CN117062836A

CN117062836A - 抗il1rap抗体

Info

Publication number: CN117062836A
Application number: CN202280023868.6A
Authority: CN
Inventors: T·J·比格沃夫; 卡斯米 K·C·艾尔; 顾晔; S·侯雷尔; D·彼得; M·格罗纳; F·席勒; A·布洛钦
Original assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Priority date: 2021-02-05
Filing date: 2022-02-04
Publication date: 2023-11-14
Also published as: WO2022170008A2; WO2022170008A3; JP2024505674A; EP4288457A2

Abstract

本发明涉及抗IL1RAP结合化合物，特别是新的抗IL1RAP抗体以及使用所述抗体的治疗和诊断方法及组合物。

Description

抗IL1RAP抗体

序列表

本申请含有已以ASCII格式电子提交并且通过引用以其整体特此并入的序列表。于2022年2月3日创建的所述ASCII副本被命名为09-0717-WO-1_SL.txt并且大小为194,305字节。

技术领域

本发明总体上涉及用于诊断和治疗用途的抗IL1RAP抗体。所述抗体可以以药物组合物和包含此类化合物的试剂盒使用。所述抗体可用于治疗各种疾病或障碍例如人的免疫学、炎性、自身免疫、纤维化和呼吸系统疾病的方法中。

背景技术

细胞因子的IL-1家族由以下11种不同的配体构成，即IL-1α(也称为IL-1F1)、IL-1β(IL-1F2)、IL-1受体拮抗剂(IL-1Ra或IL-1F3)、IL-18(IL-1F4)、IL-1F5至IL-1F10和IL-1F11(或IL-33)。已知IL-1α和IL-1β在结合至I型IL-1受体(IL-1RI)和募集共同的辅助受体IL-1受体辅助蛋白(IL-1RAcP)时诱导促炎活性，而IL-1Ra充当IL-1结合IL-1RI的竞争性抑制剂，因而发挥抗炎活性。大量研究报道，IL-18是一种促炎性细胞因子，是一种IFN-γ的诱导剂，而IL-33被描述为一种免疫调节细胞因子，参与特别是控制Th2应答。

IL1-受体辅助蛋白(IL1RAP)是初级受体(IL1R1、IL33R和IL36R)的辅助受体，是同源IL1家族细胞因子IL1(α、β)、IL33和IL36(α、β、γ)的信号传导所需要的。

IL1家族细胞因子IL1α和IL1β、IL33、和IL36α、IL36β、和IL36γ结合至它们各自的受体IL1R1、IL33R和IL36R。然后，同源受体结合充当辅助受体的IL1-受体辅助蛋白IL1RAP(也称为IL-1RAP)，导致分别由IL1、IL33和IL36介导的下游激活。

IL1RAP在存在IL1受体、IL33受体或IL36受体的组织如淋巴结(胸腺、扁桃体)、骨髓、脑、肺、皮肤、肠、肝和胎盘中表达。据报道，CML中的髓系白血病干细胞也表达IL1RAP(Jaras等人(2010).Isolation and killing of candidate chronic myeloid leukemiastem cells by antibody targeting of IL-1receptor accessory protein.Proc NatlAcad Sci U S A 107,16280-16285)。

IL1RAP在警报素的IL1家族的信号传导中的重要性已通过辅助受体IL1RAP的遗传缺失得到证实，所述遗传缺失导致IL1(IL-1腹膜内注射(Cullinan,等人(1998).IL-1receptor accessory protein is an essential component of the IL-1receptor.JImmunol 161,5614-5620))和IL33(肥大细胞(Palmer等人(2008).The IL-1receptoraccessory protein(AcP)is required for IL-33signaling and soluble AcP enhancesthe ability of soluble ST2 to inhibit IL-33.Cytokine 42,358-364.))信号传导的完全丧失；以及对于IL36通过转染研究/药理学干预证实(Towne,等人(2011).Interleukin-36(IL-36)ligands require processing for full agonist(IL-36alpha,IL-36beta,and IL-36gamma)or antagonist(IL-36Ra)activity.J Biol Chem 286,42594-42602)。单独的细胞因子抑制剂已被广泛报道，然而，当在临床试验中进行体内测试时，这些抑制剂失败了，这意味着针对一种或两种IL1细胞因子的单一中和抗体可能不足以达到所需的临床功效。

在已发表的文献中，仅描述了少数IL1RAP抗体。值得注意的是，这些抗体的大多数仅针对一些配体递送一定程度的生物活性，并且鉴定一种对所有潜在配体IL1-α、IL1-β、IL-33和IL-36α、β、γ具有必需的效力的抗体被认为是具有挑战性的，这表明不同辅助受体之间IL1RAP结合界面可能不同。因此，结合表位显现对效果至关重要，因为并非所有抗体都具有阻断信号传导的能力，即使它们确实具有结合IL1RAP和介导有效ADCC的能力(Agerstam等人(2015)PNAS112(34):10786-91)

当研究人员尝试一次仅中和单个疾病驱动细胞因子时，特别是在正常细胞因子协同作用和或在通路中对其他细胞因子成员提供反馈时，炎性疾病的多样性可解释临床试验中结局不佳或甚至失败。IL-1家族可代表在许多炎症和疾病状态下的这种趋同性。多于一种IL-1家族成员在疾病中属于重要角色，如在哮喘中的IL-1β和IL-33(Lappalainen等人(2005)Interleukin-1βcauses pulmonary inflammation,emphysema,and airwayremodeling in the adult murine lung.Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.32,311-318；Prefontaine，D.等人(2009)Increased expression of IL-33in severe asthma:evidence of expression by airway smooth muscle cells.J.Immunol.183,5094-5103)，和银屑病中的IL-1α和IL-36(Towne,J.E.&Sims,J.E.(2012)IL-36in psoriasis.Curr.Opin.Pharmacol.12,486-490(2012)；和Tortola，L.等人(2012)Psoriasiformdermatitis is driven by IL-36-mediated DC-keratinocytecrosstalk.J.Clin.Invest.122,3965-3976)。因此，通过多个IL-1相关通路的阻断可能预期得到最佳结局。

最近的出版物披露了如下体外发现：他们的IL1RAP抗体特异性地抑制所有六个IL-1家族成员(IL-1、IL-33和IL-36)的信号传导。最近，等人发表了他们的发现：针对IL1RAP的mAb在体外特异性抑制IL-1、IL-33和IL-36信号传导，并且还显著减弱异质细胞因子驱动的炎症和疾病严重程度(/>等人(2019)IL-1R3blockage broadly attenuatesthe function of six members of the IL-1family,revealing their contribution tomodels of disease.Nature Immunol.20:1138-1149)。

因为IL1RAP是涉及IL-1家族的六种细胞因子(IL-1α、IL-1β、IL-33、IL36α、IL-36β和IL-36γ)的三个信号传导通路中的辅助受体，并且由这些细胞因子驱动许多疾病，单一的拮抗剂，这种可以抑制所有通路的抗体将具有相当大的治疗益处，并且特别是可用于治疗炎性疾病。

因此，需要一种具有跨多种或所有IL1细胞因子更广泛的同时抑制和更有力的生物活性的IL1RAP抗体。

发明内容

本发明通过提供与IL1RAP结合的生物治疗剂(特别是抗体)来解决上述需求。在一个方面，本发明的抗体经由关键炎性细胞因子的IL-33和IL-36信号传导通路家族阻断IL1RAP介导的细胞因子信号传导。在一个方面，本发明的抗体可用于例如治疗如银屑病、哮喘、自身免疫病、急性感染硬皮病、COPD和慢性肾脏病的疾病中的上皮介导的炎症/纤维化。

在一个方面，本发明提供了抗IL1RAP抗体，其具有以下特性中的一种或多种。

在一个方面，本发明的抗IL1RAPR抗体具有高分子/细胞结合效力。在一个方面，本发明的抗IL1RAP抗体以<1.0nM的K_D结合人IL1RAP。在另外的方面，本发明的抗IL1RAP抗体，特别是人源化抗IL1RAP抗体，以<200pM的K_D结合人和食蟹猴IL1RAP。

在实施方案二中，本发明提供了根据实施方案一所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是单克隆抗体或其抗原结合片段。

在实施方案三中，本发明提供了根据实施方案一或二所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是人源化抗体或其抗原结合片段。

在实施方案四中，本发明提供了根据实施方案三所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，所述抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段阻断IL-1、IL-33和IL-36信号传导。

在实施方案五中，本发明提供了根据实施方案一至四中任一项所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，所述抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段不结合人IL-1R1、IL-33R和IL-36R。

在实施方案六中，本发明提供了根据实施方案一所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3、6、117、118、119、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ IDNO:4、7、136、137、138、139、140或141的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8、11、12、14、142、143、144、145、146或147的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ ID NO:9、13、15、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166或167的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQID NO:10或16的氨基酸序列(H-CDR3)。

在实施方案七中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ IDNO:4的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:146的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝M或I，以及X2＝N或S(H-CDR1)；SEQ ID NO:165的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝D或G，X2＝A或T，X3＝N或A，X4＝Q或E，X5＝M或K，X6＝Q或K，以及X7＝D或G(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

c)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ IDNO:4的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:147的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝M、I，以及X2＝N或S(H-CDR1)；SEQ ID NO:165的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝D或G，X2＝A或T，X3＝N或A，X4＝Q或E，X5＝M或K，X6＝Q或K，以及X7＝D或G(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

e)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ IDNO:4的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

f)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:166的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝D或G(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

g)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ IDNO:4的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

h)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:167的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝D或G，以及X2＝T或A(H-CDR2)；SEQ ID NO:16的氨基酸序列(H-CDR3)。

在实施方案八中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQID NO:136的氨基酸序列；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

c)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

e)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

g)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQID NO:7的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

在实施方案九中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQID NO:137的氨基酸序列；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

c)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQID NO:137的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

g)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQID NO:139的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

在实施方案十中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:134的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝A或T，X2＝Q或E，X3＝S或N，以及X4＝N或S(L-CDR1)；SEQ ID NO:140的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝K或S，以及X2＝S或T(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:9的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

c)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:134的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝A或T，X2＝Q或E，X3＝S或N，以及X4＝N或S(L-CDR1)；SEQ ID NO:140的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝K或S，以及X2＝S或T(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQIDNO:9的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

e)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:134的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝A或T，X2＝Q或E，X3＝S或N，以及X4＝N或S(L-CDR1)；SEQ ID NO:140的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝K或S，以及X2＝S或T(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

f)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:13的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

g)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:135的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝Q或E，X2＝S或N，以及X3＝N或S(L-CDR1)；SEQ ID NO:141的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝K或S(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

h)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:15的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:16的氨基酸序列(H-CDR3)。

在实施方案十一中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:149的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:149的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

f)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:161的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

h)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:162的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:16的氨基酸序列(H-CDR3)。

在实施方案十二中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:153的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:153的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

在实施方案十三中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:148的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:148的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

在实施方案十四中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:148的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:148的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

在实施方案十五中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

在实施方案十六中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:151的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:151的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

h)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:163的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:16的氨基酸序列(H-CDR3)。

在实施方案十七中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQID NO:9的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

在实施方案十八中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

在实施方案十九中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

c)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ ID NO:153的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

在实施方案二十中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

在实施方案二十一中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

在实施方案二十二中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

在实施方案二十三中，本发明提供了根据实施方案六所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

在实施方案二十四中，本发明分别提供了根据实施方案十七至二十三所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:67的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列。

在实施方案二十五中，本发明提供了一种抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:170、171、172、173、174、175或176中任一个的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ IDNO:177、178、179、180、181、182或183中任一个的氨基酸序列的重链。

在实施方案二十六中，本发明提供了根据实施方案二十五所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:170的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:177的氨基酸序列的重链。

在实施方案二十七中，本发明提供了根据实施方案二十五所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:171的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:178的氨基酸序列的重链。

在实施方案二十八中，本发明提供了根据实施方案二十五所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:172的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:179的氨基酸序列的重链。

在实施方案二十九中，本发明提供了根据实施方案二十五所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:173的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:180的氨基酸序列的重链。

在实施方案三十中，本发明提供了根据实施方案二十五所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:174的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:181的氨基酸序列的重链。

在实施方案三十一中，本发明提供了根据实施方案二十五所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:175的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:182的氨基酸序列的重链。

在实施方案三十二中，本发明提供了根据实施方案二十五所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:176的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:183的氨基酸序列的重链。

在一个实施方案中，根据实施方案一至三十二中任一项所述的抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体。在一个实施方案中，根据实施方案一至二十五中任一项所述的抗体或其抗原结合片段是人源化抗体。在一个实施方案中，根据实施方案一至二十五中任一项所述的抗体或其抗原结合片段是单克隆人源化抗体。

在实施方案三十三中，本发明提供了一种抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3、117、118、119、120、121、122、123、124、125或134的氨基酸序列(L-CDR1)，SEQ ID NO:4、136、137、138或140的氨基酸序列(L-CDR2)，SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:8、142、143或146的氨基酸序列(H-CDR1)，SEQ ID NO:9、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160或165的氨基酸序列(H-CDR2)，SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3、117、118、119、120、121、122、123、124、125或134的氨基酸序列(L-CDR1)，SEQ ID NO:4、136、137、138或140的氨基酸序列(L-CDR2)，SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:11、144、145或147的氨基酸序列(H-CDR1)，SEQ ID NO:9、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160或165的氨基酸序列(H-CDR2)，SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3、117、118、119、120、121、122、123、124、125或134的氨基酸序列(L-CDR1)，SEQ ID NO:4、136、137、138或140的氨基酸序列(L-CDR2)，SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:12、142、143或146的氨基酸序列(H-CDR1)，SEQ ID NO:13、161的氨基酸序列(H-CDR2)，SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6、127、128、129、130、131、132、133、134或135的氨基酸序列(L-CDR1)，SEQ ID NO:7、139、141的氨基酸序列(L-CDR2)，SEQ IDNO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列(H-CDR1)，SEQ ID NO:15、162、163、164或167的氨基酸序列(H-CDR2)，SEQ ID NO:16的氨基酸序列(H-CDR3)。

在实施方案三十四中，本发明提供了抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:108的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:111的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列。

在另外的实施方案三十五中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含根据先前实施方案中任一项所述的抗体或抗原结合片段和药学上可接受的载体。

在另外的实施方案三十六中，本发明提供了根据先前实施方案中任一项所述的抗体或抗原结合片段或药物组合物，用作药物。

在另外的实施方案三十七中，本发明提供了根据实施方案1-34中任一项所述的抗体或抗原结合片段或药物组合物，其中所述用途是治疗炎性疾病、自身免疫病、呼吸系统疾病、代谢障碍、上皮介导的炎性障碍、纤维化或癌症。

在另外的实施方案三十八中，本发明提供了根据实施方案1至34中任一项所述的抗IL1RAP抗体或抗原结合片段，用于治疗疾病，其中所述疾病选自炎性疾病、自身免疫病、呼吸系统疾病、代谢障碍、上皮介导的炎性障碍、纤维化和癌症。

在另外的实施方案三十九中，本发明提供了根据实施方案1至34中任一项所述的抗IL1RAP抗体或抗原结合片段在制造用于治疗疾病的药物中的用途，其中所述疾病选自炎性疾病、自身免疫病、呼吸系统疾病、代谢障碍、上皮介导的炎性障碍、纤维化和癌症。

在另外的实施方案四十中，本发明提供了根据实施方案1-34中任一项所述的抗体或抗原结合片段，根据实施方案38所述的抗IL1RAP抗体或抗原结合片段，或根据实施方案39所述的抗IL1RAP抗体或抗原结合片段的用途，其中所述用途是用于治疗银屑病、银屑病关节炎、多发性硬化、类风湿性关节炎、COPD、慢性哮喘或强直性脊柱炎。

在另一个实施方案四十一中，本发明提供了治疗疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用根据实施方案1-34中任一项所述的抗体或抗原结合片段或药物组合物，其中所述疾病选自炎性疾病、自身免疫病、呼吸系统疾病、代谢障碍、上皮介导的炎性障碍、纤维化和癌症。

在另一个实施方案四十二中，本发明提供了根据实施方案41所述的方法，其中所述疾病选自银屑病、银屑病关节炎、多发性硬化、类风湿性关节炎、COPD、慢性哮喘和强直性脊柱炎。

本发明的另外的实施方案涵盖：

-一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码根据本发明的抗IL1RAP抗体或抗原结合片段的序列，优选DNA或RNA序列；

-根据本发明的分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸编码由SEQ ID NO:1至167或170-183中的一个或多个定义的序列；

-一种载体，所述载体包含根据本发明的多核苷酸，优选表达载体，更优选包含与表达控制序列功能上关联的根据本发明的多核苷酸的载体；

-一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据本发明的多核苷酸和/或根据本发明的载体；

-一种用于产生根据本发明的抗IL1RAP抗体或抗原结合片段的方法，优选重组产生方法，所述方法包括使用根据本发明的多核苷酸和/或根据本发明的载体和/或根据本发明的宿主细胞；

-这种方法优选包括步骤：(a)在允许抗IL1RAP抗体或抗原结合片段表达的条件下培养所述宿主细胞，和(b)回收所述抗IL1RAP抗体或抗原结合片段；

-一种包含根据本发明的抗IL1RAP抗体或抗原结合片段的诊断试剂盒或诊断方法，或所述诊断试剂盒或诊断方法的用途；

-根据本发明的诊断试剂盒或诊断方法，用于诊断炎性疾病、自身免疫病、呼吸系统疾病、代谢障碍、上皮介导的炎性障碍、纤维化、癌症、银屑病、银屑病关节炎、多发性硬化、类风湿性关节炎、COPD、慢性哮喘或强直性脊柱炎。

附图说明

图1：含有抗IL1RAP亲本克隆GO11 VH/VL CDR的嵌合和移植Fab的比较

图2A/D：对优化的VK克隆变体和VH克隆变体通过ELISA针对与huIL1RAP的结合(相比于嵌合亲本抗IL1RAP GO11 Fab)进行选择和筛选。(A)VK克隆405-03、405-07、405-04、405-05、405-10的比较，证明所选克隆405-10(SEQ ID NO:18)具有与嵌合亲本克隆GO11相似的结合；(B)VK克隆405-11、406-02、405-12、406-01、406-03的比较，证明所选VK克隆405-12(SEQ ID NO:12)具有与嵌合亲本克隆GO11相似的结合；(C)VH克隆406-04、406-15、406-08、406-10、406-18的比较，证明所选VH克隆405-18(SEQ ID NO:68)具有与嵌合亲本克隆GO11相似的结合；和(D)VH克隆406-20、406-21、406-26的比较，证明所选VH克隆406-20(SEQID NO:69)具有与嵌合亲本克隆GO11相似的结合。

图3A/B：种系优化的抗IL1RAP VL CDR(A)/VH(B)CDR的比较

图4A/D：A.在细胞因子刺激的MDM中，抗IL1RaP Ab抑制IL-12p40分泌(所示为来自从不同供体获得的MDM的两次实验中一个代表的技术一式三份的平均值±SD)。B.通过抗IL1Rap Ab抑制IL-36α、β、γ细胞因子刺激的人单核细胞衍生的树突细胞(MoDC)中IL-8(IC50＝3.95nM)、TNF(IC50＝6.45nM)和IL-6(IC50＝9.41nM)蛋白的产生。C.通过抗IL1RaPAb抑制IL-36γ刺激的全血(IC50＝4.37)和IL-36γ+IL-33刺激的全血(IC50＝3.43)中的髓样细胞源性介质Mip-1b。D.通过抗IL1RaP Ab抑制IL-33/IL-12刺激的全血细胞中IFNγ的产生(IC50＝4.84nM)。

图5A/D：IL-1RAcP:抗IL1RAP Ab#A2以及IL-1RAcP-IL-1RI-IL1β复合物的结构特征，以通过90°旋转相关的两个不同的视图示出。A.IL-1RAcP以淡蓝色示出，具有半透明表面。#A2 Fab显示为带状。重链和轻链分别为深灰色和浅灰色。B.表位的位置：为清楚起见，Fab显示为半透明带状。IL-1RAcP上Fab的表位以灰色示出。C.人IL-1RAcP-IL-1RI-IL1β三元复合物(pdb 4dep)的结构，其用于与(a)相同的取向上的比较。IL-1RI为红色并且IL-1β为绿色。D.IL-1RAcP-IL-1RI界面的IL-1RAcP-侧以橙色示出。为清楚起见，-IL-1RI和IL1β显示为半透明带状。

图6A/B：IL1RAP的HDX以及X射线表位的比较。A.HDX表位以黄色示出。它包含氨基酸残基226-262和269-273。B.如图5B所示的X射线表位，其中为了清楚起见除去了snit-IL1RAP Fab。

图7A/C：A.IV施用后猴血清中的抗IL-RAP游离药物水平(药物浓度(nM)与以小时计的时间点的关系)。B.IV施用后猴血清中的抗IL1RAP总药物水平(药物浓度(nM)与以小时计的时间点的关系)。C.IV施用后食蟹猴中的可溶性IL1RAP靶标水平(Conc(nM)与以小时计的时间点的关系)。

具体实施方式

本发明涉及抗IL1RAP抗体。在一个方面，本发明的抗体用于例如在人中的诊断和治疗用途。

本发明提供了结合IL1RAP(特别是人IL1RAP)的抗体。本发明还涉及结合IL1RAP的人源化抗体。在具体实施方案中，已经基于某些先导小鼠抗体的序列鉴定了这些人源化抗体的序列。

不希望受此理论的束缚，认为抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段结合人IL1RAP并且因此干扰IL1RAP激动剂的结合，并且这样做至少部分地阻断IL1RAP至炎性介质的信号传导级联。

在一个方面，本发明的抗IL1RAP抗体具有高分子/细胞结合效力。在一个方面，本发明的抗IL1RAP抗体以<0.1nM的K_D结合人IL1RAP。在另外的方面，本发明的抗IL1RAP抗体，特别是人源化抗IL1RAP抗体，以<200pM的K_D结合人和食蟹猴IL1RAP。

在另一个方面，本发明的抗IL1RAP抗体具有高的基于细胞的功能阻断效力。

在一个方面，本发明的抗IL1RAP抗体是人源化抗体。在一个方面，本发明的抗IL1RAP抗体是单克隆抗体。在一个方面，本发明的抗IL1RAP抗体是全长抗体。在一个方面，本发明的抗IL1RAP抗体是人源化单克隆抗体，例如全长人源化单克隆抗体。

本发明的抗体或其抗原结合片段识别特定的“IL1RAP抗原表位”或“IL1RAP表位”或“IL-1RAP表位”。如本文所用，这些术语是指能够与抗IL1RAP抗体进行免疫反应的分子(例如，肽)或分子的片段。

表位是最常见的蛋白质、短寡肽、寡肽模拟物(即，模拟IL1RAP抗原的抗体结合特性的有机化合物)或其组合。抗体的肽或多肽表位的最小大小被认为是大约四至五个氨基酸。肽或多肽表位含有例如至少七个氨基酸或例如至少九个氨基酸或例如约15个至约20个之间的氨基酸。由于抗体可以识别其三级形式的抗原肽或多肽，因此包含表位的氨基酸不需要是连续的，并且在一些情况下，甚至可能不在同一肽链上。可以通过本领域已知的各种技术来确定表位，如x射线晶体学、氢/氘交换质谱(HXMS)、定点诱变、丙氨酸扫描诱变和肽筛选方法。

抗体或免疫球蛋白的一般结构是本领域技术人员所熟知的。这些分子是异四聚体糖蛋白，通常是约150,000道尔顿，由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链构成，并且通常称为全长抗体。每条轻链通过一个二硫键共价连接至重链以形成异二聚体，并且异二聚体分子通过在异二聚体的两条相同重链之间的共价二硫键来形成。尽管轻链和重链通过一个二硫键连接在一起，但是两条重链之间的二硫键数量因免疫球蛋白同种型而不同。每条重链和轻链还具有规则间隔的链内二硫桥。每条重链在氨基端具有可变结构域(V_H)，后接三个或四个恒定结构域(C_H1、C_H2、C_H3和C_H4)，以及C_H1与C_H2之间的铰链区。每条轻链具有两个结构域，即氨基端可变结构域(V_L)和羧基端恒定结构域(C_L)。V_L结构域与V_H结构域非共价缔合，而C_L结构域通常通过二硫键共价连接至C_H1结构域。认为特定的氨基酸残基在轻链与重链可变结构域之间形成界面(Chothia等人,1985,J.Mol.Biol.186:651-663)。可变结构域在本文中也称为可变区。

在不同抗体之间，可变结构域内的某些结构域差异很大，即是“高变的”。这些高变结构域含有直接参与每种特定抗体对其特异性抗原决定簇的结合和特异性的残基。轻链和重链可变结构域中的高变性都集中在被称为互补决定区(CDR)或高变环(HVL)的三个区段中。CDR由Kabat等人,1991,In:Sequences of Proteins of Immunological Interest,5^thEd.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.中的序列比较来定义，而HVL(在本文中也称为CDR)在结构方面是根据可变结构域的三维结构定义，如Chothia和Lesk,1987,J.Mol.Biol.196:901-917所述。这两种方法导致CDR的略微不同的鉴定。如Kabat所定义，在轻链可变结构域中，CDR-L1位于约残基24-34，CDR-L2位于约残基50-56，并且CDR-L3位于约残基89-97；在重链可变结构域中，CDR-H1位于约残基31-35，CDR-H2位于约残基50-65，并且CDR-H3位于约残基95-102。涵盖特定CDR的确切残基数将根据CDR的序列和大小而变化。虽然Kabat和Chothia方案分别处理了免疫球蛋白结构域的不同家族，但Lefranc和同事提出了一种统一的编号方案，称为IMGT编号方案，用于免疫球蛋白可变结构域基因组序列(包括Ab轻和重可变结构域)以及T细胞受体可变结构域(Lefranc MP,等人IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variabledomainsand Ig superfamily V-like domains and Ig superfamily V-like domains.Dev CompImmunol(2003)27:55-77)。

如上所述，Kabat、Chothia和IMGT编号方案之间有差异和缺点，其中CDR长度变量仅考虑最常见的环长度，并且因此取决于使用的编号方案会有一些不一致。在一些情况下，通过本文包括的四种方法鉴定的CDR中的一些是几乎相同的(例如L3、H3)，而在其他CDR(例如L2、H1和H2)中，所述方法之间有实质性差异。因此，为了完整起见，根据每个编号规则指示本发明实施方案的CDR，以最好地鉴定关键的Ag结合残基(参见下表1-表4)。在给定抗体的可变区氨基酸序列的情况下，本领域技术人员可以常规地确定哪些残基包含特定的CDR。因此，重链和轻链的CDR1、CDR2、CDR3定义了给定抗体所特有的独特和功能特性。

根据四种不同命名法的CDR序列

抗体A#1-A#7的可变轻链和可变重链区的CDR 1-3通过SEQ ID NO列举，并且根据下表1中的Kabat命名法呈现。

表1：根据Kabat命名法的CDR

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抗体A#1-A#7的可变轻链和可变重链区的CDR 1-3根据下表2中的CCG(ChemicalComputing Group，如Almagro等人,Proteins 2011；79:3050-3066和Maier等人,Proteins2014；82:1599-1610中所说明)呈现。

表2：根据CCG命名法的CDR

/>

在下表3中，针对抗体A#1-A#7的可变轻链和可变重链区的CDR 1-3，呈现了基于Chothia方案的另外的编号系统。

表3：根据Chothia命名法的CDR

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基于IMGT编号方案(Lefranc MP,等人IMGT unique numbering forimmunoglobulin andT cell receptor variable domains and Ig superfamily V-likedomains and Ig superfamily V-likedomains.Dev Comp Immunol(2003)27:55-77)，抗体A#1-A#7 C的可变轻链和可变重链区的CDR 1-3呈现在下表4中。

表4：根据IMGT命名法的CDR

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在Kabat、CCG、Chothia或IMGT位置(表1-表4)的情境下指示的氨基酸位置是线性的，即，各自的全长分子链的氨基酸从N末端的编号1开始连续编号，并且以对应于所述分子中氨基酸总数的编号结束。例如，由长度118个氨基酸组成的重链将在N末端以编号1开始，并且在最C末端氨基酸以编号118结束。因此，对例如位置25的任何引用意味着从此分子的N末端计数的氨基酸编号25。

条重链和轻链内的三个CDR被框架区(FR)隔开，所述框架区包含的序列倾向于可变性较小。从重链和轻链可变结构域的氨基端到羧基端，FR和CDR按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。FR的主要β-折叠构型使每条链内的CDR彼此紧靠，并且紧靠另一条链的CDR。所得构型促成抗原结合位点(参见Kabat等人,1991,NIH出版号91-3242,第I卷,第647-669页)，但不是所有的CDR残基都必需直接参与抗原结合。

FR残基和Ig恒定结构域不直接参与抗原结合，但有助于抗原结合和/或介导抗体效应子功能。一些FR残基被认为以至少以下三种方式对抗原结合具有显著作用：通过直接非共价结合至表位、通过与一个或多个CDR残基相互作用以及通过影响重链与轻链之间的界面。恒定结构域不直接参与抗原结合，但介导各种Ig效应子功能，例如抗体参与抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。

基于恒定结构域的氨基酸序列，脊椎动物免疫球蛋白的轻链被分配给两个明显不同的类别(即卡帕(κ)和拉姆达(λ))之一。通过比较，根据恒定结构域的序列，将哺乳动物免疫球蛋白的重链分配给以下五个主要类别之一：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。IgG和IgA进一步分为亚类(同种型)，例如IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁和IgA₂。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。天然免疫球蛋白类别的亚基结构和三维构型是已熟知的。

术语，“抗体”、“抗IL1RAP抗体”、“抗IL1-RAP抗体”、“人源化抗IL1RAP抗体”、“人源化抗IL1RAP表位抗体”和“变体人源化抗IL1RAP表位抗体”具体地涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)以及抗体片段(如展现出所需生物活性(例如IL1RAP结合)的抗体的可变结构域和其他部分)。人源化抗体大部分是人免疫球蛋白(例如，嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗体的其他抗原结合子序列)，其含有源自非人免疫球蛋白的最小序列)，其中来自接受者的互补决定区(CDR)的残基被来自非人物种(如小鼠、大鼠或兔)的具有所需特异性、亲和力和生物活性的CDR的残基替代。术语“单克隆抗体”(mAb)是指针对单个抗原决定簇(“表位”)的高度特异性的抗体。因此，修饰语“单克隆”表示针对相同表位的抗体，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。应理解，单克隆抗体可以通过本领域已知的任何技术或方法制备；所述技术或方法包括例如杂交瘤方法(Kohler等人,1975,Nature 256:495)，或本领域已知的重组DNA方法(参见例如，美国专利号4,816,567)，或使用噬菌体抗体文库分离重组产生的单克隆的方法，使用在Clackson等人,1991,Nature 352:624-628和Marks等人,1991,J.Mol.Biol.222:581-597中所描述的技术。

术语“单体”是指抗体的同质形式。例如，对于全长抗体，单体意指具有两条相同重链和两条相同轻链的单体抗体。

嵌合抗体由来自一个物种(例如非人哺乳动物，例如小鼠)的抗体的重链和轻链可变区和另一个物种(例如，人)抗体的重链和轻链恒定区组成，并且可以通过以下方式获得：将编码来自第一物种(例如小鼠)的抗体可变区的DNA序列连接至来自第二物种(例如人)的抗体恒定区的DNA序列，并用含有连接的序列的表达载体转化宿主以使其产生嵌合抗体。可替代地，嵌合抗体也可以是这样一种抗体，其中重链和/或轻链的一个或多个区域或结构域与来自另一种免疫球蛋白类别或同种型或来自共有序列或种系序列的单克隆抗体中的相应序列相同、同源或为其变体。嵌合抗体可以包括此类抗体的片段，条件是该抗体片段展现出其亲本抗体的所需生物活性，例如与相同表位结合(参见例如美国专利号4,816,567；和Morrison等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855)。

术语“抗体片段”、“抗IL1RAP抗体片段”、“抗IL1RAP表位抗体片段”、“人源化抗IL1RAP抗体片段”、“人源化抗IL1RAP表位抗体片段”、“变体人源化抗IL1RAP表位抗体片段”是指全长抗IL1RAP抗体的一部分，其中保留了可变区或功能能力，例如特定的IL1RAP表位结合。抗体片段的例子包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')₂、Fd、Fv、scFv和scFv-Fc片段、双抗体、线性抗体、单链抗体、微型抗体、由抗体片段形成的双抗体和由抗体片段形成的多特异性抗体。

全长抗体可用如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶的酶处理以产生有用的抗体片段。木瓜蛋白酶消化用于产生两个相同的称为“Fab”片段的抗原结合抗体片段(每个片段具有单个抗原结合位点)以及一个残余的“Fc”片段。Fab片段还含有轻链的恒定结构域和重链的C_H1结构域。胃蛋白酶处理产生F(ab')₂片段，其具有两个抗原结合位点并且仍然能够交联抗原。

Fab'片段与Fab片段的差异在于存在另外的残基，包括来自C_H1结构域C端的抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。F(ab')₂抗体片段是通过铰链区中的半胱氨酸残基连接的Fab'片段对。抗体片段的其他化学偶合也是已知的。

“Fv”片段含有完整的抗原识别和结合位点，其由紧密地非共价缔合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体组成。在此构型中，每个可变结构域的三个CDR相互作用以限定V_H-V_L二聚体的表面上的抗原结合位点。总之，六个CDR为抗体赋予抗原结合特异性。

“单链Fv”或“scFv”抗体片段是包含抗体的V_H和V_L结构域的单链Fv变体，其中所述结构域存在于单个多肽链中。单链Fv能够识别并结合抗原。scFv多肽还可任选地含有位于V_H与V_L结构域之间的多肽接头，以便有利于形成用于scFv的抗原结合的所需三维结构(参见例如，Pluckthun,1994,The Pharmacology of monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编辑,Springer-Verlag,纽约,第269-315页)。

“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，所述片段包含在同一多肽链中连接至轻链可变结构域(V.sub.L)的重链可变结构域(V.sub.H)(V.sub.H-V.sub.L或V.sub.L-V.sub.H)。双抗体更充分地描述于例如Holliger等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448中。

其他公认的抗体片段包括含有一对串联Fd区段(V_H-C_H1-V_H-C_H1)以形成一对抗原结合区的那些抗体片段。这些“线性抗体”可以是双特异性或单特异性的，如例如在Zapata等人1995,Protein Eng.8(10):1057-1062中所述。

“人源化抗体”或“人源化抗体片段”是特定类型的嵌合抗体，所述嵌合抗体包括免疫球蛋白氨基酸序列变体或其片段，所述嵌合抗体能够结合预定抗原，并且包含一个或多个基本上具有人免疫球蛋白氨基酸序列的FR和一个或多个基本上具有非人免疫球蛋白氨基酸序列的CDR。通常被称为“输入”序列的此非人氨基酸序列通常得自“输入”抗体结构域，特别是可变结构域。通常，人源化抗体至少包含非人抗体的CDR或HVL，所述CDR或HVL插入在人重链或轻链可变结构域的FR之间。本发明描述了特异性人源化抗IL1RAP抗体，其含有源自小鼠单克隆抗体的CDR或人源化CDR，所述CDR插入在人种系序列重链和轻链可变结构域的FR之间。应当理解，某些小鼠FR残基可能对于人源化抗体的功能十分重要，并且因此人种系序列重链和轻链可变结构域的某些残基被修饰为与相应小鼠序列的那些残基相同。

在另一方面，人源化抗IL1RAP抗体包含至少一个且通常是两个可变结构域的基本上全部(如包含在例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fabc和Fv片段中)，其中所有或基本上所有的CDR都对应于非人免疫球蛋白的那些CDR，并且特别是在本文中，所有CDR都是下文所详述的小鼠或人源化序列，并且所有或基本上所有的FR都是人免疫球蛋白共有序列或种系序列的那些。在另一方面，人源化抗IL1RAP抗体还包含免疫球蛋白Fc区(通常是人免疫球蛋白的Fc区)的至少一部分。通常，所述抗体将包含轻链以及至少重链的可变结构域二者。所述抗体适当时还可以包含重链的C_H1、铰链、C_H2、C_H3和/或C_H4区中的一个或多个。

人源化抗IL1RAP抗体可以选自任何种类的免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何同种型，包括IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁和IgA₂。例如，恒定结构域可以是补体固定恒定结构域，其中期望人源化抗体表现出细胞毒性活性，并且同种型通常是IgG₁。当不需要这种细胞毒性活性时，恒定结构域可以是另一种同种型，例如IgG₂。替代性人源化抗IL1RAP抗体可包含来自多于一种免疫球蛋白类别或同种型的序列，并且选择特定的恒定结构域以优化所需的效应子功能是在本领域普通技术范围内。在具体实施方案中，本发明提供了抗体，其是IgG1抗体并且更具体地，是其中敲除效应子功能的IgG1抗体。

人源化抗IL1RAP抗体的FR和CDR或HVL不需要精确地对应于亲本序列。例如，可以通过取代、插入或缺失来改变(例如，诱变)输入CDR或HVL或者共有或种系FR序列中的一个或多个残基，使得所得氨基酸残基不再与任一亲本序列的对应位置中的原始残基相同，但所述抗体仍然保留与IL1RAP结合的功能。这种改变通常不会是广泛的并且将是保守改变。通常，至少75％(更经常地至少90％，并且最经常地大于95％或大于98％或大于99％)的人源化抗体残基将对应于亲本共有或种系FR和输入CDR序列的那些残基。

影响重链可变区与轻链可变区之间的界面(“V_L-V_H界面”)的免疫球蛋白残基是影响两条链相对于彼此的接近或取向的那些残基。可能参与链间相互作用的某些残基包括V_L残基34、36、38、44、46、87、89、91、96和98，以及V_H残基35、37、39、45、47、91、93、95、100和103(利用Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest(NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.,1987)中提出的编号系统)。美国专利号6,407,213还讨论，如V_L残基43和85以及V_H残基43和60的残基也可能参与此相互作用。尽管这些残基仅针对人IgG而指示，但它们可跨物种适用。选择合理预期会参与链间相互作用的重要抗体残基来取代到共有序列中。

术语“共有序列”和“共有抗体”是指在任何特定类别、同种型或亚基结构的所有免疫球蛋白(例如人免疫球蛋白可变结构域)的每个位置处包含最频繁出现的氨基酸残基的氨基酸序列。共有序列可以是基于特定物种或许多物种的免疫球蛋白。“共有”序列、结构或抗体应理解为涵盖如某些实施方案中所述的共有人序列，并且是指在任何特定类别、同种型或亚基结构的所有人免疫球蛋白的每个位置处包含最频繁出现的氨基酸残基的氨基酸序列。因此，共有序列含有如下氨基酸序列：其在每个位置具有存在于一个或多个已知免疫球蛋白中的氨基酸，但可能不完全复制任何单个免疫球蛋白的整个氨基酸序列。可变区共有序列并非从任何天然产生的抗体或免疫球蛋白获得。Kabat等人,1991,Sequences ofProteins of Immunological Interest,第5版Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.，和其变体。

人种系序列是在人群体中自然发现的。这些种系基因的组合产生抗体多样性。抗体轻链的种系抗体序列来自保守的人种系κ或λv基因和j基因。类似地，重链序列来自种系v、d和j基因(LeFranc,M-P和LeFranc,G,“The Immunoglobulin Facts Book”AcademicPress,2001)。

如本文所用，“变体”、“抗IL1RAP变体”、“人源化抗IL1RAP变体”或“变体人源化抗IL1RAP”各自是指至少具有轻链可变鼠CDR的人源化抗IL1RAP抗体。变体包括在轻链或重链可变结构域之一者或二者中具有一个或多个氨基酸变化的那些变体，条件是所述氨基酸变化基本上不损害抗体与IL1RAP的结合。

“分离的”抗体是已鉴定并且与其天然环境的组分分离和/或从其天然环境的组分回收的抗体。抗体的天然环境中的污染组分是可能干扰抗体的诊断或治疗用途的那些物质，并且可以是酶、激素或其他蛋白质或非蛋白质溶质。在一个方面，抗体将被纯化到以抗体重量计至少大于95％分离。

分离的抗体包括在产生所述抗体的重组细胞内的原位抗体，因为抗体的天然环境的至少一种组分将不存在。然而，通常，分离的抗体将通过至少一个纯化步骤来制备，其中去除重组细胞材料。

术语“抗体性能”是指有助于抗体识别抗原或抗体在体内的有效性的因素。抗体氨基酸序列的变化可能影响抗体特性(例如折叠)，并且可能影响物理因素，例如抗体与抗原结合的初始速率(k_a)、抗体与抗原的解离常数(k_d)、抗体对抗原的亲和常数(Kd)、抗体的构象、蛋白质稳定性和抗体的半衰期。

当在本文中使用时，术语“表位标记的”是指与“表位标签”融合的抗IL1RAP抗体。“表位标签”是具有足够氨基酸数量以提供用于抗体产生的表位的多肽，但被设计为使其不干扰人源化抗IL1RAP抗体的所需活性。表位标签通常是足够独特的，使得针对所述表位标签产生的抗体基本上不会与其他表位交叉反应。合适的标签多肽通常含有至少6个氨基酸残基，并且通常含有约8至50个氨基酸残基或约9至30个残基。表位标签和结合该表位的抗体的例子包括flu HA标签多肽和其抗体12CA5(Field等人,1988Mol.Cell.Biol.8:2159-2165)；c-myc标签和其8F9、3C7、6E10、G4、B7和9E10抗体(Evan等人,1985,Mol.Cell.Biol.5(12):3610-3616)；和单纯疱疹病毒糖蛋白D(gD)标签和其抗体(Paborsky等人1990,Protein Engineering 3(6):547-553)。在某些实施方案中，表位标签是“补救受体结合表位”。如本文所用，术语“补救受体结合表位”是指IgG分子(例如IgG₁、IgG₂、IgG₃或IgG₄)的Fc区的表位，其负责增加IgG分子的体内血清半衰期。

在一些实施方案中，本发明的抗体可以缀合至细胞毒性剂。这是抑制或预防细胞功能和/或引起细胞破坏的任何物质。所述术语旨在包括放射性同位素(例如I¹³¹、I¹²⁵、Y⁹⁰和Re¹⁸⁶)、化学治疗剂和毒素，例如细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素及其片段。此类细胞毒性剂可以使用标准程序来缀合至本发明的人源化抗体，并且例如用于治疗被指示使用所述抗体治疗的患者。

“化学治疗剂”是可用于治疗癌症的化合物。可以与本发明的治疗性抗体缀合的化学治疗剂存在许多例子。此类化学治疗剂的例子包括烷化剂，例如塞替派和环磷酰胺；烷基磺酸酯，例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类，例如苯并替派、卡波醌、美妥替派(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺、三亚乙基三聚氰胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基三聚氰胺；多聚乙酰(特别是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康)；苔藓抑素；卡利司他汀；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；念珠藻素(特别是念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司他汀；瑞奥斯他汀(auristatin)(包括类似物单甲基-瑞奥斯他汀E和单甲基-瑞奥斯他汀F)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物KW-2189和CBI-TMI)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustard)(例如苯丁酸氮芥)、萘氮芥(chlomaphazine)、氯磷酰胺(chlorophosphamide)、雌氮芥、异环磷酰胺、氮芥(mechlorethamine)、盐酸甲氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑、新恩比兴、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲，例如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀(ranimustine)；抗生素，如烯二炔抗生素(例如卡奇霉素，尤其是卡奇霉素γ1I和卡奇霉素(参见例如，Agnew,Chem.Intl.Ed.Engl.,33:183-186)；达尼霉素(dynemicin)，包括达尼霉素A；双磷酸盐，如氯膦酸盐；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素生色团和相关色蛋白烯二炔抗生素生色团)、阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素、放线菌素C(cactinomycin)、卡拉比星(carabicin)、洋红霉素(caminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、更生霉素、柔红霉素、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(Adriamycin^TM)(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(如丝裂霉素C)、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素(olivomycins)、培洛霉素(peplomycin)、泛霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁多柔比星(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链脲菌素(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物，如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷；雄激素，如卡普睾酮(calusterone)、丙酸甲雄烷酮(dromostanolone propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯；抗肾上腺素，如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲络司坦(trilostane)；叶酸补充剂，如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基酮戊酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；贝斯布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲酯(edatraxate)；去氧胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依法磷酸(elfornithine)；依利醋氨；埃博霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓(gallium nitrate)；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明(lonidainine)；类美登素(maytansinoids)，如美登素(maytansine)和安丝菌素；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫吡坦(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；丙亚胺(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofuran)；锗螺胺(spirogermanium)；替奴佐酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯(trichothecene)(尤其是T-2毒素、维拉库林A(verracurin A)、漆斑菌素A(roridin A)和蛇形菌素(anguidine)；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷(pipobroman)；加息托星(gacytosine)；阿糖胞苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替派；紫杉烷，例如紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology，普林斯顿，新泽西州)和多西他赛(doxetaxel)(/>Rhone-Poulenc Rorer，安斯艾尔，法国)；苯丁酸氮芥；吉西他滨(Gemzar^TM)；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，例如顺铂和卡铂；长春碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨Navelbine^TM)；米托恩醌；替尼泊苷；依达曲塞；道诺霉素；氨基蝶呤；希罗达(xeloda)；伊班膦酸；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类维生素A，例如视黄酸；卡培他滨；以及上述任一者的药学上可接受的盐、酸或衍生物。此定义中还包括用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素药，例如抗雌激素药和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括Nolvadex^TM)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、可莫昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)(Fareston^TM)；抑制调节肾上腺的雌激素产生的酶芳香酶的芳香酶抑制剂，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特、乙酸甲地孕酮(Megace^TM)、依西美坦、福美斯坦、法倔唑、伏洛唑(Rivisor^TM)、来曲唑(Femara^TM)和阿那曲唑(Arimidex^TM)；以及抗雄激素，如氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及上述任一者的药学上可接受的盐、酸或衍生物。这些药剂中的任何一种或多种可以缀合至本发明的人源化抗体，以提供用于治疗各种障碍的有用治疗剂。

抗体也可以缀合至前药。“前药”是药学活性物质的前体或衍生物形式，其与亲本药物相比对肿瘤细胞的细胞毒性较小，并且能够被酶促活化或转化为活性更高的形式。参见例如，Wilman,1986,“Prodrugs in Cancer Chemotherapy”,Biochemical SocietyTransactions,14,第375-382页,615th Meeting Belfast和Stella等人,1985,“Prodrugs:AChemical Approach to Targeted Drug Delivery,”Directed Drug Delivery,Borchardt等人,(编),第247-267页,Humana Press。有用的前药包括但不限于含有磷酸酯的前药、含有硫代磷酸酯的前药、含有硫酸酯的前药、含有肽的前药、D-氨基酸修饰的前药、糖基化的前药、含有β-内酰胺的前药、含有任选地取代的苯氧基乙酰胺的前药以及含有任选地取代的苯基乙酰胺的前药、5-氟胞嘧啶和可以转化为活性更强的无细胞毒性药物的其他5-氟尿苷前药。可以衍生为前药形式的细胞毒性药物的例子包括但不限于上文所述的那些化学治疗剂。

对于诊断以及治疗监测的目的，本发明的抗体也可以缀合至标记物，所述标记物可以是单独的标记物或者标记物和另外的第二药剂(前药、化学治疗剂等)。与其他第二药剂区分开的标记物是指作为可检测化合物或组合物的药剂，并且其可以直接或间接缀合至本发明的人源化抗体。标记物本身可以是可检测的(例如，放射性同位素标记物或荧光标记物)，或者在酶标记物的情况下，可以催化底物化合物或组合物的可检测的化学改变。可以制备标记的人源化抗IL1RAP抗体，并将其用于各种应用中，包括体外和体内诊断。

本发明的抗体可以配制成脂质体制剂的一部分，以便实现其在体内的递送。“脂质体”是由各种类型的脂质、磷脂和/或表面活性剂构成的小囊泡。脂质体可用于向哺乳动物递送化合物或配制品，如本文公开的人源化抗IL1RAP抗体，其任选地与一种或多种药物活性剂和/或标记物偶合或组合。脂质体的组分通常以双层形式排列，类似于生物膜的脂质排列。

本发明的某些方面涉及编码本发明的人源化抗体的一个或多个结构域的分离的核酸。“分离的”核酸分子是从至少一种污染核酸分子中鉴定和分离的核酸分子，所述核酸分子在抗体核酸的天然来源中通常与所述污染核酸分子缔合。分离的核酸分子与天然细胞中存在的核酸分子区别。

在本发明的各个方面，将重组表达人源化抗体的一个或多个结构域。这种重组表达可以采用一个或多个控制序列，即在特定宿主生物中表达可操作连接的编码序列所必需的多核苷酸序列。适用于原核细胞的控制序列包括例如启动子、操纵基因和核糖体结合位点序列。真核生物控制序列包括但不限于启动子、聚腺苷酸化信号和增强子。这些控制序列可用于在原核和真核宿主细胞中表达并产生人源化抗IL1RAP抗体。

当核酸序列与另一核酸序列处于功能关系时，所述核酸序列是“可操作连接的”。例如，如果核酸前序列或分泌前导序列被表达为参与多肽分泌的前蛋白，则其与编码所述多肽的核酸可操作地连接；如果启动子或增强子影响编码序列的转录，则其可操作地与所述序列连接；或者如果核糖体结合位点的定位有助于翻译，则其可操作地连接至编码序列。通常，“可操作地连接”意指被连接的DNA序列是邻接的，并且在分泌前导序列的情况下，是邻接的并且在阅读框中。然而，增强子任选地是邻接的。可以通过在方便的限制性位点处进行连接来实现连接。如果不存在此类位点，则可以使用合成的寡核苷酸衔接子或接头。

如本文所用，表述“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可互换使用，并且所有此类名称均包括其后代。因此，“转化体”和“转化细胞”包括原代受试细胞和源自它的培养物，无需考虑转移次数。

用于治疗目的的术语“哺乳动物”是指被分类为哺乳动物的任何动物，包括人、家畜和农场动物，以及动物园动物、运动动物或宠物动物，例如狗、马、猫、牛等。优选地，哺乳动物是人。

如本文所用，“障碍”是将受益于使用本文所述的人源化抗IL1RAP抗体进行的治疗的任何病症。这包括慢性和急性障碍或疾病，包括使哺乳动物易患讨论中的障碍的那些病理病症。本文要治疗的非限制性例子或障碍包括炎性障碍、血管生成障碍、自身免疫性障碍和免疫障碍、呼吸系统障碍、癌症、血液恶性肿瘤、良性和恶性肿瘤、白血病和淋巴恶性肿瘤。

术语“癌症”和“癌性的”是指或描述哺乳动物中通常以不受调节的细胞生长为特征的生理状况。癌症的例子包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病。

IL1RAP相关障碍包括免疫系统的疾病和障碍，如自身免疫性障碍和炎性障碍。此类病症包括但不限于类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、硬皮病、舍格伦综合征、多发性硬化、银屑病、银屑病关节炎、肺部炎症、哮喘、特发性血小板减少性紫癜(ITP)上皮炎性障碍、纤维化和强直性脊柱炎。

术语“静脉内输注”是指在超过大约15分钟、通常在大约30至90分钟之间的时间段内，将药剂引入动物或人患者的静脉中。

术语“静脉团注”或“静脉推注”是指将药物施用至动物或人的静脉中，使得身体在大约15分钟或更短的时间内，通常在5分钟或更短的时间内接受所述药物。

术语“皮下施用”是指通过从药物容器相对缓慢的持续递送，将药剂引入动物或人患者的皮肤下，优选在皮肤与下层组织之间的囊袋内。向上且远离下层组织掐捏或拉拔皮肤可以产生囊袋。

术语“皮下输注”是指通过在包括但不限于30分钟或更短或者90分钟或更短的时间段中从药物容器相对缓慢的持续递送，将药剂引入动物或人患者的皮肤下，优选在皮肤与下层组织之间的囊袋内。任选地，输注可以通过皮下植入在动物或人患者的皮肤下植入的药物递送泵来进行，其中所述泵在预定的时间段(例如30分钟、90分钟或跨越治疗方案的长度的时间段)中递送预定量的药物。

术语“皮下团注”是指在动物或人患者的皮肤下进行药物施用，其中团注药物递送少于大约15分钟；在另一个方面，少于5分钟，并且在又另一个方面，少于60秒。在还又另一个方面，施用在皮肤与下层组织之间的囊袋内进行，其中所述囊袋可以通过向上且远离下层组织掐捏或拉拔皮肤来产生。

术语“治疗有效量”用于指代活性剂缓解或改善所治疗障碍的一种或多种症状的量。在另一个方面，治疗有效量是指已经显示出在例如减慢疾病进展中有效的目标血清浓度。根据待治疗的病症，可以按常规方式测量功效。

如本文所用，术语“治疗”和“疗法”等意指包括导致任何临床上需要或有益的效果的对疾病或障碍的治疗性以及预防性或抑制性措施，包括但不限于改善或缓解一种或多种症状、消除、减慢或停止疾病或障碍的进展。因此，例如，术语治疗包括在疾病或障碍的症状发作之前或之后施用药剂，从而预防或去除所述疾病或障碍的一种或多种体征。作为另一个例子，所述术语包括在疾病的临床表现后施用药剂以对抗疾病的症状。此外，在施用影响疾病或障碍的临床参数(例如组织损伤的程度或者转移的量或程度)的情况下，无论所述治疗是否导致疾病的改善，在发作之后并且在临床症状已发展之后施用药剂都构成如本文所用的“治疗”或“疗法”。此外，只要与不使用人源化抗IL1RAP抗体组合物的情况下的症状相比，单独的或与另一种治疗剂组合的本发明的组合物减轻或改善所治疗障碍的至少一种症状，则无论是否缓解了所述障碍的所有症状，结果都应被认为是对潜在障碍的有效治疗。

术语“包装插页”用于指代通常包括在治疗产品的商业包装中的说明书，所述说明书包含关于此类治疗产品的适应证、用法、施用、禁忌证和/或有关使用的警告的信息。

抗体

在一个方面，本文描述和公开了抗IL1RAP抗体(特别是人源化抗IL1RAP抗体)，以及包含本发明的一种或多种抗IL1RAP抗体(特别是一种或多种人源化抗IL1RAP抗体)的组合物和制品。

以下公开了本发明的代表性抗体的可变区和CDR：

抗IL1RAP小鼠抗体序列

本发明的代表性小鼠先导抗体(小鼠先导物)的可变区和CDR示于下文：

轻链可变区(VK)氨基酸序列

重链可变区(VH)氨基酸序列

根据Kabat、CCG、Chothia和IMGT命名法的轻链CDR-1、CDR-2、CDR3(L-CDR1-3)和重链CDR-1、CDR-2、CDR3(L-CDR1-3)氨基酸序列

表5：KABAT命名法

表6：CCG命名法

表7：CHOTHIA命名法

表8：IMGT命名法

抗IL1RAP人源化抗体序列

基于框架同源性、CDR结构、保守典范残基、保守界面堆砌残基和其他参数，为小鼠先导物选择人框架序列，以产生人源化可变区(参见实施例1-实施例2)。

源自抗体opt-27-opt73的代表性人源化可变区示于下文。

表9：轻链可变区(VK)氨基酸序列

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表10：重链可变区(VH)氨基酸序列

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下文描绘了来自人源化可变区的CDR序列，这些人源化可变区为来自源自鼠抗体005-GO11的克隆OPT 27-73的VL/VH，这些克隆包括Opt-43(#A2)、Opt 47(#A3)、Opt-54(#A4)、Opt-57(#A5)、Opt-58(#A6)和Opt-59(#A7)。CDR是根据KABAT、CCG、CHOTHIA和IMGT的命名规则指示的。

表11：L-CDR1氨基酸序列-KABAT、CCG和CHOTHIA

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表12：L-CDR1氨基酸序列-IMGT

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表13：L-CDR2氨基酸序列-KABAT、CCG和CHOTHIA

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表14：L-CDR2氨基酸序列-IMGT

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表15：L-CDR3氨基酸序列-KABAT、CCG、Chothia和IMGT

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表16：H-CDR1氨基酸序列-KABAT

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表17：H-CDR1氨基酸序列-CCG

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表18：H-CDR1氨基酸序列-CHOTHIA

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表19：H-CDR1氨基酸序列-IMGT

表20：H-CDR2氨基酸序列-KABAT、CCG

表21：H-CDR2氨基酸序列-CHOTHIA

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表22：H-CDR2氨基酸序列-IMGT

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表23：H-CDR3氨基酸序列-KABAT、CCG、CHOTHI

表24：H-CDR3氨基酸序列-IMGT

在一个方面，本发明的可变区连接至恒定区。例如，将本发明的可变区连接到下文所示的恒定区以形成抗体的重链或轻链。

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本发明的代表性轻链和重链序列示于下文(源自005-GO11亲本(A1)的人源化可变区：opt-43(A2)、opt 47(A3)、opt-54(A4)、opt-57(A5)、opt-58(A6)和opt-59(A7)连接至恒定区)。

重链氨基酸序列

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在一个方面，本发明的抗体包含3个轻链CDR和3个重链CDR，例如如上所述的表中所列出的。

在一个方面，本发明的抗体包含如上所列出的轻链和重链可变区。在一个方面中，本发明的轻链可变区融合至轻链恒定区，例如κ或λ恒定区。在一个方面，本发明的重链可变区融合至重链恒定区，例如IgA、IgD、IgE、IgG或IgM，特别是IgG₁、IgG₂、IgG₃或IgG₄。

本发明提供了一种抗IL1RAP抗体，其包含含有SEQ ID NO:170的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:177的氨基酸序列的重链(抗体A1)。

本发明提供了一种抗IL1RAP抗体，其包含含有SEQ ID NO:171的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:178的氨基酸序列的重链(抗体A2)。

本发明提供了一种抗IL1RAP抗体，其包含含有SEQ ID NO:172的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:179的氨基酸序列的重链(抗体A3)。

本发明提供了一种抗IL1RAP抗体，其包含含有SEQ ID NO:173的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:180的氨基酸序列的重链(抗体A4)。

本发明提供了一种抗IL1RAP抗体，其包含含有SEQ ID NO:174的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:181的氨基酸序列的重链(抗体A5)。

本发明提供了一种抗IL1RAP抗体，其包含含有SEQ ID NO:175的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:182的氨基酸序列的重链(抗体A6)。

本发明提供了一种抗IL1RAP抗体，其包含含有SEQ ID NO:176的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:183的氨基酸序列的重链(抗体A7)。

本发明的代表性抗体示于下文。

表25：

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在一些方面，本发明包含结合IL1RAP的中和抗体。在一些实施方案中，所述抗体特异性结合IL1RAP。在一些实施方案中，所述抗体结合包含IL1RAP的氨基酸235-367的结构域3(SEQ ID NO:187)。在一些实施方案中，抗体结合对应于IL1RAP胞外结构域(ECD)3的位置235-315的氨基酸残基内的表位(SEQ ID NO:188)。在一些实施方案中，抗体结合具有与SEQID NO:187至少90％相同的氨基酸序列的IL1RAP。

在一些方面，本发明包含结合IL1RAP的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白在对应于位置235-315的SEQ ID NO:188的残基内的位置处结合IL1RAP。在一些实施方案中，当抗原结合蛋白结合IL1RAP时，抗体位于距IL1RAP的至少一个以下残基8埃或更近：238、239、244-247、249、251-256、261、263、265、267、269、271、301、303、305-306、311、313或315。

在一些方面，本发明包含结合IL1RAP的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白在对应于位置235-273的SEQ ID NO:189的残基内的位置处结合IL1RAP。在一些实施方案中，当抗原结合蛋白结合IL1RAP时，抗体位于距IL1RAP的至少一个以下残基8埃或更近：238、239、244-247、249、251-256、261、263、265、267、269或271。

在一些方面，本发明包含结合IL1RAP的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白在对应于位置300-315的SEQ ID NO:190的残基内的位置处结合IL1RAP。在一些实施方案中，当抗原结合蛋白结合IL1RAP时，抗体位于距IL1RAP的至少一个以下残基8埃或更近：301、303、305-306、311、313或315。

在一些方面，本发明包含结合IL1RAP的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白在对应于位置226-262的SEQ ID NO:192的残基内的位置处结合IL1RAP。在一些实施方案中，当抗原结合蛋白结合IL1RAP时，抗体位于距IL1RAP的至少一个以下残基8埃或更近：238、239、244-247、249、251-256或261。

在一些方面，本发明包含结合IL1RAP的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白在对应于位置226-273的SEQ ID NO:192的残基内的位置处结合IL1RAP。在一些实施方案中，当抗原结合蛋白结合IL1RAP时，抗体位于距IL1RAP的至少一个以下残基8埃或更近：238、239、244-247、249、251-256、261、263、265、267、269或271。

本发明的抗体可用于治疗各种疾病或障碍例如人的免疫学、炎性、自身免疫疾病和呼吸系统疾病的方法中。例如，本发明的抗体可用于治疗银屑病、类风湿性关节炎或银屑病关节炎的方法中。例如，本发明的抗体可用于治疗慢性阻塞性肺障碍(COPD)或哮喘的方法中。例如，本发明的抗体可用于治疗硬皮病、掌跖脓疱病、泛发性脓疱性银屑病、糖尿病性肾病、狼疮性肾炎、硬皮病、强直性脊柱炎、IL-36受体拮抗剂缺乏自身免疫病(DITRA)、IL-1受体拮抗剂缺乏自身免疫病(DIRA)或隐热蛋白相关周期性综合征(CAPS)的方法中。

在一些方面，人源化抗体显示阻断活性，由此当与对比抗体对照相比或在不存在本发明的抗IL1RAP抗体或抗体片段的情况下相比，人源化抗体将IL-33、IL-36或IL-1介导的激活降低至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％。抗体阻断IL-33、IL-36和IL-1结合的能力可以使用本领域已知的结合测定来测量。可替代地，抗体的阻断活性可以通过以下方式来测量：评估IL-33、IL-36和IL-1的生物学效应(如IL-8、IL-6或IL-12的产生)，以确定通过IL1RAP介导的信号传导是否被抑制。

在另外的方面，本发明提供了具有良好生物物理学特性的人源化抗IL1RAP抗体。在一个方面，本发明的人源化抗IL1RAP抗体以至少90％单体形式、或以至少92％单体形式、或以至少95％单体形式存在于缓冲液中。在另外的方面，本发明的人源化抗IL1RAP抗体在缓冲液中保持至少90％单体形式、或至少92％单体形式、或至少95％单体形式一个月或四个月。

在另外的实施方案中，本发明的人源化抗体由SEQ ID NO:170的轻链序列和SEQID NO:177的重链序列组成(抗体A1)。在另一个实施方案中，本发明的人源化抗体由SEQ IDNO:171的轻链序列和SEQ ID NO:178的重链序列组成(抗体A2)。在另一个实施方案中，本发明的人源化抗体由SEQ ID NO:172的轻链序列和SEQ ID NO:179的重链序列组成(抗体A3)。在另一个实施方案中，本发明的人源化抗体由SEQ ID NO:173的轻链序列和SEQ ID NO:180的重链序列组成(抗体A4)。在另一个实施方案中，本发明的人源化抗体由SEQ ID NO:174的轻链序列和SEQ ID NO:181的重链序列组成(抗体A5)。在另一个实施方案中，本发明的人源化抗体由SEQ ID NO:175的轻链序列和SEQ ID NO:182的重链序列组成(抗体A6)。在另一个实施方案中，本发明的人源化抗体由SEQ ID NO:176的轻链序列和SEQ ID NO:183的重链序列组成(抗体A7)。

在一些实施方案中，人源化抗IL1RAP抗体(包括其抗原结合片段，如重链和轻链可变区)包含源自抗体A1、抗体A2、抗体A3、抗体A4、抗体A5、抗体A6或抗体A7的残基的氨基酸序列。

在另外的实施方案中，本发明提供了与本发明的抗体(例如本文所述的抗体A1、抗体A2、抗体A3、抗体A4、抗体A5、抗体A6或抗体A7)竞争性结合人IL1RAP的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段。抗体或抗原结合片段竞争性结合IL1RAP的能力可以使用本领域已知的竞争性结合测定来测量。

人源化抗IL1RAP抗体任选地包括在共有序列中或种系框架区中的特定氨基酸取代。这些框架位置的氨基酸残基的特异性取代可以改善抗体性能的各个方面，包括结合亲和力和/或稳定性，这优于在通过将CDR或HVL“直接交换”到人种系框架区中而形成的人源化抗体中显示的结合亲和力和/或稳定性。

在一些实施方案中，本发明描述了具有轻链可变区的单克隆抗体，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明描述了具有重链可变区的其他单克隆抗体，所述重链可变区具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。将此类CDR置于人共有重链和轻链可变结构域的FR中，将产生本发明的有用的人源化抗体。

具体而言，本发明提供了分别具有SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的轻链可变区和重链可变区的组合的单克隆抗体。此类可变区可以与人恒定区组合。

在一些实施方案中，本发明描述了具有轻链可变区序列的其他人源化抗体，所述轻链可变区序列具有SEQ ID NO:17-66中任一个所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明描述了具有重链可变区序列的其他人源化抗体，所述重链可变区序列具有SEQ ID NO:67-116中任一个所示的氨基酸序列。具体而言，本发明提供了具有SEQ ID NO:17/67、18/68、19/69、20/70、21/71、22/72、23/73、24/74、25/75、26/76、27/77、28/78、29/79、30/80、31/81、32/82、33/83、34/84，35/85、36/86、37/87、38/88、39/89、40/90、41/91、42/92、43/93、44/99、45/95、46/96、47/97、48/98、49/99、50/100、51/101、52/102、53/103、54/104、55/105、56/106、57/107、58/108、59/109、60/110、61/111、62/112、63/113、64/114、65/115和66/116的轻链可变区和重链可变区的组合的单克隆抗体。此类可变区可以与人恒定区组合。

在另外的实施方案中，本发明涉及抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，所述抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段包含：人源化轻链可变结构域，所述人源化轻链可变结构域包含SEQ ID NO:17的CDR和框架区，所述框架区具有与SEQ ID NO:17的可变结构域轻链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列至少90％相同、至少93％相同或95％相同的氨基酸序列；和人源化重链可变结构域，所述人源化重链可变结构域包含SEQ ID NO:67的CDR和框架区，所述框架区具有与SEQ ID NO:67的可变结构域重链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列至少90％相同、至少93％相同或95％相同的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗IL1RAP抗体是人源化单克隆抗体。

在另外的实施方案中，本发明涉及抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，所述抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段包含：人源化轻链可变结构域，所述人源化轻链可变结构域包含SEQ ID NO:36的CDR和框架区，所述框架区具有与SEQ ID NO:36的可变结构域轻链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列至少90％相同、至少93％相同或95％相同的氨基酸序列；和人源化重链可变结构域，所述人源化重链可变结构域包含SEQ ID NO:86的CDR和框架区，所述框架区具有与SEQ ID NO:86的可变结构域重链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列至少90％相同、至少93％相同或95％相同的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗IL1RAP抗体是人源化单克隆抗体。

在另外的实施方案中，本发明涉及抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，所述抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段包含：人源化轻链可变结构域，所述人源化轻链可变结构域包含SEQ ID NO:40的CDR和框架区，所述框架区具有与SEQ ID NO:40的可变结构域轻链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列至少90％相同、至少93％相同或95％相同的氨基酸序列；和人源化重链可变结构域，所述人源化重链可变结构域包含SEQ ID NO:90的CDR和框架区，所述框架区具有与SEQ ID NO:90的可变结构域重链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列至少90％相同、至少93％相同或95％相同的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗IL1RAP抗体是人源化单克隆抗体。

在另外的实施方案中，本发明涉及抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，所述抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段包含：人源化轻链可变结构域，所述人源化轻链可变结构域包含SEQ ID NO:47的CDR和框架区，所述框架区具有与SEQ ID NO:47的可变结构域轻链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列至少90％相同、至少93％相同或95％相同的氨基酸序列；和人源化重链可变结构域，所述人源化重链可变结构域包含SEQ ID NO:97的CDR和框架区，所述框架区具有与SEQ ID NO:97的可变结构域重链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列至少90％相同、至少93％相同或95％相同的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗IL1RAP抗体是人源化单克隆抗体。

在另外的实施方案中，本发明涉及抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，所述抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段包含：人源化轻链可变结构域，所述人源化轻链可变结构域包含SEQ ID NO:50的CDR和框架区，所述框架区具有与SEQ ID NO:50的可变结构域轻链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列至少90％相同、至少93％相同或95％相同的氨基酸序列；和人源化重链可变结构域，所述人源化重链可变结构域包含SEQ ID NO:100的CDR和框架区，所述框架区具有与SEQ ID NO:100的可变结构域重链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列至少90％相同、至少93％相同或95％相同的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗IL1RAP抗体是人源化单克隆抗体。

在另外的实施方案中，本发明涉及抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，所述抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段包含：人源化轻链可变结构域，所述人源化轻链可变结构域包含SEQ ID NO:51的CDR和框架区，所述框架区具有与SEQ ID NO:51的可变结构域轻链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列至少90％相同、至少93％相同或95％相同的氨基酸序列；和人源化重链可变结构域，所述人源化重链可变结构域包含SEQ ID NO:101的CDR和框架区，所述框架区具有与SEQ ID NO:101的可变结构域重链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列至少90％相同、至少93％相同或95％相同的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗IL1RAP抗体是人源化单克隆抗体。

在另外的实施方案中，本发明涉及抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，所述抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段包含：人源化轻链可变结构域，所述人源化轻链可变结构域包含SEQ ID NO:52的CDR和框架区，所述框架区具有与SEQ ID NO:52的可变结构域轻链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列至少90％相同、至少93％相同或95％相同的氨基酸序列；和人源化重链可变结构域，所述人源化重链可变结构域包含SEQ ID NO:102的CDR和框架区，所述框架区具有与SEQ ID NO:102的可变结构域重链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列至少90％相同、至少93％相同或95％相同的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗IL1RAP抗体是人源化单克隆抗体。

在一个另外的方面，本发明提供了抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，所述抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:3或6中任一个的轻链CDR1(L-CDR1)序列；SEQ ID NO:4或7中任一个的轻链CDR2(L-CDR2)序列；SEQ ID NO:5的轻链CDR3(L-CDR3)序列；SEQ ID NO:8、11、12、14中任一个的重链CDR1(H-CDR1)序列；SEQ ID NO:9、13或15中任一个的重链CDR2(H-CDR2)序列；和SEQ ID NO:10或16中任一个的重链CDR3(H-CDR3)序列。在一个方面，抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含上文列出的L-CDR1、上文列出的L-CDR2和上文列出的L-CDR3，所述重链可变区包含上文列出的H-CDR1、上文列出的H-CDR2和上文列出的H-CDR3。

在一个另外的方面，本发明提供了抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，所述抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:3、6、134(其中X1＝A或T；X2＝Q或E；X3＝S或N；X4＝S或N)或135(其中X1＝A或T；X2＝Q或E；X3＝S或N；X4＝S或N)中任一个的轻链CDR1(L-CDR1)序列；SEQ ID NO:4、7、140(其中X1＝S或K并且X2＝S或T)或141(其中X1＝S或K)中任一个的轻链CDR2(L-CDR2)序列；SEQ ID NO:5的轻链CDR3(L-CDR3)序列；SEQ ID NO:8、11、12、14、146(其中X1＝M或I并且X2＝N或S)或147(其中X1＝M或I并且X2＝N或S)中任一个的重链CDR1(H-CDR1)序列；SEQ ID NO:9、13或15、165(其中X1＝D或G，X2＝A或T，X3＝N或A，X4＝Q或E，X5＝M或K，X6＝Q或K，并且X7＝D或G)、166(其中X1＝D或G)或167(其中X1＝D或G；X2＝A或T)中任一个的重链CDR2(H-CDR2)序列；和SEQ ID NO:10或16中任一个的重链CDR3(H-CDR3)序列。在一个方面，抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含上文列出的L-CDR1、上文列出的L-CDR2和上文列出的L-CDR3，所述重链可变区包含上文列出的H-CDR1、上文列出的H-CDR2和上文列出的H-CDR3。

在另外的方面，本发明提供了抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，所述抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段包含：

a)分别为SEQ ID NO:3、4、5、8、9和10(KABAT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

b)分别为SEQ ID NO:3、4、5、11、9和10(CCG)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

c)分别为SEQ ID NO:3、4、5、12、13和10(CHOTHIA)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

d)分别为SEQ ID NO:6、7、5、14、15和16(IMGT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列。

a)分别为SEQ ID NO:117、136、5、8、149和10(KABAT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

b)分别为SEQ ID NO:117、136、5、11、149和10(CCG)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

c)分别为SEQ ID NO:117、136、5、12、161和10(CHOTHIA)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

d)分别为SEQ ID NO:127、7、5、14、162和16(IMGT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列。

___________________________________

a)分别为SEQ ID NO:117、136、5、142、153和10(KABAT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

b)分别为SEQ ID NO:117、136、5、144、153和10(CCG)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

c)分别为SEQ ID NO:117、136、5、12、13和10(CHOTHIA)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

d)分别为SEQ ID NO:127、7、5、14、15和16(IMGT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列。

a)分别为SEQ ID NO:117、136、5、142、148和10(KABAT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

b)分别为SEQ ID NO:117、136、5、144、148和10(CCG)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

a)分别为SEQ ID NO:117、137、5、8、148和10(KABAT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

b)分别为SEQ ID NO:117、137、5、11、148和10(CCG)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

c)分别为SEQ ID NO:117、137、5、12、161和10(CHOTHIA)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

d)分别为SEQ ID NO:127、139、5、14、162和16(IMGT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列。

a)分别为SEQ ID NO:117、137、5、8、149和10(KABAT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

b)分别为SEQ ID NO:117、137、5、11、149和10(CCG)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

d)分别为SEQ ID NO:127、139、5、14、162和16(IMGT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列

a)分别为SEQ ID NO:117、137、5、142、151和10(KABAT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

b)分别为SEQ ID NO:117、137、5、144、151和10(CCG)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

d)分别为SEQ ID NO:127、139、5、14、163和16(IMGT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列。

a)分别为SEQ ID NO:135、140、5、146、165和10(KABAT/CCG)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

b)分别为SEQ ID NO:135、140、5、12、166和10(CHOTHIA)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列；或

c)分别为SEQ ID NO:136、141、5、14、167和16(IMGT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3序列。

在一个方面，抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含上文列出的L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3组合，所述重链可变区包含上文列出的H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3组合。

在具体实施方案中，设想在这些示例性免疫球蛋白之间具有交换的CDR区(即，例如，将一种小鼠抗体或其衍生的人源化抗体的一个或两个CDR与另一种小鼠抗体或其衍生的人源化抗体的类似CDR进行交换)的嵌合抗体可以产生有用的抗体。

在某些实施方案中，人源化抗IL1RAP抗体是抗体片段。上文已经总体上讨论了各种抗体片段，并且已经开发了用于产生抗体片段的技术。通过蛋白水解消化完整抗体来得到片段(参见例如Morimoto等人,1992,Journal of Biochemical and BiophysicalMethods24:107-117；和Brennan等人,1985,Science 229:81)。可替代地，片段可以在重组宿主细胞中直接产生。例如，可以直接从大肠杆菌回收Fab'-SH片段并且将其化学偶联以形成F(ab')₂片段(参见例如，Carter等人,1992,Bio/Technology 10:163-167)。通过另一种方法，可以直接从重组宿主细胞培养物中分离F(ab')₂片段。用于产生抗体片段的其他技术对于熟练从业人员会是清楚的。因此，在一个方面，本发明提供了包含本文所述的CDR、特别是本文所述的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3、H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3的组合之一的抗体片段。在另外的方面，本发明提供了包含本文所述的可变区例如本文所述的轻链可变区和重链可变区的组合之一的抗体片段。

某些实施方案包括人源化抗IL1RAP抗体的F(ab')₂片段，所述人源化抗IL1RAP抗体包含SEQ ID NO:170、171、172、173、174、176或176中任一个的轻链序列与SEQ ID NO:177、178、179、180、181、182或183的重链序列的组合。此类实施方案可包括含有这种F(ab')₂的完整抗体。

在一些实施方案中，抗体或抗体片段包含介导效应子功能的恒定区。恒定区可以提供抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)应答。一个或多个效应子结构域可以是例如Ig分子的Fc区。

抗体的效应子结构域可以来自任何合适的脊椎动物物种和同种型。来自不同动物物种的同种型介导效应子功能的能力不同。例如，人免疫球蛋白介导CDC和ADCC/ADCP的能力的次序通常分别为IgM≈IgG₁≈IgG₃>IgG₂>IgG₄，并且IgG₁≈IgG₃>IgG₂/IgM/IgG₄。鼠免疫球蛋白介导CDC和ADCC/ADCP的次序通常分别为鼠IgM≈IgG₃>>IgG_2b>IgG_2a>>IgG₁，并且IgG_2b>IgG_2a>IgG₁>>IgG₃。在另一个例子中，鼠IgG_2a介导ADCC，而鼠IgG_2a和IgM均介导CDC。

抗体修饰

人源化抗IL1RAP抗体和药剂可包括人源化抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段的修饰。例如，可能需要就效应子功能修饰抗体，以便增强抗体在治疗癌症中的有效性。一种此类修饰是将一个或多个半胱氨酸残基引入Fc区，从而允许在此区域中形成链间二硫键。由此生成的同二聚抗体可以具有改善的内化能力和/或增加的补体介导的细胞杀伤和/或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。参见例如，Caron等人,1992,J.Exp Med.176:1191-1195；和Shopes,1992,J.Immunol.148:2918-2922。还可以使用异双功能交联剂制备具有增强的抗肿瘤活性的同二聚抗体，如Wolff等人,1993,Cancer Research 53:2560-2565中所描述。可替代地，抗体可以被工程化为含有双Fc区，从而增强抗体的补体裂解和ADCC能力。参见Stevenson等人,1989,Anti-Cancer Drug Design 3:219-230。

已经通过修饰抗体Fc区的糖基化模式产生了具有改善的支持ADCC能力的抗体。这是可能的，因为C_H2结构域中天冬酰胺残基N297处的抗体糖基化参与ADCC必需的IgG和Fcγ受体之间的相互作用。宿主细胞系已被工程化以表达具有改变的糖基化的抗体，例如增加的二等分N-乙酰基葡萄糖胺或减少的岩藻糖。与增加二等分N-乙酰基葡萄糖胺的存在相比，减少岩藻糖更大程度地增强ADCC活性。此外，低岩藻糖抗体对ADCC的增强与FcγRIIIaV/F多态性无关。

修饰抗体Fc区的氨基酸序列是增强ADCC的糖基化工程化的替代方案。已经通过广泛的突变分析确定了人IgG₁上用于Fcγ受体的结合位点。从而产生了具有增加对FcγRIIIa的结合亲和力并增强体外ADCC的Fc突变的人源化IgG₁抗体。另外，已经获得具有结合特性的许多不同排列的Fc变体，所述排列例如改善的与特定FcγR受体的结合以及不变或减弱的与其他FcγR受体的结合。

另一个方面包括免疫缀合物，其包含与细胞毒性剂缀合的人源化抗体或其片段，所述细胞毒性剂例如化学治疗剂、毒素(例如细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即放射性缀合物)。

上文已经描述了可用于产生此类免疫缀合物的化学治疗剂。可以用于形成有用的免疫缀合物的酶活性毒素以及其片段包括白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α-八叠球菌素、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆(Phytolacaamericana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Momordica charantia)抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草(Sapaonaria officinalis)抑制剂、白树毒素、迈托毒素(mitogellin)、局限曲菌素、酚霉素、依诺霉素、单端孢霉烯等。多种放射性核素可用于产生放射性缀合的人源化抗IL1RAP抗体。例子包括²¹²Bi、¹³¹I、¹³¹In、⁹⁰Y和¹⁸⁶Re。

人源化抗IL1RAP抗体与细胞毒性剂或化学治疗剂的缀合物可以通过已知方法使用多种双功能蛋白偶合剂来制备，所述双功能蛋白偶合剂例如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二巯基)丙酸酯(SPDP)、亚氨基硫杂环戊烷(IT)、亚氨酸酯的双官能衍生物(如己二亚氨酸二甲酯HCL)、活性酯(如双琥珀酰亚胺辛二酸酯)、醛(如戊二醛)、双叠氮化合物(如双(对叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮基衍生物(如双-(对重氮基苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。例如，可以如Vitetta等人,1987,Science 238:1098中所述制备蓖麻毒素免疫毒素。碳-14-标记的1-异硫氰酸基苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸与抗体缀合的示例性螯合剂。缀合物也可以使用可切割接头形成。

本文公开的人源化抗IL1RAP抗体也可以配制为免疫脂质体。通过本领域已知的方法，如Epstein等人,1985,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:3688；Hwang等人,1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4030；和美国专利号4,485,045和4,544,545中所描述的方法，制备含有抗体的脂质体。具有延长的循环时间的脂质体披露于例如美国专利号5,013,556中。

特别有用的脂质体可以通过反相蒸发法使用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG-衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物产生。通过具有确定孔径的过滤器挤出脂质体，以产生具有所需直径的脂质体。本文公开的抗体的Fab'片段可经由二硫键互换反应与如Martin等人,1982,J.Biol.Chem.257:286-288中所描述的脂质体缀合。脂质体内任选地包含化学治疗剂(例如多柔比星)。参见例如，Gabizon等人,1989,J.National CancerInst.81(19):1484。

本文所描述且公开的抗体可以通过将抗体缀合至前药活化酶来用于ADEPT(抗体导向的酶前药治疗)程序中，所述前药活化酶将前药(例如，肽基化学治疗剂)转化成活性抗癌药。参见例如，WO 81/01145、WO 88/07378和美国专利号4,975,278。可用于ADEPT的免疫缀合物的酶组分是能够以这样的方式作用于前药以便将其转化成其更具活性的细胞毒性形式的酶。可用于ADEPT的特定酶包括但不限于用于将含有磷酸盐的前药转化为游离药物的碱性磷酸酶；用于将含有硫酸盐的前药转化为游离药物的芳基硫酸酯酶；用于将无毒的5-氟胞嘧啶转化为抗癌药物5-氟尿嘧啶的胞嘧啶脱氨酶；用于将含有肽的前药转化为游离药物的蛋白酶，例如沙雷氏菌蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、羧肽酶和组织蛋白酶(例如组织蛋白酶B和L)；用于转化含有D-氨基酸取代基的前药的D-丙氨酰基羧肽酶；用于将糖基化前药转化为游离药物的碳水化合物切割酶，例如β-半乳糖苷酶和神经氨酸酶；用于将以β-内酰胺衍生的药物转化为游离药物的β-内酰胺酶；用于将分别在其胺氮上用苯氧基乙酰基或苯乙酰基衍生的药物转化为游离药物的青霉素酰胺酶，例如青霉素V酰胺酶或青霉素G酰胺酶。可替代地，可以使用具有酶活性的抗体(“抗体酶(abzyme)”)将前药转化为游离的活性药物(参见例如，Massey,1987,Nature 328:457-458)。抗体-抗体酶缀合物可以通过已知方法来制备，用于将所述抗体酶递送至肿瘤细胞群，例如通过将酶共价结合至上文所讨论的人源化抗IL1RAP抗体/异双功能交联剂来制备。可替代地，可以使用重组DNA技术来构建融合蛋白，其至少包含至少与如上文所述的酶的功能活性部分连接的本文公开的抗体的抗原结合区(参见例如，Neuberger等人,1984,Nature 312:604-608)。

在某些实施方案中，例如，可能期望使用人源化抗IL1RAP抗体片段而不是完整抗体来增加组织渗透。可能期望修饰抗体片段以便增加其血清半衰期。这可以例如通过将补救受体结合表位并入抗体片段中来实现。在一种方法中，可以使抗体片段的适当区域发生改变(例如，突变)，或者可以将表位并入肽标签中，然后例如通过DNA或肽合成将所述肽标签融合至抗体片段的任一端或中间。参见例如，WO 96/32478。

在其他实施方案中，还包括人源化抗IL1RAP抗体的共价修饰。共价修饰包括对以下残基的修饰：半胱氨酰基残基、组氨酸残基、赖氨酰基和氨基端残基、精氨酰基残基、酪氨酰基残基、羧基侧基团(天冬氨酰基或谷氨酰基)、谷氨酰胺基和天冬酰胺基残基或丝氨酰基或苏氨酰基残基。另一种类型的共价修饰涉及将糖苷化学或酶促偶合至抗体。如果适用，此类修饰可以通过化学合成或者抗体的酶促或化学切割来进行。抗体的其他类型的共价修饰可以通过使抗体的靶向氨基酸残基与有机衍生剂反应来引入分子中，所述有机衍生剂能够与所选择的侧链或氨基端或羧基端残基反应。

去除抗体上存在的任何碳水化合物部分可以化学或酶促完成。化学去糖基化由Hakimuddin等人,1987,Arch.Biochem.Biophys.259:52和由Edge等人,1981,Anal.Biochem.,118:131所描述。抗体上碳水化合物部分的酶促切割可以通过使用如由Thotakura等人,1987,Meth.Enzymol 138:350所述的各种内切糖苷酶和外切糖苷酶实现。

另一种有用的共价修饰包括以美国专利号4,640,835、美国专利号4,496,689、美国专利号4,301,144、美国专利号4,670,417、美国专利号4,791,192和美国专利号4,179,337中的一个或多个中所述的方式，将抗体连接到多种非蛋白质性聚合物(例如，聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧化烯)中的一种。

人源化和氨基酸序列变体

抗IL1RAP抗体的氨基酸序列变体可通过将适当的核苷酸变化引入抗IL1RAP抗体DNA中或通过肽合成来制备。此类变体包括例如本文实施例的抗IL1RAP抗体的氨基酸序列内的残基的缺失和/或插入和/或取代。进行缺失、插入和取代的任何组合以得到最终构建体，条件是最终构建体具有期望的特征。氨基酸变化还可以改变人源化或变体抗IL1RAP抗体的翻译后过程，诸如改变糖基化位点的数量或位置。

用于鉴定抗IL1RAP抗体的作为优选诱变位置的某些残基或区域的可用方法被称为“丙氨酸扫描诱变”，如由Cunningham和Wells(Science,244:1081-1085(1989))中所描述的。在此，鉴定残基或靶残基组(例如，带电荷的残基，诸如arg、asp、his、lys、和glu)并用中性或带负电的氨基酸(通常为丙氨酸)替代以影响氨基酸与IL1RAP抗原的相互作用。然后通过在或对取代位点引入更多或其他变体，完善对取代展示功能敏感性的那些氨基酸位置。因此，尽管预先确定了引入氨基酸序列变异的位点，但不需要预先确定突变本身的性质。例如，为了分析给定位点处的突变的性能，在靶标密码子或区域处进行丙氨酸扫描或随机诱变，并且针对所需活性筛选所表达的抗IL1RAP抗体变体。

氨基酸序列插入包括氨基和/或羧基末端融合，长度范围从一个残基到含有一百个或更多个残基的多肽，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括与表位标签融合的抗IL1RAP抗体。抗IL1RAP抗体分子的其他插入变体包括酶或增加抗体的血清半衰期的多肽与抗IL1RAP抗体的N末端或C末端的融合。

另一种类型的变体是氨基酸取代变体。这些变体在抗IL1RAP抗体分子中去除至少一个氨基酸残基并且在其位置插入不同的残基。取代诱变最感兴趣的位点包括高变区，但是也考虑FR改变。保守取代示出于表26中“优选取代”标题下。如果此类取代导致生物活性改变，则可以引入命名为“示例性取代”或如下文参考氨基酸类别进一步描述的更多实质性变化，并且筛选产物。

表26：

在蛋白质化学中，普遍认为抗体的生物学特性可通过选择对维持以下方面的效果差异显著的取代来实现：(a)取代区域中多肽骨架的结构，例如片或螺旋构象，(b)分子在靶位点处的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积。基于共同的侧链特性，将天然存在的残基分为以下组：

(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；

(2)中性亲水性：cys、ser、thr；

(3)酸性：asp、glu；

(4)碱性：asn、gin、his、lys、arg；

(5)影响链取向的残基：gly、pro；以及

(6)芳香族：trp、tyr、phe。

非保守取代将需要将这些类别之一的成员交换为另一类别。

任何不参与维持人源化或变体抗IL1RAP抗体的适当构象的半胱氨酸残基也可以被取代，通常被丝氨酸取代，以改善分子的氧化稳定性，防止异常交联，或提供确立的与细胞毒性或细胞抑制性化合物的缀合点。相反地，可以向抗体添加一个或多个半胱氨酸键以改善其稳定性(尤其是在抗体是如Fv片段的抗体片段的情况下)。

一个类型的取代变体涉及取代亲本抗体(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。通常，选择用于进一步开发的一种或多种所得变体将具有相对于生成所述变体的亲本抗体改善的生物特性。用于生成此类取代变体的一种便利方法是使用噬菌体展示的亲和力成熟。简而言之，使若干高变区位点(例如，6-7个位点)突变以在每个位点处生成所有可能的氨基取代。由此生成的抗体变体从丝状噬菌体颗粒以单价方式展示，作为与包装在每个颗粒内的M13的基因III产物的融合体。然后针对其生物学活性(例如结合亲和力)筛选噬菌体展示的变体。为了针对修饰鉴定候选高变区位点，可以进行丙氨酸扫描诱变以鉴定对抗原结合有显著贡献的高变区残基。可替代地或此外，可能有利的是，分析抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体与人IL1RAP之间的接触点。此类接触残基和邻近残基是根据本文详述的技术进行取代的候选残基。一旦生成此类变体，使这组变体经受如本文所描述的筛选，并且可以选择在一个或多个相关测定中具有优异特性的抗体以用于进一步开发。

抗体的另一种类型的氨基酸变体改变抗体的原始糖基化模式。“改变”意指使抗体中发现的一个或多个碳水化合物部分缺失、和/或添加抗体中不存在的一个或多个糖基化位点。

在一些实施方案中，可能期望修饰本发明的抗体以添加糖基化位点。抗体的糖基化通常是N连接或O连接的。N连接是指碳水化合物部分与天冬酰胺残基的侧链附接。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸外的任何氨基酸)是用于将碳水化合物部分酶促附接至天冬酰胺侧链的识别序列。因此，这些三肽序列中的任一者在多肽中的存在产生了潜在的糖基化位点。O连接的糖基化指将糖N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一附接至羟基氨基酸，最常见的是丝氨酸或苏氨酸，但也可使用5-羟脯氨酸或5-羟赖氨酸。因此，为了使给定蛋白质例如抗体糖基化，将蛋白质的氨基酸序列工程化为含有一个或多个上文所述的三肽序列(用于N-连接的糖基化位点)。也可以通过将一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基添加或取代至原始抗体的序列中来进行改变(对于O-连接的糖基化位点)。

编码抗IL1RAP抗体的氨基酸序列变体的核酸分子可通过本领域已知的多种方法来制备。这些方法包括但不限于从天然来源分离(在天然存在的氨基酸序列变体的情况下)或通过对于抗IL1RAP抗体的早期制备的变体或非变体形式进行寡核苷酸介导的(或定点)诱变、PCR诱变和盒式诱变来制备。

多核苷酸、载体、宿主细胞和重组方法

其他实施方案包括包含编码人源化抗IL1RAP抗体的序列的分离的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体和宿主细胞，以及用于产生所述人源化抗体的重组技术。分离的多核苷酸可以编码抗IL1RAP抗体的任何期望形式，包括例如全长单克隆抗体、Fab、Fab'、F(ab')₂和Fv片段、双抗体、线性抗体、单链抗体分子以及由抗体片段形成的多特异性抗体。

一些实施方案包括分离的多核苷酸，其包含编码抗体或抗体片段的具有SEQ IDNO:SEQ ID NO:17-66中任一个的氨基酸序列的轻链可变区的序列。一些实施方案包括分离的多核苷酸，其包含编码抗体或抗体片段的具有SEQ ID NO:67-116的氨基酸序列的重链可变区的序列。

一些实施方案包括分离的多核苷酸，其包含编码抗体或抗体片段的具有SEQ IDNO:17、36、40、47、50、51和52中任一个的氨基酸序列的轻链可变区的序列。一些实施方案包括分离的多核苷酸，其包含编码抗体或抗体片段的具有SEQ ID NO:67、86、90、97、100、101和102的氨基酸序列的重链可变区的序列。

在一个方面，分离的一种或多种多核苷酸序列编码具有轻链和重链可变区的抗体或抗体片段，所述轻链和重链可变区分别包含SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:167；分别包含SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:86；分别包含SEQ ID NO:40和SEQ ID NO:90；分别包含SEQ IDNO:47和SEQ ID NO:97；分别包含SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:100；分别包含SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:101；以及分别包含SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:102的氨基酸序列。

包含编码人源化抗IL1RAP抗体或其片段或链的序列的一种或多种多核苷酸可以与本领域已知的一个或多个调节或控制序列融合，并且可以包含在本领域已知的合适表达载体或宿主细胞中。编码重链或轻链可变结构域的每个多核苷酸分子可以独立地融合至编码恒定结构域例如人恒定结构域的多核苷酸序列，从而能够产生完整抗体。可替代地，多核苷酸或其部分可以融合在一起，从而提供用于产生单链抗体的模板。

对于重组产生，将编码抗体的多核苷酸插入可复制载体中以用于克隆(扩增DNA)或表达。许多用于表达重组抗体的合适载体是可用的。载体组分通常包括但不限于以下中的一者或多者：信号序列、复制起点、一种或多种标记基因、增强子元件、启动子和转录终止序列。

人源化抗IL1RAP抗体也可以作为融合多肽产生，其中抗体与异源多肽融合，所述异源多肽为例如信号序列或在成熟蛋白或多肽的氨基端具有特定切割位点的其他多肽。所选择的异源信号序列通常是由宿主细胞识别并加工(即被信号肽酶切割)的信号序列。对于不识别并加工人源化抗IL1RAP抗体信号序列的原核宿主细胞，所述信号序列可以被原核信号序列取代。信号序列可以是例如碱性磷酸酶、青霉素酶、脂蛋白、热稳定性肠毒素II前导序列等。对于酵母分泌，天然信号序列可以被例如从以下获得的前导序列取代：酵母转化酶α因子(包括酵母菌属(Saccharomyces)和克鲁维酵母属(Kluyveromyces)α因子前导序列)、酸性磷酸酶、白色念珠菌(C.albicans)葡糖淀粉酶或WO90/13646中所述的信号。在哺乳动物细胞中，可以使用哺乳动物信号序列以及病毒分泌前导序列，例如单纯疱疹gD信号。这个前体区域的DNA在阅读框中与编码人源化抗IL1RAP抗体的DNA连接。

表达和克隆载体含有使载体能够在一个或多个所选宿主细胞中复制的核酸序列。通常，在克隆载体中，此序列是使载体能够独立于宿主染色体DNA复制的序列，并且包括复制起点或自主复制序列。多种细菌、酵母和病毒的此类序列是熟知的。质粒pBR322的复制起点适用于大多数革兰氏阴性细菌，2-υ质粒起点适用于酵母，并且各种病毒起点(SV40、多瘤病毒、腺病毒、VSV和BPV)可用于在哺乳动物细胞中克隆载体。通常，哺乳动物表达载体不需要复制起点组分(通常仅可使用SV40起点，因为它含有早期启动子)。

表达和克隆载体可含有编码选择标记以便于表达鉴定的基因。典型的选择标记基因编码赋予对抗生素或其他毒素(例如氨苄青霉素、新霉素、甲氨蝶呤或四环素)的抗性的蛋白质，或者可替代地是补体营养缺陷，或者在其他替代方案中供应复杂培养基中不存在的特定营养素，例如编码芽孢杆菌(Bacilli)D-丙氨酸消旋酶的基因。

选择方案的一个例子利用药物来阻止宿主细胞的生长。经异源基因成功转化的那些细胞产生赋予药物抗性的蛋白质，因而幸免于选择方案。这种显性选择的例子使用药物新霉素、霉酚酸和潮霉素。哺乳动物细胞的常见选择标记是使得能够鉴定有能力吸收编码人源化抗IL1RAP抗体的核酸的细胞的那些标记，例如DHFR(二氢叶酸还原酶)、胸苷激酶、金属硫蛋白-I和-II(如灵长类动物金属硫蛋白基因)、腺苷脱氨酶、鸟氨酸脱羧酶等。首先通过在含有甲氨蝶呤(Mtx，DHFR的竞争性拮抗剂)的培养基中培养所有转化体来鉴定经DHFR选择基因转化的细胞。在采用野生型DHFR时，适当的宿主细胞是DHFR活性缺陷的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系(例如DG44)。

可替代地，可通过在含有针对选择标记的选择剂(如氨基糖苷抗生素，例如卡那霉素、新霉素或G418)的培养基中进行细胞生长来选择经编码抗IL1RAP抗体、野生型DHFR蛋白和另一种选择标记(如氨基糖苷3'-磷酸转移酶(APH))的DNA序列转化或共转化的宿主细胞(特别是包含内源DHFR的野生型宿主)。参见例如，美国专利号4,965,199。

当在作为宿主细胞的酵母细胞中进行重组产生的情况下，可以使用存在于酵母质粒YRp7中的TRP1基因(Stinchcomb等人,1979,Nature 282:39)作为选择标记。TRP1基因提供缺乏在色氨酸中生长的能力的酵母突变菌株(例如ATCC号44076或PEP4-1)的选择标记(Jones,1977,Genetics 85:12)。然后，酵母宿主细胞基因组中trp1损伤的存在提供通过在没有色氨酸的情况下生长来检测转化的有效环境。类似地，缺乏Leu2p的酵母菌株(如ATCC20,622和38,626)由携带LEU2基因的已知质粒所补充。

此外，源自1.6μm环状质粒pKD1的载体可用于转化克鲁维酵母。可替代地，报告了乳酸克鲁维酵母(K.lactis)的用于大规模生产重组小牛凝乳酶的表达系统(Van denBerg,1990,Bio/Technology 8:135)。还已经公开了用于由克鲁维酵母工业菌株分泌成熟重组人血清白蛋白的稳定的多拷贝表达载体(Fleer等人,1991,Bio/Technology 9:968-975)。

表达和克隆载体通常含有被宿主生物识别并与编码抗IL1RAP抗体或其多肽链的核酸分子可操作连接的启动子。适用于与原核宿主一起使用的启动子包括phoA启动子、β-内酰胺酶和乳糖启动子系统、碱性磷酸酶、色氨酸(trp)启动子系统和杂合启动子(例如tac启动子)。其他已知细菌启动子也是合适的。用于细菌系统的启动子也将含有与编码人源化抗IL1RAP抗体的DNA可操作连接的夏因-达尔加诺(Shine-Dalgarno，S.D.)序列。

许多真核启动子序列是已知的。事实上，所有真核基因都具有富含AT区，它位于转录起始位点上游大约25至30个碱基处。在许多基因的转录起点上游70至80个碱基处发现的另一种序列是CNCAAT区，其中N可以是任何核苷酸。大多数真核基因的3'端是AATAAA序列，它可能是向编码序列的3'端添加多聚A尾的信号。将所有这些序列适当地插入真核表达载体中。

与酵母宿主一起使用的合适启动序列的例子包括3-磷酸甘油酸酯激酶或其他糖酵解酶的启动子，所述其他糖酵解酶例如烯醇酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、己糖激酶、丙酮酸脱羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、3-磷酸甘油酸酯变位酶、丙酮酸激酶、磷酸丙糖异构酶、磷酸葡萄糖异构酶和葡萄糖激酶。

诱导型启动子具有受生长条件控制的转录的另外的优势。这些启动子包括以下酶的酵母启动子区域：乙醇脱氢酶2、异细胞色素C、酸性磷酸酶、与氮代谢相关联的衍生酶、金属硫蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶以及负责麦芽糖和半乳糖利用的酶。EP 73,657中进一步描述了用于酵母表达中的合适载体和启动子。酵母增强子还有利地与酵母启动子一起使用。

载体中的人源化抗IL1RAP抗体在哺乳动物宿主细胞中的转录受到例如从以下获得的启动子的控制：病毒基因组，所述病毒如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(如2型腺病毒)、牛乳头瘤病毒、禽类肉瘤病毒、巨细胞病毒、逆转录病毒、乙肝病毒和猿猴病毒40(SV40)；异源哺乳动物启动子，例如肌动蛋白启动子或免疫球蛋白启动子；或热休克启动子，条件是此类启动子与宿主细胞系统相容。

方便地以SV40限制性片段的形式获得SV40病毒的早期和晚期启动子，所述片段还含有SV40病毒复制起点。方便地以HindIII E限制性片段的形式获得人巨细胞病毒的立即早期启动子。使用牛乳头瘤病毒作为载体在哺乳动物宿主中表达DNA的系统披露于美国专利号4,419,446中。该系统的修改形式描述于美国专利号4,601,978中。还参见Reyes等人,1982,Nature 297:598-601，其披露了在来自单纯疱疹病毒的胸苷激酶启动子的控制下人p-干扰素cDNA在小鼠细胞中的表达。可替代地，劳斯肉瘤病毒长末端重复序列可以用作启动子。

可以在重组表达载体中使用的另一个有用的元件是增强子序列，其用于增加高级真核生物对编码人源化抗IL1RAP抗体的DNA的转录。现在已知来自哺乳动物基因(例如，球蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、甲胎蛋白和胰岛素)的许多增强子序列。然而，通常，使用来自真核细胞病毒的增强子。例子包括复制起点后侧上的SV40增强子(bp 100-270)、巨细胞病毒早期启动子增强子、复制起点后侧的多瘤增强子和腺病毒增强子。关于用于活化真核启动子的增强元件的描述，还参见Yaniv,1982,Nature 297:17-18。可以将增强子剪接到载体中人源化抗IL1RAP抗体编码序列的5'或3'位置处，但是优选地位于启动子5'的位点。

真核宿主细胞(酵母、真菌、昆虫、植物、动物、人或来自其他多细胞生物体的有核细胞)中使用的表达载体也可以含有转录终止和稳定mRNA所需的序列。此类序列通常可从真核或病毒DNA或cDNA的5'非翻译区和偶尔3'非翻译区获得。这些区域包含在编码抗IL1RAP抗体的mRNA的非翻译部分中转录成聚腺苷酸化片段的核苷酸区段。一种有用的转录终止组分是牛生长激素聚腺苷酸化区。参见WO 94/11026及其中披露的表达载体。在一些实施方案中，可以使用CHEF系统来表达人源化抗IL1RAP抗体。(参见例如，美国专利号5,888,809；其所披露的内容通过引用并入本文。)

用于在本文的载体中克隆或表达DNA的合适宿主细胞是上文所述的原核生物、酵母或高等真核生物细胞。适合于此目的的原核生物包括真细菌，例如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如肠杆菌科(Enterobacteriaceae)，如埃希氏杆菌属(Escherichia)，例如大肠杆菌、肠杆菌(Enterobacter)、欧文氏菌(Erwinia)、克雷伯菌(Klebsiella)、变形杆菌(Proteus)、沙门氏菌(Salmonella)(例如鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium))、沙雷氏菌(Serratia)(例如粘质沙雷氏菌(Serratia marcescans))和志贺氏菌(Shigella)，以及芽孢杆菌如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)和地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)(例如1989年4月12日公开的DD 266,710中披露的地衣芽孢杆菌41P)、假单胞菌(Pseudomonas)(如铜绿假单胞菌)和链霉菌(Streptomyces)。一种优选的大肠杆菌克隆宿主是大肠杆菌294(ATCC 31,446)，但其他菌株例如大肠杆菌B、大肠杆菌X1776(ATCC 31,537)和大肠杆菌W3110(ATCC 27,325)是合适的。这些例子只是说明而非限制。

除原核生物外，真核微生物如丝状真菌或酵母菌也是人源化抗IL1RAP抗体编码载体的合适克隆或表达宿主。在低等真核宿主微生物中，酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)或普通面包酵母是最常用的。然而，许多其他属、种和菌株一般是可获得的并且可用于本文中，例如粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)；克鲁维酵母属宿主，例如乳酸克鲁维酵母、脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)(ATCC 12,424)、保加利亚克鲁维酵母(K.bulgaricus)(ATCC 16,045)、柳条克鲁维酵母(K.wickeramii)(ATCC 24,178)、沃氏克鲁氏酵母(K.waltii)(ATCC 56,500)、果蝇克鲁维酵母(K.drosophilarum)(ATCC 36,906)、耐热克鲁维酵母(K.thermotolerans)和马克斯克鲁维酵母(K.marxianus)；耶氏酵母(yarrowia)(EP 402,226)；巴斯德毕赤酵母(Pichia pastors)(EP 183,070)；假丝酵母(Candida)；里氏木霉(Trichoderma reesia)(EP 244,234)；粗糙链孢霉(Neurosporacrassa)；许旺酵母属(Schwanniomyces)，例如西方许旺酵母(Schwanniomycesoccidentalis)；以及丝状真菌如链孢霉属(Neurospora)、青霉属(Penicillium)、弯颈霉属(Tolypocladium)和曲霉菌属(Aspergillus)宿主，如构巢曲霉(A.nidulans)和黑曲霉(A.niger)。

用于表达糖基化人源化抗IL1RAP抗体的合适宿主细胞来源于多细胞生物体。无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞，包括例如许多杆状病毒株和变体，以及来自如以下的宿主的相应许可昆虫宿主细胞：草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda，毛虫)、埃及伊蚊(Aedes aegypti，蚊子)、白纹伊蚊(Aedes albopictus，蚊子)，黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster，果蝇)和家蚕(Bombyx mori，蚕)。用于转染的多种病毒株是可公开获得的，例如苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)NPV的L-1变体和家蚕NPV的Bm-5株，并且此类病毒可特别用于转染草地贪夜蛾细胞。

棉花、玉米、马铃薯、大豆、牵牛花、番茄和烟草的植物细胞培养物也可以用作宿主。

在另一个方面，人源化抗IL1RAP的表达在脊椎动物细胞中进行。脊椎动物细胞在培养(组织培养)中的繁殖已成为常规程序并且技术已广泛可用。有用的哺乳动物宿主细胞系的例子是用SV40转化的猴肾CV1系(COS-7，ATCC CRL 1651)，人胚肾系(293细胞或被亚克隆用于在悬浮培养中生长的293细胞(Graham等人,1977,J.Gen Virol.36:59))，幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)，中国仓鼠卵巢细胞/-DHFR1(CHO,Urlaub等人,1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216；例如DG44)，小鼠支持细胞(TM4，Mather,1980,Biol.Reprod.23:243-251)，猴肾细胞(CV1，ATCC CCL 70)，非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCCCRL-1587)，人宫颈癌细胞(HELA，ATCC CCL 2)，犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)，水牛鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)，人肺细胞(W138，ATCC CCL 75)，人肝细胞(Hep G2，HB 8065)，小鼠乳房肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)，TR1细胞(Mather等人,1982,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68)，MRC 5细胞，FS4细胞，和人肝细胞瘤系(Hep G2)。

用上文所述的用于人源化抗IL1RAP抗体产生的表达或克隆载体转化宿主细胞，并在视需要修饰的常规营养培养基中培养用于诱导启动子，选择转化体或扩增编码所需序列的基因。

可以在多种培养基中培养用于产生本文所述的人源化抗IL1RAP抗体的宿主细胞。可商购的培养基如Ham's F10(Sigma-Aldrich Co.，圣路易，密苏里州)、极限必需培养基((MEM),(Sigma-Aldrich Co.)、RPMI-1640(Sigma-Aldrich Co.)和杜尔贝科氏改良伊格培养基((DMEM),Sigma-Aldrich Co.)适于培养宿主细胞。此外，在Ham等人1979,Meth.Enz.58:44、Barnes等人,1980,Anal.Biochem.102:255、美国专利号4,767,704、美国专利号4,657,866、美国专利号4,927,762、美国专利号4,560,655、美国专利号5,122,469、WO 90/103430和WO 87/00195中的一个或多个所述的任何培养基可用作宿主细胞的培养基。任何这些培养基可根据需要补充激素和/或其他生长因子(如胰岛素、运铁蛋白或表皮生长因子)、盐(如氯化钠、钙、镁和磷酸盐)、缓冲液(如HEPES)、核苷酸(如腺苷和胸苷)、抗生素(如庆大霉素)、痕量元素(定义为通常以微摩尔范围的终浓度存在的无机化合物)和葡萄糖或等效能源。还可以适当浓度包括本领域技术人员将知的其他补充物。培养条件(如温度、pH等)是先前选择用于表达的宿主细胞所使用的那些条件，且对于普通技术人员是清楚的。

当使用重组技术时，抗体可在细胞内、在周质空间中产生，或直接分泌到培养基中。如果抗体在细胞内产生，则第一步可以破坏细胞以释放蛋白质。可以例如通过离心或超滤来去除颗粒碎片，即宿主细胞或裂解片段。Carter等人,1992,Bio/Technology 10:163-167描述了一种用于分离分泌到大肠杆菌周质空间的抗体的程序。简而言之，将细胞糊状物在乙酸钠(pH 3.5)、EDTA和苯甲基磺酰氟(PMSF)存在下经约30分钟解冻。可以通过离心去除细胞碎片。在抗体分泌到培养基中的情况下，则通常首先使用市售蛋白质浓缩滤器(例如Amicon或Millipore Pellicon超滤单元)浓缩来自此类表达系统的上清液。可以在任何上述步骤中包括蛋白酶抑制剂(如PMSF)以抑制蛋白水解，而且可包括抗生素以防止外来污染物的生长。可以使用多种方法从宿主细胞分离抗体。

可使用例如以下方法来纯化从细胞制备的抗体组合物：羟磷灰石色谱、凝胶电泳、透析和亲和色谱，其中亲和色谱是典型的纯化技术。蛋白质A作为亲和配体的适用性取决于抗体中存在的任何免疫球蛋白Fc结构域的种类和同种型。蛋白质A可用于纯化基于人γ1、γ2或γ4重链的抗体(参见例如，Lindmark等人,1983J.Immunol.Meth.62:1-13)。推荐蛋白质G用于所有小鼠同种型和用于人γ3(参见例如，Guss等人,1986EMBO J.5:1567-1575)。亲和配体所附接的基质最经常是琼脂糖，但是可使用其他基质。机械稳定的基质如可控孔径玻璃或聚(苯乙烯二乙烯)苯允许比用琼脂糖可实现的更快的流速和更短的加工时间。在抗体包含C_H3结构域的情况下，Bakerbond ABX^TM树脂(J.T.Baker，菲利普斯堡，新泽西州)可用于纯化。取决于待回收的抗体，也可使用其他蛋白质纯化技术，如离子交换柱上的分级分离、乙醇沉淀、反相HPLC、二氧化硅上的色谱、肝素SEPHAROSE^TM上的色谱、阴离子或阳离子交换树脂(如聚天冬氨酸柱)上的色谱、色谱聚焦、SDS-PAGE和硫酸铵沉淀。

在任何一个或多个初步纯化步骤之后，可将包含目标抗体和污染物的混合物进行低pH疏水相互作用色谱，使用pH约2.5-4.5之间的洗脱缓冲液，通常在低盐浓度(例如约0-0.25M盐)下进行。

还包括在如本文所定义的低、中等和高严格性条件下与由编码本发明的抗体或抗体片段的一种或多种分离的多核苷酸序列所代表的核苷酸序列的全部或部分(例如，编码可变区的部分)杂交的核酸。杂交核酸的杂交部分的长度通常为至少15(例如20、25、30或50)个核苷酸。杂交核酸的杂交部分与编码抗IL1RAP多肽(例如重链或轻链可变区)或其互补体的核酸的部分或全部的序列至少80％(例如至少90％、至少95％或至少98％)相同。本文所述类型的杂交核酸可以例如用作克隆探针、引物(例如PCR引物)或诊断探针。

非治疗用途

本文所述的抗体可用作亲和纯化剂。在此过程中，使用本领域熟知的方法将抗体固定在固相例如蛋白质A树脂上。使固定化抗体与含有待纯化的IL1RAP蛋白(或其片段)的样品接触，并且然后用合适的溶剂洗涤支持物，所述溶剂将除去样品中除了与固定化抗体结合的IL1RAP蛋白以外的基本上所有材料。最后，用另一种合适的溶剂洗涤支持物，所述溶剂将从抗体中释放IL1RAP蛋白。

抗IL1RAP抗体，例如人源化抗IL1RAP抗体，也可用于诊断测定以检测和/或定量IL1RAP蛋白，例如检测特定细胞、组织或血清中的IL1RAP表达。抗IL1RAP抗体可以诊断性地使用以例如监测疾病的发展或进展，其作为临床测试程序的一部分以例如确定给定治疗和/或预防方案的功效。可以通过偶联抗IL1RAP抗体来促进检测。可检测物质的例子包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料、生物发光材料、放射性材料、使用各种正电子发射断层成像的正电子发射金属以及非放射性顺磁性金属离子。关于可根据本发明缀合至抗体以用作诊断剂的金属离子参见例如美国专利号4,741,900。

抗IL1RAP抗体可用于诊断IL1RAP相关障碍(例如，以IL1RAP的异常表达为特征的障碍)的方法中或可用于确定受试者是否具有增加的发展IL1RAP相关障碍的风险。此类方法包括使来自受试者的生物样品与IL1RAP抗体接触，并且检测抗体与IL1RAP的结合。“生物样品”是指从潜在地表达IL1RAP的个体、细胞系、组织培养物或其他细胞来源获得的任何生物样品。用于从哺乳动物获得组织活检物和体液的方法在本领域是熟知的。

在一些实施方案中，所述方法可以进一步包括将患者样品与对照样品(例如，不患有IL1RAP相关障碍的受试者)中的IL1RAP水平进行比较，以确定患者是否患有IL1RAP相关障碍或有发展IL1RAP相关障碍的风险。

在一些实施方案中，例如出于诊断目的，用可检测部分标记抗体将是有利的。可获得许多可检测的标记物，包括放射性同位素、荧光标记物、酶底物标记等。可以使用各种已知技术将标记物与抗体间接缀合。例如，抗体可以与生物素缀合，并且上文提到的三大类标记物中的任一种可以与抗生物素蛋白缀合，或者反之亦然。生物素选择性结合抗生物素蛋白，并且因此标记物可以这种间接方式与抗体缀合。可替代地，为了实现标记物与抗体的间接缀合，可以将抗体与小半抗原(例如地高辛)缀合，并且将上文提到的不同类型的标记物之一与抗半抗原抗体(例如抗地高辛抗体)缀合。由此，可以实现标记物与抗体的间接缀合。

示例性放射性同位素标记物包括³⁵S、¹⁴C、¹²⁵I、³H和¹³¹I。可以使用例如CurrentProtocols in Immunology,第1卷和第2卷,1991,Coligen等人编Wiley-Interscience,NewYork,N.Y.,Pubs中描述的技术，用放射性同位素标记抗体。放射性可以例如通过闪烁计数来测量。

示例性荧光标记物包括来源于稀土螯合物(铕螯合物)或荧光素及其衍生物、罗丹明及其衍生物、丹酰、丽丝胺、藻红蛋白和德克萨斯红的标记物。可以通过已知技术将荧光标记物缀合至抗体，所述技术例如在Current Protocols in Immunology中披露的那些技术。荧光可以使用荧光计来定量。

本领域已知各种特征良好的酶底物标记物(关于综述，参见例如，美国专利号4,275,149)。酶通常催化生色底物的化学改变，所述改变可以使用各种技术进行测量。例如，改变可以是可以分光光度法测量的底物的颜色变化。可替代地，酶可以改变底物的荧光或化学发光。上文描述了用于对荧光变化定量的技术。化学发光底物通过化学反应以电子方式激发，并且然后可以发射可以使用例如化学发光计测量的光，或向荧光受体供能。

酶标记的例子包括萤光素酶(如萤火虫荧光素酶和细菌荧光素酶(美国专利号4,737,456)、荧光素、2,3-二氢酞嗪二酮、苹果酸脱氢酶、脲酶、过氧化物酶如辣根过氧化物酶(HRPO)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖类氧化酶(如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)、杂环氧化酶(如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶)、乳过氧化物酶、微过氧化物酶等。用于将酶缀合至抗体的技术描述于例如O'Sullivan等人,1981,Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in EnzymeImmunoassay,in Methods in Enzym.(J.Langone和H.Van Vunakis,编),Academic press,纽约州,73:147-166。

酶-底物组合的例子包括例如：以过氧化氢酶为底物的辣根过氧化物酶(HRPO)，其中过氧化氢酶氧化染料前体，例如邻苯二胺(OPD)或3,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐(TMB)；以磷酸对硝基苯酯为生色底物的碱性磷酸酶(AP)；以及具有生色底物例如对硝基苯基-β-D-半乳糖苷酶或荧光底物4-甲基伞形基-β-D-半乳糖苷酶的β-D-半乳糖苷酶(β-D-Gal)。

本领域技术人员可以使用许多其他酶-底物组合。有关这些的一般性综述，参见美国专利号4,275,149和美国专利号4,318,980。

在另一个实施方案中，使用未标记人源化抗IL1RAP抗体，并用结合人源化抗IL1RAP抗体的标记抗体进行检测。

本文所述的抗体可用于任何已知的测定方法中，例如竞争性结合测定、直接和间接夹心测定以及免疫沉淀测定。参见例如，Zola,Monoclonal Antibodies:A Manual ofTechniques,第147-158页(CRC Press,Inc.1987)。

抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段可以用于抑制配体与IL-36受体的结合。此类方法包括向细胞(例如，哺乳动物细胞)或细胞环境施用抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，由此抑制由IL-36受体介导的信号传导。这些方法在体外或在体内进行。“细胞环境”意指细胞周围的组织、介质或细胞外基质。将抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段施用于细胞的细胞环境，其方式为使得抗体或片段能够结合细胞外部的和周围的IL1RAP分子，从而防止IL-36配体结合其受体。

诊断试剂盒

抗IL1RAP抗体可以用于诊断试剂盒，即预定量的试剂与用于进行诊断测定的说明书的包装组合。在抗体被酶标记的情况下，试剂盒可包括酶所需的底物和辅因子，例如提供可检测生色团或荧光团的底物前体。此外，可以包含其他添加剂，例如稳定剂、缓冲液(例如封闭缓冲液或裂解缓冲液)等。可以广泛地改变各种试剂的相对量以提供显著优化测定灵敏度的溶液中的试剂浓度。试剂可以干燥粉末形式(通常是冻干的)提供，其包括在溶解后将提供具有适当浓度的试剂溶液的赋形剂。

治疗用途

在另一个实施方案中，本文公开的人源化抗IL1RAP抗体可用于治疗与如本文所述的IL1RAP表达相关联的各种障碍。治疗IL1RAP相关障碍的方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的人源化抗IL1RAP抗体。

人源化抗IL1RAP抗体或药剂是通过任何合适的方式施用的，所述方式包括肠胃外、皮下、腹膜内、肺内和鼻内施用以及(如果局部免疫抑制治疗需要)病灶内施用(包括在移植前灌注抗体或使移植物以其他方式与抗体接触)。人源化抗IL1RAP抗体或药剂可以例如以输注或团注形式施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。此外，人源化抗IL1RAP抗体通过脉冲输注以合适的方式来施用，特别是以抗体的递减剂量施用。在一个方面，给药通过注射、最优选静脉内或皮下注射来给予，这部分取决于施用是短暂的还是长期的。

对于疾病的预防或治疗，抗体的合适剂量将取决于多种因素，例如如上文所定义的待治疗的疾病的类型、疾病的严重程度和病程、施用抗体是用于预防还是用于治疗目的、先前的疗法、患者的临床病史和对抗体的反应，以及主治医师的判断。将抗体以合适的方式一次或在一系列治疗中施用至患者。

根据疾病的类型和严重程度，约1μg/kg至20mg/kg(例如0.1-15mg/kg)的抗体是用于向患者施用的初始候选剂量，例如通过一次或多次单独施用或通过连续输注来施用。根据上文提到的因素，典型的每日剂量范围可为约1μg/kg至100mg/kg或更高。对于数天或更长时间内的重复施用，取决于病症，持续治疗直至出现对疾病症状的所需抑制为止。然而，其他剂量方案可以是有用的。容易通过常规技术和测定来监测此疗法的进展。示例性给药方案是WO 94/04188中披露的给药方案。

术语“抑制”在本文与“改善”和“减轻”用于相同语境中，意指减轻疾病的一种或多种特征。

抗体组合物将以符合良好医学实践的方式来配制、给药和施用。在此情况下考虑的因素包括所治疗的特定障碍、所治疗的特定哺乳动物、单独患者的临床状况、病因、药剂的递送部位、施用方法、施用时间表以及执业医师已知的其他因素。待施用的抗体的“治疗有效量”将由此类考虑因素决定，并且是预防、改善或治疗与IL1RAP表达相关联的障碍所必需的最小量。

抗体不必，但任选地用一种或多种目前用于预防或治疗讨论中的障碍的药剂来配制。此类其他药剂的有效量取决于配制品中存在的人源化抗IL1RAP抗体的量、障碍或治疗的类型以及上文讨论的其他因素。这些药剂通常以与上文所用相同的剂量和施用途径来使用，或者以此前所用剂量的约1％至99％来使用。

药物组合物及其施用

可以将包含IL1RAP结合剂(例如，抗IL1RAP抗体)的组合物施用于患有或有风险患上免疫障碍、呼吸系统障碍或癌症的受试者。本发明进一步提供了IL1RAP结合剂(例如，抗IL1RAP抗体)在制造用于预防或治疗癌症、呼吸系统障碍或免疫障碍的药物中的用途。如本文所用，术语“受试者”是指可以被施用IL1RAP结合剂的任何哺乳动物患者，包括例如人和非人哺乳动物，如灵长类动物、啮齿动物和狗。明确意图用于使用本文所述的方法进行治疗的受试者包括人。在免疫障碍、呼吸系统障碍或癌症的预防或治疗中，抗体或药剂可以单独或与其他组合物组合施用。可以与抗体或药剂组合施用的此类组合物包括甲氨蝶呤(MTX)和免疫调节剂，例如抗体或小分子。

用于此类药物组合物中的抗体的例子是包括具有SEQ ID NO:17-66中任一个的轻链可变区氨基酸序列的抗体或抗体片段的那些。用于此类药物组合物中的抗体的例子还是包括具有SEQ ID NO:67-116中任一个的重链可变区氨基酸序列的人源化抗体或抗体片段的那些。

用于此类药物组合物中的抗体的另外的例子还是包括具有SEQ ID NO:17、36、40、47、50、51和52中任一个的轻链可变区氨基酸序列的人源化抗体或抗体片段的那些。用于此类药物组合物中的优选抗体还是包括具有SEQ ID NO:67、86、90、97、100、101和102中任一个的重链可变区氨基酸序列的人源化抗体或抗体片段的那些。

用于此类药物组合物中的抗体的另外的例子还是包括具有SEQ ID NO:17和67、SEQ ID NO:36和86、SEQ ID NO:40和90、SEQ ID NO:47和97、SEQ ID NO:50和100、SEQ IDNO:51和101以及SEQ ID NO:52和102中任一组的轻链可变区和重链可变区的人源化抗体或抗体片段的那些。

用于此类药物组合物中的抗体的另外的例子还是包括抗体A1、抗体A2、抗体A3、抗体A4、抗体A5、抗体A6或抗体A7的那些。

各种递送系统是已知的并且可用于施用IL1RAP结合剂。引入方法包括但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。IL1RAP结合剂可以例如通过输注、团注或注射施用，并且可以与其他生物活性剂如化学治疗剂一起施用。施用可以是全身的或局部的。在优选的实施方案中，施用是通过皮下注射进行的。可以在例如预填充注射器中制备用于此类注射的配制品，其可以每隔一周施用一次。

在具体实施方案中，通过注射、借助导管、借助栓剂或借助植入物来施用IL1RAP结合剂组合物，所述植入物为多孔、无孔或凝胶状材料，包括膜(如硅橡胶膜)或纤维。通常，当施用组合物时，使用不吸收抗IL1RAP抗体或药剂的材料。

在其他实施方案中，抗IL1RAP抗体或药剂在控释系统中递送。在一个实施方案中，可以使用泵(参见例如，Langer,1990,Science 249:1527-1533；Sefton,1989,CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.14:201；Buchwald等人,1980,Surgery 88:507；Saudek等人,1989,N.Engl.J.Med.321:574)。在另一个实施方案中，可以使用聚合物材料。(参见例如，MedicalApplications of Controlled Release(Langer和Wise编,CRC Press,Boca Raton,Fla.,1974)；Controlled Drug Bioavailability,Drug Product Design and Performance(Smolen和Ball编,Wiley,New York,1984)；Ranger和Peppas,1983,Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61。还参见Levy等人,1985,Science 228:190；During等人,1989,Ann.Neurol.25:351；Howard等人,1989,J.Neurosurg.71:105.)其他控释系统例如在Langer(同上)中讨论。

IL1RAP结合剂(例如抗IL1RAP抗体)可以作为药物组合物施用，所述药物组合物包含治疗有效量的所述结合剂和一种或多种药学上相容的成分。

在典型的实施方案中，根据常规程序将药物组合物配制成适于静脉内或皮下施用于人的药物组合物。通常，用于注射施用的组合物是在无菌等渗水性缓冲液中的溶液。必要时，药物组合物还可以包含增溶剂和局部麻醉剂(例如利多卡因)以减轻注射部位的疼痛。通常，将成分单独或混合在一起以单位剂型来供应，例如作为干燥冻干粉末或无水浓缩物在指示活性剂的量的密闭容器例如安瓿或小药囊中。在将通过输注施用药物时，可以用含有无菌药物级水或盐水的输液瓶分配所述药物。在通过注射施用药物时，可以提供无菌注射用水或盐水的安瓿，以便可以在施用之前将成分混合。

此外，可以将药物组合物作为药物试剂盒提供，所述试剂盒包括(a)含有冻干形式的IL1RAP结合剂(例如抗IL1RAP抗体)的容器和(b)含有药学上可接受的注射用稀释剂(例如无菌水)的第二容器。药学上可接受的稀释剂可以用于重构或稀释冻干抗IL1RAP抗体或药剂。按照管理药物或生物产品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的通告可以任选地与这样一个或多个容器相关联，所述通告反映所述机构批准制造、使用或销售用于人施用。

可以通过标准临床技术确定在免疫障碍或癌症的治疗或预防中有效的IL1RAP结合剂(例如，抗IL1RAP抗体)的量。此外，可任选地采用体外测定以帮助鉴定最佳剂量范围。待用于配制品中的确切剂量还将取决于施用途径以及免疫障碍或癌症的阶段，并且应根据从业人员的判断和每名患者的情况来决定。可以从源自体外或动物模型测试系统的剂量-反应曲线外推有效剂量。

通常，向患有免疫障碍或表达IL1RAP的癌症的患者施用的抗IL1RAP抗体或IL1RAP结合剂的剂量通常为约0.1mg/kg至约100mg/kg受试者体重。向受试者施用的剂量为约0.1mg/kg至约50mg/kg、约1mg/kg至约30mg/kg、约1mg/kg至约20mg/kg、约1mg/kg至约15mg/kg、或约1mg/kg至约10mg/kg受试者体重。

示例性剂量包括但不限于1ng/kg至100mg/kg。在一些实施方案中，剂量为约0.5mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg或约16mg/kg。剂量可以例如每天一次、每周一次(每周)、每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次、每两周一次或每月一次、每两个月一次或每三个月一次施用。在具体实施方案中，剂量为约0.5mg/kg/周、约1mg/kg/周、约2mg/kg/周、约3mg/kg/周、约4mg/kg/周、约5mg/kg/周、约6mg/kg/周、约7mg/kg/周、约8mg/kg/周、约9mg/kg/周、约10mg/kg/周、约11mg/kg/周、约12mg/kg/周、约13mg/kg/周、约14mg/kg/周、约15mg/kg/周或约16mg/kg/周。在一些实施方案中，剂量范围是约1mg/kg/周至约15mg/kg/周。

在一些实施方案中，包含IL1RAP结合剂的药物组合物可进一步包含与结合剂缀合或未缀合的治疗剂。可以将抗IL1RAP抗体或IL1RAP结合剂与用于治疗或预防免疫障碍或癌症的一种或多种治疗剂组合共施用。

这种组合疗法的施用可以对疾病参数(例如症状的严重程度、症状的数量或复发的频率)产生累加或协同作用。

关于组合施用的治疗方案，在一个特定实施方案中，将抗IL1RAP抗体或IL1RAP结合剂与治疗剂同时施用。在另一个特定实施方案中，在施用抗IL1RAP抗体或IL1RAP结合剂之前或之后，在施用抗IL1RAP抗体或IL1RAP结合剂之前或之后至少一小时至长达数月，例如至少一小时、五小时、12小时、一天、一周、一个月或三个月，施用所述治疗剂。

制品

在另一个方面，包括含有可用于治疗上文所述的障碍的材料的制品。制品包含容器和标签。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器和试管。容器可以由多种材料(如玻璃或塑料)形成。容器容纳有效于治疗病症的组合物，并且可以具有无菌进入口。例如，容器可以是静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶。组合物中的活性剂是人源化抗IL1RAP抗体。容器上或与容器相连的标签表明所述组合物用于治疗所选病症。所述制品可以进一步包括第二容器，所述第二容器包含药学上可接受的缓冲剂，例如磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液。其还可以包括从商业和用户角度来看所需的其他材料，包括其他缓冲液、稀释剂、过滤器、针、注射器和具有使用说明书的包装插页。

在以下实施例中进一步描述本发明，这些实施例并不意图限制本发明的范围。

本发明的抗体进一步描述于下文的实施例中。

实施例

实施例1：抗人IL1RAP抗体的鉴定

A)用人IL1RAP的免疫

用重组产生的人IL1RAP(Genbank登录号NP_002173.1)蛋白免疫小鼠，并且取产生强滴度应答的那些小鼠进行传统的杂交瘤产生。在全血和PBMC测定中，阻断IL33和IL36信号传导的融合产物具有针对IL1的较弱的/细胞类型特异性活性，被亚克隆和重新筛选。目前，在临床研究中，使用针对单独细胞因子或同源受体的抗体探索了每种通过IL1RAP传导信号的细胞因子的抑制，证明了该通路家族的吸引力。使用标准PCR引物组从杂交瘤中克隆了可变结构域。可变结构域和具体的CDR描述于上文。

B)嵌合Fab的产生：

生成候选IL1RAP G011嵌合Fab以在ELISA结合实验中基准化和评价人源化/序列优化的Fab。简而言之，通过将小鼠VK和VH残基分别与人Ck和CH1残基融合来生成嵌合Fab。使用选定的抗体候选物的小鼠序列，设计并合成了鼠VK和VH的基因片段。使用含有针对鼠框架1区特异性的序列和退火至基因III序列末端的突出端序列的生物素化正向引物，和来自保守的人恒定区(分别为Cκ或CH1)的反向引物来扩增V区。使用基因片段作为模板进行PCR，并且使用标准方案将DNA产物克隆到M13LE01载体中。选择表达目的DNA的大肠杆菌斑块，并且将相应DNA样品分离并测序。用0.5mM IPTG诱导处于对数生长期的大肠杆菌XL1-blue细胞，随后用代表嵌合Fab的正确斑块感染，并且在25℃过夜生长。通过离心收集培养上清液或细菌沉淀。将沉淀在-80℃下冷冻15分钟，随后在室温下在裂解缓冲液(20mMTris，150mM NaCl，5mM EDTA，pH 8.0)中解冻。通过有力地涡旋15分钟来重悬沉淀。通过离心获得形成含有可溶性嵌合Fab的周质提取物的裂解物。

C)ELISA结合测定的开发：

为了在筛选过程中鉴定阳性结合物，开发了ELISA结合测定以鉴定独立于Fab表达的结合物，以确保数据代表了Fab的结合活性。简而言之，将板以96孔形式用不同量的抗Fd(Meridian Life Science，目录号W90075C)包被过夜。用3％牛奶在PBD中封闭测定板1h，随后添加不同量的嵌合/序列优化的Fab的培养上清液或周质提取物。对于初步筛选，用800ng/mL的抗Fd抗体和400ng/mL的抗Fd抗体包被板，用于验证性筛选(周质Fab，一式三份)。生物素化抗原以30ng/mL用于1X初步筛选(分泌的Fab)，并且以10ng/mL用于3X验证性筛选(周质Fab，一式三份)。

D)IgG的克隆、表达和纯化

将小鼠抗体转化为嵌合抗体，这些嵌合抗体由人恒定结构域(hu IgG1KO/κ)上的小鼠可变结构域组成。hu IgG1KO(敲除)具有两个替代突变(Leu234Ala和Leu235Ala)，它们通过减少效应子功能，如FcγR和补体结合来消除ADCC和CDC活性。小鼠抗体和嵌合抗体的可变结构域是相同的。产生嵌合抗体以确认抗体的功能并且确保获得正确的可变结构域序列。

为了产生抗体构建体，使用HD克隆试剂盒(Clontech，美国)，将序列优化的VH和VK区的密码子优化DNA与来自人IgG1的重链和轻链恒定区融合，以将VK基因定向克隆到pTT5 huIgK载体中，并且将VH基因定向克隆到pTT5 huIgG1KO载体中。为了促进HD克隆，在/>HD克隆之前，对PCR产物进行纯化并且用克隆增强子处理。根据制造商的方案(Clontech，美国)进行克隆和转化。通过分离少量制备的DNA，并且对分离的DNA进行Sanger双链测序，确认亚克隆基因V-基因片段的DNA序列。

轻链和重链表达载体DNA二者被扩增以转染到CHO-E细胞中。将在无血清培养基中悬浮生长的转染的CHO-E细胞在摇瓶中以140rpm、37℃和5％CO₂在搅拌下培养，并在指数生长条件下保持。在转染当天，用1mg轻链质粒和0.5mg重链质粒化学转染细胞。然后将它们以1至2x10⁶个细胞/ml接种到1L的FreeStyle^TMCHO表达培养基(LifeTechnologies，美国纽约州)中。然后将细胞在轨道振荡下孵育10至12天，其中一次性进料150ml商业进料溶液以允许蛋白质表达。根据制造商的说明，使用/>仪器(Pall ForteBio，美国加州)和protA生物传感器尖端测定细胞培养上清液中的抗体滴度。

使用MabSelect^TM(Amersham Biosciences)通过蛋白A亲和色谱从培养上清液中纯化重组抗体，并且储存在60mM NaOAc缓冲液(pH 5.0)中。通过质谱和分析超速离心评估样品的纯度和异质性程度。在功能测试之前，确认所有样品的单体含量≥90％，杂质含量<10％。

实施例2：人源化IL1RAP抗体的产生

为了降低人体施用后的潜在免疫原性，通过设计和筛选过程，将小鼠抗人IL1RAP单克隆抗体GO11“人源化”。基于框架同源性、CDR结构、保守典范残基、保守界面堆砌残基和其他参数，为小鼠先导物选择人框架序列。这些框架位置的氨基酸残基的特异性取代可以改善抗体性能的各个方面，包括结合亲和力和/或稳定性，这优于在通过将CDR或HVL“直接交换”到人种系框架区中而形成的人源化抗体中显示的结合亲和力和/或稳定性。对于框架工程，我们鉴定了与鼠GO11候选物紧密匹配的人种系，并且将来自小鼠先导物的CDR移植到人种系IGKV1-39*01和IGHV1-69*02上。将得到的移植的可变区克隆到基于M13的载体中，并且在大肠杆菌细胞中表达。在ELISA实验中评价了来自大肠杆菌周质提取物的移植的Fab的结合活性，并且将具有小鼠可变区的嵌合Fab作为阳性对照(图1)。

如图1所示，移植的Fab描绘出比小鼠Fab弱的结合活性，这表明需要鉴定用以恢复结合活性的关键小鼠残基。

除了CDR外，某些小鼠框架残基如典范残基和Vernier区残基，已知在定位CDR环中起着重要作用。为了鉴定保留更接近CDR和Vernier区的鼠先导候选残基的相似结合的人框架，将典范残基从人残基改为小鼠残基。构建了代表框架序列中各种突变/变化的噬菌体文库，特别是对VK中的K45Q、I48V、Y49H和Q100A以及VH中的Q3H、K23E、R38K、A40R、M48I、R67K、V68A、T69R、I70F、A72V和Y95F进行了评价(图2A/D)。用含有不同组合的DNA转化大肠杆菌细胞。选择大约450个VK克隆变体和1350个VH克隆变体，并且通过ELISA针对与huIL1RAP的结合进行筛选。与嵌合亲本抗IL1RAP Fab相比。

选择被描绘为与阳性对照相似的结合的分子，并在验证性ELISA结合实验中再次检查这些分子的结合活性。使用代表所选结合物的斑块再次感染大肠杆菌细胞，并用0.5mMIPTG诱导培养物。使用周质提取物以确认与huIL1RAP抗原的结合。如前，我们在实验中保持嵌合Fab作为阳性对照。

如在图2A-图2D中可见，VK的克隆405-10和405-12(分别为SEQ ID NO:18和19)和VH的克隆406-18和406-20(分别为SEQ ID NO:68和69)克隆描绘了与嵌合对照相似的结合。这些轻链框架的序列分析揭示，在FW2中的氨基酸突变Y49H存在于所有克隆中，这些克隆被描绘为与阳性对照嵌合Fab结合相似，并且因此被认为是优化轻链框架中包括的重要的关键小鼠残基。对于VH，在FW3中的氨基酸突变A72V与其他小鼠残基一起存在于多个克隆(包括406-18和406-20)中，因此被认为对优化的分子很重要，但不是关键的。在框架3中除A72V之外，406-18具有额外的变化T69R，而4306-20具有I70F变化，但是这些残基显现都不是结合的关键。鉴于这些观察结果，我们决定使用具有A72V残基的移植的VH作为最终文库中的潜在关键残基，并且如后所述。

CDR的优化

种系化演变为一种新型策略，其将非关键小鼠残基改变为更多的人种系残基，以提高源自非人灵长类动物的抗体的人含量百分比，并且从而减少抗药物抗体的形成。通过将这些小鼠IL1RAP残基改变为人种系残基作为IgG骨架中的点突变体，我们评价了这些小鼠IL1RAP残基在L-CDR1、L-CDR2以及部分L-CDR3、H-CDR1和H-CDR2中的作用。

13种轻链变体(T25A、E27Q、N28S、N30S、Y50A、K52S、T53Y、A55Q、E56S、H90Q、H91S、G93S和S95P)和19种重链变体(Y27G、I28T、L30S、T31S、W33Y、M34I、N35S、Q50R、F52I、A54I、S55L、D56G、S57I、T58A、N61A、E62Q、M63K、K65Q和D66G)分别在载体pTT5中生成(参见图3A/B)。轻链突变体与亲本嵌合重链配对，并且重链突变体与亲本嵌合轻链配对，用于在CHO-E细胞中表达分析7天。在ELISA实验中评价所得变体的结合，并且将其与具有小鼠可变区、人恒定区的亲本嵌合IgG进行比较。对于轻链变体，六个点突变体VK-T25A、E27Q、N28S、N30S、K52S和T53Y被描绘为类似于嵌合IgG的结合(+10％对照；图3A)，而对于重链，十个点突变体VH-I28T、L30S、M34I、N35S、D56G、T58A、N61A、E62Q、M63K、K65Q和D66G被描绘为与嵌合IgG相似的结合(+10％对照；图3B)。

选择与嵌合亲本Fab相比显示更好或相等的结合和改善的表达的Fab进行进一步表征。

抗体GO11的代表性人源化可变区示于说明书部分中。以此方式，抗体A1至抗体A7是人源化抗体，其源自小鼠抗体005-GO11(VL/VH SEQ ID NO:1和2)(克隆到人IgG1 KO(KO＝敲除)/κ骨架。抗体A1至抗体A7示于表25中。

本发明的示例性抗IL1RAP Ab特异性地结合人和食蟹猴IL1RAP(ECD)。用SPR测定抗体与人IL1RAP和食蟹猴IL1RAP的结合亲和力，分别为110pM和160pM。本发明的抗IL1RAP抗体对小鼠IL1RAP无交叉反应性。

表27：

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实施例3：生物活性；人源化抗人IL1RAP抗体在功能性人体测定中的效力-阻断IL-33、IL-36和IL-1信号传导

IL-1β对靶细胞的激活取决于其与以下两种膜结合受体的相互作用：IL-1受体I型(IL-1R1)和IL-1受体辅助蛋白(IL-1RAcP)，IL-1R1是以高亲和力结合IL-1β的配体识别受体。尽管IL-1RAcP不直接与IL-1β相互作用，但其募集对于有信号传导能力的复合物的形成是必要的。IL1RAP也是IL-33受体复合物的功能部分，并且因此结合IL1RAP可以抑制IL-1和IL-33信号传导。

为了测试潜在先导候选抗体阻断IL-1和IL-33信号传导的能力，建立了IL-1和IL-33依赖性细胞测定。测试本发明的示例性抗体对IL-1β和IL-33信号传导的抑制。

方案：

单核细胞源性巨噬细胞(MDM)的生成和刺激：

如最近在Koss等人(IL36 is a Critical Upstream Amplifier ofNeutrophilic Lung Inflammation in Mice，等待出版)的描述中，人单核细胞源性巨噬细胞分化并且产生。用含有以下的培养基刺激细胞：杜尔贝科改良伊格尔培养基(DMEM)(1×)+GlutaMAXTM-I(GIBCO#31966-021)；10％HI胎牛血清(FCS；GIBCO#16140-071)；1％NEAA(100x GIBCO#11140-035)；1％P/S(10,000U/mL青霉素，10,000μg/mL链霉素GIBCO#15140-122)和10ng/mL重组人MCSF(R&D Systems；216-MCC/CF)。将6.2x104个MDM接种在96孔板中。在37℃和5％CO2下，在24h后用抗IL1rap AB(0.4、2、10、50、250nM)预刺激巨噬细胞，并且在30min后用rhIL-36α(33ng/mL；6995-IL-010/CF；R&D Systems)、rhIL-36β(33ng/mL；6834-ILB-025/CF；R&D Systems)、rhIL-36γ(33ng/mL；2320-IL-025/CF；R&D Systems)、rhIL-1α(10ng/mL；200-LA-010/CF；R&D Systems)刺激MDM持续24h。根据制造商的说明，经由单个MSD(Meso Scale Discovery，#K151UQK-1)测量上清液中的IL12p40浓度。

单核细胞源性树突细胞(MoDC)的生成和刺激：

如在Koss等人(IL36 is a Critical Upstream Amplifier of NeutrophilicLung Inflammation in Mice，等待出版)中所描述的，单核细胞是从来自人志愿者的外周血单个核细胞中分离的。根据制造商的说明，使用树突细胞培养试剂盒(#10985，Stemcel)将1x10⁵个单核细胞接种在96孔板中。在37℃和5％CO2下，在8天后用抗IL1rap AB(0.4、2、10、50、250nM)预刺激分化的MoDC 30分钟，并且用rhIL-36α(33ng/mL；6995-IL-010/CF；R&DSystems)、rhIL-36β(33ng/mL；6834-ILB-025/CF；R&D Systems)和rhIL-36γ(33ng/mL；2320-IL-025/CF；R&D Systems)的组合进一步刺激48h。根据制造商的说明，经由MSD(MesoScale Discovery，#K15067L)测量上清液中的IL-8、IL-6和TNFα浓度。

全血测定：

将来自人志愿者供体的180μL全血(用RPMI培养基(RPMI1640 Gibco#61870-010)以1:2稀释)吸移入96孔板中。将本发明的抗IL1rap Ab(0.07、0.21、0.62、1.8、5.5、16.5、50、150、450nM(MIP1β)、0.1、1、10、100、1000nM(IFNγ))添加到孔中，并且在37℃和5％CO2下，预孵育30min。将rhIL33(3625-IL-010/CF，R&D Systems，0.6nM)、rhIL36γ(6835-IL-010/CF，R&D Systems，10nM)、rhIL-12(219-IL/CF，R&D Systems，0,25nM)添加到孔中，在37℃和5％CO2下保持24h。收集上清液，并且根据制造商的说明测量Mip1β(DY271-05，DuoSetELISA，R&D Systems)和IFNγ(#555142，ELISA，BD Biosciences)蛋白浓度。

结果：

确定了抗IL1RaP Ab抑制由IL1家族细胞因子激活免疫细胞的能力。rem单核细胞源性巨噬细胞(MDM)在体外被单独的IL-36α、β、γ，单独的IL-1a或IL-36α、β、γ和IL-1a的组合刺激为相关的人先天免疫细胞。测量IL-12蛋白质的产生，作为IL1家族细胞因子激活下游的细胞激活的标记物。

抗IL1RaP Ab明显抑制了IL-12响应于IL-36α、β、γ或IL-36α、β、γ与IL-1a组合刺激的产生(分别地，IC50＝0.35nM和IC50＝6.48nM)(图4A)。图4A示出了在细胞因子刺激的MDM中，本发明的抗IL1RaP Ab抑制IL-12p40分泌(所示为来自从不同供体获得的MDM的两次实验中一个代表的技术一式三份的平均值±SD)。由于单独的IL-1a不能在MDM中诱导IL-12产生，并且在IL-33刺激后获得了相似的结果(数据未示出)，因此响应于IL-4刺激随后暴露于IL-36α、β、γ、IL-1a或IL-36α、β、γ连同IL-1a，测量抗IL1RaP Ab抑制IL-12蛋白的能力。在IL-4调理的MDM中，抗IL1RaP Ab#A2明显抑制了IL-12响应于IL-36α、β、γ(IC50＝1.91nM)、IL-1a(IC50＝5.92nM)和IL-36α、β、γ/IL-1a(IC50＝8.14nM)的产生(图4A)。

先前的实验已经证明MoDC对IL-1a或IL-33的刺激无响应(未示出)。因此，作为IL1RAP抗体能力的下一个度量，我们在体外用IL-36α、β、γ或单独刺激了人单核细胞源性树突细胞(MoDC)，即一种相关的人适应性免疫细胞。IL-8(IC50＝3.95nM)、TNF(IC50＝6.45nM)和IL-6(IC50＝9.41nM)的蛋白质产生被抗IL1Rap Ab明显抑制(图4B)。与在MDM和DC中的发现一致，当我们测量全血中典范髓样细胞源性介质Mip-1b的产生时，IL-33没有诱导其产生，而IL-36γ有效诱导Mip-1b产生，该Mip-1b产生被抗IL1RaP Ab#A2(IC50＝4.37)明显抑制(图4C)。在将IL-36γ与IL-33组合后(IC50＝3.43)获得了相似的数据(图4C)。

据报道，IL-33激活淋巴细胞产生IFNγ。初步实验示出，在将IL-33与IL-12组合后，在全血测定中观察到IFNγ的最高产生(数据未示出)。因此，我们在全血测定中确定了抗IL1RaP Ab抑制IL-33/IL-12介导的IFNγ产生的能力，其中IFNγ的产生被明显抑制(IC50＝4.84nM)(图4D)。

实施例4：抗IL1RAP抗体的表位结合：独特的表位如晶体结构和HDX MS所示

为了理解抗IL1RAP克隆与IL1RAP结合的位置，使用受体的胞外结构域进行了蛋白质的结构分析。IL1RAP的“胞外结构域”与IL1受体(例如，IL1 R I型或II型)形成细胞膜结合的复合物。已知人IL1RAP(登录号Q9NPH3 UniProtKB/Swiss-Prot)由三个胞外结构域组成：结构域I：氨基酸21至134；结构域II：氨基酸135-234；和结构域III：氨基酸235至367。

IL1RAP:Fab二元复合物的结晶：

以1.2:1的摩尔比混合IL1RAP和抗IL1RAP#A2 Fab并且浓缩至20mg/mL。通过将1μl复合物与1μL含有0.1M乙酸铵、0.1M BIS-TRIS pH 6.0和15％w/v聚乙二醇10000的储备溶液混合，使用悬滴蒸汽扩散法获得晶体。一天之内出现板状的晶体。将晶体用补充有30％v/v甘油的储备溶液进行冷冻保护，并且在液氮中快速冷冻。

数据收集和结构确定：

在SLS(在Villigen，瑞士)的光束线X10SA下在100K下收集数据。在PILATUS 6M-F检测器上收集720帧，每帧0.25°。用autoPROC软件处理数据(Smart等人Global phasingLimited,2013；Evans,P.(2006)Scaling and assessment of data quality.ActaCrystallogr DBiol Crystallogr 62,72-82；Kabsch,W.(2010)Xds.Acta Crystallogr DBiol Crystallogr 66,125-132；Vonrhein,C.,Flensburg,C.,Keller,P.,Sharff,A.,Smart,O.,Paciorek,W.,Womack,T.和Bricogne,G.(2011)Data processing and analysiswith the autoPROC toolbox.Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 67,293-302；Tickle,I.,Flensburg,C.,Keller,P.,Paciorek,W.,Sharff,A.,Vonrhein,C.和Bricogne,G.(2018)STARANISO.Global Phasing Ltd.,Cambridge,United Kingdo；Winn,M.D.,Ballard,C.C.,Cowtan,K.D.,Dodson,E.J.,Emsley,P.,Evans,P.R.,Keegan,R.M.,Krissinel,E.B.,Leslie,A.G.,McCoy,A.,McNicholas,S.J.,Murshudov,G.N.,Pannu,N.S.,Potterton,E.A.,Powell,H.R.,Read,R.J.,Vagin,A.和Wilson,K.S.(2011)Overviewof the CCP4 suite and current developments.Acta Crystallogr D BiolCrystallogr 67,235-24；和Evans,P.R.,and Murshudov,G.N.(2013)How good are mydata and what is the resolution？Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 69,1204-1214)。在PHENIX软件套件中，用SCULPTOR创建了分子替代模型(Adams等人(2010)PHENIX:acomprehensive Python-based system for macromolecular structure solution.ActaCrystallogr D Biol Crystallogr 66,213-221)，其中使用pdb:1hzh的Fab作为模板。使用用SCULPTOR制备的Fab模型以及来自pdb:4dep的白介素-1受体辅助蛋白作为模板，用PHASER进行分子置换(McCoy等人(2007)Phaser crystallographic software.J ApplCrystallogr 40,658-674)。结构用Buster(Bricogne等人(2020)BUSTER version2.11.7.in BUSTER version2.11.7,2.11.7Ed.,Global Phasing Ltd.,Cambridge,UnitedKingdom)模型构建来精修，并且用COOT进行最小二乘拟合分析(Emsley等人(2010)Features and development of Coot.Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 66,486-501)。用PyMOL(Schrodinger，LLC.(2015)The PyMOL Molecular Graphics System,2.4版)得到图6A-图6C。

表28：

HDX MS的实验程序：

对于HDX(氢/氘交换质谱)实验，单独分析IL1RAP抗原(对照)，以及将该抗原连同以大约等摩尔比存在的本发明的抗IL1RAP#A2抗体(混合样品)一起进行分析。所有样品处理通过LEAP HDX PAL系统进行。为了鉴定肽，将对照样品用H₂O缓冲液(H₂O 10mM磷酸钠pH7.4)孵育。对于交换实验，将对照和混合样品用D₂O缓冲液(D₂O 10mm磷酸钠pH 7.4)在10、100和1000第二时间点(一式两份)通过以下程序孵育：(1)将4μL样品添加到40μL的H20/D2O缓冲液中；(2)将混合物在20℃下孵育持续各种时间点(0、10、100和1000秒)；(3)将40μl的孵育样品转移到40μL的4℃淬灭缓冲液(4M尿素，0.4M TCEP-HCl)中；(4)通过使200μL/min的流动相A(99％H2O、1％乙腈和0.1％甲酸)流动2分钟，将60μL淬灭样品注射到固定化蛋白酶XIII/胃蛋白酶柱(1:1 2.1x30mm，NovaBioAssays)上。使消化肽在Vanguard前置柱(ACQUITY UPLC BEH C18，1.7μm，2.1mm X 5mm，Waters)上脱盐3分钟，并且然后在4℃下以160μl/min的流速，用Acquity UPLC BEH C18柱1.7um，1mm X 50mm(Waters)通过液相色谱分离。LC梯度溶剂系统由流动相A(上述组合物)和流动相B(0.1％甲酸、5％H2O和95％乙腈)构成。流动相B的百分比在5％保持5分钟；从5％增至在5.6分钟处的15％，增至在10.4分钟处的40％，增至在11分钟处的90％；在90％保持至11.5分钟；减至在12.4分钟处的5％，并且然后在5％保持至14分钟。色谱分离后，通过以正电喷雾电离模式运行的ThermoScientific Orbitrap融合质谱仪检测肽。然后通过Byonic软件(Protein Metrics)分析数据以鉴定肽，并且通过HDExaminer软件(Sierra Analytics)计算氘掺入。

结果：

确定了与IL-1RAcP的胞外结构域(残基21-368，表28)复合的抗-IL1RAP#A2 Fab的结构。除残基21-23和351-368外，IL-1RAcP的所有残基的电子密度都是可见的。除了链H的四个C末端残基和链L的第一个N末端残基外，也可以完全追踪Fab链。结晶B因子在D3结构域和Fab(和/>)中最低，并且朝着IL-1RAcP的N末端增加(在结构域D2中为/>在结构域D1中为/>)。这可以通过复合物的晶体堆积来解释，其中D1结构域与相邻分子的接触次数最少。

IL-1RAcP的结构类似于先前确定的人IL-1RAcP-IL-1RI-IL1β(Thomas等人(2012)Structure of the activating IL-1receptor signaling complex.Nature structural&molecular biology 19,455-457)和IL-1RAcP-IL-1RII IL1β(Wang等人(2010)Structuralinsights into the assembly and activation of IL-1beta with its receptors.NatImmunol 11,905-911)的结构，其中所有IL-1RAcP骨架Cα原子的均方根偏差分别为和本发明的示例性抗IL1RAP#A2 Fab结合IL-1RAcP的D3结构域，界面在每个结合配偶体上掩埋约/>的表面积。D3结构域上的表位残基与参与IL1RAcP-IL-1RI界面的残基大部分一致。虽然IL1RAcP与IL-1RI的相互作用延伸到IL1RAcP的D2和D3结构域中的残基，但本发明的IL1RAcP和抗IL1RAP抗体的界面限制于D3结构域。

图5A-图5D展示了IL-1RAcP:本发明的抗IL1RAP Ab以及IL-1RAcP-IL-1RI-IL1β复合物的结构特征，以通过90°旋转相关的两个不同的视图示出。在图5A中，IL-1RAcP以淡蓝色示出，具有半透明表面。Fab显示为带状。重链和轻链分别为深灰色和浅灰色。图5B示出了IL-1RAcP上Fab的位置，以灰色示出。为清楚起见，Fab显示为半透明带状。图5C示出了人IL-1RAcP-IL-1RI-IL1β三元复合物(pdb 4dep)的结构，其用于与图5A相同的取向上的比较。IL-1RI为红色并且IL-1β为绿色。图5D展示了IL-1RAcP-IL-1RI界面的IL-1RAcP-侧(以橙色示出)。为清楚起见，IL-1RI和IL1β显示为半透明带状。

表位通过由程序PISA定义的氨基酸残基238、239、241、244-247、249、251-256、261、263、265、267、269、271、301、303、305-307、311、313和315形成。这与通过HDX-MS确定的表位(残基226-262和269-273)有良好一致性，如在图6A-图6B中所证明的，两图比较了IL1RAP上的HDX以及X射线表位。在图6A中，HDX表位以黄色示出，其包含残基226-262和269-273。在图6B中，示出了x射线表位(也如图6B中所示，但为清楚起见，在此图中，除去了本发明的抗IL1RAP Fab)。

IL1RAP胞外结构域的氨基酸开始于氨基酸位置21并且延伸至氨基酸367，如SEQIDNO:184所示。IL1RAP结构域1对应于氨基酸位置21-134(SEQ ID NO:185)，结构域2对应于氨基酸位置135-234(SEQ ID NO:186)，结构域3对应于氨基酸位置235-267(SEQID NO:187)。结构域3在这里被进一步划分，划分根据由x射线晶体学(XR-D3A/B对应于氨基酸位置235-315(SEQ ID NO:188)，XR D3A对应于氨基酸位置235-273(SEQ IDNO:189)，以及XR D3B对应于氨基酸300-315(SEQ ID NO:190))和HDX作图(HDXD2/3 A对应于氨基酸位置226-262(SEQ ID NO:191)，以及HDX D2/3 B对应于氨基酸位置226-273(SEQ ID NO:192))定义的所鉴定的表位结合区。SEQ ID NO:202-207中加下划线和粗体的氨基酸位置对应于通过X射线作图鉴定的与示例性抗IL1RAP抗体#A2结合的表位的接触氨基酸K238、N239、V241、V244、I245、H246、S247、N249、H251、V252、V253、Y254、E255、K256、E261、L263、P265、T267、Y269、S271、S301、S303、S305、R306、T307、T311、T313、I315。

IL1RAP ECD登录号：Q9NPH3(氨基酸21-367)

SERCDDWGLDTMRQIQVFEDEPARIKCPLFEHFLKFNYSTAHSAGLTLIWYWTRQDRDLEEPINFRLPENRISKEKDVLWFRPTLLNDTGNYTCMLRNTTYCSKVAFPLEVVQKDSCFNSPMKLPVHKLYIEYGIQRITCPNVDGYFPSSVKPTITWYMGCYKIQNFNNVIPEGMNLSFLIALISNNGNYTCVVTYPENGRTFHLTRTLTVKVVGSPKNAVPPVIHSPNDHVVYEKEPGEELLIPCTVYFSFLMDSRNEVWWTIDGKKPDDITIDVTINESISHSRTEDETRTQILSIKKVTSEDLKRSYVCHARSAKGEVAKAAKVKQKVPAPRYTVELACGFGAT(SEQ ID NO:184)

IL1RAP ECD结构域1(氨基酸21-134)：

SERCDDWGLDTMRQIQVFEDEPARIKCPLFEHFLKFNYSTAHSAGLTLIWYWTRQDRDLEEPINFRLPENRISKEKDVLWFRPTLLNDTGNYTCMLRNTTYCSKVAFPLEVVQK(SEQ ID NO:185)

IL1RAP ECD结构域2(氨基酸135-234)：

DSCFNSPMKLPVHKLYIEYGIQRITCPNVDGYFPSSVKPTITWYMGCYKIQNFNNVIPEGMNLSFLIALISNNGNYTCVVTYPENGRTFHLTRTLTVKVV(SEQ ID NO:186)

IL1RAP ECD结构域3(氨基酸235-367)：

IL1RAP ECD XR-D3A/B(氨基酸235-315)：

IL1RAP ECD XR D3A(氨基酸235-273)：

IL1RAP ECD XR D3B(氨基酸300-315)：

IL1RAP ECD HDX D2/3 A(氨基酸226-262)：

IL1RAP ECD HDX D2/3 B(氨基酸226-273)：

互补位由来自CDR-H1的残基I28和L30-W33、来自CDR-H2的残基F52、A54、S55、S57和Y59、来自在CDR-H2后的环的残基K74、来自CDR-H3的残基Y102-G107和Y109形成。从轻链来看，只有CDR-L2(残基E56和G57)和CDR-L3(残基G93和T94)在IL1RAP的结合中是关键的。极性相互作用包含十个氢键和一个盐桥。将这些汇总于表29中。

表29.极性相互作用

IL-1RAcP

T267

V253

H251

N239

H246

N249

H246

R306

CDR-H1

T31

CDR-H2

S57

Y59

CDR-H3

Y104

Y109

S103

CDR-L2

E56

据报道，两种抗体，CAN 03和CAN04分别结合结构域3和结构域2，并且抑制IL-1信号传导和部分抑制IL-33信号传导(参见Wang等人,2010,Nature Immunology,11:905-912和WO 2020/035577)。

CAN04和CAN03是根据在WO2020/035577中描述的VH和VL序列(通过引用并入本文)合成的，并且用于与示例性抗IL1RAP抗体(#A2)相对比。

表30总结了CAN04与示例性抗IL1RAP(#A2)的嵌合前体的比较。在Hek Blue和NCI-H292测定中的跨多种测量参数中，CAN04 Ab没有显示抑制如#A2的广泛的抑制，仅在WB(全血)测定中展示出针对IL36γ的可比的抑制效力。

对于CAN03 Ab，虽然检测到抗体结合，但在我们的体外筛选测定中没有可测量的抑制(数据未显示)。这与先前在WO2020/035577中报道的发现一致，其中仅当CAN03与CAN04组合时，检测到可测量的IL-1 B抑制，并且仅在单独的CAN04情况下的水平上。

表30：mAb“CAN04”与抗IL1RAP#A2的比较：

据报道，“CAN04”Ab结合IL1 RAP的结构域2，即在IL1 RAP的氨基酸135至234内(参见Wang等人,2010,Nature Immunology,11:905-912)，并且据报道，与CAN04抗体结合的表位可以位于IL1 RAP的氨基酸135至154、155至174、175至194、195至214或氨基酸215至234之间。据报道，“CAN03”抗体结合IL1 RAP的结构域3，该结构域由IL1 RAP的氨基酸235至369定义的结构区组成。

然而，当比较#A2与CAN04和CAN03的表位的HDX测量时，它们的表位完全不同，甚至没有重叠的氨基酸。这可能是由于由CAN04和CAN03识别的不同表位的非线性或构象性质。这也可以解释生物学活性的差异，特别是当与#A2抗体相比时，CAN03没有抑制活性。

实施例5：可溶性IL1RAP和食蟹猴PK的测量

已知可溶性IL1RAP存在于人和食蟹猴血液中。为了确定可溶性IL1RAP如何影响体内抗IL1RAP抗体的PK，在食蟹猴血清样品中定量游离和总抗IL1RAP的水平。

游离抗IL1RAP抗体的测定：

使用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法测量游离抗IL1RAP抗体的血清浓度。简而言之，将微量滴定板(Nunc)在2℃-8℃下用2μg/mL重组食蟹猴IL1RAP包被过夜。洗去未结合的捕获试剂(含有0.05％Tween 20的l X PBS)，并且用5％BSA(Seracare)封闭孔，并且在室温下孵育1小时。然后洗涤板，并且添加校准标准品、QC和样品系列稀释物，并且在室温下孵育1小时。洗涤板并且添加辣根过氧化物酶(HRP)缀合的山羊抗人IgG(经猴血清蛋白预吸附)(Southern Biotech)，并且在室温下孵育1小时。随后洗涤，用四甲基联苯胺(TMB)底物检测到结合的HRP缀合物。用1M H2SO4停止反应，并且使用微板读取器在450nm和650nm双波长处测量吸光度。产生的信号与样品中存在的抗Ang1抗体的量成比例。使用四参数逻辑斯谛模型，使用Softmax Pro软件(v5.4)进行校准标准曲线拟合，并且反向计算所有未知样品浓度。(参见图7A)

总抗IL1RAP抗体的测定

使用同质Meso Scale Discovery(MSD)电化学发光测定法测量总抗IL1RAP抗体的血清浓度。简而言之，用5％BSA(Seracare)封闭金小斑链霉亲和素板(MSD部件#L45SA)1小时。然后洗涤板，并且添加生物素和MSD Sulfo标签缀合的山羊抗人IgG(经猴血清蛋白预吸附)(Southern Biotech)的捕获和检测预混液，其含有校准标准品、QC和样品系列稀释物，并且在室温下孵育2小时。洗涤后，添加2x MSD读取缓冲液，并且然后在Sector Imager6000仪器上测量电化学发光信号。使用MSD Discovery Workbench软件从拟合为四参数逻辑斯谛方程的标准曲线中计算出未知的血清浓度。(参见图7B)

游离和总可溶性IL1RAP的测定

使用Gyrolab^TM工作站，用生物素化和Alexa Fluor 647标记的抗IL1RAP抗体分别作为捕获和检测试剂，测定游离和总可溶性IL1RAP血清浓度。使用识别与治疗性mAb所识别表位不同的表位的单克隆抗IL1RAP捕获和检测抗体测量总可溶性IL1RAP浓度。使用单克隆抗IL1RAP抗体作为捕获抗体和治疗性抗IL1RAP作为检测抗体，测量游离可溶性IL1RAP浓度。将参考标准品和研究样品在2％BSA缓冲液中稀释。将样品和试剂放置在96孔聚丙烯微板中，并且在加载到仪器中之前用微板箔密封器密封。向CD上的微结构中添加捕获试剂、样品，标准品、检测试剂和洗涤溶液是完全自动化的过程。在测定过程中，该方法的组分被机器人加载到Bioaffy CD上的微柱结构内的链霉亲和素珠上：首先是生物素化捕获抗体、洗涤缓冲液，然后是校准标准品、和样品、洗涤缓冲液，并且然后是AlexaFluor 647缀合的检测抗体。洗涤以除去未结合的Alexa Fluor后，测量荧光强度，该荧光强度与样品中存在的可溶性IL1RAP的量成比例。从Alexa647荧光发射得出的荧光值转换为浓度值的数据回归中确定分析物浓度。定量基于来自重组食蟹猴标准曲线的四参数逻辑斯谛(1/Y2)回归。(参见图7C)

结果：

结合表面IL1RAP对于阻断活性是必要的。虽然IL1RAP也结合可溶性形式的ILRAP以及表面IL1RAP，但可以预测有效剂量。

序列：

/>

序列表

<110> 勃林格殷格翰国际有限公司

<120> 抗IL1RAP抗体

<130> 09-0717-WO-1

<140>

<141>

<150> 63/146,051

<151> 2021-02-05

<160> 194

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 1

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Asn Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

His Tyr Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Lys Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Ser Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 2

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 2

Gln Val His Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Met Phe

50 55 60

Lys Asp Lys Ala Arg Phe Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 3

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 3

Arg Thr Ser Glu Asn Ile Asn Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 4

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 4

Tyr Ala Lys Thr Leu Ala Glu

1 5

<210> 5

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 5

Gln His His Tyr Gly Thr Ser Leu Thr

1 5

<210> 6

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 6

Glu Asn Ile Asn Ser Tyr

1 5

<210> 7

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 7

Tyr Ala Lys

1

<210> 8

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 8

Thr Tyr Trp Met Asn

1 5

<210> 9

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 9

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Met Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 10

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 10

Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 11

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 11

Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr Trp Met Asn

1 5 10

<210> 12

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 12

Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

1 5

<210> 13

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 13

Phe Pro Ala Ser Asp Ser

1 5

<210> 14

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 14

Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr Trp

1 5

<210> 15

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 15

Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Thr

1 5

<210> 16

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 16

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

1 5 10 15

Tyr

<210> 17

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 17

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Asn Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Ser Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 18

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 18

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Asn Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

His Tyr Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Ser Leu

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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 101

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 101

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 102

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 102

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 103

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 103

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 104

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 104

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

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65 70 75 80

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100 105 110

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<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 105

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Ala Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

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65 70 75 80

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100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 106

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 106

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 107

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 107

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 108

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 108

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 109

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 109

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 110

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 110

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Ala Tyr Tyr Asn Gln Met Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 111

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 111

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 112

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 112

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Ala Tyr Tyr Asn Gln Met Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 113

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 113

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Arg Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 114

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 114

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Met Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Arg Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 115

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 115

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Arg Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 116

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 116

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Met Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Arg Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ser Tyr Tyr Ala Gly Gly Tyr Ala Leu Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 117

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 117

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 118

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 118

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asn Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 119

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 119

Arg Thr Ser Gln Asn Ile Asn Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 120

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 120

Arg Thr Ser Glu Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 121

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 121

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 122

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 122

Arg Thr Ser Glu Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 123

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 123

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 124

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 124

Arg Thr Ser Gln Asn Ile Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 125

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 125

Arg Thr Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 126

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 126

Arg Thr Ser Glu Asn Ile Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 127

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 127

Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

1 5

<210> 128

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 128

Gln Asn Ile Asn Ser Tyr

1 5

<210> 129

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 129

Glu Ser Ile Asn Ser Tyr

1 5

<210> 130

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 130

Gln Ser Ile Asn Ser Tyr

1 5

<210> 131

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 131

Glu Ser Ile Ser Ser Tyr

1 5

<210> 132

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 132

Glu Asn Ile Ser Ser Tyr

1 5

<210> 133

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 133

Gln Asn Ile Ser Ser Tyr

1 5

<210> 134

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<220>

<221> 变体

<222> (2)..(2)

<223> /替代="T"

<220>

<221> 变体

<222> (4)..(4)

<223> /替代="E"

<220>

<221> 变体

<222> (5)..(5)

<223> /替代="N"

<220>

<221> 变体

<222> (7)..(7)

<223> /替代="S"

<220>

<221> 位点

<222> (1)..(11)

<223> /注释="序列中给出的变体残基没有

关于变体位置注释中的那些的偏好性"

<400> 134

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 135

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<220>

<221> 变体

<222> (1)..(1)

<223> /替代="E"

<220>

<221> 变体

<222> (2)..(2)

<223> /替代="N"

<220>

<221> 变体

<222> (4)..(4)

<223> /替代="N"

<220>

<221> 位点

<222> (1)..(6)

<223> /注释="序列中给出的变体残基没有

关于变体位置注释中的那些的偏好性"

<400> 135

Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

1 5

<210> 136

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 136

Tyr Ala Lys Ser Leu Ala Glu

1 5

<210> 137

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 137

Tyr Ala Ser Ser Leu Ala Glu

1 5

<210> 138

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 138

Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Glu

1 5

<210> 139

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 139

Tyr Ala Ser

1

<210> 140

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<220>

<221> 变体

<222> (3)..(3)

<223> /替代="K"

<220>

<221> 变体

<222> (4)..(4)

<223> /替代="T"

<220>

<221> 位点

<222> (1)..(7)

<223> /注释="序列中给出的变体残基没有

关于变体位置注释中的那些的偏好性 "

<400> 140

Tyr Ala Ser Ser Leu Ala Glu

1 5

<210> 141

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<220>

<221> 变体

<222> (3)..(3)

<223> /替代="S"

<220>

<221> 位点

<222> (1)..(3)

<223> /注释="序列中给出的变体残基没有

关于变体位置注释中的那些的偏好性"

<400> 141

Tyr Ala Lys

1

<210> 142

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 142

Thr Tyr Trp Ile Asn

1 5

<210> 143

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 143

Thr Tyr Trp Ile Ser

1 5

<210> 144

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 144

Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr Trp Ile Asn

1 5 10

<210> 145

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 145

Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr Trp Ile Ser

1 5 10

<210> 146

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<220>

<221> 变体

<222> (4)..(4)

<223> /替代="M"

<220>

<221> 变体

<222> (5)..(5)

<223> /替代="N"

<220>

<221> 位点

<222> (1)..(5)

<223> /注释="序列中给出的变体残基没有

关于变体位置注释中的那些的偏好性"

<400> 146

Thr Tyr Trp Ile Ser

1 5

<210> 147

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<220>

<221> 变体

<222> (9)..(9)

<223> /替代="I"

<220>

<221> 变体

<222> (11)..(11)

<223> /替代="S"

<220>

<221> 位点

<222> (1)..(11)

<223> /注释="序列中给出的变体残基没有

关于变体位置注释中的那些的偏好性"

<400> 147

Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr Trp Met Asn Asn

1 5 10

<210> 148

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 148

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 149

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 149

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 150

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 150

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gln Met Phe Gln

1 5 10 15

Asp

<210> 151

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 151

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 152

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 152

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Asp

<210> 153

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 153

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 154

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 154

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Ala Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 155

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 155

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Asp

<210> 156

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 156

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 157

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 157

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Ala Tyr Tyr Asn Gln Met Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 158

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 158

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Gln Met Phe Gln

1 5 10 15

Asp

<210> 159

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 159

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 160

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 160

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Met Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 161

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 161

Phe Pro Ala Ser Gly Ser

1 5

<210> 162

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 162

Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala

1 5

<210> 163

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 163

Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Thr

1 5

<210> 164

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 164

Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Ala

1 5

<210> 165

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<220>

<221> 变体

<222> (7)..(7)

<223> /替代="D"

<220>

<221> 变体

<222> (9)..(9)

<223> /替代="T"

<220>

<221> 变体

<222> (12)..(12)

<223> /替代="N"

<220>

<221> 变体

<222> (13)..(13)

<223> /替代="E"

<220>

<221> 变体

<222> (14)..(14)

<223> /替代="M"

<220>

<221> 变体

<222> (16)..(16)

<223> /替代="Q"

<220>

<221> 变体

<222> (17)..(17)

<223> /替代="D"

<220>

<221> 位点

<222> (1)..(17)

<223> /注释="序列中给出的变体残基没有

关于变体位置注释中的那些的偏好性"

<400> 165

Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 166

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<220>

<221> 变体

<222> (5)..(5)

<223> /替代="D"

<220>

<221> 位点

<222> (1)..(6)

<223> /注释="序列中给出的变体残基没有

关于变体位置注释中的那些的偏好性"

<400> 166

Phe Pro Ala Ser Gly Ser

1 5

<210> 167

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<220>

<221> 变体

<222> (6)..(6)

<223> /替代="G"

<220>

<221> 变体

<222> (8)..(8)

<223> /替代="A"

<220>

<221> 位点

<222> (1)..(8)

<223> /注释="序列中给出的变体残基没有

关于变体位置注释中的那些的偏好性"

<400> 167

Ile Phe Pro Ala Ser Asp Ser Thr

1 5

<210> 168

<211> 329

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 168

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

325

<210> 169

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 169

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 170

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 170

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Asn Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

His Tyr Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Lys Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Ser Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 171

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 171

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

His Tyr Ala Lys Ser Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Ser Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 172

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 172

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

His Tyr Ala Lys Ser Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Ser Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 173

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 173

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

His Tyr Ala Lys Ser Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Ser Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 174

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 174

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

His Tyr Ala Ser Ser Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Ser Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 175

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 175

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

His Tyr Ala Ser Ser Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Ser Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

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多肽"

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<213> 人工序列

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多肽"

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多肽"

<400> 181

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<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 184

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Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr Phe His Leu Thr Arg Thr

195 200 205

Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala Val Pro Pro Val

210 215 220

Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys Glu Pro Gly Glu

225 230 235 240

Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe Leu Met Asp Ser

245 250 255

Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys Pro Asp Asp Ile

260 265 270

Thr Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile Ser His Ser Arg Thr Glu

275 280 285

Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys Val Thr Ser Glu

290 295 300

Asp Leu Lys Arg Ser Tyr Val Cys His Ala Arg Ser Ala Lys Gly Glu

305 310 315 320

Val Ala Lys Ala Ala Lys Val Lys Gln Lys Val Pro Ala Pro Arg Tyr

325 330 335

Thr Val Glu Leu Ala Cys Gly Phe Gly Ala Thr

340 345

<210> 185

<211> 114

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 185

Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met Arg Gln Ile Gln

1 5 10 15

Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro Leu Phe Glu His

20 25 30

Phe Leu Lys Phe Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala Gly Leu Thr Leu

35 40 45

Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu Glu Pro Ile Asn

50 55 60

Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys Asp Val Leu Trp

65 70 75 80

Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Cys Met Leu

85 90 95

Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro Leu Glu Val Val

100 105 110

Gln Lys

<210> 186

<211> 100

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 186

Asp Ser Cys Phe Asn Ser Pro Met Lys Leu Pro Val His Lys Leu Tyr

1 5 10 15

Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile Thr Cys Pro Asn Val Asp Gly Tyr

20 25 30

Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Thr Ile Thr Trp Tyr Met Gly Cys Tyr

35 40 45

Lys Ile Gln Asn Phe Asn Asn Val Ile Pro Glu Gly Met Asn Leu Ser

50 55 60

Phe Leu Ile Ala Leu Ile Ser Asn Asn Gly Asn Tyr Thr Cys Val Val

65 70 75 80

Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr Phe His Leu Thr Arg Thr Leu Thr

85 90 95

Val Lys Val Val

100

<210> 187

<211> 133

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 187

Gly Ser Pro Lys Asn Ala Val Pro Pro Val Ile His Ser Pro Asn Asp

1 5 10 15

His Val Val Tyr Glu Lys Glu Pro Gly Glu Glu Leu Leu Ile Pro Cys

20 25 30

Thr Val Tyr Phe Ser Phe Leu Met Asp Ser Arg Asn Glu Val Trp Trp

35 40 45

Thr Ile Asp Gly Lys Lys Pro Asp Asp Ile Thr Ile Asp Val Thr Ile

50 55 60

Asn Glu Ser Ile Ser His Ser Arg Thr Glu Asp Glu Thr Arg Thr Gln

65 70 75 80

Ile Leu Ser Ile Lys Lys Val Thr Ser Glu Asp Leu Lys Arg Ser Tyr

85 90 95

Val Cys His Ala Arg Ser Ala Lys Gly Glu Val Ala Lys Ala Ala Lys

100 105 110

Val Lys Gln Lys Val Pro Ala Pro Arg Tyr Thr Val Glu Leu Ala Cys

115 120 125

Gly Phe Gly Ala Thr

130

<210> 188

<211> 81

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 188

Gly Ser Pro Lys Asn Ala Val Pro Pro Val Ile His Ser Pro Asn Asp

1 5 10 15

His Val Val Tyr Glu Lys Glu Pro Gly Glu Glu Leu Leu Ile Pro Cys

20 25 30

Thr Val Tyr Phe Ser Phe Leu Met Asp Ser Arg Asn Glu Val Trp Trp

35 40 45

Thr Ile Asp Gly Lys Lys Pro Asp Asp Ile Thr Ile Asp Val Thr Ile

50 55 60

Asn Glu Ser Ile Ser His Ser Arg Thr Glu Asp Glu Thr Arg Thr Gln

65 70 75 80

Ile

<210> 189

<211> 39

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 189

Gly Ser Pro Lys Asn Ala Val Pro Pro Val Ile His Ser Pro Asn Asp

1 5 10 15

His Val Val Tyr Glu Lys Glu Pro Gly Glu Glu Leu Leu Ile Pro Cys

20 25 30

Thr Val Tyr Phe Ser Phe Leu

35

<210> 190

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 190

Ser Ile Ser His Ser Arg Thr Glu Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile

1 5 10 15

<210> 191

<211> 37

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 191

Thr Arg Thr Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala Val

1 5 10 15

Pro Pro Val Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys Glu

20 25 30

Pro Gly Glu Glu Leu

35

<210> 192

<211> 48

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 192

Thr Arg Thr Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala Val

1 5 10 15

Pro Pro Val Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys Glu

20 25 30

Pro Gly Glu Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe Leu

35 40 45

<210> 193

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<220>

<221> 变体

<222> (9)..(9)

<223> /替代="M"

<220>

<221> 位点

<222> (1)..(10)

<223> /注释="序列中给出的变体残基没有

关于变体位置注释中的那些的偏好性"

<400> 193

Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr Trp Ile Asn

1 5 10

<210> 194

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<220>

<221> 变体

<222> (9)..(9)

<223> /替代="I"

<220>

<221> 变体

<222> (10)..(10)

<223> /替代="S"

<220>

<221> 位点

<222> (1)..(10)

<223> /注释="序列中给出的变体残基没有

关于变体位置注释中的那些的偏好性"

<400> 194

Gly Tyr Ile Phe Leu Thr Tyr Trp Met Asn

1 5 10

Claims

1.一种抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，所述抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段以等于或<0.1nM的K_D结合人IL1RAP。

2.根据权利要求1所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是单克隆抗体或其抗原结合片段。

3.根据权利要求1所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是人源化抗体或其抗原结合片段。

4.根据权利要求3所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其以等于或<200pM的K_D结合人和食蟹猴IL1RAP。

5.根据权利要求1所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3、6、117、118、119、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ ID NO:4、7、136、137、138、139、140或141的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8、11、12、14、142、143、144、145、146或147的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ ID NO:9、13、15、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166或167的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ IDNO:10或16的氨基酸序列(H-CDR3)。

6.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ ID NO:4的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

c)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ ID NO:4的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

e)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ ID NO:4的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

f)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:166的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝D或G(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

g)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ ID NO:4的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

h)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:167的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝D或G，以及X2＝T或A(H-CDR2)；SEQ ID NO:16的氨基酸序列(H-CDR3)。

7.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ IDNO:136的氨基酸序列；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

c)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ IDNO:136的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

e)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ IDNO:136的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

f)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:166的氨基酸序列，其中氨基酸X1＝D或G(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

g)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ IDNO:7的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

8.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ IDNO:137的氨基酸序列；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

c)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ IDNO:137的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

g)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列(L-CDR1)；SEQ IDNO:139的氨基酸序列(L-CDR2)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和

9.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ ID NO:9的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:9的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

f)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:13的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

h)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:15的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:16的氨基酸序列(H-CDR3)。

10.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ ID NO:149的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:149的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

f)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:161的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

h)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:162的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:16的氨基酸序列(H-CDR3)。

11.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:153的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:153的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

12.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:148的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:148的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

13.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ ID NO:148的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:148的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

14.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

15.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:151的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

d)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:151的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)，或

h)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:163的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:16的氨基酸序列(H-CDR3)。

16.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ ID NO:9的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)。

17.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ ID NO:149的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)。

18.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:153的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)。

19.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:148的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)。

20.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ ID NO:148的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)。

21.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

22.根据权利要求5所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

b)重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)；SEQ IDNO:151的氨基酸序列(H-CDR2)；SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)。

23.根据权利要求1所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:17、36、40、47、50、51或52中任一个的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:67、86、97、100、101或102中任一个的氨基酸序列。

24.根据权利要求23所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列；或

25.根据权利要求1所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:170、171、172、173、174、175或176中任一个的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:177、178、179、180、181、182或183中任一个的氨基酸序列的重链。

26.根据权利要求25所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:170的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:177的氨基酸序列的重链。

27.根据权利要求25所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:171的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:178的氨基酸序列的重链。

28.根据权利要求25所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:172的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:179的氨基酸序列的重链。

29.根据权利要求25所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:173的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:180的氨基酸序列的重链。

30.根据权利要求25所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:174的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:181的氨基酸序列的重链。

31.根据权利要求25所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:175的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:182的氨基酸序列的重链。

32.根据权利要求25所述的抗IL1RAP抗体，其中所述抗体包含：含有SEQ ID NO:176的氨基酸序列的轻链；和含有SEQ ID NO:183的氨基酸序列的重链。

33.根据权利要求1所述的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:148的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:4的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:148的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:4的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:149的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:137的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:150的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:152的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:4的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:152的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:138的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:153的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:4的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:154的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:155的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:138的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:148的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:148的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:156的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:123的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:143的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:157的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:124的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:137的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:148的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:4的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:157的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:148的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:158的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:151的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:152的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:154的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:156的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:143的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:157的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:136的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:157的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:137的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:148的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:137的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:152的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:137的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:153的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:137的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:154的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:137的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:155的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:137的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:148的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:137的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:156的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:137的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:143的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:157的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:137的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:157的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:125的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:4的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:159的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:125的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:4的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:160的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQ ID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:125的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:4的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:159的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)；或

轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:125的氨基酸序列(L-CDR1)、SEQ ID NO:4的氨基酸序列(L-CDR2)、SEQ ID NO:5的氨基酸序列(L-CDR3)；和重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列(H-CDR1)、SEQ ID NO:160的氨基酸序列(H-CDR2)、SEQID NO:10的氨基酸序列(H-CDR3)。

34.根据权利要求33所述的抗IL1RAP抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含

35.根据权利要求1至34中任一项所述的抗IL1RAP抗体或抗原结合片段，用作药物。

36.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或抗原结合片段和药学上可接受的载体。

37.一种治疗疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用根据权利要求1至34中任一项所述的抗体或抗原结合片段或其药物组合物，其中所述疾病选自炎性疾病、自身免疫病、呼吸系统疾病、代谢障碍、上皮介导的炎性障碍、纤维化和癌症。

38.根据权利要求1至34中任一项所述的抗IL1RAP抗体或抗原结合片段，用于治疗疾病，其中所述疾病选自炎性疾病、自身免疫病、呼吸系统疾病、代谢障碍、上皮介导的炎性障碍、纤维化和癌症。

39.根据权利要求1至34中任一项所述的抗IL1RAP抗体或抗原结合片段在制造用于治疗疾病的药物中的用途，其中所述疾病选自炎性疾病、自身免疫病、呼吸系统疾病、代谢障碍、上皮介导的炎性障碍、纤维化和癌症。

40.根据权利要求37所述的方法，根据权利要求38所述的抗IL1RAP抗体或抗原结合片段，或根据权利要求39所述的抗IL1RAP抗体或抗原结合片段的用途，其中所述疾病选自银屑病、银屑病关节炎、多发性硬化、类风湿性关节炎、COPD、慢性哮喘和强直性脊柱炎。

41.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸编码由SEQ ID NO.1至167或170-183中的一个或多个定义的序列。

42.一种载体，所述载体包含根据权利要求41所述的多核苷酸，优选表达载体，更优选包含与表达控制序列功能上关联的根据本发明的多核苷酸的载体。

43.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据权利要求42所述的多核苷酸和载体。

44.一种产生根据权利要求1至34中任一项所述的抗IL1RAP抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括步骤(a)在允许所述抗IL1RAP抗体或抗原结合片段表达的条件下培养所述宿主细胞，和(b)回收所述抗IL1RAP抗体或抗原结合片段。

45.一种包含根据权利要求1至34中任一项所述的抗IL1RAP抗体或抗原结合片段的诊断试剂盒或诊断方法，或所述诊断试剂盒或诊断方法的用途。

46.根据权利要求45所述的诊断试剂盒或诊断方法，用于诊断炎性疾病、自身免疫病、呼吸系统疾病、代谢障碍、上皮介导的炎性障碍、纤维化、癌症、银屑病、银屑病关节炎、多发性硬化、类风湿性关节炎、COPD、慢性哮喘或强直性脊柱炎。

47.一种分离的抗体或抗原结合片段，其中当结合IL1RAP时，所述抗体结合以下残基：K238、N239、V241、V244、I245、H246、S247、N249、H251、V252、V253、Y254、E255、K256、E261、L263、P265、T267、Y269、和S271，并且其中所述抗体阻断根据权利要求1-34所述的任何抗体的结合。

48.根据权利要求47所述的分离的单克隆抗体，其中所述抗体将抗IL1RAP与IL1RAP的结合阻断至少80％。