UA119539C2 - Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding cd123 and cd3, and uses therof - Google Patents
Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding cd123 and cd3, and uses therof Download PDFInfo
- Publication number
- UA119539C2 UA119539C2 UAA201602538A UAA201602538A UA119539C2 UA 119539 C2 UA119539 C2 UA 119539C2 UA A201602538 A UAA201602538 A UA A201602538A UA A201602538 A UAA201602538 A UA A201602538A UA 119539 C2 UA119539 C2 UA 119539C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- domain
- cells
- shi
- day
- polypeptide chain
- Prior art date
Links
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims description 160
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 68
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 27
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 254
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 236
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 211
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 210
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 165
- 239000002957 persistent organic pollutant Substances 0.000 claims description 156
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 80
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 73
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 61
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 61
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 61
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 54
- 241000282553 Macaca Species 0.000 claims description 51
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 46
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 40
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 27
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 24
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 23
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 22
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 22
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 21
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 19
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 claims description 19
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 19
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 18
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 17
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 17
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 17
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 15
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 claims description 15
- 210000005134 plasmacytoid dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 12
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 12
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 claims description 12
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 claims description 11
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 11
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 claims description 10
- 206010003908 B-cell small lymphocytic lymphoma Diseases 0.000 claims description 9
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 9
- 208000025316 Richter syndrome Diseases 0.000 claims description 9
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 9
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 claims description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 8
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 claims description 8
- 208000032800 BCR-ABL1 positive blast phase chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 7
- 208000004860 Blast Crisis Diseases 0.000 claims description 7
- 241000288906 Primates Species 0.000 claims description 7
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 7
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims description 6
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 6
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 claims description 6
- 201000008736 Systemic mastocytosis Diseases 0.000 claims description 6
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 6
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 6
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 claims description 6
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 claims description 6
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 6
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 claims description 5
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 claims description 5
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 5
- 238000011955 best available control technology Methods 0.000 claims description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000005945 translocation Effects 0.000 claims description 5
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 3
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 claims description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 claims description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 claims description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 claims description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 claims description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims 4
- 229910052754 neon Inorganic materials 0.000 claims 3
- 241000283725 Bos Species 0.000 claims 2
- 240000000220 Panda oleosa Species 0.000 claims 2
- 235000016496 Panda oleosa Nutrition 0.000 claims 2
- GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N neon atom Chemical compound [Ne] GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 235000021395 porridge Nutrition 0.000 claims 2
- 230000001755 vocal effect Effects 0.000 claims 2
- 206010063409 Acarodermatitis Diseases 0.000 claims 1
- 101150114104 CROT gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100002917 Caenorhabditis elegans ash-2 gene Proteins 0.000 claims 1
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 102100028717 Cytosolic 5'-nucleotidase 3A Human genes 0.000 claims 1
- 101710095312 Cytosolic 5'-nucleotidase 3A Proteins 0.000 claims 1
- 244000024708 Dioscorea cayenensis Species 0.000 claims 1
- 101100234002 Drosophila melanogaster Shal gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000764238 Isis Species 0.000 claims 1
- 101100189356 Mus musculus Papolb gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000283965 Ochotona princeps Species 0.000 claims 1
- 241001069925 Orestes Species 0.000 claims 1
- 241001079606 Paches Species 0.000 claims 1
- 241001559981 Palyas Species 0.000 claims 1
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 claims 1
- 240000005546 Piper methysticum Species 0.000 claims 1
- 235000016787 Piper methysticum Nutrition 0.000 claims 1
- 208000012287 Prolapse Diseases 0.000 claims 1
- 241000287531 Psittacidae Species 0.000 claims 1
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 claims 1
- 241000022563 Rema Species 0.000 claims 1
- 241000159610 Roya <green alga> Species 0.000 claims 1
- 241000447727 Scabies Species 0.000 claims 1
- 244000166071 Shorea robusta Species 0.000 claims 1
- 235000015076 Shorea robusta Nutrition 0.000 claims 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 claims 1
- 244000111306 Torreya nucifera Species 0.000 claims 1
- 235000006732 Torreya nucifera Nutrition 0.000 claims 1
- 241000448053 Toya Species 0.000 claims 1
- 235000013447 Xanthosoma atrovirens Nutrition 0.000 claims 1
- 240000001781 Xanthosoma sagittifolium Species 0.000 claims 1
- KZENBFUSKMWCJF-UHFFFAOYSA-N [5-[5-[5-(hydroxymethyl)-2-thiophenyl]-2-furanyl]-2-thiophenyl]methanol Chemical compound S1C(CO)=CC=C1C1=CC=C(C=2SC(CO)=CC=2)O1 KZENBFUSKMWCJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000013527 bean curd Nutrition 0.000 claims 1
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 claims 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 claims 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 claims 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 claims 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims 1
- 235000021017 pears Nutrition 0.000 claims 1
- MFZOSKPPVCIFMT-UHFFFAOYSA-N pinazepam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N(CC#C)C(=O)CN=C1C1=CC=CC=C1 MFZOSKPPVCIFMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 208000005687 scabies Diseases 0.000 claims 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 claims 1
- 239000000779 smoke Substances 0.000 claims 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 claims 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 claims 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 abstract description 3
- 125000004177 diethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 149
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 74
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 64
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 63
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 46
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 46
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 38
- 210000003969 blast cell Anatomy 0.000 description 37
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 37
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 31
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 30
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 28
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 28
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 28
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 25
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 25
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 25
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 23
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 22
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 21
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 20
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 19
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 19
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 19
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 19
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 19
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 18
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 17
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 16
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 16
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 15
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 14
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 13
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 11
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 11
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 11
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 10
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 10
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 10
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 8
- JKKPSTXVKNWEAH-VWHZSNQBSA-N bbip Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)C=2C=CC(=CC=2)C(=O)C=2C=CC=CC=2)CCC1 JKKPSTXVKNWEAH-VWHZSNQBSA-N 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 7
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 description 6
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 6
- 208000027697 autoimmune lymphoproliferative syndrome due to CTLA4 haploinsuffiency Diseases 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 6
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 6
- 230000006334 disulfide bridging Effects 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000025324 B-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 5
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 5
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 5
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 5
- 230000034994 death Effects 0.000 description 5
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 5
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 5
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 235000013550 pizza Nutrition 0.000 description 5
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 5
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical group NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000719 anti-leukaemic effect Effects 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 4
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 4
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 4
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 4
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 4
- 241000206761 Bacillariophyta Species 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 3
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 3
- 101001094649 Homo sapiens Popeye domain-containing protein 3 Proteins 0.000 description 3
- 101000608234 Homo sapiens Pyrin domain-containing protein 5 Proteins 0.000 description 3
- 101000578693 Homo sapiens Target of rapamycin complex subunit LST8 Proteins 0.000 description 3
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 3
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 102100038560 Maleylacetoacetate isomerase Human genes 0.000 description 3
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 3
- 102100039889 Pyrin domain-containing protein 5 Human genes 0.000 description 3
- 102100036546 Salivary acidic proline-rich phosphoprotein 1/2 Human genes 0.000 description 3
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 3
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 3
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 3
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 3
- 108010035293 maleylacetoacetate isomerase Proteins 0.000 description 3
- 210000003643 myeloid progenitor cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 2
- 241000726103 Atta Species 0.000 description 2
- 241001227124 Dialytes Species 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 210000003040 circulating cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 231100000050 cytotoxic potential Toxicity 0.000 description 2
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 2
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 2
- -1 etc. Chemical class 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000009093 first-line therapy Methods 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 2
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 2
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 210000002332 leydig cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- HXKKHQJGJAFBHI-UHFFFAOYSA-N 1-aminopropan-2-ol Chemical compound CC(O)CN HXKKHQJGJAFBHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PFFIDZXUXFLSSR-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-N-[2-(4-methylpentan-2-yl)-3-thienyl]-3-(trifluoromethyl)pyrazole-4-carboxamide Chemical compound S1C=CC(NC(=O)C=2C(=NN(C)C=2)C(F)(F)F)=C1C(C)CC(C)C PFFIDZXUXFLSSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 2-(ethylamino)ethanol Chemical compound CCNCCO MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 102100020724 Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000566113 Branta sandvicensis Species 0.000 description 1
- RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-N CDP-choline Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C=C1 RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-N 0.000 description 1
- 101100310927 Caenorhabditis elegans sra-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100367084 Caenorhabditis elegans such-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010048610 Cardiotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000283153 Cetacea Species 0.000 description 1
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 206010050685 Cytokine storm Diseases 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 206010012186 Delayed delivery Diseases 0.000 description 1
- QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N Diacetyl Chemical group CC(=O)C(C)=O QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N Digitonin Natural products CC1CCC2(OC1)OC3C(O)C4C5CCC6CC(OC7OC(CO)C(OC8OC(CO)C(O)C(OC9OCC(O)C(O)C9OC%10OC(CO)C(O)C(OC%11OC(CO)C(O)C(O)C%11O)C%10O)C8O)C(O)C7O)C(O)CC6(C)C5CCC4(C)C3C2C QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 208000031637 Erythroblastic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000036566 Erythroleukaemia Diseases 0.000 description 1
- IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N Ethenol Chemical compound OC=C IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000785414 Homo sapiens Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101100182729 Homo sapiens LY6K gene Proteins 0.000 description 1
- 101000939500 Homo sapiens UBX domain-containing protein 11 Proteins 0.000 description 1
- WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N Hydroxyethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCO WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N Idarubicin Chemical compound C1[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2C[C@@](O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N 0.000 description 1
- XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N Idarubicin Natural products C1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2CC(O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 241001150538 Iria Species 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102100032129 Lymphocyte antigen 6K Human genes 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006994 Precancerous Conditions Diseases 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 241001506137 Rapa Species 0.000 description 1
- 101100371158 Rattus norvegicus Tsku gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 101100042881 Sambucus nigra SNA-I gene Proteins 0.000 description 1
- 101000777243 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) UV-damage endonuclease Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 206010042682 Swelling face Diseases 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric Acid Chemical class [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001115954 Turtur Species 0.000 description 1
- 102100029645 UBX domain-containing protein 11 Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 208000021841 acute erythroid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000036676 acute undifferentiated leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000729 antidote Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010420 art technique Methods 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- YLBMNMLHAAOXAL-UHFFFAOYSA-N aziv Chemical compound O1C(C)=C(O)C(=O)CC1OC1C2(C)CCC3(C)C4(C)CCC5C(C)(CO)C(OC6C(C(O)C(O)C(O6)C(O)=O)OC6C(C(O)C(O)C(CO)O6)OC6C(C(O)C(O)C(CO)O6)O)CCC5(C)C4CC=C3C2CC(C)(C)C1 YLBMNMLHAAOXAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003008 blinatumomab Drugs 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 231100000259 cardiotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000015861 cell surface binding Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000011441 consolidation chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000007596 consolidation process Methods 0.000 description 1
- 238000009108 consolidation therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000004405 cytokine-induced killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N digitonin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO7)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@@H](CO)O5)O)C[C@@H]4CC[C@H]3[C@@H]2[C@@H]1O)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@@H](C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N digitonine Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CC(O)C(OC5C(C(O)C(OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)CO7)O)C(O)C(CO)O6)OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)C(CO)O7)O)C(O)C(CO)O6)O)C(CO)O5)O)CC4CCC3C2C2O)C)C2OC11CCC(C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000002503 electroluminescence detection Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000000913 erythropoietic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 101150077246 gas5 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000908 idarubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000013394 immunophenotyping Methods 0.000 description 1
- 238000011293 immunotherapeutic strategy Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229940076264 interleukin-3 Drugs 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 235000014413 iron hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- NCNCGGDMXMBVIA-UHFFFAOYSA-L iron(ii) hydroxide Chemical class [OH-].[OH-].[Fe+2] NCNCGGDMXMBVIA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000009115 maintenance therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 description 1
- 238000001208 nuclear magnetic resonance pulse sequence Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000003335 steric effect Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Hydrogenated Pyridines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Винахід стосується біспецифічного моновалентного діатіла, що одночасно зв'язується з CD123 і CD3, фармацевтичної композиції, що містить таке діатіло, та їх застосування для лікування захворювання або стану, пов’язаного з надекспресією CD123.The invention relates to bispecific monovalent diatyl that binds simultaneously to CD123 and CD3, a pharmaceutical composition containing such diatyl, and their use for the treatment of a disease or condition associated with overexpression of CD123.
Description
(54) БІСПЕЦИФІЧНЕ МОНОВАЛЕНТНЕ ДІАТІЛО, ЯКЕ ЗДАТНЕ ЗВ'ЯЗУВАТИСЯ З СО123 І СО3, ТА(54) BISPECIFIC MONOVALENT DIATHYLO, WHICH IS ABLE TO BIND WITH CO123 AND CO3, AND
ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯITS APPLICATION
(57) Реферат:(57) Abstract:
Винахід стосується біспецифічного моновалентного діатіла, що одночасно зв'язується з СО123 іThe invention relates to a bispecific monovalent diethyl, which simultaneously binds to CO123 and
СО3, фармацевтичної композиції, що містить таке діатіло, та їх застосування для лікування захворювання або стану, пов'язаного з надекспресією СО123.CO3, pharmaceutical compositions containing such a dibody, and their use for the treatment of a disease or condition associated with overexpression of CO123.
Пептнді кнPeptndi kn
МБ, жне с же С ЧУВ НЕНИ неє засн «ЕН я Лйнкер Я ; й - г ІMB, zhne s same S CHUV NENY nee zasn "EN I Linker I ; y - g I
Б-стро свЖис Ка іB-stro svZhys Ka i
Ботвуюровть вве ЩО че іBotvuyurovt vve WHAT che and
Пеолінептидний лані 1 Ескіцрвня; Кл» | ! «оон ЗДИДАДА.. чани маля днк щу да - А ЛЕнкев Н «ізнщер стикання і Н соон «АЛДДДА нене нн ВPeolineptid doe 1 Eskitsrvnia; Cl" | ! "oon ZDYDADA.. chany malya dnk schu da - A Lenkev N "iznshcher contact and N soon "ALDDDA nene nn V
Пожпенктидний лазнцваг З Б спіоадь сабо У Ше :Pozhpentidny lazntsvag Z B spioad sabo U She:
Ж-стірклю) р йZh-stirklyu) r.y
Гептнліі м, ЯHeptnlii m, Ya
Поліпаптидний лапиіваг Я зеевсево Бодя ! сих НPolypeptid lapiivag Ya zeevsevo Bodya! sikh N
Нептиді и Зебфане Бо - дидтілеь версія 2Neptidis and Zebphane Bo - didtile version 2
МНЕ есе Кот Сех ен пMNE essay Kot Seh en p
Ж. се сімею ОО На яI am a family member
КН, жк С А про» ення» сосн сна СМ ана ях шко сн: ве сосок «ДДДАЙА не ше госн ЗДДДДАЛ. зн, ХУ анннннсненнKN, zhk SA A pro" enny" pine sleep SM ana yah shko sleep: ve nipple "DDDAYA ne she gosn ZDDDDAL. zn, HU annnnnsnenn
ВН іВігтра ЗВVN and Vigtra ZV
Посилання на споріднені заявкиLinks to related applications
Згідно з даною заявкою вимагається пріоритет відповідно до заявок на видачу патентів СШАThis application claims priority under US patent applications
МоМо 61/869510 (поданою 23 серпня 2013 р.; у стадії розгляду), 61/907749 (поданою 22 листопада 2013 р.; у стадії розгляду) і 61/990,475 (поданою 8 травня 2014 р.; у стадії розгляду), і заявкою на видачу Європейського патенту Мо 13198784 (поданою 20 грудня 2013 р.), кожна з яких повністю включена у даний документ за допомогою посилання.MoMo 61/869510 (filed Aug. 23, 2013; pending), 61/907749 (filed Nov. 22, 2013; pending), and 61/990,475 (filed May 8, 2014; pending), and European Patent Application No. 13198784 (filed on December 20, 2013), each of which is fully incorporated herein by reference.
Посилання на перелік послідовностейLink to the list of sequences
Дана заявка містить у собі один або декілька переліків послідовностей відповідно до 37This application contains one or more sequence listings according to 37
С.Р.А. 1.821 єї зед., які розкриті як на паперовому, так і на машинозчитувальному носії, і чиї паперові і машинозчитувальні розкриття повністю включені в даний документ за допомогою посилання.S.R.A. 1.821 of its ed., which are disclosed in both paper and machine-readable media, and whose paper and machine-readable disclosures are fully incorporated herein by reference.
Область техніки, до якої відноситься даний винахідThe field of technology to which this invention belongs
Даний винахід відноситься до СЮО123 х СОЗ біспецифічних моновалентних диатіл, які здатні одночасно зв'язуватися з СО123 і СОЗ, і до застосувань таких молекул у лікуванні гематологічних злоякісних пухлин.This invention relates to СХО123 x POP bispecific monovalent diethyls, which are capable of simultaneously binding to СО123 and POP, and to the applications of such molecules in the treatment of hematological malignant tumors.
Попередній рівень техніки даного винаходуPrior art of this invention
І. 60123I. 60123
СО0123 (альфа-рецептор інерлейкіну 3, І/-З3Ка) являє собою молекулу з молекулярною масою 40 кДа і є частиною комплексу рецепторів інтерлейкіну З (5іоте5Кі, Е.О. еї аї. (1996) "Нитап ІпіейеиКіп-3 (1-3) Іпдисе5 Оівиіде-іпКей 1/-3 АВесеріог АїІрна-Апа Веїа-СнаїйпCO0123 (interleukin 3 alpha receptor, I/-Z3Ka) is a molecule with a molecular weight of 40 kDa and is part of the interleukin C receptor complex (5iote5Ki, E.O. ei ai. (1996) "Nitap IpieieiKip-3 (1-3 ) Ipdyse5 Oivyide-ipKey 1/-3 AVeseriog AiIrna-Apa Veia-Snaiip
Неїегодітетгігайоп, М/піснп І5 Недшцігей Рог Ресеріог Асіїмайоп Виї Мої Нідп-Айіппу Віпаіпд", Мої.Neiegoditetgigayop, M/pisnp I5 Nedshcigei Rog Reseriog Asiimayop Vii Moi Nidp-Aiippu Vipaipd", Moi.
Сеї. Віо!. 16(6):3035-3046). Інтерлейкін З (ІІ -3) керує ранньою диференціацією мультипотентних стовбурових клітин у клітини еритроїдних, мієлоїдних і лімфоїдних попередників. СО123 експресується на СО34-- комітованих клітинах - попередниках (Таив55ід, О.С. єї аї. (2005) "Нетаїйороїієїїс Зієет Сеїїє Ехргез5 Мийіріє Муєїоід МаїгкКкегв: Ітріїсайоп5 Рог Те Огідіп АпаSow Vio!. 16(6):3035-3046). Interleukin C (II -3) controls the early differentiation of multipotent stem cells into cells of erythroid, myeloid, and lymphoid progenitors. СО123 is expressed on СО34-- committed cells - precursors (Taiv55id, O.S. eyi ai. (2005) "Netaiiroiiiiiis Zieet Seiiie Ehrgez5 Miyirie Mueioid MaigkKkegv: Itriisayop5 Rog Te Ogidip Apa
Тагдеїєд Тнегару ОЇ Асціє Муєїоід І еикетіа", Віоса 106:4086-4092), але не на СО34ч4/Сс038- нормальних гемопоетичних стовбурових клітинах. СО123 експресується базофілами, тучними клітинами, плазмацитоїдними дендритними клітинами, деяка експресія спостерігається у моноцитів, макрофагів і еозинофілів, і низька експресія або її відсутність спостерігається уTagdeied Tnegaru OY Ascie Mueioid I eiketia", Viosa 106:4086-4092), but not on СО34х4/Сс038- normal hematopoietic stem cells. СО123 is expressed by basophils, mast cells, plasmacytoid dendritic cells, some expression is observed in monocytes, macrophages and eosinophils, and low expression or its absence is observed in
Зо нейтрофілів і мегакаріоцитів. Деякі, які не відносяться до гемопоетичних тканини (плацента, клітини Лейдига в яєчках, певні клітинні елементи головного мозку і деякі ендотеліальні клітини) експресують СО123; проте, експресія є, головним чином, цитоплазматичною.From neutrophils and megakaryocytes. Some that do not belong to hematopoietic tissue (placenta, Leydig cells in the testicles, certain cellular elements of the brain and some endothelial cells) express CO123; however, expression is primarily cytoplasmic.
Повідомлялося, що СО123 експресується лейкобластами і лейкозними стовбуровими клітинами (І 5С) (Чогдап, С.Т. єї аї. (2000) "Тне ІпіепецйКіп-3 Весеріог АІрна Саїп Ів А ОпідиеIt was reported that CO123 is expressed by leukoblasts and leukemic stem cells (I 5C) (Chogdap, S.T. Yei ai. (2000) "Tne IpiepetsyKip-3 Veseriog AIrna Saip Iv A Opidie
МаїкКег Рог Нитап Асціє МуєіІодепоиз І еикетіа 5ієт СеїІв", Ї еиКетіа 14:1777-1784; діп, МУ. єї аї. (2009) "Ведшаїйоп ОЇ ТН17 Сеї! Оімегепііайоп Апа ЕАЕ Іпдисіїоп Ву МАРЗК МІК", Віоса 113:6603- 6610) (фігура 1). У нормальних популяціях клітин - попередників у людини СО123 експресується підкласом гемопоетичних клітин - попередників (НРС), але не нормальними гемопоетичними стовбуровими клітинами (НС). СО123 також експресується плазмацитоїдними дендритними клітинами (рос) і базофілами і меншою мірою моноцитами і еозинофілами (І оре, А.Р. еї аї. (1989) "Весіргосаї! Іппібйоп ОЇ Віпаїпд Веймееп Іпіепецкіп З Апа Стапиосуїе-Масгорпаде Соіопу-MaikKeg Rog Nytap Ascie MueiiIodepoiz I eiketia 5iet SeiIv", Yi eiketia 14:1777-1784; dip, MU. eyi ai. (2009) "Vedshaiiop OII TN17 Seii! Oimegepiiaiop Apa EAE Ipdisiop Wu MARZK MIC", Viosa 113:6603-6610) (figure 1). In normal human progenitor cell populations, CO123 is expressed by a subclass of hematopoietic progenitor cells (HPCs), but not by normal hematopoietic stem cells (NS). СО123 is also expressed by plasmacytoid dendritic cells (ros) and basophils and to a lesser extent by monocytes and eosinophils (I ore, A.R. ei ai. (1989) "Vesirgosai! Ippibyop OY Vipaipd Veimeep Ipiepetskip Z Apa Stapiosuiye-Masgorpade Soiopu-
Зійтшайпу Расіог То Нитап Еовіпорніїв", Ргос. Маї). Асад. бсі. (0О.5.А.) 86:7022-7026; Бип, О. єї а. (1996) "Мопосіопа! Апіїроду 723 Несодпіге5 Те М-Тептіпа! Оотаїп ОЇ Те Нитап Іпіепеикіп-Ziytshaipu Rasiog To Nytap Eoviporniiv", Rgos. Mai). Asad. bsi. (0O.5.A.) 86:7022-7026; Byp, O. eyi a. (1996) "Moposiopa! Apiirodu 723 Nesodpige5 Te M-Teptipa! Ootaip OI Te Nytap Ipiepeikip-
З (1-3) Весеріог АІрна Спаіп Апа Рипсійп5 Аз А 5ресіїйїс І-3 Весеріог Апіадопіві", Віоса 87:83- 92; Мийо, І. еї аї. (2001) "ІпіепеиКіп-3 Весеріог АіІрна СНаіп (СО123) Ів Муідеіу Ехргеззей ІпZ (1-3) Veseriog AIrna Spaip Apa Rypsiip5 Az A 5resiiiis I-3 Veseriog Apiadopivi", Viosa 87:83- 92; Miho, I. ei ai. (2001) "IpiepeiKip-3 Veseriog AiIrna SNaip (SO123) Iv Muideiu Ehrghezzei Ip
Нетаїйоіодіс Маїїдпапсієв", Наетаїйюіодіса 86(12):1261-1269; Мабвієп, В.). еї аї. (2006) "Спагасієгігайоп ОЇ Муєїоідй Апа Ріазтасуйій ЮОепагйіс Сеїв іп о Нитап Гипд", у. Іттипої. 177:7784-7793; Когреїаіпеп, Е.І. еї аі. (1995) "Іпепегоп-Ссатта Оргеашіаїез ІпіепешцкКіп-З3 (1-3)Netaiyodis Maiidpapsiev", Naetaiiyuodisa 86(12):1261-1269; Mabviep, V. ei ai. (2006) "Spagasiyegigayop OY Muyeioid Apa Riaztasuiy YuOepagyis Seiv ip o Nytap Gypd", u. Ittipoi. 177:7784-7793; Kogreiaipep, E.I. ei ai. (1995) "Ipepegop-Ssatta Orgeashiaiez IpiepestskKip-Z3 (1-3)
Весеріог Ехргезвіоп п Нитап Епаоїнеїа! Сеїйв Апа Зупегдіге5 М/П 1-3 Іп Бійтшіайпо МаїогVeseriog Ehrgezviop p Nytap Epaoineia! Seijv Apa Zupegdige5 M/P 1-3 Ip Biitsiaippo Maiog
Нівіосотраїйбійу Сотріех Сіавз ІІ Ехргеззіоп Апа СуїоКіпе Ргодисійоп", Віоса 86:176-182).Niviosotraiibiyu Sotriech Siavz II Ehrgeziop Apa SuioKipe Rgodisiop", Viosa 86:176-182).
Повідомлялося, що СО123 надлишково експресується на злоякісних клітинах у широкому спектрі гематологічних злоякісних пухлин, включаючи в себе гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ) і мієлодиспластичний синдром (МДС) (Мийо, ГІ. еї аї. (2001) "ІпіегеиКіп-3 Весеріог АІрна СНаїп (СО123) Ів М/ідему Ехргеззей Іп Нетаїйоіодіс Маїїдпапсієв", Наетаїйоіодіса 86(12):11261-1269).CO123 has been reported to be overexpressed on malignant cells in a wide range of hematological malignancies, including acute myeloid leukemia (AML) and myelodysplastic syndrome (MDS) (Milleau, GI. et al. (2001) "IpiegeiKip-3 Veseriog AIrna SNaip ( СО123) Iv M/idemu Ehrgezzei Ip Netaiiodis Maiidpapsiev", Naetaiodis 86(12):11261-1269).
Надлишкова експресія СО123 зв'язана з більш несприятливим прогнозом при ГМЛ (Тенатапії,Overexpression of CO123 is associated with a more unfavorable prognosis in AML (Tenatapiya,
М.5. еї а. (2013) "Тагдеїпу Ої Асшіе Муєїйоїа І еиКаетіа Ву СуюкКіпе-Іпаисеа Кіїег СеїЇ5 ВНедігесієаM.5. her a. (2013).
Мпа А Моме! СО123-5ресіїс Спітетіс Апіїдеп Весеріог", Вг. У. Наєетаїйо!. 161:389-401).Mpa A Mome! СО123-5resiis Spitetis Apiidep Veseriog", Vg. U. Naeetaio!. 161:389-401).
Вважається, що ГМЛ і МДС виникають і підтримуються невеликою популяцією лейкозних стовбурових клітин (15), які, як правило, є дрімаючими (тобто клітинами, які не швидко бо діляться) і, отже, є стійкими до клітинної смерті (апоптозу) і традиційних хіміотерапевтичних засобів. | 5С характеризуються високими рівнями експресії СО123, що відсутні у відповідній нормальній популяції гемопоетичних клітин у нормальному кістковому мозку людини (іп, МУ. еї аІ. (2009) "Недшіанйоп ОЇ Ти17 Сеї! ОйШегепіайоп Апа ЕАЕ Іпдисіоп Ву МАРЗК МІК", Віоой 113:6603-6610; Чогаап, О.Т. єї аї. (2000) "Тне ІпіейеиКіп-3 Весеріог АІрна СНаїп Із А ОпіднеAML and MDS are thought to arise and be maintained by a small population of leukemia stem cells (15), which are typically dormant (i.e., cells that do not divide rapidly) and are therefore resistant to cell death (apoptosis) and conventional chemotherapeutic agents. means | 5C are characterized by high levels of expression of СО123, which are absent in the corresponding normal population of hematopoietic cells in normal human bone marrow (ip, MU. ei AI. (2009) "Nedshianyop ОЙ Ty17 Seii! ОйShegepiayop Apa EAE Ipdysiop Vu MARZK MIK", Vioiy 113:6603 -6610; Chogaap, O.T. (2000).
МаїКег Рог Нитап Асціє МуєіІодепоив І еиКетіа біет СеїІв", ЇейКетіа 14:1777-1784). СО123 експресується в 45 95-95 906 випадків ГМЛ, 85 96 випадків волохатоклітинного лейкозу (ВКЛ) і 40 95 випадків гострого В-лімфобласного лейкозу (В-ГЛЛ). Експресія СЮО123 також пов'язана з іншими численними злоякісними пухлинами/передраковими станами: клітини - попередники хронічного мієлоїдного лейкозу (ХМЛ) (включаючи в себе ХМЛ із бласним кризом); клітини Рид-MaiKeg Rog Nytap Ascie MueiiIodepoiv I eiKetia biet SeiIv", YeiKetia 14:1777-1784). СО123 is expressed in 45 95-95 906 cases of AML, 85 96 cases of hairy cell leukemia (VCL) and 40 95 cases of acute B-lymphoblastic leukemia (B- Expression of ХО123 is also associated with numerous other malignancies/precancerous conditions: chronic myeloid leukemia (CML) progenitor cells (including CML with blast crisis); Ryd cells
Штернберга (К5) при ходжкінській лімфомі; трансформована неходжкінська лімфома (НХЛ); деякі типи хронічного лімфоцитарного лейкозу (ХЛЛ) (СО11сж); підклас гострого Т- лімфобласного лейкозу (Т-ГЛЛ) (16 95, найбільш незрілий підклас, головним чином вражає дорослих), злоякісні пухлини із плазмацитоїдних дендритних клітин (РОС) (0С2) і злоякісні пухлини з СЮО34-/С038-клітин кісткового мозку при мієлодиспластичному синдромі (МДО).Sternberg (K5) in Hodgkin's lymphoma; transformed non-Hodgkin's lymphoma (NHL); some types of chronic lymphocytic leukemia (CLL) (СО11сж); subclass of acute T-lymphoblastic leukemia (T-CLL) (16 95, the most immature subclass, mainly affects adults), malignant tumors from plasmacytoid dendritic cells (ROS) (0C2) and malignant tumors from ХО34-/С038-cells of the bone marrow in myelodysplastic syndrome (MDO).
ГМЛ являє собою клональне захворювання, що характеризується проліферацією і нагромадженням трансформованих мієлоїдних клітин - попередників у кістковому мозку, яке в підсумку призводить до гемопоетичної недостатності. Частота виникнення ГМЛ збільшується з віком, і пацієнти більш старшого віку, як правило, мають гірші результати лікування, ніж більш молоді пацієнти (Кобак, Т. єї аї. (2009) "Сцтепі Апа Етегдіпд Тнегарієзє Рог Асшє МуевіоійAML is a clonal disease characterized by the proliferation and accumulation of transformed myeloid cells - precursors in the bone marrow, which ultimately leads to hematopoietic insufficiency. The incidence of AML increases with age, and older patients tend to have worse outcomes than younger patients (Kobak, T. eyi ai. (2009) "Sctepi Apa Etegdipd Tnegaryezye Rog Assye Muevioiy
Ї енкетіа", Сіїп. ТНег. 2:2349-2370). На жаль, на даний час більшість дорослих пацієнтів з ГМЛ вмирає внаслідок свого захворювання.Y enketia", Siip. TNeg. 2:2349-2370). Unfortunately, at present, the majority of adult patients with AML die as a result of their disease.
Лікування ГМЛ початково фокусується на індукції ремісії (індукційна терапія). Як тільки досягається індукція, фокус лікування зрушується на закріплення цієї ремісії (післяремісійна, або консолідаційна терапія) і в деяких випадках на підтримуючу терапію. Стандартна парадигма індукції ремісії для ГМЛ являє собою хіміотерапію за допомогою комбінації антрацикліну і цитарабіну з наступною або консолідаційною хіміотерапією (як правило, за допомогою підвищених доз тих же лікарських засобів, які використовувалися протягом періоду індукції ремісії), або трансплантацією стовбурових клітин людини залежно від здатності пацієнта переносити інтенсивне лікування і імовірності видужання тільки за допомогою хіміотерапії (див.,Treatment of AML initially focuses on inducing remission (induction therapy). Once induction is achieved, the focus of treatment shifts to consolidation of this remission (post-remission or consolidation therapy) and in some cases to maintenance therapy. The standard remission induction paradigm for AML is chemotherapy with an anthracycline and cytarabine combination followed by either consolidation chemotherapy (usually with increased doses of the same drugs used during the remission induction period) or human stem cell transplantation, depending on the patient's ability tolerate intensive treatment and the likelihood of recovery only with the help of chemotherapy (see,
Коо) наприклад, Кобог, С... (2012) "Ситепі Тгеаїтепі ОЇ Асціє Муевіоіай ГеиКетіа", Си. Оріп. Опсої. 24:711-719).Koo) for example, Kobog, S... (2012) "Sitepi Tgeaitepi OI Ascie Muevioiai GeiKetia", Sy. Orip. Opsoi 24:711-719).
Засоби, часто використовувані в індукційній терапії, містять у собі цитарабін і антрациклін.Agents often used in induction therapy contain cytarabine and anthracycline.
Цитарабін, також відомий як Агас, знищує злоякісні клітини (і інші нормальні клітини, що швидко діляться), перешкоджаючи синтезу ДНК. Побічні ефекти, пов'язані з лікуванням за допомогоюCytarabine, also known as Agas, kills malignant cells (and other normal, rapidly dividing cells) by interfering with DNA synthesis. Side effects associated with treatment with the help
Агас, містять у собі знижену стійкість до інфекції як результат зниженої продукції лейкоцитів; кровотеча як результат зниженої продукції тромбоцитів; і анемію внаслідок потенційного зниження кількості еритроцитів. Інші побічні ефекти містять у собі нудоту і блювання.Agas, contain reduced resistance to infection as a result of reduced production of leukocytes; bleeding as a result of reduced production of platelets; and anemia due to a potential decrease in the number of red blood cells. Other side effects include nausea and vomiting.
Антрацикліни (наприклад, даунорубіцин, доксорубіцин і ідарубіцин) характеризуються декількома механізмами дії, включаючи в себе інгібування синтезу ДНК і РНК, руйнування структур ДНК більш високих порядків і виробництво ушкоджуючих клітини вільних кисневих радикалів. Найбільш значний побічний ефект антрациклінів являє собою кардіотоксичність, яка суттєво обмежує дозу, що вводиться протягом життя, і у деякій міри застосовність антрациклінів.Anthracyclines (eg, daunorubicin, doxorubicin, and idarubicin) are characterized by several mechanisms of action, including inhibition of DNA and RNA synthesis, destruction of higher order DNA structures, and production of cell-damaging free oxygen radicals. The most significant side effect of anthracyclines is cardiotoxicity, which significantly limits the lifetime dose and, to some extent, the applicability of anthracyclines.
Таким чином, на жаль, незважаючи на істотний прогрес у лікуванні вперше виявленого ГМЛ, 20 96 - 40 95 пацієнтів не досягають ремісії за допомогою стандартної індукційної хіміотерапії, і в 95 - 70 9о пацієнтів, які досягли спочатку повної ремісії, як припускають, виникне рецидив не пізніше ніж через З роки. Оптимальна стратегія в період рецидиву або для пацієнтів зі стійким до лікування захворюванням, залишається неясною. Встановлено, що трансплантація стовбурових клітин є найбільш ефективною формою протилейкозної терапії у пацієнтів з ГМЛ 50 при першій або наступній ремісії (йорог, Ссх.). (2012) "Сцтепі Тгеайтепі ОГ Асшіе МуеіоїаThus, unfortunately, despite significant progress in the treatment of newly diagnosed AML, 20 96 - 40 95 patients do not achieve remission with standard induction chemotherapy, and 95 - 70 90 of patients who achieve an initial complete remission are estimated to relapse. not later than in 3 years. The optimal strategy during relapse or for patients with treatment-resistant disease remains unclear. It has been established that stem cell transplantation is the most effective form of anti-leukemia therapy in patients with AML 50 in the first or subsequent remission (Yorog, Sskh.). (2012) "Sctepi Tgeaitepi OG Asshie Mueioia
І еикетіа", Ситт. Оріп. Опсої. 24:711-719).And eiketia", Sitt. Orip. Opsoi. 24:711-719).
І. СОЗI. SOZ
СОЗ являє собою Т -клітинний корецептор, що складається із чотирьох різних ланцюгів (Ууиспегрієппід, КМУ. еї аї. (2010) "Зігистига! Віоіоду ОЇ ТНе Т-СеїІ Несеріог: Іпвзіднів Іпіо НесеріогPOP is a T-cell co-receptor consisting of four different chains (Uuispegrieppid, KMU. ей ай. (2010) "Zygistiga! Viioidou ОЙ ТНе T-СейЙ Neseriog: Ipvzidniv Ipio Neseriog
Авбзетбріу, Гідапа ВНесодпйіоп, Апа Іпйіайоп ОО Зідпаїйпуд", Соїй бргіпд Нагб. Регзресі. Віо). 2(4):а005140; радев5 1-14). У ссавців комплекс СОЗ містить ланцюг СОЗу, ланцюг СОЗб їі два ланцюги СОЗє. Зазначені ланцюги зв'язуються з молекулою, відомою як Т-клітинний рецептор (ТОК), для створення сигналу активації в Т-лімфоцитах. При відсутності СОЗ не відбувається правильного складання ТСК, і вони розпадаються (Ппотав, 5. єї аїЇ. (2010) "МоїІесшаг (510) Ітітипоїоду Гебз5оп5 Егот ТПегарешііс Т-СеїЇ Несеріог Сепе Тгапвіег", Іттипоіоду 129(2):170-Avbzetbriu, Gidapa VNesodpyiop, Apa Ipyiayop OO Zidpayipud", Soyy brhipd Nagb. Regzresi. Vio). 2(4):а005140; radev5 1-14). In mammals, the SOZ complex contains a chain of SOZu, a chain of SOZb and two chains of SOZe. These chains bind to a molecule known as the T-cell receptor (T-cell receptor) to create an activation signal in T-lymphocytes. In the absence of TSCs, TSCs do not assemble properly and they disintegrate (Ppotav, 5. ейі айЙ. (2010) "MoiIesshag (510).
177). СОЗ виявлений зв'язаним з мембранами всіх зрілих Т-клітин і практично ні з яким іншим типом клітин (див. Чхапеуау, С.А. єї аї. (2005) Іп: Іттипобіоіоду: Те Іттипе бувієт Іп Неайн177). POPs are found bound to the membranes of all mature T cells and to almost no other cell type (see Chhapeuau, SA yei ai. (2005) Ip: Ittipobioiodu: Te Ittipe buviet Ip Neain
Апа Оівзєазе, " бій ей. Сапапа бсієпсе Рибріїзпіпу, ММ, рр. 214-216; Бип, 7. у. еї аї. (2001) "Меснапізтв Сопігібшіпа То Т Сеї! Весеріог Зідпаіїйпуд Апа Аззетріу Вехуєаієд Ву Те боїшіоп зігисішге ОЇ Ап Есіодотаіїп Егадтепі ОЇ Те СОЗе:у Неїегодітег", Сеїї 105(7):913-923;. Киппв,Apa Oivzease, " biy ey. Sapapa bsiepse Rybriizpipu, MM, pp. 214-216; Byp, 7. u. ei ai. (2001) "Mesnapiztv Sopigibshipa To T Seii! Veseriog Zidpaiiipud Apa Azzetriu Vehuyeaied Vu Te boishiop zigisishge OYI Ap Esiodotaiip Egadtepi OYI Te SOZe:u Neiegoditeg", Seyi 105(7):913-923;. Kippv,
М.5. еї а. (2006) "Оесопвігисіпа Те Ропт Апа Рипсіоп ОЇ Те ТСВ/СОЗ Сотріех", Іттипйу. 2006 Рер.;24(2):133-139).M.5. her a. (2006) "Oesopvigysipa Te Ropt Apa Rypsiop OYI Te TSV/SOZ Sotrieh", Ittipyu. 2006 Rer.;24(2):133-139).
І. Біспецифічні диатілаI. Bispecific diatoms
Здатність інтактного, немодифікованого антитіла (наприклад, Ідс) зв'язувати епітоп антигену залежить від присутності варіабельних доменів на легких і важких ланцюгах імуноглобуліну (тобто доменів МІ і МН, відповідно). Конструкція диатіла заснована на одноланцюговому конструкті Ем (зсЕм) (див., наприклад, Ноїйдег еї а). (1993) "Оіародіев" Зтаї! Вімаіепі АпаThe ability of an intact, unmodified antibody (for example, Ids) to bind an antigen epitope depends on the presence of variable domains on the light and heavy immunoglobulin chains (ie, the MI and MN domains, respectively). The structure of the diatyl is based on the single-stranded structure Em (zsEm) (see, for example, Neuideg et al. (1993) "Oiarodiyev" Come on! Vimaiepi Apa
Візресіїйс Апіїбоду Егадтепів", Ргос. Маї!. Асай. Зсі. (0О.5.А.) 90:6444-6448; патентну публікаціюVizresiiys Apiibodu Egadtepiv", Rgos. Mai!. Asai. Zsi. (0O.5.A.) 90:6444-6448; patent publication
США Мо 2004/0058400 (Ноїїпдег еї аІ); 5 2004/0220388 (Мепепз еї аї.); АЇї еї аІ. (1999) РЕВЗUnited States Mo 2004/0058400 (New York Office of the Attorney General); 5 2004/0220388 (Mepepz ei ai.); Aiy ai ai. (1999) REVZ
І екйК. 454(1-2):90-94; І и, 0. єї аї. (2005) "А шу Нитап Весотрбіпапі Іда-І іКе Візресіїїс Апіїроду ТоAnd ekyK. 454(1-2):90-94; And y, 0. ей яй. (2005) "A shu Nitap Vesotrbipapi Ida-I iKe Visresiiis Apiirodu To
Воїй Те Ерідепта! Стомлй Расіог Весеріог Апа Тне Інзшіп-ГіКе Стоуліи Расіог Несеріог РогWoe to Te Eridepta! Stomly Raciog Veseriog Apa Tne Inzship-GiKe Stoulii Raciog Neseriog Rog
Епнапсед Апійштог Асіїмцу", у). Віої. Спет. 280(20):19665-19672; МО 02/02781 (Мепепз еї аї.);Epnapsed Apiishtog Asiimtsu", y). Vioi. Spet. 280(20):19665-19672; MO 02/02781 (Mepepz ei ai.);
ОІаївеп, Т. еї аї. (2004) "Сомаїіеєпі ОівиНіде-іпкКеа Апі-СЕА Оіароду Айомже Зйе-ЗресіїісOIaivep, T. ei ai. (2004).
Сопійдайоп Апа Вадіоіабеїїпа Рог Титог Тагдеїйпд Арріїсайопв", Ргоївїп Епд. Оев5. Зеї. 17(11):21- 27; Ми, А. єї аі. (2001) "Мийітетгігайоп ОА СНітетіс Апії-СО20 5іпдіе Снаіп Ем-Ем Ризіоп РгоївїпSopidayop Apa Vadioiabeiipa Rog Tytog Tagdeiipd Arriisaiopv", Rgoivip Epd. Oev5. Zei. 17(11):21- 27; My, A. eyii ai. (2001) "Miyitetgigayop OA SNitetis Apii-СО20 5ipdie Snip Em-Em Risiop Rgoivip
І Медіаїед Тпгоцдп Магіаріє ботаїп Ехспапде", Ргоївїп Епдіпеетіпу 14(2):1025-1033; Азапо еї аї. (2004) "А біароду Рог Сапсег ІттипоїНегару Апа ї5 Рипсіїопа! Епнапсетепі Ву Ривіоп ОЇ НитапAnd Mediaied Tpgotsdp Magiarie botaip Ekhspapde", Rgoivip Epdipeetipu 14(2):1025-1033; Azapo ei ai. (2004) "A biarodu Rog Sapseg IttipoiNegaru Apa y5 Rypsiiopa! Epnapsetepi Wu Ryviop OY Nytap
Ес Ротаїп", АБвзігасі ЗР-683, 9. Віоспет. 76(8):992; Такетига, 5. єї аї. (2000) "Сопвітисіоп ОТГА ріароду (Зтаї! Весотрбіпапі Візресіїіс Апіїроду) Овіпа А Веідіпуд Зувзіет", Ргоїєїп Епа. 13(8):583- 588; Ваєценпіє, Р.А. еї а!. (2009) "Візресіїїс Т-СеїЇ Епдадіпд Апіїродіє5 Рог Сапсег Тегару", СапсегEs Rotaip", ABvzigashi ZR-683, 9. Viospet. 76(8):992; Taketiga, 5. ei ai. (2000) "Sopvitisiop OTGA riarodu (Ztaii! Vesotrbipapi Vizresiiis Apiirodu) Ovipa A Veidipud Zuvziet", Rgoieip Epa. 13(8):583- 588; Vayetsenpie, R.A. ei a!. (2009) "Vizresiis T-SeiY Epdadipd Apiirodie5 Rog Sapseg Tegaru", Sapseg
Вез. 69(12):4941-4944).Transportation 69(12):4941-4944).
Взаємодія легкого ланцюга антитіла і важкого ланцюга антитіла і, зокрема, взаємодія його доменів МІ ії МН формує один із сайтів зв'язування епітопа антитіла. Напроти, конструкт 5сЕм містить домен Мі. ії МН антитіла, що міститься в одному поліпептидному ланцюзі, причому в домені відділені гнучким лінкером, довжина якого достатня для забезпечення можливості самоскладання двох доменів у функціональний сайт зв'язування епітопа. Якщо самоскладання доменів МІ ії МН стає неможливим внаслідок недостатньої довжини лінкера (менше ніж приблизно 12 амінокислотних залишків), два конструкти 5сЕм взаємодіють один 3 одним з утворенням бівалентної молекули, у якій Мі одного ланцюга асоціюються з МН іншого (розглянуто в Магмііп еї а!. (2005) "Весотбіпапі Арргоаснез То Іда-іІїКе Візресіїїс Апіїродієв", АсіаThe interaction of the light chain of the antibody and the heavy chain of the antibody and, in particular, the interaction of its MI and MN domains form one of the binding sites of the antibody epitope. In contrast, the 5cEm construct contains the Mi domain. and MH antibodies contained in one polypeptide chain, and in the domain are separated by a flexible linker, the length of which is sufficient to ensure the possibility of self-assembly of two domains into a functional epitope binding site. If the self-assembly of the MI and MH domains becomes impossible due to the insufficient length of the linker (less than about 12 amino acid residues), the two 5sem constructs interact with each other to form a bivalent molecule in which the Mi of one chain are associated with the MH of the other (reviewed in Magmiip ei a!. (2005).
Ріаптасої. біп. 26:649-658).Riaptasoi beep 26:649-658).
Природні антитіла здатні зв'язуватися тільки з одним видом епітопів (тобто є моноспецифічними), хоча вони можуть зв'язуватися із множинними копіями цього виду (тобто проявляючи бівалентність або мультивалентність). У відомому рівні техніки повідомлялося про здатність робити диатіла, які відрізняються від таких природних антитіл у тому, що вони здатні зв'язувати два або більше різних видів епітопів (тобто проявляючи біспецифічність або мультиспецифічність на додаток до бівалентності або мультивалентності) (див., наприклад,Natural antibodies are capable of binding to only one type of epitope (ie, are monospecific), although they can bind to multiple copies of that type (ie, exhibiting bivalency or multivalency). The prior art has reported the ability to make antibodies that differ from such natural antibodies in that they are capable of binding two or more different types of epitopes (ie, exhibiting bispecificity or multispecificity in addition to bivalency or multivalency) (see, e.g.,
Ноїїїдег еї аї. (1993) "Оіародіе5" Зтаї! ВімаІепі Апа Візресіїйс Апібоду Егадітепів", Ргос. Ма).Noiiiideg ei ai. (1993) "Oiarodie5" Come on! VimaIepi Apa Vizresiiys Apibodu Egaditepiv", Rgos. Ma).
Асад. 5сі. (0.5.А.) 90:6444-6448; 05 2004/0058400 (Ноїпдег еї аІ.); 05 2004/0220388 (Мепепвз єї аІ.); АЇї еї аї. (1999) РЕВ5 І ей. 454(1-2):90-94; 1 и, 0. еї а. (2005) "А Ешіу Нитап Весотрбіпапі Іда-Asad 5 (0.5.A.) 90:6444-6448; 05 2004/0058400 (Noipdeg eyi AI.); 05 2004/0220388 (Mepepvz eyi aI.); Hey, hey, hey. (1999) REV5 And hey. 454(1-2):90-94; 1 i, 0. ei a. (2005) "A Eshiu Nytap Vesotrbipapi Ida-
НКе Візресіїйс Апіїроду То Воїп Те Ерідегтаї! СтоулЛй Расіог Несеріог Апа Тпе Іпвиїїп-ГіКе СтолиNKe Vizresiiis Apiirodu To Voip Te Eridegtai! StoolLy Rasiog Neseriog Apa Tpe Ipviiiip-GiKe Tables
Расіог Ресеріог Рог Еппапсей Апійитог Асіїмйу, " у. Віої. Спет. 280(20):19665-19672; МО 02/02781 (Мепепз5 еї аїЇ.); Мепеп5, М. еї аїЇ., "Мемж/ Несотбіпапі Ві-апа Тіізресіїйс АпіїбодуRasiog Reseriog Rog Eppapsey Apiiytog Asiimyu, " y. Vioi. Spet. 280(20):19665-19672; MO 02/02781 (Mepepz5 ei aiYi.); Mepep5, M. ei aiYi., "Memzh/ Nesotbipapi Vi-apa Tiizresiiys Apiibodu
Оегімайме5, " Іп: Моме! Егопіїєт5 п Те Ргодисіоп ОЇ Сотроцйпа5з Рог Віотедіса! О5е, А.Oegimaime5, " Ip: Mome! Egopiiet5 p Te Rhodisiop OYI Sotrocypa5z Rog Viotedis! O5e, A.
МапВгоекКромеп еї а. (Ед5.), Кіншег Асадетіс Рибіїзпетг5, Богагесні, Тпе Меїпепапавз (2001), радев5 195-208; Ми, А. еї аї. (2001) "Мийітетгігайоп ОГ А СНітетіс Апіі-СО20 біпаіє Спаіп Ем-ЕРм ЕивіопMapVgoekKromep ei a. (Ed5.), Kinsheg Asadetis Rybiizpetg5, Bogagesni, Tpe Meipepapavz (2001), radev5 195-208; We, A. ei ai. (2001).
Ргоївїп І5 Медіаїеа Тигоцойп Магіаріє Оотаіїп Ехспапде, " Ргоївіп Епдіпеегіпд 14(2):1025-1033;Rgoivip I5 Mediaiea Tygotsoip Magiarie Ootaiip Ekhspapde, " Rgoivip Epipeegipd 14(2):1025-1033;
Азапо еї аї. (2004) "А біароду Рог Сапсег Іттипоїпегару Апа 5 ЕРипсіпа! Епнапсетепі ВуAzapo ei ai. (2004) "A biarodu Rog Sapseg Ittipoipegaru Apa 5 ERypsipa! Epnapsetepi Vu
Еивіоп ОЇ Нитап Ес Ротаїп, " Арзігасі ЗР-683, У. Віоспет. 76(8):992; ТаКетига, 5. єї аї. (2000) "Сопвігисіоп ОЇ А Оіароду (Зтаї! Весотрбіпапі Візресіїїс Апіїроду) Овіпд А Нейідіпд Бувіет, "Eiviop OY Nytap Es Rotaip, "Arzigashi ZR-683, U. Viospet. 76(8):992; TaKetiga, 5. ey ai. (2000) "Sopvigysiop OY A Oiarodu (Ztai! Vesotrbipapi Visresiiis Apiirodu) Ovipd A Neyidipd Buviet, "
Ргоївіп Епд. 13(8):583-588; Ваєценпіє, Р.А. єї аї. (2009) "Візресіїїс Т-Сеі! Епдадіпа Апіїродієв РогRhoivip Epd. 13(8):583-588; Vayetsenpie, R.A. oh yeah (2009) "Vizresiiis T-Sei! Epdadipa Apiirodiev Rog
Сапсег ТНегару, " Сапсег Рез. 69(12):4941-4944).Sapseg TNegaru, "Sapseg Res. 69(12):4941-4944).
Забезпечення не моноспецифічними диатілами надає істотну перевагу: здатність колігування та колокалізації клітин, які експресують різні епітопи. Таким чином, біспецифічні бо диатіла характеризуються широким діапазоном застосувань, включаючи в себе терапію та імунодіагностику. Біспецифічність забезпечує можливість великої гнучкості в конструюванні та розробці диатіла в різних застосуваннях, забезпечуючи підвищену авидність у відношенні мультимерних антигенів, перехресну зшивку різних антигенів і спрямований націлений вплив на конкретні типи клітин на підставі присутності обох цільових антигенів. У зв'язку з їхньою підвищеною валентністю низькі швидкості дисоціації і швидке виведення із циркуляції (для диатіл невеликого розміру, що становить -50 кДа або нижче), відомі в даній області техніки молекули диатіл також продемонстрували конкретне застосування в області візуалізації пухлин (Рйгоетгаїа еї аї. (1997) "Ітргомед Титог Тагодеїїпу Ву Оівиїрнпіде Зіабіїгеа Оіародієз Ехргеззеай ІпThe provision of non-monospecific diethyls provides a significant advantage: the ability to bind and colocalize cells that express different epitopes. Thus, bispecific antibodies are characterized by a wide range of applications, including therapy and immunodiagnostics. Bispecificity allows for great flexibility in the design and development of the diethyl in various applications, providing increased avidity for multimeric antigens, cross-linking of different antigens, and targeted targeting of specific cell types based on the presence of both target antigens. Due to their increased valence, low dissociation rates, and rapid clearance from the circulation (for small diethyls of -50 kDa or below), known art diethyl molecules have also demonstrated specific application in the field of tumor imaging ( (1997).
Рісніа равіогів, " Ргоївіп Епд. 10:1221). Особливе значення представляє колігування різних клітин, наприклад, перехресна зшивка цитотоксичних Т-клітин з пухлинними клітинами (5іаєг72 єї аІ. (1985) "Нуртій Апіїбодіез Сап Тагдеї 5йез Бог АНаск Ву Т СеїІ5, " Маште 314:628-631, апаRisnia Raviogiv, " Rgoivip Epid. 10:1221). Of particular importance is the binding of different cells, for example, cross-linking of cytotoxic T-cells with tumor cells (5iaeg72 eyi aI. (1985) "Nurtiy Apiibodiez Sap Tagdei 5yez Bog ANask Vu T SeiII5, Mashte 314:628-631, apa
Ноїїїдег єї а. (1996) "Зресіїс Кійпуд ОЇ Гутрпота СеїІє Ву Суїоїохіс Т-СеїІ5 Меадіаїєй Ву АNoiiyideg heri a. (1996).
Візресійс Оіарсау, " Ргоївіп Епа. 9:299-305).Visresiis Oiarsau, "Rgoivip Epa. 9:299-305).
Домени зв'язування з епітопом диатіла також можуть бути спрямовані на поверхневу детермінанту будь-якої імунної ефекторної клітини, такої як СОЗ, СО16, СО32 або СОбА4, які експресуються на Т - лімфоцитах, клітинах - природних кілерах (МК) або інших мононуклеарних клітинах. У багатьох дослідженнях також виявили, що зв'язування диатіла з детермінантами ефекторних клітин, наприклад, рецепторами Есу (Есук), активує ефекторну клітину (Ноїїдег єї а!. (1996) "Зресіїйс Кпїпуд ОГГ утрпота Сеї Ву Суїшюїохіс Т-СеїІв Медіаїеа Ву А Візресіїїс Оіабоау, " Ргоїєїп Епд. 9:299-305; НоіЇїдег єї аї. (1999) "Сагсіпоетргуопіс Апіїдеп (СЕА)-5ресіїс Т-сеї)Diethyl epitope binding domains can also be directed to the surface determinant of any immune effector cell, such as POP, CO16, CO32 or CObA4, which are expressed on T lymphocytes, natural killer cells (NK) or other mononuclear cells. Many studies have also found that diethyl binding to effector cell determinants, such as Esu (Esu) receptors, activates the effector cell (Noiidegh et al. (1996) Zresiiis Kpipud OGG utrpota Sei Wu Suishyuohis T-SeiIv Mediaiea Wu A Vizresiis Oiaboau, "Rhoieip Epd. 9:299-305; NoiYideg ei ai. (1999) "Sagsipoetrguopis Apiidep (SEA)-5resiis T-sei)
Асіїмайноп Іп Соїоп Сагсіпота Іпдисей Ву Апії-саз х Апії-сєа Візресіїіс Оіародієз Апа В7 х Апіїі-сваAsiimaynop Ip Soiop Sagsipota Ipdyseus Wu Apii-saz x Apii-sea Vizresiiis Oiarodies Apa B7 x Apii-sva
Візресійс Ривіоп Ргоїєїп5, " Сапсег Ве5. 59:2909-2916; міжнародні патентні публікації МоМо УМО 2006/113665; УМО 2008/157379; УМО 2010/080538; УМО 2012/018687; УМО 2012/162068).. Як правило, активація ефекторних клітин запускається зв'язуванням антигену, зв'язаного антитілом, з ефекторною клітиною за допомогою взаємодії Ео-Есук; таким чином, у зв'язку із цим, молекули диатіл можуть проявляти Ід-подібну функціональність, незалежно від того, чи містять вони домен Ес (наприклад, згідно з результатами будь-якого аналізу ефекторної функції, відомого в даній області техніки або представленого в якості прикладу в даному документі (наприклад, аналізу АОСС)). Шляхом перехресної зшивки пухлинних і ефекторнихVisresiis Ryviop Rgoieip5, Sapseg Ve5. 59:2909-2916; international patent publications MoMo UMO 2006/113665; UMO 2008/157379; UMO 2010/080538; UMO 2012/018687; UMO 2012/162068).. As a rule, activation of effectors cell activation is triggered by binding of an antibody-bound antigen to an effector cell via the Eo-Esuc interaction, thus diethyl molecules can exhibit Id-like functionality regardless of whether they contain an Esuc domain (e.g., according to the results of any effector function assay known in the art or exemplified herein (e.g., AOSS assay)).By cross-linking tumor and effector
Зо клітин диатіло не тільки приводить ефекторну клітину в просторову близькість щодо пухлинних клітин, але приводить до ефективного лізису пухлинних клітин (див., наприклад, Сао вї аї. (2003) "Вівресіїїс Апіїроду Сопіцдаїез Іп Тегарешіісв, " Аду. Огид. Оєїїм. Нем. 55:171-197).From the cells, the diabody not only brings the effector cell into spatial proximity to the tumor cells, but also leads to effective lysis of the tumor cells (see, for example, Sao y ai. (2003) "Vivresiis Apiirodu Sopitsdaiez Ip Tegaresiisv," Adu. Ogyd. Oeiim. Nem. 55:171-197).
Проте, перераховані вище переваги зустрічаються з суттєвою вартістю. Утворення таких не моноспецифічних диатіл вимагає успішного складання двох або більше окремих і різних поліпептидів (тобто таке утворення вимагає, щоб диатіла утворювалися за допомогою гетеродимеризації різних видів поліпептидних ланцюгів). Цей факт контрастує з моноспецифічними диатілами, які утворюються за допомогою гомодимеризації ідентичних поліпептидних ланцюгів. Оскільки необхідно надати щонайменше два несхожі поліпептиди (тобто два види поліпептидів) для утворення не моноспецифічного диатіла, і оскільки гомодимеризація таких поліпептидів приводить до неактивних молекул (ТаКетига, 5. єї аї. (2000) "Сопвігисіоп ОЇ А Оіароду (Зтаї! Несотрбіпапі Візресіїйс Апіїроду) Овіпда А ВеїоїдіпдHowever, the above benefits come at a significant cost. The formation of such non-monospecific diethyls requires the successful assembly of two or more separate and different polypeptides (ie, such formation requires diethyls to be formed by heterodimerization of different types of polypeptide chains). This fact contrasts with monospecific diethyls, which are formed by homodimerization of identical polypeptide chains. Since it is necessary to provide at least two dissimilar polypeptides (i.e., two types of polypeptides) for the formation of a non-monospecific diethyl, and since homodimerization of such polypeptides leads to inactive molecules (Taketiga, 5. ei ai. (2000) "Sopvigisiop OI A Oiarodu (Ztaii! Nesotrbipapi Visresiiis Apiirodu ) Ovipda A Veioidipd
Зузієт, " Ргоїєїп Епа. 13(8):583-588), одержання таких поліпептидів має здійснюватися таким шляхом, який запобіжить утворенню ковалентних зв'язків між поліпептидами того самого виду (тобто так, щоб запобігти гомодимеризації) (Такетитга, 5. єї аї. (2000) "Сопвігосіп ОЇ А ріароду (Зтаї! Ресотрбіпапі Візресіїїс Апіїрбоду) Овіпу А Вейідіпдуд бЗувзієт, " Ргоївїп Епд. 13(8):583-588). У зв'язку із цим у даній області техніки розкрите нековалентне зв'язування таких поліпептидів (див., наприклад, Оіаївеп еї аї. (2004) "СомаІепі Різиніде- ійкКей Апіі-СЕА Оіароду АйПомуб 5Це- зЗресіїїс Сопіидайоп Апа НРадіоіабеїїпу Рог Титог Тагдеїїпуд Арріїсайопе, " Ргої. Епог. Оев5. зе. 1721-27; Авапо еї аї. (2004) "А Оіароду Рог Сапсег Іттипоїйегару Апа 5 РипсійопаїZuziet, " Pharmacology Epa. 13(8):583-588), the preparation of such polypeptides must be carried out in such a way that prevents the formation of covalent bonds between polypeptides of the same species (ie, so as to prevent homodimerization) (Taketitga, 5. (2000) "Sopvigosip OI A riarodu (Ztaii! Resotrbipapi Vizresiiis Apiirbodu) Ovipu A Veyidipdud bZuvziet, " Rgoivip Epd. 13(8):583-588). In this connection, a non-covalent bond was discovered in this field of technology tying of such polypeptides (see, for example, Oiaivep ei ai. (2004) "SomaIepi Rizinide-ikKe Apii-SEA Oiarodu IPomub 5Ce-zZresiiis Sopiydayop Apa NRadioiabeiipu Rog Titog Tagdeiipud Arriisaiope," Rgoi. Epog. Oev5. ze. 1721-27; Avapo ei ai. (2004) "A Oiarodu Rog Sapseg Ittipoiiyegaru Apa 5 Rypsiyopai
Еппнапсетепі Ву Ривіоп ОЇ Нитап Ес ботаїп, " Арзігасі ЗР-683, 9. Віоспет. 76(8):992; ТаКкетига,Eppnapsetepi Wu Ryviop OY Nytap Es botaip, "Arzigashi ZR-683, 9. Viospet. 76(8):992; TaKketiga,
З. еї аі. (2000) "Сопвігисіоп ОЇ А Оіароду (Зтаї! Ресотрбріпапі Візресіїс Апіїроду) Овіпд АZ. ei ai. (2000).
Веіадіпа Зувієт, " Ргоїєїп Епду. 13(8):583-588; и, 0. єї а. (2005) "А Ешу Нитап НесотрбіпапіVeiadipa Zuviet, "Rhoyeip Epdu. 13(8):583-588; и, 0. yei a. (2005) "A Eshu Nytap Nesotrbipapi
Ідс-ГіКе Візресіїїс Апіїрбоду То Воїй Те Ерідепта! Стоули Расюг Ресеріог Апа Тне Іпвиїп-І їкеIds-GiKe Vizresiiis Apiirbodu To Voii Te Eridepta! Stouli Rasyug Reseriog Apa Tne Ipvyip-I ike
Стомй Расіог Несеріог Гог Епнапсед Апійитог Асіїмпу, " у. Віої. Снет. 280(20):19665-19672).Stomy Rasiog Neseriog Gog Epnapsed Apiiytog Asiimpu, " u. Vioi. Snet. 280(20):19665-19672).
Проте, у даній області техніки встановлено, що біспецифічні диатіла, які складаються з нековалентно зв'язаних поліпептидів, Є нестабільними і легко дисоціюються до нефункціональних мономерів (див. наприклад, Г и, О. еї аї. (2005) "А Єшу Нитап НесотрбіпапіHowever, in this field of technology, it has been established that bispecific diethyls, which consist of non-covalently bound polypeptides, are unstable and easily dissociate into non-functional monomers (see, for example, G. and O. ei ai. (2005) "A Yeshu Nytap Nesotrbipapi
Ідс-ГіКе Візресіїїс Апіїрбоду То Воїй Те Ерідепта! Стоули Расюг Ресеріог Апа Тне Іпзиїїп-І їкеIds-GiKe Vizresiiis Apiirbodu To Voii Te Eridepta! Stouli Rasyug Reseriog Apa Tne Ipziiiip-I ike
Стомй Расіог Несеріог Гог Епнапсед Апійитог Асіїмпу, " У. Віої. Спет. 280(20):19665-19672).Stomy Rasiog Neseriog Gog Epnapsed Apiiytog Asiimpu, " U. Vioi. Spet. 280(20):19665-19672).
Через таку проблему, у даній області техніки досягли успіху в розробці стабільних, ковалентно зв'язаних гетеродимерних не моноспецифічних диатіл (див., наприклад, міжнародні патентні публікації Момо МУО 2006/113665; УУО/2008/157379; МО 2010/080538; УМО 2012/018687;Due to such a problem, in this field, the techniques have achieved success in the development of stable, covalently bound heterodimeric non-monospecific diethyls (see, for example, international patent publications Momo MUO 2006/113665; UUO/2008/157379; MO 2010/080538; UMO 2012 /018687;
МО/2012/162068; УуЧоппзоп, 5. еї аї. (2010) "ЕпНесіог СеїЇ Несгийтепі М/йй Моме! Ем-Вазей Юиаї!-MO/2012/162068; UuChoppzop, 5. ей ай. (2010) "EpNesiog Seyi Neshyytepi M/y Mome!
Айіпйу Ве-Тагоєїїпуд Ргоїєїп І єад5 То Роїепі Титог Суїоїувів Апа Іп Мімо В-Сеї! Оерієїйоп, " у.Ayipyu Ve-Tagoeiipud Rgoieip I ead5 To Roiepi Tytog Suioiuviv Apa Ip Mimo V-Sei! Oeriyeiyop, " y.
Моїес. Віо!Ї. 399(3):436-449; Меп, М.О. єї аї. (2010) "Тнегарешіс Сопіт! ОЇ В Сеї! Асіїмайоп МіаMoyes. Vio! 399(3):436-449; Map, M.O. oh yeah (2010) "Tnegareshis Sopit! OI V Sei! Asiimayop Mia
Вестийтепі ОЇ Есдатта Весеріог ПІБ (СОЗ2В) Іппірбйогу Бипсіоп М/йА А Момеї! Візресіїїс Апіїроду зсаноїд, " Апійгйїв Апейт. 62(7):1933-1943; Мооге, Р.А. еї аї. (2011) "Арріїсанйоп ОЇ Оца! АйіппуVestiytepi OI Esdatta Veseriog PIB (SOZ2B) Ippirbyogu Bipsiop M/yA A Momei! Review of Apiirodu zsanoid, " Apiigiiv Apeit. 62(7):1933-1943; Mooge, R.A. ei ai. (2011) "Aririisanyop OYI Otsa! Ayippus
Веїагоєїіпд Моїесшевз То Аспієме Оріїта! Недігесієйд Т-Сеї! Кіїйпуд ОЇ В-СеїІ ї утрпота, " Віосд 117(17)4542-4551). Такі підходи передбачають конструювання одного або декількох цистеїнових залишків у кожному з використовуваних видів поліпептидів. Наприклад, було показано, що додавання цистеїнового залишку до С-кінця таких конструктів забезпечує утворення дисульфідного зв'язку між поліпептидними ланцюгами, стабілізуючи отриманий гетеродимер, не створюючи перешкоди для характеристик зв'язування бівалентної молекули.Veiagoeiipd Moiesshevz To Aspieme Oriita! Nedigesiied T-Sei! Biosd 117(17)4542-4551). Such approaches involve the construction of one or more cysteine residues in each of the types of polypeptides used. For example, it has been shown that the addition of a cysteine residue to the C-terminus of such constructs ensures the formation of a disulfide bond between polypeptide chains, stabilizing the resulting heterodimer without creating obstacles to the binding characteristics of the bivalent molecule.
Незважаючи на такий успіх, одержання стабільних, функціональних гетеродимерних, не моноспецифічних диатіл може бути додатково оптимізоване шляхом ретельного розгляду і розміщення цистеїнових залишків в одній або декількох використовуваних поліпептидних ланцюгах. Такі оптимізовані диатіла можна одержати з більш високим виходом і з підвищеною активністю, ніж не оптимізовані диатіла. Таким чином, даний винахід відноситься до проблеми одержання поліпептидів, які спеціально розроблені і оптимізовані для утворення гетеродимерних диатіл. Даний винахід вирішує зазначену проблему шляхом забезпечення ілюстративних, оптимізованих СО123 х СОЗ диатіл.Despite this success, the production of stable, functional heterodimeric, non-monospecific diethyls can be further optimized by careful consideration and placement of cysteine residues in one or more of the polypeptide chains used. Such optimized diethyls can be obtained in higher yield and with increased activity than non-optimized diethyls. Thus, this invention relates to the problem of obtaining polypeptides that are specially designed and optimized for the formation of heterodimeric diethyls. The present invention solves this problem by providing illustrative, optimized CO123 x POP diethyl.
Коротке розкриття даного винаходуBrief disclosure of this invention
Даний винахід відноситься до СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл, які здатні одночасно зв'язуватися з СО123 ії СОЗ, і до застосувань таких молекул у лікуванні захворювання, зокрема гематологічних злоякісних пухлин. сО0123 х СОЗ біспецифічні диатіла згідно із даним винаходом містять щонайменше два різні поліпептидні ланцюги, які асоціюються один з одним гетеродимерним чином з утворенням одного сайту зв'язування, специфічного у відношенні епітопа СО123, і одного сайтом зв'язування, специфічного у відношенні епітопа СОЗ3. Таким чином, СО123 х СОЗ диатіло згідно із даним винаходом є моновалентним у тому розумінні, що воно здатне зв'язуватися тільки з однією копією епітопа СО123 і тільки з однієї копією епітопа СОЗ, але є біспецифічним у тому розумінні, що окреме диатіло здатне зв'язуватися одночасно з епітопом СО123 і з епітопом СОЗ.This invention relates to CO123 x POP bispecific diethyls, which are capable of simultaneously binding to CO123 and POPs, and to the applications of such molecules in the treatment of diseases, in particular hematological malignant tumors. сО0123 x POP bispecific diethyls according to the present invention contain at least two different polypeptide chains that associate with each other in a heterodimeric manner with the formation of one binding site specific for the CO123 epitope and one binding site specific for the POP3 epitope. Thus, the CO123 x POP dibody according to the present invention is monovalent in the sense that it is able to bind to only one copy of the CO123 epitope and only to one copy of the POP epitope, but is bispecific in the sense that a single dibody is capable of binding bind simultaneously with the CO123 epitope and with the POP epitope.
Окремі поліпептидні ланцюги диатіл ковалентно зв'язані один з одним, наприклад, шляхом зв'язування дисульфідним зв'язком цистеїнових залишків, розташованих у межах кожного поліпептидного ланцюга. Згідно з конкретними варіантами здійснення диатіла згідно із даним винаходом додатково містять домен Ес імуноглобуліну або альбумінзв'язуючий домен для збільшення періоду напівжиття іп мімо.Individual diethyl polypeptide chains are covalently linked to each other, for example, by disulfide bonding of cysteine residues located within each polypeptide chain. According to specific embodiments of the diethyl according to the present invention, they additionally contain an immunoglobulin Es domain or an albumin-binding domain to increase the half-life of ip mimo.
Більш конкретно, згідно із даним винаходом також передбачено характеризуюче оптимізованою послідовністю СО123 х СОЮЗ біспецифічне моновалентне диатіло, здатне специфічно зв'язуватися з епітопом СО123 і з епітопом СОЗ, причому диатіло містить перший поліпептидний ланцюг і другий поліпептидний ланцюг, ковалентно зв'язані один 3 одним, причому:More specifically, according to the present invention, a bispecific monovalent dibody characterized by an optimized sequence of СО123 x СОЯЗ is also provided, capable of specifically binding to the epitope of СО123 and to the epitope of COZ, and the dibody contains a first polypeptide chain and a second polypeptide chain covalently linked to each other , and:
А. перший поліпептидний ланцюг містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця: і. домен 1, що містить: (1) субдомен (1А), який містить домен Мі. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися зA. the first polypeptide chain contains, in the direction from the M-end to the C-end: i. domain 1 containing: (1) subdomain (1A) containing the Mi domain. of a monoclonal antibody capable of binding to
СОЗ (Мі соз) (ЗЕО ІЮ МО:21); і (2) субдомен (18), який містить домен УН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (МНеоїгз) (ЗЕО ІЮ МО:26);SOZ (Mi soz) (ZEO IU MO:21); and (2) subdomain (18), which contains the UN domain of a monoclonal antibody capable of binding to CO123 (MNeoigz) (ZEO IU MO:26);
БО причому субдомени 1А і 1В відділені один від одного пептидним лінкером (5ЕО ІЮ МО:29); і. домен 2, причому домен 2 являє собою Е-спіральний домен (ЗЕО І МО:34) або К- спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:35), причому домен 2 відділений від домена 1 пептидним лінкером (ЗЕО ІЮО МО:30); іBO and subdomains 1A and 1B are separated from each other by a peptide linker (5EO IU MO:29); and. domain 2, and domain 2 is an E-helical domain (ZEO I MO:34) or a K-helical domain (ZEO IYU MO:35), and domain 2 is separated from domain 1 by a peptide linker (ZEO IYUO MO:30); and
В. другий поліпептидний ланцюг містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця: і. домен 1, що містить: (1) субдомен (ТА), який містить домен Мі. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися зB. the second polypeptide chain contains, in the direction from the M-end to the C-end: i. domain 1 containing: (1) a subdomain (TA) containing the Mi domain. of a monoclonal antibody capable of binding to
СО123 (Мі соїгз) (ЗЕО ІЮ МО:25); і (2) субдомен (18), який містить домен УН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНеоз) (ЗЕО ІЮ МО:22); 60 причому субдомени 1А і 1В відділені один від одного пептидним лінкером (5ЕО ІЮ МО:29);СО123 (Mi soigz) (ZEO IU MO:25); and (2) subdomain (18), which contains the UN domain of a monoclonal antibody capable of binding to SOZ (MNeoz) (ZEO IU MO:22); 60, and subdomains 1A and 1B are separated from each other by a peptide linker (5EO IU MO:29);
і. домен 2, причому домен 2 являє собою К-спіральний домен (ЗЕО І МО:35) або Е- спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:34), причому домен 2 відділений від домена 1 пептидним лінкером (5ЗЕО ІЮ МО:30); і причому домен 2 першого і другого поліпептидних ланцюгів не являють собою обоє Е-спіральних домена або обоє К-спіральних домена; і при цьому: (а) зазначений домен МІ. зазначеного першого поліпептидного ланцюга і зазначений доменand. domain 2, and domain 2 is a K-helical domain (ZEO I MO:35) or an E-helical domain (ZEO IU MO:34), and domain 2 is separated from domain 1 by a peptide linker (5ZEO IU MO:30); and domain 2 of the first and second polypeptide chains are not both E-helical domains or both K-helical domains; and at the same time: (a) the specified MI domain. the specified first polypeptide chain and the specified domain
МН зазначеного другого поліпептидного ланцюга утворюють антигензв'язуючий домен, здатний специфічно зв'язуватися з епітопом СОЗ; і (р) зазначений домен МІ. зазначеного другого поліпептидного ланцюга і зазначений доменMN of the specified second polypeptide chain form an antigen-binding domain capable of specifically binding to the POP epitope; and (p) the specified MI domain. the specified second polypeptide chain and the specified domain
МН зазначеного першого поліпептидного ланцюга утворюють антигензв'язуючий домен, здатний специфічно зв'язуватися з епітопом СО123.MNs of the specified first polypeptide chain form an antigen-binding domain capable of specifically binding to the CO123 epitope.
Згідно із даним винаходом також передбачено характеризуюче неоптимізованою послідовністю СО123 х СОЮЗ біспецифічне моновалентне диатіло, здатне специфічно зв'язуватися з епітопом СО123 і з епітопом СОЗ, причому диатіло містить перший поліпептидний ланцюг і другий поліпептидний ланцюг, ковалентно зв'язані один з одним, причому:According to the present invention, a bispecific monovalent dibody characterized by an unoptimized sequence of СО123 x СОЯЗ is also provided, capable of specifically binding to the epitope of СО123 and to the epitope of SOZ, and the dibody contains the first polypeptide chain and the second polypeptide chain, covalently linked to each other, and:
А. перший поліпептидний ланцюг містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця: і. домен 1, що містить: (1) субдомен (ТА), який містить домен Мі. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися зA. the first polypeptide chain contains, in the direction from the M-end to the C-end: i. domain 1 containing: (1) a subdomain (TA) containing the Mi domain. of a monoclonal antibody capable of binding to
СОЗ (Мі соз) (ЗЕО ІЮО МО:23); і (2) субдомен (18), який містить домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (МНеоїгз) (ЗЕО ІЮ МО:28); причому субдомени 1А і 1В відділені один від одного пептидним лінкером (5ЕО ІЮ МО:29); і. домен 2, причому домен 2 являє собою Е-спіральний домен (ЗЕО І МО:34) або К- спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:35), причому домен 2 відділений від домена 1 пептидним лінкером (ЗЕО ІЮО МО:30); іSOZ (Mi soz) (ZEO IYUO MO:23); and (2) subdomain (18), which contains the MH domain of a monoclonal antibody capable of binding to CO123 (MNeoigz) (ZEO IU MO:28); and subdomains 1A and 1B are separated from each other by a peptide linker (5EO IU MO:29); and. domain 2, and domain 2 is an E-helical domain (ZEO I MO:34) or a K-helical domain (ZEO IYU MO:35), and domain 2 is separated from domain 1 by a peptide linker (ZEO IYUO MO:30); and
В. другий поліпептидний ланцюг містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця: і. домен 1, що містить: (1) субдомен (1А), який містить домен Мі. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися зB. the second polypeptide chain contains, in the direction from the M-end to the C-end: i. domain 1 containing: (1) subdomain (1A) containing the Mi domain. of a monoclonal antibody capable of binding to
СО123 (Мі сої2гз) (ЗЕО ІЮ МО:27); іСО123 (Ми сой2гз) (ZEO IU MO:27); and
Зо (2) субдомен (18), який містить домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНеоз) (ЗЕО ІЮ МО:24); причому субдомени 1А і 1В відділені один від одного пептидним лінкером (5ЕО ІЮ МО:29); і. домен 2, причому домен 2 являє собою К-спіральний домен (ЗЕО І МО:35) або Е- спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:34), причому домен 2 відділений від домена 1 пептидним лінкером (5ЗЕО ІЮ МО:30); і причому домен 2 першого і другого поліпептидних ланцюгів не являють собою обоє Е-спіральних домена або обоє К-спіральних домена; і при цьому: (а) зазначений домен МІ. зазначеного першого поліпептидного ланцюга і зазначений доменZo (2) subdomain (18), which contains the MH domain of a monoclonal antibody capable of binding to SOZ (MNeoz) (ZEO IU MO:24); and subdomains 1A and 1B are separated from each other by a peptide linker (5EO IU MO:29); and. domain 2, and domain 2 is a K-helical domain (ZEO I MO:35) or an E-helical domain (ZEO IU MO:34), and domain 2 is separated from domain 1 by a peptide linker (5ZEO IU MO:30); and domain 2 of the first and second polypeptide chains are not both E-helical domains or both K-helical domains; and at the same time: (a) the specified MI domain. the specified first polypeptide chain and the specified domain
МН зазначеного другого поліпептидного ланцюга утворюють антигензв'язуючий домен, здатний специфічно зв'язуватися з епітопом СОЗ; і (р) зазначений домен МІ. зазначеного другого поліпептидного ланцюга і зазначений доменMN of the specified second polypeptide chain form an antigen-binding domain capable of specifically binding to the POP epitope; and (p) the specified MI domain. the specified second polypeptide chain and the specified domain
МН зазначеного першого поліпептидного ланцюга утворюють антигензв'язуючий домен, здатний специфічно зв'язуватися з епітопом СО123.MNs of the specified first polypeptide chain form an antigen-binding domain capable of specifically binding to the CO123 epitope.
Крім того, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення описаних вище біспецифічних моновалентних диатіл, у якому перший або другий поліпептидний ланцюг додатково містить альбумінзв'язуючий домен (ЗЕО ІЮ МО:36), з'єднаний на С-кінці з доменом 2 або на М-кінці з доменом 1 за допомогою пептидного лінкера (ЗЕО ІЮ МО:31).In addition, according to the present invention, a variant of the implementation of the above-described bispecific monovalent diethyls is provided, in which the first or second polypeptide chain additionally contains an albumin-binding domain (ZEO IU MO:36), connected at the C-end to domain 2 or to M -ends with domain 1 using a peptide linker (ZEO IU MO:31).
Крім того, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення описаних вище біспецифічних моновалентних диатіл, у якому перший або другий поліпептидний ланцюгIn addition, according to the present invention, an embodiment of the bispecific monovalent diethyls described above is provided, in which the first or second polypeptide chain
БО додатково містить домен 3, що містить домен СН2 і СНЗ домена Ес імуноглобуліну Їде (ЗЕО ІЮBO additionally contains domain 3, which contains the CH2 domain and the CH3 domain of Es immunoglobulin Ide (ZEO IU
МО:37), причому домен З з'єднаний на М-кінці з доменом ТА за допомогою пептидного лінкера (ЗЕО ІО МО:33).MO:37), and the C domain is connected at the M-end to the TA domain by means of a peptide linker (ZEO IO MO:33).
Крім того, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення описаних вище біспецифічних моновалентних диатіл, у якому перший або другий поліпептидний ланцюг додатково містить домен 3, що містить домен СН2 і СНЗ домена Ес імуноглобуліну до (ЗЕО ІЮIn addition, according to the present invention, a variant of the implementation of the above-described bispecific monovalent diethyls is provided, in which the first or second polypeptide chain additionally contains domain 3, containing the CH2 domain and the CH3 domain of the Es immunoglobulin to (ZEO IU
МО:37), причому домен З з'єднаний на С-кінці з доменом 2 за допомогою пептидного лінкера (ЗЕО ІО МО:32).MO:37), and domain C is connected at the C-terminus to domain 2 by means of a peptide linker (ZEO IO MO:32).
Крім того, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення будь-якого з описаних вище біспецифічних моновалентних диатіл, у якому домен 2 першого поліпептидного ланцюга являє собою К-спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:35), і домен 2 другого поліпептидного ланцюга являє собою Е-спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:34).In addition, according to the present invention, an embodiment of any of the above-described bispecific monovalent diethyls is provided, in which domain 2 of the first polypeptide chain is a K-helical domain (ZEO IU MO:35), and domain 2 of the second polypeptide chain is E -spiral domain (ZEO IU MO:34).
Крім того, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення будь-якого з описаних вище біспецифічних моновалентних диатіл, у якому домен 2 першого поліпептидного ланцюга являє собою Е-спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:34), і домен 2 другого поліпептидного ланцюга являє собою К-спіральний домен (ЗЕО ІЮ МО:35).In addition, according to the present invention, an embodiment of any of the above-described bispecific monovalent diethyls is provided, in which domain 2 of the first polypeptide chain is an E-helical domain (ZEO IU MO:34), and domain 2 of the second polypeptide chain is K -spiral domain (ZEO IU MO:35).
Крім того, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення біспецифічного моновалентного диатіла, здатного специфічно зв'язуватися з епітопом СО123 і з епітопом СОЗ, причому диатіло містить перший поліпептидний ланцюг і другий поліпептидний ланцюг, ковалентно зв'язані один з одним, причому: зазначене біспецифічне диатіло містить наступне:In addition, according to the present invention, an embodiment of a bispecific monovalent dibody capable of specifically binding to the CO123 epitope and to the POP epitope is provided, and the dibody contains a first polypeptide chain and a second polypeptide chain covalently linked to each other, and: the specified bispecific the body contains the following:
А. перший поліпептидний ланцюг, який характеризується амінокислотною послідовністюA. the first polypeptide chain, which is characterized by an amino acid sequence
ЗЕО ІЮО МО:1; іZEO IYUO MO:1; and
В. другий поліпептидний ланцюг, який характеризується амінокислотною послідовністю 5ЕОB. the second polypeptide chain, which is characterized by the amino acid sequence 5EO
ІО МО:З; причому зазначений перший і зазначений другий поліпептидні ланцюги ковалентно зв'язані один з одним дисульфідним зв'язком.IO MO:Z; and the specified first and specified second polypeptide chains are covalently linked to each other by a disulfide bond.
Диатіла згідно із даним винаходом проявляють несподівано посилені функціональні активності, як додатково описано нижче.Diabodies of the present invention exhibit unexpectedly enhanced functional activities, as further described below.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні перехресно реагувати з білками СО123 і СОЗ як людини, і так примата, переважно білками СО123 і СОЗ яванської макаки.Diabodies according to the present invention are preferably able to cross-react with proteins CO123 and POPs, both human and primate, preferably proteins CO123 and POPs of the Javan macaque.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні піддавати деплеції в міго клітинному аналізі плазмацитоїдні дендритні клітини (рос) з культури первинних РВМС зі значенням 1ІС50, що становить приблизно 1 нг/мл або менше, приблизно 0,8 нг/мл або менше, приблизно 0,6 нг/мл або менше, приблизно 0,4 нг/мл або менше, приблизно 0,2 нг/мл або менше, приблизно 0,1 нг/мл або менше, приблизно 0,05 нг/мл або менше, приблизно 0,04 нг/мл або менше, приблизно 0,03 нг/мл або менше, приблизно 0,02 нг/мл або менше або приблизно 0,01 нг/мл або менше. Значення ІС50 переважно становить приблизно 0,01 нг/мл або менше. В описаному вище аналізі культура первинних РВМС може походити від яванської макаки, у цьому випадку зазначена деплеція являє собою деплецію плазмацитоїдних дендритних клітин яванської макаки (рос). Необов'язково диатіла згідно із даним винаходом можуть бути здатні піддавати деплеції плазмацитоїдні дендритні клітини (рос) з первинної культури РВМС, як описано вище, причому аналіз проводять згідно або відповідно до протоколу прикладу 14, як описано в даному документі, або шляхом модифікації такого аналізу, що буде зрозуміло фахівцям у даній області техніки, або іншими способами, відомими фахівцям у даній області техніки.Diabodies according to the present invention are preferably capable of depleting plasmacytoid dendritic cells (ros) from the culture of primary PBMCs with an IC50 value of about 1 ng/ml or less, about 0.8 ng/ml or less, about 0, 6 ng/mL or less, about 0.4 ng/mL or less, about 0.2 ng/mL or less, about 0.1 ng/mL or less, about 0.05 ng/mL or less, about 0, 04 ng/mL or less, about 0.03 ng/mL or less, about 0.02 ng/mL or less, or about 0.01 ng/mL or less. The IC50 value is preferably about 0.01 ng/ml or less. In the analysis described above, the culture of primary PBMCs can be derived from the Javan macaque, in which case the specified depletion represents the depletion of plasmacytoid dendritic cells of the Javan macaque (ros). Optionally, the cells of the present invention may be capable of depleting plasmacytoid dendritic cells (PDCs) from a primary PBMC culture, as described above, and the assay is performed according to either the protocol of Example 14, as described herein, or a modification of such assay , which will be understood by those skilled in the art, or by other methods known to those skilled in the art.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно проявляють цитотоксичність в іп міго аналізіDiabodies according to the present invention preferentially exhibit cytotoxicity in an IP migo assay
Казиті-3 зі значенням ЕС50О, що становить приблизно 0,05 нг/мл або менше. Значення ЕС50 переважно становить приблизно 0,04 нг/мл або менше, приблизно 0,03 нг/мл або менше, приблизно 0,02 нг/мл або менше або приблизно 0,01 нг/мл або менше. Необов'язково диатіла згідно із даним винаходом можуть проявляти цитотоксичність, як описано вище, причому аналіз проводять згідно або відповідно до протоколу прикладу 3, як описано в даному документі, або шляхом модифікації такого аналізу, що буде зрозуміло фахівцям у даній області техніки, або іншими способами, відомими фахівцям у даній області техніки.Casiti-3 with an EC50O value of approximately 0.05 ng/ml or less. The EC50 value is preferably about 0.04 ng/ml or less, about 0.03 ng/ml or less, about 0.02 ng/ml or less, or about 0.01 ng/ml or less. Optionally, diethyls according to the present invention may exhibit cytotoxicity as described above, and the assay is performed according to or in accordance with the protocol of Example 3 as described herein, or by modification of such assay as will be understood by those skilled in the art, or by others methods known to specialists in this field of technology.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно проявляють цитотоксичність в іп міго аналізіDiabodies according to the present invention preferentially exhibit cytotoxicity in an IP migo assay
Мо!т-13 зі значенням ЕС5О, що становить приблизно 5 нг/мл або менше. Значення ЕС5О0 переважно становить приблизно З нг/мл або менше, приблизно 2 нг/мл або менше, приблизно 1 нг/мл або менше, приблизно 0,75 нг/мл або менше або приблизно 0,2 нг/мл або менше.Mo!t-13 with an EC50 value of about 5 ng/ml or less. The EC500 value is preferably about 3 ng/ml or less, about 2 ng/ml or less, about 1 ng/ml or less, about 0.75 ng/ml or less, or about 0.2 ng/ml or less.
Необов'язково диатіла згідно із даним винаходом можуть проявляти цитотоксичність, як описано вище, причому аналіз проводять згідно або відповідно до протоколу прикладу 3, як описано в даному документі, або шляхом модифікації такого аналізу, що буде зрозуміло фахівцям у даній області техніки, або іншими способами, відомими фахівцям у даній області техніки.Optionally, diethyls according to the present invention may exhibit cytotoxicity as described above, and the assay is performed according to or in accordance with the protocol of Example 3 as described herein, or by modification of such assay as will be understood by those skilled in the art, or by others methods known to specialists in this field of technology.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата МОЇ М-13 у миші. Диатіла згідно із даним винаходом переважно можуть бути здатні інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата МОЇ М-13 у миші в концентрації, що становить щонайменше приблизно 20 мкг/кг, щонайменше приблизно 4 мкг/кг, щонайменше приблизно 0,8 мкг/кг, щонайменше приблизно 0,6 мкг/кг або щонайменше приблизно 0,4 мкг/кг.Diatila according to the present invention is mainly capable of inhibiting the growth of tumor xenograft MY M-13 in mice. Diabodies according to the present invention can preferably be capable of inhibiting the growth of a tumor xenograft MY M-13 in a mouse at a concentration of at least about 20 μg/kg, at least about 4 μg/kg, at least about 0.8 μg/kg, at least about 0 .6 μg/kg or at least about 0.4 μg/kg.
Переважні антитіла згідно із даним винаходом будуть інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата МОЇ М-13 у миші щонайменше на 25595, але можливо щонайменше приблизно на 40 95 або більше, щонайменше приблизно на 50 95 або більше, щонайменше 60 приблизно на 60 95 або більше, щонайменше приблизно на 70 95 або більше, щонайменше приблизно на 8095 або більше, щонайменше приблизно на 9095 або більше або навіть повністю інгібувати ріст пухлини МОЇ М-13 через деякий період часу або викликаючи регресію або зникнення пухлини. Зазначене інгібування спостерігається щонайменше для лінії мишейPreferred antibodies of the present invention will inhibit the growth of a MY M-13 tumor xenograft in a mouse by at least 25595, but possibly by at least about 40 95 or more, at least about 50 95 or more, at least 60 by about 60 95 or more, at least about by 70 95 or more, at least about 8095 or more, at least about 9095 or more, or even completely inhibit the growth of MY M-13 tumor over a period of time or causing regression or disappearance of the tumor. This inhibition is observed at least for a line of mice
МС. Необов'язково диатіла згідно із даним винаходом можуть бути здатні інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата МОЇ М-13 у миші описаним вище чином згідно або відповідно до протоколу прикладу б, як описано в даному документі, або шляхом модифікації такого аналізу, що буде зрозуміло фахівцям у даній області техніки, або іншими способами, відомими фахівцям у даній області техніки.MS. Optionally, diethyls according to the present invention may be capable of inhibiting the growth of a MOI M-13 tumor xenograft in a mouse as described above according to or in accordance with the protocol of example b as described herein, or by modifying such an assay as will be understood by those skilled in the art technical field, or by other methods known to specialists in this technical field.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата К54-11 у миші. Диатіла згідно із даним винаходом переважно можуть бути здатні інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата 2554-11 у миші в концентрації, що становить щонайменше приблизно 0,5 мг/кг, щонайменше приблизно 0,2 мг/кг, щонайменше приблизно 0,1 мг/кг, щонайменше приблизно 0,02 мг/кг або щонайменше приблизно 0,004 мг/кг.Diatila according to the present invention are mainly capable of inhibiting the growth of K54-11 tumor xenograft in mice. Diabodies of the present invention may preferably be capable of inhibiting the growth of tumor xenograft 2554-11 in a mouse at a concentration of at least about 0.5 mg/kg, at least about 0.2 mg/kg, at least about 0.1 mg/kg, at least about 0.02 mg/kg or at least about 0.004 mg/kg.
Переважні антитіла згідно із даним винаходом будуть інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата К54-11 у миші щонайменше приблизно на 25595, але можливо щонайменше приблизно на 40 95, щонайменше приблизно на 50 95, щонайменше приблизно на 6096, щонайменше приблизно на 7095, щонайменше приблизно на 8095, щонайменше приблизно на 90 95 або навіть повністю інгібувати ріст пухлини 54-11 через деякий період часу або викликаючи регресію або зникнення пухлини. Зазначене інгібування спостерігається щонайменше для лінії мишей МБО. Необов'язково диатіла згідно із даним винаходом можуть бути здатні інгібувати ріст пухлинного ксенотрансплантата К54-11 у миші описаним вище чином згідно або відповідно до протоколу прикладу б, як описано в даному документі, або шляхом модифікації такого аналізу, що буде зрозуміло фахівцям у даній області техніки, або іншими способами, відомими фахівцям у даній області техніки.Preferred antibodies of the present invention will inhibit the growth of a K54-11 tumor xenograft in a mouse by at least about 25595, but possibly at least about 40 95, at least about 50 95, at least about 6096, at least about 7095, at least about 8095, at least about 90 95 or even completely inhibit the growth of the tumor 54-11 after a period of time or causing regression or disappearance of the tumor. This inhibition is observed at least for the MBO mouse line. Optionally, diethyls according to the present invention may be capable of inhibiting the growth of a K54-11 tumor xenograft in a mouse as described above according to or in accordance with the protocol of example b as described herein, or by modifying such an assay as will be understood by those skilled in the art techniques, or by other methods known to specialists in this field of technology.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні піддавати деплеції лейкозні бластні клітини іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ. Диатіла згідно із даним винаходом переважно можуть бути здатні піддавати деплеції лейкозні бластні клітини іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ при концентраціях, що становлять щонайменше приблизно 0,01 нг/мл, щонайменше приблизно 0,02 нг/мл, щонайменше приблизно 0,04 нг/мл,Diabodies according to the present invention are mainly capable of depleting leukemic blast cells and migo in the primary culture of AML bone marrow cells. Diabodies of the present invention may preferably be capable of depleting leukemic myeloid blast cells in a primary culture of AML bone marrow cells at concentrations of at least about 0.01 ng/ml, at least about 0.02 ng/ml, at least about 0, 04 ng/ml,
Зо щонайменше приблизно 0,06 нг/мл, щонайменше приблизно 0,08 нг/мл або щонайменше приблизно 0,1 нг/мл. Диатіла згідно із даним винаходом переважно можуть бути здатні піддавати деплеції лейкозні бластні клітини іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозкуOf at least about 0.06 ng/ml, at least about 0.08 ng/ml, or at least about 0.1 ng/ml. Diabodies according to the present invention may preferably be able to deplete leukemic and myoblast cells in the primary culture of bone marrow cells
ГМЛ менше ніж на 20 95 від загальної популяції первинних лейкозних бластних клітин при концентраціях диатіла, що складають щонайменше приблизно 0,01 нг/мл, щонайменше приблизно 0,02 нг/мл, щонайменше приблизно 0,04 нг/мл, щонайменше приблизно 0,06 нг/мл, щонайменше приблизно 0,08 нг/мл або щонайменше приблизно 0,1 нг/мл, необов'язково після інкубації первинної культури з диатілом протягом приблизно 120 годин. Лейкозні бластні клітини переважно піддають деплеції іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ менше ніж на 2095 від загальної популяції первинних лейкозних бластних клітин при концентраціях диатіла, що становить приблизно 0,01 нг/мл або 0,1 нг/мл, після інкубації первинної культури з диатілом протягом приблизно 120 годин.AML is less than 20 95 of the total population of primary leukemic blast cells at diethyl concentrations of at least about 0.01 ng/ml, at least about 0.02 ng/ml, at least about 0.04 ng/ml, at least about 0, 06 ng/ml, at least about 0.08 ng/ml, or at least about 0.1 ng/ml, optionally after incubation of the primary culture with diethyl for about 120 hours. Leukemic blast cells are preferentially depleted of ip migo in primary culture of AML bone marrow cells to less than 2095 of the total population of primary leukemic blast cells at diethyl concentrations of approximately 0.01 ng/ml or 0.1 ng/ml, after incubation of primary cultures with diatyl for about 120 hours.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні індукувати експансію Т-клітинної популяції іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ. Така експансія переважно може становити приблизно 70 95 або більше від максимальної Т-клітинної популяції, яка може бути піддана експансії в аналізі. Диатіла згідно із даним винаходом переважно можуть бути здатні індукувати експансію Т-клітинної популяції іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ приблизно на 70 95 або більше від максимальної Т-клітинної популяції, яка може бути піддана експансії в аналізі при концентраціях диатіла, що складають щонайменше приблизно 0,01 нг/мл, щонайменше приблизно 0,02 нг/мл, щонайменше приблизно 0,04 нг/мл, щонайменше приблизно 0,06 нг/мл, щонайменше приблизно 0,08 нг/мл або щонайменше приблизно 0,1 нг/мл, необов'язково після інкубації первинної культури з диатілом протягом приблизно 120 годин. Т-клітинна популяція переважно збільшується іп міго у первинній культур клітин кісткового мозку ГМЛ приблизно на 7095 або більше від максимальної Т-клітинної популяції, яка може бути піддана експансії в аналізі при концентраціях диатіла, що становить приблизно 0,01 нг/мл або приблизно 0,1 нг/мл після інкубації первинної культури з диатілом протягом приблизно 120 годин.Diabodies according to the present invention are preferably capable of inducing the expansion of the T-cell population in the primary culture of AML bone marrow cells. Such expansion can preferably be about 70 95 or more of the maximum T-cell population that can be expanded in the assay. Diabodies according to the present invention preferably can be capable of inducing expansion of the T-cell population in a primary culture of AML bone marrow cells by about 70 95 or more of the maximal T-cell population that can be expanded in the assay at diabodies concentrations of at least about 0.01 ng/mL, at least about 0.02 ng/mL, at least about 0.04 ng/mL, at least about 0.06 ng/mL, at least about 0.08 ng/mL, or at least about 0.1 ng/ml, optionally after incubating the primary culture with diatyl for approximately 120 hours. The T-cell population preferentially expands in primary cultures of AML bone marrow cells by about 7095 or more of the maximal T-cell population that can be expanded in the assay at diethyl concentrations of about 0.01 ng/ml or about 0 ,1 ng/ml after incubation of the primary culture with diatyl for approximately 120 hours.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні індукувати активацію Т-клітинної популяції іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ. Така активація може відбуватися при концентраціях диатіла, що складають щонайменше приблизно 0,01 нг/мл, бо щонайменше приблизно 0,02 нг/мл, щонайменше приблизно 0,04 нг/мл, щонайменше приблизно 0,06 нг/мл, щонайменше приблизно 0,08 нг/мл або щонайменше приблизно 0,1 нг/мл, необов'язково після інкубації первинної культури з диатілом протягом приблизно 72 годин. Таку активацію можна виміряти за експресією маркера Т-клітинної активації, такого як СО25.Diabodies according to the present invention are preferably capable of inducing the activation of the T-cell population of migo in the primary culture of AML bone marrow cells. Such activation can occur at diethyl concentrations of at least about 0.01 ng/ml, for at least about 0.02 ng/ml, at least about 0.04 ng/ml, at least about 0.06 ng/ml, at least about 0 .08 ng/ml or at least about 0.1 ng/ml, optionally after incubating the primary culture with diethyl for about 72 hours. Such activation can be measured by the expression of a marker of T-cell activation, such as CO25.
Активація Т-клітинна популяція іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ, вимірювана за експресією СО25, переважно відбувається при концентраціях диатіла, що становить приблизно 0,01 нг/мл або приблизно 0,1 нг/мл, після інкубації первинної культури з диатілом протягом приблизно 72 годин.Activation of the ip migo T-cell population in a primary culture of AML bone marrow cells, as measured by expression of CO25, preferentially occurs at diethyl concentrations of about 0.01 ng/ml or about 0.1 ng/ml after incubation of the primary culture with diethyl within about 72 hours.
Диатіла згідно із даним винаходом переважно здатні піддавати деплеції лейкозні бластні клітини іп міїго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ менше ніж на 20 95 від загальної популяції первинних лейкозних бластних клітин і в той же час індукувати експансію Т-клітинної популяції іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ приблизно на 70 95 або більше від максимальної Т-клітинної популяції, яка може бути піддана експансії в аналізі, при концентраціях диатіла, що складають щонайменше приблизно 0,01 нг/мл, щонайменше приблизно 0,02 нг/мл, щонайменше приблизно 0,04 нг/мл, щонайменше приблизно 0,06 нг/мл, щонайменше приблизно 0,08 нг/мл або щонайменше приблизно 0,1 нг/мл, необов'язково після інкубації первинної культури з диатілом протягом приблизно 120 годин. Концентрації диатіла переважно становлять приблизно 0,01 нг/мл або приблизно 0,1 нг/мл, і первинну культуру інкубують з диатілом протягом приблизно 120 годин.Diatila according to the present invention is preferably capable of depleting leukemic blast cells of ip migo in the primary culture of AML bone marrow cells to less than 20 95 of the total population of primary leukemic blast cells and at the same time inducing the expansion of the T cell population of ip migo in the primary cell culture bone marrow AML by about 70 95 or more of the maximum T cell population that can be expanded in the assay at diethyl concentrations of at least about 0.01 ng/ml, at least about 0.02 ng/ml, at least about 0.04 ng/ml, at least about 0.06 ng/ml, at least about 0.08 ng/ml, or at least about 0.1 ng/ml, optionally after incubating the primary culture with diethyl for about 120 hours. Concentrations of diethyl are preferably about 0.01 ng/ml or about 0.1 ng/ml, and the primary culture is incubated with diethyl for about 120 hours.
Диатіла згідно із даним винаходом можуть бути здатні піддавати деплеції лейкозні бластні клітини іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ і/або індукувати експансію Т- клітинної популяції іп міго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ і/або індукувати активацію Т-клітинної популяції іп мійго у первинній культурі клітин кісткового мозку ГМЛ описаним вище чином згідно або відповідно до протоколу прикладу 8, як описано в даному документі, або шляхом модифікації такого аналізу, що буде зрозуміло фахівцям у даній області техніки, або іншими способами, відомими фахівцям у даній області техніки.Diabodies according to the present invention may be capable of depleting leukemic blast cells of glioma in a primary culture of AML bone marrow cells and/or inducing expansion of a glioma T-cell population in a primary culture of AML bone marrow cells and/or inducing activation of a glioma T-cell population myo in a primary culture of AML bone marrow cells as described above according to or in accordance with the protocol of Example 8 as described herein, or by modifying such an assay as will be understood by those skilled in the art, or by other methods known to those skilled in the art .
Щоб уникнути невірного тлумачення, диатіла згідно із даним винаходом можуть проявляти одну, дві, три, більше трьох або всі з функціональних ознак, описаних у даному документі.To avoid misinterpretation, diatoms of the present invention may exhibit one, two, three, more than three, or all of the functional features described herein.
Таким чином, диатіла згідно із даним винаходом можуть проявляти будь-яку комбінацію функціональних ознак, описаних у даному документі.Thus, dibodies of the present invention may exhibit any combination of the functional features described herein.
Диатіла згідно із даним винаходом є придатними для застосування в якості фармацевтичного засобу. Диатіла переважно є придатними для застосування в лікуванні захворювання або стану, пов'язаного з експресією СО123 або, що характеризується експресієюDiatila according to the present invention are suitable for use as a pharmaceutical agent. Diatila is preferably suitable for use in the treatment of a disease or condition associated with the expression of CO123 or characterized by the expression
СО123. Даний винахід також відноситься до застосування диатіла згідно із даним винаходом у виробництві фармацевтичної композиції, переважно для лікування захворювання або стану, пов'язаного з експресією СО123 або, що характеризується експресією СО123, як додатково визначене в даному документі.CO123. The present invention also relates to the use of diethyl according to the present invention in the manufacture of a pharmaceutical composition, preferably for the treatment of a disease or condition associated with the expression of CO123 or characterized by the expression of CO123, as further defined herein.
Захворювання або стан, пов'язаний з експресією СО123 або, що характеризується експресією СО123, може являти собою злоякісну пухлину. Наприклад, злоякісна пухлина може бути обрана із групи, що складається з наступного: гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ), хронічний мієлогенний лейкоз (ХМЛ), включаючи в себе бластний криз ХМЛ і онкоген Абельсона, пов'язаний із ХМЛ (транслокація Всег-АВІ), мієлодиспластичний синдром (МДС), гострий В- лімфобластний лейкоз (В-ГЛЛ), хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), включаючи в себе ХЛЛ із синдромом Ріхтера або трансформацією Ріхтера, волохатоклітинний лейкоз (ВКЛ), новоутворення із бластних плазмацитоїдних дендритних клітин (УБПДК), нехождкінські лімфоми (НХЛ), включаючи в себе мантійноклітинну лімфому (МКЛ) і дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому (МЛЛ), лімфома Ходжкіна, системний мастоцитоз і лімфома Беркіта.A disease or condition associated with the expression of CO123 or characterized by the expression of CO123 may be a malignant tumor. For example, the malignancy may be selected from the group consisting of acute myeloid leukemia (AML), chronic myelogenous leukemia (CML), including CML blast crisis, and CML-associated Abelson oncogene (Vseg-AVI translocation). ) ), non-Hodgkin's lymphomas (NHL), including mantle cell lymphoma (MCL) and small cell lymphocytic lymphoma (SLL), Hodgkin's lymphoma, systemic mastocytosis, and Burkitt's lymphoma.
Захворювання або стан, пов'язаний з експресією СО123 або, що характеризується експресією СО123, може являти собою запальний стан. Наприклад, запальний стан може бути обраний із групи, що складається з наступного: системна червона вовчанка (СЧВ), алергія, бронхіальна астма та ревматоїдний артрит.A disease or condition associated with the expression of CO123 or characterized by the expression of CO123 may be an inflammatory condition. For example, the inflammatory condition may be selected from the group consisting of systemic lupus erythematosus (SLE), allergy, bronchial asthma, and rheumatoid arthritis.
Крім того, згідно із даним винаходом передбачена фармацевтична композиція, що містить будь-яке з описаних вище диатіл і фізіологічно прийнятний носій.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition containing any of the diethyls described above and a physiologically acceptable carrier.
Крім того, згідно із даним винаходом передбачено застосування описаної вище фармацевтичної композиції в лікуванні захворювання або стану, пов'язаного з експресієюIn addition, the present invention provides for the use of the pharmaceutical composition described above in the treatment of a disease or condition associated with the expression
С0123 або, що характеризується експресією СО123.C0123 or characterized by the expression of СО123.
Зокрема, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення такого застосування, у якому захворювання або стан, пов'язаний з експресією СО123 або, що характеризується експресією СО123, являє собою злоякісну пухлину (особливо злоякісну пухлину, обрану із групи, що складається з наступного: гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ), хронічний мієлогенний лейкоз 60 (ХМЛ), включаючи в себе бластний криз ХМЛ і онкоген Абельсона, пов'язаний із ХМЛIn particular, according to the present invention, an embodiment of such application is provided, in which the disease or condition associated with the expression of CO123 or characterized by the expression of CO123 is a malignant tumor (especially a malignant tumor selected from the group consisting of the following: acute myeloid leukemia (CML), chronic myelogenous leukemia 60 (CML), including CML blast crisis and CML-associated Abelson oncogene
(транслокація Всег-АВІ), мієлодиспластичний синдром (МДС), гострий В-лімфобластний лейкоз (В-ГЛЛ), хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), включаючи в себе ХЛЛ із синдромом Ріхтера або трансформацією Ріхтера, волохатоклітинний лейкоз (ВКЛ), новоутворення із бластних плазмацитоїдних дендритних клітин (УБПДК), нехождкінські лімфоми (НХЛ), включаючи в себе мантійноклітинну лімфому (МКЛ) і дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому (МЛЛ), лімфома(Vseg-AVI translocation), myelodysplastic syndrome (MDS), acute B-lymphoblastic leukemia (B-CLL), chronic lymphocytic leukemia (CLL), including CLL with Richter's syndrome or Richter's transformation, hairy cell leukemia (HCL), neoplasms with blast plasmacytoid dendritic cells (BPDC), non-Hodgkin lymphomas (NHL), including mantle cell lymphoma (MCL) and small cell lymphocytic lymphoma (SLL), lymphoma
Ходжкіна, системний мастоцитоз і лімфома Беркіта).Hodgkin's disease, systemic mastocytosis and Burkitt's lymphoma).
Зокрема, згідно із даним винаходом передбачено варіант здійснення такого застосування, у якому захворювання або стан, пов'язаний з експресією СО123 або, що характеризується експресією СО123, являє собою запальний стан (особливо запальний стан, обраний із групи, що складається з наступного: системна червона вовчанка (СЧВ), алергія, бронхіальна астма та ревматоїдний артрит).In particular, according to the present invention, an embodiment of such an application is provided, in which the disease or condition associated with the expression of CO123 or characterized by the expression of CO123 is an inflammatory condition (especially an inflammatory condition selected from the group consisting of the following: systemic lupus erythematosus (SLE), allergy, bronchial asthma and rheumatoid arthritis).
Такі терміни, як "приблизно" слід розуміти як середнє в межах 10 95, більш переважно в межах 5 95 від зазначеного значення, якщо контекстом не передбачено інше.Terms such as "approximately" should be understood as an average within 10 95 , more preferably within 5 95 , of the stated value, unless the context dictates otherwise.
Короткий опис графічних матеріалівBrief description of graphic materials
На фігурі 1 показано, що СО123, як відомо, експресується на лейкозних стовбурових клітинах.Figure 1 shows that CO123 is known to be expressed on leukemic stem cells.
На фігурі 2 проілюстровані структури першого і другого поліпептидних ланцюгів двохланцюгового СО123 х СОЗ біспецифічного моновалентного диатіла згідно із даним винаходом.Figure 2 illustrates the structures of the first and second polypeptide chains of the two-chain CO123 x SOZ bispecific monovalent diethyl according to the present invention.
На фігурах ЗА ї ЗВ проілюстровані структури двох версій першого, другого і третього поліпептидних ланцюгів трьеохланцюгового СЮО123 х СОЗ біспецифічного моновалентного Ес - диатіла згідно із даним винаходом (версія 1, фігура ЗА; версія 2, фігура ЗВ).Figures 3A and 3B illustrate the structures of two versions of the first, second and third polypeptide chains of three-chain ХХО123 x SOZ bispecific monovalent Es-diatyl according to the present invention (version 1, figure 3A; version 2, figure 3B).
На фігурі 4 (панелі А-Е) показана здатність різних СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл опосередковувати Т-клітинний переспрямований цитоліз клітин - мішеней, що проявляють мінливу кількість СО123. На фігурі представлені криві залежності від дози, які вказують на те, біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ ("САКТ-Figure 4 (panels A-E) shows the ability of different CO123 x POP bispecific diethyls to mediate T-cell-redirected cytolysis of target cells exhibiting varying amounts of CO123. The figure shows dose dependence curves, which indicate that a bispecific diabody characterized by an optimized sequence of СО123 x POPs ("SАКТ-
А"), що містить альбумінзв'язуючий домен (0ОАКТ-А з АВО "м/АВО") виявило більшу цитотоксичність, ніж контрольне біспецифічне диатіло (контрольне САКТ) або, біспецифічне диатіло, що характеризується неоптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ ("САКТ-В") уA"), containing the albumin-binding domain (OAKT-A with ABO "m/ABO") showed greater cytotoxicity than the control bispecific dibody (control SACT) or the bispecific dibody characterized by an unoptimized sequence of СО123 x POP ("SACT- B") in
Зо численних типах клітин-мішеней: К54-11 (панель А); ТЕ-1 (панель В); Моїт-13 (панель С);Among the numerous types of target cells: K54-11 (panel A); TE-1 (panel B); Moit-13 (panel C);
Казиті-3 (панель 0); ї ТНР-1 (панель Е) у співвідношенні Е:Т (ефектор: мішень), що становить 107.Kaziti-3 (panel 0); of TNR-1 (panel E) in the E:T (effector:target) ratio of 107.
На фігурі 5 (панелі А-О) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СО3 біспецифічного диатіла (ОАКТ-А), що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла, що містить альбумінзв'язуючий домен (ФАКТ-А з АВО "м/АВО"), що і характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла, що містить домен Ес імуноглобуліну Ії (ОАВТ-А з Ес "м/Бс"), опосередковувати Т-клітинну активацію в процесі перенаправленого цитолізу клітин-мішеней. На фігурі представлені криві залежності від дози, що показують цитотоксичність, опосередковану ОАКТ-А, САНТ-А м/АВО ії ВАКТ-А м/Ес у клітинах Казиті-3 (панель А) ї ТНР-1 (панель В) і очищених СО8 Т-клітинах при співвідношенні ЕТ (ефекторна клітина: клітина - мішень), що становить 10:1 (18 год. інкубація). На панелях С і О показані криві залежності від дози Т-клітинної активації з використанням маркера СО25 на СО8 Т-клітинах у присутності (панель С) і при відсутності (панель С) клітин - мішеней.Figure 5 (panels A-O) shows the ability characterized by the optimized sequence of CO123 x CO3 bispecific diethyl (OACT-A), characterized by the optimized sequence of CO123 x COZ bispecific diethyl containing the albumin-binding domain (FACT-A with ABO " m/ABO"), which is characterized by an optimized sequence of СО123 x СОЗ of a bispecific diethyl containing the Es domain of immunoglobulin II (ОАВТ-А with Es "m/Bs"), to mediate T-cell activation in the process of redirected cytolysis of target cells. The figure shows dose-response curves showing cytotoxicity mediated by OAKT-A, SANT-A m/ABO and VACT-A m/Es in Kazyti-3 (panel A) and TNR-1 (panel B) cells and purified CO8 T cells at an ET ratio (effector cell: target cell) of 10:1 (18 h incubation). Panels C and O show dose-dependent curves of T-cell activation using the CO25 marker on CO8 T-cells in the presence (panel C) and in the absence (panel C) of target cells.
На фігурі 6 (панелі А-В) показані вмісти гранзиму В і перфорину в СО4 і СО8 Т-клітинах після обробки за допомогою, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (ОАКТ-А) (панель А) або контрольного біспецифічного диатіла (контрольного САКТ) (панель В) у присутності клітин-мішеней Казиті-3 і дрімаючих Т-клітин у співвідношенні Е:Т, що становить 10:1.Figure 6 (panels A-B) shows the content of granzyme B and perforin in CO4 and CO8 T-cells after treatment with an optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyl (OAKT-A) (panel A) or control bispecific diethyl ( of control SACT) (panel B) in the presence of Kazity-3 target cells and dormant T cells at an E:T ratio of 10:1.
На фігурі 7 (панелі А-В) показана іп мімо протипухлинна активність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3 біспецифічного диатіла (ЮАКТ-А) при рівнях дозування в нг/кг. Клітини МОЇ М-13 (проміжний рівень експресії СО123) змішували з Т- клітинами і імплантували підшкірно (ТЕ 1:11) мишам М5О. Внутрішньовенне лікування здійснювали один раз на день протягом 8 днів (00х8), починаючи від дня імплантації. Різні концентрації ОАКТ-А порівнювали з контрольним біспецифічним диатілом (контрольним САКТ).Figure 7 (panels A-B) shows the antitumor activity characterized by the optimized sequence of CO123 x COZ3 bispecific diethyl (YACT-A) at dosage levels in ng/kg. MOI M-13 cells (intermediate level of CO123 expression) were mixed with T-cells and implanted subcutaneously (TE 1:11) into M5O mice. Intravenous treatment was carried out once a day for 8 days (00x8), starting from the day of implantation. Different concentrations of OAKT-A were compared with the control bispecific diatyl (control SACT).
На панелі А показані клітини Мої!т-13 окремо або з Т-клітинами, і ефект різних доз ОАКТ-А на об'єм пухлини, навіть у часові точки за межами 30 днів. На панелі В показаний ефект збільшуючих доз ЮОАКТ-А на об'єм пухлини, спостережуваний у мишей МО, що одержали клітини МОГ М-13 і Т-клітини (ТЕ 1:1) протягом періоду часу, що становить 0-18 днів.Panel A shows Moi!t-13 cells alone or with T cells, and the effect of different doses of OACT-A on tumor volume, even at time points beyond 30 days. Panel B shows the effect of increasing doses of UOACT-A on tumor volume observed in MO mice receiving MOG M-13 cells and T cells (TE 1:1) over a time period of 0-18 days.
На фігурі 8 показана іп мімо протипухлинна активність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (ФАКТ-А) на клітини К54-11 (ОЛЛ із ознаками моноцитів). Клітини змішували з Т-клітинами і імплантували підшкірно (ТЕ 1:1) мишамFigure 8 shows the antitumor activity characterized by the optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyl (FACT-A) on K54-11 cells (ALL with monocyte features). The cells were mixed with T-cells and implanted subcutaneously (TE 1:1) into mice
МО. Внутрішньовенне лікування здійснювали один раз на день протягом 4 днів (0Ох4), починаючи від дня імплантації. Різні концентрації ЮАКТ-А порівнювали з контрольним біспецифічним диатілом (контрольне САКТ).Mo. Intravenous treatment was carried out once a day for 4 days (0Ох4), starting from the day of implantation. Different concentrations of UACT-A were compared with the control bispecific diethyl (control SACT).
На фігурі 9 (панелі А-В) показані СО123.-- бластні клітини в мононуклеарах кісткового мозку (ВМ ММС) ї мононуклеарах периферичної крові (РВМС) від пацієнта 1 з ГМЛ (панель А) у порівнянні із клітинною лінією ГМЛ Казиті-3 (панель В).Figure 9 (panels A-B) shows CO123 blast cells in bone marrow mononuclear cells (BMMCs) and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from patient 1 with AML (panel A) in comparison with the Kaziti-3 AML cell line ( panel B).
На фігурі 10 (панелі А-С) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (ФАКТ-А) опосередковувати скорочення бластних клітин при первинному ГМЛ через 120 год. (панель А), керувати експансією Т-клітинної популяції при первинному ГМЛ через 120 год. (панель В) і індукувати Т-клітинну активацію приFigure 10 (panels A-C) shows the ability characterized by the optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyl (FACT-A) to mediate the reduction of blast cells in primary AML after 120 h. (panel A), to control the expansion of the T-cell population in primary AML after 120 h. (panel B) and induce T-cell activation at
ГМЛ через 48 год. і 72 год. (панель С).GML after 48 hours. and 72 hours (panel C).
На фігурі 11 (Панелі А-Н) показана ідентифікація популяції СО123-4 бластних клітин у первинному зразку РВМО ОЛЛ. На панелях А і Е показане пряме і бічне світлорозсіювання популяції нормальних РВМС, що вводиться, (панель А) і РВМС ОЛЛ (панель Е). На панелях В іFigure 11 (Panels A-H) shows the identification of the CO123-4 population of blast cells in the primary sample of RVMO ALL. Panels A and E show the forward and lateral light scatter of a population of injected normal PBMCs (Panel A) and PBMC ALL (Panel E). In panels B and
Е показана ідентифікація популяції лімфоцитів в якості, головним чином, В-клітин (панель В) і лейкозних бластних клітин (панель Б). На панелях С і б показана ідентифікація популяції лімфоцитів, які Є СО123ж. На панелях О і Н показана ідентифікація СО19- клітин Її СО123- клітин.E shows the identification of the lymphocyte population as mainly B cells (panel B) and leukemic blast cells (panel B). Panels C and b show the identification of the population of lymphocytes that are CO123g. Panels O and H show the identification of СО19 cells and Her СО123 cells.
На фігурі 12 (панелі А-В) показана ідентифікація СО4 і СО8 популяцій Т-клітин у первинному зразку РВМСО ОЛЛ. На панелі А показане пряме і бічне світлорозсіювання популяції РВМО ОЛЛ, що вводиться. На панелі В показані СО4 або СО8 популяції Т-клітин, які присутні в зразках.Figure 12 (panels A-B) shows the identification of СО4 and СО8 populations of T cells in the primary sample of RVMSO ALL. Panel A shows forward and lateral light scattering of the injected RVMO ALL population. Panel B shows the CO4 or CO8 T cell populations present in the samples.
Кількості вказують, що СО4 Т-клітини представляють приблизно 0,5 95 від загальної кількості клітин, і СО8 Т-клітини представляють приблизно 0,495 від загальної кількості клітин, які присутні у зразку РВМО ОЛЛ.Quantities indicate that CO4 T cells represent approximately 0.5 95 of the total number of cells, and CO8 T cells represent approximately 0.495 of the total number of cells present in the PBMO ALL sample.
На фігурі 13 (панелі А-Н) показана здатність, біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) опосередковувати деплецію бластнихFigure 13 (panels A-H) shows the ability of a bispecific diabody characterized by an optimized sequence of CO123 x POP (OAKT-A) to mediate blast cell depletion
Зо клітин при ОЛЛ за допомогою аутологічних СТІ. (цитотоксичні Т-лімфоцитів). На панелях А і Е показане пряме і бічне світлорозсіювання популяції нормальних РВМС, що вводиться, (панельFrom cells in ALL with the help of autologous STIs. (cytotoxic T-lymphocytes). Panels A and E show forward and side light scattering of the population of normal PBMCs injected (panel
А) і РВМСО ОЛЛ (панель Е). РВМС залишали не обробленими (панелі В і Є), обробляли за допомогою контрольного біспецифічного диатіла (контрольного ЮОАКТ) (панелі С і б) або обробляли за допомогою ЮАКТ-А (панелі Ю їі Н) і інкубували протягом 7 днів, після чого офарблювали у відношенні СОЗ34 і СО19.A) and RVMSO ALL (panel E). PBMCs were left untreated (panels B and E), treated with a control bispecific diethyl (control JUAKT) (panels C and b), or treated with JUACT-A (panels J and H) and incubated for 7 days, after which they were stained with ratios of SOZ34 and СО19.
На фігурі 14 (панелі А-Ї) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (БАКТ-А) опосередковувати Т-клітинну експансію (панелі А, В, С, 0, Н і І) і активацію (панелі 0, Е, Е, У, К ії ) у нормальних РВМС (панелі А-Е) і РВМС ОЛЛ (панелі О-І). Клітини залишали не обробленими (панелі А, 0, с і У) або обробляли за допомогою контрольного біспецифічного диатіла (контрольного ЮАКТ) (панелі В, Е, Н і К) або САКТ-А (панелі С, РЕ, І і І) протягом 7 днів.Figure 14 (panels A-Y) shows the ability characterized by the optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyl (BACT-A) to mediate T-cell expansion (panels A, B, C, 0, H and I) and activation (panels 0 , E, E, U, K and ) in normal RVMS (panels A-E) and RVMS ALL (panels O-I). Cells were left untreated (panels A, 0, c, and Y) or treated with control bispecific diethyl (control UACT) (panels B, E, H, and K) or SACT-A (panels C, PE, I, and I) for 7 days.
На фігурі 15 (панелі А-С) показана ідентифікація бластної популяції ГМЛ і Т-клітин у первинному зразку ГМЛ. На панелі А показане пряме і бічне світлорозсіювання популяції РВМСFigure 15 (panels A-C) shows the identification of the AML blast population and T cells in a primary AML sample. Panel A shows the direct and lateral light scattering of the RBMS population
ГМЛ, що вводиться. На панелі В показана ідентифікація бластної популяції ГМЛ у зразку ГМЛ.GML, which is introduced. Panel B shows the identification of the AML blast population in the AML sample.
На панелі С показана ідентифікація Т-клітинної популяції в зразку ГМЛ.Panel C shows the identification of the T-cell population in the AML sample.
На фігурі 16 (панелі А-С) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (ФАКТ-А) опосередковувати деплецію бастних клітин при ГМЛ за допомогою аутологічних СТІ. і Т-клітинної експансії. Первинні РВМСFigure 16 (panels A-C) shows the ability of the optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyl (FACT-A) to mediate mast cell depletion in AML using autologous STIs. and T-cell expansion. Primary RVMS
ГМЛ від пацієнта 2 інкубували з РВ5, контрольним біспецифічним диатілом (контрольним рАКТ) або САКТ-А протягом 144 год. Підраховували бластні клітини (панель А), СО4 Т-клітини (панель В) і СО8 Т-клітини (панель С).AML from patient 2 was incubated with PB5, a control bispecific diethyl (control pACT) or SACT-A for 144 hours. Blast cells (panel A), CO4 T cells (panel B), and CO8 T cells (panel C) were counted.
На фігурі 17 (панелі А-Ю) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (БАКТ-А) опосередковувати Т-клітинну активацію при ГМЛ. Експресію СО25 (панель А) і Кі-67 (панель В) визначали для СО4 і СО8 т- клітин від пацієнта 2 з ГМЛ після інкубації з контрольним біспецифічним диатілом (контрольним рАКТ) або БАКТ-А з аутологічними РВМС. Вміст перфорину (панель С) і гранзиму В (панель 0) визначали для СО4 і СО8 Т-клітин від пацієнта 2 з ГМЛ після інкубації з контрольним САКТ або рАВТА-А з аутологічними РВМС.Figure 17 (panels A-Y) shows the ability characterized by the optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyl (BACT-A) to mediate T-cell activation in AML. The expression of CO25 (panel A) and Ki-67 (panel B) was determined for CO4 and CO8 t-cells from patient 2 with AML after incubation with control bispecific diethyl (control pACT) or BACT-A with autologous PBMCs. The content of perforin (panel C) and granzyme B (panel 0) was determined for CO4 and CO8 T cells from patient 2 with AML after incubation with control SACT or pAVTA-A with autologous PBMCs.
На фігурі 18 (панелі А-О) показано, що біспецифічне диатіло яке характеризується бо оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) здатне перехресно реагувати з білкамиFigure 18 (panels A-O) shows that a bispecific diabody characterized by an optimized sequence of CO123 x POP (OAKT-A) is capable of cross-reacting with proteins
СсО0123 і СО3 як людини, так і примата. На панелях показані криві сенсограм ВІАСОВЕТМ результатів аналізів, проведених для оцінки здатності ОАКТ-А зв'язуватися з білюеами СОЗ (панелі А і В) і СО123 (панелі С і Ю) людини (панелі А і С) і нелюдиноподібного примата (панеліСсО0123 and СО3 in both humans and primates. The panels show the curves of the VIASOVETM sensograms of the results of the analyzes carried out to evaluate the ability of OAKT-A to bind to the bileumes of POPs (panels A and B) and CO123 (panels C and Y) of humans (panels A and C) and non-human primates (panels
В 'ї 0). Представлені значення КО.In 0). KO values are presented.
На фігурі 19 (панелі А-В) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (ФАКТ-А) опосередковувати деплецію аутологічних моноцитів іп міго з РВМС людини і яванської макаки. На панелях представлені результати кривих залежності від дози опосередкованої САКТ-А цитотоксичності з первиннимиFigure 19 (panels A-B) shows the ability characterized by the optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyl (FACT-A) to mediate the depletion of autologous monocytes from human and cynomolgus PBMCs. The panels show the results of the dose-dependent curves of SACT-A-mediated cytotoxicity with primary ones
РВМС людини (панель А) або РВМС яванської макаки (панель В).Human PBMC (panel A) or Javan macaque PBMC (panel B).
На фігурі 20 (панелі А-М) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (АКТ-А) опосередковувати деплецію РОС у яванських макак без системної індукції цитокінів. На панелях А-ЮО показані контрольні результати, отримані через 4 год. і 4 днів з інертним носієм і носієм. На панелях Е-Н показані контрольні результати, отримані через 4 год. і 4 днів з контрольним біспецифічним диатілом (контрольним САКТ). На панелях 1-М показані результати, отримані через 4 год. і 4 днів у дозі рАВТ-А, що становить 10 нг/кг/день, і через 4 дня в дозі ПОАКТ-А, що становить 30 нг/кг/день.Figure 20 (panels A-M) shows the ability of the optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyl (AKT-A) to mediate ROS depletion in Javan macaques without systemic cytokine induction. Panels A-SU show the control results obtained after 4 h. and 4 days with inert vehicle and vehicle. Panels E-H show control results obtained after 4 h. and 4 days with a control bispecific diet (control SACT). Panels 1-M show the results obtained after 4 h. and 4 days at a dose of rAVT-A, which is 10 ng/kg/day, and after 4 days at a dose of POACT-A, which is 30 ng/kg/day.
На фігурі 21 (панелі А-Ю) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (ФАКТ-А) опосередковувати залежну від дози деплецію рОС у яванських макак. Яванським макакам вводили дози БАВТ-А, що становлять 0,1, 1, 10, 30 100, 300 або 1000 нг/кг. РВМС оцінювали в зазначений час і визначали загальну кількість В-клітин (панель А), моноцитів (панель В), МК-клітин (панель С) і рос (панельFigure 21 (panels A-Y) shows the ability of the optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyl (FACT-A) to mediate dose-dependent depletion of ROS in cynomolgus macaques. Javan macaques were administered BABT-A doses of 0.1, 1, 10, 30, 100, 300, or 1000 ng/kg. PBMCs were evaluated at the indicated times and the total number of B cells (panel A), monocytes (panel B), MK cells (panel C), and ROS (panel
В).IN).
На фігурі 22 (панелі А-Ю) показана здатність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (САКТ-А) періодично модулювати Т-клітини у яванських макак. Яванським макакам вводили дози САКТ-А, що становлять 0,1, 1, 10, 30 100, 300 або 1000 нг/кг. РВМС оцінювали в зазначений час і визначали загальну кількість Т-клітин (панель А), СО4 Т-клітин (панель В), СОб9 клітин (панель С) і СО8 Т-клітин (панель 0).Figure 22 (panels A-Y) shows the ability of the optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyl (SACT-A) to periodically modulate T-cells in Javan macaques. Javan macaques were injected with doses of 0.1, 1, 10, 100, 300, or 1000 ng/kg of SACT-A. PBMCs were assessed at the indicated times and the total number of T cells (panel A), CO4 T cells (panel B), COb9 cells (panel C), and CO8 T cells (panel 0) were determined.
На фігурі 23 показано аналіз 505-РАСЕ очищеного білка ЮАКТ-А при відновлюючих (ліворуч) і невідновлюючих (праворуч) умовах.Figure 23 shows the 505-RACE analysis of purified YAKT-A protein under reducing (left) and non-reducing (right) conditions.
Зо На фігурах 24А-24В показані фізико-хімічні характеристики очищеного ОАКТ-А. На фігурі 24А: профіль 5ЕС білка САКТ-А на каліброваній колонці Т5К З30005УМУХхї.. На фігурі 24В: мас- спектр білка ОАКТ-А.Figures 24A-24B show the physicochemical characteristics of purified OAKT-A. Figure 24A: 5ES profile of the SAKT-A protein on a calibrated column T5K Z30005UMUHkhi.. Figure 24B: mass spectrum of the OAKT-A protein.
На фігурах 25А-250 показаний аналіз 5РЕ. зв'язування САКТ-А з імобілізованими СО123 іFigures 25A-250 show the analysis of 5PE. binding of SAKT-A with immobilized CO123 and
СО3 людини або яванської макаки. Пунктирними лініями представлена глобальна апроксимація до 1:11 моделі Ленгмюра експериментальних кривих зв'язування, отриманих при концентраціяхCO3 of man or Javan macaque. Dashed lines represent the global approximation to 1:11 of the Langmuir model of experimental binding curves obtained at concentrations
РАВТ-А, що становлять 0, 6,25, 12,5, 25, 50 або 100 нм (безперервні лінії). Дані є репрезентативними для трьох незалежних експериментів.RAVT-A of 0, 6.25, 12.5, 25, 50, or 100 nm (solid lines). Data are representative of three independent experiments.
На фігурах 26А-26Е показано, що САКТ-А здатне одночасно зв'язуватися як з СОЗ, так іFigures 26A-26E show that SACT-A is able to simultaneously bind to both POPs and
СО0123. На фігурі 26А-2688 представлені результати біфункціонального аналізу ЕГІ5А і продемонстроване одночасне залучення обох антигенів-мішеней САКТ-А. На планшети ЕГІЗА наносили СО123 людини (фігура 26А) або яванської макаки СО123 (фігура 268). За титруванням концентрацій САКТ-А і контрольного ПОАКТ випливало виявлення за допомогоюСО0123. Figure 26A-2688 presents the results of bifunctional analysis of EHI5A and demonstrated the simultaneous involvement of both target antigens of SACT-A. Human CO123 (figure 26A) or Javan macaque CO123 (figure 268) was applied to EGIZA tablets. The titration of the concentrations of SACT-A and the control POACT resulted in detection using
СОЗ-біотин людини. На фігурах 26С-26Е продемонстровано зв'язування клітинною поверхнею рАВТ-А на СО123-Моїт-13 клітині-мішені (фігура 26С), Т-клітинах людини (фігура 260) і тТ- клітинах яванської макаки (фігура 26Е). Зв'язування виявляли за допомогою аналізу ГАС5 з використанням моноклонального антитіла, специфічного у відношенні Е-спіральної і К- спіральної області молекули ОАКТ-А або контрольного АКТ.Human POP biotin. Figures 26C-26E demonstrate cell surface binding of pAVT-A on CO123-Moit-13 target cells (Figure 26C), human T cells (Figure 260) and cynomolgus macaque tT cells (Figure 26E). Binding was detected using the GAS5 assay using a monoclonal antibody specific for the E-helical and K-helical region of the OAKT-A molecule or control AKT.
На фігурах 27А-27Н показана здатність ПОАКТ-А опосередковувати переспрямований цитоліз клітини - мішені ефекторними клітинами людей або мавпи проти СО123-4-Казиті-3 лейкозних клітинних ліній, показана здатність молекул зв'язуватися з підкласом нормальних циркулюючих у кровотоці лейкоцитів, включаючи в себе рОС і моноцити, і показана здатність молекул піддавати деплеції СО14-СО123"9й клітини (рОС і базофіли), не вражаючи моноцити (СО14- клітини). На фігурі 27А показані відносні сайти зв'язування з антитілом до СО123-РЕ 0937 і лейкозні клітинні лінії Казиті-3, визначені за допомогою аналізу ОБАС5. На фігурі 27В показана відносно низька відсоткова цитотоксичність, опосередкована САКТ-А або контрольним БАКТ на клітинній лінії ГМЛ (клітинах 0937), які, як показано на фігурі 27А, містять відносно мало сайтів зв'язування з СО123). На фігурі 27С показана відсоткова цитотоксичність, опосередкована рАВТ-А або контрольним САКТ у присутності очищених Т-клітин людини (в якості ефекторних клітин) на клітинній лінії ГМЛ (клітинах Казипті-3), які, як показано на фігурі 27А, містять значну бо кількість сайтів зв'язування з СО123. На фігурах 278-27С співвідношення Е:Т становить 10:1. На фігурі 270 показана вісоткова цитотоксичність, опосередкована САКТ-А або контрольним СОАКТ у присутності очищених РВМСОС яванської макаки (в якості ефекторних клітин) на клітинахFigures 27A-27H show the ability of POAKT-A to mediate redirected cytolysis of target cells by human or monkey effector cells against СО123-4-Casity-3 leukemic cell lines, and show the ability of molecules to bind to a subclass of normal leukocytes circulating in the bloodstream, including pOC and monocytes, and the ability of the molecules to deplete CO14-CO123 cells (pOC and basophils) without affecting monocytes (CO14- cells) is shown. Figure 27A shows the relative binding sites of the anti-CO123-PE 0937 antibody and leukemia cell Casiti-3 lines as determined by the OBAS5 assay Figure 27B shows a relatively low percentage of cytotoxicity mediated by SACT-A or control BACT in a AML cell line (0937 cells) which, as shown in Figure 27A, contain relatively few binding sites binding with CO123).Figure 27C shows the percentage cytotoxicity mediated by pAVT-A or control SACT in the presence of purified human T cells (as effector cells) on AML cell line (Kazipti-3 cells), which, as shown in figure 27A, contain a significant number of binding sites with CO123. In Figures 278-27C, the E:T ratio is 10:1. Figure 270 shows the vitelline cytotoxicity mediated by SAKT-A or control SOAKT in the presence of purified Javan macaque RBMSOS (as effector cells) on cells
Казиті-З3 (співвідношення Е:Т становить 15:1), ії продемонстровано, що ОБАКТ-А може зв'язуватися з Т-клітинами яванської макаки. На фігурі 27Е показані відносні сайти зв'язування з антитілом до СО123-РЕ на клітинах Казиті-3, моноцитах людини, плазмацитоїдних дендритних клітинах людини ("рОсС"), моноцитах яванської макаки і плазмацитоїдних дендритних клітинах яванської макаки, що визначали за допомогою аналізу ОБАС5. На фігурі 27Е показана здатність рАВТ-А піддавати деплеції СО14- СО1239 клітки. На фігурі 275 показана здатність ОАЕТ-А піддавати деплеції СО14- СО123Н! клітини людини. На фігурі 27Н показана здатність ОАВТ-А піддавати деплеції СО14- СО12З3Н! клітини яванської макаки. Цитотоксичність визначали за вивільненням ГОН, при цьому значення ЕС5О визначали за допомогою програмного забезпечення СгарпРайд РКІЗМФ)Casiti-Z3 (E:T ratio 15:1), and demonstrated that OBACT-A can bind to Javan macaque T cells. Figure 27E shows the relative binding sites of the anti-CO123-PE antibody on Kazyti-3 cells, human monocytes, human plasmacytoid dendritic cells ("hPCs"), cynomolgus monocytes, and cynomolgus plasmacytoid dendritic cells as determined by the OBAS5 assay . Figure 27E shows the ability of rAVT-A to deplete cells of СО14-СО1239. Figure 275 shows the ability of OAET-A to undergo CO14-СО123Н depletion! human cells. Figure 27H shows the ability of OAVT-A to undergo depletion of СО14-СО12С3Н! cells of the Javan macaque. Cytotoxicity was determined by the release of HON, while the value of EC5O was determined using the SgarpRide RKIZMF software)
На фігурі 28 показано застосування двохкомпартментної моделі для оцінки фармакокінетичних параметрів ЮАКТ-А. Дані показують концентрації ОАКТ-А у сироватці наприкінці інфузії (ЕОЇ) у яванських макак після одержання 96б-годинної інфузії в дозі, що становить 100 нг/кг/"день, 300 нг/кг/день, 600 нг/кг/день і 1000 нг/кг/"день. Кожна точка представляє окрему тварину; горизонтальні лінії представляють середнє значення для групи дозування.Figure 28 shows the application of the two-compartment model for estimating the pharmacokinetic parameters of YACT-A. The data show end-of-infusion serum concentrations of OACT-A in Javan macaques following a 96-hour infusion at 100 ng/kg/day, 300 ng/kg/day, 600 ng/kg/day, and 1000 ng/kg/day. Each dot represents a separate animal; horizontal lines represent the mean value for the dosage group.
На фігурах 29А-29С показаний ефект інфузій ОАКТ-А на продукцію цитокіну, 1-6. Вмісти ІІ - б у сироватці (середнє їх ЗЕМ) у мавп, яким вводили інфузії ОАКТ-А, показані за групами лікування. Яванським макакам вводили інертний носій - контроль в 1 день, після чого вводили 4 щотижневі інфузії або інертного носія (група 1) (фігура 29А), або ОЮАКТ-А, що вводиться у вигляді 4-денних інфузій щотижня, починаючи з 8 дня, в 15, 22 і 29 день (групи 2-5) (фігура 298) або у вигляді інфузії 7 днів на тиждень протягом 4 тижнів, починаючи на 8 день (група б) (фігура 29С). Інтервали лікування зазначені сірими колонками.Figures 29A-29C show the effect of OAKT-A infusions on cytokine production, 1-6. Serum II-b contents (the average of their ZEM) in monkeys that received OAKT-A infusions are shown by treatment groups. Javan macaques were injected with inert vehicle - control on day 1, followed by 4 weekly infusions of either inert vehicle (group 1) (Figure 29A) or OYUACT-A administered as 4-day weekly infusions starting on day 8, in 15, 22 and 29 days (groups 2-5) (figure 298) or as an infusion 7 days a week for 4 weeks, starting on day 8 (group b) (figure 29C). Treatment intervals are indicated by gray columns.
На фігурах ЗОА-З3ОЕ показано ефект інфузій ОАКТ-А на деплецію СО14-/С0123- клітин (фігури ЗОА-30С) і СОЗ303-- клітин (фігури 300-ЗОЕ). Показано середнє хх ЗЕМ циркулюючих у кровотоці вмістів СО14-/20123- (фігури ЗОА-30С) або СО303- (фігури 3000-30) по днях дослідження та по групам. Яванським макакам вводили інертний носій - контроль в 1 день, післяFigures ZOA-Z3OE show the effect of OAKT-A infusions on the depletion of СО14-/С0123- cells (figures ZОА-30С) and СОЗ303- cells (figures 300-ЗОЕ). The average xx ZEM of circulating in the bloodstream contents of СО14-/20123- (figures ЗОА-30С) or СО303- (figures 3000-30) by study days and by groups is shown. Javanese macaques were injected with an inert carrier - control on 1 day, after
Зо чого вводили 4 щотижневих інфузії або інертний носій (група 1) (фігури ЗбА і 300), або ОАКТ-А, що вводиться у вигляді 4-денних інфузій щотижня, починаючи з 8 дня, в 15, 22 і 29 день (групи 2-5) (фігури З0А і ЗОЕ) або у вигляді інфузії 7 днів на тиждень протягом 4 тижнів, починаючи на 8 день (група 6) (фігури ЗОС і ЗОЕ). Інтервали лікування зазначені сірими колонками.From which 4 weekly infusions were administered, either an inert vehicle (group 1) (figures ZbA and 300), or OAKT-A administered as 4-day infusions every week, starting on day 8, on days 15, 22 and 29 (groups 2 -5) (figures Z0A and ZOE) or as an infusion 7 days a week for 4 weeks, starting on the 8th day (group 6) (figures ZOS and ZOE). Treatment intervals are indicated by gray columns.
На фігурі З1А-31І показані спостережувані зміни в Т-клітинних популяціях (фігури ЗТА-31С),Figure Z1A-31I shows the observed changes in T-cell populations (figures ZTA-31C),
Сра4 клітинних популяціях (фігури 310-31КЕ) ї СО8-- клітинних популяціях (фігури 310-311), що одержують ВАКТ-А, що вводиться у вигляді 4-денних інфузій, починаючи на 8 день, в 15, 22 і 29 день. Легенда: СО25 (сірі квадрати); СОб9-- (сірі трикутники), РО-1 ж (білі трикутники); Тіт-3-- (білі квадрати). Т-клітини підраховували за допомогою маркерів СО4 і СО8, а не канонічногоSra4 cell populations (figures 310-31KE) and CO8 cell populations (figures 310-311) receiving VACT-A, administered as 4-day infusions, starting on day 8, on day 15, 22 and 29. Legend: СО25 (gray squares); СОб9-- (gray triangles), RO-1 (white triangles); Titus-3-- (white squares). T-cells were counted using CO4 and CO8 markers, not the canonical one
СОЗ3, для усунення можливого взаємовпливу з боку ОАКТ-А. Яванським макакам вводили інертний носій - контроль в 1 день, після чого вводили 4 щотижневі інфузії або інертний носій (група 1), або САКТ-А, що вводиться у вигляді 4-денних інфузій щотижня, починаючи з 8 дня, в 15, 22 і 29 день (група 5) або у вигляді інфузії 7 днів на тиждень протягом 4 тижнів, починаючи на 8 день (група 6). Інтервали лікування зазначені сірими колонками. Показано середнє ж 5ЕМ від абсолютної кількості циркулюючих у кровотоці Т-клітин по днях дослідження і по групах (фігури З1А-31С). Показані відносні значення (середній відсоток - БЕМ) СО25ж, СОбою, РО-1 іSOZ3, to eliminate possible interaction with OAKT-A. Javan macaques were injected with inert vehicle - control on day 1, followed by 4 weekly infusions of either inert vehicle (group 1) or SACT-A administered as 4-day weekly infusions starting on day 8, at 15, 22 and day 29 (group 5) or as an infusion 7 days a week for 4 weeks starting on day 8 (group 6). Treatment intervals are indicated by gray columns. The average 5EM of the absolute number of T-cells circulating in the bloodstream by study days and by groups is shown (figures 31A-31C). The relative values (average percentage - BEM) of СО25ж, СОбой, РО-1 and
Тіт-З- на СО4 (фігури 310-31Є) або СО8 Т-клітинах (фігури З1Е-31Н) по днях дослідження і по групах.Tit-Z- on CO4 (figures 310-31E) or CO8 T-cells (figures C1E-31H) by study days and by groups.
На фігурі З2А-32Е показані спостережувані зміни в СО4--Т-клітинних популяціях (фігури 32А- 32) і СО8Т-клітинних популяціях (фігури 3200-32) під час і після безперервної 7-денної інфузії рАВТ-А. Показано середнє х 5ЕМ у відсотках від СО25.ж, СОбожю, РО-1.к і Тіт-З- на СО4 (фігуриFigures 32A-32E show the observed changes in CO4 T cell populations (Figures 32A-32) and CO8 T cell populations (Figures 3200-32) during and after a continuous 7-day infusion of pAVT-A. The average x 5EM is shown as a percentage of СО25.ж, СОбожь, РО-1.к and Tit-Z- on СО4 (figures
З2А-32С) або СО8 (фігури 320-32Е) Т-клітинах по днях дослідження і по групах 2, З і 4.З2A-32C) or СО8 (figures 320-32E) T-cells by study days and by groups 2, 3 and 4.
Інтервали лікування зазначені сірими колонками. Легенда: СО25-- (сірі квадрати); СОб9-- (сірі трикутники), РО-1-- (білі трикутники); Тіт-3- (білі квадрати).Treatment intervals are indicated by gray columns. Legend: СО25-- (gray squares); СОб9-- (gray triangles), RO-1-- (white triangles); Tit-3- (white squares).
На фігурі ЗЗА-3ЗЕ показані спостережувані зміни в СО4-«Т-клітинних популяціях (фігури ЗЗА- 33С) і СО8Т-клітинних популяціях (фігури 330-33Е) під час і після безперервної 7-денної інфузії рАВТ-А. Показано середнє х 5ЕМ у відсотках від СО4ж наївних клітин (С095-/0028-), СМТ (с0р95-/002в8ж) і ЕМТ (2095-4/С2028-) Т-клітин в СО4ж популяції (фігури ЗЗА-33С) або СО8 популяції (фігури 330-3ЗЕ) по днях дослідження і по групах 2, З і 4. Яванським макакам вводили інертний носій - контроль в 1 день, після чого вводили 4 щотижневих інфузії або інертний носій 60 або САКТ-А, що вводиться у вигляді 4-денних інфузій щотижня, починаючи з 8 дня, в 15, 22 і 29 день (групи 2-4). Інтервали лікування зазначені сірими колонками. Легенда: наївні клітини (білі трикутники); СМТ (чорні трикутники), ЕМТ (сірі квадрати).Figure ZZA-3ZE shows the observed changes in CO4 T-cell populations (Figures ZZA-33C) and CO8 T-cell populations (Figures 330-33E) during and after a continuous 7-day infusion of rAVT-A. The average x 5EM is shown as a percentage of СО4х naive cells (С095-/0028-), SMT (с0р95-/002в8ж) and EMT (2095-4/С2028-) T cells in СО4х population (figures ЗЗА-33С) or СО8 population (figures 330-3ZE) by study days and by groups 2, 3 and 4. Javan macaques were injected with an inert vehicle - control on day 1, after which 4 weekly infusions were administered or inert vehicle 60 or SACT-A, which is administered in the form of 4- daily infusions every week, starting from the 8th day, on the 15th, 22nd and 29th day (groups 2-4). Treatment intervals are indicated by gray columns. Legend: naïve cells (white triangles); SMT (black triangles), EMT (gray squares).
На фігурі 34 показана опосередкована САКТ-А цитотоксичність проти клітин Казиті-3 зFigure 34 shows SACT-A mediated cytotoxicity against Kazyti-3 cells with
РВМС або від мавп, які не зазнали впливу, або мавп, що одержали лікування за допомогою численних інфузій ОАКТ-А.PBMCs from either unexposed monkeys or monkeys treated with multiple infusions of OACT-A.
На фігурах 35А-35Е показано, що вплив САКТ-А підвищував відносну частоту центральнихFigures 35A-35E show that exposure to SACT-A increased the relative frequency of central
Сра4 клітин пам'яті та ефекторних СО8 в клітин пам'яті за рахунок відповідної раніше не підданої впливам Т-клітинної популяції. Показано середнє їх ЗЕМ у відсотках від СО4-- наївних клітин (сб0р95-2028я53, СМТ (2095-2028) ії ЕМТ (2б095-/2028-) Т-клітин в СО4-- популяції (фігуриSpra4 of memory cells and effector CO8 in memory cells at the expense of the corresponding T-cell population not previously exposed to influences. The average of their ZEM is shown as a percentage of CO4- naive cells (сб0р95-2028я53, SMT (2095-2028) and EMT (2б095-/2028-) T cells in the СО4- population (figures
ЗБА-35С) або в СО8-- популяції (фігури 350-35Е по днях дослідження і по групах. Яванським макакам вводили інертний носій - контроль в 1 день, після чого вводили 4 щотижневих інфузії або інертний носій (група 1), або САКТ-А, що вводиться у вигляді 4-денних інфузій щотижня, починаючи з 8 дня, в 15, 22 і 29 день (група 5) або у вигляді інфузії 7 днів на тиждень протягом 4 тижнів, починаючи на 8 день (група 6). Інтервали лікування зазначені сірими колонками.ZBA-35C) or in the СО8- population (figures 350-35E by study days and by groups. Javanese macaques were injected with an inert vehicle - control on day 1, after which 4 weekly infusions of either an inert vehicle (group 1) or SACT- A, administered as 4-day weekly infusions starting on day 8, on days 15, 22, and 29 (group 5) or as an infusion 7 days per week for 4 weeks starting on day 8 (group 6). treatments are indicated by gray columns.
Легенда: наївні (білі трикутники); СМТ (чорні трикутники), ЕМТ (сірі квадрати).Legend: naive (white triangles); SMT (black triangles), EMT (gray squares).
На фігурах З6А-36Е показано ефект САКТ-А на параметри еритроцитів у мавп, які одержали інфузії молекул. Показані вмісти циркулюючих еритроцитів (фігури З6А-36С) або ретикулоцитів (фігури 3600-36) (середнє х 5ЕМ) у зразках, зібраних у зазначені часові точки від мавп, що одержали лікування за допомогою САКТ-А.Figures 36A-36E show the effect of SACT-A on erythrocyte parameters in monkeys that received infusions of the molecules. Circulating erythrocyte (Figures 36A-36C) or reticulocyte (Figures 3600-36) contents (mean x 5EM) in samples collected at the indicated time points from monkeys treated with SACT-A are shown.
На фігурах 37А-37В показана частота зустрічальності (середній відсоток є ЗЕМ) СО123 клітин (фігура 37А) або НЗС (С034-7С2038-/26045-/26090-- клітин) (фігура 37В) в Гіп- клітинній популяції в зразках кісткового мозку, зібраних у зазначені часові точки від мавп, що одержали лікування за допомогою САКТ-А. Яванським макакам вводили інертний носій - контроль в 1 день, після чого вводили 4 щотижневих інфузії або інертний носій (група 1), або ОАКТ-А, що вводиться у вигляді 4-денних інфузій щотижня, починаючи з 8 дня, в 15, 22 і 29 день (групи 2-5) або у вигляді інфузії 7 днів на тиждень протягом 4 тижнів, починаючи на 8 день (група 6).Figures 37A-37B show the frequency of occurrence (average percentage is ZEM) of СО123 cells (Figure 37A) or NSS (С034-7С2038-/26045-/26090-- cells) (Figure 37B) in the Hyp cell population in bone marrow samples, collected at the indicated time points from monkeys treated with SACT-A. Javan macaques were injected with inert vehicle - control on day 1, followed by 4 weekly infusions of either vehicle (group 1) or OAKT-A administered as 4-day infusions weekly starting on day 8, at 15, 22 and day 29 (groups 2-5) or as an infusion 7 days a week for 4 weeks starting on day 8 (group 6).
Докладне розкриття даного винаходуDetailed disclosure of this invention
Даний винахід відноситься до характерних оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних моновалентних диатіл, які здатні одночасно зв'язуватися з СО123 і СОЗ, Її доThis invention refers to bispecific monovalent diethyls characterized by an optimized sequence of СО123 x POPs, which are capable of simultaneously binding to СО123 and POPs.
Зо застосувань таких молекул у лікуванні гематологічних злоякісних пухлин. Незважаючи на те, що неоптимізовані СО123 х СОЗ біспецифічні диатіла є повністю функціональними, аналогічно вдосконаленням, отриманим в експресії генів за допомогою оптимізації кодонів (див., наприклад, Стговієап, Н. єї аї. (1982) "Ргєїегепіїа! Содоп Озаде Іп РгоКагуоііїс Сепевз: Те Оріїтаї!From the applications of such molecules in the treatment of hematological malignant tumors. Although non-optimized CO123 x POP bispecific diethyls are fully functional, similar to the improvements obtained in gene expression by codon optimization (see, for example, Stgovieap, N. eyi ai. (1982) "Rgieiegepiia! Sodop Ozade Ip RgoKaguoiiis Sepevz : Te Oriitai!
Содоп-Апіїсодоп Іпіегасіп Епегау Апа Тне Зеїесіїме Содоп Озаде Іп ЕНісіепну Ехргеззей Сепев"Sodop-Apiisodop Ipiegasip Epegau Apa Tne Zeyesiime Sodop Ozade Ip ENisiepnu Ehrgezzei Sepev"
Сепе 18(3):199-209), можливо додатково підсилити стабільність і/або функцію СО123 х СОЮЗ біспецифічних диатіл шляхом модифікації або оптимізації їх послідовностей.Sepe 18(3):199-209), it is possible to further enhance the stability and/or function of СО123 x SOYUZ bispecific diethyls by modifying or optimizing their sequences.
Переважні СО123 х СОЗ біспецифічні диатіла згідно із даним винаходом складаються із щонайменше двох поліпептидних ланцюгів, які асоціюються один з одним з утворенням одного сайту зв'язування, специфічного у відношенні епітопа СО123, і одного сайту зв'язування, специфічного у відношенні епітопа СОЗ (фігура 2). Окремі поліпептидні ланцюги диатіла ковалентно зв'язані один з одним, наприклад, шляхом зв'язування дисульфідним зв'язком цистеїнових залишків, розташованих у межах кожного поліпептидного ланцюга. Кожний поліпептидний ланцюг містить антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга, антигензв'язуючий домен варіабельного домена важкого ланцюга і домен гетеродимеризації. Проміжний лінкерний пептид (лінкер 1) відокремлює антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга від антигензв'язуючого домена варіабельного домена важкого ланцюга. Антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга першого поліпептидного ланцюга взаємодіє з антигензв'язуючим доменом варіабельного домена важкого ланцюга другого поліпептидного ланцюга з утворенням першого функціонального антигензв'язуючого сайту, який є специфічним відносно першого антигену (тобто або СО123, або СО3). Аналогічно, антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга другого поліпептидного ланцюга взаємодіє з антигензв'язуючим доменом варіабельного домена важкого ланцюга першого поліпептидного ланцюга з утворенням другого функціонального антигензв'язуючого сайту, який є специфічним відносно другого антигену (тобто або СО123, або СОЗ, залежно від ідентичності першого антигену). Таким чином, вибір антигензв'язуючого домена варіабельного домена легкого ланцюга та антигензв'язуючого домена варіабельного домена важкого ланцюга першого і другого поліпептидних ланцюгів скоординований так, щоб два поліпептидні ланцюги спільно містили антигензв'язуючі домени варіабельних доменів легкого та важкого ланцюга, здатні зв'язуватися з СО123 і СО3.Preferred CO123 x POP bispecific diethyls according to the present invention consist of at least two polypeptide chains that associate with each other to form one binding site specific for the CO123 epitope and one binding site specific for the POP epitope (Fig. 2). Individual diethyl polypeptide chains are covalently linked to each other, for example, by disulfide bonding of cysteine residues located within each polypeptide chain. Each polypeptide chain contains the antigen-binding domain of the variable domain of the light chain, the antigen-binding domain of the variable domain of the heavy chain and the heterodimerization domain. The intermediate linker peptide (linker 1) separates the antigen-binding domain of the variable domain of the light chain from the antigen-binding domain of the variable domain of the heavy chain. The antigen-binding domain of the variable domain of the light chain of the first polypeptide chain interacts with the antigen-binding domain of the variable domain of the heavy chain of the second polypeptide chain to form a first functional antigen-binding site that is specific for the first antigen (ie, either CO123 or CO3). Similarly, the antigen-binding domain of the light chain variable domain of the second polypeptide chain interacts with the antigen-binding domain of the heavy chain variable domain of the first polypeptide chain to form a second functional antigen-binding site that is specific for the second antigen (ie, either CO123 or POPs, depending from the identity of the first antigen). Thus, the selection of the antigen-binding domain of the variable domain of the light chain and the antigen-binding domain of the variable domain of the heavy chain of the first and second polypeptide chains is coordinated so that the two polypeptide chains jointly contain the antigen-binding domains of the variable domains of the light and heavy chains capable of binding with СО123 and СО3.
Утворення гетеродимерів першого і другого поліпептидних ланцюгів може керуватися доменами гетеродимеризації. Такі домени містять у собі ЗМЕРКЗС (5БО ІЮО МО:50) (абоThe formation of heterodimers of the first and second polypeptide chains can be controlled by heterodimerization domains. Such domains contain ZMERKZS (5BO IYUO MO:50) (or
МЕРКЗБС; 5ЕО ІЮ МО:51) на одному поліпептидному ланцюзі і ЗЕМКОСЕС (5ЕО ІЮ МО:52) (абоMERCZBS; 5EO IU MO:51) on one polypeptide chain and ZEMCOSES (5EO IU MO:52) (or
ЕМКОЕС; 5БЕО ІЮ МО:53) на іншому поліпептидному ланцюзі (052007/0004909). Альтернативно, такі домени можна сконструювати так, щоб вони містили спіралі протилежних зарядів. Домен гетеродимеризації одного з поліпептидних ланцюгів містить послідовність щонайменше із шести, щонайменше із семи або щонайменше з восьми позитивно заряджених амінокислот, і домен гетеродимеризації іншого поліпептидного ланцюга містить послідовність щонайменше із шести, щонайменше із семи або щонайменше з восьми негативно заряджених амінокислот.EMKOES; 5BEO IU MO:53) on another polypeptide chain (052007/0004909). Alternatively, such domains can be designed to contain helices of opposite charges. The heterodimerization domain of one of the polypeptide chains contains a sequence of at least six, at least seven, or at least eight positively charged amino acids, and the heterodimerization domain of the other polypeptide chain contains a sequence of at least six, at least seven, or at least eight negatively charged amino acids.
Наприклад, перший або другий домен гетеродимеризації переважно буде містити послідовність із восьми позитивно заряджених амінокислот, і інший з доменів гетеродимеризації переважно буде містити послідовність із восьми негативно заряджених амінокислот. Позитивно заряджена амінокислота може являти собою лізин, аргінін, гістидин і т. д. лабо негативно заряджена амінокислота може являти собою глутамінову кислоту, аспарагінову кислоту і т. д. Позитивно заряджена амінокислота переважно являє собою лізин і/або негативно заряджена амінокислота переважно являє собою глутамінову кислоту.For example, the first or second heterodimerization domain will preferably contain a sequence of eight positively charged amino acids, and the other of the heterodimerization domains will preferably contain a sequence of eight negatively charged amino acids. A positively charged amino acid can be lysine, arginine, histidine, etc., or a negatively charged amino acid can be glutamic acid, aspartic acid, etc. A positively charged amino acid is preferably lysine and/or a negatively charged amino acid is preferably glutamine acid
СсО0123 х СОЗ біспецифічні диатіла згідно із даним винаходом сконструйовані так, щоб такі перші і другі поліпептидні ланцюги були ковалентно зв'язані один з одним за допомогою цистеїнових залишків уздовж їх довжини. Такі цистеїнові залишки можуть бути введені в проміжний лінкер, який відокремлює домени Мі і МН поліпептидів. Альтернативно і більш переважно, другий пептид (лінкер 2) введений у кожен з поліпептидних ланцюгів, наприклад, на амінокінці поліпептидних ланцюгів або в положенні, яке поміщає лінкер 2 між доменом гетеродимеризації і антигензв'язуючим доменом варіабельного домена легкого ланцюга або варіабельного домена важкого ланцюга.СсО0123 x POP bispecific diethyls according to the present invention are designed so that such first and second polypeptide chains are covalently linked to each other by means of cysteine residues along their length. Such cysteine residues can be introduced into the intermediate linker that separates the Mi and MH domains of the polypeptides. Alternatively and more preferably, a second peptide (linker 2) is introduced into each of the polypeptide chains, for example, at the amino terminus of the polypeptide chains or in a position that places linker 2 between the heterodimerization domain and the antigen-binding domain of the variable domain of the light chain or the variable domain of the heavy chain.
Згідно з конкретними варіантами здійснення характерні оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічні моновалентні диатіла згідно із даним винаходом додатково містять доменAccording to specific implementation options, the bispecific monovalent diethyls according to the present invention, characterized by the optimized sequence of СО123 x POPs, additionally contain a domain
Ес імуноглобуліну або альбумінзв'язуючий домен для збільшення періоду напівжиття іп мімо.ES immunoglobulin or albumin-binding domain to increase the half-life of IP mimo.
СО0123 х СОЗ3 біспецифічні моновалентні диатіла згідно із даним винаходом, які містять домен Ес імуноглобуліну (тобто СО123 х СОЗ біспецифічні моновалентні Ес - диатіла)СО123 x СОЗ3 bispecific monovalent diethyls according to the present invention, which contain the Es domain of immunoglobulin (i.e. СО123 x СОЗ bispecific monovalent Es - diethyls)
Зо складаються з першого поліпептидного ланцюга, другого поліпептидного ланцюга і третього поліпептидного ланцюга. Перший і другий поліпептидні ланцюги асоціюються один з одним з утворенням одного сайту зв'язування, специфічного у відношенні епітопа СО123, і одного сайту зв'язування, специфічного у відношенні епітопа СЮОЗ. Перший поліпептидний ланцюг і третій поліпептидний ланцюг асоціюються один з одним з утворенням домена Ес імуноглобуліну (фігура ЗА і фігура ЗВ). Перший і другий поліпептидні ланцюги біспецифічного моновалентногоZo consists of the first polypeptide chain, the second polypeptide chain and the third polypeptide chain. The first and second polypeptide chains are associated with each other to form one binding site specific for the CO123 epitope and one binding site specific for the SHOZ epitope. The first polypeptide chain and the third polypeptide chain are associated with each other to form the Es domain of the immunoglobulin (Figure 3A and Figure 3B). The first and second polypeptide chains of bispecific monovalent
Ес - диатіла ковалентно зв'язані один з одним, наприклад, шляхом зв'язування дисульфідним зв'язком цистеїнових залишків, розташованих у межах кожного поліпептидного ланцюга.Es - diethyl are covalently bound to each other, for example, by disulfide bonding of cysteine residues located within each polypeptide chain.
Перший і третій поліпептидні ланцюги ковалентно зв'язані один з одним, наприклад, шляхом зв'язування дисульфідним зв'язком цистеїнових залишків, розташованих у межах кожного поліпептидного ланцюга. Кожний з першого і другого поліпептидних ланцюгів містить антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга, антигензв'язуючий домен варіабельного домена важкого ланцюга і домен гетеродимеризації. Проміжний лінкерний пептид (лінкер 1) відокремлює антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга від антигензв'язуючого домена варіабельного домена важкого ланцюга. Антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга першого поліпептидного ланцюга взаємодіє з антигензв'язуючим доменом варіабельного домена важкого ланцюга другого поліпептидного ланцюга з утворенням першого функціонального антигензв'язуючого сайту, який є специфічним відносно першого антигену (тобто або СО123, або СОЮЗ). Аналогічно, антигензв'язуючий домен варіабельного домена легкого ланцюга другого поліпептидного ланцюга взаємодіє з антигензв'язуючим доменом варіабельного домена важкого ланцюга першого поліпептидного ланцюга з утворенням другого функціонального антигензв'язуючого сайту, який є специфічним відносно другого антигену (тобто або СОЗ, або СО123, залежно від ідентичності першого антигену). Таким чином, вибір антигензв'язуючого домена варіабельного домена легкого ланцюга та антигензв'язуючого домена варіабельного домена важкого ланцюга першого і другого поліпептидних ланцюгів скоординований так, щоб два поліпептидні ланцюги спільно містили антигензв'язуючі домени варіабельних доменів легкого та важкого ланцюга, здатні зв'язуватися з СО123 і СОЗ. Кожний з першого і третього поліпептидних ланцюгів містять деяку частину або весь домен СН2 і/або деяку частину або весь домен СНЗ повного домена Ес імуноглобуліну і цистеїнмісткий пептид. Деяка частина або весь домен СНЗ2 і/або деяка частина 60 або весь домен СНЗ асоціюються з утворенням домена Ес імуноглобуліну біспецифічних моновалентних Ес - диатіл згідно із даним винаходом. Перший і третій поліпептидні ланцюги біспецифічних моновалентних Ес - диатіл згідно із даним винаходом ковалентно зв'язані один з одним, наприклад, шляхом зв'язування дисульфідним зв'язком цистеїнових залишків, розташованих у межах цистеїнмісткого пептиду поліпептидних ланцюгів.The first and third polypeptide chains are covalently linked to each other, for example, by disulfide bonding of cysteine residues located within each polypeptide chain. Each of the first and second polypeptide chains contains the antigen-binding domain of the variable domain of the light chain, the antigen-binding domain of the variable domain of the heavy chain and the heterodimerization domain. The intermediate linker peptide (linker 1) separates the antigen-binding domain of the variable domain of the light chain from the antigen-binding domain of the variable domain of the heavy chain. The antigen-binding domain of the variable domain of the light chain of the first polypeptide chain interacts with the antigen-binding domain of the variable domain of the heavy chain of the second polypeptide chain to form a first functional antigen-binding site that is specific for the first antigen (ie, either CO123 or SOYUZ). Similarly, the antigen-binding domain of the light chain variable domain of the second polypeptide chain interacts with the antigen-binding domain of the heavy chain variable domain of the first polypeptide chain to form a second functional antigen-binding site that is specific for the second antigen (ie, either POP or CO123, depending from the identity of the first antigen). Thus, the selection of the antigen-binding domain of the variable domain of the light chain and the antigen-binding domain of the variable domain of the heavy chain of the first and second polypeptide chains is coordinated so that the two polypeptide chains jointly contain the antigen-binding domains of the variable domains of the light and heavy chains capable of binding with CO123 and POPs. Each of the first and third polypeptide chains contain some part or all of the CH2 domain and/or some part or all of the CH3 domain of the complete Es immunoglobulin domain and a cysteine-containing peptide. Some part or all of the CHZ2 domain and/or some part of 60 or all of the CHZ domain are associated with the formation of the Es domain of the bispecific monovalent Es-diethyl immunoglobulin according to the present invention. The first and third polypeptide chains of bispecific monovalent Es-diethyl according to the present invention are covalently linked to each other, for example, by disulfide bonding of cysteine residues located within the cysteine-containing peptide of the polypeptide chains.
І. Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, "ВАВТ-А"I. A bispecific diabody characterized by an optimized sequence of СО123 x SOZ, "VAVT-A"
Згідно із даним винаходом передбачено біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю, здатне одночасно і специфічно зв'язуватися з епітопом СО123 і з епітопом СОЗ ("СбО123 х СО3" біспецифічне диатіло або САКТ-А). Як обговорюється нижче, виявлено, що ЮБАКТ-А проявляє підвищену функціональну активність щодо інших, що характеризуються неоптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл подібної сполуки, і, у зв'язку із цим, називається "що характеризується оптимізованою послідовністю"According to the present invention, a bispecific diabody is provided, characterized by an optimized sequence, capable of simultaneously and specifically binding to the CO123 epitope and to the COS epitope ("СбО123 x СО3" bispecific diabody or SACT-A). As discussed below, YUBACT-A has been found to exhibit increased functional activity relative to others characterized by a non-optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyl-like compounds, and is therefore termed "sequence-optimized".
СО0123 х СОЗ біспецифічне диатіло.СО0123 x POP bispecific diabody.
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАВТ-А) містить перший поліпептидний ланцюг і другий поліпептидний ланцюг. Перший поліпептидний ланцюг біспецифічного диатіла буде містити, у напрямку від М-кінця до С-кінця,The bispecific diabody characterized by the optimized sequence of СО123 x СОЗ (ОАВТ-А) contains the first polypeptide chain and the second polypeptide chain. The first polypeptide chain of the bispecific diethyl will contain, in the direction from the M-terminus to the C-terminus,
М-кінець, варіабельний домен легкого ланцюга (домен МІ) моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МІ соз), проміжний лінкерний пептид (лінкер 1), варіабельний домен важкого ланцюга (домен УН) моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (МНеоігз), і С- кінець. Переважна послідовність такого домена Мі соз являє собою 5ЕО ІЮ МО:21:M-terminus, variable domain of the light chain (MI domain) of a monoclonal antibody capable of binding to POPs (MI soz), intermediate linker peptide (linker 1), variable domain of the heavy chain (UN domain) of a monoclonal antibody capable of binding to СО123 (МНеоигз), and С- the end. The predominant sequence of such a Mi soz domain is 5EO IU MO:21:
ОАУМТОЕРБІ ТУ5РОСТМУМТІ ТСВ5ЗТОаАМТТЗМУАМИМУМООКРИасСАРВИ СС ТМКААРМУТРАВНOAUMTOERBI TU5ROSTMUMMTI TSV5ZTOaAMTTZMUAMIMUMOOKRYasSARVY SS TMKAARMUTRAVN
ЕЗОаБІ І! ЧСОКААЇ ТІТИАОАЕОЕАрУМСАЇ М УЗМІ МУУРасаТткі тм аEZOABI I! CHSOKAAI TITIAAOAEOEArUMSAI M UZMI MUURasaTtki tm a
Антигензв'язуючий домен Мі соз містить СОКІ 5ЕО ІЮ МО:38: КЗ55ТОАМТТЗММУАМ, СОК2Antigen-binding domain Mi soz contains SOKI 5EO IU MO:38: KZ55TOAMTTZMMUAM, SOC2
ЗЕО Ір МО:39: СТМКЕАР і СОКЗ 5ЕО ІЮ МО:40: А М/УЗМІ ММ.ZEO Ir MO:39: STMKEAR and SOCZ 5EO IU MO:40: A M/UZMI MM.
Переважна послідовність такого лінкера 1 являє собою 5ЕБЕО ІЮ МО:29: СбОо5ООО0.The preferred sequence of such linker 1 is 5EBEO ИЮ МО:29: СбОо5ООО0.
Переважна послідовність такого домена МНсо:гз являє собою 5ЕО ІЮ МО:26:The preferred sequence of such domain МНсо:гз is 5EO IU MO:26:
ЕМО МОБОАЕЇ ККРІАБЗБУКУЗСКАЗИахУТЕТОУУМКУУВОАРИОСІЇ ЕМО ОПРОМИАТЕММОКЕEMO MOBOAEII KKRIABZBUKUZSKAZIAHUTETOUUMKUUVOARIOSII EMO OPROMYATEMMOKE
КавмтІТМОКЗТЗТАУМЕЇ 551 В5ЕОТАМУУСАВЗНІ Ї ВАБМУБАУУСОСТІ МТУKavmtITMOKZTZTAUMEI 551 V5EOTAMUUSAVZNI AND VABMUBAUUSOSTI MTU
Антигензв'язуючий домен МНеоїгз містить СОКІ 5ЕО І МО:47: ЮМУМК, СОК2 5ЕО ІЮThe antigen-binding domain of MNeoigz contains SOCI 5EO and MO:47: YMUMK, SOC2 5EO IU
Зо МО:48: ОПРОЗМСОСАТЕУМОКЕКО і СОКЗ 5ЕО ІЮО МО:49: ЗНІ І КА.From MO:48: OPROZMSOSATEUMOKEKO and SOCZ 5EO IYUO MO:49: ZNI AND KA.
Другий поліпептидний ланцюг буде містити, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М-кінець, домен Мі моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (Мі соїгз3), проміжний лінкерний пептид (наприклад, лінкер 71), домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНеоз), і С-кінець. Переважна послідовність такого домена Мі соігз являє собою 5ЕО ІЮ МО:25:The second polypeptide chain will contain, in the direction from the M-terminus to the C-terminus, the M-terminus, the Mi domain of a monoclonal antibody capable of binding to CO123 (Mi coygz3), an intermediate linker peptide (for example, linker 71), the MH domain of a monoclonal antibody antibodies capable of binding to POPs (MNeoz), and the C-end. The preferred sequence of such a domain Mi soigz is 5EO IU MO:25:
ВЕММТО5РОБІ АМ5І СЕВНУТМЗОСКОЗОБИ МЗаМОКМУЇ ПУМООКРООРРКОИ ТММ АЗТВЕЗОVEMMTO5ROBI AM5I SEVNUTMZOSKZOBY MZaMOKMUI PUMOOKROORRKOI TMM AZTVEZO
УєхРОовЕЗаЗазатовТІ ТЗІ ОДЕОМАУУУСОМОМЗУРМТЕСОСТКІ БІКUekhROovezAzazatovTi tzi odeomauuusomomzurmtesostki bik
Антигензв'язуючий домен Мі соїгз містить СОКІ 5ЕО ІЮ МО:44: К55ОБІ ЇЇ М5ОМОКМТІ т,The antigen-binding domain of Mi soigz contains SOKI 5EO IU MO:44: K55OBI HER M5OMOKMTI t,
СОМ2 ЗЕО ІЮ МО:45: МАЗТКЕЗ і СОКЗ 5ЕО ІЮ МО:46: ОМОМ5УРУТ.SOM2 ZEO IYU MO:45: MAZTKEZ and SOCZ 5EO IYU MO:46: OMOM5URUT.
Переважна послідовність такого домена МНсоз являє собою 5ЕО ІЮ МО:22:The preferred sequence of such a MNsoz domain is 5EO IU MO:22:
ЕМО МЕЗОСИЇ МОРОИБІ ВІ БСААЗОЕТЕЗТМАММУ УВО РОКИ ЕУМавІВЗКУММУАТУМАEMO MESOSIA MOROIBI VI BSAAZOETEZTMAMMU UVO ROKY EUMavIVZKUMMUATUMA
ОБМУМКОВЕТІЗАВОБКМ5І М ОММ5І КТЕОТАУУУСУВНОаМЕеаМОуУ УМ ЕАУМУусОС,ТІ УТУ55OBMUMKOVETIZAVOBKM5I M OMM5I KTEOTAUUUSUVNOaMEeaMOuU UM EAUMUusOS,TI UTU55
Антигензв'язуючий домен МНсоз містить СОМК1Т ЗЕО ІЮ МО:41: ТМАММ, СОК2 5ЕО І МО:42:The antigen-binding domain of MNsoz contains SOMK1T ZEO IU MO:41: TMAMM, SOC2 5EO and MO:42:
ВІВЗКУММУАТУМАрЗМКО і СОКЗ 5ЕО ІЮ МО:43: НОМЕОМЗУУЗМУБАХ.VIVZKUMMUATUMArZMKO and SOCZ 5EO IYU MO:43: NOMEOMZUUZMUBAH.
Біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом сконструйовані так, щоб перший і другий поліпептиди були ковалентно зв'язані один з одним за допомогою цистеїнових залишків по їхній довжині. Такі цистеїнові залишки можуть бути введені в проміжний лінкер (наприклад, лінкер 1), який відокремлює домени МІ ії МН поліпептидів. Альтернативно і більш переважно, другий пептид (лінкер 2) введений у кожний поліпептидний ланцюг, наприклад, у положенні на М-кінці відносно домена Мі або на С-кінці відносно домена МН такого поліпептидного ланцюга. Переважна послідовність такого лінкера 2 являє собою ЗЕО ІЮ МО:30: ССО.Bispecific diethyls characterized by an optimized sequence of CO123 x POP according to the present invention are designed so that the first and second polypeptides are covalently linked to each other by means of cysteine residues along their length. Such cysteine residues can be introduced into an intermediate linker (for example, linker 1), which separates the MI and MH domains of polypeptides. Alternatively and more preferably, the second peptide (linker 2) is introduced into each polypeptide chain, for example, in a position at the M-end relative to the Mi domain or at the C-end relative to the MN domain of such a polypeptide chain. The preferred sequence of such linker 2 is ZEO IU MO:30: ССО.
Утворення гетеродимерів може керуватися за допомогою додаткової інженерії таких поліпептидних ланцюгів, щоб вони містили поліпептидні спіралі протилежних зарядів. Таким чином, згідно із переважним варіантом здійснення один з поліпептидних ланцюгів буде сконструйований так, щоб він містив "Е-спіральний" домен (ЗБО 10 /МО:34:The formation of heterodimers can be controlled by further engineering such polypeptide chains to contain polypeptide helices of opposite charges. Thus, according to a preferred embodiment, one of the polypeptide chains will be designed to contain an "E-helical" domain (ZBO 10 /MO:34:
ЕМААГЕКЕМААГЕКЕМААГЕКЕМААГЕК), чиї залишки утворюють негативний заряд при рнН 7, тоді як інший із двох поліпептидних ланцюгів буде сконструйований так, щоб містити "К- спіральний" домен (5ЕБО ІЮ МО:35: КМААГКЕКМААЇКЕКМААЇІКЕКМААЇКЕ), чиї залишки утворюють позитивний заряд при рН 7. Присутність таких заряджених доменів забезпечує асоціацію між першим і другим поліпептидами й, таким чином, сприяє гетеродимеризації.EMAAGEKEMAAGEKEMAAGEKEMAAGEK), whose residues form a negative charge at pH 7, while the other of the two polypeptide chains will be designed to contain a "K-helical" domain (5EBO IU MO:35: КМААГКЕКМААИКМАЙИIKEКМААИКЕ), whose residues form a positive charge at pH 7. The presence of such charged domains provides an association between the first and second polypeptides and thus promotes heterodimerization.
Несуттєво, яка спіраль забезпечується першим або другим поліпептидними ланцюгами.It is not essential which helix is provided by the first or second polypeptide chains.
Проте, переважно, біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю ср123 х СОЗ згідно із даним винаходом ("БАКТ-А") містить перший поліпептидний ланцюг, який характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО':1):However, preferably, the bispecific dibody characterized by the optimized sequence of sr123 x POP according to the present invention ("BACT-A") contains the first polypeptide chain, which is characterized by the following sequence (5EO IU MO':1):
ОАУМТОЕРБІ ТУ5РОСТМУМТІ ТСВ5ЗТОаАМТТЗМУАМИМУМООКРИасСАРВИ СС ТМКААРМУТРАВНOAUMTOERBI TU5ROSTMUMMTI TSV5ZTOaAMTTZMUAMIMUMOOKRYasSARVY SS TMKAARMUTRAVN
ЕЗОаБІ І! ЧСОКААЇ ТІТаАОАЕОЕАрУМСАЇ М УЗМІ УУгсса7ткі тм ссвазасасЕМОЇ МОаИАЕЇEZOABI I! CHSOKAAI TITAAOAEEOEARUMSAI M UZMI UUgssa7tki tm ssvazasasemoi MOaIAEI
ККРОАБУКУЗСКАБаМТЕТОУУМКУМВОАРООСТ ЕМІСОПРОМОАТЕУМОКеЕКИ ВМТ мокKKROABUKUZSKABAMTETOUUMKUMVOAROOST EMISOPROMOATEUMOKeEKY VMT mok
АУМЕГ 551 А5ЕОТАМУУСАВЗНІ І ВАМ РАМ УУусОС,сТІ УТУЗасСИасаЕМААЕКЕМААЇ ЕКЕМААAUMEG 551
ІГЕКЕМААГ ЕКIHEKEMAAG EC
Ланцюг 1 САКТ-А складається з наступного: БЕО ІЮ МО:21 - БЕО ІЮ МО:29 - БЕО ІЮ МО:С26 -Chain 1 SAKT-A consists of the following: BEO IU MO:21 - BEO IU MO:29 - BEO IU MO:C26 -
ЗЕО ІЮ МО:30 - БЕО ІЮ МО:34. Кодуючий ланцюг 1 САКТ-А полінуклеотид являє собою 5ЕО ІЮZEO IU MO:30 - BEO IU MO:34. Coding chain 1 SACT-A polynucleotide is 5EO IU
МО:с2: саддсідюдідасісаддадсснсасідассдідіссссаддсддаасідідасссідасадсадаїссадсасаддсдсадщда ссасаїсіаасіасдссаайдддіясадсадаадссаддасаддсассааддддссідаїсдддддаіасааасаааадддсіссса ассссідсасдайнсіддаадісідсюдддсоддаааддссодсісідасіанассдддасасаддассдаддасдаадссданасіаняої дсісідюдіаіадсааєсідддансоаддададдсасаааасюдасідосідддаддададчоаїссддсдоасддаддсдаддаодса дсюддіадсадіссддддседадсідаадааасссддадсіссдідаадащісндсааадссадіддсіасасснсасадасіасіаїаї даадідддісаддасаддсіссаддасадддасіддааі(ддаісодсдаїаісанссиссаасдддассасцісіасааіїсадаадащтшаа аддсаддаюдасіанНассодюддасаааїсаасаадсасідснагадчдадсдадсісссідсдсісідаадаїасадссоаюіасіандю сісддісасассідсідададссадсідашоснандаддасаддоасасссіддідасадщіснссодадаашдіяддсдадодавчаасді дассдсасіддадааададданосідстодадааддаадаісдсдсасідааааддаддісдсадсссіддадаааМО:с2: саддсідюдідасісаддадсснсасідассдідіссссаддсддаасідідасссідасадсадаїссадсасаддсдсадщда ссасаїсіаасіасдссаайдддіясадсадаадссаддасаддсассааддддссідаїсдддддаіасааасаааадддсіссса ассссідсасдайнсіддаадісідсюдддсоддаааддссодсісідасіанассдддасасаддассдаддасдаадссданасіаняої дсісідюдіаіадсааєсідддансоаддададдсасаааасюдасідосідддаддададчоаїссддсдоасддаддсдаддаодса дсюддіадсадіссддддседадсідаадааасссддадсіссдідаадащісндсааадссадіддсіасасснсасадасіасіаїаї даадідддісаддасаддсіссаддасадддасіддааі(ддаісодсдаїаісанссиссаасдддассасцісіасааіїсадаадащтшаа аддсаддаюдасіанНассодюддасаааїсаасаадсасідснагадчдадсдадсісссідсдсісідаадаїасадссоаюіасіандю сісддісасассідсідададссадсідашоснандаддасаддоасасссіддідасадщіснссодадаашдіяддсдадодавчаасді дассдсасіддадааададданосідстодадааддаадаісдсдсасідааааддаддісдсадсссіддадааа
Другий поліпептидний ланцюг САНТ-А характеризується наступною послідовністю (ЗЕО ІЮThe second polypeptide chain of SANT-A is characterized by the following sequence (ZEO IU
МО:3):MO:3):
ВЕММТО5РОБІ АМ5І СЕВНУТМЗОСКОЗЗОБИ МЗаМОКММІ ПУМООКРООРРК МУ АЗТВЕЗОаVEMMTO5ROBI AM5I SEVNUTMZOSKZOZOBY MZaMOKMMI PUMOOKROORRK MU AZTVEZOa
УєРОовЕЗаЗазатовТтІ ТЗІ ОАДЕОМАУУУСОМОМЗУРУТРСОСТКІ ЕІКССОСЗОСИ,СЕМОЇ МЕЗО са МОРааБІ ВІ ЗСААЗаєТЕЗТМАММУМУУВОАРОаКаИаї ЕУУМавіВЗКУМММАТУМАОЗУКОВЕТІЗА рОБКМ5І М ОММ5ЗІ КТЕОТАУУУуСУВВНЕОМеаМЗУУ УМА аОоС,сТтІ УтУЗааСасакмМААІ КЕКУероовезаЗазатовТти ТЗ ОADEOMAUUUSOMZURUTRSOSTKI EIXSOSSOSOS, SEMOI MEZO sa MORAABI AND ZSAAZAETESTMAMMUMUUVOAOaroaKaIai EUUMaviVZKUMMMATUMAOSUKOVETIZA rOBKM5I M OMM5ZI KTEOTAUUUuSUVVNEOMEAMZUU UMA aOoS, sttIMAEKSaUsa KISzaa
Зо МААЇ КЕКМААЇ КЕКМААЇ КЕFrom MAAI KEKMAAI KEKMAAI KE
Ланцюг 2 САКТ-А складається з наступного: БЕО ІЮ МО:25 - БЕО ІЮ МО:29 - БЕО ІЮ МО:22 -Chain 2 SAKT-A consists of the following: BEO IU MO:25 - BEO IU MO:29 - BEO IU MO:22 -
ЗЕО ІЮ МО:30 - БЕО ІЮ МО:35. Кодуючий ланцюг 2 САРБТ-А полінуклеотид являє собою 5ЕО ІЮZEO IU MO:30 - BEO IU MO:35. Coding chain 2 SARBT-A polynucleotide is 5EO IU
МО:А: даснсдюдаїдасасацдісіссідаїадісіддссодадвісіддддаадсддадідасіаісндсаададсісссадісасідсда асадсддаааїсадааааасіаісідассіддіассадсадаадссаддссадсссссіааасідсідаїсіандддснссассадада асіддсддсссдасадансадсддсадсддсадсддсасаданнасссідасаацшсіадісюсаддссдаддасдюдсідщіа сіандісадааїдайцасадсіаїсссіасаспсддссадддадассаадсіддааайаааддаддсддаїссддсадсдааддсдад дідсадсіддіддадісюдаддаддснодіссадссіддадддісссідадасісіссіїдсадссісюдайсассіїсадсасаїасдс їаїдаанпдодіссдссаддсіссадддааддддсіддадідаднодааддаїсаддіссаадіасаасаанаїдсаассіасіаїдссо асісюі(дааддаіадайсассаїсісаадададаїйсааадаасісасіціаісідсаааїдаасадссідаааассдаддасасддсс діїанасюцідідадасасодіаасісддсаанснасощіснДдшщаснНапддадасаддддасасіддідасідщісноссдддадаа тіддсоадіддаааадіддссдсасідааддчадааадндсідсіндааададааддісдссдсаснааддааааддісдсадсссюда аададМО:А: даснсдюдаїдасасацдісіссідаїадісіддссодадвісіддддаадсддадідасіаісндсаададсісссадісасідсда асадсддаааїсадааааасіаісідассіддіассадсадаадссаддссадсссссіааасідсідаїсіандддснссассадада асіддсддсссдасадансадсддсадсддсадсддсасаданнасссідасаацшсіадісюсаддссдаддасдюдсідщіа сіандісадааїдайцасадсіаїсссіасаспсддссадддадассаадсіддааайаааддаддсддаїссддсадсдааддсдад дідсадсіддіддадісюдаддаддснодіссадссіддадддісссідадасісіссіїдсадссісюдайсассіїсадсасаїасдс їаїдаанпдодіссдссаддсіссадддааддддсіддадідаднодааддаїсаддіссаадіасаасаанаїдсаассіасіаїдссо асісюі(дааддаіадайсассаїсісаадададаїйсааадаасісасіціаісідсаааїдаасадссідаааассдаддасасддсс діїанасюцідідадасасодіаасісддсаанснасощіснДдшщаснНапддадасаддддасасіддідасідщісноссдддадаа тіддсоадіддаааадіддссдсасідааддчадааадндсідсіндааададааддісдссдсаснааддааааддісдсадсссюда аадад
Як обговорюється нижче, виявлено, що, біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) характеризується здатністю одночасно зв'язувати СО123 і СОЗ клітини як людини, так і мавпи. Виявлено, що забезпечення ОАКТ-А викликало Т-клітинну активацію, опосередковувало зменшення бластних клітин, керувало експансією Т-клітинної популяції, індуціювало Т-клітинну активацію і викликало переспрямований цитоліз злоякісних клітин - мішеней.As discussed below, it was found that a bispecific diabody characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs (OACT-A) is characterized by the ability to simultaneously bind CO123 and POPs in both human and monkey cells. It was found that provision of OAKT-A caused T-cell activation, mediated the reduction of blast cells, managed expansion of the T-cell population, induced T-cell activation, and caused redirected cytolysis of malignant target cells.
ІЇ. Біспецифічне диатіло порівняння, що характеризується неоптимізованою послідовністюII. Bispecific diabody comparison characterized by non-optimized sequence
СОр123 х СОЗ, "САВТ-В"СОр123 x SOZ, "SAVT-V"
РАВТ-В являє собою, біспецифічне диатіло, що характеризується неоптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що характеризується макроструктурою, подібною з такою в САКТ-RAVT-B is a bispecific diabody, characterized by an unoptimized sequence of СО123 x СОЗ, characterized by a macrostructure similar to that of SАКТ-
А. Перший поліпептидний ланцюг САКТ-В буде містити, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М- кінець, домен МІ моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (Мі соз), проміжний лінкерний пептид (лінкер 1), домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися зA. The first polypeptide chain of SAKT-B will contain, in the direction from the M-terminus to the C-terminus, the M-terminus, the MI domain of a monoclonal antibody capable of binding to SOZ (Mi soz), an intermediate linker peptide (linker 1), MH domain of a monoclonal antibody capable of binding to
СО123 (МНеоігз), проміжний лінкер 2, Е-спіральний домен і С-кінець. Домен Мі соз першого поліпептидного ланцюга САКТ-В характеризується наступною послідовністю (ЗЕО ІЮО МО:23):CO123 (MNeoigz), intermediate linker 2, E-helical domain and C-terminus. The Mi soz domain of the first polypeptide chain of SAKT-B is characterized by the following sequence (ZEO IYUO MO:23):
РІОГТО5РАІМ5АЗРЕИЕКУТМТСВАЗОЗЗУЗУММУ УООКатЗРКАУМУОТЗКМАБОаУРУВЕЗИа5 бо аБИатТ5У5І ТІЗЗМЕАЕВААТУУСООМЗ5ЗМАРІ ТЕаАСТКІ ЕІ КRIOGTO5RAIM5AZREIEKUTMTSVAZOZZUZUMMU UOOKatZRKAUMUOTZKMABOaURUVEZIa5 bo aBYatT5U5I TIZZMEAEVAATUUSOOMZ5ZMARI TEaASTKI EI K
Домен МНоеоїгз першого поліпептидного ланцюга БАКТ-В характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:28):The MNoeoigz domain of the first polypeptide chain of BACT-B is characterized by the following sequence (5EO IU MO:28):
ОМОГ МОБОАЕЇ ККРОАЗУКУЗСКАБОаМ ТЕТОУУМКУУВОАРИаСаї ЕМІСОПРОМОАТЕММОКЕOMOG MOBOAEI KKROAZUKUZSKABOAM TETOUUMKUUVOARIASAI EMISOPROMOATEMMOKE
КавмтІТМОКЗТЗТАУМЕЇ 551 В5ЕОТАМУУСАВЗНІ Ї ВАБМУБАУУСОСТІ МТУKavmtITMOKZTZTAUMEI 551 V5EOTAMUUSAVZNI AND VABMUBAUUSOSTI MTU
Таким чином, ланцюг 1 САКТ-В складається з наступного: БЕО ІЮО МО:23 - БЕО ІЮ МО:29 -Thus, chain 1 of SAKT-B consists of the following: BEO IYUO MO:23 - BEO IYU MO:29 -
ЗЕО ІЮ МО:28 - БЕО ІЮ МО:30 - 5ЕО ІЮ МО:34. Послідовність першого поліпептидного ланцюга рАВТ-В являє собою наступне (5ЕО ІЮО МО:5):ZEO IU MO:28 - BEO IU MO:30 - 5EO IU MO:34. The sequence of the first polypeptide chain of rAVT-B is as follows (5EO IYUO MO:5):
РІОГТО5РАІМ5АЗРЕИЕКУТМТСВАЗОЗЗУЗУММУ УСОКатЗРКАУМЛУЮТЗКМАБамМуРУВЕбИа5 аБИатТ5У5І ТІЗЗМЕАЕВСААТУУСООМ5ЗМРІ ТРЕОАСТКГЕЇ КсаСИаапасвомМоО! МОБСОАЕЇ ККРОRIOGTO5RAIM5AZREIEKUTMTSVAZOZZUZUMMU USOKatZRKAUMLYUTZKMABAmMuRUVEbIA5 aBYatT5U5I TIZZMEAEVSAATUUSOOM5ZMRI TREOASTKGEI KsaSYaapasvomMoO! MOBSOAEI KKRO
АБУКУЗСКАБЗИачУТЕТОУУМКУМУВОАРИСИЇ ЕМІСОПРОМОаАТЕММОКЕКаТвВмМТтМОКЗТЗТАММЕABUKUZSKABZIAACHUTETOUMKUMUVOARISII EMISOPROMOaATEMMOKEKKaTvVmMTtMOKZTZTAMME
І 55І А5ЕОТАУУУСАВЗНІ І ВАБМ/ РАМУ СпИСТІ УТУЗасСИасаЕМААЕКЕМААЇ ЕКЕМААЇ ЕКЕI 55I A5EOTAUUUSAVZNI I VABM/ RAMU SPISTI UTUZAsSIasaEMAAEKEMAAI EKEMAAI EKE
МААЇ ЕКMAAI EC
Кодуючий ланцюг 1 САКТ-В полінуклеотид являє собою 5ЕО ІЮ МО:6: дасайсадсідасссадісіссадсааїсаїдісідсаїсіссадддададааддісассадассідсададссадіїсаадчідіаацді іїіасадаасіддіассадсадаадісаддсассісссссаааададдащшаїдасасаїссаааддадснсіддадісссНаїсдснса ддасаддддісддчодассісаїасісісісасааісадсадсаддаддсідаадаїдсідссаснанасідссаасадюддацдіадіаа сссдсісасойсддіасідддассаадсіддадсідаааддадоасддаіїссддсддсаддаддссаддідсадсіддідсадієс9994 сюадсідаадааасссддадснссодідааддаідціснодсааадссадіддсіасассіїсасадасіасіаїадаадідддісаддсадад сіссаддасадддасіддааддаісддсодаїаїсанссіїссаасдддадссасшсіасааіїсадаадшаааддсадддадасіанас сдддасаааїісаасаадсасідснаіа(дчдадсюдадсісссідсдсісідаадаїасадссдідіасіанодідсісддісасассідсщда дадссадсіддашоснайддддасадддсасссіддідасадщіснссддададашіддсадіддадаадддссдсасіддадааа даддандасюстоддадааддаададісдсідсаспдааааддаддісдсадсссіддадаааКодуючий ланцюг 1 САКТ-В полінуклеотид являє собою 5ЕО ІЮ МО:6: дасайсадсідасссадісіссадсааїсаїдісідсаїсіссадддададааддісассадассідсададссадіїсаадчідіаацді іїіасадаасіддіассадсадаадісаддсассісссссаааададдащшаїдасасаїссаааддадснсіддадісссНаїсдснса ддасаддддісддчодассісаїасісісісасааісадсадсаддаддсідаадаїдсідссаснанасідссаасадюддацдіадіаа сссдсісасойсддіасідддассаадсіддадсідаааддадоасддаіїссддсддсаддаддссаддідсадсіддідсадієс9994 сюадсідаадааасссддадснссодідааддаідціснодсааадссадіддсіасассіїсасадасіасіаїадаадідддісаддсадад сіссаддасадддасіддааддаісддсодаїаїсанссіїссаасдддадссасшсіасааіїсадаадшаааддсадддадасіанас сдддасаааїісаасаадсасідснаіа(дчдадсюдадсісссідсдсісідаадаїасадссдідіасіанодідсісддісасассідсщда дадссадсіддашоснайддддасадддсасссіддідасадщіснссддададашіддсадіддадаадддссдсасіддадааа даддандасюстоддадааддаададісдсідсаспдааааддаддісдсадсссіддадааа
Другий поліпептидний ланцюг САКТ-В буде містити, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М- кінець, домен Мі. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (Мі соїгз), Проміжний лінкерний пептид (лінкер 1) і домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНеоз), проміжний лінкер 2, К-спіральний домен і С-кінець.The second polypeptide chain of SAKT-B will contain, in the direction from the M-end to the C-end, the M-end, the Mi domain. of a monoclonal antibody capable of binding to CO123 (Mi soigz), Intermediate linker peptide (linker 1) and the MH domain of a monoclonal antibody capable of binding to SOZ (MNeoz), intermediate linker 2, K-helical domain and C-terminus.
Домен Мі соїгз другого поліпептидного ланцюга ОАКТ-В характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:27):The Mysoigz domain of the second polypeptide chain of OAKT-B is characterized by the following sequence (5EO IU MO:27):
ВЕММТО5РОБІ АМ5І СЕВНУТМЗОКОЗЗОБИ МЗаМОКММ ПУМООКРООРРКОИ ІМУУАЗТВЕЗОаVEMMTO5ROBI AM5I SEVNUTMZOKOZZOBY MZaMOKMM PUMOOKROORRKOI IMUUAZTVEZOa
Зо УєхРОовЕЗаЗазатовТІ ТЗІ ОДЕОМАУУУСОМОМЗУРМТЕСОСТКІ БІКFrom Ukraine
Домен МНсоз другого поліпептидного ланцюга ОАКТ-В характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:24):The MNsoz domain of the second polypeptide chain of OAKT-B is characterized by the following sequence (5EO IU MO:24):
РІКГІОО5СОСАЕЇ АВРОАЗУКМЗСКТЗаМУТЕТАУТМНУУКОВРИаСаї ЕУЛаміМРЗНам ГТМУМОКRIKGIOO5SOSAEI AVROAZUKMZSKTZaMUTETAUTMNUUKOVRYaSai EUlamiMRZNam GTMUMOK
ЕКОКАТІ ТТОКЗЗЗТАУМОЇ 551 Т5ЕОБАУУУСАВНУМООНУСІ ОУМУуСсОСТТ ТУECOKATI TTOKZZZTAUMOYI 551 T5EOBAUUUSAVNUMOONUSI OUMUuSsOSTT TU
Таким чином, ланцюг 2 САКТ-В складається з наступного: БЕО ІЮО МО:27 - БЕО ІЮ МО:29 -Thus, chain 2 of SAKT-B consists of the following: BEO IYUO MO:27 - BEO IYU MO:29 -
ЗЕО ІЮ МО:24 - 5ЕО ІЮ МО:30 - БЕО ІЮ МО:35. Послідовність другого поліпептидного ланцюга рАВТ-В являє собою наступне (5ЕО ІЮ МО:7):ZEO IU MO:24 - 5EO IU MO:30 - BEO IU MO:35. The sequence of the second polypeptide chain of pAVT-B is as follows (5EO IU MO:7):
ВЕММТО5РОБІ АМ5І СЕВНУТМЗОСКОЗЗОБИ МЗаМОКММІ ПУМООКРООРРК МУ АЗТВЕЗОаVEMMTO5ROBI AM5I SEVNUTMZOSKZOZOBY MZaMOKMMI PUMOOKROORRK MU AZTVEZOa
УєхРОовЕЗаЗазатовТтІ ТЗІ ОАДЕОМАУУУСОМОМЗУРМУТРСОСТКІ ЕІКСОСОЗССІСОІКІ О0ОБИаАUkraine
ЕГАДРЕИАЗУКМЗСКТЗамхтТЕТАМТМНУМКОАРИОСІЕММОМІМРЗВаМТМУМОКЕКОКАТІ ТОКEGADREIAZUKMZSKTZamkhTETAMTMNUMKOARIOSIEMMOMIMRZVaMTMUMOKEKOKATI TOK
ЗЗТАУМОЇ 551 ТЗЕОЗБАМУУСАВУМОоОоНУСІ ОМмУуУсОСсТ тУЗЗОС,СИааакМААІ КЕКМААЇ КЕКМ551
ААЇ КЕКМААЇІ КЕAAI KEKMAAIII KE
Кодуючий ланцюг 2 САКТ-В полінуклеотид являє собою 5ЕО ІЮ МО:8:Coding chain 2 of the SAKT-B polynucleotide is 5EO IU MO:8:
Саснсаїдаїдасасадісіссідаіадісіддссуаюавдісіддадоааасоддаюдасіацісносаадаасісссадісастідсюда асадсддаааїсадааааасіаісідассіддіассадсадаадссаддссадсссссіааасідсідаїстандддсіссассаддда асіддсддсссдасаданйсадсдасадсддсадсддсасадайнНасссюасаанісіадісюсаддссдаддасаюдадсідщіа сіандісадааїдайасадсіаїсссіасаспсддссаддддассаадсідчааанйаааддаддсддаїссддсадсдаадоасодаїа ісааасідсадсадісаддддсдаасіддсаадассіддддссісадідаадащціссідсаадасісіддсіасасстасіадаїаса сдадсасідддіаааасададдссюдасадддісіддаадданддагасанааїссіадссудонНагасіаацасааісадааднс ааддасааддссасандасіасадасаааїссіссадсасадссіасаддсаасідадсадссдасаїсідаддасісюдсадісіана сюдсаадайанащдаюаїсанасідссідасіасіддддссааддсассасісісасадісіссіссддаддаціддсоддідавдаааад їддссадсасдааддадааадноасідстоааададааддісдссдсаснааддааааддісдсадсссідааададСаснсаїдаїдасасадісіссідаіадісіддссуаюавдісіддадоааасоддаюдасіацісносаадаасісссадісастідсюда асадсддаааїсадааааасіаісідассіддіассадсадаадссаддссадсссссіааасідсідаїстандддсіссассаддда асіддсддсссдасаданйсадсдасадсддсадсддсасадайнНасссюасаанісіадісюсаддссдаддасаюдадсідщіа сіандісадааїдайасадсіаїсссіасаспсддссаддддассаадсідчааанйаааддаддсддаїссддсадсдаадоасодаїа ісааасідсадсадісаддддсдаасіддсаадассіддддссісадідаадащціссідсаадасісіддсіасасстасіадаїаса сдадсасідддіаааасададдссюдасадддісіддаадданддагасанааїссіадссудонНагасіаацасааісадааднс ааддасааддссасандасіасадасаааїссіссадсасадссіасаддсаасідадсадссдасаїсідаддасісюдсадісіана сюдсаадайанащдаюаїсанасідссідасіасіддддссааддсассасісісасадісіссіссддаддаціддсоддідавдаааад їддссадсасдааддадааадноасідстоааададааддісдссдсаснааддааааддісдсадсссідааадад
І. Модифіковані варіанти біспецифічного диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А)I. Modified variants of bispecific diethyl, characterized by an optimized sequence of СО123 x СОЗ (ОАКТ-А)
А. Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що містить альбумінзв'язуючий домен (ФБАКТ-А з АВО "м/АВО")A. A bispecific diabody characterized by an optimized sequence of СО123 x POP containing an albumin-binding domain (FBACT-A with ABO "m/ABO")
Згідно із другим варіантом здійснення згідно із даним винаходом, біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) буде містити один або декілька альбумінзв'язуючих доменів (АВО" (ФАКТ-А з АВО "м/АВО") на одній або обох 60 поліпептидних ланцюгах диатіла.According to the second embodiment of the present invention, a bispecific dibody characterized by an optimized sequence of CO123 x POP (OACT-A) will contain one or more albumin-binding domains (ABO" (FACT-A with ABO "m/ABO") on one or both 60 polypeptide chains diethyl.
Як розкрито в міжнародній патентній публікації Ме УМО 2012/018687, для поліпшення іп мімо фармакокінетичних властивостей диатіл, диатіла можна модифікувати так, щоб вони містили поліпептидну частину білка, що зв'язується із сироватковими білками, на одному або декількох кінцях диатіла. Така поліпептидна частина білка, що зв'язується із сироватковими білками, найбільш переважно буде вбудована на С-кінці молекули диатіла. Особливо переважна поліпептидна частина білка, що зв'язується із сироватковими білками, для цієї мети являє собою альбумінзв'язуючий домен (АВО) з білка З стрептокока. Альбумінзв'язуючий домен З (АВОЗ) білка С штаму 5ігеріососси5 148 є особливо переважним.As disclosed in international patent publication Me UMO 2012/018687, in order to improve the ip mimo pharmacokinetic properties of diethyls, diethyls can be modified so that they contain a polypeptide part of a protein that binds to serum proteins at one or more ends of the diethyl. Such a polypeptide part of the protein, which binds to serum proteins, will most preferably be embedded at the C-end of the diethyl molecule. A particularly preferred polypeptide part of the protein that binds to serum proteins, for this purpose, is the albumin-binding domain (ABO) from protein C of streptococcus. Albumin-binding domain C (AVOZ) of protein C of strain 5igeriosossi5 148 is particularly preferred.
Альбумінзв'язуючий домен З (АВОЗ) білка С штаму 5ігеріососси5 5148 складається з 46 амінокислотних залишків, що утворюють стабільну трьохспіральну структуру і характеризується широкою альбумінзв'язуючою специфічністю (допапе5оп, М.О. еї аї. (2002) "Бігисіиге, Зресійсіку,Albumin-binding domain C (AVOZ) of protein C of strain 5igeriosossi5 5148 consists of 46 amino acid residues that form a stable three-helix structure and is characterized by a wide albumin-binding specificity (dopape5op, M.O. ei ai. (2002) "Bigisiige, Zresiisiku,
Апа Моде ОЇ Іпіегасіїоп Рог Васієгіа! АІритіп-Віпаіпд Модиїев, " У. Віої. Спет. 277(10):8114-8120).Apa Mode OI Ipiegasiiop Rog Vasiegia! AIritip-Vipaipd Modiyev, " U. Vioi. Speth. 277(10):8114-8120).
Альбумін являє собою найпоширеніший білок у плазмі і характеризується періодом напіввиведення, що становить 19 днів у людей. Альбумін містить декілька низькомолекулярних сайтів зв'язування, які дозволяють йому нековалентно зв'язуватися з іншими білками і, тим самим, продовжувати їхні періоди напівжиття в сироватці.Albumin is the most abundant protein in plasma and has a half-life of 19 days in humans. Albumin contains several low-molecular-weight binding sites that allow it to bind noncovalently to other proteins and thereby extend their serum half-lives.
Таким чином, перший поліпептидний ланцюг такого біспецифічного диатіла, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що містить альбумінзв'язуючий домен, містить третій лінкер (лінкер 3), який відокремлює Е-спіраль (або К-спіраль) такого поліпептидного ланцюга від альбумінзв'язуючого домена. Переважна послідовність такого лінксера З являє собою ЗЕО ІЮ МО:31: 50505. Переважний альбумінзв'язуючий домен (АВО) характеризується наступною послідовністю (ЗЕО ІО МО:36):Thus, the first polypeptide chain of such a bispecific diethyl, characterized by an optimized sequence of СО123 x POP, containing an albumin-binding domain, contains a third linker (linker 3), which separates the E-helix (or K-helix) of such a polypeptide chain from albuminz' connecting domain. The preferred sequence of such linker C is ZEO IU MO:31: 50505. The preferred albumin-binding domain (ABO) is characterized by the following sequence (ZEO IU MO:36):
ГАЄАКМІ АМАЕГОКМаУЗОМУКМІ ІОМАКЗАЕСУКАПІОЕЇЇГ ААЇ Р.GAYEAKMI AMAEGOKMaUZOMUKMI IOMAKZAESUKAPIOEIIG AAI R.
Таким чином, переважний перший ланцюг, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла, що містить альбумінзв'язуючий домен, характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:9):Thus, the preferred first chain, characterized by the optimized sequence of СО123 x POP of the bispecific diethyl containing the albumin-binding domain, is characterized by the following sequence (5EO IU MO:9):
ОАУМТОЕРБІ ТУ5РОСТМУТІ ТАЗ ТАМ ТТ ЗМУАМУМУМООКРИООСАРВИГ ІС ТМКААРМУТРАНOAUMTOERBI TU5ROSTMUTI TAZ TAM TT ZMUAMUMUMOOKRIOOSARVIG IS TMKAARMUTRAN
ЕЗОаБІ І! ЧСОКААЇ ТІТаАОАЕОЕАрУМСАЇ М УЗМІ УУгсса7ткі тм ссвазасасЕМОЇ МОаИАЕЇEZOABI I! CHSOKAAI TITAAOAEEOEARUMSAI M UZMI UUgssa7tki tm ssvazasasemoi MOaIAEI
ККРОАБУКУЗСКАБаМТЕТОУУМКУМВОАРООСТ ЕМІСОПРОМОАТЕУМОКеЕКИ ВМТ мокKKROABUKUZSKABAMTETOUUMKUMVOAROOST EMISOPROMOATEUMOKeEKY VMT mok
Зо АУМЕГ 551 А5ЕОТАМУУСАВЗНІ І ВАБУУРАУУуСсОС,ТІ МУТУЗЗПаССИ,асСсЕМААЇ ЕКЕМААЇ ЕКЕМААFrom AUMEG 551 A5EOTAMUUSAVZNI AND VABUURAUUuSsOS, TI MUTUZZPASSY, ASSSEMAAI EKEMAAI EKEMAA
ГЕКЕМААЇ ЕКОСІИ5І АЕАКМІ АМАЕЇ ОКУ УОМУКМИПОМАКЗАЕСУКАПІОБЕЇ ГГ ААЇ РHEKEMAAI ECOSII5I AEAKMI AMAEYI OKU UOMUKMYPOMAKZAESUKAPIOBEI GG AAI R
Диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ диатіло, що містить альбумінзв'язуючий домен, складається з: БЕО ІЮ МО:21 - БЕО ІЮ МО:29 - БЕО ІЮ МОС26 - ЗЕБЕО ІВ МО:30 - БЕО ІЮ МО:34 - 5ЕО 10 МО:31 - БЕО ІЮО МО:36. Полінуклеотид, що кодує таке диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що містить дериватив альбумінзв'язуючого домена, являє собою 5ЕО ІЮ МО:10: саддсідюдідасісаддадсснсасідассощдіссссаддсддаасідідасссідасаїддсадаїссадсасаддасдсадіда ссасаїсіаасіасдссаайдддіясадсадаадссаддасаддсассааддддссідаїсдддддаіасааасаааадддсіссса ассссідсасдайнсіддаадієідсдддсддаааддссдсісідасіанассддддсасаддссдаддасдаадссданастаної дсісідюдіаіадсааєсіаддансоаддададдсасаааасюдасідосідддаддддадчдаїссддсадсдааддсдадаюдса дсюддіадсадіссддддседадсідаадааасссддадсіссдідаадащісндсааадссадіддсіасасснсасадасіасіаїаї даадідддісаддсаддсіссаддасадддасіддааі(ддаісоддсдаїаісанссіссаасдаддссасінсіасааіїсадаадшаа аддсаддаюдасіанНассодюддасаааїсаасаадсасідснайадададсідадсісссідсдсісідаадаїасадссоіасіанодід сісддісасассідсідададссадсідашоснандаддасаддоасасссіддідасадщіснссодадаашдіяддсдадодавчаасді дассдсасіддадааадчадданосідстддадааддадаїсосідсасідааааддаддісдсадсссддадаааддсдасдадіс ісідссдаадсаааадіосіддссаассдсдаасіддаіаааіаюдсуададсдацнанНаїіаадаассідандасаасдсааааїсса сддааддсдідааадсасідайдащдааансіддссдсссідссіDiabody characterized by the optimized sequence of СО123 x СОЗ diabody containing albumin-binding domain consists of: BEO IU MO:21 - BEO IU MO:29 - BEO IU MOS26 - ZEBEO IV MO:30 - BEO IU MO:34 - 5EO 10 MO:31 - BEO IYUO MO:36. Полінуклеотид, що кодує таке диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що містить дериватив альбумінзв'язуючого домена, являє собою 5ЕО ІЮ МО:10: саддсідюдідасісаддадсснсасідассощдіссссаддсддаасідідасссідасаїддсадаїссадсасаддасдсадіда ссасаїсіаасіасдссаайдддіясадсадаадссаддасаддсассааддддссідаїсдддддаіасааасаааадддсіссса ассссідсасдайнсіддаадієідсдддсддаааддссдсісідасіанассддддсасаддссдаддасдаадссданастаної дсісідюдіаіадсааєсіаддансоаддададдсасаааасюдасідосідддаддддадчдаїссддсадсдааддсдадаюдса дсюддіадсадіссддддседадсідаадааасссддадсіссдідаадащісндсааадссадіддсіасасснсасадасіасіаїаї даадідддісаддсаддсіссаддасадддасіддааі(ддаісоддсдаїаісанссіссаасдаддссасінсіасааіїсадаадшаа аддсаддаюдасіанНассодюддасаааїсаасаадсасідснайадададсідадсісссідсдсісідаадаїасадссоіасіанодід сісддісасассідсідададссадсідашоснандаддасаддоасасссіддідасадщіснссодадаашдіяддсдадодавчаасді дассдсасіддадааадчадданосідстддадааддадаїсосідсасідааааддаддісдсадсссддадаааддсдасдадіс ісідссдаадсаааа diosiddssaassdsdaasiddaiaaaaiayudsuadadsdacnanNaiiiaadaaassidandasaasdsaaaaaissa sddaaddsdidaaadsasidaydaschdaaansiddssdsssidssi
Другий поліпептидний ланцюг такого диатіла, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3, що містить альбумінзв'язуючий домен, характеризуєтьсяThe second polypeptide chain of such a diethyl, characterized by an optimized sequence of СО123 x СОЗ3, containing an albumin-binding domain, is characterized
БО послідовністю, описаною вище (5ЕБО ІЮО МО:3) і кодується полінуклеотидом, що характеризуються послідовністю 5ЕО ІЮ МО 4.BO by the sequence described above (5EBO IJU MO:3) and encoded by a polynucleotide characterized by the sequence 5EO IJU MO 4.
В. Біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що містять домен Ес Іде (БАКТ-А з Ес "Мми/гс")B. Bispecific dibodies, characterized by an optimized sequence of СО123 x POP, containing the Es Ide domain (BACT-A with Es "Mmy/gs")
Згідно із третім варіантом здійснення згідно із даним винаходом передбачено характеризуюче оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3 біспецифічне диатіло, що складається із трьох поліпептидних ланцюгів і, що містить домен Ес Ід (версія 1 і версія 2 рАВТА-А з Ес "м/Ес") (фігура ЗА-ЗВ).According to the third variant of implementation according to the present invention, a bispecific dibody characterized by an optimized sequence of СО123 x СОЗ3, consisting of three polypeptide chains and containing the Es Id domain (version 1 and version 2 pAVTA-A with Es "m/Es") ( figure ZA-ZV).
Для утворення такого домена Ес ІдО перший і третій поліпептидний ланцюг диатіла містять, у напрямку від М-кінця до С-кінця, цистеїнмісткий пептид, (найбільш переважно пептид 1, що 60 характеризується амінокислотною послідовністю (ЗЕО ІЮ МО:55): ОКТНТСРРСР), деяку частину або весь домен СНАІ і/або деяку частину або весь домен СНЗ повного домена Ес імуноглобуліну і С-кінець. Деяка частина або весь домен СН2 і/або деяка частина або весь домен СНЗ3 асоціюються з утворенням домена Ес імуноглобуліну біспецифічних моновалентних утримуючихFor the formation of such an Es IdO domain, the first and third polypeptide chains of diethyl contain, in the direction from the M-terminus to the C-terminus, a cysteine-containing peptide, (most preferably peptide 1, characterized by the amino acid sequence (ZEO IU MO:55): OKTNTSRRSR), some part or all of the SNAI domain and/or some part or all of the SNZ domain of the complete Es immunoglobulin domain and the C-terminus. Some or all of the CH2 domain and/or some or all of the CH3 domain are associated with the formation of the Es domain of immunoglobulin bispecific monovalent retention
Ес домен диатіл згідно із даним винаходом. Перший і другий поліпептидні ланцюги біспецифічних моновалентних Ес - диатіл згідно із даним винаходом ковалентно зв'язані один з одним, наприклад, шляхом зв'язування дисульфідним зв'язком цистеїнових залишків, розташованих у межах цистеїнмісткого пептиду поліпептидних ланцюгів.Es domain diethyl according to the present invention. The first and second polypeptide chains of bispecific monovalent Es-diethyl according to the present invention are covalently linked to each other, for example, by disulfide bonding of cysteine residues located within the cysteine-containing peptide of the polypeptide chains.
Домени СН2 і/або СНЗ першого і третього поліпептидів необов'язково повинні бути ідентичними і переважно модифіковані так, щоб сприяти утворенню комплексу між двома поліпептидами. Наприклад, амінокислотна заміна (переважно заміна на амінокислоту, що містить об'ємну бічну групу, що утворює "виступ", наприклад, триптофан) може бути введена в домен СН2 або СНЗ так, щоб стеричний вплив запобігав взаємодії з аналогічно мутованим доменом і змушувало мутований домен утворювати пари з доменом, у якому була сконструйована комплементарна, або забезпечуюча розміщення мутація, тобто "западина" (наприклад, заміна на гліцин). Такі набори мутацій можна сконструювати в будь-якій парі поліпептидів, що містять молекулу біспецифічного моновалентного Ес - диатіла, і, крім того, сконструювати в будь-якій частині поліпептидних ланцюгів зазначеної пари. Способи білкової інженерії, щоб сприяти гетеродимеризації замість гомодимеризації, добре відомі в даній області техніки, зокрема, відносно інженерії імуноглобуліноподібних молекул, і передбачені в даному документі (див., наприклад, Кіддулау еї аї. (1996) "Кпорз-Іпіо-Ноїез' Епдіпеегіпд ОЇ Апіїрбоду СНЗThe CH2 and/or CH3 domains of the first and third polypeptides do not necessarily have to be identical and are preferably modified to facilitate the formation of a complex between the two polypeptides. For example, an amino acid substitution (preferably a substitution with an amino acid containing a bulky side group that forms a "protrusion", such as tryptophan) can be introduced into the CH2 or CH3 domain such that the steric effect prevents interaction with the similarly mutated domain and forces the mutated domain to pair with a domain in which a complementary or accommodating mutation, i.e., a "pocket" (for example, a glycine substitution), has been engineered. Such sets of mutations can be constructed in any pair of polypeptides containing a molecule of bispecific monovalent Es - diethyl, and, in addition, constructed in any part of the polypeptide chains of the indicated pair. Methods of protein engineering to promote heterodimerization instead of homodimerization are well known in the art, particularly with respect to the engineering of immunoglobulin-like molecules, and are contemplated herein (see, e.g., Kiddulau et al. (1996) Kporz-Ipio-Noyes' Epidep. OI Apiirbodu SNZ
Ботаїпе Рог Неаму СНаїп Неїегодітегігайоп, " Ргоїєїп Епадг. 9:617-621, Амуеї! єї аї. (1997) "ЗтабієBotaipe Rog Neamu SNaip Neiegoditegigayop, "Rgoieip Epadg. 9:617-621, Amueyi! yei ai. (1997) "Ztabiye
Неїегодітег5 Егот Ветоавєїїпд Те ЮОотаїп Іпіепасе ОЇ А Нотодітег О5іпд А Ріаде ОізріауNeiegoditeg5 Egot Vetoaveiiipd Te YuOotaip Ipiepase OII A Notoditeg O5ipd A Riade Oizriau
Мргагу, " У. Мої. Віої. 270: 26-35, апа Хіє еї аї. (2005) "А Мем Рогтаї ОЇ Візресіїйс Апіїбоду: НідніуMrgagu, " U. Moi. Vioi. 270: 26-35, apa Hie ei ai. (2005) "A Mem Rogtai OYI Vizresiiis Apiibodu: Nidniu
ЕНісієепі Неїегодітегігайоп, Ехргеззіоп Апа Титог Сеї! Гувів, " У. Іттипої. Меїйоав 296:95-101; кожна з яких повністю включена в даний документ за допомогою посилання). Переважно, що "виступ" конструюють у доменах СН2-СНЗ першого поліпептидного ланцюга, а "западину" конструюють у доменах СН2-СНЗ третього поліпептидного ланцюга. Таким чином, "виступ" буде сприяти в запобіганні гомодимеризації першому поліпептидному ланцюгу за допомогою своїх доменів СН2 і/або СНЗ. Оскільки третій поліпептидний ланцюг переважно містить заміну, щоENisieepi Neiegoditegigayop, Ehrgeziop Apa Tytog Sei! Guviv, " U. Ittipoi. Meiyoav 296:95-101; each of which is fully incorporated herein by reference). Preferably, the "protrusion" is constructed in the CH2-CH3 domains of the first polypeptide chain, and the "recess" is constructed in the domains CH2-CH3 of the third polypeptide chain. Thus, the "protrusion" will assist in preventing homodimerization of the first polypeptide chain by means of its CH2 and/or CH3 domains. Since the third polypeptide chain preferably contains a substitution that
Зо забезпечує утворення "западини", вона буде гетеродимеризоватися з першим поліпептидним ланцюгом, а також гомодимеризоватися один з одним. Переважний виступ створюється шляхом модифікації домена Ес нативного домена Ес дос так, щоб вона містила модифікацію Т36бМУ.Zo ensures the formation of a "well", it will heterodimerize with the first polypeptide chain, as well as homodimerize with each other. The overhang is created by modifying the Es domain of the native Es dos domain so that it contains the T36bMU modification.
Переважна западина створюється шляхом модифікації домена Ес нативного домена Ес Ідс, щоб вона містила модифікацію 73665, І З368А і У407М. Для сприяння в очищенні гомодимера третьому поліпептидному ланцюгу від кінцевого біспецифічного моновалентного Ес - диатіла, що містить перший, другий і третій поліпептидні ланцюги, сайт зв'язування з білком А доменівA preferred depression is created by modifying the Es domain of the native Es domain to contain the 73665, I Z368A, and U407M modifications. To assist in the purification of the homodimer of the third polypeptide chain from the terminal bispecific monovalent Es - diethyl containing the first, second and third polypeptide chains, the binding site with the protein A domains
СнН2г ї СНЗ третього поліпептидного ланцюга переважно піддають мутації за допомогою амінокислотної заміни в положенні 435 (Н435К). Таким чином, гомодимер третього поліпептидного ланцюга не буде зв'язуватися з білком А, тоді як біспецифічне моновалентне Ес - диатіло буде зберігати свою здатність зв'язувати білок А через сайт зв'язування з білком А на першому поліпептидному ланцюзі.СНН2г and СНЗ of the third polypeptide chain are preferably mutated by means of an amino acid substitution at position 435 (Н435К). Thus, the homodimer of the third polypeptide chain will not bind to protein A, while the bispecific monovalent Es-diabody will retain its ability to bind protein A through the binding site to protein A on the first polypeptide chain.
Переважна послідовність для доменів СН2 і СНЗ домена Ес антитіла, що присутня в першому поліпептидному ланцюзі, являє собою (ЗЕО ІЮ МО:56):The preferred sequence for the CH2 and CH3 domains of the Es domain of the antibody, which is present in the first polypeptide chain, is (ZEO IU MO:56):
АРЕААСОИаРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМИМЕМНМАКТКРАЕЕAREAASOIaRBZURBI ERRKRKOTI MIZVTREUTSMUMOUZNEOREUKEMU UMIMEMNMAKTKRAEEE
ОММОТУАУМ5МІ ТМ НОБУУЛ МЕ КЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМOMMOTUAUM5MI TM NOBUUL ME KEUKSKUSMKAI RARIEKTIZKAKYORAEROMMUTI RROVEEMTKM
ОМБІ МС УКОЕМРЗОІАМЕЖМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ЮОБраЗЕРІ ЗК ТМОКЗАУМООСМУЕЗОСБМOMBI MS UKOEMRZOIAMEZHM EZMSOREMMUKTTRRMI YUOBrazERI ZK TMOKZAUMOSMUEZOSBM
МНЕАЇІ НМНУТОК5БІ 5І РОКMNEAIII NMNUTOK5BI 5I YEAR
Переважна послідовність для доменів СН2 і СНЗ домена Ес антитіла, що присутня в третьому поліпептидному ланцюзі, являє собою (ЗЕО ІЮ МО:11):The preferred sequence for the CH2 and CH3 domains of the Es antibody domain, which is present in the third polypeptide chain, is (ZEO IU MO:11):
АРЕААСОИаРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМИМЕМНМАКТКРАЕЕAREAASOIaRBZURBI ERRKRKOTI MIZVTREUTSMUMOUZNEOREUKEMU UMIMEMNMAKTKRAEEE
ОММОТУАУМ5МІ ТМ НОБУУЛ МЕ КЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКСОРАЕРОМУУТІ РРОВЕЕМТКМOMMOTUAUM5MI TM NOBUUL ME KEUKSKUSMKAI RARIEKTIZKAKSORAEROMUUTI RROVEEMTKM
ОМ5І ЗСАУКагУРЗВІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5раЗЕРІ УК ТУоКЗАУМУОВаМУЕЗСОСВМOM5I ZSAUKagURZVIAMEMEZMSOREMMUKTTRRMI O5raZERI UK TUoKZAUMUOVAvaMUEZSOSVM
МНЕАЇІ НМАУТОК5БІ ЗІ РОКMNEAIII NMAUTOK5BI SI ROK
С. Конструкт версії 1 ОАКТ-А м/гсS. Construct version 1 OAKT-A m/gs
Щоб проілюструвати такі Ес - диатіла, згідно із даним винаходом передбачено конструкт версії 1 ОАКТ-А м/Ес. Перший поліпептид конструкта версії 1 ОАКТ-А м/Ес містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М-кінець, домен МІ. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися зIn order to illustrate such Es - diatila, according to this invention, the construct version 1 OAKT-A m/Es is provided. The first polypeptide of the construct version 1 OAKT-A m/Es contains, in the direction from the M-terminus to the C-terminus, the M-terminus, the MI domain. of a monoclonal antibody capable of binding to
СО123 (Мі соіг2з), проміжний лінкерний пептид (лінкер 1), домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНсоз), лінкер 2, Е-спіральний домен, лінкер 5, пептид 1, 60 поліпептид, який містить домени СН2 і СНЗ домена Ес, і С-кінець. Переважний лінкер 5 характеризується послідовністю (5ЕСО ІЮ МО:32): 5600. Переважний поліпептид, який містить домени СНІ їі СНЗ домена Ес, характеризується наступною послідовністю (ЗЕО ІЮ МО:37):CO123 (Mi soig2z), intermediate linker peptide (linker 1), MH domain of a monoclonal antibody capable of binding to SOZ (MHsoz), linker 2, E-helical domain, linker 5, peptide 1, 60 polypeptide containing CH2 domains and the NW of the Es domain, and the C-terminus. The preferred linker 5 is characterized by the sequence (5ЕСО IЮ MO:32): 5600. The preferred polypeptide, which contains the SNI and SНZ domains of the Es domain, is characterized by the following sequence (ZEO IЮ MO:37):
АРЕААСОИаРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМИМЕМНМАКТКРАЕЕAREAASOIaRBZURBI ERRKRKOTI MIZVTREUTSMUMOUZNEOREUKEMU UMIMEMNMAKTKRAEEE
ОММОТУАУМ5МІ ТМ НОБУУЛ МЕ КЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМOMMOTUAUM5MI TM NOBUUL ME KEUKSKUSMKAI RARIEKTIZKAKYORAEROMMUTI RROVEEMTKM
ОМБІ МС УКОЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБравзЕРІ ЗК ТМОКЗАМмОбаМУЕОБМOMBI MS UKOEMRZOIAMEM EZMSOREMMUKTTRRMI OBROWSERI ZK TMOKZAMmObaMUEOBM
МНЕАЇІ НМНУТОК5БІ ЗІ РОКMNEAIII NMNUTOK5BI SI ROK
Таким чином, перший поліпептид такого конструкта версії 1 САКТ-А м/с складається з наступного: ЗЕО ІЮ МО:25 - БЕО ІЮ МО:29 - БЕО ІЮ МО:22 - БЕО ІЮ МО:30 - БЕО ІЮ МО:34 - БЕОThus, the first polypeptide of this construct version 1 SACT-A m/s consists of the following: ZEO IU MO:25 - BEO IU MO:29 - BEO IU MO:22 - BEO IU MO:30 - BEO IU MO:34 - BEO
ІО МО:З32 - БЕО ІЮ МО:55 - БЕО ІЮ МО:37.IO MO:Z32 - BEO IU MO:55 - BEO IU MO:37.
Переважна послідовність першого поліпептиду такого конструкта версії 1 САКТ-А м/гс характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:13):The preferred sequence of the first polypeptide of this construct version 1 of SAKT-A m/gs is characterized by the following sequence (5EO IU MO:13):
ВЕММТО5РОБІ АМ5І СЕВНУТМЗОСКОЗЗОБИ МЗаМОКММІ ПУМООКРООРРК МУ АЗТВЕЗОаVEMMTO5ROBI AM5I SEVNUTMZOSKZOZOBY MZaMOKMMI PUMOOKROORRK MU AZTVEZOa
УєхРОовЕЗаЗазатовТІ ТЗІ ОАДЕОМАУУУСОМОМЗУРУТРСОСТКІ ЕІКаОСОаБассасСЕМОЇ МЕЗО са МОРєРааБІ ВІ ЗСААЗаєТЕЗТМАММУМУУВОАРОаКаИаї ЕУУМавіВЗКУМММАТУМАОЗУКОВЕТІЗА рОБКМ5І М ОММ5ЗІ КТЕОТАУУУуСУВВНЕОЕМеаМЗУУ ЗМ гам аОоС,сТІ УтУЗааСаасЕМАА ЕКЕUekhroovezzazatovti tzi oadeomauuusomzurutrsostki eikaosoabassassemoi mezo sa moreRaabi vi zsaazaeteztmammumuuuvoaroaKaIai EUUMaviVzkummmatumaoZukovetiza rOBKM5I M OMM5zi KTEOTAUUuuSUVvneOemeaMZUU ZaaAaSEM aOoS,s
МААЇ ЕКЕМААЇ ЕКЕМААГ ЕКОССЯСОКТНТОРРСОРАРЕДАСОРБЗУНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАВТРЕМТСУУМОMAAI EKEMAAI EKEMAAG ECOSSYASOKTNTTORRSORAREDASORBZUNBI ERRKRKOTI MIZAVTREMTSUUMO
МЗНЕОРЕУКЕМУУУрамЕМНМАКТКРАЕЄОММОЗТУАМУМЗМІ ТМ НОБУ/ЛІ МЕКЕМКОСКМУМЗМКАГ РАРMZNEOREUKEMUUUramEMNMAKTKRAEEOMMOZTUAMUMZMI TM NOBU/LI MEKEMKOSKMUMZMKAG RAR
ІЕКТІЗКАКаОРАЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5БІ М СІ МКаЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСЕОРЕММУКТТРРМІ. розравзгЕвгУЗкІі ТМоКЗАМОСС,ММЕЗСЗУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І РОКIEKTIZKAKaORAEROMUTI RROVEEMTKMOM5BI M SI MKaEMRZOIAMEM EZMSEOREMMUKTTRRMI. Explanations of TMoKZAMOSS, MMEZSZUMNEAI NMNUTOKOBI 5TH YEAR
Переважний полінуклеотид кодуючий такий поліпептид, являє собою (ЗЕО ІЮ МО:14): даснсдюдаїдасасацдісіссідаїадісіддссодадвісіддддаадсддадідасіаісндсаададсісссадісасідсда асадсддаааїсадааааасіаісідассіддіассадсадаадссаддссадсссссіааасідсідаїсіандддснссассаддда асіддсддсссдасаданйсадсдасадсддсадсддсасадайнНасссюасаанісіадісюсаддссдаддасаюдадсідщіа сіандісадааїдайцасадсіаїсссіасаспсддссадддадассаадсіддааайаааддаддсддаїссддсадсдааддсдад дідсадсіддіддадісюдаддаддснодіссадссіддадддаісссідадасісіссіідсадссісіддайсассисадсасаїасус їаїдаанпдодіссдссаддсіссадддааддддсіддаяддаодааддаїсаддіссаадіасаасаацнаюдсаассіасіадхессд асісюі(дааддаіадайсассаїсісаадададаїйсааадаасісасіціаісідсаааїдаасадссідаааассдаддасасддсс діюїанасіцідідадасасодіаасіїсддсаанснасощдіснданоснанддде асаддоддасасіддаідасідідіснссддадда тіддсоадіддадаадіддссдсасіддадааададанддсідстддадааддаддісдсідсасндааааддаддісдсадсссідаПереважний полінуклеотид кодуючий такий поліпептид, являє собою (ЗЕО ІЮ МО:14): даснсдюдаїдасасацдісіссідаїадісіддссодадвісіддддаадсддадідасіаісндсаададсісссадісасідсда асадсддаааїсадааааасіаісідассіддіассадсадаадссаддссадсссссіааасідсідаїсіандддснссассаддда асіддсддсссдасаданйсадсдасадсддсадсддсасадайнНасссюасаанісіадісюсаддссдаддасаюдадсідщіа сіандісадааїдайцасадсіаїсссіасаспсддссадддадассаадсіддааайаааддаддсддаїссддсадсдааддсдад дідсадсіддіддадісюдаддаддснодіссадссіддадддаісссідадасісіссіідсадссісіддайсассисадсасаїасус їаїдаанпдодіссдссаддсіссадддааддддсіддаяддаодааддаїсаддіссаадіасаасаацнаюдсаассіасіадхессд асісюі(дааддаіадайсассаїсісаадададаїйсааадаасісасіціаісідсаааїдаасадссідаааассдаддасасддсс діюїанасіцідідадасасодіаасіїсддсаанснасощдіснданоснанддде асаддоддасасіддаідасідідіснссддадда тіддсоадіддадаадіддссдсасіддадааададанддсідстддадааддаддісдсідсасндааааддаддісдсадсссіда
Зо адаааддсддсддддасаааасісасасаїдсссассдідсссадсассідаадссосддаадддассодісадісіссісносссссаа аасссааддасасссісаїдаїсісссддассссідаддісасадсдіддддодасддадссасдаадасссідаддісааднсаа сюдіасадаасдасдддваддідсаїааїдссаадасааадссосддааддадсадіасаасадсасотассдуідюддісадсаіїссі сассдіссюсассаддасіддсдааіддсааддадіасаадідсааддісіссаасааадсссісссадсссссаїсдадаааассаї сіссааадссазадддсадссссдадаассасаддідіасасссідсссссаїсссдддаддадаїдассаадаассаддісадссідчі даїдссіддісааадодсіїсіаїсссадсдасаіїсдссудіддадіяддададсаадддсадссддадаасаасіасаадассасдссіс ссдідсіддасіссдасддсісснсНссісіасадсаадсісассуіддасаададсаддіддсадсаддддаасодіснсісаїдсіссді даюсаїдаддсісідсасаассасіасасдсадаададссісісссідісіссдддіаааЗо адаааддсддсддддасаааасісасасаїдсссассдідсссадсассідаадссосддаадддассодісадісіссісносссссаа аасссааддасасссісаїдаїсісссддассссідаддісасадсдіддддодасддадссасдаадасссідаддісааднсаа сюдіасадаасдасдддваддідсаїааїдссаадасааадссосддааддадсадіасаасадсасотассдуідюддісадсаіїссі сассдіссюсассаддасіддсдааіддсааддадіасаадідсааддісіссаасааадсссісссадсссссаїсдадаааассаї сіссааадссазадддсадссссдадаассасаддідіасасссідсссссаїсссдддаддадаїдассаадаассаддісадссідчі даїдссіддісааадодсіїсіаїсссадсдасаіїсдссудіддадіяддададсаадддсадссддадаасаасіасаадассасдссіс ссдідсіддасіссдасддсісснсНссісіасадсаадсісассуіддасаададсаддіддсадсаддддаасодіснсісаїдсіссді даюсаїдаддсісідсасаассасіасасдсадаададссісісссідісіссдддіааа
Другий ланцюг такого конструкта версії 1 САКТ-А м/Ес буде містити, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М-кінець, домен Мі. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СЮОЗ (Мі соз), проміжний лінкерний пептид (лінкер 71), домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СЮО123 (МНеоігз), лінкер 2, К-спіральний домен і С-кінець. Таким чином, другий поліпептид такого конструкта версії 1 ОАКТ-А м/с складається з наступного: БЕО ІЮ МО:21 -The second chain of such a construct version 1 SAKT-A m/Es will contain, in the direction from the M-terminus to the C-terminus, the M-terminus, the Mi domain. of a monoclonal antibody capable of binding to SHUOZ (Mi soz), intermediate linker peptide (linker 71), MH domain of a monoclonal antibody capable of binding to SHUO123 (MNeoigz), linker 2, K-helical domain and C-terminus. Thus, the second polypeptide of this construct version 1 OAKT-A m/s consists of the following: BEO IU MO:21 -
ЗЕО ІЮ МО:29 - 5БО ІЮО МО26 - 5ЕБО І МО:30 - 5ЕБО ІО МО:35. Такий поліпептид характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:15): даумідерзм5радімств5ідамизпуапиудаКкрддаргдііддаіпКкгарулранздвзідокаанндадаєдеадуусаї жузпімладакимідддазададекцімаздавіккрдазукуизсКазаутауутКммтаарададїіемідайрзпданупакікаг міймакзівїауте!55іІїзеагамуусагзпІгазулаумддаіміи55дасддаКмааіКекмиааІКеКиааІКекмаа!КеZEO IU MO:29 - 5BO IYUO MO26 - 5EBO I MO:30 - 5EBO IO MO:35. Такий поліпептид характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:15): даумідерзм5радімств5ідамизпуапиудаКкрддаргдііддаіпКкгарулранздвзідокаанндадаєдеадуусаї жузпімладакимідддазададекцімаздавіккрдазукуизсКазаутауутКммтаарададїіемідайрзпданупакікаг міймакзівїауте!55іІїзеагамуусагзпІгазулаумддаіміи55дасддаКмааіКекмиааІКеКиааІКекмаа!Ке
Переважний полінуклеотид, що кодує такий поліпептид, характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮО МО:16): саддсідюдідасісаддадсснсасідассдідіссссаддсддаасідідасссдасаїдсадаїссадсасаддсдсадщда ссасаїсіаасіасдссаайдддіясадсадаадссаддасаддсассааддддссідаїсдддддаіасааасаааадддсіссса ассссідсасдайнсіддаадісідсюдддсоддаааддссодсісідасіанассдддасасаддассдаддасдаадссданасіаняої дсісідюдіаіадсаафсідддаонсоаддададдсасаааасідасідідсідааддаддідаассддсддсоддадасдаддаоса дсюддіадсадіссддддседадсідаадааасссддадсіссдідаадащісндсааадссадіддсіасасснсасадасіасіаїаї даадідддісаддасаддсіссаддасадддасіддааі(ддаісодсдаїаісанссиссаасдддассасцісіасааіїсадаадащтшаа аддсаддаюдасіанНассоіддасаааїсаасаадсасідснагадаоадсідадсісссідсдсісідаадаїасадссоаютасіаноїд сісддісасассідсідададссадсідашоснандаддасаддоасасссіддідасадщіснссодадаадіяддсдадодаааацді дассдсасідааддадааауноасідстдааададааддісдссдсаснааддааааддісдсадсссдааададПереважний полінуклеотид, що кодує такий поліпептид, характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮО МО:16): саддсідюдідасісаддадсснсасідассдідіссссаддсддаасідідасссдасаїдсадаїссадсасаддсдсадщда ссасаїсіаасіасдссаайдддіясадсадаадссаддасаддсассааддддссідаїсдддддаіасааасаааадддсіссса ассссідсасдайнсіддаадісідсюдддсоддаааддссодсісідасіанассдддасасаддассдаддасдаадссданасіаняої дсісідюдіаіадсаафсідддаонсоаддададдсасаааасідасідідсідааддаддідаассддсддсоддадасдаддаоса дсюддіадсадіссддддседадсідаадааасссддадсіссдідаадащісндсааадссадіддсіасасснсасадасіасіаїаї даадідддісаддасаддсіссаддасадддасіддааі(ддаісодсдаїаісанссиссаасдддассасцісіасааіїсадаадащтшаа аддсаддаюдасіанНассоіддасаааїсаасаадсасідснагадаоадсідадсісссідсдсісідаадаїасадссоаютасіаноїд сісддісасассідсідададссадсідашоснандаддасаддоасасссіддідасадщіснссодадаадіяддсдадодаааацді дассдсасідааддадааауноасідстдааададааддісдссдсаснааддааааддісдсадсссдааадад
Третій поліпептидний ланцюг такої версії 1 САКТ-А м/с буде містити домени СН2 і СНЗ домена Ес дО. Переважний поліпептид складається з пептиду 1 (5ЕО ІЮ МО:55) і доменів СН2 іThe third polypeptide chain of this version 1 of SAKT-A m/s will contain the CH2 and CH3 domains of the Es dO domain. A preferred polypeptide consists of peptide 1 (5EO IU MO:55) and domains CH2 and
СНЗ домена Ес (5ЕО ІЮО МО:11) і характеризується послідовністю 5ЕО ІЮ МО:54:The SNZ of the Es domain (5EO IYUO MO:11) and is characterized by the sequence 5EO IYU MO:54:
ОКТНТСОРРСОРАРЕДАСОИРБЗУНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕМУ УМрИаМЕМOKTNTSORRSORAREDASOIRBSUNBI ERRKRKOTI MIZVTREUTSUUMOMZNEOREUKEMU UMRYAMEM
НМАКТКРАЕЕЕОУМЗТУВУУБМІ ТМ НОСУМІ МЕКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКСОРАЕЕРОММТІNMAKTKRAEEEOUMZTUUVUUBMI TM NOSUMI MEKEUKSKUZMKAI RARIEKTIZKAKSORAEEROMMTI
РРОВЕЕМТКМОМУ5І БСАУКаєУРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5ОрОаЗЕРІ УЗКІТМОКЗАМУRROVEEMTKMOMU5I BSAUKaeURZOIAMEM EZMSOREMMUKTTRRMI O5OrOazERI UZKITMOKZAMU
ООСМУМЕЗСЗУММНЕАЇ НМАУТОКОІ 5І 5РОКOOSMUMEZSSZUMMNEAII NMAUTOKOII 5I 5YEAR
Переважний полінуклеотид, який кодує такий поліпептид, характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:12): дасаааасісасасаїдсссассудідсссадсассюаадссдсддаддддассадісадіснеосісносссссаааасссааддас асссісаїдаїсісссддассссдададісасадсддаюддіддасдададссасдаадасссідаддісаадісаасіддіасодчдас дасдіддаддідсаіааі|дссаадасааадссдсдддаддадсадіасаасадсасоаїассдщдіддісадсдіссісассдіссідсас саддасіддсіааддсааддадіасаадідсааддісіссаасааадсссісссадсссссаїсдадаааассаїсіссададссаа аддасадссссдадаассасаддідіасасссідсссссаїсссдддаддададассаадаассаддісадссідчадн дсдсадіса аадаснсіаїсссадсдасаїсдссудоаадодаоадададсаадддсадссддадаасаасіасаадассасдссісссоюдсіддасі ссдасддсісснсіїссісдісадсаадсісассдіддасаададсаддддсадсаддддаасдісіїсісаюдсіссдадаїдсащда9да сісідсасаассдсіасасдсадаададссісісссідісіссодддіаааПереважний полінуклеотид, який кодує такий поліпептид, характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:12): дасаааасісасасаїдсссассудідсссадсассюаадссдсддаддддассадісадіснеосісносссссаааасссааддас асссісаїдаїсісссддассссдададісасадсддаюддіддасдададссасдаадасссідаддісаадісаасіддіасодчдас дасдіддаддідсаіааі|дссаадасааадссдсдддаддадсадіасаасадсасоаїассдщдіддісадсдіссісассдіссідсас саддасіддсіааддсааддадіасаадідсааддісіссаасааадсссісссадсссссаїсдадаааассаїсіссададссаа аддасадссссдадаассасаддідіасасссідсссссаїсссдддаддададассаадаассаддісадссідчадн дсдсадіса аадаснсіаїсссадсдасаїсдссудоаадодаоадададсаадддсадссддадаасаасіасаадассасдссісссоюдсіддасі ссдасддсісснсіїссісдісадсаадсісассдіддасаададсаддддсадсаддддаасдісіїсісаюдсіссдадаїдсащда9да сісідсасаассдсіасасдсадаададссісісссідісіссодддіааа
О. Конструкт версії 2 ОАКТ-А м/гсO. Construction version 2 OAKT-A m/gs
В якості другого прикладу такого диатіла ЮАКТ-А м/с, згідно із даним винаходом передбачено трьохланцюгове диатіло, "версія 2 диатіла ПОАКТ-А м/Ес" (фігура ЗВ).As a second example of such a diatyl YUAKT-A m/s, according to the present invention, a three-chain diatyl, "version 2 diatyl POAKT-A m/Es" is provided (figure 3B).
Перший поліпептид такого конструкта версії 2 ОАКТ-А м/Ес містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М-кінець, пептидний лінкер (пептид 1), поліпептид, який містить домени СН2 і СНЗ домена Ес, з'єднаний (за допомогою лінкера 4) з доменом Мі моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (Мі соігз), проміжний лінкерний пептид (лінкер 1), домен. МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНеоз), лінкер 2, К-спіральний домен іThe first polypeptide of this construct version 2 OAKT-A m/Es contains, in the direction from the M-end to the C-end, the M-end, a peptide linker (peptide 1), a polypeptide that contains the CH2 and CH3 domains of the Es domain, connected (using linker 4) with the Mi domain of a monoclonal antibody capable of binding to CO123 (Mi soigz), an intermediate linker peptide (linker 1), domain. MN of a monoclonal antibody capable of binding to POPs (MNeoz), linker 2, K-helical domain and
С-кінець.C-end.
Переважний поліпептид, який містить домени СН2 ії СНЗ домена Ес, характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:37):The preferred polypeptide, which contains the CH2 and CH3 domains of the Es domain, is characterized by the following sequence (5EO IU MO:37):
АРЕААСОИаРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСМУМОУЗНЕОРЕУКЕМУ УМИМЕМНМАКТКРАЕЕ 0) ОММОТУАУМ5МІ ТМ НОБУУЛ МЕ КЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМAREAASOIaRBZURBI ERRKRKOTI MIZVTREUTSMUMOUZNEOREUKEMU UMIMEMMMNMAKTKRAEEE 0) OMMOTUAUM5MI TM NOBUUL ME KEUKSKKUZMKAI RARIEKTIZKAKIORAEROMMUTI RROVEEMTKM
ОМБІ МС УКОЕМРЗОІАМЕЖМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ЮОБраЗЕРІ ЗК ТМОКЗАУМООСМУЕЗОСБМOMBI MS UKOEMRZOIAMEZHM EZMSOREMMUKTTRRMI YUOBrazERI ZK TMOKZAUMOSMUEZOSBM
МНЕАЇІ НМНУТОК5БІ ЗІ РОК "Лінкер 4" переважно буде містити амінокислотну послідовність (ЗЕО ІЮ МО:57): АР555.MNEAIII NMNUTOK5BI ZI ROK "Linker 4" will preferably contain the amino acid sequence (ZEO IU MO:57): AR555.
Переважний "лінкер 4" характеризується послідовністю (ЗЕО ІЮ МО:33): АРОЗЗРМЕ. Таким чином, перший поліпептид такого конструкта версії 20АКТ-А м/гс складається з наступного:The predominant "linker 4" is characterized by the sequence (ZEO IU MO:33): AROZZRME. Thus, the first polypeptide of this construct version 20AKT-A m/gs consists of the following:
ЗЕО ІО МО:55 - БЕО ІЮ МО:37 - БЕО І МО:3З3 - БЕО ІЮ МО:25 - БЕО 10 МО:29 - БЕО ІЮ МО:22 -ZEO IU MO:55 - BEO IU MO:37 - BEO I MO:3З3 - BEO IU MO:25 - BEO 10 MO:29 - BEO IU MO:22 -
ЗЕО ІЮ МО:30 - БЕО ІЮ МО:35. Поліпептид, що характеризується такою послідовністю, являє собою (ЗЕО ІО МО:17):ZEO IU MO:30 - BEO IU MO:35. The polypeptide characterized by this sequence is (ZEO IO MO:17):
ОКТНТСОРРСОРАРЕДАСОИРБЗУНБІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕУТСУУМОМЗНЕОРЕУКЕМУ УМрИаМЕМOKTNTSORRSORAREDASOIRBSUNBI ERRKRKOTI MIZVTREUTSUUMOMZNEOREUKEMU UMRYAMEM
НМАКТКРАЕЕЕОУМЗТУВУУМІ ТМ НОМ МСКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОММТІNMAKTKRAEEEOUMZTUVUUMI TM NOM MSKEUKSKUZMKAI RARIEKTIZKAKOORAEROMMTI
РРОВЕЕМТКМОМУ5БІ МУСІ УКЕЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБОраЗЕРІ КІ ТУОКВАМУRROVEEMTKMOMU5BI MUSI UKEEMRZOIAMEM EZMSOREMMUKTTRRMI OBORAZERI KI TUOKVAMU
ОООСММЕЗСЗУММНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І 5РОКАРЗЗЗРМЕВЕММТО5РОБІ АМ5І ЕНУТМЗОСКЗОOOOSMMEZSSZUMMNEAII NMNUTOKOBI 5I 5ROKARZZZRMEVEMMTO5ROBI AM5I ENUTMZOSKZO
З МБамМОКкмМмМІ ТУМООКРИаОРРКІ ПУ АЗТАЕЗаМУРєРОВЕЗаЗазатовТтІ ТЗІ ОАЕОМАМУУУСZ MBamMOKkmMmmI TUMOOKRYaORRKI PU AZTAEZaMURyerovezaZazatovTtI TZI OAEOMAMUUUS
ОМОУ5УРУТРСОСТКІ ЕІКСОСОСЗССИасСЕМОЇ МЕЗО СОЇ МОРОСБІ ВІ БСААБИЕТЕЗТМАММУУВOMOU5URUTRSOSTKI EIXOSOSZSSSIassemoi MEZO SOI MOROSBI V BSAABIETEZTMAMMUUV
ОСАРОКИа! ЕМУМавІВЗКУМММАТУМАОЗУКОВЕТІЗАВОБКМ5І МІ ОММ5І КТЕОТАУУУСУВНОИаМЕ аМ5УУЗУМУБгАУУсОсТтІ УТУЗЗаИасацакмМААІ КЕКМУМААІ КЕКУААЇ КЕКМААЇ КЕOSAROKYa! EMUMAVIVZKUMMMATUMAOZUKOVETIZAVOBKM5I MI OMM5I KTEOTAUUUSUVNOIAME aM5UUUZUMUBgAUUsOstTI UTUZZaIasatsakmmMAAI KEKMUMAAI KEKUAAI KEKMAAI KE
Переважний полінуклеотид, що кодує такий поліпептид, характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:18): дасаааасісасасаїдсссассудідсссадсассюаадссдсддаддддассадісадіснеосісносссссаааасссааддас асссісаїдаїсісссддассссдададісасадсуадаюддіддасоададссасдаадасссюададісааднсаасіддіасдадчдас дасдіддаддідсаіааі|дссаадасааадссдсдддаддадсадіасаасадсасоаїассдщдіддісадсдіссісассдіссідсас саддасіддсіааддсааддадіасаадідсааддісіссаасааадсссісссадсссссаїсдадаааассаїсіссададссаа аддасадссссдадаассасаддідіасасссідсссссаїсссдддаддадаїдассаадаассаддісадссідіадідссіддіса аадаснсіаїсссадсдасаїсдссудоаадодаоадададсаадддсадссддадаасаасіасаадассасдссісссоюдсіддасі ссдасддсісснсіїссісіасадсаадсісассдіддасаададсаддддсадсаддддаасдісіїсісаюдсіссдадаїдсащда9да сісідсасаассасіасасдсадаададссісісссідісіссдддіааадссссНссадсіссссіаюдаадасіїсдідаїдасасацдіс іссідаіадісіддссдідадісюддададсодддідасіащдісндсаададсісссадісасідсідаасадсуддаааїсадааааасіа ісдассіддіассадсадаадссаддссадсссссіааасідсідаісіандддаснссассадддааісіддсдідсссдасадайсад сддсадсддасадсддсасадаціасссідасаацісіадісідсаддссудаддасдіддсідідіасіандісадааюдайнасадсіаїс бо ссіасасісддссаддддассаадсіддааанаааддадоасддаїссддсддасоддадоасдаддаідсадсюдіддадісюдадда даснддаіссадссіддадудісссюдадасісіссіддсадссісіддансассисадсасаїасдсіадаанддаїссдссаддсісс аддааадддасіддадчіадонадааддаїсаддіссаадіасаасаанНаїдсаассіасіаїдссдасісюідааддагадайсассаї сісаададаїдансааадаасісасідіаіїсісааадаасадссдаааассдаддасасддссдідіанасдідідадасасоддіа асісддсаанйснасущісндашндснанддаддасаддддасасіддідасідщіснссаяададчадіддсддіддаааадіддссус асідааддадаааандсдс і ндааададааддісдссдсасіааддааааддісдсадсссідааададПереважний полінуклеотид, що кодує такий поліпептид, характеризується наступною послідовністю (5ЕО ІЮ МО:18): дасаааасісасасаїдсссассудідсссадсассюаадссдсддаддддассадісадіснеосісносссссаааасссааддас асссісаїдаїсісссддассссдададісасадсуадаюддіддасоададссасдаадасссюададісааднсаасіддіасдадчдас дасдіддаддідсаіааі|дссаадасааадссдсдддаддадсадіасаасадсасоаїассдщдіддісадсдіссісассдіссідсас саддасіддсіааддсааддадіасаадідсааддісіссаасааадсссісссадсссссаїсдадаааассаїсіссададссаа аддасадссссдадаассасаддідіасасссідсссссаїсссдддаддадаїдассаадаассаддісадссідіадідссіддіса аадаснсіаїсссадсдасаїсдссудоаадодаоадададсаадддсадссддадаасаасіасаадассасдссісссоюдсіддасі ссдасддсісснсіїссісіасадсаадсісассдіддасаададсаддддсадсаддддаасдісіїсісаюдсіссдадаїдсащда9да сісідсасаассасіасасдсадаададссісісссідісіссдддіааадссссНссадсіссссіаюдаадасіїсдідаїдасасацдіс іссідаіадісіддссдідадісюддададсодддідасіащдісндсаададсісссадісасідсідаасадсуддаааїсадааааасіа ісдассіддіассадсадаадссаддссадсссссіааасідсідаісіандддаснссассадд дааісіддсдідсссдасадайсад сддсадсддасадсддсасадаціасссідасаацісіадісідсаддссудаддасдіддсідідіасіандісадааюдайнасадсіаїс бо ссіасасісддссаддддассаадсіддааанаааддадоасддаїссддсддасоддадоасдаддаідсадсюдіддадісюдадда даснддаіссадссіддадудісссюдадасісіссіддсадссісіддансассисадсасаїасдсіадаанддаїссдссаддсісс аддааадддасіддадчіадонадааддаїсаддіссаадіасаасаанНаїдсаассіасіаїдссдасісюідааддагадайсассаї сісаададаїдансааадаасісасідіаіїсісааадаасадссдаааассдаддасасддссдідіанасдідідадасасоддіа асісддсаанйснасущісндашндснанддаддасаддддасасіддідасідщіснссаяададчадіддсддіддаааадіддссус асідааддадаааандсдс і ндааададааддісдссдсасіааддааааддісдсадсссідааадад
Другий поліпептидний ланцюг такого конструкта версії 2 ОАКТ-А м/с містить, у напрямку від М-кінця до С-кінця, домен Мі моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (Мі соз), проміжний лінкерний пептид (лінкер 1) і домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СЮО123 (МНео12з). Зазначена частина молекули з'єднана (за допомогою лінкера 2) 3 Е-спіральним доменом. Таким чином, третій поліпептид такого конструкта версії 2 ОАКТ-А м/с складається з наступного: БЗЕО ІЮ МО:21 - БЕО 10 МО:29 - БЕО ІЮ МО:26 - БЕО ІЮ МО:30 -The second polypeptide chain of this construct version 2 of OAKT-A m/s contains, in the direction from the M-terminus to the C-terminus, the Mi domain of a monoclonal antibody capable of binding to SOZ (Mi soz), an intermediate linker peptide (linker 1) and the MH domain of a monoclonal antibody capable of binding to ХХО123 (МНео12з). The specified part of the molecule is connected (using linker 2) by 3 E-helical domains. Thus, the third polypeptide of this construct version 2 of OAKT-A m/s consists of the following: BZEO IU MO:21 - BEO 10 MO:29 - BEO IU MO:26 - BEO IU MO:30 -
ЗЕО ІЮ МО:34. Поліпептид, що характеризується такою послідовністю, являє собою (ЗЕО ІЮZEO IU MO:34. A polypeptide characterized by such a sequence is (ZEO IU
МО:1), і переважно кодується полінуклеотидом, що характеризуються послідовністю ЗЕО ІЮMO:1), and is preferably encoded by a polynucleotide characterized by the sequence ZEO IU
МО:2.MO:2.
Третій поліпептидний ланцюг буде містити домени СН2 і СНЗ домена Ес до. Переважний поліпептид складається з пептиду 1 (ЗЕО ІО МО:55) і доменів СН2 і СНЗ домена Ес (ЗЕО ІОThe third polypeptide chain will contain the CH2 and CH3 domains of the Es domain. The preferred polypeptide consists of peptide 1 (ZEO IO MO:55) and the CH2 and CZ domains of the Es domain (ZEO IO
МО:11) і характеризується послідовністю ЗЕО ІЮ МО:54.MO:11) and is characterized by the sequence ZEO IU MO:54.
Для оцінки активності вищезгаданих СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл (АКТ-А, ОАВТ-А м/АвО, РАВТ-А м/Рс, ОАВТ-В) одержали контрольне біспецифічне диатіло (контрольне САКТ).To evaluate the activity of the above-mentioned CO123 x POP bispecific diatoms (ACT-A, OAVT-A m/AvO, RAVT-A m/Rs, OAVT-B) a control bispecific diatom (control SACT) was obtained.
Контрольне САВТ здатне одночасно зв'язуватися з РІТС і СОЗ. Його два поліпептидні ланцюги характеризуються наступними відповідними послідовностями:Control SAVT is able to simultaneously communicate with RITS and SOZ. Its two polypeptide chains are characterized by the following corresponding sequences:
Ланцюг 1 контрольного ОАКТ (5ЕО ІЮ МО:19):Chain 1 of the control OAKT (5EO IU MO:19):
ОМУММТОТРЕБІ РУБ аиСОАБІЗСАЗБЗОБВІ УНЗМОаМТ МІ В/М ОКРЕОЗБРКМИУКУЗМАЕБамМР рагЕзазавзаторЕТІ КІЗАМЕАЕОЇ аУМЕСЗОЗТНУРУТЕРОССИаТтТКІ ЕІКаОСОЗа,ваасСЕМОЇ МЕЗОвССOMUMMTOTREBI RUB aiSOABIZSAZBZOBBI UNZMOaMT MI V/M OKREOZBRKMIUKUZMAEBamMR ragEzazazatorETI KIZAMEAEOY aUMESZOZTNURUTEROSSIatTtKI EIKaOSOZa,vaASSEMOYI MEZOvSS
ГМОРИСБІ ВІ БСААЗСОЕТЕМТ МАММУУВОАРОКаТї ЕУУМАВІВЗКУМММАТУМАОБУКОВЕТІЗАООHMORISBI VI BSAAZSOETEMT MAMMUUVOAROKATI EUUMAVIVZKUMMMATUMAOBUKOVETIZAOO
ЗКМ5І М ОММ5І КТЕОТАУУ УС УВНМЕаМЗУУБМЕАУМмаОа,тІ УтТУЗОИаСИ,сСЕМААГЕКЕМАZKM5I M OMM5I KTEOTAUU US UVNMEAMZUUBMEAUMmaOa, tI UtTUZOIasY, sSEMAAGEKEMA
АЇ ЕКЕМААЇ ЕКЕМААЇ ЕКAI EKEMAAI EKEMAAI EK
Ланцюг 2 контрольного ОАКТ (5ЕО ІЮ МО:20):Chain 2 of the control OAKT (5EO IU MO:20):
ОАУМТОЕРБІ ТУ5РОСТМУТІ ТАЗ ТАМ ТТ ЗМУАМУМУМООКРИООСАРВИГ ІС ТМКААРМУТРАНOAUMTOERBI TU5ROSTMUTI TAZ TAM TT ZMUAMUMUMOOKRIOOSARVIG IS TMKAARMUTRAN
Зо ЕЗОаБІ І! ЧСаКААЇ ТІТИАОАЕОЕАрУМСАЇ М УЗМІ УУгсса7ткі тм свссвсазасасЕМУКІ рЕТОСОИЇ.From EZOaBI I! ЧСаКААЙ TITIAOАЕОЕАРУМСАЙ M UZMI UUgssa7tki tm svssvsazasasEMUKI RETOSOYI.
МОРЕИВвАРМКІ БСМАЗБаЄТЕЗОММУ ММУУУКОЗРЕКСОГ ЕМ МАО АМКРУММЕТУУЗОБУКОаВЕТІЗНАОО зЗКкЗЗУМ ОМММ АМЕОоМаімУстазУуамруУмсоатеУтувЗаасациакмМААІ КЕКМААЇ КЕКМАMOREIVvARMKI BSMAZbaYETEZOMMU MMUUUKOZREKSOG EM MAO AMKRUMMETUUZOBUKOaVETIZNAOO zZKkZZUM OMMM AMEOoMaimUstazUuamruUmsoateUtuvZaasatsiakmMAAI KEKMAAI KEKMA
АЇ КЕКМААЇ КЕAI KEKMAAI KE
ІМ. Фармацевтичні композиціїIM. Pharmaceutical compositions
Композиції згідно із даним винаходом містять у собі композиції нерозфасованого лікарського засобу, придатні у виробництві фармацевтичних композицій (наприклад, неочищених або нестерильних композицій) і фармацевтичних композицій (тобто композицій, які є придатними для введення суб'єктові або пацієнтові), які можна використовувати в одержанні стандартних лікарських форм. Такі композиції містять профілактично або терапевтично ефективну кількість, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл згідно із даним винаходом або комбінацію таких засобів і фармацевтично прийнятний носій. Композиції згідно із даним винаходом переважно містять профілактично або терапевтично ефективну кількість, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла згідно із даним винаходом і фармацевтично прийнятний носій.The compositions of the present invention comprise bulk drug compositions suitable for the manufacture of pharmaceutical compositions (eg, crude or non-sterile compositions) and pharmaceutical compositions (ie, compositions suitable for administration to a subject or patient) that can be used in the preparation standard dosage forms. Such compositions contain a prophylactically or therapeutically effective amount characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs of bispecific diethyls according to the present invention or a combination of such agents and a pharmaceutically acceptable carrier. Compositions according to the present invention preferably contain a prophylactically or therapeutically effective amount characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs of the bispecific diethyl according to the present invention and a pharmaceutically acceptable carrier.
Згідно із даним винаходом також передбачені фармацевтичні композиції, що містять біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом і друге терапевтичне антитіло (наприклад, пухлинноспецифічне моноклональне антитіло), яке є специфічним відносно конкретного антигену злоякісної пухлини, і фармацевтично прийнятний носій.The present invention also provides pharmaceutical compositions containing bispecific diethyls characterized by an optimized CO123 x POP sequence according to the present invention and a second therapeutic antibody (e.g., a tumor-specific monoclonal antibody) that is specific for a particular malignant tumor antigen, and a pharmaceutically acceptable carrier .
Згідно з конкретним варіантом здійснення термін "фармацевтично прийнятний" означає схвалений регуляторним органом федерального уряду або уряду штату або перерахований уIn a specific embodiment, the term "pharmaceutically acceptable" means approved by a federal or state regulatory agency or listed in
Фармакопеї США або іншій загальновизнаній Фармакопеї для застосування у тварин і більш конкретно у людей. Термін "носій" відноситься до розріджувача, ад'юванта (наприклад, ад'юванта Фрейнда (повного і неповного), допоміжна речовина або інертний носій, з яким водять терапевтичний засіб. Такі фармацевтичні носії можуть являти собою стерильні рідини, такі як вода і масла, включаючи в себе масла мінерального, тваринного, рослинного або синтетичного походження, такі як арахісове масло, соєве масло, мінеральне масло, кунжутне масло і подібне. Вода являє собою переважний носій, якщо фармацевтичну композицію вводять внутрішньовенно. Сольові розчини і водяні розчини декстрози і розчини гліцерину також можна бо використовувати в якості рідких носіїв, зокрема, для ін'єкційних розчинів. Підходящі фармацевтичні допоміжні речовини містять у собі крохмаль, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, борошно, крейду, силікагель, стеарат натрію, гліцерин моностеарат, тальк, хлорид натрію, сухе знежирене молоко, гліцерин, пропілен, гліколь, воду, етанол і подібне.US Pharmacopoeia or other generally accepted Pharmacopoeia for use in animals and more specifically in humans. The term "carrier" refers to the diluent, adjuvant (eg, Freund's adjuvant (complete and incomplete), excipient, or inert vehicle with which the therapeutic agent is administered. Such pharmaceutical carriers may be sterile liquids such as water and oils , including oils of mineral, animal, vegetable, or synthetic origin, such as peanut oil, soybean oil, mineral oil, sesame oil, and the like. Water is the preferred vehicle if the pharmaceutical composition is administered intravenously. Saline and aqueous dextrose solutions and solutions glycerol can also be used as liquid carriers, in particular for injection solutions. Suitable pharmaceutical excipients include starch, glucose, lactose, sucrose, gelatin, malt, rice, flour, chalk, silica gel, sodium stearate, glycerol monostearate , talc, sodium chloride, skimmed milk powder, glycerin, propylene, glycol, water, ethanol and the like.
Композиція при необхідності також може містити незначні кількості змочувальних засобів або емульгаторів, або рН буферних засобів. Зазначені композиції можуть приймати форму розчинів, суспензій, емульсій, таблеток, драже, капсул, порошків, сполук уповільненого вивільнення і подібне.The composition, if necessary, may also contain small amounts of wetting agents or emulsifiers, or pH buffering agents. These compositions can take the form of solutions, suspensions, emulsions, tablets, dragees, capsules, powders, slow-release compounds, and the like.
Як правило, інгредієнти композицій згідно із даним винаходом поставляються або окремо, або змішаними разом у стандартній лікарській формі, наприклад, у вигляді сухого ліофілізованого порошку або безводного концентрату в герметично запаяному контейнері, такому як ампула або саше із вказівкою кількості активного засобу. Якщо композиція призначена для введення за допомогою інфузії, вона може продаватися з інфузійним флаконом, що містить стерильну воду або сольовий розчин фармацевтичного ступеня чистоти. Якщо композиція призначена для введення за допомогою ін'єкції, ампула зі стерильною водою для ін'єкцій або сольовим розчином може бути надана для того, щоб інгредієнти можна було змішати перед введенням.Typically, the ingredients of the compositions according to the present invention are supplied either individually or mixed together in a standard dosage form, for example, as a dry lyophilized powder or anhydrous concentrate in a hermetically sealed container, such as an ampoule or sachet, with an indication of the amount of active agent. If the composition is intended for administration by infusion, it may be sold with an infusion bottle containing sterile water or pharmaceutical grade saline. If the composition is intended for administration by injection, an ampoule of sterile water for injection or saline may be provided so that the ingredients can be mixed prior to administration.
Композиції згідно із даним винаходом можуть бути введені до складу у вигляді нейтральних або сольових форм. Фармацевтично прийнятні солі містять у собі без обмеження солі, утворені такими аніонами, як аніони, що відбуваються із соляної, ортофосфорної, оцтової, щавлевої, винної кислот і т.д., Її солі, утворені катіонами, такими як катіони, що відбуваються з натрію, калію, амонію, кальцію, гідроксидів заліза, ізопропіламіну, триетиламіну, 2-етиламіноетанолу, гістидину, прокаїну і т.д.Compositions according to the present invention can be included in the composition in the form of neutral or salt forms. Pharmaceutically acceptable salts include, without limitation, salts formed by anions such as anions derived from hydrochloric, orthophosphoric, acetic, oxalic, tartaric acids, etc., salts thereof formed by cations such as cations derived from sodium , potassium, ammonium, calcium, iron hydroxides, isopropylamine, triethylamine, 2-ethylaminoethanol, histidine, procaine, etc.
Згідно із даним винаходом також передбачено фармацевтичний пакет або набір, що містить один або декілька контейнерів, заповнених біспецифіческими диатілами, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЮЗ, згідно із даним винаходом окремо або таким фармацевтично прийнятним носієм. Крім того, один або декілька інших профілактичних або терапевтичних засобів, придатних для лікування захворювання, також можуть бути включені у фармацевтичний пакет або набір. Згідно із даним винаходом також передбачено фармацевтичний пакет або набір, що містить один або декілька контейнерів, заповнених одним або декількома інгредієнтами фармацевтичних композицій згідно із даним винаходом.The present invention also provides a pharmaceutical package or kit containing one or more containers filled with bispecific diethyls characterized by an optimized sequence of СО123 x SOYUZ, according to the present invention alone or in such a pharmaceutically acceptable carrier. In addition, one or more other prophylactic or therapeutic agents suitable for the treatment of the disease may also be included in the pharmaceutical package or kit. The present invention also provides a pharmaceutical package or kit containing one or more containers filled with one or more ingredients of the pharmaceutical compositions according to the present invention.
Необов'язково такий(ї) контейнер(и) може супроводжувати повідомлення у формі, передбаченій державним органом, що регулюють виробництво, застосування або продаж фармацевтичних засобів або біологічних продуктів, причому зазначене повідомлення відбиває дозвіл відповідним органом виробництва, застосування або продажу для введення людям.Optionally, such container(s) may be accompanied by a notice in the form prescribed by the governmental authority regulating the manufacture, use or sale of pharmaceuticals or biological products, and said notice reflects the approval by the relevant authority of the manufacture, use or sale for administration to humans.
Згідно із даним винаходом передбачені набори, які можна використовувати в описаних вище способах. Набір може містити біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом. Набір може додатково містити один або декілька інших профілактичних і/або терапевтичних засобів, придатних для лікування злоякісної пухлини, в одному або декількох контейнерах; і/або набір може додатково містити один або декілька цитотоксичних антитіл, які зв'язуються з одним або декількома антигенами злоякісної пухлини, зв'язаними зі злоякісною пухлиною. Згідно з певними варіантами здійснення інший профілактичний або терапевтичний засіб являє собою хіміотерапевтичний засіб. Згідно з іншими варіантами здійснення профілактичний або терапевтичний засіб являє собою біологічний або гормональний терапевтичний засіб.The present invention provides kits that can be used in the methods described above. The kit may contain bispecific diethyls characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs according to the present invention. The kit may additionally contain one or more other prophylactic and/or therapeutic agents suitable for the treatment of a malignant tumor in one or more containers; and/or the kit may additionally contain one or more cytotoxic antibodies that bind to one or more malignant tumor antigens associated with a malignant tumor. In certain embodiments, the other prophylactic or therapeutic agent is a chemotherapeutic agent. In other embodiments, the prophylactic or therapeutic agent is a biological or hormonal therapeutic agent.
М. Способи введенняM. Methods of introduction
Композиції згідно із даним винаходом можуть бути передбачені для лікування, профілактики і зменшення інтенсивності одного або декількох симптомів, пов'язаних із захворюванням, порушенням або інфекцією, шляхом введення суб'єктові ефективної кількості білка злиття або кон'югованої молекули згідно із даним винаходом або фармацевтичній композиції, що містить білок злиття або кон'юговану молекулу згідно із даним винаходом. Згідно із переважним аспектом такі композиції є по суті очищеними (тобто по суті не містять речовин, які обмежують її дію або роблять небажані побічні ефекти). Згідно з конкретним варіантом здійснення суб'єкт являє собою тварину, переважно ссавець, таку, що не має відношення до приматів, ссавець (наприклад, корова, кінь, кішка, собака, гризун і т. д.) або примат (наприклад, мавпа, така як, яванська макака, людей і т. д.). Згідно із переважним варіантом здійснення суб'єкт являє собою людину.The compositions of the present invention may be administered to treat, prevent, and reduce the intensity of one or more symptoms associated with a disease, disorder, or infection by administering to a subject an effective amount of a fusion protein or conjugate molecule of the present invention or a pharmaceutical a composition containing a fusion protein or a conjugated molecule according to the present invention. According to a preferred aspect, such compositions are substantially purified (ie, substantially free of substances that limit its effect or cause undesirable side effects). According to a specific embodiment, the subject is an animal, preferably a non-primate mammal, a mammal (eg, a cow, horse, cat, dog, rodent, etc.) or a primate (eg, a monkey, such as, Javan macaque, humans, etc.). According to the preferred embodiment, the subject is a human.
Відомі різні системи доставки і їх можна використовувати для введення композицій згідно із даним винаходом, наприклад, інкапсулювання в ліпосомах, мікрочастинки, мікрокапсули, рекомбінантні клітини, здатні експресувати антитіло або злитий білок, опосередкований бо рецептором ендоцитоз (див., наприклад, МУ еї аї. (1987) "Кесеріог-Медіаївд п Міо СепеVarious delivery systems are known and can be used to administer the compositions of the present invention, for example, encapsulation in liposomes, microparticles, microcapsules, recombinant cells capable of expressing an antibody or fusion protein, bo receptor-mediated endocytosis (see, e.g., MU et al. (1987) "Keseriog-Mediaivd p Mio Sepe
Ткапетогптаїйоп Ву А бБоїшріє ОМА Саттієг Зувзієт, " У. Віої. Спет. 262:4429-4432), конструкція з нуклеїнової кислоти у вигляді частини ретровірусного або іншого вектора і т. д.Tkapetogptaiyop Wu A bBoishrie OMA Sattieg Zuvziet, " U. Vioi. Spet. 262:4429-4432), a nucleic acid construct in the form of a part of a retroviral or other vector, etc.
Способи введення молекули згідно із даним винаходом містять у собі без обмеження парентеральне введення (наприклад, інтрадермальне, внутрішнм'язове, інтраперитонеальне, внутрішньовенне і підшкірне), епідуральне і мукозальне введення (наприклад, інтраназальний і пероральний шляхи). Згідно з конкретним варіантом здійснення, біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом вводять внутрішньом'язово, внутрішньовенно або підшкірно. Композиції можна вводити будь- яким зручним шляхом, наприклад, за допомогою інфузії або болюсної ін'єкції, шляхом поглинання через епітеліальні або шкірно-слизуваті оболонки (наприклад, слизувату ротової порожнини, слизувату прямої кишки і кишківника і т. д-) Її можна вводити разом з іншими біологічно активними засобами. Введення може бути системним або місцевим. Крім того, пульмонарне введення також можна використовувати, наприклад, за допомогою застосування інгалятора або небулайзера і сполуки з аерозольним засобом. Див., наприклад, патенти СШАMethods of administration of a molecule according to the present invention include, but are not limited to, parenteral administration (eg, intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, and subcutaneous), epidural, and mucosal administration (eg, intranasal and oral routes). According to a specific variant of implementation, bispecific diethyls characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs according to the present invention are administered intramuscularly, intravenously, or subcutaneously. The compositions can be administered by any convenient route, for example, by infusion or bolus injection, by absorption through epithelial or skin-mucosal membranes (eg, oral mucosa, rectal and intestinal mucosa, etc.) It can be administered together with other biologically active agents. Introduction can be systemic or local. In addition, pulmonary administration can also be used, for example, using an inhaler or nebulizer and a compound with an aerosol agent. See, e.g., U.S. Pat
МоМо 6019968; 5985320; 5985309; 5934272; 5874064; 5855913; 5290540 і 4880078 і міжнародні патентні публікації згідно РСТ МоМо УМО 92/19244; УМО 97/32572; МО 97/44013; УМО 98/31346 іMoMo 6019968; 5985320; 5985309; 5934272; 5874064; 5855913; 5290540 and 4880078 and international patent publications according to PCT MoMo UMO 92/19244; UMO 97/32572; MO 97/44013; UMO 98/31346 and
УМО 99/66903, кожна з яких повністю включена в даний документ за допомогою посилання.UMO 99/66903, each of which is fully incorporated herein by reference.
Згідно із даним винаходом також передбачено, що біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом впаковані в герметично запаяний контейнер, такий як ампула або саше із вказівкою кількості молекули. Відповідно одному варіанту здійснення, біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом поставляють у вигляді сухого стерилізованого ліофілізованого порошку або безводного концентрату в герметично запаяному контейнері і його можна розвести, наприклад, водою або сольовим розчином до відповідної концентрації для введення суб'єктові. Біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом переважно поставляють у вигляді сухого стерильного ліофілізованого порошку в герметично запаяному контейнері в стандартному дозуванні, що становить щонайменше 5 мкг, більш переважно щонайменше 10 мкг, щонайменше 15 мкг, щонайменше 25 мкг, щонайменше 50 мкг, щонайменше 100 мкг абоAccording to the present invention, it is also provided that bispecific diethyls characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs according to the present invention are packaged in a hermetically sealed container, such as an ampoule or a sachet with an indication of the number of molecules. According to one embodiment, bispecific diethyls characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs according to the present invention are supplied in the form of a dry sterilized lyophilized powder or anhydrous concentrate in a hermetically sealed container and can be diluted, for example, with water or saline to a suitable concentration for administration sub to the object Bispecific diethyls characterized by an optimized sequence of СО123 x POPs according to the present invention are preferably supplied in the form of a dry sterile lyophilized powder in a hermetically sealed container in a standard dosage amounting to at least 5 μg, more preferably at least 10 μg, at least 15 μg, at least 25 μg, at least 50 mcg, at least 100 mcg or
Зо щонайменше 200 мкг.Of at least 200 mcg.
Ліофілізовані, біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністюLyophilized, bispecific diethyls characterized by an optimized sequence
СсО0123 х СО3 згідно із даним винаходом необхідно зберігати при температурі від 2 до 8"С у їхньому оригінальному контейнері і молекули необхідно вводити не пізніше ніж через 12 годин, переважно не пізніше ніж через 6 годин, не пізніше ніж через 5 годин, не пізніше ніж через З години або не пізніше ніж через 1 годину після їхнього розведення. Згідно з альтернативним варіантом здійснення, біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністюСсО0123 x СО3 according to the present invention must be stored at a temperature of 2 to 8"C in their original container and the molecules must be administered no later than 12 hours, preferably no later than 6 hours, no later than 5 hours, no later than in 3 hours or no later than 1 hour after their dilution According to an alternative embodiment, bispecific diabodies characterized by an optimized sequence
СОр123 х СОЗ згідно із даним винаходом поставляють у рідкій формі в герметично запаяному контейнері із вказівкою кількості і концентрації молекули, злитого білка або кон'югованої молекули. Рідку форму, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЮЗ біспецифічних диатіл згідно із даним винаходом переважно поставляють у герметично запаяному контейнері, у якому молекули перебувають у концентрації, що становить щонайменше 1 мкг/мл, більш переважно щонайменше 2,5 мкг/мл, щонайменше 5 мкг/мл, щонайменше 10 мкг/мл, щонайменше 50 мкг/мл або щонайменше 100 мкг/мл.СОр123 x POPs according to the present invention are supplied in liquid form in a hermetically sealed container with an indication of the amount and concentration of the molecule, fusion protein or conjugated molecule. A liquid form characterized by an optimized sequence of СО123 x СОЮЗ bispecific diethyls according to the present invention is preferably supplied in a hermetically sealed container, in which the molecules are at a concentration of at least 1 μg/ml, more preferably at least 2.5 μg/ml, at least 5 µg/ml, at least 10 µg/ml, at least 50 µg/ml or at least 100 µg/ml.
Кількість композиції згідно із даним винаходом, яка буде ефективною у лікуванні, профілактиці або зменшенні інтенсивності одного або декількох пов'язаних з порушенням симптомів, можна визначити за допомогою стандартних клінічних технік. Точна доза, застосовувана в складі, також буде залежати від шляху введення і серйозності стану, і повинна визначатися відповідно до рішення лікаря і усіх відповідних обставин пацієнта. Ефективні дози можна екстраполювати із кривих залежності від дози з іп міго тестових систем або тестових систем - тваринних моделей.The amount of a composition according to the present invention that will be effective in treating, preventing or reducing the intensity of one or more symptoms associated with the disorder can be determined using standard clinical techniques. The exact dosage used in the composition will also depend on the route of administration and the severity of the condition, and should be determined according to the judgment of the physician and all relevant circumstances of the patient. Effective doses can be extrapolated from dose-response curves from IP test systems or animal model test systems.
Для передбачених даним винаходом біспецифічних диатіл, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що вводиться пацієнтові дозування переважно визначають на підставі маси тіла (кг) суб'єкта - реципієнта. Дозування, що вводиться, як правило, становить від щонайменше приблизно 0,3 нг/кг на день до приблизно 0,9 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 1 нг/кг на день до приблизно З нг/кг на день, від щонайменше приблизно З нг/кг на день до приблизно 9 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 10 нг/кг на день до приблизно 30 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 30 нг/кг на день до приблизно 90 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 100 нг/кг на день до приблизно 300 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 200 нг/кг на день до приблизно 600 нг/кг на день, від щонайменше 60 приблизно 300 нг/кг на день до приблизно 900 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 400 нг/кг на день до приблизно 800 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 500 нг/кг на день до приблизно 1000 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 600 нг/кг на день до приблизно 1000 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 700 нг/кг на день до приблизно 1000 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 800 нг/кг на день до приблизно 1000 нг/кг на день, від щонайменше приблизно 900 нг/кг на день до приблизно 1000 нг/кг на день або щонайменше приблизно 1000 нг/кг на день.For the bispecific diethyls provided by this invention, characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs, the dosage administered to the patient is preferably determined based on the body weight (kg) of the recipient subject. The dosage administered is typically from at least about 0.3 ng/kg per day to about 0.9 ng/kg per day, from at least about 1 ng/kg per day to about 3 ng/kg per day, from at least about 3 ng/kg per day to about 9 ng/kg per day, from at least about 10 ng/kg per day to about 30 ng/kg per day, from at least about 30 ng/kg per day to about 90 ng/kg per day, from at least about 100 ng/kg per day to about 300 ng/kg per day, from at least about 200 ng/kg per day to about 600 ng/kg per day, from at least 60 to about 300 ng/kg per day to about 900 ng/kg per day, from at least about 400 ng/kg per day to about 800 ng/kg per day, from at least about 500 ng/kg per day to about 1000 ng/kg per day, from at least about 600 ng/ kg per day to about 1000 ng/kg per day, from at least about 700 ng/kg per day to about 1000 ng/kg per day, from at least about 800 ng/kg per day to about 100 0 ng/kg per day, from at least about 900 ng/kg per day to about 1000 ng/kg per day, or at least about 1000 ng/kg per day.
Згідно з іншим варіантом здійснення пацієнтові вводять схему лікування, що передбачає одну або декілька доз такої профілактично або терапевтично ефективної кількості, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3 біспецифічних диатіл, передбачених згідно із даним винаходом, причому схему лікування вводять протягом 2 днів, З днів, 4 днів, 5 днів, 6 днів або 7 днів. Згідно з певними варіантами здійснення схема лікування передбачає періодичне введення доз профілактично або терапевтично ефективної кількості, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3 біспецифічних диатіл, передбачених згідно із даним винаходом (наприклад, введення дози в 1 день, 2 день, З день і 4 день даного тижня і відсутність введення доз профілактично або терапевтично ефективної кількості, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл, передбачених згідно із даним винаходом в 5 день, 6 день і 7 день цього ж тижня). Як правило, проводять 1, 2, 3, 4, 5 або більше курсів лікування. Кожний курс може проходити за однаковою схемою або за різними схемами.According to another embodiment, the patient is administered a treatment regimen that provides one or more doses of such a prophylactically or therapeutically effective amount, characterized by an optimized sequence of СО123 x СОЗ3 bispecific diethyls provided according to the present invention, and the treatment regimen is administered for 2 days, 3 days, 4 days, 5 days, 6 days or 7 days. According to certain variants of implementation, the treatment scheme involves the periodic administration of doses of a prophylactically or therapeutically effective amount, characterized by an optimized sequence of СО123 x СОЗ3 bispecific diethyls provided according to the present invention (for example, administration of a dose on day 1, day 2, day C and day 4 of this week and lack of administration of prophylactically or therapeutically effective doses characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs of bispecific diethyls provided according to the present invention on day 5, day 6 and day 7 of the same week). As a rule, 1, 2, 3, 4, 5 or more courses of treatment are carried out. Each course can follow the same scheme or different schemes.
Згідно з іншим варіантом здійснення доза, що вводиться, збільшується за першу чверть, першу половину або перші дві третини або три чверті схеми (схем) (наприклад, за першу, другу або третю схему лікування з 4 курсів), поки не буде досягнута денна профілактично або терапевтично ефективна кількість, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 хAccording to another embodiment, the administered dose is increased over the first quarter, first half, or first two-thirds or three-quarters of the regimen(s) (eg, the first, second, or third treatment regimen of 4 courses) until the daily prophylactic dose is reached. or a therapeutically effective amount characterized by an optimized sequence of СО123 x
СОЗ біспецифічних диатіл.POPs of bispecific diethyls.
У таблиці 1 представлено 5 прикладів різних схем дозувань, описаних вище, для типового курсу лікування.Table 1 presents 5 examples of the different dosage regimens described above for a typical course of treatment.
Таблиця 1Table 1
Схема | День | Дозування диатіла (нг диатіла на кг маси тіласуб'єктав день) пиши ши иши ншши ншш ше пиши ши иши ншши ншш ше пиши нши иши ши ше шеScheme | Day | Diatyl dosage (ng diatyl per kg body weight of subjects per day)
Дозування і частоту введення, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 хDosage and frequency of administration, characterized by an optimized sequence of CO123 x
СО3З біспецифічних диатіл згідно із даним винаходом знизити або змінити шляхом посилення поглинання і проникнення, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл у тканині за допомогою таких модифікацій, як, наприклад, ліпідизація.CO3Z of bispecific diethyls according to the present invention can be reduced or changed by increasing absorption and penetration, characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs of bispecific diethyls in the tissue by means of such modifications as, for example, lipidization.
Дозування, що вводиться пацієнтові, що характеризуються оптимізованою послідовністюDosages administered to the patient characterized by an optimized sequence
СО0123 х СОЗ біспецифічних диатіл згідно із даним винаходом можна розрахувати для застосування в якості монотерапії. Альтернативно, біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом використовують у комбінації іншими терапевтичними композиціями, і дозування, що вводиться пацієнтові є менше, ніж при використанні зазначених молекул в якості монотерапії.СО0123 x POPs of bispecific diethyls according to the present invention can be calculated for use as monotherapy. Alternatively, bispecific diethyls characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs according to the present invention are used in combination with other therapeutic compositions, and the dosage administered to the patient is less than when using these molecules as monotherapy.
Фармацевтичні композиції згідно із даним винаходом можна вводити місцево в необхідну в лікуванні область; цього можна досягти, наприклад, без обмеження за допомогою місцевої інфузії, ін'єкції або за допомогою імплантату, причому зазначений імплантат виготовлений з пористого, непористого або желатиноподібного матеріалу, включаючи в себе такі мембрани, як мембрани бзіаїавіїс, або волокна. При введенні молекули згідно із даним винаходом переважно необхідно приділити увагу застосуванню матеріалів, які не абсорбують молекулу.Pharmaceutical compositions according to the present invention can be administered locally to the area required for treatment; this can be achieved, for example, without limitation by means of a local infusion, injection or by means of an implant, and said implant is made of a porous, non-porous or gelatinous material, including membranes such as biaiawiis membranes or fibers. When introducing a molecule according to this invention, it is mainly necessary to pay attention to the use of materials that do not absorb the molecule.
Композиції згідно із даним винаходом можуть бути доставлені у везикулі, зокрема ліпосомі (див. Гапдег (1990) "Мем Меїйоаз ОЇ Огид Оеїїмегу, " Зсіепсе 249:1527-1533); Тгеаї єї аї., вCompositions according to the present invention can be delivered in a vesicle, in particular a liposome (see Hapdeg (1990) "Mem Meijoaz OYI Ogid Oeiimegu," Zsiepse 249:1527-1533); Tgeai yei ai., v
Прозотез іп їте ТПегару ої Іп'єсііоив Різеазе апа Сапсетг, І оре2-Вегевівїп апа Ріаег (ед5.), І івв,Prosotez ip eate TPegaru oi Ipyesiioiv Rizease apa Sapsetg, I ore2-Vegevivip apa Riaeg (ed5.), I ivv,
Мем Могк, рр. 353-365 (1989); І оре2-Вегезівіп, іріа., рр. З 17-327; див., головним чином, там же).Mem Mogk, pp. 353-365 (1989); I ore2-Vegezivip, iria., year Z 17-327; see mainly ibid.).
Композиції згідно із даним винаходом можуть бути доставлені в системі контрольованого або уповільненого вивільнення. Будь-яку техніку, відому фахівцеві в даній області техніки, можна використовувати для одержання сполук уповільненого вивільнення, що містять одне або декілька біспецифічних диатіл, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 хThe compositions of the present invention can be delivered in a controlled or sustained release system. Any technique known to a person skilled in the art can be used to prepare sustained release compounds containing one or more bispecific diethyls characterized by an optimized sequence of СО123x
СОЗ згідно із даним винаходом. Див., наприклад, патент США Мо 4526938; міжнародні патентні публікації згідно РСТ МоМо УУО 91/05548; УМО 96/20698; Міпа еї аїЇ. (1996) "Іпгаштогаї!POPs according to the present invention. See, for example, US Pat. No. 4,526,938; international patent publications according to PCT MoMo UUO 91/05548; UMO 96/20698; Mipa ey aiYi. (1996) "Ipgashtogai!
Вадіоіттипоїйегарпу ОЇ А Нитап Соїоп Сапсег Хеподгай Овіпд А Зивіаіпед-НеІєазе Сеї, ""
Вадіоїегару 5 Опсоіоду 39:179-189, 5опд єї аї. (1995) "Апіїроду Медіаїєд І па Тагодеїйпуд ОЇ!Vadioyegaru 5 Opsoiodu 39:179-189, 5opd eyi ai. (1995) "Apiirodu Mediaiied I pa Tagodeiipud OI!
Гопа-Сіксціайпуд Етиївіопе, " РОА Шошгпа! ої Рпаптасешіїса! 5сіепсе є Тесппоіоду 50:372-397;Gopa-Siksciaipud Etyiviope, " ROA Shoshgpa! oi Rpaptaseshiisa! 5siepse is Tesppoiodu 50:372-397;
Сієек еї аї. (1997) "Віодедгадабріе Роїутегіс Саптієтв Рог А БЕРСЕ Апіїроду Рог СагаіомазсшагSiyeek ei ai. (1997) "Viodedgadabrie Roiutegis Saptietv Rog A BERSE Apiirodu Rog Sagaiomazsshag
Арріїсайоп, " Ро. Іпг!. Бутр. СопігоЇ. Неї. Віоасі. Маїег. 24:853-854; їат еї аї. (1997) "Місгтоепсарзціайоп ОЇ Весотбіпапі Нитапілед Мопосіопа! Апіїбоду Еог І оса! Оєїїмегу, " Ргос. ій! Зутр. Сопіго! Неї. Віоасі. Маїєег. 24:759-760, кожна з яких повністю включена в даний документ за допомогою посилання. Відповідно одному варіанту здійснення насос можна використовувати в системі контрольованого вивільнення (Див. І апдег, раніше; бейоп, (1987) "Ітріапіабіе Ритрз», " СВО Сі. Вем. Віотеа. Епд. 14:201-240; Виспмаїа еї аї. (1980) "Гопд-Тегт,Arriisayop, " Ro. Ipg!. Butr. SopigoYi. Nei. Vioasi. Maieg. 24:853-854; iat ei ai. (1997) "Misgtoepsarztsiaiop OYI Vesotbipapi Nitapiled Moposiopa! Apiibodu Eog I wasa! Oyeiimegu, " Rgos. ii! Zutr. Sopigo! Nei. Vioasi. Maiieeg. 24:759-760, each of which is fully incorporated herein by reference. According to one embodiment, the pump can be used in a controlled release system (See I apdeg, earlier; beyop, (1987) "Itriapiabie Ritrz", " SVO Si. Vem. Viotea. Epd. 14:201-240; Wyspmaia ei ai. (1980) "Hopd-Tegt,
Сопііїписив Іпігамепои5 Нераїіп Аадтіпівігайоп Ву Ап Ітріапіабіє Іптивзіоп Ритр Іп АтриїаюгуSopiiipysiv Ipigamepoi5 Neraiip Aadtipivigayop Vu Ap Itriapiabiie Iptivsiop Rytr Ip Atriiayugu
Раїєпів М/Йй Весшитепі Мепоиб5 Тиготровзів, " Зигдегу 88:507-516; і Зацдек еї аї. (1989) "АRaiepiv M/Yi Vesshitepi Mepoib5 Tygotrovziv, "Zygdegu 88:507-516; and Zatsdek ei ai. (1989) "A
Ргєїїтіпагу Ттіа! ОЇ ТНе Ргодгаттабіє Ітріапіаріє Медісайоп Зузієт Рог Іпзцїїп Оеєїїмегу, " М. Епаді.Rgyeiitipagu Ttia! OII TNe Rgodgattabie Itriapiarie Medisayop Zuziet Rog Ipstsiip Oeiiimegu, " M. Epadi.
У. Меа. 321:574-579). Згідно з іншим варіантом здійснення полімерні матеріали можна використовувати для досягнення контрольованого вивільнення молекул (див., наприклад,U. Mea. 321:574-579). In another embodiment, polymeric materials can be used to achieve controlled release of molecules (see, e.g.,
Меадіса! Арріїсайоп5 ої Сопіго!Ієй Веїєазе, І апдег апа М/ізе (єдз.), СВО Ргез., Воса Вайп, Ріогіда (1974); СопітоПейа Огид Віоамайарішу, Огид Ргодисі Оезідп апа Репогптапсе, Зтоїеп апа Ваї! (єд».), МПеу, Мем Могк (1984); І ему єї а)ї. (1985) "Іппірйіоп ОГ Саїсітісайоп ОЇ Віоргозіпеїйс НеайMeadis! Arriisaiop5 oi Sopigo!Iey Veiyease, I apdeg apa M/ize (edz.), SVO Rgez., Vosa Vip, Riogida (1974); SopitoPeia Abomination Vioamayarishu, Abomination Rgodisi Oezidp apa Repogptapse, Ztoiep apa Vai! (ed.), MPeu, Mem Mogk (1984); And emu her a)y. (1985).
Маїмез Ву І оса! СопігоПей-НеїІеазе Оірпозрпопаїє, " Зсієпсе 228:190-192; ВБиппа єї аї. (1989) "Сопігоїїей Веївазе ОЇ Юоратіпе гот А Роїутетіс Вгаїп Ітріапі: іп Мімо Спагасівгігайоп, " Апп.Maimez Wu and wasp! SopigoPei-NeiIease Oirpozrpopaiie, " Zsiepse 228:190-192; VBippa eyi ai. (1989) "Sopigoiei Veivaze OI Juoratipe got A Roiutetis Vgaip Itriapi: ip Mimo Spagasivgigayop, " App.
Мешцгої. 25:351-356; Номага еї аї. (1989) "Іпігасегебга! Огиад Оеєїїмегу Іп Наїб5 М/йй І езіоп-ІпдисейMesztsgoi. 25:351-356; Nomaga ei ai. (1989).
Метогу Оеїйсіїв, " У. Мешгозигу. 7(1):105-112); патенти США МоМео 5679377; 5916597; 5912015; 5989463; 5128326; міжнародні патентні публікації згідно РСТ МоМо УМО 99/15154 і УМО 99/20253).Metogu Oeiisiyiv, "U. Meshgozygu. 7(1):105-112); US patents MoMeo 5679377; 5916597; 5912015; 5989463; 5128326; international patent publications according to PCT MoMo UMO 99/15154 and UMO 99/20253).
Зо Приклади полімерів, використовуваних у сполуках уповільненого вивільнення, містять у собі без обмеження полімер 2-гідроксиетилметакрилату, полімер метилметакрилату, полімер акрилової кислоти, співполімер етилену та вінілацетату, полімер метакрилової кислоти, полігліколіди (РІ С), поліангідриди, полімер М-вінілпіролідону, полімер вінілового спирту, поліакриламід, поліетиленгліколь, полілактиди (Рі А), співполімер лактидів і гліколідів (РІ БА) і поліортоефіри.Examples of polymers used in sustained release compounds include, but are not limited to, 2-hydroxyethyl methacrylate polymer, methyl methacrylate polymer, acrylic acid polymer, ethylene vinyl acetate copolymer, methacrylic acid polymer, polyglycolides (PIC), polyanhydrides, M-vinylpyrrolidone polymer, vinyl alcohol, polyacrylamide, polyethylene glycol, polylactides (Ri A), copolymer of lactides and glycolides (RI BA) and polyorthoesters.
Систему контрольованого вивільнення можна розмістити поблизу до терапевтичної мішені (наприклад, легеням), таким чином, буде необхідна тільки частка системної дози (див., наприклад, Соодзоп, в Меаїса! Арріїсайоп5 ої СопігоПей Кеїєазе, раніше, мої. 2, рр. 115-138 (1984)). Композиції, придатні в якості імплантатів контрольованого вивільнення, можна використовувати згідно Юипп із співавт. (див. патент США Ме 5945155). Зазначений конкретний спосіб заснований на терапевтичному ефекті іп 5йи контрольованого вивільнення біоактивного матеріалу з полімерної системи. Імплантація, як правило, відбувається в будь-якому місці в організмі пацієнта, що має потребу в терапевтичному лікуванні. Можна використовувати неполімерну систему уповільненої доставки, за допомогою якої неполімерний імплантат в організмі суб'єкта використовується в якості системи доставки лікарського засобу. При імплантації в організм органічний розчинник імплантату буде розсіюватися, диспергуватися або вилуговуватися з композиції в навколишню тканинну рідину, і неполімерний матеріал буде поступово коагулювати або осаджуватися з утворенням твердої, мікропористої матриці (див. патент США Мо 5888533).A controlled-release system can be placed close to the therapeutic target (e.g., the lungs) so that only a fraction of the systemic dose is required (see, e.g., Soodzop, in Meaisa! Arriisaiop5 oi SopigoPei Keiiaze, formerly, my. 2, pp. 115- 138 (1984)). Compositions suitable as controlled release implants can be used according to Juipp et al. (see US patent Me 5945155). This specific method is based on the therapeutic effect of the controlled release of the bioactive material from the polymer system. Implantation usually occurs anywhere in the patient's body that needs therapeutic treatment. A non-polymeric delayed delivery system can be used, whereby a non-polymeric implant in the subject's body is used as a drug delivery system. When implanted in the body, the organic solvent of the implant will disperse, disperse, or leach from the composition into the surrounding tissue fluid, and the non-polymeric material will gradually coagulate or precipitate to form a solid, microporous matrix (see US Pat. No. 5,888,533).
Системи контрольованого вивільнення обговорюються в огляді І апдег (1990, "Мем МешодьControlled-release systems are discussed in the review I apdeg (1990, "Mem Meshod
ОГ Ота Овіїмегу, " Зсіепсе 249:1527-1533). Будь-яку техніку, відому фахівцеві в даній області техніки, можна використовувати для одержання сполук уповільненого вивільнення, що містять один або декілька терапевтичних засобів згідно із даним винаходом. Див., наприклад, патентOG Ota Owiimegu, " Zsiepse 249:1527-1533). Any technique known to one skilled in the art can be used to prepare sustained release compounds containing one or more therapeutic agents of the present invention. See, e.g., patent
США Ме4526938; міжнародні патентні публікації МоМо УМО 91/05548 і УМО 96/20698; Міпо еї аї. (1996) "Іпташтога! Радіоїттипоїйегарну ОГ А Нитап СоЇоп Сапсег Хепоагай Овіпуд А 5ивіаіпеад-USA Me4526938; international patent publications of MoMo UMO 91/05548 and UMO 96/20698; Mipo ei ai. (1996) "Iptashtoga! Radioittipoiyegarnu OG A Nytap SoYop Sapseg Hepoagai Ovipud A 5iviaipead-
Веїєазе Сі, " Вадіоїнегару 5 Опсоіоду 39:179- 189, 5опд еєї а!. (1995) "Апіїроду Медіаїед І пдWiese C, "Wadionegaru 5 Opsiodu 39:179-189, 5opd eei a!. (1995) "Apiirodu Mediaied I pd
Тагдеїпуд ОЇ Гопд- Сігсшайпд Етиїівіоп5, " РОА доштаї ої Рнаптасеціїса! Зсіепсе є ТесппоЇоду 50:372- 397; СіееК еї аї. (1997) "Віодедгадабріє Роїутегс Сагпієт5 Бог А рю Апіїроду РогTagdeipud OY Gopd- Sigsshaipd Ethiiiviop5, " ROA hilddaii oi Rnaptaseciisa! Zsiepse e TesppoYodu 50:372- 397; SieeK ei ai. (1997) "Viodedgadabrie Roiutegs Sagpiet5 Boh A ryu Apiirodu Rog
Сагаїомазсшіаг Арріїсайоп, " Рго. ІпгІ. 5утр. Сопігої. Веї. Віоасі. Маїег. 24:853- 854; ії ат еї аї. (1997) "Містоепсарзшціанйоп ОЇ Весотбіпапі Нитапігед Мопосіопа! Апіїбоду Рог І оса! Оевїїмегу, "Sagaiomazsshiag Arriisayop, " Rgo. IpgI. 5utr. Sopigoi. Vei. Vioasi. Maieg. 24:853- 854; ii at ei ai. (1997) "Mistoepsarzshtianiop OYI Vesotbipapi Nitapiged Moposiopa! Apiibodu Horn and wasp! Oeviyimegu, "
Ргос. ІпгІ. 5утр. Сопігої! Ве!. Віоасі. Маїег. 24:759- 760, кожна з яких повністю включена в даний документ за допомогою посилання.Rgos. IPgI. 5 a.m. Sopigoi! Wow! Vioasi. Maieg. 24:759-760, each of which is incorporated herein by reference in its entirety.
Якщо композиція згідно із даним винаходом являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує, біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом, нуклеїнову кислоту можна вводити іп мімо для стимуляції експресії кодуємого нею, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла шляхом конструювання її у вигляді частини відповідного нуклеїново кислотного експресійного вектора і введення її так, щоб вона стала внутрішньоклітинною, наприклад, шляхом застосування ретровірусного вектора (див. патент США Мо 4980286), або шляхом прямої ін'єкції, або шляхом використання бомбардування мікрочастинками (наприклад, генної гармати; Віоїївіс,If the composition of the present invention is a nucleic acid encoding a bispecific dibody characterized by an optimized CO123 x POP sequence according to the present invention, the nucleic acid can be administered i.p. to stimulate expression of the bispecific dibody encoded by it characterized by an optimized CO123 x POP sequence by constructing it as part of an appropriate nucleic acid expression vector and introducing it so that it becomes intracellular, for example by using a retroviral vector (see US Patent No. 4,980,286), or by direct injection, or by using microparticle bombardment (e.g. , gene cannon; Vioiivis,
Биропі), або покриття ліпідами, або рецепторами клітинної поверхні, або засобами трансфекції, або шляхом введення Її, з'єднаної з гомеобоксо-подібним пептидом, який, як відомо, проникає в ядро (див., наприклад, чЧоїйої еї аІ. (1991) "Апіеєппаредіа Нотеорох Реріїде Недшіаїез МеигкаїBiropi), or coating with lipids, or cell surface receptors, or by means of transfection, or by introducing It, linked to a homeobox-like peptide, which is known to penetrate into the nucleus (see, for example, chChoioi ei aI. (1991 ) "Apieepparedia Noteoroch Reriide Nedsiaies Meigkai
Могрподепевів, " Ргос. Маї!. Асайд. бсі. (0О.5.А.) 88:1864-1868) і т.д. Альтернативно, нуклеїнова кислота може бути введена внутрішньоклітинно і вбудована в ДНК клітини - хазяїна для експресії шляхом гомологічної рекомбінації.Mogrpodepev, "Rhos. Mai!. Asaid. bsi. (0O.5.A.) 88:1864-1868) etc. Alternatively, the nucleic acid can be introduced intracellularly and incorporated into the DNA of the host cell for expression by homologous recombination
Лікування суб'єкта за допомогою терапевтично або профілактично ефективної кількості, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл згідно із даним винаходом може передбачати однократне лікування або переважно може містити в собі серію лікувань. Згідно із переважним прикладом суб'єкт одержує лікування за допомогою, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл згідно із даним винаходом один раз на тиждень приблизно 1-10 тижнів, переважно 2-8 тижнів, більш переважно приблизно 3-7 тижнів і навіть більш переважно протягом приблизно 4, 5 або 6 тижнів. Фармацевтичні композиції згідно із даним винаходом можна вводити один раз на день, два рази на день або три рази на день. Альтернативно, фармацевтичні композиції можна вводити один раз на тиждень, два рази на тиждень, один раз у два тижні, один раз на місяць, кожні шість тижнів, один раз у два місяці, двічі на рік або один раз на рік. Крім того, слід розуміти, що ефективне дозування молекул, використовуваних для лікування, може збільшуватися або зменшуватися протягом курсу конкретного лікування.Treatment of a subject with a therapeutically or prophylactically effective amount characterized by an optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyls according to the present invention may involve a single treatment or may preferably include a series of treatments. According to a preferred example, the subject receives treatment with characterized by an optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyls according to the present invention once a week for about 1-10 weeks, preferably for 2-8 weeks, more preferably for about 3-7 weeks and even more preferably for about 4, 5 or 6 weeks. Pharmaceutical compositions according to the present invention can be administered once daily, twice daily, or three times daily. Alternatively, the pharmaceutical compositions can be administered once a week, twice a week, once every two weeks, once a month, every six weeks, once every two months, twice a year, or once a year. In addition, it should be understood that the effective dosage of molecules used for treatment may increase or decrease over the course of a particular treatment.
МІ. Застосування композицій згідно із даним винаходомE. Application of compositions according to this invention
Біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ згідно із даним винаходом характеризуються здатністю забезпечувати лікування будь-якого захворювання або стану, пов'язаного з експресією СО123 або, що характеризується експресієюBispecific diabodies characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs according to the present invention are characterized by the ability to provide treatment for any disease or condition associated with the expression of CO123 or characterized by the expression
СО0123. Таким чином, без обмежень такі молекули можна використовувати в діагностиці або лікуванні гострого мієлоїдного лейкозу (ГМЛ), хронічного мієлоїдного лейкозу (ХМЛ), включаючи в себе бластний криз ХМЛ і онкоген Абельсона, пов'язаний із ХМЛ (транслокацію Всг-АВІ), мієлодиспластичного синдрому (МДС), гострого В-лімфобласного лейкозу (В-ГЛЛ), хронічного лімфоцитарного лейкозу (ХЛЛ), включаючи в себе ХЛЛ із синдромом Ріхтера або трансформацією Ріхтера, волохатоклітинного лейкозу (ВКЛ), новоутворення із бластних плазмацитоїдних дендритних клітин (УБПДК), нехождкінських лімфом (НХЛ), включаючи в себе мантійноклітинну лімфому (МКЛ) і дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому (МЛЛ), лімфомиСО0123. Thus, without limitation, such molecules may be used in the diagnosis or treatment of acute myeloid leukemia (AML), chronic myeloid leukemia (CML), including CML blast crisis and CML-associated Abelson oncogene (Vsg-AVI translocation), myelodysplastic syndrome (MDS), acute B-lymphoblastic leukemia (B-CLL), chronic lymphocytic leukemia (CLL), including CLL with Richter's syndrome or Richter's transformation, hairy cell leukemia (CLL), neoplasm from blast plasmacytoid dendritic cells (BPDC), non-Hodgkin's lymphomas (NHL), including mantle cell lymphoma (MCL) and small cell lymphocytic lymphoma (MLL), lymphomas
Ходжкіна, системного мастоцитозу і лімфоми Беркіта (див. приклад 2); аутоїмунної вовчанки (СЧВ), алергії, бронхіальної астми і ревматоїдного артриту. Крім того, біспецифічні диатіла згідно із даним винаходом можна використовувати у виробництві лікарських засобів для лікування описаних вище станів.Hodgkin, systemic mastocytosis and Burkitt's lymphoma (see example 2); autoimmune lupus (SLE), allergies, bronchial asthma and rheumatoid arthritis. In addition, the bispecific diethyls according to the present invention can be used in the manufacture of drugs for the treatment of the conditions described above.
Представивши опис даного винаходу загалом, він стане більш зрозумілим з посиланням на наступні приклади, які представлені для ілюстрації і не передбачено, що вони обмежують даний винахід, якщо не зазначено інше.Having presented the description of the present invention in general, it will become more clear by reference to the following examples, which are presented by way of illustration and are not intended to limit the present invention unless otherwise indicated.
Приклад 1Example 1
Конструкція СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл і контрольного білкаConstruction of CO123 x POP bispecific diethyl and control protein
У таблиці 2 представлений перелік біспецифічних диатіл, які експресували і очищували.Table 2 presents a list of bispecific diethyls that were expressed and purified.
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-A bispecific diabody characterized by an optimized sequence of СО123 x POP (OAKT-
А) і біспецифічне диатіло, що характеризується неоптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (САВТ-В) здатні одночасно зв'язуватися з СО123 і СОЗ3. Контрольне біспецифічне диатіло (контрольне САКТ) здатне одночасно зв'язуватися з РІТС і СОЗ. Біспецифічні диатіла являють собою гетеродимери або гетеротримери з перерахованими амінокислотними послідовностями.A) and a bispecific diabody characterized by an unoptimized sequence of СО123 x POPs (САВТ-В) are capable of simultaneously binding to СО123 and POP3. The control bispecific diabody (control SACT) is capable of simultaneously binding to RITS and SOZ. Bispecific diethyls are heterodimers or heterotrimers with the listed amino acid sequences.
Способи утворення біспецифічних диатіл представлені в міжнародних патентних публікаціяхMethods of formation of bispecific diethyls are presented in international patent publications
МоМо УМО 2006/113665, УМО 2008/157379, УМО 2010/080538, УМО 2012/018687, УМО 2012/162068 іMoMo UMO 2006/113665, UMO 2008/157379, UMO 2010/080538, UMO 2012/018687, UMO 2012/162068 and
МО 2012/162067. (510)MO 2012/162067. (510)
Таблиця 2 вежа ню | КЛКТТКЯ . о. . : й НуклеїновокислотніTable 2 of the tower KLKTTKYA. at. . : and Nucleic acids
Біспецифічні диатіла послідовності й й й . кодуючі послідовності поліпептидного ланцюгаBispecific diatyl sequences y and y . coding sequences of the polypeptide chain
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою | 5ЕО І МО ЗЕО І МОСг2 послідовністю СО123 х СОЗ (БАКТ-А) ЗЕО ІЮ МО:З ЗЕО І МО (зв'язується з СОЗ на епітопі 1)Bispecific diabody characterized by optimized | 5EO AND MO ZEO AND MOSg2 sequence СО123 x POP (BACT-A) ZEO IU MO:Z ZEO AND MO (binds with POP on epitope 1)
Біспецифічне диатіло, що характеризується неоптимізованою | 5ЕО ІЮ МО:5 ЗЕО ІЮ МО:6 послідовністю СО123 х СОЗ (БАКТ-В) ЗЕО ІЮ МО:7 ЗЕО І МО:8 (зв'язується з СОЗ на епітопі 2)Bispecific diabody characterized by non-optimized | 5EO IU MO:5 ZEO IU MO:6 sequence CO123 x POP (BACT-B) ZEO IU MO:7 ZEO I MO:8 (binds with POP on epitope 2)
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, що міститьA bispecific diabody characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs containing
АВ язуючий домен (АКТА 5рО Ір МО ЕО Ю МОМ (зв'язується з СОЗ на епітопі 1), ЗЕО о МОЗ ЗЕ о МО містить альбумінзв'язуючий домен (АВО) для збільшення періоду напівжиття іп мімоAB binding domain (AKTA 5rO Ir MO EO Y MOM (binds with POPs on epitope 1), ZEO o MOZ ZE o MO contains an albumin-binding domain (ABO) to increase the half-life of ip mimo
Версія 1, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 хVersion 1, characterized by an optimized sequence of СО123 x
СОЗ біспецифічного диатіла, що містить | 5ЕО І МО:54 ЗЕО Ір МОл2 домен Ес да (версія 1 ОАВТ-А м/Ес) ЗЕО І МОЗ ЗЕО ІЮ МО:14 (зв'язується з СОЗ на епітопі 1), ЗЕО ІЮ МО5 ЗЕО І МО:16 містить домен бс для збільшення періоду напівжиття іп мімоPOPs of bispecific diethyl, containing | 5EO I MO:54 ZEO Ir MOl2 domain Es da (version 1 OAVT-A m/Es) ZEO I MOZ ZEO IU MO:14 (binds with POPs on epitope 1), ZEO IU MO5 ZEO I MO:16 contains a domain bs to increase the half-life period of ip mimo
Версія 2, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 хVersion 2, characterized by an optimized sequence of СО123 x
СОЗ біспецифічного диатіла, що містить | 5ЕО І МО:54 ЗЕО Ір МОл2 домен Ес Ідс (версія 2 ОАКТ-А м/Ес) ЗЕО ІЮ МО:17 ЗЕО І МО:18 (зв'язується з СОЗ на епітопі 1), ЗЕО І МО ЗЕО І МОСг2 містить домен бс для збільшення періоду напівжиття іп мімоPOPs of bispecific diethyl, containing | 5EO I MO:54 ZEO Ir MOl2 Es Ids domain (version 2 OAKT-A m/Es) ZEO IU MO:17 ZEO I MO:18 (binds with POPs on epitope 1), ZEO I MO ZEO I MOSg2 contains a domain bs to increase the half-life period of ip mimo
Контрольне біспецифічне диатіло (контрольне САКТ) , (зв'язується з СОЗ на епітопі 1) ще 5 МО оо (зв'язується з нерелевантною мішенню - ІControl bispecific diabody (control SACT) , (binds to POPs on epitope 1) another 5 MO oo (binds to an irrelevant target - I
ІТСITS
Приклад 2Example 2
Мічення антитілом клітин - мішеней для кількісного РАСЗ (ОБАС5)Antibody labeling of target cells for quantitative RASZ (OBAS5)
У загальному 105 клітин - мішеней збирали з культури, ресуспендовували в 10 95 сироватціA total of 105 target cells were collected from the culture, resuspended in 10 95 serum
АВ людини в буфері для ЕАС5З (РВЗ-1 95 ВБ5АчО,1 95 МаА?ліаде) і інкубували протягом 5 хв. для блокування рецепторів Ес. Мічення антитілом мікросфер з різними здатностями зв'язуватися з антитілом (Счапішт" мМ Бітріу СейПшамкв (0552), Вапоз І арогайогієв5, Іпс., Різпег5, ІМ) їі клітини - мішені мітили за допомогою РЕ антитіла до СО123 (ВО Віозсіепсе5) згідно з інструкціями виробника. Коротко, одну краплю кожної мікросфери О5С додавали в 5 мл поліпропіленову пробірку і мічене РЕ антитіло до СО123 додавали в концентрації 1 мкг/мл як до клітин - мішеней, так і мікросферам. Пробірки інкубували в темряві протягом 30 хвилин при 4 "С. Клітини і мікросфери промивали шляхом додавання 2 мл буфера для ГАСЗ і центрифугування при 2500 х б протягом 5 хвилин. Одну краплю популяції порожніх мікросфер додавали після промивання.Human AB in buffer for EAS5Z (RVZ-1 95 ВБ5АчО, 1 95 MaA?liade) and incubated for 5 min. to block Es receptors. Antibody labeling of microspheres with different abilities to bind to the antibody (Schapisht" MM Bitriu SeiPshamkv (0552), Vapoz I Arogayogiev5, Ips., Rizpeg5, IM) and target cells were labeled using RE antibodies to CO123 (VO Viozsiepse5) according to the instructions manufacturer. Briefly, one drop of each O5C microsphere was added to a 5 ml polypropylene tube and PE-labeled antibody to CO123 was added at a concentration of 1 μg/ml to both target cells and microspheres. The tubes were incubated in the dark for 30 minutes at 4 °C. Cells and microspheres were washed by adding 2 ml of buffer for GASZ and centrifugation at 2500 x b for 5 minutes. One drop of the population of empty microspheres was added after washing.
Мікросфери аналізували спочатку на проточному цитометрі для встановлення специфічних для аналізу налаштувань приладу (напруги РМТ і компенсація). З використанням таких самих налаштувань приладу реєстрували геометричне середнє значень флуоресценції мікросфер і клітин - мішеней. Стандартну криву сайтів зв'язування з антитілом на популяціях мікросфер одержували з геометричного середнього значень флуоресценції популяцій мікросфер. Сайти зв'язування 3 антитілом на клітинах - мішенях розраховували на підставі середнього геометричного значень флуоресценції клітин - мішеней з використанням стандартної кривої, отриманої для мікросфер в електронній таблиці ОціскСаї (Вапоз І арогайогіев5).The microspheres were analyzed first on a flow cytometer to set the instrument settings specific to the analysis (RMT voltages and compensation). Using the same device settings, the geometric mean of fluorescence values of microspheres and target cells was recorded. A standard curve of antibody binding sites on populations of microspheres was obtained from the geometric mean of fluorescence values of populations of microspheres. Binding sites of 3 antibodies on target cells were calculated on the basis of the geometric mean of the fluorescence values of target cells using the standard curve obtained for microspheres in the OtsiskSai spreadsheet (Vapoz I Arogayogiev5).
Для визначення підходящих клітинних ліній - мішеней для оцінки СО123 х СО3 біспецифічних диатіл, рівні поверхневої експресії СО123 на лініях - мішенях Казиті-3 (ГМЛ),To determine suitable cell lines - targets for evaluation of СО123 x СО3 bispecific diethyls, levels of surface expression of СО123 on lines - targets of Kaziti-3 (GML),
Моїт13 (ГМЛ), ТНР-1 (ГМЛ), ТЕ-1 (еритролейкоз) і К54-11 (ОЛЛ) оцінювали за допомогою кількісного аналізу ЕАСЗ (ОБАС5). Абсолютні кількості сайтів зв'язування з антитілом СО123 на клітинній поверхні розраховували з використанням набору ОБАС5. Як показано в таблиці 3, абсолютна кількість сайтів зв'язування з антитілом СО123 на клітині становили порядок Казиті-Moit13 (AML), TNR-1 (AML), TE-1 (erythroleukemia) and K54-11 (ALL) were evaluated using the quantitative analysis of EASZ (OBAS5). The absolute number of binding sites with the CO123 antibody on the cell surface was calculated using the OBAS5 kit. As shown in Table 3, the absolute number of binding sites with the CO123 antibody on the cell was of the order of Kaziti-
З (високе) » Моїт!3 (середнє) » ТНР-1 (середнє) » ТЕ-1 (помірно низьке) » К54-11 (низьке). Три клітинні лінії з найвищими рівнями експресії являли собою клітинні лінії ГМЛ: Казиті-3, МОЇ! М1З і ТНР-1. Ті, що не мали відношення до ГМЛ клітинних ліній: ТЕ-1 і К54-11, характеризувалися помірно низькою/низькою експресією СО123, відповідно.Z (high) » Moit!3 (medium) » TNR-1 (medium) » TE-1 (moderately low) » K54-11 (low). The three cell lines with the highest expression levels were AML cell lines: Kazyti-3, MY! M1Z and TNR-1. Those unrelated to AML cell lines: TE-1 and K54-11, were characterized by moderately low/low expression of CO123, respectively.
Таблиця ЗTable C
Клітинна лінія - Поверхнева мішеней експресія СЮО123 (сайти зв'язування з антитілом)Cell line - Surface expression of ХО123 targets (antibody binding sites)
Приклад ЗExample C
Аналіз цитотоксичності СТІ. (аналіз вивільнення І ОН)Analysis of STI cytotoxicity. (analysis of IOH release)
Прикріплені пухлинні клітини - мішені відкріплювали за допомогою 0,25 95 розчину трипсину-Attached tumor cells - targets were detached with the help of 0.25 95 solution of trypsin-
ЕОТА і збирали шляхом центрифугування при 1000 об./хв. протягом 5 хв. Суспензію клітинних ліній - мішеней збирали з культури, відмивали за допомогою середовища для аналізу.EOTA and collected by centrifugation at 1000 rpm. within 5 min. The suspension of target cell lines was collected from the culture, washed with the medium for analysis.
Концентрацію і життєздатність клітин вимірювали за витисненням трипанового синього з використанням лічильника клітин ВесКтап СошКег Мі-СеїЇ. Клітини - мішені розводили до 4х105 клітин/мл у середовищі для аналізу. 50 мкл розведеної клітинної суспензії додавали в 96- ямковий О-донний оброблений клітинною культурою планшет (Мо за кат. ВО РаЇсоп 353077).Cell concentration and viability were measured by trypan blue extrusion using a VesKtap SoshKeg Mi-SeiY cell counter. Target cells were diluted to 4x105 cells/ml in medium for analysis. 50 μl of the diluted cell suspension was added to a 96-well O-bottom plate treated with cell culture (Mo by cat. VO RaYsop 353077).
Встановлювали три набори контролів для вимірювання максимального вивільнення з мішені (МЕ), незалежної від антитіла Т-клітинної цитотоксичності (АІСС) і спонтанного вивільнення із клітини - мішені (ЗК) у такий спосіб: 1) МЕ: 200 мкл середовища для аналізу без СЮО123 х СОЗ біспецифічних диатіл і 50 мкл клітин - мішеней; детергент додавали наприкінці експерименту для визначення максимального вивільнення ГІ ОН. 2) АІСС: 50 мкл середовища для аналізу без СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл, 50 мклThree sets of controls were set up to measure maximal release from the target (ME), antibody-independent T-cell cytotoxicity (AICT) and spontaneous release from the target cell (TC) as follows: 1) ME: 200 μl of assay medium without SHO123 x POPs of bispecific diethyls and 50 μl of target cells; detergent was added at the end of the experiment to determine the maximum release of GI OH. 2) AISS: 50 μl medium for analysis without CO123 x POP bispecific diethyls, 50 μl
Зо клітин - мішеней і 100 мкл Т-клітин. 3) ЗЕ: 150 мкл середовища без СО123 х СОЮЗ біспецифічних диатіл і 50 мкл клітин - мішеней.From target cells and 100 μl of T cells. 3) ZE: 150 μl of medium without CO123 x SOYUZ bispecific diethyls and 50 μl of target cells.
СсО0123 х СО3З біспецифічні диатіла (АКТ-А, ОАВТ-А м/АВО і БАКТ-В) і контролі спочатку розводили до концентрації, що становить 4 мкг/мл, і потім одержували серійні розведення до кінцевої концентрації, що становить 0,00004 нг/мл (тобто 40 Ффмг/мл). 50 мкл розведень додавали до планшета, що містить 50 мкл клітин - мішеней/лунка.СсО0123 x СО3Z bispecific diethyls (ACT-A, OAVT-A m/ABO and BACT-B) and controls were first diluted to a concentration of 4 μg/ml and then serially diluted to a final concentration of 0.00004 ng /ml (ie 40 Ffmg/ml). 50 μl of dilutions were added to a plate containing 50 μl of target cells/well.
Очищені Т-клітини промивали один раз середовищем для аналізу і ресуспендовували в середовищі для аналізу із щільністю Т-клітин, що становить 2 х 109 клітин/мл. 2 х 105 Т-клітин в 100 мкл додавали до кожної лунки до кінцевого співвідношення ефектора до клітини - мішені (Е:Т), що становить 10:1. Планшети інкубували протягом приблизно 18 год. при 37 "С в 5 95 СО».Purified T cells were washed once with assay medium and resuspended in assay medium at a T cell density of 2 x 109 cells/ml. 2 x 105 T cells in 100 μl were added to each well to a final ratio of effector to target cell (E:T) of 10:1. Tablets were incubated for about 18 hours. at 37 "С at 5 95 СО".
Після інкубації 25 мкл 10х лізуючого розчину (Рготеда, Мо за кат. С182А) або 1 мг/мл дигітоніну додавали до контрольних лунок максимального вивільнення, перемішували за допомогою піпетки З рази і планшети інкубували протягом 10 хв. до повного лізису клітин - мішеней. Планшети центрифугували при 1200 об./хв. протягом 5 хвилин і 50 мкл супернатанту переносили з кожної лунки аналітичного планшета в плоскодонний планшет для ЕЇГ ІЗА і 50 мкл розчину субстрату СОН (Рготеда, Мо за кат. 51780) додавали до кожної лунки. Планшети інкубували протягом 10-20 хв при кімнатній температурі (КТ) у темряві, потім додавали 50 мкл стоп - розчину. Оптичну щільність (0.0.) вимірювали при 490 нм у межах 1 год. на планшет-After incubation, 25 μl of 10x lysing solution (Rgoteda, MO under cat. C182A) or 1 mg/ml of digitonin was added to the maximum release control wells, mixed with a pipette 3 times, and the tablets were incubated for 10 min. until complete lysis of target cells. Tablets were centrifuged at 1200 rpm. for 5 minutes, and 50 μl of the supernatant was transferred from each well of the analytical tablet to a flat-bottomed tablet for EIG IZA, and 50 μl of the SON substrate solution (Rgoteda, Mo. under cat. 51780) was added to each well. Tablets were incubated for 10-20 min at room temperature (RT) in the dark, then 50 μl of stop solution was added. The optical density (0.0.) was measured at 490 nm within 1 hour. on a tablet-
Зо ридері Місог2 Мищіабеї (Регкіп ЕІптег, Мо за кат. 420-014). Цитотоксичність в 96 розраховували, як описано нижче, і криві відповіді на дозу одержували з використанням програмного забезпечення СгарпРай РКІБМ5Ф)From riders Misog2 Myschiabei (Regkip EIPteg, Mo under cat. 420-014). Cytotoxicity in 96 was calculated as described below, and dose-response curves were obtained using SgarpRai RKIBM5F software)
Лізис конкретних клітин розраховували з даних 0.0. с використанням наступної формули:The lysis of specific cells was calculated from the data 0.0. using the following formula:
Цитотоксичність (95) - 100 х (00 зразка - 00 АІСС)УХОЮ МА-О0О 58)Cytotoxicity (95) - 100 x (00 sample - 00 AISS) EAR MA-ООО 58)
Переспрямований цитоліз клітинних ліній - мішеней за допомогою різних рівнів поверхневого СО123Redirected cytolysis of target cell lines using different levels of surface CO123
СО0123 х СОЗ біспецифічні диатіла виявили виражену здатність до перенаправленого цитолізу з концентраціями, які повинні досягати 50 95 від максимальної активності (ЕС505) у діапазоні суб-нг/мл, незалежно від специфічності зв'язування з епітопом СОЗ (ОАКТ-А у порівнянні з ОАКТ-В) у клітинних лініях - мішенях з високим рівнем експресії СО123, Казиті-З (ЕС50О-0,01 нг/мл) (фігура 4, панель 0), середнім рівнем експресії СО123, Моїт!З3 (ЕС50О-0О,18 нг/мл) і ТНР-1 (ЕС5О-0,24 нг/мл) (фігура 4, панель С і Е, відповідно) і помірно низьким або низьким рівнем експресії СО123, ТЕ-1 (ЕС50-0,46 нг/мл) і 54-11 (ЕС50О-0,5 нг/мл) (фігура 4, панель В і А, відповідно). Аналогічно, опосередкований СО123 х СОЗ біспецифіческими молекулами переспрямований цитоліз також спостерігали із численними клітинними лініями - мішенями з Т-клітинами з різних донорів і відсутність активності у вигляді перенаправленого цитолізу спостерігали в клітинних лініях, які не експресують СО123. Результати узагальнено представлені в таблиці 4.СО0123 x POP bispecific diethyls showed a pronounced ability for redirected cytolysis with concentrations that should reach 50 95 of the maximum activity (EC505) in the sub-ng/ml range, regardless of the specificity of binding to the POP epitope (OAKT-A compared to OAKT -B) in cell lines - targets with a high level of expression of CO123, Kazity-Z (EC50O-0.01 ng/ml) (figure 4, panel 0), medium expression level of CO123, Moit!Z3 (EC50O-0O,18 ng /ml) and TNR-1 (EC5O-0.24 ng/ml) (Figure 4, panel C and E, respectively) and moderately low or low level of expression of CO123, TE-1 (EC50-0.46 ng/ml) and 54-11 (EC50O-0.5 ng/ml) (Figure 4, panels B and A, respectively). Similarly, CO123 x POP bispecific molecule-mediated redirected cytolysis was also observed with numerous cell lines - targets with T cells from different donors and no activity in the form of redirected cytolysis was observed in cell lines that do not express CO123. The results are summarized in Table 4.
Таблиця 4Table 4
Клітинна лінія - Поверхнева експресія ЕС50О, що Макс. 95 цитолізу мішень СОр123 (сайти характеризуються зв'язування з оптимізованою антитілом) послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл (нг/мл)Cell line - Surface expression of EC50O, which Max. 95 cytolysis of CO123 targets (sites characterized by binding to an optimized antibody) sequence of CO123 x POP bispecific diethyls (ng/ml)
Е:Т-10: валі 7 / Ї7777171717957.......Й.Щ.|.ЮЙЙЮЮ.05.....БЬ 1 |. ЮЙМдлов сE:T-10: vali 7 / Ю7777171717957.......Х.Ш.|.ЮЮЮЮЮ.05.....БЙ 1 |. YuYMdlov village
Якщо буде потреба відтворити зазначений приклад, слід розуміти, що фахівець у даній області техніки зможе в межах доцільних і прийнятних границях змінити описаний вище протокол підходящим чином для відтворення описаних результатів. Таким чином, не мається на увазі, що проілюстрований протокол повинен дотримуватися точно визначеним чином.If there is a need to reproduce the specified example, it should be understood that a specialist in this field of technology will be able, within reasonable and acceptable limits, to modify the protocol described above in a suitable way to reproduce the described results. Thus, it is not implied that the illustrated protocol must be followed in a precisely defined manner.
Приклад 4Example 4
Т-клітинна активація під час перенаправленого цитолізу за допомогою біспецифічних диатіл (ОАВТ-А, ОАНТ-А м/АВО ії САКТ-А м/с), що характеризуються оптимізованою послідовністюT-cell activation during redirected cytolysis with the help of bispecific diethyls (OAVT-A, OANT-A m/ABO and SACT-A m/s) characterized by an optimized sequence
СОр123 х СОЗСОр123 x SOZ
Зо Біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ виявили виражену здатність до перенаправленого цитолізу незалежно від присутності або відсутності технології збільшення періоду напівжиття (САКТ-А у порівнянні з ОАКТ-А м/АВО у порівнянні з ОАКТ-А м/Ес) у клітинних лініях - мішенях з високою експресією СО123, Казиті-3, і середньою експресією СО123, ТНР-1 (фігура 5, панелі А і В, відповідно). Щоб одержати характеристики Т-клітинної активації протягом процесу опосередкованого, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатілом перенаправленого цитолізу,З Bispecific dibodies characterized by the optimized sequence of СО123 x POPs showed a pronounced ability for redirected cytolysis regardless of the presence or absence of half-life extension technology (SACT-A compared to OAKT-A m/ABO compared to OAKT-A m/Es) in cell lines - targets with high expression of СО123, Casyti-3, and medium expression of СО123, TNR-1 (figure 5, panels A and B, respectively). In order to obtain characteristics of T-cell activation during the process of mediated, characterized by an optimized sequence of СО123 x POPs of bispecific diethyl redirected cytolysis,
Т-клітини з аналізів перенаправленого цитолізу офарблювали відносно маркера Т-клітинної активації СО25 і аналізували за допомогою БАС5. Як показано на фігурі 5, панелі ОЮ, С025 зазнав позитивно регуляції в СО8 Т-клітинах залежним від дози чином, указуючи на те, що, біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3 індуціювали Т-клітинну активацію в процесі перенаправленого цитолізу. Напроти, при відсутності клітин - мішеней не спостерігалася активація СО8 Т-клітин (фігура 5, панель С), що вказує на те, що біспецифічні диатіла, що характеризуються оптимізованою послідовністюT cells from the redirected cytolysis assays were stained for the T cell activation marker CO25 and analyzed with BAS5. As shown in Figure 5, panel OY, C025 was upregulated in C08 T cells in a dose-dependent manner, indicating that bispecific diethyls characterized by an optimized C0123 x C03 sequence induced T cell activation in the process of redirected cytolysis. In contrast, in the absence of target cells, activation of CO8 T cells was not observed (Figure 5, panel C), indicating that bispecific diacetyl characterized by an optimized sequence
СОр123 х СОЗ не активують Т-клітини при відсутності клітин - мішеней. Аналогічно, СО8 Т-СОр123 x POPs do not activate T-cells in the absence of target cells. Similarly, СО8 T-
клітини не активувалися при інкубації із клітинами - мішенями і контрольним біспецифічним диатілом (контрольним ЮАКТ) (фігура 5, панель Ю), указуючи на необхідність перехресної зшивки Т-клітини і клітини - мішені з біспецифіческими диатілами, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3.cells were not activated when incubated with target cells and a control bispecific dialyte (control UAKT) (Figure 5, panel Y), indicating the need for cross-linking of T cells and target cells with bispecific dialytes characterized by the optimized sequence of СО123 x СОЗ3.
Приклад 5Example 5
Внутрішньоклітинне фарбування по відношенню до гранзиму В і перфоринуIntracellular staining for granzyme B and perforin
Для визначення внутрішньоклітинних вмістів гранзиму В і перфорину в Т-клітинах аналізAnalysis to determine the intracellular contents of granzyme B and perforin in T cells
СТІ налаштовували, як описано вище. Через приблизно 18 год. клітини з аналітичного планшета офарблювали антитілами до СО4 і до СО8 шляхом інкубації протягом 30 хвилин при 4 "С. Після поверхневого фарбування клітини інкубували в 100 мкл буфера для фіксації і пермеабілізації (ВО Віобсіепсе5) протягом 20 хв. при 4 "С. Клітини промивали буфером для пермеабілізації/відмивання (ВО Віобсієпсев) і інкубували в 50 мкл суміші антитіл до гранзиму В і перфорину (отриманої в 1Х буфері для пермеабілізації/відмивання) при 4 "С протягом 30 хвилин. Потім клітини промивали за допомогою 250 мкл буфера для пермеабілізації/відмивання і ресуспендовували в буфері для пермеабілізації/відмивання для одержання даних ЕАС5.The STI was configured as described above. After about 18 hours. cells from the analytical tablet were stained with antibodies to CO4 and to CO8 by incubation for 30 minutes at 4 "C. After surface staining, the cells were incubated in 100 μl of buffer for fixation and permeabilization (VO Viobsiepse5) for 20 minutes at 4 "C. Cells were washed with permeabilization/washing buffer (VO Viobsiepsev) and incubated in 50 μl of a mixture of antibodies to granzyme B and perforin (prepared in 1X permeabilization/washing buffer) at 4 °C for 30 minutes. Then cells were washed with 250 μl of buffer for permeabilization/washing and resuspended in permeabilization/washing buffer to obtain EAC5 data.
Позитивна регуляція гранзиму В і перфорину, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЮЗ біспецифічним диатілом (0ОАКТ-А) в Т-клітинах під час перенаправленого цитолізуPositive regulation of granzyme B and perforin characterized by an optimized sequence of СО123 x СОЯЗ bispecific diethyl (0ОАКТ-А) in T cells during redirected cytolysis
Для дослідження можливого механізму опосередкованою, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічним диатілом (ЮАКТ-А), цитотоксичностіTo study the possible mechanism of cytotoxicity mediated by the optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyl (YACT-A)
Т-клітинами, внутрішньоклітинні вмісти гранзиму В і перфорину вимірювали в Т-клітинах після перенаправленого цитолізу. Залежну від дози позитивну регуляцію вмістів гранзиму В і перфорину як в СО8, так і СО4 Т-клітинах спостерігали після інкубації Т-клітин і клітин Казиті-З з САКТ-А (фігура 6, панель А). Цікаво, що позитивна регуляція була майже у два рази вища вT cells, intracellular contents of granzyme B and perforin were measured in T cells after redirected cytolysis. A dose-dependent up-regulation of granzyme B and perforin contents in both CO8 and CO4 T cells was observed after incubation of T cells and Kaziti-Z cells with SACT-A (Figure 6, panel A). Interestingly, positive regulation was almost twice as high in
СО8 Т-клітинах у порівнянні з СО4 Т-клітинами (фігура 6, панель А). Якщо аналіз проводили в присутності інгібіторів гранзиму В і перфорину, клітинний лізис не спостерігався. Позитивна регуляція гранзиму В або перфорину була відсутня в СО8 або СО4 Т-клітинах, якщо Т-клітини інкубували із клітинами - мішенями Кавзиті-3 і контрольним біспецифічним диатілом (контрольним ОБАКТ) (фігура 5, панель В). Наведені дані вказують на те, що опосередкованийCO8 T-cells compared to CO4 T-cells (Figure 6, panel A). If the analysis was performed in the presence of inhibitors of granzyme B and perforin, cell lysis was not observed. Up-regulation of granzyme B or perforin was absent in CO8 or CO4 T cells when T cells were incubated with Cavity-3 target cells and control bispecific diethyl (OBACT control) (Figure 5, panel B). The given data indicate that the mediated
Зо рАВТА-А лізис клітин - мішеней може бути опосередкований через механізми за участю гранзимуFrom rAVTA-A, the lysis of target cells can be mediated through mechanisms involving granzyme
В ї перфорину.In her perforin.
Приклад 6Example 6
Іп ммо протипухлинна активність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (АКТ-А)IP mmo antitumor activity characterized by the optimized sequence of CO123 x POP bispecific diethyl (AKT-A)
Виділення РВМС і Т-клітин із цільної крові людиниIsolation of PBMCs and T-cells from human whole blood
РВМС від здорових донорів - людей виділяли із цільної крові з використанням центрифугування в градієнті Фікола. Коротко, цільну кров розводили 1:1 стерильним РВ5. 35 мл розведеної крові наносили на 15 мл РісоП-Радие"М Рійи5 в 50 мл пробірках і пробірки центрифугували при 1400 об./хв. протягом 20 хв. із розгальмовуванням. Лейкоцитарну плівку між двома фазами збирали в 50 мл пробірку з 45 мл РВ5 шляхом центрифугування пробірок при 600 х д (1620 об./хв.) протягом 5 хв. Супернатант видаляли і клітинний осад відмивали один раз за допомогою РВЗ і кількість життєздатних клітин визначали шляхом витиснення барвника трипанового синього. РВМС ресуспендовували до кінцевої концентрації, що становить 2,5 х 105 клітин/мл у повному середовищі (КРМІ 1640, 10 95ЕВ5, 2 мМ глутаміну, 10 мМ НЕРЕ5, 100PBMCs from healthy human donors were isolated from whole blood using centrifugation in a Ficol gradient. Briefly, whole blood was diluted 1:1 with sterile PB5. 35 ml of diluted blood was applied to 15 ml of RisoP-Radie"M Riya5 in 50 ml test tubes and the tubes were centrifuged at 1400 rpm for 20 min. with deceleration. The leukocyte film between the two phases was collected in a 50 ml test tube with 45 ml of РВ5 by the tubes were centrifuged at 600 x d (1620 rpm) for 5 min. The supernatant was removed and the cell pellet was washed once with RVZ and the number of viable cells was determined by trypan blue dye extrusion. The RVMS was resuspended to a final concentration of 2, 5 x 105 cells/ml in complete medium (KRMI 1640, 10 95EV5, 2 mM glutamine, 10 mM HERE5, 100
МКМ ООмкМ/мл пеніциліну/стрептоміцину (Р/5).MKM OOμM/ml of penicillin/streptomycin (P/5).
Виділення Т-клітин. Не піддані впливу Т-клітини виділяли шляхом негативної селекції зIsolation of T cells. Unexposed T-cells were isolated by negative selection from
РВМС із цільної крові людини з використанням набору для виділення Т-клітин людиниPBMC from human whole blood using a human T-cell isolation kit
Бупареада5 Опіоиспей (Гіте ТесппоЇІодіе5) згідно з інструкціями виробника. Після виділення Т- клітини культивували протягом ночі в середовищі КРМІ з 1095 ЕВ5, 195 пеніциліну/стрептоміцину.Bupareada5 Opioispei (Gite TesppoYiIodie5) according to the manufacturer's instructions. After isolation, T-cells were cultured overnight in KRMI medium with 1095 EU5, 195 penicillin/streptomycin.
Модель пухлиниTumor model
Т-клітини і пухлинні клітини людей (Моїт13 або 54-11) комбінували у співвідношенні 1:5 (1 х 1051 5 х 106, відповідно) і суспендовували в 200 мкл стерильного сольового розчину і вводили за допомогою підшкірної ін'єкції (5С) в 0 день дослідження (500). Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) або контрольне біспецифічне диатіло (контрольне ОАКТ) вводили внутрішньовенно (ІМ) за допомогою ін'єкцій у хвостову вену по 100 мкл, як презентовано в таблиці 5 (МОЇ М113) і таблиці 6 (54-11).Human T-cells and tumor cells (Moit13 or 54-11) were combined in a ratio of 1:5 (1 x 1051 5 x 106, respectively) and suspended in 200 μl of sterile saline and injected by subcutaneous injection (5C) into 0 research day (500). A bispecific dibody characterized by an optimized sequence of CO123 x POP (OAKT-A) or a control bispecific dibody (OAKT control) was administered intravenously (IM) using 100 µl tail vein injections as presented in Table 5 (MY M113) and Table 6 (54-11).
Таблиця 5Table 5
Схема дослідження для моделі МОЇМ13Scheme of research for the MYIM13 model
Група лікування Доза (мг/кг)Treatment group Dose (mg/kg)
Контроль - інертний носій (клітиниControl - inert carrier (cells
МОЇ М-13 окремо імплантовані або 50О,1,2, 3 - Т-клітини)MY M-13 are separately implanted or 50O,1,2, 3 - T-cells)
РАВТ-А 5рО,1,.2,23 |. 8 2 2щ(-RAVT-A 5rO,1,.2,23 |. 8 2 2sh(-
РАВТ-А 5рО,1,.2,23 |. 8 2 2щ(-RAVT-A 5rO,1,.2,23 |. 8 2 2sh(-
РАВТ-А 5рО,1,.2,23 |. 8 2 2щ(-RAVT-A 5rO,1,.2,23 |. 8 2 2sh(-
РАВТ-А 5рО,1,.2,23 |. 8 2 2щ(-RAVT-A 5rO,1,.2,23 |. 8 2 2sh(-
ОАВТ-А 0,004 500,1,2,3 | ЙДщ 8OAVT-A 0.004 500,1,2,3 | YDshch 8
ОАВТ-А 0,0008 500,1,2,3 | ЙДщ 8OAVT-A 0.0008 500,1,2,3 | YDshch 8
РАВТ-А 0,00016 50р0,1,223 | щЙщЙ((8щжRAVT-A 0.00016 50r0.1.223 | щХХХ((8щж
Таблиця 6Table 6
Схема дослідження для моделі К54-11Study scheme for the K54-11 model
Група лікування Доза (мг/кг)Treatment group Dose (mg/kg)
Контроль - інертний носій (клітини 8554-11 окремо імплантовані) ЗО, 1,2, ЗControl - inert carrier (cells 8554-11 separately implanted) ZO, 1,2, Z
Контроль - інертний носій (К54- 11-4Т-клітини імплантовані) ЗО, 1,2, ЗControl - inert carrier (K54-11-4T cells implanted) ZO, 1,2, Z
Контрольне ОАВТ 500,1,2,3 | 8 2 жКфЄControl OAVT 500,1,2,3 | 8 2 zhKfE
РАВТ-А 500,1,2,3 | 8 2 жКфЄRAVT-A 500,1,2,3 | 8 2 zhKfE
РАВТ-А 500,1,2,3 | 8 2 жКфЄRAVT-A 500,1,2,3 | 8 2 zhKfE
РАВТ-А 500,1,2,3 | 8 2 жКфЄRAVT-A 500,1,2,3 | 8 2 zhKfE
РАВТ-А 500,1,2,3 | 8 2 жКфЄRAVT-A 500,1,2,3 | 8 2 zhKfE
РАВТ-А 0,004 5р0,1,2,3 | 8RAVT-A 0.004 5r0,1,2,3 | 8
Збір даних і статистичний аналіз:Data collection and statistical analysis:
Маси тварин - Маси окремих тварин реєстрували два рази на тиждень до завершення дослідження, починаючи з моменту ін'єкції пухлинних клітин.Animal weights - The weights of individual animals were recorded twice a week until the end of the study, starting from the moment of injection of tumor cells.
Стан агонії/смертність - Проводили спостереження за тваринами два рази на тиждень відносно загального стану агонії і щодня відносно смертності. Смертельні випадки тварин оцінювали як пов'язані з лікарським засобом або технічні на підставі факторів, включаючи в себе макроскопічні спостереження і втрату маси тіла; смертельні випадки у тварин реєстрували щодня. довжина (мм) х ширина?State of agony/mortality - Animals were observed twice a week for general state of agony and daily for mortality. Animal deaths were assessed as drug-related or technical based on factors including macroscopic observations and body weight loss; animal deaths were recorded daily. length (mm) x width?
Об'єм пухлини - Об'єми окремих пухлин реєстрували двічі на тиждень, починаючи не пізніше одного тижня після імплантації пухлини і продовжуючи до завершення дослідження.Tumor volume - Volumes of individual tumors were recorded twice a week, starting no later than one week after tumor implantation and continuing until the end of the study.
Об'єм пухлини (мм)Tumor volume (mm)
І епдій (тт) х міді"And epdium (tt) x midi"
Титог Моїште (тт) - ЗПСМ, 9 ( 5 ух ахTytog Moishte (tt) - ZPSM, 9 (5 uh ah
Тварини, що вмерли внаслідок технічної або пов'язаної з лікарським засобом смерті, виключали з розрахунків даних.Animals that died due to technical or drug-related death were excluded from data calculations.
Інгібування росту пухлини - Значення інгібування росту пухлини (ТОЇ) розраховували для кожної групи, що містить тварин, що одержали лікування, з використанням наступної формули:Tumor Growth Inhibition - Tumor growth inhibition (TGI) values were calculated for each group containing treated animals using the following formula:
Середній кінц. об'єм пухлини (який піддівали лікуванню)-середній початк. об'єм пухлини (який піддівали лікуванню)Middle school the volume of the tumor (which was subjected to treatment) is the average beginning. tumor volume (which was treated)
Середній кінц. об'єм пухлини (контроль)-середній поч. об'єм пухлини (контроль) 1. Меап Ріпа! Титог МоЇште (Тгєаїед) - Меап Іпійа! Титог Моїште (Ттєаїєд) х100Middle school tumor volume (control) - average beginning tumor volume (control) 1. Meap Ripa! Titog MoYishte (Tgeaied) - Meap Ipiya! Tytog Moishte (Tteaied) x100
Меап Ріпа! Титог Моїште (Сопігої) - Меап Іпійа! Титог Моїште (Сопігої)Meap Ripa! Titog Moishte (Sopigoi) - Meap Ipiya! Titog Moishte (Sopigoi)
Тварин, у яких спостерігалася часткова або повна ремісія, або тварин, що вмерли внаслідок технічної або пов'язаної з лікарським засобом смерті, виключали з розрахунків ТОЇ. КритеріїAnimals in which partial or complete remission was observed, or animals that died due to technical or drug-related death, were excluded from TOI calculations. Criteria
Національного інституту раку для активності сполуки становить ТО1»58 95 (Согреїй еї аї. (2004)of the National Cancer Institute for the activity of the compound is ТО1»58 95 (Sogreii ei ai. (2004)
Апіїсапсег Огиа ЮОемеІортепі Сиіде; Тоїожа, Му: Нитапа 99-123).Apiisapseg Ogia YuOemeIortepi Siide; Toyozha, Mu: Nytapa 99-123).
Часткова/повна відповідь пухлини - Окремих мишей, що характеризуються наявністю пухлин розміром менше ніж 1 мм? на 1 день, класифікували як таких, що характеризуються частковою ремісією (РК) і значення регресії пухлини в 9о (901) визначали з використанням наступної формули:Partial/complete tumor response - Individual mice characterized by the presence of tumors less than 1 mm in size? on day 1, were classified as those characterized by partial remission (RP) and the value of tumor regression in 9o (901) was determined using the following formula:
Початковий об'єм пухлини (мм)Initial tumor volume (mm)
Кінцевий об'єм пухлини (мм)Final tumor volume (mm)
Н ЗN Z
1- Ніла! Титог Моїште (тт 4009,1- Nila! Tytog Moishte (tt 4009,
Іпйа! Титог Моїште (тт")Yup! Tytog Moishte (tt")
Окремих мишей, у яких були відсутні пальпуємі пухлини, класифікували як таких, що зазнали повної ремісії (СК).Individual mice that did not have palpable tumors were classified as having undergone complete remission (CR).
Статистичні дані відносно об'єму пухлини - Статистичний аналіз проводили між контрольними групами, що одержали лікування і, порівнюючи об'єми пухлин. Для цих аналізів використовували двохфакторні аналізи дисперсії з наступним апостеріорним критеріємTumor Volume Statistics - Statistical analysis was performed between treated and control groups comparing tumor volumes. For these analyses, two-way analyzes of variance with a posteriori criterion were used
Бонферони. Усі аналізи проводили з використанням програмного забезпечення СгарпРайBonferroni. All analyzes were performed using SgarpRay software
РКІБМО (версії 5.02). Дані у відношенні маси і пухлини від окремих тварин, що вмерли внаслідок технічної або пов'язаної з лікарським засобом смерті, виключали з аналізу. Проте, дані відносно пухлин тварин, які продемонстрували часткову або повну відповіді, включали в зазначені розрахунки.RKIBMO (version 5.02). Weight-to-tumor data from individual animals that died due to technical or drug-related death were excluded from analysis. However, tumor data from animals that demonstrated a partial or complete response were included in these calculations.
Результати МОЇ! М1З3The results are MINE! M1Z3
Клітинну лінію ГМЛ, МОГМ13, попередньо змішували з активованими Т-клітинами і імплантували 5С МОБ)/ЗСІЮО гама (М5О) нокаутним мишам (М-в/група) у день 500, як докладно описано нижче. Пухлини МОЇ М13 в отримавшій лікування за допомогою інертного носія групі (клітини МОЇМ13 окремо або разом з Т-клітинами) продемонстрували профіль щодо агресивного росту іп мімо (фігура 7, панелі А і В). У день 5ЮОве середній об'єм пухлин отримавших лікування за допомогою інертного носія групі становив 129,8ж429,5 мм і до дня 5015 пухлини досягли середнього об'єму, що становить 786,4-156,7 мм3. До кінця експерименту в день 5018 пухлини досягали середнього об'єму, що становить 1398,82236,9The AML cell line, MOGM13, was premixed with activated T cells and implanted with 5C MOB)/ZSIUO gamma (M5O) knockout mice (M-v/group) on day 500, as detailed below. MYM13 tumors in the vehicle-treated group (MYM13 cells alone or together with T cells) showed an aggressive growth profile and mimo (Figure 7, panels A and B). On the 5th day, the average volume of tumors in the group treated with an inert carrier was 129.8x429.5 mm, and by the 5015th day, the tumors reached an average volume of 786.4-156.7 mm3. By the end of the experiment on day 5018, the tumors reached an average volume of 1398.82236.9
ММ.MM.
Лікування за допомогою ЮАКТ-А починали в той же день, як була імплантована суміш пухлинних клітин і Т-клітин (КЗОО)| і продовжували далі із щоденними ін'єкціями протягом додаткових 7 днів для досягнення в загальному 8 щоденних ін'єкцій. Тварин лікували за допомогою ВАКТ-А при 9 рівнях дози (0,5,0,2,0,1,0,02 і 0,004 мг/кгі 20, 4, 0,8 ї 0,16 мкг/кг).Treatment with UACT-A was started on the same day as the mixture of tumor cells and T cells (KZOO) was implanted. and continued with daily injections for an additional 7 days to reach a total of 8 daily injections. Animals were treated with VACT-A at 9 dose levels (0.5, 0.2, 0.1, 0.02 and 0.004 mg/kg, 20, 4, 0.8 and 0.16 μg/kg).
Результати показано на фігурі 7, панелі А (0,5,0,2,0,1, 0,02 і 0,004 мг/кг) і фігурі 7, панелі В (20, 4, 0,8 і 0,16 мкг/кг). У день дослідження 11 ріст пухлин МОЇ М13 значно інгібувався при рівнях дози, що становлять 0,16, 0,5,0,2, 0,1, 0,02 ї 0,004 мг/кг (р « 0,001). Більше того, лікування мишей з пухлиною МОЇ М13 при рівнях доз, що становлять 20 і 4 мкг/кг доза, призводило до 8/8 і 7/8 СЕ, відповідно. До кінця експерименту в день 5018 середній об'єм пухлин, оброблених за допомогою ВАКТ-А у дозі, що становить 0,8 - 20 мкг/кг, перебував у діапазоні від 713,6,05267,4 до 0 мм3, причому всі пухлини були значно менші, ніж пухлини в отримавшій лікування за допомогою інертного носія контрольній групі. Значення ТО становили 100, 94 і 49 95 для груп, що одержали дози 20, 4 і 0,8 мкг/кг, відповідно. У порівнянні з отримавшою лікування за допомогою інертного носія групі з пухлинними клітинами МОГ М13, групи, які одержали ОАКТ-А при рівні дози, що становить 20 і 4 мкг/кг, досягли статистичного рівня значимості до дня 5015, тоді як група, що одержала лікування за допомогою 0,8 мкг/кг, досягла статистичного рівня значимості до дня 5018.The results are shown in Figure 7, panel A (0.5, 0.2, 0.1, 0.02, and 0.004 mg/kg) and Figure 7, panel B (20, 4, 0.8, and 0.16 μg/ kg). On study day 11, MY M13 tumor growth was significantly inhibited at dose levels of 0.16, 0.5, 0.2, 0.1, 0.02, and 0.004 mg/kg (p < 0.001). Moreover, treatment of MY M13 tumor-bearing mice at dose levels of 20 and 4 μg/kg dose resulted in 8/8 and 7/8 CE, respectively. By the end of the experiment on day 5018, the average volume of tumors treated with VACT-A at a dose of 0.8 - 20 μg/kg was in the range from 713.6.05267.4 to 0 mm3, and all tumors were significantly smaller than tumors in the control group treated with an inert carrier. TO values were 100, 94, and 49,95 for groups receiving doses of 20, 4, and 0.8 μg/kg, respectively. Compared with the vehicle-treated group with MOG M13 tumor cells, the OACT-A dose-level groups of 20 and 4 μg/kg reached statistical significance by day 5015, whereas the group that received treatment with 0.8 μg/kg, reached statistical significance by day 5018.
Результати К54-11Results K54-11
Клітинну лінію ОЛЛ, К54-11, попередньо змішували з активованими Т-клітинами і імплантували 5С МОБ)/ЗСІЮО гама (М5О) нокаутним мишам (М-в/група) у день 500, як докладно описано нижче. Пухлини К54-11 в отримавшій лікування за допомогою інертного носія групі (клітини К54-11 окремо або разом з Т-клітинами) продемонстрували профіль щодо агресивного росту іп мімо (фігура 8).The ALL cell line, K54-11, was premixed with activated T cells and implanted with 5C MOB)/ZSIUO gamma (M5O) knockout mice (M-v/group) on day 500, as detailed below. K54-11 tumors in the vehicle-treated group (K54-11 cells alone or in combination with T cells) demonstrated an aggressive growth profile (Figure 8).
Лікування за допомогою ЮАКТ-А починали в той же день, як була імплантована суміш пухлинних клітин і Т-клітин (КЗОО)| і продовжували далі із щоденними ін'єкціями протягом додаткових З днів для досягнення в загальному 4 щоденних ін'єкцій. Тварин лікували за допомогою ЮАВТ-А при 5 рівнях доз (0,5, 0,2, 0,1, 0,02 і 0,004 мг/кг). Результати показані на фігурі 8.Treatment with UACT-A was started on the same day as the mixture of tumor cells and T cells (KZOO) was implanted. and continued with daily injections for an additional 3 days to reach a total of 4 daily injections. Animals were treated with YAVT-A at 5 dose levels (0.5, 0.2, 0.1, 0.02 and 0.004 mg/kg). The results are shown in Figure 8.
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (РАВРТ-А) ефективно інгібувало ріст як МОЇ М1З3 ГМЛ, так ії К54-110ЛЛ пухлин, імплантованихA bispecific diabody characterized by an optimized sequence of CO123 x POP (RAVRT-A) effectively inhibited the growth of both MY M1Z3 AML and K54-110LL tumors implanted
ЗС МОБ/5СІО мишам у контексті моделі М/іпп, якщо введення доз починали в день імплантації і продовжували протягом З або більше послідовних днів. На підставі критеріїв, встановленихZS MOB/5SIO mice in the context of the M/ipp model, if the administration of doses was started on the day of implantation and continued for 3 or more consecutive days. Based on the established criteria
Національним інститутом раку, САКТ-А при рівні дози, що становить 0,1 мг/кг і вище (ТОЇ »58), вважається активним у моделі К54-11, і доза ОАКТ-А, що складає 0,004 мг/кг і вище, була активною в моделі МОЇ М13. Більш низькі дози БАКТ-А, пов'язані з інгібуванням росту пухлин у моделі МОЇ М13 у порівнянні з моделлю К54-11, узгодяться з даними іп міго, що демонструють, що клітини МОЇ М13 характеризуються підвищеним рівнем експресії СО123, ніж клітини К54-11, що корелює з підвищеною чутливістю до опосередкованої ОАКТ-А цитотоксичності іп міго у клітинах МОЇ М13.According to the National Cancer Institute, AKT-A at a dose level of 0.1 mg/kg and above (TOI »58) is considered active in the K54-11 model, and an OACT-A dose of 0.004 mg/kg and above was active in MY M13 model. The lower doses of BACT-A associated with tumor growth inhibition in the MY M13 model compared to the K54-11 model would be consistent with the ip migo data demonstrating that MY M13 cells express higher levels of CO123 than K54-11 cells , which correlates with increased sensitivity to OAKT-A-mediated cytotoxicity of migo in MY M13 cells.
Якщо буде потреба відтворити зазначений приклад, слід розуміти, що фахівець у даній області техніки зможе в межах доцільних і прийнятних границях змінити описаний вище протокол підходящим чином для відтворення описаних результатів. Таким чином, не мається на увазі, що проілюстрований протокол повинен дотримуватися точно визначеним чином.If there is a need to reproduce the specified example, it should be understood that a specialist in this field of technology will be able, within reasonable and acceptable limits, to modify the protocol described above in a suitable way to reproduce the described results. Thus, it is not implied that the illustrated protocol must be followed in a precisely defined manner.
Приклад 7Example 7
Поверхнева експресія СО123 на лейкозних бластних клітинах і стовбурових клітинах у первинному зразку тканини від пацієнта 1 з ГМЛSurface expression of CO123 on leukemic blast cells and stem cells in a primary tissue sample from patient 1 with AML
Для визначення патерну експресії СО123 у первинних зразках від пацієнта 1 з, кріоконсервовані первинні зразки кісткового мозку і РВМС пацієнта з ГМЛ оцінювали відносно поверхневої експресії СЮО123 на лейкозних бластних клітинах.To determine the expression pattern of CO123 in primary samples from patient 1, cryopreserved primary samples of bone marrow and PBMC of a patient with AML were evaluated for surface expression of CO123 on leukemic blast cells.
Зразок кісткового мозку ГМЛ- клінічний звітGML bone marrow sample - clinical report
Вік: 42Age: 42
Стать: жіночаFemale
Підтип ГМЛ: М2GML subtype: M2
Відсоткове співвідношення злоякісних клітин на підставі морфології: 67,5 90Percentage ratio of malignant cells based on morphology: 67.5 90
Імунофенотипування кісткового мозку:Bone marrow immunophenotyping:
СбОр15-19 95, СО33-98,5 96, СО38-28,8 ую, С045-81,8 96, СО64-39,7 У, СО0117-42,9 Фо, НІ А-СбОр15-19 95, СО33-98.5 96, СО38-28.8 uyu, С045-81.8 96, СО64-39.7 U, СО0117-42.9 Fo, NO A-
ОрА-1795, Сб0р2-1,895, СО5-0,5395, 0007-0295, С0О10-0,41 95, СО19-1,1 95, СбОр20-1,4 Об,OrA-1795, Сб0р2-1.895, Со5-0.5395, 0007-0295, С0О10-0.41 95, СО19-1.1 95, СбОр20-1.4 Ob,
Зо бОр22-0,71 У6 6О034-0,82 95Зо bОр22-0.71 У6 6О034-0.82 95
Експресія СЮО123 у лейкозних бластних клітинах у мононуклеарах кісткового мозку (ВМ ММС)Expression of ХУО123 in leukemic blast cells in bone marrow mononuclear cells (BM MMC)
Загалом 0,5 х 106 мононуклеарів кісткового мозку (ВМ ММС) і мононуклеарів периферичної крові (РВМС)) від пацієнта 1 з ГМЛ оцінювали відносно експресії СО123. Клітинну лінію Казиті-З включали в якості контролю. Лейкозні бластні клітини ідентифікували з використанням мієлоїдного маркера СОЗ33. Як показано на фігурі 9, панелі А, 87 9о клітин з кісткового мозку ГМЛ від пацієнта 1 експресували СО123 і СО33. Рівні експресії СО123 були дещо нижче, ніж в експресуючій СО123 на високому рівні клітинній лінії ГМЛ, Казиті-3 (фігура 9, панель В).A total of 0.5 x 106 bone marrow mononuclear cells (BMMCs) and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from patient 1 with AML were evaluated for CO123 expression. The Kaziti-Z cell line was included as a control. Leukemic blast cells were identified using the myeloid marker SOZ33. As shown in figure 9, panel A, 87 90 cells from the bone marrow of AML from patient 1 expressed CO123 and CO33. CO123 expression levels were slightly lower than in the highly CO123-expressing AML cell line, Kazity-3 (Figure 9, panel B).
Приклад 8Example 8
Аналіз аутологічного цитолізу СТІ. з використанням первинних зразків від пацієнта з ГМЛAnalysis of autologous STI cytolysis. using primary samples from a patient with AML
Кріоконсервований первинний зразок ГМЛ (мононуклеари кісткового мозку (ВММС) і мононуклеари периферичної крові (РВМС)) від пацієнта 1 з ГМЛ відтаювали в КРМІ 1640 з 10 96A cryopreserved primary AML sample (bone marrow mononuclear cells (BMNCs) and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs)) from patient 1 with AML was thawed in KRMI 1640 with 10 96
ЕВ5 і залишали для відновлення протягом ночі при 37 "С в 5595 СО». клітини промивали середовищем для аналізу (КРМІ 1640--10 95ЕВ5) і кількість життєздатних клітин визначали за витисненням трипанового синього. 150000 клітин/лунка в 150 мкл середовища для аналізу додавали до 9б-ямкового О-донного планшету (ВО Віозсіепсе5). Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) розводили до 0,1 ї 0,01 нг/мл і 50 мкл кожного розведення додавали до кожної лунки (кінцевий об'єм - 200 мкл).ЕВ5 and left to recover overnight at 37 "С in 5595 СО". cells were washed with analysis medium (KRMI 1640--10 95ЕВ5) and the number of viable cells was determined by trypan blue extrusion. 150,000 cells/well in 150 μl of analysis medium were added to a 9b-well O-bottom plate (VO Viozsiepse5).The bispecific diabody characterized by the optimized sequence of CO123 x POP (OACT-A) was diluted to 0.1 and 0.01 ng/ml and 50 μl of each dilution was added to each well ( final volume - 200 μl).
Контрольне біспецифічне диатіло (контрольне ОАКТ) розводили до 0,1 нг/мл і 50 мкл кожного розведення додавали до кожної лунки (кінцевий об'єм - 200 мкл). Окремий аналітичний планшет налаштовували для кожної часової точки (48, 72, 120 ї 144 години) і планшети інкубували при 37 "С в інкубаторі з 595 СО». У кожну часову точку клітини офарблювали за допомогою антитіл до СО4, СО8, С025, С0р45, 2033 ії СО123. Мічені клітини аналізували в проточному цитометрі РАСЗ Саїїриг, обладнаному програмним забезпеченням для збору данихControl bispecific diabody (control OAKT) was diluted to 0.1 ng/ml and 50 μl of each dilution was added to each well (final volume - 200 μl). A separate analytical plate was set up for each time point (48, 72, 120 and 144 hours) and the plates were incubated at 37 "C in an incubator with 595 CO". At each time point, cells were stained with antibodies to CO4, CO8, С025, С0р45, 2033 ii СО123. Labeled cells were analyzed in a flow cytometer of RASZ Sairig, equipped with software for data collection
СепОицевзі Рго, версії 5.2.1 (ВО ВіозЗсіепсе5). Аналіз даних проводили з використанням програмного забезпечення РіІоулЛо м9.3.3 (Тгеевїаг, Іпс). Т-клітинну експансію вимірювали шляхом гейтирування на популяціях СО4-- і СО8-- і активацію визначали шляхом вимірювання середнього значення інтенсивності флуоресценції СО25 (МЕ) на гейтированих у відношенні сра- і Сов популяціях. Популяцію лейкозних бластних клітин ідентифікували за допомогою гейтирування СО45-СО33.SepOitsevzi Rgo, version 5.2.1 (VO ViozZsiepse5). Data analysis was performed using RiIoullo m9.3.3 software (Tgeeviag, Ipswich). T-cell expansion was measured by gating on the СО4 and СО8 populations, and activation was determined by measuring the average value of the fluorescence intensity of СО25 (ME) on the gated in relation to сра- and Сов populations. The population of leukemic blast cells was identified using CO45-CO33 gating.
Аутологічна деплеція пухлинних клітин, Т-клітинна експансія і активація за допомогою біспецифічного диатіла, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАВТ-А) у первинних зразках від пацієнта 1 з ГМЛAutologous depletion of tumor cells, T-cell expansion and activation using a bispecific dialyzer characterized by an optimized sequence of СО123 x СОЗ (ОАВТ-А) in primary samples from patient 1 with AML
Для визначення опосередкованою біспецифічним диатілом, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ВАВТ-А) активності у пацієнта 1 з ГМЛ, зразки від пацієнта інкубували з 0,1 нг/мл або 0,01 нг/мл ОАВТ-А і відсоткові відношення лейкозних бластних клітин і Т-клітин вимірювали в різні часові точки після лікування. Лейкозні бластні клітини ідентифікували шляхом СО45-/СО033- гейтирування. Інкубація первинних зразків кісткового мозку при ГМЛ із ПОАКТ-А приводила до деплеції популяції лейкозних клітин із часом (фігура 10, панель А), що супроводжувалося супутньою експансією залишкових Т-клітин (фігура 10, панель В) і індукцією маркерів Т-клітинної активації (фігура 10, панель С). В оброблених рАВТА-А зразках Т-клітини зазнали експансії від приблизно 7 95 до приблизно 80 95 до 120 год. Т- клітинна активація, вимірювана по експресії СО25 на С04 і СО8 клітинах, досягала піка через 72 год. і знижувалася до часової точки 120 год.To determine mediated bispecific diethyl, characterized by an optimized sequence of CO123 x POP (BAVT-A) activity in patient 1 with AML, samples from the patient were incubated with 0.1 ng/ml or 0.01 ng/ml OABT-A and the percentage ratio of leukemic blast cells and T cells were measured at different time points after treatment. Leukemic blast cells were identified by CO45-/CO033- gating. Incubation of primary AML bone marrow samples with POACT-A resulted in depletion of the leukemic cell population over time (Figure 10, panel A), accompanied by concomitant expansion of residual T cells (Figure 10, panel B) and induction of markers of T cell activation ( figure 10, panel C). In rAVTA-A treated samples, T cells expanded from about 7 95 to about 80 95 to 120 h. T-cell activation, measured by the expression of СО25 on С04 and СО8 cells, reached its peak after 72 hours. and decreased to the time point of 120 h.
Якщо буде потреба відтворити зазначений приклад, слід розуміти, що фахівець у даній області техніки зможе в межах доцільних і прийнятних границях змінити описаний вище протокол підходящим чином для відтворення описаних результатів. Таким чином, не мається на увазі, що проілюстрований протокол повинен дотримуватися точно визначеним чином.If there is a need to reproduce the specified example, it should be understood that a specialist in this field of technology will be able, within reasonable and acceptable limits, to modify the protocol described above in a suitable way to reproduce the described results. Thus, it is not implied that the illustrated protocol must be followed in a precisely defined manner.
Приклад 9Example 9
Поверхнева експресія СЮО123 на лейкозних бластних клітинах і стовбурових клітинах у первинному зразку тканини від пацієнта з ОЛЛSurface expression of SUO123 on leukemic blast cells and stem cells in a primary tissue sample from a patient with ALL
Для визначення патерну експресії СО123 у первинних зразках від пацієнта з ОЛЛ, кріоконсервований первинний зразок РВМС від пацієнта з ОЛЛ оцінювали відносно поверхневої експресії СО123 на лейкозних бластних клітинах.To determine the expression pattern of CO123 in primary samples from a patient with ALL, a cryopreserved primary sample of PBMC from a patient with ALL was evaluated for surface expression of CO123 on leukemic blast cells.
Експресія СО123 у лейкозних бластних клітинах у мононуклеарах периферичної крові (РВМО)Expression of CO123 in leukemic blast cells in peripheral blood mononuclear cells (PBMO)
Загалом 0,5 х 106 мононуклеарів периферичної крові (РВМС)) від здоровішого донора і пацієнта з ОЛЛ оцінювали відносно експресії СО123. Як показано на фігурі 11, панелях Б-Н переважну більшість клітин з кісткового мозку ОЛЛ експресували СО123. Навпаки, якA total of 0.5 x 106 peripheral blood mononuclear cells (PBMC)) from a healthy donor and a patient with ALL were evaluated for CO123 expression. As shown in Figure 11, panels B-H, the vast majority of cells from the bone marrow of ALL expressed CO123. On the contrary, how
Зо передбачалося, у нормального донора В-клітини є негативними у відношенні СО123 і рос і моноцити є позитивними у відношенні СО123 (фігура 11, панель 0).As expected, in a normal donor, B-cells are negative for CO123 and cells and monocytes are positive for CO123 (Figure 11, panel 0).
Т-клітинну популяцію ідентифікували в зразку пацієнта з ОЛЛ по фарбуванню клітин у відношенні СО4 і СО8. Як показано на фігурі 12, панелі В, тільки невелика фракція загальнихThe T-cell population was identified in a sample of a patient with ALL by staining cells in relation to CO4 and CO8. As shown in figure 12, panel B, only a small fraction of the total
РВМС у зразку пацієнта з ОЛЛ являла собою Т-клітини (приблизно 0,5 95 являли собою СА Т- клітини і приблизно 0,4 95 являли собою СОВ8 Т-клітини).PBMC in a sample from a patient with ALL were T cells (approximately 0.5 95 were CA T cells and approximately 0.4 95 were SOB8 T cells).
Приклад 10Example 10
Аналіз аутологічного цитолізу СТІ. з використанням первинних зразків від пацієнта з ОЛЛAnalysis of autologous STI cytolysis. using primary samples from a patient with ALL
Кріоконсервований первинний зразок ОЛЛ (мононуклеари периферичної крові (РВМС)) відтаювали в КРМ 11640 з 10 95 ЕВ5 і залишали відновлюватися протягом ночі при 37 "С в 5 95A cryopreserved primary sample of ALL (peripheral blood mononuclear cells (PBMC)) was thawed in KRM 11640 with 10 95 ЕВ5 and left to recover overnight at 37 "C in 5 95
СО». Клітини промивали середовищем для аналізу (КРМІ 1640-10 9585) і кількість життєздатних клітин визначали по витисненню трипанового синього. 150000 клітин/лунка в 150 мкл середовища для аналізу додавали до 96-ямкового О-донного планшету (ВО Віобсіепсев).SO". Cells were washed with analysis medium (KRMI 1640-10 9585) and the number of viable cells was determined by trypan blue exclusion. 150,000 cells/well in 150 μl medium for analysis were added to a 96-well O-bottom plate (VO Viobsiepsev).
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАНТ-A bispecific diabody characterized by an optimized sequence of СО123 x POP (OANT-
А) розводили до 10, 1 нг/мл і 50 мкл кожного розведення додавали до кожної лунки (кінцевий об'єм - 200 мкл). Окремий аналітичний планшет встановлювали для кожної часової точки (48, 72, 120 ї 144 години) і планшети інкубували при 37 "С в інкубаторі з 5 95 СО». У кожній часовій точці клітини офарблювали за допомогою антитіл до СО4, СО8, С0р25, 2045, СО33 і СО123.A) was diluted to 10.1 ng/ml and 50 μl of each dilution was added to each well (final volume - 200 μl). A separate analytical tablet was installed for each time point (48, 72, 120 and 144 hours) and the tablets were incubated at 37 "С in an incubator with 5 95 СО". At each time point, cells were stained with antibodies to СО4, СО8, С0р25, 2045 , СО33 and СО123.
Мічені клітини аналізували в проточному цитометрі ЕАС5 Саїїрбиг, обладнаному програмним забезпеченням для збору даних СеПОицеві Рго, версії 5.2.1 (ВО Віозсіеєпсе5). Аналіз даних проводили з використанням програмного забезпечення Ріом/о м9.3.3 (Тгеезіаг, Іпс). Т-клітинну експансію вимірювали шляхом гейтирування на популяціях СО4- і СО8-- і активацію визначали шляхом вимірювання МЕ! СО25 на гейтированих у відношенні СО4- ії СО8- популяціях.Labeled cells were analyzed in an EAS5 Saiirbig flow cytometer equipped with SePoitsevi Rgo data collection software, version 5.2.1 (VO Viozsieepse5). Data analysis was performed using Riom/o m9.3.3 software (Tgeeziag, Ipswich). T-cell expansion was measured by gating on the СО4- and СО8-- populations, and activation was determined by measuring ME! СО25 on the gated in relation to СО4- and СО8- populations.
Популяцію лейкозних бластних клітин ідентифікували за допомогою гейтируванняThe population of leukemic blast cells was identified using gating
Ср45-С033-н.Sr45-C033-n.
Аутологічна деплеція пухлинних клітин, Т-клітинна експансія і активація за допомогою біспецифічного диатіла, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЮЗ (ОАВТ-А) у первинних зразках від пацієнтів з ОЛЛAutologous depletion of tumor cells, T-cell expansion and activation with the help of a bispecific diatyl characterized by an optimized sequence of СО123 x СОЮЗ (ОАВТ-А) in primary samples from patients with ALL
Для визначення опосередкованої біспецифічним диатілом, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) активності в первинних зразках від бо пацієнта з ОЛЛ зразки пацієнта інкубували з 1 нг/мл БАКТ-А ії відсоткові відносини лейкозних бластних клітин і Т-клітин вимірювали в різні часові точки після лікування. Лейкозні бластні клітини ідентифікували по СО45:/20337 гейтируванню. Інкубація первинних зразків кісткового мозку при ОЛЛ із ОАКТ-А приводила до деплеції популяції лейкозних клітин із часом у порівнянні з необробленим контролем або контрольним БАКТ (фігура 13, панель Н у порівнянні з панелями Е і б). Якщо Т-клітини підраховували (фарбування у відношенні СО8 і СО4) і активацію (фарбування у відношенні СО25) аналізували, Т-клітини піддавали експансії і активувалися в зразку САКТ-А (фігура 14, панелі І і І, відповідно) у порівнянні з необробленими зразками або обробленими контрольним ЮАКТ зразками (фігура 14, панелі Н, б, К і у, відповідно).To determine the activity mediated by a bispecific diethyl characterized by an optimized sequence of CO123 x POP (OACT-A) in primary samples from a patient with ALL, patient samples were incubated with 1 ng/ml BACT-A and the percentage ratio of leukemic blast cells and T cells was measured in different time points after treatment. Leukemic blast cells were identified by CO45:/20337 gating. Incubation of primary ALL bone marrow samples with OAKT-A resulted in depletion of the leukemic cell population over time compared to untreated control or control BACT (Figure 13, panel H compared to panels E and b). When T cells were counted (CO8 and CO4 staining) and activation (CO25 staining) analyzed, T cells were expanded and activated in the SACT-A sample (Figure 14, panels I and I, respectively) compared to untreated samples or treated with the control YAKT samples (Figure 14, panels H, b, K and y, respectively).
Приклад 11Example 11
Поверхнева експресія СО123 на лейкозних бластних клітинах і стовбурових клітинах у первинному зразку тканини від пацієнта 2 з ГМЛSurface expression of CO123 on leukemic blast cells and stem cells in a primary tissue sample from patient 2 with AML
Для визначення патерну експресії СО123 у первинних зразках пацієнта 2 з ГМЛ кріоконсервовані первинні зразки кісткового мозку і РВМС пацієнта з ГМЛ оцінювали відносно поверхневої експресії СО123 на лейкозних бластних клітинах.To determine the expression pattern of CO123 in primary samples of patient 2 with AML, cryopreserved primary samples of bone marrow and PBMC of a patient with AML were evaluated for surface expression of CO123 on leukemic blast cells.
Експресія СЮО123 у лейкозних бластних клітинах у мононуклеарах кісткового мозку (ВММС)Expression of ХУО123 in leukemic blast cells in bone marrow mononuclear cells (BMMS)
Загалом 0,5 х 105 мононуклеарів кісткового мозку (ВМ ММС) і мононуклеарів периферичної крові (РВМС)) від пацієнта 2 з ГМЛ оцінювали для ідентифікації лейкозних бластних клітин.A total of 0.5 x 105 bone marrow mononuclear cells (BMMCs) and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs)) from patient 2 with AML were evaluated to identify leukemic blast cells.
Лейкозні бластні клітини ідентифікували з використанням мієлоїдних маркерів СОЗЗ і СО45. Як показано на фігурі 15, панелі В, 94 95 клітин з кісткового мозку з ГМЛ являли собою лейкозні бластні клітини. Т-клітинну популяцію ідентифікували по експресії СОЗ3. Як показано на фігурі 15, панелі С, приблизно 15 95 клітин зі зразка кісткового мозку ГМЛ і РВМС являли собою Т- клітини.Leukemic blast cells were identified using myeloid markers SOZZ and СО45. As shown in figure 15, panel B, 94 95 cells from bone marrow from AML were leukemic blast cells. The T-cell population was identified by the expression of SOC3. As shown in Figure 15, panel C, approximately 15 95 cells from the AML and PBMC bone marrow sample were T cells.
Приклад 12Example 12
Аналіз аутологічного цитолізу СТІ. з використанням первинних зразків від пацієнта 2 з ГМЛAnalysis of autologous STI cytolysis. using primary samples from patient 2 with AML
Кріоконсервований первинний зразок ГМЛ (мононуклеари кісткового мозку (ВМ ММС) і мононуклеари периферичної крові (РВМС)) від пацієнта 2 з ГМЛ відтаювали в КРМ 11640 з 10 ФоA cryopreserved primary AML sample (bone marrow mononuclear cells (BMMCs) and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs)) from patient 2 with AML was thawed in KRM 11640 with 10 Fo
ЕВ5 і залишали відновлюватися протягом ночі при 37 "С в 595 СО». клітини промивали середовищем для аналізу (КРМІ 1640--10 96 ЕВ5) і кількість життєздатних клітин визначали поEB5 and left to recover overnight at 37 "С in 595 СО". cells were washed with analysis medium (KRMI 1640--10 96 EB5) and the number of viable cells was determined
Зо витисненню трипанового синього. 150000 клітин/лунка в 150 мкл середовища для аналізу додавали до 9б-ямкового О-донного планшету (ВО Віозсіепсе5). Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) і контрольне біспецифічне диатіло (контрольне ЮАКТ) розводили до 0,1 і 0,01 нг/мл і 50 мкл кожного розведення додавали до кожної лунки (кінцевий об'єм - 200 мкл). Окремий аналітичний планшет встановлювали для кожної часової точки (48, 72, 120 ї 144 години) і планшети інкубували при 37 "С в інкубаторі з 5 95 СО». У кожній часовій точці клітини офарблювали за допомогою антитіл до СО4, СО8, С025, С0р45, 2033 ії СО123. Мічені клітини аналізували в проточному цитометрі РАСЗ Саїїриг, обладнаному програмним забезпеченням для збору данихFrom the extrusion of trypan blue. 150,000 cells/well in 150 μl medium for analysis were added to a 9b-well O-bottom tablet (VO Viozsiepse5). A bispecific dibody characterized by an optimized sequence of CO123 x POP (OACT-A) and a control bispecific dibody (control UAKT) were diluted to 0.1 and 0.01 ng/ml and 50 μl of each dilution was added to each well (final volume - 200 μl). A separate analytical plate was installed for each time point (48, 72, 120 and 144 hours) and the plates were incubated at 37 "С in an incubator with 5 95 СО". At each time point, cells were stained with antibodies to СО4, СО8, С025, С0р45 .
СепОицевзі Рго, версії 5.2.1 (ВО ВіозЗсіепсе5з). Аналіз даних проводили з використанням програмного забезпечення РіІоулЛо м9.3.3 (Тгеевїаг, Іпс). Т-клітинну експансію вимірювали шляхом гейтирування на популяціях СО4- і СО8 і активацію визначали шляхом вимірюванняSepOitsevzi Rgo, version 5.2.1 (VO ViozZsiepse5z). Data analysis was performed using RiIoullo m9.3.3 software (Tgeeviag, Ipswich). T-cell expansion was measured by gating on the СО4- and СО8 populations, and activation was determined by measuring
МЕРІ С0О25 на гейтированих у відношенні СО4- і СОвж- популяціях. Популяцію лейкозних бластних клітин ідентифікували за допомогою гейтирування СО45-4СО33-.MEASURES of С0О25 on gated in relation to СО4- and СОвж- populations. The population of leukemic blast cells was identified using gating СО45-4СО33-.
Аутологічна деплеція пухлинних клітин, Т-клітинна експансія і активація в первинних зразках від пацієнта 2 з ГМЛAutologous tumor cell depletion, T-cell expansion and activation in primary samples from patient 2 with AML
Для визначення опосередкованою біспецифічним диатілом, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) активності в первинних зразках від пацієнта 2 з ГМЛ зразки пацієнта інкубували з 0,1 або 0,01 нг/мл БАКТ-А і відсоткові відносини лейкозних бластних клітин і Т-клітин вимірювали в різні часові точки після лікування. Інкубація первинних зразків кісткового мозку при ГМЛ із ОАКТ-А приводила до деплеції популяції лейкозних клітин із часом (фігура 16, панель А), що супроводжувалося супутньою експансією залишкових Т-клітин (як СО4, так ії СОВ8) (фігура 16, панель В і фігура 16, панель С, відповідно).To determine mediated bispecific diatyl characterized by an optimized sequence of CO123 x POP (OAKT-A) activity in primary samples from patient 2 with AML, patient samples were incubated with 0.1 or 0.01 ng/ml BACT-A and percentage ratios of leukemic blast cells and T cells were measured at various time points after treatment. Incubation of primary AML bone marrow samples with OAKT-A resulted in depletion of the leukemic cell population over time (Figure 16, panel A), accompanied by a concomitant expansion of residual T cells (both CO4 and SOB8) (Figure 16, panel B and figure 16, panel C, respectively).
Для визначення того, чи були Т-клітини активовані, клітини офарблювали у відношенні СО25 або Кі-67, обох маркерів Т-клітинної активації. Як показано на фігурі 17, панелях А і В, інкубація первинних зразків кісткового мозку при ГМЛ із ПОАКТ-А приводила до Т-клітинної активації.To determine whether T cells were activated, cells were stained for CO25 or Ki-67, both markers of T cell activation. As shown in Figure 17, panels A and B, incubation of primary AML bone marrow samples with POAKT-A resulted in T cell activation.
Зазначені дані представляли часову точку 144 год.The indicated data represented a time point of 144 hours.
Внутрішньоклітинне фарбування по відношенню до гранзиму В і перфорину.Intracellular staining for granzyme B and perforin.
Для визначення внутрішньоклітинних вмістів гранзиму В і перфорину в Т-клітинах проводили аналіз СТІ. Через приблизно 18 год. клітини з аналітичного планшета офарблювали антитілами бо до СО4 і до СЮО8 шляхом інкубації протягом 30 хвилин при 4 "С. Після поверхневого фарбування клітини інкубували в 100 мкл буфера для фіксації і пермеабілізації протягом 20 хв. при 4 "с.To determine the intracellular contents of granzyme B and perforin in T cells, STI analysis was performed. After about 18 hours. cells from the analytical tablet were stained with antibodies to CO4 and to СХО8 by incubation for 30 minutes at 4 °C. After surface staining, the cells were incubated in 100 μl of buffer for fixation and permeabilization for 20 min at 4 °C.
Клітини промивали буфером для пермеабілізації і інкубували в 50 мкл суміші антитіл до гранзиму В і перфорину, отриманої в 1Х буфері для пермеабілізації/відмивання, при 4 "С протягом 30 хвилин. Потім клітини промивали за допомогою 250 мкл буфера для пермеабілізації/відмивання і ресуспендовували в буфері для пермеабілізації/відмивання для одержання даних ЕАС5Cells were washed with permeabilization buffer and incubated in 50 μl of a mixture of anti-granzyme B and perforin antibodies prepared in 1X permeabilization/washing buffer at 4 °C for 30 minutes. Cells were then washed with 250 μl of permeabilization/washing buffer and resuspended in buffers for permeabilization/washing to obtain EAS5 data
Позитивна регуляція гранзиму В і перфорину, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЮЗ біспецифічним диатілом (ОАКТ-А) в Т-клітинах під час перенаправленого цитолізуPositive regulation of granzyme B and perforin characterized by the optimized sequence of СО123 x СОЯЗ bispecific diethyl (OAKT-A) in T cells during redirected cytolysis
Для дослідження можливого механізму опосередкованою біспецифічним диатілом, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-А) цитотоксичності Т- клітинами, внутрішньоклітинні вмісти гранзиму В і перфорину вимірювали в Т-клітинах після перенаправленого цитолізу. Якщо Т-клітини інкубували з контрольним біспецифічним диатілом (контрольним САКТ), позитивну регуляцію гранзиму В і перфорину не спостерігали. Позитивну регуляцію вмістів гранзиму В і перфорину як в СОВ8, так і СО4 Т-клітинах спостерігали під дією біспецифічного диатіла, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (РАРТ-А) (фігура 17, панелі С і Б). Цікаво, що позитивна регуляція була майже у два рази вище в СО8 Т-клітинах у порівнянні з СО4 Т-клітинами (фігура 17, панель С і фігура 17, панель 0).To investigate the possible mechanism of T-cell cytotoxicity mediated by a bispecific diethyl characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs (OAKT-A), the intracellular contents of granzyme B and perforin were measured in T-cells after redirected cytolysis. If the T-cells were incubated with the control bispecific diatil (control SACT), the positive regulation of granzyme B and perforin was not observed. Positive regulation of the content of granzyme B and perforin in both COB8 and CO4 T-cells was observed under the action of a bispecific diethyl characterized by an optimized sequence of CO123 x POP (PART-A) (Figure 17, panels C and B). Interestingly, the upregulation was nearly twofold higher in CO8 T cells compared to CO4 T cells (Figure 17, panel C and Figure 17, panel 0).
Наведені дані вказують на те, що опосередкований ОАКТ-А лізис клітин - мішеней опосередкований через шлях за участю гранзиму В і перфорину.These data indicate that OAKT-A-mediated lysis of target cells is mediated through a pathway involving granzyme B and perforin.
Приклад 13Example 13
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ, перехресно реагує з білками СО123 і СОЗ нелюдиноподібного приматаA bispecific diabody characterized by an optimized sequence of CO123 x POPs cross-reacts with nonhuman primate CO123 and POPs proteins
Для кількісного визначення ступеню зв'язування між біспецифічним диатілом, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАВТ-А) і СОЗ людини або яванської макаки, проводили аналізи ВІАСОРЕ "М. В аналізах ВІАСОКЕ"М вимірюють константу швидкості дисоціації, Ка. Афінність зв'язування (КО) між антитілом і його мішенню являє собою функцію кінетичних констант для асоціації (константа швидкості асоціації, Ка) і дисоціації (константа швидкості дисоціації, Ка) згідно з формулою: КО - ІкаКаїЇ. В аналізі ВІАСОБЕ "МTo quantitatively determine the degree of binding between a bispecific diethyl characterized by an optimized sequence of СО123 x POP (ОАВТ-А) and POPs of a person or a Javan macaque, VIASORE "M" analyzes were performed. In VIASOKE"M analyzes the dissociation rate constant, Ka, is measured. The binding affinity (CO) between the antibody and its target is a function of the kinetic constants for association (association rate constant, Ka) and dissociation (dissociation rate constant, Ka) according to the formula: KO - IkaKaiY. In the analysis of VIASOBE "M
Зо використовується поверхневий плазмонний резонанс для вимірювання прямо зазначених кінетичних параметрів. Рекомбінантний СОЗ людини або яванської макаки прямо імобілізовували на підкладку. Очищений СО123 людину або яванської макаки захоплювали і імобілізовували на підкладку. Вимірювали час тривалості дисоціації і проводили бівалентну апроксимацію даних. Константи зв'язування і афінності одержували з використанням 1:1 апроксимації зв'язування. Результати аналізів ВІАСОВЕ"М, у яких порівнювали зв'язування з білками СО123 ії СОЗ людини в порівнянні з більами СО123 і СОЗ яванської макаки, показані на фігурі 18. Афінності зв'язування з білками СО123 яванської макаки (Фігура 180) і СОЗ яванської макаки (фігура 188) є порівнянними з афінностями зв'язування для білків СО123 людини (Фігура 182) ії СОЗ людини (фігура 184А).Surface plasmon resonance is used to measure directly indicated kinetic parameters. Recombinant human or Javan macaque POPs were directly immobilized on the substrate. Purified CO123 from humans or Javan macaques was captured and immobilized on the substrate. The duration of dissociation was measured and bivalent approximation of the data was performed. Binding and affinity constants were obtained using a 1:1 binding approximation. The results of the VIASOVE"M assays, which compared binding to human CO123 and POP proteins in comparison with CO123 pain and Javanese macaque POPs, are shown in Figure 18. Affinities of binding to Javanese macaque CO123 proteins (Figure 180) and Javanese macaque POPs (Figure 188) are comparable to binding affinities for human CO123 proteins (Figure 182) and human POPs (Figure 184A).
Приклад 14Example 14
Аутологічна деплеція моноцитів іп міго з РВМС людини і яванської макакиAutologous depletion of myoblast monocytes from PBMCs of humans and Javan macaques
РВМО зі зразків цільної крові людини або яванської макаки додавали до О-донних планшетів із щільністю Т-клітин, що становить 200000 клітин/лунка в 150 мкл середовища для аналізу.RVMOs from human or cynomolgus macaque whole blood samples were added to O-bottom plates at a T-cell density of 200,000 cells/well in 150 μl assay medium.
Розведення, що характеризуються оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл (ФАКТ-А або ОАКТ-А м/АВІ)) одержували в середовищі для аналізу. 50 мкл кожного розведення ОАВТ-А або САКТ-А м/АВО додавали до планшета, що містить РВМС у лунках у двох паралелях. Планшети інкубували протягом -- 18-24 год. при 37 "С. Супернатанти використовували для визначення цитотоксичності, як описано вище. Як показано на фігурі 19 (панелі А і В), деплецію клітин рос спостерігали як в РВМС людини (фігура 19, панель А), такіDilutions characterized by an optimized sequence of СО123 x POP bispecific diethyls (FACT-A or OACT-A m/AVI)) were obtained in the medium for analysis. 50 μl of each dilution of OAVT-A or SAKT-A m/ABO was added to the plate containing PBMC in the wells in two parallels. Tablets were incubated for 18-24 hours. at 37 "C. Supernatants were used to determine cytotoxicity as described above. As shown in Figure 19 (panels A and B), depletion of ROS cells was observed both in human PBMCs (Figure 19, panel A), such
РВМС яванської макаки (фігура 19, панель В). Зазначені результати вказують на те, що циркулюючі в кровотоці РОС можна використовувати в якості фармакодинамічного маркера для доклінічних токсикологічних випробувань у яванських макак.RBMS of the Javan macaque (Figure 19, panel B). These results indicate that ROS circulating in the bloodstream can be used as a pharmacodynamic marker for preclinical toxicological tests in Javan macaques.
Якщо буде потреба відтворити зазначений приклад, слід розуміти, що фахівець у даній області техніки зможе в межах доцільних і прийнятних границях змінити описаний вище протокол підходящим чином для відтворення описаних результатів. Таким чином, не мається на увазі, що проілюстрований протокол повинен дотримуватися точно визначеним чином.If there is a need to reproduce the specified example, it should be understood that a specialist in this field of technology will be able, within reasonable and acceptable limits, to modify the protocol described above in a suitable way to reproduce the described results. Thus, it is not implied that the illustrated protocol must be followed in a precisely defined manner.
Приклад 15Example 15
Деплеція плазмацитоїдних дендритних клітин у яванських макак, що одержали лікування за допомогою біспецифічного диатіла, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 хDepletion of plasmacytoid dendritic cells in Javan macaques treated with a bispecific diatyl characterized by an optimized sequence of СО123x
СОЗ (САВТ-А)SOZ (SAVT-A)
В якості частини токсикологічного дослідження з пошуку діапазону доз яванським макакам вводили біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СЮОЗ (РАВРТ-А) у вигляді 4-денних інфузій у дозах, що становлять 0,1, 1, 10, 30 100, 300 або 1000 нг/кг. Контрольне САКТ вводили в дозі 100 нг/кг. Для ідентифікації рос і популяцій моноцитівAs part of a toxicological study to find a dose range, Javan macaques were injected with a bispecific diabody characterized by an optimized sequence of СО123 x SUOZ (РАВРТ-А) in the form of 4-day infusions in doses of 0.1, 1, 10, 30, 100, 300 or 1000 ng/kg. Control SACT was administered at a dose of 100 ng/kg. To identify ROS and monocyte populations
РВМС яванської макаки, клітини мітили за допомогою антитіла до СО14-РЇТС. Моноцити ідентифікували як СО14- популяцію і рОС ідентифікували як СО14-200123: популяцію. Як показано на фігурі 20, панелях К і Її, рос зазнали деплеції не пізніше ніж через 4 дні після інфузії при дозі не вище 10 нг/кг ОАКТ-А. Не спостерігали деплецію рОС у мавп, що одержали лікування за допомогою контрольного біспецифічного диатіла (контрольного ЮАКТ) або отримавшими лікування за допомогою інертного носія разом з наповнювачем мавп у часовій точці - 4 дня (фігура 20, панелі С, Н, С і 0, відповідно). Вміст цитокінів: інтерферону-гама, ТМЕ- альфа, 11 6, ІІ 5, 11 4 ї 1/2, визначали через 4 години після інфузії. Спостерігалося невелике підвищення або відсутність підвищення вмістів цитокінів у отримавших лікування за допомогою рАВТА-А тварин у порівнянні з отримавшими лікування за допомогою контрольного ПОАКТ або отримавшими лікування за допомогою інертного носія тваринами.RBMS of the Javan macaque, cells were labeled with an antibody to CO14-RITS. Monocytes were identified as the CO14- population and pOS were identified as the CO14-200123: population. As shown in Figure 20, panels K and I, ROS were depleted no later than 4 days after infusion at a dose not higher than 10 ng/kg OACT-A. No depletion of ROS was observed in monkeys treated with control bispecific diethyl (control SUACT) or treated with inert vehicle together with monkey filler at the 4-day time point (Figure 20, panels C, H, C and 0, respectively ). The content of cytokines: interferon-gamma, TME-alpha, 11 6, II 5, 11 4 and 1/2, was determined 4 hours after the infusion. There was little or no increase in cytokine levels in animals treated with pAVTA-A compared to control POACT or vehicle-treated animals.
На фігурі 21 і фігурі 22 представлені результати аналізу ЕАС5 для В-клітин (С020) (фігура 21, панель А), моноцитів (СО14») (фігура 21, панель В), МК-клітин (СО0О159-5016) (фігура 21, панель С), рос (Ср12зні, 20143) (фігура 21, панель 0) і Т-клітин (загалом, СО4» і СО8») (фігура 22, панель А, фігура 22, панель В і фігура 22, панель 0, відповідно).Figure 21 and Figure 22 present the results of EAS5 analysis for B cells (C020) (Figure 21, panel A), monocytes (CO14") (Figure 21, panel B), MK cells (СО0О159-5016) (Figure 21, panel C), ros (Sr12zni, 20143) (Figure 21, panel 0) and T cells (generally, СО4» and СО8») (Figure 22, panel A, figure 22, panel B and figure 22, panel 0, respectively ).
Лікування мавп за допомогою контрольного ОАКТ не приводило до помітних ефектів на Т- або В-лімфоцити, МК-клітини, моноцити і рос. Лікування мавп за допомогою БАКТ-А у дозах, що становлять 10 нг/кг;/день або вище, приводило до усунення рос (фігура 21, панель 0).Treatment of monkeys with the control OAKT did not lead to noticeable effects on T- or B-lymphocytes, MK-cells, monocytes and ROS. Treatment of monkeys with BACT-A at doses of 10 ng/kg/day or higher resulted in elimination of ROS (Figure 21, panel 0).
Деплеція рОС була повною і тривалою, повертаючись до рівнів до лікування через декілька тижнів після завершення введення доз. Вміст циркулюючих у кровотоці Т-лімфоцитів знижувався при введенні ОАКТ-А, але повертався до рівнів до лікування до кінця кожногоPO depletion was complete and sustained, returning to pre-treatment levels several weeks after dosing was completed. The content of circulating T-lymphocytes in the bloodstream decreased with the introduction of OAKT-A, but returned to pre-treatment levels by the end of each
Зо тижневого циклу, що вказує на зміни в міграції, а не на справжню деплецію. Як СО4, такі СО8 Т- лімфоцити характеризувалися однаковим патерном. Маркер активації Т-лімфоцитів, СОб69 (фігура 22, панель С), був лише в невеликому ступені позитивним серед циркулюючих клітин і не змінювався слідом за введення дози ЮАКТ-А. Вміст В-лімфоцитів, моноцитів і МК-клітин коливалися протягом курсу введення доз ЮАКТ-А з істотною мінливістю, спостережуваною серед мавп. Тенденція убік підвищених вмістів циркулюючих В-лімфоцитів і моноцитів спостерігали в обох мавп при найвищих дозах.Out of a weekly cycle, indicating changes in migration rather than true depletion. Both CO4 and CO8 T-lymphocytes were characterized by the same pattern. A marker of T-lymphocyte activation, COb69 (Figure 22, panel C), was only marginally positive among circulating cells and did not change following the administration of a dose of UACT-A. The content of B-lymphocytes, monocytes and MK-cells fluctuated during the course of administration of doses of SUACT-A, with significant variability observed among monkeys. A trend toward elevated levels of circulating B-lymphocytes and monocytes was observed in both monkeys at the highest doses.
Отже, вищенаведені результати демонструють терапевтичну ефективність, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла (АКТ-А).Therefore, the above results demonstrate the therapeutic efficacy characterized by the optimized sequence of СО123 x POP bispecific diethyl (AKT-A).
Біспецифічне диатіло, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (САКТ-A bispecific diabody characterized by an optimized sequence of СО123 x POP (SАКТ-
А) можна використовувати в якості терапевтичного засобу для лікування численних захворювань і станів, включаючи в себе наступне ГМЛ, АВІ (ОЛЛ), ХЛЛ, МДС, росі, мантійноклітинна лімфома, волохатоклітинний лейкоз, ХЛЛ із трансформацією Ріхтера, бластний криз при ХМЛ, ВІЇ. (підклас є СЮО123. (див. приклад 2); системна червона вовчанка (СЧВ), алергія (базофіли є СО123.), бронхіальна астма і т. д.A) can be used as a therapeutic agent for the treatment of numerous diseases and conditions, including the following AML, AVI (ALL), CLL, MDS, rossi, mantle cell lymphoma, hairy cell leukemia, CLL with Richter's transformation, blast crisis in CML, HIV. (subclass is СХО123. (see example 2); systemic lupus erythematosus (SLE), allergy (basophils are СО123.), bronchial asthma, etc.
Приклад 16Example 16
Порівняльні властивості біспецифічного диатіла, що характеризується оптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ3 (ОАКТ-А), і біспецифічного диатіла, що характеризується неоптимізованою послідовністю СО123 х СОЗ (ОАКТ-В)Comparative properties of a bispecific diethyl characterized by an optimized sequence of CO123 x POP3 (OAKT-A) and a bispecific diethyl characterized by an unoptimized sequence of CO123 x POP (OAKT-B)
Несподівана перевага і властивості, що характеризуються оптимізованою послідовністюAn unexpected advantage and properties characterized by an optimized sequence
С0123 х СОЗ біспецифічних диатілС0123 x POPs of bispecific diethyls
Як обговорювалося вище, САКТ-А і САКТ-В конструювали аналогічним чином, і перший поліпептид обох конструктів містять, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М-кінець, домен Мі. моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (Мі соз), проміжний лінкерний пептид (лінкер 1), домен МН моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СЮО123 (МНеоігз), лінкер 2, Е-спіральний домен і С-кінець. Аналогічно, другий поліпептид обох конструктів містять, у напрямку від М-кінця до С-кінця, М-кінець, домен МІ моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СО123 (Мі сорігз), проміжний лінкерний пептид (лінкер 1), домен Мн моноклонального антитіла, здатного зв'язуватися з СОЗ (МНеоз), лінкер 2, К-спіральний домен іAs discussed above, SAKT-A and SAKT-B were constructed in a similar manner, and the first polypeptide of both constructs contain, from the M-terminus to the C-terminus, the M-terminus, the Mi domain. monoclonal antibody capable of binding to SOZ (Mi soz), intermediate linker peptide (linker 1), MH domain of monoclonal antibody capable of binding to SHO123 (MNeoigz), linker 2, E-helical domain and C-terminus. Similarly, the second polypeptide of both constructs contain, in the direction from the M-terminus to the C-terminus, the M-terminus, the MI domain of a monoclonal antibody capable of binding to CO123 (Mi surigs), an intermediate linker peptide (linker 1), the Mn domain of a monoclonal antibodies capable of binding to POPs (MNeoz), linker 2, K-helical domain and
С-кінець.C-end.
Як показано в прикладі 1, було виявлено, що обоє СО123 х СОЗ біспецифічних диатіла здатні одночасно зв'язуватися з СОЗ і СО123. Крім того, як розкрито в прикладі З і на фігурі 4, панелях С і О, два СО123 х СОЗ3 біспецифічні диатіла виявили виражену здатність до перенаправленого цитолізу з концентраціями, які повинні досягати 50 95 від максимальної активності (ЕС50) у діапазоні суб-нг/мл, незалежно від специфічності зв'язування з епітопомAs shown in example 1, it was found that both CO123 x POPs of bispecific diethyls are capable of simultaneously binding to POPs and CO123. In addition, as disclosed in Example C and Figure 4, panels C and O, the two CO123 x COZ3 bispecific diethyls showed a marked capacity for redirected cytolysis with concentrations that should reach 50 95 of maximal activity (EC50) in the sub-ng/range. ml, regardless of the specificity of binding to the epitope
СОЗ (САВТ-А у порівнянні з ВАКТ-В) у клітинних лініях - мішенях з високою експресією СО123.POPs (SAVT-A compared to VAKT-B) in target cell lines with high CO123 expression.
Таким чином, невеликі варіації в конкретних послідовностях СО123 х СОЗ біспецифічних диатіл не повністю анулюють біологічну активність.Thus, small variations in specific sequences of СО123 x POPs of bispecific diethyls do not completely nullify biological activity.
Проте, у всіх досліджених клітинних лініях було виявлено, що САКТ-А був більш активним і більш ефективним у переспрямованому цитолізі, ніж САКТ-В (див., наприклад, фігуру 4, панеліHowever, in all cell lines examined, SACT-A was found to be more active and more efficient in redirected cytolysis than SACT-B (see, for example, Figure 4, panels
А, С і Ю). Таким чином, САКТ-А виявило несподівану перевагу в порівнянні з подібним ОАКТ-В.A, C and Y). Thus, SACT-A showed an unexpected advantage compared to similar OACT-B.
Приклад 17Example 17
Фармакологія БАКТ-А у нелюдиноподібного примата для лікування гематологічних злоякісних пухлинPharmacology of BACT-A in a nonhuman primate for the treatment of hematologic malignancies
Альфа-ланцюг рецептора інтерлейкіну З (1-3), СО123, надлишково експресується на злоякісних клітинах у широкому діапазоні гематологічних злоякісних пухлин (Мипог, Ї. єї аї. (2001) "Іпепецйкіп-3 Весеріог АІрпа СНаіїп (СО123) І5 МУідему Ехргеззед Іп НетайіодісThe alpha chain of the interleukin C (1-3) receptor, CO123, is overexpressed on malignant cells in a wide range of hematological malignancies (Mypog, Y. Yei ai. (2001) "Ipepecykip-3 Veseriog AIrpa SNaiip (CO123) I5 MUidemu Ehrgezzed Ip Netayiodis
Маїїдпапсіє5, " Наетаїйоіодіса 86:1261-1269; Тевіа, ШО. еї аІ. (2014) "С0123 Іє А МетрбгапеMayidpapsie5, " Naethaioiodisa 86:1261-1269; Tevia, SHO. ei aI. (2014) "C0123 Ie A Metrgbape
Віотажег Апа А Пегарецшіїс Тагдеї Іп Нетаїйоіодіс Маїїдпапсієв, " Віота!К. Нев. 2:4) і пов'язаний з несприятливим прогнозом (Мегде, ЕЕ. єї аїЇ. (2011) "Нідн Гемеієї ОГ СбО34-СО3810/-Viotazheg Apa A Pegaretsshiis Tagdei Ip Netaiioiodis Maiidpapsiev, " Viota!K. Nev. 2:4) and is associated with an unfavorable prognosis (Megde, EE. ei aiYi. (2011) "Nidn Hemeiei OG SbO34-СО3810/-
СО123--ВІав5ів Аге Ргєдісіїме ОЇ Ап Адмегзе Оцісоте Іп Асціє Муєїйоїа І еоКетіа: А Стгойре О!цеві-SO123--VIAv5iv Age Rgyedisiime OYI Ap Admegze Otsisote Ip Ascie Mueyiyoia I eoKetia: A Stgoire O!tsevi-
ЕІ Оез І еисетієз Аіїдсез ЕЇ МаїЇадієз би Запа (ОБГ АМ5) 5їйау, " Наєтайюіодіса 96:1792- 1798). Більше того, повідомлялося, що СО123 експресується лейкозними стовбуровими клітинами (І 5С) (Чогдап, С.Т. єї аї. (2000) "Тне ІпіепецйКіп-3 Весеріог АІрна Саїп Ів А ОпідиеEI Oez I eisetiez Aiidsez EI MaiYadiez bi Zapa (OBG AM5) 5iiau, " Najetaiyuodisa 96:1792- 1798). Moreover, it has been reported that CO123 is expressed by leukemic stem cells (I 5C) (Chogdap, ST. ei ai. ( 2000) "Tne IpiepetsyKip-3 Veseriog AIrna Saip Yv A Opidie
МаїкКег Рог Нитап Асціє Мувеіодепоизв І еикетіа біет СеїЇ5, " еикетіа 14:1777-1784; іп, І... вії аї. (2009) "Мопосіопа! Апіїбоду-Меадаіаївєа Тагдеїпуд Ої СО123, 1-3 НРесеріог АІрна СпНаїп, ЕїЇтіпаїевMaikKeg Rog Nytap Ascie Muveiodepoizv I eiketia biet SeiYi5, " eiketia 14:1777-1784; ip, I... viii ai. (2009) "Moposiopa! Apiibodu-Meadaiaivea Tagdeipud Oi CO123, 1-3 NReseriog AIrna SpNaip, EiYitipaiev
Нитап Асшіє Муєїоій ІейКетіс 5ієт Сей, " Се біет СеїЇ 5:31-42), що є перспективною ознакою, що дозволяє націлено впливати на основну причину таких захворювань. Відповідно до цього висновку, СЮО123 також бере участь в аутокринній петлі ІЇ/-3, що підтримує виникнення і розвиток лейкозу, як показано за допомогою здатності блокувального СО123 моноклонального антитіла знижувати приживлення лейкозних стовбурових клітин і поліпшувати виживаність у мишачій моделі гострого мієлоїдного лейкозу (ГМЛ) (іп, Ї. еї аїІ. (2009) "Мопосіопа! Апіроау-Nytap Asshiye Mueioiy IeyKetis 5yet Sei, " Se biet SeyiY 5:31-42), which is a promising feature that allows to target the main cause of such diseases. According to this finding, SUO123 is also involved in the autocrine loop of II/-3, that supports the onset and development of leukemia, as shown by the ability of a blocking CO123 monoclonal antibody to reduce engraftment of leukemic stem cells and improve survival in a mouse model of acute myeloid leukemia (AML) (ip, Y. ei ai. (2009) "Moposiopa! Apiroau-
Медіатейд Тагдейнпуд ОЇ СО123, І/-3 Весеріог АІрна Спаїп, ЕІтіпаїєз Нитап Асціє МуеєїоїаMediateid Tagdeinpud ОЙ СО123, I/-3 Veseriog AIrna Spaip, EItipayez Nytap Ascie Mueioia
Ї еникетіс С1ет СеїїІв, " Сеїї бієт Сеї! 5:31-42). Проте, у дослідженні 1 фази у пацієнтів з високим ризиком ГМЛ моноклональне антитіло не виявило протилейкозну активність (Нобегпів5, А. МУ. еї а. (2010) "А Рназе І 5ішау ОГ Апіі-са123 Мопосіопа! Апіїбоду (таб) С5І 360 Тагаєїіпу І еоКетіа 5ієтYeniketis S1et SeiiIv, " Seii biet Seii! 5:31-42). However, in a phase 1 study in patients with high risk of AML, the monoclonal antibody did not show anti-leukemic activity (Nobegpiv5, A. MU. ei a. (2010) "A Rnaze I 5ishau OG Apii-sa123 Moposiopa! Apiibodu (tab) S5I 360 Tagayeiipu I eoKetia 5iet
Сеїїв (І5С) Іп АМІ,, " У. Сіїп. Опсої. 28(З,иррі):е13012). Таким чином, необхідні альтернативні підходи відносно націленого впливу на СО123, включаючи в себе стратегії деплеції. Хоча СО123 експресується підкласом нормальних гемопоетичних клітин-попередників (НРС), гемопоетичні стовбурові клітини (НБЗС) експресують СО123 у невеликій кількості або не експресують взагалі (Чогдап, С.Т. еї а. (2000) "ТНе ІпіепеиКкіп-3 Весеріог АІрпа Спаїп І5 А Опідое МаїКег Рог НитапSeiyiv (I5C) Ip AMI,, " U. Siip. Opsoi. 28(Z, irri):e13012). Thus, alternative approaches to the targeted impact on СО123, including depletion strategies, are needed. Although СО123 is expressed by a subclass of normal hematopoietic cells -progenitors (HSCs), hematopoietic stem cells (HSCs) express CO123 in small amounts or do not express it at all (Chogdap, S.T. ei a. (2000) "TNe IpiepeiKkip-3 Veseriog AIrpa Spaip I5 A Opidoe MaiKeg Rog Nytap
Асціє МуєІодепошз ІГеиКетіа 5іет СеїЇв, " ГеиКетіа 14:1777-1784; іп, МУ. еї а. (2009) "ВедшіайопAscie MuyeIodeposhz IGeiKetia 5iet SeiYiv, " GeiKetia 14:1777-1784; ip, MU. ei a. (2009) "Vedshiayop
ОГ Тн17 Сеї! ОіНегепііанйоп Апа ЕАЕ Іпдисіп Ву МАРЗК МІК, " Віоса 113:6603-6610), вказуючи на те, що стратегії на підставі деплеції клітин з СО123 забезпечують відновлення за допомогою нормального гемопоеза.OG Tn17 Sei! OiNegepiianyop Apa EAE Ipdysip Vu MARZK MIC, " Viosa 113:6603-6610), indicating that strategies based on depletion of cells with CO123 provide recovery through normal hematopoiesis.
Націлювання власних Т-лімфоцитів пацієнта на лейкозні клітини - мішені являє собою перспективну імунотерапевтичну стратегію для лікування гематологічних злоякісних пухлин.Targeting the patient's own T-lymphocytes to leukemic target cells is a promising immunotherapeutic strategy for the treatment of hematological malignancies.
Спробу застосувати терапевтичний потенціал зазначеного підходу здійснили з використанням блінатумомабу (ВіТте на основі біспецифічного антитіла, що характеризується здатністю зв'язуватися з СОЗ і В-клітинним антигеном СО19) у пацієнтів з В-клітинними лімфомами і пре-An attempt to apply the therapeutic potential of this approach was made using blinatumomab (ViTte based on a bispecific antibody characterized by the ability to bind to POPs and B-cell antigen CO19) in patients with B-cell lymphomas and pre-
В-клітинним гострим лімфобласним лейкозом ((Кіїпдег, М. еї аї!. (2012) "І"иттипорНнаптасоіодісB-cell acute lymphoblastic leukemia
Везропзе ОЇ Раїїєпів М/йп В-І іпеаде Асше І утрпобіавіїс І еиКетіа То Сопііписив Іптивіоп ОЇ ТVezropze OI Raiiiepiv M/yp V-I ipeade Asshe I utrpobiaviis I eIKetia To Sopiipysiv Iptiviop OI T
СеїІ-Епдадіпда СО19/С03-Вівзресіїїс ВІТЕ Апіїроду Вііпаїштотар, " Віоса 119:6226-6233; Торр,SeiI-Epdadipda СО19/С03-Vivzresiis VITE Apiirodu Viipaistotar, " Viosa 119:6226-6233; Torr,
М.5. еї аї. (2012) "гопа-Тегт РоПом-Ор ОЇ Нетаїйоіодіс Неіарзе-Егее Зигуїмаї! Іп А Рназе 2 БішауM.5. oh oh (2012).
ОЇ Вііпаїштотаб Іп Раїєпів М/йп МАО Іп В-І іпеаде АГ, " Віоса 120:5185-5187; Торр, М.5. еї а). (2011) "Тагдеїєд Тнегару МУйН ТНне Т-СеїІ-Еподадіпа Апіїбоду Вііпаїштотаб ої СпетоїНегару-ОЙ Viipaishtotab Ip Raiepiv M/yp MAO Ip V-I ipeade AG, "Viosa 120:5185-5187; Torr, M.5. ei a). (2011) "Tagdeiied Tnegaru MUyN TNne T-SeiI-Epodadipa Apiibodu Viipaiishtotab oi SpetoiNegaru -
Веїтгасіогу Міпіта! Незідипа! Оізеазе Іп В-І іпеаде Асціє І утрпобіавіїйс І ейКетіа Раїепів Незиїв ІпVeitgasiogu Mipita! Nezidypa! Oizease Ip V-I ipeade Ascie I utrpobiaviiis I eiKetia Raiepiv Neziiv Ip
Нідйп Незропзе Наїе Апа Ргоіопдей І еикетіа-Егеє Зигуїмаї, " У. Сііп. Опсої. 29:2493-2498).Nidyp Nezropze Naie Apa Rgoiopdei I eiketia-Egeye Zyguimai, " U. Siip. Opsoi. 29:2493-2498).
Молекули СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла згідно із даним винаходом, такі як ОАКТ-А, бо містять альтернативну біспецифічну, засновану на антитілі модальність, яка забезпечує поліпшену стабільність і більш надійні властивості для виконання на виробництві (дойп5оп, 5. еї а!ї. (2010) "ЕЄнНестог СеїЇ Вестийтепі МУйи Моме! Ем-Вазедй Юца!І-Аніппу Ве-Тагоеїїпу Ргоївіп І єад»Bispecific diethyl CO123 x POP molecules according to the present invention, such as OAKT-A, because they contain an alternative bispecific, antibody-based modality that provides improved stability and more reliable properties for production performance (doip5op, 5. ei a!i. ( (2010)
То Роїепі Титог Суюіувів Апа Іп Мімо В-Сеї! Оерієїоп, " У. Мої. Віої. 399:436-449; Мооге, Р.А. еї аї. (2011) "Арріїсайоп ОЇ Юца! Айіпйу Неїагдеїпу МоїЇесшев То Аспієме Оріїта! Неадігесієд Т-СеїTo Roiepi Titog Suyuiuviv Apa Ip Mimo V-Sei! Oeriyeop, " U. Moi. Vioi. 399:436-449; Mooge, RA. Ayipyu Neiagdeipu MoiYesshev To Aspieme Oriita! Neadigesiyed T-Sei
Кіпа ої В-СеїІ Гутрпота, " Віоой 117:4542-4551).Kipa oi V-SeiI Gutrpota, "Viooi 117:4542-4551).
Щоб продемонструвати перевагу і ефективність молекул СО123 х СОЗ біспецифічного диатіла згідно із даним винаходом, підтверджували біологічну активність описаних вище САКТ-In order to demonstrate the advantage and effectiveness of CO123 x POP molecules of the bispecific diethyl according to this invention, the biological activity of the above-described SACT-
А в іп міїго і доклінічних моделях лейкозу, а також його фармакокінетику, фармакодинаміку і безпечну фармакологію на яванських макаках (Масаса газсісціагіє) оцінювали по відношенню або до описаного вище контрольного ВБАКТ (біспецифічного у відношенні СОЗ ї флуоресцеїну), або "контрольного ОАКТ-2", яке є біспецифічним у відношенні СО123 і флуоресцеїну).And in IP miigo and preclinical models of leukemia, as well as its pharmacokinetics, pharmacodynamics and safety pharmacology in Javan macaques (Masasa gazsisgiagie) were evaluated in relation to either the control VBACT described above (bispecific in relation to POPs and fluorescein), or the "control OAKT-2" , which is bispecific for CO123 and fluorescein).
Амінокислотна послідовність першого поліпептидного ланцюга "контрольного ОАВТ-2" (СО123ЗМІ - лінкер - 4-4420МУН - лінкер - Е-спіраль; лінкери підкреслені) (ЗЕО ІО МО:58):Amino acid sequence of the first polypeptide chain of "control OAVT-2" (СО123ЗМИ - linker - 4-4420МУН - linker - E-helix; linkers are underlined) (ZEO IO MO:58):
РЕММТО5РОБ ГАМ5І ЯЕВМТ МЗОКЗЗОБІ МБаМОКММСТ МУМООКРИаОРРREMMTO5ROB GAM5I YAEVMT MZOKZZOBI MBAMOKMMST MUMOOKRYaORR
КОМУ АБЗТА ЕЗЕМРОВЕЗОа ЗИаЗаИаИТОгТІ т І55І ОАЕОМА МУУСОМОУБУTO WHOM ABZTA EZEMROVEZOa ZIAZAIAITOGTI t I55I OAEOMA MUUSOMOUBU
РУТРООСТКІ ЕІКССО)аБаСО СЕМУКІ ОЕТаСс; аа МОРСВРМК І 5СМАБОЕТЕRUTROOSTKI EIXSO)aBaSO SEMUKI OETaSs; aa MORSVRMC AND 5SMABOETE
ЗВУМММУМУМВО ЗРЕКСОГЕМ МА ОТІАВМКРУМУЕ ТУУЗОБУКОаВ ЕТІЗНООЗКZVUMMMUMUMVO ZREKSOGEM MA OTIAVMKRUMUUE TUUZOBUKOaV ETIZNOOZK
ЗУ ОМММІ А МЕОМСІМУСТ аБУМаМОУМУсс батвУтУЗЗа аСОааЕМАА.ZU OMMMI A MEOMSIMUST aBUMaMOUMUss batvUtUZZa aSOaaEMAA.
ЕКЕМААЇ ЕКЕ МААЇ ЕКЕМАА І ЕКEKEMAAI EKE MAAI EKEMAA AND EK
Амінокислотна послідовність другого поліпептидного ланцюга "контрольного ОАНТ-2" (4420МІ - лінкер - СО12ЗМН - лінкер - К-спіраль) (ЗЕО ІЮ МО:59):Amino acid sequence of the second polypeptide chain of "control OANT-2" (4420MI - linker - СО12ЗМН - linker - K-helix) (ZEO IU MO:59):
ОМУМТОТРЕБ ГРУБІ арОАБІЗСАЗБЗОВІ М НІМаМТМіАМ М ОКРООБРКOMUMTOTREB GRUBI aROABISSAZBZOVI M NIMAMTMiAM M OKROOBRK
МИМКУ5МАЕ 5аМРОВЕБЗа5 а5СаТОЕТІКІ БАМЕАЕОІЇ ЯМ МЕС5ОБТНУР мтРаастТкКГЕ ІКасаасаис ЕМО МОБОАЕ І ККРИАБУКМ БСКАБаМТЕТMIMKU5MAE 5aMROVEBZa5 a5SaTOETIC BAMEAEOII YAM MES5OBTNUR mtRaastTkKGE IKasaasais EMO MOBOAE and KKRIABUKM BSKABaMTET
ОУУМКУМУВОА РИаСаГЕМІСО ПРОМСОАТЕМ МОКЕКаВМТтІ ТМОКОТОТАУOUUMKUMUVOA RIASAGEMISO PROMSOATEM MOKEKaVMTtI TMOKOTOTAU
МЕ! 55І А5ЕО ТАУУУСАВ5Н ГІ ВАБМ/ ГАМУ СОСТІ МТУ СССО,аакмМААME! 55I A5EO TAUUUSAV5N GI VABM/ GAMU SOSTI MTU SSSO, aakmMAA
ЇКЕКМААЇ КЕ КМААЇ КЕКМА АЇ КЕYIKEKMAAI KE KMAAI KEKMA AI KE
Біфункціональний аналіз ЕІ ІЗАBifunctional analysis of EI IZA
Планшет Махізогр ЕГІЗА (Мипс), на який протягом ночі наносили розчинний ІЗ К-альфаMakhizogr EGIZA tablet (Mips), on which soluble IZ K-alpha was applied during the night
Зо людини або яванської макаки (0,5 мкг/мл) у бікарбонатному буфері, блокували за допомогою 0,5 96 ВА; 0,1 95 Гуееп-20 в РВ5 (РВЗТ/ВЗА) протягом 30 хвилин при кімнатній температурі.From human or Javan macaque (0.5 μg/ml) in bicarbonate buffer, blocked with 0.5 96 VA; 0.1 95 Gueep-20 in RV5 (RVZT/VZA) for 30 minutes at room temperature.
Наносили молекули ЮАКТ-А, після чого слідувало послідовне додавання кон'югату СОЗ єб- біотин людей і стрептавідин-НКР (даскбзоп ІттипоКезеагсі). Активність НКР виявляли по перетворенню тетраметилбензидину (ВіобХ) в якості субстрату протягом 5 хв.; реакцію переривали за допомогою 40 мкл/лунка 1 95 Н25О» і поглинання зчитували при 450 нм.SUAKT-A molecules were applied, followed by the sequential addition of the POP conjugate human biotin and streptavidin-NCR (daskbzop IttypoKezeagsi). NKR activity was detected by the transformation of tetramethylbenzidine (ViobH) as a substrate within 5 min.; the reaction was stopped with 40 μl/well of 1 95 H25O" and the absorbance was read at 450 nm.
Аналіз поверхневого плазмонного резонансуAnalysis of surface plasmon resonance
Здатність ОАКТ-А зв'язуватися з біллами СОЗ або СО123 людини і яванської макаки аналізували з використанням біосенсора ВіАсоге 3000 (СЕ, Неайсаге), як описано в доппзоп,The ability of OAKT-A to bind to POP or CO123 beads of humans and Javan macaques was analyzed using the ViAsoge 3000 biosensor (CE, Neaisage) as described in doppzop,
З. еї а). (2010) ("ЕЄНесіог Сеї! Нестийтепі М/ЙйН Моме! Рм-Вазей ЮцаІ-Анйіпйу Ве-Тагодеїїпуд РгоївіпZ. ei a). (2010).
Ї еадо5 То Роїепі Титог Суюїувзів Апа Іп Мімо В-Сеї! Оерієїоп, " .). Мої. Віо!. 399:436-449) і Мооге,Yi eado5 To Roiepi Titog Suyuiuvziv Apa Ip Mimo V-Sei! Oeriyeop, " .). Moi. Vio!. 399:436-449) and Mooge,
Р.А. еї аї. (2011) ("Арріїсаййоп ОЇ Оцаї! Айіппу Неїагдеїіпуд Моїіесціез То Аспієме Оріїта! ВНеадігесієаR.A. oh oh (2011).
Т-Сеї! Кійпуд СО В-Се! Гутрпота, " Віоой 117:4542-4551). Коротко, карбоксильні групи на сенсорному чипі СМ5О активували за допомогою ін'єкції 0,2М М-етил-М-(З-диетиламіно-пропіл) карбодиїіміду і 0,05М М-гідрокси-сукциніміду. Розчинний СОЗ або СО123 (1 мкг/мл) впорскували на поверхню активованого СМ5 в 10 мМ ацетату натрію, рН 5,0, при об'ємній швидкості потоку, що становить 5 мкл/хв., після чого додавали 1 М етаноламіну для деактивації. Експерименти по зв'язуванню проводили в 10 мМ НЕРЕЗ5, рН 7,4, 150 мМ Масі, З мм ЕОТА і 0,005 95 поверхнево- активної речовини Р20. Регенерацію імобілізованих рецепторних поверхонь проводили шляхом імпульсної ін'єкції 10 мМ гліцину, рН 1,5. Значення КО визначали по глобальній апроксимації кривих зв'язування до 1:1 моделі зв'язування Ленгмюра (програмне забезпечення ВіАема|чайопT-Sei! Kiipud SO V-Se! Gutrpota, Biol 117:4542-4551). Soluble POP or CO123 (1 μg/mL) was injected onto the surface of activated CM5 in 10 mM sodium acetate, pH 5.0, at a volumetric flow rate of 5 μL/min, followed by the addition of 1 M ethanolamine for deactivation. Binding experiments were performed in 10 mM NEREZ5, pH 7.4, 150 mM Mass, 3 mm EOTA, and 0.005 95 surfactant P20. Regeneration of immobilized receptor surfaces was performed by pulse injection of 10 mM glycine, pH 1 ,5. The value of KO was determined by the global approximation of the binding curves to the 1:1 Langmuir binding model (ViAem software|chayop
У4.1).U4.1).
Аналіз цитолізуAnalysis of cytolysis
Клітинні лінії, використовувані для аналізів лізису клітин, одержували з Американської колекції типових культур (АТСС) (Мапазза5, МА). РВМС виділяли із крові здорових донорів з використанням набору РісоїІ-Радие Ріив (СЕ НеайНсаге); Т-клітини очищували за допомогою набору для негативної селекції (Іїе Тесппоіодіеб5). Щільність СО123 на клітинній поверхні визначали з використанням Оцапішт зітріу СеїІшміаг гранул (Вапоз І арогайогіев, Іпс., Різпегв, ІМ).Cell lines used for cell lysis assays were obtained from the American Type Culture Collection (ATSC) (Mapazza5, MA). RBMS was isolated from the blood of healthy donors using a RisoiI-Radie Riiv kit (SE NeiNsage); T cells were purified using a negative selection kit (Iie Tespoiodieb5). The density of CO123 on the cell surface was determined using Otsapisht zitriu SeiIshmiag granules (Vapoz I Arogayogiev, Ips., Rizpegv, IM).
Аналізи цитотоксичності проводили, як описано Мооге, Р.А. еї аї. (2011) ("Арріїсанйоп ОГ ОиаїCytotoxicity assays were performed as described by Mooge, R.A. oh oh (2011) ("Arriisanyop OG Oiai
Аніппу Неїагодеїїпд Моїесшцевз То Аспієме Оріїта! Недігесієд Т-Сеї! Кіїпоу ОЇ В-Сеїї Гутрпота, " 60 Віоод 117:4542-4551). Коротко, клітинні лінії - мішені (105 клітин/імл)у обробляли серійними розведеннями таких білків, як ЮАКТ-А або контрольне ЮАКТ, у присутності Т-клітин у зазначених співвідношеннях ефекторних клітин до клітин - мішеней і інкубували при 37 С протягом ночі. Лізис клітин визначали за вивільненням лактатдегідрогенази (ІОН, Рготеда) у супернатанті культури. Для аналізу цитолізу за допомогою проточної цитометрии клітини - мішені мітили за допомогою СМТМЕК (Се Тесппоіодіе5) і цитоліз піддавали моніторингу з використанням проточного цитометра ЕАСсСЗСаїїриг. Дані аналізували з використанням програмного забезпечення РКІЗМО 5 (сгарпРад) і представляли у вигляді цитотоксичності в 95.Anippu Neiagodeiipd Moiesshtcevz To Aspieme Oriita! Nedigesied T-Sei! Kiipou OY V-Seiyi Gutrpota, " 60 Biood 117:4542-4551). Briefly, target cell lines (105 cells/ml) were treated with serial dilutions of proteins such as UACT-A or control UACT in the presence of T cells in the indicated ratios of effector cells to target cells and incubated at 37 C overnight. Cell lysis was determined by the release of lactate dehydrogenase (ION, Rgoteda) in the culture supernatant. To analyze cytolysis using flow cytometry, target cells were labeled using SMTMEK (Se Tesppoiodie5) and cytolysis was monitored using an EAScSZSaiiirig flow cytometer.Data were analyzed using RKIZMO 5 software (sgarpRad) and presented as cytotoxicity in 95.
Фармакологія у відношенні яванської макакиPharmacology in relation to the Javan macaque
Експерименти на нелюдиноподібному приматові проводили в СПагієх Рімег Іарогайогіе5 (АНепо, ММ), згідно вимогам місцевого інституціонального комітету з утримання і використання тварин АСИС). Спеціально виведеним, раніше не підданим експериментам яванським макакам (Масаса газсісціагі5) китайського походження (віковий діапазон 2,5-9 років, діапазон за масою 2,7-5 кг) вводили інертний носій або ОАКТ-А за допомогою внутрішньовенної інфузії через порт- системи в стегновій і яремній вені з використанням програмувальних інфузійних насосів з живленням від акумуляторної батареї (САОО-ІедасуфФ, 5ІМ5 Оепцес, Іпс., ЗІ. Раш, ММ). Зразки периферичної крові або кісткового мозку збирали в пробірки які містили антикоагулянт в зазначені часові точки. Аналізи фенотипу клітинної поверхні проводили за допомогою аналізатора Ї5К Рогіезза (ВО ВіозЗсіепсе5), обладнаного лазерами з довжинами хвиль, що становлять 488 нм, 640 нм і 405 нм, і за допомогою наступних антитіл: С0О4-М450, СО8-М450,Experiments on non-human primates were carried out in Spagiy Rimeg Iarogayogie5 (ANepo, MM), in accordance with the requirements of the local institutional committee for the maintenance and use of animals (ASIS). Specially bred, previously unexposed Javan macaques (Masasa gazsisciagi5) of Chinese origin (age range 2.5-9 years, weight range 2.7-5 kg) were administered an inert vehicle or OAKT-A by intravenous infusion through a port system in the femoral and jugular vein using programmable infusion pumps powered by a battery (SAOO-IedasufF, 5IM5 Oepces, Ips., ZI. Rush, MM). Peripheral blood or bone marrow samples were collected in tubes containing anticoagulant at the indicated time points. Analyzes of the cell surface phenotype were carried out using the Y5K Rogiezza analyzer (VO ViozZsiepse5), equipped with lasers with wavelengths of 488 nm, 640 nm, and 405 nm, and using the following antibodies: C0O4-M450, C08-M450,
СО123-РЕ-Су7, СО45-РегбР, СО4-АРОС-Н7У, СО8-РІТС, СО25-РЕ-Су7, СОб69-РегСР, РО-1-РЕ,СО123-РЕ-Су7, СО45-РегбР, СО4-АРОС-Н7У, СО8-RITS, СО25-РЕ-Су7, СОб69-РегСР, РО-1-РЕ,
ТІМ3-АРС, СОЗ-Расіїс Вінє, С095-АРС, Сргв-ву421, СО16-РІТС, СОЗ3-АІеха488, СОЗ38-РЕ,TIM3-ARS, SOZ-Rasiis Vigne, C095-ARS, Srgv-vu421, SO16-RITS, SOZ3-AIekha488, SOZ38-RE,
СОр123-РЕ-Су7, СО117-РегСбР-Суб5,5, СО34-АРС, 2090-ВУ421, СО45ВА-АРО-Н?7 і СО33-АРС (ВОСОр123-РЕ-Су7, СО117-РегСбР-Суб5,5, СО34-АРС, 2090-ВУ421, СО45ВА-АРО-Н?7 and СО33-АРС (ВО
Віобсіепсе5). Абсолютну кількість клітин визначали з використанням ТтСООМТ (ВОViobsiepse5). The absolute number of cells was determined using TtSOOMT (VO
Віозсієпсе5). Вміст цитокінів 1-2, 1/-4, 1-5, 1-6, ТМЕ-а ії ІРМ-у у сироватці вимірювали з використанням набору цитометричних гранул з моноклональними антитілами до цитокінуWiozsiepse5). The content of cytokines 1-2, 1/-4, 1-5, 1-6, TME-a and IRM-u in the serum was measured using a set of cytometric beads with monoclonal antibodies to the cytokine
ТИ1/Тп2 нелюдиноподібного примата (ВО Віозсіепсе). Концентрацію ОАКТ-А у зразках сироватки мавпи вимірювали з використанням сендвіч-імуноаналізу з електролюмінесцентним виявленням (Мезозсаїіе Оіадповзіїс5, МБО, КосКмійе, МО). Коротко, на аналітичний планшет (М5О) наносили рекомбінантний І/-3 Ка людини (К8УО бувієт) і планшет блокували за допомогою 5 95 ВБ5А. Наносили калібровані стандарти або розведені досліджувані зразки, після чого додавали біотинильоване моноклональне антитіло, що проявляє специфічне зв'язування у відношенні описаних вище Е-спіральних (5ЕО ІЮ МО:34) і К-спіральних (5ЕО ІЮ МО:35) доменів молекули. Додавали мічений ЗЙОГРО-ТАСтТМ кон'югат стрептавідину (М5О) і утворення комплексів аналізували в пристрої формування зображень М5О 5ЕСТОКФ) Концентрації ОАКТ-TI1/Tp2 of a non-human primate (VO Viozsiepse). The concentration of OAKT-A in monkey serum samples was measured using a sandwich immunoassay with electroluminescence detection (Mesozsaili Oiadpovziis5, MBO, KosKmiye, MO). Briefly, recombinant human I/-3 Ka (K8UO bouviet) was applied to an analytical plate (M5O) and the plate was blocked with 5 95 VB5A. Calibrated standards or diluted test samples were applied, after which a biotinylated monoclonal antibody was added, which shows specific binding to the E-helical (5EO IU MO:34) and K-helical (5EO IU MO:35) domains of the molecule described above. Labeled ZYOGRO-TAStTM conjugate of streptavidin (M5O) was added and the formation of complexes was analyzed in the image forming device M5O 5ESTOKF) Concentrations of OAKT-
А визначали зі стандартних кривих, створених шляхом апроксимації даних інтенсивності світлового випромінювання в п'ятипараметричній логістичній моделі.A was determined from standard curves created by approximating light radiation intensity data in a five-parameter logistic model.
Визначення фізико-хімічних характеристик очищеного ОАКТ-А продемонструвало гомогенний гетеродимер з молекулярною масою, що становить 58,9 кДа (фігура 23; фігури 24А- 248), який є стабільним при 2-8"С протягом аж до 12 місяців в РВ5. Аналіз 5РЕ продемонстрував майже ідентичні афінності зв'язування ОАКТ-А з відповідними розчинними антигенами СОЗ ї СО123 людини і яванської макаки (фігури 25А-250 і таблиця 7). Крім того, рАВТ-А одночасно зв'язувався з обома антигенами у форматі ЕГІ5А, у якому використовувалиDetermination of the physicochemical characteristics of purified OAKT-A demonstrated a homogeneous heterodimer with a molecular weight of 58.9 kDa (Figure 23; Figures 24A-248), which is stable at 2-8"C for up to 12 months in RV5. Analysis 5PE showed almost identical binding affinities of OAKT-A to the corresponding soluble human and Javan macaque antigens POP and CO123 (Figures 25A-250 and Table 7). In addition, pAVT-A simultaneously bound to both antigens in the EHI5A format, in which was used
СО0123 людини або мавпи для захоплення і СОЗ людини для виявлення (фігури 26А-26В), і продемонструвало подібне зв'язування з Т-лімфоцитами людини і мавпи (фігури 26С-26Е). Дані в таблиці 7 являють собою середні значення від З незалежних експериментів, кожний з яких проведені у двох паралелях.human or monkey CO0123 for capture and human POP for detection (figures 26A-26B), and demonstrated similar binding to human and monkey T lymphocytes (figures 26C-26E). The data in Table 7 represent average values from 3 independent experiments, each of which was conducted in two parallels.
Таблиця 7Table 7
Рівноважні константи дисоціації (Ко) для зв'язуванняEquilibrium dissociation constants (Ko) for binding
РАВТ-А з СОЗ і СО123 людини і яванської макакиRAVT-A with POPs and CO123 of humans and Javan macaques
Ка (я 50) Ка (я 50) Ко (5 50)Ka (I 50) Ka (I 50) Ko (5 50)
рАВТ-А опосередковує переспрямований цитоліз Т-лімфоцитами людини або яванської макаки рАВТ-А опосередковував переспрямований цитоліз клітин-мішеней ефекторними клітинами людини або мавпи проти СО123- лейкозних клітинних ліній Казипті-3 (фігура 27А-270)), який супроводжувався індукцією маркерів активації. Не спостерігали будь-якої активності проти СО 123-негативних мішеней (0937 клітини) або із застосуванням контрольного САКТ, що вказувало на те, що Т-клітинна активація строго залежить від залучення клітин-мішеней і що моновалентне залучення СОЗ за допомогою ЮАКТ-А було недостатнім для запуску Т-клітинної активації. Оскільки СО123 експресується на підкласі нормальних циркулюючих лейкоцитах, включаючи в себе рос і моноцити (фігура 27Е), ефект ОАКТ-А додатково досліджували в нормальних РВМС людини і мавпи.pAVT-A mediates redirected cytolysis by human or cynomolgus T-lymphocytes pAVT-A mediated redirected cytolysis of target cells by human or monkey effector cells against CO123- leukemic Casipti-3 cell lines (Figure 27A-270)), which was accompanied by induction of activation markers. No activity was observed against CO 123-negative targets (0937 cells) or with control SACT, indicating that T cell activation is strictly dependent on target cell engagement and that monovalent engagement of POPs by UACT-A was insufficient to trigger T-cell activation. Since CO123 is expressed on a subclass of normal circulating leukocytes, including white blood cells and monocytes (Figure 27E), the effect of OAKT-A was further investigated in normal PBMCs of humans and monkeys.
Ефект східчастої зміни спостерігали серед РВМС людини із залежною від дози швидкої деплеції СО14-СО123гог клітин (рос і базофілів), спостережуваної не пізніше ніж через З години після початку лікування, при цьому моноцити (СО14-- клітини) не зазнали впливу в цій часовій точці (фігури 27-27). Деплеція СО14-СО123"9" клітин збільшувалася із часом при всіх концентраціях молекули ЮАКТ-А, тоді як кількість моноцитів дещо знижувалася до 6 год. і зазнала деплеції через 18 годин і в концентраціях, вище ніж 1 нг/мл. Інкубація РВМС мавпи зA step-change effect was observed among human PBMC with a dose-dependent rapid depletion of CO14-CO123gog cells (ros and basophils) observed no later than 3 hours after the start of treatment, while monocytes (CO14- cells) were not affected at this time point (figures 27-27). The depletion of СО14-СО123"9" cells increased over time at all concentrations of the SUAKT-A molecule, while the number of monocytes slightly decreased up to 6 h. and was depleted after 18 hours and at concentrations higher than 1 ng/ml. Incubation of monkey RVMS with
РАВТ-А приводила до порівнянної залежної від дози деплеції СО14-СО123"9! клітин (фігура 27Н), додатково підтверджуючи релевантність цього виду для фармакології ОАКТ-А (СО14- клітини мавпи експресують СО123 у невеликому ступені або не експресують взагалі, і вони не зазнають деплеції).RAVT-A resulted in a comparable dose-dependent depletion of СО14-СО123"9! cells (Figure 27H), further confirming the relevance of this species for OAKT-A pharmacology (СО14- monkey cells express little or no СО123, and they do not undergo depletion).
Фармакокінетика САКТ-А у яванських макакPharmacokinetics of SACT-A in Javan macaques
Яванську макаку вибирали в якості прийнятної фармакологічної моделі для аналізу ОАКТ-А на підставі еквівалентного розподілу обох цільових антигенів у цьому виді в порівнянні з людьми на підставі імуногістохімії з попередниками пАбр, відповідно до опублікованої інформації (Мипо;, ЇЇ. еї аї. (2001) "ІпіепнеийКкіп-3 Весеріог АІрпа СНаійп (СО123) Ів У/іаєїуThe cynomolgus macaque was chosen as an acceptable pharmacological model for the analysis of OAKT-A based on the equivalent distribution of both target antigens in this species compared to humans based on immunohistochemistry with pAbr precursors, according to published information (Mypo;, ІІ. еі аі. (2001) "IpiepneiiKkip-3 Veseriog AIrpa SNaiip (СО123) Iv U/iaeiu
Ехргеззейд Іп Нетайоіодіс Маїїдпапсіе5, " Наєтаїйоіодіса 86:1261-1269; Когреїаіпеп, Е.І. еї аї. (1996) "П/-3 Весеріог Ехргеззіоп, Неашайоп Апа Еипсійп Іп СеїЇїз ОЇ Тне Мазсшайшге, " Іттипо).Ehrgezeid Ip Netaiiodis Maiidpapsie5, " Naietaiiodis 86:1261-1269; Kogreiaipep, E.I. ei ai. (1996) "P/-3 Veseriog Ehrgeziop, Neashayop Apa Eipsiip Ip SeiYiiz OYI Tne Mazsshaishge, " Ittipo).
Коо) Сеї! Віої. 74:1-7).Koo) Sei! Vioi 74:1-7).
Дослідження, проведене згідно із даним винаходом, містило в собі б груп лікування, що складаються із 8 яванських макак на групу (4 самця, 4 самки) (таблиця 8). Усі групи одержували інертний носій - контроль для першої інфузії; потім інертний носій або ЮАКТ-А вводили внутрішньовенно протягом 4 щотижневих циклів. Тваринні групи 1 одержували інертний носій - контроль протягом усіх 4 наступних інфузій, тоді як групи 2-5 одержували дози САКТ-А, які щотижня збільшуються, протягом 4 днів на тиждень протягом усіх наступних інфузій. Тваринні групи 6 одержували лікування за допомогою 7-денних безперервних доз ОАКТ-А, які щотижня збільшуються, для всіх інфузій. Схеми 4 дня введення/3 дня без введення і 7 днів введення розробляли для того, щоб розрізняти тривалі і часові ефекти, пов'язані із введенням САКТ-А.A study conducted according to the present invention would include treatment groups consisting of 8 cynomolgus monkeys per group (4 males, 4 females) (Table 8). All groups received an inert vehicle - control for the first infusion; then the inert vehicle or SUACT-A was administered intravenously for 4 weekly cycles. Animal group 1 received an inert vehicle control for all 4 subsequent infusions, while groups 2-5 received weekly increasing doses of SACT-A for 4 days per week for all subsequent infusions. Animal groups 6 were treated with 7-day continuous weekly escalating doses of OACT-A for all infusions. The 4-day administration/3-day no-administration and 7-day administration schedules were designed to distinguish between long-term and transient effects associated with SACT-A administration.
Двоє самців і 2 самок на кожну групу вбивали наприкінці фази лікування (36 день), тоді як мавп, які залишилися, вбивали після 4-тижневого відновлення (65 день). Підгрупа мавп, у яких виробилися антитіла до лікарського засобу (АБА), спрямовані проти гуманізованої Ем як СОЗ, так і СО123, і дані після виникнення АбБА виключали з аналізу РК. Усіх мавп піддавали впливу рАВТ-А протягом періоду дослідження.Two males and 2 females per group were killed at the end of the treatment phase (day 36), while the remaining monkeys were killed after a 4-week recovery (day 65). A subset of monkeys developed anti-drug antibodies (ABA) directed against humanized Em to both POPs and CO123, and data after the occurrence of ABA were excluded from LC analysis. All monkeys were exposed to rAVT-A during the study period.
Таблиця 8Table 8
Інертний (4 дні введення/З дні без введення) (7 дняInert (4 days of administration/C days without administration) (7 days
Ме інфу- Дні носій нг/кг/день введення) зії дослід- Інг/кг/4 дніві| нг/кг/день ження Інг/кг/7дніві 1 2 З 4 5 (5) носій носій носій носій носій носій з ше || п носій 400 400 400 400 700 носій 400 1200 1200 1200 2100 носій 400 1200 2400 2400 4200 носій 400 1200 2400 4000 000Me infu- Days of carrier ng/kg/day of administration) sion of experiment- Ing/kg/4 days| ng/kg/day Ing/kg/7 days 1 2 Z 4 5 (5) carrier carrier carrier carrier carrier carrier with n carrier 400 400 400 400 700 carrier 400 1200 1200 1200 2100 carrier 400 1200 2400 2400 4200 carrier 400 1200 2400 4000 000
ПІ сіні НИ ПИ ПОН ННЯ ПОЛЯ НОЯ ленняAfter the hay, we went to the north of the field
Двохкомпартментну модель використовували для оцінки параметрів РК (таблиця 9 і фігура 28). Тіга був коротким (4-5 хв.), відбиваючи швидке зв'язування із циркулюючими мішенями;The two-compartment model was used to estimate the parameters of the RK (table 9 and figure 28). Tiga was short (4-5 min.), reflecting rapid binding to circulating targets;
Ті28 також був швидким, як очікувалося для молекули такого розміру, яка зазнає виведення через нирки. Аналіз зразків сироватки, зібрані наприкінці кожної інфузії від мавп групи 6, показали залежне від дози збільшення Стах ОАВТ-А. У таблиці 9 інертний носій являв собоюTi28 was also rapid, as expected for a molecule of this size that undergoes renal elimination. Analysis of serum samples collected at the end of each infusion from group 6 monkeys showed a dose-dependent increase in Stach OAVT-A. In Table 9, the inert medium was
РВ5, рН 6,0, що містить 0,1 мг/мл рекомбінантного альбуміну людини, 0,1 мг/мл Р5Б-80 і 0,24 95 бензиловий спирт використовували для всіх інфузій інертного носія протягом перших 4 днів кожного тижня інфузії з наступним введенням цієї ж сполуки без бензилового спирту протягом, залишившихся З днів кожної щотижневої інфузії. ОАКТ-А вводили в ті ж часові точки, що і безперервну внутрішньовенну інфузію розчину РВ5, рН 6,0, що містить 0,1 мг/мл рекомбінантного альбуміну людини, 0,1 мг/мл РЗ-80, і 0,24 95 бензилового спирту в необхідній концентрації.РВ5, pH 6.0, containing 0.1 mg/ml recombinant human albumin, 0.1 mg/ml P5B-80, and 0.24 95 benzyl alcohol was used for all inert vehicle infusions during the first 4 days of each infusion week, followed by administration of the same compound without benzyl alcohol during the remaining 3 days of each weekly infusion. OAKT-A was administered at the same time points as a continuous intravenous infusion of PB5 solution, pH 6.0, containing 0.1 mg/ml recombinant human albumin, 0.1 mg/ml RZ-80, and 0.24 95 benzyl alcohol in the required concentration.
Таблиця 9Table 9
Двохкомпартментний аналіз параметрів РК САКТ-А у яванських макак (середнє ж 50) (середнє ж 50)Two-compartment analysis of SACT-A RK parameters in Javan macaques (mean 50) (mean 50)
Вивільнення цитокіну у отримавших лікування за допомогою Ваг-А-яванських макакCytokine release in Wag-A-treated Javan macaques
Беручи до уваги властивості ОАКТ-А у відношенні Т-клітинної активації, передбачалося збільшення циркулюючих цитокінів, що супроводжує інфузію і, отже, використовували низьку початкову дозу в якості стратегії "десенсибілізації" на підставі попередніх даних, отриманих з подібними сполуками (див., наприклад, Торр, М.5. єї аї. (2011) "Тагдеїєд Тнегару М/йп ТНе Т-Given the properties of OAKT-A in terms of T cell activation, an increase in circulating cytokines accompanying the infusion was anticipated and therefore a low initial dose was used as a "desensitization" strategy based on previous data obtained with similar compounds (see, e.g. , Torr, M.5.
Се І-Епдадіпу Апіїроду Вііпаїитотаб ОЇ СпетоїНпегару-Веїтасіогу Міпіта! Везідца! бізєазе Іп В-Se I-Epdadipu Apiirodu Viipaiitotab OI SpetoiNpegaru-Veitasiogu Mipita! Star! Bizease Ip B-
Іпеаде Асшіе І утрпобіавіїс І еиКетіа Раїїєпіє Незийв5 Іп Нідп Резропзе Наїе Апа РгоіопдеаIpeade Asshie I utrpobiaviis I eiKetia Raiiiepiye Neziyv5 Ip Nidp Rezropze Naiee Apa Rgoiopdea
Ї енкетіа-Егеє Зигуїмаї, " у. СіІйп. Опсої. 29:2493-2498; Вагоои, В. евї а!. (2008) "Титог ВРедгезвіопY enketia-Egeye Zyguimayi, " in. SiIip. Opsoi. 29:2493-2498; Vagooi, V. evi a!. (2008) "Titog VRedgezviop
Іп Сапсег Раїепів Ву Мегу Гом/ Розез ОЇ А Т СеїІ-Епдадіпуд Апіїроду, " Зсіеєпсе 321:974-977). З досліджених цитокінів І/-6 продемонстрував самі істотні зміни при інфузії, нехай навіть і тимчасові по природі, мінімальної величини і з більшими величинами мінливості між тваринами та між групами (фігури 29А-29С). Невеликі, тимчасові зміни в ІЇ/-6 також спостерігали після інфузій інертного носія (усі інфузії в групі 1 ії всі інфузії в 1 день), що вказує на чутливість зазначеного цитокіну до стресу на маніпуляції. Проте, залежні від ОАКТ-А збільшення («80 пг/мл) І--6 у сироватці спостерігали у деяких мавп після першої інфузії ОАКТ-А (100 нг/кг/день), які поверталися до вихідного значення до 72 год. Цікаво, що величина вивільнення 1-6 знижувалася з кожною наступною інфузією БАКТ-А, навіть якщо рівень дози збільшувався аж до 1000 нг/кг/день. Також спостерігали мінімальні і тимчасові пов'язані з ОАКТ-А збільшенняIp Sapseg Raiepiv Vu Megu Gom/ Rozez OII A T SeiI-Epdadipud Apiirodu, "Zsieepse 321:974-977). Of the studied cytokines, I/-6 demonstrated the most significant changes during infusion, even if temporary in nature, of minimal magnitude and with with greater inter-animal and inter-group variability (Figures 29A-29C).Small, transient changes in II/-6 were also observed after inert vehicle infusions (all infusions in group 1 and all infusions on day 1), indicating the sensitivity of this cytokine to manipulation stress However, OACT-A-dependent increases (80 pg/ml) in serum I-6 were observed in some monkeys after the first infusion of OACT-A (100 ng/kg/day), which returned to baseline to 72 h. Interestingly, the magnitude of release of 1-6 decreased with each successive infusion of BACT-A, even as the dose level was increased up to 1000 ng/kg/day.Also, minimal and transient OACT-A-related increases were observed
ТМЕ-а у сироватці («10 пг/мл); як і у випадку з І/-6, найвищу величину вивільнення ТМЕ-а спостерігали після першої інфузії. Не спостерігали будь-яких пов'язаних з САКТ-А змін у рівняхTME-a in serum ("10 pg/ml); as in the case of I/-6, the highest amount of TME release was observed after the first infusion. No SACT-A-related changes in levels were observed
І -5, ІП -4, І/- 2 або ІРМ-у під час усього дослідження з порівняння з контролями. Можна зробити висновок про те, що вивільнення цитокінів у відповідь на лікування мавп за допомогою ОАКТ-А було мінімальним, тимчасовим і являло собою ефект на першу дозу, контрольований за допомогою підвищення дози в межах одного суб'єкта.I -5, IP -4, I/- 2 or IRM-u during the entire study in comparison with controls. It can be concluded that the release of cytokines in response to treatment of monkeys with OAKT-A was minimal, transient, and was a first-dose effect controlled by increasing the dose within a single subject.
Опосередкована САВТ-А деплеція циркулюючих СО147/С0123: лейкоцитів іп мімоSAVT-A-mediated depletion of circulating СО147/С0123: leukocytes ip mimo
Абсолютні вмісти циркулюючих СЮО14-/20123-ж- клітин вимірювали під час дослідження в якості фармакодинамічного кінцевого результату. Поряд з тим, що кількість СЮО123" клітин у контрольній групі 1 залишалася стабільним із часом, лікування за допомогою САКТ-А було пов'язане з великою деплецією циркулюючих СО14-/С0123- клітин (94-100 до від початкового значення перед дослідженням), спостережуваної, починаючи з першої виміряної часової точки (72 години) після початку першої інфузії ОАКТ-А (100 нг/кг/день) у всіх тварин у всіх групах активного лікування (фігури ЗОА-30С). Деплеція була тривалою, оскільки вона тривала протягомThe absolute contents of circulating ХОО14-/20123-ж- cells were measured during the study as a pharmacodynamic end result. While the number of CO123" cells in control group 1 remained stable over time, treatment with SACT-A was associated with a large depletion of circulating CO14-/C0123- cells (94-100% from baseline before the study), observed starting at the first measured time point (72 hours) after the start of the first OACT-A infusion (100 ng/kg/day) in all animals in all active treatment groups (Figures ZOA-30C).
З-денної щотижневої перерви у введенні дози в групі 2-5, повертаючись до вихідних рівнів тільки під час пролонгованого періоду відновлення. Для усунення можливості маскування рАВТ-А або модулювання СО123 (малоймовірний сценарій, що дає низькі рівні циркулюючогоC-day weekly dose break in group 2-5, returning to baseline levels only during a prolonged recovery period. To eliminate the possibility of rAVT-A masking or CO123 modulation (an unlikely scenario resulting in low levels of circulating
БАВТ-А), кількість рОС опідраховували за допомогою ортогонального маркера, СОЗ303.BAVT-A), the amount of ROS was calculated using an orthogonal marker, SOZ303.
Відповідно до даних відносно СО123, СОЗОЗ-рос аналогічно піддавали деплеції у мавп, які одержали лікування за допомогою САКТ-А (фігури 300-ЗОР).According to the data for СО123, SOZOZ-ros were similarly depleted in monkeys treated with SACT-A (figures 300-ZOR).
Зо Вміст циркулюючих Т-лімфоцитів, активація і аналіз підкласівFrom the content of circulating T-lymphocytes, activation and analysis of subclasses
На відміну від стійкої деплеції циркулюючих СО123- клітин, ОАКТ-А, що вводиться за схемою 4 дня введення/3 дня без введення (групи 2-5), було пов'язане із щотижневими коливаннями в вмістах циркулюючих Т-клітин, при цьому введення у вигляді безперервних 7- денних інфузій приводило до аналогічного зниження вмістів циркулюючих Т-клітин після першого введення, яке повільно відновлювалося без коливання навіть протягом періоду введення доз (фігури З1А-31С). Відмінність між двома стратегіями введення доз указує на те, що ефект ЮАКТ-А на Т-лімфоцити узгодиться з міграцією і/або скупченням клітин по краю ділянки запалення, а не з деплецією. Після припинення введення доз, вміст Т-клітин несподівано піднімався до рівнів, приблизно в 2 рази вище, ніж вихідні значення протягом тривалості періоду відновлення. Інфузія ЮАКТ-А була пов'язана із залежною від впливу прогресуючою підвищеною частотою зустрічальності Т-клітин, експресуючих маркер пізньої активації, РО-1, особливо на СО4-- клітинах, при цьому група дозування 6 проявляла найвищі загальні вмісти (фігури 310-311 ї фігури 32А-32Е і фігури ЗЗА-ЗЗЕ). Тіт-3, маркер, пов'язаний з виснаженням Т-клітин, не був виявлений на СО4.Т-клітинах і тільки з низькою частотою середIn contrast to the sustained depletion of circulating CO123 cells, OAKT-A administered in a 4-day on/3-day off schedule (groups 2–5) was associated with weekly fluctuations in circulating T cell counts, with administration in the form of continuous 7-day infusions led to a similar decrease in circulating T-cells after the first administration, which slowly recovered without fluctuation even during the period of administration of doses (Figures 31A-31C). The difference between the two dosing strategies indicates that the effect of UACT-A on T lymphocytes would be consistent with cell migration and/or clustering at the edge of the inflammatory site, rather than depletion. After cessation of dosing, T cell content unexpectedly rose to levels approximately 2-fold higher than baseline for the duration of the recovery period. UACT-A infusion was associated with an exposure-dependent, progressive increase in the incidence of T cells expressing the late activation marker, PO-1, particularly on CO4- cells, with dose group 6 showing the highest total counts (Figures 310-311 figures 32A-32E and figures ZZA-ZZE). Tit-3, a marker associated with T-cell exhaustion, was not detected on CO4.T-cells and only at a low frequency among
Сов клітин (5,5-9,7 95) і містився 20,5-35,5 95 СО8-/РО-1- подвійних-позитивних клітин. Не спостерігалася будь-яка узгоджувана зміна в маркері ранньої Т-клітинної активації, СОб9, і тільки невеликі зміни в експресії СО25 серед циркулюючих клітин.Sov of cells (5.5-9.7 95) and contained 20.5-35.5 95 СО8-/РО-1- double-positive cells. There was no consistent change in the marker of early T-cell activation, COb9, and only small changes in CO25 expression among circulating cells.
Щоб виключити виснаження після іп мімо впливу, ех мімо цитотоксичний потенціал ефекторних клітин, виділених від яванських макак, які одержують численні інфузії ОАКТ-А, порівнювали із цим параметром у раніше не підданих експериментам мавп. Як показано на фігурі 34, РВМС, виділені від мавп, які одержали лікування за допомогою ОБАКТ-А, продемонстрували цитотоксичність, порівнянну з такою у клітин, виділених від раніше не підданих експериментам мавп, вказуючи на те, що іп мімо вплив САКТ-А не виявляв негативного впливу на здатність Т-клітин знищувати клітини - мішені.To rule out exhaustion after ip mimo exposure, ex mimo cytotoxic potential of effector cells isolated from Javan macaques receiving multiple infusions of OAKT-A was compared with this parameter in naïve monkeys. As shown in Figure 34, PBMCs isolated from monkeys treated with OBACT-A showed cytotoxicity comparable to that of cells isolated from previously naïve monkeys, indicating that the effect of SACT-A is not had a negative effect on the ability of T cells to destroy target cells.
Вплив САКТ-А збільшував відносну частоту зустрічальності центральних СО клітин пам'яті і ефекторних СО8- клітин пам'яті за рахунок відповідної раніше не підданої впливам Т-клітинної популяції (фігури ЗБА-35Е і фігури 32А-32Е ії фігури ЗЗА-З3ЗЕ), вказуючи на те, що вплив ОАКТ-А стимулював експансію і/або мобілізацію зазначених клітин.The influence of SACT-A increased the relative frequency of occurrence of central CO memory cells and effector CO8 memory cells at the expense of the corresponding T-cell population not previously exposed to the effects (figures ZBA-35E and figures 32A-32E and figures ZZA-Z3ZE), indicating that exposure to OAKT-A stimulated the expansion and/or mobilization of these cells.
Ефекти на гемопоез і попередники кісткового мозку рАВТ-А добре переносився мавпами у всіх досліджуваних дозах; проте, оборотні зниження параметрів еритроцитів спостерігали при найвищих дозах (фігури ЗбА-36С). Швидкий забір крові міг вносити в це свій потенційний внесок, оскільки тварини, що одержали лікування за допомогою інертного носія продемонстрували слабке зниження кількості еритроцитів.Effects on hematopoiesis and bone marrow progenitors rAVT-A was well tolerated by monkeys at all tested doses; however, reversible decreases in erythrocyte parameters were observed at the highest doses (figures ZbA-36C). Rapid blood sampling could potentially contribute to this, as animals treated with an inert vehicle showed a slight decrease in erythrocyte counts.
Ретикулоцитартну відповідь спостерігали у всіх тварин; при найвищому рівні впливу (група 6), проте, відповідь виявилася дещо менш вираженою для подібного зниження кількості еритроцитів (фігури 360-36Е). Морфологічний аналіз мазків кісткового мозку протягом дослідження був без особливостей. Проточна цитометрія, проте, виявила, що частота зустрічальності СО123-- клітин у межах негативних у відношенні незрілих клітинних ліній (Гіп-) популяцій кісткового мозку знижувалася у отримавших лікування за допомогою САКТ-А тварин наприкінці періоду введення доз, повертаючись до вихідних значень у кінці відбудовного періоду (фігура 37А-37В). Н5С (визначені як І іп-/2034-/2038-/2045ВА-/С090-- клетки (Рапа,A reticulocyte response was observed in all animals; at the highest level of exposure (group 6), however, the response was somewhat less pronounced for a similar decrease in the number of erythrocytes (Figures 360-36E). Morphological analysis of bone marrow smears during the study was unremarkable. Flow cytometry, however, revealed that the frequency of CO123 cells within the immature cell line-negative (Hyp-) populations of bone marrow decreased in SACT-A-treated animals at the end of the dosing period, returning to baseline at the end of the dosing period. reconstruction period (figures 37A-37B). H5C (defined as I ip-/2034-/2038-/2045BA-/С090-- cells (Rapa,
МУ МУ. єї а. (2011) "Нитап Вопе Маїітом Нетаїйороїіеїйс бієт СеїЇІ5 Аге Іпстєазед Іп Егедоепсу АпаMU MU her a. (2011).
Муеїоіїд-Віазей МУйи Аде, " Ргос. Маї. Асад. сі. (0О.5.А.) 108:20012-20017)) показали більшу мінливість між групами; мавпи, що одержали лікування за допомогою БАКТ-А, групи 4-6 показали деяке видиме зниження в порівнянні з відповідними рівнями перед введенням доз, проте, ніякого зниження не спостерігалося у всіх групах, що одержали лікування, у порівнянні з отримавшими лікування за допомогою інертного носія тваринами. Ці дані вказують на те, щоMueioiid-Viazei MUyi Ade, "Rhos. Mai. Asad. si. (0O.5.A.) 108:20012-20017)) showed greater variability between groups; monkeys treated with BACT-A, group 4- 6 showed some apparent reduction from the respective pre-dose levels, however, no reduction was observed in all treatment groups compared to vehicle-treated animals.These data indicate that
НОС були менш чутливими до націленого впливу за допомогою ЮАКТ-А і узгодяться зі спостережуваною оборотністю негативних ефектів лікування САКТ-А на гемопоез.NOS were less sensitive to targeting with SUACT-A and would be consistent with the observed reversibility of the negative effects of SUACT-A treatment on hematopoiesis.
Як продемонстровано вище, у відношенні інфузій протягом 4 тижнів за щотижневою схемою 4 дня введення/3 дня без введення або за схемою 7 днів введення щотижня з початкових доз, що становлять 100 нг/кг/день, які збільшуються поетапно щотижня до 300, 600 їі 1000 нг/кг/день, введення ОАКТ-А яванським макакам переносилося добре. Деплецію циркулюючих СО123-- клітин, включаючи в себе рос, спостерігали після початку першого введення і вона тривала протягом усього дослідження при всіх дозах і схемах. Також спостерігалося оборотне зниження попередника СО123-- кісткового мозку. Вивільнення цитокіном, як істотна загроза безпеки при націлених на СОЗ видах терапії, виявилася коректуємою і узгодиться з ефектом введення першої дози. Незначну оборотну анемію відзначали при найвищих дозах, але не відзначалиAs demonstrated above, in terms of infusions over 4 weeks on a weekly schedule of 4 days of administration/3 days off or on a schedule of 7 days of administration every week from initial doses of 100 ng/kg/day, which are increased in stepwise fashion every week to 300, 600 IU 1000 ng/kg/day administration of OACT-A to Javan macaques was well tolerated. Depletion of circulating CO123 cells, including ROS, was observed after the first administration and continued throughout the study at all doses and regimens. A reversible decrease in the bone marrow precursor СО123 was also observed. Cytokine release, as a significant safety hazard in POP-targeted therapies, was reversible and consistent with the effect of the first dose. Slight reversible anemia was noted at the highest doses, but not noted
Зо ніяких інших (пов'язаних з метою впливу або не пов'язаних з метою впливу) несприятливих ефектів.No other (related to the purpose of exposure or not related to the purpose of exposure) adverse effects.
Яванська макака являє собою прийнятну тваринну модель для фармакологічної оцінкиThe Javan macaque is an acceptable animal model for pharmacological evaluation
РАВТ-А, беручи до уваги високий ступінь гомології між ортологами і здатність ОАВТ-А зв'язуватися з подібною афінністю з антигенами і опосередковувати переспрямований Т- клітинний цитоліз в обох видів. Крім того, обоє антигенів узгоджено експресуються в мавп і людей, включаючи в себе подібну експресію гемопоетичними попередниками і у цитоплазмі ендотелія численних тканин. Невеликі виключення являють собою експресію в клітинах Лейдига в людей, а не мавп і низький вміст або відсутність СО123 у моноцитах мавп у порівнянні з людьми.RAVT-A, given the high degree of homology between the orthologs and the ability of RAVT-A to bind with similar affinity to antigens and mediate redirected T-cell cytolysis in both species. In addition, both antigens are consistently expressed in monkeys and humans, including similar expression by hematopoietic progenitors and in the cytoplasm of the endothelium of numerous tissues. Minor exceptions are expression in Leydig cells in humans rather than monkeys and low or absent CO123 in monkey monocytes compared to humans.
Першочергове завдання, пов'язане з терапевтичними стратегіями, у які залучена Т-клітинна активація, містить у собі вивільнення цитокінів і не пов'язані з метою впливу на цитотоксичні ефекти. Нещодавнє дослідження з СОЗ х СО123 біспецифічних імунним конструктом злиття 5СЕм з бівалентним розпізнаванням СОЗ продемонструвало протилейкозну активність іп міїго, але викликало неспецифічну активацію Т-клітин і секрецію ІЕМ-у (Кио, 5.К. еї аї. (2012) "Епдіпеетіпа А СО123хХСО3 Вівресіїс всЕм Іттипоїибвіоп Рог Те Тгєаїтепі ОЇ ГешКетіа АпаThe primary focus of therapeutic strategies involving T-cell activation involves the release of cytokines and is not related to cytotoxic effects. A recent study with POP x CO123 bispecific immune construct fusion of 5Cem with bivalent recognition of POP demonstrated anti-leukemic activity of ip miigo, but caused non-specific activation of T cells and secretion of IEM-u (Kyo, 5.K. ei ai. (2012) "Epdipetipa A СО123хХСО3 Vivresiis vsEm Ittipoiibviop Rog Te Tgeaitepi OI GeshKetia Apa
ЕПтіпайоп ОЇ І еиКетіа біет СеїЇв, " Ргоївєїп Епа. Юез. Зе!І. 25:561-569). Моновалентна природа кожного із плечей зв'язування і у високому ступені гомогенна форма САКТ-А забезпечує те, щоThe monovalent nature of each of the binding arms and the highly homogeneous form of SACT-A ensure that
Т-клітинна активація залежить винятково від залучення клітин - мішеней: Т-клітинна активація не спостерігалася при відсутності клітин - мішеней або при використанні молекули контрольного рАКТ, яка містила в собі тільки плече націленого впливу на СОЗ. Крім того, високі дози (аж до 100 мкг/кг/ день) молекули контрольного ОАКТ не запускали вивільнення цитокінів у яванських макак.T-cell activation depends exclusively on the involvement of target cells: T-cell activation was not observed in the absence of target cells or when using the control rAKT molecule, which contained only the arm of targeted influence on POPs. In addition, high doses (up to 100 μg/kg/day) of the control OAKT molecule did not trigger cytokine release in Javan macaques.
Початкова доза молекули САКТ-А, що складає 100 нг/кг/день, добре переносилася, при цьому спостерігалося мінімальне вивільнення цитокінів. Проте, цитокінова буря дійсно починалася при високій початковій дозі (5 мкг/кг/день); проте, така доза могла бути досягнута безпечним чином за допомогою поетапних щотижневих підвищень дози, вказуючи на те, що опосередковане ВАКТ-А вивільнення цитокінів, імовірно, є, головним чином, ефектом першої дози. Деплеція СО123-- клітин - мішеней, тим самим усуваючи джерело лігування з СОЗ, може пояснювати ефект першої дози: майже повну деплецію СО123-- клітин спостерігали в дозах, що бо не перевищують 3-10 нг/кг/день, вказуючи на те, що у вивільненні цитокінів іп мімо прослідковується зміщений дозозалежний ефект у порівнянні із цитотоксичністю. Профілі залежності від дози для цитотоксичності і вивільнення цитокінів Т-клітинами людини також узгодяться із представленим спостереженням.An initial dose of 100 ng/kg/day of the SACT-A molecule was well tolerated with minimal cytokine release. However, the cytokine storm did start at a high starting dose (5 μg/kg/day); however, this dose could be reached safely with stepwise weekly dose increases, indicating that VACT-A-mediated cytokine release is likely to be primarily an effect of the first dose. Depletion of CO123- target cells, thereby eliminating the source of ligation with POPs, may explain the effect of the first dose: almost complete depletion of CO123- cells was observed at doses not exceeding 3-10 ng/kg/day, indicating that that in the release of cytokines, a shifted dose-dependent effect is followed in comparison with cytotoxicity. The dose-response profiles for cytotoxicity and cytokine release by human T cells are also consistent with the presented observation.
Т-клітинна десенсибілізація, у якій може відігравати роль опосередкована БАКТ-А позитивна регуляція РОТ, як виявляється, також вносить свій внесок в обмеження вивільнення цитокінів після першої інфузії СОАКТ-А. Нещодавні дослідження показують, що підвищена експресія РО-1 після індукованої антигеном затримки Т-клітин у ділянках запалення вносить свій внесок, за допомогою взаємодій з РО-І 1, у термінацію стоп-сигналу, таким чином, вивільняючи і десенсибілізуючи клітини (Нопаа, Т. еї аї. (2014) "Типіпуд ОЇ Апіїдеп Зепзйїмку Ву Т Сеї!І Кесеріог-T-cell desensitization, in which BACT-A-mediated upregulation of ROT may play a role, also appears to contribute to the limitation of cytokine release after the first SOACT-A infusion. Recent studies show that increased expression of PO-1 after antigen-induced arrest of T cells at sites of inflammation contributes, through interactions with PO-I 1, to the termination of the stop signal, thus releasing and desensitizing the cells (Nopaa, T . ei ai. (2014) "Titipud OYI Apiidep Zepzyimku Vu T Seii!I Keseriog-
ЮОеєрепадепі Медаїйме Реєдраск Сопігоїє Т Се! ЕМПесюг Рипсійп Іп Іпйатей Тіввцев, " Іттипйу 40:235-247; ММеї, РЕ. еї аї. (2013) "Змепдій ОЇ РО-1 Зідпаїпу ОїйегепіаПу Анесів Т-Сеї! ЕПесіогЮОеерепадепи Медаийме Реедраск Зопигоие T Se! Empesyug Rypsiip Ip Ipyatei Tivvtsev, " Ittipyu 40:235-247; MMei, RE. ei ai. (2013) "Zmepdiy OYI RO-1 Zidpaipu OiyegepiaPu Anesiv T-Sei! EPesiog
Ейпсійоп5, " Ргос. Маї!. Асай. 5сі. (0О.5.А.) 110:Е2480-Е2489). Протидія РО-1 потужності сигналуEipsiyop5, "Rhos. Mai!. Asai. 5si. (0O.5.A.) 110:E2480-E2489). The antidote of RO-1 signal strength
ТСК не є інформативною: поряд з тим, що проліферація і продукція цитокінів виявляються найбільш чутливими до інгібуванню РО-1, вплив на цитотоксичність є мінімальним (УМеї, Е. еї аї. (2013) "Зігепаїй ОЇ РО-1 5ідпаїїпуд ОіїйегепііаПйу Анесів Т-СеїЇ ЕпНесіюг Еипсійоп5, " Ргос. Маї!. Асад. зЗсі. (0О.5.А.) 110:Е2480-Е2489). Закономірно, ех мімо цитотоксичний потенціал Т-клітин від мавп, на яких впливали багаторазовими інфузіями САКТ-А, був порівнянний з таким в Т-клітин від раніше не підданих експериментам мавп, незважаючи на підвищені вмісти РО-1 у перших. Крім того, позитивна регуляція РО-1 не супроводжувалася експресією ТІМЗ, відмітної ознаки виснаження Т-клітин, як показано для Т-клітин, які були піддані тривалій стимуляції антитіламиTSC is not informative: in addition to the fact that proliferation and cytokine production are most sensitive to PO-1 inhibition, the effect on cytotoxicity is minimal (Umei, E. ei ai. (2013) "Zygepaii OII RO-1 5idpaiipud OiiiyegepiiaPyu Anesiv T- Seyi EpNesiug Eipsiyop5, " Rgos. Mai!. Asad. zZsi. (0O.5.A.) 110:E2480-E2489). Consistently, the cytotoxic potential of T-cells from monkeys exposed to multiple infusions of SACT-A was comparable to that of T-cells from monkeys previously not exposed to experiments, despite the increased levels of PO-1 in the former. In addition, the upregulation of PO-1 was not accompanied by the expression of TIMZ, a hallmark of T cell exhaustion, as shown for T cells subjected to long-term antibody stimulation
СОЗ або хронічних інфекцій (сСебеї, Н.М. еї а). (1989) "Т СеїІ5 Егот Раїепів Биссез5ішу ТгєаїейPOPs or chronic infections (sSebei, N.M. ei a). (1989) "T SeiI5 Egot Raiepiv Bissez5ishu Tgeaiei
Мун ОКТЗ бо Мої Веасі М/Н Тне Т-СеїІ Весеріог Апіїроду, " Нит. Іттипої. 26:123-129; МНе!ту,Mun OKTZ bo Moi Veasi M/N Tne T-SeiI Veseriog Apiirodu, " Nit. Ittipoi. 26:123-129; MNe!tu,
Е.9. (2011) "Т Сеї! Ехнаивійоп, " Маї. Іттипої. 12:492-499).E.9. (2011) "T Sei! Ekhnaiviyop, " Mai. And so on. 12:492-499).
Деплеція циркулюючих СО123-- клітин у отримавших лікування за допомогою САКТ-А мавп була швидкою і тривала протягом щотижневої перерви у введенні доз у схемі 4 дня введення/3 дня без введення, що узгодиться з усуненням клітин - мішеней. Навпаки, часові коливання в кількості циркулюючих Т-клітин, імовірно, були результатом міграції із/в тканині і лімфоїдні органи залежно від ВОАКТ-А. Вплив САКТ-А стимулює експансію і/або мобілізацію підданих впливу антигену Т-лімфоцитів, клітин, які переважно перебувають у тканинах і швидшеDepletion of circulating CO123- cells in SACT-A-treated monkeys was rapid and continued during the weekly dosing break in a 4-day on/3-day off schedule, consistent with elimination of target cells. In contrast, temporal fluctuations in the number of circulating T cells were likely the result of migration from/into tissues and lymphoid organs in a VOAKT-A-dependent manner. The effect of SACT-A stimulates the expansion and/or mobilization of antigen-exposed T-lymphocytes, cells that are mainly located in tissues and faster
Зо проявляють цитотоксичну ефекторну функцію (Мігепаа, УМ. еї а. (2007) "Рпузіоіодіс Апа АбеїтапіZo exhibit a cytotoxic effector function (Migepaa, UM. ei a. (2007) "Rpuzioiodis Apa Abeitapi
Ведшіайнйоп ОЇ Метогу Т-Сеї! Ттапіскіпд Ву Те Совіїтшаюгту МоїІесше СО28," Віоса 109:2968- 2977; Магеїй-Вегу, Р.М. еї аї. (2010) "Метогу Т-Сеї Тгтайіскіпд: Мем Оігесіопе Рог ВивуVedshiaynyop OI Metogu T-Sei! Ttapiskipd Wu Te Soviitshayugtu MoiIesshe CO28," Viosa 109:2968- 2977; Magee-Wegu, R.M. ei ai. (2010) "Metogu T-Sei Tgtaiiskipd: Mem Oigesiope Rog Vivu
Соттиегв, " Іттипоіоду 130:158-165).Sottiegv, " Ittypoiodu 130:158-165).
Деплеція СО123.- нормальних клітин може передбачати потенційні ризики. рос і базофіли експресують високі вмісти СО123 у порівнянні зі зниженими вмістами в моноцитах і еозинофілах (орег, А.Р. єї аї. (1989) "Весіргосаї! Іппібйіоп ОЇ Віпаїпу Веїмееп ІпіепецйКкіп З Апа Стапиіосуїе-Depletion of СО123.- normal cells can predict potential risks. ros and basophils express high contents of CO123 in comparison with reduced contents in monocytes and eosinophils (oreg, A.R. Yei ai. (1989) "Vesirgosai! Ippibyiop OY Vipaipu Veimeep IpiepecyKkip Z Apa Stapiiosuie-
Масторнаде Соіопу-5іїтиїайпоа Расіог То Нитап ЕозіпорнНіїє, " Ргос. Май). Асад. осі. (0.5.А.) 86:7022-7026; Мипо, Ї. еї аї. (2001) "ІпїепешиКіп-3 Весеріог АІрпа Спаіп (СО123) Ів МідеїуMastornade Soiopu-5iitiiaipoa Rasiog To Nytap EozipornNiie, " Rgos. May). Asad. osi. (0.5.A.) 86:7022-7026; Mipo, Y. ei ai. (2001) "IpiepeshiKip-3 Veseriog AIrpa Spaip (SO123 ) Iv Mideiu
Ехргеззей Іп Нетайіодіс Маїїдпапсієв5, " Наетайюіодіса 86:1261-1269; Мабвіеп, В.. єї аї. (2006) "СНагасієгігайоп ОЇ Мувєїоій Апа Ріазтасуюій ЮОепагтйіс Сеїїв й Нитап Гипд, " У. Іттипо). 177:7784-7793; Когреїаіпеп, Е.І. еї аі. (1995) "Іпепегоп-Ссатта Оргеашіаїез ІпіепешцкКіп-З3 (1-3)Ehrghezzei Ip Netaiiodis Maiidpapsiev5, " Naetayuiodis 86:1261-1269; Mabviep, V.. yei ai. (2006) "SNagasiyegigayop OY Muveioii Apa Riaztasuyuy YuOepagtyis Seyiiv and Nytap Gypd, " U. Ittipo). 177:7784-7793; Kogreiiep, Kogreia E.I. ei ai. (1995) "Ipepegop-Ssatta Orgeashiaiez IpiepestskKip-Z3 (1-3)
Весеріог Ехргезвіоп п Нитап Епаоїнеїа! Сеїйв Апа Зупегдіге5 М/П 1-3 Іп Бійтшіайпо МаїогVeseriog Ehrgezviop p Nytap Epaoineia! Seijv Apa Zupegdige5 M/P 1-3 Ip Biitsiaippo Maiog
Нівіосотраїййбійу Сотрієх Сіавз ІІ Ехргеззіоп Апа СуюкКіпе Ргодисійп, " Віоса 86:176-182). Було показано, що рос відіграє роль у контролі певних вірусів у моделях інфекцій на мишах або мавпах, хоча вони не виявлялися критично важливими для контролю імунної відповіді при грипі (Соіоппа, М. евї аї. (1997) "Зресіїйсну Апа Рипсійоп ОЇ Іттиподіобиїїп Зирепатіу МК Сеї ІппірйогуNiviosotraiiibiyu Sotrieh Siavz II Ehrgeziop Apa SuyukKipe Rgodisip, " Viosa 86:176-182). Ros has been shown to play a role in the control of certain viruses in mouse or monkey models of infection, although they have not been shown to be critical for controlling the immune response in influenza ( Soioppa, M. evi ai. (1997) "Zresiisnu Apa Ripsiiop OI Ittipodiobiiip Zirepatiu MK Seii Ippiriogu
Апа біїйтиіашюгу Весеріоге5, " ІттипоіЇ. Вем. 155:127-133; Зтії, У.у. еї а. (2006) "РіазтасуюіаApa biiytiiashyugu Veserioghe5, " IttypoiY. Vem. 155:127-133; Ztii, U.u. ei a. (2006) "Riaztasuyia
Оепагтйіс Сеїїв Іппірії Ритопагу Іттипораїйоіоду Апа Рготоїєе Сієагапсе ОЇ Резрігаюгу ЗупсуйаїOepagtyis Seiyiv Ippirii Ritopagu Ittiporaioiodu Apa Rgotoiee Sieaagapse OI Rezrigayugu Zupsuiai
Міги5, " У. Ехр. Мей. 203:1153-1159). Моделі пухлин РОС можуть стимулювати ріст пухлин і метастазування, тоді як деплеція РОС призводила до інгібування пухлини (Зауапі, А. еї аї. (2012) "Оеєрієїйоп ОЇ Ріавтасуйюій Оепагіїйс Сеїййв Іппірйє Титог СтоулЛИ Апа Ргемепів ВопеMigi5, " U. Ehr. Mei. 203:1153-1159). ROS tumor models can stimulate tumor growth and metastasis, while depletion of ROS resulted in tumor inhibition (Zauapi, A. ei ai. (2012) " Seyiyv Ipirye Tytog StoulLY Apa Rgemepiv Vope
Меїавзіазіє ОЇ Вгеабзі Сапсег Сеїв, " У. Іттипої. 189:4258-4265). Тимчасовий, незначний, залежний від дози набряк обличчя спостерігався в деяких мавп, що одержали лікування за допомогою ЮАКТ-А; проте, у цих мавп не спостерігали підвищених вмістів гистаміну або у випадку, коли базофіли людини лізували шляхом опосередкованого ВАКТ-А Т-клітинний лізис.Meiausziazie OY Vgeabzi Sapseg Seiv, " U. Ittipoi. 189:4258-4265). Transient, minor, dose-dependent facial swelling was observed in some monkeys treated with UAKT-A; however, these monkeys did not have elevated levels histamine or in the case when human basophils were lysed by VACT-A-mediated T-cell lysis.
Деплеція моноцитів може передбачати потенційні ризики інфекції; наслідок рОС, деплеція базофілів або еозинофілів у людей, таким чином, повинна зазнати моніторингу.Monocyte depletion may predict potential risks of infection; consequence of ROS, basophil or eosinophil depletion in humans should therefore be monitored.
Комітовані гемопоетичні попередники, які експресують СО123, такі як загальний мієлоїдний попередник (СМР) (Чогаап, С.Т. єї аї. (2000) "Тне ІпіепецшКіп-3 Весеріог АІрна Спаїп Ів А Опідие 60 МаїКег Бог Нитап Асше Муевеіодепоив І еиКетіа бієт СеїІв, " | еоКетіа 14:1777-1784; Вієдег,Committed hematopoietic progenitors that express CO123, such as common myeloid progenitor (CMP) (Chogaap, S.T. eyi ai. (2000) "Tne IpiepecshKip-3 Veseriog AIrna Spaip Iv A Opidie 60 MaiKeg Bog Nytap Asshe Mueveiodepoiv I eikEtia biet SeiIv , " | eoKetia 14:1777-1784; Wiedeg,
М.А. еї аї. (2012) "Нетаїороїіевів, " Соїд Зргіпд На. Регзресі. Віо!. 4:24008250), можуть бути піддані націленому впливу з боку ЮАКТ-А, що є можливим поясненням незначної анемії, спостережуваної після введення ЮАКТ-А у найвищій дозі. Імовірно, еритропоетична ретикулоцитарна відповідь діє при всіх рівнях дози ЮАКТ-А; проте, відносно адекватних знижень параметрів еритроцитів, тварини, що зазнавали впливу найвищих доз САКТ-А (група 6, 7-денна інфузія), показали знижену ретикулоцитарну відповідь, вказуючи на можливу цитотоксичну активність на попередників (наприклад, СМР). Ефект був оборотним після припинення лікування за допомогою САКТ-А, що узгодиться з репопуляцією зі збережених НОС з низьким вмістом або відсутністю СО123.MA. oh oh (2012) "Netaioroiyev, " Soyd Zrgipd Na. Regresi Vio!. 4:24008250), may be targeted by UACT-A, which is a possible explanation for the slight anemia observed after administration of the highest dose of UACT-A. Presumably, the erythropoietic reticulocyte response operates at all levels of the dose of UAKT-A; however, relative to adequate reductions in erythrocyte parameters, animals exposed to the highest doses of SACT-A (group 6, 7-day infusion) showed a reduced reticulocyte response, indicating possible cytotoxic activity on progenitors (eg, CMP). The effect was reversible after cessation of SACT-A treatment, consistent with repopulation from preserved NOS with low or no CO123.
Альтернативні підходи для деплеції СО123-- клітин містять у собі специфічне у відношенніAlternative approaches for the depletion of CO123 cells contain a specific aspect
СО0123 моноклональне антитіло другого покоління з посиленою областю Ес (іп, Ї. єї аї. (2009) "Мопосіопа! Апіїроду-Меадіаїєда Тагоеїїпд ОЇ СО123, 1-3 Весеріог АІрпа Спаїйп, Еїйтіпа(їез НитапCO0123 is a second-generation monoclonal antibody with an enhanced Es region (ip, Y. ey ai. (2009) "Moposiopa! Apiirodu-Meadieda Tagoeiiipd OY CO123, 1-3 Veseriog AIrpa Spaiip, Eytipa(iez Nytap
Асціє Муейоїа І ейКетіс 5іет Сеїїв, " СеїЇ біет Сеї! 5:31-42; Вобегів, А. МУ. єї аї. (2010) "А РНазе І зішау ОГ Апіїі-са1ї23 Мопосіопа! Апіїбоду (тар) С5І 360 Тагдеїйпуд ГеиКетіа 5ієт СеїЇв (І 5С) ІпAscie Mueioia I eiKetis 5iet Seiyiv, " SeiYi biet Seii! 5:31-42; Vobegiv, A. MU. ei ai. (2010) "A RNaze I zishau OG Apiii-sa1i23 Moposiopa! Apiibodu (tar) C5I 360 Tagdeiipud GeiKetia 5iet SeiYiv (I 5C) Ip
АМІ, "У. СіІйп. Опсої. 28(З,иррі):е13012), пов'язаний з 1-3 дифтерійний токсин (Ргапкеї, А. еї аї. (2008) "Рпавзе І Сіїпіса! іду ОЇ Оірпіпетгіа Тохіп-ІпіепеицйкКіп З Ривіоп Ргоївіп Іп Райепів М/Н АсшеAMI, "U. SiIip. Opsoi. 28(Z,irri):e13012), related to 1-3 diphtheria toxin (Rhapkei, A. ei ai. (2008) "Rpavze I Siipisa! idu OI Oirpipetgia Tohip-IpiepeitsykKip From Ryviop Rgoivip Ip Rayepiv M/N Asshe
Муеє!оіа Гешкетіа Апа Муе!Іодузріавіа, " Геик. Гутрпота 49:543-553), індуковані цитокінами (СІК) клітини-кілери, експресуючі специфічні до СО123 химерні антигенні рецептори (САК) (Тепатагпії, 5. єї аї. (2013) "Тагдеїіпу Ої Асціє Муеіоіа І еикаетіа Ву СуюкКіпе-Іпдисед КіПег СеїїЇвMuye!oia Geschketia Apa Mue!Ioduzriavia, " Geik. Gutrpota 49:543-553), cytokine-induced killer cells (KIK) expressing CO123-specific chimeric antigen receptors (SAC) (Tepatagpii, 5. ei ai. (2013) "Tagdeiipu Oi Ascie Mueioia I eikaetia Wu SuyukKipe-Ipdysed KiPeg SeiiYiv
Ведігесівєд М/йН А Моме! СО123-5ресіїїс Спітетіс Апіїдеп Ресеріог, " Вг. У. Наєтацйо)!. 161:389-401) і 60123 САК Т-клітини (ДІЇ, 5. еї а. (2014) "ЕНісасу Адаїпвї Нитап Асцшіе Муеєїйоїа І еиКетіа АпаVedigesived M/yN A Mome! СО123-5resiis Spitetis Apiidep Reseriog, " Vg. U. Nayetatio)!. 161:389-401) and 60123 SAC T-cells (ACTIONS, 5. ei a. (2014) "ENisasu Adaipvi Nytap Ascshie Mueyiyoia I eiKetia Apa
Муеїоабіайоп ОЇ Могпта! Нетаїйороієзіз п А Моизе Моде!ї О5іпд Спітепс Апіїдеп Весеріог-Mueioabiayop OY Mogpta! Netaiyoroieziz p A Moise Mode!i O5ipd Spiteps Apiidep Veseriog-
Моаіієа Т СеїІв, " Віоса 123(15): 2343-2354; Магаїгов, А. єї аї. (2013) "Т СеїІ5 Ехргеззіпд СО123- зресіїс СПітегіс Апіїдеп ВНесеріогв Ехпірії Зресіїс Суюоїуйс ЕпПесіог Еипсіоп5 Апа АпійтогMoaiiea T. Seyiv, "Viosa 123(15): 2343-2354; Magaigov, A. Yei ai. (2013) "T SeyI5 Ehrgezzipd CO123- zresiis SPitegis Apiidep VNeseriogv Ehpirii Zresiis Suyuoiyus EpPesiog Eipsiop5 Apa Apiitog
Енесів Адаіїпвї Нитап Асшіє Муеїйоїіа І еиКетіа, " Віоса 122:3138-3148). САВ Т-клітини виявили виражений цитоліз лейкозних бластних клітин іп міго і протилейкозну активність у ксеногенній моделі диссемінованого ГМЛ (Магаїго5, А. єї аІ. (2013) "її Се Ехргеззіпд СО123-5ресіїісEnesiv Adayipvi Nytap Asshiye Mueiyoiia I eiKetia, " Viosa 122:3138-3148. SAV T-cells revealed pronounced cytolysis of leukemic blast cells of the myoblast and anti-leukemic activity in a xenogeneic model of disseminated GML (Magaigo5, A. Yei aI. (2013)) " Se Ehrgezzipd СО123-5resiiis
Спітегіс Апіїдеп Несеріог5 Ехпірії Зресіїс Сушюїуйс ЕпПесіог Рипсіопбе Апа Апійштог ЕНесівSpitegis Apiidep Neseriog5 Ehpirii Zresiis Sushuiuis EpPesiog Rhypsiopbe Apa Apiishtog ENesiv
Адаїпзї Нитап Асшіе Муеїоїй ІГеиКетіа, " Віоса 122:3138-3148). У нещодавньому дослідженніAdaipzi Nytap Asshie Mueioi IGeiKetia, " Viosa 122:3138-3148). In a recent study
Зо повідомлялося про абляцію нормального гемопоезу в М5О мишей з пересадженими СОЗ34ч клітинами людини після переносу СО123 САК Т-клітин (Сі, 5. еї а). (2014) "ЕмПісасу АдаїпвіAblation of normal hematopoiesis in M5O mice transplanted with human SOZ34h cells after transfer of СО123 SAC T cells was reported (Si, 5. ей а). (2014) "EmPisasu Adaipwi
Нитап Асціє Муевїоід І еиКетіа Апа МуеїЇоабіайоп ОЇ Мопта! Нетаїйороїіевзіз п А Моизе Моавбві!Nytap Ascie Muevioid I eiKetia Apa MueiYoabiayop OY Mopta! Netaiyoroiievziz p And Moize Moavbvi!
Овіпа Спітетіс Апіїдеп Несеріог-Моадітієа Т Сеїїв, " Віоса 123(15): 2343-2354), хоча інші автори не спостерігали подібних ефектів іп міго або іп мімо (Тенатапії, 5. єї аї. (2013) "Тагдеїйпуд ОЇ АсцієOvipa Spitetis Apiidep Neseriog-Moaditiea T Seiyiv, " Viosa 123(15): 2343-2354), although other authors did not observe similar effects of ip migo or ip mimo (Tenatapii, 5. ei ai. (2013) " Tagdeiipud OY Ascie
МуеєїЇоід ІешКаєтіа Ву СуїйоКіпе-Іпдисед Кіег СеїІ5 Ведікгесієй М/йН А МомеІ СО123-5ресіїсMueyeiYoid IeshKaetia Wu SuiyoKipe-Ipdysed Kieg SeiI5 Vedicgesiei M/yN A MomeI СО123-5resiis
Спітетгіс Апіїдеп Несеріог, " Вг. У. Наєтаїйої!. 161:389-401; Ріггіюїа, І. еї аї. (2014) "СпітегісSpitegis Apiidep Neseriog, " Vg. U. Nayetaiyoi!. 161:389-401; Riggiuia, I. ei ai. (2014) "Spitegis
Апіїдеп Несеріогї5 Адаїнзії СОЗ3З/СО0123 Апіїдеп5 ЕПісіепну Тагдеї Ргітагу Асціє Муєїоід І еиКкетіаApiidep Neseriogyi5 Adainsii SOZ3Z/СО0123 Apiidep5 EPisiepnu Tagdei Rgitagu Ascie Mueioid I eiKketia
Сеїв іп мімо, " ГешКетіа адоїі:10.1038/Леи.2014.62). В обговорюваних вище експериментах спостерігали деплецію СО123- популяцій попередників кісткового мозку, але вона була оборотною під час періоду відновлення; крім того, деплеція цієї невеликої популяції не призводила до змін у насиченості клітинами кісткового мозку або в співвідношенні еритроїдних клітин до мієлоїдних (Е:М) при всіх досліджених рівнях доз САКТ-А. Ці відмінності підкреслюють потенційні переваги САКТ-А у порівнянні із клітинними видами терапії, оскільки це забезпечує титруєму систему, яка заснована на аутологічних Т-клітинах на відміну від "надефективних" ех мімо трансдукованих клітин, які важче контролювати. СО123 надлишково експресується в деяких гематологічних злоякісних пухлинах, включаючи в себе ГМЛ, волохатоклітинний лейкоз, новоутворення із бластних плазмацитоїдних дендритних клітин (УБПДК), пре-В-клітинний гострий лімфобластний лейкоз (В-ГЛЛ) і хронічний лімфоцитарний лейкоз, хворобу Ходжкіна з наявністю клітин Рид-Штернберга, а також при мієлодиспластичному синдромі і системному мастоцитозі (Кпапап-ЮРаба)а, М.А. еї аї. (2013) "Оіадповіїс Апа Тнегарешіс Адмапсез Іп ВіавіїсSeiv ip mimo, "GeshKetia adoii:10.1038/Ley.2014.62). In the experiments discussed above, depletion of CO123- populations of bone marrow progenitors was observed, but it was reversible during the recovery period; moreover, depletion of this small population did not lead to changes in saturation bone marrow cells or in the erythroid to myeloid (E:M) ratio at all SAKT-A dose levels tested. These differences highlight the potential advantages of SAKT-A over cell-based therapies as it provides a titratable system that is based on autologous T -cells as opposed to "overefficient" ex mimo-transduced cells, which are more difficult to control. CO123 is overexpressed in some hematological malignancies, including AML, hairy cell leukemia, blast plasmacytoid dendritic cell neoplasms (BPDC), pre-B-cell acute lymphoblastic leukemia (B-CLL) and chronic lymphocytic leukemia, Hodgkin's disease with the presence of cells Reed-Sternberg, as well as in myelodysplastic syndrome and systemic mastocytosis (Kpapap-Yuraba), M.A. oh oh (2013) "Oiadpoviis Apa Tnegareshis Admapsez Ip Viaviis
Ріазтасуйоідй Оепайііс СеїЇ Меоріазт: А Росив Оп Нетайороївїїс Сеї! Тгтаперіапіайоп, " Віої. ВіосаRiaztasuioidy Oepaiiis SeiY Meoriazt: And Rosyv Op Netayoroiviis Seiy! Tgtaperiapiayop, " Vioi. Viosa
Маїтом Тгаперіапі. 19:1006-1012; Ріопап, 5. єї а. (2006) "Оєїесіюп ОЇ МоїІесшаг Тагоаєїв Оп ТНе зипасе ОЇ СО34-4/С038-- ет Сеїї5 Іп Магпоив Муевіоїд Маїїдпапсіев, " Гешк. Гутрпота 47:207- 222; Мипо, Ї.. єї аї. (2001) "ІпїепеишКіп-3 Весеріог АІрна СНнаіп (СО123) Ів М/ідеіму Ехргеззей ІпMaitom Tgaperiapi. 19:1006-1012; Riopap, 5. yei a. (2006). Gutrpota 47:207-222; Mipo, Yi.. yei ai. (2001).
Нетайоіодіс Маїїдпапсіе5, " Наєетаїйюіодіса 86:11261-1269; Еготт, 9.8. (2011) "Ром СуїтеїйісNetaiodis Maiidpapsie5, " Naeetaiodis 86:11261-1269; Egott, 9.8. (2011) "Rome Suiteiis
Апаїузіз ОТ СО123 І5 Овзетці Бог Іттипорпепоїуріпд Сіаззіса! НодокКіп Гупрпота, " Суюотеїгу ВApaiuziz OT СО123 И5 Ovzetsi God Ittyporpepoiuripd Siazzis! NodokKip Guprpota, " Suyuoteigu V
Сіїй. Суїот. 80:91-99). Прогнозована фармакодинамічна активність і контрольований профіль безпеки, спостережуваний у нелюдиноподібних приматів додатково підтверджує клінічну застосовність і ефективність САКТ-А в якості імунотерапії для зазначених порушень.That's it. Suiot. 80:91-99). The predicted pharmacodynamic activity and controlled safety profile observed in nonhuman primates further supports the clinical applicability and efficacy of SACT-A as an immunotherapy for these disorders.
На закінчення необхідно відзначити, що САКТ-А являє собою молекулу на основі антитіла, яка залучає суб'єсдиницю СОЗеє ТСЕ. для перенапрямку Т-лімфоцитів проти клітин, експресуючихIn conclusion, it should be noted that SACT-A is an antibody-based molecule that engages the TSE subunit. to redirect T-lymphocytes against cells expressing
СОр123, антиген, що зазнає позитивної регуляції при деяких гематологічних злоякісних пухлинах.СОр123, an antigen that undergoes positive regulation in some hematological malignant tumors.
РАВТ-А зв'язується обома антигенами як людини, так і яванської макаки з подібними афінностями і перенаправляє Т-клітини обох видів на знищення СО123-- клітин. Мавпи, яким вводили інфузії 4 або 7 днів на тиждень із дозами, які щотижня підвищуються, ЮАКТ-А, продемонстрували деплецію циркулюючих СО123-- клітин через 72 год. після початку лікування, яка тривала протягом 4 тижнів лікування, незалежно від схем введення доз. Зниження циркулюючих Т-клітин також відбувалося, але відновлювалося до вихідного значення до наступної інфузії у мавп, що одержують лікування за схемою, яка передбачає 4 дня введення дози, що узгодиться з опосередкованою ЮАКТ-А мобілізацією. Введення САКТ-А збільшувало циркулюючі РОТ, але не ТІМ-З-, Т-клітини; крім того, ех мімо аналіз Т-клітин від мавп, що одержали лікування виявив незмінений переспрямований лізис клітин - мішеней, вказуючи на відсутність виснаження. Токсичність була обмежена мінімальним часовим вивільненням цитокінів після першої інфузії СОАКТ-А, але не після наступних уведень, навіть якщо доза підвищувалася, і мінімальним зниженням кількості еритроцитів із супутнім зниженням СО123ч- попередників кісткового мозку. Клінічне випробування САКТ-А при гематологічних злоякісних пухлинах є обгрунтованим.RAVT-A binds both human and Javan macaque antigens with similar affinities and redirects T-cells of both species to destroy CO123 cells. Monkeys infused 4 or 7 days per week with weekly escalating doses of UACT-A demonstrated depletion of circulating CO123- cells after 72 h. after the start of treatment, which lasted for 4 weeks of treatment, regardless of the dosing regimens. A decrease in circulating T cells also occurred, but recovered to baseline by the next infusion in monkeys treated with a 4-day dosing schedule, consistent with YACT-A mediated mobilization. Administration of SAKT-A increased circulating ROT, but not TIM-Z, T-cells; in addition, ex vivo analysis of T cells from treated monkeys revealed unchanged redirected lysis of target cells, indicating no depletion. Toxicity was limited by a minimal temporal release of cytokines after the first COACT-A infusion, but not after subsequent administrations, even as the dose was increased, and a minimal decrease in the number of erythrocytes with a concomitant decrease in CO123h-bone marrow progenitors. A clinical trial of SACT-A in hematological malignancies is justified.
Усі згадані в даному описі винаходу публікації і патенти включені в даний документ тією самою мірою, як якби було передбачено, що кожна окрема публікація або патентна заявка спеціально і індивідуально включена за допомогою посилання у всій своїй повноті. Поряд з тим, що даний винахід був описаний з використанням конкретних його варіантів здійснення, слід розуміти, що можливі додаткові модифікації, і передбачено, що дана заявка охоплює будь-які зміни, застосування або адаптації даного винаходу, притримуючись в цілому принципів даного винаходу і включаючи в себе такі відхилення від даного розкриття, які узгоджуються з відомою або загальноприйнятою практикою в даній області техніки, до якої належить даний винахід, і які можуть бути застосовані до основних ознак, викладених вище в даному документі.All publications and patents mentioned in this description of the invention are incorporated herein to the same extent as if each individual publication or patent application were specifically and individually incorporated by reference in their entirety. While the present invention has been described using specific embodiments thereof, it should be understood that additional modifications are possible, and it is intended that this application cover any changes, applications, or adaptations of the present invention, adhering generally to the principles of the present invention and including contain such deviations from this disclosure as are consistent with known or generally accepted practice in the art to which the present invention belongs and which may be applied to the essential features set forth herein above.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙLIST OF SEQUENCES
«Ті МАКРОДЖЕНІКС,. ІНК,"Those MACROGENICS,. Inc.,
Бонвіні, ЕзізBonvini, Eziz
Джонсон, ЛесліJohnson, Leslie
Жудн, ЛінZhudn, Lin
Мур, ПожMoore, Pozh
Чічілі, Гурунадх дядерсон, Раль «ІА» БІСПЕНИВІЧУНІ МОНОВБАЛЕНТНІ ДКАТІЛЯА, ЯКІ ЗДАТНІ ЗН'ЯЗУВАТИСЯ ЗChichili, Gurunadh Dyaderson, Ral "IA" BISPENIFIED MONOVALENT DKATILYAA THAT ARE ABLE TO DISTRIBUTE
Сів І СО, тА їх ЗАСТ УВАННЯ «ізаз і1581 ВІВаРСТ «їі5В Не Біла, ІВ «ї5ї1 38І3-55-33 «Іі58х 5 езичат, а «іі» 28і13-УБ-22 «ІБ ЕВ ІОВА «Іі» 3833-35-35 «ІБ 5 БІЗОВ, У «Ії» ввій-а5-ВЕ «ів5Ба» 585 «ії7Вз Раїевітп версія 3,5 сеї і сії 352 «піду РН «13» Втучна Послідовність «ща» «33 Первии Поліпептидний Ланцюг ПАБТ-8 «ах 1Siv I SO, and their PROOF "izaz i1581 VIVARST "ii5V Ne Bila, IV "i5i1 38I3-55-33 "Ii58x 5 languages, and "ii" 28i13-UB-22 "IB EV IOVA "Ii" 3833-35- 35 "IB 5 BIZOV, U "Ii" vviy-a5-VE "iv5Ba" 585 "ii7Vz Raievitp version 3.5 sei and sei 352 "pidu RN "13" Ttuchna Sequence "shcha" "33 First Polypeptide Chain PABT-8 " ah 1
Піп йіа Уві Чаї ТвКЕ зів біс РгОо бек оіво Тр Уві бБег Рго щі БІ 1 5 а їхPip yia Uvi Chai TvKE ziv bis RgOo bek oivo Tr Uvi bBeg Rgo shchi BI 1 5 a ih
Тк Узі Твгоієс ТвВгоСух йгрв бек озЗек ТВг о бі Аза Уві ТК оОТВг баг ща 85 що вАчп тує бів йхп отр уві біп бів іє Рео бі піп йіа Бго Агд о пі ща «5 ігр її о бі Біж т оАхпоїшж5 АКБ діз вго їгб оїБг о Рео вЕа ЯгЕ вве о 58 ще зем пі Бер оіву івен бі біу іуУу5 йіз бів іву ТЛ о бів ТВг о Зі діз іп біз біб бер Бін діа дБ їв туго БУ Вів ів о тТгв о їук бек вав а 5 іо тер ожаї ВБе бі бі Бі ТВг око ів ТВК Узі іч Біу пі біTk Uzi Tvgoies TvVgoSukh igrv bek ozZek TVg o bi Aza Uvi TK oOTVg bag shcha 85 what vAchp tuye biv yhp otr uv bip biv ie Reo bi pip yia Bgo Agd o pischa «5 igr her o bi Bizh t oAhpoishzh5 AKB diz vgo igb oiBg o Reo veEa YagE vve o 58 still zem pi Ber oivu even bi biu iuUu5 yiz biv ivu TL o biv TVg o Zi diz ip biz bib ber Bin dia dB iv tugo BU Viv iv o tTgv o iuk bek wav a 5 io ter ozhai WBe bi bi Bi TVg oko iv TVK Uzi ich Biu pi bi
Сіж бек бу біу бі бі Біб Уві біпоіви Уві бЗіп бек Бі Віа бін іш ія гух РгоО бі Аза Заг УВІ губ ді 5Звг Суб і м5 ВЗЕа Бек БіУSizh bek bu biu bi bi Bib Uvi bipoivy Uvi bZip bek Bi Via bin ish iya guh RgoO bi Aza Zag UVI gub di 5Zvg Sub i m5 VZEa Bek BiU
ІА ІЗ5 ІаIA IZ5 Ia
Тек ТВе Бе ТрБг одер оте тег Меї Гуз тео Уві АгБ Бій діз Бго сіюTek TVe Be TrBg oder ote tag Mei Guz teo Uvi AgB Biy diz Bho siyu
Зіп бі ів Біб їКве 112 бі А5в тів її га Звге дк БІ Аів їйгZip bi iv Bib iKve 112 bi A5v tiv her ha Zvge dk BI Aiv oylg
Те їУє еп Біб і ує Бе ої х5 Бі Агв Уві їВг о їіїе ТБгоУді йо іх ія Іщ5 їзTe iUye ep Bib i uye Be oi x5 Bi Agv Uvi iVg o iiiie TBgoUdi yo ih iya Ishch5 iz
Веб Тс о зегк о ТвВг о Ата Тук Меї бів ів бек Бег о іш йкБ его пен дОWeb Ts o zegk o TvVg o Ata Tuk Mei biv iv bek Beg o ish ykB ego pen dO
ТЕг бів Уві Туг Туг Су дів йгЕ бек Ні іви ів дДРр ОйІіва бек ТВTeg biv Uvi Tug Tug Su div yE bek Ni ivy iv dDRr OiIiva bek TV
РЕ Ата туго тер оБЕЖ бБіп біу Твг о їв Уві ТВг Уві бег бек ці бі1У 85 ДІНЕ 55 гаRE Ata tugo ter oBEZH bBip biu Tvg o iv Uvi TVg Uvi beg back ci bi1U 85 DINE 55 ha
Суб щі спа у біу Бін Уві бі Ажва ів біб Ее5 Бін УдДі Віз Від ів 5 Ба 55Sub shchi spa u biu Bin Uvi bi Azhva iv bib Ee5 Bin UdDi Wiz Vid iv 5 Ba 55
Сів і біш Уві та Аів ее Бін о їУу5 біс Уві Дія Аіа гео БЕ іУхSiv i bish Uvi and Aiv ee Bin o iUu5 bis Uvi Diya Aia geo BE iUh
За щі ув 218 2 ккїїВ ЩІ «2122 ДНЕ «візх Вгучна Послідовність «Ех «Зах Молекула Нуклеїнової Кислоти ХодУюча Первнк Поліпептидняк Ядниюг ПАНТ-А «ах 2 тавишсівіджш їКкасісарра рсстїсВсТЕ пОСрЕШЕТсСсс сЕБрІдвавс ТЕТ ЕВОССТЕ що всаїдсараї «ксазвсвсвше сесСаБівасс всвіксївасї зсвссазтїв рсіссавсав іа завссавдас веБбсяссаар деЕдссТЕВіс шсвЕЕЕТВсла зсазаардввс сссстТнрвасг ївЗа щі ув 218 2 ккїїВ ЩІ «2122 ДНЕ «візх Вгучна Послідовність «Ех «Зах Молекула Нуклеїнової Кислоти ХодУюча Первнк Поліпептидняк Ядниюг ПАНТ-А «ах 2 тавишсівіджш їКкасісарра рсстїсВсТЕ пОСрЕШЕТсСсс сЕБрІдвавс ТЕТ ЕВОССТЕ що всаїдсараї «ксазвсвсвше сесСаБівасс всвіксївасї зсвссазтїв рсіссавсав іа завссавдас веБбсяссаар деЕдссТЕВіс shsvEEETVsla zsazaardvvs ssstTnrvasg ate
СЕКС КТІСТЕБавЕ ТСТЕСІБЕЕС БЕЗавреЕссвЕ СІСТрВСТВХ ЄассдЕтрся ше сОЕБССЕВЕЕ дсезадссва ТівсіаїТБЇ в СЇсСтТЕТсВї віаротваїсї дідБЕТВІТе щаSEX KTISTEBAVE TSTESIBEES BEAZREESSVE SISTrVSTVH EassdEtrsya se soEBSSEVEE dsezadssva TivsiaiTBY in SYSStTETsVia viarotvaisi didBETVITE sha
ШЕБЕШЕІТБЕвса свадасісвЕс СЕІЕсСіДЕра ВБЕСРЕТЕБаАї СОБІ НЕ ЗрЕсрашріЕ ай саБсЕрЕТЕс аБТКсрвЕус СЕЗЕсСівацв вавсксввав СІ ссЕТЕВа вет за паарссаштв шСІВІВСЇЇ сесарастас їВІатраЗеІ вЕрІсавЕшса вЕстссвЕЕВ аа сакшжеасівв заївнаїсЕБ сЕВтВісВії ссіїсгацщ є БЕК сівсваїсвЕ тай варіїтїазав всавБЕрішВс таїтяссЕдів Басзавісва сзартастяс стаїзіврад - яШЕБЕШЕІТБЕвса свадасісвЕс СЕІЕсСіДЕра ВБЕСРЕТЕБаАї СОБІ НЕ ЗрЕсрашріЕ ай саБсЕрЕТЕс аБТКсрвЕус СЕЗЕсСівацв вавсксввав СІ ссЕТЕВа вет за паарссаштв шСІВІВСЇЇ сесарастас їВІатраЗеІ вЕрІсавЕшса вЕстссвЕЕВ аа сакшжеасівв заївнаїсЕБ сЕВтВісВії ссіїсгацщ є БЕК сівсваїсвЕ тай варіїтїазав всавБЕрішВс таїтяссЕдів Басзавісва сзартастяс стаїзіврад - я
ТЕСТ Ссс ТЕКС СЕса врасВсавСС шТвЕТастТатЄ БТЕСТСЕВІс ЗсассТвстЕ БЕЗЕ вЕаЕвссаБсІ ЕШЕТІТЕстїВ ТБрЕрЕВсав БЕСасссїдЕ брак вЕїЇвІС БіссвЕзрЕВ щаTEST Ссс ТЕКС Сеса врасВсавSS швЕТастаТЕ BTESTSEVIS ЗсассТвсте БЕЗ веаЕвссаБси ШЕХИТЕстев TBrЕРЕВsav BEСасссидЕ lack веІІВС BissvezREV scha
ТБЕТБЕБСЕВБІіЕ каЕЗавідЕС сЕСасТвшар плаараБЕТТв сСіБСІТІЕва дааБЕлдЕві У дтншсвсітТЕ звазциваввЕ срсвашКсств ЕлдЕЗав хІ6 «ЕїВВ з «тії са «дійах ЕТ «213» Штучна ПюслідовністьTBETBEBSEVBIiE kaEZaviDES sesasTvshar plaaraBETTVv sSiBSITIEva daaBELDEVi In dtnshsvsitTE zvaztsivavve srsvashKsstv EldeZav hI6 "EiVV with "tiy sa "diyah ET "213" Artifical Pursequency
ЕВшХ «223» Другий Пеліпептидний Ланцюг ПАДЕТ-й «щих 3ЭВшХ "223" Second Pepipeptide Chain PADET-th "shchih 3
Вер Бве уві Беї їВгоЗій бек Рго Ав обБес їв; Аза Уді зЗеб оїви Біш ї В та 15Ver Bwe in Bei yVgoZiy bek Rgo Av obBes yiv; Aza Udi zZeb oivy Bish y B and 15
Зі Абе о аї ТБКОМеЖ Зек о сує і ек Бек Зек Бій бЕК івц Єву) дев о бЕЄ т 5 ЗВZ Abe o ai TBKOMeZ Zek o suye i ek Bek Zek Bii beK ivts Eve) dev o bEE t 5 ZV
Бі Ап піп іх йоа ТУукК їер оТВг Тк Бу Зіп бів із Бге ЗЕ бів а ссBi Ap pip ih yoa TUukK yer oTVg Tk Bu Zip biv iz Bge ZE biv a ss
РБго Бгоа іух ігр ів Тів Туг їгр біз бек ТНг о ДрЕ біб Зекозіу чдіRBgo Bgoa iuh ihr iv Tiv Tug igr biz bek TNg o DrE bib Zekoziu chdi
Б 5 БеB 5 Be
Рго ар дев Ре зве Бі беб о віу Зак бЕУ Те дер Бе твг їв тТБе та 85 яRgo ar dev Re zve Bi beb o viu Zak bEU Te der Be tvg yiv tTBe ta 85 i
ІТ бек бег оівгз біз 3із біс Ар отві дів Уві Тк Туг Су БІ Ддех ва ск 5IT back beg oivgz biz 3iz bis Ar otvi div Uvi Tk Tug Su BI Ddeh va sk 5
Азр їшжк зве о Тук Рг ТК БТ Бе пі бів Бі Трої Ево БІВ Бі їде 155 18 їз піт бі щі Бек піз бі сіу щі бів Уві сій о іго Уві БІ ЕК 115 іа 5Azr yishzhk zve o Tuk Rg TK BT Be pi biv Bi Troi Evo BIV Bi ide 155 18 iz pit bi schi Bek piz bi siu schi biv Uvi siy o igo Uvi BI EK 115 ia 5
ЗіУу віт ші ім Уві зі Бо Сіу пі бек о іви АгЕ ігц бек о Сух дів ї5а8 ії їіZiUu vit shi im Uvi zi Bo Siu pi bek o ivy AgE igc bek o Suh div i5a8 iii iii
ЗЕ Зек спіу РНе ТВг о ББе зер о ТВ о Тек Аїа МеЕї йно ТКко Уві др Біл їі145 ї558 і ЕВZE Zek spiu RNe TVg o BBe zer o TV o Tek Aia MeEi ino TKko Uvi dr Bil ii145 і558 i EV
Вів Бго бі іш ШЕ фівц біс тТгр о уУді бі гр 118 дгш о Бег оічв тЖК ї55 ї7а ї125 дп оА5п тує Віз Тс оТук тТуг Ата Аз о бБег Уві іх Ав дгЕ ре Те 188 ії: ї5-аViv Bho bi ish SHE fivc bis tTgr o uUdi bi gr 118 dgsh o Beg oichv tZHK і55 і7a і125 dp oA5p tuye Viz Ts oTuk tTug Ata Az o bBeg Uvi ih Av dgE re Te 188 ii: і5-а
Ії бек йгЕ врахо бБЕгоі 5 Аа бвгоїєр Тугб ів біз Меї йза ек 155 288 ша їви іу« Твге бін й5о Тпгодів баі ТУгБ КУБ Су Мі Дкш Ні ЗІУ девIi bek yGE vraho bBEgoi 5 Aa bvgoier Tugb iv biz Mei yza ek 155 288 sha yivy iu« Tvge bin y5o Tpgodiv bai TUgB KUB Su Mi Dksh Ni ZIU dev
І 2і15 еВAnd 2 and 15 eV
РБе БІ Аа бек тТуг Уві Бег їгр Бйе діа ТУє їкробіюж Біп біу тпгRBe BI Aa bek tTug Uvi Beg igr Bye dia TUe ikrobiuzh Bip biu tpg
ТЕ Ко 255 а ів оУаЕ тТвг Уві бек бек БбіУу Бі їух бі БіУ біб іу5 Уді йБа дія 285 з5 ша іероічз Зі іув Мві Азія Діз іец бе Біб їх Уві дДіз діз ін ух зкя вУВTE Ko 255 a iv oUaE tTvg Uvi bek bek BbiUu Bi iuh bi BiU bib iu5 Udi yBa diya 285 z5 sha ieroichz Zi iuv Mvi Asia Diz iets be Bib ikh Uvi dDiz diz in uh zkya vUVV
Сі; ів Жаї Аїз дів ів іу5 БіSi; iv Zhai Aiz div iv iu5 Bi
ТВ ва «вів» 4 «іх щи сах ДНК «ліїх Штучна ПосліданністіхThe TV "led" 4 of them, the DNA of the Artificial Consecutives
Ех «223» Молекула Нуклеїнової Кислоти Кодуюча Другий Поліпептидняив Ланцюг ПАНТ-й «а 8Ex "223" Nucleic Acid Molecule Encoding the Second Polypeptide Chain PANT-th "a 8
БасТЖЕсЕТяВ гдасясаБІС ССстТЕВТадї СТДЕСсСЕіра БІСТЕЕБЕВа яшсЕбЕТЕВї Ба вівІсїїдса вравсСтссса віІсаствств звасаєсвсаз сїісаравниав сіабствасе ВаBasTJEsetyaV gdasyasaBIS SSstTEVTadi STDESsSEira BISTEEBEVa yashEbetEVi Ba vivIsiidsa vravsStsssa viIsastvstv zvasayesvsaz siisaravnyav siabstvase Va
ТЕШІВссавс вЕВаВссВЕБв СІдЕСсссКї ЗвастшсїшВа КОТ НІЄЕЕдС ТТСссВсКЗЕЕ ї155 вавіствЕвсв КЕсссввсвВв зії сЗрсвБС ЗБСЕрсарОв Стаса БаВТТЄ ТВсксІвага зда вВІТтстаЕтс ЄрсвЕрІсда ррБасЕСВрІЄ Етстастахх шІсляравтва сівБсярдствВї За сКстасВІжї ТоЕшссаррЕ пессаарстрв Басаставак баБЕсБЕваїс СЕКС ЕДСЕвВ ЗБ реЕсдарЕтТнК врсїврікра вБІСіБЕБрБса БЕСІЇвЕБІсс аБсССіБдавр БісссіваЕВ ааТЕШІВссавс вЕВаВссВЕБв СІдЕСсссКї ЗвастшсїшВа КОТ НІЄЕЕдС ТТСссВсКЗЕЕ ї155 вавіствЕвсв КЕсссввсвВв зії сЗрсвБС ЗБСЕрсарОв Стаса БаВТТЄ ТВсксІвага зда вВІТтстаЕтс ЄрсвЕрІсда ррБасЕСВрІЄ Етстастахх шІсляравтва сівБсярдствВї За сКстасВІжї ТоЕшссаррЕ пессаарстрв Басаставак баБЕсБЕваїс СЕКС ЕДСЕвВ ЗБ реЕсдарЕтТнК врсїврікра вБІСіБЕБрБса БЕСІЇвЕБІсс аБсССіБдавр БісссіваЕВ аа
Ес сствїв садсстсівв Вфітсассієс: азвшсасаївсн сізівваїїв рЕсссвссав 855Es sstvyv sadsstsivv Vfitsassies: azvshsasaivsn sizivvaiiv rEsssvssav 855
БСТССЗБЕЕБВ ЗЕБВЕСТЕБа ЕТЕЕБВТТЕЕВ ЗЕЕВТсавиї ссавеЄвВсЗа сваіївЗІвга аа вссІвсїасв сервсістаї рааревізва їїсвосвістї свасаватра сТісвзараве Баш їсастджяВЕс ТЕСаацїнвЗа сСВЗЕссСтТвЕааа вссІдашЕВсВ свЕСссЕІвБТа СЕВСсТвЕТЕТЕ Ба вевсасваїв астісввдсва ТіСттТасетв ТСТЕрестЕв стівІтїрвдд асвсввваєя «аБСТССЗБЕЕБВ ЗЕБВЕСТЕБа ЕТЕЕБВТТЕЕВ ЗЕЕВТсавиї ссавеЄвВсЗа сваіївЗІвга аа вссІвсїасв сервсістаї рааревізва їїсвосвістї свасаватра сТісвзараве Баш їсастджяВЕс ТЕСаацїнвЗа сСВЗЕссСтТвЕааа вссІдашЕВсВ свЕСссЕІвБТа СЕВСсТвЕТЕТЕ Ба вевсасваїв астісввдсва ТіСттТасетв ТСТЕрестЕв стівІтїрвдд асвсввваєя «а
СівЕсЕастЕ КЕТІ Тссдн ЗрЕаТЕТЕЕс вЕТЕБаВаЗЕ ГЕБССЕсВІїЇ дадЕсЗЕЗав ТВSIVESEASTE KATI Tssdn ZREATETEES VETEBAVAZE HEBSSESVIIY DadEsSEZAV TV
ВІТВСТЕСЯї тТразагавза врісвссріва сіїзавваза аврісвсавс сстрааавав ваHello
«гів 5 «211 ЗБЕ «2125 РЕТ «8135 Штечна Послідовність яд» «23 Першими Паопліпептидний Ланцює ПАКТ-В «Вих 5"giv 5 "211 ZBE "2125 RET "8135 Shchechna Sequence of poison" "23 First Polypeptide Chains PAKT-B "Ex 5
Вев її біз іє ївгобБій Зеєб Рго пів Кіз Мі Бек бів Бек о Бгао 515 ї 5 їй ї5Vev her biz ie yivgobBij Zeeb Rgo piv Kiz Mi Bek biv Bek o Bgao 515 i 5 her i5
Ззіц ік: уві Тбг о Меє ТБгоСу5 деЕ дів Бек БЗег озек Удь бег тук МЕЄZzits ik: in Tbg o Mee TBgoSu5 deE div Bek BZeg ozek Ud beg tuk MEEE
За 5 ЗВFor 5 ZV
Веп ігр отУг Біб бів бух Зег обі ТпгоЗегб Бго гУ5 вгЕ о їгв 11іе тує з 8 5 пр б Бек оіу5 Уві дів Зег обі Уві РКО туго ДгЕ ББе 5Бег Бі вк ко: 5 ва іч заакосіу їБг оЗег Туб бек о іев ївБг Хі бек о Зеєб Меї біс; йівз бі ке 78 75 во ахр вів дів ТбгоТУг ТК Ск5 бів бів тро очЗЕК Зевс о йлй Бр ів ТР а ак тва бі Аза бі їпг ох ів) бів ів їі Бі зі бі Бег бі бі ї5а 15 за зві Бі бій Уаї Бі іву Уві Бі баг бі віз БЗів із ії 95 15 Го 315 іга 175 пі Аїа баг о Уві їіУу5 Фаі бек Су 1іУу5 ів бек Зі Тек таб вве т ї15а із іа ар о їУг ої Меї їіУу5 го Маї сш бБіп дів Бго бі бі Бі ів бів 145 ї5а 155 ТВ їв їїе піу дв І1е 112 Рго Баг АхпобіуУу із ТБг о ББе Тег йз5ап бівVep igr otUg Bib biv buh Zeg obi TpgoZegb Bgo gU5 vgE o ygv 11ie tuye z 8 5 pr b Bek oiu5 Uvid div Zeg obi Uvi RKO tugo DgE BBe 5Beg Bi vk ko: 5 va ich zaakosiu yBg ozeg Tub bek o iev yivBg Hi bek o Zeeb Mei bis; ivz bi ke 78 75 vo ahr viv div TbgoTUg TK Sk5 biv biv tro ochZEK Zeus o ily Br iv TR a aktva bi Aza bi ipg oh iv) biv iv ii Bi zi bi Beg bi bi i5a 15 za zvi Bi bii Uai Bi ivu Uvi Bi bag bi visa BZiv iz ii 95 15 Go 315 iga 175 pi Aia bag o Uvi iiUu5 Fai bek Su 1iUu5 iv bek Zi Tek tab vve t i15a iz ia ar o iUg oi Mei iiUu5 go Mai ssh bBip div Bgo bi bi Bi iv biv 145 і5a 155 TV iv ієе piu dv I1e 112 Rgo Bag AkhpobiuUu iz TBg o BBe Teg yz5ap biv
155 178 і75 ія Рпе іх Бі КЕ УВІ ТБГг Ті ТБ о Маї Або ге беб ТВ Бак отвг 158 іх ще155 178 i75 iya Rpe ih Bi KE UVI TBGg Ti TV o Mai Abo ge beb TV Bak otvg 158 ih more
Вів Тег Ме сіб ївв бе бБегоі в АгЕш его Біб дв тТвг дів уві тек 155 ва еВViv Tag Me sib ivv be bBegoi v AgEsh ego Bib dv tTvg div v tek 155 va eV
ТуУуг Су Дів йгш бек Ні іеб ів; йгЕ бів Зег о їв оБне дів Тує ТЕО гів зії М: сіу біп шіу тТвВгкКоїеб Уві ТК оУді Бек зек Бі Бі Сех біУу біб щіTuUug Su Div ygsh bek Ni ieb iv; ygE biv Zeg o iv oBne div Tuye TEO giv zii M: siu bip shiu tTvVgkKoieb Uvi TK oUdi Bek zek Bi Bi Seh biUu bib shchi
ТЕ ЕВ 235 у піз Мві Лів віз го зів ух Зі Уві іа Аїа ів біб іє пів УВЕ 255 Фа5 дів бів ів бі їх Зіц Уді Ат Азів ів: біз і 5 зав Іа «діва «лаз В «газ» ДНЕTE EV 235 u piz Mvi Liv viz go ziv uh Zi Uvi ia Aia iv bib ie piv UVE 255 Fa5 div biv iv bi ih Zits Udi At Aziv iv: biz i 5 zav Ia "diva "laz V "gaz" DNE
ТЕ о діток ем др пункт ер «Тіз Штечна ПосліДОВНІСТЬ «ДЕК «2233 Молекула Нуклеїнової Кислоти Кодеюча Перший Поліпенптиднний Язнцює ПАНТ-В «ща 5 шва ссввс тТрасссавтс Тссавсваїс вевІствсак сіссавреввВ раверісвс де вкісасствсв єзшссавтсс зантвріваарї ївсаїваввсї шрізссвроя паавісвеЕх 158 вссісссссв завезівБЕаї їівірасаса іссазавшірв СІТсСтТвЕравї ссстТінісвс іа їЕсарієвсв кІрреїствв сассісаїівс їстстїсасва ссарсвсвї шравасіваа МЕТЕ о діток ем др пункт ер «Тіз Штечна ПосліДОВНІСТЬ «ДЕК «2233 Молекула Нуклеїнової Кислоти Кодеюча Перший Поліпенптиднний Язнцює ПАНТ-В «ща 5 шва ссввс тТрасссавтс Тссавсваїс вевІствсак сіссавреввВ раверісвс де вкісасствсв єзшссавтсс зантвріваарї ївсаїваввсї шрізссвроя паавісвеЕх 158 вссісссссв завезівБЕаї їівірасаса іссазавшірв СІТсСтТвЕравї ссстТінісвс іа іEsarievsv kIrreistvv sassisaiivs іststіsasva ssarsvsvi sravasivaa ME
БаАТЕшСтТвЕссВ СТВІ їВсТЕ севасвиївр зщіЗЕТаВІс СЕСІСЯСЕТЇ СЕБКНсСіРЕВ за шствавсішв ЗЕСсіраВарЕ ЯБЕЕСЕЕВІСС ШЕСРЕСЕває БЕСВрЕТЕСся ЕСТЕБЕТЕІВЕ зваBaateshStTvessV STVI iVSTE sevasviivr zschZETAvis SESSISYESETI SEBKNSSIREV za shstvavsishv ZESSiraVARE YABEESEEVISS SHESRESevaye BESVreTESsya ESTEBETEIVE zva
ЇССЕБЕБсСТЕ засів ЗВБаа ЗСССЕдашКї сТСсБІБВаадЕ СБІСІТвсавз арссВшірЕс Зива ївсассьтсв савасІвсїа таієввЕїєв вісзевсварЕ сіссвБраса девзстТевБаВ ЗкYESSEBEBsSTE seeded ZVBaa ZSSEDashKi stTSsBIBVaade SBISITvsavz arssVshirEs Ziva ivsasstsv savasIvsia taiyevvEieyev viszevsvarE sissvBrasa devzstTevBaV Zk
ТЕБВісЕрсв збатїсВІсКку їїссВаВсдер россасісїся вставтсасав діставав ща вериїрвста їївссштТера свзавїсвавсв висаВствсСїЇ зівідсвеої пдвотосстк Бей сЕКІсТЕВаВш шізсавссв вісі ВСТсСЕВБСсас Вс ЕдЕ ВЕССЗрСІЕ резTEBVISErsv zabatisvisKku hersSVAVsder rossassisya vstvtsasav got scha veriirvsta hervssshTera svvasvsvv vysVstvsSie zydsveoi pdvotostk Bey seKistEvaVsh shizsavssv visi VSTsSEVBSsas Vs EE VESSZrSIE rez
ТЕТЕсСЕГВІї Бибрвасарев сгассстврів всвндівБіств стевасвиїтв сЕЕСсЕдігЕВ яTETESSEGVIi Bybrvasarev sgassstvrv vsvndivBistv stevasviitv seESsEdigEV i
БаЗЕТЕЕсСси сЗстЕБаКна ЕВЕЕТТЕСІ БСТСТЕвЕБЯна арЕВЕБІСсвС СБС Бва Те ававвававТсЕ савтустрва давав ща «лів «Віз ва «гід РЕ «зі3х ВтуУучна Послідовність «ах «2383» Доегия Попіпептидний Ланцюг БАВТ-8 каяяЗ 7BAZETEESSSY SZSTEBAKNA EVEETTESI BSTSTEVEBYANA AREVEBISsvS SBS Bva Te avavvavvavTse savtustrva shcha "liv "Viz va "gid RE "zi3x VtuUučnic Sequence "ah "2383" Doegia Popipeptide Chain BAVT-8 kayaZ 7
А5а БНе Уві Меї Твгобій 5Зегобго йо о бетг оіецз діа Уві бекБ ів осі 1 їх ІВ ІїA5a BNe Uvi Mei Tvgobiy 5Zegobgo yo o betg oiecz dia Uvi bekB iv osi 1 ih IV Ii
Сі: др Уві Тбг о Меї Зег осСе5 іт бек оБег СВ; Бек ій ів о д5в бек ща а ЗSi: dr Uvi Tbg o Mei Zeg osSe5 it bek oBeg SV; Bek iy iv o d5v bek shcha a Z
Зі хво обпів і Ам тТуб ів ТК ої тТУг бів бін і5 Бго бі Фів її В ЗкZ hvo obpiv and Am tTub iv TK oi tTUg biv bin i5 Bho bi Fiv her V Zk
Рга Рго їу5 ів іецш 112 ТУг їгробід дег Тр дк бів ек Бі УвіRga Rgo iu5 iv ietssh 112 TUg ygrobid deg Tr dk biv ek Bi Uvi
Рго во агЕ Бе бек Зі бег біб беб бі ТК др Бе Тбкг ів; ТвгRgo vo agE Be bek Zi beg bib beb bi TK dr Be Tbkg iv; Tvg
Уа ТВ аUa TV a
Ії бек Звг оівц бів бід біб д5р Уві Аїв Уві Тук ТУ Су пів дал я ска 5Ii bek Zvg oivts biv bid bib d5r Uvi Aiv Uvi Tuk TU Su piv dal i ska 5
Аза Лук бБеє Ту Бо ТУукБ ТБ РБе Бі Біб Бі ТБкоіУу5 ев Біб Ті тав 15 15 їжх5 ці піу бі Хек бі Бі бі бІУ Ар Ії іх іву бів пів 5егAza Luk bBee Tu Bo TUukB TB RBe Bi Bib Bi TBkoiUu5 ev Bib Ti tav 15 15 izhh5 tsi piu bi Hek bi Bi bi biu Ar Ii ih ivu biv piv 5eg
З іа і і віз біц івес; Аза Ага Бго Бі йіа Бек Уві їує МЕТ Зег ів іхZ ia i i viz bis ives; Aza Aga Bgo Bi yia Bek Uvi iyue MET Zeg iv ih
ЗВ І55 ї38ZV I55 i38
ТВЕ Берг обі тує Твг Бе Тог одгЕ Туг ТВг о Ввї Ніє ТгоБоУві веб бій 14 15 ї55 ТБTVE Berg vows TVG Be Tog odgE Tug TVg o Vvi Nie TgoBoUvi web battle 14 15 i55 TB
Аг овБго Біу Біп Бі із сіб їброїїв сі тує Іів доб Рро баг о дгв 185 ї78 їт5 біУу ТуУуг тг ойхп Тс а5ап бій Ух Ре оі5 Ар і та Ті о вгец ТКAg ovBgo Biu Bip Bi iz sib yibroiiv si tue Iiv dob Rro bag o dgv 185 i78 yt5 biUu TuUug tg oihp Ts a5ap bij Uh Re oi5 Ar i ta Ti o vgec TK
Ід 185 ічEid 185 ich
Тег да Бгух его его зве ТТ дія Тег Беї ЗЕ іев о бек бек ге ТК ї55 га ахTag da Bguh ego ego zve TT action Tag Bei ZE iev o bek bek ge TK y55 ha ah
Щек бі й5оробег Аїв Узі Ту ТУг без ів йгЕ ТУК Тубк дв дою НІChek bi y5orobeg Aiv Uzi Tu TUg bez iv yGE TUK Tubk dv doyu NO
ЗЕ ЗІБ ааZE ZIB aa
Тук їх Єву бер тую їга бі бБіп Біу ТБЕ ТОг ово Бк обаі зво бекTuk ih Eveu ber tuyu iga bi bBip Biu TBE TOg ovo Bk obai zvo bek
ЗУ МІ 5 тав сі бі СУБ БІР біу Зі у Уаї Аіз біз івео їує біш ух Уві діа гАБ зе ЇВZU MI 5 tav si bi SUB BIR biu Zi u Uai Aiz biz iveo yiue bis uh Uvi dia gAB ze ЯV
Від івгц і5 бій ех Уві біз діа їівєц іх Біб іує Уві діз Аз ї ви зва да ееFrom ivghts i5 bij eh Uvi biz dia yiviets ih Bib iue Uvi diz Az yi vy zva da ee
Її же ав «і» Ж «аіЕ Я; «81і2з ДНК «2і3» Втучна Послідовність аз «223» Молекула Нуклеїнової Хислоти Кодуюча ДоУугив Поліпептидняє Ланцебв ПВЕТ-В «аа» я ваЗсЯтсЕіІва їрВсасаріс ссстраїавЕї стІрфвесвіввВ дісідвбрвеЕря шБсдЕВіВВсї ЕС втвссїїрсз арарсїссса рісесівстр звасладекеав вісзразана статі їзHer av "i" Z "aiE I; "81i2z DNA "2i3" Fat Sequence az "223" Molecule of Nucleic Acid Encoding DoUgiv Polypeptide Lanzebv PVET-B "aa" i vaZSYatseIiva irVsasaris ssstraiaveEi styrfvesvivvV disidbrveEry shBsdeViVvsi ES vtvsshisrisszaravsssssa risesiv stastr zzasadesssa
ТЕЕтассздІ зЕВадесадв старе ссї вавстрсіра їгівівбдеро сіссвассаве ї5еTEETAsszdI zEVadesadv stare ssi vavstrsira igivivbdero sissvassave i5e
БВВЕСТЕБсЕ ТЕСССрасВЕ ВТС сРЕС ВроввсавсЕ БСасараттї сВссстТвВсВ жав ес зЕс їЕсапрІсва вЕЗссівРІЇ ЕТіБІАсіВї Бісврнаїва сСтасвиствії БЕ: кестасактї ксЕрСсашев вассзавстд влаайтавас всешсераїс ссср ка жЕСЕаїВІсвВ а8асірсВвжса БІСсарЕББІЇ ваастрЕКЗа вассІрЕЕвІ сСтсадірлав в. агетїбсствсв грвстіствв сівсВссстІ асівавеівсга сраїрсасів вЕтТазавсав наБВВЕСТЕБсЕ ТЕСССрасВЕ ВТС сРЕС ВроввсавсЕ БСасараттї сВссстТвВсВ жав ес зЕс їЕсапрІсва вЕЗссівРІЇ ЕТіБІАсіВї Бісврнаїва сСтасвиствії БЕ: кестасактї ксЕрСсашев вассзавстд влаайтавас всешсераїс ссср ка жЕСЕаїВІсвВ а8асірсВвжса БІСсарЕББІЇ ваастрЕКЗа вассІрЕЕвІ сСтсадірлав в. agetibsstvsv grvstistvv sivsVssstI asivaveivsga srairsasiv vEtTazavsav on
ЗБЕссСтвЕдВЕ аррбЕсстЕва аїрЕвіїреа їасаїтТавіс стТавссвівр їїзівставаї яеНа твсавессввда зЕжссвараа савешссвсв Ттірастаєза вгандатсстс свровсвисє ще ївсаївсавс ТЕВдоІВвсст Басаїсівад шВстстрсВЕ ЄСІБІЕВСів сЕсСаБраТаї ща їнїнаїЕвВіс РИСІ РІСТ ТЕСТ сБЕ ЕРСсаВрЕса стастКссвІ ВБЕСТКСТКЄ та дар ВЕбІс вЕсЕріІррдяава вЕсЕБссрвІа стІрдабивва варіївбство ЯтТтрЕсларау тва авевісвсгсв састтавкра ававееісргв ресстраввк ве я «дів» я «їз 355 «а125 РВЕ «2і3з ВтУчна ПослідовністьЗБЕссСтвЕдВЕ аррбЕсстЕва аїрЕвіїреа їасаїтТавіс стТавссвівр їїзівставаї яеНа твсавессввда зЕжссвараа савешссвсв Ттірастаєза вгандатсстс свровсвисє ще ївсаївсавс ТЕВдоІВвсст Басаїсівад шВстстрсВЕ ЄСІБІЕВСів сЕсСаБраТаї ща їнїнаїЕвВіс РИСІ РІСТ ТЕСТ сБЕ ЕРСсаВрЕса стастКссвІ ВБЕСТКСТКЄ та дар ВЕбІс вЕсЕріІррдяава вЕсЕБссрвІа стІрдабивва варіївбство ЯтТтрЕсларау тва авевісвсгсв састтавкра ававееісргв ресстраввк ве я «дів» я «їз 355 "a125 RVE "2i3z VTUchna Sequence
Іов «2235 СПІ23 х СОЗ Поліпептиднеи Ланцюг Дізтіла Що Має бльбумін Зв'взУючни Савт «аЯщх З ів Аза Уві Уві ТЕ обЗів Біб Бго 5егоіен ТК Уві бЗев Бго бі КІ ї ку Ів І5Iov "2235 SPI23 x SOZ Polypeptide Chains of the Body That Has Albumin Zv'vzUyuchni Savt "aYashchh Z iv Aza Uvi Uvi TE obZiv Bib Bho 5egoien TK Uvi bZev Bho bi KI i ku Iv I5
ТНг ові Тек оівб ТвВг о Суз йрш бегобек ТНг Обі дів УдЕ Твгб тр бекTNg ovi Tek oivb TvVg o Suz yrsh running back TNg Obid div UdE Tvgb tr back
КЯ Ж 35KYA Zh 35
ВкпоїУг біз бепоїгр Уві сіб обі УЗ БК Бі піп Аза Рго АБЕ щі за мок іец її біз бік ТМйг ойсолоіт5 АГЕ дід РКО ТгБОТНгЕ РКО Аїа АгЕ РБе ща ва 5VkpoiUg biz bepoigr Uvi sib obi UZ BK Bi pip Aza Rgo ABE shchi za mok iets her biz bik TMyg oisoloit5 AGE did RKO TgBOTNgE RKO Aia AgE RBe shcha va 5
Веб Бі Бек іеріви Зі Біб їх дія біз Ево їпе оті ТНК о Зіу діаWeb Bi Bek irivy Z Bib their action biz Evo ipe oti TNK o Ziu dia
Бе ха ть щеThere's more
Зі діва із Ав Бін йіз АхроїУук ТУг ее дів їіву Тра тТугб б ве в5а ща Зк їв тТго Уді Бе бік зі Біу Твг ож івец ТВк Уві ів Бі Біу біб їв 155 їїZ div iz Av Bin yiz AkhroiUuk TUg ee div yivu Tra tTugb b ve v5a scha Zk iv tTgo Udi Be bik zi Biu Tvg oz ivec TVk Uvi iv Bi Biu bib iv 155 her
Бі Звг оці» ді Бі Зі бій: Уві піп оіве Уді Зів Зег Бі Аїа Щи нев із Кк: іецр о тУ5 ух Рг бі дів Зег Уві іж5 Уві зЗвг осСж5 іуз вів Звг обіBi Zvg eyes" di Bi Zi bij: Uvi pip oive Udi Ziv Zeg Bi Aia Shchy nev from Kk: ietsr o tU5 uh Rg bi div Zeg Uvi izh5 Uvi zZvg osSzh5 iuz viv Zvg obi
І3а 135 148 тТЖже ТВг оББе тТвг ой ТУК ТК Меї Ух тТгпоУді йгє бій бів бро щі ї45 Еща ї5Е ї5а135 148
БІ БІ івбосжій ТК отів сі й5р тів їте Бго бек о й5й Бі Ява ТНК і155 ЕЯВ 175 тре ТУ о йча Бій оіе5 ве іє Бі Ан Уві Тбк оті ТБгб Уві 85ріт їїе 155 їіBI BI ivboszhiy TK otiv si y5r tiv yite Bgo bek o y5y Bi Java TNK i155 EYAV 175 tre TU o ycha Bii oie5 ve iie Bi An Uvi Tbk oti TBgb Uvi 85rit ijee 155 ii
Бог отВг Бегб Тег о йІжа ТУг МЕТ сів ев бег обер о їв; дев 5Зег ЗВ дзGod otVg Begb Teg o yIzha TUg MET siv ev beg ober o ate; dev 5Zeg ZV dz
МО га5 тТвг ойіа Уві Ту ТУуг Сез дів АгЕ бек о Ніз ів; ої во дгЕ 83а ве ТроMO ha5 tTvg oiia Uvi Tu TUug Sez div AgE bek o Niz iv; oi in dgE 83a ve Tro
ФІ 215 гаFI 215 ha
ТпЕ йід тує Тк оБІіУу зі» Бі Те о іев Уві ТК Уві Бегб бек БР щіTpE yid tuye Tk oBIiUu zi" Bi Te o iev Uvi TK Uvi Begb bek BR shchi
ЕВ 23 255 ЗецяEV 23 255 Zetsia
Ск БЕК шіу щі бін Уві дія дід ім обі Без Біб Маї біз Віз івSk BEK shiu shchi bin Uvi diya did im obi Bez Bib Mai biz Wiz iv
ЗЕ 58 Ккіку бі їФ5 Бі Уві дів дів ів БВ г е5 бів Уві Аї8 Віз во БІВ 15 ге зва УаZE 58 Kkiku bi yF5 Bi Uvi div div iv BV g e5 biv Uvi Ai8 Viz vo BIV 15 ge zva Ua
СІ БЕК ші Бег оівец Аіз Бі: АІВ гу5 Уді ів: дія ой дев азіш ів їв ща 285 боSI BEK shi Beg oivets Aiz Bi: AIV gu5 Udi iv: action oi dev azish iv iv shcha 285 bo
Ар оіУуз туго бі Уді зЗег дер о їУк туго іт й5п їв; її Ар о йзл дія ща а за іух баг йіз біс бі Уві їух Діаз їв тів й5о Зі Бі Его; Аїхв діаAr oiUuz tugo bi Udi zZeg der o iUk tugo it y5p ate; her Ar o yzl action shcha a for iuh bag yiz bis bi Uvi iuh Diaz yiv tiv y5o Zi Bi Ego; Aikhv dia
Ва 15 ЗІ5 з28 ін ого «1 зв «Ех Здаю «иїйлУ ДНЕ «3ї13» Втучна Послідовність «а «Ва3х Пролінуклесткд Кодуючнй С0Т23 х СВІ Полсіпелтидний Ланцюг ДіатілаВа 15 ЗИ5 з28 ого "1 зв "Эх Даю "иийлу Дне "3й13" Тучный Sequence "а "Ва3х Prolinuclastkd Coding C0Т23 х SVI Polsipeltide Chain Diatyl
Що Має дльбумін Зв'язуючий Сайт «вах ії саЕвстТЕтвв сТрвсігавєва вестісєвВсів вссвтвіссс свВррсвЕдаВс сТЕТЕВсссТЕ са всвідсараї ссарсасвев сесавтрасс всвістазсї ясвссавттв рЕїрсарсав 1283 ааврІсвЕдяс ВЕДСЗССЯАВЕ ББЕССТраїс ЕСРЕЕТасяВ асаваавЕбХ Сесії рЕВс і сестрдсасвні ТІТСтвЕравк їсСЕрдствирс Бразааессв сістивсїВаї їВссшпвров 2883 гавсесваре всеазадссвв ТВі аттЕЕ ссіствтввії атарсавтсї вівЕБТВІс зеЩо Має дльбумін Зв'язуючий Сайт «вах ії саЕвстТЕтвв сТрвсігавєва вестісєвВсів вссвтвіссс свВррсвЕдаВс сТЕТЕВсссТЕ са всвідсараї ссарсасвев сесавтрасс всвістазсї ясвссавттв рЕїрсарсав 1283 ааврІсвЕдяс ВЕДСЗССЯАВЕ ББЕССТраїс ЕСРЕЕТасяВ асаваавЕбХ Сесії рЕВс і сестрдсасвні ТІТСтвЕравк їсСЕрдствирс Бразааессв сістивсїВаї їВссшпвров 2883 гавсесваре всеазадссвв ТВі аттЕЕ ссіствтввії атарсавтсї вівЕБТВІс зе
ЕБЕЕНЕТЕЕсСа свазаствяс ТЕТЕСТЕЕБа ЕБЕВЕТЕваАї ССЕВСЕЕсвЕ аЕБСраєвте ЗБа савстшнівс авіссспио ссвЕсксваар ВвВАСсСсВрар сІсссшІдВва ДЕБЕТ ЕТСТТ ІВ зававшСсашів ЕсСтТасВссії свсвЕВсїас їзівісваві євесІсвивса рЕсіссВвЕВ аа гаршевстівс ваїреВтсвЕ СЕВТВІсСаК ссттссаВсЕ євесєсастТТ сізеватсвЕ в завдічіїтазав шсаррдотввс сїВітЗссвів сасзазтсва сазаревсівс скат рває аа стезЕсСтссС їЕсвсїстТва зБасВсавск віІстВстатТ вістрі вВоІвВСесТнСТЕ щеЕБЕЕНЕТЕЕсСа свазаствяс ТЕТЕСТЕЕБа ЕБЕВЕТЕваАї ССЕВСЕЕсвЕ аЕБСраєвте ЗБа савстшнівс авіссспио ссвЕсксваар ВвВАСсСсВрар сІсссшІдВва ДЕБЕТ ЕТСТТ ІВ зававшСсашів ЕсСтТасВссії свсвЕВсїас їзівісваві євесІсвивса рЕсіссВвЕВ аа гаршевстівс ваїреВтсвЕ СЕВТВІсСаК ссттссаВсЕ євесєсастТТ сізеватсвЕ в завдічіїтазав шсаррдотввс сїВітЗссвів сасзазтсва сазаревсівс скат рває аа стезЕсСтссС їЕсвсїстТва зБасВсавск віІстВстатТ вістрі вВоІвВСесТнСТЕ ще
ЗЕВЕССВЕСТ БЕТТІБСЕТА СТРЕРЕВСВЕ шЕсассстТрЕ СсазсавБеЕТс ССС ЕБВрЕВ тав їсТЕЕСЕБТЕ єЗЕаВвстТєвс сЕсВгтТвшар зазидвовіїв сСідССТТЕвЗ равесавеїтє тваZEVESSVEST BETTIBSETA STREREVSVE shEsasstTre SsazsavBeETs ССС EBВреВ tav истEEСEBTE jeZEaVvstТevs sEsVgtTvshar zazidvovieiv sSidSSTTEvZ ravesaveite tva
ЕсТШЕсаСтТрР вааашвкаеї сБсашесстТЕ гасагакрор шсЕББТСТСТ ЕЕСЄсаВНСЯ З завЕїрствв ставссрсва встрратяаа ГТВіврЕсвїва пшсрвсїяєїв сТавзвраассте ЗО атівасвасЕ гязавніссевс вшразашсвів зварсвскїКа тіБВіЕлааВЕ ЗгідБЕСсрРСС паESTSHEsaStTrR vaaashvkaei sBsashesstTE gasagakror shseEBBTSTST EESYEsaVNsya Z zaveirstvv stavsrsva vstratyaaa GTVivrEsviiva pshsrvsiayeiv stavzvraasste ZO ativasvasE gyazavnissevs vshrazashsviv zvarsvskiKa tiBViElaAVE ZgidBESSrRSS pa
СЕК пав «стгійз її сії 81 «ій Рв «213 Штучна Послідовність ау «223 КНО-СНЗ Домени Модибікованого Людського йнтитіла Б Області «ав» 11 дів го бін дів дів Бі Біб Бго бег Уві Бе їв не Бк Рго і хуSEC pav "stgiyz her sii 81 "ii Rv "213 Artificial Sequence au "223 KNO-SNZ Domains of Modified Human yntitil B Regions "av" 11 div go bin div div Bi Bib Bgo beg Uvi Be iv ne Bk Rgo and hu
З т Ів І5Z t Iv I5
РРО і бе БВг Єви Мет Бі Заг ойгдш ТОг о Бго Зіц Уві ТБ їх УвіRRO and be BVg Eva Met Bi Zag oigdsh TOg o Bgo Zits Uvi TB ich Uvi
Кк, 5 щеKk, 5 more
Чаї Маї й5о Уді его Ніх Бі: д5р Рг бію Уві їз ВБе й Тгр туєChai Mai y5o Udi ego Nih Bi: d5r Rg biyu Uvi iz VBe and Tgr tuye
ЕВ ва йEV va y
Уві 5 БіУ Уві піц Уві Ні дД5п Аів ух Те ух Рез дев Зін 1 ще 55 БаUvi 5 BiU Uvi pizza Uvi Ni dD5p Aiv uh Te uh Rez dev Zin 1 more 55 Ba
Біп Ту йхлп бек ТМг о тТуг одн Уві Уві бЗег Уві ів тВг уві ів Ні 25 та ще щеBeep Tu ykhlp bek TMg o tTug one Uvi Uvi bZeg Uvi iv tVg uv iv No 25 and more
Зіп Аза їкроієв Ахп зі і БІ Туб г Сух Еез Уві Бек й5п і Ук за 5Zip Aza ikroiev Ahp with and BI Tub g Suh Eez Uvi Bek y5p and Uk for 5
Від ів бга бів Бго ї1і2е біб їх ТВБ Кт бег ої: Аїв 55 пі бівFrom iv bga biv Bgo i1i2e bib ih TVB Kt beg oi: Aiv 55 pi biv
Іва 155 118Iva 155,118
БРго ге біз Бгбо бів Уві Бук ТК обер о бго бро бек все щі зів Мет 115 іа І25BRgo ge biz Bgbo biv Uvi Buk TK ober o bgo bro bek vse shchi ziv Met 115 ia I25
ТВгБ ог Взп бій: Уді Зек ої): Баг бу» біз Уві їУух БІ РНе Тут РгоTVgB og Vzp bij: Udi Zek oyi): Bag bu» biz Uvi iUuh BI RNe Tut Rgo
ІА ІЗ ї158IA IZ 158
Зег ой їів дів Уді Зі тебозів бег о Ахп ові пів Вб Бі дп дяZeg oi iiv div Udi Zi teboziv beg o Ahp ovi piv Vb Bi dp dya
Іде 155 і ІБЕ тує Кує Тк ОТвг оБго Рко ЗУаї ген йха 5ег д5р пі бек РБе не івц 1855 ЕТ 75Ide 155 and IBE tuye Kuye Tk OTvg oBho Rko ZUai gen yha 5eg d5r pi bek RBe ne ivts 1855 ET 75
Уві 5Зег іє: іез тТпаг о Ууді р У Звг обгш ТК Зів бів Бі Ахп о УвіUvi 5Zeg ie: iez tTpag o Uudi r U Zvg obgsh TK Ziv biv Bi Ahp o Uvi
Івя їв івIvy ate ivy
НЕ бек Кз бек Мі МЕЖ Ні біб Дів іо Ніз доп дрЕ Тує ТК обБівNE bek Kz bek Mi MEZH Ni bib Div io Niz dop drE Tuye TK obBiv
ІБ 2 За іу бек їм Бже ем ве Рго зв г ух «їх 15 єт1ї» Бі «тій ДНК «ті3з Штучна Послідовність «зах «333з Молекула НуУуклеїнової Кислоти Кодуюча Пептид 1 З СНО їі СНІIB 2 Za iu bek im Bzhe em ve Rgo zg uh "their 15 et1i" Bi "ti DNA "ti3z Artificial Sequence "zah "333z NuUucleic Acid Molecule Coding Peptide 1 Z SHO i SNI
Бешщени Івшб Ес області «ща 12 касавзастс авсасвївсос вВссєЕБІіЕсСсСса шовІстіЕВЗЕ ССЕСЕБЕЕвЕ ЗВССрІСЛЕВС У тЕсестстІссС сссгававсс сзавевсаеєс стсвевдвіст сссЕвВсссс тТЕВдЕїсВосВ іще їЕСЕТЕЕЇрдЕ ївБ БЕБІ сСсасраднає ссірадвіса ввріїсваастїв візсвїіввВо їн вЕСЕТЕЄВЕЕ їЕсатТаатЕСс сзаваВсавар сеВсЕрЕВрЕ ВавоВвиОВсВа саЕСЯСЕТВС щаБешщени Івшб Ес області «ща 12 касавзастс авсасвївсос вВссєЕБІіЕсСсСса шовІстіЕВЗЕ ССЕСЕБЕЕвЕ ЗВССрІСЛЕВС У тЕсестстІссС сссгававсс сзавевсаеєс стсвевдвіст сссЕвВсссс тТЕВдЕїсВосВ іще їЕСЕТЕЕЇрдЕ ївБ БЕБІ сСсасраднає ссірадвіса ввріїсваастїв візсвїіввВо їн вЕСЕТЕЄВЕЕ їЕсатТаатЕСс сзаваВсавар сеВсЕрЕВрЕ ВавоВвиОВсВа саЕСЯСЕТВС ща
СЕТЕТЕБІСЗ БСЕіСссІсВвС сер Сстргвс саввасїврІ ївравіквсва сеВвріясаде ще їЕсаВевІСЇ седасвадис сетсссарег сссаїссвва азассвІістїс сададссада заSETETEBISZ BSEiSssisIsVvS ser Sstrgvs savvasivri yivravikvsva seVvriyasade yEsaVEVISI sedassvadis setsssareg sssaissvva azassvIistis sadadssada for
Б 2 5 БЕ» а жЖЕВвсСВЕсСсСсс рававссвсВ ївізсасс сів сКаї сссвЕЕЗЕва БаТБассТаВЕ чий шо: Е Е ББАВ як ЕВББОБЕЗ ВБЯЕ щ звассвевІса дІстТшвВеЕїТв сгрЕсарісвав шЕСТЕСТВТс ССВЕСЕВСВХ СЕССКТБЕВЕ аа іїБЕБЕЕВВавса сібврсарІсЄ рсвевасвас свВсвараксв свсстссєсвХ вотбреВстсу ее дасввЕКіссу ЇсСтісстїсвї садсвароїс ВвссрТдЕВсВЗ врадсареЕтв дІВрСавБеЕв ще васвтсттст сатестссро свтссатдар встствровсвз вссвЕствовВс соевраавВЕс евБ 2 5 БЕ» а жЖЕВвсСВЕсСсСсс рававссвсВ ївізсасс сів сКаї сссвЕЕЗЕва БаТБассТаВЕ чий шо: Е Е ББАВ як ЕВББОБЕЗ ВБЯЕ щ звассвевІса дІстТшвВеЕїТв сгрЕсарісвав шЕСТЕСТВТс ССВЕСЕВСВХ СЕССКТБЕВЕ аа іїБЕБЕЕВВавса сібврсарІсЄ рсвевасвас свВсвараксв свсстссєсвХ вотбреВстсу ее дасввЕКіссу ЇсСтісстїсвї садсвароїс ВвссрТдЕВсВЗ врадсареЕтв дІВрСавБеЕв ще васвтсттст сатестссро свтссатдар встствровсвз вссвЕствовВс соевраавВЕс Ev
СІсСІсссїві СсіссЕвЕт За а БІSISSISSIVI SSISSEVET Za a BI
Е ЕВE EV
«215У 13 «1ї5 БІВ «12» РЕТ «-8і13х Штучна Послідовність"215U 13 "1i5 BIV "12" RET "-8i13x Artificial Sequence
ОСЕВВУASSESSMENT
«23» Переки Поліпептидний Ланцюг ВВЕТ-А екс берсія З Ковструкт «ща» 153"23" Perky Polypeptide Chain VVET-A ex version Z Kovstrukt "shcha" 153
Ах вве Уві Мет прозі беб Бго бо5о бЗег оі2гр; діа Уві зЗебоїівги бі ї 5 ІВ іїAh vve Uvi Met prose beb Bho bo5o bZeg oi2gr; dia Uvi zZeboiivgy bi i 5 IV ii
Бій йгЕ Уві ТК Мет бек Су ЕУе БЕК Зег СЕ; Берг о іец їв Доба бат га 5 ВЕК зі ака біз іув5 дп тТУК ім ТВг ге БУЄ біб Бін іу5 Рг щу бів з В акFight ygE Uvi TK Met bek Su EUe BEK Zeg SE; Berg o iets ate Doba bat ha 5 CENTURY with aka biz iuv5 dp tTUK im TVg ge BUYE bib Bin iu5 Rg schu biv with V ak
Рко Рг гУу5 іев о ієц 118 ТубБ їкродів бег ТїВК АгЕ Бі Бег щі Уві ща 55 вRko Rg gUu5 iev o iets 118 TubB ikrodiv beg TiVK AgE Bi Beg shchi Uvi shcha 55 in
Бго А5р о АгЕ БВе Бек зі бБег озіу бБеє бі ТВг оА5в о Бре Тс їв теBgo A5r o AgE BVe Bek z bBeg oziu bBeye bi TVg oA5v o Bre Ts ate te
Б У 75 ща їі бег о бегоівр бів діз біс все Уві Аїа ді ТУР Буг їх щі деп ща ах бор Тк бе Тук Бра ТУує Твг оББе слі бій Біб ТЕ озіу5 їв Бір Т1 ваз 185 їв іу5 бік Бі бі бек шБіУу біу БІ піУ біз таі зі ів Уві Сію вв її5 іа ЕлB U 75 shcha ii beg o begoivr biv diz bis vse Uvi Aia di TUR Bug ih shchi dep shcha ah bor Tk be Tuk Bra TUue Tvg oBBe sli bij Bib TE oziu5 iv Bir T1 vaz 185 iv iu5 bik Bi bi bek shBiUu biu BI piU biz tai z iv Uvi Siyu vv her5 ia El
ЗзіУу пі бБіу ів Уві Зіп Бко зі пі беб о іец; дБ ів зЗегоСуя Дів 135 ї8аZziUu pi bBiu iv Uvi Zip Bko zi pi beb o iets; dB iv zZegoSuya Div 135 i8a
Вата бег обі Бе те о ББе бек Те о Тує АтТа Неї Яха то Уві Ак обів ї45 іа і5а ІБVata beg obi Be te o BBe bek Te o Tuye AtTa Nei Yaha to Uvi Ak obiv i45 ia i5a IB
Вів Рг бі іуз Бі із Сі: Тїгр о уаі Бі дгрЕ Ті дер оБЕг ої ТЖК ї155 ІТ 135 йхп оба ук ВЕш ї1Вг оїУЄ Тут Ака АзооЗеб Уві ї5 Вр дгфЕ Ре тТвгViv Rg bi iuz Bi iz Si: Tigr o wai Bi dgrE Ti der oBEg oi TZHK i155 IT 135 ykhp oba uk VEsh i1Vg oiUE Tut Aka AzooZeb Uvi i5 Vr dgfE Re tTvg
ІїВВ ІБ ККУ її бЗег Абе дор йо баг 15 Ах бак оіву Тук ву біб Меї йЗзв бек 155 ша а їжи їух Твг біб ар о ТикК віз Маї Тк Туг Су Уві Агж Ні б5іу ведIiVV IB KKU her bZeg Abe dor yo bag 15 Ah bak oivu Tuk vu bib Meii yZzv bek 155 sha a eat iuh Tvg bib ar o TiKK viz Mai Tk Tug Su Uvi Agzh Ni b5iu ved
ЗВ ІБ т28ZV IB t28
Ре іу дп обег тк Уві Звгоїгр о бНе Аіз тує Тго о БІуУ Бі обі тегRe iu dp obeg tk Uvi Zvgoigr o bNe Aiz tuye Tho o BIuU Bi obi tag
Ми: Мк: тав їв; фаї ТБг о Уді Бек зЗег бі СЕУ У» БІ Бі зі біб Уві їв йізWe: Mk: tav ate; fai TBg o Udi Bek zZeg bi SEU U» BI Bi zi bib Uvi yiv yiz
Ба 5 їец бів їУу5 Бір; Уві Дід ія во бів ї5 Бі: Уві Ата ІЗ гер обі дав За УаBa 5 yeets beat iUu5 Bir; Uvi Did iya vo biv i5 Bi: Uvi Ata IZ ger obi gave Za Ua
Їх бін Уві Віа йіа івги Біб і -е5 пі Біб Бі» й5рої ех Тр о Нія ТвTheir bin Uvi Via yia ivgy Bib i -e5 pi Bib Bi» y5roi ek Tr o Nia Tv
КБ зви 28KB Zvy 28
У: РКО Бго СУу5 бро віз Рез біз віз ів бік бі Рг Бек Уві ББе ша 255 За їв: Ве Рга Рго ух Рко із 5 ТК ів Меї Ті его дгБ їВг Нга за5 З16 ЗІ5 ЗВIn: RKO Bho SUu5 bro vis Rez bis vis iv bik bi Rg Bek Uvi BBe sha 255 Za iv: Ve Rga Rgo uh Rko iz 5 TK iv Mei Ti ego dgB yVg Nga za5 З16 ЗИ5 ЗВ
Зі: Маї Тнг Су» Уаї Уві Уві й5р Уві 5ег НЕіх б5Зів Ар Рез бів Маї 325 З з35 їу5 Ре дсп То тує Уві хв Зі Уві бі: Чаї Ні5 йхмй дів губ ТЕZ: Mai Tng Su» Uai Uvi Uvi y5r Uvi 5eg NEih b5Ziv Ar Rez biv Mai 325 Z zz35 iu5 Re dsp To tuye Uvi hv Z Uvi bi: Chai Ni5 ykhmy div gub TE
За зах за їУух Рго агв біс біц ців Тут Ав о Явк БВК о тує деЕш Уві Уві бек ді за зва ЗБЕFor zach za iUuh Rgo agv bis bis tsiv Tut Av o Yavk BVK o tuye deEsh Uvi Uvi bek di za zva ZBE
Кен ТВг УВІ із. Ні Бій бор їкроіви доп Бі із бів тТук Гу Сух аа ЗУБ заKen TVg UVI from. No Fight bor ikroivy dop Bi iz biv tTuk Gu Suh aa ZUB za
ЇУ5 Уві Бег дхи і У5 ів ів Бго бів Рго Ті пів і БТг о бів Зевк 85 За 55 «В іїх5 бів їУ5 СЕУ бів РБго дев бів Бра сій Уві ТУР ТВРБ ов га РКО а Со ї5 аг ой пін бій Мет їБг ої Вхв біп Уві бЗег їв Тс ос Уу5 ви Уді ре аа аа іЇу5 щі Рів о Туг Рго бвегод5о Кі дія чаї Біб Тер бів его й5ип Бі 485 ве -5ІU5 Uvi Beg dy and U5 iv iv Bgo biv Rgo Ti piv and BTg o biv Zevk 85 Za 55 "V iih5 biv iU5 SEU biv RBgo dev biv Bra siy Uvi TUR TVRB ov ha RKO a So і5 ag oy pin bij Met іBg oi Vhv bip Uvi bZeg yiv Ts os Uu5 vy Udi re aa aa iYu5 shchi Riv o Tug Rgo bvegod5o Ki deya chai Bib Ter biv ego y5ip Bi 485 ve -5
Сів Рко біз айви о б5ап ТїУг оі5 ТВг о ївпеб о Рго Без Ві іес д5р бек 85 аа Б й і ве Бе Ре іви Тк оБег ог ея ів те ові Яр і 5вг ойгрЕ ТБ а ат 5 яв сіп бів бі Абл о Уаї Еве бег Суз ЗекоуУаі Меї Ніб біб Вів їв Ні5Siv Rko biz quive o b5ap TiUg oi5 TVg o ivpeb o Rgo Bez Vi ies d5r bek 85 aa B y i ve Be Re ivy Tk oBeg og eya iv te ovi Yar i 5vg oygrE TB a at 5 yav sip biv bi Abl o Uai Eve beg Suz ZekouUai Mei Nib bib Viv ate Ni5
АБ КЕ ааAB KE aa
Ап оНів Тк о ТВе бів ї5 бер овен бегоівен о бег Рро бі іхAp oNiv Tk o TVe biv i5 ber ram begoiven o beg Rro bi ih
ВЕНА Бах БІВ «тіше ії «еїї І1538 «Вії ДН «213» ШтеУчна Послідовність «2 «й23» Молекула Нуклеїнової Кислоти Кодуюча Пердзий Поліпелтидний Ланцюк ПаАВТ-5 макс Версія 1 Канструкт «ав» 4VENA Bach BIV "tishe ii "eiii I1538 "Viii DN "213" Protein Sequence "2 "y23" Encoding Nucleic Acid Molecule Perdziy Polypeltide Chain PaAVT-5 max Version 1 Construct "av" 4
ВАСІ ТсБІКАа Траса саБІКС ТССТБЕТаБІ СІРЕССЕЇТКа БІСТЕББББа КЕСЕЕЕТЕВКХ Ба асшІстїроа впавсіссса вісавствсїв зазсарсреаза вісавазева стВістТрас 123 їЕЕІВсКкашс орадеЕссоВвЕв СсзЕсссоКу зазвсівсїіс:а їсївіЕвБЕнс фіссвссвЕЕ і158VASI TsBIKAa Trasa sABIX TSSTBETaBI SIRESSEITka BISTEBBBBA KESEEEETEVKH Ba asshIstiroa vpavsisssa visavsvsev zazsarsreaza visavazeva stVistTras 123 iEEIVsKKashs oradeEssoVvev SszEsssoKu zazvsivsiis:a essyviEvBEns ivs15
ШВВІСЄТЕБСЕ ЄпсссвЕВслЕ ВЕТСаЕСРтЕС ЗЕСшБЕаБсЕ шоВвсаваїїї свссстраєав ваШвВИСЕТЕБСЕ ЕпсссвЕВСЛЕ ВЕТсаЕСРТЕС ЗЕСшБЕаБСЕ шоВвсаваиии svssstraeaav va
ВЕЕЕсСетавтє їрсвршссва сеВсвЕвису віІріаствії вісвравтїва сСівсарств ЗО ксстасаик ГСЕБССВЕБЕ Евшсснавсів ваваставає ЕВЕБСЕБаТо СЕБСБЕСБЕВ БаVEEEsSetavtye irsvrshssva seVsveEvisu viIriastvii visvravtiva sSivsarstv ZO ksstasaik GSEBSSVEBE Evshssnavsiv vavastavaye EVEBSEBaTo SEBSBESBEV Ba
БЕСЕВБЕТЕС ВЕСТЕЕТЕДа дІСтвБЕвЕЗ БЕСІЕввІСсс ВЕССІЕЕВЕЕ ЕТСССтЕВЕВ ЯBESEVBETES VESTEETEDa dISTvBEveZ BESIEVvISss VESSIEEEVEE ETSSStEVEV I
КТЄТСЄТЕТЕ сарсстТстТРЕ аттсвссІїс врсасвївсв статрааттв врІссвссав ака шСТСсяБЕЕВ ВБББЕСтТЕсВ ЕТСЕЕСіББЗ ВЕБЗісябЕтї соваБІВсСяВ савстяТЕсВ всKTYETSYETETE sarsstTstTRE attsvssIis vrsasvyivsv statraattv vrIssvssav aka shSTSsyaBEEV VBBBESTTEsV ETSEESiBBZ WEBzisyabEti sovaBIVsSyaV savstyaTESV vs
ВССТВСТаТЕ ССЕВСТСТвЕ вваревізеа тІсассвІстТ садваезеабсв стгааававас Бозі їісвсїнівїіїє тТрсзавідаа сарссїравза вІсрарсаса сеЕсІрІвіа їіасівівів еВ зЕВсВІЄЕТВ ВСТТСЕШсСВа ІТТ ВІНівЕ ТСТТЕБТТТв СТІВІТЕЕВЕ ЗСЗЕЕВЕасВ ЕВ стІвЕКсаств КТС ТтссвЕ дроаідїввс бсісвзсвав ївБЕссвоІвВсї сеВЕбаларав тяВССТВСТаТЕ ССЕВСТСТвЕ вваревізеа тІсассвІстТ садваезеабсв стгааававас Бозі їісвсїнівїіїє тТрсзавідаа сарссїравза вІсрарсаса сеЕсІрІвіа їіасівівів еВ зЕВсВІЄЕТВ ВСТТСЕШсСВа ІТТ ВІНівЕ ТСТТЕБТТТв СТІВІТЕЕВЕ ЗСЗЕЕВЕасВ ЕВ стІвЕКсаств КТС ТтссвЕ дроаідїввс бсісвзсвав ївБЕссвоІвВсї сеВЕбаларав тя
ЕБЕТЕСТЕСТТ ТГБЕЗЕВАЕдаА ЕЕХСЕСІрсВ сСІТБаВаЗЕБ ЗБЕБІСЕСВЕС СсстЕсВЕВаВ АВEBETESTESTT TGBEZEVAEdaA EEHSSESIRSV sSITbaVAZEB ZBEBISESVESS SsstEsVEVaV AV
ЕБЕСЕБСЕЕБЕ всававстсв сасвірссса ссртрдсссве сасстравис СсБСЕЕвсвЕЗ З нт свисї їТІстсіїссс сссввавссс варрастессс їсатїнатсіс соеррвІКосТ зва вавиТсВвІяї БОСБІрЕІЕві ЕБасвісяро сясваВЕарасс сіБВЕБІсСВа вІссавсТЕЕ 128 їВсЕКЕвВсСЕ ЕсЕірравві рсаїавівсс зарасвзвавс сесвЕвррарва всарівсаве Іа вЕСасЕЇВСЄ БІДЕТЕБТСсВЕ сЕБІСЄТеасІ ЕІЄсТВЕсСВОС ЗвЕВсТЕвсї наатТЕрезов 1149ЕБЕСЕБСЕЕБЕ всававстсв сасвірссса ссртрдсссве сасстравис СсБСЕЕвсвЕЗ З нт свисї їТІстсіїссс сссввавссс варрастессс їсатїнатсіс соеррвІКосТ зва вавиТсВвІяї БОСБІрЕІЕві ЕБасвісяро сясваВЕарасс сіБВЕБІсСВа вІссавсТЕЕ 128 їВсЕКЕвВсСЕ ЕсЕірравві рсаїавівсс зарасвзвавс сесвЕвррарва всарівсаве Іа вЕСасЕЇВСЄ БІДЕТЕБТСсВЕ сЕБІСЄТеасІ ЕІЄсТВЕсСВОС ЗвЕВсТЕвсї наатТЕрезов 1149
Баріасавші єкавивіскіс свакскваеаркс сісссарссс сксвісвавава звассвісїкк 13 вавЕсксаявас ЕБСВЕССССЕ яБНаАССВЯСаЕ БІШТаАСВоСИ їБсссссВІС ссвБЕваЕвВЕ 13585 автбвдвссвада ВвссвевІсвВЕ ССТЕТЕНтдс стветсваве БСЕТСтТавсс саворасвс Іа шСсЕТЕрВЕЇ рака сза тТрЕртарссв дарзасавії агадвватсвІ нЕСстТессЕТЕ їзБаріасавші єкавивіскіс свакскваеаркс сісссарссс сксвісвавава звассвісїкк 13 вавЕсксаявас ЕБСВЕССССЕ яБНаАССВЯСаЕ БІШТаАСВоСИ їБсссссВІС ссвБЕваЕвВЕ 13585 автбвдвссвада ВвссвевІсвВЕ ССТЕТЕНтдс стветсваве БСЕТСтТавсс саворасвс Іа шСсЕТЕрВЕЇ рака сза тТрЕртарссв дарзасавії агадвватсвІ нЕСстТессЕТЕ їз
ЕТвЕВІТсСв ВСЕВБСТСсСТ сТТсєТстТає зесзарсіса ссвіврасєва версаевівв їз4а кавсарбвва вВерІстІсІс атвстссвЕтв Зірсвіравв сІсСТЕсВвсза ссасівсасе І 5 ктавзанавсє їстссстріс їСссЕЕКізаз 1558 «зі 15 «211» 254 «вВ125 РЕТ «13» Штучна Люслідзвність «во «223» йругия Поліпептиднки Ланцюг ПАКТ-й зиБс Берсівя З Конструкт севах 15 біб вів Уві Уві тег озів Бі: Рг Зек о іео) ТБг Мі Бег Бго Бі бі 4 5 18 15ЕТвЕВІТсСв ВСЕВБСТСсСТ сТТсєТстТає зесзарсіса ссвіврасєва версаевівв їз4а кавсарбвва вВерІстІсІс атвстссвЕтв Зірсвіравв сІсСТЕсВвсза ссасівсасе І 5 ктавзанавсє їстссстріс їСссЕЕКізаз 1558 «зі 15 «211» 254 «вВ125 РЕТ «13» Штучна Люслідзвність «во «223» йругия Поліпептиднки Ланцюг ПАКТ-й зиБс Берсівя З Конструкт севах 15 bib viv Uvi Uvi tag oziv Bi: Rg Zek o ieo) TBg Mi Beg Bgo Bi bi 4 5 18 15
Те Жаї їпгсоі вм зве СУ ДгЕ ЗЕК зве Бе о БЕЄ бід УдЕ ТР ОТГ о бЕге ша жа ЗВ в«п ік Аів Ап ігроуві бів Бів іУу5 РКО біж зів діа Рг АгЕ біTe Zhai ipgsoi vm zve SU DgE ZEK zve Be o BEE bid Ude TR OTG o bege sha zha ZV v«p ik Aiv Ap igrouvi biv Biv iUu5 RKO bizh ziv dia Rg AgE bi
Ба ЕЕ 5 їев ї1ї2е 15 бі ТК об5поі єв йгр Аза го Тк; тб о Бго вів ре РБеBa EE 5 iev i1i2e 15 bi TK ob5poi ev ygr Aza go Tk; tb o Bho led re RBe
БЕ 55 ВЕ: ек бі 5ег оієец їв біУ БІ їух дів бів ев те Іі Тмге бі Аїз йб 7 т5 ва біб вів зів дхв біб біз д5р тує ТУК СУу5 дів ів тро о тТуг Бег деп ях Фа 5 ін Тгв Уві РБне Бі сім бік ТВгоїуз ієер ТВг о Жаї і) сі Щіу біBE 55 VE: ek bi 5eg oieec yiv biU BI yuh div biv ev te Ii Tmge bi Aiz yb 7 t5 wa bib viv ziv dhv bib biz d5r tuye TUK SUu5 div iv tro o tTug Beg dep yah Fa 5 in Tgv Uvi RBne Bi sim side TVgoiuz iyeer TVg o Zhai i) si Shchiu bi
Ве їв55 заVe ate 55 for
Бі звг зі Бі Бі щі бі; Уві бій ісем Уві зів бек пі Ді бі 115 іа І35 їз і5 і: Рго Бі дів Зег о Уді іух баї Звг ої жа іух Вів Звг щіЄBi zvg with Bi Bi schi bi; Uvi biy isem Uvi ziv bek pi Di bi 115 ia I35 iz i5 i: Rgo Bi div Zeg o Udi iuh bai Zvg oyi zha iuh Viv Zvg shchiE
ІЗ ї35 їдя тТук тТаг обве ТБг од5в ТУ ТугБ Мет іх тТевочУві йгЕ сів діва го щу їі45 ї155 ів ї5О бБіп бі іви біз Тр о їзе бі йзр 112 Ті Бго Зевс йов Бі Ав Те 1655 іУв Т75IZ i35 eating tTuk tTag obve TBg od5v TU TugB Met ih tTevochUvi yGE siv diva go shchu ii45 i155 iv i5O bBip bi ivy biz Tr o izebi yzr 112 Ti Bgo Zeus yov Bi Av Te 1655 iUv T75
Не Тук йди біп іїу5 Бне іу5 ЗІУ Агро ді ТК Ті тб охваі дров ехNo Tuk go beep iiu5 Bne iu5 ZIU Agro di TK Ti tb ohvai drov eh
ІВ І1655 щаIV I1655 shcha
Бек їВгобБегє ТВг о Віа ТУк Меї ЗІ ів Бек зЗвбоївн др бег біб дев їз5 раз яBek iVgobBege TVg o Via Tuk Mei ZI iv Bek zZvboyivn dr beg bib dev iz5 times i
Твк йАта Маї Туг Тук о Су5 Аїа кре бек Ні іви і2гн йгш Вів зве ТоTvk yAta Mai Tug Tuk o Su5 Aia kre bek Ni ivy i2gn ygsh Viv zve To
РУ 215 Ко,RU 215 Ko,
Рре діа тТук тер озіє бій бі їйг ої Маії ТБ о Уді Бегб бБеб Бі Б1УRre dia tTuk ter ozie bii ulih oi Maiii TV o Udi Begb bBeb Bi B1U
Мт ЗБ зав був біт пі БІ їУ5 Уві із діа ів іє бід Бус Уві Віз із їв та Ба 55 із Біш ух Уві Ата Аза ів їх іш ії у5 Маі Аіїв біз еп огує Бі и га УЗ тів її «ТЕМ КЕБ «212 ДНК «иі13» Штучна Песлідовність еІаих «ваїх Молекула Нуклеїнової Кнслоти Кодуюча Другий Поліпептидний Лачцюг ПАНТ-йMt ZB zav buly bit pi BI iU5 Uvi iz dia iv ie bid Bus Uvi Viz iz iv ta Ba 55 iz Bish uh Uvi Ata Aza iv ih ish ii u5 Mai Aiiv biz ep oguye Bi i ga UZ tiv her "TEM KEB "212 DNA "II13" Artificial Sequence of the Nucleic Acid Molecule Encoding the Second Polypeptide Chain PANT
Ікс Вевзсія 1 Конствукт «-«а50х ів сВЕвСТЕТеЕ сТЕВсІісаввБа восСтТтТсКасів ЗсССсЕЕЕТЕЄсЄ савЕсЕшаВс ТЕСТ 5а всвІБсавВТ ссарсвсввв сЕсартвВсс зсаїстТавст вгестевіІтр вБІЄсВЕсаЕ їла звавссаєвас аврсвссаве всвсстваїс вревртасва асавааавЕвІ сссствЕаКс їВа сстБсасЕНІ Ті сішравЕ ССТЕсСТЕвЕу вЕЗалаБЕССсЕ сСІСсвЕВБсСТаЄ ЄассЕБЕДСВ га гаврссЕввв еасеЕварссяв ТКасівіївї ВСТЄТВівЕї вівнсваїсІ штвЕррірвттс ЗаІкс Вевзсія 1 Конствукт «-«а50х ів сВЕвСТЕТеЕ сТЕВсІісаввБа восСтТтТсКасів ЗсССсЕЕЕТЕЄсЄ савЕсЕшаВс ТЕСТ 5а всвІБсавВТ ссарсвсввв сЕсартвВсс зсаїстТавст вгестевіІтр вБІЄсВЕсаЕ їла звавссаєвас аврсвссаве всвсстваїс вревртасва асавааавЕвІ сссствЕаКс їВа сстБсасЕНІ Ті сішравЕ ССТЕсСТЕвЕу вЕЗалаБЕССсЕ сСІСсвЕВБсСТаЄ ЄассЕБЕДСВ га гаврссЕввв еасеЕварссяв ТКасівіївї ВСТЄТВівЕї вівнсваїсІ штвЕррірвттс За
БЕЄБЕСЕБСВ саваастТЕас ТЕТЕСТЕЕБа ЕРЕБЕТЕБат ссЕЕСЕШСЕЕ ЗЕЕСЕВЕЕТЕ зва гавсїірвівс вніссврЕвс їсасстввав вазсссввас стііссвісва шБІЄїЇсїїв ад ваввссавтр БСІТВСсВссСтї свсаввосївс їзізіваврі всеїгаердсав вЕСТссарев ка саЕВЕВСІВв затрисїсвЕ скзіВЕсатї ссіїссавсЕ ЄБЕБЕСсВСТІЄ стасввіса 5 шхавіїТіваар БсарБЕТЕВІ їаКіНнсвБіВ васлаявссаз ссавсастнс тат аїврав вавБЕЄБЕСЕБСВ саваастТЕас ТЕТЕСТЕЕБа ЕРЕБЕТЕБат ссЕЕСЕШСЕЕ ЗЕЕСЕВЕЕТЕ зва гавсїірвівс вніссврЕвс їсасстввав вазсссввас стііссвісва шБІЄїЇсїїв ад ваввссавтр БСІТВСсВссСтї свсаввосївс їзізіваврі всеїгаердсав вЕСТссарев ка саЕВЕВСІВв затрисїсвЕ скзіВЕсатї ссіїссавсЕ ЄБЕБЕСсВСТІЄ стасввіса 5 шхавіїТіваар БсарБЕТЕВІ їаКіНнсвБіВ васлаявссаз ссавсастнс тат аїврав вав
ГТваЕСТсСК ХЕСрІЇСТса араївоврвсс ШКЕТасЄБІТ БСЕЕТСЕБТС ВСВССТЕсТЕ БЕ вЕВЕКСВЕСЇ ЕВТІїшсїТа тірсЕБЕЗВСсОорД ЕрСВСсСТКВЕ їБВсЗЕТВІС тІссссанев УаGTvaESTsSK HESriIISTsa arayivovrvss SHKETasEBIT BSEETSEBTS VSVSSTESTE BE VEVEXVESYI EVTiishsiTa tirsEBEZVSsOorD ErSVSsSTKVE iBVsZETVIS tIssssanev Ua
ТЕТЕЕСЕВтЕ Баававтвсс се стаствази барасеввіїс сІЕБСТЇТкаа Вваєваввтс "ва вссЕдсаКІїВа аррааааевї сесвроссїв ЗзазеВЕ отуTETEESEVte Baavavtvss se stastvazi barasevviis siEBSTITkaa Vvaevavvts "va vssEdsaKIiVa arraaaaevi sesvrossiv ZzazeVE otu
«зів 17 «Ех БЕ «185 РВК «813 Штучна Послідовність «еВ «Ра Перший Поліпептидний Ланцюг ПАНІ-й вУБс Версія 2 Конструкт «Зав: 17 й5воічУух ТвгоНів таб оСїУ5 Бго Рг Сух Ргро дів Рго бі: 8ї8 Авіа біу ї 5 КЗ її"ziv 17 "Ex BE "185 RVC "813 Artificial Sequence "eV "Ra First Polypeptide Chain PANI-y vUBs Version 2 Construct "Zav: 17 y5voichUuh TvgoNiv tab oSiU5 Bgo Rg Suh Rgro div Rgo bi: 8і8 Avia biu і 5 KZ her
Бі Рго Зевк о Уві Ре ів ББеє Бго Бк іє го із ав ОТ ви ВеBi Rgo Zevk o Uvi Re iv BBye Bgo Bk ie go iz av OT vi Ve
КО 5 ЗВKO 5 ZV
Іі баг Агро ТВг оРБго бі3іц Маї Тр оСуб5 Уві Уві Уві й5р Уві беб НІі5Ii bag Agro TVg oRBgo bi3its Mai Tr oSub5 Uvi Uvi Uvi y5r Uvi beb NIi5
Кукя виз Ах вів вв ге Біб Маї їе5 ББЕеєЄ Аза оїг тує Маі 5 бі Уві сів УвіKukya viz Ah viv vv ge Bib Mai ie5 BBEeeE Aza oig tuye Mai 5 bi Uvi siv Uvi
З5 БZ5 B
Ніз А5п о йзва і ТВгб огУ5 Рго дгрш Біб бін бБіп Тек бий Звк ота ТЖеNiz A5p o yzva and TVgb ogU5 Rgo dgrsh Bib bin bBip Tek biy Zvk ota TJe
ТУ т5 ваTU t5 va
Вгв Уві Уаі Зег Уві ів. Тіт Уві іви Ні ціп да Те ів б5п щі ях ве 5 ів бів ТубБ із Сух іт Маї бег Ап і вія ів Рго бів Рго тів та Іва їі бів гу Тег Іі Бег іх бів гує 5БіУ бій Рго АгЕ шій Бго бБіп Уді 115 іа ВVgv Uvi Uai Zeg Uvi iv. Tit Uvi ivy Ni cip da Te iv b5p shchi yah ve 5 iv biv TubB zi Sukh it Mai beg Ap i via iv Rgo biv Rgo tiv ta Iva yii biv gu Teg Ii Beg ih biv guye 5BiU biy Rgo AgE shiy Bgo bBip Udi 115 ia IN
Тук ТВг іє Бео Без Звг о йгрш ів біз Меї Трої йхв бів Уді ее 158 І35 їде ів) їв; о Сух5 ів Уві і5 Бі РЕ їук Бр Зв о Ав ІІ дІз Уві бід іч 155 155 їі.Tuk TVg ie Beo Bez Zvg o ygrsh iv biz Mei Troi yhv biv Udi ee 158 I35 ide iv) ate; o Suh5 iv Uvi i5 Bi RE iuk Br Zv o Av II dIz Uvi bid ich 155 155 ii.
ТР бів бБег деп обьу віз Бго о Бів Ахп дай Тук вує Тег о Тве о БгО Рг їБ5 ІВ 175TR biv bBeg dep obu viz Bgo o Biv Ahp dai Tuk vue Teg o Tve o BgO Rg yB5 IV 175
Уві ін Ах бек вй5р ді Зек Бе Бе іез туго бБег оїу5 іо ТВг УвіUvi in Ah bek vy5r di Zek Be Be iez tugo bBeg oiu5 io TVg Uvi
ІЗ їяЗ їнИЗ ияЗ ин
Ахроіу5 Бек Аг Тгробів біп бі Аб5п Уві Бе его Сух Бег Уві Мет їЗ5 2 5Ahroiu5 Bek Ag Tgrobiv bip bi Ab5p Uvi Be ego Suh Beg Uvi Met yZ5 2 5
Ні бів дів ев Ніз дев Ні ТК Те обів і 5 бар оівен о бЗег г ву дек а іх МК.Ni biv div ev Niz dev Ni TK Te obiv and 5 bar oiven o bZeg g vu dek a ih MK.
Рго БіУу іх бів Бгеа бегобек о бБег Бра Меї Біб; др Рее Уві Меб Тек 245 Кку а Фа віп о бЗег Рге баб о Бес о їв бів Уві бегоієез бі бів беш Уві ТК оМвуRgo BiUu ih biv Bgea begobek o bBeg Bra Mei Bib; dr Ree Uvi Meb Tek 245 Kku a Fa vip o bZeg Rge bab o Bes o iv biv Uvi begoieez bi biv besh Uvi TK oMvu
Ва 25 5And 25 5
ЕК оСея губ бек бек цій бегоівев іви ди БЗег о пі Вой баб ої ех ДалЕК осея губ бек бек цій бегоівев іві ди БЗег о пі Вой bab ой ех Дал
Мах зба увMach zba uv
Тук їз Твг ото о тТУг бів бБівБ іт5 Ре Бі Бій Рга Рго 55 івн о іг5 ях 258 яTuk iz Tvg oto o tTUg biv bBivB it5 Re Bi Bii Rga Rgo 55 ivn o ig5 yah 258 i
Ті Туг Тїгробіа 5ег ївгоАевБ бів бегобіу Узі Рго вв Абе Рбе бек г 255 ЗаTi Tug Tigrobia 5eg yivgoAevB biv begobiu Uzi Rgo vv Abe Rbe bek g 255 Za
Біт чек бі бек Бі ТвКг бе Бе Твг ої Те Ті Бек яве ої ви цівBit check bi back Bi TvKg be Be Tvg oi Te Ti Bek yave oi vy tsiv
ЕК зі ЗАВ дів біз Ах хаїі діа Маїф тує туго су Бі» доп йхв Тук бег о ТУук РКО 355 з 335EK with ZAV div biz Ah haii dia Maif tuye tugo su Bi» dop yhv Tuk beg o TUuk RKO 355 of 335
ТУук Так Бне пі бів бі тв Ух фе біб» 318 іУух Бі бі діву бвБ 48 ах за ші піт бі ші біб Уві хіп ів Уві біб его бі ші бі Їівш УвіTUuk Tak Bne pi biv bi tv Uh fe bib" 318 iUuh Bi bi divu bvB 48 ah za shi pit bi shi bib Uvi hip iv Uvi bib ego bi shi bi Yiivsh Uvi
ЗБ зба За віп Рго Бі бі Бек їв дробів бег оСух Дів дів Бек бі Ре теZB zba Za vip Rgo Bi bi Bek ate fractions beg osukh Div div Bek bi Re te
БЕ зу зBE zu z
Ре бек Твг отук Аза МеЖ дяв о їго о Щаї дгв біл Аіа г Бі зу 1 щЕ5 5 ха де їв осів їга Уві бі ЯгЕ Ті йгБ о бегб іу5 ТУг о дб5ап йха ТУ АвБа Тг 455 ча ФІRe bek Tvg otuk Aza MeZ dyav o him o Shchai dgv bil Aia g Bi zu 1 shE5 5 ha de yiv osiv yga Uvi bi YagE Ti ygB o begb iu5 TUg o db5ap yha TU AvBa Tg 455 cha FI
ТУуг Ту йіз дер дек Уві із дБ АгЕ РВЕ Тег Ті бег Агр Ар Яхо ой І ааTUug Tu yiz der dek Uvi iz dB AgE RVE Tag Ti beg Agr Ar Yaho oi I aa
Бег о іу5 йхкп Бек Їец туго і2ев Бі Меї Ахи бег ов їх5 ТВг оби дев 35 яд АкBeg o iu5 yhkp Bek Yiets tugo i2ev Bi Mei Ahy beg ov ih5 TVg obi dev 35 yad Ak
Твт дів Маї Туг ТУг Су Уві дБ Ні бі дДхбв Рне бі Ай обек ТКTvt div Mai Tug Tug Su Uvi dB Ni bi dDhbv Rne bi Ai obek TK
ЯБе ак заYaBe ak for
Уві бек Тго РН Аза тТУук Тер обі пів біУу ТБ єв Уді Так Уді зекUvi bek Tho RN Aza tTUuk Ter obi half biUu TB ev Udi Tak Udi zek
ЗБЕ ча се щЕк екоZBE cha se shEk eco
Бег оБіу пШіу Сук ві біу Бі їує Маі Аква Аівз ї8ец іу5 під іув Уві 3855 ох ЗаBeg oBiu pShiu Suk vi biu Bi iyue Mai Akva Aivz i8ets iu5 pod iuv Uvi 3855 oh Za
Віз під їівгцп і бів і ді бВжІа Аза іш і«5 Бій іУ5 Уві Аза А1ЗViz under iivgcp and biv i di bVzhIa Aza ish i«5 Bii iU5 Uvi Aza A1Z
Зяш 5 ІВ їец тує Біц «155 18 «2іїУ 1545 «ігУ ДНК «213» Штучна Послідовність «35 «2335 Молекула Нуклеїнової Кислоти Кодуюча Первик Поліпептияник Ланцюг БАВТ-5 мус Версія 2 Конструкт «аввз ій швиЗзазВвоїс асвсеаїрІсс ассрієстса ровсстїЕВає соБСВЕрЕВВ ЗВссЕвОТсарТс ев тест сскК сосссазвазсс сСазеявсвсос сісвасЕВісТї сссврвасссос тради їЇсвІВ їі158Zyash 5 IV iets tuye Bits "155 18 "2iiU 1545 "igU DNA "213" Artificial Sequence "35 "2335 Nucleic Acid Molecule Coding Primer Polypeptianic Chain BAVT-5 mus Version 2 Construct "avvz iy shvyZzazVvois asvseairIss assriestsa skrovssstiEVot testassoBSVErEVV ZTVV sssssazvazss sSazeyavsvsos sisvasEVisti sssvrvassssos trady iYisvIV ii158
ТБСЕТЕБЕТЕВ ТЕЕВСЕТЕВЕ СіЗсбВарас ссіваБЕТса ВЕТІсаВсіБ ЕТВСВТрвах іа петгишірнарв сТесвІЗВ'вс саздвовазав ссоповесеандеЕ арсзрівсвав сашсвнсвТВЕ МозTBSETEBETEV TEEVSETEVE SiZsbVaras ssivaBETsa VETIsaVsiB ETVSVTrvah ia pethyshirnarv sTesvIZV'vs sazdvovazav ssopoveseandeE arszrivsvav sashsvnsvTVE Moz
СЕТЕСНЕТСВ БСЕТССТсСВС свІсСстТЕсСВс саррастврс сЕВатТЕнсСвВа нгдзЕТасяВЕ зе ів ваввісї ссавсаавис ссзсссввсс сссвісвана звассаїсіс свавшссавав БО. вИдЕСаЕСссс БваЕВассВга шЕІріявсвсс сІБсССсССак ССІСЕрЕЗЕЕЗ вас вассвад ага зассавЕтса БІКТБЕЇТРЕЇБ СКТЕБІСаВа ВЕСТ СТаТЕ ссВБсСБяИСВї СЕС вІвЕВЕ аа їбЕсварарся абЕБбЕсавсс ссвраагавс їлсзаввсса сростсссве всссвдвстс ща васЕШКТССТ КСтТІССЕтсСТа саБСВаБсТС ЗссрірЕася зрарсарЕтТЕ всавсавеєє 5 авсвтсттсї саїрсіссвБї раірсвіваш всїсівсасв вссвстасеВс бовесзадвех БиSETESNETSV BSETSSTsSVS svisSstTEsSVs sarrastvrs sevatTENsSvVa ngdzETAsyaVE ze iv vavvisi ssavsaavis ssssssvvss sssvisvana zvassaisis svavshssaav BO. вИдЕСаЕСссс БваЕВассВга шЕІріявсвсс сІБсССсССак ССІСЕрЕЗЕЕЗ вас вассвад ага зассавЕтса БІКТБЕЇТРЕЇБ СКТЕБІСаВа ВЕСТ СТаТЕ ссВБсСБяИСВї СЕС вІвЕВЕ аа їбЕсварарся абЕБбЕсавсс ссвраагавс їлсзаввсса сростсссве всссвдвстс ща васЕШКТССТ КСтТІССЕтсСТа саБСВаБсТС ЗссрірЕася зрарсарЕтТЕ всавсавеєє 5 авсвтсттсї саїрсіссвБї раірсвіваш всїсівсасв вссвстасеВс бовесзадвех Би
СЕКТ ССсКТвІ СЕСссЕребЗа зЕссссТКссС ЗвСтсССсостТа ївЕВВсВстТІ сЕТЕЗІваса КЕ сВЕТСТССЕш ВІОБІСТЕВЕС СЕТЕВБССТШ БЕЕРБаБІврЕ їрастВТЕїС тірсвадаес Уа тсесарієвс твсІваасав СЕБаваїісваЕ зававстаїтсє ГїввсстІррІв ссавгаравв Ве кевшЕСсвЕс сссотаВвВсу шстТЕВІсСтаї їрБЕКСІКСЄСВ ССаЕрЕВАТС ТЕБСЕКрЕСЄ Ук васяЕВсІса ЕСЕРІВРІвв сСаЕсовсасВ вВАТТіВссс Єсвовасстс тарісїссав щеСЕКТ ССсКТвІ СЕСссЕребЗа зЕссссТКссС ЗвСтсССсостТа ївЕВВсВстТІ сЕТЕЗІваса КЕ сВЕТСТССЕш ВІОБІСТЕВЕС СЕТЕВБССТШ БЕЕРБаБІврЕ їрастВТЕїС тірсвадаес Уа тсесарієвс твсІваасав СЕБаваїісваЕ зававстаїтсє ГїввсстІррІв ссавгаравв Ве кевшЕСсвЕс сссотаВвВсу шстТЕВІсСтаї їрБЕКСІКСЄСВ ССаЕрЕВАТС ТЕБСЕКрЕСЄ Ук васяЕВсІса ЕСЕРІВРІвв сСаЕсовсасВ вВАТТіВссс Єсвовасстс тарісїссав ще
ВІСЕВЗРЕВСЕ ТЕЕсСТсТЕта СтвітїЕїсяад заїваїсасв детвіссств Сас Еде Тада савЕЕБасса ВЕСсірЕВавї ТявавББаБЕС БЕЗТССЕВЕСВ БСБЕБаБЕСЕа БЕБЕСавБсте їЗ55VISEVZREVSE TEESSTsteta StvitiEisyaad zaivaisasv detvissstv Sas Ede Tada savEEBassa VESSirEVavi TyavavBBaBES BEZTSSEVESV BSBEBaBESEa BEBESavBste iZ55
ЕКЕЕВЕТСТр ЕвЕБасВСТХ врІссавсст БЕВБЕЕКССІ Теврастстс стІвТЕсавсЕ ї1158 їстрЕВІїсВз ссїТїсавсВс абасЕСТаТЕ ЗАТЕ ЕЇСС ЄССаББСЕСС ВЕРЕС ЕБЕ т2а сТЕвВЕтрЕвс ТтІЄєБавеває саврріскаве Тасвасзаїтї взікгавсста статвЕствах ї25о їсте ваврЕ ВвіВврастсяас саїсісвава пзідвіїсаа аравстсвсї вдтаїстосав Іа азівавсавсс їраваассва сшасасврІс ше Еасї ЄТЕТРарВсВ сЕБТаВТТє їзЕКЕЕВЕТСТр ЕвЕБасВСТХ врІссавсст БЕВБЕЕКССІ Теврастстс стІвТЕсавсЕ ї1158 їстрЕВІїсВз ссїТїсавсВс абасЕСТаТЕ ЗАТЕ ЕЇСС ЄССаББСЕСС ВЕРЕС ЕБЕ т2а сТЕвВЕтрЕвс ТтІЄєБавеває саврріскаве Тасвасзаїтї взікгавсста статвЕствах ї25о їсте ваврЕ ВвіВврастсяас саїсісвава пзідвіїсаа аравстсвсї вдтаїстосав Іа азівавсавсс їраваассва сшасасврІс ше Еасї ЄТЕТРарВсВ сЕБТаВТТє їз
БЕЕсСаВВІЄСЕТ Всі ЕКС СВІ ТЕрРЕВсарЕ ЕсВсасІдЕХ наст їз43 їсстЕБанЕВІ БІББссвштївв зазавнівріс всаоссїсване зразавттвс свБОТТТвава Іа даЕжасЕТСЕ СІрДСВІЇїВа Есавававвт рІВРСССїра ВаБваш ї545 китів» їЗ «ЩІ1ї» ду «гід РН «213» Штучна ПОСЛІДОВНІСТЬBEEsSaVVIESET All EKS SVI TERREVsaRE EsVsasIDEH nast iz43 issteEBanEVI BIBBssvshtivv zazawnivris vsaossisvane zrazavttvs svBOTTTtvava Ia daEjasETSE SirdSVIiiVa Esavavavvt rivRSSSira VaBvash i545 whales" from "SHI1i" du "guide" RNU "213
Соки ок:Juices ok:
«3235 Перший Поліпептидний Ланцюг Контрольного ПАТ ча» 15 дев Уві Уві Меї ТВгобБів ТВгоБго Бве его ів Бга Уві ек ів щіу ї 5 Ія ії5 дор піп діа 5ег Ії зег осСе5 дДгЕ о бег бек обід бЗегоівез Уві Нія баг а де 3 деп біт А5п ого їтК іш АкБш Тгроїуб їв Біп їу5 Рго Бі ія Баг 35 яв 45"3235 First Polypeptide Chain of the Control PAT cha" 15 dev Uvi Uvi Mei TVgobBiv TVgoBgo Bve ego iv Bga Uvi ek iv shchiu i 5 Iia ii5 dor pip dia 5eg Iii zeg osSe5 dDgE o beg back dinner bZegoivez Uvi Niya bag a de 3 dep bit A5p ogo itK ish AkBsh Tgroiub yiv Bip iu5 Rgo Bi iya Bag 35 yav 45
Рго із Уві ів їі Тур іє Уві бЕеєЄ дхп о йгЕ Бе бек бі Уді ге за В дав ВгЕ ВНе бЗег Бі бБег о бі Бер обі ТБг од5о вБе ТБгоієв ї95 1Rgo from Uvi iv ii Tur ie Uvi bEeeE dhp o yGE Be bek bi Udi ge za V dav VgE VNe bZeg Bi bBeg o bi Ber obi TBg od5o vBe TBgoiev i95 1
Уа т ва ---г йгЕБ Уві БІС: біз Бім дер ів піу Маї ТУугб Бе Су5 Бебг бів баг а ще паUa t wa ---g ygEB Uvi BIS: biz Bim der iv piu Mai TUugb Be Su5 Bebg biv bag a still pa
ТВе ніх Фаї Рго Тр отр овНе Бі бі бі ТБ о іїуз ів 53 їі 155 ща ї8а 115 сін Щі Зіу Бег Щі щіуУ бі ЗІ Зіз Уві бій іш Уві біб бек і її15 іа 195 бі Бі із Уві біп Рго бі БР бБеб їви брЕ ївц бЗег обСув Віз із 138 Ії5 ІаTVe nih Fai Rgo Tr otr ovNe Bi b b b TB o iiuz iv 53 ii 155 shcha i8a 115 syn Shchi Ziu Beg Shchi shchiuU bi ZI Ziz Uvi biy ish Uvi bib bek i yije15 ia 195 bi Bi iz Uvi bip Rho bi BR bBeb yvi brE evts bZeg obSuv Viz from 138 Ii5 Ia
Бек пі РБе Таг Ре дм ТВг оТУук діа Меї дл Тго Уві дра бів Аїз 155 155 і55 158Bek pi RBe Tag Re dm TVg oTUuk dia Mei dl Tho Uvi dra biv Aiz 155 155 i55 158
РО бІіУ їк5 БІ ген Бім Тер о Уві Атїа АбЕ 118 АгЕб бЗег офух Тук вп ї55 ЕТ 195RO bIiU ik5 BI gen Bim Ter o Uvi Atia AbE 118 AgEb bZeg ofuh Tuk vp y55 ET 195
Асп о тТУг дів ТК о їУР ТуУуб Аїа А5а бег Уві їх Ар дк о вББе Твг о тів ї5а їд5 їа ек БГЕ Ак йхр бек і у5 Ахп бек їв Тугк івгв Бій МеЄ дов бег ої ву ї55 зва В їУу Так о бів й5о ТВг о йіз Маії ТУук Тує Суз Уді АгЕ Ні5 Бі дп РБеAsp o tTUg div TK o yUR TuUub Aia A5a beg Uvi ih Ar dk o vBBe Tvg o tiv y5a yd5 ia ek BGE Ak yhr bek i y5 Ahp bek yiv Tugk ivgv Biy MeE dov bey oi vu y55 zva V yUu Tak o biv y5o TVg o yiz Maii TUuk Tuye Suz Udi AgE Ni5 Bi dp RBe
ІВ 25 ваIV 25 va
Зі б5п Бек БУГ Хві Бек Тгр обме діз Туг іга ді бій ЗА їВБг о ївуZ b5p Bek BUG Khvi Bek Tgr obme diz Tug iga di bij ZA iVBg o yiva
ІБ в 35 АХ чаї ТЕ Узі Зег озЗаг щі Бі хук Бі Бі БІ пів Уві біз Віз їв; 45 вай 55IB in 35 AH chai TE Uzi Zeg ozZag shchi Bi huk Bi Bi BI piv Uvi biz Viz ate; 45 and 55
Зів і5 бів Уві діз біз ів Біб їУу5 біб Уді ів діз ів» бій їух 2858 5 аZiv i5 biv Uvi diz biz iv Bib iUu5 bib Udi iv diz iv" bii yuuh 2858 5 a
Зіз Уві дів Віз ів піц ік ших «Ії» а «ії» ув «Тт12У РЕТ «2133 Штучна Пюслідоанність «БУ «223» Друг Попіпептидний Ланцюг Контрольного БВЕТ «ІН» ЗВZiz Uvi div Viz iv piz ik sich "Ii" and "ii" in "Tt12U RET "2133 Artificial Puslidoannost "BU "223" Friend Peptide Chain of Control BVET "IN" ZV
Зіп йід Уві ві Тнг піз бій Бго зер оїєр Тк Уві Зек Рго сїу Бі ії їх ІВ ї5Zip yid Uvi vi Tng piz bij Bho zer oyer Tk Uvi Zek Rgo siu Bi ii ih IV i5
Те уві те оівгу ТБ осу5 дев бек обеє ТВ Бі бід УВДЕ Те тТВвг о бек еВ ші БІ деп отУг дів Або тво Уві біб бій Гео Ре Бі бів йіз Рг АгсЕ Бі 35 В 5 їен; Тіе бі ву ТБг дай іс йгЕ Дія Рг Тр оїйр о Бго Аїва Аге ВБе я 23 ваг обі зЗвгоіву іви зі бі Ух бів вів їец їм Ті Те Зі дів 5 КЕ У5 да бів Аза біз вб5в бів дія ДВ оТук ТУуг Суб Аїа ів ТО отТук зве в5а ща 5 іец їгб5 Уді Ре біу пі бі ТТ ої 5 ів Те Уві ів зі Зі бі дав 185 118 бік зЗек Зі Бі біу пі Бі: Уві іуУу5 ів Ав ошіз Те Бі щі іу їза Ії іев Уаї бів Рго бі агави Рга Мет їі ів беє СУу5 Уді біз бек 15 їх ку іаTe uv te oivgu TB osu5 dev bek obee TV Bi bid UVDE Te tTVvg o bek eV shi BI dep otUg div Or tvo Uvi bib bij Geo Re Bi biv yiz Rg AgsE Bi 35 V 5 yen; Tie bi vu TBg dai is yGE Diya Rg Tr oiir o Bgo Aiva Age WBe i 23 vag obi zZvgoivu iva zi bi Uh biv viv iec im Ti Te Z div 5 KE U5 da biv Aza biz vb5v biv action DV oTuk TUug Sub Aia iv TO otTuk zve v5a shcha 5 iets igb5 Udi Re biu pi bi TT oi 5 iv Te Uvi iv zi Zi bi dav 185 118 bik zZek Zi Bi biu pi Bi: Uvi iuUu5 iv Av oshiz Te Bi schi iu iza Ii iev Uai biv Rgo bi agavy Rga Met ii iv bee SUu5 Udi biz bek 15 ih ku ia
ТВе твг о Ббе 5ег од5р тТук Тго Меї йб5ап Тег оУві бе бій Зек Рго Бім з35 ящ ї55 ІБ іч пі ву БІ: їгр Уві Аїва бів Ті дб Ахп ої Бе туго Дхв тує ії155 ІТ Тт5 сів таг отже Тег бегойбоо Бек Уві їе5 бі дгБ Ре ТК Тіз зве два ід 155 98TVe tvg o Bbe 5eg od5r tTuk Tgo Mei yb5ap Tag oUvi be bij Zek Rgo Bim z35 yash yi55 IB ich pi vu BI: igr Uvi Aiva biv Ti db Ahp oi Be tugo Dhv tuye ii155 IT Tt5 siv tag therefore Tag begoiboo Bek Uvi ie5 bi dB Re TK Tiz zve two id 155 98
В5в Ах Заг оіуУух его зЗег Уві ТУ о івн бів Мет йхп й ів АгЕ УдіV5v Ah Zag oiuUuh ego zZeg Uvi TU o ivn biv Met yhp iv iv AgE Udi
ІЗ зва 285 піс дв БЕХ піУ Бе Тук Бук Се Твгобіб бек Тек те Зі Меї давIZ zva 285 pis dv BEH piU Be Tuk Buk Se Tvgobib bek Tek te Zi Mei dav
МКЕсЯ 215 гаMKEsYA 215 ha
Тк тега ві БІБ БІ тве бек Уві тББоУаі ев бек бі Бі Сує біуTk tega vi BIB BI tve bek Uvi tBBoUai ev bek bi Bi Suye biu
ЗВ 235 тавZV 235 tav
СіУу Бі гу5 Маі бів із ів і бін іуз Уві 518 біз ге ГУух5 Біц ге БВ ша5 іже Уві йіз біз івь із Бі» іє Уві дів Дів ів і» БіSiUu Bi gu5 Mai biv iz iv i bin iuz Uvi 518 biz ge GUukh5 Bits ge BV sha5 izhe Uvi iz biz iv iz Bi" ie Uvi div Div iv i" Bi
Ба ВУ г «із гі «щіїв 118 еійх РТ «21і3з Штучна Пюслідовність се «223 Легкий Ланцюг СОЗ-Зв'язуючога Домена ПАКТ-А. ча» 21Ba VU g "iz gi "shchiev 118 eiiih RT "21i3z Artificial Pulse Sequence se "223 Light Chain of SOZ-Binding Domain of PACT-A. cha" 21
Біб Ат Уві Уді ївг обі бі: Ро Зег оїев ТК ові 5Беє го Щі с1у ї 5 ІЗ іхBib At Uvi Udi ivg obi bi: Ro Zeg oiev TK ovi 5Beye ho Shchi s1u i 5 Из их
Тнг о Уаії Твгоі во Те оСух5 дв бек заго ТК обі йів ді ТК о ТВКЕ ве та ТВ ЗВTng o Uaiii Tvgoi vo Te oSukh5 dv back zago TK obi iv di TK o TVKE ve and TV ZV
Вп отУуг Дів Аза оїгвр уві біп вів гу5 Рео біб зів Аза Рго АгЕЖ щуVp otUug Div Aza oigvr uv bip viv gu5 Reo bib ziv Aza Rgo AgЕЖ schu
З5 вк «вх ів; їїе Зі сі Тбг о йхп і АБ Дів бка тгб ТБ о Рго ДЕа др ББе па ва ек обБіу Заг оігць івц Зі» сіу ЕУу5 Віз віз іец о їБб гі Тв Бі діа ще ТВ та ваЗ5 вк «вх ив; ієе Z si Tbg o ykhp i AB Div bka tgb TB o Rgo DEa dr BBe pa wa ek obBiu Zag oigcs ivcs Zi» siu EUu5 Viz viz iets o iBb gi Tv Bi dia still TV ta va
Зі аів Бін Вр бів біз дБ о ТУк ТУг о Єуз бів їв о ТкКротїук Бек еп а СЯ 5 івм тКроуУяі Рее сі шіу біб ТЕ ог е5 ів БТ Уві івец БІту за 185 іт «ЕІ» 25 «жїїз 135 «кіз» РТ «2135 Штучна Послідовність са «823 Нажхми Ланцюг СО3-Зв'язуючага Домена ПАКТ-В. «ах 25 зів Уві біп оісо Уві бів зЗег о Зі щіу БІ ів: Уві Бій Бго щі іх ї Кі ІВ 15 звк ів о АДгвоівгу Бек їз Дів Аа бек о бі Бе Те ве о бег тк тую за 5 ЗВ ліз Меї йза треб о Уві агЕ біз Віз Бко бі іуз Зі і: Біб ТгБ УвіZ aiv Bin Vr biv biz dB o TUk TUg o Yeuz biv iv o TkKrotiuk Bek ep a SYA 5 ivm tKrouUyai Ree si shiu bib TE og e5 iv BT Uvi ivets BITu for 185 it "EI" 25 "zhiyiz 135 "kiz" RT " 2135 Artificial Sequence of "823 Nazhkhmy Chain of CO3-Binding Domain of PAKT-B. "ah 25 ziv Uvi bip oiso Uvi biv zZeg o Zi shchiu BI iv iv: Uvi Biy God shchi ih i Ki IV 15 zvk iv o ADgvoivgu Bek iz Div Aa bek o bi Be Te ve o beg tk tuyu za 5 ZV liz Mei yza treb o Uvi agE biz Wiz Bko bi iuz Zi i: Bib TgB Uvi
ЗіУ АгЕ Ге йгр Бек ої5 Буг Аа йсап Тег Аза їБг о тук ТУє Ава Або 55 Б ве Уві ух йхв АгЕ РнНе ТК Іфе его АгББЕ в5р о й5р бек Є у5 др бег 65 та 75 ще ев Тук іген бів Меї в5и Зег бен Бух ТР ОБЕС Аква ТВ о Аха Уві тує 5 ІсЕоя 5ZiU AgE Ge ygr Bek oi5 Bug Aa ysap Teg Aza yBg o tuk TUe Ava Abo 55 B ve Uvi uh ykhv AgE RnNe TK Ife ego AgBBE v5r o y5r bek Ye u5 dr beg 65 and 75 still ev Tuk igen biv Mei v5y Zeg ben Buch TR OBES Aqua TV o Aha Uvi tuye 5 IsEoya 5
Тук КСух Уві дгжш Ні щіу йзп Бе БіУ йзпобег о тТуг Чаї бег ТКр о Рве ха Ії ітTuk KSukh Uvi dzhsh Ni shchiu yzp Be BiU yzpobeg o tTug Chai beg TKr o Rve ha Ii it
Віз їшк їв Біб БІ Бі ТК їв Уві ТБг ові Звко5Зег 5 із І «їв 23 я21їз Б кій РЕ «213» Втучна Пюслідовність «лох 223 ДЕгкнн Данцюг КО3З- Зв'язуючого Довена ПАКТ-В аа» ВViz yishk yiv Bib BI Bi TK yiv Uvi TBg ovi Zvko5Zeg 5 iz I "yiv 23 i21iz B kiy RE "213" Vtuchna Pyusodlnost "loh 223 DEgknn Dantsyug KO3Z- Binding Doven PAKT-V aa" V
Вхр Їїе бів ів о ївгб бів бек РКО йів БІе КМеї 5ег йів Зеб о рго бу ії а ІВ ї5 губ Уві тТве Меї Тег о Сех дгБ іа Зег бБег Бег Уві Бег Тугб МЕЄ и Мк: заVhr Yyye biv iv o ivgb biv bek RKO iv Bie KMei 5eg iv Zeb o rgo bu ii a IV i5 gub Uvi tTve Mei Teg o Seh dgB ia Zeg bBeg Beg Uvi Beg Tugb MEYE i Mk: za
Зав їКкв оТУук бів бів їіУу5 бек БЗфу ТБгеойег Бго гу дгш о Тго о Тів Тугб ї5 45 45Zav iKkv oTUuk biv biv iiUu5 bek BZfu TBgeoyeg Bgo gu dgsh o Tgo o Tiv Tugb i5 45 45
Аха ТК баг оїух Уді Аз бБег Бі Уді Бко туго ЯбЕ ББе беб іє бек 5 за аAha TK bag oiuh Udi Az bBeg Bi Udi Bko tugo YabE BBe beb ie bek 5 for a
Зі бек йіУ тре бек о Туб бек їв ТБ ТІВ Зее овес МЕЖ 15 АР ші 5 У 5 щаZi bek yiU tre bek o Tub bek ate TV TIV Zee oves MEZH 15 AR shi 5 U 5 shcha
Ав Ат дів їБК оТук Тег Се Бі Бій Ткробег Зег дхй РКО ів отТвг яз за ЗаAv At div iBK oTuk Tag Se Bi Bii Tcrobeg Zeg dhy RKO iv otTvg yaz za Za
Бе іх Аіа Бі ївпг оїух гео іш гецз їух їв 15 «ВівВк ва «ІЩЕ ТЕЗ «2325 РЕТ «213з Штучна Песлідовність «ОВУ «23» Важким Ланцюг СОЗ-За"'язуючого Люмена ПДАЕТ-В «408 за йхв ЇТ2е їУ5 ів бів шій Бек БІ біз біц івоу йів АгЕ РгГО Піх дів ії 5 їв Ії бЕгоУві їе5 Меї его осСух іе5 ТБ обеєБ бі Ту ТР Бе твг одгд о тук о; 5 БІ:Be ih Aia Bi yivpg oiuh geo ish gecz yuh iv 15 "VivVk va "ISHE TEZ "2325 RET "213z Artificial Persistence "OVU "23" Heavy Chain of SOZ-Za"jasing Lumen PDAET-V "408 for ihv YIT2e iU5 iv biv Shy Bek BI biz bis ivou yiv AgE RgGO Pih div ii 5 iv Ii bEgoUvi ie5 Mei ego osSukh ie5 TB obeeB bi Tu TR Be tvg odgd o tuk o; 5 BI:
Те Ме Ні Тер оМаї гє5 біп Ас Рко Бі Біп пі івц Біз Тер отівє 35 2 З піб Тег Ті йхп о Ркоа Бек вге бЗіу ТЖБ ТК о б5ий ТУК дхк бів гу Не ви іч б5а і Віа ТБг ої ТБг о їВг од5о і Бег о бек его ЗВ Ава ТтТугTe Me Ni Ter oMai ge5 bip As Rko Bi Bip pi ivc Biz Ter otivye 35 2 Z pib Tag Ti yhp o Rkoa Bek vge bZiu TZHB TK o b5y TUK dhk biv gu Ne vi ich b5a i Via TBg oi TBg o iVg od5o i Beg o bek ego ZV Ava TtTug
Меї зів ів Зег оЗек ів ТВг оБег піч дов Бег вів Уві Туб ТУЄ Су ях а з із Агш ТуУук ТУг бер АБО Ні ТУук бух ім Ах» Туг Тев пі в біMei ziv iv Zeg ozek iv TVg obeg pich dov Beg viv Uvi Tub TUYE Su yah a z iz Agsh TuUuk TUg ber OR Ni TUuk buh im Ah» Tug Tev pi in bi
Ії ї85 116Ii i85 116
Тк о тВгоїев ТвАг о Уві зег бек 115 «їх 95 «11 113 «їх РТ «йіЗ» Штучна ПослідзавністьTk o tVgoiev TvAg o Uvi zeg back 115 "its 95 "11 113 "its RT "yiZ" Artificial Consistency
КВKV
«23» ДЛегжнй Ланцег СБІ23-Зн'язуючога домена ПАНТ-А каЯябх 35 дкв вве Уві Меї ІЗг оцпів зег гг Аа Зег оївгу Аза Уві БЗег їв о біуУ ї Е а Іх біз ЯгЕ Уві Твг оМеї бБег осбуб5 їз Бек 5ег бій Бег ів ів А5а о 5ег 2 5 ЕІ"23" ДЛегжный Ланцег СБИ23-Знязюючога дома PANT-A kaYayabh 35 dkv vve Uvi Mei IZg otspiv zeg gg Aa Zeg oivgu Aza Uvi BZeg yiv o biuU i E a Ih biz YaE Uvi Tvg oMei bBeg osbub5 iz Bek 5eg biy Beg iv iv A5a o 5eg 2 5 EI
Сі йхп Зіп о іух йхп тТкгоіви тТВе о тТгОо Туг Бій ців зуб Рг пф бів 35 В «5 го Бго їу5 ів ев фі Туг тТгройіз 5еєб ТБг АгЕ біз его Зі Уві 8 ко Ява АгЕ бе бек 51 бег Бі зЗвг біт ТВг дев о БвВе Тр оівц Тае 55 В та аSi yhp Zip o iuh yhp tTkgoivy tTVe o tTgOo Tug Biy civ zub Rg pf biv 35 V "5 go Bgo iu5 iv ev fi Tug tTgroyiz 5eeb TBg AgE biz ego Z Uvi 8 ko Java AgE be bek 51 beg Bi zZvg bit TVg dev o BvVe Tr oivts Tae 55 V and a
ІІїв бЗвго бен оіву бів За біб А5в о баї АтТа Уві ТУ Ту Гу Бів Ав ко я 5IIiv bZvgo ben oivu biv Za bib A5v o bai AtTa Uvi TU Tu Gu Biv Av ko i 5
Ар тек бек Туг Бго ТК ТВгб оББе зі бій бі ТВг ої Ух ів бів Тіє зва їв її85 іт «а В «ії ї13и «гій РЕТ «213» Штучна Послідовність ах «333» ВБажкай Ланцвшютє СБІЗ3-Зв'язуючаго Доменна ПАНТ-А «ОВ 28 бі: Уві біб ізо Уві зів дек бі із Біб їву їт5 фу Бгто бі діа ї 5 Та ІВArt tek back Tug Bgo TK TVgb obBe z bij bi TVg oi Uhiv biv Thie zva ev ihe85 it "a V "ii i13y "hii RET "213" Artificial Sequence ah "333" VBzhkai Lantsvshutie SBIZ3-Binding Domain PANT-A "OV 28 bi: Uvi bib iso Uvi ziv dec bi iz Bib yivu yt5 fu Bgto bi dia y 5 Ta IV
Мет Уві Гуз Уді бег КУуз 15 віз зв обі ТУг Те о Ббе ТВг о Яхро тує га Ж Б іт Мет іх їгБ Уві ге бів діа Рго біб біп біу ігр бів ТкБр о ті ї5 Би 5Met Uvi Guz Udi beg KUuz 15 viz zv obi TUg Te o Bbe TVg o Yahro tuye ha Zh B it Met ih ygB Uvi ge biv dia Rgo bib bib biu igr biv TkBr o ti iy5 Bi 5
Зі 5 118 Кі БгоО Зег Ахп Зі бів ТК РН о Тук взй бій іт5 Бе аз З із пі дгЕ Уді тйаг о Тіе ТК Уві й5и іух бБег ТигоБеє ТВБ АР ту г КЕ 75 ВеZ 5 118 Ki BgoO Zeg Ahp Z biv TK RN o Tuk vzy bij it5 Be az Z iz pi dgE Udi tyag o Tie TK Uvi y5y iuh bBeg TygoBeye TVB AR tu g KE 75 Ve
Мет Бін іви обеб бек Еву Ав вк цію вер Тнг о йів Уві тб о тУК гух в ща 5 13 ЯгЕ бек Ні їеу їву Аг Дід бегб Тев РБе Віа ТУуБ тев щі бівMet Bin ivy obeb bek Evu Av vk tsiu ver Tng o iv Uvi tb o tUK guh v shcha 5 13 YagE bek Ni ieu ivu Ag Did begb Tev RBe Via TUuB tev shchi biv
ЕЯКЗ їі155 118 ціх Твг оівц Уді їйЬк Уві Бек БЕКЭЯКЗ ии155 118 цих Твг оивц Уди улик Уви Бек БЕК
К15 128 «лів у «ії» З «під РТ «213» Штучна Послідовність ех «223» ДегккЯ Ланцюг СБІ23-Зв'язуючого Дожена ПАНТ-В «аз 2УK15 128 "left in "ii" Z "under RT "213" Artificial Sequence ex "223" DegkkYA Chain SBI23-Binding Dozen PANT-B "az 2U
Ав Рре тав Мет тївак Бій 5Зек Рге ва бег ої ве: йіз Уві бегоїіву БЩу ї З ІВ ЇхAv Rre tav Met tivak Biy 5Zek Rge va beg oyi ve: yiz Uvi begoiivu BSHchu i Z IV Their
Зі: ГЕ УаїЕ КТБг Мет ЗегоЄх Її 5 бер обегр біб бек їн іер; деп бег а 5 Б ш-іу вх бів іх й5а ТБ іє ТК о Тер оТуг Шіп бів і5 Рко Зі бів ї5 а 5Z: GE UaiE KTBg Met ZegoYeh Her 5 ber obegr bib bek yin ier; dep beg a 5 B sh-iu vh biv ih y5a TB ie TK o Ter oTug Ship biv i5 Rko Z biv i5 a 5
Бго бго їуз ів бен Іі Тук тїгройіз Бег То Аг бій зег о пбіу УвіBho bho yuuz iv ben Ii Tuk tigroyiz Beg To Ag biy zeg o pbiu Uvi
БВ 55 5BV 55 5
Гка й5р ге ге беєе біу бег Бі бег обі ТВг дез КББе Трої тк 55 КЕ а щеGka y5r ge ge beee biu beg Bi beg obi TVg des KBBe Troi tk 55 KE and more
Іі бек о зЗвгоівв ців Аіз бів а5р Узі бів Уві ТУ туго Се5 бів деп ща 5Ii bek o zZvgoivv tsiv Aiz beat a5r Uzi beat Uvi TU tugo Se5 beat dep shcha 5
Ар туго БЕК о Тук РКЄ ТЕг о ІБг РНе біб бів ЗІ Те оїУ5 ів бін ІїгArt tugo BEK o Tuk RKE TEg o IBg RNe bib biv ZI Te oiiU5 iv bin Iig
Іва 15 ЕВ іч «вій 28 «каіїв 158 вій ВКТ «313» Штучна Послідевність ве» «23» ВажиниЯ Ланцюг СБІЗЗ-Зв'язуючего домена ПАВІ-В «88 28 іп Уві біл івц Уві бів его бі біз Біб ву гу і5 Рг Шіу діз 3 5 ІВ їх цег Уві їз Уві бек ГУу5 15 діа его обі Туг фїйргроКБе То ЯЗ тук дя 25 КуIva 15 EV ich "vii 28 "kaiiv 158 vii VKT "313" Artificial Sequence ve" "23" Weight Chain of SBIZZ-Binding domain PAVI-B "88 28 ip Uvi bil ivc Uvi biv ego bi biz Bib vu gu i5 Rg Shiu diz 3 5 IV ih ceg Uvi iz Uvi bek GUu5 15 dia ego obi Tug fiirgroKBe To YAZ tuk dya 25 Ku
Ту МІ їф5 ТгБ Уві Ага сіп дів Бго бів ів Зі веб БВ пр оті ко Я5Tu MI yif5 TgB Uvi Aga sip div Bho biv iv Z web BV pr oti ko Ya5
Бі Яр Ті ті Бго бек б бі ія ТЕ Ре ТУг й" бій їт5 Бе ща 55 Бо іже Біб АкЕ Чаї ТБкг от1іе ТБ Уаї Ав іух Бег те зе ТВгоВбів тукBi Yar Ti ti Bgo bek b bi iya TE Re TUg y" bij it5 Be shcha 55 Bo izhe Bib AkE Chai TBkg ot1ie TB Uai Av iuh Beg te ze TVgoVbiv tuk
КЕ та щеKE and more
Меї піц ів его обек і ен дкв бег Біб йо ТК Аза Уві Тек Тук ух 5 а 55 дів дгЕ Зег Ніх ев іви дгв о Аїв бек Тео Ре Аїа Туг тТгбвбв обіу бів аа ї55 118 і Таб ів Мді твг о Уді бвег обБЕетг ї15 іа «18» 35 «ЗАЕх й 2135 БРВ «Віз» Штучна гпеослІДдОВНІСТЬ 248» «223» Лінкер 1 Поліпентид ай» 25Mei pizza iv ego obek i en dkw beg Bib yo TK Aza Uvi Tek Tuk uh 5 a 55 div dgE Zeg Nih ev ivy dgv o Aiv bek Theo Re Aia Tug tTgbvbv obiu biv aa і55 118 i Tab iv Mdi tvg o Udi bveg obBEetg і15 ia "18" 35 "ZAEkh y 2135 BRV "Viz" Artificial gpeoslIDIVITY 248" "223" Linker 1 Polypentide ai" 25
Зі щік жбіу Зег Бі Бі пі І 4 є чаї» За «ТЕ К «313» РЕТ «ЗІЗ» Штучна Посліденність «ВРХ «823» бінкеюв 2 Поліпептид «зах заZ schik zhbiu Zeg Bi Bi pi I 4 there are teas" Za "TE K "313" RET "PPE" Artificial Sequence "Cattle "823" binkeyuv 2 Polypeptide "zah za
Бі їУ у бі ві Бі ї 5 «тах ЗІ ч21ї» й «Із РНК «З135 Штучна Пенлідовність є23йУ «ги3» Лінкев З поліпептид ча» ЗЕ зіу щу БіуУу Баг 1 218» 33 «ай» 35 вав «їй» 33Bi iU in bi vi Bi i 5 "tah ZI h21i" y "From RNA "Z135 Artificial penlidity is 23yU "hy3" Link with polypeptide cha" ZE zyu schu BiuUu Bag 1 218" 33 "ai" 35 vav "yy" 33
«1» 5 «2125 РЕТ «13» Штучна Послідовність се «33 ДЛінкат й Пдязпаетт ках анкет З БеліпЕжития «й» З"1" 5 "2125 RET "13" Artificial Sequence se "33 DLink and Pdyazpaett kah questionnaires From BelipEzhitiya "and" From
Аів рРга Зег бек Бех Рго Мет Біб ї 5 стій за «її» 8 «12» КТ «213» Штучна ПослідовністьAiv rRga Zeg bek Beh Rgo Met Bib i 5 stand for "her" 8 "12" CT "213" Artificial Sequence
ЖJ
«23» Е-єпіральник Домен ченні за"23" E-epiralnik Domen chenny for
Сі Уаї іа дів ів Біб і5 Бівю Ущі 8із Ах ів бі уз піц Уві і 5 та 15Si Uai ia div iv Bib i5 Bivu Uschi 8iz Ah iv bi uz pizza Uvi i 5 and 15
Віз Ліз іє Бі: іх Біо Уві діа дів ев біб і у сеї 5 «сії» 8 «13» КТ «2і13» Штучна ПослідовністьWiz Lizie Bi: ih Bio Uvi dia div ev bib i u sei 5 "sii" 8 "13" CT "2i13" Artificial Sequence
Жах «23 к-єпіральний Домен «аа 5 іУ5 Уві із дів ів і5 біс іх щі із АБа івц і Бі Бу Уві 1 5 та 15Horror "23 k-epiral Domain "aa 5 iU5 Uvi from virgins i5 bis ich schi from ABa ivts and Bi Bu Uvi 1 5 and 15
Віз лів із іуу5 Бін їх Фаі Афа діа іен БУ 51 за й «тів ЗБ «її» ав «313» РТ «213» Штучна Послідовність я» «223 Переважний Альбумін-Зв'язуючиий Домен «Вих де їм Аїд бін дів 5 Уві 12» Аза Азлп йгв бі іво бер ов ув Туг біш я к їв І5Viz liv with iuu5 Bin ih Fai Afa dia ien BU 51 za y "tiv ZB "her" av "313" RT "213" Artificial Sequence i" "223 Predominant Albumin-Binding Domain "Vih de im Had bin div 5 Uvi 12" Aza Azlp ygv bi ivo ber ov uv Tug bish i k yev I5
Уді бек й5оО Тур тур іх вп ів Ті йо в5в дів іУу5 Зек Афа 515 а 25 ЗВUdi bek y5oO Tur tur ih vp iv Ti yo v5v div iUu5 Zek Afa 515 a 25 ZV
Зі Уві гУ5 Аїа Єв) Ті б5р Бін 112 ів АРа дів ів о бге 35 ща я «Іа» 5 115 ду «3125 РЕК «2135 Нощшо завівпх «ВаВх «гаї ВЕБ РЕВТЦКЕ «сва2в 1... 237 23» СНІ-СНЗ дожени Людської Б ОбластіZ Uvi gU5 Aia Yev) Ti b5r Bin 112 iv ARa div iv o bge 35 shcha i "Ia" 5 115 du "3125 REK "2135 Noschsho zavivph "VaVh "gai WEB REVTSKE "sva2v 1... 237 23" SNI-SNZ to the women of Lyudska B Oblast
Я» 8УI" 8U
Атїа Рго бів Віз та сІу біу Бго бЗеє Маї Ре іео Ре РгОо Бр і 1 5 ха І5Atia Rgo biv Viz ta siu biu Bho bZee Mai Re ieo Re RgOo Br i 1 5 ha I5
Рг ів й ТвКоЄви Ме БЕ бек Аге Тг о РКО бів Уві ПЕ сСух УВЕ а 25 ЗВRg iv and TvKoEvy Me BE bek Age Tg o RKO biv Uvi PE ssukh UVE a 25 ZV
Уві Уві д5в уУдії бек Ні біб взр Ре Біб Уві іх Ре да тео отуг 35 ща дБ чі Ахр біу Уаї Біб Уві Ні Ахв Аіз іух ТВгГ ої у5 Рео йгдш і 015 -Е 55 ве іп о ТуУуг о боп бек ТК о ТУуг ойгш Уві Мі бег Маї іви тік о Уві івн Ні 55 Уа т щаUvi Uvi d5v uUdiy bek Ni bib vzr Re Bib Uvi ih Re da teo otug 35 scha dB chi Ahr biu Uai Bib Uvi Ni Ahv Aiz iuh TVgG oi u5 Reo ygdsh i 015 -E 55 ve ip o TuUug o bop bek TK o TUug oigsh Uvi Mi beg Mai ivy tik o Uvi ivn Ni 55 Ua t shcha
Зіп й5р о їкороіви вн шіу іх Бін ТУг о фУє Суб іє Уві Зет АХА їі 5 як ак іа ге РгОо Аза Рго Ті біб бух тпг лів Зег оїу5 Віз Бу5 щі іпZip y5r o ikoroivy wn shiu ih Bin TUg o fUe Sub ie Uvi Zet AHA yi 5 jak ia ge RgOo Aza Rgo Ti bib buh tpg liv Zeg oiu5 Wiz Bu5 shchi ip
Іще І ЗаMore And For
ТгРО ЯгЕ піц Рго бів таї ТК ТвВгоіву Рго Рго беб др вів п: Бе 115 128 175TgRO YaGE pizza Rgo biv tai TK TvVgoivu Rgo Rgo beb dr viv p: Be 115 128 175
ТнНг гу дк біп Уві его ів їгр ос Уух ів Уві Рух Бі Ре їжк ВО 13 135 їща бек Ав тів Діз Уві ші Тгб Біб Зеб йеп о Біє бій бго Бі» д5ж Ав ї145 ізо 155 ідеTnNg gu dk bip Uvi ego iv ygr os Uuh iv Uvi Rukh Bi Re izhk VO 13 135 yishcha bek Av tiv Diz Uvi shi Tgb Bib Zeb yep o Biye bij bgo Bi» d5zh Av і145 iso 155 ide
Тек оічуз ТВг ОТВеб РБгоа Рго баіф ї2ен дв его Ар о іу бБеєб Бе ве їв 155 Я 175Tek oichuz TVg OTVeb RBgoa Rgo baif i2en dv ego Ar o iu bBeyeb Be ve yiv 155 I 175
ТУг обер ої іє ТВг о Уві йоо у 5ерг дев Тгв о біп бів бі хв УвіTUg ober oi ie TVg o Uvi yoo u 5erg dev Tgv o bip biv bi hv Uvi
ІБ ї155 ча вне бек Су5 бЗег Уаі Мет Ні іє біз іец Ні йо Нія тТУК о ТВкК бівIB i155 cha vne bek Su5 bZeg Uai Met Ni ie biz iets Ni yo Niya tTUK o TVkK biv
ІЗ зва гаIZ zva ha
ЇУуї БЕг ізн Зег їв бек обго Біб туYiUui BEg izn Zeg ate bek obgo Bib tu
ЕВ гі «ій» 38 «еіїх ї4 «Ті» РТ «вій Му веесційх «МИХ «Т2ї8 МІ БЕАТОКЕ «ЕР СЕР. «23» СОЇ Зарзіабельного Домена Легкега ПЛанцюга йнти-СВ3 Днтитіла «ваз ЗEV gi "ii" 38 "eiih i4 "Ti" RT "vii Mu veestiyh "MYH "T2i8 MI BEATOKE "ER SER. "23" SOY ZARZIABLE DOMAIN LEGKEG PLANTSYUG YNTI-SV3 DNTITILA "VAZ Z
АгЕ Бек о бБег Тиг Бі ів ді ТК о тТнг о Бег йо Туг АТВ бла ї З ІВ «тів З «тії 7AgE Bek o bBeg Tig Bi iv di TK o tTng o Beg yo Tug ATV bla i Z IV «tiv Z «tii 7
«32 РЕТ «133 БМуи5 явиесніце «Ре «2 ВІБС БЕДТОКЕ «23» 5 БарЕІЗВбельногоа йДомена Легкего Ланнюга бЯнти-С 3 Антитіла «355 За бік їЗг бха із кв Дів бро ї 5 «їз 4 іїх З «12» РТ «іЗх Ми вихсчіце «еВ «ее ВІВ БЕАТЦНЕ"32 RET "133 BMui5 yaviesnice "Re "2 VIBS BEDTOKE "23" 5 BarEIZVbelnogoa and Domain of Light Lannyug bYanti-S 3 Antibodies "355 For the side of іZg bha from к Div bro і 5 "із 4 іх Z "12" RT "іZh My vyhschice «eV «ee VIV BEATTSNE
ВІВ СЕКVIV SEC
«273 «03 Баріабельного Дощжена Легжого Ланцюга днти-СО3 дДнтитіла «аа» ня від іви тк о БУЄ Зек й ів о їгв о Уді ї 5 «і і ії 5 «213 РТ -еі3» Ви явосміне"273 "03 Variable Precipitated Light Chain dnty-CO3 dDntitila "aa" from ivy tk o BUYE Zek i iiv o iigv o Udi i i i i i i i 5 "i i i i i 5 "213 RT -ei3" You yavosmine
БЕХBEH
«2ІЗ ВІ БЕАТЦКЕ «2235 «Ні Варіабельного Домена бажкого Ланцюга днти-- 3 йнтитіла «аа 1 тТВг отУує Віва Мет Дев"2IZ VI BEATZKE "2235 "No Variable Domain of the desired Chain dnty-- 3 yntitila "aa 1 tTVg otUue Viva Met Dev
З є «Вів» 427 «ЗІЗ 18 «Віда РТ «13» Мих фвиЗсніне а» «алі» МЕС РЕДТУКЕ «аайх ІК. «223» КБ Варізбельного Домена ВЗажкогоа Ланцюга Внти-СО3 дДнтитіла «ЯВВах 4With is "Viv" 427 "PPE 18 "Vida RT "13" Mykh fvyZsnine a" "ali" MES REDTUKE "aayh IC. "223" KB of the Varisable Domain of the VZazhgoa Chain of Vnty-СО3 dDntitila "ЯВВах 4
Аг Тів дгд обег ої Ух ТУуг дв дха ТУг біз Те тує Буг дів 5 о бег ї 5 ІВ 15Ag Tiv dgd obeg oi Uh TUug dv dha TUg biz Te tuye Bug div 5 o beg y 5 IV 15
Уві ух й5Ю «вій» а «Зі 34 «їв РЕТ 135 Мих виесміне «але» «ааїх МІС БЕАТОКЕ «дови ї1..К15 «223» КП Варіабельного ДЙомена Важкого Ланиюга днти-СОЗ Антитіла «ащйх ахUvi uh y5Yu "vii" a "Zi 34 "yiv RET 135 Myh viesmine "but" "aaih MISS BEATOKE "dovi y1..K15 "223" KP Variable Dyomen Heavy Laniyug dnty-SOZ Antibodies "ashchyh ah
Ні бі Дяк БвВе бі деп бЗег Туг Уві бег о Тгв Ре дів Тук ї 5 Ів чаїв 44 «ії» 17 «215х РВК «13 Мух яиасціне а» «алі» МЕС РЕДТУКЕ «вах (І... І15і «223» КО ВБарізбельного йовена Легкого Ланцюга йнти-С0і23 днтитіла «40» ад іх Бег Зег бБіп бег вер оіє; й5в Зег Бі А5п пів і ух 5 о тїугБ ів ї 5 їв 15Ni bi Dyak BvVe bi dep bZeg Tug Uvi beg o Tgv Re div Tuk i 5 Iv chaiv 44 "ii" 17 "215x RVC "13 Muh yaiascine a" "ali" MES REDTUKE "vah (I... I15i "223" KO ВBarizbelny yoven Light Chain ynty-S0i23 dntitila "40" ad ih Beg Zeg bBip beg ver oie; y5v Zeg Bi A5p piv i uh 5 o tiugB iv i iv iv 15
ТеThat
«1 ях «3135 7 «812з РЕТ «еї3У Мує ши цінх «ех «а» МЕС БЕБТОКЕ «2283 СЕК «223» СОНО Варізбельного Домена Легкого Ланцюга днти-СО133 йнититіла «ай» 45"1 yah "3135 7 "812z RET "ei3U Muye shi tsinkh "eh "a" MES BEBTOKE "2283 SEC "223" SONO of the Variable Domain of the Light Chain dnty-СО133 ynititila "ai" 45
Тра вів бег ТП АгЕ бів бБегTra viv beg TP AgE viv bBeg
У Бач «ій ай «її» З «Та Ат «із» Му швизсміне о» єв» ВЕБ БЕДТЧНЕ «ах СЕР. «каїх СОЯ ЯЗдарзіабельного домена Легкого ланцюга йнтаи-С ОЗ днтитіда «ВОЗ 45 зів вп й Буг Бек о Туг Бро тТуб ТК ї 5 1» 4 2115 5 «ТА РяТ ії» Ми5 жихсціц «ах «2235 МІС РЕАТЦНЕ «газ (ЕКО «223» СБВІі Варівбельного Домена Бажкого Ланцюга йнти-0123 йнтвтіла «ааах 4у во о ТУк Туб Меї і 55In Bach "iy ay "her" Z "Ta At "iz" Mu shvyzsmine o" ev" WEB BEDTCHNE "ah WED. "some SOY of the Yazdarziable domain of the light chain of yntai-S OZ dntitida "WHO 45 ziv vp y Bug Bek o Tug Bro tTub TK y 5 1" 4 2115 5 "TA RyaT ii" My5 zhihscits "ah "2235 MIS REACTSNE "gas (ECO " 223" SBVIi Varivbelny Domain of the Bazhsky Chain ynty-0123 yntvtila "aaah 4u vo o TUk Tub Mei i 55
З вFrom the
«-5ї85Бх 45 ка У «832У РЕК «каз Ми вок нічех «ад» «ВЕУ ВІ БЕДТИКЕ «аа» 53.05 «223 СО Варівбельного домена Важкхого Яанцюга йнти-С0123 йнтеитіла «ах ам аз 1ї1е Тїів о бго зЗег деп обі діа тб Бе тег без БІяЯ іУу5 Ре і ї 5 ІВ їз -щіу «3165 8 «ЕВ У «5325 РТ кіз» Ми5 шуихсніше «2 «аа ВІ РЕАРОКЕ «ваду ї1..К75 «їз ЗІЗ ВархЗбельного Демена ВажкогОо Ленцюга днти-3Б1З3 днититіла «ОВ 4 бек Ні іч івз аге бів бек ї 5 «тб 5 «Її 7 «ВІ ВІ «213» Штечна Послідовність «ех «223 Гетеродинмевизація Доменна кави х 58"-5і85Бх 45 ka У "832У REK "kaz My vok nicheh "ad" "VEU VI BEDTYKE "aa" 53.05 "223 СО of the Boiling domain of the Heavy Yaantsyug ynty-С0123 ynteitila "ah am az 1і1e Tiiv o bgo zZeg dep obi dia tb Be tag without BIAYA iUu5 Re i 5 IV iz -shiu "3165 8 "EV U "5325 RT goats" My5 shuihsnishe "2 "aa VI REAROKE "vadu y1..K75 "iz ЗИZ VarkhZbelnoy Demen VajkogOo Lentsyuga dnty-3B1Z3 dnititila "OV 4 bek Ni ich ivz age biv bek y 5 "tb 5 "Her 7 "VI VI "213" Stechna Sequence "ex "223 Heterodynamevization Domain coffee x 58
Зі Уві Бі6 Рг те Бек СБ ї 5 каівйз» 5With Uvi Bi6 Rg te Bek SB i 5 kaivyz" 5
«зії Б «аі2 РТ «813» Втучна Послідовність «ВаВУ «23» Гетеродимеризанія Дожена «аа Бі"zii B "ai2 RT "813" Ttuchna Sequence "VaVU "23" Heterodimerization Dogen "aa Bi
УаПаї іш Рго і уУ5 Бек бух і 5 ех Б «Вії «213» вит «813» Штучна ПеслідавністьUaPai ish Rgo and uU5 Bek buh and 5 eh B "Vii "213" vit "813" Artificial Peslidavnist
ОВOV
«223» Єетеродужевнизанія Дожена «438 52"223" Yeeteroduzhevnyzaniya Dozhena "438 52
Зі Ре й вен Бі Зі СУ5 4 « «зії 53 «1ЕУ в «ві2з РТ «З135 Бречна Посліловність ші тЕчна см ліІДОВНІСТЬ «вав «823» Гетеродинеризація ДоБена «ах 53From Re and Ven Bi from SU5 4 " "zion 53 "1EU in "vi2z RT "Z135 Brechna Poslilovnost shi liquid cm leadivity "vav "823" Doben heterodynerization "ah 53
Твге бл Ягве обі Біб су з в «щі» Ба -е21Ех 25У «іа РА «із» Штучна ПослідовністьTvge bl Yahweh obi Bib su z v "shchi" Ba -e21Ex 25U "ia RA "iz" Artificial Consistency
ВКVK
«га3з Третій Попліпентидний Ланцег ПАВЕТ-й веРс Берсія 31 Конструкт ах 58 й ву5 Те Ні ТВК обУу5 Бго Бко уз Рга бів Рго біз дів діа Щі ї 5 ІВ і15"ha3z Third Poplipentidny Lantseg PAVET-th verS Bersia 31 Construct ah 58 y vu5 Te No TVK obUu5 Bgo Bko uz Rga biv Rgo biz div dia Shchi y 5 IV i15
Зі Бго баг Уді Ре івц бБе РБга го іх Рго гУух й їВг із Ме га ТЕ ЗВ їі2 Чек АгБ о Іг Рго біз Маі ТвгоСух Уві Уві Мі й5в Уаі бек Ні 35 Я «5With Bgo bag Udi Re ivc bBe RBga go ih Rgo gUuh y yVg iz Me ha TE ZV ii2 Chek AgB o Ig Rgo biz Mai TvgoSukh Uvi Uvi Mi y5v Uai bek No 35 I "5
Він вв Рго бів Уві уз Бе зв о Тго те Уві хв те Уві зів Уві. 5 аHe vv Rgo beat Uvi uz Be zv o Tho te Uvi hv te Uvi called Uvi. 5 a
Ні5 дхп дів іує ТВг овУ5 Рго бе біб біб ЗіБ ТУг дей бегб ТК отееNi5 dhp div iue TVg ovU5 Rgo be bib bib ZiB TUg dey begb TK otee
КЕ а аKE and a
Аг Уві Уяі Зегк Уві іви Тк уві іец Ніх Бій Де ТеБ іє Ахв Бі їх А 5 і БЕ ТУ 15 су Без Уві 5ег Ах іх Дів бе Бго віз ББо ї18Ag Uvi Uyai Zegk Uvi ivy Tk uv iets Nih Biy De TeB ie Ahv Bi ih A 5 i BE TU 15 su Bez Uvi 5eg Ah ih Div be Bho viz BBo і18
Іо І55 ї115 бів іже їпг олів его оїу5 вів Гея 51 сій Бго АгЕ бін Рг бів Уві її15 зв і125Io I55 i115 biv izhe ipg oliv ego oiu5 viv Gaia 51 siy Bho AgE bin Rg biv Uvi ije15 zv i125
ТЖг ТК оті бра Рго бег о вбЕ бів біб МОХ Ти Її 55 дп бів Уві бег 138 55 Іа іви Бек СУ5 Аіз Уві ї5 Бі Бе їг Ко Зег йбБи Бі АБа Уві бів 145 158 155 ї155ТЖг ТК оти бра Rgo beg o вбE biv bib MOH Ti Her 55 dp biv Uvi beg 138 55 Ia ivy Bek SU5 Aiz Uvi i5 Bi Be ig Ko Zeg ybBi Bi ABa Uvi biv 145 158 155 i155
Тгв БІБ Зег деп віє бій Мго біз ба Аа Тук ге Те ОТВе го га 1855 І158 175Tgv BIB Zeg dep viye bij Mgo biz ba Aa Tuk ge Te OTVe go ha 1855 I158 175
Уві ін ар 5ег Азр обі 5ег ба РБе іву Уві Бегоіує їв ївг Уві ї58 ік а аз ув зегоАгЕ Тр оціп бБіп Бі Аза Уві Ре бЗве оСУ5 бег о Уді КЕ 155 28 захUvi in ar 5eg Azr obi 5eg ba RBe ivu Uvi Begoiue yiv ivg Uvi y58 ik a az uv zegoAgE Tr otsip bBip Bi Aza Uvi Re bZve oSU5 beg o Udi KE 155 28 zah
Ні5 біб біз івеь Ніх Аа дгшй тує ТвК бів г 5 бек оіви бегоі ву 5егNi5 bib biz iveh Nih Aa dgshy tuye TvK biv g 5 bek oivy begoi vu 5eg
ІВ 15 Кс го Бу іу»IV 15 Ks go Bu iu"
Ка «еїійх 5 «втіх ї8 «1 РТ «З13з Штучна Послідовність «их «23» Пептид Її «аа» 55Ka "eiiiih 5 "vtyh i8 "1 RT "Z13z Artificial Sequence "ih "23" Peptide Her "aa" 55
Аявоіт: ТТГ Ні ТБг оСУу5 Бго Рго Ся Рго 1 5 Ії «Фіз 55 «Вії ЗЕ «гій РЕТ «213» Втучна Послідовність «Ва» «23» Переважні СНО 1 СНІ Довени Бо Області «аа 56Ayavoit: TTG No TBg oSUu5 Bgo Rgo Sya Rgo 1 5 Ii "Phys 55 "Vii ZE "hii RET "213" Tuchna Sequence "Va" "23" Predominant SNO 1 SNI Doveny Bo Oblasti "aa 56
Вів Рге шів Аза Віа бі біу Бго беб Уді Ре бе РББе Бго Рго 15 ї 5 3 15Viv Rge shiv Aza Via bi biu Bgo beb Udi Re be RBBe Bgo Rgo 15 th 5 3 15
Рга іх ЗИ ТВгоіви Мет Іів бег йгш ТО о РгОо біб Уві Тег осбух Уді га Кк: ЗаRga ih ZY TVgoivy Met Iiv beg ygsh TO o RgOo bib Uvi Teg osbuh Udi ha Kk: Za
Уві Уді дв Маї бек Ні бій б5в Рго Біб Уві іє ББе йхап Тер о ТУг ї5 8 дьUvi Udi dv Mai bek Ni bij b5v Rgo Bib Uvi ie BBe yhap Ter o TUg i5 8 d
Уві 5 Зі Маї бів тазі Ні й5п дід іб5 ТВг ої Ух Бк йгрш ів БІ ща іп ТУг Дхв Бег Твг оТУг р Уві ві Бег Мі Зієцз Те Уві їв Ні 55 Уа 75 Ва бій вв тїКооівв дв пі ух Біш їТг оіїу5 су Гу Уві Бек Ап і ув 85 а зеUvi 5 Zi Mai biv tazi Ni y5p did ib5 TVg oi Uh Bk ygrsh iv BI shcha ip TUg Dhv Beg Tvg oTUg r Uvi vi Beg Mi Ziezz Te Uvi iv Ni 55 Ua 75 Va bij vv tiKooivv dv pi uh Bish yTg oiiu5 su Gu Uvi Bek Up and uv 85 a ze
Віз ів го віз Бга ї12е Біб із їБг оті ек їз Від їх су бів то іїз5 зоViz iv ho viz God i12e Bib iz iBg oti ek iz From their su biv to iiz5 zo
Тго ГЕ Біш Бго бів Уві ТУуб ТБ оі вн Вео Бго бек АБЕ Бі: пі: Кеу 115 328 ї135 їКг гу й сіп Уді Звгоївев Та о бУу5 іа Уві Гу Бі Рв Тк ко 158 І35 ї38 ек др бів віз Уві Біб тб Бі бег Ап бі Зіп бБге БІ: Аха доп 345 і ї55 ЗБЕTho GE Bish Bho biv Uvi TUub TB oi wn Veo Bho bek ABE Bi: pi: Keu 115 328 i135 iKg gu y sip Udi Zvgoivev Ta o bUu5 ia Uvi Gu Bi Rv Tk ko 158 I35 i38 ek dr biv viz Uvi Bib tb Bi beg Ap bi Zip bBge BI: Aha dop 345 and i55 ZBE
Тук іш тп оте Бгеа Рг Уві із дв о Зеб др бі бБеб Рв ре 12 155 В ІБTuk ish tp ote Bgea Rg Uvi iz dv o Zeb dr bi bBeb Rv re 12 155 V IB
Тук бек Еух ів» ТВг Уві йхрішз Звк Агв їгрозЗіп бій БІ доп УдіTuk back Euch iv" TVg Uvi yhrishz Zvk Agv ygrozZip bij BI dop Udi
І8а 185 158I8a 185 158
Ре бег Су5 бЗег Уаї Меї Ні5 бі бів ів Ні б5ап Ні Тук ТВг бів їЗ5 ВІ 5 іш Бвг їі вец Зекоіви Зве о Бко Бі г ухRe beg Su5 bZeg Uai Mei Ni5 bi biv iv Ni b5ap Ni Tuk TVg biv iZ5 VI 5 ish Bvg iii vec Zekoivy Zve o Bko Bi g uh
ЕВ гі «іх 57 «ії 5 2125 РН «вії» Штучна Послідовність их «833» Лінкев 3 Поліпептид «3885 57 віз Бра дев бек бек 3 5 лів» а «ії УЗ «еігх РЕ «813» Штучна Послідовність «еВ «833» дмінокислатна Послідовність Першого Поліпептиднего Лаенцюга "Кантраольне пант-2" «ща» БВ др Бе Уві Меї тТвг Зі бег Бго Яков бек ів йід Уві бег ів Бі ї - їі ї5 під Яга Уві ТВг Неї бек Се 5 Бек беєб Бій 5ег іец і во о б5в бек 28 Б ЗЕEV gi "ih 57 "ii 5 2125 RN "vii" Artificial Sequence ih "833" Linkev 3 Polypeptide "3885 57 visa Bra dev back back 3 5 liv" a "ii UZ "eigh RE "813" Artificial Sequence "eV "833 » amino acid Sequence of the First Polypeptide Chain "Kantraolne pant-2" "shcha" BV dr Be Uvi Mei tTvg Zi beg Bgo Yakov bek iv yid Uvi beg iv Bi i - iii i5 pod Yaga Uvi TVg Nei bek Se 5 Bek beyeb Biy 5eg iets i in o b5v bek 28 B ZE
СІіУу й5и зів і уз б5п тТкКоїви Те отго отже БІБ бів губ Бго о1у 518SiiUu y5y ziv i uz b5p tTkKoivy Te otgo therefore BIB biv gub Bgo o1u 518
ЗБ 45 45ЗB 45 45
Бго бро гу іер'вв Ті Тг ТК дів бБег ТВгГ АгБ біз его бБіУу Уді з5 аBgo bro gu ier'vv Ti Tg TK div bBeg TVgG AgB biz ego bBiUu Udi z5 a
Рко б5а йгв орав баг оЗі дек обі бЗвг біб ТК бе вве тТвг їв ТЕ хв 5 ваRko b5a ygv orav bag oZi dec obi bZvg bib TK be vve tTvg yiv TE hv 5 va
Іїв Зевс Звгоіви; біп бів Біб в5е Уві Аїя Уві тб ТБ Св бій дейIiv Zeus Zvgoivy; bip biv Bib v5e Uvi Aiya Uvi tb TB Sv bij dey
Ж а зAnd with
Вер тТуг зег о Туг Бго Туг ТВг о БНе Бі» біп Біу ївгоіїу5 Гео бів ІТ18 щО їз 38 і бі Бі Бі 5ег зі» біт бі Зі Біб Уві їт5 івб Ав обі ТВ 115 ї125а8 І55 ці бі бі іс; Уаї Бій Рго Бі Агд Рго Меї ї5 ів баг о Сух УдіVer tTug zeg o Tug Bgo Tug TVg o BNe Bi» biu Biu ivgoiiu5 Geo biv IT18 shO iz 38 i bi Bi Bi 5eg zi» bit bi Zi Bib Uvi it5 ivb Av obi TV 115 i125a8 I55 ci bi bi is; Uai Biy Rgo Bi Agd Rgo Mei i5 iv bag o Suh Udi
Ії і35 їіIii i35 iii
Віз бег шщіу Ре тЧг о БНе бег о йхв ТУг Тге о Меї Аха їго Уві АгБ о біВ її 15 ї-е 165Viz beg shshchiu Re tChg o BNe beg o ykhv TUg Tge o Mei Aha his Uvi AgB o biV her 15 th-e 165
Бег Бго бій і Бі їв біб Ткр Уві Дів бів 118 Абе дов іУ5 вгУ 55 ІВ 175 тУг ха Тк Бі: тВгЕ о їУуг Туг его дев бег Уді іх бі дгш Ре ТНг ї88 І іїBeg Bho bij i Bi yiv bib Tkr Uvi Div biv 118 Abe dov iU5 vgU 55 IV 175 tUg ha Tk Bi: tVgE o yiUug Tug ego dev beg Udi ih bi dgsh Re TNg і88 I ii
Ії бБег Агро дов А5о о бев ів Бек об5еє Уві Тер їв бів Меї бов Ява їз ОВ 25 ім йгЕ Уві Бі» Азр Мет бі їфе їук тк Су ВК о Бію Веб о їук текIi bBeg Agro dov A5o o bev iv Bek ob5ee Uvi Ter iv biv Mei bov Java iz OV 25 im yGE Uvi Bi» Azr Met bi ife yuuk tk Su VK o Biyu Web o yuuk tek
ЖАВ 215 аа зіУу Мет до тує їгройпіб бів бі Те бек Уді тб ові бек зак бБІТУZHAV 215 aa ziUu Met to tuye igroipib biv bi Te bek Udi tb ovi bek zak bBITU
ІБ ЗВ ранні ЕХ пі Ст: піуУу Біб Бі біб Уві вів Аза ів Біб їх бін Уві Ата Аїа та5 дБ зах їез бів іх Бім Уві йіз дів іесб біб їе5 Бі ді біз Аїз ів ії зва 55 ВУВ їх «2ї18У ца «21 74 «Вій» РЕК «213» Втучна Послідовність «ВВ Х «823 бмінокислотна Послідовність ДоУгого Полілепнтидного Ланцюга "Контрольне ант -я" «ах 5 хи Уві Уві Меї їне бів тб о Бго вБв о бек оі2гу БгОо Уві бБег іві 19 ії ік ІВ ї5 йкв обі дід бек їі 5екК Су5 Дж бек бек бій бег ої Уві Ні 5вг а 5 ЗВ ап ошіє бо ТВгоТуєв їв г ТБооїк ів бів їУ5 Бра бі бів 5ег «В 5IB ZV early EH pi St: piuUu Bib Bi bib Uvi viv Aza iv Bib ikh bin Uvi Ata Aia ta5 dB zach iez biv ih Bim Uvi iz div iesb bib ie5 Bi di biz Aiz iv iyi zva 55 VUV ih "2і18U tsa "21 74 "Viy" REK "213" Paste Sequence "BB X "823 amino acid Sequence of the DoUg Polyleptide Chain "Control ant -ya" "ah 5 kh Uvi Uvi Mei ine biv tb o Bgo vBv o bek oi2gu BgOo Uvi bBeg ivi 19 ii ik IV i 5 ykv obi did bek ii 5ekK Su5 J bek bek bij beg oi Uvi Ni 5vg a 5 ZV ap oshie bo TVgoTuev ate g TBooik iv biv iU5 Bra bi biv 5eg «В 5
Тга гу« Уві іец: ГРіе туго іух Уві бег о Асп дге о РБе бек бі Уві гоTga gu« Uvi iets: GRie tugo iuh Uvi beg o Asp dge o RBe bek bi Uvi go
БЕ 5-55 Ба дп АгЕ Бе бек о біУу зве обі Бек пі Тег одхв о вве тТбг ів у Рів щБ та т щеBE 5-55 Ba dp AgE Be bek o biUu zve obi Bek pi Tag odhv o vve tTbg iv in Riv shB ta t more
Зес йгбЕБ Уві Біб Вів біз йо ів бі Уді Тук Ре Сух Звек о бів бЕг 5 зZes ygbEB Uvi Bib Viv biz yo iv bi Udi Tuk Re Suh Zvek o biv bEg 5 z
Твг Ні Маї Рко ТкроТве Рез біу пі Бі ТВгоії5 іо біз Іте ї55 і Бі бі 5ег Зі Зіу Бі бі Зін ві бій ів Уві бій Бек щуTvg Ni Mai Rko TcroTve Rez biu pi Bi TVgoii5 io biz Ite i55 i Bi bi 5eg Z Ziu Bi bi Zin vi bij iv Uvi bij Bek schu
Аїаз піц ієз іє і 5 ко бі віз звгоМаї 5 Маі бек с уз Бу ДІ ї138 1535 їде зе ші Туг ТР оРБе їпг Або їжг оїує Мет іт ТгроМеї йгш мів АтаAyaz pizza iez ie i 5 kobi visa zvgoMayi 5 Mai bek s uz Bu DI i138 1535 ide ze shi Tug TR orBe ipg Abo izhg oiue Met it TgroMei ygsh miv Ata
Рг бі Зі бі ів бів Те тів бі вв 112 ї11е БК бек Ахв біRg bi Zi bi iv biv Te tiv bi vv 112 i11e BC bek Ahv bi
Аїз г о Бне Тек о д5за Зі 155 Бе їх бі др Маії ТБе Іі Те о ЖвіAiz g o Bne Tek o d5za Z 155 Be ikh b dr Maii TBe Ii Te o Zhvi
Взр ів бек ТТ авг о ївйгобія тТг Ме біз іец бек ев фей дгрЕ 5вг іш й Тег обі Уві ТУуг Туг Сух біз дв бек Ні іш їв йре й1аVzr iv bek TT avg o ivygobiya tTg Me biz iets bek ev fey dgrE 5vg ish y Teg obi Uvi TUug Tug Suh biz dv bek Ni ish yiv yre y1a
Зее Тв БвБв о Ав Тк їко бі бів бі ТК оі сь Уві Трг ові бек бЕгZee Tv BvBv o Av Tk iko bi biv bi TK oi si Uvi Trg ovi bek bEg
Бі Зі СУуз іУ Бім пі іх Уві із біз ін і сі Бус Уді АзаBi Zi SUuz iU Bim pi ih Uvi iz biz in i si Bus Udi Aza
Аїв івь уз біс іух Уві йіз із ів іух Біб іт Уві дів біз ївишAiv iv uz bis iuh Uvi yiz iz iv iuh Bib it Uvi div biz ivish
Кс ЗБ ЗPriest ZB Z
Її хе БІВHer he BIV
Claims (5)
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361869510P | 2013-08-23 | 2013-08-23 | |
US201361907749P | 2013-11-22 | 2013-11-22 | |
EP13198784.4A EP2839842A1 (en) | 2013-08-23 | 2013-12-20 | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof |
US201461990475P | 2014-05-08 | 2014-05-08 | |
PCT/US2014/051790 WO2015026892A1 (en) | 2013-08-23 | 2014-08-20 | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding cd123 and cd3, and uses therof |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
UA119539C2 true UA119539C2 (en) | 2019-07-10 |
Family
ID=65632998
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
UAA201602538A UA119539C2 (en) | 2013-08-23 | 2014-08-20 | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding cd123 and cd3, and uses therof |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
CL (1) | CL2016000362A1 (en) |
DK (1) | DK3035965T3 (en) |
ES (1) | ES2860973T3 (en) |
GE (1) | GEP20197053B (en) |
HK (1) | HK1225999A1 (en) |
HR (1) | HRP20210215T1 (en) |
HU (1) | HUE054315T2 (en) |
LT (1) | LT3035965T (en) |
UA (1) | UA119539C2 (en) |
-
2014
- 2014-08-20 DK DK14837858.1T patent/DK3035965T3/en active
- 2014-08-20 ES ES14837858T patent/ES2860973T3/en active Active
- 2014-08-20 UA UAA201602538A patent/UA119539C2/en unknown
- 2014-08-20 HU HUE14837858A patent/HUE054315T2/en unknown
- 2014-08-20 LT LTEP14837858.1T patent/LT3035965T/en unknown
- 2014-08-20 GE GEAP201414100A patent/GEP20197053B/en unknown
-
2016
- 2016-02-17 CL CL2016000362A patent/CL2016000362A1/en unknown
- 2016-12-22 HK HK16114613A patent/HK1225999A1/en unknown
-
2021
- 2021-02-08 HR HRP20210215TT patent/HRP20210215T1/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HK1225999A1 (en) | 2017-09-22 |
HRP20210215T1 (en) | 2021-04-16 |
HUE054315T2 (en) | 2021-08-30 |
ES2860973T3 (en) | 2021-10-05 |
DK3035965T3 (en) | 2021-02-15 |
NZ716914A (en) | 2021-09-24 |
CL2016000362A1 (en) | 2016-10-28 |
LT3035965T (en) | 2021-04-12 |
GEP20197053B (en) | 2019-12-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
UA121914C2 (en) | Pd1 and/or lag3 binders | |
JP7243021B2 (en) | Use of plinabulin in combination with immune checkpoint inhibitors | |
UA128001C2 (en) | Tumor-targeted agonistic cd28 antigen binding molecules | |
UA125611C2 (en) | Bispecific molecules having immunoreactivity in relation to pd-1 and ctla-4, and methods of their use | |
US20170015758A1 (en) | Compositions And Methods For Modulating And Redirecting Immune Responses | |
BR112020025926A2 (en) | bispecific anti-psma x anti-cd28 antibodies and their uses | |
UA119329C2 (en) | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding to gpa33 and cd3, and uses thereof | |
UA111612C2 (en) | DOMAINS WHICH ARE CONNECTED TO DEIMMUNIZED SERUM | |
UA126897C2 (en) | Anti-dr5 antibodies and methods of use thereof | |
BR112018009972B1 (en) | CTLA4 LIGAND, LINKER, CONTAINER OR INJECTION DEVICE, POLYNUCLEOTIDE, VECTOR, HOST CELL, METHODS FOR MAKING CTLA4 LIGAND AND TO PREVENT CTLA4 FROM CONNECTING TO CD80 OR CD86 AND USES OF SUCH CTLA4 LIGAND | |
CN111201038A (en) | PSGL-1 antagonists and uses thereof | |
WO2019183040A1 (en) | ANTIBODIES BINDING TO VISTA AT ACIDIC pH | |
EP3132802B1 (en) | Therapeutic agent for solid cancer | |
JP2023524530A (en) | Triple therapy to enhance cancer cell killing in poorly immunogenic cancers | |
US20180094058A1 (en) | Compositions and methods for preventing tumor growth and treating cancer by targeting lectin galactoside-binding soluble 3 binding protein | |
US20230256054A1 (en) | Immunity enhancing agent for cancer by allergin-1 antagonist | |
WO2020014327A2 (en) | Antibodies binding to vista at acidic ph | |
US20240141056A1 (en) | Methods and compositions for activation of t cells using nanoparticles conjugated with multiple ligands for binding receptors on t cells | |
UA119539C2 (en) | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding cd123 and cd3, and uses therof | |
CN113874008A (en) | Beta-carboline compounds and their use in non-cytotoxic and immunotherapeutic treatment of cancer | |
KR20220044490A (en) | Combination Therapy with Semaphorin-4D Blockade (SEMA4D) and DC1 Therapy | |
WO2017066414A1 (en) | Drug delivery conjugates for use in combination therapy | |
KR20240110996A (en) | Use of plinabulin in combination with immune checkpoint inhibitors |