UA118334C2 - Спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка ефективніше використовує воду - Google Patents

Спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка ефективніше використовує воду Download PDF

Info

Publication number
UA118334C2
UA118334C2 UAA201406657A UAA201406657A UA118334C2 UA 118334 C2 UA118334 C2 UA 118334C2 UA A201406657 A UAA201406657 A UA A201406657A UA A201406657 A UAA201406657 A UA A201406657A UA 118334 C2 UA118334 C2 UA 118334C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
still
kak
shi
same
protein
Prior art date
Application number
UAA201406657A
Other languages
English (en)
Inventor
Ендрю Кеннет Боррелл
Девід Роберт Джордан
Джон Малліт
Патрісія Клейн
Original Assignee
Дзе Стейт Оф Квінсленд Ектінг Тру Дзе Департмент Оф Егрікалчер, Фішеріз Енд Форестрі
Дзе Тексас Ей Енд Ем Юніверсіті Сістем
Грейнз Рісерч Енд Дівелопмент Корпорейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дзе Стейт Оф Квінсленд Ектінг Тру Дзе Департмент Оф Егрікалчер, Фішеріз Енд Форестрі, Дзе Тексас Ей Енд Ем Юніверсіті Сістем, Грейнз Рісерч Енд Дівелопмент Корпорейшн filed Critical Дзе Стейт Оф Квінсленд Ектінг Тру Дзе Департмент Оф Егрікалчер, Фішеріз Енд Форестрі
Publication of UA118334C2 publication Critical patent/UA118334C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
    • A01H5/10—Seeds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/46—Gramineae or Poaceae, e.g. ryegrass, rice, wheat or maize
    • A01H6/4666—Sorghum, e.g. sudangrass
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8273—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for drought, cold, salt resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Cultivation Of Plants (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Hydroponics (AREA)
  • Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)

Abstract

Винахід стосується способу отримання генетично модифікованої рослини, яка ефективніше використовує воду, яка включає стадію введення в рослину послідовності гена сорго ID Sb02g029210, що розташований від пари основ 64347327 до пари основ 64350341, яка кодує SbPIN1, і яка асоційована з фенотипом «залишатися зеленим", причому включає в себе зсув в споживанні води на період після цвітіння або підвищену доступність води під час росту сільськогосподарської культури або підвищену ефективність транспірації, що приводить до збільшення індексу збирання урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання.

Description

(57) Реферат:
Винахід стосується способу отримання генетично модифікованої рослини, яка ефективніше використовує воду, яка включає стадію введення в рослину послідовності гена сорго ІЮ
ЗрО29029210, що розташований від пари основ 64347327 до пари основ 64350341, яка кодує
ЗРрРІМТ, і яка асоційована з фенотипом «залишатися зеленим", причому включає в себе зсув в споживанні води на період після цвітіння або підвищену доступність води під час росту сільськогосподарської культури або підвищену ефективність транспірації, що приводить до збільшення індексу збирання урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання.
Мене пеення я ТЕО ки і «5 ВКЮ ви т .е із ; Ба ї БАК. снення
І. в а я Ж с З КЗ сх ск і
Ех жа у , Ж гу еп : їх тд ечих, ВО Як х Я : - ЕСЕ СЕ нин о п по пон нн нн с ще з ї
У ! я І
Езас кажи ф !
ЕЕ нн и нн Кн нн п п нн КК НН КН НН ПН ПВ В НН ПК ПК КВК о щи чо з ТО во ща о
Свбеня гі
Реєстрація даних
Дана заявка пов'язана із і запитує пріоритет попередньої патентної заявки США Мо 61/560763, зареєстрованої 16 листопада 2011 року під назвою "Засухостійкі рослини", зміст якої включений в даний опис як посилання у повному обсязі.
Галузь винаходу
Дане розкриття описує отримання засухостійких рослин. Дане розкриття робить можливим зміну фенотипічної характеристики, яка називається "залишатися зеленим", для поліпшення адаптації у рослин до засухи рекомбінантним, мутагенним способами і/або способами розмноження і селекції. Також у даному описі наведені практики адміністрування рослинних систем для збільшення урожаю сільськогосподарської культури і ефективності збору урожаю у середовищах із обмеженим забезпеченням водою.
Попередній рівень техніки
Бібліографічні дані публікацій, на які наведені посилання автором у цьому описі, зібрані в алфавітному порядку у кінці даного опису.
Посилання на будь-яку попередню галузь техніки у цьому описі не є і не повинно бути прийняте за визнання або будь-яку форму пропозиції того, що ця попередня галузь техніки становить частину загальновідомого знання в будь-якій країні.
Зростаюче населення людства вимагає підвищення продуктивності сільськогосподарської культури. Це було головною метою селекціонерів рослин і генетиків. Один із підходів до підвищення продуктивності сільськогосподарської культури включає селекцію ознак рослини, які сприяють отриманню більш високого урожаю зерна і стійкості (ргіпдег (2010) Маїцге Сепеїіс5 42:А475-476). Цей підхід називають "Зелена революція". Інші підходи включають розвиток ідеальної архітектури рослини, які, наприклад, привели до ідентифікації локусу кількісної ознаки (ОТ), яка кодує запатоза промотор-зв'язувальний подібний білок 14 (О559РІ 14) у рисі і який сприяє підвищенню урожаю рису (ао еї а!. (2010) Майге Сепеїйс5 42:541-544; Міга еї аї. (2010)
Маїшге Сепеїїсв 42:545-549).
Засуха є єдиним самим важливим обмеженням у виробництві зерна у всьому світі. У рослинах сорго присутній ряд систем засухостійкості, які включають фотосинтез типу С4, глибоке коріння і товстий шар листкового воску, які дозволяють рости у гарячих і сухих
Зо середовищах. Стійкість до засухи робить сорго особливо важливим у посушливих областях, таких як південні райони Сахари в Африці, західно-центральна Індія, північно-східна Австралія і південні рівнини США. Із навантаженням, яке збільшується, на доступність недостатніх водних ресурсів, ідентифікація ознак, пов'язаних із урожаєм зерна в умовах засухи, стає більш важливою.
Механізм адаптації до засухи, ідентифікований у сорго, який приводить до утримання листків зеленими протягом більш тривалого періоду під час наливання зерна в умовах засухи, відомо як ознака "залишатися зеленим". Ознака "залишатися зеленим" асоціювалася із високим урожаєм зерна в умовах засухи у період після цвітіння сорго (Воїтеї! еї а). (2000) Стор 501. 40:11037-1048; Каззапип еї аї. (2010) ЄирНуїїса 72:351-362), пшениці (Тгйсит аевіїмуит Г..) |(Зрапо еї аІ. (2003) У. Ехр. Вої. 54:1415-1420; СНгівіорнег єї аї. (2008) А!йві. 9. Адгіс. Вез. 59:354-364|, рису (Огула заїїма І.) І(Казпімжаді еї аїІ. (2006) Ріапі Рпузіоїюду апа Віоспетівігу 44:152-157| і кукурудза (7еа тауз І.) |пепо еї аї. (2009) Ріапі Вгеей 128:54-621|. Крім того, він може непрямо впливати на урожай зерна в умовах засухи, посилюючи стійкість до вугільної гнилі (Мастгорпотіпа рНазеоїїпа (Таззі| Соїда.) (Тепкоцапо еї аї. (1993) Тнеог. Аррі. Сепеї. 85:644-648;
Сагис еї аї. (2002) Іпії. богапит апа МіПеїв Мемуві. 43:63-65). Це знижує вилягання (Кеаду еї аї. (2008), Еорпуїїса 159:191-198), дозволяючи селекціонерам рослин використовувати позитивний зв'язок між висотою рослини і урожаєм зерна (огаап еї аї. (2003) Тпеог. Аррі. Сепеї. 106:559- 567). Ознака "залишатися зеленим" є важливим критерієм селекції для адаптації до засухи у програмах розведення сорго як в США (Козепому еї аї. (1983) Адгіс. УМаїег Мапад. 7:207-222), так і в Австралії (Неп?еї! єї аї. (1997) А!,йзвігаїйа Іпї. Зогурапит ії МіПеї5 Мем/5і. 38:1-9).
Значна частка фізіологічних очевидних фактів збирається у підтримку цієї ознаки (Вогтеї| еї а!. (2000ба) Стор 5сі. 40:1026-1037; ВопеїЇ апа Наттег (2000) Стор 5сі. 40:1295-1307; Наїттів вї а. (2007) У. Ехр. Вої. 58:327-338; Спгівіорнег евї аї. (2008) зирга; Мап Оозіегот еї а!. (2010а) Рієїй
Стор Вез. 115:19-28 апа Мап Оозіегот еї аї!. (201065) Рієїд Стор Вев. 115:29-38). Не дивлячись на те, що цей механізм засухостійкості застосовувався виробниками сорго в США і Австралії протягом більше 25 років, і широке фізіологічне обгрунтування ознаки стає все більш ясним, причинні механізми і залучені генетичні локуси до цього часу були невідомі.
В умовах обмеженого водопостачання урожай зерна є функцією транспірації (Т), ефективності транспірації (ТЕ) і індексу збору урожаю (НІ) (Раззіоцга (1977) 9. А!йві. Іпві. Адгіс. бо зЗсі. 43:117-120|. В рамках цього урожай зерна пов'язаний із Т у період після цвітіння (Тигпег
(2004) 3. Ехр. Вої. 55:2413-2425; Мапзепаді еї а!. (2006) Рипсі. Ріапі. Вісі. 33:823-837), оскільки НІ збільшується із часткою Т всієї сільськогосподарської культури, яка здійснюється після періоду цвітіння (Раззіошига, (1977) зирга; зайгаз апа Соппог (1991) Рієїй Стор5 Кев. 26:227-239; Наттег (2006) Аагіс. сі. 19:16-22). Збільшена Т у період після цвітіння пов'язана із зниженим стресом від засухи поблизу періоду цвітіння, що може позитивно впливати на темп росту сільськогосподарської культури у періоді цвітіння зернових злаків і, отже, на кількість зерен (Апагаде еї аї. (2002) Стор сі. 42:1173-1179; Мап Оовіегот апа Наттег (2008) Рієїд Стор5 Незв. 108:259-268). Якщо загальна кількість доступної води обмежена, Т у період після цвітіння може бути збільшена шляхом обмеження Т у період до цвітіння. Це може бути досягнуто шляхом обмеження розміру крони або генетичним шляхом, або шляхом обробки сільськогосподарської культури. Однак менша крона знижує тільки загальну кількість Т, якщо її ТЕ не знижена. Значні генотипічні відмінності в ТЕ для сорго опубліковані (Натітег еї аї. (1997) А!йві. 9. Адгіс. Кев. 48:649-655; Непаегзоп еї а!. (1998) А!ві. 9. Ріапі Рпувзіої. 25:111-123; МопоскК апа Наттег (1999)
У. Стор Ргод. 2:265-286; Хіп евї а. (2009) Рієїд Стор Вев. 111:74-80). Альтернативно, може бути збільшено споживання води у період після цвітіння, шляхом збільшення загальної кількості води, доступної сільськогосподарській рослині, або шляхом більш глибокого укорінення або шляхом зниженої нижньої межі витягання води рослиною (Мапзсепаді еї аї. (2006) 5ирга).
Ознака "залишатися зеленим" впливає на багато які із вищезгаданих процесів у сорго. По- перше, ознака "залишатися зеленим" знижує споживання води під час періоду до цвітіння шляхом обмеження розміру крони (за допомогою зниження кущистості і більш дрібних листків).
По-друге, ознака "залишатися зеленим" поліпшує доступність води шляхом збільшення співвідношення коріння:пагони. Існують деякі експериментальні докази кращого витягання води рослинами у лініях із ознакою "залишатися зеленим", проте необхідно більше досліджень. Ці відгуки кореня можуть також бути пояснені посиленим транспортом ауксину (У/апо еї аї. (2009)
Моїесшіаг Ріапі 2(4):823-831). По-третє, ознака "залишатися зеленим" збільшує зеленість листків у період цвітіння, ефективно підвищуючи фотосинтетичну здатність, і, таким чином, ТЕ (за умови, що фотосинтез збільшується пропорційно швидше, ніж провідність). Збільшення зеленості листків є непрямим результатом зниження маси листків, тобто азот концентрується у листку.
Зо Отримання більшої кількості харчових продуктів за допомогою меншої кількості води є однією із основних проблем, які стоять у наш час перед людством. Існує реальна і нагальна необхідність як у країнах, які розвиваються, так і у розвинених країнах, в ідентифікації генів і генних мереж, які регулюють адаптацію до засухи у сільськогосподарських рослинах. Це дозволяє збільшувати адаптацію до засухи у широкого діапазону видів сільськогосподарських культур, які вирощують в умовах середовищ із обмеженим водопостачанням у всьому світі.
Суть даного винаходу
Локуси кількісних ознак (ОТІ) застосовують для ідентифікації геномних областей у сорго, асоційованих із і/або які іншим чином сприяють фенотипу "залишатися зеленим". ОТ. ідентифікують ознаку "залишатися зеленим" (50) Х, де Х є цифрою, яка збільшується від 1, яка означає область на хромосомі, яка містить локуси, асоційовані із фенотипом "залишатися зеленим". Область в межах 5ІДХ, вказана як 5ідХт, де т є буквеним позначенням, таким як
За і 5І9ДЗЬ. У одному із варіантів здійснення Х являє собою 1, і область являє собою 5941 на хромосомі З між маркерними генами їхр581 і їхр38 сорго, або його еквівалент у геномі іншої рослини. У іншому варіанті здійснення, Х являє собою 2, і область являє собою 542 на хромосомі З між маркерними генами їхр530 і їхр31 сорго, або його еквівалент у геномі іншої рослини. У ще одному варіанті здійснення, Х являє собою 3, і область являє собою 5193 на хромосомі 2 між маркерними генами їхр471 і їхр179 сорго, або його еквівалент у геномі іншої рослини. 5ІДЗ розділений на 5ідза (область між їхр298 і 5РБ-2568) і 59356 (область між 5Рб- 2568 і їхр179). У іншому варіанті здійснення, Х являє собою 4, і область являє собою 5194 на хромосомі 5 між маркерними генами їхр283 і їхр15 сорго, або його еквівалент у геномі іншої рослини.
Список генів, асоційованих із фенотипом "залишатися зеленим", представлений у таблицях
ТА-1С. Фіг. 68 представляє діаграму того, скільки із генів в 591, 5192, 5і9дЗа, 5936 і 5194 впливають на фенотип "залишатися зеленим".
Як наведено у даному описі, ЗІДХ включають локуси, які кодують білки або регуляторні агенти, такі як мікроРНК, рівень експресії яких сприяє виявленню фенотипу "залишатися зеленим". Передбачається, що вибір генетичного локусу або генетичної області в 5І9Х у сільськогосподарській рослині, включаючи підвищення або зниження експресії природженого локусу або локусів, зсуває споживання води рослиною на період після цвітіння або збільшує бо доступність води під час росту сільськогосподарської культури або збільшує ефективність транспірації, таким чином, збільшуючи індекс збору урожаю (НІ) і урожай зерна в умовах обмеженого водопостачання. Додатково запропоновано, що 5іДдХ є частиною генетичної і фізіологічної мережі, асоційованої із адаптацією до засухи. Поліморфні варіанти локусів у межах 5ІДХ можуть також впливати на рівні експресії. Отже, дане розкриття описує селекцію батьківських рослин для розведення, які експресують специфічний поліморфізм, так само як введення 5ІДХ у рослину будь-якою кількістю способів, включаючи рекомбінантні способи або шляхом стандартних протоколів розмноження. Мутагенез існуючих (тобто природжених) локусів також розглядається у даному описі.
У даному описі наведений спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, де вказаний спосіб, включає модуляцію рівня експресії природженого або введеного локусу 5ІДХ або локусів у всій рослині або у вибраній тканині рослини, 5ІДХ, відповідному місцю на хромосомі у межах рослини сорго, або його еквівалент у іншій рослині, де БІДХ кодує продукт, рівень якого асоційований із або сприяє виявленню фенотипу "залишатися зеленим", де фенотип включає в себе зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання, і де 5БІДХ ідентифікують шляхом тонкого генетичного картування.
Запропонований у даному описі спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, де спосіб включає введення у рослину або у батьківську рослину агента, вибраного із списку, який складається із наступних: (і) генетичний агент, який містить один або більше локусів, розташованих в області, вибраній із 5941 на хромосомі З між їхр581 і їхр38; 5Щ2 на хромосомі З між їхр530 і їхр31; 5ідЗа (область між їхр298 і 5РБ-2568); 5ід3р (область між 5РбБ- 2568 і їхр179); і 5Ід4 на хромосомі 5 між їхр283 і їхр15 у сорго, або його еквівалент у іншій рослині, рівень експресії якого асоційований із або сприяє виявленню фенотипу "залишатися зеленим", де фенотип включає у себе зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в
Зо умовах обмеженого водопостачання; і (її) агент, який регулює підвищуючи або понижуючи природжену форму локусу або локусів. Посилання на "5ід3" включає 5ідЗа, розташований між їхр298 і 5РБ-2568 і 59360, розташований між 5РЬБ-2568 і їхр179.
Цей аспект охоплює застосування рекомбінантних технологій для введення одного або більше локусів у рослину, так само як застосування протоколів розмноження до вибраних рослин, які мають специфічний профіль експресії одного або більше локусів. Мутагенез із подальшою селекцією може також бути застосований для зміни профілів експресії або патернів у природжених локусах.
Додатково у даному описі наданий спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, де спосіб включає модуляцію рівня експресії природженого або введеного локусу ЗІДХ або локусів у всій рослині або у вибраній тканині рослини, де локус або локуси, відповідні локусу або локусам, розташованим в 5191, 5ід2, 593 (включаючи 51ідЗа і 5і93Б) і/або 5194 на хромосомі у рослині сорго, або його еквівалент у іншій рослині, яка кодує продукт, рівень експресії якого асоційований із або сприяє виявленню фенотипу "залишатися зеленим", де фенотип включає в себе зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання, і, де 5ІДХ ідентифікують шляхом тонкого генетичного картування.
У даному описі пояснюється, що рівень експресії одного або більше локусів у області БІДХ сприяє серед іншого утворенню специфічної архітектури крони листків, що дозволяє рослині ставати більш ефективним у плані споживання води. Локус або локуси в 5ІДХ, тому, у даному описі названі як "ген(и) адаптації до засухи" або "локус/локуси адаптації до засухи". Приклади локусів перераховані в таблицях 1А-1С. У одному прикладі локус вибраний із таблиці 18. У іншому прикладі локус кодує білок, асоційований із ауксином, такий як булавоподібний несвітний (РІМ) білок. Білки РІМ є носіями, які виділяють ауксин, які містять трансмембранні домени і, головним чином, локалізуються у плазматичних мембранах. Локус, який кодує білок
РІМ, представлений у даному описі як РІМ. Іншими прикладами генетичних локусів є ІРА-1 (ідеальна архітектура рослини 1), М/ЕР (М/еакпу Раптеге Рапісіє), засатоза 5рі (подібний промотор-зв'язувальному білку) і ССО7/8.
Дане розкриття описує введення одного або більше локусів ознаки "залишатися зеленим" у рослину або введення функціонального еквівалента, такого як кКДНК або підвищуюче регулювання або понижувальне регулювання експресії природженого локусу або локусів. Це включає рекомбінантні технології, розмноження, гібридизацію і протоколи селекції і способи мутагенезу.
Даний опис дозволяє застосовувати ряд генів ознаки "залишатися зеленим", як перераховано у таблиці 18 (і таблиці 1С) для отримання нечутливих до засухи рослин шляхом технології рекомбінантної ДНК і/або розмноження, схрещування і способами гібридизації. Це включає підвищуюче регулювання або понижувальне регулювання генів в одному або більше із 591, 592, ЗЗа, ЗІЗ і/або 5194 (як проілюстровано таблицями 18 і 10).
Даний опис дозволяє застосовувати ряд генів ознаки "залишатися зеленим", перерахованих у таблиці ТА, для отримання нечутливих до засухи рослин за допомогою технології рекомбінантних ДНК і/або шляхом розмноження, схрещування і способами гібридизації.
Термін "ЗБРІМп" застосований для опису білка 5БРІМ, який утворюється у сорго, де п є цифрою, яка вказує компонент носія, що виділяє ауксин, і п складає від 1 до 11. Посилання на "ЗВРІМп" включає його гомологи і ортологи в інших рослинах. Прикладами локусів ЗЕРІМп є такі, які кодують ЗОБРІМА і БРРІМЕа, і їх еквіваленти на інших рослинах. У даному описі запропоновано, що рівень або місце експресії РІМ або рівень експресії РІМ із специфічною поліморфною варіацією сприяє прискоренню виявленню фенотипу "залишатися зеленим". РІМ може бути введений або його рівень експресії може бути змінений рекомбінантними засобами, стандартними протоколами розмноження і способами мутагенезу. ЗБРІМА відповідає О5РІМУЕ, і
ЗБРІМ2 відповідає О5РІМЗа. Термін "О5" стосується рису (див. таблицю 1А).
У іншому варіанті здійснення локус являє собою ІРА-1. Рівень експресії ІРА-1 або рівень або місце експресії ІРА-1 із специфічною поліморфною варіацією, як запропоновано у даному описі, сприяють виявленню фенотипу "залишатися зеленим".
У іншому варіанті здійснення локус являє собою М/ЕР. Рівень або місце експресії МЕР або рівень експресії МЕР із специфічною поліморфною варіацією, як запропоновано у даному описі, сприяє виявленню фенотипу "залишатися зеленим".
У іншому варіанті здійснення локусом є 5рі. Рівень або місце експресії Зрі або рівень
Зо експресії 5рі із специфічною поліморфною варіацією, як запропоновано у даному описі сприяє виявленню фенотипу "залишатися зеленим". У іншому варіанті здійснення локусом є ССО7/8.
Рівень або місце експресії ССО7/8 або рівень експресії ССО7/8 із специфічною поліморфною варіацією, як запропоновано у даному описі, сприяє виявленню фенотипу "залишатися зеленим".
Локуси "залишатися зеленим" можуть експресуватися у всій рослинній тканині або у вибраній тканині. Також може бути вибрана диференційна експресія.
У даному описі наданий спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, який включає введення у рослину або у батьківську рослину одного або більше локусів, відповідних локусу, розташованому у ЗІ, 592, 5ІдЗа, 5ІДЗЬ або 5194, як перераховано в таблицях ТА-16, або його функціонального еквівалента або агента, який модулює експресію природженої форми одного або більше із цих локусів, де рівень і/або місце експресії одного або більше локусів викликають зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання.
Наданий у даному описі спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, де спосіб включає введення у рослину або у батьківську рослину одного або більше локусів, відповідних локусу, розташованому в Зі9Ч1, 5142, 5ідЗа, 5ЗІ9З3р або 5194, як перераховано у таблиці 1В, або їх функціонального еквівалента або агента, який модулює експресію природженої форми одного або більше із цих локусів, де рівень і/або місце експресії одного або більше із локусів викликають зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання.
У одному із варіантів здійснення ЗОРІМ2 (для ЗБогопит бБісоїог член сімейства компонента носія, який виділяє ауксин 2) знаходиться у 519д2 на хромосомі 3, тонко картованої у області між маркерними генами їхр512 і їхр530, і 5БРІМ4 у 5ЩІ на хромосомі 3, тонкий - картований в бо області між маркерними генами іхр563 і їхр442, як запропоновано у даному описі, відповідають за ознаку "залишатися зеленим" у сорго, що приводить до отримання діапазону фенотипів, які надають адаптацію до засухи через збільшення споживання води у період цвітіння (завдяки зниженню кущіння і більш дрібному листю), збільшення доступності води (завдяки збільшеному співвідношенню коріння:пагони), збільшенню ефективності транспірації при помірному водному дефіциті (завдяки більш високій концентрації азоту у листках), збільшенню біомаси на одиницю листкової поверхні при граничному водному дефіциті (завдяки збільшенню транспірації на одиницю листкової поверхні) і збільшенню урожаю зерна, розміру зерна і стійкості до вилягання.
Посилання на їхр маркерні гени у сорго поширюється на еквівалентні маркерні гени у геномі інших рослин.
Іншим аспектом, наведеним у даному описі, є спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, який включає введення у рослину або у батьківську рослину одного або більше локусів, відповідних 5ОРІМ1-11, ІРА-1, УМЕР, Зрі і/або ССО7/8 або їх функціональному еквіваленту, або агента, який модулює експресію природженої форми одного або більше із цих локусів, де рівень і/або місце експресії одного або більше із цих локусів викликають зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання. "Функціональний еквівалент" локусу включає молекулу кКДНК або гомолог із інших видів рослин. Цей аспект включає рекомбінантний підхід для введення локусу або протокол розмноження для введення або вибору локусу із специфічним профілем експресії.
Даний винахід додатково описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, спосіб, який включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу або кКДНнК, який кодує локус, розташований у 5941 або у молекулі, яка модулює експресію природженого локусу. Приклади перераховані у таблицях 1А-1С, таких як таблиця 18.
Дане розкриття додатково описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, який включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу або кДНК, яка кодує
Зо локус, розташований у 5942, або молекули, яка модулює експресію природженого локусу.
Приклади перераховані у таблицях 1А-1С, таких як таблиця 18.
Дане розкриття додатково описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, який включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу або кДНК, яка кодує локус, розташований у 5ідЗа, або молекули, яка модулює експресію природженого локусу.
Приклади перераховані в таблицях 1А-1С, таких як таблиця 18.
Дане розкриття додатково описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, який включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу або кКДНК, яка кодує локус, розташований у 5І93Бб, або молекули, яка модулює експресію природженого локусу.
Приклади перераховані в таблицях 1А-1С, таких як таблиця 18.
Дане розкриття додатково описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, який включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу або кДНК, яка кодує локус, розташований у 594, або молекули, яка модулює експресію природженого локусу.
Приклади перераховані в таблицях 1А-1С, таких як таблиця 18.
Дане розкриття додатково описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, який включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу або кДНК, яка кодує білок РІМ, або молекули, яка модулює експресію природженого локусу РІМ. Прикладами РІМ є
ЗБРІМІ1-11, які включають 5БРІМА і ББРІМА і інші ББРІМ, перераховані у таблиці 1А, так само як їх еквіваленти в інших рослинах.
У іншому варіанті здійснення дане розкриття описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, який включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу або кДНК, яка кодує ІРА-1, або їх функціонального гомолога або ортолога, або агента, який модулює рівень експресії природженого ІРА-1, щоб викликати зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до 60 збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання.
У іншому варіанті здійснення дане розкриття описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, який включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу або кКДНК, яка кодує УМЕР, або їх функціонального гомолога або ортолога, або агента, який модулює рівень експресії природженого МЕР, щоб викликати зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання.
У іншому варіанті здійснення дане розкриття описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, де спосіб включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу або кДНК, яка кодує 5рі, або їх функціонального гомолога або ортолога, або агента, який модулює рівень експресії природженого 5рі, щоб викликати зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання.
У іншому варіанті здійснення дане розкриття описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, де спосіб включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу або кДНК, яка кодує ССО7/8, або їх функціонального гомолога, або ортолога, або агента, який модулює рівень експресії природженого ССО7/8, щоб викликати зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання.
У одному із варіантів здійснення рослини модифікують або відбирають, щоб змінити рівень експресії двох або більше із локусів, перерахованих у таблицях 1В або 1с.
У одному із варіантів здійснення рослини модифікують або відбирають, щоб змінити рівень експресії двох або більше із РІМ, ІРА-1, МЕР, Зрі і/або ССО7/8 і/або двох або більше РІМ.
Генетично модифіковані рослини і їх потомство, які демонструють ознаку "залишатися зеленим", також допускаються у даному описі, так само як насіння, плоди і квіти, ії інші репродуктивні або пророщувані органи. Такі "генетично модифіковані рослини" включають рослини, модифіковані рекомбінантними засобами, так само як рослини, відібрані за допомогою протоколів розмноження і/або рослини, піддані мутагенезу і селекції.
У даному описі допускається генетичний матеріал, який кодує продукт, який асоційований із або сприяє виявленню фенотипу "залишатися зеленим", де фенотип включає в себе зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання, і локусом, який кодується в області БІДХ, де Х є цифрою, відповідною місцю на хромосомі, і де
ЗІДХ ідентифікують шляхом тонкого генетичного картування, як допускають на ньому, як в функціональному еквіваленті 5ІдДХ. Генетичний матеріал є корисним для отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, так само як для того розробки маркерних генів для селекції ознак під час протоколу розмноження.
Генетичний матеріал, розглянутий у даному описі, включає кДНК, геномну ДНК і ідіоплазму, яка кодує один або більше локусів, перерахованих у таблицях 1А-1С, таких як таблиця 18.
Генетичний матеріал, розглянутий у даному описі, включає кДНК, геномну ДНК і ідіоплазму, яка кодує один або більше із РІМ, ІРА-1, М/ЕР, 5рі і/або ССО7/8. Посилання на "РІМ" включає один або більше РІМ.
У даному описі надана система управління рослиною для зниження залежності урожаю сільськогосподарської культури від води або іншим чином поліпшення ефективності споживання води і збільшення урожаю зерна або продукту. Система управління рослиною включає отримання сільськогосподарської культури, адаптованої до засухи, включаючи зернові злаки, із застосуванням селекції і експресії локусу 5ІДХ або його функціонального еквівалента окремо або у комбінації із введенням інших корисних ознак, таких як розмір зерна, розмір кореня, солестійкість, стійкість до гербіцидів, стійкість до шкідників і т. п. Альтернативно або у доповнення, система управління рослиною включає, отримання адаптованих до засухи рослин і сільськогосподарські прийоми, такі як зрошування, вимоги до живлення, щільність сільськогосподарської культури і геометрія, боротьба із бур'янами, боротьба із комахами, бо аерація грунту, мінімальна обробка грунту, піднесені грядки і т. п. Приклади локусу ЗІДХ у сорго включають 50БРІМІ1 - 11, ІРА-1, МЕР, Зрі ії ССО7/8 і їх еквіваленти у інших рослинах. Приклади локусів включають розташовані в 5941, 5ід2, ЗЗа, 5ідЗБ і/або 5194 (див. таблиці 1А-1С, такі як таблиця 18).
Бізнес-модель також наведена у даному описі для поліпшення економічної вигоди від урожаю сільськогосподарської культури, де модель включає отримання сільськогосподарських рослин, які містять вибрану ознаку 5ІДХ, або підвищену або знижену ознаку 5БІДХ, яка приводить до отримання сільськогосподарської рослини із зсувом водоспоживання у цієї рослини на період після цвітіння, таким чином, збільшуючи Ні і урожай зерна в умовах обмеженого водопостачання, отримання насіння від отриманої сільськогосподарської рослини і розподіл насіння між виробниками насіння для збільшення урожаю і прибутку.
Дане розкриття додатково описує маркерні гени для фенотипу "залишатися зеленим" для застосування у програмах розведення засухостійких рослин, де маркерні гени включають локус ознаки "залишатися зеленим" Х (5І94Х), де Х є цифрою, яка відповідає місцю на хромосомі у рослині сорго, або її еквіваленту у іншій рослині, який кодує продукт, асоційований із або сприяючий виявленню фенотипу "залишатися зеленим", де фенотип включає в себе зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання.
Приклади придатних маркерних генів включають 5191 на хромосомі З між їхр581 і їхр38; 592 на хромосомі З між їхр530 і їхр31; 593 розділений на 5ідзЗа (область між їхр298 і 5РЬ-2568) і ЗІЮДЗЬ (область між 5РЬ-2568 і їхр179) і 544 на хромосомі 5 між їхр283 і їхр15. Приклади включають перераховані в таблицях 18 і 1С. Ці маркерні гени виявлені на основі геному сорго, але мають еквіваленти у геномах інших рослин. Крім того, маркерний ген, суміжний або прилеглий до геномних місць, наведених вище, також може бути застосований для скринування специфічного потомства у програмі розведення.
Отже, у даному описі наведений ряд біомаркерів, включаючи 501 на хромосомі З між їхр581 і їхр38; 542 на хромосомі З між їхр530 і їхр31; 5943 розділений на 5ідзЗа (область між їхр298 і 5РБ-2568) і 5І9д4З3Ь (область між 5РЬБ-2568 і їхр179) і 5ід4 на хромосомі 5 між їхр283 і їхр15 на хромосомі 5 у сорго, або його еквівалент у геномі іншої рослини. Такі маркерні гени корисні у протоколах розмноження, розроблених для отримання рослин, які демонструють фенотип "залишатися зеленим". Приклади локусів перераховані у таблицях 1А-1С. Специфічні приклади наведені у таблиці 18.
У одному із варіантів здійснення локус знаходиться у 51941, яка вибрана із РІМ5, СІО112,
Р45098А1, нечутливих до індол-3-ацетату і брасиностероїдів.
У одному із варіантів здійснення локус знаходиться у 5142 і є компонентом носія, який виділяє ауксин За (РІМЗа).
У одному із варіантів здійснення локус знаходиться у області 5ідзЗа, яка вибрана із білка, подібного білку, який відповідає за старіння листка (5260029023510), білка, подібного білку, який відповідає за старіння листка (56029023520), КАМОЗАЇ С2Н?2 із доменом "цинкові пальці" білка фактора транскрипції (55029024410), білка передбачуваного ауксин-незалежного прискорювача росту (560029024540), білка, схожого із білком, подібним білку, чутливому до дегідратації (5р029024670), білка, подібного білку транспортера глюкози (560029024690), МУКУ білка фактора транскрипції 76 (56029024760), глутамінсинтазаподібного білка (5260029025100), білка, асоційованого із старінням ОН (5р029025180), передбачуваної аланінамінотрансферази (55029025480), білка, подібного ауксин-індукованому білку (565029025610), білка, подібного ауксин-індукованому білку (56029025620), передбачуваного білка із непарною відповіддю в дальній червоній області (56029025670), білка, подібного (цитохром-Р450)-монооксигеназі
СУРО2А1Т (560029025820), ауксин-незалежного прискорювача росту (56029025960), аспарт- атамінотрансферази (565029026430), білка, подібного 8'-гідроксилазі З абсцизинової кислоти (55029026600), білка, схожого із етилен-зв'язувальним білком (55029026630) і сімейства передбачуваних ауксин-індукованих білків (ЗБ029027150).
У одному із варіантів здійснення локус знаходиться у 5930, вибраному від передбачуваного ауксин-незалежного прискорювача росту (560029027470), білка бдциатоза промотор- зв'язувального подібного білка 17 (565029028420), білка, подібного білку 0О50940505400 (О5РІМО) (55029029210), білка Здиатовза промотор-зв'язувального подібного білка 17 (565029029300), білка, схожого із ауксин-індукованим білком (56029029630).
У одному із варіантів здійснення локус знаходиться у 5194, вибраному із рецептора брасиностероїду ІБК (565059006842), рецептора брасиностероїду ЇЖКК (56059006860), передбачуваного білка із непарною відповіддю у дальній червоній області (56Б059007130), бо цитохрому Р450 84А1 (565059007210), рецептора гібереліну 5І0112 (565059007270), рецептора гібереліну СІЮ112 (56059007290), сахароза-фосфат синтази (5Б059007310), аквапорину 5ІР1-1 (5р059007520), гіберелін 20 оксидази 2 (5Б6059008460), О5ІДА29-ауксин-чутливого білка (565059008510), О5ІДА29 - ауксин-чутливого білка (50Б059008512), білка-рецептора гібереліну
СІО112 (55059008610), білка, подібного амінотрансферазі, передбачуваного білка (5р059009410), індол-3-оцтової кислоти амідопохідної сполуки (56059010310), індол-3-оцтової кислоти амідопохідної сполуки (560054010320), індол-3-оцтової кислоти амідопохідної сполуки (565059010326), цитохрому Рі450 86А2 (5р059010360), цитохрому Р450 51, передбачуваного білка (560059011296), цитохрому Р.4-50 51, передбачуваного білка (565059011430), триацилгліцеролліпази, білка старіння листка, білка (ОО біосинтезу жасминової кислоти (50059013160), регулятора росту, такого як (50059015590), цитохрому РаібБО 78А4 (5р059016750), білка, подібного білку із сімейства АВС-транспортерів, експресованого білка (5р059017120) і Запатоза промотор-зв'язувального подібного білка 19 (56059017510).
У наведеній специфікації застосовуються наступні абревіатури:
СоО7/8 ген, який надає фенотип "залишатися зеленим"
СІ довірчий інтервал
СМми споживання води сільськогосподарською культурою
ОМ суха вага
СІА зелена листкова поверхня но висока щільність
НІ індекс збору урожаю нт сильне кущіння
НМ надлишок води
НУНО надлишок води, висока щільність (помірний дефіцит води)
НМТ О надлишок води, низька щільність (найменше піддані водному стресу)
ІРА-1 ідеальна архітектура рослини 1
ІЇА листкова поверхня
ЩО); низька щільність
ІТ низьке проростання
ІМ нестача води
ГгУно нестача води, висока щільність (найбільш схильні до водного стресу) щу) нестача води, низька щільність (помірний дефіцит води)
МІ. біля ізотонічна лінія
О5РІМ РІМ із рису
РАВ біомаса у період після цвітіння
РАБМ маса стебла у період після цвітіння
РІМ булавоподібне суцвіття
РРВА відношення біомас у періоди до:після цвітіння
ОТ. локус кількісної ознаки во5 укриття від дощу
ВМС відносний вміст води
ЗБРІМ РІМ із сорго
ЗЛ питома вага листка
ЗМІ. статистичне машинне навчання рі Здцчатоза промотор-зв'язувальний подібний білок
ЗІ ознака "залишатися зеленим" від область тонкого генетичного картування між їхр5б3 і їхр581, яка містить 60 анотованих генів більш велика середня область між їхр440 іїхр580, яка містить 307 анотованих генів кандидати у хвості між їхр580 і їхр38, які містять 178 анотованих генів від? область тонкого генетичного картування між їхр512 і їхр2, яка містить 15 анотованих генів більш велика область між їхр31 і їхр530, яка містить 241 анотований ген зюаЗа вся область між їхр298 і 5РЬр-2568, яка містить 520 анотованих генів
ЗаЗЬ вся область між 5Рр-2568 і їхр179, яка містить 291 анотований ген зіа4 вся область, обмежена їхр283 і їхр15, яка містить 306 анотованих генів т транспірація т2 кущіння в пазусі листка 2
ТЗ кущіння в пазусі листка З т4 кущіння в пазусі листка 4 ть кущіння в пазусі листка 5 т6 кущіння в пазусі листка 6
ТЕ ефективність транспірації т5 граничний стрес
МРО дефіцит тиску пари ' й
МІРА М/еайНу Рагтегз Рапісіє
ММ добре зволожений.
Таблиця 1А надає інформацію про РІМ із сорго і рису.
Задля ЗА. уч ї У зе че
Дезаліні ЗОКИНН БЕЗ, 1 оЖМвня ої Бижовий т. Ко | їЖ І дув пераЖеиь: Е : Її. 00000 Мем ХУКЬОЮЬ зим!
І сбоме 1 Нею РОМе Жак кмин Б о НЕ Денкащю зи ре воВЩВ. ом полова пово ново палат ввно вв оо моннннан ння ми ов с поввни миснни - со н функ
КшОВІ т Н у т Н і ї і Н Бемианкех ї і т 1 СЗЗ НАВ ВВЕ: В ОВУ ЯМІ ЗВОваЯ І ЛОТИ БАНЮ івве жо мя ; МОВ ї : : ї , : і Н Е ї мохом В В
Н ї 7 7 1 | ї7 і І т т пжнюка Її ї й : - : ! : ! : : Її вв каючки о і щої зе іжщшз5 :
ОДА з НА с Не зн нн у о ОН о вх ретененнннннянс
Ї : Н : ; Н ; Н і і Е ПОНеВИ Її ї мин ЩІ Ї сплжжхоллоя мілко і В. дкиляпкк М длюілкя їн ЗВУК. ГО ІМ Мк ; ши ес Сн п фКконоМ і ОХ й і БИ КУМ рве ОБ ЖЕК фе і ! ! | ! | М ший й
ЕП пи но по о о ни вн я оо оо: А: НЕ НН, ї ї ї Н 1 : ї : | ї ТУ 1 бююехо Її ро Н і 1 ї Н ї 1 Н Н і В ТОМБДИВІх ЛКФМаВЕ 1 і це: і
ЗНО ПАН КК М А и З Ко В АН В В ВН : Н : 1 ' ! ! т Ї Ін Ткиаки ї ! : з Н : : Н Н Н ї Н І Бо і Е
ОДН ПЕ и С НЕ оо ок НН сти : ї і : Н і Н Н Н ї В У і Н пиши нин нн ня ви вин но нн ники и ява нь мне. : 1 Її ї : і Н ї Ї Ї тю г :
Е Е ; і і ; 053000 ямі візи тю іще 4 :
Ох ПО А в В З в ЗЕ В В До ПК
І : ! : Ї 7 5 ї і Н Я ТЕМА жи і ! ! : і : ї Ї і Я | Н Н Гояокню Н і і
ЕВОАН МИОК п дно ВІК ЕВ ЯК Б дент і : є Н ї : Н В Ї ї Н : Н Н НЕ і і ЗО Н Н : : 4 Н Н Н ї Зої ї і йиемкої
ОНА ННННН МОНА ОАЕ НААН, МА НА НК о ЗМ КЗ ВАМИ
По і Ї ї ї і Н і і Я ї фони ; Е : ї Я і і Я і : : Ї со; 1 ЖК і ! і
ПО ДИ ОВ ОМ ПОКИ НА КЕН в с В о ІНН ВИ НН
Н Н : : Н Я : ї Н І ЗУМКУТН» о оуюмюх З їн Н
Н Н : : і Н ї В Я ІА | кокос І : Н і 1
Й ї сгтеннбігтсттоттот Мол Ї дюни В сотеоттчной НИ НЕ АЙ о у
Н і : : 1 Н ї НЕОН і і Н З
Н ї Я і ї Н Н ї бю ої х : Н І вцкноке зюжюю; і : | : : в Е ше. | зак х
ЗО нс НН ЗМ ВНЗ ВО) ЯМ ОЗ МНН - і З ї ом, вхея я я кни ни шк г третя ния пише пф портр 8 і саме їм: Би ЇЇ жар зі смеамі обі мав ї і Н 1. я Н
Я нн В ня дме: Б: лозі маеві оон Кос и ОК в в
Н ІЗ : : 1 Її ї В ї ї Ї ї КЗ пЕЦАЖОІ ї ; : ї і : і і : і рекет у і заалеж
ЗВ но ЖИЖНІ 00 АБ ВОКаМ ЯНЬОЄ 1 сб ЗафБюуа І ЛЕ БоєВІІ і Са ЕІ ЗОККВК жи; В КК ВК : То й Н Ї Ї ї ї ЕК вет Зв МЕ ї і нин нн и п п п и и п и НЕ ВН о ее нак осн НАМ
Н Я ї : і Н Н Н Ї ТОБУМНУЄМ у Маомтос і і І й З сідденннну ПОДА А З НА ННЯ 1.201000 фо 5 І КО
Я й Ще номен у Ще Її НІ 1 ТБ г ваоеа ї я я
Н і Ї В і Н і Ковка Ген еще : за Н пн аа и па по пол о по, Ко В Мои М НМ Же Мн
Н ї їх 1 1 ї ту у деку тки Ї зх ще ІЗ :. ї З ЖІ ЗОШ ХУ УМХ іх МІ щІ
ВО З СЕ «А А ЕН палінні НВ МВВ ЛОВ СВК нн і : ТЕ Ї | щ | ї ГК. І Ї ї Ї : ізо ї і Ї Н В: і і ідо і ї 1 | і ; їх ії тЗащим?: с 5вщох ї за і заацї зт23 1 фхаукіаик і ов ї Іі ь Ж дет І
З і пи пн по и св: я п пане ши: пон Н ! дтнчнен шин - ї ї г |: ї ї ї ї і ВИМ:
Н ї ї Н і і! і : ї Н Н Н Тв.
І Едельолех І ї ї ї 5 і Н Н ї і ер онни і їаха: і вия іс ІоОНОКІВ. І ББОХ і ВО А І 05 НБН: а 8 Мила: ЖІ ЦЮ. БМК. Й,
Е і Я : і і : і ї Н і Княже Н і 1
ДН ПИ нн ПА: о ЗК пн З ня ск ек ЗИ ОСА НН
Ї | ! Ї Ї ї Н : Ї Н р пзухаани ї Ні Н
НЕК З Пе п САН: ї З нн ВІКА КВУ А ОХ ЖЕУВ со
СС ее овею |земо ве пн нина я ан І НЕ т и і МОБІМО. ! ЗЯКІЙ ї Я ї ЖЕ ї ше пн | - Шо ї Ах ! МИХ АДя Е В ВЕ ! ЕВ шк нон пон нн п о п п пн нн нн нн я : : Ї ! ! ! не я Е | | вк
Таблиця 18
Області 59
Область 5191
Область тонкого генетичного картування (область між їхр563 і їхр581, яка містить 60 анотованих генів): - вірогідний компонент носія, із виділенням ауксину 5, РІМ5 (56039037350), основний кандидат - білок-рецептор гібереліну СІО11 2 (50039037296) - білок цитохром Р450 98А1 (565034037380) - білок індол-3-ацетат (525039037450) - білок, нечутливий до брасиностероїдів (ЗБО34037580)
Більш велика середня область (область між їхр440 і їхр580, яка містить 307 анотованих генів): - білок цитокінін-дегідрогеназа 5 (56039036160) - білок О-еритро-сфінгозин кіназа АВА (56039036460) - білок центрин відповідь на ауксин. СО (565039036610) - білок індол-3-оцтової кислоти амідопохідної сполуки (5256039036680) - подібний етилен-чутливому фактору фактор транскрипції ЕКРІ 1с (56039037080) - подібний етилен-чутливому фактору фактор транскрипції ЕКРІ 1с (56039037085) - білок сімейства І ейсіпе Кісп Кереаї (56039037140) - білок фактора транскрипції ЗАМУВ гіберелін ТЕ (56Б039037680) - білок симпортер водню ауксину (526039038030) - білок фактора транскрипції І АХ (56039038820) - білок гібереліну 20 оксидази 2 (526039038880)
Кандидати у хвості (область між їхр580 і їхр38, яка містить 178 анотованих генів): - білок цитокінін-дегідрогеназа 5 (56039036160) - білок протеїн-фосфатаза 2С. АВА 5іотаїйа (565039039630) - білок дема ргоїїпе Біозуп АВА маїег СО (55039039820) - білок, подібний транспортеру ауксину гоої сар. СО (55039040320) - білок, зв'язувальний АВА-регульовані елементи (56039040510)
Область 5192
Область тонкого генетичного картування (область між їхр512 і їхр2, яка містить 15 анотованих генів): - вірогідний компонент носія, із виділенням ауксину За РІМЗа (560349029320), основний кандидат
Більш велика область (область між їхр31 і їхр530, яка містить 241 анотованих генів): - білок ауксин-індукований білок (526039028020) - білок ауксин-індукований білок (526039028050) - білок ауксин-індукований білок (526039028060) - білок індол-3-оцтової кислоти амідопохіда сполука (56Б03д028240) - білок цитохром Р450 72А1 (565034028560) - білок, нечутливий до брасиностероїдів (2Б0349028800) - білок (АВА глюкозилтрансфераза СО) (56039029060) - білок (АВА глюкозилтрансфераза СО) (56Б039029070) - білок (АВА глюкозилтрансфераза СО) (56039029080) - білок ОБ ГА білок КОСА, передбачуваний (56039029470) - білок нечутливий до брасиностероїдів (55039029550)
Таблиця 18 (продовження)
Область 593
ЗідЗа вся область (область між їхр298 і 5РЬ-2568, яка містить 520 анотованих генів): - білок, подібний білку, який відповідає за старіння листка (526029023510) - білок, подібний білку, який відповідає за старіння листка (526029023520) - КАМОЗА1 С2На із доменом "цинкові пальці" білка фактора транскрипції (5Б029024410) - білок, передбачуваний ауксин-незалежний прискорювач росту (565029024540) - білок, схожий із чутливим до дегідратації білком (565029024670) - білок, схожий із транспортером глюкози (565029024690) - МККУ білок фактора транскрипції 76 (56029024760) - глутамін-синтаза-подібний білок (526029025100) - білок, асоційований із старінням ОН (56029025180) - передбачувана аланінамінотрансфераза (565029025480) - білок, подібний ауксин-індукованому білку (5Б029025610) - білок, подібний ауксин-індукованому білку (5Б0249025620) - слабо схожий із передбачуваним білком із непарною відповіддю у дальній червоній області (5БрОо2г9025670) - білок, схожий із (цитохром-Р450)-монооксигеназою СУРУ2АТ1 (56029025820) - ауксин-незалежний прискорювач росту (56029025960) - аспартатамінотрансфераза (56029026430) - білок, схожий із 8'-гідроксилазою З абсцизинової кислоти (5Б029026600) - білок, схожий із етилен-зв'язувальним білком (56029026630) - слабо схожий із передбачуваним ауксин-індукованим сімейством білків (526029027150) 5ІДЗЬ вся область (область між 5РЬБ-2568 і їхр179, яка містить 291 анотованих генів): - схожий із передбачуваним ауксин-незалежним прискорювачем росту (565029027470) - білок Запатовза промотор-зв'язувального подібного білка 17 (560029028420) - білок, подібний білку 0О50990505400 (О5РІМО9) (5рО2г7а029210) - білок Запатовза промотор-зв'язувального подібного білка 17 (560029029300) - білок, схожий із ауксин-індукованим білком (526029029630)
Область 5194
Вся область 5144 (область, обмежена іхр283 і їхр15, яка містить 306 анотованих генів): - білок-рецептор брасиностероїду І КК (5Б6059006842) - білок-рецептор брасиностероїду І КК (5Б059006860) - слабо схожий із передбачуваним білком із непарною відповіддю у дальній червоній області (56Б059007130) - білок цитохром Р450 84А1 (5Б059007210) - білок-рецептор гібереліну СІС11І 2 (5БО59007270) - білок-рецептор гібереліну СІС11І 2 (5БО59007290) - білок сахароза-фосфат синтаза (526059007310) - аквапорин ЗІР1-1 (5р054007520) - білок гібереліну 20 оксидаза 2 (56059008460) - білок ОБІДА29 - ауксин-чутливий білок (26059008510) - білок ОБІДА29 - ауксин-чутливий білок (526059008512) - білок-рецептор гібереліну СІО11І 2 (2БО59008610) - схожий із амінотрансферазою, передбачуваний білок (5Б059009410) - білок індол-3-оцтової кислоти амідопохіда сполука (ЗБ0О59010310) - білок індол-3-оцтової кислоти амідопохіда сполука (5ЗБ059010320) - білок індол-3-оцтової кислоти амідопохіда сполука (5ЗБ059010326) - білок цитохром Р450 86А2 (565Б059010360) - білок цитохром Р450 51, передбачуваний білок (526059011296) - білок цитохром Р450 51, передбачуваний білок 5БО59011430) - білок триацилгліцеролліпаза, білок старіння листка, білок ЗО біосинтезу жасминової кислоти (56059013160) - білок, подібний білка регулятора росту (5БО59015590) - білок цитохром Р450 78А4 (565Б0590167 50) - білок, подібний білка сімейства АВС-транспортерів, експресований білок (5БО59017120) - білок Запатовза промотор-зв'язувального подібного білка 19 (526059017510)
Таблиця 1С
Потенційний механізм надання фенотипу "залишатися зеленим"
Ся Запученість Потенційний механізм надання 9 ІО гена Анотація ученість у фенотипу "залишатися
ОТ. метаболічні шляхи " зеленим
Надмірна експресія цього гена може приводити до підвищення поглинання ІАА в порожнину ЕК і зниження шо Й ріст пазушної доступності ІАА в цитозолі вірогідний компонент бруньки, (Мгамес 2009), може
За! | 5рО39037350 | носія, із виділенням полярний приводити до зниження ауксину 5, РІМ5 полярного транспорту транспорт ауксину . ауксину, що збільшує конкуренцію між зародками (ШЮотадаї5Ка 2011) (тобто один зародок зростає і пригнічує інших).
Гібереліни дестабілізують від! | 5Ь039037296 | білок рецептор подовження супресорами ло овження Цей 9 9 гібереліну СІС1І1 2 клітини упресор д І ген може мати вплив на розмір листка
Цей ген може змінювати біпок цитохром РА50 ріст пазушної біосинтез стриголактонів.
За! | БрОЗ9037380 98 В Р бруньки, шлях Стриголактони в свою чергу є стриголактону понижувальними регуляторами кущіння. ріст пазушної . . а бруньки, розмір | Цей ген може кодувати 91 |55039037450 білок індол-З-ацетат листка, біосинтез |біосинтез ауксину. ауксину
Брасиностероїди підвищуючи білок. нечутливий до ріст пазушної регулюють носіїв, які
За! | БрОЗ9037580 б асиноств, оїдів д бруньки, старіння, | виділяють ауксин
Р род транспорт ауксину| АВСВ/РОР19 і пов'язані із старінням. від1 56039036160 білок цитокінін- бруньки синтез цитокініни підвищуючи дегідрогеназа 5 цитокініну регулюють росту зародка білок О-еритро- передача сигналів| АВА пов'язаний із регуляцією ат | БрОЗ39036460 сфінгозинкіназа. АВА поді регуляція вето лина продихів у білок центрин відповідь | передача сигналів| Цей ген може змінювати 591 | ЗБОЗ9036610 наауксин БО ауксину сприйнятливість ауксину. . . а. . ріст пазушної віді | 8Б039036680 кислоти амідопохіда о |бруньки, розмір | Цей ген може кодувати 9 9 д д листка, біосинтез |біосинтез ауксину. сполука ауксин подібний етилен- Етилен впливає на ріст кореня чутливому фактору старіння, ріст і старіння. Мутація в цьому 591 | ЗБО39037080 фактор транскрипції кореня гені змінює чутливість до
ЕВРІТс етилену. подібний етилен- Етилен впливає на ріст кореня чутливому фактору старіння, ріст і старіння. Мутація в цьому 591 | ЗБО39037085 фактор транскрипції кореня гені змінює чутливість до
ЕВРІТс етилену.
Таблиця 1С (Продовження)
Ся Запученість Потенційний механізм надання 9 ІО гена Анотація ученість у фенотипу "залишатися
ОТ. метаболічні шляхи зеденим" іст пазушної МАХ, який є локусом у шляху вві | в603а037140 білок сімейства І ейсіпе я ві шлях стриголактону, знаходиться у 9 9 Вісп Нереаї ру й сімействі білків І ейсіпе Вісн стриголактону Вереа!.
Гібереліни білок фактора подовження дестабілізуватимуть білки
За | БрО39037680 | транскрипції клини РЕА, які є супресорами
САМУВ гіберелін ТЕ подовження. Цей ген міг мати впливи на розмір листка. іст пазушної Цей ген може впливати на вві | в503а038030 білок симпортер водню я ві транспорт ауксину. Ауксини 9 9 ауксину РУ ' пов'язані із ростом пагонів і транспорт ауксину кореня.
І АХ кодує носій вхідного білок фактор потоку ауксину. Ауксини 591 | З5БО39038820 транскрипції ГАХ транспорт ауксинуУ пов'язані із ростом пагонів і кореня. від1 56039036160 білок цитокінін- бруньки синтез Цитокініни підвищуючи дегідрогеназа 5 цитокініну регулюють ріст зародка. . . передача сигналів| АВА пов'язаний із регуляцією
За | БрО39039630 рок двотеїнфої сфатаза впливу, регуляція | росту і змиканням продихів у - продихів відповідь на стрес. біпок дена огоїпе передача сигналів| АВА пов'язаний із регуляцією
За! | 5рО390398201,., -Р впливу, регуляція | росту і змиканням продихів у
Біозхуп АВА маїєї 10 й й й продихів відповідь на стрес. білок, подібний білку Ауксини пов'язані із ростом ат | БрО39040320 | транспортера транспорт ауксину укси! р пагонів або кореня. ауксину гоої сар СО білок, зв'язувальний передача сигналів| АВА пов'язаний із регуляцією
За! | 5рО039040510 | АВА-регульовані стресу, регуляція | росту і змиканням продихів у елементи продихів відповідь на стрес.
Надекспресія цього гена може приводити до збільшеного експорту ІАА (Мгамес 2009) і . . може приводити до
ПІД ріст пазушної . вірогідний компонент бруньки збільшеного полярного
Заг | БрОЗд9029320 | носія, із виділенням ій ний транспорту ауксину, який ауксину За РІМЗа Р може пригнічувати відросток транспорт ауксину зародка за допомогою підвищеного апікального домінування (Шотадаї5Ка 2011). білок, подібний ауксин- Ауксини пов'язані із ростом 592 | ЗБОЗ9028020 індукованому білку шлях ауксину пагонів або кореня. білок, подібний ауксин- Ауксини пов'язані із ростом іде | ЗБОЗ9028050 індукованому білку шлях ауксину пагонів або кореня. білок, подібний ауксин- Ауксини пов'язані із ростом іде | ЗБОЗ9028060 індукованому білку шлях ауксину пагонів або кореня. . . . ріст пазушної білок індол-З-оцтової бруньки, розмір | Цей ген може кодувати іде | ЗБОЗ9028240 сполука амідопохіда листка, біосинтез |біосинтез ауксину.
У ауксину
Таблиця 1С (Продовження) ві Залученість у Потенційний механізм
Оті. ІО гена Анотація метаболічні надання фенотипу шляхи "залишатися зеленим"
Цей ген може змінювати ріст пазушної біосинтез стриголактонів. 2 | БрОЗ9028560 | білок цитохром Р450 72А1 | бруньки, шлях Стриголактони в свою чергу стриголактону є понижувальними регуляторами кущіння. ріст пазушної Брасиностероїди . . бруньки, підвищуючи регулюють еаг | БрОоЗдО28800 білок, нечутлив в до старіння, носіїв, які виділяють ауксин
Р род транспорт АВСВ/РСРІ9 і асоційовані із ауксину старінням. передача АВА асоційований із білок (АВА сигналів стресу, |регуляцією росту і іде | З5О39029060 глюкозилтрансфераза СО) регуляція змиканням продихів у продихів відповідь на стрес. передача АВА асоційований із білок (АВА сигналів стресу, |регуляцією росту і іде | З5О39029070 глюкозилтрансфераза СО) регуляція змиканням продихів у продихів відповідь на стрес. передача АВА асоційований із білок (АВА сигналів стресу, |регуляцією росту і іде | З5О39029080 глюкозилтрансфераза СО) регуляція змиканням продихів у продихів відповідь на стрес.
Білок ОЕА є супресором росту, який взаємодіє із білок ОБГ А білка ЕСА, подовження гіберелінами, регулюючи іде | З5ОЗ9029470 передбачуваний білок клітини, ріст подовження клітини. Цей ген може регулювати розмір листка. ріст пазушної Брасиностероїди . . бруньки, підвищуючи регулюють аг | БрОЗд029550 білок, нечутлив в до старіння, носії, які виділяють ауксин
Р род транспорт АВСВ/РСР9 і пов'язані із ауксин старінням. білок, подібний білку, який безпосередньо впливати на зюиЗа!| 5рО02г7а023510 відповідає за старіння старіння площу зеленої листкової поверхні після цвітіння. . . од: - Цей ген може білок, подібний білку, який безпосередньо впливати на зюиЗа!| 5рОг7а023520 відповідає за старіння старіння площу зеленої листкової поверхні після цвітіння.
КАМО5ИЗ5Б1 є гомологом
КАМОБАТ С2Н?2 із ріст пазушної шляху стригопактону. Цей зюиЗа!| 5рО02г7а024410 доменом "цинкові пальці!" бруньки фактор транскрипції може білка фактора транскрипції впливати на проростання через локус КМ51. білок, передбачуваного й зЗідЗа| БрО29024540 | ауксин-незалежного ріст Цей локус може впливати на розмір листка. прискорювача росту білок, подібний білку передача Може впливати на будь-які зюиЗа!| 5рО02г7а024670 ' пищия й ростові процеси у відповідь чутливому до дегідратації | сигналів стресу. | 4 дефіцит води.
Таблиця 1С (Продовження) ві Залученість у Потенційний механізм
Оті. ІО гена Анотація метаболічні надання фенотипу шляхи "залишатися зеленим"
Глюкоза потрібна для росту, біпок. схожий із може бути включена в зюиЗа!| 5рО027а024690 ' шлях глюкози осмотичне регулювання і 9 9 транспортером глюкози тому запобігання дегідратації. . Транскрипційні фактори зюиЗа!| 5рО027а024760 пк білка фактора регуляція генів | МУЕКУ асоційовані із різними р рипц відповідями на стрес. глутамінсинтазаподібний Цей ген може впливати на зюиЗа!| 5рО02г7а025100 білок д асиміляція азоту | підтримку площі зеленої листкової поверхні.
Цей ген може білок, асоційований із . безпосередньо впливати на
ЗідЗа| 5рО29025180 старінням ОН старіння площу зеленої листкової поверхні після цвітіння. передбачувана Цей ген може впливати на зЗідЗза| БрОгд025480 пил асиміляція азоту | підтримку площі зеленої 9 9 аланінамінотрансфераза В У писТково поверхні. білок, подібний ауксин- передача Цей ген може впливати на
ЗідЗа| ЗрО29025610 індукованому білку сигналів ауксину | ростові процеси.
Білок, подібний ауксин- передача Цей ген може впливати на
ЗідЗа| 5р029025620 індукованому білку сигналів ауксину | ростові процеси. слабо схожий із Цей ген може впливати на передбачуваним білком із | ріст пазушної сприйманість сусідів і
ЗідЗа| 5рО29025670 непарною відповіддю в бруньки вплинути на кількість дальній червоній області кущіння.
Цей ген може змінювати білок, схожий із (цитохром- | ріст пазушної біосинтез стриголактонів. зюиЗа| 5рО02а025820 | РА50)-монооксигеназою бруньки, шлях Стриголактони в свою чергу
СУРО2А!Т стриголактону є понижувальними регуляторами кущіння. передбачуваний ауксин- Цей локус може впливати на зюиЗа!| 5рО0249025960 | незалежний прискорювач | ріст розмір листка. росту
Цей ген може впливати на зюиЗа| 5рО0249026430 | аспартатамінотрансфераза| асиміляція азоту | підтримку площі зеленої листкової поверхні. й й я передача АВА пов'язаний із білок, подібний 87 сигналів стрес егуляцією росту і зюиЗа!| 5рО2а026600 | гідроксилазі З егупяція ресу, роя в о У хів абсцизинової кислоти регуляц . . род У продихів відповідь на стрес.
Етилен впливає на ріст сюза білок, подібний етилен- старіння, ріст кореня і старіння. Мутація в 9 зв'язувальному білку кореня цьому гені змінює чутливість до етилену. слабо схожий із передбачуваним ауксин- | передача Цей ген може впливати на
ЗідЗа| 5рО29027150 індукованим сімейством сигналів ауксину | ростові процеси білків схожий із передбачуваним Локус може впливати на
ЗазЗЬ | 5БрОо2г7а027470 | ауксин-незалежним ріст ус розмір листка прискорювачем росту
Таблиця 1С (Продовження)
Фроеню | жени едОдИн и
ІО гена Анотація 2, фенотипу "залишатися
ОТ. метаболічні шляхи " зеленим
Транскрипційні фактори 5РІ. залучені у ростові процеси, наприклад, тимчасове . регулювання розвитку білок Бапатова відростків. РІ 14, також відзь | Зрог4д028420 й рід ВА ріст відомий як МЕАІ ТНУ подібного білка 17 РАКМЕКЗ РАМІСГЕ, який скорочує кількість кущіння, але збільшує кількість повторних колосків у рисі (Го 2012). білок, подібний | О5РІМУО грає роль у рості еазЗЬ| БрОо2д029210 О50990505400 (О5РІМО) ріст кореня додаткового кореня (У/апд 2009
Транскрипційні фактори 5РІ. залучені у ростові процеси, й . наприклад, тимчасової білок Здватоза бруньки регуляції розвитку відростків. промотор- й ' ЗРІ14, також відомий як
ЗІЮЗЬ| ЗрО29029300 1 Зв'язувального архітектура |М/єдІТНУ гААМЕВЗ подібного білка 17 колоска (кількість РАМІСІ Е, який скорочує зерен) 2, т, кількість кущіння, але збільшує число колосків у рисі
Ї о 2012). білок, подібний ауксин- | передача сигналів| Ген може впливати на ростові
Брасиностероїди підвищуючи сія | вроБОООбВА? білок-рецептор рот пазушної регулюють носіїв, які їа 9 в руньки, старіння, | виділяють ауксин брасиностероїду КК І ранспорт ауксину, АВСВ/РОР'19 і асоційовані із старінням.
Брасиностероїди підвищуючи сія | вроБООО6ВБО білок-рецептор рот пазушної регулюють носіїв, які їа 9 в руньки, старіння, | виділяють ауксин брасиностероїду КК | ранспорт ауксину АВСВ/РСОР19 і асоційовані із старінням. слабо схожий із передбачуваним білком | . . Цей ген може впливати на
ЗІа4 | БрО59007130 | із непарною відповіддю нки сприйманість сусідів і в дальній червоній РУ вплинути на кількість кущіння. області
Цей ген може змінювати білок цитохром РАБО ріст пазушної біосинтез стриголактонів.
ЗІа4 | БрРО59007210 Аді бруньки, шлях Стриголактони в свою чергу є стриголактону понижувальними регуляторами кущіння.
Гібереліни дестабілізують в білок-рецептор подовження білки ОМ. А, які є - 194 | ББО59007270 гібереліну СІО112 клітини супресорами подовження. Цей ген може мати вплив на розмір листка.
Таблиця 1С (Продовження)
Ся Запученість Потенційний механізм надання 9 ІО гена Анотація ученість у фенотипу "залишатися
ОТ. метаболічні шляхи " зеленим
Гібереліни дестабілізують вда | вБо59007290 | білок рецептор подовження супресорами по, овження Цей 9 9 гібереліну СІСО1І1 2 клітини упресор ца І ген може мати вплив на розмір листка. єю | вро52007310 білок сахароза-фосфат асиміпяція Сахароза є фотоасимілянтом і 9 9 синтаза ц необхідна для росту.
Й с. аквапорини асоціювали із
Зіда4 | 5БрО59007520 | аквапорин БІР 1-1 транспортом молекул води.
Гібереліни дестабілізують вда | вро5дооваво | білок гібереліну 20 подовження супресорами подовження Цей 9 9 оксидаза 2 клітини упресор ца І ген може мати вплив на розмір листка. чутливий білок ауксину росту. чутливий білок ауксину росту.
Гібереліни дестабілізують від4 | вЬо5о008610 | білок рецептор подовження супресорами подовження Цей гібереліну СІЮ11 2 клітини ген може впливати на розмір листка. подібний Цей ген може впливати на
ЗІа4 | БрРО59009410 | амінотрансферазі, асиміляція азоту |підтримку площі зеленої передбачуваний листкової поверхні. . . . ріст пазушної білок індол-3-оцтової бруньки, розмір | Цей ген може кодувати зда | ЗБО59010310 | кислоти амідопохіда листка, біосинтез |біосинтез ауксину. сполука ауксину . . . ріст пазушної білок індол-3-оцтової бруньки, розмір | Цей ген може кодувати зда | ЗБО59010320 | кислоти амідопохіда листка, біосинтез |біосинтез ауксину. сполука ауксину . . . ріст пазушної білок індол-З-оцтової бруньки, розмір | Цей ген може кодувати зіда | ЗрО59010326 | кислоти амідопохіда листка, біосинтез |біосинтез ауксину. сполука ауксину
Цей ген може змінювати біпок цитохром РА50 ріст пазушної біосинтез стриголактонів.
ЗІа4 | БрРО59010360 86А? В Р бруньки, шлях Стриголактони у свою чергу є стриголактону понижувальними регуляторами кущіння.
Цей ген може змінювати . іст пазушної біосинтез стриголактонів. білок цитохром Р450 51, рі
ЗІа4 | БрРО59011296 передбачуваний білок бруньки, шлях Стриголактони у свою чергу є стриголактону понижувальними регуляторами кущіння.
Цей ген може змінювати . іст пазушної біосинтез стриголактонів. білок цитохром Р450 51, рі
ЗІа4 | БрО59011430 передбачуваний білок бруньки, шлях Стриголактони у свою чергу є стриголактону понижувальними регуляторами кущіння.
Таблиця 1С (Продовження) . Потенційний механізм надання
ЗІ ІО гена Анотація Залученість у фенотипу "залишатися
ОТ. В метаболічні шляхи У " зеленим білок триацилгліцеролліпаза, старіння, реакція Жасмінова кислота
ЗІа4 | БрО59013160 | білок старіння листка, ' асоційована із відповіддю на . І впливу білок СО біосинтезу стрес. жасминової кислоти вирннинко ут ре 000 сен
ЗІа4 | БрРО59015590 ' ріст розмір листка або кількість регулятору роста - кущіння.
Цей ген може змінювати білок цитохром РАБО ріст пазушної біосинтез стриголактонів.
ЗІа4 | БрО59016750 78АА бруньки, шлях Стриголактони в свою чергу є стриголактону понижувальними регуляторами кущіння.
Транспортери АВС, також відомі як РОР або транспортери МОК і грають білок, подібної білка із роль у вихідному потоку сімейства АВС- вихідний потік ауксину. Вони асоційовані із зіда | ЗБО59017120 транспортерів, ауксину довжиною стовбура, і деякі із експресований білок цих транспортерів взаємодіють із РімМами і можуть тому мати вплив на ріст пазушної бруньки.
Транскрипційні фактори 5РІ. залучені у ростові процеси, . . наприклад, тимчасову . ріст пазушної й : . білок Здпатоза бруньки регуляцію розвитку відростків. від4 5Б059017510 промотор- архітектура ЗРІ14, також відомий як зв'язувального о. МЕАЇ ТНУ ЕААМЕН5 : й колоска (кількість - подібного білка 19 зерен) РАМІСІ Е, який знижує кількість кущіння, але збільшує число колосків у рисі
Ї о 2012).
Короткий опис креслень
Деякі фігури містять кольорові зображення або об'єкти. Кольорові фотографії можуть бути отримані від патентовласника по запиту у відповідному патентному бюро. У разі отримання в патентному бюро, може бути запитана деяка плата.
На Фіг. 1 представлений графік, який показує взаємозв'язок між кількістю стебел на м: і площею зеленої листкової поверхні у період цвітіння в діапазоні МІЇ,, які містять різні інтрогресії
ЗІ.
На Фіг. 2 представлений графік, який показує взаємозв'язок між кількістю стебел на м: і площею зеленої листкової поверхні у період цвітіння для діапазону інтрогресій 519 у початковий
ЕТх7000, вирощений при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/ме2;
НО - 20 рослин/м).
На Фіг. 3 представлений графік, який показує гістограму очікуваних значень для стебел на одну рослину у популяції тонкого генетичного картування 5941, усереднених за три сезони.
На Ффіїг. 4 показані зведені у таблицю дані про маркерний ген (ВВ/ТТ) для популяції тонкого генетичного картування 51941. ВВ означає, що обидва алелі схожі із алелем батьком із ознакою "залишатися зеленим", ТТ означає, що обидва алелі схожі із алелем старіючого батька, х означає відсутність доступних даних про маркерний ген. Чорний і червоний колір шрифту для маркерних генів означає фактичний і передбачуваний статус маркерного гена, відповідно.
Зелене і коричневе затінення зверху для генотипів означають фенотипи залишатися зеленим
(слабке кущіння) і старіючий (сильне кущіння), відповідно. Маркерні гени, виділені рожевим кольором, вказують на імовірне місцерозташування гена "слабкого кущіння".
На Фіг. 5 представлений графік, який показує гістограму стебел на одну рослину при 44 ОАЕ для п'яти генотипів, вирощених при двох водних режимах. Генотипи включають КТх7000 (рекурентний батько), 6078-1 (донорський батько), і три на вибір із популяції тонкого генетичного картування 5ід1. НУМО - надлишок води, низька щільність (10 рослин/м-7). ЇММ.О - нестача води, низька щільність (10 рослин/м?).
На Фіг. 6 представлені зведені у таблицю дані про маркерний ген (ВВ/Т) для підвибірки із популяції тонкого генетичного картування 591. ВВ означає, що обидва алелі схожі на алель батька із ознакою "залишатися зеленим", ТТ означає, що обидва алелі схожі на алель старіючого батька, ВТ означає, що один алель схожий на алель батька із ознакою "залишатися зеленим", інший схожий на алель старіючого батька, х означає відсутність доступних даних про маркерний ген. Зелене і коричневе затінення зверху для генотипів означають фенотипи залишатися зеленим (слабке кущіння) і старіючий (сильне кущіння), відповідно. Маркерні гени, виділені рожевим кольором, вказують на імовірне місцерозташування гена "слабкого кущіння".
На Фіг. 7 представлений графік, який показує фенотипічну варіацію у популяції тонкого генетичного картування 541 для наявності Т2.
На Фіг. 8 представлений графік, який показує фенотипічну варіацію у популяції тонкого генетичного картування 541 для наявності Т3.
На Фіг. 9 представлені зведені у таблицю зображення, які показують гістограму наявності 12 для восьми рекомбінантних генів сильного кущіння і восьми - слабкого кущіння із популяції тонкого генетичного картування 5191.
На фіг. 10 представлені зведені у таблицю дані про маркерний ген (ВВ/ТТ) для популяції тонкого генетичного картування 5141. ВВ означає, що обидва алелі схожі на алель батька із ознакою "залишатися зеленим", ТТ означає, що обидва алелі схожі на алель старіючого батька,
ВТ означає, що один алель схожий на алель батька із ознакою "залишатися зеленим", інший схожий на алель старіючого батька, х означає відсутність доступних даних про маркерний ген.
Чорний і червоний колір шрифту для маркерних генів означає фактичний і передбачуваний статуси маркерного гена, відповідно. Зелене і коричневе затінення зверху для генотипів означає
Зо фенотипи залишатися зеленим (слабке кущіння) і старіючий (сильне кущіння), відповідно.
Маркерні гени, виділені рожевим кольором, вказують на імовірне місцерозташування гена "слабкого кущіння".
На Фіг. 11 представлена зведена у таблицю гістограма загальної кількості кущіння у однієї рослини для п'яти рекомбінантних генів сильного кущіння і трьох - слабкого кущіння із популяції тонкого генетичного картування 5191. Значення 2,5 було вибране як умовна межа між сильним і слабким кущінням.
На фіг. 12 представлені зведені у таблицю дані про маркерний ген (ВВ/ТТ) для популяції тонкого генетичного картування 5141. ВВ означає, що обидва алелі схожі на алель батька із ознакою "залишатися зеленим", ТТ означає, що обидва алелі схожі на алель старіючого батька,
ВТ означає, що один алель схожий на алель батька із ознакою "залишатися зеленим", інший схожий на алель старіючого батька, х означає відсутність доступних даних про маркерний ген.
Чорний і червоний колір шрифту для маркерних генів означають фактичний і передбачуваний статус маркерного гена, відповідно. Зелене і коричневе затінення зверху для генотипів означають фенотипи залишатися зеленим (слабке кущіння) і старіючий (сильне кущіння), відповідно. Маркерні гени, виділені рожевим кольором, вказують на імовірне місцерозташування гена "слабкого кущіння".
На Фіг. 13А-О0 представлені графіки, які показують розподіл листків за розміром на головному стеблі і гілках для КЕТх7000 і 6078-1 (5941 МІУ), вирощених в лізиметрах в умовах високого і низького МРО.
На Фіг. 14 представлений графік, який показує розподіл листків за розміром на головних стеблах для КТх7000, 6078-1 (5191 МІ) ії трьох рекомбінантних генів із популяції тонкого генетичного картування 51941, вирощених в умовах обмеженого водопостачання і умовах високої щільності у полі (НО - 20 рослин/м3).
На фіг. 15 представлені зведені у таблицю дані про маркерний ген (ВВ/ТТ) для популяції тонкого генетичного картування 5141. ВВ означає, що обидва алелі схожі на алель батька із ознакою "залишатися зеленим", ТТ означає, що обидва алелі схожі на алель старіючого батька,
ВТ означає, що один алель схожий на алель батька із ознакою "залишатися зеленим", інший схожий на алель старіючого батька, х означає відсутність доступних даних про маркерний ген.
Чорний і червоний колір шрифту для маркерних генів означає фактичний і передбачуваний бо статус маркерного гена, відповідно. Зелене і коричневе затінення зверху для генотипів означають фенотипи залишатися зеленим (невеликий листок) і старіючий (великий листок), відповідно. Маркерні гени, виділені рожевим кольором, вказують на імовірне місцерозташування гена "невеликих листків".
На Фіг. 16 представлений графік, на якому показано розподіл листків за розміром (1-6) для батьків популяції тонкого генетичного картування 51941, вирощених в голку.
На Фіг. 17 представлений графік, на якому показано розподіл листків по довжині (І 1-6) для батьків популяції тонкого генетичного картування 51941, вирощених в голку.
На Фіг. 18 представлений графік, на якому показано розподіл листків по ширині (1-6) для батьків популяції тонкого генетичного картування 51941, вирощених в голку.
На Фіг. 19 представлений графік, на якому показано розподіл листків за розміром (11-11) для батьків популяції тонкого генетичного картування 51941, вирощених в голку.
На Фіг. 20 представлений графік, на якому показано розподіл листків по довжині (1-10) для батьків популяції тонкого генетичного картування 51941, вирощених в голку.
На Фіг. 21 представлена зведена у таблицю гістограма фенотипічної варіації для довжини 10 у підвиборці із популяції тонкого генетичного картування 5941, вирощеної в голку.
На Фіг. 22 представлені зведені у таблицю дані про маркерний ген (ВВ/Т) для підвибірки із популяції тонкого генетичного картування 591. ВВ означає, що обидва алелі схожі на алель батька із ознакою "залишатися зеленим", ТТ означає, що обидва алелі схожі на алель старіючого батька, ВТ означає, що один алель схожий на алель батька із ознакою "залишатися зеленим", інший схожий на алель старіючого батька, х означає відсутність доступних даних про маркерний ген. Чорний і червоний колір шрифту для маркерних генів означає фактичний і передбачуваний статус маркерного гена, відповідно. Зелене і коричневе затінення зверху для генотипів означають фенотипи "залишатися зеленим" (короткий листок) і старіючий (довгий листок), відповідно. Маркерні гени, виділені рожевим кольором, вказують на імовірне місцерозташування гена "невеликих листків".
На Фіг. 23 показане схематичне уявлення, яке показує імовірне місцерозташування маркерного гена (рожеве затінення), що забезпечує фенотипи як "слабке кущіння", так і "невелике листя" в області 51.
На Фіг. 24 показана схема, яка показує, що підвищена доступність води у період цвітіння досягається через зниження споживання води завдяки двом механізмам (знижене кущіння і менші листки) у рослин, які містять область 51941.
Фі. 25 являє собою зведене у таблицю зображення, яке показує, що розмір крони модулюється як конститутивними, так і адаптивними відповідями, регульованими геном(ами) в області 5941.
На Фіг. 26 представлений графік, який показує розподіл листків за розміром на головних стеблах для КТх7000, 6078-1 (5941 МІ) ї трьох рекомбінантних генах із популяції тонкого генетичного картування 51941, вирощених в умовах обмеженого водопостачання і умовах високої щільності в полі (НО - 20 рослин/м).
На Фіг. 27 представлений графік, який показує взаємозв'язок між площею листка 12 і загальною площею зеленої листкової поверхні у період цвітіння для цих двох батьків (6078-1 і
ЕТх7000) і трьох рекомбінантних генів із популяції тонкого генетичного картування 5191.
На Фіг. 28 представлений графік, який показує взаємозв'язок між загальною площею зеленої листкової поверхні (сме/м-) і водоспоживанням сільськогосподарської культури (мм) у період цвітіння для цих двох батьків (6078-1 і КТх7000) і трьох рекомбінантних генів із популяції тонкого генетичного картування 5191.
На Фіг. 29 представлений графік, який показує взаємозв'язок між зеленою листковою поверхнею і водоспоживанням (Т) у чотирьох 54 ОТІ і рекурентному батьку (КТх7000) у дослідженнях із лізиметрами при двох рівнях МРО.
На Фіг. 30 представлений графік, який показує гістограму фенотипічної варіації для "співвідношення коріньспаростки" при б у популяції тонкого генетичного картування 5191, вирощених в голку.
На Фіг 31 представлений графік, який показує часовий патерн кумулятивного водоспоживання сільськогосподарської культури для КТхХ7000 і 591, вирощеної в умовах дефіциту води і малої щільності (20 рослин/м-). Вертикальні лінії відмічають період цвітіння.
На Фіг. 32 представлений графік, який показує взаємозв'язок між довжиною (мм) і зеленістю (БРАВ) листка 10 у популяції тонкого генетичного картування 5141, вирощеного в голку.
На Фіг. 33 представлений графік, який показує взаємозв'язок між зеленістю листка (РАЮ) і фотосинтезом листка у підвиборці ліній із популяції тонкого генетичного картування 5041, включаючи батьків.
На Фіг. 34 представлений графік, який показує взаємозв'язок між зеленістю листка (РАЮ) і
МУШОЕ (Шесог) у підвиборці ліній із популяції тонкого генетичного картування 51941, включаючи батьків.
На Фіг. 35 представлений графік, який показує взаємозв'язок між зеленістю листка (РАЮ) і
УММОЕ (ісог) у чотирьох 519 Мії5 (2941, 59422, 593 і 594) і рекурентному батьку (КТх7000).
На Фіг. 36 представлений графік, який показує взаємозв'язок між транспірацією на одиницю листкової поверхні і площею ефективної транспірації у чотирьох 59 ОТІ. і рекурентному батьку (КТх7000) у дослідженнях із лізиметрами при двох рівнях МРО.
На Фіг. 37 представлений графік, який показує взаємозв'язок між СММО (мм) до і після періоду цвітіння у підвиборці ліній із популяції тонкого генетичного картування ЗІ91, включаючи батьків, вирощених в умовах високої щільності (НО) і низької щільності (НО).
Фіг. З8А і В є графіками, які показують патерни кумулятивного водоспоживання для 501 і
КТх7000, вирощених в умовах ГМУ/НО.
На Фіг. 39 представлений графік, який показує взаємозв'язок між СУМ (мм) до і після періоду цвітіння у чотирьох 59 ОТІ і рекурентному батьку (КТх7000), вирощених в умовах дефіциту води (Г/М) і умовах низької щільності (І 0).
На Фіг. 40 представлений графік, який показує взаємозв'язок між РРВЕ і РАВ у чотирьох 59
ОТГ. ї рекурентному батьку (ЕТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/м-; НО - 20 рослин/мг).
На Фіг. 41 представлений графік, який показує взаємозв'язок між ОГАА і РРВК у чотирьох
Ід ОТ. і рекурентному батьку (ЕТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/ме; НО - 20 рослин/м-).
На Фіг. 42 представлений графік, який показує взаємозв'язок між СІ АА і РАЗВ у чотирьох
Ід ОТ. і рекурентному батьку (ЕТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (І О - 10 рослин/ме; НО - 20 рослин/м-).
На Фіг. 43 представлений графік, який показує взаємозв'язок між РРВЕ і РАВ у чотирьох 59
ОТГ. ї рекурентному батьку (ЕТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/м-; НО - 20 рослин/мг).
На Фіг. 44 представлений графік, який показує взаємозв'язок між РРВК і РАЗМ у чотирьох
Зо Ід ОТ. і рекурентному батьку (ЕТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/м-; НО - 20 рослин/мг).
На Фіг. 45 представлений графік, який показує взаємозв'язок між РРВЕК і урожаєм зерна у чотирьох 54 ОТ! і рекурентному батьку (КТх/7/000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/м-; НО - 20 рослин/м3).
На Фіг. 46 представлено зведене у таблицю зображення, яке показує дані про маркерний ген (ВВ/ЛТ) для КТх7000 (рекурентний батько), 6078-1 (МІ, що містить повну область 51941), 10709- 5 (МІГ, що містить нижню 1/3 області 591), 10604-5 (МІ, що містить верхню 3/4 області 51) і 10568-2 (МІ, що містить верхню 1/2 області 5941). ВВ означає, що обидва алелі схожі на алель батька із ознакою "залишатися зеленим", ТТ означає, що обидва алелі схожі на алель старіючого батька, ВТ означає, що один алель схожий на алель батька із ознакою "залишатися зеленим", інший схожий на алель старіючого батька, х означає відсутність доступних даних про маркерний ген. Чорний і червоний колір шрифту для маркерних генів означає фактичний і передбачуваний статус маркерного гена, відповідно.
На Фіг. 47 представлений графік, який показує взаємозв'язок між КУУС на середині стадії наливання зерна (РІ-2) і відносною швидкістю старіння листка в різних комбінаціях 59 ОТІ і рекурентному батьку (КТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/м-; НО - 20 рослин/м-).
На Фіг. 48 представлений графік, який показує взаємозв'язок між відносною швидкістю старіння листка і площею зеленої листкової поверхні при зрілості в різних 519 ОТ. і рекурентному батьку (КТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/м-; НО - 20 рослин/м3).
На Фіг. 49 представлений графік, який показує взаємозв'язок між відносним вмістом води (ЕУМУС) на середині стадії наливання зерна (РІ-2) і стовбуровою масою при зрілості в різних комбінаціях ЗД ОСТІ і рекурентному батьку (КТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/м-; НО - 20 рослин/м).
На Фіг. 50 представлений графік, який показує взаємозв'язок між біомасою стебла у період після цвітіння і біомасою у період після цвітіння в різних комбінаціях 5ід ОТ. і рекурентному бо батьку (КТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (СО - 10 рослин/ме; НО - 20 рослин/м-) в експерименті, вирощеному в 2004.
На Фіг. 51 представлений графік, який показує взаємозв'язок між біомасою стебла у період після цвітіння і урожаєм зерна в різних комбінаціях 59 ОТ і рекурентному батьку (КТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО «- 10 рослин/м-; НО :« 20 рослин/м") в експерименті, вирощеному в 2004.
На Фіг. 52 представлений графік, який показує взаємозв'язок між масою стебла у період після цвітіння (РАБМ) і біомасою у період після цвітіння (РАВ) у чотирьох 549 ОТІ і рекурентному батьку (КТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/м7; НО - 20 рослин/м?) в експерименті, вирощеному в 2005.
На Фіг. 53 представлений графік, який показує взаємозв'язок між масою стебла у період після цвітіння (РАБМ) і урожаєм зерна у чотирьох 59 ОТІ і рекурентному батьку (КТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/мг; НО - 20 рослин/м") в експерименті, вирощеному в 2005.
На Фіг. 54 представлений графік, який показує взаємозв'язок між масою стебла у період після цвітіння (РАБМ) і біомасою у період після цвітіння (РАВ) в різних лініях тонкого генетичного картування 591 і рекурентному батьку (ЕТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/м-; НО - 20 рослин/м?) в експерименті, вирощеному в 2006.
На Фіг. 55 представлений графік, який показує взаємозв'язок між відносним вмістом води (РУС) на середині стадії наливання зерна (РІ -2) і урожаєм зерна в різних комбінаціях 519 ОТІ і рекурентному батьку (КТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (СО - 10 рослин/м2; НО ї- 20 рослин/м-) в експерименті, вирощеному в 2004.
На Фіг. 56 представлений графік, який показує взаємозв'язок між водним потенціалом листка (ІГМУР) РІ--2 в середині наливання зерна (бари) і урожаєм зерна (г/м) в БІд1 ОТ. (6078-1) і рекурентному батьку (КТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/м-; НО - 20 рослин/м3).
Зо На Фіг. 57 представлений графік, який показує взаємозв'язок між РРВК і СУМО під час наливання зерна у чотирьох ІДД ОТ і рекурентному батьку (КТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/мг; НО - 20 рослин/м-).
На Фіг. 58 представлений графік, який показує взаємозв'язок між СУМО під час наливання зерна (мм) і урожаєм зерна (г/м7) у чотирьох ЗД ОТІ і рекурентному батьку (КТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/мг; НО - 20 рослин/м).
На Фіг. 59 представлений графік, який показує взаємозв'язок між РРВЕК і урожаєм зерна у чотирьох 54 ОТ! і рекурентному батьку (КТх/7/000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/мг; НО - 20 рослин/м).
На Фіг. 60 представлений графік, який показує взаємозв'язок між СУМО під час наливання зерна (мм) і зернистістю (мг) у чотирьох 59 ОТІ і рекурентному батьку (КТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/м-; НО - 20 рослин/м-).
На Фіг. 61 представлений графік, який показує взаємозв'язок між РРВК і зернистістю у чотирьох 54 ОТ! і рекурентному батьку (КТх/7/000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/м-; НО - 20 рослин/м).
На Фіг. 62 представлений графік, який показує взаємозв'язок між РРВК і СУМО під час наливання зерна в різних лініях тонкого генетичного картування 5941 і рекурентному батьку (КТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/м-; НО - 20 рослин/м-).
На Фіг. 63 представлений графік, який показує взаємозв'язок між СУМО під час наливання зерна (мм) і урожаєм зерна (г/м?) в різних лініях тонкого генетичного картування ЗЮОЇ1 і рекурентному батьку (КТх7000), вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (ГО - 10 рослин/м-; НО - 20 рослин/м-).
На Фіг. 64А-С представлені графіки, які показують результати запуску симуляції моделі сільськогосподарської культури сорго із застосуванням генетичного сорту Вивіег із звичайними бо 2 пагонами/рослина (НТ) проти Визвіег тільки із 1 пагоном/рослина (ІТ) в добре зволоженій (МЛЛ/)
і гранично стресовій (Т5) віртуальному середовищі. Для обох віртуальних середовищ вибирали наступні параметри: щільність посадки 5 рослин/м: із відстанню між рядами 1 м; глибина грунту - 1800 мм; грунт РАУММУС - 324 мм; М необмежений. На Фіг. 64А показаний модельований індекс площі листкової поверхні (ГАЇ) від часу (через 0-120 днів після посіву). Фіг. 648 показує модельовану екстраговану грунтову воду (ЕМУ5) від часу (через 0-120 днів після посіву). Фіг. 64С показує модельовану біомасу і урожай зерна (кг/га) від часу (через 0-120 днів після посіву).
Фіг. 65 являє собою схематичне зображення, яке показує порівняння РІМ, ЗРІ. ії ортологів
ССО7/6, вирівняних по ОТ. відносно хромосом 1-5 сорго "залишатися зеленим".
Фіг. 66 представляє схематичне зображення, яке показує порівняння РІМ, 59РІ. і ортологів
ССО7/8, вирівняних по ОСТІ. відносно хромосом сорго 6-10 "залишатися зеленим".
На Фіг. 67А представлений графік диференційної експресії ББРІМА (кандидат 5141) в умовах хорошого зволоження. В умовах хорошого зволоження цей ген понижуючи регулюється в молодих кореневих кінчиках Тх642 і МІ 51 в порівнянні із Тх7000.
На Фіг. 67В представлений графік диференційної експресії ББРІМА (кандидат 5141) в умовах дефіциту води. В умовах дефіциту води цей ген підвищуючи регулюється у більшості тканин, а особливо у набухаючому листку Тхб42 і МІ. 591, у порівнянні із Тх7000.
На Фіг. 67С представлений графік диференційної експресії БВРІМ2 (кандидат 51д2) в умовах хорошого зволоження. В умовах хорошого зволоження цей ген злегка підвищуючи регулюється в стеблі і тканинах кореня Тхб642 і МІ. 501 у порівнянні із Тх7000.
На Фіг. 670 представлений графік диференційної експресії БОРІМ2 (кандидат 5192) в умовах дефіциту води. В умовах дефіциту води цей ген підвищуючи регулюється у більшості тканин
Тхб642 і МІГ 5941 у порівнянні із Тх7000.
Фіг. 68 є схематичним зображенням мережі генів, ідентифікованих в 591, 5ід2, 5ідЗа, 5ІдЗо і 5194, і впливу, який пропонується, на фенотип "залишатися зеленим".
Докладний опис винаходу
У даному описі, якщо контекст не передбачає інакше, слова "включають" або такі варіації як "включає" або "включаючи", необхідно розуміти як такі, що мають на увазі включення певного елемента або цілого об'єкта, або стадії способу, або групи елементів, або цілих об'єктів, або стадій способу, але не виключення будь-якого іншого елемента або цілого об'єкта, або стадії
Зо способу, або групи елементів, або стадій способу, або цілих об'єктів.
Як використовується у даному описі, невизначені і певні форми однини включають множинні аспекти, якщо контекст ясно не диктує інакше. Таким чином, наприклад, посилання на "локус" включає єдиний локус, так само як два або більше локусів; посилання на "ауксин" включає єдиний ауксин, так само як два або більше ауксинів; посилання на "розкриття" включає один і множину аспектів, якьї описуються у даному розкритті. Аспекти, наведені, описані і/або якьі патентуються у даному описі охоплені терміном "винахід". Всі аспекти, наведені у даному описі, допускаються в межах обсягу опису і його формули винаходу.
Дане розкриття описує локуси, асоційовані із і сприяючі фенотипу "залишатися зеленим" у сільськогосподарської культури, включаючи рослини зернових злаків. Локуси генетично називають ЗІДХ, де Х є цифрою від 1 і більше, відповідаючи генетичному локусу або області генетичного локусу на конкретній хромосомі в рослині зернового злака. Підобласть називають 5ІДХт, де т є буквеним позначенням області в межах 5ІДХ. Рівень і/або місце експресії локусу
ЗІДХ, як наводиться у даному описі, сприяють утворенню фізіологічної і генетичної мережі, яка індукує або посилює зсув у споживанні води сільськогосподарськими рослинами на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, таким чином, збільшуючи індекс збору урожаю (НІ) і урожай зерна в умовах обмеженого водопостачання. "Експресія" 5ІДХ включає підвищуючу регуляцію або понижувальну регуляцію рівня експресії, так само як селекцію поліморфного варіанта, який експресується на більш високому рівні або який кодує більш активний або ефективний продукт. Приклад "фізіологічної мережі" включає архітектуру покриву листків, яка індукує або посилює зсув у споживанні води сільськогосподарськими рослинами на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, таким чином, збільшуючи індекс збору урожаю (НІ) і урожай зерна в умовах обмеженого водопостачання. Локус може самостійно надавати цей фенотип або його функціональний еквівалент, такий як кКДНК, яка кодує білок, який кодується локусом. Отже, контроль фенотипу "залишатися зеленим" може бути здійснений технологіями генної інженерії рекомбінантної ДНК, розмноженням і селекцією, так само як хімічним, радіоактивним або генетичним мутагенезом із подальшою селекцією.
У одному із варіантів здійснення Х являє собою 1, і область являє собою 5191 на хромосомі бо З між маркерними генами їхр581 і їхр38 сорго, або його еквівалент у геномі іншої рослини. У іншому варіанті здійснення Х являє собою 2, і область являє собою 51942 на хромосомі З між маркерними генами їхр530О і їхр31 сорго, або його еквівалент у геномі іншої рослини. У ще одному варіанті здійснення Х являє собою 3, і область являє собою 5193, розділену на 5дзЗа (область між їхр298 і 5Рр-2568) і 5435 (область між 5Рр-2568 і їхр179) сорго, або його еквівалент у геномі іншої рослини. У все ще іншому варіанті здійснення, Х являє собою 4, і область являє собою 5144 на хромосомі 5 між маркерними генами їхр583 і їхр15 сорго, або його еквівалент у геномі іншої рослини. Ці маркерні гени або суміжні маркерні гени або прилягаючі до них, також є корисними в програмах розведення для отримання рослин, які демонструють фенотип "залишатися зеленим" у сорго або інших рослин.
Відповідно, у даному описі представлений спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, який включає введення у рослину або у батьківську рослину агента, який вибраний із списку, що складається із: (ї) генетичного агента, який містить один або більше локусів, розташовану в області, вибраній із 541 на хромосомі З між їхр581 і їхр38; 519Д42 на хромосомі З між їхр530 і їхр31; 5ідЗа (область між їхр298 і 5РЬ-2568); 59356 (область між 5Рр- 2568 і їхр179); і 594 на хромосомі 5 між їхр283 і їхр15 сорго або його еквівалента в іншій рослині, рівень експресії якого, асоційований із або сприяє виявленню фенотипу "залишатися зеленим", де фенотип включає в себе зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання; і (ії) агента, який підвищуючи регулює або понижуючи регулює природжену форму локусу або локусів.
У одному із варіантів здійснення області БІДХ визначені таким чином, 5141: область тонкого генетичного картування між їхр5б3 і їхр581, яка містить 60 анотованих генів, більш велика середня область між їхр440 і їхр580, яка містить 307 анотованих генів, кандидати в хвості між їхр580 і їхр38, які містять 178 анотованих генів; 5ід2: область тонкого генетичного картування між їхр512 і їхр2, яка містить 15 анотованих генів, більш велика область між їхр31 і їхр530, яка містить 241 ген, який анотується; 5ідЗа: вся область між їхр298 і 5РЬ-2568, яка містить 520 анотованих генів; 5І9ЗБр: вся область між 5Рр-2568 і їхр179, яка містить 291 ген, який
Зо анотується; ЗІД4: вся область, обмежена їхр283 і їхр15, яка містить 306 анотованих генів. Ці маркерні гени або суміжні маркерні гени, або які прилягають, також є корисними в програмах розведення для отримання рослин, які демонструють фенотип "залишатися зеленим" у сорго або інших рослинах.
Відповідно, допущений у даному описі спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, де спосіб включає введення у рослину або у батьківську рослину засобу, вибраного із списку, який складається із 5Ід1: область тонкого генетичного картування між їхр5б63 і їхр581, яка містить 60 анотованих генів, більш велика середня область між їхр440 і їхр580, яка містить 307 анотованих генів, кандидати в хвості між їхр580 і їхр38, які містять 178 анотованих генів; 5Ід2: область тонкого генетичного картування між їхр512 і їхр2, яка містить 15 анотованих генів, більш велика область між їхр31 і їхр530, яка містить 241 ген, який анотується; 5ідЗа: вся область між їхр298 і 5РЬрБ-2568, яка містить 520 анотованих генів; 5ІДЗр: вся область між 5Рр- 2568 і їхр179, яка містить 291 ген, який анотується; 5Ід4: вся область, обмежена їхр283 і їхр15, яка містить 306 анотованих генів; сорго або його еквівалент в іншій рослині, рівень експресії якого асоційований із або сприяє фенотипу "залишатися зеленим", де фенотип включає в себе зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання; і агент, який підвищуючи регулює або понижуючи регулює природжену форму локусу або локусів.
Відповідно, наведений у даному описі спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, де спосіб включає введення у рослину або у батьківську рослину, засобу, вибраного із списку, який складається із локусу, вибраного із таблиці 18 сорго, або його еквівалента в іншій рослині, рівень експресії якого, асоційований із або сприяє виявленню фенотипу "залишатися зеленим", де фенотип включає в себе зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання; і агента, який підвищуючи регулює або понижуючи регулює природжену форму локусу або локусів.
Відповідно, наведений у даному описі спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, де спосіб включає введення у рослину або у батьківську рослину, засобу, вибраного із списку, який складається із локусу, вибраного із таблиці 1А сорго, або його еквівалента в іншій рослині, рівень експресії якого асоційований із або сприяє виявленню фенотипу "залишатися зеленим", де фенотип включає в себе зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання; і агента, який підвищуючи регулює або понижуючи регулює природжену форму локусу або локусів.
Не маючи наміру обмежувати даний опис якою-небудь теорією або механізмом дії, рівень експресії 5ІДХ окремо або в комбінації із дією генетичної або фізіологічної мережі змінює архітектуру рослини, включаючи архітектуру покриву листків, посилюючи або інакше підтримуючи ефективне споживанні води. У одному аспекті модифікована архітектура є зміненою архітектурою покриву листків.
Термін "потомство" включає безпосереднє потомство, так само як віддалені близькі форми рослини, якщо вони стійко експресують ознаку 5ІДХ, введений на початку першому батькові.
Посилання на "сільськогосподарську рослину" включає рослину зернового злака.
Сільськогосподарські рослини, які допускаються у даному описі, включають сорго, пшеницю, овес, кукурудзу, ячмінь, жито і рис, абаку, люцерну, мигдаль, яблуню, спаржу, банан, квасолю, ожину, кормові боби, канолу, кеш'ю, касаву, нут, цитрусові, кокосовий горіх, кофе, кукурудзу, бавовник, фігу, льон, виноград, земляний горіх, гашиш, кенаф, лаванду, тапо, гриб, маслину, цибулю, горох, арахіс, грушу, американське просо, картоплю, рамі, рапс, плевел, сою, полуниці, цукровий буряк, цукрову тростину, соняшник, батат, колоказію, чай, тютюн, томат, тритикале, трюфель і ям. У одному прикладі механізми стійкості до засухи у сорго застосовані для підтримки стійкості до засухи у сорго, так само як у інших сільськогосподарських рослин. У одному прикладі генетично модифікована рослина більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів. "генетично модифікована рослина" може бути отримана технологією рекомбінантної ДНК, селекцією за допомогою протоколу
Зо розмноження і/або селекцією після мутагенезу. "Стійкість до засухи" включає уникнення засухи, адаптацію до засухи, засухостійкість, зниження чутливості до посушливих умов, відсутність чутливості до засухи, підвищену ефективність водоспоживання так само як здатність зрушувати споживання води на період після цвітіння або збільшувати доступність води під час росту сільськогосподарської культури або підвищувати ефективність транспірації, таким чином, збільшуючи НІ і урожай зерна в умовах обмеженого водопостачання. Рослини, які демонструють стійкість до засухи, описані як "рослини, адаптовані до засухи" або "рослини, які демонструють, зниження чутливості до умов обмеженого водопостачання". У даному описі пояснюється, що стійкість до засухи індукується, підвищується або інакше асоціюється із фенотипом "залишатися зеленим". "Генетично модифікований" відносно рослини включає спочатку отриману генетично модифіковану рослину так само як будь-яке потомство, пряме або віддалене, які стійко експресує ознака "залишатися зеленим". Отже, дане розкриття надає обидві класичні методики розмноження для введення генетичного агента, тобто локусу "залишатися зеленим" або локусів або їх функціональних еквівалентів, таких як КДНК або геномний фрагмент або агент, який змінює експресію локусу або білка, який кодується ним, таким чином, так само як технологія генної інженерії. Останнє охоплене термінами "засоби генної інженерії" і "рекомбінантні засоби".
Маркерні гени, які визначають 5ІДХ, можуть також бути скриновані під час протоколів розмноження для спостереження за передачею специфічних генетичних областей. Крім того, специфічний 5ї9ДХ або 5і9Х область можуть бути генетично вставлені рекомбінантними засобами в рослинну клітину або калюс рослини і відновлений сіянець. "Генетично модифікована" рослина включає батька або будь-яке потомство так само як будь-які продукти рослини, такі як зерно, насіння, пророщуваний матеріал, пилок і яйцеклітини. Визначальні області БІДХ у сорго розташовані в 51 на хромосомі З між їхр581 і їхр38; 5ІД2 на хромосомі З між їхр530 і їхр31; 593 розділений на 5ідза (область між їхр298 і 5РБ-2568) і 593Ь (область між 5РБ-2568 і їхр179) і 5Ід4 на хромосомі 5 між їхр283 і їхр15. Зокрема, визначальні області 5ІДХ у сорго розташовані в 591: область тонкого генетичного картування між їхр5б3 і їхр581, яка містить 60 анотованих генів, більш велика середня область між їхр440 і їхр580, яка містить 307 анотованих генів, кандидати в хвості між їхр580 і їхр38, які містять 178 анотованих генів; 52: область тонкого генетичного картування між їхр512 і їхр2, яка містить 15 анотованих генів, бо більш велика область між їхр31 і їхр530, яка містить 241 ген, який анотується; 5ідЗа: вся область між їхр298 і 5РЬрБ-2568, яка містить 520 анотованих генів; 5ІДЗр: вся область між 5Рб- 2568 і їхр179, яка містить 291 ген, який анотується; 5Ід4: вся область, обмежена їхр283 і їхр15, яка містить 306 анотованих генів. Дане розкриття поширюється на еквівалентні області або еквівалентні локуси, розташовані у цих областях в рослинах, відмінних від сорго.
Посилання на "фенотип залишатися зеленим" включає характеристики, вибрані із підвищеної пластичності архітектури крони, зменшеного розміру крони, посиленої біомаси на одиницю листкової поверхні одиниці у період цвітіння, більш високої ефективності транспірації, підвищеного споживання води під час наливання зерна, підвищеного водного статусу рослини під час наливання зерна, зниженого співвідношення біомаси у період до:після цвітіння, відстроченого старіння, збільшеного урожаю зерна, більшого розміру зерен і зниженого вилягання. "МОХ" включає ОТ в 59 1, 2, З (включаючи 5і9За і 5936), 4 їі т. д. які представляють специфічний локус або групу, або область локусів, пов'язаних із адаптацією до засухи. У одному варіанті здійснення 5ІДХ являє собою 51941, розташованим на хромосомі З між маркерними генами їхр581 і їхр38 сорго. У іншому варіанті здійснення 5ІДХ являє собою 5192, розташованим на хромосомі З між маркерними генами їхр530 і їхр31 сорго. У все ще іншому варіанті здійснення 5ІДХ являє собою 5ідЗа (область між їхр298 і 5Рр-2568) або 5ІдЗбЬ (область між 5Рбр- 2568 і їхр179) сорго. У ще одному варіанті здійснення 5ід являє собою 5194, розташованим на хромосомі 5 між маркерними генами їхр283 і їхр15 сорго. У певному варіанті здійснення 5191: область тонкого генетичного картування між їхр563 і їхр581, яка містить 60 анотованих генів, більш велика середня область між їхр440 і їхр580, яка містить 307 анотованих генів, кандидати в хвості між їхр580 і їхр38, які містять 178 анотованих генів; 5ІД2: Область тонкого генетичного картування між їхр512 і їхр2, яка містить 15 анотованих генів, більш велика область між їхр31 і їхр530, яка містить 241 ген, який анотується; 5ідЗа: вся область між їхр298 і 5РЬ-2568, яка містить 520 анотованих генів; 5ідЗр: вся область між 5РЬ-2568 і їхр179, яка містить 291 ген, який анотується; 5Ід4: вся область, обмежена їхр283 і їхр15, яка містить 306 анотованих генів. 2ІХ, розглянутий для застосування у даному описі, може бути ізольованим природним генетичним елементом, або специфічна варіація може бути штучним чином індукована або отримана за допомогою класичної або рекомбінантної практики розмноження. Наприклад, специфічний
Зо поліморфний варіант може приводити у результаті до високих рівнів експресії або давати продукт із більш стійкою експресією або продукт, який є більш або менш плейотропним в межах генетичної або фізіологічної мережі. Посилання на 5ІДдХ включає кДНК, яка кодує продукт, так само як геномний локус або область, яка може включати або не включати область промотора, 5 і 3' області, які нетранслюються, інтрони, екзони і т. п. ""ДНК" є прикладом функціонального еквівалента 5ІдхХ.
Даний винахід додатково описує маркерні гени для фенотипу "залишатися зеленим" для застосування у програмах розведення для засухостійких рослин, маркерні гени, які містять локус кількісної ознаки (ОТ), ознака залишатися зеленим Х (5І9Х), у якому Х є цифрою, відповідною місцю на хромосомі у рослині сорго, або його еквівалент в іншій рослині, який кодує продукт, асоційований із або сприяючий виявленню фенотипу "залишатися зеленим", де фенотип включає в себе зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання. Приклади придатних маркерних генів включають 5491 на хромосомі З між їхр581 і їхр38; 5Ід2 на хромосомі З між їхр530 і їхр31; 5193, розділений на 54дзЗа (область між їхр298 і 5Рр-2568) і 5І93Б (область між 5РЬ-2568 і їхр179) і 5ід4 на хромосомі 5 між їхр283 і їхр15. Ці маркерні гени взяті на основі геному сорго, але поширюються на еквіваленти у геномі іншої рослини. Приклади придатних маркерних генів включають 5141: область тонкого генетичного картування між їхр5б3 і їхр581, яка містить 60 анотованих генів, більш велика середня область між їхр440 і їхр580, яка містить 307 анотованих генів, кандидати в хвості між їхр580 і їхр38, які містять 178 анотованих генів; 5ід2: область тонкого генетичного картування між їхр512 і їхр2, яка містить 15 анотованих генів, більш велика область між їхр31 і їхр530, яка містить 241 ген, який анотується; 5ідЗа: вся область між їхр298 і 5РЬ-2568, яка містить 520 анотованих генів; 5І9ЗБр: вся область між 5Рр-2568 і їхр179, яка містить 291 ген, який анотується; 5Ід4: вся область, обмежена їхр283 і їхр15, яка містить 306 анотованих генів.
Приклади придатних маркерних генів включають локус, наведений в таблицях ТА-16.
Приклади придатних маркерних генів включають локус, наведений у таблиці 18.
Отже, ряд біомаркерів допускається даним описом, включаючи від їхр581 до їхр38 на хромосомі З у сорго; від їхр530 до їхр31 на хромосомі З у сорго; їхр298 - 5Рр-2568 і 5РЬБ-2568 - бо їхр179 на хромосомі 2 у сорго; і їхр283 - їхр15 на хромосомі 5 у сорго, або їх еквівалент у геномі іншої рослини. Ряд біомаркерів додатково допускається даним описом, включаючи наступні 51: область тонкого генетичного картування між їхр5б3 і їхр581, яка містить 60 анотованих генів, більш велика середня область між їхр440 і їхр580, яка містить 307 анотованих генів, кандидати в хвості між їхр580 і їхр38, які містять 178 анотованих генів; 5ід2: область тонкого генетичного картування між їхр512 і їхр2, яка містить 15 анотованих генів, більш велика область між їхр31 і їхр530, яка містить 241 ген, який анотується; 5ідЗа: вся область між їхр298 і 5Рр- 2568, яка містить 520 анотованих генів; 5ІДЗр: вся область між 5Рр-2568 і їхр179, яка містить 291 ген, який анотується; 5194: вся область, обмежена їхр283 і їхр1і5, яка містить 306 анотованих генів. Додатково наведений ряд біомаркерів, як перераховано у таблиці 18В. Такі маркерні гени є корисними в протоколах розмноження, розроблених для отримання рослин, які демонструють фенотип "залишатися зеленим". Альтернативно, маркерні гени, суміжні або які прилягають до цих областей, можуть бути застосовані в протоколі розмноження.
Дане розкриття описує застосування генетичного матеріалу, відповідного 5ІДХ, або генетичного матеріалу, який змінює експресію природженого локусу 5ІДХ, або його генетичного еквівалента, щоб посилити фенотип "залишатися зеленим". "Природжений" локус означає локус, який присутній у батьківській рослині до розмноження, рекомбінантного втручання або мутагенезу. "Змінює" включає "модулює".
Дане розкриття дозволяє отримувати рослини, генетично модифіковані згідно із способами, наведеними у даному описі, так само як насіння, плоди, квіти і інші репродуктивні або інші органи розмноження. Дане розкриття також описує застосування кореневища і пророщування кореневища. Це засноване на тій передумові, що насіння, плоди, квіти, репродуктивні і пророщувані органи ті ж або можуть передавати фенотип "залишатися зеленим", введений у первинного батька(ів).
Посилання на "агент, який підвищуючи регулює 5ІДХ", включає прискорювачів, мікроРНК, гени і хімічні сполуки, які сприяють підвищенню експресії 5БІДХ або підвищенню активності продукту 5ІДХ. Агент також може бути інтроном геномного 5ІДХ, який є частиною природної генетичної мережі, щоб посилювати експресію. Агент може також бути функціональним еквівалентом 5ІДХ (або ОТІ), таким як кДНК.
У одному варіанті здійснення 5ІДХ кодує локус, вибраний із 5941, 51942, БідЗа, 5935 і 5194, як
Зо перераховано у таблиці 18 (і таблиці 1А). Взаємодія деяких із цих локусів у різних мережевих шляхах, показані на Фіг. 68.
У одному варіанті здійснення 5ІДХ кодує локус, вибраний із 5941, 51942, БідЗа, 5936 і 5194, як перераховано у таблиці 18 (і таблиці 1).
У одному варіанті здійснення 5ІДХ кодує білок РІМ.
Білок РІМ створює градієнт ауксину у клітинах і містить трансмембранний домен і, головним чином, локалізується у плазматичній мембрані. Білки РІМ є обмежуючими факторами швидкості транспорту ауксину і забезпечують векторний напрям для потоків ауксину. У даному описі пояснюється, що 5ІДХ кодує білок РІМ. Введення 5ІДХ де помо у рослину або підвищення його експресії або експресії його гомолога або ортолога сприяє виявленню однієї або більше ознак або субознак, асоційованих із фенотипом "залишатися зеленим".
Як указано вище, білки РІМ є носіями виділення ауксину, опосередковано через які відбувається полярний транспорт ауксину (РАТ) від клітини до клітини в протилежність транспорту ауксину через ксилему (Казпойне еї аї. (2000) Ріапі СеїЇ 13:1683-1697; Рііті еї аї. (2003) Сицтепі Оріпіоп іп Ріапі Віоіоду 6:7-12). Термін "РІМ' відбувається від РіМ-подібної флуоресценції, яка утворюється у Агарідорзіз, коли транспорт ауксину має дефект. Відома множина білків РІМ (див. Рогезіап апа Магоцо (2009) Ріапі Рпузіоіоду; апа М/апод еї аї. (2009) зирга). Дане розкриття описує 5БВРІМп, де п є цифрою від 1 до 11 (Таблиця 1А). Однак поточне розкриття описує еквівалентні або гомологічні РІМ із інших рослин.
Як пояснюється у даному описі, в одному варіанті здійснення 5БРІМ2 (компонент носія, із виділенням ауксину 2 для сорго зернового) знаходиться в 5142 на хромосомі 3, тонко картований в області між маркерними генами їхр512 і їхр530, і ББРІМ4 знаходиться в 51941 на хромосомі 3, тонко картований в області між маркерними генами їхр5б3 і їхр 442, і є відповідальними за ознаку "залишатися зеленим" у сорго, приводячи в результаті до діапазону фенотипів, які надають ознаки адаптації до засухи через збільшене споживання води у період цвітіння (завдяки зниженню кущіння і меншому розміру листків), підвищену доступність води (завдяки розширенню співвідношення корінь:пагін), підвищену ефективність транспірації в умовах помірного дефіциту води (завдяки більш високій концентрації азоту у листках), збільшену біомасу на одиницю листкової поверхні в умовах граничного дефіциту води (завдяки підвищеній транспірації на одиницю листкової поверхні) і збільшений урожай зерна, розмір бо зерна і стійкість до вилягання. Посилання на їхр маркерні гени у сорго поширюється на еквівалентні маркерні гени у геномі інших рослин. ЗОРІМ4 відповідає О5РІМ5, і 5БРІМ2 відповідає О5РІМЗа. Термін "О5" стосується рису (посилання на таблицю 14А).
Іншим аспектом, наведеним у даному описі, є спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих
Б же самих видів, де спосіб включає введення у рослину або у батьківську рослину одного або більше локусів їх функціонального еквівалента або агента, який модулює експресію природженого або одного або більше локусів, де рівень експресії одного або більше локусів викликають зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання.
Дане розкриття додатково описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, який включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу, вибраного із списку, наданого у таблиці 18, або молекули, яка модулює експресію природженого локусу.
Дане розкриття додатково описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, який включає введення у рослину або у батьківську рослину локус або кДНК, яка кодує білок РІМ або молекулу, яка модулює експресію природженого локусу РІМ. Приклади РІМ включають ЗБРІМА і ББРІМА і інші ЗБЕРІМ, перераховані у таблиці 14А, так само як їх еквіваленти в інших рослинах.
У даному розкритті пояснюється, що 5ОБРІМА ї 5БРІМ2 у сорго є головними генами адаптації до засухи, які тонко картовані у багаторазових дослідженнях в області між маркерними генами їхр536б і їхр442 на хромосомі 3 (5941) і області між маркерними генами їхр512 і їхр530 на хромосомі З (5192). Відмінності в передачі сигналів ауксину пояснюють всі численні фенотипи, які спостерігаються у рослин, які містять 5БРІМА або 2. Другим геном є 5БРІМ5. Фенотипи, які виявляються рослинами із 5БРІМА і 5БРІМ2, пояснюються безпосередньо змінами у виділенні ауксину і включають знижене кущіння, менший розмір листків (і в довжину, і в ширину ), знижену масу листків і збільшене співвідношення корінь:паростки. Фенотипи, які виявляються рослинами
Зо із ЗОРІМА і 5ББРІМ2, можуть також бути пояснені непрямо (або як емержентні наслідки цих прямих ефектів) і включають підвищену доступність води у період цвітіння, більш високу концентрацію М у період цвітіння, підвищені транспірацію і біомасу на одиницю листкової поверхні, більш високу ефективність транспірації, підтримка площі зеленої листкової поверхні під час наливання зерна, збільшений індекс збору урожаю, більш високий урожай зерна, більш великі зерна і підвищену стійкість до вилягання. Даний опис допускає те, що 5БРІМА або 2 діють окремо або разом в інших основних злаках і видах сільськогосподарських культур, посилюючи адаптацію до засухи в місцях по всьому світу, де вода обмежує ріст сільськогосподарської культури у період після цвітіння.
Відповідно до пояснень в даній специфікації, рівень експресії 29Х, такого як 5191, 592,
ЗідЗа, ЗІ9ДЗЬ і/або 5194 (як визначено у таблиці 18), (ЗБРІМ4) і/або 5ід2 (5БРІМ2) див. таблицю 1А| у всій або певній рослинній тканині, надає або надають адаптацію до засухи як безпосередньо, так і непрямо, зрештою, приводячи до більш високого урожаю зерна, більш великому розміру зерен і стійкості до вилягання в умовах обмеженого водопостачання.
Відповідно до пояснень в даній специфікації, рівень експресії БІДХ, такого як 5191 (5ОРІМ4) іабо 5ід2 (ЗБРІМ2), у всій або певній рослинній тканині надає або надають адаптацію до засухи, як безпосередньо, так і непрямо, зрештою, приводячи до більш високого урожаю зерна, більш великому розміру зерен, і стійкості до вилягання в умовах обмеженого водопостачання. Цей аспект поширюється на О5РІМ5, який відповідає ББРІМА, ії О5РІМЗа, який відповідає 5ОРІМ2.
Інші білки РІМ, наведені у даному описі, включають перераховані у таблиці ТА і їх еквіваленти в інших рослинах.
У ще одному варіанті здійснення 5ІДХ кодує 5рі (білка Здчатоза промотор-зв'язувального подібного білка), такий як, але не обмежений ним, 5рі14. орі регулює кущіння відростків і більш високий урожай зерен (див. діао еї аї. (2010) 5,ирга;
Мішга еї а). (2010) вирга).
У іншому варіанті здійснення дане розкриття описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, який включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу або кДНК, яка кодує ССО?7/8, або їх функціонального гомолога або ортолога або агента, який модулює рівень експресії природженого ССО7/8, щоб викликати зсув бо у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання.
У іншому варіанті здійснення дане розкриття описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, який включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу або кКДНК, яка кодує М/ЕР, або їх функціонального гомолога або ортолога або агента, який модулює рівень експресії природженого М/ЕР, щоб викликати зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання.
У іншому варіанті здійснення дане розкриття описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, де спосіб включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу або кДНК, яка кодує 5рі, або їх функціонального гомолога або ортолога або агента, який модулює рівень експресії природженого рі, щоб викликати зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання.
У іншому варіанті здійснення дане розкриття описує спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка більш ефективно використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, де спосіб включає введення у рослину або у батьківську рослину локусу або кДНК, яка кодує ССО?7/8, або їх функціонального гомолога або ортолога або агента, який модулює рівень експресії природженого ССО7/8, щоб викликати зсув у споживанні води на період після цвітіння або збільшення доступності води під час росту сільськогосподарської культури або підвищення ефективності транспірації, яка приводить до збільшення індексу збору урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання.
У одному варіанті здійснення рослини модифікують або отримують шляхом селекції, щоб змінити рівень експресії двох або більше із ЗБРІМ1-11, ІРА-1, М/ЕР, Зрі і/або ССО7/8. Тут включене два або більше 5БРІМ. "Два або більше" включає 2, 3,4,5,6,7,8,9,10111.
Підвищена доступність води у період цвітіння досягається через зниження споживання води завдяки двом механізмам (зниження кущіння і більш дрібне листя) у рослин, які містять області 51 або 5192. Обидва механізми, індивідуально, судячи по всьому, зменшують розмір крони в середньому приблизно на 995. Мехнізм "Слабкого кущіння" домінує в середовищах із низькою щільністю, де потенціал кущіння високий. Механізм "невеликого листка" домінує в середовищах із високою щільністю, де потенціал кущіння низький. Об'єднані, ці два механізми надають сільськогосподарські рослини із значною пластичністю для зміни архітектури крони у відповідь на тяжкість водного обмеження.
Ознака "залишатися зеленим" посилює пластичність архітектури крони через конститутивні і адаптивні відповіді. Розмір крони із 591 або 51д2 знижується приблизно на 595, навіть коли вода не обмежена (конститутивна відповідь). Розмір крони додатково меншає (адаптивна відповідь) при помірній засусі (х1095) і при більш важкій засусі (х1595). Слабке кущіння є передусім конститутивною відповіддю. Невеликий розмір листка є і конститутивним і адаптивним відповіддю.
Крім того, у даному описі пропонується, що області 5941 або 5ід2 надають адаптацію до засухи шляхом зниження розміру крони (через зниження кущіння і менший розмір листків) і зниження водоспоживання сільськогосподарською культурою у період цвітіння. Це показане високою кореляцією (г--0,9) між розміром крони і споживанням води сільськогосподарською культурою в дослідженнях із штучною засухою (укриття від дощу (КОЗІ) і лізиметрами.
Підвищена доступність води у період цвітіння може також бути досягнута через поліпшену досяжність води (більш легка екстрагованість води і більш глибокий або кращий латеральний розподіл коріння).
Ознака "залишатися зеленим" збільшує біомасу на одиницю листкової поверхні у період цвітіння. Вважаючи, що маси коріння еквівалентні (або щонайменше не значно менше), ці відмінності можуть бути пояснені відмінностями в транспірації (Т) на одиницю листкової поверхні (ГАЇ (Т/ А) і/або ефективністю транспірації (ТЕ). Дослідження із лізиметрами вказують на те, що збільшення в Т/ А, а не ТЕ, пояснює спостережувані збільшення біомаси на одиницю листкової поверхні. Потрібно зазначити, що підвищена Т/ А зустрічається тільки тоді, коли дефіцит води достатній для зниження листкової поверхні. Коли дефіцит води був менш важким (тобто недостатнім для зниження листкової поверхні), те ТЛА знижувалося, приводячи у бо результаті до більш високої ТЕ.
Більш висока ТЕ в лініях 5ІДХ, таких як лінія 5941 або лінія 5ід2, також спостерігається при менш важкому дефіциті води. Запропоновано, що підвищена ТЕ у результаті інтрогресії 5191 або 5192 відбуватися завдяки а) пропорційно більш високій фотосинтетичній здатності у порівнянні із продиховою провідністю, завдяки більш дрібним, більш тонким і більше зеленим листкам і/або р) зменшенню в транспірації при підтримці біомаси. Дослідження із лізиметрами вказують на те, що обидва із цих механізмів сприяють збільшенню ТЕ в лініях 5ід1 або 5192, при цьому скороченням транспірації є основним механізмом.
Запропоновано, що зміни в транспірації на одиницю листкової поверхні відбуваються завдяки а) кількості продихів, р) розміру відкриття продиху, с) зміні під часі відкриття і закриття продиху відносно МРО і/або 4) кількості клітин біля основи ворсинок (які впливають на граничний шар і Т/ А). Інтрогресія 51941, наприклад, в КТх7000 модифіковану анатомію листка шляхом збільшення кількості клітин оболонки, які оточують судинний пучок.
Відмінності у морфології листків очевидні між КЕТх7000 і 5ід1 або 5192. У цьому випадку, була більша кількість менших оболонок судинних пучків в 591 або 5192. Крім того, було менше продихів, і більше клітин біля основи ворсинок на одиницю листкової поверхні (листків 7 і 10) в 51 або 51942 у порівнянні із ЕТх7000.
Підвищене споживання води під час наливання зерна досягають через (ї) підвищену доступність води у період цвітіння і (її) поліпшену досяжність води (більш легка екстрагованість і більш глибоке або краще латеральне поширення коріння) під час наливання зерна.
Споживання води сільськогосподарською культурою (СУМО) у період перед цвітінням негативно корелювало із СМ у період після цвітіння в експерименті із штучною засухою (укриття від дощу КО5І). Загалом, 2595-е збільшення споживання води у період цвітіння (80 проти 60 мм) приводило до 2595-му збільшення урожаю зерна (400 проти 300 г/м2). Це перевело до 50 кг/га зерна на кожний додатковий мм доступної води.
Збільшене споживання води під час періоду наливання зерна продемонстрували 51 і 542 як при низькій, так і при високій густоті в експерименті із укриттям від дощу (КОБ5). Це було передусім завдяки (ї) зниженому споживанню води у періоді цвітіння в умовах високої густоти, і (ії) поліпшеної доступності води під час наливання зерна при низькій густоті.
Як пояснено у даному описі, БІДХ, така як 5941 або 51д2, надає адаптацію до засухи, будучи
Зо асоційованим із продукцією біомаси у період до і після цвітіння. Область 51941 або 5192, наприклад, знижує співвідношення біомас до:після періоду цвітіння до нижче критичного рівня, збільшуючи урожай зерна і стійкості до вилягання.
Відповідно до даного опису, рівень і місце експресії 5І9Х, такий як 5191, 5192, 5193 (включаючи 5ідЗа і 593Б) і/або 51944 (наприклад, як визначено у таблиці 18), сприяють одному або більш наступних фенотипів: (ї) відстрочене старіння листка (ознака "залишатися зеленим"), більш високий урожай зерна і стійкість до вилягання є наслідками більш високого статусу води у рослини під час наливання зерна (через підвищене споживання води під час наливання зерна); (і) інтрогресія 5БІДХ в, наприклад, фон КТх7000 збільшує статус води у рослини у середині стадії наливання зерна, на що вказують а) більш високий відносний вміст води (КУМС) і 5) більш низький водний потенціал листка (МУР); (ії) більш високий урожай зерна і більший розмір зерен є наслідками підвищеної доступності води під час наливання зерна; (ім) більш високий урожай зерна, більший розмір зерен і підвищена стійкість до вилягання не є взаємовиключаючими (тобто, всі три ознаки представлені 5ІДХ); (м) переваги у урожаї і розмірі зерна є відносно високими в умовах важкої граничної засухи, у порівнянні із умовами помірної граничної засухи; (м) сприятливий ефект від генів "залишатися зеленим" в, наприклад, фоні КТх7000 (інбредні) зустрічається у діапазоні урожаю 1-3 т/га (12-2295), із подальшим меншим, але все ще значним сприятливим ефектом у діапазоні урожаю 3-4 т/га (8-1095). Однак мала місце невелика втрата, пов'язана із цими областями (2-495) при більш високих рівнях урожаю (5-8 т/га) через більш вологі умови. Зверніть увагу на те, що ці діапазони урожаю були б значно вище для гібридів. Оскільки середній урожай зерна сорго для гібридів в північному зерновому поясі становить приблизно 2,5 т/га, сприятливий ефект від генів "залишатися зеленим" повинен бути значним. Ніякого зниження урожаю зерна в більш вологих умовах (вода необмежена) через ознаку "залишатися зеленим" не спостерігали у гібридів; (мі) інтрогресія 5БІДХ в, наприклад, КТх7000 також збільшує розмір зерен на 1195, в середньому, в умовах важкої граничної засухи. Не було ніякого впливу 5БІДХ ОТІ на розмір зерен в умовах помірної граничної засухи або у відсутність засухи; і
Зо
(мії) кожний із ключових механізмів 5ІДХ картується в певній області, вказуючи на те, що дія одного гена має множинні плейотропні ефекти.
У даному винаході додатково розглядається бізнес-модель для збільшення економічної вигоди від отримання сільськогосподарської культури. Згідно із цим варіантом здійснення, бізнес-модель, також наведена у даному описі, надана для збільшення економічної вигоди від урожаю сільськогосподарської культури, де модель включає отримання сільськогосподарських рослин, які містять вибрану ознаку 5ІДХ або підвищену або знижену ознаку 5ІДХ, що приводить до того, що отримують сільськогосподарську рослину із зсувом у водоспоживанні у цієї рослини на період після цвітіння, таким чином, збільшуючи НІ і урожай зерна в умовах обмеженого водопостачання, отримання насіння із отриманої сільськогосподарської рослини і розподіл насіння між виробниками зерна для збільшення урожаю і прибутку.
У даному описі надана система вирощування рослини, з метою зниження залежності сільськогосподарської культури від води або іншим чином поліпшення ефективності споживання води і збільшення урожаю зерна або продукту. Система вирощування рослини включає отримання сільськогосподарської культури, адаптованої до засухи, включаючи рослини хлібних злаків, із застосуванням селекції і експресії локусу БІДХ або його функціонального еквівалента окремо або в комбінації із введенням інших корисних ознак, таких як розмір зерен, розмір кореня, солестійкість, стійкість до гербіцидів, стійкість до шкідників і т. п. Альтернативно або крім того, система вирощування рослини включає отримання рослини адаптованої до засухи і сільськогосподарські процедури, такі як зрошування, поживні підживлення, щільність сільськогосподарської культури і геометрія, боротьба із бур'янами, боротьба із комахами, аерація грунту, мінімальна обробки грунту, підведені грядки і т. п. Приклади 5ІДХ включають 51: область тонкого генетичного картування між їхр5б3 і їхр581, яка містить 60 анотованих генів, більш велика середня область між їхр440 і їхр580, яка містить 307 анотованих генів, кандидати в хвості між їхр580 і їхр38, які містять 178 анотованих генів; 5ід2: область тонкого генетичного картування між їхр512 і їхр2, яка містить 15 анотованих генів, більш велика область між їхр31 і їхр530, яка містить 241 ген, який анотується; 5ідЗа: вся область між їхр298 і 5Рр- 2568, яка містить 520 анотованих генів; 5ІДЗр: вся область між 5РБ-2568 і їхр179, яка містить 291 ген, якийанотується; 51ІдД4: вся область, обмежена їхр283 і їхр15, яка містить 306 анотованих
Зо генів. Приклади локусів в цих областях перераховані у таблиці 18 (і таблиці 1С). Приклади локусу БІДХ включають ЗОБРІМ1-11, ІРА-1, МУЕР, рі і ССО7/В8 і їх еквіваленти в інших рослинах.
Дане розкриття описує засоби для виклику або посилення здатності до адаптації до засухи у рослини шляхом введення до помо одного або більше ознак фенотипу "залишатися зеленим" або підвищення експресії природженого одного або більше локусів 5ІДХ у рослини і/або селекційного відбору поліморфного варіанту ЗІДХ із поліпшеною або посиленою експресією або активністю продукту. Маніпуляції із фенотипом "залишатися зеленим" можуть бути проведені окремо або як частина інтегрованої системи вирощування рослини, яка може включати додаткову селекцію ознаки і/або поліпшені агрономічні технології. Сільськогосподарські культури, які отримуються, у результаті більш ефективно використовують воду і дають більш високий урожай зерна і мають більш великий розмір зерен.
Бізнес-модель розширяється до збору насіння із адаптованих до засухи або посилених сільськогосподарських рослин для розподілу виробникам, щоб, зрештою, збільшити урожай зерна.
Дане розкриття додатково описує застосування генетичного агента, вибраного із (ї) локусу
ЗІ9Х; (ії) функціонального еквівалента локусу 5ІДХ; і (ії) агента, який модулює експресію природженого локусу 5ІЯДХ при отриманні адаптованої до засухи рослини. "Функціональний еквівалент" включає кКДНК.
Як пояснено у даному описі, локуси БІДХ ідентифіковані як такі, які кодують один або більше локусів, перерахованих у таблиці 18В, які при експресії або підвищуючій регуляції або понижувальній регуляції у всіх або вибраних тканинах рослини або коли специфічний поліморфний варіант будь-якого одного або більше із них, отриманий відбором при розмноженні або генною інженерією, підтримує фенотип "залишатися зеленим".
Як пояснено у даному описі, локуси БІДХ ідентифіковані як такі, які кодують один або більше із ЗБРІМ1-11, ІРА-1, М/ЕР, РІ. і/або ССО7/8, які при експресії або підвищуючій регуляції або понижувальній регуляції у всіх або вибраних тканинах рослини або коли специфічний поліморфний варіант будь-якого одного або більше із них, отриманий відбором при розмноженні або генною інженерією, підтримує фенотип "залишатися зеленим".
Генетично модифіковані рослини і їх потомство, яке демонструє ознаку "залишатися зеленим", також допускаються даним описом, так само як насіння, плоди і квіти ії інші бо репродуктивні або пророщувані органи.
У одному із варіантів здійснення локус знаходиться у 5191, вибраній із РІМ5, 210112,
Р45098А1, нечутливих до індол-3-ацетату і брасиностероїдів.
У одному із варіантів здійснення локус знаходиться у 5142 і є компонентом носія, який виділяє ауксин За (РІМЗа).
У одному із варіантів здійснення локус знаходиться у 5ідЗа, вибраній із білка, подібного, білка, який відповідає за старіння листка (565029023510), білка, подібному білка, який відповідає за старіння листка (56029023520), КАМО5БАТ1 С2На із доменом "цинкові пальці" білка фактора транскрипції (560029024410), передбачуваного ауксин-незалежного прискорювача росту (5р029024540), білка, схожого із білком, подібним білку, чутливому до дегідратації (55029024670), схожої із транспортером глюкози (55029024690), МУККУ білка фактора транскрипції 76 (565029024760), глутамінсинтазаподібного білка (565029025100), білка, асоційованого із старінням ОН (55029025180), передбачуваної аланін амінотрансферази (5р029025480), білка, подібного ауксин-індукованому білку (565029025610), білка, подібного ауксин-індукованому білку (56029025620), передбачуваного білка із непарною відповіддю в дальній червоній області (565029025670), білка, подібного (цитохром-Р450)-монооксигеназі
СУРО2АТ (560029025820), ауксин-незалежного прискорювача росту (56029025960), аспартатамінотрансферази (56029026430), білка, подібного 8'-гідроксилазі З абсцизинової кислоти (560029026600), білка, схожого із етилен-зв'язувальним білком (55029026630) і сімейства передбачуваних ауксин-індукованих білків (526029027150).
У одному із варіантів здійснення локус знаходиться у 5І9ДЗБ, вибраному із передбачуваного ауксин-незалежного прискорювача росту (560029027470), білка бдциатоза промотор- зв'язувального подібного білка 17 (565029028420), білка, подібного білюу 0О50990505400 (О5РІМО) (55029029210), білка Здиатовза промотор-зв'язувального подібного білка 17 (56029029300), білка, схожого із ауксин-індукованим білком (56029029630).
У одному із варіантів здійснення локус знаходиться у 5194, вибраному із рецептора брасиностероїду ЇКК (565059006842), рецептора брасиностероїду ЇЖКК (560059006860), передбачуваного білка із непарною відповіддю в дальній червоній області (565059007130), цитохрому Р450 84А1 (560059007210), рецептора гібереліну СІ0112 (56059007270), рецептора гібереліну СІЮ112 (56059007290), сахароза-фосфат синтази (5Б059007310), аквапорину 5ІР1-1
Зо (565Б059007520), гіберелін 20 оксидази 2 (565059008460), О5ІДА29 - ауксин-чутливого білка (565059008510), О5ІДА29 - ауксин-чутливого білка (5Б059008512), білок-рецептора гібереліну
СІ0112 (560059008610), білка, подібного амінотрансферазі, передбачуваного білка (5р059009410), індол-3-оцтової кислоти амідо-похідної сполуки (5Б059010310), індол-3-оцтової кислоти амідо-похідної сполуки (50Б059010320), індол-3-оцтової кислоти амідо-похідної сполуки (565Б059010326), цитохрому Рі450 86А2 (5р059010360), цитохрому Р450 51, передбачуваного білка (560059011296), цитохрому Р.4-50 51, передбачуваного білка (565059011430), триацилгліцеролліпази, білка старіння листка, білка (ОО біосинтезу жасминової кислоти (5р059013160), білка регулятора росту, такого як (56059015590), цитохрому Р.4-50 78А4 (565059016750), білка, подібного білку із сімейства АВС-транспортерів, експресованого білка (56Б059017120) і ЗЄдцатоза промотор-зв'язувального подібного білка 19 (56059017510).
Приклади
Аспекти, які наведені і надаються даним описом, додатково описані наступними необмежуючими прикладами.
Приклад 1
Ідентифікація гена 5ІДХ
Локус кількісної ознаки (ОТ), який називається 5191, який є прикладом 5ІДХ, ідентифікували як такий, що збільшує або поліпшує ефективність використання води рослинами сорго, 5941 кодує у сорго зернове член сімейства компонентів носія, із виділенням ауксину 4, РІМА (або
ЗБРІМА).
Цей головний ген адаптації до засухи був тонко картований в багаторазових дослідженнях на 152 генному блоці між маркерними генами їхр5б3 і їхр442. Зміни у виділенні ауксину пояснюють всю множину фенотипів, які спостерігаються у рослин, які містять ЗВРІМ4. Ген- кандидат (і промоторна область) секвенований у двох батьків популяції тонкого генетичного картування (КТх7000 і Тхб42), щоб ідентифікувати однонуклеотидний поліморфізм. Визначення профілю експресії РНК у популяції тонкого генетичного картування 5191 також проводили на підвиборці ліній, часів і органів. Фенотипи, які демонструються рослинами із 5БРІМА, які можуть бути пояснені безпосередньо підвищеною доступністю ауксину, включають знижене кущіння, менші листки (і в довжину, і в ширину ), знижену масу листка і збільшене співвідношення корінь:паростки. Фенотипи, які демонструються рослинами із 5БРІМА, які могли бути пояснені бо непрямо (або як емержентні наслідки цих прямих ефектів), включають підвищену доступність води у періоді цвітіння, більш високу концентрацію М у листках у періоді цвітіння, підвищену транспірацію і біомасу на одиницю листкової поверхні, знижене співвідношення біомаси до:після періоду цвітіння, більш високу ефективність транспірації, підтримка площі зеленої листкової поверхні під час наливання зерна, підвищений індекс збору урожаю, більш високий урожаю зерна, більш великий розмір зерен і підвищену стійкість до вилягання. Запропоновано, що БЗОРІМА діє в інших основних злакових рослинах і видах сільськогосподарських культур, посилюючи адаптацію до засухи у місцях по всьому світу, де вода обмежує ріст сільськогосподарської культури у період після цвітіння. 51 (5БРІМ4) надає адаптацію до засухи і безпосередньо, і непрямо, зрештою, приводячи до більш високого урожаю зерна, більш великому розміру зерен і стійкості до вилягання в умовах обмеженого водопостачання.
Інші області 5ЮХ визначені таким чином: 5141: область тонкого генетичного картування між їхр5б3 і їхр581, яка містить 60 анотованих генів, більш велика середня область між їхр440 і їхр580, яка містить 307 анотованих генів, кандидати у хвості між їхр580 і їхр38, які містять 178 анотованих генів; 5Ід2: область тонкого генетичного картування між їхр512 і їхр2, яка містить 15 анотованих генів, більш велика область між їхр31 і їхр530, яка містить 241 ген, який анотується;
ЗдЗа: вся область між їхр298 і 5Рр-2568, яка містить 520 анотованих генів; 5ІДЗБ: вся область між 5РЬ-2568 і їхр179, яка містить 291 ген, який анотується; 5Ід4: вся область, обмежена їхр283 і їхр15, яка містить 306 анотованих генів.
Приклади локусів перераховані у таблицях 18 і 1С, і взаємодія деяких із цих генів в шляхах мережі показано на Фіг. 68.
Збільшена доступність води у період цвітіння досягається через зниження споживання води за допомогою двох механізмів (знижене кущіння і менші листки) у рослин, які містять область 591. Обидва механізми, індивідуально, судячи по всьому, знижують розмір крони у середньому приблизно на 995. Механізм "слабке кущіння" домінує у середовищах із низькою щільністю, коли потенціал кущіння високий. Механізм "невеликого листка" домінує у середовищах високої густоти, коли потенціал кущіння низький. Об'єднані, ці два механізми надають злакам значну пластичність для зміни архітектури крони у відповідь на тяжкість водного обмеження.
Ознака "залишатися зеленим" посилює пластичність архітектури крони через засновницькі і адаптивні відповіді. Розмір крони із 591 знижується приблизно на 595, навіть коли вода не обмежує (конститутивна реакція). Розмір крони додатково знижується (адаптивна реакція) при помірній засусі (1095) і більш важкій засусі (1595). Слабке кущіння є передусім конститутивною відповіддю. Невеликий розмір листка є і конститутивною і адаптивною відповіддю.
Існує зв'язок між зниженим розміром крони (через знижене кущіння і менші листки) і зниженим споживанням води сільськогосподарською культурою у період цвітіння. Є висока кореляція (1--0,9) між розміром крони і споживанням води сільськогосподарською культурою у дослідженнях із КОЗ5 і лізиметрами.
Підвищена доступність води у періоді цвітіння також досягається через поліпшену досяжність води (більш легка екстракція води і більш глибоке і краще латеральне поширення коріння).
Ознака "залишатися зеленим" збільшує біомасу на одиницю листкової поверхні у періоді цвітіння. Передбачаючи, що маси кореня еквівалентні (або щонайменше не значно менше), ці відмінності можуть бути пояснені відмінностями у транспірації на одиницю листкової поверхні (ТЛА) і/або ефективність транспірації (ТЕ). Дослідження із лізиметрами вказують на те, що збільшення ТЛА, а не ТЕ, викликає збільшення біомаси, які спостерігаються, на одиницю листкової поверхні. Потрібно зазначити, що збільшення Т/ А зустрічалося тільки в умовах слабкого МРО; ТЛА фактично знижувалася в умовах сильного МРО, мабуть, як механізм збереження води.
Більш висока ТЕ в лініях 5941 також спостерігалася в умовах більш сильного МРО.
Збільшення ТЕ через інтрогресію 5941 може відбуватися завдяки а) пропорційно більш високій фотосинтетичній здатності у порівнянні із продиховою провідністю, через більше дрібне, більше тонке і більше зелене листя і/або Б) зменшенню в транспірації при одночасній підтримці біомаси. Дослідження із лізиметрами вказують на те, що обидва із цих механізмів сприяють підвищенню ТЕ в лініях 2941, при цьому основним механізмом є зниження транспірації.
Зміни в транспірації на одиницю листкової поверхні можуть відбуватися завдяки а) кількості продихів, 5) розміру продихового отвору, с) зміні часу відкриття і закриття продиху відносно МРО іабо а) кількості клітин біля основи ворсинок (які впливають на граничний шар і ТЛА).
Інтрогресія 5941 в КТх7000 знижувала кількість продихів і збільшувала кількість клітин біля основи ворсинок на одиницю листкової поверхні в листках 7 і 10; обидва механізми можуть 60 зберігати воду, знижуючи Т/ А.
Інтрогресія 5941 в КТх7/000 змінювала анатомію листка, збільшуючи кількість клітин оболонки, які оточують судинний пучок. Збільшена кількість клітин оболонки судинного пучка також могла сприяти збільшенню фотосинтетичної асиміляції і ТЕ.
Відмінності у морфології листків (наприклад, листки 7 і 10) очевидні між Тх7000 і 591. У цьому випадку, мали місце більша кількість і більш дрібні оболонки, які оточують судинний пучок, біля 591. Збільшена кількість клітин оболонки судинного пучка також могли сприяти збільшенню фотосинтетичної асиміляції і ТЕ.
Збільшене споживання води під час наливання зерна досягається через (ї) підвищену доступність води у періоді цвітіння і (її) поліпшену досяжність води (більш легка екстракція води і більш глибоке і краще латеральне поширення коріння) під час наливання зерна. а) Підвищена доступність води у період цвітіння
Застосування води сільськогосподарською культурою (СУМІ) перед періодом цвітіння негативно корелювало із СУМ після періоду цвітіння в експерименті із КО5. Загалом, 25965-е збільшення споживання води після періоду цвітіння (80 проти 60 мм) приводило до 25965-му збільшення урожаю зерна (400 проти 300 г/м7). Це переводиться в 50 кг/га зерна на кожний додатковий мм доступної води.
Юр) Підвищена доступність води під час наливання зерна
Збільшене споживання води під час періоду наливання зерна демонструвалося із 51, як в умовах із низькою, так і високою щільністю в експерименті із КО5. Це було передусім завдяки (Її) зниженому споживанню води у період цвітіння в умовах високої густоти, і (ії) підвищеної доступності води під час наливання зерна при низькій густоті.
Область 5141 надає адаптацію до засухи через зв'язок між продукцією біомаси у період до і після цвітіння. Область 5141 знижує співвідношення біомас у періоди до:після цвітіння до нижче критичного рівня, збільшуючи урожай зерна і стійкість до вилягання.
Відстрочене старіння листка (ознака "залишатися зеленим"), більш високий урожай зерна і стійкість до вилягання є наслідками більш високого статусу води у рослини під час наливання зерна (через підвищене споживання води під час наливання зерна).
Інтрогресія 5ЩІ в початковий КТх7000 збільшувала статус води рослини в середині наливання зерна, як показано а) більш високим відносним вмістом води (КУУС) і Б) більш
Зо низьким водним потенціалом листка (І МУР).
Більш високий урожай зерна і більший розмір зерен є наслідками підвищеної доступності води під час наливання зерна.
Більш високий урожай зерна, більший розмір зерен і підвищена стійкість до вилягання не є взаємовиключаючими (тобто, всі три ознаки демонструються 5191).
Переваги в урожаї і розмірі зерен відносно вище в умовах важкої граничної засухи, ніж в умовах помірної граничної засухи.
Дослідження вказують на те, що найбільший сприятливий ефект від генів "залишатися зеленим" у початковий КТх7000 (нібредні) зустрічається у діапазоні урожаю 1-3 т/га (12-22905), із подальшим меншим, але все ще значним, сприятливим ефектом у діапазоні урожаю 3-4 т/га (8- 1095). Однак, була невелика втрата, асоційована із цими областями (2-495) при більш високих рівнях урожаю (5-8 т/га) через більш вологі умови. Потрібно зазначити, що ці діапазони урожаю були б значно вище у гібридах. Оскільки середній урожай зерна сорго для гібридів в північному зерновому поясі становить приблизно 2,5 т/га, сприятливий ефект від генів "залишатися зеленим" повинен бути значним. Ніякого скорочення урожаю зерна в умовах більшого зволоження (вода не обмежує) через ознаку "залишатися зеленим" в гібридах не спостерігалося.
Інтрогресія 5941 в КТх7000 також збільшила розмір зерен у середньому на 1195 в умовах важкої граничної засухи. Не було ніякого впливу цього ОТ. на розмір зерен в умовах помірної граничної засухи або у відсутність засухи.
Кожний із ключових механізмів 591 картується в ту ж саму область, вказуючи на дію одного гена із множинними плейотропічними ефектами.
Приклад 2
Знижене кущіння (фізіологічні польові дослідження МІ)
Дані показують вплив 591 на кущіння і в умовах наводненості (НМ) і в умовах нестачі води (/М/). Відмінності у розвитку крони перед цвітінням були значною мірою наслідком відмінностей у кущінні серед ліній. Кількість стебел на м: у період цвітіння була найкращою загальною мірою ефекту кущіння на динаміку крони. Кількості стебел на мг були еквівалентні при обох водних режимах (12,89), вказуючи на те, що знижене кущіння є конститутивною ознакою. Генотипи розрізнялися значно (Р « 0,001) за цим параметром, в межах від 8,59 до 16,67. Однак, генотип і 60 обробка не взаємодіяли значно для цього параметра.
Кількість стебел на ме аналізували з точки зору їх статусу 519, і середні категорії представлені у таблиці 2. КТх7000 давав на 4195 більше (Р « 0,05) стебел/м2, ніж В35 (14,07 проти 10,00). Інтрогресія однієї тільки області 5941 в КТх7000 (6078-1) знижувала кількість стебел/м? значно (Р « 0,05) у порівнянні із ЕТХ7000 (9,40 проти 14,07). У порівнянні із. 5191 окремо, додаткові інтрогресії і 21942 і 5ід4 збільшували кількість стебел до 10,49 (1,2 комбінації) і 10,74 (1,4 комбінації). Потрібно вказати на те, що ці три майже ізолінії, які не містять області 59 (2212-3, 2235-11 і 6120-16) також демонстрували сильне кущіння, еквівалентне Тх7000. Отже, повне ранжування кущіння в цих лініях може бути представлене як 591 « В35 « 5194 « 5142 «
ЗІЗ « відсутність « КТх7000.
У періоді цвітіння кількість стебел високо корелювало (г--0,71) із загальною площею зеленої листкової поверхні (СІ АА; Фіг. 1).
Таблиця 2
Ід статус Стебел/ме А нььккоийнининннининннншшшш
ЗІд1 область нн 10,49 10,74 н"?"Є6ІЦИ?ГТИТИОЗТОИТШИІІОІОЛОВОВОВОВОВИООЛШІШОТВВТНТЬНЬНЙНТЬТЙТТЬЙТЬТИЙННИИ ШИТТЯ втх7000 14,07 нию"иннийййнІШИНННННШШШНнннншшшшш
І 50 (0,05 нших шишш
Кількість стебел на м? в рекурентному батьку (КТх7000) і різні лінії, які містять інтрогресії 941 ОТІ,, як окремо, так і в комбінації із іншим 59 ОТ.
Відмінності у зеленій листковій поверхні у період цвітіння (СІ АА) з'являлися передусім через відмінності у зеленій листковій поверхні відростків у періоді цвітіння (СГ ААЮ, оскільки
СІ ААЇ високо корелювала із СІ АА (1--0,78), проте, листкова поверхня головного стебла не корелювала.
Зелену листкову поверхню відростків у період цвітіння аналізували із точки зору статусу 59, і середні категорій представлені у таблиці 3. ЕТх7000 мавмайже у вісім разів більше (Р « 0,05)
СІААїЇ, ніж В35 (15460 проти 1980).Інтрогресія області 541 окремо в КТх7000 (6078-1) знижувала ОСІ ААЇ значно (Р « 0,05) у порівнянні із КТх7000 (3121 проти 15460). У порівнянні із 51 окремо, додаткові інтрогресії або 5142, або 5194 збільшували СГААЇ до 4187 (1,2 комбінації) і 4797 (1,4 комбінації). Всі лінії, які містять 291 (в будь-якій комбінації), достовірно відрізнялися (Р « 0,05) по Сі ААЇ від 5941 окремо. Потрібно указати на те, що ОСІ ААЇ у цих трьох майже ізолініях, які містять області 5ід (2212-3, 2235-11 і 6120-16), достовірно не відрізнялася від КТх7000. Отже, достовірне ранжування (Р «0,05) по СІ ААїЇ у цих лініях являє собою В35 - 991 - 5194 « 5ІД2 - 593 « відсутність - КТх7000.
Зо
Таблиця З
Зід статус нин площа у періоді цвітіння 11111111111лсмуму1
ЗІд1 область нини 3121 4187 4797 нІ"?"нкСІцІЛІЛрСЦТЩЦІюНННИшнНннн нн втх7000 15460 нини
І 50 (0,05 нишшш 5282
Зелена листкова поверхня відростків у періоді цвітіння в рекурентному батьку (КТх7000) і різні лінії, які містять інтрогресії 541 ОТІ,, як окремо, так і в комбінації із іншим 59 ОТ.
Зелена листкова поверхня і кількість стебел на м: у період цвітіння високо корелювали в обробках із високою (НО) і низькою щільністю (І.О) в експерименті із укриттям від дощу (Фіг. 2).
Інтрогресія області 5941 або 5ідта в ЕТх7000 знижувала кількість стебел на м: і СІ ААЇ при обох щільностях.
Приклад З
Знижене кущіння - дослідження із тонким генетичним картуванням
Популяцію тонкого генетичного картування 5191 вирощували в полі в умовах високої і низької густоти три роки підряд. Кількість стебел на одну рослину вимірювали у періоді цвітіння кожний рік і проводили загальний аналіз по всіх роках. У цілому, КТх7000 продукував на 47905 більше стебел на одну рослину, ніж 6078-1 (1,85 проти 1,26; фіг. 3).
У цих польових дослідженнях, ознаку (кількість стебел на одну рослину) картували в 60- генному блоці між маркерними генами їхр5б63 і їхр581 (Фіг. 4). Умовне значення 1,54 стебел на одну рослину давало оптимальне розділення між сильним і слабким кущінням з метою генетичного картування (тобто, рекомбінантні гени із менше 1,54 стебел відносили до ВВ генотипів, в той час як такі із більше 1,54 стеблами відносили до ТТ генотипів). Спуск по маркерних генах показує, що мутація із набуванням нової функції (слабке кущіння) досягалася в трьох генотипух (10564-2, 10704-1 і 10620-4) при маркерних генах їхр542 або їхр563. Дані вказують на те, що точковий розрив в гені знаходиться між їхр5б3 і їха3з676, оскільки один рекомбінантний ген (10568-2) продемонстрував фенотип високе кущіння, в той час як три інших (10620-4, 10704-1 і 10564-2) продемонстрували фенотипи слабке кущіння при цьому точковому розриві. Ген компонента носія, із виділенням ауксину 5 розташований в цільовій області і, тому, є серйозним кандидатом (Таблиця 4), оскільки ауксин, як відомо, впливає на ріст другорядних зародків у рослин.
те г : хяхх що ще о і Ге 1 ії . | ше 18
З т і У Ж пек З і ї Кк | че 4 т. я і х сек ш В | Б Ж ше с
ЕЕ В 5 І ще 2 у жу чне І Хо: х ся ї хе жан щи о дл І: і Ж м ї Ка седннххх сш сор ще КО М і КУ - 1 не 5 : г | ше їх ту. Я дек ккко У Я Я ух . а Є ' 5 | те о М і. ! 7 що сх Е ххх М хх М ї секх о я ву о жи ї скл п ще Ко ще се В а ї н-
Ти ТБ - о. ОО | х і Би с ще ТОЙ я о о КЗ і - о о ї ох й ке -х г . БЕ М У її ще 5 ЯЗ Те З. жі ще 1 КЗ Тоте І о ще ях 55 З ХА у - Її сих п. її г і п ЗЕ Е : не
ЕЕ Як Ко . | і ту - шк З - п Б 7 о ша ІК декх 0. та п ЖУХ Кв щі Ба ня ще жк : ХЕ хх
Її | в Й З ще ще ДКЯ о Ко З В сет сек ПА) - о сш ря ЕЕ п: В 3. ї кА сек З Й ххх й спдккк що - ща КЗ її КЗ в В: вх ще Зо шк УББ якоох мк ЕЕ її о п ще а шо дес пн ТІ
КЕ х ще о п. Ох Ж: ж а у; о - у5У ах ЖК ЯКЕ ке м
З З ще о КЗ М: Ка ж Ка т КЗ і я о ух З Ух В сек Ух ух жде о ще ЕЕ с. ооо 7 іх о МУ ен КО Са У о: пах ї як БУ І їж шх ЧЕ дее ххх ща ХУ сн Гах У З Он У З З ве В що дж дах З а Мене КТК о що о А п і ет ох т Й . . З ТЕ п п ще щаЗ п т и кккн с З ЕЕ ос се - 3 КЕ техн шо й ЕН се г о с виш я я о. че т У і що п ККУ тя КО КЕ п у Пехю о ЗУ хе КЕ з А ка І За о кхж с- ніх п М ЕЕ. о кни зов я а КУ С й кккнх
ТЕ К с ОС Кі вк у п и в як що» У ВЕ в: о. р -- Ех хв нок Ж й як
КЕ оух ух ке з ще Ж о З п КИ КУ КО. в й КВ о ж СКК у Ки ок їх хх їх ї сх. що
С чу хе Ух вх М х ЖЖ ко ще т ЕС УК уп -О я ще ЗА ж. БУ ЗВУ Б чен - хе о Но, в о по жна ще щ- села й як о в: і по СОН ВЕ в жк т Кр НИ мечі М іде ме о ях са о. о Я ще Ех Кох З с ще же МЕ твоя не Ж КК ща я КЕ деже ще щ- дк .
І Та ІЗ ХХ . о СЕ зх їз КВ кн ТК ЗК ря КЕ дв: ІВЖХ - хУмх ще що ЗК КУЗЯ м я цес сяк
Ії о їн о. сх ор ск КН я зако ня ше
ЩЕ . що я В МЕ з о их МІ й не З пи ще ж лох За К ще саяще щи я се
Ме Зх с Кх п ще . ке З М КНУ Пон ех кана ско не ККУ п " о. - ї і я т сонне конях па ккринек пие те п рчий -- нг о ЕЕ ск нене пек й ик дв на яння пох шення - ї п і, сх жене те джу не он пеоеннення що : ле ві і і. п. доклЕ сЖЕЕ декан 'ххе ях МЕЖ іш З не пошу п ше с: х 3 С хх ЩО. ХУ хх її : ПЖНВ вк КК до хе АЖКНЯ ЯК де З й НО Й не я Х З і. о ще я ще ох ж інн пох нн ше м М
Ск ЕК ще с У Ге - НУ КАК Х кт поь сао ке Ту У ОЙ ск ях ях тУкУх ке п. З ше: - 5 кг а . у КН: ох сани о сер о а дояхнчнх ння я Й ої о о. пах щі сек мВ ян СК пане: пе п - ее ши. й же кеееенн сні севени пе тин ши шк що м о соя х в ке ОА З . ех є ож Мх Ми ЗК суден п ЯК хх и не джин ши ке її їх с що І о. в ст то | век ТЕ М жи ве ТК ВЖКОЄ ккд я х ЩО й - пе в | ре Е Ох ; не по ХК Ной сл коди ав ТК є о скчнчкоюя ще хх св Її п. 5 Ех у З де по й сен х п по г Ж |х с кв зно М вх ен м ж КУ » ОКХ т се ХХ З ЖУК х мух дня З. КУ ЗХ ххх ше сх за сс Ай - ще Я»: Сх хх пику жк сю см о Я ЗУ о Бо т ах я Ка І ех кон СК нин Ох МАМ ще щ й що щ- що дкк хх а в е с о п В ще ще ОВ ве . пт - . З я о ОК То и ік нн, я ве пе ще пвуяю й Ен - п с - ще пт пок
ІЗ схе ХУ її. й і що хК им ХХ іх ЖЕ дя ок ох я гЗ хх т. Ме М УЖ Я де м з «М чок шок й - клнкх що Ок ще
ЕЕ с - ЕЕ сте теж; Пн ща мнижнт я мох
ЦК 0 ДАохя що ча сУх ху с ВІ Ії хх де ХХ НЄ Зах «ще ще ж ка І де з я хе дос хе ще 3 п о. т М жк : сежноєх мне ке кктнке Не ЗЕ ОЙ сек дян - о: . пені ОКХЮ спнніннк, що Кблже ша ях пен М
Зо їх хх У НЯ 0 СН - мк. ХУТ ох х яке доле н АЖНХ ще в хх КВ є не п ще У ке - о. я. пе о ен За вне М дя шк шк ск. пе х ме у; с У су У кох Ко 5 хх ще З Що ях ЩІ хх з У ж дк ке ск 3; ще ще що ще ще
ОО в о 5 2 і о ке ке пня Ох ох ш ШИ У п ї о і. п ст пе «ях вені не ех п. у ї и 3. ї СКК. я ж зужее сану У ува ще я їй яко п нн се п з їх а у с ме Ж Б. КК ік п. х М ск м кеенх 5 ї о Но о п М зе кю миня ШИ МОН ще ШО п й що о. о. пенні її соки хе зі ще ее вих ще им жвнннх М не
І ще . ШЕ і. о ще ще в ен ШУ ЗВ З я а ще пОш нм м . я п шле в ння нн м є т о: -й то с. жене ин тт 5 Т дк. х о Сом хе З с ХВ ж сок де уко з ЕХ Те х х ці ціх ЯК ТО: З й ще п а й ОК З с. п ; М о я яко ЕХ ЗО ок пе Те Ух Зх З Ди іх сах мех от бл п щ ї- о ЕЕ п НТ пу» тки а рі и її п ої жк ше СЕ ТЕ ЕЕ схо поко їх ше син у Ц - ик У. З Ко кВ. зх х жк ай жу т МУК і пк: ТК, ЗУ МК: а ЗО ще Ко й х
Ко но я 4 1 ії яви не сення денне щЮК век чНЕ КЗ; т хх ин 3 п ЕКЕ ще ОКЕ ХЕ с. Ох ПОМ ай дять и п у аз яв ох - С Ж се Тен ЗК тя Би їх іно КК - жк р 5) на ля г; тент кін ви п: м не ока ши
З ик ро ч г 0 . те ли НТК пе не ах З ХУЙ хехю я ян ХХ сх ож і зтайк со і о п меш ша пен скине дует и Тон и та и б я 5 п п мн ЩЕ че си 35 НВ а ех мех не ше дк хе же 4 ш ,Щ Ге! Хо ЕЕ. С Я хі оон кв; пувкю З ЖЕ такс слкх бю щк зх пил ек
Нн ов (о) це ої ін Б М Зм я МИ хіх: ння дян е а с с о : нев саше а де ще Тжее Бк з пен со по
К Н е ЩІ ж ма МК ТЖЕ се Ж ЕЕ УК ще ЗХ в й М щ- х ще ий - и Я УЖЕ по ЗК щі їх че хв; с-жуа ще я КА се ще яже не ма щі Й Й со ях пе ще ВІЇ я ЗЕ ЗІ : Вена сх ще хх ще
ІНН уб оз К жння я пет пи КК пня по я л ний гені шо п КЕ піт гени ; дк в М ще дитя (д оці и ів як 7 я Не й ве не ПВЕК ях які хоче хеом ух ос. ЦІ . ка ; ше її ско и 0. о леж ще ще ддляня С лі із 1 нд ро те пи Тех пак йожж зве о пд хе д 8 и зт ме о В хи ях ех а й - ск
Ж д а п ра ще ях ї8х їх уїх ще ск х хх се чех ек. е Г а дог КЕ З хе Тех хх Ох че - дж кг оожях хх пил
Н е т ш - т Б і вра хо до -х ех ТЕ в - га
Н на н о чех зетовв кан п м Пе тонн - я Н М а ва не ТОВ я я они мкм але п м склі тен
ІЗ и с. н шен ща іш я ШИ Й ій т мі л их М ши ще пеня М тих ке онНКк їж абк мі шИ А пен винен я им ма ек іЖ м Б ген окернй ар БЕ - ет рн інн ке шкннх ша вх п кикня ях и и я р для ще як пли ща с ще чн Ми (к ни пи пи вк я им к ген сМпОНе ЕЕ арт ами оне ена пе ув їх нт Ми Ух сонне ан р5 н їх ш- 37 ням 63 сія ров СТО і і їх з ІЗ 1ї М а1 р4і4 ви і їх в 1 ді ро ко | лен 63
З) ня й
М
Субпопуляцію популяції тонкого генетичного картування 5941 вирощували в полі із укриттям від дощу (КО5) в умовах із лишком і недоліком води, при цьому кожний варіант водних умов ділили на умови із високою і низькою щільністю. Це створювало чотири водних режими із рівнем дефіциту води, який збільшується: НУМО (найменше піддані стресу) « НУМУНО « ЛМГО « ГМУНО (найбільш піддані стресу). Кількість стебел на одну рослину вимірювали на 44 день після проростання на кожній ділянці. Відмінності були найбільш очевидними в умовах із низькою щільністю (0), оскільки експресія ознаки кущіння максимізована в цьому варіанті. У середньому КТх7000, 10568-2 і 10709-5 продукували на 2795 більше стебел на одну рослину, ніж 6078-1 і 10604-5 в умовах ГМО (2,05 проти 1,62; Фіг. 5), і на 2395 більше стебел на одну рослину в умовах НУМО (1,49 проти 1,22). Ген "слабкого кущіння" картували в 152-генному блоці між їхр5б63 і їхр442 (ту ж саму область ідентифікували в польових дослідженнях із тонким генетичним картуванням; Фіг. б), який містить ген-кандидат (компонент носія, із виділенням ауксину 5).
Приклад 5
Знижене кущіння (дослідження із тонким генетичним картуванням 5191 в голку)
Провели три додаткових дослідження із тонким генетичним картуванням на популяції 591 в регульованих умовах в голку. У цих дослідженнях кущіння аналізували більш детально у порівнянні із більш ранніми польовими дослідженнями. Підраховували загальну кількість відростків і, більш специфічно, підраховували кількість відростків, які з'явилися із пазух листків 2 (12), З (13) і 4 (14). Наявність або відсутність Т2 служило найкращим індикатором загального потенціалу кущіння для даного рекомбінантного гена. Т2 також була самою кращою ознакою для тонкого генетичного картування гена.
У цьому експерименті за загальну кількість відростків брали суму 12, ТЗ і Т4, де Т2 був паростком, який з'явився із пазухи листка 2 (і так далі для ТЗ і Т4), включаючи повторні паростки. Значну генотипічну варіацію спостерігали для всіх ознак, які стосуються кущіння у цьому дослідженні (Таблиця 5) із наслідуваністю, загалом, вище 30.
Таблиця З
Суавка їх : Е ї- їх я с
І НЕ ї к щ я їх ж
КУВНННИ І
Кетьарукююв маю 29 вки яв й ВЯт ЗУБ пові заава пен твість 18 жов ВлІКЮ пяде З за р оав в вінку ннеть я п щи ОО пах КИ ще а нонеснщетьсяя БА в 000 б яву по КК ее звев 509 пе бе Зв б 00 Ззю ве дБ ОЗ пи На» 58 09? МИ ей 4 же как па ща ОВ по МА
ВЕКОБА Я сервиивано и ВхМО 53 Б чо Б Зтязо
У таблиці 5 наведений підсумок середніх значень, які передбачаються, Р-величини і наслідуваність ознак кущіння, виміряні в урожай 111. Істотні відмінності (Р « 0,05) затінені жовтим кольором, в той час як випадки, де наслідуваність » 20 затінені зеленим кольором.
Окремий аналіз даних 12, ТЗ і Т4 виявив, що 6078-1 не утворював Т2 паростки ні в одному із цих чотирьох повторів, у той час як КТх7000 утворював 12 паростки в 2 із 4 повторів (Фіг. 7).
Відмінності були також очевидні в числі Т3. 6078-1 утворював ТЗ відросток в 1 із 4 повторів, в той час як КТх7000 утворював ТЗ відросток у всіх 4 повторах (Фіг. 8).
Число ТА відростків також варіювало середовищ генотипів. 6078-1 утворював ТА відросток в
З із 4 повторів, в той час як КТх7000 утворював ТА відросток у всіх 4 повторах. Отже, інтрогресія 591 істотно запобігала росту Т2 і ТЗ відростків у початковий КЕТх7000.
Аналіз "ознаки маркерного гена х" ідентифікував область розміром 7 см між їха3676 і їхр442, яка містить приблизно 60 генів, значно (Р « 0,05) для всіх ключових ознак кущіння за винятком наявності Т4 (Таблиця 6), вказуючи на те, що ген(и) кущіння розташований у цьому блоці.
Потрібно указати на те, що вершина цього блоку є тим же самим точковим розривом (між їха3б676 і їхр53б), як вже ідентифіковано польовими дослідженнями із тонким генетичним картуванням, підтверджуючи попередній результат із більш специфічним фенотипом (12) у контрольованих умовах.
Твб3вця в "ККУ АК ТАТА ТВА Т АРК пи по о о п вс В Бей ни ни ША в - в 5 її 5 ово в їх ще ре ши ван А і З шк ше и не ще
ПОН рин о ГЕ Я пп пах ва -й ща «йо еВ ШО 0: 906 бо Ол 03 вії о
Я ЖаЯ3ИЯ офеереенма БА Ме БО ОБ п ЗБ Ват о пив
Я СОМИ! звиаозьнии БО Я Оле и У КО ва п 5 ТУНе не і 4з85 Ж па5 бі 023 ві ва о ши шен пн и 7 МАЯМІ соні 365 ПУ я У Бей бла оз ВО и
Я ВНОЯБІЯ сеезевнай ЯКУ ОН ОО ВА ОБО БО МЕ ОВ ОО ов 5 Вбе ОО вав о я5аіятЗ Бо 0 па 00 ВОЗ во 0065 оо 18 їхваЗа новий тата БУ ОВУ 05 ба Б в оо й ОВО 0 00 БІ 08 ВЕ ОО ОБО ОХ бої ОВ о шиє ши ЕС шен - Я ОО сення 0 3503 66 ОМ 0Ооб по 005 оз оо 35 ж НЕ, мона оо бо ще оо об 005 085 НО
НЕ ЯВИ ней тен зіва пох БО я во НЯ пов ота їй вай оюовй 0 Зо б 003 000 Бої 00 303 055 18 шжразо ей «510552 005 530 005 003 009 503 ор одо
І МОЮ сени Ваз 3 бля 035 вн ою ом оо о Ве
Ве
У таблиці 6 наведений підсумок Р-величин для різних ознак кущіння, виміряних в урожаї 11. Значні відмінності (Р « 0,05) затінені жовтим кольором, в той час як відмінності із (Р « 0,1) затінені зеленим кольором.
Аналіз точкового розриву цих ліній, який згідно із їх генотипом (ВВ або ТТ) піднімається! або "опускається! в цікавлячій області, проводили, щоб додатково точно визначити ген слабкого кущіння. Був ясно видний дуже чіткий розрив, який відділяє лінії, які утворювали відросток Т2 у повторах 0-2 (група із слабким кущінням; 8 рекомбінантних генів), від тих, які утворювали 12 відросток у повторах 3-4 (група із сильним кущінням; 8 рекомбінантних генів) (Таблиця 7, Фіг. 91.
був х 2 Бог
ЗННЦЯ о
КАК КК Ам рин не 7 меми мм з З 7 05 : щ : ши и ни не
І роз фе На : ве. г |:
З Б ! ' і кр Во
З с І З З . ! З Х КУ і ру й їх ї ря
І Ком | А Б Ї х ; З
Н - і укх щ ї З ї хх : ка ї ї-к ще ще ; пе
Е Кок кла рек и вн нин о В Соя оре фот ни жо и ОВ ви ШЕ М ВО а ск я он о ван сі пек с ВЕ ше жи а ІА ші Е шш ши ши ЕІ
ВЕН ОСС нн шині шт
Со: ех вк ІЗ Па пек шо см Зо а ше ши: ши ши - ши ее ким ВВ вне а КК Її кон вм КВ родоовон ру осо ІЗ фас ода: своя Пов сов Зно оо но ува Я
ОО МНН тОов 0 ОО ща | п і ЕН
Шо ака нн НИ ши ее ем ші ЕН ! ни нн и М
Я я п в о
ЕНН КИ о шви ооо вносквоннх осот ни нн шк ки ши м З я ше МАН НН 0 1 6 и за повар во х повне З а х юю и А о ВИ о В Ко о В А КОКО в Ки Мо У КА В У ОК ооо
Таблиця 7 показує наявність відростків (Т1-Т3) і загальну кількість відростків для восьми рекомбінантних генів сильного кущіння (коричневе затінення) і восьми рекомбінантних генів 5 слабкого кущіння (затінення зеленого кольору) із популяції тонкого генетичного картування 51941.
Підіймаючись по маркерних генах на Фіг. 10, мутація із набуванням нової функції (слабке кущіння) досягається у рекомбінантному гені 10604-1-157-5 при маркерному гені їхр587. Це означає, що ген(и) слабкого кущіння знаходиться у блоці, який поширюється вниз до (але не включаючи) їхр446 і вгору до (але не включаючи) їхр581. Підіймаючись по маркерних генах, мутація із набуванням нової функції (слабке кущіння) досягається в трьох рекомбінантних генах (10604-1-195-5, 10604-1-56-7, 10604-1-477-4) при одному із трьох маркерних генів: їхр5б3, їха3676 або їха2986 (бракуючі дані про маркерний ген не дозволяють отримати більш точне місцерозташування). Однак, якби мутація із набуванням нової функції не була б досягнута до їха3б676, ген міг би знаходитися тільки у блоці, який тягнеться вниз до (але не включаючи) їха2986. Отже, область не накладається із областю, виділеною за допомогою 10604-1-157-5, вказуючи на те, що генотипування або фенотипування є неправильним для цього рекомбінантного гена. Передбачаючи, що 10604-1-457-5 є неправильним (за будь-якою причиною), всі інші рекомбінантні гени картують ген у блоці між їхр5б63 і їхр581, який містить ген- кандидат (компонент носія, із виділенням ауксину 5).
Субпопуляцію ліній застосовували в цьому експерименті, щоб підтвердити область гена кущіння. Більше повторів на кожний рекомбінантний ген (20) застосовували, щоб додатково знизити дисперсію помилки і збільшити дозволяючу потужність між лініями. Попередні результати вказують на наявність гена кущіння між маркерними генами їхаЗ3676 і їхр536 (та ж сама область як ідентифіковано раніше). Отже, п'ять досліджень тонкого генетичного картування, включаючи три польових дослідження і два дослідження в голку, всі вказують на наявність гена слабкого кущіння в одному і тому ж місці.
Аналіз точкового розриву тих ліній, які, згідно із їх генотипом (ВВ або ТТ), піднімаються!" або "опускаються" по цікавлячій області, проводили, щоб додатково точно визначити ген слабкого кущіння. Був ясно видний чіткий розрив, який відділяє лінії, які утворювали загальну кількість
Зо відростків » 2,5 (група із сильним кущінням; 5 рекомбінантних генів) від тих, які утворювали загальну кількість відростків « 2,5 (група із слабким кущінням; З рекомбінантних гени) |Габлиця 8, Фіг. 111.
Тане ралі КА АКА АКА АК ККД ААК ДАК КА КН КАК НК КА нок ро пен АК КН Кін ок КК Ко ккум і някк пукскнкнккунксюнс щі і ї ! і Н і ї хх і х що і їж ж КІ о нн нн о он нн ня ее деднне в они же ж ши ше
ЕЕ -: «Ши ща НЕ я, шк ше
Мі хв Ин: виш МИ З ше я зе ее сх о вів о нн п п нн ши сію ем шкі ші о о п в сссве сни шли як шк. нак жк Не г з: ши ши шиє: шк шк ше КЕ
Таблиця 8 показує наявність відростків (Т1-Т4), включаючи повторні паростки і загальну кількість відростків для п'яти рекомбінантних генів сильного кущіння (коричневе затінення) і трьох рекомбінантних генів слабкого кущіння (зелене затінення) із популяції тонкого генетичного картування 5191.
Підіймаючись по маркерних генах на Фіг. 12, мутація із набуванням нової функції (слабке кущіння) досягається у рекомбінантному гені 10604-1-157-5 при маркерному гені їхр587. Однак, просування далі через маркерний ген їхр581, і можливо їха2986 і їха3676, все ж не надає функцію в 10604-1-359-3 або 10604-1-318-1, вказуючи на те, що або генотипування або фенотипування 10604-1-1457-5 було помилковим. Мутація із набуванням нової функції досягається при маркерному гені їхр5б3 у 10604-1-8-1, вказуючи на те, що низький ген кущіння знаходиться у блоці, розташованому від їхр5б3 вгору до (але не включаючи) їхр542 і вниз до (але не включаючи) їха3б76. Це та ж сама область, що і виділена в трьох польових дослідженнях і в попередньому дослідженні в голку. Отже, ген РіІМ4 у сорго зернове (позначений у даному описі "5ОРІМА") є серйозним кандидатом на ген слабкого кущіння 5191.
Приклад 6
Менші листки
Загалом, інтрогресія області 5941 в КТх7000 знижувала розмір листків (у довжину і ширину) в умовах хорошого зволоження і в умовах обмеження води, вказуючи на конститутивну дію гена. Однак, скорочення розміру листка, загалом, було більше в умовах обмеження води, вказуючи на в деякій мірі адаптивну (індуцибельну) відповідь у доповнення до конститутивної відповіді. Отже, 591 забезпечує два механізми для зниження розміру крони: а) знижене кущіння і 5) зменшений розмір листків. Об'єднані, ці два механізми забезпечують достатню міру пластичності для зміни рослиною архітектури крони у відповідь на фактори менеджменту і/або навколишнього середовища.
Зо Ряд досліджень із лізиметрами особливо корисні в оцінці патернів розміру листків при рівнях дефіциту тиску водяної пари (МРО), які змінюються (Фіг. 13А-Ю0). Не дивлячись на те, що горщики регулярно поливали в обох експериментах, розмір крони відрізнявся між сезонами, мабуть, через сезонні відмінності у температурі і МРО, створюючи умови високого (1,8 кПа) і низького (1,3 кПа) МРО. Для головної гілки і самого великого відростка (Т3), скорочення розміру листків було значним як в умовах високого, так і низького МРО (Фіг. 13А-О), не дивлячись на те, що скорочення почалося пізніше в умовах низького МРО у порівнянні із високим УРО у головній гілці (12 проти 19) і ТЗ (17 проти І 5).
Однак для інших відростків (Т4-Т6), розподіл листків за розміром відрізнявся помітно між експериментами. У той час як не було ніякої відмінності у розмірі листків між ЕТх7000 і 6078-1 при високому МРО, листків 6078-1 було значно менше при низькому МРО. Це вказує на адаптивну (індуцибельну) відповідь на зменшення листка при певних умовах навколишнього середовища для відростків Т4-16.
Приклад 7
Менші листки (дослідження із укриттям від дощу)
Експерименти проводили під укриттям від дощу (КО), щоб оцінити вплив області 5941 при двох щільностях сільськогосподарської культури, таким чином, створюючи два рівні водного дефіциту (висока щільність - сильний стрес; низька щільність - слабкий стрес). Загалом кущіння було слабким або було відсутнім при НО (20 рослин/м?) і було нормальним при ГО (10 рослин/мг).
Розмір крони був менше в обидва роки при вирощуванні із високою щільністю (НО), відображаючи більший водний дефіцит, який створюється цією умовою. У обидва роки при більш помірному (0) і більш важкому водному дефіциті (НО), розміри листків були, загалом, менше у 6078-1 (5941) у порівнянні із ЕТх7000. Виключенням було те, де патерн розподілу листків за розміром був схожим для 6078-1 і КТх7000 при більш помірному водному дефіциті (0), все ж листки було значно меншими у 6078-1 (до 1895 менший) при сильному водному дефіциті (НО), вказуючи на адаптивну відповідь рослин із 591 на збільшення водного дефіциту.
Фактично, інтрогресія області 5941 в КТх7000 знижувала розмір чотирьох самих великих листків (І10-І13) в середньому на 16,595 при більш сильному водному дефіциті (НО). Оскільки кущіння було слабким для обох генотипів при цій обробці, зниження розміру листків у 6078-1 повинно було помітно зменшити розмір крони і отже, споживанні води сільськогосподарською рослиною (маючи на увазі схожу транспірацію на одиницю листкової поверхні).
Потрібно указати на те, що механізм зменшення листків, асоційований із 51, імовірно, працює як у присутності кущіння (І 0), так і у відсутності кущіння (НО), але, імовірно, найкраще виражений при НО, коли, як правило, зустрічається одностебельність і умови сильного дефіциту води.
Приклад 8
Менші листки (дослідження із тонким генетичним картуванням 5001 із укриттям від дощу)
Субпопуляцію популяції тонкого генетичного картування ЗІЩЧ1 вирощували у полі із укриттям від дощу (КОБ5) в умовах надлишку і нестачі води, при цьому кожну водну обробку ділили на умовах високої і низької густоти. Це створювало чотири водних режими із рівнем водного дефіциту, що збільшується: НУМО (найменше піддані стресу) « НУМНО «ГМО «х ГЛМУНО (найбільш піддані стресу). Область кожного повністю розгорнутого листка головного стебла
Зо вимірювали для всіх генотипів у всіх обробках.
Інтрогресія цілої області 5941 (6078-1) і, більш специфічно, меншої області, позначеної 10604-5, приводила до скорочення розміру листків 9-13 в умовах нестачі води і високої густоти (Фіг. 14). Наприклад, у порівнянні із КТх7000, у 111 він складав на 995 і на 1695 менше для 10604-5 і 6078-1, відповідно. Оскільки кущіння було незначним у цій обробці, відмінності в розмірі крони були, по суті, через відмінності у розмірі листків.
В умовах низької густоти на розподіл листків за розміром впливало кущіння, приводячи до деяких кросоверів, у порівнянні із високою щільністю (див. Фіг. 14). Однак, варто указати, що 10604-5 утворював менші листки 9-13 відносно 10709-5, 10568-2 ії КТх7000, як при НО, так і при
ГО обробці.
Ген "листка невеликого розміру", картований в 152-генний блок між їхр563 і їхр442 (та ж сама область, ідентифікована для гена слабкого кущіння), який містить ген-кандидат (компонент носія, із виділенням ауксину 5), див. Фіг. 15.
Приклад 9
Менші листки (дослідження із тонким генетичним картуванням в голку)
Листкова поверхня варіювала значно (Р « 0,001) серед генотипів із наслідуваністю, яка наближається до 60 для листків 4 і 5. Інтрогресія області 5941 в КТх7/000 знижувала площу листків 1-6 (Фіг. 16). Наприклад, площа 1.6 була на 2295 вище у КТх7000 (67,4 см), ніж у 6078-1 (55,3 см), хоч ця відмінність не була значущою на рівні Р-0,05. Площа 1 6 коливалася від 47,8 см до 93,9 см: (150 (0,051 - 21) із наслідуваністю 42.
Відмінності в площі листкової поверхні були швидше завдяки відмінностям у довжині листків (Фіг. 17), ніж ширині листків (Фіг. 18). У той час як площа листкової поверхні експонентно росла із номером листка (Фіг. 21), довжина листка збільшувалася лінійно (Фіг. 17). Залежність між шириною листка і номером була параболічною (Фіг. 18). Отже, відмінність в площі листкової поверхні між 6078-1 і КТх7000 із збілошенням номера листка була, головним чином, через відмінність у довжині листків між цими генотипуми. Це вказує на те, що функція генів, які знижують розмір листка, більш ймовірно, пов'язана із збільшенням клітини (довжина листка), ніж розподілом (ширина листка).
Алометрична залежність у популяції тонкого генетичного картування 5191 між площею листка (п) і площею листка (п'-1) вказує на істотну зміну у приблизно Листка 8 (одночасний із початком цвітіння). Після цього, збільшення у розмірі листка, відбувається із меншою швидкістю.
Інтрогресія області 591 в КТх7000 знижувала площу листків 9-11 (Фіг. 19), так само як листків 1-6 (розглянутих раніше). Площа І 9 варіювала значно (Р-0,06) середовищ генотипів, в межах від 234-300 см, із наслідуваністю 21 (Таблиця 8). Площа 1.9 була на 895 вище у КТх7000 (263 см), ніж 6078-1 (244 см) |Фіг. 19). Схожі тенденції були очевидні для листків 10 і 11.
Таблиця 9 х ши ко о а х т 5 М ду Ж В 5 й В ї розміваветкаїГ 07 7 ше і5 БА алею С Ба БО зав тов я мав
СА НКАУ ГК ІБ УЗ за тло їм; За» і А звява Ол ВА ТЯВ з ОСЕЙ ТБ в мА БИ чо ща тет аа чаВва В мо А а Та ОО ее ВО ОС що ци ща за 0087 ВВЕ ШОУ Ана ШЕ
МОВА ТВ Яке ОБ. ТЕ пою ГЕжеКВ
ЗУ В КР Я оо До ЗУ я МО ЕЕя
У таблиці 9 наведений підсумок середніх значень, які передбачаються, Р-величин і наслідуваності ознак розміру листка, виміряних в урожаї 11. Значущі відмінності (Р « 0,05) затінені жовтим кольором, у той час як наслідуваності » 20 затінені зеленим кольором. ОГА - площа зелених листків. ОУУ - суха вага. ЗІ ММ 19 111 - питома вага листка.
Велика частина варіації у площі зеленої листкової поверхні в урожаї листків 11, пояснювалася відмінністю у кущінні. Однак, листки 9-11 було менше у 6078-1 у порівнянні із
ЕтТх7000. Ці відмінності були значущими (Р « 0,05) при їхр114 (134,7-135,6 СМ) і між маркерними генами їха3676 і їхр442 (149,1-156,2 СМ) (Таблиця 101. Потрібно зазначити, що "слабке кущіння і "невеликі листки!" були обидва асоційовані із однією і тією ж областю між маркерними генами їха3676 і їхр442, вказуючи на можливість того, що один ген, регулює обидві ознаки архітектури крони.
Таблиця 10 шк . ж в 5 хв я в 4 х а с Е З М я їх с ох ше ше ше шеше ж ши ше т с Кк що а и ше и ож В ши ше я о вано ше ше М а ОКО секвевнна СМ І8О ваз З о б о в о б ов ето аю ше
ТЕСТЬ ее У ЗБ ОХ ЗОВ БО БО ОЯ В в б о ОО т же: юеваанниНй й Б 05 бЕБ ОВУ ОБ Вая Боб ее а ОО В в ВУ ВН щОВа ЗаБята Ва? БО оз 3 а Ов 5 ВО з Во а
З Во ламаний яті 4 п ви а а о ОВ вх а ОО в ча вза ю ОНИ З45ня? З ЗО ЛО БО ЗОЗ ЗВ Зав пов ве В ва 15 Вваяв НМ чат а Ой Б і п ОшЯ ОО ЗЕ БО БВ ЗО по виш ННЯ
ТБ ОВОООО срейнювний ОКУ 0050 об ба осеосО оба ся оо в во вв за БО шщаеов Ома ВІ ОВО ВО ВІВ ОМВО о ве її? же? зн 0 ЗаОНБА З ВІ вх Ва вод ох ЗОБІ от ОО 8 ние зма зі ена Бо бе й ваз Б она аа а ся ши "Ще свенменеи ні ОО Б БО Бех Во вах вав б ою ле ред вхо
У таблиці 10 наведений підсумок Р-величин для різних ознак розміру листка, виміряних в урожаї І 11. Істотні відмінності (Р « 0,05) затінені жовтим кольором, у той час як відмінності (РЙи « 0,1) затінені зеленим кольором. ОА - площа зеленого листків. ОМ - суха маса. ОМУ - суха вага.
ЗІ МУ - питома вага листка.
Приклад 10
Менші листки (дослідження із тонким генетичним картуванням в голку)
Номер листка і довжина лінійно корелювали для батьківських рослин популяції тонкого генетичного картування 5941 (Фіг. 20). Інтрогресія 591 в КТх7/000 приводила до скорочення довжини листків 8-10, при цьому 110 був на 795 коротше у 6078-1, ніж у КТх7000 (550 проти 592
ММ).
З метою генетичного картування вибирали 'хвостиї популяції тонкого генетичного картування ЗІ9Ч1. Два генотипи демонстрували особливо довгі листки (10604-1-157-5 і 10604-1- 318-1), і три генотипи демонстрували особливо короткі листки (10604-1-222-1, 10604-1-501-327-
З ії 6078-1).
Мутація із набуванням нової функції (короткий листок) досягалася в рекомбінантному гені 10604-1-222-1 між маркерними генами їха2986 і їхр542. Це означало, що ген(и) невеликого листка знаходиться у блоці, який тягнеться вниз до (але не включаючи) їхр581 і вгору до (але не включаючи) їхрі440. Отже ген "невеликого листка картується в ту ж саму область як і ген "слабкого кущіння".
З метою генетичного картування вибирали 'хвостиї популяції тонкого генетичного картування 591 (Фіг. 21). Три генотипи демонстрували особливо довгі листки (10604-1-157-5, 10604-1-318-1 ії КТх7000), і два генотипи демонстрували особливо короткі листки (10604-1-222-1 і 6078-1).
Підіймаючись по маркерних генах на Фіг. 22, мутація із набуванням нової функції (короткий листок) досягалася в рекомбінантному гені 10604-1-222-1 між маркерними генами їха2986 і їхр542. Це означало, що ген(и) невеликого листка розташовується у блоці, який тягнеться вниз до (але не включаючи) їхр581 і вгору до (але не включаючи) їхр440. Отже, ще раз, ген "невеликого листка" картується в ту ж саму область, що і ген "слабкого кущіння". Потрібно зазначити, що довжина листка у 19 і І 10 картується в ту ж саму область.
Багаторазові дослідження вказують на те, що ген (або гени), які викликають фенотип слабкого кущіння і невеликого листка розташовані між маркерними генами їхр563 і їха2986 (фіг. 23). Поясненням є один геном із множинними плейотропними ефектами. Підвищена доступність ауксину могла б пояснити обидва фенотипи, і слабке кущіння і невеликий листок, які спостерігаються у рослин, які містять цю область. Ген компонента носія, із виділенням ауксину 5, розташовані в цільовій області і тому ідентифікований як кандидат.
Приклад 11
Ознака "залишатися зеленим" посилює пластичність архітектури крони через конститутивні і адаптивні відповіді
Підвищена доступність води у період цвітіння досягається через знижене споживанні води завдяки двом механізмам (знижене кущіння і менші листки) у рослин, які містять область 581, (Фіг. 24). Обидва механізми, окремо, імовірно, знижують розмір крони у середньому приблизно на 995. Механізм "слабкого кущіння" домінує у середовищах із низькою щільністю, коли потенціал кущіння високий. Механізм "невеликого листка" домінує у середовищах із високою щільністю, коли потенціал кущіння низький. Об'єднані, ці два механізми забезпечують сільськогосподарські рослини із значною пластичністю для зміни архітектури крони у відповідь на тяжкість водного обмеження.
Ознака "залишатися зеленим" демонструє і конститутивні і адаптивні відповіді (Фіг. 25).
Розмір крони із 591 знижується приблизно на 595, навіть коли вода не обмежує (конститутивна відповідь). Розмір крони додатково знижується (адаптивна реакція) при помірній засусі (10905) і більш важкій засусі (ї1595). Слабке кущіння є передусім конститутивною відповіддю, хоч менший розмір листка у відростків у відповідь на збільшення водного дефіциту є адаптивною відповіддю. Невеликий розмір листка є і конститутивною і адаптивною відповіддю.
Приклад 12
Зв'язок між зниженим розміром крони (через знижене кущіння і менші листки) і зниженим споживанням води сільськогосподарською культурою у періоді цвітіння.
Знижене споживання води сільськогосподарською культурою у періоді цвітіння може бути викликане а) меншим розміром крони із еквівалентною транспірацією на одиницю листкової поверхні, 5) еквівалентним розміром крони із більш низькою транспірацією на одиницю листкової поверхні або с) меншим розміром крони і більш низькою транспірацією на одиницю листкової поверхні. Дослідження із КО5 показали, що в умовах надлишку води область 51, і особливо рекомбінантний ген, який містить ген-кандидат 5191 (10604-5), демонстрував знижене споживання води через менший розмір крони, а не більш низької транспірації на одиницю листкової поверхні. Високі кореляції (1г2-0,9) між розміром крони і споживанням води сільськогосподарською культурою спостерігалися в дослідженнях із лізиметрами і КО5. (а) Економія води завдяки меншому розміру листка
Кущіння було незначним в цьому експерименті завдяки високій густоті сільськогосподарської культури. Отже, відмінності у розмірі крони відбувалися через відмінності в розмірі листків (Фіг. 27), як показано високою кореляцією між розміром листка 12 і загальною площею зеленої листкової поверхні у періоді цвітіння (Фіг. 28).
У свою чергу площа зеленої листкової поверхні у періоді цвітіння високо корелювала із споживанням води сільськогосподарською культурою у періоді цвітіння (Фіг. 29). Відносно
ЕТх7000 ці дві лінії, які містять ген-кандидат 51941 (6078-1 і 10604-5), обидві демонстрували менші листки (110-113), більш низьку площу зеленої листкової поверхні у періоді цвітіння (СІ АА), і знижене водоспоживання сільськогосподарською культурою у періоді цвітіння. (б) Економія води завдяки зниженій транспірації на одиницю листкової поверхні (дослідження із лізиметрами)
Транспірація (Т) дорівнює утворенню площі листкової поверхні (І А) на питому транспірацію (ТЛА). У умовах високого МРО І А була приблизно однаковою між 5191 і КТх7000 (11795 проти 11628 см), все ж Т/ А була менше для 5191, ніж Тх7000 (2,60 проти 2,85), приводячи до меншої кількості споживаної води на одну рослину (Т) із 5941, ніж КТх7000 (30,7 проти 32,8 І). Отже, економія води для 51941 (у середовищі із високим МР) досягалася повністю шляхом скорочення
ТЛА, вказуючи на те, що це є конститутивною стратегією збереження води, яка забезпечується
5941. У цьому випадку, більш висока ефективність транспірації (ТЕ) для 51941 була наслідком еквівалентної біомаси і більш низької транспірації.
Більш широкий аналіз, який порівнює чотири 519 ОТ (5191, 51942, 5193 і 5194) із КТх7000, допомагає поставити відповідь 5941 в перспективу. В умовах високого МРО Т/Л А позитивно корелювала із Т, однак в умовах низького МРО, ТЛА негативно корелювала із Т (12-0,52).
Зелена листкова поверхня і транспірація позитивно корелювали і в умовах низького і високого (Фіг. 29) МРО. У обох експериментах, 5 ОТ знижували площу зеленої листкової поверхні і транспірацію у порівнянні із КТх7000. (с) Економія води завдяки зниженню листкової поверхні
Транспірація (Т) дорівнює утворенню ГА на Т/ А. В умовах низького МРО ГА була на 3195 менше для 5941, ніж КТх7000 (4898 проти 7082 см). Це трохи змістилося через збільшення на 9956 ТЛА для 5191 у порівнянні із КТх7000 (5,15 проти 4,70). Чистий результат становив 2290 скорочення споживання води на одну рослину (Т) для 501 у порівнянні із КТх7000 (25,6 проти 32,7 І), передусім завдяки зменшеному розміру крони. Збільшення ТЛА, яке демонструється 51, може самостійно бути механізмом адаптації до засухи, шляхом охолоджування листка і дозволяючи фотосинтезу продовжуватися.
Здатність ТЛА змінюватися, імовірно, особливо важлива для регуляції водного статусу рослини. В умовах високого МРО зниження ТЛА для 5191 було ключовим механізмом для зниження Т і збільшення ТЕ. В умовах низького МРО збільшення Т/ А для 5141 могло сприяти підтримці функції листка через охолоджування.
Дослідження із лізиметрами на підвиборці тонкого генетичного картування 5941 дають додаткове розуміння цієї області. В умовах високого МРО ГА на одну рослину було менше для 10604-5 (місце гена-кандидата 591), ніж для ЕТх7000 (10283 проти 11628 см), все ж Т/Л А була еквівалентна для 10604-5 і КТх7000 (2,86), приводячи до меншої кількості споживаної води на одну рослину для 10604-5, ніж КТх7000 (28,0 проти 32,8 І). Отже, економія води для 10604-5 досягалася повністю за рахунок скорочення розміру крони.
В умовах низького МРО ГА на одну рослину була менше у всіх лініях 591 у порівнянні із
ЕТх7000, приводячи до економії води у всіх лініях 5941. Тому було важко провести тонке генетичне картування цієї області, оскільки всі рекомбінантні гени відповідали однаково на
Зо 6078-1. (4) Симуляція агрономічних умов
Культиватором саджали по 5 рослин/м2 із відстанню між рядами в 1 м. Глибина грунту - 1800 мм; грунт РАМУС - 324 мм; М без обмеження. Результати показані на Фіг. 64А-С.
Обробки
НТ Сильне кущіння (2 відростки/рослини).
Ї Т Слабке кущіння (1 відросток/рослина).
МИЛІ Добре зволожені (Починаючи із 10095 насиченого водою профілю і дощового живлення).
Т5 Граничний стрес (Починаючи із наполовину насиченого водою профілю |162 ммі і відсутність дощового живлення після саджання).
Приклад 13
Підвищена доступність води у період цвітіння може також бути досягнута через поліпшену досяжність води завдяки більш легкій екстракції води і/або більш глибокому і кращому латеральному поширенню коріння рослин, які містять область 5191
Коренева маса і співвідношення коріньспаростки (Фіг. 30) були вище для 5191, ніж для
КТХ7000 на стадії листка 6. Мала місце значна трансгресивна сегрегація цих ознак у популяції тонкого генетичного картування 51. Зв'язок між масою кореня і співвідношенням корінь:відростки дає можливість додаткового генетичного поліпшення у цих ознаках.
Відношення кореневої маси на одиницю листкової поверхні може бути застосоване як індекс адаптації до засухи на стадії сходів, оскільки воно об'єднує в собі здатність рослини отримувати доступ до води (коренева маса) із здатністю рослини споживати воду (листкова поверхня).
Більший індекс вказує на велику здатність отримувати доступ до води на одиницю листкової поверхні. 591 демонстрував більше відношення маси кореня до листкової поверхні у ЕТХх7000 завдяки більшій масі кореня і меншій площі листкової поверхні.
У дослідженні із тонким генетичним картуванням 5191 індекс збору урожаю кореня (співвідношення корінь:загальна біомаса) на стадії І 6, картувався в їха3676 і їха2986, те ж саме місцеросташування, що і ген-кандидат 591 (Таблиця 11).
ко З с не в З З Не З и зе НН Ве НИ НН У - З Ж з 5 ши Б в кі ях їх а и й в хх
З З к к я З с ен и и В НЕ НК КЕ я г шини НЕО ше ни шипи пепсин мобконхМЯ. ска ОКО ОО ВАВ ВВ В ВЕ В Ж ВВ В В ОК ВВ ВАХ ВАК ВВ В В В КВ, шви ОН о в о М В 3 ОВО Ана ВО ЗМ Ка а ВАХ ВИ Кам а ВВ ВУ ВІКО М У М КОМ Б КО а ЗХ аа шк зи в в а а в в в
Я ЖЖ секкоже ЛЯЖЖ 0 ОВК ВІК ВИК ВЕ В КК в ВМ КМ ІК КК З ІК ЗІК За ак Зах ЖаК «В ак св
З УМА: жк НБУ ВЕУ БВ ОВК КК ОВ ОМ КК АН ВУ ВМ У ВЕ Я КУ ЕК ЗІ ВЕ ХК 03 8 СЯ бак оо в й ВКМ БТя В ЕК а КУ ЗІ За ЗК и 3 383 Б КВ Б В І ХВ У ОК уко ва За Ка КВ
КО зекУ ехо вевіЗ ЕТ Ма КО 3 ЖУК З ще зх у с ща зе в зв зв ме х В те тм зе зе за за вк з її. Фк ММх 88485 КЯш ВІК БІ ВІ В З ЗА БО БВ Б ЖЕ МВ а КОХ п ОХ о ІВ В паж ВХ в Ва в ВХ, ка шен
МН Ма шко й жо ван в ж В в кв й КЕ п ЕНН Коти МУКЖА У КВ Я ВМО и КК КИ В В Я ВЕЖ АКТУ и В В ВИ І М У КК УК 14 файно Ж ВОК ІК ВЖК Ж) М Ох 95 ЗХ 53 ВХ ЖЕ Ж; ІМ Жов ФО5 ВВ йо (ОБ В ФО Я05 фо ОК В щи МОЖ педа Ва ОВ В ОХ ВІВ З ви п у ВИ ЕІ Ж ж ж ВК и т а а па В
Уся жхох ЗжУумОКя біз ВУ ах ВУ ад ях ЗІ ж а и а за сах ж ва За УА Кл у ЖК Ва КУ жах ж.
Зк а ми СМАК а ХО В БА ОА ЗОЗ ЩЕ аа а ІК ко КВ КВ В НК УК ВЕ Уа ВУ І Ма МК
ЗХ КН НЕ В МЕМ ши В В В В В ВК "ЖЕ ВУХВ дви Ве Ка КАХ г ХМ ВМ І У ЗМ У ВО У ВЕ ВХ КВУ п ах и М В КУ я око ВЗН ІОВ ВК ВІ ВК ВО ВО В В ВК ВВ В ВВ ОК ЗК КВ ЗОВ НВ ВО ВВ ВО ВАВ В КВ . мк35 - кої
Ком жк
ВУ. . день яка ад
Таблиця 11 є збагаченням Р-значень для різного розміру листка (синє затінення), проростаючи (коричневе затінення) і біомаса (сіре затінення) ознаки, виміряні в зборах урожаю
ЇІб6і1 11. Істотні відмінності (Р. « 0,05) затінені жовтим кольором, у той час як відмінності (Р. « 0,1) затінені зеленим кольором.
Більш високе співвідношення маси кореня до листкової поверхні, продемонстроване 5191 в стадії 6, може пояснити, чому споживання води на ранній стадії росту сільськогосподарської культури було більше (20-50 ОАЕ) у порівнянні із ЕТХх7000 при обробці ГУМОЮ (Фіг. 31). Ще не ясно, чи була підвищена доступність води під час наливання зерна, продемонстрована зю1, у порівнянні із КЕТх7000 (Фіг. 31) завдяки більш легкій екстракції води і/або більш сильному поширенню коріння.
У експерименті із камерою для кореня в сЗайцоп, Квінсленд, Австралія (Мап Оо5іегот еї аї. (2010) зирга), нижня гравіметрична межа екстракції води була на 0,2695 нижче для АЗ5 (Ознака "залишатися зеленим"), ніж для АО)Ї 39 (старіючі) гібридні. АЗ5 містить область 5ІД1, тоді як
АОІ 39 не містить. Беручи до уваги, що об'ємна щільність була 1,3 г см, і глибина грунту була 150 см, це потенційно могло збільшувати доступність води в полі на » 5 мм протягом усього життєвого циклу сільськогосподарської культури.
Приклад 14
Ознака "залишатися зеленим" збільшує біомасу на одиницю листкової поверхні у період цвітіння. Беручи до уваги, що маси коренів еквівалентні (або щонайменше не значно менші), ці відмінності можуть бути пояснені відмінностями в транспірації на одиницю листкової поверхні і або ефективності транспірації
Біомаса головного стебла на одиницю листкової поверхні (В/ А) у період цвітіння була на «-2495 більше для 5941, ніж ЕТх7000 в умовах слабкого водного стресу (35,2 проти 26,2 г/м2/см) і умовах сильного водного стресу (40,6 проти 31,4 г/м2/см7) (Таблиця 12). В/Л А головного стебла у період цвітіння було на «1495 вище в умовах сильного водного стресу, ніж в умовах слабкого водного стресу і для 51941 і для КТх7000, тобто В/ А збільшувався із дефіцитом води. Потрібно зазначити, що В/ А відростка було еквівалентне для 5941 і КТх7/000 в умовах слабкого і
Зо сильного водного стресу.
Таблиця 12
Біомаса головного Біомаса відростка на Загальна біомаса на
Число стебла на одиницю одиницю листкової одиницю листкової зід статус піній писткової поверхні у поверхні у період поверхні у період період цвітіння цвітіння цвітіння (г/м2/сме)х1000 (г/м2/см2)х1000 (г/м2/см2)х1000
Слабкий Сильний Слабкий | Сильний . Сильний . . . . Слабкий . 11 У ех шин стрес стрес стрес стрес стрес
Вютобластьб! ЇЇ 7777 Ї11111Ї111111111Г1
Безобластей!ї///// | Її 9 9 3/1 ЇЇ її пи п п Я ПОЛЯ ПОЛЯ ОО НО п-50(0,05) | | 670 | 670 | 5ео | 50 | 596 | 596
У Таблиці 12 показані біомаси на одиницю листкової поверхні головного стебла, проростків і загальна для КТх7000 (рекурентний батько) деякої кількості майже ізогенних ліній, які містять різні інтрогресії 5941, вирощених в умовах високого і низького дефіциту води в Віїйоевіа,
Квінсленд, Австралія.
Докладні вимірювання споживання води вказують на те, що більш висока біомаса на одиницю листкової поверхні, яка спостерігається в лініях 591 в ВіїоеїЇа, була, ймовірно, завдяки більш високій транспірації на одиницю листкової поверхні, а не ТЕ.
Слабкий водний стрес 51 і КТх7000 показали еквівалентне В/ А в умовах слабкого дефіциту води. Однак, Т була на -7 96 нижче для 51941, завдяки на «10 95 більш низькому Т/ А, яке, у свою чергу, збільшило
ТЕ на 9 95 (фіг. 53). Тому, 591 не змінював біомасу, але споживання води було меншим, у порівнянні із КТх7000.
Сильний водний стрес
У умовах сильного водного стресу В/ А було на --6 95 вище для 5191 у порівнянні із КТх7000.
В/ЛА позитивно корелювало із Т/ А, але не із ТЕ. Отже, більш високе В/Г А, виявлене 51941, мало місце завдяки більш високому Т/ А. Загалом, В/Л А позитивно корелювало із Т/Л А і негативно корелювало із ТЕ в умовах сильного водного стресу.
У цьому випадку із 5ІД1 споживання води було на «22 95 менше, ніж у КТх7000 під час періоду до цвітіння. Тому, із 5941 було б значно більше доступної води для наливання зерна, незважаючи на більш низьку біомасу у період цвітіння.
Приклад 15
Підвищена ТЕ при інтрогресії 591 може відбуватися завдяки а) пропорційно більш високій фотосинтетичній здатності у порівнянні із продиховою провідністю, через менших, більш тонких і більше зелених листків або б) зменшенню в транспірації на одиницю листкової поверхні, при підтримці біомаси на одиницю листкової поверхні
У популяції тонкого генетичного картування 5191 довжина і зеленість (РАЮ) листка 10 високо негативно корелювали (1--0,72, Фіг. 32). Отже, зменшення розміру листка в цій популяції
Зо збільшувало концентрацію азоту в листку. Інтрогресія 5ІД1 в початковий КТх7000 зменшувало довжину 110 на «-7 95 (від 592 до 550 мм) і збільшувало 5РАО у 110 на «4 95 (із 47,1 до 48,9).
Більше зелене листя може збільшувати фотосинтетичну здатність і тому ефективність використання води. У підвиборці із популяції тонкого генетичного картування 591, фотосинтез збільшувався за рахунок значення 5РАО до досягнення плато при 5РАЮ «48,5 (фіг. 33). Однак, лінія (6078-1) із самим високим значенням 5РАЮ (51,6) демонструвала відносно низьку швидкість фотосинтезу (32,1 Му/ме/день). Цей результат або а) аномальний, або Б) вказує на реальне зниження в фотосинтезі при високих значеннях 5РАЮ.
Зеленість листка (ЗРАЮ) і УМОЕ (заснований на індексі, обчисленому програмним забезпеченням Гісог), позитивно корелювали у підвиборці із популяції тонкого генетичного картування 591 (Фіг. 34). Жодна із інтрогресій 51 не наближалася до такого значення як у 6078-1 (0,68), незважаючи на відносно високу 5РАО у 10604-5 і 10709-5 МІГ...
У порівнянні із ЕТх7000 і іншими ІД ОТ, 591 демонстрував більше зелений листок (вище значення 5РАЮ) і вище за М/ОЕ (заснований на індексі, обчисленому програмним забезпеченням | ісог) |Фіг. 351.
Приклад 16
Підвищена ТЕ при інтрогресії 591 може відбуватися завдяки а) пропорційно більш високій фотосинтетичній здатності у порівнянні із продиховою провідністю, через менших, більше тонких і більше зелених листків або Б) зменшенню в транспірації на одиницю листкової поверхні, при підтримці біомаси на одиницю листкової поверхні
Ефективність транспірації (ТЕ) негативно корелювала із транспірацією на одиницю листкової поверхні (ТЛА) в умовах слабкого і сильного МРО (Фіг. 36) для ряду 59 МІ, включаючи рекурентного батька (КТх7000). Однак, ранжування 59 МІ відносно ЕТх7000 залежало від умов МРО. Наприклад, ТЛА для 5191 було нижче відносно КТх7000 в умовах сильного МРО, але все ж вище, ніж для КТх7000 в умовах слабкого МРО.
В умовах високого МРО нахил негативної кореляції між ТЛ А і ТЕ був крутим, таким, що невелике зменшення в ТЛА із 2,9 мм/см? (5194) до 2,6 мм/см? (5941), приводило до значного збільшення ТЕ із 4,2 г/м"/мм (51944) до 5,1 г/мг/мм (5191) |Фіг. 361. Градієнт був менш крутим в умовах слабкого МРО, таким чином, що в шість разів більше зменшення в Т/Л А приводило до збільшення ТЕ на одиницю у порівнянні із умовами сильного МРО (1,2 проти 0,2 одиниць).
Потрібно зазначити, що для еквівалентного ТЕ, 5941 демонстрував більш високе ТЛА, ніж
КтТх7000 (5,1 проти 4,6 мм/см-) в умовах слабкого МРО. Це може забезпечувати механізм для листків 5941, щоб залишитися більш холодними в певних умовах навколишнього середовища.
Приклад 17
Зміни в транспірації на одиницю листкової поверхні можуть відбуватися завдяки а) кількості продихів, Б) діаметру продихового відкриття, с) зміні у виборі часу відкриття і закриття продихів відносно МРО і/або а) кількості клітин біля основи ворсинок (які впливають на граничний шар і нат/ЛА)
Інтрогресія 5941 в КТх7000 по-різному впливала на Т/ А залежно від умов МРО. Відносно
ЕТх7000, 5941 збільшувала Т/ А на -«-9 95 в умовах слабкого МРО і зменшувала ТЛ А на «10 95 в умовах сильного МРО. Т/ А, серед іншого, може регулюватися а) кількістю продихів на одиницю
Зо листкової поверхні, Б) розміром продихового відкриття, с) вибором часу відкриття і закриття іабо а) кількістю клітин біля основи ворсинок (які впливають на граничний шар і на Т/Л А).
Проводили вимірювання двох із цих чотирьох компонентів (а і 4). У одному експерименті із укриттям від дощу збирали окремі листки із ділянки обробки із високою щільністю в межах зрошуваного контролю, видаляли кутикули, і робили знімки поверхні кутикули. Ці зображення застосовували для визначення а) кількості продихів на одиницю листкової поверхні, Б) кількості епидермальних клітин на одиницю листкової поверхні і с) кількості клітин біля основи відростків на одиницю листкової поверхні.
Одночасно робили поперечні зрізи листка. Попередній аналіз цих даних вказує на те, що інтрогресія 541 в КТх/000 змінювала анатомію листка. Відмінності в морфології листків (наприклад, листки 7 і 10) очевидні між ЕТх7000 і 2491. У цьому випадку, більше і більше дрібні оболонки, оточували судинний пучок, із 5941. Підвищена кількість клітин в оболонці, оточували судинний пучок, також, ймовірно, могла сприяти збільшенню фотосинтетичної асиміляції (РМА5 2007) і ТЕ.
Приклад 18
Збільшене споживання води під час наливання зерна досягається через (ї) підвищену доступність води у періоді цвітіння і (ї) кращу досяжність води (більш легка екстракція води і більш глибоке і краще латеральне поширення коріння) під час наливання зерна а) Підвищена доступність води у період цвітіння
Споживання води сільськогосподарською культурою (СУМІ) перед періодом цвітіння негативно корелювало із СМ після періоду цвітіння в експерименті із КОЗ (Фіг. 37). Наприклад, збереження 20 мм води до періоду цвітіння (165 проти 185 мм) дозволяло споживати додаткові 20 мм після періоду цвітіння (80 мм проти 60 мм). Так вся вода, збережена до періоду цвітіння споживалася сільськогосподарською культурою після періоду цвітіння. Загалом, 25 9У5-е збільшення споживання води після періоду цвітіння в цьому експерименті приводило до 25 9р- ого збільшення урожаю зерна (400 проти 300 г/м2). Це переводиться в 50 кг/га зерна на кожний додатковий мм доступної води. У той час як ці дані підтверджують концепцію того, що підвищене споживання води під час наливання зерна, досягається через поліпшену досяжність води у періоді цвітіння, це не говорить нам що-небудь про підвищену доступність води під час наливання зерна. 60 Юр) Підвищена доступність води під час наливання зерна
Підвищене споживання води під час періоду наливання зерна демонструвалося із 51 і при обох обробках, із низькою і високою щільністю, в експерименті із КО5. Це було передусім завдяки (їі) підвищеній доступності води у періоді цвітіння в умовах високої густоти, і (ії) підвищеної доступності води під час наливання зерна в умовах низької густоти (Фіг. Зва і Б).
У дослідженні КТх7000 і чотирьох МІС 59 (5191, 51942, 593 і 594), СММШ до і після періоду цвітіння негативно корелювали в експерименті із КО5 в умовах низької густоти (Фіг. 39). У цьому випадку, збереження х25 мм води до періоду цвітіння (168 проти 191 мм) сприяло споживанню х-50 мм після періоду цвітіння (135 мм проти 86 мм), вказуючи на те, що і підвищена доступність води (525 мм) і досяжність (725 мм) були однаково важливі. Однак, 591 був аномальний в цьому прикладі, оскільки високе споживання води після періоду цвітіння було пов'язане із високим споживанням води до періоду цвітіння. Поясненнями цієї аномалії для 5191 є а) помилка в даних про воду перед періодом цвітіння, 5) помилка в даних про воду у період після цвітіння або с) немає помилок у вимірюванні води (просто 591 по-різному відповідав на інші МІУ). Аналіз даних про біомасу показує, що по деяких причинах 5191 давав велику біомасу перед періодом цвітіння в умовах ГУМІО в порівнянні до інших МІГ, вказуючи на те, що патерни споживання води перед періодом цвітіння просто відображали продукцію біомаси в цьому експерименті. Проте, цей приклад дійсно представляє свідоцтва підвищеної доступності води для 5191 під час періоду наливання зерна.
Приклад 19
Зв'язок між продукцією біомаси у період до і після цвітіння
В умовах низької густоти (І 0) зниження біомаси у період цвітіння на 23 95 (із 700 до 640 г/м) збільшувало біомасу у період після цвітіння більш, ніж в два рази (із «200 до 425 г/м2). В умовах
ГО 591 давав схожу із КТх7000 біомасу у період до цвітіння (610 г/м2), але все ж давав меншу біомасу у період після цвітіння (265 проти 327 г/м2). Проте, в умовах НО, 5941 і ЕТх7000 давали схожу біомасу перед періодом цвітіння (7840 г/м7), але все ж 5941 давав більше біомаси у період після цвітіння (195 проти 17 г/м).
Зв'язок між ОСІ АА і співвідношенням біомаси до:після періоду цвітіння є критичним для історії із 2941. СІ АА повинна бути знижена в « З разів, щоб гарантувати доступність відповідної води для наливання зерна, і це є критичною роллю гена 51491. У цьому експерименті 591 знижував СІ АА відповідно, щоб досягнути співвідношення біомас до:після періоду цвітіння, яке «З в умовах ГО, але не НО. В умовах НО, потрібно зазначити, що інтрогресія 591 в КТх7000 знижувала СГ АА із 31200 до 29300 см2/ме, знижуючи співвідношення біомас до:після періоду цвітіння із 8,2 до 6,5 (але все ще не до « 3). Це підкреслює важливість відповідних стратегій регуляції, таких як щільність сільськогосподарської культури, в максимізації обмежених водних ресурсів.
Негативний зв'язок між СІ АА і масою стебла у період після цвітіння також є критичним в історії із 5941. Більш низька СІ АА, і отже, знижене споживання води у період цвітіння, була пов'язана із більш високою масою стебла у періоді після цвітіння (компонент стійкості до вилягання). Інтрогресія 5941 в КТх7000 збільшувала масу стебла у періоді після цвітіння в обох умовах, І О (крайнє збільшення) і НО (значуще збільшення) умови.
Зв'язок між співвідношенням біомаси до:після періоду цвітіння (РРВЕ) і біомасою у період після цвітіння інформативно. Дві обробки густоти забезпечують континуум у діапазоні РРВЕК від «2 до » 8. Скорочення РРВЕ від » 8 до «3 приводило до поступового збільшення біомаси у період після цвітіння. Однак, додатково скорочення РРВК нижче З приводило до відносно різкого збільшення в біомасі у період після цвітіння, мабуть, оскільки, більше води було доступно під час наливання зерна, коли співвідношення РРВК опустилося нижче 3. Інтрогресія 51 в КТх7000 збільшувала біомасу у період після цвітіння при НО, але не при ГО.
Зв'язок між співвідношенням біомас до:після періоду цвітіння (РРВЕ) і біомасою стебла у період після цвітіння є в такій же мірі інформативним. Маса стебла у період після цвітіння є компонентом стійкості до вилягання. Аналіз цього компонента забезпечує деяке розуміння того, як інтрогресії 59 впливають на стійкість до вилягання. Скорочення РРВЕ із » 8 до «4 приводило до поступового збільшення маси стебла у період після цвітіння. Однак, додаткове скорочення
РРВЕ нижче 4 приводило до відносно різкого збільшення в масі стебла у період після цвітіння.
Інтрогресія 5941 в КТх7000 збільшувала масу стебла у період після цвітіння при обох умовах,
ГО (крайнє збільшення) і НО (значне збільшення).
Зв'язок між РРВЕ і урожаєм зерна був менше зрозумілим у цьому експерименті. У той час як урожай зерна був вище для 51941, ніж для КТх7000 при обох щільностях, більш високий урожай міг бути пояснений тільки більш низьким РРВЕ для 51941 при НО. 5О0
Досліджували дві інтрогресії 591 в цьому експерименті: а) 6078-1 (ціла область 5941), і Б) 10946-5 (рекомбінантний ген, який охоплює приблизно 1/3 області 5ІД41 між маркерними генами 5рОЗОСМ116 і БрОЗОСМ106).
Скорочення біомаси перед періодом цвітіння на 20 95 (із 920 до 735 г/м") збільшувало біомасу у період після цвітіння приблизно на 100 95 (від 200 до 400 г/м?) |Фіг. 40). Загалом, біомаса перед періодом цвітіння для КТх7000-51д2 » 5193-5194 » 51 і біомаса у період після цвітіння для 591 » 5ід3-5194 » 5ІдДд2 » КТх7000. Дані для 51941 при І О були аномальними.
Розмір крони, як очевидно із СІ АА, значною мірою визначав співвідношення біомас до:після періоду цвітіння (Фіг. 41). При обох обробках, із високою і низькою щільністю, інтрогресія 5941 у початковий ЕТх7000 знижувала СІ АА, яка, у свою чергу, знижувала співвідношення біомас до:після періоду цвітіння до « 3, гарантуючи відповідну доступність води для наливання зерна в цих умовах водного обмеження.
Розмір крони, як очевидно із СІ АА, був визначальним фактором маси стебла у період після цвітіння (РАЗМ) |Фіг. 421. При обох обробках, із високою і низькою щільністю, інтрогресія 591 або ЗЩТа у початковий КТх/000 знижували СІАА, яка, у свою чергу, збільшила РАЗМ.
Приблизно на 40 г/м? більше стовбурового резерву використовувалося при НО у порівнянні із 10, відображаючи більш сильний стрес, який заподіюється цією обробкою.
Зв'язок між співвідношенням біомас до:після періоду цвітіння (РРВЕ) і біомасою у період після цвітіння (РАВ) був тісним (Фіг. 43). Дві обробки густоти забезпечують континуум у діапазоні РРВЕК від « 1,5 до » 4. Скорочення РРВЕ від «4,5 до «3,5 не надало впливу на РАВ.
Однак, додатково скорочення РРВЕ. нижче «3,5 привело до відносно різкого збільшення в РАВ, мабуть, оскільки, більше води було доступно під час наливання зерна, коли співвідношення
РРВЕ впало до менше 3,5. Інтрогресія 5941 в КТх7000 знижувала РРВК до менше З і при НО, і при ГО, таким чином, збільшуючи РАВ при обробках із обома густинами.
Співвідношення біомас до:після періоду цвітіння (РРВЕК) також впливало на стійкість до вилягання (Фіг. 44). У цьому випадку маса стебла у період після цвітіння (РАЗМ) береться як замісник оцінки стійкості до вилягання. При високій і низькій густоті РРВК негативно корелювало із біомасою стебла у період після цвітіння. Таким чином, високе співвідношення біомас до:після періоду цвітіння збільшувало кількісно стовбуровий резерв, який знову мобілізується під час
Зо наливання зерна, таким чином, скорочення біомаси стовбура і збільшуючи імовірності вилягання. У порівнянні із КТх/000 5Щ1а значно знижував стовбуровий резерв, який мобілізується при ГО (75 проти 65 г/м) і при НО (-80 проти 140 г/м2). У порівнянні із КТх7000 51 значно знижував кількісно стовбуровий резерв, який мобілізується при НО (80 проти 140 г/м2), але не при ГО. Міра, до якої мобілізувався стовбуровий резерв, була більше при НО, ніж при ГО, відображаючи більший дефіцит води при НО. Наприклад, відмінність в мобілізації стовбурового резерву між НО і ГО була дворазовою для ЕТх7000 (приблизно 140 проти 70 г/м).
Урожай зерна залишався низьким (при точці відліку «4,2 т/га), доти, доки співвідношення біомас до:після періоду цвітіння попадало нижче «3 (НО) або «2,5 (І 0) |Фіг. 45). Нижче за ці критичні значення урожай зерна збільшувався значно для кожного подальшого кроку зниження у цих співвідношеннях із швидкістю збільшення урожаю зерна трохи вище при І 0, ніж при НО.
Це вказує на те, що доступність води у період після цвітіння була тісно пов'язана із СГ АА і біомасою у період до цвітіння, і що певне скорочення в Сі АА було необхідне, щоб гарантувати відповідну доступність води для наливання зерна. При обох щільностях 591 знижував співвідношення біомас до:після періоду цвітіння нижче критичних рівнів, приводячи до збільшення урожаю в 28 95 (І 0) і 22 95 (НО), відносно КТх7000. Ці дані дають критичний зв'язок між дією гена 5191 (знижений розмір крони у періоді цвітіння) і урожаєм зерна при граничній засусі. Потрібно зазначити, що інтрогресія 5І(1а вплинула деякий чином на скорочення РРВК (при НО і ГО) і збільшення урожаю зерна (тільки при І 0) відносно КТх7000, але не в однаковій мірі як 5941. Отже, немає переконливих доказів із цього експерименту, що ключовий ген 5191 розташовується в області Біда. Це підтримує докази, представлені раніше, оскільки найбільш серйозний кандидат на 51941 (5БРІМ4) розташований вище місця інтрогресії 5Х91а.
Досліджували чотири інтрогресії 591 в цьому експерименті: а) 6078-1 (ціла область 591 між маркерними генами їха2179 і їхр38), 5) 10709-5 (рекомбінантний ген, який охоплює приблизно 1/3 області БІД41 між маркерними генами 5БОЗОСМ106 і їхр38), с) 10604-5 (рекомбінантний ген, який охоплює приблизно 3/4 області 5Ід41 між маркерними генами їха2506 і їхр5б5), і 4) 10568-2 (рекомбінантний ген, який охоплює майже 1/2 області 5941 між маркерними генами їха2506 і їхр5б63) |Фіг. 461.
При низькій густоті (І.О), біомаса у періоді до цвітіння варіювала тільки в межах «5 95 (від 522 до 552 г/м?) серед генотипів, все ж біомаса у період після цвітіння варіювала майже у бо подвійному розмірі (від 173 до 313 г/м"). Це вказує на те, що на істотні відмінності в біомасі у період після цвітіння впливало щось інше, на відміну від біомаси перед періодом цвітіння, наприклад, відмінності в доступності води. Наприклад, 10709-5 і ЕТх7000 обидва давали біомасу 550 г/м" перед періодом цвітіння, все ж рекомбінантний ген 5191 (10709-5) давав біомасу у період після цвітіння на «60 95 більше (310 проти 130 г/м).
У умовах високої густоти (НО), біомаси у період до і після цвітіння високо негативно корелювали. Інтрогресія 5ЩД41 в КТх7000 знижувала біомасу перед періодом цвітіння на 9 95 і збільшувала біомасу у період після цвітіння на 23 95.
Споживання води сільськогосподарською культурою (СММО) у періоді цвітіння краще розрізнювалося між генотипуми, ніж біомаса у період до цвітіння. Комбінуючи дані при НОЇ ГО, імовірно, що біомаса у період після цвітіння (РАВ) залишалася низькою (в точці відліку 150 г/м2), доти, доки СУМ у періоді цвітіння не опускалося нижче «180 мм. Нижче цього критичного значення, РАВ збільшувався із кожним подальшим зниженням в СМ аж до рівня 175 мм, при цьому РАВ виходило на плато, яке дорівнює приблизно 310 г/м. Подальші зниження в СУМО у періоді цвітіння нижче 175 мм не приводили до додаткового РАВ.
Розмір крони, як очевидно із СІ АА, значною мірою визначав відношення біомас до:після періоду цвітіння (РРВЕК). При обох обробках, і при високій і при низькій густоті, інтрогресія 591 (або специфічні рекомбінантні гени, такі як 10709-5) у початковий КЕТх7000 знижувала СІ АА, яка, у свою чергу, знижувала співвідношення біомас до:після періоду цвітіння, таким чином, збільшуючи доступність води для наливання зерна в цих умовах водного обмеження. Значення
РРВК для 6078-1, імовірно, було аномальним (дуже високе), оскільки цей генотип розташовується набагато вище за лінію регресії СІ АА/РРВЕ.
Розмір крони, як очевидно із СІ АА, був визначальним фактором для маси стебла у період після цвітіння (РАЗМ). При обробці із високою щільністю інтрогресії 541 (або рекомбінантні гени
ЗІ, такі як 10604-5 і 10709-5) в початковий ЕТх7000 знижувала СІ АА, яка, у свою чергу, збільшувала РАЗМ. Приблизно, на 60 г/м? більше стовбурового резерву використовувалося при
НО у порівнянні із ГО, відображаючи більш високий вплив, який надається цією обробкою. Ще раз дані для 6078-1 при І 0, імовірно, є аномальними.
Зв'язок між співвідношенням біомас до:після періоду цвітіння (РРВЕ) і біомасою у період після цвітіння (РАВ) був тісним. Дві обробки густоти забезпечують континуум у діапазоні РРВК від « 2 до » 5, хоч нахил регресії був більше для 10, ніж для НО. При НО, зниження РРВЕ із 6 до «3,5 приводило до поступового збільшення РАВ від «130 г/м? (КТх7000) до «180 г/м2 (10604- 5). Додаткове зниження РРВЕ менше «3 при ГО приводило до більш різкого збільшення РАВ, мабуть, оскільки більше води було доступно під час наливання зерна, при падінні співвідношення РРВЕК нижче трьох.
Співвідношення біомас до:після періоду цвітіння (РРВЕК) також впливало на стійкість до вилягання. У цьому випадку масу стебла у період після цвітіння (РАЗМ) застосовували як базу для оцінки стійкості до вилягання. При високій і низькій густоті РРВК негативно корелював із біомасою стебла у періоді після цвітіння. Таким чином, високе співвідношення біомас до:після періоду цвітіння збільшувало кількісно стовбуровий резерв, знову мобілізований під час наливання зерна, таким чином, скорочуючи біомасу стовбура і збільшуючи імовірності вилягання. У порівнянні із ЕТхХ7000 51941 значно знижував стовбуровий резерв, мобілізований при НО (4100 проти 160 г/мг). Міра мобілізації стовбурового резерву була більше при НО, ніж при ГО, відображаючи більший дефіцит води при НО. Наприклад, відмінність в мобілізації стовбурового резерву між НО і ГО була більш, ніж дворазовою для КТх7000 (приблизно 160 проти 60 г/м7). Цікаво, що РАЗМ збільшувався із зменшенням РРВЕ у всьому діапазоні РРВЕ (1,5-6), тоді як урожай зерна, і в меншій мірі РАВ, збільшувалися тільки тоді, коли РРВЕ опадав нижче «3. Це вказує на те, що відносно невелика економія води перед періодом цвітіння все ще може поліпшити стійкість до вилягання, не дивлячись на те, що велика економія води була необхідна для отримання відповіді в урожаї зерна.
Урожай зерна залишався низьким (в точці відліку 3,1 т/га), поки співвідношення біомас до:після періоду цвітіння не опускалося нижче «3. Нижче цих критичних значення урожай зерна значно збільшувався із кожним подальшим зниженням в цьому співвідношенні. Оскільки жодна із інтрогресій 591 не знижувала РРВК до « З при НО, ніякі сприятливі ефекти для урожаю від 51 не були отримані у цій обробці. При ГО деякі інтрогресії 591 знижували РРВК нижче критичного рівня, приводячи до збільшення урожаю в 12 95 (10568-2) і 5 95 (10709-5), відносно
КТх7000. Ці дані описують критичний зв'язок між дією гена 5191 (знижений розмір крони у періоді цвітіння) і урожаєм зерна при граничній засусі.
СУМУ під час наливання зерна залишався низьким (в точці відліку 60 мм), поки співвідношення біомас до:після періоду цвітіння не опускалося нижче --3,5 (Фіг. 47). Нижче за це 60 критичне значення СМ під час наливання зерна збільшувався значно для кожного подальшого кроку зниження цього відношення. Оскільки жодна із інтрогресій 5941 не знижувала РРВК до « 3,5 при НО, ніякого збільшення в СУМ під час наливання зерна не отримували від рекомбінантних генів 591 у цій обробці. При ГО деякі інтрогресії 5941 (ії ЕТх7000) знижували
РРВЕК нижче критичного рівня, збільшуючи СМУМО під час наливання зерна до «80 мм у порівнянні із базовою лінією при НО (60 мм).
Зв'язок між СУМ під час наливання зерна і урожаєм зерна був позитивним (Фіг. 48). Однак кореляція між цими параметрами була відносно низькою (1--0,23), ймовірно через високу варіабельність вимірювань грунтової води у полі.
Приклад 20
Відстрочене старіння листка (ознака залишатися зеленим) є наслідком більш високого статусу води в рослині під час наливання зерна (через збільшене споживання води)
Статус води у рослині визначали по РІ -2 (два листки під криючим листком) в середині стадії наливання зерна застосовують за допомогою двох методів: водний потенціал листка (ГМУР) і відносний вміст води (КУУС). І М/Р вимірювали в полі за допомогою бомби високого тиску. Після визначення МУР в полі, зразок того ж самого листка вміщували на лід і, протягом декількох хвилин, переносили в лабораторію на відстані приблизно 300 м для визначення КМ/С стандартними методами.
ВМУС БІ-2 негативно корелювало із відносною швидкістю старіння листка в середині наливання зерна і в умовах високої і низької густоти в ряді 59 МІ, включаючи рекурентного батька. Функції кореляції для НО і ГО були паралельні, але із зміщенням на приблизно 0,35 одиниць старіння листка, тобто для заданого рівня КМ/С, скажемо 70, відносні швидкості старіння листка дорівнювали 2,1 і 2,45 для 10 і НО, відповідно. Інтрогресія області 5941 в
ЕТх7000 збільшувала КУУМС на середині стадії наливання зерна (РІ-2) і знижувала відносну швидкість старіння листка і при НО, і при ГО, хоч вплив був більш сильним при НО.
У свою чергу, відносна швидкість старіння листка високо негативно корелювала із площею зеленої листкової поверхні в зрілості (ЗАМ) при НО і ГО (Фіг. 49) із більш високими швидкостями старіння листка, продемонстрованими при НО. 51941 давала більш ніж в два рази більше СІ АМ, ніж ЕТх7000 при НО (2106 проти 859 см"/м3) і на 19 95 більше СІ АМ при ГО (2145 проти 1725 см/м"), див. також Фіг. 50.
Приклад 21
Підвищена стійкість до вилягання є наслідком більш високого статусу води у рослини під час наливання зерна (через підвищене споживання води)
Велика маса стовбура в зрілості є компонентом стійкості до вилягання. КУУС на середині стадії наливання зерна (РІ -2) високо негативно корелювала із масою стовбура в зрілості для ряду ЗД МІ ів, вирощених в умовах обмеженого водопостачання при двох щільностях сільськогосподарської культури (Фіг. 51). Інтрогресія 5941 в КТх7000 збільшувала ЕМУС на середині стадії наливання зерна (РІ-2) і масу стовбура в зрілості при НО ї ГО, при цьому більший стрес був при НО. Відносно КТх7000, 591 збільшувала масу стовбура в зрілості на 9 95 при ГО (224 проти 203 г/м?) і 29 95 при НО (286 проти 204 г/м7). Отже, сприятливий ефект 591, із точки зору стійкості до вилягання, збільшувався із ростом рівня водного дефіциту.
Біомаса у період після цвітіння, головним чином, складається із а) маси стебла у період після цвітіння (РАБМ), мірою мобілізованого стовбурового резерву і компонента стійкості до вилягання і Б) урожаю зерна. Виробники зерна вимагають максимізації як урожаю зерна, так і стійкості до вилягання, тобто вони не хочуть одного за рахунок іншого. Маса стебла у періоді після цвітіння високо лінійно корелювала із РАВза умовами НО і ГО (Фіг. 52). У той час як 5191 здійснював невеликий вплив на РАБМ при більш слабкій засусі (0), кількість сухої маси, переміщеної із стебла під час наливання зерна, була набагато менше для 51091 у порівнянні із
ЕТх7000 (85 проти 139 г/м2) при більш важкій засусі (НО). Це приводило до більшої маси стовбура в зрілості для 591 відносно ЕТх7000 (286 проти 204 г/м), який, у свою чергу, повинен мати підвищену стійкість до вилягання.
У той час як кореляція між РАЗМ і РАВ була високою при НО і ГО (Фіг. 51), кореляції між урожаєм зерна і РАВ були низькими при обох щільностях (Фіг. 52). 5941 інтрогресії в КТх7000 збільшувала урожай зерна при НО і 10, хоч РАВ було вище тільки при НО. Потрібно зазначити, що більш високий урожай зерна для 5941 у порівнянні із ЕТх7000 (290 проти 184 г/м) при НО досягався із значно меншою кількістю стовбурового резерву для 5141, ніж для КТх7000 (85 проти 139 г/м2), вказуючи на те, що потреба у вуглецю під час наливання зерна значною мірою покривалася поточної фотоасиміляцією і стовбуровим резервом для 51941 і ЕТх7000, відповідно.
Потенційний компроміс між РАБМ і урожаєм зерна виділений на Фіг. 53. При НО 5191 досягав найбільшого урожаю зерна при будь-який інтрогресії (290 г/м2), зберігаючи втрату маси бо стовбура до 85 г/м". У порівнянні із ЕТх7000 5191 оптимізував компроміс між урожаєм зерна і
РАБМ. Подальше зниження у споживанні стовбурового резерву за допомогою 5924 (38 г/м?) приводило до більш низького урожаю зерна (263 г/м2). При ГО 51 також давав високий урожай зерна відносно ЕТх7000 (282 проти 214 г/м"), споживаючи небагато менше стовбурового резерву (46 проти 50 г/м). Тому при обох щільностях 5191 давав більш високі урожай зерна і стійкість до вилягання, ніж КТх7000.
Регресія між РАБМ і масою стовбура в зрілості була відносно плоскої для різних інтрогресій
ІД при НО і 10, хоч КТх7000 випадав нижче лініь регресії в обох випадках. Для заданого рівня споживання стовбурового резерву (наприклад, «140 г/м? при НО або 50 г/м? при І 0), інтрогресія області 5 в КТх7000 значно збільшувала стовбурову масу в зрілості, вказуючи на те, що деякий інший фактор (наприклад, міцність стовбура), у доповнення до кількості стовбурового резерву був важливий.
Маса стебла у період після цвітіння (РАЗМ) високо лінійно корелювала із РАВ за умовами
НО ї ГО (Фіг. 54). Функції кореляції при НО і ГО були майже паралельні із зміщенням на приблизно 50 г/м, тобто для заданого рівня РАВ, скажімо 300 г/м2, РАБМ складала на 50 г/м2 менше при НО, ніж при ГО («100 проти «50 г/м2). Це відображає більш високий рівень впливу в обробці НО. При НО і 5щЩ1 і 5ідта споживали «80 г/м? стовбурового резерву у порівнянні із майже 140 г/м для КЕТх7000, все ж 5191, давала на «2895 РАВ більше, ніж 5щтіа при еквівалентному споживанні стовбурового резерву. При ГО, За і в меншій мірі 5941, обидва збільшували РАВ відносно КТх7000. Однак, у той час як 5ід1а приводила до споживання на 60 г/м менше стовбурового резерву, ніж ЕТх7000, 5941 приводила до споживання на «20 г/м? більше стовбурового резерву, ніж ЕТх7000.
Урожай зерна позитивно корелював із РАВ при НО і ГО. При НО, 5191 випереджав за урожаєм КТх7000 на 24 95, хоч 5ід1а був еквівалентний ЕТх7000 за урожаєм зерна. При 10,
ЗІ91 і БІЩ1а випереджали за урожаєм КТх7000 на 42 9б і 20 95, відповідно.
У цьому експерименті не було ніякого компромісу між РАЗМ і урожаєм зерна, оскільки кореляція між цими параметрами була позитивною і лінійною для обох густот сільськогосподарської культури (Фіг. 55). При НО 5971 демонстрував самі високі стовбурову масу і урожай зерна для всіх інтрогресій 59, підтверджуючи, що урожай зерна і стійкість до вилягання не є взаємовиключаючими.
Зо Зв'язок між РАБМ і стовбуровою масою в зрілості позитивно корелював при НО і негативно корелював при ГО. При НО РАБМ і стовбурова маса в зрілості були обидва значно вище для 591, ніж для ЕТх7000. При ГО стовбурова маса в зрілості була вище для 51941, ніж для ЕТх7000 (314 проти 271 г/м2), хоч 5941 приводила до споживання більшої кількості стовбурового резерву у порівнянні із ЕТх7000 (87 проти 66 г/м2). Загалом, 591 збільшувала стовбурову масу в зрілості на 22 Фо (НО) ї 16 9о (І 0) у порівнянні із КТх7000. Крім того, Б(91а приводила до споживання значно меншої кількості стовбурового резерву, ніж КТх/000 при обох щільностях сільськогосподарської культури.
Маса стебла у період після цвітіння (РАЗМ) високо лінійно корелювала із РАВ за умовами
НО ї ГО (Фіг. 56). Спадкова мінливість у споживанні резерву стебла у період після цвітіння коливалася від 30 до 110 г/м? при ГО, і від -100 до 160 г/м? при НО, відображаючи більш високий рівень впливу при обробці НО. При НО, батьківська 5941 (6078-1) і два із рекомбінантних генів 5941 (10604-5 і 10709-5) приводили до споживання значно меншої кількості стовбурового резерву у порівнянні із КТх7/000 (4100 проти 160 г/м2), при цьому все ж продукували більше РАВ, ніж КТх7000 (4170 проти 130 г/м). При ГО, тільки один із рекомбінантних генів 5941 (10568-2) приводили до значно меншого споживання стовбурового резерву, ніж ЕТх7000 (30 проти 60 г/ме), і давали більше РАВ, ніж ЕТх7000 (4310 проти 230 г/мг).
Урожай зерна позитивно корелював із РАВ при ГО і негативно корельований при НО, хоч, загалом (комбінація НО і 0), залежність була позитивною, вважаючи КТх7000 (НО) викидом в даних.
У цьому експерименті не було ніякого компромісу між РАБМ і урожаєм зерна, оскільки кореляція між цими параметрами була позитивною і лінійною для обох густот сільськогосподарської культури. При НО батьківська 5191 (6078-1) демонструвала високу стовбурову масу і урожай зерна у порівнянні із іншими інтрогресіями 51941. Дані ЕТх7000 були аномалією при НО, демонструючи низьку стовбурову масу, і високий урожай зерна. При 0 10709-5 і 10568-2 демонстрували високі маси стовбурів і урожаї зерна у порівнянні із ЕТх7000.
Зв'язок між РАБМ і стовбуровою масою в зрілості позитивно корелював при обох щільностях. При НО і РАБМ і стовбурова маса в зрілості були значно вище для 6078-1 і 10709-5, ніж для ЕТх7000. При ГО тільки один рекомбінантний ген 5941 (10568-2) випереджав КТх7000 60 по РАМ і стовбуровій масі в зрілості.
Приклад 22
Більш високий урожай зерна є наслідком більш високого статусу води в рослині під час наливання зерна
Інтрогресія 5Щ1І у початковий КТх7/000 збільшувала статус води рослини в середині наливання зерна, як указано за допомогою а) більш високого відносного вмісту води (ЕМУС) в
ЕІ -2 при ГО ії НО, більш низького водного потенціалу листка (МУР) в РІ-2 при ГО і НО. У цілому, рослини випробовували більший стрес при І 0, ніж при НО в цьому експерименті, який показує більш низьке КМУС при ГО. Однак, корисний ефект 591 на статус води в рослині був більш істотним при НО, коли ЕУУС було на 26 95 вище для 5191, ніж для ЕТх7000.
ЕМУ/С в середині наливання зерна в РІ -2 позитивно корелювало із урожаєм зерна при НО і
ГО. При більш високих рівнях дефіциту води у рослини (КМ/С « 73), урожай зерна був вище при 10, ніж при НО для заданого рівня ЕМУС. КУУС і урожай зерна були вище для 5І9ЧІ1, ніж для
ЕТх7000 при обох щільностях сільськогосподарської культури. Наприклад, для 5941 при НО 26 У5-е збільшення КМУС було пов'язане із 58 95-им збільшенням урожаю зерна відносно
АтТх7000.
Водний потенціал листка (ГМУУР) в ЕГ-2 в середині наливання зерна негативно корелював із урожаєм зерна за умовами НО і ГО (Фіг. 57). При обох щільностях 5Щ1 демонстрував більш низький /М/Р (менше піддане стресу) і більш високий урожай зерна відносно КТх7000. Ці дані, разом із даними КУУС, забезпечують переконливі докази зв'язку між більш високим статусом води в рослині під час наливання зерна із підвищеним урожаєм зерна завдяки області 5941.
Приклад 23
Більш високий урожай зерна і більший розмір зерен є наслідками підвищеної доступності води під час наливання зерна
Критичним по відношенню до гіпотези про функцію 5191 є зв'язок між споживанням води до і після періоду цвітіння і, згодом, зв'язок між споживанням води у період після цвітіння і урожаєм зерна. Ген 591 не має великого значення на польовому рівні, якщо немає ніякого зв'язку між підвищеною доступністю води під час наливання зерна і або урожаєм зерна або розміром зерен.
По-перше, важливо встановити зв'язок між співвідношенням біомас до':спісля періоду цвітіння
Зо (РРВЕ) і споживанням води сільськогосподарською культурою (СУМ) під час наливання зерна.
СУМ під час наливання зерна залишався низьким (при точці відліку 785 і 95 мм для 0 і НО, відповідно), поки співвідношення біомас до:після періоду цвітіння не опускалося нижче «3 і 2,5 для ГО ї НО, відповідно (Фіг. 58). Нижче цього критичного значення СУ під час наливання зерна збільшувалося значно для кожного наступного кроку зниження цього співвідношення. При обох щільностях інтрогресії 591 знижували РРВК досить, щоб значно збільшити СУМУ у порівнянні із КТх7000.
По-друге, важливо показати зв'язок між СМ/ЛО під час наливання зерна і урожаєм зерна.
Загалом, ці параметри позитивно пов'язані в експерименті із КО5 крім двох відмітних викидів в даних при ГО (5142 і 5193) |Фіг. 59). Інтрогресія 5941 в КТх7000 збільшувала і СМ. під час наливання зерна і урожай зерна при обох щільностях сільськогосподарської культури.
Нарешті, зв'язок між РРВЕК і урожаєм зерна в умовах обмеженого водопостачання завершує картину (Фіг. 59). Урожай зерна залишався низьким (при точці відліку 410 г/м7), поки співвідношення біомас до:після періоду цвітіння не опускалося нижче «2,7 (Фіг. 59). Нижче цього критичного значення урожай зерна збільшувався значно для кожного наступного кроку зниження цього співвідношення. При обох щільностях інтрогресії ЗЩЧЧ1 знижували РРВЕ досить, щоб значно збільшити урожай зерна у порівнянні із КЕТх7000. Ці дані показують критичний зв'язок між дією гена 5191 (знижений розмір крони у періоді цвітіння) і урожаєм зерна при граничній засусі.
СМ під час наливання зерна позитивно корелювало із розміром зерен і при обробці НО і при ГО (Фіг. 60). Інтрогресія 5941 в ЕТх7000 значно збільшила розмір зерен при НО, але не при
ГО.
Зв'язок між РРВЕ і розміром зерен в умовах обмеженого водопостачання підкреслює важливість збереження води перед періодом цвітіння як визначального фактора розміру зерен (Фіг. 61). Розмір зерен залишався низьким (при точці відліку «17 ії 17,5 мг для НО і 10, відповідно), поки співвідношення біомас до:після періоду цвітіння не опускалося нижче -2,7 (Фіг. 61). Нижче цього критичного значення, розмір зерен, збільшувався значно для кожного наступного кроку зниження цього співвідношення. При НО, але не при 10, інтрогресії ЗЮД1 знижували РРВК досить, щоб значно збільшити розмір зерен у порівнянні із КТх7000. Ці дані показують критичний зв'язок між дією гена 5191 (знижений розмір крони у періоді цвітіння) і бо розміром зерна при граничній засусі.
СУШІ під час наливання зерна залишалося низьким (при точці відліку 758 мм для НО), поки співвідношення біомас до:після періоду цвітіння не опускалося нижче --3,5 (Фіг. 62). Потрібно зазначити, що РРВК не знижувався нижче критичного порога ні для якого генотипу при НО, отже, СУМ під час наливання зерна залишалося відносно низьким для всіх генотипів у цій обробці. Однак, оскільки для генотипів значення опускалися нижче цього критичного значення при обробці ГО, СМ) під час наливання зерна збільшувалося значно для кожного наступного кроку зниження цього відношення. Тільки один рекомбінантний ген 591 (10709-5) збільшував
СУМ під час наливання зерен у порівнянні із КТх7000.
Загалом, СУМО під час наливання зерна і урожай зерна позитивно корелювали за об'єднаними наборами даним для обробок НО і ГО, при цьому генотипи показували більше споживання води і продукцію більшої кількості зерна при І О (Фіг. 63). Однак, зв'язок між цими параметрами не був дуже сильним. Також конкретні рекомбінантні гени 591 стійко випереджали КТх7000 по кількості урожаю при обробках НОЇ 0.
Приклад 24
Генетичний аналіз ОТІ. і РІМ
Аналіз ОТ.
Дані за ознакою залишатися зеленим ОТІ збирали із 7 досліджень (Ставіа еї аїЇ. (1999)
МоїІесшаг апа Сепега! Сепеїїсв 262:579-588; Найзтапп єї аї. (2002) ШегогеїїсаІ апа Арріїєй
Сепеїісв 106:133-142; Кереде еї а. (2001) Тнеогеїїса! апа Арріїєд Сепеїйсв 103:266-276; Згіпіпма5 еїаї. (2009) Тнеог Аррі Сепеї 118:703-717; ЗИириані еї а. (2000) Тиеог Арр Сепеї 101:733-741;
Тао єї а. (2000) Тнеог Аррі Сепеї 100:1225-1232; Хи єї аї. (2000) Сепоте 43:461-469). В 7 дослідженнях ідентифікували 47 індивідуальних ОТ і нанесли на консенсусну карту сорго (Масе еї аї. (2009) ВМС Ріапі Віої. 9:13). Якщо передбачувані довірчі інтервали (СІ) ОТІ. для однієї і тієї ж ознаки накладалися, то ці ОТ. групували в мета-ОТІ. Дев'ять мета-ОТІ. ознаки "залишатися зеленим" ідентифікували таким чином. ОТІ. однієї і тієї ж ознаки класифікували як окремі ОТІ, якщо їх СІ не накладалися, і середні значення для ОТ розташовувалися на відстані менше ніж або дорівнює 15 см один від одного.
Аналіз ОТ шляхом статистичної комп'ютерної обробки (ЗМІ) (Ведо еї аІ. (2008) ВМС
Сепеїіс5 9:35) проводили на ряді із більш, ніж 500 записів у випробуванні ОЕЕОІ сорго руї із
Ко) чоловічими особинами. 23 ОТ, ідентифіковані із імовірністю « 0,05, також наносили на консенсусну карту.
Генний аналіз РІМ
Всі доступні РІМ-гени в рисі ії Агабідорзі5 досліджували за допомогою МСВІ (млум/.пебі.ого).
Всього ідентифікували послідовності для 9 рисових РіІМ-генів (О5РІМІ, О5РІМІЮБ, О5РІМ'І1с,
О5РІМ2, О5РІМЗа, О5РІМЗБ, О5РІМА, О5РІМ5, О5РІМБ) і З РІМ-генів Агарідорзів5 (АЕРІМІ, АгРІМ2,
АЇТРІМ4). Всі гени (білкові послідовності) досліджували за допомогою ВАТ на УМО5 сорго (м/мли.дгатепе.ого) і 100 кращих попадань ідентифікували. Порівнювали бал (5-величина: міра схожості, яка вивчається, із показаною послідовністю), Е-величину (імовірність випадкова того, що існує інше вирівнювання із схожістю більшою, ніж дана 5-величина), 900 і довжину гомологічної ділянки послідовностей для кожного із 1200 попадань. Залежність між 4 мірами аналізували, і З-величину вибирали як головну міру для оцінки імовірності схожості послідовностей. Після аналізу розподілу значень 5 бала, виділяли З категорії 5 балів (» 1000; » 499 і « 1000; « 499), і створювали список 11 генів сорго із балами » 499 (тобто в перших 2 категоріях). Див. таблицю 13.
Таблиця 13 ауксину За ауксину 5 ауксину 6 ауксину 16
Таблиця 13 (продовження) 01 анотація вЬо79026370 О5РІМА подібний вірогідному компоненту носія, із виділенням ауксину 4 вЬь109004430 О5РІМІ подібний передбачуваному компоненту носія, із виділенням ауксину ЗБ вЬь109008290 ОБРІМІС подібний вірогідному компоненту носія, із виділенням ауксину 1с вь109026300 ОБРІМ? подібний вірогідному компоненту носія, із виділенням ауксину 2
Порівняння
Із 11 ідентифікованих РІМ ортологів 10 (90,9 95), вирівняні по відомому ОТІ за ознакою "залишатися зеленим". Тільки один із 11 РІМ-генів сорго (56039043960 на 5ВІ-03, відмічений сірою зіркою на фіг. 65 і 66) не був вирівняний ні по одному із наведених ОТІ. Із 79 зображених на графіках ОТІ (23 5МІ-ОТІ і 56 із літератури/мета-ОТІ) 30 (38 95) вирівняні за ортологами
РІМ.
Приклад 25
Аналізи РІМ2, РІМ3, РІМА і РІМ5
Джерело ознаки "залишатися зеленим" ВТхб42 (В35) і майже ізогенні лінії (МІ), які містять
З91, 592, 5194 ОТІ, що так само як контрастує старіючу лінію Тх7000, вирощували в кореневих трубках в теплиці.
Мета експерименту полягала в тому, щоб виміряти рівні експресії генів, які ідентифіковані у даному описі як гени-кандидати ознаки "залишатися зеленим" в умовах хорошого зволоження і після впливу на рослини стресу від засухи для того, щоб бачити, чи є які-небудь відмінності в експресії у рослин із ознакою залишатися-зеленою у порівнянні із старіючими рослинами.
Експеримент розділили на дві частини: ранній стрес від засухи (Ехр) і пізній стрес від засухи (Ехр2).
Результати раннього експерименту із стресом від засухи показані у таблиці 14.
Таблиця 14 ід ОТ.
ОрРІМ2 5рОоЗдо29320 О5РІМЗа 5ід2 кандидат
ОБРІМЗ 5рОоЗ9032850 О5РІМІ Верхній бід! ОТІ. 5БРІМА 56039037350 О5РІМЬ Зіді-кандидат 5БРІМ5 50034043960 О5РІМб Нижній 5Бю1 ОТІ.
Підсумок основних відмінностей в експресії цих РІМ-генів наведений нижче (Таблиця 15 і фіг. 67А-0).
Таблиця 15
Відповідь на УМО
МЛМ: вище в Тх7000 проти
МЛМ: мало в листку, Більш низька ВтТхб42 і 591 в корінні, (Фіг.
ЗБРІМА (591- багато в корінні, ММО: : . - 11), МИО: вище для 5ІЩЧ1 і експресія в більшості кандидат) мало в листку, багато в тканин ВТхб642 проти Тх7000 в корінні листку, стеблах і верхньому корінні (Фіг. 2)
ММ: вище в 5ІдД2/ВТхб642
МЛМ: багато в листку, корінні (Фіг. 3) вутеолі ев
ЗБРІМ2, (5д2- | мало в корінні, УМО: Збільшення в корінні, р ФГ. в), М ВИЩ
ВтТхб642 і в меншій мірі 5ІД2 кандидат) багато в листку, мало в | зменшення в стеблах і х корінні проти Тх7000 в більшості
Р тканин крім старого коріння (Фіг. 4)
Таблиця 15 (продовження) середовищ тканин МАВ) проти Тх7000
МЛМ: вище для 591 (і в
МЛ б набагато меншій мірі Тхб42) : багато в листку, . с. інні. МО: Збільшення в корінні, | проти Ттх7000 у верхньому
ЗБРІМЬ бага в корінні, не сильна зміна в молодому корінні особливо, агато в листку, мало в , : корінні листку МО: вище для ЗЗ1 (ів меншій мірі) ВТхб42 проти
Тх7000 в стеблі
Емержентні патерни ідентифікували для 50РІМА і БВРІМ2, 591 і 5ід2, відповідно.
У обох випадках експресія цих генів була вищою в лініях із ознакою "залишатися зеленим" у порівнянні із старіючою лінією у відповідь на водний дефіцит.
Ці два РІМ-гени показали відмінності в тканині-специфічності. ЗОРІМА, загалом (за всіма умовами), більш сильно експресувався в корінні і стеблах і менше експресувався в листку, в той час як 5БРІМ2, загалом, показав більш сильну експресію в листку і стеблах і більш слабку експресію в корінні).
Приклад 26
Визначення локусів 5ІДХ
У таблицях 1В і 1С наведені приклади локусів, розташованих в: 5941: область тонкого генетичного картування між їхр5б3 і їхр581, яка містить 60 анотованих генів, більш велика середня область між їхр440 і їхр580, яка містить 307 анотованих генів, кандидати в хвості між їхр580 і їхр38, які містять 178 анотованих генів; 5іД2: область тонкого генетичного картування між їхр512 і їхр2, яка містить 15 анотованих генів, більш велика область між їхр31 і їхр530, що містить 241 ген, що анотується; 5ідЗа: вся область між їхр298 і 5РЬ-2568, яка містить 520 анотованих генів; 5І9ЗБр: вся область між 5Рр-2568 і їхр1!79, яка містить 291 ген, який анотується; 5Ід4: вся область, визначена їхр283 і їхр15, яка містить 306 анотованих генів, те як ці різні локуси вписуються в різну біохімічний і фізіологічний шляхи зображено на Фіг. 68.
У одному із варіантів здійснення локус в 591 вибраний із РІМ5, 510112, Р4А5098А1, нечутливих до індол-3-ацетату і брасиностероїдів.
У одному із варіантів здійснення локус знаходиться в 5142 і є компонентом носія, який виділяє ауксин За (РІМЗа).
У одному із варіантів здійснення локус знаходиться в 5ідзЗа, вибраній із білка, подібного білку, який відповідає за старіння листка (56029023510), білка, подібного білку, який відповідає за старіння листка (56029023520), КАМО5БАТ1 С2На із доменом "цинкові пальці" білка фактора транскрипції (560029024410), передбачуваного ауксин-незалежного прискорювача росту (5р029024540), білка, схожого із білком, подібним білку, чутливому до дегідратації
Зо (55029024670), білка, схожого із транспортером глюкози (56029024690), МКУ білка фактора транскрипції 76 (565029024760), глутамінсинтазаподібного білка (56029025100), білка, який асоційований із старінням ОН (55029025180), передбачуваної аланінамінотрансферази (5р029025480), білка, подібного ауксин-індукованому білку (565029025610), білка, подібного ауксин-індукованому білку (56029025620), передбачуваного білка із непарною відповіддю в
З5 дальній червоній області (565029025670), білка, подібного (цитохром-Р450)-монооксигеназі
СУРО2АТ (560029025820), ауксин-незалежного прискорювача росту (56029025960), аспартатамінотрансферази (56029026430), білка, подібного 8'-гідроксилазі З абсцизинової кислоти (560029026600), білка, схожого із етилен-зв'язувальним білком (560029026630) і сімейства передбачуваних ауксин-індукованих білків (526029027150).
У одному із варіантів здійснення локус знаходиться в ЗІДЗр, вибраному із передбачуваного ауксин-незалежного прискорювача росту (565029027470), здиатоза промотор-зв'язувального подібного білка 17 (560029028420), білка, подібного білку О50990505400 (О5РІМО) (56029029210), Запатоза промотор-зв'язувального подібного білка 17 (56029029300), білка, схожого із ауксин-індукованим білком (565029029630).
У одному із варіантів здійснення локус знаходиться в 5194, вибраному із рецептора брасиностероїду КК (55059006842), рецептора брасиностероїду ІК (5Б059006860), передбачуваного білка із непарною відповіддю в дальній червоній області (5Б6Б059007130), цитохрому Р450 84А1 (560059007210), рецептора гібереліну СІ0112 (56059007270), рецептора гібереліну СІЮ112 (56059007290), сахароза-фосфат синтази (5Б059007310), аквапорину ЗІР1-1 (5р059007520), гібереліну 20 оксидази 2 (560059008460), О5ІДА29 - ауксин-чутливого білка (565059008510), О5ІДА29 - ауксин-чутливого білка (50Б059008512), білка-рецептора гібереліну
СІО112 (560059008610), білка, подібного амінотрансферазі, передбачуваного білка (5р059009410), індол-3-оцтової кислоти амідо-похідної сполуки (5Б059010310), індол-3-оцтової кислоти амідопохідної сполуки (560054010320), індол-3-оцтової кислоти амідопохідної сполуки (5р059010326), цитохрому Рі450 86А2 (560059010360), цитохрому Р450 51, передбачуваного білка (560059011296), цитохрому Р.4-50 51, передбачуваного білка (565059011430), триацилгліцеролліпази, білка старіння листка, білка (ОО біосинтезу жасминової кислоти (50р059013160), регулятора росту, такого як (560059015590), цитохрому Ра.б5О0 78А4 (5р059016750), білка, подібного білку із сімейства АВС-транспортерів, експресованого білка (5р059017120) і Запатоза промотор-зв'язувального подібного білка 19 (5Б059017510).
Фахівці в даній області оцінять, що аспекти, наведені у даному описі, можуть легко мати варіації і модифікації крім, зокрема, описаних. Необхідно розуміти, що ці аспекти включають всі такі варіації ії модифікації. Аспекти, наведені у даному описі, також включають всі стадії, властивості, композиції і сполуки, на які робиться посилання або вказані в цій специфікації, індивідуально або все разом, і будь-хто і всі комбінації будь-яких двох або більше із стадій або властивостей.
Бібліографія
Апагаде еї а!. (2002) Стор сі. 42:1173-1179.
Ведо єї аї. (2008) ВМС Сепеїісз 9:35.
Воїтєї! єї а). (2000а) Стор 5сі. 40:1026-1037.
Во!їтеї! еї аї. (20005) Стор 5сі. 40:1037-1048.
ВогтєїЇ апа Наттег (2000) Стор 5сі. 40:1295-1307.
Спгізюорнег" єї а!. (2008) А!йві. У). Адгіс. Ве5. 59:354-364.
Ставіа єї а). (1999) МоіІєсшціаг апа Сепега! Сепеїййсв5 262:579-588.
Ботадаї5Ка апа І еузег (2011) Ваї Рем Мо! Сеї! Віої! 12:211-221.
Еогевіап апа Магойо (2009) Ріапі Рпузіоіоду.
Нігті еї а. (2003) Ситепі Оріпіоп іп Ріапі Віоіоду 6:7-12.
Сагиа еї а!. (2002) Ійї. Богапит апа МіПеїв Мем/ві. 43:63-65.
Наттег" евї а!. (1997) Айві. У). Адгіс. Нез. 48:649-655.
Наттег (2006) Адігіс. Зсі. 19:16-22.
Нагтіх єеї а. (2007) 9. Ехр. Вої. 58:327-338.
Найзтанпт есї а). (2002) Тнеогеїїса! апа Арріїєд Сепеїйсв 106:133-142.
Непаегзоп еї а!. (1998) Айві. У. Ріапі Рпузіої. 25:111-123.
Неп?еї! єї аї. (1997) А!йвігаїйа Іпі. огайит апа Міїїєїв Мемуві. 38:1-9.
УЛіао евї аї. (2010) Майте Сепеїїсв 42:541-544. щдогаап єї а. (2003) Тнеєог. Аррі. Сепеї. 106:559-567.
Казпімаді єї аї. (2006) Ріапі Рпузіоїоду апа Віоспетівігу 44:152-157.
Каззапип еї а. (2010) ЄирНуїїса 72:351-362.
Кебреде ега!. (2001) Тнеогеїїса! апа Арріїєд Сепеїїсв 103:266-276.
Масе єї а!. (2009) ВМО Ріапі Віо!. 9:13.
Мапзспаді еї а). (2006) Рипсі. Ріапі. Віої!. 33:823-837.
Місшга еї а!. (2010) Майте Сепеїйсв 42:545-549.
МопіоскК апа Наттег (1999) У. Стор Ргоад. 2:265-286.
Раззіошга (1977) У. А!йві. Іпві. Адгіс. Зсі. 43:117-120.
Вазпоне еї аї. (2000) Ріапі Сеї! 13:1683-1697.
Ведау еї а!. (2008) Єирпуїїса 159:191-198.
Возепому вї а!. (1983) Адгіс. УМаїег Мапаад. 7:207-222.
Зайдгаз апа Соппог (1991) Рієїй Сторз Вев. 26:227-239.
Зрапо еї аї. (2003) 9. Ехр. Вої. 54:1415-1420.
Зргіпдег (2010) Майшге Сепеїйсв 42:475-476.
Згіпіпмаз еї а! (2009) Тнеог Аррі Сепеї 118:703 717. зириані єї аї. (2000) Тнєог Аррі Сепеї 101:733-741.
Тао еї а. (2000) Тнеог Аррі Сепеї 100:1225-1232.
Тепкопцапо вї аї. (1993) Тнеєог. Аррі. Сепеї. 85:644-648.
Титег (2004) 9). Ехр. Вої. 55:2413-2425.
Мап Оозіегот апа Наттег (2008) Рієїй Стор Нез. 108:259-268.
Мап Оозіегот еї аї. (2010а) Рієїд Сторз Вев. 115:19-28. 60 Мап Оозіегот еї аї. (20100) Рієїй Стор5 Вев. 115:29-38.
Мапа єї а. (2009) Моїесшаг Ріапі 2(4):823-8391.
Хіп вї а!. (2009) Рієїд Сторз Вев. 111:74-80.
Хи вї а. (2000) Сепоте 43:461-469. «пепа еї а. (2009) Ріапі Вгеєй 128:54-62.

Claims (5)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка ефективніше використовує воду, ніж генетично немодифікована рослина тих же самих видів, де вказаний спосіб включає стадію введення в рослину або батьківську рослину послідовності нуклеїнової кислоти, яка кодує ЗБРІМІ і яка асоційована з фенотипом "залишатися зеленим", причому включає в себе зсув в споживанні води на період після цвітіння або підвищену доступність води під час росту сільськогосподарської культури або підвищену ефективність транспірації, що приводить до збільшення індексу збирання урожаю і урожаю зерна в умовах обмеженого водопостачання, і причому 5БРІМІ кодується геном сорго ІЮ 5рО2га029210, що розташований від пари основ 64347327 до пари основ 64350341.
2. Спосіб за п. 1, в якому генетично модифікована рослина є рослиною сорго.
3. Спосіб за п. 1, в якому генетично модифікована рослина вибрана з пшениці, вівса, кукурудзи, ячменю, жита і рису.
4. Спосіб за п. 1, в якому генетично модифікована рослина вибрана з абаки, люцерни, мигдалю, яблуні, спаржі, банана, квасолі, ожини, кормових бобів, каноли, кеш'ю, касави, нуту, цитрусових, кокосового горіха, кави, кукурудзи, бавовнику, фіги, льону, винограду, земляного горіха, гашишу, кенафи, лаванди, оману, гриба, маслини, цибулі, гороху, арахісу, груші, американського проса, картоплі, рамі, рапсу, пажитниці, сої, полуниці, цукрового буряку, цукрової тростини, соняшнику, батату, колоказії, чаю, тютюну, томата, тритикале, трюфеля і яму.
5. Спосіб за п. 1, в якому фенотип "залишатися зеленим" додатково включає фенотип, вибраний з підвищеної пластичності архітектури крони, зменшеного розміру крони, збільшеної біомаси на одиницю листкової поверхні в період цвітіння, більш високої ефективності Зо транспірації, підвищеного споживання води під час наливання зерна, зниженого утворення біомаси в період до і після цвітіння і затримки старіння.
6. Спосіб за п. 1, в якому фенотип "залишатися зеленим" додатково включає більший розмір зерна. Перюз пинівня ко ЗМК ка не е Е я я ж ; . МНК нн нн В ДАТ кн не ніна хх а у МОХ Я їн рик КИ Ж ве ! 5 СЕК і п нн п он ї як я х | » ; шо нн п ЕЕ в в о о що що нко їв че о ща ШО вк -к КЕ СТИ фік. і бо ї ПЕ З В ця о но ї : С ся я КАМ КЕ І її спе фмким ї Я і З ща ЗІ ї З БОЮ «іа і ж. Е с тя БО зада ої аМщО жо х ОО Фази ще ва Ва тя Її й . і і Ух г Ї ши ШЕ В і чи: Бл и а НЯ ро сх У і НЕ ко 2 ГК де «а ее ї ж МО. дя « ! ї во ї шов ще «екз у ШИ зу з Її : жрвет ї - З0000 о ово ї і МУ і ї і ; Е ї Я ; і ї і МОВ нн нон нн он и ння нем Е ви вих ; кер и веж ЗЕ о 15000 15:20 ОО ОО ЗО ї З ооетеноттоленкоетостетнндтнннд несе он я ооо ААНК КК норок тео ОК оо Кн оте освіти ЕН КЕ в у СУЯ У ОВК ВЕН еКуку СК
Чнг. МО Тонке тен вУне КИ КЕ ВИНИХ ! і І ї : а вух о і в Ще СК ВНБНЕ КУН пт ІК іх щ сне кувнння : Ї з уст ї Я : І ї Ка І х ккд ОКО І зе ; с і МЯКІ І Бе І : : -
їх . : ТЕ ж КЕШ Ко : х ДНА Кл Кер НШСУ В Елен ше ЕЕ; кож і же КИНЕ ГІ х ЯЗ у БУ їх Я КК Вод ЗЕ ЯКУ БАЖАН 4 те р Ор Я Що. яв 1 ї кох ОБ х розм ож : ї ї її т І ще ї в СК ши иши Ок що ан ;: Я ї ї ї ши - - т ее ев зви Ван Ї ЕЕ ЗЕ ЯКУ
Ух. Кх Гена НеЯ її ї ГНЕ Ока Її КА її ко, ІЗ 5 ШЕННЯ ЗШ Я: ЯН: їжи пн НЕ: ше и ї ШЕ; ж Ще ще» «ж таль ов ери: БР 1 ши в ОН ши ро ї не ЕЕ, Мт НЕ І ок ж аж я я нн: х гу Е; Іо кн ОХ ї ї Кк Е; |: С се Бр ше ГЕ сш ГЕ и еВ ши шеи шн З зи 30 Я ! НЕ пики НА ША НКУ і КЕ І ВЕ га ЕКЗ г ШЕ Ба: ЕН ранку Кл З В ї З Е:
й . 1 Я інн нення х ен не нн с КЕ ЗНИК : : ЩО Коня неоходкноикін см ов кажи оку жа НЕ 555 кн ке за хе Же с Же х я З Я УНН х в т Ж Же Ох М Ж бе Я ще З Не п КК С НН НН нн -к ЕК од - зе ен ке нн ВО Он а НИ 5 ФЕ сеї Ве -КХ все УА 5 ДУ дю на хх щі ще ве « си и ЕК се Бей 5 ща Кк В ж и еться С Не ЕІ у о НН о са ВІ я ох М ок и Е рю пущку г евотВни как. -х бк З Бсх 1.
ж ше в фо щ хеолво жо я жо
1.331251: 5: ЕН нн Яни нн ні М Й В розвине Яна й й АЖ 3 "ж а я 55: їж: 585 Ма тет ої ОТЖЕ 3Ж ВВ ЯЗ ВВ ЗБ 85 т 6 ве т о ве ВВ а її її жЖї ще ВВ з ВВ яв ВО Б НВ Ви Б Бе ЗБ НВ ще ща т за її її Чт ВВ БЕ Б Бе БО БЕ БО БО ББ5 об яб Бо БО бе бе Ба сОБАКВВ. т її В яв 85 ВО БЕ бо ай Б ОО б Ба ВВ В Ва ВВ да т ТУ тт тт ВВ НВ ВВ ва Бе бе ЗВ 5Б ВВ ОВ БО б ве вв ов Ве От ще т ТІ В ВВ ББ Вб Бе ве Ов БО БО Бе Бе яв тт б ве ща ТТ махові ТТ лЛт ВВ БА Б Б Б Ба Б 5 Б 8 ВВ ВВ ВВ Ве Ве Ве ТР виОНО тт Вб Ве БО ОВ яв ВВ Ве бе ва ВО б ВВ ОВ ВВ оте ТР От Оїт Вам тт Вб ВО Бе Б БО БЕ бе БВ жи бе ВВ БЕ Я Ве б ОТ ОСНО т КЕ її вв В ва ве ви Вб Б ВВ Бе ж Вб ох ВОК ЕТ У І т ве тт ВЕ В Ва аб як БВ Ве ВВ ВВ х 8 ох ож ОРОС врях ТУ Ве Б ве БВ ОВ БВ ЯВ Її Ва ож ВВ ох Я ОТК Я тж СОУ воБх т ВВ В яв Ва Ва БВ НЕ БЖ хх ох жо я Ж ох У ол бл Ов же т вв Вб Ве Вб Б БЕ еВ ВО ЯР ОТ ОР ТК ОВ ОТ Я КОТ жали її вв Ва ва в вв ве ве еВ жу ЗК їж Ту това ож тт у т я ж ВЕ ВВ Ва в ЯЗ БВ вв ол у Я Те ож ОК те от чт у зт ще Жт ВВ ва вав ва ва Ва В її її у її о Ят її ле т зт ВО хе її БЕ 88 ше б ВЗ БЕ ва ОВ її т ОР ж ЯК тк же оте ЗУ зу ве її БЕ б ВВ Б Б БВ ОО якої Я Я ОО ЯК жо Ох зим Ммие її щи 85 Ба яб5 ва я ЗВ Я у я р р Р Я же Ж їх НО БаМОЮ ТТ ВВ ВВ ШО Б Ба ВВ ВО У ат От От ж ВЕ зеоомие їт ВВ в ВВ ве аб в еВ т т ОО ЯК ть ож Ж От зеюосми її ВВ ВО ве Б в ве Ве т БЕ УРОК ОО Р ЖК ок ту Бе тт ве ва вв ВВ Ве В Ва ОТ Я Р Те Ж Я Ж ЖЕ От рот зна тт ще ба Ба ОБ во Ве о йа її т 3 3 Я ТЕ ОтТРОЖТ ТЕ лЖ ту в ж ВВ Ва Ва в ва Бе зе т Р ОО ЕК ОЖр от у ту ВОЗ ке а ВЕ о ехо ЗЕ В ЗЕ З З Зк ЗНШИН: ЗМ Ж ЗЕ А Є НЕ З ЗА Зх МИ ЗВ ЗВ жа тт щВ Ва т ве ов Р отроОт т З Те ре ТЕ о трРОЖР ТК зт жа тт ВЕ ов її 8 ва вк як От тк От ої Я ЖК ЖЖ Жт Ж у у за омне жї ВЕБ Ве її ВБ ОБ ЯР ЖЕ Я у Яр ЖЖ ж ОЯж Яж ЖК ЯР я Я жо тт ВЕ ВВ т ВБоВЕ О ЖК тр ж Я рот Оля ж ол ле т кеВ тт ВЕ ВВ їТ в ВВ лу у РЕ ОО ж т ки теме я и НЕ кни. СИХ Мр сн я Сех ЖК з ВИХ МНЕ с У МНК З МНЕ я ЯН Сех МЕ ве я іх и Ше ке М; М З З а ех С МВ я ШЕ У МНЕ З НЕ ВН С У МН
«г. Я в2
КТ КК КК КК КК КОЮ ЖАЛА АКК КК ОКХ КК КМ жк КК КК КК кАк КК КК А КК ОО КК А ЖК КК КОКО КУМ как КОКО мк Зщі Ех ХК ; . т ВЕ зінавех, КК Ж "ВІванН Наннк х до ння оораввог Ух ВН: зна: ЗВВНВНН: З Вон: сен: ЕЕ хо ВН: ННЯ Зоо: хх Вин: Кт с ТЕ - ЕТОВ ВБЕНННННХ НН: звводвая вх ПИЛИ В Кл ЛИПИ В т я ЗБК. ОНАННк сонне: Тит и ще "ВН МИТ "ЗБ ТИН их хх. БУ СН ШИПИ "ВВА зовн тт й и ї Ву ІЗ "ВІВ: Зрннннни ов зн : БОНН. «ех Ї "ВН. ПОПОВ ПИВ ЗиННННН: КИ ом і: НН: и Кк: "ХОВревН В "НН: т ї х ї ан: пт Е "ЗБНВННН ит ЗБ хх ав. ї РоКЯ Н "п В "ЗвваННес он: НН їх ШНААЕ Ме у дин: Оси В Вин: ен ПИВ ї Її роя І нн: ЗНАК ІОВ І: ЗВ: ПИВ тож ; 3 ЕН топи я КВ на сени вв ОБО ак її: ДННННЕ: Нннннн З БВ і ЗВ: з НН: Ко Ії М їй З ТУ ї донна ТОБ і дон: х Док у В і ЩО Ух ЕВ ов Кот т В т БЕ їж Е ОН: КВН: осот її ПЛІТ ї КОТОВ з ї БВ знана: До ї Вин ї КІВ ще Е ЕВ ШОВ ЕОСОВ Е ЗО : ВЕ з ІЗ ТОВ ПИТИ В ІОВ т ЕНН ї КО в : ЛИПИ ЗВ: ПОС О В ї НК х ИЙ Б 5 КВК Пий Б: ї НН х КВ У с ІЗ ЗК ВОВНИ ОЙ к оман: ІЗ "НН б Тр ї ТІТОВ "Вр оВер: і. ВВ ІЗ "НК: На ЗІ Ве "МВВ: ен З ПИВ я дивне ї ВЕ: Її ї Вова: ЯНВ: з ЕС Е В із ЗЕ: хе ї ЗК ПЛОВ К ТОВ у ННЯ ЕЙ ї НН: ПЕИЛОВ ї ОВ х ЕОВЙ ПОВ ї ТОВ ПІТИИВ КВ ї КВН: із З ї отв нан: КО ї ВВ ї КИ ї ВН: зон: дини: т Вин: ї ЗБ: те им І ОВ онДН: ИЙ т ИН Я З дж, кис зу ЯМ Н КЕ в МК я ти Че ТОР БО ЯК ХЕ куки г т кети п кууху ух зх генотип н іх свалноме норялку) МУК КК КУМ КК КК КК КК КК КК КК КК КК КК
«Че. 5 ФЧиг. а с - їй В 5 мо Ж в Ж я на ое тт я З ВВ ВЕ КВ т ж ВВ Б ВВ Зв я тт чї ВВ В ВВ СеВМОоЗІ т ж Ве ВЕ Б5 ТЯ т ж на Вова етев тт тт 8 В ВЕ Вей тт ЖЕ Би ва ВВ. Вера тт Ж ВВ зв ВВ пОЕБЕВОУ т ж в ва ВВ Як тт їт ва ВВ ва ць т жт в НВ В хе ту її ВВ вв ВВ о тт г ВВ ВЕ х щем тї тт ВВ на т то тт чт ВВ Ва ТЕ в т т ва ва пе тт її ве ва їх зак ТЕ Р Ва ВВ ОтТЕ че т її ва ВВ Її НН її ж Вб ВВ ої Зеосмие тт ва Ва Вот зво Ммеє т В БВ Б От ЗБ НОННояї ЖТ ВЕ ВВ ВВ ОТ ВО т вт Ва ва її ЕК т ж ВЕБ вв ТІ ве тт ж ВВ ВВ Ту іа тж я ВВ отт ЕЕ тт ж Ва вт їх зва а о ЖЕ ВТ ВВ ТР її Я Тож Ви ОТ тт тра тт ВВ я ої тт іно т ж от ом
Фіг. 6 нн в п п КК в п в в КК ї ї Н дж і Зі Е : Ко ї Її 5 Її : х Її : у мих ї Н інн ї ей ї ї Н : А і: ї і ї х : ї х ї ї
Н я. зе І: МАМО ак: : ' п : ї й ЗА : ї ко ел СУ : ї ТУ КІ ї В ЗУ ІЗ Е ма Ії : Ж р де ї ЗОН ТЯ дод ї ЗК
ІК. ВАМ х хакі ЗЕМНОЇ 1 Оодкякк : ї жиЕпижний ЗК ОХ ї сюршо Я ІНК ї ї Уч ВН ОН Не: В БУК ВЕК ВК оВ ОО г Кх х з г ЕІ 3. (У Тож В і ЕК ВНИВКН Х вв 1 1 ВИНЕН КЕ КН тож ВУ ЗЕНКХЖН КМИН Бод МАК ї ЗМЕН АК КЕН Інно ї Ж В КК АК КО ї НАУ А КОНЯ ї У В КЕ ОКУ ВАНКЇ її Ок ї ЕК НИ В АК Ам кож Я ЗМІНА ІІ ВІ ВІ МН ВН СХ ОК ї- ї 1 ВА А М В М їм БАД: Н пе МК: КВК НВ В: 3 ЩЕ ЕМ АК ВВ АМН ї Се В к ї ВЗА а ВІ І М М ХУ їм Е ПК М КН В В ВН : ; Е ЕК и Я М А КВ ТК М М І ї ЕК КО В М КК В ВУ НН : я Е ПІВНИК НІ НА ВВ М КН їж ї ХІЗМВХНЕ ИН КВ КН Н У ї З Во КУ Я КК І ФОМА спам КН Я У В ВК КВ Я тек ДК СК М ЕН М В їз МО | МАННА ВЕН МО НИ КК КВК ЕМ ї ра УЖ Ст х пЕх: ЗУ КАЗКУ НК ЕІ ВУ ЯН КОКО ХУ ККУ ХУ чкя І ї ДЗ З В КО В ВК В М ІВ В МВ : : ОКА З ВЕ В НА В В ВВ ВН : В ВЕНА В НАВ ОН ВК В В : ї З КЕ М В НЕ НК КН У : Е Я ШОВ М НА В и В М : ї ЕН ВВА НОВ ВМ НЕ КН ЕН В КН ВН : ї ЕМ ЕХ ПЗУ НАН Я І юдеї ха кр о КН КН КН В МК В АН Н ОКУ рен ЖК ЕЕЯК КВ ВК ВЕК КК ЕН Я ВЕ ККУ ЗУ НК КВ ЗК А Е тож У хлех Ух : ще їх : і - Я ; - Я х Е р; 7; жк ча ОК ки КК жу ща у З ОН ТЯ МНН ме ша В и: і З а Ж 035 ЕЕ ВУ В ВК Я НЯ ХЕ КОЗУ ЗЕ чі Ва т З і: : ї в 1 ї Е : Я "ЗК І 1 Е АКОКЛМ зо : х у з що Ж їх . с ї : аотиві У звастанючаме пану : : Ї ем нн ме ак Н Ах зх КА ї Н Е : ї : 5 : З оо о ооо ооо ооо ев оо ооо ооо ооо ооо ооо овен ь р: те З зу КУ ой ще ЕХ ЖКУ ї ї ї й ї х КОЖ ок : ТО ї З - ї ї з ще І ї ХЛ І І СЖММ о : : : Н ї : ї Н й ЩІ 3 Н ї У і Н ї КЕ З ВУ с се їх ч г. в су ух Хе цеих я їн ї Е Я Ди ВИ Е ВЖЕ Техник ннв ВВ Вая ВН МИНЕ х Тит ВН ФЕН ВІ ЗНТУ ВК ВК х КО - а і Б УВК МВА ВН ВН Я Н ікон о пчуккки МУ аа КК, и: жу ех, пеХеКІ У х Н КУТЯ ав МУКИ КЕ В ПЕКІН Кох : КЗ ЯЗ ІН ПЕН НО ВВЕ ОО ї Ч КЕКВ. УКХ ПУТ АН НЕ КМ ЕКО Ого зд і КУ ПЮРЕ МІН В МВВ МУЗ КІНЖ НІХ он МОН І ї ся Я УТА КК В М КВ КЕН 5 ЗЛІ ЕНИХ сиве Ти ІЗ ск су У ВК ВК ОЗ З КН Я кв ВВЕ ЕК ЕК ї ке З ЕК її ЗАЛІ ЕНКМЕКВЕ МИНУВ. МХ У КН НВ ТЕ пи і ї ат НЕК В ЕВ КВ ЕН 5 ху Е ЗК УЖЕ КІ КК УК НУ 5 їх ІК що СУХУ КЛ КК и В НО В КК У НУ їж Н МЕНЕ КМ КК НІ ЕНН КІН ЕК НН АК ІКНІ МИ ННИХ їх КОЖ ТНОНЕЕВИ КН КК В ВИН КА с дації Мен В А О В НВ ВНИ ВВ НУ кт г ї ХЕ ЕМЖК ЕН НК КЗ КАК КК КЗ КК ЕЕ ВЕК І ЕН ЕХ ТЕ ТИКИ В ИН МИ ІН В В А КН АН У їх 1 і ОНКО і ПКУ Н ЕВ КЕ ЗАКО ПЕН ЗНАК я ЗВ УМХ В ВУ х га В ОоКовБииа УК КК о и КК и и З НК НИ В ВК М КИ и Ж п КОЖ ПОЗ ЕК ВІК В ВН жо І КОНОНКО У А В КН КА В КІ жо ЗОВ М ПЗ МКМ НИМКНиКОКНІ Нв мЕ КО ВИНІ КІ ПВ КН А в В ПК НИЦІ ЖОджх се Я ВИНИК ТЕМНЕ ВН НЕ ВВ ЕН А ЕН НН ПА МЕ Ж Тк ПОЗ ОКІ НК ПЗУ В КН З и МИ В НН ЕОМ БЕ ОБУ АН НЕ ВИ ОЗКИКНЕНИ ОН Я ПАН ХО СІМ КВ ЗОНІ МИМЕ ОБ І ЕНН ЗХ У КО КМ НН И НВК ЗНІМКІВ К В КЕВ ЧК Х КОЖ НЕУЕН НК и КК ММК МНКИМ ЕК НН ЕЕ КЕ НИ ІА НІХ ї Ч ННЯ УМ НАННЯ КК КО ВН І В А М НЕ А НЕ ВО т КН КЗ КВН КК МВи М НК ВН КЕ НН НЕ НА НЕ (Я х Кук яке вки Ки КК оно Кот В КК ХЕУВСТЕТЕ КВК ВХ ОО ВИК КНУ КЗ КАМ ЗІЗ КВ ЕК З Кох ТАТИ НИ КВН МКК ІНКІВ НК ЕН МЕН НЕННЯ КИ ВНИХ (Я ве л каса тукиї ура х МК ЕККАКВКЕЕ КАК Я ОКО ун КО ТЮщ х ЕЕ НААН ВК АКА КЕ НН ЕВ НН КН ЕЕ ВХ МОЖЕ ТЕН НН КН КИ НК КІМ НЕ ЕМН КЕ КЗ НА ННІ НМ ЧЕ х УЗН В В ВН НН В ВН ННЯ х НН: цх КОМ М ВЖК КИ ЕН ИН ВИ М МДУ ї Я КК ОДУ В ВН КК ПІКІВ М : МижауКонКчк вв ВЕН НН ОН ВВЕ пон; ких її ї ж КЕ: Кф. У ТЯ Зух Іхх ПЕТ ЕЛ М ПН НК М В Я В НН М КО ВН КВ ї дош КЕРІВН ЕК НУ ЖК НИ В В Не ї дз ек МІЦНУ їх у 1 хН КУТУ КУКИ КВ ВЗ КК, МІУ ЕІ ї ЩІК ЗАЦИМИЕ. КАК МЕ ЗК о ВЕК КМ КНВО З МЕВОКАЙНМХ З ї Е кож х дО туту Ж нт. якщо але ко ск оку Ук ВК, ца дужок ший ї Р я 7 35 А ла За дБ о ВО ЗК НЕ Я а а в ВЕ В я ВН БУВ ї ї ї З ГЕ ях ще Ух іх се ху ЖЕ Б с її ї г Ж 1 : Генон р зрестою чому печу : «нг, 8 сг. В рек нлякккКкн ОК ун АЖ дних соски о Кік А Кн КК ОКО дн ах мех конку Кк кінні нки их і В В Н Н хх ! ща : ї Н Н Н 1, з : Н х х ї і ї Е Ї ! Е х В « і ї х Кб ежую Чия ще ІЗ ї Н ши е5ВЛЬНе КУН Я х Снайке ко ння Н Н ж ? - НК КУЦ і Н я у Бі ї Н ї А : Н ї ; : її , : : х Ї : : Н ї х Н ї су их 5 ї ЩО ПЯМ р : й І : ; ром Е ОКР т СЕ с У : і Бе ! ше НЕ. С щи ! ру кфоаряї т : ї М К СК КО. 1 У Е їх Е: ї Ше ан ша п ше : роххх ї они НН Не НН З ж. ї Ех : ї мо 1 я ох як ї : і г ІЗ рожЖ 1 нене МЕН ие Е 1 ж ї Ко ї 1 : хх ще зх І 1 Є ї ї Кок з ГУ Я карт пк : от» х ва КО ї ї 1-5 й Коди Я К ; І хх х Ви гне З Я ї ї 3 1 ї --- Н КЗ До й зд рн ех о я ее же «ей М-й вне пенні ней нн і ж ке зн рн У Кт Во ї я ВЕН Ше : їж Е не НЕ БВ ї а : БО Н ї КИ НЯ ї ї ї ло і же В Пен Не те ї хо З ДЯ : Й пе Ті во ; я ; Я и: ШЕ ЩЕ: : Н ! ПКУ г: сек й в- ий ве | фан в те -- Е я У зн Кун ї кри КО З Мо ; ї ї ї Я : І Ер І ни НЕ | ! і Берн БЕ кі ж кн ие | ! ! і Я: її що і Б шк Е ї ик хо І ОО Я ї ї жу Ж ї ННЯ й, Н : я КК КК ПК М КОКО ї 7 В т й Й й ТЕТУ ї ія х я Хо Н ще т, 2 у; Ух Ся ГУ х дк Фе ря ж їх У З ШЕ щи яко а К; ве ОД ся и що я ой Я Бо щоех дій я й ще : : с ши АК у КЕ КК В п о и : 3 ; М п нн нн о о Ні ШН Н ї сих п Кит ух. пт Кк ши кі п ЖИМ Тк хх ех М ах Н ве З он ен п ше шини Її са НН ЗНА Хв АХ що Я НН 5 Ж У СЯ ке ее ен Кс ї А. Ох - кох ях як зи С Як с: й г Оу вх ча ак я -К І З ще М я що БО о як Ух ща : МО КМ І В с т МК ооо ОК ож ЦІМ зна 5 ШИ и а ШЕ І ї Ох Сх Б й пух К КУ т кічтрУ о Як: оку куту ЖЕ т КК Гете Ок спадом пору ен ЧО ек т сі вкюх жо» 5 вх»
х КУ КУ З г З їх я КЗ У Ко ; їх А 3 Же є ЗІ ЗЕ ЗА ЗШ ЗІ ЗЕ ЗВ ЗНО НН З ЗМ З: ЗІ КК х ж ТЕ ТУ ТР т зт тб ВЕ Ве БВ ВВ яв Ба Ва Б МВ ва Ва б Рот тт т ТР ВЕ 5 Ве В ЗБ а я ВВ сова я ж ж ЖЕО ЖК ЖЕ ЗР т В яв ав ве Я ве зв Ва Так во ВОК Я т В г ВВ ва ва 8 85 ай ВВ ве жна ТОЖ ЗУ ЖК Р о тк УТ ТТ ВВ аб ав в аа в 85 ве ВИЖ ОО т тт ТК от тб ве 83 еВ Б 5 5 ЗВ ВО Вин т ОТ ож Жт ТК ВР її тт В В ша Я В ОВ 55 вв ЗНО ЯК Же ОЖЕ жк жу ЖЖ ЖЕ ТТ ОВ Я Б В Б еВ Я не І ТЕ Р В жк ТР ту ЗТ ВВ ЗБ БУ Ва Б яв 88 яв кваЄ ТЕОЖЕ ОКО ТК ОО жЕ О ТУ ТР ОТттТ Ва ще Ба ва В я ОТТО ТЕ живе ЖЕО Же Тр От тт ВВ БВ 5 Бе В Б ВВ тт кВ КО ОК Р тт ут Ве ВВ Б Б Б ВЕ ВВ ЖК ТРОЇ МеВ ЖЕО ТТ хх ж ВВ ВН ОВО я ох ох ох ЖЕ ОТО ТЕ У ТЕ ЛЕ З т хх ВВ ВВ і ЗЗНи ЗИЕ НЕ НЕ ВИ ЖЕ Є МЕ Я Я У пев ша пн пп пово ше в м ме М з а З У мож? ТЕ Ж тк ве БЕ ВБ'ОВЕ БВ ОК ОК ОК ОСТ КЖ ОККО ЖК ТЕ жа тот ве б ви БВ Б ОВ ж ТЕО РКО ЖЖ ОТО Ту зві тт Вт В Б БВ Ят ще ве я ОО ТРО Р К ОЕОЕООЕОТЕ воює тт В ВЕ 5 ВЕ В я БВ КО ТЕ ОТ Р тт Ж то лт ин щББ ЗО ВВ Би Б БВ БЕ 5 ВО ВЗ Вб ще еВ ва Ба Ве щмозоминс вБ БВ Ва аа БЕ БВ БО Б 5 ВО Б еВ ВВ ва Ва В ЗОМ Ве Б ВО 55 БО Б У Бе В 5 55 8 85 ев БО 8 кВ ве ва ше БЕ ВЕ ще Я ве 5 ща Бе З Ве ше ще яв Би ща вв о яв ви Ва ей ав ва вв Ва ве Зв а ав В як КН Б БВ Є Бе БЕ ща ЗБ Б Б Я ве Ва В БВ В ВА и сон ни не нн НН НН За НЕ НН ИН НН ЗЕ ЗМ Уже НЕ: М за З ВХ вв З ЗМ: З а З М З МС я МИ НК ОБ ХЕ ин З НЕ ЖЕ ЯН НЕ а З ЗМ ВВЕ З нев ях ЗВ ЗК З МВ З З З МИ З Я во: НВО и ВН З еВ МЕ В НК о ие я З я ЯН НН ЕК в В менЯу КА о з а ЗВ Є З КУ Б ЗК ЕЕ Я ЗО з КАМИ: ЗЕ ЗИ З М З.
М Я п юс З а ее нив нки ни них НК о В МИХ ЗНА НЕ ВЕ
«нг 6 вин нн ї ї : Я у й х що - хх ща Бе з ; їж : 1 1 ТОЖ опи 1 Рот ФК, г ; Мої мевосфенУ Ж х г де. ке ху. : Га ї Ттміку дух УВК 2 ра ке ЖЖ ЗНУ х . ї Сиїьне кни ня , о лВже жене ! Ко і з ї : рок ї я : з ї ї ї 1 хз З щі М :
щи. дено я ї 1 ж ІЗ ї і: х ТО ї ї х їх ОХ ї З і; 1 їх ї ї ; 1 ож і у і : ; і у : їж їі дюкєсесеці ї ї ж а а: х : ко т ії ї ї З : 1 ї Н десесое : : 1 ГУ Її Н Я В Н Їх ї : ї ї ї ххх ї ї 1 ш : і З . 1 Ж ї 1 Ж Г : Н 1 х ї не ИН Я | Н ї ї Тео М і і і « Ок МК. ї Н ї ї питилиии х у є рі Я і З ше ! їОе ШЕ і | 3 ї є !
її. їі і і З ї Зх Н ХЕ г : Е Ї ї є : ЕНН ї У х ї ї 1 ї ї ІЗ Хм ї Із ї Е ї їх ї 1 ї х їх Н Е : Н 1 Н ; 1 1 - зу : Н Н 3 ї 3 ОХ М ї ї :. : 3 ї ї х у Н кА інн ї і І ще і її Ге : ї Н 1 ІЗ го : 1 ок : Н ї : 1 ІЗ ІЗ і х у ТОЖ їі Я : і : ; Ех ї її Я: : ї Н І І І : : : ї йо їх 1 ї У ї х х к к Ф. х Кох їі Я і і х 1 ІЗ КОЖ ше Н ТОЖ о ї і ї 1 ї х ї ІЗ Ге Н Н но Н Ї / і 4 г ! З І Ток ! меж і ОКУ З : 1 З і І З ї : Е : о й їі ; 3 і ІЗ ї їж Н ІЗ т тож хі В 1 ї 3 ІЗ : НН н ї и їх і : Її ї в ї з Е ї : 17 і : Н Е 3 Н рок 1 З ї : ро ШЕ і і | ше ШЕ ! Її що З : Я 1 і: ї А : гу : ї ї Кк жк за ї : В ї 1 ІЗ ія х ї ї х : ї їж З 1 : Н І ї Ме и У М х Н 3 Е кої ї ЕУ : ї ож 53 : З Н З Е : 1 : У І ї І сі ї 3 : 1 ї ї ІЗ ї х. ї у КУ ї у Во 3 їі Н і 3 ї кож ті ї З : : ож ї 1 ' ї х х ї В І х г ї ї Ох ї ї ' ї х ІЗ ї хЕ ї у Е т Н т їі Н ії У х ож : з ї : шк -- Я 1 Н ї ї І: ї КУ 1 1 ІЗ у ДЯН: Не они нн нн В КК А НК ї КО ти і Її : їх : от ук х З Гак сЯ і ЗЕ Я ЗК х; Х ГК С Ку ГКЖ к х. КУ хі х ау х ї их СЗЗ сн ук Я У ве Не УЖ Ух Ух З. се В Ж х х : ЗОМ ОБО. я ТОН ЗМУ НК. ЗОНА ЗК» : Ї пит : : реж ех: бою екв хамх у очи г. КУ Я сх и 5» А ІЗ : ук МЕ Зх КУ ої Я ЗЕ СА у Є її СикЯ с, ин ОХ й Кт. ж хх чи ух, х ех, СОЯ : БЕХ Мех КК КУ: НН ев З і І РО Ї : : : їх я є Бо Н : С вик Уки Її У СТ КЕ БУ Зх КЗ Ка І Н і Генона т спало вУу Орач х і ! о я я КАК і о п п а о а м «ж жо ме ЖЖ жк Я з в а екв ех еко ЖК У жо ЕК КК УЖ 51 5 В ї ї ех ї в в кВ є з зе З ЗМ НН НН ЗНЗ ЯВИ : Ше не не и сн НЕ КН Я Бо т т р ОК т т ОНА ЗИ НЕ х ЗШ а щи ЗК ЕЕ ТО Ежен: М У ни кН не ННЯ на не ІНН ие я Зм я ЗМ В я ЕН Я Как кеш а е з М Ме а я НЕ ХЕ ВЕК ВИ БЕ ЗаННЕ ЗЕ ННЕ З НЕ ВЕ ВЕ ЗЕ Ж ЕЕ Я ЖЕН У; МНЕ Я ДЕ У ЗА З ЗВ З УНН Я ЗВИК ЗЕ МЕ Я Вр БЕ нан я Зв ЗЕ ЗШ ЗЕ ЗЕ МИ З НЕ ЗЕ Я р кош як: ЗУ Же я МЕ Я МИ ЕК Я ВЕЖУ Ток тк ТЕ отр отт т Ба БО КОКО Ст Отже ТТ ЕВ В НВ ТК ОС ТЕ ТТ хх БВ ВВ ви т РО ТЕ ТЯ я хх ВВ ВВ рим т же ож тт ве Б Ве ВВ В т зт оч аб ви вв вв яв жав тт т" ВВ Ва ва овВ ве Ве р тт Вт вв В в ат В в БО ОВ 0 ту В БО ВБ Бе ще ВВ В пкосвню В еВ не 8 зв в ве в позив В БВ ЯЗ БВ ОБ ОБ 85 5 щем! Б ВВ Я ЗБ о ме Б БВ меНо вв ев б яв во вв ва. ве ко за Ве 55 55 5 а ВЕ ВЕ а О з ШЕ з НН НН УНН Ше х т кое зе: ЗМК Я НЕ Ж ЕЕ М ХНН Я зво КОЛЕ ОСБЕ Ж ТК Я ту екв Ук і ЯН Ж ни У ЗМ Я ЕВ Я І ЗЕ ЖЕ З ЯН кр ва ШЕ З не ж м я ЗШ В ЗМ М З В ЯК Я зе ге не ке ан у М у в у ЕН Я
Фів. З
Н : щеня ї зе МКМ т : У І: я й ння і У 8 г й роках ЖиХ ТИ ще ек, Е АКОТ. еко дя У шк, Н в ой : скофйннх У В-З ЕКО Ка й Зд Е що ЗОНІ я Ух х Н ту Н КЗ не їх ї М дюн й я ж : т ЗІ СЯ ще я ; С : я 5 хх ; х жк ї Кча ша Я й х, Ж і Б хх 7 КУ т я; ї ж і в дини х х : ж зд ї ДК у х : М Я дез чем Н -Е х ї Ше х Еч Н ОАЕ: ОО ; : що ВО У ох НЕ аю Не ї А ох Ох Н Модне І К5 кя Н як що ох Е с : вон ту : я Я Н
КО. ж : - 1 : Ко чо Н як ВО. Е ее Н і щої : Пн ї : оз - й Кене пе НЕО НЕК чи ЗА ДИИХ, ЗО ІЗ г : - ї ан кю М їх ее ЗУ, . в Як ОМ колки к- ших роя і нео ТК фон Я З нн ВС їж АЖ ОХ, Й Вй хх У, Шо ку - Н шлю Ух ме ї Ге ях щ : з хх хх ї мит ох Ж я ШНКЯ КУ их що БІ Ж їх Ух : Я Ух ще Н - Я щ : о Б ях : КЗ хх що ся м щОВАВ хх х Ж ! «7 х й В Ж х хе шик! Є ШО КЗ КЯ : я до і - Мих; Н доки ех й КігзатЕхе Зі Номер ластюа и ЖУК чі. В оо ЗЕ Я сон жуфскуккик как ев му Не ож се фсмуа у ВЕК они ! бюеперичент 9 Вази мервами ЯК ТУ ІМ У її до Ко вч то. ша КУ ово й з. сет Тх се зе ши ЕВ Ж С С Ен -т Ж ож ЖЕ Б КОЖ ЖЕ я КО Ка ак Ох З че есе шЖ Ж я Е-зй х ОО ВА, й Ех шов Кай х : іх Е х Жду в; ту ков ВИ Ко х ГОМ я ж Б я БАВООМ пох їжею Ук : нн в кн сн: НЕ В ЗВ ВНИМ а ВО КОВО В НУ Номер пнетка мінх У Ще ї м ше і : ї : : : те во КВ : : КЗ : пи жк : ши М Ка х : ж 7 і Не пу : с ! Б З Н с і 0 ху : г | Ж сек х : Н Ку ще тк х : го о ок р Пежо І хх : ш? п їх Н У : дю же із : м Н Я пе по : ж і: Од х, : су ; ок т : й і Сай Я Н В | в У і у З 5 БУ : Ме: ка Ж : КОС: я : У ЖІ я: : Ко : ей : їй ооо : ве : і Море нияка : 3 КК ЯК ЗКУ : с а п и В АЖ Є -5. Зі - з жа Е ЕН ж Ї з нн а КК ж КК В щі нн нн ще са и Н ж Н ї - «КИ пи о мн в п но їй - х «ХХХ ХК УК уККК соде
АХ. : ме З ОБО, Ме ЩЕ и еВ й. ях . ке в я по хе і зд Таж М оокаину за ВІКО же тЗ З «хфккклккнжх Бе В ДНК он ДЕ СВК Е ЗК у А вва хх ' оореочнни У я . В | лов що і роз з х 3 ; а ХХ «фксссєкххх, нн нн нн у мн ЖК І: СВ и у -к В ПЧ ох х хе : Зх ня х й х Ку | В щя КУ З Ге А у сок БУ ТК ! сх С ОМ З є 000нж ТХЛЮЮ гу ; Як В: кн на а м п п а а З ; с, ще ї суб я х - Ж Ж пе ня МН НК о я ЧЕ ОО Ще КЗ х У в ваш й з
В. й хх м Н ой ке І сі ке : од їх -х Косово і; рооЛо че К у 7 й їх 5 и їх их З Я ж їй тк Ї кк й : ее Її В я о ОЗ, Її 15 об киж мр пу Немев знотка іх нн нн НК НН т НН ж Я х па і Я
Фіг. 14
МИХ - Б що хї ген ши ше іх тт жт їт вв ва зва ТЕ тт її вв вв ВВ їх тт ж ви яв вв сек тт ж вв ВЕ ВВ тане тт її вв Ва В ЕІ т їт вв ва Ва зкВоваи тт її вв вв ВВ вче тк її Вб ви вв Враз? т т вв вв ВВ Се ТЕ т в ВБ ВВ краю тт тт ве вв ВВ ія мо її зЗж вв 5 ВВ зо т т ВВ 85 х ами тт ж ВВ вв їт іназоне тт її вав В її МОХ тт її вв еВ ту їн її її яв 85 От щен тт її ва вв хро т зт ва 88 її вишами її зх ВВ ВВ оТу зщсние її ав ВВ Ва лу Меозоасвиа їж ва вв ве Ту Божа її ВТ ВВ ВЕБ ТТ веево тї вт ва в її каея Їж сх ВЕБ 885 ТІ ЖЕО її ж ВВ В Ту аз тт Ве в т СТ Те ке ми З ЗИ Є МУ МЕЗЖ Ж жов ВЕТО ТЕ ЯвоЗОосеміВ ТР ВЕ ов ТР їт ін? її ж вот її жов т вв ва чт її жаков ччптпнищ т о чит т хк
Фіг. 15 сн нн нн ном а нан нання: В і Н ка ж З щаї ! Її : 1 : се ї по НН В о п М ї І ; ж Кк х 1 ї ї Н т ї і ї ЖЖ З і я, г і : : : ї ! У : ! : ї Кох В їй 1 я : Ні жа ЗК х Ки к
ОО. Я : Н КЗ ї їж : га Я І ї Тожх і Ка Ж Н З і еае 5 ї КЗ с-й ; З Ж деко лю х їх Я Н ІЗ ГБ ї ї й Н ї ОКХ х Н 1 ОО ї ЕК Я : Ї їж ї МОХ і ї КОЖ МЕ у і Її: ау : : х м сх ІЗ " у ж, мк нан ТК МОЮ, Ко ! Ж рейх КАТЕ ї вч : їх ї ще: : я : ката Її -щ і ка І днк МКК 1 е я 1 з 7 ї МУ 1 ї т є
ОО. я Я Ко : ЗИ ч В б і їх ху - т, ї ож о моди ї ї т ЩАМ фр АААД КУ я ККУ ЕК УК МУК КУА КК КМ М я У КУМ тк кА їх ї Ето ! і К х дже ІЗ То ї со х ї . т сх ї і З ЕКЗ : во Н З 3 ях ре Рфрус і ау кК К ум ма Кк КАЖУ нн ІЗ : ї ох Н ї і Е Б: м : Е , | дві 1 як жк оо : Е : ї і ! З х У ї їх 1 жх х су же. ї Е ЦЕ 15 ІЗ іа їв 16 ї І МУ хх Ко Моя кох 5 ї х У Я : пеки акг ТЕ х Ночев листка ! : : : ї М оооотооототоковввововеккккк око ОККО МАК КК ов АК ККАКАК і ооо оо дк КК юкюсюний
Чит. іб в нн ни и інн о в и п п ї : ї і Ух х. їх ї з : х ЕК ся х . ва |! ї Е х о х КУ КУ ї : Ї І ї Вк. ї ; КА Її : за ий Я Н дяк в : й ї х Я Ж КУ хх Ж : дї Кз ї фо 1 х сх ї їх с їх с х С БУ х їж В: Ж ї хи се дх х Може ї Кк є їх Жое З Ка ах ї х З х со о зій їх 8 ! шо ОВК ї І я ї ут Ка : ен АН ОшНеИ КО Ж пекти Ге Н сен фе ЖЖ їж Н ше сей ТЕХ ХО дк а ЩЕ ЕВ о Ки щік З ЕК їх ї АН дек м Ж х 1 аж ле КИ хо Н т ЩЖ ЕН Н НК Ва т з к оо Я Я лок З не І Можу М НН сі й ї ВО З ки ї їх Н Бе Кк Н чай їх. ля. я й о Сула я же ! сс : же ро х хх ї ї нн а п В ї З ї Кі ї В си ще - К х х На 1 1 : с ЕК ї ї НІ 1 а їж 5 18 ї ї ї Е і і "фкухщях пот Її . Номер зиства Е ї ї Моюююююююююю юку юю юю юю юю юю юю тю юю юю яю яю кю юю юю я Кк юю юю юю юю кю юю юю юю юю юю юю юю ох бе ВЖК ско Ко
МЖК КАААЖА ЖК ЖК ЖАКА МКК КАЖАН АК КАМЮ ЖЖ ЖК книжка КК КАЖАЖК КК КАК юки КК МАК ЖЖАЖАЖ КМ Ж АЖ юки жк юю : ї Н : 1 ї ХЕ : ї а : Н Н Н «ух : у ; ва Н і і КЗ і «ої А Н ХУ дик КАК КАК ХК ХХХ А НК КАК ККУ КАК ХХХ М ККУ УК ху нАкхнннх» Н ше о. У : о З Кая Н оч «Я і К-Я : і ! си ! 1 ж Н дк ЩЕ о кі. яд че УК РОДОВІ. шо псафен ТЖ КВК, 3 ї ся ї 1 Б : са перемі 1 25 ; ки в ее о за Ше З нектеюдеюютт є кююттюттняї ХНН воетКиит, Я 3 ; і Кен жа Н ї а Н й нк денне ї 1 Ж ші Ме сх : З Же щі рана Н Я і Н їж Н ї 1 і : ї З ї З ї У ї мя ж їх вх сх У : Не: МЕ ЦЕ ща ще 18 і Н ср : ї іга ЕВ ї Помер лнетка ! З ї ж БУ ФВ ЗЕ х Ь У ще : ях ї Як ВК ко і сі : їх Е Її : В; ї я Ж ! Я см З КК ї Шк СКК, БАН і 3 і Би Е во ї тим ї Тк У де : ї МО КК що лав жу Ї ХЕ и ПЕК: За КИ : де ШО ОХ КО То Я сх У я З х Я я і в я ! о БИ Кз Е пкд Н КИ ї і й В ж ща ї Ка Я і в Най і З нн кох нон нн а В Ен ВИ : не м їй Б РЕ: ВЕн ям Кн ОЗНА ТУ ї т пк Ех дещо : зігуккЕхеа у густу ких Ку : повернете на гони Се
Фіг. 19 Бех ва КУ о н м ІЗ ї їх ; Н : Н : А : і : і : ТК ї Н : | і Е : : і В Н ще : Н К ше МК І ї : ее ак ! КОЖ ї де жо її І ше В ЗО і КА шк ВОДІ ї 3 ро Ку ї да В Я : х ї т ї Н сш Е що і : БЕ їх Я І іх ще Та зані Те Н ий пря ТК Її : й гі : Кок ї Кз КК. пек м ї 5 ЕК Брафо ЩИ Ї дк ЖІ а І Кк ї хх ех ї Кк й ї ч Н Б : Я : Н КЕ З щи : ; ІН В ре : Н Код да ; ! : щ -Е 3 й й : Н їх ї КУ : І їж 1 я : га : же : На ще ї ще : шжеу УКЖО Її ; ї їх 1 : ше ї : і ро Її : ї хх : ї Її Кокфенлннижкних, пили ююжю пою, о Ан ї і і Н ка і їх ЕЕ й оме : Н : Н ; : Момов аиетеи : же Ше» духу ся : В КИ ЕУК В : : і ; Ї Крюк км т М М КК КК ик Я о Ки ЕЙ, ота х. ак І де йо ооо ооо ово і о о о о ло іійо іо й аасіоісннья ї х ї їх ж ж ї сич В і ща ї В ї х ежих їх Довге листя ї ше Ту ЕВ й КА Я Кук сов куки Е У НЕ ях и БАНКУ КЕ НС | ї ше ВОК рено фо Е 7 й ; Її нах ши Ше ; БІО, ; і 3 х 1 к х красі і Її Ева Б ГЖВ : і ЕЗК ШЕ ШНЕК , ї сих, Е і ГУ во ше у ї : С Н ІК ганку ї НИ ДЕН ШЕ ВЕ ВЕ ВЕК ВЕ у Е ї ї кт Ме У 3 ск З ї ї Кі ЯН чи к- 3 ГЯШКУ з ІЗ ї ІЗ КЗ Не Зав нЕ чна; НК 1 пе Я і ІЗ : т, Й і ї КІ «В і а й ту У. А НН ак : З У ЖК і сонні: ФЕН. фей с док с п ДТ СА Ада ДАН А КА фе АКА АТАК ! водними и ЕН а Ен ! і з зи ГЕ: ж ЕС і: ОБР се а осв х і 1 Ех 1 а ї ІЗ пк : і НЕ А НЕ те Б Бр ЕЗ : І - 1 Кх ї т ЯЗ ох СЯ ї її ї ехж їх ІЗ шк на ОБ ЕлАЯ: Окис и НЕ: й у Н КЗ ж шини ши: г ШЕ ові | Е ех. : Ка ї хх 5 | ЕНН хе її х ГУ ї ї роза ї ГА ї 5 ГУ ЕН ї 3 її Е; їх ї ї З : 3 Ба Е ЗНМ НЕ НЕ З тра Е Н і В Ж : 41 Ба 3 1 3 : З з с з і: блжх ші АМЕИЕ Е Ж ВДЕ ЗЕ ЗЕ ШИН Я З з ТТ: ж З ї джнгу Ен я фен. ее пеки о и коки СС КВ кое ке ши оо Ме їх ж ям ее ни ше НК НН Е НИВНВК: т. їх НЕ МЕШНЕ З мох Мо І ВО Ї НИ ЕНН у НЕ ЕЕ ЧЕ З Шк 7 П ї и Кох Кох КУ ї 1 Ох х її 1 х ї Н Гі 1 р У же НН ї у Я х 11315 ІЗ ший Е 1 КЕ ї ; ІК кох ї х 5 х 11 їх ІЗ "7-о ха 1 КЕ ї 7. ІЗ НК ї ие КК ЕЗ Та Ех ІЗ ще ЖЖ перо р фон нн и ни ни ни а и ни і ж це ї ї ІЗ ї г; 5 Кот КУ з х ЕЕ ї х 1: їх х ікс НЕ ЗНЕНЕ Е Н ее НЕ ШНЕК ООН І 4 іх ї к А ЗЕ ШЕ Че ШЕ ЕН К.М птеит і. «БА Б В їх ІЗ і ГУ ї НУ ЗНУ їх 5 КУН и І х МЕНЯ : ї хе свої Ко КК і ЗЕ ИН ен ж З 513 Я І ж І вар ЕВ ШЕ Е 11 і з Меси ІЗ Я г чен ЯНА 3 ут 3 Ко ЩЕ 3 ЯЗ кг : ї ще ІЗ ДН НЕ НЕ яае и ШИ нин На ї Од х БЕЗ Я ї ї 55 і ОР ХЕ СЕН чну : ни З КОЖ ї її ре НЕ на Нр КОХ и НН КК і 1341 і фон ще ники В в І ЕЕ ЕН Не Е ОН ЖоОтех У НК М КК КН ї і ї й Я : : Е ;
я . 4; ч ї. во о Е ї Ко в БжЯ т 5 з Ол х СЯ Б х Мох ж; х. Е щи вах С хх се а кА Вей що ще пен В що? Н Сон ве НН и А В НН НН Н Касети КК КМ ЖК ск ах На о КЕ НВ ї в сх їх що - Я Канн НН: А ще МИ. Х Кок в ІЗ НН м Же ОК ки мож жа в і ї -х ВОЗ о Кі А НО А МНКІ і 3 М пк СЕННЯ що НН и иа НУ» ши щу і ! ку ше: коша п є в і і я хо Ж КУ КУ дае ПМ ОХ Мох І ! З о чи ОК як я в. ще У і ї т Бе п їй м ко й І: Е коси я що і ї КЗ в е ї : ї ї ї ї й й Н Ж важка ер и З А і з сот У сСидянОомУ ПЕК Н Чне хі Ж, жо ж не м яко ко шен:
ши ів шк и ЗШ НЕ Я ав ж же от т вв рі тоже тео т ВЕ ОВЕН ТТ Ор отв от ВВ т тож ол ве жрі т т тот ВВ аз КОЖ ТЕ ЛЕ ВЕ виз я ож ВВ ВОІВ кож ТК ту ВВ жо з ж тк її Ва їв т жк Ж ВВ ва яв жов ВВ я т чт тт ве 88 зв т Уг х на ВВ знахо ЗТ ЗЖ хх нв ВВ р ут тЖ ВВ НВ ВВ ря тт ва ни ня ВВ рак тт ВВ В Ба ВВ вра тт на а вна на сосна їт ве ва Би ВЕ МКМ тт ВВ В еВ Ба кис Мма че її ВЕ вв БЕ ща Вам її вв ва ав Ве врада тт вя й ня яв же тт вв ва яв ВВ ЕКлУЕМ тт ва ви ВА ВЕ мая чт ж хх ж ВВ ке ТР Ж ЖК тр ОНК 3 ре В я ше К МНЕ ЗНЗ ЕКО тро тр т т в їхряаї чт ж ож т ВВ вах ТЕО От т Ва
ЧФне У он нин он Зав ен нн нн нин и нн нн он нн ванн вин вано зони ІЗ году КК Її ї дю ОА ї - Її т ї Е Га з і їх 3 Ух ІЗ і МЕ НЕ і БеЯ ї 1 ї їх СЕ : Ж Зх І: ї їх и Бо З ї їх її д їх їх ! з ОКХ ЗО по І: т КО хе. ще ї Ес» ОТ СОМ ОМ їх ' ІЗ хх пучки : Кох 1 З КОЖ ХХ хе. ї ї ї шЕ ОМ Н їж КН 1-х І їх м ІК є ря ТО їж ї їх їх Н їх 3 і : ї М Хол Ж Кл КУ ї 1.5 їж сх їх і їх Я Ух ї їх кжх МНК коЯ КЕ що І їх ї-й ЕОМ ОДНЕ Ї ЕД Же Те ї їх» Ід У 1 Я ОО сн я З ЗНО : їх Ж в Ед дк РАКУ рВад їх І ЕЕ що 17 НК х у КО Ех
: 1.5 Х НЯ т ї в НН 5 КЕ Я іх НК ее їж їх і ЕВ СОН ЕКек я НКУ 1 ЕнШй Ж Ка г м БОНН 5 ї 1 що. І: ех ї- ї А ЕЕ 15 КБ їх г Я - ТМ СКУ ї Еш Хе 15 Подих КВ КОХ НКИ ІК ІНК х це НЯ х їх 3 Ко : 7 хх : І СЕ У рай З ж їх ж їх ї : ЕД ж ІНК НК т КЕ Тих КОЖ ШЕ СУ пе рак хх ї сх 1 5 (Я Зх Оу КО я М ошю 1 1 ЖЕ Коїе ТЕ п її х Ох з хх їх НВ - КОЖ ел КОХ ТУ я Іжа хо Ж На У Код в ї ЗО. Б ІК СМ УМО ОО КІ ї ЕЕ. ї 1.2 КОЖ ВО. сину тях ї зн же Еш мо В ТА ко КЕ а І НЕ Я 3 м т 1 хх рххв и ВО І ТК НВО хх І Ех 5 дк 3 х їх ух їх ди МО КОТ КК СХ вла ГО ІЩЕ КОЩо Ох 3 х У ї її 3 Бах дк м дк КО М Ж Не КУ Б Я 1 КО Ох б Е 1 ВО та ія дБ в Ж ЖЕ Й МКУ як МО С хх їх КОЖ ! і ЕД шк шим І МК З Ух ІЗ Ж. Ся І. з ! Я І п пуск І жи В ТМ КО ще і НУ Мене Ж ! БОз р м КЕ к КОМ КК їх. КОя Ко ЕЕ 1 КО І Я 1 С Фуротму и Мод А М ВК Кок ех ія НУ їх 5 КО, і Н 1 ех Р ему Ку а ДК и ЖЕ Я ІВ хх Ж їх 5 ! ТЕ І Кен БАНЯ Кк КУЄ ке ІкУ т хм Ох З Н ЕВ г я М Жов хі ТІ: ем І їж ЕКЗ їх ГЕ Н Ме КЕ і ком п МО КУ ох ЖК ки, Ком. я І У Ен 7 5 ех о РМ ІВ ОХ ЖЕК ЖАХ МО КЕ Кх р Іще їл Кол о Ки г КІ КЯ Рош т ЖК М, У - т м ке хх Кох. Сея Вк і У де М І МЕ що КЕ В Ши В Ж З 1 : З шир и др ДО ОК М.Х - так р ше Ж І Ж м І 1 : І Моро В о ЖК КК НЯ КО км ОКО ОД а 1 ЖЕ ; Її щу З г 1 Ж и М І ВК КУ х ЖЕ МОТО ЖК Ж А КО 1 5 : КОЖ Лю МЕ ТІМ па ок МАМ вжи МО 1 ОМ КОМА - НЕОН нн в ни ня МО ож 1 Е ЛЖВ ЖОМО жк пани а В Ж КО МО Той ЗЕ ОО М жк МІ у ї т СМ ЕМ ОО М ЕД ГЕ ТЕМІ ж ПЕЙДЖ К МАВ їх ї і Км МО КО Ж и ДК АК в МО ВК у х 3 ях 1 ї КО У КОМИ поко ШОВК ОК ЖЖ Молю КК М кв шк В М уч ї з і ЕК КЕ Бу ОО І ЩИХ Он НН и НН вно Н З Ко о і Хх Хр КОКО МТ х ОВУ КЕ І ОО Ж Кри и М С СК во ї х Ж їх ЖК тхж ОХ а о - з УКХ ХЕ. Ух З Ка хз х КОЛУ, Ї 1 НН в р НЯ КА і ща жо ваш ЖЖ ЗБ Н і ЕЕ І Кіишк л КМ ЖО КУ УК щу їж щ Ж Ж Ж КІ ї Їх ! ГУ Б БУшКНО ПУ ВК Од Ж ЗИ ВО, їх ге їЖх Ж Ка ї ! Н 1 В. Каже Ж АК СО вищ ОКХ КОХ хх КУ НА м кл хо Е Н 1 ву ІЗ Мкотшкх М КЕ М как РІО ТЕ Б СУ 1-2 Не хг с Ге Е : 15 ще КК ре им В Ж Ух ЕЗхН ух її їж їх ГУ ! : Я х Вам ММ ж КМ ЗУ Ж, я й Ка ЕЕ 5 НшКЯ Гая Е: р мин сх КОЖ пак ам ОС Ж КЕ Яни СУ ІЕЕ їх х її Га з : Ежя Я Коул Ам М Ж У ї і іш КІ ОК їм їж ї ; їж я Бо ви о ІВ ЖК Коха Кк їх КАХ ЕН ї їх ху Тк г ФУТ СИ МК Е ВК ін УЗН НКХ КОЖ хх іч Я Ох УА КТ : щ 1 хе ЕОМ ща о кВ КАХ Я го пах Е ЯН ТА Ком ! їх зв шк ОО о КВ Х КОЖ ВЕХ КА Я же КУБА Зак (Я -к З жк хх ЕЕ І ОО МКК. ТОК КТ КІ БУ Ех і ї ко злет ї р» 1. 5 хх. БОЖКО п йо ЕХ ком, ї ах М х де Жов, І їх ї Я На УНН се ВНУ ЕДЕ Баш во її ПО ЖЖ їжі (7 ї к і ЗУ Мох Гея 1 ТЕ ой ЖЕ БУ то їх х ДНЯ -явйя Н хх ро ГІ КВ яв 1 КК ка Еш й ги їх У Кл ; З ж їде ЯНоя Ж. р ЕЕ 1 Ж ТЕ ТОВ ІЗ ї ї Ко ІНК З : Б Еш В 1 ПЕ КЕ Я т ХЕ б п т їх ї а швея Е : МУ ЕЕ що. р 1 ху КО їх 1 кЯ х НКУ їх їх ННЯ їх Е : ке З х Р ї 2-х їх Ге ух тих М їх 1. їси їх ГЕ; ! Н з ЗО У НУ ї КН КОо. 1 ж ІБ КІ ж: 1 КОХ ОО їшЕ Ку з : дк. 1 сх ІЩЕ : поету Ж 1 1 КО БУ ї НН ЯКУ її їЕ : 55 КУ Я Я : х І Я КУ Яся, їй ї НО їх їж : ох З що ЕЕ Н ї ТА 1 мк КО хх Об Ах ЕХ Е.О їх
Н З. ЗУ І Я ї х ЯКУ Тжх ке Ех їх іх І ОХ 1 ;; : ле і ІА. 1 т ї Хо 1 ме гу їх ти хх їду ОКХ : ЗМ М І Я т ї КОХК КК ЩА Б рми їх ще хх Зх ї з Мох Її" Н х ї Кл, НЕ х хх ї РН Же ша Зх. ї КЕ: У ІЗ Н х ї ВАХ. хи х а ї і х ї 1 ї гани І и: х ї Не Тех Н МУ ї ї ї їх 1 п а кн п п п п и Со В НИ В СО В ї ї КЕ пи ї М й ї 1 ее і КК 3 СН ЕК, упро КК В Кк ккккан НеЗБЕВИ ТЕН УКВ Х вн М В аа о ВМ ЕВ ї : : 3: НН Н і. В і ї ї 3 3 3 У са с КАЖАН АААККААК КАК КАК КАК ККАДКААЛККАККККА КАК ; ї З я КАК НЕУ 3 Н Ї ї ї 3 ї Її ї В ї Ї ї ХВ ТА. ї і її КЕ ї 1 ї ї ї ї ї : Н Ан Аа и нн на ни ники ння КК КК КК КАК КК КАК ПЕК їх х. в ТЕ ї х В у. х х х СІ ї КВ 1 ІЗ СВ ї ї х х ї ї ї КИДО ОМ фс нн нн п п в В ТЕЩА | ї : х ї : ї і М 1 ї ї ї НЕ Ї : З ї ї ї ї ї ї ї Н «ЛЖК ня о ко Оу Т ІЗ 7 ї ІЗ х т т т ї Е МКУ | ї ї ї Її : 1 ї : ї ІЗ : ї песо а НН пес і Т і 7 ї ну ї 5 ІЗ ї гЗ В й чкахІ ї ї ї 1 ї М ї ї ї : х : ї МЕМ ХХ дну кн ек Кф КА в ее Кн нн нн нн вн ння КА т ї т В ї ! ї ї МВ ХЕ ІЗ і х ї Н 3 Н ї : Е х 1 х ї 3 по о о в КК в о о во ооо о о зоооар Ко хх й і і З З х ПВ 3 Коддкнки ї В й х ї Н Я і ; ї і КМ А З о в НМ х се ту ї т Я Ь і і і із й З з о НН НН в НН НН НН НН КН Тк г ! ї ї З І Ти і ї ї ї НК 3 . ІЗ В ї ї : як ї с ї ї як що х З оон ВИК п КК п НК п а КН пи КК НК М Я ї Н : ї ї і і і В | ї Н Н ОМ нн нн в в в нн нн он ни ХВО Н З ї : ї ї Н і Н В В І Н Ї п пре се не во: ооо ДН Ве есе зни ЗИ СА Кк «ЖК КК кАААЖАЖЖЖККВКЯ олива ни ноловвог ки ККД КК КК КК ААКААААААЖККККЯ кл УК КК КК КК КАК ДАК ккккююююи ОК НААААЖАКККВК КК КК КК КК ОК КАААКААААТАТТККУ сккккдккк кі кюк Хушаикх ІЗ ІЗ і ІЗ ї ІЗ 5 1 У ІЗ х х ІЗ ї ВК у і. х ї с ї І Я м х з ї ї ї К ще 3 3 Ежен ї ІЗ зх Ки й У З М р ж т. КЕ ЕВ ї ї ї ї ї Її ї 1 ї ї ї ї їх з ПКЕЕ отр кн З нон НН нн в ни они нн нн кН іон, нн знанню ПК З ї й ї я 3 їо ня ВАН ї ї : мн оон и А п В М п КК ПК КК В КК КК В і У у х З ще З і с. х її КЕ х Яке Н : : ї ї ї ї ї Е : х ї ї ОО оон ово нн ККУКУ КК Кт и У ДО км фАкуукх Гео уми в п 4; х х (Я У КОВБМОК КОВОЇ : ї 3 В х : ї ї. їх ї ІЗ ї ее Й ї Еіосоовн сх пен врзаосня: є ване т аа : го су я У нал в оваов волося и осо ння пополсловоя о кв зола у вилив нвлаплавни су АЖ КАК КАК КК КК КАК ААІ ВАК КК а зсноння с озна лжккккккіккко а ПИВОМ В ; В їв Ї В й В А : ; ІЗ ї у ОО й ІЗ т В т із х в і: у у ПАМ СЕК І З ї ві ї В ; В В ї у 3 ТОМУАХИЧАн ик Ам фе у фр Пенн зим зе зав: зв зання ГАМА ї ї т Я ї І ї і: ї т и ви и в и нн ня цим й ї ї 7 : : ; : ї По я ї ї Я їх ІЗ ї Н і: У х К х пон нн нн нн НН НЕ М ПН НВ ПО КК НИМ МХ З Н р З Н Й Н ; ї 1 І ї 3 ОО нн сення нн нн нн пн нн нн ння шин нина нн косо неон ана по ї х т ї ї ї Е ї ї Е ПВХ і ї : ї В ї Н ї Е ї Н ї ї 3 Во ЗМ зи ек в нки кекс кн кв ек коки ск ок кн зок кс вики ЧЕКУ ї ї ї ї ї х : т ї ї І ї ї ОБО ко Вих М а НН М КО М КО В КАК КВН УАДАХ З х З ї х сі і Пер Х ї В : ї : ї : В ї ї І 3 5 х У фен оно мн нання х гілок ля А КЕ : ї ї Й В | Я і | В 3 Н оо пак ння міс он мно о м о он па он нн ооо мн мини по 3. Н : х ї 1 : ї ї : ї ї ї з Нащо Я х ї : : : Ї За ї І 1 ї ї : ї ї ї і ї ї 3 Е нон пк и и п и и и и и и и пн и . ЗУ. ї х. ї З їх г ї г із Я 1 ІЗ Я х Ї я ї Ї т : т ї ї ПХТ АНХ ї ІЗ Д х ї ц 3 ц ІЗ ї х. ї х Е нн п п в о п в НУК 1 : Й х і ї : ї І: ї з ї ММ: ма КХ мин К нн 3 ОНИ чний ння Х ННЯ з шк КТК КУ ть жіно и В ль Кк ін же м Ж ЖЖ ння нн ет ую м жк п кою ж юю м М кни мм як Емма мн Я Кт Кене Зак Я хе нежК ка нки ок п Кан кн а ван . ооо в В БСК ще ПЕК Поу укісв вк суку уих киаку Ве ПМ. с та спежене снжкнванна ОН о пн УМО КК о в п цк Я дк со жо ВВ о Й ЩЕ 5 я я ЕВ х ва чак ние За ен А с в ОК Я МО З СТОКУ Кн др ПО КЗ Зо ХВ у ща с "ж о ще В ЗУ : КО ОК: Кл ДИ ТИ я а ше М и ММ КО ; о кА я А п ВЕ З Зеду веканаа СБК) ж М о і КЕ ШО, Ж МУК, Б КО й, ,ЗМИ з з ОО а З ХВ М к її 5 пе ен і мовно де ТещеНУВ во в х хравина я КОХ Сода Я Н Тоді код і му де 2 пранні Пж ке к цу С ДК КУН Ме : тк ї ПОН ОНИ тккжу її Ше й и ши ни се 00 ВИКОНАВ не : В ї ж суки я п дви ен М я фіг. 24 вещи Ган ее САНВЕНИ строю я ню льна ие оба яса Помон Тв чия СНІ у ; Й МБО КЕ З ЕН ЖОВ я кОНеВЕУТНІВ пане евреє ж нка ни и візновід» зла нвия відпоніь вмллоков в МК: : ще «Ж : ХВ «ВУЖ пікошок КК хезкн нн я о ш сок ВО ши и ВІК о ода Може ЯВКУ ее : я и Ти С Ж ГУдвУ . пев ї б як НЕ ї і Я ТК ї о ух ку ої ї х КО ОХ ЯНИКК ТІ рі 5 : зи М Не 54 т : Що ЗЕ. : і ОЇ і й й і : і Б ; яко яки Е 5 ї В: ї ож ЗО ! : : г : що Ж 31 1 Н ї жк « щ- ії р ; ! Шия : М Я ОО: щ ! ! шви ше ! мо иАЄ Кі : ї шк ще ше Не З Ї ЕЕ шими шин нн ши м си хо о схе І і й І І Ж ої і Я. :; м и ШЕ : ! ши : : я і: | з ї ше не А НЕ НЕ ЖЕ: З : М т дви її Ї у ї Ох кох і Я : ге бо ою | же шишише й ; С 1 Е У т В її КО а 3 г : и ше І : | сш | г Ж з КЕ Н ї ї з ї | 4 її : | ї : : УА КІ її : З и Не М З Я ЩЕ Шо овдня ЕН : ! ши БІ. : Гі Я : і ши ее : г х ГЕ | Я | ши ки ШИ | : ШЕ й щі 1 я і ши ше Я : її К г З х Кк с й я щ ше ко а у і їй їй ге 3 Ж зе шо о о щЕ «і Ж й ХХ он ни ОН К Кк: рек -ї де ке се Ка ма й Я в Ко) не х ху. Тех ЕЕ ВАН о тож ел
Фіг. 25 нм в пі в п В о п вив и пп оо пе ї СаО і і К М УУКУКК КК КАК КАК КК КК КК КАК ЖУК ККУ КС КК КК КК КАК КК КК КК КК КК КК КК КК КАК КК КАК КК КАК Ки Ї ; : ее що : і За ВЖЕ І ї Де - 5 в; рю. шо. жа х. ОО є СЗ ї же ВЕТО сек ве й. я х З ши ше я кох ох з НО фр х і соив В й і ЯК: това Е й и ик ї с Б. Кох ї ОО ї Ух з Сай Ь Х . : КЕ о у х со 150 і х я ек пічн о - чн. км, ох у --е То : ко з ї ЕЕ нн о п З Ко вх ї ех Е жк Ех ЗІ З ЗНУ гру а ях, а ска Я ї ше ше и ши и 3 і ККУ ЩА рух ї : Цемев пет зано а В ОА НН Бодя С чи Ск З
Чнг. об Писове вильнть їх Зайаа ши : Ме зів щей іо с Можу; Н сх хо ЗМщ КЗ в де КК Кк Ж : ай я, Тож ух ав ї я Все Б : с я ЗНА ши това з ОМ уж он КО сей ЗНО а в В ж Не я ОК зов, ши шк й КОХ лвной | 1 З (м КК о ех Кк ЕК ЮК ЮК ВК ЮК Мю ик Кк Ме ня кю кю юю кю кютттюю рі мк БЕЖ ен вон нн нн нини трос у ї й 8 І ле Ще се ВОММО І . ких у МО і еВ ви 7 З зоба ще зно ува задо іо «до КК укусу сексу Пещалнетка 15 сЕе ск Ак
Янг.
: щи Ввеоке цена оь і - 1
ХЕ . 1 шк нива ' й Аз ПК ж я я я я я яка МКК я я тая тя Та КК В В Ви М ММ КУТ А КВК КВ У УК КК КУ КК НВ В КК Ж ЖК ХХ КТ МКК тт птн нини. ї ЦЕСУ ! ща рен Е НЯ Е НЕ Ж ше і що Е дет МКККЮ Я що Ж Жахи який : ї хх хх Фо й сі 3 ОО хх 1390 Ен р п кв З вм коки ! ще Н Б і ей З ОКО ! зи і ; і СУ У ї докт Ж дещо і ож Ин и нн кН і хо ї жує : : я ОВ ово дод ки А ра кс НН І 8 ! ; А ВДИХ заБай зиа ач дгНЯ запа не вне ОО НЕО а ЗЕ За Ж -х ї лют ки ик овиКеК Я дужках кис у у шу кубку юки Н Тина зенено повер листя пе чаЄ ВИ НнЯ (ОМ Н Хо Зх, зе
Фіг. 25 ! Ззнметенчні дослідження в ОКР : Н ков НН КК КК КВ і ші ЧЕМ г ен Я зозве ж Я їі Код, ! БК х в КУ шко ї Н ие в За я З ШЕ їх дм й Я ж г ї ї тож КІ ях бра -7 ї ї Ії ка ї о су В свй - - ї ї ХХ і ХАН с я ХК Н і ОБ ді в Ку с І и РО ЖЖ дося нжнжня МОЖ киснинннни плин є мішжжжжнюня джкжляжжнних ї і є | в ши ше : - ! сек с ї Я Ек і ЯН ж с: : ще ко КО зт нн НН : Н 5 ї Н Н КО Е лик яках ї і їж В Мам УР рі ро : шщЕ І Я ї : ВУ Я р ЕЕ Я фохемнчетноююеє мн тку хек кох юкто ос сеюекккк скотч еккк кокс їж» Її ї Н с" Н ї Н Кон ї ї ї р Н : Ї їж і : Н її ЖЕ Н ї ї КО - БеЄ ку: Уж ная Уа ту чагУужу 7 й КО БУ ща ХК ХО Не ЖІ Н й - і Н й жу кіу тех ККУ, ск ху ги суха зе Урик той : Полепрзененої поеБерхн вт на лиж росяннУ і нн «Чнг, 59 Кз її мой
ИН я яки яння ккк як АЖАКЖНИ ТК пек АК КККЮ КК нн КККАККК ЖЖ, МАН ХХХ КАХХХ МКК ААААККЯ : У ЕКУ днннкєюєтєєяняя г. ож ВМ; К. ЕВ Н У ЩЕ КОМ птах Н ХМК КН Я КУ НК Н ІЗ АВНННЕ 1 й ї. Теж її НС : ЗУ ТОЖ ї НУ ЗМІ РО ї ПОНАКНКИНКИ ГОМ Н ї ПЕВНИХ ЗМК ТЕ ї ІЗ ЕТ КЕН ПЕН ІЕЕ 3 що МОВУ БО пд З ? ЗМО НВ ПН ВОК НОН і в па жах ока ВВЕ КЕ КНУ КМУ МЕВИКЕКУ РОЩО мл Н ТАКЖЕ ОК КВК КЕНИМНКИ Ж Н т» З НК КЕН ЗІ НЕИК З іш ! ЗАВ НЕК АН Ве МОНЕ
1. пек ї В Я ПУЕ НЕ ЗЕ МН РТ жу 33 Н Я ЗЕ: КЕНЕ ЗУ З Бош МК: якій ННЯ ІТК ПОКЛИК ЩІ ІОЖфОСУ ї СКЗ ЕТ їх 235 ПММ ЕЕ : Пр НВ ОН ВОНА ВНУ : км, зла с) Ех хх КК З МО еиІ РОЖ ках БУ (Ко ТОКМАК УМІВ ПКЕЕ ЗКУ РО о Я і Зал В КОНИК ПОН КЕКИ АН Н Ж КУЗІВ ВЖИ З ЗК ОН І до ЗОЗ ЗНУ ККУУ КВ : - ;; ЗНІМОК Не ММК МІК НКХ І. ож 1 ї ВИМ ПЕНЯ ОЗ МНН М ТЕЖ ЗА КУ ЗК КО ї 1 ОК. МПК ИН ММК ПІККІІКИ ІНК НЯ суку. ї ЗМК ННЯ МІУ: ІНК ЗНУ МВК ВИННИК ИИх МЗАН Ж пада з ОКА ІНН ПИЖМА ЗК КАК НН ККУ З МАН Я І ТОЖ ВВ МН КК ОКХ И КІН ЗБК КАК ВЕК НН Ж о з МК: ЗК СЕ НН ПАНЕ КАК них ЗиКНА Ж 1 УК ЖІ ЗМУ: У ЕВ ВН ВАН СІ И КТК ЗЕ 3 1 у МКК МАННУ ПОКИ ВМІВ НН ЕМ МУ КУ ТО ИН ЗХ ПОКИ ВВА ХІН НАВ ВК ЗВ НЯ ЗМІНІ КЕ ЗЕ 3 1 Уж І Ух Б В ОВ А ЗУЖИ ТК НЯТТЯ ее я МЕ ІБН. Еш п ПМЖ ЗНАК ЗК ПІН ЕК МОВНА ИМЯ БОБООеНе СОБК КМ ВК НН ЗИВ ВН КЕН ННе КИМ ТОЖ КОЖ МН КК Мне ЗЧИЦХВКК В: ПУЕ МІВО КИ ПЗВ 35 1 ВИДНО ККУ УЧИ ПИВІ ОЗ ЕК кеВ КІН КУ33
1. ЛЕН В КК КОНЕНКЕНИВ ПО ОК АНУ НН : уж ЕКО М пе: ТІК. В А Ук УЗА ЗХ ух З5у23 ЗЕНИК АЖ п ТЕН ЕНЕ ВИК ПОНІ МВ ЖИІНИКЕМНеНІВ ПН ККНХ : З У ПЕВНЕ НН ПЕЖО ЧИХ ВІ МН УК КВН МІНІ ЗЕМ Кохжжо КА УВА КО ІВ КВК НУ ЕК Мед ПІХВИ М ЗЕМНЕ ОА ПКУ ПВ ЖІ ИН ВИННИК ЕМ МІЖ МІНИ ЗЕ НЕ НЯ ПЕК МНЕ ЗМК Нв МВ ВКА В НК НВ НК НЕ УВК ВЗН НВ В ТЕН ВН КН В КОНКУ й ТОЖ соч ТЕН МНЕ ЗИЦЗИМИ МНКИИНК БОЮ НКУ АК п ОБ ПЕК КВК ИН МНН ОКА КК ваш їх й ПЕН ТИСКМКИ КН КОМИ ооо варарово: : я де ЕОМ жу ІЕС: КА я АК В Й їх ях 5 и Х Х 155 5 КЕ ЕЕ МАК а З З а а ВВ я ОВ Не ж МИМВ КК Св МНЕ КВ і ож; жу Б В в З : ТОВ КЕ БЕ ще сума : Мо чан НУК ! і ев пюстаючоче пори В Генеогн КЕ Я ФГ Кр ж ме Я : «Кк ву ККУ РЕА : ча вона пи Ль Я чі вестача воли ко у Я у ож і їх ОВЕН : ї Ж У : КОЖ : ом ї 1 х ; ї хх : : і Х й ї ї - ЖК Її і Ш ху, ї : 1 М зи ї Ї і: В З Н : ь ща Я В ГО сх : ро ді Я : ох ; : їх зем я Я Я ї ї З. СІК з й КЕ ас Ч : ї сх сх ех Е Я І їх Ж ай ї Е З ой ! : 1 - Вк ' : їх Конні ! ї 1 ду ЩЕ : : 1 х Ай : Її зв в Її око ях Кз ! - В М З ко Н ук 1 НЕ: «Ж і р НВ ТО К- й : пев БМ ІВ : х Я - її в з Я соти їй ще Я Я ка КК КЕ іш Ж оч ТАКО КУ Я ; і : Б 1. : ї Ох т : : 1 У Сея : : То КЗ щ Е Х : ї : 1 У ЗМУ я ї : ї То умо З : Я : 1 : ї З Н їх ї ї 2 15 х ї : 1 Шк щи у ї Н В В зве "щ 1 Б НК КУ ї Я В Ї г: КЗ КЗ ї Я ї Ге: ка ї : ї КО а ЯК : Н : о ща КК Н : 3 : ЕЕ Ка : дл і: ОВ мете : их і ї я и : дек умухч : ОО Я ї ес : їх г то ВВ жд за Н 1 Ж ца я пок чи 40 з ! і ш Уе ю ЗА Кум Й ї Її Х Ж ЩІ КІ Б : ОО 5525 КЗ ЕК 2 : ро В ща о й : 1 У й я :
р. А с « г. кажи су : ТО ТЕух юр тк АЖ : ЩЕ: Дня ех пкттнннннні ро с Н екю ук Фе
Зк ж Ек, ; ЗИ р т п пп Н З ж ї че й - М ОНИ Я ТЕ ск ЗД друку уки ДУМ УК КУ УТ У УКУСУ У У КАК КК МК на ; то яти і Кс і Й Н а кеКчИН о : їх ЖИ ж що « : ЯОО0СВЕВ Жолннкєннчннкк кн вунк хх уукуннкнннекА ук як н КК ЖККК ККК чн учА манку учня нннн кн кож : Я Н у Н ско му УмУ, р ж і хна «ЕМВ І г УЖ ко р о о В р У що ММ Я х : : їх ї со : а і йно : Зк с ! м: ши ж : ях Н :
- . Кай : ЗВ «Дн Кн КК Ок КК НК ХК кА КК КК КК юю ке жтиннкй ща щк С 5 ж Кк щК Повжина листка 10 м) я НМ НЕ Ка х шо дощ
Фіг. 32 ЖИТА кою Я : птах : ЕК АЖ ї ре дх ж й с х Я : тк сажа п п в и п Бо хі І : хх Ї ит ї са ; Н -кх ТУ ду ууу чу у у У АТ кн у кет у ж ук кун я Ух і я Н божу ЗБ: «7 : ще ко пк І Бк паї «7 І хе" ХМ: 2 і КЕ ї зок сю сх ї 0 духу КУКА КК У КАК КК КК АКАКК КАК АК ЛК КУ УК КК КК нн ХНИ З ях посли в; ОЗ хі х ООЖЛЮОК о р Я х ; У Е х м ої ї хе Н : М : : ж Тк і 1 Б Н 1 Н : Н : я сер ще що ких пвх пеуг Я Зх БОЖІ ке БУ М я ОЗ ле сю ЖК Жук мг. а
Ї ЖЕ Мк х А Е М зір Н ВЖЕ. і ї ща Е ПЕ ж ШЕ вон ; У ще НН З ІЯ НИ ї Косеждй 1 5 сни ї ОК маму: Ух і щЩчею ра Шини Ж о роса ся НОВ че їз шт цес З ії БЕ ша їм чих фс Не ще і ї 3 ї Се Я жЖЮ ї Ї ; 1 5 і : Й п Ї кітнеккн ку хв ки днк км у кн Ак Кк дкткіінкк і : ї «З У ЯК я як В а ЕК і і Ве З Я КУ і : ккд а к Н а. м зно ни ! хо а ШИ ВК шо г. 3 ї ж жд; кт і : З вв. Б А с о З в кв ен За НН ї : я І ТЕМЕ х я ЗХ ї Н с кі Я ЗУ у ї ї М аю У їі КУ ї ї Н дк ї і! : ОВ ії : з Б Ч ї Н Бе 1 : ї ї Н Н лов я ЗВ ве ях яке а ща ББЖ ЗЕ: - ж ск ох й Ж. и р а
КУКА КАК КК КУА КАК АНАК КА КАК КК КАК НКАУ УКХ УКХ КО АТАКА ААААКА АТАКА КАК АКАМ УМХ КК КАК КАТА ККУ КК а ААААКАК КАНА ААААКАК ТУ і : ї УК ку жук «ств сус тА я и В гуЗ ї : : лани ЕКОН св г.я КЛ ! ІЗ 1 ! : ї і Я Б тебе ат І якщо швея : РО Ве; Ве В му ї ге | Я Я, ! Ксух Мер ї жа : ох з ге Кор : Щи с аку
ОБЖ. нн нн НН М око нання : й ни в М НВ : т и Е: я т те ве сухо У ї Го зве тек у іо УРЕ Е Ех ВІЛ а : не Я : : - ЩІ и КК КК : їм шк я ій ї КО ! Мі і Е р ха ОДНАК КК КК КК КАК КАК АААЛЛЖ ЮК КК КК Ж КК КК КК ЖЖ КАК КК А ЖЖ ЖК КАК ККАКАЖЯ як ЖЖ кАКЮЮ : 1 і У ЗИ НЯ у І і : і І і За Ен КК А А КК М КК В НН ї Н : : их ря тк ток тако тод ЩО же хм : : ЕЕ іо КО БЕК Я М БЖ ЕК Н і . : ї УК СОБКО т. пис й ше і і Ж, о, т сш і і Її ТЕНТИ ДНЯ ЕЕ ДБН КО БЕДЕККЕКЕ ЕС ЕН Ка Н ФЖу як ЧК в З З : С ке 3 с ухи ! Ж 3 ЧЕК Я І Е я ВЕК ї Ся В пбжу о МАМ спаде Ж 1 ж Ко пн нн нн нн и нав Я Б ЗК я ех. ЗНО те ща нн мем нм о нання ї -к 1 . ок. до ша ї пожн ї їк Е : й в з ! ше : незши кнщн н п : бо а Я Із Е СКС ЖЕ А ДЕ ОДА Я
Б. 135 тА ік 1 КЗ ЗЕ КК хх сток от во ктуттю й кі 1 СЛУ У пезноя де перен НА кох -
Фіг. і; Жжож ж й ї СЕМ а кв еч ВВ Е, нен НН ЗЕ ВОНА ЗБК ЗНОС т Нестача волю ванока ПИЛЬНІ ЖЕ ів МАК М Дочки кутник уникав юкк ким І ВД ння тка нення їх й КУ Е і ше: І Пю їх м не
ЖЖ. жі ЖК ї НЕ деки хо ен ВК ви НЕ як зей МЕ, ї АЙ НЕК : я ВО : ж іх ші Кз ї В хх ом кп рес й щк ! з я з-щи Її БУ : а пот вт КК ся й ОВ ЕВ й ОО С нн МНН іх БЖ ч КУ ї К Її ТК: Кк хх : с РЕК ща ї М Ж о в І ке диск ххх А І ШК і Во о ваш НН НН ше ен в ВЕН З паж ю : це її туйухікнр кер ЕХ Я СК Ж у НІ І МО сх ІК 1 Кров нене спожи ння воли У ГпзвнІНеВа Ок ть Ва х пер атвезння перюд наливання зерна й й Я Те Я ту х В ж в с х Же ки КК п КК КК КК КК КК - й ї БАснНЙ тодкхх ї мак Боже Ме і й та вия Ж ос хе ох ху ІЗ ся п р о о ех й ї «Ж м ї тку ща ї Баш як я, ТЯ ї - ж Мая т : ща ее "Е | пк ж !
зх. ЛЕВКО деку щі хо ща ї Моя ї й З ТО 5 1 ТЕ ве з я ЖК схилу ака ж САКЕ ЕН ВН ОН В ПН КН дак р
«нг. о тах шо : ен І я : їх дек і м Кн нн в п а : КЗ т ! . : ох : УЧ Ї ра Бич нн нн нн нн нн ння :
хх. щі ї Но Н ж : їх ярі : У : т НЕ і ве Н тв, В о дор Її хе :
58. МК т у : х : . киш ре : ща і в зі Ва ЗИМИ: : ж ! не и НОЯ р хни ж ж) : М Н ОХ лико ЗМИСОВН Я кр ШК Н ож Й ж ше ! цк Ж й : йЕеся Н ГУК ам їх Е хе Н с ку і Ух І Уха усу иу : Мод Ме в Ж М : 0 МЕ, Ук, : кх : спюолквк х : що Н ТАКУ а Е
Хо. 7 ї я ! : шо им, Н в : : я тА : Ж п а КК КН НК КК КК КК В КН КК : ко Е о Я жом Б "ЖЖ че пкт уз п «хр ем : Тх СН БК ТК ЕВ Вк ще ЗК Я КЕ ВУЩУ ме ї с х БУ КН Я ту сітоух чХ туру кку М ка Кік ши ї Бірмаса у періва ло вітіння АГ : ще їй жх о й г) ЧНІ х В хх ОД КК КК ВК КК КК Я є Х кКх оч Є З ї ш МО : що хе АК кон нн нн нн нн нн нн о нн нн : й : : ї В В вузи : І ак і под сел ох Н Н ЕВу ; ж ОК не ХМ і ! М я нн нн о ненні 3 -Е ї їх ї 3 хм Н КТ Н 1 щі -4 я Н 1 ВЕ Ї щкКї Н х хе : Іа Же ке ве ШК : ! жо зі Ж Кам ай ; Н у ВА нн нн нн и ож кН І хх : з х7 ре За 1 Я З вві с я по чу ШИ ро Шеся : і х і ож ї Ї З с ї і Ж ж шо | ! У Ж У ї Ж Що Ж ОН : ї ї я ЕТ ї Н Ж ою м х З ще ї 1 шо ІІ ї і МУ ї ї І ЩО: : ї МОСТІ ї і; Ж : Н і ЇХ жо: Н у Де в п Кв в ї їщо І Я ЖК ЖЕ Же БЕК КК ЖК ЗК МЖК Я А АЖ Б Ї ї Н З се КУ т Ас а і ще ї ї пн нн в п о В В В НК НН В
Фіг. 41 Зак е Ко п НН щі г ех Н А ЩЕ Н сх пис м т а м : о ї і ху їх суро ух х ха ее у пек емеуииК пику ОНКО ї КЗ МО ЗМ ЗО ЗБОЮ Зк: КИ КОМ ОК КЕ Б ВУХ: КЯ ія 5 1 бо щі БОКУ і Ж : ! Ж : і ї КЗ ї ї Й ше Н Ж кі ва худ ВМО Е І нн нн і в ї Я а лижах ж і М Н й р «МКК тА жо укрюта : щ і З но : Таку ЕЗКЕК і У щі тий ж ж хе і о Не ту Не У Н Х : ра Шоу Б Ж кох і й ї Бе Я ЗИ Н дк КО Ж ее : М Я хо Н Х яко : МОЖ і 2-х ! і в Я чунке Н З ! ук : х гак Кая їЖІкК ї МОУ КУ пу у у у У У УК У У У КК У УААН ус уч у у ух І зва Е Ї пад ісв я й Я (4 Н З Я Фіг КК жо КА ен нн и о, нн п пп нн пн і Її же Сея жо Ех ОМ АОС БНО Н Я ; і їх кк ІЗ и а в в в в т в КК п я Зк ї і ей . ї с ШК А МК юю Я і ожх ЕК й : їх х б ІЗ - І КУ ї т ТБ во хе пк с вий
Ще. Її шити в : І : І і Б Е ме з ОК род І МКУ т Бех б сур т кое еН, а. гу пи. я в че 15 з Б . і жк ЕХ З ут Й жо я ЕЕ І: зве ЖЖ ї-к ї ша КЗ Х Кожух Ж КУ Ба і Е Е ку і Р х ох щої як ах А й пе Б шк нн о и г 1 5 ж га х. лік ххх ро Коз КУ їх Я Я вай й ле ла 0 ж 35 0 з5 45 85 50. і а ен На пт о тан у Ж: СОНЯ хі Е і тету кві ие К вувокі і р кв вк трі ву Н копи Не КНекНе НЯ НАННЯ ПЕНЯ : ЕК ддкнннжютю учні т ек КК ТО КК ЕЕ КК Ме нику вік уссн ех кухня кан как аанняннкннкк я Я Фіг з щу ек
; : : ї ї ; Я : ї ! У ОСНО Ї Н Я Й і яЖм й КК МУ ККУ КК КК КК УК КК КУ ЧУ К ККУ КК КК чн : у Же ша і М Б зо ЧЕ ЗК ща ЩА БВ в 5. Ак ЩЕ : ма я МК ях ї ї ши кА я ! ї Ох я ї к хх м ї ї Од х її Р ту : ї ЕЕ мя ! ї ї т й ЖЖ ї ї В яв та шо ї з КУ ку : ї їж Же Б ОЇ ; Я я ЯН ж одА зх ух окон х схов ВВ і : ов а ВЕ ж оюх схем «ж ЗБ : : іш Бий Вк ! ї На хи вон ї ї ї ОК З дім Н Е Ж щу ВКМ в ЩЕ шо дО А ще їх я ї ї ше: ше ! ; МОЯ ях, ! ї
І. - хе З Н їх ї З З : ї їв ! ; АК вн Ко КК ї ї зх х ї Гм С нівнізнеенва ана ее авіа паче нина ї Ї В ЗНО НЕ НА УАЗ Є ВЕН ВЕСТ ЕНН : зх В Чи і : і ї ! НЕея ща ОН : і ї ї і ї ск їх ! : ШО : :ї ї х. їх Н ка т ї І: що Т х ї Н і Ши Н Е | я : їх х к ї й о ї г че КЕ : я х хе й Н ся ї ЗЕ зи, КЕ В їж ІЗ ЯЗ : рс--ет 3 дека о. Ж Е НО» Е ще я . жо БЕ - 6 п і ж Ь Я. ие Е й я с и ШИ ши тека : Р: ї ї х и Зв ки ИЙ й : Е Бо уюхжевухуєнуххтєтяряй ЗЕ БО ; шк Не 2 не ве «: : Нео ї : Ед і і 1 ж 1 Н і нка і В : і : ї 1 р ї ї и : по ак 12 їй о їй а З як а 8 |! : сер - Я ех Х шох хо М Е ЧЕК КК Ку КК риЖ Ж ка суку ХК 1 ; СВИНЯ меню ПЕК ЗАЕС Я НЕТУ у Хихеютттт тт А АКА АКА КК КК КАК КАК КАК КАК КК КАЖАН.
др. ше
Янг. 5 я є - ж ж В Ж ж МЕЖ Е Тк отЕ ТТ Ва ВЕ мав тт тт Вк Ви ВЕ «р тт т В ев в СОМИ тЖї тт ща ЗВ те тт т ва вв В я тт тт в; вн ве вчи тт її ве ве в жен тт тт ВВ ВО ВВ ка еЕ ко ТЕ ТЕ ВВ ВВ ВВ о т тт ВВ вв ВВ хо тт її в вв ВВ в У ж Ва в х на тт тт В ВЕ Ту ЖОВ т жїт 5 Вот заена ТЕ ОТЖ В ВА т хе чоч вв її ОВ тт. ж Ва Ве т Кв ее тт ВВ ВВ ВВ тт -акомина їт Ва В ВВ її ееюоуот т Вт Ва ВВ її ве їт вт а ва її ЖБОА т ж ВВ В т ЖЕНЯ ТТ. ж ВВР рен ТТ. ж ВВ ВТ ТТ зищемия її В вот От хваще тт ж ВВ ож пт В тт во От ту жазоа ТЕО жтОотТрРОЖЖ їТ зв тож отож
Фіг. о нен НН Я ; і ї ї З г : що Н пеоНаоне З : Н ще : ЖЖ і - : хх Н Н і Н асеквижх Н І І ПК ту : хЕ : і ку 1 КЗ ЗІ тт ї Бо ди 3 Й й сою х я. ї ТУ Е ТО. ше У У ях : ОНИ тах й вай І "о їх | гу хх : їх В Н ше вн : Зх є джу с : ож У БЕН Н -й х дж ї ее ! тях Кох що і їв З тех і; - ЖЕ Ї «ЖЕО ! хх ша я СОМ : КЗ дек жа ж муж Н х шо жу ї МОЄ ! беж : Ж і з НЕ УЗ ї ж ке Е
Ух. Н ї їх ! Н ях 1 І УК Н : : с З - К "Кн чек -к ї й ще МАВ що ЕС ла вам о: ах дв ки дек ния ; зх суми с ІМ дутики ко і ех і пійнОосниЯ міст води весен СТ ялини зе Н с В У бук 7 вон Но Я : 135АК жк са ї ! оо : Хек ї б дю Н и ЕК, І і Н ГЕ Е з ДЯ у Я ї С ї їж МЖК ж й ї те В : у х : ї ї СУ Н я т У ДВ 1 і ОО ях і те і бо Б. - : КУ і ся т І НЕ Н х « :
З С. ї БО ЖК: ях х. НЕ : » з і КІН ВО окон нон нс нн ванн Н Вяоошк зва : 1О0ОЗКАК ТІ Му ЕХ : ТИ : РО о НЕО ї І Н Мости 1 НЕ ж: ТЕ у ї 00 КУ нн нн С : ЕЕ ит в с Н КЕ : и Н ї м нших і й «ук дж, ж сх люд хіх ее, сф сухому ї Н ТАКЕ Нео 15 ко АЖ МО ХМ Ж : Її ї ї дух г Ще КУ з х - ї : жа суєк вок ФК Уюи утік уи ЕК ь Я рр і а Я езаж же. 1 ї аносна виють СІЯ НСС НН ІОН ЕН С. Фіг, АВ о се кі
Пенн нн нн Н Н і ее шко щу Е 1 ї І че ї : ЗЕ дру у У У У М УМ КУ У ТУ ї Тех ! ї ї я і же ї Н СОЖощ Б Ко Се Я що Бі їм і ВО и Її ї Мо 1 у МКК 1 і ТУ ср дет їй Н Е У Не і і киНекя ІЗ й і їж Н хни Е Ї Ще. Н гу ІК ї КОЖ а де ше Ї кої ЖК ше? ма БА о І То Н Й УЖ дк ВАК ІЗ ї го В зв Ще щі ха Я ІК: : ї Од т шт коккждтия : Р оле ХО ж ск пиккжани Е ї 1 УТ со ї Н їв | Нв ШЕ БО КІ пе НН шк і і 1 : ТО я Ж їі ОК Н пом І ї і Н і Н ОО : ї ї ША : ої 3 с хе ї ї Н 1 Ка ї 1 х рі З Н їж Н З Е Н Н і ї й ї ї че З Кк дя Божих ех кої : ще а г ща зва тав НЕ Й Н : ях се джлюю В дв в пед ви й секжня ний пен ки щи диво я ин з Н І оба гар шик Е г ач жк Ж ХНА КЕ ОКУ ВЕ ж ЖК: : Пізносний вміє т вади У СЕМЕН СТОК АЛ Ваня ЗО і : ; х Е і ще я ФЕЯ нн М В В В В ОО ОО КО НВ НО НН НН т В М ЛИ : Н : ж коза Н Ех жу ЕК во : Я ит і НК за : і : ще і : ік їі Шо Е Н їі ї- шия р я ща | і Її ж Н «В: Н З
І с. Е іні ї 3 їж Н ща ї і ї ях Ї кох ї 1 хе Н сх Н Бхж | Є реУЯ кт : Н ДЕ ях що Н Н Е ї «Жид поже 1 Н ії ж ї а в і З 1 ж ї пи он пику Н З 1 Я і а ще же За як. і Е 1-х Н - пед меш З і ї о ЕС ШНМ ши ще Е Е ї -. 7 кої КБ » Я ї ів | ж ще ЗО і Е Не ; Кр : Н о Н п В І Кок Н Де ВЕБ : М Ех : дет ВЖЕ. ї Н НН ї дет. ї І ії Кк ї ки? Н і 1 хх Ж и м ї ї 1 шк КЕ. Е Е рожі сідосу шк ! і Н рн ши : і ; дет КЗЗ Н І ЗЕ чи с і : 1 ЕК жо ОРЕ Н Н 1 кое Ки ЮК МКК КК Кк кю пики х Ку й ху Її ; їх За хх ях Ж Уч Я Ки жить їх хх Н їм КЕ й ва У Б во КХ ше щ З : їх ж г: Н З хкковико вик Кх хек іти уріє кукі тіж ких ї і Ома СТУК Є перо ен БОНН СИ : ї Я й т Е НА А КК БУ дви Фіг о З я ЯН»
па М а М і як пам суощу і і А У СВ : ї і ї ще і Н і і і з і ї 1 МАК ї 1 : і п МНЕ: З : Н шо ке і : цк МЕ ІНК р нм : і Му ше пон ТЕЖ - І: Е я до ет я й : ! я АХ кни То ям ше Ї т пог, : ре пеше а З Я і Я їх г ка В Е : с З ве ва 1 паю : ТІ со ї р їх В в ес : Е охо ї щі кА і : і б ї х І Н і І ї З - ІЗ : і г ТК Н х ії ї Ж З Я Я ; як. Ше ря я і Ї Н КТ і Її : Ї : і Н Ї ї с Н ! ї ї ї их З х зсЯ сх ск, у КЕ, "хх Н Н пе. пе х х вих дода, жк Н і Кухні кино хх ей вч зе из Дах : і : зУмаси См є ПЕВ НОВЕ КНЯ ке : г шко
Чи. Зі ее вон оо Ж ши Н Ж од ІАЕ щи ще ї У У лова ! Тех : м Е Ж кох я ря ще ! хх сих ї Її З здох а я і : ї ХК Не ї і КО КК Н : Ж же дах 7 Н їх ан я М «7. Н ї ЕЯШЕекЯ А ит ЯК Н х г я окон ее 7 ї ї ж Ме ож ВЕ вай : З БО що шт Же жо Н Н Ка хи ТО ХМК й скму 4 :
Ж.О ще ;; сх СА ї кож. мо КК їх щи я УМ ї Її ие ЗЕ ок і : То т КОНЯ В Н ЕЯ й М як ОН хо, ноя ЕН Я ї Оу ТхНе тю і : Е : х Б і : ЕЖУ - й : КУ сх х ке ух. ше о Я -« : Таж НО й Безу ЖЕ Б «Б Бо Бе ще ї ї Ма Їнх Кк лудик км, і траф х кВ Ки жо а ст ку МК С ; 1 ОМС СТЮ ПЕК БЕСЛЯ НЕННЯ БИ З Е і я ча : о ! я Ах го с Х жсже вх нин а а ї Ії Н Н : ЕЕ З Н КАЖУ кк ї 1 : г КЗ Ще ї Н : рев і ї ї 3 я я то Н і ТОЙ Я Н ро шк : З БО ж ВІ і : рок ще у і Н з нн не КУ нн он ЗУ зе Н от «БЕ ші і ОЖю де У сет ВК І і Н й вил фо Кен м ШТ : і У пи Я У і ЗШ УМ сни я іч У : ! КО З дитя Я : З і в вн АЙ ше БО шоу і гж У р й Н ; і і : 3 ї х Н ї і 1 Н ; Е ; нку УК КК КК КК КАНА ЧАК ККУ ХХ А МАЛИК уч ХУ КК КК КАХ ЯН НК В Н ї сах с; вові те сх хсм гу сх х ї і ва ЗІ «щу ча жк З. у «а ЗЕ І ех соку со и яті ік окт зу а каки пай і і біемасв с У ПЕТО Я ЕЕТЯ ЗТВЯЕНЯ ТЕХ З і ї Бе т 7 1 о ОО ОН ОО яку певу
Фнг. 5 вн нн в а нин Ж зв; 1, : КІ 5 ке ем. хх ї ж ЗК я ся ЗОБКВХ : : ж поко сис нн ни сор М нн а КО щх Н Кос ях 1 - о і ТЕ сх ! ІЗ ко тт нини ЗУ УМА у т нена МУКУ УЖ їж КЕ КВН Н ро т МО НИ: ко Дт зе Н Кожух воно КК ЕЕ Ех сут ЗХ ї ж в В Н Ох Я зад ЗУЖОМУ Н Еш м З І я : Її То Н їз, і рота : ТО і НК : Ж : Е о НЕК А Я АН АК КК КК А АН АК КМ ТТ АК АКА тон ВХ ее НИ Кен СХ зх ПИТ ЕНН В ЗІ ща а ІЗ А й ІЗ ххх Ге Я жа. х че он жан. кв ку, уко умо Ки вич кщок сети ук. Вся ! іпомаса сша У ЕМ ПОВЕ ЦМВ ТН Я 2 Їіднкккнкоплоо АК АХ МАК АНА АХА КАААААА КА АХА АКА АКА А о З ХХААКАААКА АХА КАК КА АХА Аа ой сх ка жк ши Чи з мин и п в п п п КК ПК ПУ ї ІЧ : Н ї це їх с 1 : ЦЕ із Ка З Н кн и НН и : ща: ї ї ЖІ : З : : нс авя дей Е се АН ен ху у: З б Я а тхо і Ще Н як Ж ожх пок жу длАХ : бра док і ЖЕ М ЗЕ Я З дя З Тек Ух Н є ня н 1-5 Н 2 БО о шо іже ЗОЇ й В і їх Н х и Ї КО А: Ж т : : й Н щ: шт 1 хх і с охквокх с і ЖЖ ді я ЕВ М Е ОМ М й ї Е я І А од. ж : ож щЕ: п Ісубу ! ТЕЖ Н : зв: І: : Мі З : і 3 і Ї Ї ТК п Я З і Ге ЩЕ ЯК щ-кЕ ТЕ ЩЕ ВЕ : : ї Ж кув ко укускв В и жо ух хо міжн ху как в зу вв ою КОЖ х : Где ца В Ве СЕМЕН СТВ НУ КН НЯ ЗК БК А ї З ах З Ї : і ож и ши
Фнг. 55 і що Бі : КЕН ях ЗЕ ВІСІ їжи ЕХ їй Не й се що й : Н З йо ща кед і Од зо БЮТ т ШЕ ід й і і бе ЖОВ іч НЕ ре сЗ Не хо ся : : ОС с Рі Б ше НЕ же я Бі щонаї я Ж НЕ ше іе ЗЕ їх З » : і НЯ Н й НИ ї ок : Н ТЕМНІ рі і ЕОАЕ З рі і : ї БК «жиє вч см а с іже ку вч Е ої : НО п Ма ВоЯЮ ве ЗА ЗЕ З: х Н : і Ко Ук Р ШЕ ЕК она ха г ца 3 З еВ, це у: що і ОБЖ для БУ т севеднні стаю наливання зериа ВНС: : й З т : нн ж а НН КК КН КК НК А ТНК КАК КК КК КО дО оз
Чнг. о
З ца МО ! ек ї КУ з і ШВАХ і ; Кр вон і г ящ (ж за) хх ЧНІ сккжкк : бек Ж Ду У У У У У У У МКК КУ У УК ект В ск ї К- : ро з Ї ї ок и ННІ щи се Ж і ще х : ко Зх Кз х ї Хе ї - х : ш ї їх У ї їЗ ; « вт В хх ї не У х : хе МУ х. ух х. : шк НК ще 0 ДМ вла ої КЗ ї те Ей ВОК, ТК : В і ПЕ х Е ще с Ж МД ї - КО КУКА КК КК У УК УКХ КИ УУКУ МК У АХ КК КК дя ККУ УК КК км ен НН я МУ. й : У Н КУЕхеу Хлжкхха нене жкнк кий ТЕМУ : ще І Н чих. І ї ї Н жу Н і сх дек ї : Ух ЖК : п ї : ей ож КК пи їх т 15 кВ Ж БУ Б я в М: 3 ди, У п ща Я овен погеценничния М з Бе ї Спандношенвя бомає У пер спі цаніння Е во а й Я фіг. 57 ОКУ ж М ї ї ї БЕ С ї «8. ка - і ОВ гу щуку кл як і щ т і Си шо мою й Кая ДІ їй 7 шхї К ві я ї ше М КК. не ММ . в РОЗКВХЖ у сою ж Ко яти щЕ | жо ню С дж - ку А КК КК п В о п. 1 во і ж і ку нин КК КК М В що зе як їв що о но г : ву т туту «і сук кута ож ек схеукж у, ба по Ст у веріюд наливання зерна см) и и НН
Фіг. 8 нг. ЗК ук уч АК А ум НАХ у у у АКА КК КУКА КАХ КК КК КК КАК ККУ КАКАХ КК КК АХ ХХХ КК ХА кн нн КАК жна х їх х шок дк : шу ОБОВ Е ІЗ : ї : А пох Н і В; НИ Н : : ї Н ї ! : ж ЗИ З: : | ї щ ї ду Її У о ОВ : КЕ Ж де Н КО х ї Н ж З, В г тя : вк і : ї Ден З Що : ї Н ке ВКА манна мини нан нн нн нн нн Н і : ще с ВХ Ко рот Ї т, дея В. ка : Шщотх НЕ Ж кож ше ек я 7 х ї Н КО ЖЕ: поло ї ЕМ ц хх Н Ж з х БУ БОЇ х Н ба Кл АТ УТА г (Я ди ЧІ Е ї ї т Ї ЛЕЛЕК ШЕ ТЕ Н ї Е В : ше Ко ї і ІМ В: НИ Га тНй ї ї І ри : ШЕ ї ї ї В Ї ї НЕ Н ЗСЖ с уоккккаквкучк кю ку АКАКК КДКА КАААЛКАКА АКА КК КАХ АХ ККК КК КК КК МКК КК КАК АК КК КАК МАК У СКА КК АААКАКАКААКАААААЄЧАЧАМНХ ї ці й й ; ше : КЗ З не ше Ви ОК Б Ж ЖЖ 3 і : к ях х Я я як я я й о НИ й і Тех жу у шкк що віку ві У вики ку т вух ї ї ЛЮБВИ ЗВ Ня Ними у пер ЯН ВЕН НЯ Н ! У І; о ї на и нн т НК В и В кох а мг. З ЖЖ жи їй вн п п т х ї ЕЗ ї шк ІВ ЩІ х що Н У прут У У УК У У УК КУТУ У ККУ КН У КК Кн куму Е Ї ї Ї х Н х Н ї : Ко В В з щі у Кому ме т ше що ке на вини 7 - х КОЖ Ж А РО сш щЕ й ; НЯ во Е НК нн Зв вини кв о а вав З КО ще я с х їх б вищі зе я ї іже ПЛЯМ ще ще МК ЕІ КОЖ шо ВН я в о й БІ сук ї ОБО ЖВІЕ " яю ІЧ шим ВТО З : поще ритм З с х ож их х ОБЖ БК, Ей з З ее осн Е їх ТЕЖ ї їж ї ї 5 В Н Н Е : і р х Я Е3Я ЩО во Кам Яке БУ га З : Я : ЖК КК як вк в кас руту ки зе й аж і: СК ж періо наливання зерна см ою топ о о о ОТ У оп ПМ ОО о о ооо тю т ко юки ріг. 60 СЯ х У ж і 35 К;
и нн НН НЛП НК ОО І і ра т г ї МУ ста ї Ї Ї : ї Н Б 1 ї я ї Е ї : Е : і : і ї км її : ШАХ М її ІЗ ск ї х Н кун . їі
Е. : Ж і Б з щ І шк ту : : їж ЯН: т ї ІЗ 1 я Кн й ї Е Ко 1 х - ї ІЗ 1 ж ї ЩІ бо ї : ; х КО і ту щЕ ї ; ЕС х з ще Е я Закеу ї ЩЕ ! ша А з ВВ і 1 ; Ба т ще з ЗМК ШЕ ї зе К- КУ ї І хх 1 хх ах ї 5 ї - : ЗЕ Оу ї ї о ЗНУ ре НЯ й її АОС зі я : їх З й тою Її 5 : МОЖ юр ТЕЖ А ї Б: х : : : І: Н Н зії : : УЖЕ Н ! Е Е : А А : Н : : 3 : : КОЗУ нн и : з ї5 Ка Ка зе Зк жа я «ак ї Н 1 і км ВД НОо НЕ УНН У СТО ООН ЕВЕР ЕННЯ Е З ддалААКААКАААККККККААКК КК ККУ АКАААКАКААТАКНМНКАААКАКККААААААККАКААККККААКААКККККААААХАКАКАКК КК ККАЛ КАААЛАААКАААКАААККМКАКААААКААААКККККАКААК КАК КАН КкККК ших :
г. о КОТ ен о о нки ї і чн як ще : Є ОО ! пох : ож Н с І ї 2 і ОН : ї ве І КВ : ! «лу з : ї щі Бе , ої ЗШ аю : ! ху 5 те Н : З щі се. І : Бо ї о : ї ; ек сах Н і Б і хна У НИ М о Б Ж Н ї ОКА х. : ї Ко Н т чізкум ся Н ї в і я НК і Ї рез: й- хе Е й М ОЕТМТКМ ся : ї ке : т щих т, о о ї - за Н ТНК: хі що НЕЗХО Ї ж (ЯЗ р х ря ї х ОК ії» Бу ж У : ї дк 5 І кхжнданняя . шк Беж «Ж улжиттхтхктх і ї НА З ЗХ ЗК : :
ВУЖ. вії Е В : : Тл ВХ. ЖК : Н фо 1 : : 1 5 Н й : Ж шк і У Н ЗО ще Я Н ік і КВ НИ а Н ие : і іх З Ух в: : : Бе ктнюим : ї іш і : і х ож 1 ж Я і : І ТЕ ші : 1 З ї 1 За їх Ух лю аж м г : НУ ТО ха ще Ко Же СОН : 3 й річні пуху ске кв: -- м чні зт ті отух зач : І ук І и ВЕК Іа р ЕЕ спр жіднешення гемає хх перізя долнеля щення і нн КК фіг. 62 ЯК ж пи в п п а а п п х ща ВО ї
Я. 0 НН:
В. Ен, ке 1 х Я з ж т МІ і ї ОХ У їх и і І Ж «ля ІЗ ї ї «а М й і ке. В) Ж і ж У А х Ж ші Ще заз ИН п ще мк я х х жи роке ВК і с КК ТТ шк р: УВА Н ї БО Ж ук ж ї їж У ит ще те ко ку ї іш Й ща кю ТЕ ШЕ Ес ї З ее Н б шк ее іч жо АН і ХК Бу і ЯМ ! : ще Ї Її ОКХ м и КК НК КК ї - хЯ сту пе зх НЯ Б я їз т3к: : БІВ 5 ща Це що ЕК ОЗ; ЕВ. що ЕЇ ; : І СЛ куворох пава зне зерна сао і ї ! Ва КК холк г. о БА УК ву жу ко Ен БО Ге ВАВ Я М КІ ї х і жк й : у Н х їж ТОНУ З х Ї У ї 7. м: 3 І і х Бе НЕЮ К: ї ї і ї о й і і и ее З З їх 5 за 3 ї х. С: Я 3 х ; ї х Е ї У ч і їх ме В х ; й і: Ушнн х х Ж СЯ х х х З р ІЗ КУ У Я х Мои і й Куй к Ї о НН КОСя че: Мох х х й м ВШшКЗ х їх х М у х . ЕЕ у міння її 5. зх Ше я Б ГУ в х х ЖК люсоюю п я Я ; ЗЕ х ж х я Ка гЯ ху
: клі Перше зе ку МАМУ ши ни ие еВ
ІЗ ее ух Зк к кох жк ох Ес пою сте кА Б їх хх кох хх х у нику Б КЗ УЖ БУ хх тк, х ш- син коки ШК нку коки Урожай бічна З пу Ж ко р НААУ г ї Е х В я рен ДРАМ я іже НЕТУ 1хБо Ж аку щ о ЩІ ЖК Я ж й й г в; г Ж Б; жк нюх кю Я кої де В Ко й Е Ж УМ с дим Кей Ка й Я Ж Ку МОН є Кк ШЕ нетканих я аква ї ща ще о Ів й щі БК КК Ка, и І ве ж свя зх зх зок
-. щ- ін 1 о. їх КУ ПІ хх ї що 7. 2 ніх ї - хе ЩЕ ох Н до В що АВ ї ї Ж у ее ї и ШЕ ее : ОО ! шк що и х. х В ЗЕ Б З -ко : БО: їх Ж. ж Не т Е Є ан те Н Е Я : ВО: НУ дах : ї вх х їх Б: г - ї : ве 1 хе КЗ 3 з хо СЗШ ще Я м : Бж Наш т ОХ : шо ОЗ Д б 4 2 шк СХ : ! Же : ее і хи Ж же шої : ОЗ | у М ж ї ї зи Я яко х КЕ ; де! ! шк Ж ч х ОО хв : реж ! пої Б ОБОВЕ В ціх ї СИ НН се - Е й -ко х : що: : Ша хе х- ко С - т Ку іч х х МО: її зон їх ЕН ЕОМ : | как Мод і шої ІЗ г кю ах Ка 1 Гая х Ж з х я в ї Об х. ТУ ох о п 1 Ве «ох Ж МО Ж.О Ох ж ХУ ОА З маше і х хх ї о ї КЗ ку х Кв шо з А З Й : х Ши 5-5 З гу ОН З : х 7 х хо ; - : -- т ЖЕ ї шок ВО : ї ПУ т щої їх Ол т : ж З о. і : г ва Ку х х 1 У х х. Б й ті о С а їх ж і хх КО : ще К ЧО ВЕК дж На ЗИ Я Гх ОХ х х ж о НН о дО: Ша; КНИШ :
х. ЩО Е ши ВОК о: Я ши: : х о: Н Мих Кук я У п МЕ х х рт В Кк МЖК : зад ше хо Ж КЕ ї о: ВЕ ГБН: хо ВОЗ : ж ї ЗЕ 7 і : В ШЕ що З : : шо Я х Ж. 7 і: ї о З й ї : 3: В УК ї ШИ : ОР зання Хо ЛА ГО же 3 х х деку; пе й зв ше Й х зожаую ему тет Хуг х КУ І Й я : ї з ен канди ЗОВ х ж ж І ве й х се Заіка ож да ж 5 В що ; х РЕНІ апонаав а я щк - ше 5 З ;
х. под - - ї ск атм соком ківі і ИН й ж : СЕОРЕ вртаноги заенН Е дЕ КВ З щ му хр х кклужя з и КК ї Е СОБАК орки Хваш кю - КЯсгк у ЗКУ 5 Ка я СЕБЕ я пане ме їв ЖЖ ик БАЙОСН,
зе. 83 «фіг. 55 Ж, А вес дих ях : ; ї х с : го Ше : ше : ї х по Ї Н її ой х ЩО пл х і ко ї Н їн ко і У Е хо ї- х : х У і я вен з пої 5 х ох : ї У ї Т.О вх ї ї ях т х Я я ї : г У В КЗ У ЗУ х У : Ух ї : г : З НЕ пе х ек В : їх сх ї т. их: «г ». І. У х нивося г. : Й Кох я хх. : шк ОЗ ї і гос ик Н ше іх як : МДЖ : ; : ша НК : пох ее : пож о х : я ж УК Е шко ОЗ ше ; не : : : хе фо ї я х ї х х 7 : Е НО КЗ : ше. ОЗ Ше з ОН : з ї ще ж Н па МЕН й готидн я пе х ших М : : Ве ох : ШЕ ЖЕх сно ї Н зе Н Я : пої ше ня вк З : їх : ОО ЖЕО Н : е ех ЗНя г я : ї Ж ЖЖ й Ї школі й се КО ЖЕ ен Б Її х Бе внех ЗЕ Ї пої ее НН НКУ ве п х п н ї ПК ї ну х т жх. х ТК Х. 5 ше ї у : : Же пИх ? рек щу ВК Н шу , . я ВК: ше в не Ше Ще Б ї реа ВО ЗИ с : Ве ВЕ ї х : шо ННЯ : ;; ЗИ : : я ї ї ї ОВ г є : : : шЕЕЕ ПІЖІКИИЙ « Ех да ох ї я шиї : Я : БО ее іі Ж ї гу ще КЗ ї Кн то : : т п я х хх кВ с СХ. І: : тео Ко Я У З - Ї ЩІ п х МІХ Її Ж: пож : ве ї хх ОД х ї . ПІТ пов х ї Ж ї его З х х У ж ї Ох ще ше і: У. ооо не НН . хо : Я : і Ж ки ОБ ше 3 : толк пл Ж хо ко : : х : Я 7 ох т с х В У м СУ У Е : не ен Б З Я : А ІЗ ї ї х. т я. х 2 : ЗНУ і й дк. г Е Я 7. : х ї : Й хо ї х : і й Ж ; : пе жк : : - и х їх пошу ; с КУ К сь х, хх
Фіг. об
UAA201406657A 2011-11-16 2012-11-16 Спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка ефективніше використовує воду UA118334C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161560763P 2011-11-16 2011-11-16
PCT/AU2012/001423 WO2013071366A1 (en) 2011-11-16 2012-11-16 Drought tolerant plants produced by modification of the stay-green stgx locus

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA118334C2 true UA118334C2 (uk) 2019-01-10

Family

ID=48428846

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201406657A UA118334C2 (uk) 2011-11-16 2012-11-16 Спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка ефективніше використовує воду

Country Status (13)

Country Link
US (1) US10590431B2 (uk)
EP (1) EP2780921A4 (uk)
CN (1) CN104520954A (uk)
AR (1) AR088897A1 (uk)
AU (1) AU2013202038C1 (uk)
BR (1) BR112014011943A8 (uk)
CA (1) CA2855995A1 (uk)
EA (1) EA030382B1 (uk)
IN (1) IN2014KN01288A (uk)
MX (1) MX369924B (uk)
UA (1) UA118334C2 (uk)
WO (1) WO2013071366A1 (uk)
ZA (1) ZA201403519B (uk)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104725495B (zh) * 2015-04-01 2018-07-24 山西省农业科学院棉花研究所 棉花GhWRKY51转录因子及其编码基因与应用
CN104725496A (zh) * 2015-04-02 2015-06-24 江苏省农业科学院 一种调控植物开花的棉花WRKY转录因子GarWRKY9及应用
WO2017031059A1 (en) * 2015-08-18 2017-02-23 Monsanto Technology Llc Methods for producing cotton plants with enhanced drought tolerance and compositions thereof
CN106399324A (zh) * 2016-08-30 2017-02-15 山东农业大学 一种调控根系发育的苹果生长素运输载体基因MdPIN1及其应用
AR117945A1 (es) * 2019-03-19 2021-09-08 Univ Nacional Del Litoral Unl Un procedimiento para mejorar las características agronómicas de una planta
CN110204600B (zh) * 2019-05-07 2022-06-14 扬州大学 BnSPL14基因、蛋白及其在控制甘蓝型油菜株型中的应用
CN110452911B (zh) * 2019-06-08 2022-05-24 吉林大学 玉米ATP结合盒转运体蛋白E2基因ZmABCE2及应用
CN114591971B (zh) * 2022-03-30 2022-12-20 西北农林科技大学 一种葡萄抗旱VvCCD7基因及其氨基酸序列和应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1177299B1 (en) 1999-05-07 2008-10-29 E.I. Du Pont De Nemours And Company Auxin transport proteins
US6936467B2 (en) * 2000-03-27 2005-08-30 University Of Delaware Targeted chromosomal genomic alterations with modified single stranded oligonucleotides
WO2003008540A2 (en) 2001-06-22 2003-01-30 Syngenta Participations Ag Abiotic stress responsive polynucleotides and polypeptides
WO2004050873A1 (en) 2002-11-29 2004-06-17 The University Of Hong Kong Genetically modified plants expressing proteinase inhibitors, sapina2a or sapin2b, and methods of use thereof for the inhibition of trypsin-and chymotrypsin-like activities
WO2007011771A2 (en) 2005-07-19 2007-01-25 Basf Plant Science Gmbh Yield increase in plants overexpressing the mtp genes
US8362325B2 (en) * 2007-10-03 2013-01-29 Ceres, Inc. Nucleotide sequences and corresponding polypeptides conferring modulated plant characteristics
WO2012065219A1 (en) * 2010-11-15 2012-05-24 The State Of Queensland As Represented By The Department Of Employment, Economic Development & Innovation Drought tolerant plants

Also Published As

Publication number Publication date
BR112014011943A2 (pt) 2017-05-30
AU2013202038C1 (en) 2015-10-08
ZA201403519B (en) 2015-12-23
WO2013071366A1 (en) 2013-05-23
IN2014KN01288A (uk) 2015-10-16
EP2780921A1 (en) 2014-09-24
US20140331347A1 (en) 2014-11-06
AR088897A1 (es) 2014-07-16
EA201490958A8 (ru) 2015-04-30
BR112014011943A8 (pt) 2017-09-26
EP2780921A4 (en) 2015-07-29
EA201490958A1 (ru) 2014-11-28
AU2013202038A1 (en) 2013-05-30
US10590431B2 (en) 2020-03-17
MX2014005995A (es) 2015-06-10
AU2013202038B2 (en) 2015-05-21
MX369924B (es) 2019-11-25
EA030382B1 (ru) 2018-07-31
CN104520954A (zh) 2015-04-15
CA2855995A1 (en) 2013-05-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA118334C2 (uk) Спосіб отримання генетично модифікованої рослини, яка ефективніше використовує воду
Fuller et al. Seed dispersal and crop domestication: shattering, germination and seasonality in evolution under cultivation
Lafitte et al. Improvement of rice drought tolerance through backcross breeding: evaluation of donors and selection in drought nurseries
Le Roux et al. Use of a transgenic early flowering approach in apple (Malus× domestica Borkh.) to introgress fire blight resistance from cultivar Evereste
Ngailo et al. Sweet potato breeding for resistance to sweet potato virus disease and improved yield: progress and challenges
Hayashi et al. Effect of planting density on grain yield and water productivity of rice (Oryza sativa L.) grown in flooded and non-flooded fields in Japan
KR20100052451A (ko) 개선된 고추 식물
JP2014528701A (ja) Ａｃｃアーゼ阻害性除草剤に対して抵抗性のイネを生成するための方法および組成物
CN104583404A (zh) 昆虫抗性和除草剂耐受性大豆事件pDAB9582.816.15.1
Ajayi et al. Estimates of genetic variation among drought tolerant traits of cowpea at seedling stage
Sarkar et al. Responses of rice to individual and combined stresses of flooding and salinity
Usman et al. Mandarin (Citrus reticulata blanco) breeding
Vacher et al. Impact of interspecific hybridization between crops and weedy relatives on the evolution of flowering time in weedy phenotypes
Fang et al. Influence of flowering phenology on seed production in smooth cordgrass (Spartina alterniflora Loisel.)
UA113503C2 (uk) Стійка до засухи рослина
Sarkar et al. Molecular Breeding for Improving Flooding Tolerance in Rice: Recent Progress and Future Perspectives
Motsa et al. Natural fecundity and germination characteristics of selected Cyclopia (Honeybush) species: preliminary findings
Waheed et al. Physiology and growth of newly bred Basmati rice lines in response to vegetative-stage drought stress
Abo-Yousef et al. Giza 179 Egyptian rice variety: as a new, early, high-yielding, tolerant to saline, and climate change challenge.
AU2016416782B2 (en) Hybrid true potato seed
Mogili et al. Mulberry breeding for higher leaf productivity
Pickup Will the Globodera pallida epidemic signal the end of the seed potato industry in Scotland?
Campos et al. Sugarcane (S. officinarum x S. spontaneum)
Abu Baker Study of Morphological and Agronomic Variation of Local and Improved Barley Lines
Shi Impact of Stolon Removal Intervals and Nitrogen Source Ratios on Propagation of Long-Day Strawberries (Fragaria× ananassa'Albion') in Soil-Less Greenhouse and Controlled Environment Systems