KR20220150416A - 비만 치료를 위한 글루카곤 및 glp-1 공동-작용제 - Google Patents

비만 치료를 위한 글루카곤 및 glp-1 공동-작용제 Download PDF

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KR20220150416A
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마리아 알렉산드라 베드나렉
루츠 울리히 제르무투스
필립 엠버리
마르셀라 페트론
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메디뮨 리미티드
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Abstract

GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 비만 및 당뇨병의 예방 및 치료 방법이 본원에 제공된다.

Description

비만 치료를 위한 글루카곤 및 GLP-1 공동-작용제{GLUCAGON AND GLP-1 CO-AGONISTS FOR THE TREATMENT OF OBESITY}
관련 출원에 대한 교차-참조
본 출원은 2016년 3월 10일에 출원된 미국 특허 가출원 제62/306,121호의 이익을 청구하며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
전자 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원과 함께 제출된 ASCII 텍스트 파일(명칭: Sequencelisting_ST25.txt; 크기: 14,333바이트; 및 생성일: 2017년 3월 6일)의 전자 제출된 서열 목록의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
비만은 세계적으로 주요하며 증가하고 있는 건강 문제이다. 이는 여러 생명-위협 질병, 예컨대 심혈관 질병, 신장 질병, 고혈압, 뇌졸중, 불임, 호흡기 기능부전 및 2형 당뇨병과 연관된다.
글루카곤 및 글루카곤-유사 펩타이드-1(GLP-1)은 글루카곤, 글루카곤-유사 펩타이드-1(GLP-1), 글루카곤-유사 펩타이드-2(GLP-2) 및 옥신토모듈린(OXM)을 포함하는 여러 상이한 프로글루카곤-유래 펩타이드를 형성하기 위해 상이한 조직에서 가공되는 158개 아미노산 전구체 폴리펩타이드인 프리-프로글루카곤으로부터 유래되며, 이는 글루코스 항상성, 인슐린 분비, 위 배출, 및 장 성장뿐만 아니라 식품 섭취의 조절을 포함하는 매우 다양한 생리적 기능에 관여된다. 글루카곤은 프로글루카곤의 아미노산 33 내지 61(프리프로글루카곤의 53 내지 81)에 대응하는 29-아미노산 펩타이드인 반면, GLP-1은 프로글루카곤의 아미노산 72 내지 108(프리프로글루카곤의 92 내지 128)에 대응하는 37-아미노산 펩타이드로서 생성된다. GLP-1(7~36) 아미드 또는 GLP-1(7~37) 산은 GLP-1 수용체에서 본질적으로 동등한 활성을 실증하는, GLP-1의 생물학적 활성 형태이다.
글루카곤은 췌장에 의해 생성되며 글루카곤 수용체("glucR")와 상호작용한다. 글루카곤은 간에서 글루코스 신합성 및 글리코겐 분해를 통해 혈당을 상승시키는 작용을 한다. 혈당이 떨어지기 시작하면, 글루카곤은 글리코겐을 분해하여 글루코스를 방출하도록 간에 신호를 보내서 혈당 수준을 정상 수준으로 높인다.
GLP-1은 글루카곤과 비교하여 상이한 생물학적 활성을 갖는다. 이는 내장 L 세포로부터 분비되어 GLP-1 수용체에 결합한다. 그 활성에는 인슐린 합성 및 분비의 자극, 글루카곤 분비의 억제, 및 음식 섭취의 억제가 포함된다.
이의 각각의 수용체에서 작용제로 작용하는 글루카곤 및 GLP-1 둘 모두는 체중 감량에서 유효한 것으로 나타났다. 예를 들어 리라글루티드(Liraglutide, VICTOZA®, Novo Nordisk) 및 엑세나티드(Exenatide, Byetta®, Eli Lilly/Amylin)를 포함하는 소정 GLP-1 유사체가 비만 치료를 위해 판매되고 있거나 개발 중이다. 글루카곤/GLP-1 작용제 펩타이드는 또한 WO 2014/091316에 개시되어 있다.
혈당 제어를 위해 일부 치료법이 이용 가능하지만, 어느 것도 현재 실질적인 체중 감량을 달성하지 못하여, 여전히 환자에 있어서 상당한 충족되지 못한 필요성이 남아 있다. 환자의 50%는 10년 내에 글루코스 제어를 위해 경구 단독치료법에서부터(보통 메트포르민 사용) 인슐린 개시까지 진행되며, 인슐린 개시 전에 종종 여러 경구 조합 치료법을 복용한다. 인슐린의 사용은 체중 증가를 악화시키며, 이는 인슐린 치료법을 시작한 후 첫 해에 6 ㎏만큼 클 수 있다. 상기 체중 증가는 증가된 인슐린 내성을 야기할 수 있고, 이는 고혈압, 이상지질혈증, 및 주요한 심혈관 유해 사례의 증가된 위험성과 연관된다. 인슐린 내성의 감소에 대해서는, 상당한 체중 감량(5% 초과)이 인슐린 내성을 감소시키기 위한 최적 개입이지만, 이는 강도 높은 식이 및 생활습관 개입 및/또는 비만 수술을 통해서만 현재로서는 신뢰 가능하게 달성될 수 있다. 당뇨병 및 비만 치료에서 치료적으로 유효하지만 유해 효과를 배제하는 투여량 요법을 사용하여 인간에게 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 투여하는 방법에 대한 필요성이 여전히 남아 있다.
GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 비만 및 당뇨병 및 관련 질환의 예방 및 치료 방법이 본원에 제공된다.
하나의 예에서, 체중 감량 방법은 이를 필요로 하는 인간 대상체에 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 HX2QGTFTSDX10SX12X13LX15X16X17X18AX20X21FX23X24WLX27X28GX30의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함하며; 식 중, X2는 G 또는 S이며, X10은 Y 또는 K이고, X12는 K, E, R, 또는 S이고, X13은 K 또는 Y이고, X15는 D 또는 E이고, X16은 S 또는 G이고, X17은 E, R, Q, 또는 K이고, X18은 R, S, 또는 A이고, X20은 R, K, 또는 Q이고, X21은 D 또는 E이고, X23은 V 또는 I이고, X24는 A 또는 Q이고, X27은 E 또는 V이고, X28은 A 또는 K이고, 및 X30은 G 또는 R이다(SEQ ID NO: 4).
하나의 예에서, 체지방 감소 방법은 이를 필요로 하는 인간 대상체에 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 예에서, 비만 치료 방법은 이를 필요로 하는 인간 대상체에 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 예에서, 과체중에 의해 야기되거나 이를 특징으로 하는 질병 또는 질환의 치료 또는 예방 방법은 이를 필요로 하는 인간 대상체에 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 예에서, 체중 관리 방법은 이를 필요로 하는 인간 대상체에 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 예에서, 비알콜성 지방간염(NASH)의 치료 방법은 이를 필요로 하는 인간 대상체에 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 예에서, 지질 산화의 증가 방법은 이를 필요로 하는 인간 대상체에 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 예에서, 식품 섭취 감소 방법은 이를 필요로 하는 인간 대상체에 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 예에서, 혈장 글루코스 저감 방법은 이를 필요로 하는 인간 대상체에 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 예에서, 혈당 제어 개선 방법은 이를 필요로 하는 인간 대상체에 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 예에서, 혈당 제어 달성 방법은 이를 필요로 하는 인간 대상체에 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 예에서, 체중 감소 및 글루코스 제어 방법은 이를 필요로 하는 인간 대상체에 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 예에서, 대상체는 당뇨병을 갖는다. 하나의 예에서, 당뇨병은 2형 진성 당뇨병이다.
하나의 예에서, 2형 진성 당뇨병의 치료 방법은 인간에게 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 예에서, 2형 진성 당뇨병을 갖는 인간 대상체에서 혈당 제어 개선 방법은 대상체에 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 예에서, 투여는 체중을 감소시킨다. 하나의 예에서, 투여는 비만을 치료한다. 하나의 예에서, 투여는 체지방을 감소시킨다.
하나의 예에서,
X2는 G이며, X10은 K이고, X12는 E, R, 또는 S이고, X13은 K이고, X17은 E 또는 K이고, X18은 S이고, X20은 R이고, X27은 E이고, 또는 X28은 A이다.
하나의 예에서,
X2는 G이며, X10은 K이고, X12는 E, R, 또는 S이고, X13은 K이고, X17은 E 또는 K이고, X18은 S이고, X20은 R이고, X27은 E이고, 및 X28은 A이다.
하나의 예에서, 펩타이드는 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성된다.
하나의 예에서, 투여는 3일 내지 10일 동안 초기 용량 및 이후 더 높은 제2 용량을 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 예에서, 초기 용량은 3일 내지 7일 동안 투여된다. 하나의 예에서, 초기 용량은 펩타이드 100 ㎍이다. 하나의 예에서, 제2 용량은 적어도 4일 동안 투여된다. 하나의 예에서, 초기 용량은 연속 4일 동안 투여되며 제2 용량은 적어도 연속 4일 동안 투여된다. 하나의 예에서, 제2 용량은 펩타이드 150 ㎍ 내지 200 ㎍이다. 하나의 예에서, 제2 용량은 펩타이드 150 ㎍ 또는 펩타이드 200 ㎍이다.
하나의 예에서, 투여는 제2 용량 후 제3 용량을 투여하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 제3 용량은 제2 용량보다 크다. 하나의 예에서, 초기 용량은 3일 내지 10일 동안 투여되며 제2 용량은 3일 내지 10일 동안 투여된다. 하나의 예에서, 초기 용량은 3일 내지 7일 동안 투여되며 제2 용량은 3일 내지 7일 동안 투여된다. 하나의 예에서, 초기 용량은 연속 4일 동안 투여되며, 제2 용량은 연속 4일 동안 투여되고, 제3 용량은 적어도 연속 4일 동안 투여된다. 하나의 예에서, 초기 용량은 연속 4일 동안 투여되며, 제2 용량은 연속 7일 동안 투여되고, 제3 용량은 적어도 연속 4일 동안 투여된다. 하나의 예에서, 제3 용량은 펩타이드 200 ㎍ 내지 400 ㎍이다. 하나의 예에서, 제3 용량은 펩타이드 200 ㎍, 펩타이드 300 ㎍, 또는 펩타이드 400 ㎍이다.
하나의 예에서, 100 ㎍의 초기 용량은 4일 동안 투여되며, 150 ㎍의 제2 용량은 4일 동안 투여되고, 200 ㎍의 제3 용량은 이후 매일 투여된다. 하나의 예에서, 100 ㎍의 초기 용량은 5일 동안 투여되고, 150 ㎍의 제2 용량은 5일 동안 투여되고, 200 ㎍의 제3 용량은 5일 동안 투여되고, 300 ㎍의 제4 용량은 이후 매일 투여된다. 하나의 예에서, 100 ㎍의 초기 용량은 5일 동안 투여되고, 200 ㎍의 제2 용량은 5일 동안 투여되고, 300 ㎍의 제3 용량은 이후 매일 투여된다.
하나의 예에서, 펩타이드 50 ㎍이 투여된다. 하나의 예에서, 펩타이드 100 ㎍이 투여된다. 하나의 예에서, 펩타이드 150 ㎍이 투여된다. 하나의 예에서, 펩타이드 200 ㎍이 투여된다. 하나의 예에서, 펩타이드 250 ㎍이 투여된다. 하나의 예에서, 펩타이드 300 ㎍이 투여된다. 하나의 예에서, 펩타이드 400 ㎍이 투여된다.
하나의 예에서, 펩타이드는 매일 투여된다. 하나의 예에서, 펩타이드는 매일 1회 투여된다.
하나의 예에서, 펩타이드는 적어도 1주 동안, 적어도 2주 동안, 적어도 3주 동안, 또는 적어도 4주 동안 투여된다.
하나의 예에서, 펩타이드는 주사에 의해 투여된다. 하나의 예에서, 투여는 피하이다.
하나의 예에서, 투여는 혼합식 시험 후 농도-시간 곡선 하 글루코스 면적에서 적어도 20% 감소를 일으킨다.
하나의 예에서, 글루코스가 감소된다. 하나의 예에서, 글루코스는 공복 혈장 글루코스이다. 하나의 예에서, 글루코스는 혼합식 시험으로부터의 식후 글루코스이다.
하나의 예에서, 투여는 적어도 1.0 ㎏, 적어도 1.3 ㎏, 또는 약 1.3 ㎏ 내지 약 2.0 ㎏의 체중 감량을 일으킨다. 하나의 예에서, 대상체의 체중은 적어도 3.5 ㎏ 또는 적어도 5 ㎏만큼 감소된다. 하나의 예에서, 대상체의 체중은 적어도 2%, 적어도 4%, 적어도 5%, 또는 적어도 10%만큼 감소된다. 하나의 예에서, 대상체의 체중은 약 2% 내지 약 20%, 약 2% 내지 약 25%, 또는 약 2% 내지 약 30%만큼 감소된다.
하나의 예에서, 지방은 간 지방이다. 하나의 예에서, 대상체에서의 간 지방은 적어도 20%만큼 감소된다. 하나의 예에서, 대상체에서의 간 지방은 약 20% 내지 약 40%만큼 감소된다. 하나의 예에서, 투여는 간 지방의 약 1/3 감소를 일으킨다. 하나의 예에서, 간 부피가 대상체에서 감소된다.
하나의 예에서, 투여는 헤모글로빈 A1c(HbA1c) 수준을 감소시킨다. 하나의 예에서, 대상체에서의 HbA1c 수준은 적어도 0.6%만큼 감소된다. 하나의 예에서, 대상체에서의 HbA1c 수준은 적어도 0.9%만큼 감소된다. 하나의 예에서, 대상체에서의 HbA1c 수준은 약 0.5% 내지 약 1.5%, 약 0.5% 내지 약 2%, 또는 약 0.5% 내지 약 3%만큼 감소된다. 하나의 예에서, 대상체에서의 HbA1c 수준은 6.3% 이하까지 감소된다.
하나의 예에서, 투여는 프룩토사민 수준을 감소시킨다.
하나의 예에서, 대상체의 식욕이 감소된다.
하나의 예에서, 대상체의 에너지 소비가 증가된다.
하나의 예에서, 질병 진행이 중단된다. 하나의 예에서, 질병 진행이 역전된다.
하나의 예에서, 펩타이드는 고상 합성에 의해 합성적으로 제조된다. 하나의 예에서, 고상 합성은 플루오레닐메틸옥시카보닐 클로라이드의 화학적 성질을 이용한다.
하나의 예에서, 펩타이드에서 X30의 카복실기는 미변형 G 또는 R이다. 하나의 예에서, 펩타이드에서 X30의 카보닐기는 아미드화된다.
하나의 예에서, 펩타이드는 라이신 잔기의 N(엡실론)기 상에 팔미토일 모이어티를 포함한다. 하나의 예에서, 팔미토일기는 링커를 통해 라이신에 연결된다. 하나의 예에서, 링커는 감마 글루타메이트이다. 하나의 예에서, 펩타이드는 라이신 잔기의 N(엡실론)기 상에 스테아로일 또는 스테아레이트 모이어티를 포함한다. 하나의 예에서, 라이신 잔기는 X10이다.
하나의 예에서, 펩타이드는 10,000 pM 미만, 5000 pM 미만, 2500 pM 미만, 1000 pM 미만, 900 pM 미만, 800 pM 미만, 700 pM 미만, 600 pM 미만, 500 pM 미만, 400 pM 미만, 300 pM 미만, 200 pM 미만, 100 pM 미만, 50 pM 미만, 25 pM 미만, 20 pM 미만, 15 pM 미만, 10 pM 미만, 5 pM 미만, 4 pM 미만, 3 pM 미만, 또는 2 pM 미만의 cAMP 검정 1에서의 EC50으로 인간 글루카곤 수용체에 결합한다.
하나의 예에서, 펩타이드는 10,000 pM 미만, 5000 pM 미만, 2500 pM 미만, 1000 pM 미만, 900 pM 미만, 800 pM 미만, 700 pM 미만, 600 pM 미만, 500 pM 미만, 400 pM 미만, 300 pM 미만, 200 pM 미만, 100 pM 미만, 50 pM 미만, 25 pM 미만, 20 pM 미만, 15 pM 미만, 10 pM 미만, 5 pM 미만, 4 pM 미만, 3 pM 미만, 또는 2 pM 미만의 cAMP 검정 1에서의 EC50으로 인간 GLP-1 수용체에 결합한다.
하나의 예에서, 펩타이드는 GLP-1 활성의 작용제, 글루카곤 활성의 작용제, 또는 GLP-1 및 글루카곤 활성 둘 모두의 작용제이다.
하나의 예에서, 펩타이드는 글루카곤 수용체 및 GLP-1 수용체 둘 모두에 결합하며, 여기서 펩타이드는 글루카곤 수용체에서보다 GLP-1 수용체에서 천연 리간드 대비 적어도 약 2-배, 5-배, 또는 10-배 더 큰 활성을 나타낸다.
하나의 예에서, 펩타이드는 이종성 모이어티를 추가로 포함한다. 하나의 예에서, 이종성 모이어티는 단백질, 펩타이드, 단백질 도메인, 링커, 유기 중합체, 무기 중합체, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 바이오틴, 알부민, 인간 혈청 알부민(HSA), HSA FcRn 결합부, 항체, 항체의 도메인, 항체 단편, 단일쇄 항체, 도메인 항체, 알부민 결합 도메인, 효소, 리간드, 수용체, 결합 펩타이드, 비-FnIII 스캐폴드, 에피토프 태그, 재조합 폴리펩타이드 중합체, 사이토카인, 지질, 또는 나열된 모이어티들 중 2개 이상의 조합이다.
하나의 예에서, 대상체는 27 ㎏/㎡ 내지 40 ㎏/㎡의 체질량 지수(BMI)를 갖는다. 하나의 예에서, 대상체는 30 ㎏/㎡ 내지 39.9 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 하나의 예에서, 대상체는 적어도 40 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다.
하나의 예에서, 대상체는 과체중이다. 하나의 예에서, 대상체는 비만이다. 하나의 예에서, 대상체는 (i) 과체중이고 (ii) 고혈압, 2형 진성 당뇨병, 이상지질혈증, 심혈관 질병 이력 또는 이들의 조합을 갖는다. 하나의 예에서, 대상체는 (i) 과체중이고 (ii) 이상당혈증, 고혈압, 이상지질혈증, 폐쇄 수면 무호흡, 또는 이들의 조합을 갖는다.
하나의 예에서, 대상체는 인슐린 치료를 받고 있다. 하나의 예에서, 투여되는 인슐린의 양이 감소된다. 하나의 예에서, 인슐린 치료법이 중단된다.
하나의 예에서, 대상체는 인슐린, 메트포르민, 설포닐우레아, 나트륨-글루코스 공동전달체-2(sglt-2) 억제제, 디펩티딜 펩티다제-4(DPP-IV) 억제제, 글루타존, 알파 글루코시다제 억제제, 또는 이들의 조합을 수여받고 있다.
하나의 예에서, 펩타이드의 반감기는 약 10시간 내지 약 12시간이다.
하나의 예에서, 투여는 식이 및 운동에 부속된다.
하나의 예에서, 펩타이드는 SEQ ID NO: 19를 포함하며, 펩타이드는 4일 동안 100 ㎍의 초기 용량으로, 4일 동안 150 ㎍의 제2 용량으로, 그리고 이어서 매일 200 ㎍의 용량으로 투여된다.
하나의 예에서, 펩타이드는 SEQ ID NO: 19를 포함하며, 펩타이드는 5일 동안 100 ㎍의 초기 용량으로, 5일 동안 200 ㎍의 제2 용량으로, 그리고 이어서 매일 300 ㎍의 용량으로 투여된다.
하나의 예에서, 펩타이드는 SEQ ID NO: 19를 포함하며, 펩타이드는 5일 동안 100 ㎍의 초기 용량으로, 5일 동안 150 ㎍의 제2 용량으로, 5일 동안 200 ㎍의 제2 용량으로, 그리고 이어서 매일 300 ㎍의 용량으로 투여된다.
하나의 예에서, 대상체는 2형 진성 당뇨병을 갖는다. 하나의 예에서, 대상체는 비만이다. 하나의 예에서, 대상체는 (i) 과체중이며 (ii) 고혈압, 2형 진성 당뇨병, 이상지질혈증, 심혈관 질병 이력 또는 이들의 조합을 갖는다. 하나의 예에서, 대상체는 (i) 과체중이며 (ii) 이상당혈증, 고혈압, 이상지질혈증, 폐쇄 수면 무호흡, 또는 이들의 조합을 갖는다.
도 1은 비히클 치료, 및 리라글루티드 치료 대비 3개의 상이한 용량으로 글루카곤/GLP-1 공동-작용제 펩타이드 G730의 투여 후 DIO 마우스에서 0일부터의 평균 체중 변화%를 나타낸다. 상이한 군에서의 시작 체중은 각각 비히클: 47.4±3.7 g, G730 10 ㎚ol/㎏: 44.5±2.2 g, G730 20 ㎚ol/㎏: 45.9±3.6 g 및 G730 50 ㎚ol/㎏: 46.1±2.4 g이었다.
도 2는 비히클 치료, 및 리라글루티드 치료 대비 3개의 상이한 용량으로 글루카곤/GLP-1 공동-작용제 펩타이드 G797의 투여 후 DIO 마우스에서 0일부터의 평균 체중 변화%를 나타낸다. 상이한 군에서의 시작 체중은 각각 비히클: 47.4±3.7 g, G797 5 ㎚ol/㎏: 47.5±1.2 g, G797 20 ㎚ol/㎏: 47.4±2.2 g 및 G797 50 ㎚ol/㎏: 47.2±1.8 g이었다.
도 3은 비히클 치료, 및 리라글루티드 치료 대비 20 ㎚ol/㎏의 용량으로 글루카곤/GLP-1 공동-작용제 펩타이드 G812의 투여 후 DIO 마우스에서 0일부터의 평균 체중 변화%를 나타낸다. 상이한 군에서의 시작 체중은 각각 비히클: 47.4±3.7 g 및 G812 20 ㎚ol/㎏: 49.2±3.4 g이었다.
도 4는 도 1, 도 2 및 도 3에 나타낸 3개의 글루카곤/GLP-1 공동-작용제 펩타이드에 대한 체중 결과에서의 변화를 비교하는 그래프이다.
도 5는 비히클 치료, 및 리라글루티드 치료 대비 2개의 상이한 용량으로 글루카곤/GLP-1 공동-작용제 펩타이드 G796의 투여 후 DIO 마우스에서 0일부터의 평균 체중 변화%를 나타낸다.
도 6은 비히클 치료, 및 리라글루티드 치료 대비 2개의 상이한 용량으로 글루카곤/GLP-1 공동-작용제 펩타이드 G865의 투여 후 DIO 마우스에서 0일부터의 평균 체중 변화%를 나타낸다.
도 7은 비히클 치료, 및 리라글루티드 치료 대비 2개의 상이한 용량으로 글루카곤/GLP-1 공동-작용제 펩타이드 G933의 투여 후 DIO 마우스에서 0일부터의 평균 체중 변화%를 나타낸다.
도 8은 도 5, 도 6 및 도 7에 나타낸 3개의 글루카곤/GLP-1 공동-작용제 펩타이드에 대한 체중 결과에서의 변화를 비교하는 그래프이다.
도 9는 계획 및 실제 G933 단회 상승 용량 연구의 순서도를 제공한다.
도 10은 G933 단회 상승 용량 연구의 대상체 기질을 제공한다.
도 11은 G933 단회 상승 용량 연구에서 대상체의 중앙값 글루코스 수준을 나타낸다.
도 12는 G933 단회 상승 용량 연구에서 대상체의 중앙값 인슐린 수준을 나타낸다.
도 13은 G933 다회 상승 용량 연구에서 코호트 1 내지 코호트 4의 순서도를 제공한다. MEDI0382는 SEQ ID NO: 19의 서열을 갖는 30개 아미노산 선형 펩타이드를 나타낸다.
도 14는 7일차에 위약 또는 100 ㎍ G933(코호트 1), 11일차에 위약 또는 150 ㎍ G933(코호트 2), 및 15일차에 위약 또는 200 ㎍ G933(코호트 3)으로 치료받은 대상체에서 평균 혼합식 시험 글루코스 수준을 나타낸다.
도 15는 7일차에 위약 또는 G933(코호트 1), 9일차에 위약 또는 G933(코호트 3), 및 15일차에 위약 또는 G933(코호트 3)으로 치료받은 대상체에서 기준선 공복 글루코스 수준에서의 변화를 나타낸다.
도 16은 코호트 1 및 코호트 3 둘 모두에서 및 7일차 및 15일차에 코호트 1 및 코호트 3에서 각각 연구 경과에 걸친 기준선 체중으로부터의 체중 변화를 나타낸다.
도 17은 반복 투여 후 MEDI0382의 혈장 농도를 나타낸다.
도 18은 G933으로 치료받은 환자에서 글루코스 수준으로 측정되는 글루코스 제어에서의 개선을 나타낸다. 단속선은 기준선에서 관찰되는 글루코스 수준을 나타내며(1일), 실선은 41일차에 관찰되는 글루코스 수준을 나타낸다.
도 19는 G933으로 치료받은 환자에서 HbA1c로 측정되는 글루코스 제어에서의 개선을 나타낸다.
도 20은 G933으로 치료받은 환자에서 절대 체중에서의 감소를 나타낸다.(G933은 이 도면에서 "MEDI" 또는 "0382"로 나타낸다; "Plac"은 위약을 나타낸다.)
도 21은 G933으로 치료받은 환자에서 체중 백분율에서의 감소를 나타낸다.("MEDI"는 이 도면에서 "MEDI0382"를 나타낸다.)
도 22는 G933으로 치료받은 환자에서 간 지방 감소의 평가를 나타낸다. 개별 대상체로부터의 대표 이미지가 제공된다.
도 23은 G933으로 치료받은 환자에서 일어난 오심 및 구토를 나타낸다.
도 24는 G933 다회 상승 용량 연구에서 코호트 5 및 코호트 6의 순서도를 제공한다.
도 25는 위약 대비 G933으로 치료받은 코호트 5 환자에서 글루코스 수준으로 측정되는 글루코스 제어에서의 개선을 나타낸다. 단속선은 기준선에서 관찰되는 글루코스 수준을 나타내며(1일), 실선은 17일차에 관찰되는 글루코스 수준을 나타낸다.(G933은 이 도면에서 "MEDI"로 나타낸다.)
도 26은 위약 대비 G933으로 치료받은 코호트 6 환자에서 글루코스 수준으로 측정되는 글루코스 제어에서의 개선을 나타낸다. 단속선은 기준선에서 관찰되는 글루코스 수준을 나타내며(1일), 실선은 17일차에 관찰되는 글루코스 수준을 나타낸다.(G933은 이 도면에서 "MEDI"로 나타낸다.)
도 27은 모든 코호트에서 기준선 글루코스 AUC로부터의 변화 백분율을 나타낸다.
도 28은 코호트 5 및 코호트 6에서 공복 글루코스 수준에서의 개선을 나타낸다.(G933은 이 도면에서 "MEDI"로 나타낸다.)
도 29는 코호트 5 및 코호트 6에서 기준선으로부터의 체중 변화를 나타낸다.(G933은 이 도면에서 "MEDI"로 나타낸다.)
도 30은 모든 코호트에 걸친 체중 감량 및 글루코스에서의 변화를 나타낸다.
도 31은 16일차 및 22일차에 코호트 5에서 및 11일차 및 17일차에 코호트 6에서 G933 혈장 농도를 나타낸다.
정의
본 개시를 통해, 용어 (하나의) 대상체는 하나 이상의 그 대상체를 나타낸다; 예를 들어, "폴리뉴클레오타이드"는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 나타내는 것으로 이해된다. 이와 같이, 용어 "하나의", "하나 이상의" 및 "적어도 하나"는 본원에서 상호 교환적으로 사용될 수 있다.
또한, 본원에서 사용되는 경우 "및/또는"은 다른 것을 포함하거나 포함하지 않는 각각의 2개의 특정된 속성 또는 성분의 구체 개시로서 간주되어야 한다. 따라서, 본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 어구에서 사용되는 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A"(단독), 및 "B"(단독)를 포함하려는 것이다. 마찬가지로, "A, B, 및/또는 C"와 같은 어구에서 사용되는 용어 "및/또는"은 각각의 다음 양태를 포괄하려는 것이다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
본원에서 어느 곳에 "포함하는"이라는 언어에 대한 양태가 기재되어 있건, "으로 구성되는" 및/또는 "으로 본질적으로 구성되는"의 관점으로 기재된 다른 유사한 양태가 또한 제공됨이 이해된다. 특정 아미노산 서열을 "포함하는" 펩타이드는 그 아미노산 서열을 함유하는 펩타이드를 나타내며, 여기서 펩타이드는 그 아미노산 서열에 대해 추가 아미노산 또는 다른 변형을 함유할 수도 또는 함유하지 않을 수도 있다. 특정 아미노산 서열"로 구성되는" 펩타이드는 그 아미노산 서열만을 함유하며 그 아미노산 서열에 대한 추가 아미노산 또는 다른 변형은 함유하지 않는 펩타이드를 나타낸다. 특정 아미노산 서열"로 구성되는" 아미노산 서열"을 포함하는" 펩타이드는 그 아미노산 서열을 함유하며 추가 아미노산은 함유하지 않는 펩타이드를 나타낸다; 그러나, 펩타이드는 그 아미노산 서열에 대한 다른 변형(예컨대, 아실 모이어티 또는 팔미토일 모이어티)을 포함할 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 개시가 관련되는 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌[the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; 및 the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press]은 본 개시에서 사용되는 여러 용어의 일반 사전을 당업자에게 제공한다.
단위, 접두사 및 기호는 이의 국제 단위 체계(SI) 승인 형태로 표시된다. 수치 범위는 범위를 정의하는 수를 포함한다. 달리 나타내지 않는 한, 아미노산 서열은 왼쪽에서 오른쪽으로 아미노에서 카복시 배향으로 작성된다. 본원에서 제공되는 제목은 개시의 다양한 양태를 제한하지 않으며, 전체로서 명세서에 대한 참조로 제공될 수 있다. 따라서, 바로 아래에 정의된 용어는 그 전문이 명세서를 참조하여 보다 자세히 정의된다.
본원에서 사용되는 용어 "폴리펩타이드"는 단수 "폴리펩타이드"뿐만 아니라 복수 "폴리펩타이드"를 포괄하려는 것이며, 2개 이상의 아미노산의 임의의 사슬 또는 사슬들을 포함한다. 따라서, 2개 이상의 아미노산의 사슬 또는 사슬들을 나타내기 위해 사용되는, 본원에서 사용되는 "펩타이드", "펩타이드 서브유닛", "단백질", "아미노산쇄", "아미노산 서열" 또는 임의의 다른 용어는 각각의 이들 용어가 보다 구체적인 의미를 가질 수 있음에도 불구하고, "폴리펩타이드"의 정의 내에 포함된다. 용어 "폴리펩타이드"는 임의의 이러한 용어 대신에, 또는 이와 상호 교환 가능하게 사용될 수 있다. 이 용어에는 번역-후 또는 합성-후 변형, 예를 들어, 글리코실화, 아세틸화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백분해 절단, 또는 비-자연 생성 아미노산에 의한 변형을 거친 폴리펩타이드가 추가로 포함된다.
보다 구체적으로, 본원에서 사용되는 용어 "펩타이드"는 전장 펩타이드 및 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 예컨대, GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, 29개, 30개, 또는 31개 아미노산 길이)를 포괄한다. 본원에서 개시되는 "펩타이드", 예컨대, GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는, 반감기를 증가시키기 위한, 예컨대 Fc 도메인 또는 알부민 도메인과 같은 추가 성분을 포함하는 융합 폴리펩타이드의 일부일 수 있다. 본원에서 기재되는 펩타이드는 또한 여러 상이한 방식으로 유도체화될 수 있다.
용어 "단리된"은 펩타이드 또는 핵산이 일반적으로 본 개시에 따르는 상태를 나타낸다. 단리된 펩타이드 및 단리된 핵산은 이들이 자연적으로 연관되는 물질, 예컨대 이들이 이의 자연 환경, 또는 이러한 제조물이 시험관내 또는 생체내 실시되는 재조합 DNA 기술에 의한 경우 제조되는 환경(예컨대 세포 배양)에서 확인되는 다른 펩타이드 또는 핵산이 없거나 실질적으로 없을 것이다. 펩타이드 및 핵산은 희석제 또는 애쥬번트와 함께 제형화될 수 있고 여전히 실제적인 목적을 위해 단리될 수 있다 - 예를 들어 펩타이드는 면역검정에서의 사용을 위해 마이크로타이터 플레이트를 코팅하기 위해 사용되는 경우 젤라틴 또는 다른 담체와 보통 혼합될 것이거나, 진단 또는 치료법에서 사용되는 경우 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제와 혼합될 것이다.
"재조합" 펩타이드는 재조합 DNA 기술을 통해 제조되는 펩타이드를 나타낸다. 숙주 세포에서 발현되는 재조합적으로 제조되는 펩타이드는 임의의 적합한 기법에 의해 분리되거나, 분획화되거나, 또는 부분적으로 또는 실질적으로 정제된 원상태 또는 재조합 폴리펩타이드와 마찬가지로, 본 개시의 목적을 위해 단리된 것으로 간주된다.
GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 나타내는 경우 용어 "단편", "유사체", "유도체", 또는 "변이체"에는 적어도 일부 요망되는 활성, 예컨대, 글루카곤 및/또는 GLP-1 수용체에 대한 결합을 보유하는 임의의 펩타이드가 포함된다. 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 단편에는 발현, 정제, 및 또는 대상체에 대한 투여 동안 요망되는 특성을 나타내는 단백분해 단편, 결실 단편이 포함된다.
본원에서 사용되는 용어 "변이체"는 아미노산 치환, 결실, 삽입, 및/또는 변형으로 인한, 나열된 펩타이드와 상이한 펩타이드를 나타낸다. 변이체는 당분야에 공지된 돌연변이화 기법을 사용하여 제조될 수 있다. 또는 대안적으로, 변이체는 또한 다른 변형(예를 들어, 펩타이드는 예컨대 반감기, 용해도 또는 안정성을 증가시키기 위해, 이종성 아미노산 서열 또는 다른 모이어티에 컨쥬게이션 또는 커플링, 예컨대 융합될 수 있음)을 함유할 수 있다. 본원에서 제공되는 펩타이드에 컨쥬게이션되거나 커플링될 모이어티의 예에는 비제한적으로 알부민, 면역글로불린 Fc 영역, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 등이 포함된다. 펩타이드는 또한 펩타이드의 합성, 정제 또는 확인의 용이성을 위한 링커 또는 다른 서열(예컨대, 6-His), 또는 고체 지지체로의 폴리펩타이드의 결합을 증강시키기 위한 링커 또는 다른 서열에 커플링되어 컨쥬게이션되거나 제조될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "서열 동일성"은 2개 이상의 폴리뉴클레오타이드 서열 간 또는 2개 이상의 폴리펩타이드 서열 간 상관관계를 나타낸다. 하나의 서열 내 위치가 비교 서열의 대응하는 위치에서 동일한 핵산 염기 또는 아미노산에 의해 점유되는 경우, 서열은 그 위치에서 "동일한" 것으로 언급된다. "서열 동일성" 백분율은 동일한 핵산 염기 또는 아미노산이 두 서열에서 모두 생기는 위치의 수를 결정하여 "동일한" 위치의 수를 산출함으로써 계산된다. 이어서 "동일한" 위치의 수를 비교 윈도우에서 위치의 총 수로 나누고 100을 곱하여 "서열 동일성" 백분율을 산출한다. "서열 동일성" 백분율은 비교 윈도우에 걸쳐 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교함으로써 결정된다. 비교를 위한 서열을 최적 정렬하기 위해, 비교 윈도우에서 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열의 일부는 부가 또는 갭으로 명명된 결실을 포함할 수 있는 반면, 참조 서열은 일정하게 유지된다. 최적 정렬은 갭을 갖는 경우에도, 참조 및 비교 서열 간에 가장 큰 가능한 "동일한" 위치의 수를 생성하는 정렬이다. 두 서열 간 "서열 동일성" 백분율은 2004년 9월 1일자로 미국 생물공학 정보 센터(National Center for Biotechnology Information)에서 이용 가능해진 프로그램 "BLAST 2 Sequences" 버전을 사용해서 결정될 수 있고, 이 프로그램은 Karlin 및 Altschul의 알고리즘(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(12):5873-5877, 1993)에 기반하는 프로그램 BLASTN(뉴클레오타이드 서열 비교를 위해) 및 BLASTP(폴리펩타이드 서열 비교를 위해)를 포함한다. "BLAST 2 Sequences"을 이용하는 경우, 2004년 9월 1일자의 디폴트 파라미터인 파라미터가 워드 크기(3), 개방 갭 페널티(11), 연장 갭 페널티(1), 갭 드롭-오프(drop-off)(50), 예상 값(10), 및 비제한적으로 매트릭스 옵션을 포함하는 임의의 다른 요구되는 파라미터에 대해 사용될 수 있다.
용어 "조성물" 또는 "약학 조성물"은 치료를 필요로 하는 대상체, 예컨대, 비만에 대해 치료받고 있는 인간 대상체에 투여하기 위한, 예컨대, 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 또는 희석제와 함께, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 함유하는 조성물을 나타낸다.
용어 "약제학적으로 허용 가능한"은 철저한 의학적 판단 범위 내에서, 합리적인 이익/위험 비에 상응하는 과도한 독성 또는 다른 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과의 접촉에 적합한 조성물을 나타낸다.
"유효량"은 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 양이며, 단회 용량으로 또는 시리즈의 일환으로의 대상체에 대한 그 투여는 치료, 예컨대, 비만 치료를 위해 유효하다. 양은, 예를 들어, 그 투여가 체중 감량 또는 체중 유지(예컨대, 체중 증가의 예방), 체지방 감소, 저혈당증의 예방 또는 조정, 고혈당증의 예방 또는 조정, 인슐린 합성의 촉진, 또는 식품 섭취의 감소 중 하나 이상을 일으키는 경우, 유효하다. 상기 양은 치료받는 모든 대상체에 대해 고정된 용량일 수 있거나, 또는 치료받을 대상체의 체중, 건강, 및 신체 상태, 요망되는 체중 감량 또는 체중 유지 정도, 펩타이드의 제형, 의학적 상황의 전문가 평가, 및 다른 관련 요인에 따라 변할 수 있다.
용어 "대상체"는 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 이용한 치료를 필요로 하는 임의의 대상체, 특히 포유류 대상체를 의미한다. 포유류 대상체에는 비제한적으로 인간, 개, 고양이, 기니아픽, 토끼, 래트, 마우스, 말, 소, 곰, 젖소, 유인원, 원숭이, 오랑우탄 및 침팬지 등이 포함된다. 하나의 구현예에서, 대상체는 인간 대상체이다.
본원에서 사용되는 "이를 필요로 하는 대상체"는 그에 대해 치료하는 것이 요망되는 개체, 예컨대 그에 대해 특정된 시기에 걸쳐 체중 또는 체지방 감소, 체중 또는 체지방 유지를 촉진하기 위해, 또는 체중 증가를 예방하거나 최소화하는 것이 요망되는 비만 대상체 또는 비만이 되기 쉬운 대상체를 나타낸다.
"치료하는" 또는 "치료" 또는 "치료하기 위한"과 같은 용어는 진단받은 병리적 질환 또는 장애를 근치하고/하거나 진행을 중지시키기 위한 치료적 조치를 나타낸다. "예방하는"과 같은 용어는 표적화된 병리적 질환 또는 장애를 예방하고/하거나 진행을 지연하는 예방적 또는 방지적 조치를 나타낸다. 따라서, 치료를 필요로 하는 자들에는 이미 질병 또는 질환을 갖는 자들이 포함된다. 예방을 필요로 하는 자들에는 질병 또는 질환을 갖기 쉬운 자들 및 질병 또는 질환이 예방되어야 하는 자들이 포함된다. 예를 들어, 과체중에 의해 야기되거나 이를 특징으로 하는 질병 또는 질환을 갖는 "환자를 치료하는"이라는 어구는 대상체가 더 이상 그로 인한 불편함 및/또는 변경된 기능을 겪지 않는 정도로의 질병 또는 질환의 중증도 감소를 나타낸다. 과체중에 의해 야기되거나 이를 특징으로 하는 질병 또는 질환을 "예방하는"이라는 어구는 질병 또는 질환에 대한 가능성 감소 및/또는 질병 또는 질환의 발생 감소를 나타낸다(예를 들어 미치료 환자 대비 상대적인 발생 감소).
"중증도를 감소시키는"과 같은 용어는 진단받은 병리적 질환 또는 장애의 증상을 지연하거나 경감시키는 치료적 조치를 나타낸다. 예를 들어, 과체중에 의해 야기되거나 이를 특징으로 하는 질병 또는 질환의 "중증도를 감소시키는"이라는 어구는 질병 또는 질환의 중증도 감소를 나타낸다(예를 들어, 미치료 환자와 비교되는 경우의 체중 감소 또는 글루코스 제어 증가).
본원에서 사용되는 "GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드"는 검정 1의 조건 하에 원상태 글루카곤 대비 적어도 약 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상의 글루카곤 수용체에서의 활성을 나타내며 또한 원상태 GLP-1 대비 약 적어도 약 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상의 GLP-1 수용체에서의 활성을 나타내는 키메라 펩타이드를 나타낸다.
본원에서 사용되는 용어 "원상태 글루카곤"은 자연 생성 글루카곤, 예컨대, SEQ ID NO: 1의 서열을 포함하는 인간 글루카곤을 나타낸다. 용어 "원상태 GLP-1"은 자연 생성 GLP-1, 예컨대, 인간 GLP-1을 나타내며, 예컨대, GLP-1(7-36) 아미드(SEQ ID NO: 2), GLP-1(7-37) 산(SEQ ID NO: 3), 또는 이들 두 화합물의 혼합물을 포괄하는 일반 용어이다. 임의의 추가 지칭의 부재 하에 "글루카곤" 또는 "GLP-1"에 대해 본원에서 사용되는 일반 언급은 각각 원상태 인간 글루카곤 또는 원상태 인간 GLP-1을 의미하려는 것이다. 달리 나타내지 않는 한, "글루카곤"은 인간 글루카곤을 나타내며, "GLP-1"은 인간 GLP-1을 나타낸다.
GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드
글루카곤 수용체 및 GLP-1 수용체에 모두 결합하는 펩타이드가 본원에 제공된다. 예시적인 펩타이드는 본원에 그 전문이 참조로 포함되는 WO 2014/091316에 제공되어 있다. 소정 구현예에서, 펩타이드는 MEDI0382, 즉, 감마 글루타메이트 링커 및 잔기 10에 팔미토일기 유도체화를 함유하는 SEQ ID NO: 19의 서열을 갖는 30개 아미노산 선형 펩타이드이다. 소정 구현예에서, 본원에서 제공되는 펩타이드는 글루카곤 및 GLP-1 활성의 공동-작용제이다. 이러한 펩타이드는 본원에서 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드로 나타낸다. 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 체중 감량을 촉진하거나, 체중 증가를 예방하거나, 요망되는 체중을 유지하기 위해 바람직한 비로 GLP-1 및 글루카곤 활성을 보유하며, 최적화된 용해도, 제형성 및 안정성을 보유한다. 소정 구현예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 인간 GLP1 및 인간 글루카곤 수용체에서 활성이며, 소정 구현예에서 GLP-1 수용체에서 천연 리간드 대비 상대 활성이 글루카곤 수용체에서에 비해 적어도 약 1-배, 2-배 5-배, 8-배, 10-배, 15-배, 20-배, 또는 25-배 높다.
소정 구현예에서, 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 글루카곤 및 GLP-1 수용체에서 요망되는 역가를 가지며, 체중 감량을 촉진하기 위해 요망되는 상대 역가를 갖는다. 소정 구현예에서, 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 10,000 pM 미만, 5000 pM 미만, 2500 pM 미만, 1000 pM 미만, 900 pM 미만, 800 pM 미만, 700 pM 미만, 600 pM 미만, 500 pM 미만, 400 pM 미만, 300 pM 미만, 200 pM 미만, 100 pM 미만, 50 pM 미만, 25 pM 미만, 20 pM 미만, 15 pM 미만, 10 pM 미만, 5 pM 미만, 4 pM 미만, 3 pM 미만, 또는 2 pM 미만의 cAMP 검정 1(실시예 2 참고)에서의 EC50으로 나타나는 GLP-1 수용체에서의 시험관내 역가를 나타낸다. 소정 구현예에서, 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 10,000 pM 미만, 5000 pM 미만, 2500 pM 미만, 1000 pM 미만, 900 pM 미만, 800 pM 미만, 700 pM 미만, 600 pM 미만, 500 pM 미만, 400 pM 미만, 300 pM 미만, 200 pM 미만, 100 pM 미만, 50 pM 미만, 25 pM 미만, 20 pM 미만, 15 pM 미만, 10 pM 미만, 5 pM 미만, 4 pM 미만, 3 pM 미만, 또는 2 pM 미만의 4.4% 인간 혈청 알부민에서의 cAMP 검정(검정 2, 실시예 2 참고)에서의 EC50으로 나타나는 GLP-1 수용체에서의 시험관내 역가를 나타낸다. 소정 구현예에서, 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 10,000 pM 미만, 5000 pM 미만, 2500 pM 미만, 1000 pM 미만, 900 pM 미만, 800 pM 미만, 700 pM 미만, 600 pM 미만, 500 pM 미만, 400 pM 미만, 300 pM 미만, 200 pM 미만, 100 pM 미만, 50 pM 미만, 25 pM 미만, 20 pM 미만, 15 pM 미만, 10 pM 미만, 5 pM 미만, 4 pM 미만, 3 pM 미만, 또는 2 pM 미만의 cAMP 검정 1(실시예 2 참고)에서의 EC50으로 나타나는 글루카곤 수용체에서의 시험관내 역가를 나타낸다. 소정 구현예에서, 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 10,000 pM 미만, 5000 pM 미만, 2500 pM 미만, 1000 pM 미만, 900 pM 미만, 800 pM 미만, 700 pM 미만, 600 pM 미만, 500 pM 미만, 400 pM 미만, 300 pM 미만, 200 pM 미만, 100 pM 미만, 50 pM 미만, 25 pM 미만, 20 pM 미만, 15 pM 미만, 10 pM 미만, 5 pM 미만, 4 pM 미만, 3 pM 미만, 또는 2 pM 미만의 4.4% 인간 혈청 알부민에서의 cAMP 검정(검정 2, 실시예 2 참고)에서의 EC50으로 나타나는 글루카곤 수용체에서의 시험관내 역가를 나타낸다. 소정 구현예에서, 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 검정 2를 사용하는 경우, 원상태 리간드와 비교되었을 때, 약 0.01 내지 0.50, 예컨대, 약 0.02 내지 0.30 범위, 예컨대, 약 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.10, 0.11. 0.12, 0.13, 0.14, 0.15, 0.16, 0.17, 0.18, 0.19, 0.20, 0.21, 0.22, 0.23, 0.24, 0.25, 0.26, 0.27, 0.28, 또는 0.30의 상대 GLP1-R/glucR 역가 비를 갖는다.
소정 구현예에서, 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 10,000 pM 미만, 5000 pM 미만, 2500 pM 미만, 1000 pM 미만, 900 pM 미만, 800 pM 미만, 700 pM 미만, 600 pM 미만, 500 pM 미만, 400 pM 미만, 300 pM 미만, 200 pM 미만, 100 pM 미만, 50 pM 미만, 25 pM 미만, 20 pM 미만, 15 pM 미만, 10 pM 미만, 5 pM 미만, 4 pM 미만, 3 pM 미만, 또는 2 pM 미만의 cAMP 검정 1(실시예 2 참고)에서 EC50으로 나타나는 글루코스-의존적 인슐린자극 펩타이드(위 억제성 펩타이드)(GIPR)에서의 시험관내 역가를 나타낸다. 소정 구현예에서, 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 10,000 pM 미만, 5000 pM 미만, 2500 pM 미만, 1000 pM 미만, 900 pM 미만, 800 pM 미만, 700 pM 미만, 600 pM 미만, 500 pM 미만, 400 pM 미만, 300 pM 미만, 200 pM 미만, 100 pM 미만, 50 pM 미만, 25 pM 미만, 20 pM 미만, 15 pM 미만, 10 pM 미만, 5 pM 미만, 4 pM 미만, 3 pM 미만, 또는 2 pM 미만의 4.4% 인간 혈청 알부민에서의 cAMP 검정(검정 2, 실시예 2 참고)에서 EC50으로 나타나는 GIPR에서의 시험관내 역가를 나타낸다.
소정 구현예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 허용 가능한 용해도, 제형화의 용이성, 혈장 안정성, 및 개선된 약동학 특성 중 하나 이상의 기준을 보유한다. 소정 구현예에서, 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 광범위한 pH 범위에 걸쳐 표준 완충액에서 가용성이다.
소정 구현예에서, GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 비제한적으로 포스페이트 완충액, 트리스 완충액, 글루타메이트 완충액, 아세테이트 완충액, 숙시네이트 완충액, 또는 히스티딘 완충액을 포함하는 완충액 시스템에서 그리고 넓은 이온 강도, 예컨대, 0.25 mM 내지 150 mM에서, 최대 0.5 ㎎/㎖, 0.6 ㎎/㎖, 0.7 ㎎/㎖, 0.8 ㎎/㎖, 0.9 ㎎/㎖, 1 ㎎/㎖, 2 ㎎/㎖, 3 ㎎/㎖, 4 ㎎/㎖, 5 ㎎/㎖, 6 ㎎/㎖, 7 ㎎/㎖, 8 ㎎/㎖, 9 ㎎/㎖, 10 ㎎/㎖ 이상의 농도로 일반 완충액 용액에서 가용성이다. 예시적인 완충액에는 100 mM 글루타메이트 pH 4.5 완충액, 100 mM 아세테이트 pH 5 완충액, 100 mM 숙시네이트 pH 5 완충액, 100 mM 포스페이트 pH 6 완충액, 100 mM 히스티딘 pH 6 완충액, 100 mM 포스페이트 pH 6.5 완충액, 100 mM 포스페이트 pH 7.0 완충액, 100 mM 히스티딘 pH 7.0 완충액, 100 mM 포스페이트 pH 7.5 완충액, 100 mM 트리스 pH 7.5 완충액, 및 100 mM 트리스 pH 8.0 완충액이 포함된다. 소정 구현예에서, 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 임의의 pH 범위, 예컨대, pH 4.0 내지 pH 8.0에 걸쳐, 예컨대, pH 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 또는 8.5에서 0.8 ㎎/㎖로 표준 완충액에서 가용성이다. 소정 구현예에서, 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 pH 4.5 내지 8.0, 5.0 내지 8.0, 5.5 내지 8.0, 6.0 내지 8.0, 6.5 내지 8.0, 7.0 내지 8.0, 4.5 내지 8.5, 5.5 내지 8.5, 5.5 내지 8.5, 6.0 내지 8.5, 6.5 내지 8.5, 또는 7.0 내지 8.5의 표준 완충액에서 가용성이다.
소정 구현예에서, 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 표준 약학 제형으로 제형화 가능하다. 예시적인 제형에는 비제한적으로 0.1 M 트리스 pH 7.5, 150 mM 만니톨, 최종 제형 pH = 7.2; 0.05 M 트리스, 50 mM 아르기닌/프롤린, 최종 제형 pH = 8.0; 또는 나트륨 포스페이트 완충액(pH 8)/1.85% W/V 프로필렌 글리콜, 최종 제형 pH = 7.0이 포함된다. 소정 구현예에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 최대 0.5 ㎎/㎖, 0.6 ㎎/㎖, 0.7 ㎎/㎖, 0.8 ㎎/㎖, 0.9 ㎎/㎖, 1 ㎎/㎖, 2 ㎎/㎖, 3 ㎎/㎖, 4 ㎎/㎖, 5 ㎎/㎖, 6 ㎎/㎖, 7 ㎎/㎖, 8 ㎎/㎖, 9 ㎎/㎖, 10 ㎎/㎖ 이상의 농도에서 이러한 또는 다른 제형으로 가용성이다.
소정 구현예에서, 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 혈청 또는 혈장 내 프로테아제에 대해 허용 가능하게 안정하다. 글루카곤 또는 GLP-1의 일반적인 분해 산물에는 +1 산물(산) 및 DPP IV-절단 산물이 포함된다. +1 질량을 갖는 산물은 글루타민의 아미드기에서 또는 C-말단에서 탈아미드화로부터 생성될 수 있다. 절단 산물은 혈장 내 프로테아제 DPP IV의 작용으로부터 생성된다. 소정 구현예에서, 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 37℃에서 혈장 중 24시간 후 최대 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100% 수준으로 혈장에서 안정하게 유지된다.
다음 아미노산 서열을 포함하는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드가 본원에서 제공된다:
HX2QGTFTSDX10SX12X13LX15X16X17X18AX20X21FX23X24WLX27X28GX30;
식 중, X2는 G 또는 S이며, X10은 Y 또는 K이고, X12는 K, E, R, 또는 S이고, X13은 K 또는 Y이고, X15는 D 또는 E이다. X16은 S 또는 G이고, X17은 E, R, Q, 또는 K이고, X18은 R, S, 또는 A이고, X20은 R, K, 또는 Q이고, X21은 D 또는 E이고, X23은 V 또는 I이고, X24는 A 또는 Q이고, X27은 E 또는 V이고, X28은 A 또는 K이고, 및 X30은 G 또는 R이다(SEQ ID NO: 4). 소정 구현예에서, 상기 나타낸 단리된 펩타이드(SEQ ID NO: 4)가 제공되며, 식 중 X2는 G이며, X10은 K이고, X12는 E, R, 또는 S이고, X13은 K이고, X17은 E 또는 K이고, X18은 S이고, X20은 R이고, X27은 E이고, 및/또는 X28은 A이다. 소정 구현예에서, 상기 나타낸 단리된 펩타이드(SEQ ID NO: 4)가 제공되며, 식 중 X10은 K이고, X12는 E이고, X17은 E이고, X20은 R이고, X27은 E이고, 및/또는 X28은 A이다.
소정 구현예에서 상기 나타낸 단리된 펩타이드가 제공되며, 식 중 X2는 S이며, X10은 Y 또는 K이고, X12는 K, E, R, 또는 S이고, X13은 K 또는 Y이고, X15는 D이고, X16은 S이고, X17은 E, R, Q, 또는 K이고, X18은 R, S, 또는 A이고, X20은 R이고, X21은 D이고, X23은 V이고, X24는 A이고, X27은 E 또는 V이고, X28은 A이고, 및 X30은 G이다(SEQ ID NO: 5). 소정 구현예에서 상기 나타낸 단리된 펩타이드가 제공되며, 식 중 X2는 S이며, X10은 Y 또는 K이고, X12는 K, E, R, 또는 S이고, X13은 K 또는 Y이고, X15는 D이고, X16은 S이고, X17이 E이고 X18이 R인 경우, 또는 X17이 R이고 X18이 S인 경우, X20은 R이고, X21은 D이고, X23은 V이고, X24는 A이고, X27은 E 또는 V이고, X28은 A이고, 및 X30은 G이다(각각 SEQ ID NO: 6 및 SEQ ID NO. 7). 소정 구현예에서 상기 나타낸 단리된 펩타이드가 제공되며, 식 중 X2는 S이며, X10은 Y이고, X12는 K이고, X13은 K이고, X15는 D이고, X16은 S이고, X17이 E이고 X18이 R인 경우, 또는 X17이 R이고 X18이 S인 경우, X20은 R이고, X21은 D이고, X23은 V이고, X24는 A이고, X27은 V이고, X28은 A이고, 및 X30은 G이다(각각 SEQ ID NO: 8 및 SEQ ID NO: 9). 소정 구현예에서 상기 나타낸 단리된 펩타이드가 제공되며, 식 중 X2는 S이며, X10은 K이고, X12는 K, E, R, 또는 S이고, X13은 Y이고, X15는 D이고, X16은 S이고, X17이 E이고 X18이 R인 경우, 및 X17이 R이고 X18이 S인 경우, X20은 R이고, X21은 D이고, X23은 V이고, X24는 A이고, X27은 E이고, X28은 A이고, 및 X30은 G이다(각각 SEQ ID NO: 10 및 SEQ ID NO: 11). 소정 구현예에서 상기 나타낸 단리된 펩타이드가 제공되며, 식 중 X2는 S이며, X10은 K이고, X12는 E이고, X13은 Y이고, X15는 D이고, X16은 S이고, X17이 E이고 X18이 R인 경우, 또는 X17이 R이고 X18이 S인 경우, X20은 R이고, X21은 D이고, X23은 V이고, X24는 A이고, X27은 E이고, X28은 A이고, 및 X30은 G이다(각각 SEQ ID NO: 12 및 SEQ ID NO: 13). 소정 구현예에서 상기 나타낸 단리된 펩타이드가 제공되며, 식 중 X2는 S이며, X10은 K이고, X12는 R이고, X13은 Y이고, X15는 D이고, X16은 S이고, X17이 E이고 X18이 R인 경우, 또는 X17이 R이고 X18이 S인 경우, X20은 R이고, X21은 D이고, X23은 V이고, X24는 A이고, X27은 E이고, X28은 A이고, 및 X30은 G이다(각각 SEQ ID NO: 14 및 SEQ ID NO: 15).
본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드에는 비제한적으로 G730(SEQ ID NO: 16), G797(SEQ ID NO: 17), G849(SEQ ID NO: 18), G933(SEQ ID NO: 19), G865(SEQ ID NO: 20), G796(SEQ ID NO: 21), G812(SEQ ID NO: 22) 및 G380(SEQ ID NO: 23)이 포함된다. 이들 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 표 1에 기재된다:
[표 1]
GLP-1/글루카곤 펩타이드 서열
Figure pat00001
K(gE-Palm) = 감마 글루탐산 링커를 통해, 엡실론 질소에 컨쥬게이션된 팔미토일기를 갖는 라이신.
소정 구현예에서 단리된 펩타이드는 G933(SEQ ID NO: 19)이다.
펩타이드 G797 및 G933 둘 모두는 위치 12에 글루타메이트 잔기를 가지며, 실시예 2에 나타낸 바와 같이, 글루카곤 및 GLP-1 수용체 둘 모두에서 강력한 활성을 유지한다. 해당 잔기는 엑센딘(exendin)-4 및 글루카곤에서는 라이신이며 GLP-1에서는 세린이다. 상기 잔기는 수용체와 접촉하는 것으로 여겨지지 않지만, 양전하로부터 음전하로의 전하 변화는 인접한 환경을 변경할 수 있다. 또한, G797, G849 및 G933은 위치 27에 글루타메이트 잔기를 갖는다. 잔기 27은 엑센딘 4에서는 라이신이며 GLP1에서는 미하전 소수성 잔기(발린)이고 글루카곤에서는 미하전 소수성 잔기(메티오닌)이다. 엑세나티드(exenatide)의 라이신은 잔기 Glu127 및 Glu24에서 GLP1 수용체와 정전기적 상호작용을 형성한다(C.R.Underwood et al J Biol Chem 285 723-730 (2010); S.Runge et al J Biol Chem 283 11340-11347 (2008)). 위치 27에서의 전하가 음성으로 변화되는 경우 GLP1R 역가 손실이 예상될 것이지만, G797, G849, 및 G933에서의 전하는 GLP1R 활성과 상용성이다.
MEDI0382는 글루카곤-유사 펩타이드-1(GLP-1) 및 글루카곤 수용체의 합성 펩타이드 이중 작용제이다. MEDI0382는 G933(SEQ ID NO: 19)이며, 이는 잔기 10에서 감마 글루타메이트 링커 및 팔미토일기 유도체화를 함유한다.
MEDI0382는 화학적으로 합성된다. 수지 상의 펩타이드쇄 연장은 Fmoc-아미노산의 커플링을 위해 제조업체에서 공급되는 프로토콜을 사용하여 고상 펩타이드 합성장치의 보조로 수행된다. 글루타민 잔기 20 및 24는 탈아미드화에 감수성이 아닌 아미노산으로 치환되며, 아르기닌 잔기 17은 단백분해에 대한 감수성을 감소시키기 위해 글루타메이트로 대체된다.
MEDI0382에 대한 서열을 아래에 나타낸다:
L-히스티딜-L-세릴-L-글루타미닐글리실-L-트레오닐-L-페닐알라닐-L-트레오닐-L-세릴-L-알파-아스파르틸-(N6-[N-(1-옥소헥사데실)-L-감마-글루타밀])L-라이실-L-세릴-L-알파-글루타밀-L-티로실-L-류실-L-알파-아스파르틸-L-세릴-L-알파-글루타밀-L-아르기닐-L-알라닐-L-아르기닐-L-알파-L-아스파르틸-L-페닐알라닐-L-발릴-L-알라닐-L-트립토필-L-류실-L-알파-글루타밀-L-알라닐글리실글리신
Figure pat00002
GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 제조 방법
본 개시는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 제조 방법을 제공한다. 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 소정 구현예에서 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 당업자에게 널리 공지된 방법에 의해, 예컨대, Merrifield(1963, J. Am. Chem. Soc. 85:2149-2154)에 의해 기재된 바와 같은 고상 합성에 의해 화학적으로 합성된다. 고상 펩타이드 합성은, 예컨대, 실시예 1에서 설명된 바와 같은 표준 시약을 사용하여, 예컨대 자동화 합성장치를 사용하여 달성될 수 있다.
대안적으로, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 당업자에게 널리 공지되어 있을 편리한 벡터/숙주 세포 조합을 사용하여 재조합적으로 제조될 수 있다. GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 재조합적으로 제조하기 위해 다양한 방법이 이용 가능하다. 일반적으로, GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열이 적절한 발현 비히클, 예컨대, 삽입된 코딩 서열의 전사 및 번역을 위해 필요한 요소를 함유하는 벡터 내로 삽입된다. GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 인코딩하는 핵산은 적절한 해독틀에서 벡터 내로 삽입된다. 이어서 발현 벡터가 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 발현할 적합한 숙주 세포 내로 전달감염된다. 적합한 숙주 세포에는 비제한적으로 박테리아, 효모, 또는 포유류 세포가 포함된다. 다양한 상업적으로 이용 가능한 숙주 발현 벡터 시스템이 본원에 기재되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 발현하기 위해 이용될 수 있다.
변형, 컨쥬게이트, 융합, 및 유도체화
소정 구현예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 아미노산 변형을 통해 안정화된다. 소정 구현예에서, C-말단 아미노산의 카복실기가 아미드화된다. 소정 구현예에서, C-말단 아미노산은 아미드화된 글리신, 예컨대, G730, G797, G849, G865, G796, G812, 및 G380이다. 소정 구현예에서, 예컨대, G933, C-말단 글리신은 미변형 산이다. 소정 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 잔기가 아실화되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드가 제공된다. 예를 들어, 소정 구현예에서 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 하나 이상의 라이신 잔기를 함유하며, 여기서 팔미토일 모이어티가 N(엡실론)기에 부착된다. 소정 구현예에서 링커는 라이신 및 팔미토일기 사이에 포함된다. 상기 링커는 감마 글루탐산기, 또는 대안적 링커, 예컨대 비제한적으로 베타 알라닌 및 아미노헥산산일 수 있다. 상이한 아실화 방법, 예컨대 콜레스테롤 또는 미리스토일기의 부가가 사용될 수 있다. 소정 구현예에서, 팔미토일 모이어티가 위치 13(예컨대, G730)에서 부가된다. 소정 구현예에서, 팔미토일 모이어티가 위치 10(예컨대, G797, G849, G933, G865, G796, 및 G812)에서 부가된다. 소정 구현예에서, 팔미토일 모이어티가 위치 17(예컨대, G380)에서 부가된다.
본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드, 예컨대, G730, G797, G849 및 G933은 혈청 알부민과의 연합에 의해, 실시예 1에 기재된 바와 같이 신장 제거에 대한 이의 성향을 감소시킴으로써 이의 반감기를 연장하기 위해 팔미토일화될 수 있다.
대안적으로 또는 부가적으로, 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는, 예컨대, 반감기를 연장시키기 위해 이종성 모이어티와 연합될 수 있다. 이종성 모이어티는 단백질, 펩타이드, 단백질 도메인, 링커, 유기 중합체, 무기 중합체, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 바이오틴, 알부민, 인간 혈청 알부민(HSA), HSA FcRn 결합부, 항체, 항체의 도메인, 항체 단편, 단일쇄 항체, 도메인 항체, 알부민 결합 도메인, 효소, 리간드, 수용체, 결합 펩타이드, 비-FnIII 스캐폴드, 에피토프 태그, 재조합 폴리펩타이드 중합체, 사이토카인, 및 2개 이상의 이러한 모이어티의 조합일 수 있다.
예를 들어, GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 이종성 폴리펩타이드와 융합될 수 있다. 펩타이드는 재조합 유전자 융합 및 발현을 통해 또는 화학적 컨쥬게이션에 의해 단백질에 융합될 수 있다. 융합을 위한 파트너로 적합한 단백질에는 비제한적으로 인간 혈청 알부민, 항체 및 항체의 Fc 부분에 대한 융합을 포함하는 항체 단편이 포함된다. GLP-1은 역가를 보유하며 이러한 단백질에 융합되었다(L. Baggio et al, Diabetes 53 2492-2500 (2004); P. Barrington et al Diabetes, Obesity and Metabolism 13 426-433 (2011); P. Paulik et al American Diabetes Association 2012, Poster 1946). 연장된 재조합 펩타이드 서열은 또한 펩타이드에 고분자량을 제공하는 것으로 기재되었다(V.Schellenberger et al Nature Biotechnol 27 1186-1190 (2009); PASylation (EP2173890)). 소정 구현예에서 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 C-말단 끝에 융합 파트너, 예컨대, 알부민 또는 Fc 부분을 포함하는 융합 단백질의 N-말단 부분으로서 포함된다. 본원에서 기재되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드는 또한 인간 혈청 알부민에 대한 친화도를 갖는 '알부답(Albudab)'과 같은 펩타이드 또는 단백질 도메인에 융합될 수 있다(M.S. Dennis et al J Biol Chem 277 35035-35043 (2002); A. Walker et al Protein Eng Design Selection 23 271-278 (2010)). 이종성 폴리펩타이드, 예컨대, 알부민 또는 Fc 영역을 포함하는, 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 융합 방법은 당업자에게 널리 공지되어 있다.
다른 이종성 모이어티는 추가로 안정화하거나 반감기를 증가시키기 위해 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드에 컨쥬게이션될 수 있다. 화학적 융합을 위해, 소정 구현예는 자유 N-말단의 유지를 특징으로 하지만 유도체에 대한 대안적 지점이 제조될 수 있다. 추가의 대안적 방법은 대형 화학적 모이어티, 예컨대 고분자량 폴리에틸렌 글리콜(PEG)로 펩타이드를 유도체화하는 것이다. "페길화된(PEGylated) GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드"는 이에 공유 결합된 PEG 사슬을 갖는다. GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 유도체화, 예컨대, 페길화(PEGylation)는 팔미토일화된 라이신에서, 또는 대안적으로 유도체화를 허용하기 위해 연장에 의해 치환되거나 포함되는 잔기, 예컨대 시스테인에서 수행될 수 있다. 상기 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드 포맷은 GLP-1 및 글루카곤 수용체 활성화 간 밸런스 및 상대 역가에 대해 시험관내 및/또는 생체내 특징규명될 수 있다.
일반 용어 "폴리에틸렌 글리콜 사슬" 또는 "PEG 사슬"은 일반 화학식 H(OCH2CH2)nOH로 나타내는, 분지쇄 또는 직쇄인, 에틸렌 옥사이드 및 물의 축합 중합체의 혼합물을 나타내며, 식 중 n은 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 이상의 정수이다. PEG 사슬에는 약 500달톤 내지 약 40,000달톤 범위로부터 선택되는 평균 총 분자량을 갖는 에틸렌 글리콜 중합체가 포함된다. PEG 사슬의 평균 분자량은 수치로 나타내며, 예컨대, PEG-5,000은 약 5,000의 평균 총 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜 사슬을 나타낸다.
페길화는 당분야에 공지된 임의의 페길화 반응에 의해 수행될 수 있다. 예컨대, 문헌[Focus on Growth Factors, 3: 4-10, 1992] 및 유럽 특허 출원 EP 0 154 316 및 EP 0 401 384를 참고한다. 페길화는 반응성 폴리에틸렌 글리콜 분자(또는 유사한 반응성 수용성 중합체)와의 아실화 반응 또는 알킬화 반응을 사용하여 수행될 수 있다.
페길화 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 제조 방법에는 일반적으로 (a) 상기 분자가 하나 이상의 PEG기에 부착되는 조건 하에 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드 또는 폴리에틸렌 글리콜(예컨대 PEG의 반응성 에스테르 또는 알데히드 유도체)과 반응시키는 단계, 및 (b) 반응 산물(들)을 수득하는 단계가 포함된다.
약학 조성물
대사 질병, 예컨대, 비만의 치료를 위해 제형화된, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 유효량을 함유하는 조성물, 예컨대, 약학 조성물이 추가로 제공된다.
본 개시의 조성물은 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있다. 적합한 제조 방법은, 예를 들어, 본원에 그 전문이 참조로 포함되는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition, A.R. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1995)]에 기재되어 있다. 조성물은 비제한적으로 수용액, 에멀젼, 겔, 현탁액, 동결건조 형태, 또는 당분야에 공지된 임의의 다른 형태를 포함하는 다양한 형태일 수 있다. 또한, 조성물은 예를 들어, 희석제, 결합제, 안정화제, 및 보존제를 포함하는 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 함유할 수 있다. 일단 제형화되면, 본 발명의 조성물은 대상체에 직접 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물과 함께 사용될 수 있는 담체는 당분야에 널리 공지되어 있으며, 비제한적으로, 예컨대, 티로글로불린, 알부민, 예컨대 인간 혈청 알부민, 파상풍 변성독소, 및 폴리아미노산, 예컨대 폴리 L-라이신, 폴리 L-글루탐산, 인플루엔자, B형 간염 바이러스 코어 단백질 등이 포함된다. 다양한 수성 담체, 예컨대, 물, 완충수, 0.8% 식염수, 0.3% 글리신, 히알루론산 등이 사용될 수 있다. 조성물은 통상적인, 널리 공지된 멸균 기법에 의해 멸균화될 수 있거나, 또는 멸균 여과될 수 있다. 생성 조성물은 그대로 사용하기 위해 패키지화되거나, 동결건조될 수 있고, 동결건조된 제조물은 투여 전에 멸균 용액과 조합된다. 조성물은 생리 조건을 근사하기 위해 요구되는 약제학적으로 허용 가능한 보조 물질, 예컨대 pH 조정제 및 완충제, 독성 조정제, 수화제 등, 예를 들어, 나트륨 아세테이트, 나트륨 락테이트, 나트륨 클로라이드, 칼륨 클로라이드, 칼슘 클로라이드, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민올레에이트 등을 함유할 수 있다.
치료 방법
2형 진성 당뇨병 환자에 대해 유효한 글루코스 제어를 포함하는 실질적인 비-수술적 체중 감량은 충족되지 못한 중요한 필요성으로 남아 있다. 본원에서 제공되는 치료 방법은 이러한 필요성을 충족시킬 수 있다.
GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)는 글루카곤의 효과, 예컨대, 식품 섭취의 억제 또는 글루코스 수준 조절과 GLP-1의 효과, 예컨대 위 운동성의 억제, 또는 인슐린 방출의 촉진을 조합할 수 있다. 따라서, 이들은 과도한 지방 조직의 제거를 가속화하고, 지속 가능한 체중 감량을 유도하고, 혈당 제어를 개선하는 작용을 할 수 있다. GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)는 또한 심혈관 위험 요인, 예컨대 고 콜레스테롤, 및 고 LDL-콜레스테롤 또는 비정상적인 HDL/LDL 비를 감소시키는 작용을 할 수 있다. GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)는 또한 트리글리세라이드를 감소시키는 작용을 할 수 있다.
본 개시는 치료를 필요로 하는 대상체에 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)을 투여하는 단계를 포함하는, 비만 또는 비만-관련 질병 또는 장애의 치료 방법을 제공한다. 소정 예에서, 투여는 식이 및 운동에 부속된다. 비만 또는 비만-관련 질병 또는 장애의 치료를 위한 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)이 추가로 제공된다. 비만 또는 비만-관련 질병 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조에서 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍, 또는 600 ㎍)의 용도가 추가로 제공된다. 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 단회 또는 분할 용량으로 투여될 수 있다. 또한, 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 증가하는 용량으로 투여될 수 있다(예컨대, 초기 용량 100 ㎍, 제2 용량 150 ㎍ 또는 200 ㎍, 및 선택적으로 제3 용량 200 ㎍, 300 ㎍ 또는 400 ㎍과 같은 용량 적정, 예컨대, 초기 용량 및/또는 제2 용량은 3일 내지 10일 동안 또는 3일 내지 7일 동안 투여된다). 소정 예에서, 대상체는 2형 진성 당뇨병을 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 30 ㎏/㎡ 내지 39.9 ㎏/㎡의 체질량 지수(BMI)를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 적어도 40의 BMI를 갖는다.
본 개시는 또한 치료를 필요로 하는 대상체에 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)을 투여하는 단계를 포함하는, 체중 감량 방법을 제공한다. 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 단회 또는 분할 용량으로 투여될 수 있다. 또한, 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 증가하는 용량으로 투여될 수 있다(예컨대, 초기 용량 100 ㎍, 제2 용량 150 ㎍ 또는 200 ㎍, 및 선택적으로 제3 용량 200 ㎍, 300 ㎍ 또는 400 ㎍과 같은 용량 적정, 예컨대, 초기 용량 및/또는 제2 용량은 3일 내지 10일 동안 또는 3일 내지 7일 동안 투여된다). 소정 예에서, 투여는 식이 및 운동에 부속된다. 소정 예에서, 대상체는 2형 진성 당뇨병을 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 27 ㎏/㎡ 내지 40 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 30 ㎏/㎡ 내지 39.9 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 적어도 40의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 과체중이다. 소정 예에서, 대상체는 비만이다.
본 개시는 또한 치료를 필요로 하는 대상체에 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)을 투여하는 단계를 포함하는, 체지방 감소 방법을 제공한다. 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 단회 또는 분할 용량으로 투여될 수 있다. 또한, 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 증가하는 용량으로 투여될 수 있다(예컨대, 초기 용량 100 ㎍, 제2 용량 150 ㎍ 또는 200 ㎍, 및 선택적으로 제3 용량 200 ㎍, 300 ㎍ 또는 400 ㎍과 같은 용량 적정, 예컨대, 초기 용량 및/또는 제2 용량은 3일 내지 10일 동안 또는 3일 내지 7일 동안 투여된다). 소정 예에서, 투여는 식이 및 운동에 부속된다. 소정 예에서, 대상체는 2형 진성 당뇨병을 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 27 ㎏/㎡ 내지 40 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 30 ㎏/㎡ 내지 39.9 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 적어도 40의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 과체중이다. 소정 예에서, 대상체는 비만이다. 소정 예에서, 지방은 간 지방이다. 간 지방의 감소는 증강된 인슐린 감수성 및/또는 개선된 간 기능을 야기할 수 있다. 소정 예에서, 대상체에서의 간 지방은 적어도 20%만큼 감소된다. 소정 예에서, 대상체에서의 간 지방은 약 20% 내지 약 40%만큼 감소된다. 소정 예에서, 투여는 간 지방의 약 1/3 감소를 일으킨다. 소정 예에서, 대상체에서 간 부피가 감소된다. 소정 예에서, 투여는 헤모글로빈 A1c(HbA1c) 수준을 감소시킨다(예컨대, 적어도 0.6%만큼, 적어도 0.9%만큼, 약 0.5% 내지 약 1.5%만큼, 약 0.5% 내지 약 2%만큼, 약 0.5% 내지 약 3%만큼, 또는 6.3% 이하만큼.
본 개시는 또한, 체중 관리를 필요로 하는 대상체에 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)을 투여하는 단계를 포함하는, 체중 관리 방법을 제공한다. 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 단회 또는 분할 용량으로 투여될 수 있다. 또한, 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 증가하는 용량으로 투여될 수 있다(예컨대, 초기 용량 100 ㎍, 제2 용량 150 ㎍ 또는 200 ㎍, 및 선택적으로 제3 용량 200 ㎍, 300 ㎍ 또는 400 ㎍과 같은 용량 적정, 예컨대, 초기 용량 및/또는 제2 용량은 3일 내지 10일 동안 또는 3일 내지 7일 동안 투여된다). 소정 예에서, 투여는 식이 및 운동에 부속된다. 소정 예에서, 대상체는 2형 진성 당뇨병을 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 27 ㎏/㎡ 내지 40 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 30 ㎏/㎡ 내지 39.9 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 적어도 40의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 과체중이다. 소정 예에서, 대상체는 비만이다.
본 개시는 또한 치료를 필요로 하는 대상체에 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)을 투여하는 단계를 포함하는, 비알콜성 지방간염(NASH)의 치료 방법을 제공한다. 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 단회 또는 분할 용량으로 투여될 수 있다. 또한, 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 증가하는 용량으로 투여될 수 있다(예컨대, 초기 용량 100 ㎍, 제2 용량 150 ㎍ 또는 200 ㎍, 및 선택적으로 제3 용량 200 ㎍, 300 ㎍ 또는 400 ㎍과 같은 용량 적정, 예컨대, 초기 용량 및/또는 제2 용량은 3일 내지 10일 동안 또는 3일 내지 7일 동안 투여된다). 소정 예에서, 투여는 식이 및 운동에 부속된다. 투여는 또한 체중을 감소시키거나 비만을 치료할 수 있다. 소정 예에서, 대상체는 27 ㎏/㎡ 내지 40 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 30 ㎏/㎡ 내지 39.9 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 적어도 40의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 과체중이다. 소정 예에서, 대상체는 비만이다.
본원에서 제공된 바와 같이, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)은 체중 증가 방지, 지방(예컨대, 간 지방) 증가 방지, 체중 감량 촉진, 지방(예컨대, 간 지방) 손실 촉진, 과체중 감소, 지방(예컨대, 간 지방) 감소, 또는 이환 비만을 포함하는 비만 치료(예컨대 식욕, 사육, 식품 섭취, 칼로리 섭취, 및/또는 에너지 소비의 제어에 의해)를 위해 투여될 수 있다. 증가된 에너지 소비는, 예를 들어, 간에서 지방산 및/또는 글루코스의 증가된 산화로부터 기인할 수 있다. 본 개시는 또한 치료를 필요로 하는 대상체에 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)을 투여하는 단계를 포함하는, 과체중 또는 과도한 체지방에 의해 야기되거나 이를 특징으로 하는 질병 또는 질환의 치료 또는 예방 방법을 제공한다. 소정 예에서, 투여는 식이 및 운동에 부속된다. 또한, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)은 다른 비만-관련 대사 장애의 치료를 위해 사용될 수 있다. 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 단회 또는 분할 용량으로 투여될 수 있다. 또한, 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 증가하는 용량으로 투여될 수 있다(예컨대, 초기 용량 100 ㎍, 제2 용량 150 ㎍ 또는 200 ㎍, 및 선택적으로 제3 용량 200 ㎍, 300 ㎍ 또는 400 ㎍과 같은 용량 적정, 예컨대, 초기 용량 및/또는 제2 용량은 3일 내지 10일 동안 또는 3일 내지 7일 동안 투여된다). 다른 비만-관련(과체중-관련) 장애의 예에는 비제한적으로 인슐린 내성, 글루코스 불내성, 전-당뇨병, 증가된 공복 글루코스, 2형 당뇨병, 고혈압, 이상지질혈증(또는 이러한 대사 위험 요인의 조합), 글루카곤종, 심혈관 질병, 예컨대 울혈성 심부전, 아테롬성경화, 동맥경화, 관상 심장 질병, 또는 말초 동맥 질병, 뇌졸중, 호흡기 기능부전, 또는 신장 질병이 포함된다.
본 개시는 또한 치료를 필요로 하는 대상체에 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)을 투여하는 단계를 포함하는 2형 진성 당뇨병의 치료 방법을 제공한다. 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 단회 또는 분할 용량으로 투여될 수 있다. 또한, 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 증가하는 용량으로 투여될 수 있다(예컨대, 초기 용량 100 ㎍, 제2 용량 150 ㎍ 또는 200 ㎍, 및 선택적으로 제3 용량 200 ㎍, 300 ㎍ 또는 400 ㎍과 같은 용량 적정, 예컨대, 초기 용량 및/또는 제2 용량은 3일 내지 10일 동안 또는 3일 내지 7일 동안 투여된다). 소정 예에서, 투여는 식이 및 운동에 부속된다. 투여는 또한 체중을 감소시키거나 비만을 치료할 수 있다. 소정 예에서, 대상체는 27 ㎏/㎡ 내지 40 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 30 ㎏/㎡ 내지 39.9 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 적어도 40의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 과체중이다. 소정 예에서, 대상체는 비만이다.
본 개시는 또한 치료를 필요로 하는 대상체에 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)을 투여하는 단계를 포함하는 혈당 제어 개선 방법 또는 혈당 제어 달성 방법을 제공한다. 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 단회 또는 분할 용량으로 투여될 수 있다. 또한, 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 증가하는 용량으로 투여될 수 있다(예컨대, 초기 용량 100 ㎍, 제2 용량 150 ㎍ 또는 200 ㎍, 및 선택적으로 제3 용량 200 ㎍, 300 ㎍ 또는 400 ㎍과 같은 용량 적정, 예컨대, 초기 용량 및/또는 제2 용량은 3일 내지 10일 동안 또는 3일 내지 7일 동안 투여된다). 소정 예에서, 투여는 식이 및 운동에 부속된다. 투여는 또한 체중을 감소시키거나 비만을 치료할 수 있다. 소정 예에서, 대상체는 2형 진성 당뇨병을 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 27 ㎏/㎡ 내지 40 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 30 ㎏/㎡ 내지 39.9 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 적어도 40의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 과체중이다. 소정 예에서, 대상체는 비만이다. 혈당 제어의 개선은 혼합식 시험을 사용하여 평가될 수 있다. 소정 예에서, 혈당 제어의 개선은 혼합식 시험 후 농도-시간-곡선(AUC) 하 글루코스 면적에서(예컨대, 치료 전 AUC에 비해) 적어도 10% 감소를 일으킨다. 소정 예에서, 혈당 제어의 개선은 혼합식 시험 후 AUC에서(예컨대, 치료 전 AUC에 비해) 적어도 15% 감소를 일으킨다. 소정 예에서, 혈당 제어의 개선은 혼합식 시험 후 글루코스 AUC에서(예컨대, 치료 전 AUC에 비해) 적어도 20% 감소를 일으킨다. 소정 예에서, 혈당 제어의 개선은 혼합식 시험 후 글루코스 AUC에서(예컨대, 치료 전 AUC에 비해) 적어도 25% 감소를 일으킨다. 소정 예에서, 혈당 제어의 개선은 혼합식 시험 후 글루코스 AUC에서(예컨대, 치료 전 AUC에 비해) 적어도 30% 감소를 일으킨다. 혈당 제어의 개선은 또한 헤모글로빈 A1c 및 프룩토사민에 기반하여 평가될 수 있다.
본 개시는 또한 치료를 필요로 하는 대상체에 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)을 투여하는 단계를 포함하는 체중 감소 및 글루코스 제어 방법을 제공한다. 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 단회 또는 분할 용량으로 투여될 수 있다. 또한, 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍은 증가하는 용량으로 투여될 수 있다(예컨대, 초기 용량 100 ㎍, 제2 용량 150 ㎍ 또는 200 ㎍, 및 선택적으로 제3 용량 200 ㎍, 300 ㎍ 또는 400 ㎍과 같은 용량 적정, 예컨대, 초기 용량 및/또는 제2 용량은 3일 내지 10일 동안 또는 3일 내지 7일 동안 투여된다). 소정 예에서, 투여는 식이 및 운동에 부속된다. 투여는 또한 체중을 감소시키거나 비만을 치료할 수 있다. 소정 예에서, 대상체는 2형 진성 당뇨병을 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 27 ㎏/㎡ 내지 40 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 30 ㎏/㎡ 내지 39.9 ㎏/㎡의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 적어도 40의 BMI를 갖는다. 소정 예에서, 대상체는 과체중이다. 소정 예에서, 대상체는 비만이다. 소정 예에서, 투여는 적어도 1.0 ㎏, 적어도 1.3 ㎏, 또는 약 1.3 ㎏ 내지 약 2.0 ㎏의 체중 감량을 일으킨다. 소정 예에서, 대상체의 체중은 적어도 3.5 ㎏ 또는 적어도 5 ㎏만큼 감소된다. 소정 예에서, 대상체의 체중은 약 2 ㎏ 내지 약 30 ㎏만큼 감소된다. 소정 예에서, 대상체의 체중은 적어도 2%, 적어도 4%, 적어도 5%, 또는 적어도 10%만큼 감소된다. 소정 예에서, 대상체의 체중은 약 2% 내지 약 20%, 약 2% 내지 약 25%, 또는 약 2% 내지 약 30%만큼 감소된다.
소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)의 투여는 적어도 1 ㎏의 체중 감량을 일으킨다. 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)의 투여는 적어도 1.3 ㎏의 체중 감량을 일으킨다. 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 투여는 적어도 1.5 ㎏의 체중 감량을 일으킨다. 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)의 투여는 1일 1회 반복 투여 4주 후 1 ㎏ 내지 3 ㎏의 체중 감량을 일으킨다. 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)의 투여는 1일 1회 반복 투여 4주 후 1.3 ㎏ 내지 2 ㎏의 체중 감량을 일으킨다.
본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)의 투여 경로는, 예를 들어, 경구, 비경구, 흡입 또는 국소일 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 비경구에는, 예컨대, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 피하, 직장, 또는 질 투여가 포함된다. 투여를 위한 형태의 또 다른 예는 주사용, 특히 정맥내 또는 동맥내 주사용 또는 드립용 용액이다. 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)는 단회 용량 또는 다회 용량으로 투여될 수 있다. 소정 구현예에서, GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)이 피하 주사에 의해 투여된다.
비경구 제형은 단회 볼루스 용량, 주입 또는 로딩 볼루스 용량에 뒤이은 유지 용량일 수 있다. 이러한 조성물은 특정한 고정 또는 가변 간격에, 예컨대 1일 1회, 또는 "필요에 따른" 기준으로 투여될 수 있다. 투여량 요법은 또한 최적의 요망되는 반응(예컨대, 치료적 또는 예방적 반응)을 제공하기 위해 조정될 수 있다.
소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)은 1일 1회 투여될 수 있다. 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)은 주사(예컨대, 피하 투여)를 통해 1일 1회 투여될 수 있다. 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 50 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍ 또는 600 ㎍)은 적어도 1주의 기간에 걸쳐, 적어도 2주의 기간에 걸쳐, 적어도 3주의 기간에 걸쳐, 또는 적어도 4주의 기간에 걸쳐, 주사(예컨대, 피하 투여)를 통해 1일 1회 투여될 수 있다. 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍, 또는 600 ㎍)은 단회 또는 분할 용량으로 투여될 수 있다. 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382) 50 ㎍ 내지 600 ㎍ 또는 100 ㎍ 내지 600 ㎍(예컨대, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍, 또는 600 ㎍)은 증가하는 용량으로 투여될 수 있다(예컨대, 초기 용량 100 ㎍, 제2 용량 150 ㎍ 또는 200 ㎍, 및 선택적으로 제3 용량 200 ㎍, 300 ㎍ 또는 400 ㎍과 같은 용량 적정, 예컨대, 초기 용량 및/또는 제2 용량은 3일 내지 10일 동안 또는 3일 내지 7일 동안 투여된다). 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)는 4일 동안 100 ㎍의 초기 용량, 4일 동안 150 ㎍의 제2 용량, 및 이후 매일 투여되는 200 ㎍의 제3 용량으로 투여될 수 있다. 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)는 5일 동안 100 ㎍의 초기 용량, 5일 동안 150 ㎍의 제2 용량, 5일 동안 200 ㎍의 제3 용량, 및 이후 매일 투여되는 300 ㎍의 제4 용량으로 투여될 수 있다. 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)는 5일 동안 100 ㎍의 초기 용량, 5일 동안 200 ㎍의 제2 용량, 및 이후 매일 투여되는 300 ㎍의 제3 용량으로 투여될 수 있다.
소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)의 반감기는 약 7시간 내지 13시간이다. 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)의 반감기는 약 9시간 내지 13시간이다. 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)의 반감기는 약 7시간 내지 12시간이다. 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)의 반감기는 약 10시간 내지 12시간이다. 소정 예에서, 본원에서 제공되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드(예컨대, MEDI0382)의 반감기는 약 8시간 내지 11시간이다.
키트
다른 구현예에서, 본 개시는 본원에 기재되는 방법을 수행하기 위해 사용될 수 있는, GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 포함하는 키트를 제공한다. 소정 구현예에서, 키트는 하나 이상의 용기에 본원에서 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 포함한다. 당업자는 개시되는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드가 당분야에 널리 공지된 확립된 키트 포맷 중 하나로 쉽게 포함될 수 있음을 쉽게 인식할 것이다.
실시예
실시예 1: GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 합성, 변형, 및 특징규명
약어 목록:
Boc: tert-부틸옥시카보닐
tert-Bu; tert-부틸
DCM: 디클로로메탄
DIC: 디이소프로필카보디이미드
Fmoc: 9-플루오레닐메톡시카보닐
HOBt: 1-하이드록시벤조트리아졸
HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피
Mtt: 4-메틸트리틸
NMP: N-메틸피롤리돈
Pbf: 2,2,4,6,7-펜타메틸디하이드로벤조푸란-5-설포닐
TFA: 트리플루오로아세트산
TIS: 트리이소프로필실란
Trt: 트리페닐메틸, 트리틸
GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 다음과 같이 합성하였다. NovaSyn TGR 상의 펩타이드 사슬 또는 사전로딩된 Fmoc-Wang 수지(NovaBiochem)의 연장을 PRELUDE™ 고상 펩타이드 합성장치(Protein Technologies, Tucson, AZ, USA)로 수행하였다. N-메틸피롤리돈(NMP) 중 아미노산의 하이드록시벤조트리아졸 에스테르의 커플링을 위해 제조업체-공급 프로토콜을 적용하였다. 플루오레닐메톡시카보닐(Fmoc)기를 아미노산의 알파-아미노기의 반영구적 보호를 위해 사용한 반면, 세린, 트레오닌, 아스파르트산, 글루탐산, 티로신에 대해 tert-부틸(tert-Bu)로, 및 아르기닌에 대해 2,2,4,6,7-펜타메틸디하이드로벤조푸란-5-설포닐(Pbf), 및 히스티딘에 대해 트리틸(Trt)로 측쇄를 보호하였다. 위치 1에서 히스티딘의 N-말단 아미노기를 tert-부틸옥시카보닐기(Boc)로 보호하였다. 측쇄의 후속 화학적 변형이 요구되는 경우, Lys(Mtt)을 펩타이드 사슬 내에 포함시켰다.
펩타이드 사슬 연장의 완료 시, 2% TFA 및 5% TIS를 함유하는 DCM(10 × 7 ㎖, 각각 0.5분)으로 펩타이드-수지를 세척하여 Mtt기를 제거하였다. Lys의 측쇄로의 지질 모이어티 커플링을 HOBt의 존재 하에 커플링 시약으로 DIC를 사용하여 PRELUDE™ 펩타이드 합성장치 상에서 수행하였다.
TFA:TIS:물(95:2.5:2.5)의 혼합물을 사용하여 수지로부터 펩타이드를 절단하였다. 실온에서 2 h 후, 펩티딜 수지를 여과하고, TFA로 세척하고, 조합된 여과액을 진공 중에 증발 건조시켰다. 잔류물을 에테르로 분쇄하고, 형성된 침전물을 여과하고, 에테르로 세척하고, 건조하였다. 미정제 펩타이드를 수중 5% 아세트산 중에 용해시키고 Varian 920-LC 시스템에 부착된 Polaris 3 C8-A 칼럼 상에서 역상 고압 액체 크로마토그래피에 의해 분석하였다. 15분 동안에 걸쳐 10% 내지 90% 완충액 B의 표준 구배 시스템을 분석을 위해 사용하였다. 완충액 A는 수중 0.1% TFA였고 완충액 B는 아세토니트릴 중 0.1% TFA였다. HPLC 프로필을 210 ㎚에서 기록하였다. 반분취용 C18 RP XBridge Waters 칼럼으로 Varian ProStar 시스템 상에서 분취용 분리를 수행하였다. 30분 동안에 걸쳐 30% 내지 70% 완충액 B의 구배로 물 및 아세토니트릴의 상술된 용매 시스템을 분리를 위해 사용하였다. 크로마토그래피 상으로 균질한 산물(97% 초과 순수)을 전기분무 질량 분광측정(MassLynx, Waters)에 의해 분석하였다.
실시예 2: 시험관내 연구
글루카곤 및 GLP-1 수용체 매개 cAMP 생성
세포-기반 cAMP 활성 검정(검정 1)에서 펩타이드의 생물학적 활성: 실시예 1의 방법에 의해 합성된 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 생물학적 활성을 생물학적 활성에 대해, 예컨대, 다음 방법에 의해, 하나 이상의 세포 수용체 반응의 자극에 대해 시험하였다. 인간, 마우스, 래트, 또는 개 GLP-1 수용체(GLP-1R), 글루카곤 수용체(GCGR) 또는 글루코스-의존적 인슐린자극 펩타이드(위 억제성 폴리펩타이드) 수용체(GIPR)를 발현하는 안정한 세포주를 표준 방법에 의해 HEK293 또는 CHO 세포에서 생성하였다. 이러한 다양한 수용체의 펩타이드 활성화는 기능적 활성 검정에서 측정될 수 있는 cAMP 제2 메신저의 하류 생성을 일으킨다.
cAMP 검정을 "검정 배지"를 사용하여 수행하였다:
검정 배지: 0.5 mM IBMX(Sigma # I7018)를 함유하는, DMEM 중 10% FBS(Gibco # 41966).
저 단백질 결합 384-웰 플레이트(Greiner # 781280)를 사용하여 검정 배지에서 수행된 시험 샘플의 11개의 1/5 연속 희석을 수행하였다. 모든 샘플 희석을 2회씩 수행하였다.
관심 수용체를 발현하는 세포의 냉동 크리오-바이알을 수조에서 신속히 해동하고, 사전-가온된 검정 배지로 옮기고, 5분 동안 240 × g에서 회전시켰다. 세포를 최적 농도에서 검정 배지 중에 재현탁하였다(예컨대 hGCGR 세포 1 × 105 세포/㎖, hGLP-1R 및 hGIPR 세포 0.5 × 105 세포/㎖).
희석 플레이트로부터, 5 ㎕ 분취물을 검은색 얕은 웰 u-형 바닥 384-웰 플레이트(Corning # 3676) 상에 스탬핑하였다. 여기에, 5 ㎕ 세포 현탁액을 첨가하고, 플레이트를 30분 동안 실온에서 인큐베이션하였다.
제조업체의 권장사항에 따라, 2단계 프로토콜을 따라 상업적으로 이용 가능한 cAMP 다이내믹 2 HTRF 키트(Cisbio, Cat # 62AM4PEJ)를 사용하여 cAMP 수준을 측정하였다. 간략하게, 키트에 제공되는 콘주게이트 및 용해 완충액 중 각각 1/20으로 희석하여 항-cAMP 크립테이트(공여체 형광단) 및 cAMP-d2(수신체 형광단)를 별도로 제조하였다. 5 ㎕ 항-cAMP 크립테이트를 검정 플레이트의 모든 웰로 첨가하고, 콘주게이트 및 용해 완충액을 첨가한 비-특이적 결합(NSB) 웰을 제외하고, 5 ㎕ cAMP-d2를 모든 웰에 첨가하였다. 플레이트를 1시간 동안 실온에서 인큐베이션한 후, 여기 파장 320 ㎚ 및 방출 파장 620 ㎚ 및 665 ㎚를 사용하여 Envision(Perkin Elmer) 상에서 판독하였다.
합성된 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 서열 및 "검정 배지"에서 수행된, cAMP 검정에서 결정된 이의 EC50 값을 표 2에 나타낸다. 표 2에서의 모든 펩타이드를 C-말단 아미드를 포함하여 합성하였다. 추가 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 C-말단 산을 포함하여 합성하고, "검정 배지"에서 수행된, cAMP 검정에서 결정된 EC50 값을 표 3에 나타낸다. "검정 배지"에서 수행된, 추가 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드에 대한 EC50을 표 4에 나타낸다. 표 4에서의 모든 펩타이드는 '산'으로 표시되지 않은 경우 C-말단 아미드를 가지며, '산'으로 표시된 경우는 C-말단 산을 갖는다.
[표 2]
C-말단 아미드를 포함하는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 cAMP 활성(검정 1)
Figure pat00003
[표 3]
C-말단 산을 포함하는 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 cAMP 활성(검정 1)
Figure pat00004
[표 4]
추가 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드의 cAMP 활성(검정 1)
Figure pat00005
Figure pat00006
Figure pat00007
Figure pat00008
Figure pat00009
약어: K(gE-palm) = 감마 글루탐산 링커를 통해, 엡실론 질소로 컨쥬게이션된 팔미토일기를 갖는 라이신; K(Ahx-palm) = 아미노헥산산 링커를 통해, 엡실론 질소로 컨쥬게이션된 팔미토일기를 갖는 라이신; K(bA-palm) = 베타 알라닌산 링커를 통해, 엡실론 질소로 컨쥬게이션된 팔미토일기를 갖는 라이신; Aib, 아미노이소부티르산. K(palm) = 엡실론 질소로 직접 컨쥬게이션된 팔미토일기를 갖는 라이신.
혈장 농도의 혈청 알부민의 존재 하에 글루카곤 및 GLP-1 수용체 매개된 cAMP 생성 검정(검정 2). cAMP 생성을 유도하는 펩타이드에 대한 작용제 역가 결정을 다음과 같이 각각 4.4%, 3.2% 및 3.2%로 인간, 래트 또는 마우스 혈청 알부민의 존재 하에 인간, 래트 또는 마우스 글루카곤 수용체(GlucR 또는 GCGR로 약칭됨) 또는 GLP-1 수용체를 발현하는 CHO 세포에서 측정하였다.
인간, 마우스 또는 래트 GlucR 또는 GLP-1 수용체의 안정한 재조합 발현을 갖는 CHO 세포를 DMEM 10% FBS 및 제네티신(100 ㎍/㎖) 중 배양하였다. 냉동보존된 세포 스톡을 2 × 107/바이알에서 1x 세포 냉동 배지-혈청 비함유 DMSO(Sigma Aldrich) 중에 제조하고 -80℃에서 보관하였다. 세포를 37℃에서 신속히 해동한 후, 인간, 래트 및 마우스 혈청 알부민에 대해 각각 4.4%, 3.2% 및 3.2%로 혈청 알부민을 함유하는 검정 완충액(DMEM) 내에서 희석하였다. 펩타이드를 DMSO 중에 연속 희석한 후, 나타낸 최종 농도로 혈청 알부민을 함유하는 DMEM 내로 100배 희석하였다. 이어서 희석된 펩타이드를 384 검은색 얕은 웰 마이크로타이터 검정 플레이트 내로 옮겼다. 세포를 검정 플레이트에 첨가하고, 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 검정을 중단하고, cAMP 수준을 제조업체의 가이드라인에 따라, CisBio Bioassays에서 이용 가능한 HTRF® 다이내믹 d2 cAMP 검정 키트를 사용하여 측정하였다. 플레이트를 Perkin Elmer ENVISION® 형광 플레이트 판독기 상에서 판독하였다. 인간 및 래트 혈청 알부민을 Sigma Aldrich에서, 그리고 마우스 혈청 알부민을 Equitech Bio Ltd.에서 구매하였다.
데이터를 제조업체의 가이드라인에 기재된 바와 같이 델타 F%로 변환하고 4-파라미터 로지스틱 피팅에 의해 분석하여 EC50 값을 결정하였다. 선택된 펩타이드에 대한 검정 2 EC50 값을 표 5에 나타낸다. 결정된 검정 2 EC50 값은 재조합 세포주에서 GLP1 및 글루카곤 수용체에서 시험된 펩타이드의 내재적 역가 및 혈청 알부민에 대한 펩타이드의 친화도에 모두 의존적하며, 자유 펩타이드의 양을 결정한다. 혈청 알부민과의 연합은 수득되는 EC50 값을 증가시킨다. 혈장 농도의 알부민에서 자유 펩타이드 분획 및 0% HSA에서 EC50을 HSA 농도를 이용한 cAMP 생성에서의 변이에 기반하여 계산할 수 있다. 예를 들어, G730 및 G933은 4.4% HSA에서 자유 펩타이드에 대해 0.85% 및 0.29% 그리고 0% HSA에서 GLP1R에서의 EC50에 대해 7 pM 및 6 pM의 값을 각각 나타낸다. G797 및 G849는 4.4% HSA에서 자유 펩타이드에 대해 0.82% 및 0.48% 및 0% HSA에서 GLP1R에서의 EC50에 대해 7 pM 및 2 pM의 값을 각각 나타낸다. 상이한 펩타이드 간 그리고 상이한 조건에 걸쳐 GLP1R 및 GlucR에서의 활성의 밸런스를 비교하기 위해, 이들을 아래의 계산을 사용하여 연관시킬 수 있으며, 여기서 EC50은 천연 리간드의 것과 관련된다.
[표 5]
혈장 농도의 혈청 알부민의 존재 하에 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드에 대한 EC50 역가(검정 2)
Figure pat00010
1 GlucR/GLP1R 비는 다음과 같이 결정하였다:
상대 역가 GlucR = 글루카곤의 EC50/시험한 펩타이드의 EC50
상대 역가 GLP1R = GLP1의 EC50/시험한 펩타이드의 EC50
GlucR/GLP1R 비 = GlucR의 상대 역가/GLP1R의 상대 역가
혈장 중 펩타이드의 안정성 시험. 혈장 중 펩타이드 G730, G797, G849 및 G933의 안정성을 다음과 같이 결정하였다.
에펜도르프 저결합 튜브 내에 고체 펩타이드를 칭량하여 약 200 μmol/ℓ의 펩타이드 스톡 용액을 제조하고 DMSO 중에 용해시켰다. 10 ㎕의 스톡 용액을 에펜도르프 저결합 튜브 내 990 ㎕의 혈장에 첨가하여 혈장 중 약 2 μmol/ℓ의 초기 농도의 펩타이드를 생성하였다. 인간, 래트 및 마우스로부터의 냉동 블랭크 혈장을 해동하고 37℃의 온도까지 가열한 후 스톡 용액을 첨가하였다. 스파이크 처리된 혈장 샘플을 부드럽게 혼합하고 약 5분 동안 평형화하도록 둔 후 실험을 시작하였다. 혈장 샘플을 37℃에서 GalaxyR CO2 인큐베이터 내에서 48시간 동안 인큐베이션하였다. 0시간, 1시간, 2시간, 6.5시간, 17시간, 24시간 및 48시간에 샘플채집(30 ㎕)을 수행하였다. 샘플을 분석 전까지 -70℃에서 보관하였다.
혈장 샘플을 다음과 같이 검정하였다. 30 ㎕ 혈장 샘플을 96-웰 저결합 플레이트(에펜도르프 단백질 저결합(LoBind)) 내 180 ㎖의 저온 에탄올로 단백질을 침전시켰다. 혼합 및 원심분리 후, 상청액 100 ㎕를 새로운 플레이트로 옮기고, 1 ㎕를 분석용 칼럼 상에 주사하였다.
분석을 포지티브 전기분무 이온화를 포함하는 중-고 해상도 질량 분광측정기(Perkin Elmer PenTOF)에 커플링된 μLC-시스템(LC Exigent μLC)을 사용하여 수행하였다. 분석용 칼럼은 입자 크기 2.7 ㎛를 갖는 5 ㎝, 1 ㎜ Agilent Poroshell(맞춤 제조) C18-칼럼이었다. 유속: 저속 역상 구배를 사용하여 0.1 ㎖/분. 사용된 이동상은 0.1% 포름산을 함유하는 물 및 아세토니트릴이었다.
생성 데이터를 다음 분해 산물에 대해 수동 평가하였다: +1 산물(산) 및 DPP IV-절단 산물. +1 질량을 갖는 산물은 글루타민의 아미드기에서 또는 C-말단에서 탈아미드화로부터 생성될 수 있다. 절단 산물은 혈장 중 프로테아제 DPP IV의 작용으로 생성된다. 펩타이드의 분해 및 펩타이드 산물의 형성을 모두 초기 펩타이드 농도의 백분율로 보고하였다. 피크를 적분하고, 잔여 펩타이드%를 계산하였다: (피크 면적/0H 피크 면적) * 100. 24 h 시점에 대한 데이터를 표 6에 나타낸다. 탈아미드화 및 DPP IV 절단 수준은 G797 및 G933에 대해 낮았다.
[표 6]
혈장 중 펩타이드 안정성
Figure pat00011
용해도 펩타이드 용해도를 다음과 같이 4.5 내지 8.0의 pH 범위 내에서 다양한 완충액 종에서 평가하였다. 건조 분말 형태의 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 실온에서 다양한 완충액 중에 재구성하였다. NanoDrop 2000 분광측정계를 사용하여 280 ㎚에서 흡광도를 측정하고, 다음 공식을 사용해서 펩타이드 농도를 계산하였다:
c=(A280*Mw)/ε
식 중: c- 농도 ε- 소멸 계수 Mw- 분자량
A280- 280 ㎚에서의 흡광도
ε = (1 × Trp = 5560) + (1 × Tyr = 1200)
결과를 표 7에 나타낸다. 각각의 펩타이드는 임의의 범위의 pH(6.5 내지 8.5)에 걸쳐 0.8 ㎎/㎖에서 가용성이었다. G730은 4.5 내지 8.0의 pH 범위에서 가용성이었고, G797은 6. 내지 8.0의 pH 범위에서 가용성이었고, G933은 6 내지 8.0의 pH 범위에서 가용성이었다. G933의 용해도를 또한 표 7에 나타내는, 여러 상이한 완충액 시스템에서 시험하였다. G933은 적어도 다음 완충액 시스템에서 1 ㎎/㎖에서 가용성이었다: 히스티딘(pH 6 및 pH 7; 이온 강도: 0.25 mM 내지 100 mM), 나트륨 포스페이트(pH 6 내지 pH 7.5; ; 이온 강도: 0.25 mM 내지 100 mM), 및 트리스/하이드록시메틸 아미노메탄(pH 7 내지 pH 9; 이온 강도: 0.25 mM 내지 100 mM).
[표 7]
펩타이드 용해도 프로필 (모든 완충액의 이온 강도: 100 mM)
Figure pat00012
제형. 펩타이드 용해도를 3개의 상이한 등장성 제형으로 평가하였다:
1. 디폴트 제형(DF) = 0.1 M 트리스 pH 7.5, 150 mM 만니톨. 최종 제형 pH = 7.2
2. 백업 제형 1(BF1) = 0.05 M 트리스, 50 mM 아르기닌/프롤린. 최종 제형 pH = 8.0
3. 백업 제형 2(BF2) = 나트륨 포스페이트 완충액(pH 8)/1.85% W/V 프로필렌 글리콜. 최종 제형 pH = 7.0
용해도를 상기에 상세히 나타낸 바와 같이 측정하였고, 결과를 표 8에 나타낸다. G730, G797 및 G933은 DF 중 적어도 5 ㎎/㎖까지 가용성이었고, DF 중 G849의 최대 용해도는 3.7 ㎎/㎖였고, G797은 BF1 중 적어도 10 ㎎/㎖까지 가용성이었고, G933은 BF2 중 적어도 10 ㎎/㎖까지 가용성이었다.
[표 8]
제형 중 펩타이드 용해도
Figure pat00013
A280 nm에서 결정된 농도
1개월 내에 역상 초성능 액체 크로마토그래피(RP UPLC) 순도를 측정하여 DF의 안정성을 평가하였다. 보관 조건은 5℃, 25℃, 40℃ 및 -80℃였다. 결과를 표 9 및 표 10에 나타낸다.
[표 9]
안정성 조건에서 1개월 후 펩타이드 제형 순도
Figure pat00014
[표 10]
안정성 조건에서 1개월 후 펩타이드 제형 순도 손실(T0 대비 %)
Figure pat00015
펩타이드는 모두 용해도, 제형성 및 안정성에 대해 허용 가능한 특성을 나타내었다.
실시예 3: 생체내 연구
G730, G797, 및 G812(연구 A). 본원에 개시된 선택된 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드를 다음과 같이, 식이 유도된 비만(DIO) 마우스 모델에서 시험하였다. 암컷 C57/Bl6JHsdOla(Harlan Laboratories, UK에서 입수)를 9주령 내지 11주령에 D12492 고지방 식이(Research Diets, NJ, USA) 및 초콜렛 간식, 델리카토 볼(delicato ball, Delicata Bakverk, Sweden)을 시작하였고, 16주 동안 식이를 유지한 후 동물 시설에 도착시키고, 3주의 순응 기간 동안 및 약물 치료 동안, 두 성분 식이의 칼로리 함량을 표 11에 나타낸다. 마우스를 9개 군으로 나누고(n=5~6), 29주령에 치료를 시작하였다. 치료군 및 투여를 표 12에 나타낸다.
[표 11]
DIO 식이의 함량
Figure pat00016
[표 12]
연구 A에 대한 치료군
Figure pat00017
GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드 G730, G797, 및 G812뿐만 아니라 리라글루티드를 비히클, 100 mM 트리스/150 mM 만니톨, pH 7.4 중에 제형화하였다. 동물을 고지방 식이로 유지하면서 치료를 14일 동안 매일 2회 피하 투여하였다. 동물의 체중을 투여 기간 동안 매일 모니터링하였다. 14일차에, 의식이 있는 마우스로부터의 혈장 글루코스 및 인슐린 측정을 위해 혈액 샘플을 4시간 공복 기간 후 수득하였다. 이어서 마우스를 이소플로우란을 사용해서 마취하고, 말단 혈액(terminal blood)을 안구 뒤 모세관층으로부터 수집하였다. 다음 파라미터를 측정하였다: 트리글리세라이드, 총 콜레스테롤, 비-에스테르화 지방산(NEFA), 베타-하이드록시부티레이트 및 섬유아세포 성장 인자 21(FGF21)의 혈액 화학 측정(아래의 표 14 및 표 15).
리라글루티드 및 비히클에 비해, 체중에 대한 리라글루티드 및 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드 G730, G797 및 G812로의 치료 효과를 도 1 내지 도 4에 나타낸다. G730 또는 G797로 치료받은 동물은 14일의 투여 기간에 걸쳐 용량 의존적이고 연속적인 체중 감량을 나타내었다. 50 ㎚ol/㎏에서, G730 및 G797로 치료받은 동물은 비히클-치료 동물에 비해 14일차에 체중에서 약 24% 변화를 경험하였다.
G730 또는 G797로 치료받은 마우스는 14일차에 글루코스 수준에서 용량-의존적 감소를 나타내었다(표 13). 이러한 두 치료로, 특히 더 높은 용량에서, 감소된 인슐린 수준이 또한 관찰되었다(표 13). 인슐린 감수성 지수인 항상성 모델 평가(Homeostatic model assessment, HOMA)는 20 ㎚ol/㎏ G730 및 20 ㎚ol/㎏ 및 50 ㎚ol/㎏ G797에서 유의미하게 개선되었다. HOMA는 β-세포 기능 및 인슐린 내성을 평가하기 위해 혈장 인슐린 및 글루코스 수준의 합을 사용하는 모델링 방법이다(표 14). 총 혈장 콜레스테롤은 모든 용량에서 리라글루티드, G730 및 G797 모두에 의해 저하되었고, 혈장 중 비-에스테르화 지방산(NEFA) 수준 및 혈장 및 간 트리글리세라이드(TG)의 변화는 덜 현저하였다. 베타-하이드록시부티레이트(BeHy)는 체중 감량과 일치하게, 증가되는 수준으로의 경향성을 가졌다. 섬유아세포 성장 인자 21(FGF21)은 일반적으로 이중 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드 치료로 증가되었다.
[표 13]
글루코스, 인슐린, 및 HOMA에 대한 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드 치료의 효과
Figure pat00018
결과를 2-테일 분포, 2-샘플 비동등 분산 t시험에 의해 평가하였다.
*는 비히클 대비 p<0.05를 나타낸다.
[표 14]
추가 혈액 화학 측정에 대한 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드 치료의 효과
Figure pat00019
결과를 2-테일 분포, 2-샘플 비동등 분산 t시험에 의해 평가하였다;
*는 비히클 대비 p<0.05를 나타낸다.
G865, G933, 및 G796(연구 B). 추가 세트의 GLP-1/글루카곤 펩타이드를 상기와 동일한 프로토콜을 사용해서, 그러나 표 15에 나타낸 치료군 및 투여로 식이 유도 비만 모델에서 시험하였다.
[표 15]
연구 B에 대한 치료군
Figure pat00020
GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드 G865, G933, 및 G796뿐만 아니라 리라글루티드를 비히클, 100 mM 트리스/150 mM 만니톨, pH 7.4 중에 제형화하였다. 동물을 고지방 식이로 유지하면서 치료를 14일 동안 매일 2회 피하 투여하였다. 동물의 체중을 투여 기간 동안 매일 모니터링하였다. 14일차에, 의식이 있는 마우스로부터의 혈장 글루코스 및 인슐린 측정을 위해 혈액 샘플을 4시간 공복 기간 후 수득하였다. 이어서 마우스를 이소플로우란을 사용해서 마취하고, 말단 혈액을 안구 뒤 모세관층으로부터 수집하였다. 다음 파라미터를 측정하였다: 트리글리세라이드, 총 콜레스테롤, 비-에스테르화 지방산(NEFA), 베타-하이드록시부티레이트 및 섬유아세포 성장 인자 21(FGF21)의 혈액 화학 측정(아래의 표 16 및 표 17).
리라글루티드 및 비히클에 비해, 체중에 대한 리라글루티드 및 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드 G933, G865 및 G796으로의 치료 효과를 도 5 내지 도 8에 나타낸다. G933, G865 및 G796으로 치료받은 동물은 14일의 투여 기간에 걸쳐 용량 의존적이고 연속적인 체중 감량을 나타내었다.
치료-후 14일차에 글루코스 수준, 인슐린 수준 및 HOMA를 표 16에 나타낸다. 치료-후 14일차에 총 혈장 콜레스테롤 수준, 혈장 비-에스테르화 지방산(NEFA) 수준, 혈장 및 간 트리글리세라이드(TG) 수준, 베타-하이드록시부티레이트(BeHy) 수준, 및 섬유아세포 성장 인자 21(FGF21) 수준을 표 17에 나타낸다.
[표 16]
글루코스, 인슐린, 및 HOMA에 대한 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드 치료의 효과
Figure pat00021
결과를 2-테일 분포, 2-샘플 비동등 분산 t시험에 의해 평가하였다;
*는 비히클 대비 p<0.05를 나타낸다.
[표 17]
추가 혈액 화학 측정에 대한 GLP-1/글루카곤 작용제 펩타이드 치료의 효과
Figure pat00022
결과를 2-테일 분포, 2-샘플 비동등 분산 t시험에 의해 평가하였다;
*는 비히클 대비 p<0.05를 나타낸다.
실시예 4: 단회-상승-용량 연구
(A) 대상체
총 362명의 대상체가 독일에서 연구에 참여하기로 동의하였다. 대상체를 다음 포함 및 제외 기준에 대해 스크리닝하였다.
포함 기준:
· 건강한 자원자, 스크리닝 시 18세 내지 45세;
· 체질량 지수 22 ㎏/㎡ 이상 30 ㎏/㎡ 이하 및 체중 70 ㎏ 이상; 및
· 여러 캐뉼라 삽관에 적합한 정맥 접근성.
제외 기준:
· G933의 평가 또는 대상체 안전성 또는 연구 결과의 해석을 방해할 임의의 질환. 구체예에는 (a) 급성 또는 만성 췌장염의 과거 이력, 또는 스크리닝 시 정상 상한(ULN)보다 높은 췌장 아밀라제 또는 리파제, (b) 치료를 필요로 하는 위마비의 과거 이력, (c) 안전성 및 관용성 데이터의 해석에 영향을 미칠 수 있는 상부 위장관에 영향을 미치는 과거 수술 이력, (d) 쓸개절제술로 치료되지 않는 급성 쓸개염 에피소드를 야기하는 담석증 이력 또는 공지된 쓸개 질병, (e) 다발 내분비샘 종양 2형(MEN-2) 이력 또는 가족력, 스크리닝 시 갑상샘 C-세포 비대를 제시하는 혈청 칼시토닌(칼시토닌 수준 50 ng/ℓ 초과) 또는 수질 갑상샘 암종, (f) 임상적으로 유의미한 심장 박동 교란, 예컨대 영구적 또는 발작성 심방 세동/조동, 발작정 심실상 빈맥, 발작적 심실 빈맥의 과거 이력, 이식 가능한 박동조율기 또는 심장율동조율기/세동제거기의 존재, (g) 치료받은 심부전 이력 또는 증상성 심부전, 및 (h) 이전 심근 경색 또는 뇌혈관 사고(예컨대, 뇌졸중)의 이력이 포함된다;
· 위장관, 신장, 또는 간 질병(길버트 증후군 제외) 또는 약물의 흡수, 분포, 대사, 또는 배출을 방해하는 것으로 알려져 있는 임의의 다른 질환의 이력 또는 존재;
· 비-흑색종 피부암을 제외한, 암 이력;
· 투여 1일 전 4주 내의 임의의 임상적으로 중요한 병, 의학적/수술적 시술, 또는 외상;
· 스크리닝 시 양성 B형 간염 표면 항원 또는 C형 간염 바이러스 항체 혈청학;
· 병력 또는 대상체의 구두 보고에 의해 결정되는, 스크리닝 시 양성 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 시험 또는 항레트로바이러스 약제의 사용;
· 스크리닝 시 정상 범위를 벗어난 혈청 칼륨 또는 칼슘;
· 스크리닝 시 ULN을 초과하는 혈청 크레아티닌, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(AST), 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT), 또는 총 빌리루빈;
· 연구자에 의해 판단되는, 임상 화학, 혈액학, 또는 소변분석 결과에서의 임의의 다른 임상적으로 중요한 비정상성도 연구로부터 제외를 초래하게 된다;
· 임의의 다음 의학 제품의 사용: (a) GLP-1 수용체 작용제의 동시적인 또는 이전 사용, (b) 스크리닝 전의 과거 28일 내에 전신 코르티코스테로이드의 현재 또는 이전 사용, 또는 (c) -1일 내지 7일 전 1주부터 체중 또는 식욕 제어를 위해 라이선스 받은 임의의 의학 제품 또는 한약 제조물의 사용은 금지된다;
· 다음 중 어느 것으로 정의되는, 바로 누운 휴식 10분 후의 비정상적인 활력 징후: (a) 수축기 혈압 90 mmHg 미만 또는 140 mmHg 이상, (b) 이완기 혈압 50 mmHg 미만 또는 90 mmHg 이상, 또는 (c) 분당 심박수 50회 미만 또는 90회 초과;
· 휴지 12-극 ECG의 리듬, 전도(예컨대, 월프-파킨슨-화이트(Wolff-Parkinson-White) 증후군, 동기능부전(sick-sinus) 증후군), 또는 형태에서의 임의의 임상적으로 중요한 비정상성, 또는 연구자의 의견 상, 비정상 T-파 형태, 또는 좌심실 비대를 포함하여, 심박수에 대해 교정된 QT 간격(QTc) 변화의 해석을 방해할 수 있는 ECG에서의 임의의 비정상성;
· 12-극 ECG에 기반하여, 프리데리샤(Fridericia) 공식을 사용하여 연장된 QTc(QTcF) 450 밀리초 초과, 또는 단축된 QTcF 340 밀리초 미만, 또는 긴 QT 증후군의 가족력;
· PR(PQ) 간격 120 밀리초 미만으로의 단축 또는 200 밀리초 초과로의 연장(1도 방실 차단);
· 간헐적인 2도 차단(수면 동안의 벤케바흐(Wenckebach) 차단은 제외되지 않음) 또는 3도 차단, 또는 방실 해리;
· 50 밀리초 내지 110 밀리초 범위를 벗어나는 QRS 간격;
· 과거 3년 내에 공지되거나 추정되는 약물 남용 이력;
· 과거 3년 내에 알콜 남용 또는 과도한 알콜 섭취 이력;
· 현재 흡연자(하루 0개피 초과); 대상체는 스크리닝 시 코티닌에 대해 양성으로 시험되는 경우에도 제외된다;
· 스크리닝 또는 연구 시설로의 입원 시 약물 남용에 대해 양성인 스크리닝 결과, 또는 연구 의약품의 투여 전 연구 시설로의 입원 시 알콜에 대해 양성인 호흡 시험. 만성 불안 또는 수면 장애에 대해 벤조디아제핀을 이용하는 대상체는 연구에 등록하는 것이 허용될 수 있다;
· 중증 알러지/과민성 이력 또는 진행되고 있는 임상적으로 중요한 알러지/과민성;
· 스크리닝 전 2개월 내에 전혈 또는 적혈구 공여, 또는 임의의 혈액 손실 500 ㎖ 초과;
· 적어도 30일 또는 본 연구에서 연구 의약품 투여의 5배 반감기 중 더 긴 기간 내에 또 다른 새로운 화학적 대상(시판이 승인되지 않은 화합물로 정의됨)의 수령, 또는 약물 치료에 포함되는 임의의 다른 임상 연구에의 참여. 제외 기간은 최종 투여 후 또는 최종 방문 후 30일 또는 연구 의약품의 5배 반감기 중 더 긴 기간에 시작한다. 동의하고 스크리닝되었지만, 본 연구 또는 이전 연구로 무작위화되지 않은 대상체는 제외되지 않는다; 또는
· 대상체가 공공 또는 사법 명령에 의해 기관에 수용된 정신병
스크리닝 후, 313명의 대상체가 포함/제외 기준에 부합하지 않는 것으로 결정되었다. 나머지 48명의 대상체가 무작위화되어 G933을 수여받았다. 48명의 치료받은 환자의 인구학을 아래의 표에 나타낸다.
[표 18]
치료 집단, 인구학
Figure pat00023
Figure pat00024
(B) 연구 설계
1상, 무작위화, 맹검, 단회-상승 용량 연구를 수행하였다. 제안된 연구 순서도를 도 9에 제공한다. 코호트별 8명의 대상체를 계획하였다. 각각의 코호트 내에서, 대상체를 G933(MEDI0382) 또는 위약에 대해 3:1로 무작위화하였다.
GPL-1 및 글루카곤 조정제에 대한 임상 문헌 데이터를 사용해서 수행된 PK/PD 모델링에 기반하여, G933의 임상적으로 유효한 용량은 300 ㎍/일 내지 2000 ㎍/일의 범위인 것으로 예측되었다. 따라서, G933의 5 ㎍, 10 ㎍, 30 ㎍, 100 ㎍, 300 ㎍, 600 ㎍, 1200 ㎍ 및 2000 ㎍의 용량 증량을 선택하였다. 각각의 코호트에 대한 안전성 데이터를 평가한 후 용량 증량을 진행하도록 허용하였다. 안전성을 추가로 증강시키기 위해, 배율 증가는 제안된 용량 범위의 하한에서 가장 컸으며, 마지막 용량 증가가 2-배보다 적도록 단계식 방식으로 감소되었다. 이 연구에서 최대 제안 용량 수준은 2000 ㎍이었다. 원숭이 AUC 데이터에 기반한 2000 ㎍의 최대 제안 인간 용량에서의 안전성 경계는 0.8이었다.
대상체는 연구 동안 1회 용량의 G933을 수여받았다. 모든 대상체에 있어서, 스크리닝 방문을 무작위화 전 28일 내(-29일 내지 -2일)에 수행하였다. 대상체는 적격성 기준의 반복 평가를 허용하고, 4-시간 기간에 걸친 심장 원격측정 모니터링을 수행하고, 다음 날 아침 투여 전에 신체 활성 수준을 표준화하기 위해, 연구 의약품의 수여 전날 저녁(-1일)에 시설에 입원하였다. 1일차에, 최소 8시간 동안 하룻밤 절식 후, 기준선 안전성 평가 및 혈액 샘플을 수득하고, 대상체에 G933 또는 위약의 단회 피하(SC) 용량을 투여하였다. 대상체는 1일 및 2일에 걸쳐 예정된 평가 및 안전성 모니터링(연속 원격측정 및 간헐적 디지털 심전도[ECG]에 의한 심장 모니터링 포함)을 위해 연구 시설에 남아있었고, 퇴원 전까지 입원해 있었다. 대상체는 안전성 평가를 수행하고 혈액 샘플을 수집한 후 3일차 아침에 시설에서 퇴원하였다. 대상체는 4일차, 7일차 및 28일차에 외래 방문을 위해 시설에 복귀하였다.
스크리닝 후, 각각의 대상체에 대한 연구 기간은 대략 29일이었으며, 여기에는 입원 평가 기간 및 외래 추적 기간이 포함되었다.
약력학 평가를 위해, 1일차에, 글루코스 및 인슐린 수준 측정을 위한 혈액 샘플을 각각의 식사(아침 식사, 점심 식사 및 저녁 식사) 전에 그리고 각각의 식사 시작 1시간 및 2시간 후(± 15분) 채혈하였다. 1일차에 각각의 식사 시작을 기록하고, 각각의 식사는 30분 내에 소비하도록 했다.
면역학적 평가를 위해, 항-약물 항체(ADA) 샘플채집을 1일차에, 투여-후 대략 1주 및 투여-후 대략 1개월에 수행하였다.
약동학(PK) 평가를 위해, 샘플채집 시간은 투여-전, 및 투여 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간, 10시간, 12시간, 16시간, 24시간, 36시간, 48시간, 및 72시간 후였다(처음 2시간 동안 ± 15분 및 투여-후 48시간까지의 나머지 시점에 대해서는 ± 30분). 1일차에, PK 샘플을 또한 각각의 식사(아침 식사, 점심 식사 및 저녁 식사) 전에 그리고 각각의 식사 시작 1시간 및 2시간 후(± 15분) 채혈하였다.
(C) 결과
용량 증량을 프로토콜에 따라 계획 대로 5 ㎍으로부터 300 ㎍까지 진행하였다; 그러나, 상당한 구토 사례로 입증된 바와 같이, 300 ㎍은 관용되지 않았으며, 용량을 최종 코호트에 대해 150 ㎍으로 감소하였다. 실제 연구 순서도를 도 9에 제공하며, 대상체 기질을 도 10에 나타낸다.
3명의 대상체만 혈장 중 적어도 하나의 정량 가능한 수준을 나타냈으므로, 5 ㎍ G933에 대한 PK 파라미터는 유도될 수 없었다. G933의 혈장 농도는 5 ㎍ 및 10 ㎍ G933군의 모든 대상체에서 2시간 내지 4.5시간부터 16시간 내지 24시간까지 측정 가능하였다. G933의 혈장 농도는 100 ㎍ 및 300 ㎍ G933군의 모든 대상체에서 48시간까지 측정 가능하였다. 투여-후 72시간에는 대상체에서 G933의 혈장 농도를 정량할 수 없었다.
모든 G933 용량에 대한 평균 농도-시간 프로필은 피크 후 뚜렷한 단일-지수 감쇠를 나타내었으며, 피크 및 투여 48시간 후 간에 중등도로 신속한 농도 강하를 가졌다.
단회 용량 혈장 G933 PK 파라미터 산정치를 대상체별 및 치료별로 기재하였고, 표 19에 치료별로 요약한다.
[표 19]
단회 용량 G933 중앙값 약동학 파라미터 산정치의 요약(기하 평균[95% CI])
Figure pat00025
G933은 5 ㎍ 내지 150 ㎍ 범위의 용량에서 G933의 단회 투여 후 7.0시간 내지 9.0시간의 최대 농도까지의 중앙값 시간(tmax) 및 300 ㎍의 최고 용량 수준에서 4.5시간의 중앙값 tmax로 흡수되었다.
G933의 겉보기 말단 제거 반감기(t1/2)를 72시간의 샘플채집 기간에 걸쳐 시각 검사에 기반하여 적어도 3개 데이터 포인트를 사용해서 결정하였다. T1/2은 너무 낮은 혈장 농도로 인해 5 ㎍ 용량군의 대상체에서는 평가 불가능하였다. AUCex%가 20%를 초과하는 다른 용량군에서, t1/2 및 결과적으로 AUC0-∞도 보고되지 않았다. 기하 평균 t1/2 값은 약 10 hr 내지 12 hr이었다.
변동 계수(CV)로 표시되는, 최대 혈장 농도(Cmax) 및 AUC0-∞에 대한 대상체-간 변동성은 두 파라미터 모두에 대해 중등도였다(3% 내지 37%).
기준선 또는 기준선-후 ADA 양성인 대상체는 없었다.
혈압, 맥박, 식품 섭취, 및 유해 사례를 연구 과정에 걸쳐 모니터링하였고, 표 20에 요약한다.
모든 치료-응급 유해 사례(TEAE)는 중증도가 등급 1(경도) 또는 등급 2(중등도)였다. 이를 아래의 표 21에 요약한다.
[표 20]
Figure pat00026
[표 21]
기관계 클래스 별 치료-응급 유해 사례 및 바람직한 용어 - 치료 집단
Figure pat00027
Figure pat00028
전체적으로, G933은 고용량에서 관찰되는 구토 그리고 맥박 및 혈압 증가를 포함하여 잘 관용되었다. 사전-특정된 외삽 종결점은 위약에 비해 모든 용량에서 GP933으로 치료받은 대상체에서 전체적인 1일 식품 섭취의 감소를 제시한다.
식사 시간 근처 개별 혈중 글루코스 및 인슐린 측정 그리고 용량별 중앙값 혈장 글루코스 및 인슐린 혈장 수준을 각각 투여-후 2.5시간 내지 14시간의 시간 간격으로 도 11 및 도 12에 나타낸다. 모든 용량에서 G933으로 치료받은 대상체의 혈장 글루코스 수준에서 글루코스 저하 효과가 나타났다. 상기 효과는 첫 번째 식사 시간 근처에 더욱 가시적이었다. 유사하게, 인슐린 혈장 수준은 첫 번째 식사 시간에 대응하여, 100 ㎍ 이상의 용량에서 특히 용량 반응을 나타내었다.
가장 빈번한 TEAE(대상체의 10% 초과 발생율)는 구토, 오심, 현기증 및 두통이었다. TEAE 구토는 가장 높은 G933 용량(100 ㎍, 150 ㎍ 및 300 ㎍)에서만 일어났다. 구토를 경험한 10명의 대상체에 있어서 총 40건의 구토 에피소드가 있었다. 30건의 에피소드는 300 ㎍ 용량에서 5명의 대상체로부터였고, 9건의 에피소드는 150 ㎍ 용량에서 4명의 대상체로부터였으며, 1건의 에피소드는 100 ㎍ 용량에서 1명의 대상체로부터였다.
식이에 대한 조정에도 불구하고 하루에 또는 연속 2일에 걸쳐 3회 이상의 구토 에피소드로 정의되는 상당한 구토가 150 ㎍ G933 군에서 6명 중 2명의 대상체(33.3%) 및 300 ㎍ G933 군에서 6명 중 5명의 대상체(83.3%)에 대해 보고되었다. 300 ㎍ 용량에서 관찰되는 상당한 구토 사례로 인해, G933의 용량을 최종 코호트에 대해 150 ㎍으로 감소하였다.
최대 150 ㎍의 용량에서 G933의 관용성은 오심, 구토, 빈맥 및 혈압에 대해 허용 가능하였다. 300 ㎍의 G933 용량에서는 수축기 혈압 및 맥박의 상당한 상승에서와 같이, 허용 불가능한 수준의 구토가 나타났다. 오심 및 구토를 갖는 것과 같이, 건강한 자원자에서 특히, 시판되는 GLP-1 작용제 범위에 걸쳐 단회 용량 후 상당한 맥박 상승이 나타났다. G933의 위장관 효과(구토)는 150 ㎍의 단회 용량에서 임의의 심혈관 효과 없이 나타났으므로, G933이 심혈관 위험 프로필에 대한 부정적 영향 없이, 혈당 제어를 개선하고 체중 감소를 야기할 것으로 예상되는 용량에서 2형 진성 당뇨병 대상체에 안전하게 투여될 수 있는 윈도우가 존재하였다. G933은 이러한 단회 용량 건강한 자원자 연구에서 안전성 및 관용성 종결점에 부합하였다.
실시예 5: 다회-상승-용량 연구 파트 I
(A) 대상체
상대적으로 잘 제어되는 2형 진성 당뇨병(T2DM)을 갖는 대략 75명의 과체중 또는 비만 대상체가 연구에 참여하기 위해 등록한다. 등록된 대상체는 다음 포함 및 제외 기준에 부합한다.
포함 기준:
· 스크리닝 시 18세 내지 65세의 남성 또는 여성;
· 체질량 지수 27 ㎏/㎡ 내지 40 ㎏/㎡(경계 포함);
· T2DM 진단 및 스크리닝 전 3개월 내에 유의미한 용량 변화(증가 또는 감소 500 ㎎/일 이상)가 일어나지 않은 메트포르민 단독치료법으로 관리된 글루코스 제어: (a) 헤모글로빈 A1C(당화 헤모글로빈; HbA1c) 값의 스크리닝은 6.5% 내지 8.5%, 또는 선택적으로 7.0% 내지 8.5%의 표적 범위 내여야 하며; (b) 메트포르민 단독치료법에 부가하여 디펩티딜 펩티다제-4(DPPIV) 억제제가 처방된 대상체는 스크리닝 전 4-주 DPPIV 억제제 제거 기간 후 연구에 들어오는 것이 적격으로 될 수 있고; (c) 메트포르민 단독치료법에 부가하여 설포닐우레아의 라이선스 받은 용량의 50% 미만이 처방된 대상체는 4주 설포닐우레아 제거 기간 후 연구에 들어오는 것이 적격으로 될 수 있고; 및 (d) 메트포르민 단독치료법에 부가하여 나트륨-글루코스 공동-수송체 2(SGLT2) 억제제가 처방된 대상체는 4주 SGLT2 억제제 제거 기간 후 연구에 들어오는 것이 적격으로 될 수 있다;
· 다중 캐뉼라삽관에 적합한 정맥 접근성;
· 코호트 4 대상체는 스크리닝 전 적어도 4주의 기간 동안 10 ㎎ 이상의 1일 용량의 스타틴을 복용해야 하고; 및
· 코호트 4 대상체는 스크리닝 기간 동안 위약의 초기 자가-주사 후 매일 피하(SC) 주사를 자가-투여할 의사 및 능력이 있어야 한다.
제외 기준:
· 연구 의약품의 평가 또는 대상체 안전성 또는 연구 결과의 해석을 방해할 임의의 질환. 구체예는 (a) 급성 또는 만성 췌장염의 과거 이력, 또는 스크리닝 시 실험실 참조 범위의 정상 상한(ULN)의 2배보다 높은 췌장 아밀라제 또는 리파제, (b) 치료를 필요로 하는 위마비의 과거 이력, (c) 안전성 및 관용성 데이터의 해석에 영향을 미칠 수 있는 상부 GI 관에 영향을 미치는 과거 수술 이력, (d) 쓸개절제술로 치료되지 않는 급성 쓸개염 에피소드를 야기하는 담석증 이력 또는 공지된 쓸개 질병, 및 (e) 스크리닝 시 갑상샘 C-세포 비대를 제시하는 혈청 칼시토닌(칼시토닌 수준 50 ng/ℓ 초과), 수질 갑상샘 암종, 또는 다발 내분비샘 종양 이력 또는 가족력이다;
· GI, 신장, 또는 간 질병(길버트 증후군 제외) 또는 약물의 흡수, 분포, 대사, 또는 배출을 방해하는 것으로 알려져 있는 임의의 다른 질환의 이력 또는 존재;
· 비-흑색종 피부암을 제외한, 암 이력(선택적으로, 과거 10년 내);
· 당뇨병성 족부 궤양의 이력 또는 존재;
· 투여 1일 전 4주 내의 임의의 임상적으로 중요한 병(공지된 당뇨병을 갖는 대상체에 대한 T2DM 이외), 의학적/수술적 시술, 또는 외상;
· 인슐린결핍증 증상 또는 불량한 혈중 글루코스 제어(예컨대, 상당한 갈증, 야뇨증, 다뇨증, 다음증, 또는 체중 감량);
· 공복 혈중 글루코스 200 ㎎/㎗(11.11 mmol/ℓ) 이상;
· 스크리닝 시 양성 B형 간염 표면 항원 또는 C형 간염 바이러스 항체 혈청학;
· 병력 또는 대상체의 구두 보고에 의해 결정되는, 스크리닝 시 양성 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 시험 또는 항레트로바이러스 약제를 복용 중인 대상체;
· 스크리닝 시 2.5 × ULN 이상의 아스파르테이트 트랜스아미나제(AST);
· 스크리닝 시 2.5 × ULN 이상의 알라닌 트랜스아미나제(ALT);
· 스크리닝 시 2 × ULN 이상의 총 빌리루빈;
· 스크리닝 시 정상 범위의 하한 미만인 헤모글로빈;
· 스크리닝 시 호중구 1.5 × 109/ℓ 미만;
· 스크리닝 시 정상 범위를 초과하는 갑상샘-자극 호르몬(TSH) 수준;
· 사구체 여과율(GFR) 60 ㎖/분/1.73 m2 이하로 정의되는 손상된 신장 기능(신장 질병에서의 변형에 따라 산정되는 GFR);
· 지속적인(대상체의 일반의에 의해 2회 이상의 이전 발생이 보고된 것으로 정의됨) 거대알부민혈증(300 ㎎/ℓ 초과);
· 상당한 후기 당뇨 합병증(울혈성 심부전 또는 말초 동맥 질병 증상을 갖는 거대혈관병증, 신경병증, 위마비, 망막병증, 신장병증 증상을 갖는 미세혈관병증);
· 스크리닝 기간 동안 심장 전도 결함(예컨대, 월프-파킨슨-화이트(Wolff-Parkinson-White) 증후군, 동기능부전(sick-sinus) 증후군).
· 다음 중 어느 것으로 정의되는, 바로 누운 휴식 10분 후의 비정상적인 활력 징후: (a) 60세 미만인 경우, 수축기 BP 90 mmHg 미만 또는 140 mmHg 이상; 60세 이상인 경우, 수축기 BP 90 mmHg 미만 또는 150 mmHg 이상, (b) 이완기 BP 50 mmHg 미만 또는 90 mmHg 이상, 또는 (c) HR 분당 45회 미만 또는 85회 맥박 초과;
· 휴지 ECG의 박동, 전도 또는 형태에서 임의의 임상적으로 중요한 비정상성 및 비정상 ST-T-파 형태 또는 좌심실 비대를 포함하여, QTc 간격 변화의 해석을 방해할 수 있는 12-극 ECG에서의 임의의 비정상성;
· 연장된 QTcF 450 msec 초과(두 성별 모두), 또는 단축된 QTcF 340 msec 미만, 또는 긴 QT 증후군의 가족력;
· PR(PQ) 간격 120 msec 미만으로의 단축(심실 조기-흥분의 증거가 없는 경우, 120 msec 미만, 그러나 110 msec 초과의 PR은 허용 가능함)
· PR(PQ) 간격 연장(240 msec 초과), 간헐적인 2도 또는 3도 AV 차단, 또는 AV 해리;
· 지속적이거나 간헐적인 다발 갈래 차단을 포함하는 120 msec를 초과하는 QRS 기간;
· 이식 가능한 심장 세동제거기 또는 영구적 박동조율기, 및 증상성 심실 및/또는 심방 부정빈맥;
· 캐나다 심혈관 학회 클래스 II 초과로 분류되는 불안정형 협심증 또는 안정형 협심증 또는 심근 경색 또는 뇌졸중;
· 심부전에 의해 야기되는 입원 이력 또는 심부전 진단;
· 과거 3년 내에 공지되거나 추정되는 약물 남용 이력;
· 과거 3년 내에 알콜 남용 또는 과도한 알콜 섭취 이력;
· 스크리닝 또는 연구 시설로의 입원 시 약물 남용에 대해 양성인 스크리닝 결과, 또는 연구 의약품의 투여 전 시설로의 입원 시 알콜에 대해 양성인 스크리닝 결과. 만성 불안 또는 수면 장애에 대해 벤조디아제핀을 이용하는 환자는 연구에 등록하는 것이 허용될 수 있다;
· 중증 알러지/과민성 이력 또는 진행되고 있는 임상적으로 중요한 알러지/과민성;
· 스크리닝 전 2개월 동안 전혈 또는 적혈구 공여, 또는 임의의 혈액 손실 500 ㎖ 초과;
· 본 연구에서 연구 의약품 최초 투여 전 적어도 30일 또는 5배 반감기 중 더 긴 기간 내에 또 다른 새로운 화학적 대상(시판이 승인되지 않은 화합물로 정의됨)을 수령했거나, 약물 치료를 포함하는 임의의 다른 임상 연구에 참여함. 제외 기간은 최종 투여 후 또는 최종 방문 후 30일 또는 연구 의약품의 5배 반감기 중 더 긴 기간에 시작한다. 동의하고 스크리닝되었지만, 본 연구 또는 이전 1상 연구로 무작위화되지 않은 대상체는 제외되지 않는다;
· 임의의 종류의 또 다른 연구에의 동시 참여;
· 임의의 다음 의학 제품의 사용: (a) GLP-1 작용제의 동시 또는 이전 사용; (b) 스크리닝 전의 28일 내에 전신 코르티코스테로이드의 사용; (c) QTc 간격을 연장하는 것으로 공지된 화합물의 사용, 또는 (d) 1일 전 1주 내에 체중 또는 식욕의 제어를 위해 라이선스 받은 임의의 한약 제조물 또는 의학 제품의 사용;
· 대상체가 공공 또는 사법 명령에 의해 기관에 수용된 정신병; 및
· 젖산 산증 또는 케톤산증 이력.
(B) 연구 설계
1/2상, 무작위화, 이중-맹검, 다회-상승 용량 연구를 2개 파트(A 및 B)로 수행한다. 연구의 순서도가 도 13에 제공된다. 파트 A로 대략 12일의 기간에 걸쳐, 메트포르민 치료법이 유지된 T2DM 대상체에서, G933(MEDI0382)에 대한 용량 적정 요법 및 적정 후 최대 유효 용량을 확립한 후, 연장된 투여 기간에 걸쳐 이용하여(파트 B) 체중 및 혈당 제어에 대한 G933의 유효성을 확립한다.
파트 A는 3개 코호트로 구성된다. 코호트 1은 7일 동안 매일 투여되는 안정 용량(예컨대, 100 ㎍)의 연구 의약품으로 구성된다(9명의 대상체; 6명은 G933, 3명은 위약). 코호트 2는 4일 동안 초기 용량(예컨대, 100 ㎍)의 연구 의약품 및 7일 동안 상향-적정 단계(적정 용량 1; 예컨대, 150 ㎍)로 구성되며(9명의 대상체; 6명은 G933, 3명은 위약), 코호트 3은 4일 동안 초기 용량(예컨대, 100 ㎍)의 연구 의약품, 4일 동안 상향-적정 단계(적정 용량 1; 예컨대, 150 ㎍) 및 7일 동안 제2 상향-적정 단계(적정 용량 2; 예컨대, 200 ㎍)로 구성된다(9명의 대상체; 6명은 G933, 3명은 위약).
파트 B는 1개 코호트로 구성된다. 이 코호트(코호트 4)의 대상체에 4일 동안 초기 용량(예컨대, 100 ㎍)의 연구 의약품, 4일 동안 상향-적정 단계(적정 용량 1; 예컨대, 150 ㎍), 4일 동안 제2 상향-적정 단계(적정 용량 2; 예컨대, 200 ㎍), 이어서 이후 가정에서 28일 동안 적정 용량 2(예컨대, 200 ㎍)를 투여한다(48명의 대상체; 24명은 G933, 24명은 위약).
초기 용량은 100 ㎍이다. 적정 용량 1 및 적정 용량 2는 300 ㎍을 초과하지 않는다. 각 대상체에 대한 연구 기간은 코호트별로 다르며 입원 다회-상승 용량(MAD) 또는 상향-적정 평가 기간(-2일에 시작해서 코호트 1에 있어서 8일, 코호트 2에 있어서 12일, 코호트 3에 있어서 16일, 및 코호트 4에 있어서 13일 후에 끝남) 및 외래 추적 기간으로 구성된다. 추가적으로, 코호트 4의 경우에만, 제2 입원 상향-적정 단계 후 연구 방문의 종료 전에 연구 의약품의 가정 내 자가-투여 28일 기간(매주 기관 방문 포함)이 포함된다.
적격성 기준 및 기준선 혼합식 시험(MMT)의 반복 평가를 허용하고, 다음 날 아침 투여 전에 신체 활성 수준을 표준화하기 위해 대상체는 연구 의약품을 수여받기 2일 전 저녁에 입원한다. 1일차에, 최소 8시간 동안 하룻밤 공복 후, 안전성, 유효성, 약동학(PK), 약력학(PD), 및 항-약물 항체(ADA) 실험실 시험을 위해 기준선 혈액 샘플을 채혈한다. 또한, 12-극 ECG를 기록하고, 대상체에 단회 SC 용량의 G933 또는 위약을 투여한다.
대상체는 ECG, 원격측정, 활력 징후의 모니터링, 및 해당 일 및 치료 기간 동안 잠재 반응에 대한 주사 부위의 평가를 포함하는 관찰 및 안전성 시험을 위해 시설에 체류한다. 추가적으로, 코호트 4에 있어서, 24-시간 외래 혈압 모니터링(ABPM)을 수행한다.
혼합식 시험(MMT) 절차를 -1일 및 모든 코호트에 대해 달성된 최대 용량 수준의 마지막 날에 수행한다. 추가 시점에는 적정 용량 1에서 첫째 날(코호트 2), 적정 용량 2에서 첫째 날(코호트 3), 상향-적정 입원 기간으로부터의 퇴원일(적정 용량 2의 5번째 날; 코호트 4), 및 가정 내 자가-투여 28-일 기간 동안 매주 기관 방문 시(코호트 4)가 포함된다. MMT를 위해, 대상체는 5분 내에 표준화된 식사(Ensure Plus®)를 소비하고, 표준화된 식사의 소비 직전 및 이후 240분에 걸쳐 글루코스 및 글루코스 대사에 관련된 파라미터의 측정을 위해 일정에 따라 일련의 혈액 샘플을 수득한다. 입원 기간 동안, 손가락 찔림 글루코스 샘플을 아침식사, 점심식사 및 저녁식사 15분 전 및 2시간 후, 그리고 잠자리에 들기 전에 수집한다.
코호트 4 대상체는 최종 종결점을 수집하기 위해 가정-내 자가-투여 기간 말기에 하룻밤 입원을 위해 재입원한다.
첫 번째 용량 전, 입원 투여 기간 동안(그리고 코호트 4에 있어서 외래 기간 동안), 시설로부터 퇴원 시, 및 7-일 내지 14-일 추적 방문 시를 (비제한적으로) 포함하는 여러 시점에 체중을 측정한다.
G933에 대한 약동학 샘플을 투여-전 및 투여-후 그리고 G933의 최종 투여 후 48시간까지 코호트별로 다양한 시점에 수득한다. 메트포르민 농도에 대한 샘플을 G933 투여 전에 수득한다. 항-약물 항체 샘플을 투여-전 및 최종 투여 후 28일까지의 다양한 시점에 수득한다.
연구에서 최종 용량이 투여된 다음 날 대상체는 시설에서 퇴원한다. 연구 의약품의 최종 용량 후 대략 28일에 최종 안전성 평가를 위한 추적 방문을 수행한다.
(C) 유효성 평가
위약 대비 다회 용량의 G933 후 글루코스 제어 및 체중에 대한 영향 평가를 위해, 코호트 4에서 MMT 글루코스 AUC의 변화%(MMT-후 최대 240분) 및 기준선으로부터(-1일) 치료 말기까지의 체중 변화를 기준선 측정을 위한 조정에 의해 공분산 분석을 사용하여 G933 및 위약군 그리고 치료군 간에 비교한다. 치료 말기에 누락된 측정은 마지막 이용 가능한 측정으로 대체한다. 비교를 0.1의 양-측 유의성 수준에서 수행한다. 위약군에 비해 G933 치료군에서의 체중 감소(예컨대, 반복 1일 1회 투여 4주에 걸쳐 1.3 ㎏ 내지 2.0 ㎏)는 예컨대, 100 ㎍ 내지 300 ㎍ 용량의 G933이 체중을 감소시키는 데 유효함을 실증한다.
헤모글로빈 A1c(당화 헤모글로빈, HbA1c) 및 프룩토사민에서 기준선(-2일)으로부터의 변화 및 MMT-후 24-시간 글루코스 AUC에서 기준선(-1일)으로부터의 변화%를 체중 평가와 유사하게 코호트 4에서 분석한다. 24-시간 글루코스 AUC 분석에는 MMT-전/MMT-후 글루코스 대사 패널로부터의 글루코스 측정뿐만 아니라 혈청 화학 글루코스 수준 및 PD 글루코스 샘플이 포함되며, 이들 결과는 고유한 시점에서 유도된다. 위약군 대비 G933 치료군에서 글루코스 제어의 증가(예컨대, 혼합식 시험(MMT) 후 농도-시간 곡선(AUC) 하 글루코스 면적에서의 적어도 20% 감소 및/또는 헤모글로빈 A1c 및 프룩토사민에 의해 측정됨)는 예컨대, 100 ㎍ 내지 300 ㎍ 용량의 G933이 글루코스 제어를 개선하는 데 유효함을 실증한다.
(D) 결과
(i) 파트 A: 코호트 1 내지 코호트 3
G933을 최대 15일 동안 1일 1회(QD) 최대 200 ㎍의 용량으로 성공적으로 투여하였다.
혼합식 시험으로부터 공복 혈장 글루코스 및 식후 글루코스 모두에서 G933을 이용하여 정상 수준으로의 상당한 글루코스 감소가 관찰되었다. 혼합식 시험에서, 곡선 하 글루코스 면적(AUC)은 코호트 1 내지 코호트 3에 걸쳐 40% 초과만큼 감소하였다.(도 14.) 코호트 1(7일) 및 코호트 3(9일 및 15일)에서 기준선 공복 글루코스 수준에서의 변화를 도 15에 나타낸다.
최대 2 ㎏의 실질적인 체중 감량에 대한 용량 의존적 경향성이 관찰되었다. 결과를 도 16에 나타내며, G933이 2형 당뇨병을 갖는 과체중/비만 환자에서 체중을 실질적으로 감소시킴을 실증한다. 코호트 3에서, 2 ㎏을 초과하는 차이가 관찰되었다.
G933은 용량 적정으로 200 ㎍까지 잘 관용되었다. 반복 투여 후 약동학을 도 17에 나타낸다. PK은 선형이었고 예측 가능하였다. 반감기는 대략 11시간이었다. 다회 매일 투여 후 축적은 최소였거나 없었고, 4일 내지 7일에 항정 상태를 달성하였다. 시험된 용량 범위에서 최대 혈장 농도는 4.21 ng/㎖ 및 18.90 ng/㎖였다. 평균 1일 노출은 2.89 ng/㎖ 내지 12.45 ng/㎖ 범위였다.
하나의 샘플만 기준선 후, 항-G933 항체에 대해 양성으로 확인되었다.
유해 사례는 관리 가능하였고, 노출된 GLP-1 단독-작용제에서의 사례와 일치하였다.
보고된 대부분의 오심 및 구토 사례는 치료 개시 시, 즉 100 ㎍ 용량 수준에서 일어났다. 구토는 G933을 수여받은 환자의 26%(n=5)에서 일어났으며 위약에서는 일어나지 않았다. 코호트 1에서, 구토 사례는 보고되지 않았다. 코호트 2에서, 3건의 구토 사례가 2명의 치료군 환자에서 보고되었다. 두 경우 모두 100 ㎍ 수준에서 투여 1일차에 일어났고, 두 경우 모두 개입 없이 해소되었다. 코호트 3에서, 13건의 구토 사례가 3명의 치료군 환자에서 보고되었다. 2명의 대상체는 1일차에 구토하였고, 이들 경우는 개입 없이 해소되었다. 1명의 대상체는 1일 내지 5일에 6회 구토하였다. 3일차에 정맥내 식염수를 제공하였고, 대상체는 5일차에 연구 참여를 철회하였다.
심장 유해 사례는 4명(44.4%)의 위약 환자 및 7명(36.8%)의 G933으로 치료받은 환자에서 보고되었다. 이의 빈도는 치료군 코호트에 걸쳐 용량과 함께 증가하는 것으로 나타나지 않았다. G933으로의 치료 후 각각의 코호트에서 약 10 bpm의 맥박 증가가 관찰되었다. 유의미한 수축기 또는 이완기 혈압 변화는 관찰되지 않았으나, G933 또는 위약을 수여받은 모든 코호트에서 혈압을 감소시키는 경향성이 관찰되었다.
위장관(GI) 유해 사례는 4명(44.4%)의 위약 환자 및 13명(68.4%)의 G933으로 치료받은 환자에서 보고되었다. GI 유해 사례는 코호트 1, 코호트 2 및 코호트 3에서 각각 3명, 4명 및 6명의 환자에 영향을 미쳤다. 가장 우세한 GI 유해 사례는 오심이었고, G933으로 치료받은 6명(31.6%)의 환자에서 보고되었다.
식욕 감소는 코호트 3에서 G933으로 치료받은 6명(85.7%)의 환자에서 보고되었다.
1건의 심각한 유해 사례(SAE)로 미코플라즈마 폐렴이 보고되었다.
요약하면, G933은 잘 관용되었으며, 유의미한 식후 글루코스 감소로 이어졌고, 임상적으로 유의미한 용량-의존적 체중 감량을 나타내었다.
(ii) 파트 B: 코호트 4
G933은 41-일 투여 기간에 걸쳐 혈중 글루코스 및 체중 감량을 유효하게 저하시켰다. 기준선(1일)부터 41일까지의 곡선-하-글루코스 면적(AUC)에서의 평균 감소를 도 18에 나타낸다. 이 시간에 걸쳐, G933은 38.5% 감소를 일으킨 반면(90% C.I. -47.1, -29.0), 위약 단독은 16.1% 감소를 일으켰다(90% C.I. -24.9, -8.0)(p-값: 0.001). G933은 또한 HbA1c에 의해 측정된 바와 같이 글루코스 제어를 개선하였다.(도 19 참고.) 치료 41일 후, HbA1c는 7.2%의 기준선 평균에서부터 42일차에 6.3%의 평균으로 0.92%만큼 감소하였다. 대조적으로, 위약 단독은 7.3%의 기준선 평균에서부터 6.7%의 평균으로 0.58%만큼 HbA1c를 감소시켰다.
체중에 대한 G933의 효과를 도 20 및 도 21에 나타낸다. 도 20은 G933으로의 41일 치료 후, 환자는 약 3.83 ㎏이 줄은 반면, 위약을 수여받은 환자는 약 1.71 ㎏만 줄었음을 나타낸다(G933 및 위약 간 차이 2.12 ㎏; p<0.001). 또한, G933으로 치료받은 환자의 44%는 적어도 5 ㎏이 줄은 반면, 위약을 수여받은 환자는 8%만 적어도 5 ㎏이 줄었다. 도 21은 G933으로의 41일 치료 후, 환자는 이들 체중의 약 4.18%가 줄은 반면, 위약을 수여받은 환자는 이들 체중의 약 1.71%만 줄었음을 나타낸다(G933 및 위약 간 차이 2.47%; p<0.001). 또한, G933으로 치료받은 환자의 84%는 이들 체중의 적어도 2%가 줄은 반면, 위약을 수여받은 환자는 42%만 이들 체중의 적어도 2%가 줄었다.
G933을 이용한 치료는 또한 간 지방 감소를 일으켰다(도 22 참고). G933 대 위약으로 기준선으로부터의 간 지방%의 평균 상대 감소(95% CI)는 20.5%였다(7.2, 33.9)(p=0.004). 간 부피의 유의미한 감소가 또한 위약에 비해 G933으로 치료받은 환자에서 관찰되었다(0.14 L(-0.24, -0.03), p=0.01).
전체적인, 유해 효과는 G933 및 위약으로 치료받은 환자에서 균형잡혔다. 유해 효과를 아래의 표에 요약한다. 사망은 일어나지 않았다.
Figure pat00029
총 17명의 환자: 위약을 수여받은 4명(15.4%) 및 G933으로 치료받은 13명(52.0%)이 오심을 보고하였다. 총 8명의 환자: 위약을 수여받은 0명 및 G933으로 치료받은 8명(32.0%)이 구토하였다. 오심 및 구토는 초기 용량 동안 더 빈번하였다.(도 23 참고.)
심장 및 혈류역학 파라미터에서는 유해 변화가 관찰되지 않았다. 수축기 또는 이완기 혈압 증가는 관찰되지 않았다. 심박수에서 분당 12.8 맥박(bpm) 증가가 13일에 나타났으나, 이는 41일 경 6.9 bpm까지 떨어졌다.
전체적인, G933은 41-일 기간의 혈중 글루코스 저하 및 체중 감량 모두에 대해 유효하였다. 혼합식 시험에 기반한 글루코스 대사를 정규화하고 HbA1c의 유의미한 감소가 수반되었다. 특히, 리라글루티드로의 치료에 대해 예상될 것(3 ㎎)보다 큰 체중 감소 산정치가 관찰되었다.
G933은 100 ㎍으로부터 200 ㎍으로의 상향-적정 용량으로 최대 41일까지 잘 관용되어, 200 ㎍으로의 1주 치료 내의 항정 상태 달성 및 다회 투여 후 최소 축적을 확인하였다. 200 ㎍ 용량 수준에서 관찰된 최대 혈장 농도는 1.98 ng/㎖ 내지 34.30 ng/㎖ 범위였다.
실시예 6: 다회-상승-용량 연구 파트 II
(A) 대상체
대략 32명의 상대적으로 잘 제어되는 2형 진성 당뇨병(T2DM)을 갖는 과체중 또는 비만 대상체가 이 연구에 참여하기 위해 등록한다. 등록된 대상체는 다음 예외를 가지며, 실시예 5에 기재된 포함 및 제외 기준에 부합한다:
포함 기준:
· 코호트 5 및 코호트 6 대상체는 스크리닝 기간 동안 위약(또는 일반 식염수)의 초기 자가-주사 후 매일 피하(SC) 주사를 자가-투여할 의사 및 능력이 있어야 한다.
제외 기준:
· 다음 중 어느 것으로 정의되는, 바로 누운 휴식 10분 후의 비정상적인 활력 징후: (a) 수축기 BP 90 mmHg 미만 또는 140 mmHg 이상; (b) 이완기 BP 50 mmHg 미만 또는 90 mmHg 이상, 또는 (c) HR 45 bpm 미만 또는 85 bpm 초과;
· 캐나다 심혈관 학회 클래스 II 초과로 분류되는 불안정형 협심증 또는 안정형 협심증 또는 임의의 이전 심근 경색 또는 뇌졸중 병력, 또는 최근 12개월 내에 일시적 허혈성 발작 이력.
(B) 연구 설계
무작위화, 이중-맹검, 다회-상승 용량 연구를 수행한다. 연구 순서도를 도 24에 제공한다. 이 연구는 2개 코호트: 코호트 5 및 코호트 6으로 구성된다. 코호트 5는 5일 동안 100 ㎍에 이어 5일 동안 150 ㎍, 5일 동안 200 ㎍ 및 7일 동안 300 ㎍으로 G933(MEDI0382) 투여를 시작하는 16명의 대상체(12명 치료군, 4명 위약)로 구성된다. 코호트 6은 5일 동안 100 ㎍에 이어 5일 동안 200 ㎍ 및 7일 동안 300 ㎍으로 G933 투여를 시작하는 추가 16명의 대상체(12명 치료군, 4명 위약)로 구성된다. 코호트 5 및 코호트 6은 대략 총 32명의 대상체이며 병렬 수행한다.
연구는 코호트 5 및 코호트 6 둘 모두에 대해 3일차에 시작하는 입원 상향-적정 평가 기간 및 외래 추적 기간으로 구성된다. 최초 4일 및 300 ㎍의 최종 투여일은 입원 기간이다.
대상체는 코호트 1 내지 코호트 4에 대해 실시예 5에 기재된 바와 같이 병원에 입원한다. 그러나 이들은 3일차에 끝나는 초기 입원 기간을 가지며, 300 ㎍ 용량 개시 전까지 각각의 용량 상향-적정 단계에 병원 방문을 포함하는 G933 가정-내 자가-투여가 이어진다. 대상체는 4번째 날에 끝나는 300 ㎍ 용량의 개시를 위해 두 번째 입원 기간을 가지며, 그 용량으로 가정-내 자가 투여가 이어진다.
혼합식 시험(MMT) 절차를 -1일, 및 달성되는 가장 높은 용량 수준의 마지막 날에 수행한다. 추가 시점에는 300 ㎍ 용량 개시 전(코호트 5에 있어서 16일 및 코호트 6에 있어서 11일), 및 투여 말기(코호트 5에 있어서 22일 및 코호트 6에 있어서 17일)가 포함된다. MMT는 실시예 5에 기재된 바와 같이 수행한다.
체중을 첫 번째 용량 전, 입원 투여 기간 동안 및 외래 기간 동안, 시설에서 퇴원 시, 7-일 내지 14-일 추적 방문 시 및 연구 방문 28-일 종료 시를 (비제한적으로) 포함하는 여러 시점에 측정한다.
G933에 대한 약동학 샘플을 투여-전 및 투여-후 그리고 G933의 최종 투여 후 48시간까지 코호트별로 다양한 시점에 수득한다. 메트포르민 농도에 대한 샘플을 G933 투여 전에 수득한다. 항약물 항체 샘플을 투여-전 및 최종 투여 후 28일까지의 다양한 시점에 수득한다.
대상체는 연구에서 최종 용량이 투여되는 다음 날에 시설에서 퇴원한다. 추적 방문을 연구 의약품의 최종 투여 대략 28일 후 최종 안전성 평가를 위해 수행한다.
(C) 결과
G933은 코호트 5 및 코호트 6에서 글루코스를 유효하게 저하시켰다. 코호트 5 및 코호트 6에서 관찰된 글루코스 AUC 수준을 각각 도 25 및 도 26에 나타낸다. 코호트 5에서, G933으로의 치료는 41.7%의 글루코스 AUC 감소를 일으킨 반면(90% C.I. -49.9, -33.5), 위약만으로의 치료는 8.0%의 글루코스 감소를 일으켰다(90% C.I. -19.6, 3.6) (p<0.001). 코호트 6에서, G933으로의 치료는 35.8%의 글루코스 AUC 감소를 일으킨 반면(90% C.I. -43.3, -28.3), 위약만으로의 치료는 -6.9%의 글루코스 감소를 일으켰다(90% C.I. -20.2, 6.3)(p=0.002). 글루코스 AUC에 대한 효과는 이전 코호트와 필적하였다, 즉 약 40% 감소로 정규화되었다. 모든 코호트에서 기준선 글루코스 AUC로부터의 변화%를 도 27에 나타낸다. G933은 또한 도 28에 나타낸 바와 같이 코호트 5 및 코호트 6에서 공복 글루코스 수준을 유효하게 저하시켰다.
G933은 또한 체중 감량에서 유효하였다. 도 29에 나타낸 바와 같이, 치료 22일 후, 코호트 5에서 G933으로 치료받은 환자는 약 3.09 ㎏이 줄은 반면, 위약으로 치료받은 환자는 약 0.98 ㎏만 줄었다(2.11 ㎏ 차이). 유사하게, 치료 17일 후, 코호트 6에서 G933으로 치료받은 환자는 약 2.23 ㎏이 줄은 반면, 위약으로 치료받은 환자는 약 0.35 ㎏만 줄었다(1.88 ㎏ 차이). 코호트 5(2.11 ㎏) 및 코호트 6(1.88 ㎏) 둘 모두는 22일 및 17일 후 코호트 4에서 투여 41일 동안 관찰된 것과 필적하는 체중 감량을 나타내었다.
체중 및 글루코스 수준 변화를 도 30에 함께 도식화하고 아래의 표 22에 요약한다.
[표 22]
Figure pat00030
G933은 코호트 5 및 코호트 6에서 잘 관용되었고, 유해 사례 프로필은 다른 시판되는 GLP-1 유사체, 예컨대 리라글루티드와 일치하였다. 어느 코호트에서도 사망 또는 심각한 유해 사례가 관찰되지 않았다.
두 적정 일정은 모두 최대 300 ㎍ 용량의 G933이 오심 및 구토에 대해 잘 관용됨을 실증하였다. 코호트 5에서, 총 4명의 환자: 위약을 수여받은 1명의 환자(20%) 및 G933을 수여받은 3명의 환자(27.3%)가 8건의 오심 에피소드를 보고하였다. 총 3명의 환자: 위약을 수여받은 0명의 환자(0%) 및 G933을 수여받은 3명의 환자(27.3%)가 8건의 구토 에피소드를 보고하였다. 코호트 6에서, 총 5명의 환자: 위약을 수여받은 0명의 환자(0%) 및 G933을 수여받은 5명의 환자(41.7%)가 6건의 오심 에피소드를 보고하였다. 1명의 환자: 위약을 수여받은 0명의 환자(0%) 및 G933을 수여받은 1명의 환자(8.3%)가 2회 구토하였다. 대상체는 초기 용량 48시간 후 외래 환자에서와 마찬가지로 낮은 비율의 오심(8/24 = 33%) 및 구토(4/24 = 16%)가 관찰되었다.
외래 혈압 측정은 G933-치료 환자에서 수축기 혈압/이완기 혈압(SBP/DBP)에서 기준선으로부터의 증가를 나타내지 않았고 감소를 향한 잠재적 경향성을 나타내었다. 코호트 5에서, 심박수는 이전에 및 다른 GLP-1 유사체 및 코호트 4에서 관찰된 것과 일치하게, G933 투여 22일 후 기준선으로부터 대략 분당 7.6회 맥박(BPM)만큼 증가하였다. 코호트 6에서, 심박수는 G933 투여 17일 후 기준선으로부터 대략 5.9 BPM만큼 증가하였다.
두 적정 방식으로 수득된 300 ㎍의 최고 용량에서 7일 후 G933의 혈장 농도를 도 31에 나타낸다. 특히 일단 항정 상태가 달성되면 프로필이 중복되어, 이 용량 수준에서의 노출이 채택된 적정 방식과 무관함을 제시하였다. 300 ㎍ 용량에서 관찰된 최대 혈장 농도는 7.9 ng/㎖ 내지 30.9 ng/㎖ 범위였다.
다회-상승-용량 연구 결과의 요약(파트 I 및 파트 II)
전체적인, 100 ㎍ 내지 300 ㎍ 용량 범위에서, G933은 대략 8시간 내지 11시간의 반감기를 갖는 선형 PK, 매일 반복 투여 후 최소 축적, 및 시험된 모든 4개 용량 수준에서 4일 내지 7일에 항정 상태 달성을 나타내었다. 이 결과는 단회 용량 연구(실시예 4)로부터의 결과를 확인시켜 주었다. 300 ㎍ 최고 용량에서 7일 후 도달된 혈장 농도는 채택되는 적정 방식과 무관하였다. Cmax에서 대상체-간 변동성은 더 작은 코호트에서는 대략 20% 내지 30%, 그리고 더 큰 코호트 4에서는 40% 내지 50%였다. 시험된 용량 범위에서 그리고 채택된 적정 방식으로의 최대 혈장 농도는 1.98 ng/㎖ 내지 34.3 ng/㎖ 범위였고, 평균 1일 혈장 농도는 0.87 ng/㎖ 내지 16.3 ng/㎖ 범위였다.
안전성 및 관용성 프로필은 다른 GLP-1 모사체와 필적하였으며, 특히, G933은 체중 감량 및 글루코스 제어를 모두 일으켰다.
***
본 개시는 본 개시의 개별 양태의 일례로서 의도되는 기재된 특정 구현예에 의해 범위가 제한되지 않으며, 기능적으로 동등한 임의의 조성물 또는 방법은 본 개시의 범위 내이다. 실제로, 본원에 나타내고 기재된 것들에 부가하여 본 개시의 다양한 변형이 상기 기재 및 첨부 도면으로부터 당업자에게 자명해질 것이다. 이러한 변형은 첨부되는 청구범위의 범위 내에 속하도록 의도된다.
본 명세서에서 언급된 모든 공보 및 특허 출원은 각각의 개별 공보 또는 특허 출원이 참조로 포함됨을 구체적이고 개별적으로 나타낸 것과 같은 정도로 본원에 참조로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> MedImmune LIMITED JERMUTUS, Lutz AMBERY, Philip Duncan BEDNAREK, Maria A. PETRONE, Marcella <120> GLUCAGON AND GLP-1 CO-AGONISTS FOR THE TREATMENT OF OBESITY <130> GLPGG-200-PCT <150> 62/306,121 <151> 2016-03-10 <160> 26 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 2 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 3 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 4 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric GLP-1/glucagon peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is Gly or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Tyr or Lys <220> <221> 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Thr Ser Asp Lys Ser Glu Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Glu Arg Ala Arg Asp Phe Val Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 13 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric GLP-1/glucagon peptide <400> 13 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Glu Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Ser Ala Arg Asp Phe Val Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 14 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric GLP-1/glucagon peptide <400> 14 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Arg Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Glu Arg Ala Arg Asp Phe Val Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 15 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric GLP-1/glucagon peptide <400> 15 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Arg Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Ser Ala Arg Asp Phe Val Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 16 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric GLP-1/glucagon peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Lysine with a palmitoyl group conjugated to the epsilon nitrogen, through a gamma glutamic acid linker <400> 16 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Lys Leu Asp Ser 1 5 10 15 Glu Arg Ala Arg Asp Phe Val Ala Trp Leu Val Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 17 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric GLP-1/glucagon peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Lysine with a palmitoyl group conjugated to the epsilon nitrogen, through a gamma glutamic acid linker <400> 17 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Glu Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Glu Arg Ala Arg Asp Phe Val Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 18 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric GLP-1/glucagon peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Lysine with a palmitoyl group conjugated to the epsilon nitrogen, through a gamma glutamic acid linker <400> 18 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Arg Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Ser Ala Arg Asp Phe Val Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 19 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric GLP-1/glucagon peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Lysine with a palmitoyl group conjugated to the epsilon nitrogen, through a gamma glutamic acid linker <400> 19 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Glu Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Glu Arg Ala Arg Asp Phe Val Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 20 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric GLP-1/glucagon peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Lysine with a palmitoyl group conjugated to the epsilon nitrogen, through a gamma glutamic acid linker <400> 20 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ser Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Ser Ala Arg Asp Phe Val Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 21 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric GLP-1/glucagon peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Lysine with a palmitoyl group conjugated to the epsilon nitrogen, through a gamma glutamic acid linker <400> 21 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ser Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Arg Asp Phe Val Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 22 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric GLP-1/glucagon peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Lysine with a palmitoyl group conjugated to the epsilon nitrogen, through a gamma glutamic acid linker <400> 22 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 23 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> chimeric GLP-1/glucagon peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Lysine with a palmitoyl group conjugated to the epsilon nitrogen, through a gamma glutamic acid linker <400> 23 His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Lys Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Val Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 24 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G931 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Lysine with a palmitoyl group conjugated to the epsilon nitrogen, through a gamma glutamic acid linker <400> 24 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Lys Leu Asp Ser 1 5 10 15 Glu Arg Ala Arg Asp Phe Val Ala Trp Leu Val Ala Gly Gly 20 25 30 <210> 25 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G934 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Lysine with a palmitoyl group conjugated to the epsilon nitrogen, through a gamma glutamic acid linker <400> 25 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Glu Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 26 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G973 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Lysine with a palmitoyl group conjugated to the epsilon nitrogen, through a gamma glutamic acid linker <400> 26 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ser Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Ser Ala Arg Asp Phe Val Ala Trp Leu Glu Ala Gly Gly 20 25 30

Claims (17)

  1. SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 포함하며, 체중 감소를 필요로 하는 인간 대상체에게 용량 당 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 펩타이드가 투여되는, 체중 감소를 위한 약제학적 조성물.
  2. SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 포함하며, 체지방 감소를 필요로 하는 인간 대상체에게 용량 당 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 펩타이드가 투여되는, 체지방 감소를 위한 약제학적 조성물.
  3. SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 포함하며, 비만 치료를 필요로 하는 인간 대상체에게 용량 당 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 펩타이드가 투여되는, 비만 치료를 위한 약제학적 조성물.
  4. SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 포함하며, 과체중에 의해 야기되거나 이를 특징으로 하는 질병 또는 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간 대상체에게 용량 당 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 펩타이드가 투여되는, 과체중에 의해 야기되거나 이를 특징으로 하는 질병 또는 질환의 치료 또는 예방을 위한 약제학적 조성물.
  5. SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 포함하며, 지질 산화 증가를 필요로 하는 인간 대상체에게 용량 당 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 펩타이드가 투여되는, 지질 산화 증가를 위한 약제학적 조성물.
  6. SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 포함하며, 식품 섭취 감소를 필요로 하는 인간 대상체에게 용량 당 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 펩타이드가 투여되는, 식품 섭취 감소를 위한 약제학적 조성물.
  7. SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 포함하며, 혈장 글루코스 저감을 필요로 하는 인간 대상체에게 용량 당 100 ㎍ 내지 600 ㎍의 펩타이드가 투여되는, 혈장 글루코스 저감을 위한 약제학적 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 당뇨병을 갖는 것인 약제학적 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 대상체가 2형 진성 당뇨병을 갖는 것인 약제학적 조성물.
  10. 제8항에 있어서, 비만을 치료하는 약제학적 조성물.
  11. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 매일 투여되는 약제학적 조성물.
  12. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 1일 1회 투여되는 약제학적 조성물.
  13. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1주 동안, 적어도 2주 동안, 적어도 3주 동안, 또는 적어도 4주 동안 투여되는 약제학적 조성물.
  14. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 주사에 의해 투여되는 약제학적 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 투여가 피하인 약제학적 조성물.
  16. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 질병 진행이 정지되는 것인 약제학적 조성물.
  17. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 질병 진행이 역전되는 것인 약제학적 조성물.
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