TWI793069B - 升糖素及ｇｌｐ－１共促效劑於治療肥胖之用途 - Google Patents

Abstract

本文提供預防及治療患者之肥胖及糖尿病之方法，其包含投與GLP-1/升糖素促效劑肽。

Description

升糖素及GLP-1共促效劑於治療肥胖之用途

肥胖係世界範圍內主要且愈來愈大之健康問題。其與許多威脅生命之疾病(例如心血管疾病、腎病、高血壓、中風、不育、呼吸功能障礙及2型糖尿病)相關。

升糖素及升糖素樣肽-1(GLP-1)衍生自前高血糖素原，即一種在不同組織中經處理以形成多種不同高血糖素原衍生之肽(包括升糖素、升糖素樣肽-1(GLP-1)、升糖素樣肽-2(GLP-2)及胃泌酸調節素(OXM))之158個胺基酸前體多肽，且參與多種生理功能(包括葡萄糖穩態、胰島素分泌、胃排空及腸生長以及食物攝取之調控)。升糖素係對應於高血糖素原之胺基酸33至61(前高血糖素原之53至81)之29個胺基酸肽，而GLP-1產生為對應於高血糖素原之胺基酸72至108(前高血糖素原之92至128)之37個胺基酸肽。GLP-1(7-36)醯胺或GLP-1(7-37)酸係GLP-1之生物活性形式，其在GLP-1受體展現基本上等效之活性。

升糖素係由胰臟產生且與升糖素受體(「glucR」)相互作用。升糖素在肝中用於經由糖質新生及肝醣分解來升高血糖。在血糖開始下降時，升糖素向肝傳導信號以分解肝醣並釋放葡萄糖，從而引起血糖含量朝向正常值升高。 與升糖素相比，GLP-1具有不同生物活性。其係自腸L細胞分泌且結合至GLP-1受體。其活性包括胰島素合成及分泌之刺激、升糖素分泌之抑制及食物攝取之抑制。 已顯示升糖素及GLP-1 (其在其各別受體用作促效劑)在體重減輕中有效。某些GLP-1類似物正在銷售或正研發用於治療肥胖，包括(例如)利拉魯肽(Liraglutide) (VICTOZA®，來自Novo Nordisk)及艾塞那肽(Exenatide) (Byetta®，來自Eli Lilly/Amylin)。升糖素/GLP-1促效劑肽亦已揭示於WO 2014/091316中。 儘管一些療法可用於控制血糖，但目前無一達成實質體重減輕，此仍係患者之顯著未滿足之需要。50%患者在10年內自經口單一療法進行葡萄糖控制(通常利用二甲雙胍)演進至起始胰島素，在起始胰島素之前經常服用多個經口組合療法。胰島素之使用加劇增重，在開始胰島素療法後，增重可在第一年內高達6 kg。此增重可導致胰島素抗性增加，其與高血壓、異常血脂症及主要不良心血管事件之增加風險相關。關於降低胰島素抗性，顯著體重減輕(＞ 5%)係用以降低胰島素抗性之最佳介入，但目前此僅可經由強化飲食及生活方式介入及/或減重手術可靠地完成。仍需要使用在治療糖尿病及肥胖中治療有效但避免不良效應之劑量方案向人類投與GLP-1/升糖素促效劑肽之方法。

本文提供預防及治療患者之肥胖及糖尿病及相關病況之方法，其包含投與GLP-1/升糖素促效劑肽。 在一種情況下，減輕體重之方法包含向有需要之人類個體投與50-600 µg或100-600 µg包含HX₂ QGTFTSDX₁₀ SX₁₂ X₁₃ LX₁₅ X₁₆ X₁₇ X₁₈ AX₂₀ X₂₁ FX₂₃ X₂₄ WLX₂₇ X₂₈ GX₃₀ 之胺基酸序列之肽； 其中X₂ 係G或S，X₁₀ 係Y或K，X₁₂ 係K、E、R或S，X₁₃ 係K或Y，X₁₅ 係D或E，X₁₆ 係S或G，X₁₇ 係E、R、Q或K，X₁₈ 係R、S或A，X₂₀ 係R、K或Q，X₂₁ 係D或E，X₂₃ 係V或I，X₂₄ 係A或Q，X₂₇ 係E或V，X₂₈ 係A或K，且X₃₀ 係G或R (SEQ ID NO:4)。 在一種情況下，減少身體脂肪之方法包含向有需要之人類個體投與50-600 µg或100-600 µg包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之肽。 在一種情況下，治療肥胖之方法包含向有需要之人類個體投與50-600 µg或100-600 µg包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之肽。 在一種情況下，治療或預防由體重過重引起或特徵在於體重過重之疾病或病況的方法包含向有需要之人類個體投與50-600 µg或100-600 µg包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之肽。 在一種情況下，管控體重之方法包含向有需要之人類個體投與50-600 µg或100-600 µg包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之肽。 在一種情況下，治療非酒精性脂肪性肝炎(NASH)之方法包含向有需要之人類個體投與50-600 µg或100-600 µg包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之肽。 在一種情況下，增加脂質氧化之方法包含向有需要之人類個體投與50-600 µg或100-600 µg包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之肽。 在一種情況下，減少食物攝取之方法包含向有需要之人類個體投與50-600 µg或100-600 µg包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之肽。 在一種情況下，降低血糖之方法包含向有需要之人類個體投與50-600 µg或100-600 µg包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之肽。 在一種情況下，改善血糖控制之方法包含向有需要之人類個體投與50-600 µg或100-600 µg包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之肽。 在一種情況下，達成血糖控制之方法包含向有需要之人類個體投與50-600 µg或100-600 µg包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之肽。 在一種情況下，減輕體重及控制葡萄糖之方法包含向有需要之人類個體投與50-600 µg或100-600 µg包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之肽。 在一種情況下，個體患有糖尿病。在一種情況下，糖尿病係2型糖尿病。 在一種情況下，治療2型糖尿病之方法包含向人類投與包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之肽。 在一種情況下，改善患有2型糖尿病之人類個體之血糖控制的方法包含向個體投與50-600 µg或100-600 µg包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之肽。 在一種情況下，投與會減輕體重。在一種情況下，投與會治療肥胖。在一種情況下，投與會減少身體脂肪。 在一種情況下， X₂ 係G，X₁₀ 係K，X₁₂ 係E、R或S，X₁₃ 係K，X₁₇ 係E或K，X₁₈ 係S，X₂₀ 係R，X₂₇ 係E，或X₂₈ 係A。 在一種情況下， X₂ 係G，X₁₀ 係K，X₁₂ 係E、R或S，X₁₃ 係K，X₁₇ 係E或K，X₁₈ 係S，X₂₀ 係R，X₂₇ 係E，且X₂₈ 係A。 在一種情況下，肽包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列、基本上由其組成或由其組成。 在一種情況下，投與包含投與初始劑量達3至10天及其後第二較高劑量。 在一種情況下，投與初始劑量達3至7天。在一種情況下，初始劑量係100 µg肽。在一種情況下，投與第二劑量達至少4天。在一種情況下，投與初始劑量達連續4天且投與第二劑量達至少連續4天。在一種情況下，第二劑量係150-200 µg肽。在一種情況下，第二劑量係150 µg肽或200 µg肽。 在一種情況下，投與進一步包含在第二劑量後投與第三劑量，其中第三劑量高於第二劑量。在一種情況下，投與初始劑量達3至10天且投與第二劑量達3至10天。在一種情況下，投與初始劑量達3至7天且投與第二劑量達3至7天。在一種情況下，投與初始劑量達連續4天，投與第二劑量達連續4天，且投與第三劑量達至少連續4天。在一種情況下，投與初始劑量達連續4天，投與第二劑量達連續7天，且投與第三劑量達至少連續4天。在一種情況下，第三劑量係200-400 µg肽。在一種情況下，第三劑量係200 µg肽、300 µg肽或400 µg肽。 在一種情況下，投與100 μg之初始劑量達4天，投與150 μg之第二劑量達4天，且隨後每日投與200 μg之第三劑量。在一種情況下，投與100 μg之初始劑量達5天，投與150 μg之第二劑量達5天，且投與200 μg之第三劑量達5天，且隨後每日投與300 μg之第四劑量。在一種情況下，投與100 μg之初始劑量達5天，投與200 μg之第二劑量達5天，且隨後每日投與300 μg之第三劑量。 在一種情況下，投與50 µg肽。在一種情況下，投與100 µg肽。在一種情況下，投與150 µg肽。在一種情況下，投與200 µg肽。在一種情況下，投與250 µg肽。在一種情況下，投與300 µg肽。在一種情況下，投與400 µg肽。 在一種情況下，每日投與肽。在一種情況下，每日一次投與肽。 在一種情況下，投與肽達至少1週、至少2週、至少3週或至少4週。 在一種情況下，藉由注射投與肽。在一種情況下，投與係皮下。 在一種情況下，投與引起在混合飲食測試後濃度-時間曲線下葡萄糖面積減少至少20%。 在一種情況下，葡萄糖減少。在一種情況下，葡萄糖係空腹血糖。在一種情況下，葡萄糖係來自混合飲食測試之餐後葡萄糖。 在一種情況下，投與引起體重減輕至少1.0 kg、至少1.3 kg或約1.3至約2.0 kg。在一種情況下，個體之體重減輕至少3.5 kg或至少5 kg。在一種情況下，個體之體重減輕至少2%、至少4%、至少5%或至少10%。在一種情況下，個體之體重減輕約2%至約20%、約2%至約25%或約2%至約30%。 在一種情況下，脂肪係肝脂肪。在一種情況下，個體之肝脂肪減少至少20%。在一種情況下，個體之肝脂肪減少約20%至約40%。在一種情況下，投與引起肝脂肪減少約三分之一。在一種情況下，個體之肝體積減小。 在一種情況下，投與降低血紅素A1c (HbA1c)含量。在一種情況下，個體之HbA1c含量減少至少0.6 %。在一種情況下，個體之HbA1c含量減少至少0.9%。在一種情況下，個體之HbA1c含量減少約0.5%至約1.5%、約0.5%至約2%或約0.5%至約3%。在一種情況下，個體之HbA1c含量減少至6.3%或更低。 在一種情況下，投與降低果糖胺含量。 在一種情況下，個體之食慾降低。 在一種情況下，個體之能量消耗減少。 在一種情況下，疾病演進停止。在一種情況下，疾病演進逆轉。 在一種情況下，肽係藉由固相合成以合成方式製得。在一種情況下，固相合成使用茀基甲基氧基羰基氯化學。 在一種情況下，肽中之X₃₀ 之羧基係未經修飾之G或R。在一種情況下，肽中之X₃₀ 之羰基經醯胺化。 在一種情況下，肽包含離胺酸殘基之N(ε)基團上之棕櫚醯基部分。在一種情況下，棕櫚醯基經由連接體連接至離胺酸。在一種情況下，連接體係γ麩胺酸酯。在一種情況下，肽包含離胺酸殘基之N(ε)基團上之硬脂醯基或硬脂酸酯部分。在一種情況下，離胺酸殘基係X₁₀ 。 在一種情況下，肽在cAMP分析1中以小於10,000 pM、小於5000 pM、小於2500 pM、小於1000 pM、小於900 pM、小於800 pM、小於700 pM、小於600 pM、小於500 pM、小於400 pM、小於300 pM、小於200 pM、小於100 pM、小於50 pM、小於25 pM、小於20 pM、小於15 pM、小於10 pM、小於5 pM、小於4 pM、小於3 pM或小於2 pM之EC50結合至人類升糖素受體。 在一種情況下，肽在cAMP分析1中以小於10,000 pM、小於5000 pM、小於2500 pM、小於1000 pM、小於900 pM、小於800 pM、小於700 pM、小於600 pM、小於500 pM、小於400 pM、小於300 pM、小於200 pM、小於100 pM、小於50 pM、小於25 pM、小於20 pM、小於15 pM、小於10 pM、小於5 pM、小於4 pM、小於3 pM或小於2 pM之EC50結合至人類GLP-1受體。 在一種情況下，肽係GLP-1活性之促效劑、升糖素活性之促效劑或GLP-1及升糖素活性二者之促效劑。 在一種情況下，肽結合至升糖素受體及GLP-1受體二者，其中肽展現於在GLP-1受體處較在升糖素受體處大至少約2倍、5倍或10倍之相對於天然配體之活性。 在一種情況下，肽進一步包含異源部分。在一種情況下，異源部分係蛋白質、肽、蛋白質結構域、連接體、有機聚合物、無機聚合物、聚乙二醇(PEG)、生物素、白蛋白、人類血清白蛋白(HSA)、HSA FcRn結合部分、抗體、抗體之結構域、抗體片段、單鏈抗體、結構域抗體、白蛋白結合結構域、酶、配體、受體、結合肽、非-FnIII架構、表位標識、重組體多肽聚合物、細胞介素、脂質或所述部分中之兩者或更多者之組合。 在一種情況下，個體之身體質量指數(BMI)為27至40 kg/m² 。在一種情況下，個體之BMI為30-39.9 kg/m² 。在一種情況下，個體之BMI為至少40 kg/m² 。 在一種情況下，個體係超重。在一種情況下，個體係肥胖。在一種情況下，個體係(i) 超重且(ii) 具有高血壓、2型糖尿病、異常血脂症、心血管疾病史或其組合。在一種情況下，個體係(i) 超重且(ii) 具有血糖代謝障礙、高血壓、異常血脂症、阻塞性 睡眠呼吸中止或其組合。 在一種情況下，個體接受胰島素療法。在一種情況下，所投與胰島素之量減少。在一種情況下，停止胰島素療法。 在一種情況下，個體接受胰島素、二甲雙胍(metformin)、磺脲、鈉-葡萄糖共運輸蛋白-2 (sglt-2)抑制劑、二肽基肽酶-4 (DPP-IV)抑制劑、欣促胰(glutazone)、α葡萄糖苷酶抑制劑或其組合。 在一種情況下，肽之半衰期係約10至約12小時。 在一種情況下，投與係飲食及鍛練之輔助。 在一種情況下，肽包含SEQ ID NO:19，且肽係以100 μg之初始劑量投與4天，以150 μg之第二劑量投與4天，且隨後以200 μg之劑量每日投與。 在一種情況下，肽包含SEQ ID NO:19，且肽係以100 μg之初始劑量投與5天，以200 μg之第二劑量投與5天，且隨後以300 μg之劑量每日投與。 在一種情況下，肽包含SEQ ID NO:19，且肽係以100 μg之初始劑量投與5天，以150 μg之第二劑量投與5天，以200 μg之第二劑量投與5天，且隨後以300 μg之劑量每日投與。 在一種情況下，個體患有2型糖尿病。在一種情況下，個體係肥胖。在一種情況下，個體係(i) 超重且(ii) 具有高血壓、2型糖尿病、異常血脂症、心血管疾病史或其組合。在一種情況下，個體係(i) 超重且(ii) 具有血糖代謝障礙、高血壓、異常血脂症、阻塞性 睡眠呼吸中止或其組合。

相關申請案交叉參考 本申請案主張於2016年3月10日提出申請之美國臨時申請案第62/306,121號之權益，其全文以引用方式併入本文中。以電子方式提交之序列表參考 與本申請案一起申請之ASCII文字檔案中以電子方式提交之序列表之內容(名稱：Sequencelisting_ST25.txt；大小：14,333個字節；及創建日期：2017年3月6日)的全文以引用方式併入本文中。 定義 貫穿本揭示內容，術語「一(a或an)」個實體係指一或多個該實體；例如，「多核苷酸」理解為表示一或多種多核苷酸。因此，術語「一(a)」(或「一(an)」)、「一或多個」及「至少一個」在本文中可互換使用。 此外，「及/或」在本文中使用時應理解為具有或無他特徵或組份之兩個指定特徵或組份中之每一者之具體揭示。因此，如(例如)本文中片語「A及/或B」中所用術語「及/或」意欲包括「A及B」、「A或B」、「A」 (單獨)及「B」 (單獨)。同樣，如(例如)「A、B及/或C」等片語中所用之術語「及/或」涵蓋以下態樣中之每一者：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A (單獨)；B (單獨)；及C (單獨)。 應理解，無論本文中何處以言語「包含」闡述態樣，亦提供以「由……組成」及/或「基本上由……組成」之術語闡述之其他類似態樣。「包含」特定胺基酸序列之肽係指含有胺基酸序列之肽，其中肽可含有或可不含其他胺基酸或胺基酸序列之其他修飾。「由特定胺基酸序列組成」之肽係指僅含有胺基酸序列且無其他胺基酸或胺基酸序列之其他修飾的肽。「包含」「由特定胺基酸序列組成」之胺基酸序列的肽係指含有胺基酸序列且無其他胺基酸之肽；然而，肽可包含胺基酸序列之其他修飾(例如，醯基部分或棕櫚醯基部分)。 除非另外定義，否則本文所用所有技術及科學術語皆具有與熟習本揭示內容所屬領域技術者之通常理解相同之意義。舉例而言，Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 第2版, 2002, CRC Press；The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 第3版, 1999, Academic Press；及Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, 修訂, 2000, Oxford University Press提供熟練人員用於本揭示內容中之許多術語之一般辭典。 單位、前綴及符號係以其國際單位製(Système International de Unites，SI)接受之形式來表示。數字範圍包括界定該範圍之數字。除非另外指示，否則胺基酸序列係按胺基至羧基取向自左至右書寫。本文提供之標題並不限制本揭示內容之各個態樣，該等態樣可參照整體說明書來掌握。因此，下文即將定義之術語係參照說明書全文更全面地定義。 如本文所用術語「多肽」意欲涵蓋單一「多肽」以及複數個「多肽」，且包含兩個或更多個胺基酸之任一或多條鏈。因此，如本文所用，「肽」、「肽亞單位」、「蛋白質」、「胺基酸鏈」、「胺基酸序列」或用於指兩個或更多個胺基酸之一或多條鏈之任何其他術語包括於「多肽」之定義中，即使該等術語中之每一者皆可具有更具體含義。術語「多肽」可代替該等術語中之任一者適用或與其互換使用。該術語進一步包括經歷轉譯後或合成後修飾(例如，醣基化、乙醯化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護/封端基團之衍化、蛋白水解裂解或藉由非天然胺基酸修飾)的多肽。 更特定而言，如本文所用術語「肽」涵蓋全長肽及其片段、變體或衍生物，例如GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，29、30或31個胺基酸長)。如本文揭示之「肽」(例如，GLP-1/升糖素促效劑肽)可為包含其他組份(例如，Fc結構域或白蛋白質結構域)以增加半衰期之融合多肽之部分。如本文所述肽亦可以多種不同方式衍化。 術語「經分離」係指肽或核酸通常將根據本發明之狀態。經分離肽及經分離核酸將不含或實質上不含其天然結合之物質，例如在其天然環境或在該製劑係藉由重組體DNA技術在活體外或活體內實踐時其製備(例如細胞培養)之環境中發現之其他肽或核酸。可將肽及核酸與稀釋劑或佐劑調配在一起且仍出於實際目的經分離 - 例如，若用於塗佈微量滴定板用於免疫分析，通常將肽與明膠或其他載劑混合，或在用於診斷或療法時與醫藥上可接受之載劑或稀釋劑混合。 「重組體」肽係指經由重組體DNA技術產生之肽。認為宿主細胞中表現之重組體產生之肽出於本發明目的經分離，如同藉由任何適宜技術分離、分級分離或部分或實質上純化之天然或重組體多肽。 術語「片段」、「類似物」、「衍生物」或「變體」在指GLP-1/升糖素促效劑肽時包括保留至少一些期望活性(例如，結合至升糖素及/或GLP-1受體)之任何肽。本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽之片段包括在表現、純化及或投與個體期間展現期望性質之蛋白水解片段、缺失片段。 如本文所用術語「變體」係指由於胺基酸取代、缺失、插入及/或修飾不同於所述肽之肽。變體可使用業內已知之誘變技術產生。變體亦可或另一選擇為含有其他修飾-例如，肽可結合或偶聯(例如，融合)至異源胺基酸序列或其他部分，例如用於增加半衰期、溶解性或穩定性。欲結合或偶聯至本文提供之肽之部分之實例包括(但不限於)白蛋白、免疫球蛋白Fc區、聚乙二醇(PEG)及諸如此類。為便於肽(例如，6-His)之合成、純化或鑑別，或為增強多肽與固體載體之結合，亦可將肽結合至或使其偶聯至連接體或其他序列於。 如本文所用術語「序列一致性」係指兩個或更多個多核苷酸序列之間或兩個或更多個多肽序列之間之關係。在一個序列中之位置由比較序列之相應位置中之相同核酸鹼基或胺基酸佔據時據稱序列在該位置「一致」。藉由測定在兩個序列中出現一致核酸鹼基或胺基酸之位置之數目以產生「一致」位置之數目來計算「序列一致性」百分比。隨後將「一致」位置之數目除以比較窗中位置之總數目並乘以100以產生「序列一致性」百分比。藉由在比較窗內比較兩個最佳比對之序列測定「序列一致性」百分比。為最佳比對序列用於比較，比較窗中多核苷酸或多肽之部分可包含添加或缺失(稱作空位)，而參照序列保持恆定。最佳比對在於比對即使具有空位，亦在參照序列與比較序列之間產生最大可能數目之「一致」位置。兩個序列之間之「序列一致性」百分比可使用程式「BLAST 2 Sequences」之形式測定，該程式可自截至2004年9月1日之國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information)獲得，該程式納入程式BLASTN (用於核苷酸序列比較)及BLASTP (用於多肽序列比較)，該等程序係基於Karlin及Altschul之算法(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(12):5873-5877, 1993)。在利用「BLAST 2 Sequences」時，截至2004年9月1日作為缺省參數之參數可用於字號(3)、開放空位罰分(11)、擴展空位罰分(1)、減少空位(50)、預期值(10)及任何其他所需參數(包括但不限於矩陣選項)。 術語「組合物」或「醫藥組合物」係指含有本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽以及(例如)醫藥上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑之組合物，其用於投與需要治療之個體，例如治療 肥胖之人類個體。 術語「醫藥上可接受的」係指在合理醫學判斷範圍內適於接觸人類及動物之組織且無過度毒性或其他併發症且與合理效益/風險比相稱的組合物。 「有效量」係以單一劑量或作為系列之部分投與個體可有效治療(例如肥胖之治療)之本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽之量。例如在該量投與引起體重減輕或體重維持(例如，預防增重)、身體脂肪損失、預防或調節低血糖症、預防或調節高血糖症、促使胰島素合成或減少食物攝取中之一或多者時，該量有效。此量可為所有所治療個體之固定劑量，或根據欲治療個體之體重、健康及身體情況、所期望體重減輕或體重維持之程度、肽之調配物、醫學情況之專業評估及其他相關因素而變。 術語「個體」意指需要用本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽治療之任何個體、具體而言哺乳動物個體。哺乳動物個體包括(但不限於)人類、狗、貓、天竺鼠、兔、大鼠、小鼠、馬、牛、熊、牛、猿、猴、猩猩及黑猩猩等。在一個實施例中，個體係人類個體。 如本文所用「有需要之個體」係指期望治療之個體，例如期望在指定時間段內有利於體重或身體脂肪損失、體重或身體脂肪維持、或預防或最小化增重的肥胖個體或易於肥胖之個體。 諸如「治療」(「treating」或「treatment」或「to treat」)等術語係指治癒經診斷病理學病況或病症及/或停止其演進之治療措施。諸如「預防」等術語係指預防靶向之病理學病況或病症及/或減緩其演進的預防性或防止性措施。因此，需要治療之彼等包括已患有疾病或病況之彼等。需要預防之彼等包括易於患有疾病或病況之彼等及欲預防疾病或病況之彼等。舉例而言，片語「治療患有由體重過重引起或特徵在於體重過重之疾病或病況之患者」係指將疾病或病況之嚴重程度降低至個體不再因其不適及/或功能改變的程度。片語「預防」由體重過重引起或特徵在於體重過重之疾病或病況係指降低疾病或病況之潛能及/或減少疾病或病況之出現(例如與未經治療患者相比，出現相對減少)。 諸如「減小嚴重程度」等術語係指減慢或減輕經診斷病理學病況或病症之症狀的治療措施。舉例而言，「減小由體重過重引起或特徵在於體重過重之疾病或病況之嚴重程度」係指降低疾病或病況之嚴重程度(例如，在與未經治療之患者相比時體重減輕患者或葡萄糖控制增加)。 如本文所用「GLP-1/升糖素促效劑肽」係相對於天然升糖素在升糖素受體展現至少約1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或更大之活性的嵌合肽且在分析1之條件下相對於天然GLP-1亦在GLP-1受體展現約至少約1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或更大的活性。 如本文所用術語「天然升糖素」係指天然存在之升糖素，例如包含SEQ ID NO: 1之序列之人類升糖素。術語「天然GLP-1」係指天然存在之GLP-1，例如人類GLP-1，且係涵蓋(例如) GLP-1(7-36)醯胺(SEQ ID NO: 2)、GLP-1(7-37)酸(SEQ ID NO: 3)或彼等兩種化合物之混合物的通用術語。如本文所用，在不存在任何其他指示下一般提及「升糖素」或「GLP-1」時分別欲指天然人類升糖素或天然人類GLP-1。除非另有指示，否則「升糖素」係指人類升糖素，且「GLP-1」係指人類GLP-1。 GLP-1/ 升糖素促效劑肽 本文提供結合至升糖素受體及GLP-1受體二者之肽。實例性肽提供於WO 2014/091316中，該案件之全文以引用方式併入本文中。在某些實施例中，肽係MEDI0382，即具有SEQ ID NO:19之序列且含有γ麩胺酸酯連接體及殘基10處之棕櫚醯基衍化的30個胺基酸直鏈肽。在某些實施例中，本文提供之肽係升糖素及GLP-1活性之共促效劑。該等肽在本文中稱作GLP-1/升糖素促效劑肽。如本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽具有游離比率之GLP-1及升糖素活性以促進體重減輕、預防增重或維持期望體重，且具有最佳化溶解性、可調配性及穩定性。在某些實施例中，如本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽在人類GLP1及人類升糖素受體有活性，在某些實施例中，相對於天然配體，其在GLP-1受體之活性比在升糖素受體高至少約1倍、2倍 5倍、8倍、10倍、15倍、20倍或25倍。 在某些實施例中，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽在升糖素及GLP-1受體具有期望功效，且具有用於促進體重減輕之期望相對功效。在某些實施例中，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽在GLP-1受體展現活體外功效，如藉由cAMP分析1中(參見實例2)小於10,000 pM、小於5000 pM、小於2500 pM、小於1000 pM、小於900 pM、小於800 pM、小於700 pM、小於600 pM、小於500 pM、小於400 pM、小於300 pM、小於200 pM、小於100 pM、小於50 pM、小於25 pM、小於20 pM、小於15 pM、小於10 pM、小於5 pM、小於4 pM、小於3 pM或小於2 pM之EC50所顯示。在某些實施例中，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽在GLP-1受體展現活體外功效，如藉由cAMP分析中4.4%人類血清白蛋白(分析2，參見實例2)中小於10,000 pM、小於5000 pM、小於2500 pM、小於1000 pM、小於900 pM、小於800 pM、小於700 pM、小於600 pM、小於500 pM、小於400 pM、小於300 pM、小於200 pM、小於100 pM、小於50 pM、小於25 pM、小於20 pM、小於15 pM、小於10 pM、小於5 pM、小於4 pM、小於3 pM或小於2 pM之EC50所顯示。在某些實施例中，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽在升糖素受體展現活體外功效，如由cAMP分析1中(參見實例2)小於10,000 pM、小於5000 pM、小於2500 pM、小於1000 pM、小於900 pM、小於800 pM、小於700 pM、小於600 pM、小於500 pM、小於400 pM、小於300 pM、小於200 pM、小於100 pM、小於50 pM、小於25 pM、小於20 pM、小於15 pM、小於10 pM、小於5 pM、小於4 pM、小於3 pM或小於2 pM之EC50所顯示。在某些實施例中，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽在升糖素受體展現活體外功效，如藉由cAMP分析中4.4%人類血清白蛋白(分析2，參見實例2)中小於10,000 pM、小於5000 pM、小於2500 pM、小於1000 pM、小於900 pM、小於800 pM、小於700 pM、小於600 pM、小於500 pM、小於400 pM、小於300 pM、小於200 pM、小於100 pM、小於50 pM、小於25 pM、小於20 pM、小於15 pM、小於10 pM、小於5 pM、小於4 pM、小於3 pM或小於2 pM之EC50所顯示。在某些實施例中，在與天然配體相比時，在使用分析2時，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽具有相對GLP1-R/glucR功效比率，其範圍為約0.01至0.50，例如約0.02至0.30，例如約0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10、0.11、 0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.20、0.21、0.22、0.23、0.24、0.25、0.26、0.27、0.28或0.30。 在某些實施例中，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽在葡萄糖依賴性促胰島素性肽(胃抑制性肽) (GIPR)展現活體外功效，如藉由cAMP分析1中(參見實例2)小於10,000 pM、小於5000 pM、小於2500 pM、小於1000 pM、小於900 pM、小於800 pM、小於700 pM、小於600 pM、小於500 pM、小於400 pM、小於300 pM、小於200 pM、小於100 pM、小於50 pM、小於25 pM、小於20 pM、小於15 pM、小於10 pM、小於5 pM、小於4 pM、小於3 pM或小於2 pM之EC50所顯示。在某些實施例中，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽在GIPR展現活體外功效，如藉由cAMP分析中4.4%人類血清白蛋白(分析2，參見實例2)中小於10,000 pM、小於5000 pM、小於2500 pM、小於1000 pM、小於900 pM、小於800 pM、小於700 pM、小於600 pM、小於500 pM、小於400 pM、小於300 pM、小於200 pM、小於100 pM、小於50 pM、小於25 pM、小於20 pM、小於15 pM、小於10 pM、小於5 pM、小於4 pM、小於3 pM或小於2 pM之EC50所顯示。 在某些實施例中，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽具有可接受溶解性、易於可調配性、血漿穩定性及改善之藥物動力學性質之一或多個準則。在某些實施例中，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽可溶於寬pH範圍內之標準緩衝液中。 在某些實施例中，GLP-1/升糖素促效劑肽可以高達0.5 mg/ml、0.6 mg/ml、0.7 mg/ml、0.8 mg/ml、0.9 mg/ml、1 mg/ml、2 mg/ml、3 mg/ml、4 mg/ml、5 mg/ml、6 mg/ml、7 mg/ml、8 mg/ml、9 mg/ml、10 mg/ml或更大之濃度溶於常見緩衝溶液中，溶於緩衝液系統中且具有(例如) 0.25至150 mM之離子強度範圍，包括但不限於磷酸鹽緩衝液、Tris緩衝液、麩胺酸鹽緩衝液、乙酸鹽緩衝液、琥珀酸鹽緩衝液或組胺酸緩衝液。實例性緩衝液包括100 mM麩胺酸鹽pH 4.5緩衝液、100 mM乙酸鹽pH 5緩衝液、100 mM琥珀酸鹽pH 5緩衝液、100 mM磷酸鹽pH 6緩衝液、100 mM組胺酸pH 6緩衝液、100 mM磷酸鹽pH 6.5緩衝液、100 mM磷酸鹽pH 7.0緩衝液、100 mM組胺酸pH 7.0緩衝液、100 mM磷酸鹽pH 7.5緩衝液、100 mM Tris pH 7.5緩衝液及100 mM Tris pH 8.0緩衝液。在某些實施例中，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽可以0.8mg/ml溶於(例如) pH 4.0至pH 8.0之pH範圍內、例如於pH 4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0或8.5下之標準緩衝液中。在某些實施例中，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽可溶於pH 4.5至8.0、5.0至8.0、5.5至8.0、6.0至8.0、6.5至8.0、7.0至8.0、4.5至8.5、5.5至8.5、5.5至8.5、6.0至8.5、6.5至8.5或7.0至8.5之標準緩衝液中。 在某些實施例中，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽可調配於標準醫藥調配物中。實例性調配物包括(但不限於)：0.1M Tris pH 7.5、150mM甘露醇，最終調配物pH= 7.2；0.05M Tris、50mM精胺酸/脯胺酸，最終調配物pH= 8.0；或磷酸鈉緩衝液(pH8)/ 1.85 % W/V丙二醇，最終調配物pH= 7.0。在某些實施例中，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽可以高達0.5 mg/ml、0.6 mg/ml、0.7 mg/ml、0.8 mg/ml、0.9 mg/ml、1 mg/ml、2 mg/ml、3 mg/ml、4 mg/ml、5 mg/ml、6 mg/ml、7 mg/ml、8 mg/ml、9 mg/ml、10 mg/ml或更大之濃度溶於該等或其他調配物中。 在某些實施例中，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽針對血清或血漿中之蛋白酶可接受地穩定。升糖素或GLP-1之常見降解產物包括+1產物(酸)及DPP IV-裂解產物。具有+1質量之產物可由麩醯胺酸之醯胺基團或C-末端之去醯胺來產生。裂解產物係自血漿中蛋白酶DPP IV之作用來產生。在某些實施例中，於37℃下在血漿中24小時後，如所揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽在血漿中以高達30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%之程度保持穩定。 本文提供包含以下胺基酸序列之GLP-1/升糖素促效劑肽： HX2QGTFTSDX10SX12X13LX15X16X17X18AX20X21FX23X24WLX27X28GX30； 其中X2係G或S，X10係Y或K，X12係K、E、R或S，X13係K或Y，X15係D或E。X16係S或G，X17係E、R、Q或K，X18係R、S或A，X20係R、K或Q，X21係D或E，X23係V或I，X24係A或Q，X27係E或V，X28係A或K，且X30係G或R (SEQ ID NO:4)。在某些實施例中，提供上文所示經分離肽(SEQ ID NO:4)，其中X2係G，X10係K，X12係E、R或S，X13係K，X17係E或K，X18係S，X20係R，X27係E，及/或X28係A。在某些實施例中，提供上述經分離肽(SEQ ID NO:4)，其中X10係K，X12係E，X17係E，X20係R，X27係E，及/或X28係A。 在某些實施例中，提供上文所示經分離肽，其中X2係S，X10係Y或K，X12係K、E，R或S，X13係K或Y，X15係D，X16係S，X17係E、R、Q或K，X18係R、S或A，X20係R，X21係D，X23係V，X24係A，X27係E或V，X28係A，且X30係G (SEQ ID NO:5)。在某些實施例中，提供上文所示經分離肽，其中X2係S，X10係Y或K，X12係K、E、R或S，X13係K或Y，X15係D，X16係S，若X17係E且X18係R，或若X17係R且X18係S，則X20係R，X21係D，X23係V，X24係A，X27係E或V，X28係A，且X30係G (分別SEQ ID NO: 6及SEQ ID NO. 7)。在某些實施例中，提供上文所示經分離肽，其中X2係S，X10係Y，X12係K，X13係K，X15係D，X16係S，若X17係E且X18係R，或若X17係R且X18係S，則X20係R，X21係D，X23係V，X24係A，X27係V，X28係A，且X30係G (分別SEQ ID NO: 8及SEQ ID NO: 9)。在某些實施例中，提供上文所示經分離肽，其中X2係S，X10係K，X12係K、E、R或S，X13係Y，X15係D，X16係S，若X17係E且X18係R，且若X17係R且X18係S，則X20係R，X21係D，X23係V，X24係A，X27係E，X28係A，且X30係G (分別SEQ ID NO: 10及SEQ ID NO: 11)。在某些實施例中，提供上文所示經分離肽，其中X2係S，X10係K，X12係E，X13係Y，X15係D，X16係S，若X17係E且X18係R，或若X17係R且X18係S，X20係R，X21係D，X23係V，X24係A，X27係E，X28係A，且X30係G (分別SEQ ID NO: 12及SEQ ID NO: 13)。在某些實施例中，提供上文所示經分離肽，其中X2係S，X10係K，X12係R，X13係Y，X15係D，X16係S，若X17係E且X18係R，或若X17係R且X18係S，則X20係R，X21係D，X23係V，X24係A，X27係E，X28係A，且X30係G (分別SEQ ID NO: 14及SEQ ID NO: 15)。 本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽包括(但不限於) G730 (SEQ ID NO: 16)、G797 (SEQ ID NO: 17)、G849 (SEQ ID NO: 18)、G933 (SEQ ID NO: 19)、G865 (SEQ ID NO: 20)、G796 (SEQ ID NO: 21)、G812 (SEQ ID NO: 22)及G380 (SEQ ID NO: 23)。該等GLP-1/升糖素促效劑肽列示於表1中：表 1 ： GLP-1/ 升糖素肽序列

K(gE-Palm) = 具有經由γ麩胺酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸。 在某些實施例中，經分離肽係G933 (SEQ ID NO: 19)。 肽G797及G933二者在位置12具有麩胺酸酯殘基，且在升糖素及GLP-1受體二者維持穩健活性，如實例2中所顯示。相應殘基係艾塞那肽-4及升糖素中之離胺酸且係GLP-1中之絲胺酸。儘管認為此殘基不接觸受體，但自正性至負性之電荷變化可改善毗鄰環境。此外，G797、G849及G933在位置27具有麩胺酸酯殘基。殘基27係艾塞那肽4中之離胺酸且係GLP1 (纈胺酸)及升糖素(甲硫胺酸)中之不帶電之疏水殘基。艾塞那肽之離胺酸於殘基Glu127及Glu24處與GLP1受體靜電相互作用(C.R.Underwood等人J Biol Chem 285 723-730 (2010)；S.Runge等人J Biol Chem 283 11340-11347 (2008))。儘管在位置27之電荷變為負性時可能預計GLP1R功效之損失，但電荷與G797、G849及G933中之GLP1R活性相容。 MEDI0382係升糖素樣肽-1 (GLP-1)及升糖素受體之合成肽雙重促效劑。MEDI0382係G933 (SEQ ID NO: 19)，其含有γ麩胺酸酯連接體及殘基10處棕櫚醯基衍化。 MEDI0382係經化學合成。藉助固相肽合成器使用製造商供應之用於Fmoc-胺基酸之偶合之方案來實施樹脂上之肽鏈伸長。用不易於去醯胺之胺基酸取代麩醯胺酸殘基20及24，且用麩胺酸酯置換精胺酸殘基17以降低對蛋白分解之易感性。 下文顯示MEDI0382之序列： L-組胺醯基-L-絲胺醯基-L-麩醯胺醯基甘胺醯基-L-蘇胺醯基-L-苯丙胺醯基-L-蘇胺醯基-L-絲胺醯基-L-α-天冬胺醯基-(N6-[N-(1-側氧基十六烷基)-L-γ-麩胺醯基])L-離胺醯基-L-絲胺醯基-L-α-麩胺醯基-L-酪胺醯基-L-白胺醯基-L-α-天冬胺醯基-L-絲胺醯基-L-α-麩胺醯基-L-精胺醯基-L-丙胺醯基-L-精胺醯基-L-α-L-天冬胺醯基-L-苯丙胺醯基-L-纈胺醯基-L-丙胺醯基-L-色胺醯基-L-白胺醯基-L-α-麩胺醯基-L-丙胺醯基甘胺醯基甘胺酸

製造 GLP-1/ 升糖素促效劑 肽之方法 本揭示內容提供製造GLP-1/升糖素促效劑肽之方法。本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽可藉由任何適宜方法製得。舉例而言，在某些實施例中，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽係藉由彼等熟習此項技術者熟知之方法、例如藉由如Merrifield (1963,J. Am. Chem. Soc. 85 :2149-2154)所述之固相合成來化學合成。固相肽合成可藉由(例如)使用自動化合成器、使用標準試劑來完成，例如如實例1中所解釋。 或者，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽可使用如熟習此項技術者將熟知之習用載體/宿主細胞組合重組體產生。多種方法可用於重組體產生GLP-1/升糖素促效劑肽。通常，將編碼GLP-1/升糖素促效劑肽之多核苷酸序列插入適當表現媒劑(例如，含有所插入編碼序列之轉錄及轉譯所必需之元件的載體)中。將編碼GLP-1/升糖素促效劑肽之核酸以適當閱讀框插入載體中。隨後將表現載體轉染至將表現GLP-1/升糖素促效劑肽之適宜宿主細胞中。適宜宿主細胞包括(但不限於)細菌、酵母或哺乳動物細胞。可利用多種市售宿主表現載體系統以表現本文所述GLP-1/升糖素促效劑肽。 修飾、結合、融合及 衍化 在某些實施例中，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽經由胺基酸修飾穩定。在某些實施例中，C-末端胺基酸之羧基經醯胺化。在某些實施例中，C-末端胺基酸係經醯胺化甘胺酸，例如G730、G797、G849、G865、G796、G812及G380。在某些實施例中，例如，G933 (即C-末端甘胺酸)係未經修飾之酸。在某些實施例中，提供GLP-1/升糖素促效劑肽，其中一或多個胺基酸殘基經醯化。舉例而言，在某些實施例中，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽含有一或多個離胺酸殘基，其中棕櫚醯基部分附接至N(ε)基團。在某些實施例中，連接體納入離胺酸與棕櫚醯基之間。此連接體可為γ麩胺酸基團或替代連接體，例如但不限於β丙胺酸及胺基己酸。可使用不同醯化方法，例如添加膽固醇或肉豆蔻醯基。在某些實施例中，棕櫚醯基部分添加於位置13 (例如，G730)。在某些實施例中，棕櫚醯基部分添加於位置10 (例如，G797、G849、G933、G865、G796及G812)。在某些實施例中，棕櫚醯基部分添加於位置17 (例如，G380)。 本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，G730、G797、G849及G933)可經棕櫚醯基化以藉由與血清白蛋白締合來延長其半衰期、由此降低其腎清除率之傾向，如實例1中所述。 或者或另外，如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽可與異源部分締合以(例如)延長半衰期。異源部分可為蛋白質、肽、蛋白質結構域、連接體、有機聚合物、無機聚合物、聚乙二醇(PEG)、生物素、白蛋白、人類血清白蛋白(HSA)、HSA FcRn結合部分、抗體、抗體之結構域、抗體片段、單鏈抗體、結構域抗體、白蛋白結合結構域、酶、配體、受體、結合肽、非-FnIII架構、表位標識、重組體多肽聚合物、細胞介素及該等部分中之兩者或更多者之組合。 舉例而言，GLP-1/升糖素促效劑肽可與異源多肽融合。肽可經由重組體基因融合及表現或藉由化學偶聯，融合至蛋白質。適於作為融合配偶體之蛋白質包括(但不限於)人類血清白蛋白、包括與抗體之Fc部分之融合之抗體及抗體片段。GLP-1已融合至該等蛋白且保留功效(L. Baggio等人, Diabetes 53 2492-2500 (2004)；P. Barrington 等人， Diabetes, Obesity and Metabolism 13 426-433 (2011)；P. Paulik等人，美國糖尿病協會(American Diabetes Association)，2012，張貼於1946年)。亦已闡述延長之重組體肽序列，以提供肽高分子質量(V.Schellenberger等人Nature Biotechnol 27 1186-1190 (2009)；PASylation (EP2173890))。在某些實施例中，GLP-1/升糖素促效劑肽係作為融合蛋白質之N-末端部分納入，其中融合配偶體(例如白蛋白或Fc部分)位於C-末端。如本文所述GLP-1/升糖素促效劑肽亦可融合至肽或蛋白質結構域，例如對人類血清白蛋白具有親和力之「Albudab」 (M.S. Dennis等人J Biol Chem 277 35035-35043 (2002)；A. Walker等人 Protein Eng Design Selection23 271-278 (2010))。如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽與異源多肽(例如白蛋白或Fc區)之融合方法為彼等熟習此項技術者熟知。 其他異源部分可結合至GLP-1/升糖素促效劑肽，以進一步穩定或增加半衰期。對於化學融合而言，某些實施例之特徵在於維持游離N-末端，但可製得用於衍化之替代點。又一替代方法係利用大的化學部分體(例如高分子量聚乙二醇(PEG))衍化肽。「聚乙二醇化GLP-1/升糖素促效劑肽」具有與其共價結合之PEG鏈。GLP-1/升糖素促效劑肽之衍化(例如聚乙二醇化)可在離胺酸處進行(即經棕櫚醯基化)，或另一選擇為在經取代或藉由延伸納入以容許衍化之殘基(例如半胱胺酸)處進行。上述GLP-1/升糖素促效劑肽格式可分析其活體外及/或活體內之相對功效及GLP-1與升糖素受體活化之間之平衡特徵。 一般術語「聚乙二醇鏈」或「PEG鏈」係指呈具支鏈或直鏈且由通式H(OCH₂ CH₂ )_n OH代表之環氧乙烷與水之縮合聚合物的混合物，其中n係3、4、5、6、7、8、9或更大之整數。PEG鏈包括具有選自約500至約40,000道爾頓之範圍之平均總分子量之乙二醇的聚合物。PEG鏈之平均分子量係由數字指示，例如，PEG-5,000係指總分子量平均值為約5,000之聚乙二醇鏈。 聚乙二醇化可藉由業內已知之聚乙二醇化反應中之任一者來實施。參見(例如) Focus on Growth Factors, 3 : 4-10, 1992及歐洲專利申請案EP 0 154 316及EP 0 401 384。聚乙二醇化可使用與反應性聚乙二醇分子(或類似反應性水溶液聚合物)之醯化反應或烷基化反應來實施。 製備聚乙二醇化GLP-1/升糖素促效劑肽之方法通常包括以下步驟：(a) 使GLP-1/升糖素促效劑肽與聚乙二醇(例如PEG之反應性酯或醛衍生物)在分子附接至一或多個PEG基團之條件下反應，及(b) 獲得反應產物。 醫藥組合物 另外提供含有有效量之如本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽之組合物(例如，醫藥組合物)，其經調配用於治療代謝疾病(例如，肥胖)。 本揭示內容之組合物可根據已知方法來調配。適宜製備方法闡述於(例如)Remington's Pharmaceutical Sciences ，第19版，A.R. Gennaro編輯，Mack Publishing Co., Easton, PA (1995)中，其全文以引用方式併入本文中。組合物可呈多種形式，包括(但不限於)水溶液、乳液、凝膠、懸浮液、凍乾形式或業內已知之任何其他形式。另外，組合物可含有醫藥上可接受之添加劑，包括(例如)稀釋劑、黏合劑、穩定劑及防腐劑。一旦經調配，可將本發明組合物直接投與個體。 可用於本發明組合物之載劑為業內所熟知，且包括(但不限於，例如)甲狀腺球蛋白、白蛋白(例如人類血清白蛋白)、破傷風類毒素及聚胺基酸(例如聚L-離胺酸、聚L-麩胺酸)、流行性感冒、B型肝炎病毒核心蛋白及諸如此類。可使用多種水性載劑，例如水、緩衝水、0.8%鹽水、0.3%甘胺酸、玻尿酸及諸如此類。組合物可藉由習用熟知滅菌技術來滅菌，或可經無菌過濾。可包裝所得組合物以供按原樣使用，或可將其凍乾，將凍乾製劑在投與前與無菌溶液合併。組合物可視需要含有醫藥上可接受之輔助物質以接近生理條件，例如pH調節及緩衝劑、張力調節劑、潤濕劑及諸如此類，例如乙酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、去水山梨醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯等。 治療方法 具有有效葡萄糖控制之顯著非手術體重減輕仍係患有2型糖尿病之患者之關鍵未滿足之需求。本文提供之治療方法可滿足此需求。 GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可組合升糖素之效應(例如，抑制食物攝取或調控葡萄糖含量)與GLP-1之效應(例如，抑制胃運動或促進胰島素釋放)。因此，其可用於加速過量脂肪組織之消除、誘導持續體重減輕及改善血糖控制。GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)亦可用於減少心血管風險因子，例如高膽固醇及高LDL-膽固醇或異常HDL/LDL比率。GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)亦可用於減少三酸甘油酯。 本揭示內容提供治療肥胖或肥胖相關疾病或病症之方法，其包含向需要治療之個體投與50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)。在某些情況下，投與係飲食及鍛練之輔助。進一步提供50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg) GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)，其用於治療肥胖或肥胖相關疾病或病症。進一步提供50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600µg)如本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)之用途，其用於製造用於治療肥胖或肥胖相關疾病或病症之藥劑。50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以單一或分開劑量投與。另外，50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以增加劑量(例如，劑量調定，例如100 µg之初始劑量、150或200 µg之第二劑量及視情況200、300或400 µg之第三劑量，例如，其中初始劑量及/或第二劑量投與達3-10天或3-7天)投與。在某些情況下，個體患有2型糖尿病。在某些情況下，個體之身體質量指數(BMI)為30至39.9 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為至少40。 本揭示內容亦提供減輕體重之方法，其包含向需要治療之個體投與50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)。50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以單一或分開劑量投與。另外，50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以增加劑量(例如，劑量調定，例如100 µg之初始劑量、150或200 µg之第二劑量及視情況200、300或400 µg之第三劑量，例如，其中初始劑量及/或第二劑量投與達3-10天或3-7天)投與。在某些情況下，投與係飲食及鍛練之輔助。在某些情況下，個體患有2型糖尿病。在某些情況下，個體之BMI為27至40 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為30至39.9 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為至少40。在某些情況下，個體超重。在某些情況下，個體係肥胖。 本揭示內容亦提供減少身體脂肪之方法，其包含向需要治療之個體投與50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)。50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以單一或分開劑量投與。另外，50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以增加劑量(例如，劑量調定，例如100 µg之初始劑量、150或200 µg之第二劑量及視情況200、300或400 µg之第三劑量，例如，其中初始劑量及/或第二劑量投與達3-10天或3-7天)投與。在某些情況下，投與係飲食及鍛練之輔助。在某些情況下，個體患有2型糖尿病。在某些情況下，個體之BMI為27至40 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為30至39.9 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為至少40。在某些情況下，個體超重。在某些情況下，個體係肥胖。在某些情況下，脂肪係肝脂肪。肝脂肪之減少可引起胰島素敏感性增強及/或肝功能改善。在某些情況下，個體之肝脂肪減少至少20%。在某些情況下，個體之肝脂肪減少約20%至約40%。在某些情況下，投與引起肝脂肪減少約三分之一。在某些情況下，個體之肝體積減小。在某些情況下，投與會降低血紅素A1c (HbA1c)含量(例如，減低至少0.6%、至少0.9%、約0.5%至約1.5%、約0.5%至約2%、約0.5%至約3%或降低至6.3%或更低)。 本揭示內容亦提供管控體重之方法，其包含向有需要之個體投與50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)。50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以單一或分開劑量投與。另外，50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以增加劑量(例如，劑量調定，例如100 µg之初始劑量、150或200 µg之第二劑量及視情況200、300或400 µg之第三劑量，例如，其中初始劑量及/或第二劑量投與達3-10天或3-7天)投與。在某些情況下，投與係飲食及鍛練之輔助。在某些情況下，個體患有2型糖尿病。在某些情況下，個體之BMI為27至40 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為30至39.9 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為至少40。在某些情況下，個體超重。在某些情況下，個體係肥胖。 本揭示內容亦提供治療非酒精性脂肪性肝炎(NASH)之方法，其包含向需要治療之個體投與50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)。50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以單一或分開劑量投與。另外，50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以增加劑量(例如，劑量調定，例如100 µg之初始劑量、150或200 µg之第二劑量及視情況200、300或400 µg之第三劑量，例如，其中初始劑量及/或第二劑量投與達3-10天或3-7天)投與。在某些情況下，投與係飲食及鍛練之輔助。投與亦可減輕體重或治療肥胖。在某些情況下，個體之BMI為27至40 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為30至39.9 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為至少40。在某些情況下，個體超重。在某些情況下，個體係肥胖。 如本文所提供，可投與50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)用於預防增重、預防脂肪增加(例如，肝脂肪)、促進體重減輕、促進脂肪損失(例如，肝脂肪)、減輕體重過重、減少脂肪(例如，肝脂肪)、或治療肥胖(例如藉由控制食慾、進食、食物攝取、卡路里攝取及/或能量消耗)，包括病態肥胖。增加之能量消耗可係(例如)由於肝中脂肪酸及/或葡萄糖之增加氧化。本揭示內容亦提供治療或預防由體重過重或過量身體脂肪引起或特徵在於其之疾病或病況的方法，其包含向需要治療之個體投與50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)。在某些情況下，投與係飲食及鍛練之輔助。另外，50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可用於治療其他肥胖相關代謝失調。50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以單一或分開劑量投與。另外，50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以增加劑量(例如，劑量調定，例如100 µg之初始劑量、150或200 µg之第二劑量及視情況200、300或400 µg之第三劑量，例如，其中初始劑量及/或第二劑量投與達3-10天或3-7天)投與。其他肥胖相關(體重過重相關)病症之實例包括(但不限於)：胰島素抗性、葡萄糖不耐受、糖尿病前期、空腹葡萄糖增加、2型糖尿病、高血壓、異常血脂症(或該等代謝風險因子之組合)、高血糖素瘤、心血管疾病(例如鬱血性心臟衰竭)、動脈粥樣硬化、動脈硬化、冠狀動脈心臟病或外周動脈疾病、中風、呼吸功能障礙或腎病。 本揭示內容亦提供治療非2型糖尿病之方法，其包含向需要治療之個體投與50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)。50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以單一或分開劑量投與。另外，50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以增加劑量(例如，劑量調定，例如100 µg之初始劑量、150或200 µg之第二劑量及視情況200、300或400 µg之第三劑量，例如，其中初始劑量及/或第二劑量投與達3-10天或3-7天)投與。在某些情況下，投與係飲食及鍛練之輔助。投與亦可減輕體重或治療肥胖。在某些情況下，個體之BMI為27至40 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為30至39.9 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為至少40。在某些情況下，個體超重。在某些情況下，個體係肥胖。 本揭示內容亦提供改善血糖控制或實現血糖控制之方法，其包含向需要治療之個體投與50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)。50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以單一或分開劑量投與。另外，50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以增加劑量(例如，劑量調定，例如100 µg之初始劑量、150或200 µg之第二劑量及視情況200、300或400 µg之第三劑量，例如，其中初始劑量及/或第二劑量投與達3-10天或3-7天)投與。在某些情況下，投與係飲食及鍛練之輔助。投與亦可減輕體重或治療肥胖。在某些情況下，個體患有2型糖尿病。在某些情況下，個體之BMI為27至40 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為30至39.9 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為至少40。在某些情況下，個體超重。在某些情況下，個體係肥胖。可使用混合飲食測試評估血糖控制之改善。在某些情況下，在混合飲食測試後(例如，與治療之前之AUC相比)，血糖控制之改善引起濃度-時間-曲線下之葡萄糖面積(AUC)減少至少10%。在某些情況下，在混合飲食測試後(例如，與治療之前之AUC相比)，血糖控制之改善引起AUC減少至少15%。在某些情況下，在混合飲食測試後(例如，與治療之前之AUC相比)，血糖控制之改善引起葡萄糖AUC減少至少20%。在某些情況下，在混合飲食測試後(例如，與治療之前之AUC相比)，血糖控制之改善引起葡萄糖AUC減少至少25%。在某些情況下，在混合飲食測試後(例如，與治療之前之AUC相比)，血糖控制之改善引起葡萄糖AUC減少至少30%。亦可基於血紅素A1c及果糖胺評估血糖控制之改善。 本揭示內容亦提供降低體重及控制葡萄糖之方法，其包含向需要治療之個體投與50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)。50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以單一或分開劑量投與。另外，50-600 µg或100-600 µg如本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以增加劑量(例如，劑量調定，例如100 µg之初始劑量、150或200 µg之第二劑量及視情況200、300或400 µg之第三劑量，例如，其中初始劑量及/或第二劑量投與達3-10天或3-7天)投與。在某些情況下，投與係飲食及鍛練之輔助。投與亦可減輕體重或治療肥胖。在某些情況下，個體患有2型糖尿病。在某些情況下，個體之BMI為27至40 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為30至39.9 kg/m² 。在某些情況下，個體之BMI為至少40。在某些情況下，個體超重。在某些情況下，個體係肥胖。在某些情況下，投與引起體重減輕至少1.0 kg、至少1.3 kg或約1.3至約2.0 kg。在某些情況下，個體之體重減輕至少3.5 kg或至少5 kg。在某些情況下，個體之體重減輕約2至約30 kg。在某些情況下，個體之體重減輕至少2%、至少4%、至少5%或至少10%。在某些情況下，個體之體重減輕約2%至約20%、約2%至約25%或約2%至約30%。 在某些情況下，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)之投與引起體重減輕至少1 kg。在某些情況下，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)之投與引起體重減輕至少1.3 kg。在某些情況下，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽之投與引起體重減輕至少1.5 kg。在某些情況下，在重複每日一次投藥4週後，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)之投與引起體重減輕1至3 kg。在某些情況下，在重複每日一次投藥4週後，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)之投與引起體重減輕1.3至2 kg。 本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)之投與途徑可為(例如)經口、非經腸、藉由吸入或局部。如本文所用術語「非經腸」包括(例如)靜脈內、動脈內、腹膜內、肌內、皮下、直腸或陰道投與。用於投與之形式之另一實例係注射、具體而言靜脈內或動脈內注射或滴注用溶液。本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以單一劑量形式或以多個劑量形式投與。在某些實施例中，50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg) GLP-1/升糖素促效劑肽係藉由皮下注射投與。 非經腸調配物可為單一濃注劑量、輸注或負荷濃注劑量、之後維持劑量。該等組合物可以具體指定或可變間隔投與，例如，一天一次或基於「視需要」。亦可調節劑量方案以提供最佳期望反應(例如，治療性或預防性反應)。 在某些情況下，50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可每天一次投與。在某些情況下，50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可每天一次經由注射投與(例如，皮下投與)。在某些情況下，50-600 µg或100-600 µg (例如，50、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可在至少1週之時段內、在至少2週之時段內、在至少3週之時段內或在至少4週之時段內每天一次經由注射投與(例如，皮下投與)。在某些情況下，50-600 µg或100-600 µg (例如，100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575或600 µg)本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以單一或分開劑量投與。在某些情況下，50-600 µg或100-600 µg (例如，100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、或600 µg)本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以增加劑量(例如，劑量調定，例如100 µg之初始劑量、150或200 µg之第二劑量及視情況200、300或400 µg之第三劑量，例如，其中初始劑量及/或第二劑量投與達3-10天或3-7天)投與。在某些情況下，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以100 μg之初始劑量投與4天、150 μg之第二劑量投與4天且隨後每日投與200 μg之第三劑量。在某些情況下，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以100 μg之初始劑量投與5天、150 μg之第二劑量投與5天、200 μg之第三劑量投與5天且隨後每日投與300 μg之第四劑量。在某些情況下，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)可以100 μg之初始劑量投與5天、200 μg之第二劑量投與5天且隨後每日投與300 μg之第三劑量。 在某些情況下，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)之半衰期係約7至13小時。在某些情況下，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)之半衰期係約9至13小時。在某些情況下，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)之半衰期係約7至12小時。在某些情況下，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)之半衰期係約10至12小時。在某些情況下，本文提供之GLP-1/升糖素促效劑肽(例如，MEDI0382)之半衰期係約8至11小時。 套組 在其他實施例中，本發明提供包含GLP-1/升糖素促效劑肽之可用於實施本文所述方法之套組。在某些實施例中，套組包含一或多個容器中之本文揭示之GLP-1/升糖素促效劑肽。熟習此項技術者將容易地認識到，所揭示GLP-1/升糖素促效劑肽可容易地納入業內熟知之已確立套組格式中之一者中。 實例實例 1 ： GLP-1/ 升糖素促效劑 肽之合成、修飾及表徵 縮寫之清單： Boc：    第三丁氧基羰基tert -Bu：     第三丁基 DCM：   二氯甲烷 DIC：    二異丙基碳二亞胺 Fmoc：  9-茀基甲氧基羰基 HOBt：  1-羥基苯并三唑 HPLC： 高效液相層析法 Mtt：     4-甲基三苯甲基 NMP：N -甲基吡咯啶酮 Pbf：          2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺醯基 TFA：    三氟乙酸 TIS：     三異丙基矽烷 Trt： 三苯基甲基、三苯甲基 如下合成GLP-1/升糖素促效劑肽。NovaSyn TGR或預裝載Fmoc-Wang樹脂(NovaBiochem)上肽鏈之伸長係利用PRELUDE™固相肽合成器(Protein Technologies, Tucson, AZ, USA)實施。製造商供應之方案應用於N -甲基吡咯啶酮(NMP)中胺基酸之羥基苯并三唑酯的偶合。茀基甲氧基羰基(Fmoc)用於半永久性保護胺基酸之α-胺基，而針對絲胺酸、蘇胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、酪胺酸用第三丁基(tert -Bu)、及針對精胺酸用2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺醯基(Pbf)、及針對組胺酸用三苯甲基(Trt)保護側鏈。用第三丁基氧基羰基(Boc)保護位置1中組胺酸之N -末端胺基。在需要側鏈之後續化學修飾時，向肽鏈中納入Lys(Mtt)。 在完成肽鏈伸長後，藉由用含有2% TFA及5% TIS (10 × 7 ml，各自0.5 min)之DCM洗滌肽-樹脂移除Mtt基團。在PRELUDE™肽合成器上使用DIC作為偶合劑在HOBt存在下實施脂質部分與Lys之側鏈之偶合。 使用TFA:TIS:水(95:2.5:2.5)之混合物自樹脂裂解肽。於室溫下2h後，將肽基樹脂過濾，用TFA洗滌且將合併之濾液在真空中蒸發至乾燥。將殘餘物與醚一起研磨，並將所形成沈澱過濾、用醚洗滌並乾燥。將粗製肽溶解於水中之5%乙酸中並藉由反相高效液相層析在附接至Varian 920-LC系統之Polaris 3 C8-A管柱上進行分析。在15 min之過程內10至90%緩衝液B之標準梯度系統用於分析。緩衝液A係水中之0.1% TFA且緩衝液B係乙腈中之0.1% TFA。於210 nm下記錄HPLC概況。在Varian ProStar系統上利用半製備型C18 RP XBridge Waters管柱實施製備性分離。在30 min之過程內30至70%緩衝液B之梯度之水及乙腈之上述溶劑系統用於分離。藉由電噴霧質譜(MassLynx, Waters)分析層析均質產物(＞ 97%純)。實例 2 ：活體外研究 升糖素 及 GLP-1 受體介導之 cAMP 產生 基於細胞之 cAMP 活性分析 ( 分析 1) 中肽之生物活性 ：藉由以下方法針對生物活性(例如一或多種細胞受體反應之刺激)測試藉由實例1之方法合成之GLP-1/升糖素促效劑肽之生物活性。藉由標準方法在HEK293或CHO細胞中生成表現人類、小鼠、大鼠或狗GLP-1受體(GLP-1R)、升糖素受體(GCGR)或葡萄糖依賴性促胰島素性肽(胃抑制性多肽)受體(GIPR)之穩定細胞系。該等各種受體之肽活化引起cAMP第二傳訊者之下游產生，其可在功能活性分析中量測。 使用「分析介質」實施cAMP分析： 分析介質：DMEM中之10% FBS (Gibco編號41966)，含有0.5mM IBMX (Sigma編號I7018)。 使用低蛋白結合384孔板(Greiner編號781280)以實施測試試樣之11個1/5連續稀釋，該等測試試樣係在分析介質中製得。所有試樣稀釋液皆係以一式兩份製得。 將表現所關注受體之細胞之冷凍低溫小瓶在水浴中快速解凍，轉移至預升溫之分析介質中並以240xg旋轉5分鐘。將細胞以最佳濃度(例如hGCGR細胞為1×10⁵ 個細胞/ml，hGLP-1R及hGIPR細胞為0.5×10⁵ 個細胞/ml)重新懸浮於分析介質中。 自稀釋板，將5μL複製品壓印於黑色淺井u形底384-孔板(Corning編號3676)上。向此中添加5μL細胞懸浮液並將板於室溫下培育30分鐘。 使用市售cAMP動態2 HTRF套組(Cisbio，目錄號62AM4PEJ)遵循兩個步驟方案根據製造商之推薦量測cAMP含量。簡言之，抗cAMP穴狀化合物(供體螢光團)及cAMP-d2 (受體螢光團)係藉由將每一1/20稀釋於套組中提供之偶聯或溶解緩衝液中來製造。將5 μL抗cAMP穴狀化合物添加至分析板之所有孔中並將5 μL cAMP-d2添加至所有孔中，但非特異性結合(NSB)孔除外，向其添加偶聯及溶解緩衝液。將板在室溫下培育1小時，且然後在Envision (Perkin Elmer)上使用320 nm之激發波長以及620 nm及665 nm之發射波長來讀取。 「分析介質」中實施之cAMP分析中測定之合成之GLP-1/升糖素促效劑肽之序列及其EC50值示於表2中。表2中之所有肽皆合成有C-末端醯胺。額外GLP-1/升糖素促效劑肽合成有C-末端酸且「分析介質」中實施之cAMP分析中測定之EC50值示於表3中。「分析介質」中實施之額外GLP-1/升糖素促效劑肽之EC50示於表4中。表4中之所有肽皆具有C-末端醯胺，除非其表示為「酸」，在該情形下，其具有C-末端酸。表 2 ：具有 C- 末端醯胺之 GLP-1/ 升糖素促效劑 肽之 cAMP 活性 ( 分析 1)

表 3 ：具有 C- 末端酸之 GLP-1/ 升糖素促效劑 肽之 cAMP 活性 ( 分析 1)

表 4 ：額外 GLP-1/ 升糖素促效劑 肽之 cAMP 活性 ( 分析 1)

縮寫：K(gE-palm) = 具有經由γ麩胺酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸；K (Ahx-palm) = 具有經由胺基己酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸；K(bA-palm) = 具有經由β丙胺酸酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸；Aib，胺基異丁酸。K(palm) = 具有直接結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸。在血清白蛋白之血漿濃度存在下升糖素及 GLP-1 受體介導之 cAMP 產生分析 ( 分析 2) . 在分別4.4%、3.2%及3.2%之人類、大鼠或小鼠血清白蛋白存在下在表現人類、大鼠或小鼠升糖素受體(縮寫為GlucR或GCGR)或GLP-1受體之CHO細胞中量測誘導cAMP產生之肽之促效劑功效測定，如下。 在DMEM 10% FBS及建那黴素(geneticin) (100 µg/ml)中培養具有人類、小鼠或大鼠GlucR或GLP-1受體之穩定重組體表現之CHO細胞。在1×細胞冷凍介質-DMSO無血清(Sigma Aldrich)中以2×10⁷ /小瓶製備冷凍保藏細胞原液並儲存於-80℃下。將細胞於37℃下快速解凍且隨後稀釋至對於人類、大鼠及小鼠血清白蛋白分別含有4.4%、3.2%及3.2%血清白蛋白之分析緩衝液(DMEM)中。將肽連續稀釋於DMSO中且隨後在含有血清白蛋白之DMEM中以所述最終濃度稀釋100倍。隨後將經稀釋肽轉移至384黑色淺井微量滴定分析板中。將細胞添加至分析板並於室溫下培育30 min。在培育後，停止分析並使用自CisBio Bioassays獲得之HTRF®動態d2 cAMP分析套組根據製造商之指南量測cAMP含量。利用Perkin Elmer ENVISION®螢光讀板儀對板進行讀數。人類及大鼠血清白蛋白係購自Sigma Aldrich且小鼠血清白蛋白係購自Equitech Bio Ltd。 如製造商之指南中所述將數據轉變為% δ F且藉由4-參數對數擬合以測定EC₅₀ 值來分析。選擇肽之分析2 EC₅₀ 值示於表5中。所測定之分析2 EC50值取決於重組體細胞系中GLP1及升糖素受體處測試之肽之固有功效及肽對血清白蛋白之親和力(此測定游離肽之量)。與血清白蛋白之結合增加所得EC50值。白蛋白之血漿濃度下之游離肽的分數及0% HAS下之EC50可基於cAMP生成隨HSA濃度之變化來計算。舉例而言，G730及G933分別對於4.4% HAS下之游離肽給出0.85%及0.29%之值且對於0% HAS下之GLP1R之EC50給出7 pM及6 pM之值。G797及G849分別對於4.4% HAS下之游離肽給出0.82%及0.48%之值且對於0% HAS下之GLP1R之EC50給出7 pM及2 pM之值。為比較不同肽之間及跨越不同條件GLP1R及GlucR之活性的平衡，可使用以下計算使該等相關，其中EC50與天然配體之彼等相關。表 5 ： 在血清白蛋白之血漿濃度存在下 GLP-1/ 升糖素促效劑 肽之 EC50 效能 ( 分析 2)

¹ GlucR/GLP1R比率係如下計算： 相對功效GlucR = EC50升糖素/ EC50測試肽 相對功效GLP1R = EC50 GLP1/ EC50測試肽 GlucR/GLP1R比率 = 相對功效GlucR/ 相對功效GLP1R血漿中肽之穩定性測試 . 肽G730、G797、G849及G933之血漿中穩定性係如下測定。 藉由將固體肽稱重至Eppendorf低結合管中並溶解於DMSO中製備約200 µmol/L之肽之原液。將10µL原液添加至Eppendorf低結合管中之990 µL血漿中，從而產生約2 µmol/L之肽於血漿中之初始濃度。在添加原液之前，將人類、大鼠及小鼠之冷凍空白血漿解凍並加熱至37℃之溫度。在開始實驗之前，將經摻雜血漿試樣輕柔混合倂使其平衡約5分鐘。於37℃下將血漿試樣在GalaxyR CO₂ 培育器中培育48小時。於0、1、2、6.5、17、24及48小時實施取樣(30 µL)。將試樣儲存於-70℃下直至分析。 如下分析血漿試樣。將30 µL血漿試樣與180 ml冷乙醇一起在96孔低結合板(Eppendorf Protein LoBind)中進行蛋白質沈澱。在混合及離心後，將100 µl上清液轉移至新板並1 µl注射至分析管柱上。 使用耦聯至中等高解析度質譜儀(Perkin Elmer PenTOF)之µLC-系統(LC Exigent µLC)以陽性電噴霧離子化實施分析。分析管柱係粒徑為2.7 µm之5 cm、1 mm Agilent Poroshell (定製的) C18-管柱。流速：0.1 ml/min，使用緩慢反相梯度。所用移動相係乙腈及水，其含有0.1%甲酸。 針對以降解產物下人工評估所得數據：+1產物(酸)及DPP IV-裂解產物。具有+1質量之產物可由麩醯胺酸之醯胺基團或C-末端之去醯胺產生。裂解產物係自血漿中蛋白酶DPP IV之作用來產生。肽之降解及肽產物之形成二者皆係以初始肽濃度之百分比報告。對峰進行積分並計算剩餘肽%：(峰面積/峰面積0H)*100。24h時間點之數據示於表6中。對於G797及G933而言，去醯胺及DPP IV裂解之程度較低。表 6 ：血漿中之肽穩定性

溶解性 在各種緩衝液物質中在4.5至8.0之pH範圍內評估肽溶解性，如下。於室溫下在各種緩衝液中重構GLP-1/升糖素促效劑肽之乾燥粉末形式。使用NanoDrop 2000分光光度計於280 nm下量測吸光度且使用以下等式計算肽濃度： c=(A₂₈₀ *M_w )/ε 其中：c- 濃度，ε- 消光係數，Mw- 分子量 A₂₈₀ - 280 nm下之吸光度 ε = (1 × Trp = 5560) + (1 × Tyr = 1200) 結果示於表7中。肽中之每一者在pH (6.5至8.5)之範圍內以0.8mg/ml可溶。G730在4.5至8.0之pH範圍內可溶，G797在6.至8.0之pH範圍內可溶，且G933在6至8.0之pH範圍內可溶。在多種不同緩衝液系統中測試G933之溶解性，亦示於表7中。G933在至少以下緩衝液系統中以1mg/ml可溶：組胺酸(pH 6及7；離子強度：0.25至100 mM)、磷酸鈉(pH 6-7.5；離子強度：0.25至100 mM)及tris/羥基甲基胺基甲烷(pH 7-9；離子強度：0.25至100 mM)。表 7 ： 肽溶解性概況 ( 所有緩衝液之離子強度 ： 100mM)

調配物 . 在三種不同等滲調配物中評估肽溶解性： 1.     缺省調配物(DF)= 0.1M Tris pH 7.5，150mM甘露醇。最終調配物pH= 7.2 2.     後備調配物1 (BF1)=0.05M Tris，50mM精胺酸/脯胺酸。最終調配物pH= 8.0 3.     後備調配物2 (BF2)= 磷酸鈉緩衝液(pH8)/ 1.85 % W/V丙二醇。最終調配物pH= 7.0 如上文詳述量測溶解性，且結果示於表8中。G730、G797及G933在DF中可溶至至少5mg/ml，G849於DF中之最大溶解性係3.7 mg/ml，G797在BF1中可溶至至少10mg/ml，且G933在BF2中可溶至至少10mg/ml。表 8 ：調配物中之肽溶解性

藉由A280nm測定之濃度 在一個月內藉由量測純度反相超效液相層析(RP UPLC)評估DF之穩定性。儲存條件係5℃、25℃、40℃及-80℃。結果示於表9及10中。表 9 在穩定性條件中 1 個月後之肽調配物純度

表 10 ：在穩定性條件中 1 個月後之肽調配物純度損失 ( 與 T0 相比之 %)

肽皆顯示關於溶解性、可調配性及穩定性之可接受之性質。實例 3 ： 活體內研究 G730 、 G797 及 G812 ( 研究 A) . 在飲食誘導之肥胖(DIO)小鼠模型中測試本文揭示之選擇之GLP-1/升糖素促效劑肽，如下。使雌性C57/Bl6JHsdOla (自Harlan Laboratories, UK獲得)在9-11週齡時開始接受高脂肪飲食D12492 (Research Diets, NJ, USA)及巧克力甜食、德利卡托球(delicato ball) (Delicata Bakverk, Sweden)，且在到達動物設施之前、在3週馴化時段期間及在藥物治療期間，維持該飲食16週，飲食之兩種組份之卡路里含量示於表11中。將小鼠分成9個組(n=5-6)，且在29週齡時開始治療。該等治療組及投藥示於表12中。表 11 ： DIO 飲食之含量

表 12 ：研究 A 之治療組

取GLP-1/升糖素促效劑肽G730、G797及G812以及利拉魯肽於媒劑：100 mM Tris/150mM甘露醇(pH 7.4)中調配。每日兩次皮下投與治療達14天，同時維持動物高脂肪飲食。在整個投藥時段中每日監測動物之體重。在第14天，在4小時禁食時段後自有意識之小鼠獲得血樣用於量測血糖及胰島素。隨後使用異氟烷(isoflourane)麻醉小鼠且自眼後之毛細血管床收集末梢血。量測以下參數：三酸甘油酯、總膽固醇、非酯化脂肪酸(NEFA)、β-羥基丁酸酯及纖維母細胞生長因子21 (FGF21)之血液化學量測(下表14及15)。 與利拉魯肽及媒劑相比，用利拉魯肽及GLP-1/升糖素促效劑肽G730、G797及G812治療對體重之效應示於圖1-4中。經G730或G797治療之動物在14天投藥時段內顯示劑量依賴性及連續體重減輕。於50 nmol/kg下，與經媒劑治療之動物相比，經G730及G797治療之動物經歷約24%之體重變化。 經G730或G797治療之小鼠在第14天顯示葡萄糖含量隨劑量降低(表13)。利用該兩種治療，尤其於較高劑量下，亦觀察到降低之胰島素含量(表13)。胰島素敏感性指數穩態模型評估(HOMA)於20 nmol/kg G730及20及50 nmol/kg G797下顯著改善。HOMA係一種使用血漿胰島素及葡萄糖含量之總和來評估β-細胞功能及胰島素抗性的建模方法(表14)。所有劑量之利拉魯肽、G730及G797均可降低總血漿膽固醇，其中血漿中非酯化脂肪酸(NEFA)含量及血漿及肝三酸甘油酯(TG)之變化較不顯著。β-羥基丁酸酯(BeHy)有含量增加之趨勢，此時體重平行下降。纖維母細胞生長因子21 (FGF21)通常隨雙重GLP-1/升糖素促效劑肽治療而增加。表 13 ： GLP-1/ 升糖素促效劑肽治療對葡萄糖、胰島素及 HOMA 之效應

結果藉由雙尾分佈、兩試樣不等方差t測試來評估； *指示與媒劑相比，p＜0.05。表 14 ： GLP-1/ 升糖素促效劑 肽治療對其他血液化學量測之效應

結果藉由雙尾分佈、兩試樣不等方差t測試來評估； *指示與媒劑相比，p＜0.05。G865 、 G933 及 G796 ( 研究 B) . 在飲食誘導之肥胖模型中使用上述相同方案、但利用表15中所示之治療組及劑量測試GLP-1/升糖素肽之又一組。表 15 ：研究 B 之治療組

將GLP-1/升糖素促效劑肽G865、G933及G796以及利拉魯肽調配於媒劑、100 mM Tris/150mM甘露醇(pH 7.4)中。每日兩次皮下投與治療達14天，同時維持動物高脂肪飲食。在整個投藥時段中每日監測動物之體重。在第14天，在4小時禁食時段後自有意識之小鼠獲得血樣用於量測血糖及胰島素。隨後使用異氟烷麻醉小鼠且自眼後之毛細血管床收集末梢血。量測以下參數：三酸甘油酯、總膽固醇、非酯化脂肪酸(NEFA)、β-羥基丁酸酯及纖維母細胞生長因子21 (FGF21)之血液化學量測(下表16及表17)。 與利拉魯肽及媒劑相比，用利拉魯肽及GLP-1/升糖素促效劑肽G933、G865、G796治療對體重之效應示於圖5-8中。經G933、G865或G796治療之動物在14天投藥時段內顯示劑量依賴性及連續體重減輕。 治療後第14天之葡萄糖含量、胰島素含量及HOMA示於表16中。治療後第14天之總血漿膽固醇含量、血漿非酯化脂肪酸(NEFA)含量、血漿及肝三酸甘油酯(TG)含量、β-羥基丁酸酯(BeHy)含量及纖維母細胞生長因子21 (FGF21)含量示於表17中。表 16 ： GLP-1/ 升糖素促效劑 肽治療對葡萄糖、胰島素及 HOMA 之效應

結果藉由雙尾分佈、兩試樣不等方差t測試來評估； *指示與媒劑相比，p＜0.05。表 17 ： GLP-1/ 升糖素促效劑 肽治療對其他血液化學量測之效應

結果藉由雙尾分佈、兩試樣不等方差t測試來評估； *指示與媒劑相比，p＜0.05。實例 4 ： 單一升高劑量研究 (A)     個體 總共362個個體同意參與在德國之研究。針對以下納入及排除準則篩選個體。 納入準則： ● 健康志願者，在篩選時年齡18至45歲； ● 身體質量指數≥ 22且≤ 30 kg/m² 且體重≥ 70 kg；及 ● 適合多次插管之靜脈通路。 排除準則： ● 可干擾G933之評估或個體安全性或研究結果之解釋之任何病況。具體實例包括(a) 在篩選時急性或慢性胰臟炎之過去史、或胰臟澱粉酶或脂酶大於正常值上限(ULN)，(b) 需要治療之胃肌輕癱過去史，(c) 可能影響安全性及耐受性數據之解釋之影響上胃腸道之手術的過去史，(d) 導致不可由膽囊切除術治療之急性膽囊炎或已知膽道疾病發作之膽石症的病史，(e) 在篩選時2型多發性內分泌贅瘤形成(MEN-2)之病史或家族史、暗示甲狀腺C細胞增生之血清降鈣素(鈣含量＞ 50 ng/L)、或髓質甲狀腺癌，(f) 臨床上顯著之心率紊亂之過去史，例如，永久或陣發性心房震顫/撲動、陣發性室上性心動過速、陣發性室性心動過速、存在可植入心律調節器器件或心律轉變器/去顫器，(g) 經治療或症狀性心臟衰竭之病史，及(h) 先前心肌梗塞或腦血管意外(例如，中風)之病史； ● 胃腸、腎或肝疾病(吉伯特氏症候群(Gilbert’s syndrome)除外)或已知干擾藥物之吸收、分佈、代謝或排泄之任何其他病況之病史或存在； ● 癌症之病史，非黑色素瘤皮膚癌除外； ● 在第1天投藥之前4週內任何臨床上重要之疾病、醫學/手術程序或創傷； ● 在篩選時陽性B型肝炎表面抗原或C型肝炎病毒抗體血清學； ● 在篩選時陽性人類免疫缺失病毒(HIV)測試或如由病歷或個體之口頭報告確定之抗反轉錄病毒醫藥之使用； ● 在篩選時超過正常範圍之血清鉀或鈣； ● 在篩選時，血清肌酸酐、天冬胺酸轉胺酶(AST)、丙胺酸轉胺酶(ALT)或總膽紅素大於ULN； ● 如由研究者判斷之臨床化學、血液學或尿分析結果之任何其他臨床上重要之異常亦應引起自研究排除； ● 使用以下任何藥用產品：(a)同時或先前使用GLP-1受體促效劑，(b)篩選前過去28天內目前或先前使用全身性皮質類固醇，或(c) 禁止在第-1至第7天前1週使用許可用於控制體重或食慾之任何藥用產品或草藥製劑； ● 在仰臥休息10分鐘後異常生命徵象，定義為以下中之任一者：(a) 收縮壓＜ 90 mmHg或≥ 140 mmHg，(b) 舒張壓＜ 50 mmHg或≥ 90 mmHg，或(c) 心率＜ 50或＞ 90下/分鐘； ● 任何臨床上重要之節律、傳導(例如，沃夫巴金森懷特症候群(Wolff-Parkinson-White syndrome)、病竇症候群)或靜臥12導程ECG之形態異常、或在研究者之觀點看來可能干擾針對心率校正之QT間隔(QTc)變化之解釋的ECG之任何異常，包括異常T波形態，或左心室肥大； ● 基於12導程ECG，使用Fridericia公式之延長之QTc (QTcF) ＞ 450毫秒，或縮短QTcF ＜ 340毫秒，或長QT症候群之家族史； ● PR (PQ)間隔縮短至＜ 120毫秒或延長＞ 200毫秒(一度房室傳導阻斷)； ● 間歇二度阻斷(不排除熟睡中Wenckebach傳導阻斷)或三度阻斷、或房室分離； ● 在50-110毫秒範圍外之QRS間隔； ● 已知或懷疑在過去3年內藥物濫用史； ● 在過去3年內酒精濫用或過量攝取酒精之歷史； ● 現時吸煙者(每天＞ 0根香煙)；若在篩選時個體經測試對可丁寧(cotinine)呈陽性，則亦排除該等個體； ● 在篩選或進入研究單位時對於藥物濫用呈陽性篩選，或在進入研究單位時在投與研究產品之前對於酒精呈陽性呼吸測試。可允許針對慢性焦慮症或睡眠病症利用苯并二氮呯之個體進入研究； ● 嚴重過敏/超敏之歷史或進行性臨床上重要之過敏/超敏； ● 在篩選之前2個月內全血或紅血球捐獻，或任何血液損失＞ 500 mL； ● 在此研究中研究產品之投與之至少30天或5個半衰期(以較長者為準)內服用另一新化學實體(定義為尚未批准用於銷售之化合物)、或參與包括藥物治療之任何其他臨床研究。在最後劑量後或在最後拜訪後(以最長者為準)開始30天或研究產品之5個半衰期之排除時段。不排除同意並篩選但未隨機化至此研究或先前研究中之個體；或 ● 精神病學疾病，使得個體以官方或裁決令方式提交至機構 在篩選後，313個個體經測定不滿足納入/排除準則。其餘48個個體經隨機化且服用G933。48個經治療患者之人口統計示於下表中。

(B) 研究設計 實施1期、隨機化、盲化、單一遞增劑量研究。所提出研究之流程圖提供於圖9中。計劃每個佇列8個個體。在每一佇列內，將個體3:1隨機化至G933 (MEDI0382)或安慰劑。 基於使用關於GPL-1及升糖素調節劑之臨床文獻數據執行的PK/PD建模，預測G933之臨床有效之劑量在300至2000 µg/天之範圍內。因此，選擇5、10、30、100、300、600、1200及2000 µg G933之劑量增量。在容許進行劑量遞增之前評估每一佇列之安全性數據。為進一步增強安全性，增加倍數在所提出劑量範圍之較低端最大且以逐步方式降低，以使最後劑量增加小於2倍。此研究中之最大提出劑量值係2000 µg。基於猴AUC數據之2000 µg之最大提出人類劑量下之安全界限係0.8。 在研究期間，個體接受1個劑量之G933。對於所有個體而言，在隨機化之前28天內(第-29天至第-2天)實施篩選拜訪。個體在服用研究產品之前之當晚(第-1天)進入單位以容許重複評估合格性準則、在4小時時段內實施心臟遙測監測、及在投藥之前次日早上標準化身體活動程度。在第1天，在過夜禁食最少8小時後，獲得基線安全性評估及血樣，且向個體投與G933或安慰劑之單一皮下(SC)劑量。貫穿第1天及第2天，個體保留在研究設施中用於定時評估及安全性監測(包括藉由連續遙測術及間歇數位心電圖[ECG]之心臟監測)，且保留在室內直至釋放。在實施安全性評估且收集血樣後在第3天早上自單位釋放個體。在第4、7及28天，個體返回至單位進行門診拜訪。 在篩選後，每一個體之研究持續時間係約29天，其包括住院評估時段及門診隨訪期。 對於藥效學評估而言，在第1天，在每餐(早餐、午餐及晚餐)之前及在開始每餐後1及2小時(± 15分鐘)抽取血樣用於量測葡萄糖及胰島素含量。記錄第1天每餐之開始且每餐皆在30分鐘內用光。 對於免疫評估而言，在第1天、投藥後約1週及投藥後約1個月進行抗藥物抗體(ADA)取樣。 對於藥物動力學(PK)評估而言，取樣時間係投藥前、及投藥後1、2、4、6、8、10、12、16、24、36、48及72小時(對於前2個小時± 15分鐘且對於投藥後至48小時之其餘時間點± 30分鐘)。在第1天，亦在每餐(早餐、午餐及晚餐)之前、在開始每餐後1及2小時(± 15分鐘)抽取PK試樣。 (C) 結果 如每個方案所計劃，劑量遞增自5 µg進行至300 µg；然而，300 µg不耐受，如由顯著嘔吐事件所證明，且對於最終佇列，劑量遞減至150 µg。實際研究之流程圖提供於圖9中，且個體佈置示於圖10中。 對於5 μg G933不可衍生出PK參數，此乃因僅3個個體顯示血漿中之至少一個可量化等級。在5 μg及10 μg G933組中之所有個體中，G933之血漿濃度自2-4.5小時可量測直至16-24小時。在100 μg及300 μg G933組中之所有個體中，G933之血漿濃度可量測直至48小時。在投藥後72小時，個體皆不具有G933之可量化血漿濃度。 所有G933劑量之平均濃度-時間曲線皆展示峰值後明顯之單指數下降，且峰值與投藥後48小時之間濃度適度快速下降。 單一劑量血漿G933 PK參數估計值由個體及治療列示且由表19中之治療概述。

G933係在以介於5至150 µg範圍內之劑量單一投與G933後以7.0-9.0小時之至最大濃度之中值時間(t_max )、及以 300 µg之最高劑量值以4.5小時之中值t_max 吸收。 在72小時取樣時段內基於目視檢查使用至少3個數據點測定G933之表觀終末消除半衰期(t_1/2 )。在劑量組5 µg之個體中由於血漿濃度過低而t_1/2 不可評估。在其他劑量組中，在%AUCex高於20%時，亦不報告t_1/2 且因此AUC_{0- ∞} 。幾何平均值t_1/2 值係約10-12 hr。 最大血漿濃度(C_max )及AUC_{0- ∞} 之個體間差異(如由變異係數(CV)表示)對於兩個參數係中等的(3-37%)。 在基線下或基線後，個體皆非ADA陽性。 在研究過程中監測血壓、脈搏、食物攝取及不良事件且其概述於表20中。 所有治療急診不良事件(TEAE)之嚴重程度係1級(輕度)或2級(中等)。其概述於下表21中。表 20

BP = 血壓 (a) 中值脈搏峰值定義為自投藥前至第28天之最大脈搏之中值 (b) 中值脈搏最大投藥後變化定義為自投藥前至第28天脈搏之最大變化之中值 (c) 跨越早餐、午餐及晚餐之整體每日食物攝取 (d) 對應於投藥後3.5小時之早餐後約1小時收集中值葡萄糖含量 (e) 對應於投藥後7小時之午餐後約1小時收集中值葡萄糖含量 (f) 對應於投藥後13.5小時之晚餐後約1小時收集中值葡萄糖含量

總之，G933對於嘔吐耐受良好且於較高劑量下觀察之脈搏率及血壓增加。預定探索終點表明與安慰劑相比經所有劑量之GP933治療之個體之整體每日食物攝取的減少。 用餐時間周圍之個別血糖及胰島素量測及中值血糖及胰島素血漿含量分別依照劑量示於圖11及12中，投藥後時間間隔2.5-14小時。在經所有劑量之G933治療之個體之血糖含量中觀察到葡萄糖降低效應。此效應在第一用餐時間周圍更可見。類似地，胰島素血漿含量尤其在對應於第一用餐時間之100 µg或更高之劑量下顯示劑量反應。 最常見TEAE (發生率＞ 10%之個體)係嘔吐、噁心、眩暈及頭痛。嘔吐之TEAE僅在最高G933劑量(100、150及300 μg)下發生。10個經歷嘔吐之個體總共40次嘔吐發作。30次發作來自300 μg劑量下之5個個體，9次發作來自150 μg劑量下之4個個體，且1次發作來自100 μg劑量下之1個個體。 儘管調節飲食，但對於150 μg G933組中6個個體中之2個(33.3%)及300 μg G933組中6個個體中之5個(83.3%)報告顯著嘔吐，定義為在單一天或跨越連續2天3或更多次嘔吐發作。由於在300 μg劑量下觀察之顯著嘔吐之事件，對於最終佇列，G933之劑量遞減至150 μg。 於高達150 µg之劑量下，關於噁心、嘔吐、心動過速及血壓，G933之耐受性係可接受的。於G933之300 µg之劑量下，觀察到不可接受之嘔吐程度，收縮壓及脈搏率亦顯著上升。在單一劑量後、具體而言在健康志願者中跨越市售GLP-1促效劑之範圍觀察到顯著脈搏上升，同時具有噁心及嘔吐。鑒於在150 µg之單一劑量下觀察到G933之胃腸效應(嘔吐)而無任何心血管效應，存在一窗，其中G933可以預計會改善血糖控制並驅動體重減輕且對心血管風險概況無負面影響之劑量安全投與至患有2型糖尿病之個體。在此單一劑量健康志願者研究中，G933滿足安全性及耐受性終點。實例 5 ：多個遞增劑量研究部分 I (A)     個體 約75個患有相對良好控制之2型糖尿病(T2DM)之超重或肥胖個體入選參與研究。入選個體滿足以下納入及排除準則。 納入準則： ● 在篩選時男性或女性之年齡為18至65歲； ● 身體質量指數為27至40 kg/m² (包括)； ● 診斷T2DM及利用二甲雙胍單一療法管控之葡萄糖控制，其中在篩選前之3個月內未發生顯著劑量變化(增加或減少≥ 500 mg/天)：(a) 篩選血紅素A1C (糖化血紅素；HbA1c)值應在6.5%至8.5%或視情況7.0%至8.5%之靶範圍內；(b) 除二甲雙胍單一療法外亦開立二肽基肽酶-4 (DPPIV)抑制劑處方之個體在篩選之前之4週DPPIV抑制劑清除時段後可有資格進入研究；(c) 除二甲雙胍單一療法外亦開立小於50%之許可劑量之磺脲的個體在4週磺脲清除時段後可有資格進入研究；且(d) 除二甲雙胍單一療法外亦開立鈉-葡萄糖共運輸蛋白2 (SGLT2)抑制劑之個體在4週SGLT2抑制劑清除時段後可有資格進入研究； ● 適合多次插管之靜脈通路； ● 在篩選前，佇列4個體必須服用≥ 10 mg每日劑量之司他(statin)達至少4週之時段；且 ● 在篩選時段期間在安慰劑之初始自注射後，佇列4個體必須願意且能夠自投與每日皮下(SC)注射。 排除準則： ● 可干擾研究產品之評估或個體安全性或研究結果之解釋之任何病況。具體實例係：(a) 急性或慢性胰臟炎之過去史、或在篩選時胰臟澱粉酶或脂酶大於正常值上限(ULN)之兩倍，(b) 需要治療之胃肌輕癱過去史，(c) 可能影響安全性及耐受性數據之解釋之影響上GI道之手術的過去史，(d) 導致不可由膽囊切除術治療之急性膽囊炎或已知膽道疾病發作之膽石症的病史，及(e) 在篩選時暗示甲狀腺C細胞增生之血清降鈣素(鈣含量＞ 50 ng/L)、髓質甲狀腺癌、或多發性內分泌贅瘤形成之病史或家族史； ● GI、腎或肝疾病(吉伯特氏症候群除外)或已知干擾藥物之吸收、分佈、代謝或排泄之任何其他病況之病史或存在； ● 癌症(視情況在過去10年內)之病史，非黑色素瘤皮膚癌除外； ● 糖尿病足潰瘍之病史或存在； ● 在第1天投藥之前4週內任何臨床上重要之疾病(對於患有已知糖尿病之個體T2DM除外)、醫學/手術程序或創傷； ● 胰島素貧乏症或較差血糖控制之症狀(例如，明顯口渴、夜尿、多尿、多飲或體重減輕)； ● 空腹血糖≥ 200 mg/dL (11.11 mmol/L)； ● 在篩選時陽性B型肝炎表面抗原或C型肝炎病毒抗體血清學； ● 在篩選時陽性人類免疫缺失病毒(HIV)測試或如由病歷或個體之口頭報告確定之服用抗反轉錄病毒醫藥的個體； ● 在篩選時天冬胺酸鹽胺基轉移酶(AST) ≥ 2.5 × ULN； ● 在篩選時丙胺酸胺基轉移酶(ALT) ≥ 2.5 × ULN； ● 在篩選時總膽紅素 ≥ 2 × ULN； ● 在篩選時低於正常範圍之下限之血紅素； ● 在篩選時嗜中性球＜ 1.5 × 10⁹ /L； ● 在篩選時高於正常範圍之甲狀腺刺激之激素(TSH)含量； ● 腎功能受損，定義為腎小球濾過率(GFR) ≤ 60 mL/分鐘/1.73m² (根據腎病之改善估計GFR)； ● 持續性(定義為由個體之常規醫師在≥ 2個先前機會下記載)巨白蛋白尿(＞ 300 mg/L)； ● 顯著晚期糖尿病併發症(具有鬱血性心臟病或周圍動脈疾病之症狀之大血管病變、具有神經病變之症狀之微血管病變、胃肌輕癱、視網膜病變、腎病變)； ● 在篩選時段期間心臟傳導缺陷(例如，沃夫巴金森懷特症候群、病竇症候群)。 ● 在仰臥休息10分鐘後異常生命徵象，定義為以下中之任一者：(a) 若＜ 60歲，則收縮BP ＜ 90 mm Hg或≥140 mm Hg；若≥ 60歲，則收縮BP ＜ 90 mm Hg或≥ 150 mm Hg，(b) 舒張BP ＜ 50 mm Hg或≥ 90 mm Hg，或(c) HR ＜ 45或＞ 85下/分鐘； ● 任何臨床上重要之節律、傳導或靜臥ECG之形態異常及12導程ECG之任何異常，其可能干擾QTc間隔變化之解釋，包括異常ST-T波形態或左心室肥大； ● 延長之QTcF ＞ 450 msec (對於兩性)或縮短之QTcF ＜ 340 msec、或長QT症候群之家族史； ● PR (PQ)間隔縮短＜ 120 msec (若無心室預激發之證據，則PR ＜ 120 msec但＞ 110 msec係可接受的)； ● PR (PQ)間隔延長(＞ 240 msec)、間歇二度或三度AV阻斷或AV分離； ● QRS持續時間 ＞ 120 msec，包括持續性或間歇束支傳導阻斷 ● 可植入式心臟去顫器或永久性心律調節器、及症狀性心室及/或房性快速性心律不整； ● 經分類高於加拿大心血管協會(Canadian Cardiovascular Society)類別II之不穩定性心絞痛或穩定性心絞痛或心肌梗塞或中風； ● 由心臟衰竭引起之住院史或診斷心臟衰竭； ● 已知或懷疑在過去3年內藥物濫用史； ● 在過去3年內酒精濫用或過量攝取酒精之歷史； ● 在篩選或進入研究單位時對於藥物濫用呈陽性篩選，或在進入單位時在投與研究產品之前對於酒精呈陽性篩選。可允許針對慢性焦慮症或睡眠病症利用苯并二氮呯之患者進入研究； ● 嚴重過敏/超敏之歷史或進行性臨床上重要之過敏/超敏； ● 在篩選之前2個月期間全血或紅血球捐獻，或任何血液損失＞ 500 mL； ● 在此研究中研究產品之首次投與之前之至少30天或5個半衰期(以較長者為準)內服用另一新化學實體(定義為尚未批准用於銷售之化合物)、或參與包括藥物治療之任何其他臨床研究。在最後劑量後或在最後拜訪後(以最長者為準)開始30天或研究產品之5個半衰期之排除時段。不排除同意並篩選但未隨機化至此研究或先前1期研究中之個體； ● 同時參與任何種類之另一研究； ● 使用以下任何藥用產品：(a)同時或先前使用GLP-1促效劑，(b)篩選前28天內使用全身性皮質類固醇；(c) 使用已知延長QTc間隔之化合物，或(d) 在第1天之前之1週內使用許可用於控制體重或食慾之任何草藥製劑或藥用產品； ● 精神病學疾病，使得個體以官方或裁決令方式提交至機構；及 ● 乳酸性酸中毒或酮酸中毒之病史。 (B) 研究設計 在兩個部分(A及B)中實施1/2期、隨機化、雙盲、多遞增劑量研究。研究之流程圖提供於圖13中。部分A確立在約12天之時段內維持二甲雙胍療法之T2DM個體中之G933 (MEDI0382)之劑量調定方案及調定後之最大有效劑量，其隨後在延長投藥時段內利用(部分B)以確立G933對體重及血糖控制之效能。 部分A由3個佇列組成。佇列1由在7天內每日投與研究產品之穩定劑量(例如，100 µg)組成(9個個體；6個G933，3個安慰劑)。佇列2由以下組成：研究產品之初始劑量(例如，100 µg)達4天及向上調定階梯(調定劑量 1；例如，150 µg)達7天(9個個體；6個G933，3個安慰劑)，且佇列3由以下組成：研究產品之初始劑量(例如，100 µg)達4天、向上調定階梯(調定劑量1；例如150 µg)達4天、及第二向上調定階梯(調定劑量2；例如200 µg)達7天(9個個體；6個G933，3個安慰劑)。 部分B由1個佇列組成。向此佇列(佇列4)中之個體投用研究產品之初始劑量(例如，100 µg)達4天、向上調定階梯(調定劑量1；例如150 µg)達4天、第二向上調定階梯(調定劑量2；例如200 µg)達4天，及隨後在家中調定劑量2 (例如，200 µg)達其後的28天(48個個體；24個G933，24個安慰劑)。 初始劑量係100 µg。調定劑量1及2不超過300 µg。每一個體之研究持續時間隨佇列而變且由住院多個遞增劑量(MAD)或向上調定評估時段(在第-2天開始且對於佇列1在第8天後結束、對於佇列2在第12天後結束、對於佇列3在第16天後結束、且對於佇列4在第13天後結束)及門診隨訪期組成。另外，僅對於佇列4，在第二住院向上調定階梯後及在研究拜訪結束前，包括研究產品之家中自投與之28天時段(每週現場拜訪)。 在服用研究產品之前之兩晚上收入個體以容許重複評估合格性準則及基線混合飲食測試(MMT)並在投藥之前次日早上標準化身體活動程度。在第1天，在過夜禁食最少8小時後，抽取基線血樣用於安全性、效能、藥物動力學(PK)、藥效學(PD)及抗藥物抗體(ADA)實驗室測試。另外，記錄12導程ECG，且向個體投與G933或安慰劑之單一SC劑量。 個體整天及在治療期間保留在設施中用於觀察及安全性測試(包括ECG、遙測術、生命徵象之監測及用於潛在反應之注射位點之評估)。另外，對於佇列4而言，實施24小時可行動血壓監測(ABPM)。 混合飲食測試(MMT)程序在第-1天及在所有佇列達到之最高劑量值之最後一天實施。額外時間點包括調定劑量1下之第一天(佇列2)、調定劑量2下之第一天(佇列3)、自向上調定住院時段釋放當天(調定劑量2之第五天；佇列4)、及在家中自投與之28天時段期間每週現場拜訪(佇列4)。對於MMT而言，個體在5分鐘內用光標準化飲食(Ensure Plus^® )，且在即將消耗標準化飲食之前及在消耗後240分鐘獲得定時連續血樣用於量測葡萄糖及與葡萄糖代謝相關之參數。在住院時段期間，在早餐、午餐及晚餐之前15分鐘及之後2小時及在睡覺之前收集刺指葡萄糖試樣。 在家中自投與時段結束時重新收入佇列4個體過夜住院以收集最終終點。 在多個時間點(包括但不限於在第一劑量之前、在住院投藥時段期間(及在佇列4之門診時段期間)、在自單位釋放時及在第7至14天隨訪時)量測體重。 在投藥前及投藥後及在因佇列不同之時間點直至G933之最後劑量後48小時獲得G933之藥物動力學試樣。在G933投藥之前獲得二甲雙胍濃度之試樣。在投藥前及在不同時間點直至最後劑量後28天獲得抗藥物抗體試樣。 在研究中投與最後劑量後當天自單元釋放個體。在研究產品之最後劑量後約28天實施隨訪用於最終安全性評估。 (C) 效能評估 為評估與安慰劑相比G933之多個劑量後對葡萄糖控制及體重的影響，藉由調節基線量測及治療組使用協方差之分析比較G933與安慰劑組之間佇列4中MMT葡萄糖AUC之變化百分比(直至MMT後240分鐘)及自基線(第-1天)至治療結束之體重變化。用最後獲得之量測替代治療結束之丟失量測。比較係以0.1之兩側顯著水準執行。與安慰劑組相比G933治療組中體重下降(例如，在重複每日一次投藥之4週內介於1.3與2.0 kg之間)展現(例如) 100-300 µg之劑量之G933有效減輕體重。 類似於體重之評估，在佇列4中分析自基線(第-2天)之血紅素A1c (糖化血紅素，HbA1c)及果糖胺變化、及自基線(第-1天)之MMT後24小時葡萄糖AUC的變化百分比。24小時葡萄糖AUC分析包括MMT前/後葡萄糖代謝組之葡萄糖量測以及血清化學葡萄糖含量及PD葡萄糖試樣，其中彼等結果來自獨特時間點。與安慰劑組相比G933治療組中葡萄糖控制增加(例如，混合飲食測試(MMT)後濃度-時間曲線下葡萄糖面積(AUC)減少至少20%及/或如藉由血紅素A1c及果糖胺所量測)展現(例如) 100-300 µg之劑量之G933有效改善葡萄糖控制。 (D)     結果 (i)  部分A：佇列1-3 G933係以高達200 μg之劑量每天一次(QD)成功投與高達15天。 在混合飲食測試之空腹血糖及餐後葡萄糖二者中觀察到利用G933葡萄糖顯著減少至正常值。在混合飲食測試中，跨越佇列1-3，葡萄糖曲線下面積(AUC)減少＞40% (圖14)。佇列1 (第7天)及佇列3 (第9及15天)中之基線空腹葡萄糖含量變化示於圖15中。 觀察到朝向高達2 kg之顯著體重減輕之劑量依賴性趨勢。結果示於圖16中且展現G933在患有2型糖尿病之超重/肥胖患者中顯著減輕體重。在佇列3中，觀察到超過2 kg之差異。 在劑量調定下，G933高達200 μg耐受良好。重複投藥後之藥物動力學示於圖17中。PK係線性且可預測的。半衰期係約11小時。在多個每日投藥後累積最少或無累積，且在第4天與第7天之間達成穩態。所測試劑量範圍內之最大血漿濃度係4.21 ng/mL及18.90 ng/mL。平均每日暴露介於2.89 ng/mL與12.45 ng/mL之間之範圍。 基線後，僅一個試樣經確認對抗G933抗體呈陽性。 不良事件可管控且與GLP-1單一促效劑之彼等預期一致。 所報告之絕大多數噁心及嘔吐事件在治療起始時發生，即100 μg劑量值。嘔吐發生在26% (n=5)服用G933之患者中且服用安慰劑中無。在佇列1中，未報告嘔吐事件。在佇列2中，在兩個活動患者中報告三個嘔吐事件。兩個病例發生在100 μg值下之投藥第1天，且兩個病例在無介入下消退。在佇列3中，在3個活動患者中報告13個嘔吐事件。2個個體在第1天嘔吐，且該等病例在無介入下消退。1個個體在第1天與第5天之間嘔吐六次。在第3天給予靜脈內鹽水，且個體在第5天退出。 在4個(44.4%)安慰劑患者及7個(36.8%)經G933治療之患者中報告心臟不良事件。其頻率似乎不隨活動佇列間之劑量而增加。在用G933治療後，在每一佇列中觀察到約10 bpm之脈搏率增加。觀察到收縮或舒張壓無顯著變化，但在服用G933或安慰劑之所有佇列中觀察到血壓下降之趨勢。 在4個(44.4%)安慰劑患者及13個(68.4%)經G933治療之患者中報告胃腸(GI)不良事件。GI不良事件在佇列1、2及3中分別影響3、4及6個患者。最流行之GI不良事件係噁心，其在6個(31.6%)經G933治療之患者中有報告。 食慾下降在佇列3中之6個(85.7%)經G933治療之患者中有報告。 報告一個嚴重不良事件(SAE)：黴漿菌肺炎。 總之，G933耐受良好，引起顯著餐後葡萄糖降低，且顯示臨床上顯著之劑量依賴性體重減輕。 (ii) 部分B：佇列4 在41天投藥時段內，G933有效降低血糖及體重減輕。自基線(第1天)至第41天之葡萄糖曲線下面積(AUC)之平均減少示於圖18中。在此時間內，G933引起38.5%減少(90% C.I. -47.1、-29.0)，而安慰劑僅引起16.1%減少(90% C.I. -24.9、-8.0) (p-值：0.001)。G933亦改善葡萄糖控制，如藉由HbA1c所量測。(參見圖19)。在治療41天後，HbA1c降低0.92%，自7.2%之基線平均值降低至第42天之6.3%之平均值。相比之下，安慰劑僅將HbA1c降低0.58%，自7.3%之基線平均值降低至6.7%之平均值。 G933對體重之效應示於圖20及21中。圖20顯示在用G933治療41天後，患者丟失約3.83 kg，而服用安慰劑之患者僅丟失約1.71 kg (G933與安慰劑之間相差2.12 kg；p＜0.001)。另外，44%經G933治療之患者丟失至少5 kg，而僅8%服用安慰劑之患者丟失至少5 kg。圖21顯示在用G933治療41天後，患者之體重丟失約4.18%，而服用安慰劑之患者之體重僅丟失約1.71% (G933與安慰劑之間相差2.47%；p＜0.001)。另外，84%經G933治療之患者之體重丟失至少2%，而僅42%服用安慰劑之患者之體重丟失至少2%。 用G933治療亦引起肝脂肪減少。(參見圖22)。利用G933對安慰劑之自基線(95% CI)之肝脂肪的平均相對減少百分比係20.5% (7.2、33.9) (p=0.004)。與安慰劑相比，亦在經G933治療之患者中觀察到肝體積顯著減少(0.14 L (-0.24、-0.03)，p=0.01)。 總之，不良效應在經G933及安慰劑治療之患者中平衡。不良效應概述於下表中。未發生死亡。

總共17個患者報告噁心：4個服用安慰劑(15.4%)且13個經G933治療(52.0%)。總共8個患者嘔吐：0個服用安慰劑且8個經G933治療(32.0%)。在較早劑量期間，噁心及嘔吐更頻繁。(參見圖23)。 未觀察到心臟及血液動力學參數之不利變化。未觀察到收縮或舒張壓增加。在第13天觀察到心率增加12.8下/分鐘 (bpm)，但截至第41天，此下降至6.9 bpm。 總之，G933關於41天時段之血糖降低及體重減輕二者係有效的。將基於混合飲食測試之葡萄糖代謝正規化且其伴隨HbA1c顯著降低。顯著地，觀察到用利拉魯肽(3 mg)治療可預期之體重減輕之較大點估計值。 在100 μg至200 μg之向上調定劑量下，G933耐受良好高達41天，從而確認於200 μg下在治療1週內達成穩態且在多次投藥後最少累積。200 μg劑量值下觀察之最大血漿濃度介於1.98 ng/mL與34.30 ng/mL之間之範圍。實例 6 ： 多個遞增劑量研究部分 II (A)     個體 約32個患有相對良好控制之2型糖尿病(T2DM)之超重或肥胖個體入選參與研究。入選個體滿足實例5中所述之納入及排除準則，以下除外： 納入準則： ● 在篩選時段期間在安慰劑(或生理鹽水)之初始自注射後，佇列5及6個體必須願意且能夠自投與每日皮下(SC)注射。 排除準則： ● 在仰臥休息10分鐘後異常生命徵象，定義為以下中之任一者：(a) 若收縮BP ＜ 90 mm Hg或≥ 140 mm Hg；(b) 舒張BP ＜ 50 mm Hg或≥ 90 mm Hg；或(c) HR ＜45或＞ 85 bpm； ● 經分類高於加拿大心血管協會類別II之不穩定性心絞痛或穩定性心絞痛、或心肌梗塞或中風之任何先前病史、或在先前12個月內暫時性腦缺血發作之病史。 (B) 研究設計 實施隨機化、雙盲、多個遞增劑量研究。研究之流程圖提供於圖24中。此研究由2個佇列組成：佇列5及佇列6。佇列5由16個個體(12個活性、4個安慰劑)組成，其開始以100 µg投用G933 (MEDI0382)達5天，之後150 µg達5天、200 µg達5天及300 µg達7天。佇列6由其他16個個體(12個活性、4個安慰劑)組成，其開始以100 µg投用G933達5天、之後200 µg達5天及300 µg達7天。佇列5及6具有總共約32個個體且係平行運行。 該研究由對於佇列5及6二者在第3天開始之住院向上調定評估時段及門診隨訪期組成。以300 µg投藥之前4天及最後一天係住院。 如佇列1-4之實例5中所述個體進入診所。然而，其具有在第3天結束之初始住院時段、之後家中自投與G933且在每一劑量向上調定階梯時拜訪診所直至起始300 µg劑量。個體具有第二住院時段用於起始300 µg劑量(其在該劑量之第四天結束)，之後在家中自投與。 混合飲食測試(MMT)程序在第-1天及在達到最高劑量值之最後一天實施。額外時間點包括在開始300 µg劑量之前(對於佇列5為第16天及對於佇列6為第11天)及在投藥結束時(對於佇列5為第22天及對於佇列6為第17天)。如實例5中所述實施MMT。 在多個時間點(包括但不限於在第一劑量之前、在住院投藥時段期間及在門診時段期間、在自單位釋放時、在第7至14天隨訪時及在28天研究拜訪結束時)量測體重。 在投藥前及投藥後及在因佇列不同之時間點直至G933之最後劑量後48小時獲得G933之藥物動力學試樣。在G933投藥之前獲得二甲雙胍濃度之試樣。在投藥前及在不同時間點直至最後劑量後28天獲得抗藥物抗體試樣。 在研究中投與最後劑量後當天自單元釋放個體。在研究產品之最後劑量後約28天實施隨訪用於最終安全性評估。 (C) 結果  在佇列5及6中，G933有效降低葡萄糖。佇列5及6中觀察之葡萄糖AUC值分別示於圖25及26中。在佇列5中，用G933治療引起葡萄糖AUC減少41.7% (90% C.I. -49.9、-33.5)，而用安慰劑治療僅引起葡萄糖減少8.0% (90% C.I. -19.6、3.6) (p＜0.001)。在佇列6中，用G933治療引起葡萄糖AUC減少35.8% (90% C.I. -43.3、-28.3)，而用安慰劑治療僅引起葡萄糖減少-6.9% (90% C.I. -20.2、6.3) (p= 0.002)。對葡萄糖AUC之效應與先前佇列相當，即正規化約40%減少。所有佇列中自基線葡萄糖AUC之變化百分比示於圖27中。如圖28中所示，在佇列5及6中，G933亦有效降低空腹葡萄糖含量。 G933亦有效減輕體重。如圖29中所示，在治療22天後，佇列5中經G933治療之患者丟失約3.09 kg，而經安慰劑治療之患者僅丟失約0.98 kg (相差2.11 kg)。類似地，在治療17天後，佇列6中經G933治療之患者丟失約2.23 kg，而經安慰劑治療之患者僅丟失約0.35 kg (相差1.88 kg)。佇列5 (2.11kg)及6 (1.88kg)二者顯示在22及17天後與佇列4中投藥41天期間觀察之體重減輕相當之體重減輕。 體重及葡萄糖含量變化一起繪製於圖30中且概述於下表22中。 表22

G933在佇列5及6中耐受良好，且不良事件概況與其他市售GLP-1類似物(例如利拉魯肽)一致。在任一佇列中皆未觀察到死亡或嚴重不良事件。 兩個調定時間表皆展現高達300 µg之劑量之G933關於噁心及嘔吐耐受良好。在佇列5中，總共4個患者報告8次噁心發作：1個服用安慰劑之患者(20%)及3個服用G933之患者(27.3%)。總共3個患者報告8次嘔吐發作：無服用安慰劑之患者(0%)及3個服用G933之患者(27.3%)。在佇列6中，總共5個患者報告6次噁心發作：無服用安慰劑之患者(0%)及5個服用G933之患者(41.7%)。一個患者嘔吐兩次：無服用安慰劑之患者(0%)及1個服用G933之患者(8.3%)。觀察到較低噁心率(8/24 = 33%)及嘔吐率(4/24 = 16%)，此乃因在第一劑量後48小時，個體出院。 可行動血壓量測顯示G933治療之患者中收縮壓/舒張壓(SBP/DBP)自基線未增加及朝向減少之潛在趨勢。在佇列5中，在G933之22天投與後，心率自基線增加約7.6下/分鐘(BPM)，此與先前觀察及其他GLP-1類似物及佇列4中一致。在佇列6中，在G933之17天投與後，心率自基線增加約5.9 BPM。 300 μg之最高劑量下7天後利用兩個調定方案獲得之G933之血漿濃度提供於圖31中。尤其一旦達成穩態，曲線重疊，表明此劑量值下之暴露獨立於所採取調定方案。300 μg劑量下觀察之最大血漿濃度介於7.9 ng/mL至30.9 ng/mL之範圍。多個遞增劑量研究結果 ( 部分 I 及 II) 之概述 總之，在100-300 μg之劑量範圍內，G933顯示線性PK，且半衰期為約8-11小時，在每日重複劑量後最小累積，且在所有四個測試劑量值下介於第4天與第7天之間達成穩態。結果確認來自單一劑量研究(實例4)之結果。在300 μg之最高劑量下7天後達成之血漿濃度獨立於所採取之調定方案。Cmax之個體間差異在較小佇列中係約20-30%，且在較大佇列4中係40-50%。所測試劑量範圍中及利用所採取調定方案之最大血漿濃度介於1.98 ng/mL與34.3 ng/mL之間之範圍，且平均每日血漿濃度介於0.87ng/mL與16.3ng/mL之間之範圍。 安全性及耐受性特性與其他GLP-1模擬物相當，且顯著地，G933引起體重減輕及葡萄糖控制二者。 *** 本揭示內容之範疇並不受所述具體實施例限制，該等實施例意欲作為本揭示內容之個別態樣之單一闡釋，且功能上等效之任何組合物或方法在本揭示內容之範疇。實際上，除本文中所展示及闡述之修改外，熟習此項技術者依據前述說明及附圖亦將明瞭本揭示內容之各種修改。該等修改意欲屬於隨附申請專利範圍之範疇。 本說明書中所提及之所有出版物及專利申請案皆以引用方式併入本文中，其併入程度如同明確地且單獨地指出將每一個別出版物或專利申請案以引用方式併入一般。

圖1顯示與媒劑治療及利拉魯肽治療相比，在投與三個不同劑量之升糖素/GLP-1共促效劑肽G730後DIO小鼠中自第0天之平均體重變化%。不同組中之開始體重分別係：媒劑：47.4±3.7g，G730 10 nmol/kg：44.5±2.2g，G730 20 nmol/kg：45.9±3.6g及G730 50 nmol/kg：46.1±2.4g。 圖2顯示與媒劑治療及利拉魯肽治療相比，在投與三個不同劑量之升糖素/GLP-1共促效劑肽G797後DIO小鼠中自第0天之平均體重變化%。不同組中之開始體重分別係：媒劑：47.4±3.7g，G797 5 nmol/kg：47.5±1.2g，G797 20 nmol/kg：47.4±2.2g及G797 50 nmol/kg：47.2±1.8g。 圖3顯示與媒劑治療及利拉魯肽治療相比，在投與20 nmol/kg之劑量之升糖素/GLP-1共促效劑肽G812後DIO小鼠中自第0天之平均體重變化%。不同組中之開始體重分別係：媒劑：47.4±3.7g，及G812 20 nmol/kg：49.2±3.4g。 圖4係比較圖1、2及3中提供之三種升糖素/GLP-1共促效劑肽之體重變化結果的圖。 圖5顯示與媒劑治療及利拉魯肽治療相比，在投與兩個不同劑量之升糖素/GLP-1共促效劑肽G796後DIO小鼠中自第0天之平均體重變化%。 圖6顯示與媒劑治療及利拉魯肽治療相比，在投與兩個不同劑量之升糖素/GLP-1共促效劑肽G865後DIO小鼠中自第0天之平均體重變化%。 圖7顯示與媒劑治療及利拉魯肽治療相比，在投與兩個不同劑量之升糖素/GLP-1共促效劑肽G933後DIO小鼠中自第0天之平均體重變化%。 圖8係比較圖5、6及7中提供之三種升糖素/GLP-1共促效劑肽之體重變化結果的圖。 圖9提供計劃及實際G933第一遞增劑量研究之流程圖。 圖10提供G933第一遞增劑量研究之個體佈置。 圖11顯示G933第一遞增劑量研究中個體之中值葡萄糖含量。 圖12顯示G933第一遞增劑量研究中個體之中值胰島素含量。 圖13提供G933多個遞增劑量研究中佇列1-4之流程圖。MEDI0382係指具有SEQ ID NO:19之序列之30個胺基酸直鏈肽。 圖14顯示在第7天經安慰劑或100 μg G933 (佇列1)、在第11天經安慰劑或150 μg G933 (佇列2)及在第15天經安慰劑或200 μg G933 (佇列3)治療之個體之平均混合飲食測試葡萄糖含量。 圖15顯示在第7天經安慰劑或G933 (佇列1)、在第9天經安慰劑或G933 (佇列3)及在第15天經安慰劑或G933 (佇列3)治療之個體之基線空腹葡萄糖含量變化。 圖16顯示分別在研究過程中在佇列1及3中及在第7及15天在佇列1及3中自基線體重之體重變化。 圖17顯示在重複投藥後MEDI0382之血漿濃度。 圖18顯示如藉由經G933治療之患者之葡萄糖含量量測之葡萄糖控制的改善。虛線代表在基線(第1天)時觀察之葡萄糖含量，且實線代表在第41天觀察之葡萄糖含量。 圖19顯示如藉由經G933治療之患者之HbA1c含量量測之葡萄糖控制的改善。 圖20顯示經G933治療之患者之絕對體重減少。(在此圖中，G933稱為「MEDI」或「0382」；「Plac」係指安慰劑。) 圖21顯示經G933治療之患者之體重減輕%。(在此圖中，「MEDI」係指「MEDI0382」。) 圖22顯示經G933治療之患者之肝脂肪減少的評估。提供個別個體之代表性影像。 圖23顯示在經G933治療之患者中發生之噁心及嘔吐。 圖24提供G933多個遞增劑量研究中佇列5及6之流程圖。 圖25顯示與安慰劑相比如藉由經G933治療之佇列5患者之葡萄糖含量量測之葡萄糖控制的改善。虛線代表基線(第1天)時觀察之葡萄糖含量，且實線代表第17天時觀察之葡萄糖含量。(在此圖中，G933稱為「MEDI」。) 圖26顯示與安慰劑相比如藉由經G933治療之佇列6患者之葡萄糖含量量測之葡萄糖控制的改善。虛線代表基線(第1天)時觀察之葡萄糖含量，且實線代表第17天時觀察之葡萄糖含量。(在此圖中，G933稱為「MEDI」。) 圖27顯示所有佇列中自基線葡萄糖AUC之變化%。 圖28顯示佇列5及6中空腹葡萄糖含量之改善。(在此圖中，G933稱為「MEDI」。) 圖29顯示佇列5及6中自基線之體重變化。(在此圖中，G933稱為「MEDI」。) 圖30顯示跨越所有佇列之體重減輕及葡萄糖變化。 圖31顯示佇列5中在第16及22天及佇列6中在第11及17天之G933血漿濃度。

<110> 英商梅迪繆思有限公司(MEDIMMUNE LIMITED)

<120> 用於治療肥胖之升糖素及GLP-1共促效劑

<130> GLPGG-200-PCT

<140> 106108066

<141> 2017-03-10

<150> 62/306,121

<151> 2016-03-10

<160> 26

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 29

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

<210> 2

<211> 30

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

<210> 3

<211> 31

<212> PRT

<213> 智人

<400> 3

<210> 4

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa係Gly或Ser

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa係Tyr或Lys

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)..(12)

<223> Xaa係Lys,Glu,Arg，或Ser

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)..(13)

<223> Xaa係Lys或Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)..(15)

<223> Xaa係Asp或Glu

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(16)

<223> Xaa係Ser或Gly

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (17)..(17)

<223> Xaa係Glu,Arg,Gln，或Lys

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (18)..(18)

<223> Xaa係Arg,Ser，或Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (20)..(20)

<223> Xaa係Arg,Lys，或Gln

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (21)..(21)

<223> Xaa係Asp或Glu

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (23)..(23)

<223> Xaa係Val或Ile

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (24)..(24)

<223> Xaa係Ala或Gln

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa係Glu或Val

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (28)..(28)

<223> Xaa係Ala或Lys

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (30)..(30)

<223> Xaa係Gly或Arg

<400> 4

<210> 5

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa係Tyr或Lys

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)..(12)

<223> Xaa係Lys,Glu,Arg，或Ser

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)..(13)

<223> Xaa係Lys或Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (17)..(17)

<223> Xaa係Glu,Arg,Gln，或Lys

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (18)..(18)

<223> Xaa係Arg,Ser，或Ala

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa係Glu或Val

<400> 5

<210> 6

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa係Tyr或Lys

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)..(12)

<223> Xaa係Lys,Glu,Arg，或Ser

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)..(13)

<223> Xaa係Lys或Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa係Glu或Val

<400> 6

<210> 7

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa係Tyr或Lys

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)..(12)

<223> Xaa係Lys,Glu,Arg，或Ser

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)..(13)

<223> Xaa係Lys或Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)..(27)

<223> Xaa係Glu或Val

<400> 7

<210> 8

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<400> 8

<210> 9

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<400> 9

<210> 10

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)..(12)

<223> Xaa係Lys,Glu，或Arg

<400> 10

<210> 11

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)..(12)

<223> Xaa係Lys,Glu,Arg，或Ser

<400> 11

<210> 12

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<400> 12

<210> 13

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<400> 13

<210> 14

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<400> 14

<210> 15

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<400> 15

<210> 16

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)..(13)

<223> 具有經由γ麩胺酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸

<400> 16

<210> 17

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 具有經由γ麩胺酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸

<400> 17

<210> 18

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 具有經由γ麩胺酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸

<400> 18

<210> 19

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 具有經由γ麩胺酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸

<400> 19

<210> 20

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 具有經由γ麩胺酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸

<400> 20

<210> 21

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 具有經由γ麩胺酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸

<400> 21

<210> 22

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 具有經由γ麩胺酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸

<400> 22

<210> 23

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合GLP-1/升糖素肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (17)..(17)

<223> 具有經由γ麩胺酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸

<400> 23

<210> 24

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> G931

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)..(13)

<223> 具有經由γ麩胺酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸

<400> 24

<210> 25

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> G934

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 具有經由γ麩胺酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸

<400> 25

<210> 26

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> G973

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> 具有經由γ麩胺酸連接體結合至ε氮之棕櫚醯基的離胺酸

<400> 26

Claims (12)

1. 一種包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列之肽的用途，其係用於製備治療非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的藥物，其中投與每劑50-600μg之該肽至需治療之人類個體。
2. 如請求項1之用途，其中該肽係每日投與。
3. 如請求項2之用途，其中該肽係每日一次投與。
4. 如請求項3之用途，其中該肽係投與至少1週。
5. 如請求項3之用途，其中該肽係投與至少2週。
6. 如請求項3之用途，其中該肽係投與至少3週。
7. 如請求項3之用途，其中該肽係投與至少4週。
8. 如請求項1至7中任一項之用途，其中該肽藉由注射投與。
9. 如請求項8之用途，其中該投與係經皮下。
10. 如請求項1至7中任一項之用途，其中疾病進展停止。
11. 如請求項1至7中任一項之用途，其中疾病進展逆轉。
12. 如請求項1至7中任一項之用途，其中投與每劑100-600μg之該肽。

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