JP2024505674A - 抗ｉｌ１ｒａｐ抗体 - Google Patents

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Abstract

【課題】診断的及び治療的使用のための抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を提供する。【解決手段】本発明は、抗ＩＬ１ＲＡＰ結合化合物、特に新たな抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、並びにそれを使用するための治療用及び診断用の方法及び組成物に関する。【選択図】なし

Description

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されており、参照によりその全体として本明細書によって組み込まれる、配列表を含有する。２０２２年２月３日に作成された前記ＡＳＣＩＩ複写物は、０９－０７１７－ＷＯ－１＿ＳＬ．ｔｘｔと題され、サイズが１９４，３０５バイトである。
本発明は、概して、診断的及び治療的使用のための抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体に関する。抗体は、医薬組成物及びそのような化合物を含むキットにおいて使用され得る。抗体は、様々な疾患又は障害、例えばヒトにおける免疫学的、炎症性、自己免疫性、線維性、及び呼吸器系の疾患の治療のための方法において有用である。
サイトカインのＩＬ－１ファミリーは、１１種の異なるリガンド、すなわちＩＬ－１α（ＩＬ－１Ｆ１とも称される）、ＩＬ－１β（ＩＬ－１Ｆ２）、ＩＬ－１受容体アンタゴニスト（ＩＬ－１Ｒａ又はＩＬ－１Ｆ３）、ＩＬ－１８（ＩＬ－１Ｆ４）、ＩＬ－１Ｆ５～ＩＬ－１Ｆ１０、及びＩＬ－１Ｆ１１（又はＩＬ－３３）から構成される。ＩＬ－１α及びＩＬ－１βは、タイプＩ ＩＬ－１受容体（ＩＬ－１ＲＩ）に結合すると炎症促進性活性、及び共通の共受容体ＩＬ－１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ－１ＲＡｃＰ）の動員を誘導することが公知であり、一方でＩＬ－１Ｒａは、ＩＬ－１ＲＩへのＩＬ－１結合の競合的阻害剤として作用し、ゆえに抗炎症活性を発揮する。数多くの研究は、ＩＬ－１８が、ＩＦＮ－γの誘導因子である炎症促進性サイトカインであることを報告し、一方でＩＬ－３３は、特にＴｈ２応答の制御に関わる免疫調節性サイトカインとして記載された。
ＩＬ１受容体アクセサリータンパク質ＩＬ１ＲＡＰは、コグネートＩＬ１ファミリーサイトカインＩＬ１（α、β）、ＩＬ３３、及びＩＬ３６（α、β、γ）のシグナル伝達に要される主な受容体（ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ３３Ｒ、及びＩＬ３６Ｒ）に対する共受容体である。
ＩＬ１ファミリーサイトカインＩＬ１α及びＩＬ１β、ＩＬ３３、並びにＩＬ３６α、ＩＬ３６β、及びＩＬ３６γは、それらのそれぞれの受容体ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ３３Ｒ、及びＩＬ３６Ｒに結合する。次いで、コグネート受容体はＩＬ１受容体アクセサリータンパク質ＩＬ１ＲＡＰ（ＩＬ－１ＲＡＰとも指定される）に結合し、それは、それぞれＩＬ１、ＩＬ３３、及びＩＬ３６によって媒介される下流活性化をもたらす共受容体として働く。
ＩＬ１ＲＡＰは、リンパ節（胸腺、扁桃腺）、骨髄、脳、肺、皮膚、消化管、肝臓、及び胎盤等、ＩＬ１－、ＩＬ３３－、又はＩＬ３６－受容体が存在する組織において発現される。報告によると、ＣＭＬにおける骨髄性白血病幹細胞も、ＩＬ１ＲＡＰを発現する（Jaras, et al. (2010). Isolation and killing of candidate chronic myeloid leukemia stem cells by antibody targeting of IL-1 receptor accessory protein. Proc Natl Acad Sci U S A 107, 16280-16285）。
ＩＬ１ファミリーのアラーミンのシグナル伝達におけるＩＬ１ＲＡＰの重要性は、ＩＬ１（ＩＬ－１ ｉ．ｐ．注射（Cullinan, et al. (1998). IL-1 receptor accessory protein is an essential component of the IL-1 receptor. J Immunol 161, 5614-5620））；及びＩＬ３３（マスト細胞（Palmer, et al. (2008). The IL-1 receptor accessory protein (AcP) is required for IL-33 signaling and soluble AcP enhances the ability of soluble ST2 to inhibit IL-33. Cytokine 42, 358-364.））に対するシグナル伝達の完全な喪失につながった共受容体ＩＬ１ＲＡＰの遺伝的欠失によって、並びにＩＬ３６に対するトランスフェクション研究／薬理学的介入（Towne, et al. (2011). Interleukin-36 (IL-36) ligands require processing for full agonist (IL-36alpha, IL-36beta, and IL-36gamma) or antagonist (IL-36Ra) activity. J Biol Chem 286, 42594-42602）によって確認されている。個々のサイトカイン阻害剤はよく報告されているが、しかしながら、臨床試験においてインビボで試験された場合、これらの阻害剤は失敗し、１種又は２種のＩＬ１サイトカインに対する単一の中和抗体では所望の臨床効能に十分でない可能性があることを暗示する。
公開された文献において、ほんの少数のＩＬ１ＲＡＰ抗体が記載されている。注目すべきは、これらの抗体のほとんどが、リガンドの一部に対してある程度のレベルの生物活性を実現するのみであり、潜在的リガンドＩＬ１－α、ＩＬ１－β、ＩＬ－３３、及びＩＬ－３６α、β、γのすべてに対して不可欠な効力を有する抗体を特定することは難題と見なされ、ＩＬ１ＲＡＰ結合界面が、種々の共受容体の間で異なり得ることを示唆する。そのため、すべての抗体が、たとえそれらがＩＬ１ＲＡＰに結合し且つ効率的なＡＤＣＣを媒介する能力を有するとしても、シグナル伝達を遮断する能力を有するとは限らないため、結合エピトープが効果にとって決定的に重要なようである（Agerstam, et al. (2015) PNAS 112 (34):10786-91）。
炎症性疾患の多様な性質は、研究者が、単に、一度に単一の疾患駆動性サイトカインを中和しようと試みた場合の、特に通常のサイトカインにおいて、経路における他のサイトカインメンバーに相乗効果を与え且つ／又はフィードバックを提供しようと試みた場合の、臨床試験における最適に満たない成果又はさらには失敗を説明し得る。ＩＬ－１ファミリーは、多くの炎症状態及び疾患状態におけるそのような収束を表し得る。喘息におけるＩＬ－１β及びＩＬ－３３（Lappalainen, et al. (2005) Interleukin-1β causes pulmonary inflammation, emphysema, and airway remodeling in the adult murine lung. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 32, 311-318；Prefontaine, D. et al. (2009) Increased expression of IL-33 in severe asthma: evidence of expression by airway smooth muscle cells. J. Immunol. 183, 5094-5103）、並びに乾癬におけるＩＬ－１α及びＩＬ－３６（Towne, J. E. & Sims, J. E. (2012) IL-36 in psoriasis. Curr. Opin. Pharmacol. 12, 486-490 (2012)；及びTortola, L. et al. (2012) Psoriasiform dermatitis is driven by IL-36-mediated DC-keratinocyte crosstalk. J. Clin. Invest. 122, 3965-3976）等、１種を上回るＩＬ－１ファミリーメンバーが目立った役割の原因と考えられている疾患。ゆえに、複数のＩＬ－１関連経路の遮断によって、最適な成果が予想され得る。
最近の刊行物は、それらのＩＬ１ＲＡＰ抗体が、６種すべてのＩＬ－１ファミリーメンバー（ＩＬ－１、ＩＬ－３３、及びＩＬ－３６）のシグナル伝達を特異的に阻害するというインビトロにおける知見を開示した。最近では、Ｈｏｊｅｎらが、ＩＬ－１、ＩＬ－３３、及びＩＬ－３６シグナル伝達をインビトロで特異的に阻害し、不均一なサイトカインにより駆動される炎症及び疾患重症度を有意に減衰もさせる、ＩＬ１ＲＡＰに対するｍＡｂについての彼らの知見を発表した（Hojen et al (2019) IL-1R3 blockage broadly attenuates the function of six members of the IL-1 family, revealing their contribution to models of disease. Nature Immunol. 20: 1138-1149）。
ＩＬ１ＲＡＰは、ＩＬ－１ファミリーの６種のサイトカイン（ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－３３、ＩＬ３６α、ＩＬ－３６β、及びＩＬ－３６γ）に関わる３種のシグナル伝達経路における共受容体であり、多くの疾患はこれらのサイトカインによって駆動されることから、すべての経路を阻害し得る抗体等の単一のアンタゴニスト剤は、かなり治療的に有益であり、特に炎症性疾患の治療において有用であろう。
それゆえ、必要であるのは、複数又はすべてのＩＬ１サイトカインにわたるより広い同時阻害、及びより強力な生物活性を有するＩＬ１ＲＡＰ抗体である。
本発明は、ＩＬ１ＲＡＰに結合する生物製剤（ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）、特に抗体を提供することによって上記の必要性に取り組む。一態様において、本発明の抗体は、主要な炎症性サイトカインのＩＬ－３３及びＩＬ－３６シグナル伝達経路ファミリーを介したＩＬ１ＲＡＰ媒介性サイトカインシグナル伝達を遮断する。一態様において、本発明の抗体は、例えば、乾癬、喘息、自己免疫疾患、急性感染強皮症（ａｃｕｔｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、ＣＯＰＤ、及び慢性腎疾患等の疾患における上皮媒介性炎症／線維症の治療に有用である。
一態様において、本発明は、下の特性の１種又は複数を有する抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を提供する。
一態様において、本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰＲ抗体は、高い分子／細胞結合効力を有する。一態様において、本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、ＫD＜１．０ｎＭでヒトＩＬ１ＲＡＰに結合する。さらなる態様において、本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、特にヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、ＫD＜２００ｐＭでヒト及びカニクイザルＩＬ１ＲＡＰに結合する。
実施形態２において、本発明は、前記抗体又は抗原結合フラグメントが、モノクローナル抗体又はその抗原結合フラグメントである、実施形態１に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態３において、本発明は、前記抗体又は抗原結合フラグメントが、ヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントである、実施形態１又は２に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態４において、本発明は、ＩＬ－１、ＩＬ－３３、及びＩＬ－３６シグナル伝達を遮断する、実施形態３に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態５において、本発明は、ヒトＩＬ－１Ｒ１、ＩＬ－３３Ｒ、及びＩＬ－３６Ｒに結合しない、実施形態１～４のいずれか１つに従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態６において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号３、６、１１７、１１８、１１９、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、又は１３５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４、７、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、又は１４１のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号８、１１、１２、１４、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、又は１４７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号９、１３、１５、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、又は１６７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０又は１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態１に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態７において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号３のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号１４６（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｍ又はＩ、Ｘ２＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ；Ｘ２＝Ａ又はＴ；Ｘ３＝Ｎ又はＡ；Ｘ４＝Ｑ又はＥ；Ｘ５＝Ｍ又はＫ；Ｘ６＝Ｑ又はＫ；Ｘ７＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号３のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１４７（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｍ、Ｉ、Ｘ２＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ；Ｘ２＝Ａ又はＴ；Ｘ３＝Ｎ又はＡ；Ｘ４＝Ｑ又はＥ；Ｘ５＝Ｍ又はＫ；Ｘ６＝Ｑ又はＫ；Ｘ７＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号３のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６６（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号３のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６７（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ、Ｘ２＝Ｔ又はＡ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態８において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号１４６（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｍ又はＩ、Ｘ２＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ；Ｘ２＝Ａ又はＴ；Ｘ３＝Ｎ又はＡ；Ｘ４＝Ｑ又はＥ；Ｘ５＝Ｍ又はＫ；Ｘ６＝Ｑ又はＫ；Ｘ７＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１４７（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｍ、Ｉ、Ｘ２＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ；Ｘ２＝Ａ又はＴ；Ｘ３＝Ｎ又はＡ；Ｘ４＝Ｑ又はＥ；Ｘ５＝Ｍ又はＫ；Ｘ６＝Ｑ又はＫ；Ｘ７＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６６（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１２７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６７（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ、Ｘ２＝Ｔ又はＡ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態９において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号１４６（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｍ又はＩ、Ｘ２＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ；Ｘ２＝Ａ又はＴ；Ｘ３＝Ｎ又はＡ；Ｘ４＝Ｑ又はＥ；Ｘ５＝Ｍ又はＫ；Ｘ６＝Ｑ又はＫ；Ｘ７＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１４７（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｍ、Ｉ、Ｘ２＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ；Ｘ２＝Ａ又はＴ；Ｘ３＝Ｎ又はＡ；Ｘ４＝Ｑ又はＥ；Ｘ５＝Ｍ又はＫ；Ｘ６＝Ｑ又はＫ；Ｘ７＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６６（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１２７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６７（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ、Ｘ２＝Ｔ又はＡ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態１０において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１３５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｑ又はＥ；Ｘ２＝Ｓ又はＮ；Ｘ３＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４１（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態１１において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１３５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｑ又はＥ；Ｘ２＝Ｓ又はＮ；Ｘ３＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４１（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態１２において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１４４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１３５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｑ又はＥ；Ｘ２＝Ｓ又はＮ；Ｘ３＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４１（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態１３において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１４４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１３５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｑ又はＥ；Ｘ２＝Ｓ又はＮ；Ｘ３＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４１（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態１４において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１３５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｑ又はＥ；Ｘ２＝Ｓ又はＮ；Ｘ３＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４１（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態１５において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１３５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｑ又はＥ；Ｘ２＝Ｓ又はＮ；Ｘ３＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４１（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態１６において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１４４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１３５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｑ又はＥ；Ｘ２＝Ｓ又はＮ；Ｘ３＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４１（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態１７において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号３のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号３のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号３のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号３のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態１８において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１２７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態１９において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及びｄ）配列番号１４４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１２７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態２０において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１４４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１２７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態２１において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１２７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態２２において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１２７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態２３において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｄ）配列番号１４４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１２７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、実施形態６に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態２４において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号４０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
を含む、それぞれ実施形態１７～２３に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態２５において、本発明は、抗体が、配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、又は１７６のいずれか１種のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、又は１８３のいずれか１種のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を提供する。
実施形態２６において、本発明は、抗体が、配列番号１７０のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１７７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施形態２５に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を提供する。
実施形態２７において、本発明は、抗体が、配列番号１７１のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施形態２５に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を提供する。
実施形態２８において、本発明は、抗体が、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１７９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施形態２５に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を提供する。
実施形態２９において、本発明は、抗体が、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１８０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施形態２５に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を提供する。
実施形態３０において、本発明は、抗体が、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施形態２５に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を提供する。
実施形態３１において、本発明は、抗体が、配列番号１７５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施形態２５に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を提供する。
実施形態３２において、本発明は、抗体が、配列番号１７６のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施形態２５に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を提供する。
一実施形態において、実施形態１～３２のいずれか１つに従った抗体又はその抗原結合フラグメントはモノクローナル抗体である。一実施形態において、実施形態１～２５のいずれか１つに従った抗体又はその抗原結合フラグメントはヒト化抗体である。一実施形態において、実施形態１～２５のいずれか１つに従った抗体又はその抗原結合フラグメントはモノクローナルヒト化抗体である。
実施形態３３において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
配列番号３、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、若しくは１３４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４、１３６、１３７、１３８、若しくは１４０のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８、１４２、１４３、若しくは１４６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号９、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、若しくは１６５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
配列番号３、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、若しくは１３４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４、１３６、１３７、１３８、若しくは１４０のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１、１４４、１４５、若しくは１４７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号９、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、若しくは１６５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
配列番号３、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、若しくは１３４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４、１３６、１３７、１３８、若しくは１４０のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１２、１４２、１４３、若しくは１４６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１３、１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
配列番号６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、若しくは１３５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号７、１３９、１４１のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５、１６２、１６３、１６４、若しくは１６７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
を含む、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
実施形態３４において、本発明は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号３３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号４０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号４５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号６１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
を含む、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
さらなる実施形態３５において、本発明は、先行の実施形態のいずれか１つに従った抗体又は抗原結合フラグメント、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
さらなる実施形態３６において、本発明は、薬としての使用のための、先行の実施形態のいずれか１つに従った抗体若しくは抗原結合フラグメント又は医薬組成物を提供する。
さらなる実施形態３７において、本発明は、使用が、炎症性疾患の、自己免疫疾患の、呼吸器疾患の、代謝障害の、上皮媒介性炎症性障害の、線維症の、又はがんの治療である、実施形態１～３４のいずれか１つに従った抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は医薬組成物を提供する。
さらなる実施形態３８において、本発明は、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害、上皮媒介性炎症性障害、線維症、及びがんから選択される疾患を治療することにおける使用のための、実施形態１～３４のいずれか１つに従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は抗原結合フラグメントを提供する。
さらなる実施形態３９において、本発明は、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害、上皮媒介性炎症性障害、線維症、及びがんから選択される疾患を治療するための医薬の製造における、実施形態１～３４のいずれか１つに従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は抗原結合フラグメントの使用を提供する。
さらなる実施形態４０において、本発明は、使用が、乾癬、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、慢性喘息、又は強直性脊椎炎の治療のためのものである、実施形態１～３４のいずれか１つに従った抗体若しくは抗原結合フラグメント、実施形態３８に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は実施形態３９に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体若しくは抗原結合フラグメントの使用を提供する。
別の実施形態４１において、本発明は、疾患を治療する方法であって、それを必要とする患者に、実施形態１～３４のいずれか１つに従った抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は医薬組成物を投与する工程を含み、疾患が、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害、上皮媒介性炎症性障害、線維症、及びがんから選択される、方法を提供する。
別の実施形態４２において、本発明は、疾患が、乾癬、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、慢性喘息、及び強直性脊椎炎から選択される、実施形態４１に従った方法を提供する。
本発明のさらなる実施形態は、以下を包含する：
－ 本発明に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は抗原結合フラグメントをコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド、好ましくはＤＮＡ又はＲＮＡ配列；
－ 配列番号１～１６７又は１７０～１８３のうちの１種又は複数によって規定される配列をコードする、本発明に従った単離されたポリヌクレオチド；
－ 本発明に従ったポリヌクレオチドを含むベクター、好ましくは発現ベクター、より好ましくは発現制御配列と機能的に結び付いた本発明に従ったポリヌクレオチドを含むベクター；
－ 本発明に従ったポリヌクレオチド及び／又は本発明に従ったベクターを含む宿主細胞；
－ 本発明に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は抗原結合フラグメントの産生のための方法、好ましくは本発明に従ったポリヌクレオチドの、及び／又は本発明に従ったベクターの、及び／又は本発明に従った宿主細胞、の使用を含む組み換え産生法；
－ そのような方法は、好ましくは、（ａ）抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は抗原結合フラグメントの発現を可能にする条件下で宿主細胞を培養する工程、及び（ｂ）抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は抗原結合フラグメントを回収する工程を含む；
－ 本発明に従った抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体若しくは抗原結合フラグメント、又はその使用を含む診断用キット又は診断法；
－ 炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害、上皮媒介性炎症性障害、線維症、がん、乾癬、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、慢性喘息、又は強直性脊椎炎の診断のための、本発明に従った診断用キット又は診断法。
抗ＩＬ１ＲＡＰ親クローンＧＯ１１ ＶＨ／ＶＬ ＣＤＲを含有する、キメラ及び移植されたＦａｂの比較の図である。 最適化されたＶＫクローン変種及びＶＨクローン変種を選択し、キメラ親抗ＩＬ１ＲＡＰ ＧＯ１１ Ｆａｂと比較して、ＥＬＩＳＡによってｈｕＩＬ１ＲＡＰへの結合についてスクリーニングした図である。（Ａ）選択されたクローン４０５－１０（配列番号１８）が、キメラ親クローンＧＯ１１と同様の結合を有することを実証した、ＶＫクローン４０５－０３、４０５－０７、４０５－０４、４０５－０５、４０５－１０の比較；（Ｂ）選択されたＶＫクローン４０５－１２（配列番号１２）が、キメラ親クローンＧＯ１１と同様の結合を有することを実証した、ＶＫクローン４０５－１１、４０６－０２、４０５－１２、４０６－０１、４０６－０３の比較；（Ｃ）選択されたＶＨクローン４０５－１８（配列番号６８）が、キメラ親クローンＧＯ１１と同様の結合を有することを実証した、ＶＨクローン４０６－０４、４０６－１５、４０６－０８、４０６－１０、４０６－１８の比較；及び（Ｄ）選択されたＶＨクローン４０６－２０（配列番号６９）が、キメラ親クローンＧＯ１１と同様の結合を有することを実証した、ＶＨクローン４０６－２０、４０６－２１、４０６－２６の比較。 生殖細胞系列最適化抗ＩＬ１ＲＡＰ ＶＬ ＣＤＲ（Ａ）／ＶＨ（Ｂ）ＣＤＲＳの比較の図である。 Ａ．サイトカイン刺激されたＭＤＭにおける、抗ＩＬ１ＲａＰ ＡｂによるＩＬ－１２ｐ４０分泌の阻害の図である（種々のドナーから獲得されたＭＤＭを用いた２回の実験を代表する１回からの技術的三つ組の平均値±ＳＤが描写される）。Ｂ．抗ＩＬ１Ｒａｐ Ａｂによる、ＩＬ－３６α、β、γサイトカイン刺激されたヒト単球由来樹状細胞（ＭｏＤＣ）におけるＩＬ－８（ＩＣ５０＝３．９５ｎＭ）、ＴＮＦ（ＩＣ５０＝６．４５ｎＭ）、及びＩＬ－６（ＩＣ５０＝９．４１ｎＭ）タンパク質産生の抑制の図である。Ｃ．抗ＩＬ１ＲａＰ ＡｂによるＩＬ－３６γ刺激された全血（ＩＣ５０＝４．３７）、及びＩＬ－３６γ＋ＩＬ－３３刺激された全血（ＩＣ５０＝３．４３）における、骨髄系細胞由来媒介因子Ｍｉｐ－１ｂの抑制の図である。Ｄ．抗ＩＬ１ＲａＰ Ａｂによる、ＩＬ－３３／ＩＬ－１２刺激された全血細胞におけるＩＦＮγ産生の阻害（ＩＣ５０＝４．８４ｎＭ）の図である。 ９０°回転によって関連付けられた２種の異なる像における、ＩＬ－１ＲＡｃＰ：抗ＩＬ１ＲＡＰ Ａｂ ＃Ａ２及びＩＬ－１ＲＡｃＰ－ＩＬ－１ＲＩ－ＩＬ１β複合体の構造特色の図である。Ａ．ＩＬ－１ＲＡｃＰは、半透明の表面を有する淡い青色で示されている。＃Ａ２ Ｆａｂはリボンとして示されている。重鎖及び軽鎖は、それぞれ濃い及び薄い灰色で色付けされている。Ｂ．エピトープの場所：明瞭性のために、Ｆａｂは半透明のリボンとして示されている。ＩＬ－１ＲＡｃＰ上のＦａｂのエピトープは灰色で示されている。Ｃ．（ａ）と同じ配向での、比較のためのヒトＩＬ－１ＲＡｃＰ－ＩＬ－１ＲＩ－ＩＬ１β三元複合体の構造（ｐｄｂ ４ｄｅｐ）。ＩＬ－１ＲＩは赤色で、ＩＬ－１βは緑色で色付けされている。Ｄ．ＩＬ－１ＲＡｃＰ－ＩＬ－１ＲＩ界面のＩＬ－１ＲＡｃＰ側がオレンジ色で示されている。明瞭性のために、－ＩＬ－１ＲＩ及びＩＬ１βは半透明のリボンとして示されている。 ＩＬ１ＲＡＰのＨＤＸ及びＸ線エピトープの比較の図である。Ａ．ＨＤＸエピトープは黄色で示されている。それは、アミノ酸残基２２６～２６２及び２６９～２７３を含む。Ｂ．明瞭性のためにｓｎｉｔ－ＩＬ１ＲＡＰ Ｆａｂが除去されている、図５Ｂに示されるＸ線エピトープ。 Ａ．ＩＶ投与後の、サル血清における抗ＩＬ－ＲＡＰ遊離薬物レベル（薬物濃度（ｎＭ）対時間単位での時点）。Ｂ．ＩＶ投与後の、サル血清における抗ＩＬ１ＲＡＰ全薬物レベル（薬物濃度（ｎＭ）対時間単位での時点）。Ｃ．ＩＶ投与後の、カニクイザルにおける可溶性ＩＬ１ＲＡＰ標的レベル（濃度（ｎＭ）対時間単位での時間）。
発明の説明
本発明は抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体に関する。一態様において、本発明の抗体は、例えばヒトにおける、診断的及び治療的使用のためのものである。
本発明は、ＩＬ１ＲＡＰ、特にヒトＩＬ１ＲＡＰに結合する抗体を提供する。本発明は、ＩＬ１ＲＡＰに結合するヒト化抗体にも関する。具体的な実施形態において、これらのヒト化抗体の配列は、ある特定のリードマウス抗体の配列に基づいて特定されている。
この理論によって拘束されることを望むことなく、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントはヒトＩＬ１ＲＡＰに結合し、ゆえにＩＬ１ＲＡＰアゴニストの結合を妨害し、そうすることで、ＩＬ１ＲＡＰから炎症性媒介因子へのシグナル伝達カスケードを少なくとも部分的に遮断すると考えられる。
一態様において、本発明は、下の特性の１種又は複数を有する抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を提供する。
一態様において、本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、高い分子／細胞結合効力を有する。一態様において、本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、ＫD＜０．１ｎＭでヒトＩＬ１ＲＡＰに結合する。さらなる態様において、本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、特にヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、ＫD＜２００ｐＭでヒト及びカニクイザルＩＬ１ＲＡＰに結合する。
別の態様において、本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、高い細胞ベースの機能的遮断効力を有する。
一態様において、本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体はヒト化抗体である。一態様において、本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体はモノクローナル抗体である。一態様において、本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は全長抗体である。一態様において、本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、ヒト化モノクローナル抗体、例えば全長ヒト化モノクローナル抗体である。
本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントは、特異的「ＩＬ１ＲＡＰ抗原エピトープ」又は「ＩＬ１ＲＡＰエピトープ」又は「ＩＬ－１ＲＡＰエピトープ」を認識する。本明細書で使用される場合、これらの用語は、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体との免疫反応性の能力がある分子（例えば、ペプチド）又は分子のフラグメントを指す。
エピトープは、最も一般的にはタンパク質、短いオリゴペプチド、オリゴペプチド模倣体（すなわち、ＩＬ１ＲＡＰ抗原の抗体結合特性を模倣する有機化合物）、又はその組み合わせである。抗体に対するペプチド又はポリペプチドエピトープの最小サイズは、約４～５個のアミノ酸であると考えられる。ペプチド又はポリペプチドエピトープは、例えば少なくとも７個のアミノ酸若しくは例えば少なくとも９個のアミノ酸、又は例えば約１５～約２０個のアミノ酸を含有する。抗体は、その三次形態において抗原ペプチド又はポリペプチドを認識し得ることから、エピトープを含むアミノ酸は連続している必要はなく、ある場合には、同じペプチド鎖上にさえなくてもよい。エピトープは、Ｘ線結晶解析学、水素／重水素交換質量分析（ＨＸＭＳ）、部位指向性変異誘発、アラニンスキャニング変異誘発、及びペプチドスクリーニング法等、当技術分野において公知の様々な技法によって決定され得る。
抗体又は免疫グロブリンの一般化構造は当業者に周知である。これらの分子は、２本の同一の軽（Ｌ）鎖及び２本の同一の重（Ｈ）鎖から構成される、典型的に約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、典型的に全長抗体と称される。各軽鎖は、１つのジスルフィド結合によって重鎖に共有結合で連結されてヘテロ二量体を形成し、ヘテロ四量体分子は、ヘテロ二量体の２本の同一の重鎖間の共有結合性ジスルフィド連結により形成される。軽鎖及び重鎖は１つのジスルフィド結合によって一緒に連結されるが、２本の重鎖間のジスルフィド連結の数は、免疫グロブリンアイソタイプによって変動する。各重鎖及び軽鎖は、規則的に間隔が空いた鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、アミノ末端に可変ドメイン（ＶH）、それに続く３種又は４種の定常ドメイン（ＣH1、ＣH2、ＣH3、及びＣH4）、並びにＣH1とＣH2との間にヒンジ領域を有する。各軽鎖は、２種のドメインのアミノ末端可変ドメイン（ＶL）及びカルボキシ末端定常ドメイン（ＣL）を有する。ＶLドメインはＶHドメインと非共有結合で結び付き、一方でＣLドメインは、ジスルフィド結合を介してＣH1ドメインに一般的に共有結合で連結される。特定のアミノ酸残基が、軽鎖及び重鎖可変ドメインの間に界面を形成すると考えられている（Chothia et al., 1985, J. Mol. Biol. 186:651-663）。可変ドメインは、本明細書において可変領域とも称される。
可変ドメイン内のある特定のドメインは、種々の抗体間で大幅に異なる、すなわち「超可変」である。これらの超可変ドメインは、その特異的抗原決定基に対する各特定の抗体の結合及び特異性に直接関わる残基を含有する。超可変性は、軽鎖及び重鎖可変ドメインの両方において、相補性決定領域（ＣＤＲ）又は超可変ループ（ＨＶＬ）として公知の３種のセグメントに集中している。ＣＤＲは、Kabat et al., 1991, In: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.における配列比較によって規定され、一方でＨＶＬ（本明細書においてＣＤＲとも称される）は、Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917によって記載されるように、可変ドメインの三次元構造に従って構造的に規定される。これら２種の方法は、ＣＤＲのわずかに異なる特定をもたらす。Ｋａｂａｔによって規定されるように、軽鎖可変ドメインにおいて、ＣＤＲ－Ｌ１は約残基２４～３４に、ＣＤＲ－Ｌ２は約残基５０～５６に、ＣＤＲ－Ｌ３は約残基８９～９７に位置し；重鎖可変ドメインにおいて、ＣＤＲ－Ｈ１は約残基３１～３５に、ＣＤＲ－Ｈ２は約残基５０～６５に、ＣＤＲ－Ｈ３は約残基９５～１０２に位置する。特定のＣＤＲを包含する正確な残基番号は、ＣＤＲの配列及びサイズに応じて変動するであろう。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａスキームは、免疫グロブリンドメインの種々のファミリーを別個に処理するが、Ｌｅｆｒａｎｃ及び同僚らは、Ａｂ軽及び重可変ドメインを含めた免疫グロブリン可変ドメインゲノム配列、並びにＴ細胞受容体可変ドメインに対する、ＩＭＧＴ番号付けスキームと称される統一番号付けスキームを提唱した（Lefranc MP, et al. IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains and Ig superfamily V-like domains. Dev Comp Immunol (2003) 27:55-77）。
上で述べられるように、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及びＩＭＧＴ番号付けスキームの間には違い及び欠点があり、可変のＣＤＲ長が、最も頻度の高いループ長を考慮に入れるだけであり、それゆえ、使用される番号付けスキームに応じて何らかの不一致がある。ある場合には、本明細書に含まれる４種の方法によって特定されるＣＤＲの一部はほぼ同一であり（例えば、Ｌ３、Ｈ３）、一方で他のＣＤＲ（例えば、Ｌ２、Ｈ１、及びＨ２）では、方法の間で実質的な違いがある。ゆえに、完全性のために、本実施形態のＣＤＲは、重大なＡｇ結合残基を最善に特定する番号付け慣習のそれぞれに従って表示される（下の表１～４を参照されたい）。当業者であれば、抗体の可変領域アミノ酸配列を考慮して、どの残基が特定のＣＤＲを含むかをルーチン的に決定し得る。それゆえ、重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、所与の抗体に特異的な、固有で且つ機能的な特性を規定する。
４種の異なる命名法に従ったＣＤＲの配列
抗体Ａ＃１～Ａ＃７に関する可変軽鎖及び可変重鎖領域のＣＤＲ１～３が、下の表１において、配列番号によって列挙され、Ｋａｂａｔ命名法に従って提示される。
Figure 2024505674000002
Figure 2024505674000003
抗体Ａ＃１～Ａ＃７に関する可変軽鎖及び可変重鎖領域のＣＤＲ１～３が、下の表２において、ＣＣＧ（Almagro et al., Proteins 2011; 79:3050-3066及びMaier et al, Proteins 2014; 82:1599-1610において例示されるＣｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ）に従って提示される。
Figure 2024505674000004
Figure 2024505674000005
Ｃｈｏｔｈｉａスキームに基づく付加的な番号付けシステムが、下の表３において、抗体Ａ＃１～Ａ＃７に関する可変軽鎖及び可変重鎖領域のＣＤＲ１～３に対して提示される。
Figure 2024505674000006
Figure 2024505674000007
ＩＭＧＴ番号付けスキーム（Lefranc MP, et al. IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains and Ig superfamily V-like domains. Dev Comp Immunol (2003) 27:55-77）に基づく抗体Ａ＃１～Ａ＃７Ｃに関する可変軽鎖及び可変重鎖領域のＣＤＲ１～３が、下の表４において提示される。
Figure 2024505674000008
Figure 2024505674000009
Ｋａｂａｔ、ＣＣＧ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴの位についてのこの文脈において表示されるアミノ酸位（表１～４）は線状である、すなわちそれぞれの全長分子鎖のアミノ酸は、Ｎ末端における番号１から開始して連続的に番号付けされ、前記分子におけるアミノ酸の総数に相当する番号で終了する。例えば、長さが１１８個のアミノ酸からなる重鎖は、Ｎ末端において番号１から開始し、最もＣ末端のアミノ酸において番号１１８で終了するであろう。ゆえに、例えば２５位へのあらゆる言及は、この分子のＮ末端から数えられるアミノ酸番号２５を意味する。
重鎖及び軽鎖のそれぞれの中の３種のＣＤＲは、あまり可変的ではない傾向がある配列を含有するフレームワーク領域（ＦＲ）によって分離される。重鎖及び軽鎖可変ドメインのアミノ末端からカルボキシ末端に、ＦＲ及びＣＤＲは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４という順序で並べられる。ＦＲの主にβ－シートの立体配置は、鎖のそれぞれの中のＣＤＲを、互いに、並びに他の鎖由来のＣＤＲにごく近接させる。結果として生じる立体構造は、抗原結合部位に寄与する（Kabat et al., 1991, NIH Publ. No. 91-3242, Vol. I, pages 647-669を参照されたい）が、すべてのＣＤＲ残基が、必ずしも抗原結合に直接関わるわけではない。
ＦＲ残基及びＩｇ定常ドメインは、抗原結合に直接関わらないが、抗原結合に寄与し且つ／又は抗体エフェクター機能を媒介する。一部のＦＲ残基は、少なくとも３種のやり方で：エピトープに非共有結合で直接結合することによって、１つ又は複数のＣＤＲ残基と相互作用することによって、並びに重鎖及び軽鎖の間の界面に影響を及ぼすことによって、抗原結合に対する著しい効果を有すると考えられる。定常ドメインは、抗原結合に直接関わらないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）への抗体の参加等、様々なＩｇエフェクター機能を媒介する。
脊椎動物免疫グロブリンの軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２種のはっきりと区別できるクラスのカッパ（κ）及びラムダ（λ）の一方に割り当てられる。比較すると、哺乳類免疫グロブリンの重鎖は、定常ドメインの配列に従って、５種の主たるクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭのうちの１種に割り当てられる。ＩｇＧ及びＩｇＡは、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4、ＩｇＡ1、及びＩｇＡ2にさらに分けられる。免疫グロブリンの種々のクラスに相当する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。天然免疫グロブリンのクラスのサブユニット構造及び三次元立体配置は周知である。
「抗体」、「抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体」、「抗ＩＬ１－ＲＡＰ抗体」、「ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体」、「ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰエピトープ抗体」、及び「変種ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰエピトープ抗体」という用語は、所望の生物学的活性、例えばＩＬ１ＲＡＰ結合を呈する、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、二特異性抗体）、並びに抗体の可変ドメイン及び他の部分等の抗体フラグメントを具体的に包含する。ヒト化抗体とは、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び生物学的活性を有する、マウス、ラット、又はウサギ等の非ヒト種のＣＤＲ由来の残基によって置き換えられている、大部分がヒト免疫グロブリン（例えば、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はそのフラグメント（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は抗体の他の抗原結合部分配列等））である。「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、単一の抗原決定基「エピトープ」に対する高度に特異的である抗体を指す。それゆえ、「モノクローナル」という修飾語句は、同一のエピトープに対する抗体を指し示し、何らかの特定の方法による抗体の産生を要すると解釈されるべきではない。モノクローナル抗体は、例えばハイブリドーマ法（Kohler et al., 1975, Nature 256:495）、又は当技術分野において公知の組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）、又はClackson et al., 1991, Nature 352: 624-628及びMarks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222: 581-597に記載される技法を使用した、ファージ抗体ライブラリーを使用して組み換えで産生されるモノクローナルの単離の方法を含めた、当技術分野において公知のあらゆる技法又は方法論によって作製され得ることが理解されるべきである。
「単量体」という用語は、抗体の均一な形態を指す。例えば、全長抗体に関して、単量体は、２本の同一の重鎖及び２本の同一の軽鎖を有する単量体抗体を意味する。
キメラ抗体は、１種の種（例えば、マウス等の非ヒト哺乳類）由来の抗体の重鎖及び軽鎖可変領域と、別の種（例えば、ヒト）抗体の重鎖及び軽鎖定常領域とからなり、第１の種（例えば、マウス）由来の抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列を、第２の（例えば、ヒト）種由来の抗体の定常領域に対するＤＮＡ配列に連結し、連結された配列を含有する発現ベクターで宿主を形質転換して、それにキメラ抗体を産生させることによって獲得され得る。代替的に、キメラ抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の１つ又は複数の領域又はドメインが、別の免疫グロブリンクラス若しくはアイソタイプ由来の、又はコンセンサス若しくは生殖細胞系列配列由来のモノクローナル抗体における相当する配列と同一である、それと相同である、又はその変種であるものでもあり得る。キメラ抗体は、抗体フラグメントが、その親抗体の所望の生物学的活性、例えば同じエピトープへの結合を呈するという条件で、そのような抗体のフラグメントを含み得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びMorrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855を参照されたい）。
「抗体フラグメント」、「抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体フラグメント」、「抗ＩＬ１ＲＡＰエピトープ抗体フラグメント」、「ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体フラグメント」、「ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰエピトープ抗体フラグメント」、「変種ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰエピトープ抗体フラグメント」という用語は、可変領域又は機能的能力、例えば特異的ＩＬ１ＲＡＰエピトープ結合が保持されている、全長抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の一部分を指す。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びｓｃＦｖ－Ｆｃフラグメント、ダイアボディ、線状抗体、単鎖抗体、ミニボディ、抗体フラグメントから形成されるダイアボディ、並びに抗体フラグメントから形成される多特異性抗体を含むが、それらに限定されるわけではない。
全長抗体をパパイン又はペプシン等の酵素で処理して、有用な抗体フラグメントを作出し得る。パパイン消化は、それぞれが単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合抗体フラグメント、及び残りの「Ｆｃ」フラグメントを産生するために使用される。Ｆａｂフラグメントは、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖のＣH1ドメインも含有する。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有するＦ（ａｂ’）2フラグメントを産出し、依然として抗原に架橋し得る。
Ｆａｂ’フラグメントは、ＣH1ドメインのＣ末端における抗体ヒンジ領域由来の１つ又は複数のシステインを含めた付加的な残基の存在によって、Ｆａｂフラグメントとは異なる。Ｆ（ａｂ’）2抗体フラグメントは、ヒンジ領域においてシステイン残基によって連結されたＦａｂ’フラグメントのペアである。抗体フラグメントの他の化学的共役も公知である。
「Ｆｖ」フラグメントは、堅い非共有結合性の結び付きにある１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる、完全な抗原認識及び結合部位を含有する。この立体配置において、各可変ドメインの３種のＣＤＲは相互作用して、ＶH－ＶL二量体の表面での抗原結合（ｂｉｄｉｎｇ）部位を規定する。集合的に、６種のＣＤＲは、抗体に抗原結合特異性を付与する。
「単鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶH及びＶLドメインを含む単鎖Ｆｖ変種であり、ドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。単鎖Ｆｖは、抗原を認識し得且つ結合し得る。ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶH及びＶLドメイン間に位置するポリペプチドリンカーも任意に含有して、ｓｃＦｖによる抗原結合のための所望の三次元構造の形成を促し得る（例えば、Pluckthun, 1994, In The Pharmacology of monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315を参照されたい）。
「ダイアボディ」とは、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントを指し、フラグメントは、同じポリペプチド鎖における軽鎖可変ドメイン（Ｖ．ｓｕｂ．Ｌ）に接続された重鎖可変ドメイン（Ｖ．ｓｕｂ．Ｈ）を含む（Ｖ．ｓｕｂ．Ｈ－Ｖ．ｓｕｂ．Ｌ又はＶ．ｓｕｂ．Ｌ－Ｖ．ｓｕｂ．Ｈ）。ダイアボディは、例えばHolliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448においてより十分に記載される。
他の認められている抗体フラグメントは、抗原結合領域のペアを形成する直列Ｆｄセグメントのペア（ＶH－ＣH1－ＶH－ＣH1）を含むものを含む。これらの「線状抗体」は、例えばZapata et al. 1995, Protein Eng. 8(10):1057-1062に記載されるように、二特異性又は単一特異性であり得る。
「ヒト化抗体」又は「ヒト化抗体フラグメント」とは、所定の抗原に結合し得、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有する１種又は複数のＦＲ、及び非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有する１種又は複数のＣＤＲを含む、免疫グロブリンアミノ酸配列変種又はそのフラグメントを含む特異的タイプのキメラ抗体である。「インポート」配列としばしば称されるこの非ヒトアミノ酸配列は、典型的に「インポート」抗体ドメイン、特に可変ドメインから選ばれる。一般的に、ヒト化抗体は、ヒト重鎖又は軽鎖可変ドメインのＦＲの間に挿入された、非ヒト抗体の少なくともＣＤＲ又はＨＶＬを含む。本発明は、ヒト生殖細胞系列配列重鎖及び軽鎖可変ドメインのＦＲの間に挿入された、マウスモノクローナル抗体に由来するＣＤＲ又はヒト化ＣＤＲを含有する特異的ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を記載する。ある特定のマウスＦＲ残基は、ヒト化抗体の機能に重要であり得、それゆえ、ある特定のヒト生殖細胞系列配列重鎖及び軽鎖可変ドメイン残基は、相当するマウス配列のものと同じであるように改変されることが理解されるであろう。
別の態様において、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、少なくとも１種、典型的には２種の可変ドメインの実質的にすべてを含み（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ、及びＦｖフラグメントに含有される等）、ＣＤＲのすべて又は実質的にすべては、非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、本明細書において具体的には、ＣＤＲのすべては、本明細書において下で詳述されるようにマウス又はヒト化配列であり、ＦＲのすべて又は実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス又は生殖細胞系列配列のものである。別の態様において、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、免疫グロブリンＦｃ領域の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含む。通常、抗体は、軽鎖、並びに重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有するであろう。抗体は、必要に応じて、重鎖のＣH1、ヒンジ、ＣH2、ＣH3、及び／又はＣH4領域のうちの１種又は複数も含み得る。
ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含めた免疫グロブリンのあらゆるクラス、並びにＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4、ＩｇＡ1、及びＩｇＡ2を含めたあらゆるアイソタイプから選択され得る。例えば、定常ドメインは、補体結合（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｆｉｘｉｎｇ）定常ドメインであり得、ヒト化抗体は細胞傷害活性を呈し、アイソタイプは典型的にＩｇＧ1であることが望ましい。そのような細胞傷害活性が望ましくない場合、定常ドメインは、別のアイソタイプ、例えばＩｇＧ2のものであり得る。代替ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、１種を上回る免疫グロブリンクラス又はアイソタイプ由来の配列を含み得、特定の定常ドメインを選択して所望のエフェクター機能を最適化することは、当技術分野における通常の技能の範囲内にある。具体的な実施形態において、本発明は、ＩｇＧ１抗体である、より特にエフェクター機能のノックアウトがあるＩｇＧ１抗体である、抗体を提供する。
ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体のＦＲ及びＣＤＲ又はＨＶＬは、親配列に精確に相当する必要はない。例えば、インポートＣＤＲ若しくはＨＶＬ、又はコンセンサス若しくは生殖細胞系列ＦＲ配列における１つ又は複数の残基は、結果として生じるアミノ酸残基が、いずれかの親配列における相当する位置における元の残基ともはや同一ではないが、抗体がそれにも関わらずＩＬ１ＲＡＰへの結合の機能を保持するように、置換、挿入、又は欠失によって変更され得る（例えば、変異誘発される）。そのような変更は、典型的に大幅ではなく、保存的変更であろう。通例、ヒト化抗体残基の少なくとも７５％、よりしばしば少なくとも９０％、最も高頻度には９５％を上回る又は９８％を上回る又は９９％を上回る割合は、親コンセンサス又は生殖細胞系列ＦＲ及びインポートＣＤＲ配列のものに相当するであろう。
重鎖及び軽鎖可変領域の間の界面（「ＶL－ＶH界面」）に影響を及ぼす免疫グロブリン残基は、互いに対して２本の鎖の近接性又は配向に影響を及ぼすものである。鎖間相互作用に関わり得るある特定の残基は、ＶL残基３４、３６、３８、４４、４６、８７、８９、９１、９６、及び９８、並びにＶH残基３５、３７、３９、４５、４７、９１、９３、９５、１００、及び１０３を含む（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987）に明記される番号付けシステムを利用して）。米国特許第６，４０７，２１３号も、ＶL残基４３及び８５、並びにＶH残基４３及び６０等の残基もこの相互作用に関わり得ることを論じる。これらの残基は、ヒトＩｇＧに対してのみ表示されるものの、それらは種にわたって適用可能である。鎖間相互作用に関わると合理的に予想される重要な抗体残基は、コンセンサス配列への置換に選択される。
「コンセンサス配列」及び「コンセンサス抗体」という用語は、あらゆる特定のクラス、アイソタイプ、又はサブユニット構造のすべての免疫グロブリン、例えばヒト免疫グロブリン可変ドメイン、における各場所に最も高頻度に存在するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を指す。コンセンサス配列は、特定の種の又は多くの種の免疫グロブリンに基づき得る。「コンセンサス」配列、構造、又は抗体は、ある特定の実施形態に記載されるコンセンサスヒト配列を包含し、あらゆる特定のクラス、アイソタイプ、又はサブユニット構造のすべてのヒト免疫グロブリンにおける各場所に最も高頻度に存在するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を指すと理解される。ゆえに、コンセンサス配列は、１種又は複数の公知の免疫グロブリンに存在するが、あらゆる単一免疫グロブリンの全アミノ酸配列を正確に再現しなくてもよいアミノ酸を各位置に有するアミノ酸配列を含有する。可変領域コンセンサス配列は、いかなる天然に産生される抗体又は免疫グロブリン、Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.、及びその変種からも獲得されない。
ヒト生殖細胞系列配列は、ヒト集団に天然に見出される。それらの生殖細胞系列遺伝子の組み合わせは、抗体多様性を生み出す。抗体の軽鎖に対する生殖細胞系列抗体配列は、保存されたヒト生殖細胞系列カッパ又はラムダｖ遺伝子及びｊ遺伝子から生じる。同様に、重鎖配列は、生殖細胞系列ｖ、ｄ、及びｊ遺伝子から生じる（LeFranc, M-P, and LeFranc, G, "The Immunoglobulin Facts Book" Academic Press, 2001）。
本明細書で使用される場合、「変種」、「抗ＩＬ１ＲＡＰ変種」、「ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ変種」、又は「変種ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ」はそれぞれ、少なくとも軽鎖可変ネズミ科ＣＤＲを有するヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を指す。変種は、アミノ酸変化がＩＬ１ＲＡＰへの抗体の結合を実質的に損なわないという条件で、一方又は両方の軽鎖又は重鎖可変ドメインにおける１つ又は複数のアミノ酸変化を有するものを含む。
「単離された」抗体とは、同定されており、その天然環境の構成要素から分離され且つ／又は回収されているものである。抗体の天然環境の夾雑構成要素は、抗体の診断的又は治療的使用を妨害し得るそうした材料であり、酵素、ホルモン、又は他のタンパク性若しくは非タンパク性溶質であり得る。一態様において、抗体は、抗体の少なくとも９５質量％を上回る単離まで精製されるであろう。
抗体の天然環境の少なくとも１種の構成要素も存在しないであろうことから、単離された抗体は、それが産生される組み換え細胞内のインサイチューの抗体を含む。しかしながら、通常、単離された抗体は、組み換え細胞材料が除去される少なくとも１種の精製工程によって調製されるであろう。
「抗体性能」という用語は、抗原の抗体認識又はインビボでの抗体の有効性に寄与する因子を指す。抗体のアミノ酸配列の変化は、フォールディング等の抗体特性に影響を及ぼし得、抗原への抗体結合の初速度（ｋa）、抗原からの抗体の解離定数（ｋd）、抗原に対する抗体の親和定数（Ｋｄ）、抗体の立体構造、タンパク質安定性、及び抗体の半減期等の物理的因子に影響し得る。
「エピトープタグ付けされた」という用語は、本明細書で使用される場合、「エピトープタグ」に融合した抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を指す。「エピトープタグ」とは、抗体産生のためのエピトープを提供する十分な数のアミノ酸を有するポリペプチドであるが、それがヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の所望の活性を妨害しないように設計される。エピトープタグに対して作られた抗体が、他のエピトープと実質的に交差反応しないように、エピトープタグは通例十分に固有である。適切なタグポリペプチドは、一般的に少なくとも６個のアミノ酸残基を含有し、通例では約８～５０個のアミノ酸残基、又は約９～３０個の残基を含有する。エピトープタグ、及びエピトープに結合する抗体の例は、ｆｌｕ ＨＡタグポリペプチド及びその抗体１２ＣＡ５（Field et al., 1988 Mol. Cell. Biol. 8: 2159-2165）；ｃ－ｍｙｃタグ、並びにそれに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７、及び９Ｅ１０抗体（Evan et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5(12):3610-3616）；並びに単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグ及びその抗体（Paborsky et al. 1990, Protein Engineering 3(6): 547-553）を含む。ある特定の実施形態において、エピトープタグは「サルベージ受容体結合エピトープ」である。本明細書で使用される場合、「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期を増加させることに関与するＩｇＧ分子（ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、又はＩｇＧ4等）のＦｃ領域のエピトープを指す。
一部の実施形態において、本発明の抗体は、細胞傷害剤にコンジュゲートされ得る。これは、細胞の機能を阻害し若しくは阻止し、且つ／又は細胞の破壊を引き起こすあらゆる物質である。該用語は、放射性同位体（Ｉ131、Ｉ125、Ｙ90、及びＲｅ186等）、化学療法剤、及び細菌、真菌、植物、又は動物起源の酵素的に活性な毒素等の毒素、並びにそのフラグメントを含むことが意図される。そのような細胞傷害剤は、標準的手順を使用して本発明のヒト化抗体に共役され得、例えば抗体を用いた療法に適応した患者を治療するために使用され得る。
「化学療法剤」とは、がんの治療において有用な化学的化合物である。本発明の治療用抗体とコンジュゲートされ得る化学療法剤の数多くの例がある。そのような化学療法剤の例は、チオテパ及びシクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）等のアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファン等のスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、及びウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチルオロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含めたエチレンイミン及びメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（とりわけブラタシン及びブラタシノン）；カンプトセシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン、アウリスタチン（類似体モノメチル－アウリスタチンＥ及びモノメチル－アウリスタチンＦを含む）；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ－２１８９及びＣＢＩ－ＴＭＩを含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロマファジン（ｃｈｌｏｍａｐｈａｚｉｎｅ）、クロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミン酸化物（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ ｏｘｉｄｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン等のナイトロジェンマスタード；トロホスファミド、ウラシルマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン等のニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、とりわけカリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅｍｉｃｉｎ）ガンマ１Ｉ及びカリケアマイシンｐｈｉＩ１、例えばAgnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186を参照されたい；ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含めたダイネマイシン；クロドロネート等のビスホスフォネート；エスペラミシン；並びに、ネオカルチノスタチンクロモフォア及び関連色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア（ｃｈｒｏｍｏｍｏｐｈｏｒｅｓ））、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシン、アウトラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（商標））（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｕｃｉｎ）、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣ等のマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン等の抗生物質；メトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）等の代謝拮抗物質；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート等の葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン等のプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン等のピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の抗副腎薬（ａｎｔｉ－ａｄｒａｎａｌ）；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）等の葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デモコルシン（ｄｅｍｏｃｏｌｃｉｎｅ）；ジアジコン；エルフォミチン（ｅｌｆｏｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；メイタンシン及びアンサマイトシン等のメイタンシノイド；ミトグアゾン、ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（とりわけＴ－２トキシン、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジンＡ、及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミタブロニトール（ｍｉｔａｂｒｏｎｉｔｏｌ）；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、及びドセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（商標））；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン及びカルボプラチン等の白金類似体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビンＮａｖｅｌｂｉｎｅ（商標）；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸等のレチノイド；カペシタビン；並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、又は誘導体を含む。例えばタモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（商標）を含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ（商標））を含めた、抗エストロゲン剤及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）；例えば４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（Ｍｅｇａｃｅ（商標））、エキセメスタン、ホルメスタン、ファドロゾール、ボロゾール（Ｒｉｖｉｓｏｒ（商標））、レトロゾール（Ｆｅｍａｒａ（商標））、及びアナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（商標））等、副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤；並びにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン等の抗アンドロゲン剤；並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、又は誘導体等、腫瘍に対するホルモン作用を調節する又は阻害するように作用する抗ホルモン剤もこの定義に含まれる。これらの作用物質のうちのいずれか１種又は複数を本発明のヒト化抗体にコンジュゲートして、様々な障害の治療のための有用な治療剤を提供し得る。
抗体はプロドラッグにもコンジュゲートされ得る。「プロドラッグ」とは、親薬物と比較して腫瘍細胞に対して細胞傷害性が低く、より活性な形態に酵素的に活性化され得る又は変換され得る、薬学的に活性な物質の前駆体又は誘導体形態である。例えば、Wilman, 1986, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy", In Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast、及びStella et al., 1985, "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery, In: "Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 247-267, Humana Pressを参照されたい。有用なプロドラッグは、ホスフェート含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、サルフェート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ－アミノ酸改変プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、β－ラクタム含有プロドラッグ、任意に置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグ、及び任意に置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５－フルオロシトシン、並びにより活性な細胞傷害性遊離薬物に変換され得る他の５－フルオロウリジンプロドラッグを含むが、それらに限定されるわけではない。プロドラッグ形態に誘導体化され得る細胞傷害薬の例は、上で記載されるそうした化学療法剤を含むが、それらに限定されるわけではない。
診断的並びに治療的モニタリング目的のために、本発明の抗体は、標識単独であれ、標識及び付加的な第２の作用物質（プロドラッグ、化学療法剤等）であれ、標識にもコンジュゲートされ得る。他の第２の作用物質と区別される標識とは、検出可能な化合物又は組成物である作用物質を指し、それは、本発明のヒト化抗体に直接的に又は間接的にコンジュゲートされ得る。標識は、それ自体が検出可能であり得る（例えば、放射性標識又は蛍光標識）、又は酵素標識の場合には、検出可能である基質化合物又は組成物の化学的変更を触媒し得る。標識されたヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、インビトロ及びインビボ診断法を含めた様々な適用において調製され得且つ使用され得る。
本発明の抗体をリポソーム調製物の一部として製剤化して、インビボでのその送達に影響を及ぼし得る。「リポソーム」とは、様々なタイプの脂質、リン脂質、及び／又は界面活性剤から構成される小さな小胞である。リポソームは、任意に、１種又は複数の薬学的活性剤及び／又は標識に共役した又はそれとの組み合わせでの、本明細書に開示されるヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体等、化合物又は製剤の哺乳類への送達に有用である。リポソームの構成要素は、一般に、生体膜の脂質編成と同様の二重層形成で編成される。
本発明のある特定の態様は、本発明のヒト化抗体の１種又は複数のドメインをコードする単離された核酸に関した。「単離された」核酸分子とは、同定され、それが抗体核酸の天然供給源において通常結び付いている少なくとも１種の夾雑核酸分子から分離されている核酸分子である。単離された核酸分子は、それが天然細胞に存在するような核酸分子と区別される。
本発明の様々な態様において、ヒト化抗体の１種又は複数のドメインは組み換えで発現されるであろう。そのような組み換え発現は、１種又は複数の制御配列、すなわち特定の宿主生物における作動的に連結されたコード配列の発現に必要なポリヌクレオチド配列を採用し得る。原核細胞における使用に適切な制御配列は、例えばプロモーター、オペレーター、及びリボソーム結合部位配列を含む。真核生物制御配列は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを含むが、それらに限定されるわけではない。これらの制御配列は、原核及び真核宿主細胞におけるヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の発現及び産生に利用され得る。
核酸配列は、それが別の核酸配列と機能的関係性に置かれた場合、「作動的に連結され」ている。例えば、核酸プレ配列若しくは分泌リーダーは、それが、ポリペプチドの分泌に参加するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドをコードする核酸に作動的に連結されている；プロモーター若しくはエンハンサーは、それが配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動的に連結されている；又はリボソーム結合部位は、それが翻訳を促すように位置する場合、コード配列に作動的に連結されている。一般的に、「作動的に連結された」とは、連結されているＤＮＡ配列が連続しており、分泌リーダーの場合には、連続しており且つリーディングフレームにあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは連続していてもよい。連結は、好都合な制限部位におけるライゲーションによって遂行され得る。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーが使用され得る。
本明細書で使用される場合、「細胞」、「細胞株」、及び「細胞培養物」という表現は、互換可能に使用され、すべてのそのような名称はその子孫を含む。ゆえに、「形質転換体」及び「形質転換細胞」は、移行の回数に関係なく、初代対象細胞及びそれに由来する培養物を含む。
治療の目的のための「哺乳類」という用語は、ヒト、飼いならされた動物、及び家畜、並びにイヌ、ウマ、ネコ、ウシ等の動物園用、スポーツ用、又はペット用動物を含めた、哺乳類として分類されるあらゆる動物を指す。好ましくは、哺乳類はヒトである。
「障害」とは、本明細書で使用される場合、本明細書に記載されるヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を用いた治療から利益を得るであろうあらゆる病状である。これは、哺乳類を問題の障害にかかりやすくするそうした病態を含めた、慢性及び急性の障害又は疾患を含む。本明細書において治療される対象となる障害の非限定的な例は、炎症性、血管新生性、自己免疫性、及び免疫学的障害、呼吸器障害、がん、血液学的悪性腫瘍、良性及び悪性の腫瘍、白血病、並びにリンパ系悪性腫瘍を含む。
「がん」及び「がん性」という用語は、無調節の細胞成長によって典型的に特徴付けられる、哺乳類における生理学的病状を指す又は記載する。がんの例は、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病を含むが、それらに限定されるわけではない。
ＩＬ１ＲＡＰ関連障害は、自己免疫障害及び炎症性障害等、免疫系の疾患及び障害を含む。そのような病状は、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、強皮症、シェーグレン症候群、多発性硬化症、乾癬、乾癬性関節炎、肺炎症、喘息、特発性血小板減少性紫斑病（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ ｐｕｒａｒａ）（ＩＴＰ）、上皮炎症性障害、線維症、及び強直性脊椎炎を含むが、それらに限定されるわけではない。
「静脈内注入」という用語は、およそ１５分間を上回る期間、一般的にはおよそ３０～９０分間にわたる、動物又はヒト患者の静脈内への作用物質の導入を指す。
「静脈内ボーラス」又は「静脈内プッシュ」という用語は、身体が、およそ１５分間未満、一般的には５分間未満以内に薬物を受けるような、動物又はヒトの静脈への薬物投与を指す。
「皮下投与」という用語は、薬物レセプタクルからの比較的緩徐な持続的送達による、動物又はヒト患者の皮膚下への、好ましくは皮膚と下層組織との間のポケット内への作用物質の導入を指す。皮膚をつまみ上げ又は引き上げ且つ下層組織から離すことは、ポケットを創出し得る。
「皮下注入」という用語は、３０分間未満又は９０分間未満を含むがそれらに限定されない期間の間の、薬物レセプタクルからの比較的緩徐な持続的送達による、動物又はヒト患者の皮膚下への、好ましくは皮膚と下層組織との間のポケット内への薬物の導入を指す。任意に、注入は、動物又はヒト患者の皮膚下に埋め込まれた薬物送達ポンプの皮下埋め込みによって行われ得、ポンプは、３０分間、９０分間、又は治療レジメンの長さに及ぶ期間等の所定の期間の間、所定の量の薬物を送達する。
「皮下ボーラス」という用語は、動物又はヒト患者の皮膚の下での薬物投与を指し、ボーラス薬物送達はおよそ１５分間未満；別の態様では５分間未満、さらに別の態様では６０秒間未満である。なおさらに別の態様において、投与は、皮膚と下層組織との間のポケット内であり、ポケットは、皮膚をつまみ上げ又は引き上げ且つ下層組織から離すことによって創出され得る。
「治療有効量」という用語は、治療されている障害の症状の１種又は複数を軽減する又は改善する活性剤の量を指すために使用される。別の態様において、治療有効量とは、例えば疾患進行を減速させることにおいて有効であることが示されている標的血清濃度を指す。効能は、治療される対象となる病状に応じて、従来のやり方で測定され得る。
「治療」及び「療法」という用語並びに同等のものは、本明細書で使用される場合、疾患又は障害の１種又は複数の症状の緩和又は軽減、その進行の退行、減速、又は停止を含むがそれらに限定されない、あらゆる臨床的に望ましい又は有益な効果につながる、疾患又は障害に対する治療的並びに予防的又は抑制的方策を含むことを企図される。ゆえに、例えば、治療という用語は、疾患又は障害の症状の発生の前又は後の作用物質の投与、それによる疾患又は障害の１種又は複数の兆候を阻止すること又は除去することを含む。別の例として、該用語は、疾患の症状と闘うための、疾患の臨床所見の後の作用物質の投与を含む。さらに、発生後及び臨床症状が発症した後の作用物質の投与は、治療が疾患の改善につながるか否かに関わらず、投与が組織傷害の程度又は転移の量若しくは度合い等の疾患又は障害の臨床的パラメーターに影響を及ぼす場合、本明細書で使用される「治療」又は「療法」を含む。さらに、単独での又は別の治療剤との組み合わせでの本発明の組成物が、治療されている障害の少なくとも１種の症状を、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体組成物の使用なしでのその症状と比較して、緩和する又は改善する限りにおいて、障害のすべての症状が緩和されたか否かに関わらず、結果は、基礎障害の有効な治療と見なされるべきである。
「添付文書」という用語は、そのような治療用製品の使用に関する適応症、用法、投与、禁忌、及び／又は警告についての情報を含有する、治療用製品の商業的パッケージに慣例的に含まれる使用説明書を指すために使用される。
抗体
一態様において、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、特にヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、並びに１種又は複数の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、特に本発明の１種又は複数のヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を含む組成物及び製造品が本明細書に記載され且つ開示される。
本発明の代表的な抗体の可変領域及びＣＤＲが下に開示される。
抗ＩＬ１ＲＡＰマウス抗体配列
本発明の代表的なマウスリード抗体（マウスリード）の可変領域及びＣＤＲが下に示される。
軽鎖可変領域（ＶＫ）アミノ酸配列
Figure 2024505674000010
重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列
Figure 2024505674000011
Ｋａｂａｔ、ＣＣＧ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及びＩＭＧＴ命名法に従った軽鎖ＣＤＲ－１、ＣＤＲ－２、ＣＤＲ３（Ｌ－ＣＤＲ１～３）、及び重鎖ＣＤＲ－１、ＣＤＲ－２、ＣＤＲ３（Ｌ－ＣＤＲ１～３）アミノ酸配列
Figure 2024505674000012
Figure 2024505674000013
Figure 2024505674000014
Figure 2024505674000015
抗ＩＬ１ＲＡＰヒト化抗体配列
ヒトフレームワーク配列を、フレームワーク相同性、ＣＤＲ構造、保存された標準残基、保存された界面パッキング（ｉｎｔｅｒｆａｃｅ ｐａｃｋｉｎｇ）残基、及び他のパラメーターに基づいてマウスリードに対して選択して、ヒト化可変領域を産生した（実施例１～２を参照されたい）。
抗体ｏｐｔ－２７～ｏｐｔ７３に由来する代表的なヒト化可変領域が下に示される。
Figure 2024505674000016
Figure 2024505674000017
Figure 2024505674000018
Figure 2024505674000019
Figure 2024505674000020
Figure 2024505674000021
Figure 2024505674000022
ヒト化可変領域由来のＣＤＲ配列、Ｏｐｔ－４３（＃Ａ２）、Ｏｐｔ４７（＃Ａ３）、Ｏｐｔ－５４（＃Ａ４）、Ｏｐｔ－５７（＃Ａ５）、Ｏｐｔ－５８（＃Ａ６）、及びＯｐｔ－５９（＃Ａ７）を含めた、ネズミ科抗体００５－ＧＯ１１に由来するクローンＯＰＴ２７～７３由来のＶＬ／ＶＨが下に描写される。ＣＤＲは、命名慣習ＫＡＢＡＴ、ＣＣＧ、ＣＨＯＴＨＩＡ、及びＩＭＧＴに従って表示される。
Figure 2024505674000023
Figure 2024505674000024
Figure 2024505674000025
Figure 2024505674000026
Figure 2024505674000027
Figure 2024505674000028
Figure 2024505674000029
Figure 2024505674000030
Figure 2024505674000031
Figure 2024505674000032
Figure 2024505674000033
Figure 2024505674000034
Figure 2024505674000035
Figure 2024505674000036
Figure 2024505674000037
Figure 2024505674000038
Figure 2024505674000039
Figure 2024505674000040
Figure 2024505674000041
Figure 2024505674000042
Figure 2024505674000043
Figure 2024505674000044
Figure 2024505674000045
Figure 2024505674000046
Figure 2024505674000047
Figure 2024505674000048
Figure 2024505674000049
Figure 2024505674000050
Figure 2024505674000051
Figure 2024505674000052
Figure 2024505674000053
Figure 2024505674000054
 一態様において、本発明の可変領域は定常領域に連結される。例えば、本発明の可変領域を、下に示される定常領域に連結して、抗体の重鎖又は軽鎖を形成する。
Figure 2024505674000055
本発明の代表的な軽鎖及び重鎖配列が下に示される（定常領域に連結された、００５－ＧＯ１１親（Ａ１）に由来するヒト化可変領域：ｏｐｔ－４３（Ａ２）、ｏｐｔ４７（Ａ３）、ｏｐｔ－５４（Ａ４）、ｏｐｔ－５７（Ａ５）、ｏｐｔ－５８（Ａ６）、及びｏｐｔ－５９（Ａ７））。
軽鎖アミノ酸配列
Figure 2024505674000056
重鎖アミノ酸配列
Figure 2024505674000057
Figure 2024505674000058
一態様において、本発明の抗体は、例えば上で記載される表に明記される３種の軽鎖ＣＤＲ及び３種の重鎖ＣＤＲを含む。
一態様において、本発明の抗体は、上で明記される軽鎖及び重鎖可変領域を含む。一態様において、本発明の軽鎖可変領域は、軽鎖定常領域、例えばカッパ又はラムダ定常領域に融合される。一態様において、本発明の重鎖可変領域は、重鎖定常領域、例えばＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、又はＩｇＭ、特にＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、又はＩｇＧ4に融合される。
本発明は、配列番号１７０のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１７７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体（抗体Ａ１）を提供する。
本発明は、配列番号１７１のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体（抗体Ａ２）を提供する。
本発明は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１７９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体（抗体Ａ３）を提供する。
本発明は、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１８０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体（抗体Ａ４）を提供する。
本発明は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体（抗体Ａ５）を提供する。
本発明は、配列番号１７５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体（抗体Ａ６）を提供する。
本発明は、配列番号１７６のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体（抗体Ａ７）を提供する。
本発明の代表的な抗体が下に示される。
Figure 2024505674000059
Figure 2024505674000060
Figure 2024505674000061
一部の態様において、本発明は、ＩＬ１ＲＡＰに結合する中和抗体を含む。一部の実施形態において、抗体はＩＬ１ＲＡＰに特異的に結合する。一部の実施形態において、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰのアミノ酸２３５～３６７を含むドメイン３（配列番号１８７）に結合する。一部の実施形態において、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）３の２３５～３１５位に相当するアミノ酸残基内のエピトープ（配列番号１８８）に結合する。一部の実施形態において、抗体は、配列番号１８７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有するＩＬ１ＲＡＰに結合する。
一部の態様において、本発明は、抗原結合タンパク質が、配列番号１８８の２３５～３１５位に相当する残基内の場所でＩＬ１ＲＡＰに結合する、ＩＬ１ＲＡＰに結合する抗原結合タンパク質を含む。一部の実施形態において、抗原結合タンパク質がＩＬ１ＲＡＰに結合している場合、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰの以下の残基２３８、２３９、２４４～２４７、２４９、２５１～２５６、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、３０１、３０３、３０５～３０６、３１１、３１３、又は３１５のうちの少なくとも１つから８オングストローム以下に位置する。
一部の態様において、本発明は、抗原結合タンパク質が、配列番号１８９の２３５～２７３位に相当する残基内の場所でＩＬ１ＲＡＰに結合する、ＩＬ１ＲＡＰに結合する抗原結合タンパク質を含む。一部の実施形態において、抗原結合タンパク質がＩＬ１ＲＡＰに結合している場合、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰの以下の残基２３８、２３９、２４４～２４７、２４９、２５１～２５６、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、又は２７１のうちの少なくとも１つから８オングストローム以下に位置する。
一部の態様において、本発明は、抗原結合タンパク質が、配列番号１９０の３００～３１５位に相当する残基内の場所でＩＬ１ＲＡＰに結合する、ＩＬ１ＲＡＰに結合する抗原結合タンパク質を含む。一部の実施形態において、抗原結合タンパク質がＩＬ１ＲＡＰに結合している場合、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰの以下の残基３０１、３０３、３０５～３０６、３１１、３１３、又は３１５のうちの少なくとも１つから８オングストローム以下に位置する。
一部の態様において、本発明は、抗原結合タンパク質が、配列番号１９２の２２６～２６２位に相当する残基内の場所でＩＬ１ＲＡＰに結合する、ＩＬ１ＲＡＰに結合する抗原結合タンパク質を含む。一部の実施形態において、抗原結合タンパク質がＩＬ１ＲＡＰに結合している場合、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰの以下の残基２３８、２３９、２４４～２４７、２４９、２５１～２５６、又は２６１のうちの少なくとも１つから８オングストローム以下に位置する。
一部の態様において、本発明は、抗原結合タンパク質が、配列番号１９２の２２６～２７３位に相当する残基内の場所でＩＬ１ＲＡＰに結合する、ＩＬ１ＲＡＰに結合する抗原結合タンパク質を含む。一部の実施形態において、抗原結合タンパク質がＩＬ１ＲＡＰに結合している場合、抗体は、ＩＬ１ＲＡＰの以下の残基２３８、２３９、２４４～２４７、２４９、２５１～２５６、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、又は２７１のうちの少なくとも１つから８オングストローム以下に位置する。
本発明の抗体は、様々な疾患又は障害、例えばヒトにおける免疫学的、炎症性、自己免疫性の疾患、及び呼吸器疾患の治療のための方法において有用である。例えば、本発明の抗体は、乾癬、関節リウマチ、又は乾癬性関節炎の治療のための方法において有用である。例えば、本発明の抗体は、慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）又は喘息の治療のための方法において有用である。例えば、本発明の抗体は、強皮症、掌蹠膿疱症、汎発性膿疱性乾癬、糖尿病性腎症、ループス腎炎、強皮症、強直性脊椎炎、ＩＬ－３６受容体アンタゴニスト欠損症自己免疫疾患（ＤＩＴＲＡ）、ＩＬ－１受容体アンタゴニスト欠損症自己免疫疾患（ＤＩＲＡ）、又はクリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）の治療のための方法において有用である。
一部の態様において、ヒト化抗体は遮断活性を呈示し、それによってそれは、比較（ｃｏｍｐａｒｉｔｏｒ）抗体対照と又は本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体若しくは抗体フラグメントの非存在下と比較した場合、ＩＬ－３３、ＩＬ－３６、又はＩＬ－１媒介性活性化を少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％減少させる。ＩＬ－３３、ＩＬ－３６、及びＩＬ－１の結合を遮断する抗体の能力は、当技術分野において公知の結合アッセイを使用して測定され得る。代替的に、抗体の遮断活性は、ＩＬ－８、ＩＬ－６、又はＩＬ－１２の産生等、ＩＬ－３３、ＩＬ－３６、及びＩＬ－１の生物学的効果をアッセイして、ＩＬ１ＲＡＰによって媒介されるシグナル伝達が阻害されるかどうかを判定することによって測定され得る。
さらなる態様において、本発明は、好ましい生物物理学的特性を有するヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を提供する。一態様において、本発明のヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、緩衝液中に、少なくとも９０％の単量体形態で、又は少なくとも９２％の単量体形態で、又は少なくとも９５％の単量体形態で存在する。さらなる態様において、本発明のヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、１カ月間又は４カ月間、緩衝液中に、少なくとも９０％の単量体形態で、又は少なくとも９２％の単量体形態で、又は少なくとも９５％の単量体形態でとどまる。
さらなる実施形態において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１７０の軽鎖配列及び配列番号１７７の重鎖配列からなる（抗体Ａ１）。別の実施形態において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１７１の軽鎖配列及び配列番号１７８の重鎖配列からなる（抗体Ａ２）。別の実施形態において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１７２の軽鎖配列及び配列番号１７９の重鎖配列からなる（抗体Ａ３）。別の実施形態において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１７３の軽鎖配列及び配列番号１８０の重鎖配列からなる（抗体Ａ４）。別の実施形態において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１７４の軽鎖配列及び配列番号１８１の重鎖配列からなる（抗体Ａ５）。別の実施形態において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１７５の軽鎖配列及び配列番号１８２の重鎖配列からなる（抗体Ａ６）。別の実施形態において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１７６の軽鎖配列及び配列番号１８３の重鎖配列からなる（抗体Ａ７）。
一部の実施形態において、重鎖及び軽鎖可変領域等のその抗原結合フラグメントを含めたヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、抗体Ａ１、抗体Ａ２、抗体Ａ３、抗体Ａ４、抗体Ａ５、抗体Ａ６、又は抗体Ａ７に由来する残基のアミノ酸配列を含む。
さらなる実施形態において、本発明は、本発明の抗体、例えば本明細書に記載される抗体Ａ１、抗体Ａ２、抗体Ａ３、抗体Ａ４、抗体Ａ５、抗体Ａ６、又は抗体Ａ７と、ヒトＩＬ１ＲＡＰに競合的に結合する抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。ＩＬ１ＲＡＰに競合的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントの能力は、当技術分野において公知の競合的結合アッセイを使用して測定され得る。
ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、コンセンサス又は生殖細胞系列フレームワーク領域における特異的アミノ酸置換を含んでもよい。これらのフレームワーク位置におけるアミノ酸残基の特異的置換は、ヒト生殖細胞系列フレームワーク領域へのＣＤＲ又はＨＶＬの「直接入れ替え」によって形成されるヒト化抗体において示されるものと比して、結合親和性及び／又は安定性を含めた抗体性能の様々な態様を向上させ得る。
一部の実施形態において、本発明は、配列番号１に明記されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有するモノクローナル抗体を記載する。一部の実施形態において、本発明は、配列番号２に明記されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する他のモノクローナル抗体を記載する。ヒトコンセンサス重鎖及び軽鎖可変ドメインのＦＲにそのようなＣＤＲを置くことは、本発明の有用なヒト化抗体を産出するであろう。
特に、本発明は、それぞれ配列番号１及び配列番号２の軽鎖可変及び重鎖可変領域の組み合わせを有するモノクローナル抗体を提供する。そのような可変領域は、ヒト定常領域と組み合わせられ得る。
一部の実施形態において、本発明は、配列番号１７～６６のいずれか１つに明記されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を有する他のヒト化抗体を記載する。一部の実施形態において、本発明は、配列番号６７～１１６のいずれか１つに明記されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を有する他のヒト化抗体を記載する。特に、本発明は、配列番号１７／６７、１８／６８、１９／６９、２０／７０、２１／７１、２２／７２、２３／７３、２４／７４、２５／７５、２６／７６、２７／７７、２８／７８、２９／７９、３０／８０、３１／８１、３２／８２、３３／８３、３４／８４、３５／８５、３６／８６、３７／８７、３８／８８、３９／８９、４０／９０、４１／９１、４２／９２、４３／９３、４４／９９、４５／９５、４６／９６、４７／９７、４８／９８、４９／９９、５０／１００、５１／１０１、５２／１０２、５３／１０３、５４／１０４、５５／１０５、５６／１０６、５７／１０７、５８／１０８、５９／１０９、６０／１１０、６１／１１１、６２／１１２、６３／１１３、６４／１１４、６５／１１５、及び６６／１１６の軽鎖可変及び重鎖可変領域の組み合わせを有するモノクローナル抗体を提供する。そのような可変領域は、ヒト定常領域と組み合わせられ得る。
さらなる実施形態において、本発明は、配列番号１７のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号１７の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域、並びに配列番号６７のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン、及び配列番号６７の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態において、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
さらなる実施形態において、本発明は、配列番号３６のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号３６の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域、並びに配列番号８６のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン、及び配列番号８６の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態において、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
さらなる実施形態において、本発明は、配列番号４０のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号４０の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域、並びに配列番号９０のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン、及び配列番号９０の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態において、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
さらなる実施形態において、本発明は、配列番号４７のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号４７の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域、並びに配列番号９７のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン、及び配列番号９７の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態において、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
さらなる実施形態において、本発明は、配列番号５０のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号５０の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域、並びに配列番号１００のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン、及び配列番号１００の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態において、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
さらなる実施形態において、本発明は、配列番号５１のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号５１の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域、並びに配列番号１０１のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０１の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態において、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
さらなる実施形態において、本発明は、配列番号５２のＣＤＲを含むヒト化軽鎖可変ドメイン、及び配列番号５２の可変ドメイン軽鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域、並びに配列番号１０２のＣＤＲを含むヒト化重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０２の可変ドメイン重鎖アミノ酸配列のフレームワーク領域のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９３％同一、又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントに関する。一実施形態において、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体はヒト化モノクローナル抗体である。
さらなる一態様において、本発明は、配列番号３又は６のいずれか１種の軽鎖ＣＤＲ１（Ｌ－ＣＤＲ１）配列；配列番号４又は７のいずれか１種の軽鎖ＣＤＲ２（Ｌ－ＣＤＲ２）配列；配列番号５の軽鎖ＣＤＲ３（Ｌ－ＣＤＲ３）配列；配列番号８、１１、１２、１４のいずれか１種の重鎖ＣＤＲ１（Ｈ－ＣＤＲ１）配列；配列番号９、１３、又は１５のいずれか１種の重鎖ＣＤＲ２（Ｈ－ＣＤＲ２）配列；及び配列番号１０又は１６のいずれか１種の重鎖ＣＤＲ３（Ｈ－ＣＤＲ３）配列を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。一態様において、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントは、上で挙げられるＬ－ＣＤＲ１、上で挙げられるＬ－ＣＤＲ２、及び上で挙げられるＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、並びに上で挙げられるＨ－ＣＤＲ１、上で挙げられるＨ－ＣＤＲ２、及び上で挙げられるＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む。
さらなる一態様において、本発明は、配列番号３、６、１３４（式中、Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｓ又はＮ）、又は１３５（式中、Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｓ又はＮ）のいずれか１種の軽鎖ＣＤＲ１（Ｌ－ＣＤＲ１）配列；配列番号４、７、１４０（式中、Ｘ１＝Ｓ又はＫ、Ｘ２＝Ｓ又はＴ）、又は１４１（式中、Ｘ１＝Ｓ又はＫ）のいずれか１種の軽鎖ＣＤＲ２（Ｌ－ＣＤＲ２）配列；配列番号５の軽鎖ＣＤＲ３（Ｌ－ＣＤＲ３）配列；配列番号８、１１、１２、１４、１４６（式中、Ｘ１＝Ｍ又はＩ、Ｘ２＝Ｎ又はＳ）、又は１４７（式中、Ｘ１＝Ｍ又はＩ、Ｘ２＝Ｎ又はＳ）のいずれか１種の重鎖ＣＤＲ１（Ｈ－ＣＤＲ１）配列；配列番号９、１３、又は１５、１６５（式中、Ｘ１＝Ｄ又はＧ、Ｘ２＝Ａ又はＴ、Ｘ３＝Ｎ又はＡ、Ｘ４＝Ｑ又はＥ、Ｘ５＝Ｍ又はＫ、Ｘ６＝Ｑ又はＫ、Ｘ７＝Ｄ又はＧ）、１６６（式中、Ｘ１＝Ｄ又はＧ）、又は１６７（式中、Ｘ１＝Ｄ又はＧ；Ｘ２＝Ａ又はＴ）のいずれか１種の重鎖ＣＤＲ２（Ｈ－ＣＤＲ２）配列；及び配列番号１０又は１６のいずれか１種の重鎖ＣＤＲ３（Ｈ－ＣＤＲ３）配列を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。一態様において、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントは、上で挙げられるＬ－ＣＤＲ１、上で挙げられるＬ－ＣＤＲ２、及び上で挙げられるＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、並びに上で挙げられるＨ－ＣＤＲ１、上で挙げられるＨ－ＣＤＲ２、及び上で挙げられるＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む。
さらなる態様において、本発明は、
ａ）それぞれ配列番号３、４、５、８、９、及び１０（ＫＡＢＡＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｂ）それぞれ配列番号３、４、５、１１、９、及び１０（ＣＣＧ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｃ）それぞれ配列番号３、４、５、１２、１３、及び１０（ＣＨＯＴＨＩＡ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｄ）それぞれ配列番号６、７、５、１４、１５、及び１６（ＩＭＧＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列
を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
さらなる態様において、本発明は、
ａ）それぞれ配列番号１１７、１３６、５、８、１４９、及び１０（ＫＡＢＡＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｂ）それぞれ配列番号１１７、１３６、５、１１、１４９、及び１０（ＣＣＧ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｃ）それぞれ配列番号１１７、１３６、５、１２、１６１、及び１０（ＣＨＯＴＨＩＡ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｄ）それぞれ配列番号１２７、７、５、１４、１６２、及び１６（ＩＭＧＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列
を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
さらなる態様において、本発明は、
ａ）それぞれ配列番号１１７、１３６、５、１４２、１５３、及び１０（ＫＡＢＡＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｂ）それぞれ配列番号１１７、１３６、５、１４４、１５３、及び１０（ＣＣＧ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｃ）それぞれ配列番号１１７、１３６、５、１２、１３、及び１０（ＣＨＯＴＨＩＡ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｄ）それぞれ配列番号１２７、７、５、１４、１５、及び１６（ＩＭＧＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列
を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
さらなる態様において、本発明は、
ａ）それぞれ配列番号１１７、１３６、５、１４２、１４８、及び１０（ＫＡＢＡＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｂ）それぞれ配列番号１１７、１３６、５、１４４、１４８、及び１０（ＣＣＧ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｃ）それぞれ配列番号１１７、１３６、５、１２、１６１、及び１０（ＣＨＯＴＨＩＡ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｄ）それぞれ配列番号１２７、７、５、１４、１６２、及び１６（ＩＭＧＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列
を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
さらなる態様において、本発明は、
ａ）それぞれ配列番号１１７、１３７、５、８、１４８、及び１０（ＫＡＢＡＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｂ）それぞれ配列番号１１７、１３７、５、１１、１４８、及び１０（ＣＣＧ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｃ）それぞれ配列番号１１７、１３７、５、１２、１６１、及び１０（ＣＨＯＴＨＩＡ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｄ）それぞれ配列番号１２７、１３９、５、１４、１６２、及び１６（ＩＭＧＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列
を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
さらなる態様において、本発明は、
ａ）それぞれ配列番号１１７、１３７、５、８、１４９、及び１０（ＫＡＢＡＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｂ）それぞれ配列番号１１７、１３７、５、１１、１４９、及び１０（ＣＣＧ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｃ）それぞれ配列番号１１７、１３７、５、１２、１６１、及び１０（ＣＨＯＴＨＩＡ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｄ）それぞれ配列番号１２７、１３９、５、１４、１６２、及び１６（ＩＭＧＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列
を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
さらなる態様において、本発明は、
ａ）それぞれ配列番号１１７、１３７、５、１４２、１５１、及び１０（ＫＡＢＡＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｂ）それぞれ配列番号１１７、１３７、５、１４４、１５１、及び１０（ＣＣＧ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｃ）それぞれ配列番号１１７、１３７、５、１２、１６１、及び１０（ＣＨＯＴＨＩＡ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｄ）それぞれ配列番号１２７、１３９、５、１４、１６３、及び１６（ＩＭＧＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列
を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
さらなる態様において、本発明は、
ａ）それぞれ配列番号１３５、１４０、５、１４６、１６５、及び１０（ＫＡＢＡＴ／ＣＣＧ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｂ）それぞれ配列番号１３５、１４０、５、１２、１６６、及び１０（ＣＨＯＴＨＩＡ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列；又は
ｃ）それぞれ配列番号１３６、１４１、５、１４、１６７、及び１６（ＩＭＧＴ）のＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３配列
を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
一態様において、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントは、上で挙げられるＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、及びＬ－ＣＤＲ３の組み合わせを含む軽鎖可変領域、並びに上で挙げられるＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３の組み合わせを含む重鎖可変領域を含む。
具体的な実施形態において、これらの例示的な免疫グロブリンの間で切り替えられたＣＤＲ領域を有するキメラ抗体（すなわち、例えば、マウス抗体又はそれに由来するヒト化抗体の１種の１つ又は２つのＣＤＲと、別のマウス抗体又はそれに由来するヒト化抗体由来の類似したＣＤＲとを切り替える）は、有用な抗体を産出し得ることが企図される。
ある特定の実施形態において、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は抗体フラグメントである。様々な抗体フラグメントが上で大まかに論じられており、抗体フラグメントの産生のために開発されている技法がある。フラグメントは、無傷抗体のタンパク質分解的消化により導き出され得る（例えば、Morimoto et al., 1992, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117；及びBrennan et al., 1985, Science 229:81を参照されたい）。代替的に、フラグメントは、組み換え宿主細胞において直接産生され得る。例えば、Ｆａｂ’－ＳＨフラグメントは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から直接回収され得、化学的に共役されてＦ（ａｂ’）2フラグメントを形成し得る（例えば、Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167を参照されたい）。別の手法によって、Ｆ（ａｂ'）2フラグメントは、組み換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。抗体フラグメントの産生のための他の技法は、技能を有する実践者に明らかであろう。したがって、一態様において、本発明は、本明細書に記載されるＣＤＲ、特に、本明細書に記載されるＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、及びＨ－ＣＤＲ３の組み合わせの１種を含む抗体フラグメントを提供する。さらなる態様において、本発明は、本明細書に記載される可変領域、例えば本明細書に記載される軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の組み合わせの１種を含む抗体フラグメントを提供する。
ある特定の実施形態は、配列番号１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、又は１８３の重鎖配列との組み合わせで配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７６、又は１７６のいずれかの軽鎖配列を含むヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体のＦ（ａｂ'）2フラグメントを含む。そのような実施形態は、そのようなＦ（ａｂ'）2を含む無傷抗体を含み得る。
一部の実施形態において、抗体又は抗体フラグメントは、エフェクター機能を媒介する定常領域を含む。定常領域は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）応答を提供し得る。エフェクタードメインは、例えばＩｇ分子のＦｃ領域であり得る。
抗体のエフェクタードメインは、あらゆる適切な脊椎動物種及びアイソタイプ由来のものであり得る。種々の動物種由来のアイソタイプは、エフェクター機能を媒介する能力が異なる。例えば、ＣＤＣ及びＡＤＣＣ／ＡＤＣＰを媒介するヒト免疫グロブリンの能力は、一般的に、それぞれＩｇＭ≒ＩｇＧ1≒ＩｇＧ3＞ＩｇＧ2＞ＩｇＧ4及びＩｇＧ1≒ＩｇＧ3＞ＩｇＧ2／ＩｇＭ／ＩｇＧ4の順序にある。ネズミ科免疫グロブリンは、一般的に、それぞれネズミ科ＩｇＭ≒ＩｇＧ3＞＞ＩｇＧ2b＞ＩｇＧ2a＞＞ＩｇＧ1及びＩｇＧ2b＞ＩｇＧ2a＞ＩｇＧ1＞＞ＩｇＧ3の順序でＣＤＣ及びＡＤＣＣ／ＡＤＣＰを媒介する。別の例において、ネズミ科ＩｇＧ2aはＡＤＣＣを媒介し、一方でネズミ科ＩｇＧ2a及びＩｇＭの両方はＣＤＣを媒介する。
抗体改変
ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体及び作用物質は、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントの改変を含み得る。例えば、エフェクター機能に関して抗体を改変して、がんを治療することにおける抗体の有効性を増強することが望ましい可能性がある。１種のそのような改変は、Ｆｃ領域へのシステイン残基の導入であり、それによってこの領域における鎖間ジスルフィド結合形成を可能にする。このようにして作出されたホモ二量体抗体は、向上した内在化能並びに／又は増加した補体媒介性細胞殺傷及び／若しくは抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有し得る。例えば、Caron et al., 1992, J. Exp Med. 176:1191-1195；及びShopes, 1992, J. Immunol. 148:2918-2922を参照されたい。増強した抗腫瘍活性を有するホモ二量体抗体は、Wolff et al., 1993, Cancer Research 53: 2560-2565に記載されるヘテロ二官能性架橋剤を使用しても調製され得る。代替的に、二重のＦｃ領域を含有するように抗体を操作し得、抗体の補体溶解（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｌｙｓｉｓ）及びＡＤＣＣ能を増強する。Stevenson et al., 1989, Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230を参照されたい。
ＡＤＣＣを支持する向上した能力を有する抗体は、それらのＦｃ領域のグリコシル化パターンを改変することによって作出されている。ＣH2ドメインにおけるアスパラギン残基Ｎ２９７における抗体グリコシル化は、ＡＤＣＣにとっての前提条件のＩｇＧとＦｃγ受容体との間の相互作用に関わることから、これが可能である。分岐Ｎ－アセチルグルコサミンの増加又はフコースの低下等、グリコシル化の変更を有する抗体を発現するように、宿主細胞株が操作されている。フコース低下は、分岐Ｎ－アセチルグルコサミンの存在を増加させることがするよりも、ＡＤＣＣ活性により大きな増強を提供する。さらに、低フコース抗体によるＡＤＣＣの増強は、ＦｃγＲＩＩＩａ Ｖ／Ｆ多型とは無関係である。
抗体のＦｃ領域のアミノ酸配列を改変することは、ＡＤＣＣを増強するグリコシル化操作の代替策である。Ｆｃγ受容体に対するヒトＩｇＧ1上の結合部位は、広範な変異分析によって決定されている。これは、ＦｃγＲＩＩＩａに対する結合親和性を増加させ且つインビトロでＡＤＣＣを増強するＦｃ変異を有するヒト化ＩｇＧ1抗体の作出につながった。付加的に、Ｆｃ変種は、結合特性の多くの異なる並べ替え、例えば他のＦｃγＲ受容体への変わらない又は減退した結合を有する特異的ＦｃγＲ受容体への結合の向上を用いて獲得されている。
別の態様は、化学療法剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、若しくは動物起源の酵素的に活性な毒素、又はそのフラグメント）、又は放射性同位体（すなわち、ラジオコンジュゲート）等の細胞傷害剤にコンジュゲートしたヒト化抗体又はそのフラグメントを含むイムノコンジュゲートを含む。
そのようなイムノコンジュゲートの作出において有用な化学療法剤は、上で記載されている。有用なイムノコンジュゲートを形成するために使用され得る酵素的に活性な毒素及びそのフラグメントは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ）、ニガウリ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サボンソウ（Ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、トリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）等を含む。多様な放射性核種が、ラジオコンジュゲートしたヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の産生に使用可能である。例は、212Ｂｉ、131Ｉ、131Ｉｎ、90Ｙ、及び186Ｒｅを含む。
ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体及び細胞傷害剤又は化学療法剤のコンジュゲートは、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジポイミド酸ジメチルＨＣＬ等）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジル等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒｅｌｄｅｈｙｄｅ）等）、ｂｉｓ－アジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ｂｉｓ－ジアゾニウム誘導体（ｂｉｓ－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トルエン２，６－ジイソシアネート等）、及びｂｉｓ－活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン等）等の多様な二官能性タンパク質共役剤を使用して、公知の方法によって作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Vitetta et al., 1987, Science 238:1098に記載されるように調製され得る。炭素－１４標識１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドのコンジュゲーションのための例示的なキレート剤である。コンジュゲートは、切断可能なリンカーを用いても形成され得る。
本明細書に開示されるヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、イムノリポソームとしても製剤化され得る。抗体を含有するリポソームは、Epstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688；Hwang et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030；並びに米国特許第４，４８５，０４５号及び第４，５４４，５４５号に記載される等、当技術分野において公知の方法によって調製される。増強した循環時間を有するリポソームは、例えば米国特許第５，０１３，５５６号に開示される。
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、及びＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法によって作出され得る。リポソームを規定の細孔サイズのフィルターから押し出して、所望の直径を有するリポソームを産出する。本明細書に開示される抗体のＦａｂ'フラグメントは、ジスルフィド交換反応により、Martin et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:286-288に記載されるようにリポソームにコンジュゲートされ得る。化学療法剤（ドキソルビシン等）は、リポソーム内に含有されてもよい。例えば、Gabizon et al., 1989, J. National Cancer Inst. 81(19):1484を参照されたい。
本明細書に記載され且つ開示される抗体は、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤）を活性抗がん薬に変換するプロドラッグ活性化酵素に抗体をコンジュゲートすることによって、ＡＤＥＰＴ（抗体指向性酵素プロドラッグ療法）手順においても使用され得る。例えば、ＷＯ８１／０１１４５、ＷＯ８８／０７３７８、及び米国特許第４，９７５，２７８号を参照されたい。ＡＤＥＰＴに有用なイムノコンジュゲートの酵素構成要素は、プロドラッグに対して、それをそのより活性な細胞傷害性形態に変換するようなやり方で作用し得る酵素である。ＡＤＥＰＴにおいて有用である具体的な酵素は、ホスフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するためのアルカリホスファターゼ；サルフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するためのアリールスルファターゼ；非毒性５－フルオロシトシンを抗がん薬５－フルオロウラシルに変換するためのシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するためのセラチア（ｓｅｒｒａｔｉａ）プロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、及びカテプシン（カテプシンＢ及びＬ等）等のプロテアーゼ；Ｄ－アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換するためのＤ－アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するためのβ－ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼ等の炭水化物切断酵素；β－ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するためのβ－ラクタマーゼ；並びに、それらのアミン窒素で、それぞれフェノキシアセチル又はフェニルアセチル基で誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するためのペニシリンＶアミダーゼ又はペニシリンＧアミダーゼ等のペニシリンアミダーゼを含むが、それらに限定されるわけではない。代替的に、酵素活性を有する抗体（「アブザイム（ａｂｚｙｍｅ）」）を使用して、プロドラッグを遊離活性薬物に変換し得る（例えば、Massey, 1987, Nature 328: 457-458を参照されたい）。抗体－アブザイムコンジュゲートは、例えば上で論じられるヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体／ヘテロ二官能性架橋試薬に酵素を共有結合で結合することによる、腫瘍細胞集団へのアブザイムの送達のための公知の方法によって調製され得る。代替的に、上で記載される酵素の少なくとも機能的に活性な部分に連結された、本明細書に開示される抗体の少なくとも抗原結合領域を含む融合タンパク質は、組み換えＤＮＡ技法を使用して構築され得る（例えば、Neuberger et al., 1984, Nature 312:604-608を参照されたい）。
ある特定の実施形態において、例えば組織透過性を増加させるために、無傷抗体よりもむしろヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体フラグメントを使用することが望ましい可能性がある。その血清半減期を増加させるために、抗体フラグメントを改変することが望ましい可能性がある。これは、例えば抗体フラグメントへのサルベージ受容体結合エピトープの組み込みによって達成され得る。一方法において、抗体フラグメントの適当な領域を変更し得る（例えば、変異させる）、又はエピトープをペプチドタグに組み込み得、それを次いで、例えばＤＮＡ若しくはペプチド合成によって、末端で若しくは中央で抗体フラグメントに融合する。例えば、ＷＯ９６／３２４７８を参照されたい。
他の実施形態において、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の共有結合性改変も含まれる。共有結合性改変は、システイニル残基、ヒスチジル残基、リシニル及びアミノ末端残基、アルギニル残基、チロシル残基、カルボキシル側基（アスパルチル又はグルタミル）、グルタミニル及びアスパラギニル残基、又はセリル若しくはトレオニル残基の改変を含む。別のタイプの共有結合性改変は、抗体にグリコシドを化学的又は酵素的に共役することを伴う。そのような改変は、化学合成によって、又は適用可能な場合には、抗体の酵素的若しくは化学的切断によって行われ得る。抗体の共有結合性改変の他のタイプは、抗体の標的アミノ酸残基と、選択された側鎖又はアミノ若しくはカルボキシ末端残基と反応し得る有機誘導体化剤とを反応させることによって、分子内に導入され得る。
抗体上に存在するあらゆる炭水化物部分の除去は、化学的又は酵素的に遂行され得る。化学的脱グリコシル化は、Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52によって及びEdge et al., 1981, Anal. Biochem., 118:131によって記載される。抗体上の炭水化物部分の酵素的切断は、Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol 138:350によって記載されるように、多様なエンド－及びエキソ－グリコシダーゼの使用によって達成され得る。
別のタイプの有用な共有結合性改変は、米国特許第４，６４０，８３５号、米国特許第４，４９６，６８９号、米国特許第４，３０１，１４４号、米国特許第４，６７０，４１７号、米国特許第４，７９１，１９２号、及び米国特許第４，１７９，３３７号のうちの１つ又は複数に明記される様式で、多様な非タンパク性ポリマー、例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンのうちの１種に抗体を連結することを含む。
ヒト化及びアミノ酸配列変種
抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体のアミノ酸配列変種は、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体ＤＮＡに適当なヌクレオチド変化を導入することによって、又はペプチド合成によって調製され得る。そのような変種は、例えば、本明細書における例の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又はそれへの挿入、及び／又はその置換を含む。最終的な構築物が所望の特徴を所有するという条件で、欠失、挿入、及び置換のあらゆる組み合わせを行って最終的な構築物に到達する。アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数又は位置を変化させる等、ヒト化又は変種抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の翻訳後過程も変更し得る。
変異誘発のための好ましい場所である、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体のある特定の残基又は領域の特定のための有用な方法は、Cunningham及びWells（Science, 244:1081-1085 (1989)）によって記載される「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。ここでは、残基又は標的残基の群が特定され（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ等の荷電残基）、中性の又は負に帯電したアミノ酸（典型的にはアラニン）によって置き換えられて、アミノ酸とＩＬ１ＲＡＰ抗原との相互作用に影響を及ぼす。置換に対して機能的感受性を示すそうしたアミノ酸場所は、次いで、置換の部位における又はそれに対するさらなる又は他の変種を導入することによって精密化される。ゆえに、アミノ酸配列変動を導入するための部位はあらかじめ定められているものの、変異それ自体の性質があらかじめ定められている必要はない。例えば、所与の部位における変異の性能を分析するために、アラニンスキャニング又はランダム変異誘発を標的コドン又は領域において行い、発現した抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体変種を、所望の活性についてスクリーニングする。
アミノ酸配列挿入は、長さが１個の残基から、１００個以上の残基を含有するポリペプチドに及ぶアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例は、エピトープタグに融合した抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を含む。抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体分子の他の挿入変種は、抗体の血清半減期を増加させる酵素又はポリペプチドの抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体のＮ又はＣ末端への融合を含む。
別のタイプの変種は、アミノ酸置換変種である。これらの変種は、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体分子における少なくとも１個のアミノ酸残基を除去され、異なる残基がその箇所に挿入される。置換変異誘発のための最も関心対象の部位は超可変領域を含むが、ＦＲ変更も企図される。保存的置換は、「好ましい置換」という見出しの下で表２６に示される。そのような置換が生物学的活性の変化をもたらす場合には、「例示的な置換」と表示される又はアミノ酸クラスに関して下でさらに記載されるより実質的な変化が導入され得、産物がスクリーニングされ得る。
Figure 2024505674000062
タンパク質化学において、抗体の生物学的特性は、（ａ）例えばシート若しくはヘリックス立体構造のような、置換のエリアにおけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷若しくは疎水性、又は（ｃ）側鎖の大きさを維持することに対するそれらの効果が著しく異なる置換を選択することによって遂行され得ることが一般的に認められている。天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいて群に分けられる：
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｉｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及び
（６）芳香族：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
非保存的置換は、別のクラスの代わりにこれらのクラスの１種のうちのメンバーを交換することを伴うであろう。
ヒト化又は変種抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の適正な立体構造を維持することに関わらないいかなるシステイン残基も、また、一般的にセリンで置換されて、分子の酸化安定性を向上させ得る、異常な架橋を阻止し得る、又は細胞傷害性若しくは細胞増殖抑制性化合物へのコンジュゲーションの確立された地点を提供し得る。逆に、システイン結合を抗体に付加して、その安定性を向上させ得る（特に、抗体が、Ｆｖフラグメント等の抗体フラグメントである場合）。
置換変種の１タイプは、親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体）の１つ又は複数の超可変領域残基を置換することを伴う。一般的に、さらなる開発のために選択された、結果として生じる変種は、それらがそれから作出される親抗体と比べて向上した生物学的特性を有するであろう。そのような置換変種を作出するための好都合なやり方は、ファージディスプレイを使用した親和性成熟である。簡潔には、いくつかの超可変領域部位（例えば、６～７個の部位）を変異させて、各部位におけるすべての考え得るアミノ置換を作出する。このようにして作出された抗体変種は、各粒子内にパッケージされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物への融合体として繊維状ファージ粒子から１価の形で呈示される。ファージにより呈示された変種は、次いでそれらの生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。改変のための候補超可変領域部位を特定するために、アラニンスキャニング変異誘発を実施して、抗原結合に著しく寄与する超可変領域残基を特定し得る。代替的又は加えて、抗原－抗体複合体の結晶構造を分析して、抗体とヒトＩＬ１ＲＡＰとの間の接触点を特定することが有益であり得る。そのような接触残基及び近隣残基は、本明細書に詳述される技法に従った置換の候補である。そのような変種が作出されると、変種のパネルを本明細書に記載されるスクリーニングに供し、１種又は複数の関連アッセイにおいて優れた特性を有する抗体をさらなる開発のために選択し得る。
抗体のアミノ酸変種の別のタイプは、抗体の元のグリコシル化パターンを変更する。「変更する」によって、抗体に見出される１つ若しくは複数の炭水化物部分を欠失させること、及び／又は抗体に存在しない１つ若しくは複数のグリコシル化部位を付加することを意味する。
一部の実施形態において、本発明の抗体を改変してグリコシル化部位を付加することが望ましい可能性がある。抗体のグリコシル化は、典型的にＮ－結合型又はＯ－結合型のいずれかである。Ｎ－結合型とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の付着を指す。Ｘがプロリンを除くあらゆるアミノ酸である、トリペプチド配列のアスパラギン－Ｘ－セリン及びアスパラギン－Ｘ－トレオニンは、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的付着のための認識配列である。ゆえに、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的グリコシル化部位を創出する。Ｏ－結合型グリコシル化とは、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はトレオニンへの、糖類のＮ－アセチルガラクトサミン（ａｃｅｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）、ガラクトース、又はキシロースのうちの１種の付着を指すが、５－ヒドロキシプロリン又は５－ヒドロキシリジンも使用され得る。ゆえに、所与のタンパク質、例えば抗体をグリコシル化するために、タンパク質のアミノ酸配列を、上で記載されるトリペプチド配列の１種又は複数を含有するように操作する（Ｎ－結合型グリコシル化部位に関して）。変更は、元の抗体の配列への１つ又は複数のセリン又はトレオニン残基の付加又はそれによる置換によっても行われ得る（Ｏ－結合型グリコシル化部位に関して）。
抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体のアミノ酸配列変種をコードする核酸分子は、当技術分野において公知の多様な方法によって調製される。これらの方法は、天然供給源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列変種の場合）、又は抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体のより早期に調製された変種若しくは非変種型についてのオリゴヌクレオチド媒介性（若しくは部位指向性）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、及びカセット変異誘発による調製を含むが、それらに限定されるわけではない。
ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、及び組み換え法
他の実施形態は、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含むベクター及び宿主細胞、並びにヒト化抗体の産生のための組み換え技法を包含する。単離されたポリヌクレオチドは、例えば全長モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）2、及びＦｖフラグメント、ダイアボディ、線状抗体、単鎖抗体分子、並びに抗体フラグメントから形成される多特異性抗体を含めた、あらゆる所望の形態の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体をコードし得る。
一部の実施形態は、配列番号１７～６６のいずれかのアミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントの軽鎖可変領域をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態は、配列番号６７～１１６のアミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントの重鎖可変領域をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチドを含む。
一部の実施形態は、配列番号１７、３６、４０、４７、５０、５１、及び５２のいずれかのアミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントの軽鎖可変領域をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態は、配列番号６７、８６、９０、９７、１００、１０１、及び１０２のアミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントの重鎖可変領域をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチドを含む。
一態様において、単離されたポリヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号１７及び配列番号１６７；それぞれ配列番号３６及び配列番号８６；それぞれ配列番号４０及び配列番号９０；それぞれ配列番号４７及び配列番号９７；それぞれ配列番号５０及び配列番号１００；それぞれ配列番号５１及び配列番号１０１；並びにそれぞれ配列番号５２及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖及び重鎖可変領域を有する抗体又は抗体フラグメントをコードする。
ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はそのフラグメント若しくは鎖をコードする配列を含むポリヌクレオチドは、当技術分野において公知のように、１種又は複数の調節又は制御配列に融合され得、当技術分野において公知のように、適切な発現ベクター又は宿主細胞に含有され得る。重鎖又は軽鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド分子のそれぞれは、ヒト定常ドメイン等の定常ドメインをコードするポリヌクレオチド配列に独立して融合され得、無傷抗体の産生を可能にする。代替的に、ポリヌクレオチド又はその一部分は一緒に融合され得、単鎖抗体の産生のための鋳型を提供する。
組み換え産生のために、抗体をコードするポリヌクレオチドは、クローニング（ＤＮＡの増幅）のための又は発現のための複製可能なベクターに挿入される。組み換え抗体を発現させるための多くの適切なベクターが使用可能である。ベクター構成要素は、一般的に、以下のもの：シグナル配列、複製の起点、１種又は複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列のうちの１種又は複数を含むが、それらに限定されるわけではない。
ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、抗体が、成熟タンパク質又はポリペプチドのアミノ末端において、特異的切断部位を有するシグナル配列又は他のポリペプチド等、異種ポリペプチドと融合されている融合ポリペプチドとしても産生され得る。選択される異種シグナル配列は、典型的に、宿主細胞によって認識され且つプロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものである。ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体シグナル配列を認識せず且つプロセシングしない原核宿主細胞に関しては、シグナル配列は、原核生物シグナル配列によって置換され得る。シグナル配列は、例えばアルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、リポタンパク質、耐熱性エンテロトキシンＩＩリーダー等であり得る。酵母分泌に関しては、天然シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼアルファ因子（サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）及びクルイベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）α因子リーダーを含む）、酸性ホスファターゼ、Ｃ．アルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）グルコアミラーゼ、又はＷＯ９０／１３６４６に記載されるシグナルから獲得されるリーダー配列で置換され得る。哺乳類細胞では、哺乳類シグナル配列、並びにウイルス分泌リーダー、例えば単純ヘルペスｇＤシグナルが使用され得る。そのような前駆体領域に対するＤＮＡは、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体をコードするＤＮＡにリーディングフレームでライゲートされる。
発現及びクローニングベクターは、ベクターが１種又は複数の選択された宿主細胞において複製するのを可能にする核酸配列を含有する。一般的に、クローニングベクターにおいて、この配列は、ベクターが宿主染色体ＤＮＡから独立して複製するのを可能にし、複製の起点又は自律複製配列を含むものである。そのような配列は、多様な細菌、酵母、及びウイルスに対して周知である。プラスミドｐＢＲ３２２由来の複製の起点は、ほとんどのグラム陰性細菌に適切であり、２－ν．プラスミド起点は酵母に適切であり、様々なウイルス起点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ、及びＢＰＶ）は、哺乳類細胞においてクローニングベクターに有用である。一般的に、複製の起点構成要素は、哺乳類発現ベクターに必要とされない（ＳＶ４０起点は、それが初期プロモーターを含有するという理由だけで、典型的に使用され得る）。
発現及びクローニングベクターは、発現の特定を容易にする選択可能なマーカーをコードする遺伝子を含有し得る。典型的な選択可能なマーカー遺伝子は、抗生物質又は他の毒素、例えばアンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、若しくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質をコードする、又は代替的に、補完的栄養要求性欠損（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ａｕｘｏｔｒｏｐｈｉｃ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ）である、又は他の代替策では、複合培地に存在しない特異的栄養素、例えばバシラス（Ｂａｃｉｌｌｉ）に対してＤ－アラニンラセマーゼをコードする遺伝子を供給する。
選択スキームの１つの例は、宿主細胞の成長を止める薬物を利用する。異種遺伝子による形質転換に成功しているそうした細胞は、薬物耐性を付与するタンパク質を産生し、ゆえに選択レジメンを生き残る。そのような優性選択の例は、薬物ネオマイシン、ミコフェノール酸、及びハイグロマイシンを使用する。哺乳類細胞に対するよく見られる選択可能なマーカーは、ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸還元酵素）、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン－Ｉ及び－ＩＩ（霊長類メタロチオネイン遺伝子等）、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ等、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体をコードする核酸を取り込む能力がある細胞の特定を可能にするものである。ＤＨＦＲ選択遺伝子で形質転換された細胞は、まず、ＤＨＦＲの競合アンタゴニストであるメトトレキサート（Ｍｔｘ）を含有する培養培地中で形質転換体のすべてを培養することによって特定される。野生型ＤＨＦＲが採用される場合の適当な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性を欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株（例えば、ＤＧ４４）である。
代替的に、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質、及びアミノグリコシド３'－ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）等の別の選択可能なマーカーをコードするＤＮＡ配列で形質転換された又は共形質転換された宿主細胞（特に、内因性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）は、アミノグリコシド系（ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｉｃ）抗生物質、例えばカナマイシン、ネオマイシン、又はＧ４１８等の選択可能なマーカーに対する選択剤を含有する培地における細胞成長によって選択され得る。例えば、米国特許第４，９６５，１９９号を参照されたい。
宿主細胞として酵母細胞において組み換え産生を実施する場合、酵母プラスミドＹＲｐ７に存在するＴＲＰ１遺伝子（Stinchcomb et al., 1979, Nature 282: 39）が、選択可能なマーカーとして使用され得る。ＴＲＰ１遺伝子は、トリプトファンにおいて成長する能力を欠く酵母の変異体系統、例えばＡＴＣＣ番号４４０７６又はＰＥＰ４－１（Jones, 1977, Genetics 85:12）に選択マーカーを提供する。酵母宿主細胞ゲノムにおけるｔｒｐ１損傷の存在は、次いで、トリプトファンの非存在下における成長によって、形質転換を検出するための有効な環境を提供する。同様に、ＡＴＣＣ ２０，６２２及び３８，６２６等のＬｅｕ２ｐ欠損酵母系統は、ＬＥＵ２遺伝子を持つ公知のプラスミドによって補完される。
加えて、１．６μｍ環状プラスミドｐＫＤ１に由来するベクターは、クルイベロミセス酵母の形質転換に使用され得る。代替的に、組み換え仔牛キモシンの大規模産生のための発現システムがＫ．ラクティス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）に関して報告された（Van den Berg, 1990, Bio/Technology 8:135）。クルイベロミセスの産業用系統による成熟組み換えヒト血清アルブミンの分泌のための安定な多コピー発現ベクターも開示されている（Fleer et al., 1991, Bio/Technology 9:968-975）。
発現及びクローニングベクターは、通例、宿主生物によって認識され、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はそのポリペプチド鎖をコードする核酸分子に作動的に連結されているプロモーターを含有する。原核生物宿主との使用に適切なプロモーターは、ｐｈｏＡプロモーター、β－ラクタマーゼ及びラクトースプロモーターシステム、アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーターシステム、並びにｔａｃプロモーター等のハイブリッドプロモーターを含む。他の公知の細菌プロモーターも適切である。細菌システムにおける使用のためのプロモーターは、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体をコードするＤＮＡに作動的に連結されたシャイン・ダルガノ（Ｓ．Ｄ．）配列も含有するであろう。
多くの真核生物プロモーター配列が公知である。事実上すべての真核生物遺伝子は、転写が始まる部位からおよそ２５～３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写の開始から７０～８０塩基上流に見出される別の配列はＣＮＣＡＡＴ領域であり、Ｎはあらゆるヌクレオチドであり得る。ほとんどの真核生物遺伝子の３'末端には、コード配列の３'末端へのポリＡテールの付加のためのシグナルであり得るＡＡＴＡＡＡ配列がある。これらの配列のすべては、真核生物発現ベクターに適切に挿入される。
酵母宿主との使用のための適切な促進配列の例は、３－ホスホグリセリン酸キナーゼ、又はエノラーゼ、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース－６－リン酸イソメラーゼ、３－ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、グルコースリン酸イソメラーゼ、及びグルコキナーゼ等の他の糖分解酵素に対するプロモーターを含む。
誘導性プロモーターは、成長条件によって制御される転写の付加的な利点を有する。これらは、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソシトクロムＣ、酸性ホスファターゼ、窒素代謝と関連した誘導体酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ、並びにマルトース及びガラクトース利用に関与する酵素に対する酵母プロモーター領域を含む。酵母発現における使用のための適切なベクター及びプロモーターは、ＥＰ７３，６５７にさらに記載される。酵母エンハンサーも、酵母プロモーターと有利に使用される。
哺乳類宿主細胞におけるベクターからのヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体転写は、そのようなプロモーターが宿主細胞システムと適合するという条件で、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２等）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、及びシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）等のウイルスのゲノムから、異種哺乳類プロモーター、例えばアクチンプロモーター若しくは免疫グロブリンプロモーターから、又は熱ショックプロモーターから獲得されるプロモーターによって制御される。
ＳＶ４０ウイルスの初期及び後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製の起点も含有するＳＶ４０制限フラグメントとして好都合に獲得される。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ Ｅ制限フラグメントとして好都合に獲得される。ベクターとしてウシパピローマウイルスを使用して哺乳類宿主においてＤＮＡを発現させるためのシステムは、米国特許第４，４１９，４４６号に開示される。このシステムの改変は、米国特許第４，６０１，９７８号に記載される。単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼプロモーターの制御下での、マウス細胞におけるヒトｐ－インターフェロンｃＤＮＡの発現を開示するReyes et al., 1982, Nature 297:598-601も参照されたい。代替的に、ラウス肉腫ウイルスの長い末端反復がプロモーターとして使用され得る。
組み換え発現ベクターにおいて使用され得る別の有用なエレメントはエンハンサー配列であり、それは、高等真核生物によるヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体をコードするＤＮＡの転写を増加させるために使用される。哺乳類遺伝子（例えば、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、及びインスリン）から、多くのエンハンサー配列が現在公知である。しかしながら、典型的に、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーが使用される。例は、複製起点の後ろ側（ｂｐ１００～２７０）にあるＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後ろ側にあるポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーを含む。真核生物プロモーターの活性化のための増強エレメントの記載に関しては、Yaniv, 1982, Nature 297:17-18も参照されたい。エンハンサーは、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体コード配列に対して５'又は３'位でベクター内にスプライスされ得るが、好ましくはプロモーターから５'部位に位置する。
真核宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、又は他の多細胞生物由来の有核細胞）において使用される発現ベクターは、転写の終結のために及びｍＲＮＡを安定させるために必要な配列も含有し得る。そのような配列は、真核生物又はウイルスＤＮＡ又はｃＤＮＡの５'、及び時には３'非翻訳領域から一般に入手可能である。これらの領域は、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分に、ポリアデニル化フラグメントとして転写されるヌクレオチドセグメントを含有する。１種の有用な転写終結構成要素は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。ＷＯ９４／１１０２６及びその中に開示される発現ベクターを参照されたい。一部の実施形態において、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、ＣＨＥＦシステムを使用して発現され得る。（例えば、米国特許第５，８８８，８０９号を参照されたい；その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。）
本明細書におけるベクターにおけるＤＮＡをクローニングする又は発現させるための適切な宿主細胞は、上で記載される原核生物、酵母、又は高等真核生物細胞である。この目的のための適切な原核生物は、グラム陰性又はグラム陽性生物等の真正細菌、例えばエスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、例えば大腸菌、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）、クラブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、例えばサルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セラチア、例えばセラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ）、及び赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）等の腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、並びに枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）（例えば、１９８９年４月１２日に公開されたＤＤ２６６，７１０に開示されるＢ．リケニフォルミス４１ Ｐ）等のバシラス、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）等のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、並びにストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）を含む。１種の好ましい大腸菌クローニング宿主は大腸菌２９４（ＡＴＣＣ ３１，４４６）であるが、大腸菌Ｂ、大腸菌Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ ３１，５３７）、及び大腸菌Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ ２７，３２５）等の他の系統は適切である。これらの例は、限定的というよりむしろ例示的である。
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母等の真核微生物は、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体コードベクターに対する適切なクローニング又は発現宿主である。出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、すなわちよく見られるパン屋の酵母は、下等真核宿主微小生物の間で最もよく使用される。しかしながら、分裂酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）；例えばＫ．ラクティス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）、Ｋ．フラギリス（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）（ＡＴＣＣ １２，４２４）、Ｋ．ブルガリクス（Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）（ＡＴＣＣ １６，０４５）、Ｋ．ウィッケラミイ（Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ）（ＡＴＣＣ ２４，１７８）、Ｋ．ワルチイ（Ｋ．ｗａｌｔｉｉ）（ＡＴＣＣ ５６，５００）、Ｋ．ドロソフィラルム（Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ）（ＡＴＣＣ ３６，９０６）、Ｋ．サーモトレランス（Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、及びＫ．マルシアヌス（Ｋ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ）等のクルイベロミセス宿主；ヤロウイア（ｙａｒｒｏｗｉａ）（ＥＰ４０２，２２６）；ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｓ）（ＥＰ１８３，０７０）；カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）；トリコデルマ・レーシア（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ）（ＥＰ２４４，２３４）；アカパンカビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）；シュワニオミセス・オシデンタリス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）等のシュワニオミセス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ）；並びに、例えばアカパンカビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、アオカビ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、トリポクラジウム（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）、並びにＡ．ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）及びクロコウジカビ（Ａ．ｎｉｇｅｒ）等のアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）宿主等の糸状菌等、いくつかの他の属、種、及び系統が、一般に使用可能であり、本明細書において有用である。
グリコシル化されたヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の発現のための適切な宿主細胞は、多細胞生物に由来する。無脊椎動物細胞の例は、例えば数多くのバキュロウイルス系統及び変種、並びにツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（毛虫）、ネッタイシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ）（蚊）、ヒトスジシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ）（蚊）、キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）（ミバエ）、及びカイコ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）（蚕）等の宿主由来の相当する許容昆虫宿主細胞を含めた、植物及び昆虫細胞を含む。トランスフェクションのための多様なウイルス系統、例えばオートグラファ・カリフォルニア（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）ＮＰＶのＬ－１変種、及びカイコＮＰＶのＢｍ－５系統が公的に入手可能であり、そのようなウイルスは、特にツマジロクサヨトウ細胞のトランスフェクションに使用され得る。
綿、トウモロコシ、ジャガイモ、大豆、ペチュニア、トマト、及びタバコの植物細胞培養物も宿主として利用され得る。
別の態様において、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰの発現は、脊椎動物細胞において行われる。培養下の脊椎動物細胞の増殖（組織培養）は、ルーチン的手順になっており、技法は広く使用可能である。有用な哺乳類宿主細胞株の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ヒト胎児腎臓株（２９３、又は浮遊培養における成長のためにサブクローニングされた２９３細胞（Graham et al., 1977, J. Gen Virol. 36: 59））、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ１（ＣＨＯ、Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216；例えばＤＧ４４）、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather, 1980, Biol. Reprod. 23:243-251）、サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ科腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲ１細胞（Mather et al., 1982, Annals N.Y. Acad. Sci. 383: 44-68）、ＭＲＣ ５細胞、ＦＳ４細胞、及びヒト肝細胞癌株（Ｈｅｐ Ｇ２）である。
宿主細胞は、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体産生のために上で記載される発現又はクローニングベクターで形質転換され、プロモーターを誘導する、形質転換体を選択する、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために、必要に応じて改変された従来の栄養培地中で培養される。
本明細書に記載されるヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を産生するために使用される宿主細胞は、多様な培地中で培養され得る。Ｈａｍ'ｓ Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．）、及びダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．）等の市販の培地は、宿主細胞を培養するのに適切である。加えて、Ham et al., 1979, Meth. Enz. 58: 44、Barnes et al., 1980, Anal. Biochem. 102: 255、米国特許第４，７６７，７０４号、米国特許第４，６５７，８６６号、米国特許第４，９２７，７６２号、米国特許第４，５６０，６５５号、米国特許第５，１２２，４６９号、ＷＯ９０／１０３４３０、及びＷＯ８７／００１９５のうちの１つ又は複数に記載される培地のいずれかは、宿主細胞に対する培養培地として使用され得る。これらの培地のいずれかは、ホルモン、並びに／又は他の成長因子（インスリン、トランスフェリン、又は上皮成長因子等）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、及びリン酸塩等）、緩衝剤（ＨＥＰＥＳ等）、ヌクレオチド（アデノシン及びチミジン等）、抗生物質（ゲンタマイシン等）、微量元素（マイクロモル域にある最終濃度で通例存在する無機化合物として定義される）、及びグルコース若しくは等価のエネルギー源を必要に応じて補給され得る。他の補給剤も、当業者に公知であろう適当な濃度で含まれ得る。温度、ｐＨ等の培養条件は、発現のために選択された宿主細胞を用いて以前に使用されたものであり、当業者に明らかであろう。
組み換え技法を使用する場合、抗体は、細胞内に、ペリプラズム腔において産生され得る、又は培地に直接分泌され得る。抗体が細胞内に産生される場合、細胞は、第１の工程としてタンパク質を放出するために分断され得る。宿主細胞であれ溶解されたフラグメントであれ、微粒子状残屑は、例えば遠心分離又は限外濾過によって除去され得る。Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167は、大腸菌のペリプラズム腔に分泌される抗体を単離するための手順を記載する。簡潔には、細胞ペーストを、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、及びフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で約３０分間にわたって融解する。細胞残屑は、遠心分離によって除去され得る。抗体が培地に分泌される場合、そのような発現システムからの上清を、一般的にまず、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えばＡｍｉｃｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して濃縮する。ＰＭＳＦ等のプロテアーゼ阻害剤が、タンパク質分解を阻害するために先行工程のいずれかにおいて含まれ得、抗生物質は、偶発的夾雑物の成長を阻止するために含まれ得る。多様な方法を使用して、宿主細胞から抗体を単離し得る。
細胞から調製された抗体組成物は、例えばヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及び親和性クロマトグラフィーを使用して精製され得、親和性クロマトグラフィーは典型的な精製技法である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適切性は、抗体に存在するあらゆる免疫グロブリンＦｃドメインの種及びアイソタイプに依存する。プロテインＡを使用して、ヒトガンマ１、ガンマ２、又はガンマ４重鎖に基づく抗体を精製し得る（例えば、Lindmark et al., 1983 J. Immunol. Meth. 62:1-13を参照されたい）。プロテインＧは、すべてのマウスアイソタイプに対して及びヒトガンマ３に対して推奨される（例えば、Guss et al., 1986 EMBO J. 5:1567-1575を参照されたい）。親和性リガンドが付着されるマトリックスは、最も頻繁にはアガロースであるが、他のマトリックスが使用可能である。制御性細孔ガラス又はポリ（スチレンジビニル）ベンゼン等の機械的に安定なマトリックスは、アガロースを用いて達成され得るよりも速い流速及び短い処理時間を可能にする。抗体がＣH3ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎ．Ｊ．）が精製に有用である。イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）でのクロマトグラフィー、アニオン又はカチオン交換樹脂でのクロマトグラフィー（ポリアスパラギン酸カラム等）、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿等のタンパク質精製のための他の技法も、回収される対象となる抗体に応じて使用可能である。
あらゆる予備的精製工程の後、関心対象の抗体及び夾雑物を含む混合物は、典型的に低い塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍの塩から）で実施される、約２．５～４．５のｐＨの溶出緩衝液を使用した低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供され得る。
本発明の抗体又は抗体フラグメントをコードする単離されたポリヌクレオチド配列によって表されるヌクレオチド配列のすべて又は一部分（例えば、可変領域をコードする部分）に、本明細書に規定される低い、中程度の、及び高いストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする核酸も含まれる。ハイブリダイズする核酸のハイブリダイズする部分は、典型的に長さが少なくとも１５個（例えば、２０、２５、３０、又は５０個）のヌクレオチドである。ハイブリダイズする核酸のハイブリダイズする部分は、抗ＩＬ１ＲＡＰポリペプチド（例えば、重鎖又は軽鎖可変領域）をコードする核酸の一部分若しくはすべての配列又はその相補体と、少なくとも８０％、例えば少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％同一である。本明細書に記載されるタイプのハイブリダイズする核酸は、例えばクローニングプローブ、プライマー、例えばＰＣＲプライマー、又は診断用プローブとして使用され得る。
非治療的使用
本明細書に記載される抗体は、親和性精製剤として有用である。この過程において、抗体は、当技術分野において周知の方法を使用して、プロテインＡ樹脂等の固相に固定される。固定された抗体を、精製される対象となるＩＬ１ＲＡＰタンパク質（又はそのフラグメント）を含有するサンプルと接触させ、その後、支持体を、固定された抗体に結合しているＩＬ１ＲＡＰタンパク質を除いた、サンプルにおける実質的にすべての材料を除去するであろう適切な溶媒で洗浄する。最後に、支持体を、抗体からＩＬ１ＲＡＰタンパク質を放出するであろう別の適切な溶媒で洗浄する。
抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体、例えばヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、ＩＬ１ＲＡＰタンパク質を検出し且つ／又は定量するための、例えば特異的細胞、組織、又は血清におけるＩＬ１ＲＡＰ発現を検出する診断用アッセイにおいても有用である。抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、例えば所与の治療及び／又は阻止レジメンの効能を判定する臨床試験手順の一部として、例えば疾患の発症又は進行をモニターするために診断的に使用され得る。検出は、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を共役することによって促され得る。検出可能な物質の例は、様々な酵素、補欠分子族、蛍光性材料、発光性材料、生物発光性材料、放射性材料、様々な陽電子放出断層撮影を使用した陽電子放出金属、及び非放射性常磁性金属イオンを含む。本発明に従った診断法としての使用のための、抗体にコンジュゲートされ得る金属イオンに関しては、例えば米国特許第４，７４１，９００号を参照されたい。
抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、ＩＬ１ＲＡＰ関連障害（例えば、ＩＬ１ＲＡＰの異常な発現によって特徴付けられる障害）を診断するための、又は対象がＩＬ１ＲＡＰ関連障害を発症する増加したリスクを有するかどうかを判定するための方法において使用され得る。そのような方法は、対象由来の生物学的サンプルとＩＬ１ＲＡＰ抗体とを接触させる工程、及びＩＬ１ＲＡＰへの抗体の結合を検出する工程を含む。「生物学的サンプル」によって、ＩＬ１ＲＡＰを潜在的に発現する個体、細胞株、組織培養物、又は細胞の他の供給源から獲得されたあらゆる生物学的サンプルを意図する。哺乳類から組織生検及び体液を獲得するための方法は、当技術分野において周知である。
一部の実施形態において、方法は、患者サンプルにおけるＩＬ１ＲＡＰのレベルを、対照サンプル（例えば、ＩＬ１ＲＡＰ関連障害を有しない対象）と比較して、患者がＩＬ１ＲＡＰ関連障害を有する又はＩＬ１ＲＡＰ関連障害を発症するリスクがあるかどうかを判定する工程をさらに含み得る。
一部の実施形態において、例えば診断目的のために、抗体を検出可能な部分で標識することが有利であろう。放射性同位体、蛍光標識、酵素基質標識等を含めた、数多くの検出可能な標識が使用可能である。標識は、様々な公知の技法を使用して、抗体と間接的にコンジュゲートされ得る。例えば、抗体はビオチンとコンジュゲートされ得、上で述べられる標識の３種の広いカテゴリーのいずれかはアビジンとコンジュゲートされ得る、又は逆もまた同様である。ビオチンはアビジンに選択的に結合し、ゆえに、標識は、この間接的様式で抗体とコンジュゲートされ得る。代替的に、標識と抗体との間接的コンジュゲーションを達成するために、抗体は、小さなハプテン（ジゴキシン等）とコンジュゲートされ得、上で述べられる種々のタイプの標識の１種は、抗ハプテン抗体（例えば、抗ジゴキシン抗体）とコンジュゲートされる。ゆえに、標識と抗体との間接的コンジュゲーションが達成され得る。
例示的な放射性同位体標識は、35Ｓ、14Ｃ、125Ｉ、3Ｈ、及び131Ｉを含む。抗体は、例えばCurrent Protocols in Immunology, Volumes 1 and 2, 1991, Coligen et al., Ed. Wiley-Interscience, New York, N.Y., Pubs.に記載される技法を使用して、放射性同位体で標識され得る。放射能は、例えばシンチレーション計数によって測定され得る。
例示的な蛍光標識は、希土類キレート（ユーロピウムキレート）に由来する標識、又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、リサミン、フィコエリスリンを含み、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄが使用可能である。蛍光標識は、例えばCurrent Protocols in Immunologyに開示されるもの等、公知の技法により抗体にコンジュゲートされ得る。蛍光は、蛍光光度計を使用して定量され得る。
当技術分野において公知の様々な十分に特徴付けされた酵素－基質標識がある（総説に関しては、例えば米国特許第４，２７５，１４９号を参照されたい）。酵素は、一般的に、様々な技法を使用して測定され得る発色性基質の化学的変更を触媒する。例えば、変更は、分光光度的に測定され得る基質の色変化であり得る。代替的に、酵素は、基質の蛍光又は化学発光を変更し得る。蛍光の変化を定量するための技法は、上で記載される。化学発光基質は、化学反応によって電子的に励起され、次いで、例えば化学発光測定器（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ）を使用して測定され得る光を発し得る、又はエネルギーを蛍光アクセプターに与える。
酵素標識の例は、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ等のルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ウレアーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）等のペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカリドオキシダーゼ（グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ等）、複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｄｉｃ）オキシダーゼ（ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ等）、ラクトペルオキシダーゼ、ミクロペルオキシダーゼ等を含む。抗体に酵素をコンジュゲートするための技法は、例えばO'Sullivan et al., 1981, Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. (J. Langone & H. Van Vunakis, eds.), Academic press, N.Y., 73: 147-166に記載される。
酵素－基質組み合わせの例は、例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）と基質としての過酸化水素（ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）であって、過酸化水素は、オルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ）又は３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン塩酸塩（ＴＭＢ）等の色素前駆体を酸化する；アルカリホスファターゼ（ＡＰ）と発色性基質としてのｐａｒａ－ニトロフェニルリン酸；及びβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ（β－Ｄ－Ｇａｌ）と、ｐ－ニトロフェニル－β－Ｄ－ガラクトシダーゼ等の発色性基質又は蛍光性基質４－メチルウンベリフェリル－β－Ｄ－ガラクトシダーゼを含む。
数多くの他の酵素－基質組み合わせが当業者にとって使用可能である。これらについての一般的総説に関しては、米国特許第４，２７５，１４９号及び米国特許第４，３１８，９８０号を参照されたい。
別の実施形態において、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は非標識で使用され、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体に結合する標識抗体を用いて検出される。
本明細書に記載される抗体は、競合的結合アッセイ、直接的及び間接的サンドイッチアッセイ、並びに免疫沈降アッセイ等、あらゆる公知のアッセイ法において採用され得る。例えば、Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987)を参照されたい。
抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを使用して、ＩＬ－３６受容体へのリガンドの結合を阻害し得る。そのような方法は、細胞（例えば、哺乳類細胞）又は細胞環境に抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントを投与する工程であって、それによって、ＩＬ－３６受容体によって媒介されるシグナル伝達が阻害される、工程を含む。これらの方法は、インビトロ又はインビボで実施され得る。「細胞環境」によって、細胞を取り囲む組織、媒体、又は細胞外マトリックスを意図する。抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体又はフラグメントが、細胞の外側にある及び細胞を取り囲むＩＬ１ＲＡＰ分子に結合し得るような様式で、細胞の細胞環境に投与され、それゆえ、ＩＬ－３６リガンドのその受容体への結合を阻止する。
診断用キット
抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、診断用キット、すなわち、診断用アッセイを実施するための使用説明書を有する、所定の量の試薬のパッケージされた組み合わせにおいて使用され得る。抗体が酵素で標識される場合、キットは、検出可能なクロモフォア又はフルオロフォアを提供する基質前駆体等、酵素によって要求される基質及び補因子を含み得る。加えて、安定剤、緩衝液（例えば、ブロッキング緩衝液又は溶解緩衝液）等、他の添加物が含まれ得る。様々な試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する、試薬の溶液中での濃度を提供するように広く変動し得る。試薬は、溶けると適当な濃度を有する試薬溶液を提供するであろう賦形剤を含めた、通例では凍結乾燥された乾燥粉末として提供され得る。
治療的使用
別の実施形態において、本明細書に開示されるヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、本明細書に記載されるＩＬ１ＲＡＰの発現と関連した様々な障害の治療において有用である。ＩＬ１ＲＡＰ関連障害を治療するための方法は、それを必要とする対象に治療有効量のヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を投与する工程を含む。
ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は作用物質は、非経口、皮下、腹腔内、肺内、及び鼻腔内、並びに局所的免疫抑制治療に望まれる場合には病変内投与（灌流させる、又はそうでなければ、移植前に移植片と抗体とを接触させることを含む）を含めた、あらゆる適切な手段によって投与される。ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は作用物質は、例えば注入として又はボーラスとして投与され得る。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与を含む。加えて、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、特に下降する用量の抗体を用いて、パルス注入によって適切に投与される。一態様において、投薬は、一部には投与が短期間又は慢性であるかどうかに応じて、注射、最も好ましくは静脈内又は皮下注射によって与えられる。
疾患の阻止又は治療に関して、抗体の適当な投薬量は、上で規定されるような治療される対象となる疾患のタイプ、疾患の重症度及び経過、抗体が阻止又は治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴及び抗体への応答、並びに主治医の裁量等、多様な因子に依存するであろう。抗体は、一度に又は一連の治療にわたって患者に適切に投与される。
疾患のタイプ及び重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１～１５ｍｇ／ｋｇ）の抗体は、例えば、１回若しくは複数の別個の投与による、又は連続的注入によるかどうかに関わらず、患者への投与のための初回の候補投薬量である。典型的な１日投薬量は、上で述べられる因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ又はそれを上回る量に及び得る。数日間又はそれよりも長い期間にわたる反復投与に関しては、病状に応じて、疾患症状の所望の抑制が生じるまで、治療は継続される。しかしながら、他の投薬量レジメンが有用であり得る。この療法の進行は、従来の技法及びアッセイによって容易にモニターされる。例示的な投薬レジメンは、ＷＯ９４／０４１８８に開示されるものである。
「抑制」という用語は、疾患の１種又は複数の特徴の低減を意味するために、「改善」及び「緩和」と同じ文脈で本明細書において使用される。
抗体組成物は、適正診療規範（ｇｏｏｄ ｍｅｄｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅ）と一致した形で製剤化され、投薬され、投与されるであろう。この文脈における検討のための因子は、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳類、個々の患者の臨床病状、障害の原因、作用物質の送達の部位、投与の方法、投与のスケジュール、及び医学的実践者に公知の他の因子を含む。投与される対象となる抗体の「治療有効量」は、そのような検討によって管理されると考えられ、ＩＬ１ＲＡＰ発現と関連した障害を阻止する、改善する、又は治療するために必要な最小量である。
抗体は、問題の障害を阻止する又は治療するために現在使用されている１種又は複数の作用物質とともに製剤化される必要はないが、それとともに製剤化されてもよい。そのような他の作用物質の有効量は、製剤に存在するヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の量、障害又は治療のタイプ、及び上で論じられる他の因子に依存する。これらは、一般的に、同じ投薬量で且つ上で使用される投与経路を用いて、又はこれまで採用された投薬量の約１～９９％で使用される。
医薬組成物及びその投与
ＩＬ１ＲＡＰ結合剤（例えば、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体）を含む組成物は、免疫学的障害、呼吸器障害、又はがんを有する又は有するリスクがある対象に投与され得る。本発明は、がん、呼吸器障害、又は免疫学的障害の阻止又は治療のための医薬の製造におけるＩＬ１ＲＡＰ結合剤（例えば、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体）の使用をさらに提供する。本明細書で使用される「対象」という用語は、霊長類、齧歯類、及びイヌ等、例えばヒト及び非ヒト哺乳類を含めた、ＩＬ１ＲＡＰ結合剤が投与され得るあらゆる哺乳類患者を意味する。本明細書に記載される方法を使用した治療に具体的に意図される対象はヒトを含む。抗体又は作用物質は、免疫学的障害、呼吸器障害、又はがんの阻止又は治療において、単独で又は他の組成物との組み合わせで投与され得る。抗体又は作用物質との組み合わせで投与され得るそのような組成物は、メトトレキサート（ＭＴＸ）、及び免疫調節薬、例えば抗体又は小分子を含む。
そのような医薬組成物における使用のための抗体の例は、配列番号１７～６６のいずれかの軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する抗体又は抗体フラグメントを含むものである。そのような医薬組成物における使用のための抗体の例は、配列番号６７～１１６のいずれかの重鎖可変領域アミノ酸配列を有するヒト化抗体又は抗体フラグメントを含むものでもある。
そのような医薬組成物における使用のための抗体のさらなる例は、配列番号１７、３６、４０、４７、５０、５１、及び５２のいずれかの軽鎖可変領域アミノ酸配列を有するヒト化抗体又は抗体フラグメントを含むものでもある。そのような医薬組成物における使用のための好ましい抗体は、配列番号６７、８６、９０、９７、１００、１０１、及び１０２のいずれかの重鎖可変領域アミノ酸配列を有するヒト化抗体又は抗体フラグメントを含むものでもある。
そのような医薬組成物における使用のための抗体のさらなる例は、配列番号１７及び６７、配列番号３６及び８６、配列番号４０及び９０、配列番号４７及び９７、配列番号５０及び１００、配列番号５１及び１０１、並びに配列番号５２及び１０２のいずれかの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を有するヒト化抗体又は抗体フラグメントを含むものでもある。
そのような医薬組成物における使用のための抗体のさらなる例は、抗体Ａ１、抗体Ａ２、抗体Ａ３、抗体Ａ４、抗体Ａ５、抗体Ａ６、又は抗体Ａ７を含むものでもある。
様々な送達システムが公知であり、ＩＬ１ＲＡＰ結合剤を投与するために使用され得る。導入の方法は、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路を含むが、それらに限定されるわけではない。ＩＬ１ＲＡＰ結合剤は、例えば注入、ボーラス、又は注射によって投与され得、化学療法剤等の他の生物学的に活性な作用物質と一緒に投与され得る。投与は、全身性又は局所性であり得る。好ましい実施形態において、投与は皮下注射によるものである。そのような注射のための製剤は、１週間おきに１回投与され得る、例えばプレフィルドシリンジに調製され得る。
具体的な実施形態において、ＩＬ１ＲＡＰ結合剤組成物は、注射によって、カテーテルによって、座薬によって、又は埋め込みによって投与され、埋め込みは、シラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜等の膜、又は繊維を含めた、多孔質、非多孔質、又はゼラチン状材料のものである。典型的に、組成物を投与する場合、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は作用物質を吸収しない材料が使用される。
他の実施形態において、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は作用物質は、制御性放出システムで送達される。一実施形態において、ポンプが使用され得る（例えば、Langer, 1990, Science 249:1527-1533；Sefton, 1989, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201；Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507；Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574を参照されたい）。別の実施形態において、ポリマー材料が使用される。（例えば、Medical Applications of Controlled Release (Langer and Wise eds., CRC Press, Boca Raton, Fla., 1974)；Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen and Ball eds., Wiley, New York, 1984)；Ranger and Peppas, 1983, Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61を参照されたい。Levy et al., 1985, Science 228:190；During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351；Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105も参照されたい。）他の制御性放出システムは、例えば上記Ｌａｎｇｅｒに論じられる。
ＩＬ１ＲＡＰ結合剤（例えば、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体）は、治療有効量の結合剤、及び１種又は複数の薬学的に適合する成分を含む医薬組成物として投与され得る。
典型的な実施形態において、医薬組成物は、人間への静脈内又は皮下投与に適した医薬組成物として、ルーチン的手順に従って製剤化される。典型的に、注射による投与のための組成物は、無菌の等張水性緩衝液の状態の溶液である。必要な場合、医薬品は、可溶化剤、及び注射の部位における痛みを和らげるためのリグノカイン等の局所麻酔薬も含み得る。一般的に、成分は、活性剤の分量を表示したアンプル又はサシェ（ｓａｃｈｅｔｔｅ）等の密閉容器において、例えば乾燥した凍結乾燥粉末又は水不含濃縮物として、別個に又は単位剤形で一緒に混合されて供給される。医薬品が注入によって投与されるべきである場合、それは、無菌の医薬品グレードの水又は生理食塩水を含有する注入ボトルを用いて分配され得る。医薬品が注射によって投与される場合、投与前に成分が混合され得るように、注射用滅菌水又は生理食塩水のアンプルが提供され得る。
さらに、医薬組成物は、（ａ）凍結乾燥形態のＩＬ１ＲＡＰ結合剤（例えば、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体）を含有する容器、及び（ｂ）注射のための薬学的に許容される希釈剤（例えば、滅菌水）を含有する第２の容器を含む薬学的キットとして提供され得る。薬学的に許容される希釈剤は、凍結乾燥された抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は作用物質の復元又は希釈に使用され得る。そのような容器には、任意に、医薬品又は生物学的製品の製造、使用、又は販売を規制する行政機関によって指示された形態の通知書が伴い得、通知書は、ヒト投与のための製造、使用、又は販売についての、機関による承認を反映する。
免疫学的障害又はがんの治療又は阻止において有効である、ＩＬ１ＲＡＰ結合剤（例えば、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体）の量は、標準的臨床技法によって決定され得る。加えて、最適な投薬量域を特定するのを助けるために、インビトロアッセイが採用されてもよい。製剤において採用されるべき精確な用量は、投与の経路、及び免疫学的障害又はがんのステージにも依存すると考えられ、実践者の判断及び各患者の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、インビトロ又は動物モデル試験システムから導き出された用量－応答曲線から推定され得る。
概して、免疫学的障害又はＩＬ１ＲＡＰ発現がんを有する患者に投与される抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はＩＬ１ＲＡＰ結合剤の投薬量は、典型的に対象の体重の約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇである。対象に投与される投薬量は、対象の体重の約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇである。
例示的な用量は、１ｎｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇを含むが、それに限定されるわけではない。一部の実施形態において、用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１１ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、約１３ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、又は約１６ｍｇ／ｋｇである。用量は、例えば毎日、１週間あたり１回（毎週）、１週間あたり２回、１週間あたり３回、１週間あたり４回、１週間あたり５回、１週間あたり６回、２週間に１回、又は毎月、２カ月ごとに、又は３カ月ごとに投与され得る。具体的な実施形態において、用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ／週、約１ｍｇ／ｋｇ／週、約２ｍｇ／ｋｇ／週、約３ｍｇ／ｋｇ／週、約４ｍｇ／ｋｇ／週、約５ｍｇ／ｋｇ／週、約６ｍｇ／ｋｇ／週、約７ｍｇ／ｋｇ／週、約８ｍｇ／ｋｇ／週、約９ｍｇ／ｋｇ／週、約１０ｍｇ／ｋｇ／週、約１１ｍｇ／ｋｇ／週、約１２ｍｇ／ｋｇ／週、約１３ｍｇ／ｋｇ／週、約１４ｍｇ／ｋｇ／週、約１５ｍｇ／ｋｇ／週、又は約１６ｍｇ／ｋｇ／週である。一部の実施形態において、用量は、約１ｍｇ／ｋｇ／週～約１５ｍｇ／ｋｇ／週に及ぶ。
一部の実施形態において、ＩＬ１ＲＡＰ結合剤を含む医薬組成物は、結合剤にコンジュゲートされた又はコンジュゲートされていない治療剤をさらに含み得る。抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はＩＬ１ＲＡＰ結合剤は、免疫学的障害又はがんの治療又は阻止のための１種又は複数の治療剤との組み合わせで共投与され得る。
そのような併用療法投与は、疾患パラメーター（例えば、症状の重症度、症状の数、又は再発の頻度）に対して相加又は相乗効果を有し得る。
組み合わせ投与のための治療レジメンに関して、具体的な実施形態において、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はＩＬ１ＲＡＰ結合剤は、治療剤と同時に投与される。別の具体的な実施形態において、治療剤は、少なくとも１時間最高で数カ月、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はＩＬ１ＲＡＰ結合剤の投与の前又は後に、例えば抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はＩＬ１ＲＡＰ結合剤の投与の少なくとも１時間、５時間、１２時間、１日、１週間、１カ月、又は３カ月前又は後に投与される。
製造品
別の態様において、上で記載される障害の治療に有用な材料を含有する製造品が含まれる。製造品は、容器及び標識を含む。適切な容器は、例えばボトル、バイアル、シリンジ、及び試験管を含む。容器は、ガラス又はプラスチック等の多様な材料から形成され得る。容器は、病状を治療するのに有効である組成物を保ち、無菌のアクセスポートを有し得る。例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静注液バッグ又はバイアルであり得る。組成物における活性剤は、ヒト化抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体である。容器上の又はそれに伴う標識は、組成物が、選定の病状を治療するために使用されることを表示する。製造品は、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝液を含む第２の容器をさらに含み得る。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、及び使用のための使用説明書を有する添付文書を含めた、商業的な及びユーザーの立場から望ましい他の材料をさらに含み得る。
本発明は、本発明の範囲を限定することを意図されない以下の実施例においてさらに記載される。
本発明の抗体は、下の実施例においてさらに記載される。
（実施例１）
抗ヒトＩＬ１ＲＡＰ抗体の特定
Ａ）ヒトＩＬ１ＲＡＰによる免疫
マウスを、組み換えで産生されたヒトＩＬ１ＲＡＰ（ＧｅｎｂａｎｋアクセッションＮＰ＿００２１７３．１）タンパク質、及び伝統的ハイブリドーマ作出に取り入れられた強い力価応答をもたらすもので免疫した。ＩＬ１に対するより弱い／細胞タイプ特異的な活性を有する、全血及びＰＢＭＣＳアッセイにおいてＩＬ３３及びＩＬ３６シグナル伝達を遮断する融合産物をサブクローニングし且つ再スクリーニングした。ＩＬ１ＲＡＰを通じてシグナルを送るサイトカインのそれぞれの阻害を、個々のサイトカインに対する又はコグネート受容体に対する抗体のいずれかを使用して臨床研究において現在調べており、この経路ファミリーの魅力を実証する。可変ドメインを、標準的ＰＣＲプライマーセットを使用してハイブリドーマからクローニングした。可変ドメイン及び特異的ＣＤＲは上で記載される。
Ｂ）キメラＦａｂの作出：
候補ＩＬ１ＲＡＰ Ｇ０１１キメラＦａｂを作出して、ＥＬＩＳＡ結合実験においてヒト化／配列最適化Ｆａｂをベンチマークし且つ評価した。簡潔には、マウスＶＫ及びＶＨ残基を、それぞれヒトＣｋ及びＣＨ１残基に融合することによって、キメラＦａｂを作出した。選択された抗体候補のマウス配列を使用して、ネズミ科ＶＫ及びＶＨに対して遺伝子フラグメントを設計し且つ合成した。ネズミ科フレームワーク１領域に対する特異的配列、及び遺伝子ＩＩＩ配列の末端にアニールされる突出配列を含有するビオチン化順方向プライマー、並びに保存されたヒト定常領域（それぞれＣκ又はＣＨ１）由来の逆方向プライマーを使用して、Ｖ領域を増幅する。遺伝子フラグメントを鋳型として使用してＰＣＲを実施し、標準的プロトコールを使用して、ＤＮＡ産物をＭ１３ＬＥ０１ベクターにクローニングした。関心対象のＤＮＡを発現する大腸菌プラークを選択し、相当するＤＮＡサンプルを単離し且つシーケンシングした。対数期に成長した大腸菌ＸＬ１－ｂｌｕｅを、０．５ｍＭ ＩＰＴＧによって誘導し、その後に、キメラＦａｂを表す正しいプラークによる感染が続き、２５℃で一晩成長させた。培養上清又は細菌ペレットのいずれかを、遠心分離によって収集した。ペレットを－８０℃で１５分間冷凍し、その後に溶解緩衝液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ８．０）中にてＲＴでの融解が続いた。ペレットを、１５分間激しくボルテックスすることによって再懸濁した。可溶性キメラＦａｂを含有するペリプラズム抽出物由来の溶解物を、遠心分離によって獲得した。
Ｃ）ＥＬＩＳＡ結合アッセイ開発：
スクリーニングの間に陽性の結合剤を特定するために、ＥＬＩＳＡ結合アッセイを開発して、Ｆａｂの発現とは無関係の結合剤を特定して、データがＦａｂの結合活性を表すことを保証した。簡潔には、プレートを、９６ウェル形式で種々の量の抗Ｆｄ（Ｍｅｒｉｄｉａｎ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｃａｔ＃Ｗ９００７５Ｃ）で一晩コートした。アッセイプレートを、ＰＢＤ中３％ミルクで１時間ブロッキングし、その後に、キメラ／配列最適化Ｆａｂの培養上清又はペリプラズム抽出物のいずれかの種々の量の添加が続いた。一次スクリーニングに関しては、プレートを、８００ｎｇ／ｍＬの抗Ｆｄ抗体で、確認スクリーニングに関しては４００ｎｇ／ｍＬの抗Ｆｄ抗体でコートした（ペリプラズムＦａｂ、三つ組）。ビオチン化抗原を、１×一次スクリーニングに関しては３０ｎｇ／ｍＬで（分泌Ｆａｂ）、３×確認スクリーニングに関しては１０ｎｇ／ｍＬで使用した（ペリプラズムＦａｂ、三つ組）。
Ｄ）ＩｇＧのクローニング、発現、及び精製
マウス抗体を、ヒト定常ドメイン上のマウス可変ドメインからなるキメラ抗体に変換した（ｈｕ ＩｇＧ１ＫＯ／カッパ）。ｈｕ ＩｇＧ１ＫＯ（ノックアウト（ｋｎｏｃｋ ｏｕｔ））は、ＦｃγＲ及び補体結合等のエフェクター機能を低下させることによってＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性を排除する、２種の置き換え変異（Ｌｅｕ２３４Ａｌａ及びＬｅｕ２３５Ａｌａ）を有する。マウス及びキメラ抗体の可変ドメインは同一である。キメラ抗体を作出して、抗体の機能を確認し且つ正しい可変ドメイン配列が獲得されていることを保証する。
抗体構築物を産生するために、配列最適化ＶＨ及びＶＫ領域に対するコドン最適化ＤＮＡを、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ（登録商標）ＨＤ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）を使用して、ヒトＩｇＧ１由来の重鎖及び軽鎖定常領域に融合して、ｐＴＴ５ ｈｕＩｇＫベクターにＶＫ遺伝子を、ｐＴＴ５ ｈｕＩｇＧ１ＫＯベクターにＶＨ遺伝子をディレクショナルクローニングした。Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ（登録商標）ＨＤ Ｃｌｏｎｉｎｇを容易にするために、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ（登録商標）ＨＤ Ｃｌｏｎｉｎｇの前に、ＰＣＲ産物を精製し、Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｅｎｈａｎｃｅｒで処理した。クローニング及び形質転換を、メーカーのプロトコール（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）に従って実施した。ミニプレップＤＮＡを単離し、単離されたＤＮＡをサンガー二本鎖シーケンシングに供することによって、サブクローニングされた遺伝子Ｖ遺伝子フラグメントのＤＮＡ配列を確認した。
軽鎖及び重鎖発現ベクターＤＮＡの両方を、ＣＨＯ－Ｅ細胞へのトランスフェクションのために増大させた。無血清培地中で浮遊で成長するトランスフェクトされたＣＨＯ－Ｅ細胞を、１４０ｒｐｍ、３７℃、及び５％ＣＯ2での撹拌下で振とうフラスコ中で培養し、指数関数的成長の条件で保った。トランスフェクションの日に、細胞に、１ｍｇの軽鎖プラスミド及び０．５ｍｇの重鎖プラスミドを化学的にトランスフェクトした。次いで、それらを、１ＬのＧｉｂｃｏ（登録商標）ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ発現培地（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＮＹ、ＵＳ）中１～２×１０6個細胞／ｍｌで播種した。次いで、細胞を、１５０ｍｌの商業的栄養溶液（ｆｅｅｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）の１回の供給で、１０～１２日間オービタル振とうの下でインキュベートして、タンパク質の発現を可能にした。細胞培養上清における抗体力価を、メーカーの使用説明書に従って、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）機器（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ、ＣＡ、ＵＳ）及びｐｒｏｔＡバイオセンサーチップを使用して決定した。
組み換え抗体を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ（商標）（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーによって培養上清から精製し、６０ｍＭ ＮａＯＡｃ緩衝液（ｐＨ５．０）中に保管した。サンプルの純度及び不均質性の程度を、質量分析及び分析超遠心分離によって査定した。機能的試験の前に、すべてのサンプルを、≧９０％の単量体含有量を有し且つ＜１０％の不純物を含有することを確認した。
（実施例２）
ヒト化ＩＬ１ＲＡＰ抗体の産生
人における投与後の潜在的免疫原性を低下させるために、マウス抗ヒトＩＬ１ＲＡＰモノクローナル抗体ＧＯ１１を、設計及びスクリーニング過程により「ヒト化」した。ヒトフレームワーク配列を、フレームワーク相同性、ＣＤＲ構造、保存された標準残基、保存された界面パッキング残基、及び他のパラメーターに基づいてマウスリードに対して選択した。これらのフレームワーク位置におけるアミノ酸残基の特異的置換は、ヒト生殖細胞系列フレームワーク領域へのＣＤＲ又はＨＶＬの「直接入れ替え」によって形成されるヒト化抗体において示されるものと比して、結合親和性及び／又は安定性を含めた抗体性能の様々な態様を向上させ得る。フレームワーク操作に関して、本発明者らは、ネズミ科ＧＯ１１候補に対して厳密にマッチするヒト生殖細胞系列を特定し、マウスリード由来のＣＤＲを、ヒト生殖細胞系列ＩＧＫＶ１－３９＊０１及びＩＧＨＶ１－６９＊０２上に移植した。結果として生じた移植された可変領域を、Ｍ１３ベースのベクターにクローニングし、大腸菌細胞において発現させた。大腸菌ペリプラズム抽出物からの移植されたＦａｂを、ＥＬＩＳＡ実験において結合活性について評価し、マウス可変領域を有するキメラＦａｂを陽性対照として保った（図１）。
図１に見られるように、移植されたＦａｂは、マウスＦａｂよりも弱い結合活性を描写し、結合活性を取り戻すための重大なマウス残基を特定する必要性を示唆した。
ＣＤＲ以外には、標準及びバーニアゾーン（Ｖｅｒｎｉｅｒ ｚｏｎｅ）残基等のある特定のマウスフレームワーク残基が、ＣＤＲループを配置することにおいて重要な役割を果たすことが知られている。ＣＤＲにより近いネズミ科リード候補残基の同様の結合を保持するヒトフレームワークを特定するために、バーニアゾーン及び標準残基をヒトからマウス残基に変化させた。フレームワーク配列における様々な変異／変化を表すファージライブラリーを構築し、具体的にはＶＫにおけるＫ４５Ｑ、Ｉ４８Ｖ、Ｙ４９Ｈ、及びＱ１００Ａ、一方でＶＨに関しては、Ｑ３Ｈ、Ｋ２３Ｅ、Ｒ３８Ｋ、Ａ４０Ｒ、Ｍ４８Ｉ、Ｒ６７Ｋ、Ｖ６８Ａ、Ｔ６９Ｒ、Ｉ７０Ｆ、Ａ７２Ｖ、及びＹ９５Ｆを評価した（図２Ａ／Ｄ）。大腸菌細胞を、種々の組み合わせを含有するＤＮＡで形質転換した。およそ４５０種のＶＫクローン変種及び１３５０種のＶＨクローン変種を選択し、キメラ親抗ＩＬ１ＲＡＰ Ｆａｂと比較して、ＥＬＩＳＡによってｈｕＩＬ１ＲＡＰへの結合についてスクリーニングした。
陽性対照と同様の結合を描写した分子を選択し、再度確認ＥＬＩＳＡ結合実験においてそれらの結合活性についてチェックした。選択された結合剤を表すプラークを使用して、大腸菌細胞を再度感染させ、培養物を０．５ｍＭ ＩＰＴＧで誘導した。ペリプラズム抽出物を使用して、ｈｕＩＬ１ＲＡＰ抗原への結合を確認した。先のように、本発明者らは、本発明者らの実験においてキメラＦａｂを陽性対照として保った。
図２Ａ～Ｄに見られ得るように、ＶＫに関してクローン４０５－１０及び４０５－１２（それぞれ配列番号１８及び１９）、ＶＨに関してクローン４０６－１８及び４０６－２０（それぞれ配列番号６８及び６９）クローンは、キメラ対照と同様の結合を描写した。これらの軽鎖フレームワークの配列分析は、ＦＷ２におけるアミノ酸変異Ｙ４９Ｈが、陽性対照キメラＦａｂと同様の結合を描写したすべてのクローンに存在し、ゆえに、最適化軽鎖フレームワークに含まれるべき重要な重大なマウス残基と見なされることを明らかにした。ＶＨに関しては、ＦＷ３におけるアミノ酸変異Ａ７２Ｖが、他のマウス残基とともに、４０６－１８及び４０６－２０を含めた複数のクローンに存在し、ゆえに最適化分子に重要であるが、重大ではないと見なされた。４０６－１８は付加的な変化Ｔ６９Ｒを有し、一方で４３０６－２０は、フレームワーク３においてＡ７２Ｖ以外にＩ７０Ｆ変化を有したが、これらの残基のいずれも結合に重大ではないようである。これらの観察結果を踏まえて、本発明者らは、最終的なライブラリーにおいて且つ後で記載されるように、潜在的な重大な残基としてＡ７２Ｖ残基を有する移植されたＶＨを使用することを決定した。
ＣＤＲの最適化
生殖細胞系列化（Ｇｅｒｍｌｉｎｉｎｇ）は、重大でないマウス残基をより多くのヒト生殖細胞系列残基に変化させて、非ヒト霊長類に由来する抗体のヒト含有量パーセントを向上させ、ゆえに抗薬物抗体の形成を低下させる新規のストラテジーとして進化している。本発明者らは、Ｌ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、及びＬ－ＣＤＲ３の一部、Ｈ－ＣＤＲ１、及びＨ－ＣＤＲ２におけるＩＬ１ＲＡＰのこれらのマウス残基の役割を、それらをＩｇＧ骨格における点変異としてヒト生殖細胞系列残基に変化させることによって評価した。
軽鎖に関しては１３種の変種（Ｔ２５Ａ、Ｅ２７Ｑ、Ｎ２８Ｓ、Ｎ３０Ｓ、Ｙ５０Ａ、Ｋ５２Ｓ、Ｔ５３Ｙ、Ａ５５Ｑ、Ｅ５６Ｓ、Ｈ９０Ｑ、Ｈ９１Ｓ、Ｇ９３Ｓ、及びＳ９５Ｐ）、及び１９種の重鎖変種（Ｙ２７Ｇ、Ｉ２８Ｔ、Ｌ３０Ｓ、Ｔ３１Ｓ、Ｗ３３Ｙ、Ｍ３４Ｉ、Ｎ３５Ｓ、Ｑ５０Ｒ、Ｆ５２Ｉ、Ａ５４Ｉ、Ｓ５５Ｌ、Ｄ５６Ｇ、Ｓ５７Ｉ、Ｔ５８Ａ、Ｎ６１Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｍ６３Ｋ、Ｋ６５Ｑ、及びＤ６６Ｇ）を、ベクターｐＴＴ５において別個に作出した（図３Ａ／Ｂを参照されたい）。７日間のＣＨＯ－Ｅ細胞における発現分析のために、軽鎖変異体を親キメラ重鎖と対合し、重鎖変異体を親キメラ軽鎖と対合した。結果として生じた変種を、ＥＬＩＳＡ実験において結合について評価し、マウス可変領域しかしヒト定常領域を有する親キメラＩｇＧと比較した。軽鎖変種に関しては、６種の点変異体ＶＫ－Ｔ２５Ａ、Ｅ２７Ｑ、Ｎ２８Ｓ、Ｎ３０Ｓ、Ｋ５２Ｓ、及びＴ５３Ｙが、キメラＩｇＧと同様の結合を描写し（＋１０％対照；図３Ａ）、一方で重鎖に関しては、１０種の点変異体ＶＨ－Ｉ２８Ｔ、Ｌ３０Ｓ、Ｍ３４Ｉ、Ｎ３５Ｓ、Ｄ５６Ｇ、Ｔ５８Ａ、Ｎ６１Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｍ６３Ｋ、Ｋ６５Ｑ、及びＤ６６Ｇが、キメラＩｇＧと同様の結合を描写した（＋１０％対照；図３Ｂ）。
キメラ親Ｆａｂと比較してより良好な又は等しい結合、及び向上した発現を示したＦａｂを、さらなる特徴付けに対して選択した。
抗体ＧＯ１１に対する代表的なヒト化可変領域は、本明細書の節に示される。このように、抗体Ａ１～抗体Ａ７は、マウス抗体００５－ＧＯ１１に由来するヒト化抗体であった（ＶＬ／ＶＨ配列番号１及び２）（ヒトＩｇＧ１ ＫＯ（ＫＯ＝ノックアウト）／カッパ骨格にクローニングされた）。抗体Ａ１～Ａ７は表２５に示される。
本発明の例示的な抗ＩＬ１ＲＡＰ Ａｂは、ヒト及びｃｙｎｏ ＩＬ１ＲＡＰ（ＥＣＤ）に特異的に結合する。ヒトＩＬ１ＲＡＰ及びｃｙｎｏ ＩＬ１ＲＡＰへの抗体結合の結合親和性を、それぞれ１１０及び１６０ｐＭであるとＳＰＲを用いて決定した。本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、マウスＩＬ１ＲＡＰに対して交差反応性ではない。
Figure 2024505674000063
（実施例３）
生物活性；機能的ヒトアッセイにおけるヒト化抗ヒトＩＬ１ＲＡＰ抗体の効力－ＩＬ－３３、ＩＬ－３６、及びＩＬ－１シグナル伝達の遮断
ＩＬ－１βによる標的細胞の活性化は、２種の膜結合型受容体：ＩＬ－１受容体タイプＩ（ＩＬ－１Ｒ１）及びＩＬ－１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ－１ＲＡｃＰ）とのその相互作用に依存する。ＩＬ－１Ｒ１は、高い親和性でＩＬ－１βに結合するリガンド認識受容体である。ＩＬ－１ＲＡｃＰはＩＬ－１βと直接相互作用しないものの、その動員は、シグナル伝達能のある複合体の形成に必須である。ＩＬ１ＲＡＰはＩＬ－３３受容体複合体の機能的部分でもあり、それゆえ、ＩＬ１ＲＡＰへの結合は、ＩＬ－１及びＩＬ－３３シグナル伝達の両方を阻害し得る。
ＩＬ－１及びＩＬ－３３シグナル伝達を遮断する潜在的リード候補抗体の能力について試験するために、ＩＬ－１及びＩＬ－３３依存性細胞アッセイを確立した。本発明の例示的な抗体を、ＩＬ－１β及びＩＬ－３３シグナル伝達の阻害について試験した。
プロトコール：
単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）の作出及び刺激：
Ｋｏｓｓら（IL36 is a Critical Upstream Amplifier of Neutrophilic Lung Inflammation in Mice、公開保留中）に最近記載されたように、ヒト単球由来マクロファージを分化させ且つ作出した。細胞を、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（１×）＋ＧｌｕｔａＭＡＸＴＭ－Ｉ（ＧＩＢＣＯ ＃３１９６６－０２１）；１０％ＨＩウシ胎仔血清（ＦＣＳ；ＧＩＢＣＯ ＃１６１４０－０７１）；１％ＮＥＡＡ（１００×ＧＩＢＣＯ ＃１１１４０－０３５）；１％Ｐ／Ｓ（１０，０００Ｕ／ｍＬペニシリン、１０，０００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、ＧＩＢＣＯ ＃１５１４０－１２２）、及び１０ｎｇ／ｍＬ組み換えヒトＭＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；２１６－ＭＣＣ／ＣＦ）を含有する培地で刺激した。６．２×１０４個のＭＤＭを９６ウェルプレートに播種した。２４時間後、マクロファージを抗ＩＬ１ｒａｐ ＡＢ（０．４、２、１０、５０、２５０ｎＭ）で予備刺激し、３０分後、ＭＤＭを、ｒｈＩＬ－３６α（３３ｎｇ／ｍＬ；６９９５－ＩＬ－０１０／ＣＦ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ｒｈＩＬ－３６β（３３ｎｇ／ｍＬ；６８３４－ＩＬＢ－０２５／ＣＦ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ｒｈＩＬ－３６γ（３３ｎｇ／ｍＬ；２３２０－ＩＬ－０２５／ＣＦ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ｒｈＩＬ－１α（１０ｎｇ／ｍＬ；２００－ＬＡ－０１０／ＣＦ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）で、３７℃及び５％ＣＯ２にて２４時間刺激した。ＩＬ１２ｐ４０濃度を、メーカーの使用説明書に従って、単一のＭＳＤ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、＃Ｋ１５１ＵＱＫ－１）により上清において測定した。
単球由来樹状細胞（ＭｏＤＣ）の作出及び刺激：
Ｋｏｓｓら（IL36 is a Critical Upstream Amplifier of Neutrophilic Lung Inflammation in Mice、公開保留中）に記載されるように、単球を、ヒトボランティアドナー由来の末梢血単核細胞から単離した。１×１０5個の単球を、メーカーの使用説明書に従って、Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｋｉｔ（＃１０９８５、Ｓｔｅｍｃｅｌ）を使用して９６ウェルプレートに播種した。８日後、分化したＭｏＤＣを、抗ＩＬ１ｒａｐ ＡＢ（０．４、２、１０、５０、２５０ｎＭ）で３０分間予備刺激し、ｒｈＩＬ－３６α（３３ｎｇ／ｍＬ；６９９５－ＩＬ－０１０／ＣＦ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ｒｈＩＬ－３６β（３３ｎｇ／ｍＬ；６８３４－ＩＬＢ－０２５／ＣＦ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、及びｒｈＩＬ－３６γ（３３ｎｇ／ｍＬ；２３２０－ＩＬ－０２５／ＣＦ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）で、３７℃及び５％ＣＯ２にて４８時間さらに刺激した。ＩＬ－８、ＩＬ－６、及びＴＮＦα濃度を、メーカーの使用説明書に従って、ＭＳＤ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、＃Ｋ１５０６７Ｌ）により上清において測定した。
全血アッセイ：
ヒトボランティアドナーからの１８０μＬの全血（ＲＰＭＩ培地（ＲＰＭＩ１６４０ Ｇｉｂｃｏ ＃６１８７０－０１０）で１：２希釈された）を、９６ウェルプレートにピペットで入れた。本発明の抗ＩＬ１ｒａｐ Ａｂ（０．０７、０．２１、０．６２、１．８、５．５、１６．５、５０、１５０、４５０ｎＭ（ＭＩＰ１β）、０．１、１、１０、１００、１０００ｎＭ（ＩＦＮγ））をウェルに添加し、３７℃及び５％ＣＯ２で３０分間プレインキュベートした。ｒｈＩＬ３３（３６２５－ＩＬ－０１０／ＣＦ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、０．６ｎＭ）、ｒｈＩＬ３６γ（６８３５－ＩＬ－０１０／ＣＦ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１０ｎＭ）、ｒｈＩＬ－１２（２１９－ＩＬ／ＣＦ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、０，２５ｎＭ）を、３７℃及び５％ＣＯ２で２４時間ウェルに添加した。上清を収集し、Ｍｉｐ１β（ＤＹ２７１－０５、ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）及びＩＦＮγ（＃５５５１４２、ＥＬＩＳＡ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）タンパク質濃度を、メーカーの使用説明書に従って測定した。
結果：
ＩＬ１ファミリーサイトカインによる免疫細胞の活性化を抑制する抗ＩＬ１ＲａＰ Ａｂの能力を判定した。ヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）を、ＩＬ－３６α、β、γ単独、ＩＬ－１ａ単独、又はＩＬ－３６α、β、γ、及びＩＬ－１ａの組み合わせを用いて、インビトロにおける関連ヒト自然免疫細胞として刺激した。ＩＬ－１２タンパク質産生を、ＩＬ１ファミリーサイトカイン活性化の下流の細胞活性化のマーカーとして測定した。
ＩＬ－３６α、β、γ、又はＩＬ－１ａとの組み合わせでのＩＬ－３６α、β、γに応答したＩＬ－１２の産生は、抗ＩＬ１ＲａＰ Ａｂによって顕著に阻害された（それぞれＩＣ５０＝０．３５ｎＭ及びＩＣ５０＝６．４８ｎＭ）（図４Ａ）。図４Ａは、サイトカインで刺激されたＭＤＭにおける、本発明の抗ＩＬ１ＲａＰ ＡｂによるＩＬ－１２ｐ４０分泌の阻害を示している（種々のドナーから獲得されたＭＤＭを用いた２回の実験を代表する１回からの技術的三つ組の平均値±ＳＤが描写される）。ＩＬ－１ａ単独では、ＭＤＭにおいてＩＬ－１２産生を誘導し得ず、ＩＬ－３３刺激後に同様の結果が獲得されたため（データ示されず）、ＩＬ－１２タンパク質を抑制する抗ＩＬ１ＲａＰ Ａｂの能力を、ＩＬ－４を用いた刺激、それに続くＩＬ－３６α、β、γ、ＩＬ－１ａ、又はＩＬ－１ａとのＩＬ－３６α、β、γへの曝露に応答して測定した。抗ＩＬ１ＲａＰ Ａｂ ＃Ａ２は、ＩＬ－４で条件付けされたＭＤＭにおいて、ＩＬ－３６α、β、γ（ＩＣ５０＝１．９１ｎＭ）、ＩＬ－１ａ（ＩＣ５０＝５．９２ｎＭ）、及びＩＬ－３６α、β、γ／ＩＬ－１ａ（ＩＣ５０＝８．１４ｎＭ）に応答したＩＬ－１２の産生を顕著に抑制した（図４Ａ）。
以前の実験は、ＭｏＤＣが、ＩＬ－１ａ又はＩＬ－３３を用いた刺激に非応答性であることを実証してした（示されず）。それゆえ、ＩＬ１ＲＡＰ抗体の能力の次の測定として、本発明者らは、インビトロにおける関連ヒト適応免疫細胞であるヒト単球由来樹状細胞（ＭｏＤＣ）を、ＩＬ－３６α、β、γ、又は単独で刺激した。ＩＬ－８（ＩＣ５０＝３．９５ｎＭ）、ＴＮＦ（ＩＣ５０＝６．４５ｎＭ）、及びＩＬ－６（ＩＣ５０＝９．４１ｎＭ）のタンパク質産生は、抗ＩＬ１Ｒａｐ Ａｂによって顕著に抑制された（図４Ｂ）。ＭＤＭ及びＤＣにおける知見と一致して、本発明者らが、全血における標準骨髄系細胞由来媒介因子Ｍｉｐ－１ｂの産生を測定した場合、ＩＬ－３３はその産生を誘導せず、一方でＩＬ－３６γはＭｉｐ－１ｂ産生を強力に誘導し、それは抗ＩＬ１ＲａＰ Ａｂ ＃Ａ２によって顕著に抑制された（ＩＣ５０＝４．３７）（図４Ｃ）。ＩＬ－３６γとＩＬ－３３とを組み合わせた後、同様のデータが獲得された（ＩＣ５０＝３．４３）（図４Ｃ）。
ＩＬ－３３は、リンパ球によるＩＦＮγの産生を活性化することが報告されている。パイロット実験は、全血アッセイにおけるＩＦＮγの最も高い産生が、ＩＬ－３３とＩＬ－１２とを組み合わせた後に観察されたことを示していた（データ示されず）。それゆえ、本発明者らは、全血アッセイにおいてＩＦＮγのＩＬ－３３／ＩＬ－１２媒介性産生を阻害する抗ＩＬ１ＲａＰ Ａｂの能力を判定し、ＩＦＮγの産生は顕著に阻害された（ＩＣ５０＝４．８４ｎＭ）（図４Ｄ）。
（実施例４）
抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体のエピトープ結合：結晶構造及びＨＤＸ ＭＳによって示される固有のエピトープ
どこで抗ＩＬ１ＲＡＰクローンがＩＬ１ＲＡＰに結合するかを理解するために、タンパク質の構造分析を、受容体の細胞外ドメインを使用して実施した。ＩＬ１ＲＡＰの「細胞外ドメイン」は、ＩＬ１受容体、例えばＩＬ１ＲタイプＩ又はタイプＩＩと細胞膜結合複合体を形成する。ヒトＩＬ１ＲＡＰ（アクセッション番号Ｑ９ＮＰＨ３ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ）は、３種の細胞外ドメイン：ドメインＩ：アミノ酸２１～１３４；ドメインＩＩ：アミノ酸１３５～２３４；及びドメインＩＩＩ：アミノ酸２３５～３６７からなることが公知である。
ＩＬ１ＲＡＰの結晶化：Ｆａｂ二元複合体：
ＩＬ１ＲＡＰ及び抗ＩＬ１ＲＡＰ ＃Ａ２ Ｆａｂを１．２：１のモル比で混合し、２０ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。１μｌの複合体と、０．１Ｍ酢酸アンモニウム、０．１Ｍ ＢＩＳ－ＴＲＩＳ ｐＨ６．０、及び１５％ｗ／ｖポリエチレングリコール１００００を含有する１μＬのリザーバー溶液とを混合することによって、ハンギングドロップ蒸気拡散法を使用して結晶を獲得した。板状の形状の結晶は、１日以内に現れた。結晶を、３０％ｖ／ｖグリセロールを補給されたリザーバー溶液で凍結保護（ｃｒｙｏ－ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ）し、液体窒素中で瞬間冷凍した。
データ収集及び構造決定：
スイスのフィリゲンにあるＳＬＳのビームラインＸ１０ＳＡにて１００Ｋでデータを収集した。フレームあたり０．２５°を有する７２０枚のフレームを、ＰＩＬＡＴＵＳ ６Ｍ－Ｆ検出器で収集した。データをａｕｔｏＰＲＯＣソフトウェアで処理した（Smart, et al. Global phasing Limited, 2013；Evans, P. (2006) Scaling and assessment of data quality. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 62, 72-82；Kabsch, W. (2010) Xds. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 66, 125-132；Vonrhein, C., Flensburg, C., Keller, P., Sharff, A., Smart, O., Paciorek, W., Womack, T., and Bricogne, G. (2011) Data processing and analysis with the autoPROC toolbox. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 67, 293-302；Tickle, I., Flensburg, C., Keller, P., Paciorek, W., Sharff, A., Vonrhein, C., and Bricogne, G. (2018) STARANISO. Global Phasing Ltd., Cambridge, United Kingdo；Winn, M. D., Ballard, C. C., Cowtan, K. D., Dodson, E. J., Emsley, P., Evans, P. R., Keegan, R. M., Krissinel, E. B., Leslie, A. G., McCoy, A., McNicholas, S. J., Murshudov, G. N., Pannu, N. S., Potterton, E. A., Powell, H. R., Read, R. J., Vagin, A., and Wilson, K. S. (2011) Overview of the CCP4 suite and current developments. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 67, 235-24；及びEvans, P. R., and Murshudov, G. N. (2013) How good are my data and what is the resolution? Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 69, 1204-1214）。分子置き換えのためのモデルを、ｐｄｂ：１ｈｚｈのＦａｂを鋳型として使用して、ＰＨＥＮＩＸソフトウェアスイート内のＳＣＵＬＰＴＯＲを用いて創出した（Adams, et al. (2010) PHENIX: a comprehensive Python-based system for macromolecular structure solution. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 66, 213-221）。ＳＣＵＬＰＴＯＲを用いて作成されたＦａｂモデル、及び鋳型としてのｐｄｂ：４ｄｅｐからのインターロイキン－１受容体アクセサリータンパク質を使用して、分子置き換えをＰＨＡＳＥＲを用いて実施した（McCoy, et al. (2007) Phaser crystallographic software. J Appl Crystallogr 40, 658-674）。構造を、Ｂｕｓｔｅｒ（Bricogne, et al. (2020) BUSTER version 2.11.7. in BUSTER version 2.11.7, 2.11.7 Ed., Global Phasing Ltd., Cambridge, United Kingdom）モデル構築を用いて精密化し、最小二乗適合分析を、ＣＯＯＴ（Emsley, et al. (2010) Features and development of Coot. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 66, 486-501）を用いて行った。図６Ａ～Ｃは、ＰｙＭＯＬ（Schrodinger, LLC. (2015) The PyMOL Molecular Graphics System, Version 2.4）を用いて作成された。
Figure 2024505674000064
ＨＤＸ ＭＳの実験手順：
ＨＤＸ（水素／重水素交換質量分析）実験に関しては、ＩＬ１ＲＡＰ抗原を、単独で（対照）及びおよそ等モル比で存在する本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ ＃Ａ２抗体とともに（混合サンプル）分析した。すべてのサンプル取り扱いを、ＬＥＡＰ ＨＤＸ ＰＡＬシステムによって実施した。ペプチドを特定するために、対照サンプルをＨ2Ｏ緩衝液（Ｈ2Ｏ １０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．４）とインキュベートした。交換実験に関しては、対照及び混合サンプルを、以下の手順によって、１０、１００、及び１０００秒間の時点でＤ2Ｏ緩衝液（Ｄ2Ｏ １０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．４）とインキュベートした（二つ組で）：（１）４μＬのサンプルを４０μＬのＨ２０／Ｄ２Ｏ緩衝液に添加した；（２）混合物を様々な時点（０、１０、１００、及び１０００秒間）の間２０℃でインキュベートした；（３）４０μＬのインキュベートされたサンプルを４０μＬの４℃のクエンチ緩衝液（４Ｍ尿素、０．４Ｍ ＴＣＥＰ－ＨＣｌ）に移した；（４）２００μＬ／分の移動相Ａ（９９％Ｈ２Ｏ、１％アセトニトリル、及び０．１％ギ酸）を２分間流すことによって、６０μＬのクエンチされたサンプルを、固定されたプロテアーゼＸＩＩＩ／ペプシンカラム（１：１ ２．１×３０ｍｍ、ＮｏｖａＢｉｏＡｓｓａｙｓ）にインジェクトした。消化されたペプチドを、Ｖａｎｇｕａｒｄ Ｐｒｅ－ｃｏｌｕｍｎ（ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、１３０Å、１．７μｍ、２．１ｍｍ×５ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ）で３分間脱塩し、次いで１６０μｌ／分の流速で４℃にてＡｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ Ｃｏｌｕｍｎ １．７ｕｍ、１ｍｍ×５０ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ）を用いた液体クロマトグラフィーによって分離した。ＬＣ勾配溶媒システムは、移動相Ａ（上記の組成）及び移動相Ｂ（０．１％ギ酸、５％Ｈ２Ｏ、及び９５％アセトニトリル）から構成された。移動相Ｂのパーセンテージを、５％で５分間保ち；５．６分間の時点で５％から１５％に、１０．４分間の時点で４０％に、１１分間の時点で９０％に増加させ；１１．５分間まで９０％で保ち；１２．４分間の時点で５％に減少させ、次いで１４分間まで５％で保った。クロマトグラフィー分離の後、ペプチドを、正のエレクトロスプレーイオン化モードで運転されるＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｆｕｓｉｏｎ質量分析計によって検出した。次いで、ペプチドを特定するためにＢｙｏｎｉｃソフトウェア（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｅｔｒｉｃｓ）によって、及び重水素取り込みを算出するためにＨＤＥｘａｍｉｎｅｒソフトウェア（Ｓｉｅｒｒａ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ）によって、データを分析した。
結果：
ＩＬ－１ＲＡｃＰの細胞外ドメイン（残基２１～３６８、表２８）と複合した抗ＩＬ１ＲＡＰ ＃Ａ２ Ｆａｂの構造を決定した。ＩＬ－１ＲＡｃＰのすべての残基は、残基２１～２３及び３５１～３６８を除いて、電子密度において可視である。Ｆａｂ鎖も、鎖Ｈの４個のＣ末端残基及び鎖Ｌの最初のＮ末端残基を除いて、完全に追跡され得た。結晶Ｂ因子は、Ｄ３ドメイン及びＦａｂにおいて最も低く（８６Å２及び８２Å２）、ＩＬ－１ＲＡｃＰのＮ末端に向けて増加する（ドメインＤ２において１００Å２及びドメインＤ１において１６０Å２）。これは、Ｄ１ドメインが近隣分子への最小数の接触点を有する、複合体の結晶パッキングによって説明され得る。
ＩＬ－１ＲＡｃＰの構造は、それぞれ２．７Å及び２．４ÅのすべてのＩＬ－１ＲＡｃＰ骨格Ｃα原子のｒ．ｍ．ｓ．偏差で、ヒトＩＬ－１ＲＡｃＰ－ＩＬ－１ＲＩ－ＩＬ１β（Thomas et al. (2012) Structure of the activating IL-1 receptor signaling complex. Nature structural & molecular biology 19, 455-457）及びＩＬ－１ＲＡｃＰ－ＩＬ－１ＲＩＩ ＩＬ１β（Wang et al. (2010) Structural insights into the assembly and activation of IL-1beta with its receptors. Nat Immunol 11, 905-911）の以前に決定された構造と似ている。本発明の例示的な抗ＩＬ１ＲＡＰ ＃Ａ２ Ｆａｂは、ＩＬ－１ＲＡｃＰのＤ３ドメインに結合し、界面は、各結合パートナー上の表面積の約９００Å２を埋める。Ｄ３ドメイン上のエピトープ残基は、ＩＬ１ＲＡｃＰ－ＩＬ－１ＲＩ界面に関わる残基と大部分が一致する。ＩＬ１ＲＡｃＰとＩＬ－１ＲＩとの相互作用は、ＩＬ１ＲＡｃＰのＤ２及びＤ３ドメインにおける残基まで及ぶものの、ＩＬ１ＲＡｃＰ及び本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の界面はＤ３ドメインに制限される。
図５Ａ～Ｄは、９０°回転によって関連付けられた２種の異なる像において、ＩＬ－１ＲＡｃＰ：本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ Ａｂ及びＩＬ－１ＲＡｃＰ－ＩＬ－１ＲＩ－ＩＬ１β複合体の構造特色を例示する。図５Ａにおいて、ＩＬ－１ＲＡｃＰは、半透明の表面を有する淡い青色で示されている。Ｆａｂはリボンとして示されている。重鎖及び軽鎖は、それぞれ濃い及び薄い灰色で色付けされている。図５Ｂは、ＩＬ－１ＲＡｃＰ上のＦａｂの場所を灰色で示している。明瞭性のために、Ｆａｂは半透明のリボンとして示されている。図５Ｃは、図５Ａと同じ配向で、比較のためにヒトＩＬ－１ＲＡｃＰ－ＩＬ－１ＲＩ－ＩＬ１β三元複合体の構造（ｐｄｂ ４ｄｅｐ）を示している。ＩＬ－１ＲＩは赤色で、ＩＬ－１βは緑色で色付けされている。図５Ｄは、ＩＬ－１ＲＡｃＰ－ＩＬ－１ＲＩ界面のＩＬ－１ＲＡｃＰ側を例示する（オレンジ色で示されている）。明瞭性のために、ＩＬ－１ＲＩ及びＩＬ１βは半透明のリボンとして示されている。
エピトープは、プログラムＰＩＳＡによって規定されるように、アミノ酸残基２３８、２３９、２４１、２４４～２４７、２４９、２５１～２５６、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、３０１、３０３、３０５～３０７、３１１、３１３、及び３１５によって形成される。これは、ＩＬ１ＲＡＰ上のＨＤＸ及びＸ線エピトープを比較した図６Ａ～Ｂに実証されるＨＤＸ－ＭＳによって決定されるエピトープ（残基２２６～２６２及び２６９～２７３）とよく合致している。図６Ａにおいて、ＨＤＸエピトープは、黄色で示され、残基２２６～２６２及び２６９～２７３を含む。図６Ｂにおいて、Ｘ線エピトープが示されている（図６Ｂにおいても示されたように。但しこの図では、明瞭性のために、本発明の抗ＩＬ１ＲＡＰ Ｆａｂが除去されている）。
ＩＬ１ＲＡＰ細胞外ドメインのアミノ酸は、配列番号１８４に示されるアミノ酸位２１から開始し、アミノ酸３６７に及ぶ。ＩＬ１ＲＡＰドメイン１は、アミノ酸位２１～１３４（配列番号１８５）に相当し、ドメイン２は、アミノ酸１３５～２３４（配列番号１８６）に相当し、ドメイン３は、アミノ酸位２３５～２６７（配列番号１８７）に非応答である。ドメイン３は、Ｘ線結晶学（アミノ酸位２３５～３１５（配列番号１８８）に相当するＸＲ－Ｄ３Ａ／Ｂ、アミノ酸位２３５～２７３（配列番号１８９）に相当するＸＲ Ｄ３Ａ、及びアミノ酸３００～３１５（配列番号１９０）に相当するＸＲ Ｄ３Ｂ）、及びＨＤＸマッピング（アミノ酸位２２６～２６２（配列番号１９１）に相当するＨＤＸ Ｄ２／３ Ａ、及びアミノ酸位２２６～２７３（配列番号１９２）に相当するＨＤＸ Ｄ２／３ Ｂ）によって規定される特定されたエピトープ結合領域に従って、本明細書でさらに分けられる。配列番号２０２～２０７における下線付き且つ太字のアミノ酸位は、Ｘ線マッピングによる、例示的な抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体＃Ａ２に結合するエピトープの、特定された接触アミノ酸Ｋ２３８、Ｎ２３９、Ｖ２４１、Ｖ２４４、Ｉ２４５、Ｈ２４６、Ｓ２４７、Ｎ２４９、Ｈ２５１、Ｖ２５２、Ｖ２５３、Ｙ２５４、Ｅ２５５、Ｋ２５６、Ｅ２６１、Ｌ２６３、Ｐ２６５、Ｔ２６７、Ｙ２６９、Ｓ２７１、Ｓ３０１、Ｓ３０３、Ｓ３０５、Ｒ３０６、Ｔ３０７、Ｔ３１１、Ｔ３１３、Ｉ３１５に相当する。
ＩＬ１ＲＡＰ ＥＣＤアクセッション番号：Ｑ９ＮＰＨ３（アミノ酸２１～３６７）
ＳＥＲＣＤＤＷＧＬＤＴＭＲＱＩＱＶＦＥＤＥＰＡＲＩＫＣＰＬＦＥＨＦＬＫＦＮＹＳＴＡＨＳＡＧＬＴＬＩＷＹＷＴＲＱＤＲＤＬＥＥＰＩＮＦＲＬＰＥＮＲＩＳＫＥＫＤＶＬＷＦＲＰＴＬＬＮＤＴＧＮＹＴＣＭＬＲＮＴＴＹＣＳＫＶＡＦＰＬＥＶＶＱＫＤＳＣＦＮＳＰＭＫＬＰＶＨＫＬＹＩＥＹＧＩＱＲＩＴＣＰＮＶＤＧＹＦＰＳＳＶＫＰＴＩＴＷＹＭＧＣＹＫＩＱＮＦＮＮＶＩＰＥＧＭＮＬＳＦＬＩＡＬＩＳＮＮＧＮＹＴＣＶＶＴＹＰＥＮＧＲＴＦＨＬＴＲＴＬＴＶＫＶＶＧＳＰＫＮＡＶＰＰＶＩＨＳＰＮＤＨＶＶＹＥＫＥＰＧＥＥＬＬＩＰＣＴＶＹＦＳＦＬＭＤＳＲＮＥＶＷＷＴＩＤＧＫＫＰＤＤＩＴＩＤＶＴＩＮＥＳＩＳＨＳＲＴＥＤＥＴＲＴＱＩＬＳＩＫＫＶＴＳＥＤＬＫＲＳＹＶＣＨＡＲＳＡＫＧＥＶＡＫＡＡＫＶＫＱＫＶＰＡＰＲＹＴＶＥＬＡＣＧＦＧＡＴ（配列番号１８４）
ＩＬ１ＲＡＰ ＥＣＤドメイン１（アミノ酸２１～１３４）：
ＳＥＲＣＤＤＷＧＬＤＴＭＲＱＩＱＶＦＥＤＥＰＡＲＩＫＣＰＬＦＥＨＦＬＫＦＮＹＳＴＡＨＳＡＧＬＴＬＩＷＹＷＴＲＱＤＲＤＬＥＥＰＩＮＦＲＬＰＥＮＲＩＳＫＥＫＤＶＬＷＦＲＰＴＬＬＮＤＴＧＮＹＴＣＭＬＲＮＴＴＹＣＳＫＶＡＦＰＬＥＶＶＱＫ（配列番号１８５）
ＩＬ１ＲＡＰ ＥＣＤドメイン２（アミノ酸１３５～２３４）：
ＤＳＣＦＮＳＰＭＫＬＰＶＨＫＬＹＩＥＹＧＩＱＲＩＴＣＰＮＶＤＧＹＦＰＳＳＶＫＰＴＩＴＷＹＭＧＣＹＫＩＱＮＦＮＮＶＩＰＥＧＭＮＬＳＦＬＩＡＬＩＳＮＮＧＮＹＴＣＶＶＴＹＰＥＮＧＲＴＦＨＬＴＲＴＬＴＶＫＶＶ（配列番号１８６）
ＩＬ１ＲＡＰ ＥＣＤドメイン３（アミノ酸２３５～３６７）：
ＧＳＰＫＮＡＶＰＰＶＩＨＳＰＮＤＨＶＶＹＥＫＥＰＧＥＥＬＬＩＰＣＴＶＹＦＳＦＬＭＤＳＲＮＥＶＷＷＴＩＤＧＫＫＰＤＤＩＴＩＤＶＴＩＮＥＳＩＳＨＳＲＴＥＤＥＴＲＴＱＩＬＳＩＫＫＶＴＳＥＤＬＫＲＳＹＶＣＨＡＲＳＡＫＧＥＶＡＫＡＡＫＶＫＱＫＶＰＡＰＲＹＴＶＥＬＡＣＧＦＧＡＴ（配列番号１８７）
ＩＬ１ＲＡＰ ＥＣＤ ＸＲ－Ｄ３Ａ／Ｂ（アミノ酸２３５～３１５）：
ＧＳＰＫＮＡＶＰＰＶＩＨＳＰＮＤＨＶＶＹＥＫＥＰＧＥＥＬＬＩＰＣＴＶＹＦＳＦＬＭＤＳＲＮＥＶＷＷＴＩＤＧＫＫＰＤＤＩＴＩＤＶＴＩＮＥＳＩＳＨＳＲＴＥＤＥＴＲＴＱＩ（配列番号１８８）
ＩＬ１ＲＡＰ ＥＣＤ ＸＲ Ｄ３Ａ（アミノ酸２３５～２７３）：
ＧＳＰＫＮＡＶＰＰＶＩＨＳＰＮＤＨＶＶＹＥＫＥＰＧＥＥＬＬＩＰＣＴＶＹＦＳＦＬ（配列番号１８９）
ＩＬ１ＲＡＰ ＥＣＤ ＸＲ Ｄ３Ｂ（アミノ酸３００～３１５）：
ＳＩＳＨＳＲＴＥＤＥＴＲＴＱＩ（配列番号１９０）
ＩＬ１ＲＡＰ ＥＣＤ ＨＤＸ Ｄ２／３ Ａ（アミノ酸２２６～２６２）：
ＴＲＴＬＴＶＫＶＶＧＳＰＫＮＡＶＰＰＶＩＨＳＰＮＤＨＶＶＹＥＫＥＰＧＥＥＬ（配列番号１９１）
ＩＬ１ＲＡＰ ＥＣＤ ＨＤＸ Ｄ２／３ Ｂ（アミノ酸２２６～２７３）：
ＴＲＴＬＴＶＫＶＶＧＳＰＫＮＡＶＰＰＶＩＨＳＰＮＤＨＶＶＹＥＫＥＰＧＥＥＬＬＩＰＣＴＶＹＦＳＦＬ（配列番号１９２）
パラトープは、ＣＤＲ－Ｈ１由来の残基Ｉ２８及びＬ３０～Ｗ３３、ＣＤＲ－Ｈ２由来のＦ５２、Ａ５４、Ｓ５５、Ｓ５７、及びＹ５９、ＣＤＲ－Ｈ２に続くループ由来のＫ７４、ＣＤＲ－Ｈ３由来のＹ１０２～Ｇ１０７及びＹ１０９によって形成される。軽鎖からは、ＣＤＲ－Ｌ２（残基Ｅ５６及びＧ５７）及びＣＤＲ－Ｌ３（残基Ｇ９３及びＴ９４）のみが、ＩＬ１ＲＡＰの結合において重大である。極性相互作用は、１０個の水素結合及び１個の塩橋を含む。これらは表２９に要約される。
Figure 2024505674000065
２種の抗体ＣＡＮ０３及びＣＡＮ０４は、それぞれドメイン３及び２に結合し、ＩＬ－１シグナル伝達を阻害し、ＩＬ－３３シグナル伝達を部分的に阻害することが報告された（Wang et al., 2010, Nature Immunology, 11 :905-912及びＷＯ２０２０／０３５５７７を参照されたい）。
ＣＡＮ０４及びＣＡＮ０３を、ＷＯ２０２０／０３５５７７（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるＶＨ及びＶＬ配列に従って合成し、例示的な抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体（＃Ａ２）と比較するために使用した。
表３０は、ＣＡＮ０４対例示的な抗ＩＬ１ＲＡＰ（＃Ａ２）のキメラ前駆体の比較を要約している。ＣＡＮ０４ Ａｂは、Ｈｅｋ－Ｂｌｕｅ及びＮＣＩ－Ｈ２９２アッセイにおいて、複数の測定されたパラメーターにわたって、＃Ａ２のものほど広い阻害を示さず、ＷＢ（全血）アッセイにおいてＩＬ３６γに対する匹敵する阻害効力を実証したのみであった。
ＣＡＮ０３ Ａｂに関して、抗体結合は検出されたものの、本発明者らのインビトロスクリーニングアッセイにおいて測定可能な阻害はなかった（データ示されず）。これは、ＣＡＮ０３がＣＡＮ０４と組み合わされた場合のみ、測定可能なＩＬ－１Ｂ阻害が、ＣＡＮ０４単独のレベルでのみ検出されたという、ＷＯ２０２０／０３５５７７において報告された以前の知見と一致した。
Figure 2024505674000066
「ＣＡＮ０４」Ａｂは、ＩＬ１ＲＡＰのドメイン２に、すなわちＩＬ１ＲＡＰのアミノ酸１３５～２３４内に結合すると報告され（Wang et al., 2010, Nature Immunology, 11 :905-912を参照されたい）、ＣＡＮ０４抗体が結合するエピトープは、ＩＬ１ＲＡＰのアミノ酸１３５～１５４、１５５～１７４、１７５～１９４、１９５～２１４内、又はアミノ酸２１５～２３４の間に位置し得ることが報告された。「ＣＡＮ０３」抗体は、ＩＬ１ＲＡＰのアミノ酸２３５～３６９によって規定される構造領域からなる、ＩＬ１ＲＡＰのドメイン３に結合すると報告された。
しかしながら、＃Ａ２、並びにＣＡＮ０４及びＣＡＮ０３のエピトープについてのＨＤＸ測定を比較した場合、それらのエピトープは、重複するアミノ酸さえなく完全に異なっていた。これは、ＣＡＮ０４及びＣＡＮ０３によって認識される多様なエピトープの非線状の又は立体構造的な性質に起因する可能性がある。このことは、＃Ａ２抗体と比較した場合に、特に、阻害活性を有しないＣＡＮ０３の、生物学的活性の差も説明し得た。
（実施例５）
可溶性ＩＬ１ＲＡＰ及びｃｙｎｏ ＰＫの測定
可溶性ＩＬ１ＲＡＰは、ヒト及びカニクイザル血中に存在することが公知である。可溶性ＩＬ１ＲＡＰが、インビボで抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体のＰＫにどのように影響を及ぼし得るかを判定するために、遊離及び全体の抗ＩＬ１ＲＡＰのレベルを、ｃｙｎｏ血清サンプルにおいて定量した。
遊離抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の判定：
遊離抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の血清濃度を、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）法を使用して測定した。簡潔には、マイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ）を、２μｇ／ｍＬの組み換えカニクイザルＩＬ１ＲＡＰで２～８℃で一晩コートした。結合していない捕捉試薬を洗い流し（０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０を有する１×ＰＢＳ）、ウェルを５％ＢＳＡ（Ｓｅｒａｃａｒｅ）でブロッキングし、室温で１時間インキュベートした。次いでプレートを洗浄し、校正標準物質、ＱＣ、及びサンプル連続希釈物を添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、サル血清タンパク質に対してあらかじめ吸着されたホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を添加し、室温で１時間インキュベートした。洗浄後、結合しているＨＲＰコンジュゲートを、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質を用いて検出した。反応を１Ｍ Ｈ２ＳＯ４で停止させ、吸光度を、４５０及び６５０ｎｍ二重波長でＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）マイクロプレートリーダーを使用して測定した。産生されたシグナルは、サンプルに存在する抗Ａｎｇ１抗体の量と比例した。Ｓｏｆｔｍａｘ Ｐｒｏソフトウェア（ｖ５．４）を、４パラメーターロジスティックモデルを使用した校正標準曲線フィッティング、及びすべての未知のサンプル濃度の逆算に使用した。（図７Ａを参照されたい。）
全抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の判定
全抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の血清濃度を、均一のＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）電気化学発光アッセイを使用して測定した。簡潔には、ｇｏｌｄ ｓｍａｌｌ ｓｐｏｔ ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎプレート（ＭＳＤパーツ ＃Ｌ４５ＳＡ）を５％ＢＳＡ（Ｓｅｒａｃａｒｅ）で１時間ブロッキングした。次いで、プレートを洗浄し、校正標準物質、ＱＣ、及びサンプル連続希釈物を含有する、ビオチン、及びサル血清タンパク質に対してあらかじめ吸着されたＭＳＤスルホ－タグコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）の捕捉及び検出マスターミックスを添加し、室温で２時間インキュベートした。洗浄後、２×ＭＳＤ Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒを添加し、次いで電気化学発光シグナルをＳｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ ６０００機器で測定した。未知の血清濃度を、ＭＳＤ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェアを使用して、４パラメーターロジスティック方程式にフィットさせた標準曲線から算出した。（図７Ｂを参照されたい。）
遊離及び全体の可溶性ＩＬ１ＲＡＰの判定
遊離及び全体の可溶性ＩＬ１ＲＡＰ血清濃度を、それぞれ捕捉及び検出試薬としてビオチン化された及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７標識された抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体を用いたＧｙｒｏｌａｂ（商標）ワークステーションを使用して決定した。全可溶性ＩＬ１ＲＡＰ濃度を、治療用ｍＡｂ由来の個別のエピトープを認識するモノクローナル抗ＩＬ１ＲＡＰ捕捉及び検出抗体を使用して測定した。遊離可溶性ＩＬ１ＲＡＰ濃度を、モノクローナル抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体捕捉抗体、及び検出としての治療用抗ＩＬ１ＲＡＰを使用して測定した。参照標準物質及び研究サンプルを２％ＢＳＡ緩衝液に希釈した。サンプル及び試薬を９６ウェルポリプロピレンマイクロプレートに置き、機器にロードする前にマイクロプレートホイルシーラーで密封した。ＣＤ上の微細構造への捕捉試薬、サンプル、標準物質、検出試薬、及び洗浄溶液の添加は、完全に自動化された過程であった。アッセイの間、ビオチン化捕捉抗体、洗浄緩衝液から始めて、次いで校正標準物質、及びサンプル、洗浄緩衝液、次いでＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート検出抗体といった具合に、方法の構成要素を、Ｂｉｏａｆｆｙ ＣＤ上のマイクロカラム構造の内側のストレプトアビジンビーズにロボット制御でロードした。結合していないＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒを除去するための洗浄後、蛍光強度を測定し、それは、サンプルに存在する可溶性ＩＬ１ＲＡＰの分量と比例した。分析物濃度を、濃度値に変換されたＡｌｅｘａ６４７蛍光発光から導き出された蛍光値のデータ回帰から決定した。定量化は、組み換えカニクイザル標準曲線からの４パラメーターロジスティック（１／Ｙ２）回帰に基づいた。（図７Ｃを参照されたい。）
結果：
表面ＩＬ１ＲＡＰへの結合は、遮断活性に必要である。ＩＬ１ＲＡＰは、表面ＩＬ１ＲＡＰだけでなく可溶性形態のＩＬＲＡＰにも結合するものの、効果的な用量が予測され得た。
配列：
Figure 2024505674000067
Figure 2024505674000068
Figure 2024505674000069
Figure 2024505674000070
Figure 2024505674000071
Figure 2024505674000072
Figure 2024505674000073
Figure 2024505674000074
Figure 2024505674000075
Figure 2024505674000076
Figure 2024505674000077
Figure 2024505674000078
Figure 2024505674000079
Figure 2024505674000080
Figure 2024505674000081

Claims (48)

  1. ０．１ｎＭに等しい又は＜０．１ｎＭのＫDでヒトＩＬ１ＲＡＰに結合する抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  2. モノクローナル抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  3. ヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  4. ２００ｐＭに等しい又は＜２００ｐＭのＫDでヒト及びカニクイザルＩＬ１ＲＡＰに結合する、請求項３に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  5. ａ）配列番号３、６、１１７、１１８、１１９、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、又は１３５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４、７、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、又は１４１のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号８、１１、１２、１４、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、又は１４７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号９、１３、１５、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、又は１６７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０又は１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項１に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  6. ａ）配列番号３のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号１４６（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｍ又はＩ、Ｘ２＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ；Ｘ２＝Ａ又はＴ；Ｘ３＝Ｎ又はＡ；Ｘ４＝Ｑ又はＥ；Ｘ５＝Ｍ又はＫ；Ｘ６＝Ｑ又はＫ；Ｘ７＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｃ）配列番号３のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｄ）配列番号１４７（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｍ、Ｉ、Ｘ２＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ；Ｘ２＝Ａ又はＴ；Ｘ３＝Ｎ又はＡ；Ｘ４＝Ｑ又はＥ；Ｘ５＝Ｍ又はＫ；Ｘ６＝Ｑ又はＫ；Ｘ７＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｅ）配列番号３のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６６（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｇ）配列番号３のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６７（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ、Ｘ２＝Ｔ又はＡ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  7. ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号１４６（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｍ又はＩ、Ｘ２＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ；Ｘ２＝Ａ又はＴ；Ｘ３＝Ｎ又はＡ；Ｘ４＝Ｑ又はＥ；Ｘ５＝Ｍ又はＫ；Ｘ６＝Ｑ又はＫ；Ｘ７＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｄ）配列番号１４７（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｍ、Ｉ、Ｘ２＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ；Ｘ２＝Ａ又はＴ；Ｘ３＝Ｎ又はＡ；Ｘ４＝Ｑ又はＥ；Ｘ５＝Ｍ又はＫ；Ｘ６＝Ｑ又はＫ；Ｘ７＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｅ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６６（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｇ）配列番号１２７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６７（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ、Ｘ２＝Ｔ又はＡ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  8. ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号１４６（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｍ又はＩ、Ｘ２＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ；Ｘ２＝Ａ又はＴ；Ｘ３＝Ｎ又はＡ；Ｘ４＝Ｑ又はＥ；Ｘ５＝Ｍ又はＫ；Ｘ６＝Ｑ又はＫ；Ｘ７＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｄ）配列番号１４７（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｍ、Ｉ、Ｘ２＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ；Ｘ２＝Ａ又はＴ；Ｘ３＝Ｎ又はＡ；Ｘ４＝Ｑ又はＥ；Ｘ５＝Ｍ又はＫ；Ｘ６＝Ｑ又はＫ；Ｘ７＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｅ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６６（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｇ）配列番号１２７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６７（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ又はＧ、Ｘ２＝Ｔ又はＡ）のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  9. ａ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｃ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｅ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｇ）配列番号１３５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｑ又はＥ；Ｘ２＝Ｓ又はＮ；Ｘ３＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４１（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  10. ａ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｃ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｅ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｇ）配列番号１３５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｑ又はＥ；Ｘ２＝Ｓ又はＮ；Ｘ３＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４１（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  11. ａ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｃ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｄ）配列番号１４４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｅ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｇ）配列番号１３５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｑ又はＥ；Ｘ２＝Ｓ又はＮ；Ｘ３＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４１（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  12. ａ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｃ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｄ）配列番号１４４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｅ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｇ）配列番号１３５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｑ又はＥ；Ｘ２＝Ｓ又はＮ；Ｘ３＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４１（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  13. ａ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｃ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｅ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｇ）配列番号１３５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｑ又はＥ；Ｘ２＝Ｓ又はＮ；Ｘ３＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４１（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  14. ａ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｃ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｅ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｇ）配列番号１３５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｑ又はＥ；Ｘ２＝Ｓ又はＮ；Ｘ３＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４１（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  15. ａ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｃ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｄ）配列番号１４４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｅ）配列番号１３４（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ａ又はＴ；Ｘ２＝Ｑ又はＥ；Ｘ３＝Ｓ又はＮ；Ｘ４＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４０（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ；Ｘ２＝Ｓ又はＴ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域、又は
    ｇ）配列番号１３５（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｑ又はＥ；Ｘ２＝Ｓ又はＮ；Ｘ３＝Ｎ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１４１（式中、アミノ酸Ｘ１＝Ｋ又はＳ）のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｈ）配列番号１４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  16. ａ）配列番号３のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  17. ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  18. ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  19. ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  20. ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  21. ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  22. ａ）配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び
    ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  23. 配列番号１７、３６、４０、４７、５０、５１、又は５２のいずれか１種のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号６７、８６、９７、１００、１０１、又は１０２のいずれか１種のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  24. 配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号４０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項２３に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  25. 配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、又は１７６のいずれか１種のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、又は１８３のいずれか１種のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体。
  26. 配列番号１７０のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１７７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項２５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体。
  27. 配列番号１７１のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項２５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体。
  28. 配列番号１７２のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１７９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項２５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体。
  29. 配列番号１７３のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１８０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項２５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体。
  30. 配列番号１７４のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項２５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体。
  31. 配列番号１７５のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項２５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体。
  32. 配列番号１７６のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び配列番号１８３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項２５に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体。
  33. 配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１８のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１２０のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１２１のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１２２のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３８のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１２１のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３８のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１２０のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１２２のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１２３のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１２４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１４８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１１７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号１３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１２５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１２５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１４２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１２５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１５９のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号１２５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）；配列番号４のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）；配列番号５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）；配列番号１６０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）；配列番号１０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項１に記載の抗ＩＬ－３６Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  34. 配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号３３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号４５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号９９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号５３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号６１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；又は
    配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
    を含む、請求項３３に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  35. 医薬としての使用のための、請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は抗原結合フラグメント。
  36. 請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
  37. 疾患を治療する方法であって、それを必要とする患者に、請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗体若しくは抗原結合フラグメント、又はその医薬組成物を投与する工程を含み、疾患が、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害、上皮媒介性炎症性障害、線維症、及びがんから選択される、方法。
  38. 炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害、上皮媒介性炎症性障害、線維症、及びがんから選択される疾患を治療することにおける使用のための、請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は抗原結合フラグメント。
  39. 炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害、上皮媒介性炎症性障害、線維症、及びがんから選択される疾患を治療するための医薬の製造における、請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は抗原結合フラグメントの使用。
  40. 疾患が、乾癬、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、慢性喘息、及び強直性脊椎炎から選択される、請求項３７に記載の方法、請求項３８に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は請求項３９に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体若しくは抗原結合フラグメントの使用。
  41. 配列番号１～１６７又は１７０～１８３のうちの１種又は複数によって規定される配列をコードする、請求項１に記載の単離されたポリヌクレオチド。
  42. 請求項４１に記載のポリヌクレオチドを含むベクター、好ましくは発現ベクター、より好ましくは発現制御配列と機能的に結び付いた本発明に従ったポリヌクレオチドを含むベクター。
  43. 請求項４２に記載のポリヌクレオチド、及びベクターを含む宿主細胞。
  44. 請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は抗原結合フラグメントの産生のための方法であって、（ａ）抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は抗原結合フラグメントの発現を可能にする条件下で宿主細胞を培養する工程、及び（ｂ）抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体又は抗原結合フラグメントを回収する工程を含む方法。
  45. 請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体若しくは抗原結合フラグメント、又はその使用を含む診断用キット又は診断法。
  46. 炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害、上皮媒介性炎症性障害、線維症、がん、乾癬、乾癬性関節炎、多発性硬化症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、慢性喘息、又は強直性脊椎炎の診断のための、請求項４５に記載の診断用キット又は診断法。
  47. ＩＬ１ＲＡＰに結合した場合に、以下の残基Ｋ２３８、Ｎ２３９、Ｖ２４１、Ｖ２４４、Ｉ２４５、Ｈ２４６、Ｓ２４７、Ｎ２４９、Ｈ２５１、Ｖ２５２、Ｖ２５３、Ｙ２５４、Ｅ２５５、Ｋ２５６、Ｅ２６１、Ｌ２６３、Ｐ２６５、Ｔ２６７、Ｙ２６９、及びＳ２７１に結合し、請求項１～３４に記載の抗体のいずれかの結合を遮断する、単離された抗体又は抗原結合フラグメント。
  48. ＩＬ１ＲＡＰへの抗ＩＬ１ＲＡＰの結合を少なくとも８０％遮断する、請求項４７に記載の単離されたモノクローナル抗体。
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