TWI821804B - Il-7結合蛋白及其於醫療中之用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供介白素7 (interleukin 7；IL-7)結合蛋白、醫藥組合物及其於治療或預防疾病或病狀中之用途。

Description

IL-7結合蛋白及其於醫療中之用途
本發明係關於介白素7 (IL-7)結合蛋白。本發明亦係關於用IL-7結合蛋白治療疾病或病症之方法、IL-7結合蛋白之用途、包含IL-7結合蛋白之醫藥組合物及其製造方法。本發明之其他態樣將自以下描述顯而易見。
自體免疫T細胞反應改變及免疫系統調節網路之功能障礙均在諸如多發性硬化症(MS)及類風濕性關節炎之人類自體免疫性病變中起重要作用(Kuchroo等人, (2002) Annu. Rev. Immunol. 20:101-123；Sospedra及Martin (2005) Annu. Rev. Immunol. 23: 683-747；Toh及Miossec (2007) Curr. Opin. Rheumatol. 19:284-288)。
儘管MS之病因學及致病機制仍然未知，但其一般被視為自體免疫性病變，其中具有致病潛能之自體反應性T細胞(諸如T H1及T H17細胞)被認為起重要作用。有證據表明，此等效應T細胞在疾病過程期間活體內活化且可歸因於中樞神經系統(CNS)炎症。亦有證據表明，此等T細胞在疾病之活躍期期間介導實驗性自體免疫性腦脊髓炎(EAE)及MS之病變中的髓鞘表現細胞之破壞。另一方面，通常在檢查中保持致病T H1及T H17細胞之調節性T細胞(T reg)在患有MS之患者中為具有缺陷的，從而進一步使免疫系統向促發炎狀態傾斜。
已知IL-7及IL-7受體(IL-7R)主要在胸腺環境中在T細胞及B細胞發育及穩態中起重要作用。在人類中，IL-7對於胸腺中之T細胞發育且對於周邊中之記憶及原生T細胞之存活至關重要。實際上，胸腺基質細胞、胎兒胸腺及骨髓為IL-7產生之位點。
IL-7為四螺旋束(four-helix bundle)，其顯示保守的上-上-下-下細胞介素支架。基於McElroy等人之工作(Structure, 2009, 17:54-65)，自最接近於N末端開始的IL-7之螺旋自胺基酸10至26 (螺旋A)、胺基酸53至63 (螺旋B)、胺基酸74至91 (螺旋C)及胺基酸128至146 (螺旋D)延伸。咸信微螺旋(mini-helix)存在於螺旋A與螺旋B之間且自胺基酸40至44延伸。出於本發明之目的，螺旋A、B、C及D稱為螺旋1、3、4及5，且微螺旋稱為螺旋2。與螺旋互連之環因此自胺基酸27至39 (螺旋1與2之間的「環1」)、45至52 (螺旋2與3之間的「環2」)、64至73 (螺旋3與4之間的「環3」)及92至127 (螺旋4與5之間的「環4」)延伸。「N末端環」自胺基酸1至9延展，且「C末端環」自胺基酸147至152延展。
IL-7受體由兩個次單元CD127及共用鏈(γ鏈或γc)組成，該共用鏈由IL-2、IL-4、IL-9、IL-15及IL-21之受體共用。CD127亦稱為IL-7受體α (IL-7Rα)及p90 IL-7R。人類CD127 (Swiss Prot寄存編號P16871)具有總共459個胺基酸(20個訊息序列)。其包含219個胺基酸胞外區、25個胺基酸跨膜區及195個胺基酸胞內區。IL-7Rα及γc均為傳訊所需的。已經解析IL-7/IL-7Rα ECD (胞外域)複合物之晶體結構(McElroy等人，見上文)，但迄今為止，存在有限的關於IL-7與功能性IL-7Rα/γc受體複合物之間的相互作用之資訊。尚未確定IL-7之殘基在此相互作用中的重要性，但預測一般暗示IL-7與γc之結合中的螺旋A (本文中之螺旋1)及螺旋D (本文中之螺旋5)。
IL-7與IL-7R複合物之結合活化多個傳訊路徑，包括JAK激酶1及3之活化，此引起STAT5之磷酸化及活化。此路徑對使T細胞前驅體發育的胸腺之存活至關重要，此係因為在誘導抗細胞凋亡蛋白Bcl-2及防止促凋亡蛋白Bax進入粒線體時需要STAT5活化。另一IL-7R介導之路徑為PI3激酶活化，此引起促凋亡蛋白BAD (BCL2相關的細胞死亡促效劑)之磷酸化及其細胞質滯留。
多發性硬化症(MS)中之致病CD4 +T細胞大部分來自T H1及T H17亞群，其由自此等細胞產生之促發炎細胞介素IFN-γ、IL-17及GM-CSF等反映。此等細胞介素促成血腦障壁功能障礙、炎症及常駐星形膠質細胞及微神經膠質細胞之活化。IL-7可在抗原刺激時誘導Th 1及Th 17表現型且效應記憶T細胞依賴於IL-7來存活及增殖。MS中之致病自體反應性T細胞藉由記憶T細胞池來維持，且IL-7對於其發育、增殖及活化至關重要。因此，需要研發IL-7/IL-7R路徑之拮抗劑。此類拮抗劑可在治療上適用於治療MS及其他發炎性及/或自體免疫性疾病及病症，尤其已觀測到T H1及/或T H17細胞升高之彼等者。
本文中揭示IL-7結合蛋白，例如IL-7結合抗體或其抗原結合片段。
在本發明之一個態樣中，提供一種IL-7結合蛋白，其結合至人類IL-7之SEQ ID NO: 12中所闡述之胺基酸序列內的一或多個胺基酸殘基。在一個實施例中，IL-7結合蛋白在HDX-MS分析中保護IL-7之殘基67至81 (SEQ ID NO: 12)免於氘交換。在另一實施例中，IL-7結合蛋白在HDX-MS分析中保護IL-7之殘基67至80 (SEQ ID NO: 16)免於氘交換。
在本發明之另一態樣中，提供一種IL-7結合蛋白，其結合至與IL-7Rα結合位點相鄰之人類IL-7，其中如藉由表面電漿子共振分析所量測之KD為100 nM或更小。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白抑制IL-7結合至IL-7R，如使用表面電漿子共振分析所測定之活體外競爭性結合分析中所量測。在其他實施例中，該IL-7結合蛋白進一步包含以下中之一或多者：如SEQ ID NO: 6中所闡述之CDRH1、如SEQ ID NO: 7中所闡述之CDRH2、如SEQ ID NO: 8中所闡述之CDRH3、如SEQ ID NO: 9中所闡述之CDRL1、如SEQ ID NO: 10中所闡述之CDRL2及/或如SEQ ID NO: 11中所闡述之CDRL3。
在本發明之另一態樣中，該IL-7結合蛋白包含如SEQ ID NO: 6中所闡述之CDRH1、如SEQ ID NO: 7中所闡述之CDRH2、如SEQ ID NO: 8中所闡述之CDRH3、如SEQ ID NO: 9中所闡述之CDRL1、如SEQ ID NO: 10中所闡述之CDRL2及如SEQ ID NO: 11中所闡述之CDRL3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有至少90%一致性的V H域，及/或與如SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少90%一致性的V L域。在另一實施例中，該IL-7結合蛋白包含如SEQ ID NO: 4中所闡述之V H域及如SEQ ID NO: 5中所闡述之V L域。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及位置237處具有丙胺酸殘基。在其他實施例中，該IL-7結合蛋白包含選自由人類IgG1同型及人類IgG4同型組成之群的支架(scaffold)。在一個實施例中，該IL-7結合蛋白具有人類IgG1同型。在另一實施例中，該IL-7結合蛋白為單株抗體。在一些實施例中，該單株抗體為人類、人類化或嵌合的。在其他實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列具有至少90%一致性的重鏈及與如SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列具有至少90%一致性的輕鏈。在一個實施例中，該IL-7結合蛋白包含如SEQ ID NO: 2中所闡述之重鏈及如SEQ ID NO: 3中所闡述之輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係以50 nM或更小、10 nM或更小、1 nM或更小或0.1 nM或更小之KD結合至IL-7。在另一實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7，且(i)以1 nM或更小之IC 50抑制周邊血液單核細胞的IL-7依賴性IFN-γ或IL-10分泌，及/或(ii)以1 nM或更小之IC 50抑制CD4+ T細胞中的IL-7依賴性STAT5磷酸化。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白抑制CD4 +T細胞及/或CD8 +T細胞之傳訊、活化、細胞介素產生及增殖。
在本發明之一個態樣中，提供一種核酸，其編碼IL-7結合蛋白。在本發明之另一態樣中，提供一種表現載體，其包含編碼IL-7結合蛋白之核酸序列。在本發明之另一態樣中，提供一種宿主細胞，其包含編碼IL-7結合蛋白之核酸序列或包含編碼IL-7結合蛋白之核酸序列之表現載體。在本發明之另一態樣中，提供一種IL-7結合蛋白，其由宿主細胞表現。
在本發明之另一態樣中，提供一種製造IL-7結合蛋白之方法，該方法包含將包含編碼IL-7結合蛋白之核酸序列或包含編碼IL-7結合蛋白之核酸序列之表現載體的宿主細胞維持在培養基中以產生該IL-7結合蛋白且分離或純化由該宿主細胞產生之該IL-7結合蛋白。
在本發明之另一態樣中，提供一種IL-7結合蛋白，其與本文中所揭示之IL-7結合蛋白競爭結合至IL-7。
在本發明之又另一態樣中，提供一種醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之載劑或賦形劑及IL-7結合蛋白，該IL-7結合蛋白在包含SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 16中所闡述序列之至少5個連續胺基酸的抗原決定基處展現對IL-7之結合。在本發明之另一態樣中，提供一種醫藥組合物，其包含IL-7結合蛋白及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
在本發明之另一態樣中，提供一種IL-7結合蛋白，其用於治療中。在本發明之一個態樣中，提供一種用於治療有需要個體之自體免疫性及/或發炎性病狀的方法，其包含向該個體投與治療有效量的IL-7結合蛋白或醫藥組合物。在本發明之一個態樣中，提供一種IL-7結合蛋白，其用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀。在本發明之另一態樣中，提供一種IL-7結合蛋白之用途，其用於製造用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀之藥劑。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症、休格倫氏症候群(Sjögren's syndrome)、類風濕性關節炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎或紅斑狼瘡。在一些實施例中，該多發性硬化症為臨床單一症候群(clinically isolated syndrome)、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。
在本發明之另一態樣中，提供一種套組，其包含IL-7結合蛋白及使用說明書。
在本發明之一個態樣中，提供一種IL-7結合蛋白，其包含如SEQ ID NO: 26中所闡述之CDRH1、如SEQ ID NO: 27中所闡述之CDRH2、如SEQ ID NO: 28中所闡述之CDRH3、如SEQ ID NO: 29中所闡述之CDRL1、如SEQ ID NO: 30中所闡述之CDRL2及如SEQ ID NO: 31中所闡述之CDRL3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 25中所闡述之胺基酸序列具有至少90%一致性的V H域，及/或與如SEQ ID NO: 24中所闡述之胺基酸序列具有至少90%一致性的V L域。在另一實施例中，該IL-7結合蛋白包含如SEQ ID NO: 25中所闡述之V H域及如SEQ ID NO: 24中所闡述之V L域。
在本發明之一個態樣中，提供一種IL-7結合蛋白，其包含如SEQ ID NO: 34中所闡述之CDRH1、如SEQ ID NO: 35中所闡述之CDRH2、如SEQ ID NO: 36中所闡述之CDRH3、如SEQ ID NO: 37中所闡述之CDRL1、如SEQ ID NO: 38中所闡述之CDRL2及如SEQ ID NO: 39中所闡述之CDRL3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 33中所闡述之胺基酸序列具有至少90%一致性的V H域，及/或與如SEQ ID NO: 32中所闡述之胺基酸序列具有至少90%一致性的V L域。在另一實施例中，該IL-7結合蛋白包含如SEQ ID NO: 33中所闡述之V H域及如SEQ ID NO: 32中所闡述之V L域。
在本發明之一個態樣中，提供一種IL-7結合蛋白，其包含如SEQ ID NO: 42中所闡述之CDRH1、如SEQ ID NO: 43中所闡述之CDRH2、如SEQ ID NO: 44中所闡述之CDRH3、如SEQ ID NO: 45中所闡述之CDRL1、如SEQ ID NO: 46中所闡述之CDRL2及如SEQ ID NO: 47中所闡述之CDRL3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 41中所闡述之胺基酸序列具有至少90%一致性的V H域，及/或與如SEQ ID NO: 40中所闡述之胺基酸序列具有至少90%一致性的V L域。在另一實施例中，該IL-7結合蛋白包含如SEQ ID NO: 41中所闡述之V H域及如SEQ ID NO: 40中所闡述之V L域。
在一些實施例中，該IL-7結合蛋白或其抗原結合片段結合至人類IL-7之SEQ ID NO: 12中所闡述之胺基酸序列內的一或多個殘基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白在HDX-MS分析中保護IL-7之殘基67至81 (SEQ ID NO: 12)免於氘交換。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白或其抗原結合片段結合至人類IL-7之SEQ ID NO: 16中所闡述之胺基酸序列內的一或多個殘基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白在HDX-MS分析中保護IL-7之殘基67至80 (SEQ ID NO: 16)免於氘交換。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至包含SEQ ID NO: 12中所闡述之胺基酸序列的抗原決定基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至與SEQ ID NO: 12中所闡述之胺基酸序列包含至少50%、60%、70%、80%、90%或95%一致性的抗原決定基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含以下中之至少一者：(a)與SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR1，(b)與SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR2，或(c)與SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含以下中之至少一者：(a)與SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR1，(b)與SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR2，或(c)與SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈；及包含SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為抗體或其抗原結合部分。在一些實施例中，該抗體為單株抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG抗體。在一些實施例中，該抗體為IgG1同型抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG4同型抗體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及/或位置237處具有丙胺酸殘基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類、人類化或嵌合的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類化的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至循環性IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且以1 nM或更小之IC 50抑制周邊血液單核細胞的IL-7依賴性IFN-γ或IL-10分泌。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為經分離之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且以1 nM或更小之IC 50抑制CD4+ T細胞中之IL-7依賴性STAT5磷酸化。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為可逆二聚體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為二聚體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為單體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白抑制CD4 +T細胞及/或CD8 +T細胞之傳訊、活化、細胞介素產生及增殖。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於治療中。進一步揭示編碼IL-7結合蛋白之核酸。在一些實施例中，該核酸包含與編碼輕鏈的SEQ ID NO: 13中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，該核酸包含編碼輕鏈的SEQ ID NO: 13中所闡述之核酸序列。在一些實施例中，該核酸包含與編碼重鏈的SEQ ID NO: 14中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，該核酸包含編碼重鏈的SEQ ID NO: 14中所闡述之核酸序列。在一些實施例中，該核酸進一步包含與編碼訊息肽的SEQ ID NO: 15中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，本文中揭示包含核酸之載體。在一些實施例中，該載體包含在哺乳動物細胞中具有功能性之啟動子。亦揭示包含核酸之宿主細胞。在一些實施例中，該宿主細胞為CHO細胞。本文中進一步揭示用於製造IL-7結合蛋白之方法，其包含將宿主細胞維持在培養基中以產生該IL-7結合蛋白且分離或純化由該宿主細胞產生之該IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中揭示包含IL-7結合蛋白之醫藥組合物。在一些實施例中，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。在一些實施例中，該醫藥組合物進一步包含至少一種額外治療劑。在一些實施例中，該醫藥組合物具有4.5至7.0之pH。在一些實施例中，該醫藥組合物具有5.5、6.0、6.2或6.5之pH。在一些實施例中，該醫藥組合物或該IL-7結合蛋白可在用於治療有需要個體之自體免疫性及/或發炎性病狀的方法中使用，該方法包含向該個體投與治療有效量的醫藥組合物或IL-7結合蛋白。在一些實施例中，該投與係在動脈內、皮下、皮內、瘤內、結節內、髓內、肌內、靜脈內或腹膜內進行。在一些實施例中，該投與係在皮下進行。在一些實施例中，該治療有效量為至少約0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg或40 mg/kg。在一些實施例中，每天至少約兩次或每1至60天一次向該個體投與該治療有效量。在一些實施例中，每4週一次向該個體投與該治療有效量。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為休格倫氏症候群。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為類風濕性關節炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為發炎性腸病(IBD)。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症。在一些實施例中，該多發性硬化症為臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為克羅恩氏病。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為潰瘍性結腸炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為紅斑狼瘡。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為糖尿病，例如I型糖尿病。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於製造用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀之藥劑。在一些實施例中，包含該IL-7結合蛋白之化合物係用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於診斷疾病或病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於診斷自體免疫性及/或發炎性病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至部分或其抗原片段。在一些實施例中，該部分為IL-7或其片段。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白直接或間接地連接至固體載體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含於具有使用說明書之套組中。在一些實施例中，該固體載體包含於套組中。
本文中揭示結合至人類IL-7之IL-7結合蛋白或其抗原結合片段，其中KD為100 nM或更小。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至與IL-7Rα結合位點相鄰之人類IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白抑制IL-7結合至IL-7R，如在活體外競爭性結合分析中所量測。在一些實施例中，競爭性結合分析為免疫分析。在一些實施例中，競爭性結合分析為表面電漿子共振分析。在一些實施例中，競爭性結合分析為例如ELISA或放射免疫分析。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含以下中之至少一者：(a)與SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR1，(b)與SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR2，或(c)與SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含以下中之至少一者：(a)與SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR1，(b)與SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR2，或(c)與SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈；及包含SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為抗體或其抗原結合部分。在一些實施例中，該抗體為單株抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG抗體。在一些實施例中，該抗體為IgG1同型抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG4同型抗體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及/或位置237處具有丙胺酸殘基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類、人類化或嵌合的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類化的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至循環性IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為經分離之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且以1 nM或更小之IC 50抑制周邊血液單核細胞的IL-7依賴性IFN-γ或IL-10分泌。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且以1 nM或更小之IC 50抑制CD4+ T細胞中之IL-7依賴性STAT5磷酸化。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白抑制CD4 +T細胞及/或CD8 +T細胞之傳訊、活化、細胞介素產生及增殖。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為可逆二聚體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為二聚體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為單體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於治療中。進一步揭示編碼IL-7結合蛋白之核酸。在一些實施例中，該核酸包含與編碼輕鏈的SEQ ID NO: 13中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，該核酸包含編碼輕鏈的SEQ ID NO: 13中所闡述之核酸序列。在一些實施例中，該核酸包含與編碼重鏈的SEQ ID NO: 14中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，該核酸包含編碼重鏈的SEQ ID NO: 14中所闡述之核酸序列。在一些實施例中，該核酸進一步包含與編碼訊息肽的SEQ ID NO: 15中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，本文中揭示包含核酸之載體。在一些實施例中，該載體包含在哺乳動物細胞中具有功能性之啟動子。亦揭示包含核酸之宿主細胞。在一些實施例中，該宿主細胞為CHO細胞。本文中進一步揭示用於製造IL-7結合蛋白之方法，其包含將宿主細胞維持在培養基中以產生該IL-7結合蛋白且分離或純化由該宿主細胞產生之該IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中揭示包含IL-7結合蛋白之醫藥組合物。在一些實施例中，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。在一些實施例中，該醫藥組合物進一步包含至少一種額外治療劑。在一些實施例中，該醫藥組合物具有4.5至7.0之pH。在一些實施例中，該醫藥組合物具有5.5、6.0、6.2或6.5之pH。在一些實施例中，該醫藥組合物或該IL-7結合蛋白可在用於治療有需要個體之自體免疫性及/或發炎性病狀的方法中使用，該方法包含向該個體投與治療有效量的醫藥組合物或IL-7結合蛋白。在一些實施例中，該投與係在動脈內、皮下、皮內、瘤內、結節內、髓內、肌內、靜脈內或腹膜內進行。在一些實施例中，該投與係在皮下進行。在一些實施例中，該治療有效量為至少約0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg或40 mg/kg。在一些實施例中，每天至少約兩次或每1至60天一次向該個體投與該治療有效量。在一些實施例中，每4週一次向該個體投與該治療有效量。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為休格倫氏症候群。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為IBD。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為類風濕性關節炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症。在一些實施例中，該多發性硬化症為臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為克羅恩氏病。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為潰瘍性結腸炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為紅斑狼瘡。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為糖尿病，例如I型糖尿病。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於製造用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀之藥劑。在一些實施例中，包含該IL-7結合蛋白之化合物係用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於診斷疾病或病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於診斷自體免疫性及/或發炎性病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至部分或其抗原片段。在一些實施例中，該部分為IL-7或其片段。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白直接或間接地連接至固體載體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含於具有使用說明書之套組中。在一些實施例中，該固體載體包含於套組中。
本文中揭示IL-7結合蛋白，其包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少95%一致性的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含以下中之至少一者：(a)與SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR1，(b)與SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR2，或(c)與SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈；及包含SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為抗體或其抗原結合部分。在一些實施例中，該抗體為單株抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG抗體。在一些實施例中，該抗體為IgG1同型抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG4同型抗體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及/或位置237處具有丙胺酸殘基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類、人類化或嵌合的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類化的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至原生IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至循環性IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且以1 nM或更小之IC 50抑制周邊血液單核細胞的IL-7依賴性IFN-γ或IL-10分泌。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為經分離之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且以1 nM或更小之IC 50抑制CD4+ T細胞中之IL-7依賴性STAT5磷酸化。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白抑制CD4 +T細胞及/或CD8 +T細胞之傳訊、活化、細胞介素產生及增殖。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為可逆二聚體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為二聚體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為單體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於治療中。進一步揭示編碼IL-7結合蛋白之核酸。在一些實施例中，該核酸包含與編碼輕鏈的SEQ ID NO: 13中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，該核酸包含編碼輕鏈的SEQ ID NO: 13中所闡述之核酸序列。在一些實施例中，該核酸包含與編碼重鏈的SEQ ID NO: 14中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，該核酸包含編碼重鏈的SEQ ID NO: 14中所闡述之核酸序列。在一些實施例中，該核酸進一步包含與編碼訊息肽的SEQ ID NO: 15中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，本文中揭示包含核酸之載體。在一些實施例中，該載體包含在哺乳動物細胞中具有功能性之啟動子。亦揭示包含核酸之宿主細胞。在一些實施例中，該宿主細胞為CHO細胞。本文中進一步揭示用於製造IL-7結合蛋白之方法，其包含將宿主細胞維持在培養基中以產生該IL-7結合蛋白且分離或純化由該宿主細胞產生之該IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中揭示包含IL-7結合蛋白之醫藥組合物。在一些實施例中，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。在一些實施例中，該醫藥組合物進一步包含至少一種額外治療劑。在一些實施例中，該醫藥組合物具有4.5至7.0之pH。在一些實施例中，該醫藥組合物具有5.5、6.0、6.2或6.5之pH。在一些實施例中，該醫藥組合物或該IL-7結合蛋白可在用於治療有需要個體之自體免疫性及/或發炎性病狀的方法中使用，該方法包含向該個體投與治療有效量的醫藥組合物或IL-7結合蛋白。在一些實施例中，該投與係在動脈內、皮下、皮內、瘤內、結節內、髓內、肌內、靜脈內或腹膜內進行。在一些實施例中，該投與係在皮下進行。在一些實施例中，該治療有效量為至少約0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg或40 mg/kg。在一些實施例中，每天至少約兩次或每1至60天一次向該個體投與該治療有效量。在一些實施例中，每4週一次向該個體投與該治療有效量。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為休格倫氏症候群。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為類風濕性關節炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為IBD。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症。在一些實施例中，該多發性硬化症為臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為克羅恩氏病。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為潰瘍性結腸炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為紅斑狼瘡。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為糖尿病，例如I型糖尿病。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於製造用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀之藥劑。在一些實施例中，包含該IL-7結合蛋白之化合物係用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於診斷疾病或病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於診斷自體免疫性及/或發炎性病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至部分或其抗原片段。在一些實施例中，該部分為IL-7或其片段。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白直接或間接地連接至固體載體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含於具有使用說明書之套組中。在一些實施例中，該固體載體包含於套組中。
本文中揭示IL-7結合蛋白或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR1、與SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR2及與SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈；及包含SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為抗體或其抗原結合部分。在一些實施例中，該抗體為單株抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG抗體。在一些實施例中，該抗體為IgG1同型抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG4同型抗體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及/或位置237處具有丙胺酸殘基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類、人類化或嵌合的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類化的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至原生IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至循環性IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為經分離之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且以1 nM或更小之IC 50抑制周邊血液單核細胞的IL-7依賴性IFN-γ或IL-10分泌。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且以1 nM或更小之IC 50抑制CD4+ T細胞中之IL-7依賴性STAT5磷酸化。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白抑制CD4 +T細胞及/或CD8 +T細胞之傳訊、活化、細胞介素產生及增殖。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為可逆二聚體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為二聚體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為單體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於治療中。進一步揭示編碼IL-7結合蛋白之核酸。在一些實施例中，該核酸包含與編碼輕鏈的SEQ ID NO: 13中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，該核酸包含編碼輕鏈的SEQ ID NO: 13中所闡述之核酸序列。在一些實施例中，該核酸包含與編碼重鏈的SEQ ID NO: 14中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，該核酸包含編碼重鏈的SEQ ID NO: 14中所闡述之核酸序列。在一些實施例中，該核酸進一步包含與編碼訊息肽的SEQ ID NO: 15中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，本文中揭示包含核酸之載體。在一些實施例中，該載體包含在哺乳動物細胞中具有功能性之啟動子。亦揭示包含核酸之宿主細胞。在一些實施例中，該宿主細胞為CHO細胞。本文中進一步揭示用於製造IL-7結合蛋白之方法，其包含將宿主細胞維持在培養基中以產生該IL-7結合蛋白且分離或純化由該宿主細胞產生之該IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中揭示包含IL-7結合蛋白之醫藥組合物。在一些實施例中，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。在一些實施例中，該醫藥組合物進一步包含至少一種額外治療劑。在一些實施例中，該醫藥組合物具有4.5至7.0之pH。在一些實施例中，該醫藥組合物具有5.5、6.0、6.2或6.5之pH。在一些實施例中，該醫藥組合物或該IL-7結合蛋白可在用於治療有需要個體之自體免疫性及/或發炎性病狀的方法中使用，該方法包含向該個體投與治療有效量的醫藥組合物或IL-7結合蛋白。在一些實施例中，該投與係在動脈內、皮下、皮內、瘤內、結節內、髓內、肌內、靜脈內或腹膜內進行。在一些實施例中，該投與係在皮下進行。在一些實施例中，該治療有效量為至少約0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg或40 mg/kg。在一些實施例中，每天至少約兩次或每1至60天一次向該個體投與該治療有效量。在一些實施例中，每4週一次向該個體投與該治療有效量。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為休格倫氏症候群。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為類風濕性關節炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為IBD。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症。在一些實施例中，該多發性硬化症為臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為克羅恩氏病。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為潰瘍性結腸炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為紅斑狼瘡。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為糖尿病，例如I型糖尿病。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於製造用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀之藥劑。在一些實施例中，包含該IL-7結合蛋白之化合物係用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於診斷疾病或病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於診斷自體免疫性及/或發炎性病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至部分或其抗原片段。在一些實施例中，該部分為IL-7或其片段。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白直接或間接地連接至固體載體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含於具有使用說明書之套組中。在一些實施例中，該固體載體包含於套組中。
本文中揭示IL-7結合蛋白或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR1、與SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR2及與SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈；及包含SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為抗體或其抗原結合部分。在一些實施例中，該抗體為單株抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG抗體。在一些實施例中，該抗體為IgG1同型抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG4同型抗體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及/或位置237處具有丙胺酸殘基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類、人類化或嵌合的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類化的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至原生IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至循環性IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為經分離之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且以1 nM或更小之IC 50抑制周邊血液單核細胞的IL-7依賴性IFN-γ或IL-10分泌。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且以1 nM或更小之IC 50抑制CD4+ T細胞中之IL-7依賴性STAT5磷酸化。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白抑制CD4 +T細胞及/或CD8 +T細胞之傳訊、活化、細胞介素產生及增殖。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為可逆二聚體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為二聚體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為單體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於治療中。進一步揭示編碼IL-7結合蛋白之核酸。在一些實施例中，該核酸包含與編碼輕鏈的SEQ ID NO: 13中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，該核酸包含編碼輕鏈的SEQ ID NO: 13中所闡述之核酸序列。在一些實施例中，該核酸包含與編碼重鏈的SEQ ID NO: 14中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，該核酸包含編碼重鏈的SEQ ID NO: 14中所闡述之核酸序列。在一些實施例中，該核酸進一步包含與編碼訊息肽的SEQ ID NO: 15中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些實施例中，本文中揭示包含核酸之載體。在一些實施例中，該載體包含在哺乳動物細胞中具有功能性之啟動子。亦揭示包含核酸之宿主細胞。在一些實施例中，該宿主細胞為CHO細胞。本文中進一步揭示用於製造IL-7結合蛋白之方法，其包含將宿主細胞維持在培養基中以產生該IL-7結合蛋白且分離或純化由該宿主細胞產生之該IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中揭示包含IL-7結合蛋白之醫藥組合物。在一些實施例中，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。在一些實施例中，該醫藥組合物進一步包含至少一種額外治療劑。在一些實施例中，該醫藥組合物具有4.5至7.0之pH。在一些實施例中，該醫藥組合物具有5.5、6.0、6.2或6.5之pH。在一些實施例中，該醫藥組合物或該IL-7結合蛋白可在用於治療有需要個體之自體免疫性及/或發炎性病狀的方法中使用，該方法包含向該個體投與治療有效量的醫藥組合物或IL-7結合蛋白。在一些實施例中，該投與係在動脈內、皮下、皮內、瘤內、結節內、髓內、肌內、靜脈內或腹膜內進行。在一些實施例中，該投與係在皮下進行。在一些實施例中，該治療有效量為至少約0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg或40 mg/kg。在一些實施例中，每天至少約兩次或每1至60天一次向該個體投與該治療有效量。在一些實施例中，每4週一次向該個體投與該治療有效量。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為休格倫氏症候群。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為類風濕性關節炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為IBD。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症。在一些實施例中，該多發性硬化症為臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為克羅恩氏病。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為潰瘍性結腸炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為紅斑狼瘡。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為糖尿病，例如I型糖尿病。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於製造用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀之藥劑。在一些實施例中，包含該IL-7結合蛋白之化合物係用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於診斷疾病或病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白係用於診斷自體免疫性及/或發炎性病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至部分或其抗原片段。在一些實施例中，該部分為IL-7或其片段。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白直接或間接地連接至固體載體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含於具有使用說明書之套組中。在一些實施例中，該固體載體包含於套組中。
本文中揭示醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之載劑及IL-7結合蛋白或其抗原結合片段，該IL-7結合蛋白或其抗原結合片段在包含SEQ ID NO: 12中所闡述序列之至少5個連續胺基酸的抗原決定基處展現對IL-7之結合特異性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白在包含與SEQ ID NO: 12中所闡述之胺基酸序列具有至少約50%、60%、70%、80%、90%或95%一致性之序列之至少5個連續胺基酸的抗原決定基處展現對IL-7之結合特異性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR1、與SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR2及與SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈；及包含SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為抗體或其抗原結合部分。在一些實施例中，該抗體為單株抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG抗體。在一些實施例中，該抗體為IgG1同型抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG4同型抗體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及/或位置237處具有丙胺酸殘基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類、人類化或嵌合的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類化的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至原生IL-7。在一些實施例中，該醫藥組合物進一步包含至少一種額外治療劑。在一些實施例中，該醫藥組合物具有4.5至7.0之pH。在一些實施例中，該醫藥組合物具有5.5、6.0、6.2或6.5之pH。在一些實施例中，該醫藥組合物可在用於治療有需要個體之自體免疫性及/或發炎性病狀的方法中使用，該方法包含向該個體投與治療有效量的該醫藥組合物。在一些實施例中，該投與係在動脈內、皮下、皮內、瘤內、結節內、髓內、肌內、靜脈內或腹膜內進行。在一些實施例中，該投與係在皮下進行。在一些實施例中，該治療有效量為至少約0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg或40 mg/kg。在一些實施例中，每天至少約兩次或每1至60天一次向該個體投與該治療有效量。在一些實施例中，每4週一次向該個體投與該治療有效量。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為休格倫氏症候群。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為類風濕性關節炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為IBD。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症。在一些實施例中，該多發性硬化症為臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為克羅恩氏病。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為潰瘍性結腸炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為紅斑狼瘡。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為糖尿病，例如I型糖尿病。在一些實施例中，該醫藥組合物包含於具有使用說明書之套組中。在一些實施例中，該醫藥組合物為穩定的液體水性醫藥調配物，其包含濃度為20至150 mg/ml的本文中所描述之抗人類IL-7結合蛋白、張力劑、界面活性劑及pH為4.0至8.0的緩衝液系統。
本文中揭示用於藉由向個體投與IL-7結合蛋白或其抗原結合片段來治療自體免疫性及/或發炎性病狀的方法。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR1、與SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR2及與SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈；及包含SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為抗體或其抗原結合部分。在一些實施例中，該抗體為單株抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG抗體。在一些實施例中，該抗體為IgG1同型抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG4同型抗體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及/或位置237處具有丙胺酸殘基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類、人類化或嵌合的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類化的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至原生IL-7。在一些實施例中，該投與係在動脈內、皮下、皮內、瘤內、結節內、髓內、肌內、靜脈內或腹膜內進行。在一些實施例中，該投與係在皮下進行。在一些實施例中，該治療有效量為至少約0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg或40 mg/kg。在一些實施例中，每天至少約兩次或每1至60天一次向該個體投與該治療有效量。在一些實施例中，每4週一次向該個體投與該治療有效量。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為休格倫氏症候群。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為類風濕性關節炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為IBD。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症。在一些實施例中，該多發性硬化症為臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為克羅恩氏病。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為潰瘍性結腸炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為紅斑狼瘡。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為糖尿病，例如I型糖尿病。
本文中揭示IL-7結合蛋白或其抗原結合片段之用途，其用於製造用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀之藥劑。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR1、與SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR2及與SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈；及包含SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為抗體或其抗原結合部分。在一些實施例中，該抗體為單株抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG抗體。在一些實施例中，該抗體為IgG1同型抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG4同型抗體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及/或位置237處具有丙胺酸殘基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類、人類化或嵌合的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類化的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至原生IL-7。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為休格倫氏症候群。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為類風濕性關節炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為IBD。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症。在一些實施例中，該多發性硬化症為臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為克羅恩氏病。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為潰瘍性結腸炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為紅斑狼瘡。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為糖尿病，例如I型糖尿病。
本文中揭示IL-7結合蛋白或其抗原結合片段，其用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR1、與SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR2及與SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈；及包含SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為抗體或其抗原結合部分。在一些實施例中，該抗體為單株抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG抗體。在一些實施例中，該抗體為IgG1同型抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG4同型抗體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及/或位置237處具有丙胺酸殘基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類、人類化或嵌合的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類化的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至原生IL-7。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為休格倫氏症候群。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為類風濕性關節炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為IBD。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症。在一些實施例中，該多發性硬化症為臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為克羅恩氏病。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為潰瘍性結腸炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為紅斑狼瘡。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為糖尿病，例如I型糖尿病。
本文中揭示IL-7結合蛋白或其抗原結合片段之用途，其用於診斷疾病或病狀。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR1、與SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR2及與SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈；及包含SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為抗體或其抗原結合部分。在一些實施例中，該抗體為單株抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG抗體。在一些實施例中，該抗體為IgG1同型抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG4同型抗體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及/或位置237處具有丙胺酸殘基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類、人類化或嵌合的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類化的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至原生IL-7。在一些實施例中，該疾病或病狀為自體免疫性及/或發炎性病狀。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為休格倫氏症候群。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為類風濕性關節炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為IBD。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症。在一些實施例中，該多發性硬化症為臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為克羅恩氏病。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為潰瘍性結腸炎。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為紅斑狼瘡。在一些實施例中，該自體免疫性及/或發炎性病狀為糖尿病，例如I型糖尿病。在一些實施例中，對本文中所揭示之IL-7結合蛋白之結合的偵測指示IL-7之存在。在一些實施例中，在個體中或在或自個體之樣本上/中量測IL-7之含量。在一些實施例中，量測IL-7之含量可藉由此項技術中已知之方法及分析來進行。在一些實施例中，將IL-7之含量與IL-7之參考含量進行比較。在一些實施例中，參考含量指示正常、非疾病、疾病或疾病階段。在一些實施例中，在個體中或自獲自個體之多個樣本中多次量測IL-7之含量。
本文中揭示一種固體載體，其包含IL-7結合蛋白或其抗原結合片段。在一些實施例中，該固體載體為陣列。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白直接或間接地連接至固體載體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR1、與SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR2及與SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈；及包含SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為抗體或其抗原結合部分。在一些實施例中，該抗體為單株抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG抗體。在一些實施例中，該抗體為IgG1同型抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG4同型抗體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及/或位置237處具有丙胺酸殘基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類、人類化或嵌合的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類化的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至原生IL-7。在一些實施例中，裝置包含固體載體及用於偵測訊息之處理器，該訊息指示部分與IL-7結合蛋白之結合。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含於具有使用說明書之套組中。在一些實施例中，該固體載體包含於套組中。
本文中進一步揭示一種注射器或自動注射器裝置，其包含IL-7結合蛋白或其抗原結合片段。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR1、與SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR2及與SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列的可變區輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR3。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列的可變區重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈；及包含SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為抗體或其抗原結合部分。在一些實施例中，該抗體為單株抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG抗體。在一些實施例中，該抗體為IgG1同型抗體。在一些實施例中，該單株抗體為IgG4同型抗體。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及/或位置237處具有丙胺酸殘基。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類、人類化或嵌合的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類化的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白為人類的。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。在一些實施例中，該IL-7結合蛋白結合至原生IL-7。在一些實施例中，該注射器或自動注射器裝置包含於具有使用說明書之套組中。
本發明之其他態樣及實施例將自以下詳細描述顯而易見。
對IL-7受體介導之傳訊的抑制提供一種有前景的用於治療自體免疫性及/或發炎性疾病之治療性干預。在一些實施例中，本文中揭示減少B細胞活化、減少自體抗體產生及/或減少B細胞抗原呈遞之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白結合IL-7，抑制IL-7受體介導之傳訊，且將並不限制調節性T細胞(T regs)之發育或功能。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白抑制CD4 +及CD8 +T細胞兩者之傳訊、活化、細胞介素產生及增殖。在一些實施例中，IL-7介導之傳訊的IL-7結合蛋白阻斷減少發炎性反應。
IL-7 結合蛋白如本文中所使用，術語「IL-7介導之傳訊」意謂由IL-7受體複合物在由其配位體IL-7結合時所引發之生物效應。因此，IL-7介導之傳訊包括但並不必限於以下中之一或多者或全部：IL-7誘導的STAT-5之磷酸化、IL-7誘導的T H17細胞之擴增及IL-7誘導的T H17細胞之存活。
如本文中所使用之術語「IL-7結合蛋白」係指能夠結合至IL-7之抗體及其他蛋白構築體，諸如域。術語「IL-7結合蛋白」與「抗IL-7抗原結合蛋白」在本文中互換使用。此不包括天然同源受體。
本文中所使用之術語「抗體」最廣義而言係指分子，其具有免疫球蛋白樣域(例如，IgG、IgM、IgA、IgD或IgE)且包括單株、重組、多株、嵌合、人類、人類化、多特異性抗體(包括雙特異性抗體)及異結合抗體；單一可變域(例如，單域抗體(DAB))、抗原結合抗體片段、Fab、F(ab') 2、Fv、二硫鍵連接之Fv、單鏈Fv、二硫鍵連接之scFv、雙功能抗體、TANDABS等及前述任一者之經修飾型式(對於替代性「抗體」型式之概述，參見Holliger及Hudson, Nature Biotechnology, 2005, 第23卷, 第9號, 1126-1136)。
在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白可衍生自大鼠、小鼠、靈長類動物(例如，食蟹獼猴、舊大陸猴(Old World monkey)或大猩猩(Great Ape))或人類。IL-7結合蛋白可為人類、人類化或嵌合抗體。IL-7結合蛋白可包含恆定區，其可具有任何同型或亞類。恆定區可具有IgG同型，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其變異體。IL-7結合蛋白恆定區可為IgG1。在一些實施例中，IL-7結合蛋白為IgG1k抗體。
如本文中所使用，「約」意謂±10%。
本文中互換使用之術語「完全(full)」、「全(whole)」或「完整(intact)」抗體係指異源四聚醣蛋白。完整抗體由藉由共價二硫鍵連接之兩條相同重鏈(HC)及兩條相同輕鏈(LC)構成。此H 2L 2結構摺疊以形成包含兩個抗原結合片段(稱為『Fab』片段)及『Fc』可結晶片段之三個功能域。Fab片段由胺基端處之可變域可變重鏈(VH)或可變輕鏈(VL)及羧基末端處之恆定域CH1 (重)及CL (輕)構成。Fc片段由藉由成二聚成對CH2及CH3區形成的兩個域構成。Fc可藉由結合至免疫細胞上之受體或藉由結合C1q (經典補體路徑之第一組分)來誘發效應子功能。抗體之五種類別IgM、IgA、IgG、IgE及IgD分別由稱作µ、α、γ、ε及δ之不同重鏈胺基酸序列定義，各重鏈可與K或λ輕鏈配對。血清中之大部分抗體屬於IgG類別，存在人類IgG之四種同型(IgG1、IgG2、IgG3及IgG4)，其序列主要在其鉸鏈區中不同。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白為人類IgG1。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白為二硫鍵連接之α2β2四聚體。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白包含兩條輕鏈(κ)及兩條重鏈(IgG1)。
完全人類抗體可使用多種方法獲得，例如使用可產生人類抗體之譜系的基於酵母之庫或轉基因動物(例如，小鼠)。在其表面上呈遞結合至相關抗原之人類抗體的酵母可使用基於螢光活化細胞分選(Fluorescence-Activated Cell Sorting；FACS)之方法或藉由使用經標記抗原在珠粒上進行捕捉來選擇。已經修飾以表現人類免疫球蛋白基因之轉基因動物可免疫接種有相關抗原及使用B細胞分選技術分離之抗原特異性人類抗體。使用此等技術產生之人類抗體可接著針對諸如親和力、可發展性及選擇性之所需特性進行表徵。
在一些實施例中，可使用替代性抗體型式。替代性抗體型式包括替代性支架，其中IL-7抗體之一或多個CDR可排列至適合的非免疫球蛋白蛋白質支架或骨架上，諸如親和抗體、SpA支架、LDL受體A類域、高親和性多聚體(參見例如美國專利申請公開案第2005/0053973號、第2005/0089932號、第2005/0164301號)或EGF域。
術語「域」係指摺疊多肽結構，其獨立於多肽之其餘部分保留其三級結構。一般而言，域對多肽之離散功能特性負責，且在許多情況下可將其添加、移除或轉移至其他多肽而不損失蛋白質及/或域之其餘部分之功能。
術語「單一可變域」係指包含表徵抗體可變域之序列的摺疊多肽域。其因此包括完整抗體可變域，諸如VH、VHH及VL以及經修飾之抗體可變域，例如其中一或多個環已由未表徵抗體可變域之序列，或已截斷或包含N末端或C末端延伸部之抗體可變域，以及至少保留結合活性及全長域特異性之可變域之摺疊片段置換。單一可變域可獨立於不同可變區或域結合抗原或抗原決定基。「域抗體」或「DAB」可被視為與「單一可變域」相同。單一可變域可為人類單一可變域，且亦包括來自諸如嚙齒動物(例如，如WO 00/29004 A1中所揭示)、護士鯊及駱駝科VHH DAB之其他物種的單一可變域。駱駝科VHH為衍生自包括駱駝、駱馬、單峰駝及栗色駱馬之物種的免疫球蛋白單一可變域多肽，其產生天然不含輕鏈之重鏈抗體。此類VHH域可根據此項技術中可用之標準技術進行人類化，且此類域被視為「單一可變域」。如本文中所使用，VH包括駱駝科VHH域。
抗原結合片段、IL-7結合蛋白片段、功能片段、生物活性片段或免疫有效片段可包含部分重鏈或輕鏈可變序列。片段之長度為至少5、6、8或10個胺基酸。可替代地，片段之長度為至少15個、至少20個、至少50個、至少75個或至少100個胺基酸。
可藉助於在非抗體蛋白質支架上排列一或多個CDR來提供抗原結合片段。如本文中所使用之「蛋白質支架」包括但不限於免疫球蛋白(Ig)支架，例如IgG支架，其可為四鏈或兩鏈抗體，或其可僅包含抗體之Fc區，或其可包含一或多個來自抗體之恆定區，該等恆定區可屬於人類或靈長類來源，或其可為人類及靈長類動物恆定區之人工嵌合體。
蛋白質支架可為Ig支架，例如IgG或IgA支架。IgG支架可包含抗體之一些或所有域(亦即CH1、CH2、CH3、VH、VL)。IL-7結合蛋白可包含選自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgG4PE之IgG支架。舉例而言，支架可為IgG1。支架可由抗體之Fc區組成，或包含抗體之Fc區，或為其部分。
蛋白質支架可為選自由以下組成之群的支架之衍生物：CTLA-4、脂質運載蛋白、蛋白A衍生之分子，諸如蛋白A之Z域(親和抗體、SpA)、A域(高親和性多聚體/最大抗體)；熱休克蛋白，諸如GroEl及GroES；運鐵蛋白(反式抗體(trans-body))；錨蛋白重複蛋白(DARPin)；肽適體；C型凝集素域(四連接素(Tetranectin))；人類γ-晶狀體球蛋白及人類泛蛋白(阿非林(affilin))；PDZ域；人類蛋白酶抑制劑之蠍毒素孔尼茲(kunitz)類型域；及纖維黏連蛋白(fibronectin)/纖連蛋白(adnectin)；其已經受蛋白工程改造以便獲得與除天然配位體以外的抗原之結合。
如本文中所使用之術語「拮抗劑抗體」係指能夠完全或部分抑制抗原(例如，IL-7)之生物活性的抗體或其片段，例如藉由完全或部分阻斷與配位體之結合或減小抗原之生物活性而與其結合。
「抗原結合位點」係指抗原結合蛋白上能夠特異性結合至抗原之位點，此可為單一可變域，或其可為如可在標準抗體上發現之成對VH/VL域。單鏈Fv (ScFv)域亦可提供抗原結合位點。
如本文中所使用，術語「嵌合抗原受體」(「CAR」)係指由胞外抗原結合域(其通常衍生自單株抗體或其片段，例如呈scFv形式之VH域及VL域)、視情況存在之間隔子區、跨膜區及一或多個胞內效應子域組成的工程改造受體。CAR亦已被稱為嵌合T細胞受體或嵌合免疫受體(CIR)。將CAR以基因方式引入造血細胞(諸如T細胞)中以再導引所需細胞表面抗原之T細胞特異性，從而產生CAR-T治療劑。
「人類化抗體」係指其CDR衍生自非人類供體免疫球蛋白、分子之其餘免疫球蛋白衍生部分衍生自一或多種人類免疫球蛋白的一種類型之工程改造抗體。另外，可改變構架支援殘基以保持結合親和力(參見例如，Queen等人 Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson等人 Bio/Technology, 9:421 (1991))。適合的人類受體抗體可為藉由與供體抗體之核苷酸及胺基酸序列同源而選自習知資料庫之人類受體抗體，例如KABAT資料庫、Los Alamos資料庫及Swiss Protein資料庫。以與供體抗體之構架區(基於胺基酸)同源為特徵之人類抗體可適合於提供用於插入供體CDR之重鏈恆定區及/或重鏈可變構架區。可以類似方式選擇能夠供應輕鏈恆定區或可變構架區之適合受體抗體。應注意，受體抗體重鏈及輕鏈無需源於相同受體抗體。先前技術描述產生此類人類化抗體之若干方法，參見例如EP-A-0239400及EP-A-054951。
如本文中所使用，術語「間隔子區」係指用以連接跨膜域與目標結合域之寡肽或多肽。此區亦可稱為「鉸鏈區」或「柄區」。間隔子之大小可視目標抗原決定基之位置而變化以便在CAR:目標結合後保持設定距離(例如，14 nm)。
如本文中所使用之術語「跨膜域」係指穿過細胞膜的CAR分子之部分。
如本文中所使用之術語「胞內效應子域」(亦稱為「傳訊域」)係指CAR中負責在抗原結合域與目標結合之後進行胞內傳訊的域。胞內效應子域負責活化其中表現CAR的免疫細胞之正常效應子功能中之至少一者。舉例而言，T細胞之效應子功能可為細胞溶解活性或輔助活性，包括細胞介素之分泌。
熟習此項技術者將瞭解，本文中所揭示之VH及/或VL域可例如以scFv之形式併入CAR-T治療劑中。
在一些實施例中，本發明之IL-7結合蛋白展示人類IL-7與來自另一物種之IL-7 (諸如食蟹獼猴IL-7)之間的交叉反應性。在一實施例中，本發明之IL-7結合蛋白特異性結合人類及獼猴IL-7。此尤其適用，因為藥物研發通常需要在於人類中測試藥物之前在小鼠系統中測試主要藥物候選物。提供可結合人類及獼猴物種之藥物允許吾人測試此等系統中之結果且使用相同藥物進行資料之並排比較。此避免需要尋找對獼猴IL-7起作用之藥物及對人類IL-7起作用之單獨藥物的複雜情況，且亦避免需要使用不相同藥物來比較人類與獼猴中之結果。亦設想在用於疾病模型(諸如狗或小鼠)中之其他物種之間的交叉反應性。
視情況，IL-7結合蛋白對至少食蟹獼猴IL-7之結合親和力及對人類IL-7之結合親和力相差不超過2或5倍。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白為物種特異性的。
親和力(亦稱為「結合親和力」)為單一相互作用位點處之結合強度，亦即一個分子(例如，本發明之IL-7結合蛋白)與另一分子(例如，其目標抗原)在單一結合位點處之結合強度。可藉由平衡方法(例如，酶聯免疫吸附分析(ELISA)或放射免疫分析(RIA))或動力學(例如，使用BIACORE儀器進行表面電漿子共振分析)來測定IL-7結合蛋白對其目標之結合親和力。舉例而言，實例2中所描述之BIACORE方法可用於量測結合親和力。
親合力(亦稱為功能親和力)為多個相互作用位點處之累積結合強度，例如兩個分子(或更多個，例如在雙特異性或多特異性分子之情況下)與彼此在多個位點處之結合強度之總和，例如考慮相互作用之價數。
在一實施例中，IL-7結合蛋白-IL-7相互作用之平衡解離常數(KD)為約100 nM或更小、約10 nM或更小、約2 nM或更小或約1 nM或更小。替代性地，KD可在約5 nM與約10 nM之間；或在約1 nM與約2 nM之間。KD可在約1 pM與約500 pM之間；或在約500 pM與約1 nM之間。在一實施例中，IL-7結合蛋白-IL-7相互作用之平衡解離常數(KD)為100 nM或更小、10 nM或更小、2 nM或更小或1 nM或更小。替代性地，KD可在5 nM與10 nM之間；或在1 nM與2 nM之間。KD可在1 pM與500 pM之間；或在500 pM與1 nM之間。熟習此項技術者將瞭解，KD數值愈小，結合愈強。KD之倒數(亦即1/KD)為具有單位M -1之平衡締合常數(KA)。熟習此項技術者將瞭解，KA數值愈大，結合愈強。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為約30至90 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為約30至約80 pM、約30至約70 pM、約30至約60 pM、約30至約50 pM、約30至約55 pM或約30至約40 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為約40至約80 pM、約40至約70 pM、約40至約60 pM、約40至約50 pM、約40至約55 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為約30至約55 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為約31、約34、約46、約53、約69、約73、約75或約87 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為約31、約34、約46、約53、約69、約73、約75或約87 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為約34 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為約67 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD在25℃下為約30至約55 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD在約25℃下為約36 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為約45至約90 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD在37℃下為約45至約90 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD在37℃下為約67 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為30至90 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為30至80 pM、30至70 pM、30至60 pM、30至50 pM、30至55 pM或30至40 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為40至80 pM、40至70 pM、40至60 pM、40至50 pM、40至55 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為30至55 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為31、34、46、53、69、73、75或87 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為31、34、46、69、75或87 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為34 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為67 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD在25℃下為30至55 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD在25℃下為36 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為45至90 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD在37℃下為45至90 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD在37℃下為67 pM。
在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為31、34、46、53、69、73、75或87 pM±15%。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為31、34、46、69、75或87 pM±15%。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為34 pM±15%。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為67 pM±15%。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD在25℃下為30至55 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD在25℃下為36 pM±15%。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD為45至90 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD在37℃下為45至90 pM。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之KD在37℃下為67 pM±15%。
熟習此項技術者將瞭解，表面電漿子共振(SPR)為用以量測結合親和力以及測定結合動力學之適合方法，參見例如Day等人, Direct comparison of binding equilibrium, thermodynamic, and rate constants determined by surface- and solution-based biophysical methods, Protein Science (2002), 11:1017-1025；及Hearty等人, 「Measuring antibody-antigen binding kinetics using surface plasmon resonance」Methods Mol Biol (2012) 907:411-4。
解離速率常數(kd)或「解離速率(off-rate)」描述IL-7結合蛋白-IL-7複合物之穩定性，亦即每秒衰減的複合物之分數。舉例而言，0.01 s -1之kd等於每秒衰減1%複合物。在一實施例中，解離速率常數(kd)為約1×10 -3s -1或更小、約1×10 -4s -1或更小、約1×10 -5s -1或更小或約1×10 -6s -1或更小。kd可在約1×10 -5s -1與約1×10 -4s -1之間；或在約1×10 -4s -1與約1×10 -3s -1之間。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之kd為約2.06×10 -4s -1或更小、約1.58×10 -4s -1或更小、約1.7×10 -4s -1或更小，或約5.68×10 -4s -1或更小、約6.78×10 -4s -1或更小、約8.26×10 -4s -1或更小、約5.15×10 -4s -1或更小。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之kd為約1.58×10 -4s -1或更小。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之kd為約5.68×10 -4s -1或更小。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之kd在25℃下為約2.06×10 -4s -1或更小、約1.58×10 -4s -1或更小或約1.7×10 -4s -1或更小。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之kd在37℃下為約5.68×10 -4s -1或更小、約6.78×10 -4s -1或更小、約8.26×10 -4s -1或更小或約5.15×10 -4s -1或更小。
在一實施例中，解離速率常數(kd)為1×10 -3s -1或更小、1×10 -4s -1或更小、1×10 -5s -1或更小或1×10 -6s -1或更小。kd可在1×10 -5s -1與1×10 -4s -1之間；或在1×10 -4s -1與1×10 -3s -1之間。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之kd為2.06×10 -4s -1或更小、1.58×10 -4s -1或更小、1.7×10 -4s -1或更小，或5.68×10 -4s -1或更小、6.78×10 -4s -1或更小、8.26×10 -4s -1或更小或5.15×10 -4s -1或更小。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之kd為1.58×10 -4s -1或更小。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之kd為5.68×10 -4s -1或更小。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之kd在25℃下為2.06×10 -4s -1或更小、1.58×10 -4s -1或更小或1.7×10 -4s -1或更小。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白之kd在37℃下為5.68×10 -4s -1或更小、6.78×10 -4s -1或更小、8.26×10 -4s -1或更小或5.15×10 -4s -1或更小。
締合速率常數(ka)或「締合速率(on-rate)」描述IL-7結合蛋白-IL-7複合物形成之速率。在一實施例中，締合速率常數(ka)為約6.49×10 6M -1s -1、約4.65×10 6M -1s -1、約3.17×10 6M -1s -1、約8.28×10 6M -1s -1、約1.47×10 7M -1s -1、約1.10×10 7M -1s -1或約5.90×10 6M -1s -1。在一實施例中，締合速率常數(ka)在25℃下為約6.49×10 6M -1s -1、4.65×10 6M -1s -1或約3.17×10 6M -1s -1。在一實施例中，締合速率常數(ka)在37℃下為約8.28×10 6M -1s -1、約1.47×10 7M -1s -1、約1.10×10 7M -1s -1或約5.90×10 6M -1s -1。在一實施例中，締合速率常數(ka)為6.49×10 6M -1s -1、4.65×10 6M -1s -1、3.17×10 6M -1s -1、8.28×10 6M -1s -1、1.47×10 7M -1s -1、1.10×10 7M -1s -1或5.90×10 6M -1s -1。在一實施例中，締合速率常數(ka)在25℃下為6.49×10 6M -1s -1、4.65×10 6M -1s -1或3.17×10 6M -1s -1。在一實施例中，締合速率常數(ka)在37℃下為8.28×10 6M -1s -1、1.47×10 7M -1s -1、1.10×10 7M -1s -1或5.90×10 6M -1s -1。
如貫穿本說明書所使用之術語「中和」意謂與在不存在IL-7結合蛋白之情況下IL-7之活性相比，IL-7之生物活性在如本文中所描述之IL-7結合蛋白之存在下在活體外或活體內減小。中和可歸因於阻斷IL-7結合至其受體、防止IL-7活化其受體、下調IL-7或其受體或影響效應子功能性中之一者或多者。
生物活性之減小或抑制可為部分或完全的。相對於在不存在IL-7結合蛋白之情況下的IL-7活性，中和IL-7結合蛋白可藉由使B細胞活化之臨限值降低至少20%、30%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、82%、84%、86%、88%、90%、92%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%來中和IL-7之活性。中和可使用熟習此項技術者所已知或如本文中所描述之一或多種分析來測定或量測。舉例而言，圖2B、圖2C及圖2D。
熟習此項技術者將顯而易見，術語「衍生」旨在不僅在其為材料之實體來源的意義上定義來源，且亦定義與該材料在結構上相同但並不源自參考來源的材料。
「分離」旨在將諸如IL-7結合蛋白之分子自可在自然界中發現該分子之環境中移除。舉例而言，分子可經純化遠離其通常將藉以在自然界中存在之物質。舉例而言，IL-7結合蛋白可相對於含有IL-7結合蛋白之培養基純化為至少95%、96%、97%、98%或99%或更大。本文中所揭示之IL-7結合蛋白及抗體可為經分離之IL-7結合蛋白及抗體。
「CDR」定義為抗原結合蛋白之互補決定區胺基酸序列。此等互補決定區胺基酸序列為免疫球蛋白重鏈及輕鏈之高變區。在免疫球蛋白之可變部分中存在三個重鏈及三個輕鏈CDR (或CDR區)。因此，如本文中所使用之「CDR」係指全部三個重鏈CDR、全部三個輕鏈CDR、全部重鏈及輕鏈CDR或至少兩個CDR。
貫穿本說明書，可變域序列及全長抗原結合序列內(例如，抗體重鏈序列或抗體輕鏈序列內)之可變域區中的胺基酸殘基係根據Kabat編號規約進行編號。類似地，用於實例中之術語「CDR」、「CDRL1」、「CDRL2」、「CDRL3」、「CDRH1」、「CDRH2」、「CDRH3」遵循Kabat編號規約。對於其他資訊，參見Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第4版, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)。
變異體熟習此項技術者將顯而易見，存在可變域序列及全長抗體序列中之胺基酸殘基的替代編號規約。亦存在CDR序列之替代編號規約，例如Chothia等人(1989) Nature 342: 877-883中所闡述之彼等編號規約。IL-7結合蛋白之結構及蛋白質摺疊可意謂其他殘基被視為CDR序列之部分，且熟習此項技術者將如此理解。
可供熟習此項技術者使用的CDR序列之其他編號規約包括「AbM」(University of Bath)及「contact」(University College London)方法。可確定使用Kabat、Chothia、AbM及contact方法中之至少兩者的最小重疊區域以提供「最小結合單元」。最小結合單元可為CDR之子部分。
下表1表示使用各CDR或結合單元之各編號規約的一種定義。Kabat編號方案用於表1中以對可變域胺基酸序列進行編號。應注意，CDR定義中之一些可視所使用之個別公開案而變化。 表1
   Kabat CDR Chothia CDR AbM CDR Contact CDR 最小結合單元
H1 31-35/35A/ 35B 26-32/33/34 26-35/35A/35B 30-35/35A/35B 31-32
H2 50-65 52-56 50-58 47-58 52-56
H3 95-102 95-102 95-102 93-101 95-101
L1 24-34 24-34 24-34 30-36 30-34
L2 50-56 50-56 50-56 46-55 50-55
L3 89-97 89-97 89-97 89-96 89-96
因此，提供IL-7結合蛋白，其包含以下CDR中之任一者或組合：SEQ ID NO: 6之CDRH1、SEQ ID NO: 7之CDRH2、SEQ ID NO: 8之CDRH3、SEQ ID NO: 9之CDRL1、SEQ ID NO: 10之CDRL2、SEQ ID NO: 11之CDRL3。CDR可藉由至少一個胺基酸取代、缺失或添加來修飾，其中變異體IL-7結合蛋白實質上保留未經修飾蛋白質之生物特性，諸如與IL-7之結合。
將瞭解，CDR H1、H2、H3、L1、L2、L3中之每一者可單獨或與任何其他CDR組合以任何排列或組合形式進行修飾。在一個實施例中，CDR藉由取代、缺失或添加至多3個胺基酸(例如，1或2個胺基酸，例如1個胺基酸)來修飾。通常，修飾為取代，特定言之保守性取代，例如，如下表2中所示。 表2：
側鏈 成員
疏水性 Met、Ala、Val、Leu、Ile
中性親水性 Cys、Ser、Thr
酸性 Asp、Glu
鹼性 Asn、Gln、His、Lys、Arg
影響鏈取向之殘基 Gly、Pro
芳族物 Trp、Tyr、Phe
舉例而言，在變異體CDR中，包含CDR作為替代定義(例如，Kabat或Chothia)之部分的側接殘基可經保守性胺基酸殘基取代。在一些實施例中，包含如上文所描述之變異體CDR的IL-7結合蛋白可在本文中稱為「功能性CDR變異體」。
因此，在另一實施例中，本文中提供之IL-7結合蛋白為IL-7結合蛋白，其結合至IL-7且包含SEQ ID NO: 8之CDRH3或其變異體CDRH3。在一實施例中，IL-7結合蛋白包含SEQ ID NO: 6之CDRH1或其變異體CDRH1、SEQ ID NO: 7之CDRH2或其變異體CDRH2、SEQ ID NO: 8之CDRH3或其變異體CDRH3、SEQ ID NO: 9之CDRL1或其變異體CDRL1、SEQ ID NO: 10之CDRL2或其變異體CDRL2及SEQ ID NO: 11之CDRL3或其變異體CDRL3。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白(包括具有一或多個變異體CDR之彼等者)可結合至IL-7且亦可中和IL-7活性。
本文中揭示IL-7結合蛋白，其結合至IL-7且包含SEQ ID NO: 4之重鏈可變區。IL-7結合蛋白可包含SEQ ID NO: 5之輕鏈可變區。在一些實施例中，IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。在一個實施例中，IL-7結合蛋白包含SEQ ID NO: 4之重鏈可變區及SEQ ID NO: 5之輕鏈可變區。
CDR L1、L2、L3、H1、H2及H3傾向於在結構上展現有限數目個鏈構形(典型)中之一者。CDR之特定典型結構類別由CDR之長度及環填充兩者定義，由位於CDR及構架區兩者中之關鍵位置處的殘基決定(在結構上確定殘基或SDR)。Martin及Thornton (1996; J Mol Biol 263:800-815)已產生用以定義「關鍵殘基」典型模板之自動方法。使用集群分析來定義CDR集合之典型類別，且接著藉由分析埋入疏水性、氫鍵殘基及保守甘胺酸及脯胺酸來鑑別典型模板。可藉由將序列與關鍵殘基模板進行比較且使用一致性或相似性矩陣對各模板進行評分而將抗體序列之CDR指派至典型類別。
基於DRSPAI-L7B抗體之典型類別，可預測功能性抗體結合在以下CDR取代之存在下維持，其中在Kabat編號之前的胺基酸為原始胺基酸序列，且在Kabat編號結束時之胺基酸序列為經取代之胺基酸： CDRL1 典型物： K24R S27aN、S27aD、S27aT、S27aE、S31,N、S31T、S31K、S31G L27bV D27cL、D27cY、D27cV、D27cI、D27cS、D27cN、D27sF、D27cH、D27cG、D27cT Y32F、Y32N、Y32A、Y32H、Y32S、Y32R I33M、I33L、I33V、I33R N34H CDRL2 典型物： G51A CDRL3 典型物： Q89S、Q89G、Q89F、Q89L、Q90N、Q90H S91N、S91F、S91G、S91R、S91D、S91H、S91T、S91Y、S91V N92Y、N92W、N92T、N92S、N92R、N92Q、N92Q、N92H、N92A、N92D V93E、V93N、V93G、V93H、V93T、V93S、V93R、V93A D94Y、D94T、D94V、D94L、D94H、D94N、D94I、D94W、D94P、D94S L96P、L96Y、L96R、L96I、L96W、L96F CDRH1 典型物：Y32I、Y32H、Y32F、Y32T、Y32N、Y32C、Y32E、Y32D G33Y、G33A、G33W、G33T、G33L、G33V V34M、V34I、V34L、V34T、V34W H35E、H35N、H35Q、H35S、H35Y、H35T CDRH2 典型物：I51L、I51V、I51T、I51S、I51N、I51M G55D Y59L CDRH3 典型物：Y102H、Y102V、Y102I、Y102S、Y102D、Y102G
如上文所論述，CDR之特定典型結構類別由CDR之長度及環填充兩者定義，由位於CDR及構架區兩者中之關鍵位置處的殘基決定。因此，取代亦可在本發明之IL-7結合蛋白之構架殘基中基於典型類別來進行，同時保留功能性抗體。此類取代可包括(使用Kabat編號)： 輕鏈：位置2處之I、L或V；位置3處之Q、L或E；位置4處之M或L；位置48處之I或V；及/或 重鏈：位置2處之V、I或L；位置4處之L或V；位置20處之L、I、M或V；位置24處之T、A、V、G或S；位置27處之F、Y、T或G；位置29處之F、L、I、V或S；位置47處之W或Y；位置48處之I、M、L或V；位置69處之I、L、F、M或V；位置71處之R、K、V或I；位置78處之A、L、V、Y或F；位置80處之L或M；位置90處之Y或F；位置94處之R、K、G、S、H、N、T、A及/或L。
因此，IL-7結合蛋白可在所陳述位置內具有上述取代中之任一者。每變異體CDR、每重鏈或輕鏈可變區、每重鏈或輕鏈及每IL-7結合蛋白可存在多個取代，且因此，取代之任何組合可存在於本發明之IL-7結合蛋白中，其限制條件為維持CDR之典型結構。為避免疑問，上述取代不應解釋為限制可進行之可能的CDR取代，同時仍保留功能性抗IL-7抗體。
本文中所揭示之VH或VL (或HC或LC)序列可為具有至多10個胺基酸取代、添加或缺失之變異體序列。舉例而言，變異體序列可具有至多9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代、添加或缺失。序列變異可排除CDR中之一或多者或全部，例如CDR與VH或VL (或HC或LC)序列相同，且變異係在VH或VL (或HC或LC)序列之其餘部分中，使得CDR序列為固定且完整的。
可替代地，重鏈可變區可與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大或100%一致性；且輕鏈可變區可與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大或100%一致性。
重鏈可變區可為SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列之變異體，其可含有30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代、插入或缺失。輕鏈可變區可為SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列之變異體，其可含有30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代、插入或缺失。
在一特定實施例中，本文中所描述之IL-7結合蛋白結合至IL-7且包含(SEQ ID NO: 4)及(SEQ ID NO: 5)之重鏈與輕鏈可變域組合；或IL-7結合蛋白，其具有分別與SEQ ID NO: 4及SEQ ID NO: 5具有至少約75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之重鏈及輕鏈可變域。在一實施例中，IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。
本文中所描述之IL-7結合蛋白之重鏈可變區中之任一者可與適合的恆定區組合。IL-7結合蛋白之輕鏈可變區中之任一者可與適合的恆定區組合。本文中所揭示之恆定區可為人類恆定區。
本發明亦提供一種核酸分子，其編碼本文中所描述之IL-7結合蛋白中之任一者之多肽序列。核酸分子可包含編碼以下之序列：(i)一或多個CDRH、重鏈可變序列或全長重鏈序列；及(ii)一或多個CDRL、輕鏈可變序列或全長輕鏈序列，其中(i)及(ii)在相同核酸分子上。可替代地，編碼本文中所描述之IL-7結合蛋白的核酸分子可包含編碼以下之序列：(a)一或多個CDRH、重鏈可變序列或全長重鏈序列；或(b)一或多個CDRL、輕鏈可變序列或全長輕鏈序列，其中(a)及(b)在單獨核酸分子上。在一些實施例中，核酸包含與編碼輕鏈的SEQ ID NO: 13中所闡述之核酸序列具有至少約80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列。在一些實施例中，核酸包含編碼輕鏈的SEQ ID NO: 13中所闡述之核酸序列。在一些實施例中，核酸包含與編碼重鏈的SEQ ID NO: 14中所闡述之核酸序列具有至少約80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列。在一些實施例中，核酸包含編碼重鏈的SEQ ID NO: 14中所闡述之核酸序列。在一些實施例中，核酸進一步包含與編碼訊息肽的SEQ ID NO: 15中所闡述之核酸序列具有至少約80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性的序列。
如藉由EC50或表面電漿子共振分析所顯示，如上文所描述之IL-7結合蛋白，例如具有藉由一或多個胺基酸殘基之化學修飾及/或插入、缺失或取代而部分改變序列的變體或與上文所描述之序列中之任一者具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大或99%或更大一致性的彼等變體可展現在由DRSPAI-L7B顯示的效力之10倍內或5倍內的結合至IL-7之效力。DRSPAI-L7B為藉由結合至介白素7 (IL-7)而強效(Kd 67 pM)抑制IL-7介導之傳訊的人類IgG1。DRSPAI-L7B為由兩條輕(κ)鏈及兩條重(IgG1)鏈組成的二硫鍵連接之α2β2四聚體。重鏈恆定區含有兩個點突變L235A及G237A (LAGA)，其減少mAb與Fcy受體之結合且防止Fc介導之效應子功能，包括CDC及ADCC。DRSPAI-L7B包含具有SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸的重鏈及具有SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸的輕鏈。
在一些實施例中，本文中所描述之IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 19、21或23中所闡述之胺基酸具有至少80%、85%、90%或95%序列一致性的重鏈。在一些實施例中，本文中所描述之IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 19、21或23中所闡述之胺基酸的重鏈。在一些實施例中，本文中所描述之IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 18、20或22中所闡述之胺基酸具有至少80%、85%、90%或95%序列一致性的輕鏈。在一些實施例中，本文中所描述之IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 18、20或22中所闡述之胺基酸的輕鏈。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 19中所闡述之胺基酸的重鏈及具有SEQ ID NO: 18中所闡述之胺基酸的輕鏈。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 21中所闡述之胺基酸的重鏈及具有SEQ ID NO: 20中所闡述之胺基酸的輕鏈。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 23中所闡述之胺基酸的重鏈及具有SEQ ID NO: 22中所闡述之胺基酸的輕鏈。
在一些實施例中，DRSPAI-L7B減少周邊中之致病及記憶T細胞之存活及活化，經由其在使淋巴組織誘導子細胞(Lti)及ILC3發育中之作用阻斷三級淋巴器官(TLO)之建立及維持，且並不影響調節性T細胞數目或功能。在一些實施例中，DRSPAI-L7B在周邊起作用且將減少向TLO及大腦之T細胞移行且因此不需要CNS滲透。相對於MS，在一些實施例中，DRSPAI-L7B將減少炎症且減少慢性自體免疫性，從而引起復發緩解性MS (RRMS)及原發進行性MS (PPMS)兩者中之復發率減小及進展延遲。
如本文中所使用之術語「抗原決定基」係指與IL-7結合蛋白之特定結合域接觸的抗原之部分，亦稱為互補位。抗原決定基可為線性或構形/非連續的。構形或非連續抗原決定基包含藉由其他序列分離(亦即不在藉由多肽鏈之三級摺疊組裝的抗原之一級序列中的連續序列中)之胺基酸殘基。儘管殘基可來自多肽鏈之不同區，但其在抗原之三維結構中極為接近。在多聚抗原之情況下，構形或非連續抗原決定基可包括來自不同肽鏈之殘基。包含於抗原決定基內之特定殘基可經由電腦建模程式或經由三維結構來確定，該等三維結構經由此項技術中已知的方法(諸如X射線結晶)獲得。抗原決定基定位可使用熟習此項技術者已知的如公開案中所描述之各種技術來進行，諸如 Methods in Molecular Biology' Epitope Mapping Protocols', Mike Schutkowski 及 Ulrich Reineke ( 第 524卷 , 2009) 以及 Johan Rockberg 及 Johan Nilvebrant ( 第 1785卷 , 2018)。例示性方法包括基於肽之方法，諸如肽掃描，其中使用諸如ELISA之技術或藉由例如在噬菌體上活體外顯示肽或蛋白質突變體之大型庫來篩選一系列重疊肽之結合。可藉由包括X射線結晶、溶液核磁共掁(NMR)光譜分析及低溫電子顯微術(cryo-EM)之結構技術來確定詳細抗原決定基資訊。諸如丙胺酸掃描之突變誘發為其中將結合損失分析用於抗原決定基定位的有效方法。另一種方法為與蛋白分解及液體層析質譜(LC-MS)分析組合的氫/氘交換(HDX)，以表徵非連續或構形抗原決定基。
在一個態樣中，提供一種IL-7結合蛋白，其在SEQ ID NO: 1內之一或多個胺基酸殘基處結合至人類IL-7。在一個實施例中，提供一種IL-7結合蛋白，其在SEQ ID NO: 12內之一或多個胺基酸殘基處結合至人類IL-7。在另一實施例中，提供一種IL-7結合蛋白，其在SEQ ID NO: 16內之一或多個胺基酸殘基處結合至人類IL-7。
在另一態樣中，提供一種IL-7結合蛋白，其在HDX-MS分析中保護如IL-7之SEQ ID NO: 12中所闡述之殘基免於氘交換。在一個實施例中，提供一種IL-7結合蛋白，其在HDX-MS分析中保護IL-7之殘基67至81 (SEQ ID NO: 1)免於氘交換。在一些實施例中，IL-7結合蛋白結合至與SEQ ID NO: 12中所闡述之胺基酸序列具有至少約50%、60%、70%、80%、90%或95%一致性的序列。在一些實施例中，IL-7結合蛋白結合至與SEQ ID NO: 16中所闡述之胺基酸序列具有至少約50%、60%、70%、80%、90%或95%一致性的序列。在一些實施例中，IL-7結合蛋白在位於與摺疊IL-7蛋白質上之IL-7Rα及γ-鏈相互作用位點相鄰的位點處結合至IL-7。在一些實施例中，IL-7結合蛋白在包含具有SEQ ID NO: 12中所闡述序列之至少5個連續胺基酸的抗原決定基處展現對IL-7之結合特異性。在一些實施例中，IL-7結合蛋白在包含具有SEQ ID NO: 16中所闡述序列之至少5個連續胺基酸的抗原決定基處展現對IL-7之結合特異性。在一些實施例中，IL-7結合蛋白在包含具有SEQ ID NO: 12中所闡述序列之至少10個連續胺基酸的抗原決定基處展現對IL-7之結合特異性。在一些實施例中，IL-7結合蛋白在包含具有SEQ ID NO: 16中所闡述序列之至少10個連續胺基酸的抗原決定基處展現對IL-7之結合特異性。
在一些實施例中，可藉由競爭性結合分析來測定IL-7結合蛋白對抗原之親和力。在一些實施例中，競爭性結合分析為免疫分析。在一些實施例中，競爭性結合分析為例如ELISA或放射免疫分析。
在一些實施例中，生物活性之減小或抑制可為部分或完全的。相對於在不存在IL-7結合蛋白之情況下的IL-7活性，中和本文中所揭示之IL-7結合蛋白可將IL-7之活性中和至少20%、30%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、82%、84%、86%、88%、90%、92%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。中和可使用熟習此項技術者所已知或如本文中所描述之一或多種分析來測定或量測。
在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白靶向膜結合IL-7受體α (CD127)，其在IL-7結合時形成具有共用γ鏈之異二聚受體(CD132)。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白靶向可溶性IL-7受體α (sCD127)。
可藉由熟習此項技術者已知之一或多種技術來測定本發明之IL-7結合蛋白與參考IL-7結合蛋白(例如，參考抗體或IL-7受體)之間的競爭，諸如ELISA、FMAT、表面電漿子共振(SPR)或ForteBio Octet Bio-Layer干涉術(BLI)。此類技術亦可稱為抗原決定基分組。此競爭存在若干可能的原因：兩種蛋白質可結合至相同或重疊抗原決定基，可能存在結合之空間抑制，或第一種蛋白質之結合可誘導抗原之構形變化，此防止或減少第二種蛋白質之結合。
生物活性之減小或抑制可為部分或完全的。相對於在不存在抗原結合蛋白之情況下的＜目標＞活性，中和抗原結合蛋白可將＜目標＞之活性中和至少20%、30%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、82%、84%、86%、88%、90%、92%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。
中和可使用熟習此項技術者已知或如本文中所描述之一或多種分析來測定或量測。
一致性百分比查詢核酸序列與主題核酸序列之間的「一致性百分比」為以百分比表述的在查詢序列之整個長度內在已使用諸如BLASTN、FASTA、ClustalW、MUSCLE、MAFFT、EMBOSS Needle、T-Coffee及DNASTAR Lasergene之適合演算法或軟體進行逐對全域序列比對之後，使用諸如BLASTN、FASTA、DNASTAR Lasergene、GeneDoc、Bioedit、EMBOSS needle或EMBOSS infoalign之適合演算法或軟體計算的「一致性」值。重要地，查詢核酸序列可由在本文中之一或多個技術方案中鑑別之核酸序列描述。
查詢胺基酸序列與主題胺基酸序列之間的「一致性百分比」為以百分比表述的在查詢序列之整個長度內在已使用諸如BLASTP、FASTA、ClustalW、MUSCLE、MAFFT、EMBOSS Needle、T-Coffee及DNASTAR Lasergene之適合演算法/軟體進行逐對全域序列比對之後，使用諸如BLASTP、FASTA、DNASTAR Lasergene、GeneDoc、Bioedit、EMBOSS needle或EMBOSS infoalign之適合演算法或軟體計算的之「一致性」值。重要地，查詢胺基酸序列可由在本文中之一或多個技術方案中鑑別之胺基酸序列描述。
查詢序列可與主題序列100%一致，或與主題序列相比，其可包括至多某一整數數目個胺基酸或核苷酸改變，使得一致性%小於100%。舉例而言，查詢序列與主題序列至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致。此類改變包括至少一個胺基酸缺失、取代(包括保守性及非保守性取代)或插入，且其中該等改變可出現於查詢序列之胺基末端或羧基末端位置或彼等末端位置之間的任何位置，其單獨穿插於查詢序列中之胺基酸或核苷酸當中或查詢序列內之一或多個連續基團內。
可在整個查詢序列長度(包括CDR)上測定一致性%。可替代地，一致性%可排除一或多個或所有CDR，例如所有CDR與主題序列100%一致且一致性%變化係在查詢序列之其餘部分(例如，構架序列)中，使得CDR序列為固定且完整的。在一些實施例中，變異體序列實質上保留諸如DRSPAI-L7B的未經修飾蛋白質之生物特性。
修飾熟習此項技術者將瞭解，在產生IL-7結合蛋白(諸如宿主細胞中之抗體)時，可進行轉譯後修飾。舉例而言，此可包括某些前導序列之裂解；各種醣基化型態之各種糖部分之添加；非酶促醣化；去醯胺化；氧化；二硫鍵擾亂及其他半胱胺酸變異體，諸如游離硫氫基、外消旋二硫鍵、硫醚及三硫鍵；異構化；C末端離胺酸截割；及N末端麩醯胺環化。本發明涵蓋已經受或已經歷一或多次轉譯後修飾的IL-7結合蛋白之用途。因此，本發明之「IL-7結合蛋白」或「抗體」分別包括如前文所定義的已經歷諸如本文中所描述之轉譯後修飾的「IL-7結合蛋白」或「抗體」。
醣化為還原糖(諸如葡萄糖)與蛋白質中之游離胺基之間的轉譯後非酶促化學反應，且通常在離胺酸側鏈之ε胺處或在蛋白質之N末端處觀測到。醣化可僅在還原糖之存在下在生產及儲存期間發生。
去醯胺化可在生產及儲存期間發生，為主要以大約3:1比率將天冬醯胺(N)轉化為異天冬胺酸(異天冬胺酸鹽)及天冬胺酸(天冬胺酸鹽) (D)之酶促反應。因此，此去醯胺化反應與天冬胺酸鹽(D)異構化為異天冬胺酸鹽有關。天冬醯胺之去醯胺化及天冬胺酸鹽之異構化二者均涉及中間物丁二醯亞胺。為降至較低程度，去醯胺化可以類似方式與麩醯胺殘基一起發生。去醯胺化可發生於CDR、Fab (非CDR區)或Fc區中。
氧化可在生產及儲存期間(亦即在氧化條件之存在下)發生且引起蛋白質之共價修飾，由反應性含氧物種直接誘導或藉由與氧化應激之次級副產物反應間接誘導。氧化主要與甲硫胺酸殘基發生，但可發生於色胺酸及游離半胱胺酸殘基處。氧化可發生於CDR、Fab (非CDR)區或Fc區中。
二硫鍵擾亂可在生產及鹼性儲存條件期間發生。在某些情形下，二硫鍵可斷裂或錯誤形成，從而產生不成對的半胱胺酸殘基(-SH)。此等游離(不成對)硫氫基(-SH)可促進改組。
硫醚之形成及二硫鍵之外消旋化可在鹼性條件下，在生產或儲存中，經由去氫丙胺酸及過硫化物中間物β消除二硫鍵橋回至半胱胺酸殘基而發生。去氫丙胺酸及半胱胺酸之後續交聯使得形成硫醚鍵，或游離半胱胺酸殘基可與 D-半胱胺酸及 L-半胱胺酸之混合物一起重新形成二硫鍵。
三硫化物由硫原子插入二硫鍵(Cys-S-S-S-Cys)產生且歸因於生產用細胞培養物中硫化氫之存在而形成。
重鏈及/或輕鏈中之N末端麩醯胺(Q)及麩胺酸鹽(麩胺酸) (E)有可能經由環化形成焦麩胺酸鹽(pGlu)。大多數pGlu形成發生於生產用生物反應器內，但其可視加工之pH及溫度以及儲存條件而以非酶促方式形成。通常在天然人類抗體中觀測到N末端Q或E之環化。
C末端離胺酸截割為藉由羧基肽酶催化之酶促反應，且其通常在重組及天然人類抗體中觀測到。此過程之變型包括由於來自重組宿主細胞之細胞酶而自一個或兩個重鏈移除離胺酸。在向人類個體/患者投與時可能引起任何剩餘C末端離胺酸之移除。
術語「肽」、「多肽」及「蛋白質」各自係指包含兩個或更多個胺基酸殘基之分子。肽可為單體或聚合物。
在一些實施例中，可能需要修飾IL-7結合蛋白之效應子功能例如以增強ADCC或CDC、半衰期等。IL-7結合蛋白可在人類中或在鼠類動物模型中在活體內具有至少6小時、至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少7天或至少9天之半衰期。
抗體之Fc效應子部分的突變變化可用於改變FcRn與抗體之間的相互作用之親和力以調節抗體轉換。抗體之半衰期可在活體內延長。此對患者群體可能為有益的，因為最大劑量量及最大給藥頻率可由於使IC 50在活體內維持較長時段而實現。可整體或部分移除抗體之Fc效應子功能，此係因為可能不需要殺死表現CD127之彼等細胞。此移除可引起安全概況增加。
在一些實施例中，包含恆定區之IL-7結合蛋白可具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。恆定域可包含IgG2或IgG4同型之天然禁用恆定區或突變IgG1恆定域。在一些實施例中，本發明之IL-7結合蛋白可為Fc禁用的。適合修飾之實例描述於EP0307434中。實現Fc禁用之一種方式包含取代重鏈恆定區之位置235及237 (EU索引編號)處的丙胺酸殘基，亦即L235A及G237A (通常稱為「LAGA突變」)。另一實例包含經位置234及235 (EU索引編號)處之丙胺酸取代，亦即L234A及L235A (通常稱為「LALA」突變)。在一些實施例中，已使用LAGA突變禁用本文中所揭示之IL-7結合蛋白之Fc效應子功能。可替代地，IL-7結合蛋白可為Fc啟用的且不包含位置235及237處之丙胺酸取代。
用以減小效應子功能之額外改變及突變包括：(除非另外指出，否則參考IgG1)：醣基化N297A或N297Q或N297G；L235E；IgG4:F234A/L235A；及嵌合IgG2/IgG4。IgG2：H268Q/V309L/A330S/P331S及IgG2：V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S可減少FcγR及C1q結合(Wang等人 2018及US 8,961,967)。
減小效應子功能之其他突變包括L234F/L235E/P331S；使用來自人類IgG2之CH1及鉸鏈區以及來自人類IgG4之CH2及CH3區創建的嵌合抗體；IgG2m4，其基於具有衍生自IgG4之四個關鍵胺基酸殘基變化(H268Q、V309L、A330S及P331S)的IgG2同型；含有V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S取代以消除對Fcγ受體及C1q補體蛋白之親和力的IgG2σ；IgG2m4 (H268Q/V309L/A330S/P331S，變為IgG4)；IgG4 (S228P/L234A/L235A)；huIgG1 L234A/L235A (AA)；huIgG4 S228P/L234A/L235A；IgG1σ (L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S)；IgG4σ1 (S228P/F234A/L235A/G237A/P238S)；及IgG4σ2 (S228P/F234A/L235A/G236/G237A/P238S，其中表示缺失) (Tam等人, Antibodies 2017, 6(3))。
在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白可包含選自突變恆定域之一或多個修飾以使得抗體具有增強的效應子功能/ADCC及/或補體活化。適合修飾之實例描述於Shields等人 J. Biol. Chem (2001) 276:6591-6604、Lazar等人 PNAS (2006)103:4005-4010以及US6737056、WO2004063351及WO2004029207中。IL-7結合蛋白可包含具有經改變醣基化概況之恆定域以使得IL-7結合蛋白具有增強的效應子功能/ADCC及/或補體活化。用以產生具有經改變醣基化概況之IL-7結合蛋白的適合方法之實例描述於WO2003/011878、WO2006/014679及EP1229125中。
宿主及載體可藉由多種習知技術中之任一種來製備IL-7結合蛋白。舉例而言，IL-7結合蛋白可自天然表現其之細胞純化(例如，抗體可自產生其之融合瘤純化)，或在重組表現系統中產生。
多種不同表現系統及純化方案可用於產生本發明之IL-7結合蛋白。一般而言，用編碼所要抗原結合蛋白之重組表現載體轉化宿主細胞。視表現系統而定，表現載體可藉由宿主維持為單獨的基因元件或整合至宿主染色體中。
在一些實施例中，本文中描述包含核酸分子之表現載體。亦提供一種重組宿主細胞，其包含如本文中所描述之表現載體。本文中所描述之IL-7結合蛋白可在適合的宿主細胞中產生。可採用廣泛範圍之宿主細胞，包括原核生物(包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性細菌，例如大腸桿菌(Escherichia coli)、桿菌屬(Bacilli sp.)、假單胞菌屬(Pseudomonas sp.)、棒狀桿菌屬(Corynebacterium sp.))；真核生物，包括酵母(例如，釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、甲醇酵母(Pichia pastoris))；真菌(例如，曲黴菌屬(Aspergilus sp.))；或高等真核生物，包括昆蟲細胞及哺乳動物來源之細胞株。細胞株之實例包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、PER.C6、HEK293、HeLa或NSO。在一些實施例中，本文中所描述之宿主細胞為CHO細胞、NSO骨髓瘤細胞、COS細胞或SP2細胞。宿主細胞可為非人類宿主細胞。宿主細胞可為非胚胎宿主細胞。可使用人類細胞，因此實現經修飾人類醣基化型態。可替代地，可採用其他真核細胞株。在一些實施例中，適合的哺乳動物宿主細胞以及用於轉化、培養、擴增、篩選及產物產生及純化之方法的選擇為此項技術中已知的。在一些實施例中，宿主細胞為酵母菌株。可在培養基(例如，無血清培養基)中培養宿主細胞。IL-7結合蛋白可由宿主細胞分泌至培養基中。相對於含有IL-7結合蛋白之培養基，可將IL-7結合蛋白可純化為至少95%或更大(例如，98%或更大)。
宿主細胞可為經分離之宿主細胞。宿主細胞通常不為多細胞有機體(例如，植物或動物)之部分。宿主細胞可為非人類宿主細胞。
供與細菌、真菌、酵母及哺乳動物宿主細胞一起使用的適當選殖及表現載體為此項技術中已知的。
用於產生如本文中所描述之IL-7結合蛋白的方法可包含培養宿主細胞且回收IL-7結合蛋白之步驟。在本發明之一個態樣中，提供一種製造IL-7結合蛋白之方法，該方法包含將宿主細胞維持在培養基中以產生IL-7結合蛋白且分離或純化由宿主細胞產生之IL-7結合蛋白。
重組轉化、轉染或轉導之宿主細胞可包含至少一個表現卡匣，其中該表現卡匣包含編碼本文中所描述之IL-7結合蛋白之重鏈的聚核苷酸，且進一步包含編碼本文中所描述之IL-7結合蛋白之輕鏈的聚核苷酸。可替代地，重組轉化、轉染或轉導之宿主細胞可包含至少一個表現卡匣，其中第一表現卡匣包含編碼本文中所描述之IL-7結合蛋白之重鏈的聚核苷酸；且進一步包含第二卡匣，該第二卡匣包含編碼本文中所描述之IL-7結合蛋白之輕鏈的聚核苷酸。穩定轉化之宿主細胞可包含載體，該載體包含一或多個編碼本文中所描述之IL-7結合蛋白之重鏈及/或輕鏈或其片段的表現卡匣。舉例而言，此類宿主細胞可包含編碼輕鏈之第一載體及編碼重鏈之第二載體。
細胞可在促進抗原結合蛋白之表現的條件下使用諸如搖瓶、旋轉器燒瓶及生物反應器之多種裝備來培養。藉由習知蛋白質純化程序來回收多肽。蛋白質純化程序通常由一系列單元操作組成，該等單元操作由經研發以選擇性濃縮且分離抗原結合蛋白之各種過濾及層析過程構成。經純化之抗原結合蛋白可調配於醫藥學上可接受之組合物中。
使用說明在一個態樣中，本文中所描述之IL-7結合蛋白用於治療中。本文中所描述之IL-7結合蛋白可用於治療IL-7抑制劑所指示之疾病或病狀，例如發炎性或自體免疫性疾病。在一些實施例中，藉由本文中所描述之IL-7結合蛋白進行的IL-7抑制影響自體反應性效應T細胞之存活、擴增及功能，同時保留調節性T淋巴球。在一些實施例中，藉由本文中所描述之IL-7結合蛋白進行的IL-7抑制抑制異位淋巴組織之形成。在一些實施例中，藉由本文中所描述之IL-7結合蛋白進行的IL-7抑制可藉由抑制先天性淋巴細胞(ILC)存活而有助於恢復穩態。
在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白能夠拮抗IL-7之生物效應且能夠拮抗IL-7R-介導之T H17擴增及IL-7R-介導之T H17存活中的至少一者。術語抑制、拮抗及中和在本文中同義地使用。無術語旨在表明完全中和之要求；亦考慮部分中和，其對應於減小但不完全消除生物效應。
在分子水準下，可藉由CD4+ T細胞群體(或T H17細胞群體)之IL-17產生的增加觀測到T H17擴增及/或存活。因此，在一實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白減少CD4+ T細胞群體之IL-17產生。亦可藉由CD4+ T細胞群體(或T H17細胞群體)之IFN-γ產生的增加觀測到IL-7受體介導之T H17擴增及存活。因此，在一實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白拮抗(減少) CD4+ T細胞群體之IFN-γ產生。在分子水準下，本文中所揭示之IL-7結合蛋白可抑制IL-7受體介導之STAT-5磷酸化。
在一些實施例中，在分子水準下，吾人可藉由諸如IL-7誘導之P-STAT5或Bcl-2的分析來觀測且量測本文中所描述之IL-7結合蛋白之阻斷效應。在一些實施例中，在細胞水準下，吾人可藉由諸如IL-17或IFNγ之T H17分泌的分析來觀測且量測阻斷效應。例示性分析描述於PCT申請案編號PCT/US2009/053136 (WO2010/017468)中。在例示性pSTAT-5分析中，可在存在及不存在測試藥劑之情況下用IL-7刺激PBMC。隨後可例如藉由pSTAT-5染色(例如，使用經標記之抗pSTAT-5抗體，諸如ALEXA FLUOR 647小鼠抗Stat5 (pY694，BD [#612599]))，隨後進行螢光活化細胞分選來定量地評定細胞之pSTAT-5含量。亦可藉由ELISA來測定磷酸化STAT-5含量。減少磷酸化STAT-5含量的彼等藥劑可為自體免疫性疾病之潛在治療候選物。
在一些實施例中，本發明提供一種用於治療人類個體之自體免疫性疾病的方法，其包含以足以減少IL-7R-介導之STAT-5磷酸化的量向個體投與IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白阻斷或抑制IL-7介導的直接在IL-7R下游的STAT5磷酸化。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白下調負責淋巴球移行至活性T H1細胞上之CNS的活化標記物及趨化介素受體之表面表現。
當與不存在無拮抗劑之情況下的STAT-5含量相比時，或當與陰性對照或未經處理細胞相比時，諸如本發明之抗原結合蛋白的拮抗劑可能能夠使磷酸化STAT-5之含量減小至少20%、50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。拮抗劑可具有50 μg/ml、25 μg/ml或更小、10 μg/ml或更小、5 μg/ml或更小或2 μg/ml或更小之IC 50。在一實施例中，拮抗劑具有小於或等於1 μg/ml、小於或等於0.75 μg/ml、小於或等於0.5 μg/ml、小於或等於0.25 μg/ml或小於或等於0.1 μg/ml之IC 50。在一個實施例中，拮抗劑具有小於或等於50 ng/ml、小於或等於40 ng/ml、小於或等於30 ng/ml、小於或等於20 ng/ml或小於或等於10 ng/ml之IC 50。在一個實施例中，拮抗劑具有5 ng/ml之IC 50。
本文中所揭示之拮抗劑可尤其在抑制T H17細胞之擴增中有效。T H17細胞之擴增可在T H17擴增分析中測定，其可包含在存在及不存在測試藥劑之情況下刺激原生T細胞群體以擴增，隨後刺激細胞以產生IL-17且評定在存在及不存在測試藥劑之情況下由細胞產生的IL-17之含量。在一例示性分析中，人類CD4+ T細胞可藉由在IL-1、IL-6及IL-23之存在下用T細胞受體活化刺激而分化為T H17。在分化5天之後，可分選出CCR6+細胞以產生富集T H17群體。此群體接著可用人類IL-7刺激且可測定上清液中之IL-17及IFN-γ的增加。可測定諸如本發明之抗原結合片段的測試藥劑抑制IL-7誘導IL-7R之能力，因為在培育期期間存在此相互作用之拮抗劑應防止T H17細胞之擴增，從而引起IL-17及IFN-γ產生之減少。
相比於陰性對照，IL-7結合蛋白可能能夠在此分析中抑制20%或更多的IL-17分泌。更通常，相比於對照，IL-7結合蛋白能夠抑制50%、75%、85%或90%或更多的IL-17分泌。在一些實施例中，IL-7結合蛋白可在分析中展現小於或等於50 μg/ml之IC 50。在其他實施例中，IC 50可小於或等於20 μg/ml、10 μg/ml或5 μg/ml。因此，在另一態樣中，本發明提供一種用於治療自體免疫性疾病或發炎性病症的方法，其包含以足以減少患者中之T H17細胞計數的量向患者投與本文中所揭示之IL-7結合蛋白。
在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白用於治療個體。術語「個體(individual)」、「個體(subject)」及「患者」在本文中互換使用。個體通常為人類。個體亦可為哺乳動物，諸如小鼠、大鼠或靈長類動物(例如狨猴或猴)。個體可為非人類動物。IL-7結合蛋白亦可具有獸醫學用途。待治療之個體可為農場動物，例如母牛或公牛、綿羊、豬、閹公牛(ox)、山羊或馬，或可為家畜，諸如犬或貓。動物可為任何年齡或成熟的成年動物。在一些實施例中，治療可為治療性、防治性或預防性的。個體可為有需要之個體。除將來可能罹患疾病之個體以外，需要治療之彼等個體亦可包括已患有醫學疾病之個體。
因此，本文中所描述之IL-7結合蛋白可用於防治性或預防性治療。在此情況下，向個體投與本文中所描述之IL-7結合蛋白以便預防或延遲疾病之一或多個態樣或症狀之發作。個體可為無症狀的。個體可具有疾病之遺傳傾向。在一些實施例中，向此個體投與防治有效量之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，防治有效量為預防或延遲本文中所描述之疾病之一或多個態樣或症狀之發作的量。
本文中所描述之IL-7結合蛋白亦可用於治療方法中。術語「治療」涵蓋疾病之至少一個態樣或症狀之緩解、減少或預防。舉例而言，本文中所描述之IL-7結合蛋白可用於減輕或減少本文中所描述之疾病之一或多個態樣或症狀。
在一些實施例中，以用於治療性、防治性或預防性治療之有效量使用本文中所描述之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中所描述之IL-7結合蛋白之治療有效量為可有效減輕或減少疾病之一或多個態樣或症狀的量。在一些實施例中，本文中所描述之IL-7結合蛋白亦可用於治療、預防或治癒本文中所描述之疾病。在一些實施例中，本文中所描述之IL-7結合蛋白對個體之健康具有一般有益作用，例如其可增加個體之預期壽命。
本文中所描述之IL-7結合蛋白不必實現完全治癒或根除疾病之每種症狀或表現特徵以構成可行的治療性治療。如在相關領域中所認識，用作治療劑之藥物可降低給定疾病病況之嚴重程度，但不必消除疾病之每種表現特徵以被視為適用的治療劑。類似地，防治性投與之治療不必完全有效預防疾病之發作以便構成可行的防治劑。簡單地減小疾病之影響(例如，藉由減少其症狀之數目或嚴重程度，或藉由增加另一治療之有效性，或藉由產生另一有益作用)或降低疾病將在個體中出現(例如，藉由延遲疾病之發作)或惡化之可能性為足夠的。
在一些實施例中，本文中所描述之IL-7結合蛋白可用於治療中以治療患有或疑似患有本文中所描述之疾病或病狀的個體。在一些實施例中，向患有或疑似患有本文中所描述之疾病或病狀的個體投與本文中所描述之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中所描述之IL-7結合蛋白可用於治療多發性硬化症(MS)及其他自體免疫性或發炎性疾病(尤其牽涉致病性T H17細胞之彼等疾病)。在一些實施例中，本文中所描述之IL-7結合蛋白可用於治療類風濕性關節炎、牛皮癬、白塞氏病(Behcet's disease)、糖尿病(例如，I型糖尿病)及全身性紅斑狼瘡(SLE)。
對IL-7誘導之IL-7R-介導之傳訊的抑制可適用於治療已牽涉IL-17或IL-2升高之發炎性(非自體免疫性)疾病，諸如哮喘。因此，可藉由本文中所揭示之IL-7結合蛋白治療的發炎性及/或自體免疫性疾病包括發炎性皮膚疾病，包括牛皮癬及異位性皮膚炎；全身性硬皮病及硬化症；發炎性腸病(IBD)；克羅恩氏病；潰瘍性結腸炎；局部缺血性再灌注病症，包括手術組織再灌注損傷、心肌局部缺血性病狀，諸如心肌梗塞、心跳驟停、在心臟手術之後的再灌注及在經皮管內冠狀動脈血管成形術之後的收縮、中風及腹主動脈瘤；繼發於中風之腦水腫；顱外傷；低血容性休克；窒息；成人呼吸窘迫症候群；急性肺損傷；白塞氏病；皮肌炎；多發性肌炎；多發性硬化症(MS)；皮膚炎；腦膜炎；腦炎；葡萄膜炎；骨關節炎；狼瘡性腎炎；自體免疫性疾病，諸如類風濕性關節炎(RA)、脊椎關節炎、休格倫氏症候群、脈管炎；涉及白血球滲出之疾病；中樞神經系統(CNS)發炎性病症；繼發於敗血症或外傷之多器官損傷症候群；酒精性肝炎；細菌性肺炎；抗原-抗體複合物介導之疾病，包括腎絲球腎炎；敗血症；類肉瘤病；對組織/器官移植之免疫病理學反應；肺部炎症，包括肋膜炎、肺泡炎、脈管炎、肺炎、慢性支氣管炎、支氣管擴張、瀰漫性泛細支氣管炎、過敏性肺炎、特發性肺部纖維化(IPF)及囊腫性纖維化；牛皮癬性關節炎；視神經脊髓炎；格-巴二氏症候群(Guillain-Barre syndrome；GBS)；COPD；1型糖尿病等。
特定言之，本文中所揭示之IL-7結合蛋白可適用於治療所有形式之多發性硬化症，包括視神經脊髓炎。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白適用於治療分類為臨床單一症候群(CIS)；原發進行性(PPMS)；復發緩解性(RRMS)及/或繼發進行性(SPMS)之多發性硬化症。在一些實施例中，預測用本文中所揭示之IL-7結合蛋白治療在於活動性發炎性疾病之情形下投與時(亦即在用於治療臨床單一症候群或復發性形式之MS時)最有效。疾病之此等階段可在臨床上及/或藉由諸如釓增強之成像標準或其他更敏感性技術及/或活動性疾病之其他迄今為止未定義的生物標記物來定義。特定言之，當個體進入或處於復發時，本文中所揭示之IL-7結合蛋白可用於治療RRMS (經由靜脈內、皮下、經口或肌內遞送)。在一實施例中，向處於復發發作或在自復發發作起1小時、2小時、3小時、6小時、12小時、24小時、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天內的個體投與本文中所揭示之IL-7結合蛋白。
在一些實施例中，自體免疫性及/或發炎性疾病選自IBD、類風濕性關節炎(RA)、休格倫氏症候群、克羅恩氏病、糖尿病(例如I型糖尿病)、全身性紅斑狼瘡(SLE)及潰瘍性結腸炎。在另一實施例中，自體免疫性及/或發炎性病狀為類風濕性關節炎(RA)。在另一實施例中，自體免疫性及/或發炎性病狀為休格倫氏症候群。在另一實施例中，自體免疫性及/或發炎性病狀為全身性紅斑狼瘡(SLE)。在另一實施例中，自體免疫性及/或發炎性病狀為潰瘍性結腸炎。在另一實施例中，自體免疫性及/或發炎性病狀為糖尿病，例如I型糖尿病。
在一些實施例中，本文中提供用於治療本文中所揭示之疾病或病狀之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中提供用於治療自體免疫性及/或發炎性疾病之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中提供用於治療多發性硬化症(MS)之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中揭示用於治療復發緩解性MS、繼發進行性MS及/或原發進行性MS之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中提供用於治療類風濕性關節炎(RA)之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中提供用於治療休格倫氏症候群之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中提供用於治療全身性紅斑狼瘡(SLE)之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中提供一種用於治療潰瘍性結腸炎之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中提供用於治療糖尿病(例如I型糖尿病)之IL-7結合蛋白。
在一些實施例中，本文中提供IL-7結合蛋白在製造用於治療本文中所揭示之疾病或病狀之藥劑中的用途。在一些實施例中，本文中提供IL-7結合蛋白在製造用於治療自體免疫性及/或發炎性疾病之藥劑中的用途。在一些實施例中，本文中提供IL-7結合蛋白在製造用於治療多發性硬化症之藥劑中的用途。在一些實施例中，本文中提供IL-7結合蛋白在製造用於治療類風濕性關節炎(RA)之藥劑中的用途。在一些實施例中，本文中提供IL-7結合蛋白在製造用於治療休格倫氏症候群之藥劑中的用途。在一些實施例中，本文中提供IL-7結合蛋白在製造用於治療全身性紅斑狼瘡(SLE)之藥劑中的用途。在一些實施例中，本文中提供IL-7結合蛋白在製造用於治療潰瘍性結腸炎之藥劑中的用途。在一些實施例中，本文中提供IL-7結合蛋白在製造用於治療糖尿病(例如I型糖尿病)之藥劑中的用途。
亦提供一種用於治療有需要個體之自體免疫性及/或發炎性病狀的方法，其包含向個體投與治療有效量的本文中所揭示之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，提供一種用於治療有需要個體之類風濕性關節炎(RA)的方法，其包含向該個體投與治療有效量的本文中所揭示之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，提供一種治療有需要個體之休格倫氏症候群的方法，其包含向該個體投與治療有效量的本文中所揭示之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，提供一種用於治療有需要個體之全身性紅斑狼瘡(SLE)的方法，其包含向該個體投與治療有效量的本文中所揭示之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，提供一種治療有需要個體之潰瘍性結腸炎的方法，其包含向該個體投與治療有效量的本文中所揭示之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中提供一種用於治療有需要個體之多發性硬化症的方法，其包含向該個體投與治療有效量的本文中所揭示之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中提供一種治療有需要個體之糖尿病(例如I型糖尿病)的方法，其包含向該個體投與治療有效量的本文中所揭示之IL-7結合蛋白。
在一些實施例中，本文中揭示一種用於治療患者之多發性硬化症的方法，其包含向該患者投與本文中所揭示之IL-7結合蛋白，其中該患者患有復發緩解性多發性硬化症。在一些實施例中，本文中揭示一種用於治療人類個體之自體免疫性或發炎性疾病的方法，其包含以可有效減小T H17細胞相對於T H1細胞之比率的量向該個體投與本文中所揭示之IL-7結合蛋白。在一些實施例中，本文中揭示一種用於治療人類個體之自體免疫性或發炎性疾病的方法，其包含以可有效減小T H細胞相對於(Foxp3+)T reg細胞之比率的量向該個體投與本文中所揭示之IL-7結合蛋白。
在一些實施例中，治療可包含進一步監測個體之疾病或病狀。治療可包含單一治療。治療可包含重複治療。治療可包含在個體之剩餘壽命內重複治療。治療可包含每日一次的治療。治療可包含每兩週一次的治療。在一些實施例中，可基於對患者或自患者獲得之樣本的評定來選擇治療。
醫藥組合物 / 投與途徑 / 劑量可將如本文中所描述之IL-7結合蛋白併入醫藥組合物中以用於治療本文中所描述之人類疾病。在一個實施例中，醫藥組合物包含IL-7結合蛋白以及一或多種醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。
此類組合物包含如由可接受之醫藥慣例所已知及需要的醫藥學上可接受之載劑。在一個實施例中，醫藥組合物包含醫藥學上可接受之載劑或賦形劑及IL-7結合蛋白，該IL-7結合蛋白在包含SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 16中所闡述序列之至少5個連續胺基酸的抗原決定基處展現對IL-7之結合。
本發明之醫藥組合物可用於治療性或防治性應用。在一些實施例中，提供包含IL-7結合蛋白及其醫藥學上可接受之載劑或賦形劑的醫藥組合物。在另一實施例中，提供包含1至500 mg本文中所揭示之IL-7結合蛋白的醫藥組合物。在另一實施例中，提供包含20至300 mg本文中所揭示之IL-7結合蛋白的醫藥組合物。在另一實施例中，提供包含50至200 mg本文中所揭示之IL-7結合蛋白的醫藥組合物。在另一實施例中，本文中提供包含50至200 mg IL-7結合蛋白之醫藥組合物，該IL-7結合蛋白為包含如SEQ ID NO: 3中所闡述之輕鏈胺基酸序列及如SEQ ID NO: 2中所闡述之重鏈胺基酸序列的抗體。在另一實施例中，本文中提供包含50至200 mg IL-7結合蛋白之醫藥組合物，該IL-7結合蛋白為包含如SEQ ID NO: 18中所闡述之輕鏈胺基酸序列及如SEQ ID NO: 19中所闡述之重鏈胺基酸序列的抗體。在另一實施例中，本文中提供包含50至200 mg IL-7結合蛋白之醫藥組合物，該IL-7結合蛋白為包含如SEQ ID NO: 20中所闡述之輕鏈胺基酸序列及如SEQ ID NO: 21中所闡述之重鏈胺基酸序列的抗體。在另一實施例中，本文中提供包含50至200 mg IL-7結合蛋白之醫藥組合物，該IL-7結合蛋白為包含如SEQ ID NO: 22中所闡述之輕鏈胺基酸序列及如SEQ ID NO: 23中所闡述之重鏈胺基酸序列的抗體。在一些實施例中，本文中所描述之醫藥組合物含有30 mg、31 mg、32 mg、33 mg、34 mg、35 mg、36 mg、37 mg、38 mg、39 mg、40 mg、41 mg、42 mg、43 mg、44 mg、45 mg、46 mg、47 mg、48 mg、49 mg、50 mg、51 mg、52 mg、53 mg、54 mg、55 mg、56 mg、57 mg、58 mg、59 mg、60 mg、61 mg、62 mg、63 mg、64 mg、65 mg、66 mg、67 mg、68 mg、69 mg、70 mg、71 mg、72 mg、73 mg、74 mg、75 mg、76 mg、77 mg、78 mg、79 mg、80 mg、81 mg、82 mg、83 mg、84 mg、85 mg、86 mg、87 mg、88 mg、89 mg、90 mg、91 mg、92 mg、93 mg、94 mg、95 mg、96 mg、97 mg、98 mg、99 mg、100 mg、101 mg、102 mg、103 mg、104 mg、105 mg、106 mg、107 mg、108 mg、109 mg或110 mg本文中所揭示之IL-7結合蛋白。
在一些實施例中，當在醫藥製劑中時，本發明之治療劑(IL-7結合蛋白)以單位劑型存在。在一些實施例中，給藥方案將由醫療專業人士及/或臨床因素來確定。如醫學技術中所熟知，任一患者之劑量視許多因素而定，包括患者之身材、體表面積、年齡、待投與之化合物、性別、投與時間及途徑、一般健康狀況及同時投與之其他藥物。例示性劑量可根據所治療之個體之身材及健康狀況以及所治療之病狀而變化。舉例而言，在一些實施例中，所揭示之抗體或功能片段可以1至100 mg/kg之劑量進行投與。在一些實施例中，所揭示之IL-7結合蛋白可以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100 mg/kg之劑量進行投與。在一些實施例中，本文中所揭示之醫藥組合物以大於至多約5 mL、10 mL、15 mL、20 mL、25 mL、30 mL、35 mL、40 mL、45 mL、50 ml、60 mL、70 mL、80 mL、90 mL、100 mL、110 mL、120 mL、130 mL、140 mL、150 mL、200 mL、300 mL、400 mL或500 mL之體積進行投與。在一些實施例中，本文中所揭示之醫藥組合物以此等劑量進行多次投與。在一些實施例中，將劑量投與單次或多次，例如每日一次、每週一次、每兩週一次或每月一次、每小時一次，或在所治療之疾病或病狀再發、復發或進展時進行投與。在一些實施例中，劑量之投與可藉由在約2至約24小時，諸如約2至約12小時，或約2至約6小時之時段內緩慢連續輸注來進行。
在一些實施例中，醫藥組合物包含用於非經腸、經皮、管腔內、動脈內、鞘內及/或鼻內投與或藉由直接注射至組織中的組合物。在一些實施例中，經由輸注或注射向患者投與醫藥組合物。在一個實施例中，提供包含用於靜脈內投與之IL-7結合蛋白的醫藥組合物。在一些實施例中，提供包含用於皮下投與之IL-7結合蛋白的醫藥組合物。在一些實施例中，動脈內、皮下、皮內、瘤內、結節內、髓內、肌內、藉由靜脈內(i.v.)注射、藉由靜脈內(i.v.)輸注或腹膜內向個體投與本文中所描述之醫藥組合物。在一些實施例中，藉由皮內或皮下注射向個體投與IL-7結合蛋白或其醫藥組合物。
在一些實施例中，藉由用於製備向個體投與之醫藥學上可接受之組合物的本身已知之方法來製備醫藥組合物，使得有效數量之IL-7結合蛋白與醫藥學上可接受之載劑在混合物中組合。適合的載劑描述於例如Remington's Pharmaceutical Sciences (Remington's Pharmaceutical Sciences, 第20版, Mack Publishing Company, Easton, Pa., USA, 2000)中。在此基礎上，組合物可包括(但非排他性地)與一或多種醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑締合的物質之溶液，且含於具有適合pH且與生理學流體等滲之緩衝溶液中。在一些實施例中，本文中所揭示之醫藥組合物為酸性的。在一些實施例中，本文中所揭示之醫藥組合物為鹼性的。在一些實施例中，醫藥組合物可具有約1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5或約14之pH。
在一些實施例中，適合的醫藥學上可接受之載劑包括不干擾醫藥組合物之生物活性之有效性的基本上化學惰性且無毒的組合物。適合的醫藥載劑之實例包括但不限於水、生理鹽水溶液、甘油溶液、N-(1(2,3-二油烯基氧基)丙基)N,N,N-三甲基氯化銨(DOTMA)、二油醯基磷脂醯基-乙醇胺(DOPE)及脂質體。在一些實施例中，此類組合物含有治療有效量的本文中所揭示之IL-7結合蛋白以及適合量的載劑以便提供用於向個體直接投與之形式。
醫藥組合物可非限制性地包括凍乾粉末或無菌水性或非水性可注射溶液或懸浮液，其可進一步含有使組合物與既定接受者之組織或血液實質上相容的抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及溶質。舉例而言，可存在於此類組合物中之其他組分包括水、界面活性劑(諸如Tween)、醇、防腐劑、多元醇、丙三醇及植物油。即用型注射溶液及懸浮液可由無菌粉末、顆粒、錠劑或濃縮溶液或懸浮液製備。
本文中所揭示之醫藥組合物可調配為多種形式且藉由多種不同手段投與。醫藥調配物可視需要以含有習知可接受之載劑、助劑及媒劑之調配物形式經口、經直腸或非經腸投與。如本文中所使用之術語「非經腸」包括皮下、靜脈內、肌內或胸骨內注射及輸注技術。投與包括注射或輸注，包括動脈內、心內、腦室內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及皮下、吸入、經皮、經黏膜、舌下、經頰及局部(包括上表皮、真皮、灌腸劑、滴眼劑、滴耳劑、鼻內、經陰道)投與。在一些例示性實施例中，投與途徑為經由注射，諸如肌內、靜脈內、皮下或腹膜內注射。
液體調配物可包括經口調配物、靜脈內調配物、鼻內調配物、經眼調配物、眼調配物、氣溶膠及其類似者。在某些實施例中，投與各種調配物之組合。在某些實施例中，組合物經調配以用於延長釋放概況。
本發明之醫藥組合物可與其他治療劑或治療組合投與。在一些實施例中，用於個體之治療可為手術、營養方案、身體活動、免疫療法、醫藥組合物、細胞移植、血液融合或其任何組合。
在一些實施例中，本文中所揭示之組合物/調配物為穩定的。在一些實施例中，「穩定的」調配物為於其中之IL-7結合蛋白在儲存時基本上保留其物理及/或化學穩定性及/或生物活性的調配物。用於量測蛋白質穩定性之各種分析技術可用於此項技術中且例如綜述於Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee編, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs (1991)及Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993)中。可在所選溫度下在所選時段內量測穩定性。在一些實施例中，使調配物在環境溫度下或在40℃下穩定至少1個月及/或在2至8℃下穩定至少1至2年。在一些實施例中，調配物在冷凍(例如，至-70℃)及解凍後為穩定的。在一些實施例中，如藉由色彩及/或透明度之目測檢查所觀測，或如藉由UV光散射(量測可見聚集物)或尺寸排阻層析(SEC)所量測，若蛋白質在聚集、沈澱及/或變性方面展示極少變化至無變化，則蛋白質在調配物中「保留其物理穩定性」。SEC量測未必為可見聚集物之前驅體的可溶性聚集物。在一些實施例中，若在給定時間處之化學穩定性使得蛋白質被視為保留其生物活性，則蛋白質在調配物中「保留其化學穩定性」。化學降解物種可為具生物活性及化學不穩定的。可藉由對蛋白質之化學改變形式進行偵測及定量來評定化學穩定性。化學改變可涉及可例如使用SEC、SDS-PAGE及/或基質輔助雷射解吸離子化/飛行時間質譜(MALDI/TOF MS)評估的大小修改(例如，截割)。其他類型之化學改變包括可例如藉由離子交換層析評估的電荷改變(例如，由於去醯胺化而發生)。
在一些實施例中，本文中所描述之IL-7結合蛋白為在乙酸鹽緩衝液中濃度為至少約2、3、4、5 mg/ml的二聚體且為濃度小於約5、4、3、2、1 mg/ml的單體。在一些實施例中，本文中所描述之IL-7結合蛋白為在乙酸鹽緩衝液中濃度為約5 mg/ml的二聚體且為濃度為約1 mg/ml的單體。在一些實施例中，IL-7結合蛋白為可逆二聚體。在一些實施例中，IL-7結合蛋白為二聚體。在一些實施例中，IL-7結合蛋白為單體。
在一些實施例中，舉例而言，若IL-7結合蛋白在給定時間處之生物活性在如抗原結合分析所測定製備醫藥調配物之時間處展現的生物活性之約10% (在分析之誤差內)內，則IL-7結合蛋白在醫藥調配物中「保留其生物活性」。
在一些實施例中，本文中所揭示之緩衝液係指藉由其酸-鹼結合物組分之作用抵抗pH之變化的緩衝溶液。在一些實施例中，緩衝液可為磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸。在一些實施例中，緩衝液選自由以下組成之群：乙酸鈉、碳酸鈉、檸檬酸鹽、甘胺醯甘胺酸、組胺酸、甘胺酸、離胺酸、精胺酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉、檸檬酸鈉、硼酸鈉、三(羥甲基)-胺基甲烷、二甘胺酸、麥黃酮、蘋果酸、丁二酸鹽、順丁烯二酸、反丁烯二酸、酒石酸、天冬胺酸或其混合物。本文中所揭示之組合物可包含抗氧化劑，包括抗壞血酸及/或甲硫胺酸。在一些實施例中，本文中所揭示之組合物包含防腐劑。在一些實施例中，舉例而言，防腐劑為可包括於調配物中以基本上減少微生物(包括其中之細菌作用)，因此有助於產生多次用調配物之化合物。潛在防腐劑之實例包括十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化六羥季銨；苯紮氯銨；苄索氯銨；酚；丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如，Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離性界面活性劑，諸如TWEEN™、PLURONICS™或聚乙二醇(PEG)。
在一些實施例中，本文中所揭示之組合物可進一步包含化學治療劑、細胞毒性劑、細胞介素、生長抑制劑、抗激素劑及/或保心藥。此類分子適當地以有效用於既定目的之量以組合形式存在。
在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白可例如藉由凝聚技術或藉由在膠態藥物遞送系統(例如，脂質體、白蛋白微球粒、微乳劑、奈米粒子及奈米膠囊)或巨乳液中進行界面聚合(分別例如羥甲基纖維素或明膠-微膠囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊)而包覆於所製備之微膠囊中。此類技術揭示於 Remington's Pharmaceutical Sciences第16版, Osol, A.編(1980)中。
在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白以持續釋放製劑形式製備。持續釋放製劑之適合實例包括含有抗體之固體疏水性聚合物之半滲透基質，該等基質呈成形製品之形式，例如膜或微膠囊。持續釋放基質之實例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸交酯、L-麩胺酸與γ乙基-L-麩胺酸酯之共聚物、不可降解乙烯-乙酸乙烯酯、諸如LUPRON DEPOT™之可降解乳酸-乙醇酸共聚物(由乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙立德(leuprolide acetate)構成之可注射微球體)及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。
在一些實施例中，本文中揭示醫藥組合物，其包含以1 mg/ml至500 mg/ml之濃度存在的IL-7結合蛋白，且其中組合物具有2.0至10.0之pH。組合物可進一步包含緩衝液系統、防腐劑、張力劑、螯合劑、穩定劑及界面活性劑。在一些實施例中，醫藥組合物為水性調配物，例如包含水之調配物。此調配物通常為溶液或懸浮液。在另一實施例中，醫藥調配物為水性溶液。在一些實施例中，水性調配物為包含至少50% w/w水之調配物。在一些實施例中，將水性溶液定義為包含至少50% w/w水之溶液。在一些實施例中，醫藥組合物為穩定的液體水性醫藥調配物，其包含濃度為20至150 mg/ml的本文中所描述之抗人類IL-7結合蛋白、張力劑、界面活性劑及pH為4.0至8.0的緩衝液系統。
醫藥組合物亦可包含額外穩定劑，該等穩定劑可進一步增強治療活性IL-7結合蛋白之穩定性。穩定劑可包括但不限於甲硫胺酸及EDTA，其保護多肽免遭甲硫胺酸氧化；以及非離子性界面活性劑，其保護多肽免遭與冷凍-解凍或機械剪切相關之聚集。在一些實施例中，組合物可進一步包含界面活性劑。界面活性劑可選自清潔劑；乙氧基化蓖麻油；聚乙二醇化甘油酯；乙醯化單甘油酸酯；去水山梨糖醇脂肪酸酯；聚氧化丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物(例如，泊洛沙姆(poloxamers)，諸如PLURONIC F68、泊洛沙姆188及407、Triton X-100)；聚氧乙烯去水山梨糖醇脂肪酸酯；聚氧乙烯及聚乙烯衍生物，諸如烷基化及烷氧基化衍生物(tween，例如Tween-20、Tween-40、Tween-80及Brij-35)；單甘油酸酯或其乙氧基化衍生物；二甘油酯或其聚氧乙烯衍生物；醇；甘油；凝結素及磷脂(例如，磷脂醯基絲胺酸、磷脂醯基膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯基肌醇、二磷脂醯基甘油及鞘磷脂)；磷脂(例如，二軟脂醯基磷脂酸)及溶血磷脂(例如，乙醇胺、膽鹼、絲胺酸或蘇胺酸之軟脂醯基溶血磷脂醯基-L-絲胺酸及l-醯基-sn-甘油基-3-磷酸酯)之衍生物以及溶血磷脂醯基及磷脂醯膽鹼之烷基、烷氧基(烷基酯)、烷氧基(烷基醚)-衍生物，例如溶血磷脂醯膽鹼、二軟脂醯基磷脂醯膽鹼之十二醯基及肉豆蔻醯基衍生物及極性頭部基團之修飾，亦即膽鹼、乙醇胺、磷脂酸、絲胺酸、蘇胺酸、甘油、肌醇及帶正電DODAC、DOTMA、DCP、BISHOP；溶血磷脂醯絲胺酸及溶血磷脂醯蘇胺酸以及甘油磷脂(例如，腦磷脂)；甘油糖脂(例如，吡喃半乳糖苷(galactopyransoide))；神經鞘糖脂(例如，腦醯胺、神經節苷脂)；十二烷基磷酸膽鹼；雞蛋溶血卵磷脂；梭鏈孢酸衍生物-(例如，牛磺酸-二氫梭鏈孢酸鈉等)；長鏈脂肪酸及其鹽C6-C12 (例如，油酸及辛酸)；醯基肉鹼及衍生物；離胺酸、精胺酸或組胺酸之N a-醯基化衍生物，或離胺酸或精胺酸之側鏈醯基化衍生物；二肽之N a-醯基化衍生物，其包含離胺酸、精胺酸或組胺酸及中性或酸性胺基酸之任何組合；三肽之N a-醯基化衍生物，其包含中性胺基酸及兩種帶電胺基酸之任何組合；DSS (多庫酯鈉，CAS註冊號[577-11-7])；多庫酯鈣(docusate calcium) (CAS註冊號[128-49-4])；多庫酯鉀(CAS註冊號[7491-09-0])；SDS (十二烷基硫酸鈉或月桂基硫酸鈉)；辛酸鈉；膽酸或其衍生物；膽酸及其鹽；及甘胺酸或牛膽素結合物；熊去氧膽酸；膽酸鈉；去氧膽酸鈉；牛膽酸鈉；甘膽酸鈉；N-十六基-N,N-二甲基-3-銨基-l-丙磺酸鹽；陰離子性(烷基-芳基-磺酸根)單價界面活性劑；兩性離子性界面活性劑(例如，N-烷基-N,N-二甲基銨基-l-丙磺酸鹽、3-膽醯胺基-l-丙基二甲基銨基-l-丙磺酸鹽)；陽離子性界面活性劑(四級銨鹼) (例如，鯨蠟基-三甲基溴化銨、氯化鯨蠟基吡錠)；非離子性界面活性劑(例如，十二烷基β-D-葡萄哌喃糖苷)；泊洛沙胺(poloxamine) (例如，Tetronic)，其為由環氧丙烷及環氧乙烷依序加成至乙二胺中衍生之四官能嵌段共聚物；或界面活性劑可選自咪唑啉衍生物之群或其混合物。
診斷 / 監測在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白用於診斷或預後之方法中。在一些實施例中，診斷包括確定個體是否患有疾病或病狀及/或確定疾病或病狀之嚴重程度。在一些實施例中，預後包括預測個體是否將罹患疾病或病狀；個體是否將需要治療；個體將需要之治療類型；個體是否將對治療起反應；個體是否及/或何時將經歷疾病發作、再發或復發；及症狀或疾病發作、再發或復發之嚴重程度或持續時間。在一些實施例中，診斷或預後之方法可包括例如基於診斷或預後來選擇或推薦用於個體之適合治療。在一些實施例中，接著可向個體投與所選或所推薦治療或治療組合。
在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白用於在自體免疫性或發炎性疾病(尤其牽涉致病性T H17細胞之彼等疾病)之預後中進行診斷或使用。此類疾病與高IL-17表現量相關。已報導在MS患者之血清及CSF中(Matusevicius, D.等人; Mult. Scler. 5, 101-104; 1999)及在獲自類風濕性關節炎患者之滑液中IL-17含量升高。IL-17亦牽涉牛皮癬(Homey等人; J. Immunol. 164(12):6621-32; 2000)，而Hamzaoui等人報導在白塞氏病中之高IL-17含量(Scand. J. Rhuematol.; 31:4, 205-210; 2002)。亦已在全身性紅斑狼瘡(SLE)中觀測到IL-17含量升高(Wong等人; Lupus 9(8):589-93; 2000)。
在一些實施例中，本文中所揭示之方法包含量測個體中或獲自個體之樣本上/中的IL-7之含量。在一些實施例中，量測IL-7之含量可藉由此項技術中已知之方法及分析來進行。在一些實施例中，將IL-7之含量與IL-7之參考含量進行比較。在一些實施例中，參考含量指示正常、非疾病、疾病或疾病階段。在一些實施例中，在個體中或自獲自個體之多個樣本中多次量測IL-7之含量。在一些實施例中，診斷或預後方法可與一或多種其他分析或測試結合進行以改善診斷或預後。舉例而言，其他標記物可包括於分析中。
分析個體之組織樣本可在一或多個時間點處進行。單獨的組織樣本可獲自個體以用於在一或多個時間點中之每一者處進行分析。可對相同組織樣本進行在一或多個時間點處進行分析。在一或多個時間點處進行分析可提供對藥物之有效性、疾病治療方案之縱向時程或其組合的評定。在一或多個時間點中之每一者處，可將組織樣本與相同參考物進行比較。可在一或多個時間點中之每一者處將組織樣本與不同參考物進行比較。一或多個時間點可為相同的。一或多個時間點可為不同的。一或多個時間點可包含在治療性投與之前的至少一個時間點、在治療性投與之後的至少一個時間點、在陽性疾病診斷之前的至少一個時間點、在疾病緩解診斷之後的至少一個時間點、在疾病治療方案期間的至少一個時間點或其組合。
如本文中所描述之方法可用於監測具有罹患疾病或病狀之風險的個體作為預防性措施。如本文中所描述之方法可單獨用於診斷及/或監測治療之功效。如本文中所描述之方法可與其他分析組合使用以用於診斷或監測(諸如細胞學分析或分子剖析)。
在一些實施例中，與參考樣本或參考含量相比，個體或樣本中IL-7或IL-7受體含量增加指示與疾病之存在相關的陽性診斷，例如個體患有相關疾病或病狀或患有更嚴重的疾病。在一些實施例中，患有疾病或病狀之個體包括疑似患有疾病或病狀之個體及/或處於罹患疾病或病狀之風險下的個體。舉例而言，個體可能尚未經正式診斷，但可能由於一或多種症狀之存在而疑似患有疾病或病狀。舉例而言，IL-7表現在患有淋巴球減少症的個體之循環中增加，且在循環性IL-7含量與CD4 +T細胞數目之間存在較強反相關(Mackall等人, 2011)。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白用於偵測淋巴球減少症。
在一些實施例中，可在投與療法之前進行用於預測個體對治療之反應性的方法。接著可考慮對何時選擇或推薦用於個體之適合治療的預測。可替代地，預測對治療之反應性的方法可在用療法治療之後進行且用於監測並預測個體對治療之反應。舉例而言，IL-7之全身含量可隨疾病之持續時間而增加(Khaibullin等人, 2017)，且已將增加的循環性IL-7鑑別為在MS中對IFN-β治療起反應的潛在預測性生物標記物。在一些實施例中，循環性IL-7在克羅恩氏及潰瘍性結腸炎患者以及患有SLE之患者中增加。在一些實施例中，可在樣本中基於樣本中之IL-7含量偵測到本文中所揭示之疾病或病狀。
獲自個體之樣本可包含組織、細胞、細胞片段、細胞細胞器、核酸、基因、基因片段、表現產物、基因表現產物、基因表現產物片段或其任何組合。樣本可為異質的或均質的。樣本可包含血液、尿液、腦脊髓液、精液、唾液、痰液、糞便、淋巴液、組織、黏液或其任何組合。樣本可為組織特異性樣本，諸如獲自生殖組織(諸如精子或卵子)、甲狀腺、皮膚、心臟、肺臟、腎臟、乳房、胰臟、肝臟、肌肉、平滑肌、膀胱、膽囊、結腸、腸、大腦、食道、前列腺或其任何組合之樣本。在一些實施例中，樣本可為無細胞樣本。
如本文中所使用，術語「無細胞」係指在自身體獲得樣本之前核酸序列出現在體內的狀態。舉例而言，樣本中之循環性無細胞核酸序列可能起源於在人體血流中循環之無細胞核酸序列。相比之下，自固體組織(諸如活檢體)提取之核酸序列一般不被視為「無細胞」。在一些情況下，無細胞DNA可包含胎兒DNA、母本DNA或其組合。在一些情況下，無細胞DNA可包含釋放至血漿中之DNA片段。在一些情況下，無細胞DNA可包含指示組織來源、疾病或病狀之循環性DNA。可自血液樣本分離無細胞核酸序列。可自血漿樣本分離無細胞核酸序列。
樣本可藉由諸如健康照護(或醫學)專業人士或機器人之另一個體或實體自個體獲得。醫學專業人士可包括醫師、護士、醫學技術人員或其他人員。在一些情況下，醫師可為專家，諸如腫瘤學家、外科醫師或內分泌學家。醫學技術人員可為專家，諸如細胞學家、抽血醫師、放射學家、肺科專家或其他人員。醫學專業人士可自個體獲得樣本以進行測試，或將個體轉至測試中心或實驗室以提交樣本。醫學專業人士可指示測試中心或實驗室對樣本進行適當測試或分析，諸如本發明之方法，包括測定基因序列資料、基因表現量、序列變異體資料或其任何組合。在一些情況下，醫學專業人士不必參與病狀或疾病之初始診斷或初始樣本採集。個體(individual) (諸如個體(subject))可替代地經由使用非處方套組來獲得樣本。套組可含有用於獲得如本文中所描述之樣本的收集單元或裝置、用於在樣本分析前儲存樣本之儲存單元及套組之使用說明書。
套組進一步提供一種套件(kit-of-parts)，其包含醫藥組合物以及使用說明書。為方便起見，套件可包含預定量之試劑與使用說明書。
在一些實施例中，本文中揭示包含本文中所揭示之IL-7結合蛋白的套組。在一些實施例中，套組可為診斷套組。在一些實施例中，套組包含本文中所揭示之IL-7結合蛋白及使用說明書。在一些實施例中，套組包含用於量測樣本中之IL-7含量的構件及使用說明書。套組可提供用於自個體獲得樣本之單元或裝置(例如，具有耦接至抽吸器之針頭的裝置)。套組可包括各自含有本文中所描述之單一單位劑量之套組組分的複數個注射器、安瓿、箔包或泡殼包裝。套組之容器可為氣密的、防水的(例如，不透濕氣或蒸發變化的)及/或不透光的。套組可包括適用於投與組分之裝置，例如注射器、吸入器、移液管、鑷子、計量匙、滴管(例如，滴眼管)、拭子(例如，棉簽或木拭子)或任何此類遞送裝置。在一些實施例中，裝置可為例如經封裝用於手術插入之醫學植入裝置。本文中所揭示之套組可包含使得方法能夠進行的一或多種試劑或儀器。在一些實施例中，試劑或儀器包括以下中之一或多者：適合的緩衝液(水性溶液)、包含可在其上進行定量反應之孔的載體。套組可為用於特定組織樣本之特定套組。此外，本文中所揭示之套組可包含對照。
除上述組分以外，套組中亦可提供使用說明書。此等說明書可以各種形式存在於套組中，諸如在適合的介質或基材(例如，其上印刷有資訊之一或多張紙)上之印刷資訊、在套組之封裝中、在包裝插頁中等。在一些實施例中，使用說明書可提供於其上已記錄資訊之電腦可讀媒體(例如，隨身碟(jump/thumb drive)、CD等)上，或提供於可經由用以存取網站處之資訊的網際網路使用的網址上。
裝置本發明之另一態樣提供一種預填充注射器或自動注射器裝置，其包含本文中所描述之IL-7結合蛋白或組合物。在一些實施例中，儲存於容器、預填充注射器、注射器或自動注射器裝置中之組合物含有本文中所揭示之IL-7結合蛋白。
陣列本文中揭示包含本文中所揭示之IL-7結合蛋白的載體。載體可為固體載體。視載體之既定用途而定，載體可採用範圍介於簡單至複雜之多種組態。載體可具有整體載片或板組態，諸如矩形或圓盤組態。可使用標準微板組態。在一些實施例中，表面可為平滑的或實質上平面的，或具有不規則性，諸如凹陷或隆起。在一些實施例中，載體可具有矩形橫截面形狀，其具有約10至200 mm、40至150 mm或75至125 mm之長度；約10至200 mm、20至120 mm或25至80 mm之寬度；及約0.01至5.0 mm、0.1至2 mm或0.2至1 mm之厚度。
在一些實施例中，載體可為有機或無機的；可為金屬(例如，銅或銀)或非金屬；可為聚合物或非聚合物；可為導電、半導電或非導電的(絕緣)；可為反射或非反射的；可為多孔或無孔的；等。如本文中所描述之載體可由任何適合材料形成，包括金屬、金屬氧化物、半導體、聚合物(尤其呈任何適合形式之有機聚合物，包括編織、非編織、模塑、擠塑、澆鑄等)、矽、氧化矽及其複合物。載體可為陣列。在一些實施例中，載體包含陣列。陣列可包含具有兩個或更多個離散區之有序空間排列。陣列可包含位於已知或未知離散區處之IL-7結合蛋白。歸因於進行此排列相對簡單，可選擇陣列之列及行排列。然而，空間排列可基本上為由使用者選擇之任何形式，且視情況呈圖案形式。陣列之區域可為任何適宜的形狀，包括圓形、橢圓形、卵圓形、環形或一些其他類似彎曲形狀，其中在某些實施例中，形狀可為用於產生陣列的特定方法之結果。
在一些實施例中，載體可為平面。在一些情況下，載體可為球形。在一些情況下，載體可為珠粒。在一些情況下，載體可為磁性的。在一些實施例中，磁性載體可包含磁鐵、磁赤鐵礦(maghemitite)、FePt、SrFe、鐵、鈷、鎳、二氧化鉻、肥粒鐵或其混合物。在一些實施例中，載體可為非磁性的。在一些實施例中，非磁性載體可包含聚合物、金屬、玻璃、合金、礦物或其混合物。在一些情況下，非磁性材料可為在磁性載體周圍之塗層。在一些情況下，磁性材料可分佈於磁性材料之連續相中。在一些實施例中，載體包含磁性及非磁性材料。在一些情況下，載體可包含磁性材料與非磁性材料之組合。在一些實施例中，本文中所揭示之IL-7結合蛋白直接或間接地與本文中所揭示之載體相關。
電腦控制系統本發明提供經程式化以實施本發明之方法的電腦控制系統。在一些實施例中，電腦系統經程式化或以其他方式經組態以與設備介接，該設備經組態以偵測IL-7及/或本文中所揭示之IL-7結合蛋白與部分之結合。電腦系統可為使用者之電子裝置或相對於電子裝置遠端定位之電腦系統。電子裝置可為行動電子裝置。
在一些實施例中，電腦系統包括中央處理單元(CPU，本文中亦稱「處理器」及「電腦處理器」)，其可為單核或多核處理器或用於並行處理之複數個處理器。在一些實施例中，電腦系統亦包括記憶體或記憶體位置(例如，隨機存取記憶體、唯讀記憶體、快閃記憶體)、電子儲存單元(例如，硬碟)、用於與一或多個其他系統通信之通信介面(例如，網路配接器)及周邊裝置，諸如快取記憶體、其他記憶體、資料儲存及/或電子顯示配接器。在一些實施例中，記憶體、儲存單元、介面及周邊裝置經由諸如母板之通信匯流排與CPU通信。在一些實施例中，儲存單元可為用於儲存資料之資料儲存單元(或資料儲存庫)。在一些實施例中，電腦系統藉助於通信介面可操作地耦接至電腦網路(「網路」)。在一些實施例中，網路可為網際網路、網際網路及/或商際網路，或與網際網路通信之內部網路及/或商際網路。在一些實施例中，網路為電信及/或資料網路。網路可包括一或多個電腦伺服器，其可實現分散式計算，諸如雲端計算。在一些實施例中，在藉助於電腦系統之一些情況下，網路可實施點對點網路，其可使得耦接至電腦系統之裝置能夠充當用戶端或伺服器。在一些實施例中，CPU執行可實施於程式或軟體中之機器可讀指令序列。指令可儲存於記憶體位置(諸如記憶體)中。指令可導引隨後可程式化之CPU或以其他方式對該CPU進行組態以實施本發明之方法。由CPU執行之操作之實例可包括提取、解碼、執行及寫回。在一些實施例中，CPU可為電路(諸如積體電路)之部分。系統之一或多個其他組件可包括於電路中。在一些情況下，電路為特殊應用積體電路(ASIC)。在一些實施例中，儲存單元可儲存檔案，諸如驅動器、程式庫及所保存程式。儲存單元可儲存使用者資料，例如使用者偏好及使用者程式。在一些情況下，電腦系統可包括在電腦系統外部的一或多個額外資料儲存單元，諸如位於經由內部網路或網際網路與電腦系統通信之遠端伺服器上。在一些實施例中，電腦系統經由網路與一或多個遠端電腦系統通信。舉例而言，電腦系統可與使用者之遠端電腦系統通信。遠端電腦系統之實例包括個人電腦(例如，攜帶型PC)、平板(slate/tablet) PC電話、智慧型電話或個人數位助理。使用者可經由網路存取電腦系統。
如本文中所描述之方法可藉助於機器(例如，電腦處理器)可執行程式碼來實施，該機器可執行程式碼儲存於電腦系統之電子儲存位置上，諸如儲存於記憶體或電子儲存單元上。機器可執行或機器可讀程式碼可以軟體之形式提供。在使用期間，程式碼可由處理器執行。在一些情況下，可自儲存單元檢索程式碼並且將其儲存於記憶體上以隨時供處理器存取。在一些情形下，可排除電子儲存單元，且將機器可執行指令儲存於記憶體上。在一些實施例中，程式碼可經預編譯且經組態以供與具有經調適以執行程式碼之處理器的機器一起使用，或可在運行時間期間進行編譯。程式碼可以程式設計語言形式提供，該程式設計語言可經選擇以使得程式碼能夠以預編譯或編譯時(as-compiled)方式執行。
本文中所提供之系統及方法之態樣(諸如電腦系統)可以程式設計實施。可將技術之各種態樣視為通常呈機器(或處理器)可執行程式碼及/或攜載於或實施於一種類型之機器可讀媒體中的相關資料之形式的「產品」或「製品」。機器可執行程式碼可儲存於電子儲存單元上，諸如記憶體(例如，唯讀記憶體、隨機存取記憶體、快閃記憶體)或硬碟。「儲存」型媒體可包括電腦、處理器或其類似者之任何或所有有形記憶體或其相關模組，諸如各種半導體記憶體、磁帶驅動器、磁碟驅動器及其類似者，其可在任何時間為軟體程式設計提供非暫時性儲存。所有或部分軟體可時常經由網際網路或各種其他電信網路通信。此類通信例如可使得能夠將一個電腦或處理器之軟體負載至另一者中，例如自管理伺服器或主電腦負載至應用程式伺服器之電腦平台中。因此，可承載軟體元件的另一類型之媒體包括諸如跨越局部裝置之間的實體介面、經由有線及光學陸上通訊線網路及經由各種空中鏈路使用的光波、電波及電磁波。亦可將攜載此類波之實體元件(諸如有線或無線鏈路、光學鏈路或其類似者)視為承載軟體之媒體。如本文中所使用，除非受限於非暫時性有形「儲存」媒體，否則諸如電腦或機器「可讀媒體」之術語係指參與向處理器提供指令以用於執行的任何媒體。
諸如電腦可執行程式碼之機器可讀媒體可採用許多形式，包括但不限於有形儲存媒體、載波媒體或實體傳輸媒體。非易失性儲存媒體包括例如光碟或磁碟，諸如任何電腦或其類似者中諸如可用於實施圖式中所示之資料庫等的儲存裝置中之任一者。易失性儲存媒體包括動態記憶體，諸如此電腦平台之主記憶體。有形傳輸媒體包括同軸電纜；銅線及光纖，包括包含電腦系統內之匯流排的電線。載波傳輸媒體可採用以下形式：電訊號或電磁訊號，或聲波或光波，諸如在射頻(RF)及紅外(IR)資料通信期間產生之聲波或光波。因此，電腦可讀媒體之常見形式包括例如：硬碟、磁帶、任何其他磁性媒體、CD-ROM、DVD或DVD-ROM、任何其他光學媒體、打孔卡紙帶、具有孔圖案之任何其他實體儲存媒體、RAM、ROM、PROM及EPROM、FLASH-EPROM、任何其他記憶體晶片或匣、傳送資料或指令之載波、傳送此載波之電纜或鏈路，或電腦可自其中讀取程式碼及/或資料之任何其他媒體。許多此等形式之電腦可讀媒體可參與將一或多個指令之一或多個序列攜載至處理器以供執行。
在一些實施例中，本文中所揭示之電腦系統可包括電子顯示器或與電子顯示器通信，該電子顯示器包含提供例如一或多個結果(來自先前實驗之即時結果或歸檔結果)、一或多個使用者輸入、來自程式庫或資料庫之參考值或其組合的使用者介面(UI)。UI之實例包括而不限於圖形使用者介面(GUI)及基於網站之使用者介面。
此外，本發明之方法及系統可藉助於一或多種演算法來實施。演算法在由中央處理單元執行時可藉助於軟體來實施。舉例而言，演算法可經由監督式學習來確定最佳化條件，以最佳化諸如用於本文中所揭示之方法中的緩衝液類型、緩衝液濃度、溫度、培育期、臨限值、診斷/預後指示的條件。
實例
實例 1 ： 食蟹獼猴中之 DRSPAI-L7B闡述研究以評估食蟹獼猴中之DRSPAI-L7B。部分1，評估0.1、1及10 mg/kg之三次單一劑量IV注射。在部分2中，在來自部分1之媒劑對照動物中重複給藥(四次SC注射) 30 mg/kg。收集血液樣本以經由量測STAT5磷酸化來評定藥物PK以及游離及總IL-7含量及DRSPAI-L7B之藥效學活性。
總抗體含量在GYROLAB上使用通用抗原捕獲及偵測方法來測定總抗體含量。藉由檢查所獲得資料來確定最大偵測峰血清濃度(C max)及觀測到其之時間(T max)。另外，使用非區室PK模型來計算AUC、總血清清除率(CL)；穩態下之分佈體積(Vss)及終末半衰期(t½)。(表3) 表 3 ： 單一遞增劑量部分 1 及重 複 劑量部分 2 之 DRSPAI-L7B (IV 投與 ) 的 平均 PK 參數
部分 1
劑量 (mg/kg) C max (ug/mL) AUC inf (hr*ug/mL) 半衰期 (hr) CL (mL/hr/Kg) V ss (mL/Kg)
0.1 3.12 (2.80-3.55) 721 (710-733) 350 (270-410) 0.14 (0.14-0.14) 82 (71-90)
1.0 37.2 (27.8-48.4) 8250 (7520-9060) 470 (350-560) 0.12 (0.11-0.13) 71 (58-80)
10.0 307 (262-337) 93100 (76800-112000) 420 (340-490) 0.11 (0.09-0.13) 66 (58-73)
部分 2 (30 mg/kg)
時期 C max (ug/mL) AUC i0-168 (hr*ug/mL)
第一劑量 320 (258-398) 41600 (32700-47300)
第二劑量(給藥後168 h) 463 (407-516) N/A
第三劑量(給藥後168 h) 556 (490-602) N/A
第四劑量 911 (688-1270) 119000 (94100-169000)
未觀測到目標介導之藥物處置(target mediated drug disposition；TMDD)，且隨著劑量自0.1 mg/kg增加至10 mg/kg，血清Cmax及AUC之增加為成劑量比例的。緩慢清除DRSPAI-L7B，平均半衰期為大約17±3.9天且在重複給藥時，藥物積聚為2.8倍。資料呈現於圖1A、圖1B及圖1C中。
使用酸解離橋接分析以使用DRSPAI-L7B進行捕獲來評定抗藥物抗體(ADA)之存在。在研究之部分1或部分2期間未偵測到ADA。
進行進一步研究以測定在皮下(SC)給藥後石蟹獼猴中的DRSPAI-L7B之PK及PD。評估0.1、1、3及10 mg/kg之四次單一劑量IV注射。在第1天藉由SC注射一次來投與該等劑量。
藉由使用線性上升/對數下將梯形法(linear up/log down trapezoidal method)計算自開始給藥至最末可定量時間點(AUC 0-t)之血清濃度時間曲線(AUC)下面積來測定DRSPAI-L7B之全身性暴露。藉由PK SUBMIT來確定最大觀測峰血清濃度(Cmax)及觀測到其之時間(Tmax)。 表 4 ： DRSPAI-L7B (SC 投與 ) 之 血清 PK 參數
參數 DRSPAI-L7B之劑量(mg/kg)
0.1 1 3 10
AUC 0-t(µg.h/ml) 平均值 943 6960 18900 60200
最小值 687 3870 17100 52700
最大值 1120 9130 21300 69700
C max(µg/ml) 平均值 2.01 18.1 34.2 119
最小值 1.76 16.9 29.5 108
最大值 2.21 19.0 39.1 128
T max(h) 平均值 168 96 96 96
最小值 96 48 96 96
最大值 168 96 96 168
在最高劑量10 mg/kg下，性別平均化平均Cmax為119 µg/mL (範圍介於108至128 µg/mL)，且平均AUC 0-t為60200 µg.h/mL (範圍介於52700至69700 µg.h/mL)。
在所有劑量下，存在總IL-7含量之劑量依賴性增加，從而顯示DRSPAI-L7B之目標接合。在≥1 mg/kg下，IL-7誘導的總Th及Tc淋巴球中之STAT5磷酸化亦存在劑量依賴性抑制，且在≥3 mg/kg下，Th淋巴球中之Bcl-2表現亦存在劑量依賴性降低。
在給與1.0 mg/kg之三隻猴中之兩者中偵測到低含量之抗DRSPAI-L7B抗體。在一隻雄性中，此引起減少的目標接合及較低的AUC。
實例 2 ： 對 IL-7 之 DRSPAI-L7B 結合親和力在25℃及37℃下藉由表面電漿子共振(SPR)使用Biacore 8K儀器來評定DRSPAI-L7B與人類及食蟹獼猴IL-7結合之動力學及親和力。DRSPAI-L7B對人類IL-7之親和力在25℃下為大約34 pM且在37℃下為大約67 pM (表5)。DRSPAI-L7B對食蟹獼猴IL-7之親和力在25℃下為大約53 pM且在37℃下為大約75 pM (表5)。 表 5 ： DRSPAI-L7B 對 人類及食蟹獼猴 IL-7 之結合動力學及親和力
25℃ 下之DRSPAI-L7B
分析物 平均ka (1/Ms) 平均kd (1/s) 平均KD (pM) SD (KD，pM)
hIL-7 6.49E+06 2.06E-04 31 5
hIL-7 4.65E+06 1.58E-04 34 7
cynoIL-7 3.17E+06 1.70E-04 53 6
37℃ 下之DRSPAI-L7B
分析物 平均ka (1/Ms) 平均kd (1/s) 平均KD (pM) SD (KD，pM)
hIL-7 8.28E+06 5.68E-04 69 5
hIL-7 1.47E+07 6.78E-04 46 8
hIL-7 1.10E+07 8.26E-04 75 12
hIL-7 5.90E+06 5.15E-04 87 3
hIL-7 ： 幾何平均KD (pM)* 67.4 (58.4 ，76.3)
cynoIL-7 6.17E+06 4.62E-04 73 5
*自所有實驗推導之幾何平均KD (pM，具有85%置信區間)
實例 3 ： 抑制 IL-7 傳訊 - 功能分析根據ICH GCP依據由國家、地區或研究中心倫理委員會審批通過之方案或機構審查委員會(Institutional Review Board；IRB)批准之方案，在患者知情同意之情況下獲得所有人類樣本。疾病PBMC由經批准之外部人類組織供應商供應。PBMC在-80℃下冷凍儲存直至使用。
健康志願者血液由血液供給單位(Blood Donation Unit)提供：藉由靜脈穿刺術抽取血液且將其轉移至含有肝素鈉(1U/mL)之罐或血袋中。對於全血分析或PBMC分離，收集血液且在1小時內使用。不同供體用於各實驗。細胞藉由自-80℃儲存中移除來解凍且立即置放於37℃下之水浴中。在將細胞懸浮液轉移至15 mL離心管中之後，極緩慢地添加溫熱培養基(RPMI + 10%加熱不活化FCS、1%青黴素/鏈黴素及1% GlutaMax)以逐漸降低DMSO濃度。一旦體積增加至10 mL，則將細胞離心且再次洗滌，隨後進行計數且再懸浮於適當體積之分析培養基中，以得到5×10 6個細胞/1毫升。
所有抗體在到達時經等分以供在-80℃下長期儲存。對於實驗，將抗體等分試樣解凍且儲存於4℃下不長於8週。
試劑 供應商
AIM V培養基 Gibco
重組人類IL-7 R&D Systems
BD Phosflow™裂解/固定緩衝液5× BD Bioscience
BD Phosflow™滲透緩衝液III BD Biosciences
流式細胞量測染色緩衝液 eBioscience
FcR阻斷試劑 Miltenyi Biotec
BD Phosflow™ PE小鼠抗STAT5 (pY694) BD Bioscience
試劑 供應商
小鼠抗人類CD8 FITC (純系：SK1) Biolegend
小鼠抗人類CD4 PerCP/Cy5.5 (純系：RPA-T4) Biolegend
小鼠抗人類CD3 BV510 (純系：SK7) Biolegend
抗小鼠Ig, κ/陰性對照補償粒子集 BD Bioscience
BD FACSDiva CS&T 研究 珠粒 BD Bioscience
所有抗體處理及rhIL-7刺激在培養基中以4×最終分析濃度(F.A.C)製成，隨後1:1混合且在室溫下培育5分鐘。在不存在抗體或IL-7刺激物之情況下，添加培養基。
對於全血：將100 μL之抗體:IL-7混合物等分至FACS導管中，隨後添加100 μL之全血。將導管藉由渦流平緩混合且在37℃下在含濕氣培育箱中培育20分鐘。在刺激時段結束時，添加2.5 mL預溫熱PHOSFLOW裂解緩衝液(1×)且將樣本在37℃下培育另外10分鐘。將2 mL PBS添加至懸浮液中且將導管離心以使細胞集結(300× g，在室溫下5分鐘)。捨棄上清液且在PBS中將細胞洗滌兩次以上。在最終洗滌之後，將細胞再懸浮於500 μL滲透緩衝液III (預先冷卻至-20℃)中且渦動以混合。將導管在冰上培育30分鐘，隨後在3 mL PBS中洗滌一次。將細胞再懸浮於100 μL PBS中且轉移至96孔圓底培養板中以進行染色。
對於PBMC處理：將50 μL之抗體:IL-7混合物添加至96孔圓底組織培養板之各孔中。將50 μL PBMC懸浮液添加至各處理孔(2.5×10 5個細胞/孔)中。將板在旋轉板搖動器上平緩混合，隨後在37℃下在含濕氣培育箱中培育20分鐘。在刺激時段結束時，添加250 μL預溫熱PHOSFLOW裂解緩衝液(1×)且將樣本在37℃下培育另外10分鐘。在固定之後，藉由離心集結細胞(300× g，在室溫下5分鐘)且在200 μL PBS中洗滌兩次。將細胞集結粒再懸浮於100 μL滲透緩衝液III (預先冷卻至-20℃)中且上下吸取以混合。將細胞在冰上培育30分鐘，隨後在200 μL PBS中洗滌一次且再懸浮於PBS中。
對於所有樣本：在滲透之後，將板離心(300× g，在室溫下5分鐘)，且將細胞集結粒再懸浮於1:5稀釋於含3% BSA之PBS的25 μL FcR阻斷試劑中。將細胞在室溫下培育10分鐘，隨後添加2.5 μL抗CD3 (BV510)、2.5 μL抗CD4 (PerCP/Cy5.5)、2.5 μL抗CD8 (FITC)、7.5 μL抗pSTAT5 (PE)及35 μL流式細胞量測染色緩衝液(每樣本總共50 μL)。在對照排除染色劑之情況下，改為添加當量體積之染色緩衝液。將板在旋轉板搖動器上簡單混合且在冰上避光培育30分鐘。將細胞在200 μL染色緩衝液中洗滌且再懸浮於200 μL染色緩衝液中以供在同一天在FACS Canto II上進行分析。
使用細胞計數器設置及追蹤(Cytometer Set-up and Tracking；CST)珠粒檢查儀器之效能。此為對儀器之QC檢查，設定基線且在使用之前最佳化各雷射器之電壓。校準之結果儲存於儀器上之CST軟體內。
使用抗小鼠IgG,κ/陰性對照補償珠粒根據製造商說明書來進行對儀器之補償。用於在實驗期間對細胞進行染色之相關抗體用於標記適當補償珠粒類型。使用經適當標記之珠粒藉由在FACS Diva軟體內可供使用的自動補償設施來進行對實驗之補償。在分析補償樣本之後，計算適當補償設定且將其應用於各實驗染色面板。pSTAT5 FACS分析：在FSC-A與FSC-H圖中採集細胞以排除二重峰。將單細胞採集至FSC-A與SSC-A圖中且在活淋巴球周圍進行閘控。將此等單細胞採集至AmCyan與FSC-A圖中且在CD3+群體周圍進行閘控。在CD3 +上產生PerCP-Cy5.5與FITC圖以鑑別CD4 +及CD8 +群體。對於pSTAT5，針對各子集創建PE螢光之直方圖。基於未刺激之樣本來設定陽性閘且將PE陽性統計百分比用於資料分析。
使用FlowJo軟體(版本10)分析資料且以Microsoft Excel (2010)試算表格式使用分批分析設施在FlowJo軟體內生成結果。在Excel試算表中將細胞群體以親代%形式製表。此親代%藉由歸一化為未刺激之對照而轉化為反應百分比，或藉由歸一化為未刺激之對照且自100 (理論最大反應百分比)減去此值而轉化為抑制百分比。
在已生成濃度反應曲線之情況下，將個體供體資料與非線性邏輯曲線擬合回歸擬合且在GraphPad Prism (版本6)中計算來自所有供體之IC 50之平均值(average) (平均值(mean)及中值)、範圍、SD及SEM。在進行統計測試之情況下，應用雙向ANOVA與用於多重比較之西達克氏校正(Sidak's correction)。將 p值＜0.05視為統計學上顯著的。*表示 p＜0.05；**表示 p≤0.01；***表示 p≤0.001；且****表示 p≤0.0001。
在全血分析中，在用1 ng/ml重組人類IL-7 (rhIL-7；58 pM)進行20分鐘刺激之後，藉由流式細胞量測在CD4 +T細胞中評定STAT5磷酸化。如圖2A及表6中所展示，DRSPAI-L7B防止IL-7經由STAT5以濃度依賴性方式傳訊，其中中值IC 50為34 pM (5.1 ng/mL)。A1290防止IL-7經由STAT5以濃度依賴性方式傳訊，其中中值IC 50為18 pM (0.00275 µg/ml)。A1291防止IL-7經由STAT5以濃度依賴性方式傳訊，其中中值IC 50為16 pM (0.00246 µg/ml)。A1294防止IL-7經由STAT5以濃度依賴性方式傳訊，其中中值IC 50為76 pM (0.0114 µg/ml)。在存在或不存在DRSPAI-L7B之情況下用34 pg/mL (2 pM)重組人類IL-7 (rhIL-7)刺激永生化T淋巴母細胞CCRF-CEM細胞。STAT5磷酸化藉由MSD對細胞裂解物進行評定。DRSPAI-L7B強力阻斷IL-7誘導之pSTAT5 (表6；IC 50＜1 pM)。 表 6. 功能分析中 DRSPAI-L7B 之效力之概述
分析 IL-7 DRSPAI-L7B  IC 50
ng/ml pM ng/ml pM
CCRF-CEM細胞中之pSTAT5 0.034 2 ＜0.15 ＜1
全血中之pSTAT5 1 58.8 5.1 34
T eff 及T mem 增殖(CD4 +) § 20 1,176 78 520
T eff 及T mem 增殖(CD4 +) § 10 588 79.5 530
藉由PBMC進行之IFN-γ產生 10 588 29.4 195.8
藉由T mem進行之IL-17產生 20 1,176 40.5 270
§使用EC80刺激與針對每批細胞測定之IL-7進行分析
IL-7 誘導的健康及疾病 T 細胞中之 STAT5 磷酸化在DRSPAI-L7B或抗RSV抗體(同型對照)之存在下，用rhIL-7刺激來自健康供體或IBD患者(兩名克羅恩氏病及一名潰瘍性結腸炎)之PBMC。固定所刺激細胞且藉由流式細胞量測來評定CD8 +(圖2B)、CD4 +(圖2C)及CD3 +(圖2D) T細胞中之STAT5磷酸化。資料展示為相對於未刺激條件的pSTAT5增加，平均值±SD，n=3。* p＜0.05，** p≤0.01，*** p≤0.001，經匹配雙向ANOVA與西達克氏多重比較校正。圖2B、圖2C及圖2D。
實例 4 ： 動態光散射分析對DRSPAI-L7B、A1290、A1291及A1294進行動態光散射(Dynamic Light Scattering；DLS)分析以表徵高階聚集物種及樣本異質性。
將各別抗體中之每一者濃縮至≥10 mg/ml且經由滲析至50 mM磷酸鈉pH 7.5或50 mM乙酸鈉pH 5.0緩衝液中進行緩衝液交換，隨後使用0.22 µm針筒過濾器歸一化為10 mg/ml。在過濾後，在40℃下以10 mg/ml之目標濃度將所有樣本加壓2週。在於加壓及未加壓條件下在兩種緩衝液中培育後，評估樣本。使用經Corning 6575密封件密封之96孔Corning Costar 3635板在25℃下在Wyatt DynaPro DLS板讀取器上一式三份運行100 µl樣本。
使用DYNAMICS v7.1.9軟體分析資料。資料分佈為以下峰：峰1 = 0.1至1 nm，峰2 = 1至10 nm，峰3 = 10至100 nm，峰4 = 100至1000 nm，峰5 = 1000至10000 nm。使用以下標準過濾資料：振幅必須在0與1之間，基線限值為1±0.01，且所有平方之總和(SOS)必須小於100。＞8 nm之Rh及峰2 ＜ 98%下之平均質量%與嚴重聚集風險相關。
A1290、A1291及A1294展示嚴重聚集風險，其全部展現＞8 nm之流體動力半徑(Rh)值。DRSPAI-L7B具有＜8 nm之Rh值且因此並未展現此聚集風險。 縮寫
γc 共用γ鏈
BV510 Brilliant Violet 510
CD(X) 分化簇(X)
CHO 中國倉鼠卵巢細胞
CST 細胞計數器設置及追蹤
DMSO 二甲亞碸
FAC 最終分析濃度
FACS 螢光活化細胞分選
FcR Fc受體
FCS 胎牛血清
FITC 異硫氰酸螢光素
FSC-(A/H/W) 正向散射-(面積/高度/寬度)
HEK 人類胚胎腎細胞
IBD 發炎性腸病
IC 50 50%抑制濃度
IL-7 介白素7
IL-7Rα 介白素7受體α
JAK 詹納斯(Janus)激酶
(e)LNB (電子)實驗室筆記型電腦
mAb 單株抗體
PBMCs 周邊血液單核細胞
PBS 磷酸鹽緩衝生理鹽水
PE 藻紅素
PerCP/Cy5.5 多甲藻素葉綠素蛋白複合物/花青5.5
SD 標準差
SEM 平均值之標準誤差
SSC-(A/H/W) 側面散射-(面積/高度/寬度)
pSTAT5 磷酸化STAT5
rhIL-7 重組人類IL-7
RPMI 洛斯維帕克紀念研究所培養基(Roswell Park Memorial Institute medium)
STAT5 訊息轉導及轉錄活化因子5
實例 5 ： DRSPAI-L7B 對 人類 PBMC 中之 細胞介素產生的影響DRSPAI-L7B用於查詢IL-7在Th1及Th17功能以及分化中發揮之作用。評定DRSPAI-L7B對來自在CD3促效抗體之存在下用IL-7刺激之健康PBMC之細胞介素分泌的影響。
健康志願者血液由血液供給單位提供：藉由靜脈穿刺術抽取血液且將其轉移至含有肝素鈉(1U/mL)之罐或血袋中。收集血液且將其用於PBMC分離。
將血液用PBS稀釋2×，分層至Accuspin導管中之15 mL聚蔗糖上且不間斷地以800 rcf離心20分鐘。用滴管小心地移除血漿且將含有PBMC之層小心地轉移至50 mL導管中。將PBMC在50 mL PBS (250 rcf，10分鐘)中洗滌兩次且接著再懸浮於50 mL RPMI+10% FCS+L-麩醯胺中並使用Vi-cell XR計數。
以5×10 6個細胞/毫升將PBMC再懸浮於培養基中。在培養基中以所需最終濃度之2.5×製備抗RSV抗體(同型對照)及DRSPAI-L7B之抗體稀釋液。混合相等體積之細胞懸浮液及抗體稀釋液(150 μL)且在室溫下培育30 min。在培養基中以最終濃度之5×製備IL-7且將20 μL添加於96孔U形底聚苯乙烯板之所需孔中，該板已在4℃下用10 μg/mL抗CD3預塗佈整夜。將培養基添加於所有其餘孔中。將80 μL之混合細胞懸浮液/抗體稀釋液(2×10 6個細胞/孔)添加至96孔板之各孔中，且將其在37℃、5% CO2下培育48小時。
在48小時之後，將板以300 rcf離心5分鐘且在不干擾集結粒之情況下移除上清液並轉移至新的96孔U形底板中。上清液在收穫之後立即用於ELISA/MSD或儲存於-80℃下直至進一步使用。
抗RSV IgG1之儲備濃度為2.8 mg/mL。在使用當天，解凍且稀釋至適當濃度。DRSPAI-L7B儲備濃度為11.33 mg/mL。在使用當天，解凍且稀釋至適當濃度。重組人類IL-7購自R&D systems。將凍乾蛋白質在無菌PBS+0.1%牛血清蛋白中再懸浮至25 µg/mL且將50 μL等分試樣儲存於-20℃下。在使用當天，解凍且稀釋至適當濃度。抗CD3純系HIT3a.儲備液為1 mg/mL。在使用當天稀釋至適當濃度。 其他材料
試劑 公司
RPMI Gibco
FCS In house
L-麩醯胺酸 In house
96孔平底型TC處理之聚苯乙烯板 Costar
96孔U形底型TC處理之聚苯乙烯板 Greiner
DPBS Gibco
鋁箔蓋 Beckman Coulter
板密封件 Greiner bio-one
U-plex生物標記物組1 (人類) Mesoscale Discovery
ECL訊號源自MSD儀器且使用各分析物之標準曲線將其轉換為濃度。對於資料經歸一化之圖式，將抗CD3 +IL-7樣本之平均值設定為100%且將所有其他值歸一化為彼平均值。將抗體濃度進行對數變換且針對細胞介素濃度進行繪製。無IL-7 (僅抗CD3)樣本展示於各圖式中以進行比較。對於曲線擬合，使用來自Graphpad Prism之以下非線性擬合：log(抑制劑)相對於反應(三個參數)，且藉由Graphpad Prism計算IC 50值。
DRSPAI-L7B以濃度依賴性方式抑制IFN-γ (圖3A)及IL-10 (圖3B)分泌(IFN-γ平均IC 50=195.8±101 pM；IL-10平均IC 50=207.2±86 pM)。資料呈現n=6名獨立供體之平均值±SEM，在3次獨立實驗中評定。圖3C、圖3D、圖3E、圖3F、圖3G說明在rhIL-7及抗CD3之存在下DRSPAI-L7B對IL-2的抑制。在5名供體中進行IL-7刺激之後，IL-2產生增加。此增加完全藉由DRSPAI-L7B抑制。
實例 6 ： DRSPAI-L7B 抑制記憶 T 細胞之 細胞介素產生為準確測定IL-7在Th17細胞功能及分化中之作用，使用『poised 12Th17』分析來剖析Th17相關細胞介素之分泌。自健康供體分離T mem細胞且在DRSPAI-L7B之存在下與IL-7一起培育。
自血液供給單位(BDU)中之供體收集人類全血。通常，藉由靜脈穿刺術每供體收集200 mL且將抗凝劑檸檬酸鹽-右旋糖溶液(ACD，Sigma，目錄號C3821)立即添加至各樣本中。以15%添加ACD (例如30 mL ACD添加至200 mL血液中)。在收集2小時內，且使用微生物安全櫃，以每導管30 mL (max)將血液均勻分配至預填充LEUCOSEP導管(Greiner，目錄號227288)中。將血液在室溫下在擺桶轉子(swing bucket rotor)中在不施加制動的情況下以800× g離心15分鐘。將PBMC在PBS (500× g，10分鐘)中洗滌且接著再懸浮於10 mL PBS中並使用NucleoCounter計數。將細胞再次以500× g離心且以5×10^7個細胞/毫升之濃度將細胞集結粒再懸浮於FACS緩衝液中。
將人類CD4 +記憶T細胞(T mem) EasySep富集混合液以50 µL/mL添加至細胞懸浮液中。將細胞在室溫下培育10分鐘，其後以50 µL/mL添加EasySep磁性粒子。將懸浮液再次在室溫下培育10分鐘，其後將細胞懸浮液置放於EasySep磁體中持續10分鐘。接著將細胞懸浮液轉移至新鮮導管中，同時仍置放於磁體內以確保負性選擇。將細胞以500× g離心10分鐘且再懸浮於細胞培養基中。使用NucleoCounter測定細胞計數。
使細胞在37℃及5% CO 2下在培養基中靜置整夜。次日，將細胞離心且以2.5×10^5個細胞/毫升之濃度再懸浮於分析培養基中。將重組hIL-7以20n g/mL之最終濃度添加至細胞中。接著在37℃及5% CO 2下在DRSPAI-L7B之存在下將細胞培育4天，其後在37℃及5% CO 2下將該等細胞用10 nM PMA及1 µM離子黴素刺激16小時。
使用 MSD 偵測來自上清液之 IL-17在16小時之PMA及離子黴素刺激之後，將細胞離心且將40 µL之上清液轉移至經0.5%阻斷劑B預阻斷的MSD板中。用抗IL-17A捕獲抗體塗佈此等MSD板。將樣本在室溫下培育2小時，同時搖動，其後用PBS及0.05% Tween-20洗滌板。接著添加經MSD SULFO-TAG試劑標記之10 µL IL-17特異性偵測抗體且將樣本在室溫下培育另外2小時，同時搖動。將板再次在PBS及0.05% Tween-20中洗滌三次且將2×讀取緩衝液T添加至樣本中。在Sector Imager上讀取板。
偵測其他細胞介素U-Plex MSD套組經設計以使得能夠研究DRSPAI-L7B對IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α及CCL3之分泌的影響。藉由用連接子偶合捕獲抗體塗佈板來製備MSD U-Plex板。各捕獲抗體經生物素化且具有指派至其之獨特連接子。將上清液以1/100稀釋且轉移至MSD板中。將樣本在室溫下培育1小時，同時搖動，其後用PBS及0.05% Tween-20洗滌板。隨後添加經MSD SULFO-TAG試劑標記之50 µL特異性偵測抗體且將樣本在室溫下培育另外一小時，同時搖動。將板再次在PBS及0.05% Tween-20中洗滌三次且將2×讀取緩衝液T添加至樣本中。在Sector Imager上讀取板。
以11.33 mg/mL之儲備濃度在20 mM組胺酸、180 mM海藻糖、40 mM精胺酸、8 mM甲硫胺酸、0.05 mM EDTA pH 6.0中製造DRSPAI-L7B抗體。在分析培養基中將抗體稀釋至20 µg/mL之濃度。接著在分析培養基中進行1:3連續稀釋以生成10點劑量反應曲線。將稀釋液轉移至分析板中，從而確保抗體之最高最終分析濃度為10 µg/mL。
BRL-54319MM (雷帕黴素(Rapamycin))用作分析中之陽性對照，在分析培養基中之最終分析濃度為1 µM。
將重組人類IL-7在無菌PBS中再懸浮至25 µg/mL且將50 μL等分試樣儲存於-20℃下。將等分試樣在使用當天解凍且稀釋至適當濃度。 其他材料
試劑 公司
預填充Leucosep導管 Greiner
人類IL-17基礎套組 MSD
Easy50 EasySep磁體 Stemcell
磷酸緩衝生理鹽水，無Ca2+/Mg2+ (PBS) Gibco
IMDM Gibco
96孔Costar圓底聚苯乙烯無菌板，帶蓋，透明 Costar
加熱不活化胎牛血清 Hyclone
Xvivol5 Lonza
青黴素鏈黴素(Penstrep) Invitrogen
Easysep人類記憶CD4+ T細胞富集套組 Stem cell
L-麩醯胺酸 Invitrogen
MEM非必需胺基酸 Invitrogen
HEPES Invitrogen
PMA-佛波醇12-肉豆蔻酸鹽13-乙酸酯 Sigma
離子黴素 Sigma
丙酮酸鈉 Invitrogen
U-plex生物標記物組1 (人類)套組 Mesoscale Discovery
CellTiter-Glo Promega
FACS緩衝液：含有2%加熱不活化FBS之無菌PBS。細胞培養基：450 mL IMDM、50 mL FBS、5 mL青黴素鏈黴素、5 mL L-麩醯胺酸、5 mL非必需胺基酸及5 mL丙酮酸鈉。分析培養基：500 mL Xvivo 15、5 mL青黴素鏈黴素、5 mL L-麩醯胺酸、5 mL HEPES及5 mL丙酮酸鈉。
將所有資料歸一化為各板上8個高對照孔及8個低對照孔之平均值。接著應用具有以下式之四參數曲線擬合。
其中a為最小值，b為希爾斜率(Hill slope)，c為XC50，且d為最大值。資料呈現為平均IC 50與n次實驗之平均值之標準差。
將自健康供體血液分離之CD4 +T mem細胞在DRSPAI-L7B之存在下用IL-7培育4天，其後其外加有PMA/離子黴素持續16小時，隨後收穫。藉由MSD評定上清液中之細胞介素分泌。DRSPAI-L7B處理引起對IL-17 (圖4A，IC 50=270±31.59 pM)、TNFα (圖4B，IC 50=127.1±89.83 pM)、IL-6 (圖4C，IC 50=202.07±99.64 pM)、IL-10 (圖4D，IC 50=197.48 ±148.91)、INFγ (圖4E，IC 50=157.98±89.55)及CCL3 (圖4F，IC 50=163.83±85.96)分泌之濃度依賴性抑制。亦觀測到IL-6、IL-10、IFNγ、TNFα及CCL3之劑量依賴性抑制。將對此等細胞介素產生之抑制表述為用雷帕黴素(1 µM)陽性對照物達成之百分比。
實例 7 ： T 細胞 群體分析鑒於T細胞在MS中之重要作用，在來自RRMS、PPMS及SPMS患者之PBMC中分析T細胞群體。
根據ICH GCP依據由國家、地區或研究中心倫理委員會審批通過之方案或機構審查委員會(IRB)批准之方案，在患者知情同意之情況下獲得所有人類樣本。
自BDU血液分離健康PBMC且冷凍儲存於液氮中直至使用。疾病PBMC由經批准之外部人類組織供應商供應。藉由靜脈穿刺術抽取健康對照血液且將其轉移至具有肝素鈉抗凝劑(1U/mL)之容器中。收集血液且在1小時內使用以進行PBMC分離。
使用預先製備及冷凍之健康對照人類PBMC，且藉由使血液在15 mL聚蔗糖上分層來製備PBMC。將導管在制動器斷開的情況下以800 g離心20分鐘。將界面處之單核細胞層轉移至50 mL法爾康導管(Falcon tube)中，藉由用PBS注滿至45 mL來洗滌且以300 g離心10分鐘。將集結粒再懸浮於冷凍培養基A (60:40 FCS:培養基)中，逐滴添加5%原始血液體積且接著添加等體積之冷凍培養基B (80:20 FCS:DMSO)以減小滲壓衝擊。將細胞轉移至冷凍小瓶(1毫升/小瓶(約1×10 7個細胞))中且在-80℃下在Mr Frosty冷凍容器中冷凍至多1週，隨後轉移至液氮中以供長期儲存。
PBMC 復原細胞藉由自液氮儲存中移除解凍且立即置放於37℃下之水浴中直至解凍。在將細胞懸浮液轉移至50 mL離心管中之後，極緩慢地添加培養基(RPMI + 10%加熱不活化FCS、1%青黴素/鏈黴素及1%麩醯胺)以逐漸降低DMSO濃度。一旦體積增加至30 mL，則將細胞以300 g離心10分鐘，且再懸浮於5 mL培養基中，隨後進行計數，與培養基一起構成15 mL，如上離心且將細胞再懸浮於適當體積之培養基中，以得到5×10 6個細胞/1毫升。
在5次個別實驗中之每一者中，將兩名健康對照(HC)、兩名RRMS、一名PPMS及一名SPMS、供體PBMC樣本如上進行解凍且如下處理細胞。不同供體用於各實驗，HC廣泛地與所用疾病患者供體在年齡及性別上匹配。
T 細胞 表現型流式細胞量測分析在PBMC以5×10 6個/mL再懸浮於培養基中後，將100 μL細胞轉移至FACS導管(用於完全染色)及額外50 μL HC樣本(用於FMO對照導管)中。藉由添加2 mL FACS緩衝液來洗滌細胞，以300 g離心5分鐘且將集結粒再懸浮於殘餘體積中。添加5 μL人類FcX Trustain阻斷液持續10分鐘，隨後添加100 μL抗體染色混合液且在室溫下培育30分鐘。藉由添加2 mL FACS緩衝液來洗滌細胞，以300 g離心5分鐘且將集結粒再懸浮於殘餘體積中。添加500 μL經稀釋之存活/死亡可固定Aqua死亡細胞染色劑且在室溫下培育25分鐘。藉由添加2 mL FACS緩衝液來洗滌細胞，以300 g離心5分鐘且將集結粒再懸浮於殘餘體積中。添加200 μL FACS緩衝液且在同一天使用BD FACS Canto II分析樣本。
使用細胞計數器設置及追蹤(CST)珠粒檢查儀器之效能。此為對儀器之QC檢查，設定基線且在使用之前最佳化各雷射器之電壓。校準之結果儲存於儀器上之CST軟體內。
使用UltraComp補償珠粒根據製造商說明書來進行對儀器之補償。用於在實驗期間對細胞進行染色之相關抗體用於標記補償珠粒。使用經適當標記之珠粒藉由在FACS Diva軟體內可供使用的自動補償設施來進行對實驗之補償。在分析補償樣本之後，計算補償設定且將其應用於各實驗染色面板。
試劑
PBS (w/o Ca 2+及Mg 2+)
試劑
RPMI 1640
L-麩醯胺酸200 mM
青黴素/鏈黴素
加熱不活化FCS
DMSO
FcX Trustain阻斷試劑
BD Horizon Brilliant染色緩衝液
抗人類CD8 AF488 (純系：RPA-T8)
抗人類CD25 PE (純系：BC96)
抗人類CD4 PcrCP/Cy5.5 (純系：RPA-T4)
抗CD45RO PE/Cy7 (純系：UCHL1)
抗CCR7 AF647 (純系：G043H7)
抗CD20 APC/Fire750 (純系：2H7)
抗CD 127 BV421 (純系：A019D5)
抗CD 14 BV510 (純系：M5E2)
抗CD 19 BV510 (純系：SJ25C1)
抗CD56 BV510 (純系：5.1H11)
抗CD 16 BV510 (純系：3G8)
Aqua可固定存活/死亡染色劑
UltraComp cBeads補償粒子集
BD FACSDiva CS&T研究珠粒
設備描述
Muse細胞分析儀(計數器)
BD Canto II流式細胞儀
在BD FACS Canto II流式細胞儀上使用BD Biosciences FACS Diva軟體(v8.0.1)採集樣本。用FlowJo軟體(v10.0.8)分析所得經補償.fcs檔案且使用軟體內之分批分析設施在Excel中生成結果。
在來自RRMS、PPMS及SPMS患者之PBMC中分析T細胞群體。自患者生成資料，其中所有患者接受治療(10/10 RRMS患者接受那他珠單抗(natalizumab)，且所有進行性MS患者接受類固醇及/或對症治療)，觀測到T reg細胞之減少。藉由流式細胞量測基於細胞表面上之CD45RO、CCR7、CD127及CD25表現剖析來自健康對照及MS患者之CD4 +(圖5A)、CD8 +(圖5B)及調節性T細胞(圖5C)。在CD4 +或CD8 +亞群中之健康與疾病T細胞群體之間未見差異。與HC相比，RRMS及PPMS T reg群體顯著減少，在SPMS患者中之T reg數值中未發現差異。如藉由單向ANOVA與杜奈特多重比較測試(Dunnett multiple comparison test)所測試，***0＜0.0001，*0＜0.05。所呈現之資料表示n=每組5至10名供體之平均值±SEM，在5次獨立實驗中進行分析。效應記憶=CD45RO +CCR7 -，中樞記憶=CD45RO +CCR7 +，原生=CD45RO -CCR7 +，效應=CD45RO -CCR7 -，T reg=CD127 low/-CD25 +。
實例 8 ： STAT5 磷酸化根據ICH GCP依據由國家、地區或研究中心倫理委員會審批通過之方案或機構審查委員會(IRB)批准之方案，在患者知情同意之情況下獲得所有人類樣本。
自BDU血液分離健康PBMC且冷凍儲存於液氮中直至使用。疾病PBMC由經批准之外部人類組織供應商供應。
藉由靜脈穿刺術抽取健康對照血液且將其轉移至具有肝素鈉抗凝劑(1U/mL)之容器中。收集血液且在1小時內使用以進行PBMC分離。
使用預先製備及冷凍之健康對照人類PBMC，且藉由使血液在15 mL聚蔗糖上分層來製備PBMC。將導管在制動器斷開的情況下以800 g離心20分鐘。將界面處之單核細胞層轉移至50 mL法爾康導管中，藉由用PBS注滿至45 mL來洗滌且以300 g離心10分鐘。將集結粒再懸浮於冷凍培養基A (60:40 FCS:培養基)中，逐滴添加5%原始血液體積且接著添加等體積之冷凍培養基B (80:20 FCS:DMSO)以減小滲壓衝擊。將細胞轉移至冷凍小瓶(1毫升/小瓶(約1×10 7個細胞))中且在-80℃下在Mr Frosty冷凍容器中冷凍至多1週，隨後轉移至液氮中以供長期儲存。
細胞藉由自液氮儲存中移除解凍且立即置放於37℃下之水浴中直至解凍。在將細胞懸浮液轉移至50 mL離心管中之後，極緩慢地添加培養基(RPMI + 10%加熱不活化FCS、1%青黴素/鏈黴素及1%麩醯胺)以逐漸降低DMSO濃度。一旦體積增加至30 mL，則將細胞離心(300 g，10分鐘)，再懸浮於5 mL培養基中且計數，接著用培養基注滿至15 mL，如上離心且將細胞再懸浮於適當體積之培養基中，以得到5×10 6個細胞/毫升。
在5次個別實驗中之每一者中，將兩名健康對照(HC)、兩名RRMS、一名PPMS及一名SPMS供體PBMC樣本如上進行解凍且如下處理細胞。不同HC供體用於各實驗，廣泛地與所用疾病患者供體在年齡及性別上匹配。
DRSPAI-L7B 在 T 細胞 中 對 IL-7 誘導性 pSTAT5 之抑制在PBMC以5×10 6個/mL再懸浮於培養基中後，將450 μL細胞轉移至15 mL法爾康管中且與含有5 μL近紅外存活/死亡染色劑之5 mL PBS一起培育。藉由添加9 mL全培養基來洗滌細胞，離心(300 g，5分鐘)且以5×10 6個細胞/毫升將細胞集結粒再懸浮於AIM V無血清培養基中。所有抗體處理及rhIL-7刺激係在1:1 (IL-7:mAb)混合及在室溫下培育10分鐘之前以4×最終分析濃度在AIM V無血清培養基中製得。在不存在抗體或IL-7刺激物之情況下，添加培養基。所用IL-7之最終濃度為1 ng/mL (57 pM)。所用mAb之最終濃度：500 ng/mL (3.33 nM)。
將100 μL之PBMC懸浮液添加至每供體的四個FACS導管中(5×10 5個細胞/測試)。100 μL之抗體：將IL-7混合物添加至適當FACS導管(僅培養基、僅IL-7、IL-7 + DRSPAI-L7B或IL-7 + 抗RSV同型對照抗體)中。平緩混合導管，隨後在37℃下在含濕氣培育箱中培育20分鐘。在刺激時段結束時，將細胞以300 g離心5分鐘，再懸浮細胞集結粒且添加250 μL之預溫熱PHOSFLOW固定緩衝液(1×)。將樣本在37℃下培育另外10分鐘。在固定之後，藉由離心(300 g，5分鐘)使細胞集結且在2 mL PBS中洗滌。將細胞集結粒再懸浮於100 μL冰冷滲透緩衝液III中且平緩地渦流以混合。將細胞在冰上培育30分鐘，隨後在1 mL PBS中洗滌一次且離心(300 g，5分鐘)。將細胞在2 mL PBS中洗滌，接著離心(300 g，5分鐘)。
在滲透後，將細胞集結粒再懸浮於1:5稀釋於FACS緩衝液中的25 μL FcR阻斷試劑中。將細胞在室溫下培育10分鐘，隨後添加偵測抗體染色混合液：5 μL抗CD3 (PerCP/Cy5.5)、5 μL抗CD4 (AF488)、5 μL抗CD8 (APC)、20 μL抗pSTAT5 (PE)及15 μL FACS緩衝液(每測試總共50 μL)。在FMO對照排除染色劑之情況下，改為添加當量體積之FACS緩衝液。將導管簡單混合且在室溫(RT)下避光培育30分鐘。將細胞在2 mL FACS緩衝液中洗滌，離心(300 g，5分鐘)且將集結粒再懸浮於100 μL FACS緩衝液中以供在同一天使用FACS Canto II流式細胞儀進行分析。
使用細胞計數器設置及追蹤(CST)珠粒檢查FACS Canto II儀器之效能。此為對儀器之QC檢查，設定基線且在使用之前最佳化各雷射器之電壓。校準之結果儲存於儀器上之CST軟體內。
使用UltraComp補償珠粒根據製造商說明書來進行對儀器之補償。用於在實驗期間對細胞進行染色之相關抗體用於標記適當補償珠粒類型。對於存活/死亡細胞染料之補償，將1 μL未經稀釋之染料添加至1滴ArcAmine反應珠粒中，培育30分鐘，洗滌，且在運行樣本之前立即添加ArcAmine負性珠粒。使用經適當標記之珠粒藉由在FACS Diva軟體內可供使用的自動補償設施來進行對實驗之補償。在分析補償樣本之後，計算補償設定且將其應用於各實驗染色面板。
抗體及試劑對於實驗，將抗體等分試樣解凍且儲存於4℃下不長於8週。DRSPAI-L7B (抗IL-7)及抗RSV同型對照。
試劑 供應商
PBS (w/o Ca 2+及Mg 2+) Life Technologies
RPMI 1640 Life Technologies
L-麩醯胺酸200 mM Life Technologies
青黴素/鏈黴素 Life Technologies
加熱不活化FCS Life Technologies
AIM V培養基 Gibco
重組人類IL-7 R&D Systems
BD Phosflow™裂解/固定緩衝液5× BD Bioscience
BD Phosflow™滲透緩衝液III BD Biosciences
FcX Trustain阻斷試劑 BioLegend
BD Phosflow™ PE小鼠抗STAT5 (pY694) BD Bioscience
小鼠抗人類CD8 APC (純系：SK1) BioLegend
小鼠抗人類CD4 BioLegend
試劑 供應商
AF488 (純系：RPA-T4)   
小鼠抗人類CD3 PcrCP/Cy5.5 (純系：SK7) BioLegend
近紅外可固定存活/死亡染色劑 Life Technologies
UltraComp cBeads補償粒子集 Life Technologies
ArcAmine反應珠粒 Life Technologies
BD FACSDiva CS&T研究珠粒 BD Biosciences
設備描述
Muse細胞分析儀(計數器)
BD Canto II流式細胞儀
在BD FACS Canto II流式細胞儀上使用BD Biosciences FACS Diva軟體(v8.0.1)採集樣本。用FlowJo軟體(v10.0.8)分析所得經補償.fcs檔案且使用軟體內之分批分析設施在Excel中生成結果。
為測定疾病細胞對IL-7起反應之能力且確認DRSPAI-L7B在來自MS患者之樣本中的功效，在非飽和(IC90 = 500 ng/mL (3.3 nM))濃度之DRSPAI-L7B或抗RSV IgG1κ同型對照抗體之存在下，用1 ng/mL (58 pM) IL-7刺激自健康對照或MS患者供體分離之PBMC。
在DRSPAI-L7B或抗RSV抗體(同型對照)之存在下，用rhIL-7刺激來自健康供體或MS患者(10名健康、10名RRMS、5名PPMS及5名SPMS)之PBMC。藉由流式細胞量測來評定CD4 +(圖6A)及CD8 +(圖6B) T細胞中之STAT5磷酸化。IL-7刺激以1 ng/mL (58 pM，比在疾病中所報導高約200倍)誘導衍生自健康供體及MS患者之CD4 +及CD8 +T細胞中的STAT5磷酸化。IL-7刺激幾乎完全由500 ng/mL或3.3 nM (非飽和濃度)之DRSPAI-L7B消除。將所展示之資料歸一化為IL -7處理條件，平均值±SEM。* p＜0.05，** p≤0.01，*** p≤0.001，**** p＜0.0001。單向ANOVA與杜凱氏多重比較校正(Tukey's multiple comparison correction)。在衍生自IBD患者的PBMC之IL-7刺激時觀測到類似結果。
實例 9 ： 疾病中之 IL-7 含量根據ICH GCP依據由國家、地區或研究中心倫理委員會審批通過之方案或機構審查委員會(IRB)批准之方案，在患者知情同意之情況下獲得所有人類樣本。將樣本儲存於-80℃下直至需要使用。
在方法SOP後，進行IL-7之量測。簡言之，方法遵循MSD套組方案，其中用稀釋劑43進行1:2樣本稀釋。在經預塗佈IL-7 MSD板上培育經稀釋樣本，隨後用釕化抗IL-7抗體進行偵測。血漿樣本中IL-7之含量與使用MSD Sector Imager 6000讀取器之所得ECL訊號讀數成正比。IL-7方法使用MSD V-PLEX人類IL-7套組(目錄號K151RCD)。
標準物、對照及未知樣本之ECL訊號源自MSD儀器且導出至Softmax Pro GxP以供分析。各方法之反演計算濃度使用標準曲線及具有1/y2加權4參數曲線擬合模型進行內插。將IL-7濃度之概述轉移至Microsoft Excel。
將所有資料自Microsoft Excel 2016轉移至GraphPad Prism v.6以用於繪圖及統計分析。在Prism中基於樣本基質(血清)及分析物(IL-7)將資料拷貝至「行表(Column Table)」中對各資料集進行包括夏皮羅-威爾克常態性測試(Shapiro-Wilk normality test)之行統計學測試以確定各資料集是否為常態分佈。若資料不為常態分佈，則使用公式y=log(y)對資料進行變換以使分佈歸一化。再次對經變換資料進行行統計學測試以便確認常態分佈。
對於血清樣本，使用單向方差分析(ANOVA)比較各組。使用夏皮羅-威爾克常態性測試在行統計學函數中測試資料之分佈。使用克魯斯卡爾-沃利斯不成對非參數分析(Kruskal-Wallis, non-parametric analysis)藉由鄧恩氏多重比較測試(Dunn's multiple comparisons test)來評定非常態分佈資料中之組差異，以比較各行彼此之平均秩。亦使用y=log(y)對資料進行變換以便使資料之分佈歸一化。在變換之後，使用行統計學函數進行夏皮羅-威爾克測試以確認變換產生資料之常態分佈。接著使用普通的單向不配對ANOVA與杜凱氏多重比較測試來評定經變換常態分佈資料之統計學顯著差異，以將各行之平均值彼此比較。
在來自健康對照(HC，n=10)、克羅恩氏病(n=15)、潰瘍性結腸炎(UC，n=15)、全身性紅斑狼瘡(SLE，n=15)及原發性休格倫氏症候群(pSS，n=15)患者之血清樣本中定量IL-7含量。與健康對照相比，IL-7在克羅恩氏病、UC及SLE (分別為7.3、9.44及5.53倍)中顯著增加。在pSS群體中亦存在IL-7之較小增加(相比於HC，3.55倍)。資料為平均值±SD。** p≤0.01，*** p≤0.001，**** p≤0.0001；使用單向ANOVA與鄧恩氏多重比較校正分析血清。圖7A及圖7B。
實例 10 ： DRSPAI-L7B 產生用質體轉染細胞株。此質體含有密碼子最佳化DRSPAI-L7B重鏈及輕鏈基因，各自處於單獨的人類EF1ɑ啟動子之轉錄控制下。輕鏈恆定區為人類κ且重鏈恆定區為人類IgG1，含有LAGA取代。LAGA取代對應於L235A/G237A。基於DRSPAI-L7B之表現來擴增及篩分經轉染細胞株。
實例 11 ： 抗原決定基結合 儀器使用Waters Synapt G2-Si質譜儀 Acquity M級UPLC LEAP H/D-X PAL液體處置機器人
溶液淬滅溶液：400 mM磷酸鉀、6 M鹽酸胍、0.5 M TCEP pH 2.5 (在與樣本1:1混合之後，用NaOH對淬滅緩衝液進行pH調整以在混合時得到此pH)。 稀釋緩衝液：含50 mM磷酸鈉100 mM NaCl之H 2O pH 7.0。
蛋白質： IL7：濃度：0.68 mg/ml (33 μM)於PBS中。在處理之前的序列(SEQ ID NO: 1)： 分泌前導子(上文加底線的)
DRSPAI-L7B產生於HEK細胞中且在PBS中以15 mg/ml (100 µM)使用。
HDX稀釋緩衝液為： 非氘化：含50 mM磷酸鈉100 mM NaCl之H 2O pH 7.0 氘化：含50 mM磷酸鈉100 mM NaCl之D 2O pH 6.6 對於初始測試，在單次運行中測試DRSPAI-L7B以檢查分解品質及訊號強度。
對於HDX實驗，如下製備IL7:mAb混合物： 「Apo」樣本包含20 µl濃縮IL7、15 µl PBS及25 µl稀釋緩衝液。「mAb」樣本包含20 µl濃縮IL7、15 µl DRSPAI-L7B及25 µl稀釋緩衝液。對於IL7此得到50 µM之最終標稱濃度且對於DRSPAI-L7B此得到25 µM之最終標稱濃度。在冰上製備樣本且保持處於0℃直至分析。
對於mAb結合實驗，使樣本經受使用LEAP H/D-X PAL機器人執行的使用10倍稀釋於氘化緩衝液中之標準氘化方法。將蛋白質樣本置放於0℃擱架中。將6 µl蛋白質樣本轉移至保持處於20℃之小瓶中，接著添加54 µl稀釋緩衝液(0時間點不氘化，其他時間點氘化)以引發氫交換。在培育適當時間之後，抽取50 µl之此樣本且將其轉移至含有50 µl淬滅溶液(400 mM磷酸鈉、6 M鹽酸胍、0.5M三羧基乙基膦[在與樣本混合之後，pH 2.5])之預冷卻小瓶(0℃)中。在混合且培育1 min之後，再抽取90 µl之此樣本且將其轉移至HDX管理器，其中經由100 µl環以50 µl/min將其注射至固定胃蛋白酶管柱(Enzymate BEH，2.1×30 mm，Waters #186007233，保持處於15℃)上。將所得肽溶離於0.2%甲酸中且截獲於Vanguard BEH C18預管柱(2.1×5 mm；Waters #186003975)上。接著將截獲管柱與分析型反相管柱(BEH C18，1×100 mM，Waters #186002346)一致地切換且使用以下梯度溶離肽，其中A=0.2%甲酸、0.03%三氟乙酸/水，B=0.2%甲酸/乙腈：
步驟 時間(min) 流速(µL/min) A% B% 曲線
1. 初始 40.000 88.0 12.0   
2. 8.00 40.000 64.0 36.0 6
3. 9.00 40.000 5.0 95.0 6
4. 10.00 40.000 5.0 95.0 6
5. 10.50 40.000 88.0 12.0 6
6. 11.50 40.000 5.0 95.0 6
7. 13.00 40.000 5.0 95.0 6
8. 13.50 40.000 88.0 12.0 6
9. 15.00 40.000 88.0 12.0 6
在梯度階段期間，將胃蛋白酶管柱用胃蛋白酶洗滌緩衝液(2 M鹽酸胍、0.8%甲酸、5%乙腈、5%丙-2-醇，pH 2.5) 2×80 µl以25 µl/min進行洗滌，且以25 µl/min返回至0.2%甲酸中以備用於下一樣本。來自分析型管柱之溶離液使用ESI-MS，使用以正解析度模式操作之Waters Synapt G2-Si質譜儀進行分析，其中收集連續資料。亦採集含有白胺酸-腦啡肽及Glu-Fib離子之噴針電噴霧離子源(lockspray)資料。對於肽鑑別樣本，採集MSe資料(在碰撞池中之低能量與高能量條件之間交替採集)以提供片段化資料以輔助穩固肽鑑別。對於HDX樣本，採集單次低能量採集(加噴針電噴霧離子源)。
初始樣本以MS e模式運行以使用ProteinLynx Global Serverv3.0.2(Waters)生成肽搜尋清單。一式兩份運行HDX樣本，其中氘化期為0、0.5及5 min。將肽搜尋清單導入DynamX v3.0 (Waters)中且過濾以得到高品質肽，以在HDX樣本中搜尋(最小強度＞10,000；肽分數＞7.0)。接著引入且處理HDX樣本資料以測定各樣本中各經鑑別肽之氘化。必要時人工檢查且優化肽及離子分配。
為將肽含量資料內插至殘基含量資料(以實現熱圖及結構視圖)，使用由DyanamX用於生成熱圖之演算法，其中對於各殘基，使用來自最短重疊肽之資料(其中兩種重疊肽具有相同長度，使用最接近N末端之肽)。
結果在殘基67至81之區中的兩種肽(自全長未處理構築體編號)在mAb之存在下展示較強保護作用。 (SEQ ID NO: 12 - FKRHICDANKEGMFL) (SEQ ID NO: 16 - FKRHICDANKEGMF)
同樣，覆蓋殘基67至81之區展示明顯的保護訊息。此外，將熱圖資料映射至IL7 (與IL7Rα複合)之可用3D結構上，且受保護區覆蓋殘基67至81 (FKRHICDANKEGMFL)。此區遠離IL7與受體IL7Rα相互作用之區。抗原決定基位於摺疊蛋白質上IL7Rα及ɣ-鏈相互作用位點附近。
實施例本發明之其他態樣及實施例將自以下例示性實施例顯而易見。
實施例 ：1.     一種IL-7結合蛋白，其結合至人類IL-7之SEQ ID NO: 12中所闡述之胺基酸序列內的一或多個胺基酸殘基。 2.     如實施例1之IL-7結合蛋白，其在HDX-MS分析中保護IL-7之殘基67至81 (SEQ ID NO: 12)免於氘交換。 3.     如實施例1之IL-7結合蛋白，其在HDX-MS分析中保護IL-7之殘基67至80 (SEQ ID NO: 16)免於氘交換。 4.     一種IL-7結合蛋白或其IL-7結合片段，其結合至與IL-7Rα結合位點相鄰之人類IL-7，其中KD為100 nM或更小，且抑制IL-7結合至IL-7R，如在活體外競爭性結合分析中所量測。 5.     如實施例1至4中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含以下中之至少一者：(a)與SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR1，(b)與SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR2，或(c)與SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR3。 6.     如實施例1至5中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含以下中之至少一者：(a)與SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR1，(b)與SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR2，或(c)與SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR3。 7.     如實施例1至6中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區輕鏈。 8.     一種IL-7結合蛋白或其IL-7結合片段，其包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少95%一致性的可變區輕鏈。 9.     如實施例8之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含以下中之至少一者：(a)與SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR1，(b)與SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR2，或(c)與SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR3。 10.   一種IL-7結合蛋白或其IL-7結合片段，其包含與SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR1、與SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR2及與SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈CDR3。 11.   一種IL-7結合蛋白或其IL-7結合片段，其包含與SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR1、與SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR2及與SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈CDR3。 12.   如實施例10至11中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區輕鏈。 13.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含具有SEQ ID NO: 5中所闡述之胺基酸序列的可變區輕鏈。 14.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 6中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 7中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 8中所闡述之胺基酸序列的重鏈CDR3。 15.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 9中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR1；包含SEQ ID NO: 10中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR2；及包含SEQ ID NO: 11中所闡述之胺基酸序列的輕鏈CDR3。 16.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的可變區重鏈。 17.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 4中所闡述之胺基酸序列的可變區重鏈。 18.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈。 19.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。 20.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。 21.   如實施例20之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及位置237處具有丙胺酸殘基。 22.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含與SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈。 23.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含含有SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈。 24.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含：包含SEQ ID NO: 2中所闡述之胺基酸序列的重鏈；及包含SEQ ID NO: 3中所闡述之胺基酸序列的輕鏈。 25.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白為抗體或其抗原結合部分。 26.   如實施例25之IL-7結合蛋白，其中該抗體為單株抗體。 27.   如實施例26之IL-7結合蛋白，其中該單株抗體為IgG1。 28.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白為人類、人類化或嵌合的。 29.   如實施例28之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白為人類化的。 30.   如實施例28之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白為人類的。 31.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白結合至IL-7且中和IL-7。 32.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白結合至原生IL-7。 33.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白結合至循環性IL-7。 34.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白為經分離之IL-7結合蛋白。 35.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白結合至IL-7且以1 nM或更小之IC50抑制周邊血液單核細胞的IL-7依賴性IFN-γ或IL-10分泌。 36.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白結合至IL-7且以1 nM或更小之IC50抑制CD4+ T細胞中之IL-7依賴性STAT5磷酸化。 37.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白為可逆二聚體。 38.   如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白抑制CD4+ T細胞及/或CD8+ T細胞之傳訊、活化、細胞介素產生及增殖。 39.   一種核酸，其編碼如前述實施例中任一項之IL-7結合蛋白。 40.   如實施例39之核酸，其中該核酸包含與編碼輕鏈的SEQ ID NO: 13中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。 41.   如實施例39或40之核酸，其中該核酸包含編碼輕鏈的SEQ ID NO: 13中所闡述之核酸序列。 42.   如實施例39至41中任一項之核酸，其中該核酸包含與編碼重鏈的SEQ ID NO: 14中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。 43.   如實施例39至42中任一項之核酸，其中該核酸包含編碼重鏈的SEQ ID NO: 14中所闡述之核酸序列。 44.   如實施例39至43中任一項之核酸，其中該核酸進一步包含與編碼訊息肽的SEQ ID NO: 15中所闡述之核酸序列具有至少80%一致性的序列。 45.   一種載體，其包含如實施例39至44中任一項之核酸。 46.   如實施例45之載體，其進一步包含在哺乳動物細胞中具有功能性之啟動子。 47.   一種宿主細胞，其包含如實施例39至44中任一項之核酸，或如實施例45或46之載體。 48.   如實施例47之宿主細胞，其中該宿主細胞為CHO細胞。 49.   一種製造如實施例1至38中任一項之IL-7結合蛋白的方法，該方法包含將如實施例47或48之宿主細胞維持在培養基中以產生該IL-7結合蛋白且分離或純化由宿主細胞產生之該IL-7結合蛋白。 50.   一種IL-7結合蛋白，其藉由如實施例49之方法產生。 51.   一種IL-7結合蛋白，其與如實施例1至38中任一項之IL-7結合蛋白競爭結合至IL-7。 52.   一種醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之載劑及IL-7結合蛋白或其IL-7結合片段，該IL-7結合蛋白或其IL-7結合片段在包含SEQ ID NO: 12中所闡述序列之至少5個連續胺基酸的抗原決定基處展現對IL-7之結合。 53.   如實施例52之醫藥組合物，其中該IL-7結合蛋白係根據如實施例1至38中之任一項。 54.   一種醫藥組合物，其包含如實施例1至38中任一項之IL-7結合蛋白及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。 55.   如實施例52至54中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物進一步包含至少一種額外治療劑。 56.   如實施例52至55中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有4.5至7.0之pH。 57.   如實施例52至56中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有5.5、6.0、6.2或6.5之pH。 58.   如實施例1至38中任一項之IL-7結合蛋白，其用於治療中。 59.   一種用於治療有需要個體之自體免疫性及/或發炎性病狀的方法，其包含向該個體投與治療有效量的如實施例1至38中任一項之IL-7結合蛋白或如實施例52至57之醫藥組合物。 60.   如實施例59之方法，其中該投與係在動脈內、皮下、皮內、瘤內、結節內、髓內、肌內、靜脈內或腹膜內進行。 61.   如實施例60之方法，其中該投與係在皮下進行。 62.   如實施例59至61中任一項之方法，其中該治療有效量為至少約0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg或40 mg/kg。 63.   如實施例59至62中任一項之方法，其中該治療有效量為約3 mg/kg。 64.   如實施例59至63中任一項之方法，其中至少約每1至60天一次向個體投與該治療有效量。 65.   如實施例59至64中任一項之方法，其中每4週一次向個體投與該治療有效量。 66.   如實施例59至65中任一項之方法，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為休格倫氏症候群。 67.   如實施例59至65中任一項之方法，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為類風濕性關節炎。 68.   如實施例59至65中任一項之方法，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症。 69.   如實施例68之方法，其中該多發性硬化症為臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。 70.   如實施例59至65中任一項之方法，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為克羅恩氏病。 71.   如實施例59至65中任一項之方法，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為潰瘍性結腸炎。 72.   如實施例59至65中任一項之方法，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為紅斑狼瘡。 73.   一種如實施例1至38中任一項之IL-7結合蛋白的用途，其用於製造用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀之藥劑。 74.   如實施例73之用途，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為休格倫氏症候群。 75.   如實施例73之用途，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為類風濕性關節炎。 76.   如實施例73之用途，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症。 77.   如實施例76之用途，其中該多發性硬化症為臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。 78.   如實施例73之用途，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為克羅恩氏病。 79.   如實施例73之用途，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為潰瘍性結腸炎。 80.   如實施例73之用途，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為紅斑狼瘡。 81.   如實施例1至38中任一項之IL-7結合蛋白，其用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀。 82.   如實施例81使用之IL-7結合蛋白，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為休格倫氏症候群。 83.   如實施例81使用之IL-7結合蛋白，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為類風濕性關節炎。 84.   如實施例81使用之IL-7結合蛋白，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症。 85.   如實施例84使用之IL-7結合蛋白，其中該多發性硬化症為臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。 86.   如實施例81使用之IL-7結合蛋白，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為克羅恩氏病。 87.   如實施例81使用之IL-7結合蛋白，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為潰瘍性結腸炎。 88.   如實施例81使用之IL-7結合蛋白，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為紅斑狼瘡。 89.   一種如實施例1至38或50至51中任一項之IL-7結合蛋白的用途，其用於診斷疾病或病狀。 90.   一種組合物，其包含結合至部分或其抗原片段的如實施例1至38或50至51中任一項之IL-7結合蛋白。 91.   如實施例90之組合物，其中該部分為IL-7或其片段。 92.   一種固體載體，其包含如實施例1至38或50至51中任一項之IL-7結合蛋白。 93.   如實施例92之固體載體，其中該固體載體為陣列。 94.   一種裝置，其包含： a. 如實施例92或93之固體載體，及 b. 用於偵測訊息之處理器，其中該訊息指示部分與如實施例1至38或50至51中任一項之IL-7結合蛋白的結合。 95.   一種預填充注射器或自動注射器裝置，其包含如實施例1至38、50至51中任一項之IL-7結合蛋白，或如實施例52至57中任一項之醫藥組合物。 96.   一種套組，其包含如實施例1至38或50至51中任一項之IL-7結合蛋白及使用說明書。 97.   一種IL-7結合蛋白，其包含與SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 22中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的輕鏈。 98.   如實施例97之IL-7結合蛋白，其與SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 22之CDR包含至少80%一致性。 99.   一種IL-7結合蛋白，其包含與SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 21或SEQ ID NO: 23中所闡述之胺基酸序列具有至少80%一致性的重鏈。 100.  如實施例99之IL-7結合蛋白，其與SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 21或SEQ ID NO: 23之CDR包含至少80%一致性。 101.  一種IL-7結合蛋白，其包含：具有SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 22中所闡述之胺基酸序列的輕鏈；及具有SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 21或SEQ ID NO: 23中所闡述之胺基酸序列的重鏈。 102.  一種IL-7結合蛋白，其包含具有SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 22之CDR及具有SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 21或SEQ ID NO: 23之CDR。 103.  一種IL-7結合蛋白，其包含具有SEQ ID NO: 18中所闡述之胺基酸序列的輕鏈及具有SEQ ID NO: 19中所闡述之胺基酸序列的重鏈。 104.  一種IL-7結合蛋白，其包含具有SEQ ID NO: 20中所闡述之胺基酸序列的輕鏈及具有SEQ ID NO: 21中所闡述之胺基酸序列的重鏈。 105.  一種IL-7結合蛋白，其包含具有SEQ ID NO: 22中所闡述之胺基酸序列的輕鏈及具有SEQ ID NO: 23中所闡述之胺基酸序列的重鏈。 106.  一種組合物，其包含如實施例97至105中任一項之IL-7結合蛋白。 107.  如實施例97至105中任一項之IL-7結合蛋白，其用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀包含休格倫氏症候群、類風濕性關節炎、多發性硬化症(臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性)、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎或紅斑狼瘡。 108.  一種用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀之方法，其包含向個體投與如實施例106之組合物。 109.  如實施例108之方法，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀包含休格倫氏症候群、類風濕性關節炎、多發性硬化症(臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性)、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎或紅斑狼瘡。 110.  一種如實施例97至105中任一項之IL-7結合蛋白的用途，其用於製造用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀之藥劑。 111.  如實施例110之用途，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀包含休格倫氏症候群、類風濕性關節炎、多發性硬化症(臨床單一症候群、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性)、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎或紅斑狼瘡。 112.  一種套組，其包含如實施例97至105中任一項之IL-7結合蛋白及使用說明書。
序列 SEQ ID NO 1 ： 具有前導序列之人類 IL-7 序列 SEQ ID NO 2 ： DRSPAI-L7B 重鏈 SEQ ID NO 3 ： DRSPAI-L7B 輕鏈 SEQ ID NO 4 ： DRSPAI-L7B V H SEQ ID NO 5 ： DRSPAI-L7B V L SEQ ID NO 6 ： DRSPAI-L7B CDRH1 SEQ ID NO 7 ： DRSPAI-L7B CDRH2 SEQ ID NO 8 ： DRSPAI-L7B CDRH3 SEQ ID NO 9 ： DRSPAI-L7B CDRL1 SEQ ID NO 10 ： DRSPAI-L7B CDRL2 SEQ ID NO 11 ： DRSPAI-L7B CDRL3 SEQ ID NO 12 ： DRSPAI-L7B 第 1 受保護位點 SEQ ID NO 13 ： 編碼 DRSPAI-L7B 輕鏈之 核酸 序列 SEQ ID NO 14 ： 編碼 DRSPAI-L7B 重鏈之核酸序列 SEQ ID NO 15 ： 編碼傳訊肽之核酸序列 SEQ ID NO: 16 ： DRSPAI-L7B 第 2 受保護位點 SEQ ID NO 17 ： 人類 IL-7 序列 ( 無 分泌前導子 ) SEQ ID NO 18 ： A1290 輕鏈 SEQ ID NO 19 ： A1290 重鏈 SEQ ID NO 20 ： A1291 輕鏈 SEQ ID NO 21 ： A1291 重鏈 SEQ ID NO 22 ： A1294 輕鏈 SEQ ID NO 23 ： A1294 重鏈 SEQ ID NO 24 ： A1290 V L SEQ ID NO 25 ： A1290 V H SEQ ID NO 26 ： A1290 CDRH1 SEQ ID NO 27 ： A1290 CDRH2 SEQ ID NO 28 ： A1290 CDRH3 SEQ ID NO 29 ： A1290 CDRL1 SEQ ID NO 30 ： A1290 CDRL2 SEQ ID NO 31 ： A1290 CDRL3 SEQ ID NO 32 ： A1291 V L SEQ ID NO 33 ： A1291 V H SEQ ID NO 34 ： A1291 CDRH1 SEQ ID NO 35 ： A1291 CDRH2 SEQ ID NO 36 ： A1291 CDRH3 SEQ ID NO 37 ： A1291 CDRL1 SEQ ID NO 38 ： A1291 CDRL2 SEQ ID NO 39 ： A1291 CDRL3 SEQ ID NO 40 ： A1294 V L SEQ ID NO 41 ： A1294 V H SEQ ID NO 42 ： A1294 CDRH1 SEQ ID NO 43 ： A1294 CDRH2 SEQ ID NO 44 ： A1294 CDRH3 SEQ ID NO 45 ： A1294 CDRL1 SEQ ID NO 46 ： A1294 CDRL2 SEQ ID NO 47 ： A1294 CDRL3
本發明之新穎特徵詳細闡述於隨附申請專利範圍中。將參考闡述利用本發明原理之說明性實施例及其隨附圖式的以下詳細描述來獲得對本發明之特徵及優勢之較佳理解： 圖 1A ：說明在給藥(i.v.)有0.1 mg/kg、1 mg/kg或10 mg/kg之DRSPAI-L7B目標劑量的動物中DRSPAI-L7B之濃度。 圖 1B及 圖 1C說明每週皮下給藥有30 mg/kg之重複目標劑量之濃度， 圖 1B遵循劑量1且 圖 1C遵循劑量4。在所指示時間點處收集血清樣本且藉由Gyrolab免疫分析來定量DRSPAI-L7B。 圖 2A ：說明獲自在DRSPAI-L7B之存在下用IL-7刺激之健康供體的全血之pSTAT5抑制%。 圖 2B說明來自周邊血液單核細胞(PBMC)之CD8+ T細胞中的STAT5磷酸化， 圖 2C說明來自周邊血液單核細胞(PBMC)之CD4+ T細胞中的STAT5磷酸化， 圖 2D說明來自周邊血液單核細胞(PBMC)之CD3+ T細胞中的STAT5磷酸化，該等周邊血液單核細胞獲自在DRSPAI-L7B或抗RSV抗體(同型對照)之存在下用rhIL-7刺激的健康供體或IBD患者。 圖 3A ：說明在rhIL-7及抗CD3之存在下用增加濃度之DRSPAI-L7B處理的健康供體PBMC對IFN-γ分泌之抑制。 圖 3B說明在rhIL-7及抗CD3之存在下用增加濃度之DRSPAI-L7B處理的健康供體PBMC對IL-10分泌之抑制。 圖 3C 、圖 3D 、圖 3E 、圖 3F 、圖 3G說明在rhIL-7及抗CD3之存在下DRSPAI-L7B對IL-2的抑制。 圖 4A ：說明CD4 +T mem細胞中之IL-17抑制，該等CD4 +T mem細胞自健康供體血液分離，在外加佛波醇肉豆蔻酸鹽乙酸鹽(phorbol myristate acetate；PMA)/離子黴素(ionomycin)之後在DRSPAI-L7B之存在下與IL-7一起培育。 圖 4B說明CD4 +T mem細胞中之TNFα抑制，該等CD4 +T mem細胞自健康供體血液分離，在外加PMA/離子黴素之後在DRSPAI-L7B之存在下與IL-7一起培育。 圖 4C ：說明CD4 +T mem細胞中之IL-6抑制，該等CD4 +T mem細胞自健康供體血液分離，在外加PMA/離子黴素之後在DRSPAI-L7B之存在下與IL-7一起培育。 圖 4D ：說明CD4 +T mem細胞中之IL-10抑制，該等CD4 +T mem細胞自健康供體血液分離，在外加PMA/離子黴素之後在DRSPAI-L7B之存在下與IL-7一起培育。 圖 4E ：說明CD4 +T mem細胞中之INFγ抑制，該等CD4 +T mem細胞自健康供體血液分離，在外加PMA/離子黴素之後在DRSPAI-L7B之存在下與IL-7一起培育。 圖 4F ：說明CD4 +T mem細胞中之CCL3抑制，該等CD4 +T mem細胞自健康供體血液分離，在外加PMA/離子黴素之後在DRSPAI-L7B之存在下與IL-7一起培育。 圖 5A ：說明基於細胞表面上之CD45RO、CCR7、CD127及CD25表現藉由流式細胞量測術剖析的來自健康對照及MS患者的CD4 +淋巴球之概況。 圖 5B說明基於細胞表面上之CD45RO、CCR7、CD127及CD25表現藉由流式細胞量測術剖析的來自健康對照及MS患者的CD8 +淋巴球之概況。 圖 5C說明基於細胞表面上之CD45RO、CCR7、CD127及CD25表現藉由流式細胞量測術剖析的來自健康對照及MS患者的調節性T細胞之概況。 圖 6A ：說明來自獲自在DRSPAI-L7B或抗RSV抗體(同型對照)之存在下用rhIL-7刺激之健康供體或MS患者的PBMC的CD4 +T細胞中之STAT5磷酸化。 圖 6B說明來自獲自在DRSPAI-L7B或抗RSV抗體(同型對照)之存在下用rhIL-7刺激之健康供體或MS患者的PBMC的CD8 +T細胞中之STAT5磷酸化。 圖 7A ：說明線性圖，且 圖 7B說明來自健康對照(HC，n=10)、克羅恩氏病(n=15)、潰瘍性結腸炎(UC，n=15)、全身性紅斑狼瘡(SLE，n=15)及原發性休格倫氏症候群(pSS，n=15)患者之血清樣本中的IL-7含量之對數座標圖。 

          <![CDATA[<110>  英商葛蘭素史密斯克藍智慧財產發展有限公司]]>
                 (GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited)
          <![CDATA[<120>  IL-7結合蛋白及其於醫療中之用途]]>
          <![CDATA[<130>  PU66978]]>
          <![CDATA[<140> TW 110144544]]>
          <![CDATA[<141> 2021-11-30]]>
          <![CDATA[<150>  US 63/120564]]>
          <![CDATA[<151>  2020-12-02]]>
          <![CDATA[<160>  47    ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  177]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  具有前導序列之人類IL-7序列]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Leu Pro Pro Leu Ile 
          1               5                   10                  15      
          Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys 
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu 
                  35                  40                  45              
          Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe 
              50                  55                  60                  
          Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser 
                          85                  90                  95      
          Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr 
                      100                 105                 110         
          Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu 
              130                 135                 140                 
          Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu 
                          165                 170                 175     
          His 
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  DRSPAI-L7B重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Ile Trp Thr Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asn Gly Tyr Gly Glu Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 
              130                 135                 140                 
          Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 
              210                 215                 220                 
          Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Ala Gly Ala Pro Ser Val 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 
                  355                 360                 365             
          Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 
                          405                 410                 415     
          Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  218]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  DRSPAI-L7B輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Ser Leu Asp His Asp 
                      20                  25                  30          
          Gly Asp Ser Tyr Ile Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Tyr Met Gly Ser Asn Val Glu Phe Gly Val Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 
                          85                  90                  95      
          Val Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 
              130                 135                 140                 
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 
                      180                 185                 190         
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 
                  195                 200                 205             
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215             
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  DRSPAI-L7B Vh]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Ile Trp Thr Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asn Gly Tyr Gly Glu Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser 
                  115         
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  DRSPAI-L7B Vl]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Ser Leu Asp His Asp 
                      20                  25                  30          
          Gly Asp Ser Tyr Ile Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Tyr Met Gly Ser Asn Val Glu Phe Gly Val Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 
                          85                  90                  95      
          Val Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  DRSPAI-L7B CDRH1]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Ser Tyr Gly Val His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  DRSPAI-L7B CDRH2]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          Ala Ile Trp Thr Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Phe Ser Ser 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  DRSPAI-L7B CDRH3]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Asn Gly Tyr Gly Glu Ser Phe Ala Tyr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  DRSPAI-L7B CDRL1]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          Lys Ala Ser Glu Ser Leu Asp His Asp Gly Asp Ser Tyr Ile Asn 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  DRSPAI-L7B CDRL2]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Met Gly Ser Asn Val Glu Phe 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  DRSPAI-L7B CDRL3]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Gln Gln Ser Asn Val Asp Pro Leu Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  DRSPAI-L7B第1受保護位點]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Phe Lys Arg His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  654]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  編碼DRSPAI-L7B輕鏈之核酸序列]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          gacatccaga tgacccagag ccctagcagc ctgagcgcca gcgtgggaga cagggtgacc       60
          atcacctgca aggccagcga gtccctggac cacgacggcg acagctacat caactggtac      120
          cagcagaagc ccggcaaggc ccccaagctg ctgatctaca tgggcagcaa cgtggagttc      180
          ggcgtgcccg ccaggtttag cggcagcggc agcggcaccg acttcaccct gaccatcagc      240
          agcctccagc ccgaggactt cgccacctac tactgccagc agagcaacgt ggaccccctg      300
          actttcggcg gcggcaccaa ggtggagatt aagcgtacgg tggccgcccc cagcgtgttc      360
          atcttccccc ccagcgatga gcagctgaag agcggcaccg ccagcgtggt gtgtctgctg      420
          aacaacttct acccccggga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaatgc cctgcagagc      480
          ggcaacagcc aggagagcgt gaccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagc      540
          agcaccctga ccctgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgc ctgtgaggtg      600
          acccaccagg gcctgtccag ccccgtgacc aagagcttca accggggcga gtgc            654
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  1341]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  編碼DRSPAI-L7B重鏈之核酸序列]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtccagc ccggaaggag cctgaggctg       60
          agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgggg tccactgggt gaggcaggcc      120
          cccggaaagg gcctggagtg gctggccgcc atctggaccg gcggctccac cgactacaac      180
          agcgccttca gcagcaggtt caccatcagc agggacaact ccaagaacac cctgtacctg      240
          cagatgaaca gcctcagggc cgaggacacc gccgtgtact attgcgcaag gaacggctac      300
          ggcgagagct tcgcctactg gggccagggc accctggtga ccgtgagcag cgccagcacc      360
          aagggcccca gcgtgttccc cctggccccc agcagcaaga gcaccagcgg cggcacagcc      420
          gccctgggct gcctggtgaa ggactacttc cccgagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc      480
          ggagccctga ccagcggcgt gcacaccttc cccgccgtgc tgcagagcag cggcctgtac      540
          agcctgagca gcgtggtgac cgtgcccagc agcagcctgg gcacccagac ctacatctgt      600
          aacgtgaacc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aggtggagcc caagagctgt      660
          gacaagaccc acacctgccc cccctgccct gcccccgagc tggccggagc ccccagcgtg      720
          ttcctgttcc cccccaagcc taaggacacc ctgatgatca gcagaacccc cgaggtgacc      780
          tgtgtggtgg tggatgtgag ccacgaggac cctgaggtga agttcaactg gtacgtggac      840
          ggcgtggagg tgcacaatgc caagaccaag cccagggagg agcagtacaa cagcacctac      900
          cgggtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tgaacggcaa ggagtacaag      960
          tgtaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgcc cctatcgaga aaaccatcag caaggccaag     1020
          ggccagccca gagagcccca ggtgtacacc ctgcccccta gcagagatga gctgaccaag     1080
          aaccaggtgt ccctgacctg cctggtgaag ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag     1140
          tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggacagc     1200
          gatggcagct tcttcctgta cagcaagctg accgtggaca agagcagatg gcagcagggc     1260
          aacgtgttca gctgctccgt gatgcacgag gccctgcaca atcactacac ccagaagagc     1320
          ctgagcctgt cccctggcaa g                                               1341
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  57]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  編碼傳訊肽之核酸序列]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          atgggctggt cctgcatcat cctgtttctg gtggccaccg ccaccggtgt gcacagc          57
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  DRSPAI-L7B第2受保護位點]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Phe Lys Arg His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  152]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  人類IL-7序列(無分泌前導子)]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu 
          1               5                   10                  15      
          Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp 
                  35                  40                  45              
          Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg 
              50                  55                  60                  
          Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val 
                          85                  90                  95      
          Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser 
                      100                 105                 110         
          Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu 
                  115                 120                 125             
          Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys 
              130                 135                 140                 
          Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His 
          145                 150         
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  218]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  A1290輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Asp Asp 
                      20                  25                  30          
          Gly Asp Ser Phe Ile Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 
              130                 135                 140                 
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 
                      180                 185                 190         
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 
                  195                 200                 205             
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215             
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  A1290重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Ile Trp Thr Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asn Gly Tyr Gly Glu Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 
              130                 135                 140                 
          Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 
              210                 215                 220                 
          Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Ala Gly Ala Pro Ser Val 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 
                  355                 360                 365             
          Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 
                          405                 410                 415     
          Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  218]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  A1291輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser His Ser Val Asp Asp Asp 
                      20                  25                  30          
          Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Tyr Met Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 
              130                 135                 140                 
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 
                      180                 185                 190         
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 
                  195                 200                 205             
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215             
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  A1291重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Ile Trp Thr Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Glu Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asn Gly Tyr Gly Glu Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 
              130                 135                 140                 
          Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 
              210                 215                 220                 
          Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Ala Gly Ala Pro Ser Val 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 
                  355                 360                 365             
          Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 
                          405                 410                 415     
          Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  218]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  A1294輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Asp Asp 
                      20                  25                  30          
          Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Tyr Met Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 
              130                 135                 140                 
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 
                      180                 185                 190         
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 
                  195                 200                 205             
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215             
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  A1294重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Val Ala Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asn Gly Tyr Gly Glu Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 
              130                 135                 140                 
          Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 
              210                 215                 220                 
          Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Ala Gly Ala Pro Ser Val 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 
                  355                 360                 365             
          Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 
                          405                 410                 415     
          Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  A1290輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Asp Asp 
                      20                  25                  30          
          Gly Asp Ser Phe Ile Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
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          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Ile Trp Thr Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asn Gly Tyr Gly Glu Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser 
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          1               5                   10                  15      
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          Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Asp Asp Gly Asp Ser Phe Ile Asn 
          1               5                   10                  15  
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser His Ser Val Asp Asp Asp 
                      20                  25                  30          
          Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Tyr Met Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
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          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
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                  35                  40                  45              
          Ala Ala Ile Trp Thr Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Glu Phe Ser 
              50                  55                  60                  
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          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  35]]>
          Ala Ile Trp Thr Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Glu Phe Ser Ser 
          1               5                   10                  15      
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          <![CDATA[<220>]]>
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          Lys Ala Ser His Ser Val Asp Asp Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn 
          1               5                   10                  15  
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
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          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
          Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Val Ala Phe Ser 
              50                  55                  60                  
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                  115         
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          Thr Tyr Gly Val His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  43]]>
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          <![CDATA[<400>  43]]>
          Ala Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Val Ala Phe Ser Ser 
          1               5                   10                  15      
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          <![CDATA[<400>  44]]>
          Asn Gly Tyr Gly Glu Ser Phe Ala Tyr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  45]]>
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          <![CDATA[<400>  45]]>
          Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Asp Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn 
          1               5                   10                  15  
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          <![CDATA[<400>  46]]>
          Met Ala Ser Asn Leu Glu Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  47]]>
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          <![CDATA[<400>  47]]>
          Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr 
          1               5
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
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Claims (21)

  1. 一種IL-7結合蛋白，其包含如SEQ ID NO：4中所載之VH域及如SEQ ID NO：5中所載之VL域。
  2. 如請求項1之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含恆定區以使得該IL-7結合蛋白具有減小的ADCC及/或補體活化或效應子功能性。
  3. 如請求項2之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白包含重鏈Fc域，該重鏈Fc域根據EU編號在位置235及位置237處具有丙胺酸殘基，且其中該IL-7結合蛋白包含選自人類IgG1同型及人類IgG4同型之支架(scaffold)。
  4. 如請求項3之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白具有人類IgG1同型。
  5. 如請求項1之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白為單株抗體。
  6. 如請求項5之IL-7結合蛋白，其中該單株抗體為人類、人類化或嵌合的。
  7. 如請求項1之IL-7結合蛋白，其包含與SEQ ID NO：2中所載之胺基酸序列具有至少90%一致性的重鏈，及與如SEQ ID NO：3中所載之胺基酸序列具有至少90%一致性的輕鏈。
  8. 如請求項7之IL-7結合蛋白，其包含如SEQ ID NO：2中所載之重鏈及如SEQ ID NO：3中所載之輕鏈。
  9. 如請求項1之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白係以50nM或更小、10nM或更小、1nM或更小或0.1nM或更小之KD結合至IL-7。
  10. 如請求項1之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白結合至IL-7，且(i)以1nM或更小之IC50抑制周邊血液單核細胞的IL-7依賴性IFN-γ或IL-10分泌，及/或(ii)以1nM或更小之IC50抑制CD4+ T細胞中的IL-7依賴性STAT5磷酸化。
  11. 如請求項1之IL-7結合蛋白，其中該IL-7結合蛋白抑制CD4+ T細胞及/或CD8+ T細胞之傳訊、活化、細胞介素產生及增殖。
  12. 一種核酸，其編碼如請求項1至11中任一項中所定義之IL-7結合蛋白。
  13. 一種表現載體，其包含如請求項12中所定義之核酸序列。
  14. 一種宿主細胞，其包含如請求項12之核酸序列或如請求項13之表現載體。
  15. 一種IL-7結合蛋白，其由如請求項14之宿主細胞表現。
  16. 一種製造如請求項1至11中任一項之IL-7結合蛋白的方法，該方法包含將如請求項14中所定義之宿主細胞維持在培養基中以產生該IL-7結合蛋白且分離或純化由該宿主細胞產生之該IL-7結合蛋白。
  17. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至11及15中任一項之IL-7結合蛋白及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
  18. 一種如請求項1至11及15中任一項中所定義之IL-7結合蛋白之用途，其用於製造用於治療自體免疫性及/或發炎性病狀之醫藥品。
  19. 如請求項18之用途，其中該自體免疫性及/或發炎性病狀為多發性硬化症、休格倫式症候群(Sjögren's syndrome)、類風濕性關節炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎或紅斑狼瘡。
  20. 如請求項19之用途，其中該多發性硬化症為臨床單一症候群(clinically isolated syndrome)、復發緩解性、原發進行性或繼發進行性的。
  21. 一種套組，其包含如請求項1至11及15中任一項之IL-7結合蛋白及使用說明書。
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