, важкий ланцюг якого містить варіантну Ес-ділянку і, більш переважно, варіантну Ес-ділянку "РсМТ1", "БсМТ2" або "РсМТ3". Нижче показані ці послідовності:
Амінокислотна послідовність важкого ланцюга варіантного химерного антитіла 405, що має варіантну Ес-ділянку СМТ (ЗЕО ІО МО:9) (залишки СОАНн підкреслені):
ОМОГ ОО5ОРЕ І УКРОАБІ КІ. 5СТАБОЄМІК ОТМІНУМУКОВ РЕОСІЕУЛСА В
ІМРТМаМТАМ ОРКЕОЮКАТІ ТАОТ5ОМТАМ ОМА ТЕО ТАУУУСЗАУС врагМАМОУМ СМОСПАБУТУ5З5 АЗТКОаРБЗУЕР Ї АРЗЗКОТЗОа СТААГ ас УК
ОМЕРЕРМТМ5 МУМЗСОАІ ТОМ НТЕРАМІ 055 СІ У5І 55УМТ МРЗЗБІ аТОТ
МІСМУМНКРЗ МТКМОКАМЕР КЗ5СОКТНТОСР РСРАРЕЇЇ СО РОУБІ І РРКР
КОТ МІЗАТР ЕУТСУММОУ5 НЕОРЕМКЕМУ ММрОаМЕМНМА КТКРРЕЕОМУМ
ЗТ АМУБІТ М НОВУ Мак ЕУКСКУБЗМКА І РАРІЕКТІВ КАКИОРВЕРО
МУТГРРЗАОЕ І ТКМОМБІ ТО І УКагмРБОЇ АМЕМЕЗМООР ЕММУКТТРІ М
ГгОоБРОаБЕРГ М ЗК ТМОКЗАМ ООСММЕЗСЗМ МНЕАЇ НМНМУТ ОКБІ БІ РОК бо Ілюстративна молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкий ланцюг варіантного химерного антитіла 405, що має варіантну Ес-ділянку ЕСМТ1 (5ЕО ІО МО:8): саддіїсадс Ідсадсадіс їддсссідад сіддюдаадс саддддссіс асісаадню іссідіасад снсіддсії саасаїсааа дасассіаїа їссасюддї дааасададд ссідаасаду дссіддааю данддаада ащшаїссіа ссааддсіа їасіадайаї дасссаааді Іссаддасаа доссасіаїс асадсадаса саїссіссаа сасадссіас сідсаадіса дссдссідас аїсюаддас асідссдісії апйасідсіс ссддіддадда даддасодсі ісіаїдсіаї ддасіасідд ддісадддад ссіссддас сдщдадсісс дссіссасса адддсссаїс ддіснеоссс сіддсасссї ссіссаадад сассісіддо ддсасадс9д сссіддосід ссіддісаад дасіасісс ссдаассдодї часодідісд ддаасісад дсдсссдас садсддсдід сасасснНеос сддсідіссі асадіссіса ддасісіасі сссісадсад сдіддідасс дідсссісса дсадснудоу сасссадасс іасаїсідса асдідааїса саадсссадс аасассаадд (ддасаадад адндадссс аааіснцо9їд асаааасіса сасаїдссса ссдідсссад сассідаасі ссюддоддда ссдісадісі Іссіснасс сссаааассс ааддасассс ісаюаїсіс ссддассссі даддісасаї дсащадчаї даасдідадс сасдаадасс сідаддісаа дісаасщао їасодіддасд дсдддадодї дсаїааюдсс аадасааадс сдссддадда дсадіасаас адсасдсісс дідіддісад саїссісасс діссідсасс аддасіддсі дааюдсаад дадіасааді дсааддісіс саасааадсс сісссадссс ссаїсдадаа аассаїсісс ааадссааад ддсадссссд адаассасад дідїасассс дсссссаїс ссдддаюдад сідассаада ассаддісад ссюассідс сіюддісааад дсіїсіаїсс садсдасаїс дссдіддацді дадададсаа Ююддсадссу дадаасаасі асаадассас дссісісдід сюдасіссо асоддсіссії снссісіас адсаадсіса ссдіддасаа дадсаддащо садсаддоада асдіснсіс аїдсіссдід аїдсадада сісідсасаа ссасіасасу садаададсс ісісссідіс Іссдддіааа ща
Зо Амінокислотна послідовність важкого ланцюга варіантного химерного антитіла 405, що має варіантну Ес-ділянку ЕСМТ2 (ЗЕО ІО МО 11) (залишки СОВНн підкреслені):
ОМОГ ОО5ОРЕ І УКРОАБІ КІ. 5СТАБОЄМІК ОТМІНУМУКОВ РЕОСІЕУЛСА В
ІМРТМаМТАМ ОРКЕОЮКАТІ ТАОТ5ОМТАМ ОМА ТЕО ТАУУУСЗАМС врагМАМОУМ СМОСПАБУТУ5З5 АЗТКОаРБЗУЕР Ї АРЗЗКОТЗОа СТААГ ас УК
ОМЕРЕРМТМ5 МУМЗСОАІ ТОМ НТЕРАМІ 055 СІ У5І 55УМТ МРЗЗБІ аТОТ
МІСМУМНКРЗ МТКМОКАМЕР КЗ5СОКТНТСР РСОРАРЕЇ МСС РОМБ РРКР
КОТ МІЗАТР ЕУТСУММОУ5 НЕОРЕМКЕМУ ММрОаМЕМНМА КТКРРЕЕОМУМ
ЗТ АМУБМІ т МЕНОВСМ/Л МаК ЕУКСКУЗМКА І РАРІЕКТІ5 КАКИОРАВЕРО
МУТГРРЗАОЕ І ТКМОМБІ ТО І УКагмРБОЇ АМЕМЕЗМООР ЕММУКТТРІ М
ГгОоБРОаБЕРГ М ЗК ТМОКЗАМ ООСММЕЗСЗМ МНЕАЇ НМНМУТ ОКБІ БІ РОК
Ілюстративна молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкий ланцюг варіантного химерного антитіла 405, що має варіантну Ес-ділянку ЕСЄМТ2 (5ЕО ІЮО МО:10): саддіїсадс Ідсадсадіс їддсссідад сіддюдаадс саддддссіс асісаадню іссідіасад снсіддсії саасаїсааа дасассіаїа їссасюддї дааасададд ссідаасаду дссіддааю данддаада ащшаїссіа ссааддсіа їасіадайаї дасссаааді Іссаддасаа доссасіаїс асадсадаса саїссіссаа сасадссіас сідсаадіса дссдссідас аїсюаддас асідссдісії апйасідсіс ссддіддадда даддасодсі ісіаїдсіаї ддасіасюо ддісадддад ссіссддас сдщдадсісс дссіссасса адддсссаїс ддіснеоссс сіддсасссї ссіссаадад сассісіддо ддсасадс9д сссіддосід ссіддісаад дасіасісс ссдаассдодї часодідісд ддаасісад дсдсссдас садсддсдід сасасснНеос сддсідіссі асадіссіса ддасісіасі сссісадсад сдіддідасс дідсссісса дсадснудоу сасссадасс іасаїсідса асдідааїса саадсссадс аасассаадд (ддасаадад адндадссс аааіснцо9їд асаааасіса сасаїдссса ссдідсссад сассдаасі сдідддоаодда ссдісадісі Ііссіснасс сссаааассс ааддасассс ісаюаїсіс ссддассссі даддісасаї дсощадчаї даасдідадс сасдаадасс сідаддісаа дісаасщао їасодіддасд бо дсдддадодї дсаїааюдсс аадасааадс сдссддадда дсадіасаас адсасдсісс дідіддісад садіссісасс діссідсасс аддасіддсі дааюдсаад дадіасааді дсааддісіс саасааадсс сісссадссс ссаїсдадаа аассаїсісс ааадссааад ддсадссссд адаассасад дідїасассс дсссссаїс ссдддаюдад сідассаада ассаддісад ссюассідс сіюддісааад дсіїсіаїсс садсдасаїс дссдіддацді дадададсаа Ююддсадссу дадаасаасі асаадассас дссісісдід сюдасіссо асоддсіссії снссісіас адсаадсіса ссдіддасаа дадсаддащо садсаддоада асдіснсіс аїдсіссдід аїдсадада сісідсасаа ссасіасасу садаададсс ісісссідіс Іссдддіааа ща
Амінокислотна послідовність важкого ланцюга варіантного химерного антитіла 405, що має варіантну Ес-ділянку ЕСЄМТЗ (ЗЕО ІО МО 13) (СОВ н залишки підкреслені):
ОМОГ ОО5ОРЕ І УКРОАБІ КІ. 5СТАБОЄМІК ОТМІНУМУКОВ РЕОСІЕУЛСА В
ІМРТМаМТАМ ОРКЕОЮКАТІ ТАОТ5ОМТАМ ОМА ТЕО ТАУУУСЗАМС врагМАМОУМ СМОСПАБУТУ5З5 АЗТКОаРБЗУЕР Ї АРЗЗКОТЗОа СТААГ ас УК
ОМЕРЕРМТМ5 МУМЗСОАІ ТОМ НТЕРАМІ 055 СІ У5І 55УМТ МРЗЗБІ аТОТ
МІСМУМНКРЗ МТКМОКАМЕР КЗ5СОКТНТОСР РСРАРЕЇЇ СО РОУБІ І РРКР
КОТ МІЗАТР ЕУТСУММОУ5 НЕОРЕМКЕМУ ММрОаМЕМНМА КТКРРЕЕОМУМ
ЗТ АМУБЗМІ т МЕНОВСМ/Л МаК ЕУКСКУЗМКА І РАРІЕКТІ5 КАКИОРАВЕРО
МУТГРРЗАОЕ І ТКМОМУБІ ТО І УКагмРБОЇ АМЕМЕЗМООР ЕММУКТТРРМУ
ГгОоБРОаБЕРГ М ЗК ТМОКЗАМ ООСММЕЗСЗМ МНЕАЇ НМНМУТ ОКБІ БІ РОК
Ілюстративна молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкий ланцюг варіантного химерного антитіла 405, що має варіантну Ес-ділянку ЕСЄМТЗ (5ЕО ІЮ МО:12): саддіїсадс Ідсадсадіс їддсссідад сіддюдаадс саддддссіс асісаадню іссідіасад снсіддсії саасаїсааа дасассіаїа їссасюддї дааасададд ссідаасаду дссіддааю данддаада ащшаїссіа ссааддсіа їасіадайаї дасссаааді Іссаддасаа доссасіаїс асадсадаса саїссіссаа сасадссіас сідсаадіса дссдссідас аїсюаддас асідссдісії апйасідсіс ссддіддадда
Зо даддасодсі ісіаїдсіаї ддасіасюо ддісадддад ссіссддас сдщдадсісс дссіссасса адддсссаїс ддіснеоссс сіддсасссї ссіссаадад сассісіддо ддсасадс9д сссіддосід ссіддісаад дасіасісс ссдаассдодї часодідісд ддаасісад дсдсссдас садсддсдід сасасснНеос сддсідіссі асадіссіса ддасісіасі сссісадсад сдіддідасс дідсссісса дсадснудоу сасссадасс іасаїсідса асдідааїса саадсссадс аасассаадд (ддасаадад адндадссс аааіснцо9їд асаааасіса сасаїдссса ссдідсссад сассідаасі ссюддоддда ссдісадісі Іссіснасс сссаааассс ааддасассс ісаюаїсіс ссддассссі даддісасаї дсощадчаї даасдідадс сасдаадасс сідаддісаа дісаасщао їасодіддасд дсдддадодї дсаїааюдсс аадасааадс сдссддадда дсадіасаас адсасдсісс дідіддісад садіссісасс діссідсасс аддасіддсі дааюдсаад дадіасааді дсааддісіс саасааадсс сісссадссс ссаїсдадаа аассаїсісс ааадссааад ддсадссссд адаассасад дідїасассс дсссссаїс ссдддаюдад сідассаада ассаддісад ссюассідс сіюддісааад дсіїсіаїсс садсдасаїс дссдіддацді дадададсаа Ююддсадссу дадаасаасі асаадассас дссісссоюд сюдасіссо асоддсіссії снссісіас адсаадсіса ссдіддасаа дадсаддащо садсаддоада асдіснсіс аїдсіссдід аїдсадада сісідсасаа ссасіасасу садаададсс ісісссідіс Іссдддіааа ща
Згідно з одним варіантом здійснення, даний винахід відноситься до застосування варіантного химерного антитіла 405, що має важкий ланцюг, який має модифікацію в Ес-ділянці та кодуються послідовністю нуклеїнової кислоти 5ЕО І МО:8, або містить амінокислотну послідовність ЖЕО ІЮ МО:9, або кодується послідовністю нуклеїнової кислоти 5ЕО ІЮ МО:10 або містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:11, або кодується послідовністю нуклеїнової кислоти 5ЕО ІЮ МО:12 або містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:13.
Згідно з одним варіантом здійснення, даний винахід відноситься до застосування антитіла до НЕНг/пеи, яке містить легкий ланцюг імуноглобуліну, що має модифікацію Мб55 у домені МІ, бо і важкий ланцюг імуноглобуліну, що має модифіковану Ес-ділянку. Переважно, таке антитіло до
НЕВг/пеи буде являти собою химерне антитіло 405 або варіантне химерне антитіло 405, яке містить легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ МО:2, і важкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО:7, 5ЕО ІЮ МО:9,
ЗЕО ІЮ МО 11 і 5ЕО ІС МО 13. Згідно з деякими варіантами здійснення, антитіло до НЕН2г/пви за даним винаходом додатково містить константний домен легкого ланцюга, злитий з варіабельним доменом легкого ланцюга, який, згідно з деякими варіантами здійснення, містить щонайменше 5ЕО ІЮО МО:4. Згідно з іншими варіантами здійснення, антитіло є модифікованим, фрагментом або модифікованим фрагментом.
Химерні антитіла 405 були сконструйовані, згідно з різними варіантами здійснення за даним винаходом, для підвищення зв'язування з активуючими низькоафінними рецепторами Ес, але не для зміни або лише мінімального підвищення зв'язування з інгібуючим низькоафінним рецептором СОЗ32В (ЕсуКІІБ). До таких антитіл належать наступні антитіла дикого типу і Ес- оптимізовані антитіла: е сп405 з Ес дикого типу, яке має легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність
ЗЕО ІЮ МО:2, і важкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:7. сп405 з Ес дикого типу має заміну Мб655 на легкому ланцюзі, що приводить у результаті до утворення деглікозильованого легкого ланцюга. є сп405-ЕСМТ, яке має легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність з«ЕО ІЮ МО:2, і важкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:9. сп405-ЕСМТ1 має заміну
М655 на легкому ланцюзі, що приводить у результаті до утворення деглікозильованого легкого ланцюга, й заміни Е243І, К292Р, УЗ00І, УЗО5І ії РЗОбІ на важкому ланцюзі (всі пронумеровані за Кара). сп405-РСМТ1 характеризується 10-кратним збільшенням зв'язування з СО16А (ЕсувПІ-А) людини, та зв'язування з СО16-158Рте пропорційно підвищено в порівнянні зі зв'язуванням з СО16-1582, е сп405-ЕСМТ2, ("маргетуксимаб", рег. Мо САЗ 1350624-75-7), яке має легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:2, і важкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:11. Маргетуксімаб має заміну М655 на легкому ланцюзі, що приводить у результаті до утворення деглікозильованного легкого ланцюга, й заміни Г235М, Е243І, К292Р,
УЗ001І ї РЗОбІЇ на важкому ланцюзі (всі пронумеровані за Кара). Це антитіло є результатом додатково удосконалення антитіла сп405-ЕСМТ1 і має схожі властивості зв'язування СО16А, але також має більш сприятливе зменшення зв'язування з СОЗ2В (ЕСУМІІВ). є сп405-ЕСМТЗ, яке має легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО2, і важкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО:13. сп405-ЕСМТЗ має заміну
М655 на легкому ланцюзі, що приводить у результаті до утворення деглікозильованого легкого ланцюга, й заміни 243, К292Р ї УЗ00І. на важкому ланцюзі (всі пронумеровані за Кара). Це антитіло є результатом додатково удосконалення антитіла СпП405-ЕСМТІ і має схожі властивості зв'язування СО16А, але також має більш сприятливе зменшення зв'язування з СОЗ2В (ЕсукКІ!ІВ). е сп405-М2970О (також назване в даному документі "сп405-Ад"), яке має легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність 56 ІО МО:2, і важкий ланцюг, що має заміну М2970 (пронумеровану за Кабрай.
Порівняння послідовностей важкого ланцюга сп405 з Ес дикого типу і Ес-оптимізованих варіантів сп405-РСМТ1, сп405-РсМТ2 і сп405-РСМТЗ3 показано на фіг. 2. СОК позначені чорними смугами, показаними під відповідними залишками.
В. Молекули, які специфічно зв'язують РО-1
До молекул, які специфічно зв'язують РО-1 і охоплюються даним винаходом, належать антитіла до РО-1, здатні специфічно зв'язуватися з безперервною або дискретною (наприклад, конформаційною) частиною (епітопом) РО-1 людини. Антитіла до РО-1, що застосовуються в способах за даним винаходом, переважно будуть також характеризуватися здатністю зв'язуватися з молекулами РО-1 одного або декількох видів, що не відносяться до людини, особливо мишей, щурів, собак і приматів.
Відомі антитіла, які є специфічними щодо РО-1 (див., наприклад, патентну заявку США Мо 62/198867, патенти США МоеМо 5952136, 7488802, 7521051, 8008449, 8088905, 8354509, 8552154, 8779105, 8900587, 9084776, патентні РСТ публікації УМО 2004/056875, УМО 2006/121168, УМО 2008/156712, МО 2012/135408, МО 2012/145493, МО 2013/014668, МО 2014/179664, МО 2014/194302 і УМО 2015/112800). Додаткові шукані антитіла можна отримати виділенням від гібридом, які секретують антитіло, продукування у яких індукується під час контакту з РО-1 або його пептидним фрагментом. РО-1 людини (включаючи сигнальну послідовність з 20 амінокислотних залишків (показану підкресленою) і зрілий білок з 268 амінокислотних залишків) має амінокислотну послідовність (5ЕО ІЮ МО: 14): (510) МОІРОАРМ/РМ МАМІ ОСА РОМ/ЕГО5РОВ РМУМРРТЕБРА ГГ УУТЕСОМА
ТЕТО5ЕЗМТ5 ЕЗЕМІ МУМАМ ЗРУОМОТОКІГА АЕРЕОНЗОРОа О0СВЕВМТОЇ.
РМавВОЕеЕНМ5У МААВАМОБЗИтТ МІ СОСАІ5І АР КАОІКЕБІ ВА ЕГАМТЕВВАЕ
МРТАНРБОРБЗР ВРАСОРОТІ М МОСС а5 І МГ ММУМІАМ ІС5ВААВСТІ
САВВЕТОаОРІ К ЕОРБАМРУЕЗ МОМаЕІ СОРОМ ВЕКТРЕРРУР СУРЕОТЕМАТ
ІМЕРБОМИТ5 БРАННОИаЗАВИ РАБАОРІ АРЕ ОВСНОБМУРІ
Переважні антитіла до РО-1 мають домени Мі і/або Мн моноклональних антитіл до РО-1 людини "РО-1 тАБ 1" (ніволумабу, реєстр. Мо САБ 946414-94-4, який також відомий як 5С4, вМ5-936558, ОМО-4538, МОХ-1106 і продається під назвою ОРОІМОФ компанією ВгізіоІ-Муеєтв зацібб); "РО-1 тА 2" (пембролізумабу (раніше відомого як ламбролізумаб), реєстр. Мо СА5 1374853-91-4, який також відомий як МК-3475, 5СІН-900475 і продається під назвою
КЕУТКООСАФ компанією Мегок); "РО-1 тАБ 3" (ЕНІ1Т2.2Н7; Оапа Ратбег), "РО-1 тАБ 4" (підилізумабу, реєстр. Мо СА5 1036730-42-3 який також відомий як СТ-011, СигеТесі, ) або будь-якого з антитіл до РО-1, представлених в таблиці 1, і більш переважно має 1, 2 або всі З
СОР ділянки Мі і/або 1, 2 або всі З СОК домени Мн таких моноклональних антитіл до РО-1.
Нещодавно були виявлені додаткові антитіла до РО-1ї, які мають унікальні зв'язуючі характеристики та придатні для способів і композицій за даним винаходом (див. заявку на видачу патенту США Мо 62/198867). Зокрема, переважними є молекули, що зв'язують РО-1 і мають гуманізований домен МН і/або Мі антитіла до РО-1 "РО-1 тАБ 5" (пРО-1 тА 2,
МасгосСіепісв); "РО-1 тАБ 6" (пРО-1 тАБ 7, МасгосСепісв); "РО-1 тАБ 7" (пРО-1 тА 9,
МасгосСіепісв); "РО-1 тА 8" (пРО-1 тАбБ 15, МасгосСепісв) і більш переважно мають 1, 2 або всі
З СОК ділянки М. і/або 1, 2 або всі З СОК домену Мн таких моноклональних антитіл до РО-1. До таких переважних антитіл до РО-1 відносяться антитіла, які мають варіантні Ес-ділянки, біспецифічні (або мультиспецифічні) антитіла, химерні або гуманізовані антитіла, молекули
Віте, діатіла й т. д.
Амінокислотна послідовність варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ 1 (5ЕО ІО
МО: 15) (залишки СОКНн підкреслені):
ОМОЇ МЕЗОССІС ММОРОВОБІ ВІ ОСКАБаИатТеВ М5АМНУУВОА РОКИ ЕМ МАМ м/УразквУм дрБУКОВЕТІ ЗАОМОКМТІ Е ГОММ5І ВАЄО ТАМУУСАТМО руУжмаостІМмт У55
Коо) СОВНІ РО-1 тАБ 1 (5ЕО ІЮ МО:16) М2О МН
СОВнг РО-1 тАБ 1 (5ЕО Ір МО 717) МУУравкАУМАрзуУка
СОАнНЗ РО-1 тАБ 1 (5ЕО ІЮ МО:18) МОУ
Амінокислотна послідовність варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАбБ 1 (ЗЕО ІО
МО: 19) (залишки СОН). підкреслені):
ЕІММГТО5РАТ І 5І 5РОЕВАТ І 5СВАБОБУ5 ЗМ АММООКР СОАРА МО
АБМВАТаИаІРА НЕЗаБЗаБаИто ЕТІ ТІЗОІ ЕР ЕСЕАМУМСОО 5556МРАТЕСО атТКкМєїК
СОВІТ РО-1 тАбБ 1 (5ЕО 10 МО:20) ВАБОЗУЗЗМІ А
СОВІ2 РО-1 тАбБ 1 (5ЕО 10 МО:21) ОАЗМВАТ
СОВІЗ РО-1 тАбБ 1 (5ЕО 10 МО:22) О0О5ББЗМУМРАТ
Амінокислотна послідовність варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ 2 (ЗЕО І
МО: 23) (залишки СОАНн підкреслені):
ОМОГ МОБОаМЕ УККРОАБУКМ 5БСКАБОМТЕТ МУУМУМУВОА РОСС ЕМ Мас
ІМРОМастМЕ МЕКЕКМАМТІ ТТО5ЗТТТАМ МЕ КІ ОБО ТАМУУУСАВННЮО
УвВЕбМмагрму вдраттУгУзо
СОВНІ РО-1 тАБ 2 (5ЕО ІЮ МО:24) МУУМУ
СОВн2 РО-1 тАБ 2 (5ЕО ІЮ МО:25) СІМРОМОаСсТМЕМЕКЕКМ
СОАнНЗ РО-1 тАБ 2 (5ЕО Ір МО:26) ВОУВЕОМагрУ
Амінокислотна послідовність варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАбБ 2 (ЗЕО ІО
МО: 27) (залишки СОН). підкреслені):
ЕІММГТО5РАТ І 5І 5РОЕВАТ І ЗСВАЗКОамУ5 Т5ИауБМІ НУХУ ООКРООАРНВІ
ПМГАБЗМЕ5 МРАНЕЗИаБа ЗаТОЕТІ ТІ БІ ЕРЕОБРАМУ МСОНЗАОІ РІ тРаСсаткумгїІк
СОВІТ РО-1 тАбБ 2 (5ЕО І МО:28) ВАЗКОУЗТЗИОМУБМІ Н
СОВІ2 РО-1 тАБ 2 (5ЕО ІО МО:29)1 АБЗМІ Е5
СОВІЗ РО-1 тАбБ 2 (5ЕО 10 МО:30) ОНЗВАОЇІ РІ Т
Амінокислотна послідовність варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ З (ЗЕО І
МО: 31) (залишки СОАНн підкреслені):
ОМОГ ОО5аОАЕ ГГ АКРОАБМОМ 5СКАБОаМЗЕТ 5БУЛІНМУКОВ РОСС ЕМІС У 60 ІМРОТОаЕТЕМ МОКЕКОКАТІ ТАОКЗЗЗТАМ МОЇ 551 1560 5АМУУСАВМ/В раззахмхнАМОМ МмаОостеУТУ5
СОАНІ РО-1 тАБ З (5ЕО ОО МО:32) 5БУМІН
Сова РО-1 тАБ З (5БЕО І МО:33) МІМРОТаЄТЕУМОКЕКО
СОАнЗ РО-1 тАБ З (5ЕО ІЮ МО:34) ВМ ВроЗахунНАмМру
Амінокислотна послідовність варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тА З (ЗЕО ІО
МО: 35) (залишки СОН). підкреслені):
РІМГТО5РАБЗ І ТУ5І СОВАТ ІЗСВАБЗОБУЗ Т5СУЗУМНМУМ ООКРИаюОРРКІ.
ПКЕаЗМЕЗ СІРАВНЕЗОаЗОа 5 ТОЕТІ МІН РУЕЕЕОТАТУ МСОНЗМ/ЕІРУ
ТтРасаткКіІ ЕІ К
СОВІТ РО-1 тАБ З (5ЕО ІЮ МО:36) ВАБОВУЗТЗОУЗУМН
СОВІ2 РО-1 тАБ З (5ЕО 10 МО:37) РЕЗМІ Е5
СОВІЗ РО-1 тАбБ З (5ЕО 10 МО:38) ОНБМУБІРУТ
Амінокислотна послідовність варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ 4 (ЗЕО І
МО: 39) (залишки СОАНн підкреслені):
ОМОЇ МОБОБЗЕ І ККРОАБУКІ ЗСКАЗОМУТЕТ ММамММУМУВвВОА РОС ОМ МОМ
ІМГО5СЕБТМ АЕЕЕКОВЕМЕ 5 ОТЗУМТАМ І ОТ ТАЕЄО ТаМУєсСУВУС
УВАГОУМУСОСЄ ТІ МТУ
СОАНІ РО-1 тАБ 4 (5ЕО І МО:40) ММаММ
СОАна РО-1 тАбБ 4 (5ЕО 10 МО:41) ММІМТО5ИаєЕЗТМАєЕРКОИ
СОАНЗ РО-1 тАбБ 4 (5ЕО ІО МО:42) ММА
Амінокислотна послідовність варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАбБ 4 (ЗЕО ІО
МО: 43) (залишки СОН). підкреслені):
ЕІММГТО5РББ І ЗАЗМаОвМТ ІТО5АНЗЗУ5 УМНУГООКРО КАРКІ МІМАТ
ЗМ АБаМРЗА ЕЗазИаБаИтьУ СІ ТІМ ОРЕ ОБРАТУУСООВ З55ЕРГТРаСО
ТК ЕІК
СОВІ РО-1 тАБ 4 (5ЕО 1Ю МО:44) БАН55У5УМН
СОВІ2 РО-1 тАБ 4 (5ЕО І МО:45) АТОМІ АБ
СОВІЗ РО-1 тАбБ 4 (5ЕО 10 МО:46) ООВЗ5ЕРІ Т
Амінокислотна послідовність варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ 5 (ЗЕО І
МО: 53) (залишки СОВНн підкреслені):
ЕМО! МЕЗО І МОРОСБІ ВІ ЗБСААБИаєМЕ5 5ЕЯМНУМАОА РОаКаї ЕММАМ І5504545157У
АБТУКОВЕТІ ЗАОМАКМТІ М І ОММ5І АТЕО ТА УМСАБІ З ОМЕОУМУСсОСТ ТУТУ55
СОАНІ РО-1 тАБ 5 (5ЕО ІЮ МО:54) БРОМН
СОАна РО-1 тАбБ 5 (5ЕО ІЮ МО:55) МІЗ5БИЗМ5ІЗМАОТУКа
СОАНЗ РО-1 тАбБ 5 (5ЕО ІО МО:56) І 5ОМЕОУ
Амінокислотна послідовність варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАбБ 5 (ЗЕО ІО
МО: 57) (залишки СОН). підкреслені):
ОМУМТО5РІЗ ІРМП ЕОРАБ ІЗСВА5ОБОБІ М НЗТОаМТМІ НМУ М'ОКРООБРО ГПвАУЗМАЕ
БОМРОВЕБОа5 О5ОТОЕТІ КІ БАМЕАЕОМаМ УМС5БОТТНМУР МТЕСОСТКІ ЕЕ ІК
СОВІТ РО-1 тАБ 5 (5ЕО І МО:58) Н55ОБІ УНЗТОаМТмІ Н
СОВІ2 РО-1 тАбБ 5 (ЗЕО ІЮ МО:59) АВУ5МАЕ5
СОВІЗ РО-1 тАБ 5 (ЗЕО І МО:60) БОТТНУРМ/Т
Амінокислотна послідовність варіабельного домену важкого ланцюга (РО-1 тА 6 (5ЕО ІЮ
МО: 61) (СОВн залишки підкреслені):
ОМОГ МОБОАЕ МККРИОАБУКМ 5БСКАБИаУЗЕТ БМУММУМУУВОА РОСС ЕМУХОаМ ІНРЗОЗЕТУМ
БОКЕКОВМТІ ТМОК5ОЗТЗТАМ МЕ! 551 А5ЕО ТАМУУСАВЕН Мат5РЕАММСа ОСТІ МТУ де Х являє собою І або А.
СОАНІ РО-1 тАбБ 6 (5ЕО ІЮ МО:62) БУМ ММ
СОАна РО-1 тАбБ 6 (5ЕО 10 МО:63) МІНР5ОБЕТУМІ ВОКЕКО
СОАНЗ РО-1 тА 6 (5ЕО І МО:64) ЕНХаТ5РЕАУ
Амінокислотна послідовність варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАбБ 6 (ЗЕО ІО
МО: 65) (залишки СОН). підкреслені):
ЕІММГТО5РАТ І5І5РОЕВАТ І 5СВАХІЕВЗМО ММаМ5ЕММУМУЕ ООКРООРРКІ. ГПІНААЗМХИаЗ суРЗАЕЗаБа ЗаТОЕТІ ТІ БІ ЕРЕОБАМУУ ЕСООБКЕМРУ ТРаСИткКмМЕї Кк де Хі являє собою М або 5, а Х2 являє собою О або Е; або Хі являє собою М, а Х2 являє собою С); або Х: являє собою 5, а Х2 являє собою СО); або Хі являє собою 5, а Хо являє собою КЕ.
СОВІТ РО-1 тАбБ 6 (5ЕО ІЮ МО:66) ВАХ ЕЗМОММОамМЗЕММ де Хі є таким, як описано вище.
СОВІ2 РО-1 тА 6 (ЗЕО ІО МО:67) ААБМХ»а5
Гс10) де Х» є таким, як описано вище.
СОВІЗ РО-1 тАбБ 6 (5ЕО ІЮ МО:68) ООБКЕМРУТ
Згідно з конкретними варіантами здійснення, РО-1 тА 6 містить: (а) 5ЕО ІЮО МО: 61, де Х являє собою І; і 5ЕО ІО МО: 65, де Хі являє собою М, а Хг2 являє собою СО); або (5) 5ЕО ІЮО МО: 61, де Х являє собою І; і 5ЕО ІЮ МО: 65, де Хі являє собою 5, а Хг2 являє собою 0.
Амінокислотна послідовність варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАбБ 7 (ЗЕО І
МО: 69) (залишки СОАНн підкреслені):
ЕМОЇ МЕБОСІС І ХІАРОСБІ КІ 5СААБОЕТЕ5 МІ МУХ2МУВОА РОКИ ЕМУХзАТ ІБССОССІМТ УМ 5ОБУКОВЕТІ 5АОМАКМОІ У ГОММ5ХАВАєО ТАТУУСАНХУС ЕОСАМЕАУМ Се ОСТІ МТУ55 де Хі являє собою М або А; Хо являє собою 5 або б; Хз являє собою М або Т; Х4 являє собою І або А; Хі являє собою У, Х2 являє собою 5, Хз являє собою У, а Ха являє собою і: або
Хі являє собою А, Хо являє собою б, Хз являє собою Т, а Ха представляє собою А.
СОВНІ РО-1 тАБ 7 (З5ЕО ІЮ МО:70) ЗМІ МХ2 де Хг є таким, як описано вище.
СОВнг РО-1 тАБ 7 (5ЕО І МО-71) ТІБСОСОСаМТУУоБУКОа
СОВнНЗ РО-1 тАБ 7 (5ЕО ІЮ МО:72) МОРС АМ/ГАУ
Амінокислотна послідовність варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тА 7 (ЗЕО ІО
МО:73) (залишки СОН) підкреслені):
РІОМТО5РУОБ І 5АБМОаОВМТ ІТСВАБЕМІМ ХІМ АМУ/МООКР СОКАРКІ Ї ІМХ» АКТІ АДСМУРБ5
ВЕБОаБавБато ЕТІ ТІБ5І ОР ЕОБАТУУСОН НУАМРМ/ТЕСО СТКІ БІК де Хі являє собою М або 5, а Х? являє собою М або 0; Хі являє собою 5, а Хо» являє собою
М; або Х: являє собою М, а Хо являє собою 0.
СОВІТ РО-1 тАбБ 7 (5ЕО 10 МО:74) ВАБЕМІМХ: МІ А де Хі є таким, як описано вище.
СОВІ2 РО-1 тАбБ 7 (5ЕО ІЮ МО:75) ХгАКТІ АА де Хг є таким, як описано вище.
СОВІЗ РО-1 тАбБ 7 (5ЕО 10 МО:76) ОННУАМРМТ
Згідно з конкретними варіантами здійснення, РО-1 тАб 7 містить:
Зо (а) 5ЕО ІО МО:69, де Хі являє собою У, Х2 являє собою 5, Хз являє собою У, а Х. являє собою І і 5ЕО ІЮО МО:73, де Х: являє собою 5, а Х2 являє собою М; або (Б) 5ЕО І МО:69, де Хі являє собою А, Х?» являє собою б, Хз являє собою Т, а Ха представляє собою А; і ЗЕО ІО МО:73, де Хі: являє собою М, а Хо являє собою 0.
Амінокислотна послідовність варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тА 8 (ЗЕО І
МО:77) (залишки СОКНн підкреслені):
ЕМОЇ МЕБОСО ІМАРОСБІ ВІ 5СААБОЕТЕ5 5МИБМУМВОА РОаКОЇ ЕММАА І5сСаСАОТМУ
АОБМУКОВЕТІ БВОМАКМ5І М І ОММ5І ВАЕО ТАТУУСАНВа ТМАМОМУСОС ТІ МТУ
СОВНІ РО-1 тАБ 8 (5ЕО І МО:78) ЗМІ 15
СОВнг РО-1 тАБ 8 (5ЕО І МО:79) АІЗССАОТУМАрЗУКО
СОВнНЗ РО-1 тАБ 8 (5ЕО Ір МО:80) ВАТ УАМОУ
Амінокислотна послідовність варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАБ 8 (ЗЕО ІО
МО:81) (залишки СОН) підкреслені):
ІОМТО5РБОБ ІБАБМООВМТ ІТСВАБЕМІМ ММ АММООКР сСКАРКІ МО АКТІ дДОаМРБ5
ВЕБОаБавБато ЕТІ ТІБ5І ОР ЕОБАТУУСОН НУАМРМ/ТЕСО СТКІ БІК
СОВІТ РО-1 тАбБ 8 (5ЕО 10 МО:82) ВАБЕМІМММІ А
СОВІ2 РО-1 тАбБ 8 (5ЕО ІЮ МО:83) ОАКТІ АА
СОВІЗ РО-1 тАбБ 8 (5ЕО 10 МО:84) ОННУАМРМТ
Таблиця 1
Додаткові антитіла до РО-1
РО1-17, РО1-28, РО1-33, РО1-35 і РО1-Е2 Патенти США МоМо 7488802, 7521051, 8088905 і патентна РСТ публікація
МО 2004/056875 1708, 203, 4НІ1, 5С4, 4А11, 703 і 5Е4 Патенти США МоМо 8008449, 8779105, 9084776 і патентна РСТ публікація УМО 2006/121168
Таблиця 1
Додаткові антитіла до РО-1
ПРО-1.08А, пПРО-1.09А, 109А, КОЗА, 409А, п409А11, Патенти США МоМо 8354509,
Н409А16, п409А17, кодон-оптимізоване 109А; і кодон- | 8900587, 5952136 і патентна РСТ оптимізоване 409А публікація УУО 2008/156712 1ЕЗ, 1Е8 і 1НЗ3 Патентна публікація США 2014/0044738 і патентна РСТ публікація УМО 2012/145493
АРЕ1950, АРЕ1963 і АРЕ2О58 2014/179664
САТ, пАг, ВІ, Вб, СНІ, А2, С7, Н7, 5Н-А4, 5Н-АЗ9, | Патентна публікація США ватн1тіо, ватнН11, во2Нн7, ВОс2НІТО, ВОЗЕ12, ВО4Аб, | 2014/0356363 і патентна РСТ ва5ре, натнНтТ0-НагА-22-15, ВНИ1НІ10-Н2А-27-25, публікація МО 2014/194302 ватн1т0-3С, нат1н1т0-16С, ВатТнІ1т10-17С, Ватїн1то- 190, Ват1НІ10-21С і ВС1НІ10-2302
НтмМ7789М, НІМ7799М, НІМ7800М, Н2М7780М, Патентна публікація США
Нгм7788Мм, Н2гмМ7790М, Н2гмМ7791М, Н2М7794М, 2015/0203579 і патентна РСТ
Нагм7795М, Н2М7796М, Н2М7798М, НАНОО19Р, публікація МО 2015/112800
НахноозаР2, НахНООЗБ5Р2, НаХхНООЗ37 Р,
Нахн9о045Р2, НахНО0О48Р2, НАНЗОБ57Р2, НАНЗОбВР2,
НахХнНеО119Р2, НаХНУ9120Р2, НаХНО128раг,
НахХхпео135рг, НахХхпе145р2г, НахХхнВв992р, НаХп8999р і нахпооовр;
РО-1 тАБ 1, РО-1 тАБ2, пРО-1 тАБ 2, РО-1 тАБ 3, Заявка на видачу патенту США Мо
РО-1 тАБ 4, РО-1 тАБ 5, РО-1 тАбБ 6, РО-1 тАБ 7, б62/198867
ПРО-1 тАБ 7, РО-1 тАБ 8, РО-1 тАБ 9, НРО-1 тАБ 9,
РО-1 тАБ 10, РО-1 тАБ 11, РО-1 тАБ 12, РО-1 тАБ 13, РО-1 тАбБ 14, РО-1 тАБ 15 і ПРО-1 тАБ 15
Згідно з конкретними варіантами здійснення, антитіла РО-1, придатні для способів і композицій за даним винаходом, містять домени МІ. ії МН будь-якого з наведених вище антитіл (наприклад, РО-1 тАбБ 1, РО-1 тАБ 2, РО-1 тАБ 3, РО-1 тАбБ 4, РО-1 тАБ 5, РО-1 тАБ 6, РО-1 тАб 7, РО-1 тА 8 або будь-якого з антитіл до РО-1 в таблиці 1), домен каппа СІ. і домен Ес 3054, необов'язково без С-кінцевого лізинового залишку. Такі антитіла переважно будуть містити домен СНІ Ідса4 і шарнір і більш переважно будуть містити стабілізований шарнір Ідс4, що містить заміну 5228Р (причому нумерація наведена згідно з ЄЮ системою нумерації за
Кабай).
Амінокислотною послідовністю домену каппа Сі. є (ЗЕО ІЮ МО:86):
ВТУМААРБМЕРІ ЕРРБОЕОЇ КВ СТАБММСІІЇ М МЕМРАЕАКМО МУКМОМАГОБа М5ОЕБМТЕОО
ЗКО5ТМУ5І 55 ТІ ТІ -КАОМЕ КНКМУМАСЕМТ НОСІ 55РУТК 5БЕМВОЕС
Амінокислотна послідовність домену СНІ Ідс4 і стабілізованого шарніру (5ЕО ІЮ МО:87) являє собою:
АБТКОРОМЕР ГАРСЗАБТОЕ 5ТААГ ОСІ МК ОМЕРЕРМТМ5 МУМ5САІГТ5ОаМ НТЕРАМІ О55
СІ М5І 55ММТ МРБОББІ акт УТСОММОНКРО МІТІКМОКВАМЕ5 КМОРРСОРРОР
Нижче представлена амінокислотна послідовність доменів СН2-СНЗ 1904 (5ЕО 10 МО:52).
Ілюстративне антитіло до РО-1, що позначається "РО-1 тАБ 6-ІЗО", містить легкий ланцюг, який має домен МІ з РО-1 тАБ 6 (ЗЕО ІЮО МО:65), де Хі являє собою 5, а Хо являє собою 0, і каппа СІ (5ЕО ІЮ МО:86); і важкий ланцюг, що має домен МН з РО-1 тАБ 6 (5ЕО ІО МО:61), де
Хі являє собою І, домен СНІ Ід0С4, стабілізований шарнір дос 4 (5ЕО ІЮО МО:87) і домен СН2-
СНЗ Іда4 (ЗЕО ІЮ МО:52).
Нижче показана амінокислотна послідовність повного легкого ланцюга з РО-1 тАбБ 6-І5О (ЗЕО ІЮО МО:87) (залишки СОК. підкреслені):
ЕІМГТО5РАТ І5І5РОЕНАТ І 5СВАБЕБУО ММам5ЕМММР ООКРООРРКІ ГІНААДЗМОСО сУРОНЕБабБа 5БОТОБТІТІ5 5ІЕРЕОБАМУ РГЕСООБКЕМРУ ТРОаСсОаТКкМЕ! КАТУАДАРБМЕ
ІЕРРОБОЕОЇК БОТАБУМУСІЇ ММЕМРАЕАКМ ОМУКМОМАГОВ СМБОЕБМТЕО О5КО5ТУБІ 5
ЗТ ТІ 5КАОМ ЕКНКУМАСЕМ ТНОСІ 55РМТ К5ЕМАВОЕС
Нижче показана амінокислотна послідовність повного важкого ланцюга з РО-1 тАб 6-І5О
(ЗЕО ІЮ МО:88) (залишки СОКн підкреслені):
ОМОГ МОБОАЕ УККРОАБУКМ 5БСКАБИаУЗЕТ ЗБУММУММУМУУВОА РИСИ ЕУЛОМ ІНРЗОЗЕТУ
БОКЕКОВМТІ ТУОКБ5ТЗТАМ МЕ! 55185мО ТАМУУМСАВЕН МСсТ5РЕАУМС ОСТІ МТУЗЗА
ЗІКОаРОМЕРІ АРСЗАБЗТІЗЕЗ ТААГОЯСІУКО МЕРЕРУТУБМ/ М5ОАІТ5ОаУН ТЕРАМІ О5505
ЇМ5І5БУМТМ РБББІСТКТУ ТОМУОНКРОМ ТКМОКАМЕЗК МаРРСОРРСОРА РЕБРІ ааРБЗМЕ
ІГЕРРРКРКОТ МІ5ЗАТРЕМТСО МУМОУБОБЕОР ЕМОРММУМУра МЕМНМАКТКР ВЕЄЕОЕМЗТУВ
МУ5МІТМІНО ОУМІМОаКЕМКОС КУЗМКОаГ РОБ ІЕКТІЗКАКа ОРАВЕРОММУТІ РРБ5ОЕБЕЕМТКМ
ОМ5ІТСІУКОа ЕМРООІАМЕМ ЕЗМООРЕМММ КТТРРМІО5О СЕР ЗВІТ УОКБАМОБС,М
МЕБСЗУМНЕА І НМНУТОК5БІ 51 51 Са
Інше ілюстративне антитіло до РО-1 являє собою РО-1 тАБ 1 (ніволумаб), яке являє собою антитіло людини, що містить легкий ланцюг, який має домен МІ (5ЕО ІЮ МО:19) і домен каппа
СІ (див., наприклад, ЗЕО ІЮ МО:86); і важкий ланцюг, який має домен МН (5ЕО ІЮ МО: 15), домен СНІ Ідса4 і стабілізований шарнір (див., наприклад, 5Е6ЕО ІЮ МО:87) і домени СН2-СНЗ
ІЧ04 (див., наприклад, 5ЕО ІЮ МО:54).
Інше ілюстративне антитіло до РО-1 являє собою РО-1 тАБ 2 (пембролізумаб), яке являє собою гуманізоване антитіло, що містить легкий ланцюг, який має домен МІ (ЗЕО ІЮ МО:27) і домен каппа СІ. (див., наприклад, ЗЕО ІЮ МО:86); і важкий ланцюг, який має домен МН (ЗЕО І
МО:23), СНІ Ідбса4 і стабілізований шарнір Ідс4 (див., наприклад, 5ЕО ІЮО МО:87) і домени СН2-
СНЗ ІдС4 (див., наприклад, 5ЕО ІЮ МО:52). б. Варіанти антитіла
Також передбачено, що можна отримати варіанти антитіл. Варіанти можуть мати модифікації послідовності (наприклад, заміни, делеції та/"або додавання) в необхідних положеннях в межах їх амінокислотних послідовностей відносно нативної амінокислотної послідовності. Фахівці в даній галузі техніки зрозуміють, що зміни амінокислот можуть змінювати посттрансляційні процеси з антитілом, такі як зміна кількості або положення сайтів глікозилювання або зміна характеристик заякорювання у мембрані. Згідно з переважним варіантом здійснення, антитіло й варіанти являють собою варіанти Ес-ділянки.
Варіанти можуть мати однакову або змінену активність у порівнянні з нативним антитілом.
Наприклад, може бути необхідно, щоб варіант мав таку ж саму активність, але був
Зо модифікований таким чином, щоб він був більш стабільним або мав більш тривалий період напівжиття іп мімо, наприклад, у результаті кон'югування антитіла з альбуміном, або епітоп зв'язування рецептора реутилізації, як описано, наприклад, в патенті США Мо 5739277. Або, наприклад, може бути необхідно, щоб антитіло мало підвищену афінність зв'язування з антигеном, але таку ж саму ефекторну функцію, що й нативне антитіло, або може бути необхідно, щоб антитіло мало таку ж саму афінність зв'язування з антигеном, але зменшену ефекторну функцію. Активність можна протестувати, наприклад, за допомогою аналізів іп міїго, таких як аналізи ІФА, аналізи із застосуванням поверхневого плазмонного резонансу, аналізи зв'язування білка з радіоактивною міткою (КІА) або іммунопреципітаційні аналізи.
Істотні зміни у функції або імунологічній ідентичності можуть бути здійснені шляхом вибору модифікацій, які істотно розрізняються за їх впливом на підтримку: (а) структури поліпептидного скелета в ділянці модифікації, наприклад, у вигляді листа або спіральної конформації, (Б) заряду або гідрофобності молекули в цільовому сайті або (с) об'єму бічного ланцюга. Також можна використовувати скануючий амінокислотний аналіз для виявлення однієї або декількох амінокислот уздовж безперервної послідовності, наприклад, як описано в роботі Сиппіпапйат апа МУеїв (1989) Зсієпсе 244:1081-1085. До числа переважних скануючих амінокислот відносяться відносно невеликі нейтральні амінокислоти, такі як аланін, гліцин, серин і цистеїн.
Зазвичай у цій групі переважною скануючої амінокислотою є аланін, оскільки він є найбільш поширеною амінокислотою, часто зустрічається як у прихованих, так і у відкритих положеннях, а також тому, що він усуває бічний ланцюг за межами бета-вуглецю і з меншою ймовірністю змінює конформацію основного ланцюга у варіанта. Якщо аланінова заміна не дає належних кількостей варіанта, можна використовувати ізомерну амінокислоту. Крім того, будь-який цистеїновий залишок, що не залучений у підтримку належної конформації антитіла або поліпептиду, може бути заміщений, зазвичай серином, для поліпшення окислювальної стабільності молекули й попередження помилкового зшивання. Проте, за певних обставин, зокрема, коли антитіло є фрагментом антитіла, таким як фрагмент Ем, в антитіло або поліпептид можна внести цистеїновий зв'язок(зв'язки) для підвищення його стабільності.
Той факт, що зміна однієї амінокислоти в залишку СОК може призвести в результаті до втрати функціонального зв'язування (Киаїкой, 5. еїс. (1982) "Зіпдіе Атіпо Асійа ЗиБ5ійшіоп
АГНегіпуд Апіідеп-Віпаіпоу бресіїйсну," Ргос. Маї!. Асад. 5сі. (О5А) 79(6):1979-1983), уможливлює бо системне визначення альтернативних функціональних послідовностей СОК. Згідно з одним переважним способом отримання таких варіантних СОМ, полінуклеотид, що кодує СОК, піддають мутації (наприклад, за допомогою випадкового мутагенезу або сайт-спрямованого способу (наприклад, за допомогою полімеразної ланцюгової ампліфікації з праймерами, які кодують мутантний локус)) для отримання СОК, що має замінений амінокислотний залишок. Під час порівняння ідентичності відповідного залишку у вихідній (функціональній) послідовності
СОК з ідентичністю заміненої (нефункціональної) варіантної послідовності СОК можна знайти оцінку заміни за ВІО5ИМБб2.їїїЇ для такої заміни. Система ВГОБОМ забезпечує матрицю амінокислотних замін, створену шляхом аналізу бази даних послідовностей для надійних вирівнювань (Едау, 5.К. (2004) "УУпеге Сіда Тне ВГОЗООМб2 АїІдптепі Зсоге Маїгіх Соте Егот?,"
Маїшге Віоїесп. 22(8):1035-1036; Непікої, .сх. (1992) "Атіпо асіа зирзійшіоп таїйгісев їїот ргоївїп ріоскв5," Ргос. Маї)!. Асай. сі. (ОА) 89:10915-10919; Капіп, 5. еї аї. (1990) "Ме йоавз Рог Аззезвіпа
Тне зіаїйівіїса! Зідпітісапсе ОЇ Моїіесшаг б5едиепсе ЕРєаїцгез Ву О5іпд Сепега! 5согіпд Зспетев, "
Ргос. Маї). Асай. осі. (О5А) 87:2264-2268; Аїйївспиї, 5.Р. (1991) "Атіпо Асій 5ибзійшіоп Маїгісе5
Есот Ап Іптоптаїййоп Тнеогеїйс Регересіїме," У. Мої. Віої. 219, 555-565. У даний час найсучаснішою базою даних ВГО5БИМ є база даних ВІ О50)М62 (ВІ ОБИМБб2.Її)). У наведеній нижче таблиці 2 представлені оцінки замін В ОБОМБб2.Її| (чим вище оцінка, тим більш консервативною є заміна й, отже, більш імовірно, що заміна не вплине на функцію). Якщо антигензв'язуючий фрагмент, що містить отриманий у результаті СОВ, не може, наприклад, зв'язуватися з ВОНІ, тоді оцінку заміни В ОБИОМБб.Її| вважають недостатньо консервативною та вибирають і здійснюють нову кандидатну заміну, яка має більш високу оцінку заміни. Таким чином, наприклад, якщо вихідним залишком був глутамат (ЕЕ), а нефункціональним залишком-замінником був гістидин (Н), то оцінка заміни ВІ ОБИМБб2.ЇїЇ буде 0, і переважними є більш консервативні зміни (такі як, аспартат, аспарагін, глутамін або лізин).
Таблиця 2
Оцінки замін В ОБИМБб2. ії) ГТА|ВнІМ Іо со | ЕЇСІНІ! у кКІМ є РІЗ|т| М ХМ
А|змі ил 2г|2г|і0о 1 л|10|2 лили 2 1 ного віллі о 2г|з ного 32211 3 2 11 3 | 2 з міг210 з6|Їніз о 0103/9302 3 2 10 4 | 2| з 0212 н|6| 310 ч2е|л| 134 113 3 10111 4 | з со 1-31 3|-53Щ|9 3 4| 3/3 31213 11 2 о |лініої|о|з 5 ч2| 2103 2 10 3 1 10/11 е2г|І 2
Ел 101 0|2| 4 ч2145| 2103 3 я 2 3101 3 | 2 2 сао г21 0113 2 2|6| 244 213 3 2 012 2 | З| з ніІгіо ніч о010| 28393112 121-112 2 || з 11131 3|93|-11 3343 4-2 Зі 013 211 3
ЕЕ 213|4|11 21 3|4| 3 2144 2142 03 211 2 || нн кіл ол з нні гл 32513101 | 2 2 міліліе| зло е2|з3| 2 нія лі ог ||| лін
ЕЕ 21-31 3|3| 213 3|3|11010 310 614 21 2) ян
РІЛЛІ 2|ч| 3 122133 12 4147 || 4 || 2 5 Інілініо|л 10 010 21210112 1 41 || 2 то лот чере лілія тіні ге || о
Міо з3| || 2 е2|з| зн гін 2 210 з
Таким чином, даний винахід відноситься до застосування спрямованого або випадкового мутагенезу для виявлення покращених СОК.
О. Варіанти Ес-ділянки
У традиційній імунній функції взаємодія комплексів антитіло-антиген з клітинами імунної
Зо системи приводить у результаті до широкого спектру відповідей, починаючи від ефекторних функцій, таких як АЮСС, дегрануляція тучних клітин і фагоцитоз, і до імуномодулюючих сигналів, таких як регуляція проліферації лімфоцитів і секреції антитіл. Усі ці взаємодії ініціюються під час зв'язування Ес-ділянки антитіл або імунних комплексів зі спеціалізованими рецепторами клітинної поверхні на гематопоетичних клітинах. Різноманітність клітинних
Зо відповідей, що запускаються антитілами й імунними комплексами, обумовлена структурною гетерогенністю трьох рецепторів Ес: ЕсуКІ (СОб64), ЕсукІ! (СО32) і ЕсукПІ (СО16). ЕсукІ (СО64),
ЕсуАкПА (СОЗ2А) і ЕсукІ (СО16) є активуючими (тобто такими, що підсилюють імунну систему) рецепторами; ЕсукіІІвВ (СОЗ2В) є інгібуючим (тобто таким, що послаблює імунну систему) рецептором.
Нижче показана амінокислотна послідовність Ес-ділянки ДС1 (під 5ЕО 10 МО:49, нумерація за Кабваї): 231 240 250 260 270 280
АРЕГ ГГ ЯаРБЗМ РІ ЕРРКРКОТ І МІЗАТРЕМТ СММУМОУЗНЕО РЕУКЕМУММО 290 300 310 320 330
СМЕМНМАКТК РЕЕЄОУМЗТУ АУМУБЗМІ ТМІ Н ОБУ МЕОКЕМУК СКУЗМКАЇГ РА
340 350 360 370 380
РІЕКТІЗКАК СОРВЕРОММТ І РРОВЕЕМТК МОМ5І ТС УК ЕМРБЗОІАМЕ 390 400 410 420 430
МЕЗМСОРЕММ УКТТРРМІ ОЗ СВСЗЕРІ КІ ТМОКЗАМООСЇ ММЕЗСЗУМНЕ
440 447
АЇ НМНУТОКЗ І 5І 5РОХ яка пронумерована згідно з ЄЮ системою нумерації за Каваї, де Х являє собою лізин (К) або відсутній.
Амінокислотна послідовність домену СН2-СНЗ ілюстративного Ї3)052 людини являє собою (ЗЕО ІЮО МО:50): 231 240 250 260 270 280
АРРМА-ВРБМ РІ РРРКРКОТ І МІЗАТРЕМТ СУММОУМЗНЕО РЕМОЕМУ УМО 290 300 310 320 330
СМЕМНМАКТК РВЕЕОЕЄЕМЗТЕ ВУЗУ ТУМН ОБУ МаКЕМУК СКУЗМКаї РА 340 350 360 370 380
РІЕКТІЗКТК СОРРБЕРОММТ ІГРРОВЕЄЕМТК МОМ5І ТОЇ УК СЕМРБЗОІЗМЕ 390 400 410 420 430
МЕЗМСОРЕММ УКТТРРМІ О5 ВСВСБЗЕРІ УЗ5КІ ТМОКЗАМСОСЇ ММЕЗСЗУМНЕ
Коо) 440 447
АЇ НМНУТОКЗ І 5І 5РОХ яка пронумерована згідно з БЮ системою нумерації за Кабаї, де Х являє собою лізин (К) або відсутній.
Амінокислотна послідовність домену СН2-СНЗ ілюстративного ЇД3 людини являє собою
З5 (5ЕБЕОІЮО МОС51): 231 240 250 260 270 280
АРЕГГЯаРБМ РІ ЕРРКРКОТ І МІЗАТРЕМТ СУММОУЗНЕО РЕМОЕКМ УМО 290 300 310 320 330
СМЕМНМАКТК РВЕЕОУМЗТЕ ВУУБЗМІТМІ Н ОБМ/ЛІ МЕОКЕМК СКУМЗМКАЇГ РА 340 350 360 370 380
РІЕКТІЗКТК СОРРБЕРОММТ ІГРРОВЕЄЕМТК МОМ5І ТОЇ УК СЕМРЗОІАМЕ 390 400 410 420 430
МЕББЗООРЕММ УМТТРРМІ О5 ВСВСБЗЕРІ ЗК ТМОКЗАМООС МІЕБСЗУМНЕ 440 447
АЇ НМАЕТОКЗ І 5І 5РОХ яка пронумерована згідно з БЮ системою нумерації за Кабаї, де Х являє собою лізин (К) або відсутній.
Амінокислотна послідовність домену СН2-СНЗ ілюстративного 904 людини являє собою (ЗЕО ІЮ МО:52): 231 240 250 260 270 280
АРЕНІ ааРБМУ БГЕРРКРКОТ І МІЗАТРЕМТ СУММОУМБОЕО РЕМОЄМУУММО 290 300 310 320 330
СМЕМНМАКТК РВЕЕОЕМЗТУ АУУБЗМІ ТМІ Н ОБУМІ МСОКЕМК СКУБМКаї Р 340 350 360 370 380
ЗІЕКТІЗКАК СОРАВЕРОМУМТ І РРІЗОЕЄЕМТК МОМ5І ТОЇ УК СЕМРЗОІАМЕ 390 400 410 420 430
МЕЗМСОРЕММ УКТТРРМІ О5 СЗЕРІ МАГ ТМОКЗАМОвєа МУМЕЗСЗУМНЕ 440 447
А НМНУТОКЗІЗІ ах бо яка пронумерована згідно з ЄЮ системою нумерації за Кабаї, де Х являє собою лізин (К) або відсутній.
За декількома різними положеннями в межах константних ділянок антитіла спостерігалися поліморфізми (наприклад, за положеннями Ес, у тому числі без обмеження положеннями 270, 272, 312, 315, 356 і 358, пронумерованим згідно з ЄЮ системою нумерації за Каба)б, і, отже, можуть мати місце невеликі відмінності між наведеною послідовністю та послідовностями, відомими з рівня техніки. Були добре охарактеризовані поліморфні форми імуноглобулінів людини. У даний час відомі 18 Ст алотипів: (31 т (1, 2, 3, 17) або С1т (а, х, ї, 7), с2т (23) або б2т (п), ОЗт (5, 6, 10, 11, 13, 14, 15, 16, 21, 24, 26, 27, 28) або СЗт (01, с3, 63, БО, 63, 54, 5,1, 91, с5, М, м, 95) (І етапс, О.еї аі. у "ЛОНЕ НОМАМ СУ 5ОВСІ АЗБОЕ5: МОЇ ЕС АВ АМАЇ МІВ ОБ
ЗТВОСТиВЕ, ЕОМСТІОМ АМО ВЕСШІ АТІОМ, (ЗНакіб, Р. (єд.) 1990, рр. 43-78, Регдатоп, Охіога, у Геїпапс, сх. еї аї., (1979) "т, Ат Апа Кт Іттипоадіобиїййп АїПоїуре5 ОЇ Тмо Рориїайопв Іп
Типівіа,;" Нит. Сепеї. 50:199-211). Зокрема, передбачається, що антитіла за даним винаходом можуть включати будь-який алотип, ізоалотип або гаплотип будь-якого гена імуноглобуліну й не обмежені алотипом, ізоалотипом або гаплотипом послідовностей, наведених у даному документі. Крім того, в деяких системах експресії С-кінцевий амінокислотний залишок (виділений жирним і підкреслений у ЗЕО ІЮ МО:49-52 вище) домену СНЗ може бути видалений посттрансляційно. Отже, С-кінцевий залишок домену СНЗ (виділений жирним і підкреслений вище) є необов'язковим амінокислотним залишком в антитілах, які застосовують у способах за даним винаходом.
Молекули за даним винаходом можуть мати варіантні Ес-ділянки. Модифікація Ес-ділянки зазвичай приводить до зміни фенотипу, наприклад, зміни періоду напівжиття в сироватці, зміни стабільності, зміни сприйнятливості до клітинних ферментів або зміни ефекторної функції. Може бути необхідна модифікація антитіла за даним винаходом щодо ефекторної функції, з тим щоб підвищити ефективність антитіла під час лікування, наприклад, злоякісної пухлини. У деяких випадках необхідне зменшення або виключення ефекторних функції, наприклад, у випадку антитіл, механізм дії яких передбачає блокування або антагонізм, але не знищення клітин, які мають цільовий антиген. Підвищена ефекторна функція зазвичай необхідна щодо небажаних клітин, таких як пухлинні та чужорідні клітини, де ЕсукК експресуються на низьких рівнях, наприклад, пухлиноспецифічні В-клітини з низькими рівнями ЕсукіІІВ (наприклад, під час неходжкінської лімфоми, СІ. і лімфоми Беркітта). Згідно із зазначеними варіантами здійснення, молекули за даним винаходом, яким надали або у яких підвищабо ефекторну функціональну активність, корисні для лікування та/або попередження розвитку захворювання, порушення або інфекції, за яких необхідна підвищена ефективність ефекторної функціональної активності.
Згідно з деякими варіантами здійснення, молекули за даним винаходом містять одну або декілька модифікацій щодо амінокислот Ес-ділянки, які зменшують афінність і авідність Ес- ділянки, і отже молекули за даним винаходом, до одного або декількох рецепторів ЕсукК. Згідно з іншими варіантами здійснення, молекули за даним винаходом містять одну або декілька модифікацій щодо амінокислот Ес-ділянки, які збільшують афінність і авідність Ес-ділянки, і отже молекули за даним винаходом, до одного або декількох рецепторів Есуг. Згідно з іншими варіантами здійснення, молекули містять варіантну Ес-ділянку, причому зазначений варіант надає або опосередковує підвищену АЮСс-активність і/або підвищене зв'язування з ЕсукПА відносно молекули, яка не містить Рс-ділянку або містить Ес-ділянку дикого типу. Згідно з альтернативними варіантами здійснення, молекули містять варіантну Ес-ділянку, причому зазначений варіант надає або опосередковує знижену АЮОСсС-активність (або іншу ефекторну функцію) і/або підвищене зв'язування з ЕСуКІІВ відносно молекули, яка не містить Ес-ділянку або містить Ес-ділянку дикого типу.
Згідно з деякими варіантами здійснення, даний винахід відноситься до молекул, які містять варіантну Ес-ділянку, причому у такої варіантної Ес-ділянки не спостерігають зв'язування, яке піддається детекції, з будь-яким ЕсукК відносно порівнюваної молекули, яка містить Ес-ділянку дикого типу. Згідно з іншими варіантами здійснення, даний винахід відноситься до молекул, які містять варіантну Ес-ділянку, причому така варіантна Ес-ділянка зв'язує лише один Есук, переважно один з ЕсуКІІА, ЕсСуУКІІВ або ЕсуУКПА.
Молекули за даним винаходом можуть характеризуватися зміненими показниками афінності щодо активуючого і/або інгібуючого рецептора Есу. Згідно з одним варіантом здійснення, антитіло або молекула містить варіантну Ес-ділянку, яка має підвищену афінність щодо ЕсуМІІВ і знижену афінність щодо ЕсукКША і/або ЕсукКІІА відносно порівнюваної молекули з
Ес-ділянкою дикого типу. Згідно з іншим варіантом здійснення, молекули за даним винаходом містять варіантну Ес-ділянку, яка має знижену афінність щодо ЕсуКІІВ і підвищену афінність щодо ЕсукКША і/або ЕсуАІІА відносно порівнюваної молекули з Ес-ділянкою дикого типу. Згідно з 60 ще одним варіантом здійснення, молекули за даним винаходом містять варіантну Ес-ділянку,
яка має знижену афінність щодо ЕсукіІІВ і знижену афінність щодо ЕсукША і/або ЕсукКПА відносно порівнюваної молекули з Ес-ділянкою дикого типу. Згідно з ще одним варіантом здійснення, молекули за даним винаходом містять варіантну Ес-ділянку, яка має нормальну афінність щодо ЕсСукіІІВ і знижену (або підвищену) афінність щодо ЕсСукІША і/або ЕсувкПА відносно порівнюваної молекули з Ес-ділянкою дикого типу.
Згідно з деякими варіантами здійснення, даний винахід відноситься до імуноглобулінів, які містять варіантну Ес-ділянку зі зміненою афінністю щодо ЕсСуКША і/або ЕсукПА з тим, щоб імуноглобулін мав посилену ефекторну функцію, наприклад, АОСС. Необмежуючі приклади ефекторних клітинних функцій включають АЮОСС, антитілозалежний клітинний фагоцитоз (АОСР), фагоцитоз, опсонізацію, опсонофагоцитоз, зв'язування клітин, утворення розеток, зв'язування Сід і СОС.
Згідно з особливо переважними варіантами здійснення, даний винахід відноситься до химерних антитіл до НЕК2г/пеи, які містять варіантну Ес-ділянку, причому зазначений варіант надає або має підвищену АЮСс-активність і/або підвищене зв'язування з ЕСУКША (СО16А), за результатами вимірювання за допомогою способів, відомих фахівцеві в даній галузі техніки та проілюстрованих у даному документі. Аналізи АОСС, що застосовують згідно зі способами за даним винаходом, можуть бути МК-залежними або макрофагозалежними.
Згідно з особливо переважними варіантами здійснення, даний винахід відноситься до молекул, які специфічно зв'язують РО-1 і містять варіантну Ес-ділянку, причому зазначений варіант надає або має зменшену АЮСсС-активність і/або зменшене зв'язування з ЕсукША (СО16А), за результатами вимірювання за допомогою способів, відомих фахівцеві в даній галузі техніки та проіїілюстрованих у даному документі. Аналізи АЮОСС, що застосовують згідно зі способами за даним винаходом, можуть бути МК-залежними або макрофагозалежними. Згідно з додатковими переважними варіантами здійснення, даний винахід відноситься до молекул, які специфічно зв'язують РО-1 і містять варіантну Ес-ділянку, причому зазначений варіант надає або має зменшену СОС-активність і/або зменшене зв'язування з Сід, за результатами вимірювання за допомогою способів, відомих фахівцеві в даній галузі техніки та проілюстрованих у даному документі.
Згідно з переважним варіантом здійснення, зміна афінності або ефекторної функції є
Зо щонайменше 2-кратним, переважно щонайменше 4-кратним, щонайменше 5-кратним, щонайменше б-кратним, щонайменше 7-кратним, щонайменше 8-кратним, щонайменше 9- кратним, щонайменше 10-кратним, щонайменше 50-кратним або щонайменше 100-кратним відносно порівнюваної молекули, яка містить Ес-ділянку дикого типу. Згідно з іншими варіантами здійснення даного винаходу, варіантна Ес-ділянка специфічно зв'язує один або декілька ЕсК з афінністю, яка щонайменше на 65 96, переважно щонайменше на 70 95, щонайменше на 75 95, щонайменше на 80 95, щонайменше на 85 95, щонайменше на 90 95, щонайменше на 95 965, щонайменше на 100 95, щонайменше на 125 95, щонайменше на 150 95, щонайменше на 175 95, щонайменше на 200 95, щонайменше на 225595 або щонайменше на 250 95 більша, ніж у молекули, яка містить Ес-ділянку дикого типу. Такі вимірювання можна здійснювати за допомогою іп мімо або іп міго аналізу, й згідно з переважним варіантом здійснення, іп міго аналізами, такими як аналізи ІФА або на основі поверхневого плазмонного резонансу.
Згідно з різними варіантами здійснення, молекули містять варіантну Ес-ділянку, причому зазначений варіант має агоністичну дію щонайменше на одну активність рецептора Есук або антагоністичну дію щонайменше на одну активність рецептора ЕсукК. Згідно з переважним варіантом здійснення, молекули містять варіант, який має агоністичну (або антагоністичну) дію на одну або декілька активностей ЕсуКІІВ, наприклад, опосредковану В-клітинним рецептором передачу сигналу, активацію В-клітин, проліферацію В-клітин, вироблення антитіл, приплив внутрішньоклітинного кальцію у В-клітин, прогресування клітинного циклу, ЕсуКІІВ- опосредковане інгібування передачі сигналу ЕсєКІ, фосфорилювання ЕсуКІІВ, ЗНІР-рекрутинг,
ЗНІР-фосфорилювання і асоціацію з Зпс, або активність однієї або декількох наступних молекул (наприклад, МАР-кінази, УМК, р38 або АК) у шляху сигнальної трансдукції за участю
ЕСУАІІВ. Згідно з іншим варіантом здійснення, молекули містять варіант, який має агоністичну (або антагоністичну) дію на одну або декілька активностей ЕсеєРІІ, наприклад, активацію тучних клітин, мобілізацію кальцію, дегрануляцію, вироблення цитокінів або вивільнення серотоніну.
Згідно з деякими варіантами здійснення, молекули містять Ес-ділянку, що містить домени або ділянки від двох або більше ізотипів (до (наприклад, Ідс1, Ідс2, Ід і Ідся4). Різні ізотипи
ІЧ характеризуються різними фізичними та функціональними властивостями, включаючи період напівжиття в сироватці, зв'язування комплементу, афінності зв'язування ЕсукК і активності ефекторних функцій (наприклад, АЮОСС, СОС і т. д.3), через відмінності в 60 амінокислотних послідовностях їх шарніра й/або Ес-ділянок, наприклад, як описано в роботах
Ріезсп, В.К. апа Меррегті, у. (1999) "Бипсіоп5 ОЇ Те Ес Кесеріог5 Рог Іттиподіобриїїп (5, " У. Сііп.
Іар. Апаї. 14:141-156; Снарреї, М.5. єї аї. (1993) "Ідепійісайоп ОЇ А бесопдагу Ес Сатта ВІ
Віпаіпд 5йе М/йіп А СепеїїсаПу Епдіпеегед Нитап Ідсї Апіїроду," У. Віої. Спет. 33:25124-25131;
СНарреї, М.5. еї аї. (1991) "Ідепійісайоп ОЇ Тне Ес Сатта Ресеріог Сіазз І Віпаіпуд 5пе Іп Нитап
Ід Тигоцді Те Ове ОЇ Весотрбіпапі ІДСТ/даг Нубтіа Апа Роіпі-Миїаїєд Апііїродієв," Ргос. Маї!.
Асад. осі. (0.5.А.) 88:9036-9040; Вгйддетапп, М. еї аїЇ. (1987) "Сотрагізоп ОЇ Те Епесіог
Ейпсіп5 ОЇ Нитап Іттипоаіобиїйпе Овіпд А Маїсней 5еї ОЇ Спітегіс Апііродіев," У. Ехр. Мей 166:1351-1361. Такий тип варіантної Ес-ділянки можна використовувати окремо або в комбінації з амінокислотною модифікацією для впливу на Ес-опосередковану ефекторну функцію й/або активність зв'язування. У комбінації аминокислотна модифікація та шарнір/Ес-ділянка Ідс можуть проявляти подібну функціональність (наприклад, підвищену афінність щодо ЕсуВІІА) і можуть діяти адитивно або, що більш переважно, синергічно, модифікуючи ефекторну функціональність молекули за даним винаходом відносно молекули за даним винаходом, що містить Ес-ділянку дикого типу. Згідно з іншими варіантами здійснення, амінокислотна модифікація і ЕРс-ділянка Ід: можуть проявляти протилежну функціональність (наприклад, відповідно підвищену й знижену афінність щодо ЕсункІИА) і можуть діяти, селективно послаблюючи або зменшуючи специфічну функціональність молекули за даним винаходом відносно молекули, що не містить Ес-ділянку або містить Ес-ділянку дикого типу того ж самого ізотипу.
Згідно з переважним конкретним варіантом здійснення, молекули містять варіантну Ес- ділянку, причому вказана варіантна Ес-ділянка містить щонайменше одну амінокислотну модифікацію відносно Ес-ділянки дикого типу, так щоб зазначена молекула мала змінену афінність щодо ЕСВ, за умови, що зазначена варіантна Ес-ділянка не має заміни в положеннях, які безпосередньо контактують з ЕсуВ, за результатами кристалографічного й структурного аналізу взаємодій Ес-ЕсА, таких як описані в роботі Зопдептапп, Р. еї аї. (2000) "Те 3.2-А
Стувіа! бігисійге ОЇ Те Нитап ІдСсі Ес Егадтепі-Рєс Саттаві! Сотрієх," Маїште 406:267-273.
Прикладами положень у Ес-ділянці, які безпосередньо контактують з ЕсуВ, є амінокислотні залишки 234-239 (шарнірна ділянка), амінокислотні залишки 265-269 (петля В/С), амінокислотні залишки 297-299 (петля СЕ) та амінокислотні залишки 327-332 (петля Б/й). Згідно з деякими варіантами здійснення, молекули за даним винаходом містять варіантні Ес-ділянки, які містять модифікацію щонайменше одного залишку, яка не створює безпосереднього контакту з ЕсуВ, за результатами кристалографічного й структурного аналізу, наприклад, не знаходиться в сайті зв'язування Гс-ЕсуВ.
Варіантні Рс-ділянки добре відомі з рівня техніки, й згідно з даним винаходом, можна застосовувати будь-який відомий варіант Ес для надання або модифікації ефекторної функції, що проявляється молекулою за даним винаходом, яка містить Ес-ділянку (або її частину), згідно з результатами функціонального аналізу, наприклад, у МК-залежному або макрофагозалежному аналізі. Наприклад, варіанти Ес-ділянки, які були виявлені як таки, що змінюють ефекторну функцію, розкриті в галузі конструювання антитіл, і будь-який відповідний розкритий у ній варіант можна застосовувати в молекулах за даним винаходом.
Згідно з деякими варіантами здійснення, молекули містять варіантну Ес-ділянку, яка має одну або декілька амінокислотних модифікацій в одній або декількох ділянках, при цьому модифікація (-її) змінює (відносно Ес-ділянки дикого типу) співвідношення афінностей варіантної
Ес-ділянки до активуючого Есуй (такого як ЕсуВПА або ЕсувВІПА) відносно інгібуючого Есув (такого як ЕсуВІІВ):
Звіща у дикого тету зо варівнтворсь фено вима КВ. жнвючий
Сиквічношення фс юннати
Зміна улнковго тину ех варі ного афтнеєть шо КС еюуючнй.
Якщо варіант Ес має співвідношення афінностей більше 1, то способи за даним винаходом особливо корисні під час здійснення терапевтичного або профілактичного лікування захворювання, порушення або інфекції або ослаблення їх симптому, коли необхідна підвищена ефективність ефекторної клітинної функції (наприклад, АОСС), опосередкованої ЕсуВ, наприклад, злоякісної пухлини або інфекційного захворювання. Якщо варіант Ес має співвідношення афінності менше 1, способи за даним винаходом особливо корисні під час здійснення терапевтичного або профілактичного лікування захворювання або порушення або ослаблення їх симптому, коли необхідна знижена ефективність ефекторної клітинної функції, опосередкованої ЕсуВ, наприклад, аутоїмунних або запальних порушень. У таблиці З наведені ілюстративні одиночні, подвійні, потрійні, четверні та п'ятикратні мутації, у яких співвідношення афінностей або перевищує, або менше 1, і більше інформації про ці мутації можна знайти в галузі конструювання антитіл.
Таблиця З
Ілюстративні одиночні й множинні мутації, наведені за співвідношеннями афінностей
Е243І. Е243І| і Е2431|, РАЛІ і І 234Е, Е2431І, І 235У, Е2431І,
В292Р Мм421К К292Р і 3001. В292Р, УЗООЇІ і
РЗОбІ. р270Е Е243І| і Е243І, К292Р і І 235І, Е2431, І 235Р, Е2431І, ножі НЕ нь ШЕ З
РЗОбІ.
Вв29203 Е243І| і Е243І, 292Р і Ї 2350, Е2431, Е243І, Н292Р,
РЗОбІ. МЗО5І К292Р і 300. МЗО5І, ЗОЇ ії
РЗОбІ. по: іон Зсз-еШІ НИННННННН
РЗОбІ. РЗОбІ. 0270Е і М421К
ШИНИ: ЛЕ: ЗБошИИ: З І НИ
УЗ. РЗОбІ. 0270Е і РЗОбІ.
ШИНИ ЛЕ: и: 3. ЧНІ НН
МУЗО5І Мм421К 3160 і 41605
ШИШНННІ. ЛЕ оси х - М НИНІ
РЗОбІ. РЗОбІ. КЗ3921 і РЗ9бІ.
ШЕ: ЛЕ іони 22: ЧНІ НН
РЗОбІ. Вва16а РЗОбІ. і 0419Н нИШНИ: НЕ шани: З. ЖІ НИ дан РЗОбІ. УЗО0І і РЗОбІ. р п
ОА19Нн МЗО5І і РЗОбІ.
ПИШНИЙ засл з: НИ НН
КЗ7оМ УЗо0І і Мм421К
НИНИНИ НИЙ діЛИ. 3. ЗІ НИ
РЗОбІ. К2925 і РЗОбІ.
Мр
УЗО00І і РЗОбІ. ями | 007
РЗОбІ. і 4160 о ре Я 1
РЗОбІ. УЗОБІ песни: ЗАНИ НННННННННЯ НОЯ НОЯ м421К
ШИНИ. ЛИ ННЯ ПНЯ НОЯ
РЗОбІ.
ШИНИ МЛН ННЯ ПОН НОЯ
МУЗО5І
ШИНИ ЛИ ННЯ ПОН НОЯ
РЗОбІ.
НИ: НН ННЯ ПОН НОЯ дан
Згідно з конкретним варіантом здійснення, у варіантних Ес-ділянках будь-які амінокислотні модифікації (наприклад, заміни) припадають на будь-які з положень 235, 240, 241, 243, 244, 247, 262, 263, 269, 298, 328 або 330 і переважно на один або декілька з наступних залишків: А240,
І240, 1241, 1243, Н2г44, М298, ІЗ28 або У330. Згідно з іншим конкретним варіантом здійснення, у варіантних Ес-ділянках будь-які амінокислотні модифікації (наприклад, заміни) припадають на будь-які з положень 268, 269, 270, 272, 276, 278, 283, 285, 286, 289, 292, 293, 301, 303, 305, 307,
309, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 або 439 і переважно на один або декілька з наступних залишків: Н280, 20280, М280, 5290, 5290, Т290,
У290, М294, К295, Р296, 0298, М298, Р298, М298, ІЗОО або І 300.
Згідно з переважним варіантом здійснення, у варіантних Ес-ділянках, які зв'язують ЕсСукК зі зміненою афінністю, будь-які амінокислотні модифікації (наприклад, заміни) припадають на будь-які з положень 255, 256, 258, 267, 268, 269, 270, 272, 216, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 300, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 320, 322, 326, 329, 330, 332, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 339, 340, 359, 360, 373, 376, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 або 439.
Переважно, варіантна Ес-ділянка має будь-який з наступних залишків: А256, М268, 0272, 0286,
О286, 5286, А290, 5290, А298, М301, АЗ12, ЕЗ20, М320, 0320, 8320, ЕЗ322, АЗ26, 0326, ЕЗ26,
М326, 5326, К330, 339, АЗ33, АЗ34, Е334, НЗЗ34, 1334, М334, 0334, 334, К335, 0335, АЗ59,
АЗбО або А430.
Згідно з іншим варіантом здійснення, у варіантних Ес-ділянках, які зв'язують Есук (через його Ес-ділянку) зі зменшеною афінністю, будь-які амінокислотні модифікації (наприклад, заміни) припадають на будь-які з положень 252, 254, 265, 268, 269, 270, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 300, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 або 439.
Згідно з іншим варіантом здійснення, у варіантних Ес-ділянках, які зв'язують Есук (через його Ес-ділянку) з посиленою афінністю, будь-які амінокислотні модифікації (наприклад, заміни) припадають на будь-які з положень 280, 283, 285, 286, 290, 294, 295, 298, 300, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 331, 333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 або 430. Згідно з іншим варіантом здійснення, у варіантних с-ділянках, які зв'язують ЕсукПА зі збільшеною афінністю, знаходяться будь-які з наступних залишків: А255, А256, А258, А267, А268, М268, А272, 0272,
А276, А280, А283, А285, А286, 0286, 0286, 5286, А290, 5290, МЗ301, ЕЗ20, М320, 0320, ВЗ20,
Е322, АЗ26, 0326, Е326, 5326, КЗ330, АЗ331, 0335, АЗ337 або А430.
Переважні варіанти включають одну або декілька модифікацій у будь-яких положеннях: 228, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 262, 263, 264, 265, 266, 271, 273, 215, 281, 284, 291, 296, 297, 298, 299, 302, 304, 305, 313, 323, 325, 326, 328, 330 або 332.
Особливо переважні варіанти включають одну або декілька модифікацій, вибраних з груп
Коо) А-АЇ: в |230А,230Е,230уабо2306;...77777711111111 0 о (232Е,232аК, 23211111 1 |240А,240,240Мабо240т;. 77777111 о Щ|263А,263і,263Мабо2631;. 11111111
Р |264Р,264Е,264В,2641,264А,264Ттабо2в4Му;.С//111сСс1 о (|265Е,265У,265Н,265І,265І,2651,265М,265Мабо2650;.Й.С:/: УЗН: /( Д(/|///СУ" ОЗ в |266А,266і,266Мабо266т;. 77777711 271М, 271У, 271МУ або 2710; 2995, 299М, 299ММ або 2997;
325У, 325ММ або 325Р; 328Р, 328Н, 328М або 328М; 332, 332Р, 3320 або 332, і
Ще одні особливо переважні варіанти включають одну або декілька модифікацій, вибраних з груп 1-105:
ШЛЕ ойооовй ій ові НН сі ННЯ
ІЗЗ2Е 07 Ф|вай1Е/Р2аЗА/Моб2Е/М2в4А | 60 |52390/І332Е/АЗІЮЇ поши т
ІЗЗ2Е 9 |Роа1Е/Р24ЗУ/М2б2т/У2648 | ба |52390/13300.ЙЙЙЙЙЙЙЙЙС:Й;Х//:УО
ІЗЗ2Е й
ЩІ Е2415 / Е24З3Н / М2621 / М264Т 13 |вгоаїн/Рга3О/М2б2т/М2баВ | 66 |52390/М2970/І332Е/КЗабЕ
ІЗЗ2Е |Ро41М//РгЯ43МУ/МобгА/МУ264А | 68 |52390/5298А/ІЗЗАЕ 16 |вгоа1у/Р2газу/МУ2б2т/М264т | 69 |52390/М2641/АЗЗОГ/ІЗЗ2Е
М2970 / ІЗЗ2Е 27 |Ізавт/ІЗЗаЕ 77777180 | 5239Е/М2бд/ІЗЗаЕ СС
ІЗЗ2Е 33 |Ма970/т2991/І332Е | 86 |5аземМ/ІЗЗаМ 7777777 п Р ТАТКО ПОЛОН КОЛО зб |Ма970/т2991/І332Е | 89 |52390/13300....:К:С(КТ:СС(К::З 37 |Мг970/т299У/І332Е 0 |190 |52390/ІЗ3З3аЕ С: ОССС:(//./:С 43 |52390/АЗЗОУ/ІЗЗАЕ | 96 |М2ба/АЗЗОГ/ІЗЗАЕ 45 |52390/АЗЗОУ/ІЗЗ2Е/КЗаЄТ | 98 |Моба/ІЗЗаЕ З 46 |52390/АЗЗОУ/ІЗЗ2Е/То3АІ | 99 |М2ба/5298А/ІЗЗаЕ і 53 |52390/р265і/М2970/І332Е/: | | (
Згідно з одним варіантом здійснення, молекула, яка специфічно зв'язує НЕК2/пеи (наприклад, антитіло до НЕК2/пеиц), і/або молекула, яка специфічно зв'язує РО-1 (наприклад, антитіло до РО-1), будуть містити варіантну Ес-ділянку, яка має щонайменше одну модифікацію в Ес-ділянці. Згідно з одним варіантом здійснення, молекула, яка специфічно зв'язує НЕК2г/пеий (наприклад, антитіло до НЕК2/пеи), буде містити варіантну Ес-ділянку, яка має щонайменше одну модифікацію, що посилює зв'язування з ЕСсукІІА і/або посилює АЮСс-активність відносно того ж антитіла, яке містить Ес-ділянку дикого типу. Згідно з деякими варіантами здійснення, варіантна Ес-ділянка містить щонайменше одну заміну, вибрану з групи, що складається з
ІЇ235М, 2431, К292Р, М300Ї, МЗ305І Її РЗОбІ, причому зазначена нумерація відповідає Є системі нумерації за Кабаї.
Згідно з конкретним варіантом здійснення, варіантна Ес-ділянка містить: (А) щонайменше одну заміну, вибрану з групи, що складається з Е2431, К292Р, УЗО00І, М3051І і РЗ9бІ; (В) щонайменше дві заміни, вибрані з групи, що складається з: (1) Е243І і РЗ396І; (2) Е243І і К292Р; їі (3) К292Р і МЗ3О5І; (С) щонайменше три заміни, вибрані з групи, що складається 3: (1) 2431, К292Р і 3001; (2) Е243І, К292Р їі М3О5І; (3) Е243І, К292Р і РЗ396І і (4) К292Р, МЗО5І і РЗ396І ; (Юр) щонайменше чотири заміни, вибрані з групи, що складається з: (1) 243, К292Р, УЗО0І і РЗ96І. і (2) Е243І, К292Р, МЗО5І і РЗ396І ; або (Е) щонайменше п'ять замін, вибраних з групи, що складається 3: (1) Е243Ї, К292Р, УЗ00І, МЗО5І і РЗ396Ї і (2)1235М, Е243І, К292Р, УЗО00І і РЗ9бІ.
Згідно з іншим конкретним варіантом здійснення, варіантна Ес-ділянка містить заміни з: (А) 2431, К292Р і 3001; (В) 1235М, 2431, К292Р, УЗО0І і Р3961 ; або (С) Е243І, К292Р, 3001, УЗО5І і РЗОбІ..
Згідно з одним варіантом здійснення, молекула, яка специфічно зв'язує РО-1 (наприклад, антитіло до РО-1), буде містити варіантну Ес-ділянку, яка має щонайменше одну модифікацію, що зменшує зв'язування з ЕсукША (СО16А) і/або зменшує АЮСб-активність відносно того ж антитіла, яке містить Ес-ділянку дикого типу. Згідно з деякими варіантами здійснення, варіантна
Ес-ділянка містить щонайменше одну заміну, вибрану з групи, що складається з І 234А, І 235А,
рагббА, М2970О і М297С, причому зазначена нумерація відповідає ЕІ системі нумерації за Кабраї.
Згідно з конкретним варіантом здійснення, варіантна Ес-ділянка містить заміну з І 234А і І 235А.
Згідно з альтернативним варіантом, використовують Ес-ділянку, яка первісно характеризується зниженим (або практично відсутнім) зв'язуванням з ЕсуКША (СО16А) і/або зменшеною ефекторною функцією (відносно зв'язування, яким характеризується Ес-ділянка 421 дикого типу (5ЕО ІЮО МО:1)). Згідно з конкретним варіантом здійснення, молекула, яка специфічно зв'язує НЕН2г/пеи (наприклад, антитіло до НЕР2г/пеи), і/або молекула, яка специфічно зв'язує РО-1 (наприклад, антитіло до РО-1), буде містити Ес-ділянку ДС22 (5ЕО І
МО:50) або Ес-ділянку ЇДС24 (5ЕО І МО:52), необов'язково без С-кінцевих амінокислотних залишків. За використанням Ес-ділянки 4014 даний винахід також відноситься до введення стабілізуючої мутації, такої як 5228Р, яка пронумерована згідно з ЄЮ системою нумерації за
Кабваї (Ім еї аї., (2008) "Тпе Емесі ОЇ А Роїпі Мшиїанйоп Оп Те егабіїйу ОГ Ідд4 А5 Мопіюгей Ву
Апа|Муїїса! Опгасепінтидайоп, " У. Рнаптасешііса! Зсієпсез 97:960-969), для зменшення випадків обміну ланцюгами. У Ес-ділянку ІД24 можуть бути введені й інші стабілізуючі мутації, відомі з рівня техніки (Реїег5, Р еї аї., (2012) "Епдіпеегіпд ап Ітргомед Ідс4 Моїесшцше м/йпй ВНедисеа
Рівийіде Вопа Неїегодепейу апа Іпстеєазей Раб ЮОотаїп ТНепта! еїарішу," У. Віої. Спет. 287:24525-24533; РСТ патентна публікація УМО 2008/145142). Згідно з конкретним варіантом здійснення, молекула, яка специфічно зв'язує РО-1 (наприклад, антитіло до РО-1), буде містити
Ес-ділянку Іда4 і мутацію 5228Р.
Згідно з іншими варіантами здійснення, даний винахід відноситься до застосування будь- якого відомого з рівня техніки варіанта Ес, такого як такий, що розкритий в роботі деМегів, В. єї аІ. (2002) "Іпіегасіоп Зйез Оп Нитап ІдС-Ес Рог Есдаттав: Сштепі Моде!5," Іттипої. І ей. 82:57-65; Ргезіа, І.С. еї а). (2002) "Епдіпеегіпа ТНегарецшііс Апііїродієз Рог Ітргомед Еипсійоп,"
Віоспет. бос. Тгап5. 30:487-90; Ідизодіє, Е.Е. єї аї. (2001) "Епдіпеетед Апіїбодієв М/йй Іпстєазєй
Асіїмйу То Неспий Сотріетепі," У. Іттипої. 166:2571-75; ЗПієїд5, А.Г. еї аї. (2001) "Нідн
Везоїшіоп Марріпуд ОЇ Те Віпаіпд 5йе Оп Нитап да Рог Рс Сатта ВІ, Ес Сатта ВІЇ, Ес
Сатта ВІЇ, Апа РсАп Апа Оєзідп ОГ дат Мапапів М/Н Ітргомейа Віпаїпд То Те Ес датта В,"
У. Віої. Спет. 276:6591-6604; Ідизодіє, Е.Е. єї аї. (2000) "Марріпд ОЇ Те Ста Віпаіпд 5пе Оп
Впихап, А СНітегіс Апіроду М/Н А Нитап Ідсї Ес," У. Іттипої. 164:4178-84; Ведау, М.Р. еї аї.
Зо (2000) "ЕЇІтіпайоп ОЇ Ес Весеріог-Оерепаєпі ЕмНесіог Рипсіпз ОЇ А Модіїей Ідс4 Мопосіопаї!
Апіїроду То Нитап С04," У. Іттипої. 164:1925-1933; Хи, 0. єї а!. (2000) "п Міо Спагасієгігайоп ої Еіме Нитапігеа ОКТЗ Еїесіог Рипсіп Маїапі Апііродієвз," СеїЇ. Іттипої. 200:16-26; Аптоитг,
К.Г. єї аї. (1999) "ВНесотбріпапі питап Ідсї Моіесшціез І асКіпд Есдатта Ресеріог І Віпаіпд Апа
Мопосуїе Тгіддегіпуд Асіїмйіев," Єшг. у). Іттипої!. 29:2613-24; деНепів, В. єї а!. (1996) "Модшиіацоп ОЇ
Ес(батта)в Апа Нитап Сотрієтепі Асіїмайоп Ву Ідс23-Соге Оіїдозасснаглде Іпіегасііопв,"
Іттипої. Ген. 54:101-04; І па, 9. еї аі. (1996) "Мийіріє Іпіегасіоп5 ОЇ ІдС;» МуУййп п5 Соге
Оїїдозасснатіде Сап Модиїіаіє Ресодпійоп Ву Сотрієтепі Апа Нитап Ес Сатта Весеріог І Апа
Іпїнепсе Те Зупіпевзів ОЇ 5 Оіїдозасспагде СНаїіп5," У. Іттипої. 157:4963-4969; Ниїспіпв еї аї. (1995) "Ітргомей Віодібзтіршіоп, Титог Тагдеїпо9, Апа НВедисей Іттиподепісйу іп Місе У А
Сатта 4 Маїгапі ОЇ Сатраї-1Н," Ргос. Майї). Асай. Зсі. (0О.5.А.) 92:111980-84; УейМегів, В. еї аї. (1995) "Весодпійоп 5йез Оп Нитап Ід Бог Ес Сатта Весеріоге: Те Воїе ОЇ Спусозуїайоп,"
Іттипої. Гей. 44:111-17; І опа, У. еї аї. (1995) "ОіІїдозассНагіде-Ргоївїп Іпіегасіопе Іп Їїдс Сап
Моадиіаїє Ресодпійоп Ву Ес Сатта Несеріогв," ЕАБЕВ У. 9:115-19; АІеаге, М.І. еї аї. (1994) "А
Моп-Асіїмаїіпа "Нитапігеа" Апії-СОЗ Мопосіопа! Апіїбоду Веїаїнв Іттипозирргезвзіме Ргорепіев5 іп Мімо," Тгапзріапіайоп 57:1537-1543; І па еї аї. (1992) "Мийіріє Віпаіїпяа 5йе5 Оп Те СН2
Ботаїп ОЇ дО Рог Моизе Ес Сатта К11," Мої. Іттипої. 29:53-59; І шипа еї аї. (1991) "Нитап Ес
Сатта ВІ Апа Гс Сатта ВІЇ Іпіегасі М/Н Оівііпсі Виї Омепарріпа Зйез Оп Нитап Ід" у).
Ітітипої. 147:2657-2662; Юипсап, А.В. єї аї. (1988) "І осаїїгайоп ОЇ Те Віпаіпд Зйе Рог Те
Нитап Нідн-Айіпйу Ес Несеріог Оп ІдСї" Маїште 332: 563-564; патентах США МоМо 5624821, 5885573, 6194551, 7276586 та 7317091; і РСТ патентних публікаціях МУО 00/42072 і МО 99/58572. Згідно з деякими варіантами здійснення, молекули за даним винаходом додатково містять один або декілька сайтів глікюзилювання з тим, щоб до молекули ковалентно приєднувався один або декілька вуглеводних фрагментів. Переважно, молекули за даним винаходом з одним або декількома сайтами глікозилювання й/або однією або декількома модифікаціями в Ес-ділянці надають або мають підвищену антитілоопосередковану ефекторну функцію, наприклад, підвищену АЮСсС-активність, у порівнянні з немодифікованої молекулою.
Згідно з деякими варіантами здійснення, даний винахід також відноситься до молекул, які містять одну або декілька модифікацій амінокислот, які відомі як такі, що безпосередньо або опосередковано взаємодіють з вуглеводним фрагментом Ес-ділянки, включаючи без обмеження 60 амінокислоти в положеннях 241, 243, 244, 245, 245, 249, 256, 258, 260, 262, 264, 265, 296, 299 і
301. Амінокислоти, які безпосередньо або опосередковано взаємодіють з вуглеводним фрагментом Ес-ділянки, відомі з рівня техніки, див., наприклад, роботу ЩЧейегі5, КЕ. еї а. (1995) "Весодпійоп 5пйез Оп Нитап Ідсї Бог Ес Сатта ВРесеріоге: Те Воїє ОЇ Спіусозуїайоп," Іттипо).
І ей. 44:111-17.
Згідно з іншим варіантом здійснення, даний винахід відноситься до молекул, які були модифіковані внесенням одного або декількох сайтів глікозилювання в один або декілька сайтів молекул, переважно без зміни функціональності молекул, наприклад, активності зв'язування з цільовим антигеном або ЕсуВ. Сайти глікозилювання можуть бути внесені у варіабельну і/або константну ділянку молекул за даним винаходом.
Отже, згідно з деякими варіантами здійснення, даний винахід відноситься до способів модифікації вуглеводного вмісту молекули за даним винаходом шляхом додавання або видалення сайту глікозилювання. Способи модифікації вуглеводного вмісту антитіл (і молекул, що містять домени антитіла, наприклад, Ес-ділянку) добре відомі з рівня техніки й охоплюються даним винаходом, див., наприклад, патент США Мо 6218149, ЕР 0359096 ВІ; патентну публікацію США Мо 2002/0028486, УМО 03/035835; патентну публікацію США Мо 2003/0115614; патент США Мо 6218149; патент США Мо 6472511; усі з яких включені в даний документ в повному їх обсязі за допомогою посилання. Згідно з іншими варіантами здійснення, даний винахід відноситься до способів модифікації вуглеводного вмісту молекули за даним винаходом шляхом видалення одного або декількох ендогенних вуглеводних фрагментів молекули. Згідно з конкретним варіантом здійснення, даний винахід відноситься до зсуву сайту глікозилювання
Ес-ділянки антитіла шляхом модифікації положень, суміжних із 297. Згідно з конкретним варіантом здійснення, даний винахід відноситься до модифікації положення 296 так, щоб глікозилювалося положення 296, а не положення 297.
Ефекторну функцію можна модифікувати за допомогою таких методик, які описані в галузі техніки конструювання антитіл, або іншими способами. Наприклад, можна ввести цистеїновий залишок(залишки) в Бсо-ділянку, тим самим забезпечуючи можливість утворення міжланцюгового дисульфідного зв'язку в цій ділянці, в результаті чого утворюється гомодимерне антитіло, яке може характеризуватися покращеною здатністю до інтерналізації та/або підвищеним комплементзалежним цитолізом клітин і АОСС. Див. роботи Сагоп, Р.С. еї аї.
Зо (1992) "Епдіпеетед Нитапігейд Оітегтіс опт ОГ ІдСсї Аге Моге ЕНесіїме Апіїродіев," ). Ехр. Меа. 176:1191-1195; ЗНорез, В. (1992) "А Сепеїїсау Епдіпеетеа Нитап ДС Миїапі МУйН Епнапсей
Суоїуйїйс Асіїмйу, У. Іттипої. 148(9)2918-2922. Гомодимерні антитіла з підвищеною протипухлинною активністю також можна отримати за допомогою гетеробіфункціональних зшиваючих лінкерів, як описано в роботі Моїй, Е.А. еї аЇ. (1993) "Мопосіопа! Апіібоду
Нотодітетв: Еппапсед Апійштог Асімпйу Іп Миде Місе," Сапсег Везеєагсп 53:2560-2565.
Альтернативно, може бути сконструйовано антитіло, яке має подвійні Ес-ділянки й, отже, може мати підвищені комплементзалежні літичні й АОСС-характеристики (5іємепзоп, О.Т. еї аї. (1989) "А Спітегтіс Апіїбоду М/йНп Юа! Ес Ведіопе (різРарЕс) Ргерагей Ву Мапіршіайоп5 Аї ТНне да
Ніпде," Апіі-Сапсег Огид Оевідп 3:219-230.
Е. Кон'югати з поліпептидами
Молекули за даним винаходом можуть бути рекомбінантно злиті або хімічно кон'юговані (включаючи як ковалентні, так і нековалентні кон'югації) з гетерологічними поліпептидами або їх частинами з утворенням злитих білків. Переважно, молекула за даним винаходом (особливо антитіло) злита щонайменше з 10, щонайменше з 15, щонайменше з 20, щонайменше з 25, щонайменше з 30, щонайменше з 40, щонайменше з 50, щонайменше з 60, щонайменше з 70, щонайменше з 80, щонайменше з 90 або щонайменше зі 100 амінокислотами гетерологічного поліпептиду з утворенням необхідного злитого білка. Злиття не обов'язково має бути прямим, а може відбуватися за допомогою лінкерних послідовностей. Молекули (наприклад, антитіла та поліпептиди) можна кон'югувати з терапевтичним засобом для модифікування певної біологічної відповіді, здійснення впливу (наприклад, збільшення) на період напіввиведення з сироватки терапевтичного засобу або націлювання терапевтичного засобу на конкретну субпопуляцію клітин. Для полегшення очищення їх також можна злити з маркерними послідовностями (наприклад, гексагістидиновим пептидом або міткою "Пад") Методики кон'югування таких терапевтичних частинок з антитілами добре відомі; див., наприклад, роботу
Неїївігот еї аї., "Апіїродіез Рог Огид Оеєїїмегу" іп СОМТВОГЕєО От ОБЕГІМЕВМУ (2па еад.,
Вобіпзоп еї а. (ед5.), 1987, рр. 623-53, Магсеї! Оеккег, Іпс.).
Додаткові злиті білюиим можна створити за допомогою методик перетасовування генів, перетасовування мотивів, перетасовування екзонів і/або перетасовування кодонів (що разом звуться "перетасовуванням ДНК"). Перетасування ДНК можна використовувати для зміни 60 активності молекул за даним винаходом (наприклад, антитіл з більш високими значеннями афінності й білош низькими значеннями швидкості дисоціації). Молекули за даним винаходом або нуклеїнові кислоти, що їх кодують, можна додатково змінити, піддавши їх неспецифічному мутагенезу методом ПЛР із внесенням помилок, випадкової нуклеотидної вставки або іншими способами перед рекомбінуванням. Одну або декілька частин полінуклеотиду, що кодує молекулу за даним винаходом, можна рекомбінувати з одним або декількома компонентами, мотивами, відрізками, частинами, доменами, фрагментами й т. д. однієї або декількох гетерологічних молекул.
Е. Діатіла й діатіла ОАКТФО
Даний винахід також відноситься до діатіл і перенацілюючих реагентів з подвійною афінністю (й, зокрема, до діатіл ОАКТФО (Масгосепісв, Іпс.)). Відповідно, даний винахід також відноситься до молекул діатіл (особливо діатіл ОАКТФ)), які містять щонайменше два зв'язаних ковалентним зв'язком поліпептидних ланцюга, які утворюють щонайменше два епітоп- зв'язуючих сайти, один з яких специфічно зв'язується з НЕК2/пеи, а другий з них зв'язується з рецептором клітинної поверхні (або його лігандом), який регулює імунну контрольну точку.
Переважно, такі діатіла будуть зв'язуватися з НЕК2г/пеи і з РО-1. Зокрема, даний винахід відноситься до діатіл і САКТ, які містять антигензв'язуючі домени з антитіла до НЕК2/пеи й антитіла до РО-1.
Конструювання і побудова гомодимерних діатіл і стабільних, зв'язаних ковалентним зв'язком гетеродимерних немоноспецифічних діатіл описано, наприклад, в патентних публікаціях США
МоМо 2013-0295121, 2010-0174053 і 2009-0060910; публікаціях європейських патентів МоМе ЕР 2714079, ЕР 2601216, ЕР 2376109, ЕР 2158221 і РСТ публікаціях МО 2012/162068, УМО 2012/018687, УМО 2010/080538, УМО 2008/157379, УМО 2006/113665 і в роботах Зіоап, О.О. еї аї. (2015) "Тагдеїпу НІМ Везегмоїг іп Іп'єсієй СО4 Т Сеїв Бу ЮпаІ-АНіппу Не-їагдеїпуд Моїіесшев (АРТ) іІпаї Віпа НІМ ЕпувіІоре апа Весгий Суюіохіс Т СеїІв," Р о5 Раїйод. 11(11):е1005233. до: 10.1371/Лоигпаї. рраї.1005233; АІ Низзаїпі, М. еї аї. (2015) "Тагдейпа СО123 Іп АМІ. Овіпу А Т-Сеї
Рігестєа ЮцаІ-Аніпйу Ре-Тагдеїпд (ЮАКТФ) Ріацогт," Віоса 127(1):122-131; Спіснії, С.В. еї аї. (2015) "А СОЗХСО123 Вівресіїс САВТ Рог Неадігесіїпд Нозі Т Сеїїє То Муєіодепоив ІешКетіа:
Ргесіїпіса! Асіїміу Апа Заїеїу Іп Моппитап Р'гітаїгїев," Зсі. Тктапві. Мед. 7(289):289гав2; Мооге, Р.А. еї а!. (2011) "Арріїсайоп ОЇ Юцаї Аніпійу Реїагодеїїпу Моїесшціез То Аспієме Оріїта! Ведігесієйд Т-Сеї!
Коо) Кіїйпа ОЇ В-СеїІ утрпота," Віоса 117(17):4542-4551; Мет, М.С. еї аї. (2010) "Тнегарецшіїс Сопігої!
ОЇ В Сеї Асіїмайоп Міа Нестийтепі ОЇ Рсдатта Весеріог ІБ (СОЗ2В) Іппірйогу Рипсіоп М/йИ А
Момеї! Вівресіїс Апіроду Зсаноїд," Аппйів АВНешт. 62(7):1933-1943; дойп5оп, 5. еї аї. (2010) "ЕНесіог Сеї! Вестийтепі М/йНй Моме! Ем-Вазед ЮпаІ-АнНіпйу Ве-Тагоеїпу Ргоївіп І єад5 То Роїепі
Титог Суюїузів Апа іп мімо В-Сеї! Оерієїоп," У. Мої. Віої. 399(3):436-449; Магуіп, У.5. єї а!. (2005) "Весотбіпапі Арргоасне5з То Ідс-ІіКе Вівресіїс Апііродіе5," Асіїа Рпаптасої. біп. 26:649-658;
ОІаївеп, Т. еї аї. (2004) "СомаІєпі Оівийіде-Гіпкеа Апі-СЕА Оіароду Айомже Зйе-Зресіїіс
Сопійдайноп Апа Радіоіабеїпу Рог Титог Тагодеїїпуд Арріїсайопв," Ргої. Епдг. ЮОев. Беї. 17:21-27;
Ноїїїдег", Р. єї аї. (1993) "Оіародівв": 5таї! Вімаіепі Апа Візресіїйс Апіїроду Егадтепів," Ргос. Маї).
Асайд. осі. (0О.5.А.) 90:6444-6448. Кожний поліпептидний ланцюг молекули діатіла містить Мі ділянку і Мн ділянку, з одних і тих самих або різних антитіл, які ковалентно зв'язані так, щоб домени не могли піддаватися самозбиранню. Взаємодія двох поліпептидних ланцюгів буде приводити до утворення двох пар Мі-Мн, утворюючи два епітоп-зв'язуючих сайти, тобто двовалентну молекулу. Домени можна розділити пептидним лінкером, а поліпептидні ланцюги можна сконструювати таким чином, щоб вони містабо щонайменше один цистеїновий залишок на кожному ланцюзі з тим, щоб могли утворюватися міжланцюгові дисульфідні зв'язки для стабілізації діатіла.
Згідно з переважними варіантами здійснення, перший поліпептидний ланцюг діатіла містить: () домен (А), що містить ділянку зв'язування варіабельного домену легкого ланцюга першого імуноглобуліну (МІ.1), специфічного до епітопів НЕК2/пеи; (і) домен (В), що містить ділянку зв'язування варіабельного домену важкого ланцюга другого імуноглобуліну (МН2), специфічного до епітопів РО-1; і (ії) необов'язково домен (С).
Другий поліпептидний ланцюг такого діатіла містить: () домен (0), що містить ділянку зв'язування варіабельного домену легкого ланцюга другого імуноглобуліну (МІ 2), специфічного до такого епітопу РО-1; (і) домен (Е), що містить ділянку зв'язування варіабельного домену важкого ланцюга першого імуноглобуліну (УНІ), специфічного до такого епітопу НЕК2/пеи; і (ії) необов'язково домен (Б).
Домени (А) і (В) діатіла не зв'язуються один з одним з утворенням епітоп-зв'язуючого сайту. бо Аналогічним чином, домени (0) і (Е) діатіла не зв'язуються один з одним з утворенням епітоп-
зв'язуючого сайту. Замість цього, домени (А) і (Е) діатіла зв'язуються один з одним з утворенням сайту зв'язування, який зв'язує епітоп НЕК2/пеи, а домени (В) і (0) діатіла зв'язуються один з одним з утворенням сайту зв'язування, який зв'язує епітоп РО-1.
В альтернативному варіанті варіабельні домени першого та другого поліпептидних ланцюгів можуть замінюватися на протилежні так, щоб перший поліпептидний ланцюг діатіла містив: () домен (А), що містить ділянку зв'язування варіабельного домену легкого ланцюга другого імуноглобуліну (МІ 2), специфічного до епітопу РО-1; (і) домен (В), що містить ділянку зв'язування варіабельного домену важкого ланцюга першого імуноглобуліну (УНІ), специфічного до епітопу НЕК2/пеи; і (ії) необов'язково домен (С); а другий поліпептидний ланцюг такого діатіла містив: () домен (0), що містить ділянку зв'язування варіабельного домену легкого ланцюга першого імуноглобуліну (МІ.1), специфічного до такого епітопу НЕК2/пеи; (і) домен (Е), що містить ділянку зв'язування варіабельного домену важкого ланцюга другого імуноглобуліну (МН2), специфічного до такого епітопу РО-1; і (ії) необов'язково домен (Б).
У такій конфігурації з заміною доменів на протилежні, домени (А) і (Е) діатіла зв'язуються один з одним з утворенням сайту зв'язування, який зв'язує епітоп РО-1, а домени (В) і (0) діатіла зв'язуються один з одним з утворенням сайту зв'язування, який зв'язує епітоп НЕК2/пеи.
За наявності, домени (С) і (Е) зв'язані один з одним ковалентним зв'язком. Домени (С) і (Є) можуть сприяти утворенню гетеродимера доменами, які полегшують взаємодію першого й другого поліпептидних ланцюгів. Домени гетеродимеризації, які корисні при отриманні діатіл, описані, наприклад, в РСТ публікаціях УУО 2012/162068, УМО 2012/018687, УМО 2010/080538, УМО 2008/157379 їі УМО 2006/113665, кожна з яких включена в даний документ за допомогою посилання. Домени (С) і/або (Р) можуть містити Ес-домен або його частину (наприклад, домен
СН?2 або домен СНЗ). Ес-домен або його частина можуть бути отримані з імуноглобуліну будь- якого ізотипу або алотипу, в тому числі без обмеження ІА, ДО, Ідс, ІДЕ і І9М. Згідно з переважними варіантами здійснення, Ес-домен (або його частина) отримані з дос. Згідно з конкретними варіантами здійснення, ізотипом Ідс є Ідс1, Ідс2, ІдОЗ або Ідс4 або його алотипи.
Згідно з одним варіантом здійснення, молекула діатіла містить Ес-домен, при цьому Ес-домен містить домен СНа2 і домен СНЗ, які незалежно вибрані з будь-якого типу імуноглобуліну (тобто
Ес-домену, що містить домен СН2, отриманий з Ідс, і домен СНЗ, отриманий з ЧЕ, або домен
СНО, отриманий з Ідс1, і домен СНЗ, отриманий з Ідс2 і т. д.). Бс-домен може бути сконструйований у поліпептидному ланцюзі, що входить до складу молекули діатіла за даним винаходом, у будь-якому положенні відносно інших доменів або частин зазначеного поліпептидного ланцюга (наприклад, Ес-домен або його частина може бути С-кінцевим по відношенню як до домену М, так і до домену МН поліпептидного ланцюга, або він може бути М- кінцевим по відношенню як до домену М/., так і до домену МН, або він може бути М-кінцевим по відношенню до одного домену і С-кінневим по відношенню до іншого (тобто між двома доменами поліпептидного ланцюга) й т. д.).
Ес-домени в поліпептидних ланцюгах молекул діатіла переважно димеризуются, що приводить до утворення молекули діатіла, яка характеризується імуноглобуліноподібними властивостями, наприклад, Ес-ЕсСумк взаємодіями. Діатіла, які містять Ес, можуть бути димерами, наприклад, складатися з двох поліпептидних ланцюгів, кожний з яких містить домен
МН, домен МІ і Ес-домен. Димеризація зазначених поліпептидних ланцюгів приводить до отримання двовалентного діатіла, що містить Ес-домен, хоча й зі структурою, що відрізняється від структури немодифікованого двовалентного антитіла. Такі молекули антитіл будуть характеризуватися зміненими фенотипами відносно імуноглобуліну дикого типу, наприклад, зміненим періодом напівжиття в сироватці, властивостями зв'язування і т. д. Згідно з іншими варіантами здійснення, молекули діатіл, що містять Ес-домени, можуть бути тетрамерами. Такі тетрамери містять два "важчі" поліпептидні ланцюги, тобто поліпептидний ланцюг, що містить
МІ, МН і Ес-домен, і два "легші" поліпептидні ланцюги, тобто поліпептидний ланцюг, що містить
МІ. ї МН. Легші й важчі ланцюги взаємодіють з утворенням мономера, а зазначені мономери взаємодіють через їх неспаровані Ес-домени з утворенням Ід-подібної молекули. Таке Ід- подібне діатіло є чотирьохвалентним.
Для утворення тетраспецифічної молекули діатіла, яке описано вище, необхідна взаємодія чотирьох різних поліпептидних ланцюгів. Такі взаємодії складні для досягнення з належною ефективністю в межах одноклітинної рекомбінантної продукуючої системи через безліч варіантів потенційних помилкових спаровувань ланцюгів. Одним рішенням для зменшення бо ймовірності помилкових спаровувань є розробка мутацій типу "виступ-у-западину" в необхідних парах поліпептидних ланцюгів. Такі мутації сприяють гетеродимеризації відносно гомодимеризації. Наприклад, що стосується Ес-Ес-взаємодій, амінокислотна заміна (переважно заміна на амінокислоту, яка містить об'ємну бічну групу, що утворює "виступ", наприклад, триптофан) може бути введена в домен СН2 або СНЗ з тим, щоб стеричний вплив перешкоджав взаємодії з аналогічно мутованим доменом і змушував мутований домен утворювати пару з доменом, в який методом інженерії була вбудована комплементарна або сумісна мутація, тобто "западина" (наприклад, заміна на гліцин). Такі набори мутацій можна методом інженерії вбудувати в будь-яку пару поліпептидів, що входить до складу молекули діатіла, й додатково вбудувати в будь-яку частину поліпептидних ланцюгів зазначеної пари. Способи білкової інженерії для полегшення гетеродимеризації відносно гомодимеризації добре відомі з рівня техніки, зокрема, щодо інженерії імуноглобуліноподібних молекул, і охоплюються даним документом (див., наприклад, Кіадугау еї аї. (1996) "Кпорз-Іпіо-Ноїез' Епаіпеейпу ОГ Апіїроду
СНЗ Ротаїпе Рог Неаму СНаїп Неїегодітегігайоп," Ргоївіп Епаг. 9:617-621, Амеїї єї аї. (1997) "шіабіє Неїегодітегз Егот ВНетоавеїїту Те Оотаїп Іпіейасе ОЇ А Нотодаітег Овіпд А Рнаде
Різріау І ібгагу," У. Мої. Віої. 270: 26-35, і Хіє єї аї. (2005) "А Мем Рогтаї ОЇ Візресіїїс Апіїроаду:
Ніднпіу Ейісієпі Неїегодітетгігайоп, Ехргезвзіоп Апа Титог Сеї! Гувів," У. Іттипої. Меїйодв» 296:95- 101; кожна з яких включена в даний документ за допомогою посилання в повному її обсязі.
Даний винахід також відноситься до молекул діатіл, що містять варіантні Ес-домени або варіантні шарнірні-Ре-домени (або їх частину), причому варіантний Ес-домен містить щонайменше одну амінокислотну модифікацію (наприклад, заміну, вставку, делецію) відносно порівнянного Ес-домену дикого типу або шарнірного-Ес-домену дикого типу (або його частини).
Молекули, що містять варіантні Ес-домени або шарнірні-Ес-домени (або їх частину) (наприклад, антитіла), в нормі мають змінені фенотипи відносно молекул, що містять Ес-домени дикого типу або шарнірні-Рс-домени дикого типу або їх частини. Варіантний фенотип може експресуватися у вигляді зміненого періоду напівжиття в сироватці, зміненої стабільності, зміненої сприйнятливості до клітинних ферментів або зміненої ефекторної функції, що визначають за результатами МК-залежного або макрофагозалежного аналізу. Модифікації Ес-домену, виявлені як такі, що змінюють ефекторну функцію, описані вище.
Даний винахід також відноситься до молекул, що містять шарнірний домен. Шарнірний домен може бути отриманий з імуноглобуліну будь-якого ізотипу або алотипу, в тому числі ІдА,
ІЧО, Ід, ІДЕ і І9М. Згідно з переважними варіантами здійснення, шарнірний домен отриманий з ідо, причому ізотипом дО є Ідс1, Ідс2, ДОЗ або Ідс4 або їх алотипи. Зазначений шарнірний домен може бути вбудований методами інженерії в поліпептидний ланцюг, що входить до складу молекули діатіла, разом з Ес-доменом так, щоб молекула діатіла містила шарнірний-Ес- домен. Згідно з конкретними варіантами здійснення, шарнір і Ес-домен незалежно вибрані з будь-якого ізотипу імуноглобуліну, відомого з рівня техніки і проілюстрованого в даному документі. Згідно з іншими варіантами здійснення, шарнір і Ес-домен розділені щонайменше одним іншим доменом поліпептидного ланцюга, наприклад, доменом МІ. Шарнірний домен, або необов'язково шарнірний-Ес-домен, може бути вбудований методами інженерії в поліпептид за даним винаходом у будь-якому положенні відносно інших доменів або частин зазначеного поліпептидного ланцюга. Згідно з конкретними варіантами здійснення, поліпептидний ланцюг за даним винаходом містить шарнірний домен, при цьому шарнірний домен знаходиться на С-кінці поліпептидного ланцюга, причому зазначений поліпептидний ланцюг не містить Ес-домен.
Згідно з ще одними варіантами здійснення, поліпептидний ланцюг за даним винаходом містить шарнірний-Рс-домен, при цьому шарнірний-Рс-домен знаходиться на С-кінці поліпептидного ланцюга. Згідно з наступними варіантами здійснення, поліпептидний ланцюг за даним винаходом містить шарнірний-Ес-домен, при цьому шарнірний-Рс-домен знаходиться на М-кінці поліпептидних ланцюгів.
Без прив'язки до конкретного механізму дії, молекули діатіл за даним винаходом характеризуються підвищеною терапевтичною ефективністю, відносно відомих з рівня техніки терапевтичних антитіл, частково через здатність діатіла специфічно зв'язуватися з клітиною- мішенню, яка має знижений рівень експресії конкретного антигену (наприклад, НЕК2/пеи або
РО-1), наприклад, завдяки здатності діатіла залишатися на клітині-мішені довше через підвищену авідність взаємодії діатіло-епітоп. Отже, діатіла за даним винаходом особливо корисні при лікуванні, попередженні або контролі захворювання або порушення, такого як злоякісна пухлина, в підгрупі, яка має низькі рівні експресії цільового антигену в популяції клітин-мішеней.
Молекули діатіл можуть бути отримані за допомогою різних способів, у тому числі синтезу білка де помо і рекомбінантною експресією нуклеїнових кислот, що кодують зв'язуючі білки. 60 Необхідні послідовності нуклеїнових кислот можуть бути отримані рекомбінантними способами
(наприклад, ПЛР-мутагенезу раніше отриманого варіанта необхідного полінуклеотиду) або за допомогою твердофазного синтезу ДНК. Переважно застосовують рекомбінантні способи експресії. У зв'язку з виродженням генетичного коду кожну амінокислотну послідовність імуноглобуліну кодує декілька послідовностей нуклеїнових кислот, і даний винахід відноситься до всіх нуклеїнових кислот, які кодують зв'язуючі білки, які описані в даному документі.
С. Отримання антитіл
Антитіла за переважними варіантами здійснення даного винаходу можна одержати або отримати будь-яким з безлічі способів. Наприклад, такі антитіла можна отримати з плазми, синтетичним способом, рекомбінантним способом або трансгенним способом за допомогою клітини (наприклад, гібридомної культури) і т. д. Отримання синтетичних білків було описано, наприклад, у роботі Оамузоп, Р.Е. еї аї. (2000) "Зупіпезіз ОЇ Маїїме Ргоївїнз Ву Спетісаї! І ідайоп,"
Аппи. Вем Віоспет. 69:923-960; М/ЇКеп, «у. еї аї. (1998) "Спетіса! Ргоївіп Зупіпевів," Сит. Оріп.
ВіоїесНнпої. 9(4):412-426; і в роботі Коспепаоетнег, С.(3. єї а. (1999) "Снетіса! Ргоївїп Зупінезів, "Ст. Оріп. Спет. Віо!. 3(6):665-671.
Антитіла можуть бути отримані рекомбінантно шляхом спочатку виділення антитіл, отриманих з тварин-хазяїв, отримання послідовності генів і застосування послідовності генів для рекомбінантної експресії антитіла в клітинах-хазяїнах (наприклад, клітинах СНО). Вектори, що містять полінуклеотіди, які становлять інтерес, можуть бути введені в клітину-хазяїна будь- яким з ряду відповідних способів, включаючи електропорацію, трансфекцію з використанням хлориду кальцію, хлориду заліза, фосфату кальцію, ОЕАЕ-декстрану або інших речовин, бомбардування мікрочастинками, ліпофекцію й інфекцію (наприклад, де вектор є інфекційним агентом, таким як вірус коров'ячої віспи). Вибір векторів або полінуклеотидів, які вводять, часто буде залежати від особливостей клітини-хазяїна.
Для виділення генів, що кодують антитіло, поліпептид або білок, які становлять інтерес, можна застосовувати будь-які клітини-хазяїни, здатні до надекспресії гетерологічних ДНК.
Необмежувальні приклади відповідних клітин-хазяїв ссавців включають без обмеження клітини
СО5, Нега ї СНО. Переважно, клітини-хазяїни експресують кДНК на рівні, який приблизно в 5 разів перевищує, більш переважно в 10 разів перевищує, ще більш переважно в 20 разів перевищує рівень відповідного ендогенного антитіла або білка, які становлять інтерес, за
Зо наявності, у клітини-хазяїна. Скринінг клітин-хазяїв щодо специфічного зв'язування з НЕК2/пеи або РО-1 здійснюють імуноаналізом або ЕАС5. Отримання антитіл за допомогою клітинної (наприклад, гібридомної) культури описано, наприклад, у роботі Гатшу, Е. еї аї. (2005) "Мопосіопаї Ап КесотрБбіпапі Апііродіеєх, 30 МУеаг5 АйПег...,, Нит. Апіроаіе5. 14(1-2):33-55;
АїІдіпаїюп, 5. єї аї. (2007) "ЗсаІе-Ор ОЇ Мопосіопа! Апіїроду Рипіїсайоп Ргосев5ев," У. Спготайювдг.
В Апаїуї. Тесппої. Віотей. І їе осі. 848(1):64-78; 5.5. Рай (2006) У. Спгтотаїйодг. В Апаїуї.
Тесппої. Віотей. Ме сі. 848(1):8-18; Вігсп, У.В. еї аї. (2006) "Апіїроду Ргодисійоп," Адм. Огид
Оеїїм. Вем. 58(5-6):671-685; Емеп, М.5. єї а). (2006) "Зегпит-Егеє Нубідота Сийите: Етісаї,
Зсіепійіс Апа Заїеїу Сопвзідегайопв," Тгтепаз Віоїеснпої. 24(3):105-108; Стайтапп, К. еї аї. (2006) "Мапитасіштпа Ої Весотрбіпапі ТПнегарецшіїс Ргоївїп5 Іп Містобіа! Зузіетв," Віоїесппої. у). 1(2):164- 86; в патенті США Мо 7121239; і патентних публікаціях США Мо 20070037216 та Мо 20040197866.
Іншим способом, який може бути використаний, є експресія послідовності антитіл. у рослинах (наприклад, тютюні) або в трансгенному молоці. Були розкриті відповідні способи рекомбінантної експресії антитіл у рослинах або молоці (див., наприклад, Реегег»5, К. еї аї. (2001) "Ргодисіюп ОЇ Апіїродієз Апа Апіїроду Егадтепів Іп Ріапів," Массіпе 19:2756; І опрега, М. еї аї. (1995) "Нитап Апіїродієз ГЕгот Тгапздепіс Місе," Іпі. Неу. Іттипої! 13:65-93; і РоїІоскК еї а1!.(1999) "Тгапздепіс МіїК Аз А Меїнод Рог Те Ргодисіп ОЇ Несотрбіпапі Апіїродіев," У. Іттипої Меїйовд5 231:147-157).
З рівня техніки відомі відповідні способи одержання похідних антитіл, наприклад, гуманізованих, оптимізованих, одноланцюгових і т. д. Похідні антитіл, які мають, наприклад, підвищену афінність щодо їх антигену, можуть бути отримані за допомогою способів фагового дисплея. Технологія, яка зветься дозріванням афінності, передбачає використання мутагенезу або "прогулянки" по СОВА і повторного відбору з використанням спорідненого антигену для виявлення антитіл, які зв'язуються з більш високою афінністю щодо антигену в порівнянні з вихідним або батьківським антитілом (див., наприклад, Сіазег, 5.М. еї аї. (1992) "Апіроду
Епаіпеетіпд Ву Содоп-Вазед Миїадепевів Іп А Ніатепіоив Рнаде Месіог Зузівет," У). Іттипооау 149:3903; Ми, Н. еї аї. (1998) "Зіерміве іп мйго Айіппу Маїшигайоп ОЇ Мітахіп, Ап АІрпам Веїаз- тАб," Ргос. Маї). Асад. 5сі. (0О.5.А.) 95:6037-6042; Мепоп, О.Е. єї аї. (1995) "Аніпйу Маїшгаїйоп ОЇ
Тне ВА9Зб Апіїі-Сагсіпота Апіїроду Ву Содоп-Вазед Митадепевів," ). Іттипоіоду 155:1994-2004;
Зспієг, А еї аї. (1996) "Івоїайоп ОЇ Рісотоїаг АНіпйу апіі-с-етоВ-2 біпдіє-СНаійп Ем Ву МоїІесшіаг (510) Емоїшіоп ОЇ Тне Сотріетепіату Оеєїегтіпіпу Ведіопв Іп Те Сепіег ОЇ Те Апіїроду Віпаїпд Зйе,"
У. Мої. Віо. 263:551-567).
Повністю людські антитіла (які також звуться цілком людськими антитілами) можна отримати із застосуванням трансгенних мишей, які не здатні експресувати ендогенні гени важкого й легкого ланцюга імуноглобулінів, але можуть експресувати людські гени важкого і легкого ланцюга. Огляд цієї технології отримання людських антитіл наведено, наприклад, в роботі
Ї опрего, М. єї а!. (1995) "Нитап Апііродієв5 ГЕгот Тгапздепіс Місе," Іпі. Неу. Іттипої. 13:65-93, і в патенті США Мо 5633425. Повністю людські антитіла також можна отримати за допомогою інших методик, відомих у даній галузі техніки, в тому числі бібліотек фагового дисплея (які описані в роботі Ноодепроот, Н.В. еї аї. (1991) "Ву-Развіпу Іттипізайоп. Нитап Апіїбодієв Егот 5упінеїйїс
Верепоїгез ОЇ Септіїпе Мн Сйепе бедтепів Неатапдей Іп Міго," У. Мої. Віої. 227:381, і в роботі
Магкзв, 9.0. еї аї. (1991) "Ву-Равзвіпд Іттипігайоп. Нитап Апіїбодіев Рот М-Сепе Гіргалев
ОРізріауєЯа Оп РНнаде," У. Мої. ВіоЇ. 222:581) або "спрямованого відбору" (який описано, наприклад, в роботі Уезрегв, І..5. еї аЇ. (1994) "Сцідіпуд Те ЗеїІесіоп ОЇ Нитап Апіїродіев Егот
Ріпаде Оізріау ВБерепоігез То А біпдіє Ерйоре ОЇ Ап Апіїдеп," Віотїесппоіоду 12:899-903). Для отримання гуманізованих або людських антитіл також можна застосовувати трансгенних тварин, які призначені для вироблення більш бажаної (наприклад, повністю людських антитіл) або більш робастної імунної відповіді. Прикладами такої методики є ХЕМОМОИ5БЕ "м (Ардепіх,
Іпс., Фрімонт, Каліфорнія) і НОМАВ-МО5ЕФ і ТО МОЗЕ "М (обидві від Медагех, Іпс., Прінстон,
Нью-Джерсі).
Даний винахід відноситься до модифікацій описаних у даному документі антитіл (тобто антитіл до НЕНг/пеи і антитіл до РО-1), у тому числі до функціонально еквівалентних антитіл і злитих поліпептидів, які істотно не впливають на властивості таких молекул, а також до варіантів, які характеризуються підвищеною або зменшеною активністю. Модифікація поліпептидів є звичайною практикою в даній галузі техніки й не потребує докладного опису в даному документі. Приклади модифікованих поліпептидів включають поліпептиди з консервативними замінами амінокислотних залишків, однією або декількома делеціями або доповненнями амінокислот, які не роблять значного згубного впливу на функціональну активність, або із застосуванням хімічних аналогів. До амінокислотних залишків, які можуть бути консервативно замінені один одним, відносяться без обмеження гліцин/аланін, серин/треонін,
Зо валін/золейцин/лейцин, аспарагін/глутамін, аспарагінова кислота/глутамінова кислота, лізин/аргінін і фенілаланін/тирозин. До таких поліпептидів також відносяться глікозильовані й неглікозильовані поліпептиди, а також поліпептиди 3 іншими посттрансляційними модифікаціями, такими як, наприклад, глікозилювання різними цукрами, ацетилювання і фосфорилювання. Переважно, амінокислотні заміни будуть консервативними, тобто внесена в результаті заміни амінокислота буде мати ті ж самі хімічні властивості, що й вихідна амінокислота. Такі консервативні заміни відомі з рівня техніки, та їх приклади були наведені вище. Амінокислотні модифікації можуть варіювати від зміни або модифікації однієї або декількох амінокислот до повної реорганізації ділянки, такої як варіабельна ділянка. Зміни в варіабельній ділянці можуть змінювати афінність і/або специфічність зв'язування. Інші способи модифікації передбачають застосування відомих у даній галузі методик зв'язування, включаючи без обмеження ферментативні засоби, окиснювальне заміщення й хелатування. Модифікації можна застосовувати, наприклад, для прикріплення міток для імуноаналізу, такого як прикріплення радіоактивних фрагментів для радіоїмунологічного аналізу. Модифіковані поліпептиди отримують за допомогою загальноприйнятих у даній галузі техніки процедур, і їх можна піддавати скринінгу за допомогою відомих у даній галузі техніки стандартних аналізів.
Н. Характеристика зв'язуючих молекул
Зв'язуючі молекули, такі як антитіла, можуть бути охарактеризовані різними способами.
Зокрема, антитіла можна проаналізувати щодо здатності специфічно зв'язуватися з антигеном, наприклад, НЕК2/пеи, РО-1, або, якщо молекула містить Ес-ділянку (або її частину), то щодо здатності формувати Ес-Есук взаємодії, тобто специфічного зв'язування Ес-ділянки (або її частини) з Есук.
До імуноаналізів, які можна застосовувати для аналізу специфічного зв'язування, перехресної реактивності й Бо-БЕсукК взаємодій, відносяться без обмеження системи конкурентного і неконкурентного аналізу з використанням таких методик, як вестерн-блот, радіоіїмунологічні аналізи, ІФА (твердофазний імуноферментний аналіз), імуноаналізи "сендвіч" - типу, аналізи імунопреципітації, реакції преципітації, реакції дифузійної преципітації в гелі, імунохроматографічні аналізи, аналізи імунодифузії, аналізи аглютинації, аналізи фіксації комплементу, імунорадіометричні аналізи, флуоресцентні імуноаналізи й імуноаналізи з використанням білка А і т. ії. (див., наприклад, СОВВЕМТ РАОТОСОЇ5 ІМ МОГЕСЦШІ АВ 60 ВІОГ ОС (А!йзибеї, Е.М. еї а!., Едв., 1987) Стеєпе Рибр. Авзосіаїез5, Мем/ МОК, МУ).
Афінність зв'язування з цільовим антигеном зазвичай вимірюють або визначають за допомогою стандартних аналізів взаємодій між антитілом і антигеном, таких як конкурентні аналізи ВіАсоге, аналізи насичення або імунологічні аналізи, такі як ІФА або КІА. Для імунологічних або функціональних аналізів з метою характеристики молекул за даним винаходом можна використовувати сортування флуоресцентно-активованих клітин (ЕАС5) з використанням будь-якої методики, відомої фахівцям у даній галузі техніки. Аналізи на основі поверхневого плазмонного резонансу можна застосовувати для характеристики кінетичних параметрів зв'язування антигензв'язуючого домену або Ес-Есук.
Охарактеризувати зв'язування з Есук молекулами, що містять Ес-ділянку (або його частину) іабо містять епітоп-зв'язуючий домен, специфічний до Есуюк, можна згідно зі способами, описаними в галузі техніки конструювання антитіл. Аналізи ефекторних функцій клітин є добре відомими, наприклад, які описані в роботі Регизвіа, В. єї а). (2000) "Авзауз їог апііроду-дерепаепі сеїІ-тедіаїєд суюїохісйу (АОСС) Апа Ремегзе АОСС (Недігесієй Суююхісйу) п Нитап Майгаї
КіШег Сеїїв," Меїйподе5 Мої. Віої. 121:179-192; Іенйтапп, А.К. еї а). (2000) "РНнадосуїозів:
Меазигетепі Ву Ріо Суютеїгу," У. Іттипої. Меїнодз 243(1-2):229-242; Ваддіоїїпі, М. еї аї. (1998) "СейПшШаг Модеіз Рог Те Оеєїесіоп Ап ЕмаїЇнайоп ОГ Огоа5 Тнаї Модиіаїє Нитап РНнадосуїє
Асіїмпу," Ехрепепіїа 44(10):841-848; Вгомп, Е.9. (1994) "п Міго Аззауз ОЇ Рнадосуїйс Рипсійп ОЇ
Нитагп Регірпега! Віоса ГеиКосуїе5: Кесеріог Моашіацйоп Апа зЗідпа! Тгапзаисііоп, " Меїйод5 СеїЇ
ВіоІ. 45:147-164; і Мипп, О.Н. еї аї. (1990) "Рнадосуюзів ОЇ Титог Се Ву Нитап Мопосуїев5
Сийитей Іп Весотбріпапі Масторнаде Соіопу-5іїтиаййпу Расіог," у). Ехр. Мед. 172:231-237.
МІЇ. Способи лікування
Молекули, які специфічно зв'язуються з НЕНгдг/пеи, і молекули, які специфічно хв'язують рецептор клітинної поверхні (або його ліганд), який залучений у регуляцію імунної контрольної точки (особливо РО-1), можна застосовувати для терапевтичних цілей у індивідуумів із злоякісною пухлиною або іншими захворюваннями. Згідно з одним варіантом здійснення, молекули, які мають таку специфічність зв'язування, вводять одночасно. У контексті даного документа таке "одночасне" введення призначене для позначення: (А) введення однієї фармацевтичної композиції, яка містить як молекулу, яка специфічно зв'язує НЕК2/пеи, так і молекулу, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні (або його
Зо ліганд), який залучений у регуляцію імунної контрольної точки (зокрема, РО-1). Такі молекули можуть бути однією й тією ж самою молекулою (наприклад, діатілом) або можуть відрізнятися (наприклад, антитіло до НЕК2/пеи або його антигензв'язуючий фрагмент і антитіло до РО-1 або його антигензв'язуючий фрагмент); або (В) роздільного введення двох або білоше фармацевтичних композицій, причому одна з цих композицій містить молекулу, яка специфічно зв'язує НЕК2г/пеи, а інша композиція з цих композицій містить молекулу, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні (або його ліганд), який залучений у регуляцію імунної контрольної точки (зокрема, РО-1), при цьому ці композиції вводять в межах 24-годинного періоду.
Згідно з другим варіантом здійснення, використовують дві різні молекули й молекули вводять "послідовно" (наприклад, вводять антитіло до НЕК2г/пеи, а пізніше вводять антитіло до
РО-1 або навпаки). При такому послідовному введенні другу композицію, яку вводять, найбільш переважно вводять щонайменше через 24 години або пізніше після введення першої введеної композиції.
Проведення терапії або "лікування" відноситься до будь-яких ознак успіху при лікуванні або полегшенні пошкодження, патології або стану, включаючи будь-який об'єктивний або суб'єктивний параметр, такий як пом'якшення, ремісія, ослаблення симптомів або полегшення переносимості пацієнтом пошкодження, патології або стану, уповільнення швидкості переродження або погіршення, що робить кінцеву точку переродження менш виснажливою або покращує фізичний або психічний стан пацієнта. Лікування або полегшення симптомів може бути засноване на об'єктивних або суб'єктивних параметрах, у тому числі результатах фізичного обстеження, психоневрологічних обстежень і/або психіатричної оцінки.
До переважних суб'єктів для лікування відносяться тварини, найбільш переважно види ссавців, такі як люди або інші примати й домашні тварини, такі як собаки, кішки і т. п., які є суб'єктом із захворюванням або іншими патологічними станами. "Пацієнт" позначає суб'єкта, переважно ссавця (в тому числі людину).
Згідно з одним варіантом здійснення, моноклональне антитіло до НЕК2/пеи і моноклональне антитіло до РО-1 можна застосовувати для імунотерапії, спрямованої на клітини злоякісної пухлини різних тканин, які експресують НЕК2г/пеи, і, зокрема, клітини такої злоякісної пухлини, 60 як злоякісна пухлина молочної залози, гліобластома карцинома шийки матки, метастатична колоректальна злоякісна пухлина, злоякісна пухлина шлунка, гепатоклітинна карцинома, лейкоз, злоякісна пухлина легені, метастатична меланома, васкуляризована злоякісна пухлина підшлункової залози й метастатична злоякісна пухлина передміхурової залози. Такої імунотерапії може, наприклад, бути достатньо для зменшення клітинного ділення клітини злоякісної пухлини, затримки розвитку (наприклад, початку розвитку й збільшення розмірів) метастазів і/або для стимуляції активності імунної системи на клітини злоякісної пухлини.
Зрозуміло, що молекули вводять в концентрації, яка сприяє зв'язуванню в фізіологічних (наприклад, іп мімо) умовах. Молекули (наприклад, антитіла або діатіла) можна вводити з додатковими засобами, які посилюють або направляють власну імунну відповідь індивідуума, такими як засіб, що підсилює АЮСС.
Згідно з ще одним варіантом здійснення, одну або декілька таких молекул (наприклад, антитіл або діатілу можна кон'югувати з радіоактивною молекулою, токсином (наприклад, каліхеміцином), хіміотерапевтичною молекулою, ліпосомами або іншими везикулами, що містять хіміотерапевтичні сполуки, й ввести їх індивідууму, який потребує на таке лікування, для націлювання цих сполук на клітину злоякісної пухлини, яка містить антиген, що розпізнається антитілом, і, отже, знищити клітини злоякісної пухлини або уражені клітини. Не обмежуючись будь-якою конкретною теорією, антитіло (наприклад, антитіло до НЕК2г/пеиц) інтерналізується клітиною, що несе НЕК2г/пеи на своїй поверхні, тим самим доставляючи кон'юговану частинку в клітину для індукції терапевтичного ефекту, а молекула, яка специфічно зв'язується з рецептором клітинної поверхні (або його лігандом), який бере участь у регуляції імунної контрольної точки (особливо РО-1), сприяє активації імунної системи.
Згідно з ще одним варіантом здійснення, такі молекули (наприклад, антитіла або діатіла) можна використовувати як ад'ювантну терапію під час хірургічного видалення пухлини з метою затримки, стримання або попередження розвитку метастаз. Молекули також можна вводити до операції (неоад'ювантна терапія) для зменшення розміру пухлини й, отже, забезпечення можливості проведення або спрощення хірургічної операції, збереження тканини під час хірургічної операції талабо зменшення будь-якої фізичної вади, що є наслідком хірургічної операції.
Антитіла до НЕК2г/пеи за даним винаходом особливо корисні для лікування й/або
Зо запобігання розвитку захворювання або порушення, де необхідна ефекторна функція клітин (наприклад, АЮСС), опосередкована ЕсукК (наприклад, у випадку злоякісної пухлини).
Наприклад, антитіла до НЕК2/пеи за даним винаходом можуть зв'язувати антиген клітинної поверхні й ЕсуК (наприклад, ЕСуУКПША) на імунній ефекторній клітині (наприклад, МК-клітині), стимулюючи ефекторну функцію (наприклад, АОСС, СОС, фагоцитоз, опсонізацію і т. д.) проти зазначеної клітини. Згідно з деякими варіантами здійснення, антитіла до НЕК2/пеи за даним винаходом особливо придатні для лікування злоякісних пухлин. Ефективність стандартної терапії моноклональними антитілами залежить від поліморфізму Есук у суб'єкта. Сапгоп, С. еї а!. (2002) "Пнегарешіс Асіїмну ОЇ Нитапігей Апіії- СО20 Мопосіопа! Апіїбоду Апа Роїутог!рнізт п
Ід. Бс о Весеріої ЕсдаттанвВіІПа Сепе, Віоо4 99:754-758; М/Уєпа, МУ.К. еї а. (2003) "Тмо
Іттиподіобиййп со ЕРгтадтепі С Весеріог Роїутогрпізтве Іпдерепдепіу Ргєдісї Везропзе То
Айихітарб Іп Раїепів М/йЙН Роїїїсшаг Гутрпота," У Сіїп Опсої. 21(21):3940-3947. Ці рецептори експресуються на поверхні ефекторних клітин і опосередковують АЮСС. Високоафінні алелі підвищують здатність ефекторних клітин опосередковувати АОСС. Зокрема, антитіла до
НЕК2г/пеи за даним винаходом містять варіантну Ес-ділянку, яка характеризується підвищеною афінністю до Есук (відносно Ес-ділянки дикого типу) на ефекторних клітинах, таким чином будучи більш ефективними імунотерапевтичними реагентами для пацієнтів, незалежно від поліморфізму ЕсукК у них.
МІ. Порушення, які піддаються лікуванню
До ілюстративних порушень, які можна лікувати за допомогою різних варіантів здійснення даного винаходу, відносяться без обмеження проліферативні порушення й конкретно злоякісна пухлина (і навіть більш конкретно злоякісна пухлина, яка експресує НЕН2г/пеи). Згідно з різними варіантами здійснення, даний винахід відноситься до способів і композицій для лікування, попередження або контролю захворювання або порушення у суб'єкта, що передбачає введення суб'єкту терапевтично ефективної кількості молекули, яка специфічно зв'язує НЕНг/пеи, і молекули, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні (або його ліганд), який залучений у регуляцію імунної контрольної точки (наприклад, РО-1). Наприклад, молекули за даним винаходом особливо корисні для попередження, інгібування, зменшення росту або регресії первинних пухлин і метастазування клітин злоякісної пухлини. Незважаючи на те, що не мається на увазі, що молекули за даним винаходом обмежені конкретним механізмом дії, бо молекули за даним винаходом можуть опосередковувати ефекторну функцію проти клітин злоякісної пухлини, сприяти активації імунної системи проти клітин злоякісної пухлини, зшивати антигени клітинної поверхні й/або рецептори на клітинах злоякісної пухлини та посилювати апоптоз або передачу негативних щодо зростання регуляторних сигналів або їх комбінацію, що приводить у результаті до усунення пухлини й/або до зменшення пухлини.
Антитіла зі зниженою афінністю до ЕсукКіІІВ і з підвищеною афінністю до ЕсукША і/або
ЕСУКПА можуть приводити до посиленої активації відповіді на зв'язування ЕсукК і, отже, мають підвищену терапевтичну ефективність для лікування й/або попередження розвитку злоякісної пухлини. До необмежуючих прикладів злоякісних пухлин, що піддаються лікуванню за допомогою наведених у даному документі способів, відносяться гостра мієлоїдна лімфома, карцинома наднирників, аденокарцинома, базальноклітинна злоякісна пухлина, злоякісна пухлина сечового міхура, злоякісна пухлина кісток, саркома кісток і сполучних тканин, злоякісна пухлина головного мозку, злоякісна пухлина молочної залози, бронхіальна злоякісна пухлина, злоякісна пухлина шийки матки, хоріокарцинома, хронічний лімфоцитарний лейкоз, хронічний мієлолейкоз, злоякісна пухлина товстої кишки, колоректальна злоякісна пухлина, ендотеліальна злоякісна пухлина, злоякісна пухлина стравоходу, злоякісна пухлина ока, злоякісна пухлина фаллопієвих труб, злоякісна пухлина жовчного міхура, злоякісна пухлина шлунково-кишкового тракту, гліома, волосатоклітинний лейкоз, гепатома, хвороба Ходжкіна, злоякісна пухлина жовчних проток, злоякісна пухлина суглобів, саркома Капоши, злоякісна пухлина нирки, злоякісна пухлина глотки, злоякісна пухлина печінки, лейкоз, злоякісна пухлина легені, лімфобластний лейкоз, лімфома, злоякісна мезотеліома, медулобластома, меланома, мезотеліома, злоякісна пухлина середнього вуха, множинна мієлома, мієлома, злоякісна міксома, злоякісна пухлина носової порожнини, злоякісна пухлина носоглотки, нейробластома, неходжкінська лімфома, недрібноклітинна злоякісна пухлина легені, злоякісна пухлина носа, злоякісна пухлина ротової порожнини, злоякісна пухлина яєчника, злоякісна пухлина підшлункової залози, злоякісна пухлина статевого члена, злоякісна пухлина черевної порожнини, злоякісна пухлина глотки, злоякісна пухлина гіпофіза, злоякісна пухлина передміхурової залози, злоякісна пухлина прямої кишки, ниркова злоякісна пухлина, злоякісна пухлина слинних залоз, злоякісна пухлина шкіри, саркома м'яких тканин, плоскоклітинна карцинома, злоякісна пухлина шлунка, злоякісна пухлина яєчок, злоякісна пухлина щитоподібної залози, злоякісна пухлина органів сечової системи, злоякісна пухлина матки, злоякісна пухлина піхви, злоякісна пухлина насінників, злоякісна пухлина жіночих зовнішніх статевих органів і пухлина Вільма.
Згідно з деякими варіантами здійснення, злоякісною пухлиною є гематопоетична злоякісна пухлина або пов'язана з кров'ю злоякісна пухлина, така як лімфома, лейкоз, мієлома, лімфолейкоз, злоякісна пухлина селезінки й злоякісна пухлина лімфатичних вузлів. Згідно з переважним варіантом здійснення, злоякісною пухлиною є В-клітинна злоякісна пухлина, така як, наприклад, лімфома високого, проміжного або низького ступеня злоякісності (в тому числі В- клітинна лімфома, така як, наприклад, лімфома Беркітта, дифузна великоклітинна лімфома, фолікулярна лімфома, лімфома Ходжкіна, лімфома з клітин мантійної зони, лімфома з клітин маргінальної зони, В-клітинна лімфома слизової лімфоїдної тканини, неходжкінська лімфома, дрібноклітинна лімфоцитарна лімфома й Т-клітинні форми лімфоми) та лейкози (в тому числі хронічний лімфоцитарний лейкоз, такий як В-клітинний лейкоз (СО5- В-лімфоцитів), хронічний мієлоїдний лейкоз, лімфоїдний лейкоз, такий як гострий лімфобластний лейкоз, мієлодисплазія, мієлоїдний лейкоз, такий як гострий мієлоїдний лейкоз і вторинний лейкоз), множинна мієлома, така як плазмацитома, й інші гематологічні та/або В-клітинні або Т-клітинні злоякісні пухлини.
Іншими ілюстративними злоякісними пухлинами є злоякісні пухлини додаткових гематопоетичних клітин, включаючи поліморфоядерні лейкоцити, такі як базофіли, еозинофіли, нейтрофіли й моноцити, дендритні клітини, тромбоцити, еритроцити та натуральні кілери.
Згідно з деякими варіантами здійснення, злоякісною пухлиною є злоякісна пухлина, в якій надекспресується НЕК2г/пеи. Згідно з деякими варіантами здійснення, злоякісною пухлиною є злоякісна пухлина молочної залози, злоякісна пухлина шлунка, злоякісна пухлина передміхурової залози, злоякісна пухлина матки, злоякісна пухлина яєчника, злоякісна пухлина товстої кишки, ендотеліальна злоякісна пухлина, карцинома наднирників, недрібноклітинна злоякісна пухлина легені, злоякісна пухлина голови й шиї, злоякісна пухлина гортані, злоякісна пухлина печінки, ниркова злоякісна пухлина, гліобластома або злоякісна пухлина підшлункової залози, в якій надекспресується НЕК2/пеи.
ЇХ. Фармацевтичні композиції
Для введення як "активних інгредієнтів" фармацевтичної композиції можна застосовувати різні склади з молекулами за даним винаходом (наприклад, антитілами або діатіламі). Згідно з 60 деякими варіантами здійснення, такі молекули можна вводити в чистому вигляді. Крім фармакологічно активного засобу(засобів) композиції за даним винаходом можуть містити відповідні фармацевтично прийнятні носії, що включають наповнювачі та допоміжні речовини, які добре відомі в даній галузі техніки та є відносно інертними речовинами, які полегшують введення фармакологічно ефективної речовини або які полегшують переробку активних сполук в препарати, які можна застосовувати в фармацевтичних цілях для доставки в місце дії.
Наприклад, наповнювач може надавати форму або консистенцію або відігравати роль розчинника. Відповідні наповнювачі включають без обмеження стабілізуючі засоби, змочувальні й емульгуючі засоби, солі для зміни осмолярності, інкапсулюючі засоби, буфери та підсилювачі проникнення в шкіру. Композиції можуть бути представлені в будь-якій зручній формі, наприклад, в таблетках, пігулках, порошках, пастилках, саше, облатках, настоянках, суспензіях, емульсіях, розчинах, сиропах, аерозолях (як тверда речовина або як рідке середовище), мазях, що містять, наприклад, до 10 мас. 9о активної сполуки, м'яких та твердих желатинових капсулах, супозиторіях, стерильних ін'єкційних розчинах і стерильних упакованих порошках, крім інших необмежуючих альтернатив. Такі композиції можна отримати за допомогою будь-якого відомого способу, наприклад, шляхом змішування активного інгредієнта з носієм(носіями) або наповнювачем(наповнювачами) в стерильних умовах.
Відповідні склади для парентерального введення включають водні розчини активних сполук у водорозчинній формі, наприклад, як водорозчинні солі. Крім того, можна вводити суспензії активних сполук, придатних для масляних ін'єкційних суспензій. До придатних ліпофільних розчинників або носіїв відносяться жирні масла, наприклад, кунжутна олія, або синтетичні естери жирних кислот, наприклад етилолеат або тригліцериди. Водні ін'єкційні суспензії можуть містити речовини, які збільшують в'язкість суспензії та включають, наприклад, карбоксиметилцеллюлозу натрію, сорбіт і/або декстран. Необов'язково, суспензія також може містити стабілізатори. Для інкапсулювання засобу для доставки в клітину також можна застосовувати ліпосоми.
Фармацевтичний склад для системного введення згідно з даним винаходом може бути складений для ентерального, парентерального введення або місцевого застосування.
Фактично, всі три типи складу можна застосовувати одночасно для здійснення системного введення активного інгредієнта. Наповнювачі, а також склади для парентеральної та
Зо непарентеральний доставки лікарських засобів, викладені в роботі ВЕМІМЕАТОМ: ТНЕ 5СІЕМСЕ
АМО РАЕАСТІСЕ ОЕЄ РНАВМАСУ, 2151 Еайоп, Іірріпсой МУШіате5 5 МУМ/їКіп5 Рибіїзпіпуд (2005).
Придатні склади для перорального введення включають тверді або м'які желатинові капсули, пігулки, таблетки, в тому числі таблетки з покриттям, настойки, суспензії, сиропи або інгаляційні форми і їх форми з контрольованим вивільненням. Зазвичай ці засоби складають для введення шляхом ін'єкції (наприклад, внутрішньочеревно, внутрішньовенно, підшкірно, внутрішньом'язово і т. д.), хоча також можна застосовувати інші форми введення (наприклад, пероральну, черезслизову й т. д.). Відповідно, молекули за даним винаходом (наприклад, антитіла до
НЕК2/пеи, антитіла до РО-1) переважно об'єднують у комбінацію з фармацевтично прийнятними середовищами, такими як сольовий розчин, розчин Рінгера, розчин декстрози й т. і.
Фармацевтичні композиції також можна скласти таким чином, щоб забезпечити швидке, тривале або уповільнене вивільнення їх активних інгредієнтів після введення пацієнтові з використанням процедур, відомих у даній галузі техніки. Фізичні та хімічні характеристики композицій за даним винаходом можна модифікувати або оптимізувати згідно з рівнем техніки в залежності від способу введення й конкретного захворювання або порушення, яке підлягає лікуванню. Композиції можуть бути представлені в стандартній лікарській формі, в герметично закритій ємності або як частина набору, який може включати в себе інструкції по застосуванню й/"або множину стандартних лікарських форм.
Згідно з конкретними варіантами здійснення, терапевтичні засоби можуть бути включені в композицію, наприклад, шляхом інкапсуляції в ліпосоми, мікрочастинки, мікрокапсули, рекомбінантні клітини, здатні експресувати антитіло або злитий білок, опосередкованого рецептором ендоцитозу (див., наприклад, УМи .У. апа УмМи С.Н. (1987) "Кесеріог-Меадіаїва п
Міо Сепе Тгап5іогтайоп Ву А Боїшбіе ОМА Сагтієг Бузіет, " У. Віої. Спет. 262:4429-4432), конструювання нуклеїнової кислоти як частини ретровірусного або іншого вектора і т. д. Згідно з іншим конкретним варіантом здійснення, терапевтичні засоби постачають у вигляді сухого стерилізованого ліофілізованого порошку або безводного концентрату в герметично закритій ємності, і їх можна ресуспендувати, наприклад, водою або сольовим розчином до відповідної концентрації для введення суб'єктові.
Переважно терапевтичний засіб поставляють як сухий стерильний ліофілізований порошок бо в герметично закритій ємності в стандартній дозі щонайменше 5 мг, більш переважно щонайменше 10 мг, щонайменше 15 мг, щонайменше 25 мг, щонайменше 35 мг, щонайменше 45 мг, щонайменше 50 мг або щонайменше 75 мг. Ліофілізований порошок слід зберігати за температури від 2 "С до 8 "С у своїй початковій ємності, а молекули слід вводити парентерально в межах 12 годин, переважно в межах 6 годин, в межах 5 годин, в межах З годин або в межах 1 години після ресуспендування. Згідно з альтернативним варіантом здійснення, терапевтичні засоби постачають в рідкій формі в герметично закритій ємності із зазначенням кількості та концентрації терапевтичного засобу. Переважно, рідку форму поставляють в герметично закритій ємності щонайменше 1 мг/мл, більш переважно щонайменше 2,5 мг/мл, щонайменше 5 мг/мл, щонайменше 8 мг/мл, щонайменше 10 мг/мл, щонайменше 15 мг/кг, щонайменше 25 мг/мл, щонайменше 50 мг/мл, щонайменше 100 мг/мл, щонайменше 150 мг/мл, щонайменше 200 мг/мл молекул.
За необхідності введення більш одного терапевтичного засобу, засоби можна скласти разом в одному складі або можна скласти в окремих композиціях. Отже, згідно з деякими варіантами здійснення, молекула, яка специфічно зв'язує НЕК2г/пеи, і молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні (або його ліганд), який залучений у регуляцію імунної контрольної точки (наприклад, РО-1), складають разом в одній фармацевтичній композиції. Згідно з альтернативними варіантами здійснення, молекули складають в окремих фармацевтичних композиціях.
Х. Набори
Композиції також можуть бути включені в набір. Набір може включати, згідно з необмежуючими аспектами, фармацевтичну композицію, яка містить терапевтичний засіб, інструкції по застосуванню й/або інші компоненти. Згідно з переважними варіантами здійснення, набір може включати готову для введення композицію. До ємностей наборів можна віднести пляшку, дозатор, упаковку, відділення або інші типи ємностей, в яких може бути розміщений компонент. Ємність може містити знаки на своїй поверхні. Знаками, наприклад, можуть бути слово, фраза, абревіатура, зображення або символ. Ємності можуть дозувати передбачену кількість компонента (наприклад, композицій за даним винаходом). Композиція може бути дозована в спреї, аерозолі або в рідкій формі або в напівтвердий формі. Ємності можуть мати механізми для розпилення, прокачування або стискання. Згідно з деякими аспектами, набір
Зо може включати в себе шприц для введення композицій за даним винаходом.
Якщо в наборі міститься більше одного компонента, вони можуть бути упаковані разом, або такий набір також зазвичай буде містити другу, третю або інші додаткові ємності, в які можуть бути окремо розміщені додаткові компоненти. Набори за даним винаходом також можуть включати ємність, в якій розміщені компоненти, щільно укладені для комерційного продажу. Такі ємності можуть включати в себе виготовлені литтям під тиском або видувним формуванням пластикові ємності, в яких зберігаються необхідні пляшки, дозатори або упаковки. Набір може також включати в себе інструкції по використанню компонентів набору, а також по застосуванню будь-яких інших композицій, сполук, засобів, активних інгредієнтів або об'єктів, які не включені в набір. Інструкції можуть включати варіанти, які можуть бути реалізовані. Інструкції можуть включати в себе пояснення, як, наприклад, застосовувати, використовувати та зберігати продукти або композиції.
ХІ. Введення й дозування
Доступні різні шляхи введення композицій за даним винаходом. Конкретний вибраний спосіб буде залежати, звичайно, від конкретного вибраного терапевтичного засобу, незалежно від того, чи призначено введення для попередження, діагностики або лікування захворювання, тяжкості медичного порушення, яке лікують, і дози, необхідної для терапевтичної ефективності.
Способи за даним винаходом можна здійснювати на практиці з застосуванням будь-якого способу введення, який є прийнятним з медичної точки зору й дає ефективні рівні активних сполук, не викликаючи неприйнятних з клінічної точки зору побічних ефектів. До таких способів введення відносяться без обмеження пероральний, трансбуккальний, підязиковий, інгаляційний, черезслизовий, ректальний, інтраназальний, місцевий, очний, періокулярний, внутрішньоочний, трансдермальний, підшкірний, внутрішньоартеріальний, внутрішньовенний, внутрішньом'язовий, парентеральний або інфузійний методи. Згідно з конкретним варіантом здійснення, може бути необхідне локальне введення фармацевтичних композицій за даним винаходом в область, яка потребує на таке лікування; це можна здійснити, наприклад, шляхом без обмеження локальної інфузії, шляхом ін'єкції або за допомогою імплантату, причому зазначений імплантат являє собою пористий, непористий або желатиноподібний матеріал, включаючи мембрани, такі як мембрани 5ікКаїавійс, або волокна.
Застосовуваний в контексті даного документа термін "-ерапевтично ефективна кількість" бо означає загальну кількість кожного активного компонента фармацевтичної композиції або 5О0 способу, яка є достатньою для того, щоб спостерігалася значна користь для пацієнта, тобто вилікування або полегшення хронічних станів, зменшення симптомів, збільшення швидкості вилікування таких станів або зміна рівнів речовини, яка піддається виявленню, в обробленій або навколишній тканині. Щодо окремого активного інгредієнта, який вводять окремо, цей термін позначає тільки такий інгредієнт. Щодо комбінації, термін відноситься до об'єднаних у комбінацію кількостей активних інгредієнтів, які приводять в результаті до терапевтичного ефекту, незалежно від того, чи вводять їх у комбінації, послідовно або одночасно.
Точна доза, яка буде використана в складах за даним винаходом, буде залежати від шляху введення й від тяжкості стану, та повинна визначатися на розсуд практикуючого клініциста й з урахуванням обставин для кожного пацієнта, та може бути визначена за допомогою стандартних клінічних методик. Ефективні дози (тобто дози, достатні для ефективного лікування, попередження або полегшення одного або декількох симптомів, пов'язаних з порушенням) можна екстраполювати з кривих залежності "доза-відповідь", отриманих з тест- систем іп міго або на тваринних моделях. Конкретний режим дозування, тобто доза, час та повторення, буде, таким чином, залежати від конкретного індивідуума й історії хвороби такого індивідуума, а також від шляху введення. Дозування та частоту введення молекули за даним винаходом можна зменшити або змінити шляхом посилення її поглинання й/або проникнення в тканину, як, наприклад, шляхом ліпідизації.
Згідно з переважним варіантом здійснення, терапевтичні засоби за даним винаходом уводять в періодичних режимах дозування або шляхом безперервної інфузії, або частого введення без тривалих періодів спокою. Таке періодичне введення може передбачати дозування з постійними інтервалами без періодів спокою. Зазвичай терапевтичні засоби, зокрема цитотоксичні засоби, застосовують у більш низьких дозах. Такі режими дозування охоплюють постійне щоденне введення відносно низьких доз протягом тривалих періодів часу, яке може мінімізувати токсичні побічні ефекти й виключати періоди спокою. Згідно з конкретними варіантами здійснення, терапевтичні засоби вводять постійною низькою дозою або безперервною інфузією в діапазоні від приблизно 24 годин до приблизно 2 днів, до приблизно 1 тижня, до приблизно 2 тижнів, до приблизно З тижнів, до приблизно 1 місяця, до приблизно 2 місяців, до приблизно З місяців, до приблизно 4 місяців, до приблизно 5 місяців, до приблизно 6
Зо місяців. Фахівець-онколог може оптимізувати схеми таких режимів дозування.
Переважно, молекули за даним винаходом уводять із застосуванням режиму лікування, що передбачає одну або декілька доз, при цьому режим лікування призначають на період 2 дні, З дні, 4 дні, 5 днів, 6 днів або 7 днів. Згідно з деякими варіантами здійснення, режим лікування передбачає періодичне введення доз ефективної кількості таких молекул (наприклад, уведення дози на 1-й день, 2-й день, 3-й день і 4-й день заданого тижня та не введення доз цієї молекули в інші дні тижня. Зокрема, охоплюється введення таких молекул на 5-й день, 6-й день і 7-й день того ж тижня. Зазвичай має місце 1, 2, 3, 4, 5 або більше курсів лікування. Кожен курс може мати один і той самий режим або інший режим лікування.
Згідно з іншим варіантом здійснення, дозу, яку вводять, підвищують протягом першої чверті, першої половини або перших двох третин або трьох чвертей режиму(-ів) (наприклад, протягом першого, другого або третього режиму лікування з 4 курсів), доки не досягають добової профілактично або терапевтично ефективної кількості молекули.
Дозування таких молекул, які вводять пацієнтові, можна розрахувати для застосування як монотерапії. Альтернативно, молекулу можна застосовувати в комбінації з іншими терапевтичними композиціями, та дозування, яке вводять пацієнтові, буде нижчим, ніж при застосуванні зазначених молекул як монотерапії. Дозування таких молекул (або комбінації таких молекул), яке вводять пацієнтові, зазвичай становить щонайменше приблизно 1,0 мг/кг маси тіла, щонайменше приблизно З мг/кг маси тіла, щонайменше приблизно 5 мг/кг маси тіла, щонайменше приблизно 10 мг/кг маси тіла або щонайменше приблизно 20 мг/кг маси тіла. У разі антитіл, до яких відноситься даний винахід, дозування, яке вводять пацієнтові, зазвичай становить від 1,0 мг/кг до 100 мг/кг маси тіла пацієнта. Переважно, дозування, яке вводять пацієнтові, становить від 1,0 мг/кг маси тіла до 20 мг/кг маси тіла, від 1,0 мг/кг маси тіла до 10 мг/кг маси тіла, від 1,0 мг/кг маси тіла до 5 мг/кг маси тіла, від 2,0 мг/кг маси тіла до 20 мг/кг маси тіла або від 5 мг/кг маси тіла до 20 мг/кг маси тіла пацієнта. Згідно з одним варіантом здійснення, дозування, яке вводять пацієнтові, становить від 6 мг/кг маси тіла до 18 мг/кг маси тіла. Згідно з іншим варіантом здійснення, дозування, яке вводять пацієнтові, становить 6 мг/кг маси тіла, 10 мг/кг маси тіла, 15 мг/кг маси тіла або 18 мг/кг маси тіла. Розраховану дозу будуть уводити, виходячи з маси тіла пацієнта на початковому рівні лікування. Значна (210 95) зміна маси тіла від вихідного рівня або маси у фазі сталого плато повинно призводити до перерахунку 60 дози.
В альтернативному варіанті, пацієнтові вводять фіксоване дозування таких молекул (або комбінації таких молекул) незалежно від маси тіла. У разі антитіл, до яких відноситься даний винахід, фіксоване дозування, яке вводять пацієнтові, зазвичай становить від 50 мг до 500 мг.
Переважно, фіксоване дозування, яке вводять пацієнтові, становить від 50 мг до 300 мг, від 100 мг до 300 мг або від 100 мг до 200 мг. Згідно з одним варіантом здійснення, фіксоване дозування, яке вводять пацієнтові, становить 200 мг.
У визначення дози зазвичай будуть вносити свій внесок такі емпіричні фактори, як період напівжиття. Для подовження періоду напівжиття антитіла й попередження атаки антитіла імунною системою хазяїна можна застосовувати антитіла, які сумісні з імунною системою людини, такі як гуманізувані антитіла або повністю людські антитіла. Частоту введення можна визначити й скоригувати під час курсу терапії, та в її основі лежить зменшення кількості клітин злоякісної пухлини, підтримання зменшення клітин злоякісної пухлини, зменшення проліферації клітин злоякісної пухлини або уповільнення розвитку метастаз. В альтернативному варіанті, можуть бути придатні склади з уповільненим безперервним вивільненням антитіл до НЕК2/пеи.
З рівня техніки відомі різні склади та пристрої для досягнення уповільненого вивільнення.
ХІІ. Комбіновані терапії
Даний винахід додатково відноситься до введення молекули, яка специфічно зв'язує
НЕВ2г/пеи, і молекули, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні (або його ліганд), який залучений у регуляцію імунної контрольної точки (наприклад, РО-1), у додатковій комбінації з іншими видами терапії, відомими фахівцями в даній галузі техніки, для лікування або попередження злоякісної пухлини, аутоїмунного захворювання, запалення або інфекційного захворювання, в тому числі без обмеження сучасними стандартними й експериментальними хіміотерапевтичними засобами, гормональними терапевтичними засобами, біологічними терапевтичними засобами, імунотерапевтичними засобами, засобами променевої терапії або хірургічним втручанням. Згідно з деякими варіантами здійснення, молекули за даним винаходом (наприклад, антитіла до НЕНг/пеи і антитіла до РО-1 згідно з даним винаходом) уводять у комбінації з терапевтично або профілактично ефективною кількістю одного або декількох терапевтичних засобів, відомих фахівцям у галузі лікування й/(або попередження розвитку злоякісної пухлини, зокрема, злоякісної пухлини, що експресує НЕНг/пеи.
Зо Застосовуваний у контексті даного документа термін "комбінація" позначає застосування більш ніж одного терапевтичного засобу. Застосування терміну "комбінація" як не обмежує порядок, в якому терапевтичні засоби вводять суб'єкту з порушенням, так і не означає, що ці засоби вводять точно в один і той самий час, а скоріше мається на увазі, що антитіло або поліпептид за даним винаходом та інший засіб уводять ссавцю в послідовності та в межах такого часового інтервалу, щоб антитіло або поліпептид за даним винаходом могли діяти разом з іншим засобом, забезпечуючи підвищений сприятливий ефект, ніж якби їх вводабо іншим чином. Наприклад, кожне терапевтичний засіб (наприклад, хіміотерапію, променеву терапію, гормональну терапію або біологічну терапію) можна вводити в один і той самий час або послідовно в будь-якому порядку в різні моменти часу; проте, якщо їх не вводити в один і той самий час, їх слід вводити досить близько за часом з тим, щоб отримати необхідний терапевтичний або профілактичний ефект. Кожний терапевтичний засіб можна вводити окремо, в будь-якій зручній формі та будь-яким відповідним шляхом, наприклад, один - пероральним шляхом, а інший - парентеральним.
Згідно з різними варіантами здійснення, перший терапевтичний засіб можна вводити до (наприклад, за 5 хвабон до, 15 хвабон до, 30 хвабон до, 45 хвабон до, 1 годину до, 2 години до, 4 години до, 6 годин до, 12 годин до, 24 години до, 48 годин до, 72 години до, 96 годин до, 1 тиждень до, 2 тижні до, З тижні до, 4 тижні до, 5 тижнів до, 6 тижнів до, 8 тижнів до або 12 тижнів до), одночасно з або після (наприклад, через 5 хвабон після, 15 хвабон після, 30 хвабон після, 45 хвабон після, 1 годину після, 2 години після, 4 години після, 6 годин після, 12 годин після, 24 години після, 48 годин після, 72 години після, 96 годин після, 1 тиждень після, 2 тижні після, З тижні після, 4 тижні після, 5 тижнів після, 6 тижнів після, 8 тижнів після або 12 тижнів після) введення другого (або наступного) терапевтичного засобу суб'єкту з порушенням. Згідно з переважними варіантами здійснення, два або більше засоби вводять за одне відвідування пацієнта або з інтервалом не більше 12 годин один від одного, не більше 24 годин один від одного або не більше 48 годин один від одного.
Незважаючи на те, що, як розглянуто вище, можна використовувати різні шляхи дозування та введення для доставки комбінації молекули, яка специфічно зв'язує НЕК2г/пеи, і молекули, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, суб'єктам-реципієнтам, які в них потребують, згідно з даним винаходом, деякі 60 комбінації, шляхи дозування та введення є особливо переважними для застосування під час такого лікування. Особливо переважним під час такого дозування та введення є застосування варіантного химерного антитіла 405 за даним винаходом (наприклад, маргетуксимабу) в комбінації з антитілом до РО-1 за даним винаходом (наприклад, пембролізумабом).
Комбінацію дози варіантного химерного антитіла 405 і дози антитіла до РО-1 можна вводити один або декілька разів (при цьому кожне введення в такому режимі комбінованого лікування в даному документі називають "циклом"), кожен з яких буде включати введення від 6 до 18 мг, переважно 6 мг, 10 мг, 15 мг або 18 мг варіантного химерного антитіла 405 на кг маси тіла пацієнта та від 1 до 10 мг, переважно 1 мг, 2 мг, З мг або 10 мг антитіла до РО-1 на кг маси тіла пацієнта або фіксованої дози 200 мг антитіла до РО-1. Найбільш переважно цикл будуть проводити раз на три тижні (4-3 дні), доки не спостерігатимуть ремісію захворювання або некеровану токсичність.
Згідно з особливо переважними варіантами здійснення, варіантне химерне антитіло 405 (наприклад, маргетуксимаб) і антитіло до РО-1 (наприклад, пембролізумаб) уводять суб'єкту шляхом ІМ інфузії раз на три тижні (5 З дні) протягом періоду щонайменше 1 місяць або більше, щонайменше 3 місяця або більше, або щонайменше 6 місяців або більше, або щонайменше 12 місяців або більше. Особливо переважною тривалістю лікування є щонайменше 6 місяців або більше, або протягом щонайменше 12 місяців або більше, або доки не спостерігатимуть ремісію захворювання або некеровану токсичність. При такому ІМ введенні варіантне химерне антитіло 405 і антитіло до РО-1 можна вводити сумісно або послідовно. Згідно з особливо переважними варіантами здійснення, варіантне химерне антитіло 405 і антитіло до РО-1 вводять суб'єкту послідовно шляхом ІМ інфузії з інтервалом не більше 24 годин. Під час такого послідовного введення варіантне химерне антитіло 405 можна вводити до або після введення антитіла до
РО-1.
Особливо переважно вводити суб'єкту декілька доз комбінації варіантного химерного антитіла 405 і антитіла до РО-1. Таким чином, режим лікування може передбачати 1 цикл, щонайменше 2 цикли або більше 2 циклів, щонайменше З цикли або більше 3 циклів, щонайменше 4 цикли або більше 4 циклів, щонайменше 5 циклів або більше 5 циклів або щонайменше 6 циклів або більше 6 циклів. Дозування кожного антитіла в кожному такому циклі може бути одним і тим самим або може відрізнятися від попереднього введеного дозування.
Зо Так, наприклад, терапія може передбачати введення "першої" (або "Ударної") дози варіантного химерного антитіла 405 з подальшою зниженою "другою" дозою варіантного химерного 405 антитіла.
Згідно з деякими варіантами здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять першою дозою приблизно 6, 10, 15 або 18 мг/кг з подальшим введенням другої меншої дози, причому другу дозу вводять приблизно за три тижні (-3 дні) після введення першої дози. Наприклад, якщо перша доза варіантного химерного антитіла 405 становить приблизно 18 мг/кг маси тіла, друга доза буде менше 18 мг/кг маси тіла (наприклад, приблизно З мг/кг маси тіла, приблизно 6 мг/кг маси тіла, приблизно 8 мг/кг маси тіла, приблизно 10 мг/кг маси тіла або приблизно 15 мг/кг маси тіла). Згідно з деякими варіантами здійснення, вводять додаткові наступні дози варіантного химерного антитіла 405, причому наступні дози вводять за три тижні (53 дні) після введення другої дози або дози, яка передує наступній. Згідно з деякими варіантами здійснення, наступні дози вводять в тій самій концентрації що й для другої нижчої дози. Згідно з переважними варіантами здійснення, протягом усього курсу лікування вводять однакову дозу варіантного химерного антитіла 405.
Переважно, щоб антитіла не вводабо як ІМ струменеву або болюсну ін'єкцію, а замість цього щоб таке введення здійснювали шляхом ІМ інфузії. Отже, переважно антитіла розводять в інфузійному мішку, що містить відповідний розчинник, наприклад, 0,9 95 хлорид натрію. Оскільки можливі інфузійні або алергічні реакції, рекомендують премедикацію для попередження таких інфузійних реакцій, і при введенні антитіл слід дотримуватися обережності щодо анафілактичної реакції. Особливо переважно, щоб ІМ інфузію вводабо суб'єкту протягом періоду від 30 хвабон до 24 годин. Згідно з конкретними варіантами здійснення, ІМ інфузію переважно вводять протягом періоду 30-180 хвабон, або 30-120 хвабон, або 30-90 хвабон, або протягом періоду 60 хвабон або протягом меншого періоду, якщо у суб'єкта не спостерігають ознаки або симптоми побічної інфузійної реакції.
Відповідно, даний винахід відноситься до переважного способу лікування злоякісної пухлини, при цьому спосіб передбачає введення суб'єкту, який цього потребує, варіантного химерного антитіла 405 в дозуванні приблизно 6-18 мг/кг маси тіла й антитіла до РО-1 у фіксованому дозуванні приблизно 200 мг, причому кожне з антитіл вводять кожні три тижні (ж3 дні). Згідно з одним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні 60 приблизно 6, 10, 15 або 18 мг/кг маси тіла. Згідно з наступним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні приблизно б мг/кг маси тіла, а антитіло до РО-1 вводять у фіксованому дозуванні 200 мг. Згідно з наступним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні приблизно 10 мг/кг маси тіла, а антитіло до РО-1 вводять у фіксованому дозуванні приблизно 200 мг. Згідно з наступним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні приблизно 15 мг/кг маси тіла, а антитіло до
РО-1 вводять у фіксованому дозуванні приблизно 200 мг. Згідно з наступним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні приблизно 18 мг/кг маси тіла, а антитіло до РО-1 вводять у фіксованому дозуванні приблизно 200 мг. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 і антитіло до РО-1 вводять за допомогою ІМ інфузії в межах 24-годинного періоду. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, злоякісна пухлина являє собою злоякісну пухлину, яка експресує
НЕН2/пеи. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою пембролізумаб.
Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою ніволумаб. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою підилізумаб. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою ЕНІ1І2.2Н7. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою ПРО-1 тАБ 2. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою ПРО-1 тАБ 7. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою ПРО-1 тАБбБ 9. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою пПРО-1 тАБ 15. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 вибрано з антитіл, наведених у таблиці 1.
Даний винахід відноситься до іншого переважного способу лікування злоякісної пухлини,
Зо при цьому спосіб передбачає введення суб'єкту, який цього потребує, варіантного химерного антитіла 405 у дозуванні приблизно 6-18 мг/кг маси тіла й антитіла до РО-1 у дозуванні приблизно 1-10 мг, причому кожне з антитіл вводять кожні три тижні (ж3 дні). Згідно 3 одним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні приблизно 6, 10, 15 або 18 мг/кг маси тіла. Згідно з наступним варіантом здійснення, антитіло до РО-1 вводять у дозуванні приблизно 1, 2, З або 10 мг/кг маси тіла. Згідно з наступним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні приблизно 6 мг/кг маси тіла, а антитіло до
РО-1 вводять у дозуванні приблизно 1 мг/кг маси тіла. Згідно з наступним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні приблизно 6 мг/кг маси тіла, а антитіло до
РО-1 вводять у дозуванні приблизно 2 мг/кг маси тіла. Згідно з наступним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні приблизно 6 мг/кг маси тіла, а антитіло до
РО-1 вводять у дозуванні приблизно 10 мг/кг маси тіла. Згідно з наступним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні приблизно 10 мг/кг маси тіла, а антитіло до РО-1 вводять у дозуванні приблизно 1 мг/кг маси тіла. Згідно з наступним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні приблизно 10 мг/кг маси тіла, а антитіло до РО-1 вводять у дозуванні приблизно 2 мг/кг маси тіла. Згідно з наступним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні приблизно 10 мг/кг маси тіла, а антитіло до РО-1 вводять у дозуванні приблизно 10 мг/кг маси тіла. Згідно з наступним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні приблизно 15 мг/кг маси тіла, а антитіло до РО-1 вводять у дозуванні приблизно 1 мг/кг маси тіла. Згідно з наступним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні приблизно 16 мг/кг маси тіла, а антитіло до РО-1 вводять у дозуванні приблизно 2 мг/кг маси тіла. Згідно з наступним варіантом здійснення, варіантне химерне антитіло 405 вводять у дозуванні приблизно 15 мг/кг маси тіла, а антитіло до РО-1 вводять у дозуванні приблизно 10 мг/кг маси тіла. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 і антитіло до РО-1 вводять шляхом ІМ інфузії в межах 24-годинного періоду. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, злоякісна пухлина являє собою злоякісну пухлину, яка експресує НЕК2/пеи. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою пембролізумаб. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне 60 антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою ніволумаб. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою підилізумаб. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою ЕНІ12.2Н7. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою ПРО-1 тАБ 2. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою ПРО-1 тАБ 7. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою ПРО-1 тАБбБ 9. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 являє собою пПРО-1 тАБ 15. Згідно з будь-яким з наведених вище варіантів здійснення, варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб, а антитіло до РО-1 вибрано з антитіл, наведених у таблиці 1.
Згідно з конкретними варіантами здійснення, терапевтичні засоби вводять суб'єкту циклічно.
Така циклічна терапія передбачає введення першого засобу протягом певного періоду часу з подальшим введенням другого засобу й/або третього засобу протягом певного періоду часу та повторення цього послідовного введення. Циклічна терапія може зменшити розвиток резистентності до одного або декількох видів терапії, дозволити уникнути побічних ефектів або зменшити їх кількість і/або підвищити ефективність лікування. Типові цикли проводять з частотою приблизно раз на тиждень, приблизно раз на 10 днів, приблизно раз на два тижні та приблизно раз на три тижні. Кожен цикл може передбачати щонайменше 1 тиждень спокою, щонайменше 2 тижні спокою, щонайменше З тижні спокою. Кількість проведених циклів становить від приблизно 1 до приблизно 12 циклів, частіше від приблизно 2 до приблизно 10 циклів і частіше від приблизно 2 до приблизно 8 циклів.
Згідно з одним варіантом здійснення для лікування порушення, пов'язаного з проліферацією клітин, молекулу за даним винаходом (наприклад, антитіло до НЕК2/пеи, антитіло до РО-1) кон'югують з або вводять в додатковій комбінації з іншим терапевтичним засобом, таким як без обмеження алкілуючий засіб (наприклад, мехлоретамін або цисплатин), інгібітор ангіогенезу, антрациклін (наприклад, даунорубіцин/дауноміцин або доксорубіцин), антибіотик (наприклад, дактиноміцін, блеоміцин або антраміцин), антитіло (наприклад, антитіло до МЕСЕ, таке як бевацизумаб (продається під назвою АМАБЗТІМФ від компанії Сепепіесі, Іпс.), антитіло до
ЕСЕР, таке як панітумумаб (продається під назвою МЕСТІВІХ"М від компанії Атодеп, Іпс.), або антитіло до інтегринів, таке як наталізумаб (продається під назвою ТУЗАВНКІ від компаній
Віодеп Ідес і ЕІап РІагтасеціісаіє, Іпс.)), антиметаболіт (наприклад, метотрексат або 5- фторурацил), антимітотичний засіб (наприклад, вінкристин або паклітаксел), цитоксин (наприклад, цитостатичний або цитопатичний засіб), засіб гормональної терапії (наприклад, селективний модулятор рецепторів естрогену (наприклад, тамоксифен або ралоксифен), інгібітор ароматаз, аналог рилізинг-фактора лютеїнізуючого гормону, прогестаген, адренокортикостероїд, естроген, андроген, протиестрогеновий засіб, засіб, що блокує андрогенові рецептор, інгібітор 5-альфа-редуктази, інгібітор продукування продуктів наднирників і т. д.), інгібітор матриксної металопротеїнази, радіоактивний елемент (наприклад, джерела альфа-випромінювання, джерела гамма-випромінювання й т. д.) або будь-який іншій хіміотерапевтичний засіб.
До необмежуючих прикладів відповідних інгібіторів ангіогенезу належать АВТ-627; ангіостатин (фрагмент плазміногену); ангіозим; антиангіогенний антитромбін І; Вау 12-9566; бенефін; бевацизумаб; ВМ5-275291; бісфосфонати; хрящовий інгібітор (СО); САЇ; фрагмент комплементу СО59; СЕР-7055; Со!Ї 3; комбретастатин А-4; ендостатин (фрагмент колагену
ХМІ); інгібітори фарнезилтрансферази (ЕТІ); фрагменти фібронектину; аго-реїа; галофугінон; гепаринази; фрагмент гепаринового гексасахариду; НММ833; людський хоріонічний гонадотропний гормон (пс); ІМ-862; інтерферон альфа/бета/гама; інтерферон-індукований білок (ІР-10); інтерлейкін-12; крингл 5 (фрагмент плазміногену); маримастат; інгібітори металопротеїнази (ТІМР); 2-метоксіестрадіол; ММІ 270 (Со5 27023А); МоАБ ІМСОС-1С11; неовастат; ММ-3; панзем; Рі-88; плацентарний інгібітор рибонуклеаз; інгібітор активатора плазміногену; тромбоцитарний фактор-4 (РЕ4); приномастат; 16 кДа фрагмент пролактину; проліферин-споріднений білок (РКР); РТК 787/2К 222594; ретиноїди; солімастат; скваламін; 55 3304; 5 5416; 506668; 5111248; тетрагідрокортизол-5; тетратіомолібдат; талідомід; тромбоспондин-ї (Т5Р-1); ТМР-470; трансформуючий фактор росту-бета (ТОБЕ-Б); васкулостатин; вазостатин (фрагмент кальретикуліну); 206126 і 20 6474.
До необмежуючих прикладів додаткових антитіл для лікування порушення, пов'язаного з бо проліферацією клітин, відносяться антитіла до 17-1А, самрз, АЕР, СОЗ, СО18, С0О20, С022, СО33,
Сра44, С052, СЕА, СТІ А-4, ДНК-асоційовані білки, рецептор ЕСЕ, Ер-САМ, гангліозид 502, др
ІШЬ/Па, ар72, НГА-ОВ 10-бета, антиген НІ А-ОК, ІЗЕ, гангліозид 503, МОС-1, пиС242, антиген
РЕМ, антиген 5К-1, пухлинний антиген СА125, пухлинний антиген МОС1І, МЕСЕ і МЕСБЕ- рецептор.
ХІП.Приклади
Тепер, після загального опису даного винаходу, те ж саме буде більш зрозумілим при зверненні до наведених далі прикладів, які представлені як ілюстрації та не призначені для обмеження даного винаходу, якщо не зазначено інше.
ПРИКЛАД 1
Визначення афінності за допомогою ВІАСоге
Кінетичні параметри зв'язування елюйованих і очищених антитіл аналізували за допомогою аналізу ВІАсоге (пристрою ВІАсогефФ 1000, ВіАсоге Іпс., Піскатауей, Нью-Джерсі) і асоційованого з ним програмного забезпечення. НЕК-2 імобілізували на одній з чотирьох проточних комірок (проточній комірці 2) поверхні сенсорного чипа за допомогою хімії зв'язування аміногруп (шляхом модифікації карбоксиметильних груп сумішшю МНЗ/ЕЮС), так щоб на поверхні імобілізувалися приблизно 1000 одиниць відповіді (КО) рецептора. Після цього активні естерні групи, які не прореагували, "Слокували" ін'єкцією 1 М ЕМН2. Після отримання відповідної поверхні сп405-ЕСУМТ (с дикого типу), сп405 і трастузумаб (контроль) вводабо ін'єкцією в концентрації 6,25-200 нМ на поверхню зі швидкістю потоку 70 мл/хв. протягом 180 секунд.
Після збору всього набору даних отримані в результаті криві зв'язування глобально апроксимували й розраховували константи швидкості реакції та уявну рівноважну константу зв'язування з використанням комп'ютерних алгоритмів, які постачаються виробником і описані в
ВІАємаїнайноп Зоймаге НапароокК, доступній від ВіАсоге, Іпс. На фіг. З наведені в графічному вигляді результати аналізу ЗРК, а в таблиці 4 наведені розраховані константи.
Таблиця 4
Константи швидкості реакції та рівноважні константи, розраховані за даними ВіАсоге ен ол | шу 1-00 1,7 х 105 (розрах.) 20222334 ре 1 ке 10 1,1 х 105 розрах. трастууумаб.їд/////////7777777/ | 16х105 | 13хлої |1777777108
ПРИКЛАД 2
Апоптоз
Різні лінії клітин інкубували протягом ночі з сп405 і сп405-ЕСМТ1. Апоптоз аналізували за
Зо допомогою аналізу ЕАС5, а результати наведені в таблиці 5.
Таблиця 5 11111007 Експериментїїд///// | //////// Експеримент2///:УГГИ вт474 | 701 ...777.0 ЮДщ|Ї 0 1 5 ющ хо мс ЇЇ 7777170 1 юЮюЮ0 1 0 1 ю 0 г "
ОМоАМВазь | 00І1000001000001000000
ОМоАМВ23і | 0 ЇЇ щБх 0. Її. ..70 1 5 юж 0 г гФ вт Ї77111710117111110 1 0 1 ю щ0 г Ф
АБУ | 7071 777171710 1. ЮюЮюД0 1 юж 0 г о5КОУЗ3 7 ЇЇ 7701 .ЮюЮюЮЙД0 1 0 1 ж 0 "
Продовження таблиці 5 онтге 0000 100000010СС00 10000
ООУСАВНЯ СІ000С10000010000100000
ПРИКЛАД З
Проліферація
Включення ("НІтимідину (НІТак) у ДНК використовували як біохімічний показник проліферації клітин 5КВКЗ для порівняння впливів різних химерних антитіл 405 за даним винаходом. Вивчали ефекти сп405-Ад, сп405 і СпПЯ40-ЕСМТ1 на клітини СО16-158Е-- і СО16- 158Мч-.- і порівнювали їх з контролями. Результати зображені на фіг. 4.
ПРИКЛАД 4
Протипухлинна активність у мишей (модель злоякісної пухлини молочної залози)
Протипухлинну активність різних антитіл вивчали на моделі злоякісної пухлини молочної залози із застосуванням нетрансгенних і трансгенних (ПСО16А) мишей. П'ятдесяти ВаЇІр/с КАС2- /- нетрансгенним мишам вводабо ін'єкцією підшкірно (5с) на 0-й день клітини злоякісної пухлини молочної залози УМТ-1. Мишей розділяли на п'ять груп по 10 мишей в кожній і кожного тижня протягом 8 тижнів внутрішньочеревно (ІР) обробляли за допомогою сп405 М2970, сп405-Ес дикого типу, сп405-ЕСМТ1, сп405-ЕСМТ2 або РВ5 (негативного контролю). Розвиток пухлини відстежували два рази на тиждень за допомогою штангенциркуля, а масу пухлини оцінювали за наступною формулою: маса пухлини - (довжина х ширинаг)/2. Результати показані на фіг. 5.
Двадцяти трьом ВаЇБ/с КАС2-/- тоО16-/- НСр16Ах трансгенним мишам вводабо ін'єкцією 5с на 0-й день клітини злоякісної пухлини молочної залози ДУІМТ-1. Мишей розділяли на три групи й кожного тижня протягом 8 тижнів внутрішньочеревно (ІР) обробляли за допомогою сп405-Ес дикого типу (п-8), сСп405-ЕСМТ1 (п-8) або РВ5 (негативного контролю; п--7). Розвиток пухлини відстежували два рази на тиждень за допомогою штангенциркуля, а масу пухлини оцінювали за наступною формулою: маса пухлини - (довжина х ширинаг)/2. Результати показані на фіг. 6.
ПРИКЛАД 5
Протипухлинна активність у мишей (модель злоякісної пухлини яєчника)
Протипухлинну активність різних антитіл вивчали на моделі злоякісної пухлини яєчника із застосуванням нетрансгенних і трансгенних (ПСО1Тб6А) мишей. 22 К3-/- М/М нетрансгенним мишам з відтворювального резервату МасгосСепісх вводабо ін'єкцією 5с на 0-й день клітини
Зо злоякісної пухлини яєчника 5КОМ-3. Мишей розділяли на чотири групи й кожного тижня протягом 8 тижнів внутрішньочеревно (ІР) обробляли за допомогою сп405 М2970О (п-5), сп405-
Ес дикого типу (п-б), сп405-РСМТ1 (п-б6) або РВ5 (негативного контролю; п-5). Розвиток пухлини відстежували два рази на тиждень за допомогою штангенциркуля, а масу пухлини оцінювали за наступною формулою: маса пухлини - (довжина х ширина-)/2. Ефект такого лікування на виживання показаний на фіг. 7, секції А. 32 К3-/- М/М пСО16Ах трансгенним мишам з відтворювального резервату Масгосепіс5 вводабо 5с на 0-й день клітини злоякісної пухлини яєчника 5КОМ-3. Мишей розділяли на чотири групи й кожного тижня протягом 8 тижнів внутрішньочеревно (ІР) обробляли за допомогою сп405 М2970О (п-8), сп405-Ес дикого типу (п-8), сп405-ЕСМТ (п-8) або РВ5 (негативного контролю; п-8). Розвиток пухлини відстежували два рази на тиждень за допомогою штангенциркуля, а масу пухлини оцінювали за наступною формулою: маса пухлини - (довжина х ширина?)/2. Ефект такого лікування на виживання показаний на фіг. 7, секції В. 96 тСО16-/- пиСОр1бА ЕРохМ1-/- (пи/пи) трансгенним мишам з відтворювального резервату МасгосСепісх вводабо 5с на 0-й день клітини злоякісної пухлини яєчника БКОМУ-3. Мишей розділяли на шість груп по 16 мишей в кожній і кожного тижня протягом 8 тижнів внутрішньочеревно (ІР) обробляли за допомогою сп405-ЕСМТ3, сп405-ЕСМТ1, сн405-
ЕсмМт4, спа405, сп405Ад або РВЗ (негативного контролю). Розвиток пухлини відстежували два рази на тиждень за допомогою штангенциркуля, а масу пухлини оцінювали за наступною формулою: маса пухлини - (довжина х ширинаг2)/2. Ефект такої обробки на виживаність показаний на фіг. 8.
ПРИКЛАД 6
Аналізи АОСС на різних лініях клітин злоякісної пухлини
На фіг. 9 проілюстровано репрезентативне імуногістохімічне фарбування різних ліній клітин злоякісних пухлин за НЕК2/пеи. Лінії клітин ранжували за їх інтенсивністю забарвлення щодо
НЕК2/пеи, як зазначено в наборі для проведення тесту щодо НЕКг/пеи, який продається під назвою САКО НегсеріТезі М (бакоСуютаїйіоп, Глоструп, Данія): відсутність забарвлення щодо
НЕК2/пеи (оцінка ОАКО-0); слабке забарвлення щодо НЕК2г/пеи (оцінка ОАКО-1-); помірне забарвлення щодо НЕК2г/пеи (оцінка ОАКО-2); і сильне забарвлення щодо НЕКг/пеи (оцінка рАКО-3--). На секціях А-М представлені різні лінії клітин, які наведені в таблиці 6.
Таблиця 6 рАКО-фарбування різних ліній клітин злоякісної пухлини на фіг. 9
А | МОА-МВ-435 | Карциномамолочнотзалози.ї | 4,7х103 | 0
АЛ Підініс і Б інінно НН НОЙ інн НО залози 0 | ОМСАВ-8 | Карциномаяєчника.ї7//-// | 44хл0ї | кю залози кишки/колоректальна злоякісна пухлина 1711 мМт-ї 0001 | Карциномамолочнотзалозиїд// | 20х105 | кю
Було протестовано декілька антитіл сп405, включаючи антитіла сп405 з Ес-варіантними доменами, щодо їх здатності опосередковувати АЮОСС на лініях клітин злоякісної пухлини, в тому числі сп405-ЕСМТ1, сп405-ЕсМтТ2, сп405-РсМТЗ3, сп405-ЕСУМТ (Бс дикого типу), сп405
М2979 і трастузумаб (як контроль). Дані дійсних аналізів (ЗК х 2095 МА, АІСС х 50 95 МВ) викладені в таблиці 7, де оціночні показники ЄСзо вважали дійсними лише в тому випадку, якщо модель відповідала максимальному лізису »20 95. Порівняння параметрів ЕСбхо і максимального лізису проводабо шляхом постановки питання, чи були найкращі підібрані значення, отримані для Ес-оптимізованих антитіл, статистично відмінними від тих, які були отримані для антитіла сп405 з Ес дикого типу за допомогою Е-критерію для суми квадратів. Дані також узгоджувалися з сигмоїдальними моделями доза-відповідь, як показано на фіг. 10-13.
Таблиця 7
Аналізи АОСС на різних лініях клітин
Бас НБН РИН с НИВИ Й (нг/мл) лізис (90) (секція)
МОА-МВ- 3 спаро-геМТі МОЇ - | 5 (| М5 | ос) 435 оспаро-емТта | МО | - | їз | м5 / оспаро-гемтЗ | МО | - | 7 | м5 оспар5-гсмуТ | мо | - ЇЇ 7 | - о трастзумабї | МО | - | 7 | м
МОА-МВ- 10 (В) 231 оспар5-гсМуТ | 9 | - | 27 | - дБІЯ оспаро-гсМТІ | 714 | - | 34 | «001 | (А) оспаро-сМТта | 21 | - | 24 | «001 оспаро-геМмТУ | 5100 | - | 23 | «001
І спар5-гсмут | мо | - ЇЇ 6 | -
Таблиця 7
Аналізи АОСС на різних лініях клітин
Бі Піо НП ННЯ ПИЛИ ПИ (нг/мл) лізис (90) (секція) 111 | трастуумаб.// | МО | - | 5 | Мм5/
ОУСАВ-8 11 (В) оспар5-ЕсЄМуТ | 57 | - | 16 | -
МСЕ-7 11 (С) оспаро-еМмТта | 9 | Мм5 | 51 | «001 о спаро-гемТтЗ | 8 | Мм5 | 48 | «001 оспар5-ЕСМУТ | 23 | Мм5 | 32 | - о трастзумаб.ї/ | 9 | - | 21 | мМ вт-2о о спар5-гсМТ! | 42 | «001 | 66 7 щ | «001 | 11(0) оспар5-ЕСМУТ | 00 | - | з | - нт-29 оспаро-гсМТТ | 04 | - | 43 | «001 1 1) оспаро-еМмТта | 05 | - | 44 | «001 о спаро-емМТУ | 1 | - | з8 | «001 о спаро-гсМуТ | мо | - | 13 | - 28751 12 (А) оспар5-гсМуТ | 38 | - | 938 | - о трастзумаб.ї | МО | - | 23 | «001
УМ оспаро-сМТТ | 8 | Мм5 | 73 | «001 | 12(В) оспар5-ЕСМУТ | 22 | - | 4 | -
МОА-МВ- 13 (А) 453 о спаро-гемтЗ | 6 | Мм5 | 57 щ | «001 оспарб-гсМуТ | і ЇЇ 7-1 45 | - вт-474 13 (В) оспарб-гсМуТ | і Її 7-16 | - о трастзумаб.ї/ | 7 | М5 | 60 | м5 /
ЗКВА-З 13 (С) о спаро-гемтЗ | 08 | «001 | 61 | м5 / о спаро-гсМуТ | 6 | - | 62 | - тЗКОУ-З 13 (0) о спаро-гемтЗ | 09 | «005 | 56 | мМ5 /
І спар5-гсмуТ | з | - | 58 | -
ПРИКЛАД 7
Активність моноклональних антитіл до костимулюючих мішеней або мішеней, які є контрольними точками, на проліферацію Т-клітин
У контексті ало-МіІ А-аналізу у Т-клітин індукували проліферацію у відповідь на невідповідність за НГ А (І аїсптап, У.Е. єї аї. (2004) "РО-І1-Оеєїїйсіепі Місе пом Тнаї РО-І1 Оп Т-
СеїІв, Апіїдеп-Ргезепіїпу СеїЇ5, Апа Нові Тіззцев Медаїїмеіу Ведшіагез Т-СеїІв." Ргос. Маї!. Асад. зЗсі. (0.5.А.) 101(29):10691-10696; Ууапод, МУ. єї аї. (2008) "РО-І1/РО-1 5ідпа! Оеєїїсіепсу Рготоїев5
АйПодепвеїс Іттипе Незропзез Апа Ассеїегаїез Неаїї АїПІПодгаїї Не|есіоп," Тгап5ріапіайноп 86(6):836- 44) або у відповідь на мітогенну/фармакологічну стимуляцію. Відомо, що агоністичні антитіла, які націлені на костимулюючі молекули, індукують проліферативні відповіді шляхом повторного посилення передачі Т-клітинних сигналів і стабілізації факторів транскрипції, які сприяють ефекторній функції у Т-клітин або керують нею (Меїего, І. еї а. (2013) "Адопівї Апііїродієв їо
ТМЕВ Моїієсшев ТНаї Созійтшагє Тї апа МК Сеїв," СіІй. Сапсег Вев5. 19(5):1044-1053).
Аналогічним чином, антагоністичні антитіла, які націлені на ключові молекули контрольних точок, які здійснюють негативну регуляцію Т-клітинних відповідей (інгібітори контрольних точок), можуть індукувати проліферативні відповіді шляхом підтримки функції передачі сигналів і ефекторної функції у Т-клітин і тим самим підвищення протипухлинного імунітету (Саресе, 0. єї а!. (2012) "Тагодеїйпуд Совійтшціагу Моїесшіев о Ітргоме Апійитог Іттипйу," У. Віотеа. Віоїесни. 2012:926321). Ефект моноклональних антитіл до костимулюючих мішеней або мішеней, які є контрольними точками, на проліферацію у відповідь на алоантиген можна легко виміряти в короткострокових реакціях змішаних культур лімфоцитів (ало-МІ А) шляхом відстеження включення ЗН-тимідину. Для виявлення здатності антитіл до інгібіторів контрольних точок посилювати проліферацію одержували тАБб до РО-1 або тАБ до І АС-3, очищали їх і екзогенно додавали на початку ало-МІ В-аналізу в кількості 20, 10, 5, 2,5 і 1,25 мкг/мл (фіг. 14). Наприкінці 5-6 днів 96-лунковий планшет імпульсно обробляли "Н-тимідином і культивували протягом 18 годин для вимірювання проліферації. Кілька контрольних антитіл до РО-1, ГАС-3 і СТІ А-4 людини оцінювали за їх здатністю підвищувати проліферацію Т-клітин у відповідь на стимуляцію ало-антигеном. Як показано на фіг. 15, додавання РО-1 тАб 1 (504 (ВМ5-936558)),
РО-1 тАБ 2 (МК-3475; МегсК, ламбролізумабу) або РО-1 тАБ З (ЕНІТ2.2Н7; Сапа Рагбег) на початку ало-МІ В-аналізу індукувало сильну проліферацію Т-клітин в порівнянні з ізотипічним контрольним антитілом Ідс1 або контрольними лунками, що містабо клітини-респондери та стимулятори. У лунках, які містабо лише опромінені клітини-стимулятори, не спостерігали проліферації. Незважаючи на те, що спостерігали дозозалежну проліферативну відповідь, у разі
Зо РО-1 тА 4 (СТ-011; СитеТесі, ВАТ-1) спостерігали мінімальну проліферацію в порівнянні з РО- 1 тАБ 1 (504 (ВМ5-936558)), РО-1 тАбБ 2 (МК-3475; МегсК, ламбролізумабом) або РО-1 тАбБ З (ЕНІ12.2Н?7; бапа Рагрег). Невелику дозозалежну проліферативну відповідь спостерігали також у випадку з ГАС-3 тАБб 1 (257, ВМ5-986016, Медагех/ВМ5), яке аналогічно порівнювали з іпілімумабом УегмоуФ, тАб до СТІ А-4 (ВгівіоІ-Муегв Замір).
ПРИКЛАД 8
Дослідження з підвищенням дози маргетуксимабу і пембролізумабу
Дослідження з підвищенням дози проводабо для визначення максимальної переносимої дози (МТО) або максимальної дози, яку можна вводити (МАЮ) (якщо МТО не визначена) з доз маргетуксимабу, які підвищували та вводабо в комбінації з фіксованою дозою, що дорівнювала приблизно 200 мг, пембролізумабу. За цим могла йти фаза розширення когорти для додаткового визначення безпеки й початкової ефективності комбінації з дозою маргетуксимабу, встановленою в дослідженні з підвищенням дози. Як маргетуксимаб, так і пембролізумаб уводабо раз на З тижні. Обидва засоби вводабо в один і той самий день, причому спочатку вводабо пембролізумаб, а потім маргетуксимаб. Кожен цикл терапії визначали як З тижні, в яких маргетуксимаб і пембролізумаб давали на 1-й день. Оцінки пухлин можна проводити під час дослідження, переважно в кінці кожних двох циклів обробки (тобто кожні 6 тижнів (кінець 2-го, 4- го, 6-го і т. д. циклів|).
Маргетуксимаб можна оцінити за дві послідовні дози з підвищенням, які становабо приблизно 10 мг/кг маси тіла та приблизно 15 мг/кг маси тіла, в комбінації з 200 мг пембролізумабу у пацієнтів когорти. Якщо було визначено, що МТО була перевищена в когорті першої дози, може бути використана когорта зі зменшенням дози для оцінки меншої дози маргетуксимабу (б мг/кг) в комбінації з 200 мг пембролізумабу. У ході частини дослідження, пов'язаної з підвищенням дози, може бути досліджена більш висока доза маргетуксимабу (наприклад, 18 мг/кг).
У ході фази розширення когорти залучали додаткових пацієнтів і давали їм маргетуксимаб в
МТО (або МАбБ), встановленій на фазі дослідження, пов'язаній з підвищенням дози, в комбінації з 200 мг пембролізумабу.
Усі згадані в даному описі публікації та патенти включені в даний документ за допомогою посилання в тій самій мірі, якщо б кожна окрема публікація або патентна заявка була конкретно 60 й окремо вказана як включена за допомогою посилання в повному її обсязі. Незважаючи на те, бо що даний винахід був описаний у зв'язку з конкретними варіантами його здійснення, буде зрозуміло, що його можна піддати додатковим модифікаціям, і мається на увазі, що дана заявка охоплює будь-які варіанти, застосування або адаптації даного винаходу, згідно, в цілому, З ідеями даного винаходу, та включає такі відхилення від даного розкриття, які входять в загальновідому або загальноприйняту практику в галузі техніки, до якої відноситься даний винахід, і які можуть бути застосовні до основних ознак, викладених вище в даному документі.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«110» Масгодепісв, Іпс.
Міддіпюоп, доп Магс
Рапауа, Маїітівп ВНагаї
Ї еспівіїдег, Вобей дозері
Коепід, 5сой
Вопміпі, Еліо «120» Комбінована терапія для лікування злоякісної пухлини -1305 1301.0120РСТ -1505 5 62/175,039 -1515 2015-06-12 -1505 5 62/211,109 -1515 2015-08-28 «160» 87 «170» РаїепіНп мегвіоп 3.5
Зо «2105» 1 «211» 645 «2125 ОМА -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Полінуклеотид, що кодує легкий ланцюг переважних варіантних химерних антитіл 405 «400» 1 дасаїсдюда Юдасссадіс ссасааднс аїдіссассі стддосда іадддісадс (610)
аїсассідса аддссадсса ддадююдааї асюдсдіад ссіддіаїса дсадааасса 120 ддасайсіс ссааасідсі дашасісс дсаїсснсс даїасасідд адісссідаї 180 сдснсасід дсадсадаїс дддасадаї Ннсасшса ссаїсадсадідідсадасі 240 даадассщ9 садшаца сідісадсаа санаїасіа сассісссас спсддадод 300 ддіассаадд юддадаїсаа асдіасоддід дсідсассаї сідіснсаї сіисссдсса 360
Іїстдаюдадс аднодаааїс їддаасідсс ісіднаїді дссідсідааїааснстаї /-420 сссадададд ссааадіаса чіддааддід даїаасодссс іссааіс9до їаасісссад 480 дададідіса сададсадда садсааддас адсассіаса дссісадсад сасссідасу 540 сідадсааад садасіасда дааасасааа дісіасдссі дсдаадісас ссаїсададс 600 сюадсісдс ссдісасааа дадснсаас аддддададі днад 645 -2105 2 «2115 214 «2125» РАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» легкий ланцюг переважних варіантних химерних антитіл 405
Зо «4005 2
Азр Іе Маї Меї Тнг Сіп Зег Ні Гуз Рне Меї Зег Тнг Зег Ма! СПУ 1 5 10 15
Ар Аго Маї 5ег Пе Тнг Суз ГІ уз Аа 5ег Сіп Авзр Маї Азп ТНг Аа 20 25 зо маї Аа Тгтр Туг Сп Сіп Гуз Рго Су Нів бег Рго Гуз І ей Ї ей Пе в2
35 40 45
Туг Зег Аа Зег РНе Агу Туг Тиг Сіпу Маї Рго Авр Агу РНе Тниг Спу 50 55 60 зЗег Агу бег СПУ ТНг Азр Рпе Тнг Рне Тнпг Пе 5ег 5ег Ма! Сіп Аа 65 70 75 80
Сім Авр І єи Аїа Маї Туг Туг Су Сп Сип Ні Туг Тик Тнг Рго Рго 85 90 95
Тиг Рпе Сіу Спу Спіу ТАг Гуз Маї Спи Пе Гуз Агу Тнг Маї Аа Аа 100 105 110
Рго бег Ма! РНе Іе РНе Рго Рго 5ег Азр Сім Сп І єи Гуз Зег Спу 115 120 125
Тиг Айва 5ег Маї Маї Суз І ви І еи Авп Авп РнНе Туг Рго Агу Сім Аа 130 135 140
І уз Маї Сп Тр Гуз Маї Азр Авп Аа І єи СіІп бег Сіу Авп 5ег Сп 145 150 155 160
Зо
Сіи Зег Ма! Тиг Спи Стпп Авр Зег Гуз Авр Зег ТНиг Туг Зег І еи Зег 165 170 175
З5 зЗег ТигІ єи ТигГеи Зег Гуз Аіа Авр Туг Си Гуз Нів Гуз Маї Туг 180 185 190
Аа Сув Спи Маї Тниг Ні Сіп Сіу Г еи 5ег Зег Рго Ма! ТНг Гуз Зег
195 200 205
Ре Азп Аг9 Сіу Сіи Суз 210 «2105» З «2115 107 «212» РАТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «2215 МІЗБС ГЕАТОВЕ «реа» (1).4107) «223» Варіабельний домен легкого ланцюга мишачого антитіла 405 «4005 З
Азр Іе Маї Меї Тнг Сіп Зег Ні Гуз Рне Меї Зег Тнг Зег Ма! СПУ 1 5 10 15 Авр Ага Маї бег Пе ТАиг Суз Гуз Аа 5ег Сп Авр Маї Авп Тнг Аа 20 25 0) маї Ага Тгр Туг Сп СІп Гув Рго Су Ні 5ег Рго Гуз І ви І єи Пе
Туг Зег Аа Зег РНе Агу Туг Тиг Сіпу Маї Рго Авр Агу РНе Тниг Спу 60
З5
Авзп Агу 5ег Спу ТНг Ав5р Ре ТНиг Рпе Тпг Пе 5Зег Зег Ма! Сіп Аа 65 70 75 80 40
Сім Авр І єи Аїа Маї Туг Туг Су Сп Сип Ні Туг Тик Тнг Рго Рго 85 90 95
ТАгРНе Стпу Спу Спу Тиг Гуз Геи Сім Пе Гув 100 105 «-210» 4 «2115 107 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Ділянка МІ химерного 405 «400» 4
Азр Іе Маї Меї Тнг Сіп 5ег Ні Гуз Рне Меї Зег Тнг Зег Ма! СПУ 201 5 10 15
Ар Аго Маї 5ег Пе Тнг Суз ГІ уз Аа 5ег Сіп Авзр Маї Азп ТНг Аа 0) 25 маї Ага Тгр Туг Сп СІп Гув Рго Су Ні 5ег Рго Гуз І ви І єи Пе
Зо
Туг Зег Аа Зег РНе Агу Туг Тиг Сіпу Маї Рго Авр Агу РНе Тниг Спу 60 35 зЗег Агу бег СПУ ТНг Азр Рпе Тнг Рне Тнпг Пе 5ег 5ег Ма! Сіп Аа 65 70 75 80
Сім Авр І єи Аїа Маї Туг Туг Су Сп Сип Ні Туг Тик Тнг Рго Рго 40 85 90 95
Тиг Ре Спу Спу Спу ТНг Гуз Маї Сім Пе Гув 100 105 «2105» 5 «2115 107 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Варіабельний домен легкого ланцюга гуманізованого антитіла 405 «4005» 5
Азр Пе Сип Меї ТАг Сп Зег Рго Зег Зег І ви Зег Аа 5ег Ма! СПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тнг Пе Тнг Суз Агу Аа 5ег Сп Авр Маї Ап ТАг Аіа 20 25 0) маї Ага Тгр Туг Сп СІп Гув Рго Спу Гуз Аа Рго Гуз І еи І еи Пе 35 40 45 /Туг Зег Аіа бег РНе І єи Спи 5ег Спу Ма! Рго Зег Агу РНе Зег Спу 50 55 60 зЗег Агу бег СПУ ТНг Азр РНе ТнНг І єи Тнг Пе бег 5ег І ви Сіп Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Сув Сип Сп Нів Туг Тик Тнг Рго Рго 85 90 95
Тиг Рне Су Сіп Спу Тиг Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 -2105» 6 «2115 1353 «2125 ОМА -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Полінуклеотид, що кодує важкий ланцюг химерного 405 з
Ес-ділянкою дикого типу «4005» 6 саддіїсадс Ідсадсадіс ї(ддсссдад сіюддідаадс саддддссіс асісаадію (610) іїссідіасад сНнеіддсії саасаїсааа дасассіаїа іссасддаї дааасададд 120 ссідаасада дссюдааюд данддаадд ащшайссіа ссаащдаясіа іасіадаїаї 180 дасссаааді Ііссаддасаа додссасіаїс асадсадаса саїссіссаа сасадссіас 240 сідсаадіса дссдссідас аїсідаддас асідссадїісі апасідсіс сссодіддада /-з00 ддааасддсі ітадсїаї ддасіасідд даісадддад ссіссдідас сдідадсісс 360 дссіссасса адддсссаїс ддаісноссс сіддсасссі ссіссаадад сассісіддд 420
Зо ддсасадсодао сссіддосід ссіддісаад дасіасцсс ссдаассоді дасоддідієд 480 тддааасісад дсдсссідас садсддсаїд сасассісс сдосідіссіасадіссіса 540 ддасісіасі сссісадсад соїддщдасс дїдсссісса дсадснода сасссадасс 600
Тасаїсідса асдідааїіса саадсссадс аасассаадод ддасаадад адідадссс 660 аааїсноїд асаааасіса сасаїдссса ссдідсссад сассідаасі ссідддддчда 720 ссдісадісі Іссісносс сссаааассс ааддасассс ісаїдаїсіс ссддассссі 780 даддісасаї всдіддщої ддасдідадс сасдаадасс сюдаддісаа діїсаасідд 840 тасдюдасод дсдаюадавдої дсаїаадсс аадасааадс сдсдддадда дсадіасаас 900 адсасдіасс дідіддісад сдіссісасс діссідсасс аддасіддсі дааїддсаад 960 дадіасааді дсааоддісіс саасааадсс сісссадссс ссаїсдадаа аассаїсісс 1020 ааадссааад дасадссссу адаассасад дідіасассс Ідсссссаїс ссдддаїдад 1080 сідассаада ассаддісад ссідассідс сіддісааад дсисіаїсс садсдасаїс 1140 дссдюдадасді дддададсаа дддсадссяо дадаасаасі асаадассас дссісссдід 1200 сіддасіссд асодсіссії сіссісіас адсаадсіса ссдіддасаа дадсаддідд 1260 садсаддоада асдіснсіс асіссадїа аїдсащдавдао сісідсасаа ссасіасасд 1320 садаададсс ісісссідіс Іссддаїааа да 1353 -2105 7 «2115» 450 «2125» РАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Важкий ланцюг химерного 405 з Ес-ділянкою дикого типу
Зо «4005 7
Сп Маї Стій Ї ви Сп Спи бег Спу Ро Сім Гей Ма! Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зегі ви Гуз І єи 5ег Суз ТНг Аа Зег СпПу Рпе Авп Пе Гуз Авр Тиг 20 25 зо
Туг Пе Ніз Тгр Маї Гуз Сип Агу Рго Спи Сп Спу Гей Си Тер Пе 35 40 45
Сіу Ага Іе Туг Рго ТНг Авп Сіу Туг ТНг Ага Туг Авр Рго Гуз Рпе 50 55 60
Сіп Авр Гуз Аа ТНг Пе Тнг Аа Авр Тнг 5ег Зег Азп Тиг Айїа Туг 1065 70 75 80
Ї еи СіІп Маї бЗег Ага І єи Тнг Зег Спи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95 зЗег Аг Ттр Спу Сіу Азр Спу РНе Туг Аіа Меї Азвр Туг Тгтр Сіу Сп 100 105 110
Су Авіа 5ег Маї Тнг Ма! Зег Зег Аа 5ег ТНг Гуз Спу Рго бЗег Ма! 115 120 125
Рпеє Рго І єм Аа Рго 5ег Зег І уз Зег Тиг Зег СПу Су ТНг Аа Аа 130 135 140
Ї ви Спу Сувз І еи Ма! Гуз Авр Туг Ре Рго Сім Рго Маї Тиг Маї Зег 145 150 155 160
Тер Авп 5ег Сту Аа І єи ТАг Зег Спу Маї Ні Тиг Рне Рго Аїа Маї 165 170 175
З5
Ї єи Сп бег бег Спу І єи Туг 5ег І єи бег 5ег Маї Ма! Тнг Маї Рго 180 185 190 зЗег Зег ЗегІ ей Спу Тиг Сп Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Нів ГГ ув 195 200 205
Рго 5ег Авп Тпг Гуз Маї Азр Гуз Аг Маї Спи Рго Гу бег Сув А5р 210 215 220
Гуз Тнг Ні Тиг Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сі І єи І еи Спіу Спу 10225 230 235 240
Рго бег Ма! Рне Геи Рне Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І єи Мей Пе 245 250 255 зЗег Агу ТАг Рго Сіи Ма! Тнг Суз Маї Маї Маї Авр Маї Зег Ні Спи 260 265 270
Азр Рго Сіи Маї Гуз Рпе Авп Тр Туг Ма! Азр Сту Маї Спи Маї Нів 275 280 285
Авп Аа Гуз ТАг Гуз Рго Агу Сі См Сп Туг Азп Зег Тниг Туг Аг9 290 295 00 маї Маї Зег Ма! Гей Тнг Маї І єи Ніз Сіп Авр Тр І єи Авзп ау І ув 305 з10 315 з20
Сім Туг Гуз Суз Гуз Маї 5ег Авп Гуз Аа І єм Рго Аїа Рго Пе Спи 325 330 335
З5
Гуз Тниг Пе 5ег Гуз Аа Гуз Спу Сіп Рго Агу Сім Рго Сіп Маї Туг 340 345 350
Тиг Ге Рго Рго 5ег Ага Ар Си І еи ТНг Гуз Авп Сп Маї Зег І ви 355 360 365 ТАгСувз І ви Маї Гуз Спу РНе Туг Рго Зег Авр Іе Аа Маї Спи Ттр 370 375 380
Сім Зег Авп Спу Сіп Рго Спи Авп Авп Туг Гуз ТАг Тнг Рго Рго Маї 385 390 395 400
І еи Авр 5ег Авр Спу 5ег Ре Ре Г єи Туг Зег Гуз Геи Тнг Ма! Азр 405 до 415
Гуз 5ег Агу Тгтр Сп Сп СпПу Авп Маї Рпє 5Зег Суз Зег Ма! Меї Нів 420 425 430
Сім Аїйа І єм Ні Авп Ні Туг Тиг Сп Гуз Зег І єи Зег ГГ еи 5ег Рго 435 440 445 ауГув 450 «210» 8 00«2115 1353 «2125 ОМА -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Полінуклеотид, що кодує важкий ланцюг варіантного химерного антитіла 405 з варіантною Ес-ділянкою ЕСМТ 1 «-4005» 8 саддіїсадс (дсадсадісєс ддсессдад сюдідаадс садддоссіс асісаадняа (610)
іїссідіасад сісіддсії саасаїсааа дасассіаїа іссасідддї дааасададча 120 ссідаасадо дссіддаад дайддаадо ашаїйссіа ссааддсіа їасіадаа! 180 дасссаааді Ііссаддасаа ддссасіаїс асадсадаса саїссіссаа сасадссіас 240 сідсаадіса дссдссідас аісідаддас асідссдісі айасідсіс ссдаїддуча 300 ддааасодасі ісіасіаї ддасіасідд ддісадддад ссіссдідас соідадсісс 360 дссіссасса адддсссаїс даїсноссс сіддсасссі ссіссаадад сассісіддда 420 ддсасадсодо сссіддосід ссіддісаад дасіасійсс ссдаассоді дасодідіса 480 дааасісад дсдсссідас садсддсдід сасасснсос сдусідіссіасадіссіса 540 ддасісіасі сссісадсад саїддідасс дідсссісса дсадснода сасссадасс 600
Тасаїсідса асдідааїіса саадсссадс аасассаадоу юддасаадададндадссс 660 аааїсноїд асаааасіса сасаїдссса ссдідсссад сассідаасі ссіддадада 720 ссдісадісі ІссіснНасс сссаааассс ааддасассс ісаїдаїсіс ссддасссосі 780 дадаїсасаї дсодчоіоої ддасдідадс сасдаадасс сідаддісаа днсаасда 840 тасдаюдасо дсоюддавдої дсаїаадсс аадасааадс сдссддадда дсадіасаас 900 адсасдсісс дідіддісад саїссісасс діссюдсасс аддасіддсі дааддодсаад 960
Зо дадіасааді дсааддісіс саасааадсс сісссадссс ссаїсдадаа аассаїсісс 1020 ааадссааад дасадссссу адаассасад дідіасассс Ідсссссаїс ссдадаюдад 1080 сідассаада ассаддісад ссідассідс сіддісааад дсисіаїсс садсдасаїс 1140 дссдюдадасді дддададсаа дддсадссод дадаасаасі асаадассас дссісісдід 1200 сіддасіссяд асодсіссії сіссісіас адсаадсіса ссодіддасаа дадсадаідоа 1260 садсаддоада асдіснсіс адсіссдід аїдсащдадао сісідсасаа ссасіасасд 1320 садаададсс ісісссідіс Іссдадіааа ща 1353 «210» 9 «2115» 450 «212» РАТ -213» Штвтучна послідовність «220» 223» важкий ланцюг варіантного химерного антитіла 405 з варіантною Ес-ділянкою ЕСМТ 1 «400» 9
Сп Маї Сій Ї ви Сп Сп бег Спіу Рго Сі І еи Маї Гуз Рго Спу Аа 1 5 10 15 зегі ви Гуз І єи 5ег Суз ТНг Аа Зег Спу Рпе Авп Іе Гуз Авр ТНг 20 25 зо
ТупІе Ні5 Ттр Маї Гуз Сіп Аг Рго Спи Сп Спу Гей Сім Тгр Пе
Сіу Ага Іе Туг Рго ТНг Авп Сіу Туг ТНг Аг Туг Авр Рго Гу Рпе
Коо) 50 55 бо
Сіп Авр Гуз Аа ТНг Пе Тнг Аа Авр Тнг 5ег Зег Азп Тиг Айїа Туг 65 70 75 80 35
Ї еи СіІп Маї бЗег Ага І єи Тнг Зег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95 40 зЗег Аг Ттр Спу Сіу Азр Спу РНе Туг Аіа Меї Азвр Туг Тгтр Сіу Сп 100 105 110 ау Авіа бег Маї Тниг Маї Зег 5ег Аа 5ег ТНг Гуз СПу Рго 5ег Ма! 115 120 125
Рне Ро І еи Аа Рго 5ег 5ег І уз Зег Тиг Зег Сіу Спу ТНг Аа Аа 130 135 140
Ї ви Спу Суз І еи Маї Гуз Авр Туг Рне Рго Сім Рго Маї Тиг Ма! Зег 145 150 155 160
Тер Авп 5ег Сту Аа І єи ТАг Зег Спу Маї Ні Тиг Рне Рго Аїа Маї 165 170 175
Ї єи Сп бег бег Спу І єи Туг 5ег І єи бег 5ег Маї Ма! Тнг Маї Рго 180 185 190 зЗегЗег зе ви Спіу ТАг Сп ТНг Тук Пе Суз Авп Маї Авп Нів Гуз 195 200 205
Рго Бег Азп Тиг Гуз Маї Авр Гуз Аго Маї Спи Рго Гуз Зег Суз Авр
Ко) 210 215 220
Гуз Тнг Ні Тиг Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сі І єи І еи Спіу Спу 225 230 235 240
З5
Рго Зег Маї Рне Г еи І єи Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг Геи Меї Пе 245 250 255 зЗег Агу ТАг Рго Сіи Ма! Тнг Суз Маї Маї Маї Авр Маї Зег Нів Сі 260 265 270
Авр Рго Си Маї Гуз Рпеє Азп Тгр Туг Маї Азр Стпу Маї Сім Маї Нів 275 280 285
Авзп Аа Гуз Тнпг Гуз Рго Рго Сім Спи Сп Туг Авп Зег ТНг Геи Ага 290 295 зо00 маї Маї Зег Іе І єи Тнг Маї І єи Ніз Сіп Авр Тр Гей Авп Су ГІ уз 305 з10 315 320
Сім Туг Гуз Суз Гуз Маї 5ег Авп Гуз Аа І єм Рго Айа Рго Пе Спи 325 330 335
Гуз Тниг Пе 5ег Гуз Аа Гуз Спу Сіп Рго Агу Сім Рго Сіп Маї Туг 340 345 350
ТАгГеи Ріо Рго 5ег Агу Авр Си І єи ТАиг Гуз Авп ап Маї 5ег І ви 355 360 365
Тниг Суз І еи Ма! Гуз Спу РНе Туг Рго 5ег Авр Іе Аа Маї Сіи Тгтр 370 375 380
Сім Зег Авзп Спу Сіп Рго Спи Авп Авп Туг Гуз ТНиг ТАг Рго І єи Маї 385 390 395 400
З5
І еи Авр 5ег Авр Спу 5ег Ре Ре Г єи Туг Зег Гуз Геи Тнг Ма! Азр 405 до 415
Гуз 5ег Агу Тгтр Сп Сп Спу Авп Маї Рпє 5Зег Суз Зег Ма! Меї Нів 420 425 430 ам Аа єи Нів Авп Ні Туг ТАг Сп Гуз Зег І еи Зег І єи Зег Рго 435 440 445
Сіу Гуз 450 «2105 10 «2115 1353 «2125 ОМА -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Полінуклеотид, що кодує важкий ланцюг варіантного химерного антитіла 405 з варіантною Ес-ділянкою ЕСМТ2 «4005 10 саддіїсадс (дсадсадісєс ддсессдад сюдідаадс садддоссіс асісаадняа (610) іїссідіасад сісіддсії саасаїсааа дасассіаїа іссасідддї дааасададча 120 ссідаасадо дссіддаад дайддаадо ашаїйссіа ссааддсіа їасіадаа! 180 дасссаааді Ііссаддасаа ддссасіаїс асадсадаса саїссіссаа сасадссіас 240
Зо сідсаадіса дссдссідас аісідаддас асідссдісі айасідсіс ссдаїддуча 300 ддааасодасі ісіасіаї ддасіасідд ддісадддад ссіссдідас соідадсісс 360
З5 дссіссасса адддсссаїс даїсноссс сіддсасссі ссіссаадад сассісіддда 420 ддсасадсодо сссіддосід ссіддісаад дасіасійсс ссдаассоді дасодідіса 480 дааасісад дсдсссідас садсддсдід сасасснсос сдусідіссіасадіссіса 540 ддасісіасі сссісадсад саїддідасс дідсссісса дсадснода сасссадасс 600
Тасаїсідса асдідааїіса саадсссадс аасассаадоу юддасаадададндадссс 660 аааїсноїд асаааасіса сасаїдссса ссдідсссад сассідаасі союдадода 720 ссдісадісі ІссіснНасс сссаааассс ааддасассс ісаїдаїсіс ссддасссосі 780 дадаїсасаї дсодчоіоої ддасдідадс сасдаадасс сідаддісаа днсаасда 840 тасдюдасод дсдаддадої дсаїаадсс аадасааадс сдссддадда дсадіасаас 900 адсасдсісс дідіддісад сдіссісасс діссюдсасс аддасіддсі дааддодсаад 960 дадіасааді дсааддісіс саасааадсс сісссадссс ссаїсдадаа аассаїсісс 1020 ааадссааад дасадссссу адаассасад дідіасассс Ідсссссаїс ссдадаюдад 1080 сідассаада ассаддісад ссідассідс сіддісааад дсисіаїсс садсдасаїс 1140 дссдюдадасді дддададсаа дддсадссод дадаасаасі асаадассас дссісісдід 1200 сіддасіссяд асодсіссії сіссісіас адсаадсіса ссодіддасаа дадсадаідоа 1260 садсаддоада асдіснсіс адсіссдід аїдсащдадао сісідсасаа ссасіасасд 1320 садаададсс ісісссідіс Іссдадіааа ща 1353
Зо «2105 11 «2115» 450 «2125» РАТ -213» Штвтучна послідовність «220» 223» важкий ланцюг варіантного химерного антитіла 405 з варіантною
Ес-ділянкою ЕСМТ2 «4005 11
Сп Маї Стій Ї ви Сп Спи бег Спу Ро Сім Гей Ма! Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зегпІец Гуз еи Бег Сув Тиг Аіа Зег Спіу Ріє Авзп Іе Гуз Авр ТНг 20 25 0)
Туг Пе Ніз Тгр Маї Гуз Сип Агу Рго Спи Сп Спу Гей Си Тер Пе 35 40 45
Сіу Ага Іе Туг Рго ТНг Авп Сіу Туг ТНг Ага Туг Авр Рго Гуз Рпе 50 55 60
Сіп Авр Гуз Аа ТНг Пе Тнг Аа Авр Тнг 5ег Зег Азп Тиг Айїа Туг 65 70 75 80
Ї еи СіІп Маї бЗег Ага І єи Тнг Зег Спи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95 юю Зег Ага Тр Сіу Спіу Азр Сіу РНе Туг Аа Меї Авр Туг Тгтр Су Сп 100 105 110
Су Авіа 5ег Маї Тнг Ма! Зег Зег Аа 5ег ТНг Гуз Спу Рго бЗег Ма!
Ко) 115 120 125
Рне Ро І еи Аа Рго 5ег 5ег І уз Зег Тиг Зег Сіу Спу ТНг Аа Аа 130 135 140
Ї ви Спу Сувз І еи Ма! Гуз Авр Туг Ре Рго Сім Рго Маї Тиг Маї Зег 145 150 155 160
Тер Авп 5ег Сту Аа І єи ТАг Зег Спу Маї Ні Тиг Рне Рго Аїа Маї 165 170 175
Гей Сп бег Зег Спу І еи Туг Зег І єи бег Зег Маї Ма! Тнг Маї Рго 180 185 190 зЗег Зег ЗегІ ей Спу Тиг Сп Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Нів ГГ ув 195 200 205
Рго Бег Азп Тиг Гуз Маї Авр Гуз Агу Маї Спи Рго Гуз Зег Сув А5р 210 215 220
Гуз Тнг Ні5 Тиг Суз Рго Рго Суз Рго Аїа Рго Сім ГГ еи Ма! СПу Су 225 230 235 240
Рго Зег Маї Рне Г еи І єи Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг І еи Меї Пе 245 250 255
Зег Ага Тниг Рго Спи Ма! Тиг Суз Маї Маї Маї Ар Маї Зег Ні Си 260 265 270
Азр Рго Сіи Маї Гуз Рпе Авп Тр Туг Ма! Азр Стпу Маї Сім Маї Нів 275 280 285
Авзп Аа Гуз Тнпг Гуз Рго Рго Сім Спи Сп Туг Авп Зег ТНг Геи Ага 290 295 00
З5 маї Маї Зег Ма! Гей Тнг Маї І єи Ніз Сіп Авр Тр І єи Авзп Су ГГ ув 305 з10 315 з20
Сім Туг Гуз Суз Гуз Маї 5ег Авп Гуз Аа І єм Рго Айа Рго Пе Спи 325 330 335
Гув Ти Пе 5ег Гуз Аа Гуз Спу Сип Рго Аг Спи Рго Сп Маї Туг 340 345 350
Тиг Ге Рго Рго 5ег Ага Ар Си І еи ТНг Гуз Авп ап Маї 5ег І ви 355 360 365
Тниг Суз І еи Маї Гуз Спу РНе Туг Рго Зег Азр Іе Аа Ма! Спи Тгтр 370 375 380
Сім Зег Авзп Спу Сіп Рго Спи Авп Авп Туг Гуз ТНиг ТАг Рго І єи Маї 385 390 395 400
Ї еи Авр 5ег Азр Стпу 5ег Ре Ре Г єи Туг Зег Гуз І еи Тнг Ма! Азр 405 до 415
Гуз 5ег Агу Тгтр Сп Сп Спу Авп Маї Рпє 5Зег Суз Зег Ма! Меї Нів 420 425 430
Сім Аїйа І єм Ні Авп Ні Туг Тиг Сп Гуз Зег І єи Зег ГГ еи 5ег Рго 435 440 445
Сіу Гуз 450
З5 «2105 12 «2115 1353 «2125 ОМА -213» Штвтучна послідовність
«223» Полінуклеотид, що кодує варіантне химерне антитіло 405 з варіантною Ес-ділянкою ЕСМТЗ «-4005 12 саддіїсадс Ідсадсадіс ї(ддсссдад сіюддідаадс саддддссіс асісаадію (610) іїссідіасад сНнеіддсії саасаїсааа дасассіаїа іссасддаї дааасададд 120 ссідаасадд дссіддааю дайддаадо ашаїйссіа ссааюодсіа їасіадааі 180 дасссаааді Ііссаддасаа додссасіаїс асадсадаса саїссіссаа сасадссіас 240 сідсаадіса дссдссідас аїсідаддас асідссадїісі апасідсіс сссодіддада /-з00 ддааасддсі ісадстаї ддасіасідд даісадддад ссіссдідас соідадсісс 360 дссіссасса адддсссаїс ддіснсссс сюдсасссі ссіссаадад сассісіддд 420 ддсасадсодао сссіддосід ссіддісаад дасіасцсс ссдаассоді дасоддідієд 480 тддааасісад дсдсссідас садсддсаїд сасассісс сдосідіссіасадіссіса 540 ддасісіасі сссісадсад соїддщдасс дідсссісса дсадсідод сасссадасс 600
Тасаїсідса асдідааїіса саадсссадс аасассаадод ддасаадад адідадссс 660 аааїсноїд асаааасіса сасаїдссса ссдідсссад сассідаасі ссідддддчда 720
Зо ссдісадісі Іссіснасс сссаааассс ааддасассс ісаїдаїсіс ссоддасссосі 780 даддісасаї всдіддщої ддасдідадс сасдаадасс сюдаддісаа діїсаасідд 840 тасдюдасод дсдюдадавдої дсаїаадсс аадасааадс сдссуддадда дсадіасаас 900 адсасдсісс дідіддісад садіссісасс діссідсасс аддасіддсі дааїддсаад 960 дадіасааді дсааоддісіс саасааадсс сісссадссс ссаїсдадаа аассаїсісс 1020 ааадссааад дасадссссу адаассасад дідіасассс Ідсссссаїс ссдддаїдад 1080 сідассаада ассаддісад ссідассідс сіддісааад дсисіаїсс садсдасаїс 1140 дссдюдадасді дддададсаа дддсадссяо дадаасаасі асаадассас одссісссдуюд 1200 сіддасіссд асодсіссії сіссісіас адсаадсіса ссдіддасаа дадсаддідд 1260 садсаддоада асдіснсіс асіссадїа аїдсащдавдао сісідсасаа ссасіасасд 1320 садаададсс ісісссідіс Іссддаїааа да 1353 «2105 13 «2115» 450 «212» РАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Варіантне химерне антитіло 405 з варіантною Ес-ділянкою ЕСМТЗ «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1).(450) «223» Варіантне химерне антитіло 405 з варіантною Ес-ділянкою ЕСМТЗ -4005 13
Сп Маї Сіп Гей Сп Сіп Зег Спу Рго Сім ГГ еи Маї Гуз Рго Сну Аіа 1 5 10 15 зегі ви Гуз І єи 5ег Суз ТНг Аа Зег СпПу Рпе Авп Пе Гуз Авр Тиг 20 25 зо
Туг Пе Ніз Тгр Маї Гуз Сип Агу Рго Спи Сп Спу Гей Си Тер Пе 35 40 45
Сіу Ага Іе Туг Рго ТНг Авп Сіу Туг ТНг Ага Туг Авр Рго Гуз Рпе 50 55 60
Сіп Авр Гуз Аа ТНг Пе Тнг Аа Авр Тнг 5ег Зег Азп Тиг Айїа Туг 65 70 75 80
Ї еи СіІп Маї бЗег Ага І єи Тнг Зег Спи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95 зЗег Аг Ттр Спу Сіу Азр Спу РНе Туг Аіа Меї Азвр Туг Тгтр Сіу Сп 100 105 110
Су Авіа 5ег Маї Тнг Ма! Зег Зег Аа 5ег ТНг І ув Спу Рго бЗег Маї 115 120 125
Рне Ро І еи Аа Рго 5ег 5ег І уз Зег Тиг Зег Сіу Спу ТНг Аа Аа 130 135 140
Ї ви Спу Сувз І еи Ма! Гуз Авр Туг Ре Рго Сім Рго Маї Тнг Ма! Зег 145 150 155 160
Зо Тер Авп 5ег Сіу Аа І єи Тнг Зег Спу Маї Ні Тнг Рне Рго Ага Маї 165 170 175
Ї єи Сп бег Зег Спу І єи Туг 5ег І єи бег 5ег Маї Ма! Тнг Маї Рго 180 185 190 зЗег Зег ЗегІ ей Спу Тиг Сп Тиг Туг Пе Сув Авп Маї Авп Нів ГГ ув 195 200 205
Рго Бег Азп Тиг Гуз Маї Авр Гуз Аг Маї Спи Рго Гуз Бег Сув А5р 210 215 220
Гуз Тнг Ні Тиг Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сі І єи І еи Спіу Спу 225 230 235 240
Рго Зег Маї Рне Г еи І єи Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг Геи Меї Пе 245 250 255 зЗег Агу ТАг Рго Сіи Ма! Тнг Суз Маї Маї Маї Авр Маї Зег Нів Сі 260 265 270
Азр Рго Сіи Маї Гуз Рне Авп Тгр Туг Ма! Азр Сту Маї Спи Маї Нів 275 280 285
Авзп Аа Гуз Тнпг Гуз Рго Рго Сім Спи Сп Туг Авп Зег ТНг Геи Ага 290 295 00 маї Маї Зег Ма! І еи Тнг Маї І єи Ніз Сіп Авр Тр І єи Авп ау І ув 305 з10 315 з20
Сім Ту Гуз Суз І уз Ма! бЗег Авп І уз Аа І єм Рго Аа Рго Пе Спи 325 330 335
Гуз Тиг Пе Зег Гуз Аа Гуз Спу Сип Рго Агу Сім Рго Сіп Маї Туг 340 345 350
Тиг Ге Рго Рго 5ег Ага Ар Си І еи ТНг Гуз Авп ап Маї 5ег І ви 355 360 365
Тниг Суз І еи Ма! Гуз Спу РНе Туг Рго 5ег Авр Іе Аа Маї Сіи Тгтр 370 375 380 сій Зег Авп Спу Сіп Рго Спи Авп Авп Туг Гуз ТНг ТАг Рго Рго Маї 385 390 395 400
Гей Авр бег Авр Сіпу 5ег Ре Ре І єм Туг Зег Гуз І еи Тнг Ма! Азр 405 до 415
Гуз 5ег Агу Тгтр Сп Сп Спу Авп Маї Рпє 5Зег Суз Зег Ма! Меї Нів 420 425 430
Сім Аїйа І єм Ні Авп Ні Туг Тиг Сп Гуз Зег І єи Зег ГГ еи 5ег Рго 435 440 445
Сіу Гуз 450 «2105» 14 «2115 288 «2125 РВАТ «213» Ното зарієп5
Зо «220» «221» МІС ГЕАТОВЕ «222» (1). (288) «223» РО-1 людини «4005» 14
Меї Сіп Пе Рго Сп Аїа Рго Тр Рго Маї Маї Тгр Аа Ма! І еи Сп 401 5 10 15
Ї ви Спу Тгр Аг Рго Сту Тр Рпе Геи Авр 5ег Рго Авр Аго Рго Тгтр 20 25 зо
Авп Рго Рго Тнг РНе 5ег Рго Аа І єи І и Маї Ма! Тиг Спи Спу Ар 35 40 45
Азп Аа Тиг Рне Тиг Сувз 5ег Рпе 5Зег Азп Тпиг 5ег СІм 5ег Рпе Маї 50 55 60
Ї еи Авп Тр Туг Агу Меї 5ег Рго 5ег Азп Сп ТНг Азр Гуз І єи Аа 65 70 75 80
Аа РнНе Рго Сім Ар Ага 5ег Сп Рго СПу Сіп Авр Суз Агу Рпе Ага 85 90 95 маї Тиг Сп ГГ еи Рго Авп Су Ага Ар РНе Ні Меї 5ег Маї Ма! Ага 100 105 110
Аа Ага Ага Авп Авр 5ег Сіу ТАг Туг ГГ еи Суз Спу Аа Пе 5ег І єи 115 120 125
Зо
Аа Рго Гуз Аа СіІп Пе Гуз Сіи Зег І ей Агу Аа Сім Гей Аг Маї 130 135 140
Тиг сін Ага Аго Аа Си Маї Рго Тнг Аа Ні Рго 5ег Рго 5ег Рго 145 150 155 160
Ага Рго Аа Сіпу Сіп Ре Сп Тнг І єи Маї Ма! Спіу Ма! Ма! Спу Спу 165 170 175
Ї еи Г єи Спу Зег І еи Маї І еи І єи Маї Ттр Ма! І еи Аа Ма! Пе Суб 180 185 190 зЗег Аг Аа Аа Ага Стпу ТАг Пе Спу Аа Ага Агу Тиг Спу Сп Рго 195 200 205
Ї ви Гуз Спи Авр Рго 5ег Аїа Маї Рго Маї Рне 5ег Маї А5р Туг Спу 210 215 220
Сі Гей Ар РНе Сіп Тгр Аго Сі Гуз Тнг Рго Сім Рго Рго Маї Рго 225 230 235 240
Суз Маї Рго Спи Сп Тиг Спи Туг Аа Тнг Пе Маї Рне Рго 5ег Спу 245 250 255
Меї Спу Тнг Зег Зег Рго Аа Ага Агд Сіпу Зег Аа Авр Спу Рго Ага 260 265 270 зЗег Аа Сіп Рго І єи Ага Рго Сім Ар Су Ні Суз Зег Тр Рго Гей 275 280 285
Зо «2105» 15 «2115 113 «2125 РВАТ «213» Ми5 тив5сши5
З5 «220» «221» МІС РЕАТОВЕ «реа» (1)..0113) «223» варіабельний домен важкого ланцюга РО-1 тАБ 1
«4005 15
Сіп ма! Сіп І еи Ма! Спи Зег Сіу Сіу Спу Ма! Ма! Спп Рго Сіпу Агд 1 5 10 15 зег І ей Ага І єи Азвр Суз І уз АІа бег Спу Пе Тнг РНне 5ег Авзп 5ег 20 25 0)
Сіу Меї Ніз Тгр Маї Аг Сп Айа Рго Сіу Гуз Сіпу І еи Спи Тр Маї 35 40 45
Аа Ма! Ме Тгр Туг Авр Су Бег Гуз Аго Туг Туг Аіа Авр 5ег Маї 50 55 60
Гуз Спіу Ага Ре ТНг Пе 5ег Агу Авр Авп з5ег Гуз Авзп ТНг Гей Рпе 65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп 5ег І ви Агу Аа Сіи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95
Аа Тиг Авп Азвр Азвр Туг Ттр Сіу Сп Сіу Тиг ГГ еи Маї Тнг Маї Зег 100 105 110
Зо зег
З5 «2105» 16 «2115 5 «2125 РВАТ «213» Ми5 тивсшШ5
«020» «221» МІБС ЕГЕАТИОВЕ «222» (1)..(5) «223» СОВНІ з РО-1 тА 1 «4005» 16
Авп бег Сіу Меї Ніб 1 5 «-2105» 17 «-2115 17 «212» РВТ «213» Мив5 тивсшиШв5 «020» «221» МІБС ЕГЕАТОВЕ «дод» (1).4117) «223» СОВНІ2 з РО-1 тА 1 «400» 17 ма! Ме Тгр Туг Авр ау 5ег Гуз Ага Туг Туг АІа Авр 5ег Ма! Гуз 1 5 10 15 з0 супу «-2105» 18 «2115» 4 «212» РВТ «213» Мив5 тивсшиШв5 «020»
«221» МІС РЕАТОВЕ «реа» (1).(4) «223» СОКНЗ з РО-1 тАбБ 1 «4005» 18
Авп Ар Ар Туг 4 «2105» 19 «2115 107 «212» РВАТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «221» МІС РЕАТОВЕ «реа» (1).4107) «223» варіабельний домен легкого ланцюга РО-1 тАБ 1 «4005» 19
Сі Пе Маї Геи Тит Сп Зег Рго Аа ТНг І еи Зег І еи Зег Рго Спу 1 5 10 15
Сім Ага Аа Тпг І еи Зег Суз Агу Аїа 5ег Сп Зег Ма! Зег Зег Туг 20 25 0)
Зо
Ї еи Ага Тр Туг Сп Сп Гув Рго Спу Сп Аа Рго Ага Геи Г єи Пе
З5
Туг Авр Аа 5ег Азп Аго Аа Тпг С1у Пе Рго Аїа Ага РНе 5ег Спу бо 40 Зег Сіу Зег Сіу Тиг Азр Рнпе ТнНг І єи Тнг Пе 5ег 5ег І ви Сім Рго
65 70 75 80 сій Авр РНе Аїа Маї Туг Туг Суз Сп Сп Зег 5ег Авп Тр Рго Ага 85 90 95
Тиг Ре Су Сіп Спу Тит Гуз Маї Спи Пе Гув 100 105 «2105» 20 «2115 11 «2125 РВАТ «213» Ми5 тив5сшив5 «220» «221» МІС РЕАТОВЕ 20. «22» (1)..111) «223» СОКІ1 з РО-1 тАБ 1 «4005» 20 Агу Аа 5ег Сп 5ег Ма! Зег Зег ТугГеи Аа 1 5 10 «2105 21
Зо «2115 7 «2125 РВАТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «221» МІС РЕАТОВЕ «222» (1).(7) «223» СОКІ2 з РО-1 тАБ 1 «4005» 21
Азр Аа 5ег Авп Агу Аа ТНг 1 5 «2105 22 «2115» 9 «2125 РВАТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «221» МІС РЕАТОВЕ «реа» (1)..(9) «223» СОКІЗ з РО-1 тАБ 1 «4005 22
Сіп Сп бег Зег Авп Тр Рго Аг Тиг 1 5 «2105 23 «2115» 120 «212» РАТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «2215 МІБС ГЕАТИОВЕ «222» (1)..4120) «223» варіабельний домен важкого ланцюга РО-1 тАБ 2 «4005» 23
Сіп ма! Сіп І еи Маї Сип Зег Спу Маї Спи Маї Гуз Гуз Рго Спу Аіа 1 5 10 15
Бе Маї Гуз Ма! Зег Сув Гуз Аа Зег Спу Туг ТНиг Рпе Тнг Авп Туг
20 25 0)
Туг Меї Туг Тгр Маї Агу Сп Аїа Рго Сіу Сіп Спіу Геи Спи Тр Меї 35 40 45 сСіу Спу Пе Авп Рго 5ег Авп Сіу Сіу Ти Авп Ре Авп Си Гув Рпе 50 55 60
Гуз Авп Аг Маї ТНг І єи Тиг ТАг Авр Зег Зег Тпг Тит Тнг Аа Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Гуз 5ег І єи Сіп Рне Азр Азр ТНг Аа Маї Туг Туг Суб 85 90 95
Аа Агу Аг Авр Туг Агу Ріє Авр Меї ау Рне Авр Туг Тр Сіу Сп 100 105 110
Сіу Тег Тнг Маї ТАг Ма! Зег Зег 115 120 «2105» 24 «2115 5 00 «212» РАТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» 0о«2215 МІБС РГЕАТОВЕ «реа» (1)..(5) «223» СОВ1 варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ 2 «4005» 24
Авп Туг Тут Меї Тут 1 5 «2105» 25 «2115 17 «212» РАТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..417) «223» СОВ2 варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ 2 «4005» 25
Су Пе Авп Рго Зег Авзп СПу Спу ТАг Авзп РНе Авзп Си Гуз Рпеє Гуз 1 5 10 15
Авп «2105» 26 «2115 11 «212» РАТ «213» Ми5 тив5сши5
Зо «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..011) «223» СОРВЗ варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ 2 «4005» 26
Аг9 Ар Туг Ага Ре Азвр Меї Сіу Рне Авр Туг 1 5 10
«2105» 27 «2115 111 00о«212» РАТ «213» Ми5 тивсшШ5 «220» «2215 МІЗБС ГЕАТОВЕ «222» (1)..4111) «223» варіабельний домен легкого ланцюга РО-1 тАБ 2 «4005» 27
Сі Пе Маї Геи Тиг Стпп Зег Рго Ага ТНг І еи Зег І єи Зег Рго Спу 1 5 10 15 ами Агу Аа ТНг І єи 5ег Суз Агу Аа 5ег Гуз Сіу Ма! Зег Тит Зег 20 25 0)
Сіу Туг Зег Туг І еи Ніз Ттр Туг Сип Сп Гуз Рго Сіу Сп Аа Рго
Ага Г еи Геи Пе Туг Геи Аа 5ег Туг І ви Спи Зег Спу Маї Рго Аа 60
Зо
Агу Рпе 5ег Спу Зег Сіу Зег Спу ТНиг Авр Рне Тнг І єи Тнг Пе Бег 65 70 75 80
З5 зег І ви Сім Рго Сім Авр Ріє Аїа Маї Туг Туг Суз Сп Нів 5ег Ага 85 90 95 40 Аврі еи Рго І єи Тиг Рпе Сіу Спу Сіу ТНг Гуз Маї Спи Пе Гув
100 105 110 «2105» 28 «2115 15 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «дод» (1)..115) «223» СОВ1 варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАБ 2 «4005» 28
Ага Аа 5ег Гуз Спу Ма! Зег Тиг Зег Сіу Туг Зег Туг І ви Нів 1 5 10 15 «2105» 29 «2115 7 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..(7)
Зо «223» СОВ2 варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАБ 2 «4005» 29
Ї еи Авіа 5ег Туг І єи Спи 5ег 1 5 «2105 30 «2115» 9 «212» РАТ
«213» Ми5 тив5сши5 «221» МІБС РГЕАТИОВЕ «реа» (1)..(9) «223» СОРВЗ варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАБ 2 «4005» 30
Сіп Ні Зег Агу Авр ГГ еи Рго ГГ еи ТНг 1 5 «2105 31 «2115 121 «212» РВТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «221» МІС РЕАТОВЕ «дод» (1).4121) «223» варіабельний домен важкого ланцюга РО-1 тАбБ З «4005 31
Сп Маї Стій Ї ви Сп Сіпй бег Спу Аа Си І єи Аа Гуз Рго Сіпу Аа 1 5 10 15
Зо зЗег Ма! СіІп Меї 5ег Суз Гуз Аа Зег Спіу Туг 5ег Рпе ТНг 5ег Зег 20 25 Зо
Тер Пе Ніз Ттр Маї Гуз Сип Агу Рго Спу Сіп Счу Геи С1и Тер Пе 35 40 45 ау Туг Пе Тут Рго Зег ТНг Спу Рпе Тниг Сім Туг Авп Сп Гув Рпе
50 55 60
Гуз Авр Гуз Аа ТНг І єи ТНиг Аа Авр Гуз Зег Зег Зег ТНг Аа Туг 65 70 75 80
Меї ап І єи Зег 5ег І єи ТНг бег Сім Авр 5ег Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95
Аа Ага Тр Ага Ар 5ег 5ег Спу Туг Ні Аа Меї Ар Туг Ттр Спу 100 105 110
Сіп Спу ТАг Зег Маї Тниг Маї Зег Зег 115 120 «2105 32 «2115 5 «2125 РВАТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «221» МІС ГЕАТОВЕ «222» (1)..(5) «223» СОВ1 варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ З
Зо «-4005 32 зЗег Зег Тр Пе Нів 1 5 «2105» ЗЗ3 «2115 17 «2125 РВАТ «213» Ми5 тив5сшив5
«221» МІЗС ГЕАТОВЕ 00«й22» (1).(17) «223» СОВ2 варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ З «4005» ЗЗ3
ТупПе Тут Рго Бег Тнг Спу Рпе Тнг Сім Туг Авп ап Гу РНе Гуз 1 5 10 15
Ар «2105» 34 «2115 13 20. «212» РАТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «б21» МІЗБС ГЕАТОВЕ «222» (1)..(13) «223» СОРВЗ варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ З «4005 34
Зо
Ага9 Тр Аго Авр 5ег Зег Сіпу Туг Ні Аа Меї Азвр Туг 1 5 10 «2105» 35 «2115 111 «212» РВТ «213» Ми5 тив5сши5
«221» МІС РЕАТОВЕ «222» (1)..4111) «223» варіабельний домен легкого ланцюга РО-1 тАБ З «4005» 35
Азр Іе Маї І єи Тиг Сп Зег Рго Аа 5ег І еи Тниг Ма! Зег І еи Спу 1 5 10 15
Сіп Ага Аа Тниг Пе 5ег Суз Агу Аа 5ег СіІп 5ег Ма! Зег Тит Зег 20 25 0)
Сіу Туг Зег Туг Меї Ніз Ттр Туг Сип Сп Гув Рго Сіу Сп Рго Рго 35 40 45
Гуз І еи Ї єи Пе Гуз РНе Сіпу бег Авп І еи Сіи бег Спу Пе Рго Аїа 50 55 60
Агу Рпе Зег Спу Зег Сіу Зег СПу Тиг А5р Ре Тпг ГГ еи Авп Пе Нів
Х65 70 75 80
Рго Маї Спи Спи СтПи Авр ТНг Аа Тнг Туг Туг Суз Сп Нів 5ег Тр 85 90 95
Зо
Сі Пе Рго Туг Тиг Рпе Спу Спу Спу ТНг Гуз Геи Спи Пе Гув 100 105 110
З5 «2105» 36 «2115 15 «2125 РВАТ «213» Ми5 тив5сши5
«221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..415) «223» СОВ1 варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАб З -4005 36
Ага Аа 5ег Сп 5ег Ма! Зег ТНг Зег Сіу Туг Зег Туг Меї Нів 1 5 10 15 «-2105 37 «2115 7 15. «212» РАТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІС ЕГЕАТОВЕ «дод» (1).(7) «223» СОВ2 варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАБ З «4005 37
Рпе Стпу бег Авп Геи Си Зег 1 5
Зо «2105» 38 «2115» 9 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..(9) «223» СОРВЗ варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАб З
«4005» 38
Сіп Ні Зег Тгтр Спи Пе Рго Туг ТНг 1 5 «2105» 39 «2115 117 «212» РВТ «213» Ми5 тив5сшив5 «220» «221» МІС РЕАТОВЕ 15. «222» (1).117) «223» варіабельний домен важкого ланцюга РО-1 тАБ 4 «4005» 39
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бег Спіу 5ег Сі І єи Гуз Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зЗег Ма! Гуз Пе Зег Суз Гуз Аа бЗег Спу Туг ТНг Рпе ТНг Авп Туг 20 25 Зо
Сіу Меї Авп Тр Маї Аго ап Аа Рго Спу Сип СПу Гей Сп Тгтр Меї
Зо
Сіу Тгтр Пе Азп Тниг Авр бег Спу Сіи Зег ТАг Туг Аіа Спи Си Ре 60 35
Гуз Спу Агу РНе Маї Рне 5ег ей Авр Тнг Зег Ма! Азп ТНг Аа Туг 65 70 75 80 40 Ї еи СіІп Пе ТНг 5ег І єи ТНг АіІа Сіи Авр ТНг Спу Меї Туг Рне Суз
85 90 95
Ммаї Ага Маї Сіу Туг Ар Аїйа І єи Ар Туг Тгр Спу Сіп Спу ТАг Гей 100 105 110 маї Тнг Маї Зег Зег 115 «2105» 40 «2115 5 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІС ЕГЕАТОВЕ 20. «222» (1)..(5) «223» СОВ1 варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тА 4 «4005» 40
Авп Туг Су Меї Авп 1 5 «2105 А
Зо «2115 16 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..416) «223» СОВ2 варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тА 4 «4005 41
Тер Пе Авп ТАг Авр 5ег Сіу Спи Зег ТНг Туг Аіа Си Спи Рпе Гуз 1 5 10 15 «2105» 42 «2115» 8 «212» РВТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..(8) «223» СОРВЗ варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тА 4 «4005» 42 маї Сіпу Туг Азр Аа І єи Азр Туг 1 5 «2105 43 «2115» 106 25. «212» РВАТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «2215 МІБС ГЕАТОВЕ «222» (1)..01106) «223» варіабельний домен легкого ланцюга РО-1 тА 4 «-4005 43
Сп Пе Маї Г еи Тнг Сп бег Рго бЗег 5ег І єи 5ег Аа 5ег Маї Су 1 5 10 15
Ар Аго Маї ТА Пе Тниг Суз 5ег Аа Агу 5ег 5ег Ма! Зег Туг Меї
20 25 0)
Ні Ттр Рпє Сп Сп Гуз Рго Спу Гуз Аа Рго Гуз І єи Ттр Пе Туг 35 40 45
Агу Тнг Зег Авп І еи Аа 5ег Сіпу Маї Рго 5ег Агу Рпе Зег Спу Зег 50 55 60 сСіу Зег Спу Тиг Зег Туг Суз І ви Тит Пе Авп 5ег ГГ еи Сп Рго Спи 65 70 75 80
Азр Ре Аа Тпг Туг Туг Сувз Сип Сп Агу Зег Зег РНе Рго І еи ТНг 85 90 95
Рпе Спу Спу Спу ТАг Гуз Геи Спи Пе Гув 100 105 «210» 44 «2115 10 «2125 РВАТ «213» Ми5 тивсшШ5
Зо «220» «221» МІС РЕАТОВЕ «реа» (1)..010) «223» СОВ1 варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тА 4 «400» 44 зЗег АІа Агу 5ег Зег Ма! Зег Туг Меї Нів 1 5 10
«210» 45 «2115 7 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «дод» (1)..(7) «223» СОВ2 варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тА 4 «4005» 45
Агу Тниг Зег Авп І еи Аа 5ег 1 5 «210» 46 «2115» 9 20. «212» РАТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ЕГЕАТОВЕ «222» (1)..(9) «223» СОРВЗ варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тА 4 «4005» 46
Зо
Сп Сп Агу бег бег РНе Рго І єи ТНг 1 5 «210» 47 «2115» 120 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5
«221» МІС РЕАТОВЕ «реа» (1).4120) «223» Варіабельний домен важкого ланцюга мишачого антитіла 405 «4005» 47
Сп Маї Стій Ї ви Сп Спи бег Спу Ро Сім Гей Ма! Гуз Рго Сіу Аа 1 5 10 15 зегі ви Гуз І єи 5ег Суз ТНг Аа Зег СпПу Рпе Авп Пе Гуз Авр Тиг 20 25 0)
Туг Пе Ніз Тгр Маї Гуз Сип Агу Рго Спи Сп Спу Гей Си Тер Пе 35 40 45
Сіу Ага Іе Туг Рго ТНг Авп Сіу Туг ТНг Ага Туг Авр Рго Гуз Рпе 50 55 бо
Сіп Авр Гуз Аа ТНг Пе Тнг Аа Авр Тнг 5ег Зег Азп Тиг Айїа Туг
Х65 70 75 80
Ї еи СіІп Маї бЗег Ага І єи ТНг Зег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув 85 90 95
Зо зЗег Аг Ттр Спу Сіу Азр Спу РНе Туг Аіа Меї Азвр Туг Тгтр Сіу Сп 100 105 110
З5
Сіу Аа 5ег Ма! ТАг Ма! Зег Зег 115 120 «2105» 48
«2115 120 «2125 РВАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Варіабельний домен важкого ланцюга гуманізованого антитіла 405 «4005» 48
Сім Маї Сіп Г еи Ма! Спи Зег Сіу Сіу Спу Геи Маї Сіп Рго Спу Спу 1 5 10 15
Зег ей Аг І еи бег Суз Аа Аа Зег Спу Рпє Авп Іе Гуз Авр Тиг 0)
Туг Пе Ніз Тгр Маї Аго Сіп Аїа Рго Сіу Гуз Спу І еи Спи Тр Маї 20 35 40 45
Аа Ага Іе Туг Рго ТНг Авп сту Туг ТНг Аго Туг Аа Авр 5ег Маї 50 55 60 25
Гуз Спіу Ага Ре ТНг Пе 5ег Аа Авр Тнг 5ег Гуз Авп Тиг Аїа Туг 65 70 75 80
Зо
Ї еи Сп Меї Авп 5ег І ви Агу Аа Сіи Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Суз 85 90 95
Бег Ага Тр Сіу Спіу Азр Сіу РНе Туг Аа Меї Авр Маї Тгтр Сіпу Сп 100 105 110
СІу Ти еи Маї Тнг Маї 5ег 5ег 115 120
«210» 49 «2115 217 00о«212» РАТ «213» Ното зарієп5 «220» «2215 МІЗБС ГЕАТОВЕ «222» (1).217) «223» РЕс-ділянка Їдс1 «220» «2215 МІЗБС ГЕАТОВЕ «222» (217).(217) «223» де Х являє собою лізин (К) або відсутній «4005» 49
Аа Рго Сі І єи Ї єи Спу Спу Рго 5бег Маї РНе І єи РНе Рго Рго І ув 1 5 10 15
Рго Гуз Авр Тиг Геи Ме! Пе 5ег Ага Тнг Рго Сім Маї Тнг Суз Маї 20 25 0) маї Маї Авр Маї 5ег Ніз СіІи Авр Рго Сіи Маї Гу5 Рне Авп Тр Туг 0) 35 40 45 маї Азр Сіу Маї Спи Маї Ні Авп Аа Гуз ТАг Гуз Рго Агу Сіи Сі 50 55 60
З5
Сіп Туг Азп Зег ТНиг Туг Аг Маї Ма! 5ег Ма! І єи Тнг Ма! І єи Нів 65 70 75 80
Сіп Авр Тгр І єи Авп Су Гуз Спи Туг Гуз Сув Гуз Маї 5ег Авп ГГ ув 85 90 95
Аа! єи Рго Аа Рго Ме Спи Гув ТНг Пе Зег Гуз Аа Гуз Спіу Сп 100 105 110
Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг І єеи Рго Рго Зег Агу Сім Спи Меї 115 120 125
ТАг Гуз Азп Сп Маї 5ег І єи Тнг Суз І еи Ма! Гуз Спіу Рне Туг Рго 130 135 140 зЗег А5р Іе Аа Маї Спи Тгр Сіи Зег Авп Спу Сіп Рго Спи Ап Авп 145 150 155 160
Туг Гуз Тиг ТНиг Рго Рго Маї І еи Авр 5ег Авр Сіу Зег Рпеє Ре І єи 165 170 175
ТугзЗег Гуз І еи ТНг Маї Авр Гуз Зег Агу Тр Сп Сп Спіу Авп Маї 180 185 190
Рпе 5ег Суз Зег Ма! Меї Нів Спи Аа І єи Ні Авп Нів Туг ТАг Сп 195 200 205
Гуз 5ег І еи Зег І ви Зег Рго Спіу Хаа 210 215
З5 «2105» 50 «2115 216 «2125 РВАТ «213» Ното зарієп5
«221» МІС РЕАТОВЕ 00о«рд2о» (1).216) «223» Домен СН2-СНЗ ілюстративного ЇДС12 людини «220» «221» МІЗБС РГЕАТОВЕ «222» (216).(216) «223» де Х являє собою лізин (К) або відсутній «4005» 50
Аа Ріо Рго Маї Аїа Сіу Рго 5ег Маї Рне ГІ єи РНе Рго Рго Гуз Рго 1 5 10 15
Гуз А5р ТАг ГГ еи Ме! Пе Зег Агу ТАг Рго Сім Ма! Тнг Суз Маї Маї 20 25 0) маї Авр Маї 5Зег Ні Сім Авр Рго Сім Ма! Сіп Рне Авп Тгр Туг Маї 35 40 45
Азр Сту Маї Сіи Маї Ні Авп Аїа Гуз ТНг Гуз Рго Агу Сім Спи Сп 50 55 60
Зо
Рпе Авп 5ег Тниг Рне Аг Маї Маї Зег Ма! Геи Тиг Маї Маї Нів Сип 65 70 75 80
Авр Пр еи Авп ау Гуз Сім Туг Гуз Суз Гуз Ма! Зег Авп Гуз Спу 85 90 95
Ї еи Рго Аїа Рго Іе Спи Гув Тнг Пе 5ег Гув ТНг Гув Спу Сп Ро 100 105 110
Ага Сіи Рго Сіп Маї Тук Ти Гей Рго Рго 5ег Агу Сім Спи Меї ТНг 115 120 125
Гуз Азп СіІп Маї 5ег І єи ТНиг Суз І єи Ма! Гуз Сіу Рне Туг Рго 5ег 130 135 140
Азр ІПе Зег Ма! Спи Ттр Сіи Зег Авп Сіу Сп Рго Спи Авп Авп Туг 145 150 155 160
Гуз Тнг ТАг Рго Рго Меї І єи Авр 5ег Авр Стпу 5ег Ріє РнНе І єи Туг 165 170 175 зЗег Гуз І еи Тниг Маї Авр Гуз Зег Ага Ттр Сп Сіп Сіу Азп Маї Рпе 180 185 190 зЗег Суз Зег Ма! Меї Ні Сім Аа Геи Нів Авп Ні Туг Тиг Сп Гув 195 200 205 зЗегіІ еи 5ег І єи бег Рго Сіу Хаа 210 215
Зо «2105 51 «2115 217 «212» РВТ «213» Ното зарієп5 «220» «221» МІС РЕАТОВЕ «дод» (1).217) «223» Домен СН2-СНЗ ілюстративного ЇДИЗ людини
«221» МІЗБС РГЕАТОВЕ «222» (217).(217) «223» де Х являє собою лізин (К) або відсутній «4005 51
Аа Рго Сі І єи Ї єи Спу Спу Рго 5бег Маї РНе І єи РНе Рго Рго І ув 101 5 10 15
Рго Гуз Авр Тнг ГГ еи Меї Пе 5ег Агу ТНг Рго Сім Ма! Тнг Суз Маї 20 25 0) маї Маї Азр Маї 5ег Ніз Сім Авр Рго Сіи Маї Сіп Рне Гуз Тр Туг 35 40 45 маї Азр Сіу Маї Сім Маї Ні Авп Аа Гуз ТАг Гуз Рго Агу Сіи Си 50 55 60
Сп Туг Авп бег ТНг РНе Агу Маї Маї 5ег Ма! І єи Тниг Ма! І єи Нів 65 70 75 80
Сіп Авр Тгр Гей Авп Су Гуз Спи Туг Гуз Сув Гуз Маї Зег Авп ГГ ув 85 90 95
Аа І єи Рго Аа Рго Пе Спи Гуз Тит Пе бег Гуз ТНг І ув Спу Сп 100 105 110
Рго Ага Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг І еи Рго Рго Зег Агу Сім Спи Меї 115 120 125
ТАг Гуз Азп Сп Маї 5ег І єи Тнг Суз І еи Ма! Гуз Спіу Рне Туг Рго 130 135 140
Бег Авр Іе Аа Маї Сіи Ттр Спи бег Зег Спу Сп Рго Спи Авп Авп 145 150 155 160
Туг Азп Тит Тнг Рго Рго Меї І еи Авр бЗег Авр Сіпу бег РНе РнНе І еи 165 170 175
Туг Зег Гуз Геи ТАг Маї Авр Гуз 5ег Ага Тр Сп Сп Спу Авп Пе 180 185 190
Рпе 5ег Суз Зег Ма! Меї Ніз Сім Аїйа І єи Ні Авп Агу РНе ТАг Сп 195 200 205
Гуз 5ег І еи Зег І ви Зег Рго Спіу Хаа 210 215 «2105 52 «2115 217 «212» РВТ «213» Ното зарієп5
Зо «220» «221» МІБС ГЕАТОВЕ «дод» (1).217) «223» Домен СН2-СНЗ ілюстративного ЇДС4 людини «220» «221» МІБС ГЕАТОВЕ «дод» (217).4(217) «223» де Х являє собою лізин (К) або відсутній
«4005 52
Аа Рго Сім Ре Геи Спу Спу Рго 5ег Маї Ре Геи Рне Рго Рго ГГ ув 1 5 10 15
Рго Гуз Авр Тнг ГГ еи Меї Пе 5ег Аг ТНиг Рго Спи Ма! Тнг Суз Маї 20 25 0)
Маї Маї Азр Маї 5ег Сіп СП Авр Рго Сім Маї Сіп Рне Авп Тгр Туг 35 40 45
Маї Авр Суу Маї Спи Маї Ні Авп Аїа Гуз ТАг Гуз Рго Аг Сіи Си 50 55 60
Сіп Рне Авп 5ег ТНиг Туг Ага Маї Маї 5ег Маї Геи ТАг Ма! Геи Нів 65 70 75 80
Сіп Авр Тгр Гей Авп Су Гуз Спи Туг Гуз Сув Гуз Маї Зег Авп ГГ ув 85 90 95
Су Г єи Рго Зег Бег Пе СПм Гув ТНг Пе Зег Гуз Аа Гуз Спу Сп 100 105 110
Зо
Рго Аг Сім Рго Сіп Маї Туг ТАг І еи Рго Рго Зег Сп Сім си Меї 115 120 125
ТАг Гуз Авп ап Маї Зег І єи ТАг Суз І ви Ма! Гуз Спу РНе Туг Рго 130 135 140 зЗег А5р Іе Аа Маї Спи Тгр Сіи Зег Авп Спу Сіп Рго Спи Ап Авп (145 150 155 160
Туг Гуз Тиг ТНиг Рго Рго Маї І еи Авр 5ег Авр Сіу Зег Рпеє Ре І єи 165 170 175
Туг Зег Ага Геи ТНг Маї Авр Гуз Зег Ага Тгр Сп Сім Сіу Авп Маї 180 185 190
Рпе 5ег Суз Зег Ма! Меї Нів Спи Аа І єи Ні Авп Нів Туг ТАг Сп 195 200 205
Гуз Зегі еи 5ег і єи Зег І еи Спіу Хаа 210 215 «2105 53 20. «2115 116 «2125 РВАТ «213» Ми5 тив5сши5 25 «220» «221» МІС ГЕАТОВЕ «222» (1)..4116) «223» варіабельний домен важкого ланцюга РО-1 тАбБ 5
Зо «-4005 53
Сім Маї Сіп Г еи Ма! Спи Зег Сіу Сіу Спу Геи Маї Сіп Рго Спу Спу 1 5 10 15 35 зЗег І ей Ага І єи бег Суз Аа Аа бег Сіу РНе Маї Рне 5ег 5ег РНе 0) ау Меї Ніз Тгтр Маї Агу Сп Аа Рго Спу Гуз Спу Геи Сім Тер Маї
35 40 45
Аа Туг Пе Зег Зег Сіу Зег Меї 5ег Пе 5ег Туг Аіа А5р ТАг Маї 50 55 бо
Гуз Спу Ага Ре Тнг Іе 5ег Ага Азвр Авп Аа Гуз Авп ТНг І єи Туг 65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп 5ег І ви Агу ТНг Си Авр ТАг Аа Г еи Туг Туг Суб 85 90 95
Аа 5ег І еи Зег Авр Туг Ре Авр Тут Ттр Спу Сип Спіу Тиг ТАг Маї 100 105 110
ТигМаї Зег Зег 115 «2105 54 «2115 5 «212» РВАТ «213» Ми5 тив5сши5
Зо «220» «221» МІЗБС РЕАТОВЕ «реа» (1)..(5) «223» СОК1 варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ 5 «4005 54
Зег Рпе Спу Меї Нів 1 5
«2105 55 «2115 17 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «дод» (1).4117) «223» СОВ2 варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ 5 -4005 55
ТупПе 5ег Зег Сіу Зег Меї 5ег Пе 5ег Туг АІа Азр ТНг Маї І ув 1 5 10 15 спіу «2105 56 «2115 7 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ 00«222» (1)..(7) «223» СОРВЗ варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ 5 «-4005 56
Гей Бег Авр Туг Рпе Авр Туг 1 5 «2105 57 «2115 112
«2125 РВАТ «213» Ми5 тивсшШ5 «220» «221» МІС РЕАТОВЕ «222» (1)..1112) «223» варіабельний домен легкого ланцюга РО-1 тАБ 5 «4005 57
Азр Маї Ма! Меї Тиг Сп 5ег Рго Гей Зег ГГ еи Рго Маї ТНг І еи Спу 1 5 10 15
Сіп Рго Аа 5ег Пе бег Сувз Агу Зег Бег Сіп 5ег ГІ еи Маї Ні 5ег 0) 20 Тигаїу Авп ТАг Туг Гей Нів Тр Туг І ви Сип Гув Рго Спу Сп Зег
Рго Сп І єи Геи Пе Туг Ага Маї Зег Азп Агу РНе Зег Сіу Ма! Рго 25 50 55 бо
Азр Агу Ре 5Бег Спу 5ег Спу 5ег Спу ТНиг Авр РНе ТнНг І єи Гуз Пе 65 70 75 80
Зо зЗег Аг Маї Спи Аа Спи Ар Маї Сіпу Маї Туг Туг Суз Зег СіІп ТНг 85 90 95
З5
Тиг Ні Маї Рго Тгтр Тнг Рпе Стпу Спіп Спу ТАг Гуз Гей Спи Пе Гув 100 105 110 40 «2105» 58
«2115 16 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..416) «223» СОВ1 варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАбБ 5 «4005 58
Аг Зег Зег Сп 5ег І еи Маї Ні5 Зег Тиг Спу Авзп Тиг Туг Г еи Ніб 1 5 10 15 «2105 59 «2115 7 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ 25. «222» (1).(7) «223» СОВ2 варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАбБ 5 «4005» 59
Аго Маї бег Авп Агу Рпе 5ег 1 5 «210» 60 «2115» 9 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220»
«221» МІБС ГЕАТОВЕ «222» (1)..(9) «223» СОРВЗ варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАбБ 5 «4005» 60 зег Сп ТАг ТАгк Ніз Маї Рго Ттр Тиг 1 5 «2105 61 «211» 119 «212» РВТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «221» МІБС ГЕАТОВЕ «д22» (1)..4119) «223» варіабельний домен важкого ланцюга РО-1 тАБ 6 «220» «221» МІБС ГЕАТОВЕ «222» (А8).(48) «223» Хаа являє собою Ізолейцин (І) або Аланін (А) «4005 61
Сп Маї Сій І єи Маї Сіп бЗег Спіу Аа Спи Маї Гуз Гуз Рго Спу Аа
Ко) 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї Бег Суз Гуз Аа бег Спу Туг Зег Рпе Тнг 5ег Туг 20 25 Зо
Тр Меї Авп Тр Маї Ага Сп Аа Рго Спіу Сіп Спу Геи Спи Тер Хаа 35 40 45
Стпу Ма! Пе Нів Рго 5ег Азр 5ег Спи ТНг Тр І єи Азр Сп Гуз Рпе 50 55 60
Гуз А5р Аго Маї Тит Пе Тнг Маї Авр Гуз бег Тпг Зег ТНг Аа Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Аа Ага Сім Ні Туг Спу Тиг 5ег Рго РНе Аа Туг Тгтр Спу Сп Спу 100 105 110
Тиг Ге Маї Тниг Ма! бег Зег 115 «2105» 62 «2115 5 «212» РВТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1).(5)
Зо «223» СОВ1 варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тА 6 -4005 62 зЗег Туг Ттр Меї Авп 1 5 «2105» 63 «2115 17 «212» РАТ
«2135» Мив5 тивсшив5 «221» МІЗС ЕГЕАТОВЕ «дод» (1).4117) «223» СОВ2 варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тА 6 «-4005» 63 ма! Ме Нів Рго Зег Авр бег Сіи ТНг Тгр Гей Авр Сп Гуз РНе І уз 1 5 10 15
Авр «2105» 64 «2115 10 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..410) «223» СОРВЗ варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тА 6 «4005» 64
Спи Ні Туг Спу Тнг бЗег Рго Рнеє Ага Туг 1 5 10 «-2105» 65 «2115 111 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5
«221» МІС РЕАТОВЕ «222» (1)..4111) «223» варіабельний домен легкого ланцюга РО-1 тА 6 «220» «221» МІЗБС РГЕАТОВЕ «рег» (26)..(26) «223» Хаа являє собою Аспарагін (М) або Серин (5) «220» «221» МІЗБС РГЕАТОВЕ «ре2» (58)..(58) «223» Хаа являє собою Глутамін (0) або Аргінін (В) «400» 65
Сі Пе Маї Геи Тит Сп Зег Рго Аа ТНг І еи Зег І ви Зег Рго Спу 201 5 10 15
Сім Ага Аа ТНг ГГ еи Зег Суз Агу Аїа Хаа Сім 5ег Маї А5р Авп Туг 0) 25
Сіу Меї 5Зег Ріє Меї Авп Тгр РНе Сп Сп Гуз Рго Спу Сп Рго Рго
Зо
Гуз Гени І єи Пе Ні Аа Аа 5ег Авп Хаа Сіу Зег Сіу Маї Рго 5ег 60 35 Ага РНе 5ег Сіу бег Сіу бЗег Спіу Тиг Азр РНе ТНг Гей ТНг Пе 5ег 65 70 75 80 зег І ви Сім Рго Сім Авр Ре Аа Маї Туг Рпе Суз Сп Сип Зег Гуз 40 85 90 95
Сі Маї Рго Туг Тиг Рне Спіу Спу Спу Тнг Гуз Маї Спи Пе Суб 100 105 110 «2105» 66 «2115 15 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ 15. «222» (1)..(15) «223» СОВ1 варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАбБ 6 «220» «221» МІС ЕГЕАТОВЕ 20. «222» (3)..(3) «223» Хаа являє собою Аспарагін (М) або Серин (5) «400» 66
Ага Аа Хаа Сіи 5ег Ма! Азр Авп Туг Сіу Меї Зег Рпе Меї Ап 1 5 10 15 «2105» 67
Зо «2115 7 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «дод» (1).(7) «223» СОВ2 варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАбБ 6 «220»
«221» МІС ЕГЕАТОВЕ «222» (5)..(5) «223» Хаа являє собою Глутамін (С) або Аргінін (В) «4005» 67
Аа АІа бЗег Авп Хаа Спу 5ег 1 5 «2105» 68 «2115» 9 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..(9) «223» СОРВЗ варіабельного домену легкого ланцюга РО-1 тАБ 6 -4005» 68
Сіп Сп бег Гуз Спи Маї Рго Туг ТНг 1 5 «2105» 69 «211» 119 00«212» РАТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ЕГЕАТОВЕ «д22» (1)..4119) «223» варіабельний домен важкого ланцюга РО-1 тАбБ 7 «220» «221» МІС ЕГЕАТОВЕ
«д22» (1)..4119) 223» де Х1 являє собою М або А; Х2 являє собою 5 або С;
ХЗ являє собою У або Т; Х4 являє собою І або А;
Х1 являє собою У, Х2 являє собою 5, ХЗ являє собою У, а ХА являє собою і ; або Х1 являє собою А, Х2 являє собою С, ХЗ являє собою Т, а Х4 являє собою А «400» 69
Си Маї Сип Ї еи Ма! Спи Зег СПу СпПу Сну І еи Хаа Аг Рго Спу Спу 1 5 10 15 зегі ви Гуз І єи Зег Суз Аа Аа 5ег Спу Рне Тиг Рне 5ег Зег Туг
Зо
Ї еи Маї Хаа Тгр Маї Аг Сіп Аа Рго Су І уз СПУ Ї єи Си Тгтр Хаа 35 40 45 20
Аа Тиг Пе Зег Сіу Сіу Спу Спу Авп ТНг Туг Туг Зег Ар 5ег Маї 50 55 60 25
Гуз Спіу Ага Ре Тнг Іе 5ег Ага Авр Авп Аа Гуз Авп 5ег І еи Туг 65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп 5ег Хаа Агу Аа Си Авр ТНг Аа Тнг Туг Туг Суз 85 90 95
Аа Ага Туг Сіу РНе Азр Су Аа Тер РНе Ага Туг Ттр Сіу Сіп Спу 100 105 110
Тиг Ге Маї Тниг Ма! бег Зег 115
«2105 70 «2115 5 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ 10. «222» (1).(5) «223» СОВ1 варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ 7 «220» «221» МІС ЕГЕАТОВЕ 15. «222» (5).(5) «223» Хаа являє собою Серин (5) або Гліцин (С) «-4005 70 зе ТугІ єи Маї Хаа 1 5 «2105 71 «2115 17 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5
Зо «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «дод» (1).4117) «223» СОВ2 варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ 7 «4005 71
Тпиг Пе Зег СПу Спу СПу Спу Азп ТНг Туг Туг Зег Авр Зег Маї Г ув 1 5 10 15 спіу «-2105 72 «-2115 10 «212» РВТ «213» Мив5 тивсици5 «020» «221» МІБС ЕГЕАТОВЕ «222» (1)..(10) «223» СОРВЗ варіабельного домену важкого ланцюга РО-1 тАБ 7 «4005 72
Тугачїу Рне Авр Су Аа Тір Ре Аа Туг 1 5 10 «-2105 73 «-2115 107 «212» РВТ «213» Мив5 тивсици5 «020» «221» МІБС ЕГЕАТОВЕ «222» (1)..(107) «223» варіабельний домен легкого ланцюга РО-1 тАБ 7 «020» «221» МІБС ЕГЕАТОВЕ «222» (1)..4107) 223» де Х1 являє собою М або 5, а Х2 являє собою М або 0;
Х1 являє собою 5, а Х2 являє собою М; або Х1 являє собою М, а Х2 являє собою Ю «4005» 73
Азр Пе Сип Меї ТАг Сп Зег Рго Зег Зег І ви Зег Аа 5ег Ма! СПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тнг Пе Тнг Суз Агу Аа бег Сім Авп Пе Туг Хаа Туг 20 25 0)
Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Стпу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45
Туг Хаа Аа Гуз ТнНг І єи Айа Аа Сту Маї Рго 5ег Ага РНе 5ег Спу 50 55 бо
Зег Сіу Зег Сіу Тиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе Зег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Суз СіІп Ні Ні Туг Аіа Маї Рго Тр 85 90 95
Тиг Ре Сатпу Сип Спу ТАг Гуз Гей Спи Пе Гув 100 105
Зо «2105» 74 «2115 11 «2125 РВАТ «213» Ми5 тивсшШ5
З5 «220» «221» МІС РЕАТОВЕ «222» (1)..111) «223» СОКІ1 з РО-1 тАбБ 7
«221» МІЗС ГЕАТОВЕ «дод» (1).411) «223» Хаа являє собою Аспарагін (М) або Серин (5) «4005» 74
Ага Аа 5ег Сім Авп Пе Туг Хаа Туг І єи Аа 1 5 10 «2105 75 «2115 7 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ 20. «222» (1)..(7) «223» СОВІ2 з РО-1 тАБ 7 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ 25. «вда» (1)..1) «223» Хаа являє собою Аспарагін (М) або Аспартат (0) «4005 75
Хаа Аа Гуз ТНг І єи АЇа Аа 1 5 «2105 76 «2115» 9 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220»
«221» МІС РЕАТОВЕ «реа» (1)..(9) «223» СОКІЗ з РО-1 тАбБ 7 «4005 76
Сіп Ні Ні Туг Ага Ма! Рго Тр Тиг 1 5 «-2105 77 «2115 117 «2125 РВАТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «221» МІС РЕАТОВЕ «222» (1)..4117) «223» варіабельний домен важкого ланцюга РО-1 тА 8 «4005 77
Сім Маї Сіп Г еи Ма! Спи Зег Счу Сіу Спу Геи Маї Агу Рго Спу Спу 1 5 10 15 зег І ви Аго І єи 5ег Суз Аїа Аа 5ег Спіу Рне Тиг Ріє 5ег Зег Туг 20 25 0)
Зо
Ї ем Пе Зег Тгр Маї Аг Сіп Айїа Рго Сіу Гуз Спу І еи Спи Тр Маї
З5
Аа Аа Пе Зег Спу Спу Спу Аа Авр Тнг Туг Туг Аа Авр 5ег Маї 60 40 Гуз Спіу Ага Ре Тнг Іе 5ег Ага Авр Авп Аа Гуз Авп 5ег І еи Туг
65 70 75 80
Ї еи Сп Меї Авп 5ег І еи Агу Аа Сіи Авр ТНг Аа Тнг Туг Туг Суб 85 90 95
Аа Агу Ага Стпу Тпиг Туг Аа Меї Азвр Туг Ттр Спу Сіп Спу Тиг еи 100 105 110 маї Тнг Маї Зег 5ег 115 «2105 78 «2115 5 «212» РВТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..(5) «223» СОКНІ з РО-1 тА 8 -4005 78 зЗег Тугпі еи Пе 5ег 1 5 «2105» 79 «2115 17 «212» РАТ «2135» Мив5 тивсшив5 «220» «221» МІС ЕГЕАТОВЕ
«дод» (1).4117) «223» СОРН2 з РО-1 тАБ 8 «4005 79
Аа Пе Зег СПу Спу Спіу АІа Авр ТАг Туг Туг Аіа Авр 5ег Маї ГГ ув 1 5 10 15 130 ау «210» 80 «2115» 8 «212» РВТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..(8) «223» СОРНЗ з РО-1 тАБ 8 «400» 80
Агоу сту Тниг Туг Аіа Меї Азвр Туг 1 5
Зо «2105 81 «2115 107 «212» РВТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..0107) «223» варіабельний домен легкого ланцюга РО-1 тА 8
«4005 81
Азр Пе Сип Меї ТАг Сп Зег Рго Зег Зег І ви Зег Аа 5ег Ма! СПу 1 5 10 15
Азр Аг Маї Тиг Пе Тнг Суз Агу Аа Зег Сім Авп Пе Туг Авп Туг 20 25 0)
Ї еи Ага Тр Туг СіІп Сп Гуз Рго Стпу Гуз Айа Рго Гуз І єи Геи Пе 35 40 45
Туг Авр Аа Гуз ТНг Геи Аїйа Аа Сту Маї Рго 5ег Агу РНе Зег Спу 50 55 60
Зег Сіу Зег Сіу Тиг Азр Ре Тнг І єи Тнг Пе Зег 5ег І єи Сп Рго 65 70 75 80 сій Авр РНе Аа Тнг Туг Туг Суз Сп Нів Ніз Туг Аїа Маї Рго Тр 85 90 95
Тиг Ре Сатпу Сип Спу ТАг Гуз Гей Спи Пе Гув 100 105
Зо «2105» 82 «2115 11 «2125 РВАТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «221» МІС РЕАТОВЕ «222 (1)..111)
«223» СОКІ1 з РО-1 тАбБ 8 -4005» 82
Ага Аа бег Сім Авп Іе Туг Авп Туг І єи Аа 1 5 10 «2105» 83 «2115 7 «212» РАТ «213» Ми5 тив5сши5 «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..(7) «223» СОКІ2 з РО-1 тАбБ 8 -4005 83
Авр Аа Гуз ТНг І ви Аа Аа 1 5 «2105» 84 «2115» 9 «212» РАТ «213» Ми5 тив5сши5
Зо «220» «221» МІЗС ГЕАТОВЕ «222» (1)..(9) «223» СОКІЗ з РО-1 тАбБ 8 «4005» 84
Сіп Ні Ні Туг Аа Маї Рго Тгр ТНг 1 5
«2105» 85 «2115 107 «2125 РАТ -213» Штвтучна послідовність «220» «223» Домен каппа Сі. «4005» 85
Агу Тнг Маї Аа Аа Рго 5ег Ма! Рне Пе Рне Рго Рго 5ег Авр Си 1 5 10 15
Сіп Гей Гу5 Зег Спіу Тниг Аа 5Зег Маї Ма! Суз І еи ГГ еи Авп Авзп Ре 0) 20
Туг Рго Ага Сти Аїа Гуз Маї Сіп Тгр Гуз Маї Авр Авп Аа ГГ еи Сп 35 40 45 25 Бег Сіу Азп бег Сіп Спи бег Ма! ТНг Спи Стій Авр 5ег Гуз Авр 5ег 50 55 60
ТАг Туг ЗегІ еи бег бег ТНг І єи ТНг І єи 5ег Гуз Аіа Авр Туг См 65 70 75 80
Гуз Ні Гуз Маї Туг Аіа Суз Спи Маї ТНиг Ні Сіп Сіу Геи 5ег Зег 85 90 95
Рго Маї Тиг Гуз бег РНе Авп Агу Спіу Спи Сув 100 105
«210» 86 «2115 110 «2125 РВАТ «213» Ното зарієп5 «220» «221» МІС РЕАТОВЕ «реа» (1).4110) «223» Домен СНІ і стабілізований шарнір са «400» 86
Аа 5ег Тпг Гуз СПУ Рго 5ег Ма! Рне Рго Г єи Аа Рго Суз 5ег Ага 15. 1 5 10 15 зег Тиг Зег Си Зег ТАг Аа Аа І єи Стпу Суз І еи Маї Гуз Авр Туг 0) 20
Рпє Рго Си Рго Маї Тнг Маї Зег Тгтр Авзп Зег Спу Аа Геи Тнг Зег 35 40 45 25
Стпу Маї Ні5 Тнг РНе Рго Аїа Маї І єи Сп бег бег СПУ І єи Туг Зег 50 55 60
Гей Зег Зег Маї Ма! Тнг Маї Рго Зег Зег Зег І ви Спу Тиг Гув ТНг 65 70 75 80
Туг Тиг Суз Авп Маї Авр Ніз Гуз Рго 5ег Азп ТНг Гуз Маї Авр ГГ ув 85 90 95
Аго Маї Сім Зег Гуз Туг Спу Рго Рго Суз Рго Рго Суз Рго 100 105 110
«-2105» 87 «211» 445 «212» РВТ «213» Ми5 тив5сшив5 «220» «221» МІС РЕАТОВЕ 10. «222» (1)..(445) «223» повний важкий ланцюг РО-1 тАБ 6-І5О «4005» 87 ап Маї Сіп І еи Маї Сип Зег Спу Аа Сіи Маї Гуз Гув Рго Спу Аа 1 5 10 15 зег Ма! Гуз Маї Бег Суз Гуз Аа бег Спу Туг Зег Рпе Тнг 5ег Туг 20 25 Зо
Тр Меї Авп Тр Маї Ага Сп Аа Рго Сіу Сіп Сіу Геи Спи Тер Пе 35 40 45
Стпу Ма! Пе Нів Рго 5ег Азр 5ег Спи ТНг Тр І єи Азр Сп Гуз Рпе 50 55 60
Зо
Гуз Ар Ага Маї Ти Пе Тнг Маї Авр Гуз Зег Тпг Зег Тнг Аа Туг 65 70 75 80
Меї Сі І єи Зег 5ег І єи Ага бег Сім Авр ТНг Аа Маї Тут Туг Суз 85 90 95
Аа Ага Сі Ніз Туг Спу ТНг Зег Рго РНе Аїа Туг Тр Спіу Сп Спу 100 105 110
ТА єи Маї Тнг Маї бЗег 5ег Аа 5ег ТНг Гуз Спу Рго бег Ма! Рпе 115 120 125
Рго І єи Аа Рго Суз 5ег Агу бег Тиг Зег Си Зег ТАг Аа Аа І єи 130 135 140
Спу Суз І еи Маї І уз Авр Туг Рне Рго Си Рго Маї Тнг Маї 5ег Тр 145 150 155 160
Авп бег Су Аа І єи ТАг Зег Спу Маї Ні Тиг РНе Рго Аїа Маї Гей 165 170 175
Сп бег бЗег СПУ І и Туг Зег І еи 5ег бег Ма! Ма! Тнг Маї Рго 5ег 180 185 190 зЗег Зегі ви Сіу ТНиг Гуз ТНг Туг ТНиг Сувз Авп Маї Авр Нізв Гуз Рго 195 200 205 зЗег Авп ТНг Гуз Маї Авр Гуз Агу Маї Сіи Зег Гуз Туг Спу Рго Рго 210 215 220
Зо
Сув Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіши РнНє І єи Спіу Спіу Рго бег Ма! Рне 225 230 235 240
Ї еи Рне Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр Тпг І ви Ме! Пе 5ег Агу ТАг Рго 245 250 255
Сім Маї Тнг Суз Маї Маї Ма! Азр Маї 5Зег Сип Спи Авр Рго Сім Маї 260 265 270
Сіп Рне Авп Тр Туг Ма! Азр Сту Маї Спи Маї Нів Авп Аїйа Гуз ТНг 275 280 285
Гуз Рго Агу Спи Спи Сіп Ре Авзп Зег ТНг Туг Ага Маї Маї 5ег Маї 290 295 00
Ї єи ТНиг Маї І єи Ніз Сіп Авр Тр І єи Азп Су Гуз Спи Туг І уз Сув 305 з10 315 320
Гуз Ма! Зег Авп І уз Спу І еи Рго 5ег Зег Пе Спиши Гуз ТНиг Пе 5ег 325 330 335
Гуз Аа Гуз Су Сип Рго Агу Си Рго Сіп Маї Туг Тиг Г еи Рго Рго 340 345 350 зег Сп Си Си Меї ТАг Гуз Авп Сіп Маї Зег І єи Тниг Суз ГІ еи Маї 355 360 365
Гуз Спу Ре Туг Рго Зег Авр Іе Аа Маї Сім Тгтр Спи Зег Азп Спу 370 375 380
Зо
Сіп Рго Сім Авп Авп Туг Гуз Тпг ТНг Рго Рго Маї Г еи Авр 5ег Авр 385 390 395 400
Сспіу Зег Рпе Ре Г еи Туг 5ег Ага І єи ТНиг Маї Азр Гуз Зег Ага Тр 405 до 415
Сіп Си Су Авп Маї Рпе 5ег Суз 5ег Ма! Меї Ніз Сім Аїа І еи Нів 420 425 430
Авп Ні Туг Тиг ап Гуз Бег Геи Зег ГГ еи Бег І ви Спу

Claims (29)

435 440 445 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Варіантне химерне антитіло 405 у поєднанні з молекулою, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, для застосування у лікуванні раку у суб'єкта, який потребує цього, причому вказане варіантне химерне антитіло 405 містить варіабельний домен легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:4, і важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО:9, 5ЕО ІЮ МО:11 і БЕО ІЮ МО:13.
2. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за п. 1, де зазначена молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, є антитілом до РО-1 або його антигензв'язуючим фрагментом.
3. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за п. 2, де зазначене антитіло до РО-1 або його антигензв'язуючий фрагмент: (а) конкурує за зв'язування з РО-1 з ніволумабом, пембролізумабом, підилізумабом, антитілом ЕНІ12.2Н7, антитілом НРО-1 тАБ 2, антитілом пНРО-1 тАБ 7, антитілом ПРО-1 тАБ 9, антитілом ПРО-1 тАБ 15, антитілом РО-1 тАБ 6-І5О або антитілом до РО-1, вибраним з таблиці 1; або (5) містить три СОК важкого ланцюга й три СОК легкого ланцюга ніволумабу, пембролізумабу, підилізумабу, антитіла ЕН12.2Н7, антитіла НРО-1 тАбБ 2, антитіла ПРО-1 тАБ 7, антитіла ПРО-1 тА 9, антитіла ПРО-1 тАБ 15, антитіла РО-1 тАбБ 6-ІЗО або антитіла до РО-1, вибраного з таблиці 1; або (с) містить варіабельний домен важкого ланцюга й варіабельний домен легкого ланцюга Зо ніволумабу, пембролізумабу, підилізумабу, антитіла ЕН12.2Н7, антитіла ПРО-1 тАБ 2, антитіла НИРО-1 тАБ 7, антитіла НРО-1 тА 9, антитіла НРО-1 тА 15, антитіла РО-1 тАБ 6-І5О або антитіла до РО-1, вибраного з таблиці 1.
4. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за п. 2 або 3, де зазначене антитіло до РО-1 або його антигензв'язуючий фрагмент містить Ес-ділянку.
5. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за п. 4, де зазначене антитіло до РО-1 або його антигензв'язуючий фрагмент містить варіантну Ес-ділянку, що має щонайменше одну модифікацію в Ес-ділянці, яка зменшує АЮСсС-активність або Ес-ділянку
ІС.
6. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за п. 5, де зазначене антитіло до РО-1 або його антигензв'язуючий фрагмент містить варіант шарніра Ідс4, що містить стабілізуючу заміну.
7. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за п. 6, де зазначене антитіло до РО-1 або його антигензв'язуючий фрагмент містить варіант шарніра Ідс4, що містить заміну з228Р, пронумеровану за Кабаї.
8. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 2-7, де зазначене антитіло до РО-1 є ніволумабом, пембролізумабом, підилізумабом, антитілом ЕН1І2.2Н7, антитілом пНРО-1 тАБ 2, антитілом ПРО-1 тАбБ 7, антитілом НРО-1 тАбБ 9, антитілом ПРО-1 тАБ 15, антитілом РО-1 тАБ 6-І5О або антитілом до РО-1, вибраним з таблиці 1.
9. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 2-8, де: (а) зазначене варіантне химерне антитіло 405 призначене для введення у дозуванні приблизно 6-18 мг/кг, і зазначене антитіло до РО-1 призначене для введення у фіксованому дозуванні приблизно 100-500 мг; або
(р) зазначене варіантне химерне антитіло 405 призначене для введення у дозуванні приблизно 6-18 мг/кг, і зазначене антитіло до РО-1 призначене для введення у дозуванні приблизно 1-10 мг/кг.
10. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 2-9, де зазначене варіантне химерне антитіло 405 призначене для введення у дозуванні приблизно 6- 18 мг/кг кожні три тижні, а зазначене антитіло до РО-1 призначене для введення у фіксованому дозуванні приблизно 200 мг кожні три тижні.
11. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 2-9, де зазначене варіантне химерне антитіло 405 призначене для введення у дозуванні приблизно 6- 18 мг/кг кожні три тижні, а зазначене антитіло до РО-1 призначене для введення у дозуванні приблизно 1-10 мг/кг кожні три тижні.
12. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 9-11, де зазначене варіантне химерне антитіло 405 призначене для введення у дозуванні, вибраному з 6, 10, 15 і 18 мг/кг, кожні три тижні.
13. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 9, 11 або 12, де зазначене антитіло до РО-1 призначене для введення у дозуванні, вибраному з 1,2, 3 і 10 мг/кг, кожні три тижні.
14. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 1-13, де зазначене варіантне химерне антитіло 405 і зазначена молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, призначені для одночасного введення в одній фармацевтичній композиції.
15. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 1-13, де зазначене варіантне химерне антитіло 405 і зазначена молекула, яка специфічно зв'язує Зо рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, призначені для введення в роздільних фармацевтичних композиціях у межах 24-годинного періоду один від одного.
16. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 1-13, де один із зазначеного варіантного химерного антитіла 405 і зазначеної молекули, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, призначено для введення щонайменше через 24 години або більше після введення іншого із зазначеного варіантного химерного антитіла 405 і зазначеної молекули, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку.
17. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 1-16, де зазначеною злоякісною пухлиною є злоякісна пухлина, в якій експресується НЕК2г/пеи.
18. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за п. 17, де зазначеною злоякісною пухлиною є злоякісна пухлина молочної залози, злоякісна пухлина шлунка, злоякісна пухлина передміхурової залози, злоякісна пухлина матки, злоякісна пухлина яєчника, злоякісна пухлина товстої кишки, ендотеліальна злоякісна пухлина, карцинома наднирників, недрібноклітинна злоякісна пухлина легені, злоякісна пухлина голови й шиї, злоякісна пухлина гортані, злоякісна пухлина печінки, ниркова злоякісна пухлина, гліобластома або злоякісна пухлина підшлункової залози.
19. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 1-18, для застосування у додатковій комбінації з третім терапевтичним засобом, вибираним з групи, що складається з антиангіогенного засобу, протипухлинного засобу, хіміотерапевтичного засобу та цитотоксичного засобу.
20. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за п. 19, де третій терапевтичний засіб призначений для одночасного введення з зазначеним варіантним химерним антитілом 405 і/або зазначеною молекулою, яка специфічно зв'язує рецептор бо клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку.
21. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за п. 19, де третій терапевтичний засіб призначений для введення окремо від зазначеного варіантного химерного антитіла 405 і/або зазначеної молекули, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку.
22. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 1-21, де зазначене варіантне химерне антитіло 405 являє собою маргетуксимаб.
23. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 2-22, де зазначене антитіло до РО-1 являє собою пембролізумаб.
24. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 2-22, де зазначене антитіло до РО-1 являє собою ніволумаб.
25. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 2-22, де зазначене антитіло до РО-1 являє собою підилізумаб.
26. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 2-22, де зазначене антитіло до РО-1 містить варіабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга антитіла ПРО-1 тАбБ 2 - БЕО ІЮ МО:53 і БЕО І МО:57.
27. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 2-22, де зазначене антитіло до РО-1 містить варіабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга антитіла ПРО-1 тА 7 - БЕО ІЮ МО:61 і БЕО ІЮ МО:65.
28. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 2-22, де зазначене антитіло до РО-1 містить варіабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга антитіла ПРО-1 тА 9 - ЗЕО ІЮ МО:69 і ЗЕО ІЮ МО:73. Зо
29. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 2-22, де зазначене антитіло до РО-1 містить варіабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга антитіла ПРО-1 тАБ 15 - БЕО ІЮ МО:77 і БЕО ІЮ МО:81.
30. Варіантне химерне антитіло 405 та молекула, яка специфічно зв'язує рецептор клітинної поверхні або його ліганд, який регулює імунну контрольну точку, за будь-яким з пп. 2-22, де зазначене антитіло до РО-1 містить важкий ланцюг і легкий ланцюг антитіла РО-1 тАБ 6-І50 - ЗЕО ІЮ МО:88 і БЕО ІЮ МО:87.
19 о ЖОа Машача ОіІУМтТОо:нкЕ мати нУВ ТОК АСОСУМ Химерна МІУМТОоБЕКЕ МЕТО БЕТОКАВОрУМ Гуманізонана ПІСЕТОВЕВО БОАНЛУЗИКУТ ІТС АЗОСТУМ о За БО Мияшиача ТАЗА ТОСКе СНаРКЦОІЯ АВЕВУТОУВИ Химерня ТАЗА ОБИРКЬОІХ АВЕВУТОУРО Гуманізована ТАУАЖОКВ сКАВКБІч АБЕТКУ ве за ЕН Зо Міншача нЕТОЩКБОатТо ЕТЕТІОБУЄА ІНАУ ТОЮ Химерна ЕТСВАВОГИО КТЕТЕБЯРОВ КАМЮ Гуманізована вЕБсвВаБеотТОо тОТтІБОє БІНГАТУХСОО Минича НЕТТВеТЕСО ОТКІБІККА. ке ІВ НО: З Химерна КУТТРРКЕОв ОЗІКУВІК БО жо ЩО: 4 Гуманізована пЕутТтТвРТЕВО ЗІ ККТ БЕО ЖОВ МО:5
С чи 1
МТІ СМАК УКВОАН ОКСАНО ЕМІКІ ТІВ ЕН сВІ му БИ НІ СУСАР ОРОС ВАВ ІКОТХІ НОВО ЕКІОвІУРІМОУТИХ ЩО МТЗ ОУОіООЗКенО КРАНІ СТАВСЕМІКСГУІНКУКОВРЕОСЬКНІСВІВТНОУТНХ БИ -т УОМюЮВОорЕІМКРОАВІКОВСТАЗВЕМІКОТУІККУКОВЕКОСККІОВІУ РОК ВО МІ) ЗЕКРОоРКАКІТАарТахн ту сут АТУ СВ ВКоО КУ АНО НиМАУ тав 18 МІ БЕКРОЗКАТІТАВТВЗЯНТАтьОУВВІ ТКУ ВВ Емо ав вува 185 мг пПЕКЕОРКАТІТАТТЕНИТАУ ОУЕН ТИВСТАтУХСЕНКОЗОсКУАМОУВООСАДУТиВя 10 ят бРЕКОркАтТІВАрТОВЕТаУБОзнНогнЕровУТУСВНМЦОоПсЕАМИ ОО уви 138 твворовявоввовавеяє вввлавинасокаввановиовикнняй МТІі АБТЕСКІУКРОАРЕЗКИТВОСТААВССЬУКНУВЕВУ ТИВ ВОМНТКВАІ ВН 180 шт ВЕТКОРБеУКВЬАОВІКИрНОСТ АН ОСІУКОУКВЕРрУ КУН ОА рАМОВВ 188 МТЗ АВТБОРЖУКРОАРЧЕКВЕВОСТААБОСЬУКОХЕРЕВУТУВИНІВАЮТОСЬиИТЕВАТОВИ ХАЙ нт ОдЕТКЕРЕУКРІСАБТОЕКОТВОСТаАТОСІУКОКВЕРУКУВИНІОСАСТІЕУНТУКАМІВИЯ ВО МгЗ сОжБраВТУ ТУ ОТ УХсМУМККаМ ТКУ Вес НС ЕсТАКЕСЬШО 248 МЕ СТУП ЕлутУро оку УМНиВаМІУрКАУ висо ТНТсВросвАрРЕсе 34 МІЗ СОУЛЬЗАТУТУВаВЬИТОТУІСсМУМВК НИТКУ ВУВРКООКТНУСРВИРАВЕНШОЯ СО І ХІМ УТУРяЗВУРОТХІСсМУМНЕУОМ КУКИ УКРКСрКЕНТОСВвсвАрРЕТЬОВ ЗО МТІ РЕУКІБЕРКВКр МІВ ВЕУТСМУЧСУВНОг КУН век ТКеоЕвОВ ЗО МІ вЕУРІБВЕРКОТІМІЧНТВЕсТСУусУНиОвнеУКЕНиУУ во ЕУНВАКТЕРИШНОУМ ОО МІЗ веУКрБВОКеКОТІІЧНТРЕУТІУУЧПУЧНЕПРЕУКУМИТУПОУЕУННАКТКВрКЕСВ ЗО Ж ЕБУРТКРЕКАКИТІМІЗНІВЕІСУУУП НЕО УКЕМИХ УП ІУЕУНМАКТККНЕКИУМ ХО Мтї ТБКУУВТОТУ НО МЕС МСКиднКа РАВ МАО УТЬВРЕВНОВ ЗО МІХ втечу снОо очок АКІВКТІВКАКОВНВККИУЖТЬьРиВвОЕ ЗБ КЗ шТЬЕМУВУ То, МКК уУКСКиВикАСРАКІККТІІКАКВОРКЕРОУУТЬЕРШНОВ ЗЕО «т ВТЖНУсуЕиНО МКК СКУМкАЕАКіККТІЗКАКОВВЕРОУТЬСЕВНОК ЗВ МТІ БТКМОзаеМЬУКОоКти МІУ МЕХнсОоКЕМн ев ОК ЕріакоувКа Ви Яд ре ТЕМОУВТСвУКОКУМ УК ОоОеВиМУКІТеКУБОВрОВЕК БІК УЮКиКИІ Й МТЗ СТКМОжНТТОБУКОКУКОМ АЕН НОБЕНМУКІТКМОЗпОЕтвУВКТУрКвя ЗІ ШТ ГІКНОУЗБРСБУКОРУВОАИЄМНЕИМОСРЕВМУКТ ТЕТУ ОПОВ ЕБВКТ Юрка Зо вт) соситкеУнниАі нин оквьаняРОК я яко ха щи В Мт ООсМУкІсВуМмнраьиннУТОокЗБяаРИМ 50 ВО ХВ МО: МІ ООН тЕВсХУМНКАНМИУТОКНЬВЬЗВОК я вка хо зо:33 вт щюМУКчСВУМниАІНКНУТОКОЬЯВЯРОК З 0 вЕО б ЩО:
Фі.
ву Секція АС РЕКТ во Секція В: 405 ї-- че ЧИ ж тей нМ А. зе що Ж | щі ПИ пботнтеонюнтннкте 6.25 М ї в М В о зв З не ож же 0 Час е Час с ко 545 Секшя С: трастузумаб ЕР Шен ВИЗ в 1, ; Й ни законні АЙ м й з шк ї ке - « й ів га ща Козу У 2 ФнНг.
З як - 5 в. ж Я мов -- ТУ да ТУ ше; Ве ку як «вОоНавх пе Ві МО у у че Контроль г Ж Е. я Мк хо ВОК як ен кВ - ше сс у шк я їх щ ЕЕ З во ще че Контроль пе ВВ зв - в. мо ня уз в СЯ Авіме ма Ссварз-Асімкгімлі Секція АХ Секція В д - се ШК ь- х и ШЕ вет ян «СОЛЬЗЯВУ " ія х с, с мая т. 5. с Б Б Бі мсек 56 5 е - до те Конт мож зе Кит ща ) граь Ж 5 | Коритроль ше в Ея Ку я ЕН: з з з СЯ Я-ЕеМТІ (мке/мл) СЯ БЕМТІ (мкг млі Секшя С Секція
Фиг. 4
КАС пасе Б З ; щи. що | І шви т т вою З А фак 2 Е | си и щиу 7 | -к еди я у в. - о дит лина шин в шен шини ян вн: вн ин вини нин шин - о ка ще щі щ Дві -- РНЕ «в спЯОСЕСМТ саке «в. ОБ Мм297О «й СВІ еМТО ' он. 5 тен. ПС ВАя НАС. Найус 2000 4 с п-н РОБ ї 5 4 . - ненні (й в фрі амоБесмт у ях і | Я 8 і ке ж їй р Па ше а - о ва. БЕ зи щи ши т ха т я МНН кн 0 21 42 63 Дт
Фіг. 6
Секщшя А: КА. МИХ ЖаЙ чренн шк ше шин я зейрек праг ве (МеВ і її певен ВЕСНИ еВ х 7 щ ші що неірне ФВ М2ОТО (Мей) вві і оож-у т- РВБІМеВ) - 80 ей -а | . Ж І і ь. фент й ав : ше ши що а КУ. я ГІ В дя Секшя В: КЗ. СТВА ММ М чі -- опОБ-леМТ (МеВ) Б 1 --- сВарБЕеМТ (МеВ х шк сне ор МІВ (МеВ в Ка; ща 83 ща дя
Фіг. 7
І р! Дер о-е УЗ Во 4 У. що «оо Во і що о о-а ОО «ші ан ї ше Шон ще фо КУТЯ с В Ю щ | Щ- о КЕ ще ЩА МО чЯб0 зв 95 -й-е- сваОБеМмта -- соб свабЕЕеМТ о -- сВаОБДа -К- сеМмОБеМмтЯ -Ь.
Раз Фіг, 5
ОК ВК Я ШК ОВ Дон а її ше в. о п САМЕ ща НИ Ка МО
Ше. коза ше. ЕЕ нн ЕЕ ш ше шщ ше ше й вишня ше пе ють ле КІ п. Б що ЗанЕкех і; й - й 55 в ше Її кі: кщко Ж Ву ДЗ Я ОТ й КО ЕЕ Б ЗОНИ : с сі й і. Ве» : з ОО ОО М сь 1. о. й. ве в п ЩЕ о . а ЕЕ ї!. о ЗХ їх З АХУЗ хх хх МКМ, пе Ж г й ок ее В Я КЗ о та и й є й : ще Не ко й: ОК КК ОКХ ВАЛ ОО ви З й її о ше ж КОЖ с Ме ОБ ПУХУ ОК ж ж ОБ Секція Ко ШО. . в : . їх я в . ня Ко й Я КК КЗ ЗК ме БО подане щеня Секція Е ие Моя ще Як щі щі Ой Ето зак нан Секція їх 7 ой ЖК, ВО М БО В ВИД 5 : ; окція їі. зе ї З я яку уллллтвв «КМ Я й що х ОО Я Б Зо ВХ З: ХО Я й г Е к ЕН. в. - Е: йон я о 5 БИ 5 й З У ее а ся ЕХ З ОО ЗБ ї-" ВН КК: ОО ОХ СХ ЧУ 5 а БЕ г. а Кз щ й ще я я КИ ща ні й а вк и ї 1 й ХОМ я зе Є й а, до сей З щк й с х шу пот ше Є наш в щу Секша К сені пн о в Я й скря і Б ва: КК еВ ща ОХ с Єскця М
Фіг. 9
Секція АОМЦОА- МАЗІ (Мах не СОС КОМ вав -- сваОБРоМТО д і - СТО ЕМ дя 804 о-ен СнаОБ Ес ж Е ї еВ Трастузумай ОБ се сто мово в. Ї. заз о цвоц ЯНво азуя ВМ Секція В: МИХА М ОчМе оче МОБ ЕОМ я опа кеМмтТо 00004 -як ФімовЕоМта Я Я о-в- СТО Кот ж В я онко Трастузумай Ж , я 0 -е- смоБМмою ще Но Її Я. нн НК г чн а опопоомю Е. 4 -к че о ояеЕ они ее зон не цена
Фіг. 1
UAA201712418A 2015-06-12 2016-06-09 Комбінована терапія для лікування злоякісної пухлини UA125207C2 (uk)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562175039P 2015-06-12 2015-06-12
US201562211109P 2015-08-28 2015-08-28
US201562242640P 2015-10-16 2015-10-16
PCT/US2016/036608 WO2016201051A1 (en) 2015-06-12 2016-06-09 Combination therapy for the treatment of cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA125207C2 true UA125207C2 (uk) 2022-02-02

Family

ID=57504564

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201712418A UA125207C2 (uk) 2015-06-12 2016-06-09 Комбінована терапія для лікування злоякісної пухлини

Country Status (20)

Country Link
US (2) US11078279B2 (uk)
EP (1) EP3307240A4 (uk)
JP (2) JP2018516966A (uk)
KR (1) KR20180021774A (uk)
CN (2) CN107708666A (uk)
AU (2) AU2016276706B2 (uk)
BR (1) BR112017026704A2 (uk)
CA (1) CA2988602A1 (uk)
CL (1) CL2017003131A1 (uk)
GE (1) GEP20217271B (uk)
HK (1) HK1247129A1 (uk)
IL (1) IL256224B (uk)
MX (1) MX2017016071A (uk)
MY (1) MY194621A (uk)
PH (1) PH12017502270A1 (uk)
RU (1) RU2733315C2 (uk)
TW (1) TW201709929A (uk)
UA (1) UA125207C2 (uk)
WO (1) WO2016201051A1 (uk)
ZA (1) ZA201708225B (uk)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5555223B2 (ja) * 2008-04-02 2014-07-23 マクロジェニクス，インコーポレーテッド ＨＥＲ２／ｎｅｕ特異的抗体およびその使用方法
KR102193343B1 (ko) * 2012-05-15 2020-12-22 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Pd-1/pd-l1 신호전달을 방해하는 것에 의한 암 면역요법
TW201709929A (zh) * 2015-06-12 2017-03-16 宏觀基因股份有限公司 治療癌症的聯合療法
PE20231958A1 (es) 2015-07-30 2023-12-06 Macrogenics Inc Moleculas de union a pd-1 y metodos de uso de las mismas
CN108136010A (zh) * 2015-10-08 2018-06-08 宏观基因有限公司 用于治疗癌症的联合疗法
TW202208440A (zh) 2015-12-14 2022-03-01 美商宏觀基因股份有限公司 對於pd-1和ctla-4具有免疫反應性的雙特異性分子及其使用方法
TWI640536B (zh) 2016-06-20 2018-11-11 克馬伯有限公司 抗體
SG10201913263SA (en) 2016-09-29 2020-03-30 Beijing Hanmi Pharmaceutical Co Ltd Heterodimeric immunoglobulin constructs and preparation methods thereof
TN2019000161A1 (en) * 2016-11-18 2020-10-05 Beijing Hanmi Pharmaceutical Co Ltd Anti-pd-1/anti-her2 natural antibody structure-like bispecific antibody of heterodimeric form and preparation thereof
WO2019153200A1 (zh) * 2018-02-08 2019-08-15 北京韩美药品有限公司 抗pd-1/抗her2天然抗体结构样异源二聚体形式双特异抗体及其制备
EP3773916A4 (en) * 2018-04-04 2021-12-15 TrueBinding, Inc. PROCEDURES AND COMPOSITIONS FOR BLOCKING THE INTERACTION BETWEEN NON-GLYCOSYLATED PD-1 POLYPEPTIDES
CN112955464A (zh) * 2018-06-20 2021-06-11 因赛特公司 抗pd-1抗体及其用途
JP2022543114A (ja) * 2019-08-02 2022-10-07 シーティーティーキュー－アケソ（シャンハイ） バイオメド テク カンパニー リミテッド 抗ｐｄ－１抗体およびその医学的使用
US20210236667A1 (en) * 2020-01-31 2021-08-05 University Of Saskatchewan Methods and compositions for targeting disease related cell surface receptors using radiolabeled and/or cytotoxin labelled antibodies
US20230158016A1 (en) * 2020-03-16 2023-05-25 H Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Delta opioid receptor antagonists reprogram immunosuppressive microenvironment to boost immunotherapy
IL303350A (en) 2020-12-04 2023-08-01 Macrogenics Inc Preparations containing an antibody against HER2/NEU and their use
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer

Family Cites Families (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4449736A (en) 1981-12-16 1984-05-22 Dresser Industries, Inc. Releasable tubing string connector
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
ATE159982T1 (de) 1988-09-15 1997-11-15 Univ Columbia Antikörper mit modifiziertem kohlenhydratgehalt und verfahren zur herstellung und verwendung
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
AU669124B2 (en) 1991-09-18 1996-05-30 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing humanized chimera antibody
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
DE69612501T2 (de) 1996-12-04 2001-10-25 Agfa Gevaert Nv Verfahren zur Herstellung eines durch Wärme erzeugten verbesserten Bildes
EP1007569B1 (en) 1997-02-11 2009-04-08 Immunomedics, Inc. Stimulation of an immune response with antibodies labeled with the alpha-galactosyl epitope
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US6541214B1 (en) 1998-11-13 2003-04-01 Oregon Heath Science University N-terminally truncated HER-2/neu protein as a cancer prognostic indicator
US7109292B2 (en) 1999-03-08 2006-09-19 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
MXPA02001878A (es) 1999-08-23 2003-08-20 Dana Farber Cancer Inst Inc Moleculas b7-4 novedosas y usos de las mismas.
PL354286A1 (en) 1999-08-23 2003-12-29 Dana-Farber Cancer Institutedana-Farber Cancer Institute Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
US6803192B1 (en) 1999-11-30 2004-10-12 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-H1, a novel immunoregulatory molecule
ES2629683T3 (es) 1999-11-30 2017-08-14 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-H1, una nueva molécula inmunorreguladora
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
WO2002086083A2 (en) 2001-04-20 2002-10-31 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of enhancing cell responsiveness
US20040241745A1 (en) 2001-07-31 2004-12-02 Tasuku Honjo Substance specific to pd-1
KR100988949B1 (ko) 2001-10-25 2010-10-20 제넨테크, 인크. 당단백질 조성물
CA2466279A1 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
IL149820A0 (en) 2002-05-23 2002-11-10 Curetech Ltd Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency
US7351803B2 (en) 2002-05-30 2008-04-01 Macrogenics, Inc. CD16A binding proteins and use for the treatment of immune disorders
PT1537878E (pt) 2002-07-03 2010-11-18 Ono Pharmaceutical Co Composições de imunopotenciação
AU2003262650B2 (en) 2002-08-14 2009-10-29 Macrogenics, Inc. FcgammaRIIB-specific antibodies and methods of use thereof
JP2006500035A (ja) 2002-09-23 2006-01-05 マクロジェニックス インコーポレイテッド ヘルペスウイルス科の核酸配列および／またはポリペプチド配列を含むワクチンの同定方法およびワクチン接種用組成物
ES2367430T3 (es) 2002-12-23 2011-11-03 Wyeth Llc Anticuerpos contra pd-1 y sus usos.
CA2513025A1 (en) 2003-01-09 2004-07-29 Macrogenics, Inc. Dual expression vector system for antibody expression in bacterial and mammalian cells
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
ES2897506T3 (es) 2003-01-09 2022-03-01 Macrogenics Inc Identificación y modificación de anticuerpos con regiones Fc variantes y métodos de utilización de los mismos
US7563869B2 (en) 2003-01-23 2009-07-21 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Substance specific to human PD-1
EP1613269B1 (en) 2003-04-04 2015-02-25 Incyte Corporation Compositions, methods and kits relating to her-2 cleavage
US20070166281A1 (en) 2004-08-21 2007-07-19 Kosak Kenneth M Chloroquine coupled antibodies and other proteins with methods for their synthesis
CN101076807B (zh) 2004-10-15 2014-09-03 弗里塞恩公司 一次性密码验证的方法和系统
US7632497B2 (en) 2004-11-10 2009-12-15 Macrogenics, Inc. Engineering Fc Antibody regions to confer effector function
CA2590935C (en) 2004-12-15 2014-09-30 Macrogenics, Inc. Fc.gamma.riib-specific antibodies and methods of use thereof
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9284375B2 (en) 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9296816B2 (en) 2005-04-15 2016-03-29 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
RU2406760C3 (ru) 2005-05-09 2017-11-28 Оно Фармасьютикал Ко., Лтд. Моноклональные антитела человека к белку программируемой смерти 1 (pd-1) и способы лечения рака с использованием анти-pd-1-антител самостоятельно или в комбинации с другими иммунотерапевтическими средствами
CN101248089A (zh) 2005-07-01 2008-08-20 米德列斯公司 抗程序性死亡配体1（pd-l1）的人单克隆抗体
AU2006267090B2 (en) 2005-07-11 2013-03-07 Provention Bio, Inc. Methods for the treatment of autoimmune disorders using immunosuppressive monoclonal antibodies with reduced toxicity
SI2573114T1 (sl) 2005-08-10 2016-08-31 Macrogenics, Inc. Identifikacija in inženiring protiteles z variantnimi fc regijami in postopki za njih uporabo
HUE030269T2 (en) 2006-06-26 2017-04-28 Macrogenics Inc FC RIIB-specific antibodies and methods for their use
PT2066349E (pt) * 2006-09-08 2012-07-02 Medimmune Llc Anticorpos anti-cd19 humanizados e respectiva utilização no tratamento de tumores, transplantação e doenças auto-imunes
WO2008031531A1 (en) * 2006-09-15 2008-03-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Tumor therapy with a combination of anti-her2 antibodies
US20080112961A1 (en) 2006-10-09 2008-05-15 Macrogenics, Inc. Identification and Engineering of Antibodies with Variant Fc Regions and Methods of Using Same
US8652466B2 (en) 2006-12-08 2014-02-18 Macrogenics, Inc. Methods for the treatment of disease using immunoglobulins having Fc regions with altered affinities for FcγRactivating and FcγRinhibiting
WO2008083174A2 (en) 2006-12-27 2008-07-10 Emory University Compositions and methods for the treatment of infections and tumors
CA2688275A1 (en) 2007-05-31 2008-12-04 Genmab A/S Stable igg4 antibodies
SI2170959T1 (sl) 2007-06-18 2014-04-30 Merck Sharp & Dohme B.V. Protitelesa proti receptorjem pd-1 za humano programirano smrt
CA2691434C (en) 2007-06-21 2020-07-21 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US20090028857A1 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
US8062852B2 (en) 2007-10-01 2011-11-22 The Children's Hospital And Regional Medical Center Detection and treatment of autoimmune disorders
EP2224958A2 (en) 2007-11-30 2010-09-08 Bristol-Myers Squibb Company Anti-b7h4 monoclonal antibody-drug conjugate and methods of use
JP5555223B2 (ja) * 2008-04-02 2014-07-23 マクロジェニクス，インコーポレーテッド ＨＥＲ２／ｎｅｕ特異的抗体およびその使用方法
SI2350129T1 (sl) 2008-08-25 2015-11-30 Amplimmune, Inc. Sestavki PD-1 antagonistov in postopek njihove uporabe
EP3133086B1 (en) 2008-09-26 2018-08-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Human anti-pd-1, pd-l1, and pd-l2 antibodies and uses thereof
SG10201407908VA (en) 2008-12-19 2015-01-29 Macrogenics Inc Covalent diabodies and uses thereof
JP2013512251A (ja) 2009-11-24 2013-04-11 アンプリミューン、インコーポレーテッド Ｐｄ−ｌ１／ｐｄ−ｌ２の同時阻害
US8876892B2 (en) 2010-04-21 2014-11-04 Medtronic, Inc. Prosthetic heart valve delivery system with spacing
JP2013532153A (ja) 2010-06-18 2013-08-15 ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッド 慢性免疫病に対する免疫治療のためのｔｉｍ−３およびｐｄ−１に対する二重特異性抗体
AU2011286024B2 (en) 2010-08-02 2014-08-07 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
CN107854439A (zh) 2011-03-31 2018-03-30 默沙东公司 针对人程序性死亡受体pd‑1的抗体的稳定制剂和有关的治疗
RU2625034C2 (ru) 2011-04-20 2017-07-11 МЕДИММЬЮН, ЭлЭлСи Антитела и другие молекулы, которые связывают в7-н1 и pd-1
CA2836873C (en) 2011-05-21 2019-10-22 Macrogenics, Inc. Deimmunized serum-binding domains and their use for extending serum half-life
BR112013032552A2 (pt) 2011-07-24 2017-12-12 Curetech Ltd variantes de anticorpos monoclonais humanizados imunomoduladores
CA2887027C (en) * 2012-10-02 2021-11-16 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-kir antibodies and anti-pd-1 antibodies to treat cancer
US9815897B2 (en) 2013-05-02 2017-11-14 Anaptysbio, Inc. Antibodies directed against programmed death-1 (PD-1)
WO2014194302A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind pd-1
WO2015036394A1 (en) * 2013-09-10 2015-03-19 Medimmune Limited Antibodies against pd-1 and uses thereof
ES2763429T5 (es) 2013-12-17 2023-06-21 Hoffmann La Roche Procedimientos de tratamiento de cánceres usando antagonistas de la unión al eje de PD-1 y taxanos
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
TW201709929A (zh) * 2015-06-12 2017-03-16 宏觀基因股份有限公司 治療癌症的聯合療法
PE20231958A1 (es) 2015-07-30 2023-12-06 Macrogenics Inc Moleculas de union a pd-1 y metodos de uso de las mismas

Also Published As

Publication number Publication date
US11078279B2 (en) 2021-08-03
RU2018100424A (ru) 2019-07-15
RU2733315C2 (ru) 2020-10-01
CN107708666A (zh) 2018-02-16
BR112017026704A2 (pt) 2018-08-28
HK1247129A1 (zh) 2018-09-21
MX2017016071A (es) 2018-02-21
WO2016201051A1 (en) 2016-12-15
JP2018516966A (ja) 2018-06-28
CA2988602A1 (en) 2016-12-15
AU2021212139A1 (en) 2021-08-26
US20180298100A1 (en) 2018-10-18
IL256224B (en) 2022-06-01
RU2018100424A3 (uk) 2019-11-26
KR20180021774A (ko) 2018-03-05
GEP20217271B (en) 2021-07-12
AU2016276706A1 (en) 2018-01-04
MY194621A (en) 2022-12-07
EP3307240A1 (en) 2018-04-18
EP3307240A4 (en) 2018-12-19
TW201709929A (zh) 2017-03-16
CL2017003131A1 (es) 2018-05-25
PH12017502270A1 (en) 2018-06-11
IL256224A (en) 2018-02-28
CN116898963A (zh) 2023-10-20
US20220041725A1 (en) 2022-02-10
AU2016276706B2 (en) 2021-05-13
ZA201708225B (en) 2020-09-30
JP2022050522A (ja) 2022-03-30
AU2016276706A2 (en) 2018-06-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA125207C2 (uk) Комбінована терапія для лікування злоякісної пухлини
US11608377B2 (en) Enhanced depletion of targeted cells with CD47 blockade and an immune costimulatory agonist
TWI551296B (zh) 反應b7-h3之抗體、其免疫活性片段及使用
BR112019025035A2 (pt) método para tratar câncer
TW201702272A (zh) Ｐｒａｍｅ肽專一性類ｔ細胞受體抗體
JP2020529864A (ja) 多重特異性抗体とその作製及び使用方法
MXPA04012664A (es) Objetivo de superficie celular raag10 novedoso y una familia de anticuerpos que reconocen ese objetivo.
MX2012015131A (es) Terapia contra el cancer que utiliza anticuerpos dirigidos a la cldn6 objetivo in vivo.
JP2020530306A (ja) 多重特異性抗体とその作製及び使用方法
JP2020530777A (ja) 多重特異性抗体とその作製及び使用方法
CA2417874C (en) Use of ox-2 inhibitors for the treatment of cancer
CA2996601A1 (en) T-cell receptor mimic (tcrm) antibodies
JP2022527860A (ja) 排出ポンプ－癌抗原マルチ特異性抗体ならびにそれに関する組成物、試薬、キットおよび方法
US20220324978A1 (en) Anti-pd-1 antibodies and uses thereof
AU2020200574B2 (en) Methods and products for preventing and/or treating metastatic cancer
EP3980463A1 (en) Anti-psgl-1 compositions and methods for modulating myeloid cell inflammatory phenotypes and uses thereof
US20210388109A1 (en) Compositions and methods regarding engineered and non-engineered gamma delta t-cells for treatment of solid tumors
WO2023019396A1 (en) Mesothelin-targetting antibodies, chimeric antigen receptors, and uses thereof
WO2022089557A1 (zh) Itpripl1的调节剂在制备调节免疫反应或抗肿瘤的药物中的用途
US20230235081A1 (en) Mesothelin-targetting antibodies, chimeric antigen receptors, and uses thereof
WO2023019393A1 (en) Cd123-targetting antibodies, chimeric antigen receptors, and uses thereof
KR20210066743A (ko) CD300c 항원 또는 그의 수용체에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체
Pastorino Immunotherapy in the Treatment of Human Solid Tumors: Basic and Translational Aspects
BR112017002729B1 (pt) Terapia de combinação kit para tratar um tumor sólido em um indivíduo, anticorpo ou porção de ligação a antígeno do mesmo, uso e composição farmacêutica