UA119850C2 - КОН'ЮГАТ БІОЛОГІЧНО АКТИВНОГО ПОЛІПЕПТИДНОГО МОНОМЕРА ТА Fc-ФРАГМЕНТА ІМУНОГЛОБУЛІНУ ЗІ ЗНИЖЕНИМ РЕЦЕПТОРОПОСЕРЕДКОВАНИМ КЛІРЕНСОМ ТА СПОСІБ ЙОГО ОДЕРЖАННЯ - Google Patents

КОН'ЮГАТ БІОЛОГІЧНО АКТИВНОГО ПОЛІПЕПТИДНОГО МОНОМЕРА ТА Fc-ФРАГМЕНТА ІМУНОГЛОБУЛІНУ ЗІ ЗНИЖЕНИМ РЕЦЕПТОРОПОСЕРЕДКОВАНИМ КЛІРЕНСОМ ТА СПОСІБ ЙОГО ОДЕРЖАННЯ Download PDF

Info

Publication number
UA119850C2
UA119850C2 UAA201600685A UAA201600685A UA119850C2 UA 119850 C2 UA119850 C2 UA 119850C2 UA A201600685 A UAA201600685 A UA A201600685A UA A201600685 A UAA201600685 A UA A201600685A UA 119850 C2 UA119850 C2 UA 119850C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
immunoglobulin
fragment
conjugate
physiologically active
active polypeptide
Prior art date
Application number
UAA201600685A
Other languages
English (en)
Inventor
Сон Хі Парк
Сон Хи Парк
Мін Юн Кім
Мин Юн КИМ
Х'юн К'ю Лім
Хьюн Кью Лим
Сун Мін Пе
Сун Мин Пэ
Сун Йоуп Чун
Се Чхан Квон
Сэ Чхан Квон
Original Assignee
Ханмі Фарм. Ко., Лтд.
Ханми Фарм. Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ханмі Фарм. Ко., Лтд., Ханми Фарм. Ко., Лтд. filed Critical Ханмі Фарм. Ко., Лтд.
Publication of UA119850C2 publication Critical patent/UA119850C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/27—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Винахід стосується фармацевтичної композиції тривалої дії, яка містить кон’югат, що включає фізіологічно активний поліпептид, зв’язаний з Fc-фрагментом імуноглобуліну, де композиція включає мономерний кон’югат, що містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, приєднану до одного Fc-ланцюга одиничного Fc-фрагмента імуноглобуліну, що містить два Fc-ланцюги імуноглобуліну, за допомогою непептидильного лінкера, що має обидва кінці, та димерний кон’югат, що містить дві молекули такого самого фізіологічно активного поліпептиду, приєднаного до одиничного Fc-фрагмента імуноглобуліну, що містить два Fc-ланцюги імуноглобуліну, за умови, що молярне співвідношення мономерного кон’югата і димерного кон’югата в композиції складає принаймні 19, де кожний з двох Fc-ланцюгів імуноглобуліну в димерному кон’югаті є зв’язаним з однією молекулою фізіологічно активного поліпептиду за допомогою непептидильного лінкера, що має обидва кінці; та непептидильний лінкер є вибраним з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколю та пропіленгліколю, поліоксіетилованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілового етилового етеру, полімеру, що є здатним до біодеградації, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти та їх комбінацій.

Description

Винахід стосується фармацевтичної композиції тривалої дії, яка містить кон'югат, що включає фізіологічно активний поліпептид, зв'язаний з Ес-фрагментом імуноглобуліну, де композиція включає мономерний кон'югат, що містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, приєднану до одного Ес-ланцюга одиничного Ес-фрагмента імуноглобуліну, що містить два Ес- ланцюги імуноглобуліну, за допомогою непептидильного лінкера, що має обидва кінці, та димерний кон'югат, що містить дві молекули такого самого фізіологічно активного поліпептиду, приєднаного до одиничного Ес-фрагмента імуноглобуліну, що містить два Ес-ланцюги імуноглобуліну, за умови, що молярне співвідношення мономерного кон'югата і димерного кон'югата в композиції складає принаймні 19, де кожний з двох Ес-ланцюгів імуноглобуліну в димерному кон'югаті є зв'язаним з однією молекулою фізіологічно активного поліпептиду за допомогою непептидильного лінкера, що має обидва кінці; та непептидильний лінкер є вибраним з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколю та пропіленгліколю, поліоксіетилованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілового етилового етеру, полімеру, що є здатним до біодеградації, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти та їх комбінацій.
Винахід стосується фармацевтичної композиції тривалої дії, що містить кон'югат, який містить фізіологічно активний поліпептид, приєднаний до Ес-фрагменту імуноглобуліну, причому містить мономерний кон'югат, що містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, приєднану до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну та необов'язково містить мультимерний кон'югат, який містить дві або більше молекул такого ж саме фізіологічно активного поліпептиду, приєднаного до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну за умови, що молярне відношення мономерного кон'югату до мультимерного кон'югату в композиції складає принаймні 19; кон'югату мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну, що містить мономер фізіологічно активного поліпептиду, приєднаний непептидильним лінкером до Ес-фрагменту імуноглобуліну, в якому цей фізіологічно активний поліпептид приєднано непептидильним лінкером до Ес-фрагменту імуноглобуліну в мономерній формі, кон'югату, який характеризується зниженою рецепторопосередкованою інтерналізацією або рецепторопосередкованим кліренсом порівняно з будь-яким димерним кон'югатом, що містить дві молекули фізіологічно активного поліпептиду, приєднані непептидильним лінкером до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну або кон'югату, що містить фізіологічно активний поліпептидний димер, приєднаний всередині рамки зчитування до Ес-фрагменту імуноглобуліну; та способу одержання цієї фармацевтичної композиції тривалої дії.
Відомо, що кліренсу білків іп мімо відбувається з допомогою різних механізмів, в тому числі руйнуванням сироватковими протеазами, кліренсу білків нирками або з допомогою рецепторів, тому було досліджено різні спроби уникнення дії цих механізмів кліренсу білків з організму, метою яких було покращення часу напівжиття фізіологічно активних білків з посиленням таким чином їх терапевтичної ефективності. Зокрема було проведено дослідження білкових кон'югатів, які містили полімер поліетиленгліколю (ПЕГ), альбумін, жирну кислоту або Ес- фрагмент антитіла (сталу ділянку), зв'язану з білком з метою збільшення часу напівжиття білка.
Для отримання ковалентного зв'язування цього матеріалу з фізіологічно активним білком з метою збільшення часу напівжиття сироватки фізіологічно активного білка та скорочення інтервалу введення лікарського засобу покращуючи зручність його застосування для пацієнтів.
Зокрема, з метою надання білкам стійкості та зменшення їх контакту з протеазами та їх кліренсу нирками, було застосовано спосіб хімічного прикріплення високорозчинних полімерів, як-то ПЕГ до поверхні білкових лікарських засобів. У разі застосування цього способу, відомо, що полімер неспецифічно зв'язується з білююом-мішенню у специфічному сайті або сайтах, що покращує розчинність білка, робить його більш стійким, запобігає виникненню білкового гідролізу та, крім того, не викликає певних побічних проявів (Зада еї аї., ). Гептепіайоп Віоепдіпеєгіпд 71: 137- 139, 1991). Однак, цей спосіб має певні недоліки, які полягають в тому, що навіть, якщо ПЕГ, приєднаний до фізіологічно активного білка зможе збільшити його стійкість, він значно зменшує його титр, та зі зростанням молекулярної маси ПЕГ знижується його реакційна здатність до взаємодії з білюом, що призводить до зменшення виходу. На додачу до цього, в разі змінення певного амінокислотного залишку білка жирними кислотами, ця змінена жирна кислота оборотним чином зв'язується з сироватковим альбуміном зі збільшенням часу напівжиття білка сироватки, але цей час напівжиття дорівнює приблизно від одного дня до одного тижня, що свідчить про його незначне збільшення. Крім того, іншим недоліком є те, що фізіологічно активний білок, який оборотним чином відокремлюється від альбуміну легко виводиться з організму через нирки.
З цих причин були здійснені спроби застосування фрагментів імуноглобуліну для покращення часу напівжиття фізіологічно активних матеріалів, в тому числі білків. Зокрема, активні дослідження проводять з метою покращення стійкості лікувальних білків їх злиттям з подібними Ес-фрагментами імуноглобуліну.
В науковій літературі відомо про досягнення експресії інтерферону (опублікована Заявка на
Патент Кореї Мо. 2003-9464), рецепторів інтерлейкіну-4, інтерлейкіну-7 або еритропоетину (Патент Кореї Мо. 249572) у ссавців із застосуванням способу генетичної рекомбінації, в якій продукт експресії мав вигляд молекули, злитої з Ес-фрагментом імуноглобуліну. Також, у
Міжнародній патентній публікації Мо. УМО 01/03737 описано злитий білок, що містить цитокін або фактор росту, приєднаний до Ес-фрагменту імуноглобуліну через олігопептидний лінкер. Крім того, у Патенті США Мо. 5 116 964 описано злитий білок, що містить білок ІНК (глікобілок поверхні лімфоцитарної клітини) або білок СО4, злитий з М- або С-кінцем Ес-фрагменту імуноглобуліну із застосуванням способу генетичної рекомбінації та у Патенті США Мо 5 349 053 описано злитий білок І/-2 з Есо-фрагментом імуноглобуліну. Крім того, приклади Ес - злитих білків, отриманих із застосуванням способу генетичної рекомбінації, охоплюють злитий білок бета-інтерферону або його похідну з Ес-фрагментом імуноглобуліну (Міжнародна патентна 60 публікація Мо. М/О 00/23472), злитий білок І/-5 рецептора з Ес-фрагментом імуноглобуліну
(Патент США Мо 5 712 121), злитий білок альфа-інтерферону з Ес-фрагментом імуноглобуліну 04 (Патент США Мо 5 723 125) та злитий білок СО4 з Ес-фрагментом імуноглобуліну 2 (Патент
США Мо 6 451 313). Додатково слід зазначити Патент США Мо. 5 605 690, який стосується модифікації амінокислотних залишків у Ес-фрагменті імуноглобуліну та в якому описано злитий білок ТМЕК-Ід01 Ес, отриманий з допомогою способу генетичної рекомбінації із застосуванням
Ес-фрагменту, отриманого модифікацією амінокислотних залишків особливого сайту зв'язування комплементу або сайту зв'язування рецептора в Ес-фрагменті імуноглобуліну.
Окрім цього, способи одержання злитих білків з допомогою способу генетичної рекомбінації із застосуванням Ес - ділянки імуноглобуліну, модифікованої, як зазначено вище також наведено у
Патентах США Мо Мо 6 277 375, 6 410 008 та 6 444 792. Однак, для застосування біомедичних засобів зі злитим з ними Ес-фрагментом імуноглобуліну необхідно подолати цитотоксичні проблеми, викликані ефекторною функцією, яка притаманна Ес-фрагменту.
Винахідники зробили великі зусилля, щоб отримати кон'югат, який має збільшений час напівжиття іп мімо сироватки приєднанням Ес-фрагменту імуноглобуліну до фізіологічно активного поліпептиду. В результаті винахідники відкрили, тим самим завершуючи винахід, що в разі прикріплення фізіологічно активного поліпептиду до Ес-фрагменту імуноглобуліну в мономерній формі, він буде відрізнятися значно зниженим рецепторопосередкованим кліренсом порівняно до фізіологічно активного поліпептиду в мультимерній формі та також має подовжений час напівжиття навіть в тваринній моделі щурів.
Для одержання фармацевтичної композиції тривалої дії, що містить кон'югат, який містить фізіологічно активний поліпептид, приєднаний до Ес-фрагменту імуноглобуліну, тобто композиції, яка містить мономерний кон'югат, що містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, приєднану до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну та необов'язково містить мультимерний кон'югат, який містить дві або більше молекул такого ж саме фізіологічно активного поліпептиду, приєднаного до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну, отриманого за умови, що молярне відношення мономерного кон'югату до мультимерного кон'югату в композиції складає принаймні 19.
Іншою метою винаходу є одержання кон'югату мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну, що містить мономер фізіологічно активного поліпептиду,
Зо приєднаний непептидильним лінкером до Ес-фрагменту імуноглобуліну, в якому фізіологічно активний поліпептид приєднано непептидильним лінкером до Ес-фрагменту імуноглобуліну в мономерній формі, кон'югату, який характеризується зменшенням рецепторопосередкованої інтерналізації або рецепторопосередкованого кліренсу порівняно до кон'югату, який містить фізіологічно активний поліпептид, приєднаний до Ес-фрагменту імуноглобуліну всередині рамки зчитування.
Іншою метою винаходу є надання способу одержання фармацевтичної композиції тривалої дії, способу, який полягає у: (а) прикріпленні фізіологічно активного поліпептиду до Ес- фрагменту імуноглобуліну з одержанням суміші кон'югатів фізіологічно активного поліпептиду з
Ес-фрагментом імуноглобуліну; та (Б) у відокремленні від суміші кон'югату мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну, який містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, приєднану до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну.
Як описано вище, кон'югат за винаходом, який містить фізіологічно активний поліпептидний мономер, приєднаний до кон'югату Ес-фрагменту імуноглобуліну характеризується суттєво зниженою рецепторопосередкованою інтерналізацією або рецепторопосередкованим кліренсом, отже має збільшений час напівжиття сироватки. Відповідно, кон'югат винаходу може забезпечити надання лікарського засобу, який має збільшений час напівжиття сироватки та терапевтичну перевагу.
Опис Фігур.
На Фіг. 1 схематично зображено характерну структуру кон'югату мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом (Фіг. 1А) та найбільш поширену конфігурацію кон'югату димеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом (Фіг.1В).
На Фіг. 2 зображено порівняння рівня інтерналізації рецептора між кон'югатом агоністу СІ Р- 1 з Рс-фрагментом імуноглобуліну (Приклад винаходу) та злитого білка агоністу І Р-1 з Ес- фрагментом імуноглобуліну, в якому агоніст (І Р-1 існує в димерній формі (Порівняльний приклад).
На Фіг. 3 зображено порівняння фармакокінетичних характеристик іп мімо між кон'югатом агоністу І Р-1 за Прикладом винаходу та кон'югатом агоністу СІ Р-1 за Порівняльним прикладом.
Для досягнення вищезазначених цілей, винаходом передбачено фармацевтичну композицію тривалої дії, яка містить кон'югат, який містить фізіологічно активний поліпептид, приєднаний до Ес-фрагменту імуноглобуліну, композицію, яка містить мономерний кон'югат, що містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, приєднану до одиничного Ес- фрагменту імуноглобуліну та необов'язково містить мультимерний кон'югат, який містить дві або більше молекул такого ж саме фізіологічно активного поліпептиду, приєднаного до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну за умови, що молярне відношення мономерного кон'югату до мультимерного кон'югату в композиції дорівнює принаймні 19.
У одному втіленні, кон'югат, який є складовою частиною фармацевтичної композиції тривалої дії може містити непептидильний лінкер, розташований між фізіологічно активним поліпептидом та Ес-фрагментом імуноглобуліну для прикріплення фізіологічно активного поліпептиду до Ес-фрагменту імуноглобуліну.
У іншому втіленні, мономерний кон'югат може відрізнятися зниженою рецепторопосередкованою інтерналізацією або зниженим рецепторопосередкованим кліренсом порівняно з будь-яким димерним кон'югатом, який містить дві молекули фізіологічно активного поліпептиду, приєднані непептидильним лінкером до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну або кон'югату, який містить фізіологічно активний поліпептидний димер, приєднаний всередині рамки зчитування до Ес-фрагменту імуноглобуліну.
У іншому втіленні, фізіологічно активний поліпептид може бути вибрано з групи, яка складається з глюкагоноподібного пептиду-1 (СІ Р-1), гранулоцитарного колонієстимулюючого фактора (05-С5Р), людського гормону росту (ПОН), еритропоетину (ЕРО), глюкагону, оксинтомодуліну, інсуліну, гормону, що звільняє гормон росту, , пептиду, який звільняє гормон росту, інтерферонів, рецепторів інтерферонів, рецептора, зв'язаного з С білком, інтерлейкінів та інтерлейкінових рецепторів, ферментів, інтерлейкін-зв'язуючих білків, цитокін--зв'язуючих білків, фактора активування макрофагів, макрофагового пептиду, В - клітинного фактора, Т - клітинного фактора, білка А, алергологічного пригнічувача, клітинних некротичних глікобілків, імунотоксину, лімфотоксину, фактора некрозу пухлин, пухлинних супресорів, фактора росту метастазів, альфа-1ї антитрипсину, альбуміну, о-лактальбуміну, аполіпопротеїну-Е, високоглікозилованого еритропоетину, ангіопоетинів, гемоглобіну, тромбіну, пептиду
Зо активування тромбінового рецептора, тромбомодуліну, антигенів крові МІЇ, МПа, МІ, ЇХ та ХП, фактора активування плазміногену, фібрин-зв'язуючого білка, урокінази, стрептокінази, гірудину, білка С, С-реактивного білка, пригнічувача реніну, пригнічувача колагенази, супероксид дисмутази, лептину, тромбоцитарного фактора росту, епітеліального фактора росту, епідермального фактора росту, ангіостатину, ангіотензину, фактора росту кісток, кісткового морфогенетичного білка, кальцитоніну, атріопептину, хрящового індукуючого фактора імпульсної відповіді, елкатоніну, фактора активування сполучної тканини, пригнічувача шляху тканевого фактора, фолітропіну, лютропіну, люліберину, факторів росту нервової тканини, паратироїдного гормону, релаксину, секретину, соматомедину, інсуліноподібного фактора росту, гормону кори наднирникових залоз, холецистокініну, панкреатичного поліпептиду, гастрин-вивільнюючого пептиду, фактора вивільнення кортикотропіну, тиреотропного гормону, автотаксину, лактоферину, міостатину антигенів клітинної поверхні, моноклональних антитіл, поліклональних антитіл та фрагментів антитіл.
У іншому втіленні, фізіологічно активний поліпептид може бути вибрано з групи, яка складається з глюкагоноподібного пептиду-1 (СІ Р-1), гранулоцитарного колонієстимулюючого фактора (05-С5Б), людського гормону росту (ПОН), еритропоетину (ЕРО), глюкагону, оксинтомодуліну, інсуліну та їх похідних.
У іншому втіленні, непептгидильний лінкер може бути вибрано з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, сополімеру етиленгліколю та пропіленгліколю, поліоксиетилованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілового етилового етеру, полімеру, що дезінтегрується під дією біологічних факторів, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти та їх комбінацій.
У іншому втіленні, непептидильний лінкер може мати молекулярну масу в межах 1-100 кДа.
У іншому втіленні, Ес-фрагмент імуноглобуліну може складатися з 1-4 доменів, вибраних з групи, яка складається з доменів СНІ, СН2, СНЗ та СНЯА.
У іншому втіленні, Ес-фрагмент імуноглобуліну може додатково містити шарнір.
У іншому втіленні, Ес-фрагмент імуноглобуліну може бути вибрано з групи, яка складається з ЇЧО, ІДА, ІдО, ЧЕ, І9М, їх комбінацій та гібридів.
У іншому втіленні, Ес-фрагмент імуноглобуліну може бути Ес-фрагментом Ідса4.
У іншому втіленні, Ес-фрагмент імуноглобуліну може бути в неглікозилованій формі.
У іншому аспекті, винаходом передбачено кон'югат мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну, що містить мономер фізіологічно активного поліпептиду, приєднаний непептидильним лінкером до Ес-фрагменту імуноглобуліну, в якому фізіологічно активний поліпептид приєднано непептидильним лінкером до Ес-фрагменту імуноглобуліну в мономерній формі; кон'югат, який характеризується зниженою рецепторопосередкованою інтерналізацією або зниженим рецепторопосередкованим кліренсом порівняно з будь-яким димерним кон'югатом, який містить дві молекули фізіологічно активного поліпептиду, приєднані непептидильним лінкером до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну або кон'югату, який містить фізіологічно активний поліпептидний димер, приєднаний всередині рамки зчитування до Ес-фрагменту імуноглобуліну.
У іншому аспекті, винаходом передбачено спосіб одержання фармацевтичної композиції тривалої дії, який полягає у: (а) прикріпленні фізіологічно активного поліпептиду до Ес- фрагменту імуноглобуліну з одержанням суміші кон'югатів фізіологічно активного поліпептиду з
Ес-фрагментом імуноглобуліну; та (Б) відокремленні від суміші кон'югату мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну, який містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, приєднану до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну.
У одному втіленні, фізіологічно активний поліпептид та Ес-фрагмент імуноглобуліну, які включено в цьому способі до складу кон'югату, може бути з'єднано між собою непептидильним лінкером.
У іншому втіленні, кон'югат, який містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, приєднану до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну в цьому способі може відрізнятися зниженою рецепторопосередкованою інтерналізацією або рецепторопосередкованим кліренсом порівняно з будь-яким димерним кон'югатом, що містить дві молекули фізіологічно активного поліпептиду, приєднані непептидильним лінкером до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну, або кон'югату, що містить фізіологічно активний поліпептидний димер, приєднаний всередині рамки зчитування до Ес-фрагменту імуноглобуліну.
У одному аспекті, винаходом передбачено фармацевтичну композицію тривалої дії, що містить кон'югат, який містить фізіологічно активний поліпептид, приєднаний до Ес-фрагменту імуноглобуліну, композиції, яка містить мономерний кон'югат, який містить одну молекулу
Зо фізіологічно активного поліпептиду, приєднаного до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну та необов'язково містить мультимерний кон'югат, що містить дві або більше молекул такого ж фізіологічно активного поліпептиду, приєднаного до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну за умови, що молярне відношення мономерного кон'югату до мультимерного кон'югату в композиції складає принаймні 19.
У втіленні винаходу було відкрито, що кон'югат, який містить мономер фізіологічно активного поліпептиду, приєднаний до Ес-фрагменту імуноглобуліну характеризується зниженою рецепторопосередкованою інтерналізацією та рецепторопосередкованим кліренсом порівняно до кон'югату, що містить фізіологічно активний поліпептидний мультимер, зокрема фізіологічно активний поліпептидний димер, приєднаний до Ес-фрагменту імуноглобуліну, отже може мати збільшений час напівжиття сироватки. Таким чином було відкрито, що лікарський засіб, що містить кон'югат, який містить мономер фізіологічно активного поліпептиду, приєднаний до Ес- фрагменту імуноглобуліну для одержання зменшеного рецепторопосередкованого кліренсу може бути застосовано, як лікарський засіб тривалої дії, оскільки він характеризується зниженою рецепторопосередкованою інтерналізацією та рецепторопосередкованим кліренсом.
Інакше кажучи, основою винаходу є відкриття того, що кон'югат мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Есо-фрагментом імуноглобуліну характеризується зниженою рецепторопосередкованою інтерналізацією та зниженим рецепторопосередкованим кліренсом в порівнянні з мультимерним кон'югатом, зокрема з димерним кон'югатом.
Як тут застосовано, термін "фармацевтична композиція тривалої дії" має відношення до фармацевтичної композиції, що містить кон'югат мономеру фізіологічно активного поліпептиду з
Ес-фрагментом імуноглобуліну, який характеризується зниженою рецепторопосередкованою інтерналізацією та рецепторопосередкованим кліренсом порівняно до окремого фізіологічно активного поліпептиду або до мультимеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну. Інакше кажучи, цей термін має відношення до фармацевтичної композиції, що містить мономерний кон'югат, який містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, приєднану до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну. Крім того, термін "фармацевтична композиція" може бути застосовано взаємозамінне з терміном "препарат".
У фармацевтичній композиції винаходу, мономерний кон'югат, який містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, приєднану до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну бо може бути присутнім з молярним відношенням принаймні 19:11, переважно принаймні 99:11,
більш переважно принаймні 500:1 по відношенню до мультимерного кон'югату, який містить дві або більше молекул такого ж саме фізіологічно активного поліпептиду, приєднаного до Ес- фрагменту імуноглобуліну. Інакше кажучи, фармацевтична композиція тривалої дії характеризується тим, що її молярне відношення мономерного кон'югату до мультимерного кон'югату (мономерний кон'югат| / |мультимерний кон'югат|) складає принаймні 19.
Відповідно до втілення винаходу, фізіологічно активний поліпептид у складі кон'югату фізіологічно активного поліпептиду-непептидильного полімеру- Ес-фрагменту імуноглобуліну є присутнім в мономерній формі та, в такому разі, цей кон'югат має більшу тривалість дії іп мімо порівняно до випадку, в якому фізіологічно активний поліпептид є присутнім в димерній формі.
Отже, в разі композиції, в якій є присутнім тільки мономерний кон'югат без наявності мультимерного кон'югату або в якій молярне відношення мономерного кон'югату до мультимерного кон'югату, зокрема димерного кон'югату складає принаймні 19, ця композиція має відмінну дію, яка полягає у збільшенні, порівняно до інших композицій, часу напівжиття фізіологічно активного поліпептиду сироватки.
Мономерний кон'югат за винаходом має довгу тривалість дії іп мімо через те, що інтерналізація, опосередкована рецептором фізіологічно активного поліпептиду є зниженою порівняно до мультимерного кон'югату, який містить дві або більше молекул фізіологічно активного поліпептиду, приєднані до Ес-фрагменту імуноглобуліну. Зокрема відомо, що кліренсу через нирки, яке є іншим механізмом, який визначає час напівжиття молекули в організмі залежить від молекулярної маси самої молекули. Отже, якщо ниркове кліренсу є важливою змінною, яка визначає час напівжиття, то час напівжиття буде зростати зі зростанням відношення мультимерного кон'югату, який має більшу молекулярну масу. Однак, в цьому винаході було відкрито мономерний кон'югат, який характеризується збільшеною тривалістю дії іп мімо та в цьому зв'язку може бути помітно, що опосередкована рецептором інтерналізація є важливим фактором збільшення часу напівжиття іп мімо кон'югату за винаходом. Ці результати можуть бути наслідками корисного впливу (наприклад, зменшення стеричної перешкоди) мономерного кон'югату, якого не було спостережено в мультимерному кон'югаті.
Отже, фармацевтична композиція тривалої дії за винаходом може відрізнятися більшою тривалістю дії іп мімо у порівнянні з фармацевтичною композицією, що містить або кон'югат
Зо мультимеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну або кон'югат, який містить димер фізіологічно активного поліпептиду, приєднаний всередині рамки зчитування до Ес-фрагменту імуноглобуліну. Зокрема, мономерний кон'югат, який містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, приєднану до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну може бути присутнім в фармацевтичній композиції за винаходом в молярному відношенні принаймні 19:11, переважно принаймні 99:11, білош переважно принаймні 500:1 відносно мультимерного кон'югату, до складу якого входять дві або більше молекул такого ж саме фізіологічно активного поліпептиду, приєднаного до Ес-фрагменту імуноглобуліну та, в цьому разі, композиція, яка містить мономерний кон'югат та мультимерний кон'югат забезпечує одержання відмінного препарату тривалої дії, тому що час напівжиття цієї композиції іп мімо не знижується.
Як тут застосовано, термін "кон'югат фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну" має відношення до кон'югату, який містить фізіологічно активний поліпептид, приєднаний до Ес-фрагменту імуноглобуліну. Переважним чином цей кон'югат може містити непептидильний лінкер, розміщений між фізіологічно активним поліпептидом та Ес-фрагментом імуноглобуліну для приєднання фізіологічно активного поліпептиду до Ес-фрагменту імуноглобуліну.
Як тут застосовано, термін "кон'югат мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес- фрагментом імуноглобуліну" має відношення до кон'югату, який містить мономер фізіологічно активного поліпептиду, приєднаний до Ес-фрагменту імуноглобуліну. Цей кон'югат охоплює форму, в якій одиничний фізіологічно активний поліпептид приєднано до одиничного Ес- фрагменту імуноглобуліну. В цьому випадку одиничний Ес - фрагмент імуноглобуліну існує переважно в формі, в якій два Ес-ланцюги зв'язано між собою, наприклад, але без обмеження, дисульфідним зв'язком. Структуру цього кон'югату мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну зображено, але без обмеження цим зображенням, на Фіг.1.
Термін "кон'югат мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну" в цьому описі застосовано взаємозамінне з терміном "мономерний кон'югат".
Кон'югат мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну характеризується зниженою рецепторопосередкованою інтерналізацією або рецепторопосередкованим кліренсом порівняно до подібних характеристик мультимерного 60 кон'югату, який містить дві або більше молекул фізіологічно активного поліпептиду, приєднані до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну або кон'югату, який містить мультимер фізіологічно активного поліпептиду, приєднаний всередині рамки зчитування до Ес-фрагменту імуноглобуліну. Отже, лікарський засіб, який містить тільки один кон'югат мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну або містить велику кількість кон'югату, характеризується довгою тривалістю дії іп мімо та відмінною терапевтичною ефективністю.
Тим часом мультимерний кон'югат, який містить дві або більше молекули фізіологічно активного поліпептиду, приєднані до Ес-фрагменту імуноглобуліну також охоплює форму, в якій дві або більше молекул фізіологічно активного поліпептиду приєднано до одиничного Ес- фрагменту імуноглобуліну (наприклад, яка містить два Ес - ланцюги, зв'язані між собою дисульфідним зв'язком тощо).
Зокрема, кон'югат димеру фізіологічно активного поліпептиду 3 Ес-фрагментом імуноглобуліну охоплює форму, в якій дві молекули фізіологічно активного поліпептиду приєднано до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну (наприклад, яка містить два Ес - ланцюги, зв'язані між собою дисульфідним зв'язком тощо). В такому разі фізіологічно активний поліпептид може бути приєднано непептидильним лінксером до кожного з двох ланцюгів, що складають Ес-фрагмент імуноглобуліну, але не обмежуючись цим. Цю конфігурацію наведено на Фіг. 1(В).
Крім того, кон'югат всередині рамки зчитування також охоплює форму з одержанням мультимеру фізіологічно активного поліпептиду, зокрема димеру фізіологічно активного поліпептиду, приєднаного всередині рамки зчитування до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну, а також мультимеру, в якому два або більше злитих поліпептидів містять фізіологічно активний поліпептид, злитий з Ес-фрагментом імуноглобуліну.
В той же час, фізіологічно активний поліпептидний мономер у складі конструкції мономерного фізіологічно активного поліпептиду, зв'язаного з Ес-фрагментом імуноглобуліну за винаходом є ковалентно зв'язаним з Ес-фрагментом імуноглобуліну через непептидильний лінкер.
Як тут застосовано, термін "непептидильний лінкер"- має відношення до біосумісного полімеру, який складається з двох або більше зв'язаних між собою повторюючихся одиниць та в якому ці одиниці є зв'язаними між собою із застосуванням будь-якого непептидного
Зо ковалентного зв'язку. Цей непептидильний лінкер може мати два або три кінці.
Застосований у винаході непептидильний лінкер може бути вибрано з групи, яка складається, але без обмеження, з полієтиленгліколю, поліпропіленгліколю, сополімеру етиленгліколю та пропіленгліколю, поліоксиетилованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілового етилового етеру, полімерів, що дезінтегруються під дією біологічних факторів, як-то полімолочної кислоти (РІ А) та полілактид-ко-гліколіду (РІ БА), ліпідних полімерів, хітинів, гіалуронової кислоти та їх комбінацій, але не обмежуючись цим.
Переважним чином він є поліетиленгліколем.
Крім того, обсяг винаходу також охоплює їх відомі в цій галузі похідні та похідні, які може бути легко отримано на сучасному етапі розвитку.
Пептидильний лінкер, який застосовують у злитому білку, отриманому традиційним способом злиття всередині рамки має недолік, пов'язаний з тим, що його іп мімо легко розщеплює протеаза та таким чином неможливо отримати очікуваний ефект збільшення часу напівжиття сироватки активного лікарського засобу з допомогою носія. З тієї причини, на додачу до пептидильного лінкеру, для одержання кон'югату у винаході може бути застосовано й непептидильний лінкер. Для збереження часу напівжиття сироватки пептиду цей непептидильний лінкер може бути стійким до дії протеази полімером, подібним до полімеру носія. Отже, у винаході може бути застосовано будь-який непептидильний лінкер без жодного обмеження за умови, що він буде складатися з полімеру, який має вищезазначену функцію, тобто складатися з полімеру, який є стійким до дії протеази іп мімо. Цей непептидильний лінкер має молекулярну масу 1-100 кДа, переважно 1-20 кДа, але не обмежуючись цим.
Крім того, цей непептидильний лінкер, який за винаходом приєднано до Ес-фрагменту імуноглобуліну може бути отримано не тільки з одного типу полімеру, але й також із поєднанням різних типів полімерів.
Непептидильний лінкер за винаходом має здатні до зв'язування з Ес-фрагментом імуноглобуліну реакційні групи та білковий лікарський засіб.
Реакційні групи на обох кінцях непептидильного полімеру переважним чином вибрано з групи, яка складається з реакційної альдегідної групи, пропіональдегідної групи, бутиральдегідної групи, малеїмідної групи та сукцинімідної похідної яка може бути сукцинімідилпропіонатом, гідроксисукцинімідилом, сукцинімідилкарбоксиметилом або бо сукцинімідилкарбонатом. Зокрема, якщо непептидильний полімер має на обох власних кінцях реакційну альдегідну групу, то фізіологічно активний поліпептид та імуноглобулін ефективно зв'язуються, відповідно, з обома кінцями непептидильного лінкеру з мінімізуванням неспецифічних реакцій. Кінцевий продукт, отриманий відновним алкілуванням через альдегідний зв'язок є набагато стійкішим, ніж продукт, зв'язаний з допомогою амідного зв'язку.
Альдегідна реакційна група може необов'язково зв'язуватися з М-кінцем в умовах низького рН та може утворювати ковалентний зв'язок з лізиновим залишком в умовах високого рН, наприклад, зрН оо.
Реакційні групи на обох кінцях непептидильного лінкеру можуть бути однаковими або різними. Наприклад, один кінець непептидильного лінкеру може мати малеїмідну групу та інший кінець може мати альдегідну групу, пропіональдегідну групу або алкілальдегідну групу, як-то бутилальдегід. Якщо як непептидильний лінкер застосовано поліетиленгліколь, що має гідроксильні реакційні групи на обох кінцях, то ці гідроксильні групи може бути активовано з допомогою відомою хімічної реакції з одержанням різних реакційних груп. Альтернативним чином, для одержання кон'югату винаходу може бути застосовано наявний у продажу поліеєтиленгліколь з модифікованою реакційною групою.
Як тут застосовано, термін "фізіологічно активний поліпептид" в загальному сенсі означає поліпептид, який має будь-яку фізіологічну активність іп мімо та звичайно має поліпептидну структуру та різні фізіологічні активні властивості. Фізіологічно активні поліпептиди охоплюють поліпептиди, які регулюють генетичну експресію та фізіологічну функцію та виправляють аномальний стан, спричинений втратою або надлишковим виділенням речовин, залучених до регулювання функцій іп мімо. Фізіологічно активні поліпептиди також можуть містити білкові лікувальні агенти загального призначення.
Тип та розмір фізіологічно активного поліпептиду у кон'югаті за винаходом не має певного обмеження за умови, що його може бути приєднано до Ес-фрагменту імуноглобуліну в мономерній формі з виявленням зменшеної рецепторопосередкованої інтерналізації або рецепторопосередкованого кліренсу порівняно до подібних характеристик в разі його приєднання до Ес-фрагменту імуноглобуліну в мультимерній формі. Крім того, більш бажаним є фізіологічно активний поліпептид, опосередкована рецептором інтерналізація та опосередковане рецептором кліренсу якого є головним серед механізмів кліренсу білка іп мімо.
Ко) Фізіологічно активний поліпептид може бути вибрано з групи, яка складається, але без обмеження, з глюкагоноподібного пептиду-! (СІ Р-1), гранулоцитарного колонієстимулюючого фактора (05-С5Р), людського гормону росту (ПОН), еритропоетину (ЕРО), глюкагону, оксинтомодуліну, інсуліну, гормону, що звільняє гормон росту, , пептиду, який звільняє гормон росту, інтерферонів, рецепторів інтерферонів, рецептора, зв'язаного з О білком, інтерлейкінів та інтерлейкінових рецепторів, ферментів, інтерлейкін-зв'язуючих білків, цитокін-зв'язуючих білків, фактора активування макрофагів, макрофагового пептиду, В - клітинного фактора, Т - клітинного фактора, білка А, алергологічного пригнічувача, клітинних некротичних глікобілків, імунотоксину, лімфотоксину, фактора некрозу пухлин, пухлинних супресорів, фактора росту метастазів, альфа-1ї антитрипсину, альбуміну, о-лактальбуміну, аполіпопротеїну-Е, високоглікозилованого еритропоетину, ангіопоетинів, гемоглобіну, тромбіну, пептиду активування тромбінового рецептора, тромбомодуліну, антигенів крові МІ, МПа, МИ, ЇХ та ХПІ, фактора активування плазміногену, фібрин-зв'язуючого білка, урокінази, стрептокінази, гірудину, білка С, С-реактивного білка, пригнічувача реніну, пригнічувача колагенази, супероксид дисмутази, лептину, тромбоцитарного фактора росту, епітеліального фактора росту, епідермального фактора росту, ангіостатину, ангіотензину, фактора росту кісток, кісткового морфогенетичного білка, кальцитоніну, атріопептину, хрящового індукуючого фактора імпульсної відповіді, елкатоніну, фактора активування сполучної тканини, пригнічувача шляху тканевого фактора, фолітропіну, лютропіну, люліберину, факторів росту нервової тканини, паратироїдного гормону, релаксину, секретину, соматомедину, інсуліноподібного фактора росту, гормону кори наднирникових залоз, холецистокініну, панкреатичного поліпептиду, гастрин-вивільнюючого пептиду, фактора вивільнення кортикотропіну, тиреотропного гормону, автотаксину, лактоферину, міостатину антигенів клітинної поверхні, моноклональних антитіл, поліклональних антитіл та фрагментів антитіл. Переважно фізіологічно активний поліпептид може бути вибрано з групи, яка складається, але без обмеження, з глюкагоноподібного пептиду- 1 (СІ Р-1), гранулоцитарного колонієстимулюючого фактора (5-С5Е), людського гормону росту (ПОН), еритропоетину (ЕРО), глюкагону, оксинтомодуліну, інсуліну та їх похідних.
Крім того, термін "фізіологічно активний поліпептид" охоплює не тільки природні фізіологічно активні поліпептиди, але й також агоністи, прекурсори, похідні, фрагменти або варіанти кожного поліпептиду.
Застосований у винаході фізіологічно активний поліпептид може бути агоністом СІ Р-1 та прикладом його може бути, але без особливого обмеження, (1Н-імідазол-4-іл)-ацетил-1 (СЕСТЕТЗОЇ ЗКОМЕЕЕАМКІ РГІЕММІКМОСРОЗОСАРРРЗ (5ЗЕБО ОО МО: 1) (Васпет) або
НОЄЕСТЕТ5ОМ5ЗМУІ ЕЕОААКЕРІАУМІ МКО (5ЕО ІО МО: 2) (Васпет)). Напрямком амінокислотної послідовності вважають напрямок від М-кінця до С-кінця.
Сполуку (1Н-імідазол-4-іл)у-ацетил-ї (ЗЕСТЕТ5ЗОЇ БКОМЕЕЕАМВІ РІЕМІ КМаСРОБОа АРРРБ5 (Васпет)) було застосовано для одержання агоністу СІ Р-1 з Ес-фрагментом імуноглобуліну у
Прикладі за винаходом.
Зазначені тут приклади похідних оксинтомодуліну охоплюють, але без обмеження, всі похідні оксинтомодуліну, наведені в Заявці на Патент Кореї Мо. 10-2012-0137271 та приклади похідних білка вивільнення інсуліну охоплюють, але без обмеження, похідні цього білка, наведені в Заявці на Патент Кореї Мо. 10-2009-0008151.
Оскільки Ес - ділянка імуноглобуліну є поліпептидом, що дезінтегрується під дією біологічних факторів, який метаболізується іп мімо, вона з безпечною для застосування в якості носія лікарського засобу. Також, через те, що Ес - ділянка імуноглобуліну має молекулярну масу, яка є меншою, ніж молекулярна маса всієї молекули імуноглобуліну, вона є корисною с точки зору одержання, очищення та виходу кон'югату. Крім того, через усунення Бар - ділянки, яка характеризується високим рівнем гетерогенності, обумовленої різницею амінокислотної послідовності між антитілами, позостала Ес - ділянка має значно збільшену гомогенність та низьку здатність до викликання сироваткової антигенності.
Термін "Ес - ділянка імуноглобуліну", як тут застосовано, має відношення до білка, який містить важколанцюгову сталу ділянку 2 (СН2) та важколанцюгову сталу ділянку З (СНЗ) імуноглобуліну за виключенням важколанцюгової та легколанцюгової змінних ділянок, важколанцюгової сталої ділянки 1 (СНІ) та легколанцюгової сталої ділянки 1 (С11) імуноглобуліну. Ес - ділянка імуноглобуліну може додатково містити шарнір у важколанцюговій сталій ділянці. Також Ес - ділянка імуноглобуліну за винаходом може бути подовженою Ес - ділянкою, що містить повну важколанцюгову сталу ділянку 1 (СНІ) та / або легколанцюгову сталу ділянку 1 (СІ 1) або її частину, за виключенням важколанцюгових та легколанцюгових змінних ділянок за умови, що вона буде мати суттєво таку ж саме або кращу, ніж її природна
Зо форма, фізіологічну функцію. Крім того, вона також може бути фрагментом, що має делецію відносно великої частини амінокислотної послідовності СНО та / або СНЗ.
Інакше кажучи, Ес - ділянка імуноглобуліну за винаходом може містити 1) домен СНІ, домен
СН2, домен СНЗ та домен СНА, 2) домен СНІ та домен СНІ, 3) домен СНІ та домен СНЗ, 4) домен СНЕО та домен СНЗ, 5) комбінацію одного або більше доменів та імуноглобулінову шарнір (або частину цієї петельної ділянки) та 6) димер кожного домену важколанцюгових та легколанцюгових сталих ділянок.
Ес-фрагмент імуноглобуліну за винаходом може містити не тільки природну амінокислотну послідовність, але й також її мутантну послідовність. Як тут застосовано, термін "мутант амінокислотної послідовності" означає послідовність, що характеризується від природної амінокислотної послідовності через делецію, вставку, неконсервативне або консервативне заміщення або комбінації таких змінень одного або кількох амінокислотних залишків.
Наприклад, у разі Ес-фрагменту Ідс, прийнятною метою для модифікації можуть бути амінокислотні залишки в положеннях 214-238, 297-299, 318-322 або 327-331, які, як відомо, є важливим для зв'язування.
Додатково, можливим є також застосування й інших мутантів, включаючи мутантів з делецією ділянки, здатної утворювати дисульфідний зв'язок, з делецією деяких амінокислотних залишків на М-кінці природного Ес-фрагменту або з додаванням метіонінового залишку до М- кінця природного Ес-фрагменту. Крім того, для усунення ефекторних функцій може бути видалено сайт зв'язування комплементу, наприклад, сайт зв'язування Сід. Також може бути видалено сайт залежної від антитіл клітинно-опосередкованої цитотоксичності (АОСС). Способи одержання цих послідовностей, які є похідними Ес-фрагменту імуноглобуліну наведено у
Міжнародних патентних публікаціях МоМо. МО 97/34631 та МО 96/32478.
Амінокислотні заміщення білків та пептидів, які суттєво не змінюють активність молекул відомі в науковій літературі (Н. Мешгайй, НВ. Г. НІЇї, Тне Ргоївїп5, Асадетіс Ргезв5, Мем МогК, 197 9).
Найбільш поширеними з них є заміщення АїПІа/бег, МаЙІе, Авр/СІм, ТАиг/5ег, АїЇа/Сіу, АїІа/ТНу, зегп/Азп, АІа/Маї, зег/с1Іу, Тпу/Рпе, Аїпа/Рго, ГІ уз/Аго, Азр/Азп, ГешПе, Гешиллаї, АІа/іІм, Ав5р/су, які можуть відбуватися в двох напрямках.
У деяких випадках Ес-фрагмент імуноглобуліну також може бути змінено, наприклад, фосфорилюванням, сульфатуванням, акрилуванням, глікозилюванням, метилуванням, 60 фарнезилуванням, ацетилюванням або амідуванням.
Описані вище Ес-мутанти є мутантами, які виявляють подібну до Ес-фрагменту винаходу біологічну активність, але також ще наділені стійкістю проти дії нагрівання, рН тощо.
Додатково, ці Ес-фрагменти може бути отримано з природних форм, виділених з людського та тваринного організму, включаючи таких тварин, як корови, кози, свині, миші, кролі, хом'яки, щурі та морські свинки або вони також можуть являти собою рекомбінантні форми або похідні, отримані з трансформованих клітин тварин або мікроорганізмів. Для цього винаходу їх можна отримати з природного імуноглобуліну виділенням цілого імуноглобуліну 3 живого людського або тваринного організму з наступною протеазною обробкою. Якщо такий цілий імуноглобулін обробляють папаїном, то він розщеплюється на ЕРабр- та Ес-фрагменти. Якщо ж його обробляють пепсином, то він розщеплюється на рЕ"'с- та Е(аб)»- фрагменти. Для виділення Ес- або ре'с- фрагментів, ці фрагменти може бути піддано, наприклад, ексклюзійній хроматографії.
Переважним чином, Ес-фрагмент імуноглобуліну за винаходом є рекомбінантним Ес- фрагментом імуноглобуліну, отриманим з мікроорганізму із застосуванням людського Ес- фрагменту.
Додатково, Ес-фрагмент імуноглобуліну може також існувати у формі, яка має природні цукрові ланцюги, цукрові ланцюги, які є збільшеними або зниженими у порівнянні з природною формою або може знаходитися у деглікозилованій формі. Збільшення, зменшення або усунення цукрових ланцюгів Ес-фрагменту імуноглобуліну може бути здійснено із застосуванням загальноприйнятних способів, як-то із застосуванням хімічного способу, ферментативним шляхом та генно-інженерним шляхом із застосуванням мікроорганізму. Ес-фрагмент імуноглобуліну, отриманий усуненням цукрових ланцюгів виявляє зменшену зв'язувальну спорідненість до комплементу (с14) та має знижену залежну від антитіл клітинно- опосередковану цитотоксичність або зовсім її не має та тим самим не викликає жодних небажаних імунних відповідей іп мімо. В цьому зв'язку, Ес-фрагмент імуноглобуліну у деглікозилованій або аглікозилованій формі може бути більш прийнятним для застосування в якості носія лікарського засобу.
Як тут застосовано, термін "деглікозилування" означає ферментативне усунення цукрових функціональних груп з Ес-фрагменту та термін "аглікозилування" означає неглікозилований Ес- фрагмент, який є продуктом експресії еукаріотів, переважним чином Е. соїї.
Зо Слід зазначити, що Ес-фрагмент імуноглобуліну може мати людське або тваринне походження, тобто походити з таких тварин, як-то великої рогатої худоби, кіз, свиней, мишей, кроликів, хом'яків, щурів або морських свинок та переважним чином, він має людське походження. Крім того, Ес - фрагмент імуноглобуліну може бути Ес-фрагментом, який походить від імуноглобулінів Іде, ІдА, ІдО, ІДЕ та ІМ, їх комбінацій або гібридів та, переважним чином, він походить від імуноглобулінів Їде або ІДМ, які є одними серед найбільш розповсюджених білків в крові людини та найбільш переважніше він є похідною муноглобулінів класу дос, які, як відомо, підвищують період напіврозпаду ліганд-зв'язуючих білків.
Термін "комбінація", як тут застосовано, означає утворення зв'язку між поліпептидом, що кодує одноланцюгові Ес-фрагменти імуноглобуліну однакового походження та одноланцюговим поліпептидом іншого походження з одержанням димеру або мультимеру. Інакше кажучи, димер або мультимер може бути утворено із застосуванням двох або більше фрагментів, вибраних з групи, яка складається з фрагментів дО Ес, ІдА Ес, І9М Ес, ІдО Ес та ІЗЕ Ес.
Як тут застосовано, термін "гібрид" означає наявність двох або більше послідовностей, відповідних Ес-фрагментам імуноглобуліну, які мають різне походження в одноланцюговому Ес- фрагменті імуноглобуліну. У цьому винаході можливо застосування різних типів гібридів. Інакше кажучи, доменні гібриди можуть складатися з 1 - 4 доменів, вибраних з групи, яка складається з доменів СНІ, СН2г, СНЗ та СНА СЕ до Ес, І9М Ес, ІДА Ес, ІДЕ Ес та дО Ес та може містити шарнір.
З іншого боку, імуноглобуліни класу (9 можна розділити на підкласи Ідс1, Ідс2, доз та
Ід4 та комбінації та гібриди цих підкласів також може бути застосовано у винаході, як-то, переважним чином, підкласи Ідс2 та Ідс4 та більш переважніше, Ес-фрагмент підкласу досі, який дуже рідко має ефекторні функції, як-то СОС (функцію залежної від комплементу цитотоксичності). Інакше кажучи, найбільш бажаним Ес-фрагментом імуноглобуліну для застосування в якості носія лікарського засобу за винаходом є неглікозилований Ес-фрагмент, який походить від людського імуноглобуліну ІД54. Людський Ес-фрагмент є більш бажаним, ніж
Ес-фрагмент нелюдського походження, який може діяти, як антиген в організмі людини та викликати небажані імунні відповіді, як-то утворення нових антитіл проти антигену.
В одному прикладі винаходу було отримано кон'югат прикріпленням мономеру фізіологічно активного поліпептиду через непептидильний полімер до Ес-фрагменту імуноглобуліну бо (Приклад) та було відкрито, що отриманий кон'юЮгат характеризується зниженою рецепторопосередкованою інтерналізацією, отже має збільшений, порівняно до кон'югату з фізіологічно активним поліпептидом в димерній формі, час напівжиття іп мімо (Фіг. 2 та 3).
У іншому аспекті, винаходом передбачено кон'югат мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну, що містить мономер фізіологічно активного поліпептиду, приєднаний непептидильним лінкером до Ес-фрагменту імуноглобуліну, в якому фізіологічно активний поліпептид приєднано непептидильним лінкером до Ес-фрагменту імуноглобуліну в мономерній формі; кон'югат, який характеризується зниженою рецепторопосередкованою інтерналізацією або рецепторопосередкованим кліренсом порівняно з будь-яким димерним кон'югатом, до складу якого входять дві молекули фізіологічно активного поліпептиду, приєднані непептидильним лінкером до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну; або кон'югату, який містить димер фізіологічно активного поліпептиду, приєднаний всередині рамки зчитування до Ес-фрагменту імуноглобуліну.
Наведені тут фізіологічно активний поліпептид, Ес-фрагмент імуноглобуліну, непептидильний лінкер та кон'югат є такими, як описано вище.
У іншому аспекті, винаходом передбачено спосіб одержання фармацевтичної композиції тривалої дії, спосіб, який полягає у: (а) прикріпленні фізіологічно активного поліпептиду до Ес- фрагменту імуноглобуліну з одержанням суміші кон'югатів фізіологічно активного поліпептиду з
Ес-фрагментом імуноглобуліну; та (Б) відокремленні від суміші кон'югату мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Есо-фрагментом імуноглобуліну, який містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, приєднану до одиничного Ес-фрагменту імуноглобуліну.
Наведені тут фізіологічно активний поліпептид, Ес-фрагмент імуноглобуліну, непептидильний лінкер та фармацевтична композиція тривалої дії є такими, як описано вище.
Операція (а) способу за винаходом є операцією ковалентного зв'язування фізіологічно активного поліпептиду через непептидильний лінкер з Ес - фрагментом імуноглобуліну.
Операція (а) може полягати у: (ї) зв'язуванні будь-якого фізіологічно активного поліпептиду та
Ес-фрагменту імуноглобуліну до реакційної групи на одному з кінців непептидильного лінкера; та (ії) зв'язуванні позосталого компоненту з реакційною групою на іншому кінці непептидильного лінкеру. Крім того, операція (а) може полягати у застосуванні між (і) та (ії) ще додаткового етапу відокремлення фізіологічно активного поліпептиду або Ес-фрагменту імуноглобуліну, зв'язаного
Зо з одним кінцем непептидильного лінкеру. Для одержання цього кон'югату, зміст Патенту Кореї
Мо 10-0725315 може бути включено сюди за посиланням.
У разі одержання кон'югату із застосуванням цього процесу на додачу до кон'югату, який містить фізіологічно активний мономер, приєднаний до Ес-фрагменту імуноглобуліну, у вигляді побічних продуктів може бути отримано кон'югати, які містять фізіологічно активний поліпептид в димерній або мультимерній формі.
Отже, спосіб винаходу після операції (а) одержання суміші кон'югатів, може додатково полягати у здійсненні операції (Б) відокремлення від суміші кон'югату мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну, який містить мономер фізіологічно активного поліпептиду, приєднаного до Ес-фрагменту імуноглобуліну.
Умови відокремлення в операції (Б) можуть відрізнятися в залежності від типу застосованого непептидильного лінкеру та фізіологічно активного поліпептиду тощо.
Нижче винахід буде детальніше описано з посиланням на наступні приклади. Однак слід розуміти, що ці приклади наведено лише з ілюстративною метою та не призначені обмежувати обсяг винаходу.
Приклад: Одержання кон'югату агоністу СІ Р-1Е з Ес-фрагментом імуноглобуліну.
Було здійснено сайт-специфічну реакцію пропіон-АІ 02 ПЕГ з молекулярною масою 3,4 кДа (ІОВ, Когеа) з лізиновим залишком агоністу СІ Р-1. Для одержання кон'югату, в якому ПЕГ та агоніст (СІ Р-1К є зв'язаними між собою у відношенні 1:1, реакційну суміш піддали катіонообмінній хроматографії на колонці з очищенням моно-ПЕГілованого агоністу СІ Р-1. Для одержання кон'югату агоністу СІ Р-1К з Ес-фрагментом імуноглобуліну, який містить моно-
ПЕГілований агоніст СІ Р-1, специфічно приєднаний до М-кінця Ес-фрагменту імуноглобуліну, реакцію було здійснено в умовах рН 5,0-8,2. Після реакції зв'язування було здійснено процес очищення із застосуванням гідрофобної колонки та аніонообмінної колонки з одержанням таким чином кон'югату агоністу СІ Р-1К з Ес-фрагментом імуноглобуліну, наділеного пов'язаною з агоністом СІ Р-1К сайт-специфічністю до Ес-фрагменту імуноглобуліну.
Після проведення аналізу отриманого в результаті цього процесу кон'югату агоністу СГ Р-АТВ з Ес-фрагментом імуноглобуліну було виявлено, що отримана сполука являла собою або виключно кон'Югат мономера агоністу (зЗЇР-1 з Ро-фрагментом імуноглобуліну або мультимерний кон'югат, в тому числі сліди кон'югату димера агоністу СІ Р-1 з Ес-фрагментом імуноглобуліну був присутнім у відсотковій кількості 5 95 (за масою) або ще менше, якщо брати за основу загальну масу отриманого кон'югату.
Порівняльний приклад: Одержання кон'югату димера агоністу СІ Р-1 з Ес-фрагментом імуноглобуліну.
Послідовність ДНК, яка містила агоніст СІ Р-1, приєднаний до Ес-фрагменту імуноглобуліну клонували у векторі експресії для тваринних клітин. Було здійснено трансфекцію тваринної клітинної лінії 293-Е (Егеевіуїє 293-Е сеїЇ, Іпмйгодеп) із застосуванням ДНК, в якій було закодовано цей рекомбінантний білок та розчину для трансфекції (Егеезіуїе"М МАХ Веадепі,
Іпмігодеп), після чого клітини культивували протягом 48 год. та культуру було зібрано.
Отриманий в результаті експресії кон'югат димера агоністу СГ Р-1 з Рс-фрагментом імуноглобуліну очистили з культури із застосуванням афінної колоночної хроматографії.
Експериментальний Приклад 1: Оцінка рецепторної інтерналізації.
Для оцінки рецепторної інтерналізації в цих дослідженнях було застосовано набор для аналізу РаїйНипіег? еХргев55 Асіїмаїед СРСР. Іпегпаїїгайоп Авзау. Для цього клітини 0205, в яких відбувалася експресія людського рецептора СІ Р-1 засіяли у білий 96-луночний планшет та культивували протягом 24-48 год. Кон'югат агоністу СІ Р-1 з Ес-фрагментом імуноглобуліну за
Прикладом піддали чотириразовому серійному розведенню з концентрації З мкМ, кон'югат агоністу СІ Р-1 з Ес-фрагментом імуноглобуліну всередині рамки зчитування за Порівняльним
Прикладом піддали чотириразовому серійному розведенню з концентрації 15 мкМ та кожне з цих розведень додали в лунку планшету. Потім було здійснено індукцію рецепторної інтерналізації кожного з кон'югатів їх трьеохгодинним інкубуванням в інкубаторі в середовищі СО2 з температурою 37 С. Потім до лунок планшету додали субстрат, призначений для визначення підданих ендоцитозу рецепторів, реакція з яким тривала протягом години з кімнатною температурою та люмінесценцію лунок було виміряно із застосуванням скануючого спектрофотометру для читання мікропланшетів. Результати цих вимірювань наведено на Фіг. 2.
В результаті, як зображено на Фіг. 2, кон'югат за Прикладом відрізнявся показником ЕСво у 377 НМ та кон'югат за Порівняльним Прикладом відрізнявся показником ЕСзо у 14.59 нМ, що свідчить про те, що кон'югат агоністу СІ Р-1 з Рсо-фрагментом імуноглобуліну винаходу має суттєво зменшену рецепторну інтерналізацію порівняно до кон'югату агоністу СІ Р-1 з Ес-
Зо фрагментом імуноглобуліну за Порівняльним Прикладом. Ці результати вказують на те, що кон'югат, який містить мономер фізіологічно активного поліпептиду, приєднаний до Ес- фрагменту імуноглобуліну може мати зменшену опосередковану рецептором інтерналізацію та кліренсу порівняно до кон'югату, в якому фізіологічно активний поліпептид є присутнім в димерній формі.
Експериментальний Приклад 2: Перевірка порівняння фармакокінетичних характеристик іп мімо кон'югатів агоністу СІ Р-1К з Ес-фрагментом імуноглобуліну.
Для порівняння фармакокінетичних характеристик іп мімо кон'югату агоністу СІ Р-1К з Ес- фрагментом імуноглобуліну за Прикладом та кон'югату агоністу СІ Р-1К з Ес-фрагментом імуноглобуліну було досліджено змінення сироваткових концентрацій цих кон'югатів із застосуванням нормальних щурів лінії Спрег-Доулі (50).
Для цього, кон'югат агоністу СІ Р-1К з Ес-фрагментом імуноглобуліну (400 мкг/кг) та кон'югат агоністу СГ Р-ІК з ЕРо-фрагментом імуноглобуліну всередині рамки зчитування (400 мкг/кг) розвели фізіологічним розчином та підшкірно ввели тваринам з дозою у 2мл / кг. Відбір зразків крові щурів було здійснено з яремної вени через 4, 8, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192, 216, 240, 288, 312 та 336 год. після введення досліджуваних матеріалів з наступним відокремленням сироватки з крові та кількісним аналізом концентрації лікарського засобу в кожному з отриманих зразків сироватки із застосуванням ІФА-аналізу. Отримані результати кількісного аналізу наведено на Ффіг.4.
Для цього кожен з досліджуваних кон'югатів агоністу СІ Р-1 з Ес-фрагментом імуноглобуліну (концентрація обох кон'югатів дорівнювала 400 мкг / кг) розвели фізіологічним розчином та підшкірно ввели тваринам з дозою у 2мл / кг. Відбір зразків крові щурів було здійснено з яремної вени через 4, 8, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192, 216, 240, 288, 312 та 336 год. після введення досліджуваних матеріалів з наступним відокремленням сироватки з крові та кількісним аналізом концентрації лікарського засобу в кожному з отриманих зразків сироватки із застосуванням ІФА- аналізу. Отримані результати кількісного аналізу наведено на фіг.3.
В результаті показники часу напівжиття сироватки кон'югату агоністу СІ Р-1К з гс- фрагментом імуноглобуліну за Прикладом та кон'югату агоністу СІ Р-1К з Ес-фрагментом імуноглобуліну за Порівняльним Прикладом дорівнювали, відповідно, 40,9 год. та 28 год. та максимальні сироваткові концентрації кон'югатів становили, відповідно, 1758,6 нг/мл та 742,7 бо нг/мл. Інакше кажучи, в разі підшкірного введення нормальним щурам лікарського засобу з однаковою дозою було виявлено, що кон'югат агоністу СІ Р-14К з фрагментом імуноглобуліну за винаходом мав відмінне поглинання іп мімо та час напівжиття у порівнянні з кон'югатом димерного агоністу СІ Р-1К з Ес-фрагментом імуноглобуліну (фіг.3).
В той час, як винахід було описано з посиланням на окремі ілюстративні втілення, фахівцям в галузі, до якої він має відношення слід розуміти, що цей винахід може бути втілено також в інших специфічних формах без відходу від його технічної суті або суттєвих характеристик. Тому описані вище втілення розглянуто у всіх відношеннях лише в ілюстративному, а не в обмежувальному сенсі. Крім того, обсяг винаходу визначено не детальним описом, а з допомогою доданої Формули Винаходу та слід розуміти, що всі модифікації та варіанти, отримані від значення та обсягу винаходу та їх еквіваленти є частиною обсягу доданої Формули
Винаходу. «110» ЖАНМІФАВМ КО, ІД «ЩО» Кон'юви бктогічне актизнога полігентидного мономеру та Бо -- фрагменту імуноглобуліну зі зниженим рецепторопорередкованим кліряеноюм тя опо його вдержамня. «Тк ОБАЗЯНІ «Ох КМ ЗО ЛОВ К «іт Он «1605 2 «180» Коравкчніп 2.0 «их «ії» ЗВ «ВТМ Блок «ие Нігучна послідовністю «ие «ий Аеовіт ЦЯ ад» З су по сну ТЕ ВвВе ТВі Вег Авр ви Звбіф ує С МН ЗВ Св ОО 1 5 15 та
Ав ук Аг іє Ра Не Зо тр ем уз бал у СУ Ро бог бек о 55 за су іа то Рто Ро баг
1 У «ай» Білок «вій Цітучна послідовність «о ера Агомют БВ «НК я
Нів чу ін су ПУ Не Тве Баг Аво Маббег Баг Тут ви СП і 5 т т
Сапа Аза був Са РНе пе АВ Тр во ма! Суб СОУ

Claims (12)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Фармацевтична композиція тривалої дії, яка містить кон'югат, що включає фізіологічно активний поліпептид, зв'язаний з Ес-фрагментом імуноглобуліну, де композиція включає мономерний кон'югат, що містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, приєднану до одного Ес-ланцюга одиничного Ес-фрагмента імуноглобуліну, що містить два Ес-ланцюги імуноглобуліну, за допомогою непептидильного лінкера, що має обидва кінці, та димерний кон'югат, що містить дві молекули такого самого фізіологічно активного поліпептиду, приєднаного до одиничного Ес-фрагмента імуноглобуліну, що містить два Ес-ланцюги імуноглобуліну, за умови, що молярне співвідношення мономерного кон'югата і димерного кон'югата в композиції складає принаймні 19, де кожний з двох Ес-ланцюгів імуноглобуліну в димерному кон'югаті є зв'язаним з однією молекулою фізіологічно активного поліпептиду за допомогою непептидильного лінкера, що має обидва кінці; та непептидильний лінкер є вибраним з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколю та пропіленгліколю, поліоксіетилованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілового етилового етеру, полімеру, що є здатним до біодеградації, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти та їх комбінацій.
2. Композиція за п. 1, в якій мономерний кон'югат характеризується зниженою опосередкованою рецептором інтерналізацією або опосередкованим рецептором кліренсом у порівнянні з будь- яким димерним кон'югатом, що містить дві молекули фізіологічно активного поліпептиду, що є приєднаним за допомогою непептидильного лінкера до одиничного Ес-фрагмента імуноглобуліну, або кон'югата, що містить фізіологічно активний поліпептидний димер, приєднаний у рамці зчитування до Ес-фрагмента імуноглобуліну.
З. Композиція за п. 1, в якій фізіологічно активний поліпептид є вибраним з групи, яка складається З глюкагоноподібного пептиду-1 (СІ Р-1), гранулоцитарного колонієстимулювального фактора (5-С5Е), людського гормону росту (ПОН), еритропоетину (ЕРО), глюкагону, оксинтомодуліну, інсуліну, релізинг-гормону гормону росту, релізинг-пептиду Зо гормону росту, інтерферонів, рецепторів інтерферонів, рецептора, зв'язаного з (С-білком, інтерлейкінів, інтерлейкінових рецепторів, ферментів, інтерлейкінзв'язувальних білків, цитокінзв'язувальних білків, фактора активації макрофагів, пептиду макрофагів, фактора В- клітин, фактора Т-клітин, білка А, інгібітора алергії, клітинних некротичних глікопротеїнів, імунотоксину, лімфотоксину, фактора некрозу пухлин, пухлинних супресорів, метастатичного фактора росту, альфа-1 антитрипсину, альбуміну, а-лактальбуміну, аполіпопротеїну-Е, високоглікозилованого еритропоетину, ангіопоетинів, гемоглобіну, тромбіну, пептиду активування тромбінового рецептора, тромбомодуліну, антигенів крові МІ, МПа, МИ, ЇХ та ХПІ, фактора активування плазміногену, фібринзв'язувального білка, урокінази, стрептокінази, гірудину, білка С, С-реактивного білка, інгібітора реніну, інгібітора колагенази, супероксид дисмутази, лептину, тромбоцитарного фактора росту, епітеліального фактора росту, епідермального фактора росту, ангіостатину, ангіотензину, фактора росту кісток, кісткового морфогенетичного білка, кальцитоніну, атріопептину, хрящового індукуючого фактора імпульсної відповіді, елкатоніну, фактора активування сполучної тканини, інгібітора шляху тканинного фактора, фолікулостимулюючого гормону, лютеїнізуючого гормону, люліберину, факторів росту нервової тканини, паратироїдного гормону, релаксину, секретину, соматомедину, інсуліноподібного фактора росту, гормону кори наднирникових залоз, холецистокініну, панкреатичного поліпептиду, релізинг-пептиду гастрину, фактора вивільнення кортикотропіну, тиреотропного гормону, аутотаксину, лактоферину, міостатину, антигенів клітинної поверхні, вакцинних антигенів вірусного походження, моноклональних антитіл, поліклональних антитіл та фрагментів антитіл.
4. Композиція за п. 1, в якій фізіологічно активний поліпептид є вибраним з групи, яка складається з глюкагоноподібного пептиду-1 (СІ Р-1), гранулоцитарного колонієстимулюючого фактора (0-С5БЕ), гормону росту людини (ПСН), еритропоетину (ЕРО), глюкагону, оксинтомодуліну, інсуліну та їх похідних.
5. Композиція за п. 1, в якій непептидильний лінкер має молекулярну масу 1-100 кДа.
6. Композиція за п. 1, в якій Ес-фрагмент імуноглобуліну містить 1-4 домени, вибрані з групи, яка складається з доменів СНІ, СН2, СНЗ та СНЯ4.
7. Композиція за п. 1, в якій Ес-фрагмент імуноглобуліну додатково включає шарнірну ділянку.
8. Композиція за п. 1, в якій Ес-фрагмент імуноглобуліну являє собою такий, що походить від групи, що включає Ідс, ІдА, дО, ІДЕ, ІМ, їх комбінації та їх гібриди.
9. Композиція за п. 1, в якій Ес-фрагмент імуноглобуліну є Ес-фрагментом Ід.
10. Композиція за п. 1, в якій Ес-фрагмент імуноглобуліну є неглікозилованим.
11. Спосіб отримання фармацевтичної композиції тривалої дії за п. 1, який полягає у: (а) зв'язуванні фізіологічно активного поліпептиду з Ес-фрагментом імуноглобуліну, що має два Ес-ланцюги імуноглобуліну, за допомогою непептидильного лінкера, що має обидва кінці, з отриманням суміші кон'югатів фізіологічно активного поліпептиду 3 Ес-фрагментом імуноглобуліну; та (Б) відокремленні із суміші кон'югата мономеру фізіологічно активного поліпептиду з Ес- фрагментом імуноглобуліну, який містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, зв'язану з одним Ес-ланцюгом імуноглобуліну одиничного Ес-фрагмента імуноглобуліну, що містить два Ес-ланцюги імуноглобуліну, за допомогою непептидильного лінкера. Зо
12. Спосіб за п. 11, в якому кон'югат фармацевтичної композиції тривалої дії, що містить одну молекулу фізіологічно активного поліпептиду, приєднану до одиничного Ес-фрагмента імуноглобуліну, характеризується зниженою опосередкованою рецептором інтерналізацією або опосередкованим рецептором кліренсом у порівнянні з будь-яким димерним кон'югатом, що містить дві молекули фізіологічно активного поліпептиду, приєднані за допомогою непептидильного лінкера до одиничного Ес-фрагмента імуноглобуліну, або димеру фізіологічно активного поліпептиду, приєднаного у рамці зчитування до Ес-фрагмента імуноглобуліну. ши щи гг я і ши т и у В ве й й Б. Е й КУ їх І ся У Ку Ех є Ку я а КЗ СК ки а Є се ь о се Фіг, 1 ще з КОон'юєах агозністу ЗР за Прикладом й конлогат агоністу «3 РАЗ за Порівняльним Прикладом ЩО і з н | гі а З в Ж - КІ Й / и Ко І З ; зе Ко. конуєнтвація агоністів РА Фа т ЧО я «ве КОН яюгат агоністу ЗР за Йовіжняльним Прикладом З ЖК кон'ютат агоністу ФІРА за Прикладом
Ж. Х куди х ж СК. - 50000. ; кв.
В . гу В ! о 8 85 8 Ба мб ЗВ зе Час гад
Фі.
UAA201600685A 2013-07-12 2014-07-14 КОН'ЮГАТ БІОЛОГІЧНО АКТИВНОГО ПОЛІПЕПТИДНОГО МОНОМЕРА ТА Fc-ФРАГМЕНТА ІМУНОГЛОБУЛІНУ ЗІ ЗНИЖЕНИМ РЕЦЕПТОРОПОСЕРЕДКОВАНИМ КЛІРЕНСОМ ТА СПОСІБ ЙОГО ОДЕРЖАННЯ UA119850C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20130082511 2013-07-12
PCT/KR2014/006329 WO2015005748A1 (ko) 2013-07-12 2014-07-14 수용체-매개 제거가 감소된, 생리활성 폴리펩타이드 단량체-면역글로불린 Fc 단편 결합체 및 이의 제조방법

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA119850C2 true UA119850C2 (uk) 2019-08-27

Family

ID=52280326

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201600685A UA119850C2 (uk) 2013-07-12 2014-07-14 КОН'ЮГАТ БІОЛОГІЧНО АКТИВНОГО ПОЛІПЕПТИДНОГО МОНОМЕРА ТА Fc-ФРАГМЕНТА ІМУНОГЛОБУЛІНУ ЗІ ЗНИЖЕНИМ РЕЦЕПТОРОПОСЕРЕДКОВАНИМ КЛІРЕНСОМ ТА СПОСІБ ЙОГО ОДЕРЖАННЯ

Country Status (23)

Country Link
US (1) US10487128B2 (uk)
EP (2) EP3639858A1 (uk)
JP (3) JP2016529227A (uk)
KR (2) KR102182701B1 (uk)
CN (2) CN105517578B (uk)
AR (1) AR096891A1 (uk)
AU (1) AU2014287880C1 (uk)
BR (1) BR112016000680A2 (uk)
CA (1) CA2918023A1 (uk)
DK (1) DK3020418T3 (uk)
EA (1) EA030454B1 (uk)
ES (1) ES2792975T3 (uk)
HK (1) HK1223017A1 (uk)
HU (1) HU231423B1 (uk)
IL (1) IL243568B (uk)
MX (1) MX2016000343A (uk)
MY (1) MY176834A (uk)
NO (1) NO20160175A1 (uk)
PH (1) PH12016500075A1 (uk)
PT (1) PT3020418T (uk)
TW (1) TWI680768B (uk)
UA (1) UA119850C2 (uk)
WO (1) WO2015005748A1 (uk)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090038701A1 (en) 2006-01-17 2009-02-12 Baxter International Inc. Device, system and method for mixing
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
MY192248A (en) * 2014-03-31 2022-08-10 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Method for improving solubility of protein and peptide by using immunoglobulin fc fragment linkage
CN107810202A (zh) 2015-02-17 2018-03-16 韩美药品株式会社 长效胰岛素或胰岛素类似物复合物
EP3313875A4 (en) 2015-06-24 2018-12-26 Board of Regents of the University of Texas System Methods and compositions for treatment of symptoms associated with intracranial hemorrhage
WO2017037178A1 (en) * 2015-09-01 2017-03-09 Trauma Care Consult Traumatologische Forschung Gemeinnützige Gesellschaft Mbh Hemostatic material
TW201718629A (zh) * 2015-09-25 2017-06-01 韓美藥品股份有限公司 包含多個生理多肽及免疫球蛋白Ｆｃ區之蛋白質接合物
US20180009869A1 (en) * 2016-07-08 2018-01-11 AskGene Pharma, Inc. Fusion Protein Comprising Leptin and Methods for Producing and Using the Same
BR112019002394B1 (pt) 2016-08-10 2021-12-21 Ajou University Industry-Academic Cooperation Foundation Proteína heterodimérica fundida com fc e seu uso
WO2018030806A1 (ko) * 2016-08-10 2018-02-15 아주대학교산학협력단 항체 중쇄불변부위 이종이중체에 융합된 사이토카인 및 이를 포함하는 약제학적 조성물
BR112019005637A2 (pt) 2016-09-23 2019-07-30 Hanmi Pharm Ind Co Ltd análogos da insulina com afinidade reduzida para o receptor de insulina e seu uso
US20200078470A1 (en) * 2016-12-05 2020-03-12 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Conjugate with attenuated immune response
JP7121024B2 (ja) * 2017-02-07 2022-08-17 ハンミ ファーマシューティカルズ カンパニー リミテッド 非ペプチド性重合体リンカー化合物、そのリンカー化合物を含む結合体、及びそれらの製造方法
US11752216B2 (en) * 2017-03-23 2023-09-12 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof
AU2018298063A1 (en) 2017-07-03 2020-02-20 Torque Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immunostimulatory fusion molecules and uses thereof
KR102144380B1 (ko) * 2017-09-27 2020-08-13 한양대학교 산학협력단 제2형 당뇨병 치료를 위한 락토페린 기반의 유전자 전달체
JP2020535199A (ja) * 2017-09-29 2020-12-03 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド 効力が向上した持続性タンパク質結合体
US20210046189A1 (en) * 2018-03-30 2021-02-18 HANMl PHARM. CO., LTD. Long-acting protein conjugates for brain targeting, a preparation method thereof, and a composition comprising the same
JP2021536483A (ja) * 2018-09-06 2021-12-27 シダラ セラピューティクス インコーポレーテッド ウイルス感染症の治療のための組成物及び方法
CA3117212A1 (en) 2018-10-23 2020-04-30 Dragonfly Therapeutics, Inc. Heterodimeric fc-fused proteins
US11267858B2 (en) * 2019-05-31 2022-03-08 Spectrum Pharmaceuticals, Inc. Methods of treatment using G-CSF protein complex
WO2022216129A1 (ko) 2021-04-09 2022-10-13 한미약품 주식회사 글루카곤 유도체를 포함하는 만성 신장 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5116964A (en) 1989-02-23 1992-05-26 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
US5605690A (en) 1989-09-05 1997-02-25 Immunex Corporation Methods of lowering active TNF-α levels in mammals using tumor necrosis factor receptor
US5349053A (en) 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
ES2120949T4 (es) 1990-06-28 2011-12-29 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh 50% Proteinas de fusión con porciones de inmunoglobulinas, su preparación y empleo.
AU660662B2 (en) 1991-02-08 1995-07-06 Progenics Pharmaceuticals, Inc. CD4-gamma2 and CD4-IgG2 chimeras
EP0533006A1 (en) 1991-09-18 1993-03-24 F.Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft Chimaeric interleukin 5-receptor/immunoglobulin polypeptides
US6410008B1 (en) 1994-12-12 2002-06-25 Beth Israel Hospital Association Chimeric IL-10 proteins and uses thereof
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
US5723125A (en) 1995-12-28 1998-03-03 Tanox Biosystems, Inc. Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide
US6750334B1 (en) 1996-02-02 2004-06-15 Repligen Corporation CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor
EP0904107B1 (en) 1996-03-18 2004-10-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
PT1121382E (pt) 1998-10-16 2006-10-31 Biogen Idec Inc Proteinas de fusao do interferao beta e as respectivas utilizacoes
ES2317843T3 (es) 1999-07-13 2009-05-01 Bolder Biotechnology, Inc. Proteinas de fusion de eritropoyetina-inmunoglobulina.
US20050202538A1 (en) * 1999-11-12 2005-09-15 Merck Patent Gmbh Fc-erythropoietin fusion protein with improved pharmacokinetics
DE10021731B4 (de) 2000-05-04 2005-12-08 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Cyclipostine, Verfahren zu ihrer Herstellung und pharmazeutische Zubereitung derselben
TWI353991B (en) * 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
JP4870569B2 (ja) * 2003-11-13 2012-02-08 ハンミ ホールディングス カンパニー リミテッド 免疫グロブリン断片を用いた蛋白質結合体およびその製造方法
KR100754667B1 (ko) 2005-04-08 2007-09-03 한미약품 주식회사 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Ｆｃ 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물
KR100824505B1 (ko) * 2005-08-16 2008-04-22 한미약품 주식회사 개시 메티오닌 잔기가 제거된 면역글로불린 Ｆｃ 영역의대량 생산방법
US7625564B2 (en) * 2006-01-27 2009-12-01 Novagen Holding Corporation Recombinant human EPO-Fc fusion proteins with prolonged half-life and enhanced erythropoietic activity in vivo
JP2008169195A (ja) * 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
JP2009019027A (ja) 2007-07-16 2009-01-29 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd アミノ末端のアミノ酸が変異したインスリン分泌ペプチド誘導体
WO2010011096A2 (en) * 2008-07-23 2010-01-28 Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. A polypeptide complex comprising non-peptidyl polymer having three functional ends
BRPI1013626B8 (pt) 2009-03-20 2021-05-25 Hanmi Holdings Co Ltd método para preparar conjugado de polipeptídeo fisiologicamente ativo em sítio específico
EP2504360B1 (en) * 2009-11-23 2018-08-15 Amgen Inc. Monomeric antibody fc
AR081066A1 (es) 2010-04-02 2012-06-06 Hanmi Holdings Co Ltd Conjugado de insulina donde se usa un fragmento de inmunoglobulina
UA113626C2 (xx) * 2011-06-02 2017-02-27 Композиція для лікування діабету, що містить кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат інсулінотропного пептиду тривалої дії
LT2718318T (lt) 2011-06-10 2018-10-25 Hanmi Science Co., Ltd. Nauji oksintomodulino dariniai ir farmacinė kompozicija, apimanti šiuos darinius, nutukimo gydymui
HUE042585T2 (hu) 2011-06-17 2019-07-29 Hanmi Science Co Ltd Oxintomodulint és immunglobulin-fragmentumot tartalmazó konjugátum és alkalmazása
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법

Also Published As

Publication number Publication date
NZ716251A (en) 2020-12-18
JP2016529227A (ja) 2016-09-23
DK3020418T3 (da) 2020-06-02
TWI680768B (zh) 2020-01-01
EP3020418A1 (en) 2016-05-18
ES2792975T3 (es) 2020-11-12
JP2021059585A (ja) 2021-04-15
HK1223017A1 (zh) 2017-07-21
CA2918023A1 (en) 2015-01-15
JP6976400B2 (ja) 2021-12-08
CN110876808B (zh) 2023-06-13
NO20160175A1 (en) 2016-02-03
PH12016500075B1 (en) 2016-04-18
BR112016000680A2 (pt) 2017-12-12
IL243568A0 (en) 2016-02-29
WO2015005748A1 (ko) 2015-01-15
IL243568B (en) 2020-01-30
PH12016500075A1 (en) 2016-04-18
EP3020418B1 (en) 2020-02-26
US10487128B2 (en) 2019-11-26
HU231423B1 (hu) 2023-08-28
MX2016000343A (es) 2016-05-05
HUP1600209A2 (hu) 2016-05-30
KR20150008012A (ko) 2015-01-21
JP2019163258A (ja) 2019-09-26
AU2014287880C1 (en) 2020-07-09
CN105517578B (zh) 2020-03-10
AR096891A1 (es) 2016-02-03
AU2014287880A1 (en) 2016-02-11
MY176834A (en) 2020-08-24
US20160158378A1 (en) 2016-06-09
KR102182701B1 (ko) 2020-11-26
PT3020418T (pt) 2020-05-28
CN110876808A (zh) 2020-03-13
AU2014287880B2 (en) 2020-01-02
CN105517578A (zh) 2016-04-20
EA201690116A1 (ru) 2016-07-29
EA030454B1 (ru) 2018-08-31
KR20200136856A (ko) 2020-12-08
TW201513884A (zh) 2015-04-16
EP3020418A4 (en) 2017-01-11
EP3639858A1 (en) 2020-04-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA119850C2 (uk) КОН'ЮГАТ БІОЛОГІЧНО АКТИВНОГО ПОЛІПЕПТИДНОГО МОНОМЕРА ТА Fc-ФРАГМЕНТА ІМУНОГЛОБУЛІНУ ЗІ ЗНИЖЕНИМ РЕЦЕПТОРОПОСЕРЕДКОВАНИМ КЛІРЕНСОМ ТА СПОСІБ ЙОГО ОДЕРЖАННЯ
US20220118103A1 (en) Method for decreasing immunogenicity of protein and peptide
US20220380437A1 (en) Immunoglobulin fc conjugate which maintains binding affinity of immunoglobulin fc fragment to fcrn
EP3549950A1 (en) Conjugate having attenuated immune response
NZ716251B2 (en) Conjugate of biologically active polypeptide monomer and immunoglobulin fc fragment with reduced receptor-mediated clearance, and the method for preparing the same
NZ716275B2 (en) An Immunoglobulin Fc Conjugate which Maintains Binding Affinity of Immunoglobulin Fc Fragment to FcRn