TWI829785B - 流感病毒複製抑制劑之組合 - Google Patents

Abstract

本文提供可抑制流感病毒複製、減少流感病毒量及/或治療流感之化合物的組合。

Description

流感病毒複製抑制劑之組合

本揭示案大體上係關於流感病毒複製抑制劑之組合，以及藉由向需要其治療之患者投與所述組合來治療或預防流感感染或複製之方法。

流感以季節性流行方式在全世界傳播，導致每年數十萬人死亡，在大流行性年份中數百萬人死亡。舉例而言，20世紀發生了三次流感大流行，且殺死數千萬人，其中各次大流行均由人類病毒之新穎病毒株的出現而引起。通常，此等新穎病毒株係由現有的流感病毒自其他動物物種傳播給人類所造成的。

流感主要經由感染者咳嗽或打噴嚏時產生之較大攜帶病毒之液滴在人與人之間傳播；此等較大液滴可隨後停留於感染者附近（例如約6呎內）的易感個體之上呼吸道之黏膜表面上。傳播亦可經由與呼吸道分泌物直接接觸或間接接觸而發生，諸如觸摸經流感病毒污染之表面且隨後觸摸眼、鼻或口。在症狀出現前1天至症狀開始後約5天，成人可能將流感傳播給其他人。幼兒及免疫系統較弱的人可能在症狀發作後10天或更多天仍具傳染性。

流感病毒為正黏液病毒科之RNA病毒，所述正黏液病毒科包括五個屬：A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒、傳染性鮭魚貧血症病毒（Isavirus）及托高土病毒（Thogotovirus）。

A型流感病毒屬係造成季節性流感及大流行性流感的原因。其具有一個物種，A型流感病毒，且野生水鳥為多種A型流感之天然宿主。偶爾，病毒會傳播至其他物種且接著可在家禽中造成破壞性爆發或引起人類流感大流行。A型病毒為三種流感類型當中最具毒性的人類病原體且引起最嚴重的疾病。A型流感病毒可基於抗體對此等病毒之反應再分為不同的血清型。按已知人類大流行性死亡之數目排序的人類中已確認之血清型為：H1N1（其於1918年引起西班牙流感）、H2N2（其於1957年引起亞洲流感）、H3N2（其於1968年引起香港流感）、H5N1（2007至2008年流感季節之大流行性威脅）、H7N7（其為潛在的大流行性威脅）、H1N2（存在於人類及豬中之地方病）、H9N2、H7N2、H7N3及H10N7。

B型流感病毒屬可引起季節性流感，且具有一個物種，B型流感病毒。B型流感幾乎完全感染人類且不如A型流感常見。已知易受B型流感感染影響之唯一一種其他動物為海豹。此類型之流感以相比A型慢2至3倍之速率突變，且因此基因多樣性較低，僅具有一種B型流感血清型。由於此抗原多樣性之缺乏，通常在很小的時候就獲得對B型流感之一定程度的免疫性。然而，B型流感充分突變使得持續免疫性不可能。抗原變化之此降低速率結合其受限宿主範圍（抑制交叉物種抗原轉移）確保不會發生B型流感之大流行。

C型流感病毒屬具有一個物種，C型流感病毒，其感染人類及豬且可引起嚴重疾病及局部流行病。然而，C型流感不如其他類型普遍，且似乎通常引起兒童之輕度疾病。

在血清型及屬中之流感病毒在結構上極其類似。流感病毒基因組由填充至尺寸變化之棒狀結構的八個單股RNA組成，被稱為核糖核蛋白複合物（RNP）。各RNP含有獨特的病毒RNA、支架核蛋白之多個複本及由PA、PB1及PB2子單元組成的異三聚體病毒聚合酶，所述異三聚體病毒聚合酶催化病毒基因組之轉錄及複製。流感聚合酶複合物之近期生物化學及結構研究提供對藉由流感聚合酶之奪帽（cap-snatching）及RNA合成之機理理解的見解。簡言之，PB2端帽結合域首先結合於其5'端帽而隔離宿主前mRNA。隨後PA（核酸內切酶子單元）分裂在端帽下游所捕獲之前mRNA 10-13核苷酸。PB2子單元隨後旋轉約700以將加帽引子導引至PB1聚合酶活性位點中。PB1子單元與PB2及PA子單元直接相互作用。此等子單元在不同流感病毒株中含有高度保守域，且作為有吸引力的抗流感藥物目標而吸引。除聚合酶複合物以外，流感基因組編碼其自身神經胺糖酸苷酶（NA）、血球凝集素（HA）、核蛋白（NP）、基質蛋白M1與M2及非結構蛋白NS1與NS2。NA為抗病毒藥物奧司他韋（oseltamivir）（Tamiflu®）、蘭那米韋（laninamivir）（Inavir®）、帕拉米韋（peramivir）及紮那米韋（zanamivir）（Relenza®）之目標。此等藥物抑制NA之酶活性,從而減緩自經感染細胞釋放後代病毒。

流感由於失去生產力及相關醫療治療而產生直接成本，以及由於預防性措施而產生間接成本。在美國，流感每年造成超過100億美元之總成本，而據估計未來之大流行可能導致數千億美元之直接及間接成本。防治性成本亦較高。全世界政府已花費數十億美元來為潛在H5N1禽流感大流行做準備及計劃，其中費用與購買藥物及疫苗以及進行災難演習及發展針對改良邊境管制之策略相關聯。

流感之當前治療選項包含接種疫苗及使用抗病毒藥物進行化學療法或化學預防。使用流感疫苗進行針對流感之疫苗接種通常推薦用於高危險群體，諸如兒童及老年人，或患有哮喘、糖尿病或心臟病的人。然而，有可能經疫苗接種後仍患上流感。所述疫苗各季節針對幾個特殊流感病毒株進行重新調配，但可能無法包含在所述季節在世界範圍內有效感染人群的所有病毒株。製造商花費約六個月調配及生產應對季節性流行所需的數百萬劑量；偶爾，新的或被忽略的病毒株在那期間變得突出且感染已經接種之人群（如2003至2004流感季中的H3N2福建流感）。亦可能恰巧在疫苗接種之前感染，且感染所述疫苗應預防的特定病毒株，因為疫苗需要約兩週才能起效。

另外，此等流感疫苗之有效性可變。歸因於病毒之高突變率，特定流感疫苗通常提供不超過幾年之保護。針對某一年調配之疫苗在下一年可能係無效的，因為流感病毒隨時間推移而快速變化，且不同病毒株佔據優勢。

由於不存在RNA改正酶，流感vRNA之RNA依賴性RNA聚合酶大致每一萬個核苷酸（其為流感vRNA之大致長度）產生一次核苷酸插入錯誤。因此，幾乎每一種新製造之流感病毒均為突變型抗原漂移。若超過一個病毒株感染單個細胞，則將基因組分離成vRNA之八個獨立片段允許vRNA混合或再配。引起的病毒遺傳學之迅速變化產生抗原轉移且允許病毒感染新宿主物種及快速戰勝保護性免疫。

抗病毒藥物亦可用於治療流感，其中NA抑制劑尤其有效，但病毒可對批准之NA抗病毒藥物產生耐藥性。同樣，已很好地記載多重耐藥性大流行性A型流感病毒的出現。耐藥性大流行性A型流感變成重大公共衛生威脅。除耐藥性A型流感病毒以外，NA抑制劑經批准用於治療早期流感感染（流感症狀發作48小時內）。

因此，仍需要用於治療流感感染之藥物，諸如具有延長治療時間及/或對病毒滴度之降低敏感性的藥物。

本揭示案通常係關於治療流感的方法，抑制流感病毒之複製的方法，降低流感病毒之量的方法及可用於這些方法的化合物及組合物。

本文提供治療或預防有需要個體之流感感染或複製的方法，所述方法包括向所述個體投與治療有效量之（1）3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，及（2）第二流感治療劑，所述第二流感治療劑選自由以下組成之群組：巴洛沙韋瑪波西酯（baloxavir marboxil）、巴洛沙韋、神經胺糖酸苷酶抑制劑及法匹拉韋，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。

此外，本揭示案提供一種組合，其包括（1）3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，及（2）巴洛沙韋或巴洛沙韋瑪波西酯，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物；及（3）神經胺糖酸苷酶抑制劑，諸如奧司他韋、奧司他韋酸、紮那米韋、蘭那米韋、帕拉米韋或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。

進一步提供向生物樣品或患者投與安全且有效量之如本文所揭示之組合的方法。

本文中亦提供藉由向生物樣品或患者投與安全且有效量之如本文所揭示之組合來減少所述生物樣品或患者之流感病毒之量的方法。

進一步提供治療或預防患者之A型流感或B型流感感染的方法，其包括向所述患者投與安全且有效量之如本文所揭示之組合。

亦提供本文所描述之組合之用途，其用於抑制或減少生物樣品或患者之流感病毒的複製，用於減少生物樣品或患者之流感病毒之量，或用於治療患者之流感。

本文進一步提供本文所描述之組合之用途，其用於製造用以治療患者之流感的藥劑，用於減少生物樣品或患者之流感病毒之量，或用於抑制生物樣品或患者之流感病毒之複製。

本文中所揭示之組合可經共同調配或可單獨地投與至個體、患者或宿主。

本文揭示抗流感化合物（抗病毒劑）之組合，及此等組合在抑制流感病毒活性中之用途。在一些態樣中，本揭示案大體上係關於本文所述之組合物的用途，其用於抑制生物樣品或患者之流感病毒之複製，用於降低生物樣品或患者之流感病毒之量（降低病毒滴度）及用於治療或預防患者之流感。本文中所揭示之組合可經共同調配或可單獨地投與至個體、患者或宿主。

所述組合尤其包括3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物作為有效成分，或者在本文中被稱作「化合物1」。此化合物被認為係結合CAP的PB2結構域抑制劑。

在各種實施例中，化合物1與第二抗病毒劑組合使用作為針對流感，例如針對流感病毒複製或感染的預防劑或治療劑。流感可為大流行性或耐藥性的大流行性/季節性流感病毒。在一些情況下，流感為A型流感或B型流感。第二抗病毒劑可為聚合酶抑制劑、核酸內切酶抑制劑或神經胺糖酸苷酶抑制劑或流感疫苗。下文提供關於化合物1及第二抗病毒劑之投藥時序的進一步論述。

在一些態樣中，提供一種組合，其包括3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物及第二抗病毒劑，且在一些情況中，第二抗病毒劑選自由以下組成之群組：巴洛沙韋、巴洛沙韋瑪波西酯、神經胺糖酸苷酶抑制劑及法匹拉韋，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。

在單獨地投與時，化合物1及第二抗病毒劑之投藥可為同時（例如，在彼此之約5至10分鐘內），或間隔1個或多個小時（例如，1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、24小時、26小時、48小時或72小時）。在一些情況下，化合物1可在第二抗病毒劑之前投與。在一些其他情況下，化合物1可在第二抗病毒劑之後投與。下文提供關於化合物1及第二抗病毒劑之投藥時序的進一步論述。

在一些態樣中，提供一種組合，其包括治療有效量之a）3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物及b）治療有效量之第二抗病毒劑，且在一些情況中，第二抗病毒劑選自由以下組成之群組：巴洛沙韋、巴洛沙韋瑪波西酯、神經胺糖酸苷酶抑制劑及法匹拉韋，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。

在其他態樣中，提供治療有效量之如本文所揭示之組合的用途，其用於治療或預防人類患者之流感病毒感染或複製。舉例而言，流感病毒可為大流行性或耐藥性的大流行性/季節性流感病毒。在一些情況下，流感病毒可為A型流感或B型流感。其他流感病毒如下所述。

在其他態樣中，提供3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物與第二抗病毒劑組合的用途，其用於製造供治療或預防流感病毒感染或複製用之藥劑，且在一些情況中，第二抗病毒劑選自由以下組成之群組：巴洛沙韋、巴洛沙韋瑪波西酯、神經胺糖酸苷酶抑制劑及法匹拉韋，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。

在其他態樣中，提供3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物與第二抗病毒劑組合的用途，其用於抑制流感病毒感染或複製，且在一些情況中，第二抗病毒劑選自由以下組成之群組：巴洛沙韋、巴洛沙韋瑪波西酯、神經胺糖酸苷酶抑制劑及法匹拉韋，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。

在其他態樣中，提供一種治療或預防流感病毒感染或複製之方法，其包括向患有流感病毒感染或處於流感病毒感染之風險下的人類患者投與以下之組合：a）治療有效量之3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，及b）治療有效量之第二抗病毒劑，在一些情況下，所述第二抗病毒劑選自由以下組成之群組：巴洛沙韋、巴洛沙韋瑪波西酯、神經胺糖酸苷酶抑制劑及法匹拉韋，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。

在其他態樣中，提供一種治療或預防流感病毒感染或複製之方法，其包括向患有流感感染或處於流感感染之風險下的人類患者投與劑量為約10至1,000 mg/kg之3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，及治療有效量之第二抗病毒劑，在一些情況下，所述第二抗病毒劑選自由以下組成之群組：巴洛沙韋、巴洛沙韋瑪波西酯、神經胺糖酸苷酶抑制劑及法匹拉韋，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。

在其他態樣中，提供一種治療或預防患者之流感病毒感染或複製之醫藥組合物，其包括3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物作為有效成分，其中所述組合物與第二抗病毒劑組合投與，在一些情況下，所述第二抗病毒劑選自由以下組成之群組：巴洛沙韋、巴洛沙韋瑪波西酯、神經胺糖酸苷酶抑制劑及法匹拉韋，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。

在其他態樣中，提供一種抑制A型流感或B型流感中之流感聚合酶之核酸內切酶活性的方法，所述方法包括使病毒與如本文所揭示之化合物1與第二抗病毒劑之組合接觸。

在其他態樣中，提供一種用於治療或預防宿主中之A型流感或B型流感感染的方法，所述方法包括向所述宿主投與治療量之如本文所揭示之化合物1與第二抗病毒劑之組合。

在其他態樣中，提供一種用於減少宿主中A型流感或B型流感中之流感聚合酶之核酸內切酶活性的方法，所述方法包括向所述宿主投與治療量之如本文所揭示之化合物1與第二抗病毒劑之組合。

在其他態樣中，提供一種用於減少宿主中之流感病毒複製的方法，所述方法包括向所述宿主投與治療量之如本文所揭示之化合物1與第二抗病毒劑之組合。

在一些實施例中，提供使用所揭示之化合物1與第二抗病毒劑之組合的方法，所述方法進一步包含使流感病毒與治療有效量之第三抗病毒劑接觸或向宿主投與治療有效量之第三抗病毒劑。舉例而言，在一些實施例中，方法可進一步包括在組合之前、之後或同時向宿主投與流感疫苗。在一些情況下，所揭示之方法包括投與化合物1及流感疫苗而不投與另一抗病毒劑（亦即，疫苗為第二抗病毒劑）。在一些情況下，化合物1與流感疫苗經同時投與。在一些情況下，化合物1與流感疫苗經共同調配。

在其他態樣中，提供一種如本文所揭示之化合物1與第二抗病毒劑之組合的用途，其用於治療A型流感或B型流感病毒感染。

在其他態樣中，提供一種如本文所揭示之化合物1與第二抗病毒劑之組合的用途，其用於製造供治療A型流感或B型流感病毒感染用之藥劑。

在其他態樣中，提供一種組合，其包括a）3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，b）巴洛沙韋、巴洛沙韋瑪波西酯或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，及c）神經胺糖酸苷酶抑制劑。

用於本文所揭示之方法的神經胺糖酸苷酶抑制劑可為奧司他韋、奧司他韋酸、紮那米韋（Relenza®）、蘭那米韋（Inavir®）或帕拉米韋、或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。核酸內切酶抑制劑可用於本文所揭示之方法中，且在一些情況下，核酸內切酶抑制劑稱為「PA」抑制劑。在各種實施例中，核酸內切酶抑制劑可為巴洛沙韋或巴洛沙韋瑪波西酯或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。聚合酶抑制劑可用於本文所揭示之方法中，且在一些情況下，聚合酶抑制劑稱為「PB1」抑制劑。在各種實施例中，聚合酶抑制劑可為法匹拉韋或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。流感疫苗可用於本文所揭示之方法中。

在本文所揭示之態樣的各種實施例中，第二抗病毒劑為巴洛沙韋、巴洛沙韋瑪波西酯或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。在本文所揭示之態樣的其他實施例中，第二抗病毒劑為神經胺糖酸苷酶抑制劑（例如，更特定言之，奧司他韋、奧司他韋酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物）。在本文所揭示之態樣的其他實施例中，第二抗病毒劑為法匹拉韋或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 使用方法

本文中所描述之組合可用於減少生物樣本(例如，感染細胞培養物）之病毒滴度或人類之病毒滴度（例如，患者之肺病毒滴度）。

如本文所使用，術語「流感病毒介導之病狀」、「流感感染」或「流感」可互換使用意謂由流感病毒感染引起之疾病。

流感為由流感病毒引起之影響鳥類及哺乳動物的感染性疾病。流感病毒為正黏液病毒科之RNA病毒，所述正黏液病毒科包括五個屬：A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒、傳染性鮭魚貧血症病毒及托高土病毒。A型流感病毒屬具有一種物種，A型流感病毒，其可根據抗體對此等病毒之反應再分為不同血清型：H1N1、H2N2、H3N2、H5N1、H7N7、H1N2、H9N2、H7N2、H7N3、H7N9及H10N7。B型流感病毒屬具有一種物種，B型流感病毒。B型流感幾乎完全感染人類且不如A型流感普遍。C型流感病毒屬具有一種物種，C型流感病毒，其感染人類及豬且可引起重度疾病及局部流行。然而，C型流感病毒不如其他類型普遍，且似乎通常引起兒童之輕度疾病。

在一些實施例中，流感或流感病毒與A型或B型流感病毒相關。在一些實施例中，流感或流感病毒與A型流感病毒相關。在一些特定實施例中，A型流感病毒為H1N1、H2N2、H3N2、H7N9或H5N1。在一些實施例中，所揭示之組合有效地抑制大流行性或耐藥性大流行性/季節性流感病毒的生長或複製。

對於人類，流感之共同症狀為發冷、發熱、咽炎、肌肉疼痛、嚴重頭痛、咳嗽、虛弱及渾身不適。在更嚴重情況下，流感引起肺炎，其可致死，尤其對於幼兒及老年人而言。儘管其通常與感冒混淆，但流感為嚴重得多之疾病且由不同病毒類型引起。流感可引起噁心及嘔吐，尤其對於兒童，但此等症狀更像不相關之胃腸炎之特徵，其有時稱為「胃流感」或「24小時流感」。

流感之症狀可在感染之後一至兩天相當突然地開始。通常，第一症狀為發冷或畏寒，但發熱在感染早期亦普遍，其中體溫範圍為38℃至39℃（約100℉至103℉）。許多人病情嚴重以致臥床數天，其全身疼痛不適，所述疼痛不適在其背部及腿部更嚴重。流感之症狀可包含：全身疼痛（尤其關節及咽喉）、極端寒冷及發熱、乏力、頭痛、眼部刺激流淚、眼部發紅、皮膚（尤其面部）紅腫、口腔紅腫、咽喉紅腫及鼻部發紅、腹痛（患B型流感之兒童）。流感之症狀並非特異性的，而係與許多病原體疊加（「流感類疾病」）。通常，需要實驗室資料以確認診斷。

術語「疾病」、「病症」及「病狀」可在本文中互換使用以指流感病毒介導之醫學或病理學病狀。

如本文所使用，術語「個體」、「宿主」及「患者」可互換使用。術語「個體」、「宿主」及「患者」係指動物（例如，諸如雞、鵪鶉或火雞之鳥類或哺乳動物），特定言之，哺乳動物，諸如非靈長類動物（例如牛、豬、馬、羊、兔、天竺鼠、大鼠、貓、狗或小鼠）及靈長類動物（例如猴、黑猩猩或人類），且更特定言之為人類。在一些實施例中，個體為非人類動物，諸如家畜（例如馬、牛、豬或羊），或寵物（例如狗、貓、天竺鼠或兔）。在一較佳實施例中，個體為人類。

如本文所使用之術語「生物樣本」包含（但不限於）：細胞培養物或其提取物；獲自哺乳動物之活檢物質或其提取物；血液、唾液、尿液、糞便、精液、淚液或其他體液或其提取物。

如本文所使用，術語「抑制流感病毒之複製」包含降低病毒複製之量（例如降低至少10%）與完全遏制病毒複製（亦即病毒複製之量降低100%）兩者。在一些實施例中，流感病毒之複製抑制至少50%、至少65%、至少75%、至少85%、至少90%或至少95%。

流感病毒複製可藉由此項技術中已知之任何適合的方法量測。舉例而言，可量測生物樣品（例如經感染之細胞培養物）之流感病毒滴度或人類之流感病毒滴度（例如患者之肺病毒滴度）。更特定言之，對於基於細胞之檢定，在細胞經活體外培養之各情況下，在存在或不存在測試劑之情況下將病毒添加至培養物中，且在合適時間長度後評估病毒依賴性端點。對於典型檢定，可使用適於流感病毒株A/Puerto Rico/8/34的Madin-Darby犬腎細胞（MDCK）及標準組織培養物。可使用的第一類細胞檢定視經感染目標細胞之死亡（一種稱為細胞病變效應（CPE）之過程）而定，其中病毒感染引起細胞來源之耗竭及細胞之最終裂解。在第一類細胞檢定中，微量滴定盤之孔中的較小部分細胞經感染（通常1/10至1/1000），使病毒在48至72小時內經歷若干輪複製，隨後使用細胞ATP含量相較於未感染對照物之減小來量測細胞死亡之量。可採用之第二類細胞檢定視經感染細胞中之病毒特異性RNA分子之增殖而定，其中使用分支鏈DNA雜交方法（bDNA）直接量測RNA水平。在第二類細胞檢定中，較低數目之細胞最初於微量滴定盤之孔中進行感染，允許病毒在經感染之細胞中複製且傳播至額外輪次之細胞，接著細胞裂解且量測病毒RNA含量。通常在18至36小時後提早停止此檢定，此時所有目標細胞仍有活力。病毒RNA藉由雜交至固定於分析盤之孔的特異性寡核苷酸探針、接著藉由與連接至報導酶之額外探針雜交而擴增信號來定量。

如本文所使用，「病毒滴度」或「滴度」為病毒濃度之量度。滴度測試可採用連續稀釋以自本質上僅評估為陽性或陰性之分析型程序獲得大致定量資訊。滴度對應於仍產生正讀數之最高稀釋因子；舉例而言，前8次連續兩倍稀釋中之正讀數轉換為1:256之滴度。一特定實例為病毒滴度。為確定滴度，將製備若干稀釋液，諸如10^-1 、10^-2 、10^-3 、…、10^-8 。仍感染細胞之病毒最低濃度為病毒滴度。

如本文所使用，術語「治療（treat/treatment/treating）」係指治療性與預防性治療。舉例而言，治療性治療包含由投與一或多種療法（例如一或多種治療劑，諸如本文所述之化合物或組合物）引起減輕或減緩流感病毒介導之病況之進展、嚴重度及/或持續時間，或改善流感病毒介導之病況的一或多種症狀（特定言之，一或多種可辨別的症狀）。在特定實施例中，治療性治療包含改善流感病毒介導之病狀的至少一個可量測身體參數。在其他實施例中，治療性治療包含身體上藉由例如穩定可辨別症狀、生理上藉由例如穩定身體參數或兩者來抑制流感病毒介導之病狀之發展。在其他實施例中，治療性治療包含減少或穩定流感病毒介導之感染。抗病毒藥物可用於社區環境以治療已患有流感之人群，以降低症狀之嚴重度且減少其患病之天數。

如本文所使用，術語「預防」、「預防性」、「預防性用途」及「預防性治療」係指目的在於預防而非治療或治癒疾病之任何醫學或公共衛生程序。如本文所使用，術語「預防（prevent/prevention/preventing）」係指降低患上或產生既定病狀之風險，或降低或抑制並未生病但已成為或可能接近成為患病人員的個體之復發或所述病狀。術語「化學預防」係指使用例如小分子藥物（而非疫苗）之藥物預防病症或疾病。

預防性用途包含在已偵測到爆發之情形下使用，以預防感染在處於嚴重流感併發症之高風險下的許多人彼此緊密接觸生活的場所（例如，醫院、托兒所、監獄、老人安養院等）中傳染或傳播。其亦包含在需要保護以免患發流感但在疫苗接種後並未獲得保護（例如歸因於較弱免疫系統）之人群之中的使用，或在疫苗對其不可用時或在其由於副作用無法獲得疫苗時的使用。其亦包含在疫苗接種後兩週內或在疫苗接種之後但在疫苗有效之前的任何時段期間之使用。預防性使用亦可包含治療並未患流感或不認為具有併發症高風險之人以降低感染流感且將其傳染給與他/她緊密接觸之高風險的人（例如健康照護工作者、護理之家工作者等）之機會。

如本文所使用且根據美國疾病控制及預防中心（United States Centers for Disease Control and Prevention,（US CDC），流感「爆發」定義為在彼此接近之人群中（例如在輔助生活設施之相同區域中、在同一家庭中等）於48至72小時時段內發生的急性發熱性呼吸道疾病（AFRI）相對於正常背景速率急劇提高或當所分析之群體中之任何個體測試為流感陽性時。

在一些實施例中，組合適用作對易患由流感病毒感染引起之併發症的患者（特定言之人類）之預防性或防治性措施。組合可適用於在已確認指示病例或爆發之情形中的防治性方法中，以防止感染在社區或人群之其餘部分中傳播。

如本文所使用，「有效量」係指足以引起所需生物反應之量。在本揭示案中，所需生物反應為抑制流感病毒之複製，減少流感病毒之量，或減輕或改善流感病毒感染之嚴重程度、持續時間、進展或發作，預防流感病毒感染之加快，預防與流感病毒感染相關之症狀的復發、顯現、發作或進展，或增強或改良針對流感感染使用之另一療法的防治性或治療性作用。向個體投與之化合物之精確量將視投與模式、感染之類型及嚴重度以及個體之特徵（諸如一般健康狀況、年齡、性別、體重及對藥物之耐受性）而定。熟習此項技術者將能夠依據此等及其他因素判定適當的劑量。

因此，當3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸與其他抗病毒劑共同投與時，例如當與抗流感藥物共同投與時，有效量之第二藥劑將視所使用之藥物類型而定。安全量為具有最小副作用或可接受之副作用量及嚴重度的一個量，如可容易地由熟習此項技術者所測定。批准藥劑之適合的劑量為已知的且可由熟習此項技術者根據個體之病況、所治療病況之類型及所使用的本文所描述之化合物之量進行調整。在未明確地標註量之情況下，應假設安全且有效的量。舉例而言，可以約0.01至100 mg/kg體重/天之間的劑量範圍向個體投與3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基）雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。

如本文所使用，本文所描述之化合物或組合物之「安全且有效的量」為不在患者中引起過度或有害副作用之化合物或組合物之有效量。

一般而言，給藥方案可根據各種因素進行選擇，所述因素包含：所治療之病症及病症之嚴重程度；採用之特定化合物之活性；採用之特定組合物；患者之年齡、體重、一般健康狀況、性別及膳食；採用之特定化合物之投與時間、投與途徑及排泄率；個體之腎及肝功能；及採用之特定化合物或其鹽、治療之持續時間；與採用之特定化合物組合或同時使用之藥物；以及醫學領域中熟知之類似因素。熟習此項技術者可容易確定及開立用於治療、預防、抑制（完全或部分）或遏止疾病進展所需之本文所描述之化合物的安全且有效量。

本文所描述之化合物之劑量可在約0.01至約100 mg/kg體重/天、約0.01至約50 mg/kg體重/天、約0.1至約50 mg/kg體重/天或約1至約25 mg/kg體重/天之間的範圍內。應理解，每天之總量可以單次劑量投與，或可以多次給藥投與，諸如一天兩次（例如每12小時）、一天三次（例如每8小時）或一天四次（例如每6小時）。

對於治療性治療，可在症狀（例如鼻塞、咽喉痛、咳嗽、疼痛、乏力、頭痛及發冷/盜汗）之發作之例如48小時內（或40小時內、或小於2天、或小於1.5天或24小時內）向患者投與本文所描述之化合物。治療性治療可持續任何合適的持續時間，例如，5天、7天、10天、14天等。對於社區爆發期間之預防性治療，可例如在指示病例之症狀之發作的例如2天內向患者投與本文所描述之化合物，且可持續任何合適的持續時間，例如7天、10天、14天、20天、28天、35天、42天等。 組合療法

本文所描述之組合可單獨或與額外合適的治療劑（例如第三抗病毒劑或疫苗）進一步組合投與。在採用組合療法時，安全且有效量可使用第一量之化合物1，亦即3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，第二抗病毒劑及一定量之一或多種第三抗病毒劑來實現。在一些情況下，第三抗病毒劑為吡嗪甲醯胺抗病毒化合物、流感神經胺糖酸苷酶抑制劑或流感PB1聚合酶域抑制劑。可藉由額外合適的治療劑（例如，抗病毒劑或疫苗）來實現其他治療組合。

適用於此等組合之第二抗病毒劑為巴洛沙韋（CAS號1985605-59 -1），其作為瑪波西酯前藥（CAS號1985606-14-1；商標名Xofluza®）正由Shionogi Co.（一個日本醫藥公司）研發用於治療A型流感及B型流感中。

另外適用於此等組合之第二抗病毒劑為奧司他韋磷酸鹽（CAS號 204255-11-8；商標名（Tamiflu®），其為由羅氏醫藥公司（Roche pharmaceutical company）正在研發之神經胺糖酸苷酶抑制劑，作為用於治療或預防流感感染之藥物。

另外適用於此等組合之第二抗病毒劑為法匹拉韋（CAS號 259793-96-9；T-705；商標名Avigan®），其為由Toyama Chemical Co.Ltd.（一個日本醫藥公司）研發用於治療RNA病毒（包含A型流感及B型流感）的吡嗪甲醯胺衍生物。在日本批准使用200 mg錠劑以治療流感。對於成年人，法匹拉韋可以每天10 mg至10,000 mg之量經口投與。在一些實施例中，法匹拉韋可以每天100 mg至4,000 mg之量經口投與。在一些實施例中，法匹拉韋可在第1天以一天兩次1,600 mg，及在第2天至第5天以一天兩次600 mg之法匹拉韋之量經口投與，其中總共投藥時間段為五天。

Kitano等人報導巴洛沙韋與神經胺糖酸苷酶抑制劑之組合協同地抑制MDCK細胞中之A型流感/H1N1病毒複製（《傳染性疾病公開論壇（Open Forum Infectious Diseases ）》，4，Issue suppl_1，2017年10月1日，第S371頁）。因此，在一些實施例中，提供一種組合，其包括3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸及巴洛沙韋或巴洛沙韋瑪波西酯及神經胺糖酸苷酶抑制劑。適用於此組合之神經胺糖酸苷酶抑制劑包含例如奧司他韋、奧司他韋酸、紮那米韋、蘭那米韋及帕拉米韋，或更特定言之奧司他韋磷酸鹽、奧司他韋酸、紮那米韋水合物、蘭那米韋及帕拉米韋三水合物。

在本揭示案之一些實施例中，化合物1或其醫藥學上可接受之鹽及第二抗病毒劑各自一安全且有效量（亦即各自以在單獨投與時將在治療上有效的量）投與。在一些實施例中，化合物1及第二抗病毒劑各自以單獨不提供治療效果之量（低於治療量）投與。在一些實施例中，化合物1可以安全且有效量投與，而第二抗病毒劑以低於治療量投與。在一些實施例中，化合物1可以低於治療量投與，而第二抗病毒劑以安全且有效量投與。

如本文所使用，術語「組合療法」、「組合」及「共同投與」或「共投與」可互換使用以指使用多於一種療法（例如一或多種預防劑及/或治療劑）。所述術語之使用不限制向個體投與療法（例如預防劑及/或治療劑）的次序。

共投與可涵蓋以基本上同時之方式，諸如以單一醫藥組合物形式，例如具有固定比率之第一量及第二量之膠囊或錠劑，或以多個各自之個別膠囊或錠劑形式投與組合之第一量及第二量之化合物。此外，此等共投與亦可涵蓋以任一次序以依序方式使用組合之各化合物。

在一些實施例中，本揭示案係針對組合療法用於使用本發明之化合物或醫藥組合物抑制生物樣品或患者之流感病毒複製，或治療或預防患者之流感病毒感染之方法。因此，本文所描述之醫藥組合物亦包含展現出抗流感病毒活性的包括3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸與第二抗病毒劑組合的彼等組合物。

使用方法亦包含化合物1與第二抗病毒劑之組合，與另一抗病毒劑之其他組合及/或利用流感疫苗之疫苗接種。

在共投與包含第一量之3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸及第二量之3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸的個別投藥時，第二抗病毒劑在時間上充分緊密的投與以具有所期望的治療效果。舉例而言，各投與之間的時間段可在數分鐘至數小時範圍內且可藉由考量各化合物之特性（諸如效能、溶解度、生物可用性、血漿半衰期及動力學概況）選定以產生所期望的治療效果。舉例而言，3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸及第二抗病毒劑可在彼此之約24小時內、在彼此之月16小時內、在彼此之約8小時內、在彼此之約4小時內、在彼此之約1小時內或在彼此之約30分鐘內以任何次序投與。

更特定言之，3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸可在向個體投與第二抗病毒劑之前（例如，15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週之前）、同時或之後（例如，15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週之後）經投與。

如本文所闡述之共投與一定量之3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸及一定量之第二抗病毒劑的方法可產生增強或協同的治療效果，其中所觀測到的組合效應大於預期由單獨投與一定量之化合物1及一定量之第二抗病毒劑所產生之累加效應。

如本文所使用，術語「協同」係指比組分化合物之累加效應更有效的本揭示案之組合。療法組合（例如防治劑或治療劑之組合）之協同作用可允許使用較低劑量之療法中之一或多者及/或較不頻繁地向個體投與所述療法。能夠利用較低劑量之療法（例如預防劑或治療劑）及/或較不頻繁地投與所述療法可降低與向個體投與所述療法相關聯之毒性而不降低所述療法在預防、處理或治療病症方面之功效。另外，協同作用可使得藥劑在預防、處理或治療病症方面之功效改良。最後，療法之組合（例如預防劑或治療劑之組合）的協同作用可避免或降低與任一單獨療法之使用相關聯之不利或不合需要之副作用。

此外，當時有本揭示案之組合療法時，組分治療劑可經投與以使得各投藥之間的時間段可更長（例如，數天、數週或數月）。

協同作用之存在可使用用於評估藥物相互作用之適合的方法來判定。適合的方法包含例如Sigmoid-Emax方程式（Holford, N.H.G.及Scheiner, L.B.，《臨床藥代動力學（ Clin. Pharmacokinet. ）》。 6：429-453 (1981)）、Loewe可加性方程（Loewe，S及Muischnek，H.，《存檔實驗藥理學與病理學（ Arch. Exp. Pathol.Pharmacol. ）》 114：313-326 (1926)）及中值效應方程（Chou，TC及Talalay，P.，《酶調控研究進展（Adv.Enzyme Regul. ） 》22：27-55 (1984)）。上文提及之各方程式可結合實驗資料應用以產生有助於評估藥物組合之作用的對應圖表。與上文提及之方程式相關之對應圖表分別為濃度-效應曲線、等效線圖曲線及組合指數曲線。MacSynergy™ II為適用於計算組合指數之公認圖解軟體（Prichard及Shipman，1990）。 抗流感疫苗

本文所描述之化合物可預防性地結合抗流感疫苗投與。此等疫苗可例如經由皮下或鼻內投與來投與。經由皮下注射之疫苗接種通常在血清中誘導具有中和活性之IgG抗體，且對於預防病況進展成諸如肺炎及類似者之更嚴重病況極其有效。然而，在為感染位點之上呼吸道黏膜中，IgA為主要防治性組分。由於IgA並不藉由皮下投與誘導，故其對於經由鼻內途徑投與疫苗亦可為有利的。 定義及通用術語

本文所描述之化合物在本文中藉由其化學結構及/或化學名稱定義。在藉由化學結構與化學名稱提及化合物且化學結構與化學名稱矛盾時，化學結構決定化合物之身分。 醫藥學上可接受之鹽及溶劑合物

本文所描述之化合物可以游離形式或在適當時以鹽形式存在。醫藥學上可接受之彼等鹽尤其受關注，因為其適用於投與作為所描述之組合之組分的化合物以用於醫學目的。非醫藥學上可接受之鹽適用於製造過程以達到分離及純化目的，且在一些個例中，用於分離本文所描述之化合物或其中間物之立體異構形式。

如本文所使用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指合理醫學判斷範疇內適用於接觸人類及低等動物之組織而無不當副作用（諸如毒性、刺激、過敏反應及類似者）且與合理益處/風險比相當的化合物之鹽。

醫藥學上可接受之鹽在此項技術中已熟知。舉例而言，S. M. Berge等人在《醫藥科學雜誌（J. Pharmaceutical Sciences）》, 1977, 66, 1-19中詳細描述醫藥學上可接受之鹽，該文獻以引用之方式併入本文中。本文所描述的化合物之醫藥學上可接受之鹽包含衍生自適合的無機酸及鹼以及有機酸及鹼之彼等鹽。可在化合物之最終分離及純化期間就地製備此等鹽。

在本文所描述之化合物含有鹼基或足夠鹼性之生物電子等排物體之情況下，酸加成鹽可藉由1）使呈其游離鹼形式之純化化合物與適合的有機或無機酸反應及2）分離因此形成之鹽來製備。在實踐中，酸加成鹽可為供使用之更適宜形式，且所述鹽之使用相當於游離鹼形式之使用。

醫藥學上可接受之無毒酸加成鹽之實例為胺基與無機酸(諸如氫氯酸、氫溴酸、磷酸、硫酸及過氯酸)或與有機酸(諸如乙酸、草酸、順丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、丁二酸或丙二酸)形成之鹽，或藉由使用此項技術中所用之其他方法(諸如離子交換)形成之鹽。其他醫藥學上可接受之鹽包含己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、羥乙酸鹽、葡糖酸鹽、羥乙酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、柳酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫代氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽及其類似者。

在本文所描述之化合物含有羧酸基或足夠酸性之生物電子等排物體的情況下，鹼加成鹽可藉由1）使呈其酸形式之純化化合物與適合的有機或無機鹼反應及2）分離因此形成之鹽來製備。在實踐中，鹼加成鹽之使用可為更適宜形式，且所述鹽形式本身之使用相當於游離酸形式之使用。衍生自適當鹼之鹽包含鹼金屬（例如鈉、鋰及鉀）鹽、鹼土金屬（例如鎂及鈣）鹽、銨鹽及N⁺ (C_1-4 烷基)₄ 鹽。本揭示案亦設想本文所揭示之化合物之任何鹼性含氮基團的四級銨化。藉由此類四級銨化可獲得水溶性或油溶性或可分散性產物。

鹼加成鹽包含醫藥學上可接受之金屬鹽及胺鹽。適合的金屬鹽包含鈉、鉀、鈣、鋇、鋅、鎂及鋁。鈉鹽及鉀鹽通常為較佳的。在適當時，其他醫藥學上可接受之鹽包含使用諸如鹵化物、氫氧化物、羧酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、低碳數烷基磺酸鹽及芳基磺酸鹽之相對離子形成之無毒銨、四級銨及胺陽離子。適合的無機鹼加成鹽由金屬鹼製備，所述金屬鹼包含氫化鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鋁、氫氧化鋰、氫氧化鎂、氫氧化鋅及其類似物。適合的胺鹼加成鹽由因其低毒性及醫學用途之可接受性而時常用於藥物化學的胺製備。氨、乙二胺、N-甲基-葡糖胺、離胺酸、精胺酸、鳥胺酸、膽鹼、N,N'-二苯甲基乙二胺、氯普魯卡因、二乙醇胺、普魯卡因、N-苯甲基苯乙基胺、二乙胺、哌嗪、參(羥基甲基)-胺基甲烷、四甲基銨氫氧化物、三乙胺、二苯甲基胺、二苯羥甲胺、去氫松香胺、N-乙基哌啶、苯甲胺、四甲銨、四乙銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、鹼性胺基酸、二環己胺及類似物。

其他酸及鹼在其本身並非醫藥學上可接受時可用於製備在獲得本文所描述之化合物及其醫藥學上可接受之酸或鹼加成鹽時適用作中間物之鹽。

此組合之組分可包含不同醫藥學上可接受之鹽的混合物/組合及呈游離形式之化合物與醫藥學上可接受之鹽的混合物/組合。

組合之組分可以溶劑合物的形式存在。術語「溶劑合物」係指化合物(包含其鹽)與一或多個溶劑分子之分子複合物。此等溶劑分子為通常用於醫藥技術之已知對接受者無害的彼等溶劑分子，例如水、乙醇、二甲亞碸、丙酮及其他常見有機溶劑。術語「水合物」係指包括化合物及水之分子複合物。 醫藥組合物

本文所描述之化合物可調配成進一步包括醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑、佐劑或媒劑之醫藥組合物。在一些實施例中，本揭示案係關於一種醫藥組合物，其包括本文所描述之化合物及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑、佐劑或媒劑。在一些實施例中，本揭示案包含一種醫藥組合物，其包括安全且有效量之本文所描述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑、佐劑或媒劑。醫藥學上可接受之載劑包含例如關於預期投與形式適當選擇且符合習知醫藥慣例之醫藥稀釋劑、賦形劑或載劑。

「有效量」包含「治療有效量」及「預防有效量」。術語「治療有效量」係指在治療及/或減輕患者之流感病毒感染中有效的量。術語「預防有效量」係指在預防及/或實質上減輕流感病毒感染爆發之機會或規模方面有效的量。

醫藥學上可接受之載劑可含有並不過度抑制化合物之生物活性之惰性成分。醫藥學上可接受之載劑應為生物相容的，例如無毒、非炎性、非免疫原性或在向個體投與後無其他非所要反應或副作用。可採用標準醫藥調配技術。

如本文所使用之醫藥學上可接受之載劑、佐劑或媒劑包含適用於所要特定劑型的任何溶劑、稀釋劑或其他液體媒劑、分散或懸浮助劑、表面活性劑、等張劑、增稠或乳化劑、防腐劑、固體黏合劑、潤滑劑及類似物。《雷明頓氏醫藥科學（Remington's Pharmaceutical Sciences ）》，第16版，E. W. Martin（Mack Publishing Co.，賓夕法尼亞州伊斯頓（Easton，Pa.），1980）揭示了在調配醫藥學上可接受之組合物中所使用之各種載劑及用於其製備之已知技術。除非任何習知載劑介質諸如藉由產生任何不合需要之生物效應或另外以有害方式與醫藥學上可接受之組合物之任何其他組分相互作用而與本文所描述之化合物不相容，否則預期其使用屬於本揭示案之範疇內。

如本文所使用，術語「副作用」涵蓋療法(例如，預防劑或治療劑)的不合需要及不良之作用。副作用始終係不希望的，但不希望的效應不一定係不利。療法（例如，預防劑或治療劑）之不良效應可為有害或不適或有風險的。副作用包含（但不限於）發熱、發冷、嗜睡、胃腸道毒性（包含胃腸潰瘍及糜爛）、噁心、嘔吐、神經毒性、腎毒性、腎臟毒性（包含如乳頭狀壞死及慢性間質性腎炎之病況）、肝毒性（包含血清肝臟酶水準升高）、骨髓毒性（包含白血球減少症、骨髓抑制、血小板減少症及貧血）、口腔乾燥、金屬味、妊娠延長、無力、嗜眠、疼痛（包含肌肉紊亂痛、骨痛及頭痛）、脫髮、乏力、眩暈、椎體外症狀、靜坐不能、心血管紊亂及性功能障礙。

可充當醫藥學上可接受之載劑的物質之一些實例包含（但不限於）：離子交換劑；氧化鋁；硬脂酸鋁；卵磷脂；血清蛋白（諸如人血清白蛋白）；緩衝物質（諸如twin 80、磷酸酯、甘胺酸、山梨酸或山梨酸鉀）；飽和蔬菜脂肪酸、水、鹽或電解質之部分甘油酯混合物（諸如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉或鋅鹽）；膠態二氧化矽；三矽酸鎂；聚乙烯吡咯啶酮；聚丙烯酸酯；蠟；聚乙烯-聚環氧丙烷嵌段共聚物；甲基纖維素；羥丙基甲基纖維素；羊毛脂；糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；黃蓍粉末；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，諸如可可脂及栓劑蠟；油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；二元醇，諸如丙二醇或聚乙二醇；酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；瓊脂；緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；褐藻酸；無熱原質水；等張生理鹽水；林格氏溶液；乙醇；及磷酸酯緩衝溶液；且根據調配者之判斷，諸如月桂基硫酸鈉及硬脂酸鎂之其他無毒相容潤滑劑以及著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、調味劑及芳香劑、防腐劑及抗氧化劑亦可存在於組合物中。 用於經肺遞送之調配物

在一些實施例中，本文所描述之醫藥組合物適用於藉由吸入直接經由呼吸道向下呼吸道（例如肺）投與。藉由吸入投與之組合物可呈可吸入粉末組合物或液體或粉末噴霧劑形式，且可能以標準形式使用粉末吸入裝置或氣溶膠分配裝置來投與。此類裝置為眾所周知的。對於藉由吸入投與，粉末狀調配物通常包括活性化合物以及惰性固體粉末狀稀釋劑（諸如乳糖或澱粉）。可吸入乾粉組合物可存在於明膠或類似物質之膠囊及藥筒或者用於吸入器或吹入器之層壓鋁箔的泡殼中。各膠囊或藥筒可通常含有例如約10 mg至約100 g各活性化合物。可替代地，本文所描述之組合物可在無賦形劑之情況下呈現。

可吸入組合物可經封裝用於單位劑量或多劑量遞送。舉例而言，組合物可按類似於以下中所述之方式封裝以用於多劑量遞送：GB 2242134、美國專利第6,632,666號、第5,860,419號、第5,873,360號及第5,590,645號（皆說明了「Diskus」裝置）；或GB2i78965、GB2129691、GB2169265、美國專利第4,778,054號、第4,811,731號及第5,035,237號（其說明了「Diskhaler」裝置）；或者EP 69715（「Turbuhaler」裝置）或GB 2064336及美國專利第4,353,656號（「Rotahaler」裝置）。

用於藉由吸入局部遞送至肺之噴霧組合物可調配為水溶液或懸浮液或自加壓包裝遞送之氣溶膠，諸如定劑量吸入器（MDI），其中使用適合的液化推進劑，包含氫氟烷烴，諸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷及尤其1,1,1,2-四氟乙烷、1,1,1,2,3,3,3-七氟-正丙烷及其混合物。適用於吸入之氣溶膠組合物可以懸浮液或溶液之形式呈現。

藉由吸入投與之藥物通常具有受控制粒度。用於吸入至支氣管系統中之最佳粒度通常為約1 μm至約10 μm，且在一些實施例中，為約2 μm至約5 μm。具有大於約20 μm之粒度的粒子一般過大而在吸入時不能達至較小呼吸道。為達成此等粒度，活性成分之粒子可經歷諸如微米尺寸化之粒度減小處理過程。可藉由風選或篩分分離出所需粒度部分。較佳地，所述粒子將為結晶。

鼻內噴霧劑可使用水性或非水性媒劑添加諸如增稠劑、調節pH之緩衝鹽或酸或鹼、等張調節劑或抗氧化劑之藥劑來調配。

用於藉由霧化吸入之溶液可使用水性媒劑添加諸如酸或鹼、緩衝鹽、等張調節劑或抗菌劑之試劑來調配。其可藉由過濾或在高壓釜中加熱來滅菌，或呈現為非滅菌產品。霧化器以自調配物水溶液產生之薄霧形式供應氣溶膠。

在一些實施例中，本文所描述之醫藥組合物可與補充活性成分一起調配。

在一些實施例中，本文所描述之醫藥組合物自乾粉吸入器投與。

在其他實施例中，本文所描述之醫藥組合物藉由氣溶膠分配裝置視情況結合諸如「Volumatic®」吸入室之吸入室來投與。

載劑可為含有例如水、乙醇、多元醇（例如丙三醇、丙二醇、液體聚乙二醇及類似物）、其合適混合物及/或植物油之溶劑或分散介質。可例如藉由使用諸如卵磷脂之包衣、在分散液之情況下藉由維持所要粒度及藉由使用表面活性劑來維持適當流動性。本文中所描述之組合物中微生物之作用之預防可藉由添加抗細菌劑及抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞及其類似物來實現。在許多情況下，較佳包含等張劑，例如糖或氯化鈉。可藉由在組合物中使用延緩吸收劑（例如，單硬脂酸鋁及明膠）來延長可注射組合物之吸收。

在一些實施例中，本文所描述之醫藥組合物可在控制組合物釋放之基質內。在一些實施例中，所述基質可包括：脂質、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚己內酯、聚(乙醇酸)、聚(乳酸)、聚己內酯、聚乳酸、聚酸酐、聚丙交酯-共-乙交酯、聚胺基酸、聚氧化乙烯、丙烯酸封端之聚氧化乙烯、聚醯胺、聚乙烯、聚丙烯腈、聚磷氮烯、聚(原酸酯)、蔗糖乙酸異丁酸酯（SAIB）及其組合，以及例如美國專利第6,667,371號、第6,613,355號、第6,596,296號、第6,413,536號、第5,968,543號、第4,079,038號、第4,093,709號、第4,131,648號、第4,138,344號、第4,180,646號、第4,304,767號、第4,946,931號中所揭示之其他聚合物，所述文獻中之各者明確地以全文引用之方式併入本文中。在此等實施例中，所述基質持續釋放藥物。

醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑亦可包含任何溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑及/或抗真菌劑、等張劑及吸收延遲劑以及類似物。此類介質及藥劑用於醫藥活性物質之用途在此項技術中已熟知。除非任何習知介質或試劑與活性成分不相容，否則考慮將其用於醫藥組合物中。

本文所描述之醫藥組合物可經調配用於根據習知技術投與。參見，例如，雷明頓（Remington），《醫藥科學與實踐 （The Science and Practice of Pharmacy ）》 （第20版.2000）。舉例而言，本揭示案之鼻內醫藥組合物可調配為氣溶膠（此術語包含液體與乾粉氣溶膠）。如熟習此項技術者所已知，液體粒子之氣溶膠可藉由任何適合的手段產生，諸如使用壓力驅動之氣溶膠霧化器或超音波霧化器。參見例如美國專利第4,501,729號。固體粒子之氣溶膠（例如凍乾、冷凍乾燥等）可同樣使用任何固體微粒藥劑氣溶膠產生器藉由醫藥領域中已知之技術來產生。作為另一實例，本揭示案之醫藥組合物可調配為按需可溶形式，其提供醫藥組合物之凍乾部分及醫藥組合物之溶解溶液部分。

在本發明之一些實施例中，醫藥組合物呈水性懸浮液形式，其可由溶液或懸浮液來製備。對於溶液或懸浮液，劑型可由親脂性物質、脂質體（磷脂小泡/膜）及/或脂肪酸（例如，棕櫚酸）之微胞組成。在特定實施例中，醫藥組合物為能夠溶解於由經投與、施用及/或遞送醫藥組合物之組織之上皮細胞黏膜所分泌的流體中之溶液或懸浮液，其可有利地增強吸收。

醫藥組合物可為水溶液、非水溶液或水溶液及非水溶液之組合。

合適水溶液包含（但不限於）：水凝膠、水性懸浮液、水性微球體懸浮液、水性微球體分散液、水性脂質體分散液、脂質體之水性微胞、水性微乳液及前述之任何組合或可溶解於鼻腔黏膜分泌之流體中的任何其他水溶液。例示性非水溶液包含（但不限於）：非水凝膠、非水性懸浮液、非水性微球體懸浮液、非水性微球體分散液、非水性脂質體分散液、非水性乳液、非水性微乳液及前述之任何組合或可溶解或混合於黏膜分泌之流體中的任何其他非水溶液。

粉末調配物之實例包含（但不限於）：純粉末混合物、微米化粉末、冷凍乾燥粉末、凍乾粉末、粉末微球、包衣粉末微球、脂質體分散液及前述之任何組合。粉末微球可由各種多醣及纖維素形成，包含（但不限於）澱粉、甲基纖維素、三仙膠、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素、卡波姆（carbomer）、聚乙烯醇海藻酸鹽、阿拉伯膠、聚葡萄胺糖及其任何組合。

在特定實施例中，可吸入組合物為至少部分地或甚至實質上（例如，至少80%、90%、95%或更多）可溶於由黏膜分泌之流體中以便於吸收的一種組合物。組合物可調配有促進藥劑溶解於分泌物內的載劑及/或其他物質，包含（但不限於）脂肪酸（例如，棕櫚酸）、神經節苷脂（例如，GM-1）、磷脂（例如，磷脂醯絲胺酸）及乳化劑（例如，聚山梨醇酯80）。

本領域的技術人員將瞭解，對於鼻內投與或遞送，由於投與之醫藥組合物的量通常較小，故鼻分泌物可能改變所投與劑量之pH，因為鼻腔中的pH範圍可寬達5至8。此類改變可影響可供吸收之未離子化藥物之濃度。因此，在代表性實施例中，醫藥組合物更包括緩衝劑以就地維持或調節pH。典型的緩衝劑包含（但不限於）抗壞血酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、麩蛋白、碳酸鹽及磷酸鹽緩衝劑。

在一些實施例中，醫藥組合物之pH經選擇以使得投藥之後的黏膜組織之內部環境為中性或酸性，此（1）可提供供吸收之呈未離子化形式的活性化合物，（2）抑制更可能存在於鹼性環境中之病原菌之生長，及（3）減少刺激黏膜之可能性。

對於液體及粉末噴霧劑或氣溶膠，醫藥組合物可經調配以具有任何適合且所需的粒度或液滴大小。在說明性實施例中，粒子或液滴之大部分及/或平均粒度之範圍等於或大於約1、2.5、5、10、15或20微米及/或等於或小於約25、30、40、45、50、60、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400或425微米（包含前述之所有組合）。大部分及/或平均粒度或液滴大小之合適範圍之代表性實例包含（但不限於）約5至100微米、約10至60微米、約175至325微米及約220至300微米，其有助於安全且有效量之活性化合物例如在鼻腔中（例如，在鼻腔上部三分之一、上鼻道、嗅區及/或通向嗅覺神經通路之鼻竇區中）的沈積。一般而言，小於約5微米之粒子或液滴將沈積於氣管或甚至肺中，而為約50微米或更大之粒子或液滴一般不能達至鼻腔且沈積於鼻前部。

國際專利公開案WO 2005/023335描述具有適用於實踐本揭示案代表性實施例之直徑大小的粒子及液滴。在特定實施例中，粒子或液滴具有約5至30微米、約10至20微米、約10至17微米、約10至15微米、約12至17微米、約10至15微米或約10至12微米之平均直徑。粒子可「實質上」具有如本文所描述之平均直徑或大小，亦即至少約50%、60%、70%、80%、90%、或95%或更多的粒子具有指定直徑或大小範圍。

本文所描述之醫藥組合物可以具有如上文所述之液滴大小的噴霧化或霧化液體形式遞送。

根據包括鼻內遞送方法的特定實施例，可能期望延長醫藥組合物在鼻腔中（例如，在鼻腔上部三分之一、上鼻道、嗅區及/或鼻竇區中）之滯留時間，例如以增強吸收。因此，醫藥組合物可視情況經調配有生物黏附聚合物、膠（例如，三仙膠）、聚葡萄胺糖（例如，高度純化陽離子多醣）、果膠（或當施用至鼻黏膜時如同凝膠一樣稠化或乳化的任何碳水化合物）、微球體（例如，澱粉、白蛋白、聚葡萄糖、環糊精）、明膠、脂質體、卡波姆、聚乙烯醇、海藻酸鹽、阿拉伯膠、聚葡萄胺糖及/或纖維素（例如，甲基或丙基纖維素；羥基或羧基纖維素；羧甲基或羥丙基纖維素），其為增加在鼻腔中之滯留時間的試劑。作為另一方法，增大調配物之黏度亦可提供延長藥劑與鼻上皮之接觸的手段。醫藥組合物可調配為鼻乳液、軟膏或凝膠，其由於其黏度而提供局部施用之優勢。

潮濕及高度血管化的膜可促使快速吸收。因此，醫藥組合物可視情況包括保濕劑（尤其在凝膠類組合物之情況下）以確保充分的鼻內濕氣含量。適合的保濕劑之實例包含（但不限於）丙三醇（glycerin/glycerol）、礦物油、植物油、膜調節劑、舒緩劑及/或糖醇（例如木糖醇、山梨糖醇；及/或甘露糖醇）。保濕劑在醫藥組合物中之濃度將視所選藥劑及調配物而變化。

醫藥組合物亦可視情況包含吸收增進劑，諸如抑制酶活性、降低黏液之黏度或彈性、降低黏膜纖毛清除效應、打開緊密結合及/或溶解活性化合物之藥劑。化學增強劑為本領域中已知且包含螯合劑（例如，EDTA）、脂肪酸、膽酸鹽、界面活性劑及/或防腐劑。當調配展現較差膜滲透率、缺乏親脂性及/或由胺基肽酶降解之化合物時，用於滲透之增強劑可尤其適用。吸收增強劑在醫藥組合物中之濃度將視所選藥劑及調配物而變化。

為了延長儲存壽命，可視情況將防腐劑添加至醫藥組合物。適合的防腐劑包含（但不限於）苯甲醇、對羥基苯甲酸酯、硫柳汞、氯丁醇及氯化苯甲烴銨及前述之組合。防腐劑之濃度將視使用之防腐劑、所調配之化合物、調配物及其類似物而變化。在代表性實施例中，防腐劑以約2重量%或更小之量存在。

本文所描述之醫藥組合物可視情況含有氣味劑，例如如EP 0 504 263 B1中所描述，以提供對氣味之感覺，以便有助於吸入組合物，從而促進至嗅區之遞送及/或藉由嗅覺神經元觸發傳輸。

作為另一選項，組合物可包括調味劑，例如以增強味道及/或個體對組合物之可接受性。 經肺投與之多孔粒子

在一些實施例中，粒子為多孔的，使得其具有適當密度以避免在經由吸入器投與時沈積於咽喉後部。相對較大之粒度及相對較低之密度的組合避免肺中之吞噬作用，提供適當靶向之遞送，避免組分之全身遞送且在肺內提供高濃度之組分。

用於製備此等顆粒及用於遞送此等顆粒之代表性方法描述於例如美國專利第7,384,649號、美國專利第7,182,961號、美國專利第7,146,978號、美國專利第7,048,908號、美國專利第6,956,021號、美國專利第6,766,799號及美國專利第6,732,732號中。

揭示此等顆粒之其他專利包含美國專利第7,279,182號、美國專利第7,252,840號、美國專利第7,032,593號、美國專利第7,008,644號、美國專利第6,848,197號及美國專利第6,749,835號。

美國專利第7,678,364號揭示用於將粒子遞送至肺部系統之方法，其包括：向需要治療、防治或診斷之患者的呼吸道投與安全且有效量之乾粉，所述乾粉包括：a）與治療劑、防治劑或診斷劑複合之多價金屬陽離子；b）醫藥學上可接受之載劑；及c）含多價金屬陽離子之組分，其中所述乾粉經噴霧乾燥且具有為藥劑總重量之約10% w/w或更多的多價金屬陽離子總量、約0.4 g/cm³ 或更低之敲緊密度、約5微米至約30微米之中值幾何直徑及約1至約5微米之空氣動力直徑。

粒子中存在之本文所描述之化合物或其鹽之量可在約0.1重量%至約95重量%之範圍內，儘管在一些情況下，可甚至高達100%。舉例而言，約1至約50重量%，諸如約5至約30重量%。藥物分佈於在整個粒子中之粒子可為較佳的。

在一些實施例中，粒子包含除上文所描述之磷脂外之界面活性劑。如本文所使用，術語「界面活性劑」係指較佳地吸收至兩種不可混溶相之間的界面（諸如水與有機聚合物溶液之間的界面、水/空氣界面或有機溶劑/空氣界面）的任何試劑。界面活性劑一般具有親水性部分及親脂性部分，使得其在吸收至粒子時易於使各部分達至不吸引類似包衣之粒子的外部環境，因此減少粒子集結。界面活性劑亦可促進治療劑或診斷劑之吸收且提高藥劑之生物可用性。

可用於製造本文所描述之粒子之適合的界面活性劑包含（但不限於）：十六烷醇；脂肪醇，諸如聚乙二醇（PEG）；聚氧乙烯-9-月桂醚；表面活性脂肪酸，諸如棕櫚酸或油酸；甘膽酸鹽；表面活性素（surfactin）；泊洛沙姆（poloxamer）；脫水山梨糖醇脂肪酸酯，諸如脫水山梨糖醇三油酸酯（Span® 85）；Tween® 80；及泰洛沙泊（tyloxapol）。

界面活性劑可以約0至約5重量%範圍內之量存在於粒子中。較佳地，其可以約0.1至約1.0重量%範圍內之量，例如1.0重量%存在於粒子中。

具有小於約0.4 g/cm³ 之敲緊密度、至少約5 μm之中值直徑及約1 μm至約5 μm或約1 μm至約3 μm之空氣動力直徑的粒子更能夠避免口咽區中之慣性及重力沈積，且靶向呼吸道或肺深部。使用較大之更多孔粒子為有利的，因為其能夠比較小之更緻密粒子（諸如當前用於吸入療法之彼等粒子）更有效地氣霧化。 脂質體遞送

本文中所描述之組合物經有利地遞送至肺，以在實際或潛在流感感染之位點處提供化合物。此可藉由經肺遞送經由定劑量吸入器或其他經肺遞送裝置實現，且亦藉由使粒子進入肺中之肺泡周圍的微血管床實現。

包含較小單層囊泡之奈米載劑（諸如脂質體）展示優於用於將藥物遞送至肺之其他習知方法的若干優勢，包含延長之藥物釋放及細胞特異性靶向藥物遞送。奈米級藥物載劑亦可有利於遞送水溶性較差之藥物，且本文所描述之化合物中之某些水溶性較差。額外優勢包含其提供受控釋放、保護以免代謝及降解、降低之藥物毒性及靶向能力的能力。

脂質體（較佳單層囊泡）如藉由動態光散射所量測具有小於200 nm之大小，且較佳特徵在於包含化學純合成磷脂，最佳具有長度至少16個碳之側鏈，且含有本文所描述之化合物中之一或多者或足以將一定量之其化合物較佳遞送（亦即靶向）至肺泡周圍之微血管床的其醫藥學上可接受之鹽。可例如藉由動態光散射使用氦-氖100 mW NEC氣體雷射及Malvern K7027相關器量測囊泡直徑，理想地每次產生至少兩個或三個量測值以用於各大小判定。

表述「化學純磷脂」意欲定義基本上不含有害淨化部分及引起由其形成之較小單層囊泡（SUV）之聚集的雜質且純度超過97%之磷脂。較佳地，脂質體之直徑絕大多數為約50至約160 nm，電荷基本上為中性，且併入側鏈長度為16至18個碳原子的磷脂。更佳地，脂質體由二硬脂醯基磷脂醯膽鹼（DSPC）製備且包含作為囊泡穩定劑之膽固醇（最佳以全部脂質之10%至50%之量）。

脂質體具有大於體溫（亦即大於37℃）之熔點亦可為有利的。出於此原因，使用純磷脂，較佳為飽和且具有至少16個碳、較佳16個碳與18個碳之間的碳鏈長度之磷脂可為有利的。二硬脂醯基磷脂醯膽鹼（DSPC）為較佳磷脂。膽固醇有助於穩定脂質體且較佳以足以提供脂質體穩定性之量添加。最佳地，脂質體更包括聚乙二醇化磷脂，諸如DSPEPEG。所述方法涉及向患者之血流中引入一定量脂質體，所述脂質體大小小於200 nm（較佳為單層囊泡）且較佳特徵在於包含化學純合成磷脂，最佳具有長度為至少16個碳之側鏈，且含有本文所描述之化合物或足以將一定量化合物較佳遞送（亦即靶向）至肺中肺泡周圍之微血管床的其醫藥學上可接受之鹽或前藥。

本文所描述之化合物可與如本文中亦描述之其他抗流感藥劑組合。此類額外藥劑亦可存在於所述脂質體中，可存在於不同脂質體中，或可經由不同途徑共同投與。

脂質體包含本文所描述之化合物中之一或多者或其醫藥學上可接受之鹽，且可視情況包含其他抗流感藥劑。脂質體可藉由將磷脂及膽固醇溶解於諸如氯仿之適當有機溶劑中及蒸發溶劑以形成脂質膜來製備。若採用離子載體來將本文所描述之化合物載入脂質體中，則可在蒸發前將離子載體添加至脂質溶液。接著將乾燥脂質膜於適當水相中再水合，所述水相為諸如磷酸鹽緩衝鹽水或其他生理學上適當之溶液。水溶性藥物或治療劑可含於水合溶液中，但若需要遠距離裝載，則可將諸如上文所描述之螯合劑之裝載劑添加至水合溶液以包封於脂質體之內部水空間內。

在添加水合溶液時，不同大小之脂質體自發地形成且包封一部分水相。其後，使脂質體及懸浮水溶液經受諸如擠壓之剪切力、音波處理或根據美國專利第4,753,788號中所描述之方法經由均質器進行之處理；以產生特定大小內之囊泡。

隨後可處理脂質體以自懸浮溶液移除非所需化合物，例如未包封藥物，其可經由諸如凝膠層析或超過濾之過程實現。

脂質體於乾粉氣溶膠中用於靶向肺遞送之用途描述於例如Willis等人, 《肺（Lung）》, 2012年6月, 190(3):251-262中。 投與方法

視所治療感染之嚴重程度而定，上文所述描述之化合物及醫藥學上可接受之組合物可經口、經直腸、非經腸、腦池內、陰道內、腹膜內、局部（作為散劑、軟膏或滴劑）、經頰、作為經口或經鼻噴霧、至經肺系統（諸如藉由使用吸入器，諸如定劑量吸入器（MDI））或其類似途徑向人類及其他動物投與。

用於經口投與之液體劑型包含（但不限於）醫藥學上可接受之乳劑、微乳劑、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑。除活性化合物之外，液體劑型可含有常用於此項技術中之惰性稀釋劑（諸如水或其他溶劑）、增溶劑及乳化劑（諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、EtOAc、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲醯胺）、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇及脫水山梨糖醇之脂肪酸酯及其混合物。除惰性稀釋劑之外，經口組合物亦可包含佐劑，諸如濕潤劑、乳化劑及懸浮劑、甜味劑、調味劑及芳香劑。

可注射製劑（例如，無菌可注射水性或油性懸浮液）可根據已知技術使用適合的分散劑、濕潤劑及/或懸浮劑調配。無菌可注射製劑亦可為於無毒性非經腸可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液、懸浮液或乳液，例如呈於1,3-丁二醇中之溶液。在可接受之媒劑及溶劑中，可使用的有水、林格氏溶液（Ringer's solution）、U.S.P.及等滲氯化鈉溶液。此外，無菌非揮發性油常規地用作溶劑或懸浮介質。出於此目的，可採用任何溫和的不揮發性油，包含合成的單酸甘油酯或二酸甘油酯。另外，脂肪酸（諸如油酸）用於製備可注射劑。

可例如藉由經由細菌截留過濾器過濾或藉由併入在使用之前可溶解或分散於無菌水或其他無菌可注射介質中之呈無菌固體組合物形式之滅菌劑來將可注射調配物滅菌。

為延長本文所描述之化合物之效應，通常期望減緩來自皮下或肌肉內注射之化合物之吸收。這可藉由使用水溶性較差之結晶或非晶形物質之液體懸浮液來實現。化合物之吸收率則視其溶解率而定，溶解率又可能視晶體大小及結晶形式而定。或者，藉由將化合物溶解或懸浮於油媒劑中來達成非經腸投與之化合物之延遲吸收。藉由於可生物降解聚合物（諸如聚乳酸交酯-聚乙交酯）中形成化合物之微膠囊基質來製造可注射積存形式。視化合物與聚合物之比率及所使用之特定聚合物的性質而定，可控制化合物釋放速率。其他生物可降解聚合物之實例包含聚(原酸酯)及聚(酸酐)。可注射積存調配物亦可藉由將化合物包覆於與身體組織相容之脂質體或微乳液中來製備。

用於經直腸或經陰道投與之組合物特定地為栓劑，其可藉由將本文所描述化合物與合適非刺激性賦形劑或載劑，諸如可可脂、聚乙二醇或栓劑蠟混合來製備，所述賦形劑或載劑在環境溫度下為固體，但在體溫下為液體且因此在直腸或陰道腔中熔融並釋放活性化合物。

用於經口投與之固體劑型包括膠囊、錠劑、丸劑、散劑及粒劑。在此類固體劑型中，將活性化合物與至少一種惰性醫藥學上可接受之賦形劑或載劑(諸如檸檬酸鈉或磷酸二鈣)及/或以下混合：a）填充劑或增量劑，諸如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇及矽酸；b）黏合劑，諸如羧甲基纖維素、褐藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯啶酮、蔗糖及阿拉伯膠；c）保濕劑，諸如甘油；d）崩解劑，諸如瓊脂-瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯澱粉、褐藻酸、某些矽酸鹽及碳酸鈉；e）溶液阻滯劑，諸如石蠟；f）吸收加速劑，諸如四級銨化合物；g）潤濕劑，諸如鯨蠟醇及丙三醇單硬脂酸酯；h）吸附劑，諸如高嶺土及膨潤土；及i）潤滑劑，諸如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及其混合物。在膠囊、錠劑及丸劑之情況下，劑型亦可包含緩衝劑。

亦可使用相似類型之固體組合物作為軟填充及硬填充的明膠膠囊中之填充劑，所述膠囊使用賦形劑，諸如乳糖（lactose/milk sugar）以及高分子量聚乙二醇及其類似物。錠劑、糖衣藥丸、膠囊、丸劑及粒劑之固體劑型可製備有包衣及外殼，諸如腸溶包衣及醫藥調配技術中熟知之其他包衣。其可視情況含有乳濁劑，且亦可具有僅在或優先在腸道之某一部分中釋放或視情況以延遲方式釋放活性成分之組合物。可使用之包埋組合物之實例包含聚合物質及蠟。亦可使用相似類型之固體組合物作為軟填充及硬填充的明膠膠囊中之填充劑，所述膠囊使用賦形劑，諸如乳糖（lactose/milk sugar）以及高分子量聚乙二醇及其類似物。

活性化合物亦可呈具有一或多種如上文所提及之賦形劑之微膠囊化形式。錠劑、糖衣藥丸、膠囊、丸劑及粒劑之固體劑型可製備有包衣及殼層，諸如腸溶衣、釋放控制包衣及醫藥調配技術中熟知之其他包衣。在此等固體劑型中，活性化合物可與至少一種惰性稀釋劑（諸如蔗糖、乳糖或澱粉）混合。如在一般實踐中，此類劑型亦可包含除惰性稀釋劑以外之其他物質，例如製錠潤滑劑及其他製錠助劑，諸如硬脂酸鎂及微晶纖維素。在膠囊、錠劑及丸劑之情況下，劑型亦可包括緩衝劑。其可視情況含有乳濁劑，且亦可具有僅在或優先在腸道之某一部分中釋放或視情況以延遲方式釋放活性成分之組合物。可使用之包埋組合物之實例包含聚合物質及蠟。

用於表面或經皮投與本文所描述化合物之劑型包含軟膏、糊劑、乳膏、洗劑、凝膠、散劑、溶液、噴霧劑、吸入劑或貼片。活性組分係在無菌條件下與醫藥學上可接受之載劑及如可為所需之任何所需防腐劑或緩衝劑混雜。亦涵蓋經眼調配物、滴耳劑及滴眼劑屬於本揭示案之範疇內。另外，本揭示案涵蓋使用經皮貼片，其具有向身體提供控制遞送化合物之附加優點。此類劑型可藉由將化合物溶解或分配於適當介質中來製備。亦可使用吸收增強劑來增加化合物通過皮膚之通量。速率可藉由提供速率控制膜或藉由將化合物分散於聚合物基質或凝膠中來控制。

本文中所描述之組合物可經口、非經腸、藉由吸入噴霧、局部、經直腸、經鼻、經頰、經陰道或經由植入式貯器投與。如本文中所使用之術語「非經腸」包含（但不限於）皮下、靜脈內、肌肉內、關節內、滑液內、胸骨內、鞘內、肝內、病灶內及顱內注射或輸注技術。特定言之，組合物係經口、腹膜內或靜脈內投與。

本文所描述之組合物之無菌可注射形式可為水性或油性懸浮液。此等懸浮液可根據此項技術中已知之技術使用適合之分散劑或潤濕劑及懸浮劑來調配。無菌可注射製劑亦可為無毒非經腸可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液或懸浮液，例如呈1,3-丁二醇中之溶液的形式。在可接受媒劑及溶劑中，可採用的有水、林格氏溶液及等張氯化鈉溶液。此外，無菌非揮發性油常規地用作溶劑或懸浮介質。出於此目的，可採用任何溫和不揮發性油，包含合成單甘油酯或二甘油酯。脂肪酸（諸如油酸及其甘油酯衍生物）適用於製備可注射劑，天然醫藥學上可接受之油（諸如橄欖油或蓖麻油，尤其其聚氧乙烯化形式）亦然。此等油溶液或懸浮液亦可含有長鏈醇稀釋劑或分散劑，諸如羧甲基纖維素或通常用於調配醫藥學上可接受之劑型（包含乳液及懸浮液）之類似分散劑。其他常用界面活性劑（諸如Tween、Span及其他乳化劑）或常用於製造醫藥學上可接受之固體、液體或其他劑型之生物可用性增強劑亦可用於調配之目的。

本文中所描述之醫藥組合物可用任何經口可接受之劑型經口投與，所述劑型包含（但不限於）膠囊、錠劑、水性懸浮液或溶液。在用於經口用途之錠劑之情況下，常用載劑包含（但不限於）乳糖及玉米澱粉。通常亦添加潤滑劑，諸如硬脂酸鎂。對於以膠囊形式經口投與，適用之稀釋劑包含乳糖及乾燥玉米澱粉。當需要水性懸浮液用於經口使用時，使活性成分與乳化劑及懸浮劑組合。若需要，亦可添加某些甜味劑、調味劑或著色劑。

替代地，本文所描述之醫藥組合物可以用於經直腸投與之栓劑形式投與。此等栓劑可藉由將試劑與合適非刺激性賦形劑混合來製備，所述賦形劑在室溫下為固體但在直腸溫度下為液體且因此將在直腸中熔融以釋放藥物。此類材料包含（但不限於）可可脂、蜂臘及聚乙二醇。

本文所描述之醫藥組合物亦可局部投與，當治療目標包含局部施用可容易地接近之區域或器官時尤其如此，所述治療目標包含眼、皮膚或低位腸道之疾病。用於此等區域或器官中之每一者的適合的局部調配物易於製備。

用於低位腸道之局部施用可以經直腸栓劑調配物（參見上文）形式或以適合灌腸調配物形式實現。亦可使用局部經皮貼片。

對於局部施用，醫藥組合物可以含有懸浮或溶解於一或多種載劑中之活性組分之適合的軟膏形式調配。用於本文所描述化合物之局部投藥之載劑包含（但不限於）礦物油、液體凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚環氧丙烷化合物、乳化蠟及水。替代地，醫藥組合物可以含有懸浮或溶解於一或多種醫藥學上可接受之載劑中之活性組分之適合洗劑或乳膏形式調配。適合之載劑包含（但不限於）礦物油、脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鯨蠟酯蠟、鯨蠟硬脂醇、2-辛基十二醇、苯甲醇及水。

對於經眼使用，醫藥組合物可調配為具有或不具有防腐劑（諸如苯紮氯銨）之於等張、pH經調整的無菌生理鹽水中之微米化懸浮液，或特定而言調配為於等張、pH經調整的無菌生理鹽水中之溶液。替代地，對於經眼使用，醫藥組合物可調配於諸如凡士林之軟膏中。

用於本文所描述方法中之化合物可以單位劑型調配。術語「單位劑型」係指適合以單位劑量形式用於經受治療之個體的物理離散單元，其中各單元含有經計算以產生所要治療效應的預定量之活性物質，其視情況與合適之醫藥載劑結合。單位劑型可用於單一日劑量或多個日劑量（例如每天約1至4次或更多次）中之一者。當使用多種日劑量時，用於各劑量之單位劑型可相同或不同。

本揭示案參考詳述例示性實施例的本文所描述之實例更全面地理解。然而，此等實例不應解釋為限制本揭示案之範疇。本揭示案通篇所有引用在此明確地以引用之方式併入。 實例實例 1- 細胞病變效應檢定

實施研究以評估測試化合物3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸與其他流感抗病毒劑在基於流感病毒細胞之細胞病變效應（CPE）檢定中的活體外組合效應。

型流感病毒A/PR/8/34（H1N1）（ATCC VR-1469）獲自ATCC。MDCK細胞（ATCC CCL-34）係獲自ATCC且保持於補充有10%胎牛血清（Corning R35-076-CV）、1% L-麩醯胺酸（Gibco 25030081）、1%非必需胺基酸（NEAA，Gibco 11140050）及1%青黴素-鏈黴素（PS，Hyclone SV30010）之最小必需伊格爾培養基（Sigma M2279）中。

用於MDCK細胞之測試培養基為補充有1% L-麩醯胺酸、1% NEAA、1% PS之OptiPRO SFM培養基（Gibco 12309019），且2.5 µg/mL胰蛋白酶用作MDCK細胞之測試培養基。

在384孔盤中，MDCK細胞以2,000個細胞/孔接種且培養於37℃及5% CO₂ 下隔夜。第二天，2種藥物組合對中之每一者使用對每一化合物之七種藥物濃度的棋盤狀交叉模式來測試，包含每一化合物單獨一式三份培養盤。並行地評估作為對照化合物之Pimodivir（VX-787）。藉由Tecan HP D300數位分配器接種化合物（於DMSO中）。隨後添加病毒（2 TCID₉₀ /孔）。化合物之測試濃度為0.125、0.25、0.5、1、2、4及8× EC₅₀ 值。化合物組合列舉於表4中。DMSO（Sigma34869）於細胞培養基中之最終濃度為0.5%。將所得培養物培育在37℃及5% CO₂ 下額外5天直至病毒對照中之病毒感染顯示明顯的CPE（如藉由活細胞數目減少所評估）。為評估細胞存活率，隨後將CCK-8套組溶液（一瓶色度系統，Biolite 35004）添加至各孔中且將細胞培育在37℃下3小時。使用SpectraMax 340PC384盤式讀取器（分子裝置）量測吸光度（460 nm）。 化合物組合之抗病毒活性及細胞毒性分別表示為抑制%及存活%，且藉由以下等式計算： 抑制（%）= （原始資料_cpd -平均_VC ）/（平均_CC -平均_VC ）×100 存活(（%）=（原始資料_cpd -平均_MC ）/（平均_CC -平均_MC ）×100 原始資料_cpd 表示經化合物處理之孔的吸光度值；平均_VC 、平均_CC 及平均_MC 分別為病毒對照（VC；經病毒感染之細胞，無化合物）、細胞對照（CC；無病毒或化合物之細胞）及培養基對照（MC，僅培養基）之平均吸光度值使用MacSynergy™ II軟體（Prichard及Shipman，1990）來計算組合指數。隨後計算協同作用量曲線圖（95%）。正組合指數值表示協同作用，且負組合指數值表示拮抗作用。

如下表中展示，3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸展示與流感抗病毒藥物（包含巴洛沙韋（不含巴洛沙韋瑪波西酯前藥之羥基形式）、奧司他韋酸及法匹拉韋）在針對IFV A/PR/8/34（H1N1）之流感抗病毒CPE檢定中之強大的協同作用。

組合	化合物	協同作用量（ 95% ）	拮抗作用量（ 95% ）	組合效應
1	巴洛沙韋	285.84	-12.28	強大的協同作用
2	奧司他韋酸	269.37	-9.19	強大的協同作用
3	法匹拉韋	413.85	-3.15	強大的協同作用

絕對組合指數值＜25（亦即，協同作用量95%）表示累加效應。絕對組合指數值25至50表示輕微的協同作用或拮抗作用。絕對組合指數值50至100表示中等協同作用或拮抗作用。絕對組合指數值＞100表示強大的協同作用或拮抗作用。

圖1至圖3提供三種測試組合之各別計算曲線圖的視覺圖示。

化合物1與巴洛沙韋（不含巴洛沙韋瑪波西酯前藥之羥基形式）、奧司他韋酸及法匹拉韋之此等相同的三種組合亦表現出針對B型流感之抗病毒活性。

無

[圖1]為展示化合物1與巴洛沙韋之組合在檢定MDCK細胞中之流感病毒A/PR/8/34 （H1N1） 複製中之作用的MacSynergy™ II圖式。展示與95%信賴區間相比較之協同作用/拮抗作用。通篇化合物1係指3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸。

[圖2]為展示化合物1與奧司他韋酸之組合在檢定MDCK細胞中之流感病毒A/PR/8/34（H1N1） 複製中之作用的MacSynergy™ II圖式。展示與95%信賴區間相比較之協同作用/拮抗作用。

[圖3]為展示化合物1與法匹拉韋之組合在檢定MDCK細胞中之流感病毒A/PR/8/34（H1N1）複製中之作用的MacSynergy™ II圖式。展示與95%信賴區間相比較之協同作用/拮抗作用。

Claims (16)

1. 一種組合，其包括3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽及第二抗病毒劑。
2. 如申請專利範圍第1項所述的組合，其中所述第二抗病毒劑為神經胺糖酸苷酶抑制劑、聚合酶抑制劑、核酸內切酶抑制劑或流感疫苗。
3. 如申請專利範圍第1項所述的組合，其中所述第二抗病毒劑為選自以下者之神經胺糖酸苷酶抑制劑：奧司他韋(oseltamivir)、奧司他韋酸、紮那米韋(zanamivir)、蘭那米韋(laninamivir)及帕拉米韋(peramivir)或其醫藥學上可接受之鹽。
4. 如申請專利範圍第3項所述的組合，其中所述神經胺糖酸苷酶抑制劑是奧司他韋、奧司他韋酸或其醫藥學上可接受之鹽。
5. 如申請專利範圍第1項所述的組合，其中所述第二抗病毒劑為選自以下者之核酸內切酶抑制劑：巴洛沙韋瑪波西酯(baloxavir marboxil)及巴洛沙韋(baloxavir)或其醫藥學上可接受之鹽。
6. 如申請專利範圍第1項所述的組合，其中所述第二抗病毒劑為選自以下者之聚合酶抑制劑：法匹拉韋(favipiravir)或其醫藥學上可接受之鹽。
7. 如申請專利範圍第1項所述的組合，其中所述第二抗病毒劑為流感疫苗。
8. 一種組合，其包括a)3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽，b)巴洛沙韋、巴洛沙韋瑪波西酯、或其醫藥學上可接受之鹽，及c)神經胺糖酸苷酶抑制劑。
9. 如申請專利範圍第8項所述的組合，其中所述神經胺糖酸苷酶 抑制劑為奧司他韋、奧司他韋酸、紮那米韋、蘭那米韋、帕拉米韋或其醫藥學上可接受之鹽。
10. 如申請專利範圍第9項所述的組合，其中所述神經胺糖酸苷酶抑制劑為奧司他韋、奧司他韋酸或其醫藥學上可接受之鹽。
11. 如申請專利範圍第1項至第10項中任一項所述的組合，其係用於製造治療或預防流感病毒感染或複製的醫藥品。
12. 如申請專利範圍第11項所用之組合，其中所述3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽與所述第二抗病毒劑經共同調配。
13. 如申請專利範圍第11項所用之組合，其中所述3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)雙環[2.2.2]辛烷-2-羧酸或其醫藥學上可接受之鹽與所述第二抗病毒劑呈分開的調配物形式。
14. 如申請專利範圍第11項所用之組合，其中所述流感病毒為大流行性或耐藥性的大流行性/季節性流感病毒。
15. 如申請專利範圍第1項至第10項中任一項所述的組合，其係用於製造治療或預防宿主中之A型流感或B型流感感染之醫藥品。
16. 如申請專利範圍第15項所用之組合，其中所述醫藥品進一步包括治療有效量之第三抗病毒劑。