UA122973C2

UA122973C2 - Похідні моно- або дизаміщених індолів як інгібітори реплікації вірусів денге

Info

Publication number: UA122973C2
Application number: UAA201804007A
Authority: UA
Inventors: Барт Рудольф Романі Кестелейн; Барт Рудольф Романи Кестелейн; П'єр Жан-Марі Бернар Рабуассон; Пьер Жан-Мари Бернар Рабуассон; Жан-Франсуа Бонфанті; Жан-Франсуа Бонфанти; Тім Г'юґо Марія Йонкерс; Тим Хьюго Мария Йонкерс; Дороте Аліс Марі-Еве Бардіо; Дороте Алис Мари-Еве Бардио; Арно Дідьє М Маршан; Арно Дидье М Маршан
Original assignee: Янссен Фармасьютікалз, Інк.; Янссен Фармасьютикалз, Инк.; Католіке Універсітейт Левен; Католике Университейт Левен
Priority date: 2015-09-16
Filing date: 2016-09-15
Publication date: 2021-01-27
Also published as: IL258043B; JP7050666B2; US20180256545A1; MA42810A; CN108473422B; AU2016324982A1; US10765662B2; JP2021181485A; AU2016324982B2; HRP20211352T1; MX2018003255A; HK1257842A1; EA035663B1; KR102646174B1; CR20180213A; CA2996979A1; CL2018000696A1; EA201890722A1; EP3350162A1; CA2996979C

Description

Даний винахід стосується похідних моно- або дизаміщених індолів, способів запобігання інфекціям або лікування інфекцій, спричинених вірусом денге, із застосуванням цих сполук, а також стосується цих сполук для застосування як лікарського препарату, більш переважно для застосування як лікарського препарату для лікування інфекцій або запобігання інфекціям, спричиненим вірусом денге. Даний винахід додатково стосується фармацевтичних композицій або комбінованих препаратів на основі таких сполук, композицій або препаратів для застосування як лікарського препарату, більш переважно для запобігання інфекціям або лікування інфекцій, спричинених вірусом денге. Даний винахід також стосується способів одержання цих сполук.

Передумови створення винаходу

Флавівіруси, які переносяться комарами або кліщами, спричиняють інфекції у людини, які становлять загрозу життю, такі як енцефаліт і геморагічна гарячка. Відомо чотири різних, але тісно пов'язаних серотипи флавівірусу, який спричиняє денге, так званих ОЕММ'І, -2, -3 та -4.

Денге є ендемічним захворюванням для більшості тропічних і субтропічних регіонів усього світу, переважно у міських і напівміських районах. Згідно з даними Всесвітньої організації охорони здоров'я (МУ/НО), 2,5 мільярда людей, з яких 1 мільярд дітей, перебувають під загрозою інфікування ОЕММ (МУНО, 2002). За оцінками, щорічно в усьому світі виникає від 50 до 100 мільйонів випадків гарячки денге (ОР), півмільйона випадків захворювання денге у тяжкій формі (тобто геморагічної гарячки денге (ОНР) і синдрому шоку під час геморагічної гарячки денге

ІОЗ5І), а також більш ніж 20000 смертей. ОНЕ стала основною причиною госпіталізації та смерті дітей в ендемічних регіонах. Загалом денге є найбільш поширеною причиною захворювання спричиненого арбовірусом. Через нещодавні великі спалахи у країнах, розташованих у

Латинській Америці, Південно-Східній Азії і західній частині Тихого океану (у тому числі в

Бразилії, Пуерто-Рико, Венесуєлі, Камбоджі, Індонезії, В'єтнамі, Таїланді), кількість випадків денге за останні роки значно збільшилася. Не лише число випадків денге збільшується із поширенням захворювання в нові райони, але й спалахи мають тенденцію набувати більш тяжкого перебігу.

Для запобігання захворюванню та/або контролю захворювання, асоційованого з інфекцією, спричиненою вірусом денге, на даний час єдиними доступними способами є стратегії, спрямовані на знищення комарів з метою контролю чисельності переносника інфекції. Хоча й у розробці вакцин проти денге має місце наявний прогрес, існує багато труднощів. Вони включають існування явища, що має назву антитілозалежне підсилення (АОЕ).

Одужання після інфекції, спричиненої одним серотипом, забезпечує довічний імунітет проти даного серотипу, однак надає лише частковий і тимчасовий захист проти наступної інфекції, спричиненої одним із трьох інших серотипів. Після інфікування іншим серотипом вже існуючі гетерологічні антитіла формують комплекси із серотипом вірусу денге, що щойно інфікував організм, але не нейтралізують патоген. Замість цього, як передбачається, полегшується проникнення вірусу в клітини, що призводить до неконтрольованої реплікації вірусу та підвищення піку титрів вірусів. Як під час первинної, так і під час вторинної інфекцій підвищення титрів вірусу асоційоване із захворюванням денге в більш тяжкій формі. Однією з причин того, що діти більш схильні до захворювання денге в тяжкій формі, ніж дорослі, може бути той факт, що материнські антитіла можуть легко передаватися немовлятам під час грудного вигодовування.

У місцевостях із поширенням двох або більше серотипів, котрі циркулюють одночасно, які називаються також регіонами з підвищеною ендемічністю, ризик захворювання денге в серйозній формі значно вищий через підвищений ризик перенесення вторинної, більш тяжкої інфекції. До того ж, в умовах підвищеної ендемічності ймовірність появи більш вірулентних штамів є підвищеною, що так само підвищує ймовірність геморагічної гарячки денге (ОНЕ) або синдрому шоку під час геморагічної гарячки денге.

Комарі, які переносять вірус денге, у тому числі Аєдез аеадурії та Аєдез аіІрорісіи5 (тигровий комар), рухаються земною кулею на північ. Згідно з даними Центрів контролю і профілактики захворювань (СОС) Сполучених Штатів (США), обидва види комарів в даний час є поширеними в південному Техасі. Поширення на північ комарів, які переносять вірус денге, не обмежується поширенням у США, а спостерігається також і в Європі.

Нещодавно (грудень 2015 року) вакцина проти вірусу денге, одержана Запоїї Разхіеиг, була вперше схвалена в Мексиці. Вакцина також була схвалена в Бразилії, на Філіппінах і в

Сальвадорі. Експертиза й тестування тривають в інших країнах, де денге є пріоритетом для охорони здоров'я. Проте вакцина залишає широкі можливості для вдосконалення через обмежену ефективність, особливо проти ОЕММ-1 і -2, низьку ефективність у суб'єктів, які раніше (610) не були заражені флавівірусами, і надто тривалу схему прийому препарату.

Незважаючи на ці недоліки, вакцина являє собою революційний продукт в ендемічних умовах, оскільки вона забезпечуватиме захист більшої частини населення, але ймовірно не немовлят, які страждають від денге найбільше. Крім того, схема прийому препарату та надто обмежена ефективність у суб'єктів, які раніше не були заражені флавівірусами, робить її непридатною та недоцільною/неекономічною для мандрівників із не ендемічних районів у райони, ендемічні за денге. Вищезгадані недоліки вакцин проти вірусу денге є причиною того, чому існує потреба в противірусному засобі проти збудника денге для передконтактної профілактики денге.

До того ж на даний час відсутні спеціальні противірусні лікарські засоби для лікування або запобігання інфекції, спричиненої вірусом гарячки денге. Очевидно, що все ще існує велика нереалізована потреба медицини в терапевтичних засобах для запобігання вірусним інфекціям або лікування вірусних інфекцій у тварин, більш конкретно в людини, а особливо вірусних інфекцій, спричинених флавівірусами, більш конкретно вірусом денге. Надзвичайно необхідними є сполуки з придатною противірусною ефективністю, які не мають побічних ефектів або мають низькі ступені прояву побічних ефектів, характеризуються широким спектром активності проти багатьох серотипів вірусу денге, низькою токсичністю та/або придатними фармакокінетичними або фармакодинамічними властивостями.

Отже, в даному винаході передбачаються сполуки, похідні моно- або дизаміщених індолів, які проявляють високоефективну активність проти всіх чотирьох (4) серотипів вірусу денге.

Також сполуки згідно з даним винаходом мають придатний фармакокінетичний профіль, і несподівано ці конкретні сполуки проявляють покращену хіральну стабільність.

Короткий опис винаходу

Даний винахід базується на несподіваному відкритті того, що щонайменше одна з вищезгаданих проблем може бути розв'язана за допомогою наявних сполук за даним винаходом.

У даному винаході представлені сполуки, які, як було показано, мають високу противірусну активність проти всіх чотирьох (4) серотипів, відомих на сьогодні. До того ж у даному винаході продемонстровано, що всі ці сполуки ефективно інгібують проліферацію вірусу денге (ОЕММ).

Таким чином, дані сполуки являють собою придатний клас високоефективних сполук, які можна застосовувати в лікуванні вірусних інфекцій та/або запобіганні вірусним інфекціям у тварин, ссавців і людей, більш конкретно для лікування інфекцій та/або запобігання інфекціям, спричиненим вірусами денге.

До того ж даний винахід стосується застосування таких сполук як лікарських препаратів і застосування їх для виготовлення лікарських препаратів для лікування вірусних інфекцій та/або запобігання вірусним інфекціям, які, зокрема, спричиняються вірусами, що належать до родини вірусів денге, у тварин або ссавців, більш конкретно в людини. Даний винахід також стосується способів одержання всіх таких сполук і фармацевтичних композицій, що включають їх в ефективній кількості.

Даний винахід також стосується способу лікування інфекцій або запобігання інфекціям, спричиненим вірусом денге, у людини за допомогою введення пацієнту, який потребує цього, ефективної кількості однієї або декількох таких сполук або їхньої фармацевтично прийнятної солі необов'язково в комбінації з одним або декількома іншими лікарським препаратами, наприклад з іншим противірусним засобом.

Одним аспектом даного винаходу є забезпечення сполук формули (І)

М- сі у (о) Осн» т ни (А З Ж

М 4 г Н дЙл7/

ОХ

Аз (0,

їхньої стереоїзомерної форми, фармацевтично прийнятної солі, сольвату або поліморфу, що містять моно- або дизаміщену індольну групу; при цьому вказана сполука вибрана із групи, де

А: являє собою Н, ЕЕ»: являє собою КЕ, СІ або ОСН», а Ез являє собою Н;

Ві являє собою Н, Е2 являє собою Е або СІ, а Ез являє собою СНз;

Ві являє собою СН»вз, Н2 являє собою ОСН», а Ез являє собою Н;

В: являє собою ЕК, Е2 являє собою ЕК, а Ез являє собою НН;

Ві являє собою СН», В» являє собою ЕК, а Ез являє собою НН;

Ві являє собою СЕз або ОСЕ», і 2 являє собою Н, і Ез являє собою НН;

А: являє собою ОСЕ», Во являє собою ОСН», а Ез являє собою Н, або

Ві являє собою ОСЕ», В2 являє собою Н, а Ез являє собою СНз.

Зокрема, сполуки за даним винаходом або їхня стереоїзомерна форма, фармацевтично прийнятна сіль, сольват або поліморф вибрані із групи: сі СІ СІ но но но то ФВ ОМе то ФВ ОМе то ФВ ОМе (9) ів) і)

М М М

ФІ; оо ФІ; оо ФІ; шо я и и и

М о) М (9) М о)

Е Н СІ Н Мео Н

СІ СІ СІ но но но то ФВ ОМе "то г ОМе "то г ОМе і) іо) Ге) х 38-- Х 38-- іч в- гої (о го

Е М о сі М о МмеОо М (в

Н

СІ СІ СІ но но но то фі ОМе "то ФВ ОМе "то 5 ОМе шов; і

Ее М М ЕЗС М о ОТ ОТ

Е М (в) Е М о М (о)

Н Н Н сі сі СІ но о) но

Х-к "то Фі ОМе "то фі, ОМе (в) ОМе що і

М

ЕЗСО М ЕЗСО М ЕзсОо х й 8 х Н -8587 В; й Р:

М оо М оо М що

Н Мео Н Н

Частиною даного винаходу також є фармацевтична композиція, що містить сполуку формули (І) або її стереоїзомерну форму, фармацевтично прийнятну сіль, сольват або поліморф разом з однією або кількома фармацевтично прийнятними допоміжними речовинами, розріджувачами або носіями.

Фармацевтично прийнятні солі сполук формули (І) включають їхні солі приєднання кислот та основні солі. Придатні солі приєднання кислот утворюються з кислот, які утворюють нетоксичні солі. Придатні основні солі утворюються з основ, які утворюють нетоксичні солі.

Сполуки за даним винаходом також можуть існувати в несольватованій і сольватованій формах. Термін "сольват" застосовується в даному документі для опису молекулярного комплексу, що містить сполуку за даним винаходом і одну або декілька молекул фармацевтично прийнятного розчинника, наприклад етанолу.

Термін "поліморф" позначає здатність сполуки за даним винаходом існувати в більш ніж одній формі або кристалічній структурі.

Сполуки за даним винаходом можна вводити у вигляді кристалічних або аморфних продуктів. Вони можуть бути одержані, наприклад, у вигляді твердої пресованої маси, порошків або плівок за допомогою таких способів як осадження, кристалізація, ліофілізація, висушування розпиленням або висушування випарюванням. Їх можна вводити окремо або в комбінації з однією або декількома іншими сполуками за даним винаходом або в комбінації з одним або декількома іншими лікарськими засобами. Як правило, їх будуть вводити у вигляді складу з однією або декількома фармацевтично прийнятними допоміжними речовинами. Термін "допоміжна речовина" застосовується в даному документі для опису будь-якого інгредієнта, відмінного від сполуки(сполук) за даним винаходом. Вибір допоміжної речовини значною мірою залежить від таких факторів як конкретний спосіб уведення, вплив допоміжної речовини на розчинність і стабільність, а також природа лікарської форми.

Сполуки за даним винаходом або будь-яка їхня підгрупа можуть бути складені в різні фармацевтичні форми для цілей введення. Як придатні композиції можуть бути згадані всі композиції, які зазвичай застосовуються для лікарських речовин, що вводяться системно. Для одержання фармацевтичних композицій за даним винаходом ефективну кількість конкретної сполуки, необов'язково у формі солі приєднання, як активний інгредієнт об'єднують в однорідну суміш із фармацевтично прийнятним носієм, при цьому носій може набувати великого різноманіття форм залежно від форми препарату, потрібного для введення. Дані фармацевтичні композиції переважно представлені у вигляді одиничної лікарської форми, придатної, наприклад, для перорального або ректального введення. Наприклад, під час одержання композицій у лікарській формі для перорального введення може застосовуватися будь-яке зі звичайних фармацевтичних середовищ, таких як, наприклад, вода, гліколі, масла, спирти тощо, у випадку рідких препаратів для перорального введення, таких як суспензії, сиропи, настоянки, емульсії та розчини; або твердих носіїв, таких як крохмалі, цукри, каолін, розріджувачі, змащувальні засоби, зв'язувальні речовини, розпушувачі тощо, у випадку порошків, пігулок, капсул і таблеток. Через простоту їх уведення таблетки і капсули є найбільш переважними одиничними лікарськими формами для перорального введення, у випадку яких, безумовно, використовуються тверді фармацевтичні носії. Також включені препарати у твердій формі, які можуть бути перетворені безпосередньо перед застосуванням у рідкі форми.

Особливо переважним є складання вищезгаданих фармацевтичних композицій у одиничну лікарську форму для простоти введення та рівномірності дозування. Одинична лікарська форма, застосовувана в даному документі, позначає фізично окремі одиниці, придатні як одиничні дози, при цьому кожна одиниця містить попередньо визначену кількість активного інгредієнта, розраховану для одержання необхідного терапевтичного ефекту, у поєднанні з необхідним фармацевтичним носієм. Прикладами таких одиничних лікарських форм є таблетки (у тому числі подільні або вкриті оболонкою таблетки), капсули, пігулки, пакетики з порошком, пластинки, супозиторії, розчини або суспензії для ін'єкцій тощо, а також окремі сукупності з них.

Фахівці в галузі лікування інфекційних захворювань зможуть визначити ефективну кількість з урахуванням результатів тестів, наведених далі в даному документі. Загалом передбачається, що ефективна добова кількість буде становити від 0,01 мг/кг до 50 мг/кг маси тіла, більш переважно від 0,1 мг/кг до 10 мг/кг маси тіла. Доцільним може бути введення необхідної дози у вигляді двох, трьох, чотирьох або більше частин дози через відповідні інтервали протягом доби.

Вказані частини дози можуть бути складені у вигляді одиничних лікарських форм, наприклад таких, що містять від 1 до 1000 мг і, зокрема, від 5 до 200 мг активного інгредієнта на одиничну лікарську форму.

Точне дозування і частота введення залежать від конкретної застосовуваної сполуки формули (І), конкретного стану, лікування якого здійснюють, тяжкості стану, лікування якого здійснюють, віку, маси і загального фізичного стану конкретного пацієнта, а також від іншого медикаментозного лікування, яке індивідуум може одержувати, що добре відомо фахівцям у даній галузі. До того ж очевидно, що ефективну кількість може бути знижено або збільшено залежно від реакції суб'єкта, лікування якого здійснюють, та/або залежно від оцінки лікаря, який призначає сполуки за даним винаходом. Таким чином, вищевказані діапазони ефективної кількості Є лише рекомендаціями і не призначені для обмеження тією чи іншою мірою обсягу або застосування даного винаходу.

Мається на увазі, що дане винахід також включає будь-які ізотопи атомів, що наявні в сполуках за даним винаходом. Наприклад, ізотопи водню включають тритій і дейтерій, а ізотопи вуглецю включають С-13 і С-14. (610) Дані сполуки, що застосовуються в даному винаході, можуть також існувати в їхній стереохімічно ізомерній формі, охоплюючи всі можливі сполуки, складені з тих самих атомів, які зв'язані за допомогою такої ж послідовності зв'язків, однак мають різні просторові структури, які не є взаємозамінними. Якщо не згадано або не вказано інше, то хімічне позначення сполук охоплює суміш усіх можливих стереохімічно ізомерних форм, які можуть мати вказані сполуки.

Вказана суміш може містити всі діастереомери та/або енантіомери з основною молекулярною структурою вказаної сполуки. Передбачається, що всі стереохімічно ізомерні форми сполук, застосовувані в даному винаході або в чистому вигляді, або в суміші одна з одною, призначені для включення в обсяг даного винаходу, у тому числі будь-які рацемічні суміші або рацемати.

Чисті стереоіїзомерні форми сполук і проміжних сполук, вказаних у даному документі, визначаються як ізомери, які практично не містять інших енантіомерних або діастереомерних форм тієї ж основної молекулярної структури вказаних сполук або проміжних сполук. Зокрема, термін "стереоїзомерно чистий" стосується сполук або проміжних продуктів, що характеризуються стереоїзомерним надлишком, що становить щонайменше 8095 (тобто не менше 9095 одного ізомеру і не більше 1095 інших можливих ізомерів), до стереоіїзомерного надлишку, що становить 10095 (тобто 10095 одного ізомеру та відсутність іншого), більш конкретно, сполук або проміжних продуктів, що характеризуються стереоїзомерним надлишком від 9095 до 10095, ще більш конкретно, що характеризуються стереоїзомерним надлишком від 9495 до 10095, і найбільш конкретно, що характеризуються стереоізомерним надлишком від 9795 до 10095. Терміни "енантіомерно чистий" і "діастереомерно чистий" потрібно розуміти аналогічно, але в такому разі щодо відповідно енантіомерного надлишку та діастереомерного надлишку суміші, що становить інтерес.

Чисті стереоїзомерні форми сполук і проміжних сполук, що застосовуються згідно з даним винаходом, можна одержати із застосуванням процедур, відомих із рівня техніки. Наприклад, енантіомери можна відокремлювати один від одного шляхом селективної кристалізації їхніх діастереомерних солей з оптично активними кислотами або основами. Їх прикладами є винна кислота, дибензоїлвинна кислота, дитолуоїлвинна кислота та камфорсульфонова кислота. Як альтернатива енантіомери можна відокремлювати за допомогою хроматографічних методик із застосуванням хіральних нерухомих фаз. Зазначені чисті стереохімічно ізомерні форми також можна одержувати з відповідних чистих стереохімічно ізомерних форм придатних вихідних речовин за умови, що реакція відбувається стереоспецифічно. Переважно, якщо потрібний конкретний стереоіїзомер, то вказана сполука буде синтезована за допомогою стереоспецифічних способів одержання. У даних способах переважно застосовують енантіомерно чисті вихідні матеріали.

Загальні підходи синтезу

Синтез сполук загальної формули І можна здійснювати, як викладено на схемі 1. Похідна 2- (4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)оцтової кислоти загальної формули ЇЇ, що містить О-захисну групу РО гідроксильної функціональної групи (РО може являти собою, наприклад, О-бензильну захисну групу), можна перетворювати на відповідну похідну хлорангідриду загальної формули

ШІ їз застосуванням реагенту для хлорування, такого як, наприклад, оксалілхлорид або тіонілхлорид. Реакцію Фріделя-Крафтса за участі хлорангидриду загальної формули ПІ із заміщеним індолом загальної формули ІМ можна здійснювати із застосуванням реагенту кислоти Льюїса, такого як, наприклад, ЕСАЇСІ, у придатному розчиннику, такому як, наприклад,

СНесі», і за придатних умов реакції, які, як правило, включають охолоджування, з одержанням

З-ацильованого індолу загальної формули У. Видалення захисної групи Ро із сполук загальної формули М можна здійснювати шляхом, наприклад, відновлювального гідрогенолізу (РО - бензил) у придатному розчиннику, такому як, наприклад, ЕЇОАсС, із одержанням сполук загальної формули МІ. Уведення анілінового фрагмента в альфа-положення щодо карбонільного фрагменту сполук загальної формули МІ можна здійснювати за допомогою послідовності реакцій, яка включає, наприклад, бромування МІ реагентом, наприклад, таким як трибромід фенілтриметиламонію, у придатному розчиннику, наприклад, такому як ТНЕ, з одержанням сполук загальної формули МІЇ, і подальше здійснення реакції сполук загальної формули МІ! із 3- метокси-5-(метилсульфоніл)аніліном (МІ) у придатному розчиннику, наприклад, такому як

СНзСМ, і необов'язково із застосуванням основи, наприклад, такої як ТЕА або ОІРЕА, з одержанням сполук загальної формули І у вигляді рацемічних сумішей. Хіральне розділення сполук загальної формули ! можна здійснювати за допомогою, наприклад, хіральної хроматографії з одержанням енантіомерів А і В загальної формули І.

в

Крос - я

В Жря У Ра Ол їй Б ем ох, ех! сі с не н о / п- Як Кз Ху у сх М В 4

Х й пж ке й З ня -- - -- - о, ше іх а 62202020 Д ри і

Му в ве но и -с--85 СІ Ш -- (0-6РО з У

В В о7 в

МО. ню й ху М й Б А, НО. Й У / ку / о- (9) / ІФ) М нам - зал ІФ) ; у ж- х --4 2 ЛЯХ бу / у ; ни Ве еще) / Му ЇЙ

В тн Ві сах У ве Сну Н А г щи ? В! І - -т7 ї і і; о в М дим 7 ем о 2 н м В ОЩ ГТ в

Кз м Ва ЯІ ва І

Хіральне розділення

Енантіомери КА) та КВ)

Схема І

Як альтернатива перетворення проміжних сполук загальної формули М в сполуки загальної формули І також можна здійснювати за допомогою послідовності реакцій, викладеної на схемі 2: бромування в альфа-положенні щодо карбонільної функціональної групи проміжних сполук загальної формули М за допомогою придатного реагенту для бромування, такого як, наприклад, трибромід фенілтриметиламонію, у придатному розчиннику, такому як, наприклад, ТНЕ, забезпечує одержання сполук загальної формули ЇХ. Подальше здійснення реакції сполук загальної формули ІХ із З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліном (МІ) у придатному розчиннику, такому як, наприклад, СНіІСМ, і необов'язково із застосуванням основи, такої як, наприклад,

ТЕА або ОІРЕА, забезпечує одержання сполук загальної формули Х. Після видалення О- захисної групи (РО) із сполук загальної формули Х шляхом, наприклад, відновлювального гідрогенолізу (РО - бензил) у придатному розчиннику, такому як, наприклад, ЕОАс або мМеон, одержують сполуки загальної формули І! у вигляді рацемічних сумішей. Хіральне розділення сполук загальної формули ! можна здійснювати за допомогою, наприклад, хіральної хроматографії з одержанням енантіомерів А і В загальної формули І. (с;

сі

Кит - 4 я чит ді р вив о /

ТУ ТУ з м Віола у

Ж й чи зе зе о У г нини а 3 ---ШБШ2Н- Й г хх о и о АК що / Шк І ЩЕ , ко й Н на п -0-6 с ШІ с-во т. У а а7 сі сі - - І во-о -- но - а г: м- - - и о і Й |й Ок с- о- о- шо щ Ко р / й (9) / вам ЕТ чу од ї У ІФ) / А

А й и Й - р Чи У и и Віхи М я у Мей х КЯ хиу ів д-- У ТЛ г н Зд-- - І. й і й о сх Й го яв я о В. о

Ра ІХ На х Ва І

Хіральне розділення

Енантіомери КА) та (В)

Схема 2

У разі третього підходу синтез сполук загальної формули І можна здійснювати за допомогою послідовності реакцій, викладеної на схемі 3. У цьому підході застосовується трикомпонентна реакція в одному реакторі як ключова стадія реакції для утворення центрального скелету сполук загальної формули !: конденсація 2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорбензальдегіду (ХІ) із 3- метокси-5-(метилсульфоніл)аніліном (МІ) у придатному розчиннику, такому як, наприклад,

ЕЮН, забезпечує одержання проміжного іміну ХІЇ, який після додавання заміщеного М-Вос- захищеного індол-карбоксальдегіду загальної формули ХІІ ії за присутності каталізатору для обернення поляризації, такого як, наприклад, З-бензил-5-(2-гідроксиетил)-4-метилтіазол-З-ій, забезпечує одержання сполук загальної формули Х. Після видалення О-захисної групи (РО) із сполук загальної формули Х шляхом, наприклад, відновлювального гідрогенолізу (РО - бензил) у придатному розчиннику, такому як, наприклад, ЕОАс або МеонН, одержують сполуки загальної формули | як рацемічні суміші. Хіральне розділення сполук загальної формули можна здійснювати за допомогою, наприклад, хіральної хроматографії з одержанням енантіомерів А і В загальної формули І.

бан

Чи Ві

Вакетои в за ї ник; ї (У МИ у ую чи, г ! ша з ТО са-4 4 оме айучі хшо о ме Н | а що

Ро й -о : (й тя хІ ХІІ РО Гуль

Машу

І СІ раТО Тк но -ї й то Ме то Ме ні ма ії

УК о-- У ; що ! у т ву А й о що щи о о

Ка х Ка І

Хіральне розділення

Енантіомеви МА) та КВ)

Схема 3

Приклади

Способи І С/М5

Вимірювання під час здійснення високоефективної рідинної хроматографії (НРІС) проводили за допомогою насоса для І С, детектора на діодній матриці (БАС) або УФ-детектора та колонки, як описано у відповідних способах. За необхідності використовували додаткові детектори (див. наведену нижче таблицю способів).

Потік із колонки спрямовували до мас-спектрометра (М5), який був оснащений джерелом іонізації за атмосферного тиску. У компетенції фахівця в даній галузі є встановлення настроюваних параметрів (наприклад, діапазону сканування, часу витримки тощо) з метою одержання іонів, які забезпечують визначення номінальної моноіїзотопної молекулярної маси (ММ/У) сполуки. Збір й обробку даних здійснювали за допомогою відповідного програмного забезпечення.

Сполуки описували за їхніми значеннями експериментального часу утримування (Кі) та іонами. Якщо не вказано інше, то в таблиці даних вказаний молекулярний іон відповідає (МАНІ (протонована молекула) та/або ІМ-НІ (депротонована молекула). У випадку, якщо сполука не була безпосередньо здатна до іонізації, вказують тип аддукту (тобто МАМНАГ, (МАНСООІ|: тощо). Для молекул зі складними ізотопними розподілами (Вг, СІ) описане значення є таким значенням, яке одержане для найменшої маси ізотопу. Усі результати одержували з експериментальними похибками, які зазвичай асоційовані із застосовуваним способом.

Далі в даному документі "БОЮ" означає одиничний квадрупольний детектор, "МБО" означає мас-селективний детектор, "КТ" означає кімнатну температуру, "ВЕН" означає містковий гібрид етилсилоксану/діоксиду кремнію, "САЮ" означає детектор на діодній матриці, "Не" означає діоксид кремнію підвищеної міцності.

Коди способів І С/М5 (швидкість потоку, виражена у мл/хв; температура колонки (Т) в"С; час аналізу у хвилинах)

Швидк ість

Код потоку Час

Й Рухома | аналіз способ Прилад Колонка Й І радієнт тн й фаза У у 1 (хв.) колонк и

А:10 мМ

Уагеств: паж . , , 0,8

Асопших? | мате: ВЕН СПСООМІВідово А до 59

ІС-А пор ств Ще в95ю | Азаіах. ||, 7- РІСТ - х (1,7 мкм, : 2

ШИ НО в ух утримування тт рАБГ- 2,1 х 50 мм) тт Й й

Й сем протягом 0,7 хв. кког 500 ЗАС

ВІСН

А: 10 ММ вежа 15 о мас: СНІСООМіІ Від 10095 А до 07

Асдийу" | Мас: НУ | 000) 596Азагиохв.| мав. що т -Е Й сту В ТЕХ: ол д лу 1С-8 РІС ІЗ (1,5 мкм, | в 9575 НО ло 095 А за ШИ 3,5

БАГ- 2,1 х 100 мм) ие 0,90 хв., до 595 А оо сем | за 0.5 хв о всем

Швидк ість потоку Час

Код .

Ще . Рухома , аналіз способ Прилад Колонка Градієнт тя й фаза У у

Т (хв.) колонк и 84200 А протягом 0,49 хв. до 10,505 ас: А:9У А за2,15 хв.,

Асаціу" мат: ВЕН 7 мМ утримування ТУза3 я "аїсте: ВЕ тт о,тучрукт Май

ПРІСТ- | сСсоОоМ протягом Мк. . 1сС- СІВ (1,7 мкм, НІ / 554 6,2 рАР- 2 1х 100 мм) 4979 1,94 хв., знову пиши 2,1х ММ) сто

Очпацго СсЗСХ, до 84,25 А за 402С

Місто! М Всем 0,73 хв., утримування протягом 0,73 хв.

Уагегв: й в Від 5095 А до ке ЩО А:ІЮММ | доб зазахв,

ОСРІСТ- | УМ аїсгв: ВЕН свсоом ло 1095 А за мл/кв. 1с-5 ВАВ: СІВ (1,7 мкм, ші. РНІЮ обхв. ШИ 5

Асдицу | 2,1 х 50 мм) і то в см утримування 402С протягом Іі хв. детектор

Уагегв: лен АсібмМ | вВідзббАдо | 99

УР у аех ВЕН СТСООМ | 1095 А за 3,5 хв., | ХВ.

ІС-Е рАР- | СІВ (1,7 мкм, ШИ 5 в ( Й | НУРНІО утримування тттння

Асаину | 2,1 х 50 мм) Й то ВІСНСМ | протягом 1.5 хв. | дод детектор

Способи 5БЕС/М5

Вимірювання під час 5ЕС проводили із застосуванням аналітичної системи хроматографії з надкритичною рухомою фазою, укомплектованою бінарним насосом для доставки діоксиду вуглецю (С0О2) і модифікатором, автоматичним дозатором, термостатом для колонок,

детектором на діодній матриці, обладнаним проточною кюветою для роботи під високим тиском, що витримує до 400 бар. За умови оснащення мас-спектрометром (М5) потік із колонки спрямовували до (М5). У компетенції фахівця в даній галузі є встановлення настроюваних параметрів (наприклад, діапазону сканування, часу витримки тощо) з метою одержання іонів, що забезпечують визначення номінальної моноізотопної молекулярної маси (ММ) сполуки. Збір й обробку даних здійснювали за допомогою відповідного програмного забезпечення.

Аналітичні способи 5ЕС/М5 (швидкість потоку, виражена в мл/хв.; температура колонки (Т) в"С; протитиск (ВРЕ) у барах.

Швидкість Час аналізу

Код способу Колонка Рухома фаза Градієнт потоку Го

ПОШИ ВвВРА

Т колонки

Колонка Овісеї В 4095 В з З 7

ЗЕС-А СпігаІракфФ ІС (5 мкм, 150177 25 утримуванням 7 | ------- тя х 4,6 мм) (х0,3те ХВ. 35 100 ' ІРИМН»г

Колонка Оаісеї! вн 3095 В з 3,5 6

ЗЕС-В Спігаїсекю 00-33 (3 мкм) оо утримуванням 7 | ------- тя 100 х 4,6 мм) (ко,Зз хв. 35 103 ' ІРИМН»г

А: СО» о

Колонка раїсеів:вюн | зо0жВзабі ор 9,5

ЗЕС-С Спігазраке АБЗ (3 мкм) 0,295 хв., З пс пі 150 х 4,6 мм) ІРИМН» Ку 40 110 395 НО 7 ХВ. 3595 В, з

А: СО» утримуванням 4

Колонка Оаїсе!| 5 7 5ЕС-О Спігаграке А5-НО(5 мкм/ б БНО |хводозбюзаї п 250 х 4,6 мм) 0,2 хв., З 40 110 " ІРИМН» утримуванням 2

ХВ.

Колонка Оаїсеї А:СО» 259683 З 7

ЗЕС-Е СпігаІракф ІС (5 мкм, 150 в: мМеОнН утримуванням 7 | ------- тя х 4,6 мм) І ХВ. 35 100

Колонка Овісеї В 3095 В з З 7

ЗЕС-Е Спігаіракф ІА (5 мкм, 150) 77 5 утримуванням 7 | --------- | ----я-нтнн- х 4,6 мм) 0,575 хв. 35 100 ' ІРИМН»г

Температури плавлення

Значення являють собою або максимальні значення, або діапазони температур плавлення, та їх одержують з експериментальними похибками, які зазвичай асоційовані з даним аналітичним способом. рзесв823е (позначений як ОС)

Для ряду сполук температури плавлення визначали за допомогою 05С0823е (МешШег- Гоїєдо).

Значення температури плавлення вимірювали за градієнта температури, що становив 10 "С/хвилина. Максимальна температура становила 300 "С.

Кути оптичного обертання

Кути оптичного обертання вимірювали на поляриметрі Реткіп-ЕІтег 341 із натрієвою лампою й позначали наступним чином: |Ф12 (Х, с у Гг100 мл, розчинник, ТС).

ІФА" - (1000) / (І х с), де І означає довжину пробігу в дм, а с означає концентрацію в г/100 мл для зразка за температури Т (С) і довжини хвилі А (в нм). Якщо використовувана довжина хвилі світла становить 589 нм (О-лінія натрію), то замість цього можна використовувати символ 0.

Завжди має наводитися знак напрямку обертання (їж або -). У випадку застосування цього рівняння концентрацію і розчинник завжди наводять в круглих дужках після кута обертання. Кут обертання вказують у градусах, а одиниці концентрації не наводять (вважають, що вони виражені в г/100 мл).

Приклад 1. синтез 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-1Н-індол-З3-іл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 1) і хіральне розділення на енантіомери 1А та 18

СІ пи СІ СІ я- ІнСОсІ, р г

С ТМЕ, к.т., 30 хв. о К 2 ВВ, СНІСІЬ о х Й ул "оме?) ОН хто тод. М "оме від-30 ло 20-Є, Ми "он на | о і год. -ЕЮ в с са а вия г 0,5 н. МаОН 2 Га

СесО» а 7 3,3 н. Мас 7-0 ось 9 ус

РМЕ, к.т., , о ; 7 ох к.т.,. Протягом у; о- протягом ночі о 4 Мов кл год. но ла олова ночі а 4е "това сі СІ і сі ре ре - но пек

Ї гу во, ї У Ше В сб хо пої рашеея ше о. ІЙ На, РОС о / -е Вгз о 7 у щу - пи лю | ниви ши

ЕБАІСІ, з КОС, кт. Ю хв. фа: ТНЕ,відфСлокт, ОКУ

СН ОС, 2 год. Е и Е Баш 1,5 гол. ї- ям 1 18 КІ

М

Її м-о З а їх У- тт, Хіральне розділення -66-6Ш66Н6Н66ТОЦТЦТТТУПТОТТ р шт --Н-НШИШИНИНЦННТНТНТНТНТНЦШНЮХ Енантіомери 1А та ІВ пр нн фл

СНСМ, бос, 20 ви а год. '

Синтез проміжної сполуки 1а 5 Розчин 2-(4-хлор-2-метоксифеніл)оцтової кислоти |(САБ 170737-95-68| (20 г, 101 ммоль) у сухому ТНЕ (300 мл) охолоджували за 0 "С. Додавали оксалілхлорид (18 мл, 202 ммоль) і дві краплі ЮОМЕ. Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 30 хв.

Розчинник випарювали за зниженого тиску. Залишок розчиняли в етанолі (300 мл) і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1 год. Реакційну суміш концентрували за зниженого тиску з одержанням етил-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)ацетату Та (23 г), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез проміжної сполуки 16

До розчину етил-2-(4-хлор-2-метоксифеніл)ацетату Та (10 г, 44 ммоль) у СНоСі» (350 мл), охолодженому за -30 "С, краплями додавали 1 М розчин ВВгз в СНеоСіг (87,5 мл, 87,5 ммоль), при цьому температуру підтримували нижчою за -20 "С. Реакційну суміш перемішували за - 30 С протягом 1 год. перед гасінням за допомогою метанолу. рН доводили до 8 шляхом додавання водного насиченого розчину МансСоз. Фази розділяли. Водну фазу екстрагували за допомогою СНеСі». Органічні фази об'єднували, висушували над МазО»., фільтрували й концентрували за зниженого тиску з одержанням етил-2-(4-хлор-2-гідроксифеніл)ацетату 156 (9,5 г), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез проміжної сполуки 1с

До суміші етил-2-(4-хлор-2-гідроксифеніл)ацетату 15 |(СА5 1261826-30-5) (2,82 г, 13,1 ммоль) і карбонату цезію (8,56 г, 26,3 ммоль) у ОМЕ (50 мл) додавали бензил-2-брометиловий етер

ІСА5 1462-37-9) (2,29 г, 14,5 ммоль). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 24 год. Додавали НО і реакційну суміш екстрагували за допомогою ЕАс. Органічну фазу висушували над Маг5О:, фільтрували і концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі із використанням градієнта ЕЮАсС (від 295 до 2095) у гептані з одержанням етил-2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)ацетату 1с зо (4,17 г).

Синтез проміжної сполуки 14

До розчину етил-2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)ацетату 1с (4,17 г, 12,0 ммоль) у суміші ЕН (80 мл) і ТНЕ (40 мл) додавали 0,5 н. Маон (72 мл, 36,0 ммоль). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом З год. Реакційну суміш частково концентрували за зниженого тиску для видалення органічних розчинників. Залишок підкислювали до рН 2-3 за допомогою 1 н. НСІ і суміш екстрагували за допомогою ЕАс.

Органічну фазу висушували над Ма50О», фільтрували та концентрували за зниженого тиску з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)оцтової кислоти 14 (3,83 г).

Синтез проміжної сполуки Те:

Розчин 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)оцтової кислоти 14 (7,12 г, 22,2 ммоль) у тіонілхлориді (50 мл, 689 ммоль) перемішували за кімнатної температури протягом 18 год.

Реакційну суміш концентрували за зниженого тиску та випарювали спільно з толуолом з одержанням /-2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)уацетилхлориду Ле (7,53 г), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез проміжної сполуки 17 1 М хлорид діетилалюмінію у гексані (22,2 мл, 22,2 ммоль) додавали краплинами за 0 "С до розчину б-фтор-1Н-індолу (ІСАБ 399-51-9| (2 г, 14,86 ммоль) у СНоСіг (100 мл). Після перемішування протягом 15 хв за 0"Сб розчин /2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4- хлорфеніл)ацетилхлориду 1е (7,53 г, 22,2 ммоль) у дихлорметані (75 мл) додавали краплями протягом 1 год., при цьому внутрішню температуру реакційної суміші підтримували нижчою за 4 "С. Реакційну суміш перемішували за 0 С протягом 2 год. Додавали краплями розчин тетрагідрату тартрату калію-натрію (сегнетової солі) (СА 6100-16-9І (8,35 г, 29,6 ммоль) у воді (9 мл). Реакційну суміш перемішували за 0 "С протягом 20 хв. Додавали ТНЕ (200 мл) і Маг25О4 (35 г) і суміш перемішували протягом З год. за кімнатної температури. Реакційну суміш фільтрували через ОісаійефФ і осад на фільтрі промивали декілька разів за допомогою ТНЕ.

Об'єднані фільтрати випарювали за зниженого тиску та випарювали спільно із СНЗСМ. Твердий залишок перемішували в СНзСМ (20 мл) за 40 "С. Осад відфільтровували, тверді речовини промивали за допомогою СНзСМ (З х З мл) і висушували під вакуумом за 45 "С з одержанням неочищеної сполуки 1 (2,48 г). Концентруванням фільтрату одержували другу порцію 11 (0,9 г).

Об'єднані фракції (3,4 г) перекристалізовували з ЕОАс. Осад відфільтровували, промивали за допомогою ЕТОАс (Зх) і висушували під вакуумом за 45"С з одержанням 2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(6-фтор-1Н-індол-З-іл)уетанону 11 (2,21 г).

Синтез проміжної сполуки 19

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(6-фтор-1Н-індол-З-іл)етанону 1 (2,21 г, 5,05 ммоль) і 1095 паладію на вугіллі (1 г) в ЕАс (75 мл) і ТНЕ (40 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 10 хв. в атмосфері Не. Реакційну суміш фільтрували через

ОісаШшефФф і фільтрат концентрували за зниженого тиску. Залишок кристалізували з суміші ТНЕ (10 мл) та діїзопропілового етеру (20 мл). Осад відфільтровували, промивали за допомогою діїізопропілового етеру (Зх) і висушували під вакуумом за 50 "С з одержанням 2-(4-хлор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-1Н-індол-з-іл)етанону 19 (1,52 г).

Синтез проміжної сполуки 1п

Трибромід фенілтриметиламонію (САЗ 4207-56-11 (1,73 г, 4,59 ммоль) додавали порціями до охолодженого (070) розчину /2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-1Н-індол-3- іл)етанону 149 (1,52 г, 4,37 ммоль) у ТНЕ (60 мл). Суміш перемішували за 0 "С протягом 45 хв. і за кімнатної температури протягом 90 хв. Осад відфільтровували й промивали за допомогою

ТНЕ. Об'єднані фільтрати концентрували за зниженого тиску з одержанням 2-бром-2-(4-хлор-2- (2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-1Н-індол-З-іл)уетанону 1п (1,87 г), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез сполуки 1 і хіральне розділення на енантіомери 1А та 18

Суміш 2-бром-2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-1Н-індол-З-іл)етанону 1П (1,87 г, 4,37 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА5 62606-02-4) (1,76 г, 8,74 ммоль) і дізопропілетиламіну (1,51 мл, 8,74 ммоль) у СНЗСМ (125 мл) перемішували за 60 "С протягом 20 год. Реакційну суміш розбавляли водою (500 мл) та екстрагували за допомогою ЕбО (2х).

Об'єднані органічні фракції промивали сольовим розчином, висушували над Мод5бох і випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж ОСгасе КемеїегієФ із осилікагелем 80 г, рухома фаза: гептан/Е(ОАСсС/ЕКН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували, випарювали за зниженого тиску та випарювали спільно з СНЗСМ. Залишок очищали за допомогою обернено- фазової НРІ С (нерухома фаза: Кготазік) С18 100А 5 мкм (ЕКа Мобеї), рухома фаза: градієнт від 5095 бікарбонату амонію у воді (0,2595), 5095 ацетонітрилу до 095 бікарбонату амонію у воді (0,2595), 10095 ацетонітрилу). Фракції, що містять продукт, об'єднували та випарювали за зниженого тиску з одержанням сполуки 1 (1400 мг) як рацемічної суміші.

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 1 (1400 мг) здійснювали за допомогою хірального (610) розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: (5,5) МУпеїК-Ої1, 5 мкм за допомогою методики рециркуляції із відбиранням піка, рухома фаза: 10095 етанол). Фракції, що містять продукт, об'єднували та випарювали за зниженого тиску з одержанням енантіомеру ТА (588 мг) як першого елюйованого продукту та енантіомеру 18 (466 мг) як другого елюйованого продукту. Енантіомер ТА очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж Огасе КемеїегізФ із силікагелем 12 г, рухома фаза: гептан/Е(ОАсС/ЕФН, градієнт від 100/00 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували та випарювали за зниженого тиску. Залишок перемішували в НгО (7,5 мл) - МеОнН (2,5 мл). Тверді речовини відфільтровували, промивали сумішшю НгО/Меон 3/1 (Зх) і висушували під вакуумом за 45 "С з одержанням енантіомеру ТА (0,425 г). Енантіомер 18 очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж

Сгасе КемеїегізФ із силікагелем 12 г, рухома фаза: гептан/г(ОАсС/ЕЮН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували та випарювали за зниженого тиску. Залишок перемішували в НгО (7,5 мл) - МеОнН (2,5 мл). Тверді речовини відфільтровували, промивали сумішшю НгО/Меон 3/1 (4х) і висушували під вакуумом за 45 "С з одержанням енантіомеру 18 (0,375 г).

Сполука 1

ІН ЯМР (300 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,85 - 4,09 (т, 2 Н) 4,20 (ї, 9-43

Гц, 2 Н) 5,30 (Ї, 9У-4,9 Гу, 1 Н) 6,38 (й, 9-7,5 Гц, 1 Н) 6,58 (5, 1 Н) 6,66 (5, 1 Н) 6,91 - 7,00 (т, 2 Н) 7,01 - 7,15 (т, З Н) 7,25 (да, 9-94, 2,3 Гц, 1 Н) 7,37 (й, 9-83 Гц, 1 Н) 8,16 (ад, 9-8,7, 5,7 Гц, 1 Н) 8,68 (5, 1 Н) 12,17 (бг. 5., 1 Н)

І С/М5 (спосіб І С-0): Вк 3,70 хв., МН" 547

Енантіомер ТА

І"Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-ав) 6 ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,88 - 4,05 (т, 2 Н) 4,20 (ї, 9У-4,6

Гц, 2 Н) 5,26 (І, 9-5,5 Гц, 1 Н) 6,37 (9, 9У-7,8 Гц, 1 Н) 6,58 (І, 9-1,9 Гц, 1 Н) 6,65 (І, 9-21 Гц, 1 Н) 6,92 -6,97 (т, 2 Н) 7,02 - 7,09 (т, 2 Н) 7,11 (9, 922,0 Гу, 1 Н) 7,24 (аа, 9-96, 2,4 Гу, 1 Н) 7,37 (а, уеЕ8,З Гу, 1 Н) 8,15 (да, 9-88, 5,6 Гц, 1 Н) 8,67 (5, 1 Н) 12,15 (бг 5, 1 Н)

Ї С/мМ5 (спосіб І С-А): В; 1,05 хв., МН" 547

ІФЧого: 139,32 (с 0,435, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб БЕС-0): Ві 3,52 хв., МН" 547, хіральна чистота 99,09.

Енантіомер 18 зо "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50-адв) б ррт 3,08 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,88 - 4,05 (т, 2 Н) 4,20 (ї, 9-46

Гц, 2 Н) 5,27 (1, У-5,5 Гц, 1 Н) 6,37 (9, 9-7,7 Гу, 1 Н) 6,58 (І, У-1,9 Гц, 1 Н) 6,66 (ї, 9-21 Гц, 1 Н) 6,92 -6,97 (т, 2 Н) 7,02 - 7,09 (т, 2 Н) 7,11 (а, 9-2,0 Гу, 1 Н) 7,24 (аа, 9-96, 2,4 Гц, 1 Н) 7,37 (й, уУ-8,3 Гц, 1 Н) 8,15 (аа, 2-8,8, 5,6 Гц, 1 Н) 8,67 (5, 1 Н) 12,15 (рг 5, 1 Н)

Ї С/мМ5 (спосіб І С-А): В; 1,05 хв., МН" 547

ІФого: -145,67 (с 0,605, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-С): Вк 4,02 хв., МН" 547, хіральна чистота 97,99.

Приклад 2. синтез /1-(б-хлор-1Н-індол-З-іл)-2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 2) і хіральне розділення на енантіомери 2А та 28 а ик хи й й І и У о Сук рин нич У нею оті ще віз (У -- - я Й000--т 0-й НЄЕ--- ат веАСІ, г БОАсклоїтол ПУ ТНЕ, відОчС докт,

ССС, год одврй тм алі З год. ?2а 25 й ОМе Не но М но, вай я еВ, Тв то оме о; дити 000000 а пом Я А У Хіральне розділення хо А - ,Йш|у(«4: 0 - - - - 6 ще: у щі У --- -- - - Яял -ж 2 ІЕнантізмери 2А та 28

АХ А СТСМ, ТМЕ, кт, 4 я с" ан 5 днів шо астн 2 о 2

Синтез проміжної сполуки 2а

1 М хлорид дієтилалюмінію у гексані (15,0 мл, 15,0 ммоль) додавали краплями за 0 "С до розчину б-хлор-1Н-індолу |(СА5 17422-33-2| (1,52 г, 10,0 ммоль) у СНоСі» (35 мл). Через 30 хв. за 0 "С повільно додавали розчин 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)ацетилхлориду 1е (5,09 г, 15,0 ммоль, синтез: див. приклад 1) у СНеСі» (10 мл). Реакційну суміш перемішували за 0 С протягом З год. Додавали 1 М розчин сегнетової солі. Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1 год. Тверді речовини, що утворилися, відфільтровували й розподіляли між ЕОАс і З н. НСІ. Фази розділяли. Водну фазу екстрагували за допомогою

ЕАСс, і об'єднані органічні фази промивали сольовим розчином, висушували над Моа5ох, фільтрували й концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали з ЕЮАс. Осад відфільтровували та висушували під вакуумом з одержанням першої партії 2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(6-хлор-1Н-індол-З-іл)етанону 2а. Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі із використанням градієнта ЕТОАс (095 - 5095) у гептані. Фракції, що містять потрібний продукт, об'єднували та концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали з ЕАс. Тверді речовини фільтрували та висушували під вакуумом з одержанням другої порції 2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(6-хлор-1Н-індол-З-іл)етанону 2а (загальна кількість для двох партій: 2,10 г).

Синтез проміжної сполуки 25

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(6б-хлор-1Н-індол-З-іл)етанону 2а (1,98 г, 4,36 ммоль) і 1095 паладію на вугіллі (0,2 г) в ЕЮАс (40 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 1 год. в атмосфері Не. Реакційну суміш розбавляли ТНЕ і фільтрували через СеїйеФф) Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали з ЕІОАс. Тверді речовини відфільтровували та висушували під вакуумом з одержанням 1-(б-хлор-1Н-індол-З-іл)- 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону 26 (1,29 г).

Синтез проміжної сполуки 2с

Розчин триброміду фенілтриметиламонію |ІСА5 4207-56-11 (1,47 г, 3,91 ммоль) у ТНЕ (10 мл) додавали краплями за 0"Сб до розчину / 1-(б-хлор-1Н-індол-З3-іл)-2-(4-хлор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)етанону 26 (1,29 г, 3,55 ммоль) у ТНЕ (25 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом З год. Осад відфільтровували й промивали за допомогою ТНЕ.

Фільтрат концентрували за зниженого тиску з одержанням 2-бром-1-(6-хлор-1Н-індол-3-іл)-2-(4- хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону 2с (1,57 г), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез сполуки 2 і хіральне розділення на енантіомери 2А та 28

Суміш 2-бром-1-(6б-хлор-1 Н-індол-З3-іл)-2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону 2с (1,57 г, 3,55 ммоль) і З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА 62606-02-4) (2,14 г, 10,7 ммоль) у

СНЗІСМ (35 мл) і ТНЕ (10 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 5 днів. Реакційну суміш концентрували за зниженого тиску. Залишок розчиняли в ЕЇ(ОАс і промивали 1 н. НОСІ.

Органічну фазу промивали 1 н. НСІ і водним насиченим розчином Мансоз, висушували над

Маг5О», фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали з ЕІОАс і ТНЕ.

Тверді речовини відфільтровували. Фільтрат концентрували за зниженого тиску і залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі із використанням градієнта ЕЮАсС (від 1095 до 10095) у СНеСі». Фракції, що містять потрібний продукт, об'єднували з твердими речовинами, одержаними раніше, та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі із використанням ЕТОАс (5095) у СНеСі» як елюенту з одержанням /1-(6б-хлор-1Н-індол-3-іл)-2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 2, 0,99 г) як рацемічної суміші.

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 2 (894 мг) здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: А5 20 мкм, рухома фаза: 10090 метанол). Фракції, що містять продукт, об'єднували та випарювали з одержанням енантіомеру 2А (324 мг) як першого елюйованого продукту та енантіомеру 28 (328 мг) як другого елюйованого продукту. Обидва енантіомери піддавали твердненню наступним чином: тверді речовини перемішували в 1/1 суміші води і Меон (10 мл) протягом 1 год., відфільтровували й висушували під вакуумом за 50 "С з одержанням енантіомеру 2А (253 мг) та енантіомеру 28 (252 мг) як білі порошки.

Сполука 2

І"Н ЯМР (300 МГц, ОМ50-ав6) 6 ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,83- 410 (т, 2) 420 (т, 2 Н) 5,31 (Бг. 5., 1 Н) 6,38 (а, 9У-7,9 Гц, 1 Н) 6,58 (5, 1 Н) 6,66 (5, 1 Н) 6,90 - 6,99 (т, 2 Н) 7,02 - 7,15 (т, 2 Н) 7,23 (аа, 9-86, 1,6 Гц, 1 Н) 7,36 (й, 9У-8,3 Гц, 1 Н) 7,50 (5, 1 Н) 8,15 (й, 9У-8,5 Гц, 1 Н) 8,70 (5, 1 Н) 12,23 (ре. 5., 1 Н) бо І.С/М5 (спосіб І С-Е): АВ: 1,37 хв., МН" 563

Енантіомер 2А "Н ЯМР (360 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 3,08 (в, З Н) 3,72 (в, З Н) 3,86 - 4,07 (т, 2 Н) 4,20 (Бгії, 94,5 Гц, 2 Н) 5,30 (І, 9-5,7 Гц, 1 Н) 6,37 (рга, У-7,7 Гц, 1 Н) 6,58 (5, 1 Н) 6,65 (рг 5, 1 Н) 6,90 - 6,99 (т, 2 Н) 7,05 - 7,14 (т, 2 Н) 7,22 (да, 2-8,5, 1,9 Гц, 1 Н) 7,36 (а, 9У-8,3 Гц, 1 Н) 7,50 (а, У-1,8

Гц, 1 Н) 8,15 (а, 9У-8,5 Гц, 1 Н) 8,70 (5, 1 Н) 12,23 (5,1 Н)

І С/М5 (спосіб І С-А): В 1,11 хв., МН" 563

ІФого: 149,57 (с 0,43, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-С): Вк4,15 хв., МН" 563, хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 12270

Енантіомер 28 "Н ЯМР (360 МГц, ОМ5О-ав) б ррт 3,08 (в, З Н) 3,72 (в, З Н) 3,86 - 4,07 (т, 2 Н) 4,19 (Бгії, у-4,5 Гц, 2 Н) 5,30 (ї, 9-5,7 Гц, 1 Н) 6,37 (бг а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 6,58 (5, 1 Н) 6,66 (Бу 5, 1 Н) 6,90 - 6,99 (т, 2 Н) 7,05 - 7,14 (т, 2 Н) 7,23 (да, У-8,6, 1,8 Гц, 1 Н) 7,36 (а, 9-8,3 Гц, 1 Н) 7,50 (а, 9-1,9

Гу, 1 Н) 8,15 (а, 9-8,5 Гц, 1 Н) 8,70 (5, 1 Н) 12,23 (5,1 Н)

І С/М5 (спосіб І С-А): В 1,11 хв., МН" 563

ІФЧого: -144,17 (с 0,401, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб БЕО-С): Нь4,68 хв., МН" 563, хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 121 С

Приклад 3. синтез 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-метокси-1Н-індол-З-іл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука З) і хіральне розділення на енантіомери ЗА та ЗВ й во о; а с мих Щ во у но ду р ие о ? Мова Тоні , бок ї Я Ще плн 1е о, На РИС о; ва 5 -- -- -- о дят- м опт мео/ 7 7ДО0 ББАІСЇ, СТСЬ, г пюодекттд стру 0 ТНЕ відб'Єлокт, від-50чС док. Зі годомео7 М мео7 ТМ 3 тел.

За Кім

Я ОоМе Но

МО дн ТУ А Но т

ОК ші Ї 4 Й ор дме й ВН ная Фь І А - Хіральне розділення т --66Щ6-ЩЩ6ШШШ2ИШИ Й | У н 7в- --- 3-7 Енантіомерн ЗА та ЗВ

Ма лях м ТМЕ, 6О2С, 64 год. мером а З

Н я з зе

Синтез проміжної сполуки За 1 М хлорид діетилалюмінію у гексані (17,2 мл, 17,2 ммоль) додавали краплями за -50 "С у суспензію б-метокси-1Н-індолу |(СА5 3189-13-7) (1,69 г, 11,5 ммоль) у СНоСі2 (56 мл). Через 30 хв. за -50 "С повільно додавали розчин 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніллуацетилхлориду 1е (5,82 г, 17,2 ммоль, синтез: див. приклад 1) у СНоСі» (23 мл). Реакційну суміш перемішували за -50"С протягом З год, забезпечували повільне нагрівання до кімнатної температури та перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли СНеосСіг та виливали в 1 М розчин сегнетової солі. Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 год. Фази розділяли. Органічну фазу промивали НгО і сольовим розчином, висушували над

Ма?»5О», фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі з використанням градієнта ЕЮАс (2095 - 6095) у гептані.

Фракції, що містять потрібний продукт, об'єднували та випарювали за зниженого тиску. Залишок розтирали з ЕЮАс. Тверді речовини відфільтровували та висушували під вакуумом з одержанням /2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(6-метокси-1Н-індол-З-іл)уетанону За (1,39 г).

Синтез проміжної сполуки ЗБ

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(б-метокси-1 Н-індол-З3-іл)уетанону За (2,13 г, 4,79 ммоль) і 1095 паладію на вугіллі (0,2 г) в ЕІАс (125 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 5 год. в атмосфері Не. Реакційну суміш фільтрували через Сеїйеф.

Фільтрувальний шар промивали за допомогою ТНЕ. Об'єднані фільтрати концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали з СНеСі». Тверді речовини відфільтровували та висушували під вакуумом з одержанням 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-метокси-1 Н- індол-З-іл)етанону ЗБ (1,38 г).

Синтез сполуки З і хіральне розділення на енантіомери ЗА та ЗВ

Розчин триброміду фенілтриметиламонію |ІСА5 4207-56-11 (1,57 г, 4,18 ммоль) у ТНЕ (27 мл) додавали краплями за 0 "С до розчину 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-метокси-1 Н- індол-З-іл)етанону ЗБ (1,38 г, 3,83 ммоль) у ТНЕ (37 мл). Суміш перемішували за 0 "С протягом 1 год. і за кімнатної температури протягом З год. Додавали З-метокси-5-(метилсульфоніл)анілін

ІСА5 62606-02-4| (3,85 г, 19,1 ммоль) і реакційну суміш нагрівали за 60 "С протягом 64 год.

Реакційну суміш розбавляли ЕТОАс і промивали 1 н. НСІЇІ. Фази розділяли. Органічну фазу промивали 1 н. НСІ, водним насиченим розчином МанНсСОз, Нг2О та сольовим розчином, висушували над Маг5О54, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі з використанням градієнта Меон (від 095 до 1095) у СН»СІ». Шляхом подальшого очищення за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі з використанням градієнта ЕІОАсС (від 5095 до 95905) у гептані, за яким здійснювали осаджування з ЕАс, одержували 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(б-метокси-1Н-індол-З-іл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанон (сполука 3, 1,12 г) як рацемічну суміш.

Хіральне розділення енантіомерів сполуки З (1,12 г) здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: А5 20 мкм, рухома фаза: 10090 метанол). Фракції, що містять продукт, об'єднували та випарювали за зниженого тиску з одержанням енантіомеру ЗА як першого елюйованого продукту та енантіомеру ЗВ як другого елюйованого продукту. Енантіомер ЗА перемішували в суміші Е2О (б мл) і СНзЗСМ (0,3 мл).

Тверді речовини відфільтровували, промивали ЕСО (5 х 1,5 мл) і висушували під вакуумом з одержанням енантіомеру ЗА (392 мг) як порошку. Енантіомер ЗВ перемішували у суміші Е2О (З мл) ії СНзСМ (0,15 мл). Тверді речовини відфільтровували, промивали ЕСО (5 х 1,0 мл) і висушували під вакуумом з одержанням енантіомеру ЗВ (172 мг) як порошку.

Сполука З "Н ЯМР (300 МГц, ОМ50О-ав) 6 ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,76 (5, З Н) 3,86 - 4,10 (т, 2 Н) 4,19 (т, 2 Н) 5,30 (Її, 9У-5,3 Гц, 1 Н) 6,34 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 6,57 (5, 1 Н) 6,65 (5, 1 Н) 6,83 (аа, 9У-8,7, 2,0 Гц, 1 Н) 6,94 (т, З Н) 7,06 (а, 9У-7,7 Гц, 1 Н) 7,10 (5, 1 Н) 7,36 (й, 9У-8,6 Гц, 1 Н) 8,02 (а, 9-8,7

Гу, 1 Н) 8,55 (5, 1 Н) 11,92 (бБг. 5., 1 Н)

І.С/М5 (спосіб І С-0): В; 3,49 хв., МН" 559

Енантіомер ЗА "Н ЯМР (360 МГц, ОМ50-4дв) 5 ррт 3,08 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,76 (5, З Н) 3,89 - 4,07 (т, 2 Н) 4,19 (ї, 9-4,7 Гц, 2 Н) 5,26 - 5,33 (т, 1 Н) 6,34 (й, 9-7,8 Гц, 1 Н) 6,55 - 6,58 (т, 1 Н) 6,63 - 6,67 (т, 1 Н) 6,83 (аа, 9-8,7, 2,3 Гц, 1 Н) 6,91 - 6,97 (т, З Н) 7,05 (й, У-7,8 Гц, 1 Н) 7,11 (а, 9-20 Гц, 1 Н) 7,36 (а, 9-8,3 Гц, 1 Н) 8,03 (а, 9-8,7 Гу, 1 Н) 8,55 (5, 1 Н) 11,92 (рг5, 1 Н)

І.С/М5 (спосіб І С-В): Ах 1,90 хв., МН" 559

ІФЧого: 139,12 (с 0,445, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5БЕС-О): В: 4,04 хв., МН" 559, хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 146 "С

Енантіомер ЗВ

ІН ЯМР (360 МГц, ОМ50О-4в) 6 ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,76 (5, З Н) 3,89 - 4,07 (т, 2 Н) 4,19 (ї, 9-4,7 Гц, 2 Н) 5,26 - 5,33 (т, 1 Н) 6,35 (й, 9-7,7 Гц, 1 Н) 6,55 - 6,58 (т, 1 Н) 6,63 - 6,67 (т, 1 Н) 6,83 (аа, 9-8,7, 2,3 Гц, 1 Н) 6,91 - 6,97 (т, З Н) 7,05 (й, У-7,8 Гц, 1 Н) 7,11 (а, 9-20 Гц, 1 Н) 7,36 (а, 9-8,3 Гц, 1 Н) 8,03 (й, 9У-8,7 Гц, 1 Н) 8,55 (5, 1 Н) 11,92 (Бг 5, 1 Н)

І.С/М5 (спосіб І С-В): В; 1,89 хв., МН" 559

ІФЧо-о: -136,07 (с 0,455, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5БЕС-О): В: 4,47 хв., МН" 559, хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 149 С

Приклад 4. синтез 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-7-метил-1 Н-індол-З-іл)-2- ((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 4) і хіральне розділення на енантіомери 4А та 48 ро г сі с о 4 вно щ- но - 4

У і ху АТ и вади юн, На ас Щ орі Я Ще ру ле 5 га пу. і 4 Вуз вл ЕСАСЇ. поту КОС, кло, 2 год. хе -х ТНЕ, відО"Слокт., і й СТСЬ. ОС, 2 год. во; Ж й, 2 год.

Її н Ї н 42 4 п омМе в но т о но й Тл то ій Я й м, рме у, МИ Ь ЗА Хіральне розділення (р п - я ( -т (г н бо --- -0--. Енантюомери ЗА та 48 ож М СТСМ, ТМЕ, кот. бднів Т т , в!

Ас

Синтез проміжної сполуки 4а 1 М хлорид діетилалюмінію у гексані (12,2 г, 12,2 ммоль) додавали краплями за 0 "С до суспензії б-фтор-7-метил-1Н-індолу |(САБ 57817-10-4) (1,20 г, 8,04 ммоль) у СНоСї» (17 мл).

Через 30 хв. за 0"С повільно додавали розчин /2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4- хлорфеніл)ацетилхлориду Те (4,09 г, 12,1 ммоль, синтез: див. приклад 1) у СНоСі» (17 мл).

Реакційну суміш перемішували за 0 "С протягом 2 год. Додавали 1М розчин сегнетової солі і суміш енергійно перемішували протягом 2 год. Додавали Е(ОАс. Фази розділяли. Водну фазу екстрагували за допомогою ЕОАс. Органічні фази об'єднували, висушували над М4абох, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш- хроматографії на силікагелі із використанням градієнта ЕТОАс (від 595 до 5095) у СНесСі».

Шляхом додаткового очищення за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі із використанням градієнта ЕТОАс (від 595 до 5095) у гептані одержували 2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(6-фтор-7-метил-1Н-індол-З-іл)етанон 4а (2,94 г).

Синтез проміжної сполуки 4р

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(6-фтор-7-метил-1Н-індол-З-ілуетанону 4а (2,69 г, 5,95 ммоль) і 1095 паладію на вугіллі (0,3 г) в ЕІЮАс (150 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 2 год. в атмосфері Не. Реакційну суміш фільтрували через Сеїйеф.

Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали з ЕІЮАс. Тверді речовини відфільтровували та висушували під вакуумом з одержанням / 2-(4-хлор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-7-метил-1 Н-індол-з-іл)етанону 465 (1,15 г).

Синтез проміжної сполуки 4с

Розчин триброміду фенілтриметиламонію |ІСА5 4207-56-11 (1,09 г, 2,89 ммоль) у ТНЕ (18 мл) додавали краплями за 0 "С до розчину 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-7-метил- 1Н-індол-З-іл)етанону 4р (0,95 г, 2,63 ммоль) у ТНЕ (25 мл). Суміш перемішували за 0"с протягом 15 хв. і за кімнатної температури протягом 2 год. Осад відфільтровували та промивали за допомогою ЕІОАс. Фільтрат концентрували за зниженого тиску з одержанням 2- бром-2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-7-метил-1Н-індол-З-іл)етанону 4с (1,16 г), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез сполуки 4 і хіральне розділення на енантіомери 4А та 48

Суміш 2-бром-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-хлор-7-метил-1 Н-індол-З-іл/уетанону 4с (1,16 г, 2,63 ммоль) і З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА 62606-02-4| (1,59 г, 7,90 ммоль) у СНІСМ (6 мл) і ТНЕ (6 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 6 днів.

Реакційну суміш розбавляли ЕОАс і промивали за допомогою 1 н. НС. Органічну фазу промивали 1 н. НСІ, водним насиченим розчином МанНсСоОз, НгО і сольовим розчином, висушували над Мо95О5, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі із використанням градієнта ЕЮАс (від 1595 до 7095) у СНеСіг. Фракції, що містять потрібний продукт, об'єднували та концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали з СНеСі». Тверді речовини відфільтровували та висушували під вакуумом з одержанням 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(б-фтор-7- метил-1Н-індол-3-іл)-2-(З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 4, 1,05 г) як рацемічної суміші.

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 4 (1,37 г) здійснювали за допомогою хіральної

ЗЕС (нерухома фаза: СпПігаІракф ІА 5 мкм, 250 х 20 мм, рухома фаза: 36,295 Меон, 6095 СО», 3,895 ОСМ). Фракції, що містять продукт, об'єднували та випарювали за зниженого тиску з одержанням енантіомеру 4А (548 мг) як першого елюйованого продукту та енантіомеру 4В (574 мг) як другого елюйованого продукту. Енантіомер 4А перемішували у суміші ЕСО (6 мл) і СНзЗСМ (0,25 мл). Тверді речовини відфільтровували, промивали ЕСО (3 х 1,5 мл) і висушували під вакуумом за 507С з одержанням енантіомеру 4А (369 мг) як порошку. Енантіомер 4В перемішували у суміші Е2О (б мл) і СНзСМ (0,25 мл). Тверді речовини відфільтровували, промивали ЕСО (5 х 1,0 мл) і висушували під вакуумом за 50 "С з одержанням енантіомеру 48 (352 мг) як порошку.

Сполука 4 "Н ЯМР (300 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 2,39 (в, З Н) 3,09 (в, З Н) 3,72 (в, З Н) 3,88 - 4,10 (т, 2 Н) 4,19 (т, 2 Н) 5,32 (бг. 5., 1 Н) 6,40 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 6,57 (5, 1 Н) 6,67 (5, 1 Н) 6,89 - 7,00 (т, 2 Н) 7,01 - 7,09 (т, 2 Н) 7,11 (а, 9У-1,8 Гц, 1 Н) 7,36 (й, 9У-8,3 Гц, 1 Н) 7,98 (да, У-8,5, 5,2 Гц, 1 Н) 8,64 (5,1 Н) 12,24 (ре. 5., 1 Н)

І.С/М5 (спосіб І С-Е): В 1,31 хв., МН" 561

Енантіомер 4А "Н ЯМР (400 МГц, ОМ5О-ав) б ррт 2,38 (5, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,90 - 4,07 (т, 2 Н) 4,19 (і, 9-4,7 Гц, 2 Н) 5,28 (Бгї, 9-5,3 Гу, 1 Н) 6,40 (а, 9-7,8 Гу, 1 Н) 6,57 (Ї, 9-1,9 Гц, 1 Н) 6,65 - 6,68 (т, 1 Н) 6,92 - 6,97 (т, 2 Н) 6,98 - 7,06 (т, 2 Н) 7,10 (а, 9-2,0 Гц, 1 Н) 7,36 (а, 9-83 Гц, 1 Н) 7,98 (аа, ю-8,7, 5,2 Гц, 1 Н) 8,62 (5, 1 Н) 12,21 (рг 5, 1 Н)

І С/М5 (спосіб І С-А): Ак 1,10 хв., МН" 561

ІФЧого: я116,97 (с 0,575, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-0): Ві 3,54 хв., МН" 561, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 48

І"Н ЯМР (400 МГц, ОМ50-ав) б ррт 2,35 - 2,44 (т, З Н) 3,09 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,90 - 4,08 (т, 2 Н) 4,20 (ї, 9У-4,7 Гц, 2 Н) 5,29 (рг 5, 1 Н) 6,40 (а, У-7,7 Гц, 1 Н) 6,56 - 6,60 (т, 1 Н) 6,64 - 6,70 (т, 1 Н) 6,92 - 6,97 (т, 2 Н) 6,98 - 7,07 (т, 2 Н) 7,11 (а, 9-20 Гц, 1 Н) 7,36 (а, 9-8,3 Гц, 1 Н) 7,98 (да, 2-8,8, 5,2 Гу, 1 Н) 8,63 (5, 1 Н) 12,21 (Біг 5, 1 Н)

Ї С/М5 (спосіб І С-В): Ве 2,04 хв., МН" 561 зо ІФЧого: -115,47 (с 0,455, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5БЕС-О): В: 4,09 хв., МН" 561, хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 173 С

Приклад 5. синтез 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(б-хлор-7-метил-1 Н-індол-З-іл)-2- ((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)детанону (сполука 5) і хіральне розділення на енантіомери 5А та 58

С ях ОМе о, - Впо в -х Мо ВпО, ек г а ов р ще бок нів нят 1е б. ТЯ Вгз о во

Ло 0-25 --- ОЙ дно 00 - (З - - - Я - се ту "М ЕБАІСІ, й иту ІНЕ ОС. Ттод. дозу СТВСМ. 707. 16 год.

СНоСІ;, 0ЗС, З гол. сич КЛОУВТОД ори : н і н

Ба Бе сі сі вою но. ТУ о і ОМе боки обме ! о. і А Но, Ра оо/ тм, Хіральне розділення ра ВИ з- -ВИ.БИНИНИНИНИНИННТЮтЇ р ри сн-к -565-НШНШНШНШНШНННШЦуЮютТ Енантіомери ЗА та 28 ен У н св- Ес, кот. 12 год. Ї т У н зв сети ов ат о що й оо зе

Синтез проміжної сполуки 5а 1 М хлорид діетилалюмінію в гексані (8,91 г, 8,р91 ммоль) додавали краплями за 0 "С до розчину б-хлор-7-метил-1Н-індолу (СА 57817-09-1| (0,984 г, 5,94 ммоль) у СНеСіг (40 мл).

Через 30 хв. за 0 "С повільно додавали 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)ацетилхлорид 1е (2,11 г, 6,22 ммоль) у СНоСі» (40 мл) за 0 "С. Реакційну суміш перемішували за 0 "С протягом

З год. Додавали льодяну воду і реакційну суміш екстрагували за допомогою СНесСі». Органічний шар висушували над Ма95О:, фільтрували та розчинник випарювали за зниженого тиску.

Неочищений продукт очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 120 г, гептан/с(ОАс 70/30). Чисті фракції об'єднували та випарювали до сухого стану з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(6-хлор-7-метил-1 Н-індол-З-іл)етанону 5а (1,08 г).

Синтез проміжної сполуки 56

У потоці М2 за 0 "С розчин триброміду фенілтриметиламонію (СА 4207-56-11 (0,91 г, 2,42 ммоль) у ТНЕ (40 мл) додавали краплями до розчину 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)- 1-(6-хлор-7-метил-1Н-індол-З-іл)уетанону 5а (1,08 г, 2,31 ммоль) у ТНЕ (40 мл). Суміш перемішували за 0 С протягом 1 год., охолоджувальну баню забирали і перемішування продовжували за кімнатної температури протягом 2,5 год. Осад відфільтровували й промивали за допомогою ЕОАс. Фільтрат концентрували за зниженого тиску з одержанням 2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-2-бром-1-(6-хлор-7-метил-1 Н-індол-З-іл)/етанону 55 (1,3 г).

Синтез проміжної сполуки 5с

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-2-бром-1-(6б-хлор-7-метил-1 Н-індол-3- іл)етанону 55 (1,3 г, 2,38 ммоль) і З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА 62606-02-4) (1,43 г, 1,13 ммоль) у СНІСМ (80 мл) перемішували за 70 "С протягом 16 год. Розчинник видаляли за зниженого тиску. Неочищений продукт очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 24 г, гептан/гїОАс 70/30). Чисті фракції об'єднували та випарювали до сухого стану з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(б-хлор-7-метил-1Н- індол-З3-іл)-2-((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону 5с (1,1 г).

Синтез сполуки 5 і хіральне розділення енантіомерів 5А та 5В

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(б-хлор-7-метил-1 Н-індол-З-іл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону 5с (0,8 г, 1,2 ммоль) у ЕЮАс (40 мл) гідрували за атмосферного тиску Не протягом 12 год. із застосуванням Ра/сС (10905) (54 мг, 0,05 ммоль) як каталізатора. Суміш фільтрували через шар Сеїйефб і промивали за допомогою ЕОАсС, а потім за допомогою СНоСіг/СНзОнН 90/10. Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Додавали

СНіСМ, а тверду речовину, що утворилася, відфільтровували та висушували з одержанням 2- (4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(б-хлор-7-метил-1 Н-індол-з-іл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 5) як рацемічної суміші.

Енантіомери сполуки 5 (642 мг) розділяли за допомогою хіральної 5БЕС (нерухома фаза:

Спігазракб ІСО0-Н 5 мкм 250 х 30 мм, рухома фаза: 6095 СО», 4095 МеонН (-- 0,395 ІРІМН»)) з одержанням 301 мг першого елюйованого енантіомеру і 320 мг другого елюйованого енантіомеру. Перший елюйований енантіомер кристалізували із СНзЗСМ. Осад відфільтровували й висушували з одержанням 198 мг енантіомеру 5А. Другий елюйований енантіомер кристалізували із СНз3СМ. Осад відфільтровували й висушували з одержанням 198 мг енантіомеру 58.

Сполука 5

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ5О-ав) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,91 - 4,06 (т, 2 Н) 4,19 (ї, 9-4,6

Гц, 2 Н) 5,91 (Біг 5, 1 Н) 6,41 (9, 9-7,6 Гу, 1 Н) 6,58 (т, 1 Н) 6,67 (Брг 5, 1 Н) 6,92 - 6,98 (т, 2 Н) 7,06 (а, 9-7,9 Гу, 1 Н) 7,11 (а, 9-1,9 Гц, 1 Н) 7,22 (й, 9-8,5 Гу, 1 Н) 7,35 (а, 9У-8,2 Гу, 1 Н) 7,99 (а, 9У-8,5

Гц, 1 Н) 8,64 (5, 1 Н) 12,29 (рг 5, 1 Н)

Ї С/мМ5 (спосіб І С-0): Ве 3,20 хв., МН" 577

Енантіомер 5А

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ5О-ав) 6 ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,90 - 4,07 (т, 2 Н) 4,19 (ї, 9-4,6

Гц, 2 Н) 5,31 (Ббг 5, 1 Н) 6,41 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 6,58 (І, 9-1,9 Гц, 1 Н) 6,67 (5, 1 Н) 6,93 - 6,96 (т, 2

Н) 7,06 (а, 9-76 Гу, 1 Н) 7,11 (а, 9-2,2 Гц, 1 Н) 7,22 (а, 9-8,5 Гц, 1 Н) 7,35 (а, 9-8,2 Гц, 1 Н) 7,99 (а, 9-8,5 Гу, 1 Н) 8,64 (5, 1 Н) 12,29 (Біг 5, 1 Н)

І.С/М5 (спосіб І. С-0): Ве 3,20 хв., МН" 577

ІФЧого: -119,57 (с 0,37, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб БЕС-А): В 2,30 хв., МН" 577, хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 207 "С

Енантіомер 5В

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ5О-ав) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,90 - 4,07 (т, 2 Н) 4,19 (ї, 9-4,7

Гц, 2 Н) 5,31 (Ббг 5, 1 Н) 6,41 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 6,58 (І, 9-1,7 Гц, 1 Н) 6,67 (5, 1 Н) 6,92 - 6,98 (т, 2

Н) 7,07 (9, 97,9 Гу, 1 Н) 7,11 (а, 9-1,9 Гц, 1 Н) 7,23 (а, У-8,5 Гц, 1 Н) 7,36 (а, 9-8,5 Гц, 1 Н) 7,99 (9, 9-8,2 Гу, 1 Н) 8,64 (5, 1 Н) 12,29 (Біг 5, 1 Н)

І.С/М5 (спосіб І. С-0): Ве 3,20 хв., МН" 577

ІФого: 126,17 (с 0,334, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-А): В: 2,93 хв., МН" 577, хіральна чистота 99,2965. (610) Температура плавлення: 206 С

Приклад 6. синтез 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(6-метокси-5-метил-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 6) і хіральне розділення на енантіомери 6А та 6В їяй й--

Є р, сі с и щ во їх Но їх чи не чи с 16 това щі р Но, РдЄ б. ра ї Віз

Ї 05 --- - Д-т и Я Я - Я меоб 7 Д БАС, ЗУ вОлоктиїзтод СОУ 0 ТНЕ ОС тов,

СТЬСЬ. ОС, 3 год. Мел Ще мес чят М кл.,З год. 63 бь сі Оме в но, пт А. их чі в 5 і г, Хіральне розділення чин В 110 А - Енантіомери бА та 68 що | СТІСМ, ТНЕ, ші; о мо В 55еС,ттед МВВ бе

Синтез проміжної сполуки ба 1 М хлорид дієтилалюмінію в гексані (18,6 мл, 18,6 ммоль) додавали краплями за 0 "С до розчину б-метокси-5-метил-1Н-індолу |(СА5 1071973-95-9| (2 г, 12,4 ммоль) у СНеСіг (30 мл).

Через 30 хв. за 0 "С повільно додавали 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)ацетилхлорид 1е (4,41 г, 13,0 ммоль) у СНоСі» (30 мл) за 0 "С. Реакційну суміш перемішували за 0 "С протягом

Неочищений продукт піддавали твердненню шляхом розтирання з СНзСМ/діїзопропіловим етером. Тверду речовину відфільтровували та висушували під вакуумом з одержанням 2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(6б-метокси-5-метил-1Н-індол-З3-іл)уетанону ба (2,65 г).

Синтез проміжної сполуки бр

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(б-метокси-5-метил-1Н-індол-З-іл/уетанону ба (1,7 г, 3,66 ммоль) у ЕІОАсС (70 мл) гідрували за атмосферного тиску Не протягом 12 год. із застосуванням Ра/сС (1095) (164 мг, 0,154 ммоль) як каталізатора. Суміш фільтрували через шар

Сеїйетб і промивали за допомогою ЕТОАс. Фільтрат концентрували за зниженого тиску з одержанням // 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-метокси-5-метил-1Н-індол-3-іл)уетанону бЬ (910 мг).

Синтез сполуки 6 і хіральне розділення енантіомерів бА та 6В

У потоці М2 за 0 "С розчин триброміду фенілтриметиламонію ІСА5 4207-56-11 (1,09 г, 2,89 ммоль) у ТНЕ (20 мл) додавали краплями до розчину 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6- метокси-5-метил-1Н-індол-З-іл)оетанону бБ (1,08 г, 2,89 ммоль) у ТНЕ (30 мл). Суміш перемішували за 0 "С протягом 1 год., охолоджувальну баню забирали та перемішування продовжували за кімнатної температури протягом З год. Краплями додавали З-метокси-5- (метилсульфоніл)анілін І(ІСА5 62606-02-4| (1,74 г, 8,67 ммоль) у СНІСМ (20 мл) та одержану суміш перемішували за 55 "С протягом 72 год. Суміш розбавляли СНесСі» і промивали 1 н. НСІ (двічі), висушували над М950О»:х, фільтрували та розчинник випарювали за зниженого тиску.

Очищення проводили за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 80 г,

СНеСіІг/СНнЗОН 98,5/1,53. Чисті фракції об'єднували та випарювали до сухого стану з одержанням 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(6-метокси-5-метил-1 Н-індол-З-іл)уетанону (сполука 6, 862 мг) як рацемічної суміші.

Енантіомери сполуки 6 (1,3 г) розділяли за допомогою хіральної ЕС (нерухома фаза:

СПігаїсекю О0О-Н, 5 мкм, 250 х 30 мм, рухома фаза: 5595 СО», 4595 ЕН (- 0,395 ІРІМН»х)).

Перший елюйований енантіомер піддавали твердненню із петролейного етеру/діізопропілового етеру. Осад відфільтровували й висушували з одержанням 441 мг енантіомеру бА. Другий елюйований енантіомер кристалізували із петролейного етеру/дізопропілового етеру. Осад відфільтровували та висушували з одержанням 461 мг енантіомеру 68.

Сполука 6

"Н ЯМР (500 МГц, ОМ50О-ав) 2,21 (5, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,72 (в, З Н) 3,79 (5, З Н) 3,89 - 4,06 (т, 2 Н) 4,19 (ї, 9-46 Гц, 2 Н) 5,30 (рег 5, 1 Н) 6,33 (а, У-7,9 Гц, 1 Н) 6,57 (І, 9У-1,7 Гц, 1 Н) 6,65 (рг 5, 1

Н) 6,89 (5, 1 Н) 6,92 - 6,96 (т, 2 Н) 7,01 (а, 2-7,9 Гц, 1 Н) 7,10 (а, 9-1,9 Гц, 1 Н) 7,35 (а, 9-8,2 Гу, 1 Н) 7,90 (5, 1 Н) 8,48 (5, 1 Н) 11,84 (рег 5, 1 Н)

І.С/М5 (спосіб І С-С): В: 2,99 хв., МН" 573

Енантіомер бА "Н ЯМР (500 МГц, ОМ50О-ав) 6 ррт 2,22 (5, З Н) 3,09 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,79 (5, З Н) 3,90 - 4,07 (т, 2 Н) 4,20 (І, 2-44 Гц, 2 Н) 5,30 (рі 5, 1 Н) 6,34 (а, 9-76 Гц, 1 Н) 6,57 (5, 1 Н) 6,65 (ріг 5, 1

Н) 6,90 (5, 1 Н) 6,93 - 6,97 (т, 2 Н) 7,01 (а, 2-7,9 Гц, 1 Н) 7,11 (а, 9-1,6 Гц, 1 Н) 7,36 (а, 9-8,5 Гу, 1 Н) 7,91 (5, 1 Н) 8,49 (5, 1 Н) 11,84 (рг 5, 1 Н)

І.С/М5 (спосіб І С-С): В: 2,98 хв., МН" 573

ІФого: я147,17 (с 0,2936, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-В): Вк: 1,86 хв., МН" 573, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 68 "Н ЯМР (500 МГц, ОМ50О-ав) 6 ррт 2,22 (5, З Н) 3,09 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,79 (5, З Н) 3,90 - 4,07 (т, 2 Н) 4,20 (ри, 9-44 Гц, 2 Н) 5,30 (Брг 5, 1 Н) 6,34 (9, 9-76 Гц, 1 Н) 6,57 (5, 1 Н) 6,65 (рі 5, 1 Н) 6,90 (5, 1 Н) 6,92 - 6,97 (т, 2 Н) 7,02 (а, 9-7,6 Гц, 1 Н) 7,11 (а, 9-1,6 Гц, 1 Н) 7,36 (а, 9У-8,5

Гу, 1 Н) 7,91 (в, 1 Н) 8,49 (5, 1 Н) 11,84 (ріг 5, 1 Н)

І.С/М5 (спосіб І С-С): В: 2,98 хв., МН" 573

ІФЧого: -152,47 (с 0,2927, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-В): Вк 3,43 хв., МН" 573, хіральна чистота 10095.

Приклад 7. синтез 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(5,6-дифтор-1Н-індол-З-іл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 7) і хіральне розділення на енантіомери 7А та 7В в пих

ЩО, я В

У АТХ щк Во ях юю її р С а ОТ сова Тон ші о я Її Т -

Б пи 1 Б / На, Ра) оо В щщ 7 ББА, со Ес, к.т.. 45 хв. ВІ згУ ТНЕ, к.х., З год.

СС», ОС, З год. Е7 ям вн Зм 7а ть

Но ОМе п но - І но т -43 Л в о р о / пл са й І в. ра ва вх УНК Й Хіральне розділення н н 7 те

Синтез проміжної сполуки 7а 1 М хлорид дієтилалюмінію в гексані (12,5 мл, 12,5 ммоль) додавали краплями за 0 "С до розчину 5,6-дифтор-1Н-індолу |(СА5 169674-01-5) (1,27 г, 8,30 ммоль) у СНеСіг (50 мл). Через 30 хв. за 0 "С повільно додавали розчин 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніллуацетилхлориду 1е (4,23 г, 12,5 ммоль, синтез: див. приклад 1) у СНоСі» (20 мл). Реакційну суміш перемішували за 0 "С протягом З год. Додавали 1 М розчин сегнетової солі та суміш енергійно перемішували протягом 30 хв. Додавали НгО і фази розділяли. Водну фазу екстрагували двічі за допомогою

ЕАс. Органічні фази об'єднували, промивали сольовим розчином, висушували над Ма5Оха, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали з ЕСО. Тверді речовини відфільтровували та висушували під вакуумом з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4- хлорфеніл)-1-(5,6-дифтор-1Н-індол-З3-іл)етанону 7а (1,37 г).

Синтез проміжної сполуки 7Б

Суміш /2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(5,6-дифтор-1Н-індол-З-іл)етанону 7а (1,43 г, 3,14 ммоль) і 1095 паладію на вугіллі (0,07 г) у ЕЮАс (70 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 45 хв. в атмосфері Но. Реакційну суміш фільтрували через Сеїйеф).

Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш- хроматографії на силікагелі з використанням градієнта ЕТОАс (від 095 до 1595) у СНоСіг» з одержанням 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(5,6-дифтор-1Н-індол-З-іл)етанону 765 (0,88 г).

Синтез проміжної сполуки 7с

Розчин триброміду фенілтриметиламонію |ІСАЗ 4207-56-11 (1,68 г, 4,47 ммоль) у ТНЕ (20 мл) додавали краплями до розчину 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(5,6-дифтор-1Н-індол-3- іл)етанону 76 (1,49 г, 4,07 ммоль) у ТНЕ (45 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 4 год. Осад відфільтровували та промивали за допомогою ЕОАс. Фільтрат концентрували за зниженого тиску з одержанням 2-бром-2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)- 1- (5,6-дифтор-1Н-індол-З-іл)етанону 7с (1,81 г), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез сполуки 7 і хіральне розділення на енантіомери 7А та 7В

Суміш 2-бром-2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(5,6-дифтор-1Н-індол-З-іл)уетанону 7с (1,81 г, 4,07 ммоль) і З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА5 62606-02-4) (2,46 г, 12,2 ммоль) у СНІСМ (40 мл) перемішували за кімнатної температури протягом З днів. Реакційну суміш концентрували за зниженого тиску. Залишок розподіляли між ЕАс і 1 н. НСІ. Фази розділяли.

Водну фазу екстрагували за допомогою ЕАс. Органічні фази об'єднували, промивали сольовим розчином, висушували над Моа5О»:, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі з використанням градієнта ЕЮАс (5095 - 10095) у гептані. Фракції, що містять потрібний продукт, об'єднували та концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали з СНеоСі». Тверді речовини відфільтровували та висушували під вакуумом з одержанням / 2-(4-хлор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)-1-(5,6-дифтор-1 Н-індол-З3-іл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 7, 0,97 г) як рацемічної суміші.

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 7 (914 мг) здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: А5 20 мкм, рухома фаза: 10090 метанол). Фракції, що містять продукт, об'єднували та випарювали з одержанням енантіомеру 7А (351 мг) як першого елюйованого продукту та енантіомеру 7В (337 мг) як другого елюйованого продукту. Енантіомер 7А перемішували в 1/1 суміші Мен і води (10 мл). Тверді речовини відфільтровували, промивали невеликою кількістю МеОонН/води 1/1 та висушували під вакуумом за 50 "С з одержанням енантіомеру 7А (323 мг) як білого порошку. Енантіомер 7В додатково очищали шляхом препаративної хіральної ЗЕС (нерухома фаза: СпігаІракф ріасе! А5 20 х 250 мм, рухома фаза: СО», ЕЮН -- 0,495 іІРІМН»). Фракції, що містять потрібний продукт, об'єднували та випарювали за зниженого тиску. Залишок перемішували в 1/1 суміші МеОн і води (10 мл) протягом 30 хв. Тверді речовини відфільтровували, промивали невеликою кількістю МеОН/води 1/2 і висушували під вакуумом за 50 "С з одержанням енантіомеру 7В (209 мг) як білого порошку.

Сполука 7 "Н ЯМР (300 МГц, ОМ5О-ав) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,86 - 4,07 (т, 2 Н) 4119 (т, 2 Н) 5,29 (І, 95,3 Гц, 1 Н) 6,37 (й, 9-7,9 Гу, 1 Н) 6,58 (5, 1 Н) 6,65 (5, 1 Н) 6,91 - 7,01 (т, 2 Н) 7,05 - 7,16 (т, 2 Н) 7,36 (а, У-8,3 Гц, 1 Н) 7,50 (аа, 9У-10,7, 7,0 Гц, 1 Н) 8,01 (ад, 9-11,3, 8,3 Гц, 1 Н) 8,72 (5, 1 Н) 12,31 (рег. 5., 1 Н)

І.С/М5 (спосіб І С-Е): В 1,21 хв., МН" 565

Енантіомер 7А "Н ЯМР (360 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 3,09 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,87 - 4,05 (т, 2 Н) 4,19 (Бгії, 9-46 Гц, 2 Н) 5,31 (г, 9У-5,4 Гц, 1 Н) 6,37 (а, У-7,8 Гц, 1 Н) 6,58 (Брг 5, 1 Н) 6,65 (Біг 5, 1 Н) 6,92 - 7,01 (т, 2 Н) 7,06 - 7,16 (т, 2 Н) 7,36 (а, 9-8,3 Гц, 1 Н) 7,50 (аа, У-10,7, 6,9 Гц, 1 Н) 8,01 (аа, 9-11,1,81 Гц, 1 Н) 8,72 (5, 1 Н) 12,31 (Бг5, 1 Н)

І С/М5 (спосіб І С-А): Вк 1,15 хв., МН" 565

ІФЧого: 120,22 (с 0,499, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-С): В 3,47 хв., МН" 565, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 7В "Н ЯМР (360 МГц, ОМ50-ав) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,86 - 4,06 (т, 2 Н) 4,19 (Бгі, у-4,5 Гц, 2 Н) 5,30 (Б, У-5,4 Гц, 1 Н) 6,37 (а, 9У-7,8 Гц, 1 Н) 6,58 (5, 1 Н) 6,65 (5, 1 Н) 6,92 - 7,00 (т, 2 Н) 7,06 - 7,14 (т, 2 Н) 7,36 (а, 9-8,3 Гц, 1 Н) 7,50 (аа, 9У-10,7, 6,8 Гц, 1 Н) 8,01 (аа, 9-11, 8,0Гц,1 НН) 8,72 (5,1 Н) 12,30 (5,1 Н)

І С/М5 (спосіб І С-А): Ак 1,10 хв., МН" 565

ІФого: -125,07 (с 0,414, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб БЕС-0): Н1,60 хв., МН" 565, хіральна чистота 10095.

Приклад 8. синтез 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-5-метил-1 Н-індол-З3-іл)-2- бо ((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)детанону (сполука 8) і хіральне розділення на енантіомери 8А та 88 в «У сі сі о р ВпО -к но я- | Ж -- о- ду Я з, тд А З Су зр з зв това 7 ну, вс а. Ва 05 -- Ж - 2 Ж- - Йо---- т У --------- вл ЗМ Евлдісі, прин ЕЮАс, ТНЕ, ор ТНЕ, 02С, 1,5 год,, й СТОСЬ, О9С, 1 год, в; к.т.. 15 хв. ви; к.т., 30 хв. ' кол.. З год. н н

За вв сі ОоМе с но т-к но тек то сх й тео ОМе о, / нам В ОК е тілзптіта доп, в во їн мех Й Хіральне розділення її й У ВІРА. і т н В -- -- -3353 Енантюмерн 8А та 88 ша СВСМ. 55 С,18год ООН г Шщ

Зс

Синтез проміжної сполуки ва 1 М хлорид дієтилалюмінію в гексані (17,0 мл, 17,0 ммоль) додавали краплями за 0"Сів атмосфері М2г до розчину б-фтор-5-метил-1Н-індолу |(СА5 162100-95-0) (1,69 г, 11,3 ммоль) у

СНесіг (150 мл). Через 15 хв. за 0 "С повільно додавали розчин 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4- хлорфеніл)ацетилхлориду Те (5,37 г, 15,8 ммоль, синтез: див. приклад 1) у СНоСі» (100 мл).

Реакційну суміш перемішували за 0 "С протягом 1 год. і за кімнатної температури протягом 2 год. Реакційну суміш виливали в розчин льоду/сегнетової солі та суміш енергійно перемішували. Шари розділяли. Органічний шар висушували над Мдзох і фільтрували через тонкий шар Оісаїйеф. Осад на фільтрі промивали декілька разів за допомогою ТНЕ та об'єднані фільтрати концентрували за зниженого тиску. Твердий залишок суспендували в СНзСМ (20 мл), відфільтровували, промивали невеликою кількістю СНзСМ і висушували під вакуумом за 50 "С з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(6-фтор-5-метил-1 Н-індол-3-іл)уетанону ва (2,39 г) як білої твердої речовини.

Синтез проміжної сполуки 8Б

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(6-фтор-5-метил-1Н-індол-З-іл/уетанону ва (2,39 г, 4,71 ммоль) і 1095 паладію на вугіллі (0,5 г) у ЕЮАсС (135 мл) і ТНЕ (15 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 15 хв. в атмосфері Не». Реакційну суміш фільтрували через

ОісайШефФ і осад на фільтрі промивали за допомогою ЕОАс і ТНЕ. Об'єднані фільтрати концентрували за зниженого тиску. Залишок перемішували в ОІРЕ/ТНЕ (2/1), відфільтровували, промивали за допомогою ОІРЕ (Зх) і висушували під вакуумом за 50 "С з одержанням 2-(4-хлор- 2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(б-фтор-5-метил-1 Н-індол-З3-іл)етанону 85 (0,90 г).

Синтез проміжної сполуки 8с

Трибромід фенілтриметиламонію |ІСАЗ 4207-56-1| (982 мг, 2,61 ммоль) додавали до охолодженого (07) розчину 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-5-метил-1 Н-індол-

З-іл)етанону 86 (900 г, 2,49 ммоль) у ТНЕ (60 мл) в атмосфері М». Реакційну суміш перемішували за 0 С протягом 90 хв. і за кімнатної температури протягом 30 хв. Осад відфільтровували та промивали за допомогою ТНЕ (2х). Об'єднані фільтрати концентрували за зниженого тиску з одержанням 2-бром-2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-5-метил- 1Н-індол-З-іл)етанону 8с (1,1 г), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез сполуки 8 і хіральне розділення на енантіомери 8А та 88

Суміш 2-бром-2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(б-фтор-5-метил-1 Н-індол-3-іл/уетанону вс (1,10 г, 2,49 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА 62606-02-4| (1,00 г, 4,97 ммоль) та діїізопропілетиламіну (857 мкл, 4,97 ммоль) у СНІЗСМ (60 мл) перемішували за 557 протягом 18 год. Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури та виливали в воду під час перемішування (250 мл). Продукт екстрагували за допомогою суміші Е2О/2-МетнНЕ 9/ і за допомогою ЕСО. Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над

Ма5О», фільтрували та випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж Сгасе Кемеїегі5Ф із силікагелем 40 г, рухома фаза: гептан/Б(ОАс/ЕЮН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували та випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою препаративної НРІС (нерухома фаза: КР ХВгіддефФ Ргер С18 ОВО - 10 мкм, 50 х 150 мм, рухома фаза: 0,2595 розчин

МНаАНСО: у воді, СНІЗСМ). Потрібні фракції об'єднували та випарювали за зниженого тиску, і твердий залишок висушували за 50 "С під вакуумом з одержанням рацемічного 2-(4-хлор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-5-метил-1 Н-індол-З-іл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 8, 600 мг).

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 8 (570 мг) здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: А5 20 мкм, рухома фаза: 10090 метанол). Фракції, що містять продукт, об'єднували та випарювали з одержанням енантіомеру 8А як першого елюйованого продукту та енантіомеру 88 як другого елюйованого продукту.

Обидва енантіомери перемішували у воді/Меон 4/1 (5 мл), відфільтровували, промивали за допомогою води/Меон 4/1 і висушували під вакуумом за 50 "С з одержанням енантіомеру ВА (178 мг) та енантіомеру 88 (189 мг).

Сполука 8 "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-дв) б ррт 2,30 (й, 9У-1,3 Гц, З Н) 3,08 (в5, З Н) 3,72 (в, З Н) 3,88 - 4,05 (т, 2 Н) 4,19 (І, 9-4,5 Гц, 2 Н) 527 (рг 5, 1 Н) 6,35 (а, 9-:7,7 Гц, 1 Н) 6,57 (І, 9-1,9 Гц, 1 Н) 6,64 (ї, уУ1,5 Гц, 1 Н) 6,92 - 6,97 (т, 2 Н) 7,01 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 7,10 (а, 9-2,0 Гц, 1 Н) 7,19 (й, 9-1011 Гц, 1 Н) 7,36 (а, 9-8,4 Гц, 1 Н) 8,02 (а, 97,9 Гц, 1 Н) 8,61 (5, 1 Н) 12,02 (рег 5, 1 Н)

І.С/М5 (спосіб І. С-В): Ве 2,01 хв., МН" 561

Енантіомер вА

ІН ЯМР (400 МГц, ОМ50-ав) 6 ррт 2,30 (й, 9-1,3 Гц, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,87 - 4,06 (т, 2 Н) 4,19 (Ї, 9-4,5 Гц, 2 Н) 5,26 (ргі, 9-51 Гу, 1 Н) 6,35 (а, 927,7 Гц, 1 Н) 6,57 (І, 9-1,8 Гц, 1 Н) 6,65 (Її, 9-1,9 Гц, 1 Н) 6,92 - 6,97 (т, 2 Н) 7,01 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 7,10 (а, 9-1,8 Гу, 1 Н) 7,19 (а, 9у10,1 Гу, 1 Н) 7,36 (а, 9-81 Гц, 1 Н) 8,03 (а, 9У-7,9 Гу, 1 Н) 8,61 (5, 1 Н) 12,03 (рг 5, 1 Н)

І С/М5 (спосіб І С-А): Ак 1,10 хв., МН" 561

ІФЧого: 172,47 (с 0,485, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-С): В 3,59 хв., МН" 561, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 88 "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-дв) б ррт 2,30 (й, 9У-1,3 Гц, З Н) 3,08 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,88 - 4,05 (т, 2 Н) 4,19 (ї, 2-46 Гц, 2 Н) 5,27 (Біг 5, 1 Н) 6,35 (а, У-7,7 Гц, 1 Н) 6,57 (ї, У-1,8 Гц, 1 Н) 6,65 (ї, уУ-1,8 Гц, 1 Н) 6,91 - 6,97 (т, 2 Н) 7,01 (а, У-7,9 Гц, 1 Н) 7,10 (а, 9У-2,0 Гц, 1 Н) 7,19 (а, У-10,3 Гц, 1 Н) 7,36 (а, У-8,4 Гц, 1 Н) 8,03 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 8,61 (5, 1 Н) 11,94 (ріг 5, 1 Н)

І С/М5 (спосіб І С-А): Ак 1,10 хв., МН" 561

ІФЧого: -170,67 (с 0,425, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5БЕС-О): В: 4,06 хв., МН" 561, хіральна чистота 98,7905.

Приклад 9. синтез 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(5-(трифторметил)-1Н-індол-3-іл)етанону (сполука 9) і хіральне розділення на енантіомери 9А та 98 о я Нам. с ВК ;

А ши щш бо ен дю ТЕ жк тт юю Тен у о. ач че сен 3-Й --- (Я - - - я м -- 65 :--5.| КИ ши дн косо», СТСМ, о а РОН. | - темп. утвор. флегми, 12 год. хи БОС, тод. но У да що зь --й кї по

РО р Я У сі б ше ої В ОмМе вас 1095,На ой з, ОМе п Е о, р пп Е сл їх, є / ЯК ші ЕЮАс, Я Й - і боти он вання й Ше атм. тиск, 10 хв. ван й ник ана о Н Н

Хот 9е З теє тя. | Хіральне розділення

УМХ: 160С, 4 хв.

Енантіомери 9А та 98

Синтез проміжної сполуки За

Суміш 4-хлор-2-гідрокси-бензальдегіду (СА 2420-26-01) (7,72 г, 49,31 ммоль), бензил-2- брометилового етеру |(САЗ 1462-37-9| (7,8 мл, 49,31 ммоль) і карбонату калію (8,2 г, 59,17 5 ммоль) у СНІСМ (200 мл) нагрівали за температури утворення флегми протягом 12 год. Суміш випарювали за зниженого тиску. Залишок поглинали за допомогою ЕІАс, промивали водою (двічі), висушували над М9505, фільтрували та розчинник випарювали з одержанням 2-(2- (бензилокси)етокси)-4-хлорбензальдегіду 9а (14.2 г).

Синтез проміжної сполуки 95

Суміш 2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорбензальдегіду Уа (2,1 г, 7,22 ммоль), З-метокси-5- (метилсульфоніл)аніліну (СА 62606-02-4) (1,45 г, 7,22 ммоль) у ЕЮН (18 мл) перемішували за 60 С протягом 6 год. Одержаний розчин, що містить імін 95, застосовували без додаткового очищення на наступній стадії.

Синтез проміжної сполуки 9с

До розчину хлориду 3-бензил-5-(2-гідроксиетил)-4-метилтіазол-3-ію |(САЗ 4568-71-21 (1,95 г, 7,22 ммоль) у ЕЮН (10 мл) додавали триетиламін (1 мл, 7,22 ммоль) та одержану суміш перемішували за 70 "С протягом 10 хв. Цей розчин додавали до перемішуваної суміші іміну 95 (3,42 г, 7,22 ммоль, розчин в ЕН, див. вище: синтез проміжної сполуки 9р) та трет-бутил-3- форміл-5-(трифторметил)-1Н-індол-1-карбоксилату |(САЗ 1493799-60-21 (2,7 г, 8,67 ммоль) за кімнатної температури. Суміш перемішували за 70"С протягом 12 год. Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури та переносили в герметизовану пробірку, яку потім нагрівали за 160 "С із використанням одного одномодового мікрохвильового реактора (Віоїаде

Іпйіасг ЕХР 60 ) із вихідною потужністю, що варіює від 0 до 400 Вт, протягом 4 хв. (фіксований час утримання). Суміш випарювали за зниженого тиску. Очищення проводили за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 120 г, елюент: СНаСіІг/СНзЗОН 99,5/0,5).. Чисті фракції об'єднували та випарювали за зниженого тиску. Залишок (3,48 г) поглинали за допомогою СНзОН і перемішували за кімнатної температури протягом 1 год. Осад відфільтровували та висушували з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(5-(трифторметил)-1Н-індол-З3-іл)етанону 9с (1,23 г).

Синтез сполуки 9 і хіральне розділення на енантіомери 9А та 98

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-2-((3З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(5-(трифторметил)-1Н-індол-З-іл)етанону 9 (1,10 г, 1,60 ммоль) у ЕІОАс (20 мл) гідрували протягом 10 хв. за атмосферного тиску Н»г із застосуванням 1095 Ра/С (340 мг, 0,32 ммоль) як каталізатора. Реакційну суміш розбавляли ЕЮАсС та фільтрували через шар Сеїйефбт. Фільтрат випарювали за зниженого тиску з одержанням 2-(4- хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(5- (трифторметил)-1Н-індол-З3-іл)етанону (сполука 9, 910 мг) як рацемічної суміші.

Енантіомери сполуки 9 (1,15 г) розділяли за допомогою хіральної 5ЕС (нерухома фаза:

СПігазракб ІС 5 мкм, 250 х 30 мм, рухома фаза: 7595 СО», 2595 ЕН я 0,395 ІРГМН») з одержанням 544 мг першого елюйованого енантіомеру та 464 мг другого елюйованого енантіомеру. Перший елюйований енантіомер кристалізували із СНзОН і води. Осад відфільтровували та висушували з одержанням 362 мг енантіомеру 9А. Другий елюйований енантіомер кристалізували із СНзОН і води. Осад відфільтровували та висушували з одержанням 348 мг енантіомеру 98.

Сполука 9

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ5О-ав) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,87 - 4,09 (т, 2 Н) 4,20 (ї, 9-4,6

Гц, 2 Н) 5,32 (І, 9-5,5 Гц, 1 Н) 6,42 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 6,59 (І, У-1,9 Гу, 1 Н) 6,66 (5, 1 Н) 6,94 - 6,98 (т, 2 Н) 7,10 (0, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,12 (а, 9-1,9 Гц, 1 Н) 7,38 (й, 9-8,2 Гу, 1 Н) 7,54 (аа, 9-8,7, 1,7 Гу, 1 Н) 7,67 (а, 9-8,5 Гц, 1 Н) 8,50 (5, 1 Н) 8,83 (5, 1 Н) 12,53 (рг 5, 1 Н)

Ї С/мМ5 (спосіб І С-0): Ве 3,12 хв., МН" 597

Температура плавлення: 2287

Енантіомер ЗА

І"Н ЯМР (500 МГц, ОМ5О-ав) 6 ррт 3,09 (5, З Н) 3,73 (5, З Н) 3,87 - 4,07 (т, 2 Н) 4,20 (І, 9-44

Гу, 2 Н) 5,32 (Бгї, 9У-4,4 Гц, 1 Н) 6,42 (а, 9У-7,9 Гц, 1 Н) 6,59 (5, 1 Н) 6,66 (Бг 5, 1 Н) 6,94 - 6,99 (т, 2 Н) 7,10 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,12 (а, 9-1,3 Гц, 1 Н) 7,38 (а, 9-8,2 Гу, 1 Н) 7,54 (а, 9-8,5 Гц, 1 Н) 7,67 (а, 9-8,5 Гц, 1 Н) 8,50 (5, 1 Н) 8,83 (5, 1 Н) 12,52 (рг 5,1 Н)

І.С/М5 (спосіб І. С-0): В; 3,12 хв., МН" 597

ІФЧого: -154,37 (с 0,245, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-Е): В: 1,75 хв., МН" 597, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 98

І"Н ЯМР (500 МГц, ОМ50О-ав) 6 ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,88 - 4,06 (т, 2 Н) 4,20 (і, 9-44

Гц, 2 Н) 5,32 (Б, 9-4,7 Гц, 1 Н) 6,42 (а, У-7,9 Гц, 1 Н) 6,59 (5, 1 Н) 6,66 (Бр 5, 1 Н) 6,94 - 6,98 (т, 2 Н) 7,10 (а, 9У-7,9 Гц, 1 Н) 7,12 (а, 9-1,6 Гц, 1 Н) 7,38 (а, 9-8,2 Гц, 1 Н) 7,54 (а, 2-8,5 Гц, 1 Н) 7,67 (а, 9-8,5 Гц, 1 Н) 8,50 (5, 1 Н) 8,83 (5, 1 Н) 12,50 (рі 5, 1 Н)

І.С/М5 (спосіб І. С-0): В; 3,12 хв., МН" 597 (Фо: 142,67 (с 0,284, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-Е): В: 2,15 хв., МН" 597, хіральна чистота 10095.

Приклад 10. синтез 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 10) і хіральне розділення на енантіомери 10А та 108 ре тА ч В с г. и в Вон, т М ме ль р-р сг Мова важке , ой

ЕзСО. у їе З н.вас о Ві ак БАС, боти 0 БюОлетТНЕ, боту ТНЕ, Фе, ігод,

СС: ОС. 1,5 год, й к.т.. 20 хв. шйекі ви к.о.,? год. зв зв

СІ оме с

НО, я А но ук ша З її ді Й боях, 0-Й оме і п ь з ту Хіральне розділення во, " ПРА регу я я -- й Енантюмери 10А та ЮВ ва: СТВСМ, 5570, 18 год. в ши: ос кл. А год.

Синтез проміжної сполуки 1ба 1 М хлорид дієтилалюмінію в гексані (18,2 мл, 18,2 ммоль) додавали краплями заб0'"Сів атмосфері Ме до розчину 5-(трифторметокси)-1Н-індолу (СА5 262593-63-5| (2,44 г, 121 ммоль) у

СНесіг (150 мл). Після перемішування протягом 15 хв. за 0 "С повільно додавали розчин 2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)ацетилхлориду Те (6,17 г, 18,2 ммоль, синтез: див. приклад 1) у СНоСі» (100 мл). Реакційну суміш перемішували за 0 "С протягом 90 хв. і за кімнатної температури протягом 2 год. Реакційну суміш охолоджували до 0 "С і додавали краплями розчин сегнетової солі І(ІСА5 6100-16-9| (6,85 г, 24,3 ммоль) у воді (7/7 мл). Суміш енергійно перемішували протягом 30 хв. за 0 "С. Льодяну баню забирали та додавали ТНЕ (200 мл). Після перемішування протягом 30 хв. за кімнатної температури додавали Маг5О4 (25 г). Суміш перемішували протягом 90 хв. і фільтрували через ОісаїйеФ. Осад на фільтрі промивали за допомогою ТНЕ (4 х 150 мл) та об'єднані фільтрати випарювали за зниженого тиску та випарювали спільно з СНзСМ і толуолом до сухого стану. Твердий залишок перемішували в суміші толуолу (5 мл) і СНІСМ (2,5 мл), відфільтровували, промивали невеликою кількістю толуолу/СНз3СМ (2/1) і висушували під вакуумом за 50"С з одержанням 2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(5-«трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)летанону 1б0а (1,89 г).

Фільтрат випарювали за зниженого тиску. Залишок (6,8 г) очищали за допомогою флеш- хроматографії (картридж Віоїаде? 5МАР ШкКга із силікагелем 100 г, елюент: гептан/ЕІОАсС/ЕОН градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували та випарювали за зниженого тиску, та випарювали спільно з ЕІАс. Продукт перемішували у суміші ОІРЕ (15 мл) і ЕЮАс (1 мл), відфільтровували, промивали ОІРЕ (2х) і висушували під вакуумом за 50 "С з одержанням другої партії 10а (1,62 г).

Синтез проміжної сполуки 106

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(5-(трифторметокси)-1Н-індол-3- іл)етанону 10а (1,62 г, 3,22 ммоль) і 1095 паладію на вугіллі (0,5 г) у ЕІОАсС (75 мл) і ТНЕ (10 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 20 хв. в атмосфері Н». Реакційну суміш фільтрували через ОісайеФ і осад на фільтрі промивали за допомогою ТНЕ. Об'єднані фільтрати концентрували за зниженого тиску. Твердий залишок об'єднували з іншою фракцією (загальна кількість: З г), перемішували в СНесСі2 (8 мл), відфільтровували, промивали СНесСіг (5 х 1 мл) і висушували під вакуумом за 45 "С з одержанням 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1- (5-«трифторметокси)-1Н-індол-3-іл)етанону 106 (1,64 г).

Синтез проміжної сполуки 10с

Трибромід фенілтриметиламонію (САЗ 4207-56-11 (1,56 г, 4,16 ммоль) додавали порціями до охолодженого (07) розчину 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(5-(«трифторметокси)-1 Н- індол-З-іл)етанону 106 (1,64 г, 3,Р96 ммоль) у ТНЕ (75 мл) в атмосфері М». Реакційну суміш перемішували за 0 "С протягом 1 год. і за кімнатної температури протягом 40 хв. Осад відфільтровували та промивали за допомогою ТНЕ (2х). Об'єднані фільтрати концентрували за зниженого тиску З одержанням 2-бром-2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)- 1-(5- (трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)уетанону 10с (1,92 г), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез сполуки 10 і хіральне розділення на енантіомери 10А та 108

Суміш 2-бром-2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(5-(трифторметокси)-1Н-індол-3- іл)етанону 10с (1,95 г, 3,96 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА 62606-02-4) (1,60 г, 7,92 ммоль) і діззопропілетиламіну (1,37 мл, 7,92 ммоль) у СНЗСМ (75 мл) перемішували за 55"С протягом 18 год. і за кімнатної температури протягом 24 год. Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури та виливали у воду під час перемішування (350 мл).

Продукт екстрагували за допомогою ЕСО (2х). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над Мд5О», фільтрували та випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж ОСгасе КемеїегібФ із силікагелем 80 г, рухома фаза: гептан/Ег(ОАсС/ЕЮН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували, випарювали за зниженого тиску та випарювали спільно із СНЗ3СМ. Залишок очищали за допомогою препаративної НРІ С (нерухома фаза: КР ХВгідде? Ргер С18 ОВО - 10 мкм, 50 х 150 мм, рухома фаза: 0,2595 розчин МНАНСОз у воді, СНзСМ). Потрібні фракції об'єднували, випарювали за зниженого тиску, випарювали спільно із МеОнН і висушували за 50"С під вакуумом з одержанням рацемічного 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(5-«трифторметокси)-1Н-індол-3-іл)етанону (сполука 10, 700 мг). Невеликий зразок сполуки 10 (50 мг) піддавали твердненню шляхом повільного випарювання з розчину в МеОнН/воді з використанням роторного випарника Коїамарог. Тверді речовини відфільтровували, промивали водою (Зх) і висушували за 45 "С під вакуумом з одержанням аналітичного зразка сполуки 10 (46 мг).

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 10 (650 мг) здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: УМпеїКк-О1 (КК), рухома фаза: 2095 етанолу, 8095 гептану). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали з одержанням енантіомеру 10А як першого елюйованого продукту та енантіомеру 10В як другого елюйованого продукту. Обидва енантіомери перемішували у суміші води (4 мл) і МеонН (1,25 мл), відфільтровували, промивали водою/Меон 4/1 (4х) та висушували під вакуумом за 45 "С з одержанням енантіомеру 10А (115 мг) та енантіомеру 108 (140 мг).

Сполука 10

І"Н ЯМР (400 МГц, ОМ5О-дв) 6 ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,87 - 4,05 (т, 2 Н) 4,20 (І, 9-46

Гц, 2 Н) 5,27 (І, 95,6 Гу, 1 Н) 6,38 (а, У-7,9 Гц, 1 Н) 6,58 (І, 9-1,8 Гц, 1 Н) 6,65 (І, 9-24 Гц, 1 Н) бо 6,92 -6,98 (т, 2 Н) 7,07 (а, 97,7 Гц, 1 Н) 7,12 (а, 9-2,0 Гу, 1 Н) 7,21 (аа, 9У-8,8, 1,8 Гу, 1 Н) 7,38

(а, 9-81 Гу, 1 Н) 7,56 (а, 9У-8,8 Гц, 1 Н) 8,07 (а, 9-11 Гу, 1 Н) 8,77 (5, 1 Н) 12,37 (5,1 Н)

І С/М5 (спосіб І С-А): Ак 1,15 хв., МН" 613

Енантіомер 10А "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50-ав) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,87 - 4,07 (т, 2 Н) 4,20 (гі, 9-44 Гц, 2 Н) 5,29 (Би, 9-54 Гц, 1 Н) 6,39 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 6,59 (ї, У-1,9 Гц, 1 Н) 6,65 (ї, 9-22

Гу, 1 Н) 6,91 - 7,00 (т, 2 Н) 7,09 (а, У-7,9 Гц, 1 Н) 7,12 (й, 9У-1,8 Гц, 1 Н) 7,21 (аа, У-8,7,1,7 Гц, 1

Н) 7,38 (9, 9-8,4 Гу, 1 Н) 7,57 (а, У-8,8 Гц, 1 Н) 8,08 (ріг 5, 1 Н) 8,77 (5, 1 Н) 12,38 (рг 5, 1 Н)

І С/М5 (спосіб І С-А): Ак 1,15 хв., МН" 613

ІФЧого: -139,37 (с 0,425, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-С): ВЕ 3,27 хв., МН" 613, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 108

І"Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-ав) 6 ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,88 - 4,05 (т, 2 Н) 4,20 (ї, 9У-4,5

Гц, 2 Н) 5,29 (1, У-5,5 Гц, 1 Н) 6,39 (а, 9-7,7 Гу, 1 Н) 6,58 (І, У-1,8 Гц, 1 Н) 6,65 (ї, У-1,9 Гц, 1 Н) 6,92 - 6,99 (т, 2 Н) 7,09 (а, 9-7,7 Гу, 1 Н) 7,12 (а, 9-2,0 Гц, 1 Н) 7,21 (аа, 2-8,7, 1,9 Гц, 1 Н) 7,38 (а, 5-84 Гц, 1 Н) 7,57 (а, 9-8,8 Гц, 1 Н) 8,07 (а, 9У-0,9 Гу, 1 Н) 8,77 (5, 1 Н) 12,38 (ріг 5, 1 Н)

І С/М5 (спосіб І С-А): Ак 1,15 хв., МН" 613

ІФЧого: 141,77 (с 0,525, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-С): Не2,92 хв., МН" 613, хіральна чистота 10095.

Приклад 11. синтез 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(б-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 11) ї хіральне розділення з одержанням енантіомерів 11А та 118

З во. о, речи в - пе ко ксилол СО. шт В масн ща ЕЮН, Маові Ммеоб я мк темп. утвор. мео7" ех М о- меонльо, -ІУ"С. З год. іа 9 флегми, 12 год. 11» темп. утвор. флетми к.л., 12 год. с як й

І Во, я дО, Й ит. Й ра реч

СО. Си хінолін о вУбо. ню а їе пове пу ще ве з ня и з з та, ер, З меоб ям оно 220230, ме "СМ 00 БСАЮЇ мео7 ну ТНЕ. від 07С до їі 13 год. 414 СНАСТЬ ОС, 3 год. 41в кл..З год. в оме в сі в т р Впо зт ра но ще уче ші нам 5 вч Шк. ни вас ою, не со ВТ Ас т МУК

ХГ й | СНІСМ, ЗО, До з Меон, Ін: в

Ммео 48 год. Мо їх м ій атм. тиск, і год. мео В ЕК 9 117 5

Хіральне розділення

Енантіюмерн ТА та ТВ

Синтез проміжної сполуки 11а

Розчин Маоєгєї (0,69 моль, одержаний з 15,9 г Ма та 700 мл ЕЮН) додавали краплями протягом періоду (2 год. до охолодженого (-1575) розчину З-метокси-4- (трифторметокси)бензальдегіду |(СА5 853771-90-1) (50 г, 230 ммоль) та етилазидоацетату (89 г, 690 ммоль) у ЕЮН (400 мл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Після охолодження на льодяній бані реакційну суміш гасили насиченим розчином МНС (1,2 л) і перемішували протягом 10 хв. Осад відфільтровували, промивали водою і висушували з одержанням (7)-етил-2-азидо-3-(3-метокси-4-(«трифторметокси)феніл)акрилату 11а (32 г) як жовтуватої твердої речовини.

Синтез проміжної сполуки 116

Розчин (2)-етил-2-азидо-3-(3-метокси-4-«-трифторметокси)феніл)акрилату 114а (З г, 10 ммоль) у ксилолі (40 мл) нагрівали за температури утворення флегми протягом ночі. Після охолодження до кімнатної температури розчинник випарювали до сухого стану. Залишок розтирали із гексаном (50 мл) та осад відфільтровували з одержанням метил-6-метокси-5- (трифторметокси)-1Н-індол-2-карбоксилату 115 (вихід: 1,4-1,6 г) як жовтої твердої речовини.

Синтез проміжної сполуки 11с

До суміші метил-б6-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індол-2-карбоксилату 116 (25 г, 87 ммоль) у Меон/нго (2/1, 300 мл) додавали Маон (7 г, 175 ммоль) і суміш нагрівали за температури утворення флегми до одержання прозорого розчину. Після охолодження до кімнатної температури більшу частину метанолу видаляли за зниженого тиску та водний розчин, що залишився, підкислювали за допомогою конц. НСІ до рН 3-4. Продукт екстрагували за допомогою ЕАс (2 х 250 мл). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували та випарювали за зниженого тиску з одержанням б-метокси-5-(трифторметокси)- 1Н-індол-2-карбонової кислоти 11с (22,7 г) як твердої речовини.

Синтез проміжної сполуки 114

Суспензію б-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індол-2-карбонової кислоти 11с (7,5 г, 27 ммоль) і Си (1,22 г, 0,7 екв.) у хіноліні (150 мл) нагрівали до 220-230 "С в інертній атмосфері протягом 12 год. Після охолодження до кімнатної температури суміш розбавляли метил-трет- бутиловим етером (МТВЕ, 400 мл) і промивали насиченим водним розчином Манзох (2 х 500 мл). Органічний шар висушували над М950О»5, фільтрували через тонкий шар силікагелю та випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою колонкової хроматографії з одержанням б-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індолу 114 (3,75 г) як жовтої твердої речовини.

Синтез проміжної сполуки 11е 1 М хлорид діетилалюмінію в гексані (9,7 мл, 9,7 ммоль) додавали краплями за 0 "С до розчину б-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індолу 114 (1,5 г, 6,5 ммоль) у СНеСіг (25 мл). Через 30 хв. за 0"С додавали краплями 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)яацетилхлорид Ле (2,4 г, 7,13 ммоль) у СНеСіг2 (25 мл). Реакційну суміш перемішували за 0 "С протягом З год.

Реакційну суміш обережно гасили льодом за 0 "С. Додавали воду, шари розділяли та водний шар екстрагували за допомогою СНеоСі». Об'єднані органічні шари висушували над Мо5оОх, фільтрували, та розчинник випарювали за зниженого тиску. Здійснювали очищення за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 120 г, гептан/пБ(ОАс 80/20). Чисті фракції об'єднували та випарювали до сухого стану з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)- 4-хлорфеніл)-1-(6-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індол-з3-іл)етанону 11е (2,1 г).

Синтез проміжної сполуки 119

У потоці М2 за 0 "С розчин триброміду фенілтриметиламонію І(СА5 4207-56-11 (1,06 г, 2,81 ммоль) у ТНЕ (37 мл) додавали краплями до розчину 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)- 1-(6-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону 11е (1,5 г, 2,81 ммоль) у ТНЕ (38 мл).

Суміш перемішували за 0 "С протягом 1 год. Охолоджувальну баню забирали та перемішування продовжували за кімнатної температури протягом З год. Додавали розчин З-метокси-5- (метилсульфоніл)аніліну (СА 62606-02-4) (1,69 г, 8,43 ммоль) у СНІЗСМ (30 мл) та одержану суміш перемішували протягом 48 год. за 50 "С. Суміш концентрували за зниженого тиску.

Залишок поглинали за допомогою ЕАс, промивали водою, 1 н. НСІ (З рази), а потім 1095 розчином К»2СОз у воді. Органічний шар висушували над Ма5О»4, фільтрували та розчинник концентрували за зниженого тиску. Очищення проводили за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 80 г, елюент: СНегСіг/СНзОН 99,5/0,5). Чисті фракції об'єднували та випарювали до сухого стану. Залишок знову очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 40 г, елюент: гептан/Е(Ас, градієнт від 60/40 до 50/50). Чисті фракції об'єднували та випарювали до сухого стану з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4- хлорфеніл)-2-((З3-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(6-метокси-5-(трифторметокси)-1 Н- індол-З-іл)етанону 1149 (1,075 г).

Синтез сполуки 11 і хіральне розділення на енантіомери 11А та 118

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-2-((3З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(6-метокси-5-«трифторметокси)-1Н-індол-З3-іл)уетанону 119 (934 мг, 1,27 ммоль) у СНзЗОН (18 мл) гідрували протягом 1 год. за атмосферного тиску Не» із використанням 1095 Ра/С (271 мг, 0,255 ммоль) як каталізатора. Реакційну суміш розбавляли

СНесіг і фільтрували через шар Сеїйеф. Фільтрат випарювали за зниженого тиску. Очищення здійснювали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 24 г, елюент:

СНеСІг/СНЗОН 99/1). Чисті фракції об'єднували та випарювали до сухого стану з одержанням 2- (4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(6б-метокси-

Б-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)уетанону (сполука 11, 540 мг) як рацемічної суміші.

Енантіомери сполуки 11 (540 мг) розділяли за допомогою хіральної БЕС (нерухома фаза:

СВігазракб ІА 5 мкм, 250 х 20 мм, рухома фаза: 7095 СО», 3095 ІРОН - 0,395 ІРІМН») з одержанням 250 мг першого елюйованого енантіомеру та 260 мг другого елюйованого енантіомеру. Перший елюйований енантіомер осаджували із дізопропілового (610) етеру/ЕеО/гептану. Осад відфільтровували та висушували з одержанням 209 мг енантіомеру

Зо

11А. Другий елюйований енантіомер осаджували із дізопропілового етеру. Осад відфільтровували та висушували з одержанням 172 мг енантіомеру 118.

Сполука 11

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ50О-дв) б ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,84 - 4,04 (т, 5 Н) 4,15 - 423 (т, 2 Н) 5528 (ріг 5, 1 Н) 6,36 (а, 97,9 Гц, 1 Н) 6,58 (І, 9У-1,9 Гу, 1 Н) 6,64 (5, 1 Н) 6,93 (5, 1 Н) 6,96 (ад, 9-8,2,1,9 Гу, 1 Н) 7,06 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,12 (а, 9-1,9 Гу, 1 Н) 7,17 (5, 1 Н) 7,37 (а, 9-8,5 Гц, 1 Н) 8,03 (0, 9-1,3 Гу, 1 Н) 8,63 (5, 1 Н) 12,16 (Бг 5, 1 Н)

Ї С/М5 (спосіб І С-0): Вк 3,10 хв., МН" 643

Температура плавлення: 21270

Енантіомер 11А

І"Н ЯМР (500 МГц, ОМ5О-ав) б ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,87 (5, З Н) 3,89 - 4,05 (т, 2 Н) 4.19 (г, 9-44 Гц, 2 Н) 5,30 (Ббг 5, 1 Н) 6,36 (й, У-7,6 Гц, 1 Н) 6,58 (І, У-1,6 Гц, 1 Н) 6,64 (рг 5, 1 Н) 6,93 (5, 1 Н) 6,96 (ай, 9У-8,4, 1,7 Гц, 1 Н) 7,07 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,12 (а, 9-1,9 Гц, 1 Н) 7,17 (5,1 Н) 7,37 (й, 9-8,5 Гц, 1 Н) 8,04 (а, 2-0,6 Гу, 1 Н) 8,63 (5, 1 Н) 12,10 (рг 5, 1 Н)

Ї С/М5 (спосіб І С-0): Ве 3,09 хв., МН" 643

ІФЧого: -102,37 (с 0,208, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-РЕ): Ве 3,61 хв., М-Е 625, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 118

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ50-дв) б ррт 3,09 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,87 (5, З Н) 3,88 - 4,04 (т, 2 Н) 4191, 9У-4,6 Гц, 2 Н) 5,30 (І, 9-5,5 Гц, 1 Н) 6,36 (9, 9У-7,9 Гц, 1 Н) 6,58 (І, 9-1,7 Гц, 1 Н) 6,64 (рі 5, 1 Н) 6,93 (5, 1 Н) 6,96 (аа, 9У-8,2, 1,9 Гц, 1 Н) 7,07 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,12 (й, 9У-1,9 Гц, 1 Н) 7,18 (в, 1 Н) 7,37 (а, 9-82 Гц, 1 Н) 8,04 (а, 9-0,9 Гц, 1 Н) 8,63 (5, 1 Н) 12,10 (рг 5, 1 Н)

Ї С/М5 (спосіб І С-0): Ве 3,09 хв., МН" 643

ІФого: я101,87 (с 0,208, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-Е): В: 4,38 хв., МН" 643, хіральна чистота 98,795.

Приклад 12. синтез 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(7-метил-5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 12) і хіральне розділення на енантіомери 12А та 128

М. о

БО их Кия п че мавнуа ре, ши АІСЬ. ВСЬ, бно воно Но, ВШ: сс, ! 1за ОС, 2,5 год, 4-26 від ОС до темп. утвор. флегми, 5 год. ді 52 сі с и ша Її дя, У пк: жк щ їв "тов й ря Но. РИС кв що Ве

І ЕЗАЮ, рр, БЮАСІНЕ, У ТНЕ, 02С, 40 хв..

СНОІСТЬ, ОС, 1,5 гол. кот. 2 год. но щ- кл. 20 хв. я її кт. 73 хв. ї2е | 426 а ОМме сі но, Я А но. ях о; ная ву 000/0ояк : що ую а ня й п Хіральне розділення сон вои Н01111111111Бнашіомерн і7А та ЗВ

Її й У ОІРЕА. ї й іх о-8 нантпомери в снУсм бо-тобс,зттод. 0 Й 2 о 426 кот.. 05 год. зо

Синтез проміжної сполуки 12а

Суміш 1 М хлориду бору) у СНоСі» (25,5 мл, 25,5 ммоль) і хлориду алюмінію(!) (3,40 г, 25,5 ммоль) розбавляли СНоСі» (20 мл) та охолоджували на льодяній бані в атмосфері М».

Додавали краплями розчин 2-метил-4-«трифторметокси)аніліну (СА 86256-59-9| (4,688 г, 25,5 ммоль) і хлорацетонітрилу (3,24 мл, 51,0 ммоль) у СНеСі» (7,5 мл). Після закінчення додавання льодяну баню забирали та суміш нагрівали за температури утворення флегми протягом 8 год.

Суміш знову охолоджували до 0 "С із застосуванням льодяної бані. Додавали краплями 2 н. НСІ (75 мл), що спричиняло значне утворення осаду. Одержану суспензію нагрівали за температури утворення флегми протягом 90 хв. і охолоджували до кімнатної температури. Тверді речовини видаляли за допомогою фільтрації. Осад на фільтрі промивали за допомогою СНеСі» (4Х).

Фільтрати об'єднували та фази розділяли. Органічний шар виділяли, промивали водним розчином МансСоОз, висушували над М950»х, фільтрували та випарювали за зниженого тиску.

Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж ВіоїадеФ

ЗМАР ШОПга із силікагелем 100 г, рухома фаза: гептан/СНесСіг, градієнт від 100/0 до 0/100).

Потрібні фракції об'єднували та концентрували до залишкового об'єму, що становив 30 мл.

Осад відфільтровували, промивали гептаном і СНоСі» і висушували під вакуумом за 50 С з одержанням 1-(2-аміно-3-метил-5-(трифторметокси)феніл)-2-хлоретанону 12а (1,37 г). Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Твердий залишок перемішували в суміші гептану (20 мл) і діізопропілового етеру (3 мл), відфільтровували, промивали гептаном (Зх) і висушували під вакуумом за 50 "С з одержанням другої фракції 12а (0,24 г).

Синтез проміжної сполуки 125

Борогідрид натрію (326 мг, 8,61 ммоль) додавали до перемішуваного розчину 1-(2-аміно-3- метил-5-(трифторметокси)феніл)-2-хлоретанону 12а (1,92 г, 7,17 ммоль) у трет-бутанолі (50 мл) і воді (5 мл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 30 хв. і за 90 С протягом 2,5 год. Додавали воду (50 мл) і продукт екстрагували за допомогою діетилового етеру (2х). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над Мазохз, фільтрували та випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш- хроматографії (нерухома фаза: картридж Віоїаде? 5МАР Шнга із силікагелем 25 г, рухома фаза: гептан/ЕОАс, градієнт від 100/0 до 20/80). Потрібні фракції об'єднували, концентрували за зниженого тиску, випарювали спільно з гептаном і висушували під вакуумом за 50 С з одержанням 7-метил-5-(трифторметокси)-1 Н-індолу 125 (1,2 г).

Синтез проміжної сполуки 12с: 1 М хлорид дієтилалюмінію в гексані (18,2 мл, 18,2 ммоль) додавали краплями заб0"Сів атмосфері М до розчину 7-метил-5-(трифторметокси)-1 Н-індолу 125 (2,0 г, 9,3 ммоль) у СН»Сї» (150 мл). Після перемішування протягом 25 хв. за 0 "С повільно додавали розчин 2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)ацетилхлориду 1е (4,72 г, 13,9 ммоль, синтез: див. приклад 1) у СНосі» (75 мл), при цьому температуру реакції підтримували нижчою за 5 "С. Реакційну суміш перемішували за 0 "С протягом 90 хв. і за кімнатної температури протягом 2 год. Реакційну суміш охолоджували до 0 "С і краплями додавали розчин сегнетової солі |(СА5 6100-16-91) (5,25 г, 18,6 ммоль) у воді (5,5 мл). Суміш енергійно перемішували протягом 30 хв. за 0 "С. Льодяну баню забирали та додавали ТНЕ (200 мл). Після перемішування протягом 1 год. за кімнатної температури додавали Ма»5Ох (25 г). Суміш перемішували протягом 18 год. і фільтрували через

ОісаїйефФ. Осад на фільтрі промивали за допомогою ТНЕ (4 х 150 мл) та об'єднані фільтрати випарювали за зниженого тиску. Масло, що залишилось, очищали за допомогою флеш- хроматографії (нерухома фаза: картридж Віоїаде?» 5МАР ШпПга із силікагелем 100 г, рухома фаза: гептан/Б(ОАс/ЕЮН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували та випарювали за зниженого тиску. Твердий залишок перемішували у суміші СІРЕ (25 мл) і ЕЮАс (2 мл), відфільтровували, промивали за допомогою ОІРЕ (Зх) і висушували за 507 під вакуумом З одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(7-метил-5- (трифторметокси)-1Н-індол-З3-іл)етанону 12с (2,88 г).

Синтез проміжної сполуки 124

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)-1-(7-метил-5-(трифторметокси)-1 Н-індол-3- іл)етанону 12с (2,88 г, 5,56 ммоль) і 10905 паладію на вугіллі (0,5 г) в ЕІОАс (75 мл) і ТНЕ (10 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 20 хв. в атмосфері Н». Реакційну суміш фільтрували через ОісайеФ і осад на фільтрі промивали за допомогою ТНЕ. Об'єднані фільтрати концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш- хроматографії (нерухома фаза: картридж Віоїаде? 5МАР Шкга із силікагелем 50 г, рухома фаза: гептан/Ег(ОАСсС/ЕН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Фракції, що містять продукт, об'єднували та випарювали за зниженого тиску. Твердий залишок перемішували в ОІРЕ (7,5 мл), відфільтровували, промивали за допомогою ОІРЕ (2х) і висушували під вакуумом за 45 С з одержанням 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(7-метил-5-«"трифторметокси)-1 Н-індол-3- іл)етанону 12а (780 мг).

Синтез проміжної сполуки 12е

Трибромід фенілтриметиламонію (СА 4207-56-1| (327 мг, 0,869 ммоль) додавали до охолодженого (0 с) розчину 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(7-метил-5- (трифторметокси)-1Н-індол-З3-іл)етанону 124 (354 мг, 0,827 ммоль) у ТНЕ (15 мл) в атмосфері

М2. Реакційну суміш перемішували за 0 "С протягом 45 хв. і за кімнатної температури протягом (610) 75 хв. Осад відфільтровували та промивали за допомогою ТНЕ (2х). Об'єднані фільтрати концентрували за зниженого тиску з одержанням 2-бром-2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)- 1- (7-метил-5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)уетанону 12е (419 мг), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез сполуки 12 і хіральне розділення на енантіомери 12А та 128

Суміш 2-бром-2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(7-метил-5-(трифторметокси)-1Н-індол-

З-іл)етанону 12е (419 мг, 0,827 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (ІСА5 62606-02-4) (333 мг, 1,65 ммоль) і діізопропілетиламіну (285 мкл, 1,5 ммоль) у СНзСМ (30 мл) перемішували за 60 "С протягом 20 год. Реакція тривала за 70 "С протягом 7 год. і за кімнатної температури протягом 65 год. Леткі речовини випарювали за зниженого тиску. Твердий залишок об'єднували з іншою фракцією (1,14 г) та очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж Сгасе КемеїегієФ із осилікагелем 40 г, рухома фаза: гептан/г!ОАсС/ЕТОН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували та випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою препаративної НРІС (нерухома фаза: КР ХВгіддефФ Ргер С18 ОВО - 10 мкм, 50 х 150 мм, рухома фаза: 0,2595 розчин

МНаАНСО:» у воді, СНізСМ). Потрібні фракції об'єднували та випарювали за зниженого тиску.

Продукт кристалізували за кімнатної температури із ЕН (10 мл), відфільтровували, промивали

ЕН (2х) і висушували за 45"С під вакуумом з одержанням рацемічного 2-(4-хлор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(7-метил-5- (трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 12, два збори: 485 мг та 169 мг).

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 12 (602 мг) здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: М/пеІк-О1 (КК), рухома фаза: 3095 етанолу, 7095 гептану). Фракції, що містять продукт, об'єднували та випарювали з одержанням енантіомеру 12А як першого елюйованого продукту та енантіомеру 12В як другого елюйованого продукту. Обидва енантіомери перемішували у суміші води (3,5 мл) і МеОнН (1,25 мл), відфільтровували, промивали за допомогою води/МеоОнН 3/1 (4х) та висушували під вакуумом за 45 "С з одержанням енантіомеру 12А (202 мг) й енантіомеру 128 (166 мг).

Сполука 12

ІН ЯМР (400 МГц, ОМ50О-дв) 6 ррт 2,51 (5, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,90 - 4,06 (т, 2 Н) 4,19 (ї, 9-4,6 Гу, 2 Н) 5,28 (Її, 95,7 Гц, 1 Н) 6,41 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 6,58 (І, 9-1,8 Гц, 1 Н) 6,66 (Її, у22и1 Гу, 1 Н) 6,92 - 6,98 (т, 2 Н) 7,02 - 7,08 (т, 2 Н) 7,11 (а, 9-2,0 Гц, 1 Н) 7,37 (а, 9-8,4 Гц, 1 Н) 7,92 (ріг 5, 1 Н) 8,70 (5, 1 Н) 12,38 (5,1 Н)

Ї С/М5 (спосіб І С-А): В; 1,18 хв., МН" 627

Енантіомер 12А

ІН ЯМР (400 МГц, ОМ50-ав) б ррт 2,51 (рі 5, З Н) 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,88 - 4,09 (т, 2

Н) 4,19 (ри, 9-45 Гц, 2 Н) 5,28 (ргї, 9У-5,4 Гу, 1 Н) 6,41 (бг а, У-7,7 Гц, 1 Н) 6,58 (ре 5, 1 Н) 6,66 (г 5, 1 Н) 6,91 - 6,99 (т, 2 Н) 7,01 - 7,08 (т, 2 Н) 7,11 (ріг 5, 1 Н) 7,37 (9, 9-8,4 Гц, 1 Н) 7,91 (рі 5, 1

Н) 8,70 (5, 1 Н) 12,38 (рг 5, 1 Н)

Ї С/М5 (спосіб І С-А): Ве 1,21 хв., МН" 627

ІФЧого: -111,07 (с 0,51, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб 5ЕС-0): Ві 3,31 хв., МН" 627, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 128 "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50-дв) б ррт 2,51 (Бг 5, З Н) 3,09 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,90 - 4,06 (т, 2

Н) 4,19 (, У-4,6 Гц, 2 Н) 5,28 (Бі 5, 1 Н) 6,41 (а, 9У-7,9 Гц, 1 Н) 6,58 (ї, 9У-1,8 Гц, 1 Н) 6,66 (Б, 9-24 Гц, 1 Н) 6,92 - 6,99 (т, 2 Н) 7,01 - 7,08 (т, 2 Н) 7,11 (а, 9-1,8 Гц, 1 Н) 7,37 (а, У-8,4 Гц, 1 Н) 7,92(рг5,1 Н) 8,70 (5, 1 Н) 12,38 (рг 5, 1 Н)

Ї С/М5 (спосіб І С-А): Ве 1,21 хв., МН" 627

ІФЧого: 105,27 (с 0,515, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (спосіб БЕС-0): Ві 2,91 хв., МН" 627, хіральна чистота 98,59.

ПРОТИВІРУСНА АКТИВНІСТЬ СПОЛУК ЗА ДАНИМ ВИНАХОДОМ

Аналіз противірусної активності щодо ОЄММ-2

Тестували противірусну активність усіх сполук за даним винаходом проти штаму ОЕММ-2 16681, який мітили підсиленим зеленим флуоресцентним білком (естР). Середовище для культивування складалося з мінімального підтримувального середовища, доповненого 2905 термічно інактивованої ембріональної телячої сироватки, 0,0495 гентаміцину (50 мг/мл) і 2 мМ /- глутаміну. Клітини Мего, одержані з ЕСАСС, суспендували в середовищі для культивування та додавали по 25 мкл у 384-лункові планшети (2500 клітин/лунка), які вже містили противірусні сполуки. Як правило, ці планшети містили 5-кратні серійні розведення, що складалися з 9 стадій розведення тестованої сполуки за 200-кратної кінцевої концентрації в 10095 ЮОМ5О (200 нл).

Крім того, кожну концентрацію сполуки тестували в чотирьох паралельних аналізах (кінцевий 10) діапазон концентрацій: 25 мкМ - 0,000064 мкМ або 2,5 мкМ - 0,0000064 мкМ для найбільш активних сполук). Врешті, кожний планшет містив лунки, які визначали як контролі з вірусом (які містять клітини та вірус за відсутності сполуки), контролі з клітинами (що містять клітини за відсутності вірусу та сполуки) та контролі із середовищем (які містять середовище за відсутності клітин, вірусу та сполук). У лунки, які визначали як контролі із середовищем, додавали по 25 мкл середовища для культивування замість клітин Мего. Після того, як клітини додавали у планшети, планшети інкубували протягом 30 хвилин за кімнатної температури для забезпечення рівномірного розподілу клітин у лунках. Далі планшети інкубували у термостаті з повністю зволоженою атмосферою (37 "С, 595 СО») до наступного дня. Потім додавали штам

РЕМУ-2 16681, мічений есЕР, за множинності зараження (МОЇ), що становила 0,5. Отже, по 15 мкл вірусної суспензії додавали у всі лунки, що містили тестовану сполуку, та в усі лунки, які визначали як контролі з вірусом. Паралельно до контролів із середовищем та клітинами додавали по 15 мкл середовища для культивування. Далі планшети інкубували протягом З днів у термостаті з повністю зволоженою атмосферою (37"С, 595 02). У день проведення зчитування вимірювали флуоресценцію есЕР із застосуванням автоматизованого флуоресцентного мікроскопа за 488 нм (блакитний лазер). Застосовуючи внутрішньолабораторну систему ГІМ5, розраховували криві залежності інгібування від дози для кожної сполуки та визначали напівмаксимальну ефективну концентрацію (ЕСво). Отже, розраховували відсоток інгібування (І) для кожної тестованої концентрації із застосуванням наступної формули: І - 100(5т-Зсс)/(Змо-Зсс); при цьому 5т, бос і Змео являють собою рівень сигналу еСЕР у лунках із тестованими сполуками, контролями з клітинами і контролями з вірусом відповідно. ЕСво являє собою концентрацію сполуки, за якої реплікація вірусу інгібується на 5095, що виміряно за 5095 зниженням інтенсивності флуоресценції есЕР порівняно з контролем із вірусом. ЕСво розраховували із застосуванням лінійної інтерполяції (таблиця 1).

Паралельно у тих самих планшетах оцінювали токсичність сполук. Після закінчення зчитування сигналу еОЕР в усі лунки 384-лункових планшетів додавали по 40 мкл АТРІЙе, барвника, який є індикатором життєздатності клітин. АТР присутній у всіх метаболічно активних клітинах, і, якщо клітини піддаються некрозу або апоптозу, його рівень різко знижується.

Система аналізу АТРІ йе базується на продукуванні світла, спричиненому реакцією АТР. із доданою люциферазою та Ю-люциферином. Планшети інкубували протягом 10 хвилин за кімнатної температури. Потім планшети вимірювали на Мем их. Також визначали напівмаксимальну цитотоксичну концентрацію (ССво), визначену як концентрацію, потрібну для зменшення люмінесцентного сигналу на 5095 порівняно з лунками контролю з клітинами.

Врешті, визначали індекс вибірковості (5І) для сполук, який розраховували так, як вказано нижче: 5І - СС5о/ЕСво.

Паралельно у тих самих планшетах оцінювали токсичність сполук. Після закінчення зчитування сигналу есЕР в усі лунки 384-лункових планшетів додавали по 40 мкл АТРІЙе, барвника, який є індикатором життєздатності клітин. АТР присутній у всіх метаболічно активних клітинах, і, якщо клітини піддаються некрозу або апоптозу, його рівень різко знижується.

Система аналізу АТРІ йе базується на продукуванні світла, спричиненому реакцією АТР. із доданою люциферазою та Ю-люциферином. Планшети інкубували протягом 10 хвилин за кімнатної температури. Потім планшети вимірювали на Міем/'их. Також визначали напівмаксимальну цитотоксичну концентрацію (ССво), визначену як концентрацію, потрібну для зменшення люмінесцентного сигналу на 5095 порівняно з лунками контролю з клітинами.

Таблиця 1

ЕСво, ССбво і 5І для сполук за даним винаходом в аналізі противірусної активності щодо рЕММУ-2 2еА 17 бо0011 | 710 | 34 | 70 | 537500 | щЩ 9

Таблиця 1 (продовження)

ЗА 1 000032 | 6 | 52 | 6 | 16400 | 6 .4А 1 б000і3 | 779 | 30 | 9 | 523200 | 9 48 1001 | 5 | 57 | 6 | 509 | 5 76 1 000037 | 4 | 47 | 4 | 2700 | 4 .6А | бо00і3 | 5 | 38 | 6 | »з8500 | 5 68 | 0036 | 5 | 59 | 4 | 164 | 4 771 000026 | 5 | 28 | 6 | 10500 | 5 78 1 000027 | з | 28 | з | 59820 | З 7.79. 1 000010 | щ4 | 525 | 4 | »5з0100 | 4 988 | 0000061 | 4 | 524 | 4 | 539700 | 4 121 00000 | 76 | 25 | 6 | 545600 | 6 лгА 1700050 | 6 77125 | 77 | 1030 | 6

І лав | 0000034 | 9 | 25 | 11 | 5390600 | 9

Аналіз із застосуванням кількісної ПЛР зі зворотною транскриптазою (КТ-ДРСК) щодо чотирьох серотипів: Протокол А

Противірусну активність сполук за даним винаходом тестували проти штаму ОЕММ-1

Ттс9748666 (МСРУ), штаму ОЕММ-2 16681, штаму ОЕММ-3 НВ7 (МСРУ) і штамів ОЕММ-4 Нга1 (МСРМУ) Її ЕОЕМ (565/06К22700К1/2005; номер доступу в СепВапк 00398256) в аналізі із застосуванням КТ-ДРСК. Таким чином, клітини Мего інфікували за допомогою одного з ОЕММ-1, або -2, або -3, або -4 за наявності або відсутності тестованих сполук. У день З після інфікування здійснювали лізис клітин і клітинні лізати застосовували для одержання кДНК як вірусу-мішені (ЗО ОЕММ; таблиця 2), так і еталонного гена клітини (В-актин, таблиця 2). Згодом здійснювали дуплексну ПЛР у режимі реального часу на пристрої Гідпісусіег480. Одержане значення Ср є обернено пропорційним відносно рівня експресії РНК цих мішеней. Інгібування реплікації ОЕММ під дією тестованої сполуки спричиняє зсув Ср для гену З'ОТЕ. З іншого боку, якщо тестована сполука є токсичною для клітин, то спостерігатиметься аналогічний ефект для експресії В-актину. Для обчислення ЕСво застосовували порівняльний спосіб ДАсСр, який базується на відносній генній експресії гена-мішені (З'ОТЕ), нормалізованій за конститутивним геном клітини (В-актином). Крім того, визначали значення ССво, застосовуючи значення Ср, одержані для конститутивного гена р-актину.

Таблиця 2

Праймери та зонди, застосовувані для кількісної КТ-РСК у режимі реального часу

Таблиця 2 (продовження) а Елементи, що являють собою репортерні барвники (ГАМ, НЕХ) і гасники люмінесценції (7ЕМ і ТАВКЕО), виділені жирним шрифтом і курсивом.

В Нуклеотидну послідовність праймерів і зондів вибирали із консервативної ділянки в З'ОТВ- ділянці геному вірусу денге, виходячи з вирівнювання 300 нуклеотидних послідовностей чотирьох серотипів вірусу денге, депонованих у Сепрапк (Сопо еї аї., 2013, Меїнодз Мої! Віої,

СНарівг 16).

Середовище для культивування складалося з мінімального підтримувального середовища, доповненого 295 термічно інактивованої ембріональної телячої сироватки, 0,0495 гентаміцину (50 мг/мл) і 2 мМ І -глутаміну. Клітини Мего, одержані з ЕСАСС, суспендували в середовищі для культивування і додавали по 75 мкл/лунка в 96-лункові планшети (10000 клітин/лунка), які вже містили противірусні сполуки. Як правило, дані планшети містили 5-кратні серійні розведення, що складалися з 9 стадій розведення тестованої сполуки за 200-кратної кінцевої концентрації у 10055 ОМ5О (500 нл; кінцевий діапазон концентрацій: 25 мкМ - 0,000064 мкМ або 2,5 мкМ - 0,0000064 мкМ для найбільш активних сполук). Крім того, кожний планшет містив лунки, які визначали як контролі з вірусом (що містять клітини та вірус за відсутності сполуки) і контролі з клітинами (що містять клітини за відсутності вірусу та сполуки). Після того, як клітини додавали у планшети, планшети інкубували у термостаті з повністю зволоженою атмосферою (37 "С, 595

СО») до наступного дня. Серотипи 1, 2, З і 4 вірусу денге розводили, щоб одержати в аналізі Ср, що становить «22-24. Отже, по 25 мкл вірусної суспензії додавали в усі лунки, що містили тестовану сполуку, а також в усі лунки, які визначали як контролі з вірусом. Паралельно до контролів із клітинами додавали по 25 мкл середовища для культивування. Потім планшети інкубували протягом З днів у термостаті з повністю зволоженою атмосферою (37 "С, 595 СОг).

Після З днів надосадову рідину з лунок видаляли і клітини двічі промивали льодяним РВ5 (-100 мкл). Осади клітин у 96-лункових планшетах зберігали за -80 "С протягом щонайменше 1 доби.

Потім екстрагували РНК із застосуванням набору для лізування СеїЇЇ5-0-СТ"М згідно з інструкціями виробника (Ге Тесппоіодіе5). Клітинні лізати можна зберігати за -80 С або негайно застосовувати на стадії зворотної транскрипції.

У порядку підготовки до стадії зворотної транскрипції готували суміш А (таблиця ЗА) і розподіляли по 7,57 мкл/лунка в 96-лунковий планшет. Після додавання 5 мкл клітинних лізатів здійснювали п'ятихвилинну стадію денатурації за 75 "С (таблиця ЗВ). Згодом додавали 7,43 мкл суміші В (таблиця ЗС) та ініціювали стадію зворотної транскрипції (таблиця 30) для утворення «ДНК.

Врешті, готували суміш С (таблиця 4А), суміш для КТ-дРСЕ, і розподіляли по 22,02 мкл/лунка в 96-лункових планшетах для ЗРСК ГідпіСусіег, до яких додавали З мкл кДНК і здійснювали РУК на ГіднпіСусієг 480 згідно з умовами в таблиці 4В.

Застосовуючи програмне забезпечення І ідпіСусіег і службову систему ГІМ5, розрахували криві залежності ефекту від дози для кожної сполуки та визначали напівмаксимальну ефективну концентрацію (ЕСзо) і напівмаксимальну цитотоксичну концентрацію (ССвзо) (таблиці 5-8).

Зб

Таблиця З

Синтез кДНК із застосуванням суміші А, денатурації, суміші В і зворотної транскрипції

Суміш А

Планшет

А ни

Об'єм реакційної

Зразки 828 :. 20 суміші (мкл)

Елемент Й Об'єм 2, Концентрація сумні (мкл) на

Одиниця х вимірюванн | Вихідна Кінцева | 1 зразок зразкі я в

МИН-О 6019,5

І 72 І ню (5)

КЗшт425 мкм 20 0,27 0,15 124,20

Касіїпв76 0.15 124, 20

Об'єм суміш/лунка (мкл) 7,57 5.00 в Ф | Стадія денатурації 11171111 Стадя./: | Температура 77171717 |Денатурація 01111111 дУтримування./////77777777/ | 777777 47С 0 футримування//7/7/

Со Суміш В

Елемент . 2, Концентрація Об'єм (мкл) на суміші

Одиниця ; , 1 х , Вихідна Кінцева й вимірювання зразок | зразків

Буфер 2 Ехрапі шк

Хх 10,00 00 2,00 1728,0

НІНІ мес амтР 0001100 17285

Інтгібітор Й Й й Од/мкл 40,00 00 0,50 432,0

РНКази

Ехрапа КТ 50.0 0.13

Таблиця 4

Суміш і протокол для ФРСК

А Сумітш С

Об'єм 25

Зразки 833 реакційної суміші (мкл

Об'єм

Елемент й г, Концентрація (мкл) на сумі

Одиниця й ; х , Вихідна | Кінцева / І зразок , вимірювання зразків во дя! 10111111111111111мя вно

ПЛР від

Косве

Суміш 1041250

Косве х 2 І 12,50

ММ

РУши343 10829

Касцпв7Є 108.29

Об'єм сумішіипробірка 22,02 (мкл) 3.00

В ПротоколаРСКкК3 . Швидкість

Стадія Температура | Час . зміни

Попередня

Опере о1995с ІЮхв. 44 інкубація/денатурація пиклів

Таблиця 5

ЕсСово, ССво і ЗІ для сполук проти серотипу 1 в аналізах із застосуванням ЕТ-Я9РСВ 11111111 ПротоюлАГ///////////СССсС вн ВТ-ЯРСВ. серотипу 1 ТС9748666

ЕС5О (мкМ) СС50 (МКМ) 0,0013 52200 0,0016 51980 0,0042 1380 0,0017 52160 0,0016 00016 | 6 | 49 | 5 | 2830 0,00097 5380 0,00039 17200 798 2 ющ-- | босі | 6 | 29 | 6 | 538700 | 6 0000071 | 6 | 524 | 7 | 54300 | 6

Таблиця 5 (продовження) 11111111 ПротоюлАГ///////////СССсС вн ВТ-ЯРСВ. серотипу 1 ТС9748666

ЕС5О (мкМ) СС50 (МКМ) 0,00012 526300 0,000086 »26700

М - кількість незалежних експериментів, в яких тестували сполуки.

Таблиця 6

ЕСово, ССво і 5І для сполук проти серотипу 2 в аналізах із застосуванням КТ-ДРСВ 11111111 ПротоюлАГ/Г/Г//:////-/ вн ВТ-ЯРСВ. серотипу 2 16681

ЕСБО(мкМу!Ї М ГоС50 (мкм 0,00024 29700 000014 | 7 | 40 | 9 | »29700 0,00040 16800 00016 | 7 | 37 | 8 | 40100 0000065 | 5 | 36 | 6 | »52300 000021 | 5 | 45 | 8 | 65400 0,00021 514800 0,00027 89000 77988 юМЙуМ боо0054 549900 0,000049 582800 0,000062 546200 0,000053 256600

Таблиця 7

ЕСтво, ССво і 5І для сполук проти серотипу З в аналізах із застосуванням КТ-ДРСВ 11111111 ПротоюлАГ/Г///////:/3/////- З: ні ВТ-9РСВ серотипу З НВ7

ЕС5О (мкМ) СС50 (мкМ) 0,0096 0,018 0,042 0,018 0,012 0,017 | 6 | 959 | 4 | 198 | 4 0,011 0,0042 1020 7/7798 ющ | бог 1970 0,0014 »2220 0,0013 »2210 0,0011 2720

Таблиця 8

ЕСово, ССво і 5І для сполук проти серотипу 4 в аналізах із застосуванням ЕТ-ДРСВ 11111111 ПротоюлАГ/Г///:///////- ССЗ ( 11111111 вгаРСАсеротипуяноя! /-/:/ ( 1112А | 0074 | 7 | 25 |ДЙЮД 56 | 3 | 6 777174А 7 | 0078 | 8 | 522 | 6 | 24 | 6 58 2 щЩщ(| 0074 | 6 | 522 | 6 | 3 | 6 777798 юЮщ | бобові | юДюз | 525 | 3 | 5409 | з 11111111 ПротоюлАГ//////////:////////-:Ж С 11111111 втаРСВсеротипу4ЕОЕМ /:сСсС

ЛА | 17777777 Мо Її 777777 мо Її

НЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«ЦЕ» Тапхаейп Ріаіпасеціїєвів, с

КашонНекеге Гигуегеней І еихей «120» ПОХІДНІ МОНО- АБО ДИЗАМІЩЕНИХ ІНДОЛІВ ЯК ІНГІБІТОРИ

РЕПЛІКАНІЇ ВІРУСІВ ДЕНГЕ

«130» ТІР 334 СТ «150» ЕРІ6163472.0 «151» 2016-04-01 «1502 ЕРІ5І85523.6 «151» 2015-09-16 «160» 6 «1705 ВІЗА І «ВІ» «11» 19 «212» ДНК «13» вірус ленге «ВО» «81» джерело «Ал 119 «ва» лорганізм-с вірус денте"отнп молекули- невизначена ДНЕ"Ч «щої севнадлеєц арассссіс 15 «ВІК» 5 «211-721 «В1Х» ДНК 13» вірус денге да» «21» джерело «Ай 31 «В» організм-визус денге"/тнп молекули- невизначена ДНК" «а З загасавсав еаісісівв с 21 «210» 3 «211 28 гі» ДНК «213» вірус денге «ДО» «ві» джерело о М «223» організм- вірус денге" ни молекули- невизначена ДНК" «а» і засеасійса гейасасса васссссс 28 «210» 4 «1118 «12» ДНК «213» вірус денге «БО» «дві» джерело «радше 18 «2232» організм- вірус денге" лип молекули- невизначена ДНК" «как» 4 виссавеїся їсассай 15 «вій» 5

«2122 ДНК «213» вірус денге «А «гі» джерело «ваЗ»сорганізм- вірус денте"/тни молекули- невизначена ДНК" «а» 5 агеіссасеі сасасцсяі 6 гі «Дт «211221 «12» ДНК «213» вірус денге «ад» «гі» джерело «еват 121 «33» /організм- вірує денге" с/тни молекули- невизначена ДНК" «ЯН»

Несесівсе сівавроїстс 21

Claims

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Сполука формули (І) М сі й г Ге) ОСсНУ Ві НМ (А З у М я Н сх На ; (І)

її стереоїзомерна форма або фармацевтично прийнятна сіль; при цьому вказана сполука вибрана з групи, де: Ві являє собою Н, Е2 являє собою ЕК, СІ або ОСН», і Ез являє собою НН; Ві являє собою Н, Е» являє собою Е або СІ, і Ез являє собою СНЗз; Ві являє собою СН», В2 являє собою ОСН», і Ез являє собою Н; Ві являє собою ЕК, Е2 являє собою БЕ, і Ез являє собою НН; Ві являє собою СН», В»: являє собою ЕК, і Ез являє собою НН; Ві являє собою СЕз або ОСЕ», В: являє собою Н, і Ез являє собою НН; Ві являє собою ОСЕ:», В2 являє собою ОСН», і Ез являє собою Н, або Ві являє собою ОСЕ:», Рг являє собою Н, і Ез являє собою СН.

2. Сполука або її стереоїзомерна форма або фармацевтично прийнятна сіль за п. 1, де вказана сполука вибрана з групи: сі сі сі но но но то ( ОМе то (5 ОМе то ФВ ОМе (9) (9) |в) М М М вали шал шва я Е й о | сі й о | ме й о СІ СІ СІ но но но то (5 ОМе "то ФВ оМе "то ФВ оМе о) (о) Ге) Н Н їх В; З В; З х Н Ат М ов М о о Е М СІ Н МеО і (в) сі сі СІ но но но шк ФВ ОМе "то ФВ ОМе то ФВ оМе м щова що Е М М ЕЗС М о о гом Е М Ф) Е М (Ф) М |) н з н з н з сі Ге сі но но но --к ФВ, то Фі, ОМе то фі, ОМе (с) ОМе Те ат і ЕзСО М ЕзСО М зСО і й У Зв У 28-- У" 28- М оо М оо М що Н МеО Н Н

3. Фармацевтична композиція, що містить сполуку формули (І) або її стереоїзомерну форму або фармацевтично прийнятну сіль за п. 1 або п. 2 разом з однією або декількома фармацевтично прийнятними допоміжними речовинами, розріджувачами або носіями.

4. Сполука формули (І) або її стереоїзомерна форма або фармацевтично прийнятна сіль за п. 1 або фармацевтична композиція за п. З для застосування як лікарського препарату.

5. Сполука формули (І) або її стереоїзомерна форма або фармацевтично прийнятна сіль за п. 1 або фармацевтична композиція за п. З для застосування в лікуванні денге.

б. Застосування сполуки, представленої наступною структурною формулою (І)

м- СІ у Ге) осна в х - ) г Н 4 Х й. ; (1) її стереоїзомерної форми або фармацевтично прийнятної солі; при цьому вказана сполука вибрана з групи, де: Ві являє собою Н, Е2 являє собою ЕК, СІ або ОСН», і Ез являє собою НН; Ві являє собою Н, Е» являє собою Е або СІ, і Ез являє собою СНз; Ві являє собою СН», В2 являє собою ОСН», і Ез являє собою Н; Ві являє собою ЕК, Е2 являє собою БЕ, і Ез являє собою НН; Ві являє собою СН», В»: являє собою ЕК, і Ез являє собою НН; Ві являє собою СЕз або ОСЕ», В: являє собою Н, і Ез являє собою НН; Ві являє собою ОСЕ:», В2 являє собою ОСН», і Ез являє собою Н, або Ві являє собою ОСЕ», В2 являє собою Н, і Ез являє собою СНЗз, для інгібування реплікації вірусу (вірусів) денге в біологічному зразку або у пацієнта.

7. Застосування сполуки за п. б, яке додатково включає спільне введення додаткового терапевтичного засобу.

8. Застосування за п. 7, де вказаний додатковий терапевтичний засіб являє собою інший противірусний засіб.

9. Спосіб синтезу сполук формули (І) за п. 1 або п. 2, який включає стадії: а) перетворення 2-(4-хлор-2-(2-гідроксіетокси)феніл)оцтової кислоти загальної формули (ІІ) на похідне хлорангідриду загальної формули (ІІ) із застосуванням реагенту для хлорування, де РО являє собою захисну групу; Б) реакції Фріделя-Крафтса хлорангідриду загальної формули (ІІ) із заміщеним індолом загальної формули (ІМ), яка проводиться із застосуванням реагенту, який являє собою кислоту Льюїса, в прийнятному розчиннику і в прийнятних умовах реакції, які, як правило, включають охолодження, з отриманням 3-ацилованого індолу загальної формули (М), де Кі, Р? і Ез мають ті ж значення, що і в п. 1; с) видалення захисної групи Ро зі сполук загальної формули (М) з отриманням сполук загальної формули (МІ); 4) бромування (МІ) реактивом в прийнятному розчиннику з отриманням сполук загальної формули (МІЇ); е) взаємодії сполук загальної формули (МІ) з З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліном (МІ!) в прийнятному розчиннику і, необов'язково, із застосуванням основи з отриманням сполуки загальної формули (І) у вигляді рацемічних сумішей; І хірального розділення сполук загальної формули (І) з отриманням енантіомерів А і В загальної формули (І)

к Я и Водні ван я ще ді Б я що Ж Х є В. ве ее ою ом к У ЦИ жк й п АХ - ЕІ ще м мех вчи ША їй У ІМ в ваше Оу не СЬКУ ру зи ее Я У Нв шу й Не ш- Ж Кч На дн В Ше ї ни ОТ мех я п Кай ко Ех Ж дбория ж кі З пн млн А ГИ й 7 - осв ч ТЗ й Ко ск-- ьї

В. те пу ГУ В зр і г. а Бе у, ГУ у Щ пет ще: -щ пи « соду пан п осві щ й І х шо й 5, хв пи ІХіральне ірозділення ' енантіонавн НА); та НЕ

10. Спосіб за п. 9, в якому проміжні сполуки загальної формули (М) перетворюють на сполуки загальної формули (І), додержуючись стадій: Її бромування в альфа-положення карбонільної функціональної групи проміжних сполук загальної формули (М) за допомогою прийнятного реактиву бромування в прийнятному розчиннику з отриманням сполук загальної формули (ІХ), де РО така, як визначено в п. 10, і Кі, В» і Ез мають ті ж значення, що і в п. 1; і) взаємодії сполук загальної формули (ІХ) з З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліном (МІ!) в прийнятному розчиннику і, необов'язково, із застосуванням основи з отриманням сполук загальної формули (Х); ії) видалення О-захисної групи зі сполук загальної формули (Х) в прийнятному розчиннику з отриманням сполук загальної формули (І) у вигляді рацемічних сумішей; ім) хірального розділення сполук загальної формули (І) з отриманням енантіомерів А і В загальної формули (І) їж ие вк в, Я їх дян ОО щ « ще 4 ла ші - - в Би Канн и У ї З ее ря а че 7 Вон п З Ме, я чи вич з іме г в Зокта поь у ВШ р й ї в, - МИ - й марля и ай Га КУ Я Й р І не се о л-й р; М Ул й МЕ одив й, т ї не ди, М ее же г й х Щ Мч ви ве У Ве Мн і Я й Б я, й х му о і р) Храявне роздіпення і ававтіннявраі НАК та В)

11. Спосіб синтезу сполук формули (І) за п. 1 або п. 2, який включає стадії: І) конденсації 2-(2-(бензилоксі)етокси)-4-хлорбензальдегіду (ХІ) З З-метокси-5- (метилсульфоніл)аніліном (МІ) в прийнятному розчиннику з отриманням проміжного іміну (ХІЇ); І) додавання заміщеного М-Вос-захищеного індолкарбоксальдегіду загальної формули (ХІЇЇ) в присутності каталізатора для оборотності поляризації з отриманням сполук загальної формули (Х); І) видалення О-захисної групи (РО) зі сполук загальної формули (Х) в прийнятному розчиннику з отриманням сполук загальної формули (І) у вигляді рацемічних сумішей;