UA113284C2 - Спосіб поліпшеного приживлення гемопоетичних стовбурових клітин - Google Patents
Спосіб поліпшеного приживлення гемопоетичних стовбурових клітин Download PDFInfo
- Publication number
- UA113284C2 UA113284C2 UAA201309882A UAA201309882A UA113284C2 UA 113284 C2 UA113284 C2 UA 113284C2 UA A201309882 A UAA201309882 A UA A201309882A UA A201309882 A UAA201309882 A UA A201309882A UA 113284 C2 UA113284 C2 UA 113284C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- treprostinil
- cells
- stem cells
- bone marrow
- prostacyclin
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 52
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims description 57
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 title description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 114
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 68
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 53
- 150000003815 prostacyclins Chemical class 0.000 claims abstract description 44
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 claims abstract description 6
- PAJMKGZZBBTTOY-ZFORQUDYSA-N treprostinil Chemical compound C1=CC=C(OCC(O)=O)C2=C1C[C@@H]1[C@@H](CC[C@@H](O)CCCCC)[C@H](O)C[C@@H]1C2 PAJMKGZZBBTTOY-ZFORQUDYSA-N 0.000 claims description 84
- 229960005032 treprostinil Drugs 0.000 claims description 77
- OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N FORSKOLIN Chemical compound O=C([C@@]12O)C[C@](C)(C=C)O[C@]1(C)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H]1[C@]2(C)[C@@H](O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N 0.000 claims description 70
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 49
- SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N Deoxycoleonol Natural products C12C(=O)CC(C)(C=C)OC2(C)C(OC(=O)C)C(O)C2C1(C)C(O)CCC2(C)C SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N colforsin Natural products OC12C(=O)CC(C)(C=C)OC1(C)C(OC(=O)C)C(O)C1C2(C)C(O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 claims description 32
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 claims description 32
- 229960002240 iloprost Drugs 0.000 claims description 29
- HIFJCPQKFCZDDL-ACWOEMLNSA-N iloprost Chemical compound C1\C(=C/CCCC(O)=O)C[C@@H]2[C@@H](/C=C/[C@@H](O)C(C)CC#CC)[C@H](O)C[C@@H]21 HIFJCPQKFCZDDL-ACWOEMLNSA-N 0.000 claims description 29
- 229960002890 beraprost Drugs 0.000 claims description 28
- CTPOHARTNNSRSR-APJZLKAGSA-N beraprost Chemical compound O([C@H]1C[C@@H](O)[C@@H]([C@@H]21)/C=C/[C@@H](O)C(C)CC#CC)C1=C2C=CC=C1CCCC(O)=O CTPOHARTNNSRSR-APJZLKAGSA-N 0.000 claims description 28
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 claims description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 16
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 claims description 15
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 12
- 229960001123 epoprostenol Drugs 0.000 claims description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 10
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 8
- 208000015322 bone marrow disease Diseases 0.000 claims description 7
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims description 7
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 6
- 230000007547 defect Effects 0.000 claims description 6
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 5
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 4
- 208000034737 hemoglobinopathy Diseases 0.000 claims description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 4
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 3
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 claims description 3
- KAQKFAOMNZTLHT-VVUHWYTRSA-N epoprostenol Chemical compound O1C(=CCCCC(O)=O)C[C@@H]2[C@@H](/C=C/[C@@H](O)CCCCC)[C@H](O)C[C@@H]21 KAQKFAOMNZTLHT-VVUHWYTRSA-N 0.000 claims 4
- 101100049053 Mus musculus Vash1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101150101537 Olah gene Proteins 0.000 claims 1
- 235000016787 Piper methysticum Nutrition 0.000 claims 1
- 240000005546 Piper methysticum Species 0.000 claims 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims 1
- 210000003953 foreskin Anatomy 0.000 claims 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 claims 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract description 8
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 18
- ARUGKOZUKWAXDS-SEWALLKFSA-N cicaprost Chemical compound C1\C(=C/COCC(O)=O)C[C@@H]2[C@@H](C#C[C@@H](O)[C@@H](C)CC#CCC)[C@H](O)C[C@@H]21 ARUGKOZUKWAXDS-SEWALLKFSA-N 0.000 description 15
- 229950000634 cicaprost Drugs 0.000 description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 9
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 9
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 8
- KAQKFAOMNZTLHT-OZUDYXHBSA-N prostaglandin I2 Chemical compound O1\C(=C/CCCC(O)=O)C[C@@H]2[C@@H](/C=C/[C@@H](O)CCCCC)[C@H](O)C[C@@H]21 KAQKFAOMNZTLHT-OZUDYXHBSA-N 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000003995 blood forming stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N UNPD107823 Natural products O1C2COP(O)(=O)OC2C(O)C1N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 229940095074 cyclic amp Drugs 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000011134 hematopoietic stem cell transplantation Methods 0.000 description 4
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 229940127293 prostanoid Drugs 0.000 description 4
- 150000003814 prostanoids Chemical class 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 4
- 206010002961 Aplasia Diseases 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 3
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N theophylline Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 101710117545 C protein Proteins 0.000 description 2
- 101100276977 Caenorhabditis elegans dapk-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 2
- 102000008130 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108010049894 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 2
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 2
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 208000002903 Thalassemia Diseases 0.000 description 2
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 2
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 2
- 102000055135 Vasoactive Intestinal Peptide Human genes 0.000 description 2
- 108010003205 Vasoactive Intestinal Peptide Proteins 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N adenyl group Chemical class N1=CN=C2N=CNC2=C1N GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- -1 cikaprost Chemical compound 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 2
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 2
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007939 sustained release tablet Substances 0.000 description 2
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 2
- JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N (+-)-Isoprenaline Chemical compound CC(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N (-)-norepinephrine Chemical compound NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N (R)-adrenaline Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229930182837 (R)-adrenaline Natural products 0.000 description 1
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 3 Isobutyl 1 methylxanthine Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(CC(C)C)C2=C1N=CN2 APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- 102000055025 Adenosine deaminases Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 1
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 1
- 102000002110 C2 domains Human genes 0.000 description 1
- 108050009459 C2 domains Proteins 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 101100289989 Drosophila melanogaster alpha-Man-Ia gene Proteins 0.000 description 1
- 101150070878 Ereg gene Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000868422 Homo sapiens Sushi, nidogen and EGF-like domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 101150021286 MAS1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150033052 MAS5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001065566 Mus musculus Lymphocyte antigen 6A-2/6E-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101150053131 PTGER3 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010034576 Peripheral ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000002808 Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide Human genes 0.000 description 1
- 108010004684 Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 108010088540 Prostaglandin E receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000008866 Prostaglandin E receptors Human genes 0.000 description 1
- 229940127473 Prostaglandin Receptor Agonists Drugs 0.000 description 1
- 108010050183 Prostaglandin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000015433 Prostaglandin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 101150109738 Ptger4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100344462 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) YDJ1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical class [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 102100032853 Sushi, nidogen and EGF-like domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000001871 Tachycardia Diseases 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102100030859 Tissue factor Human genes 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 206010047141 Vasodilatation Diseases 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- FQPFAHBPWDRTLU-UHFFFAOYSA-N aminophylline Chemical compound NCCN.O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2.O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 FQPFAHBPWDRTLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003556 aminophylline Drugs 0.000 description 1
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- CJGYSWNGNKCJSB-YVLZZHOMSA-N bucladesine Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](OC(=O)CCC)[C@@H]2N1C(N=CN=C2NC(=O)CCC)=C2N=C1 CJGYSWNGNKCJSB-YVLZZHOMSA-N 0.000 description 1
- 229960005263 bucladesine Drugs 0.000 description 1
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 1
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229940047120 colony stimulating factors Drugs 0.000 description 1
- 239000000306 component Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229930004069 diterpene Natural products 0.000 description 1
- 150000004141 diterpene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000012137 double-staining Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000688 enterotoxigenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 229960005139 epinephrine Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical group 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000002436 femur neck Anatomy 0.000 description 1
- 230000005294 ferromagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 101150077246 gas5 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical class O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011368 intensive chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940039009 isoproterenol Drugs 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002748 norepinephrine Drugs 0.000 description 1
- SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N norepinephrine Natural products NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940126578 oral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 235000019371 penicillin G benzathine Nutrition 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- 238000011458 pharmacological treatment Methods 0.000 description 1
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 1
- 239000002644 phorbol ester Substances 0.000 description 1
- UFTCZKMBJOPXDM-XXFCQBPRSA-N pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CN=CN1 UFTCZKMBJOPXDM-XXFCQBPRSA-N 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000001023 pro-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011555 rabbit model Methods 0.000 description 1
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 229940118867 remodulin Drugs 0.000 description 1
- MYFATKRONKHHQL-UHFFFAOYSA-N rhodamine 123 Chemical compound [Cl-].COC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=CC(=[NH2+])C=C2OC2=CC(N)=CC=C21 MYFATKRONKHHQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000614 rib Anatomy 0.000 description 1
- HJORMJIFDVBMOB-UHFFFAOYSA-N rolipram Chemical compound COC1=CC=C(C2CC(=O)NC2)C=C1OC1CCCC1 HJORMJIFDVBMOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950005741 rolipram Drugs 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000009168 stem cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000009580 stem-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 210000001562 sternum Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006794 tachycardia Effects 0.000 description 1
- 229960000278 theophylline Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 229940005605 valeric acid Drugs 0.000 description 1
- 230000024883 vasodilation Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/557—Eicosanoids, e.g. leukotrienes or prostaglandins
- A61K31/558—Eicosanoids, e.g. leukotrienes or prostaglandins having heterocyclic rings containing oxygen as the only ring hetero atom, e.g. thromboxanes
- A61K31/5585—Eicosanoids, e.g. leukotrienes or prostaglandins having heterocyclic rings containing oxygen as the only ring hetero atom, e.g. thromboxanes having five-membered rings containing oxygen as the only ring hetero atom, e.g. prostacyclin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/01—Modulators of cAMP or cGMP, e.g. non-hydrolysable analogs, phosphodiesterase inhibitors, cholera toxin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Винахід стосується способу поліпшеного приживлення гемопоетичних стовбурових клітин шляхом попередньої обробки ex vivo, що включає стадію змішування зразка, що містить гемопоетичні стовбурові клітини, щонайменше з одним аналогом простацикліну разом з неспецифічним цАМФ-активуючим агентом, переважно вибраним з холерного токсину й форсколіну для одержання суміші, стадію інкубування зазначеної суміші протягом періоду часу, достатнього для стимулювання Gальфа-шляху передачі сигналу в зазначених клітинах, і необов'язково стадію виділення зазначених стимульованих клітин. Винахід також стосується композиції для ех vivo посиленого приживлення гемопоетичних стовбурових клітин.
Description
гемопоетичні стовбурові клітини, щонайменше з одним аналогом простацикліну разом з неспецифічним цАМФ-активуючим агентом, переважно вибраним з холерного токсину й форсколіну для одержання суміші, стадію інкубування зазначеної суміші протягом періоду часу, достатнього для стимулювання Сальфаз-шляху передачі сигналу в зазначених клітинах, і необов'язково стадію виділення зазначених стимульованих клітин.
Винахід також стосується композиції для ех мімо посиленого приживлення гемопоетичних стовбурових клітин.
Даний винахід пропонує новий спосіб поліпшеного приживлення гемопоетичних стовбурових клітин шляхом попередньої обробки ех мімо, що включає стадії одержання зразка, який містить гемопоетичні стовбурові клітини, додавання аналога простацикліну для одержання суміші, стадію інкубації зазначеної суміші протягом періоду часу, достатнього для стимуляції з альфав- шляху передачі сигналу в зазначених клітинах, і необов'язково виділення зазначених стимульованих клітин.
Додатково, надається композиція, що містить трепростиніл, для використання при лікуванні індивідуумів, що зазнають трансплантації гемопоетичних стовбурових клітин.
Гемопоетичні стовбурові клітини (НС) є первинними клітинами, здатними до регенерації всіх компонентів крові протягом життя індивідуума, урівноважуючими своє самовідновлення з диференціюванням клітин-нащадків. Місце розташування НС переміщається в ході розвитку, і вони циркулюють протягом всього життя ссавців, входячи й виходячи із кровотоку, щоб зайняти нішу кісткового мозку в ході послідовних стадій хоумінгу, приживлення й утримання. Хоумінг є процесом, шляхом якого донорні стовбурові клітини потрапляють у кістковий мозок, а приживлення стовбурових клітин має на увазі їхній ріст у кістковому мозку.
Гемопоетичні стовбурові клітини мають лікувальні можливості завдяки своїй здатності відновлювати клітини крові й імунної системи у реципієнтів трансплантата. Крім того, НЗС мають здатність утворювати клітини інших тканин, таких як мозок, м'язи й печінка. Методи аутологічної і алогенної трансплантації кісткового мозку людини в цей час використовуються в якості терапії таких захворювань, як лейкемія, лімфома, та інших небезпечних для життя захворювань. Для таких операцій повинна бути виділена велика кількість донорного кісткового мозку, щоб забезпечити достатню кількість НОС для приживлення.
Для заселення ніші кісткового мозку іп мімо гемопоетичними стовбуровими клітинами необхідний Саг-перетворений сигнал (1). Ці недавні дані підтверджують більш ранні іп міго експерименти, що показали, що активація бо сприяє виживанню й диференціюванню гемопоетичних стовбурових клітин (2,3). боє являє собою єднальну гуаніновий нуклеотид с- субодиницю гетеротримірного (з-білка, який стимулює всі 9 ізоформ мембранозв'язаної аденілатциклази ссавців. (Зо може бути конститутивно активована ех мімо/іп міго за допомогою обробки клітин холерним токсином, оскільки холерний токсин АДФ-рибозилює каталітичний залишок аргініну ('86/187/201/202 точний номер аргініну залежить від сплайс-варіанта Сов); інтактний залишок аргініну необхідний для гідролізу СТР і приводить до дезактивації Сов (4).
Поліпшене приживлення дійсно може спостерігатися після попередньої обробки гемопоетичних стовбурових клітин холерним токсином: у кістковому мозку налічувалося приблизно у два рази більше (іп) клітин-попередників, якщо препарат стовбурових клітин був попередньо оброблений холерним токсином (1).
Однак для препаратів стовбурових клітин для пацієнтів, що зазнають трансплантації кісткового мозку, холерний токсин був би вкрай несприятливим. Холерний токсин (СТ), особливо його нетоксичний фрагмент пентамірної В субодиниці (СТВ), є мукозним ад'ювантом, що мають сильні імуномодулюючі властивості як іп мімо, так і іп міго, і являє собою один з найбільш сильних мукозних імуногенів. Холерний токсин і СТВ викликають сильне утворення
ІДА антитіл у кишечнику й тривалу імунологічну пам'ять. На цій підставі СТВ став важливим компонентом недавно розроблених пероральних вакцин проти холери й діареї, викликаної ентеротоксигенними Е. соїї. Сильну імуногенність СТ і СТВ у значній мірі можна пояснити їхньою здатністю зв'язуватися з рецепторами на поверхні слизової оболонки кишечнику.
Додатково, протягом природного ходу інфекції пентамірна частина В молекули токсину зв'язується з поверхнею епітеліальних клітин кишечнику й швидко ендоцитується разом з А субодиницею. Будучи ендоцитованою, каталітично активна А-субодиниця відділяється від пентамірної частини В і проникає в клітину крізь пору, утворену В-субодиницею. Усередині клітини вона постійно рибозилює 5 альфа-субодиницю гетеротримірного Сі-білку, приводячи до конститутивної продукції ЦАМФ. Це, у свою чергу, приводить до секреції НгО, Ма", К", СГ і
НОСОз у просвіт тонкого кишечнику, що обумовлює швидку дегідратацію й інші особливості, обумовлені холерою. При внутрішньовенному уведенні холерний токсин поглинається більшістю клітин (тільки деякі клітини захищені специфічними бар'єрами, таким як гематоенцефалічний бар'єр). Відповідно, при цьому буде спостерігатися збільшення ЦАМФ у більшості клітин тіла й безліч побічних ефектів (від тахікардії до вазодилатації, м'язового тремору, гіперглікемії і т.д.).
Таким чином, ці ефекти роблять холерний токсин недоцільним для медичного застосування відносно стимуляції гемопоетичних стовбурових клітин.
Однак, терапевтична значимість стимулювання стовбурових клітин є істотною при виконанні бо гетерологічної трансплантації кісткового мозку (тобто гемопоетичних стовбурових клітин, узятих в імуносумісних донорів) і є стандартною процедурою, використовуваної для лікування людей, що страждають від лейкемії, для лікування людей з генетичними дефектами в компартменті клітин крові (наприклад, гемоглобінопатією, такою як таласемія; порушеннями функції нейтрофільних гранулоцитів і т.д.).
Це також важливо у зв'язку з тим, що аутологічна трансплантація кісткового мозку є стандартною процедурою, яка використовується для того, щоб збільшити терапевтичне вікно цитотоксичних лікарських засобів, і тим самим уможливити високодозову інтенсивну хіміотерапію (5,6).
Гемопоетичні стовбурові клітини експресують усі чотири рецептори простагландину Е (ЕР1- 4). Попередня обробка гемопоетичних стовбурових клітин (диметильованим) простагландіном
Е2 збільшує їхнє приживлення (7,8). Цей вплив опосередковує канонічним Сов-залежним шляхом передачі сигналу, оскільки ЦАМФ-індукована активація протеїнкінази А (РКА) синергічна з М/пі-залежними сигналами стабілізації р-катеніну (9).
Імплантація мононуклеарних клітин (ММС5) аутологічного кісткового мозку (ВМ) може бути поліпшена за допомогою берапросту натрію на моделі кролика згідно Оїзика еї а. Метою цього дослідження була підтримка розвитку артерій при периферичній ішемії й ішемії міокарду.
Гемопоетичні стовбурові клітини, однак, являють собою специфічний тип клітин кісткового мозку (16).
Комбінація терапії стовбуровими клітинами й фармакологічного лікування описане Мадоппа ег а. коли простациклін випробовували в АЗС міокардіальному приживленні після внутрішньокоронарного введення (17).
Івйіїї М. еї а). розкривають, що вповільнене вивільнення простацикліну збільшує проангіогенну функцію мезенхімальних стовбурових клітин і ріст м'язових клітин в ішемічній тканині (18).
УМО2006/017169 описує імплантуємий сенсор з біологічно сумісним покриттям для контролювання росту тканини, яке може містити, серед іншого, аналоги простацикліну.
Інгібуюча дія цикапросту або ілопросту на синтез тканинного фактора, фактора некрозу пухлини й інтерлейкіну-1 р у клітинах ТНР1 людини описане в Стиїспієу 0. еї аї. (19).
Локалізація стовбурових клітин після трансплантації є критичним показником успішності
Зо трансплантації. У цей час для трансплантації необхідно велика кількість стовбурових клітин, оскільки стовбурові клітини не завжди успішно приживаються в кістковому мозку, і Є довгий період аплазії кісткового мозку, що приводить до зниження зрілих клітин крові.
Таким чином, дотепер затребуваним є надання способів і композицій для стимуляції НЗС з метою збільшення хоумінгу, приживлення й утримання виділених Н5С у кістковомозкових нішах суб'єктів, що зазнають трансплантації кісткового мозку.
Дана проблема вирішується за допомогою варіантів здійснення дан-ого винаходу.
Короткий опис винаходу
Зненацька було показано, що синтетичні аналоги простацикліну І2 (Рог), наприклад, трепростиніл, ілопрост, берапрост і цикапрост, здатні збільшувати рівень цАМФ у гемопоетичних стовбурових клітинах, що збільшує приживлення стовбурових клітин у кістковому мозку.
Аналог простацикліну, такий як трепростиніл, забезпечує кілька переваг у порівнянні із простагландіном Е2: () це стабільний аналог простацикліну/РсСі», який також стимулює ЕР2- і ЕР 4-рецептори (10). Таким чином, він має можливість стимулювати безліч С»-сполучених рецепторів без залучення інгібуючих (т.б., Сзі-сполучених) ЕРз-рецепторів, які інгібують нагромадження цАМФ.
Для останнього повним агоністом є диметил-РСЕг (1). Напроти, трепростиніл є лише низькоафінним агоністом ЕРз-рецепторів. (і) так як вони є метаболічно більш стабільними, ніж природні простацикліни, трепростиніл, ілопрост, берапрост і цикапрост можуть викликати більш тривалі ефекти при застосуванні іп мімо і, таким чином, підтримувати більш ефективне приживлення у кістковому мозку. (ії) тривале/повторне введення аналога простацикліну, зокрема, трепростинілу, ілопросту, берапросту й цикапросту, добре переноситься.
Даний винахід надає новий спосіб поліпшеного приживлення гемопоетичних стовбурових клітин шляхом попередньої обробки ех мімо стадії, що включає: а) одержання зразка, що містить гемопоетичні стовбурові клітини, і р) додавання, щонайменше, одного аналога простацикліну для одержання суміші, с) інкубації зазначеної суміші протягом періоду часу, достатнього для стимуляції з альфав- шляху передачі сигналу в зазначених клітинах, і необов'язково бо а) виділення й необов'язково очищення зазначених стимульованих клітин.
Відповідно до одного варіанту здійснення винаходу аналог простацикліну вибирають із групи трепростинілу, ілопросту, цикапросту й берапросту або їх фармацевтично прийнятних солей.
Відповідно до винахідницького способу також може надаватися суміш стимульованих і нестимульованих стовбурових клітин.
Зокрема, зразок є кістковим мозком. Стовбурові клітини можуть походити з будь-якого відомого джерела, зокрема, вони можуть бути Н5ОЗС, виділеними з периферичної крові, пуповинної крові або кісткового мозку.
Відповідно до винаходу трепростиніл може бути похідним, обраним із групи кислотних похідних, проліків, поліморфів або ізомерів.
Аналогічно, ілопрост, цикапрост або берапрост можуть бути похідними із групи кислотних похідних, проліків, їхніх поліморфів або ізомерів.
Відповідно до альтернативного варіанта здійснення винаходу зразок може бути змішаний, щонайменше, з одним аналогом простацикліну разом з неспецифічним цАМФ-активуючим агентом, переважно обраним з холерного токсину й форсколіну.
Відповідно до окремого варіанта здійснення винаходу композиція, що містить аналог простацикліну, надається для використання при лікуванні індивідуумів, що страждають від захворювань кісткового мозку, які можуть зазнати трансплантації гемопоетичних стовбурових клітин.
Відповідно до окремого варіанта здійснення винаходу аналог простацикліну вибирають із групи трепростинілу, ілопросту, цикапросту або берапросту або їх фармацевтично прийнятних солей.
Відповідно до кращого варіанта здійснення композиція містить трепростиніл.
Зокрема, індивідууми є індивідуумами, що страждають від лейкозу, дефекту компартменту клітин крові, трансплантації кісткового мозку після хіміотерапії або опромінення.
Відповідно до додаткового варіанта здійснення винаходу дефект компартменту клітин крові є гемоглобінопатією або порушенням функції нейтрофільних гранулоцитів.
Композиція винаходу також може використовуватися для лікування індивідуумів, що страждають від захворювань кісткового мозку, які зазнають трансплантації гемопоетичних клітин, шляхом уведення аналога простацикліну протягом, щонайменше, семи днів після
Зо трансплантації кісткового мозку. Зокрема, використовується аналог простацикліну, обраний із групи трепростинілу, ілопросту, цикапросту й берапросту, більш конкретно, трепростиніл.
Відповідно до додаткового варіанта здійснення надається композиція, що містить аналог простацикліну й стимульовані гемопоетичні стовбурові клітини.
Відповідно до додаткового варіанта здійснення надається композиція, що містить трепростиніл або його фармацевтично прийнятну сіль і стимульовані гемопоетичні стовбурові клітини.
Зокрема, для застосування на тваринах або в дослідженнях на тваринах композиції винаходу можуть додатково містити форсколін або холерний токсин.
Винахідницькі композиції можуть бути фармацевтичними композиціями.
Винахідницька композиція може вводитися будь-яким способом, відомим у даній області техніки, зокрема, вона може бути приготовлена для внутрішньовенного або підшкірного введення.
Аналог простацикліну може надаватися в перорально доступній формі, обраній із групи форм із тривалим вивільненням, таблеток або капсул.
Кількість аналогів простацикліну залежить від терапевтичного застосування або способу приготування стимульованих Н5ЗС. Як правило, для терапевтичного застосування ефективна кількість трепростинілу становить, щонайменше, 1,0 нг/кг ваги тіла.
Фігури
Фігура 1. Дослідження Гіп" клітинної популяції, утриманої магнітними частками. Вісь х (позначена АРС-С7-А) показує флуоресценцію, зареєстровану за допомогою суміші антитіл до маркерів напрямку диференціювання: СОЗєЄ для Т-клітин, СО45К(-В8220) для В-клітин, СО11Б і
Гу-62/ у-60 (Сі-1) для мієлоїдного (моноцитарного/гранулоцитарного) напрямку диференціювання, Тег-119 для еритроїдного напрямку диференціювання. Вісь у являє собою флуоресценцію, зареєстровану відносно антитіл до рецептора мишачого фактора стовбурових клітин с-КіИї. Очевидно, що лівий верхній квадрант (який показує клітини, негативні за с-Кії і маркером напрямку диференціювання) збіднений клітинами.
Фігура 2. Дослідження ГГ іп- клітинної популяції, яка не зв'язалася з магнітними частками. Як на Фіг. 1, вісь х (позначена АРС-С7-А) указує флуоресценцію, зареєстровану за допомогою суміші антитіл до маркерів напрямку диференціювання: СОЗеє для Т-клітин, СО45К(-8220) для 60 веток, СО11Б ї Гу-6СИ/ у-60 (Си-1) для мієлоїдного (моноцитарного/гранулоцитарного) напрямку диференціювання, Тег-119 для еритроїдного напрямку диференціювання. Вісь у являє собою флуоресценцію, зареєстровану відносно антитіл до рецептора мишачого фактора стовбурових клітин с-Кії. Очевидно, що нижній квадрант (який показує клітини, негативні за с-Кії і позитивні за маркерами напрямку диференціювання) збіднений клітинами, і що клітини переважно виявляються у верхньому лівому квадранті, де мали очікувати позитивні за с-Кії і негативні за маркерами напрямку диференціювання клітини.
Фігура З показує дослідження іп" (Фіг. ЗА) і іп" клітинних популяцій (Фіг. ЗВ) на наявність
Зса-1 і с-Кйї Панелі ЗА і ЗВ демонструють клітини, утримані на магнітних частках (охарактеризовані на Фіг. 1), що й перебувають в елюаті (охарактеризовані на Фіг. 2). Вони були пофарбовані, як зазначено в розділі Методи, і проаналізовані на наявність одночасно с-кКії (РегСР-Суб-5-А, вісь у) і Зса-ї (РЕ-Су7-А, вісь х). Очевидно, що позитивні за маркерами напрямку диференціювання клітини, проаналізовані на панелі А, виявляються в лівому нижньому квадранті, т.б. вони позбавлені як с-Кії, так і Зса-1. Напроти, клітини на Панелі В переважно перебувають у верхніх квадрантах, т.б. вони мають високі рівні або с-Кії (верхній лівий квадрант) або й с-Кії і 5са-1 (верхній правий квадрант), як і передбачалося для популяції гемопоетичних стовбурових клітин і некомітованих попередників.
Фігура 4. Нагромадження циклічного АМФ в (Гіп", с-Кіг, 5са-17) гемопоетичних стовбурових клітинах після стимуляції форсколіном, трепростинілом, ілопростом, берапростом або комбінацією форсколіну й простаноїдів. І іп- клітини (77105/аналіз) інкубували у присутності
ЇНіІаденіну для того, щоб попередньо метаболічно позначити пул аденінових нуклеотидів відповідно до Методів. Клітини інкубували під час відсутності (лівий стовпчик, позначений 0) і в присутності зазначених сполук. Накопичений (|ЗНІЦАМФ очищали шляхом послідовної хроматографії на колонках з божех АО50-Х8 і оксидом алюмінію й визначали кількість методом рідинно-сцинтиляційних вимірів. Дані є середнім ж 5.0. (середньоквадратичне відхилення) (п-4).
Фігура 5. Крива концентрація-відповідь для індукованого трепростинілом нагромадження
ЦАМФ в (Гіп", с-Кіг, Зса-1") гемопоетичних стовбурових клітинах. Умови аналізу відповідали позначенням на Фіг. 4. Дані є середнім х 5.0. (п--2).
Фігура 6. Ех мімо обробка гемопоетичних стовбурових клітин трепростинілом приводить до
Зо поліпшеного приживлення кісткового мозку в летально опромінених мишей. Гемопоетичні стовбурові клітини, приготовлені як на Фіг. 3, попередньо обробляли зазначеними сполуками (ЕК, форсколін) відповідно до Методів. Кількість лейкоцитів була визначена за допомогою
ЕАСЗ5. Зазначене число досліджених тварин.
Фігура 7. Відношення Губ5.2 і Губ5.1 позитивних клітин крові через 16 тижнів після трансплантації кісткового мозку. Губ.1 клітини були попередньо оброблені СТХ або трепростинілом і форсколіном.
Фігура 8. Відношення Їу5.2 і Губ5.1 позитивних клітин крові через 16 тижнів після трансплантації кісткового мозку. Їу5.2 клітини були попередньо оброблені СТХ або трепростинілом і форсколіном.
Докладний опис винаходу
Надані методи й способи збільшення хоумінгу й приживлення НС у мікрооточенні кісткового мозку мають цілком визначене біологічне й медичне значення. Локалізація стовбурових клітин після трансплантації вкрай важлива для клінічних процедур, тому що на сьогоднішній день для клінічної трансплантації потрібні величезні кількості стовбурових клітин, що приводить, таким чином, до необхідності більших кількостей донорських клітин. Такі способи також досить корисні, оскільки значне число аутологічних донорських трансплантатів містить недостатню кількість стовбурових клітин, або НЗС. Також пацієнти часто не можуть знайти гістосумісних донорів, що підкреслює необхідність способів і композицій для зниження числа
Н5С, необхідних для успішної трансплантації. Можливість поліпшити хоумінг і приживлення
Н5ЗС іп міїго або ех мімо дає можливість відбору меншої кількості клітин у донорів, тим самим зменшуючи час і дискомфорт, пов'язані зі збором кістковомозкових/лплериферичних стовбурових клітин, і збільшуючи число добровільних донорів НС.
Даний винахід, таким чином, надає новий спосіб поліпшеного приживлення НЗС шляхом попередньої обробки НС ех мімо, що включає стадії: а) одержання зразка, що містить гемопоетичні стовбурові клітини; б) додавання, щонайменше, одного аналога простацикліну для одержання суміші; с) інкубації зазначеної суміші протягом періоду часу, достатнього для стимуляції з альфаз-шляху передачі сигналу в зазначених клітинах; а) необов'язково, виділення зазначених стимульованих клітин або використання зазначеної суміші, що містить зазначені стимульовані клітини, для подальшого використання, наприклад, для лікування або бо трансплантації.
Зокрема, аналог простацикліну вибирають із групи трепростинілу, ілопросту, берапросту й цикапросту або їх фармацевтично прийнятних солей.
Трепростиніл є синтетичним аналогом простацикліну. Трепростиніл комерційно доступний як Ремодулін "М. Трепростиніл є мононатрієвою сіллю (18,2А,За5,УЗа5)-((2,3,3а,4,9,9а-гексагідро- 2-гідрокси-1-((35)-3-гідроксиоктилі|-1 Н-бенз|Цінден-5-іл|Іокси|оцтової кислоти.
Ілопрост комерційно доступний як "Іломедин" і є 5-(Е)-(15,55,6Н8,7 Н)-7-гідрокси-6|(Е)- (35,485)-3-гідрокси-4-метил-1-октен-б-ініл|-бі-циклоЇ3.3.Ф|октан-3-іліден)-валеріановою кислотою.
Берапрост Є 2,3,3а,8р-тетрагідро-2-гідрокси-1-(3-гідрокси-4-метил-1-октен-б-ініл)-1 Н- циклопента(Б)бензофуран-5-бутановою кислотою.
Цикапрост є /2-К2Е)-2-КЗа5,45,5Н,бавз)-5-гідрокси-4-((35,45)-3-гідрокси-4-метилнону-1,6- диініл|-3,За,4,5,6,ба-гексагідро-1 Н-пентален-2-іліденіетокси|-оцтовою кислотою.
Відповідно до винахідницького варіанта здійснення, щонайменше, два, зокрема, щонайменше, три різні аналоги простацикліну можуть використовуватися для зазначеного способу. Альтернативно, два, три, чотири, п'ять або шість, або навіть більше різних аналогів простацикліну можуть використовуватися для зазначеного способу. Даний спосіб переважно надає стимульовані клітини, які можуть безпосередньо вводитися індивідуумам і які не проявляють яких-небудь небажаних побічних ефектів завдяки більшим кількостям неселективних ЦАМФ-стимулюючих агентів.
Відповідно до додаткового варіанта здійснення винаходу надається спосіб поліпшеного приживлення гемопоетичних стовбурових клітин за допомогою попередньої обробки ех мімо, що включає наступні стадії: а. одержання зразка, що містить гемопоетичні стовбурові клітини й р. додавання аналога простацикліну й форсколіну для одержання суміші с. інкубації зазначеної суміші протягом періоду часу, достатнього для стимуляції 5 альфав- шляху передачі сигналу в зазначених клітинах і необов'язково а. виділення зазначених стимульованих клітин і необов'язково е. виділення й/або концентрування зазначених стимульованих клітин.
Відповідно до окремого варіанта здійснення винаходу співвідношення аналога
Зо простацикліну й форсколіну може приблизно становити 1:3. НС, оброблені форсколіном і аналогами простацикліну, можуть бути очищені перед реімплантацією, однак, ці НБС також можуть бути реімплантовані без додаткових стадій очищення, тому що невеликі кількості форсколіну можуть бути присутніми, але не викликати які-небудь негативні побічні ефекти.
Альтернативно, до стовбурових клітин може додаватися комбінація трепростинілу з одним із числа ілопросту, берапросту або цикапросту. Альтернативно, трепростиніл може додаватися у комбінації з більш ніж одним або, наприклад, із двома, трьома, чотирма або п'ятьма іншими аналогами простацикліну, наприклад, без обмеження, ілопростом, берапростом або цикапростом або їх фізіологічно прийнятними солями.
Відповідно до окремого варіанта здійснення для використання при дослідженнях на тваринах або лікуванні тварин, агент, що підсилює цАМФ (енхансер), такий як форсколін і/або холерний токсин, може бути додатково доданий до НС, або суміші НЗС/грепростиніл, ілопрост, цикапрост або берапрост до інкубації.
Період часу, необхідний для стимулювання 5 альфаз-шляху передачі сигналу в зазначених клітинах, може бути обмірюваний за допомогою відомих методів, наприклад шляхом вимірів
ЦАМФ, яких існує безліч варіацій: КІА, метод резонансного переносу енергії флуоресценції (ЕКЕТ) з ЕРАС (ерас!) (Ропзіоцеп В. еї аІ., ЕМВО герогів, 5, 12, 1176-1180 (2004)), радіохімічні методи і т.д. Стимульовані клітини, у яких має місце З альфаз-шлях передачі сигналу, можуть бути відібрані або відділені від нестимульованих клітин способами, відомими в даній області техніки, такими як ЦАМФ-репортер на основі ЕКЕТ.
Відповідно до варіанта здійснення винаходу час інкубації становить приблизно від 1 до 60 хв., переважно приблизно від 2 до 30 хв. цЦАМФ-залежний шлях є шляхом, необхідним для надання сприяння приживленню гемопоетичних стовбурових клітин. Винахідниками було показано, що аналог простацикліну здатний викликати підвищення цАМФ у гемопоетичних стовбурових клітинах. Це досягається за рахунок активації безлічі рецепторів, т.б. ІР- і ЕР-рецепторів, що призводить до підвищення б альфаз-передачі сигналу. Відповідно, аналоги простацикліну, подібні трепростинілу, ілопросту, цикапросту або берапросту більш ефективно збільшують рівень цАМФ.
Відповідно до конкретного варіанта здійснення трепростиніл є кращим аналогом простацикліну, використовуваним відповідно до способу даного винаходу. 60 Альтернативно, у певних способах і композиціях винаходу також може бути доданий,
щонайменше, один агент, обраний з енхансера циклічного АМФ (ЦАМФ) або ліганду рецептора простагланліну ЕР. Приклади енхансерів цАМФ включають, але не обмежуються цим, дибутирил цАМФ (ОВцЦАМФ), форболовий ефір, форсколін, скларелін, 8-бром-ЦАМФ, холерний токсин (СТ), амінофілін, 2,4 динітрофенол (ОМР), норепінефрин, епінефрин, ізопротеренол, ізобутилметилюксантин (ІВМХ), кофеїн, теофілін (диметилксантин), дофамін, роліпрам, простагландин Е:, простагландин Ег, гіпофізарний активуючий аденілатциклазу поліпептид (РАСАР) і вазоактивний поліпептид кишечнику (МІР), поряд з іншими, відомими в даній області техніки, можуть бути додані до стовбурових клітин, або сумішей стовбурові клітини/трепростиніл або стовбурові клітини/трепростиніл, ілопрост, цикапрост і/або берапрост перед інкубацією.
Приклади енхансерів ЦАМФ також включають цАМФ і аналоги ЦАМФ, такі як 5р-5,6-0ОСІ-ВІМР5 (ВІМР5), у числі інших.
Відповідно до окремого варіанта здійснення винаходу форсколін і/або холерний токсин або
А субодиниця холерного токсину додатково додаються до стовбурових клітин або до суміші стовбурові клітини/трепростиніл перед інкубацією.
В окремому варіанті здійснення зазначені енхансери цАМФ використовуються для проведення обробки стовбурових клітин тварин або для проведення досліджень на тваринах з урахуванням приживлення стовбурових клітин.
Щодо аналогів простацикліну, відповідно до даного винаходу термін "аналоги простацикліну" включає також похідні й аналоги зазначених речовин.
Терміни "аналог" або "похідне" відносяться до хімічної молекули, яка подібна з іншою хімічною речовиною за структурою й функцією окремим елементом, що часто структурно відрізняється, або групою, яка може відрізнятися внаслідок модифікації більш, ніж однієї групи (наприклад, 2, З або 4 груп), якщо вона зберігає ту ж саму функцію як вихідна хімічна речовина.
Такі модифікації є звичайними для фахівців і включають, наприклад, додаткові або заміщені хімічні фрагменти, такі як складні ефіри або аміди кислоти, захисні групи, такі як бензильна група для спирту або тіолу, і тре-бутоксилкарбонільні групи для аміну. Також включаються модифікації алкільних бічних ланцюгів, такі як алкільні заміщення (наприклад, метил, диметил, етил і т.д.), модифікації рівня насиченості й ненасиченості бічних ланцюгів і введення модифікованих груп, таких як заміщений феніл і феноксигрупа. Похідні також можуть включати
Зо коньюгати, такі як молекули біотину або авідину, ферменти, такі як пероксидаза хріну й таке інше, і радиоізотопно-мічені, біолюмінесцентні, хемолюмінесцентні або флуоресцентні фрагменти. Крім того, фрагменти можуть бути додані до описаних тут речовин для зміни їх фармакокінетичних властивостей, наприклад, для збільшення часу напівжиття іп мімо або ех мімо, або збільшення їх здатності проникати в клітину, у числі інших бажаних властивостей.
Також включаються проліки, відомі як посилюючі численні бажані властивості фармацевтичних препаратів (наприклад, розчинність, біологічну доступність, властивості, необхідні при виробництві, і т.д.).
Термін "похідне" також включає зміни вихідної послідовності, включаючи додавання, видалення й/або заміщення, які надають функціонально еквівалентні або функціонально поліпшені молекули.
Відповідно до окремого варіанта здійснення винаходу похідний трепростинілу вибирають із групи кислотних похідних трепростинілу, проліків трепростинілу, поліморфів трепростинілу або ізомерів трепростинілу.
Аналогічно, ілопрост, цикапрост або берапрост можуть бути похідними із групи кислотних похідних, проліків, їхніх поліморфів або ізомерів.
Термін "гемопоетичні стовбурові клітини" (НС) або більш загальний термін "стовбурові клітини" слід розуміти як еквівалентні терміни в описі даного винаходу, які звичайно відносяться до плюрипотентних або мультипотентних "стовбурових клітин", які дають початок типам клітин крові, включаючи мієлоїдний (наприклад, моноцити й макрофаги, нейтрофіли, базофіли, еозинофіли, еритроцити, мегакаріоцити/тромбоцити, дендритні клітини) і лімфоїдний напрямки диференціювання (наприклад, Т-клітини, В-клітини, МК-клітини), і інших, відомих у даній області техніки. "Стовбурові клітини", як правило, характеризуються здатністю утворювати безліч типів клітин (т.б. мультипотентністю) і здатністю до самовідновлення. Однак також можуть включатися олігопотентні й уніпотентні попередники. "Гемопоез" звичайно відноситься до процесу клітинного диференціювання або утворення спеціалізованих клітин крові з НЗС. У ході розвитку гемопоез переміщається з ембріональної печінки в кістковий мозок, який потім залишається місцем гемопоезу протягом всієї зрілості. Після усталення в кістковому мозку НЗС не розподіляються безладно по всій порожнині кістки. У значній мірі, НС звичайно виявляються в безпосередній близькості до ендостальної поверхні. Число більш зрілих бо стовбурових клітин збільшується при віддаленні від поверхні кістки.
Гемопоетичні тканини містять клітини, здатні до довгочасної й короткочасної регенерації, а також комітовані мультипотентні, олігопотентні й уніпотентні клітини-попередники.
Зокрема, зразок, що містить НЗС, може являти собою кістковий мозок.
Н5ОС можуть бути отримані відомими способами з будь-якого джерела, яке, як відомо, містить НЗС, зокрема, з периферичної крові, пуповини або пуповинної крові, плаценти й кісткового мозку. Альтернативно, також можливі такі джерела, як ембріональна печінка, ембріональна селезінка й аорта-гонадо-мезонефрос тварин. Н5С людського походження є кращими для способів і композицій винаходу. Наприклад, НЗС можна знайти в кістковому мозку дорослих, включаючи стегнові кості, шийку стегна, ребра, грудину й інші кістки. НС можна одержати безпосередньо шляхом відбору зі стегна за допомогою голки й шприца або із крові, часто після попередньої обробки цитокінами, такими як -С5Е (гранулоцитарні колоніє- стимулюючі фактори), які викликають вивільнення клітин з кістково-мозкового компартменту.
Н5ОС можуть бути ідентифіковані відповідно до певних фенотипічних або генотипічних маркерів. Наприклад, НЗС можуть бути ідентифіковані за їхнім малим розміром, відсутністю маркерів напрямку диференціювання (Іїп), низькому фарбуванню (бічна популяція) вітальними барвниками, такими як родамін 123 (гппо"9) або Ноеспз5і 33342, і присутності різних антигенних маркерів на їхній поверхні, багато з яких належать до групи кластера диференціювання (наприклад, СО5, СО1165, 2034, С038, 2090, 20133, 20105, 2045, О-1 (-І у-60/0), 7-4, Тег- 119 ї со-КІ). НЗС переважно є негативними за маркерами, які звичайно використовуються для визначення напрямку диференціювання, і, таким чином, часто відносяться до Ііп(-) клітин.
Більша частина НЗС людини може бути охарактеризована як СО5-, 20458 (В220), СО11», СВ- 15, бОо3ая, СбОо59х, Тнруубреооз, СО, Сб-кіИСО117- і Пп). Однак, не всі стовбурові клітини враховуються за допомогою цих комбінацій, оскільки певні НС є СО347: і СО38:. Також деякі дослідження припускають, що на поверхні найбільш ранніх стовбурових клітин може бути відсутній с-Кії.
Для очищення Ійп(-) НС за допомогою проточної цитометрії, або ЕБЕАС5, може використовуватися набір антитіл до маркерів напрямку диференціювання зрілих клітин відносно виснаження Ііп(жї) клітин або пізніх мультипотентних попередників (МРР), включаючи, наприклад, антитіла до СОЗепсилон, СО5, СО45К, СО116, СО16, О-1, 7-4 і Тег-119, СО 13,
Зо сор32іс033, 2071, СО 19, СО61, Мас-1 (Са 1в/СО18), аи-І, 117Ка, СОЗ3, 204, СО5 і СО8 у числі інших, відомих у даній області техніки. У даній області техніки відомі додаткові способи очищення, наприклад, способи, що використовують певні характерні риси "сигнальних молекул активації лімфоцитів" (БІ АМ) сімейства молекул клітинної поверхні.
НЗС, будь то клітини з пуповинної крові, кісткового мозку, периферичної крові або іншого джерела, можуть рости або розмножуватися в будь-якому підходящому, комерційно доступному або виготовленому на замовлення певному середовищі, із сироваткою або без сироватки. НБС з людського джерела являють собою кращі варіанти здійснення винаходу. Наприклад, у певних варіантах здійснення в безсивороточному середовищі може застосовуватися альбумін і/або трансферин. Крім того, можуть бути включені цитокіни, такі як Р-З ліганд, фактор стовбурових клітин (СЕ) і тромбопоетин (ТРО), у числі інших. НЗС також можуть вирощуватися в судинах, таких як біореактори. Середовище, що підходить для ех мімо експансії НБЗС, також може містити підтримуючі НС клітини, такі як стромальні клітини (наприклад, лімфоретикулярні стромальні клітини), які можуть бути отримані, наприклад, при дезагрегації лімфоїдної тканини, і які демонструють підтримку іп міїго, ех мімо і іп мімо збереження, росту й диференціювання НЗС, а також їх нащадків. "Пуповинна кров" або "кров з пупочної вени" звичайно має відношення до відносно невеликої кількості крові (приблизно до 180 мл), отриманої від немовляти, яка вертається в неонатальну циркуляцію. Пуповинна кров багата НОС і може бути зібрана й збережена для наступного використання відповідно до методів, відомих у даній області техніки.
Терміни "ех мімо" або "іп міго" відносяться до активностей, що мають місце поза організмом, таких як експериментальні роботи або вимірювання, зроблені в або на живій тканині в штучному навколишньому середовищі поза організмом, переважно з мінімальними змінами природних умов. У деяких варіантах здійснення такі тканини або клітини можуть бути зібрані й заморожені, і пізніше розморожені для обробки ех мімо. Експерименти з культурою тканини або процедури, що тривають довше декількох днів з використанням живих клітин або тканини, у більшості випадків прийнято вважати процедурами "іп міго", хоча цей термін може використовуватися взаємозамінним чином з терміном ех мімо. Перерахування "ех мімо уведення," "ех мімо обробка" або "ех мімо терапевтичне використання" відносяться в основному до медичних процедур, у яких один або більше органів, клітин або тканин отримані від живого або тільки що померлого 60 суб'єкта, необов'язково очищені/збагачені, піддані обробці або операції з метою вплинути на стовбурові клітини (наприклад, стадія ех мімо уведення, яка припускає інкубацію клітин з композицією даного винаходу для збільшення здатності НС прищеплюватися), і потім уведені тому ж самому або іншому живому суб'єктові після необов'язкової обробки або процедури.
Такі ех мімо терапевтичні варіанти застосування також можуть включати необов'язкову стадію іп мімо обробки або методичну стадію, таку як уведення композиції винаходу один або більше разів живому суб'єктові після введення органа, клітин або тканини. Для цих варіантів здійснення передбачається й місцеве, і системне застосування відповідно до добре відомих у даній області техніки методами. Кількість трепростинілу або кількість суміші, що містить трепростиніл і стимульовані стовбурові клітини, необов'язково разом з додатковими засобами, що вводиться суб'єктові, залежить від характерних рис цього суб'єкта, таких як загальний стан здоров'я, вік, стать, вага тіла й переносимість лікарських засобів, а також ступінь, вага й тип реакції на трепростиніл і/або клітинний трансплантат.
Відповідно до конкретного варіанта здійснення винаходу композиція, що містить аналог простацикліну надається для використання при лікуванні індивідуумів, що зазнають трансплантації гемопоетичних стовбурових клітин.
Відповідно до кращого варіанта здійснення композиція містить аналог простацикліну, обраний із групи трепростинілу, ілопросту, цикапросту й берапросту або їх фармацевтично прийнятних солей, конкретніше, вона містить трепростиніл.
Винахідницька композиція також може містити трепростиніл разом з одним або більше з числа ілопросту, цикапросту або берапросту. Альтернативно, композиція може містити ілопрост у комбінації з одним або більше з числа трепростинілу, цикапросту або берапросту або їх фармацевтично прийнятних солей. Альтернативно, композиція може містити берапрост у комбінації з одним або більше з числа трепростинілу, цикапросту або ілопросту, або їх фармацевтично прийнятних солей. Альтернативно, композиція може містити цикапрост у комбінації з одним або більше з числа трепростинілу, берапросту або ілопросту або їх фармацевтично прийнятних солей.
Зазначені суб'єкти можуть страждати від якої-небудь хвороби кісткового мозку, т.б. захворювання, при якому нормальна архітектура кісткового мозку «зміщена» злоякісними новоутвореннями, апластичною анемією або інфекціями, що призводять до зниження продукції
Зо клітин крові й тромбоцитів. Зазначені захворювання кісткового мозку можуть являти собою, наприклад, лейкоз, дефект компартменту клітин крові або необхідність трансплантації кісткового мозку після хіміотерапії або лікування опроміненням.
Конкретніше, дефект компартменту клітин крові може бути гемоглобінопатією, подібною до таласемії, або порушеннями функції нейтрофільних гранулоцитів. Крім того, цей винахід передбачає використання для лікування індивідуумів, що страждають від захворювання кісткового мозку, наприклад, внаслідок хіміотерапії або опромінення, і при цьому, зазнають трансплантації гемопоетичних стовбурових клітин, шляхом уведення, щонайменше, одного аналога простацикліну протягом обмеженого періоду часу після трансплантації кісткового мозку.
Лікування суб'єктів, що зазнають трансплантації кісткового мозку, з використанням, щонайменше, одного аналога простацикліну, щонайменше, одного аналога простацикліну разом з одним або більше, зокрема, двома, більш конкретно, трьома енхансерами цАМФ або суміші, що містить, щонайменше, один, зокрема два, більш конкретно три аналоги простацикліну, і стимульованих стовбурових клітин, необов'язково разом з додатковими засобами, такими як один або більш енхансерів цАМФ, також розглядається даним винаходом.
Конкретніше, енхансер цАМФ може бути форсколіном.
Щонайменше, один аналог простацикліну може використовуватися для поліпшення приживлення людських НОС під час трансплантації кісткового мозку або після відновлення кісткового мозку з використанням НЗС. Прискорене приживлення скорочує період, під час якого суб'єкти чутливі до потенційно летальних інфекцій, кровотечі й інших серйозних ускладнень.
Отже, аналог простацикліну повинен бути корисним методом лікування, призначеним для попередньої обробки донорного кісткового мозку з метою збільшення приживлення кісткового мозку (т.б6. шляхом зменшення числа необхідних клітин і скорочення тривалості аплазії кісткового мозку).
Зокрема, аналог простацикліну вибирають із групи трепростинілу, ілопросту, цикапросту або берапросту або їх фармацевтично прийнятних солей. Конкретніше, трепростиніл є кращим для застосування аналогом простацикліну.
Тривале лікування суб'єктів протягом декількох днів після трансплантації кісткового мозку аналогом простацикліну повинне давати в результаті поліпшені клінічні результати у вигляді поліпшення приживлення (т.б6. шляхом зменшення числа необхідних клітин і скорочення бо тривалості аплазії кісткового мозку).
Таким чином, відповідно до конкретного варіанта здійснення лікування проводять протягом, щонайменше, п'яти днів після трансплантації, конкретніше протягом, щонайменше, 10 днів, ще конкретніше протягом, щонайменше, 14 днів після трансплантації.
Відповідно до альтернативного варіанта здійснення винаходу розглядається композиція, що містить один або більш ніж один, аналог простацикліну й стимульовані гемопоетичні стовбурові клітини.
Альтернативно, у певних варіантах здійснення до композиції може додаватися засіб, обраний з енхансера циклічного АМФ (ЦАМФ) або ліганду рецептора простагландіну ЕР.
Відповідно до окремого варіанта здійснення винахідницька композиція також може містити форсколін.
Зокрема, композиції винаходу є фармацевтичними композиціями.
У зазначених композиціях можуть міститися додаткові фармацевтично прийнятні ексципієнти (допоміжні речовини), відомі в даній області техніки.
Кількість аналога простацикліну залежить від терапевтичного засобу або методу приготування стимульованих НС. Зокрема, ефективну кількість трепростинілу для терапевтичних варіантів застосування становить, щонайменше, 1,0 нг/кг ваги тіла.
Винахідницька композиція може вводитися суб'єктові будь-яким способом, застосовуваним і відомим у даній області техніки. Конкретніше, забезпечується внутрішньовенне або підшкірне введення.
Зазначена композиція може перебувати у формі для перорального приймання, обраної із групи форм із тривалим вивільненням, таблеток або капсул.
Попередній опис стане повністю зрозумілим на підставі наступних прикладів. Однак, такі приклади є лише характерними прикладами застосування на практиці одного або більше варіантів здійснення даного винаходу, і їх не слід розуміти як обмежуючі винахід рамки.
Приклади
Приклад 1
Матеріали й методи
Виділення кістковомозкових стовбурових клітин
Десять мишей (С57ВІ /б) умертвляли зсувом шийних хребців. Трубчасті кістки задніх кінцівок
Зо (тобто стегнові й великогомілкові) звільнили від м'язів і сполучної тканини й промили середовищем КРМІ, використовуючи шприц і голку 2772 б. Клітинну суспензію звільнили від видимої сполучної тканини, зібрали й перенесли в центрифужні пробірки. Клітини зібрали центрифугуванням (1200 об./хв."-100 д протягом 5 хв.) і ресуспендували в З мл буферу, лізуючого еритроцити (0,15 М МН:СІ; 10 мМ КНСО»; 0,1 мм ЕОТА, значення рН від 7,2 до 7,4).
Суспензію клітин інкубували протягом 2 хв. при 20 "С, а потім 4 хвилини на льоду. Після цього, додали КРМІ (10 мл) і клітини зібрали центрифугуванням і підрахували. Типово вихід клітин становив 3"10"/мишу.
Клітини ресуспендували в крижаному РВ5 (фосфатно-сольовому буфері), що містить 2905
ЕС5 (ембріональна теляча сироватка) при щільності клітин 2,57108 клітин/мл, до яких додали суміш біотинільованих антитіл (набір "І іпеаде Сеї! Оерієїйоп Кії" від Мійкепуї Віоїес), що містить лінієспецифічні антитіла до СО5, СОр458А (8220), СО11р6, а8-1 (-(у-60/0), 7-4 і Тег-119 при відношенні 0,1 мл розчину антитіл на 105 клітин. Клітини інкубували з антитілами протягом 20 хв. на льоду й осадили центрифугуванням. Після ресуспендування до суспензії клітин додали (3,9"108 клітин/мл) вторинні антибіотин-покриті мікробусини (0,2 мл/108 клітин, надані з набором
СІ іпеаде СеїЇ ЮОерієйоп Кі" від Мікепуї Віоїес), а суміш інкубували протягом 15 хв. на льоду.
Після цього зразок розвели в МАС5-буфері (30 мл), клітини зібрали центрифугуванням і ресуспендували в 6 мл МАС5-буферу. Цю суспензію завантажили на попередньо заправлені І 5 колонки, які містили феромагнітні частки, покриті сумісним із клітинами пластмасовим матеріалом. Як правило, використовували три колонки (2 мл суспензії клітин/колонка). Елюат містив клітини, негативні за лінійним маркером (клітини Гіп"), тоді як лінійно-комітовані клітини втримувалися на колонці. Клітини осаджували центрифугуванням і ресуспендували в мл РВ5.
Типовий вихід становив 77105 | іп- клітин/умиша.
Флуоресцентно-активуєме сортування клітин (ЕАС5-аналіз)
Антитіла, використовувані для фарбування маркерів клітинної поверхні, були отримані з наступних джерел: набір мишачих лінійних антитіл був отриманий від Весіоп бБісКіп5оп
Віозсіепсе5 (ВО 559971, що містить у біотинованій формі анти-СОЗє, анти-СО11р, анти-СО45В, анти-І у-6СИ у-6с, анти-Тег/-119), афінно очищені щурячі антимишачі СО16/С032 (тоцивзе Есуплі ріоск, ВО 553142) ії флуоресцентний барвник стрептавідин-алофікоцианін-Су7 (стрептавідин
АРС-Су7, ВО554063) також були від компанії Весіоп ОісКіпхоп Віозсіепсе5. Фікоеритрин(РЕ)-Су 60 7-мічені антимишачі ГубА/Е (-антиген стовбурових клітин-1 - са!) РЕ-Су7 (катал. Мо 25-5981-
82) і РЕ-Су5 антимишачі СО117 (с-Кі) (катал. Мо 15-1171-81) були від компанії еріоб5сіепсев5.
Відразу після МАС5З 17105 лінійно-позитивних (І іп) і негативних (І іп-) клітин перенесли в
ЕАС5 пробірки й тримали на льоду в 50 мк РВ5. У цей час наступні ЕАС5 антитіла розвели (1:50) і змішали в РВ5: анти СО16/С032 очищені (для блокування Ес-рецепторів), біотинільовані анти-СОЗє, біотинільовані анти-СО11Б, біотинільовані анти-СО45Е, біотинільовані анти-ї у- бОа/Г у-6С і біотинільовані анти-Тег-119, мічені стрептавідином АРС-Су7, РЕ-Су 7-мічені анти-
Зса-1, РЕ-Су 5-мічені анти-с-Кії. Цей майстер-мікс (суміш) (50 мкл) додавали до кожного зразка, який потім перемішували за допомогою слабкого струшування й інкубували за 4 "С у темряві протягом 15 хв. Після цього, клітини збирали центрифугуванням, промивали в 2 мл РВ:5 і ресуспендували в РВ5. Зразки аналізували на приладі РЕАС5 Сапіо І (Весіоп бісКіпзоп).
Використовували установку дискримінаційного вікна як зазначено далі: "ворота" для живих клітин були встановлені шляхом реєстрації переднього й бічного розсіювання. Живі клітини додатково розрізняли на основі експресії лінійних маркерів (т.б6., СО11р6, СО45Е, І у-6СИ/ у-6С,
Тег-119). Це давало можливість установлення «воріт» для І іп: клітин, які додатково аналізували відносно експресії Зса-1 і с-КІЇ.
Аналіз нагромадження ІЗНІЦАМФ
Пп- /вса1"-клітини інкубували в 1 мл середовища для стовбурових клітин (5іет Зрап 5ЕЕМ, ет СеїЇ Тесп 209650), що містить по 0,5 мг/л бензилпеніциліну й стрептоміцину, по 50 нг/мл мишачого фактора стовбурових клітин (тЗСЕ), людського ЕП-З, НІ -11 50 нг/мл, т-іІЗ (10 нг/мл) (усе від компанії Ргергоїесі)), 10 мкг/мл аденозиндезамінази (Коспе) і ("НІаденін (Регкіп ЕІптег, 1 мкСі/мл). Преінкубація тривала протягом 4 год. при 37 "С. Потім клітини стримулювали різними речовинами (форсколіном, трепростинілом і іншими простаноїдами; холерним токсином) протягом 1 год. Потім клітини осадили центрифугуванням (5 хв. при 100 4), середовище вилучили й осад лізували в крижаній 2,595 хлорній кислоті (0,9 мл), що містить 0,1 мМ цАМФ, тримали на льоду протягом 1 год. і нейтралізували 4,2 М КОН (0,1 мл)). Клітини, позитивні за лінійними маркерами, попередньо інкубували аналогічним чином, але в середовищі, що містило
ЕМРІ замість безсивороточного середовища для стовбурових клітин. АМФ і цАМФ розділили за допомогою послідовної хроматографії на колонках, що містять Ооу"ех АС50-Х8 і нейтральний окис алюмінію (12).
Зо Той факт, що відмінності можна бачити тільки в присутності форсколіну, є технічною проблемою - без підвищення чутливості форсколіном (тобто при його відсутності) сигнал є недостатнім, щоб бачити які-небудь відмінності між різними сполуками, т.б. ілопростом, берапростом і трепростинілом. Підвищення чутливості означає, що клітини стають більш чутливими (сенсибілізуються) до рецепторної відповіді, тому що ці клітини містять надзвичайно низький рівень ЦАМФ.
По концентраційній кривій (Фіг. 5) для трепростинілу можна бачити, що збільшення цАМФ є істотним без додавання форсколіну.
Трансплантація кісткового мозку
Ізогенних мишей-реципієнтів піддавали летальному опроміненню. Якщо цих мишей не врятувати шляхом внутрішньовенного введення гемопоетичних стовбурових клітин, вони гинуть протягом перших двох тижнів. Гіп' (бсаї!" і с-Кіф) гемопоетичні стовбурові клітини були приготовлені, як описано вище, і були попередньо оброблені ех мімо за відсутності та у присутності 10 мкМ трепростинілу, комбінації трепростиніл ї- 30 мкМ форсколін (ЕЗК), 10 мкг/мл холерного токсину протягом 1 год. при 37 "С. Після цього, клітини (3х105/миша) уводили через хвостову вену. Підрахунок лейкоцитів проводили за допомогою ГАС5. Підрахунок лейкоцитів проводили кожні 5 днів, починаючи з 9 дня (коли кількість лейкоцитів була «1 г/л).
Результати
Очищення гемопоетичних стовбурових клітин
Використання методу на основі МАС5 дозволяє утримати позитивні за лінійними маркерами (пу) клітини на магнітних частках і дає можливість виділення клітин, негативних за лінійними маркерами (Гіп): властивості клітинної популяції були охарактеризовані за допомогою ЕАС5.
МАС5-затримана популяція клітин дійсно була збагачена клітинами, які були пофарбовані лінійно-специфічними маркерами й були позбавлені рецептора стовбурових клітин с-КИ/СО117 (Фіг. 1).
На противагу цьому, клітини, виділені з елюату колонки, переважно були виявлені у верхньому лівому квадранті, т.б., вони показували високий рівень с-Кії і були позбавлені АРС-
Су?7-а флуоресценції, що свідчило про виснаження лінійних маркерів (Фіг. 2).
Популяції клітин додатково оцінювали шляхом подвійного фарбування й с-КіИ ії 5са-1 (антиген стовбурових клітин-1): лінійно- позитивні клітини були позбавлені цих двох маркерів бо (Фіг. ЗА), у той час як лінійно-негативна фракція експресувала високі рівні с-Кії або комбінації с-
Кії ї Зса-1 (Фіг. ЗВ).
Нагромадження циклічного АМФ у клітинах с-Ків і Зса1-
Пул аденінових нуклеотидів гемопоетичних стовбурових клітин (с-Кі ії Зса-1- популяція, дивися Фіг. ЗВ) метаболічно позначили ІНіІаденіном і перевірили їхню відповідь на трепростиніл і інші агоністи простагландинового рецептора. Оскільки ці клітини показують досить помірну цЦАМФ-відповідь, фермент сенсибілізували шляхом використання форсколіну. Цей дитерпен зв'язується в псевдосубстратній щілині між каталітичними С1 і С2 доменами аденілатциклази й робить різні ізоформи ферменту більш легко реагуючими на стимулюючий С білок Со (13-15).
Як видно з Фіг. 4, трепростиніл, берапрост і ілопрост як такі (рег зе) викликали помірне нагромадження цАМФ, порівнянне за величиною з нагромадженням, викликаним форсколіном 30 мкМ. Однак, у комбінації з форсколіном трепростиніл викликав збільшення рівня ЦАМФ, що перевершує збільшення, викликане ІР-(І простаноїд) рецептор-специфічними сполуками ілопрост і берапрост. Це можна пояснити, якщо взяти до уваги дію трепростинілу на ЕР(Е простаноїд)-рецептори (10). Трепростиніл викликав залежне від концентрації нагромадження
ЦАМФ у межах від 0,1 до 10 мкМ (Фіг. 5). Значення ЕС5о перебувало в межах 0,3 мкМ.
Трепростиніл виявився нездатним підвищити рівень цАМФ в Гіп" фракції гемопоетичних клітин (дані не показані).
Відновлення кісткового мозку гемопоетичними стовбуровими клітинами (іп, с-Кіг, Зса17)
Летально опромінених мишей відновлювали за допомогою внутрішньовенної ін'єкції 35105
Оп, с-Ків, Зса1- клітин. Кількість лейкоцитів починала збільшуватися з найнижчого рівня на 9 день і повільно збільшувалася протягом наступних декількох тижнів. Рівень лейкоцитів у день 60 після ін'єкції гемопоетичних стовбурових клітин був обраний у якості релевантної кінцевої крапки, тому що через 60 днів циркулюючі лейкоцити могли продукуватися гемопоетичними стовбуровими клітинами, що тільки прижилися. Як видно на Фіг. б, миші, ін'єктовані попередньо обробленими трепростинілом гемопоетичними стовбуровими клітинами, мали значно вищі рівні циркулюючих лейкоцитів, ніж ті, що одержали оброблені носієм гемопоетичні стовбурові клітини (р«0,05, І-критерій Ст'юдента для непарних даних).
У якості додаткових контролів тваринам ін'єктували: () клітини, оброблені холерним токсином, оскільки він є найбільш ефективним і стійким
Ко) активатором Сов, (і) форсколіном, оскільки, як зазначено вище, він безпосередньо активує ізоформи аденілатциклази, (ії) комбінацією форсколіну й трепростинілу.
Очевидно, що трепростиніл був також ефективний у якості позитивного контролю як і холерний токсин, який, як було встановлено, є ефективним ех мімо впливом (1,2).
Приклад 2
Виділення кістковомозкових стовбурових клітин
Мишей С57ВІ /6 і В65./І. забивали й виділяли кістковомозкові стовбурові клітини, як описано в прикладі 1.
Попередня обробка виділених стовбурових клітин іп міго
Кістковомозкові стовбурові клітини, отримані від мишей С57ВІ/6 або С65)Ї, попередньо обробляли іп міго холерним токсином (СТХ) або комбінацією трепростиніл.форсколін (Е5К), і стовбурові клітини позначили ГГ у5.2 або ГГ у5.1.
У першому експерименті кістковомозкові стовбурові клітини від С57ВІ/6 мишей використовували без попередньої обробки, а стовбурові клітини позначили І Уу5.2.
Кістковомозкові стовбурові клітини від СбОЇ були попередньо оброблені іп міго холерним токсином або комбінацією трепростиніл.форсколін, а стовбурові клітини позначили ГГ у5.1.
Для порівняльних досліджень суміш клітин 1:11 Губ5.1- ії Губ52ж уводили мишам шляхом трансплантації кісткового мозку, і із самого початку було виміряно співвідношення Гу5.2 ї Губ5.1 позитивних клітин крові. Далі через 16 тижнів після трансплантації кісткового мозку був обмірюваний ріст (розростання) клітин крові. Результати показано на Фіг. 7, на якій ясно видно, що попередньо оброблені трепростинілом/Е5К клітини (Гу5.1ж) показують значно збільшене розростання в порівнянні з неопрацьованими клітинами й клітинами, попередньо обробленими
Ст.
У другому експерименті кістковомозкові стовбурові клітини від С57ВІ /6 попередньо обробили іп міго холерним токсином або комбінацією трепростиніл.форсколін, а стовбурові клітини позначили Губ5.2. Кістковомозкові стовбурові клітини від Сб. мишей, позначені ГГ у5.1, використовували без якої-небудь попередньої обробки.
Ї в цьому випадку для порівняльних досліджень суміш клітин 1:11 ГубБ.1- ї Губ5.2-- уводили бо мишам шляхом трансплантації кісткового мозку, і із самого початку було виміряне співвідношення ГГ у5.2 і Гу5.1 позитивних клітин крові. Потім через 16 тижнів після трансплантації кісткового мозку було виміряно розростання клітин крові. Результати показані на фіг. 8, де знову явно видно, що попередньо оброблені трепростинілом/Е5К клітини (Гу5.2--) показують значно збільшене розростання в порівнянні з неопрацьованими клітинами й клітинами, попередньо обробленими СТ. Таким чином, можна бачити, що ефект трепростинілу й форсколіну не залежить від джерела походження клітин кісткового мозку.
Таким чином, комбінація трепростинілу й форсколіну збільшує приживлення гемопоетичних стовбурових клітин і є настільки ж або навіть більш ефективним, як і попередня обробка холерним токсином.
Посилання 1. Адатз СВ, АЇПеу ІВ, Спипа ШІ, Спабпег КТ, Увапзоп МТ, Го Свєїізо С, Магвівї5 Е5, СНеп М,
МУвіпвівіп І 5, (іп СР, Кгопепрега НМ, бсадаєп ОТ (2009) Наєтайюроівєїйс 5іет сеї дерепа оп
Саз-теаіагеа 5ідпаїїпу о епдгай бопе татом. Маїиге 459:103-107. 2. Вехієї ТМ, М/пейоп АО, Неужопй СМ (1985) Іппіріогв5 ої споїега іохіп-іпдисейд адеповзіпе дірпозрнаїе гпірозуїайоп ої тетбБбгапе-а55осіаїєй ргоївїп5 БіосК 5ієт сеї! ашегепііайоп. Віоса 65:1544-1548. 3. Гопд ММУ, Нейпег СН, Стадомувкі ГІ. (1988) Споїега їохіп апа ріогброї аїіевієтв зупегаівіїсану тоамшіаге тигіпе петаїороїеїїс ргодепіог сеї! ргоїїТегайоп Ехр Нетаїйо)!. 16:195-200. 4. Егеізвтицйй М, Сіїтап АС (1989) Мшиїайопв ої Сза аезідпей о акег Ше геасіїміу ої їйе ргоїеїп м/йй Басієгіа! Ююхіп5. ЗИиБ5ІйШшіоп5 аг АНСИ87 тези іп Іо55 ої Сптразе асіїміїу. / Віої Снет 264:21907- 21914. 5. АКвепіїйемісй І, Ріїпп І (2002) СпетоїШегару апа ропе таїтому гезегуе: Іеззопв Ієатей їот ашоіодоиз 5ієт сеї! Ігапзріапіавноп. Сапсег Віоїпег Надіорнант 1 7:399-403. б. Амжедап АА (2002) Ніднп іпівпейу гедітеп5 мйй ашоіодои5 Петаїороїієїїс вієт сеї
Тапзріапіайоп аз ігеайтепі ої тиПіріє туеіота. Апп Тгап5ріапі 7:38-43. 7. Мопп ТЕ, Соевзвіїпд МУ, УМаїКієу СА, І епдеїКе С, Корапі КА, Гога АМ, У/ерег СУ, Вомтап
ТМ, ЧУапд ІН, Огоззег Т, ЕйгдегаІй СА, баїієу СО, ОгКіп 5Н, 20оп І (2007) Ргозіадійіп Е2 гедшаїев мепебргаїе паетаїйороїеїйс віт сеїЇ потеовіавів. Майте 447:1007-1011.
Зо 8. Ноддай у, 5іпдйп Р, затраїйй У, Рез ЇМ (2009) Ргозіадійіп Е2 еппапсе5 петаїйороїеїіс віет сеїЇ потіпо, зигуїмаї, апа ргоїїегайоп. Віоса 113:5444-5455. 9. Сиіоє5віїпу ММ, Мой ТЕ, Гоемег 5, І ога АМ, І єе 5, БіоісКк-Соорег СІ, М/відіпдег С, Ридег М,
Оаієу БО, Мооп ВТ, 7о0п ІІ (2009) Стьепеїїс іпіегасіоп ої РОЕ2 апа М/пі в5ідпаїїпу гедшіаїев демеІортепаї! зресіїїсайоп ої 5іет сеїЇ5 і гедепегайоп. Сеї! 136:1136-1147. 10. Аюпоїйї ОМ, Реге5 СМ, бегелапі СН, ВаїЇїпдег ММ, Сагеіеп5 УК, СоІїетап М, Мооге ВВ,
Реебіе5 НА5, Рассіоїї ІН, Реїег5-СоЇдеп М (2007) Зупіпеїїс рговіасусіїп апаодв айегепііайну гедшасе тасторпаде їТшпсіййп міа адівіїпсі апаіод-гесеріог Бріпаїпу 5ресіїйсйієв. У Іттипо! 178:1628- 1634. 11. Кігіуата М, О5піКирі Р, Кобауазпї Т, Нігаїа М, Бидітоїо У, і Магитіуа 5 (1997) І їідапа ріпаіпод 5ресіїісціев ої пе еідні їуре5 апа зибіурев ої Ше тоизе ргозіапоїд гесеріог5 ехргеззеай іп
СНіпезе патвієг омагу сеїІ5. Вг / Рнпнаптасої 122:217-224. 12. доппзоп ВА, АЇмаге7, В, Заіотоп, У. (1994) ЮОеїептіпайоп ої адепуїу! сусіазе саїа|уїс асімпну ивіпа зіпаіє апа доиріе спготагодгарніс ргоседитге5. Меїподз іп Епгутоіоду 238:31-56 13. Тезтег У), Зипанага АВК, Сіїтап АС, Зргапуд ЗА (1997) Стгузіа! вігисійге ої Ше саїапуїйс дотаїпз ої адепуїу! сусіазе іп а сотріех м/йй Сза.зТРУуБ. Зсіепсе 278:1907-1916. 14. Зипапага ВК, Оеззацег СМУ, Сітап Асі (1996) Сотрієхпйу апа аїмегейу ої таттаїіап адепуу! сусіазе5. Аппи Нем Ріагтасої Тохісої! 36:461-480. 15. Кидіасек О, Мійегацег Т, Мапоїї С, Нопепеддег М, Тапу МУ, Егеіввтий М, Ківивв С (2001)
Іппірйоп ої адепуїу! апа диапуїу! сусіазе ізоїогт5 ру Ше антиміга! агид Тозсагпеї. У Віої Спет 0 276:3010-3016. 16. ОївиКа Н. еї аїЇ., Те рговіасусій апаіод Бегарго5і зодішт ацдтепів Ше ейісасу ої
ІШегарешіс апдіодепез5і5 іпдисей Бу ашоіодои5 ропе тагтгом/ сеїЇ5, А... Мабзс.5игу, 2006, 20:646- 652. 17. Мадоппа В., "Рговіасусіїп ітргоме5 Ігапзсогопагу туосагаїйа! деїЇїмегу ої адірозе іі55!це- дегімеа 5іготаї сеїІв", Емпгор. Неай дошт., 2006, Мої. 27, Мо. 17, 2054-2061. 18. Івпії М. еї аї., "Мезепспута! 5ієт сеїІ-базей депе ІШегару мййп рговіасусіїп 5зупіпазе еппапсей пеомазсиціагізайіоп іп Піпаїйтб ізспетіа", 2009, Мої. 206, Мо. 1, 109-118. 19. СтшісНіву 0. У. єї аІ., "ЕНесів ої ргозіасусіїп апаіод5 оп їйе зупіпезів ої їіззцє Тасіог, штог песговів Тасіог-аІрпа апа іпіепПешкіп-1р іп питап топосуїіс ТНР-1 сеїІ5", у.. Рпапта. і Ехр. Тпегар, бо 1994, Мої. 271, Мо. 1, 446-451.
Claims (16)
1. Спосіб поліпшення здатності приживлення гемопоетичних стовбурових клітин (НЗС) шляхом попередньої обробки НЗС ех мімо, що включає наступні стадії: а) змішування зразка, що містить гемопоетичні стовбурові клітини, щонайменше з одним аналогом простацикліну разом з неспецифічним цАМФ-активуючим агентом, переважно вибраним з холерного токсину й форсколіну для одержання суміші, Б) інкубування зазначеної суміші протягом періоду часу, достатнього для стимулювання Сальфа:-шляху передачі сигналу в зазначених клітинах, і необов'язково с) виділення зазначених стимульованих клітин.
2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що зазначений аналог простацикліну вибирають із групи трепростинілу, ілопросту, цикапросту й берапросту або їх фармацевтично прийнятних солей.
3. Спосіб за п. 1 або 2, який відрізняється тим, що зазначений аналог простацикліну є трепростинілом.
4. Спосіб за п. З, який відрізняється тим, що зазначений трепростиніл є похідним трепростинілу, вибраним із групи кислотних похідних трепростинілу, проліків трепростинілу, поліморфів трепростинілу та ізомерів трепростинілу.
5. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-4, який відрізняється тим, що зазначений зразок є кістковим мозком.
6. Композиція для ех мімо посиленого приживлення гемопоетичних стовбурових клітин, яка містить щонайменше один аналог простацикліну разом з неспецифічним цАМФ-активуючим агентом, переважно вибраним з холерного токсину й форсколіну, і носієм.
7. Композиція за п. 6, яка відрізняється тим, що зазначений аналог простацикліну вибирають із групи трепростинілу, ілопросту, цикапросту й берапросту або їх фармацевтично прийнятних солей.
8. Композиція за п. 7, яка відрізняється тим, що зазначений аналог простацикліну є трепростинілом, переважно похідним трепростинілу, вибраним із групи кислотних похідних Зо трепростинілу, проліків трепростинілу, поліморфів трепростинілу або ізомерів трепростинілу.
9. Композиція, яка відрізняється тим, що містить щонайменше один аналог простацикліну разом з неспецифічним цАМФф-активуючим агентом, переважно вибраним з холерного токсину й форс коліну, і стимульовані гемопоетичні стовбурові клітини, отримані відповідно до способу за будь-яким з пп. 1-5.
10. Композиція за будь-яким з пп. б або 9, яка відрізняється тим, що є у формі для внутрішньовенного або підшкірного введення, або у формі для перорального введення, вибраної з форм із тривалим вивільненням, пігулок і капсул.
11. Композиція за будь-яким із пп. 6-10, яка відрізняється тим, що хвороба кісткового мозку є лейкозом, дефектом компартменту клітин крові, хворобами кісткового мозку, викликаними хіміотерапією або опроміненням.
12. Композиція за п. 11, яка відрізняється тим, що вказаний дефект компартменту клітин крові є гемоглобінопатією або порушенням функції нейтрофільних гранулоцитів.
13. Композиція за будь-яким із пп. 6-12, яка відрізняється тим, що призначена для застосування при лікуванні суб'єктів, що страждають від хвороби кісткового мозку, шляхом уведення аналога простацикліну разом з неспецифічним цАМФ-активуючим агентом, переважно вибраним з холерного токсину й форсколіну, щонайменше впродовж 7 днів, переважно щонайменше впродовж 10 днів, переважно щонайменше впродовж 14 днів після трансплантації кісткового мозку.
14. Спосіб за будь-яким з пп. 1-5, який відрізняється тим, що вказані стовбурові клітини отримують з пуповинної крові, донорного кісткового мозку або плаценти.
15. Композиція за будь-яким з пп. 6-10, яка відрізняється тим, що вказані стовбурові клітини походять з пуповинної крові, донорного кісткового мозку або плаценти.
16. Композиція за будь-яким з пп. 11-13, яка відрізняється тим, що вказані стовбурові клітини отримують з пуповинної крові, донорного кісткового мозку або плаценти.
поня ВИК ; | я й До» ж кож х ще т, За | хо ожююою М ГК-Я пи о М М ш ой іх вк ей ей х. й ак я Я е Фанні? ке кушеи «У ва Не ке З см БІС Ге З Ї нн НВ АН Й НА коні с й: а и ох З Ей ее СУ т З ї нини я ос ж ж х «8 зк З й сх хо ко жо оре Кк зай й зва АН А ДО ефе ; 5 ей, шк; тео чаюа й ! й Є я і З Яр с я йо з их я К Й С я ен НИ: М жа Й фон кенккх ай т С ТЕН ша ві рн. ее Сх | . М, Ку ШЕ пед ок х Ша суд снах Кк у: треки ВА: в ж, Я я | ї хай щі гу З ШУ с ж. г Еф й С е кий ва ка дк - «а | ли Ди ах У іх очі чень: У Б чт о у м НЕ: Кн м и с: ий с
Га. Ян бок ТАН Ж» у, ее ВІ ета В І вай ох хе У ; і Кеті яти Сн щі Ві з щи ех муч и це че Аочкмоо а т в : й : п ГІ ! оса. їн і х де й шее Ф че Е мкс, о ж З ще ще МУ й й ! «я Дт в як і б» ї ше, ; КИЙ вашу, у, Де кА Б ді; ЗКУ зак ще їх з ' я Ї к у тех х з? «лу жо Кі й З р не щі І ще Я -, х ще - і В жує | хо ох Ж - а А: ЛОША «а ІЗ «ОВ «су ОМ Я и и ія сне кож КАНОН ВВ Ку хау че УЖ І й нак Шк В се Ж ВЕК е шкі и ? и не Ку Аж, ЖЕ Ше нн ОН. в С Ж а в ак р ЕХ хе Ко кот я Я шт ЖК А ична, 9 я й НАХ ши Я а Я. й «и, ух Мо ши - ЖЕ ж ! ме ку У ий ї і я К киОту ПК що і ці Що Ж З в і ща ке | ї Ї ж і Як Ї й І шик У Мк «ік ей і У І! М. І і Фе ? оку ав с - «ак ; як пд Рв НКИ в Фон Ох в у я ох, ВЕ й «а | ок зх вій й Я. пе ї ; т х їж . Ж г: Ї
Сак. І ех МЕ з не ; Б. Я о а ї я ! «1. Е В Ї х в їх зх е Їх че мк й е ГИ я | і. Шк НІ ГУ фр те в: к - холи В х е ке й Бо г шк три іні вних В Ш т В З 5 ке і ЯН ; с са "А ї., ЗК ре ярок ЕН оз ви о Й а «| 2 й х че Е ке х ч жа Яуссже м Кс й мана В с Ше з о зе пав ШУ Ка Ж в щ се р ж "З 8. . й ше и и БІ су о зе є Де жир, - Е я й то анндаи їй; х - -е маш ит ання о вах як Кава
! як сок КЕ «У Е КЗ г о. щу ШК: п. жк - ЯН т - і ГК со ЕК сн : я З : З МАК ПЕК їй п ГК У Ж ВО оно» о М в с. ши я с с | | Я сх с жу стро М дек КБ ко ВОК БО ш аж НН Ем зни ТРУ З і. о ВЕ ВО р у зе ЕЕ и ий ЕЕ. . ПИ во ГК ЗІ Кум Її ЕЕ ке . шк. зе Б 5 Б В ОО У Б БЕ ОМ ШИ Я а І З МК ший | о о. ш. ЕЕ шо ша ше ше Ден ен м. й й я й я м шо «оч -е ку сек с ре; З ка я т 00 3 с 5 дм с сл ще КЗ й І мо а Б Б о са її ел Ж Я ш ке Жак її ке 5 Ах Со щь ха ке Що ду в в КЕ ш і, ПЕ І ще Бо - а У ж Бочячя 2 г є яке її СЕ Га КЕ Кк ме з о Ж ка Ем) З КУ ї- СЬ б м їх я г ЩО їх їх
Фіг. 4 к «ої і уч зо. р в. В р Я, 800 ще 7 з. щі ; ! є 00» що Е ва їй 10.0 100,0 Трепростиній (МКМ)
Фіг. 5 ше: пев пев пе пшй я ше 3 ОМ ВМО шина ш- шт щщ МОЯ По ВО ПО ЕВ, п "кв шт" т" шщ жк ВО, ПО ВО я я я І ВОМ В ОО ОО МО с КО о В ПООО ДО зни т щ щ- шт он Її ЕК ППП НИ ОПП ПППИИИПИИ ИН ПИ хх 5 5 в і Б: ІІІ В - ке ш т -7"шГш 7п«"сЕ У ДО Во ВО Есе ї І БО ПО ДОК ОО ПО ж ВО Вон вв ВО ВО ж. шщ-ш щ т" щт й вкйкю ВО кю В кккюкюю вн нн несення вки ВВ ооюю й «5 ск їх я Е Ж як ж Ех в о щ а і З г г ш Ж т Ка ща С Ро с Гм 1Жх Га - не о щ а щі З с Ж гай р- га Ге "шо рик ї а Е 25 г ща сь ї- ІЗ, - і Е
Фіг. 6
Ж в з І Й х К клжя Ж ; реч: ге ше СЕ ІЗ 1) Ж З ЕЕ в КО че і Ки Е й ГТ є є ж що Кв НИЕІИНеР НЕ НЬ но Беж, у КОН м. ж й я "звів ТИ г МО ЩЕ ШЕ в - о ва КЕ - ИН ЩЕ ШИ ен и в Ше ШЕ БЕК ШИНИ З БЕ ОА Я, "в у кв Ж Н З З : ВУОВО ІХ Мен ОК МАВ Х -Ж А КУ Вес ЖК Ж ву тя з Он, : сю в що.
Е х я зі: ВИ го ШЕ ее БА Б 5 А йже ОА я их й Га С.
С ще ск Є ЖЕ їз БО Бе ШИ З б Ге КК Ек ши ек Те жа Е рАлкААККККККК ко кюсннссн Ко ЖккЕкккннккккн о Тх її МК и НИ Ех ; г ШІ ши ше ши шк Об с ще: ще З І в. я В а зе я ха і і й Ь і ЗЕ з Ах В жк їх Я г ай мк ТУ Ця Ж із Бех о ОВ що " ПО ща ча -і М ко ших Кк Кк 5 ще ве о В са ен Є Є олах ве чен і мері ві Ки «ЩЕ я «ВЕ ЗИ ка Є є Ї р Є У ре ех За п по з К Ка пд КУ ЩЕ г її Зх Я ща з ДК ожоджкжлжнккхху ОС Ж я чі В певна сення зн У З ще ЕВ шин "В скхкюжкну: т ба Ж , 5 ою КОД г 5 Й ту Ж В ФК -в МОВЦЯ ща екор ва су х ; вже Вес ЗИ як м, ВЕУ МН ; щ н к я.
У ОО я ; . к ДИ оку МЕ З Га Я ши и ОНИ. гі нь ик и ЕНН: ванвалевсяя і ій - її Ж. 5, х МеВ Я Я ох хна шк х З зх ко СА ш.
В -Е я І ня чт, ї.
БЕ | о ж ! І й Зб щує я ГАІШ енсж МЕ. не: М ей НЕ, КК сік вк вив із ях й ГА Ї Гей ну о М в В : «В 33 КН чу В рак х Й ху. щ ДЕ шу ай нин з шо З ЩА.
Як За ще
Кк й 5 аж ! ши и Н Се ДЕ и : Ж, ОМ Є ик Як ших ше м. чех т КИТИ ВНИМ Я ще НЕ шах щен, їе С. Ін ЕС нн кі КІВ ек і. ЕЕ пОФАЧЕ що рес кан КВ о МИНКНОЙ Калажкужакнн нн с: вв. ЗНО їх Гу кб з М В: їх слу ! шин ше в со Б и БЖ, фс а ї:
І. ке щ ж Б ЕД є се щ ША ШК Де НІ шва й ши ше коки ше що Ой ре СК КО с Й; як с САДИ шия ЗЕ НИ чай ї ф Уа Ф що Ж Що екв Зї. ення і с ооо Ще м ША Не: Я МОЯ Фе й КЕ ви ШОК Ме ! С ШИ зе с нт ху КАН со як ж й Зак е щ 5 шк о п З що -Е ОКО Б в: В МЕ; - хо 5 в кох с ОВ Ж В Ей Ей, Ан Ки Й леї реж с К оо х жк Га | Я пе С ее КІ ме с вт й Ге ; реє шт я Гж й ШИ ють Й й не й Щ Ку тож й т ву тин фе ре кій Фе щь се ПіКИК А ее сне Де м є о Ко я шо Фф че ой Ф ще пщо Ж - їх се Ж х п. шій сх: г В іх З Б " Та Же ї | жо еф: БІ В ше и шк пош І наш ша я Тай, й я Ц що ! и и Кох ЕВ Е 0З г ше не р ак М ши к 5. Бу «В | се КУН С ИН Я Унів втр нан? КОЖНІ : КО -
е с. В С ОК Е ху шшЕ шще г ншшщк ше шши ншк А Є ж ЕЕ НИ жк обо АН 1 МУ З ге ші з В З У ШІ Е ї ЛЕ ф. В: іо; ОК ас я Й В «В з з ци ! г ча Ж щу ї Ж
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP11150835 | 2011-01-13 | ||
| PCT/EP2012/050484 WO2012095511A1 (en) | 2011-01-13 | 2012-01-13 | Method for enhancing engraftment of haematopoetic stem cells |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA113284C2 true UA113284C2 (xx) | 2017-01-10 |
Family
ID=44146841
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201309882A UA113284C2 (xx) | 2011-01-13 | 2012-01-13 | Спосіб поліпшеного приживлення гемопоетичних стовбурових клітин |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10213464B2 (uk) |
| EP (1) | EP2663313B1 (uk) |
| JP (2) | JP6110309B2 (uk) |
| KR (1) | KR101950526B1 (uk) |
| CN (1) | CN103379907B (uk) |
| AU (1) | AU2012206517B2 (uk) |
| BR (1) | BR112013017878B1 (uk) |
| CA (1) | CA2824113C (uk) |
| CL (1) | CL2013002034A1 (uk) |
| DK (1) | DK2663313T3 (uk) |
| EA (1) | EA033717B1 (uk) |
| ES (1) | ES2693622T3 (uk) |
| IL (1) | IL227331A (uk) |
| PL (1) | PL2663313T3 (uk) |
| PT (1) | PT2663313T (uk) |
| SG (1) | SG191908A1 (uk) |
| UA (1) | UA113284C2 (uk) |
| WO (1) | WO2012095511A1 (uk) |
| ZA (1) | ZA201304743B (uk) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2671932T3 (es) * | 2012-08-01 | 2018-06-11 | United Therapeutics Corporation | Tratamiento de hipertensión arterial pulmonar con células madre mesenquimatosas |
| US9505737B2 (en) | 2013-01-11 | 2016-11-29 | Corsair Pharma, Inc. | Treprostinil derivative compounds and methods of using same |
| JP6542128B2 (ja) | 2013-01-11 | 2019-07-10 | コルセア ファーマ インコーポレイテッド | トレプロスチニルのプロドラッグ |
| ES2910654T3 (es) * | 2014-02-12 | 2022-05-13 | 7 Hills Pharma LLC | Composiciones y métodos para mejorar la migración y el injerto de células madre hematopoyéticas |
| AU2015249751A1 (en) * | 2014-04-23 | 2016-11-10 | Texas Heart Institute | Methods of enhancing stem cell engraftment |
| EA039149B1 (ru) * | 2015-01-27 | 2021-12-10 | Сифарм Сарл | Применение композиции, содержащей вилдаглиптин, для повышения эффективности приживления гемопоэтических стволовых клеток после трансплантации и способ для повышения способности гемопоэтических стволовых клеток к приживлению |
| US9394227B1 (en) | 2015-06-17 | 2016-07-19 | Corsair Pharma, Inc. | Treprostinil derivatives and compositions and uses thereof |
| US9643911B2 (en) | 2015-06-17 | 2017-05-09 | Corsair Pharma, Inc. | Treprostinil derivatives and compositions and uses thereof |
| IL310250A (en) | 2016-05-05 | 2024-03-01 | Liquidia Tech Inc | Terfostinil in dry powder form for the treatment of pulmonary hypertension |
| CN109727671B (zh) * | 2018-12-28 | 2021-07-09 | 广东省心血管病研究所 | 一种鉴定造血干细胞移植术效果的信息分析系统及方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6441245B1 (en) | 1997-10-24 | 2002-08-27 | United Therapeutics Corporation | Process for stereoselective synthesis of prostacyclin derivatives |
| US6242482B1 (en) * | 2000-06-05 | 2001-06-05 | United Therapeutics Corporation | Prostaglandin compounds and derivatives thereof, compositions containing the same and method of using the same for the treatment of congestive heart failure |
| US8696564B2 (en) * | 2004-07-09 | 2014-04-15 | Cardiac Pacemakers, Inc. | Implantable sensor with biocompatible coating for controlling or inhibiting tissue growth |
| US20070065414A1 (en) * | 2005-09-16 | 2007-03-22 | Boston Scientific Scimed, Inc. | Enhanced delivery of cells |
| CA2647201C (en) | 2006-03-24 | 2016-03-08 | Children's Medical Center Corporation | Method to modulate hematopoietic stem cell growth |
| EP3824885A1 (en) * | 2006-10-20 | 2021-05-26 | Children's Medical Center Corporation | Method to enhance tissue regeneration |
| US8575175B2 (en) | 2008-07-23 | 2013-11-05 | Toray Industries, Inc. | Therapeutic agent for chronic renal failure |
| WO2010036798A1 (en) | 2008-09-25 | 2010-04-01 | Aradigm Corporation | Deep lung pulmonary delivery of treprostinil |
| WO2010054271A1 (en) | 2008-11-06 | 2010-05-14 | Indiana University Research & Technology Corporation | Materials and methds to enhance hematopoietic stem cells engraftment procedures |
| EP3533445A1 (en) * | 2009-03-19 | 2019-09-04 | Fate Therapeutics, Inc. | Compositions comprising cyclic amp enhancers and/or ep ligands, and methods of preparing and using the same |
| EP2461812B1 (en) * | 2009-08-07 | 2014-01-01 | SciPharm SàRL | Composition for the treatment of cystic fibrosis |
-
2012
- 2012-01-13 PL PL12700137T patent/PL2663313T3/pl unknown
- 2012-01-13 PT PT12700137T patent/PT2663313T/pt unknown
- 2012-01-13 BR BR112013017878-7A patent/BR112013017878B1/pt active IP Right Grant
- 2012-01-13 JP JP2013548848A patent/JP6110309B2/ja active Active
- 2012-01-13 KR KR1020137021164A patent/KR101950526B1/ko active IP Right Grant
- 2012-01-13 CN CN201280005272.XA patent/CN103379907B/zh active Active
- 2012-01-13 ES ES12700137.8T patent/ES2693622T3/es active Active
- 2012-01-13 UA UAA201309882A patent/UA113284C2/uk unknown
- 2012-01-13 WO PCT/EP2012/050484 patent/WO2012095511A1/en active Application Filing
- 2012-01-13 AU AU2012206517A patent/AU2012206517B2/en active Active
- 2012-01-13 US US13/979,332 patent/US10213464B2/en active Active
- 2012-01-13 EP EP12700137.8A patent/EP2663313B1/en active Active
- 2012-01-13 DK DK12700137.8T patent/DK2663313T3/en active
- 2012-01-13 EA EA201300817A patent/EA033717B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2012-01-13 CA CA2824113A patent/CA2824113C/en active Active
- 2012-01-13 SG SG2013052790A patent/SG191908A1/en unknown
-
2013
- 2013-06-25 ZA ZA2013/04743A patent/ZA201304743B/en unknown
- 2013-07-04 IL IL227331A patent/IL227331A/en active IP Right Grant
- 2013-07-12 CL CL2013002034A patent/CL2013002034A1/es unknown
-
2016
- 2016-10-19 JP JP2016204970A patent/JP2017046707A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BR112013017878A2 (uk) | 2017-08-15 |
| CN103379907A (zh) | 2013-10-30 |
| JP6110309B2 (ja) | 2017-04-05 |
| PT2663313T (pt) | 2018-10-23 |
| EP2663313B1 (en) | 2018-08-08 |
| EP2663313A1 (en) | 2013-11-20 |
| CN103379907B (zh) | 2018-01-09 |
| CA2824113A1 (en) | 2012-07-19 |
| AU2012206517A1 (en) | 2013-08-01 |
| NZ612450A (en) | 2015-03-27 |
| CL2013002034A1 (es) | 2014-03-21 |
| KR101950526B1 (ko) | 2019-02-20 |
| JP2014507409A (ja) | 2014-03-27 |
| CA2824113C (en) | 2020-04-14 |
| BR112013017878A8 (pt) | 2018-01-09 |
| BR112013017878B1 (pt) | 2021-08-31 |
| IL227331A0 (en) | 2013-09-30 |
| AU2012206517B2 (en) | 2016-12-01 |
| US20130344038A1 (en) | 2013-12-26 |
| SG191908A1 (en) | 2013-08-30 |
| KR20140005956A (ko) | 2014-01-15 |
| WO2012095511A1 (en) | 2012-07-19 |
| EA201300817A1 (ru) | 2013-11-29 |
| EA033717B1 (ru) | 2019-11-19 |
| PL2663313T3 (pl) | 2019-01-31 |
| US10213464B2 (en) | 2019-02-26 |
| ZA201304743B (en) | 2014-09-25 |
| JP2017046707A (ja) | 2017-03-09 |
| IL227331A (en) | 2017-12-31 |
| DK2663313T3 (en) | 2018-11-26 |
| ES2693622T3 (es) | 2018-12-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA113284C2 (xx) | Спосіб поліпшеного приживлення гемопоетичних стовбурових клітин | |
| US9394520B2 (en) | Expansion of hematopoietic stem cells | |
| JP2021182941A (ja) | 白血球溢出を低下させる幹細胞の使用 | |
| KR102143961B1 (ko) | 프로스타시클린-처리된 내피 전구 세포를 사용한 폐동맥 고혈압의 치료 | |
| US20120202288A1 (en) | Compositions comprising cyclic amp enhancers and/or ep ligands, and methods of preparing and using the same | |
| KR102577669B1 (ko) | 이식 후에 조혈 줄기 세포의 생착 효능을 증가시키는데 사용하기 위한 조성물 | |
| US10426740B1 (en) | Compositions and methods to inhibit stem cell and progenitor cell binding to lymphoid tissue and for regenerating germinal centers in lymphatic tissues | |
| NZ612450B2 (en) | Method for enhancing engraftment of haematopoetic stem cells | |
| WO2005116194A1 (ja) | 試験管内筋繊維形成のための筋芽細胞又は筋芽細胞様細胞培養法 | |
| Zhang et al. | A novel population of human bone marrow multipotent mesenchymal stem cells regenerates infarcted myocardium in rats |