UA123054C2

UA123054C2 - Композиція з противірусним ефектом

Info

Publication number: UA123054C2
Application number: UAA201803866A
Authority: UA
Inventors: Ріхард Аммер; Рихард АММЕР
Original assignee: Медіце Арцнайміттель Пюттер Гмбх Унд Ко. Кг; МЕДИЦЕ АРЦНАЙМИТТЕЛЬ ПЮТТЕР ГМБХ унд КО. КГ
Priority date: 2015-09-17
Filing date: 2016-09-16
Publication date: 2021-02-10
Also published as: EP3349741A1; DE202016008745U1; EA039000B1; WO2017046312A1; EA201890653A1; AR106057A1

Abstract

Винахід належить до фармацевтичної композиції, що містить тиротрицин, хлорид бензалконію та бензокаїн, для застосування в противірусній терапії або в лікуванні вірусної інфекції. 13

Description

Галузь техніки, до якої належить винахід

Винахід стосується фармацевтичної композиції, що містить тиротрицин, хлорид бензалконію та/або бензокаїн для застосування в противірусній терапії або в лікуванні вірусної інфекції.

Попередній рівень техніки

Віруси і бактерії є патогенами широко розповсюдженого гострого фарингіту. Лікарські засоби для лікування цих захворювань були доступні на ринку протягом десятиліть, такі наприклад, як льодяники від болю в горлі дорітріцінФ СіІазвіс. Їх зазвичай застосовують з антисептичними і антибактеріальними засобами, що містяться в них, для клінічно ефективного полегшення типових симптомів фарингіту, таких як біль при ковтанні і почервоніння горла.

Тиротрицин являє собою суміш різних ефективних проти бактерій лінійних і циклічних поліпептидів з груп граміцидинів і тироцидинів. Вони утворюються як ендотоксіноподібні молекули анаеробної спороутворючої бактерії ВасіШи5 апеигіпоїусйси5 (синонім Васійи5 Бгемів).

Спектр активності включає в основному грампозитивні бактерії, але також деякі грамнегативні бактерії і різні типи грибків, таких як Сапаїйда аібісап5. Тиротрицин містить 50-70 95 тироцидинів і 25-50 9о граміцидинів, які разом складають щонайменше 85 95 активного інгредієнта. Крім того, зустрічаються невеликі кількості інших структурно споріднених поліпептидів.

Хлорид бензалконію являє собою суміш хлоридів алкілбензілдіметіламмонія, алкільний фрагмент в яких складається з С8-С18 ланцюгів. Він надає загальний дезінфікуючий і консервуючий ефект і є ефективним проти бактерій, грибів, дріжджів і водоростей (навіть проти вірусів, але в меншій мірі).

Бензокаїн (етиловий ефір 4-амінобензойної кислоти) являє собою місцевий анестетик, і його в основному застосовують для терапії локальної болісності шкіри та слизової оболонки, як наприклад, в ротовій порожнині та горлі, а також в лікарських препаратах проти застудних захворювань, протикашльових препаратах, знеболюючих засобах, таких як розчини або льодяники від проблем з горлом, шлунком і зубами, в'яжучих засобах.

Стислий опис винаходу

Винахід стосується фармацевтичної композиції, що містить тиротрицин, хлорид бензалконію та/або бензокаїн, для застосування в противірусної терапії або в лікуванні вірусної інфекції.

Відповідно до кращого варіанта здійснення композиція містить всі три активних інгредієнта в

Зо комбінації.

Короткий опис креслень

Фігури 1-4: виражене у відсотках інгібування активності вірусів НК14, НІМІ і К5М розчинами дорітріцінаф з різним ступенем розведення;

Фіг. 1: синергічний противірусний ефект всіх З активних інгредієнтів - тиротрицину, хлориду бензалконію і бензокаїну в комбінації при зростаючому ступені розведення. Синергічний ефект підтверджується при порівнянні з фіг. 2-4;

Фіг. 2: слабкий противірусний ефект тиротрицину окремо при зростаючому ступені розведення;

Фіг. 3: дуже слабкий противірусний ефект хлориду бензалконію окремо при зростаючому ступені розведення;

Фіг. 4: дуже слабкий противірусний ефект бензокаїну окремо при зростаючому ступені розведення.

Докладний опис винаходу

У дослідженні іп міго вивчали дозозалежний противірусний ефект вищезгаданих активних речовин по відношенню до патогенних для людини вірусів КОМ, НКМ14 і НІМІ. Дані цього дослідження демонструють, що розчин, приготований з активних інгредієнтів і доведений до високої фізіологічної концентрації активних інгредієнтів, знижує вірусну активність на 68,4 Фо (НАМ'14), 52,7 95 (НІМ) ї 74,3 95 (К5М). Противірусний ефект більше не міг виявлятися лише при дуже високому ступені розведення активного інгредієнта. Таким чином, фармацевтична композиція, що містить тиротрицин, хлорид бензалконію і бензокаїн, характеризується яскраво вираженими, дозозалежними і синергічними противірусними властивостями по відношенню до вірусів ЕМ, НЕМ'14 і НІМІ.

Це спостереження є новим і неочікуваним за рахунок активних інгредієнтів: - тиротрицин належить до антибіотиків, діючих проти бактерій, - хлорид бензалконію і бензокаїн належать до анальгетиків, ефективних проти болю (1-4).

Таким чином, даний винахід належить до фармацевтичної композиції, яка містить - тиротрицин, - хлорид бензалконію і/або - бензокайн, бо для застосування в противірусної терапії або в лікуванні вірусної інфекції.

Композиція відповідно до даного винаходу може включати в себе, складатися з або, по суті, містити вищезазначені активні речовини. Вираз "складається, по суті, з" означає, що фармацевтична композиція містить ці компоненти в якості діючих інгредієнтів. Тим не менш, вона при цьому може містити один або кілька розчинників, допоміжних речовин та ін., які є необхідними для виробництва фармацевтичної композиції, але не вносять вклад або не вносять значний вклад у фармакологічну ефективність.

Термін "фармацевтична композиція", який використовується в даному документі, включає в себе, зокрема, пероральні лікарські форми, такі як тверді, напіврідкі або рідкі композиції для перорального введення. Відповідно до кращого варіанта здійснення композиція має форму таблетки, зокрема, льодяника або таблетки від болю в горлі.

Проте, в якості альтернативи, також можливі інші лікарські форми, такі як тверді пероральні лікарські форми, як наприклад, порошки або капсули. В цьому випадку обмежені добавки стеарата магнію або бегената кальцію можна застосовувати в якості змащувальних засобів, і крохмаль можна застосовувати в якості прискорювачів розпаду (розпушувача). У разі гранулювання можна застосовувати водний розчин лактози, етанол і відповідні концентрації крохмальних паст.

Загальноприйняті допоміжні засоби, що застосовуються у виробництві льодяників від болю в горлі, включають в себе сорбіт (Е 420), тальк, складні ефіри жирних кислоти і сахарози, дигідрат сахарінат натрію, м'ятну олію, повідон 25 і кармеллозу натрію.

На додаток до пероральних лікарських форм фармацевтична композиція відповідно до даного винаходу може включати в себе парентеральні форми, тобто рідкі розбавлені розчини для ін'єкції і рідкі розчини для втирання, а також мазі, супозиторії, очні краплі і назальні краплі.

У переважній формі композицію застосовують для лікування інфекції, викликаної риновірусом, вірусами грипу та/або пневмовірусамі.

Відповідно до варіанту здійснення фармацевтичну композицію застосовують в способі лікування вірусної інфекції, причому вірусна інфекція викликана НЕКМ14 (риновирус людини типу 14), К5М (респіраторно-синцитіальний вірус людини) та/або НІМІ (вірус грипу А НІМІ).

Одна доза фармацевтичної композиції переважно містить приблизно 0,5 мг тиротрицину, приблизно 1,0 мг хлориду бензалконію та/або приблизно 1,5 мг бензокаїну і одну або кілька

Зо фармацевтично прийнятних допоміжних речовин. У цьому контексті термін "приблизно" означає діапазон відхилень, що становить 250 95, переважнож20 95, найбільш переважної10 95 щодо маси активної речовини, наведеної вище.

Фармацевтичну композицію відповідно до даного винаходу вводять в добовій дозі, що становить приблизно 2-4 мг тиротрицину, 4-8 мг хлориду бензалконію і 6-12 мг бензокаїну.

Даний винахід далі буде пояснений з урахуванням наступних прикладів реалізації, в яких пояснюються ефекти композиції відповідно до даного винаходу.

Приклади реалізації 1. Вступ

Віруси і бактерії є патогенами широко розповсюдженого гострого фарингіту. Це захворювання, також відоме як катаральний фарингіт, являє собою запалення слизової оболонки глотки і нижчих глоткових структур, яке супроводжується типовими симптомами, що являють собою біль при ковтанні, дряпання, печіння, сухість в горлі і почервоніння слизової оболонки глотки (1).

Гострий фарингіт вимагає переважно симптоматичного лікування для полегшення болю.

Терапію антибіотиками призначають рідше, і її слід використовувати лише у 10-15 95 пацієнтів, уражених стрептококовим фарингітом (1-3), або у випадках, коли потрібно попередити віддалене ускладнення, таке як геморагічна лихоманка. Таблетки від болю в горлі, такі як дорітріцінФ, як вже неодноразово було доведено, є успішними з клінічної точки зору при симптоматичному лікуванні (4). Комбінація антибактеріальних і аналгезивних засобів: тиротрицину, хлориду бензалконію і бензокаїну, що містяться в ньому, ефективно послаблює типові симптоми фарингіту (4).

Цікаво, що окремі компоненти цієї комбінації не тільки діють проти бактерій, але, як описано авторами винаходу в даному документі, вони також активні проти вірусів. Знаходиться під питанням, чи володіє комбінація активних інгредієнтів, що містяться в дорітріцінієф), противірусним ефектом в сукупності. З огляду на це, дослідження, що наведене нижче, проводили з метою вивчення дозозалежного противірусного ефекту таблеток від болю в горлі дорітріцін? СіІаззіс по відношенню до патогенних для людини вірусів іп міїго. 2. Матеріали і способи

Таблетки дорітріцінф (МЕБІСЕ, Ізерлон, Німеччина) в розчині досліджували в різних бо ступенях розведення по відношенню до вірусів, які викликають інфекції дихальних шляхів у людей. Одна таблетка містить 0,5 мг тиротрицину, 1,0 мг хлориду бензалконію і 1,5 мг бензокаїну. Оцінювали такі віруси: риновірус людини типу 14 (НКМ14, РНК-вірус без оболонки), респіраторно-синцитіальний вірус (К5У, параміксовірус, РНК-вірус без оболонки) і вірус грипу А

НІМ! (РІША, НІМ, ортоміксовірусів, РНК-вірус з оболонкою).

Для отримання досліджуваного розчину таблетку дорітріціна? спочатку подрібнювали, а потім розчиняли в 1 мл диметилсульфоксиду (0ОМ5О), розводили дистильованою водою 1: 100 і стерилізували (за допомогою фільтра з розміром чарунок 0,45 мкм). Серію розведень фільтрату з рН, доведеним до 7,4, готували поетапно з кратністю розведення Іод2 або Іод10 з використанням повного живильного середовища. Розчинник, приготований відповідно до описаної процедури (0ОМ50О), використовували в якості контролю з розчинником.

З метою виключення артефактів, обумовлених ефектами досліджуваних розчинів щодо клітин для дослідження противірусної активності, які знижують життєздатність і метаболізм, досліджувані розчини спочатку піддавали дослідженню життєздатності в клітинній культурі. У паралельних підходах досліджувані розчини на всіх етапах розведення, так само як і контроль з розчинником, додавали до зростаючих чутливих до вірусів Неба, МОСК і НЕр-2 клітин і культивували в цілому протягом З діб (НеГа, МОСК) або 6 діб (НЕр-2) при 377" Сі 595 002. В якості додаткового контролю тільки клітини, культивовані з середовищем для культивування клітин, включали в клітинну культуру. Оцінку можливих ефектів щодо зниження життєздатності здійснювали на 1, 2, З і б добу після введення речовини з використанням МТ Т-тесту. Оброблені клітини інкубували з розчином МТТ протягом 45 хвилин (НЕр-2, Нега) і 60 хвилин, відповідно.

Відновлення жовтого барвника 3- (4,5-діметілтіазол-2-іл)у -2,5-дифеніл-тетразолия броміду (МІТ), що міститься в розчині, до блакитно-фіолетового формазану може здійснюватися тільки інтактними живими клітинами, і воно є доказом життєздатності клітин. Після солюбілізації кристалів формазану в 195 ОМ5О оптичну щільність супернатантів з клітинної культури визначали фотометрично при довжині хвилі 570 нм. Більш висока оптична щільність вказує на більшу кількість життєздатних клітин. Більш того, можливу зміну морфології клітин оцінювали за допомогою мікроскопії на З добу (НеГа, МОСК) і 6 добу (НЕр-2) після додавання речовини.

Значення ОО досліджуваних зразків для кожного підходу нормалізували до значень ОО у необроблених контролів, яке визначали як 10095 життєздатність, і відповідним чином відображали у вигляді відсотків. Таким чином, можна визначити середню інгібуючу концентрацію (ІС50) для зразків з декількох паралелей у вигляді кривих залежності "доза-ефект" для досліджуваних зразків до концентрації що не показувала будь-якого погіршення життєздатності клітин, викликаного досліджуваною речовиною і, отже, була придатною для застосування в дослідженнях противірусної активності.

Після досліджень життєздатності досліджували противірусну активність щодо НКМ14, РІцА і

КЗМ. Чутливі до вірусів клітини інфікували відповідними вірусами в середній інфікуючій дозі (МОЇ) від 0,0004 до 0,0008 (НеГа інфікували НКМ14; МОСК інфікували РіІшА; НЕр-2 інфікували

Е5М). Інфіковані вірусом клітини обробляли через 1 годину після інфікування досліджуваними розчинами в фізіологічних концентраціях речовин в напівпроникному агарозному супернатанті.

На 2 добу (РіІшА), З добу (НЕМ14) і на 5 добу (К5М) відповідно підходу до дослідження вірусні бляшки (бляшкоутворюючі одиниці/мл; РЕШ/мл), утворені в шарі клітин, підраховували з використанням зчитувальної системи АЇО ЕїЇїброї (Ашойттип Оіадповіка стрН, Штрасберг,

Німеччина) і оцінювали у вигляді відсотка інгібування щодо кількості бляшок, визначеного як повне інфікування вірусом в контрольному підході, який не передбачає додавання будь-якого активного інгредієнта.

На додаток до контролю з вірусом і негативному контролю противірусний активний інгредієнт віразола? рибавирин, який являє собою противірусний засіб проти РНК-вірусів, використовували в якості внутрішнього лабораторного контролю для перевірки процедури дослідження, описаної вище. Ефективність еталонних речовин підтверджували в тестовій системі. Всі контролі піддавали дії всіх умов культивування для аналізів противірусної активності. 3. Результати

Для дослідження противірусної активності використовували розчини, що досліджувалися, з концентраціями активних інгредієнтів, відповідними ступеню розведення таблетки дорітріцінаєф), що становить 1: 400 або вище (таблиця 1). З такими концентраціями активних інгредієнтів не було виявлено ефектів щодо зниження життєздатності на використовуваних НеГа, МОСК і НЕрг2 клітинах в дослідженні життєздатності.

В результаті комбінація активних інгредієнтів дорітріцінаФ в розведенні 1: 100 ї 1: 400, показувала порівняний противірусний ефект і значно зменшувала кількість бляшок РНК-вірусів 60 НЕМ'14, НІМІ їі Е5М на 97 95 і 68 9», 53 9б і 74 95, відповідно. Цей ефект щодо утворення бляшок знижувався з підвищенням ступеня розведення. Тільки при високих ступенях розведення ефект вже не виявлявся: для НЕМ14 від 1: 3200, для К5М від 1: 6400 і для НІМІ від 1: 64000.

Відносний інгібуючий ефект, який залежить від ступеня розведення дорітріцінафФ, показаний на фіг. 1.

Синергічний ефект З активних речовин доводиться такою самою серією експериментів з окремими речовинами, які демонструють лише дуже слабку противірусну активність при розведенні 1: 100 (фіг. 2, З, 4).

Рибавірин (КІВА), який використовується для контролю, показував зменшення кількості вірусних бляшок, що становить 53 95 у НКМ14 (РКІВА 10 мкг / мл), 96 95 у РІША (РКІВА З мкг / мл) і 97 95 у КМ (КІВА 1 мкг / мл).

Механізм дії, що лежить в основі, вивчався в додаткових експериментах. Оцінювали, чи грунтується він на синергічному ефекті, і який із трьох компонентів і на які віруси здійснює основний вплив.

Таблиця 1

Концентрації в мкг/мл активних інгредієнтів, які використовуються в дослідженні противірусної активності і належать до складових дорітріцінаєФ

Інгредієнти дорітріцінйає З | 77777777 4. Висновок

На додаток до відомих антибактеріальних і знеболюючих ефектів фармацевтична композиція відповідно до даного винаходу також характеризується яскраво вираженими дозозалежними і синергічними противірусними властивостями по відношенню до вірусів КМ,

НЕМ14 і НІМІ. 5. Джерела інформації: (1) Ровіау-Вате КМ. Іптесіоп5 іп редіайісв: ой апі пем/ дізеазез. Зміз5 Мей УУКІу 20127142:м/13654. (2) Вівпо АГ, Сегрег МА, Смайпеу УМ, «г., Каріап ЕГ, Зспугагі: ВН. Ргасіїсе дцідеїїпев Тог те діадпозів апа тападетепі ої дор А зігеріососса! рпагупаоіїів5. ІпТесіоив Оізєазе5 Босієїу ої

Атегїіса. Сіїп Іптесі біз 2002 ди! 15;535(2):113-25. (3) 5пйцІтап 5Т, Візпо АЇ, Сієд9 НМУ, Сетбег МА, Каріап ЕЇ, Геє С, єї аї. Сіїпіса! ргасіїсе диїдеїїпе Тог їпе адіадпо5і5 апа тападетепі ої дгоир А 5ігеріососса! рпагупойв: 2012 ирааїе ру Ше

Інтесііоив Різєазев 5осівїу ої Атегіса. Сіїп Іптесі біз 2012 Мом 15555(10):1279-82.

Ко) (4) Зспоїеп Т, Рашіег М, Кобег С. Оогіїнгісіп беї акшег Рпагупадіїів. Оецівсне АроїпеКеггейшипд

Claims

2005:;145(1):93-4. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Фармацевтична композиція, яка містить: - тиротрицин, - хлорид бензалконію та - бензокаїн, для застосування в противірусній терапії або в лікуванні вірусної інфекції.

2. Фармацевтична композиція для застосування в способі лікування вірусної інфекції за п. 1, причому вірусна інфекція викликана риновірусом, вірусами грипу та/або пневмовірусами.

3. Фармацевтична композиція для застосування в способі лікування вірусної інфекції за п. 1 або п. 2, причому вірусна інфекція викликана НЕКМ14 (риновірус людини типу 14), КМ (респіраторно-синцитіальний вірус людини) та/або НІТМІ (вірус грипу А НІМІ).

4. Фармацевтична композиція для застосування в способі лікування вірусної інфекції за одним або декількома з попередніх пунктів, що містить: приблизно 0,5 мг тиротрицину,

приблизно 1,0 мг хлориду бензалконію, приблизно 1,5 мг бензокаїну у вигляді однієї дози і одну або кілька фармацевтично прийнятних допоміжних речовин.

5. Фармацевтична композиція для застосування в способі лікування вірусної інфекції за одним або декількома з попередніх пунктів, яка являє собою таблетку від болю в горлі.

6. Фармацевтична композиція для застосування в способі лікування вірусної інфекції за одним або декількома з попередніх пунктів, причому зазначена композиція вводиться в добовій дозі, що становить приблизно 2-4 мг тиротрицину, 4-8 мг хлориду бензалконію і 6-12 мг бензокаїну. ібютивишжусна зкІНЕНІСТЬ ДОВІТВЯТ ВА фівсі З зктвині інгуежієнти З ! вай і се Зошит СЬ4--А- - - - Ж 5 Ж ж ЖЖ « Ж « « Ж 6 Є Є Є 2 Є Є Є Є Ж Є Є Є Є Є Є Є Є Є Є - 2 - « - -4є- обу ше «фе НАУ ЗА ш й: с-- -. щЩоче Я а ід з-д ВУ ! 5 ле що ше у Й і се Сер нд фреон, Я а дення. Щ Соня ана -- і тк ЩО Якоб З кЯдО кор о тхЗО зкЮ лк Еозведення

Фг.і схе і ПМ Протившусна звІінжЕНЕТЬ тЕрОотрицнна окрема с. -- ніж Я «о ж ВВУ 5 ех й 3 оо Сх Е о ден пи пи отв тк НЕ їха00 Як 100 з Зк Зк, Розведення

Я.