HU231423B1 - Biológiailag aktív polipeptid monomer és immunglobulin Fc fragmentum konjugátuma csökkentett receptor-közvetített kiürüléssel, és az eljárás ennek előállítására - Google Patents

Biológiailag aktív polipeptid monomer és immunglobulin Fc fragmentum konjugátuma csökkentett receptor-közvetített kiürüléssel, és az eljárás ennek előállítására Download PDF

Info

Publication number
HU231423B1
HU231423B1 HUP1600209A HUP1600209A HU231423B1 HU 231423 B1 HU231423 B1 HU 231423B1 HU P1600209 A HUP1600209 A HU P1600209A HU P1600209 A HUP1600209 A HU P1600209A HU 231423 B1 HU231423 B1 HU 231423B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
immunoglobulin
fragment
conjugate
physiologically active
active polypeptide
Prior art date
Application number
HUP1600209A
Other languages
English (en)
Inventor
Sung Hee Park
Min Young Kim
Hyung Kyu Lim
Sung Min Bae
Sung Youb Jung
Se Chang Kwon
Original Assignee
Hanmi Pharm. Co., Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from PCT/KR2014/000632 external-priority patent/WO2015064846A1/en
Application filed by Hanmi Pharm. Co., Ltd. filed Critical Hanmi Pharm. Co., Ltd.
Publication of HUP1600209A2 publication Critical patent/HUP1600209A2/hu
Publication of HU231423B1 publication Critical patent/HU231423B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/27—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Képviselő: Pintz és Társai Szabadalmi, Védjegy és Jogi Iroda Kft.
Biológiailag aktív polipeptid monomer és immunglobulin Fc fragmentum konjugátuma csökkentett receptor-közvetített kiürüléssel, és az eljárás ennek előállítására
Jelen találmány a következőkre vonatkozik: gyógyászati kompozíció, amely tartalmaz egy konjugátumot, ez pedig tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptidet hozzákapcsolva egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, ahol a kompozíció tartalmaz egy monomer konjugátumot, ez pedig tartalmazza a fiziológiailag aktív polipeptid egy molekuláját egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz hozzákapcsolva, és kívánt esetben tartalmaz egy multimer konjugátumot, ami pedig tartalmazza ugyanazon fiziológiailag aktív polipeptid két vagy több molekuláját hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz, azzal a feltétellel, hogy a monomer konjugátum mólaránya a multimer konjugátumhoz a kompozícióban legalább 19; egy fiziológiailag aktív polipeptid monomer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum, amely tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptid monomert egy nem-peptides kapcsoló (non-peptidyl linker) útján hozzákapcsolva egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, ahol a fiziológiailag aktív polipeptid a nem-peptides kapcsoló útján monomer formában van hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz, a konjugátum, amely csökkentett receptor-közvetített internalizálást (bensővé tételt) vagy receptorközvetített (receptor-mediated) kiürülést (clearance) mutat összehasonlítva vagy egy dimer konjugátummal, amely két molekula fiziológiailag aktív polipeptidet tartalmaz hozzákapcsolva egy nem-peptides kapcsoló útján egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz, vagy egy konjugátummal, amely tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptid dimert keretben (in-frame) hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz; és eljárás a gyógyászati kompozíció előállítására.
Ismeretes, hogy a fehérjék in vivo kiürülnek (clear) különböző mechanizmusok révén, ide értve a lebomlást (degradation) szérum proteázok révén, az eltüntetést (elimination) a veséken keresztül, vagy a kiürülést (clearance) receptorok révén. Így különböző kísérleteket végeztek, hogy elkerüljék az ilyen fehérje kiürülési (clearance) mechanizmusokat, és így növeljék a fiziológiailag aktív fehérjék félélettartamát, és ilyen módon fokozzák terápiás hatékonyságukat. A kísérleteket elsősorban olyan fehérje konjugátumokon hajtották végre, amelyek tartalmaznak polietilén-glikol polimert (PEG), albumint, zsírsavat vagy egy antitest Fc fragmentumot (konstans régió) egy fehérjéhez kapcsolva abból a célból, hogy növeljék a fehérje félélettartamát. Az ilyen tanulmányok megcélozzák ezen anyag kovalens kapcsolását egy fiziológiailag aktív fehérjéhez abból a célból, hogy növeljék a fiziológiailag aktív fehérje szérum félélettartamát, csökkentsék a gyógyszer bevezetés időpontjait, és ezáltal növeljék a beteg kényelmét. Elsősorban abból a célból, hogy stabilizálják a fehérjéket és gátolják érintkezésüket proteázokkal és eltüntetésüket a veséken keresztül, egy olyan eljárást alkalmaznak, amelyben kémiailag rögzítenek nagy mértékben oldható polimereket, mint például PEG-et, a fehérje gyógyszer felületére. Ezen eljárás esetében ismeretes, hogy egy polimer nemfaj lagosan kötődik a cél fehérjének egy speciális helyéhez vagy különböző helyeihez, hogy növekedjen a fehérje oldhatósága, stabilizálódjon a fehérje és akadályozva legyen a fehérje hidrolízise, és ezen kívül ne idéződjenek elő adott mellékhatások [Sada és munkatársai: J. Fermentation Bioengineering 71, 137-139 (1991)]. Ennek az eljárásnak azonban a következő problémái vannak: bár a fiziológiailag aktív fehérjéhez kötött PEG növeli a fehérje stabilitását, ez jelentősen csökkenti a fehérje titerét, és ahogyan a PEG molekulatömege növekszik, reaktivitása a fehérjével csökken, csökkenést eredményezve a kitermelésben. Ezen kívül, amikor egy fehérjének egy speciális aminosavgyöke zsírsavakkal van módosítva, a módosított zsírsav reverzibilisen kötődik szérum albuminhoz, hogy növekedjék a fehérje félélettartama, de a félélettartam mintegy egy nap és egy hét között van, jelezve, hogy a félélettartam növekedése nem annyira jelentős. Ezen kívül hátrány az is, hogy az albuminból reverzibilisen disszociált fiziológiailag aktív fehérje könnyen eltűnik a veséken keresztül.
Ezen okokból tettek erőfeszítéseket immunglobulin fragmentumok alkalmazására, hogy növeljék a fiziológiailag aktív anyagok, beleértve a fehérjéket is, félélettartamát. Elsősorban aktív tanulmányokat hajtottak végre terápiás fehérjék stabilitásának növelésére a terápiás fehérjék fuzionálása révén ilyen immunglobulin Fc fragmentumokkal.
Ismeretes interferon [2003-9464 számú koreai szabadalmi közzétételi irat (Korean Patent Laid-Open Publication)], interleukin-4 receptor, interleukin-7 receptor vagy eritropoietin receptor (249572 számú koreai szabadalom) expresszálása fúziós termékként immunglobulin Fc fragmentummal emlősben genetikai rekombinációs eljárás révén. A WO 01/03737 számú PCT szabadalmi közzétételi irat (International Patent Publication) szintén leír egy olyan fúziós fehérjét, amely tartalmaz egy citokint vagy növekedési faktort egy immunglobulin Fc fragmentumhoz kapcsolva egy oligopeptid kapcsoló útján. Ezen túl az 5,116,964 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom leír egy fúziós fehérjét, amely tartalmaz LHR (limfocita sejt felületi glikoprotein) fehérjét vagy CD4 fehérjét egy immunglobulin Fc fragmentum amino- vagy karboxi-terminális végéhez fuzionálva genetikai rekombinációs eljárás révén, és az 5,349,053 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom leírja IL-2 fúziós fehérjéjét immunglobulin Fc fragmentummal. Ezen kívül a genetikai rekombinációs eljárások révén elkészített Fc fúziós fehérjékhez szolgáló példák magukban foglalják a következőket: interferon-bétának vagy származékának fúziós fehérjéje immunglobulin Fc fragmentummal [WO 00/23472 számú PCT szabadalmi közzétételi irat (International Patent Publication)], IL-5 receptor fúziós fehérjéje immunglobulin Fc fragmentummal (5,712,121 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom), interferon-alfának fúziós fehérjéje egy immunglobulin G4 Fc fragmentummal (5,723,125 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom), és CD4 fehérje fúziós fehérjéje immunglobulin G2 Fc fragmentummal (6,451,313 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom). Ezen kívül az 5,605,690 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom aminosav gyökök módosítására vonatkozik egy immunglobulin Fc fragmentumban, és leír egy genetikai rekombinációs eljárás révén készített TNFR-IgGl Fc fúziós fehérjét, olyan Fc fragmentumot alkalmazva, amelyet egy adott komplement-kötő hely vagy receptor-kötő hely aminosav gyökeinek módosítása révén kaptak meg egy immunglobulin Fc fragmentumban. Ezen túl fúziós fehérjék elkészítésének eljárásai genetikai rekombinációs módszer révén, az előzőekben leírtak szerint módosított immunglobulin Fc régiót alkalmazva, le vannak írva a következő helyeken is: 6,277,375 számú, 6,410,008 számú és 6,444,792 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmak. Szükségesek azonban biológiai gyógyszerek (bio-medicine), amelyek rendelkeznek hozzájuk fuzionált immunglobulin Fc fragmentummal, hogy meghaladják azokat a citotoxicitási problémákat, amelyek az Fc fragmentumban benne rejlő (inherent) effektor funkció idéz elő.
Jelen találmány feltalálói jelentős erőfeszítéseket tettek, hogy elkészítsenek egy olyan konjugátumot, amelynek megnövekedett szérum in vivo félélettartama van egy immunglobulin Fc fragmentum révén, egy fiziológiailag aktív polipeptidhez. Ennek eredményeképpen a jelen találmány feltalálói arra jöttek rá, hogy amikor egy fiziológiailag aktív polipeptidet hozzákapcsolnak egy immunglobulin Fc fragmentumhoz monomer formában, ez szignifikánsan csökkentett receptor-közvetített kiürülést (clearance) mutat, továbbá hosszú félélettartamot mutat még patkány állatmodellen is, összehasonlítva azzal a helyzettel, amikor a fiziológiailag aktív polipeptid multimer formában van jelen, ezáltal téve teljessé jelen találmányt.
Jelen találmány tárgya egy gyógyászati kompozíció szolgáltatása, amely tartalmaz egy konjugátumot, ez pedig tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptidet hozzákapcsolva egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, ahol a kompozíció tartalmaz egy monomer konjugátumot, ez pedig tartalmazza a fiziológiailag aktív polipeptidnek egy molekuláját hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz, és kívánt esetben tartalmaz egy multimer konjugátumot, ez pedig tartalmazza ugyanazon fiziológiailag aktív polipeptid két vagy több molekuláját hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz, azzal a feltétellel, hogy a monomer konjugátum mólaránya a multimer konjugátumhoz a kompozícióban legalább 19.
Jelen találmány másik tárgya egy fiziológiailag aktív polipeptid monomer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum szolgáltatása, amely tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptid monomert hozzákapcsolva egy nem-peptides kapcsoló útján egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, ahol a fiziológiailag aktív polipeptid nem-peptides kapcsoló útján monomer formában van hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz, a konjugátum csökkentett receptor-közvetített internalizálást (bensővé tételt) vagy receptor-közvetített (receptor-mediated) kiürülést (clearance) mutat összehasonlítva egy olyan konjugátummal, amely egy fiziológiailag aktív polipeptidet tartalmaz keretben (in-frame) hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz.
Jelen találmány további tárgya eljárás biztosítása a gyógyászati készítmény előállítására, ahol az eljárás a következő lépéseket tartalmazza: (a) egy fiziológiailag aktív polipeptid hozzákapcsolása egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, hogy elkészítsük fiziológiailag aktív polipeptid-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumok keverékét; és (b) a keverékből egy olyan fiziológiailag aktív polipeptid monomer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum elkülönítése, amely egy molekula fiziológiailag aktív polipeptidet tartalmaz hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz.
Amint az előzőekben leírtuk, a találmány szerinti konjugátum, amely tartalmazza a fiziológiailag aktív polipeptid monomert hozzákapcsolva az immunglobulin Fc konjugátumhoz, jelentősen csökkentett receptor-közvetített internalizálást (bensővé tételt) vagy receptor-közvetített (receptor mediated) kiürülést (clearance) mutat, és így megnövekedett szérum félélettartammal bír. Következésképpen a jelen találmány szerinti konjugátum olyan gyógyszert szolgáltathat, amelynek megnövekedett szérum félélettartama van és terápiás felsőbbrendűsége.
Az 1. ÁBRA vázlatosan bemutatja egy fiziológiailag aktív polipeptid monomer-Fc konjugátum reprezentatív szerkezetét (1A. ÁBRA), és a fiziológiailag aktív polipeptid dimer -Fc konjugátum legfőbb (major) konfigurációját (1B. ÁBRA).
A 2. ÁBRA bemutatja a receptor internalizálás mértékének összehasonlítását egy GLP-1 agonistaimmunglobulin Fc fragmentum konjugátum (a jelen találmány PÉLDÁ-ja) és egy olyan GLP-1 agonista-immunglobulin Fc fragmentum fúziós fehérje között, amelyben a GLP-1 agonista dimer formában van jelen (ÖSSZEHASONLÍTÓ PÉLDA).
A 3. ÁBRA in vivo farmakokinetikák összehasonlítását mutatja be a jelen találmány szerinti PÉLDA konjugátuma és az ÖSSZEHASONLÍTÓ PÉLDA GLP-1 agonista konjugátuma között.
Abból a célból, hogy elérjük az előbb említett célokat, a jelen találmány egy gyógyászati kompozíciót ismertet, amely tartalmaz egy konjugátumot, ez pedig tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptidet hozzákapcsolva egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, ahol a kompozíció tartalmaz egy monomer konjugátumot, ez pedig tartalmazza a fiziológiailag aktív polipeptidnek egy molekuláját hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentum egy immunglobulin Fc láncához, és kívánt esetben tartalmaz egy multimer konjugátumot, ez pedig tartalmazza ugyanazon fiziológiailag aktív polipeptid két vagy több molekuláját hozzákapcsolva egy egyedi, két immunglobulin Fc láncot tartalmazó immunglobulin Fc fragmentumhoz, azzal a feltétellel, hogy a monomer konjugátum mólaránya a multimer konjugátumhoz a kompozícióban legalább 19, és a multimer konjugátum mindkét immunglobulin lánca hozzá van kapcsolva a kétvégű nem-peptides kapcsoló által a fiziológiailag aktív polipeptid egy vagy több molekulájához.
Egy további kiviteli módban a monomer konjugátum csökkentett receptor-közvetített internalizálást (bensővé tételt) vagy receptor-közvetített (receptor-mediated) kiürülést (clearance) mutathat összehasonlítva vagy egy dimer konjugátummal, amely két molekula fiziológiailag aktív polipeptidet tartalmaz nem-peptides kapcsoló útján hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz, vagy egy olyan konjugátummal, amely tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptid dimert keretben (in-frame) hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz.
Egy további kiviteli módban a fiziológiailag aktív polipeptid a következők közül választható ki: glukagon-szerű peptid-1 (GLP-1), granulocita telepstimuláló faktor (G-CSF), humán növekedési hormon (hGH), eritropoietin (EPO), glukagon, oxintomodulin, inzulin, növekedési hormont kibocsátó hormon, növekedési hormont kibocsátó peptid, interferonok, interferon receptorok, G fehérje-kötött receptor, interleukinok, interleukin receptorok, enzimek, interleukin kötő fehérjék, citokin kötő fehérjék, makrofág aktiváló faktor, makrofág peptid, B sejt faktor, T sejt faktor, A fehérje, allergia inhibitor, sejt elhalási (necrosis) glikoproteinek, immuntoxin, limfotoxin, tumor elhalási (necrosis) faktor, tumor elfojtok (suppressor), áttétel (metastasis) növekedési faktor, alfa-1 antitripszin, albumin, a-laktalbumin, apolipoprotein-E, nagy mértékben glikozilezett eritropoietin, angiopoietinek, hemoglobin, trombin, trombin receptor aktiváló peptid, trombomodulin, VII, Vila, VIII, IX és XIII véralvadási faktorok, plazminogén aktiváló faktor, fibrinkötő peptid, urokináz, sztreptokináz, hirudin, C fehéije, C-reaktív fehérje, renin inhibitor, kollagenáz inhibitor, szuperoxid diszmutáz, leptin, vérlemezke-eredetű (platelet-derived) növekedési faktor, epitheliálisnövekedési faktor, epidermális növekedési faktor (EGF), angiosztatin, angiotenzin, csont növekedési faktor, csontstimuláló fehérje, kalcitonin, atriopeptin, porc (cartilage) indukáló faktor, elkatonin, kötőszövet aktiváló faktor, szöveti faktor útvonal gátló (TFPI), folliculus-stimuláló hormon (FSH), luteinizáló hormon, luteinizáló hormon felszabadító hormon (LHRH), idegi növekedési faktor (NGF), parathormon (PTH), relaxin, szekretin, szomatomedin, inzulin-szerű növekedési faktor, adrenokortikotrop hormon (ACTH), kolecisztokinin, hasnyálmirigy (pancreatic) polipeptid, gasztrin kibocsátó peptid, kortikotropin kibocsátó faktor, pajzsmirigy (thyroid) stimuláló hormon, autotaxin, laktoferrin, miosztatin, sejtfelületi antigének, vírus eredetű vakcina antigének, monoklonális antitestek, poliklonális antitestek, és antitest fragmentumok.
Egy további kiviteli módban a fiziológiailag aktív peptid a következők közül választható ki: glukagon-szerű peptid-1 (GLP-1), granulocita telepstimuláló faktor (G-CSF), humán növekedési hormon (hGH), eritropoietin (EPO), glukagon, oxintomodulin, inzulin, és mindezek származékai.
Egy további kiviteli módban a nem-peptides kapcsoló a következők közül választható ki: polietilénglikol, polipropilén-glikol, etilén-glikol -propilén-glikol kopolimer, polioxietilezett poliol, polivinilalkohol, poliszacharid, dextrán, poliviniletil-éter, biológiailag lebontható (biodegradable) polimer, lipid polimer, kitin, hialuronsav és mindezek kombinációi.
Egy további kiviteli módban a nem-peptides kapcsoló olyan molekulatömeggel rendelkezhet, amely az 1 kDa és 100 kDa közti tartományban van.
Egy további kiviteli módban az immunglobulin Fc fragmentum 1-4 doménből lehet összeállítva, amelyek a következők közül választhatók ki: CHI, CH2, CH3 és CH4 domének.
Egy további kiviteli módban az immunglobulin Fc fragmentum tartalmazhat továbbá egy csukló (hinge) régiót.
Egy további kiviteli módban az immunglobulin Fc fragmentum a következő immunglobulinok fragmentuma közül választható ki: IgG, IgA, IgD, IgE, IgM és mindezek kombinációi és mindezek hibridjei.
Egy további kiviteli módban az immunglobulin Fc fragmentum lehet egy IgG4 Fc fragmentum.
Egy további kiviteli módban az immunglobulin Fc fragmentum lehet nem-glikozilezett formában.
A jelen találmány egy eljárást is ismertet a gyógyászati kompozíció előállítására, ahol az eljárás a következő lépéseket tartalmazza: (a) egy fiziológiailag aktív polipeptid hozzákapcsolása egy kétvégű nem-peptides kapcsoló által egy két immunglobulin Fc láncot tartalmazó immunglobulin Fc fragmentumhoz, hogy elkészítsük fiziológiailag aktív polipeptid-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumok keverékét; és (b) a keverékből egy olyan fiziológiailag aktív polipeptid monomerimmunglobulin Fc fragmentum konjugátum elkülönítése, amely a fiziológiailag aktív polipeptidnek egy molekuláját tartalmazza hozzákapcsolva egy egyedi, két immunglobulin Fc láncot tartalmazó immunglobulin Fc fragmentum egyik Fc láncához.
Az eljárás elvégezhető úgy is, hogy a gyógyászati kompozíció konjugátuma, amely egy molekula fiziológiailag aktív polipeptidet tartalmaz hozzákapcsolva egy egyedi, két immunglobulin Fc láncot tartalmazó immunglobulin Fc fragmentum egyik immunglobulin Fc láncához, csökkentett receptorközvetített internalizálást vagy receptor-közvetített kiürülést mutat összehasonlítva vagy egy dimer konjugátummal, amely két molekula fiziológiailag aktív polipeptidet tartalmaz a nem-peptides kapcsoló útján hozzákapcsolva egy egyedi, két immunglobulin Fc láncot tartalmazó immunglobulin Fc fragmentumhoz, vagy egy fiziológiailag aktív polipeptid dimerrel, amely keretben van hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz.
A jelen találmány egy gyógyászati kompozíciót szolgáltat, amely tartalmaz egy konjugátumot, amely pedig tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptidet hozzákapcsolva egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, ahol a kompozíció tartalmaz egy monomer konjugátumot, ez pedig tartalmazza a fiziológiailag aktív polipeptidnek egy molekuláját hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz, és kívánt esetben tartalmaz egy multimer konjugátumot, ez pedig tartalmazza ugyanazon fiziológiailag aktív polipeptid két vagy több molekuláját hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz, azzal a feltétellel, hogy a monomer konjugátum mólaránya a multimer konjugátumhoz a kompozícióban legalább 19.
Jelen találmány egyik kiviteli módjában arra jöttünk rá, hogy egy konjugátum, amely fiziológiailag aktív polipeptid monomert tartalmaz hozzákapcsolva egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, csökkentett receptor-közvetített interalizálást és receptor-közvetített kiürülést mutat összehasonlítva egy olyan konjugátummal, amely egy fiziológiailag aktív polipeptid multimert, elsősorban fiziológiailag aktív polipeptid dimert tartalmaz hozzákapcsolva egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, és így megnövekedett szérum félélettartammal rendelkezhet. így arra jöttünk rá, hogy egy gyógyszer, amely olyan konjugátumot tartalmaz, ahol ez egy fiziológiailag aktív polipeptid monomert tartalmaz hozzákapcsolva egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, hogy csökkentett receptor-közvetített kiürülést mutasson, alkalmazható gyógyszerként, mivel ez csökkentett receptor közvetített internalizálást és receptor-közvetített kiürülést mutat. Más szavakkal a jelen találmány azon az észlelésen (finding) alapul, hogy egy fiziológiailag aktív polipeptid monomer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum csökkentett receptor-közvetített internalizálást (bensővé tételt) vagy receptor-közvetített (receptor-mediated) kiürülést (clearance) mutat összehasonlítva egy multimer konjugátummal, elsősorban egy dimer konjugátummal.
Ahogyan itt használjuk, a „gyógyászati kompozíció” kifejezés olyan gyógyászati kompozícióra utal, amely tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptid monomer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumot, amely csökkentett receptor-közvetített internalizálást (bensővé tételt) vagy receptorközvetített (receptor-mediated) kiürülést (clearance) mutat összehasonlítva magával a fiziológiailag aktív polipeptiddel vagy egy fiziológiailag aktív polipeptid multimer-immunglobulin Fc fragmentummal. Más szavakkal a kifejezés olyan gyógyászati kompozícióra utal, amely tartalmaz egy monomer konjugátumot, ez pedig tartalmaz egy molekula fiziológiailag aktív polipeptidet hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz. Ezen kívül a „gyógyászati kompozíció” (pharmaceutical composition) kifejezés egymással felcserélhetően alkalmazható a „kiszerelés” (formulation) kifejezéssel.
Jelen találmány gyógyászati kompozíciójában egy monomer konjugátum, amely tartalmaz egy molekula fiziológiailag aktív polipeptidet hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz, legalább 19:1, előnyösen legalább 99:1 és még előnyösebben legalább 500:1 mólarányban (molar ratio) lehet jelen egy olyan multimer konjugátumra vonatkoztatva, amely két vagy több ugyanazon fiziológiailag aktív molekulát tartalmaz hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz. Más szavakkal a kompozíciót azzal lehet jellemezni, hogy a monomer konjugátum mólaránya a multimer konjugátumhoz [(monomer konjugátum/multimer konjugátum)] legalább 19. Jelen találmány egyik kiviteli módja szerint a fiziológiailag aktív polipeptid a fiziológiailag aktív polipeptid-nem-peptides polimer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum monomer formában van jelen, és ebben az esetben a konjugátumnak hosszabb in vivo tevékenységi időtartama (duration of action) van, összehasonlítva azzal az esettel, amelyben a fiziológiailag aktív polipeptid dimer formában van jelen. így egy olyan kompozíció esetében, amelyben csak egy monomer konjugátum van jelen konjugátumként multimer konjugátum nélkül, vagy amelyben a monomer konjugátum mólaránya a multimer konjugátumhoz, elsősorban dimer konjugátumhoz, legalább 19, a kompozíciónak kiváló hatása van a fiziológiailag aktív polipeptid szérum félélettartamának növelésére, összehasonlítva más kompozíciókkal.
Jelen találmány szerinti monomer konjugátum különösen hosszú in vivo tevékenységi időtartammal bír, mivel egy fiziológiailag aktív polipeptid receptora által közvetített internalizálás csökken, összehasonlítva egy multimer konjugátummal, amely a fiziológiailag aktív polipeptidnek két vagy több molekuláját tartalmazza hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz. Ismeretes elsősorban az, hogy a vese általi eltüntetés (renal elimination), egy másik mechanizmus, amely meghatározza egy molekula félélettartamát, függ a molekula molekulatömegétől. így ha a vese általi eltüntetés olyan fontos változó lenne, amely meghatározza a félélettartamot, a félélettartam növekedne, ahogyan egy nagyobb molekulatömeggel bíró multimer konjugátum hányadosa növekedne. Jelen találmányban azonban arra jöttünk rá, hogy egy monomer konjugátum hosszabb in vivo tevékenységi élettartamot mutat. Ebben a tekintetben látni lehet, hogy a receptor-közvetített internalizálás fontos tényező a jelen találmány szerinti konjugátum in vivo félélettartamának növelésében. Ezeket az eredményeket a monomer konjugátum előnyös hatásainak (például csökkentett térbeli gátlás) lehet tulajdonítani, amelyeket nem lehet megtalálni a multimer konjugátumban.
így jelen találmány gyógyászati kompozíciója hosszabb in vivo tevékenységi időtartamot mutathat összehasonlítva egy olyan gyógyászati kompozícióval, amely tartalmaz vagy egy fiziológiailag aktív polipeptid multimer-immunglobulin Fc konjugátumot, vagy egy olyan konjugátumot, amely tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptid dimert keretben (in-frame) hozzákapcsolva az immunglobulin Fc-hez. Pontosabban jelen találmány gyógyászati kompozíciójában egy monomer konjugátum, amely tartalmaz egy molekula fiziológiailag aktív polipeptidet hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz, legalább 19:1, előnyösen legalább 99:1, előnyösebben legalább 500:1 mólarányban lehet jelen egy olyan multimer konjugátumra vonatkoztatva, amely ugyanazon fiziológiailag aktív polipeptid két vagy több molekuláját tartalmazza hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz, és ebben az esetben az a kompozíció, amely a monomer konjugátumot és a multimer konjugátumot tartalmazza, kiváló hosszan működő kiszerelést nyújt, mivel a kompozíció in vivo félélettartama nem csökken.
Ahogyan itt használjuk, a „fiziológiailag aktív polipeptid-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum” kifejezés olyan konjugátumra utal, amely tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptidet konjugálva egy immunglobulin Fc fragmentumhoz. A konjugátum előnyösen tartalmazhat egy nem-peptides kapcsolót, amely a fiziológiailag aktív polipeptid és az immunglobulin Fc fragmentum között helyezkedik el, hogy hozzákapcsolja a fiziológiailag aktív polipeptidet az immunglobulin Fc fragmentumhoz.
Ahogyan itt használjuk, a „fiziológiailag aktív polipeptid monomer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum” kifejezés olyan konjugátumra utal, amely tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptid monomert egy immunglobulin Fc fragmentumhoz konjugálva. A konjugátum magában foglal egy olyan formát, amelyben egy egyedi (single) fiziológiailag aktív polipeptid hozzá van kapcsolva egy egyedi (single) immunglobulin Fc fragmentumhoz. Itt az egyedi immunglobulin Fc fragmentum előnyösen olyan formában van, amelyben két Fc lánc hozzá van kapcsolva egymáshoz például egy diszulfid kötés révén, de nem csak erre korlátozódik. A fiziológiailag aktív polipeptid monomer immunglobulin Fc fragmentum konjugátum szerkezetét az 1. ÁBRA szemlélteti, de nem csak erre korlátozódik. A leírásban a „fiziológiailag aktív polipeptid monomer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum” kifejezés egymással felcserélhetően alkalmazható a „monomer konjugátum” kifejezéssel.
A fiziológiailag aktív polipeptid monomer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumot az jellemzi, hogy ez csökkentett receptor-közvetített internalizálást vagy receptor-közvetített kiürülést mutat összehasonlítva vagy egy olyan multimer konjugátummal, amely két vagy több fiziológiailag aktív polipeptid molekulát tartalmaz hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz, vagy egy olyan konjugátummal, amely egy fiziológiailag aktív polimer multimert tartalmaz keretben (inframe) hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz. így egy gyógyszer, amely tartalmazza a fiziológiailag aktív polipeptid monomer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumot egyedül, vagy tartalmazza a konjugátumot igen nagy hányadossal (ratio), hosszú in vivo tevékenységi időtartamot és kiváló terápiás hatékonyságot mutat.
Eközben a multimer konjugátum, amely két vagy több fiziológiailag aktív polipeptidet tartalmaz az immunglobulin Fc fragmentumhoz kötve, magában foglal egy olyan formát, amelyben két vagy több fiziológiailag aktív polipeptid van hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz (például két Fc láncból áll diszulfid kötés vagy hasonló révén hozzákapcsolva egymáshoz).
A fiziológiailag aktív polipeptid dimer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum különösen magában foglal egy olyan formát, amelyben két fiziológiailag aktív polipeptid molekula van hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz (például két Fc láncból van összeállítva, amelyek diszulfid kötéssel vagy valami hasonlóval vannak egymással összekapcsolva). Itt a fiziológiailag aktív polipeptid egy nem-peptides kapcsoló útján kapcsolódhat a két lánc egyikéhez, így alkotva meg az immunglobulin Fc fragmentumot, de nem csak erre korlátozódik. Ez a konfiguráció van bemutatva az 1(B) ÁBRA-ban.
Ezen kívül a keretbeli (in-frame) konjugátum magában foglal egy formát, amelyben egy fiziológiailag aktív polipeptid multimer, elsősorban egy fiziológiailag aktív polipeptid dimer, keretben (in-frame) van hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz, és kialakulhat egy olyan multimer is, ahol két vagy több fúziós polipeptid, amelyek egy fiziológiailag aktív polipeptidet tartalmaznak, van fuzionálva egy immunglobulin Fc fragmentumhoz.
Eközben a jelen találmány szerinti fiziológiailag aktív polipeptid monomer-immunglobulin Fc fragmentumban a fiziológiailag aktív polipeptid monomer kovalensen van hozzákapcsolva egy nempeptides kapcsoló útján az immunglobulin Fc fragmentumhoz.
Ahogyan itt használjuk, a „nem-peptides kapcsoló” kifejezés egy biológiailag összeférhető (biocompatible) polimerre utal, amely két vagy több ismétlődő egységből áll egymással összekapcsolva, amelyben az ismétlődő egységek egymáshoz egy nem-peptides kovalens kötés révén vannak egymással összekapcsolva. Ennek a nem-peptides kapcsolónak két vagy három végződése (end) lehet.
A jelen találmányban alkalmazott nem-peptides kapcsolók a következők közül választhatók ki: polietilén-glikol, polipropilén-glikol, etilén-glikol kopolimeije propilén-glikollal, polioxietilezett poliol, polivinil-alkohol, poliszacharid, dextrán, poliviniletil-éter, biológiailag lebontható (biodegradable) polimerek, mint például politejsav [polylactic acid (PLA)] és politejsav-glikolsav [polylactic-glycolic acid (PLGA)], lipid polimerek, kitinek, hialuronsav, és mindezek kombinációi, de nem csak ezekre korlátozódnak. Ez előnyösen polietilén-glikol.
Ezen kívül ezeknek a szakterületen ismert származékai, valamint azok a származékai, amelyeket könnyű előállítani a technika állása szerint, szintén benne foglaltatnak jelen találmány oltalmi körében.
Azon peptides kapcsolónak, amely egy hagyományos keretbeni (in-frame) fúziós eljárás révén előállított fúziós fehérjében van felhasználva, az a hátránya, hogy könnyen elhasad proteázok révén in vivo, és így az elvárt hatást, amennyiben az aktív gyógyszer szérum félélettartama növekszik egy hordozó révén, szintén nem kaphatjuk meg. Ebből az okból a peptides kapcsolón kívül egy nempeptides kapcsolót alkalmazhatunk a jelen találmányban, hogy elkészítsük a konjugátumot. A nempeptides kapcsoló lehet egy olyan polimer, amelynek ellenállása van proteázra, hogy fennmaradjon a peptid félélettartama, hasonlóan egy hordozó félélettartamához. Ennél fogva bármilyen nem-peptides kapcsoló alkalmazható a jelen találmányban bármiféle korlátozás nélkül, mindaddig, amíg ez olyan polimerből készül, amely rendelkezik az előzőekben leírt funkcióval, vagyis ez olyan polimer, amelynek ellenállása van proteázra in vivo. A nem-peptides kapcsoló molekulatömege az 1 kDa és 100 kDa közötti tartományban van, előnyösen az 1 kDa és 20 kDa közötti tartományban, de nem csak erre korlátozódik.
Ezen kívül a nem-peptides kapcsoló, amely hozzá van kapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz a jelen találmányban, nem csupán egy fajta polimerből készülhet, hanem különböző fajtájú polimerek kombinációjából is.
A jelen találmányban alkalmazott nem-peptides kapcsoló olyan reaktív csoportokkal bír, amelyek képesek kötődni az immunglobulin Fc fragmentumhoz és a fehérje gyógyszerhez.
A reaktív csoportok a nem-peptides polimer mindkét végénél előnyösen a következők közül választhatók ki: reaktív aldehid csoport, propionaldehid csoport, butiraldehid csoport, maleimid csoport, és szukcinimid származék. Itt a szukcinimid származék lehet szukcinimidil-propionát, hidroxi-szukcinimidil-, szukcinimidil-karboximetil-csoport, vagy szukcinimidil-karbonát. Különösen akkor, amikor a nem-peptides polimernek reaktív aldehid csoportjai vannak mindkét végüknél, egy fiziológiailag aktív polipeptid és egy immunglobulin hatékonyan kötődnek a nempeptides kapcsoló mindkét végéhez, miközben minimalizálódnak a nem-fajlagos reakciók. Egy végső termék, amely reduktív alkilezés révén alakul ki egy aldehid kötés útján, sokkal stabilabb, mint az a termék, amely amid kötés útján van összekapcsolva. Az aldehid reaktív csoport szelektíven kötődhet az N-terminálishoz alacsony pH-nál és kovalens kötés alakulhat ki lizin gyökkel nagy pH-nál, például pH 9,0-náL
A reaktív csoportok a nem-peptides kapcsoló két végénél lehetnek azonosak vagy különbözők. így például a nem-peptides kapcsoló egyik vége rendelkezhet maleimid csoporttal, és a másik vége rendelkezhet aldehid csoporttal, propionaldehid csoporttal vagy butil-aldehiddel. Amikor olyan polietilén-glikolt alkalmazunk nem-peptides kapcsolóként, amely mindkét végénél hidroxil reaktív csoporttal bír, a hidroxi-csoportok különböző reaktív csoportokká aktiválhatok ismert kémiai reakciók révén. Egy másik megoldás szerint lehet alkalmazni egy kereskedelmi forgalomban rendelkezésre álló polietilén-glikolt, amelynek egy módosított reaktív csoportja van, hogy elkészítsük a jelen találmány konjugátumát.
Ahogyan itt használjuk, a „fiziológiailag aktív polipeptid” kifejezés kollektíván utal olyan polipeptidekre, amelyek bármiféle fiziológiai aktivitással bírnak in vivo, amelyek közönségesen rendelkeznek polipeptid szerkezettel, és amelyek különböző fiziológiai aktivitásokkal bírnak. A fiziológiailag aktív polipeptidek magukban foglalják azokat a polipeptideket is, amelyek úgy működnek, hogy szabályozzák a genetikai expressziót és a fiziológiai funkciót, és kijavítják azt a rendellenes állapotot, amelyet egy olyan anyag hiánya vagy fölösleges kiválasztása okoz, amely érintett a funkciók szabályozásában in vivo. A fiziológiailag aktív polipeptidek magukban foglalhatnak általános fehérje terápiás szereket.
A jelen találmány szerinti konjugátumban fiziológiailag aktív polipeptid fajtája és mérete speciálisan nincs korlátozva mindaddig, amíg ezt hozzá lehet kapcsolni az immunglobulin Fc fragmentumhoz monomer formában, hogy csökkentett receptor-közvetített internalizálást vagy receptor-közvetített kiürülést mutasson összehasonlítva azzal a helyzettel, amikor ez multimer formában van hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz. Sokkal előnyösebb továbbá egy olyan fiziológiailag aktív polipeptid, amelynek receptor-közvetített internalizálása és receptor-közvetített kiürülése nagyobb (major) in vivo fehérje kiürülési mechanizmust képvisel.
A fiziológiailag aktív polipeptid a következők közül választható ki: glukagon-szerű peptid-1 (GLP1), granulocita telepstimuláló faktor (G-CSF), humán növekedési hormon (hGH), eritropoietin (EPO), glukagon, oxintomodulin, inzulin, növekedési hormont kibocsátó hormon, növekedési hormont kibocsátó peptid, interferonok, interferon receptorok, G-fehérje-kötött receptor, interleukinok, interleukin receptorok, enzimek, interleukin kötő fehérjék, citokin kötő fehérjék, makrofág aktiváló faktor, makrofág peptid, B sejt faktor, T sejt faktor, A fehérje, allergia inhibitor, sejt elhalási (necrosis) glikoproteinek, immuntoxin, limfotoxin, tumor elhalási (necrosis) faktor, tumor elfojtok (suppressor), áttétel (metastasis) növekedési faktor, alfa-1 antitripszin, albumin, a-laktalbumin, apolipoprotein-E, nagy mértékben glikozilezett eritropoietin, angiopoietinek, hemoglobin, trombin, trombin receptor aktiváló peptid, trombomodulin, VII, Vila, VIII, IX és XIII véralvadási faktorok, plazminogén aktiváló faktor, fibrinkötő peptid, urokináz, sztreptokináz, hirudin, C fehérje, C-reaktív fehérje, renin inhibitor, kollagenáz inhibitor, szuperoxid diszmutáz, leptin, vérlemezke-eredetű (platelet-derived) növekedési faktor, epitheliális növekedési faktor, epidermális növekedési faktor (EGF), angiosztatin, angiotenzin, csont növekedési faktor, csontstimuláló fehérje, kalcitonin, atriopeptin, porc (cartilage) indukáló faktor, elkatonin, kötőszövet aktiváló faktor, szöveti faktor útvonal gátló (TFPI), folliculusstimuláló hormon (FSH), luteinizáló hormon, luteinizáló hormon felszabadító hormon (LHRH), idegi növekedési faktor (NGF), parathormon (PTH) , relaxin, szekretin, szomatomedin, inzulin-szerű növekedési faktor, adrenokortikotrop hormon (ACTH), kolecisztokinin, hasnyálmirigy (pancreatic) polipeptid, gasztrin kibocsátó peptid, kortikotropin kibocsátó faktor, pajzsmirigy (thyroid) stimuláló hormon, autotaxin, laktoferrin, miosztatin, sejtfelületi antigének, vírus eredetű vakcina antigének, monoklonális antitestek, poliklonális antitestek, és antitest fragmentumok. A fiziológiailag aktív peptid előnyösen a következők közül választható ki: glukagon-szerű peptid-1 (GLP-1), granulocita telepstimuláló faktor (G-CSF), humán növekedési hormon (hGH), eritropoietin (EPO), glukagon, oxintomodulin, inzulin, és mindezek származékai, de nem csak ezekre korlátozódik.
Ezen kívül a „fiziológiailag aktív polipeptid” kifejezés, ahogyan itt használjuk, szándékaink szerint magában foglalja nemcsak a természetes fiziológiailag aktív polipeptideket, hanem az egyes polipeptidek agonistáit, prekurzorait, származékait, fragmentumait és variánsait is.
A fiziológiailag aktív polipeptid, amelyet a jelen találmányban alkalmazunk, lehet egy GLP-1 agonista, és erre példa lehet az (lH-imidazol-4-il)-acetil-l-GEGTFTSDL SKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS (SEQ ID NO:1) (Bachem) vagy HGEGTFTSDVSSYLEEQAAK EFIAWLVKG (SEQ ID NO:2) (Bachem)], de speciálisan nem korlátozódik csak ezekre. Az aminosav-szekvencia az N-terminálistól a C-terminális felé tartó irányban van.
A jelen találmány PÉLDÁ-jában az (lH-imidazol-4-il)-acetil-l-GEGTFTSDL SKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-et (Bachem)] alkalmazzuk egy GLP-1 agonistaimmunglobulin Fc fragmentum elkészítéséhez.
Az oxintomodulin származékokhoz szolgáló példák itt magukban foglalják mindazokat, amelyek le vannak írva a 10-2012-0137271 számú koreai szabadalmi közzétételi iratban (Korean Patent LaidOpen Publication), és az inzulin-kibocsátó peptid származékokhoz szolgáló példák magukban foglalják mindazokat, amelyek le vannak írva a 10-2009-008151 számú koreai szabadalmi közzétételi iratban (Korean Patent Laid-Open Publication), de nem csak ezekre korlátozódnak.
Mivel az immunglobulin Fc régió biológiailag lebontható polipeptid, amely in vivo metabolizálódik, ez biztonságos gyógyszer hordozóként történő felhasználáshoz. Továbbá mivel az immunglobulin Fc régiónak a molekulatömege kisebb, mint a teljes immunglobulin molekuláé, ez előnyös a konjugátum elkészítése, tisztítása és kitermelése szempontjából. Ezen kívül mivel a Fab régió, amely nagy nemhomogenitást mutat az antitestek közötti különbség miatt az aminosav-szekvenciában, el van távolítva, az Fc régió nagy mértékben megnövekedett anyag homogenitást mutat és kis potenciált arra, hogy szérum antigenicitást indukálon.
Az „immunglobulin Fc fragmentum” kifejezés, ahogyan itt használjuk, olyan fehérjére utal, amely tartalmazza egy immunglobulin nehéz-lánc konstans régió 2-jét (CH2) és könnyü-lánc konstans régió 3-ját (CH3), kizárva az immunglobulin nehéz-lánc és könnyü-lánc változó régióit, a nehéz-lánc konstans régió 1 -ét (CH1) és a könnyü-lánc konstans régió 1 -ét (CL1). Az immunglobulin Fc régió magában foglalhat továbbá egy csukló (hinge) régiót a nehéz-lánc konstans régióban. Az immunglobulin Fc régió továbbá a jelen találmányban lehet egy kiterjesztett (extended) Fc régió, amely tartalmazza a nehéz-lánc konstans régió-1 (CHÍ) és/vagy a könnyü-lánc konstans régió (CLÍ) egy részét vagy egészét, kivéve a nehéz-lánc és könnyü-lánc változó régiókat, mindaddig, amíg ez rendelkezik egy olyan fiziológiai funkcióval, amely lényegében azonos a natív formáéval, vagy annál jobb. Itt lehet továbbá egy olyan fragmentum, amelynek kihagyása (deléciója) van a CH2 és/vagy a CH3 aminosav-szekvenciájának viszonylag hosszú szakaszában (portion).
Más szavakkal az immunglobulin Fc régió a jelen találmányban tartalmazhat 1) egy CHÍ domént, egy CH2 domént, egy CH3 domént, és egy CH4 domént, 2) egy CHÍ domént és egy CH2 domént, 3) egy CHÍ domént és egy CH3 domént, 4) egy CH2 domént és egy CH3 domént, 5) egy vagy több doménnek és egy immunglobulin csukló (hinge) régiónak (vagy a csukló régió egy szakaszának) kombinációját, és 6) a nehéz-lánc konstans régiók és a könnyü-lánc konstans régió egyes doménjeinek dimerj ét.
Jelen találmányban az immunglobulin Fc fragmentum szándékaink szerint azt jelenti, hogy magában foglal nem csak egy natív aminosav-szekvenciát, hanem ennek szekvencia mutánsát is. Ahogyan itt használjuk, az „aminosav-szekvencia mutáns” kifejezés olyan szekvenciára utal, amely eltér a natív aminosav-szekvenciától egy vagy több aminosav gyök kimaradása (deletion), beiktatása (insertion), nem-konzervatív vagy konzervatív helyettesítése (substitution) vagy ezek kombinációja következtében. így például az IgG Fc esetében azon aminosav gyököknél, amelyek a 214-238, 297299, 318-322 és 327-331 szakaszokban találhatók, ismeretes, hogy fontosak a kötésben, így alkalmazhatók célpontként a módosításokhoz.
Ezen kívül lehetségesek különböző további mutánsok is, ezek közé értve azokat a mutánsokat, amelyek kihagyással bírnak egy diszulfid kötést kialakítására képes régióban, kihagyással bírnak számos aminosav gyöknél a natív Fc N-terminálisánál, vagy metionin gyök hozzáadásával (addition) bírnak a natív Fc N-terminálisához. Ezen kívül abból a célból, hogy eltüntessünk effektor funkciókat, eltávolíthatunk egy komplement-kötő helyet, például egy Clq-kötő helyet, és szintén eltávolíthatunk egy antitest-függő sejt-közvetített citotoxicitási [antibody dependent cell mediated cytotoxicity (ADCC)] helyet is. Az immunglobulin Fc fragmentum ilyen szekvencia származékainak az előállítására szolgáló technikák vannak leírva a WO 97/34631 számú és WO 96/32478 számú PCT szabadalmi közzétételi iratokban (International Patent Publication).
A szakterületen ismeretesek olyan aminosav cserék fehérjékben és peptidekben, amelyek általában nem változtatják meg a molekulák aktivitását [Neurath H., Hill R.L.: The proteins;
Academic Press, New York, (1979)]. A legáltalánosabban előforduló cserék a következők: Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, Asp/Gly, mindkét irányban.
Bizonyos esetekben az immunglobulin Fc fragmentum szintén módosítható például foszforilezéssel, szulfatálással, akrilezéssel, glikozilezéssel, metilezéssel, farnezilezéssel, acetilezéssel vagy amidálással.
Az előzőekben leírt Fc mutánsok olyan mutánsok, amelyek ugyanazon biológiai aktivitást mutatják, mint a jelen találmány Fc régió biológiai aktivitása, de javított szerkezeti stabilitással bírnak hővel, pH-val és hasonlókkal szemben.
Ezen kívül ezek az Fc fragmentumok megszerezhetők olyan natív formákból, amelyek emberekből és állatokból vannak izolálva, az állatok közé beleértve a szarvasmarhákat, kecskéket, sertéseket, egereket, nyulakat, hörcsögöket, patkányokat és tengeri malacokat, vagy lehetnek ezek rekombináns formái vagy származékai, amelyek transzformált állati sejtekből vagy mikroorganizmusokból vannak kinyerve. Itt ezek egy natív immunglobulinból szerezhetők meg egy egész immunglobulint izolálva emberek vagy állatok élő testéből, majd ennek proteázzal való kezelésével. Amikor az egész immunglobulint papainnal kezeljük, ez elhasad Fab-bá és Fc-vé, és amikor ezt pepszinnel kezeljük, ez elhasad pF'c-vé és F(ab)2-vé. Ezeket a fragmentumokat alá lehet vetni például méretkizárásos kromatográfiának, hogy izoláljuk az Fc-t vagy a pF’c-t.
Előnyösen van itt egy rekombináns immunglobulin Fc régió, amelyet egy mikroorganizmusból nyertek ki egy humán Fc régiót felhasználva.
Ezen kívül az immunglobulin Fc régió natív cukorláncokkal rendelkező formájában lehet megnövekedett cukorláncokkal, összehasonlítva egy natív formával, vagy csökkentett cukorláncokkal, összehasonlítva a natív formával, vagy lehet deglikozilezett formában. Az immunglobulin Fc cukorláncok növekedése, csökkenése vagy eltávolítása végrehajtható hagyományos eljárásokat alkalmazva, például egy kémiai eljárást, egy enzimes eljárást vagy egy mikroorganizmust alkalmazó génsebészeti (genetic engineering) eljárást alkalmazva. Egy Fc-ből való cukorláncok eltávolítása révén kapott immunglobulin Fc régió éles csökkenést mutat a kötő affinitásban (binding affinity) a komplementhez (clq), és csökkenést vagy eltűnést mutat az antitestfüggő sejt-közvetített citotoxicitásban (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity) vagy a komplement-függő citotoxicitásban (complement-dependent cytotoxicity), és így nem indukál szükségtelen immunválaszokat in vivo. Ebben a tekintetben egy immunglobulin Fc fragmentum egy deglikozilezett vagy glikózmentesített (aglycosylated) formában alkalmasabb lehet felhasználásra gyógyszer hordozóként.
Ahogyan itt használjuk, a „deglikozilezés” kifejezés cukorrészek enzimes eltávolítását jelenti egy Fc régióból, és az „aglikozilezés” kifejezés egy olyan glikózmentesített Fc fragmentumot jelent, amely prokariótákban, előnyösen E. coliban van előállítva.
Eközben az immunglobulin Fc régió eredhet emberekből és állatokból, amilyenek például a szarvasmarhák, kecskék, sertések, egerek, nyulak, hörcsögök, patkányok és tengerimalacok. Ez előnyösen emberi eredetű. Ezen kívül az immunglobulin Fc fragmentum lehet egy olyan Fc fragmentum, amely IgG-ből, IgA-ból, IgD-ből, IgE-ből és IgM-ből, mindezek kombinációiból vagy mindezek hibridjeiből származik. Előnyösen ez IgG-ből vagy IgM-ből származik, amelyek a leggyakoribb (abundant) fehérjék között vannak az emberi vérben, és legelőnyösebben ez IgG-ből származik, amelyről ismeretes, hogy növeli a ligandum-kötő fehérjék félélettartamát.
A „kombináció” kifejezés, ahogyan itt használjuk, azt jelenti, hogy azonos eredetű, egyedi-láncú immunglobulin Fc fragmentumokat kódoló polipeptidek hozzá vannak kapcsolva egy eltérő eredetű, egyedi-láncú polipeptidhez, hogy egy dimer vagy multimer alakuljon ki. Más szavakkal egy dimer vagy multimer van kialakítva két vagy több fragmentumból, amelyek a következők közül választhatók ki: IgG Fc, IgA Fc, IgM Fc, IgD Fc és IgE Fc fragmentumok.
Ahogyan itt használjuk, a „hibrid” kifejezés azt jelenti, hogy olyan szekvenciák vannak jelen, amelyek két vagy több, eltérő eredetű immunglobulin Fc fragmentumot kódolnak egy egyedi láncú immunglobulin Fc fragmentumban. A jelen találmányban különböző típusú hibridek lehetségesek. Más szóval dómén hibrideket lehet összeállítani 1-4 doménből, amelyek a következők közül választhatók ki: IgG Fc, IgM Fc, IgA Fc, IgE Fc és IgD Fc CHÍ-e, CH2-je, CH3-ja és CH4-e, továbbá magában foglalhat egy csukló (hinge) régiót is.
Másrészről az IgG felosztható IgGl, IgG2, IgG3 és IgG4 alosztályokra (subclass) és ezek kombinációi és hibridjei alkalmazhatók a jelen találmányban. Előnyösek az IgG2 és az IgG4 alosztályok, és legelőnyösebb az IgG4 Fc fragmentuma, amely ritkán rendelkezik effektor funkciókkal, mint például CDC-vel (komplement-függő citotoxicitás). Más szavakkal a legelőnyösebb immunglobulin Fc fragmentum gyógyszer hordozóként való felhasználásra a jelen találmányban egy emberi IgG4-eredetű, nem-glikozilezett Fc fragmentum. Az emberi Fc fragmentum sokkal előnyösebb, mint egy nem-emberi Fc fragmentum, amely úgy tevékenykedhet, mint antigén az emberi testben, és nem kívánatos immunválaszokat idézhet elő, amilyen például egy új antitest termelése az antigén ellen.
A jelen találmány egyik példájában egy konjugátum van elkészítve egy fiziológiailag aktív polipeptid monomer hozzákapcsolása révén, egy nem-peptides polimer útján, egy immunglobulin Fc fragmentumhoz (PÉLDA), és arra jöttünk rá, hogy az elkészített konjugátum csökkentett receptorközvetített internalizálást mutat, és így megnövekedett in vivo félélettartammal bír, összehasonlítva egy konjugátummal, amelyben a fiziológiailag aktív polipeptid dimer formában van jelen. (2. ÁBRA és 3. ÁBRA).
Egy másik szempontja szerint jelen találmány egy fiziológiailag aktív polipeptid monomerimmunglobulin Fc fragmentum konjugátumot szolgáltat, amely tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptid monomert egy nem-peptides kapcsoló útján hozzákapcsolva egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, ahol a fiziológiailag aktív polipeptid egy nem-peptides kapcsoló útján monomer formában van hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz, ahol a konjugátum csökkentett receptor-közvetített internalizálást vagy receptor-közvetített kiürülést (clearance) mutat összehasonlítva vagy egy olyan dimer konjugátummal, amely a fiziológiailag aktív polipeptidnek két molekuláját tartalmazza egy nem-peptides kapcsoló útján egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz, vagy egy olyan konjugátummal, amely egy fiziológiailag aktív polipeptid dimert tartalmaz keretben (in-frame) hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz.
Itt a fiziológiailag aktív polipeptid, az immunglobulin Fc fragmentum, a nem-peptides kapcsoló és a konjugátum azok, ahogyan ezek az előzőekben le vannak írva.
A jelen találmány egy eljárást is biztosít a gyógyászati kompozíció előállítására ahol az eljárás a következő lépéseket tartalmazza: (a) egy fiziológiailag aktív polipeptid hozzákapcsolása egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, hogy elkészítsük fiziológiailag aktív polipeptid-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumok keverékét; és (b) a keverékből egy olyan fiziológiailag aktív polipeptid monomer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum elkülönítése, amely a fiziológiailag aktív polipeptidnek egy molekuláját tartalmazza hozzákapcsolva egy egyedi immunglobulin Fc fragmentumhoz.
Itt a fiziológiailag aktív polipeptid, az immunglobulin Fc fragmentum, a nem-peptides kapcsoló és a gyógyászati kompozíció olyan, ahogyan ezek az előzőekben le vannak írva.
Jelen találmány szerinti eljárásban az (a) lépés egy fiziológiailag aktív polipeptid kovalens hozzákapcsolásának lépése egy nem-peptides kapcsoló útján egy immunglobulin Fc fragmentumhoz. Az (a) lépés tartalmazhatja a következő lépéseket: (i) a fiziológiailag aktív polipeptid és az immunglobulin Fc fragmentum bármelyikének a nem-peptides kapcsoló egyik végénél levő reaktív csoporthoz kapcsolása; és (ii) a megmaradó partnernek egy reaktív csoporthoz való kapcsolása a nempeptides kapcsoló másik végénél. Az (a) lépés tartalmazhatja továbbá, az (i) és (ii) lépések között, egy elkülönítési lépését a fiziológiailag aktív polipeptidnek vagy az immunglobulin Fc fragmentumnak, amelyek hozzá vannak kapcsolva a nem-peptides kapcsoló egyik végéhez. Ezen konjugátum elkészítéséhez a 10-0725315 számú koreai szabadalom leírása referenciaként beépülhet ide.
Amikor a konjugátum ezen munkamenet révén van elkészítve, olyan konjugátumok, amelyek a fiziológiailag aktív polipeptidet dimer vagy multimer formában tartalmazzák, keletkezhetnek melléktermékként egy olyan konjugátumon túl, amely fiziológiailag aktív monomert tartalmaz hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz.
így a jelen találmány szerinti eljárás tartalmazhatja továbbá a konjugátumok keveréke előállításának (a) lépése után az elkülönítés (b) lépését fiziológiailag aktív polipeptid monomer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumok keverékéből egy fiziológiailag aktív polipeptid monomert tartalmazó konjugátumnak hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz.
Az elkülönítési feltételek a (b) lépésben változhatnak az alkalmazott nem-peptides kapcsoló, a fiziológiailag aktív polipeptid és hasonlók fajtájától függően.
Ezután a jelen találmányt további részletekkel írjuk le, utalva a példákra. Meg kell érteni azonban, hogy ezek a példák csak a szemléltetés céljait szolgálják, és nem az a szándékuk, hogy korlátozzák a jelen találmány oltalmi körét.
PÉLDA: GLP-1 agonista-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum előállítása 3,4-kDa-os propion-ALD2 PEG-et (IDB, Korea) reagáltatunk helyspecifikusan egy GLP-1 agonista lizin gyökével. Abból a célból, hogy olyan konjugátumot kapjunk, amelyben a PEG és a GLP-1 agonista 1:1 arányban vannak összekapcsolva egymással, a reakciókeveréket ezután kationcserélő oszlopkromatográfiának vetjük alá, hogy tisztítsunk egy mono-PEG-ilezett GLP-1 agonistát. Abból a célból, hogy elkészítsünk egy olyan GLP-1 agonista-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumot, amely tartalmazza a mono-PEG-ilezett GLP-1-et fajlagosan hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentum N-terminálisához, reakciót hajtunk végre a pH 5,0 és pH 8,2 közti tartományban. A kapcsolási reakció után kétlépéses tisztítási eljárást hajtunk végre egy hidrofób oszlopot és egy anioncserélő oszlopot alkalmazva, ezáltal kapva meg egy olyan GLP-1 agonista immunglobulin Fc fragmentum konjugátumot, amely tartalmazza a GLP-1 agonistát helyspecifikusan hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz.
Az ezen eljárás révén készített GLP-1 agonista-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumot elemeztük, és arra jöttünk rá, hogy csak egy GLP-1 agonista monomer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum volt jelen az elkészített konjugátumban, vagy egy multimer konjugátum, amely nyomnyi mennyiségben foglal magában GLP-1 agonista dimer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumot, volt jelen 5% (tömeg/tömeg) vagy kisebb mennyiségben az elkészített konjugátum teljes tömegére alapozva.
ÖSSZEHASONLÍTÓ PÉLDA: GLP-1 agonista dimer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum elkészítése
Egy DNS szekvenciát, amely tartalmaz egy GLP-1 agonistát hozzákapcsolva egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, klónozunk egy állati sejt expressziós vektorba. A rekombináns fehérjét kódoló DNSt átfertőzzük (transfect) a 293-F állati sejtvonalba (Freestyle 293-F sejt, Invitrogen), egy átfertőző oldatot alkalmazva (FreeStyle™ MAX Reagent, invitrogen), majd a sejteket 48 órán át tenyésztjük, és a tenyészetet kinyerjük (harvest). Az expresszált GLP-1 agonista dimer-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumot tisztítjuk a tenyészetből affinitás oszlopot alkalmazva.
1. KÍSÉRLETI PÉLDA: A receptor internalizálás becslése „PathHunter® eXpress Activated GPCR Internalization Assay” vizsgálatot alkalmazunk, hogy felbecsüljük a receptor internalizálást. Pontosabban U2OS sejteket, amelyek humán GLP-1 receptort expresszálnak, oltunk rá (seed) egy fehér 96 üreges lemezre és tenyésztünk 24-48 órán át. A PÉLDA GLP-1 agonista-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumát négyszeres sorozathígításnak vetjük alá 3 μΜ-ból hígítva, és az ÖSSZEHASONLÍTÓ PÉLDA keretbeni (in-frame) GLP-1 agonistaimmunglobulin Fc fragmentum konjugátumát négyszeres sorozathígításnak vetjük alá 15 μΜ-ból hígítva, és az egyes hígításokat hozzáadjuk az üreges lemezhez. Ezután az egyes konjugátumok receptor internalizálását indukáljuk CO2 inkubátorban 37°C hőmérsékleten 3 órán át. Ezután egy szubsztrátumot az endocitózison átment (endocytosed) receptor kimutatásához hozzáadunk az üreges lemezhez, és hagyjuk reagálni szobahőmérsékleten 60 percen át, és a lemez lumineszcenciáját mérjük egy lumineszcencia lemez leolvasóval. A mérés eredményei a 2. ABRA-ban vannak bemutatva.
Ennek eredményeképpen, ahogyan a 2. ABRA-ban bemutatjuk, a PÉLDA konjugátuma 377 nM ECso-et mutat, és az ÖSSZEHASONLÍTÓ PÉLDA konjugátuma 14,59 nM ECso-et mutat, jelezve, hogy a jelen találmány GLP-1 agonista-immunglobulin Fc fragmentum konjugátuma jelentősen csökkentett receptor internalizálást mutat, összehasonlítva az ÖSSZEHASONLÍTÓ PÉLDA GLP-1 agonista-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumával. Az ilyen eredmények azt sugallják, hogy egy olyan konjugátum, amely egy fiziológiailag aktív polipeptid monomert tartalmaz hozzákapcsolva egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, csökkentett receptor-közvetített internalizálást és kiürülést mutathat összehasonlítva egy olyan konjugátummal, amelyben a fiziológiailag aktív polipeptid dimer formában van jelen.
2, KÍSÉRLETI PÉLDA: Vizsgálat in vivo farmakokinetikák összehasonlítására GLP-1 agonistaimmunglobulin fragmentum konjugátumok között
Abból a célból, hogy összehasonlítsuk az in vivo farmakokinetikákat a PÉLDA GLP-1 agonistaimmunglobulin Fc fragmentum konjugátuma és a GLP-1 agonista-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum között, elemezzük a változásokat a konjugátumok szérum koncentrációiban, normál SD patkányokat alkalmazva.
Pontosabban a GLP-1 agonista-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum (400 mcg/kg) és a GLP1 agonista-immunglobulin Fc fragmentum konjugátum (400 mcg/ml) mindegyikét hígítjuk fiziológiás konyhasóoldatban, és szubkután bevezetjük az állatokba 2 ml/kg dózisban. 4, 8, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192, 216, 240, 288, 312 és 336 órával a vizsgálat anyag bevezetése után vért gyűjtünk a patkányok nyaki (jugular) vénájából, és szérumot különítünk el a vérből. Ezután a gyógyszer koncentrációját minden egyes szérum mintában mennyiségi vizsgálatnak vetjük alá enzimmel kapcsolt immunglobulin vizsgálattal, és a mennyiségi vizsgálat eredményeit a 3.ABRAban mutatjuk be.
A vizsgálat eredményeképpen a PÉLDA GLP-1 agonista-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumának és az ÖSSZEHASONLÍTÓ PÉLDA GLP-1 agonista-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumának szérum félélettartamai 40,9 óra, illetve 28 óra, és a konjugátumok maximális szérum koncentrációi 1758,6 ng/ml, illetve 742,7 ng/ml. Más szavakkal: amikor a gyógyszereket szubkután bevezetjük azonos dózisban normál patkányokba, az mutatható ki, hogy a jelen találmány monomer GLP-1 agonista-immunglobulin Fc fragmentum konjugátuma kiváló az in vivo abszorpció és félélettartam szempontjából, összehasonlítva a dimer GLP-1 agonistaimmunglobulin Fc fragmentum konjugátummal (3. ÁBRA).
Miközben jelen találmány adott szemléltető kiviteli módokra utalva van leírva, azoknak, akik azon a szakterületen járatosak, amelyhez ajelen találmány tartozik, megkell érteniük, hogy a jelen találmány megtestesülhet más speciális formákban is a nélkül, hogy eltérne a jelen találmány technikai szellemétől és lényeges jellemzőitől. Ennél fogva az előzőekben leírt kiviteli módokat minden szempontból csak szemléltetésként kell tekinteni, és nem korlátozó jellegűnek. Ezen kívül a jelen találmány oltalmi körét inkább a mellékelt szabadalmi igénypontok határozzák meg, mint a részletes leírás, és meg kell érteni, hogy minden módosítás vagy változat, amely a jelen találmány jelentéséből és oltalmi köréből származik, és ennek ekvivalensei, benne foglaltatik a mellékelt igénypontok oltalmi körében.

Claims (8)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Gyógyászati kompozíció, amely tartalmaz egy konjugátumot, ez pedig tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptidet hozzákapcsolva egy immunglobulin Fc fragmentumhoz, azzal jellemezve, hogy a kompozíció tartalmaz egy monomer konjugátumot, ez pedig tartalmaz egy molekula fiziológiailag aktív polipeptidet hozzákapcsolva egy egyetlen immunglobulin fragmentumnak, amely két Fc immunglobulin lánccal bír, egyik immunglobulin Fc láncához egy két véggel bíró nem-peptides kapcsoló révén, és egy multimer konjugátumot, ez pedig tartalmazza ugyanazon fiziológiailag aktív polipeptid két vagy több molekuláját hozzákapcsolva egy egyetlen, két immunglobulin Fc láncot tartalmazó immunglobulin Fc fragmentumhoz, azzal a feltétellel, hogy a monomer konjugátum mólaránya a multimer konjugátumhoz a kompozícióban legalább 19;
    és mindkét immunglobulin Fc lánc a multimer konjugátumban hozzá van kapcsolva a kétvégű nem-peptides kapcsoló által a fiziológiailag aktív polipeptid egy vagy több molekulájához;
    hogy a monomer konjugátum csökkentett receptor-közvetített internalizálást vagy receptor-közvetített kiürülést mutat összehasonlítva egy dimer konjugátummal, amely két molekula fiziológiailag aktív polipeptidet tartalmaz egy nem-peptides kapcsoló útján hozzákapcsolva egy egyetlen immunglobulin Fc fragmentumhoz, és egy olyan konjugátummal, amely tartalmaz egy fiziológiailag aktív polipeptid dimert keretben hozzákapcsolva az immunglobulin Fc fragmentumhoz;
    hogy a fiziológiailag aktív polipeptid a következők közül választható ki: glukagonszerű peptid-1 (GLP-1), egy GLP-1 agonista, glukagon, oxintomodulin, inzulin, növekedési hormont felszabadító hormon (GHRH), növekedési hormont felszabadító peptid (GHRP), interferon receptorok, G-protein-kötött receptor (GPCR), interleukinok, interleukin receptorok, enzimek, interleukin kötő fehérjék, citokin kötő fehérjék, makrofág aktiváló faktor, makrofág peptid, B sejt aktiváló faktor, T sejt aktiváló faktor, A fehérje, allergia inhibitor, sejt elhalási glikoproteinek, immuntoxin, limfotoxin, tumorszuppresszorok, áttétképzés növekedési faktor, alfa1 antitripszin, albumin, α-laktalbumin, apolipoprotein-E, nagy mértékben glikozilezett eritropoetin, angiopoetinek, hemoglobin, trombin, trombin receptor aktiváló peptid, trombomodulin, VII, Vila, VII, IX és XIII vérfaktorok, plazminogén aktiváló faktor, fibrinkötő peptid, urokináz, sztreptokináz, hirudin, C-fehérje, C-reaktív fehérje, renin inhibitor, kollagenáz inhibitor, szuperoxid diszmutáz, leptin, vérlemezke-eredetű növekedési faktor, epiteliális növekedési faktor, epidermális növekedési faktor, angiosztatin, angiotenzin, csont növekedési faktor, csontstimuláló fehérje, kalcitonin, atriopeptin, porc indukáló faktor, elkatonin, kötőszövet aktiváló faktor, szöveti faktor útvonal gátló (TFPI), follikulusz-stimuláló hormon (FSH), luteinizáló hormon, luteinizáló hormon felszabadító hormon (LHRH), idegi növekedési faktorok (NGF), paratiroid hormon, relaxin, szekretin, szomatomedin, inzulin-szerű növekedési hormon, adrenokortikotróp hormon (ACTH), kolecisztokinin, hasnyálmirigy polipeptid, gasztrin kibocsátó peptid, kortikotropin kibocsátó faktor, pajzsmirigy stimuláló hormon, autotaxin, laktoferrin, miosztatin, sejtfelületi antigének, vírus eredetű vakcina antigének, monoklonális antitestek, poliklonális antitestek, és antitest fragmentumok és;
    hogy a nem-peptides kapcsoló polietilén-glikol, amely olyan molekulatömeggel bír, amely az 1 kDa és 20 kDa közötti tartományban van.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a fiziológiailag aktív polipeptid a következők közül választható ki: glukagonszerű peptid-1 (GLP-1), egy GLP-1 agonista, glukagon, oxintomodulin és inzulin.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy az immunglobulin Fc fragmentum 1-4. doménból áll, amelyek a következők közül választhatók ki: CH1, CH2, CH3 és CH4 domének.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy az immunglobulin Fc fragmentum tartalmaz továbbá egy csukló régiót.
  5. 5. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy az immunglobulin Fc fragmentum olyan Fc fragmentum, amely a következők valamelyikéből áll: IgG, IgA, IgD, IgE, IgM és mindezek kombinációi és hibridjei.
  6. 6. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy az immunglobulin Fc fragmentum egy IgG4 Fc fragmentum.
  7. 7. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy az immunglobulin Fc fragmentum nem-glikozilezett.
  8. 8. Eljárás az 1. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció előállítására, azzal jellemezve, hogy az eljárás a következő lépéseket tartalmazza:
    (a) hozzákapcsolunk egy fiziológiailag aktív polipeptidet egy kétvégű nem-peptides kapcsoló által egy két immunglobulin Fc lánccal bíró immunglobulin Fc fragmentumhoz, hogy elkészítsük fiziológiailag aktív polipeptid-immunglobulin Fc fragmentum konjugátumok keverékét; és (b) az 1. igénypont szerinti készítmény előállítása a keverékből.
    <110> HANMI PHARM. CO., LTD.
    <120> Conjugate of biologically active polypeptide monomer and immunoglobulin Fc fragment with reduced receptor-mediated clearance, and the method for preparing the same <130> OPA14111 <150> KR 10-2013-0082511 <151> 2013-07-12 <160>2 <170> KopatentIn2.0 <210>1 <211>38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220>
    <223> GLP-1 Agonist <220>
    <221> MISC_FEATURE <222>(1) <223> 1H-imidazol-4-yl-acetyl is linked to the amino group of Gly <400>1
    Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu GluGlu
    1 5 1015
    Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro SerSer
    20 2530
    Gly Ala Pro Pro Pro Ser <210>2 <211>29 < 212> PRT < 213> Artificial Sequence <220>
    < 223> GLP-1 Agonist <400> 2
    His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
    1 5 10 15
    Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
    20 25
HUP1600209A 2013-07-12 2014-07-14 Biológiailag aktív polipeptid monomer és immunglobulin Fc fragmentum konjugátuma csökkentett receptor-közvetített kiürüléssel, és az eljárás ennek előállítására HU231423B1 (hu)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20130082511 2013-07-12
PCT/KR2014/000632 WO2015064846A1 (en) 2013-10-31 2014-01-22 Apparatus and method for head mounted display indicating process of 3d printing

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUP1600209A2 HUP1600209A2 (hu) 2016-05-30
HU231423B1 true HU231423B1 (hu) 2023-08-28

Family

ID=52280326

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HUP1600209A HU231423B1 (hu) 2013-07-12 2014-07-14 Biológiailag aktív polipeptid monomer és immunglobulin Fc fragmentum konjugátuma csökkentett receptor-közvetített kiürüléssel, és az eljárás ennek előállítására

Country Status (23)

Country Link
US (1) US10487128B2 (hu)
EP (2) EP3639858A1 (hu)
JP (3) JP2016529227A (hu)
KR (2) KR102182701B1 (hu)
CN (2) CN105517578B (hu)
AR (1) AR096891A1 (hu)
AU (1) AU2014287880C1 (hu)
BR (1) BR112016000680A2 (hu)
CA (1) CA2918023A1 (hu)
DK (1) DK3020418T3 (hu)
EA (1) EA030454B1 (hu)
ES (1) ES2792975T3 (hu)
HK (1) HK1223017A1 (hu)
HU (1) HU231423B1 (hu)
IL (1) IL243568B (hu)
MX (1) MX2016000343A (hu)
MY (1) MY176834A (hu)
NO (1) NO20160175A1 (hu)
PH (1) PH12016500075A1 (hu)
PT (1) PT3020418T (hu)
TW (1) TWI680768B (hu)
UA (1) UA119850C2 (hu)
WO (1) WO2015005748A1 (hu)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090038701A1 (en) 2006-01-17 2009-02-12 Baxter International Inc. Device, system and method for mixing
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
MY192248A (en) * 2014-03-31 2022-08-10 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Method for improving solubility of protein and peptide by using immunoglobulin fc fragment linkage
CN107810202A (zh) 2015-02-17 2018-03-16 韩美药品株式会社 长效胰岛素或胰岛素类似物复合物
EP3313875A4 (en) 2015-06-24 2018-12-26 Board of Regents of the University of Texas System Methods and compositions for treatment of symptoms associated with intracranial hemorrhage
WO2017037178A1 (en) * 2015-09-01 2017-03-09 Trauma Care Consult Traumatologische Forschung Gemeinnützige Gesellschaft Mbh Hemostatic material
TW201718629A (zh) * 2015-09-25 2017-06-01 韓美藥品股份有限公司 包含多個生理多肽及免疫球蛋白Ｆｃ區之蛋白質接合物
US20180009869A1 (en) * 2016-07-08 2018-01-11 AskGene Pharma, Inc. Fusion Protein Comprising Leptin and Methods for Producing and Using the Same
BR112019002394B1 (pt) 2016-08-10 2021-12-21 Ajou University Industry-Academic Cooperation Foundation Proteína heterodimérica fundida com fc e seu uso
WO2018030806A1 (ko) * 2016-08-10 2018-02-15 아주대학교산학협력단 항체 중쇄불변부위 이종이중체에 융합된 사이토카인 및 이를 포함하는 약제학적 조성물
BR112019005637A2 (pt) 2016-09-23 2019-07-30 Hanmi Pharm Ind Co Ltd análogos da insulina com afinidade reduzida para o receptor de insulina e seu uso
US20200078470A1 (en) * 2016-12-05 2020-03-12 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Conjugate with attenuated immune response
JP7121024B2 (ja) * 2017-02-07 2022-08-17 ハンミ ファーマシューティカルズ カンパニー リミテッド 非ペプチド性重合体リンカー化合物、そのリンカー化合物を含む結合体、及びそれらの製造方法
US11752216B2 (en) * 2017-03-23 2023-09-12 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof
AU2018298063A1 (en) 2017-07-03 2020-02-20 Torque Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immunostimulatory fusion molecules and uses thereof
KR102144380B1 (ko) * 2017-09-27 2020-08-13 한양대학교 산학협력단 제2형 당뇨병 치료를 위한 락토페린 기반의 유전자 전달체
JP2020535199A (ja) * 2017-09-29 2020-12-03 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド 効力が向上した持続性タンパク質結合体
US20210046189A1 (en) * 2018-03-30 2021-02-18 HANMl PHARM. CO., LTD. Long-acting protein conjugates for brain targeting, a preparation method thereof, and a composition comprising the same
JP2021536483A (ja) * 2018-09-06 2021-12-27 シダラ セラピューティクス インコーポレーテッド ウイルス感染症の治療のための組成物及び方法
CA3117212A1 (en) 2018-10-23 2020-04-30 Dragonfly Therapeutics, Inc. Heterodimeric fc-fused proteins
US11267858B2 (en) * 2019-05-31 2022-03-08 Spectrum Pharmaceuticals, Inc. Methods of treatment using G-CSF protein complex
WO2022216129A1 (ko) 2021-04-09 2022-10-13 한미약품 주식회사 글루카곤 유도체를 포함하는 만성 신장 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5116964A (en) 1989-02-23 1992-05-26 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
US5605690A (en) 1989-09-05 1997-02-25 Immunex Corporation Methods of lowering active TNF-α levels in mammals using tumor necrosis factor receptor
US5349053A (en) 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
ES2120949T4 (es) 1990-06-28 2011-12-29 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh 50% Proteinas de fusión con porciones de inmunoglobulinas, su preparación y empleo.
AU660662B2 (en) 1991-02-08 1995-07-06 Progenics Pharmaceuticals, Inc. CD4-gamma2 and CD4-IgG2 chimeras
EP0533006A1 (en) 1991-09-18 1993-03-24 F.Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft Chimaeric interleukin 5-receptor/immunoglobulin polypeptides
US6410008B1 (en) 1994-12-12 2002-06-25 Beth Israel Hospital Association Chimeric IL-10 proteins and uses thereof
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
US5723125A (en) 1995-12-28 1998-03-03 Tanox Biosystems, Inc. Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide
US6750334B1 (en) 1996-02-02 2004-06-15 Repligen Corporation CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor
EP0904107B1 (en) 1996-03-18 2004-10-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
PT1121382E (pt) 1998-10-16 2006-10-31 Biogen Idec Inc Proteinas de fusao do interferao beta e as respectivas utilizacoes
ES2317843T3 (es) 1999-07-13 2009-05-01 Bolder Biotechnology, Inc. Proteinas de fusion de eritropoyetina-inmunoglobulina.
US20050202538A1 (en) * 1999-11-12 2005-09-15 Merck Patent Gmbh Fc-erythropoietin fusion protein with improved pharmacokinetics
DE10021731B4 (de) 2000-05-04 2005-12-08 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Cyclipostine, Verfahren zu ihrer Herstellung und pharmazeutische Zubereitung derselben
TWI353991B (en) * 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
JP4870569B2 (ja) * 2003-11-13 2012-02-08 ハンミ ホールディングス カンパニー リミテッド 免疫グロブリン断片を用いた蛋白質結合体およびその製造方法
KR100754667B1 (ko) 2005-04-08 2007-09-03 한미약품 주식회사 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Ｆｃ 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물
KR100824505B1 (ko) * 2005-08-16 2008-04-22 한미약품 주식회사 개시 메티오닌 잔기가 제거된 면역글로불린 Ｆｃ 영역의대량 생산방법
US7625564B2 (en) * 2006-01-27 2009-12-01 Novagen Holding Corporation Recombinant human EPO-Fc fusion proteins with prolonged half-life and enhanced erythropoietic activity in vivo
JP2008169195A (ja) * 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
JP2009019027A (ja) 2007-07-16 2009-01-29 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd アミノ末端のアミノ酸が変異したインスリン分泌ペプチド誘導体
WO2010011096A2 (en) * 2008-07-23 2010-01-28 Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. A polypeptide complex comprising non-peptidyl polymer having three functional ends
BRPI1013626B8 (pt) 2009-03-20 2021-05-25 Hanmi Holdings Co Ltd método para preparar conjugado de polipeptídeo fisiologicamente ativo em sítio específico
EP2504360B1 (en) * 2009-11-23 2018-08-15 Amgen Inc. Monomeric antibody fc
AR081066A1 (es) 2010-04-02 2012-06-06 Hanmi Holdings Co Ltd Conjugado de insulina donde se usa un fragmento de inmunoglobulina
UA113626C2 (xx) * 2011-06-02 2017-02-27 Композиція для лікування діабету, що містить кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат інсулінотропного пептиду тривалої дії
LT2718318T (lt) 2011-06-10 2018-10-25 Hanmi Science Co., Ltd. Nauji oksintomodulino dariniai ir farmacinė kompozicija, apimanti šiuos darinius, nutukimo gydymui
HUE042585T2 (hu) 2011-06-17 2019-07-29 Hanmi Science Co Ltd Oxintomodulint és immunglobulin-fragmentumot tartalmazó konjugátum és alkalmazása
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법

Also Published As

Publication number Publication date
NZ716251A (en) 2020-12-18
JP2016529227A (ja) 2016-09-23
DK3020418T3 (da) 2020-06-02
TWI680768B (zh) 2020-01-01
EP3020418A1 (en) 2016-05-18
ES2792975T3 (es) 2020-11-12
JP2021059585A (ja) 2021-04-15
HK1223017A1 (zh) 2017-07-21
CA2918023A1 (en) 2015-01-15
JP6976400B2 (ja) 2021-12-08
CN110876808B (zh) 2023-06-13
NO20160175A1 (en) 2016-02-03
PH12016500075B1 (en) 2016-04-18
BR112016000680A2 (pt) 2017-12-12
IL243568A0 (en) 2016-02-29
WO2015005748A1 (ko) 2015-01-15
IL243568B (en) 2020-01-30
PH12016500075A1 (en) 2016-04-18
EP3020418B1 (en) 2020-02-26
US10487128B2 (en) 2019-11-26
MX2016000343A (es) 2016-05-05
HUP1600209A2 (hu) 2016-05-30
KR20150008012A (ko) 2015-01-21
JP2019163258A (ja) 2019-09-26
AU2014287880C1 (en) 2020-07-09
CN105517578B (zh) 2020-03-10
AR096891A1 (es) 2016-02-03
AU2014287880A1 (en) 2016-02-11
MY176834A (en) 2020-08-24
US20160158378A1 (en) 2016-06-09
UA119850C2 (uk) 2019-08-27
KR102182701B1 (ko) 2020-11-26
PT3020418T (pt) 2020-05-28
CN110876808A (zh) 2020-03-13
AU2014287880B2 (en) 2020-01-02
CN105517578A (zh) 2016-04-20
EA201690116A1 (ru) 2016-07-29
EA030454B1 (ru) 2018-08-31
KR20200136856A (ko) 2020-12-08
TW201513884A (zh) 2015-04-16
EP3020418A4 (en) 2017-01-11
EP3639858A1 (en) 2020-04-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6976400B2 (ja) 受容体媒介クリアランスが減少した、生理活性ポリペプチド単量体と免疫グロブリンＦｃ断片との結合体及びその製造方法
CN108136276B (zh) 通过使用免疫球蛋白片段的特异性位点进行连接的蛋白质复合物
US20220380437A1 (en) Immunoglobulin fc conjugate which maintains binding affinity of immunoglobulin fc fragment to fcrn
AU2013228144B2 (en) An improved process for preparation of physiologically active polypeptide complex
JP6374412B2 (ja) 生理活性ポリペプチド結合体の高収率生産のための改善された製造方法
NZ716251B2 (en) Conjugate of biologically active polypeptide monomer and immunoglobulin fc fragment with reduced receptor-mediated clearance, and the method for preparing the same