UA119539C2 - Біспецифічне моновалентне діатіло, яке здатне зв'язуватися з cd123 і cd3, та його застосування - Google Patents
Біспецифічне моновалентне діатіло, яке здатне зв'язуватися з cd123 і cd3, та його застосування Download PDFInfo
- Publication number
- UA119539C2 UA119539C2 UAA201602538A UAA201602538A UA119539C2 UA 119539 C2 UA119539 C2 UA 119539C2 UA A201602538 A UAA201602538 A UA A201602538A UA A201602538 A UAA201602538 A UA A201602538A UA 119539 C2 UA119539 C2 UA 119539C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- domain
- cells
- shi
- day
- polypeptide chain
- Prior art date
Links
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims description 160
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 68
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 27
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 254
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 236
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 211
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 210
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 165
- 239000002957 persistent organic pollutant Substances 0.000 claims description 156
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 80
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 73
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 61
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 61
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 61
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 54
- 241000282553 Macaca Species 0.000 claims description 51
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 46
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 40
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 27
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 24
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 23
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 22
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 22
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 21
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 19
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 claims description 19
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 19
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 18
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 17
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 17
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 17
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 15
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 claims description 15
- 210000005134 plasmacytoid dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 12
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 12
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 claims description 12
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 claims description 11
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 11
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 claims description 10
- 206010003908 B-cell small lymphocytic lymphoma Diseases 0.000 claims description 9
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 9
- 208000025316 Richter syndrome Diseases 0.000 claims description 9
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 9
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 claims description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 8
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 claims description 8
- 208000032800 BCR-ABL1 positive blast phase chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 7
- 208000004860 Blast Crisis Diseases 0.000 claims description 7
- 241000288906 Primates Species 0.000 claims description 7
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 7
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims description 6
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 6
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 claims description 6
- 201000008736 Systemic mastocytosis Diseases 0.000 claims description 6
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 6
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 6
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 claims description 6
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 claims description 6
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 6
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 claims description 5
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 claims description 5
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 5
- 238000011955 best available control technology Methods 0.000 claims description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000005945 translocation Effects 0.000 claims description 5
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 3
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 claims description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 claims description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 claims description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 claims description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 claims description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims 4
- 229910052754 neon Inorganic materials 0.000 claims 3
- 241000283725 Bos Species 0.000 claims 2
- 240000000220 Panda oleosa Species 0.000 claims 2
- 235000016496 Panda oleosa Nutrition 0.000 claims 2
- GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N neon atom Chemical compound [Ne] GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 235000021395 porridge Nutrition 0.000 claims 2
- 230000001755 vocal effect Effects 0.000 claims 2
- 206010063409 Acarodermatitis Diseases 0.000 claims 1
- 101150114104 CROT gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100002917 Caenorhabditis elegans ash-2 gene Proteins 0.000 claims 1
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 102100028717 Cytosolic 5'-nucleotidase 3A Human genes 0.000 claims 1
- 101710095312 Cytosolic 5'-nucleotidase 3A Proteins 0.000 claims 1
- 244000024708 Dioscorea cayenensis Species 0.000 claims 1
- 101100234002 Drosophila melanogaster Shal gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000764238 Isis Species 0.000 claims 1
- 101100189356 Mus musculus Papolb gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000283965 Ochotona princeps Species 0.000 claims 1
- 241001069925 Orestes Species 0.000 claims 1
- 241001079606 Paches Species 0.000 claims 1
- 241001559981 Palyas Species 0.000 claims 1
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 claims 1
- 240000005546 Piper methysticum Species 0.000 claims 1
- 235000016787 Piper methysticum Nutrition 0.000 claims 1
- 208000012287 Prolapse Diseases 0.000 claims 1
- 241000287531 Psittacidae Species 0.000 claims 1
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 claims 1
- 241000022563 Rema Species 0.000 claims 1
- 241000159610 Roya <green alga> Species 0.000 claims 1
- 241000447727 Scabies Species 0.000 claims 1
- 244000166071 Shorea robusta Species 0.000 claims 1
- 235000015076 Shorea robusta Nutrition 0.000 claims 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 claims 1
- 244000111306 Torreya nucifera Species 0.000 claims 1
- 235000006732 Torreya nucifera Nutrition 0.000 claims 1
- 241000448053 Toya Species 0.000 claims 1
- 235000013447 Xanthosoma atrovirens Nutrition 0.000 claims 1
- 240000001781 Xanthosoma sagittifolium Species 0.000 claims 1
- KZENBFUSKMWCJF-UHFFFAOYSA-N [5-[5-[5-(hydroxymethyl)-2-thiophenyl]-2-furanyl]-2-thiophenyl]methanol Chemical compound S1C(CO)=CC=C1C1=CC=C(C=2SC(CO)=CC=2)O1 KZENBFUSKMWCJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000013527 bean curd Nutrition 0.000 claims 1
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 claims 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 claims 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 claims 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 claims 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims 1
- 235000021017 pears Nutrition 0.000 claims 1
- MFZOSKPPVCIFMT-UHFFFAOYSA-N pinazepam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N(CC#C)C(=O)CN=C1C1=CC=CC=C1 MFZOSKPPVCIFMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 208000005687 scabies Diseases 0.000 claims 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 claims 1
- 239000000779 smoke Substances 0.000 claims 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 claims 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 claims 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 abstract description 3
- 125000004177 diethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 149
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 74
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 64
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 63
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 46
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 46
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 38
- 210000003969 blast cell Anatomy 0.000 description 37
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 37
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 31
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 30
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 28
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 28
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 28
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 25
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 25
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 25
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 23
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 22
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 21
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 20
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 19
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 19
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 19
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 19
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 19
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 18
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 17
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 16
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 16
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 15
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 14
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 13
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 11
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 11
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 11
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 10
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 10
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 10
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 8
- JKKPSTXVKNWEAH-VWHZSNQBSA-N bbip Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)C=2C=CC(=CC=2)C(=O)C=2C=CC=CC=2)CCC1 JKKPSTXVKNWEAH-VWHZSNQBSA-N 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 7
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 description 6
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 6
- 208000027697 autoimmune lymphoproliferative syndrome due to CTLA4 haploinsuffiency Diseases 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 6
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 6
- 230000006334 disulfide bridging Effects 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000025324 B-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 5
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 5
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 5
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 5
- 230000034994 death Effects 0.000 description 5
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 5
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 5
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 235000013550 pizza Nutrition 0.000 description 5
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 5
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical group NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000719 anti-leukaemic effect Effects 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 4
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 4
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 4
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 4
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 4
- 241000206761 Bacillariophyta Species 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 3
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 3
- 101001094649 Homo sapiens Popeye domain-containing protein 3 Proteins 0.000 description 3
- 101000608234 Homo sapiens Pyrin domain-containing protein 5 Proteins 0.000 description 3
- 101000578693 Homo sapiens Target of rapamycin complex subunit LST8 Proteins 0.000 description 3
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 3
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 102100038560 Maleylacetoacetate isomerase Human genes 0.000 description 3
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 3
- 102100039889 Pyrin domain-containing protein 5 Human genes 0.000 description 3
- 102100036546 Salivary acidic proline-rich phosphoprotein 1/2 Human genes 0.000 description 3
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 3
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 3
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 3
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 3
- 108010035293 maleylacetoacetate isomerase Proteins 0.000 description 3
- 210000003643 myeloid progenitor cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 2
- 241000726103 Atta Species 0.000 description 2
- 241001227124 Dialytes Species 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 210000003040 circulating cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 231100000050 cytotoxic potential Toxicity 0.000 description 2
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 2
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 2
- -1 etc. Chemical class 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000009093 first-line therapy Methods 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 2
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 2
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 210000002332 leydig cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- HXKKHQJGJAFBHI-UHFFFAOYSA-N 1-aminopropan-2-ol Chemical compound CC(O)CN HXKKHQJGJAFBHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PFFIDZXUXFLSSR-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-N-[2-(4-methylpentan-2-yl)-3-thienyl]-3-(trifluoromethyl)pyrazole-4-carboxamide Chemical compound S1C=CC(NC(=O)C=2C(=NN(C)C=2)C(F)(F)F)=C1C(C)CC(C)C PFFIDZXUXFLSSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 2-(ethylamino)ethanol Chemical compound CCNCCO MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 102100020724 Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000566113 Branta sandvicensis Species 0.000 description 1
- RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-N CDP-choline Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C=C1 RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-N 0.000 description 1
- 101100310927 Caenorhabditis elegans sra-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100367084 Caenorhabditis elegans such-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010048610 Cardiotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000283153 Cetacea Species 0.000 description 1
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 206010050685 Cytokine storm Diseases 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 206010012186 Delayed delivery Diseases 0.000 description 1
- QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N Diacetyl Chemical group CC(=O)C(C)=O QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N Digitonin Natural products CC1CCC2(OC1)OC3C(O)C4C5CCC6CC(OC7OC(CO)C(OC8OC(CO)C(O)C(OC9OCC(O)C(O)C9OC%10OC(CO)C(O)C(OC%11OC(CO)C(O)C(O)C%11O)C%10O)C8O)C(O)C7O)C(O)CC6(C)C5CCC4(C)C3C2C QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 208000031637 Erythroblastic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000036566 Erythroleukaemia Diseases 0.000 description 1
- IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N Ethenol Chemical compound OC=C IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000785414 Homo sapiens Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101100182729 Homo sapiens LY6K gene Proteins 0.000 description 1
- 101000939500 Homo sapiens UBX domain-containing protein 11 Proteins 0.000 description 1
- WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N Hydroxyethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCO WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N Idarubicin Chemical compound C1[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2C[C@@](O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N 0.000 description 1
- XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N Idarubicin Natural products C1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2CC(O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 241001150538 Iria Species 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102100032129 Lymphocyte antigen 6K Human genes 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006994 Precancerous Conditions Diseases 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 241001506137 Rapa Species 0.000 description 1
- 101100371158 Rattus norvegicus Tsku gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 101100042881 Sambucus nigra SNA-I gene Proteins 0.000 description 1
- 101000777243 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) UV-damage endonuclease Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 206010042682 Swelling face Diseases 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric Acid Chemical class [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001115954 Turtur Species 0.000 description 1
- 102100029645 UBX domain-containing protein 11 Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 208000021841 acute erythroid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000036676 acute undifferentiated leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000729 antidote Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010420 art technique Methods 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- YLBMNMLHAAOXAL-UHFFFAOYSA-N aziv Chemical compound O1C(C)=C(O)C(=O)CC1OC1C2(C)CCC3(C)C4(C)CCC5C(C)(CO)C(OC6C(C(O)C(O)C(O6)C(O)=O)OC6C(C(O)C(O)C(CO)O6)OC6C(C(O)C(O)C(CO)O6)O)CCC5(C)C4CC=C3C2CC(C)(C)C1 YLBMNMLHAAOXAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003008 blinatumomab Drugs 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 231100000259 cardiotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000015861 cell surface binding Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000011441 consolidation chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000007596 consolidation process Methods 0.000 description 1
- 238000009108 consolidation therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000004405 cytokine-induced killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N digitonin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO7)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@@H](CO)O5)O)C[C@@H]4CC[C@H]3[C@@H]2[C@@H]1O)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@@H](C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N digitonine Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CC(O)C(OC5C(C(O)C(OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)CO7)O)C(O)C(CO)O6)OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)C(CO)O7)O)C(O)C(CO)O6)O)C(CO)O5)O)CC4CCC3C2C2O)C)C2OC11CCC(C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000002503 electroluminescence detection Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000000913 erythropoietic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 101150077246 gas5 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000908 idarubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000013394 immunophenotyping Methods 0.000 description 1
- 238000011293 immunotherapeutic strategy Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229940076264 interleukin-3 Drugs 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 235000014413 iron hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- NCNCGGDMXMBVIA-UHFFFAOYSA-L iron(ii) hydroxide Chemical class [OH-].[OH-].[Fe+2] NCNCGGDMXMBVIA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000009115 maintenance therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 description 1
- 238000001208 nuclear magnetic resonance pulse sequence Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000003335 steric effect Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Hydrogenated Pyridines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Винахід стосується біспецифічного моновалентного діатіла, що одночасно зв'язується з CD123 і CD3, фармацевтичної композиції, що містить таке діатіло, та їх застосування для лікування захворювання або стану, пов’язаного з надекспресією CD123.
Description
(54) БІСПЕЦИФІЧНЕ МОНОВАЛЕНТНЕ ДІАТІЛО, ЯКЕ ЗДАТНЕ ЗВ'ЯЗУВАТИСЯ З СО123 І СО3, ТА
ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ
(57) Реферат:
Винахід стосується біспецифічного моновалентного діатіла, що одночасно зв'язується з СО123 і
СО3, фармацевтичної композиції, що містить таке діатіло, та їх застосування для лікування захворювання або стану, пов'язаного з надекспресією СО123.
Пептнді кн
МБ, жне с же С ЧУВ НЕНИ неє засн «ЕН я Лйнкер Я ; й - г І
Б-стро свЖис Ка і
Ботвуюровть вве ЩО че і
Пеолінептидний лані 1 Ескіцрвня; Кл» | ! «оон ЗДИДАДА.. чани маля днк щу да - А ЛЕнкев Н «ізнщер стикання і Н соон «АЛДДДА нене нн В
Пожпенктидний лазнцваг З Б спіоадь сабо У Ше :
Ж-стірклю) р й
Гептнліі м, Я
Поліпаптидний лапиіваг Я зеевсево Бодя ! сих Н
Нептиді и Зебфане Бо - дидтілеь версія 2
МНЕ есе Кот Сех ен п
Ж. се сімею ОО На я
КН, жк С А про» ення» сосн сна СМ ана ях шко сн: ве сосок «ДДДАЙА не ше госн ЗДДДДАЛ. зн, ХУ анннннсненн
ВН іВігтра ЗВ
Посилання на споріднені заявки
Згідно з даною заявкою вимагається пріоритет відповідно до заявок на видачу патентів США
МоМо 61/869510 (поданою 23 серпня 2013 р.; у стадії розгляду), 61/907749 (поданою 22 листопада 2013 р.; у стадії розгляду) і 61/990,475 (поданою 8 травня 2014 р.; у стадії розгляду), і заявкою на видачу Європейського патенту Мо 13198784 (поданою 20 грудня 2013 р.), кожна з яких повністю включена у даний документ за допомогою посилання.
Посилання на перелік послідовностей
Дана заявка містить у собі один або декілька переліків послідовностей відповідно до 37
С.Р.А. 1.821 єї зед., які розкриті як на паперовому, так і на машинозчитувальному носії, і чиї паперові і машинозчитувальні розкриття повністю включені в даний документ за допомогою посилання.
Область техніки, до якої відноситься даний винахід
Даний винахід відноситься до СЮО123 х СОЗ біспецифічних моновалентних диатіл, які здатні одночасно зв'язуватися з СО123 і СОЗ, і до застосувань таких молекул у лікуванні гематологічних злоякісних пухлин.
Попередній рівень техніки даного винаходу
І. 60123
СО0123 (альфа-рецептор інерлейкіну 3, І/-З3Ка) являє собою молекулу з молекулярною масою 40 кДа і є частиною комплексу рецепторів інтерлейкіну З (5іоте5Кі, Е.О. еї аї. (1996) "Нитап ІпіейеиКіп-3 (1-3) Іпдисе5 Оівиіде-іпКей 1/-3 АВесеріог АїІрна-Апа Веїа-Снаїйп
Неїегодітетгігайоп, М/піснп І5 Недшцігей Рог Ресеріог Асіїмайоп Виї Мої Нідп-Айіппу Віпаіпд", Мої.
Сеї. Віо!. 16(6):3035-3046). Інтерлейкін З (ІІ -3) керує ранньою диференціацією мультипотентних стовбурових клітин у клітини еритроїдних, мієлоїдних і лімфоїдних попередників. СО123 експресується на СО34-- комітованих клітинах - попередниках (Таив55ід, О.С. єї аї. (2005) "Нетаїйороїієїїс Зієет Сеїїє Ехргез5 Мийіріє Муєїоід МаїгкКкегв: Ітріїсайоп5 Рог Те Огідіп Апа
Тагдеїєд Тнегару ОЇ Асціє Муєїоід І еикетіа", Віоса 106:4086-4092), але не на СО34ч4/Сс038- нормальних гемопоетичних стовбурових клітинах. СО123 експресується базофілами, тучними клітинами, плазмацитоїдними дендритними клітинами, деяка експресія спостерігається у моноцитів, макрофагів і еозинофілів, і низька експресія або її відсутність спостерігається у
Зо нейтрофілів і мегакаріоцитів. Деякі, які не відносяться до гемопоетичних тканини (плацента, клітини Лейдига в яєчках, певні клітинні елементи головного мозку і деякі ендотеліальні клітини) експресують СО123; проте, експресія є, головним чином, цитоплазматичною.
Повідомлялося, що СО123 експресується лейкобластами і лейкозними стовбуровими клітинами (І 5С) (Чогдап, С.Т. єї аї. (2000) "Тне ІпіепецйКіп-3 Весеріог АІрна Саїп Ів А Опідие
МаїкКег Рог Нитап Асціє МуєіІодепоиз І еикетіа 5ієт СеїІв", Ї еиКетіа 14:1777-1784; діп, МУ. єї аї. (2009) "Ведшаїйоп ОЇ ТН17 Сеї! Оімегепііайоп Апа ЕАЕ Іпдисіїоп Ву МАРЗК МІК", Віоса 113:6603- 6610) (фігура 1). У нормальних популяціях клітин - попередників у людини СО123 експресується підкласом гемопоетичних клітин - попередників (НРС), але не нормальними гемопоетичними стовбуровими клітинами (НС). СО123 також експресується плазмацитоїдними дендритними клітинами (рос) і базофілами і меншою мірою моноцитами і еозинофілами (І оре, А.Р. еї аї. (1989) "Весіргосаї! Іппібйоп ОЇ Віпаїпд Веймееп Іпіепецкіп З Апа Стапиосуїе-Масгорпаде Соіопу-
Зійтшайпу Расіог То Нитап Еовіпорніїв", Ргос. Маї). Асад. бсі. (0О.5.А.) 86:7022-7026; Бип, О. єї а. (1996) "Мопосіопа! Апіїроду 723 Несодпіге5 Те М-Тептіпа! Оотаїп ОЇ Те Нитап Іпіепеикіп-
З (1-3) Весеріог АІрна Спаіп Апа Рипсійп5 Аз А 5ресіїйїс І-3 Весеріог Апіадопіві", Віоса 87:83- 92; Мийо, І. еї аї. (2001) "ІпіепеиКіп-3 Весеріог АіІрна СНаіп (СО123) Ів Муідеіу Ехргеззей Іп
Нетаїйоіодіс Маїїдпапсієв", Наетаїйюіодіса 86(12):1261-1269; Мабвієп, В.). еї аї. (2006) "Спагасієгігайоп ОЇ Муєїоідй Апа Ріазтасуйій ЮОепагйіс Сеїв іп о Нитап Гипд", у. Іттипої. 177:7784-7793; Когреїаіпеп, Е.І. еї аі. (1995) "Іпепегоп-Ссатта Оргеашіаїез ІпіепешцкКіп-З3 (1-3)
Весеріог Ехргезвіоп п Нитап Епаоїнеїа! Сеїйв Апа Зупегдіге5 М/П 1-3 Іп Бійтшіайпо Маїог
Нівіосотраїйбійу Сотріех Сіавз ІІ Ехргеззіоп Апа СуїоКіпе Ргодисійоп", Віоса 86:176-182).
Повідомлялося, що СО123 надлишково експресується на злоякісних клітинах у широкому спектрі гематологічних злоякісних пухлин, включаючи в себе гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ) і мієлодиспластичний синдром (МДС) (Мийо, ГІ. еї аї. (2001) "ІпіегеиКіп-3 Весеріог АІрна СНаїп (СО123) Ів М/ідему Ехргеззей Іп Нетаїйоіодіс Маїїдпапсієв", Наетаїйоіодіса 86(12):11261-1269).
Надлишкова експресія СО123 зв'язана з більш несприятливим прогнозом при ГМЛ (Тенатапії,
М.5. еї а. (2013) "Тагдеїпу Ої Асшіе Муєїйоїа І еиКаетіа Ву СуюкКіпе-Іпаисеа Кіїег СеїЇ5 ВНедігесієа
Мпа А Моме! СО123-5ресіїс Спітетіс Апіїдеп Весеріог", Вг. У. Наєетаїйо!. 161:389-401).
Вважається, що ГМЛ і МДС виникають і підтримуються невеликою популяцією лейкозних стовбурових клітин (15), які, як правило, є дрімаючими (тобто клітинами, які не швидко бо діляться) і, отже, є стійкими до клітинної смерті (апоптозу) і традиційних хіміотерапевтичних засобів. | 5С характеризуються високими рівнями експресії СО123, що відсутні у відповідній нормальній популяції гемопоетичних клітин у нормальному кістковому мозку людини (іп, МУ. еї аІ. (2009) "Недшіанйоп ОЇ Ти17 Сеї! ОйШегепіайоп Апа ЕАЕ Іпдисіоп Ву МАРЗК МІК", Віоой 113:6603-6610; Чогаап, О.Т. єї аї. (2000) "Тне ІпіейеиКіп-3 Весеріог АІрна СНаїп Із А Опідне
МаїКег Рог Нитап Асціє МуєіІодепоив І еиКетіа біет СеїІв", ЇейКетіа 14:1777-1784). СО123 експресується в 45 95-95 906 випадків ГМЛ, 85 96 випадків волохатоклітинного лейкозу (ВКЛ) і 40 95 випадків гострого В-лімфобласного лейкозу (В-ГЛЛ). Експресія СЮО123 також пов'язана з іншими численними злоякісними пухлинами/передраковими станами: клітини - попередники хронічного мієлоїдного лейкозу (ХМЛ) (включаючи в себе ХМЛ із бласним кризом); клітини Рид-
Штернберга (К5) при ходжкінській лімфомі; трансформована неходжкінська лімфома (НХЛ); деякі типи хронічного лімфоцитарного лейкозу (ХЛЛ) (СО11сж); підклас гострого Т- лімфобласного лейкозу (Т-ГЛЛ) (16 95, найбільш незрілий підклас, головним чином вражає дорослих), злоякісні пухлини із плазмацитоїдних дендритних клітин (РОС) (0С2) і злоякісні пухлини з СЮО34-/С038-клітин кісткового мозку при мієлодиспластичному синдромі (МДО).
ГМЛ являє собою клональне захворювання, що характеризується проліферацією і нагромадженням трансформованих мієлоїдних клітин - попередників у кістковому мозку, яке в підсумку призводить до гемопоетичної недостатності. Частота виникнення ГМЛ збільшується з віком, і пацієнти більш старшого віку, як правило, мають гірші результати лікування, ніж більш молоді пацієнти (Кобак, Т. єї аї. (2009) "Сцтепі Апа Етегдіпд Тнегарієзє Рог Асшє Муевіоій
Ї енкетіа", Сіїп. ТНег. 2:2349-2370). На жаль, на даний час більшість дорослих пацієнтів з ГМЛ вмирає внаслідок свого захворювання.
Лікування ГМЛ початково фокусується на індукції ремісії (індукційна терапія). Як тільки досягається індукція, фокус лікування зрушується на закріплення цієї ремісії (післяремісійна, або консолідаційна терапія) і в деяких випадках на підтримуючу терапію. Стандартна парадигма індукції ремісії для ГМЛ являє собою хіміотерапію за допомогою комбінації антрацикліну і цитарабіну з наступною або консолідаційною хіміотерапією (як правило, за допомогою підвищених доз тих же лікарських засобів, які використовувалися протягом періоду індукції ремісії), або трансплантацією стовбурових клітин людини залежно від здатності пацієнта переносити інтенсивне лікування і імовірності видужання тільки за допомогою хіміотерапії (див.,
Коо) наприклад, Кобог, С... (2012) "Ситепі Тгеаїтепі ОЇ Асціє Муевіоіай ГеиКетіа", Си. Оріп. Опсої. 24:711-719).
Засоби, часто використовувані в індукційній терапії, містять у собі цитарабін і антрациклін.
Цитарабін, також відомий як Агас, знищує злоякісні клітини (і інші нормальні клітини, що швидко діляться), перешкоджаючи синтезу ДНК. Побічні ефекти, пов'язані з лікуванням за допомогою
Агас, містять у собі знижену стійкість до інфекції як результат зниженої продукції лейкоцитів; кровотеча як результат зниженої продукції тромбоцитів; і анемію внаслідок потенційного зниження кількості еритроцитів. Інші побічні ефекти містять у собі нудоту і блювання.
Антрацикліни (наприклад, даунорубіцин, доксорубіцин і ідарубіцин) характеризуються декількома механізмами дії, включаючи в себе інгібування синтезу ДНК і РНК, руйнування структур ДНК більш високих порядків і виробництво ушкоджуючих клітини вільних кисневих радикалів. Найбільш значний побічний ефект антрациклінів являє собою кардіотоксичність, яка суттєво обмежує дозу, що вводиться протягом життя, і у деякій міри застосовність антрациклінів.
Таким чином, на жаль, незважаючи на істотний прогрес у лікуванні вперше виявленого ГМЛ, 20 96 - 40 95 пацієнтів не досягають ремісії за допомогою стандартної індукційної хіміотерапії, і в 95 - 70 9о пацієнтів, які досягли спочатку повної ремісії, як припускають, виникне рецидив не пізніше ніж через З роки. Оптимальна стратегія в період рецидиву або для пацієнтів зі стійким до лікування захворюванням, залишається неясною. Встановлено, що трансплантація стовбурових клітин є найбільш ефективною формою протилейкозної терапії у пацієнтів з ГМЛ 50 при першій або наступній ремісії (йорог, Ссх.). (2012) "Сцтепі Тгеайтепі ОГ Асшіе Муеіоїа
І еикетіа", Ситт. Оріп. Опсої. 24:711-719).
І. СОЗ
СОЗ являє собою Т -клітинний корецептор, що складається із чотирьох різних ланцюгів (Ууиспегрієппід, КМУ. еї аї. (2010) "Зігистига! Віоіоду ОЇ ТНе Т-СеїІ Несеріог: Іпвзіднів Іпіо Несеріог
Авбзетбріу, Гідапа ВНесодпйіоп, Апа Іпйіайоп ОО Зідпаїйпуд", Соїй бргіпд Нагб. Регзресі. Віо). 2(4):а005140; радев5 1-14). У ссавців комплекс СОЗ містить ланцюг СОЗу, ланцюг СОЗб їі два ланцюги СОЗє. Зазначені ланцюги зв'язуються з молекулою, відомою як Т-клітинний рецептор (ТОК), для створення сигналу активації в Т-лімфоцитах. При відсутності СОЗ не відбувається правильного складання ТСК, і вони розпадаються (Ппотав, 5. єї аїЇ. (2010) "МоїІесшаг (510) Ітітипоїоду Гебз5оп5 Егот ТПегарешііс Т-СеїЇ Несеріог Сепе Тгапвіег", Іттипоіоду 129(2):170-
177). СОЗ виявлений зв'язаним з мембранами всіх зрілих Т-клітин і практично ні з яким іншим типом клітин (див. Чхапеуау, С.А. єї аї. (2005) Іп: Іттипобіоіоду: Те Іттипе бувієт Іп Неайн
Апа Оівзєазе, " бій ей. Сапапа бсієпсе Рибріїзпіпу, ММ, рр. 214-216; Бип, 7. у. еї аї. (2001) "Меснапізтв Сопігібшіпа То Т Сеї! Весеріог Зідпаіїйпуд Апа Аззетріу Вехуєаієд Ву Те боїшіоп зігисішге ОЇ Ап Есіодотаіїп Егадтепі ОЇ Те СОЗе:у Неїегодітег", Сеїї 105(7):913-923;. Киппв,
М.5. еї а. (2006) "Оесопвігисіпа Те Ропт Апа Рипсіоп ОЇ Те ТСВ/СОЗ Сотріех", Іттипйу. 2006 Рер.;24(2):133-139).
І. Біспецифічні диатіла
Здатність інтактного, немодифікованого антитіла (наприклад, Ідс) зв'язувати епітоп антигену залежить від присутності варіабельних доменів на легких і важких ланцюгах імуноглобуліну (тобто доменів МІ і МН, відповідно). Конструкція диатіла заснована на одноланцюговому конструкті Ем (зсЕм) (див., наприклад, Ноїйдег еї а). (1993) "Оіародіев" Зтаї! Вімаіепі Апа
Візресіїйс Апіїбоду Егадтепів", Ргос. Маї!. Асай. Зсі. (0О.5.А.) 90:6444-6448; патентну публікацію
США Мо 2004/0058400 (Ноїїпдег еї аІ); 5 2004/0220388 (Мепепз еї аї.); АЇї еї аІ. (1999) РЕВЗ
І екйК. 454(1-2):90-94; І и, 0. єї аї. (2005) "А шу Нитап Весотрбіпапі Іда-І іКе Візресіїїс Апіїроду То
Воїй Те Ерідепта! Стомлй Расіог Весеріог Апа Тне Інзшіп-ГіКе Стоуліи Расіог Несеріог Рог
Епнапсед Апійштог Асіїмцу", у). Віої. Спет. 280(20):19665-19672; МО 02/02781 (Мепепз еї аї.);
ОІаївеп, Т. еї аї. (2004) "Сомаїіеєпі ОівиНіде-іпкКеа Апі-СЕА Оіароду Айомже Зйе-Зресіїіс
Сопійдайоп Апа Вадіоіабеїїпа Рог Титог Тагдеїйпд Арріїсайопв", Ргоївїп Епд. Оев5. Зеї. 17(11):21- 27; Ми, А. єї аі. (2001) "Мийітетгігайоп ОА СНітетіс Апії-СО20 5іпдіе Снаіп Ем-Ем Ризіоп Ргоївїп
І Медіаїед Тпгоцдп Магіаріє ботаїп Ехспапде", Ргоївїп Епдіпеетіпу 14(2):1025-1033; Азапо еї аї. (2004) "А біароду Рог Сапсег ІттипоїНегару Апа ї5 Рипсіїопа! Епнапсетепі Ву Ривіоп ОЇ Нитап
Ес Ротаїп", АБвзігасі ЗР-683, 9. Віоспет. 76(8):992; Такетига, 5. єї аї. (2000) "Сопвітисіоп ОТГА ріароду (Зтаї! Весотрбіпапі Візресіїіс Апіїроду) Овіпа А Веідіпуд Зувзіет", Ргоїєїп Епа. 13(8):583- 588; Ваєценпіє, Р.А. еї а!. (2009) "Візресіїїс Т-СеїЇ Епдадіпд Апіїродіє5 Рог Сапсег Тегару", Сапсег
Вез. 69(12):4941-4944).
Взаємодія легкого ланцюга антитіла і важкого ланцюга антитіла і, зокрема, взаємодія його доменів МІ ії МН формує один із сайтів зв'язування епітопа антитіла. Напроти, конструкт 5сЕм містить домен Мі. ії МН антитіла, що міститься в одному поліпептидному ланцюзі, причому в домені відділені гнучким лінкером, довжина якого достатня для забезпечення можливості самоскладання двох доменів у функціональний сайт зв'язування епітопа. Якщо самоскладання доменів МІ ії МН стає неможливим внаслідок недостатньої довжини лінкера (менше ніж приблизно 12 амінокислотних залишків), два конструкти 5сЕм взаємодіють один 3 одним з утворенням бівалентної молекули, у якій Мі одного ланцюга асоціюються з МН іншого (розглянуто в Магмііп еї а!. (2005) "Весотбіпапі Арргоаснез То Іда-іІїКе Візресіїїс Апіїродієв", Асіа
Ріаптасої. біп. 26:649-658).
Природні антитіла здатні зв'язуватися тільки з одним видом епітопів (тобто є моноспецифічними), хоча вони можуть зв'язуватися із множинними копіями цього виду (тобто проявляючи бівалентність або мультивалентність). У відомому рівні техніки повідомлялося про здатність робити диатіла, які відрізняються від таких природних антитіл у тому, що вони здатні зв'язувати два або більше різних видів епітопів (тобто проявляючи біспецифічність або мультиспецифічність на додаток до бівалентності або мультивалентності) (див., наприклад,
Ноїїїдег еї аї. (1993) "Оіародіе5" Зтаї! ВімаІепі Апа Візресіїйс Апібоду Егадітепів", Ргос. Ма).
Асад. 5сі. (0.5.А.) 90:6444-6448; 05 2004/0058400 (Ноїпдег еї аІ.); 05 2004/0220388 (Мепепвз єї аІ.); АЇї еї аї. (1999) РЕВ5 І ей. 454(1-2):90-94; 1 и, 0. еї а. (2005) "А Ешіу Нитап Весотрбіпапі Іда-
НКе Візресіїйс Апіїроду То Воїп Те Ерідегтаї! СтоулЛй Расіог Несеріог Апа Тпе Іпвиїїп-ГіКе Столи
Расіог Ресеріог Рог Еппапсей Апійитог Асіїмйу, " у. Віої. Спет. 280(20):19665-19672; МО 02/02781 (Мепепз5 еї аїЇ.); Мепеп5, М. еї аїЇ., "Мемж/ Несотбіпапі Ві-апа Тіізресіїйс Апіїбоду
Оегімайме5, " Іп: Моме! Егопіїєт5 п Те Ргодисіоп ОЇ Сотроцйпа5з Рог Віотедіса! О5е, А.
МапВгоекКромеп еї а. (Ед5.), Кіншег Асадетіс Рибіїзпетг5, Богагесні, Тпе Меїпепапавз (2001), радев5 195-208; Ми, А. еї аї. (2001) "Мийітетгігайоп ОГ А СНітетіс Апіі-СО20 біпаіє Спаіп Ем-ЕРм Еивіоп
Ргоївїп І5 Медіаїеа Тигоцойп Магіаріє Оотаіїп Ехспапде, " Ргоївіп Епдіпеегіпд 14(2):1025-1033;
Азапо еї аї. (2004) "А біароду Рог Сапсег Іттипоїпегару Апа 5 ЕРипсіпа! Епнапсетепі Ву
Еивіоп ОЇ Нитап Ес Ротаїп, " Арзігасі ЗР-683, У. Віоспет. 76(8):992; ТаКетига, 5. єї аї. (2000) "Сопвігисіоп ОЇ А Оіароду (Зтаї! Весотрбіпапі Візресіїїс Апіїроду) Овіпд А Нейідіпд Бувіет, "
Ргоївіп Епд. 13(8):583-588; Ваєценпіє, Р.А. єї аї. (2009) "Візресіїїс Т-Сеі! Епдадіпа Апіїродієв Рог
Сапсег ТНегару, " Сапсег Рез. 69(12):4941-4944).
Забезпечення не моноспецифічними диатілами надає істотну перевагу: здатність колігування та колокалізації клітин, які експресують різні епітопи. Таким чином, біспецифічні бо диатіла характеризуються широким діапазоном застосувань, включаючи в себе терапію та імунодіагностику. Біспецифічність забезпечує можливість великої гнучкості в конструюванні та розробці диатіла в різних застосуваннях, забезпечуючи підвищену авидність у відношенні мультимерних антигенів, перехресну зшивку різних антигенів і спрямований націлений вплив на конкретні типи клітин на підставі присутності обох цільових антигенів. У зв'язку з їхньою підвищеною валентністю низькі швидкості дисоціації і швидке виведення із циркуляції (для диатіл невеликого розміру, що становить -50 кДа або нижче), відомі в даній області техніки молекули диатіл також продемонстрували конкретне застосування в області візуалізації пухлин (Рйгоетгаїа еї аї. (1997) "Ітргомед Титог Тагодеїїпу Ву Оівиїрнпіде Зіабіїгеа Оіародієз Ехргеззеай Іп
Рісніа равіогів, " Ргоївіп Епд. 10:1221). Особливе значення представляє колігування різних клітин, наприклад, перехресна зшивка цитотоксичних Т-клітин з пухлинними клітинами (5іаєг72 єї аІ. (1985) "Нуртій Апіїбодіез Сап Тагдеї 5йез Бог АНаск Ву Т СеїІ5, " Маште 314:628-631, апа
Ноїїїдег єї а. (1996) "Зресіїс Кійпуд ОЇ Гутрпота СеїІє Ву Суїоїохіс Т-СеїІ5 Меадіаїєй Ву А
Візресійс Оіарсау, " Ргоївіп Епа. 9:299-305).
Домени зв'язування з епітопом диатіла також можуть бути спрямовані на поверхневу детермінанту будь-якої імунної ефекторної клітини, такої як СОЗ, СО16, СО32 або СОбА4, які експресуються на Т - лімфоцитах, клітинах - природних кілерах (МК) або інших мононуклеарних клітинах. У багатьох дослідженнях також виявили, що зв'язування диатіла з детермінантами ефекторних клітин, наприклад, рецепторами Есу (Есук), активує ефекторну клітину (Ноїїдег єї а!. (1996) "Зресіїйс Кпїпуд ОГГ утрпота Сеї Ву Суїшюїохіс Т-СеїІв Медіаїеа Ву А Візресіїїс Оіабоау, " Ргоїєїп Епд. 9:299-305; НоіЇїдег єї аї. (1999) "Сагсіпоетргуопіс Апіїдеп (СЕА)-5ресіїс Т-сеї)
Асіїмайноп Іп Соїоп Сагсіпота Іпдисей Ву Апії-саз х Апії-сєа Візресіїіс Оіародієз Апа В7 х Апіїі-сва
Візресійс Ривіоп Ргоїєїп5, " Сапсег Ве5. 59:2909-2916; міжнародні патентні публікації МоМо УМО 2006/113665; УМО 2008/157379; УМО 2010/080538; УМО 2012/018687; УМО 2012/162068).. Як правило, активація ефекторних клітин запускається зв'язуванням антигену, зв'язаного антитілом, з ефекторною клітиною за допомогою взаємодії Ео-Есук; таким чином, у зв'язку із цим, молекули диатіл можуть проявляти Ід-подібну функціональність, незалежно від того, чи містять вони домен Ес (наприклад, згідно з результатами будь-якого аналізу ефекторної функції, відомого в даній області техніки або представленого в якості прикладу в даному документі (наприклад, аналізу АОСС)). Шляхом перехресної зшивки пухлинних і ефекторних
Зо клітин диатіло не тільки приводить ефекторну клітину в просторову близькість щодо пухлинних клітин, але приводить до ефективного лізису пухлинних клітин (див., наприклад, Сао вї аї. (2003) "Вівресіїїс Апіїроду Сопіцдаїез Іп Тегарешіісв, " Аду. Огид. Оєїїм. Нем. 55:171-197).
Проте, перераховані вище переваги зустрічаються з суттєвою вартістю. Утворення таких не моноспецифічних диатіл вимагає успішного складання двох або більше окремих і різних поліпептидів (тобто таке утворення вимагає, щоб диатіла утворювалися за допомогою гетеродимеризації різних видів поліпептидних ланцюгів). Цей факт контрастує з моноспецифічними диатілами, які утворюються за допомогою гомодимеризації ідентичних поліпептидних ланцюгів. Оскільки необхідно надати щонайменше два несхожі поліпептиди (тобто два види поліпептидів) для утворення не моноспецифічного диатіла, і оскільки гомодимеризація таких поліпептидів приводить до неактивних молекул (ТаКетига, 5. єї аї. (2000) "Сопвігисіоп ОЇ А Оіароду (Зтаї! Несотрбіпапі Візресіїйс Апіїроду) Овіпда А Веїоїдіпд
Зузієт, " Ргоїєїп Епа. 13(8):583-588), одержання таких поліпептидів має здійснюватися таким шляхом, який запобіжить утворенню ковалентних зв'язків між поліпептидами того самого виду (тобто так, щоб запобігти гомодимеризації) (Такетитга, 5. єї аї. (2000) "Сопвігосіп ОЇ А ріароду (Зтаї! Ресотрбіпапі Візресіїїс Апіїрбоду) Овіпу А Вейідіпдуд бЗувзієт, " Ргоївїп Епд. 13(8):583-588). У зв'язку із цим у даній області техніки розкрите нековалентне зв'язування таких поліпептидів (див., наприклад, Оіаївеп еї аї. (2004) "СомаІепі Різиніде- ійкКей Апіі-СЕА Оіароду АйПомуб 5Це- зЗресіїїс Сопіидайоп Апа НРадіоіабеїїпу Рог Титог Тагдеїїпуд Арріїсайопе, " Ргої. Епог. Оев5. зе. 1721-27; Авапо еї аї. (2004) "А Оіароду Рог Сапсег Іттипоїйегару Апа 5 Рипсійопаї
Еппнапсетепі Ву Ривіоп ОЇ Нитап Ес ботаїп, " Арзігасі ЗР-683, 9. Віоспет. 76(8):992; ТаКкетига,
З. еї аі. (2000) "Сопвігисіоп ОЇ А Оіароду (Зтаї! Ресотрбріпапі Візресіїс Апіїроду) Овіпд А
Веіадіпа Зувієт, " Ргоїєїп Епду. 13(8):583-588; и, 0. єї а. (2005) "А Ешу Нитап Несотрбіпапі
Ідс-ГіКе Візресіїїс Апіїрбоду То Воїй Те Ерідепта! Стоули Расюг Ресеріог Апа Тне Іпвиїп-І їке
Стомй Расіог Несеріог Гог Епнапсед Апійитог Асіїмпу, " у. Віої. Снет. 280(20):19665-19672).
Проте, у даній області техніки встановлено, що біспецифічні диатіла, які складаються з нековалентно зв'язаних поліпептидів, Є нестабільними і легко дисоціюються до нефункціональних мономерів (див. наприклад, Г и, О. еї аї. (2005) "А Єшу Нитап Несотрбіпапі
Ідс-ГіКе Візресіїїс Апіїрбоду То Воїй Те Ерідепта! Стоули Расюг Ресеріог Апа Тне Іпзиїїп-І їке
Стомй Расіог Несеріог Гог Епнапсед Апійитог Асіїмпу, " У. Віої. Спет. 280(20):19665-19672).
Через таку проблему, у даній області техніки досягли успіху в розробці стабільних, ковалентно зв'язаних гетеродимерних не моноспецифічних диатіл (див., наприклад, міжнародні патентні публікації Момо МУО 2006/113665; УУО/2008/157379; МО 2010/080538; УМО 2012/018687;
МО/2012/162068; УуЧоппзоп, 5. еї аї. (2010) "ЕпНесіог СеїЇ Несгийтепі М/йй Моме! Ем-Вазей Юиаї!-
Айіпйу Ве-Тагоєїїпуд Ргоїєїп І єад5 То Роїепі Титог Суїоїувів Апа Іп Мімо В-Сеї! Оерієїйоп, " у.
Моїес. Віо!Ї. 399(3):436-449; Меп, М.О. єї аї. (2010) "Тнегарешіс Сопіт! ОЇ В Сеї! Асіїмайоп Міа
Вестийтепі ОЇ Есдатта Весеріог ПІБ (СОЗ2В) Іппірбйогу Бипсіоп М/йА А Момеї! Візресіїїс Апіїроду зсаноїд, " Апійгйїв Апейт. 62(7):1933-1943; Мооге, Р.А. еї аї. (2011) "Арріїсанйоп ОЇ Оца! Айіппу
Веїагоєїіпд Моїесшевз То Аспієме Оріїта! Недігесієйд Т-Сеї! Кіїйпуд ОЇ В-СеїІ ї утрпота, " Віосд 117(17)4542-4551). Такі підходи передбачають конструювання одного або декількох цистеїнових залишків у кожному з використовуваних видів поліпептидів. Наприклад, було показано, що додавання цистеїнового залишку до С-кінця таких конструктів забезпечує утворення дисульфідного зв'язку між поліпептидними ланцюгами, стабілізуючи отриманий гетеродимер, не створюючи перешкоди для характеристик зв'язування бівалентної молекули.
Незважаючи на такий успіх, одержання стабільних, функціональних гетеродимерних, не моноспецифічних диатіл може бути додатково оптимізоване шляхом ретельного розгляду і розміщення цистеїнових залишків в одній або декількох використовуваних поліпептидних ланцюгах. Такі оптимізовані диатіла можна одержати з більш високим виходом і з підвищеною активністю, ніж не оптимізовані диатіла. Таким чином, даний винахід відноситься до проблеми одержання поліпептидів, які спеціально розроблені і оптимізовані для утворення гетеродимерних диатіл. Даний винахід вирішує зазначену проблему шляхом забезпечення ілюстративних, оптимізованих СО123 х СОЗ диатіл.
Коротке розкриття даного винаходу
Даний винахід відноситься до СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл, які здатні одночасно зв'язуватися з СО123 ії СОЗ, і до застосувань таких молекул у лікуванні захворювання, зокрема гематологічних злоякісних пухлин. сО0123 х СОЗ біспецифічні диатіла згідно із даним винаходом містять щонайменше два різні поліпептидні ланцюги, які асоціюються один з одним гетеродимерним чином з утворенням одного сайту зв'язування, специфічного у відношенні епітопа СО123, і одного сайтом зв'язування, специфічного у відношенні епітопа СОЗ3. Таким чином, СО123 х СОЗ диатіло згідно із даним винаходом є моновалентним у тому розумінні, що воно здатне зв'язуватися тільки з однією копією епітопа СО123 і тільки з однієї копією епітопа СОЗ, але є біспецифічним у тому розумінні, що окреме диатіло здатне зв'язуватися одночасно з епітопом СО123 і з епітопом СОЗ.
Окремі поліпептидні ланцюги диатіл ковалентно зв'язані один з одним, наприклад, шляхом зв'язування дисульфідним зв'язком цистеїнових залишків, розташованих у межах кожного поліпептидного ланцюга. Згідно з конкретними варіантами здійснення диатіла згідно із даним винаходом додатково містять домен Ес імуноглобуліну або альбумінзв'язуючий домен для збільшення періоду напівжиття іп мімо.
Більш конкретно, згідно із даним винаходом також передбачено характеризуюче оптимізованою послідовністю СО123 х СОЮЗ біспецифічне моновалентне диатіло, здатне специфічно зв'язуватися з епітопом СО123 і з епітопом СОЗ, причому диатіло містить перший поліпептидний ланцюг і другий поліпептидний ланцюг, ковалентно зв'язані один 3 одним, причому:
А. перший поліпептидний ланцюг містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця: і. домен 1, що містить: (1) субдомен (1А), який містить домен Мі. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з
СОЗ (Мі соз) (ЗЕО ІЮ МО:21); і (2) субдомен (18), який містить домен УН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (МНеоїгз) (ЗЕО ІЮ МО:26);
БО причому субдомени 1А і 1В відділені один від одного пептидним лінкером (5ЕО ІЮ МО:29); і. домен 2, причому домен 2 являє собою Е-спіральний домен (ЗЕО І МО:34) або К- спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:35), причому домен 2 відділений від домена 1 пептидним лінкером (ЗЕО ІЮО МО:30); і
В. другий поліпептидний ланцюг містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця: і. домен 1, що містить: (1) субдомен (ТА), який містить домен Мі. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з
СО123 (Мі соїгз) (ЗЕО ІЮ МО:25); і (2) субдомен (18), який містить домен УН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНеоз) (ЗЕО ІЮ МО:22); 60 причому субдомени 1А і 1В відділені один від одного пептидним лінкером (5ЕО ІЮ МО:29);
і. домен 2, причому домен 2 являє собою К-спіральний домен (ЗЕО І МО:35) або Е- спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:34), причому домен 2 відділений від домена 1 пептидним лінкером (5ЗЕО ІЮ МО:30); і причому домен 2 першого і другого поліпептидних ланцюгів не являють собою обоє Е-спіральних домена або обоє К-спіральних домена; і при цьому: (а) зазначений домен МІ. зазначеного першого поліпептидного ланцюга і зазначений домен
МН зазначеного другого поліпептидного ланцюга утворюють антигензв'язуючий домен, здатний специфічно зв'язуватися з епітопом СОЗ; і (р) зазначений домен МІ. зазначеного другого поліпептидного ланцюга і зазначений домен
МН зазначеного першого поліпептидного ланцюга утворюють антигензв'язуючий домен, здатний специфічно зв'язуватися з епітопом СО123.
Згідно із даним винаходом також передбачено характеризуюче неоптимізованою послідовністю СО123 х СОЮЗ біспецифічне моновалентне диатіло, здатне специфічно зв'язуватися з епітопом СО123 і з епітопом СОЗ, причому диатіло містить перший поліпептидний ланцюг і другий поліпептидний ланцюг, ковалентно зв'язані один з одним, причому:
А. перший поліпептидний ланцюг містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця: і. домен 1, що містить: (1) субдомен (ТА), який містить домен Мі. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з
СОЗ (Мі соз) (ЗЕО ІЮО МО:23); і (2) субдомен (18), який містить домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (МНеоїгз) (ЗЕО ІЮ МО:28); причому субдомени 1А і 1В відділені один від одного пептидним лінкером (5ЕО ІЮ МО:29); і. домен 2, причому домен 2 являє собою Е-спіральний домен (ЗЕО І МО:34) або К- спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:35), причому домен 2 відділений від домена 1 пептидним лінкером (ЗЕО ІЮО МО:30); і
В. другий поліпептидний ланцюг містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця: і. домен 1, що містить: (1) субдомен (1А), який містить домен Мі. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з
СО123 (Мі сої2гз) (ЗЕО ІЮ МО:27); і
Зо (2) субдомен (18), який містить домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНеоз) (ЗЕО ІЮ МО:24); причому субдомени 1А і 1В відділені один від одного пептидним лінкером (5ЕО ІЮ МО:29); і. домен 2, причому домен 2 являє собою К-спіральний домен (ЗЕО І МО:35) або Е- спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:34), причому домен 2 відділений від домена 1 пептидним лінкером (5ЗЕО ІЮ МО:30); і причому домен 2 першого і другого поліпептидних ланцюгів не являють собою обоє Е-спіральних домена або обоє К-спіральних домена; і при цьому: (а) зазначений домен МІ. зазначеного першого поліпептидного ланцюга і зазначений домен
МН зазначеного другого поліпептидного ланцюга утворюють антигензв'язуючий домен, здатний специфічно зв'язуватися з епітопом СОЗ; і (р) зазначений домен МІ. зазначеного другого поліпептидного ланцюга і зазначений домен
МН зазначеного першого поліпептидного ланцюга утворюють антигензв'язуючий домен, здатний специфічно зв'язуватися з епітопом СО123.
Крім того, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення описаних вище біспецифічних моновалентних диатіл, у якому перший або другий поліпептидний ланцюг додатково містить альбумінзв'язуючий домен (ЗЕО ІЮ МО:36), з'єднаний на С-кінці з доменом 2 або на М-кінці з доменом 1 за допомогою пептидного лінкера (ЗЕО ІЮ МО:31).
Крім того, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення описаних вище біспецифічних моновалентних диатіл, у якому перший або другий поліпептидний ланцюг
БО додатково містить домен 3, що містить домен СН2 і СНЗ домена Ес імуноглобуліну Їде (ЗЕО ІЮ
МО:37), причому домен З з'єднаний на М-кінці з доменом ТА за допомогою пептидного лінкера (ЗЕО ІО МО:33).
Крім того, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення описаних вище біспецифічних моновалентних диатіл, у якому перший або другий поліпептидний ланцюг додатково містить домен 3, що містить домен СН2 і СНЗ домена Ес імуноглобуліну до (ЗЕО ІЮ
МО:37), причому домен З з'єднаний на С-кінці з доменом 2 за допомогою пептидного лінкера (ЗЕО ІО МО:32).
Крім того, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення будь-якого з описаних вище біспецифічних моновалентних диатіл, у якому домен 2 першого поліпептидного ланцюга являє собою К-спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:35), і домен 2 другого поліпептидного ланцюга являє собою Е-спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:34).
Крім того, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення будь-якого з описаних вище біспецифічних моновалентних диатіл, у якому домен 2 першого поліпептидного ланцюга являє собою Е-спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:34), і домен 2 другого поліпептидного ланцюга являє собою К-спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:35).
Крім того, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення біспецифічного моновалентного диатіла, здатного специфічно зв'язуватися з епітопом СО123 і з епітопом СОЗ, причому диатіло містить перший поліпептидний ланцюг і другий поліпептидний ланцюг, ковалентно зв'язані один з одним, причому: зазначене біспецифічне диатіло містить наступне:
А. перший поліпептидний ланцюг, який характеризується амінокислотною послідовністю
ЗЕО ІЮО МО:1; і
В. другий поліпептидний ланцюг, який характеризується амінокислотною послідовністю 5ЕО
ІО МО:З; причому зазначений перший і зазначений другий поліпептидні ланцюги ковалентно зв'язані один з одним дисульфідним зв'язком.
Диатіла згідно із даним винаходом проявляють несподівано посилені функціональні активності, як додатково описано нижче.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні перехресно реагувати з білками СО123 і СОЗ як людини, і так примата, переважно білками СО123 і СОЗ яванської макаки.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні піддавати деплеції в міго клітинному аналізі плазмацитоїдні дендритні клітини (рос) з культури первинних РВМС зі значенням 1ІС50, що становить приблизно 1 нг/мл або менше, приблизно 0,8 нг/мл або менше, приблизно 0,6 нг/мл або менше, приблизно 0,4 нг/мл або менше, приблизно 0,2 нг/мл або менше, приблизно 0,1 нг/мл або менше, приблизно 0,05 нг/мл або менше, приблизно 0,04 нг/мл або менше, приблизно 0,03 нг/мл або менше, приблизно 0,02 нг/мл або менше або приблизно 0,01 нг/мл або менше. Значення ІС50 переважно становить приблизно 0,01 нг/мл або менше. В описаному вище аналізі культура первинних РВМС може походити від яванської макаки, у цьому випадку зазначена деплеція являє собою деплецію плазмацитоїдних дендритних клітин яванської макаки (рос). Необов'язково диатіла згідно із даним винаходом можуть бути здатні піддавати деплеції плазмацитоїдні дендритні клітини (рос) з первинної культури РВМС, як описано вище, причому аналіз проводять згідно або відповідно до протоколу прикладу 14, як описано в даному документі, або шляхом модифікації такого аналізу, що буде зрозуміло фахівцям у даній області техніки, або іншими способами, відомими фахівцям у даній області техніки.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно проявляють цитотоксичність в іп міго аналізі
Казиті-3 зі значенням ЕС50О, що становить приблизно 0,05 нг/мл або менше. Значення ЕС50 переважно становить приблизно 0,04 нг/мл або менше, приблизно 0,03 нг/мл або менше, приблизно 0,02 нг/мл або менше або приблизно 0,01 нг/мл або менше. Необов'язково диатіла згідно із даним винаходом можуть проявляти цитотоксичність, як описано вище, причому аналіз проводять згідно або відповідно до протоколу прикладу 3, як описано в даному документі, або шляхом модифікації такого аналізу, що буде зрозуміло фахівцям у даній області техніки, або іншими способами, відомими фахівцям у даній області техніки.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно проявляють цитотоксичність в іп міго аналізі
Мо!т-13 зі значенням ЕС5О, що становить приблизно 5 нг/мл або менше. Значення ЕС5О0 переважно становить приблизно З нг/мл або менше, приблизно 2 нг/мл або менше, приблизно 1 нг/мл або менше, приблизно 0,75 нг/мл або менше або приблизно 0,2 нг/мл або менше.
Необов'язково диатіла згідно із даним винаходом можуть проявляти цитотоксичність, як описано вище, причому аналіз проводять згідно або відповідно до протоколу прикладу 3, як описано в даному документі, або шляхом модифікації такого аналізу, що буде зрозуміло фахівцям у даній області техніки, або іншими способами, відомими фахівцям у даній області техніки.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата МОЇ М-13 у миші. Диатіла згідно із даним винаходом переважно можуть бути здатні інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата МОЇ М-13 у миші в концентрації, що становить щонайменше приблизно 20 мкг/кг, щонайменше приблизно 4 мкг/кг, щонайменше приблизно 0,8 мкг/кг, щонайменше приблизно 0,6 мкг/кг або щонайменше приблизно 0,4 мкг/кг.
Переважні антитіла згідно із даним винаходом будуть інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата МОЇ М-13 у миші щонайменше на 25595, але можливо щонайменше приблизно на 40 95 або більше, щонайменше приблизно на 50 95 або більше, щонайменше 60 приблизно на 60 95 або більше, щонайменше приблизно на 70 95 або більше, щонайменше приблизно на 8095 або більше, щонайменше приблизно на 9095 або більше або навіть повністю інгібувати ріст пухлини МОЇ М-13 через деякий період часу або викликаючи регресію або зникнення пухлини. Зазначене інгібування спостерігається щонайменше для лінії мишей
МС. Необов'язково диатіла згідно із даним винаходом можуть бути здатні інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата МОЇ М-13 у миші описаним вище чином згідно або відповідно до протоколу прикладу б, як описано в даному документі, або шляхом модифікації такого аналізу, що буде зрозуміло фахівцям у даній області техніки, або іншими способами, відомими фахівцям у даній області техніки.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата К54-11 у миші. Диатіла згідно із даним винаходом переважно можуть бути здатні інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата 2554-11 у миші в концентрації, що становить щонайменше приблизно 0,5 мг/кг, щонайменше приблизно 0,2 мг/кг, щонайменше приблизно 0,1 мг/кг, щонайменше приблизно 0,02 мг/кг або щонайменше приблизно 0,004 мг/кг.
Переважні антитіла згідно із даним винаходом будуть інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата К54-11 у миші щонайменше приблизно на 25595, але можливо щонайменше приблизно на 40 95, щонайменше приблизно на 50 95, щонайменше приблизно на 6096, щонайменше приблизно на 7095, щонайменше приблизно на 8095, щонайменше приблизно на 90 95 або навіть повністю інгібувати ріст пухлини 54-11 через деякий період часу або викликаючи регресію або зникнення пухлини. Зазначене інгібування спостерігається щонайменше для лінії мишей МБО. Необов'язково диатіла згідно із даним винаходом можуть бути здатні інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата К54-11 у миші описаним вище чином згідно або відповідно до протоколу прикладу б, як описано в даному документі, або шляхом модифікації такого аналізу, що буде зрозуміло фахівцям у даній області техніки, або іншими способами, відомими фахівцям у даній області техніки.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні піддавати деплеції лейкозні бластні клітини іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ. Диатіла згідно із даним винаходом переважно можуть бути здатні піддавати деплеції лейкозні бластні клітини іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ при концентраціях, що становлять щонайменше приблизно 0,01 нг/мл, щонайменше приблизно 0,02 нг/мл, щонайменше приблизно 0,04 нг/мл,
Зо щонайменше приблизно 0,06 нг/мл, щонайменше приблизно 0,08 нг/мл або щонайменше приблизно 0,1 нг/мл. Диатіла згідно із даним винаходом переважно можуть бути здатні піддавати деплеції лейкозні бластні клітини іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку
ГМЛ менше ніж на 20 95 від загальної популяції первинних лейкозних бластних клітин при концентраціях диатіла, що складають щонайменше приблизно 0,01 нг/мл, щонайменше приблизно 0,02 нг/мл, щонайменше приблизно 0,04 нг/мл, щонайменше приблизно 0,06 нг/мл, щонайменше приблизно 0,08 нг/мл або щонайменше приблизно 0,1 нг/мл, необов'язково після інкубації первинної культури з диатілом протягом приблизно 120 годин. Лейкозні бластні клітини переважно піддають деплеції іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ менше ніж на 2095 від загальної популяції первинних лейкозних бластних клітин при концентраціях диатіла, що становить приблизно 0,01 нг/мл або 0,1 нг/мл, після інкубації первинної культури з диатілом протягом приблизно 120 годин.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні індукувати експансію Т-клітинної популяції іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ. Така експансія переважно може становити приблизно 70 95 або більше від максимальної Т-клітинної популяції, яка може бути піддана експансії в аналізі. Диатіла згідно із даним винаходом переважно можуть бути здатні індукувати експансію Т-клітинної популяції іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ приблизно на 70 95 або більше від максимальної Т-клітинної популяції, яка може бути піддана експансії в аналізі при концентраціях диатіла, що складають щонайменше приблизно 0,01 нг/мл, щонайменше приблизно 0,02 нг/мл, щонайменше приблизно 0,04 нг/мл, щонайменше приблизно 0,06 нг/мл, щонайменше приблизно 0,08 нг/мл або щонайменше приблизно 0,1 нг/мл, необов'язково після інкубації первинної культури з диатілом протягом приблизно 120 годин. Т-клітинна популяція переважно збільшується іп міго у первинній культур клітин кісткового мозку ГМЛ приблизно на 7095 або більше від максимальної Т-клітинної популяції, яка може бути піддана експансії в аналізі при концентраціях диатіла, що становить приблизно 0,01 нг/мл або приблизно 0,1 нг/мл після інкубації первинної культури з диатілом протягом приблизно 120 годин.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні індукувати активацію Т-клітинної популяції іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ. Така активація може відбуватися при концентраціях диатіла, що складають щонайменше приблизно 0,01 нг/мл, бо щонайменше приблизно 0,02 нг/мл, щонайменше приблизно 0,04 нг/мл, щонайменше приблизно 0,06 нг/мл, щонайменше приблизно 0,08 нг/мл або щонайменше приблизно 0,1 нг/мл, необов'язково після інкубації первинної культури з диатілом протягом приблизно 72 годин. Таку активацію можна виміряти за експресією маркера Т-клітинної активації, такого як СО25.
Активація Т-клітинна популяція іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ, вимірювана за експресією СО25, переважно відбувається при концентраціях диатіла, що становить приблизно 0,01 нг/мл або приблизно 0,1 нг/мл, після інкубації первинної культури з диатілом протягом приблизно 72 годин.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні піддавати деплеції лейкозні бластні клітини іп міїго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ менше ніж на 20 95 від загальної популяції первинних лейкозних бластних клітин і в той же час індукувати експансію Т-клітинної популяції іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ приблизно на 70 95 або більше від максимальної Т-клітинної популяції, яка може бути піддана експансії в аналізі, при концентраціях диатіла, що складають щонайменше приблизно 0,01 нг/мл, щонайменше приблизно 0,02 нг/мл, щонайменше приблизно 0,04 нг/мл, щонайменше приблизно 0,06 нг/мл, щонайменше приблизно 0,08 нг/мл або щонайменше приблизно 0,1 нг/мл, необов'язково після інкубації первинної культури з диатілом протягом приблизно 120 годин. Концентрації диатіла переважно становлять приблизно 0,01 нг/мл або приблизно 0,1 нг/мл, і первинну культуру інкубують з диатілом протягом приблизно 120 годин.
Диатіла згідно із даним винаходом можуть бути здатні піддавати деплеції лейкозні бластні клітини іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ і/або індукувати експансію Т- клітинної популяції іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ і/або індукувати активацію Т-клітинної популяції іп мійго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ описаним вище чином згідно або відповідно до протоколу прикладу 8, як описано в даному документі, або шляхом модифікації такого аналізу, що буде зрозуміло фахівцям у даній області техніки, або іншими способами, відомими фахівцям у даній області техніки.
Щоб уникнути невірного тлумачення, диатіла згідно із даним винаходом можуть проявляти одну, дві, три, більше трьох або всі з функціональних ознак, описаних у даному документі.
Таким чином, диатіла згідно із даним винаходом можуть проявляти будь-яку комбінацію функціональних ознак, описаних у даному документі.
Диатіла згідно із даним винаходом є придатними для застосування в якості фармацевтичного засобу. Диатіла переважно є придатними для застосування в лікуванні захворювання або стану, пов'язаного з експресією СО123 або, що характеризується експресією
СО123. Даний винахід також відноситься до застосування диатіла згідно із даним винаходом у виробництві фармацевтичної композиції, переважно для лікування захворювання або стану, пов'язаного з експресією СО123 або, що характеризується експресією СО123, як додатково визначене в даному документі.
Захворювання або стан, пов'язаний з експресією СО123 або, що характеризується експресією СО123, може являти собою злоякісну пухлину. Наприклад, злоякісна пухлина може бути обрана із групи, що складається з наступного: гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ), хронічний мієлогенний лейкоз (ХМЛ), включаючи в себе бластний криз ХМЛ і онкоген Абельсона, пов'язаний із ХМЛ (транслокація Всег-АВІ), мієлодиспластичний синдром (МДС), гострий В- лімфобластний лейкоз (В-ГЛЛ), хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), включаючи в себе ХЛЛ із синдромом Ріхтера або трансформацією Ріхтера, волохатоклітинний лейкоз (ВКЛ), новоутворення із бластних плазмацитоїдних дендритних клітин (УБПДК), нехождкінські лімфоми (НХЛ), включаючи в себе мантійноклітинну лімфому (МКЛ) і дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому (МЛЛ), лімфома Ходжкіна, системний мастоцитоз і лімфома Беркіта.
Захворювання або стан, пов'язаний з експресією СО123 або, що характеризується експресією СО123, може являти собою запальний стан. Наприклад, запальний стан може бути обраний із групи, що складається з наступного: системна червона вовчанка (СЧВ), алергія, бронхіальна астма та ревматоїдний артрит.
Крім того, згідно із даним винаходом передбачена фармацевтична композиція, що містить будь-яке з описаних вище диатіл і фізіологічно прийнятний носій.
Крім того, згідно із даним винаходом передбачено застосування описаної вище фармацевтичної композиції в лікуванні захворювання або стану, пов'язаного з експресією
С0123 або, що характеризується експресією СО123.
Зокрема, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення такого застосування, у якому захворювання або стан, пов'язаний з експресією СО123 або, що характеризується експресією СО123, являє собою злоякісну пухлину (особливо злоякісну пухлину, обрану із групи, що складається з наступного: гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ), хронічний мієлогенний лейкоз 60 (ХМЛ), включаючи в себе бластний криз ХМЛ і онкоген Абельсона, пов'язаний із ХМЛ
(транслокація Всег-АВІ), мієлодиспластичний синдром (МДС), гострий В-лімфобластний лейкоз (В-ГЛЛ), хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), включаючи в себе ХЛЛ із синдромом Ріхтера або трансформацією Ріхтера, волохатоклітинний лейкоз (ВКЛ), новоутворення із бластних плазмацитоїдних дендритних клітин (УБПДК), нехождкінські лімфоми (НХЛ), включаючи в себе мантійноклітинну лімфому (МКЛ) і дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому (МЛЛ), лімфома
Ходжкіна, системний мастоцитоз і лімфома Беркіта).
Зокрема, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення такого застосування, у якому захворювання або стан, пов'язаний з експресією СО123 або, що характеризується експресією СО123, являє собою запальний стан (особливо запальний стан, обраний із групи, що складається з наступного: системна червона вовчанка (СЧВ), алергія, бронхіальна астма та ревматоїдний артрит).
Такі терміни, як "приблизно" слід розуміти як середнє в межах 10 95, більш переважно в межах 5 95 від зазначеного значення, якщо контекстом не передбачено інше.
Короткий опис графічних матеріалів
На фігурі 1 показано, що СО123, як відомо, експресується на лейкозних стовбурових клітинах.
На фігурі 2 проілюстровані структури першого і другого поліпептидних ланцюгів двохланцюгового СО123 х СОЗ біспецифічного моновалентного диатіла згідно із даним винаходом.
На фігурах ЗА ї ЗВ проілюстровані структури двох версій першого, другого і третього поліпептидних ланцюгів трьеохланцюгового СЮО123 х СОЗ біспецифічного моновалентного Ес - диатіла згідно із даним винаходом (версія 1, фігура ЗА; версія 2, фігура ЗВ).
На фігурі 4 (панелі А-Е) показана здатність різних СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл опосередковувати Т-клітинний переспрямований цитоліз клітин - мішеней, що проявляють мінливу кількість СО123. На фігурі представлені криві залежності від дози, які вказують на те, біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ ("САКТ-
А"), що містить альбумінзв'язуючий домен (0ОАКТ-А з АВО "м/АВО") виявило більшу цитотоксичність, ніж контрольне біспецифічне диатіло (контрольне САКТ) або, біспецифічне диатіло, що характеризується неоптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ ("САКТ-В") у
Зо численних типах клітин-мішеней: К54-11 (панель А); ТЕ-1 (панель В); Моїт-13 (панель С);
Казиті-3 (панель 0); ї ТНР-1 (панель Е) у співвідношенні Е:Т (ефектор: мішень), що становить 107.
На фігурі 5 (панелі А-О) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СО3 біспецифічного диатіла (ОАКТ-А), що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла, що містить альбумінзв'язуючий домен (ФАКТ-А з АВО "м/АВО"), що і характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла, що містить домен Ес імуноглобуліну Ії (ОАВТ-А з Ес "м/Бс"), опосередковувати Т-клітинну активацію в процесі перенаправленого цитолізу клітин-мішеней. На фігурі представлені криві залежності від дози, що показують цитотоксичність, опосередковану ОАКТ-А, САНТ-А м/АВО ії ВАКТ-А м/Ес у клітинах Казиті-3 (панель А) ї ТНР-1 (панель В) і очищених СО8 Т-клітинах при співвідношенні ЕТ (ефекторна клітина: клітина - мішень), що становить 10:1 (18 год. інкубація). На панелях С і О показані криві залежності від дози Т-клітинної активації з використанням маркера СО25 на СО8 Т-клітинах у присутності (панель С) і при відсутності (панель С) клітин - мішеней.
На фігурі 6 (панелі А-В) показані вмісти гранзиму В і перфорину в СО4 і СО8 Т-клітинах після обробки за допомогою, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (ОАКТ-А) (панель А) або контрольного біспецифічного диатіла (контрольного САКТ) (панель В) у присутності клітин-мішеней Казиті-3 і дрімаючих Т-клітин у співвідношенні Е:Т, що становить 10:1.
На фігурі 7 (панелі А-В) показана іп мімо протипухлинна активність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3 біспецифічного диатіла (ЮАКТ-А) при рівнях дозування в нг/кг. Клітини МОЇ М-13 (проміжний рівень експресії СО123) змішували з Т- клітинами і імплантували підшкірно (ТЕ 1:11) мишам М5О. Внутрішньовенне лікування здійснювали один раз на день протягом 8 днів (00х8), починаючи від дня імплантації. Різні концентрації ОАКТ-А порівнювали з контрольним біспецифічним диатілом (контрольним САКТ).
На панелі А показані клітини Мої!т-13 окремо або з Т-клітинами, і ефект різних доз ОАКТ-А на об'єм пухлини, навіть у часові точки за межами 30 днів. На панелі В показаний ефект збільшуючих доз ЮОАКТ-А на об'єм пухлини, спостережуваний у мишей МО, що одержали клітини МОГ М-13 і Т-клітини (ТЕ 1:1) протягом періоду часу, що становить 0-18 днів.
На фігурі 8 показана іп мімо протипухлинна активність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (ФАКТ-А) на клітини К54-11 (ОЛЛ із ознаками моноцитів). Клітини змішували з Т-клітинами і імплантували підшкірно (ТЕ 1:1) мишам
МО. Внутрішньовенне лікування здійснювали один раз на день протягом 4 днів (0Ох4), починаючи від дня імплантації. Різні концентрації ЮАКТ-А порівнювали з контрольним біспецифічним диатілом (контрольне САКТ).
На фігурі 9 (панелі А-В) показані СО123.-- бластні клітини в мононуклеарах кісткового мозку (ВМ ММС) ї мононуклеарах периферичної крові (РВМС) від пацієнта 1 з ГМЛ (панель А) у порівнянні із клітинною лінією ГМЛ Казиті-3 (панель В).
На фігурі 10 (панелі А-С) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (ФАКТ-А) опосередковувати скорочення бластних клітин при первинному ГМЛ через 120 год. (панель А), керувати експансією Т-клітинної популяції при первинному ГМЛ через 120 год. (панель В) і індукувати Т-клітинну активацію при
ГМЛ через 48 год. і 72 год. (панель С).
На фігурі 11 (Панелі А-Н) показана ідентифікація популяції СО123-4 бластних клітин у первинному зразку РВМО ОЛЛ. На панелях А і Е показане пряме і бічне світлорозсіювання популяції нормальних РВМС, що вводиться, (панель А) і РВМС ОЛЛ (панель Е). На панелях В і
Е показана ідентифікація популяції лімфоцитів в якості, головним чином, В-клітин (панель В) і лейкозних бластних клітин (панель Б). На панелях С і б показана ідентифікація популяції лімфоцитів, які Є СО123ж. На панелях О і Н показана ідентифікація СО19- клітин Її СО123- клітин.
На фігурі 12 (панелі А-В) показана ідентифікація СО4 і СО8 популяцій Т-клітин у первинному зразку РВМСО ОЛЛ. На панелі А показане пряме і бічне світлорозсіювання популяції РВМО ОЛЛ, що вводиться. На панелі В показані СО4 або СО8 популяції Т-клітин, які присутні в зразках.
Кількості вказують, що СО4 Т-клітини представляють приблизно 0,5 95 від загальної кількості клітин, і СО8 Т-клітини представляють приблизно 0,495 від загальної кількості клітин, які присутні у зразку РВМО ОЛЛ.
На фігурі 13 (панелі А-Н) показана здатність, біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) опосередковувати деплецію бластних
Зо клітин при ОЛЛ за допомогою аутологічних СТІ. (цитотоксичні Т-лімфоцитів). На панелях А і Е показане пряме і бічне світлорозсіювання популяції нормальних РВМС, що вводиться, (панель
А) і РВМСО ОЛЛ (панель Е). РВМС залишали не обробленими (панелі В і Є), обробляли за допомогою контрольного біспецифічного диатіла (контрольного ЮОАКТ) (панелі С і б) або обробляли за допомогою ЮАКТ-А (панелі Ю їі Н) і інкубували протягом 7 днів, після чого офарблювали у відношенні СОЗ34 і СО19.
На фігурі 14 (панелі А-Ї) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (БАКТ-А) опосередковувати Т-клітинну експансію (панелі А, В, С, 0, Н і І) і активацію (панелі 0, Е, Е, У, К ії ) у нормальних РВМС (панелі А-Е) і РВМС ОЛЛ (панелі О-І). Клітини залишали не обробленими (панелі А, 0, с і У) або обробляли за допомогою контрольного біспецифічного диатіла (контрольного ЮАКТ) (панелі В, Е, Н і К) або САКТ-А (панелі С, РЕ, І і І) протягом 7 днів.
На фігурі 15 (панелі А-С) показана ідентифікація бластної популяції ГМЛ і Т-клітин у первинному зразку ГМЛ. На панелі А показане пряме і бічне світлорозсіювання популяції РВМС
ГМЛ, що вводиться. На панелі В показана ідентифікація бластної популяції ГМЛ у зразку ГМЛ.
На панелі С показана ідентифікація Т-клітинної популяції в зразку ГМЛ.
На фігурі 16 (панелі А-С) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (ФАКТ-А) опосередковувати деплецію бастних клітин при ГМЛ за допомогою аутологічних СТІ. і Т-клітинної експансії. Первинні РВМС
ГМЛ від пацієнта 2 інкубували з РВ5, контрольним біспецифічним диатілом (контрольним рАКТ) або САКТ-А протягом 144 год. Підраховували бластні клітини (панель А), СО4 Т-клітини (панель В) і СО8 Т-клітини (панель С).
На фігурі 17 (панелі А-Ю) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (БАКТ-А) опосередковувати Т-клітинну активацію при ГМЛ. Експресію СО25 (панель А) і Кі-67 (панель В) визначали для СО4 і СО8 т- клітин від пацієнта 2 з ГМЛ після інкубації з контрольним біспецифічним диатілом (контрольним рАКТ) або БАКТ-А з аутологічними РВМС. Вміст перфорину (панель С) і гранзиму В (панель 0) визначали для СО4 і СО8 Т-клітин від пацієнта 2 з ГМЛ після інкубації з контрольним САКТ або рАВТА-А з аутологічними РВМС.
На фігурі 18 (панелі А-О) показано, що біспецифічне диатіло яке характеризується бо оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) здатне перехресно реагувати з білками
СсО0123 і СО3 як людини, так і примата. На панелях показані криві сенсограм ВІАСОВЕТМ результатів аналізів, проведених для оцінки здатності ОАКТ-А зв'язуватися з білюеами СОЗ (панелі А і В) і СО123 (панелі С і Ю) людини (панелі А і С) і нелюдиноподібного примата (панелі
В 'ї 0). Представлені значення КО.
На фігурі 19 (панелі А-В) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (ФАКТ-А) опосередковувати деплецію аутологічних моноцитів іп міго з РВМС людини і яванської макаки. На панелях представлені результати кривих залежності від дози опосередкованої САКТ-А цитотоксичності з первинними
РВМС людини (панель А) або РВМС яванської макаки (панель В).
На фігурі 20 (панелі А-М) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (АКТ-А) опосередковувати деплецію РОС у яванських макак без системної індукції цитокінів. На панелях А-ЮО показані контрольні результати, отримані через 4 год. і 4 днів з інертним носієм і носієм. На панелях Е-Н показані контрольні результати, отримані через 4 год. і 4 днів з контрольним біспецифічним диатілом (контрольним САКТ). На панелях 1-М показані результати, отримані через 4 год. і 4 днів у дозі рАВТ-А, що становить 10 нг/кг/день, і через 4 дня в дозі ПОАКТ-А, що становить 30 нг/кг/день.
На фігурі 21 (панелі А-Ю) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (ФАКТ-А) опосередковувати залежну від дози деплецію рОС у яванських макак. Яванським макакам вводили дози БАВТ-А, що становлять 0,1, 1, 10, 30 100, 300 або 1000 нг/кг. РВМС оцінювали в зазначений час і визначали загальну кількість В-клітин (панель А), моноцитів (панель В), МК-клітин (панель С) і рос (панель
В).
На фігурі 22 (панелі А-Ю) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (САКТ-А) періодично модулювати Т-клітини у яванських макак. Яванським макакам вводили дози САКТ-А, що становлять 0,1, 1, 10, 30 100, 300 або 1000 нг/кг. РВМС оцінювали в зазначений час і визначали загальну кількість Т-клітин (панель А), СО4 Т-клітин (панель В), СОб9 клітин (панель С) і СО8 Т-клітин (панель 0).
На фігурі 23 показано аналіз 505-РАСЕ очищеного білка ЮАКТ-А при відновлюючих (ліворуч) і невідновлюючих (праворуч) умовах.
Зо На фігурах 24А-24В показані фізико-хімічні характеристики очищеного ОАКТ-А. На фігурі 24А: профіль 5ЕС білка САКТ-А на каліброваній колонці Т5К З30005УМУХхї.. На фігурі 24В: мас- спектр білка ОАКТ-А.
На фігурах 25А-250 показаний аналіз 5РЕ. зв'язування САКТ-А з імобілізованими СО123 і
СО3 людини або яванської макаки. Пунктирними лініями представлена глобальна апроксимація до 1:11 моделі Ленгмюра експериментальних кривих зв'язування, отриманих при концентраціях
РАВТ-А, що становлять 0, 6,25, 12,5, 25, 50 або 100 нм (безперервні лінії). Дані є репрезентативними для трьох незалежних експериментів.
На фігурах 26А-26Е показано, що САКТ-А здатне одночасно зв'язуватися як з СОЗ, так і
СО0123. На фігурі 26А-2688 представлені результати біфункціонального аналізу ЕГІ5А і продемонстроване одночасне залучення обох антигенів-мішеней САКТ-А. На планшети ЕГІЗА наносили СО123 людини (фігура 26А) або яванської макаки СО123 (фігура 268). За титруванням концентрацій САКТ-А і контрольного ПОАКТ випливало виявлення за допомогою
СОЗ-біотин людини. На фігурах 26С-26Е продемонстровано зв'язування клітинною поверхнею рАВТ-А на СО123-Моїт-13 клітині-мішені (фігура 26С), Т-клітинах людини (фігура 260) і тТ- клітинах яванської макаки (фігура 26Е). Зв'язування виявляли за допомогою аналізу ГАС5 з використанням моноклонального антитіла, специфічного у відношенні Е-спіральної і К- спіральної області молекули ОАКТ-А або контрольного АКТ.
На фігурах 27А-27Н показана здатність ПОАКТ-А опосередковувати переспрямований цитоліз клітини - мішені ефекторними клітинами людей або мавпи проти СО123-4-Казиті-3 лейкозних клітинних ліній, показана здатність молекул зв'язуватися з підкласом нормальних циркулюючих у кровотоці лейкоцитів, включаючи в себе рОС і моноцити, і показана здатність молекул піддавати деплеції СО14-СО123"9й клітини (рОС і базофіли), не вражаючи моноцити (СО14- клітини). На фігурі 27А показані відносні сайти зв'язування з антитілом до СО123-РЕ 0937 і лейкозні клітинні лінії Казиті-3, визначені за допомогою аналізу ОБАС5. На фігурі 27В показана відносно низька відсоткова цитотоксичність, опосередкована САКТ-А або контрольним БАКТ на клітинній лінії ГМЛ (клітинах 0937), які, як показано на фігурі 27А, містять відносно мало сайтів зв'язування з СО123). На фігурі 27С показана відсоткова цитотоксичність, опосередкована рАВТ-А або контрольним САКТ у присутності очищених Т-клітин людини (в якості ефекторних клітин) на клітинній лінії ГМЛ (клітинах Казипті-3), які, як показано на фігурі 27А, містять значну бо кількість сайтів зв'язування з СО123. На фігурах 278-27С співвідношення Е:Т становить 10:1. На фігурі 270 показана вісоткова цитотоксичність, опосередкована САКТ-А або контрольним СОАКТ у присутності очищених РВМСОС яванської макаки (в якості ефекторних клітин) на клітинах
Казиті-З3 (співвідношення Е:Т становить 15:1), ії продемонстровано, що ОБАКТ-А може зв'язуватися з Т-клітинами яванської макаки. На фігурі 27Е показані відносні сайти зв'язування з антитілом до СО123-РЕ на клітинах Казиті-3, моноцитах людини, плазмацитоїдних дендритних клітинах людини ("рОсС"), моноцитах яванської макаки і плазмацитоїдних дендритних клітинах яванської макаки, що визначали за допомогою аналізу ОБАС5. На фігурі 27Е показана здатність рАВТ-А піддавати деплеції СО14- СО1239 клітки. На фігурі 275 показана здатність ОАЕТ-А піддавати деплеції СО14- СО123Н! клітини людини. На фігурі 27Н показана здатність ОАВТ-А піддавати деплеції СО14- СО12З3Н! клітини яванської макаки. Цитотоксичність визначали за вивільненням ГОН, при цьому значення ЕС5О визначали за допомогою програмного забезпечення СгарпРайд РКІЗМФ)
На фігурі 28 показано застосування двохкомпартментної моделі для оцінки фармакокінетичних параметрів ЮАКТ-А. Дані показують концентрації ОАКТ-А у сироватці наприкінці інфузії (ЕОЇ) у яванських макак після одержання 96б-годинної інфузії в дозі, що становить 100 нг/кг/"день, 300 нг/кг/день, 600 нг/кг/день і 1000 нг/кг/"день. Кожна точка представляє окрему тварину; горизонтальні лінії представляють середнє значення для групи дозування.
На фігурах 29А-29С показаний ефект інфузій ОАКТ-А на продукцію цитокіну, 1-6. Вмісти ІІ - б у сироватці (середнє їх ЗЕМ) у мавп, яким вводили інфузії ОАКТ-А, показані за групами лікування. Яванським макакам вводили інертний носій - контроль в 1 день, після чого вводили 4 щотижневі інфузії або інертного носія (група 1) (фігура 29А), або ОЮАКТ-А, що вводиться у вигляді 4-денних інфузій щотижня, починаючи з 8 дня, в 15, 22 і 29 день (групи 2-5) (фігура 298) або у вигляді інфузії 7 днів на тиждень протягом 4 тижнів, починаючи на 8 день (група б) (фігура 29С). Інтервали лікування зазначені сірими колонками.
На фігурах ЗОА-З3ОЕ показано ефект інфузій ОАКТ-А на деплецію СО14-/С0123- клітин (фігури ЗОА-30С) і СОЗ303-- клітин (фігури 300-ЗОЕ). Показано середнє хх ЗЕМ циркулюючих у кровотоці вмістів СО14-/20123- (фігури ЗОА-30С) або СО303- (фігури 3000-30) по днях дослідження та по групам. Яванським макакам вводили інертний носій - контроль в 1 день, після
Зо чого вводили 4 щотижневих інфузії або інертний носій (група 1) (фігури ЗбА і 300), або ОАКТ-А, що вводиться у вигляді 4-денних інфузій щотижня, починаючи з 8 дня, в 15, 22 і 29 день (групи 2-5) (фігури З0А і ЗОЕ) або у вигляді інфузії 7 днів на тиждень протягом 4 тижнів, починаючи на 8 день (група 6) (фігури ЗОС і ЗОЕ). Інтервали лікування зазначені сірими колонками.
На фігурі З1А-31І показані спостережувані зміни в Т-клітинних популяціях (фігури ЗТА-31С),
Сра4 клітинних популяціях (фігури 310-31КЕ) ї СО8-- клітинних популяціях (фігури 310-311), що одержують ВАКТ-А, що вводиться у вигляді 4-денних інфузій, починаючи на 8 день, в 15, 22 і 29 день. Легенда: СО25 (сірі квадрати); СОб9-- (сірі трикутники), РО-1 ж (білі трикутники); Тіт-3-- (білі квадрати). Т-клітини підраховували за допомогою маркерів СО4 і СО8, а не канонічного
СОЗ3, для усунення можливого взаємовпливу з боку ОАКТ-А. Яванським макакам вводили інертний носій - контроль в 1 день, після чого вводили 4 щотижневі інфузії або інертний носій (група 1), або САКТ-А, що вводиться у вигляді 4-денних інфузій щотижня, починаючи з 8 дня, в 15, 22 і 29 день (група 5) або у вигляді інфузії 7 днів на тиждень протягом 4 тижнів, починаючи на 8 день (група 6). Інтервали лікування зазначені сірими колонками. Показано середнє ж 5ЕМ від абсолютної кількості циркулюючих у кровотоці Т-клітин по днях дослідження і по групах (фігури З1А-31С). Показані відносні значення (середній відсоток - БЕМ) СО25ж, СОбою, РО-1 і
Тіт-З- на СО4 (фігури 310-31Є) або СО8 Т-клітинах (фігури З1Е-31Н) по днях дослідження і по групах.
На фігурі З2А-32Е показані спостережувані зміни в СО4--Т-клітинних популяціях (фігури 32А- 32) і СО8Т-клітинних популяціях (фігури 3200-32) під час і після безперервної 7-денної інфузії рАВТ-А. Показано середнє х 5ЕМ у відсотках від СО25.ж, СОбожю, РО-1.к і Тіт-З- на СО4 (фігури
З2А-32С) або СО8 (фігури 320-32Е) Т-клітинах по днях дослідження і по групах 2, З і 4.
Інтервали лікування зазначені сірими колонками. Легенда: СО25-- (сірі квадрати); СОб9-- (сірі трикутники), РО-1-- (білі трикутники); Тіт-3- (білі квадрати).
На фігурі ЗЗА-3ЗЕ показані спостережувані зміни в СО4-«Т-клітинних популяціях (фігури ЗЗА- 33С) і СО8Т-клітинних популяціях (фігури 330-33Е) під час і після безперервної 7-денної інфузії рАВТ-А. Показано середнє х 5ЕМ у відсотках від СО4ж наївних клітин (С095-/0028-), СМТ (с0р95-/002в8ж) і ЕМТ (2095-4/С2028-) Т-клітин в СО4ж популяції (фігури ЗЗА-33С) або СО8 популяції (фігури 330-3ЗЕ) по днях дослідження і по групах 2, З і 4. Яванським макакам вводили інертний носій - контроль в 1 день, після чого вводили 4 щотижневих інфузії або інертний носій 60 або САКТ-А, що вводиться у вигляді 4-денних інфузій щотижня, починаючи з 8 дня, в 15, 22 і 29 день (групи 2-4). Інтервали лікування зазначені сірими колонками. Легенда: наївні клітини (білі трикутники); СМТ (чорні трикутники), ЕМТ (сірі квадрати).
На фігурі 34 показана опосередкована САКТ-А цитотоксичність проти клітин Казиті-3 з
РВМС або від мавп, які не зазнали впливу, або мавп, що одержали лікування за допомогою численних інфузій ОАКТ-А.
На фігурах 35А-35Е показано, що вплив САКТ-А підвищував відносну частоту центральних
Сра4 клітин пам'яті та ефекторних СО8 в клітин пам'яті за рахунок відповідної раніше не підданої впливам Т-клітинної популяції. Показано середнє їх ЗЕМ у відсотках від СО4-- наївних клітин (сб0р95-2028я53, СМТ (2095-2028) ії ЕМТ (2б095-/2028-) Т-клітин в СО4-- популяції (фігури
ЗБА-35С) або в СО8-- популяції (фігури 350-35Е по днях дослідження і по групах. Яванським макакам вводили інертний носій - контроль в 1 день, після чого вводили 4 щотижневих інфузії або інертний носій (група 1), або САКТ-А, що вводиться у вигляді 4-денних інфузій щотижня, починаючи з 8 дня, в 15, 22 і 29 день (група 5) або у вигляді інфузії 7 днів на тиждень протягом 4 тижнів, починаючи на 8 день (група 6). Інтервали лікування зазначені сірими колонками.
Легенда: наївні (білі трикутники); СМТ (чорні трикутники), ЕМТ (сірі квадрати).
На фігурах З6А-36Е показано ефект САКТ-А на параметри еритроцитів у мавп, які одержали інфузії молекул. Показані вмісти циркулюючих еритроцитів (фігури З6А-36С) або ретикулоцитів (фігури 3600-36) (середнє х 5ЕМ) у зразках, зібраних у зазначені часові точки від мавп, що одержали лікування за допомогою САКТ-А.
На фігурах 37А-37В показана частота зустрічальності (середній відсоток є ЗЕМ) СО123 клітин (фігура 37А) або НЗС (С034-7С2038-/26045-/26090-- клітин) (фігура 37В) в Гіп- клітинній популяції в зразках кісткового мозку, зібраних у зазначені часові точки від мавп, що одержали лікування за допомогою САКТ-А. Яванським макакам вводили інертний носій - контроль в 1 день, після чого вводили 4 щотижневих інфузії або інертний носій (група 1), або ОАКТ-А, що вводиться у вигляді 4-денних інфузій щотижня, починаючи з 8 дня, в 15, 22 і 29 день (групи 2-5) або у вигляді інфузії 7 днів на тиждень протягом 4 тижнів, починаючи на 8 день (група 6).
Докладне розкриття даного винаходу
Даний винахід відноситься до характерних оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних моновалентних диатіл, які здатні одночасно зв'язуватися з СО123 і СОЗ, Її до
Зо застосувань таких молекул у лікуванні гематологічних злоякісних пухлин. Незважаючи на те, що неоптимізовані СО123 х СОЗ біспецифічні диатіла є повністю функціональними, аналогічно вдосконаленням, отриманим в експресії генів за допомогою оптимізації кодонів (див., наприклад, Стговієап, Н. єї аї. (1982) "Ргєїегепіїа! Содоп Озаде Іп РгоКагуоііїс Сепевз: Те Оріїтаї!
Содоп-Апіїсодоп Іпіегасіп Епегау Апа Тне Зеїесіїме Содоп Озаде Іп ЕНісіепну Ехргеззей Сепев"
Сепе 18(3):199-209), можливо додатково підсилити стабільність і/або функцію СО123 х СОЮЗ біспецифічних диатіл шляхом модифікації або оптимізації їх послідовностей.
Переважні СО123 х СОЗ біспецифічні диатіла згідно із даним винаходом складаються із щонайменше двох поліпептидних ланцюгів, які асоціюються один з одним з утворенням одного сайту зв'язування, специфічного у відношенні епітопа СО123, і одного сайту зв'язування, специфічного у відношенні епітопа СОЗ (фігура 2). Окремі поліпептидні ланцюги диатіла ковалентно зв'язані один з одним, наприклад, шляхом зв'язування дисульфідним зв'язком цистеїнових залишків, розташованих у межах кожного поліпептидного ланцюга. Кожний поліпептидний ланцюг містить антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга, антигензв'язуючий домен варіабельного домена важкого ланцюга і домен гетеродимеризації. Проміжний лінкерний пептид (лінкер 1) відокремлює антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга від антигензв'язуючого домена варіабельного домена важкого ланцюга. Антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга першого поліпептидного ланцюга взаємодіє з антигензв'язуючим доменом варіабельного домена важкого ланцюга другого поліпептидного ланцюга з утворенням першого функціонального антигензв'язуючого сайту, який є специфічним відносно першого антигену (тобто або СО123, або СО3). Аналогічно, антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга другого поліпептидного ланцюга взаємодіє з антигензв'язуючим доменом варіабельного домена важкого ланцюга першого поліпептидного ланцюга з утворенням другого функціонального антигензв'язуючого сайту, який є специфічним відносно другого антигену (тобто або СО123, або СОЗ, залежно від ідентичності першого антигену). Таким чином, вибір антигензв'язуючого домена варіабельного домена легкого ланцюга та антигензв'язуючого домена варіабельного домена важкого ланцюга першого і другого поліпептидних ланцюгів скоординований так, щоб два поліпептидні ланцюги спільно містили антигензв'язуючі домени варіабельних доменів легкого та важкого ланцюга, здатні зв'язуватися з СО123 і СО3.
Утворення гетеродимерів першого і другого поліпептидних ланцюгів може керуватися доменами гетеродимеризації. Такі домени містять у собі ЗМЕРКЗС (5БО ІЮО МО:50) (або
МЕРКЗБС; 5ЕО ІЮ МО:51) на одному поліпептидному ланцюзі і ЗЕМКОСЕС (5ЕО ІЮ МО:52) (або
ЕМКОЕС; 5БЕО ІЮ МО:53) на іншому поліпептидному ланцюзі (052007/0004909). Альтернативно, такі домени можна сконструювати так, щоб вони містили спіралі протилежних зарядів. Домен гетеродимеризації одного з поліпептидних ланцюгів містить послідовність щонайменше із шести, щонайменше із семи або щонайменше з восьми позитивно заряджених амінокислот, і домен гетеродимеризації іншого поліпептидного ланцюга містить послідовність щонайменше із шести, щонайменше із семи або щонайменше з восьми негативно заряджених амінокислот.
Наприклад, перший або другий домен гетеродимеризації переважно буде містити послідовність із восьми позитивно заряджених амінокислот, і інший з доменів гетеродимеризації переважно буде містити послідовність із восьми негативно заряджених амінокислот. Позитивно заряджена амінокислота може являти собою лізин, аргінін, гістидин і т. д. лабо негативно заряджена амінокислота може являти собою глутамінову кислоту, аспарагінову кислоту і т. д. Позитивно заряджена амінокислота переважно являє собою лізин і/або негативно заряджена амінокислота переважно являє собою глутамінову кислоту.
СсО0123 х СОЗ біспецифічні диатіла згідно із даним винаходом сконструйовані так, щоб такі перші і другі поліпептидні ланцюги були ковалентно зв'язані один з одним за допомогою цистеїнових залишків уздовж їх довжини. Такі цистеїнові залишки можуть бути введені в проміжний лінкер, який відокремлює домени Мі і МН поліпептидів. Альтернативно і більш переважно, другий пептид (лінкер 2) введений у кожен з поліпептидних ланцюгів, наприклад, на амінокінці поліпептидних ланцюгів або в положенні, яке поміщає лінкер 2 між доменом гетеродимеризації і антигензв'язуючим доменом варіабельного домена легкого ланцюга або варіабельного домена важкого ланцюга.
Згідно з конкретними варіантами здійснення характерні оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічні моновалентні диатіла згідно із даним винаходом додатково містять домен
Ес імуноглобуліну або альбумінзв'язуючий домен для збільшення періоду напівжиття іп мімо.
СО0123 х СОЗ3 біспецифічні моновалентні диатіла згідно із даним винаходом, які містять домен Ес імуноглобуліну (тобто СО123 х СОЗ біспецифічні моновалентні Ес - диатіла)
Зо складаються з першого поліпептидного ланцюга, другого поліпептидного ланцюга і третього поліпептидного ланцюга. Перший і другий поліпептидні ланцюги асоціюються один з одним з утворенням одного сайту зв'язування, специфічного у відношенні епітопа СО123, і одного сайту зв'язування, специфічного у відношенні епітопа СЮОЗ. Перший поліпептидний ланцюг і третій поліпептидний ланцюг асоціюються один з одним з утворенням домена Ес імуноглобуліну (фігура ЗА і фігура ЗВ). Перший і другий поліпептидні ланцюги біспецифічного моновалентного
Ес - диатіла ковалентно зв'язані один з одним, наприклад, шляхом зв'язування дисульфідним зв'язком цистеїнових залишків, розташованих у межах кожного поліпептидного ланцюга.
Перший і третій поліпептидні ланцюги ковалентно зв'язані один з одним, наприклад, шляхом зв'язування дисульфідним зв'язком цистеїнових залишків, розташованих у межах кожного поліпептидного ланцюга. Кожний з першого і другого поліпептидних ланцюгів містить антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга, антигензв'язуючий домен варіабельного домена важкого ланцюга і домен гетеродимеризації. Проміжний лінкерний пептид (лінкер 1) відокремлює антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга від антигензв'язуючого домена варіабельного домена важкого ланцюга. Антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга першого поліпептидного ланцюга взаємодіє з антигензв'язуючим доменом варіабельного домена важкого ланцюга другого поліпептидного ланцюга з утворенням першого функціонального антигензв'язуючого сайту, який є специфічним відносно першого антигену (тобто або СО123, або СОЮЗ). Аналогічно, антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга другого поліпептидного ланцюга взаємодіє з антигензв'язуючим доменом варіабельного домена важкого ланцюга першого поліпептидного ланцюга з утворенням другого функціонального антигензв'язуючого сайту, який є специфічним відносно другого антигену (тобто або СОЗ, або СО123, залежно від ідентичності першого антигену). Таким чином, вибір антигензв'язуючого домена варіабельного домена легкого ланцюга та антигензв'язуючого домена варіабельного домена важкого ланцюга першого і другого поліпептидних ланцюгів скоординований так, щоб два поліпептидні ланцюги спільно містили антигензв'язуючі домени варіабельних доменів легкого та важкого ланцюга, здатні зв'язуватися з СО123 і СОЗ. Кожний з першого і третього поліпептидних ланцюгів містять деяку частину або весь домен СН2 і/або деяку частину або весь домен СНЗ повного домена Ес імуноглобуліну і цистеїнмісткий пептид. Деяка частина або весь домен СНЗ2 і/або деяка частина 60 або весь домен СНЗ асоціюються з утворенням домена Ес імуноглобуліну біспецифічних моновалентних Ес - диатіл згідно із даним винаходом. Перший і третій поліпептидні ланцюги біспецифічних моновалентних Ес - диатіл згідно із даним винаходом ковалентно зв'язані один з одним, наприклад, шляхом зв'язування дисульфідним зв'язком цистеїнових залишків, розташованих у межах цистеїнмісткого пептиду поліпептидних ланцюгів.
І. Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, "ВАВТ-А"
Згідно із даним винаходом передбачено біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю, здатне одночасно і специфічно зв'язуватися з епітопом СО123 і з епітопом СОЗ ("СбО123 х СО3" біспецифічне диатіло або САКТ-А). Як обговорюється нижче, виявлено, що ЮБАКТ-А проявляє підвищену функціональну активність щодо інших, що характеризуються неоптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл подібної сполуки, і, у зв'язку із цим, називається "що характеризується оптимізованою послідовністю"
СО0123 х СОЗ біспецифічне диатіло.
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАВТ-А) містить перший поліпептидний ланцюг і другий поліпептидний ланцюг. Перший поліпептидний ланцюг біспецифічного диатіла буде містити, у напрямку від М-кінця до С-кінця,
М-кінець, варіабельний домен легкого ланцюга (домен МІ) моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МІ соз), проміжний лінкерний пептид (лінкер 1), варіабельний домен важкого ланцюга (домен УН) моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (МНеоігз), і С- кінець. Переважна послідовність такого домена Мі соз являє собою 5ЕО ІЮ МО:21:
ОАУМТОЕРБІ ТУ5РОСТМУМТІ ТСВ5ЗТОаАМТТЗМУАМИМУМООКРИасСАРВИ СС ТМКААРМУТРАВН
ЕЗОаБІ І! ЧСОКААЇ ТІТИАОАЕОЕАрУМСАЇ М УЗМІ МУУРасаТткі тм а
Антигензв'язуючий домен Мі соз містить СОКІ 5ЕО ІЮ МО:38: КЗ55ТОАМТТЗММУАМ, СОК2
ЗЕО Ір МО:39: СТМКЕАР і СОКЗ 5ЕО ІЮ МО:40: А М/УЗМІ ММ.
Переважна послідовність такого лінкера 1 являє собою 5ЕБЕО ІЮ МО:29: СбОо5ООО0.
Переважна послідовність такого домена МНсо:гз являє собою 5ЕО ІЮ МО:26:
ЕМО МОБОАЕЇ ККРІАБЗБУКУЗСКАЗИахУТЕТОУУМКУУВОАРИОСІЇ ЕМО ОПРОМИАТЕММОКЕ
КавмтІТМОКЗТЗТАУМЕЇ 551 В5ЕОТАМУУСАВЗНІ Ї ВАБМУБАУУСОСТІ МТУ
Антигензв'язуючий домен МНеоїгз містить СОКІ 5ЕО І МО:47: ЮМУМК, СОК2 5ЕО ІЮ
Зо МО:48: ОПРОЗМСОСАТЕУМОКЕКО і СОКЗ 5ЕО ІЮО МО:49: ЗНІ І КА.
Другий поліпептидний ланцюг буде містити, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М-кінець, домен Мі моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (Мі соїгз3), проміжний лінкерний пептид (наприклад, лінкер 71), домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНеоз), і С-кінець. Переважна послідовність такого домена Мі соігз являє собою 5ЕО ІЮ МО:25:
ВЕММТО5РОБІ АМ5І СЕВНУТМЗОСКОЗОБИ МЗаМОКМУЇ ПУМООКРООРРКОИ ТММ АЗТВЕЗО
УєхРОовЕЗаЗазатовТІ ТЗІ ОДЕОМАУУУСОМОМЗУРМТЕСОСТКІ БІК
Антигензв'язуючий домен Мі соїгз містить СОКІ 5ЕО ІЮ МО:44: К55ОБІ ЇЇ М5ОМОКМТІ т,
СОМ2 ЗЕО ІЮ МО:45: МАЗТКЕЗ і СОКЗ 5ЕО ІЮ МО:46: ОМОМ5УРУТ.
Переважна послідовність такого домена МНсоз являє собою 5ЕО ІЮ МО:22:
ЕМО МЕЗОСИЇ МОРОИБІ ВІ БСААЗОЕТЕЗТМАММУ УВО РОКИ ЕУМавІВЗКУММУАТУМА
ОБМУМКОВЕТІЗАВОБКМ5І М ОММ5І КТЕОТАУУУСУВНОаМЕеаМОуУ УМ ЕАУМУусОС,ТІ УТУ55
Антигензв'язуючий домен МНсоз містить СОМК1Т ЗЕО ІЮ МО:41: ТМАММ, СОК2 5ЕО І МО:42:
ВІВЗКУММУАТУМАрЗМКО і СОКЗ 5ЕО ІЮ МО:43: НОМЕОМЗУУЗМУБАХ.
Біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом сконструйовані так, щоб перший і другий поліпептиди були ковалентно зв'язані один з одним за допомогою цистеїнових залишків по їхній довжині. Такі цистеїнові залишки можуть бути введені в проміжний лінкер (наприклад, лінкер 1), який відокремлює домени МІ ії МН поліпептидів. Альтернативно і більш переважно, другий пептид (лінкер 2) введений у кожний поліпептидний ланцюг, наприклад, у положенні на М-кінці відносно домена Мі або на С-кінці відносно домена МН такого поліпептидного ланцюга. Переважна послідовність такого лінкера 2 являє собою ЗЕО ІЮ МО:30: ССО.
Утворення гетеродимерів може керуватися за допомогою додаткової інженерії таких поліпептидних ланцюгів, щоб вони містили поліпептидні спіралі протилежних зарядів. Таким чином, згідно із переважним варіантом здійснення один з поліпептидних ланцюгів буде сконструйований так, щоб він містив "Е-спіральний" домен (ЗБО 10 /МО:34:
ЕМААГЕКЕМААГЕКЕМААГЕКЕМААГЕК), чиї залишки утворюють негативний заряд при рнН 7, тоді як інший із двох поліпептидних ланцюгів буде сконструйований так, щоб містити "К- спіральний" домен (5ЕБО ІЮ МО:35: КМААГКЕКМААЇКЕКМААЇІКЕКМААЇКЕ), чиї залишки утворюють позитивний заряд при рН 7. Присутність таких заряджених доменів забезпечує асоціацію між першим і другим поліпептидами й, таким чином, сприяє гетеродимеризації.
Несуттєво, яка спіраль забезпечується першим або другим поліпептидними ланцюгами.
Проте, переважно, біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю ср123 х СОЗ згідно із даним винаходом ("БАКТ-А") містить перший поліпептидний ланцюг, який характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО':1):
ОАУМТОЕРБІ ТУ5РОСТМУМТІ ТСВ5ЗТОаАМТТЗМУАМИМУМООКРИасСАРВИ СС ТМКААРМУТРАВН
ЕЗОаБІ І! ЧСОКААЇ ТІТаАОАЕОЕАрУМСАЇ М УЗМІ УУгсса7ткі тм ссвазасасЕМОЇ МОаИАЕЇ
ККРОАБУКУЗСКАБаМТЕТОУУМКУМВОАРООСТ ЕМІСОПРОМОАТЕУМОКеЕКИ ВМТ мок
АУМЕГ 551 А5ЕОТАМУУСАВЗНІ І ВАМ РАМ УУусОС,сТІ УТУЗасСИасаЕМААЕКЕМААЇ ЕКЕМАА
ІГЕКЕМААГ ЕК
Ланцюг 1 САКТ-А складається з наступного: БЕО ІЮ МО:21 - БЕО ІЮ МО:29 - БЕО ІЮ МО:С26 -
ЗЕО ІЮ МО:30 - БЕО ІЮ МО:34. Кодуючий ланцюг 1 САКТ-А полінуклеотид являє собою 5ЕО ІЮ
МО:с2: саддсідюдідасісаддадсснсасідассдідіссссаддсддаасідідасссідасадсадаїссадсасаддсдсадщда ссасаїсіаасіасдссаайдддіясадсадаадссаддасаддсассааддддссідаїсдддддаіасааасаааадддсіссса ассссідсасдайнсіддаадісідсюдддсоддаааддссодсісідасіанассдддасасаддассдаддасдаадссданасіаняої дсісідюдіаіадсааєсідддансоаддададдсасаааасюдасідосідддаддададчоаїссддсдоасддаддсдаддаодса дсюддіадсадіссддддседадсідаадааасссддадсіссдідаадащісндсааадссадіддсіасасснсасадасіасіаїаї даадідддісаддасаддсіссаддасадддасіддааі(ддаісодсдаїаісанссиссаасдддассасцісіасааіїсадаадащтшаа аддсаддаюдасіанНассодюддасаааїсаасаадсасідснагадчдадсдадсісссідсдсісідаадаїасадссоаюіасіандю сісддісасассідсідададссадсідашоснандаддасаддоасасссіддідасадщіснссодадаашдіяддсдадодавчаасді дассдсасіддадааададданосідстодадааддаадаісдсдсасідааааддаддісдсадсссіддадааа
Другий поліпептидний ланцюг САНТ-А характеризується наступною послідовністю (ЗЕО ІЮ
МО:3):
ВЕММТО5РОБІ АМ5І СЕВНУТМЗОСКОЗЗОБИ МЗаМОКММІ ПУМООКРООРРК МУ АЗТВЕЗОа
УєРОовЕЗаЗазатовТтІ ТЗІ ОАДЕОМАУУУСОМОМЗУРУТРСОСТКІ ЕІКССОСЗОСИ,СЕМОЇ МЕЗО са МОРааБІ ВІ ЗСААЗаєТЕЗТМАММУМУУВОАРОаКаИаї ЕУУМавіВЗКУМММАТУМАОЗУКОВЕТІЗА рОБКМ5І М ОММ5ЗІ КТЕОТАУУУуСУВВНЕОМеаМЗУУ УМА аОоС,сТтІ УтУЗааСасакмМААІ КЕК
Зо МААЇ КЕКМААЇ КЕКМААЇ КЕ
Ланцюг 2 САКТ-А складається з наступного: БЕО ІЮ МО:25 - БЕО ІЮ МО:29 - БЕО ІЮ МО:22 -
ЗЕО ІЮ МО:30 - БЕО ІЮ МО:35. Кодуючий ланцюг 2 САРБТ-А полінуклеотид являє собою 5ЕО ІЮ
МО:А: даснсдюдаїдасасацдісіссідаїадісіддссодадвісіддддаадсддадідасіаісндсаададсісссадісасідсда асадсддаааїсадааааасіаісідассіддіассадсадаадссаддссадсссссіааасідсідаїсіандддснссассадада асіддсддсссдасадансадсддсадсддсадсддсасаданнасссідасаацшсіадісюсаддссдаддасдюдсідщіа сіандісадааїдайцасадсіаїсссіасаспсддссадддадассаадсіддааайаааддаддсддаїссддсадсдааддсдад дідсадсіддіддадісюдаддаддснодіссадссіддадддісссідадасісіссіїдсадссісюдайсассіїсадсасаїасдс їаїдаанпдодіссдссаддсіссадддааддддсіддадідаднодааддаїсаддіссаадіасаасаанаїдсаассіасіаїдссо асісюі(дааддаіадайсассаїсісаадададаїйсааадаасісасіціаісідсаааїдаасадссідаааассдаддасасддсс діїанасюцідідадасасодіаасісддсаанснасощіснДдшщаснНапддадасаддддасасіддідасідщісноссдддадаа тіддсоадіддаааадіддссдсасідааддчадааадндсідсіндааададааддісдссдсаснааддааааддісдсадсссюда аадад
Як обговорюється нижче, виявлено, що, біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) характеризується здатністю одночасно зв'язувати СО123 і СОЗ клітини як людини, так і мавпи. Виявлено, що забезпечення ОАКТ-А викликало Т-клітинну активацію, опосередковувало зменшення бластних клітин, керувало експансією Т-клітинної популяції, індуціювало Т-клітинну активацію і викликало переспрямований цитоліз злоякісних клітин - мішеней.
ІЇ. Біспецифічне диатіло порівняння, що характеризується неоптимізованою послідовністю
СОр123 х СОЗ, "САВТ-В"
РАВТ-В являє собою, біспецифічне диатіло, що характеризується неоптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що характеризується макроструктурою, подібною з такою в САКТ-
А. Перший поліпептидний ланцюг САКТ-В буде містити, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М- кінець, домен МІ моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (Мі соз), проміжний лінкерний пептид (лінкер 1), домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з
СО123 (МНеоігз), проміжний лінкер 2, Е-спіральний домен і С-кінець. Домен Мі соз першого поліпептидного ланцюга САКТ-В характеризується наступною послідовністю (ЗЕО ІЮО МО:23):
РІОГТО5РАІМ5АЗРЕИЕКУТМТСВАЗОЗЗУЗУММУ УООКатЗРКАУМУОТЗКМАБОаУРУВЕЗИа5 бо аБИатТ5У5І ТІЗЗМЕАЕВААТУУСООМЗ5ЗМАРІ ТЕаАСТКІ ЕІ К
Домен МНоеоїгз першого поліпептидного ланцюга БАКТ-В характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:28):
ОМОГ МОБОАЕЇ ККРОАЗУКУЗСКАБОаМ ТЕТОУУМКУУВОАРИаСаї ЕМІСОПРОМОАТЕММОКЕ
КавмтІТМОКЗТЗТАУМЕЇ 551 В5ЕОТАМУУСАВЗНІ Ї ВАБМУБАУУСОСТІ МТУ
Таким чином, ланцюг 1 САКТ-В складається з наступного: БЕО ІЮО МО:23 - БЕО ІЮ МО:29 -
ЗЕО ІЮ МО:28 - БЕО ІЮ МО:30 - 5ЕО ІЮ МО:34. Послідовність першого поліпептидного ланцюга рАВТ-В являє собою наступне (5ЕО ІЮО МО:5):
РІОГТО5РАІМ5АЗРЕИЕКУТМТСВАЗОЗЗУЗУММУ УСОКатЗРКАУМЛУЮТЗКМАБамМуРУВЕбИа5 аБИатТ5У5І ТІЗЗМЕАЕВСААТУУСООМ5ЗМРІ ТРЕОАСТКГЕЇ КсаСИаапасвомМоО! МОБСОАЕЇ ККРО
АБУКУЗСКАБЗИачУТЕТОУУМКУМУВОАРИСИЇ ЕМІСОПРОМОаАТЕММОКЕКаТвВмМТтМОКЗТЗТАММЕ
І 55І А5ЕОТАУУУСАВЗНІ І ВАБМ/ РАМУ СпИСТІ УТУЗасСИасаЕМААЕКЕМААЇ ЕКЕМААЇ ЕКЕ
МААЇ ЕК
Кодуючий ланцюг 1 САКТ-В полінуклеотид являє собою 5ЕО ІЮ МО:6: дасайсадсідасссадісіссадсааїсаїдісідсаїсіссадддададааддісассадассідсададссадіїсаадчідіаацді іїіасадаасіддіассадсадаадісаддсассісссссаааададдащшаїдасасаїссаааддадснсіддадісссНаїсдснса ддасаддддісддчодассісаїасісісісасааісадсадсаддаддсідаадаїдсідссаснанасідссаасадюддацдіадіаа сссдсісасойсддіасідддассаадсіддадсідаааддадоасддаіїссддсддсаддаддссаддідсадсіддідсадієс9994 сюадсідаадааасссддадснссодідааддаідціснодсааадссадіддсіасассіїсасадасіасіаїадаадідддісаддсадад сіссаддасадддасіддааддаісддсодаїаїсанссіїссаасдддадссасшсіасааіїсадаадшаааддсадддадасіанас сдддасаааїісаасаадсасідснаіа(дчдадсюдадсісссідсдсісідаадаїасадссдідіасіанодідсісддісасассідсщда дадссадсіддашоснайддддасадддсасссіддідасадщіснссддададашіддсадіддадаадддссдсасіддадааа даддандасюстоддадааддаададісдсідсаспдааааддаддісдсадсссіддадааа
Другий поліпептидний ланцюг САКТ-В буде містити, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М- кінець, домен Мі. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (Мі соїгз), Проміжний лінкерний пептид (лінкер 1) і домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНеоз), проміжний лінкер 2, К-спіральний домен і С-кінець.
Домен Мі соїгз другого поліпептидного ланцюга ОАКТ-В характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:27):
ВЕММТО5РОБІ АМ5І СЕВНУТМЗОКОЗЗОБИ МЗаМОКММ ПУМООКРООРРКОИ ІМУУАЗТВЕЗОа
Зо УєхРОовЕЗаЗазатовТІ ТЗІ ОДЕОМАУУУСОМОМЗУРМТЕСОСТКІ БІК
Домен МНсоз другого поліпептидного ланцюга ОАКТ-В характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:24):
РІКГІОО5СОСАЕЇ АВРОАЗУКМЗСКТЗаМУТЕТАУТМНУУКОВРИаСаї ЕУЛаміМРЗНам ГТМУМОК
ЕКОКАТІ ТТОКЗЗЗТАУМОЇ 551 Т5ЕОБАУУУСАВНУМООНУСІ ОУМУуСсОСТТ ТУ
Таким чином, ланцюг 2 САКТ-В складається з наступного: БЕО ІЮО МО:27 - БЕО ІЮ МО:29 -
ЗЕО ІЮ МО:24 - 5ЕО ІЮ МО:30 - БЕО ІЮ МО:35. Послідовність другого поліпептидного ланцюга рАВТ-В являє собою наступне (5ЕО ІЮ МО:7):
ВЕММТО5РОБІ АМ5І СЕВНУТМЗОСКОЗЗОБИ МЗаМОКММІ ПУМООКРООРРК МУ АЗТВЕЗОа
УєхРОовЕЗаЗазатовТтІ ТЗІ ОАДЕОМАУУУСОМОМЗУРМУТРСОСТКІ ЕІКСОСОЗССІСОІКІ О0ОБИаА
ЕГАДРЕИАЗУКМЗСКТЗамхтТЕТАМТМНУМКОАРИОСІЕММОМІМРЗВаМТМУМОКЕКОКАТІ ТОК
ЗЗТАУМОЇ 551 ТЗЕОЗБАМУУСАВУМОоОоНУСІ ОМмУуУсОСсТ тУЗЗОС,СИааакМААІ КЕКМААЇ КЕКМ
ААЇ КЕКМААЇІ КЕ
Кодуючий ланцюг 2 САКТ-В полінуклеотид являє собою 5ЕО ІЮ МО:8:
Саснсаїдаїдасасадісіссідаіадісіддссуаюавдісіддадоааасоддаюдасіацісносаадаасісссадісастідсюда асадсддаааїсадааааасіаісідассіддіассадсадаадссаддссадсссссіааасідсідаїстандддсіссассаддда асіддсддсссдасаданйсадсдасадсддсадсддсасадайнНасссюасаанісіадісюсаддссдаддасаюдадсідщіа сіандісадааїдайасадсіаїсссіасаспсддссаддддассаадсідчааанйаааддаддсддаїссддсадсдаадоасодаїа ісааасідсадсадісаддддсдаасіддсаадассіддддссісадідаадащціссідсаадасісіддсіасасстасіадаїаса сдадсасідддіаааасададдссюдасадддісіддаадданддагасанааїссіадссудонНагасіаацасааісадааднс ааддасааддссасандасіасадасаааїссіссадсасадссіасаддсаасідадсадссдасаїсідаддасісюдсадісіана сюдсаадайанащдаюаїсанасідссідасіасіддддссааддсассасісісасадісіссіссддаддаціддсоддідавдаааад їддссадсасдааддадааадноасідстоааададааддісдссдсаснааддааааддісдсадсссідааадад
І. Модифіковані варіанти біспецифічного диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А)
А. Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що містить альбумінзв'язуючий домен (ФБАКТ-А з АВО "м/АВО")
Згідно із другим варіантом здійснення згідно із даним винаходом, біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) буде містити один або декілька альбумінзв'язуючих доменів (АВО" (ФАКТ-А з АВО "м/АВО") на одній або обох 60 поліпептидних ланцюгах диатіла.
Як розкрито в міжнародній патентній публікації Ме УМО 2012/018687, для поліпшення іп мімо фармакокінетичних властивостей диатіл, диатіла можна модифікувати так, щоб вони містили поліпептидну частину білка, що зв'язується із сироватковими білками, на одному або декількох кінцях диатіла. Така поліпептидна частина білка, що зв'язується із сироватковими білками, найбільш переважно буде вбудована на С-кінці молекули диатіла. Особливо переважна поліпептидна частина білка, що зв'язується із сироватковими білками, для цієї мети являє собою альбумінзв'язуючий домен (АВО) з білка З стрептокока. Альбумінзв'язуючий домен З (АВОЗ) білка С штаму 5ігеріососси5 148 є особливо переважним.
Альбумінзв'язуючий домен З (АВОЗ) білка С штаму 5ігеріососси5 5148 складається з 46 амінокислотних залишків, що утворюють стабільну трьохспіральну структуру і характеризується широкою альбумінзв'язуючою специфічністю (допапе5оп, М.О. еї аї. (2002) "Бігисіиге, Зресійсіку,
Апа Моде ОЇ Іпіегасіїоп Рог Васієгіа! АІритіп-Віпаіпд Модиїев, " У. Віої. Спет. 277(10):8114-8120).
Альбумін являє собою найпоширеніший білок у плазмі і характеризується періодом напіввиведення, що становить 19 днів у людей. Альбумін містить декілька низькомолекулярних сайтів зв'язування, які дозволяють йому нековалентно зв'язуватися з іншими білками і, тим самим, продовжувати їхні періоди напівжиття в сироватці.
Таким чином, перший поліпептидний ланцюг такого біспецифічного диатіла, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що містить альбумінзв'язуючий домен, містить третій лінкер (лінкер 3), який відокремлює Е-спіраль (або К-спіраль) такого поліпептидного ланцюга від альбумінзв'язуючого домена. Переважна послідовність такого лінксера З являє собою ЗЕО ІЮ МО:31: 50505. Переважний альбумінзв'язуючий домен (АВО) характеризується наступною послідовністю (ЗЕО ІО МО:36):
ГАЄАКМІ АМАЕГОКМаУЗОМУКМІ ІОМАКЗАЕСУКАПІОЕЇЇГ ААЇ Р.
Таким чином, переважний перший ланцюг, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла, що містить альбумінзв'язуючий домен, характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:9):
ОАУМТОЕРБІ ТУ5РОСТМУТІ ТАЗ ТАМ ТТ ЗМУАМУМУМООКРИООСАРВИГ ІС ТМКААРМУТРАН
ЕЗОаБІ І! ЧСОКААЇ ТІТаАОАЕОЕАрУМСАЇ М УЗМІ УУгсса7ткі тм ссвазасасЕМОЇ МОаИАЕЇ
ККРОАБУКУЗСКАБаМТЕТОУУМКУМВОАРООСТ ЕМІСОПРОМОАТЕУМОКеЕКИ ВМТ мок
Зо АУМЕГ 551 А5ЕОТАМУУСАВЗНІ І ВАБУУРАУУуСсОС,ТІ МУТУЗЗПаССИ,асСсЕМААЇ ЕКЕМААЇ ЕКЕМАА
ГЕКЕМААЇ ЕКОСІИ5І АЕАКМІ АМАЕЇ ОКУ УОМУКМИПОМАКЗАЕСУКАПІОБЕЇ ГГ ААЇ Р
Диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ диатіло, що містить альбумінзв'язуючий домен, складається з: БЕО ІЮ МО:21 - БЕО ІЮ МО:29 - БЕО ІЮ МОС26 - ЗЕБЕО ІВ МО:30 - БЕО ІЮ МО:34 - 5ЕО 10 МО:31 - БЕО ІЮО МО:36. Полінуклеотид, що кодує таке диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що містить дериватив альбумінзв'язуючого домена, являє собою 5ЕО ІЮ МО:10: саддсідюдідасісаддадсснсасідассощдіссссаддсддаасідідасссідасаїддсадаїссадсасаддасдсадіда ссасаїсіаасіасдссаайдддіясадсадаадссаддасаддсассааддддссідаїсдддддаіасааасаааадддсіссса ассссідсасдайнсіддаадієідсдддсддаааддссдсісідасіанассддддсасаддссдаддасдаадссданастаної дсісідюдіаіадсааєсіаддансоаддададдсасаааасюдасідосідддаддддадчдаїссддсадсдааддсдадаюдса дсюддіадсадіссддддседадсідаадааасссддадсіссдідаадащісндсааадссадіддсіасасснсасадасіасіаїаї даадідддісаддсаддсіссаддасадддасіддааі(ддаісоддсдаїаісанссіссаасдаддссасінсіасааіїсадаадшаа аддсаддаюдасіанНассодюддасаааїсаасаадсасідснайадададсідадсісссідсдсісідаадаїасадссоіасіанодід сісддісасассідсідададссадсідашоснандаддасаддоасасссіддідасадщіснссодадаашдіяддсдадодавчаасді дассдсасіддадааадчадданосідстддадааддадаїсосідсасідааааддаддісдсадсссддадаааддсдасдадіс ісідссдаадсаааадіосіддссаассдсдаасіддаіаааіаюдсуададсдацнанНаїіаадаассідандасаасдсааааїсса сддааддсдідааадсасідайдащдааансіддссдсссідссі
Другий поліпептидний ланцюг такого диатіла, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3, що містить альбумінзв'язуючий домен, характеризується
БО послідовністю, описаною вище (5ЕБО ІЮО МО:3) і кодується полінуклеотидом, що характеризуються послідовністю 5ЕО ІЮ МО 4.
В. Біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що містять домен Ес Іде (БАКТ-А з Ес "Мми/гс")
Згідно із третім варіантом здійснення згідно із даним винаходом передбачено характеризуюче оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3 біспецифічне диатіло, що складається із трьох поліпептидних ланцюгів і, що містить домен Ес Ід (версія 1 і версія 2 рАВТА-А з Ес "м/Ес") (фігура ЗА-ЗВ).
Для утворення такого домена Ес ІдО перший і третій поліпептидний ланцюг диатіла містять, у напрямку від М-кінця до С-кінця, цистеїнмісткий пептид, (найбільш переважно пептид 1, що 60 характеризується амінокислотною послідовністю (ЗЕО ІЮ МО:55): ОКТНТСРРСР), деяку частину або весь домен СНАІ і/або деяку частину або весь домен СНЗ повного домена Ес імуноглобуліну і С-кінець. Деяка частина або весь домен СН2 і/або деяка частина або весь домен СНЗ3 асоціюються з утворенням домена Ес імуноглобуліну біспецифічних моновалентних утримуючих
Ес домен диатіл згідно із даним винаходом. Перший і другий поліпептидні ланцюги біспецифічних моновалентних Ес - диатіл згідно із даним винаходом ковалентно зв'язані один з одним, наприклад, шляхом зв'язування дисульфідним зв'язком цистеїнових залишків, розташованих у межах цистеїнмісткого пептиду поліпептидних ланцюгів.
Домени СН2 і/або СНЗ першого і третього поліпептидів необов'язково повинні бути ідентичними і переважно модифіковані так, щоб сприяти утворенню комплексу між двома поліпептидами. Наприклад, амінокислотна заміна (переважно заміна на амінокислоту, що містить об'ємну бічну групу, що утворює "виступ", наприклад, триптофан) може бути введена в домен СН2 або СНЗ так, щоб стеричний вплив запобігав взаємодії з аналогічно мутованим доменом і змушувало мутований домен утворювати пари з доменом, у якому була сконструйована комплементарна, або забезпечуюча розміщення мутація, тобто "западина" (наприклад, заміна на гліцин). Такі набори мутацій можна сконструювати в будь-якій парі поліпептидів, що містять молекулу біспецифічного моновалентного Ес - диатіла, і, крім того, сконструювати в будь-якій частині поліпептидних ланцюгів зазначеної пари. Способи білкової інженерії, щоб сприяти гетеродимеризації замість гомодимеризації, добре відомі в даній області техніки, зокрема, відносно інженерії імуноглобуліноподібних молекул, і передбачені в даному документі (див., наприклад, Кіддулау еї аї. (1996) "Кпорз-Іпіо-Ноїез' Епдіпеегіпд ОЇ Апіїрбоду СНЗ
Ботаїпе Рог Неаму СНаїп Неїегодітегігайоп, " Ргоїєїп Епадг. 9:617-621, Амуеї! єї аї. (1997) "Зтабіє
Неїегодітег5 Егот Ветоавєїїпд Те ЮОотаїп Іпіепасе ОЇ А Нотодітег О5іпд А Ріаде Оізріау
Мргагу, " У. Мої. Віої. 270: 26-35, апа Хіє еї аї. (2005) "А Мем Рогтаї ОЇ Візресіїйс Апіїбоду: Нідніу
ЕНісієепі Неїегодітегігайоп, Ехргеззіоп Апа Титог Сеї! Гувів, " У. Іттипої. Меїйоав 296:95-101; кожна з яких повністю включена в даний документ за допомогою посилання). Переважно, що "виступ" конструюють у доменах СН2-СНЗ першого поліпептидного ланцюга, а "западину" конструюють у доменах СН2-СНЗ третього поліпептидного ланцюга. Таким чином, "виступ" буде сприяти в запобіганні гомодимеризації першому поліпептидному ланцюгу за допомогою своїх доменів СН2 і/або СНЗ. Оскільки третій поліпептидний ланцюг переважно містить заміну, що
Зо забезпечує утворення "западини", вона буде гетеродимеризоватися з першим поліпептидним ланцюгом, а також гомодимеризоватися один з одним. Переважний виступ створюється шляхом модифікації домена Ес нативного домена Ес дос так, щоб вона містила модифікацію Т36бМУ.
Переважна западина створюється шляхом модифікації домена Ес нативного домена Ес Ідс, щоб вона містила модифікацію 73665, І З368А і У407М. Для сприяння в очищенні гомодимера третьому поліпептидному ланцюгу від кінцевого біспецифічного моновалентного Ес - диатіла, що містить перший, другий і третій поліпептидні ланцюги, сайт зв'язування з білком А доменів
СнН2г ї СНЗ третього поліпептидного ланцюга переважно піддають мутації за допомогою амінокислотної заміни в положенні 435 (Н435К). Таким чином, гомодимер третього поліпептидного ланцюга не буде зв'язуватися з білком А, тоді як біспецифічне моновалентне Ес - диатіло буде зберігати свою здатність зв'язувати білок А через сайт зв'язування з білком А на першому поліпептидному ланцюзі.
Переважна послідовність для доменів СН2 і СНЗ домена Ес антитіла, що присутня в першому поліпептидному ланцюзі, являє собою (ЗЕО ІЮ МО:56):
АРЕААСОИаРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМИМЕМНМАКТКРАЕЕ
ОММОТУАУМ5МІ ТМ НОБУУЛ МЕ КЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМ
ОМБІ МС УКОЕМРЗОІАМЕЖМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ЮОБраЗЕРІ ЗК ТМОКЗАУМООСМУЕЗОСБМ
МНЕАЇІ НМНУТОК5БІ 5І РОК
Переважна послідовність для доменів СН2 і СНЗ домена Ес антитіла, що присутня в третьому поліпептидному ланцюзі, являє собою (ЗЕО ІЮ МО:11):
АРЕААСОИаРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМИМЕМНМАКТКРАЕЕ
ОММОТУАУМ5МІ ТМ НОБУУЛ МЕ КЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКСОРАЕРОМУУТІ РРОВЕЕМТКМ
ОМ5І ЗСАУКагУРЗВІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5раЗЕРІ УК ТУоКЗАУМУОВаМУЕЗСОСВМ
МНЕАЇІ НМАУТОК5БІ ЗІ РОК
С. Конструкт версії 1 ОАКТ-А м/гс
Щоб проілюструвати такі Ес - диатіла, згідно із даним винаходом передбачено конструкт версії 1 ОАКТ-А м/Ес. Перший поліпептид конструкта версії 1 ОАКТ-А м/Ес містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М-кінець, домен МІ. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з
СО123 (Мі соіг2з), проміжний лінкерний пептид (лінкер 1), домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНсоз), лінкер 2, Е-спіральний домен, лінкер 5, пептид 1, 60 поліпептид, який містить домени СН2 і СНЗ домена Ес, і С-кінець. Переважний лінкер 5 характеризується послідовністю (5ЕСО ІЮ МО:32): 5600. Переважний поліпептид, який містить домени СНІ їі СНЗ домена Ес, характеризується наступною послідовністю (ЗЕО ІЮ МО:37):
АРЕААСОИаРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМИМЕМНМАКТКРАЕЕ
ОММОТУАУМ5МІ ТМ НОБУУЛ МЕ КЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМ
ОМБІ МС УКОЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБравзЕРІ ЗК ТМОКЗАМмОбаМУЕОБМ
МНЕАЇІ НМНУТОК5БІ ЗІ РОК
Таким чином, перший поліпептид такого конструкта версії 1 САКТ-А м/с складається з наступного: ЗЕО ІЮ МО:25 - БЕО ІЮ МО:29 - БЕО ІЮ МО:22 - БЕО ІЮ МО:30 - БЕО ІЮ МО:34 - БЕО
ІО МО:З32 - БЕО ІЮ МО:55 - БЕО ІЮ МО:37.
Переважна послідовність першого поліпептиду такого конструкта версії 1 САКТ-А м/гс характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:13):
ВЕММТО5РОБІ АМ5І СЕВНУТМЗОСКОЗЗОБИ МЗаМОКММІ ПУМООКРООРРК МУ АЗТВЕЗОа
УєхРОовЕЗаЗазатовТІ ТЗІ ОАДЕОМАУУУСОМОМЗУРУТРСОСТКІ ЕІКаОСОаБассасСЕМОЇ МЕЗО са МОРєРааБІ ВІ ЗСААЗаєТЕЗТМАММУМУУВОАРОаКаИаї ЕУУМавіВЗКУМММАТУМАОЗУКОВЕТІЗА рОБКМ5І М ОММ5ЗІ КТЕОТАУУУуСУВВНЕОЕМеаМЗУУ ЗМ гам аОоС,сТІ УтУЗааСаасЕМАА ЕКЕ
МААЇ ЕКЕМААЇ ЕКЕМААГ ЕКОССЯСОКТНТОРРСОРАРЕДАСОРБЗУНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАВТРЕМТСУУМО
МЗНЕОРЕУКЕМУУУрамЕМНМАКТКРАЕЄОММОЗТУАМУМЗМІ ТМ НОБУ/ЛІ МЕКЕМКОСКМУМЗМКАГ РАР
ІЕКТІЗКАКаОРАЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5БІ М СІ МКаЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСЕОРЕММУКТТРРМІ. розравзгЕвгУЗкІі ТМоКЗАМОСС,ММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І РОК
Переважний полінуклеотид кодуючий такий поліпептид, являє собою (ЗЕО ІЮ МО:14): даснсдюдаїдасасацдісіссідаїадісіддссодадвісіддддаадсддадідасіаісндсаададсісссадісасідсда асадсддаааїсадааааасіаісідассіддіассадсадаадссаддссадсссссіааасідсідаїсіандддснссассаддда асіддсддсссдасаданйсадсдасадсддсадсддсасадайнНасссюасаанісіадісюсаддссдаддасаюдадсідщіа сіандісадааїдайцасадсіаїсссіасаспсддссадддадассаадсіддааайаааддаддсддаїссддсадсдааддсдад дідсадсіддіддадісюдаддаддснодіссадссіддадддаісссідадасісіссіідсадссісіддайсассисадсасаїасус їаїдаанпдодіссдссаддсіссадддааддддсіддаяддаодааддаїсаддіссаадіасаасаацнаюдсаассіасіадхессд асісюі(дааддаіадайсассаїсісаадададаїйсааадаасісасіціаісідсаааїдаасадссідаааассдаддасасддсс діюїанасіцідідадасасодіаасіїсддсаанснасощдіснданоснанддде асаддоддасасіддаідасідідіснссддадда тіддсоадіддадаадіддссдсасіддадааададанддсідстддадааддаддісдсідсасндааааддаддісдсадсссіда
Зо адаааддсддсддддасаааасісасасаїдсссассдідсссадсассідаадссосддаадддассодісадісіссісносссссаа аасссааддасасссісаїдаїсісссддассссідаддісасадсдіддддодасддадссасдаадасссідаддісааднсаа сюдіасадаасдасдддваддідсаїааїдссаадасааадссосддааддадсадіасаасадсасотассдуідюддісадсаіїссі сассдіссюсассаддасіддсдааіддсааддадіасаадідсааддісіссаасааадсссісссадсссссаїсдадаааассаї сіссааадссазадддсадссссдадаассасаддідіасасссідсссссаїсссдддаддадаїдассаадаассаддісадссідчі даїдссіддісааадодсіїсіаїсссадсдасаіїсдссудіддадіяддададсаадддсадссддадаасаасіасаадассасдссіс ссдідсіддасіссдасддсісснсНссісіасадсаадсісассуіддасаададсаддіддсадсаддддаасодіснсісаїдсіссді даюсаїдаддсісідсасаассасіасасдсадаададссісісссідісіссдддіааа
Другий ланцюг такого конструкта версії 1 САКТ-А м/Ес буде містити, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М-кінець, домен Мі. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СЮОЗ (Мі соз), проміжний лінкерний пептид (лінкер 71), домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СЮО123 (МНеоігз), лінкер 2, К-спіральний домен і С-кінець. Таким чином, другий поліпептид такого конструкта версії 1 ОАКТ-А м/с складається з наступного: БЕО ІЮ МО:21 -
ЗЕО ІЮ МО:29 - 5БО ІЮО МО26 - 5ЕБО І МО:30 - 5ЕБО ІО МО:35. Такий поліпептид характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:15): даумідерзм5радімств5ідамизпуапиудаКкрддаргдііддаіпКкгарулранздвзідокаанндадаєдеадуусаї жузпімладакимідддазададекцімаздавіккрдазукуизсКазаутауутКммтаарададїіемідайрзпданупакікаг міймакзівїауте!55іІїзеагамуусагзпІгазулаумддаіміи55дасддаКмааіКекмиааІКеКиааІКекмаа!Ке
Переважний полінуклеотид, що кодує такий поліпептид, характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮО МО:16): саддсідюдідасісаддадсснсасідассдідіссссаддсддаасідідасссдасаїдсадаїссадсасаддсдсадщда ссасаїсіаасіасдссаайдддіясадсадаадссаддасаддсассааддддссідаїсдддддаіасааасаааадддсіссса ассссідсасдайнсіддаадісідсюдддсоддаааддссодсісідасіанассдддасасаддассдаддасдаадссданасіаняої дсісідюдіаіадсаафсідддаонсоаддададдсасаааасідасідідсідааддаддідаассддсддсоддадасдаддаоса дсюддіадсадіссддддседадсідаадааасссддадсіссдідаадащісндсааадссадіддсіасасснсасадасіасіаїаї даадідддісаддасаддсіссаддасадддасіддааі(ддаісодсдаїаісанссиссаасдддассасцісіасааіїсадаадащтшаа аддсаддаюдасіанНассоіддасаааїсаасаадсасідснагадаоадсідадсісссідсдсісідаадаїасадссоаютасіаноїд сісддісасассідсідададссадсідашоснандаддасаддоасасссіддідасадщіснссодадаадіяддсдадодаааацді дассдсасідааддадааауноасідстдааададааддісдссдсаснааддааааддісдсадсссдааадад
Третій поліпептидний ланцюг такої версії 1 САКТ-А м/с буде містити домени СН2 і СНЗ домена Ес дО. Переважний поліпептид складається з пептиду 1 (5ЕО ІЮ МО:55) і доменів СН2 і
СНЗ домена Ес (5ЕО ІЮО МО:11) і характеризується послідовністю 5ЕО ІЮ МО:54:
ОКТНТСОРРСОРАРЕДАСОИРБЗУНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕМУ УМрИаМЕМ
НМАКТКРАЕЕЕОУМЗТУВУУБМІ ТМ НОСУМІ МЕКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКСОРАЕЕРОММТІ
РРОВЕЕМТКМОМУ5І БСАУКаєУРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5ОрОаЗЕРІ УЗКІТМОКЗАМУ
ООСМУМЕЗСЗУММНЕАЇ НМАУТОКОІ 5І 5РОК
Переважний полінуклеотид, який кодує такий поліпептид, характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:12): дасаааасісасасаїдсссассудідсссадсассюаадссдсддаддддассадісадіснеосісносссссаааасссааддас асссісаїдаїсісссддассссдададісасадсддаюддіддасдададссасдаадасссідаддісаадісаасіддіасодчдас дасдіддаддідсаіааі|дссаадасааадссдсдддаддадсадіасаасадсасоаїассдщдіддісадсдіссісассдіссідсас саддасіддсіааддсааддадіасаадідсааддісіссаасааадсссісссадсссссаїсдадаааассаїсіссададссаа аддасадссссдадаассасаддідіасасссідсссссаїсссдддаддададассаадаассаддісадссідчадн дсдсадіса аадаснсіаїсссадсдасаїсдссудоаадодаоадададсаадддсадссддадаасаасіасаадассасдссісссоюдсіддасі ссдасддсісснсіїссісдісадсаадсісассдіддасаададсаддддсадсаддддаасдісіїсісаюдсіссдадаїдсащда9да сісідсасаассдсіасасдсадаададссісісссідісіссодддіааа
О. Конструкт версії 2 ОАКТ-А м/гс
В якості другого прикладу такого диатіла ЮАКТ-А м/с, згідно із даним винаходом передбачено трьохланцюгове диатіло, "версія 2 диатіла ПОАКТ-А м/Ес" (фігура ЗВ).
Перший поліпептид такого конструкта версії 2 ОАКТ-А м/Ес містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М-кінець, пептидний лінкер (пептид 1), поліпептид, який містить домени СН2 і СНЗ домена Ес, з'єднаний (за допомогою лінкера 4) з доменом Мі моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (Мі соігз), проміжний лінкерний пептид (лінкер 1), домен. МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНеоз), лінкер 2, К-спіральний домен і
С-кінець.
Переважний поліпептид, який містить домени СН2 ії СНЗ домена Ес, характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:37):
АРЕААСОИаРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМИМЕМНМАКТКРАЕЕ 0) ОММОТУАУМ5МІ ТМ НОБУУЛ МЕ КЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМ
ОМБІ МС УКОЕМРЗОІАМЕЖМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ЮОБраЗЕРІ ЗК ТМОКЗАУМООСМУЕЗОСБМ
МНЕАЇІ НМНУТОК5БІ ЗІ РОК "Лінкер 4" переважно буде містити амінокислотну послідовність (ЗЕО ІЮ МО:57): АР555.
Переважний "лінкер 4" характеризується послідовністю (ЗЕО ІЮ МО:33): АРОЗЗРМЕ. Таким чином, перший поліпептид такого конструкта версії 20АКТ-А м/гс складається з наступного:
ЗЕО ІО МО:55 - БЕО ІЮ МО:37 - БЕО І МО:3З3 - БЕО ІЮ МО:25 - БЕО 10 МО:29 - БЕО ІЮ МО:22 -
ЗЕО ІЮ МО:30 - БЕО ІЮ МО:35. Поліпептид, що характеризується такою послідовністю, являє собою (ЗЕО ІО МО:17):
ОКТНТСОРРСОРАРЕДАСОИРБЗУНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕМУ УМрИаМЕМ
НМАКТКРАЕЕЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОМ МСКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОММТІ
РРОВЕЕМТКМОМУ5БІ МУСІ УКЕЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБОраЗЕРІ КІ ТУОКВАМУ
ОООСММЕЗСЗУММНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І 5РОКАРЗЗЗРМЕВЕММТО5РОБІ АМ5І ЕНУТМЗОСКЗО
З МБамМОКкмМмМІ ТУМООКРИаОРРКІ ПУ АЗТАЕЗаМУРєРОВЕЗаЗазатовТтІ ТЗІ ОАЕОМАМУУУС
ОМОУ5УРУТРСОСТКІ ЕІКСОСОСЗССИасСЕМОЇ МЕЗО СОЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИЕТЕЗТМАММУУВ
ОСАРОКИа! ЕМУМавІВЗКУМММАТУМАОЗУКОВЕТІЗАВОБКМ5І МІ ОММ5І КТЕОТАУУУСУВНОИаМЕ аМ5УУЗУМУБгАУУсОсТтІ УТУЗЗаИасацакмМААІ КЕКМУМААІ КЕКУААЇ КЕКМААЇ КЕ
Переважний полінуклеотид, що кодує такий поліпептид, характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:18): дасаааасісасасаїдсссассудідсссадсассюаадссдсддаддддассадісадіснеосісносссссаааасссааддас асссісаїдаїсісссддассссдададісасадсуадаюддіддасоададссасдаадасссюададісааднсаасіддіасдадчдас дасдіддаддідсаіааі|дссаадасааадссдсдддаддадсадіасаасадсасоаїассдщдіддісадсдіссісассдіссідсас саддасіддсіааддсааддадіасаадідсааддісіссаасааадсссісссадсссссаїсдадаааассаїсіссададссаа аддасадссссдадаассасаддідіасасссідсссссаїсссдддаддадаїдассаадаассаддісадссідіадідссіддіса аадаснсіаїсссадсдасаїсдссудоаадодаоадададсаадддсадссддадаасаасіасаадассасдссісссоюдсіддасі ссдасддсісснсіїссісіасадсаадсісассдіддасаададсаддддсадсаддддаасдісіїсісаюдсіссдадаїдсащда9да сісідсасаассасіасасдсадаададссісісссідісіссдддіааадссссНссадсіссссіаюдаадасіїсдідаїдасасацдіс іссідаіадісіддссдідадісюддададсодддідасіащдісндсаададсісссадісасідсідаасадсуддаааїсадааааасіа ісдассіддіассадсадаадссаддссадсссссіааасідсідаісіандддаснссассадддааісіддсдідсссдасадайсад сддсадсддасадсддсасадаціасссідасаацісіадісідсаддссудаддасдіддсідідіасіандісадааюдайнасадсіаїс бо ссіасасісддссаддддассаадсіддааанаааддадоасддаїссддсддасоддадоасдаддаідсадсюдіддадісюдадда даснддаіссадссіддадудісссюдадасісіссіддсадссісіддансассисадсасаїасдсіадаанддаїссдссаддсісс аддааадддасіддадчіадонадааддаїсаддіссаадіасаасаанНаїдсаассіасіаїдссдасісюідааддагадайсассаї сісаададаїдансааадаасісасідіаіїсісааадаасадссдаааассдаддасасддссдідіанасдідідадасасоддіа асісддсаанйснасущісндашндснанддаддасаддддасасіддідасідщіснссаяададчадіддсддіддаааадіддссус асідааддадаааандсдс і ндааададааддісдссдсасіааддааааддісдсадсссідааадад
Другий поліпептидний ланцюг такого конструкта версії 2 ОАКТ-А м/с містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця, домен Мі моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (Мі соз), проміжний лінкерний пептид (лінкер 1) і домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СЮО123 (МНео12з). Зазначена частина молекули з'єднана (за допомогою лінкера 2) 3 Е-спіральним доменом. Таким чином, третій поліпептид такого конструкта версії 2 ОАКТ-А м/с складається з наступного: БЗЕО ІЮ МО:21 - БЕО 10 МО:29 - БЕО ІЮ МО:26 - БЕО ІЮ МО:30 -
ЗЕО ІЮ МО:34. Поліпептид, що характеризується такою послідовністю, являє собою (ЗЕО ІЮ
МО:1), і переважно кодується полінуклеотидом, що характеризуються послідовністю ЗЕО ІЮ
МО:2.
Третій поліпептидний ланцюг буде містити домени СН2 і СНЗ домена Ес до. Переважний поліпептид складається з пептиду 1 (ЗЕО ІО МО:55) і доменів СН2 і СНЗ домена Ес (ЗЕО ІО
МО:11) і характеризується послідовністю ЗЕО ІЮ МО:54.
Для оцінки активності вищезгаданих СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл (АКТ-А, ОАВТ-А м/АвО, РАВТ-А м/Рс, ОАВТ-В) одержали контрольне біспецифічне диатіло (контрольне САКТ).
Контрольне САВТ здатне одночасно зв'язуватися з РІТС і СОЗ. Його два поліпептидні ланцюги характеризуються наступними відповідними послідовностями:
Ланцюг 1 контрольного ОАКТ (5ЕО ІЮ МО:19):
ОМУММТОТРЕБІ РУБ аиСОАБІЗСАЗБЗОБВІ УНЗМОаМТ МІ В/М ОКРЕОЗБРКМИУКУЗМАЕБамМР рагЕзазавзаторЕТІ КІЗАМЕАЕОЇ аУМЕСЗОЗТНУРУТЕРОССИаТтТКІ ЕІКаОСОЗа,ваасСЕМОЇ МЕЗОвСС
ГМОРИСБІ ВІ БСААЗСОЕТЕМТ МАММУУВОАРОКаТї ЕУУМАВІВЗКУМММАТУМАОБУКОВЕТІЗАОО
ЗКМ5І М ОММ5І КТЕОТАУУ УС УВНМЕаМЗУУБМЕАУМмаОа,тІ УтТУЗОИаСИ,сСЕМААГЕКЕМА
АЇ ЕКЕМААЇ ЕКЕМААЇ ЕК
Ланцюг 2 контрольного ОАКТ (5ЕО ІЮ МО:20):
ОАУМТОЕРБІ ТУ5РОСТМУТІ ТАЗ ТАМ ТТ ЗМУАМУМУМООКРИООСАРВИГ ІС ТМКААРМУТРАН
Зо ЕЗОаБІ І! ЧСаКААЇ ТІТИАОАЕОЕАрУМСАЇ М УЗМІ УУгсса7ткі тм свссвсазасасЕМУКІ рЕТОСОИЇ.
МОРЕИВвАРМКІ БСМАЗБаЄТЕЗОММУ ММУУУКОЗРЕКСОГ ЕМ МАО АМКРУММЕТУУЗОБУКОаВЕТІЗНАОО зЗКкЗЗУМ ОМММ АМЕОоМаімУстазУуамруУмсоатеУтувЗаасациакмМААІ КЕКМААЇ КЕКМА
АЇ КЕКМААЇ КЕ
ІМ. Фармацевтичні композиції
Композиції згідно із даним винаходом містять у собі композиції нерозфасованого лікарського засобу, придатні у виробництві фармацевтичних композицій (наприклад, неочищених або нестерильних композицій) і фармацевтичних композицій (тобто композицій, які є придатними для введення суб'єктові або пацієнтові), які можна використовувати в одержанні стандартних лікарських форм. Такі композиції містять профілактично або терапевтично ефективну кількість, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл згідно із даним винаходом або комбінацію таких засобів і фармацевтично прийнятний носій. Композиції згідно із даним винаходом переважно містять профілактично або терапевтично ефективну кількість, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла згідно із даним винаходом і фармацевтично прийнятний носій.
Згідно із даним винаходом також передбачені фармацевтичні композиції, що містять біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом і друге терапевтичне антитіло (наприклад, пухлинноспецифічне моноклональне антитіло), яке є специфічним відносно конкретного антигену злоякісної пухлини, і фармацевтично прийнятний носій.
Згідно з конкретним варіантом здійснення термін "фармацевтично прийнятний" означає схвалений регуляторним органом федерального уряду або уряду штату або перерахований у
Фармакопеї США або іншій загальновизнаній Фармакопеї для застосування у тварин і більш конкретно у людей. Термін "носій" відноситься до розріджувача, ад'юванта (наприклад, ад'юванта Фрейнда (повного і неповного), допоміжна речовина або інертний носій, з яким водять терапевтичний засіб. Такі фармацевтичні носії можуть являти собою стерильні рідини, такі як вода і масла, включаючи в себе масла мінерального, тваринного, рослинного або синтетичного походження, такі як арахісове масло, соєве масло, мінеральне масло, кунжутне масло і подібне. Вода являє собою переважний носій, якщо фармацевтичну композицію вводять внутрішньовенно. Сольові розчини і водяні розчини декстрози і розчини гліцерину також можна бо використовувати в якості рідких носіїв, зокрема, для ін'єкційних розчинів. Підходящі фармацевтичні допоміжні речовини містять у собі крохмаль, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, борошно, крейду, силікагель, стеарат натрію, гліцерин моностеарат, тальк, хлорид натрію, сухе знежирене молоко, гліцерин, пропілен, гліколь, воду, етанол і подібне.
Композиція при необхідності також може містити незначні кількості змочувальних засобів або емульгаторів, або рН буферних засобів. Зазначені композиції можуть приймати форму розчинів, суспензій, емульсій, таблеток, драже, капсул, порошків, сполук уповільненого вивільнення і подібне.
Як правило, інгредієнти композицій згідно із даним винаходом поставляються або окремо, або змішаними разом у стандартній лікарській формі, наприклад, у вигляді сухого ліофілізованого порошку або безводного концентрату в герметично запаяному контейнері, такому як ампула або саше із вказівкою кількості активного засобу. Якщо композиція призначена для введення за допомогою інфузії, вона може продаватися з інфузійним флаконом, що містить стерильну воду або сольовий розчин фармацевтичного ступеня чистоти. Якщо композиція призначена для введення за допомогою ін'єкції, ампула зі стерильною водою для ін'єкцій або сольовим розчином може бути надана для того, щоб інгредієнти можна було змішати перед введенням.
Композиції згідно із даним винаходом можуть бути введені до складу у вигляді нейтральних або сольових форм. Фармацевтично прийнятні солі містять у собі без обмеження солі, утворені такими аніонами, як аніони, що відбуваються із соляної, ортофосфорної, оцтової, щавлевої, винної кислот і т.д., Її солі, утворені катіонами, такими як катіони, що відбуваються з натрію, калію, амонію, кальцію, гідроксидів заліза, ізопропіламіну, триетиламіну, 2-етиламіноетанолу, гістидину, прокаїну і т.д.
Згідно із даним винаходом також передбачено фармацевтичний пакет або набір, що містить один або декілька контейнерів, заповнених біспецифіческими диатілами, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЮЗ, згідно із даним винаходом окремо або таким фармацевтично прийнятним носієм. Крім того, один або декілька інших профілактичних або терапевтичних засобів, придатних для лікування захворювання, також можуть бути включені у фармацевтичний пакет або набір. Згідно із даним винаходом також передбачено фармацевтичний пакет або набір, що містить один або декілька контейнерів, заповнених одним або декількома інгредієнтами фармацевтичних композицій згідно із даним винаходом.
Необов'язково такий(ї) контейнер(и) може супроводжувати повідомлення у формі, передбаченій державним органом, що регулюють виробництво, застосування або продаж фармацевтичних засобів або біологічних продуктів, причому зазначене повідомлення відбиває дозвіл відповідним органом виробництва, застосування або продажу для введення людям.
Згідно із даним винаходом передбачені набори, які можна використовувати в описаних вище способах. Набір може містити біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом. Набір може додатково містити один або декілька інших профілактичних і/або терапевтичних засобів, придатних для лікування злоякісної пухлини, в одному або декількох контейнерах; і/або набір може додатково містити один або декілька цитотоксичних антитіл, які зв'язуються з одним або декількома антигенами злоякісної пухлини, зв'язаними зі злоякісною пухлиною. Згідно з певними варіантами здійснення інший профілактичний або терапевтичний засіб являє собою хіміотерапевтичний засіб. Згідно з іншими варіантами здійснення профілактичний або терапевтичний засіб являє собою біологічний або гормональний терапевтичний засіб.
М. Способи введення
Композиції згідно із даним винаходом можуть бути передбачені для лікування, профілактики і зменшення інтенсивності одного або декількох симптомів, пов'язаних із захворюванням, порушенням або інфекцією, шляхом введення суб'єктові ефективної кількості білка злиття або кон'югованої молекули згідно із даним винаходом або фармацевтичній композиції, що містить білок злиття або кон'юговану молекулу згідно із даним винаходом. Згідно із переважним аспектом такі композиції є по суті очищеними (тобто по суті не містять речовин, які обмежують її дію або роблять небажані побічні ефекти). Згідно з конкретним варіантом здійснення суб'єкт являє собою тварину, переважно ссавець, таку, що не має відношення до приматів, ссавець (наприклад, корова, кінь, кішка, собака, гризун і т. д.) або примат (наприклад, мавпа, така як, яванська макака, людей і т. д.). Згідно із переважним варіантом здійснення суб'єкт являє собою людину.
Відомі різні системи доставки і їх можна використовувати для введення композицій згідно із даним винаходом, наприклад, інкапсулювання в ліпосомах, мікрочастинки, мікрокапсули, рекомбінантні клітини, здатні експресувати антитіло або злитий білок, опосередкований бо рецептором ендоцитоз (див., наприклад, МУ еї аї. (1987) "Кесеріог-Медіаївд п Міо Сепе
Ткапетогптаїйоп Ву А бБоїшріє ОМА Саттієг Зувзієт, " У. Віої. Спет. 262:4429-4432), конструкція з нуклеїнової кислоти у вигляді частини ретровірусного або іншого вектора і т. д.
Способи введення молекули згідно із даним винаходом містять у собі без обмеження парентеральне введення (наприклад, інтрадермальне, внутрішнм'язове, інтраперитонеальне, внутрішньовенне і підшкірне), епідуральне і мукозальне введення (наприклад, інтраназальний і пероральний шляхи). Згідно з конкретним варіантом здійснення, біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом вводять внутрішньом'язово, внутрішньовенно або підшкірно. Композиції можна вводити будь- яким зручним шляхом, наприклад, за допомогою інфузії або болюсної ін'єкції, шляхом поглинання через епітеліальні або шкірно-слизуваті оболонки (наприклад, слизувату ротової порожнини, слизувату прямої кишки і кишківника і т. д-) Її можна вводити разом з іншими біологічно активними засобами. Введення може бути системним або місцевим. Крім того, пульмонарне введення також можна використовувати, наприклад, за допомогою застосування інгалятора або небулайзера і сполуки з аерозольним засобом. Див., наприклад, патенти США
МоМо 6019968; 5985320; 5985309; 5934272; 5874064; 5855913; 5290540 і 4880078 і міжнародні патентні публікації згідно РСТ МоМо УМО 92/19244; УМО 97/32572; МО 97/44013; УМО 98/31346 і
УМО 99/66903, кожна з яких повністю включена в даний документ за допомогою посилання.
Згідно із даним винаходом також передбачено, що біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом впаковані в герметично запаяний контейнер, такий як ампула або саше із вказівкою кількості молекули. Відповідно одному варіанту здійснення, біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом поставляють у вигляді сухого стерилізованого ліофілізованого порошку або безводного концентрату в герметично запаяному контейнері і його можна розвести, наприклад, водою або сольовим розчином до відповідної концентрації для введення суб'єктові. Біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом переважно поставляють у вигляді сухого стерильного ліофілізованого порошку в герметично запаяному контейнері в стандартному дозуванні, що становить щонайменше 5 мкг, більш переважно щонайменше 10 мкг, щонайменше 15 мкг, щонайменше 25 мкг, щонайменше 50 мкг, щонайменше 100 мкг або
Зо щонайменше 200 мкг.
Ліофілізовані, біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю
СсО0123 х СО3 згідно із даним винаходом необхідно зберігати при температурі від 2 до 8"С у їхньому оригінальному контейнері і молекули необхідно вводити не пізніше ніж через 12 годин, переважно не пізніше ніж через 6 годин, не пізніше ніж через 5 годин, не пізніше ніж через З години або не пізніше ніж через 1 годину після їхнього розведення. Згідно з альтернативним варіантом здійснення, біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю
СОр123 х СОЗ згідно із даним винаходом поставляють у рідкій формі в герметично запаяному контейнері із вказівкою кількості і концентрації молекули, злитого білка або кон'югованої молекули. Рідку форму, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЮЗ біспецифічних диатіл згідно із даним винаходом переважно поставляють у герметично запаяному контейнері, у якому молекули перебувають у концентрації, що становить щонайменше 1 мкг/мл, більш переважно щонайменше 2,5 мкг/мл, щонайменше 5 мкг/мл, щонайменше 10 мкг/мл, щонайменше 50 мкг/мл або щонайменше 100 мкг/мл.
Кількість композиції згідно із даним винаходом, яка буде ефективною у лікуванні, профілактиці або зменшенні інтенсивності одного або декількох пов'язаних з порушенням симптомів, можна визначити за допомогою стандартних клінічних технік. Точна доза, застосовувана в складі, також буде залежати від шляху введення і серйозності стану, і повинна визначатися відповідно до рішення лікаря і усіх відповідних обставин пацієнта. Ефективні дози можна екстраполювати із кривих залежності від дози з іп міго тестових систем або тестових систем - тваринних моделей.
Для передбачених даним винаходом біспецифічних диатіл, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що вводиться пацієнтові дозування переважно визначають на підставі маси тіла (кг) суб'єкта - реципієнта. Дозування, що вводиться, як правило, становить від щонайменше приблизно 0,3 нг/кг на день до приблизно 0,9 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 1 нг/кг на день до приблизно З нг/кг на день, від щонайменше приблизно З нг/кг на день до приблизно 9 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 10 нг/кг на день до приблизно 30 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 30 нг/кг на день до приблизно 90 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 100 нг/кг на день до приблизно 300 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 200 нг/кг на день до приблизно 600 нг/кг на день, від щонайменше 60 приблизно 300 нг/кг на день до приблизно 900 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 400 нг/кг на день до приблизно 800 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 500 нг/кг на день до приблизно 1000 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 600 нг/кг на день до приблизно 1000 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 700 нг/кг на день до приблизно 1000 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 800 нг/кг на день до приблизно 1000 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 900 нг/кг на день до приблизно 1000 нг/кг на день або щонайменше приблизно 1000 нг/кг на день.
Згідно з іншим варіантом здійснення пацієнтові вводять схему лікування, що передбачає одну або декілька доз такої профілактично або терапевтично ефективної кількості, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3 біспецифічних диатіл, передбачених згідно із даним винаходом, причому схему лікування вводять протягом 2 днів, З днів, 4 днів, 5 днів, 6 днів або 7 днів. Згідно з певними варіантами здійснення схема лікування передбачає періодичне введення доз профілактично або терапевтично ефективної кількості, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3 біспецифічних диатіл, передбачених згідно із даним винаходом (наприклад, введення дози в 1 день, 2 день, З день і 4 день даного тижня і відсутність введення доз профілактично або терапевтично ефективної кількості, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл, передбачених згідно із даним винаходом в 5 день, 6 день і 7 день цього ж тижня). Як правило, проводять 1, 2, 3, 4, 5 або більше курсів лікування. Кожний курс може проходити за однаковою схемою або за різними схемами.
Згідно з іншим варіантом здійснення доза, що вводиться, збільшується за першу чверть, першу половину або перші дві третини або три чверті схеми (схем) (наприклад, за першу, другу або третю схему лікування з 4 курсів), поки не буде досягнута денна профілактично або терапевтично ефективна кількість, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х
СОЗ біспецифічних диатіл.
У таблиці 1 представлено 5 прикладів різних схем дозувань, описаних вище, для типового курсу лікування.
Таблиця 1
Схема | День | Дозування диатіла (нг диатіла на кг маси тіласуб'єктав день) пиши ши иши ншши ншш ше пиши ши иши ншши ншш ше пиши нши иши ши ше ше
Дозування і частоту введення, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х
СО3З біспецифічних диатіл згідно із даним винаходом знизити або змінити шляхом посилення поглинання і проникнення, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл у тканині за допомогою таких модифікацій, як, наприклад, ліпідизація.
Дозування, що вводиться пацієнтові, що характеризуються оптимізованою послідовністю
СО0123 х СОЗ біспецифічних диатіл згідно із даним винаходом можна розрахувати для застосування в якості монотерапії. Альтернативно, біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом використовують у комбінації іншими терапевтичними композиціями, і дозування, що вводиться пацієнтові є менше, ніж при використанні зазначених молекул в якості монотерапії.
Фармацевтичні композиції згідно із даним винаходом можна вводити місцево в необхідну в лікуванні область; цього можна досягти, наприклад, без обмеження за допомогою місцевої інфузії, ін'єкції або за допомогою імплантату, причому зазначений імплантат виготовлений з пористого, непористого або желатиноподібного матеріалу, включаючи в себе такі мембрани, як мембрани бзіаїавіїс, або волокна. При введенні молекули згідно із даним винаходом переважно необхідно приділити увагу застосуванню матеріалів, які не абсорбують молекулу.
Композиції згідно із даним винаходом можуть бути доставлені у везикулі, зокрема ліпосомі (див. Гапдег (1990) "Мем Меїйоаз ОЇ Огид Оеїїмегу, " Зсіепсе 249:1527-1533); Тгеаї єї аї., в
Прозотез іп їте ТПегару ої Іп'єсііоив Різеазе апа Сапсетг, І оре2-Вегевівїп апа Ріаег (ед5.), І івв,
Мем Могк, рр. 353-365 (1989); І оре2-Вегезівіп, іріа., рр. З 17-327; див., головним чином, там же).
Композиції згідно із даним винаходом можуть бути доставлені в системі контрольованого або уповільненого вивільнення. Будь-яку техніку, відому фахівцеві в даній області техніки, можна використовувати для одержання сполук уповільненого вивільнення, що містять одне або декілька біспецифічних диатіл, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х
СОЗ згідно із даним винаходом. Див., наприклад, патент США Мо 4526938; міжнародні патентні публікації згідно РСТ МоМо УУО 91/05548; УМО 96/20698; Міпа еї аїЇ. (1996) "Іпгаштогаї!
Вадіоіттипоїйегарпу ОЇ А Нитап Соїоп Сапсег Хеподгай Овіпд А Зивіаіпед-НеІєазе Сеї, "
Вадіоїегару 5 Опсоіоду 39:179-189, 5опд єї аї. (1995) "Апіїроду Медіаїєд І па Тагодеїйпуд ОЇ!
Гопа-Сіксціайпуд Етиївіопе, " РОА Шошгпа! ої Рпаптасешіїса! 5сіепсе є Тесппоіоду 50:372-397;
Сієек еї аї. (1997) "Віодедгадабріе Роїутегіс Саптієтв Рог А БЕРСЕ Апіїроду Рог Сагаіомазсшаг
Арріїсайоп, " Ро. Іпг!. Бутр. СопігоЇ. Неї. Віоасі. Маїег. 24:853-854; їат еї аї. (1997) "Місгтоепсарзціайоп ОЇ Весотбіпапі Нитапілед Мопосіопа! Апіїбоду Еог І оса! Оєїїмегу, " Ргос. ій! Зутр. Сопіго! Неї. Віоасі. Маїєег. 24:759-760, кожна з яких повністю включена в даний документ за допомогою посилання. Відповідно одному варіанту здійснення насос можна використовувати в системі контрольованого вивільнення (Див. І апдег, раніше; бейоп, (1987) "Ітріапіабіе Ритрз», " СВО Сі. Вем. Віотеа. Епд. 14:201-240; Виспмаїа еї аї. (1980) "Гопд-Тегт,
Сопііїписив Іпігамепои5 Нераїіп Аадтіпівігайоп Ву Ап Ітріапіабіє Іптивзіоп Ритр Іп Атриїаюгу
Раїєпів М/Йй Весшитепі Мепоиб5 Тиготровзів, " Зигдегу 88:507-516; і Зацдек еї аї. (1989) "А
Ргєїїтіпагу Ттіа! ОЇ ТНе Ргодгаттабіє Ітріапіаріє Медісайоп Зузієт Рог Іпзцїїп Оеєїїмегу, " М. Епаді.
У. Меа. 321:574-579). Згідно з іншим варіантом здійснення полімерні матеріали можна використовувати для досягнення контрольованого вивільнення молекул (див., наприклад,
Меадіса! Арріїсайоп5 ої Сопіго!Ієй Веїєазе, І апдег апа М/ізе (єдз.), СВО Ргез., Воса Вайп, Ріогіда (1974); СопітоПейа Огид Віоамайарішу, Огид Ргодисі Оезідп апа Репогптапсе, Зтоїеп апа Ваї! (єд».), МПеу, Мем Могк (1984); І ему єї а)ї. (1985) "Іппірйіоп ОГ Саїсітісайоп ОЇ Віоргозіпеїйс Неай
Маїмез Ву І оса! СопігоПей-НеїІеазе Оірпозрпопаїє, " Зсієпсе 228:190-192; ВБиппа єї аї. (1989) "Сопігоїїей Веївазе ОЇ Юоратіпе гот А Роїутетіс Вгаїп Ітріапі: іп Мімо Спагасівгігайоп, " Апп.
Мешцгої. 25:351-356; Номага еї аї. (1989) "Іпігасегебга! Огиад Оеєїїмегу Іп Наїб5 М/йй І езіоп-Іпдисей
Метогу Оеїйсіїв, " У. Мешгозигу. 7(1):105-112); патенти США МоМео 5679377; 5916597; 5912015; 5989463; 5128326; міжнародні патентні публікації згідно РСТ МоМо УМО 99/15154 і УМО 99/20253).
Зо Приклади полімерів, використовуваних у сполуках уповільненого вивільнення, містять у собі без обмеження полімер 2-гідроксиетилметакрилату, полімер метилметакрилату, полімер акрилової кислоти, співполімер етилену та вінілацетату, полімер метакрилової кислоти, полігліколіди (РІ С), поліангідриди, полімер М-вінілпіролідону, полімер вінілового спирту, поліакриламід, поліетиленгліколь, полілактиди (Рі А), співполімер лактидів і гліколідів (РІ БА) і поліортоефіри.
Систему контрольованого вивільнення можна розмістити поблизу до терапевтичної мішені (наприклад, легеням), таким чином, буде необхідна тільки частка системної дози (див., наприклад, Соодзоп, в Меаїса! Арріїсайоп5 ої СопігоПей Кеїєазе, раніше, мої. 2, рр. 115-138 (1984)). Композиції, придатні в якості імплантатів контрольованого вивільнення, можна використовувати згідно Юипп із співавт. (див. патент США Ме 5945155). Зазначений конкретний спосіб заснований на терапевтичному ефекті іп 5йи контрольованого вивільнення біоактивного матеріалу з полімерної системи. Імплантація, як правило, відбувається в будь-якому місці в організмі пацієнта, що має потребу в терапевтичному лікуванні. Можна використовувати неполімерну систему уповільненої доставки, за допомогою якої неполімерний імплантат в організмі суб'єкта використовується в якості системи доставки лікарського засобу. При імплантації в організм органічний розчинник імплантату буде розсіюватися, диспергуватися або вилуговуватися з композиції в навколишню тканинну рідину, і неполімерний матеріал буде поступово коагулювати або осаджуватися з утворенням твердої, мікропористої матриці (див. патент США Мо 5888533).
Системи контрольованого вивільнення обговорюються в огляді І апдег (1990, "Мем Мешодь
ОГ Ота Овіїмегу, " Зсіепсе 249:1527-1533). Будь-яку техніку, відому фахівцеві в даній області техніки, можна використовувати для одержання сполук уповільненого вивільнення, що містять один або декілька терапевтичних засобів згідно із даним винаходом. Див., наприклад, патент
США Ме4526938; міжнародні патентні публікації МоМо УМО 91/05548 і УМО 96/20698; Міпо еї аї. (1996) "Іпташтога! Радіоїттипоїйегарну ОГ А Нитап СоЇоп Сапсег Хепоагай Овіпуд А 5ивіаіпеад-
Веїєазе Сі, " Вадіоїнегару 5 Опсоіоду 39:179- 189, 5опд еєї а!. (1995) "Апіїроду Медіаїед І пд
Тагдеїпуд ОЇ Гопд- Сігсшайпд Етиїівіоп5, " РОА доштаї ої Рнаптасеціїса! Зсіепсе є ТесппоЇоду 50:372- 397; СіееК еї аї. (1997) "Віодедгадабріє Роїутегс Сагпієт5 Бог А рю Апіїроду Рог
Сагаїомазсшіаг Арріїсайоп, " Рго. ІпгІ. 5утр. Сопігої. Веї. Віоасі. Маїег. 24:853- 854; ії ат еї аї. (1997) "Містоепсарзшціанйоп ОЇ Весотбіпапі Нитапігед Мопосіопа! Апіїбоду Рог І оса! Оевїїмегу, "
Ргос. ІпгІ. 5утр. Сопігої! Ве!. Віоасі. Маїег. 24:759- 760, кожна з яких повністю включена в даний документ за допомогою посилання.
Якщо композиція згідно із даним винаходом являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує, біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом, нуклеїнову кислоту можна вводити іп мімо для стимуляції експресії кодуємого нею, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла шляхом конструювання її у вигляді частини відповідного нуклеїново кислотного експресійного вектора і введення її так, щоб вона стала внутрішньоклітинною, наприклад, шляхом застосування ретровірусного вектора (див. патент США Мо 4980286), або шляхом прямої ін'єкції, або шляхом використання бомбардування мікрочастинками (наприклад, генної гармати; Віоїївіс,
Биропі), або покриття ліпідами, або рецепторами клітинної поверхні, або засобами трансфекції, або шляхом введення Її, з'єднаної з гомеобоксо-подібним пептидом, який, як відомо, проникає в ядро (див., наприклад, чЧоїйої еї аІ. (1991) "Апіеєппаредіа Нотеорох Реріїде Недшіаїез Меигкаї
Могрподепевів, " Ргос. Маї!. Асайд. бсі. (0О.5.А.) 88:1864-1868) і т.д. Альтернативно, нуклеїнова кислота може бути введена внутрішньоклітинно і вбудована в ДНК клітини - хазяїна для експресії шляхом гомологічної рекомбінації.
Лікування суб'єкта за допомогою терапевтично або профілактично ефективної кількості, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл згідно із даним винаходом може передбачати однократне лікування або переважно може містити в собі серію лікувань. Згідно із переважним прикладом суб'єкт одержує лікування за допомогою, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл згідно із даним винаходом один раз на тиждень приблизно 1-10 тижнів, переважно 2-8 тижнів, більш переважно приблизно 3-7 тижнів і навіть більш переважно протягом приблизно 4, 5 або 6 тижнів. Фармацевтичні композиції згідно із даним винаходом можна вводити один раз на день, два рази на день або три рази на день. Альтернативно, фармацевтичні композиції можна вводити один раз на тиждень, два рази на тиждень, один раз у два тижні, один раз на місяць, кожні шість тижнів, один раз у два місяці, двічі на рік або один раз на рік. Крім того, слід розуміти, що ефективне дозування молекул, використовуваних для лікування, може збільшуватися або зменшуватися протягом курсу конкретного лікування.
МІ. Застосування композицій згідно із даним винаходом
Біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом характеризуються здатністю забезпечувати лікування будь-якого захворювання або стану, пов'язаного з експресією СО123 або, що характеризується експресією
СО0123. Таким чином, без обмежень такі молекули можна використовувати в діагностиці або лікуванні гострого мієлоїдного лейкозу (ГМЛ), хронічного мієлоїдного лейкозу (ХМЛ), включаючи в себе бластний криз ХМЛ і онкоген Абельсона, пов'язаний із ХМЛ (транслокацію Всг-АВІ), мієлодиспластичного синдрому (МДС), гострого В-лімфобласного лейкозу (В-ГЛЛ), хронічного лімфоцитарного лейкозу (ХЛЛ), включаючи в себе ХЛЛ із синдромом Ріхтера або трансформацією Ріхтера, волохатоклітинного лейкозу (ВКЛ), новоутворення із бластних плазмацитоїдних дендритних клітин (УБПДК), нехождкінських лімфом (НХЛ), включаючи в себе мантійноклітинну лімфому (МКЛ) і дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому (МЛЛ), лімфоми
Ходжкіна, системного мастоцитозу і лімфоми Беркіта (див. приклад 2); аутоїмунної вовчанки (СЧВ), алергії, бронхіальної астми і ревматоїдного артриту. Крім того, біспецифічні диатіла згідно із даним винаходом можна використовувати у виробництві лікарських засобів для лікування описаних вище станів.
Представивши опис даного винаходу загалом, він стане більш зрозумілим з посиланням на наступні приклади, які представлені для ілюстрації і не передбачено, що вони обмежують даний винахід, якщо не зазначено інше.
Приклад 1
Конструкція СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл і контрольного білка
У таблиці 2 представлений перелік біспецифічних диатіл, які експресували і очищували.
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-
А) і біспецифічне диатіло, що характеризується неоптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (САВТ-В) здатні одночасно зв'язуватися з СО123 і СОЗ3. Контрольне біспецифічне диатіло (контрольне САКТ) здатне одночасно зв'язуватися з РІТС і СОЗ. Біспецифічні диатіла являють собою гетеродимери або гетеротримери з перерахованими амінокислотними послідовностями.
Способи утворення біспецифічних диатіл представлені в міжнародних патентних публікаціях
МоМо УМО 2006/113665, УМО 2008/157379, УМО 2010/080538, УМО 2012/018687, УМО 2012/162068 і
МО 2012/162067. (510)
Таблиця 2 вежа ню | КЛКТТКЯ . о. . : й Нуклеїновокислотні
Біспецифічні диатіла послідовності й й й . кодуючі послідовності поліпептидного ланцюга
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою | 5ЕО І МО ЗЕО І МОСг2 послідовністю СО123 х СОЗ (БАКТ-А) ЗЕО ІЮ МО:З ЗЕО І МО (зв'язується з СОЗ на епітопі 1)
Біспецифічне диатіло, що характеризується неоптимізованою | 5ЕО ІЮ МО:5 ЗЕО ІЮ МО:6 послідовністю СО123 х СОЗ (БАКТ-В) ЗЕО ІЮ МО:7 ЗЕО І МО:8 (зв'язується з СОЗ на епітопі 2)
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що містить
АВ язуючий домен (АКТА 5рО Ір МО ЕО Ю МОМ (зв'язується з СОЗ на епітопі 1), ЗЕО о МОЗ ЗЕ о МО містить альбумінзв'язуючий домен (АВО) для збільшення періоду напівжиття іп мімо
Версія 1, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х
СОЗ біспецифічного диатіла, що містить | 5ЕО І МО:54 ЗЕО Ір МОл2 домен Ес да (версія 1 ОАВТ-А м/Ес) ЗЕО І МОЗ ЗЕО ІЮ МО:14 (зв'язується з СОЗ на епітопі 1), ЗЕО ІЮ МО5 ЗЕО І МО:16 містить домен бс для збільшення періоду напівжиття іп мімо
Версія 2, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х
СОЗ біспецифічного диатіла, що містить | 5ЕО І МО:54 ЗЕО Ір МОл2 домен Ес Ідс (версія 2 ОАКТ-А м/Ес) ЗЕО ІЮ МО:17 ЗЕО І МО:18 (зв'язується з СОЗ на епітопі 1), ЗЕО І МО ЗЕО І МОСг2 містить домен бс для збільшення періоду напівжиття іп мімо
Контрольне біспецифічне диатіло (контрольне САКТ) , (зв'язується з СОЗ на епітопі 1) ще 5 МО оо (зв'язується з нерелевантною мішенню - І
ІТС
Приклад 2
Мічення антитілом клітин - мішеней для кількісного РАСЗ (ОБАС5)
У загальному 105 клітин - мішеней збирали з культури, ресуспендовували в 10 95 сироватці
АВ людини в буфері для ЕАС5З (РВЗ-1 95 ВБ5АчО,1 95 МаА?ліаде) і інкубували протягом 5 хв. для блокування рецепторів Ес. Мічення антитілом мікросфер з різними здатностями зв'язуватися з антитілом (Счапішт" мМ Бітріу СейПшамкв (0552), Вапоз І арогайогієв5, Іпс., Різпег5, ІМ) їі клітини - мішені мітили за допомогою РЕ антитіла до СО123 (ВО Віозсіепсе5) згідно з інструкціями виробника. Коротко, одну краплю кожної мікросфери О5С додавали в 5 мл поліпропіленову пробірку і мічене РЕ антитіло до СО123 додавали в концентрації 1 мкг/мл як до клітин - мішеней, так і мікросферам. Пробірки інкубували в темряві протягом 30 хвилин при 4 "С. Клітини і мікросфери промивали шляхом додавання 2 мл буфера для ГАСЗ і центрифугування при 2500 х б протягом 5 хвилин. Одну краплю популяції порожніх мікросфер додавали після промивання.
Мікросфери аналізували спочатку на проточному цитометрі для встановлення специфічних для аналізу налаштувань приладу (напруги РМТ і компенсація). З використанням таких самих налаштувань приладу реєстрували геометричне середнє значень флуоресценції мікросфер і клітин - мішеней. Стандартну криву сайтів зв'язування з антитілом на популяціях мікросфер одержували з геометричного середнього значень флуоресценції популяцій мікросфер. Сайти зв'язування 3 антитілом на клітинах - мішенях розраховували на підставі середнього геометричного значень флуоресценції клітин - мішеней з використанням стандартної кривої, отриманої для мікросфер в електронній таблиці ОціскСаї (Вапоз І арогайогіев5).
Для визначення підходящих клітинних ліній - мішеней для оцінки СО123 х СО3 біспецифічних диатіл, рівні поверхневої експресії СО123 на лініях - мішенях Казиті-3 (ГМЛ),
Моїт13 (ГМЛ), ТНР-1 (ГМЛ), ТЕ-1 (еритролейкоз) і К54-11 (ОЛЛ) оцінювали за допомогою кількісного аналізу ЕАСЗ (ОБАС5). Абсолютні кількості сайтів зв'язування з антитілом СО123 на клітинній поверхні розраховували з використанням набору ОБАС5. Як показано в таблиці 3, абсолютна кількість сайтів зв'язування з антитілом СО123 на клітині становили порядок Казиті-
З (високе) » Моїт!3 (середнє) » ТНР-1 (середнє) » ТЕ-1 (помірно низьке) » К54-11 (низьке). Три клітинні лінії з найвищими рівнями експресії являли собою клітинні лінії ГМЛ: Казиті-3, МОЇ! М1З і ТНР-1. Ті, що не мали відношення до ГМЛ клітинних ліній: ТЕ-1 і К54-11, характеризувалися помірно низькою/низькою експресією СО123, відповідно.
Таблиця З
Клітинна лінія - Поверхнева мішеней експресія СЮО123 (сайти зв'язування з антитілом)
Приклад З
Аналіз цитотоксичності СТІ. (аналіз вивільнення І ОН)
Прикріплені пухлинні клітини - мішені відкріплювали за допомогою 0,25 95 розчину трипсину-
ЕОТА і збирали шляхом центрифугування при 1000 об./хв. протягом 5 хв. Суспензію клітинних ліній - мішеней збирали з культури, відмивали за допомогою середовища для аналізу.
Концентрацію і життєздатність клітин вимірювали за витисненням трипанового синього з використанням лічильника клітин ВесКтап СошКег Мі-СеїЇ. Клітини - мішені розводили до 4х105 клітин/мл у середовищі для аналізу. 50 мкл розведеної клітинної суспензії додавали в 96- ямковий О-донний оброблений клітинною культурою планшет (Мо за кат. ВО РаЇсоп 353077).
Встановлювали три набори контролів для вимірювання максимального вивільнення з мішені (МЕ), незалежної від антитіла Т-клітинної цитотоксичності (АІСС) і спонтанного вивільнення із клітини - мішені (ЗК) у такий спосіб: 1) МЕ: 200 мкл середовища для аналізу без СЮО123 х СОЗ біспецифічних диатіл і 50 мкл клітин - мішеней; детергент додавали наприкінці експерименту для визначення максимального вивільнення ГІ ОН. 2) АІСС: 50 мкл середовища для аналізу без СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл, 50 мкл
Зо клітин - мішеней і 100 мкл Т-клітин. 3) ЗЕ: 150 мкл середовища без СО123 х СОЮЗ біспецифічних диатіл і 50 мкл клітин - мішеней.
СсО0123 х СО3З біспецифічні диатіла (АКТ-А, ОАВТ-А м/АВО і БАКТ-В) і контролі спочатку розводили до концентрації, що становить 4 мкг/мл, і потім одержували серійні розведення до кінцевої концентрації, що становить 0,00004 нг/мл (тобто 40 Ффмг/мл). 50 мкл розведень додавали до планшета, що містить 50 мкл клітин - мішеней/лунка.
Очищені Т-клітини промивали один раз середовищем для аналізу і ресуспендовували в середовищі для аналізу із щільністю Т-клітин, що становить 2 х 109 клітин/мл. 2 х 105 Т-клітин в 100 мкл додавали до кожної лунки до кінцевого співвідношення ефектора до клітини - мішені (Е:Т), що становить 10:1. Планшети інкубували протягом приблизно 18 год. при 37 "С в 5 95 СО».
Після інкубації 25 мкл 10х лізуючого розчину (Рготеда, Мо за кат. С182А) або 1 мг/мл дигітоніну додавали до контрольних лунок максимального вивільнення, перемішували за допомогою піпетки З рази і планшети інкубували протягом 10 хв. до повного лізису клітин - мішеней. Планшети центрифугували при 1200 об./хв. протягом 5 хвилин і 50 мкл супернатанту переносили з кожної лунки аналітичного планшета в плоскодонний планшет для ЕЇГ ІЗА і 50 мкл розчину субстрату СОН (Рготеда, Мо за кат. 51780) додавали до кожної лунки. Планшети інкубували протягом 10-20 хв при кімнатній температурі (КТ) у темряві, потім додавали 50 мкл стоп - розчину. Оптичну щільність (0.0.) вимірювали при 490 нм у межах 1 год. на планшет-
Зо ридері Місог2 Мищіабеї (Регкіп ЕІптег, Мо за кат. 420-014). Цитотоксичність в 96 розраховували, як описано нижче, і криві відповіді на дозу одержували з використанням програмного забезпечення СгарпРай РКІБМ5Ф)
Лізис конкретних клітин розраховували з даних 0.0. с використанням наступної формули:
Цитотоксичність (95) - 100 х (00 зразка - 00 АІСС)УХОЮ МА-О0О 58)
Переспрямований цитоліз клітинних ліній - мішеней за допомогою різних рівнів поверхневого СО123
СО0123 х СОЗ біспецифічні диатіла виявили виражену здатність до перенаправленого цитолізу з концентраціями, які повинні досягати 50 95 від максимальної активності (ЕС505) у діапазоні суб-нг/мл, незалежно від специфічності зв'язування з епітопом СОЗ (ОАКТ-А у порівнянні з ОАКТ-В) у клітинних лініях - мішенях з високим рівнем експресії СО123, Казиті-З (ЕС50О-0,01 нг/мл) (фігура 4, панель 0), середнім рівнем експресії СО123, Моїт!З3 (ЕС50О-0О,18 нг/мл) і ТНР-1 (ЕС5О-0,24 нг/мл) (фігура 4, панель С і Е, відповідно) і помірно низьким або низьким рівнем експресії СО123, ТЕ-1 (ЕС50-0,46 нг/мл) і 54-11 (ЕС50О-0,5 нг/мл) (фігура 4, панель В і А, відповідно). Аналогічно, опосередкований СО123 х СОЗ біспецифіческими молекулами переспрямований цитоліз також спостерігали із численними клітинними лініями - мішенями з Т-клітинами з різних донорів і відсутність активності у вигляді перенаправленого цитолізу спостерігали в клітинних лініях, які не експресують СО123. Результати узагальнено представлені в таблиці 4.
Таблиця 4
Клітинна лінія - Поверхнева експресія ЕС50О, що Макс. 95 цитолізу мішень СОр123 (сайти характеризуються зв'язування з оптимізованою антитілом) послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл (нг/мл)
Е:Т-10: валі 7 / Ї7777171717957.......Й.Щ.|.ЮЙЙЮЮ.05.....БЬ 1 |. ЮЙМдлов с
Якщо буде потреба відтворити зазначений приклад, слід розуміти, що фахівець у даній області техніки зможе в межах доцільних і прийнятних границях змінити описаний вище протокол підходящим чином для відтворення описаних результатів. Таким чином, не мається на увазі, що проілюстрований протокол повинен дотримуватися точно визначеним чином.
Приклад 4
Т-клітинна активація під час перенаправленого цитолізу за допомогою біспецифічних диатіл (ОАВТ-А, ОАНТ-А м/АВО ії САКТ-А м/с), що характеризуються оптимізованою послідовністю
СОр123 х СОЗ
Зо Біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ виявили виражену здатність до перенаправленого цитолізу незалежно від присутності або відсутності технології збільшення періоду напівжиття (САКТ-А у порівнянні з ОАКТ-А м/АВО у порівнянні з ОАКТ-А м/Ес) у клітинних лініях - мішенях з високою експресією СО123, Казиті-3, і середньою експресією СО123, ТНР-1 (фігура 5, панелі А і В, відповідно). Щоб одержати характеристики Т-клітинної активації протягом процесу опосередкованого, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатілом перенаправленого цитолізу,
Т-клітини з аналізів перенаправленого цитолізу офарблювали відносно маркера Т-клітинної активації СО25 і аналізували за допомогою БАС5. Як показано на фігурі 5, панелі ОЮ, С025 зазнав позитивно регуляції в СО8 Т-клітинах залежним від дози чином, указуючи на те, що, біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3 індуціювали Т-клітинну активацію в процесі перенаправленого цитолізу. Напроти, при відсутності клітин - мішеней не спостерігалася активація СО8 Т-клітин (фігура 5, панель С), що вказує на те, що біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю
СОр123 х СОЗ не активують Т-клітини при відсутності клітин - мішеней. Аналогічно, СО8 Т-
клітини не активувалися при інкубації із клітинами - мішенями і контрольним біспецифічним диатілом (контрольним ЮАКТ) (фігура 5, панель Ю), указуючи на необхідність перехресної зшивки Т-клітини і клітини - мішені з біспецифіческими диатілами, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3.
Приклад 5
Внутрішньоклітинне фарбування по відношенню до гранзиму В і перфорину
Для визначення внутрішньоклітинних вмістів гранзиму В і перфорину в Т-клітинах аналіз
СТІ налаштовували, як описано вище. Через приблизно 18 год. клітини з аналітичного планшета офарблювали антитілами до СО4 і до СО8 шляхом інкубації протягом 30 хвилин при 4 "С. Після поверхневого фарбування клітини інкубували в 100 мкл буфера для фіксації і пермеабілізації (ВО Віобсіепсе5) протягом 20 хв. при 4 "С. Клітини промивали буфером для пермеабілізації/відмивання (ВО Віобсієпсев) і інкубували в 50 мкл суміші антитіл до гранзиму В і перфорину (отриманої в 1Х буфері для пермеабілізації/відмивання) при 4 "С протягом 30 хвилин. Потім клітини промивали за допомогою 250 мкл буфера для пермеабілізації/відмивання і ресуспендовували в буфері для пермеабілізації/відмивання для одержання даних ЕАС5.
Позитивна регуляція гранзиму В і перфорину, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЮЗ біспецифічним диатілом (0ОАКТ-А) в Т-клітинах під час перенаправленого цитолізу
Для дослідження можливого механізму опосередкованою, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічним диатілом (ЮАКТ-А), цитотоксичності
Т-клітинами, внутрішньоклітинні вмісти гранзиму В і перфорину вимірювали в Т-клітинах після перенаправленого цитолізу. Залежну від дози позитивну регуляцію вмістів гранзиму В і перфорину як в СО8, так і СО4 Т-клітинах спостерігали після інкубації Т-клітин і клітин Казиті-З з САКТ-А (фігура 6, панель А). Цікаво, що позитивна регуляція була майже у два рази вища в
СО8 Т-клітинах у порівнянні з СО4 Т-клітинами (фігура 6, панель А). Якщо аналіз проводили в присутності інгібіторів гранзиму В і перфорину, клітинний лізис не спостерігався. Позитивна регуляція гранзиму В або перфорину була відсутня в СО8 або СО4 Т-клітинах, якщо Т-клітини інкубували із клітинами - мішенями Кавзиті-3 і контрольним біспецифічним диатілом (контрольним ОБАКТ) (фігура 5, панель В). Наведені дані вказують на те, що опосередкований
Зо рАВТА-А лізис клітин - мішеней може бути опосередкований через механізми за участю гранзиму
В ї перфорину.
Приклад 6
Іп ммо протипухлинна активність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (АКТ-А)
Виділення РВМС і Т-клітин із цільної крові людини
РВМС від здорових донорів - людей виділяли із цільної крові з використанням центрифугування в градієнті Фікола. Коротко, цільну кров розводили 1:1 стерильним РВ5. 35 мл розведеної крові наносили на 15 мл РісоП-Радие"М Рійи5 в 50 мл пробірках і пробірки центрифугували при 1400 об./хв. протягом 20 хв. із розгальмовуванням. Лейкоцитарну плівку між двома фазами збирали в 50 мл пробірку з 45 мл РВ5 шляхом центрифугування пробірок при 600 х д (1620 об./хв.) протягом 5 хв. Супернатант видаляли і клітинний осад відмивали один раз за допомогою РВЗ і кількість життєздатних клітин визначали шляхом витиснення барвника трипанового синього. РВМС ресуспендовували до кінцевої концентрації, що становить 2,5 х 105 клітин/мл у повному середовищі (КРМІ 1640, 10 95ЕВ5, 2 мМ глутаміну, 10 мМ НЕРЕ5, 100
МКМ ООмкМ/мл пеніциліну/стрептоміцину (Р/5).
Виділення Т-клітин. Не піддані впливу Т-клітини виділяли шляхом негативної селекції з
РВМС із цільної крові людини з використанням набору для виділення Т-клітин людини
Бупареада5 Опіоиспей (Гіте ТесппоЇІодіе5) згідно з інструкціями виробника. Після виділення Т- клітини культивували протягом ночі в середовищі КРМІ з 1095 ЕВ5, 195 пеніциліну/стрептоміцину.
Модель пухлини
Т-клітини і пухлинні клітини людей (Моїт13 або 54-11) комбінували у співвідношенні 1:5 (1 х 1051 5 х 106, відповідно) і суспендовували в 200 мкл стерильного сольового розчину і вводили за допомогою підшкірної ін'єкції (5С) в 0 день дослідження (500). Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) або контрольне біспецифічне диатіло (контрольне ОАКТ) вводили внутрішньовенно (ІМ) за допомогою ін'єкцій у хвостову вену по 100 мкл, як презентовано в таблиці 5 (МОЇ М113) і таблиці 6 (54-11).
Таблиця 5
Схема дослідження для моделі МОЇМ13
Група лікування Доза (мг/кг)
Контроль - інертний носій (клітини
МОЇ М-13 окремо імплантовані або 50О,1,2, 3 - Т-клітини)
РАВТ-А 5рО,1,.2,23 |. 8 2 2щ(-
РАВТ-А 5рО,1,.2,23 |. 8 2 2щ(-
РАВТ-А 5рО,1,.2,23 |. 8 2 2щ(-
РАВТ-А 5рО,1,.2,23 |. 8 2 2щ(-
ОАВТ-А 0,004 500,1,2,3 | ЙДщ 8
ОАВТ-А 0,0008 500,1,2,3 | ЙДщ 8
РАВТ-А 0,00016 50р0,1,223 | щЙщЙ((8щж
Таблиця 6
Схема дослідження для моделі К54-11
Група лікування Доза (мг/кг)
Контроль - інертний носій (клітини 8554-11 окремо імплантовані) ЗО, 1,2, З
Контроль - інертний носій (К54- 11-4Т-клітини імплантовані) ЗО, 1,2, З
Контрольне ОАВТ 500,1,2,3 | 8 2 жКфЄ
РАВТ-А 500,1,2,3 | 8 2 жКфЄ
РАВТ-А 500,1,2,3 | 8 2 жКфЄ
РАВТ-А 500,1,2,3 | 8 2 жКфЄ
РАВТ-А 500,1,2,3 | 8 2 жКфЄ
РАВТ-А 0,004 5р0,1,2,3 | 8
Збір даних і статистичний аналіз:
Маси тварин - Маси окремих тварин реєстрували два рази на тиждень до завершення дослідження, починаючи з моменту ін'єкції пухлинних клітин.
Стан агонії/смертність - Проводили спостереження за тваринами два рази на тиждень відносно загального стану агонії і щодня відносно смертності. Смертельні випадки тварин оцінювали як пов'язані з лікарським засобом або технічні на підставі факторів, включаючи в себе макроскопічні спостереження і втрату маси тіла; смертельні випадки у тварин реєстрували щодня. довжина (мм) х ширина?
Об'єм пухлини - Об'єми окремих пухлин реєстрували двічі на тиждень, починаючи не пізніше одного тижня після імплантації пухлини і продовжуючи до завершення дослідження.
Об'єм пухлини (мм)
І епдій (тт) х міді"
Титог Моїште (тт) - ЗПСМ, 9 ( 5 ух ах
Тварини, що вмерли внаслідок технічної або пов'язаної з лікарським засобом смерті, виключали з розрахунків даних.
Інгібування росту пухлини - Значення інгібування росту пухлини (ТОЇ) розраховували для кожної групи, що містить тварин, що одержали лікування, з використанням наступної формули:
Середній кінц. об'єм пухлини (який піддівали лікуванню)-середній початк. об'єм пухлини (який піддівали лікуванню)
Середній кінц. об'єм пухлини (контроль)-середній поч. об'єм пухлини (контроль) 1. Меап Ріпа! Титог МоЇште (Тгєаїед) - Меап Іпійа! Титог Моїште (Ттєаїєд) х100
Меап Ріпа! Титог Моїште (Сопігої) - Меап Іпійа! Титог Моїште (Сопігої)
Тварин, у яких спостерігалася часткова або повна ремісія, або тварин, що вмерли внаслідок технічної або пов'язаної з лікарським засобом смерті, виключали з розрахунків ТОЇ. Критерії
Національного інституту раку для активності сполуки становить ТО1»58 95 (Согреїй еї аї. (2004)
Апіїсапсег Огиа ЮОемеІортепі Сиіде; Тоїожа, Му: Нитапа 99-123).
Часткова/повна відповідь пухлини - Окремих мишей, що характеризуються наявністю пухлин розміром менше ніж 1 мм? на 1 день, класифікували як таких, що характеризуються частковою ремісією (РК) і значення регресії пухлини в 9о (901) визначали з використанням наступної формули:
Початковий об'єм пухлини (мм)
Кінцевий об'єм пухлини (мм)
Н З
1- Ніла! Титог Моїште (тт 4009,
Іпйа! Титог Моїште (тт")
Окремих мишей, у яких були відсутні пальпуємі пухлини, класифікували як таких, що зазнали повної ремісії (СК).
Статистичні дані відносно об'єму пухлини - Статистичний аналіз проводили між контрольними групами, що одержали лікування і, порівнюючи об'єми пухлин. Для цих аналізів використовували двохфакторні аналізи дисперсії з наступним апостеріорним критерієм
Бонферони. Усі аналізи проводили з використанням програмного забезпечення СгарпРай
РКІБМО (версії 5.02). Дані у відношенні маси і пухлини від окремих тварин, що вмерли внаслідок технічної або пов'язаної з лікарським засобом смерті, виключали з аналізу. Проте, дані відносно пухлин тварин, які продемонстрували часткову або повну відповіді, включали в зазначені розрахунки.
Результати МОЇ! М1З3
Клітинну лінію ГМЛ, МОГМ13, попередньо змішували з активованими Т-клітинами і імплантували 5С МОБ)/ЗСІЮО гама (М5О) нокаутним мишам (М-в/група) у день 500, як докладно описано нижче. Пухлини МОЇ М13 в отримавшій лікування за допомогою інертного носія групі (клітини МОЇМ13 окремо або разом з Т-клітинами) продемонстрували профіль щодо агресивного росту іп мімо (фігура 7, панелі А і В). У день 5ЮОве середній об'єм пухлин отримавших лікування за допомогою інертного носія групі становив 129,8ж429,5 мм і до дня 5015 пухлини досягли середнього об'єму, що становить 786,4-156,7 мм3. До кінця експерименту в день 5018 пухлини досягали середнього об'єму, що становить 1398,82236,9
ММ.
Лікування за допомогою ЮАКТ-А починали в той же день, як була імплантована суміш пухлинних клітин і Т-клітин (КЗОО)| і продовжували далі із щоденними ін'єкціями протягом додаткових 7 днів для досягнення в загальному 8 щоденних ін'єкцій. Тварин лікували за допомогою ВАКТ-А при 9 рівнях дози (0,5,0,2,0,1,0,02 і 0,004 мг/кгі 20, 4, 0,8 ї 0,16 мкг/кг).
Результати показано на фігурі 7, панелі А (0,5,0,2,0,1, 0,02 і 0,004 мг/кг) і фігурі 7, панелі В (20, 4, 0,8 і 0,16 мкг/кг). У день дослідження 11 ріст пухлин МОЇ М13 значно інгібувався при рівнях дози, що становлять 0,16, 0,5,0,2, 0,1, 0,02 ї 0,004 мг/кг (р « 0,001). Більше того, лікування мишей з пухлиною МОЇ М13 при рівнях доз, що становлять 20 і 4 мкг/кг доза, призводило до 8/8 і 7/8 СЕ, відповідно. До кінця експерименту в день 5018 середній об'єм пухлин, оброблених за допомогою ВАКТ-А у дозі, що становить 0,8 - 20 мкг/кг, перебував у діапазоні від 713,6,05267,4 до 0 мм3, причому всі пухлини були значно менші, ніж пухлини в отримавшій лікування за допомогою інертного носія контрольній групі. Значення ТО становили 100, 94 і 49 95 для груп, що одержали дози 20, 4 і 0,8 мкг/кг, відповідно. У порівнянні з отримавшою лікування за допомогою інертного носія групі з пухлинними клітинами МОГ М13, групи, які одержали ОАКТ-А при рівні дози, що становить 20 і 4 мкг/кг, досягли статистичного рівня значимості до дня 5015, тоді як група, що одержала лікування за допомогою 0,8 мкг/кг, досягла статистичного рівня значимості до дня 5018.
Результати К54-11
Клітинну лінію ОЛЛ, К54-11, попередньо змішували з активованими Т-клітинами і імплантували 5С МОБ)/ЗСІЮО гама (М5О) нокаутним мишам (М-в/група) у день 500, як докладно описано нижче. Пухлини К54-11 в отримавшій лікування за допомогою інертного носія групі (клітини К54-11 окремо або разом з Т-клітинами) продемонстрували профіль щодо агресивного росту іп мімо (фігура 8).
Лікування за допомогою ЮАКТ-А починали в той же день, як була імплантована суміш пухлинних клітин і Т-клітин (КЗОО)| і продовжували далі із щоденними ін'єкціями протягом додаткових З днів для досягнення в загальному 4 щоденних ін'єкцій. Тварин лікували за допомогою ЮАВТ-А при 5 рівнях доз (0,5, 0,2, 0,1, 0,02 і 0,004 мг/кг). Результати показані на фігурі 8.
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (РАВРТ-А) ефективно інгібувало ріст як МОЇ М1З3 ГМЛ, так ії К54-110ЛЛ пухлин, імплантованих
ЗС МОБ/5СІО мишам у контексті моделі М/іпп, якщо введення доз починали в день імплантації і продовжували протягом З або більше послідовних днів. На підставі критеріїв, встановлених
Національним інститутом раку, САКТ-А при рівні дози, що становить 0,1 мг/кг і вище (ТОЇ »58), вважається активним у моделі К54-11, і доза ОАКТ-А, що складає 0,004 мг/кг і вище, була активною в моделі МОЇ М13. Більш низькі дози БАКТ-А, пов'язані з інгібуванням росту пухлин у моделі МОЇ М13 у порівнянні з моделлю К54-11, узгодяться з даними іп міго, що демонструють, що клітини МОЇ М13 характеризуються підвищеним рівнем експресії СО123, ніж клітини К54-11, що корелює з підвищеною чутливістю до опосередкованої ОАКТ-А цитотоксичності іп міго у клітинах МОЇ М13.
Якщо буде потреба відтворити зазначений приклад, слід розуміти, що фахівець у даній області техніки зможе в межах доцільних і прийнятних границях змінити описаний вище протокол підходящим чином для відтворення описаних результатів. Таким чином, не мається на увазі, що проілюстрований протокол повинен дотримуватися точно визначеним чином.
Приклад 7
Поверхнева експресія СО123 на лейкозних бластних клітинах і стовбурових клітинах у первинному зразку тканини від пацієнта 1 з ГМЛ
Для визначення патерну експресії СО123 у первинних зразках від пацієнта 1 з, кріоконсервовані первинні зразки кісткового мозку і РВМС пацієнта з ГМЛ оцінювали відносно поверхневої експресії СЮО123 на лейкозних бластних клітинах.
Зразок кісткового мозку ГМЛ- клінічний звіт
Вік: 42
Стать: жіноча
Підтип ГМЛ: М2
Відсоткове співвідношення злоякісних клітин на підставі морфології: 67,5 90
Імунофенотипування кісткового мозку:
СбОр15-19 95, СО33-98,5 96, СО38-28,8 ую, С045-81,8 96, СО64-39,7 У, СО0117-42,9 Фо, НІ А-
ОрА-1795, Сб0р2-1,895, СО5-0,5395, 0007-0295, С0О10-0,41 95, СО19-1,1 95, СбОр20-1,4 Об,
Зо бОр22-0,71 У6 6О034-0,82 95
Експресія СЮО123 у лейкозних бластних клітинах у мононуклеарах кісткового мозку (ВМ ММС)
Загалом 0,5 х 106 мононуклеарів кісткового мозку (ВМ ММС) і мононуклеарів периферичної крові (РВМС)) від пацієнта 1 з ГМЛ оцінювали відносно експресії СО123. Клітинну лінію Казиті-З включали в якості контролю. Лейкозні бластні клітини ідентифікували з використанням мієлоїдного маркера СОЗ33. Як показано на фігурі 9, панелі А, 87 9о клітин з кісткового мозку ГМЛ від пацієнта 1 експресували СО123 і СО33. Рівні експресії СО123 були дещо нижче, ніж в експресуючій СО123 на високому рівні клітинній лінії ГМЛ, Казиті-3 (фігура 9, панель В).
Приклад 8
Аналіз аутологічного цитолізу СТІ. з використанням первинних зразків від пацієнта з ГМЛ
Кріоконсервований первинний зразок ГМЛ (мононуклеари кісткового мозку (ВММС) і мононуклеари периферичної крові (РВМС)) від пацієнта 1 з ГМЛ відтаювали в КРМІ 1640 з 10 96
ЕВ5 і залишали для відновлення протягом ночі при 37 "С в 5595 СО». клітини промивали середовищем для аналізу (КРМІ 1640--10 95ЕВ5) і кількість життєздатних клітин визначали за витисненням трипанового синього. 150000 клітин/лунка в 150 мкл середовища для аналізу додавали до 9б-ямкового О-донного планшету (ВО Віозсіепсе5). Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) розводили до 0,1 ї 0,01 нг/мл і 50 мкл кожного розведення додавали до кожної лунки (кінцевий об'єм - 200 мкл).
Контрольне біспецифічне диатіло (контрольне ОАКТ) розводили до 0,1 нг/мл і 50 мкл кожного розведення додавали до кожної лунки (кінцевий об'єм - 200 мкл). Окремий аналітичний планшет налаштовували для кожної часової точки (48, 72, 120 ї 144 години) і планшети інкубували при 37 "С в інкубаторі з 595 СО». У кожну часову точку клітини офарблювали за допомогою антитіл до СО4, СО8, С025, С0р45, 2033 ії СО123. Мічені клітини аналізували в проточному цитометрі РАСЗ Саїїриг, обладнаному програмним забезпеченням для збору даних
СепОицевзі Рго, версії 5.2.1 (ВО ВіозЗсіепсе5). Аналіз даних проводили з використанням програмного забезпечення РіІоулЛо м9.3.3 (Тгеевїаг, Іпс). Т-клітинну експансію вимірювали шляхом гейтирування на популяціях СО4-- і СО8-- і активацію визначали шляхом вимірювання середнього значення інтенсивності флуоресценції СО25 (МЕ) на гейтированих у відношенні сра- і Сов популяціях. Популяцію лейкозних бластних клітин ідентифікували за допомогою гейтирування СО45-СО33.
Аутологічна деплеція пухлинних клітин, Т-клітинна експансія і активація за допомогою біспецифічного диатіла, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАВТ-А) у первинних зразках від пацієнта 1 з ГМЛ
Для визначення опосередкованою біспецифічним диатілом, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ВАВТ-А) активності у пацієнта 1 з ГМЛ, зразки від пацієнта інкубували з 0,1 нг/мл або 0,01 нг/мл ОАВТ-А і відсоткові відношення лейкозних бластних клітин і Т-клітин вимірювали в різні часові точки після лікування. Лейкозні бластні клітини ідентифікували шляхом СО45-/СО033- гейтирування. Інкубація первинних зразків кісткового мозку при ГМЛ із ПОАКТ-А приводила до деплеції популяції лейкозних клітин із часом (фігура 10, панель А), що супроводжувалося супутньою експансією залишкових Т-клітин (фігура 10, панель В) і індукцією маркерів Т-клітинної активації (фігура 10, панель С). В оброблених рАВТА-А зразках Т-клітини зазнали експансії від приблизно 7 95 до приблизно 80 95 до 120 год. Т- клітинна активація, вимірювана по експресії СО25 на С04 і СО8 клітинах, досягала піка через 72 год. і знижувалася до часової точки 120 год.
Якщо буде потреба відтворити зазначений приклад, слід розуміти, що фахівець у даній області техніки зможе в межах доцільних і прийнятних границях змінити описаний вище протокол підходящим чином для відтворення описаних результатів. Таким чином, не мається на увазі, що проілюстрований протокол повинен дотримуватися точно визначеним чином.
Приклад 9
Поверхнева експресія СЮО123 на лейкозних бластних клітинах і стовбурових клітинах у первинному зразку тканини від пацієнта з ОЛЛ
Для визначення патерну експресії СО123 у первинних зразках від пацієнта з ОЛЛ, кріоконсервований первинний зразок РВМС від пацієнта з ОЛЛ оцінювали відносно поверхневої експресії СО123 на лейкозних бластних клітинах.
Експресія СО123 у лейкозних бластних клітинах у мононуклеарах периферичної крові (РВМО)
Загалом 0,5 х 106 мононуклеарів периферичної крові (РВМС)) від здоровішого донора і пацієнта з ОЛЛ оцінювали відносно експресії СО123. Як показано на фігурі 11, панелях Б-Н переважну більшість клітин з кісткового мозку ОЛЛ експресували СО123. Навпаки, як
Зо передбачалося, у нормального донора В-клітини є негативними у відношенні СО123 і рос і моноцити є позитивними у відношенні СО123 (фігура 11, панель 0).
Т-клітинну популяцію ідентифікували в зразку пацієнта з ОЛЛ по фарбуванню клітин у відношенні СО4 і СО8. Як показано на фігурі 12, панелі В, тільки невелика фракція загальних
РВМС у зразку пацієнта з ОЛЛ являла собою Т-клітини (приблизно 0,5 95 являли собою СА Т- клітини і приблизно 0,4 95 являли собою СОВ8 Т-клітини).
Приклад 10
Аналіз аутологічного цитолізу СТІ. з використанням первинних зразків від пацієнта з ОЛЛ
Кріоконсервований первинний зразок ОЛЛ (мононуклеари периферичної крові (РВМС)) відтаювали в КРМ 11640 з 10 95 ЕВ5 і залишали відновлюватися протягом ночі при 37 "С в 5 95
СО». Клітини промивали середовищем для аналізу (КРМІ 1640-10 9585) і кількість життєздатних клітин визначали по витисненню трипанового синього. 150000 клітин/лунка в 150 мкл середовища для аналізу додавали до 96-ямкового О-донного планшету (ВО Віобсіепсев).
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАНТ-
А) розводили до 10, 1 нг/мл і 50 мкл кожного розведення додавали до кожної лунки (кінцевий об'єм - 200 мкл). Окремий аналітичний планшет встановлювали для кожної часової точки (48, 72, 120 ї 144 години) і планшети інкубували при 37 "С в інкубаторі з 5 95 СО». У кожній часовій точці клітини офарблювали за допомогою антитіл до СО4, СО8, С0р25, 2045, СО33 і СО123.
Мічені клітини аналізували в проточному цитометрі ЕАС5 Саїїрбиг, обладнаному програмним забезпеченням для збору даних СеПОицеві Рго, версії 5.2.1 (ВО Віозсіеєпсе5). Аналіз даних проводили з використанням програмного забезпечення Ріом/о м9.3.3 (Тгеезіаг, Іпс). Т-клітинну експансію вимірювали шляхом гейтирування на популяціях СО4- і СО8-- і активацію визначали шляхом вимірювання МЕ! СО25 на гейтированих у відношенні СО4- ії СО8- популяціях.
Популяцію лейкозних бластних клітин ідентифікували за допомогою гейтирування
Ср45-С033-н.
Аутологічна деплеція пухлинних клітин, Т-клітинна експансія і активація за допомогою біспецифічного диатіла, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЮЗ (ОАВТ-А) у первинних зразках від пацієнтів з ОЛЛ
Для визначення опосередкованої біспецифічним диатілом, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) активності в первинних зразках від бо пацієнта з ОЛЛ зразки пацієнта інкубували з 1 нг/мл БАКТ-А ії відсоткові відносини лейкозних бластних клітин і Т-клітин вимірювали в різні часові точки після лікування. Лейкозні бластні клітини ідентифікували по СО45:/20337 гейтируванню. Інкубація первинних зразків кісткового мозку при ОЛЛ із ОАКТ-А приводила до деплеції популяції лейкозних клітин із часом у порівнянні з необробленим контролем або контрольним БАКТ (фігура 13, панель Н у порівнянні з панелями Е і б). Якщо Т-клітини підраховували (фарбування у відношенні СО8 і СО4) і активацію (фарбування у відношенні СО25) аналізували, Т-клітини піддавали експансії і активувалися в зразку САКТ-А (фігура 14, панелі І і І, відповідно) у порівнянні з необробленими зразками або обробленими контрольним ЮАКТ зразками (фігура 14, панелі Н, б, К і у, відповідно).
Приклад 11
Поверхнева експресія СО123 на лейкозних бластних клітинах і стовбурових клітинах у первинному зразку тканини від пацієнта 2 з ГМЛ
Для визначення патерну експресії СО123 у первинних зразках пацієнта 2 з ГМЛ кріоконсервовані первинні зразки кісткового мозку і РВМС пацієнта з ГМЛ оцінювали відносно поверхневої експресії СО123 на лейкозних бластних клітинах.
Експресія СЮО123 у лейкозних бластних клітинах у мононуклеарах кісткового мозку (ВММС)
Загалом 0,5 х 105 мононуклеарів кісткового мозку (ВМ ММС) і мононуклеарів периферичної крові (РВМС)) від пацієнта 2 з ГМЛ оцінювали для ідентифікації лейкозних бластних клітин.
Лейкозні бластні клітини ідентифікували з використанням мієлоїдних маркерів СОЗЗ і СО45. Як показано на фігурі 15, панелі В, 94 95 клітин з кісткового мозку з ГМЛ являли собою лейкозні бластні клітини. Т-клітинну популяцію ідентифікували по експресії СОЗ3. Як показано на фігурі 15, панелі С, приблизно 15 95 клітин зі зразка кісткового мозку ГМЛ і РВМС являли собою Т- клітини.
Приклад 12
Аналіз аутологічного цитолізу СТІ. з використанням первинних зразків від пацієнта 2 з ГМЛ
Кріоконсервований первинний зразок ГМЛ (мононуклеари кісткового мозку (ВМ ММС) і мононуклеари периферичної крові (РВМС)) від пацієнта 2 з ГМЛ відтаювали в КРМ 11640 з 10 Фо
ЕВ5 і залишали відновлюватися протягом ночі при 37 "С в 595 СО». клітини промивали середовищем для аналізу (КРМІ 1640--10 96 ЕВ5) і кількість життєздатних клітин визначали по
Зо витисненню трипанового синього. 150000 клітин/лунка в 150 мкл середовища для аналізу додавали до 9б-ямкового О-донного планшету (ВО Віозсіепсе5). Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) і контрольне біспецифічне диатіло (контрольне ЮАКТ) розводили до 0,1 і 0,01 нг/мл і 50 мкл кожного розведення додавали до кожної лунки (кінцевий об'єм - 200 мкл). Окремий аналітичний планшет встановлювали для кожної часової точки (48, 72, 120 ї 144 години) і планшети інкубували при 37 "С в інкубаторі з 5 95 СО». У кожній часовій точці клітини офарблювали за допомогою антитіл до СО4, СО8, С025, С0р45, 2033 ії СО123. Мічені клітини аналізували в проточному цитометрі РАСЗ Саїїриг, обладнаному програмним забезпеченням для збору даних
СепОицевзі Рго, версії 5.2.1 (ВО ВіозЗсіепсе5з). Аналіз даних проводили з використанням програмного забезпечення РіІоулЛо м9.3.3 (Тгеевїаг, Іпс). Т-клітинну експансію вимірювали шляхом гейтирування на популяціях СО4- і СО8 і активацію визначали шляхом вимірювання
МЕРІ С0О25 на гейтированих у відношенні СО4- і СОвж- популяціях. Популяцію лейкозних бластних клітин ідентифікували за допомогою гейтирування СО45-4СО33-.
Аутологічна деплеція пухлинних клітин, Т-клітинна експансія і активація в первинних зразках від пацієнта 2 з ГМЛ
Для визначення опосередкованою біспецифічним диатілом, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) активності в первинних зразках від пацієнта 2 з ГМЛ зразки пацієнта інкубували з 0,1 або 0,01 нг/мл БАКТ-А і відсоткові відносини лейкозних бластних клітин і Т-клітин вимірювали в різні часові точки після лікування. Інкубація первинних зразків кісткового мозку при ГМЛ із ОАКТ-А приводила до деплеції популяції лейкозних клітин із часом (фігура 16, панель А), що супроводжувалося супутньою експансією залишкових Т-клітин (як СО4, так ії СОВ8) (фігура 16, панель В і фігура 16, панель С, відповідно).
Для визначення того, чи були Т-клітини активовані, клітини офарблювали у відношенні СО25 або Кі-67, обох маркерів Т-клітинної активації. Як показано на фігурі 17, панелях А і В, інкубація первинних зразків кісткового мозку при ГМЛ із ПОАКТ-А приводила до Т-клітинної активації.
Зазначені дані представляли часову точку 144 год.
Внутрішньоклітинне фарбування по відношенню до гранзиму В і перфорину.
Для визначення внутрішньоклітинних вмістів гранзиму В і перфорину в Т-клітинах проводили аналіз СТІ. Через приблизно 18 год. клітини з аналітичного планшета офарблювали антитілами бо до СО4 і до СЮО8 шляхом інкубації протягом 30 хвилин при 4 "С. Після поверхневого фарбування клітини інкубували в 100 мкл буфера для фіксації і пермеабілізації протягом 20 хв. при 4 "с.
Клітини промивали буфером для пермеабілізації і інкубували в 50 мкл суміші антитіл до гранзиму В і перфорину, отриманої в 1Х буфері для пермеабілізації/відмивання, при 4 "С протягом 30 хвилин. Потім клітини промивали за допомогою 250 мкл буфера для пермеабілізації/відмивання і ресуспендовували в буфері для пермеабілізації/відмивання для одержання даних ЕАС5
Позитивна регуляція гранзиму В і перфорину, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЮЗ біспецифічним диатілом (ОАКТ-А) в Т-клітинах під час перенаправленого цитолізу
Для дослідження можливого механізму опосередкованою біспецифічним диатілом, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) цитотоксичності Т- клітинами, внутрішньоклітинні вмісти гранзиму В і перфорину вимірювали в Т-клітинах після перенаправленого цитолізу. Якщо Т-клітини інкубували з контрольним біспецифічним диатілом (контрольним САКТ), позитивну регуляцію гранзиму В і перфорину не спостерігали. Позитивну регуляцію вмістів гранзиму В і перфорину як в СОВ8, так і СО4 Т-клітинах спостерігали під дією біспецифічного диатіла, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (РАРТ-А) (фігура 17, панелі С і Б). Цікаво, що позитивна регуляція була майже у два рази вище в СО8 Т-клітинах у порівнянні з СО4 Т-клітинами (фігура 17, панель С і фігура 17, панель 0).
Наведені дані вказують на те, що опосередкований ОАКТ-А лізис клітин - мішеней опосередкований через шлях за участю гранзиму В і перфорину.
Приклад 13
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, перехресно реагує з білками СО123 і СОЗ нелюдиноподібного примата
Для кількісного визначення ступеню зв'язування між біспецифічним диатілом, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАВТ-А) і СОЗ людини або яванської макаки, проводили аналізи ВІАСОРЕ "М. В аналізах ВІАСОКЕ"М вимірюють константу швидкості дисоціації, Ка. Афінність зв'язування (КО) між антитілом і його мішенню являє собою функцію кінетичних констант для асоціації (константа швидкості асоціації, Ка) і дисоціації (константа швидкості дисоціації, Ка) згідно з формулою: КО - ІкаКаїЇ. В аналізі ВІАСОБЕ "М
Зо використовується поверхневий плазмонний резонанс для вимірювання прямо зазначених кінетичних параметрів. Рекомбінантний СОЗ людини або яванської макаки прямо імобілізовували на підкладку. Очищений СО123 людину або яванської макаки захоплювали і імобілізовували на підкладку. Вимірювали час тривалості дисоціації і проводили бівалентну апроксимацію даних. Константи зв'язування і афінності одержували з використанням 1:1 апроксимації зв'язування. Результати аналізів ВІАСОВЕ"М, у яких порівнювали зв'язування з білками СО123 ії СОЗ людини в порівнянні з більами СО123 і СОЗ яванської макаки, показані на фігурі 18. Афінності зв'язування з білками СО123 яванської макаки (Фігура 180) і СОЗ яванської макаки (фігура 188) є порівнянними з афінностями зв'язування для білків СО123 людини (Фігура 182) ії СОЗ людини (фігура 184А).
Приклад 14
Аутологічна деплеція моноцитів іп міго з РВМС людини і яванської макаки
РВМО зі зразків цільної крові людини або яванської макаки додавали до О-донних планшетів із щільністю Т-клітин, що становить 200000 клітин/лунка в 150 мкл середовища для аналізу.
Розведення, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл (ФАКТ-А або ОАКТ-А м/АВІ)) одержували в середовищі для аналізу. 50 мкл кожного розведення ОАВТ-А або САКТ-А м/АВО додавали до планшета, що містить РВМС у лунках у двох паралелях. Планшети інкубували протягом -- 18-24 год. при 37 "С. Супернатанти використовували для визначення цитотоксичності, як описано вище. Як показано на фігурі 19 (панелі А і В), деплецію клітин рос спостерігали як в РВМС людини (фігура 19, панель А), такі
РВМС яванської макаки (фігура 19, панель В). Зазначені результати вказують на те, що циркулюючі в кровотоці РОС можна використовувати в якості фармакодинамічного маркера для доклінічних токсикологічних випробувань у яванських макак.
Якщо буде потреба відтворити зазначений приклад, слід розуміти, що фахівець у даній області техніки зможе в межах доцільних і прийнятних границях змінити описаний вище протокол підходящим чином для відтворення описаних результатів. Таким чином, не мається на увазі, що проілюстрований протокол повинен дотримуватися точно визначеним чином.
Приклад 15
Деплеція плазмацитоїдних дендритних клітин у яванських макак, що одержали лікування за допомогою біспецифічного диатіла, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х
СОЗ (САВТ-А)
В якості частини токсикологічного дослідження з пошуку діапазону доз яванським макакам вводили біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СЮОЗ (РАВРТ-А) у вигляді 4-денних інфузій у дозах, що становлять 0,1, 1, 10, 30 100, 300 або 1000 нг/кг. Контрольне САКТ вводили в дозі 100 нг/кг. Для ідентифікації рос і популяцій моноцитів
РВМС яванської макаки, клітини мітили за допомогою антитіла до СО14-РЇТС. Моноцити ідентифікували як СО14- популяцію і рОС ідентифікували як СО14-200123: популяцію. Як показано на фігурі 20, панелях К і Її, рос зазнали деплеції не пізніше ніж через 4 дні після інфузії при дозі не вище 10 нг/кг ОАКТ-А. Не спостерігали деплецію рОС у мавп, що одержали лікування за допомогою контрольного біспецифічного диатіла (контрольного ЮАКТ) або отримавшими лікування за допомогою інертного носія разом з наповнювачем мавп у часовій точці - 4 дня (фігура 20, панелі С, Н, С і 0, відповідно). Вміст цитокінів: інтерферону-гама, ТМЕ- альфа, 11 6, ІІ 5, 11 4 ї 1/2, визначали через 4 години після інфузії. Спостерігалося невелике підвищення або відсутність підвищення вмістів цитокінів у отримавших лікування за допомогою рАВТА-А тварин у порівнянні з отримавшими лікування за допомогою контрольного ПОАКТ або отримавшими лікування за допомогою інертного носія тваринами.
На фігурі 21 і фігурі 22 представлені результати аналізу ЕАС5 для В-клітин (С020) (фігура 21, панель А), моноцитів (СО14») (фігура 21, панель В), МК-клітин (СО0О159-5016) (фігура 21, панель С), рос (Ср12зні, 20143) (фігура 21, панель 0) і Т-клітин (загалом, СО4» і СО8») (фігура 22, панель А, фігура 22, панель В і фігура 22, панель 0, відповідно).
Лікування мавп за допомогою контрольного ОАКТ не приводило до помітних ефектів на Т- або В-лімфоцити, МК-клітини, моноцити і рос. Лікування мавп за допомогою БАКТ-А у дозах, що становлять 10 нг/кг;/день або вище, приводило до усунення рос (фігура 21, панель 0).
Деплеція рОС була повною і тривалою, повертаючись до рівнів до лікування через декілька тижнів після завершення введення доз. Вміст циркулюючих у кровотоці Т-лімфоцитів знижувався при введенні ОАКТ-А, але повертався до рівнів до лікування до кінця кожного
Зо тижневого циклу, що вказує на зміни в міграції, а не на справжню деплецію. Як СО4, такі СО8 Т- лімфоцити характеризувалися однаковим патерном. Маркер активації Т-лімфоцитів, СОб69 (фігура 22, панель С), був лише в невеликому ступені позитивним серед циркулюючих клітин і не змінювався слідом за введення дози ЮАКТ-А. Вміст В-лімфоцитів, моноцитів і МК-клітин коливалися протягом курсу введення доз ЮАКТ-А з істотною мінливістю, спостережуваною серед мавп. Тенденція убік підвищених вмістів циркулюючих В-лімфоцитів і моноцитів спостерігали в обох мавп при найвищих дозах.
Отже, вищенаведені результати демонструють терапевтичну ефективність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (АКТ-А).
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (САКТ-
А) можна використовувати в якості терапевтичного засобу для лікування численних захворювань і станів, включаючи в себе наступне ГМЛ, АВІ (ОЛЛ), ХЛЛ, МДС, росі, мантійноклітинна лімфома, волохатоклітинний лейкоз, ХЛЛ із трансформацією Ріхтера, бластний криз при ХМЛ, ВІЇ. (підклас є СЮО123. (див. приклад 2); системна червона вовчанка (СЧВ), алергія (базофіли є СО123.), бронхіальна астма і т. д.
Приклад 16
Порівняльні властивості біспецифічного диатіла, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3 (ОАКТ-А), і біспецифічного диатіла, що характеризується неоптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-В)
Несподівана перевага і властивості, що характеризуються оптимізованою послідовністю
С0123 х СОЗ біспецифічних диатіл
Як обговорювалося вище, САКТ-А і САКТ-В конструювали аналогічним чином, і перший поліпептид обох конструктів містять, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М-кінець, домен Мі. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (Мі соз), проміжний лінкерний пептид (лінкер 1), домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СЮО123 (МНеоігз), лінкер 2, Е-спіральний домен і С-кінець. Аналогічно, другий поліпептид обох конструктів містять, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М-кінець, домен МІ моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (Мі сорігз), проміжний лінкерний пептид (лінкер 1), домен Мн моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНеоз), лінкер 2, К-спіральний домен і
С-кінець.
Як показано в прикладі 1, було виявлено, що обоє СО123 х СОЗ біспецифічних диатіла здатні одночасно зв'язуватися з СОЗ і СО123. Крім того, як розкрито в прикладі З і на фігурі 4, панелях С і О, два СО123 х СОЗ3 біспецифічні диатіла виявили виражену здатність до перенаправленого цитолізу з концентраціями, які повинні досягати 50 95 від максимальної активності (ЕС50) у діапазоні суб-нг/мл, незалежно від специфічності зв'язування з епітопом
СОЗ (САВТ-А у порівнянні з ВАКТ-В) у клітинних лініях - мішенях з високою експресією СО123.
Таким чином, невеликі варіації в конкретних послідовностях СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл не повністю анулюють біологічну активність.
Проте, у всіх досліджених клітинних лініях було виявлено, що САКТ-А був більш активним і більш ефективним у переспрямованому цитолізі, ніж САКТ-В (див., наприклад, фігуру 4, панелі
А, С і Ю). Таким чином, САКТ-А виявило несподівану перевагу в порівнянні з подібним ОАКТ-В.
Приклад 17
Фармакологія БАКТ-А у нелюдиноподібного примата для лікування гематологічних злоякісних пухлин
Альфа-ланцюг рецептора інтерлейкіну З (1-3), СО123, надлишково експресується на злоякісних клітинах у широкому діапазоні гематологічних злоякісних пухлин (Мипог, Ї. єї аї. (2001) "Іпепецйкіп-3 Весеріог АІрпа СНаіїп (СО123) І5 МУідему Ехргеззед Іп Нетайіодіс
Маїїдпапсіє5, " Наетаїйоіодіса 86:1261-1269; Тевіа, ШО. еї аІ. (2014) "С0123 Іє А Метрбгапе
Віотажег Апа А Пегарецшіїс Тагдеї Іп Нетаїйоіодіс Маїїдпапсієв, " Віота!К. Нев. 2:4) і пов'язаний з несприятливим прогнозом (Мегде, ЕЕ. єї аїЇ. (2011) "Нідн Гемеієї ОГ СбО34-СО3810/-
СО123--ВІав5ів Аге Ргєдісіїме ОЇ Ап Адмегзе Оцісоте Іп Асціє Муєїйоїа І еоКетіа: А Стгойре О!цеві-
ЕІ Оез І еисетієз Аіїдсез ЕЇ МаїЇадієз би Запа (ОБГ АМ5) 5їйау, " Наєтайюіодіса 96:1792- 1798). Більше того, повідомлялося, що СО123 експресується лейкозними стовбуровими клітинами (І 5С) (Чогдап, С.Т. єї аї. (2000) "Тне ІпіепецйКіп-3 Весеріог АІрна Саїп Ів А Опідие
МаїкКег Рог Нитап Асціє Мувеіодепоизв І еикетіа біет СеїЇ5, " еикетіа 14:1777-1784; іп, І... вії аї. (2009) "Мопосіопа! Апіїбоду-Меадаіаївєа Тагдеїпуд Ої СО123, 1-3 НРесеріог АІрна СпНаїп, ЕїЇтіпаїев
Нитап Асшіє Муєїоій ІейКетіс 5ієт Сей, " Се біет СеїЇ 5:31-42), що є перспективною ознакою, що дозволяє націлено впливати на основну причину таких захворювань. Відповідно до цього висновку, СЮО123 також бере участь в аутокринній петлі ІЇ/-3, що підтримує виникнення і розвиток лейкозу, як показано за допомогою здатності блокувального СО123 моноклонального антитіла знижувати приживлення лейкозних стовбурових клітин і поліпшувати виживаність у мишачій моделі гострого мієлоїдного лейкозу (ГМЛ) (іп, Ї. еї аїІ. (2009) "Мопосіопа! Апіроау-
Медіатейд Тагдейнпуд ОЇ СО123, І/-3 Весеріог АІрна Спаїп, ЕІтіпаїєз Нитап Асціє Муеєїоїа
Ї еникетіс С1ет СеїїІв, " Сеїї бієт Сеї! 5:31-42). Проте, у дослідженні 1 фази у пацієнтів з високим ризиком ГМЛ моноклональне антитіло не виявило протилейкозну активність (Нобегпів5, А. МУ. еї а. (2010) "А Рназе І 5ішау ОГ Апіі-са123 Мопосіопа! Апіїбоду (таб) С5І 360 Тагаєїіпу І еоКетіа 5ієт
Сеїїв (І5С) Іп АМІ,, " У. Сіїп. Опсої. 28(З,иррі):е13012). Таким чином, необхідні альтернативні підходи відносно націленого впливу на СО123, включаючи в себе стратегії деплеції. Хоча СО123 експресується підкласом нормальних гемопоетичних клітин-попередників (НРС), гемопоетичні стовбурові клітини (НБЗС) експресують СО123 у невеликій кількості або не експресують взагалі (Чогдап, С.Т. еї а. (2000) "ТНе ІпіепеиКкіп-3 Весеріог АІрпа Спаїп І5 А Опідое МаїКег Рог Нитап
Асціє МуєІодепошз ІГеиКетіа 5іет СеїЇв, " ГеиКетіа 14:1777-1784; іп, МУ. еї а. (2009) "Ведшіайоп
ОГ Тн17 Сеї! ОіНегепііанйоп Апа ЕАЕ Іпдисіп Ву МАРЗК МІК, " Віоса 113:6603-6610), вказуючи на те, що стратегії на підставі деплеції клітин з СО123 забезпечують відновлення за допомогою нормального гемопоеза.
Націлювання власних Т-лімфоцитів пацієнта на лейкозні клітини - мішені являє собою перспективну імунотерапевтичну стратегію для лікування гематологічних злоякісних пухлин.
Спробу застосувати терапевтичний потенціал зазначеного підходу здійснили з використанням блінатумомабу (ВіТте на основі біспецифічного антитіла, що характеризується здатністю зв'язуватися з СОЗ і В-клітинним антигеном СО19) у пацієнтів з В-клітинними лімфомами і пре-
В-клітинним гострим лімфобласним лейкозом ((Кіїпдег, М. еї аї!. (2012) "І"иттипорНнаптасоіодіс
Везропзе ОЇ Раїїєпів М/йп В-І іпеаде Асше І утрпобіавіїс І еиКетіа То Сопііписив Іптивіоп ОЇ Т
СеїІ-Епдадіпда СО19/С03-Вівзресіїїс ВІТЕ Апіїроду Вііпаїштотар, " Віоса 119:6226-6233; Торр,
М.5. еї аї. (2012) "гопа-Тегт РоПом-Ор ОЇ Нетаїйоіодіс Неіарзе-Егее Зигуїмаї! Іп А Рназе 2 Бішау
ОЇ Вііпаїштотаб Іп Раїєпів М/йп МАО Іп В-І іпеаде АГ, " Віоса 120:5185-5187; Торр, М.5. еї а). (2011) "Тагдеїєд Тнегару МУйН ТНне Т-СеїІ-Еподадіпа Апіїбоду Вііпаїштотаб ої СпетоїНегару-
Веїтгасіогу Міпіта! Незідипа! Оізеазе Іп В-І іпеаде Асціє І утрпобіавіїйс І ейКетіа Раїепів Незиїв Іп
Нідйп Незропзе Наїе Апа Ргоіопдей І еикетіа-Егеє Зигуїмаї, " У. Сііп. Опсої. 29:2493-2498).
Молекули СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла згідно із даним винаходом, такі як ОАКТ-А, бо містять альтернативну біспецифічну, засновану на антитілі модальність, яка забезпечує поліпшену стабільність і більш надійні властивості для виконання на виробництві (дойп5оп, 5. еї а!ї. (2010) "ЕЄнНестог СеїЇ Вестийтепі МУйи Моме! Ем-Вазедй Юца!І-Аніппу Ве-Тагоеїїпу Ргоївіп І єад»
То Роїепі Титог Суюіувів Апа Іп Мімо В-Сеї! Оерієїоп, " У. Мої. Віої. 399:436-449; Мооге, Р.А. еї аї. (2011) "Арріїсайоп ОЇ Юца! Айіпйу Неїагдеїпу МоїЇесшев То Аспієме Оріїта! Неадігесієд Т-Сеї
Кіпа ої В-СеїІ Гутрпота, " Віоой 117:4542-4551).
Щоб продемонструвати перевагу і ефективність молекул СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла згідно із даним винаходом, підтверджували біологічну активність описаних вище САКТ-
А в іп міїго і доклінічних моделях лейкозу, а також його фармакокінетику, фармакодинаміку і безпечну фармакологію на яванських макаках (Масаса газсісціагіє) оцінювали по відношенню або до описаного вище контрольного ВБАКТ (біспецифічного у відношенні СОЗ ї флуоресцеїну), або "контрольного ОАКТ-2", яке є біспецифічним у відношенні СО123 і флуоресцеїну).
Амінокислотна послідовність першого поліпептидного ланцюга "контрольного ОАВТ-2" (СО123ЗМІ - лінкер - 4-4420МУН - лінкер - Е-спіраль; лінкери підкреслені) (ЗЕО ІО МО:58):
РЕММТО5РОБ ГАМ5І ЯЕВМТ МЗОКЗЗОБІ МБаМОКММСТ МУМООКРИаОРР
КОМУ АБЗТА ЕЗЕМРОВЕЗОа ЗИаЗаИаИТОгТІ т І55І ОАЕОМА МУУСОМОУБУ
РУТРООСТКІ ЕІКССО)аБаСО СЕМУКІ ОЕТаСс; аа МОРСВРМК І 5СМАБОЕТЕ
ЗВУМММУМУМВО ЗРЕКСОГЕМ МА ОТІАВМКРУМУЕ ТУУЗОБУКОаВ ЕТІЗНООЗК
ЗУ ОМММІ А МЕОМСІМУСТ аБУМаМОУМУсс батвУтУЗЗа аСОааЕМАА.
ЕКЕМААЇ ЕКЕ МААЇ ЕКЕМАА І ЕК
Амінокислотна послідовність другого поліпептидного ланцюга "контрольного ОАНТ-2" (4420МІ - лінкер - СО12ЗМН - лінкер - К-спіраль) (ЗЕО ІЮ МО:59):
ОМУМТОТРЕБ ГРУБІ арОАБІЗСАЗБЗОВІ М НІМаМТМіАМ М ОКРООБРК
МИМКУ5МАЕ 5аМРОВЕБЗа5 а5СаТОЕТІКІ БАМЕАЕОІЇ ЯМ МЕС5ОБТНУР мтРаастТкКГЕ ІКасаасаис ЕМО МОБОАЕ І ККРИАБУКМ БСКАБаМТЕТ
ОУУМКУМУВОА РИаСаГЕМІСО ПРОМСОАТЕМ МОКЕКаВМТтІ ТМОКОТОТАУ
МЕ! 55І А5ЕО ТАУУУСАВ5Н ГІ ВАБМ/ ГАМУ СОСТІ МТУ СССО,аакмМАА
ЇКЕКМААЇ КЕ КМААЇ КЕКМА АЇ КЕ
Біфункціональний аналіз ЕІ ІЗА
Планшет Махізогр ЕГІЗА (Мипс), на який протягом ночі наносили розчинний ІЗ К-альфа
Зо людини або яванської макаки (0,5 мкг/мл) у бікарбонатному буфері, блокували за допомогою 0,5 96 ВА; 0,1 95 Гуееп-20 в РВ5 (РВЗТ/ВЗА) протягом 30 хвилин при кімнатній температурі.
Наносили молекули ЮАКТ-А, після чого слідувало послідовне додавання кон'югату СОЗ єб- біотин людей і стрептавідин-НКР (даскбзоп ІттипоКезеагсі). Активність НКР виявляли по перетворенню тетраметилбензидину (ВіобХ) в якості субстрату протягом 5 хв.; реакцію переривали за допомогою 40 мкл/лунка 1 95 Н25О» і поглинання зчитували при 450 нм.
Аналіз поверхневого плазмонного резонансу
Здатність ОАКТ-А зв'язуватися з біллами СОЗ або СО123 людини і яванської макаки аналізували з використанням біосенсора ВіАсоге 3000 (СЕ, Неайсаге), як описано в доппзоп,
З. еї а). (2010) ("ЕЄНесіог Сеї! Нестийтепі М/ЙйН Моме! Рм-Вазей ЮцаІ-Анйіпйу Ве-Тагодеїїпуд Ргоївіп
Ї еадо5 То Роїепі Титог Суюїувзів Апа Іп Мімо В-Сеї! Оерієїоп, " .). Мої. Віо!. 399:436-449) і Мооге,
Р.А. еї аї. (2011) ("Арріїсаййоп ОЇ Оцаї! Айіппу Неїагдеїіпуд Моїіесціез То Аспієме Оріїта! ВНеадігесієа
Т-Сеї! Кійпуд СО В-Се! Гутрпота, " Віоой 117:4542-4551). Коротко, карбоксильні групи на сенсорному чипі СМ5О активували за допомогою ін'єкції 0,2М М-етил-М-(З-диетиламіно-пропіл) карбодиїіміду і 0,05М М-гідрокси-сукциніміду. Розчинний СОЗ або СО123 (1 мкг/мл) впорскували на поверхню активованого СМ5 в 10 мМ ацетату натрію, рН 5,0, при об'ємній швидкості потоку, що становить 5 мкл/хв., після чого додавали 1 М етаноламіну для деактивації. Експерименти по зв'язуванню проводили в 10 мМ НЕРЕЗ5, рН 7,4, 150 мМ Масі, З мм ЕОТА і 0,005 95 поверхнево- активної речовини Р20. Регенерацію імобілізованих рецепторних поверхонь проводили шляхом імпульсної ін'єкції 10 мМ гліцину, рН 1,5. Значення КО визначали по глобальній апроксимації кривих зв'язування до 1:1 моделі зв'язування Ленгмюра (програмне забезпечення ВіАема|чайоп
У4.1).
Аналіз цитолізу
Клітинні лінії, використовувані для аналізів лізису клітин, одержували з Американської колекції типових культур (АТСС) (Мапазза5, МА). РВМС виділяли із крові здорових донорів з використанням набору РісоїІ-Радие Ріив (СЕ НеайНсаге); Т-клітини очищували за допомогою набору для негативної селекції (Іїе Тесппоіодіеб5). Щільність СО123 на клітинній поверхні визначали з використанням Оцапішт зітріу СеїІшміаг гранул (Вапоз І арогайогіев, Іпс., Різпегв, ІМ).
Аналізи цитотоксичності проводили, як описано Мооге, Р.А. еї аї. (2011) ("Арріїсанйоп ОГ Оиаї
Аніппу Неїагодеїїпд Моїесшцевз То Аспієме Оріїта! Недігесієд Т-Сеї! Кіїпоу ОЇ В-Сеїї Гутрпота, " 60 Віоод 117:4542-4551). Коротко, клітинні лінії - мішені (105 клітин/імл)у обробляли серійними розведеннями таких білків, як ЮАКТ-А або контрольне ЮАКТ, у присутності Т-клітин у зазначених співвідношеннях ефекторних клітин до клітин - мішеней і інкубували при 37 С протягом ночі. Лізис клітин визначали за вивільненням лактатдегідрогенази (ІОН, Рготеда) у супернатанті культури. Для аналізу цитолізу за допомогою проточної цитометрии клітини - мішені мітили за допомогою СМТМЕК (Се Тесппоіодіе5) і цитоліз піддавали моніторингу з використанням проточного цитометра ЕАСсСЗСаїїриг. Дані аналізували з використанням програмного забезпечення РКІЗМО 5 (сгарпРад) і представляли у вигляді цитотоксичності в 95.
Фармакологія у відношенні яванської макаки
Експерименти на нелюдиноподібному приматові проводили в СПагієх Рімег Іарогайогіе5 (АНепо, ММ), згідно вимогам місцевого інституціонального комітету з утримання і використання тварин АСИС). Спеціально виведеним, раніше не підданим експериментам яванським макакам (Масаса газсісціагі5) китайського походження (віковий діапазон 2,5-9 років, діапазон за масою 2,7-5 кг) вводили інертний носій або ОАКТ-А за допомогою внутрішньовенної інфузії через порт- системи в стегновій і яремній вені з використанням програмувальних інфузійних насосів з живленням від акумуляторної батареї (САОО-ІедасуфФ, 5ІМ5 Оепцес, Іпс., ЗІ. Раш, ММ). Зразки периферичної крові або кісткового мозку збирали в пробірки які містили антикоагулянт в зазначені часові точки. Аналізи фенотипу клітинної поверхні проводили за допомогою аналізатора Ї5К Рогіезза (ВО ВіозЗсіепсе5), обладнаного лазерами з довжинами хвиль, що становлять 488 нм, 640 нм і 405 нм, і за допомогою наступних антитіл: С0О4-М450, СО8-М450,
СО123-РЕ-Су7, СО45-РегбР, СО4-АРОС-Н7У, СО8-РІТС, СО25-РЕ-Су7, СОб69-РегСР, РО-1-РЕ,
ТІМ3-АРС, СОЗ-Расіїс Вінє, С095-АРС, Сргв-ву421, СО16-РІТС, СОЗ3-АІеха488, СОЗ38-РЕ,
СОр123-РЕ-Су7, СО117-РегСбР-Суб5,5, СО34-АРС, 2090-ВУ421, СО45ВА-АРО-Н?7 і СО33-АРС (ВО
Віобсіепсе5). Абсолютну кількість клітин визначали з використанням ТтСООМТ (ВО
Віозсієпсе5). Вміст цитокінів 1-2, 1/-4, 1-5, 1-6, ТМЕ-а ії ІРМ-у у сироватці вимірювали з використанням набору цитометричних гранул з моноклональними антитілами до цитокіну
ТИ1/Тп2 нелюдиноподібного примата (ВО Віозсіепсе). Концентрацію ОАКТ-А у зразках сироватки мавпи вимірювали з використанням сендвіч-імуноаналізу з електролюмінесцентним виявленням (Мезозсаїіе Оіадповзіїс5, МБО, КосКмійе, МО). Коротко, на аналітичний планшет (М5О) наносили рекомбінантний І/-3 Ка людини (К8УО бувієт) і планшет блокували за допомогою 5 95 ВБ5А. Наносили калібровані стандарти або розведені досліджувані зразки, після чого додавали біотинильоване моноклональне антитіло, що проявляє специфічне зв'язування у відношенні описаних вище Е-спіральних (5ЕО ІЮ МО:34) і К-спіральних (5ЕО ІЮ МО:35) доменів молекули. Додавали мічений ЗЙОГРО-ТАСтТМ кон'югат стрептавідину (М5О) і утворення комплексів аналізували в пристрої формування зображень М5О 5ЕСТОКФ) Концентрації ОАКТ-
А визначали зі стандартних кривих, створених шляхом апроксимації даних інтенсивності світлового випромінювання в п'ятипараметричній логістичній моделі.
Визначення фізико-хімічних характеристик очищеного ОАКТ-А продемонструвало гомогенний гетеродимер з молекулярною масою, що становить 58,9 кДа (фігура 23; фігури 24А- 248), який є стабільним при 2-8"С протягом аж до 12 місяців в РВ5. Аналіз 5РЕ продемонстрував майже ідентичні афінності зв'язування ОАКТ-А з відповідними розчинними антигенами СОЗ ї СО123 людини і яванської макаки (фігури 25А-250 і таблиця 7). Крім того, рАВТ-А одночасно зв'язувався з обома антигенами у форматі ЕГІ5А, у якому використовували
СО0123 людини або мавпи для захоплення і СОЗ людини для виявлення (фігури 26А-26В), і продемонструвало подібне зв'язування з Т-лімфоцитами людини і мавпи (фігури 26С-26Е). Дані в таблиці 7 являють собою середні значення від З незалежних експериментів, кожний з яких проведені у двох паралелях.
Таблиця 7
Рівноважні константи дисоціації (Ко) для зв'язування
РАВТ-А з СОЗ і СО123 людини і яванської макаки
Ка (я 50) Ка (я 50) Ко (5 50)
рАВТ-А опосередковує переспрямований цитоліз Т-лімфоцитами людини або яванської макаки рАВТ-А опосередковував переспрямований цитоліз клітин-мішеней ефекторними клітинами людини або мавпи проти СО123- лейкозних клітинних ліній Казипті-3 (фігура 27А-270)), який супроводжувався індукцією маркерів активації. Не спостерігали будь-якої активності проти СО 123-негативних мішеней (0937 клітини) або із застосуванням контрольного САКТ, що вказувало на те, що Т-клітинна активація строго залежить від залучення клітин-мішеней і що моновалентне залучення СОЗ за допомогою ЮАКТ-А було недостатнім для запуску Т-клітинної активації. Оскільки СО123 експресується на підкласі нормальних циркулюючих лейкоцитах, включаючи в себе рос і моноцити (фігура 27Е), ефект ОАКТ-А додатково досліджували в нормальних РВМС людини і мавпи.
Ефект східчастої зміни спостерігали серед РВМС людини із залежною від дози швидкої деплеції СО14-СО123гог клітин (рос і базофілів), спостережуваної не пізніше ніж через З години після початку лікування, при цьому моноцити (СО14-- клітини) не зазнали впливу в цій часовій точці (фігури 27-27). Деплеція СО14-СО123"9" клітин збільшувалася із часом при всіх концентраціях молекули ЮАКТ-А, тоді як кількість моноцитів дещо знижувалася до 6 год. і зазнала деплеції через 18 годин і в концентраціях, вище ніж 1 нг/мл. Інкубація РВМС мавпи з
РАВТ-А приводила до порівнянної залежної від дози деплеції СО14-СО123"9! клітин (фігура 27Н), додатково підтверджуючи релевантність цього виду для фармакології ОАКТ-А (СО14- клітини мавпи експресують СО123 у невеликому ступені або не експресують взагалі, і вони не зазнають деплеції).
Фармакокінетика САКТ-А у яванських макак
Яванську макаку вибирали в якості прийнятної фармакологічної моделі для аналізу ОАКТ-А на підставі еквівалентного розподілу обох цільових антигенів у цьому виді в порівнянні з людьми на підставі імуногістохімії з попередниками пАбр, відповідно до опублікованої інформації (Мипо;, ЇЇ. еї аї. (2001) "ІпіепнеийКкіп-3 Весеріог АІрпа СНаійп (СО123) Ів У/іаєїу
Ехргеззейд Іп Нетайоіодіс Маїїдпапсіе5, " Наєтаїйоіодіса 86:1261-1269; Когреїаіпеп, Е.І. еї аї. (1996) "П/-3 Весеріог Ехргеззіоп, Неашайоп Апа Еипсійп Іп СеїЇїз ОЇ Тне Мазсшайшге, " Іттипо).
Коо) Сеї! Віої. 74:1-7).
Дослідження, проведене згідно із даним винаходом, містило в собі б груп лікування, що складаються із 8 яванських макак на групу (4 самця, 4 самки) (таблиця 8). Усі групи одержували інертний носій - контроль для першої інфузії; потім інертний носій або ЮАКТ-А вводили внутрішньовенно протягом 4 щотижневих циклів. Тваринні групи 1 одержували інертний носій - контроль протягом усіх 4 наступних інфузій, тоді як групи 2-5 одержували дози САКТ-А, які щотижня збільшуються, протягом 4 днів на тиждень протягом усіх наступних інфузій. Тваринні групи 6 одержували лікування за допомогою 7-денних безперервних доз ОАКТ-А, які щотижня збільшуються, для всіх інфузій. Схеми 4 дня введення/3 дня без введення і 7 днів введення розробляли для того, щоб розрізняти тривалі і часові ефекти, пов'язані із введенням САКТ-А.
Двоє самців і 2 самок на кожну групу вбивали наприкінці фази лікування (36 день), тоді як мавп, які залишилися, вбивали після 4-тижневого відновлення (65 день). Підгрупа мавп, у яких виробилися антитіла до лікарського засобу (АБА), спрямовані проти гуманізованої Ем як СОЗ, так і СО123, і дані після виникнення АбБА виключали з аналізу РК. Усіх мавп піддавали впливу рАВТ-А протягом періоду дослідження.
Таблиця 8
Інертний (4 дні введення/З дні без введення) (7 дня
Ме інфу- Дні носій нг/кг/день введення) зії дослід- Інг/кг/4 дніві| нг/кг/день ження Інг/кг/7дніві 1 2 З 4 5 (5) носій носій носій носій носій носій з ше || п носій 400 400 400 400 700 носій 400 1200 1200 1200 2100 носій 400 1200 2400 2400 4200 носій 400 1200 2400 4000 000
ПІ сіні НИ ПИ ПОН ННЯ ПОЛЯ НОЯ лення
Двохкомпартментну модель використовували для оцінки параметрів РК (таблиця 9 і фігура 28). Тіга був коротким (4-5 хв.), відбиваючи швидке зв'язування із циркулюючими мішенями;
Ті28 також був швидким, як очікувалося для молекули такого розміру, яка зазнає виведення через нирки. Аналіз зразків сироватки, зібрані наприкінці кожної інфузії від мавп групи 6, показали залежне від дози збільшення Стах ОАВТ-А. У таблиці 9 інертний носій являв собою
РВ5, рН 6,0, що містить 0,1 мг/мл рекомбінантного альбуміну людини, 0,1 мг/мл Р5Б-80 і 0,24 95 бензиловий спирт використовували для всіх інфузій інертного носія протягом перших 4 днів кожного тижня інфузії з наступним введенням цієї ж сполуки без бензилового спирту протягом, залишившихся З днів кожної щотижневої інфузії. ОАКТ-А вводили в ті ж часові точки, що і безперервну внутрішньовенну інфузію розчину РВ5, рН 6,0, що містить 0,1 мг/мл рекомбінантного альбуміну людини, 0,1 мг/мл РЗ-80, і 0,24 95 бензилового спирту в необхідній концентрації.
Таблиця 9
Двохкомпартментний аналіз параметрів РК САКТ-А у яванських макак (середнє ж 50) (середнє ж 50)
Вивільнення цитокіну у отримавших лікування за допомогою Ваг-А-яванських макак
Беручи до уваги властивості ОАКТ-А у відношенні Т-клітинної активації, передбачалося збільшення циркулюючих цитокінів, що супроводжує інфузію і, отже, використовували низьку початкову дозу в якості стратегії "десенсибілізації" на підставі попередніх даних, отриманих з подібними сполуками (див., наприклад, Торр, М.5. єї аї. (2011) "Тагдеїєд Тнегару М/йп ТНе Т-
Се І-Епдадіпу Апіїроду Вііпаїитотаб ОЇ СпетоїНпегару-Веїтасіогу Міпіта! Везідца! бізєазе Іп В-
Іпеаде Асшіе І утрпобіавіїс І еиКетіа Раїїєпіє Незийв5 Іп Нідп Резропзе Наїе Апа Ргоіопдеа
Ї енкетіа-Егеє Зигуїмаї, " у. СіІйп. Опсої. 29:2493-2498; Вагоои, В. евї а!. (2008) "Титог ВРедгезвіоп
Іп Сапсег Раїепів Ву Мегу Гом/ Розез ОЇ А Т СеїІ-Епдадіпуд Апіїроду, " Зсіеєпсе 321:974-977). З досліджених цитокінів І/-6 продемонстрував самі істотні зміни при інфузії, нехай навіть і тимчасові по природі, мінімальної величини і з більшими величинами мінливості між тваринами та між групами (фігури 29А-29С). Невеликі, тимчасові зміни в ІЇ/-6 також спостерігали після інфузій інертного носія (усі інфузії в групі 1 ії всі інфузії в 1 день), що вказує на чутливість зазначеного цитокіну до стресу на маніпуляції. Проте, залежні від ОАКТ-А збільшення («80 пг/мл) І--6 у сироватці спостерігали у деяких мавп після першої інфузії ОАКТ-А (100 нг/кг/день), які поверталися до вихідного значення до 72 год. Цікаво, що величина вивільнення 1-6 знижувалася з кожною наступною інфузією БАКТ-А, навіть якщо рівень дози збільшувався аж до 1000 нг/кг/день. Також спостерігали мінімальні і тимчасові пов'язані з ОАКТ-А збільшення
ТМЕ-а у сироватці («10 пг/мл); як і у випадку з І/-6, найвищу величину вивільнення ТМЕ-а спостерігали після першої інфузії. Не спостерігали будь-яких пов'язаних з САКТ-А змін у рівнях
І -5, ІП -4, І/- 2 або ІРМ-у під час усього дослідження з порівняння з контролями. Можна зробити висновок про те, що вивільнення цитокінів у відповідь на лікування мавп за допомогою ОАКТ-А було мінімальним, тимчасовим і являло собою ефект на першу дозу, контрольований за допомогою підвищення дози в межах одного суб'єкта.
Опосередкована САВТ-А деплеція циркулюючих СО147/С0123: лейкоцитів іп мімо
Абсолютні вмісти циркулюючих СЮО14-/20123-ж- клітин вимірювали під час дослідження в якості фармакодинамічного кінцевого результату. Поряд з тим, що кількість СЮО123" клітин у контрольній групі 1 залишалася стабільним із часом, лікування за допомогою САКТ-А було пов'язане з великою деплецією циркулюючих СО14-/С0123- клітин (94-100 до від початкового значення перед дослідженням), спостережуваної, починаючи з першої виміряної часової точки (72 години) після початку першої інфузії ОАКТ-А (100 нг/кг/день) у всіх тварин у всіх групах активного лікування (фігури ЗОА-30С). Деплеція була тривалою, оскільки вона тривала протягом
З-денної щотижневої перерви у введенні дози в групі 2-5, повертаючись до вихідних рівнів тільки під час пролонгованого періоду відновлення. Для усунення можливості маскування рАВТ-А або модулювання СО123 (малоймовірний сценарій, що дає низькі рівні циркулюючого
БАВТ-А), кількість рОС опідраховували за допомогою ортогонального маркера, СОЗ303.
Відповідно до даних відносно СО123, СОЗОЗ-рос аналогічно піддавали деплеції у мавп, які одержали лікування за допомогою САКТ-А (фігури 300-ЗОР).
Зо Вміст циркулюючих Т-лімфоцитів, активація і аналіз підкласів
На відміну від стійкої деплеції циркулюючих СО123- клітин, ОАКТ-А, що вводиться за схемою 4 дня введення/3 дня без введення (групи 2-5), було пов'язане із щотижневими коливаннями в вмістах циркулюючих Т-клітин, при цьому введення у вигляді безперервних 7- денних інфузій приводило до аналогічного зниження вмістів циркулюючих Т-клітин після першого введення, яке повільно відновлювалося без коливання навіть протягом періоду введення доз (фігури З1А-31С). Відмінність між двома стратегіями введення доз указує на те, що ефект ЮАКТ-А на Т-лімфоцити узгодиться з міграцією і/або скупченням клітин по краю ділянки запалення, а не з деплецією. Після припинення введення доз, вміст Т-клітин несподівано піднімався до рівнів, приблизно в 2 рази вище, ніж вихідні значення протягом тривалості періоду відновлення. Інфузія ЮАКТ-А була пов'язана із залежною від впливу прогресуючою підвищеною частотою зустрічальності Т-клітин, експресуючих маркер пізньої активації, РО-1, особливо на СО4-- клітинах, при цьому група дозування 6 проявляла найвищі загальні вмісти (фігури 310-311 ї фігури 32А-32Е і фігури ЗЗА-ЗЗЕ). Тіт-3, маркер, пов'язаний з виснаженням Т-клітин, не був виявлений на СО4.Т-клітинах і тільки з низькою частотою серед
Сов клітин (5,5-9,7 95) і містився 20,5-35,5 95 СО8-/РО-1- подвійних-позитивних клітин. Не спостерігалася будь-яка узгоджувана зміна в маркері ранньої Т-клітинної активації, СОб9, і тільки невеликі зміни в експресії СО25 серед циркулюючих клітин.
Щоб виключити виснаження після іп мімо впливу, ех мімо цитотоксичний потенціал ефекторних клітин, виділених від яванських макак, які одержують численні інфузії ОАКТ-А, порівнювали із цим параметром у раніше не підданих експериментам мавп. Як показано на фігурі 34, РВМС, виділені від мавп, які одержали лікування за допомогою ОБАКТ-А, продемонстрували цитотоксичність, порівнянну з такою у клітин, виділених від раніше не підданих експериментам мавп, вказуючи на те, що іп мімо вплив САКТ-А не виявляв негативного впливу на здатність Т-клітин знищувати клітини - мішені.
Вплив САКТ-А збільшував відносну частоту зустрічальності центральних СО клітин пам'яті і ефекторних СО8- клітин пам'яті за рахунок відповідної раніше не підданої впливам Т-клітинної популяції (фігури ЗБА-35Е і фігури 32А-32Е ії фігури ЗЗА-З3ЗЕ), вказуючи на те, що вплив ОАКТ-А стимулював експансію і/або мобілізацію зазначених клітин.
Ефекти на гемопоез і попередники кісткового мозку рАВТ-А добре переносився мавпами у всіх досліджуваних дозах; проте, оборотні зниження параметрів еритроцитів спостерігали при найвищих дозах (фігури ЗбА-36С). Швидкий забір крові міг вносити в це свій потенційний внесок, оскільки тварини, що одержали лікування за допомогою інертного носія продемонстрували слабке зниження кількості еритроцитів.
Ретикулоцитартну відповідь спостерігали у всіх тварин; при найвищому рівні впливу (група 6), проте, відповідь виявилася дещо менш вираженою для подібного зниження кількості еритроцитів (фігури 360-36Е). Морфологічний аналіз мазків кісткового мозку протягом дослідження був без особливостей. Проточна цитометрія, проте, виявила, що частота зустрічальності СО123-- клітин у межах негативних у відношенні незрілих клітинних ліній (Гіп-) популяцій кісткового мозку знижувалася у отримавших лікування за допомогою САКТ-А тварин наприкінці періоду введення доз, повертаючись до вихідних значень у кінці відбудовного періоду (фігура 37А-37В). Н5С (визначені як І іп-/2034-/2038-/2045ВА-/С090-- клетки (Рапа,
МУ МУ. єї а. (2011) "Нитап Вопе Маїітом Нетаїйороїіеїйс бієт СеїЇІ5 Аге Іпстєазед Іп Егедоепсу Апа
Муеїоіїд-Віазей МУйи Аде, " Ргос. Маї. Асад. сі. (0О.5.А.) 108:20012-20017)) показали більшу мінливість між групами; мавпи, що одержали лікування за допомогою БАКТ-А, групи 4-6 показали деяке видиме зниження в порівнянні з відповідними рівнями перед введенням доз, проте, ніякого зниження не спостерігалося у всіх групах, що одержали лікування, у порівнянні з отримавшими лікування за допомогою інертного носія тваринами. Ці дані вказують на те, що
НОС були менш чутливими до націленого впливу за допомогою ЮАКТ-А і узгодяться зі спостережуваною оборотністю негативних ефектів лікування САКТ-А на гемопоез.
Як продемонстровано вище, у відношенні інфузій протягом 4 тижнів за щотижневою схемою 4 дня введення/3 дня без введення або за схемою 7 днів введення щотижня з початкових доз, що становлять 100 нг/кг/день, які збільшуються поетапно щотижня до 300, 600 їі 1000 нг/кг/день, введення ОАКТ-А яванським макакам переносилося добре. Деплецію циркулюючих СО123-- клітин, включаючи в себе рос, спостерігали після початку першого введення і вона тривала протягом усього дослідження при всіх дозах і схемах. Також спостерігалося оборотне зниження попередника СО123-- кісткового мозку. Вивільнення цитокіном, як істотна загроза безпеки при націлених на СОЗ видах терапії, виявилася коректуємою і узгодиться з ефектом введення першої дози. Незначну оборотну анемію відзначали при найвищих дозах, але не відзначали
Зо ніяких інших (пов'язаних з метою впливу або не пов'язаних з метою впливу) несприятливих ефектів.
Яванська макака являє собою прийнятну тваринну модель для фармакологічної оцінки
РАВТ-А, беручи до уваги високий ступінь гомології між ортологами і здатність ОАВТ-А зв'язуватися з подібною афінністю з антигенами і опосередковувати переспрямований Т- клітинний цитоліз в обох видів. Крім того, обоє антигенів узгоджено експресуються в мавп і людей, включаючи в себе подібну експресію гемопоетичними попередниками і у цитоплазмі ендотелія численних тканин. Невеликі виключення являють собою експресію в клітинах Лейдига в людей, а не мавп і низький вміст або відсутність СО123 у моноцитах мавп у порівнянні з людьми.
Першочергове завдання, пов'язане з терапевтичними стратегіями, у які залучена Т-клітинна активація, містить у собі вивільнення цитокінів і не пов'язані з метою впливу на цитотоксичні ефекти. Нещодавнє дослідження з СОЗ х СО123 біспецифічних імунним конструктом злиття 5СЕм з бівалентним розпізнаванням СОЗ продемонструвало протилейкозну активність іп міїго, але викликало неспецифічну активацію Т-клітин і секрецію ІЕМ-у (Кио, 5.К. еї аї. (2012) "Епдіпеетіпа А СО123хХСО3 Вівресіїс всЕм Іттипоїибвіоп Рог Те Тгєаїтепі ОЇ ГешКетіа Апа
ЕПтіпайоп ОЇ І еиКетіа біет СеїЇв, " Ргоївєїп Епа. Юез. Зе!І. 25:561-569). Моновалентна природа кожного із плечей зв'язування і у високому ступені гомогенна форма САКТ-А забезпечує те, що
Т-клітинна активація залежить винятково від залучення клітин - мішеней: Т-клітинна активація не спостерігалася при відсутності клітин - мішеней або при використанні молекули контрольного рАКТ, яка містила в собі тільки плече націленого впливу на СОЗ. Крім того, високі дози (аж до 100 мкг/кг/ день) молекули контрольного ОАКТ не запускали вивільнення цитокінів у яванських макак.
Початкова доза молекули САКТ-А, що складає 100 нг/кг/день, добре переносилася, при цьому спостерігалося мінімальне вивільнення цитокінів. Проте, цитокінова буря дійсно починалася при високій початковій дозі (5 мкг/кг/день); проте, така доза могла бути досягнута безпечним чином за допомогою поетапних щотижневих підвищень дози, вказуючи на те, що опосередковане ВАКТ-А вивільнення цитокінів, імовірно, є, головним чином, ефектом першої дози. Деплеція СО123-- клітин - мішеней, тим самим усуваючи джерело лігування з СОЗ, може пояснювати ефект першої дози: майже повну деплецію СО123-- клітин спостерігали в дозах, що бо не перевищують 3-10 нг/кг/день, вказуючи на те, що у вивільненні цитокінів іп мімо прослідковується зміщений дозозалежний ефект у порівнянні із цитотоксичністю. Профілі залежності від дози для цитотоксичності і вивільнення цитокінів Т-клітинами людини також узгодяться із представленим спостереженням.
Т-клітинна десенсибілізація, у якій може відігравати роль опосередкована БАКТ-А позитивна регуляція РОТ, як виявляється, також вносить свій внесок в обмеження вивільнення цитокінів після першої інфузії СОАКТ-А. Нещодавні дослідження показують, що підвищена експресія РО-1 після індукованої антигеном затримки Т-клітин у ділянках запалення вносить свій внесок, за допомогою взаємодій з РО-І 1, у термінацію стоп-сигналу, таким чином, вивільняючи і десенсибілізуючи клітини (Нопаа, Т. еї аї. (2014) "Типіпуд ОЇ Апіїдеп Зепзйїмку Ву Т Сеї!І Кесеріог-
ЮОеєрепадепі Медаїйме Реєдраск Сопігоїє Т Се! ЕМПесюг Рипсійп Іп Іпйатей Тіввцев, " Іттипйу 40:235-247; ММеї, РЕ. еї аї. (2013) "Змепдій ОЇ РО-1 Зідпаїпу ОїйегепіаПу Анесів Т-Сеї! ЕПесіог
Ейпсійоп5, " Ргос. Маї!. Асай. 5сі. (0О.5.А.) 110:Е2480-Е2489). Протидія РО-1 потужності сигналу
ТСК не є інформативною: поряд з тим, що проліферація і продукція цитокінів виявляються найбільш чутливими до інгібуванню РО-1, вплив на цитотоксичність є мінімальним (УМеї, Е. еї аї. (2013) "Зігепаїй ОЇ РО-1 5ідпаїїпуд ОіїйегепііаПйу Анесів Т-СеїЇ ЕпНесіюг Еипсійоп5, " Ргос. Маї!. Асад. зЗсі. (0О.5.А.) 110:Е2480-Е2489). Закономірно, ех мімо цитотоксичний потенціал Т-клітин від мавп, на яких впливали багаторазовими інфузіями САКТ-А, був порівнянний з таким в Т-клітин від раніше не підданих експериментам мавп, незважаючи на підвищені вмісти РО-1 у перших. Крім того, позитивна регуляція РО-1 не супроводжувалася експресією ТІМЗ, відмітної ознаки виснаження Т-клітин, як показано для Т-клітин, які були піддані тривалій стимуляції антитілами
СОЗ або хронічних інфекцій (сСебеї, Н.М. еї а). (1989) "Т СеїІ5 Егот Раїепів Биссез5ішу Тгєаїей
Мун ОКТЗ бо Мої Веасі М/Н Тне Т-СеїІ Весеріог Апіїроду, " Нит. Іттипої. 26:123-129; МНе!ту,
Е.9. (2011) "Т Сеї! Ехнаивійоп, " Маї. Іттипої. 12:492-499).
Деплеція циркулюючих СО123-- клітин у отримавших лікування за допомогою САКТ-А мавп була швидкою і тривала протягом щотижневої перерви у введенні доз у схемі 4 дня введення/3 дня без введення, що узгодиться з усуненням клітин - мішеней. Навпаки, часові коливання в кількості циркулюючих Т-клітин, імовірно, були результатом міграції із/в тканині і лімфоїдні органи залежно від ВОАКТ-А. Вплив САКТ-А стимулює експансію і/або мобілізацію підданих впливу антигену Т-лімфоцитів, клітин, які переважно перебувають у тканинах і швидше
Зо проявляють цитотоксичну ефекторну функцію (Мігепаа, УМ. еї а. (2007) "Рпузіоіодіс Апа Абеїтапі
Ведшіайнйоп ОЇ Метогу Т-Сеї! Ттапіскіпд Ву Те Совіїтшаюгту МоїІесше СО28," Віоса 109:2968- 2977; Магеїй-Вегу, Р.М. еї аї. (2010) "Метогу Т-Сеї Тгтайіскіпд: Мем Оігесіопе Рог Виву
Соттиегв, " Іттипоіоду 130:158-165).
Деплеція СО123.- нормальних клітин може передбачати потенційні ризики. рос і базофіли експресують високі вмісти СО123 у порівнянні зі зниженими вмістами в моноцитах і еозинофілах (орег, А.Р. єї аї. (1989) "Весіргосаї! Іппібйіоп ОЇ Віпаїпу Веїмееп ІпіепецйКкіп З Апа Стапиіосуїе-
Масторнаде Соіопу-5іїтиїайпоа Расіог То Нитап ЕозіпорнНіїє, " Ргос. Май). Асад. осі. (0.5.А.) 86:7022-7026; Мипо, Ї. еї аї. (2001) "ІпїепешиКіп-3 Весеріог АІрпа Спаіп (СО123) Ів Мідеїу
Ехргеззей Іп Нетайіодіс Маїїдпапсієв5, " Наетайюіодіса 86:1261-1269; Мабвіеп, В.. єї аї. (2006) "СНагасієгігайоп ОЇ Мувєїоій Апа Ріазтасуюій ЮОепагтйіс Сеїїв й Нитап Гипд, " У. Іттипо). 177:7784-7793; Когреїаіпеп, Е.І. еї аі. (1995) "Іпепегоп-Ссатта Оргеашіаїез ІпіепешцкКіп-З3 (1-3)
Весеріог Ехргезвіоп п Нитап Епаоїнеїа! Сеїйв Апа Зупегдіге5 М/П 1-3 Іп Бійтшіайпо Маїог
Нівіосотраїййбійу Сотрієх Сіавз ІІ Ехргеззіоп Апа СуюкКіпе Ргодисійп, " Віоса 86:176-182). Було показано, що рос відіграє роль у контролі певних вірусів у моделях інфекцій на мишах або мавпах, хоча вони не виявлялися критично важливими для контролю імунної відповіді при грипі (Соіоппа, М. евї аї. (1997) "Зресіїйсну Апа Рипсійоп ОЇ Іттиподіобиїїп Зирепатіу МК Сеї Іппірйогу
Апа біїйтиіашюгу Весеріоге5, " ІттипоіЇ. Вем. 155:127-133; Зтії, У.у. еї а. (2006) "Ріазтасуюіа
Оепагтйіс Сеїїв Іппірії Ритопагу Іттипораїйоіоду Апа Рготоїєе Сієагапсе ОЇ Резрігаюгу Зупсуйаї
Міги5, " У. Ехр. Мей. 203:1153-1159). Моделі пухлин РОС можуть стимулювати ріст пухлин і метастазування, тоді як деплеція РОС призводила до інгібування пухлини (Зауапі, А. еї аї. (2012) "Оеєрієїйоп ОЇ Ріавтасуйюій Оепагіїйс Сеїййв Іппірйє Титог СтоулЛИ Апа Ргемепів Вопе
Меїавзіазіє ОЇ Вгеабзі Сапсег Сеїв, " У. Іттипої. 189:4258-4265). Тимчасовий, незначний, залежний від дози набряк обличчя спостерігався в деяких мавп, що одержали лікування за допомогою ЮАКТ-А; проте, у цих мавп не спостерігали підвищених вмістів гистаміну або у випадку, коли базофіли людини лізували шляхом опосередкованого ВАКТ-А Т-клітинний лізис.
Деплеція моноцитів може передбачати потенційні ризики інфекції; наслідок рОС, деплеція базофілів або еозинофілів у людей, таким чином, повинна зазнати моніторингу.
Комітовані гемопоетичні попередники, які експресують СО123, такі як загальний мієлоїдний попередник (СМР) (Чогаап, С.Т. єї аї. (2000) "Тне ІпіепецшКіп-3 Весеріог АІрна Спаїп Ів А Опідие 60 МаїКег Бог Нитап Асше Муевеіодепоив І еиКетіа бієт СеїІв, " | еоКетіа 14:1777-1784; Вієдег,
М.А. еї аї. (2012) "Нетаїороїіевів, " Соїд Зргіпд На. Регзресі. Віо!. 4:24008250), можуть бути піддані націленому впливу з боку ЮАКТ-А, що є можливим поясненням незначної анемії, спостережуваної після введення ЮАКТ-А у найвищій дозі. Імовірно, еритропоетична ретикулоцитарна відповідь діє при всіх рівнях дози ЮАКТ-А; проте, відносно адекватних знижень параметрів еритроцитів, тварини, що зазнавали впливу найвищих доз САКТ-А (група 6, 7-денна інфузія), показали знижену ретикулоцитарну відповідь, вказуючи на можливу цитотоксичну активність на попередників (наприклад, СМР). Ефект був оборотним після припинення лікування за допомогою САКТ-А, що узгодиться з репопуляцією зі збережених НОС з низьким вмістом або відсутністю СО123.
Альтернативні підходи для деплеції СО123-- клітин містять у собі специфічне у відношенні
СО0123 моноклональне антитіло другого покоління з посиленою областю Ес (іп, Ї. єї аї. (2009) "Мопосіопа! Апіїроду-Меадіаїєда Тагоеїїпд ОЇ СО123, 1-3 Весеріог АІрпа Спаїйп, Еїйтіпа(їез Нитап
Асціє Муейоїа І ейКетіс 5іет Сеїїв, " СеїЇ біет Сеї! 5:31-42; Вобегів, А. МУ. єї аї. (2010) "А РНазе І зішау ОГ Апіїі-са1ї23 Мопосіопа! Апіїбоду (тар) С5І 360 Тагдеїйпуд ГеиКетіа 5ієт СеїЇв (І 5С) Іп
АМІ, "У. СіІйп. Опсої. 28(З,иррі):е13012), пов'язаний з 1-3 дифтерійний токсин (Ргапкеї, А. еї аї. (2008) "Рпавзе І Сіїпіса! іду ОЇ Оірпіпетгіа Тохіп-ІпіепеицйкКіп З Ривіоп Ргоївіп Іп Райепів М/Н Асше
Муеє!оіа Гешкетіа Апа Муе!Іодузріавіа, " Геик. Гутрпота 49:543-553), індуковані цитокінами (СІК) клітини-кілери, експресуючі специфічні до СО123 химерні антигенні рецептори (САК) (Тепатагпії, 5. єї аї. (2013) "Тагдеїіпу Ої Асціє Муеіоіа І еикаетіа Ву СуюкКіпе-Іпдисед КіПег СеїїЇв
Ведігесівєд М/йН А Моме! СО123-5ресіїїс Спітетіс Апіїдеп Ресеріог, " Вг. У. Наєтацйо)!. 161:389-401) і 60123 САК Т-клітини (ДІЇ, 5. еї а. (2014) "ЕНісасу Адаїпвї Нитап Асцшіе Муеєїйоїа І еиКетіа Апа
Муеїоабіайоп ОЇ Могпта! Нетаїйороієзіз п А Моизе Моде!ї О5іпд Спітепс Апіїдеп Весеріог-
Моаіієа Т СеїІв, " Віоса 123(15): 2343-2354; Магаїгов, А. єї аї. (2013) "Т СеїІ5 Ехргеззіпд СО123- зресіїс СПітегіс Апіїдеп ВНесеріогв Ехпірії Зресіїс Суюоїуйс ЕпПесіог Еипсіоп5 Апа Апійтог
Енесів Адаіїпвї Нитап Асшіє Муеїйоїіа І еиКетіа, " Віоса 122:3138-3148). САВ Т-клітини виявили виражений цитоліз лейкозних бластних клітин іп міго і протилейкозну активність у ксеногенній моделі диссемінованого ГМЛ (Магаїго5, А. єї аІ. (2013) "її Се Ехргеззіпд СО123-5ресіїіс
Спітегіс Апіїдеп Несеріог5 Ехпірії Зресіїс Сушюїуйс ЕпПесіог Рипсіопбе Апа Апійштог ЕНесів
Адаїпзї Нитап Асшіе Муеїоїй ІГеиКетіа, " Віоса 122:3138-3148). У нещодавньому дослідженні
Зо повідомлялося про абляцію нормального гемопоезу в М5О мишей з пересадженими СОЗ34ч клітинами людини після переносу СО123 САК Т-клітин (Сі, 5. еї а). (2014) "ЕмПісасу Адаїпві
Нитап Асціє Муевїоід І еиКетіа Апа МуеїЇоабіайоп ОЇ Мопта! Нетаїйороїіевзіз п А Моизе Моавбві!
Овіпа Спітетіс Апіїдеп Несеріог-Моадітієа Т Сеїїв, " Віоса 123(15): 2343-2354), хоча інші автори не спостерігали подібних ефектів іп міго або іп мімо (Тенатапії, 5. єї аї. (2013) "Тагдеїйпуд ОЇ Асціє
МуеєїЇоід ІешКаєтіа Ву СуїйоКіпе-Іпдисед Кіег СеїІ5 Ведікгесієй М/йН А МомеІ СО123-5ресіїс
Спітетгіс Апіїдеп Несеріог, " Вг. У. Наєтаїйої!. 161:389-401; Ріггіюїа, І. еї аї. (2014) "Спітегіс
Апіїдеп Несеріогї5 Адаїнзії СОЗ3З/СО0123 Апіїдеп5 ЕПісіепну Тагдеї Ргітагу Асціє Муєїоід І еиКкетіа
Сеїв іп мімо, " ГешКетіа адоїі:10.1038/Леи.2014.62). В обговорюваних вище експериментах спостерігали деплецію СО123- популяцій попередників кісткового мозку, але вона була оборотною під час періоду відновлення; крім того, деплеція цієї невеликої популяції не призводила до змін у насиченості клітинами кісткового мозку або в співвідношенні еритроїдних клітин до мієлоїдних (Е:М) при всіх досліджених рівнях доз САКТ-А. Ці відмінності підкреслюють потенційні переваги САКТ-А у порівнянні із клітинними видами терапії, оскільки це забезпечує титруєму систему, яка заснована на аутологічних Т-клітинах на відміну від "надефективних" ех мімо трансдукованих клітин, які важче контролювати. СО123 надлишково експресується в деяких гематологічних злоякісних пухлинах, включаючи в себе ГМЛ, волохатоклітинний лейкоз, новоутворення із бластних плазмацитоїдних дендритних клітин (УБПДК), пре-В-клітинний гострий лімфобластний лейкоз (В-ГЛЛ) і хронічний лімфоцитарний лейкоз, хворобу Ходжкіна з наявністю клітин Рид-Штернберга, а також при мієлодиспластичному синдромі і системному мастоцитозі (Кпапап-ЮРаба)а, М.А. еї аї. (2013) "Оіадповіїс Апа Тнегарешіс Адмапсез Іп Віавіїс
Ріазтасуйоідй Оепайііс СеїЇ Меоріазт: А Росив Оп Нетайороївїїс Сеї! Тгтаперіапіайоп, " Віої. Віоса
Маїтом Тгаперіапі. 19:1006-1012; Ріопап, 5. єї а. (2006) "Оєїесіюп ОЇ МоїІесшаг Тагоаєїв Оп ТНе зипасе ОЇ СО34-4/С038-- ет Сеїї5 Іп Магпоив Муевіоїд Маїїдпапсіев, " Гешк. Гутрпота 47:207- 222; Мипо, Ї.. єї аї. (2001) "ІпїепеишКіп-3 Весеріог АІрна СНнаіп (СО123) Ів М/ідеіму Ехргеззей Іп
Нетайоіодіс Маїїдпапсіе5, " Наєетаїйюіодіса 86:11261-1269; Еготт, 9.8. (2011) "Ром Суїтеїйіс
Апаїузіз ОТ СО123 І5 Овзетці Бог Іттипорпепоїуріпд Сіаззіса! НодокКіп Гупрпота, " Суюотеїгу В
Сіїй. Суїот. 80:91-99). Прогнозована фармакодинамічна активність і контрольований профіль безпеки, спостережуваний у нелюдиноподібних приматів додатково підтверджує клінічну застосовність і ефективність САКТ-А в якості імунотерапії для зазначених порушень.
На закінчення необхідно відзначити, що САКТ-А являє собою молекулу на основі антитіла, яка залучає суб'єсдиницю СОЗеє ТСЕ. для перенапрямку Т-лімфоцитів проти клітин, експресуючих
СОр123, антиген, що зазнає позитивної регуляції при деяких гематологічних злоякісних пухлинах.
РАВТ-А зв'язується обома антигенами як людини, так і яванської макаки з подібними афінностями і перенаправляє Т-клітини обох видів на знищення СО123-- клітин. Мавпи, яким вводили інфузії 4 або 7 днів на тиждень із дозами, які щотижня підвищуються, ЮАКТ-А, продемонстрували деплецію циркулюючих СО123-- клітин через 72 год. після початку лікування, яка тривала протягом 4 тижнів лікування, незалежно від схем введення доз. Зниження циркулюючих Т-клітин також відбувалося, але відновлювалося до вихідного значення до наступної інфузії у мавп, що одержують лікування за схемою, яка передбачає 4 дня введення дози, що узгодиться з опосередкованою ЮАКТ-А мобілізацією. Введення САКТ-А збільшувало циркулюючі РОТ, але не ТІМ-З-, Т-клітини; крім того, ех мімо аналіз Т-клітин від мавп, що одержали лікування виявив незмінений переспрямований лізис клітин - мішеней, вказуючи на відсутність виснаження. Токсичність була обмежена мінімальним часовим вивільненням цитокінів після першої інфузії СОАКТ-А, але не після наступних уведень, навіть якщо доза підвищувалася, і мінімальним зниженням кількості еритроцитів із супутнім зниженням СО123ч- попередників кісткового мозку. Клінічне випробування САКТ-А при гематологічних злоякісних пухлинах є обгрунтованим.
Усі згадані в даному описі винаходу публікації і патенти включені в даний документ тією самою мірою, як якби було передбачено, що кожна окрема публікація або патентна заявка спеціально і індивідуально включена за допомогою посилання у всій своїй повноті. Поряд з тим, що даний винахід був описаний з використанням конкретних його варіантів здійснення, слід розуміти, що можливі додаткові модифікації, і передбачено, що дана заявка охоплює будь-які зміни, застосування або адаптації даного винаходу, притримуючись в цілому принципів даного винаходу і включаючи в себе такі відхилення від даного розкриття, які узгоджуються з відомою або загальноприйнятою практикою в даній області техніки, до якої належить даний винахід, і які можуть бути застосовані до основних ознак, викладених вище в даному документі.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«Ті МАКРОДЖЕНІКС,. ІНК,
Бонвіні, Езіз
Джонсон, Леслі
Жудн, Лін
Мур, Пож
Чічілі, Гурунадх дядерсон, Раль «ІА» БІСПЕНИВІЧУНІ МОНОВБАЛЕНТНІ ДКАТІЛЯА, ЯКІ ЗДАТНІ ЗН'ЯЗУВАТИСЯ З
Сів І СО, тА їх ЗАСТ УВАННЯ «ізаз і1581 ВІВаРСТ «їі5В Не Біла, ІВ «ї5ї1 38І3-55-33 «Іі58х 5 езичат, а «іі» 28і13-УБ-22 «ІБ ЕВ ІОВА «Іі» 3833-35-35 «ІБ 5 БІЗОВ, У «Ії» ввій-а5-ВЕ «ів5Ба» 585 «ії7Вз Раїевітп версія 3,5 сеї і сії 352 «піду РН «13» Втучна Послідовність «ща» «33 Первии Поліпептидний Ланцюг ПАБТ-8 «ах 1
Піп йіа Уві Чаї ТвКЕ зів біс РгОо бек оіво Тр Уві бБег Рго щі БІ 1 5 а їх
Тк Узі Твгоієс ТвВгоСух йгрв бек озЗек ТВг о бі Аза Уві ТК оОТВг баг ща 85 що вАчп тує бів йхп отр уві біп бів іє Рео бі піп йіа Бго Агд о пі ща «5 ігр її о бі Біж т оАхпоїшж5 АКБ діз вго їгб оїБг о Рео вЕа ЯгЕ вве о 58 ще зем пі Бер оіву івен бі біу іуУу5 йіз бів іву ТЛ о бів ТВг о Зі діз іп біз біб бер Бін діа дБ їв туго БУ Вів ів о тТгв о їук бек вав а 5 іо тер ожаї ВБе бі бі Бі ТВг око ів ТВК Узі іч Біу пі бі
Сіж бек бу біу бі бі Біб Уві біпоіви Уві бЗіп бек Бі Віа бін іш ія гух РгоО бі Аза Заг УВІ губ ді 5Звг Суб і м5 ВЗЕа Бек БіУ
ІА ІЗ5 Іа
Тек ТВе Бе ТрБг одер оте тег Меї Гуз тео Уві АгБ Бій діз Бго сію
Зіп бі ів Біб їКве 112 бі А5в тів її га Звге дк БІ Аів їйг
Те їУє еп Біб і ує Бе ої х5 Бі Агв Уві їВг о їіїе ТБгоУді йо іх ія Іщ5 їз
Веб Тс о зегк о ТвВг о Ата Тук Меї бів ів бек Бег о іш йкБ его пен дО
ТЕг бів Уві Туг Туг Су дів йгЕ бек Ні іви ів дДРр ОйІіва бек ТВ
РЕ Ата туго тер оБЕЖ бБіп біу Твг о їв Уві ТВг Уві бег бек ці бі1У 85 ДІНЕ 55 га
Суб щі спа у біу Бін Уві бі Ажва ів біб Ее5 Бін УдДі Віз Від ів 5 Ба 55
Сів і біш Уві та Аів ее Бін о їУу5 біс Уві Дія Аіа гео БЕ іУх
За щі ув 218 2 ккїїВ ЩІ «2122 ДНЕ «візх Вгучна Послідовність «Ех «Зах Молекула Нуклеїнової Кислоти ХодУюча Первнк Поліпептидняк Ядниюг ПАНТ-А «ах 2 тавишсівіджш їКкасісарра рсстїсВсТЕ пОСрЕШЕТсСсс сЕБрІдвавс ТЕТ ЕВОССТЕ що всаїдсараї «ксазвсвсвше сесСаБівасс всвіксївасї зсвссазтїв рсіссавсав іа завссавдас веБбсяссаар деЕдссТЕВіс шсвЕЕЕТВсла зсазаардввс сссстТнрвасг їв
СЕКС КТІСТЕБавЕ ТСТЕСІБЕЕС БЕЗавреЕссвЕ СІСТрВСТВХ ЄассдЕтрся ше сОЕБССЕВЕЕ дсезадссва ТівсіаїТБЇ в СЇсСтТЕТсВї віаротваїсї дідБЕТВІТе ща
ШЕБЕШЕІТБЕвса свадасісвЕс СЕІЕсСіДЕра ВБЕСРЕТЕБаАї СОБІ НЕ ЗрЕсрашріЕ ай саБсЕрЕТЕс аБТКсрвЕус СЕЗЕсСівацв вавсксввав СІ ссЕТЕВа вет за паарссаштв шСІВІВСЇЇ сесарастас їВІатраЗеІ вЕрІсавЕшса вЕстссвЕЕВ аа сакшжеасівв заївнаїсЕБ сЕВтВісВії ссіїсгацщ є БЕК сівсваїсвЕ тай варіїтїазав всавБЕрішВс таїтяссЕдів Басзавісва сзартастяс стаїзіврад - я
ТЕСТ Ссс ТЕКС СЕса врасВсавСС шТвЕТастТатЄ БТЕСТСЕВІс ЗсассТвстЕ БЕЗЕ вЕаЕвссаБсІ ЕШЕТІТЕстїВ ТБрЕрЕВсав БЕСасссїдЕ брак вЕїЇвІС БіссвЕзрЕВ ща
ТБЕТБЕБСЕВБІіЕ каЕЗавідЕС сЕСасТвшар плаараБЕТТв сСіБСІТІЕва дааБЕлдЕві У дтншсвсітТЕ звазциваввЕ срсвашКсств ЕлдЕЗав хІ6 «ЕїВВ з «тії са «дійах ЕТ «213» Штучна Пюслідовність
ЕВшХ «223» Другий Пеліпептидний Ланцюг ПАДЕТ-й «щих 3
Вер Бве уві Беї їВгоЗій бек Рго Ав обБес їв; Аза Уді зЗеб оїви Біш ї В та 15
Зі Абе о аї ТБКОМеЖ Зек о сує і ек Бек Зек Бій бЕК івц Єву) дев о бЕЄ т 5 ЗВ
Бі Ап піп іх йоа ТУукК їер оТВг Тк Бу Зіп бів із Бге ЗЕ бів а сс
РБго Бгоа іух ігр ів Тів Туг їгр біз бек ТНг о ДрЕ біб Зекозіу чді
Б 5 Бе
Рго ар дев Ре зве Бі беб о віу Зак бЕУ Те дер Бе твг їв тТБе та 85 я
ІТ бек бег оівгз біз 3із біс Ар отві дів Уві Тк Туг Су БІ Ддех ва ск 5
Азр їшжк зве о Тук Рг ТК БТ Бе пі бів Бі Трої Ево БІВ Бі їде 155 18 їз піт бі щі Бек піз бі сіу щі бів Уві сій о іго Уві БІ ЕК 115 іа 5
ЗіУу віт ші ім Уві зі Бо Сіу пі бек о іви АгЕ ігц бек о Сух дів ї5а8 ії їі
ЗЕ Зек спіу РНе ТВг о ББе зер о ТВ о Тек Аїа МеЕї йно ТКко Уві др Біл їі145 ї558 і ЕВ
Вів Бго бі іш ШЕ фівц біс тТгр о уУді бі гр 118 дгш о Бег оічв тЖК ї55 ї7а ї125 дп оА5п тує Віз Тс оТук тТуг Ата Аз о бБег Уві іх Ав дгЕ ре Те 188 ії: ї5-а
Ії бек йгЕ врахо бБЕгоі 5 Аа бвгоїєр Тугб ів біз Меї йза ек 155 288 ша їви іу« Твге бін й5о Тпгодів баі ТУгБ КУБ Су Мі Дкш Ні ЗІУ дев
І 2і15 еВ
РБе БІ Аа бек тТуг Уві Бег їгр Бйе діа ТУє їкробіюж Біп біу тпг
ТЕ Ко 255 а ів оУаЕ тТвг Уві бек бек БбіУу Бі їух бі БіУ біб іу5 Уді йБа дія 285 з5 ша іероічз Зі іув Мві Азія Діз іец бе Біб їх Уві дДіз діз ін ух зкя вУВ
Сі; ів Жаї Аїз дів ів іу5 Бі
ТВ ва «вів» 4 «іх щи сах ДНК «ліїх Штучна Посліданністіх
Ех «223» Молекула Нуклеїнової Кислоти Кодуюча Другий Поліпептидняив Ланцюг ПАНТ-й «а 8
БасТЖЕсЕТяВ гдасясаБІС ССстТЕВТадї СТДЕСсСЕіра БІСТЕЕБЕВа яшсЕбЕТЕВї Ба вівІсїїдса вравсСтссса віІсаствств звасаєсвсаз сїісаравниав сіабствасе Ва
ТЕШІВссавс вЕВаВссВЕБв СІдЕСсссКї ЗвастшсїшВа КОТ НІЄЕЕдС ТТСссВсКЗЕЕ ї155 вавіствЕвсв КЕсссввсвВв зії сЗрсвБС ЗБСЕрсарОв Стаса БаВТТЄ ТВсксІвага зда вВІТтстаЕтс ЄрсвЕрІсда ррБасЕСВрІЄ Етстастахх шІсляравтва сівБсярдствВї За сКстасВІжї ТоЕшссаррЕ пессаарстрв Басаставак баБЕсБЕваїс СЕКС ЕДСЕвВ ЗБ реЕсдарЕтТнК врсїврікра вБІСіБЕБрБса БЕСІЇвЕБІсс аБсССіБдавр БісссіваЕВ аа
Ес сствїв садсстсівв Вфітсассієс: азвшсасаївсн сізівваїїв рЕсссвссав 855
БСТССЗБЕЕБВ ЗЕБВЕСТЕБа ЕТЕЕБВТТЕЕВ ЗЕЕВТсавиї ссавеЄвВсЗа сваіївЗІвга аа вссІвсїасв сервсістаї рааревізва їїсвосвістї свасаватра сТісвзараве Баш їсастджяВЕс ТЕСаацїнвЗа сСВЗЕссСтТвЕааа вссІдашЕВсВ свЕСссЕІвБТа СЕВСсТвЕТЕТЕ Ба вевсасваїв астісввдсва ТіСттТасетв ТСТЕрестЕв стівІтїрвдд асвсввваєя «а
СівЕсЕастЕ КЕТІ Тссдн ЗрЕаТЕТЕЕс вЕТЕБаВаЗЕ ГЕБССЕсВІїЇ дадЕсЗЕЗав ТВ
ВІТВСТЕСЯї тТразагавза врісвссріва сіїзавваза аврісвсавс сстрааавав ва
«гів 5 «211 ЗБЕ «2125 РЕТ «8135 Штечна Послідовність яд» «23 Першими Паопліпептидний Ланцює ПАКТ-В «Вих 5
Вев її біз іє ївгобБій Зеєб Рго пів Кіз Мі Бек бів Бек о Бгао 515 ї 5 їй ї5
Ззіц ік: уві Тбг о Меє ТБгоСу5 деЕ дів Бек БЗег озек Удь бег тук МЕЄ
За 5 ЗВ
Веп ігр отУг Біб бів бух Зег обі ТпгоЗегб Бго гУ5 вгЕ о їгв 11іе тує з 8 5 пр б Бек оіу5 Уві дів Зег обі Уві РКО туго ДгЕ ББе 5Бег Бі вк ко: 5 ва іч заакосіу їБг оЗег Туб бек о іев ївБг Хі бек о Зеєб Меї біс; йівз бі ке 78 75 во ахр вів дів ТбгоТУг ТК Ск5 бів бів тро очЗЕК Зевс о йлй Бр ів ТР а ак тва бі Аза бі їпг ох ів) бів ів їі Бі зі бі Бег бі бі ї5а 15 за зві Бі бій Уаї Бі іву Уві Бі баг бі віз БЗів із ії 95 15 Го 315 іга 175 пі Аїа баг о Уві їіУу5 Фаі бек Су 1іУу5 ів бек Зі Тек таб вве т ї15а із іа ар о їУг ої Меї їіУу5 го Маї сш бБіп дів Бго бі бі Бі ів бів 145 ї5а 155 ТВ їв їїе піу дв І1е 112 Рго Баг АхпобіуУу із ТБг о ББе Тег йз5ап бів
155 178 і75 ія Рпе іх Бі КЕ УВІ ТБГг Ті ТБ о Маї Або ге беб ТВ Бак отвг 158 іх ще
Вів Тег Ме сіб ївв бе бБегоі в АгЕш его Біб дв тТвг дів уві тек 155 ва еВ
ТуУуг Су Дів йгш бек Ні іеб ів; йгЕ бів Зег о їв оБне дів Тує ТЕО гів зії М: сіу біп шіу тТвВгкКоїеб Уві ТК оУді Бек зек Бі Бі Сех біУу біб щі
ТЕ ЕВ 235 у піз Мві Лів віз го зів ух Зі Уві іа Аїа ів біб іє пів УВЕ 255 Фа5 дів бів ів бі їх Зіц Уді Ат Азів ів: біз і 5 зав Іа «діва «лаз В «газ» ДНЕ
ТЕ о діток ем др пункт ер «Тіз Штечна ПосліДОВНІСТЬ «ДЕК «2233 Молекула Нуклеїнової Кислоти Кодеюча Перший Поліпенптиднний Язнцює ПАНТ-В «ща 5 шва ссввс тТрасссавтс Тссавсваїс вевІствсак сіссавреввВ раверісвс де вкісасствсв єзшссавтсс зантвріваарї ївсаїваввсї шрізссвроя паавісвеЕх 158 вссісссссв завезівБЕаї їівірасаса іссазавшірв СІТсСтТвЕравї ссстТінісвс іа їЕсарієвсв кІрреїствв сассісаїівс їстстїсасва ссарсвсвї шравасіваа МЕ
БаАТЕшСтТвЕссВ СТВІ їВсТЕ севасвиївр зщіЗЕТаВІс СЕСІСЯСЕТЇ СЕБКНсСіРЕВ за шствавсішв ЗЕСсіраВарЕ ЯБЕЕСЕЕВІСС ШЕСРЕСЕває БЕСВрЕТЕСся ЕСТЕБЕТЕІВЕ зва
ЇССЕБЕБсСТЕ засів ЗВБаа ЗСССЕдашКї сТСсБІБВаадЕ СБІСІТвсавз арссВшірЕс Зива ївсассьтсв савасІвсїа таієввЕїєв вісзевсварЕ сіссвБраса девзстТевБаВ Зк
ТЕБВісЕрсв збатїсВІсКку їїссВаВсдер россасісїся вставтсасав діставав ща вериїрвста їївссштТера свзавїсвавсв висаВствсСїЇ зівідсвеої пдвотосстк Бей сЕКІсТЕВаВш шізсавссв вісі ВСТсСЕВБСсас Вс ЕдЕ ВЕССЗрСІЕ рез
ТЕТЕсСЕГВІї Бибрвасарев сгассстврів всвндівБіств стевасвиїтв сЕЕСсЕдігЕВ я
БаЗЕТЕЕсСси сЗстЕБаКна ЕВЕЕТТЕСІ БСТСТЕвЕБЯна арЕВЕБІСсвС СБС Бва Те ававвававТсЕ савтустрва давав ща «лів «Віз ва «гід РЕ «зі3х ВтуУучна Послідовність «ах «2383» Доегия Попіпептидний Ланцюг БАВТ-8 каяяЗ 7
А5а БНе Уві Меї Твгобій 5Зегобго йо о бетг оіецз діа Уві бекБ ів осі 1 їх ІВ Ії
Сі: др Уві Тбг о Меї Зег осСе5 іт бек оБег СВ; Бек ій ів о д5в бек ща а З
Зі хво обпів і Ам тТуб ів ТК ої тТУг бів бін і5 Бго бі Фів її В Зк
Рга Рго їу5 ів іецш 112 ТУг їгробід дег Тр дк бів ек Бі Уві
Рго во агЕ Бе бек Зі бег біб беб бі ТК др Бе Тбкг ів; Твг
Уа ТВ а
Ії бек Звг оівц бів бід біб д5р Уві Аїв Уві Тук ТУ Су пів дал я ска 5
Аза Лук бБеє Ту Бо ТУукБ ТБ РБе Бі Біб Бі ТБкоіУу5 ев Біб Ті тав 15 15 їжх5 ці піу бі Хек бі Бі бі бІУ Ар Ії іх іву бів пів 5ег
З іа і і віз біц івес; Аза Ага Бго Бі йіа Бек Уві їує МЕТ Зег ів іх
ЗВ І55 ї38
ТВЕ Берг обі тує Твг Бе Тог одгЕ Туг ТВг о Ввї Ніє ТгоБоУві веб бій 14 15 ї55 ТБ
Аг овБго Біу Біп Бі із сіб їброїїв сі тує Іів доб Рро баг о дгв 185 ї78 їт5 біУу ТуУуг тг ойхп Тс а5ап бій Ух Ре оі5 Ар і та Ті о вгец ТК
Ід 185 іч
Тег да Бгух его его зве ТТ дія Тег Беї ЗЕ іев о бек бек ге ТК ї55 га ах
Щек бі й5оробег Аїв Узі Ту ТУг без ів йгЕ ТУК Тубк дв дою НІ
ЗЕ ЗІБ аа
Тук їх Єву бер тую їга бі бБіп Біу ТБЕ ТОг ово Бк обаі зво бек
ЗУ МІ 5 тав сі бі СУБ БІР біу Зі у Уаї Аіз біз івео їує біш ух Уві діа гАБ зе ЇВ
Від івгц і5 бій ех Уві біз діа їівєц іх Біб іує Уві діз Аз ї ви зва да ее
Її же ав «і» Ж «аіЕ Я; «81і2з ДНК «2і3» Втучна Послідовність аз «223» Молекула Нуклеїнової Хислоти Кодуюча ДоУугив Поліпептидняє Ланцебв ПВЕТ-В «аа» я ваЗсЯтсЕіІва їрВсасаріс ссстраїавЕї стІрфвесвіввВ дісідвбрвеЕря шБсдЕВіВВсї ЕС втвссїїрсз арарсїссса рісесівстр звасладекеав вісзразана статі їз
ТЕЕтассздІ зЕВадесадв старе ссї вавстрсіра їгівівбдеро сіссвассаве ї5е
БВВЕСТЕБсЕ ТЕСССрасВЕ ВТС сРЕС ВроввсавсЕ БСасараттї сВссстТвВсВ жав ес зЕс їЕсапрІсва вЕЗссівРІЇ ЕТіБІАсіВї Бісврнаїва сСтасвиствії БЕ: кестасактї ксЕрСсашев вассзавстд влаайтавас всешсераїс ссср ка жЕСЕаїВІсвВ а8асірсВвжса БІСсарЕББІЇ ваастрЕКЗа вассІрЕЕвІ сСтсадірлав в. агетїбсствсв грвстіствв сівсВссстІ асівавеівсга сраїрсасів вЕтТазавсав на
ЗБЕссСтвЕдВЕ аррбЕсстЕва аїрЕвіїреа їасаїтТавіс стТавссвівр їїзівставаї яеНа твсавессввда зЕжссвараа савешссвсв Ттірастаєза вгандатсстс свровсвисє ще ївсаївсавс ТЕВдоІВвсст Басаїсівад шВстстрсВЕ ЄСІБІЕВСів сЕсСаБраТаї ща їнїнаїЕвВіс РИСІ РІСТ ТЕСТ сБЕ ЕРСсаВрЕса стастКссвІ ВБЕСТКСТКЄ та дар ВЕбІс вЕсЕріІррдяава вЕсЕБссрвІа стІрдабивва варіївбство ЯтТтрЕсларау тва авевісвсгсв састтавкра ававееісргв ресстраввк ве я «дів» я «їз 355 «а125 РВЕ «2і3з ВтУчна Послідовність
Іов «2235 СПІ23 х СОЗ Поліпептиднеи Ланцюг Дізтіла Що Має бльбумін Зв'взУючни Савт «аЯщх З ів Аза Уві Уві ТЕ обЗів Біб Бго 5егоіен ТК Уві бЗев Бго бі КІ ї ку Ів І5
ТНг ові Тек оівб ТвВг о Суз йрш бегобек ТНг Обі дів УдЕ Твгб тр бек
КЯ Ж 35
ВкпоїУг біз бепоїгр Уві сіб обі УЗ БК Бі піп Аза Рго АБЕ щі за мок іец її біз бік ТМйг ойсолоіт5 АГЕ дід РКО ТгБОТНгЕ РКО Аїа АгЕ РБе ща ва 5
Веб Бі Бек іеріви Зі Біб їх дія біз Ево їпе оті ТНК о Зіу діа
Бе ха ть ще
Зі діва із Ав Бін йіз АхроїУук ТУг ее дів їіву Тра тТугб б ве в5а ща Зк їв тТго Уді Бе бік зі Біу Твг ож івец ТВк Уві ів Бі Біу біб їв 155 її
Бі Звг оці» ді Бі Зі бій: Уві піп оіве Уді Зів Зег Бі Аїа Щи нев із Кк: іецр о тУ5 ух Рг бі дів Зег Уві іж5 Уві зЗвг осСж5 іуз вів Звг обі
І3а 135 148 тТЖже ТВг оББе тТвг ой ТУК ТК Меї Ух тТгпоУді йгє бій бів бро щі ї45 Еща ї5Е ї5а
БІ БІ івбосжій ТК отів сі й5р тів їте Бго бек о й5й Бі Ява ТНК і155 ЕЯВ 175 тре ТУ о йча Бій оіе5 ве іє Бі Ан Уві Тбк оті ТБгб Уві 85ріт їїе 155 їі
Бог отВг Бегб Тег о йІжа ТУг МЕТ сів ев бег обер о їв; дев 5Зег ЗВ дз
МО га5 тТвг ойіа Уві Ту ТУуг Сез дів АгЕ бек о Ніз ів; ої во дгЕ 83а ве Тро
ФІ 215 га
ТпЕ йід тує Тк оБІіУу зі» Бі Те о іев Уві ТК Уві Бегб бек БР щі
ЕВ 23 255 Зеця
Ск БЕК шіу щі бін Уві дія дід ім обі Без Біб Маї біз Віз ів
ЗЕ 58 Ккіку бі їФ5 Бі Уві дів дів ів БВ г е5 бів Уві Аї8 Віз во БІВ 15 ге зва Уа
СІ БЕК ші Бег оівец Аіз Бі: АІВ гу5 Уді ів: дія ой дев азіш ів їв ща 285 бо
Ар оіУуз туго бі Уді зЗег дер о їУк туго іт й5п їв; її Ар о йзл дія ща а за іух баг йіз біс бі Уві їух Діаз їв тів й5о Зі Бі Его; Аїхв діа
Ва 15 ЗІ5 з28 ін ого «1 зв «Ех Здаю «иїйлУ ДНЕ «3ї13» Втучна Послідовність «а «Ва3х Пролінуклесткд Кодуючнй С0Т23 х СВІ Полсіпелтидний Ланцюг Діатіла
Що Має дльбумін Зв'язуючий Сайт «вах ії саЕвстТЕтвв сТрвсігавєва вестісєвВсів вссвтвіссс свВррсвЕдаВс сТЕТЕВсссТЕ са всвідсараї ссарсасвев сесавтрасс всвістазсї ясвссавттв рЕїрсарсав 1283 ааврІсвЕдяс ВЕДСЗССЯАВЕ ББЕССТраїс ЕСРЕЕТасяВ асаваавЕбХ Сесії рЕВс і сестрдсасвні ТІТСтвЕравк їсСЕрдствирс Бразааессв сістивсїВаї їВссшпвров 2883 гавсесваре всеазадссвв ТВі аттЕЕ ссіствтввії атарсавтсї вівЕБТВІс зе
ЕБЕЕНЕТЕЕсСа свазаствяс ТЕТЕСТЕЕБа ЕБЕВЕТЕваАї ССЕВСЕЕсвЕ аЕБСраєвте ЗБа савстшнівс авіссспио ссвЕсксваар ВвВАСсСсВрар сІсссшІдВва ДЕБЕТ ЕТСТТ ІВ зававшСсашів ЕсСтТасВссії свсвЕВсїас їзівісваві євесІсвивса рЕсіссВвЕВ аа гаршевстівс ваїреВтсвЕ СЕВТВІсСаК ссттссаВсЕ євесєсастТТ сізеватсвЕ в завдічіїтазав шсаррдотввс сїВітЗссвів сасзазтсва сазаревсівс скат рває аа стезЕсСтссС їЕсвсїстТва зБасВсавск віІстВстатТ вістрі вВоІвВСесТнСТЕ ще
ЗЕВЕССВЕСТ БЕТТІБСЕТА СТРЕРЕВСВЕ шЕсассстТрЕ СсазсавБеЕТс ССС ЕБВрЕВ тав їсТЕЕСЕБТЕ єЗЕаВвстТєвс сЕсВгтТвшар зазидвовіїв сСідССТТЕвЗ равесавеїтє тва
ЕсТШЕсаСтТрР вааашвкаеї сБсашесстТЕ гасагакрор шсЕББТСТСТ ЕЕСЄсаВНСЯ З завЕїрствв ставссрсва встрратяаа ГТВіврЕсвїва пшсрвсїяєїв сТавзвраассте ЗО атівасвасЕ гязавніссевс вшразашсвів зварсвскїКа тіБВіЕлааВЕ ЗгідБЕСсрРСС па
СЕК пав «стгійз її сії 81 «ій Рв «213 Штучна Послідовність ау «223 КНО-СНЗ Домени Модибікованого Людського йнтитіла Б Області «ав» 11 дів го бін дів дів Бі Біб Бго бег Уві Бе їв не Бк Рго і ху
З т Ів І5
РРО і бе БВг Єви Мет Бі Заг ойгдш ТОг о Бго Зіц Уві ТБ їх Уві
Кк, 5 ще
Чаї Маї й5о Уді его Ніх Бі: д5р Рг бію Уві їз ВБе й Тгр тує
ЕВ ва й
Уві 5 БіУ Уві піц Уві Ні дД5п Аів ух Те ух Рез дев Зін 1 ще 55 Ба
Біп Ту йхлп бек ТМг о тТуг одн Уві Уві бЗег Уві ів тВг уві ів Ні 25 та ще ще
Зіп Аза їкроієв Ахп зі і БІ Туб г Сух Еез Уві Бек й5п і Ук за 5
Від ів бга бів Бго ї1і2е біб їх ТВБ Кт бег ої: Аїв 55 пі бів
Іва 155 118
БРго ге біз Бгбо бів Уві Бук ТК обер о бго бро бек все щі зів Мет 115 іа І25
ТВгБ ог Взп бій: Уді Зек ої): Баг бу» біз Уві їУух БІ РНе Тут Рго
ІА ІЗ ї158
Зег ой їів дів Уді Зі тебозів бег о Ахп ові пів Вб Бі дп дя
Іде 155 і ІБЕ тує Кує Тк ОТвг оБго Рко ЗУаї ген йха 5ег д5р пі бек РБе не івц 1855 ЕТ 75
Уві 5Зег іє: іез тТпаг о Ууді р У Звг обгш ТК Зів бів Бі Ахп о Уві
Івя їв ів
НЕ бек Кз бек Мі МЕЖ Ні біб Дів іо Ніз доп дрЕ Тує ТК обБів
ІБ 2 За іу бек їм Бже ем ве Рго зв г ух «їх 15 єт1ї» Бі «тій ДНК «ті3з Штучна Послідовність «зах «333з Молекула НуУуклеїнової Кислоти Кодуюча Пептид 1 З СНО їі СНІ
Бешщени Івшб Ес області «ща 12 касавзастс авсасвївсос вВссєЕБІіЕсСсСса шовІстіЕВЗЕ ССЕСЕБЕЕвЕ ЗВССрІСЛЕВС У тЕсестстІссС сссгававсс сзавевсаеєс стсвевдвіст сссЕвВсссс тТЕВдЕїсВосВ іще їЕСЕТЕЕЇрдЕ ївБ БЕБІ сСсасраднає ссірадвіса ввріїсваастїв візсвїіввВо їн вЕСЕТЕЄВЕЕ їЕсатТаатЕСс сзаваВсавар сеВсЕрЕВрЕ ВавоВвиОВсВа саЕСЯСЕТВС ща
СЕТЕТЕБІСЗ БСЕіСссІсВвС сер Сстргвс саввасїврІ ївравіквсва сеВвріясаде ще їЕсаВевІСЇ седасвадис сетсссарег сссаїссвва азассвІістїс сададссада за
Б 2 5 БЕ» а жЖЕВвсСВЕсСсСсс рававссвсВ ївізсасс сів сКаї сссвЕЕЗЕва БаТБассТаВЕ чий шо: Е Е ББАВ як ЕВББОБЕЗ ВБЯЕ щ звассвевІса дІстТшвВеЕїТв сгрЕсарісвав шЕСТЕСТВТс ССВЕСЕВСВХ СЕССКТБЕВЕ аа іїБЕБЕЕВВавса сібврсарІсЄ рсвевасвас свВсвараксв свсстссєсвХ вотбреВстсу ее дасввЕКіссу ЇсСтісстїсвї садсвароїс ВвссрТдЕВсВЗ врадсареЕтв дІВрСавБеЕв ще васвтсттст сатестссро свтссатдар встствровсвз вссвЕствовВс соевраавВЕс ев
СІсСІсссїві СсіссЕвЕт За а БІ
Е ЕВ
«215У 13 «1ї5 БІВ «12» РЕТ «-8і13х Штучна Послідовність
ОСЕВВУ
«23» Переки Поліпептидний Ланцюг ВВЕТ-А екс берсія З Ковструкт «ща» 153
Ах вве Уві Мет прозі беб Бго бо5о бЗег оі2гр; діа Уві зЗебоїівги бі ї 5 ІВ ії
Бій йгЕ Уві ТК Мет бек Су ЕУе БЕК Зег СЕ; Берг о іец їв Доба бат га 5 ВЕК зі ака біз іув5 дп тТУК ім ТВг ге БУЄ біб Бін іу5 Рг щу бів з В ак
Рко Рг гУу5 іев о ієц 118 ТубБ їкродів бег ТїВК АгЕ Бі Бег щі Уві ща 55 в
Бго А5р о АгЕ БВе Бек зі бБег озіу бБеє бі ТВг оА5в о Бре Тс їв те
Б У 75 ща їі бег о бегоівр бів діз біс все Уві Аїа ді ТУР Буг їх щі деп ща ах бор Тк бе Тук Бра ТУує Твг оББе слі бій Біб ТЕ озіу5 їв Бір Т1 ваз 185 їв іу5 бік Бі бі бек шБіУу біу БІ піУ біз таі зі ів Уві Сію вв її5 іа Ел
ЗзіУу пі бБіу ів Уві Зіп Бко зі пі беб о іец; дБ ів зЗегоСуя Дів 135 ї8а
Вата бег обі Бе те о ББе бек Те о Тує АтТа Неї Яха то Уві Ак обів ї45 іа і5а ІБ
Вів Рг бі іуз Бі із Сі: Тїгр о уаі Бі дгрЕ Ті дер оБЕг ої ТЖК ї155 ІТ 135 йхп оба ук ВЕш ї1Вг оїУЄ Тут Ака АзооЗеб Уві ї5 Вр дгфЕ Ре тТвг
ІїВВ ІБ ККУ її бЗег Абе дор йо баг 15 Ах бак оіву Тук ву біб Меї йЗзв бек 155 ша а їжи їух Твг біб ар о ТикК віз Маї Тк Туг Су Уві Агж Ні б5іу вед
ЗВ ІБ т28
Ре іу дп обег тк Уві Звгоїгр о бНе Аіз тує Тго о БІуУ Бі обі тег
Ми: Мк: тав їв; фаї ТБг о Уді Бек зЗег бі СЕУ У» БІ Бі зі біб Уві їв йіз
Ба 5 їец бів їУу5 Бір; Уві Дід ія во бів ї5 Бі: Уві Ата ІЗ гер обі дав За Уа
Їх бін Уві Віа йіа івги Біб і -е5 пі Біб Бі» й5рої ех Тр о Нія Тв
КБ зви 28
У: РКО Бго СУу5 бро віз Рез біз віз ів бік бі Рг Бек Уві ББе ша 255 За їв: Ве Рга Рго ух Рко із 5 ТК ів Меї Ті его дгБ їВг Нга за5 З16 ЗІ5 ЗВ
Зі: Маї Тнг Су» Уаї Уві Уві й5р Уві 5ег НЕіх б5Зів Ар Рез бів Маї 325 З з35 їу5 Ре дсп То тує Уві хв Зі Уві бі: Чаї Ні5 йхмй дів губ ТЕ
За зах за їУух Рго агв біс біц ців Тут Ав о Явк БВК о тує деЕш Уві Уві бек ді за зва ЗБЕ
Кен ТВг УВІ із. Ні Бій бор їкроіви доп Бі із бів тТук Гу Сух аа ЗУБ за
ЇУ5 Уві Бег дхи і У5 ів ів Бго бів Рго Ті пів і БТг о бів Зевк 85 За 55 «В іїх5 бів їУ5 СЕУ бів РБго дев бів Бра сій Уві ТУР ТВРБ ов га РКО а Со ї5 аг ой пін бій Мет їБг ої Вхв біп Уві бЗег їв Тс ос Уу5 ви Уді ре аа аа іЇу5 щі Рів о Туг Рго бвегод5о Кі дія чаї Біб Тер бів его й5ип Бі 485 ве -5
Сів Рко біз айви о б5ап ТїУг оі5 ТВг о ївпеб о Рго Без Ві іес д5р бек 85 аа Б й і ве Бе Ре іви Тк оБег ог ея ів те ові Яр і 5вг ойгрЕ ТБ а ат 5 яв сіп бів бі Абл о Уаї Еве бег Суз ЗекоуУаі Меї Ніб біб Вів їв Ні5
АБ КЕ аа
Ап оНів Тк о ТВе бів ї5 бер овен бегоівен о бег Рро бі іх
ВЕНА Бах БІВ «тіше ії «еїї І1538 «Вії ДН «213» ШтеУчна Послідовність «2 «й23» Молекула Нуклеїнової Кислоти Кодуюча Пердзий Поліпелтидний Ланцюк ПаАВТ-5 макс Версія 1 Канструкт «ав» 4
ВАСІ ТсБІКАа Траса саБІКС ТССТБЕТаБІ СІРЕССЕЇТКа БІСТЕББББа КЕСЕЕЕТЕВКХ Ба асшІстїроа впавсіссса вісавствсїв зазсарсреаза вісавазева стВістТрас 123 їЕЕІВсКкашс орадеЕссоВвЕв СсзЕсссоКу зазвсівсїіс:а їсївіЕвБЕнс фіссвссвЕЕ і158
ШВВІСЄТЕБСЕ ЄпсссвЕВслЕ ВЕТСаЕСРтЕС ЗЕСшБЕаБсЕ шоВвсаваїїї свссстраєав ва
ВЕЕЕсСетавтє їрсвршссва сеВсвЕвису віІріаствії вісвравтїва сСівсарств ЗО ксстасаик ГСЕБССВЕБЕ Евшсснавсів ваваставає ЕВЕБСЕБаТо СЕБСБЕСБЕВ Ба
БЕСЕВБЕТЕС ВЕСТЕЕТЕДа дІСтвБЕвЕЗ БЕСІЕввІСсс ВЕССІЕЕВЕЕ ЕТСССтЕВЕВ Я
КТЄТСЄТЕТЕ сарсстТстТРЕ аттсвссІїс врсасвївсв статрааттв врІссвссав ака шСТСсяБЕЕВ ВБББЕСтТЕсВ ЕТСЕЕСіББЗ ВЕБЗісябЕтї соваБІВсСяВ савстяТЕсВ вс
ВССТВСТаТЕ ССЕВСТСТвЕ вваревізеа тІсассвІстТ садваезеабсв стгааававас Бозі їісвсїнівїіїє тТрсзавідаа сарссїравза вІсрарсаса сеЕсІрІвіа їіасівівів еВ зЕВсВІЄЕТВ ВСТТСЕШсСВа ІТТ ВІНівЕ ТСТТЕБТТТв СТІВІТЕЕВЕ ЗСЗЕЕВЕасВ ЕВ стІвЕКсаств КТС ТтссвЕ дроаідїввс бсісвзсвав ївБЕссвоІвВсї сеВЕбаларав тя
ЕБЕТЕСТЕСТТ ТГБЕЗЕВАЕдаА ЕЕХСЕСІрсВ сСІТБаВаЗЕБ ЗБЕБІСЕСВЕС СсстЕсВЕВаВ АВ
ЕБЕСЕБСЕЕБЕ всававстсв сасвірссса ссртрдсссве сасстравис СсБСЕЕвсвЕЗ З нт свисї їТІстсіїссс сссввавссс варрастессс їсатїнатсіс соеррвІКосТ зва вавиТсВвІяї БОСБІрЕІЕві ЕБасвісяро сясваВЕарасс сіБВЕБІсСВа вІссавсТЕЕ 128 їВсЕКЕвВсСЕ ЕсЕірравві рсаїавівсс зарасвзвавс сесвЕвррарва всарівсаве Іа вЕСасЕЇВСЄ БІДЕТЕБТСсВЕ сЕБІСЄТеасІ ЕІЄсТВЕсСВОС ЗвЕВсТЕвсї наатТЕрезов 1149
Баріасавші єкавивіскіс свакскваеаркс сісссарссс сксвісвавава звассвісїкк 13 вавЕсксаявас ЕБСВЕССССЕ яБНаАССВЯСаЕ БІШТаАСВоСИ їБсссссВІС ссвБЕваЕвВЕ 13585 автбвдвссвада ВвссвевІсвВЕ ССТЕТЕНтдс стветсваве БСЕТСтТавсс саворасвс Іа шСсЕТЕрВЕЇ рака сза тТрЕртарссв дарзасавії агадвватсвІ нЕСстТессЕТЕ їз
ЕТвЕВІТсСв ВСЕВБСТСсСТ сТТсєТстТає зесзарсіса ссвіврасєва версаевівв їз4а кавсарбвва вВерІстІсІс атвстссвЕтв Зірсвіравв сІсСТЕсВвсза ссасівсасе І 5 ктавзанавсє їстссстріс їСссЕЕКізаз 1558 «зі 15 «211» 254 «вВ125 РЕТ «13» Штучна Люслідзвність «во «223» йругия Поліпептиднки Ланцюг ПАКТ-й зиБс Берсівя З Конструкт севах 15 біб вів Уві Уві тег озів Бі: Рг Зек о іео) ТБг Мі Бег Бго Бі бі 4 5 18 15
Те Жаї їпгсоі вм зве СУ ДгЕ ЗЕК зве Бе о БЕЄ бід УдЕ ТР ОТГ о бЕге ша жа ЗВ в«п ік Аів Ап ігроуві бів Бів іУу5 РКО біж зів діа Рг АгЕ бі
Ба ЕЕ 5 їев ї1ї2е 15 бі ТК об5поі єв йгр Аза го Тк; тб о Бго вів ре РБе
БЕ 55 ВЕ: ек бі 5ег оієец їв біУ БІ їух дів бів ев те Іі Тмге бі Аїз йб 7 т5 ва біб вів зів дхв біб біз д5р тує ТУК СУу5 дів ів тро о тТуг Бег деп ях Фа 5 ін Тгв Уві РБне Бі сім бік ТВгоїуз ієер ТВг о Жаї і) сі Щіу бі
Ве їв55 за
Бі звг зі Бі Бі щі бі; Уві бій ісем Уві зів бек пі Ді бі 115 іа І35 їз і5 і: Рго Бі дів Зег о Уді іух баї Звг ої жа іух Вів Звг щіЄ
ІЗ ї35 їдя тТук тТаг обве ТБг од5в ТУ ТугБ Мет іх тТевочУві йгЕ сів діва го щу їі45 ї155 ів ї5О бБіп бі іви біз Тр о їзе бі йзр 112 Ті Бго Зевс йов Бі Ав Те 1655 іУв Т75
Не Тук йди біп іїу5 Бне іу5 ЗІУ Агро ді ТК Ті тб охваі дров ех
ІВ І1655 ща
Бек їВгобБегє ТВг о Віа ТУк Меї ЗІ ів Бек зЗвбоївн др бег біб дев їз5 раз я
Твк йАта Маї Туг Тук о Су5 Аїа кре бек Ні іви і2гн йгш Вів зве То
РУ 215 Ко,
Рре діа тТук тер озіє бій бі їйг ої Маії ТБ о Уді Бегб бБеб Бі Б1У
Мт ЗБ зав був біт пі БІ їУ5 Уві із діа ів іє бід Бус Уві Віз із їв та Ба 55 із Біш ух Уві Ата Аза ів їх іш ії у5 Маі Аіїв біз еп огує Бі и га УЗ тів її «ТЕМ КЕБ «212 ДНК «иі13» Штучна Песлідовність еІаих «ваїх Молекула Нуклеїнової Кнслоти Кодуюча Другий Поліпептидний Лачцюг ПАНТ-й
Ікс Вевзсія 1 Конствукт «-«а50х ів сВЕвСТЕТеЕ сТЕВсІісаввБа восСтТтТсКасів ЗсССсЕЕЕТЕЄсЄ савЕсЕшаВс ТЕСТ 5а всвІБсавВТ ссарсвсввв сЕсартвВсс зсаїстТавст вгестевіІтр вБІЄсВЕсаЕ їла звавссаєвас аврсвссаве всвсстваїс вревртасва асавааавЕвІ сссствЕаКс їВа сстБсасЕНІ Ті сішравЕ ССТЕсСТЕвЕу вЕЗалаБЕССсЕ сСІСсвЕВБсСТаЄ ЄассЕБЕДСВ га гаврссЕввв еасеЕварссяв ТКасівіївї ВСТЄТВівЕї вівнсваїсІ штвЕррірвттс За
БЕЄБЕСЕБСВ саваастТЕас ТЕТЕСТЕЕБа ЕРЕБЕТЕБат ссЕЕСЕШСЕЕ ЗЕЕСЕВЕЕТЕ зва гавсїірвівс вніссврЕвс їсасстввав вазсссввас стііссвісва шБІЄїЇсїїв ад ваввссавтр БСІТВСсВссСтї свсаввосївс їзізіваврі всеїгаердсав вЕСТссарев ка саЕВЕВСІВв затрисїсвЕ скзіВЕсатї ссіїссавсЕ ЄБЕБЕСсВСТІЄ стасввіса 5 шхавіїТіваар БсарБЕТЕВІ їаКіНнсвБіВ васлаявссаз ссавсастнс тат аїврав вав
ГТваЕСТсСК ХЕСрІЇСТса араївоврвсс ШКЕТасЄБІТ БСЕЕТСЕБТС ВСВССТЕсТЕ БЕ вЕВЕКСВЕСЇ ЕВТІїшсїТа тірсЕБЕЗВСсОорД ЕрСВСсСТКВЕ їБВсЗЕТВІС тІссссанев Уа
ТЕТЕЕСЕВтЕ Баававтвсс се стаствази барасеввіїс сІЕБСТЇТкаа Вваєваввтс "ва вссЕдсаКІїВа аррааааевї сесвроссїв ЗзазеВЕ оту
«зів 17 «Ех БЕ «185 РВК «813 Штучна Послідовність «еВ «Ра Перший Поліпептидний Ланцюг ПАНІ-й вУБс Версія 2 Конструкт «Зав: 17 й5воічУух ТвгоНів таб оСїУ5 Бго Рг Сух Ргро дів Рго бі: 8ї8 Авіа біу ї 5 КЗ її
Бі Рго Зевк о Уві Ре ів ББеє Бго Бк іє го із ав ОТ ви Ве
КО 5 ЗВ
Іі баг Агро ТВг оРБго бі3іц Маї Тр оСуб5 Уві Уві Уві й5р Уві беб НІі5
Кукя виз Ах вів вв ге Біб Маї їе5 ББЕеєЄ Аза оїг тує Маі 5 бі Уві сів Уві
З5 Б
Ніз А5п о йзва і ТВгб огУ5 Рго дгрш Біб бін бБіп Тек бий Звк ота ТЖе
ТУ т5 ва
Вгв Уві Уаі Зег Уві ів. Тіт Уві іви Ні ціп да Те ів б5п щі ях ве 5 ів бів ТубБ із Сух іт Маї бег Ап і вія ів Рго бів Рго тів та Іва їі бів гу Тег Іі Бег іх бів гує 5БіУ бій Рго АгЕ шій Бго бБіп Уді 115 іа В
Тук ТВг іє Бео Без Звг о йгрш ів біз Меї Трої йхв бів Уді ее 158 І35 їде ів) їв; о Сух5 ів Уві і5 Бі РЕ їук Бр Зв о Ав ІІ дІз Уві бід іч 155 155 їі.
ТР бів бБег деп обьу віз Бго о Бів Ахп дай Тук вує Тег о Тве о БгО Рг їБ5 ІВ 175
Уві ін Ах бек вй5р ді Зек Бе Бе іез туго бБег оїу5 іо ТВг Уві
ІЗ їяЗ їн
Ахроіу5 Бек Аг Тгробів біп бі Аб5п Уві Бе его Сух Бег Уві Мет їЗ5 2 5
Ні бів дів ев Ніз дев Ні ТК Те обів і 5 бар оівен о бЗег г ву дек а іх МК.
Рго БіУу іх бів Бгеа бегобек о бБег Бра Меї Біб; др Рее Уві Меб Тек 245 Кку а Фа віп о бЗег Рге баб о Бес о їв бів Уві бегоієез бі бів беш Уві ТК оМву
Ва 25 5
ЕК оСея губ бек бек цій бегоівев іви ди БЗег о пі Вой баб ої ех Дал
Мах зба ув
Тук їз Твг ото о тТУг бів бБівБ іт5 Ре Бі Бій Рга Рго 55 івн о іг5 ях 258 я
Ті Туг Тїгробіа 5ег ївгоАевБ бів бегобіу Узі Рго вв Абе Рбе бек г 255 За
Біт чек бі бек Бі ТвКг бе Бе Твг ої Те Ті Бек яве ої ви ців
ЕК зі ЗАВ дів біз Ах хаїі діа Маїф тує туго су Бі» доп йхв Тук бег о ТУук РКО 355 з 335
ТУук Так Бне пі бів бі тв Ух фе біб» 318 іУух Бі бі діву бвБ 48 ах за ші піт бі ші біб Уві хіп ів Уві біб его бі ші бі Їівш Уві
ЗБ зба За віп Рго Бі бі Бек їв дробів бег оСух Дів дів Бек бі Ре те
БЕ зу з
Ре бек Твг отук Аза МеЖ дяв о їго о Щаї дгв біл Аіа г Бі зу 1 щЕ5 5 ха де їв осів їга Уві бі ЯгЕ Ті йгБ о бегб іу5 ТУг о дб5ап йха ТУ АвБа Тг 455 ча ФІ
ТУуг Ту йіз дер дек Уві із дБ АгЕ РВЕ Тег Ті бег Агр Ар Яхо ой І аа
Бег о іу5 йхкп Бек Їец туго і2ев Бі Меї Ахи бег ов їх5 ТВг оби дев 35 яд Ак
Твт дів Маї Туг ТУг Су Уві дБ Ні бі дДхбв Рне бі Ай обек ТК
ЯБе ак за
Уві бек Тго РН Аза тТУук Тер обі пів біУу ТБ єв Уді Так Уді зек
ЗБЕ ча се щЕк еко
Бег оБіу пШіу Сук ві біу Бі їує Маі Аква Аівз ї8ец іу5 під іув Уві 3855 ох За
Віз під їівгцп і бів і ді бВжІа Аза іш і«5 Бій іУ5 Уві Аза А1З
Зяш 5 ІВ їец тує Біц «155 18 «2іїУ 1545 «ігУ ДНК «213» Штучна Послідовність «35 «2335 Молекула Нуклеїнової Кислоти Кодуюча Первик Поліпептияник Ланцюг БАВТ-5 мус Версія 2 Конструкт «аввз ій швиЗзазВвоїс асвсеаїрІсс ассрієстса ровсстїЕВає соБСВЕрЕВВ ЗВссЕвОТсарТс ев тест сскК сосссазвазсс сСазеявсвсос сісвасЕВісТї сссврвасссос тради їЇсвІВ їі158
ТБСЕТЕБЕТЕВ ТЕЕВСЕТЕВЕ СіЗсбВарас ссіваБЕТса ВЕТІсаВсіБ ЕТВСВТрвах іа петгишірнарв сТесвІЗВ'вс саздвовазав ссоповесеандеЕ арсзрівсвав сашсвнсвТВЕ Моз
СЕТЕСНЕТСВ БСЕТССТсСВС свІсСстТЕсСВс саррастврс сЕВатТЕнсСвВа нгдзЕТасяВЕ зе ів ваввісї ссавсаавис ссзсссввсс сссвісвана звассаїсіс свавшссавав БО. вИдЕСаЕСссс БваЕВассВга шЕІріявсвсс сІБсССсССак ССІСЕрЕЗЕЕЗ вас вассвад ага зассавЕтса БІКТБЕЇТРЕЇБ СКТЕБІСаВа ВЕСТ СТаТЕ ссВБсСБяИСВї СЕС вІвЕВЕ аа їбЕсварарся абЕБбЕсавсс ссвраагавс їлсзаввсса сростсссве всссвдвстс ща васЕШКТССТ КСтТІССЕтсСТа саБСВаБсТС ЗссрірЕася зрарсарЕтТЕ всавсавеєє 5 авсвтсттсї саїрсіссвБї раірсвіваш всїсівсасв вссвстасеВс бовесзадвех Би
СЕКТ ССсКТвІ СЕСссЕребЗа зЕссссТКссС ЗвСтсССсостТа ївЕВВсВстТІ сЕТЕЗІваса КЕ сВЕТСТССЕш ВІОБІСТЕВЕС СЕТЕВБССТШ БЕЕРБаБІврЕ їрастВТЕїС тірсвадаес Уа тсесарієвс твсІваасав СЕБаваїісваЕ зававстаїтсє ГїввсстІррІв ссавгаравв Ве кевшЕСсвЕс сссотаВвВсу шстТЕВІсСтаї їрБЕКСІКСЄСВ ССаЕрЕВАТС ТЕБСЕКрЕСЄ Ук васяЕВсІса ЕСЕРІВРІвв сСаЕсовсасВ вВАТТіВссс Єсвовасстс тарісїссав ще
ВІСЕВЗРЕВСЕ ТЕЕсСТсТЕта СтвітїЕїсяад заїваїсасв детвіссств Сас Еде Тада савЕЕБасса ВЕСсірЕВавї ТявавББаБЕС БЕЗТССЕВЕСВ БСБЕБаБЕСЕа БЕБЕСавБсте їЗ55
ЕКЕЕВЕТСТр ЕвЕБасВСТХ врІссавсст БЕВБЕЕКССІ Теврастстс стІвТЕсавсЕ ї1158 їстрЕВІїсВз ссїТїсавсВс абасЕСТаТЕ ЗАТЕ ЕЇСС ЄССаББСЕСС ВЕРЕС ЕБЕ т2а сТЕвВЕтрЕвс ТтІЄєБавеває саврріскаве Тасвасзаїтї взікгавсста статвЕствах ї25о їсте ваврЕ ВвіВврастсяас саїсісвава пзідвіїсаа аравстсвсї вдтаїстосав Іа азівавсавсс їраваассва сшасасврІс ше Еасї ЄТЕТРарВсВ сЕБТаВТТє їз
БЕЕсСаВВІЄСЕТ Всі ЕКС СВІ ТЕрРЕВсарЕ ЕсВсасІдЕХ наст їз43 їсстЕБанЕВІ БІББссвштївв зазавнівріс всаоссїсване зразавттвс свБОТТТвава Іа даЕжасЕТСЕ СІрДСВІЇїВа Есавававвт рІВРСССїра ВаБваш ї545 китів» їЗ «ЩІ1ї» ду «гід РН «213» Штучна ПОСЛІДОВНІСТЬ
Соки ок:
«3235 Перший Поліпептидний Ланцюг Контрольного ПАТ ча» 15 дев Уві Уві Меї ТВгобБів ТВгоБго Бве его ів Бга Уві ек ів щіу ї 5 Ія ії5 дор піп діа 5ег Ії зег осСе5 дДгЕ о бег бек обід бЗегоівез Уві Нія баг а де 3 деп біт А5п ого їтК іш АкБш Тгроїуб їв Біп їу5 Рго Бі ія Баг 35 яв 45
Рго із Уві ів їі Тур іє Уві бЕеєЄ дхп о йгЕ Бе бек бі Уді ге за В дав ВгЕ ВНе бЗег Бі бБег о бі Бер обі ТБг од5о вБе ТБгоієв ї95 1
Уа т ва ---г йгЕБ Уві БІС: біз Бім дер ів піу Маї ТУугб Бе Су5 Бебг бів баг а ще па
ТВе ніх Фаї Рго Тр отр овНе Бі бі бі ТБ о іїуз ів 53 їі 155 ща ї8а 115 сін Щі Зіу Бег Щі щіуУ бі ЗІ Зіз Уві бій іш Уві біб бек і її15 іа 195 бі Бі із Уві біп Рго бі БР бБеб їви брЕ ївц бЗег обСув Віз із 138 Ії5 Іа
Бек пі РБе Таг Ре дм ТВг оТУук діа Меї дл Тго Уві дра бів Аїз 155 155 і55 158
РО бІіУ їк5 БІ ген Бім Тер о Уві Атїа АбЕ 118 АгЕб бЗег офух Тук вп ї55 ЕТ 195
Асп о тТУг дів ТК о їУР ТуУуб Аїа А5а бег Уві їх Ар дк о вББе Твг о тів ї5а їд5 їа ек БГЕ Ак йхр бек і у5 Ахп бек їв Тугк івгв Бій МеЄ дов бег ої ву ї55 зва В їУу Так о бів й5о ТВг о йіз Маії ТУук Тує Суз Уді АгЕ Ні5 Бі дп РБе
ІВ 25 ва
Зі б5п Бек БУГ Хві Бек Тгр обме діз Туг іга ді бій ЗА їВБг о їву
ІБ в 35 АХ чаї ТЕ Узі Зег озЗаг щі Бі хук Бі Бі БІ пів Уві біз Віз їв; 45 вай 55
Зів і5 бів Уві діз біз ів Біб їУу5 біб Уді ів діз ів» бій їух 2858 5 а
Зіз Уві дів Віз ів піц ік ших «Ії» а «ії» ув «Тт12У РЕТ «2133 Штучна Пюслідоанність «БУ «223» Друг Попіпептидний Ланцюг Контрольного БВЕТ «ІН» ЗВ
Зіп йід Уві ві Тнг піз бій Бго зер оїєр Тк Уві Зек Рго сїу Бі ії їх ІВ ї5
Те уві те оівгу ТБ осу5 дев бек обеє ТВ Бі бід УВДЕ Те тТВвг о бек еВ ші БІ деп отУг дів Або тво Уві біб бій Гео Ре Бі бів йіз Рг АгсЕ Бі 35 В 5 їен; Тіе бі ву ТБг дай іс йгЕ Дія Рг Тр оїйр о Бго Аїва Аге ВБе я 23 ваг обі зЗвгоіву іви зі бі Ух бів вів їец їм Ті Те Зі дів 5 КЕ У5 да бів Аза біз вб5в бів дія ДВ оТук ТУуг Суб Аїа ів ТО отТук зве в5а ща 5 іец їгб5 Уді Ре біу пі бі ТТ ої 5 ів Те Уві ів зі Зі бі дав 185 118 бік зЗек Зі Бі біу пі Бі: Уві іуУу5 ів Ав ошіз Те Бі щі іу їза Ії іев Уаї бів Рго бі агави Рга Мет їі ів беє СУу5 Уді біз бек 15 їх ку іа
ТВе твг о Ббе 5ег од5р тТук Тго Меї йб5ап Тег оУві бе бій Зек Рго Бім з35 ящ ї55 ІБ іч пі ву БІ: їгр Уві Аїва бів Ті дб Ахп ої Бе туго Дхв тує ії155 ІТ Тт5 сів таг отже Тег бегойбоо Бек Уві їе5 бі дгБ Ре ТК Тіз зве два ід 155 98
В5в Ах Заг оіуУух его зЗег Уві ТУ о івн бів Мет йхп й ів АгЕ Уді
ІЗ зва 285 піс дв БЕХ піУ Бе Тук Бук Се Твгобіб бек Тек те Зі Меї дав
МКЕсЯ 215 га
Тк тега ві БІБ БІ тве бек Уві тББоУаі ев бек бі Бі Сує біу
ЗВ 235 тав
СіУу Бі гу5 Маі бів із ів і бін іуз Уві 518 біз ге ГУух5 Біц ге БВ ша5 іже Уві йіз біз івь із Бі» іє Уві дів Дів ів і» Бі
Ба ВУ г «із гі «щіїв 118 еійх РТ «21і3з Штучна Пюслідовність се «223 Легкий Ланцюг СОЗ-Зв'язуючога Домена ПАКТ-А. ча» 21
Біб Ат Уві Уді ївг обі бі: Ро Зег оїев ТК ові 5Беє го Щі с1у ї 5 ІЗ іх
Тнг о Уаії Твгоі во Те оСух5 дв бек заго ТК обі йів ді ТК о ТВКЕ ве та ТВ ЗВ
Вп отУуг Дів Аза оїгвр уві біп вів гу5 Рео біб зів Аза Рго АгЕЖ щу
З5 вк «вх ів; їїе Зі сі Тбг о йхп і АБ Дів бка тгб ТБ о Рго ДЕа др ББе па ва ек обБіу Заг оігць івц Зі» сіу ЕУу5 Віз віз іец о їБб гі Тв Бі діа ще ТВ та ва
Зі аів Бін Вр бів біз дБ о ТУк ТУг о Єуз бів їв о ТкКротїук Бек еп а СЯ 5 івм тКроуУяі Рее сі шіу біб ТЕ ог е5 ів БТ Уві івец БІту за 185 іт «ЕІ» 25 «жїїз 135 «кіз» РТ «2135 Штучна Послідовність са «823 Нажхми Ланцюг СО3-Зв'язуючага Домена ПАКТ-В. «ах 25 зів Уві біп оісо Уві бів зЗег о Зі щіу БІ ів: Уві Бій Бго щі іх ї Кі ІВ 15 звк ів о АДгвоівгу Бек їз Дів Аа бек о бі Бе Те ве о бег тк тую за 5 ЗВ ліз Меї йза треб о Уві агЕ біз Віз Бко бі іуз Зі і: Біб ТгБ Уві
ЗіУ АгЕ Ге йгр Бек ої5 Буг Аа йсап Тег Аза їБг о тук ТУє Ава Або 55 Б ве Уві ух йхв АгЕ РнНе ТК Іфе его АгББЕ в5р о й5р бек Є у5 др бег 65 та 75 ще ев Тук іген бів Меї в5и Зег бен Бух ТР ОБЕС Аква ТВ о Аха Уві тує 5 ІсЕоя 5
Тук КСух Уві дгжш Ні щіу йзп Бе БіУ йзпобег о тТуг Чаї бег ТКр о Рве ха Ії іт
Віз їшк їв Біб БІ Бі ТК їв Уві ТБг ові Звко5Зег 5 із І «їв 23 я21їз Б кій РЕ «213» Втучна Пюслідовність «лох 223 ДЕгкнн Данцюг КО3З- Зв'язуючого Довена ПАКТ-В аа» В
Вхр Їїе бів ів о ївгб бів бек РКО йів БІе КМеї 5ег йів Зеб о рго бу ії а ІВ ї5 губ Уві тТве Меї Тег о Сех дгБ іа Зег бБег Бег Уві Бег Тугб МЕЄ и Мк: за
Зав їКкв оТУук бів бів їіУу5 бек БЗфу ТБгеойег Бго гу дгш о Тго о Тів Тугб ї5 45 45
Аха ТК баг оїух Уді Аз бБег Бі Уді Бко туго ЯбЕ ББе беб іє бек 5 за а
Зі бек йіУ тре бек о Туб бек їв ТБ ТІВ Зее овес МЕЖ 15 АР ші 5 У 5 ща
Ав Ат дів їБК оТук Тег Се Бі Бій Ткробег Зег дхй РКО ів отТвг яз за За
Бе іх Аіа Бі ївпг оїух гео іш гецз їух їв 15 «ВівВк ва «ІЩЕ ТЕЗ «2325 РЕТ «213з Штучна Песлідовність «ОВУ «23» Важким Ланцюг СОЗ-За"'язуючого Люмена ПДАЕТ-В «408 за йхв ЇТ2е їУ5 ів бів шій Бек БІ біз біц івоу йів АгЕ РгГО Піх дів ії 5 їв Ії бЕгоУві їе5 Меї его осСух іе5 ТБ обеєБ бі Ту ТР Бе твг одгд о тук о; 5 БІ:
Те Ме Ні Тер оМаї гє5 біп Ас Рко Бі Біп пі івц Біз Тер отівє 35 2 З піб Тег Ті йхп о Ркоа Бек вге бЗіу ТЖБ ТК о б5ий ТУК дхк бів гу Не ви іч б5а і Віа ТБг ої ТБг о їВг од5о і Бег о бек его ЗВ Ава ТтТуг
Меї зів ів Зег оЗек ів ТВг оБег піч дов Бег вів Уві Туб ТУЄ Су ях а з із Агш ТуУук ТУг бер АБО Ні ТУук бух ім Ах» Туг Тев пі в бі
Ії ї85 116
Тк о тВгоїев ТвАг о Уві зег бек 115 «їх 95 «11 113 «їх РТ «йіЗ» Штучна Послідзавність
КВ
«23» ДЛегжнй Ланцег СБІ23-Зн'язуючога домена ПАНТ-А каЯябх 35 дкв вве Уві Меї ІЗг оцпів зег гг Аа Зег оївгу Аза Уві БЗег їв о біуУ ї Е а Іх біз ЯгЕ Уві Твг оМеї бБег осбуб5 їз Бек 5ег бій Бег ів ів А5а о 5ег 2 5 ЕІ
Сі йхп Зіп о іух йхп тТкгоіви тТВе о тТгОо Туг Бій ців зуб Рг пф бів 35 В «5 го Бго їу5 ів ев фі Туг тТгройіз 5еєб ТБг АгЕ біз его Зі Уві 8 ко Ява АгЕ бе бек 51 бег Бі зЗвг біт ТВг дев о БвВе Тр оівц Тае 55 В та а
ІІїв бЗвго бен оіву бів За біб А5в о баї АтТа Уві ТУ Ту Гу Бів Ав ко я 5
Ар тек бек Туг Бго ТК ТВгб оББе зі бій бі ТВг ої Ух ів бів Тіє зва їв її85 іт «а В «ії ї13и «гій РЕТ «213» Штучна Послідовність ах «333» ВБажкай Ланцвшютє СБІЗ3-Зв'язуючаго Доменна ПАНТ-А «ОВ 28 бі: Уві біб ізо Уві зів дек бі із Біб їву їт5 фу Бгто бі діа ї 5 Та ІВ
Мет Уві Гуз Уді бег КУуз 15 віз зв обі ТУг Те о Ббе ТВг о Яхро тує га Ж Б іт Мет іх їгБ Уві ге бів діа Рго біб біп біу ігр бів ТкБр о ті ї5 Би 5
Зі 5 118 Кі БгоО Зег Ахп Зі бів ТК РН о Тук взй бій іт5 Бе аз З із пі дгЕ Уді тйаг о Тіе ТК Уві й5и іух бБег ТигоБеє ТВБ АР ту г КЕ 75 Ве
Мет Бін іви обеб бек Еву Ав вк цію вер Тнг о йів Уві тб о тУК гух в ща 5 13 ЯгЕ бек Ні їеу їву Аг Дід бегб Тев РБе Віа ТУуБ тев щі бів
ЕЯКЗ їі155 118 ціх Твг оівц Уді їйЬк Уві Бек БЕК
К15 128 «лів у «ії» З «під РТ «213» Штучна Послідовність ех «223» ДегккЯ Ланцюг СБІ23-Зв'язуючого Дожена ПАНТ-В «аз 2У
Ав Рре тав Мет тївак Бій 5Зек Рге ва бег ої ве: йіз Уві бегоїіву БЩу ї З ІВ Їх
Зі: ГЕ УаїЕ КТБг Мет ЗегоЄх Її 5 бер обегр біб бек їн іер; деп бег а 5 Б ш-іу вх бів іх й5а ТБ іє ТК о Тер оТуг Шіп бів і5 Рко Зі бів ї5 а 5
Бго бго їуз ів бен Іі Тук тїгройіз Бег То Аг бій зег о пбіу Уві
БВ 55 5
Гка й5р ге ге беєе біу бег Бі бег обі ТВг дез КББе Трої тк 55 КЕ а ще
Іі бек о зЗвгоівв ців Аіз бів а5р Узі бів Уві ТУ туго Се5 бів деп ща 5
Ар туго БЕК о Тук РКЄ ТЕг о ІБг РНе біб бів ЗІ Те оїУ5 ів бін Іїг
Іва 15 ЕВ іч «вій 28 «каіїв 158 вій ВКТ «313» Штучна Послідевність ве» «23» ВажиниЯ Ланцюг СБІЗЗ-Зв'язуючего домена ПАВІ-В «88 28 іп Уві біл івц Уві бів его бі біз Біб ву гу і5 Рг Шіу діз 3 5 ІВ їх цег Уві їз Уві бек ГУу5 15 діа его обі Туг фїйргроКБе То ЯЗ тук дя 25 Ку
Ту МІ їф5 ТгБ Уві Ага сіп дів Бго бів ів Зі веб БВ пр оті ко Я5
Бі Яр Ті ті Бго бек б бі ія ТЕ Ре ТУг й" бій їт5 Бе ща 55 Бо іже Біб АкЕ Чаї ТБкг от1іе ТБ Уаї Ав іух Бег те зе ТВгоВбів тук
КЕ та ще
Меї піц ів его обек і ен дкв бег Біб йо ТК Аза Уві Тек Тук ух 5 а 55 дів дгЕ Зег Ніх ев іви дгв о Аїв бек Тео Ре Аїа Туг тТгбвбв обіу бів аа ї55 118 і Таб ів Мді твг о Уді бвег обБЕетг ї15 іа «18» 35 «ЗАЕх й 2135 БРВ «Віз» Штучна гпеослІДдОВНІСТЬ 248» «223» Лінкер 1 Поліпентид ай» 25
Зі щік жбіу Зег Бі Бі пі І 4 є чаї» За «ТЕ К «313» РЕТ «ЗІЗ» Штучна Посліденність «ВРХ «823» бінкеюв 2 Поліпептид «зах за
Бі їУ у бі ві Бі ї 5 «тах ЗІ ч21ї» й «Із РНК «З135 Штучна Пенлідовність є23йУ «ги3» Лінкев З поліпептид ча» ЗЕ зіу щу БіуУу Баг 1 218» 33 «ай» 35 вав «їй» 33
«1» 5 «2125 РЕТ «13» Штучна Послідовність се «33 ДЛінкат й Пдязпаетт ках анкет З БеліпЕжития «й» З
Аів рРга Зег бек Бех Рго Мет Біб ї 5 стій за «її» 8 «12» КТ «213» Штучна Послідовність
Ж
«23» Е-єпіральник Домен ченні за
Сі Уаї іа дів ів Біб і5 Бівю Ущі 8із Ах ів бі уз піц Уві і 5 та 15
Віз Ліз іє Бі: іх Біо Уві діа дів ев біб і у сеї 5 «сії» 8 «13» КТ «2і13» Штучна Послідовність
Жах «23 к-єпіральний Домен «аа 5 іУ5 Уві із дів ів і5 біс іх щі із АБа івц і Бі Бу Уві 1 5 та 15
Віз лів із іуу5 Бін їх Фаі Афа діа іен БУ 51 за й «тів ЗБ «її» ав «313» РТ «213» Штучна Послідовність я» «223 Переважний Альбумін-Зв'язуючиий Домен «Вих де їм Аїд бін дів 5 Уві 12» Аза Азлп йгв бі іво бер ов ув Туг біш я к їв І5
Уді бек й5оО Тур тур іх вп ів Ті йо в5в дів іУу5 Зек Афа 515 а 25 ЗВ
Зі Уві гУ5 Аїа Єв) Ті б5р Бін 112 ів АРа дів ів о бге 35 ща я «Іа» 5 115 ду «3125 РЕК «2135 Нощшо завівпх «ВаВх «гаї ВЕБ РЕВТЦКЕ «сва2в 1... 237 23» СНІ-СНЗ дожени Людської Б Області
Я» 8У
Атїа Рго бів Віз та сІу біу Бго бЗеє Маї Ре іео Ре РгОо Бр і 1 5 ха І5
Рг ів й ТвКоЄви Ме БЕ бек Аге Тг о РКО бів Уві ПЕ сСух УВЕ а 25 ЗВ
Уві Уві д5в уУдії бек Ні біб взр Ре Біб Уві іх Ре да тео отуг 35 ща дБ чі Ахр біу Уаї Біб Уві Ні Ахв Аіз іух ТВгГ ої у5 Рео йгдш і 015 -Е 55 ве іп о ТуУуг о боп бек ТК о ТУуг ойгш Уві Мі бег Маї іви тік о Уві івн Ні 55 Уа т ща
Зіп й5р о їкороіви вн шіу іх Бін ТУг о фУє Суб іє Уві Зет АХА їі 5 як ак іа ге РгОо Аза Рго Ті біб бух тпг лів Зег оїу5 Віз Бу5 щі іп
Іще І За
ТгРО ЯгЕ піц Рго бів таї ТК ТвВгоіву Рго Рго беб др вів п: Бе 115 128 175
ТнНг гу дк біп Уві его ів їгр ос Уух ів Уві Рух Бі Ре їжк ВО 13 135 їща бек Ав тів Діз Уві ші Тгб Біб Зеб йеп о Біє бій бго Бі» д5ж Ав ї145 ізо 155 іде
Тек оічуз ТВг ОТВеб РБгоа Рго баіф ї2ен дв его Ар о іу бБеєб Бе ве їв 155 Я 175
ТУг обер ої іє ТВг о Уві йоо у 5ерг дев Тгв о біп бів бі хв Уві
ІБ ї155 ча вне бек Су5 бЗег Уаі Мет Ні іє біз іец Ні йо Нія тТУК о ТВкК бів
ІЗ зва га
ЇУуї БЕг ізн Зег їв бек обго Біб ту
ЕВ гі «ій» 38 «еіїх ї4 «Ті» РТ «вій Му веесційх «МИХ «Т2ї8 МІ БЕАТОКЕ «ЕР СЕР. «23» СОЇ Зарзіабельного Домена Легкега ПЛанцюга йнти-СВ3 Днтитіла «ваз З
АгЕ Бек о бБег Тиг Бі ів ді ТК о тТнг о Бег йо Туг АТВ бла ї З ІВ «тів З «тії 7
«32 РЕТ «133 БМуи5 явиесніце «Ре «2 ВІБС БЕДТОКЕ «23» 5 БарЕІЗВбельногоа йДомена Легкего Ланнюга бЯнти-С 3 Антитіла «355 За бік їЗг бха із кв Дів бро ї 5 «їз 4 іїх З «12» РТ «іЗх Ми вихсчіце «еВ «ее ВІВ БЕАТЦНЕ
ВІВ СЕК
«273 «03 Баріабельного Дощжена Легжого Ланцюга днти-СО3 дДнтитіла «аа» ня від іви тк о БУЄ Зек й ів о їгв о Уді ї 5 «і і ії 5 «213 РТ -еі3» Ви явосміне
БЕХ
«2ІЗ ВІ БЕАТЦКЕ «2235 «Ні Варіабельного Домена бажкого Ланцюга днти-- 3 йнтитіла «аа 1 тТВг отУує Віва Мет Дев
З є «Вів» 427 «ЗІЗ 18 «Віда РТ «13» Мих фвиЗсніне а» «алі» МЕС РЕДТУКЕ «аайх ІК. «223» КБ Варізбельного Домена ВЗажкогоа Ланцюга Внти-СО3 дДнтитіла «ЯВВах 4
Аг Тів дгд обег ої Ух ТУуг дв дха ТУг біз Те тує Буг дів 5 о бег ї 5 ІВ 15
Уві ух й5Ю «вій» а «Зі 34 «їв РЕТ 135 Мих виесміне «але» «ааїх МІС БЕАТОКЕ «дови ї1..К15 «223» КП Варіабельного ДЙомена Важкого Ланиюга днти-СОЗ Антитіла «ащйх ах
Ні бі Дяк БвВе бі деп бЗег Туг Уві бег о Тгв Ре дів Тук ї 5 Ів чаїв 44 «ії» 17 «215х РВК «13 Мух яиасціне а» «алі» МЕС РЕДТУКЕ «вах (І... І15і «223» КО ВБарізбельного йовена Легкого Ланцюга йнти-С0і23 днтитіла «40» ад іх Бег Зег бБіп бег вер оіє; й5в Зег Бі А5п пів і ух 5 о тїугБ ів ї 5 їв 15
Те
«1 ях «3135 7 «812з РЕТ «еї3У Мує ши цінх «ех «а» МЕС БЕБТОКЕ «2283 СЕК «223» СОНО Варізбельного Домена Легкого Ланцюга днти-СО133 йнититіла «ай» 45
Тра вів бег ТП АгЕ бів бБег
У Бач «ій ай «її» З «Та Ат «із» Му швизсміне о» єв» ВЕБ БЕДТЧНЕ «ах СЕР. «каїх СОЯ ЯЗдарзіабельного домена Легкого ланцюга йнтаи-С ОЗ днтитіда «ВОЗ 45 зів вп й Буг Бек о Туг Бро тТуб ТК ї 5 1» 4 2115 5 «ТА РяТ ії» Ми5 жихсціц «ах «2235 МІС РЕАТЦНЕ «газ (ЕКО «223» СБВІі Варівбельного Домена Бажкого Ланцюга йнти-0123 йнтвтіла «ааах 4у во о ТУк Туб Меї і 55
З в
«-5ї85Бх 45 ка У «832У РЕК «каз Ми вок нічех «ад» «ВЕУ ВІ БЕДТИКЕ «аа» 53.05 «223 СО Варівбельного домена Важкхого Яанцюга йнти-С0123 йнтеитіла «ах ам аз 1ї1е Тїів о бго зЗег деп обі діа тб Бе тег без БІяЯ іУу5 Ре і ї 5 ІВ їз -щіу «3165 8 «ЕВ У «5325 РТ кіз» Ми5 шуихсніше «2 «аа ВІ РЕАРОКЕ «ваду ї1..К75 «їз ЗІЗ ВархЗбельного Демена ВажкогОо Ленцюга днти-3Б1З3 днититіла «ОВ 4 бек Ні іч івз аге бів бек ї 5 «тб 5 «Її 7 «ВІ ВІ «213» Штечна Послідовність «ех «223 Гетеродинмевизація Доменна кави х 58
Зі Уві Бі6 Рг те Бек СБ ї 5 каівйз» 5
«зії Б «аі2 РТ «813» Втучна Послідовність «ВаВУ «23» Гетеродимеризанія Дожена «аа Бі
УаПаї іш Рго і уУ5 Бек бух і 5 ех Б «Вії «213» вит «813» Штучна Песлідавність
ОВ
«223» Єетеродужевнизанія Дожена «438 52
Зі Ре й вен Бі Зі СУ5 4 « «зії 53 «1ЕУ в «ві2з РТ «З135 Бречна Посліловність ші тЕчна см ліІДОВНІСТЬ «вав «823» Гетеродинеризація ДоБена «ах 53
Твге бл Ягве обі Біб су з в «щі» Ба -е21Ех 25У «іа РА «із» Штучна Послідовність
ВК
«га3з Третій Попліпентидний Ланцег ПАВЕТ-й веРс Берсія 31 Конструкт ах 58 й ву5 Те Ні ТВК обУу5 Бго Бко уз Рга бів Рго біз дів діа Щі ї 5 ІВ і15
Зі Бго баг Уді Ре івц бБе РБга го іх Рго гУух й їВг із Ме га ТЕ ЗВ їі2 Чек АгБ о Іг Рго біз Маі ТвгоСух Уві Уві Мі й5в Уаі бек Ні 35 Я «5
Він вв Рго бів Уві уз Бе зв о Тго те Уві хв те Уві зів Уві. 5 а
Ні5 дхп дів іує ТВг овУ5 Рго бе біб біб ЗіБ ТУг дей бегб ТК отее
КЕ а а
Аг Уві Уяі Зегк Уві іви Тк уві іец Ніх Бій Де ТеБ іє Ахв Бі їх А 5 і БЕ ТУ 15 су Без Уві 5ег Ах іх Дів бе Бго віз ББо ї18
Іо І55 ї115 бів іже їпг олів его оїу5 вів Гея 51 сій Бго АгЕ бін Рг бів Уві її15 зв і125
ТЖг ТК оті бра Рго бег о вбЕ бів біб МОХ Ти Її 55 дп бів Уві бег 138 55 Іа іви Бек СУ5 Аіз Уві ї5 Бі Бе їг Ко Зег йбБи Бі АБа Уві бів 145 158 155 ї155
Тгв БІБ Зег деп віє бій Мго біз ба Аа Тук ге Те ОТВе го га 1855 І158 175
Уві ін ар 5ег Азр обі 5ег ба РБе іву Уві Бегоіує їв ївг Уві ї58 ік а аз ув зегоАгЕ Тр оціп бБіп Бі Аза Уві Ре бЗве оСУ5 бег о Уді КЕ 155 28 зах
Ні5 біб біз івеь Ніх Аа дгшй тує ТвК бів г 5 бек оіви бегоі ву 5ег
ІВ 15 Кс го Бу іу»
Ка «еїійх 5 «втіх ї8 «1 РТ «З13з Штучна Послідовність «их «23» Пептид Її «аа» 55
Аявоіт: ТТГ Ні ТБг оСУу5 Бго Рго Ся Рго 1 5 Ії «Фіз 55 «Вії ЗЕ «гій РЕТ «213» Втучна Послідовність «Ва» «23» Переважні СНО 1 СНІ Довени Бо Області «аа 56
Вів Рге шів Аза Віа бі біу Бго беб Уді Ре бе РББе Бго Рго 15 ї 5 3 15
Рга іх ЗИ ТВгоіви Мет Іів бег йгш ТО о РгОо біб Уві Тег осбух Уді га Кк: За
Уві Уді дв Маї бек Ні бій б5в Рго Біб Уві іє ББе йхап Тер о ТУг ї5 8 дь
Уві 5 Зі Маї бів тазі Ні й5п дід іб5 ТВг ої Ух Бк йгрш ів БІ ща іп ТУг Дхв Бег Твг оТУг р Уві ві Бег Мі Зієцз Те Уві їв Ні 55 Уа 75 Ва бій вв тїКооівв дв пі ух Біш їТг оіїу5 су Гу Уві Бек Ап і ув 85 а зе
Віз ів го віз Бга ї12е Біб із їБг оті ек їз Від їх су бів то іїз5 зо
Тго ГЕ Біш Бго бів Уві ТУуб ТБ оі вн Вео Бго бек АБЕ Бі: пі: Кеу 115 328 ї135 їКг гу й сіп Уді Звгоївев Та о бУу5 іа Уві Гу Бі Рв Тк ко 158 І35 ї38 ек др бів віз Уві Біб тб Бі бег Ап бі Зіп бБге БІ: Аха доп 345 і ї55 ЗБЕ
Тук іш тп оте Бгеа Рг Уві із дв о Зеб др бі бБеб Рв ре 12 155 В ІБ
Тук бек Еух ів» ТВг Уві йхрішз Звк Агв їгрозЗіп бій БІ доп Уді
І8а 185 158
Ре бег Су5 бЗег Уаї Меї Ні5 бі бів ів Ні б5ап Ні Тук ТВг бів їЗ5 ВІ 5 іш Бвг їі вец Зекоіви Зве о Бко Бі г ух
ЕВ гі «іх 57 «ії 5 2125 РН «вії» Штучна Послідовність их «833» Лінкев 3 Поліпептид «3885 57 віз Бра дев бек бек 3 5 лів» а «ії УЗ «еігх РЕ «813» Штучна Послідовність «еВ «833» дмінокислатна Послідовність Першого Поліпептиднего Лаенцюга "Кантраольне пант-2" «ща» БВ др Бе Уві Меї тТвг Зі бег Бго Яков бек ів йід Уві бег ів Бі ї - їі ї5 під Яга Уві ТВг Неї бек Се 5 Бек беєб Бій 5ег іец і во о б5в бек 28 Б ЗЕ
СІіУу й5и зів і уз б5п тТкКоїви Те отго отже БІБ бів губ Бго о1у 518
ЗБ 45 45
Бго бро гу іер'вв Ті Тг ТК дів бБег ТВгГ АгБ біз его бБіУу Уді з5 а
Рко б5а йгв орав баг оЗі дек обі бЗвг біб ТК бе вве тТвг їв ТЕ хв 5 ва
Іїв Зевс Звгоіви; біп бів Біб в5е Уві Аїя Уві тб ТБ Св бій дей
Ж а з
Вер тТуг зег о Туг Бго Туг ТВг о БНе Бі» біп Біу ївгоіїу5 Гео бів ІТ18 щО їз 38 і бі Бі Бі 5ег зі» біт бі Зі Біб Уві їт5 івб Ав обі ТВ 115 ї125а8 І55 ці бі бі іс; Уаї Бій Рго Бі Агд Рго Меї ї5 ів баг о Сух Уді
Ії і35 їі
Віз бег шщіу Ре тЧг о БНе бег о йхв ТУг Тге о Меї Аха їго Уві АгБ о біВ її 15 ї-е 165
Бег Бго бій і Бі їв біб Ткр Уві Дів бів 118 Абе дов іУ5 вгУ 55 ІВ 175 тУг ха Тк Бі: тВгЕ о їУуг Туг его дев бег Уді іх бі дгш Ре ТНг ї88 І ії
Ії бБег Агро дов А5о о бев ів Бек об5еє Уві Тер їв бів Меї бов Ява їз ОВ 25 ім йгЕ Уві Бі» Азр Мет бі їфе їук тк Су ВК о Бію Веб о їук тек
ЖАВ 215 аа зіУу Мет до тує їгройпіб бів бі Те бек Уді тб ові бек зак бБІТУ
ІБ ЗВ ранні ЕХ пі Ст: піуУу Біб Бі біб Уві вів Аза ів Біб їх бін Уві Ата Аїа та5 дБ зах їез бів іх Бім Уві йіз дів іесб біб їе5 Бі ді біз Аїз ів ії зва 55 ВУВ їх «2ї18У ца «21 74 «Вій» РЕК «213» Втучна Послідовність «ВВ Х «823 бмінокислотна Послідовність ДоУгого Полілепнтидного Ланцюга "Контрольне ант -я" «ах 5 хи Уві Уві Меї їне бів тб о Бго вБв о бек оі2гу БгОо Уві бБег іві 19 ії ік ІВ ї5 йкв обі дід бек їі 5екК Су5 Дж бек бек бій бег ої Уві Ні 5вг а 5 ЗВ ап ошіє бо ТВгоТуєв їв г ТБооїк ів бів їУ5 Бра бі бів 5ег «В 5
Тга гу« Уві іец: ГРіе туго іух Уві бег о Асп дге о РБе бек бі Уві го
БЕ 5-55 Ба дп АгЕ Бе бек о біУу зве обі Бек пі Тег одхв о вве тТбг ів у Рів щБ та т ще
Зес йгбЕБ Уві Біб Вів біз йо ів бі Уді Тук Ре Сух Звек о бів бЕг 5 з
Твг Ні Маї Рко ТкроТве Рез біу пі Бі ТВгоії5 іо біз Іте ї55 і Бі бі 5ег Зі Зіу Бі бі Зін ві бій ів Уві бій Бек щу
Аїаз піц ієз іє і 5 ко бі віз звгоМаї 5 Маі бек с уз Бу ДІ ї138 1535 їде зе ші Туг ТР оРБе їпг Або їжг оїує Мет іт ТгроМеї йгш мів Ата
Рг бі Зі бі ів бів Те тів бі вв 112 ї11е БК бек Ахв бі
Аїз г о Бне Тек о д5за Зі 155 Бе їх бі др Маії ТБе Іі Те о Жві
Взр ів бек ТТ авг о ївйгобія тТг Ме біз іец бек ев фей дгрЕ 5вг іш й Тег обі Уві ТУуг Туг Сух біз дв бек Ні іш їв йре й1а
Зее Тв БвБв о Ав Тк їко бі бів бі ТК оі сь Уві Трг ові бек бЕг
Бі Зі СУуз іУ Бім пі іх Уві із біз ін і сі Бус Уді Аза
Аїв івь уз біс іух Уві йіз із ів іух Біб іт Уві дів біз ївиш
Кс ЗБ З
Її хе БІВ
Claims (5)
1. Діатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю, здатне специфічно зв'язуватися з епітопом СО123 і з епітопом СОЗ, причому діатіло містить перший поліпептидний ланцюг і другий поліпептидний ланцюг, ковалентно зв'язані один з одним, причому: А) перший поліпептидний ланцюг містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця: ї) домен 1, що містить
(1) субдомен (1А), який містить домен МІ моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (Мі соз) (ЗЕО ІЮ МО:С21) і (2) субдомен (18), який містить домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (МНеоігз) (ЗЕО ІЮ МО 26), причому зазначені субдомени ТА і 1В відділені один від одного пептидним лінкером (ЗЕО ІЮ МО:29); ї) домен 2, причому зазначений домен 2 являє собою Е-спіральний домен (5ЕО ІЮО МО:34) або К-спіральний домен (5ЕО 10 МО:35), причому зазначений домен 2 відділений від зазначеного домена 1 пептидним лінкером (ЗЕО ІЮ МО:30); і В) другий поліпептидний ланцюг містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця: ї) домен 1, що містить (1) субдомен (1А), який містить домен МІ моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (Мі сої2гз) (ЗЕО ІЮ МО С25) ; і (2) субдомен (18), який містить домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНесоз) (ЗЕО І МО:22), причому зазначені субдомени ТА і 1В відділені один від одного пептидним лінкером (ЗЕО ІЮ МО:29); ії) домен 2, причому зазначений домен 2 являє собою К-спіральний домен (5ЕО ІО МО:35) або Е-спіральний домен (5ЕО 10 МО:34), причому зазначений домен 2 відділений від зазначеного домена 1 пептидним лінкером (5ЕО ІЮО МО:30); і причому зазначений домен 2 зазначеної першої і зазначеної другої поліпептидних ланцюгів не являють собою обидва Е-спіральних домени або обидва К-спіральних домени; і при цьому: (а) зазначений домен М зазначеного першого поліпептидного ланцюга і зазначений домен УН зазначеного другого поліпептидного ланцюга утворюють антигензв'язуючий домен, здатний специфічно зв'язуватися з епітопом СОЗ; і (р) зазначений домен МІ. зазначеного другого поліпептидного ланцюга і зазначений домен УН зазначеного першого поліпептидного ланцюга утворюють антигензв'язуючий домен, здатний специфічно зв'язуватися з епітопом СО123.
2. Діатіло за п. 1, у якому зазначений перший поліпептидний ланцюг додатково містить альбумінзв'язуючий домен (5ЕО ІЮ МО:36), з'єднаний із зазначеним доменом 2 за допомогою пептидного лінкера (ЗЕО І МО':З31).
З. Діатіло за п. 1, у якому зазначений другий поліпептидний ланцюг додатково містить домен 3, що містить домен СН2 ї СНЗ домена Ес імуноглобуліну (5ЕО ІЮ МО:37), причому зазначений домен З з'єднаний із зазначеним доменом 1 за допомогою пептидного лінкера (ЗЕО ІО МО:33).
4. Діатіло за п. 1, у якому зазначений перший поліпептидний ланцюг додатково містить домен 3, що містить домен СН2 ї СНЗ домена Ес імуноглобуліну (5ЕО ІЮ МО:37), причому зазначений домен З з'єднаний із зазначеним доменом 1 за допомогою пептидного лінкера (ЗЕО ІО МО:33).
5. Діатіло за п. 1, у якому зазначений другий поліпептидний ланцюг додатково містить домен 3, що містить домен СН2 ї СНЗ домена Ес імуноглобуліну (5ЕО ІЮ МО:37), причому зазначений домен З з'єднаний із зазначеним доменом 2 за допомогою пептидного лінкера (ЗЕО І МО:32).
6. Діатіло за п. 1, у якому зазначений перший поліпептидний ланцюг додатково містить домен 3, що містить домен СН2 ї СНЗ домена Ес імуноглобуліну (5ЕО ІЮ МО:37), причому зазначений домен З з'єднаний із зазначеним доменом 2 за допомогою пептидного лінкера (ЗЕО І МО:32).
7. Діатіло за будь-яким із пп. 3-6, причому зазначене діатіло додатково містить третій поліпептидний ланцюг, що містить домен СНЕІ2 і СНЗ домена Ес імуноглобуліну (ЗЕО ІЮ МО 11).
8. Діатіло за будь-яким із пп. 3-7, причому зазначене діатіло додатково містить цистеїнвмісний пептид (5ЕО ІЮ МО:55) М-кінця до зазначеного домена СН2 і СНЗ зазначеного домена Ес імуноглобуліну.
9. Діатіло за будь-яким із пп. 1-8, у якому зазначений домен 2 зазначеного першого поліпептидного ланцюга являє собою К-спіральний домен (5ЕО ІО МО:З5), і зазначений домен 2 зазначеного другого поліпептидного ланцюга являє собою Е-спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:З34).
10. Діатіло за будь-яким із пп. 1-8, у якому зазначений домен 2 зазначеного першого поліпептидного ланцюга являє собою Е-спіральний домен (5ЕО ІО МО:З4), і зазначений домен 2 зазначеного другого поліпептидного ланцюга являє собою К-спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:З5).
11. Діатіло за будь-яким з попередніх пунктів, причому діатіло здатне перехресно реагувати з білками СО123 ї СОЗ як людини, так і примата.
12. Біспецифічне діатіло, здатне специфічно зв'язуватися з епітопом СО123 і з епітопом СОЗ, причому діатіло містить перший поліпептидний ланцюг і другий поліпептидний ланцюг, бо ковалентно зв'язані один з одним, причому зазначене біспецифічне діатіло містить наступне:
А) перший поліпептидний ланцюг, який характеризується амінокислотною послідовністю 5ЕО 10 МО:1; і В) другий поліпептидний ланцюг, який характеризується амінокислотною послідовністю 5ЕО 10 МО:З; причому зазначений перший і зазначений другий поліпептидні ланцюги ковалентно зв'язані один з одним дисульфідним зв'язком.
13. Біспецифічне діатіло, здатне специфічно зв'язуватися з епітопом СО123 і з епітопом СОЗ, причому діатіло містить перший поліпептидний ланцюг і другий поліпептидний ланцюг, ковалентно зв'язані один з одним, і додатково містить третій поліпептидний ланцюг, причому зазначене біспецифічне діатіло містить наступне: А) перший поліпептидний ланцюг, який характеризується амінокислотною послідовністю 5ЕО 10 МО:13; і В) другий поліпептидний ланцюг, який характеризується амінокислотною послідовністю 5ЕО 10 МО:15; С) третій поліпептидний ланцюг, який характеризується амінокислотною послідовністю 5ЕО 10 МО:54; причому зазначений перший і зазначений другий поліпептидні ланцюги ковалентно зв'язані один з одним дисульфідним зв'язком.
14. Біспецифічне діатіло, здатне специфічно зв'язуватися з епітопом СО123 і з епітопом СОЗ, причому діатіло містить перший поліпептидний ланцюг і другий поліпептидний ланцюг, ковалентно зв'язані один з одним, і додатково містить третій поліпепгидний ланцюг, причому зазначене біспецифічне діатіло містить наступне: А) перший поліпептидний ланцюг, який характеризується амінокислотною послідовністю 5ЕО 10 МО:17; і В) другий поліпептидний ланцюг, який характеризується амінокислотною послідовністю 5ЕО 10 МО:1; С) третій поліпептидний ланцюг, який характеризується амінокислотною послідовністю 5ЕО 10 МО:54; причому зазначений перший і зазначений другий поліпептидні ланцюги ковалентно зв'язані один з одним дисульфідним зв'язком.
15. Діатіло за будь-яким з попередніх пунктів для застосування як фармацевтичного засобу.
16. Діатіло за будь-яким із пп. 1-14 для застосування в лікуванні захворювання або стану, пов'язаного з експресією СО123 або таке, що характеризується експресією СО123.
17. Діатіло за п. 16, причому зазначене захворювання або стан, пов'язаний з експресією СО123 або такий, що характеризується експресією СО123, являє собою злоякісну пухлину.
18. Діатіло за п. 17, причому зазначена злоякісна пухлина вибрана із групи, що складається з наступного: гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ), хронічний мієлогенний лейкоз (ХМЛ), включаючи бластний криз ХМЛ і онкоген Абельсона, пов'язаний із ХМЛ |(транслокація Всі-АВІ), мієлодиспластичний синдром (МДС), гострий В-лімфобластний лейкоз (В-ГЛЛ), хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), включаючи ХЛЛ із синдромом Ріхтера або трансформацією Ріхтера, волохатоклітинний лейкоз (ВКЛ), новоутворення із бластних плазмацитоїдних дендритних клітин (УБПДК), нехождкінські лімфоми (НХЛ), включаючи мантійноклітинну лімфому (МКЛ) і дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому (МЛЛ), лімфому Ходжкіна, системний мастоцитоз і лімфому Беркіта.
19. Діатіло за п. 16, причому зазначене захворювання або стан, пов'язаний з експресією СО123 або такий, що характеризується експресією СО123, являє собою запальний стан.
20. Діатіло за п. 19, причому зазначений запальний стан вибраний із групи, що складається з наступного: системний червоний вовчак (СЧВ), алергія і бронхіальна астма, ревматоїдний артрит.
21. Фармацевтична композиція, що містить діатіло за будь-яким із пп. 1-14 ії фізіологічно прийнятний носій.
22. Застосування фармацевтичної композиції за п. 21 у лікуванні захворювання або стану, пов'язаного з експресією СО123 або такого, що характеризується експресією СО123.
23. Застосування за п. 22, при якому зазначене захворювання або стан, пов'язаний з експресією СО123 або такий, що характеризується експресією СО123, являє собою злоякісну пухлину.
24. Застосування за п. 23, при якому зазначена злоякісна пухлина вибрана із групи, що складається з наступного: гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ), хронічний мієлогенний лейкоз (ХМЛ), включаючи бластний криз ХМЛ і онкоген Абельсона, пов'язаний із ХМЛ (транслокація ВсіІ-АВІ), мієлодиспластичний синдром (МДС), гострий В-лімфобластний лейкоз (В-ГЛЛ), бо хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), включаючи ХЛЛ із синдромом Ріхтера або трансформацією Ріхтера, волохатоклітинний лейкоз (ВКЛ), новоутворення із бластних плазмацитоїдних дендритних клітин (УБПДК), нехождкінські лімфоми (НХЛ), включаючи мантійноклітинну лімфому (МКЛ) і дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому (МЛЛ), лімфому Ходжкіна, системний мастоцитоз і лімфому Беркіта.
25. Застосування за п. 22, при якому зазначене захворювання або стан, пов'язаний з експресією СО123 або такий, що характеризується експресією СО123, являє собою запальний стан.
26. Застосування за п. 25, при якому зазначений запальний стан вибраний із групи, що складається із системного червоного вовчака (СЧВ), алергії і бронхіальної астми. нн 15К ЦЗ хв щ ДЕ-ЗНа су У зфігураї Своє КВ Кз ОО Мниищі Ж - 1 й й? цьо / Ж; шт й Кеох Н у а -) скї гу Е - Мпрмальвий ре їй є СК ), й; Зак А. Зак. Ам В ЩІ ВМ яті сок ілзвферендізнія 1 ПС шрот ге М Ві зи кт ре Я вені кін дж З Збери ех сади в) йог МЕ о вн МО я 5 й ка СЕК де к й й що КОТАЗ-РЕ и СУМ б х Лийкотніблюютві С ня хо не й з 4 я з явки МНЕ й М іджтяннтня нд созаіза- й СМ позна Печечаате ою о с ий СВК ру 0 (ввалею В1-Нейді сов я січ ен / бут та х СОТ2З-РЕ х Неремазнні кання крові і щі а Ооза оо 3 і Ге і пе . пика Я усе У нн они сота Мормальний БАЙО ЗБалачевнй ВМ ох В тання СОзе соза. шари от щи ие й 1 іх Те 155 їж ви ж В он» шу СЕН ЩІ їж ВО Я 1 м не оци тагаоумінть окре? Я мегчвлувх уоскуртниинУу ті 10 ие Е ее Я - СВТ РЕ ПІДСУТВІНТЬ сковреЕ ка орманькнх сеззкостичиНх ми шині НН не пе, стевбурових. клітвних (НЯСІ Я тн а ни НАШІ ШИН Ши явки я нє Не Чо . | і КЕ1-Неюнє СОЯ Я де ОВ В х з | ЄОТ23-ВЕ сор созе 123
К-спіраль КН, м.
Поліпептидний ланцюг Ї сом «ДА заст 0 немнтии ЯЧнкев 2 оодіт і іітььььвцідь т ! Лінкері осн Поліпенптиднини ланцюг о сорм Ай ще ра А ММ й : Б-сшраль Ше спіраль) Шон ме тд : м, ЗМбране днатіле Мн, ж фета Уч сосн АДДЛВу сенс ДВ» СОС АД - соя й м в Фігтра
Поліпентидний ланцюг І Кспераль ВК, 4 , сон їзбо Б- ех пе пен СЕТЕЕИ - зв сю Пептиді Спраль) ек х у ппоолавини пани , лава з их нн АННИ ЕВЕКНН» й нни с АД пенею, нин ПИ ЗА Пінкер 5 ЗВнЕЕВ ОО евнин Ще и Лінкері ЗБниєр З ! поз Фон -КДАА Й ссснє ев як БЕ-спіраль кйсвН ізбо К- я с. АЙ спіраль! фан КИ те нн см НПоліпептняанни ланцює З ой вн Кт. Пецптнлі сн Осн іптнді се есе се МН. ннннжнаннанаанана ана нн аа на на и ан з о и и ин ї Збране с - лицтіло версія Жн, ц Фон чх : У Кт С гозн ДАДЛДЯ п: ке а Ба о сс ЦІНИ пАДАКХ шкі ну ЗВ -- в рони НИ щі й мив енмютюх: / сно Мн сив ща М. ре Шк ; шо Фігтра ЗА
Пептиді «НІ ЗОН, жан С яю С нен Шо Лінкев З ! "а имя шк І хо. й о нава 5 ЕК спіральюсвбо о. ш Б слтихиті ше Мк З Поліпептнилний ланивют З Еспірать) ль т ; хаВаде - як - й і З Тік 3 З ЯБнкеро В їх У дю де дк І СОН «МАК. пох з ОБО У Кей І У - ; Уч де Я 5 Кспіральі ше шй . шо Е І У в Й У І ж І БГептнді те. . З тт : з З г ЧК 3 Поліпентидний ланцюг 3 не . КЕ їх поема КАМ В Тех, о ВАН АНЯ З сна ОМ са они тооя ЕІ с и З се З см . ВСІХ ЗвБешанеї - тіла Ц сія З Пептилі з ЗЕтшдане Бс тіло іверся зі я я рома . ЗН, яййик с яинйє ї, нн і Пн не й с с дк оо сон - МА А ше енной пе» ккд ра чи шк КН ЗААААДИЬ чек, вами ЖИ Шипи Що Б Фігура ЗБ тТЕ-4 паля ла.
СЕ тн, БЕ бе Я -- важт-а Ж от Зак -- ст Фо 6 зажтов БО ке -- АВІ з НЕ В сх ват ж Ка Ж с ШЗ -- яд ЗИ 5 ЕІ ЩЕ Шк ще са я З зі 7 Контр.
БАКТ би 5 5 деКонтр.
АВТ ий че КЗ ще 7 Же 4 - Кк, с Ка а Е МИТНА Мк хннв Ей ві в зн Нині -Е осот курю «я заз жа ях тк Сай за? т ча? з щ т інв бжто вел с утотева шлтіни й й п конценІМацІя НІНІ Концентрація снтбмлі Мав ОУН ме В з моакт-38 ще З йод жт-я З : як со вах З-е - ПАКТ зЗАНІ й он Я -б- БЕН т-а Ж де Й Ме ня т |і рат АНЕ І. пи Я її «Же вадт-в д х ке -х Й о ваз й Ко хе - Га Ж -Ж одну т ЯКУ х 2 кое А я Й дова Же Мк 4 Конт БАКЕ Я - й йо що КЗ ж кое ВХ ! КЕ Е; я жене МЕ ака де ро нх -Ье ї Кол ;. ххх Би й й ій х х Щш т за? вх зах зах та кх «в вк сх м - . - Її х їв й о Шо зе Езнцентрація (нг/мл) Каннентрація і нгоялі ун тТнЕ-4 о не гоу НІ г І З тв Що ро -ан о ракт-а БУ І щожа я - ї и х щ І че ков -к- Контре.
ПАКТ Шк Х й : пен ім и ки зо и озна он як ча яд чат зах Конпентрація інтомл) Фігтра З
Внражена активність СТІ. у відношенні клітни ЕІ
А. Кавиті-3 В. ТТН до 130 ЦЕ вч и чи ШЕ Є ве К - миль ши пи в Р Щ В ; - т ї- ЩЕ с 494 «я і р І-й СЕ З ве Е дова А ш - МК : с Е ЩЕ мае ж; ШЕ че че чи чани з ве суч Чи й т. нн нина позна Мн яаї ща заг ни Ве щих ве Концентрація (кто) Концентрація (НМ) Нідсутність 1-клітинної актнвації при відсутності сумісного залучення
С. Ніде тність клітин мішеней " Ваомзклітннамн ТНВ-З ГМЛ що КЕЕЕЕсо то ще ко ЖЖ з ВінУ ! А х вав - «й Ж зо. жк вор- й : в й й В - до Би СР дод» «о ще Ек БЕ К е ну я во. зе Же у ве сооссКо ооо оо оо о о КК соо. ЕВ т ча зак ох ко ще ще Маеоноклональне антитивз і нгомл) Місноклокальне антитіло гнглялі - ьпактТт-А з. МАКТ-А ча вО - БАК Т-ьЯУНЕе сфе Бактр,о ВАВ «пвігура З
А Каєшти-і зсночнваючі і-клінние й ЕЕ тТа КО ча БА КТ-А ще не -е гранзим НО1СОЯЗІ зе ще Ж 0 се гранзнм В ОЦООВ ща пуб ях Й й мощі . по як х Кі я ее перборин СТВІ й в кн дер Ве вен о ев Бак й в сг паче Ми щ-
б. ІЗ ІЗ З ча за Яд таз Ех КВ тах Концентрація ПАКТ-а (нг/млі В КТЗ З спочнваючі Т-клітин І (ЕП 81) Контрольне ПАКТ тво І вв че гранзнм ВО (СЯ ве --- перфорнн (СЕН) то «ее грзнзнм ВО (СОБН шов -ае перфорнн (СВБ в М «0 зе ке з. вм дк Кс ненні сорока, те КЗ як зх ще са ня Зх Фе З С во Яд Яд яд яд зе Коннентрація кантрольного ПАБТ-А (нглнлу «Фігтра 6
А. яю -- Мов 13 -- Мобт- 13 « Т-клетнни ке Конті ВАКТ ОЗ мг/кг? «чю й о й- СБАБТА СО 00 мг/кг - й щй В ОБАКГА ее мгУкг) - Ї а ПАВТ-А (01 мог) їх ЩО -9- ПАНТ-А (02 мот) «ово ДО -ж ПАВТ-А (0 5 меті 2 ее ги С 50 / ее ДЕ ІЙ ї-- ; ЕВ 20 а день дослідження
В. ке ШИНИ т па Я -- Контр ПАКТІСО мкг'кгі І - РАБТ.А І мкг'кгі й: «В. РАБТ-А (08 мкгоюгі де -Ж- ВАВТ-Й (4 мкг/кг ї зада а БАКТ-А (20 мкг/кг І ох ) ОО чаоо т В З ЕТ 15 о день дослідження «Вігтра 7
Я ЗАЛ з КБ В тТоклитини -йк- Контро БАБКТ (02 мг/кг) і 15004 й ВАВТ-А 004 мгкг) Ї меди Що зх ми а ШК я і - ч- ОАвТ-А (002 мг/кг) Е -8- РАВБТ-А 0 мгкг) Ї ; -- РАВТ-А (02 мг/кг) Ї їх - ПВАКТ.-Д (0,5 мг/кг) і 500 и /с 0172 345678 9 101112 день доспідження Фігтра 8
А АМІ вм Мис ше : с ж150 і ро «Е ІЗ ее НЯ : -- м щ ШШ: : сич В ши З о п ялою і че - БИ ШИ й ЩЕ У ОЦ : їж З З в ОН Н з У ЖОВ днини КОВО І ї ме ВЕН ОО ; і Ак, шк ї в ше б о105 1 песни ен Ен з НТ ЕН СОТ РЕ ЕС»: СО1Т23 РЕ в Казиті-й ! 200 і о ш- ех Ще і иа й в ша.
В 300 і о Е о роувю й і ш : А Ж ЕН їі З | ПТУ Ох і Ж м У шиє що ї шо 00000 щ і 1-42 і тофу» я, Не с сх вони оре зони Нео не неон» К2-НІССМ123 РЕ 2-НЕСО123 РЕ срігтра 9
А ПА ФчЧенкозні Блаєтні ЮИТИНИ ав з шо. ГО БеоОСроюслені ВВ ж, з ЧИ КЕ Бонтв. ВАК вгбомлі щ ОХ не тез ї- БАКТАА ОС кгомлі ща . ь і. Що і. щ У г ц хе тя «зв Часінкуєвніігоді в Т- клітини зва СО необроблені вх «ж Каште АНТ ГО, ніші ! ЕЙ БАКТ АТО ягмлі в вікі шк АВТ І вгохл) ав АЙ СГ ШІ а ж хи Час інкусації галі с пре МмеЕ вав ПД І тр необроблені чава Е БКантр,о ВАВ врлал) Е ОПЛАТА ОЮ нгебмлі - Ве Й їх ши ПАТ галі 288в- ЕІ 18585 ; К «8 72 зга Фігура 6
Ноермальні РВС ее ше 17. п І а Ше - Н о щ-х їй Ка ше й . як ВШ я Ме НИ ще Кт шк : | па пдв. ш є гот. Ж Б ШЕ ВО я що - «З ВЕС НИ й Ге - г. МОЮ я я т ХО, «зд ше з ч рт ит й шодОойЯ и ий Ме тов ше ї с и «іа; КОС й Щі м УЩИ п ОН : З ВО С мої зх. Од що 1 :
я д. 5 Й ! ві Я дтютття 102 З ОЙ 0 дю 4 еою 800 00 їж 18 10 16 и Кан: ЕС ЛО КЕ1-менні негентировані ЕБСУН В дідклюю А контволь АМОРІ КаБтрель АК РІ о хількість подій 1000Ой кількість подій ЗУБ І позі ї УттВ Са з є ИН АК мом о Б В КО ЛВ ОКО Й е ша и ше НИ КУ ПОЛЕ ВВ 8 ре НН Яд ВИМ І - щі ша о І до і БО СИ ІЙ нив ен Я Сово дох п Н ш «ори КН, В ти: в» дю! дю КОХ МОВО к 1 ОО це 1 1 НІ І НЕ РАН: РЗ-Нею: ЛАН ЕК Т-Неа ве ЕСУН, 552-Н пілюти ВІ 3-Н, РІ 4-Ннідкляс контроль АН, РІ контроль АРІ а - - сш щі Я - - шосту К. кільжшить полів ЗА й : кількість поалій 537 «ХЕ Е: Ц Е пе Баш т Еш 2 Е ЕК за КИ СЕМ З-ВС «Фігура
Моб т т що од, Ей - ше лоздо я. ж ВО: у Ух с не ж й : о ВИ. и й БЕ вва Я шдкй КВ СЯ мо ол вва кана НК Е: ж. Н и В я Ва НН ця ма ша ! КЕ в й ше РІ ЕКО вюх мете В о 0 5 Ба В НКЮ ке не цк ще їж ЕаС-НРАС-Нейдни КМАНОВЛАНею негейтирсввні Е5С-Н, 5ОСН пілкляє - : що НЕ - : ск думи хі кількість шодій МНК. кількість події КЗЗ на Ї сеоссоюссююсоюссювсоєфіе» ЩО зм Й 24 ше ее ; ! ШЕУ: . лою їй си . ХОДА А вк інш Ес ню си ше шен ж ЗМК. Ом М С, ОЗ т р ОВК. Крот ня « и Й щи ле п с З шал е цо - й Сх - ку - й М пи шх г Е З. ря це КЕ це 10 їт це 10 1 НЕ т РІЗАМ: ЕІ.3-Неїдій ЕМ-НЕЕ еНеюве ЕН ЗСУ підклас КІ кр ен відклас АТО АНОРІ ша тА АН. ВЗ -б ж . : -- С й Гй . - зо ум У Е кількість полін йО53 СЕ хальвість поді 5528 я ВУ Н Фі в -щ5 1 ге а | ши я Мухи пон СОВА РеИСРСТВ СО ОЗве Фігура 1 (пролевження й
РЕМ внряи АР. Фо ши КВ одн й КИ Й б В ОО : о нин її гло й ше шин і що ! п УНН Я с еп а нн НИ в т вк ж у МА я ФО ов ВИ в ек Ин а М, ро с днини й КЕ Я Бо 8 лю ВБС-Н: ЕБС-Неїні кегектнровані ТАТ АН Тювтини хілюкість події З ОО т. ЕВ Б З ШО: п - ! - ! і - . ях Е ЕЕ Не понти 1 т І пе с СУМИ нин х Що КК чу кіл е с пи АТХ З ХК, я « -
п. т, «Й ДЕ : ЕН т й ша ши й й І 2-5 - й -ої за й б чої за? зо ої БАНІ вЕТА Невій ЕБС-Н. ВВС підклас «Я А ТТ клітини кількість олій Я ща ОО! ТЕ І кі Е ср. Й Фігура 13
Мернальні РАМН срісурва 13 й необроблені контрольне ВАК АКТА ТО ух Езельнх з ЗДДСЕТТ ТУ ди ММ Буття ДК моя тя - ік мий і мої кеВ: ов А преси | В СД С ші р ї МУ ек рн Ве ВЕУ Я Пен . . я В Н ДБ вит не 1 я и Н ох : Ж Е з вої Ки Ше мо нн ща пешше и К НННН : завер ют о люкуі : ія а ! Щ свои я Й Фк і, ! МОНА ПП ше шия Ки й Н ЕН Бу й ОСТІ сиди ща ще ов по шо І з іа НН те ТУ 5 ж СІК Ж я З шо ж бі ша - ше ше щи в сн і. 5 В я КОЖ с. 0 КБУ а пі о ит ! 4 й | ОЖЕТА : о - го ЖІ | шкі й І ДЕК о нет нннннрннннк ТО с Зеозеек Х нон кан и НИ рення : ; гене 8 по щю Я ОО ЯН ож Неон еВ ИН ково конк ВН: РЕС-Невнє ЕН: ВЕЖ НаавЕ ЯН: ВАН БАС М Я-Набавї
ЩЕ. кегеккнІнне РЕСНЬ ВУС дуклвє РЕС-Н, БК іукаи ЕС ЯВНІ ВК нн ФЕНІЗАТЬРМЕО ОРЗ аВВІ ЯЗВІЗАНРАНІ І СККНИо 0 бтЗ51ЗАБСВКСЄ 101934Ю0У пу тБІЗАСЬтВЯ КоачавОВ за" В кір ді КОЮ Бількивь веде В кекс 19 кільки лив ММЗ гав РАМ яри АТ. СО19-АРС вероблені контрольне ДАТ ПАКТ-Д й МК Ума І век че МДОУ тет ще М Тр НІ о -Е | І а : Я ЕЕ їж КВоЕЕ ШЕ М дав Е . в а ВН бою ВН пі рода с п, Е ше ОНИ ЯН Шо БЖ ОО сс МОЮ оо цит, «ії КОЖ р Ан НІ зо ВИН С о У Готи І-й ССО Бей 0 ОО. З у Я в ях ВО жи сш ШИН НИ НН ! « ж пн шен шин шини ж змо Артек ! г ПО КК що пе ЕН МИ пої ЛИ З ОТАК : її Датекоеічнни нн пелтеттристт 1 екееткктрнсть сно нненнннй 00 МК сист нин річниетий 00 М Мини АК ріки сне нава ИН І В С і В НН ОН ЗВ В КЕ А М М З КС КУС-НевнЕ ЕБЯ-Н: В А-Наїді КАНА Ан аку А-Н: Я Я-Незав Здатні ЕС АОМ вік РУСІВ пі есе сі не ке Я твізА ВВ НУО ФЕНИЗАМН ТМ СТИХИ 0 бізБІЗАЦЬВЄВ ОНА Соя виакзаьем В і озаоюя кількінтк полів Обпв кількить пожів Я кільки це УМ кількість подій ЗМ
Нормальні РЕМ А В контрольне АВТ С ОАВКТ-А І Кечуі йпеі ї зм Ь Й Необройлені Шегмя Енеми КЕ ОК ібн Б НИ : ЩА ше м ПОВ по ВИ З ша Йоан и "ря М С зи НЕ и УК ї- т Ше п яке й ме ше й; ще : шини ше НИ АН НН НА я НН Ф шин ся ШИЯ о ШИН на НЕ Га о ОКУ ше 5 ще М с - ее ше я ; ше 5 ши її ши СраА-АРС ті тако Щ М ай ОК ці 10 ЗАЛИТИ пи ОП я пі чк о й ли КЕНЕ чом они ие Нео ою НО: пе не це оце РАН: ЕКа-НеїднЕ РЯАН: РКЯ-Неїднх РАН: АНеюни ЕС-Н, САН ді дкляє ЕБС-Н.
З рік ЕЗКАН, ЗаС-Н дк ІБ ЗАКЕТООМВО СВОИ плата ера ТЛО ЗАНІ-ТСВЯВЗ ДО кількість вол 2482 кількість водій 203 кількитькцо в 16 , хонтрольне ПАКТ АКТА В, веобросюю Е ЕВ замах Е Ї вглмд зн кед: Кк ; І 2003. 150 й ІВ ся в З ШЕ: А х. ! й І 5. 150 Ку й а ОА ІІ Е ГУ ї хе зай і я їм КОЖ я оо і не 15 КАЛ ш Е ї ж ЕМО 4 Х, Н Н і СОМ кю г і сю кі Я о, У З В Я В в З В, В х КОСОВІ В Я ї БЖ ев і х Де Ю Я І-І ще В ї ЩН х Н я ще У й їн ка х х Е Ї ет Н У Є х г я маша її зх. ї х, й М щі те Ще а Ост 00 Фереттвееттетттюнт 00 Орест це ОН он це ре поши ж РЕЗНІК С Оз Бе 1 РН: РІ 2-Недне Р-НІ З-Нездна РАНІ ЕЕ2-Неїцнє «Віру ва 14 пен, ща н ідвляе, Й я, Ти Нибакажх ЩО гожН, що "Ніяк ШИ иа ни ТЕТ ЗАТОК ОВО НОг ТЕТ ЗА АКСЕНІОХ МТ ЗАТОК МИ 5 ВІД НИЩК 5 БІВ пищиича пи РБІЗ кількість вових 1915О кількість ВОЛІВ ТМ кількшть видів ІЩети
РЕМ вра А жмут рольне АКТ ВБАНК-А (3 ЗУ ЖЕ НН , х І - : З необробвні (ЖЕ в'яла І Ентлнт ш с БИ шу що Еш ще І а й Вл Ж с Ша а ле «7 Коосюсююююююююююьюк я у осююююююююєюкужкююьсо для 4 ду удоско т з 8 10. ца 19 Я ше ма 1 Ше Пе Ноя Я що ЛЕВА М- 00 ОУ : ш , Я зав я я ля КЕ Я дела КО. ї ОО КОН : Ж: ОКО : ЇХ СОЗАРС а о -е ЗОШ Шин Б ШЕ ен Зоні нти Гр, ТО Таке У ноз нонниннніжаж й РЕК, голосові ютетіююст , Мои не пе оне ЗО пе ее це онко не не ве ЕЕЯАНЕ ЕН СЕН: В АНеан ОН: ЕЯ-НЕЧенЕ ЕБУН, ек -Н пл Е ЗК-Н. Ан ЕД Ж5-Н, 55-н клКх ОУН АЦСК ПЕТ ЗАСТ М ВНУ. МВА ТСЕВОИВОЗООХ кізвкість волів ТО кількість нах БОМ кількість ОО ВІВ каєрольне ЗДЕТ РАВТ-А
41. пеюоброблені К щи веовровлені Іо велял І нем СНИ зенннвннс звеннннннн НИ нн винних НИНІ мн З й ПЕ о, ЕНИНШН Е й НВ дя ЩЕ ч В Ол ї сравмв 8 ши шшнш ншше І расові й ГГ в. ТА МІВ з. з Кая яд Мах и у ГК й» В в ня А НУ ій В Пк У Ще і КІ 1 я ос аа й ши КЕ а СЯ Ж сне 1 не во ри теж ке Ге Тс Не ов о ве не зу САН ЕО-Неюті ВЕСНУ ЕЗ-Недня ЕСНТЕО-Неї дн Чгура 14 РОН ЛАН ідказе РІДНІ НО -Несукахе ВА-Н, РИТА вінкике м Щ ВМ ЗАТВ а ВО ЕС ЯМІ ЗАПАС ОВаЮа ТАТИ Спроловаення) кізикіж поді Я кіль поліс 185 кількість пи ж: е зво Го Кс НК Як ЗИ п ша КЕ КІ ва І змекіобнню1 ВІ ше нн п нн п. і | свраб ! З ОКоластні клітЕнЕе нн ее нн я а гв| | «НК ! «аж ло подякою АЮ І. чі ще і хо ен ж ВАЛ ї шо й 00 ери ШИЯ пе яшщ шк як Ш ве о. и в. ! ООН нний !
п. 000 ше 000000 АННИ СО онеблястні 000 Не | зате рон а ОК ої1о0К ЯЗОК зок зок Мене еко ЕЗС-А СотпрретьА: СОЯ я ШЕ і Е які ВЗ Е сн ще ї, поле Тклішнюо «Е | 15.лЬ Е Жов «1 ва: і ние ня ВШ Е Ер я : ще в и ШЩ юю 021202 БАЛ Моно яд; нео Сатар-Расійс Віше ДЗ СП Чнгтра 15 ш 20000 й і : 1а00ю А й в 7 222 им вгімл ді нтбмло ЗОЇ нгдмлоі нгомя . ван САКТГА Сов . 10000 Мо ис вглал ОЗ нгімло ОЇ нг/мяб | нтумл «Фігура 16
СЕК ан - 20000 З 15000 10006 Ба 50004 до в. ооо: МК поь, ж -д с? ПОЇ нгомл б і БЕ МЛ шгомло б 1 нг/мл Фе ї емитеМ т ВАКТА БАЛЕТ ОКАНЬКе Зап Є Фігура 16 (проловження)
СсОп25 000 Соя х 3000 х ї- х х кА 2000 х Х 000 Х х - КВ дО втома і нгбмлоб ОЇ нг Ї нг/мл е А контрольне ВАКТА бак Кі-б7 СО 2000 І й Х ш- Я і нг мл і БІ мМлоі щмло 0 нгма : Фе в контрольне АКТА бай Фігтра17
Пезфорин зво. сом СТ» р ша ша ОНИ зів КІ ЩЕ КІ І. фрі нтімлод Її нгомл ОН нг нМмл С ще | СВТ А жадтрОольно Гразнзнм В Зоо спа Сов 2ю т я і щ х . то00- ЩІ ви: ши шОших м нгімлоб і шглял ВЕ нгомаб і) нтумо І) м проранх бай Фігура 17 (продовження)
СІЮ дючини СБ мавни ВО ве й «п кп- 12 «ЗНМ І К п-а 1 б ї ДАМ й пас Й 5 ен ВИМ час а час 5 каз Зе5 КЧа.Яе-3 Каа1ве5 Ка. 7е-3 С123 пюлинн СІ мавих и КО 1405 КО-О.1внМ зав КО-0а7иМ і: А дв х ВЕ в риття 1вп. нн чн 4 вк сесекеннстнннх нан ГІ сс ссквсьс за ще з. йо І Е.
Я ІЗ В - ВІ с ї Е с зо опово ов що 0 0 50 00 00200 час 5 шо 7 зд 5 каї1е5 КО1, Бей Каї дев КЗ ей Фігура 185 а, Аттелогічна лепленія меноцитів РЕМС людини еКонтр. ПАМ я я, - ПАКЕТА Ж ок зев а: ПАКЕТА ЖАВ м Фк з пе а те те я схе са таня З в; ! зо те ще т Женцентрація нгімлі
В. Аутологічня денлеція менонитів РБМІС яванської макаки ш 8 Ко шо |; З "й х ре -в Кч -о рАКТА а Сеежо-а. САКТА м/АВо і - Ч - 1 за 17 і Ісій Каниентранія с нгомлі Фігура ІЗ інертний носій З наповнювач 0 Ф4изз» 05 мазь Б ше 5 МЕ Б о шия Б НН: и ш.
ПКУ, КОЛО, З ее у піз з МЕ Ге са є ИН Гм 1 ее СО14 АРС СОЛЯ АРС СЕ ОКО зей лю о ОВУ Ок 5. | й щи щ Тони 106 ее бо зн СО014 АРС СС14 АРС «а ма: З сома Фігура 20 що щи . Кантральне АНТ ТОбккгоктілень ака просо ооо ооо ооо ооо т І шИМКИ с Й ее ; й І ла ОГС аЗ. : Ї
5. я: на : Дт шия й 77 : Ще я Н 4год мА Є : ! о; р. па нн Ні т Зх Е Ні ОЖИКМ СОКОЛ ЖЕД І ше ше БОБИ ї в Ой й обо В : Ей ун Ко ВХ. ре ка ВОВЕТЬ Я В ЕК З МЕ Ох; В М В НН Но М ше, ЕК Кн 3 ПУ Ин ре НН Ї Б ОО ШИ вису же сив: З с: тло ти З З ле зно ее зони Не Не зо нс и ие у сосок 3 2, їх. Шия : Е хіти ву ШЕУ нії Н «са ОПЛерт1азя . Ї А « 3 І не: І х - ІЗ І 4 лні у мя п х - я кодвхо шко ї ст. ди Ше Н А дні «ЕК и - шк кн Е ши НН о. й р ех ї пово ЗМОВ виш В НІ пе МО ЮНА ї по я і ЛК Е ЕКО опе ІДОЛ Ох МКК и тя 5 жо 1 з З «ач до те з 5 ла 1 1 ко Не не НК НЕ то а -- в ЯЗ В 4 ві а за й й жу скиту жЕ . гу 2 іпродовження)
10 нг/кгідень нини ше ро смозо Ягод | 5000. І Б що , і Е є тих Й Е ПИ КК, киш Кесту К: ванна НН НН Мови ве ни 1 108 ни ее ср14 АС СОЯ АРС ( стаз Й ( сотазю о - БО Зоо В» ше ШИЯ щи ЗЕ | о.
В.
Не в лок 16 онко ех СОТ4 АРЄ СО14 АР 30 нг/кгідень нюють ййійййййййййвввввйй: Що стаз Ж остам| М Ядні | М а. й нн що й ОО ще Б 106 зр те НЕО не зе о СО14 АРС СО14 АРС соя Фігтра 20 проловження
Б-клиннно Сп
ШИ сзметь Х г А самез Ба - кава о Ка ! т ЖЕ Я Я - : г НЕ |. х: хх с Г Я Гея за8ва ї- Я Я яп Г Г щ Я . к : ! Ж : ї хо : Е | З З х : ! 25905 и : З Я Я хі є Х ї НК с: х Я Я БЕ Я Ж. х З ї : : Ж хх я х . ЖЖ БЖ М З І Х З КЗ У МЕ З ЕД КЕ З З ан» ЕХ ЗИМИ сш НЕ ЗИ щшівнвікшЕх в щі ДФ В - в я м м ше ек шо ша ШІ М Ор зу Я ЕМ що БМК У зе КІ Ко ЕМ КД ВМО М р вв Ше щ ю Ж в З шо м шу не шо ВИ ін ш я «Обом пе В М ВН Бо я ш -- БО вьЬ ОО дО МО и а и а - ТІ Он а емо ВСЯ г ешовой щи ОО веж осн ЗА Ууєежх о мм Молю ж лує (МО ЩО ож -к - тех -8 ря їде що щ ї як 7 - до с, со о ВОК А шу дО со хокею з - я- І І Життя зви ч Міснацити, СП а Ш сзметь ж ЩО самка ЕОЕВ ве З й а Н ж ш в Е Е п | вх й ! Е Е Х Е Н Що Я Е; Я вх Кен КО : Е щ х х Е А Е : ЕХ ях: КУ У Я Е з ' ! жк ЕК ж І ! Н Е : Е З ЕХ КУ Я Е ! Е : з БЕ ЗІЗ ї ! ! Е : з БЕ ЗІШЕУ : ї ! її ЕК Ек а Ж Я З КЗ ДЕ ЖЕ: Ех Ж Б ВЕ Б ШЕ МЕ З Ех Ж Х Ех ЕХ тп- й уд де БУ м ХО Ух тк Фо хх Од же св хо т- 9 хо чек Ентя 5 ою беж шЕ з БМ Е ве ОБ Ме М ко Ок вів М Бе ще Б оОше Я шо о ш й З Ж шк щк ж- що щ ее Тон нн Кс с БО Зощх Мх ос» Бе со 5 у я- От та 500 ОХ з Бас во й М те Ффігтра 21 (панелі А-ВХ
МК Бл ; ва Я Мк -клітнНИ скрівзасопіадя їв Шк сзмель ХХ і ЖЖ слмка х х х Н х щ Е ї ен Бк: х х т і ж Е. х м і : : ї ж ! . : | ї - і чи г х х х Ж Не Е КУ х х х х - : х КУ х х х Х ме Н х ХЕ Х Х х х Е і ХХ хх УНН ИН: ШЕ:
т. і х ШІ ШЕ: ши шк Н У х Я х Ж Я х й : х х ЗКУ Х х Х х Х Ко, і Х х ЕЕ Х 5 хе мк Н Х Х їх ГУ х З хх Я Н Х х Х ЗКУ ГУ З Х ще і їх Ех хх З 5 ї ох Н Х Я х ГУ ГУ З Я Е З Ки і. ї Н х Я : КЗ Я Н Х Я З З КЗ Я Н х Я З З Е Я дну БЖ ОБЖ ОМ в З а М М а я І з К Б я- БО ж З їж емо же хех пе як ошо хе тоже -- СМ яко ко Как чи Ха Я їК че чеше хх Ви щУв ве ш -е хх 5 -к по бен, М Я ке як мм ожед м ЯК АЮ Ок, У Же, Я до В о шофо ї- шо Щкоеоде ми шо Б щоб ЩЕ Б Об Є Б ЩЕ ООЖо дн 7 йон ЩЕ ех - ЩІ оно ин ПИо-еоях оче що щ мод - вед кою 5 я ще й ОТ що шко КО жа Я І сш шк Я вис, спі Соч Ж ШИ самець х "жк -к І Ж щ М самка «ш- Х К Ка Ку ї Е КІ Х К Я Бе щЕ р ГЕ хи Н К тож "їн К ре А Е -Е | Е х Бі | ! : ш ряк ЩЕ : ря | є ЗКУ ЕМНЕУ х І : Х СЕ. їж ЩЕ і СУМУ не Н З х х хх Зх Н Е х хх х кх і Е Х х БУ ще Н З Х ХЕ КЗ де І Бк Х Х ШО Х : х ; х м: Е Е х х Я кІшщів ШЕ І Ів її с: Е : х Я Н К : х у А Е : х Я А Е : х Я А Е : хх КУ Я : ! ж Е ї в ЩО К БЖ БЖ З Г5, ЕХ СК Б зх З ЗЕ СУ - Беж об пі хи Ма пе сх КВ Ку Хе ЧУ ЖЖ й по - СК, з жі : -к Оже х пох - щи Ре хв ж ВЕ е - Р «з - БЕ КУ хе КІ Б ЕК Ух ІОН ох пе ше вош ом шов он їм якою - ШОЕ ШшОовВаАВ БЕН ВИ щ - на о Ж щ ох се М-е хо - - 5 - - ще що ян - реа хи щу СУШУ ие КЗ дЕОЖЕОжаАй Фігура ЗІ (панелі САТ
Т-клинни Сб СО ШО сзхець : х дхжт т М самка ОО Іль У -Е Е су і а І ру ! - І ї- І дже їх Й ОБО чі х Ж і х я | . Х х ! ц х Х х х Її: : в ЕН І | ши ШЕ. : | її ШОН й: З г х Зах ЖК Ей сш У ЩО ч З х З: КК ТБ х вк ве ГЕ с «А (1 КІ ЕЕ лі є ян ВХ хе У МУ зх за тео мех ех ВИ ом І здох меч т- Я -Не Ж М в пе я КА а ОК Ощи а а ХК пах ооу У ке Ух з - ре ее МИ ОМ ку хе КО У ММ ОХ ЖАХ УК кА Укку в ше Ше Якої мо ш- хи ха хо жорен оояк якшо ЕК од ее осн рн я шо в ше ЗБЕ ЕЕ Ж 5 Ж - оон пл Фе г ВЕ що В а - - ЯВох -х зей А «Е жк щ щ - Сак ШИ самець ї х ГУ ш Я ла | 5 ві. ММ слаека я КУ КУ М КУ х хх х Х 5 их З 5 Х х хх У на ех х х Х хх Х ш За КИ: ЖИ З не Х х х х 5 : х : - Х КУ КУ КУ хх КУ КУ х я Х КУ КУ КУ З их КУ КУ х м Х КУ КУ КУ З их КУ КУ х х Х КУ КУ КУ хх КУ КУ х щи Х х КУ КУ хх х КУ 5 ха чих КУ КУ КУ З их КУ КУ х раку х х Х Х 5 ЩЕ Х Х ЕЗ - Х Х х х З х Х Х х х Н -- Х КУ х х хх КУ КУ х х ве Х х У х хх х Х х х Мк Х х Х х х й х Х х х ух Х х х ГУ 5 ЩЕ Х Х г Х ГУ Зх Х Х х х З х Х Х х х КЕ Х КУ КУ КУ З их КУ х х КУ х ри Х х У х хх х Х х З к КЕ т Х х У х хх х Х х З КЕ КЕ Гая чих КУ КУ КУ З их КУ ХК. х ККУ х Х КУ КУ КУ З их КУ 5 й х х ККУ х Х КУ КУ КУ З их КУ М їх х ККУ х - х Х х х х Щх Х хх хх х СКУ х че ЗИ: ВИЗ ШИ: й: З 5 СУ ї
3. х ГУ х х х 5 х Х х х ХЕ ІЗ «хар ЕУ х Х З 5 х х ГУ х хх Е З х КУ х х хх КУ х х х ККУ Е Х КУ КУ КУ З их КУ КУ КУ ХХ ККУ х Х КУ КУ КУ З их КУ КУ КУ хх х ККУ х Х КУ КУ КУ З их КУ КУ КУ хх КУ х Х КУ КУ КУ З их КУ КУ КУ хх ККУ х Х КУ КУ КУ З их КУ КУ КУ хх М КУ х Х КУ КУ КУ З их КУ КУ КУ х ах М КУ х Х КУ КУ КУ З их КУ КУ КУ хх М КУ х Х КУ КУ КУ З их КУ КУ КУ З М КУ х Х КУ КУ КУ З их КУ КУ КУ х их М КУ х Х КУ КУ КУ З их КУ КУ КУ х их М КУ х Х КУ КУ КУ З их КУ КУ КУ х их М КУ х ши и І ША НН : де Іх Б БИ КН Я БЕ ІЗ ЗАД Кк С Б ІЧ ж щ--о МЕ ОХ дю жо «о У хх кох «ЕІ М у КЕ Й - - її МО ев со Ж. Мом, Во рик - вої ох сь Є 0 ЩІ бю п я ув 23 - ще щх - мо ММ ОХ -- - п хх ММ Ока М ст Ху їш Ше ве 45 йо шу СЗТ Зк їн що 5 ей - «З - - мен В со ех МО 0ОУМОУМ Фігура 23 (панелі А-В)
сраезя ї |. ШИ сомець ше й ИН - ш 34 Б самка ФО Е і-й 3 Ії -е г т З ма й я |. - и - ! те з їй с-я |. ее г 3-х и Ж : Ки : р й ! ІЗ й КУ х . зак. кВ --е ЩООж 5 хх очко сх ск ЩІ Ох ма ож ст ж кон як й сечі хо ЖЕ я т, ех Ох 2 Й п РИ к що ем з -е ММ КД ОХ ст що Ук ну -- ТЬ ін Ж - - в з не ще я ; як ЩО - дкоях хни НИ: ШИ с- Що -- МОм Го СБ АЖ : 5 сам ! Ш сдмень о МУ самка -- ч ж и г и виш сі в Зх ж МУ х а Е: з Х Х ГУ х Я КУ Х КУ КУ ж У Х х КЗ Х хе У х КУ х ЇХ х - х х Х х Х І-І 5 ї х З З ш х В х З З КЕ й ЕЕ ГІів . ЩЕ ї- ЕЕ БЕК С 5 ЕН: ЕН Е ЕЕ її т КУ х Х х З х х Х Х у: х Х х Х Х х У ККУ х Х Х о х Х Х Х Х х х ККУ КУ Х х як Х х х х Х Х Х хх ГУ Х З т х Х Х Х КУ Х Х ККУ х х КУ ре х х Х ЕУ х х х ЕЕ ГУ З х їх ЗБЕ БЕК з ЕН ЩЕ; ГИ ЕН В що зп: З х х ЕЕ 5 х хе х х х шина пиши іш г ше ши шщщ Х Х Х Х КУ 5 й Х Х Х Х Х х Х х КУ КУ Ж КУ х КУ Х Х х Х Х Х Х КУ 5 х Х Х Х Х Х х Х х КУ КУ Ж КУ х КУ Х Х х х Х х КУ КУ Ж КУ х КУ Х Х х х Х х КУ КУ Ж КУ х КУ Х Х х КУ КУ х КУ КУ КИ КЗ - Щх х КУ х х КУ КУ х КУ КУ КИ КЗ 5 х х КУ х х х х х х КУ З Шх Ж х КУ КУ КУ х Х х КУ КУ Ж КУ х КУ Х Х х х х х х КУ З Шх Х х КУ КУ КУ х х х ЕЗ ЕУ 5 З х х х Х х їй КУ 5 х ВІ МИ х Бо КИ БУ х З Х Х г; х В х -кх о Мн дня ек КО ле очей че М Я Я пи ни НС С НН З са нн сс с с НН с п З - - ух ь спро їх ж. х и - Мод ет оши - с. лег. Оу - 2 ль ШИ - ак - щш -К щон-к Ме - ЩЕ Щш ЗЕ хх -е М - ш ж ме - й - 2 5 й Ж я Я - ще т-- С о- -У о ж - т яріжч: , , зда их тк Фігура 223 (нанелі С-ІЮ)
відновлення вевілпновленні кош акт вда ке - «Фігура 23
0.8 і 06 -й « 04
0.2 Її 00 5.0 10.0 0.15.0 200 Щ250 300 евнлиниИ Фігура З4А зввОня З ох1ое 50х105 тя 59500 59000 59500 Масзрідй зі й Фігтра ЗАВ
СБ ОЗ лючини СТО янанської макаки ще ШИ мо Шк ШИ ср 0040 чних Часіс! чЧасіє) «Фігтра 25А «Фігура 2368 Єреблюдини СПебляванської макакн я шк ши - ЇЙ ет Еш и а Ден вера 0080 День «БО Я 50300 5 -Б о 50100000 Часісї Час іс) Фігтра З Фігура 230
Захват: 213125 людини БВнявлення: СІ людини -з -- ПАНТ-А їТо-- Контре ВАВ , ч - Кантр.
БАНІТ- щі : зі ««- я й її С ІЙ анна 08 5.84 в 4 павт(імкгімлі Фігура ЗА Захнат: СІ янанської макаки ! БНнявлення СІЯ люлиния З -- ОАНТ-А І -- Контр. пАнт М - 84 -- ЗОНІВ. рАНТт-з : се овен а. од в с ПАКТ імкгомл) Фігура 268
Конті БАКТ немає ї ООВАВТ ши ще Моїт-13 і у Фігтра З 100000 ЛОАНТГА ЕК 0000 УКонтр, БАКТ ШЕ с і. . ши ще кине Т- клітини люднни 3 Б клітннн ОО х її людини немає: І дожити до х ж АВТО | Ффігтра 20 с ЧОВАВТ-А Я Б а-ЕК Я Коветр. БА КТ г. Й ЩЕ і Т-клітини яванеької її і шк щ | Фігура 16Е немає! ї ї ї ши ше ше а-ЕК сг 100000 шк | я - зак антитіло до СБ ІЗ о вообо ЩІ Зотяипний контроль я о! зваях ххх й; х Б в я КЗ че - нс Фігура ТА Це57 ЕТО: 1004 Ж 80 | -- ОРАНТА - 404 105 404 402 4060 Концентранічінгомлі орігура ТВ
Кавицті-3 - Т-клітнни дюднни яко ЕТ: Ж оо. 8 С ПАТ А ЕСза-о ві НМЛ во 80 сю Конту ПАВТ КЕ ; ; Со 20 та тато 18 та Концентрація (нг/мл Фігура С Казшті-3 - РЕМ яванської макаки ЕТ -4 51: ла - т їй ЕСЕ - 5.2 внглял бе -- пАВТ-А х «в. е павт Е -- Контрь.
БАКТ 10403 02 409 382 Канцентрація (нгомлі Фігтра 27
ЇЇ. зктитіло до СТЕНОЗ
! . Зв! 2 ! | і - : о і п чавово4 ро Е . і я 54.
Е |. .
ж І. ї Б х |. . о Я КЗ Ка В ж КЗ КУ ЕК Ж ово шщ щ ні - ОН Ко БЕ З І ЕЗ т. І КалипіЗміонопитні с 00 Моноцити ВЕС яванської людинк людини явансвкої СВКаки Фігура ТЕ
Манецнти (спталесо123 7, Ш З години ян. дей йбгелив я 1553 | 5 З Е ши ше ще. ії. т І «и ШЕ і. КУ кх Б ЗШ ЕЕ ШЕН і. . . їш ші |. . г - - ЩЕ Шен шк Я. в ГЕ хе 2Б5чЯШ ЕЕ ШЕ Н шЕ ТО Е-З ІК їй ШЕ ШЕ ЩЕ) І ЩЕ як ОК СІВ 5 КЗ ЕЕ хх : ШЕ З СІВ КЗ ХУ ЕІ - х к м к е : В ее з Ф ж Ки й е ш в ВАВТ-А (нНгіМл Фігтра ТЕ пло . тр ота ж ху ЕВ ле сота сво1237 в 125 Ши остоднни м Ї У бгодни В СО 15 годня ма що ! я, Кт є. ща г я «в у Я у іт ШІ т щ ЩЕ Е Її я Шкз я ст Я ст вк їх ще г ее «З я к ше е: Й пАВтТ-А інгмлі Фігура 7
РВМС яванської макави скрема (БАС щ ЙО о 2 ж . ни Шо не КЕ я МГ. ДН о, 24 т ве ще ве чо в Ше зе ач щ В.Б т ж нн
І п. ) ! ; Концентрація нг/мл Фігура ПН - | о - 150 - ак | ВОоо- о до ее "| в», ва ооо "р ка щ о см о о хз и хх Бай Лозаіні'кгіденві Фігура 28 інертний носін а ші щі що З Я 15 й 23 ЗБ день дослідження Фігура 70А раДкт-А 501 00000 груш: Ж групіз -й пи о г ШЕ ШЕ Е х Б Б в ВО р кі ЕЕ і о ЕНН К М А й МД и в КЗ аа ще се кі сабн ов ай з З 8 15 ке 23 ки даеньдоспідження Фігтра 2 вВадит-А
1. В ЕЗ реч КК ДК сенс де ЕК 1 В 15 22 28 З день дослідження Фігура 29Є інертний носій - 0 - групаі - 5 шщ щш тд ЗО ші щ щ т її щ що денне 00 БЕ 00 Б 0 НО - у го а Фо ше Щ ЩО , о сш. ще я а : й пен ' снканрн, : ення зе сили зану день дослілження Фігура ЗА рдаит-А - 0 ше АС Група? ш щі ща Що 00000101 Групаз ет Я зв 00000004 Група З ер з ші ші я Ж АЖ Група» Е еЕ ; щ- кОм о я о ї 20» я ШЕ ШЕ не ві ваш ші шщ щ б є в 45 22 2 З ж день дослідження Фігера НВ рдяит-А що п св Група б ЗК как ПЕН мо Я с з ин «В с 2 Е с хи ша її. як а зі ПН я ее ефяй ОО Ваня 1 й т ж ха Б дань дослілження Фігура Є інертний носій - 15 ОО ШОЕЕННННОІ 00 ВОВНИ інн я ші ЩЕ ЩЕ. - В Й цу. 2 Е ще їі В. х с.
А.
І ЩЕ щ щ й.
Е : ще ВО ші щ щ -к 1 8 15 й а 45 Фігура ЗВ ккт-а - 15 щННННИ ще 00 НН , й 000001йк Група? 0 12- ші щ й І ї 00001014 Група 4 ж щ ! в ШЕ ШЕ 5 Ди У З ПИШНИЙ МЕНШИНИ ПЕ свя З - же - ши М опа 5 СЕ Й ші то | ше ШЕ ЩЕ во в. щ щ штани: щі ще щ ке ї ША ше ло зи А 1 8 ча 22 23 38 Ффітгтра ЧЕ
ВАВтТ-А ї55ч М Я сш 5 3 .- 4 г ТЕ у 7 ОМ я В в ССС: вх ші Е ЖК ЗоооссссннНнНнНнНнНнНнооооО З й ї5 22 й 46 день дослідження Фігтра ЗЕ
Інертний косій - щ і ПИШИ, ПИШИ ПИШИ ПИШИ й «ни и -а- Група! Я за с чинни и и и З 7500 и Е сти ди ЩО й : хх к «м Е 2500 г й и в т ПИШИ ООСКЕ фен МОЯ ї ї 1 в 1155:5:28 5845508 5754 день дослідження Фігтра 514 пакт да - - Група З З ї ШІЙИШИ ШИЙЦІ ПИШНЕ ПИШИ й ЕЩЕз УТА шен и ие шрам 30000345 її 8 52555348 455855 84 день дослілження ФЯгтра ІВ щ ОАВТ-А В 12568 00000000 -- Група б є «апа 0! я 1 г г г е я с її й : вНня Її - Я 5 Ж 5 ов А а 2580: іди" 6 ч я 1532293 3643 50 57 84 день дослідження Фігура С Група 1 інертний насій в каш зи иши І о ТИСИ НЕК орної я В 4532 29 36 43 50 Б? в4 день дослідження Фігура З
Група З паАавт-А в Кос і жо Ж ШИНИ ОШШИШИИО ООИШИИНИ ПИШЕ в я ШЕНЕЕ Зо ОСИ ОВ а Я ра я ОК.
ОМ - Б ай Б: ск Я Ба ШЕ Я сс: Ка: ДИ ва У КО СОЯ оосю. сок Й в ве ЕЕ ВВ 1 4 З5 22 25 35 45 50 657 55 Фігтра ЛЕ Тула пАнтТ-а Ох | 5555555 55555 ще Ж : Од ПО О они їж ще й По и й я Я вав ОО ВО МОВ 1000000 ШІ ше оншш В чн - ї В Я Я бе же у : Ве.
ВОД ОВО Я й щ з М КАНАВ 1 й чзї5 295 58 35 45 5 БТ Ка день дослідження Фігура ЗІК
Гоабпаї Інертннй носій ши жи м ши ши фе Тут.
Теттт У --й ща Я Заук А. люд, ге А а рин ння ня Я її З 5 25 25 35 45 5 БІ а день лослідження Фігтра 316: Група 5 рАаАт-А Зої ше сишни шо в'я ши и й шо З АТ еЇ ше 203 р ет я " вини ре о "ВИЛЕЦІ Че АН Кн торііна ч а ї5 22 29 36 43 50 57 64 леньдослІлження Фіттра ЗІН
Гротуна б ПАКТ А зо» пе ЯНІС ОІВ ОЇ :- ож хе М В Я БОМ» м ВО . я По ОВ КА т -Х | Б в Ки у ВЕ ВН а 1 й 15222556 53550 5755 Фігтра ЗИ паАнт-а Група З де, ШЕНИШИ БНО Зо МНЕ оч і ОН ІН НЯ ОО с -к т яв ЕЕ. як Б ом ня ни шин й авя дну -Е З | т щ- С ж пп Я рен, - "ек сов о КК вену В КЗ здана Зх 1 ж Я5 35 29 За 43 БО БТ в день дослідження Фнтра МА пАКТ-А Група З нини й ЕЕ 1 мом во» ий.
ЯМ оо. ж вай а.
А А Її - жан А т нш й Вшуое п ЕНН НК ан рення т 8 15259225 35435057 54 день дослідження Фігура ЗВ рАвт-А Група 4 панни и ши він и. оо дій - в . А А
; т. Та -е- 5 201 а пасиви нен вв ке коня сс все нат м жи 1 В 1529 29 36 45 50 57 64 день даслідження Фігура Я рант-А ши и в 41 ВЗ т м ши ше б нен ве 194 ав ї В 152229 35 43 50 57 ВА день даслідження Фігура 52 рант-а Група З ан ши. и шен я ши: дл В так ! в Е і. й хх іх ве в й на 0 ВВ Он т нн в р. вся ВЕБЕ ЕЕ о Б) 1 Б 1555 20 36 43 5О 57 84 день досплження Фігура ЗЕ ПАВТ-А Готупа Я ши ОО БОЯ ше»; А и ши нн х -е ТЕ ж ши. зе ай зе ж са з я в че Я КК В ЧУ фани Ма ах завела а вона яв» КС ть вени 1 8 1529 50 36 43 50 57 54 день дослідження зпігтра ЗЕ рант-а Група жи вс Ж 5 че у и Ж жваві ву. щ
В. и а г - С ж й й. в каш 3 8 41522 29 36 43 50 57 54 день дослідження Фігтра ЗА. ВАВТ-А Група 5 ши Е ж о и нт в в аб ч- ЕНН Ей - 8 "За ЗОНИ НЯ са й : и.
І о. ї 8 1522 29 38 43 50 57 84 день дослідження Фігура 238 папт.а Група 4 109 ши -т а пло й. " ККККИ ПИШНИЙ ПП ШИН овен 0100 АЖ Ж в І т до що ЗИ ее жо о звів о ний її й 1527» 29 3543 50 57 5 день дослідження Фгтра ЗАЄ рАВт-А Готпа 2 в пиши и й и. еоощш, «ШІ ЩЕ ШЕ сх я ї тов 9 ЦІ 1 щ й ши ї 8 1522 95 36 43 50 57 84 дань даслідження Фігура З)
ПАКТ-А Група З 1983 но но не ші у ри ни ж вад й (г шин іль я ши р ОО 55 БО М ке БО ЯМ рдшннйм і Ві Б кН Ши их й ди лей я й й ПИШИ ЕЕ КО рен й й ї 5 15252 29335 43 58 5У Ба день дослідження Фігура ЛЕ ПАНТ А Група 4 1905 5 не не не наші ни ОО ШЕ М АНУ п у ун ун ун рення є ; і - її Я 152272 79 36 43 50 55 Ба день досліпження Фігура ЗЛЕ
Такі шо неазнали Такі, що зазнали вплив 100 впливу АКТА ве ВО р ! с а і: о в 50 (й о м : й с: я й о (й о З : (й о а х Й В: 1 ! Е. уки Контрольне АКТ БАКТ-А Контрольне БАВТ-А Ффігтра
Група Інертнийн носій що ПЕ ЕЕ ПЕН БНВО ша Кн усу ук ан - Ше ЕЕ и. й в заджжийййдйа ж т.
З ху ПИШЕ ОШЕШЕШЕ ОМИШШНЕ ПИШНЕ 1 в т5з ЗВ ЗБ Фігура ХА Груна 5 ин ш я жк "ій 5. НУТ наш ши. шщ . клини и її а ї5 22 29 36 43 50 БУ 84 день дослідження Фігура 5
ПАКТ А Група б 1063 с д Я 1 00 ин ОА ТО я БО бик ВЕ, найк ви МОУ ої жк 8 20. п. - с пи В сен ИН т 8 1523223 35435057 54 день дослідження Фігура Є Група Інертнни носій яв в/м иВ : й я ше ни т В я А А М - ее Ше ШИ и и УМ я, ША т я В м ЩЕ бе ке зе нн ї В 1529 29 36 43 50 57 54 день лослідження Фігура ЗЕ
БАНТ-А Гоуца 5 лнше Ой а - - о ва В 00000000 НН до ші г В В ААУ ом.
За. а і ре де ре Шо : , її в 1522 25365 43 50 57 64 ян дослідження «ФВігтра З5ЗЕ ПАКТ. А Група 6 109 певне ль шани ше 5 - -У-д ря У ЧЕК Сх би цк ВИ кВ Ж й ! рення й 1 я 1522329 3645550 57 54 день дослідження «Фігура З5Е інертний носій БУ в-во
В. и Ж а ни миши 0 Група! -4й вЯ в 4529 75 ЗБ а БО БТ ва день дослідження «Фігура З365А ПАКТ-А 87 й й. 4- я «Фо Група 4 с оо Група5 з Я Ь фея ИН у роя : земрннуєннух -ча0 081 8 152599 2643 50 57 64 день дослідження Фігура ЗБ закт-в Во-те ще " о й с: я сн що а Щі ! 00- Грунаб КІ і Пер : -« В 5 5 ч5 22 в ЗЕ 45 Ба Бу ві день дослідження Фігура ЗЄС інертний носії ява що Же Же ще Со ПЕ НИ СИН ОБШИЕ ож й й й ее МИ» т ЩЕ о о и ше вон пт ач В тен Фея те ПИШНЕ В ! : -4 6 ві Б ї5:255293545 55 6 ВА дЕЩШЬ дослілження «Фігтра 368;
ПАКТ. А ВО 0000 Гоупа? е | тІ4 т зно Група З шо Зоо ОКА Я 0 Гопа4 - Я М то я гоупа 5 в ОО рупа з НИ вк о ши 2» год Й й шЕ. їв ши тини ше да й ши божі її сх рсасниснс, а . а бін геРВеея м ві, пр, в РОБННВЯ з : В со г з рніннінийний сс, -48 з її 8 1559 25 36 43 Ба В; ба день дослідження Фігтра За ПАКТ А т 40 г я 00000070 Брупаб зов. о ко дал я Я: ЖЕ г нших ие; ше шими Мне Др фрнняяннньяу з |яннь нн вікні лк вв золоті уковоко іно ковуккіккккуоку -й 3 її 8 їз 22 25356 43 0 57 64 лень дослідження Фігтра ОК я ШИ Група і інертнин косі «а й тр й І Група? рАВТ-А м ние ЩІ, 4 сне с З Й ГрупаЗ рАнт-А сі не Ой во, І ш Я о. йЕ СУ Ерупад акта ЕК ней ШЕ КА ГрупаЗ равт-д г а ЩІ КИ: тя й теє Ме А Ше М: с. ще Трупаб ракт-А ж ЗЕ реж ШЕУ Я ШЕ Див еп щ Як ення Е БАЧ МО Диня ІБ іже - М о.
ШЕ ох ш ши зи 6 перед введенням після останньої відновлення Фігура ТА 3 з ШИ рупа і знертний носій ЩЕ її 3» БУ Е дуна пдв я КО група3 пАнт-д е І г СУ група йАКт-в ші их ЩІ; і я в: 7е й ки Готка 5 ПБАВТтТ-в д са ред; Теж ІЗ я щ ши щея ан Бо Що : й - зт и МЕ МС передшведенням опЕля останньої відновлення перший дозя зи Фігура 27
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201361869510P | 2013-08-23 | 2013-08-23 | |
| US201361907749P | 2013-11-22 | 2013-11-22 | |
| EP13198784.4A EP2839842A1 (en) | 2013-08-23 | 2013-12-20 | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof |
| US201461990475P | 2014-05-08 | 2014-05-08 | |
| PCT/US2014/051790 WO2015026892A1 (en) | 2013-08-23 | 2014-08-20 | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding cd123 and cd3, and uses therof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA119539C2 true UA119539C2 (uk) | 2019-07-10 |
Family
ID=65632998
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201602538A UA119539C2 (uk) | 2013-08-23 | 2014-08-20 | Біспецифічне моновалентне діатіло, яке здатне зв'язуватися з cd123 і cd3, та його застосування |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| CL (1) | CL2016000362A1 (uk) |
| DK (1) | DK3035965T3 (uk) |
| ES (1) | ES2860973T3 (uk) |
| GE (1) | GEP20197053B (uk) |
| HK (1) | HK1225999A1 (uk) |
| HR (1) | HRP20210215T1 (uk) |
| HU (1) | HUE054315T2 (uk) |
| LT (1) | LT3035965T (uk) |
| UA (1) | UA119539C2 (uk) |
-
2014
- 2014-08-20 LT LTEP14837858.1T patent/LT3035965T/lt unknown
- 2014-08-20 ES ES14837858T patent/ES2860973T3/es active Active
- 2014-08-20 DK DK14837858.1T patent/DK3035965T3/da active
- 2014-08-20 HU HUE14837858A patent/HUE054315T2/hu unknown
- 2014-08-20 GE GEAP201414100A patent/GEP20197053B/en unknown
- 2014-08-20 UA UAA201602538A patent/UA119539C2/uk unknown
-
2016
- 2016-02-17 CL CL2016000362A patent/CL2016000362A1/es unknown
- 2016-12-22 HK HK16114613A patent/HK1225999A1/zh unknown
-
2021
- 2021-02-08 HR HRP20210215TT patent/HRP20210215T1/hr unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HK1225999A1 (zh) | 2017-09-22 |
| ES2860973T3 (es) | 2021-10-05 |
| CL2016000362A1 (es) | 2016-10-28 |
| LT3035965T (lt) | 2021-04-12 |
| HUE054315T2 (hu) | 2021-08-30 |
| GEP20197053B (en) | 2019-12-25 |
| HRP20210215T1 (hr) | 2021-04-16 |
| DK3035965T3 (da) | 2021-02-15 |
| NZ716914A (en) | 2021-09-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7157181B2 (ja) | 免疫チェックポイント阻害薬と併用するプリナブリンの使用 | |
| UA121914C2 (uk) | Молекула, що зв'язує pd1 і lag3 | |
| UA128001C2 (uk) | Націлені на пухлину агоністичні cd28-антигензв'язувальні молекули | |
| UA125611C2 (uk) | Біспецифічні молекули, що мають імунореактивність відносно pd-1 і ctla-4, і способи їх застосування | |
| UA128451C2 (uk) | Біспецифічне антитіло, яке специфічно зв'язується з pd1 і lag3 | |
| BR112020025926A2 (pt) | anticorpos biespecíficos anti-psma x anti-cd28 e usos dos mesmos | |
| US20170015758A1 (en) | Compositions And Methods For Modulating And Redirecting Immune Responses | |
| CA3054067A1 (en) | Antibodies binding to vista at acidic ph | |
| UA119329C2 (uk) | БІСПЕЦИФІЧНЕ ДІАТІЛО, ЯКЕ ЗДАТНЕ ЗВ'ЯЗУВАТИСЯ З gpA33 I CD3, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ | |
| UA111612C2 (uk) | Домени, які зв'язуються з деімунізованою сироваткою, і їхнє застосування для збільшення часу напівжиття в сироватці | |
| CN111201038A (zh) | Psgl-1拮抗剂及其用途 | |
| BR112018009972B1 (pt) | Ligante de ctla4, ligante, recipiente ou dispositivo de injeção, polinucleotídeo, vetor, célula hospedeira, métodos para fabricar o ligante de ctla4 e para prevenir que ctla4 se ligue à cd80 ou cd86 e usos do referido ligante de ctla4 | |
| UA126897C2 (uk) | Антитіла проти dr5 і способи їх застосування | |
| WO2019183040A1 (en) | ANTIBODIES BINDING TO VISTA AT ACIDIC pH | |
| JP2023524530A (ja) | 免疫原性が低い癌の癌細胞死滅を増強するための３剤併用療法 | |
| EP3132802B1 (en) | Therapeutic agent for solid cancer | |
| US20180094058A1 (en) | Compositions and methods for preventing tumor growth and treating cancer by targeting lectin galactoside-binding soluble 3 binding protein | |
| US20230256054A1 (en) | Immunity enhancing agent for cancer by allergin-1 antagonist | |
| AU2019301120A1 (en) | Antibodies binding to VISTA at acidic pH | |
| US20240141056A1 (en) | Methods and compositions for activation of t cells using nanoparticles conjugated with multiple ligands for binding receptors on t cells | |
| KR20220044490A (ko) | 세마포린-4d 차단(sema4d) 및 dc1 요법을 사용한 조합 요법 | |
| UA119539C2 (uk) | Біспецифічне моновалентне діатіло, яке здатне зв'язуватися з cd123 і cd3, та його застосування | |
| CN113874008A (zh) | β-咔啉化合物及其在癌症的非细胞毒性和免疫治疗中的用途 | |
| WO2017066414A1 (en) | Drug delivery conjugates for use in combination therapy |